WO2002083166A1 - Interferon-polymer complexes and medicinal use thereof - Google Patents

Interferon-polymer complexes and medicinal use thereof

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WO2002083166A1
WO2002083166A1 PCT/JP2002/003563 JP0203563W WO02083166A1 WO 2002083166 A1 WO2002083166 A1 WO 2002083166A1 JP 0203563 W JP0203563 W JP 0203563W WO 02083166 A1 WO02083166 A1 WO 02083166A1
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interferon
disease
ifn
complex
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PCT/JP2002/003563
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Yasuhiko Tabata
Hidehito Matsuoka
Tatsuji Kurose
Kenji Murai
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Santen Pharmaceutical Co., Ltd.
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Definitions

  • the present invention relates to a novel interferon-polymer complex, a method for producing the same, a medicinal use thereof, and a method for extending the duration of the drug effect of insulin.
  • IFN Infineon ferron
  • PEG polyethylene glycol
  • the present invention provides a medicine containing the IFN-polymer complex as an active ingredient, for example, a therapeutic agent for a disease associated with angiogenesis or a therapeutic agent for a liver disease. Further, the present invention provides a method for producing an IFN-polymer complex, which comprises mixing IFN and a polymer into which spermine has been introduced in the presence of a metal ion. Furthermore, the present invention provides a method for extending the duration of the pharmacodynamic effect of IFN by using an IFN-high complex. As described above, the IFN-polymer complex of the present invention has a It can be easily obtained by mixing with a spermine-introduced polymer under a metal ion.
  • the spermine used in the present invention is a kind of polyamine having a metal chelating ability and a chemical name of N, N'-bis (3-aminopropyl) -1,4-diaminobtan, and is present in animal fibers and serum. It is a compound and is highly safe for the human body.
  • the polymer used in the present invention may be any polymer that can introduce spermine and is acceptable as a pharmaceutical additive, and is not particularly limited. Polymers and the like can be mentioned, and a water-soluble polymer having a K acid group is suitably used.
  • Example 2 The same operation as in Example 1 was carried out except that pullulan was used instead of dextrin, to obtain a crudely purified aqueous solution of the target complex via a chelate bond between IFN and spermine-pullulane.
  • the reaction product was dialyzed against water for 2 days to remove unreacted DTPA and 4-dimethylaminopyridine, and then freeze-dried to obtain DTP A-introduced pullulan. About 20% mole per mole (electrical conductivity titration method)). Next, the above solution was added to an IFN-] 3 (Mochida Pharmaceutical) aqueous solution of 150,000 single ⁇ 5 / 0.375 ml.
  • IFN-speramine-dextran obtained in Example 1 was diluted with a phosphate buffer and administered to the tail vein at a dose of 100,000 units / kg as IFN administration for 13 days from the day of laser irradiation.
  • 2-5A synthetase is an antiviral enzyme specifically induced by IFN, and it is known that this enzyme activity corresponds to the antiviral activity of IFN.
  • the IFN activity ratio was calculated based on the amount (emission intensity) of 2-5A synthase. Table 2 shows the results.
  • the amount (luminescence intensity) of 2-5A synthetase in the liver when IFN-spermine-pullulane obtained in Example 2 was administered intravenously was determined by IFN alone and IFN-DTP A-Pullulan (Comparative Example 1) was significantly increased compared to intravenous administration, indicating that the IFN-spermine-pullulane complex efficiently targeted IFN activity to the liver. Understand. These effects are achieved by complexing IFN with spermine-introduced pullulan, effectively targeting IFN to its target site, the liver, resulting in enhanced IFN in the liver was done.

Abstract

IFN preparations wherein IFN is modified so as to elevate the stability of IFN and allow the exhibition of the IFN drug effect at a target site. Such an interferon-polymer complex can be obtained by mixing interferon with a polymer having spermine transferred thereinto in the presence of a metal ion. As the interferon, β-interferon is favorable. As the polymer, use is made of pharmaceutically acceptable polymers such as water-soluble polysaccharides and polyhydric alcohol polymers. As the polysaccharides, dextran and pullulan are favorable. As the polyhydric alcohol polymers, polyalkylene glycols and polyvinyl alcohol are favorable.

Description

明 細 書 インターフェロン一高^ f複合体及びその医薬用途 技術分野  Description Interferon-high ^ f complex and its pharmaceutical use
本発明は、 新規なインターフェロン一高分子複合体、 その製造方法及びその医 薬用途並びにィン夕一フエ口ンの薬効持続時間の延長方法に関する。 背景技術  The present invention relates to a novel interferon-polymer complex, a method for producing the same, a medicinal use thereof, and a method for extending the duration of the drug effect of insulin. Background art
イン夕一フエロン （以下 「I F N」 という） は、 抗ウィルス作用を有する物質 として発見されて以来、 種々の生物活性が見出されている。 例えば、 細胞増殖抑 制作用、 免疫調節作用、 細胞高分 ^成調整作用等であり、 実際にウィルス感染 疾患の他、 癌、 肝臓疾患や種々の免疫疾患等の治療に広く用いられている。 しか し、 I F Nは生体内において不安定な物質であるため、 その安定化が重要な課題 であり、 安定化を目的とした種々の製剤研究も行われている。 この生体内におけ る I F Nの安定化は、 I F Nの薬効持続時間の延長にもつながり、 I F Nの薬効 発現に重要な影響を及ぼす。 これらを目的とした研究報告として、 例えば、 高分 子材料を用いた I F Nの修飾、 具体的には、 I F N—ポリエチレングリコール （ P E G) 抱合体 （特開平 6 _ 1 9 2 3 0 0 ) が報告されている。  Infineon ferron (hereinafter referred to as “IFN”) has been found to have various biological activities since it was discovered as a substance with antiviral activity. For example, it is used for producing cell growth suppression, immunoregulatory action, and cell density regulation action, and is actually widely used for the treatment of cancer, liver disease and various immunological diseases in addition to viral infectious diseases. However, IFN is an unstable substance in the living body, so its stabilization is an important issue, and various pharmaceutical studies for stabilization have been conducted. This stabilization of IFN in vivo leads to a longer duration of IFN drug effect, and has an important effect on IFN drug effect expression. As research reports for these purposes, for example, the modification of IFN using polymer materials, specifically, the IFN-polyethylene glycol (PEG) conjugate (Japanese Patent Application Laid-Open No. 6-19230) was reported. Have been.
また、 I F Nは、血管新生抑制作用を有することも報告されている（Si dky， Y. A. et al , Cancer Res. , 47, 5155-5161, 1987) 。 血管新生は種々の疾患と密接なつ ながりがあり、 血管新生を伴う疾患としては、 例え 尿病' 膜症、 未熟児網 膜症、 黄斑変性症、 血管新生緑内障、 網膜静脈閉塞症、 網膜動脈閉塞症、 翼状片 、 ルべォ一シス、 角膜新生血管症等の眼科疾患、 固形腫瘍、 血管腫、 腫瘍の増殖 ·転移等の癌疾患、 慢性関節リュウマチ、 乾癬、 浮腫性硬化症等の自己免疫性疾 患などが挙げられる。  It has also been reported that IFN has an angiogenesis inhibitory action (Sidky, YA et al, Cancer Res., 47, 5155-5161, 1987). Angiogenesis is closely linked to various diseases.Examples of diseases associated with angiogenesis include urinary disease, retinopathy of prematurity, macular degeneration, neovascular glaucoma, retinal vein occlusion, and retinal artery. Ophthalmic diseases such as obstruction, pterygium, lubeiosis, corneal neovascular disease, solid tumors, hemangiomas, cancer diseases such as tumor growth and metastasis, rheumatoid arthritis, psoriasis, edema sclerosis, etc. Examples include immune diseases.
