WO2001010463A1

WO2001010463A1 - Pates a liberation prolongee d'un promoteur de l'osteogenese

Info

Publication number: WO2001010463A1
Application number: PCT/JP2000/005239
Authority: WO
Inventors: Tetsuo Hoshino; Haruhiko Makino; Takashi Kurasawa
Original assignee: Takeda Chemical Industries, Ltd.
Priority date: 1999-08-05
Filing date: 2000-08-04
Publication date: 2001-02-15
Also published as: CA2378486A1; EP1208850A1; AU6318900A

Description

骨形成促進物質徐放性ペースト技術分野

本発明は骨形成促進物質徐放性ペーストに関し、より詳細には、骨形成促進物質、カルシウム成分および増粘剤が配合されることを特徴とする骨形成促進物質徐放性ペーストに関する。背景技術

現在、薬効成分を生体内に投与しその奏効部位で徐放させる製剤技術が、精力的に検討されている。特に骨折治療においては、その部位がギプス等で保護されてしまうため薬物を頻回投与することは困難な場合が多く、単回の処置で長期間に亘つて薬物を患部に高濃度に供給できる徐放性製剤の開発への期待は大きい。このような状況下で、例えば特開平 9一 2 6 3 5 4 5号公報に見られるように、優れた骨形成促進作用を有する非ペプチド系低分子化合物であるべンゾチェピン誘導体を有効成分とする徐¾^性製剤が提案されている。この製剤は、有効成分を含有した生体内分解性ポリマーの懸濁液からなり、注射投与によって簡便に適用できるばかりでなく、有効成分を一定期間、骨疾患局所等の奏効部位に高濃度に供給できる。そのため、現実の臨床の場でも極めて有用性の高いものであり、その実用化が期待されている。しかしながら、この製剤は液状であり流動性が高いため、開放骨折などに適用した場合には投与局所での滞留性が必ずしも充分ではない。

一方、従来より、骨組織に高い親和性を有する人工骨、骨補填材が知られているが、これらの人工骨、骨補填材に種々の薬効成分を含有させる技術が提案されている。

例えば特開平 6— 2 2 8 0 1 1号公報には、リン酸カルシウム系薬物徐放体及びその製造方法が記載されている。この薬物徐放体は、生体硬組織内に結合し、維持され、更には薬物の放出速度が容易に制御できるという。し力 ^し、用いている基材が、いわゆる自己硬化性セメントであるリン酸四カルシウムとリン酸水素カルシウムのみで構成されている。そのため、硬化が完了する前のスラリー若しくは粘土状の状態時の硬組織への展延性、塗工性、接着性は乏しく、血液などの体液と接触することにより崩壊、流失してしまうおそれがある。

また、特開平 7— 3 1 6 7 3号公報には、自己硬化性セメントと天然生体吸収性高分子物質、例えばデキストランとからなる骨補填材が開示されていて、この骨補填材に配合してもよい生理活性物質として、骨形成因子、骨増殖因子等が例示されている。特開平 7— 2 8 9 6 2 7号公報には、生体親和性に優れかつ形態付与性をもち、練和直後の練成体が水分と接触しても崩壊しない、リン酸成分、カルシウム成分およびアルギン酸化合物が配合された医療用硬化性組成物が開示されている。特開平 1 0— 2 1 6 2 1 9号公報には、生体親和性に優れ、形態付与性をもち、練和直後の練成体が水分と接触しても崩壊せず、かつ骨に対して粘着性を示す、リン酸成分、カルシウム成分およびコラーゲンが配合された医療用硬化性組成物が開示されている。これらの公報の組成物の主たる目的が、骨が欠損した部位へ適用し硬化体を力学的支持性を有する骨補填材として機能させることにあるため、その力学的強度は十分である。しかし、組成物が硬化することによつて配合された生理活性物質が硬化体内部に完全に封じ込められてしまうため、硬化する初期の段階では、配合された生理活性物質がある程度放出されるとしても、長期に亘る安定な徐放性を期待することはできない。また、骨折治療用医用材料としてノリアン SRS (商品名，ノリアン社開発）力ペースト状骨充填材としてバイオペックス（商品名，ゥエルフアイド株式会社発売）力発売されている力骨形成促進物質等の生理活性物質を含有しておらず、さらに充填後、速やかに硬化し、硬化後は十分な強度を与える特徴を有するため、仮にこれに生理活性物質を含有させたとしても長期に亘る安定な徐放性を期待することができないことは前述の通りである。

以上のように、展延性、塗工性、接着性、可塑性に優れ、局所投与によって骨組織へ長く滞留でき、かつ長期に亘る安定な徐放性を有する徐放性製剤は、未だ開発されていないのが現状である。

このような状況下で、骨への高い組織親和性と接着性を持ち、一定の可塑性を維持しながらも体液と接触しても崩壊しない適度の硬度を有し、しかも骨形成促進物質を長期に亘り安定に徐放することができ、その結果として、骨折治療時に骨の癒合ならびに欠損部の修復を促進する目的で簡便に使用できる骨形成促進物質を含有する新たな剤形の開発が求められている。発明の開示

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、カルシウム成分の水和硬化性によって局所への滞留性を持たせ、これに増粘剤を配合することにより適度な可塑性と粘着性を示すペースト基剤を見出し、これに骨形成促進物質を配合することにより、当該物質が長期に亘り安定に徐放されることを確認して、本発明を完成した。

すなわち本発明は：

(1) 骨形成促進物質、カルシウム成分および増粘剤が配合されることを特徴とする骨形成促進物質徐放性ペースト；

(2) カルシウム成分が、カルシウムのリン酸塩、硫酸塩および炭酸塩の中から選択される一または二以上の組み合わせである上記（1) に記載のペースト；

(3) カルシウム成分がリン酸水素カルシウム無水和物若しくは二水和物とリン酸四カルシウムとの組み合わせである上記（1) に記載のペースト；

(4) カルシウム成分が硫酸カルシウム半水和物である上記（1) に記載のぺ一ス卜；

(5) さらに硫酸カルシウム二水和物が配合されることを特徴とする上記（4) に記載のペースト；

(6) カルシウム成分が、骨形成促進物質 1重量部に対して約 1〜500重量部である上記（1) に記載のペースト；

(7) 増粘剤が生体適合性高分子である上記（1) に記載のペースト；

(8) 増粘剤がデキストランである上記（1) に記載のペースト；

(9) 増粘剤がカルシウム成分 1重量部に対して約 0. 05〜4重量部である上記（1) に記載のペースト；

(10) 骨形成促進物質が非ペプチド系低分子化合物である上記（1) に記載のペース卜；

(1 1) 骨形成促進物質がベンゾチォピランもしくはベンゾチェピン誘導体である上記（1) に記載のペースト；

(12) 骨形成促進物質が（2 R, 4 S) - (-) — N— [4- (ジエトキシホスホリルメチル）フエニル] _ 1， 2, 4, 5—テトラヒドロ _ 4 _メチル—7, 8 - メチレンジォキシ— 5—ォキソー 3—べンゾチェピン一 2—力ルポキサミド若しくはその塩またはこれらの徐放性製剤である、上記（1) に記載のペースト；

