WO2004006950A2 - Use of cd152 for treating autoimmune diseases and inflammations - Google Patents

Abstract

Disclosed is the use of CD152, preferably CD152+ T cells, for treating autoimmune diseases and inflammations, particularly diseases associated with rheumatism.

Description

Verwendung von CD152 zur Behandlung von Autoimmunkrankheiten und EntzündungenUse of CD152 for the treatment of autoimmune diseases and inflammation

Die Erfindung betrifft die Verwendung von inhibitorischen Korezeptoren auf T Zellen, PD-1, BTLA und CD152, insbesondere von CD152 oder CTLA-4The invention relates to the use of inhibitory coreceptors on T cells, PD-1, BTLA and CD152, in particular CD152 or CTLA-4

(cytotoxic T lymphocyte-associäted antigen) zur(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen) for

Behandlung von Autoimmunkrankheiten, chronischenTreatment of autoimmune diseases, chronic

Entzündungen und unerwünschten Immunantworten.Inflammation and unwanted immune responses.

Autoimmunkrankheiten oder Autoaggressionskrankheiten sind im engeren Sinne Erkrankungen, bei denen durch Autoimmunisierung gegen körpereigene Substanzen gerichtete Autoantikörper beziehungsweise spezifisch sensibilisierte Lymphocyten auftreten, die in derIn the narrower sense, autoimmune diseases or autoaggressive diseases are diseases in which autoantibodies directed against the body's own substances or specifically sensitized lymphocytes occur in the

Pathogenese eine wesentliche Rolle spielen. Die Ursache der Autoimmunisierung ist die Aufhebung der gegenüber körpereigenen Geweben bestehenden Immuntoleranz infolge von Störungen der Selbst- Erkennung beziehungsweise der Kontrolle und Regulationsmechanismen des Immunsystems .Pathogenesis play an essential role. The cause of autoimmunization is the abolition of the immune tolerance to the body's own tissues as a result of disorders of self-recognition or the control and regulation mechanisms of the immune system.

Die Autoimmunkrankheiten können in organspezifische, nicht-organspezifische und Misch- oder Übergangsformen eingeteilt werden. OrganspezifischeThe autoimmune diseases can be divided into organ-specific, non-organ-specific and mixed or transitional forms. organ-specific

Autoimmunkrankheiten betreffen beispielsweise die Schilddrüse (z.B. Hashimoto-Thyreoiditis) , den Magen (z.B. perniziöse Anämie) oder den Pankreas (z.B. juveniler Diabetis mellitus) . Nicht-organspezifische Autoimmunkrankheiten betreffen z.B. die Gelenke (z.B. rheumatoide Arthritis) oder die Muskeln (z.B. Dermatomyositis) . Misch- oder Übergangsformen der Autoimmunkrankheiten sind unter anderem die Werlhof- Krankheit, das Goodpasture-Syndrom oder die autoimmunhämolytische Anämie .Autoimmune diseases affect, for example, the thyroid (e.g. Hashimoto's thyroiditis), the stomach (e.g. pernicious anemia) or the pancreas (e.g. juvenile diabetes mellitus). Non-organ-specific autoimmune diseases affect, for example, the joints (e.g. rheumatoid arthritis) or the muscles (e.g. dermatomyositis). Mixed or transitional forms of autoimmune diseases include Werlhof disease, Goodpasture syndrome or autoimmune hemolytic anemia.

Autoimmunkrankheiten wie auch Entzündungen, insbesondere chronische, werden vor allem durch die Methoden der Immunserologie diagnostiziert. Therapiert werden diese Krankheiten bisher durch Lokaltherapien wie der Gabe von Kortikosteroiden oder einer allgemeinen Wundbehandlung beziehungsweise durch eine immunmodulierende Therapie mit Immunoglobulinen, Antiphlogistika, Cyclosporin oder Methotrexat . Bei organspezifischenAutoimmune diseases as well as inflammations, especially chronic ones, are diagnosed primarily by the methods of immune serology. So far, these diseases have been treated by local therapies such as the administration of corticosteroids or general wound treatment or by immunomodulating therapy with immunoglobulins, anti-inflammatory drugs, cyclosporin or methotrexate. For organ-specific

Autoimmunerkrankungen ist häufig eine Substitutionsbehandlung, gegebenenfalls eine Transplantation, erforderlich. Sofern die Krankheit sich im Anfangsstadium befindet, ist es möglich, die durch die Autoimmun-Läsionen geschädigten Organe in ihrer Funktion dergestalt zu substituieren, dass Hormone gegeben werden; so wird bei einer Schilddrüsenunterfunktion das fehlende Schilddrüsenhormon mit Thyroxin substituiert .Autoimmune diseases often require substitution treatment, possibly a transplant. If the disease is in its early stages, it is possible to replace the function of the organs damaged by the autoimmune lesions in such a way that hormones are given; In the case of hypothyroidism, the missing thyroid hormone is replaced with thyroxine.

Die bekannten Verfahren und Verwendungen bestimmter Arzneimittel zur Behandlung von Autoimmunkrankheiten und chronischer Entzündungen weisen mehrere Nachteile auf. Bei der Gabe von substituierten Hormonen o.a. werden lediglich die Symptome therapiert, ohne dass sich die ^"Konstitution des Organs verbessert. Bei einer Gabe von bekannten Substanzen, die die Immunantwort allgemein unterdrücken - wie z.B. Cyclosporin - wird das gesamte Immunsystem supprimiert, was nachteilige Folgen wie die Zunahme von bösartigen Erkrankungen zur Folge haben kann. Ein weiterer Nachteil der bekannten Mittel und ihrer Verwendung ist, dass sie häufig nur sehr spezifisch eingesetzt werden können. Die Radiojodtherapie, bei der radioaktives Jod verabreicht wird, kann nur bei der Behandlung von Morbus Basodow eingesetzt werden. Eine Vitamin B₁₂-Gabe ist fast ausschließlich bei der atrophischen Gastritis sinnvoll . Die Verwendung von Immunspressiva, sofern sie nicht nahezu das gesamte Immunsystem herunter regulieren, ist oft nur selektiv für bestimmte Organe sinnvoll .The known methods and uses of certain drugs for the treatment of autoimmune diseases and chronic inflammation have several disadvantages. When giving substituted hormones or the like only the symptoms are treated, without the ^" constitution of the organ improving. With the administration of known substances that suppress the immune response in general - such as cyclosporin - the entire immune system is suppressed, which has disadvantageous consequences such as the increase in malignant diseases Another disadvantage of the known agents and their use is that they can often only be used very specifically. Radioiodine therapy, in which radioactive iodine is administered, can only be used in the treatment of Basodow's disease. A vitamin B ₁₂ - Administration is almost exclusively useful for atrophic gastritis, and the use of immunosuppressive drugs, unless they regulate almost the entire immune system, is often only selective for certain organs.

Der Erfindung liegt . daher die Aufgabe zugrunde, Mittel bereitzustellen, die für die effiziente Behandlung von Autoimmunerkrankungen, Entzündungen und unerwünschten Immunantworten verwendet werden können.The invention lies. therefore the task of providing means that can be used for the efficient treatment of autoimmune diseases, inflammation and unwanted immune responses.

Die Erfindung löst diese Aufgabe durch die Verwendung von CD152 zur Behandlung von Autoimmunerkrankungen und Entzündungen (Fig.e 1-9) .The invention solves this problem by using CD152 for the treatment of autoimmune diseases and inflammation (Fig.e 1-9).

CD152 oder der B7-Rezeptor CTLA-4 ist ein Gegenspieler zu dem CD28-B7-Rezeptormolekül und nimmt daher eine "Master Switch-Funktion" im immunologischen Geschehen der T-Zeil-Aktivierung und -Proliferation ein. Weitere wichtige Moleküle, die die Stimulation und Aktivierung von T Zellen gegensteuern, d.h. inhibieren, sind PD-1 (oder Programmed cell death 1) und BTLA (oder B and T lymphocyte attenuator) , die von T Zellen exprimiert werden können. BTLA ist vor allem auf Thl-Zellen exprimiert. BTLA defiziente T Zellen zeigen vermehrte Zellteilung.CD152 or the B7 receptor CTLA-4 is an opponent to the CD28-B7 receptor molecule and therefore takes on a "master switch function" in the immunological process of T-cell activation and Proliferation. Other important molecules that counteract, ie inhibit, the stimulation and activation of T cells are PD-1 (or programmed cell death 1) and BTLA (or B and T lymphocyte attenuator), which can be expressed by T cells. BTLA is mainly expressed on Thl cells. BTLA deficient T cells show increased cell division.

Die meisten Immunreaktionen des spezifischen Immunsystems sind abhängig von einer T-Zell- Aktivierung. Dabei erfordert jegliche Aktivierung dieser Zellen notwendig mindestens zwei Signale, die von der antigenprasentierenden Zelle übermittelt werden müssen. Das erste erfolgt über die Bindung des auf einem MHC-Molekül präsentierten Antigens an einen spezifischen T-Zell-Rezeptor. Das zweite - die so genannte Kostimulation - resultiert aus einer zweiten Kontaktaufnahme der beiden beteiligten Zellen über das B7-Molekül auf der antigenprasentierenden Zelle und CD28 - einem B7-Rezeptor - auf der T-Zelle.Most immune responses in the specific immune system are dependent on T cell activation. Any activation of these cells necessarily requires at least two signals, which must be transmitted by the antigen-presenting cell. The first is through the binding of the antigen presented on an MHC molecule to a specific T cell receptor. The second - the so-called costimulation - results from a second contact between the two cells involved via the B7 molecule on the antigen-presenting cell and CD28 - a B7 receptor - on the T cell.