一方、 I F Nの標的部位への移行に関する研究も種々行われている。 標的部位 への移行は、 I FNの薬効発現を効果的にするために重要であり、 例えば、 I F Nの肝臓への集積を向上させた I FN- α—プルラン複合体 (Tabata, Y. et al, J. Interferon and Cytokine Research, 19,287-292, 1999) のように、 高分子材 料を用いて I FNを修飾する技術についての研究がなされている。 しカゝし、 前述したように、 I FNは安定性が低いため、 そのままでは血管新生 を伴う疾患の治療剤として十分な効果を発揮することが困難である。 従来、 I F Nの安定化に関する研究は種々なされているが、 まだ満足できるものではない。 本発明の目的は、 I FNの安定性を高め、 且つ、 標的部位での I FNの薬効が 発揮できるように、 I FNを修飾した I FN製剤を提供することである。 発明の開示 On the other hand, various studies have been conducted on the transfer of IFN to a target site. Target site Is important for effective IFN expression, for example, IFN-α-pullulan complex (Tabata, Y. et al., J. Interferon and Cytokine Research, 19, 287-292, 1999) have been researching techniques for modifying IFN using polymeric materials. However, as described above, IFN has low stability, and as such, it is difficult to exert a sufficient effect as a therapeutic agent for a disease associated with angiogenesis. There have been various studies on IFN stabilization, but they have not been satisfactory. An object of the present invention is to provide an IFN preparation in which IFN is modified so as to enhance the stability of IFN and to exert IFN efficacy at a target site. Disclosure of the invention
本発明者らは上記課題を解決するために l意研究を行った結果、 I FNを、 I FN、 金属キレート能をもつスペルミンを導入した高分子及び金属イオンからな る I FN—高分子複合体とすることにより、 I FNの生体内における安定性が向 上し、 且つ、 標的部位での I FNの薬効が発揮できることを見いだした。 また、 この生体内安定性向上は I FNの薬効持続時間の延長にもつながるものである。 本発明は、 I FNと、 金属キレート能をもつスペルミンを導入した高^とを 金属イオンの 下で混合することにより得られる、 金属配位結合を介した I F N—高分子複合体に関する。 本発明は、 上記の I FN—高分子複合体を有効成分 として含有する医薬、 例えば、 血管新生を伴う疾患の治療剤や肝疾患の治療剤を 提供する。 また、 本発明は、 I FNと、 スペルミンを導入した高分子とを金属ィ オンの存在下で混合することからなる I FN—高分子複合体の製造方法を提供す る。 さらに、 本発明は、 I FN—高 複合体を用いることによる I FNの薬効 持続時間の延長方法を提供する。 上記の通り、 本発明の I FN—高分子複合体は、 I FNと、 金属キレート能を もつスペルミンを導入した高 子とを金属イオンの 下で混合することにより 容易に得られる。 The present inventors have conducted intensive studies to solve the above-mentioned problems. As a result, IFN-IFN-polymer composite comprising IFN, a polymer into which spermine having metal chelating ability is introduced, and a metal ion. By making the body, IFN has been found to improve the stability of the IFN in a living body and to exert the drug efficacy of IFN at a target site. In addition, this improved in vivo stability also leads to a longer duration of IFN drug efficacy. The present invention relates to an IFN-polymer complex via a metal coordination bond, which is obtained by mixing IFN and high ^ into which spermine having a metal chelating ability is introduced under a metal ion. The present invention provides a medicine containing the IFN-polymer complex as an active ingredient, for example, a therapeutic agent for a disease associated with angiogenesis or a therapeutic agent for a liver disease. Further, the present invention provides a method for producing an IFN-polymer complex, which comprises mixing IFN and a polymer into which spermine has been introduced in the presence of a metal ion. Furthermore, the present invention provides a method for extending the duration of the pharmacodynamic effect of IFN by using an IFN-high complex. As described above, the IFN-polymer complex of the present invention has a It can be easily obtained by mixing with a spermine-introduced polymer under a metal ion.
本発明の複合体に含まれる I F Nは、 α型、 /3型、 ァ型、 あるいはコンセンサ ス型、 ハイブリッド型のいずれでも良く、 またその由来も天然型、 遺伝子組換え 型、 化学合成型のいずれでも良い。 I F N- αと I F N- i3はレセプ夕一を共有し ており、 同様の作用を有してはいるが、 血管新生抑制作用に関しては、 I F N- /3の方が I F N-ひよりも高い薬効を奏するという報告 (Sidky, Y. A. e t al , Cancer Res. , 47, 5155-5161 , 1987) があり、 I F N- ]3が好適に用いられる。 本発明に用いられるスペルミンは、 金属キレート能を有し、 化学名が N， N ' —ビス（3—ァミノプロピル）一 1 , 4—ジァミノブタンであるポリアミンの一種 で、 動物繊や血清中に存在する化合物であり、 人体に対する安全性も高い。 本発明に用いられる高分子としては、 スペルミンを導入することが可能であつ て、 医薬の添加物として許容される高分子であればよく、 特に制限されないが、 水溶性高分子ゃミセル形成可能な高分子などが挙げられ、 K酸基を有する水溶性 高分子が好適に用いられる。  The IFN contained in the complex of the present invention may be any of α-type, / 3-type, α-type, consensus-type, and hybrid-type, and may be derived from any of natural-type, genetic-recombinant-type, and chemically-synthetic-type. But it is good. IFN-α and IFN-i3 share the same receptor and have similar effects, but with regard to the angiogenesis inhibitory effect, IFN- / 3 is more effective than IFN-hi. There is a report (Sidky, YA et al, Cancer Res., 47, 5155-5161, 1987) that exhibits high drug efficacy, and IFN-] 3 is preferably used. The spermine used in the present invention is a kind of polyamine having a metal chelating ability and a chemical name of N, N'-bis (3-aminopropyl) -1,4-diaminobtan, and is present in animal fibers and serum. It is a compound and is highly safe for the human body. The polymer used in the present invention may be any polymer that can introduce spermine and is acceptable as a pharmaceutical additive, and is not particularly limited. Polymers and the like can be mentioned, and a water-soluble polymer having a K acid group is suitably used.
7_Κ溶性高分子としては、 医薬の添加物として許容される水溶性高分子であれば よく、 特に制限されないが、 多糖類又は多価アルコール系高分子が好適に用いら れる。  The 7-soluble polymer may be any water-soluble polymer that is acceptable as a pharmaceutical additive, and is not particularly limited, and a polysaccharide or a polyhydric alcohol-based polymer is preferably used.
