WO2004029624A1

WO2004029624A1 - 摂食障害の診断薬および検定方法

Info

Publication number: WO2004029624A1
Application number: PCT/JP2003/012134
Authority: WO
Inventors: Masaomi Iyo; Kenji Hashimoto; Michiko Nakazato; Eiji Shimizu; Hiroki Koizumi
Original assignee: Masaomi Iyo; Kenji Hashimoto; Michiko Nakazato; Eiji Shimizu; Hiroki Koizumi
Priority date: 2002-09-24
Filing date: 2003-09-24
Publication date: 2004-04-08
Also published as: JP4276174B2; CA2500236A1; EP1548435A4; AU2003268661A1; EP1548435B1; CA2500236C; EP1548435A1; US20050244903A1; US7754434B2; JPWO2004029624A1

Abstract

　抗脳由来神経栄養因子抗体を有効成分とする摂食障害の診断薬および血液中の脳由来神経栄養因子の濃度を測定することによる摂食障害の検定方法を提供する。特に、抗脳由来神経栄養因子抗体と標識化抗脳由来神経栄養因子抗体とを用いて患者血液中の脳由来神経栄養因子の濃度を測定することによって摂食障害の診断が容易に行われる。

Description

明細書摂食障害の診断薬および検定方法技術分野

本発明は、摂食障害の診断薬および摂食障害の検定方法に関する。さらに詳しくは抗脳由来神経栄養因子抗体を主成分とすることを特徴とする摂食障害の診断薬、血液中の脳由来神経栄養因子の濃度を測定することを特徴とする摂食障害の検定方法、血液中の脳由来神経栄養因子の濃度を測定することを特徴とする摂食障害治療薬の検定方法、および脳由来神経栄養因子を増加させる化合物からなる摂食障害治療薬に関する。背景技術

摂食障害である神経性無食欲症 (拒食症： anorexia nervosa ( A N) )、および神経性大食症 (bulimia nervosa ( B N) )は、それぞれ女性の 0 . 5〜3 . 7 %および

1 . 1〜4. 2 %が、生涯のうちに罹患する疾患である。男性の罹患率は、女性の約 1 0 %であると言われている。主として、思春期 ·青年期の女性に多く、痩せを希求する心理が著明である。我が国の摂食障害は近年増加しており、 1 9 8 0 年からの 2 0年間に約 1 0倍の増加が見られる。神経性無食欲症の主な症状として、無食欲、やせ、無月経などがあり、神経性無食欲症の特徴は、正常体重の最低限の維持を拒否することである。神経性大食症の主な症状として、「気晴らし食い」と呼ばれる過食行動を頻繁に繰り返す行動、過食直後に嘔吐あるいは下剤を乱用する不適切な代償行動などが見られる。このように両者は全く正反対の病態のように見えるが、神経性無食欲症が数力月後に神経性大食症へと症状変遷したり、逆に、神経性大食症がしばしば神経性無食欲症のような症状を呈することがある。つまり、神経性無食欲症と神経性大食症は全く別の疾患ではなく、相互に移行したり重複したりするような病態であり、その患者は非常に多様でその病像も複雑である。体型と体重への認知の障害は、神経性無食欲症および神経性大食症の本質的な特徴である。例えば、セロトユンは視床下部内側部の摂食停止機構に作用して、特に炭水化物の摂取抑制をする。神経性大食症では高エネルギー食に対する強レヽ嗜好や 1回摂取量の著明な増加を示しており、セロトニン神経系の異常が強く示唆されている。食行動異常においては脳内過程だけでなく、末梢レベルでも摂食調節機構の破綻が認められている。コレシストキエンは末梢性の満腹信号物質で、迷走神経を介して中枢に伝えられ摂食を中止させる。神経性無食欲症ではコレシストキ- ンの食事負荷時の過剰応答が観察され、逆に神経性大食症ではこの食事性応答が消失していると考えられている。またコレシストキニンの中枢系への信号伝達は、セロトユン神経系を介することが動物実験より分かっており、セロトニン神経系の機能異常に関連してこの伝達過程に障害が生じている可能性が指摘されている。神経性無食欲症や神経性大食症などの疾患では、摂食障害以外にも多彩な精神身体症状がある。その原因解明のため、脳脊髄液や血液中の摂食調節物質の動態が調べられているが、多くは摂食異常の結果として 2次的に起こる反応であり、その動態を引き起こすような変化を示すものは限られている。

