WO2004004738A1

WO2004004738A1 - 角結膜上皮細胞障害治療薬又は予防薬

Info

Publication number: WO2004004738A1
Application number: PCT/JP2003/008409
Authority: WO
Inventors: Kiyoshi Akiba; Futoshi Hoshina; Mitsuzi Agata
Original assignee: Wakamoto Pharmaceutical Co.,Ltd.
Priority date: 2002-07-02
Filing date: 2003-07-02
Publication date: 2004-01-15
Also published as: JPWO2004004738A1; AU2003246241A1; EP1535617A1; KR20050013238A; CN1665514A

Abstract

　ミソプロストールのようなプロスタグランジンＥ類を有効成分とする角結膜上皮細胞障害治療用又は予防用点眼剤；プロスタグランジンＥ類と抗炎症剤を有効成分とする角結膜上皮細胞障害治療用又は予防用点眼剤を提供する。角膜又は結膜の物理的、化学的、機械的損傷に起因する、角膜又は結膜上皮細胞障害及び内因性角膜又は結膜上皮細胞障害に対し高い治療及び／又は予防効果を有する。

Description

明細書角結膜上皮細胞障害治療薬又は予防薬技術分野

本発明は、眼科用の角結膜上皮細胞障害治療薬又は予防薬に関する。更に詳しくは薬物、特に抗炎症剤等の薬物により生じた角結膜上皮細胞障害やプロス夕グランジン類の減少により生じた角結膜上皮細胞障害の治療及び/又は.予防効果を有する点眼薬に関する。

-冃：

角膜は、眼球の前極にあって水晶体前房を透明に覆っており、上皮細胞層、ボ —マン膜、実質層、デスメ膜及び内皮細胞層からなる整然とした層構造を有する組織である。角結膜上皮細胞障害は、角膜ヘルぺス、細菌性角膜潰瘍、神経麻痺性角膜炎、糖尿病性角膜症、シニーグレン症候群、ドライアイ等の内因性疾患を伴う角結膜上皮細胞障害、又は術後、薬剤性、外傷、コンタクトレンズ装着等による外因性疾患又は物理的若しくは化学的障害によって生じ、病因によつては上皮の再生が認められない難治性角膜障害に進行し、視力障害や失明に至る。角膜実質の規則的、整然とした格子様構造の形成過程で、何らかの原因で角膜上皮細胞が損傷を受けた場合、角膜細胞の働きをする物質が角膜損傷の治癒に重要な働きをすることが推定される。

白内障手術、網膜手術や硝子体切除術、角膜癌の放射線治療などの合併症として角膜潰瘍等の角膜炎を発症する。この角膜炎の治療又は予防のためべ夕メサゾン等のステロイド及びジクロフエナックナトリウム等の非ステロイド性抗炎症剤が使用されるが、これら薬剤は炎症症状に対して治療上非常に有効な薬剤群である。しかしながらこれら薬剤の使用により、特に長期使用により角結膜上皮細胞障害、角結膜潰瘍を誘発し角膜融解に至り失明に至ることが知られている

(Julianne C.Lin et al, ARCH OPHTHALMOL. 118 AUG 2000 1129-1132)。

視力の回復には、角膜上皮の正常な再生被覆が速やかに行われる必要がある。角結膜上皮細胞障害の治癒の機序は、第 1相から第 3相まであり、第 1相は上皮細胞の接着 ·伸展 ·移動、第 2相は上皮細胞の増殖、第 3相は上皮細胞の分ィ匕からなり、第 3相を経て初めて整然とした層構造をもつ上皮に戻る。これらの過程を修復する薬剤の開発が求められ、ヒアルロン酸、フイブロネクチンの点眼液等があるが満足のいくものでなく効果のある薬剤の開発が望まれている。

一方、プロスタグランジン類（以下「P G」と称する。）は哺乳類の組織又は器官に含有され、広範囲の生理活性を示す有機カルボン酸の 1群であり、一般的な構造特性として、プロスタン酸骨格を有する。

P GE _{1 5} 卩0 ₂及び？ £ ₃は血管拡張、血圧降下、胃酸分泌減少、腸管運動亢進、子宮収縮、利尿、気管支拡張及び抗潰瘍作用を持つことが知られている。眼科領域における P Gの応用については、 P G F _{2 α}同属体が眼圧降下作用を有することが記載されている (Aim, The Potential of Prostaglandin Derivatives in Glaucoma Therapy, Current Opinion in Ophthamology, volume 4, No.11,44- 50;1993) o

