WO2004058276A1

WO2004058276A1 - Histamine release inhibitor

Info

Publication number: WO2004058276A1
Application number: PCT/JP2003/015708
Authority: WO
Inventors: Yukihito Akiyama; Tomoyuki Nakamura; Koichiro Komai; Ikuyo Kasuga; Kazumi Ueda
Original assignee: Yukihito Akiyama; Tomoyuki Nakamura; Koichiro Komai; Ikuyo Kasuga; Kazumi Ueda
Priority date: 2002-12-24
Filing date: 2003-12-09
Publication date: 2004-07-15
Also published as: AU2003288993A1

Abstract

By confirming that the following substances (1) to (10) inhibit histamine release, it becomes possible to obtain a histamine release inhibitor comprising these substances as the main components: (1) adenosine (2) guanosine (3) cytidine (4) uridine (5) adenosine monophosphate (AMP) (6) adenosine diphosphate (ADP) (7) adenosine triphosphate (ATP) (8) adenosine originating in Phellinus linteus (9) N-hydroxy-N-methyl-adenosine (10) N-hydroxy-N-methyl-adenosine originating in Phellinus linteus.

Description

ヒスタミン遊離抑制剤 Histamine release inhibitor

技術分野 Technical field

本発明は、 RNA (Ribonucleic acid) 由来のヌクレオシド（Nucleoside) 、すなわちアデノシン（Adenosine), グアノシン（Guanosine)、シティジン（Cytidine ) 、及びゥリディン（Uridine)を含有するヒスタミン（Histamine)遊離抑制剤に関明 The present invention relates to a histamine (Histamine) release inhibitor containing RNA (Ribonucleic acid) -derived nucleoside, that is, adenosine (Adenosine), guanosine (Guanosine), citidine (Cytidine), and peridine (Uridine). Relationship

するものである。 To do.

田 Rice field

又本発明は、アデノシン誘導体、すなわちアデノシン一リン酸（AMP， Adenos ine b -monophosphate) 、ァテノシン二リン酸 (AD P , Adenosine 5 -diphospha te) 、又はアデノシン三リン酸（ATP， Adenosine 5' -triphosphate) , 及び Ν- hy droxy-N_methy卜 adenosineを含有するヒスタミン遊離抑制剤に関するものである。 The present invention also relates to adenosine derivatives, ie, adenosine monophosphate (AMP, Adenosine b-monophosphate), atenosin diphosphate (ADP, Adenosine 5 -diphosphate), or adenosine triphosphate (ATP, Adenosine 5 '- The present invention relates to a histamine release inhibitor containing triphosphate) and Ν-hydroxy-N_methytriadenosine.

背景技術 Background art

従来から、ヒスタミン遊離抑制作用を有する物質として、下記の物質が知られている。 Conventionally, the following substances have been known as substances having a histamine release inhibitory action.

①トリカフェオイルキナ酸（Tricafieoylquinic acid) 等（特開 2002— 8 0360) (1) Tricaffeoylquinic acid, etc. (JP 2002-80360)

②トマト抽出物（特開 2002-80387) ② Tomato extract (JP 2002-80387)

③ァピゲニン（Apigenin) 等（特開 2000-86510) (3) Apigenin, etc. (JP 2000-86510)

④ニッケィ、ャマモモ等の樹皮抽出物（特開平 10— 287582) 又、本出願人は、ヒスタミン遊離抑制作用を有する物質として、 ⑤メシマコプ（ Phellinus linteus)菌糸体由来物質を含有するヒスタミン遊離抑制剤に関して、特願 2002— 335238を既に出願している事実がある。 Bark extract of nicky, bayberry, etc. (Japanese Patent Application Laid-Open No. Hei 10-287582) Also, the present applicant relates to a histamine release inhibitor containing a substance derived from mycelium of Phellinus linteus as a substance having an action of inhibiting histamine release. There is a fact that patent application 2002-335238 has already been filed.

しかしながら、 RNA由来のヌクレオシド（アデノシン、グアノシン、シティジン、及びゥリディン）についてのヒスタミン遊離抑制作用は知られていない。 However, the histamine release inhibitory effect of RNA-derived nucleosides (adenosine, guanosine, citidine, and peridin) is not known.

又、アデノシン誘導体（アデノシン一リン酸、アデノシン二リン酸、又はアデノシン三リン酸、及び N- hydroxy- N-meihy卜 adenosine) についてのヒスタミン遊離抑制作用も知られていない。 Adenosine derivatives (adenosine monophosphate, adenosine diphosphate, or adenosine) There is also no known method for producing histamine release of syntriphosphate and N-hydroxy-N-meihydenadeneosine).