CTLA-4 oder CD152 ist ebenfalls ein B7-Rezeptormolekül und gleichzeitig ein direkter Gegenspieler zu CD28. Es ist ein für die Lymphozyten spezifischer Marker, der durch Aktivierung der Zelle auf der Oberfläche exprimiert und intrazellulär akkumuliert wird. Durch die 20fach höhere Affinität zu B7 - verglichen mit CD28 - verhindert es größtenteils die absolut notwendige Kostimulation.CTLA-4 or CD152 is also a B7 receptor molecule and at the same time a direct opponent to CD28. It is a lymphocyte-specific marker that is expressed by cell activation on the surface and accumulated intracellularly. Due to the 20-fold higher affinity for B7 - compared to CD28 - it largely prevents the absolutely necessary costimulation.

Insgesamt werden die Zellen so weniger empfänglich für die Stimulation der antigenprasentierenden Zellen, produzieren weniger IL-2Overall, the cells become less susceptible to the stimulation of the antigen-presenting Cells that produce less IL-2

("Lymphozytenwachstumsfaktor") und verharren in einer("Lymphocyte growth factor") and remain in one

Art anergischem Zustand. CD152 inhibiert durchKind of anergic condition. CD152 inhibited by

Kompetition mit CD28 um den Liganden B7, aber auch durch direktes Signalling' des Moleküls CD152.Competition with CD28 for ligand B7, but also through direct signaling of the CD152 molecule.

Die "Master-Switch" -Funktion von CD152 resultiert aus der Steuerung der Immunantwort : Hyperergie - Normergie - Anergie . Mäuse ohne genetische Information für CD152 entwickeln sehr rasch eine lymphoproliferative Erkrankung. Es gibt Hinweise auf einen Zusammenhang zwischen dem Verlauf von Infektionskrankheiten und Expression von CTLA-4, beispielsweise wird die HIV-Infektion durch CD152 beeinflusst. So ist bekannt, dass insbesondere die T Zellen von HIV-Patienten eine erhöhte Expression von CTLA-4 aufweisen. Daneben besteht auch ein deutlicher Zusammenhang mit der Chemokinrezeptorexpression und damit der Ausbreitung der Infektion im Organismus. Es gab daher Überlegungen, den Level von CD152 zu senken oder die Wechselwirkung mit CD152 mit seinen Liganden zu blockieren, um Krankheitsverläufe positiv zu beeinflussen, z.B. bei bakterieller Sepsis. Auf Grund der Offenbarung der erfindungsgemäßen Lehre erkennt der Fachmann, dass die erfindungsgemäße Verwendung von CD152, bevorzugt CD152+ T Zellen oder von PD-1 beziehungsweise BTLA von einer Verwendung von CD152Ig (CTLA-4Ig) abzugrenzen ist. Im Sinne der Erfindung verhindern z.B. die CD152+ T Zellen die Aktivierung und Stimulation von anderen, bevorzugt inflammatorischen T Zellen; sie inhibieren die Aktivierung, Zytokinsekretion, Proliferation und/oder die Migration. Durch das erfindungsgemäße abschalten der anderen, bevorzugt inflammatorischen T Zellen, durch die CD 152+ T Zellen werden keine bzw. weniger inflammatorische Zytokine produziert, die Zellteilung wird reduziert und die Entzündung gestoppt. Das Abschalten im Sinne der Erfindung betrifft alle biologischen oder chemischen Vorgänge, die dazu führen können, dass andere T Zellen eine geringere Aktivität aufweisen. Ein solcher Vorgang ist von einem Blockieren eines CD 152-Rezeptors durch CTLA- 41g verschieden.The "master switch" function of CD152 results from the control of the immune response: hyperergy - normergy - anergy. Mice without genetic information for CD152 develop lymphoproliferative disease very quickly. There is evidence of a connection between the course of infectious diseases and the expression of CTLA-4, for example HIV infection is influenced by CD152. It is known that, in particular, the T cells of HIV patients have an increased expression of CTLA-4. There is also a clear connection with chemokine receptor expression and thus the spread of the infection in the organism. There were therefore considerations to lower the level of CD152 or to block the interaction with CD152 with its ligands in order to have a positive influence on the course of the disease, for example in the case of bacterial sepsis. On the basis of the disclosure of the teaching according to the invention, the person skilled in the art recognizes that the use according to the invention of CD152, preferably CD152 + T cells or of PD-1 or BTLA is to be distinguished from the use of CD152Ig (CTLA-4Ig). For the purposes of the invention, for example, the CD152 + T cells prevent the activation and stimulation of other, preferably inflammatory, T cells; they inhibit activation, cytokine secretion, proliferation and / or the migration. By switching off the other, preferably inflammatory, T cells according to the invention, the CD 152+ T cells produce no or less inflammatory cytokines, the cell division is reduced and the inflammation is stopped. Switching off in the sense of the invention relates to all biological or chemical processes which can lead to other T cells having a lower activity. Such an operation is different from blocking a CD 152 receptor by CTLA-41g.

Fusionsproteine aus CTLA-4 und dem IgG-Fusionsteil werden derzeit in der Therapie eingesetzt. Hierbei handelt es sich aber um eine Blockade des Liganden B7, so dass sowohl CD28-Kostimulation, als auch CD152-Signale verhindert werden. Dies bedeutet, dass die T Zelle einfach nur nicht nicht stimuliert wird. Die Blockade von B7 durch CD152Ig und die damit verhinderte Kostimulation der T Zellen sind von der erfindungsgemäßen Lehre nicht erfaßt.Fusion proteins from CTLA-4 and the IgG fusion part are currently used in therapy. However, this is a blockade of ligand B7, so that both CD28 costimulation and CD152 signals are prevented. This means that the T cell just isn't not stimulated. The blockage of B7 by CD152Ig and the thus prevented costimulation of the T cells are not covered by the teaching according to the invention.

Der Erfindung liegt also die überraschende Lehre zugrunde, dass durch die Gabe von CD152 Autoimmunerkrankungen oder Entzündungen, insbesondere chronische, behandelt werden können (Fig. 1-9) . Die Gabe von CD152 kann hierbei direkt erfolgen oder so, dass Zellen verwendet werden, auf oder in denen CD152 (Fig. 9) vorkommt. Das gleiche gilt für die Moleküle PD-1 und BTLA. Selbstverständlich ist es auch möglich, dass PD-1, BTLA, aber im besonderen CD152 oder die CD152 umfassenden Zellen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Autoimmunkrankheiten oder Entzündungen und unerwünschten Immunantworten verwendet werden.The invention is therefore based on the surprising teaching that autoimmune diseases or inflammations, in particular chronic ones, can be treated by the administration of CD152 (FIGS. 1-9). CD152 can be administered directly or in such a way that cells are used on or in which CD152 (FIG. 9) occurs. The same applies to the molecules PD-1 and BTLA. Of course, it is also possible for PD-1, BTLA, but in particular CD152 or the cells comprising CD152 to be produced a medicine used to treat autoimmune diseases or inflammation and unwanted immune responses.

Bei chronischen Entzündungen oder einem erheblichen Teil der Autoimmunkrankungen werden T-Zellen, die eigentlich durch regulierende Mechanismen in ihrer Aktivität begrenzt werden sollten, permanent aktiviert. Dies hält den Entzündungsprozess aufrecht. Mit der erfindungsgemäßen Verwendung von CD152 ist es erstmals möglich, diesen Prozess der Entzündung oder Autoimmunität spezifisch zu vermindern oder abzuschalten.In chronic inflammation or a significant part of autoimmune diseases, T cells, which should be limited in their activity by regulating mechanisms, are permanently activated. This maintains the inflammatory process. With the use of CD152 according to the invention, it is possible for the first time to specifically reduce or switch off this process of inflammation or autoimmunity.

Die Verwendung von PDl oder BTLA kann zunächst in vitro vorbereitet werden oder sofort in vivo im Patienten erfolgen. Beispielsweise ist es möglich, PD-1 oder BTLA exprimierte Zellen zu verwenden und in den Patienten einzubringen, die zuvor außerhalb des Patienten generiert worden sind. Die Zellen können vom Entzündungsherd des Patienten selbst entnommen, isoliert und vermehrt werden, um sie zu verwenden oder von einer anderen Quelle stammen; beispielsweise können es immunkompetente Zellen, wie inflammatorische Zellen, sein; die so behandelt werden, dass PDl oder/und BTLA auf ihnen induziert oder in sie transfiziert wird. Es ist selbstverständlich auch möglich, in vivo einen Kontext bereitzustellen, der zu einer Expansion von PD-1 und/oder BTLA^1" Zellen führt oder zu einer Induktion von CD152. Die Induktion von CD152 auf T Zellen erfolgt insbesondere mit TRAIL, TGFb, IL-10, Cystation, Vitamin D und seine Derivate, IL-15 oder anti-PD-1 Antikörpern.The use of PDl or BTLA can first be prepared in vitro or immediately in vivo in the patient. For example, it is possible to use PD-1 or BTLA-expressed cells and to introduce them into the patient that were previously generated outside the patient. The cells can be harvested from the patient's focus of inflammation, isolated, and multiplied for use or from another source; for example, it can be immunocompetent cells, such as inflammatory cells; which are treated in such a way that PD1 or / and BTLA are induced on them or transfected into them. It is of course also possible to provide a context in vivo which leads to an expansion of PD-1 and / or BTLA ^{1 "} cells or to an induction of CD152. The induction of CD152 on T cells takes place in particular with TRAIL, TGFb, IL -10, Cystation, vitamin D and its derivatives, IL-15 or anti-PD-1 antibodies.