Pedro Cortina et al(Graefe's Arch Clin Exp Ophthalmol 235;180-185;1997) は、通常は嫌気性で且つ還元状態にある水晶体上皮細胞の in vitro培養において、ジクロフヱナックナトリウムの 2 5，5 0及 1 0 0 Mが上皮細胞の増殖を抑制することで白内障手術時の副作用としての後発白内障を抑制するとしている。そして P G E ₂の 1， 1 0 , 5 0及び 1 0 0〃Mの付加により上皮細胞の増殖が起こることから後発白内障のような細胞増殖による病態に P G E ₂の関与を示唆している。しかし、角膜上皮細胞の障害回復については何等記載していない。山本は、日本眼科学会雑誌（103 (3) P— 164 ; 1999) に、家兎角膜片の研究について次のように発表している。ジクロフエナックナトリウムゃィンドメサシンのようなプロスタグランジン合成阻害剤は、単独では角膜上皮の伸張に影響を与えないが、表皮成長因子（EGF) を同時に添加すると EGFによる上皮伸長促進作用が阻害される。上皮細胞培養ではジクロフエナックナトリウム等は上皮の増殖及び EG Fによる増殖促進作用に影響を与えないが、 EGF添カロにより上皮細胞液中の P GE₂₃ PGF_{2 α}濃度が対照群に比べ上昇している。同じ研究グループの月山らは第 66回中部眼科学会講演抄録集 (E-W-2 ； 2000) に、角膜上皮細胞の単層培養において、一定面積の欠損部を作成した場合、 EGF添加で欠損部が減少し、プロスタグランジン合成阻害剤は単独では欠損部の面積に影響を与えないが、 EGFとの同時投与で上皮創傷治癒促進作用を有意に抑制したことを発表している。 EGFの添加が培養液中の； PGE₂、 PG F _{2 α}濃度を有意に上昇していることを述べているが、外部から添加された P Gについては何等記載していない。

同様に月山らは日本眼科学会誌 (105 Ρ 35； 2,001) に、角膜上皮棚胞の単層培養において欠損部を作成した場合に EGFの添加は欠損部の創傷治癒を促進し、ジクロフナックナトリウムの添加はこの上皮創傷治癒を抑制することを記載している。そして P G F _{2 α}誘導体であるラ夕ノプロスト（Latanoprost) の追加投与は上皮創傷治癒の有意な回復を認めたが、 Latanoprostの単独投与では効果を認めていない。 PGE₂誘導体である 16, 16-ジメチルプロスタグランジン ( 16,16-dimethyl PGE2) については、単独投与においても E GFとジクロフエナックナトリウムとの同時投与においても、角膜上皮創傷治癒に対する効果は認められなかった。何れにしろ、これらの結果は、 PGE₂誘導体の角結膜上皮細胞障害に対する効果に付いて何等記載も示唆もしていない。

抗炎症剤の副作用の典型として経口投与された場合の胃粘膜障害がある。 P G 類には粘膜保護作用があり、 Scand J Rheumatol 21(2)85- 91(1992)には、ジクロフエナックナトリウムと P G誘導体であるミソプロストール（Misoprostol以下「M S」と称する）の合剤が胃潰瘍の発生を抑え、抗炎症活性は依然として維持されていることが報告されている。

同様に、 W0 9 2 / 2 1 3 5 0には、非ステロイド性抗炎症剤とプロスタグランジン E類であるミソプロストール、プロスタグランジン E l ( PGE1)、プロスタグランジン E2 ( PGE2)、 15R-メチル: /ロスタグランジン E2 (15R-methyl PGE2)、 16, 16 -ジメチルプロス夕グランジン E1 ( 16， 16- dimethyl PGE1)、 16, 16-ジメチルプロスタグランジン E2 ( 16, 16- dimethyl PGE2) の併用は副作用を軽減し、関節リユウマチ、骨粗鬆症治療剤としての有用性が記載されている。

この胃粘膜障害を軽減させるために非ステロイド性抗炎症剤の場合にシクロォキシゲナ一ゼ（以下「C〇X」と称する）の選択^!のある薬剤すなわち、メロキシカムのような C 0 X— 2選択性のある薬剤が開発され市場においても一定の評価を受けている。しかしながら胃粘膜障害が完全には消失していない。選択性も相対的なもので C 0 X— 2の活性もある程度残存しているからである。