そこで発明者等は、前記 RN A由来のヌクレオシド、及びアデノシン誘導体の薬理効果として、ヒスタミン遊離抑制作用に着目して鋭意研究したところ、これらの物質には、顕著なヒスタミン遊離抑制作用が存在することを知り本発明を完成した又、発明者等はメシマコブ菌糸体のヒスタミン遊離抑制作用に着目して鋭意研究したところ、メシマコブ菌糸体から抽出 '分離された N-hydroxy- N- methy^adenos ine には、顕著なヒスタミン遊離抑制作用が存在することを知り本発明を完成した。発明の開示 Thus, the present inventors have conducted intensive studies focusing on the histamine release inhibitory effect as the pharmacological effect of the nucleoside and adenosine derivative derived from RNA, and these substances have a remarkable histamine release inhibitory effect. The present inventors have completed the present invention.In addition, the inventors of the present invention have conducted intensive studies focusing on the histamine release inhibitory action of Mesimakov mycelium, and found that N-hydroxy-N-methy ^ adenosine Have found that a remarkable histamine release inhibitory action exists and completed the present invention. Disclosure of the invention

本願発明は、下記の請求の範囲第 1項〜第 1 1項により構成されている。 The present invention is constituted by claims 1 to 11 described below.

(1) RN A由来のヌクレオシドを含有することを特徴とするヒスタミン遊離抑制剤。 (1) A histamine release inhibitor comprising a nucleoside derived from RNA.

(2) RNA由来のヌクレオシドが、アデノシンである請求の範囲第 1項記載のヒスタミン遊離抑制剤。 (2) The histamine release inhibitor according to claim 1, wherein the RNA-derived nucleoside is adenosine.

(3) メシマコプ菌糸体から得られるアデノシンを使用する請求の範囲第 2項に記載するヒスタミン遊離抑制剤。 (3) The histamine release inhibitor according to claim 2, wherein adenosine obtained from Mesimakop mycelium is used.

(4) RNA由来のヌクレオシドが、グアノシンである請求の範囲第 1項記載のヒスタミン遊離抑制剤。 (4) The histamine release inhibitor according to claim 1, wherein the RNA-derived nucleoside is guanosine.

(5) RN A由来のヌクレオシドが、シティジンである請求の範囲第 1項記載のヒスタミン遊離抑制剤。 (5) The histamine release inhibitor according to claim 1, wherein the nucleoside derived from RNA is citin.

(6) RN A由来のヌクレオシドが、ゥリディンである請求の範囲第 1項記載のヒスタミン遊離抑制剤。 (6) The histamine release inhibitor according to claim 1, wherein the nucleoside derived from RNA is peridine.

(7) アデノシン一リン酸（AMP) を含有することを特徵とするヒスタミン遊離抑制剤。 (7) A histamine release inhibitor containing adenosine monophosphate (AMP).

(8) アデノシン二リン酸（ADP) を含有することを特徴とするヒスタミン遊離抑制剤。 (8) Histamine containing adenosine diphosphate (ADP) Release inhibitors.

(9) アデノシン三リン酸（ATP) を含有することを特徴とするヒスタミン遊離抑制剤。 (9) A histamine release inhibitor comprising adenosine triphosphate (ATP).

(10) N-hydroxy- N- methy卜 adenosineを含有することを特徴とするヒスタミン遊離抑制剤。 (10) A histamine release inhibitor comprising N-hydroxy-N-methytriadenosine.

(1 1) メシマコブ菌糸体から得られる N - hydroxy - N-methy卜 adenosineを使用する請求の範囲第 10項に記載するヒスタミン遊離抑制剤。 (11) The histamine release inhibitor according to claim 10, which uses N-hydroxy-N-methytriadenosine obtained from a mycelium of Mesimakobu.

本願発明を以上のように構成する理由は、 RNA由来のヌクレオシド、すなわち、 ①アデノシン（Adenosine ) 、 ②グアノシン（Guanosine ) 、 ③シティジン（Cy tidine) 、 ④ゥリディン（Uridine ) 等は、従来から核酸関連物質として既知の物質であるが、これらの物質に関しては、ヒスタミン遊離抑制作用が知られていなかつたことによる。又、アデノシン誘導体、すなわちアデノシン一リン酸（AMP ) 、アデノシン二リン酸（ADP) 、アデノシン三リン酸（ATP) 等は、従来から核酸関連物質として既知の物質であるが、これらの物質に関しては、ヒスタミン遊離抑制作用が知られていなかったことによる。 The reason that the present invention is constituted as described above is that RNA-derived nucleosides, namely, adenosine (Adenosine), (2) guanosine (Guanosine), (3) cytidine, (4) uridine, etc., have conventionally been related to nucleic acids. It is a substance known as a substance, but the histamine release inhibitory action was not known for these substances. Also, adenosine derivatives, that is, adenosine monophosphate (AMP), adenosine diphosphate (ADP), adenosine triphosphate (ATP), and the like are substances that are conventionally known as nucleic acid-related substances. Is due to the fact that the effect of inhibiting histamine release was not known.

