WO2003094983A1 - Resorbierbare pharmazeutische formulierung zur kontinuierlichen thrombinfreisetzung - Google Patents

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WO2003094983A1
WO2003094983A1 PCT/EP2003/004680 EP0304680W WO03094983A1 WO 2003094983 A1 WO2003094983 A1 WO 2003094983A1 EP 0304680 W EP0304680 W EP 0304680W WO 03094983 A1 WO03094983 A1 WO 03094983A1
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thrombin
formulation according
resorbable
collagen
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PCT/EP2003/004680
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Frank Gerhards
Rui-Miguel Pereira-Paz
Doris Klee
Hartwig Höcker
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Rheinisch-Westfälische Technische Hochschule Aachen (RWTH)
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    • A61L15/325—Collagen

Definitions

  • the present invention relates to a resorbable pharmaceutical formulation for continuous local thrombin release comprising thrombin which is embedded in resorbable spheres of polymers, the spheres being incorporated in a sponge.
  • the formulation according to the invention provides a resorbable hamostatic agent for use in surgery, in particular dental surgery / in dento alveolar interventions.
  • anticoagulation due to various diseases, the number of patients requiring therapeutic anticoagulation (anticoagulation) is increasing. These include, for example, patients with artificial heart valve prostheses or patients who have had a stroke or venous thrombosis.
  • vitamin K antagonists coumarin derivatives such as e.g.
  • Warfarin® Form of Warfarin®
  • heparin has a significantly shorter half-life, which makes it easier to control the anticoagulant if bleeding complications occur, without having to forego the necessary protection against thrombosis.
  • postoperative bleeding is also caused by the piasmin system.
  • the piasmin system the physiological antagonist of the blood coagulation system, ensures a dissolution of at a systemic level Blood clots. However, this function is not desirable if there is an increased risk of bleeding after surgery.
  • the optimal local wound care is the same for both concepts: after the extraction of the teeth or after a smaller dental intervention, the bone wound is tamponized with a collagen vial (e.g. Lyostypt) or a gelatin sponge (e.g. Topostatin).
  • a collagen vial e.g. Lyostypt
  • a gelatin sponge e.g. Topostatin
  • the mechanical compression of the bone wound brought about by this can achieve an initial hemostasis.
  • a local hemostatic agent based on thrombin or fibrin glue preparation can also be applied to the bone wound.
  • the mucosal wound is then closed with saliva-tight atraumatic sutures.
  • a wound protection plate made of plastic is often used in patients and attached to the remaining teeth.
  • the object of the present invention is therefore to provide a pharmaceutical formulation with which the active end product of the blood coagulation cascade, thrombin, can be made available over a limited period of time.
  • the period until stable intraoral wound healing is considered to be the required period of time. This corresponds to 7 to 10 days. After this period, stable wound healing has occurred, which means that external mechanical influences on the wound can no longer have any effect.
  • thrombin is embedded in resorbable spheres, preferably from commercially available polymers that are already used for other medical devices (e.g. surgical sutures) (see Figure 1).
  • spheres in the context of the invention is understood to mean particles, capsules or liposomes which contain the active ingredient embedded, enclosed, dispersed or dissolved, as described, for example, in Voigt, Pharmaceutical Technology, Deutscher maschinerverlag Stuttgart, 2000, pages 467-471.
  • spheres in the sense of the present invention is understood in particular to mean microparticles or nanoparticles which contain an active ingredient embedded in a polymer matrix without the formation of a separate capsule skin
  • Spheres with a size of 0.1 to 1000 / ym are preferred, very particularly with a size of 10 to 150 ⁇ m.
  • the loading of the spheres can be 0.1 to 20%, depending on the corresponding thrombin preparation, and the loading of the collagen sponge can be 0.1 to 50%.
  • the total dose should be 1 I.U. up to 2000 IU, preferably 250 IU up to 1000 IU Thrombin per implant.
  • the spheres can be produced with the aid of known processes, in particular emulsion techniques (w / o; o / w; w / o / w - emulsion evaporation or extraction method) or spray drying.
  • emulsion techniques w / o; o / w; w / o / w - emulsion evaporation or extraction method
  • spray drying emulsion techniques
  • the methods are described in the prior art.
  • EP 0 330 180 describes microspheres of the polylactic acid type containing physiologically active substances and processes for their production.
  • Other manufacturing processes include Müller RH and Hildebrand GE, Pharmaceutical Technology: Modern Pharmaceutical Forms, Stuttgart, pp. 243-258 and S339-355, Eldrigé J. et al., J. Controlled Release 1990, 11, 205 -214; Jeffery J. et al. Pharm. Res.
  • Resorbable polymers used according to the invention for producing the resorbable spheres include poly sugar and their derivatives, polyvinyl alcohol (PVA), polyvinyl pyrrolidone (PVP), polylactic acid (PLA), polylactides, polyhydroxybutyrate (PHB), poly-L-lysine, their homologues and cocondensates, lactic acid Glycolic acid copolymer (PLG), in particular Resomer RG 504 and 505 from Boehringer Ingelheim.