多糖類としては、 医薬の添加物として許容される多糖類であればよく、 特に制 限されないが、 デキストラン、 プルラン、 スターチ、 ヒアルロン酸、 エルシナン などが挙げられ、 デキストラン又はプルランが好適に用いられる。 これらの多糖 類の分子量は、 通常 4， 000〜500， 000の範囲で、 より好ましくは 70, 000〜500， 000 である。  The polysaccharide may be any polysaccharide that is acceptable as a pharmaceutical additive, and is not particularly limited. Examples thereof include dextran, pullulan, starch, hyaluronic acid, and ercinan, and dextran or pullulan is preferably used. The molecular weight of these polysaccharides is usually in the range of 4,000 to 500,000, more preferably 70,000 to 500,000.
面アルコール系高分子としては、 医薬の添加物として許容される多価アルコ ール系高分子であればよく、 特に制限されないが、 ポリエチレングリコールなど のポリアルキレングリコール又はポリビニルアルコールが好適に用いられる。 こ れらの多価アルコール系高分子の分子量は、 通常 4, 000〜500， 000の範囲にあり、 より好ましくは 70， 000〜500, 000である。 The surface alcohol-based polymer may be any polyhydric alcohol-based polymer that is acceptable as a pharmaceutical additive, and is not particularly limited. Polyalkylene glycol such as polyethylene glycol or polyvinyl alcohol is preferably used. The molecular weight of these polyhydric alcohol polymers is usually in the range of 4,000 to 500,000, More preferably, it is 70,000 to 500,000.
スペルミンを導入した高分子とは、 スペルミンと高分子とを化学結合させたも のを示し、 スペルミンと高分子とを N， N'—カルボニジルイミダゾール等の縮合剤 を用いてジメチルスルホキシドなどの溶媒中で混合し、 縮合させることにより容 易に得ることができる。 より詳しく説明すると、 スペルミンのァミノ基と高^ の水酸基とを反応性基として利用し、 縮合剤を用いて縮合させるものである。 好 適な高分子の例として挙げたデキストラン若しくはプルラン等の多糖類又はポリ アルキレングリコール若しくはポリビニルアルコール等の多価アルコール系高分 子は、 複数の水酸基を有するが、 全ての水酸基が化学結合に寄与する必要はなく 、 一部は遊離の水酸基として残っていてもよく、 またその化学結合の形態に制約 されるものではない。  Spermine-introduced polymer refers to a polymer in which spermine and a polymer are chemically bonded. Spermine and a polymer are combined with a condensing agent such as N, N'-carbonidylimidazole to form a polymer such as dimethyl sulfoxide. It can be easily obtained by mixing and condensing in a solvent. More specifically, the amino group of spermine and a highly hydroxyl group are used as reactive groups, and are condensed using a condensing agent. Polysaccharides such as dextran or pullulan or polyhydric alcohols such as polyalkylene glycol or polyvinyl alcohol, which are mentioned as examples of suitable polymers, have multiple hydroxyl groups, but all of the hydroxyl groups contribute to chemical bonding. It is not necessary to do so, and a part may remain as a free hydroxyl group, and the form of the chemical bond is not limited.
その他の製造方法としては、 塩化シァヌル法 （ 「新実験化学講座 19 高分子化 学 I」 、 日本ィ匕学会） 、 臭化シアン法 （ 「生化学実験講座 I タンパク質の化学 I」 、 日本生化学会） 、 あるいはェピクロルヒドリン法 （ 「第 4版 実験化学講 座 29 高分子材料」 、 日本化学会） なども用いることができる。  Other production methods include the cyanuric chloride method (“New Experimental Chemistry Course 19 Polymer Chemistry I”, Nippon Iridai Gakkai), the cyanogen bromide method (“Biochemical Experiment Course I, Protein Chemistry I”, The Japan Biochemical Society). ) Or the epichlorohydrin method ("Experimental Chemistry Lecture 29 Polymer Materials", 4th edition, Chemical Society of Japan).
本発明で使用される金属としては、 人体に対して安全であれば、 特に限定され るものではなく、 2価あるいはそれ以上の原子価をもつ遷移及びアル力リ土類金 属などが好ましい。 複合体の安定性や安全性の観点から、 亜铅、 銅、 ニッケル、 コバルトなどが好ましく、 亜鉛がさらに好ましい。 これらの金属は塩化物、 硫酸 塩あるいは酢酸塩などの塩の形で I F N—高分子複合体の製造に使用される。 本発明の I F N—高分子複合体は、 I F Nの水溶液と、 上記スペルミンを導入 した高分子と、 上記金属イオンとを混合することにより得ることができる。 混合 温度及び溶媒は特に限定する必要はなく、 混合温度は室温でよく、 溶媒は水でよ い。  The metal used in the present invention is not particularly limited as long as it is safe for the human body, and is preferably a transition material having two or more valences, an alkaline earth metal, or the like. From the viewpoint of stability and safety of the composite, zinc, copper, nickel, cobalt and the like are preferable, and zinc is more preferable. These metals are used in the production of IFN-polymer complexes in the form of salts such as chlorides, sulfates or acetates. The IFN-polymer complex of the present invention can be obtained by mixing an aqueous solution of IFN, the polymer into which spermine has been introduced, and the metal ion. The mixing temperature and the solvent need not be particularly limited, the mixing temperature may be room temperature, and the solvent may be water.
I F N、 スペルミンを導入した高分子及び金属イオンの混合比率は、 必要に応 じて選択することができるが、 通常、 1モルの I F Nに対し、 スペルミンを導入 した高分子の使用量は 0 . 0 1モル〜 1 0モルで、 金属イオンの使用量は 0. 1 モル〜 1 0 0モルである。 The mixing ratio of IFN, the polymer into which spermine is introduced, and the metal ion can be selected as needed. However, the amount of the polymer into which spermine is introduced is usually 0.0 per mole of IFN. 1 mol to 10 mol, the amount of metal ion used is 0.1 Mol to 100 mol.
高分子とスペルミンとの結合比も必要に応じて選択することができる。 その結 合比は高分子の種類や結合状態によっても異なるが、 通常、 高分子 1モルに対し て、 スペルミン 1モル〜 1 0 0モルである。  The binding ratio between the polymer and spermine can also be selected as needed. The bonding ratio varies depending on the type and bonding state of the polymer, but is usually 1 mol to 100 mol of spermine per 1 mol of the polymer.
I F Nは市販の水溶液を用いることができ、 その力価も所望に応じて選択する ことができる。  A commercially available aqueous solution of IFN can be used, and the titer thereof can also be selected as desired.
複合体を製造する際の混合時間は、 特に限定されないが、 5〜： L 5 0分間程度 が好ましい。 この混合溶液は、 特段の精製をすることなぐ そのまま実際の製剤 に利用することができ、 また凍結乾燥して粉末の状態で使用することもできる。 なお、 必要であれば、 ゲル濾過クロマトグラフィー等の手段を用いて、 未反応の 金属イオン又はインターフェロンを除去することもできる。  The mixing time for producing the composite is not particularly limited, but is preferably about 5 to about 50 minutes. This mixed solution can be used as it is in an actual preparation without any particular purification, or it can be freeze-dried and used in the form of a powder. If necessary, unreacted metal ions or interferon can be removed by means such as gel filtration chromatography.