更に、メシマコブ菌糸体から抽出 ·分離されるアデノシン、及び N_hydroxy- N-me thyl- adenosineには、従来ヒスタミン遊離抑制作用が知られていなかつたが、発明者等の試験において、顕著なヒスタミン遊離抑制作用が認められたことによる。図面の簡単な説明 Furthermore, adenosine and N_hydroxy-N-methyl-adenosine extracted and separated from the mycelium of Mesimakobu have not been known to inhibit histamine release, but in the tests conducted by the present inventors, the histamine release was significantly suppressed. The effect was observed. BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES

第 1図はメシマコブ菌糸体の熱水抽出物の分画工程を示す図である。第 2図は F r 7の分取チャートを示す図である。第 3図は化合物 Aの質量スペクトル（GC— MS) を示す図である。第 4図は化合物 Aの — NMRのスペクトルを示す図である。第 5図は化合物 Aの¹³ C—NMRのスペクトルを示す図である。第 6図は化合物 Aの赤外スぺクトルを示す図である。第 7図は化合物 Aの紫外 ·可視スぺクトル（UV) を示す図である。第 8図は化合物 Bの質量スペクトル（GC— MS) を示す図である。第 9図は化合物 Bの — NMRのスペクトルを示す図である。第 10図は化合物 Bの¹³ C— NMRのスペクトルを示す図である。第 1 1図は化合物 Bの赤外スぺクトルを示す図である。第 12図は化合物 Bの紫外 ·可視スぺクトル (UV) を示す図である。発明を実施するための最良の形態 FIG. 1 is a view showing a step of fractionating a hot water extract of a mycelium of Mesimakobu. FIG. 2 is a diagram showing a fractionation chart of Fr7. FIG. 3 shows a mass spectrum (GC-MS) of compound A. FIG. 4 is a diagram showing a —NMR spectrum of compound A. FIG. 5 is a chart showing ¹³ C-NMR spectrum of compound A. FIG. 6 is a diagram showing an infrared spectrum of Compound A. FIG. 7 is a diagram showing an ultraviolet-visible spectrum (UV) of Compound A. FIG. 8 shows a mass spectrum (GC-MS) of compound B. FIG. 9 is a diagram showing a —NMR spectrum of compound B. FIG. 10 shows a ¹³ C-NMR spectrum of compound B. Fig. 11 shows compounds FIG. 3 is a diagram showing an infrared spectrum of B. FIG. 12 is a diagram showing an ultraviolet-visible spectrum (UV) of Compound B. BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION

<ヒスタミン遊離抑制効果の確認〉 <Confirmation of histamine release inhibitory effect>

(1) 下記の物質について、マスト細胞からのヒスタミン遊離抑制効果を調べることによって、 I型アレルギー反応抑制効果を調べた。 (1) The inhibitory effect of the following substances on the release of histamine from mast cells was examined to determine the inhibitory effect on type I allergic reactions.

①アデノシン ① Adenosine

②グアノシン ② Guanosine

③シティ ③ City

④ゥリ Peri

⑤アデノシン一リン酸（AMP) ⑤Adenosine monophosphate (AMP)

⑥アデノシン二リン酸（ADP) ⑥Adenosine diphosphate (ADP)

⑦アデノシン三リン酸（ATP) ⑦Adenosine triphosphate (ATP)

⑧メシマコブ由来のアデノシン（化合物 Aとして後述）アデノ Adenosine derived from Meshimakobu (described later as Compound A)

⑨メシマコブ由来の N- hydroxy- N-methy卜 adenosine (化合物 Bとして後述） NN-hydroxy-N-methytriene adenosine from Meshimakobu (described later as compound B)

⑩市販のヒスタミン抑制剤（商品名：インタール（Intal ) , 主要成分：クロモグリク酸ナトリウム（Disodium cromoglicate , メーカー：藤沢薬品工業） ⑩ Commercially available histamine inhibitor (trade name: Intal (Intal), main component: sodium chromoglycate (Disodium cromoglicate, manufacturer: Fujisawa Pharmaceutical)

前記①〜⑦の物質は、市販の試薬（和光純薬製）を用いた。 As the above-mentioned substances (1) to (4), commercially available reagents (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) were used.

(2) 被験動物及び細胞の調製方法 (2) Preparation of test animals and cells

(a) 被験動物には、 Wister系ラッ卜雄（ 6〜 8週齢）を用いた。 (a) Wister rats (6-8 weeks old) were used as test animals.