(13) 骨形成促進物質が生体内分解性ポリマーによって徐放性に製剤化されている上記（1) に記載のペースト；

(14) カルシウム成分および増粘剤を含有する、上記（1) に記載のペーストを製造するための組成物；

(15) 骨形成促進物質またはその徐放性製剤、カルシウム成分および増粘剤を含有する、上記（1) に記載のペーストを製造するための組成物；

(16) 骨形成促進物質、カルシウム成分、増粘剤および水を練和することを特徵とする骨形成促進物質徐放性ペーストの製造法；

(17) 骨疾患治療剤である上記（1) ないし（13) に記載のペースト；

(18) 上記（1) ないし（13) に記載のペーストを投与することを特徴とする骨疾患治療方法；および、

(19) 骨疾患治療剤の製造のための上記（14) ないし（15) に記載の組成物の使用を提供するものである。図面の簡単な説明

図 1は、化合物 Aを含有しないマイクロカプセルを含むペースト状練和物（対照）を家兎脛骨穿孔部に投与 7週間後の脛骨穿孔部近傍の X線像である。

図 2は、化合物 A含有マイクロカプセルを含む本発明の徐放性ペーストを家兎脛骨穿孔部に投与 7週間後の脛骨穿孔部近傍の X線像である。

図 3は、化合物 A含有マイクロカプセルを含む本発明の徐放性ペーストをラッ卜の背部皮下に埋入後の投与部位での化合物 Aの残存率の推移を示すグラフである。横軸は投与後の時間（週）を、縦軸は化合物 Aの皮下残存率（％) を示す。図 4は、化合物 A含有マイクロカプセルを含む本発明の徐放性ペーストをラッ卜の背部皮下に埋入後の化合物 Aの血清中濃度の推移を示すグラフである。横軸は投与後の時間（週）を、縦軸は化合物 Aの血清中濃度（ng/m l) を示す。図 5は、実施例 16から実施例 19で得られた本発明の徐放性ペースト 0. 1 4m 1をラットの背部皮下に埋入後の化合物 Aの残存率の推移を示すグラフである。横軸は投与後の時間（週）を、縦軸は化合物 Aの皮下残存率（％) を示す。ー秦一は実施例 16で得られた徐放性ペーストの化合物 Aの皮下残存率（％) を、一〇一は実施例 17で得られた徐放性ペーストの化合物 Aの皮下残存率（％) を、一口一は実施例 18で得られた徐放性ペーストの化合物 Aの皮下残存率（％ ) を、一△一は実施例 19で得られた徐放性べ一ストの化合物 Aの皮下残存率（ ) をそれぞれ示す。

図 6は、実施例 18で得られた本発明の徐放性ペースト 0. 14m lをラットの背部皮下に埋入後の化合物 Aの血清中濃度の推移を示すグラフである。横軸は投与後の時間（週）を、縦軸は化合物 Aの血清中濃度（ng/m l) を示す。図 7は、実施例 18で得られた本発明の徐放性ペースト 0. 6m lをラットの背部皮下に埋入後の化合物 Aの残存率の推移を示すグラフである。横軸は投与後の時間（週）を、縦軸は化合物 Aの皮下残存率（％) を示す。

図 8は、実施例 18で得られた本発明の徐放性ペースト 0. 6m lをラットの背部皮下に埋入後の化合物 Aの血清中濃度の推移を示すグラフである。横軸は投与後の時間（週）を、縦軸は化合物 Aの血清中濃度（ng/m l) を示す。

図 9は、比較例 5で得られた練和物、実施例 20および実施例 21で得られた本発明の徐放性ペーストの、パドル法による in vitro放出試験における化合物 A の放出率の推移を示すグラフである。横軸は時間（時間）を、縦軸は化合物 Aの放出率（％) を示す。一〇一は比較例 5で得られた練和物の化合物 Aの放出率（ %) を、 —口—は実施例 20で得られた徐放性べ一ストの化合物 Aの放出率（％ ) を、一△一は実施例 21で得られた徐放性ペーストの化合物 Aの放出率（％) をそれぞれ示す。発明を実施するための最良の形態本発明において用いられるカルシウム成分としては、水分との接触によって常温で水和硬化性を示すものであれば公知のいかなるカルシウム成分でもよく、例えばリン酸二水素カルシウム、リン酸水素カルシウム無水和物、リン酸水素カルシゥムニ水和物、 α型リン酸三カルシウム、リン酸四カルシウム等のリン酸塩、例えば硫酸カルシウム半水和物（例、 α型硫酸カルシウム半水和物 > 3型硫酸カルシゥム半水和物等）等の硫酸塩、例えば炭酸カルシウム等の炭酸塩が挙げられ、これらのカルシウム成分の中から選ばれる一または二以上の水和硬化性を示す組み合わせが用いられる。なかでも、単独でも水和硬化性を示すリン酸二水素カルシゥム、ひ型リン酸三カルシウム、硫酸カルシウム半水和物（例、ひ型硫酸カルシゥム半水和物、 ]3型硫酸カルシウム半水和物等）や、二成分あるいは三成分以上を組み合わせることにより水和硬化性を示すリン酸カルシウムの組み合わせが好ましい。水和硬化性を示すリン酸カルシウムの組み合わせとしては例えばリン酸水素カルシゥム無水和物若しくは二水和物とリン酸四カルシウムとの組み合わせ、リン酸水素カルシウム二水和物と炭酸カルシウムとの組み合わせなどが好ましい。なお、 α型リン酸三カルシウムは単独でも水和硬化性を示すが、リン酸水素カルシウム無水和物若しくは二水和物；あるいはリン酸四カルシウムと組み合わせて用いること（リン酸水素カルシウム無水和物若しくは二水和物とひ型リン酸三カルシウムとの組み合わせ、リン酸四カルシウムと α型リン酸三カルシウムとの組み合わせ）が好ましい。水和硬化性を示すリン酸カルシウムの組み合わせは、これらが生体内でリン酸八カルシウムやアパタイトに構造を変え硬化する組み合わせであればよく特に制限はないが、組み合わせの際のカルシウム（C a ) とリン（P ) のモル比が C a / P = 1 . 1〜1 . 8であることが好ましく、 1 . 2 〜1 . 6 7であることが特に好ましい。カルシウムとリンの配合比率を上記の範囲内にするために、上記組み合わせの中に例えばリン酸ニ水素ナトリゥム等のリン酸塩を加えることができる。