このような神経性無食欲症や神経性大食症などの摂食障害の診断には、血液や尿などの患者のサンプルを用いた研究が報告されているが、未だに確立されたものは無い。病態の特殊性から早期診断、治療、社会復帰活動、再発予防といった包括的な治療体系の確立が望まれている。摂食障害の治療には、薬物治療、認知行動療法、集団行動療法などが用いられている。薬物治療としては、抗うつ薬などが用いられている（例えば、マサンド， P Sら著、 Selective serotonin - reuptake inhibitors : an update. _N Harvard Rev Psychiatry (1997) 7 : 69 - 84；およびカィャ Wら著、 Serotonin neuronal function and selective serotonin reuptake inhibitor treatment in anorexia and bulimia nervosa.、 Biol Psychiatry (1998) 44： 825-38を参照）。

脳由来神経栄養因子 (以下、 B D N Fと略称する）は、脳内で発見された神経栄養因子の一つであり、脳内神経回路網の形成ゃ努達、さらにはその生存維持に重要な役割を果たしていることが判明している。さらに 1 9 9 0年代後半には、 B D N Fはシナプスの可塑性にも関与し、記憶や学習にも重要な役割を果たしていることが知られており、また神経細胞死に対して神経保護作用も有する事が報告されている。セロトニン取り込み阻害薬などの抗うつ薬の慢性投与により、ラット海馬における BDNFの量が増加することが示唆されており、 BDNFとセロトニン神経系との関係も指摘されている。最近の遺伝子改変動物を用いた研究より、 BDNFは摂食行動にも関与している事が示唆されている（例えば、ライォンズ， WEら著、 Brain-derived neurotrophic factor-deficient mice develop aggressiveness and hyperphagia in conjunction with brain serotonergic abnormalities. , Proc Natl Acad Sci USA (1999) 96: 15239-15244を参照）。しかしながら、摂食障害の患者における BDNFの役割等については報告が無い。神経性無食欲症および神経性大食症は、前述したとおり、近年、急増している疾患であるが、その症状は一見すると相反する病態であり、また多様で複雑であるため、その診断が困難であり、早期に適切な処置を講じることができず、そのことが症状をさらに悪化させる原因になっている。従って、医療の現場から摂食障害の早期に診断するような診断薬、診断方法、治療薬および治療薬の検定方法の開発が望まれている。発明の開示

本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行なった結果、摂食障害の患者の血清中 B D N Fのレベルが、健常者のそれと比較して有意に低下していることを見出し、その違いを利用することにより、抗脳由来神経栄養因子抗体 (以下、「抗 BDNF抗体」という）を用いて摂食障害の診断が可能となることを知った。本発明にかかる知見に基づいて完成されたものである。

すなわち、本発明は下記の態様の発明を提供するものである。

1. 抗 B DN F抗体を主成分とすることを特徴とする摂食障害診断薬。

2. 患者の血液中の B DNFの濃度を測定するための上記 1に記載の摂食障害

3. 抗 B D N F抗体および標識化抗 BDNF抗体を含む上記 1または 2に記載の摂食障害診断薬。

4. 抗 B DN F抗体および標識化剤を主成分とすることを特徴とする摂食障害の診断キット。 5. 患者の血液中の B D N Fの濃度を測定するための上記 4に記載の摂食障害の診断用キット。