  • PVA polyvinyl alcohol
  • PVP polyvinyl pyrrolidone
  • PLA polylactic acid
  • PHB polyhydroxybutyrate
  • PEG poly-L-lysine
  • Other usable polymers are disclosed, inter alia, in Müller RH and Hildebrand GE, Pharmaceutical Technology: Modern Pharmaceutical Forms,ticianliche Verlagsgesellschaft Stuttgart, 1998, pp. 243-258 and S339-355.
  • the spheres thus obtained are in turn incorporated into resorbable sponges, in particular collagen sponges.
  • This is done, for example, by freeze-drying an aqueous collagen or an aqueous collagen suspension or gelatin solution in which the spheres are uniformly dispersed.
  • the production of collagen sponges is e.g. in US 4,515,637, EP 562862 and by Chvapil, J. Biomed. Mater. Res. H, 721-741 (1977).
  • the collagen used according to the present invention should preferably be soluble in vivo by enzymatic degradation or other biological processes.
  • Preferred is native collagen in its potentially soluble form or natural insoluble collagen which is inherently cross-linked and is insoluble in either an acidic or alkaline medium such as e.g. also described in US 4,515,637.
  • the collagen used is preferably type 1 collagen.
  • the origin of the collagen for use in the present invention is not particularly limited.
  • collagen is used which is derived from the skin, bone, cartilage, tendons, internal organs, etc. of a mammal such as e.g. comes from humans, horses, cattle, pigs, sheep, rabbits, mice.
  • Collagen-like protein derived from birds, fish or the like can also be used.
  • Genetically engineered collagen can also be used, and genetic engineering is currently in progress (e.g. ZymoGenetics, WA, U.S.A.)
  • the thrombin used in the present invention can be obtained from a variety of sources, e.g. pooled human or animal plasma.
  • Bovine thrombin is e.g. available from a variety of commercial sources.
  • Recombinant thrombin can also be used in accordance with the invention (e.g. ZymoGenetics, WA, U.S.A.).
  • thrombin-like compounds such as proteolytic snake venom, and thrombin precursors such as prothrombin can be used as sources for thrombin.
  • thrombin as used here also includes thrombin precursors and thrombin-like compounds and refers to all proteins and amino acid polymers of natural or synthetic origin which are able to catalyze the formation of fibrin clots from fibrinogen and / or to activate the blood platelets other coagulation factors such as factor VIII can also be used
  • This formulation according to the invention has various advantages since, on the one hand, the use of collagen sponges for mechanical wound compression and the platelet aggregation induced by collagen, the existing therapy concept is only slightly changed and, on the other hand, the healing of the wound is supported over a period of 7-10 days by the released thrombin , The platelet aggregation caused by collagen, through the release of mediators, activates plasmatic blood coagulation.
  • the release is preferably 0 to 14 days, particularly preferably 7 to 10 days.
  • the preparation can be supplemented with therapy-supporting antifibrinolytics such as tranexamic acid, ⁇ -amino caproic acid, 4- (aminomethyl) benzoic acid, aprotinin, EPO, acetaminonaphtone, thromboplastin, menadione sodium bisulfonate sulfonate sulfonate sulfonate sulfonate sulfonate, and add become.
  • antifibrinolytics such as tranexamic acid, ⁇ -amino caproic acid, 4- (aminomethyl) benzoic acid, aprotinin, EPO, acetaminonaphtone, thromboplastin, menadione sodium bisulfonate sulfonate sulfonate sulfonate sulfonate, and add become.
  • antifibrinolytics such as tranexamic acid,
  • Figure 2 shows a release profile of thrombin from poly (DL-lactide-co-glycolide) 50:50 (Boehringer Ingelheim RG 504) at 37 ° C in PBS buffer. The time-dependent cumulative thrombin release is shown, determined by means of the Bradford test measured in vitro over the release period of 28 days.
  • Figure 3 shows a release profile of thrombin from poly (DL-lactide-co-glycolide) 50:50 (Boehringer Ingelheim RG 504) at 37 ° C in PBS buffer.
  • the time-dependent cumulative thrombin release is shown, which is measured by the elimination of p-nitroaniline from the chromogenic substrate, in vitro over the release period of 28 days.
  • 1 NIH thrombin corresponds to 0.324 +/- 0.073 ⁇ g thrombin.
  • the amount of p-nitroaniline released is proportional to the active thrombin, the thrombin used had an activity of 50 NIH / mg.
  • the present invention further provides the use of the pharmaceutical formulation according to the invention as a local hemostatic agent, in particular for local hemostasis in blood-clot-inhibited / blood-coagulation-incompetent patients.
  • the cause of the anticoagulation can be iatrogenic, i.e. due to an inhibition of blood clotting due to the administration of vitamin K antagonists such as phenprocoumon or coumadin, platelet aggregation inhibitors such as acetylsalicylic acid, tirofiban, dipyramidol, ticiopidine or eptifibatide or is endogenously caused as in patients with a congenital defect in blood clotting in a mild form.