また、本願発明のカルシウム成分として、カルシウム成分を主体とした市販の組成物〔例、ノリアン SRS (商品名，ノリアン社開発）の粉剤部分、バイオペックス（商品名，ゥエルフアイド株式会社発売）の粉剤部分〕を用いてもよい。前記力ルシゥム成分として水和物を用いる場合、水和物に水を加えて練和すると、水分子数が異なる水和物あるいは無水物に水を加えて練和した時と比較し、結果として同様のカルシウム成分を含有する練和物になるが、本願発明ペーストが含有するカルシウム成分を示す場合、水と練和する前の配合時のカルシウム成分に基づいて定義される。

本発明の徐放性ペース卜の調製に用いられるカルシウム成分の粉末の粒子径は特に制限されないが、本発明の徐放性ペーストを製造する練和操作時の練り易さをできるだけ向上させるという点を考慮すると、平均粒子径約 3 0 0 m以下（例えば、約 0 . ：!〜 3 0 0 m) が好ましく、約 1 0 0 m以下（例えば、約 0 . 1 〜1 0 0 m) がさらに好ましく、約 5 0 m以下（例えば、約 0 . ；!〜 5 0 m) がより好ましい。

本発明における増粘剤は、水和硬化性を示すカルシウム成分の硬化速度を制御し、本発明の徐放性ペーストに展延性、塗工性、接着性や可塑性を付与するものであるが、そればかりではなく、本発明の徐放性ペーストに配合された骨形成促進物質を徐々に放出するための放出チャンネルを形成する機能をも併せ持つ。そのため、本発明の増粘剤としては、薬理学的に許容でき、かつ上記の機能を発揮し得るものであれば特に制限されることがないが、例えば生体適合性高分子、糖 · 糖アルコール、多価アルコール等が好ましく用いることができる。

ここで、本発明の徐放性ペーストに用いることができる生体適合性高分子としては、生体内吸収性高分子であることが好ましく、特に水溶性でありかつカルシゥムと接触しても不溶性の塩を形成しない高分子であることが好ましい。このような生体適合性高分子としては、例えばデキストラン、ジェチルアミノエチルデキストラン、硫酸化デキストラン、プルラン等の微生物由来多糖およびその誘導体；アラビアゴム等の植物由来多糖類；メチルセルロース、カルポキシメチルセルロースおよびその塩、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等の水溶性セルロース誘導体；デンプン、カルボキシメチルス夕ーチナトリウム、ヒドロキシェチルスターチ、ヒドロキシプロピルスターチ等のデンプンおよびその水溶性誘導体；キチン、キトサン、カルボキシメチルキチン等のキチン ·キトサンおよびその誘導体；ヒアルロン酸およびその塩、コンドロィチン硫酸およびその塩、デルマタン硫酸およびその塩、へパラン硫酸およびその塩、ケラタン硫酸およびその塩等のムコ多糖およびその塩；ゼラチン、アルブミン等の水溶性タンパク質；カルボキシビ二ルポリマ一、ポリプロピレングリコ —ル、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポロキサマー、ポリアミノ酸およびその塩等の水溶性合成高分子；グリコーゲン等が挙げられる。これらの中でもデキストランが特に好ましい。

糖 '糖アルコールとしては、グルコース、シユークロース、マル! ^一ス、ラクト一ス、キシリトール、マンニトール、ソルビトール等が挙げられ、キシリトール、マンニ] ^一ル、ソルビ) ^一ルが特に好ましい。更に多価アルコールとしてはグリコール、グリセリンが挙げられる。

その他、キサンタンガム、ぺクチン、アルギン酸およびその塩、コラーゲンやフイブリン等も、本発明の徐放性ペーストにおける増粘剤として用いることがでさる。

以上の増粘剤は、列挙したものの中から一または二以上のものを選択し、組み合わせて用いることができる。

本発明の徐放性ペース卜の調製に用いられる増粘剤の形態は特に制限されず、室温で固体粉末であっても液体状であってもよい。固体粉末である場合には、予め上記カルシウム成分と均一に混和して用いることができる。一方、室温で液体状である場合には、本発明の徐放性ペーストを調製するために加える後述の液成分に溶解または分散して用いることができる。また、固体粉末を当該液成分に溶解または懸濁して用いることもできる。更に、一部を液成分に溶解または懸濁し、残りを固体粉末としてカルシウム成分と均一に混和することもできる。

本発明の徐放性ペーストにおいて、増粘剤の配合量を増減することにより、有効成分である骨形成促進物質の放出期間を制御することができる。したがって、カルシウム成分に対する増粘剤の配合比率は、その種類や目的とする放出期間の設定に応じて広い範囲で選択することができるが、例えば、放出期間を数週間から数ケ月とする場合の増粘剤の配合量は、カルシウム成分 1重量部に対して約 0 . 0 5〜 4重量部であり、好ましくは約 0 . 1 〜 2重量部、特に好ましくは約 0 . 1 5〜 1 . 5重量部、さらに好ましくは約 0 . 2〜 1重量部である。

なお、本発明のカルシウム成分および増粘剤は投与後、約 1 〜 6ヶ月程度で体内に吸収されるので、ペースト投与部位は完全に自家骨に置き換わる。

また、増粘剤の配合量は、骨形成促進物質 1重量部に対して約 1〜 500重量部であり、好ましくは約 1〜 300重量部、特に好ましくは約 1〜 100重量部である。骨形成促進物質が徐放性に製剤化されている場合には、増粘剤の配合量は徐放性製剤 1重量部に対して約 0. 1〜50重量部であり、好ましくは約 0. 1〜30重量部、特に好ましくは約 0. 1〜 10重量部である。

骨形成促進物質としては、現在、ペプチド系および非ペプチド系の物質が知られているが、いずれも本発明の徐放性ペーストに用いることができる。非べプチド系骨形成促進物質としては、例えば特開平 3— 232880号公報（ョ一ロッパ特許出願公開公報第 376 1 97号公報）、特開平 4一 3641 79号公報（ョ一口ツバ特許出願公開公報第 460488号公報）、特開平 5— 294960号公報、特開平 8— 23 1 569号公報（ヨーロッパ特許出願公開公報第 7 1 978 2号公報）および特開平 2000— 72678号公報（WO 00/09 1 00号公報）等に記載されている含硫黄複素環化合物またはその塩、特開平 7— 291 983号公報（ヨーロッパ特許出願公開公報第 625522号公報）に記載されているベンゾピラン誘導体またはその塩、特開平 8— 73476号公報（W09 6/0 1267号公報）に記載されているホスホン酸誘導体またはその塩、ジャ一ナル'ォブ'ファーマコ口ジ一'ェクスペリメンタル ·セラピューチックス