6. 抗 B D N F抗体およぴ標識化抗 B D N F抗体を含む上記 4または 5に記載の摂食障害の診断キット。

7. 動物の血液中の BDNFの濃度を測定することを特徴とする摂食障害の検定方法。

8. 抗 BDNF抗体を用いて BDNFの濃度を測定する、上記 7に記載の摂食障害の検定方法。

9. 抗 B D N F抗体および標識化抗 B DNF抗体を用いて BDNFの濃度を測定する上記 7に記載の摂食障害の検定方法。

10. 動物の血液中の BDNFの濃度を測定することを特徴とする摂食障害の治療薬の検定方法。

11. BDNFを増加させる化合物からなる摂食障害の治療薬。

12. BDNFからなる摂食障害の治療薬図面の簡単な説明

第 1図は正常対照（NC)、神経性大食症（BN)および神経性無食欲症（A の患者における血清 BDNF濃度の散布図である。

第 2図は全被験者における血清 B D N F値と血清 BM I値の間の相関関係を示す。

第 3図は全被験者における血清 B D N F値と HD R Sスコアとの間の相関関係を示す。

第 4図はすべての対象における HDRSスコアと B I TEスコアの間の関係を示す。

第 5図は B D N F注射と生理食塩水注射の場合のマウスにおける一日あたりの摂餌量を比較したグラフである。発明を実施するための最良の形態

本発明の摂食障害診断薬、診断キット、摂食障害の検定方法、摂食障害治療薬およびその検定方法について以下に詳細に説明する。

本明細書における用語の意味あるいは定義は以下のとおりである。

「抗脳由来神経栄養因子抗体 (抗 BDNF抗体)」とは、 BDNFを抗原として用いて精製された抗体をいう。該抗体は、 BDNFに結合する能力があればよく、ポリクロ一ナル抗体、モノクローナル抗体を含む。また好ましいものとしては、特異的に BDNFに結合するポリク口ーナル抗体、モノクローナル抗体等が挙げられる。

「標識化抗脳由来神経栄養因子抗体 (標識化抗 BDNF抗体)」とは、抗 BDN F抗体をペルォキシダーゼ、 j3—D—ガラクトシダ一ゼ、アルカリフォスファターゼ、グルコース一 6—リン酸脱水素酵素等の酵素、デルフィユウム等の蛍光標識、放射性同位元素標識または同位元素標識、ピオチン等を結合させ、 BDNF を定量化できるように工夫された抗体をいう。更に、「標識化抗 BDNF抗体」には、ビォチン、 2, 4—ジェトロフエノール等で修飾した抗 BDNF抗体も含まれる。この際には、該標識化抗 BDNF抗体に標識化したアビジン、標識化抗 2， 4ージニトロフエノーノレ抗体を更に用いて定量ィヒできる。

「摂食障害」とは神経性無食欲症および神経性大食症を含み、思春期 .青年期の女性に多く、食行動の重篤な障害である。神経性無食欲症の特徴は、正常体重の最低限の維持を拒否することであり、神経性大食症の特徴は、無茶食いェピソ一ドの繰り返しと、それに付随する自己誘発性嘔吐や下痢■利尿剤■他の薬剤の乱用、絶食、過度な運動などの不適切な代償行動である。体型と体重への認知の障害は、神経性無食欲症および神経性大食症の本質的な特徴である。

本発明による摂食障害の診断は、例えば次のようにして行なうことが出来る。ヒトの血液から血清を調製し、血清中の BDNFの量を種々の方法により定量する。望ましくは BDNFに対して特異性の高い抗体を用いたサンドイッチ EL I SAによって BDNFを検出 -定量する。摂食障害の血清中の B DN Fの濃度が、健常者の値より有意に低いことを利用し、摂食障害を診断する。

具体的な血清中の BDNFを測定する方法としては、例えば

1. ポリスチレン、ナイロン、ガラス、シリコンラバ一、セファロ一ス等の固相に抗 BDNF抗体を固定する工程； 200

6

2. 診断する患者の血清を固相に加える、または接触させる工程；

3. 固相を洗浄する工程；

4. 標識化された抗 BDNF抗体を加える、または接触させる工程；

5. 該標識を用いて BDNFの量を測定する工程；

からなる方法等が挙げられる。

更に、具体的な血清中の BDNFを測定する方法としては、例えば、

1. ポリスチレン、ナイロン、ガラス、シリコンラバ一、セファロース等の固相に抗 BDNF抗体を固定する工程；

3. 固相を洗浄する工程；

4. ピオチンまたは 2， 4ージニトロフエノールで修飾した抗 BDNF抗体を加える、または接触させる工程；

5. 標識化アビジンまたは標識化 2, 4—ジニトロフエノール抗体を加える、または接触させる工程；

6. 該標識を用いて BDNFの量を測定する工程；

からなる方法等が挙げられる。

1. ポリスチレン、ナイロン、ガラス、シリコンラバー、セファロース等の固相に抗 BDNF抗体を固定する工程；

2. 診断する患者の血液を固相に加える、または接触させる工程；

3. 固相を洗净する工程；

4. ビォチンで修飾した抗 BDNF抗体を加える、または接触させる工程；

5. 標識化アビジンを加える、または接触させる工程；

6. 該標識を用いて BDNFの量を測定する工程；

からなる方法等が挙げられる。固相の形状として小球、ゥエル、試験管等が挙げられる。

抗原または EL I S Aのスタンダードとして用いられる BDNFは市販されている力または以下の方法で調製することができる。遺伝子工学的手法を用いる場合、 BDNFをコードする遺伝子を適切なベクターに組み込み、これを適切な宿主に揷入して形質転換し、この形質転換の培養上清から目的とする組換え B D NFを得ることができ、均質な多量の BDNFの生産に好適である。上記宿主細胞は特に限定されず、従来から遺伝子工学的手法で用いられている各種の宿主細胞、例えば大腸菌、枯草菌、酵母、植物または動物細胞を用いることができる。抗 BDNF抗体は、 BDNFを抗原として、ゥサギ、ニヮトリ、シチメンチョゥなどに免疫することにより調製される。標識ィ匕抗 BDNF抗体は、抗 BDNF 抗体をビォチン化試薬や架橋剤付きペルォキシダ一ゼの市販されているキットを用いて反応させ、調製することができる。