眼科領域においては、眼の白内障手術時おいて抗炎症剤としての非選択的 C〇 X阻害剤に代わり、メロキシカムのような C 0 X— 2選 ¾的抗炎症剤の使用が角膜細胞の損傷を軽減するとの技術が開示されている（WO 9 9 / 5 9 6 3 4 )。しかしながら、 C 0Xの選択性は相対的なものであり、 C O X—2活性を完全に抑えたものではなく、角結膜上皮細胞障害の治癒又は予防には別の手段が必要である。発明の開示

このような実状から本発明の目的は、角結膜上皮細胞障害、特に P G E類の減少に起因する角結膜上皮細胞障害又は薬物に起因する角結膜上皮細胞障害の治療 P T/JP2003/008409 又は予防薬を提供することである。

本発明は種々の原因により生じた角結膜上皮細胞障害を治療又は予防する点眼剤であって、プロスタグランジン類を有効成分とする点眼剤に関するものである。すなわち本発明は、以下に示す角結膜上皮細胞障害治療用又は予防用点眼剤を提供するものである。

1 . プロスタグランジン E類を有効成分とする角結膜上皮細胞障害治療用又は予防用点眼剤。 .

2 . プロスタグランジン E類が、ミソプロストール、プロスタグランジン E 1 ( PGE1)、プロスタグランジン E2 (PGE2)_S 15R-メチルプロスタグランジン E2 (15R-methyl PGE2), 16， 16 -ジメチルプロスタグランジン Ε ( 16, 16- dimethyl

PGE1)、 16, 16-ジメチルプロスタグランジン E2 ( 16, 16-dimethyl PGE2)、ォキシプロストール及びこれらの低級アルキルエステルからなる群から選ばれる上記

1記載の点眼剤。

3 . 角結膜上皮細胞障害が、プロスタグランジン E類の減少に起因することを特徴とする上記 1又は 2記載の点眼剤。

4 . 角結膜上皮細胞障害が、薬物に起因することを特徴とする上記 1又は 2記載の点眼剤。 ' ：

5 . 角結膜上皮細胞障害の起因となる薬物が、抗炎症剤である上記 4記載の点眼剤。

6 . 角結膜上皮細胞障害の起因となる抗炎症剤が、シクロォキシゲナーゼを非選択的に阻害する薬物である上記 5記載の点眼剤。

7 . 角結膜上皮細胞障害の起因となるシクロォキシゲナ一ゼを非選択的に阻害する薬物が、ジク口フエナックナトリゥムである上記 6記載の点眼剤。

8 . プロスタグランジン E類と角結膜上皮細胞障害の起因となる薬物を有効成分とする角結膜上皮細胞障害治療用又は予防用点眼剤。 9，角結膜上皮細胞障害の起因となる薬物が抗炎症剤である上記 8記載の点眼剤。

10. プロスタグランジン E類と抗炎症剤の質量比が 1 : 25〜50000である上記 9記載の点眼剤。

11. プロス夕グランジン E類がミソプロスト一ルであり、抗炎症剤がジクロフェナヅクナトリウムである上記 10記載の点眼剤。

12.ミソプロストールの濃度が 0.0 から 10 Mである上記 11記載の点眼剤。

13. ジクロフエナックナトリウムの濃度が 0. 01%から 0. 5%である上記 11記載の点眼剤。図面の簡単な説明 · '

図 1は、本発明の MSの角膜上皮細胞障害に対する効果を示すグラフである。図 2は、本発明の MSの結膜上皮細胞障害に対する効果を示すグラフである。発明を実施するための最良の形態

本発明に使用されるプロスタグランジン類はプロス夕グランジン E類であればいずれであっても良いが、 MS、PGE1、 PGE2、 15R-methyl PGE2, 16， 16- dimethyl PGEU 16,16- dimethyl PGE、ォキシプロステロール及びこれらの低級アルキルェステル（例えば、炭素原子数 1〜 5の低級アルキルエステル）が好ましく、 MS が最も好ましい。