本発明の I F N—高肝複合体は、 I F Nの生理活性を利用した種々の疾患の 治療に用いることができる。 例えば、 血管新生を伴う疾患や B型慢性活動' |4 F炎 、 C型慢性肝炎等の肝疾患などの治療に用いることができる。 血管新生を伴う疾 患の具体例としては、 糖尿病性網膜症、 未熟 ¾H膜症、 黄斑変性症、 血管新生緑 内障、 網膜静脈閉塞症、 網垂脈閉塞症、 翼状片、 ルべォ一シス、 角廳生血管 症等の眼科疾患、 慢性関節リュウマチ、 乾癬、 浮腫性硬化症等の自己免疫性疾患 、 固形腫瘍、 血管腫、 膠芽腫、 »腫、 星細 、 皮膚悪性黒 feffl、 腫瘍の増殖 -転移等の癌疾患などが挙げられる。  The IFN-high liver complex of the present invention can be used for treatment of various diseases utilizing the physiological activity of IFN. For example, it can be used for the treatment of diseases associated with angiogenesis and liver diseases such as chronic type B || 4F inflammation and chronic hepatitis C. Specific examples of diseases associated with angiogenesis include diabetic retinopathy, immature ¾H membrane disease, macular degeneration, neovascular glaucoma, retinal vein occlusion, retinal vein occlusion, pterygium, and Lubeo. Ophthalmic diseases such as cis, Kakujo bioangiopathy, autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis, psoriasis, edema sclerosis, solid tumors, hemangiomas, glioblastomas, »tumors, stellate cells, skin malignant black feffl, Tumor growth-cancer diseases such as metastasis.
本発明の複合体の投与量は、 患者の年齢、 体重、 投与対象疾患、 症状、 投与形 態、 投与ルートなどに応じて、 適宜決定されるが、 I F Nとして 1, 000単位/日〜 10, 000万単位/日、 好ましくは 10， 000単位/日〜2， 000万単位/日の範囲で投与され る。  The dose of the conjugate of the present invention is appropriately determined depending on the age, weight, subject disease, symptoms, administration form, administration route, and the like of the patient. It is administered in the range of 10 million units / day, preferably in the range of 10,000 units / day to 20 million units / day.
上記の方法により得られる I F N、 スペルミンを導入した高分子、 及び金属ィ オンからなる I F N—高^?複合体を用いた試験例を下記に示す。 試験例 1に示 すように、 I F N—高分子複合体は優れた血管新生阻害効果を発揮することが見 いだされた。 この試験結果は、 I F Nが 効を失うことなく標的部位に到達して いることを示し、 I F Nをスペルミン複合体にすることによる安定性向上効果を 裏付けると共に、 薬効持続時間の延長にもつながることを示唆している。 また、 試験例 2に示すように多糖類としてカレランを用いることによって、 肝臓部位に 効果的に I F Nを集積できることが分かり、 I F N—高分子複合体が肝臓疾患の 治療に有用であることを併せて見いだした。 A test example using an IFN-high ^? Complex comprising IFN, a polymer into which spermine is introduced, and a metal ion obtained by the above method is shown below. As shown in Test Example 1, the IFN-polymer complex was found to exhibit an excellent angiogenesis inhibitory effect. This test shows that IFN reaches the target site without losing efficacy. It supports the stability-improving effect of using IFN as a spermine complex, and suggests that the duration of the drug effect may be extended. In addition, as shown in Test Example 2, it was found that the use of carrelan as a polysaccharide can effectively accumulate IFN in liver sites, and that the IFN-polymer complex is useful for the treatment of liver disease. I found it.
本発明の I F N—高分子複合体は、 そのまま、 若しくは医薬として許容される 担体、 賦形剤などと混合した医薬組成物として投与することができる。 投与方法 としては、 経口投与でも非経口投与でも良ぐ 標的部位によって適宜投与方法を 選択することができる。 経口投与剤型としては、 錠剤、 カプセル剤、 顆粒剤など 力挙げられ、 公知の方法を用いて調製することができる。 例えば、 の場合ラ クト一ス、 マルトース、 サッカロース、 澱粉、 ステアリン酸マグネシウムなどの 賦形剤を用いて調製することができる。 非経口投与剤型としては、 例えば、 点眼 剤、 軟膏剤、 注射剤、 経鼻吸収剤、 経肺吸収剤、 経皮吸収剤などが挙げられ、 公 知の方法を用いて調製することができる。 例えば、 点眼剤や注射剤等の液剤は、 I F N—高 複合体を注射用蒸留水に溶解して調製することができ、 必要に応 じてグリセリン等の等張化剤、 塩酸等の p H調節剤、 リン酸緩衝液等の緩衝剤、 塩化ベンザルコニゥム等の防腐剤、 ェデト酸ナトリウム等の安定化剤等、 医薬と して許容される添加剤を用いて調製することができる。 さらに、 上記の各製剤に おいては、 安定化剤としてヒト血清アルブミン、 ヒト免疫グロブリン、 α 2マク ログロブリン、 アミノ酸などを添加することができる。 日月を するための ¾ の开^ ¾  The IFN-polymer complex of the present invention can be administered as it is or as a pharmaceutical composition mixed with a pharmaceutically acceptable carrier, excipient and the like. As the administration method, oral administration or parenteral administration is acceptable. The administration method can be appropriately selected depending on the target site. Oral dosage forms include tablets, capsules, granules, and the like, and can be prepared using known methods. For example, in the case of, it can be prepared using excipients such as lactose, maltose, saccharose, starch, and magnesium stearate. Parenteral dosage forms include, for example, eye drops, ointments, injections, nasal absorbents, pulmonary absorbents, transdermal absorbents, and the like, and can be prepared using known methods. . For example, liquid preparations such as eye drops and injections can be prepared by dissolving IFN-high complex in distilled water for injection, and if necessary, isotonic agents such as glycerin and pH adjusting agents such as hydrochloric acid. It can be prepared using pharmaceutically acceptable additives such as a regulator, a buffer such as a phosphate buffer, a preservative such as benzalkonium chloride, a stabilizer such as sodium edetate, and the like. Further, in each of the above-mentioned preparations, human serum albumin, human immunoglobulin, α2 macroglobulin, amino acids and the like can be added as a stabilizer.日 no 开 ^ を
次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、 本発明はこれらに限定され るものではない。  Next, the present invention will be described specifically with reference to examples, but the present invention is not limited thereto.