本発明方法は、また摂食障害の治療薬の判定にも有用である。すなわち、 BD NFを増加させる作用を有する化合物は、摂食障害の治療薬として有用である可能性がある。また、 BDNFの量が低いモデル動物（マウスやラットなど）は、摂食障害の動物モデルとしても有用である。従って、この検定方法を利用することにより、新しい摂食障害の治療薬のスクリ一二ングも行なうことが可能である。このような方法で見出される治療薬には、非経口的または経口的に投与できる薬物が含まれ得る。摂食障害の治療薬としては、 BDNF自身の他、下記式：

(式中、 R¹は置換されていてもよい複素環基等、 Aは置換されていてもよいヒドロキシ基等、 Bは置換されていてもよい芳香族基、 Xは酸素原子等、 Yは 2価の炭化水素基等を示す）

で示されるァゾール誘導体 (特開平 2001 - 131161)が例示される。

また、下記式：

(式中、 R¹および R ²はそれぞれノ、ロゲン原子であり、 R ³および R ⁴はそれぞれ水素原子、炭素原子数 1〜 5のアルキル基、炭素原子数 1〜 3のアルキルスルフォ-ル基またはァセチルァミノアルキル基である）で表される 5—フエエルピリミジン化合物およびその塩（特開平 8 - 3142) が例示される。

さらに、カテコール誘導体 (Furukawa. Y. , J. Biol. Chem. , 261卷， 6039頁（1986 年）、特開昭 63-83020、特開昭 63- 156751、特開平 2- 53767、特開平 2- 104568、特開平 2- 149561、特開平 3-99046、特開平 3- 83921、特開平 3- 86853、特開平 5 -

32646)、キノン誘導体 (特開平 3- 81218、特開平 4- 330010、特開平 7- 285912)、グルタミン酸誘導体 (特開平 7- 228561)、不飽和脂肪酸誘導体 (特開平 8-143454)、ォィデスマン誘導体 (特開平 8- 73395)、縮環系ォキサゾール誘導体 (特開平 8- 175992)、力ルバゾール誘導体 (特開平 8- 169879)、インドール誘導体（特開平 7 - 118152、特開平 8-239362)、天然物由来のテルペン誘導体（特開平 7- 149633、特開平 8- ³192δ9)、プリン誘導体であるレテプリニム（NeuroTherapeutics社、米国）などが挙げられる。

これらの化合物のうち、 ² -ァミノ-⁵- (², 4 -ジクロ口フエ-ル）ピリミジン (Biochemical Pharmacology 66 (2003) 1019—1023)および 4- (4一クロ口フエ二ル） - 2- (2 -メチノレ- 1H -ィミダゾーノレ - 1 -ィノレ）- 5_ [3 -（2 -メトキシフエノキシ）プロピル] - 1, 3 -ォキサゾール (Chem. Pharra. Bull. 51 (5) 565-573 (2003)が好ましレヽ。これら摂食障害治療薬の正確な投与量および投与計画は、個々の治療対象毎の所要量、治療方法、疾病または必要性の程度、および薬物の種類によって異なり、また当然医師の判断によることが必要である。例えば、 B D N Fの場合について言えば、非経口的投与する場合の投与量、投与回数は症状、年齢、体重、投与形態等によって異なるが、例えば注射剤として皮下または静脈に投与する場合、成人の患者の体重 1 k g、一日当たり約 O . l m g〜約 2 5 0 0 m gの範囲、好ましくは約 l m g〜約 5 0 O m gの範囲から投与量が選択され、例えば噴霧剤として気管に投与する場合、成人の患者の体重 l k g、一日当たり約 0. l m g〜約 2 5 0 O m gの範囲、好ましくは約 1 m g〜約 5 0 0 m gの範囲から投与量が選択される。投与計画としては、連日投与または間欠投与またはその組み合わせがある。経口的投与する場合の投与量、投与回数は症状、年齢、体重、投与形態等によって異なるが、例えば、成人の患者の体重 l k g、一日当たり約 0 . 5 m g 〜約 2 5 0 0 m gの範囲、好ましくは約 1 m g〜約 1 0 0 0 m gの範囲から投与量が選択される。