(b) 細胞の調製方法 (b) Cell preparation method

ラッ卜をエーテルで麻酔させ、脱血死させた後、ラッ卜の腹腔内に Tyrode Buff er 15m 1を注入し、腹腔内液を回収した。更にラットの腹腔内に Tyrode Buffer 10m lを注入し、更に腹腔内液を回収して先に採取した腹腔内液と混合した。この腹腔内液を、 800 r pm · 4 · 10分間遠心分離を行い、上澄を除去してフィルターをかけた。更に、 Tyrode Buffer を加えた細胞懸濁液を、 800 r pm ' 4°O l 0分間遠心分離を行い、上清を除去して、細胞を均一にした。この細胞懸濁液を血球計算盤で測定し、 8 X 10⁶ cells /m 1に調製して用いた。 After the rat was anesthetized with ether and exsanguinated, 15 ml of Tyrode Buffer was injected into the abdominal cavity of the rat, and the peritoneal fluid was collected. Further, 10 ml of Tyrode Buffer was injected into the peritoneal cavity of the rat, and the peritoneal fluid was recovered and mixed with the peritoneal fluid collected earlier. The intraperitoneal fluid was centrifuged at 800 rpm for 4 to 10 minutes, and the supernatant was removed and filtered. Further, the cell suspension to which Tyrode Buffer was added was centrifuged at 800 rpm for 4 minutes at 0 ° C., and the supernatant was removed to homogenize the cells. The cell suspension was measured with a hemocytometer, adjusted to 8 × 10 ⁶ cells / ml, and used.

(3) 生物検定の実験方法及びヒスタミンの分析方法 (3) Bioassay experimental method and histamine analysis method

(a) 生物検定の実験方法 (a) Bioassay experiment method

1. 2m 1のマイクロチューブに分注した、細胞懸濁液 370 1を 37°Cのゥオーターバスでプレインキュベー卜した。 1. The cell suspension 3701 dispensed into a 2 ml microtube was pre-incubated in a 37 ° C water bath.

10分後、各濃度に設定したサンプル 20 II 1を添加した。 Ten minutes later, Sample 20 II 1 set at each concentration was added.

更に、 10分後、アレルギー誘発剤である co即 ound48 I 80 (マスト細胞刺激用試薬：和光純薬製） 10 ^ 1 (0. 5 /ml) を添加した。 Further, 10 minutes later, 10 ^ 1 (0.5 / ml) of co-immediate ound48 I80 (reagent for mast cell stimulation: manufactured by Wako Pure Chemical Industries), which is an allergy-inducing agent, was added.

15分後、氷上で反応を停止した。 After 15 minutes, the reaction was stopped on ice.

更に、マスト細胞を除去するため、 13000 r pm ' 4°C ' 15分間遠心分離し、上清を回収した。 Further, in order to remove mast cells, the mixture was centrifuged at 13000 rpm at 4 ° C for 15 minutes, and the supernatant was collected.

この上清を、 H P L C分析のジァゾ化するサンプルとした。 This supernatant was used as a sample to be diazotized for HPLC analysis.

(b) ヒスタミンジァゾ化誘導体の調製 (b) Preparation of histamine diazotized derivative

等量の 20mM p —二トロア二リン塩酸溶液と 20 OmM 亜硝酸ナトリウム水溶液をよく混合した（ジァゾ試薬）。 Equal amounts of a 20 mM p-nitro-2-aline hydrochloride solution and a 20 OmM aqueous sodium nitrite solution were mixed well (Diazo reagent).

ジァゾ試薬 10 1に、前記（ヒスタミン）ジァゾ化用サンプル 20 1を加え、ポルテックスミキサーでよく混合した。 The (histamine) diazotizing sample 201 was added to the diazo reagent 101 and mixed well with a Portex mixer.

更に、 10% 炭酸ナトリウムエタノール溶液 30 1を加え、ポルテックスミキサ一でよく混合した。 Further, a 10% ethanol solution of sodium carbonate (301) was added, and the mixture was mixed well with a Portex mixer.

この溶液の 20111を HP LC分析に用いた。 20111 of this solution was used for HP LC analysis.

(c) ヒスタミンの分析は、ジァゾ化法により行った（Specific Determinati onof Histamine in Fish by High-performance Liquid Chromatography after Dia zi Coupling ： Biosci. Biotech. Biochem. 59 (7), 1208-1210 (1995) ) 。 (c) Histamine was analyzed by the diazotization method (Specific Determinion of Histamine in Fish by High-performance Liquid Chromatography after Diazi Coupling: Biosci. Biotech. Biochem. 59 (7), 1208-1210 (1995)) .

生物検定におけるヒスタミンの HPLC分析条件（ジァゾ法）は、表 1のとおりである。 Table 1 shows the conditions for HPLC analysis of histamine (diazo method) in the bioassay.