  • vitamin K antagonists such as phenprocoumon or coumadin
  • platelet aggregation inhibitors such as acetylsalicylic acid, tirofiban, dipyramidol, ticiopidine or eptifibatide
  • the frequency of postoperative bleeding in coagulation-incompetent patients is approximately 30% and the required duration of hospitalization is several days (on average 5 days).
  • the clinical use of the pharmaceutical formulation according to the invention significantly reduces the frequency of subsequent bleeding and thereby shortens the duration of hospitalization. It also enables certain outpatient procedures Interventions. In addition to a significantly reduced risk for the patients, this also means considerable cost savings in the healthcare system.

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft resorbierbare pharmazeutische Formulierungen zur Kontinuierlichen lokalen Thrombinfreisetzung. Das Thrombin ist in resorbierbaren sphären aus polymer eingebettet, Wobei die sphären in einem Kollagenschwamm inkorporiert sind. Die erfindungsgemässe Formulierung stellt ein resorbiebares Hämostyptikum zur Anwendung in der Chirugie, insbesondere der Zahnchirurgie bei dentoalveolären Eingriffen bereit.

Description

RESORBIERBARE PHARMAZEUTISCHE FORMULIERUNG ZUR KONTINUIERLICHEN THROMBINFREISETZUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft eine resorbierbare pharmazeutische Formulierung zur kontinuierlichen lokalen Thrombinfreisetzung umfassend Thrombin welches in resorbierbaren Sphären aus Polymeren eingebettet ist, wobei die Sphären in einem KoUagenschwamm inkorporiert sind. Die erfindungsgemäße Formulierung stellt ein resorbierbares Hamostyptikum zur Anwendung in der Chirurgie, insbesondere der Zahnchirurgie/ bei dento alveolären Eingriffen bereit.
Auf Grund verschiedenster Erkrankungen nimmt die Anzahl der Patienten die einer therapeutischen Blutgerinnungshemmung (Antikoagulation) bedürfen zu. Hierzu gehören zum Beispiel Patienten mit künstlichen Herzklappenprothesen oder Patienten die einen Schlaganfall oder eine Venenthrombose hatten.
Die therapeutisch induzierte Blutgerinnungshemmung wird fast ausnahmslos durch die tägliche orale Gabe von Vitamin K - Antagonisten (Cumarin Derivate wie z.B.
Phenprocoumon in Form von Marcumar®, bzw. Falithrom® oder Coumadin Derivate in
Form von Warfarin® ) erreicht. Durch die Hemmung der Blutgerinnung sind bereits kleine chirurgische Eingriffe, wie z.B. Zahnextraktionen, mit einem hohen Blutungsrisiko verbunden. Aus diesem Grund werden die betreffenden Patienten in der Regel unter kostenintensiven stationären Bedingungen behandelt. Hierbei wird die orale Dauerantikoagulation durch die intravenöse Gabe von Heparin, daß ebenfalls für eine Hemmung der Blutgerinnung sorgt, ersetzt. Heparin verfügt jedoch über eine deutlich kürzere Halbwertzeit wodurch bei Eintreten von Blutungskomplikationen eine bessere Steuerbarkeit der Gerinnungshemmung möglich ist ohne auf den erforderlichen Thromboseschutz zu verzichten. Neben diesen, therapeutisch induzierten Formen der Blutgerinnungshemmung, werden postoperative Nachblutungen auch durch das Piasminsystem, mitbedingt. Das Piasminsystem, der physiologische Antagonist des Blutgerinnungssystems, sorgt auf systemischer Ebene für eine Auflösung von Blutgerinnseln. Diese Funktion ist jeαoch bei einer erhöhten postoperativen Blutungsgefahr nicht erwünscht.
Neben den oben genannten Indikationen existieren noch weitere Patientengruppen welche aufgrund einer angeborenen Störung des Blutgerinnungssystems wie z.B. Protein C, Protein S oder Antithrombinmangel einer therapeutischen Antikoagulation mit Vitamin K Antagonisten bedürfen, aber auch ein angeborener Faktorenmangel wie z.B. Hämophilie A oder B, oder das von-Willebrand-Jürgens-Syndrom oder einem isolierter Faktorenmangel innerhalb des Prothrombinkomplexes können selbst bei kleinen, lokalen Eingriffen zu erheblichen Nachblutungen führen. Um Nachblutungsereignisse nach Zahnextraktionen oder zahnärztlichen - chirurgischen Eingriffen zu vermeiden, ohne den erforderlichen Thromboseschutz zu gefährden, haben sich folgende, dem „Stand der Technik" entsprechende Vorgehensweisen etabliert. Jedoch ist es auch mit diesen beiden Therapieregimen nicht möglich Nachblutungen zu verhindern:
I.) Umsetzen der oralen Dauerantokoagulation durch Vitamin K - Antagonisten auf eine intravenöse Dauerheparinisierung im sogenannten therapeutischen Bereich (PTT 2- 3 Fache des Normbereichs). Auf Grund der relativ kurzen Wirkdauer/Halbwertszeit von Heparin sollen Nachblutungen, deren Ursache durch die Heparinantikoagulation mitbedingt sind (PTT über 80 sec) durch Reduzierung der Heparingabe beherrscht werden. Eine therapeutische Heparinisierung zum Schutz vor thrombembolischen Komplikationen ist dann jedoch häufig nicht mehr gegeben (PTT < 2 facher Norm). Zudem ist diese Vorgehensweise auf Grund der vorübergehenden Hospitalisierung der Patienten mit erheblichem Kostenaufwand für die Versicherungsträger verbunden.