Die Verwendung von CD152 kann zunächst in vitro vorbereitet werden oder sofort in vivo im Patienten erfolgen (Fig. 9) . Beispielsweise ist es möglich, CD152 exprimierte Zellen zu verwenden und in den Patienten einzubringen, die zuvor außerhalb des Patienten generiert worden sind. Die Zellen können vom Entzündungsherd des Patienten selbst entnommen, isoliert und vermehrt werden, um sie zu verwenden oder von einer anderen Quelle stammen; beispielsweise können es immunkompetente Zellen, wie inflammatorische Zellen, sein; sie so behandelt werden, dass CD152 auf ihnen induziert oder in sie transfiziert wird. Es ist selbstverständlich auch möglich, in vivo einen Kontext bereitzustellen, der zu einer Expansion von CD152⁺ Zellen führt oder zu einer Induktion von„.CD152. Die Induktion von CD152 auf T Zellen erfolgt insbesondere mit TRAIL, TGFb, IL-10, Cystation, VitaminD und seinen Derivaten, Statine, IL-15 oder anti-PD-1 Antikörpern.The use of CD152 can first be prepared in vitro or immediately in vivo in the patient (FIG. 9). For example, it is possible to use CD152-expressed cells and to introduce them into the patient, which were previously generated outside the patient. The cells can be harvested from the patient's focus of inflammation, isolated, and multiplied for use or from another source; for example, it can be immunocompetent cells, such as inflammatory cells; they are treated so that CD152 is induced on them or transfected into them. It is of course also possible to provide a context in vivo which leads to an expansion of CD152 ⁺ cells or to an induction of “.CD152. The induction of CD152 on T cells takes place in particular with TRAIL, TGFb, IL-10, Cystation, VitaminD and its derivatives, statins, IL-15 or anti-PD-1 antibodies.

Es ist beispielsweise auch möglich, CD152⁺-T Zellen aus bereits laufenden Immunantworten zu isolieren, um sie nach einer in vitro Anreicherung in den Patienten zurückzugeben (Fig. 1,2,4 und 5). Hierbei können autologe T Zellen alleine oder im Verbund mit anderen Zellen in vitro stimuliert werden oder ex vivo einem Entzündungsherd am Patienten entnommen werden, dann in vitro angereichert und dem Patienten zurückgegeben werden. In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist die Autoimmunkrankheit oder Entzündung, insbesondere chronische Entzündung, oder auch chronische Immunantwort eine aήtiglomeruläre Basalmembrankrankheit, Autoimmunkrankheiten des Nervensystems, ein systemischer Lupus erythematodes, eine Addison-Krankheit, ein Antiphospholipid-Syndrom, eine IgA-Glomerulonephritis, ein Goodpasture-Syndrom, ^' ein Lambert-Eaton-Myasthenie-Syndrom, ein bullöses Pemphigoid, eine thrombozytopenische, idiopathische Purpura, ein Autoimmun-Thyreoiditis, eine rheumatoide Arthritis, ein insulinabhängiger Diabetes mellitus, ein Pemphigus, eine entzündliche Darmerkrankung, eine Kollagenose, eine Entzündung, eine unerwünschte Immunreaktion wie Sepsis, eine autoimmunhämolytische Anämie, ein Dermatitis herpetiformis Duhring, eine membranöse Glomerulonephritis, eine Graves-Krankheit, eine sympathische Ophthalmie.,.. . eine Autoimmun-Polyendokrinopathien und/oder eine Reiter-It is also possible, for example, to isolate CD152 ⁺ T cells from immune responses that are already running in order to return them to the patient after in vitro enrichment (FIGS. 1, 2, 4 and 5). Autologous T cells can be stimulated in vitro alone or in combination with other cells or taken ex vivo from an inflammation site on the patient, then enriched in vitro and returned to the patient. In a preferred embodiment of the invention, the autoimmune disease or inflammation, in particular chronic inflammation, or also chronic immune response, is an atiglomerular basement membrane disease, autoimmune diseases of the nervous system, a systemic lupus erythematosus, an Addison's disease, an antiphospholipid syndrome, an IgA glomerulononephritis, a good Syndrome, ^' a Lambert-Eaton myasthenia syndrome, a bullous pemphigoid, a thrombocytopenic, idiopathic purpura, an autoimmune thyroiditis, a rheumatoid arthritis, an insulin-dependent diabetes mellitus, a pemphigus, an inflammatory bowel disease, an inflammation, a collagen an undesirable immune reaction such as sepsis, autoimmune hemolytic anemia, dermatitis herpetiformis Duhring, membranous glomerulonephritis, Graves disease, sympathetic ophthalmia.... an autoimmune polyendocrinopathy and / or an equestrian

Krankheit, besonders multiple Sklerose und Autoimmunthrombozytopenie . Und besonders bevorzugt handelt es sich bei der Krankheit oder Entzündung um eine mit Rheuma assoziierte Krankheit, insbesondere die rheumatische Arthritis. Bevorzugt ist weiterhin die Behandlung von entzündlichen Darmerkrankungen wie Morbus Crohn und/oder Colitis Ulcerosa, von Kollagenosen wie Sklerodomie und/oder Sjörgens Syndrom, von Entzündungen wie chronischer Hepatitis C und/oder von Krankheiten des rheumatischenDisease, especially multiple sclerosis and autoimmune thrombocytopenia. And particularly preferably, the disease or inflammation is a disease associated with rheumatism, in particular rheumatoid arthritis. Preference is furthermore given to the treatment of inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and / or ulcerative colitis, of collagenoses such as sclerodomy and / or Sjörgen's syndrome, of inflammations such as chronic hepatitis C and / or of rheumatic diseases

Formenkreises wie Lupus erythematodes, Sklerodermie, Rheumatoide Arthritis, Spondylopathien und/oder reaktive Arthritis. Bevorzugt ist weiterhin die Behandlung von multipler Sklerose (MS) und ThrombozytopenieForms like lupus erythematosus, scleroderma, rheumatoid arthritis, spondylopathies and / or reactive arthritis. The treatment of multiple sclerosis (MS) and thrombocytopenia is also preferred

In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird das CD152 als CD152⁺-Zelle verwendet, vorzugsweise als eine CD152⁺-T-Zelle (Fig. 9) . Es konnte erfindungsgemäß gezeigt werden, dass isolierte CD152⁺-T-Zellen vorteilhafterweise CD152 auf ihrer Oberfläche behalten (Fig. 1) . Die Zelle kann insbesondere eine Oberflächen-CD152 exprimierende Zelle sein. Bei der CD152⁺-T-Zelle kann es sich vorteilhafterweise um Zellen handeln, die aus einem Entzündungsherd des Patienten isoliert wurden (Fig. 5) oder um Zellen, die durch in vitro Stimulation von PBMCs generiert wurden (Fig. 1,2,4 und 6). Mit Vorteil können die so gewonnenen Zellen angereichert werden, um sie dann direkt oder zur Herstellung eines Mittels zur Behandlung von Autoimmunkrankheiten oder Entzündungen zu verwenden. Mit Vorteil sind insbesondere isolierte CD152⁺-T-Zellen fähig, andere Zellen, vor allem immunassoziierte Zellen, zu inaktivieren (Fig. 2, 6 und 7) . CD4⁺CD25⁺ regulatorische Zellen sind in der Peripherie präsent und können Autoimmunität verhindern. Die CD152⁺ T Zellen, die aus den CD4+CD25+ T Zellen entstehen, müssen vorteilhafterweise für ihre inhibiJorische Funktion CD152 nicht ausschließlich benutzen; hier ist es insbesondere ein Marker, wobei es für die inhibitorische Funktion benutzt werden kann. Um ihre regulatorische Wirkung ausführen zu können, wird insbesondere direkter Zeil-Zellkontakt mit der Zielzelle benötigt (Fig. 7 und 8) ; lösliche Faktoren, wie z.B. pleiotrop wirkende Zytokine sind als primärer Mechanismus auszuschließen. Diese Zellen können allerdings nicht anhand ihres Oberflächenmoleküls CD25 aus bereits etablierten Immunantworten identifiziert werden, da alle T- Zellen, die Antigen-Kontakt hatten, den Marker CD25 hochregulieren. Mehr als 50 % der CD25⁺ T_reg Zellen exprimieren allerdings CD152 und behalten es nach Aktivierung über einen langen Zeitraum auf der Oberfläche. Diese Eigenschaft ermöglicht es, vorteilhafterweise, regulatorische T Zellen von inflammatorischen T Zellen während einer bereits etablierten Immunantwort zu trennen. Die getrennten und isolierten Zellen können den Patienten insbesondere bei jedem Rückfall appliziert werden.Das gleiche gilt für weiter Moleküle aus der Gruppe von inhibitorisch wirkenden Molekülen: PD-l und BTLA.In a further preferred embodiment of the invention, the CD152 is used as a CD152 ⁺ cell, preferably as a CD152 ⁺ T cell (FIG. 9). It could be shown according to the invention that isolated CD152 ⁺ T cells advantageously keep CD152 on their surface (FIG. 1). The cell can in particular be a cell expressing surface CD152. The CD152 ⁺ T cell can advantageously be cells which have been isolated from an inflammatory focus of the patient (FIG. 5) or cells which have been generated by in vitro stimulation of PBMCs (FIGS. 1, 2, 4) and 6). The cells obtained in this way can advantageously be enriched so that they can then be used directly or for the production of an agent for the treatment of autoimmune diseases or inflammations. In particular, isolated CD152 ⁺ T cells are able to inactivate other cells, especially immune-associated cells (FIGS. 2, 6 and 7). CD4 ⁺ CD25 ⁺ regulatory cells are present in the periphery and can prevent autoimmunity. The CD152 ⁺ T cells which arise from the CD4 + CD25 + T cells advantageously do not have to use CD152 exclusively for their inhibitory function; here it is in particular a marker, whereby it can be used for the inhibitory function. In order to be able to carry out its regulatory effect, direct cell-cell contact is particularly important Target cell required (Fig. 7 and 8); Soluble factors such as pleiotropic cytokines can be excluded as a primary mechanism. However, these cells cannot be identified by their surface molecule CD25 from already established immune responses, since all T cells that have had antigen contact upregulate the CD25 marker. However, more than 50% of the CD25 ⁺ T _reg cells express CD152 and keep it on the surface for a long time after activation. This property advantageously makes it possible to separate regulatory T cells from inflammatory T cells during an already established immune response. The separated and isolated cells can be applied to the patient especially in the event of relapse, and the same applies to other molecules from the group of inhibitory molecules: PD-1 and BTLA.

In einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung erfolgt demgemäß die Induktion von CD152 in immunkompetenten Zellen, vorzugsweise inflammatorischen T Zellen, wobei die Induktion bevorzugt ex vivo durchgeführt wird. Die Induktion kann hierbei durch Transfektion von immunkompetenten Zellen erfolgen, insbesondere mit TRAIL, TGFb, IL-10, Statinen, Cystation, Vitamin D und/oder seinen Derivaten, IL-15 oder anti-PD-1 Antikörpern.Accordingly, in a preferred embodiment of the invention, CD152 is induced in immunocompetent cells, preferably inflammatory T cells, the induction preferably being carried out ex vivo. Induction can take place by transfection of immunocompetent cells, in particular with TRAIL, TGFb, IL-10, statins, cystation, vitamin D and / or its derivatives, IL-15 or anti-PD-1 antibodies.

In einer weiteren bevorzugten Ausfuhrungsform derIn a further preferred embodiment of the

Erfindung werden die CD152+ T Zellen direkt ex vivo aus einem Entzündungsherd eines Patienten isoliert, in vitro expandiert und in einen Entzündungsherd zurückgegeben. Es kann vorteilhaft sein, die CD152+ T Zellen in vitro aus autologen PBMCs zu isolieren, wobei die PBMCs mit 0,05μg/ml - 10 μg/ml anti-CD3, 0,05μg/ml - 10 μg/ml SEB oder 0,05μg/ml - 10 μg/ml anti-CD3/0, 05μg/ml - 10 μg/ml anti-CD28 stimuliert werden.Invention, the CD152 + T cells are isolated directly ex vivo from a patient's focus of inflammation, expanded in vitro and returned to an inflammatory focus. It may be advantageous to isolate the CD152 + T cells in vitro from autologous PBMCs, the PBMCs containing 0.05μg / ml - 10 μg / ml anti-CD3, 0.05μg / ml - 10 μg / ml SEB or 0.05μg / ml - 10 μg / ml anti-CD3 / 0.05 μg / ml - 10 μg / ml anti-CD28.

Besonders bevorzugt ist es, 0,1 μg/ml - 5 μg/ml anti- CD3, 0,1 μg/ml - 5 μg/ml SEB oder 0,1 μg/ml - 5 μg/ml anti-CD3/0,l μg/ml - 5 μg/ml anti-CD28 zu verwenden.It is particularly preferred to use 0.1 μg / ml - 5 μg / ml anti-CD3, 0.1 μg / ml - 5 μg / ml SEB or 0.1 μg / ml - 5 μg / ml anti-CD3 / 0, 1 μg / ml - 5 μg / ml anti-CD28 to use.

Ganz besonders bevorzugt ist es mehr als 1 μg/ml anti-CD3, 1 μg/ml SEB und/oder 1 μg/ml anti-CD28 zu verwenden. Die Menge kann von einem Fachmann durch Routineversuche bestimmt werden. Beispielsweise dadurch, dass er in regelmäßigen bzw. unregelmäßigen Abständen Proben bzw. Aliquots entnimmt und die gewünschten Parameter hierin bestimmt .It is very particularly preferred to use more than 1 μg / ml anti-CD3, 1 μg / ml SEB and / or 1 μg / ml anti-CD28. The amount can be determined by a person skilled in the art through routine tests. For example, by taking samples or aliquots at regular or irregular intervals and determining the desired parameters therein.

In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform werden die CD152+ T Zellen nach 48 h bis 7 Tagen isoliert, bevorzugt nach 2 bis 3 Tagen.In a further preferred embodiment, the CD152 + T cells are isolated after 48 h to 7 days, preferably after 2 to 3 days.

Es ist selbstverständlich auch möglich, CD152, PD-1 und BTLA durch Transfektion in den Zellen zu generieren oder zu induzieren, besonders bevorzugt ist CD152.It is of course also possible to generate or induce CD152, PD-1 and BTLA by transfection in the cells, CD152 being particularly preferred.

Die Transfektion kann physikalisch, chemisch und/oder biologisch erfolgen. Die physikalische Transfektion kann insbesondere mittels Elektroporation erfolgen. Es ist beispielsweise möglich, dass die DNA, die für CD152 codiert in einem Entzündungsherd subkutan injiziert wird und der elektrische Impuls über eine Klammer an der Haut appliziert wird. Die chemische Transfektion von CD152-Plasmid-Konstrukten wird insbesondere durch die Gegenwart von DEAE-Dextran, Natriumphosphat oder Dendrimeren vermittelt . Die biologische Transfektion von CD152 ^' oder CD152 umfassenden Plasmiden, Cosmiden oder anderen Vektoren - einschließlich Goldpartikeln - ist mit Vorteil über den rezeptorvermittelten Gentransfer, die Lipotektion oder die retrovivale Transfektion oder andere virale Aufnahmemechanismen möglich. Das gleiche gilt für weiter Moleküle aus der Gruppe von inhibitorisch wirkenden Molekülen: PD-1 und BTLA.The transfection can take place physically, chemically and / or biologically. The physical transfection can take place in particular by means of electroporation. For example, it is possible that the DNA encoded for CD152 is injected subcutaneously in an inflammatory focus and the electrical impulse is applied to the skin via a clip. The chemical transfection of CD152 plasmid constructs is mediated in particular by the presence of DEAE dextran, sodium phosphate or dendrimers. The biological transfection of plasmids, cosmids or other vectors comprising CD152 ^' or CD152 - including gold particles - is advantageously possible via receptor-mediated gene transfer, lipotection or retrovival transfection or other viral uptake mechanisms. The same applies to other molecules from the group of inhibitory molecules: PD-1 and BTLA.

Die genannten Verfahren zur Transfektion von CD152 sind vorteilhafterweise billig und gut reproduzierbar und führen zu einem . stabilen Einbau der CD152 codierten DNA in der Zielzelle.The above-mentioned methods for transfecting CD152 are advantageously cheap and easily reproducible and lead to one. stable installation of the CD152-encoded DNA in the target cell.

Die Erfindung betrifft weiterhin Zusammensetzungen für therapeutische, prophylaktische oder diagnostische Zwecke umfassend mindestens eine CD152 T Zelle, bevorzugt CD 152+ T Zelle, PD-1 und/oder BTLA in einer geeigneten, insbesondere einer pharmazeutisch geeigneten Form oder Zusammensetzung. Die pharmazeutische Zusammensetzung umfaßt insbesondere zusätzliche Stoffe und Substanzen, beispielsweise medizinische und/oder pharmazeutischtechnische Hilfsstoffe. Im Sinne der Erfindung gelten als Arzneimittel sowohl solche pharmazeutischen Zusammensetzungen, die für therapeutische und prophylaktische Zwecke verwendet werden, als auch solche pharmazeutischen Zusammensetzungen, die in vivo als Diagnostikum eingesetzt werden. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform handelt es sich um Zusammensetzungen für die ex vivo Diagnostik die zusätzliche Stoffe und Substanzen enthalten können.The invention further relates to compositions for therapeutic, prophylactic or diagnostic purposes comprising at least one CD152 T cell, preferably CD 152+ T cell, PD-1 and / or BTLA in a suitable, in particular a pharmaceutically suitable form or composition. The pharmaceutical composition includes in particular additional substances and substances, for example medical and / or pharmaceutical auxiliary substances. For the purposes of the invention apply as pharmaceuticals, both those pharmaceutical compositions that are used for therapeutic and prophylactic purposes, and those pharmaceutical compositions that are used in vivo as a diagnostic. In a further preferred embodiment, these are compositions for ex vivo diagnostics which can contain additional substances and substances.