表 1 項目条件カラム COSMOS IL 5C18-AR-II table 1 Item Condition Column COSMOS IL 5C18-AR-II

150 mm/ . 0 mm 温度 40°C 流速 1 ml/min. 溶媒 A. ァセトニトリル 150 mm / .0 mm Temperature 40 ° C Flow rate 1 ml / min. Solvent A. Acetonitrile

B. 5%ァセトニ卜リル + B. 5% acetonitrile +

0. 1%トリフルォロ酢酸溶媒グラジェント条件溶媒 B (%) の割合 0.1% Trifluoroacetic acid Solvent gradient condition Ratio of solvent B (%)

Omin. 20% Omin. 20%

6min. 38% 6min. 38%

13min. 20% 分析時間 2 Omin. 検出器および波長可視 ·紫外検出器 13min. 20% Analysis time 2 Omin. Detector and wavelength Visible / UV detector

460 nm 460 nm

(4) ①アデノシン、 ②グアノシン、 ③シティジン、 ④ゥリジン、 ⑤アデノシン一リン酸（AMP) 、 ⑥アデノシン二リン酸（ADP) 、 ⑦アデノシン三リン酸（A TP) (以上何れも和光純薬製）、 ⑧メシマコブ由来アデノシン（化合物 Aとして後述）、 @メシマコブ由来の 1^(11"0 -1^-1116^ 卜&(1611051116 (化合物 Bとして後述(4) ①Adenosine, ②Guanosine, ③Citidine, ④ ゥ Lysine, ⑤Adenosine monophosphate (AMP), ⑥Adenosine diphosphate (ADP), ⑦Adenosine triphosphate (ATP) (all of which are manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) ) ⑧, Adenosine from Meshimakobu (as Compound A) ), 1 ^ (11 "0 -1 ^ -1116 ^ && (1611051116) derived from @meshimakobu (described later as compound B)

) 、 ⑩市販のヒスタミン抑制剤（商品名：インタ一ル，主要成分：クロモグリク酸ナトリウム，メーカー：藤沢薬品工業）の一定濃度におけるマスト細胞からのヒス夕ミン遊離抑制効果の結果を表 2に示す。表 2に示した抑制率は、何れも 3回測定した値の平均値である。 Table 2 shows the results of inhibiting the release of hismin-min from mast cells at a certain concentration of a commercially available histamine inhibitor (trade name: Intal, main component: sodium cromoglycate, manufacturer: Fujisawa Pharmaceutical) . The suppression rates shown in Table 2 are the averages of the values measured three times.

表 2 Table 2

B式料濃度 (β g/m 1 ) 抑制率（％) アデノシン 1 27. 5 アデノシン 5 43. 8 アデノシン 20 59. 3 アデノシン 50 74. 7 グアノシン 5 39. 0 ヽ , ·, ノ、^ヽ ' Formula B Concentration (β g / m 1) Inhibition rate (%) Adenosine 127.5 Adenosine 5 43.8 Adenosine 20 59.3 Adenosine 50 74.7 Guanosine 5 39.0 0 ヽ, ·, ノ, ^ ヽ '

5 38. 0 ゥリジン 5 34. 0 アデノシン一リン酸 10 54. 9 アデノシン二リン酸 10 47. 8 アデノシン三リン酸 10 40. 0 表 2の続き 5 38.0 Peridine 5 34.0 Adenosine monophosphate 10 54.9 Adenosine diphosphate 10 47.8 Adenosine triphosphate 10 40.0 Table 2 continued

抑制値は下記の計算式によった。 The suppression value was based on the following formula.

計算式： a formula:

(1一サンプルのピーク積分値/コントロールのピーク積分値） X 100 表 2によれば、前記①〜⑨の物質は、何れもヒスタミン遊離抑制効果を有していることがわかる。 ' くメシマコブ由来アデノシン、及びメシマコブ由来の N- hydroxy- N- me thy卜 ad enosine の調製万法 (1 peak integrated value of one sample / peak integrated value of control) X 100 According to Table 2, it can be seen that each of the substances (1) to (4) has an effect of inhibiting histamine release. '' Preparation of adenosine derived from Kumeshimakobu and N-hydroxy-N-methytriadenosin derived from Meshimakobu

( a) メシマコブ菌糸体 (a) Meshimakobu mycelium

大型タンク（1000 L) を用いて、炭素源としてグルコースを 4. 0%、天然物由来窒素源イーストエキス及びポリペプトンを各 0. 3%、 KH₂P0₄及び Na₂HP0₄ を各 0. 05 %を含み、初発培地 pH5. 5の培養液に、メシマコブの菌糸体を接種し、強制的に 0. 22 フィルターを通した無菌空気を培地内へ通気し、温度 28°Cで 45日間培養した。 Using a large tank (1000 L), glucose 4.0%, a naturally derived nitrogen source yeast extract and polypeptone each 0. 3% each 0. The KH ₂ P0 ₄ and Na ₂ HP0 ₄ 05 as the carbon source %, And inoculated with the mycelium of Mesimakob in the culture medium of the initial medium pH 5.5, forcibly aerated with sterile air through a 0.22 filter into the medium, and cultured at 28 ° C for 45 days did.

この培養液を遠心分離して得られた菌糸体を凍結乾燥してメシマコブ菌糸体の乾燥粉末を得た。 The mycelium obtained by centrifuging this culture was freeze-dried to obtain a dry powder of Mesimakov mycelium.