実施例 1 I F Nとスペルミン一デキストランとのキレート結合を介した複合 体 （I F N—スペルミンーデキストラン） の調製 Example 1 Preparation of a complex (IFN-spermine-dextran) via chelating bond between IFN and spermine-dextran
300mgのデキストラン（分子量 2 0万、 ナカライテスク株式会社製） を含む 30ml の無水ジメチルスルホキシド溶液中に、 81.5mgの N, N'—力ルポニジルイミダゾー ル （和光純薬株式会社製） を加え、 溶液を室温で撹拌しデキストランの水酸基を 活性化した。 この溶液に 1.01 lgのスペルミン （SIGMA社製） を加え、 同溶液を室温 でさらに 24時間 した。 反応物を水に対して 2日間透析して未反応のスペル ミンを除去した後、 凍結乾燥してスペルミンを導入したデキストランを得た （収 率 80%、 スペルミンの導入率はグルコース残基 1モル当り 5%モル （TNBS 法によるアミノ基定量） ) 。 つぎに、 I FN- /3 (持田 ®¾製） τ溶液 150,000単 375mlに上記のスペルミンを導入したデキストランの水溶液 46. Siig/Q.3ml を加え、 室温にて軽く撹拌後、 ΖηΠ2τΚ溶液 5.1ng/0.075mlを加えて混合して、 溶 液を室温で約 10分間放置した。 ついで、 生理食塩液 0.75mlを加えて攪拌し、 目的 とする I FNとスペルミン一デキストランとのキレート結合を介した複合体の粗 精製水溶液を得た。 30ml containing 300mg dextran (molecular weight 200,000, manufactured by Nacalai Tesque, Inc.) 81.5 mg of N, N'-force ruponidyl imidazole (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was added to an anhydrous dimethyl sulfoxide solution of the above, and the solution was stirred at room temperature to activate hydroxyl groups of dextran. 1.01 lg of spermine (manufactured by SIGMA) was added to this solution, and the solution was further incubated at room temperature for 24 hours. The reaction product was dialyzed against water for 2 days to remove unreacted spermine, and then freeze-dried to obtain dextran containing spermine (yield 80%, spermine introduction rate was 1 mole of glucose residue). 5% mole per amino acid (determination of amino group by TNBS method)). Then added I FN- / 3 aqueous (Mochida ®¾ Ltd.) tau solution 150,000 dextran was introduced above spermine single 375ml 46. Siig / Q.3ml, after gently stirred at room temperature, ΖηΠ 2 τΚ solution 5.1 ng / 0.075 ml was added and mixed, and the solution was left at room temperature for about 10 minutes. Subsequently, 0.75 ml of a physiological saline solution was added thereto, followed by stirring to obtain a crudely purified aqueous solution of the target complex via a chelate bond between IFN and spermine-dextran.
実施例 2 I FNとスペルミン一プルランとのキレート結合を介した複合体 (I FN—スペルミン一プルラン） の調製 Example 2 Preparation of Complex (IFN-Spermine-Pullulan) via Chelate Binding of IFN and Spermine-Pullulan
デキストリンの代わりにプルランを用いる以外は、 実施例 1と同様の操作をし て、 目的とする I FNとスペルミン一プルランとのキレ一ト結合を介した複合体 の粗精製水溶液を得た。  The same operation as in Example 1 was carried out except that pullulan was used instead of dextrin, to obtain a crudely purified aqueous solution of the target complex via a chelate bond between IFN and spermine-pullulane.
比較例 1 I FNとジエチレントリアミノペン夕酢酸 （DTPA) —プルラン とのキレート結合を介した複合体 （ I FN— DTPA—プルラン） の調製 lOOmgのプルラン（分子量 20万、 ナカライテスク株式会社製） を含む 30mlの無 水ジメチルスルホキシド溶液中に、 132.4mgのジエチレントリアミノペン夕酢酸無 7j物 (DTP A無水物，株式会社同仁化学研究所製） と 4.5mgの 4 -ジメチルァミ ノピリジンけ力ライテスク株式会社 i¾)とを加えた。 この混合溶液を室温で 24時 間撹拌した。 反応物を水に対して 2日間透析して未反応の DTPAと 4—ジメチ ルァミノピリジンを^した後、 凍結乾燥して DTP Aを導入したプルランを得 た （DTP Aの導入率はグルコース残基 1モル当り約 20%モル （電気伝導度滴定 法） ) 。 つぎに、 I FN-]3 (持田製薬製） 水溶液 150, 000単 ί5/0.375m lに上記 の D T P Aを導入したカレランの水溶液 46. 8 zg/0. 3mlを加え、室温で軽く撹拌後 、 ZnCl2水溶液 5. 1ng/0. 075mlを加えて混合して室温で約 10分間放置した。 ついで 、 生理食塩液 0. 75mlを加えて攪拌して、比較ィ匕合物 （I F N— D T P A-プルラン ) の水溶液を得た。 Comparative Example 1 Preparation of Complex (IFN-DTPA-Pullulan) via Chelate Bond between IFN and Diethylenetriaminopentenoacetic Acid (DTPA) -Pullulan Contains lOOmg of pullulan (molecular weight 200,000, manufactured by Nacalai Tesque, Inc.) In 30 ml of water-free dimethylsulfoxide solution, 132.4 mg of diethylenetriaminopentenoic acid 7j (DTP A anhydride, manufactured by Dojindo Laboratories, Inc.) and 4.5 mg of 4-dimethylaminopyridine were obtained. Was added. This mixed solution was stirred at room temperature for 24 hours. The reaction product was dialyzed against water for 2 days to remove unreacted DTPA and 4-dimethylaminopyridine, and then freeze-dried to obtain DTP A-introduced pullulan. About 20% mole per mole (electrical conductivity titration method)). Next, the above solution was added to an IFN-] 3 (Mochida Pharmaceutical) aqueous solution of 150,000 single ί5 / 0.375 ml. After adding 46.8 zg / 0.3 ml of an aqueous solution of carrelan into which DTPA had been introduced, and lightly stirring at room temperature, 5.1 ng / 0.075 ml of an aqueous solution of ZnCl 2 was added, mixed, and allowed to stand at room temperature for about 10 minutes. Then, 0.75 ml of a physiological saline solution was added and stirred to obtain an aqueous solution of a comparative conjugate (IFN-DTPA-Pullulan).
試験例 1 I F N—スペルミン―デキストランの血管新生抑制試験 Test Example 1 IFN-spermine-dextran angiogenesis inhibition test
5 ケタミン注射液及び 2 キシラジン注射液の混合液 (7 : 1) linl/kg をラットの筋肉内に投与することにより全身麻酔し、 0. 5 %トロピカミド一 0 . 5 %塩酸フエ二レフリン配合点眼液投与により散瞳させた後、 クリプトンレー ザ一光凝固装置を用いて光凝固を行った。光凝固は、 脈後局部の太い網麵管 を避け、 焦点を網隙荣層に合わせて 8ケ所に散在的に実施した (凝固条件：スポッ トサイズ 100 m、 出力 100mW、 凝固時間 0. 1秒)。 光凝固後、 g艮底撮影を行い、 レ 一ザ一照射部位を確認した。 光凝固後 14日目に 10%フルォレスセイン 0. 1mlを類 静脈から注入して、 蛍光眼底膨を行った。 実施例 1で得た I F N—スペラミン ーデキストランをリン酸緩衝液で希釈し、 レーザー照射日より 13日間、 I F N投 与量として 10万単位/ kgの用量で尾静脈へ投与した。  Rats were anesthetized with a mixture of 5 ketamine injection and 2 xylazine injection (7: 1) linl / kg intramuscularly, and 0.5% tropicamide / 0.5% fenirephrine hydrochloride was administered. After mydriasis by liquid administration, photocoagulation was performed using a krypton laser photocoagulator. Photocoagulation was carried out in eight places with focus on the retinal layer, avoiding the thick reticulotube in the post-pulse area (coagulation conditions: spot size 100 m, output 100 mW, coagulation time 0.1 sec. ). After photocoagulation, golgi bottom photograph was taken to confirm the laser-irradiated site. On the 14th day after photocoagulation, 0.1 ml of 10% fluorescein was injected through a vein to perform fluorescent fundus swelling. IFN-speramine-dextran obtained in Example 1 was diluted with a phosphate buffer and administered to the tail vein at a dose of 100,000 units / kg as IFN administration for 13 days from the day of laser irradiation.