II) Weiterführen der oralen Dauermedikation durch Vitamin K - Antagonisten und Durchführung kleiner zahnärztlich-chirurgischer Eingriffe im oberen Grenzbereich der oralen Antikoagulation (Quick-Wert von 25%-35%). Hierbei ergibt sich jedoch das Problem, daß Patienten, welche einer strengen Antikoagulation bedürfen (Quick maximal 25% bei künstlicher Herzklappe in Mitralisstellung), mit diesem Konzept nicht erreicht werden. Weiterhin hat der physiologische, perioperative Verbrauch der im Kreislauf befindlichen Restgerinnungsfaktoren eine weitere Reduzierung des endogenen Faktorangebotes zur Folge, denn unter der fortgeführten Gabe von Vitamin K-Antagonisten werden diese nur in unzureichendem Maß nachgebildet. Hierdurch sinkt die PTT weiter und es ergeben sich postoperative Blutungskomplikationen. Die Nachblutungsfrequenz steigt z.T. auf das 10-fache.
Die optimale lokale Wundversorgung erfolgt bei beiden Konzepten gleich: Nach der Extraktion der Zähne, bzw. der Durchführung eines kleineren zahnärztlichen Eingriffes wird die Knochenwunde mit einem Kollagenviies (z.B. Lyostypt) oder einem Gelatineschwamm (z.B. Topostatin) tamponiert. Die hiermit herbeigeführte mechanische Kompression der Knochenwunde kann eine initiale Blutstillung erzielen. Zeigt sich intraoperativ eine stärkere Blutung aus dem Zahnfach, so kann zusätzlich ein lokales Hamostyptikum auf Thrombinbasis oder Fibrinkleberpräparat in die Knochenwunde appliziert werden.
Um den fibrinolytischen Einfluß des Speichels zu reduzieren wird die Schleimhautwunde anschließend mit atraumatischen Nähten speicheldicht verschlossen. Aus dem gleichen Grund wird bei den Patienten häufig eine Wundschutzplatte aus Kunststoff eingesetzt und an den verbleibenden Zähnen befestigt.
Als Ergebnis einer eigenen prospektiven Studie der Erfinder konnten folgende Ursachen für das Auftreten postoperativer Blutungen bei zahnärztlich-chirurgischen Maßnahmen unter fortgeführter Marcumarisierung identifiziert werden (Gerhards et al., Gerhards F., Wagner W.: „Zum Blutungsrisiko nach zahnärztlich-chirurgischen Eingriffen unter fortgeführter Marcumarisierung". Dtsch Zahnärztl Z. (1997) 52:53-56):
1. Verbrauch der im Blutkreislauf zirkulierenden restlichen Gerinnungsfaktoren und
2. deren zusätzliche Inaktivierung durch die intravenöse Gabe von Heparin (Inaktivierung des gesamten Prothrombinkomplexes).
Der vorliegenden Erfindung liegt somit die Aufgabe zugrunde eine pharmazeutische Formulierung bereitzustellen mit der es gelingt, das aktive Endprodukt der Blutgerinnungskaskade, Thrombin, über einen begrenzten Zeitraum zur Verfügung zu stellen. Als erforderliche Zeitspanne wird dabei die Phase bis zu einer stabilen intraoralen Wundheilung angesehen. Die entspricht 7 bis 10 Tage. Nach diesem Zeitraum ist eine stabile Wundheilung eingetreten, wodurch externe mechanische Einflüsse auf die Wunde keine Wirkung mehr haben können. Um dies zu erreichen, wird Thrombin in resorbierbaren Sphären, vorzugsweise aus kommerziell erhältlichen Polymeren, die bereits für andere Medizinprodukte verwendet werden (z.B. chirurgisches Nahtmaterial), eingebettet (siehe Abbildung 1).
Unter dem Begriff „Sphären" im Sinne der Erfindung werden Partikel, Kapseln oder Liposomen verstanden , die den Wirkstoff eingebettet, umschlossen, dispergiert oder gelöst enthalten, wie z.B. in Voigt, Pharmazeutische Technologie, Deutscher Apothekerverlag Stuttgart, 2000, Seiten 467-471 beschrieben.
Unter dem Begriff „Sphären" (spheres) im Sinne der vorliegenden Erfindung werden insbesondere Mikro- oder Nanopartikel verstanden die einen Wirkstoff eingebettet in einer Polymermatrix ohne die Ausbildung einer gesonderten Kapselhaut enthalten
Bevorzugt sind hierbei Sphären von einer Größe von 0,1 bis 1000 /ym, ganz besonders mit einer Größe von 10 bis 150 μm.