(Journal of Pharmacology Experimental Therapeut ics)、第 258巻、 1120~1126 頁（1991年）に記載されているプロス夕グランデイン A 1 誘導体、バイオオーガニック 'アンド 'メディシナル 'ケミストリ一 ' レ夕一ズ（Bioorganic & Medicianal Chemistry Letters), 第 3巻、 1815〜1819頁 (1993年) に記載されているビタミン D3誘導体、ヨーロッパ公開特許公報第 524023号に記載されているベンジルホスホン酸誘導体、ボーン（Bone)、第 13巻、 249〜255頁（1992 年）に記載されているホスホン酸類、 Menatetrenone (エーザィ）およびバイオケミカル'アンド ·バイオフィジカル ·リサーチ'コミニユゲーシヨンズ（Biochemical and Biophysical Research Co腦 unications)、第 187巻、 814〜820頁（1992年）に記載されているビタミン K 2 誘導体等が挙げられる。

また、ペプチド系骨形成促進物質としては、骨形成タンパク（BMP)、繊維芽細胞増殖因子（FGF)、血小板由来増殖因子（PDGF)、トランスフォーミング成長因子（TGF— /3)、インスリン様成長因子— 1および 2 (I GF— 1、一 2)、副甲状腺ホルモン（PTH) 等が例示できる。

これらの骨形成促進物質の中で、非ペプチド系の骨形成促進物質、例えばベンゾチォピランもしくはべンゾチェピン誘導体が好ましい。該ベンゾチォピランまたはべンゾチェピン誘導体としては、例えば、特開平 3— 232880号公報（ョ一口ツバ特許出願公開公報第 376 1 97号公報）、特開平 4一 3641 79号公報（ヨーロッパ特許出願公開公報第 460488号公報）および特開平 8— 2 3 1 569号公報（ヨーロッパ特許出願公開公報第 7 1 9782号公報）および特開平 2000— 72678号公報（WO 00/09 1 00号公報）等に記載の化合物またはその塩が挙げられるが、なかでも、式（I) ：

(ェ）

[式中、環 Aは置換されていてもよいベンゼン環を、 Rは水素原子または置換されていてもよい炭化水素基を、 Bはエステル化またはアミド化されていてもよい力ルポキシ基を、 Xは— CH(OH)—または— CO—を、 kは 0または 1を、 k' は 0, 1または 2を示す。 ] で示される化合物〔化合物（I) 〕またはその塩が好ましい。

前記式（I) において、環 Aで示される置換されていてもよいベンゼン環における置換基としては、例えば、ハロゲン原子、ニトロ基、置換されていてもよいァルキル基、置換されていてもよい水酸基、置換されていてもよいメルカプト基、置換されていてもよいアミノ基、ァシル基、モノ—またはジ—アルコキシホスホリル基、ホスホノ基、置換されていてもよいァリール基、置換されていてもよいァラルキル基または置換されていてもよい芳香族複素環基が用いられ、これらの置換基は同一または異なって 1ないし 4個、好ましくは 1ないし 2個、ベンゼン環上に置換していてもよい。

該「ハロゲン原子」としては、例えばフッ素、塩素、臭素、ヨウ素等が用いられる。

該「置換されていてもよいアルキル基」におけるアルキル基としては、好ましくは炭素数 1〜 1 0のアルキル基（例えばメチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、 sec-ブチル、 ter t-ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、へキシル、ヘプチル、ォクチル、ノニルまたはデシル等）、炭素数 3〜 7のシクロアルキル基（例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロへキシルまたはシクロへプチル等）等が用いられ、これらは、例えば八ロゲン原子 (例、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等）、水酸基、炭素数 1〜6のアルコキシ基（例、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、へキシルォキシ等）、モノーまたはジ— ェアルコキシホスホリル基（例えば、メトキシホスホリル、ェトキシホスホリル、ジメトキシホスホリル、ジエトキシホスホリルなど）、ホスホノ基等で 1〜 3個置換されていてもよい。

置換されたアルキル基の具体例としては、例えばトリフルォロメチル、トリフルォロェチル、トリクロロメチル、ヒドロキシメチル、 2 _ヒドロキシェチル、メトキシェチル、 1—メトキシェチル、 2—メ卜キシェチル、 2， 2—ジェ卜キシェチル、 2—ジエトキシホスホリルェチル、ホスホノメチル等が挙げられる。該「置換されていてもよい水酸基」における置換された水酸基としては、例えばアルコキシ基、アルケニルォキシ基、ァラルキルォキシ基、ァシルォキシ基、ァリールォキシ基等が用いられる。

該「アルコキシ基」としては、好ましくは炭素数 1〜 1 0のアルコキシ基（例、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、 ter t-ブトキシ、ペンチルォキシ、へキシルォキシ、ヘプチルォキシまたはノニルォキシ等）、炭素数 4〜 6のシクロアルコキシ基（例，シクロブトキシ、シクロペントキシまたはシクロへキシルォキシ等）等が用いられる。

該「アルケニルォキシ基」としては、好ましくは炭素数 2〜 1 0のアルケニルォキシ基、例えばァリルォキシ、クロチルォキシ、 2—ペンテニルォキシ、 3— へキセニルォキシ、 2—シクロペンテニルメ卜キシまたは 2—シクロへキセニルメトキシ等が用いられる。

該「ァラルキルォキシ基」としては、好ましくは炭素数 6〜 1 9のァラルキルォキシ基、さらに好ましくは炭素数 7〜 1 4のァリール—炭素数 1〜4のアルキルォキシ基（例、ベンジルォキシ、フエネチルォキシ等）が用いられる。

該「ァシルォキシ基」としては、好ましくはアルカノィルォキシ基、例えば炭素数 2〜 1 0のアルカノィルォキシ基（例、ァセチルォキシ、プロピオ二ルォキシ、 n-プチリルォキシ、へキサノィルォキシ等）が用いられる。

該「ァリールォキシ基」としては、好ましくは炭素数 6〜 1 4のァリールォキシ基（例、フエノキシ、ビフエニルォキシ等）が用いられる。これらの基はさらに、例えば前記したと同様のハロゲン原子、水酸基、炭素数 1〜6のアルコキシ基、モノーまたはジ— アルコキシホスホリル基、ホスホノ基等で 1〜3個置換されていてもよい。置換された水酸基の具体例としては、例えばトリフルォロメトキシ、 2， 2 , 2—トリフルォロエトキシ、ジフルォロメトキシ、 2—メトキシエトキシ、 4—クロ口ベンジルォキシ、 2—（3， 4ージメ卜キシフエニル）エトキシ等が挙げられる。

該「置換されていてもよいメルカプト基」における置換されたメルカプト基としては、例えばアルキルチオ基、ァラルキルチオ基、ァシルチオ基等が用いられる。

該「アルキルチオ基」としては、好ましくは炭素数 1〜 1 0のアルキルチオ基

(例、メチルチオ、ェチルチオ、プロピルチオ、プチルチオ、ペンチルチオ、へキシルチオ、へプチルチオ、ノニルチオ等）、炭素数 4〜 6のシクロアルキルチォ基（例、シクロプチルチオ、シクロペンチルチオ、シクロへキシルチオ等）等が用いられる。