比較対照として I F N を複合体と同様にしてリン酸緩衝液に溶解した溶液 を用いた。 蛍光眼底膨をして、 蛍光漏出力認められなかったスポットを陰性、 蛍光漏出力認められたスポットを陽性として判定した。 レーザー照射 8ケ所のス ポットに対する 性スポット数から新生血管発現率を算定し、 コントロール群 ( リン酸緩衝液投与群） に対する各薬物投与群の新生血管発現率から脈絡 Μώί管新 生阻害率を算出した。 これらの結果を表 1に示す。 なお、 表中の数値は 4例の平 均値を示す。 投与液 新 管発現率 膽馳飾生阻害率 リン■難 78% 0%  As a control, a solution in which IFN was dissolved in a phosphate buffer in the same manner as the complex was used. The spot where fluorescence output was not recognized was determined as negative, and the spot where fluorescence output was recognized was determined as positive. Calculate the rate of neovascularization from the number of sex spots for 8 spots of laser irradiation and calculate the rate of choroidal neovascularization from the rate of neovascularization of each drug-administered group relative to the control group (phosphate buffer-administered group) did. Table 1 shows the results. The values in the table indicate the average values of four cases. Dosage solution New tube expression rate Bulgar raw inhibition rate Phosphorus difficulty 78% 0%
I FN- /3 76% 2%  I FN- / 3 76% 2%
I FN- i3—スぺラミンーデキス卜ラン 50% 36% 表 1より、 I FNを複合体にすることなくそのまま静脈内投与したときは脈絡 ώ!管新生阻害率はわずか^であるのに対し、実施例 1で得た I FN—スペラミ ン―デキストラン （I FN—高分子複合体） を静脈内投与したときは、 絡膜の 血管新生を 36%阻害した。 この結果は、 I FNは、 これをスペルミン複合体にす ることにより、効果を損なうことなく標的部位に到達していることを示している 。 この原因として I FNの血中安定性が向上したこと、 新生血管の血管透過性が 高ぐ このことが I FN—高 複合体の新生血管部位への集積を高めたことな どが考えられる。 また、 この安定性向上は、 薬効持続時間の延長にもつながるも のである。 I FN- i3—Suramin-dextran 50% 36% From Table 1, it can be seen that when IFN was administered intravenously without forming a complex, the choroid ώ! Inhibition rate of angiogenesis was only slightly, whereas IFN-speramin-dextran ( Intravenous administration of IFN-polymer conjugate inhibited 36% of choroidal neovascularization. This result indicates that IFN can reach the target site without impairing its effect by converting it into a spermine complex. This may be due to an increase in the stability of IFN in blood and an increase in vascular permeability of the new blood vessels. This may increase the accumulation of the IFN-high complex in the neovascular site. In addition, this improved stability will lead to longer drug duration.
試験例 2 I FN—スペルミン一プルランの肝臓集積試験 Test Example 2 Liver accumulation test of I FN-spermine-pullulane
Balb/c マウスに生理食塩液、 I FN-/3, 実施例 2で得た I F N—スペルミン -プルラン、 及び比較例 1で得た I FN— DTPA—プルランを I F N投与量と して 10万単位/マウスの用量で夫々静脈内投与した。  100,000 units of IFN-spermine-pullulane obtained in Example 2 and saline, IFN- / 3, and IFN-DTPA-pullulane obtained in Comparative Example 1 were added to Balb / c mice. / Mouse at the dose of each mouse.
投与 24時間後にマウスを脱血致死させ、 肝臓を採取し、 肝臓 lgあたり 3 ml の細胞溶解緩衝液 （10 mM HEPES / 50 mM KC1 / 3 mM Mg(0Ac)2 / 0.3 mM EDTA I 10¾ グリセロール/ 7 mM 2-メルカプトエタノール/ 0.5¾ Tergitol NP-40 (商 品名、 NPはノニルフエノキシ ポリエトキシエタノールの略） ， pH 7.5) を添 加してホモジナイズした。 得られたホモジネートを 20,000 Xgで 5分間遠心分 離し、 上清を採取した。 上清 （蛋白 m¾: 40 mg/ml) に等量のラウリル硫酸ナト リウムを添加し、 1分間煮沸後、 その 5 1をラウリル硫酸ナトリウム含 10%ポリ アクリルアミドゲルを用いて電気泳動した。 電気泳動後、 ラウリル硫酸ナトリウ ム含 10%ポリアクリルアミドゲル中の蛋白をポリビニリデンジフルオラィド膜に 転写した。転写した膜を^無脂肪ドライミルクでブロッキングした後、 一次抗体 のラット抗マウス 2- 5Aシンセ夕ーゼ抗体 (モノクローナル抗体）を含むリン酸緩 衝液 （137 mM NaCl / 2.68 mM KC1 / 1.47 mM KH2P04 / 8.06 mM Na2P04, pH 7.4 ) 中で 4 、 ー晚インキュベートした。 二次抗体にホースラディッシュペルォキ シダーゼを結合させたゥサギ抗ラット IgG抗体を、 基質にニトロブル一テトラゾ リウムを用いて、 転写膜上に 2- 5Aシンセ夕ーゼが存在する個所を化学発光させ 、 デンシトメ一夕一にて発光強度を溯：斤した。 なお、 2- 5Aシンセターゼは I FN により特異的に誘導される抗ウィルス酵素であり、 この酵素活性が I FNの抗ゥ ィルス活性に対応していることが知られている。 I FNの活性比は、 2-5Aシンセ 夕一ゼの量 （発光強度） を基準に算出した。 これらの結果を表 2に示す。 24 hours after administration, the mice were bled to death and the liver was collected, and 3 ml of cell lysis buffer (10 mM HEPES / 50 mM KC1 / 3 mM Mg (0Ac) 2 / 0.3 mM EDTA I 10¾ glycerol / lg of liver) was collected. 7 mM 2-mercaptoethanol / 0.5% Tergitol NP-40 (trade name, NP stands for nonylphenoxypolyethoxyethanol), pH 7.5) and homogenized. The obtained homogenate was centrifuged at 20,000 Xg for 5 minutes, and the supernatant was collected. An equal amount of sodium lauryl sulfate was added to the supernatant (protein m¾: 40 mg / ml), and the mixture was boiled for 1 minute. Then, 51 was electrophoresed on a 10% polyacrylamide gel containing sodium lauryl sulfate. After electrophoresis, proteins in a 10% polyacrylamide gel containing sodium lauryl sulfate were transferred to a polyvinylidene difluoride membrane. After blocking the transferred membrane with non-fat dry milk, a phosphate buffer solution containing the primary antibody rat anti-mouse 2-5A synthase antibody (monoclonal antibody) (137 mM NaCl / 2.68 mM KC1 / 1.47 mM KH) 2 P0 4 / 8.06 mM Na 2 P0 4, pH 7.4) 4 in and over晚incubated. A heron anti-rat IgG antibody in which horseradish peroxidase is conjugated to a secondary antibody, and chemiluminescence is performed at the site where 2-5A synthase is present on the transfer membrane using nitroble-tetrazolium as a substrate. The light emission intensity was set back at the densitome overnight. In addition, 2-5A synthetase is an antiviral enzyme specifically induced by IFN, and it is known that this enzyme activity corresponds to the antiviral activity of IFN. The IFN activity ratio was calculated based on the amount (emission intensity) of 2-5A synthase. Table 2 shows the results.