Arzneimittel oder pharmazeutische Zusammensetzungen, die vorliegend synonym verwendet werden, sind erfindungsgemäß Stoffe und Zubereitungen aus Stoffen, die dazu bestimmt sind, durch Anwendung am oder im menschlichen Körper Krankheiten, Leiden, Körperschäden oder krankhafte Beschwerden zu heilen, zu lindern oder zu verhüten. Medizinische Hilfsstoffe sind erfindungsgemäß solche Stoffe, die zur Produktion als aktive Ingredienzien von Arzneimitteln eingesetzt werden. Pharmazeutisch-technische Hilfsstoffe dienen der geeigneten Formulierung des Arzneimittels oder der pharmazeutischen Zusammensetzung und können sogar, sofern sie nur während des Herstellungsverfahrens benötigt werden, anschließend entfernt werden oder können als pharmazeutisch verträgliche Träger Teil der pharmazeutischen Zusammensetzung sein. Die Arzneimittelformulierung oder Formulierung der pharmazeutischen Zusammensetzung erfolgt gegebenenfalls in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger und/oder Verdünnungsmittel . Beispiele für geeignete pharmazeutisch verträgliche Träger sind dem Fachmann bekannt und umfassen z.B. Phosphat-gepuf erte Kochsalzlösungen, Wasser, Emulsionen wie z.B. Öl/Wasser-Emulsionen, verschiedene Arten von Detergenzien, sterile Lösungen, etc. Arzneimittel oder pharmazeutische Zusammensetzungen, die solche Träger umfassen, können mittels bekannter konventioneller Methoden formuliert werden. Diese Arzneimittel oder pharmazeutischen Zusammensetzungen können einem Individuum in einer geeigneten Dosis verabreicht werden, z.B. in einem Bereich von 0,01 μg bis 10 g, bzw. 0,05 μg/ml - lOμg/ml an CD152, bevorzugt CD152 T Zellen, PD-1 und/oder BTLA pro Tag und Patient. Bevorzugt werden dabei Dosen von 1 mg bis 1 g. Die Verabreichung kann auf verschiedenen Wegen erfolgen, beispielsweise intravenös, intraperitoneal, intrarektal, intragastrointestinal, intranodal, intramuskulär, lokal, beispielsweise in den Entzündungsherd, aber auch subkutan, intradermal oder auf der Haut oder über die Schleimhäute. Die Verabreichung kann selbstverständlich in Form der Gen-Therapie geschehen, beispielsweise über Vektoren. Die Art der Dosierung und des Verabreichungsweges kann vom behandelnden Arzt entsprechend den klinischen' Faktoren bestimmt werden. Es ist dem Fachmann bekannt, dass die Art der Dosierung von verschiedenen Faktoren abhängig ist, wie z.B. der Größe, der Körperoberfläche, dem Alter, dem Geschlecht oder der allgemeinen Gesundheit des Patienten, aber auch von dem speziellen Mittel, welches verabreicht wird, der Dauer und Art der Verabreichung und von anderen Medikamenten, die möglicherweise parallel verabreicht werden.Medicaments or pharmaceutical compositions which are used synonymously in the present case are substances and preparations made of substances which are intended, by application to or in the human body, to cure, alleviate or prevent illnesses, physical damage or pathological complaints. According to the invention, medical auxiliaries are substances which are used for production as active ingredients of pharmaceuticals. Pharmaceutical-technical auxiliaries serve for the suitable formulation of the medicament or the pharmaceutical composition and can even, if they are only required during the production process, be subsequently removed or can be part of the pharmaceutical composition as a pharmaceutically acceptable carrier. The pharmaceutical formulation or formulation of the pharmaceutical composition is optionally carried out in combination with an pharmaceutically acceptable carrier and / or diluent. Examples of suitable pharmaceutically acceptable carriers are known to the person skilled in the art and include, for example, phosphate-buffered saline solutions, water, emulsions such as, for example, oil / water emulsions, various types of detergents, sterile solutions, etc. Medicaments or pharmaceutical compositions which comprise such carriers, can be formulated using known conventional methods. These drugs or pharmaceutical compositions can be administered to an individual in a suitable dose, for example in a range from 0.01 μg to 10 g, or 0.05 μg / ml-10 μg / ml of CD152, preferably CD152 T cells, PD- 1 and / or BTLA per day and patient. Doses of 1 mg to 1 g are preferred. The administration can take place in various ways, for example intravenously, intraperitoneally, intrarectally, intragastrointestinally, intranodally, intramuscularly, locally, for example in the focus of inflammation, but also subcutaneously, intradermally or on the skin or via the mucous membranes. The administration can of course take the form of gene therapy, for example via vectors. The type of dosage and route of administration can be determined by the attending physician in accordance with the clinical factors. It is known to the person skilled in the art that the type of dosage depends on various factors, such as, for example Size, body surface area, age, gender, or general health of the patient, but also the particular agent being administered, the duration and mode of administration, and other drugs that may be administered in parallel.

Die pharmazeutischen Zusammensetzungen oder das Arzneimittel umfasst insbesondere eine pharmakologische Substanz, die ein oder mehrere CD152, PD-1 und/oder BTLA Moleküle oder/und diese kodierende Nukleinsäuremoleküle in einer geeigneten Lösung oder Verabreichungsform enthält. Diese können entweder alleine mit den entsprechenden unter Arzneimitteln oder pharmazeutischen Zusammensetzungen beschriebenen Hilfsstoffen oder in Kombination mit einem anderen geeigneten Stoff zur Wirkungsverstärkung verabreicht werden. Diese werden in bekannten Methoden mit CD152, PD-1 und/oder BTLA Moleküle gemischt und in einer geeigneten Formulierung und Dosierung verabreicht. Formulierungen, Dosierungen und geeignete Komponenten sind dem Fachmann bekannt.The pharmaceutical compositions or the medicament in particular comprises a pharmacological substance which contains one or more CD152, PD-1 and / or BTLA molecules and / or nucleic acid molecules encoding them in a suitable solution or administration form. These can either be administered alone with the corresponding auxiliaries described under medicaments or pharmaceutical compositions or in combination with another suitable substance for enhancing the action. These are mixed in known methods with CD152, PD-1 and / or BTLA molecules and administered in a suitable formulation and dosage. Formulations, dosages and suitable components are known to the person skilled in the art.

Die pharmazeutische Zusammensetzung oder das Arzneimittel kann selbstverständlich auch eine Kombination von 2 oder mehreren der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzungen oder Arzneimittel sein, sowie eine Kombination mit anderen Arzneimitteln zur Entzündungshemmung, die auf eine geeignete Weise zeitlich gemeinsam oder getrennt verabreicht beziehungsweise angewandt werden. Herstellung der Arzneimittel oder pharmazeutischen Zusammensetzungen erfolgt nach an sich bekannten Methoden.The pharmaceutical composition or the medicament can of course also be a combination of 2 or more of the pharmaceutical compositions or medicaments according to the invention, as well as a combination with others Anti-inflammatory drugs that are administered or applied in a suitable manner over time or separately. The pharmaceuticals or pharmaceutical compositions are prepared by methods known per se.

Die Erfindung betrifft auch einen Kit, der ein erfindungsgemäßes pharmazeutisches Mittel umfasst. Dieser Kit kann beispielsweise zur Prophylaxe, Diagnose und/oder Therapie von Autoimmunerkrankungen oder Entzündungen eingesetzt werden, wobei die Erkrankung bevorzugt ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend antiglomeruläre Basalmembrankrankheit , Autoimmunkrankheiten des Nervensystems, ein systemischer Lupus erythematodes, eine Addison- Krankheit, ein Antiphospholipid-Syndrom, eine IgA-Glomerulonephritis, ein Goodpasture-Syndrom, ein Lambert-Eaton-Myasthenie-Syndrom, ein bullöses Pemphigoid, eine thrombozytopenische, idiopathischeThe invention also relates to a kit which comprises a pharmaceutical composition according to the invention. This kit can be used, for example, for the prophylaxis, diagnosis and / or therapy of autoimmune diseases or inflammation, the disease preferably being selected from the group comprising antiglomerular basement membrane disease, autoimmune diseases of the nervous system, systemic lupus erythematosus, an Addison disease, an antiphospholipid syndrome , IgA glomerulonephritis, Goodpasture syndrome, Lambert-Eaton myasthenia syndrome, bullous pemphigoid, thrombocytopenic, idiopathic

Purpura, ein Autoimmun-Thyreoiditis, eine rheumatoide Arthritis, ein insulinabhängiger Diabetes mellitus, ein Pemphigus, eine entzündliche Darmerkrankung, eine Kollagenose, eine Entzündung, eine unerwünschte Immunreaktion wie Sepsis, eine autoimmunhamolytische Anämie, ein Dermatitis herpetiformis Duhring, eine membranöse Glomerulonephritis, eine Graves-Krankheit, eine sympathische Ophthalmie, eine Autoimmun-Polyendokrinopathien und/oder eine Reiter- Krankheit, besonders multiple Sklerose undPurpura, an autoimmune thyroiditis, rheumatoid arthritis, insulin-dependent diabetes mellitus, pemphigus, inflammatory bowel disease, collagenosis, inflammation, an undesirable immune reaction such as sepsis, autoimmune hamolytic anemia, dermatitis herpetiformis duhromeric diarrhea, a diaphragm Disease, sympathetic ophthalmia, autoimmune polyendocrinopathies and / or Reiter's disease, especially multiple sclerosis and

Autoimmunthrombozytopenie . Ganz besonders bevorzugt handelt es sich bei der Krankheit oder Entzündung um eine mit Rheuma assoziierte Krankheit, insbesondere die rheumatische Arthritis.Autoimmune thrombocytopenia. Very particularly preferred the disease or inflammation is a disease associated with rheumatism, especially rheumatic arthritis.