なお、本願発明に用いたメシマコブは、 1998年 10月に宮崎県西諸県郡須木村で子実体を採取し、株式会社アイビ一アイ（I B I) 応用きのこ研究所で菌糸体 03015708 化した上で PL— 08株として保存していたものを使用した。この菌株は、子実体を農林水産省林野庁総合研究所森林生物部森林微生物科腐朽病害研究室の阿部恭久博士の鑑定により、 ①メシマコプ子実体に特有の黄褐色の剛毛体を持つこと、及び②担子胞子の形態、からメシマコブと同定されたものを用いた。 The fruit body used in the present invention was collected in October 1998 at Suki-mura, Nishimoro-prefecture, Miyazaki Prefecture, and the mycelium was obtained from the Applied Mushroom Research Institute, IBI-ICHI Corporation (IBI). 03015708, which was stored as PL-08 strain was used. Based on the identification of the fruiting body by Dr. Yasuhisa Abe of the Rot and Disease Laboratory, Department of Forestry and Biology, Forestry Agency, Forestry Agency, Ministry of Agriculture, Forestry and Fisheries, (1) it has a yellow-brown bristle body unique to Mesimakop fruiting body, and (2) The basidiospore morphology, which was identified as Mesimakob, was used.

(b) メシマコブ菌糸体の熱水抽出物 (b) Hot water extract of Mesimakobu mycelium

前記メシマコブ菌糸体の乾燥粉末に 10倍量のイオン交換水を加え、 100°Cで 2時間、熱水抽出処理を行ない、不溶物を除去してメシマコブ菌糸体の熱水抽出物を得た。この熱水抽出物を約 70°Cで減圧濃縮した。 A 10-fold amount of ion-exchanged water was added to the dried powder of the mycelium of Mesimakob, and a hot-water extraction treatment was performed at 100 ° C for 2 hours to remove insolubles, thereby obtaining a hot-water extract of the mycelium of Mesimachob. The hot water extract was concentrated under reduced pressure at about 70 ° C.

なお、前記メシマコブの乾燥菌糸体粉末 1300 gより、前記メシマコブ熱水抽出液濃縮物が約 280 g得られた。 In addition, about 280 g of the concentrated extract of hot water extract of meshimakobu was obtained from 1300 g of the dried mycelium powder of meshimakobu.

この熱水抽出物を図 1に示す方法により分画した。 This hot water extract was fractionated by the method shown in FIG.

( c ) メシマコブ菌糸体の熱水抽出物のメ夕ノールによる分画 (c) Fractionation of hot-water extract of Mesimakobu mycelium with methanol

前記メシマコブ熱水抽出物に対し、 3倍量のメタノールを加え、 2時間静置した後遠心分離し、メタノール可溶画分と、メタノール不溶画分を得た。 A three-fold amount of methanol was added to the hot water extract of Mesimakobu, the mixture was allowed to stand for 2 hours, and then centrifuged to obtain a methanol-soluble fraction and a methanol-insoluble fraction.

なお、前記メシマコブ熱水抽出物濃縮液 280 gから、メタノール可溶画分が 5 1 g、及びメタノール不溶画分が 226 g得られた。 In addition, 51 g of a methanol-soluble fraction and 226 g of a methanol-insoluble fraction were obtained from 280 g of the concentrated water extract of Mesimakobu.

(d) 前記メタノール可溶画分のイオン吸着剤による分画 (d) Fractionation of the methanol-soluble fraction with an ion adsorbent

(ィ）カラムに充填したイオン吸着剤（Diaion HP- 20 (日本鍊水社製）、以下 H P— 20ともいう）に、前記メタノール可溶画分を吸着させた後，水溶出画分とメタノ一ル溶出画分に分画した。 (A) After adsorbing the methanol-soluble fraction onto an ion adsorbent (Diaion HP-20 (manufactured by Nippon Shusui), hereinafter also referred to as HP-20) packed in the column, the water-eluting fraction and the It was fractionated into a fraction eluted with ethanol.

なお、前記メタノール可溶画分 51 gから、水溶出画分が 43 g及びメタノール溶出画分が 4. 0 gが得られた。 From 51 g of the methanol-soluble fraction, 43 g of a water-eluting fraction and 4.0 g of a methanol-eluting fraction were obtained.

(e) イオン吸着剤処理後のメタノール可溶画分の分画 (e) Fractionation of methanol-soluble fraction after ion adsorbent treatment

SephadexLH-20 (フアルマシア社製、以下 LH— 20ともい）カラムを用い、ゲルろ過クロマトグラフィーにより、前記（C) で得られたメタノール可溶画分 4. 0 gを、下記のように分画 ·分取した。 Using 4.0 g of Sephadex LH-20 (manufactured by Pharmacia, hereinafter also referred to as LH-20) column, 4.0 g of the methanol-soluble fraction obtained in the above (C) was fractionated by gel filtration chromatography as follows. · Sorted.