表 2  Table 2
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表 2より、 実施例 2で得た I FN—スペルミン一プルランを静脈内投与したと きに、 肝臓中の 2- 5Aシンセタ一ゼの量 （発光強度） は、 I FN単独及び I FN— DTP A—プルラン （比較例 1) を静脈内投与したときよりも顕著に増加してお り、 I FN—スペルミン一プルラン複合体が I FNの活性を肝臓に効率よく夕一 ゲティングしていることがわかる。 これらの効果は、 I FNをスペルミンを導入 したプルランと複合体化することにより、 I FNがその標的部位である肝臓に効 果的に夕一ゲティングされ、 その結果、 肝での I FNが増強された。 プルランは 肝への高い親和性を示す多糖類であり、 単に I FNとスペルミン導入プルランを 混合するだけで I FNとプルランとが Zn2 +を介して結合し、 肝臓へ I FNが到 達するまでの間は、 少なくとも I FNが肝臓のターゲティング担体であるプルラ ンに結合していることが裏付けられる。 すなわち、 この試験例は、 本発明の I F N—スペルミン一カレラン複合体が肝疾患に対し有用な治療剤となり得ることを 示すものである。 鶴ト -の禾 ilfflW From Table 2, the amount (luminescence intensity) of 2-5A synthetase in the liver when IFN-spermine-pullulane obtained in Example 2 was administered intravenously was determined by IFN alone and IFN-DTP A-Pullulan (Comparative Example 1) was significantly increased compared to intravenous administration, indicating that the IFN-spermine-pullulane complex efficiently targeted IFN activity to the liver. Understand. These effects are achieved by complexing IFN with spermine-introduced pullulan, effectively targeting IFN to its target site, the liver, resulting in enhanced IFN in the liver Was done. Pullulan is a polysaccharide that has a high affinity for the liver.If IFN and pullulan are combined simply by mixing IFN and spermine-introduced pullulan via Zn 2+ , until the IFN reaches the liver During this period, it is supported that at least IFN is bound to pullulan, a targeting carrier of the liver. That is, this test example shows that the IFN-spermine-carrelan complex of the present invention can be a useful therapeutic agent for liver disease. Crane-no fir ilfflW
本発明の I FN—高分子複合体は、 I FNの生体内での安定性を向上させ、 か つ、 I F Nの標的部位に I F Nを効果的に到達させると共に、 I F Nの生物活性 を増強させる製剤である。 I F Nはその一つの活性として、 優れた血管新生阻害 効果を発揮するので、 この複合体は血管新生を伴う疾患、 例えば糖尿病 膜症 、 未熟児網膜症、 黄斑変性症、 血管新生緑内障、 網膜静脈閉塞症、 網膜動脈閉塞 症、 翼状片、 ルべォ一シス、 角膜新生血管症等の眼科疾患、 慢性関節リュウマチ 、 乾癬、 浮腫性硬化症等の自己免疫性疾患、 血管新生を伴う疾患、 固形腫瘍、 血 管腫、 膠芽腫、 »腫、 星細 «、 皮膚悪性黒^ JS、 腫瘍の増殖 -転移等の癌疾 患に有用である。 この場合 I F Nの新生血管へのターゲティングメカニズムは、 正常血管と新生血管との血管透過性の違いによる受動的夕ーゲティングである。 また、 肝臓への高い親和性をもつカレランなどを用いれば、 I F Nを肝臓にも集 積させることが可能となり、 B型慢性活動' 炎、 C型慢性肝炎等の肝疾患の治 療に有効である。 このカレランの肝臓への高い親和性は、 プリレランが肝実質ある いは非実質細胞表面に存在しているレクチン様レセプターに結合するためであり 、 このシステムは、 積極的ターゲテイングである。 The IFN-polymer complex of the present invention improves the stability of IFN in vivo, Second, it is a preparation that effectively reaches IFN to the target site of IFN and enhances the biological activity of IFN. As one of its activities, IFN exerts an excellent angiogenesis inhibitory effect, so this complex is associated with angiogenesis, such as diabetic sclerosis, prematurity retinopathy, macular degeneration, neovascular glaucoma, and retinal vein occlusion. Diseases, retinal artery occlusion, pterygium, rubeosis, corneal neovascular disease, etc., autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis, psoriasis, edema sclerosis, diseases involving angiogenesis, solid tumors Useful for cancer diseases such as hemangiomas, glioblastomas, »tumors, stellate cells, malignant skin black ^ JS, tumor growth and metastasis. In this case, the targeting mechanism of IFN to new blood vessels is passive targeting due to differences in vascular permeability between normal blood vessels and new blood vessels. In addition, the use of Kalelan, which has a high affinity for the liver, makes it possible to accumulate IFN also in the liver, which is effective in treating liver diseases such as chronic hepatitis B and chronic hepatitis C. is there. The high affinity of Carrelan for the liver is due to the binding of Prileran to lectin-like receptors present on the surface of liver parenchyma or non-parenchymal cells, and this system is an active targeting.

Claims

請求の範囲 The scope of the claims
1 . インタ一フエロン、 スペルミンを導入した高分子及び金属イオンか らなるインタ一フエロン一高分子複合体。 1. Interferon-polymer composite comprising interferon, spermine-introduced polymer and metal ion.
2. イン夕一フエロンと、 スペルミンを導入した高分子とを金属イオン の存在下で混合することにより得られるインターフェロン一高 ^^複合体。  2. Interferon-high ^^ complex obtained by mixing In-Yuichi Feron with a polymer into which spermine has been introduced in the presence of metal ions.
3. 前記ィンターフェ口ンが ]3型である請求項 1又は 2記載のィン夕ー フエロン一高分子複合体。  3. The ink-ferron-polymer composite according to claim 1, wherein the interface is a type 3].
4. 前記高分子が医薬の添加物として許容される高分子である請求項 1 又は 2記載のインタ一フエロン一高分子複合体。  4. The interferon-polymer composite according to claim 1 or 2, wherein the polymer is a polymer that is acceptable as an additive for a medicine.