Die Beladung der Sphären kann, abhängig vom entsprechenden Thrombinpräparat, 0,1 bis 20% betragen, wobei die Beladung des Kollagenschwamms 0,1 bis 50% betragen kann. Die Gesamtdosierung sollte 1 I.E. bis 2000 I.E, bevorzugt 250 I.E. bis 1000 I.E. Thrombin pro Implantat betragen.
Die Sphären können mit Hilfe von bekannten Verfahren hergestellt werden, hierbei sind besonders Emulsionstechniken (w/o; o/w; w/o/w - Emulsions-Evaporations bzw. - Extraktions Methode) oder Sprühtrocknung zu nennen. Die Methoden sind im Stand der Technik beschrieben. So beschreibt EP 0 330 180 physiologisch aktive Substanzen enthaltende Mikrosphären des Polymilchsäuretyps sowie Verfahren zu deren Herstellung. Weitere Herstellungsverfahren sind unter anderen in Müller R.H. und Hildebrand G.E, Pharmazeutische Technologie: Moderne Arzneiformen, Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft Stuttgart, 1998, S. 243-258 und S339-355, Eldrige J. et al., J. Controlled Release 1990, 11 , 205-214; Jeffery J. et al. Pharm. Res. 1993, 10, 362-368 und Pavanetto et al., Int. J. of Pharmaceutics 1992, 84, 152-159 offenbart. Erfindungsgemäss verwendete resorbierbare Polymere zur Herstellung der resorbierbaren Sphären schliessen Polyzucker und deren Derivate, Polyvinylalkohol (PVA), Polyvinylpyrrolidon (PVP), Polymilchsäure (PLA), Polylaktide, Polyhydroxybutyrat (PHB), Poly-L-Lysin, deren Homologe und Kokondensate, Milchsäure-Glycolsäure-Kopolymer (PLG), insbesondere Resomer RG 504 und 505 von Boehringer Ingelheim mit ein. Weitere verwendbare Polymere sind unter anderem in in Müller R.H. und Hildebrand G.E, Pharmazeutische Technologie: Moderne Arzneiformen, Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft Stuttgart, 1998, S. 243-258 und S339-355 offenbart.
Die so erhaltenen Sphären wiederum werden in resorbierbare Schwämme, insbesondere Kollagenschwämme inkorporiert. Dies geschieht zum Beispiel durch Gefriertrocknung eines wässrigen Kollagen oder einer wässrigen Kollagensuspension oder Gelatinelösung in welchem/r die Sphären gleichmässig dispergiert sind. Die Herstellung von Kollagenschwämmen ist z.B. in US 4,515,637, EP 562862 und von Chvapil, J. Biomed. Mater. Res. H, 721-741 (1977) beschrieben.
Kollagen
Das gemäss der vorliegenden Erfindung verwendete Kollagen sollte vorzugsweise in vivo durch enzymatischen Abbau oder andere biologische Prozesse auflösbar sein. Bevorzugt ist natives Kollagen in seiner potentiell löslichen Form oder natürliches unlösliches Kollagen welches inherent durch vernetzt ist und entweder in saurem oder alkalischen Medium unlöslich ist wie z.B. auch in US 4,515,637 beschrieben. Das verwendete Kollagen ist vorzugsweise Typ 1 Kollagen.
Die Herkunft des Kollagen zur Verwendung gemäß der vorliegenden Erfindung unterliegt keiner speziellen Einschränkung. Im Allgemeinen wird Kollagen verwendet, das von Haut, Knochen, Knorpel, Sehnen, inneren Organen usw. eines Säugetiers wie z.B. von Mensch, Pferd, Rind, Schwein, Schaf, Kaninchen, Maus stammt. Es kann auch kollagenartiges Protein verwendet werden das von Vögeln, Fischen oder dergleichen stammt. Ferner kann auch gentechnisch hergestelltes Kollagen verwendet werden, an dessen gentechnischer Herstellung wird derzeit gearbeitet (z.B. ZymoGenetics, WA, U.S.A.)
Thrombin
Das erfindungsgemäss verwendete Thrombin kann aus einer Vielzahl von Quellen gewonnen werden, wie z.B. gepooltem menschlichem oder tierischen Plasma. Bovines Thrombin ist z.B. von einer Vielzahl gewerblicher Quellen erhältlich. Zudem kann erfindungsgemäss auch rekombinantes Thrombin verwendet werden (z.B. ZymoGenetics, WA, U.S.A.).
Dieses kann von einer Vielzahl von rekombinanten Quellen wie z.B. transformierten Wirtszellen (Bakterien, Hefen oder Säugerzellen) erhalten werden. Zudem können auch thrombinartige Verbindungen wie proteolytische Schlangengifte, sowie Thrombinvorstufen wie Prothrombin als Qellen für Thrombin verwendet werden.