本発明の方法で得られる摂食障害の治療薬を薬学的に許容しうる非毒性の担体と混和することにより医薬組成物を製造することができる。このような組成物を、非経口投与用 (皮下注射、筋肉注射、または静脈注射)に調製する場合は、特に溶液剤形または懸濁剤形がよく、膣または直腸投与用の場合は、特にクリ一ムまたは坐薬のような半固形型剤形がよく、経鼻腔投与用の場合、特に粉末、鼻用滴剤、またはエア口ゾル剤形がよい。

組成物は一回量投与剤形で投与することができ、また例えばレミントンの製薬科学（マック ·パブリッシンク"■カンパユー、イーストン、 P A、 1 9 7 0年）に記載されているような製薬技術上良く知られているレ、ずれかの方法によつて調製できる。注射用製剤は医薬担体として、例えば、アルブミン等の血漿由来蛋白、グリシン等のァミノ酸、マンニトール等の糖を加えることができる。注射剤形で用いる場合には更に緩衝剤、、溶解補助剤、等張剤等を添加することもできる。また、水溶製剤、凍結乾燥製剤として使用する場合、 «を防ぐために T w e e n 8 0 (登録商標)、 T w e e n 2 0 (登録商標）などの界面活性剤を添加するのが好ましい。また注射剤以外の非経口投与剤形は、蒸留水または生理食塩液、ポリエチレングリコールのようなポリアルキレングリコール、植物起源の油、水素化したナフタレン等を含有してもよい。例えば坐薬のような膣または直腸投与用の製剤は、一般的な賦形剤として例えばポリアキレングリコール、ワセリン、カカオ油脂等を含有する。膣用製剤では、胆汁塩、エチレンジァミン塩、クェン酸塩等の吸収促進剤を含有しても良い。吸入用製剤は固体でも良く、賦形剤として例えばラクトースを含有してもよく、また経鼻腔滴剤は水または油溶液であつてもよい。

実施例

以下に、本発明の実施例を挙げて本発明をさらに具体的にを説明するが、本発明はこれらに限定されない。

実施例 1

( 1 )被験者

後記表 1に示す神経性大食症の女性患者 1 8名（平均年齢 : 2 1 . 6歳 (標準偏差 4.0)、年齢範囲： 16歳〜 34歳)および神経性無食欲症の女性患者 12名 (平均年齢： 19.6歳 (標準偏差 5. 9)、年齢範囲： 14歳〜 34歳)、ならびに同一年齢層の健康者 (平均年齢： 21.6歳 (標準偏差 1.7)、年齢範囲： 20歳〜25歳）も正常対照として被験者に選んだ。神経性大食症または神経性無食欲症のすべての患者は「精神障害の診断と統計マニュアル I V」（Diagnostic and

Statistical Manual of Mental Disorders IV： D SM— I V；ァメリ力精神医学会）に従って診断し、神経性無食欲症の患者は 2つのサブタイプ、制限型 (Restricting Type) (n = 7)_N および無茶食い Z排出型 (Binge-Eating/Purging Type) ( n = 5 )、に分類した。実験対象すベてに対し B I T E (the Bulimic Investigatory Test, Edinburgh)と 17項目ハミルトンうつ病評価尺度（HD R

S) (Br. J. Soc. Clin. Psychol. 6 ： 278-296 (1967))を付した。 B I TEは 3 3項目自己申告性ァンケート（self- report questionnaire)であり、祌経性大食症や無茶食い Z排出型の症状の対象を識別するための多様な設定に利用できるか否かの客観的スクリーニングとしてデザインされている。臨床上有意の限界尺度は症状スコアが 20あるいはそれ以上である（ヘンダーソンら、（1987) A se - rating scale for bulimia. The 'BITE'. Bri J Psychiatry 150： 18 - 24)。 17 項目 HD R Sは抑鬱症候学 (depressive symptomatology)の測定に用いた。体重と身長および肥満度指数（ B M I ： k g Zm 2 )を測定した。神経性無食欲症および神経性大食症の患者の罹患期間はそれぞれ平均 1.8年 (標準偏差 1. 7)および 3.8年 (標準偏差 2. 5)であった。治療の為に投与した抗精神病薬は、神経性大食症の患者にはリスペリドン (risperidone 4mg/0 ； n = l)、フルボキサミン (f luvoxamine、 50_150mgZ曰； n = 4)、ノロキセテン (paroxetine、 2 OmgZ日； n= 1)、トラゾドン（trazodone、 25 m g /日； n = 1 )、および神経性無食欲症の患者にはパロキセチン (paroxetine、 20— 30mgZ日； n=2)、リスペリドン（risperidone lmgノ日； n=l)であった。患者中、