該「ァラルキルチオ基」としては、好ましくは炭素数 7〜 1 9のァラルキルチォ基、さらに好ましくは炭素数 6〜 1 4のァリ一ルー炭素数 1〜 4のアルキルチォ基、例えばべンジルチオまたはフエネチルチオ等が用いられる。

該「ァシルチオ基」としては、好ましくはアルカノィルチオ基、例えば炭素数 2〜 1 0のアルカノィルチオ基（例，ァセチルチオ、プロピオ二ルチオ、 n-プチリルチオ、へキサノルチオ等）が用いられる。

これらの基はさらに例えば、前記したと同様のハロゲン原子、水酸基、炭素数 1〜6のアルコキシ基、モノーまたはジー（^ _ ₆アルコキシホスホリル基、ホスホノ基等で 1〜 3個置換されていてもよい。置換されたメルカプト基の具体例としては、例えばトリフルォロメチルチオ、 2 , 2， 2—トリフルォロェチルチオ、 2—メ卜キシェチルチオ、 4一クロ口べンジルチオ、 3， 4 _ジクロロベンジルチォ、 4 _フルォロベンジルチオ、 2— ( 3 , 4—ジメトキシフエ二ル）ェチルチオ等が挙げられる。 . 該「置換されていてもよいアミノ基」における置換されたァミノ基の置換基としては、前記したと同様の炭素数 1〜 1 0のアルキル基、炭素数 2〜 1 0のアルケニル基（例、ァリル、ビニル、 2—ペンテン— 1—ィル、 3 _ペンテン一 1—ィル、 2—へキセン— 1一ィル、 3—へキセン— 1—ィル、 2—シクロへキセニル、 2—シクロペンテニル、 2—メチルー 2 _プロペン— 1一ィル、 3—メチル— 2—ブテン— 1—ィル等）、炭素数 6〜 1 4のァリール基（例、フエニル、ナフチル等）または炭素数 7〜 1 9のァラルキル基（例、ベンジル、フエネチル等）が 1個または、同一または異なって 2個用いられ、これらの置換基は前記したと同様のハロゲン原子、炭素数 1〜6のアルコキシ基、モノ—またはジーアルコキシホスホリル基、ホスホノ基等で置換されていてもよい。

置換されたァミノ基の具体例としては、例えばメチルァミノ、ジメチルァミノ、ェチルァミノ、ジェチルァミノ、ジブチルァミノ、ジァリルァミノ、シクロへキシルァミノ、フエニルァミノまたは N _メチル _ N—フエニルァミノ、 N—メチルー N—（4—クロ口ベンジル）ァミノ、 N， N—ジ（2—メトキシェチル）ァミノ等が挙げられる。

該「ァシル基」としては、有機カルボン酸ァシル基または炭素数 1〜6の炭化水素基 [例、アルキル（例、メチル、ェチル、 n-プロピル、へキシル等）、フエニル等] を有するスルホン酸ァシル基等が用いられる。該「有機カルボン酸ァシル基」としては、例えばホルミル、炭素数 1〜 1 0のアルキル—カルボ二ル基（例、ァセチル、プロピオニル、プチリル、バレリル、ビバロイル、へキサノィル、ォクタノィル、シクロブタンカルボニル、シクロへキサンカルボニル、シクロヘプタンカルボニル等）、炭素数 2〜 1 0のアルケニルーカルボニル基（例、クロトニル、 2—シクロへキセンカルボニル等）、炭素数 6〜 1 4のァリールーカルボニル基（例、ベンゾィル等）、炭素数 7〜 1 9のァラルキル一カルボニル基（例、ベンジルカルポニル、ベンズヒドリルカルボニル等）、 5または 6 員芳香族複素環カルボニル基（例、ニコチノィル、 4一チアゾリルカルポニル等 ) 、 5または 6員芳香族複素環ァセチル基（例、 3—ピリジルァセチル、 4—チァゾリルァセチル等）が用いられる。該「炭素数 1〜6の炭化水素基を有するスルホン酸ァシル基」としては、例えばメタンスルホニル、エタンスルホニル等が用いられる。これらの基はさらに置換基、例えば前記したと同様のハロゲン原子、水酸基、炭素数 1〜6のアルコキシ基、アミノ基等で 1〜 3個置換されていてもよい。ァシル基の具体例としては、例えばトリフルォロアセチル、トリクロ口ァセチル、 4ーメトキシブチリル、 3—シクロへキシルォキシプロピオニル、 4 一クロ口べンゾィル、 3 , 4—ジメトキシベンゾィル等が挙げられる。

該「モノーまたはジーアルコキシホスホリル基」としては、例えばメトキシホスホリル、ェ卜キシホスホリル、プロポキシホスホリル、イソプロポキシホスホリル、ブトキシホスホリル、ペンチルォキシホスホリル、へキシルォキシホスホリル等のモノ— Cェ—₆アルコキシホスホリル基、例えばジメトキシホスホリル、ジエトキシホスホリル、ジプロポキシホスホリル、ジイソプロポキシホスホリル、ジブトキシホスホリル、ジペンチルォキシホスホリル、ジへキシルォキシホスホリル等のジ— C i _ ₆アルコキシホスホリル基等が用いられる。好ましくはジ— (^ _ ₆アルコキシ基、例えばジメトキシホスホリル、ジエトキシホスホリル、ジリル、ジブトキシホスホリル等が用いられる。

該「置換されていてもよいァリール基」におけるァリール基としては、好ましくは炭素数 6〜 1 4のァリール基、例えばフエニル、ナフチル、アントリル等が用いられ、これらは前記したと同様の炭素数 1〜1 0のアルキル基、ハロゲン原子、水酸基、炭素数 1〜6のアルコキシ基等で 1〜 3個置換されていてもよい。置換されたァリール基の具体例としては、例えば 4—クロ口フエニル、 3 , 4—ジメトキシフエ二ル、 4ーシクロへキシルフェニル、 5， 6 , 7， 8—テトラヒドロ— 2一ナフチル等が挙げられる。

該「置換されていてもよいァラルキル基」におけるァラルキル基としては、好ましくは炭素数 7〜 1 9のァラルキル基、例えばベンジル、ナフチルェチル、トリチル等が用いられ、芳香環上に前記した炭素数 1〜1 0のアルキル基、ハロゲン原子、水酸基、炭素数 1〜6のアルコキシ基等で 1〜 3個置換されていてもよい。置換されたァラルキル基の具体例としては、例えば 4—クロ口ベンジル、 3， 4—ジメトキシベンジル、 4—シクロへキシルベンジル、 5， 6 , 7 , 8—テトラヒドロー 2 —ナフチルェチル等が挙げられる。