Der Kit kann gegebenenfalls eine Anleitung oder Informationen zur pharmazeutischen Bereitstellung bzw. zu therapeutischen Behandlungsverfahren beinhalten. Die Information kann beispielsweise ein Beipackzettel sein oder ein anderes Medium, welches dem Anwender Informationen darüber gibt, mit welchem therapeutischen Verfahren bzw. mit welchem Schema die genannten Substanzen, das heisst insbesondere CD152+ T Zellen bzw. das erfindungsgemäße pharmazeutische Mittel, einzusetzen sind. Der Beipackzettel enthält insbesondere detaillierte und/oder wesentliche Infor- mationen über das Heilverfahren. Selbstverständlich ist es nicht zwingend erforderlich, dass diese Information auf einem Beipackzettel formuliert ist, es ist auch möglich, dass diese Information beispielsweise über das Internet mitgeteilt wird.The kit may include instructions or information on pharmaceutical delivery or therapeutic treatment procedures. The information can be, for example, an instruction leaflet or another medium which gives the user information about the therapeutic method or scheme with which the substances mentioned, ie in particular CD152 + T cells or the pharmaceutical agent according to the invention, are to be used. The package insert contains in particular detailed and / or essential information about the healing process. Of course, it is not absolutely necessary for this information to be formulated on a package insert, it is also possible for this information to be communicated, for example, via the Internet.

Im Folgenden soll die Erfindung anhand von Ausführungsbeispielen erläutert werden, ohne auf diese beschränkt zu sein.In the following, the invention is to be explained on the basis of exemplary embodiments, without being restricted to these.

BeispieleExamples

Erstmals ist es erfindungsgemäß gelungen, individuelle, CD152-exprimierende Zellen auch zytometrisch darzustellen und sie für funktioneile Untersuchungen zu isolieren. Mit Hilfe einer sensitiven Färbemethode konnte unter anderem gezeigt werden, dass während einer antigen-spezifischen Stimulation zellmembrangebundenes CD152 lediglich auf einer Subpopulation aktivierter Zellen (CD152⁺ T Zellen) exprimiert wird. Isolierte, aktivierte CD152⁺ T Zellen waren im Gegensatz zu aktivierten CD152^" T Zellen bei Restimulation in ihrer Proliferation inhibiert (Fig. 4) . Diese heterogene Expression von CD152 auf aktivierten T Zellen gewährleistet die Mannigfaltigkeit einer klonalen T Zellantwort (Fig. 3) . Die Generierung von T Zellen mit verschiedenen Effektorfunktionen ist eine grundlegende Eigenschaft der adaptiven Immunantwort. Die Daten zeigen auch, dass CD152 tatsächlich in der Lage ist, bereits aktivierte, individuelle T Zellen zu inhibieren (Fig. 3) . CD152 kann demnach sehr gut auch etablierte, "laufende" Immunantworten regulieren. Das gleiche kann für die Moleküle PDl und BTLA angenommen werden.For the first time, it has been possible according to the invention to display individual, CD152-expressing cells also cytometrically and to isolate them for functional examinations. With the help of a sensitive staining method could be shown, among other things, that during an antigen-specific stimulation cell membrane-bound CD152 is only expressed on a subpopulation of activated cells (CD152 ⁺ T cells). In contrast to activated CD152 ^" T cells, isolated, activated CD152 ⁺ T cells were inhibited in their proliferation upon restimulation (FIG. 4). This heterogeneous expression of CD152 on activated T cells ensures the diversity of a clonal T cell response (FIG. 3). The generation of T cells with different effector functions is a fundamental property of the adaptive immune response, and the data also show that CD152 is indeed able to inhibit already activated individual T cells (Fig. 3). CD152 can therefore very well also be established regulate "ongoing" immune responses, and the same can be said for the PDI and BTLA molecules.

In vitro wurden periphere mononukleäre Zellen vomPeripheral mononuclear cells from

Menschen unter kontrollierten Kulturbedingungen stimuliert. Zunächst wurden oberflächen- CD152 -expri ierende Zellen aus einer Immunantwort in vitro isoliert und charakterisiert. Es wurde mit der bereits etablierten "real time PCR" das momentane Zytokinprofil von CD152⁺ T Zellen ermittelt und eine für regulatorische Zellen typische Verminderung der IL-2 mRNA und vermehrte Akkumulation von TGFß und IL- 10 RNA festgestellt (Fig. 2) . Im Maussystem wurde gezeigt, dass Oberflächen-exprimierende CD152⁺ TStimulates people under controlled cultural conditions. First, cells expressing surface CD152 were isolated and characterized from an immune response in vitro. The current cytokine profile of CD152 ⁺ T cells was determined using the already established "real time PCR" and a reduction in IL-2 mRNA and increased accumulation of TGFβ and IL-10 RNA typical for regulatory cells was ascertained (FIG. 2). It was shown in the mouse system that surface-expressing CD152 ⁺ T

Zellen autoregulatorisch wirken. Weiterhin hat sich mit humanen CD152⁺ T Zellen eine suppressive Wirkung auf andere T-Zellantworten gezeigt (IL-Produktion nach 24 Stunden) (Fig. 2) . Außerdem hat sich mit humanen CD152⁺ T Zellen eine suppressive Wirkung auf andere Immunantworten bestätigt (IFNg Produktion nach 3 Tagen) (Fig. 6) . Sereologische Blockade von CD152 während Mitogenstimulation von PBMCs von Patienten mit rheumatischer Arthritis ergaben, dass das Molekül CD152 bei Patienten funktioneil ist. CDl52⁺ T Zellen werden am Entzündungsherd von rheumatoider Arthritis (RA) im Synovium gefunden ( Fig. 5) . Im Detail:Cells act autoregulatory. Furthermore, human CD152 ⁺ T cells have an suppressive effect shown on other T cell responses (IL production after 24 hours) (Fig. 2). In addition, a suppressive effect on other immune responses has been confirmed with human CD152 ⁺ T cells (IFNg production after 3 days) (FIG. 6). Sereological blockade of CD152 during mitogen stimulation of PBMCs from patients with rheumatoid arthritis revealed that the CD152 molecule is functional in patients. CD152 ⁺ T cells are found in the focus of inflammation of rheumatoid arthritis (RA) in the synovium (Fig. 5). In detail:

Beispiel 1example 1

CD152 bleibt auf einer Fraktion der T Zellen länger exprimiert .CD152 remains expressed longer on a fraction of the T cells.

Humane PBMCs (2 l0⁵/ml) wurden mit l,5μg/ml SEB stimuliert und nach 48 Stunden die CD152⁺ T .Zellen isoliert. Unter Kultivierung mit syngenen PBMCs und mit oder ohne l,5μg/ml SEB wurde 62 Stunden später erneut CD152 auf der Oberfläche der T-Zellen zytometrisch gemessen.Die Y-Achse zeigt in % die Anzahl der CD152+ T Zellen aller CD4+ T Zellen. Schwarze Säulen: CD152+ oder CD152- T Zellen, die zu PBMCs gesetzt wurden und nach 62h noch CD152 exprimieren (Anteilig zu allen zugesetzten Zellen) , weisse Säulen zeigen die CD152+ T Zellen die neu in den PBMCs nach Restimulation entstanden sind.l: und 2 haben kein SEB zur Restimulation erhalten, 2 und 4 habenl, 5μg/ml SEB bei Restimulation erhalten. In den Kokulturen 1 und 2 wurden CD152+ T Zellen, ind den Kokulturen wurden CD152- T Zellen zu den PBMCs zugesetzt.Human PBMCs (2 l0 ⁵ / ml) were stimulated with 1.5 μg / ml SEB and the CD152 ⁺ T. Cells were isolated after 48 hours. Cultured with syngeneic PBMCs and with or without 1.5μg / ml SEB, CD152 was again measured cytometrically on the surface of the T cells 62 hours later. The Y axis shows in% the number of CD152 + T cells of all CD4 + T cells. Black columns: CD152 + or CD152- T cells that were added to PBMCs and still express CD152 after 62 hours (proportionate to all added cells), white columns show the CD152 + T cells that were newly created in the PBMCs after restimulation. 1: and 2 received no SEB for restimulation, 2 and 4 received 1.5μg / ml SEB for restimulation. In cocultures 1 and 2, CD152 + T cells were ind CD152-T cells were added to the PBMCs in cocultures.

Beispiel 2Example 2

Aktivierte, isolierte CD152⁺ T Zellen inhibieren die Stimulation anderer T Zellen.Activated, isolated CD152 ⁺ T cells inhibit the stimulation of other T cells.