20患者は投薬治療を行っていなかった。

(2)実験方法

被験者の血清検体を採取し、測定まで一 80 °Cで保存した。 B D N Fの血清レベルは BDNF測定キット（プロメガ社、米国）を用い、製造者の指示に従って測定した。すなわち、抗 BDNFモノクロナノレ抗体を 96穴プレートにコーティングし、 4°Cで 18時間インキュベーションした。プレートをブロッキング緩衝液にて室温で 1時間ブロッキング処理した。緩衝液で洗浄した後、希釈した血清 1 O O/z Lを添加した。定量用のスタンダードとして、ヒト BDNF(78— 50 00 p gZmL)を添加したものを用いた。室温で 2時間反応させた後、緩衝液で 5回洗浄し、抗ヒト BDNF抗体を添加し室温で 2時間反応させた。緩衝液で 5回洗浄した後、抗ヮサビペルォキシダ一ゼ標識 I g Y抗体（ 100 μ L)を添加し、室温で 1時間反応させた。次に、緩衝液で 5回洗净した後、 ΤΜΒ溶液（1 00 L)を添加し、室温で 10分間反応させた後、停止液（ 1 Μ塩酸： 100 L)を添加して反応を止め、 30分以内に 450 nm波長での吸光度を自動マイクロプレートリーダー（Em a x、モレキュラーデバイス、米国）で測定した。検体中の BDNFの含量をサンドイッチ型 EL I S A法にて測定し、検量線からその B D N Fの濃度を算出した。

(3)統計分析

データは平均値士標準偏差で示した。 3群の差は一元配置分散分析 (AN OV

A)で解析した。治療方法間の多重比較のため、ボンフエロニ 'ダンテストを行つた。 2群間の統計分析はスチュデント t—テストを用いて行った。変数間の関係はピアソンの積率相関係数で確認した。 0.05以下の； p値は統計的に有意とした。

(4)結果

表 1に被験者の特徴および上記実験結果を示す。

NC AN BN P

(N二 21) (N=12) 18)

年齢 (歳） 21.3 (1.71) 19.6 (5.89) 21.6 (3.97) NS

罹患期間 (年） 1.76 (1.33) 3.72 (2.36)

体童 (kg) 50.8 (4.60) 38.1 (4.55) 50.4 (4.96) <0.0001*⁺

BMI (kg/m²) 20.0 (1.54) 15.3 (1.84) 20.4 (2.09) 〈0.000 r⁺

BDNF(ng/ml) 61.4 (19.5) 24.9 (6.75) 38.4 (15.3) く 0.027*, く 0.000 , <0.0001"

BITE症状尺度 5.86 (5.94) 17.25 (7.45) 23.78 (2.73) 0.003*, 〈0.0001+, <0.000广

BITE重症度尺度 1.90 (3.77) 7.08 (5.55) 12.3 (6.49) 0.011*, く 0.0093+, <0.0001"

17項目 HDRS 7.67 (6.14) 18.25 (6.11) 19.39 (6.03) く 0.000 , く 0.000Γ

NC=正常対照； A=W経性無食欲症； BN=神経性大食症

BMI=肥満度指数； .

BDNF=脳由来神経因子；

BITE=過食症検查試験、ェジンバラ；

17項目 HDRS=17項目ノヽミノレトンうつ病評価尺度

値は平均値 (SD)