該「置換されていてもよい芳香族複素環基」における芳香族複素環基としては、好ましくは窒素原子、酸素原子または/及び硫黄原子を 1〜 4個有する 5〜6 員芳香族複素環基、例えばフリル、チェニル、イミダゾリル、チアゾリル、ォキサゾリル、チアジアゾリル等が用いられ、これらの基は前記した炭素数 1〜1 0 のアルキル基、ハロゲン原子、水酸基、炭素数 1〜6のアルコキシ等で 1〜3個置換されていてもよい。

2個のアルキル基がベンゼン環 A上で互いに隣接して置換されている場合、互いに連結して式：—（C H ₂)m— 〔式中、 mは 3〜5の整数を示す〕で表わされるアルキレン基（例、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン等）を形成してもよく、 2個のアルコキシ基が互いに隣接して置換されている場合、式：— 0 - ( C H ₂) n- 0 - 〔式中、 nは 1〜3の整数を示す〕で表されるアルキレンジォキシ基（例、メチレンジォキシ、エチレンジォキシ、トリメチレンジォキシ等 ) を形成してもよい。このような場合は、ベンゼン環の炭素原子とともに 5〜7 員環が形成される。

前記式（I) において、 Rは水素原子または置換されていてもよい炭化水素基を示す。

Rで示される「置換されていてもよい炭化水素基」における炭化水素基としては、アルキル基（好ましくは、炭素数 1〜1 0のアルキル基、例えば、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、 sec—ブチル、 ter t-ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、へキシル等が挙げられる。）、前記したと同様のアルケニル基（好ましくは炭素数 2〜1 0のアルケニル基）、さらに、それぞれ前記したと同様の、ァリール基（好ましくは炭素数 6〜1 4のァリール基）、ァラルキル基（好ましくは炭素数 7〜1 9のァラルキル）等が用いられる。炭化水素基上の置換基としては、 5〜 6員芳香族複素環基（例、フリル、チェニル、イミダゾリル、チアゾリル、ォキサゾリル、チアジアゾリル等）、前記したと同様のハロゲン原子、前記したと同様のジ—（^ _ ₆アルコキシホスホリル基、ホスホノ基等が用いられる。

前記式（I) において、 Bはエステル化またはアミド化されていてもよいカルボキシル基を示す。

Bで示される「エステル化されていてもよいカルボキシル基」におけるエステル化された力ルポキシル基としては、例えばアルコキシカルボ二ル基、好ましくは。アルコキシ力ルポニル基（例、メトキシカルボニル、エトキシカルボ二ル、プロポキシカルボニル、ブトキシカルボ二ル等）、ァリールォキシ力ルポ二ル基、好ましくは ₄ァリールォキシカルボニル基（例、フエノキシカルボ二ル等）、ァラルキルォキシカルボニル基、好ましくは c ₇— _{1 9}ァラルキルォキシ力ルポニル基（例、ベンジルォキシカルボ二ル等）等が用いられる。

Bで示される「アミド化されていてもよいカルボキシル基」におけるアミド化されたカルボキシル基は、好ましくは、式：— C O N il^ R ²) 〔式中、 R ¹ , R ²はそれぞれ水素原子、置換されていてもよい炭化水素基または置換されていてもよい 5〜 7員複素環基を示す。〕で表される置換されていてもよいカルバモィル基が挙げられる。

R R ²で示される「置換されていてもよい炭化水素基」における炭化水素基としては、アルキル基、好ましくは炭素数 1〜 1 0のアルキル基（例、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、 sec-ブチル、 t er卜ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、へキシル、ヘプチル、ォクチル、ノニル、デシル等）、アルケニル基、好ましくは炭素数 2〜 1 0のアルケニル基 (例、ァリル、ビニル、 2—ペンテン— 1 Γル、 3—ペンテン一 1—ィル、 2 —へキセン一 1 _ィル、 3—へキセン— 1一ィル、 2—シクロへキセニル、 2— シクロペンテニル、 2—メチル _ 2—プロペン一 1 Γル、 3—メチル— 2—ブテン— 1ーィル等）、ァリール基、好ましくは炭素数 6〜 1 4のァリール基（例、フエニル、ナフチル、アントリル等）、ァラルキル基、好ましくは炭素数 7〜 1 9のァラルキル基（例、ベンジル、ナフチルェチル、トリチル等）等が用いられ、これらの炭化水素基は、例えば（i )ハロゲン原子（例、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等）、（i i)水酸基、（i i i)炭素数 1〜6のアルコキシ基（例、メトキシ、ェ卜キシ、プロポキシ、ブ卜キシ、 ter t-ブ卜キシ、ペンチルォキシ、へキシルォキシ等）、（iv) l個または、同一または異なって 2個の炭素数 1〜6のアルキル基 (例、メチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、 sec -ブチル、 ter t-ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、へキシル等）で置換されていてもよいアミノ基（例、ァミノ、メチルァミノ、ェチルァミノ、ジメチルァミノ、ジェチルァミノ、ジプロピルアミノ等）、（v) l個または、同一または異なって 2個のァシル基（例、炭素数 1〜 1 0のアルカノィル基等）で置換されたァミノ基（例、ァセチルァミノ、プロピオニルァミノ、ベンゾィルァミノ等 ) 、（vi) l個または、同一または異なって 2個の炭素数 1〜6のアルキル基で置換されていてもよい力ルバモイル基（例、力ルバモイル、メチルカルバモイル、ジメチルカルバモイル、ジェチルカルバモイル等）、（vi D C i - eアルコキシカルポニル基（例、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボ二ル等）、（vi i i)モノ—またはジ—アルコキシホスホリル基〔例、モノーまたはジ —C ^ eアルコキシホスホリル基（例えば、ジメトキシホスホリル、ジエトキシホスホリル、エチレンジォキシホスホリル等）等〕、（ix)モノ—またはジ—アルコキシホスホリルアルキル基〔例、モノ—またはジーアルコキシホスホリルーアルキル基（例、メトキシホスホリルメチル、エトキシホスホリルメチル、メトキシホスホリルェチル、エトキシホスホリルェチル、ジメトキシホスホリルメチル、ジエトキシホスホリルメチル、ジメトキシホスホリルェチル、ジエトキシホスホリルェチル等）等〕、（X)式 >2) P