Der Versuch wurde wie unter Fig. 1 durchgeführt. 36 Stunden nach Restimulation wurde IL-2 im Überstand der Kulturen gemessen. Es wurden entweder CD152+ T Zellen zugefügt (Säulen 3 und 4) oder CD152- (Säule 5 und 6) oder keine Zellen zu den PBMCs zugefügt (Säulen 1 und 2 ) zugefügt . Graue Säulen 1,3 und 5 zeigen Kokulturen, die keinen weiteren Stimulus nach Restimulation, schwarze Säulen 2,4 und 6 haben l,5μg/ml SEB erhalten. Der Balken unter der Abbildung zeigt, dass CD152+ T Zellen vor Zugabe zu den Kokukturen 170% mRNA für das inhibitorische Zytokin TGFbeta aufwiesen, CD152- allerdings nur 100%. In Anwesenheit von CD152⁺ T Zellen war fast kein IL-2 mehr zu messen. IL-2 Produktion steht hier als Parameter für allgemeine Inhibition der Stimulation. The test was carried out as in FIG. 1. 36 hours after restimulation, IL-2 was measured in the culture supernatant. Either CD152 + T cells were added (columns 3 and 4) or CD152- (columns 5 and 6) or no cells were added to the PBMCs (columns 1 and 2). Gray columns 1, 3 and 5 show cocultures that have no further stimulus after restimulation, black columns 2, 4 and 6 have 1.5 μg / ml SEB. The bar below the figure shows that CD152 + T cells had 170% mRNA for the inhibitory cytokine TGFbeta before addition to the co-structures, CD152- however only 100%. In the presence of CD152 ⁺ T cells, almost no IL-2 could be measured. IL-2 production stands here as a parameter for general inhibition of stimulation.

Beispiel 3Example 3

Ein CD152 -Signal führt zur Inaktivierung einer Subpopulation von aktivierten T Zellen.A CD152 signal leads to the inactivation of a subpopulation of activated T cells.

^'5 ^' 5

Murine T Zellen wurden für 48 Stunden mit fest-Phasegekoppelten anti-CD3/anti-CD28 stimuliert, dann restimuliert mit Antikörper-gekoppelten Latexkügelchen, entweder (1) mit 0 aCD3+aCD28+Kontrollantikörper oder (2) aCD3+aCD28+aCD152. Die Zellen wurden mit CFSE markiert . Die Abnahme der Intensität zeigt die Teilung der Zelle an. Unter CD152-Kreuzvernetzung bleiben mehr Zellen in der langsamsten Generation 5 zurück als ohne Kreuzvernetzung.Murine T cells were stimulated with fixed-phase coupled anti-CD3 / anti-CD28 for 48 hours, then restimulated with antibody-coupled latex beads, either (1) with 0 aCD3 + aCD28 + control antibody or (2) aCD3 + aCD28 + aCD152. The cells were labeled with CFSE. The decrease in intensity indicates the division of the cell. With CD152 cross-linking, more cells remain in the slowest generation 5 than without cross-linking.

Beispiel 4Example 4

0 Aktivierte, individuelle CD152⁺ T Zellen sind refraktär gegenüber einer Antigen-spezifischen Restimulation.0 Activated, individual CD152 ⁺ T cells are refractory to antigen-specific restimulation.

PBMCs wurden für 48 Stunden mit löslichem anti-CD3 25 aktiviert und für CD152 markiert, zytometrisch und isoliert. Die CD152+ , CD152- und unsortierte CD4 Zellen wurden zu frischen PBMCs gesetzt. Zwei Tage später wurde die Proliferation der Fraktionen anhand der CFSE-Färbung detektiert . CD152⁺ T Zellen 30 (CD4+mCD152+, graue Kurve) proliferierten nicht, bzw. weniger als CD4+ oder CD4+CD152- T Zellen. Aus dem Dargestellten ergibt sich, dass durch CD152 bereits aktivierte T-Zellen abgeschaltet werden können. Ml markiert den Anteil der proliferierenden Zellen. Meanfluorescenceintensity (%) : CD4+: 2200 (61%), CD4+CD152+ 3000 (36%), CD4+CD152- (1800) 74%.PBMCs were activated with soluble anti-CD3 25 for 48 hours and labeled for CD152, cytometric and isolated. The CD152 +, CD152- and unsorted CD4 cells were added to fresh PBMCs. Two days later, the proliferation of the fractions was detected using the CFSE staining. CD152 ⁺ T cells 30 (CD4 + mCD152 +, gray curve) did not proliferate, or less than CD4 + or CD4 + CD152- T cells. From what is shown it follows that CD152 already activated T cells can be switched off. Ml marks the proportion of proliferating cells. Meanfluorescenceintensity (%): CD4 +: 2200 (61%), CD4 + CD152 + 3000 (36%), CD4 + CD152- (1800) 74%.

Beispiel 5Example 5

5 - 30 % der CD4+ T Zellen aus der Synovialflüssigkeit exprimieren CD152 auf ihrer5 - 30% of the CD4 + T cells from the synovial fluid express CD152 on their

Oberfläche ex vivo. Zytometrische Darstellung vonSurface ex vivo. Cytometric representation of

CD4+ T Zellen, die CD152 auf ihrer Oberfläche exprimieren. Synovialflüssigkeit (S) aus demCD4 + T cells that express CD152 on their surface. Synovial fluid (S) from the

Kniegelenk von 10 (n= 10) Patienten mit Rheumatoider Arthritis, Blutvon 6 Patienten mit RheumatoiderKnee joint of 10 (n = 10) patients with rheumatoid arthritis, blood of 6 patients with rheumatoid arthritis

Arthritis (RA) und Blut von 6 Gesunden (N) wurde ex vivo auf den Anteil CD152+ der CD4+ T ZellenArthritis (RA) and blood from 6 healthy (N) was ex vivo on the CD152 + portion of the CD4 + T cells

(%) analysiert und verglichen.(%) analyzed and compared.

SEB: Staphylococcus aureus B, IL-2: Interleukin 2, mCD152 : Membranständiges CD152 .SEB: Staphylococcus aureus B, IL-2: Interleukin 2, mCD152: membrane-bound CD152.

Beispiel 6Example 6

Aktivierte, isolierte CD152⁺ T Zellen inhibieren die Stimulation anderer T Zellen, am Beispiel des proinflammatorischen Zytokins IFNgamma.Activated, isolated CD152 ⁺ T cells inhibit the stimulation of other T cells, using the proinflammatory cytokine IFNgamma as an example.

PBMCs wurden für 48 h mit anti-CD3 und anti-CD28 gekoppelt an Latexpartikel stimuliert und anschliessend CD152+ und CD152- CD4+ T Zellen getrennt. Diese Zellen wurden zu frischen PBMCs gegeben. Dann wurde für 48 Stunden restimuliert mit entweder SEB, anti-CD3 oder anti-CD3/anti-CD28Es wurden entweder keine weiteren Zellen (weiss) CD152+ T Zellen zugefügt (schwarze Säule) oder CD152- (graue Säule) zugefügt und es wurde IFNgamma im Überstand der Kulturen mit ELISA gemessen. In Anwesenheit von CD152^4" T Zellen war fast kein IFNgamma mehr zu messen. IFNgamma Produktion steht hier als Entzündungsparameter für allgemeine Inhibition der Stimulation (Fig. 2) . Die verschiedenen Stimulationsbedingunen stehen für verschiedene und verschieden starke Stimulationsbedingungen für die T Zellen, die alle zu dem gleichen Ergebnis führen:PBMCs were stimulated for 48 h with anti-CD3 and anti-CD28 coupled to latex particles and then CD152 + and CD152-CD4 + T cells were separated. These cells became fresh PBMCs given. Then it was restimulated for 48 hours with either SEB, anti-CD3 or anti-CD3 / anti-CD28. Either no further cells (white), CD152 + T cells (black column) or CD152- (gray column) were added and IFNgamma im Culture supernatant measured by ELISA. In the presence of CD152 ^{4 "} T cells, almost no more IFNgamma could be measured. IFNgamma production stands here as an inflammation parameter for general inhibition of stimulation (FIG. 2). The different stimulation conditions stand for different and differently strong stimulation conditions for the T cells, all of them lead to the same result:

IFNgamma ist stark reduziert in den Kokulturen.IFNgamma is greatly reduced in cocultures.

Beispiel 7Example 7

Aktivierte, isolierte CD152⁺ T Zellen (E) inhibieren die Proliferation anderer T Zellen (T) .Activated, isolated CD152 ⁺ T cells (E) inhibit the proliferation of other T cells (T).

Der Versuch wurde wie unter Fig. 6 durchgeführt. 48 Stunden nach anti-CD3-Restimulation mit PBMCs und anti-CD3 wurde die Proliferation der Targetzellen (CFSE-markierte CD4⁺ T Zellen der PBMCs der proliferierenden Zellen) in den Kulturen gemessen. Es wurden CD152⁺ T Zellen (E) zu den PBMCs (T sind die CD4 Zellen der PBMCs) zugefügt. In Anwesenheit von CD152⁺ T Zellen war fast keine Proliferation der CD4- Targetzellen (T) anhand von abnehmender CFSE- Färbungsintensität zu messen. Proliferation steht hier als Parameter für allgemeine Inhibition der Stimulation und des chronischen Entzündungsprozesses. In 2 wurden die Überstände aus dem linken Versuch (1) genommen und auf anti-CD3- stimulierte PBMCs gegeben. Es wurde die Proliferation der CD4 Zellen der PBMCs nach 3 Tagen gemessen. Als Parameter diente die CFSE-Färbung der CD4 ZellenThe experiment was carried out as in FIG. 6. 48 hours after anti-CD3 restimulation with PBMCs and anti-CD3, the proliferation of the target cells (CFSE-labeled CD4 ⁺ T cells of the PBMCs of the proliferating cells) in the cultures was measured. CD152 ⁺ T cells (E) were added to the PBMCs (T are the CD4 cells of the PBMCs). In the presence of CD152 ⁺ T cells, almost no proliferation of the CD4 target cells (T) could be measured on the basis of decreasing CFSE staining intensity. Proliferation stands here as a parameter for general inhibition of stimulation and chronic Inflammatory process. In 2 the supernatants from the left experiment (1) were taken and applied to anti-CD3-stimulated PBMCs. The proliferation of the CD4 cells of the PBMCs was measured after 3 days. The CFSE staining of the CD4 cells served as a parameter

(schwarzer Diamant) . Überstände von Kokulturen mit(black Diamond) . Supernatants from cocultures with

CD152- T Zellen sind durch weisse Vierecke gekennzeichnet. C (weisser Diamant) stellt in 1 eineCD152-T cells are identified by white squares. C (white diamond) represents 1 in 1

Probe mit nur stimulierten PBMCs dar, in 2 PBMCs mit diesem Überstand inkubiert während Restimulation.Sample with only stimulated PBMCs, incubated in 2 PBMCs with this supernatant during restimulation.