5. 医薬の添加物として許容される高分子が水溶性高分子である請求項 4記載のインタ一フエロン—高分子複合体。  5. The interferon-polymer complex according to claim 4, wherein the polymer acceptable as a pharmaceutical additive is a water-soluble polymer.
6 . 7K溶性高分子が多糖類又は多価アルコール系高分子である請求項 5 記載のインターフェロン一高分子複合体。  6. The interferon-polymer complex according to claim 5, wherein the 6.7K soluble polymer is a polysaccharide or polyhydric alcohol polymer.
7. 多糖類がデキストラン及びプルランから選択される請求項 6記載の インタ一フエロン一高分子複合体。  7. The interferon-polymer complex of claim 6, wherein the polysaccharide is selected from dextran and pullulan.
8. 多価アルコール系高分子がポリアルキレンダリコール及びポリビニ ルアルコールから選択される請求項 6記載のィンターフェロン一高分子複合体。  8. The interferon-polymer composite according to claim 6, wherein the polyhydric alcohol-based polymer is selected from polyalkylene dalicol and polyvinyl alcohol.
9. 前記金属イオンが亜鉛イオンである請求項 1又は 2記載のィンタ一 フエロン一高分子複合体。  9. The interferon-feron-polymer composite according to claim 1, wherein the metal ion is a zinc ion.
1 0. 請求項 1から 9のいずれかに記載のインターフェロン—高^?複合 体を有効成分として含有する医薬。  10. A medicament comprising the interferon-high 複合 complex according to any one of claims 1 to 9 as an active ingredient.
1 1 . 請求項 1から 9のいずれかに記載のインターフェロン一高 Η複合 体を有効成分として含有する血管新生を伴う疾患の治療剤。  11. A therapeutic agent for a disease associated with angiogenesis, comprising the interferon-one high-inhibitory complex according to any one of claims 1 to 9 as an active ingredient.
1 2. 血管新生を伴う疾患が眼科疾患である請求項 1 1記載の治療剤。 12. The therapeutic agent according to claim 11, wherein the disease associated with angiogenesis is an ophthalmic disease.
1 3. 眼科疾患が餹尿病性網膜症、 未熟児網膜症、 黄斑変性症、 血管新生 緑内障、 網膜静脈閉塞症、 網膜動脈閉塞症、 翼状片、 ルべォ一シス又は角膜新生 血管症である請求項 1 2記載の治療剤。 1 3. Ophthalmic disease is uremic retinopathy, retinopathy of prematurity, macular degeneration, angiogenesis glaucoma, retinal vein occlusion, retinal artery occlusion, pterygium, Lubeocis or corneal neoplasia 13. The therapeutic agent according to claim 12, which is vasculopathy.
1 4. 血管新生を伴う疾患が自己免疫性疾患である請求項 1 1記載の治療 剤。  14. The therapeutic agent according to claim 11, wherein the disease associated with angiogenesis is an autoimmune disease.
1 5 . 自己免疫性疾患が慢性関節リュウマチ、 乾癬、 浮腫性硬化症又は多 発性硬化症である請求項 1 4記載の治療剤。  15. The therapeutic agent according to claim 14, wherein the autoimmune disease is rheumatoid arthritis, psoriasis, edema sclerosis, or multiple sclerosis.
1 6. 血管新生を伴う疾患が癌疾患である請求項 1 1記載の治療剤。  1 6. The therapeutic agent according to claim 11, wherein the disease associated with angiogenesis is a cancer disease.
1 7 . 癌疾患が固形腫瘍又は血管腫である請求項 1 6記載の治療剤。17. The therapeutic agent according to claim 16, wherein the cancer disease is a solid tumor or a hemangioma.
1 8. 請求項 1から 9のいずれかに記載のインタ一フエロン—高分子複合 体を有効成分として含有する肝疾患の治療剤。 1 8. A therapeutic agent for liver disease, comprising the interferon-polymer complex according to any one of claims 1 to 9 as an active ingredient.
1 9. イン夕一フエロンを、 スペルミンを導入した高奸と、 金属イオン の存在下で混合してィン夕一フエ口ンー高 子複合体とすることからなるィン夕 一フエ口ンの薬効持続時間の延長方法。  1 9. In-Yuichi-Fueron is a mixture of spermine-introduced high filthy and metal ions in the presence of metal ions to form an Inu-Yuichi-Fu-N-Hydrogen complex. How to extend drug duration.
2 0 . インターフェロンと、 スペルミンを導入した高 子とを金属イオン の存在下で混合することからなるィンターフェロン一高 複合体の製造方法。  20. A method for producing an interferon-one high complex, which comprises mixing interferon and a spermine-introduced polymer in the presence of a metal ion.
2 1 . 請求項 1から 9のいずれかに記載のイン夕一フエロン一高^?複合 体を医薬として許容される添加物と共に含む医薬組成物。  21. A pharmaceutical composition comprising the inhaled ferron complex according to any one of claims 1 to 9 together with a pharmaceutically acceptable additive.
2 2 . 請求項 1から 9のいずれかに記載のインターフェロン一高 複合 体を患者に治療に有効な量投与することからなる血管新生を伴う疾患の治療方法 2 3 . 血管新生を伴う疾患が眼科疾患である請求項 2 2記載の治療方法。 22. A method for treating a disease associated with angiogenesis, which comprises administering to a patient an effective amount of the interferon-high complex according to any one of claims 1 to 9. 23. The treatment method according to claim 22, which is a disease.
2 4. 眼科疾患が 尿病 tt l膜症、 未熟 ¾H膜症、 黄斑変性症、 血管新生 緑内障、 網膜静脈閉塞症、 網膜動脈閉塞症、 翼状片、 ルべォ一シス又は角膜新生 血管症である請求項 2 3記載の治療方法。 2 4. Ophthalmic disease is urinary ttl membrane disease, immature ¾H membrane disease, macular degeneration, angiogenesis glaucoma, retinal vein occlusion, retinal artery occlusion, pterygium, rubeosis, or corneal neovascular disease The treatment method according to claim 23.
2 5 . 血管新生を伴う疾患が自己免疫性疾患である請求項 2 2記載の治療 方法。  25. The method according to claim 22, wherein the disease associated with angiogenesis is an autoimmune disease.
2 6 . 自己免疫性疾患が慢性関節リュウマチ、 乾癬、 浮腫性硬化症又は多 発性硬化症である請求項 2 5記載の治療方法。 26. The method according to claim 25, wherein the autoimmune disease is rheumatoid arthritis, psoriasis, edema sclerosis or multiple sclerosis.
2 7 . 血管新生を伴う疾患が癌疾患である請求項 2 2記載の治療方法。 2 8 . 癌疾患が固形腫瘍又は血管腫である請求項 2 7記載の治療方法。 2 9 . 請求項 1から 9のいずれかに記載のインターフェロン—高分子複合 体を患者に治療に有効な量投与することからなる肝疾患の治療方法。 27. The method according to claim 22, wherein the disease associated with angiogenesis is a cancer disease. 28. The method according to claim 27, wherein the cancer disease is a solid tumor or a hemangioma. 29. A method for treating liver disease, comprising administering to a patient the interferon-polymer complex according to any one of claims 1 to 9 in a therapeutically effective amount.
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