本発明は M S単独の使用でも良いが、非選択性抗炎症剤のような角結膜上皮細胞障害の起因となる薬剤を眼科領域で使用する場合は、合剤として配合することも可能である。

本発明で用いられる非選択性抗炎症剤は、例えばジクロフエナック、インドメ夕シン、フルルビプロフェン、イブプロフヱン等があげられるが、ジクロフェナヅクが好ましい。

プロス夕グランジン類の使用量は単独の使用又は合剤の場合も 0 . 0 0 1〃M から 1 0 Mが望ましいが、点眼時において涙液に希釈されることを考えれば 1 O /zM以上でも良い。また、ジクロフエナックナトリウムのような抗炎症剤と使用するときは、抗炎症剤の濃度によるが、抗炎症剤の質量 1に対して M Sの使用量は 2 5から 5 0 0 0 0分の 1の使用量が望ましい。一般的に抗炎症剤を点眼剤に使用する場合は 0 . 0 1 %から 0 . 5 %の範囲で使用されるが、最も好ましい濃度は 0 . 1 %である。その場合には抗炎症剤の質量 1に対して M Sの使用量は 2 5から 5 0 0 0 0分の 1の使用量が望ましい。しかしながら、これらの濃度に限定されるものではない。

本明細書の中で用いる「点眼剤」という用語は、点眼液、眼還流液、眼軟膏剤' 又は凍結乾燥剤の剤形、すなわち目の治療に関する全ての剤型を含む。本発明の点眼剤は、任意の剤形で角結膜上皮細胞障害の治療又は予防薬として使用されるが、特に点眼液、眼還流液、クリーム、眼軟膏剤又は凍結乾燥剤の剤形とすることが好ましい。しかし、これらに限定されるものではない。点眼液、眼軟膏剤、クリ一ムとする場合、添加剤としてデヒドロ酢酸ナトリゥム、パラォキシ安息香酸メチル等の保存剤、塩化ナトリウム、グリセリン等の等張化剤、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール等の増粘剤、ェデト酸ナトリウム、多糖類等の安定化剤の一般的なものを使用することができるが、これらに、 P艮定されるものではなく、眼生理的に許容されるものであればよい。上記各種剤型に添加される緩衝液としては、等張で pH4— 9、 pH 5— 9の無刺激のものを使用することが好ましい。本発明の点眼剤の例を以下に示す。

製剤例 1 ミソプロストール 0. 002%

リン酸緩衝液 1.0 %

塩化ベンザルコニゥム 0. 001%

ポリソルベート 80 0. 5 %

純水全量を 100%とする本発明の角膜疾患治療剤の用法、用量は、患者の症状、年齢等により変動するが、点眼液は通常、 1日 1—5回、 1回当たり 1—5滴点眼するのが良い。眼軟膏剤の場合は、通常、 1日 1—3回、角結膜嚢内に適量を塗布して使用する。以下、本発明を実施例に基づき具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。

実施例

〔試験例〕

MSのジクロフ; cナックナトリウムに起因するヒト角膜上皮細胞障害及びヒ卜結膜細胞障害に対する効果 . .

使用細胞:角膜細胞は SV4ひ不死化ヒト角膜上皮細胞株 (HCEC)(Araki- Sasaki etal. IOVS 36 :614- 621， 1995) を、結膜細胞は Changヒト結膜細胞株 (CCL- 20.2) (ATC CCCL-20.2) を使用した。

実験：細胞を 10%血清を含む増殖培地で 5x10⁴細胞/ mLに調整し、 96ゥエルマルチプレートに 100〃L/ゥエルで播種し 37 °Cで一晩培養した。 30— 50%コンフルェントとした後、新鮮培地に溶解し、段階希釈した MS、さらにジクロフエナヅクナトリウムを加え、 37°C、 24時間培養した。培養後、ゥヱルを洗浄し、新鮮培地を 10◦〃L/ゥエルおよび WST-8(同仁ィ匕学: Cell Counting Kit-8)を 10〃 L/ゥエルで加え、更に 1.5時間培養後、 450nm-660nmの吸光度を測定し、残存した細胞数を計測した。

毒性の評価法：いずれの被験物も添カ卩しない群を陰性対照とし、その吸光度を細胞生存率 1 0 0 %として、各被験物濃度の細胞生存率による用量相関曲線を作成した。

表 1及び図 1に SV40 不死化ヒト角膜上皮細胞の非ステロイド性抗炎症剤による角膜障害に対するミソプロストールの防御効果を示す。

非ステロイド' |、生抗炎症剤であるジクロフエナヅクナトリウムは 0 . 2 5 mMから I mMの範囲で細胞障害を起こし、ミソプロストールの 0 . ひ 1〃Mから 1 0 0 Mは細胞障害を改善した。ミソプロストール 1 0 0〃Mの高濃度ではミソプロスト一ルそのものによる細胞障害が認められた。