Zusammenfassung der BeispieleSummary of examples

PBMCs wurden mit anti-CD3 stimuliert (A) oder aus dem Entzündungsherd direkt isoliert, so das eine Fraktion CD152 auf der Oberfläche exprimiert (obere Reihe der Zellen) . 1) Diese Zellen produzieren kein oder kaum IL-2 oder IFNgamma und sind in ihrer Proliferation limitiert (2) . Unter Zeil-Zellkontakt könnenh .diese CD152+ T Zellen weiter Zellen in ihrer Proliferation und inhibition von proinflammatorischen Zytokinen abschalten. Die Entzündung . ist gestoppt. Die unteren zellen zeigen inflammatorische T Zellen, die die Entzündung in Gang halten.PBMCs were stimulated with anti-CD3 (A) or isolated directly from the focus of inflammation so that a fraction of CD152 is expressed on the surface (top row of cells). 1) These cells produce little or no IL-2 or IFNgamma and are limited in their proliferation (2). Under cell-cell contact, these CD152 + T cells can continue to switch off cells in their proliferation and inhibition of pro-inflammatory cytokines. The inflammation . is stopped. The lower cells show inflammatory T cells that keep the inflammation going.

Wirkungsweise von CD152+ T ZellenMode of action of CD152 + T cells

PBMCs werden stimuliert und so CD152+ T zellen erhalten (oder CD152+ T Zellen werden aus demPBMCs are stimulated to obtain CD152 + T cells (or CD152 + T cells are derived from the

Entzündungsherd isoliert) . Es können auch inflammatorische T zellen durch CD152 umprogrammiert werden, indem CD152 induziert oder transfiziert wird. Dann werden die Zellen in vitro expandiert und dem Patienten zurückgegeben. Die Enzündung wird abschaltet (Fig. 9, rechts unten) . Focus of inflammation isolated). Inflammatory T cells can also be reprogrammed by CD152 by inducing or transfecting CD152. Then the cells are expanded in vitro and returned to the patient. The ignition is switched off (Fig. 9, bottom right).

Claims

Patentansprüche claims

1. Verwendung von CD152, PD-1 und/oder BTLA zur Therapie von Autoimmunkrankheiten und/oder EntZündungen.1. Use of CD152, PD-1 and / or BTLA for the therapy of autoimmune diseases and / or inflammation.

2. Verwendung nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass die Autoimmunerkrankungen oder Entzündungen eine antiglomeruläre2. Use according to claim 1, characterized in that the autoimmune diseases or inflammation is an antiglomerular

Basalmembrankrankheit, Autoimmunkrankheiten des Nervensystems, ein systemischer Lupus erythematodes, eine Addison-Krankheit, ein Antiphospholipid-Syndrom, eine IgA-Glomerulonephritis, ein Goodpasture-Syndrom, ein Lambert-Eaton-Myasthenie-Syndrom, ein bullöses Pemphigoid, eine thrombozytopenische, idiopathische Purpura, eine Autoimmun-Thyreoiditis, eine rheumatoide Arthritis, ein insulinabhängiger Diabetes mellitus, ein Pemphigus, eine autoimmunhamolytische Anämie, ein Dermatitis herpetiformis Duhring, eine membranδse Glomerulonephritis, eine Graves-K ankheit, eine sympathische Ophthalmie,Basement membrane disease, autoimmune diseases of the nervous system, systemic lupus erythematosus, Addison's disease, antiphospholipid syndrome, IgA glomerulonephritis, Goodpasture syndrome, Lambert-Eaton myasthenia syndrome, bullous pemphigoid, idiotic thrombocytopenia autoimmune thyroiditis, rheumatoid arthritis, insulin-dependent diabetes mellitus, pemphigus, autoimmune hamolytic anemia, dermatitis herpetiformis Duhring, membrane glomerulonephritis, Graves disease, sympathetic ophthalmia,

Autoimmun-Polyendokrinopathien, eine multiple Sklerose, eine Reiter- rankheit, eine entzündliche Darmerkrankung, eine Kollagenose, eine Sepsis, eine Entzündung und/oder eine Krankheit des rheumatischen Formenkreises sind. Autoimmune polyendocrinopathies, multiple sclerosis, equine disorder, inflammatory bowel disease, collagenosis, sepsis, inflammation and / or rheumatic disease.

3. Verwendung nach Anspruch 2 , dadurch gekennzeichnet, dass die entzündliche Darmerkrankung Morbus Crohn und/oder Colitis Ulceros; die Kollagenosen Sklerodermie und/oder Sjörgens Syndrom; die Entzündung, eine chronische Hepatitis C und die Krankheiten des rheumatischen Formenkreises Lupus erythematodes, Sklerodermie, rheumatoide Arthritis, Spondylopathien und/oder reaktive Arthritis sind.3. Use according to claim 2, characterized in that the inflammatory bowel disease Crohn's disease and / or ulcerative colitis; collagen scleroderma and / or Sjörgens syndrome; the inflammation, chronic hepatitis C and the diseases of the rheumatic type lupus erythematosus, scleroderma, rheumatoid arthritis, spondylopathies and / or reactive arthritis.

4. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass CD152 als CD152^" Zelle verwendet wird.4. Use according to one of the preceding claims, characterized in that CD152 is used as a CD152 ^" cell.

5. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass CD152 in immunkompetenten Zellen induziert wird, vorzugsweise inflammatorischen T Zellen.5. Use according to one of the preceding claims, characterized in that CD152 is induced in immunocompetent cells, preferably inflammatory T cells.

6. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Induktion ex vivo durchgeführt wird.6. Use according to one of the preceding claims, characterized in that the induction is carried out ex vivo.

7. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Induktion durch Transfektion von immunkompetenten Zellen erfolgt, insbesondere mit TRAIL, TGFb, IL-10, Statine, Cystation, Vitamin D und/oder seine Derivate, IL-15 und/oder anti-PD-1 Antikörpern.7. Use according to one of the preceding claims, characterized in that the induction takes place by transfection of immune-competent cells, in particular with TRAIL, TGFb, IL-10, statins, cystation, vitamin D and / or its derivatives, IL-15 and / or anti-PD-1 antibodies.

8. Verwendung nach einem der vorhergehenden Anspruch, dadurch gekennzeichnet, dass die CD152+ T Zellen direkt ex vivo aus einem Entzündungsherd eines Patienten isoliert, in vitro expandiert und zurückgegeben werden.8. Use according to one of the preceding claims, characterized in that the CD152 + T cells directly ex vivo from an inflammatory focus Patients are isolated, expanded in vitro and returned.

9. Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die CD152+ T9. Use according to one of the preceding claims, characterized in that the CD152 + T

Zellen in vitro aus autologen PBMCs isoliert werden, wobei die PBMCs mit 0,05μg/ml - 10 μg/ml anti-CD3, 0,05μg/ml - 10 μg/ml SEB oder 0,05μg/ml - 10 μg/ml anti-CD3/0, 05μg/ml - 10 μg/ml anti-CD28 stimuliert werden.Cells are isolated in vitro from autologous PBMCs, the PBMCs containing 0.05μg / ml - 10 μg / ml anti-CD3, 0.05μg / ml - 10 μg / ml SEB or 0.05μg / ml - 10 μg / ml anti -CD3 / 0.05μg / ml - 10 μg / ml anti-CD28 can be stimulated.

10. Verwendung nach dem vorhergehenden Anspruch, dadurch gekennzeichnet, dass die CD152+ T Zellen nach 48 h- 7 Tagen isoliert werden, insbesondere nach 2-3 Tagen.10. Use according to the preceding claim, characterized in that the CD152 + T cells are isolated after 48 h- 7 days, in particular after 2-3 days.

11. Kit umfassend CD152, PD-1 und/oder BTLA, insbesondere CD152+ T Zellen.11. Kit comprising CD152, PD-1 and / or BTLA, in particular CD152 + T cells.

12. Pharmazeutisches Mittel umfassend CD152, PD-1 und/oder BTLA, insbesondere CD152+ T Zellen gegebenenfalls mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger . 12. Pharmaceutical composition comprising CD152, PD-1 and / or BTLA, in particular CD152 + T cells, optionally with a pharmaceutically acceptable carrier.