〔式中、 pは 2ないし 4の整数を示す。〕、

(x i)ホスホノ基、（x i i)芳香族複素環基（前記と同意義）等で 1〜3個置換されていてもよい。

R R ²で示される「置換されていてもよい 5〜 7員複素環基」における 5〜 7員複素環基としては、例えば 1個の硫黄原子、窒素原子または酸素原子を含む 5〜 7員複素環基、 2〜 4個の窒素原子を含む 5〜 6員複素環基、 1〜2個の窒素原子および 1個の硫黄原子または酸素原子を含む 5〜 6員複素環基が用いられ、これらの複素環基は 2個以下の窒素原子を含む 6員環、ベンゼン環または 1個の硫黄原子を含む 5員環と縮合していてもよい。該「置換されていてもよい 5〜 7員複素環基」が有していてもよい置換基としては、前記 R¹および R ²で示される「置換されていてもよい炭化水素基」の炭化水素基が有していてもよい置換基と同様のものが 1ないし 4個用いられる。

R R²で示される 5〜7員複素環基の好ましい例としては、例えば 2—ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チァゾリル、ォキサゾリル、テトラゾリル、チアジアゾリル、ォキサジァゾリル、トリアジニル、トリァゾリル、チェニル、ピロリル、ピロリニル、フリル、ピロリジニル、ベンゾチェニル、インドリル、イミダゾリジニル、ピペリジル、ピぺリジノ、ピペラジニル、モルホリニル、モルホリノ、ピリド [2, 3— d]ピリミジル、ベンゾピラニル、 1, 8_ナフチリジル、キノリル、チエノ [2, 3— b]ピリジル等が挙げられる。

R¹と R²は、互いに連結して式：一 NiR¹) (R²) が 5〜7員環を形成していてもよく、このような環としては、例えばモルホリン、チオモルホリン、ピペリジン、ホモピぺラジン、ピぺラジン、ピロリジン、ピロリン、ピラゾリン、イミダゾリン、イミダゾリジン、チアゾリジン、ァゼピン等が挙げられる。

R¹および R²で示される「置換されていてもよい炭化水素基」の好ましい例である置換されたアルキル基の具体例としては、例えばトリフルォロメチル、トリフルォロェチル、ジフルォロメチル、トリクロロメチル、 2—ヒドロキシェチル、 2—メトキシェチル、 2—エトキシェチル、 2， 2—ジメトキシェチル、 2, 2 ージエトキシェチル、 2—ピリジルメチル、 3—ピリジルメチル、 4一ピリジルメチル、 2—（2—チェニル）ェチル、 3—（3—フリル）プロピル、 2 _モルホリノエチル、 3—ピロリルプチル、 2—ピベリジノエチル、 2— (N， N—ジメチルァミノ）ェチル、 2— (N—メチル—N—ェチルァミノ）ェチル、 2 _(N， N—ジィソプロピルアミノ）ェチル、 5 _(N， N—ジメチルァミノ）ペンチル、 N, N—ジメチルカルバモイルェチル、 N, N—ジメチルカルバモイルペンチル、エトキシカルボニルメチル、イソプロポキシカルボニルェチル、 tert—ブトキシカルボニルプ口ピル、 2—ジエトキシホスホリルェチル、 3—ジプロポキシホスホリルプロピル、 4一ジブ卜キシホスホリルブチル、エチレンジォキシホスホリルメチル、 2 —ホスホノエチル、 3—ホスホノプロピル等、置換されたァラルキル基の具体例としては、例えば 4—クロ口ベンジル、 3 _ (2—フルオロフェニル）プロピル、 3—メトキシベンジル、 3, 4—ジメ卜キシフエネチル、 4—ェチルベンジル、 4 — (3—トリフルォロメチルフエニル）プチル、 4—ァセチルァミノベンジル、 4 —ジメチルアミノフエネチル、 4—ジエトキシホスホリルベンジル、 2_(4—ジプロポキシホスホリルメチルフエニル）ェチル等、置換されたァリール基の具体例としては、例えば 4一クロ口フエニル、 4—シクロへキシルフェニル、 5, 6, 7, 8—テトラヒドロー 2—ナフチル、 3—トリフルォロメチルフエニル、 4ーヒドロキシフエニル、 3, 4， 5—卜リメトキシフエ二ル、 6—メトキシ一 2—ナフチル、 4ー（4—クロ口ベンジルォキシ）フエニル、 3, 4—メチレンジォキシフエ二ル、 4_(2, 2, 2—トリフルォロエトキシ）フエニル、 4—プロピオニルフエ二ル、 4—シクロへキサンカルポニルフエニル、 4—ジメチルァミノフエニル、 4 一べンゾィルァミノフエニル、 4ージエトキシカルバモイルフエニル、 4— tert —ブトキシカルボニルフエニル、 4—ジェトキシホスホリルフエニル、 4—ジェトキシホスホリルメチルフエニル、 4一（2 _ジェトキシホスホリルェチル）フエニル、 2—ジエトキシホスホリルメチルフエニル、 3—ジエトキシホスホリルメチルフエニル、 4—ジプロポキシホスホリルフエニル、 4— (2—ホスホノエチル )フエニル、 4一ホスホノメチルフエニル、 4—ホスホノフエニル等、置換された 5〜 7員複素環基の具体例としては、例えば 5 _クロロー 2—ピリジル、 3—メトキシー 2—ピリジル、 5—メチル— 2—べンゾチアゾリル、 5—メチルー 4一フエ二ルー 2—チアゾリル、 3—フエニル— 5—イソォキサゾリル、 4_(4—クロロフエ二ル）— 5—メチルー 2—ォキサゾリル、 3—フエ二ルー 1, 2, 4—チアジァゾ—ル _ 5—ィル、 5—メチル— 1, 3, 4—チアジアゾールー 2—ィル、 5 —ァセチルアミノー 2—ピリミジル、 3—メチル _ 2—チェニル、 4, 5—ジメチルー 2 -フラニル、 4—メチルー 2—モルホリニル等が挙げられる。

前記のうち、環 Aは好ましくは同一または異なって、ハロゲン原子、置換されていてもよいアルキル基、置換されていてもよい水酸基、置換されていてもよいメルカプト基またはノおよび置換されていてもよいアミノ基の 1またはそれ以上、より好ましくは 1または 2個で置換されていてもよいベンゼン環である。

より好ましい環 Aとしては、同一または異なって、ハロゲン原子、炭素数 1〜 10 (さらに好ましくは炭素数 1〜5) のアルキル基、炭素数 1〜10 (さらに好ましくは炭素数 1〜5) のアルコキシ基、式：—〇_(CH₂)n—〇— 〔式中、 nは 1〜 3の整数を示す〕で表されるアルキレンジォキシ基または Zおよび炭素数 1〜10 (さらに好ましくは炭素数 1〜 5) のアルキルチオ基の 1または 2個で置換されていてもよいベンゼン環である。

環 Aの特に好ましい例としては、式：— 0_(CH₂)n—〇_ 〔式中、 nは 1〜 3の整数を示す〕で表されるアルキレンジォキシ基で隣接する炭素原子が置換されたベンゼン環である。