Daher beinhaltet der Begriff „Thrombin" wie hier verwendet auch Thrombinvorstufen und thrombinartige Verbindungen und bezieht sich auf alle Proteine und Aminosäurepolymere natürlicher oder synthetischer Herkunft die in der Lage sind die Bildung von Fibringerinnseln aus Fibrinogen zu katalysieren und/oder die Bluttplättchen zu aktivieren. Zudem können auch andere Gerinnngsfaktoren, wie z.B. Faktor VIII verwendet werden
Diese erfindungsgemasse Formulierung hat verschiedene Vorteile da zum einen durch die Verwendung von Kollagenschwämmen zur mechanischen Wundkompression und der durch Kollagen induzierten Trombozytenaggregation, das bestehende Therapiekonzept nur unwesentlich verändert wird und zum anderen durch das freigesetztes Thrombin die Wundheilung über einen Zeitraum von 7-10 Tagen unterstützt wird. Die durch Kollagen hervorgerufene Thrombozytenaggregation führt über die Ausschüttung von Mediatoren zu einer Aktivierung der plasmatischen Blutgerinnung.
Zusammenfassend kann festgestellt werden, dass die erfindunggemässe Kombination des Kollagens, mit seinen thrombozytenaggregationsfördemden Eigenschaften, und einer temporären - für den Zeitraum der Wundheilung ausreichende, lokalen Freisetzung des Gerinnungsfaktors Na (Thrombin), eine lokale Hämostase über einen längeren Zeitraum, die unabhängig von systemischen Einflüssen ist ermöglicht. Die Freisetzung erfolgt bevorzugt 0 bis 14 Tage, besonders bevorzugt 7 bis 10 Tage.
Darüberhinaus kann das Präparat durch die Beigabe weiterer, in die resorbierbaren Sphären eingearbeitete, therapieunterstützender Antifibrinolytika wie z.B. Tranexamsäure, ε-Amino-capronsäure, 4-(Aminomethyl)benzoesäure, Aprotinin, EPO, Acetaminonaphton, Thromboplastin, Menadionnatriumbisulfat, Adrenochrommono- aminoguanidinmethansulfonat oder Carbazochromnatriumsulfat ergänzt werden. Hiermit gelingt es zusätzliche thrombolytische Einflüsse durch das Piasminsystem und der fibrinolytischen Speichelwirkung bis zum Abschluß der Wundheilung auszugleichen. Auch können die erfindungsgemässen Sphären weitere Wirkstoffe wie Antibiotika, Antiinfektiva oder Lokalanästhetika enthalten. Die Freisetzung von aktivem Thrombin aus resorbierbaren Polymilchsäure-co-glycolid- sphären wurde in-vitro mit Hilfe eines chromogenen Substrats untersucht und nachgewiesen.
Abbildung 2 zeigt eine Freisetzungsprofil von Thrombin aus Poly (DL-Lactid-co-glycolid) 50:50 (Boehringer Ingelheim RG 504) bei 37°C in PBS-Puffer. Dargestellt ist die zeitabhängige kummulative Thrombinfreisetzung, bestimmt mittels Bradford-Test in-vitro gemessen über den Freisetzungszeitraum von 28 Tagen.
Abbildung 3 zeigt eine Freisetzungsprofil von Thrombin aus Poly (DL-Lactid-co-glycolid) 50:50 (Boehringer Ingelheim RG 504) bei 37°C in PBS-Puffer. Dargestellt ist die zeitabhängige kummulative Thrombinfreisetzung, die über die Abspaltung von p-Nitroanilin aus dem chromogenen Substrat, in-vitro gemessen über den Freisetzungszeitraum von 28 Tagen. 1 NIH Thrombin entspricht 0.324 +/- 0.073 μg Thrombin. Die freigesetzte p- Nitroanilin-Menge ist proportional zum aktiven Thrombin, das eingesetzte Thrombin hatte eine Aktivität von 50 NIH/mg.
Die vorliegende Erfindung stellt ferner die Verwendung der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Formulierung als lokales Hamostyptikum bereit, insbesondere für die lokalen Hämostase bei blutgerinnungsgehemmten / blutgerinnnungs-inkompetenten Patienten. Die Ursache der Blutgerinnungshemmung kann dabei iatrogen sein, d.h. aufgrund einer Hemmung der Blutgerinnung durch Gabe von Vitamin K Antagonisten, wie Phenprocoumon oder Coumadin, Thrombozytenaggregationshemmern wie Acetylsalicylsäure, Tirofiban, Dipyramidol, Ticiopidin oder Eptifibatid bedingt sein oder ist endogen bedingt wie bei Patienten mit einem angeborenen Defekt der Blutgerinnung in milder Form. Hierzu gehören z.B. Hämophile A/B, von-Willebrand-Jürgens-Syndrom und ein isolierter Faktoren mangel innerhalb des Prothrombinkomplexes.
Wie aus der Literatur bekannt und bereits oben diskutiert liegt die Häufigkeit der postoperativen Nachblutungen bei gerinnungsinkompetenten Patienten bei ca. 30% und die erforderliche Dauer der Hospitalisierung bei mehreren Tagen (im Durchschnitt bei 5 Tagen). Der klinische Einsatz der erfindungsgemässen pharmazeutischen Formulierung setzt die Nachblutungsfrequenz wesentlich herab und verkürzt dadurch die Hospitalisierungsdauer. Ferner ermöglicht sie die ambulante Durchführung bestimmter Eingriffe. Dies bedeutet neben einem deutlich verringerten Risiko für die Patienten auch eine erhebliche Kosteneinsparung im Gesundheitswesen.