NS=有意ではない

=ΑΝと ΒΝ間の比較； ρ+=ΑΝと NC間の比較； ρ^ΒΝと NC間の比較

i )全被験者における血清 B D N Fの濃度

正常対照（N C )、神経性大食症（ B N)およ申経性無食欲症（AN)の被験者における血清 B D N F濃度の散布状態を第 1図に示す。

一元 ANOVAは 3群間の有意差（F=22. 33 [2, 48] ， pく 0.000 1 )を示し、ボンフエロニ 'ダンテストは、正常対照での B D N F血清レベル（平均値： 61.4n g/m 1 [標準偏差： 19. 5] )は BN患者 (平均値： 38.4 n g/ml [標準偏差： 15. 3] ， p < 0.0001 )や AN患者 (平均値： 24. 9 n g/ml [標準偏差： 6.75]， p < 0.0001 )よりも有意に高いことが判明した。 B N患者の B D N F血清レベルは有意に（ p = 0.027 ) AN患者より大きかった。 3群間の年齢による差は見られなかった（表 1)。無茶食い Z排出型 AN患者（n = 5)の BDNF血清レベル（平均値： 27.82n gZml [標準偏差： 6.76] )は制限型 AN患者（ n = 7 )の B D N F血清レベル (平均値： 22.83 n g/ml [標準偏差： 6.39] )とは有意に違わなかった（スチュデント t—テスト、 p = 0.222)。すべての群（n= 51)を総合して、血清 BD NF値と年齢間に有意な相関（r =0.079， p = 0. 585 )はなかった。すべての患者（n = 30)において、血清 BDNF値と罹患期間の間に有意な相関（r = 0.04, p = 0.836)はなかった。

i i)血清 BDNFと血清 BMI

全被験者の血清 B D N F値と血清 B M I値の相関関係を第 2図に示す。

一元 ANOVAは 3群間（F= 32.76 [2， 48] , pく 0.0001)に有意な差を示し、ボンフエロニ ·ダンテストは正常対照の BMI値 (平均値： 20. 01 k g/m2 [標準偏差： 1. 54] )が AN患者の値 (平均値： 15. 33 k g /m2 [標準偏差： 1.84] )に比べて有意に高いこと、しかし正常対照と BN 患者 (平均値： 20.36 k g Zm 2 [標準偏差： 2.09] )の間には有意な差はないことを示した。すべての群（n= 51)を総合して、血清 BDNF値と BMI の間に有意な正相関（r = 0.378， p = 0.006)があった（第 2図参照)。さらに、血清 BDNF値と BMIの間にも有意な正相関（r =0. 396、 p = 0. 030)がすべての患者（n = 30)で見られた。しかしながら、すべての群（n = 51)を総合して、 BMIと年齢間には有意な相間（r =— 0.044， p = 0. 7 61)はなかった。したがって、未投薬患者の血清 BDNF値は投薬治療された AN患者 (スチュデント t—テスト、 p = 0.222)および投薬治療された BN 患者 (スチュデント t一テスト、 p = 0.230)と違いはなかったことが判明した。

iii)血清 BDNF値と臨床評価尺度の比較

iii-l)B I TEと 17項目 HDRS

表 1に示す 3群の B I TEと 17項目 HDRSスコアにみられるように、一元 ANOVAは 3群間の有意差（F= 53.30 [2，48] , pく 0.0001)を示し、ボンフエロニ ·ダンテストは正常対照の B I TE値 (平均値 : 5.86 [標準偏差： 5.94] )は AN患者の値 (平均値： 17. 25 [標準偏差 : 7.45] ) や BN患者の値 (平均値 : 23.78 [標準偏差： 2. 73] )に比べて有意に低いこと（pく 0.0001)を示した。 BN患者の B I TEスコアは AN患者の値と比べて有意に高かった（p = 0.003)。すべての群（n = 51)を総合して、 B I TEスコアと年齢間に有意な相関はなかった（r=—0.078， p = 0. 58 5)。

さらに、全被験者における B I TEスコアと HDRS間の相関関係を第 4図に示す。第 4図に示されるように、有意な正相関（r = 0.782, p<0.000 1)があった。

iii一 2)血清 BDNFと 17項目 HDRSスコア

全被験者の血清 BDNF値と、 HDRSスコアとの相関関係を第 3図に示す。すべての被験者（n= 51)において HDRSと血清 BDNF値の間に有意な負相関（r=— 0.447， p = 0.001)が認められた。

一元 ANOVAは 3群間の有意な差異（F= 21.23 [2, 48] , p<0.0 001)を示し、ボンフエロニ 'ダンテストは、正常対照の 17項目 HRDS値 (平均値： 7.67 [標準偏差： 6. 14] )が、 AN患者の値 (平均値： 18. 25