ジクロフエナックナトリゥムの角膜上皮細胞障害に及ぼすミソプロスト一ルの効

〔結果〕

図 1及び表 1から、ジクロフエナックナトリウムの 0 . 2 5、 0 . 5及び I mM は用量依存的に角膜上皮細胞の増殖を阻害した。この濃度は、上述した水晶体上皮細胞の増殖を阻害する濃度の 10倍に相当する。 MSの 0.01〃Mから 10〃 Mの添加で有意に細胞増殖を増大させた。 MSの 100 zMは、 MS自身に細胞毒性が認められた。表 2及び図 2にヒト結膜上皮細胞の非ステロイド性抗炎症剤による角膜障害に対するミソプロストールの防御効果を示す。

表 2

ジクロフヱナックナトリゥムの結膜上皮細胞障害に及ぼすミソプロスト一ルの効

〔結果〕

図 2及び表 2からジクロフエナヅクナトリウムの 0. 125、 0. 25及び0. 5 mMの範囲で用量依存的に結膜上皮細胞障害の増殖阻害が認められた。 M Sの 0. 1, 1及び 10 Mは細胞増殖阻害を回復した。ジクロフエナックナトリウムの高濃度では効果が低下していた。 MS 100〃Mでは MS自身に細胞毒性が認められた。産業上の利用可能性

本発明は、ミソプロストールのようなプロスタグランジン E類を有効成分とする角結膜上皮細胞障害治療用又は予防用点眼剤であり、角膜又は結膜の物理的、化学的、機械的損傷に起因する、角膜又は結膜障害及び内因性角膜又は結膜障害に対し高い治療効果を有する。特にジクロフエナックナトリウムのような非ステ口ィド性抗炎症剤による角膜障害すなわち、細胞増殖阻害を抑制する効果がある。

Claims

請求の範囲

1 . プロスタグランジン E類を有効成分とする角結膜上皮細胞障害治療用又は予防用点眼剤。

2 . プロスタグランジン E類が、ミソプロスト一ル、プロスタグランジン E 1 ( PGE1)、プロスタグランジン E2 (PGE2)_N 15R-メチルプロスタグランジン E2 (15R-methyl P.GE2), 16, 16-ジメチルプロスタグランジン El ( 16, 16 -dimethyl

PGE1)、 16， 16-ジメチルプロスタグランジン E2 ( 16, 16- dimethyl PGE2)、ォキシプロスト一ル及びこれらの低級アルキルエステルからなる群から選ばれる請求項 1記載の点眼剤。

3 . 角結膜上皮細胞障害が、プロスタグランジン E類の減少に起因することを特徴とする請求項 1又は 2記載の点眼剤。

4 . 角結膜上皮細胞障害が、薬物に起因することを特徴とする請求項 1又は 2記載の点眼剤。

5 . 角結膜上皮細胞障害の起因となる薬物が、抗炎症剤である請求項 4記載の点眼剤。

6 . 角結膜上皮細胞障害の起因となる抗炎症剤が、シクロォキシゲナーゼを非選択的に阻害する薬物である請求項 5記載の点眼剤。

7 . 角結膜上皮細胞障害の起因となるシクロォキシゲナ一ゼを非選択的に阻害する薬物が、ジクロフェナヅクナトリゥムである請求項 6記載の点眼剤。

8 . プロスタグランジン E類と角結膜上皮細胞障害の起因となる薬物を有効成分とする角結膜上皮細胞障害治療用又は予防用点眼剤。

9 . 角結膜上皮細胞障害の起因となる薬物が抗炎症剤である請求項 8記載の点眼剤。

1 0 . プロスタグランジン E類と抗炎症剤の質量比が 1 ： 2 5〜5 0 0 0 0である請求項 9記載の点眼剤。

11. プロス夕グランジン E類がミソプロスト一ルであり、抗炎症剤がジクロフェナックナトリウムである請求項 10記載の点眼剤。

12.ミソプロストールの濃度が 0.01 Mから 10〃Mである請求項 11記載の点眼剤。

13. ジクロフエナックナトリウムの濃度が 0. 01%から 0. 5%である請求項 11記載の点眼剤。

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