Claims

Patentansprüche
1. Resorbierbare pharmazeutische Formulierung zur kontinuierlichen lokalen Thrombin (Gerinnungsfaktor Ila)-Freisetzung umfassend Thrombin welches in resorbierbaren Sphären aus Polymeren eingebettet ist, wobei die Sphären in Kollagenschwämme inkorporiert sind und wobei die resorbierbaren Sphären gegebenenfalls zusätzlich ein oder mehrere Antifibrinolytika enthalten können.
2- Resorbierbare pharmazeutische Formulierung nach Anspruch 1 wobei das Polymer ausgewählt ist aus Polyzuckern und ihren Derivaten, Polyvinylalkohol (PVA), Polyvinylpyrrolidon (PVP), Polymethylmethacrylat (PPMA). Polyalkylcyanoacrylat (PACA), Acrylcopolymeren, Polyethylen-vinylacetat, Polyhydroxypropylcellulose, Polyorthoesters, Poly-ε-caprolactone, Polyaminosäuren, Polyurethane, Polyethylenglykol, Polymilchsäure (PLA), Polylaktiden, Polyhydroxybutyrat (PHB), Poly-L-Lysin und deren Homologen und Kokondensaten, Milchsäure-Glycolsäure- Kopolymer (PLG), Resomer RG 504 ®und Resomer RG 505®.-
3. Resorbierebare phamazeutische Formulierung nach Anspruch 1 oder 2 wobei der Durchmesser der Sphären 0,1 bis 1000 μm, bevorzugt 10 bis 150 μm beträgt.
4. Resorbierbare pharmazeutische Formulierung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei der KoUagenschwamm (Kollagen Typ 1) aus Kollagen aus humaner, boviner, swiner, equiner Quelle oder aus mittels gentechnischer Verfahren hergestelltem Kollagen hergestellt wird.
5. Resorbierbare pharmazeutische Formulierung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei Thrombin ausgewählt ist aus boviner, swiner, equiner oder humaner Herkunft oder das Produkt einer gentechnischen Herstellungsverfahrens ist.
6. Resorbierbare pharmazeutische Formulierung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, wobei Thrombin in einer Menge von 1 I.E. bis 2000I.E., bevorzugt 250 I.E. bis 1000 I.E. pro Implantat vorliegt.
7. Resorbierbare pharmazeutische Formulierung nach einem der Anspruch 1 bis 6, wobei die Antifibrinolytika ausgewählt sind aus Tranexansäure, ε-Aminocapronsäure, 4-(Aminomethyl)benzoesäure, Aprotinin, EPO, Acetaminonaphton, Thromboplastin, Menadionnatriumbisulfat, Adrenochrommonoaminoguanidinmethansulfonat und Carbazochromnatriumsulfat.
8. Resorbierbare pharmazeutische Formulierung nach einem der Ansprüche 1 bis 7, wobei die Freisetzung über einen Zeitraum von 0 bis 14 Tagen, bevorzugt 7 bis 10 Tagen erfolgt.
9. Resorbierbare pharmazeutische Formulierung nach einem der Ansprüche 1 bis 8, ferner enthaltend ein Antibiotikum, Antiinfektivum oder Lokalanästhetikum.
10. Verwendung einer Formulierung nach einem der vorangegangenen Ansprüche als Hamostyptikum.
11. Verwendung nach Anspruch 10 bei gerinnungsinkompetenten Patienten.
12. Verwendung nach Anspruch 10 oder 11 , wobei die Patienten unter therapeutisch induzierter Antikoagulation stehen oder an angeborenen Defekten der Blutgerinnung der milden Form leiden.
13. Verwendung nach einem der Ansprüche 10 bis 12 bei Patienten mit Venenthrombosen, Lungenembolie, Schlaganfall, Herzinfarkt, Vorhofflimmern, oder künstlichen Herzklappenprothesen, oder bei therapeutischer Antikoagulation auf Grund von angeborenen Protein C-, Protein S- oder Antithrombinmangel.
14. Verwendung nach einem der Ansprüche 10 bis 12, bei Patienten mit Hämophilie A/B, von Willebrand-Jürgens-Syndrom oder isoliertem Faktorenmangel innerhalb des Prothrombinkomplexes.