目的成分の溶出は、蒸留水を用いて行ない、全体を 8フラクション（F r l〜F r 8) として分取した（前記メタノール可溶画分 4. 0 gを 0. 5 gずつ 5回に分けて分画，分取した。）。 Elution of the target component was performed using distilled water, and the whole was fractionated as 8 fractions (Frl to Fr8). (The above methanol-soluble fraction, 4.0 g, was divided into five 0.5 g portions. And fractionated. ).

表 3に、 LH— 20による分画条件を示す。 Table 3 shows the fractionation conditions using LH-20.

表 3 Table 3

得られた 8フラクションのうち、 F r 7 (図 1参照）について、 ODSカラム（シリカゲル担体に、ォクタデシルシリル基を化学結合した充填剤、島津製作所製）を用いた HPLCにより、成分 A、及び成分 Bを単離 ·分取した。分析条件を表 4 に、分取チャートを図 2に示す。 Of the 8 fractions obtained, Fr 7 (see Fig. 1) was analyzed by HPLC using an ODS column (a packing material in which a octadecylsilyl group was chemically bonded to a silica gel carrier, manufactured by Shimadzu Corporation) to obtain component A, And component B were isolated and fractionated. The analysis conditions are shown in Table 4 and the preparative chart is shown in Figure 2.

表 4

表 4の続き Table 4

Table 4 continued

(f ) 成分 Aの同定 (f) Identification of component A

HP LCで単離 ·分取した成分 A (メタノール溶液）を、質量スペクトル（GC 一 MS) にかけて、ピーク Aに係る化合物（以下化合物 Aという）の分子量及びこの化合物 Aに結合している官能基を推定した。その結果、化合物 Aの分子量は、 2 67と推定した。スペクトルのチャートを図 3に示す。 The component A (methanol solution) isolated and fractionated by HP LC is subjected to mass spectrometry (GC-MS) to determine the molecular weight of the compound related to peak A (hereinafter referred to as compound A) and the functionality bound to compound A. The group was deduced. As a result, the molecular weight of Compound A was estimated to be 267. Figure 3 shows the spectrum chart.

化合物 A (DM SO及び数滴のクロ口ホルムで溶解させたもの）を、核磁気共鳴 ( ^XH-NMR - ¹³C-NMR) にかけた。その結果を図 4 ( ^-NMR) 及び図 5 (¹³C— NMR) に示す。 Compound A (DM SO and which is dissolved in a few drops of black port Holm), nuclear magnetic resonance - were subjected to ^{^{(X H-NMR 13 C-}} NMR). The results are shown in FIG. 4 (^ -NMR) and FIG. 5 ( ^13C- NMR).

図 4から、化合物 Aは、糖類及び芳香環領域の水素のシグナルが見られた。又図 5から、化合物 Aの単素数は 1 0と推定され、糖類及び芳香環領域の炭素のシグナルが見られた。 From FIG. 4, it was found that Compound A showed signals of hydrogen in the saccharide and aromatic ring regions. From Fig. 5, it is estimated that the simple prime number of compound A is 10 and that the saccharides and carbons in the aromatic ring region A signal was seen.

化合物 Aについて、赤外スペクトルを測定した。その結果を図 6に示す。 The infrared spectrum of Compound A was measured. Figure 6 shows the results.

HPLCで得られた化合物 A (エタノールに溶解）について、紫外 '可視スぺクトル（UV) を測定した（Amax 259 nm) 。その結果を図 7に示す。 Ultraviolet-visible spectrum (UV) of compound A (dissolved in ethanol) obtained by HPLC was measured (Amax 259 nm). Figure 7 shows the results.

以上の結果から、化合物 Aは、アデノシン（下式）と同定した。 From the above results, Compound A was identified as adenosine (the following formula).

(g) 成分 Bの同定 (g) Identification of component B

HPLCで単離 ·分取した成分 B (メタノール溶液）を、質量スペクトル（GC 一 MS) にかけて、ピーク Bに係る化合物（以下化合物 Bという）の分子量及びこの化合物 Bに結合している官能基を推定した。その結果、化合物 Bの分子量は、 2 97と推定した。スペクトルのチャートを図 8に示す。 The component B (methanol solution) isolated and separated by HPLC is subjected to mass spectrometry (GC-MS) to determine the molecular weight of the compound related to peak B (hereinafter referred to as compound B) and the functional group bound to compound B. Was estimated. As a result, the molecular weight of Compound B was estimated to be 297. Fig. 8 shows the spectrum chart.

化合物 B (DM S〇及び数滴のクロ'口ホルムで溶解させたもの）を、核磁気共鳴 ( — NMR · ¹³C— NMR) にかけた。その結果を図 9 ( 'H-NMR) 及び図 10 (¹³C— NMR) に示す。 Compound B (dissolved in DMS and a few drops of chloroform) was subjected to nuclear magnetic resonance (— NMR · ¹³ C—NMR). The results are shown in FIG. 9 ('H-NMR) and FIG. 10 ( ^13C- NMR).