[標準偏差 : 6. 11] )や BN患者の値 (平均値： 19. 39 [標準偏差： 6.0 3] )と比べて有意（p<0.0001)に高かった。

上記実験結果に見られるように、摂食障害（ANおよび BN)の女性患者の血清 BDN F値は同一年齢層の女性正常対照の値と比べて有意に減少しており、また A N患者の血清 B D N F値は B N患者の値と比べて有意に低、ことがわかつた。血清 BDNF値は HDRSスコア、抑鬱症状の測定、と反比例して相関していることも明白である。また、すべての被験者において、血清 BDNF値と BMI値の間に有意な相関があった。しかしながら、正常 BMI値である BN患者の血清 BD N F値は正常対照の値に比べて有意に低く、これは低下した血清 B D N F値は減少した BM I値によるものではないことを示唆している。総合すれば、減少した血清 BDNF値は摂食障害の病態生理学に寄与しているものと考えられる。摂食障害の主たる行動上の異常は摂食量の調節における機能不全、例えば制限、過食、排出である。上記実験の摂食障害の患者はその BMI値と B I TEスコアで代表される異常な行動を示した。上記実験において、 BMIと B I TEに対する BDNF値に関して、 BNと ANの間に差異があつたが、それは動物実験では予測出来なかった。低下した BDNF値は、無茶食いおよび排出行動および摂食障害の体重調節における維持機能を伴うことが可能である。一方、体重が増加すると、彼らは往々にして不安になり、過剰反応する。よって、体重の減少は原因ではなく低下した B D N F値に伴う摂食異常行動の結果である。

要するに、本実験により、 BDNFは摂食障害（ANおよび BN)の病態生理学において極めて重要な役割を果たし、血液 B DNFは摂食障害の生物学的マーカ一として有用であろう。

実施例 2

20週齢の雄性の BDNF (+/— )ヘテロマウス（米国ジャクソン社より購入したマウスをもとに千葉大学にて自家繁殖した）を使用した。 1匹にリコンビナントヒト BDNF (4 Omg/k g、 0.3mlの生贪に溶解）を投与し、もう 1匹に生理食塩水 (0.3ml) を 1日 1回 5日間皮下注射し、 24時間の摂餌量をマウス摂餌量測定装置（メルクエスト社、富山）を用いて測定した。その結果を第 5図に示す。

第 5図に示すように、 BDNF (+Z—）へテロマウス（BDNFの量は野生型の約 50 %)に B D N Fを投与したマウスは、生理食塩水を投与したマウスと比較して、一日あたりの摂餌量が抑制されることが分かった。

本結果より、 BDNFの投与により、 BDNF(+Z—）ヘテロマウスの異常な摂餌量が減少することが判った。すなわち BDNFを補充することにより、異常な摂食行動が改善されることが示唆された。このように BDNF、 BDNFの誘導体や BDNFを増加させる作用を有する薬剤により、摂食障害患者の異常な摂餌量の摂取 (過食など）が抑制され、摂食障害の治療効果が期待できる。さらには、 B D N F遺伝子治療により、摂食障害の患者の新しい治療法を提供することが予想される。産業上の利用可能性

抗 BDNF抗体を有効成分とする摂食障害の診断薬であって、該抗体を用いて血液中の BDNFを測定することによって、摂食障害が診断される。特に、抗 B DNF抗体と標識化抗 BDNF抗体とを用いて患者血液中の B D N Fの濃度を測定することによつて該診断が容易に行われる。

Claims

請求の範囲

1 . 抗脳由来神経栄養因子抗体を主成分とすることを特徴とする摂食障害診断薬。

2. 患者の血液中の脳由来神経栄養因子の濃度を測定するための請求項 1に記

3. 抗脳由来神経栄養因子抗体および標識化抗脳由来神経栄養因子抗体を含む請求項 1または 2に記載の摂食障害診断薬。

4. 抗脳由来神経栄養因子抗体および標識化剤を主成分とすることを特徴とする摂食障害の診断キット。

5. 患者の血液中の脳由来神経栄養因子の濃度を測定するための請求項 4に記載の摂食障害の診断用キット。

6. 抗脳由来神経栄養因子抗体および標識化抗脳由来神経栄養因子抗体を含む請求項 4または 5に記載の摂食障害の診断キット。

7. 動物の血液中の脳由来神経栄養因子の濃度を測定することを特徴とする摂食障害の検定方法。

8. 抗脳由来神経栄養因子抗体を用いて脳由来神経栄養因子の濃度を測定する請求項 7に記載の摂食障害の検定方法。

9. 抗脳由来神経栄養因子抗体および標識化抗脳由来神経栄養因子抗体を用いて脳由来神経栄養因子の濃度を測定する請求項 7に記載の摂食障害の検定方法。

1 0. 動物の血液中の脳由来神経栄養因子の濃度を測定する摂食障害の治療薬の検定方法。

1 1 . 脳由来神経栄養因子を増加させる化合物からなる摂食障害の治療薬。

1 2 . 脳由来神経栄養因子からなる摂食障害の治療薬。