15. Verwendung nach einem der Ansprüche 9 bis 14 bei chirurgischen oder zahnchirurgischen Eingriffen.
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Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9265858B2 (en) 2012-06-12 2016-02-23 Ferrosan Medical Devices A/S Dry haemostatic composition
US9283187B2 (en) 2011-04-27 2016-03-15 Biom'up Hemostatic compositions
US9533069B2 (en) 2008-02-29 2017-01-03 Ferrosan Medical Devices A/S Device for promotion of hemostasis and/or wound healing
US9724078B2 (en) 2013-06-21 2017-08-08 Ferrosan Medical Devices A/S Vacuum expanded dry composition and syringe for retaining same
US10111980B2 (en) 2013-12-11 2018-10-30 Ferrosan Medical Devices A/S Dry composition comprising an extrusion enhancer
US10653837B2 (en) 2014-12-24 2020-05-19 Ferrosan Medical Devices A/S Syringe for retaining and mixing first and second substances
US10918796B2 (en) 2015-07-03 2021-02-16 Ferrosan Medical Devices A/S Syringe for mixing two components and for retaining a vacuum in a storage condition
US11046818B2 (en) 2014-10-13 2021-06-29 Ferrosan Medical Devices A/S Dry composition for use in haemostasis and wound healing
US11052172B2 (en) 2016-08-12 2021-07-06 Biom'up France SAS Hemostatic flowable
US11109849B2 (en) 2012-03-06 2021-09-07 Ferrosan Medical Devices A/S Pressurized container containing haemostatic paste
CN114159623A (zh) * 2020-12-12 2022-03-11 复旦大学 一种自抗凝弹性体材料及其制备方法
US11801324B2 (en) 2018-05-09 2023-10-31 Ferrosan Medical Devices A/S Method for preparing a haemostatic composition

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104163779B (zh) * 2014-06-06 2016-04-13 浙江工业大学 一种管式连续化制备亚硫酸氢钠甲萘醌的方法
CN111053944B (zh) * 2019-11-28 2021-05-28 中国科学院大学温州研究院(温州生物材料与工程研究所) 一种载凝血酶微球-膨胀海绵复合止血材料及其制备方法及应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4515637A (en) * 1983-11-16 1985-05-07 Seton Company Collagen-thrombin compositions
WO1997037694A1 (en) * 1996-04-04 1997-10-16 Immuno Aktiengesellschaft Hemostatic sponge based on collagen
EP1053753A1 (de) * 1999-05-19 2000-11-22 Resorba Chirurgisches Nahtmaterial Franz Hiltner GmbH &amp; Co. Lokaler Wirkstoffträger

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4515637A (en) * 1983-11-16 1985-05-07 Seton Company Collagen-thrombin compositions
WO1997037694A1 (en) * 1996-04-04 1997-10-16 Immuno Aktiengesellschaft Hemostatic sponge based on collagen
EP1053753A1 (de) * 1999-05-19 2000-11-22 Resorba Chirurgisches Nahtmaterial Franz Hiltner GmbH &amp; Co. Lokaler Wirkstoffträger

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9533069B2 (en) 2008-02-29 2017-01-03 Ferrosan Medical Devices A/S Device for promotion of hemostasis and/or wound healing
US9283187B2 (en) 2011-04-27 2016-03-15 Biom'up Hemostatic compositions
US9662374B2 (en) 2011-04-27 2017-05-30 Biom'up Hemostatic compositions
US10046034B2 (en) 2011-04-27 2018-08-14 Biom'up Hemostatic compositions
US10342856B2 (en) 2011-04-27 2019-07-09 Biom'up Hemostatic compostions
US11109849B2 (en) 2012-03-06 2021-09-07 Ferrosan Medical Devices A/S Pressurized container containing haemostatic paste
US10799611B2 (en) 2012-06-12 2020-10-13 Ferrosan Medical Devices A/S Dry haemostatic composition
US9265858B2 (en) 2012-06-12 2016-02-23 Ferrosan Medical Devices A/S Dry haemostatic composition
US9999703B2 (en) 2012-06-12 2018-06-19 Ferrosan Medical Devices A/S Dry haemostatic composition
US9724078B2 (en) 2013-06-21 2017-08-08 Ferrosan Medical Devices A/S Vacuum expanded dry composition and syringe for retaining same
US10595837B2 (en) 2013-06-21 2020-03-24 Ferrosan Medical Devices A/S Vacuum expanded dry composition and syringe for retaining same
US11103616B2 (en) 2013-12-11 2021-08-31 Ferrosan Medical Devices A/S Dry composition comprising an extrusion enhancer
US10111980B2 (en) 2013-12-11 2018-10-30 Ferrosan Medical Devices A/S Dry composition comprising an extrusion enhancer
US11046818B2 (en) 2014-10-13 2021-06-29 Ferrosan Medical Devices A/S Dry composition for use in haemostasis and wound healing
US10653837B2 (en) 2014-12-24 2020-05-19 Ferrosan Medical Devices A/S Syringe for retaining and mixing first and second substances
US10918796B2 (en) 2015-07-03 2021-02-16 Ferrosan Medical Devices A/S Syringe for mixing two components and for retaining a vacuum in a storage condition
US11052172B2 (en) 2016-08-12 2021-07-06 Biom'up France SAS Hemostatic flowable
US11801324B2 (en) 2018-05-09 2023-10-31 Ferrosan Medical Devices A/S Method for preparing a haemostatic composition
CN114159623A (zh) * 2020-12-12 2022-03-11 复旦大学 一种自抗凝弹性体材料及其制备方法

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Publication number Publication date
AU2003232257A1 (en) 2003-11-11
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