図 9から、化合物 Bは、糖類及び芳香環領域の水素のシグナルが見られた。又図 10から、化合物 Bの単素数は 11と推定され、糖類及び芳香環領域の炭素のシグナルが見られた。 From FIG. 9, the compound B showed signals of hydrogen in the saccharide and the aromatic ring region. Also, from FIG. 10, the unit number of compound B was estimated to be 11, and the signals of saccharides and carbon in the aromatic ring region were observed.

化合物 Bについて、赤外スペクトルを測定した。その結果を図 11に示す。 HPLCで得られえこ化合物 B (エタノールに溶解）にづいて、紫外 '可視スぺクトル（UV) を測定した（Amax 2 5 9 nm) 。その結果を図 12に示す。 The infrared spectrum of Compound B was measured. Fig. 11 shows the results. Based on the compound B (dissolved in ethanol) obtained by HPLC, Torr (UV) was measured (Amax 259 nm). Figure 12 shows the results.

以上の結果から、化合物 Bは、 N- hydroxy- N- me thy卜 adenosine (下式）と同定した。 · From the above results, Compound B was identified as N-hydroxy-N-methytriadenosine (the following formula). ·

産業上の利用可能性

Industrial applicability

本願発明によれば、下記の①〜⑨の物質を主成分とするヒスタミン遊離抑制剤を得ることができる。 According to the present invention, a histamine release inhibitor containing the following substances (1) to (4) as main components can be obtained.

②グアノシン ② Guanosine

③シティジン ③ City Jin

④ゥリジン ④ ゥ lysine

⑤アデノシン一リン酸（AMP) ⑤Adenosine monophosphate (AMP)

⑥ァ.デノシン二リン酸（ADP) Dia. Denosine diphosphate (ADP)

⑦アデノシン三リン酸（ATP) ⑦Adenosine triphosphate (ATP)

⑧メシマコブ由 ^:来アデノシン由 Meshimakobu Yuki ^: Adenosine

⑨ N - hydroxy - N - me thyト adenosine ⑨ N-hydroxy-N-me thy de adenosine

⑩メシコブ由来の N-hydroxy- N-methyレ- adenos ine NN-hydroxy-N-methy les-adenos ine

Claims

請求の範囲 The scope of the claims

1. RNA由来のヌクレオシドを含有することを特徴とするヒスタミン遊離抑制剤 1. A histamine release inhibitor containing an RNA-derived nucleoside

2. RNA由来のヌクレオシドが、アデノシンである請求の範囲第 1項記載のヒス夕ミン遊離抑制剤。 2. The hisminamine release inhibitor according to claim 1, wherein the RNA-derived nucleoside is adenosine.

3. メシマコブ菌糸体から得られるアデノシンを使用する請求の範囲第 2項に記載するヒスタミン遊離抑制剤。 3. The histamine release inhibitor according to claim 2, which uses adenosine obtained from Mesimakobu mycelium.

4. RNA由来のヌクレオシドが、グアノシンである請求の範囲第 1項記載のヒス夕ミン遊離抑制剤。 4. The hisminamine release inhibitor according to claim 1, wherein the RNA-derived nucleoside is guanosine.

5. RNA由来のヌクレオシドが、シティジンである請求の範囲第 1項記載のヒス夕ミン遊離抑制剤。 5. The hisminamine release inhibitor according to claim 1, wherein the RNA-derived nucleoside is citin.

6. RNA由来のヌクレオシドが、ゥリディンである請求の範囲第 1項記載のヒス夕ミン遊離抑制剤。 6. The hisminamine release inhibitor according to claim 1, wherein the RNA-derived nucleoside is peridine.

7. アデノシン一リン酸（AMP) を含有することを特徴とするヒスタミン遊離抑制剤。 . 7. A histamine release inhibitor containing adenosine monophosphate (AMP). .

8. アデノシン二リン酸（ADP) を含有することを特徴とするヒスタミン遊離抑制剤。 8. A histamine release inhibitor containing adenosine diphosphate (ADP).

9. アデノシン三リン酸（ATP) を含有することを特徴とするヒスタミン遊離抑制剤。 9. A histamine release inhibitor containing adenosine triphosphate (ATP).

10. N- hydroxy- N-methy卜 adenosineを含有することを特徴とするヒスタミン遊離抑制剤。 10. A histamine release inhibitor containing N-hydroxy-N-methytriadenosine.

11. メシマコブ菌糸体から得られる N- hydroxy - N - methy卜 adenosineを使用する請求の範囲第 10項記載するヒスタミン遊離抑制剤。 11. The histamine release inhibitor according to claim 10, wherein the use of N-hydroxy-N-methytriadenosine obtained from the mycelium of Mesimakobu is described.