Rは水素原子、 Ci_₆アルキル基（例えば、メチル、ェチル等）またはフエ二ル基が好ましい。

Bは、例えばアルコキシ—カルポニル基および式：一 CONCR¹) (R²) 〔式中、 R R²はそれぞれ水素原子、置換されていてもよい炭化水素基または置換されていてもよい 5〜 7員複素環基を示す〕で表される基などが好ましい。

R¹および R ²の好ましい例は、 R¹が水素原子または炭素数 1〜1 0のアルキル基（例、メチル、ェチル、プロピル等）で、 R ²がハロゲン（例、フッ素、塩素、臭素等）、アルコキシ（例、メトキシ、エトキシ等）、モノ—またはジーアルコキシホスホリル（例、ジメトキシホスホリル、ジエトキシホスホリルなどのモノ—またはジー（^_₆アルコキシホスホリル等）、モノ—またはジーァルコキシホスホリルアルキル（例、ジメトキシホスホリルメチル、ジエトキシホスホリルメチルなどのモノ—またはジー — 6アルコキシホスホリル— C^— ₆ァルキルなど）（ジ— アルコキシにおけるジアルキルは、一緒になつて C — 6アルキレン基となっていてもよい）またはアルコキシカルボニル（例、メトキシカルポニル、エトキシカルポニル等）で置換されていてもよいフエニルまたはフエ二ルーじアルキル基、あるいはフエニル基で置換されていてもよい 1または 2個の窒素原子あるいは 1個の窒素原子と 1個の硫黄原子をもつ 5または 6員環複素環基（例、ピリジル等）である。

R¹および R²のより好ましい例としては、 R¹が水素原子で、 R²がモノ—またはジ— — 6アルコキシホスホリル—じト₃アルキルで置換されたフエニル基（例、 4 _ジエトキシホスホリルメチルフエニル等）である。

前記式（I) において、 Xは一 CH(〇H)—または— C〇—を示し、好ましくは、 _CO—である。

前記式（I) において、 kは 0または 1、 k' は 0、 1または 2を示し、好ましくは k力 1で、 k' が 0の場合である。

化合物（I) のさらに好ましい例としては、例えば式（II)

〔式中、 R³はアルキル基を示し、 R⁴および R⁵はそれぞれ ₆アルキル基を示すか、または一緒になつてじ卜₆アルキレン基を示す〕で表される光学活性べンゾチェピン誘導体が挙げられる。

前記式（Π) において、 R³、 R⁴および R⁵で示される「(： i_₆アルキル基」としては、例えばメチル、ェチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、 sec—ブチル、 tert—ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、へキシル等のアルキル基が挙げられ、好ましくは、炭素数 1ないし 4のアルキル基が挙げられる。 R⁴および R⁵は一緒になつて、 — 6アルキレン基を形成してもよく、この場合例えば、

，、

C^H ₂)_P

〔式中， pは 2ないし 4の整数を示す。〕で表すことができる。

R³、 R⁴および R⁵としては、例えばそれぞれメチル、ェチル等の炭素数 1ないし 4のアルキル基等が好ましい。化合物（I I) は、（2 R, 4 S ) 配位の光学活性体であって、（2 S， 4 R) 配位の化合物を実質的に含まず、光学純度が 1 0 0 %に近いほど好ましいものである。

化合物（Π) の特に好ましい例としては、例えば（2 R, 4 S ) - (-) - N - 〔4 —(ジエトキシホスホリルメチル）フエ二ル〕一 1 , 2 , 4 , 5—テトラヒドロ— 4— メチル一 7 , 8—メチレンジォキシ一 5—ォキソ一 3—べンゾチェピン— 2—力ルポキサミド（以下、化合物 Aと称することもある）またはその塩である。化合物 Aの構造は、次の式で示される。

本発明で用いられるベンゾチォピランもしくはベンゾチェピン誘導体の塩は、好ましくは薬理学的に許容される塩が用いられる。薬理学的に許容される塩としては、無機塩基との塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩または塩基性若しくは酸性ァミノ酸との塩等が用いられる。ベンゾチォピランもしくはべンゾチェピン誘導体の塩を形成させ得る塩としては、無機塩基としては、アル力リ金属（例、ナトリウム、カリウム等）、アルカリ土類金属（例、カルシウム、マグネシウム等）が、有機塩基としては、例えばトリメチルァミン、トリェチルァミン、ピリジン、ピコリン、 N, N—ジベンジルエチレンジァミン、ジェタノ一ルァミン等が、無機酸としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸等が、有機酸としては、ギ酸、酢酸、トリフルォロ酢酸、シユウ酸、酒石酸、フマール酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、 p—トルエンスルホン酸、クェン酸等が、塩基性または酸性アミノ酸としては、例えばアルギニン、リジン、ァスパラギン酸、グルタミン酸等が用いられる。

なお、本発明で用いられるベンゾチォピランもしくはベンゾチェピン誘導体またはその塩は、例えば、特開平 3 _ 2 3 2 8 8 0号公報（ヨーロッパ特許出願公開公報第 3 7 6 1 9 7号公報）、特開平 4一 3 6 4 1 7 9号公報（ヨーロッパ特許出願公開公報第 4 6 0 4 8 8号公報）、特開平 8— 2 3 1 5 6 9号公報（ョ一口ツバ特許出願公開公報第 7 1 9 7 8 2号公報）に記載された方法と同一の方法、これらと類似の方法またはこれらに準じた方法により製造することができる。本発明で用いられる骨形成促進物質としては、とりわけ強力な作用を示す物質として特開平 8— 2 3 1 5 6 9号公報（ヨーロッパ特許出願公開公報第 7 1 9 7

8 2号公報）に開示される（2 R, 4 S ) - (-) - N - [ 4— (ジエトキシホスホリルメチル）フエニル] — 1 , 2 , 4 , 5—テトラヒドロ— 4—メチル _ 7， 8— メチレンジォキシ— 5—ォキソ— 3—べンゾチェピン一 2—カルボキサミド（以下、化合物 Aという場合がある）およびその塩、 N— （4ージメトキシホスホリルメチルフエニル） — 4 _ォキソ一 4 H _ 1 _ベンゾピラン一 2—カルボキサミドおよびその塩、ジェチル 4一 ( 7—シクロへキシル— 3 , 4—ジヒドロ— 2—ナフタレンカルボキサミド）ベンジルホスホネートおよびその塩等が好ましい。なかでも、（2 R, 4 S ) - (一）一 N— [ 4— (ジエトキシホスホリルメチル）フェニル] — 1 , 2 , 4 , 5—テトラヒドロー 4—メチル一 7， 8—メチレンジォキシ一 5—ォキソ— 3—ベンゾチェピン一 2—カルボキサミド（以下、化合物 Aという場合がある）およびその塩がとりわけ好ましい。

本発明で用いられる骨形成促進物質には、骨伝導性を有する物質および骨誘導性を有する物質の両者が含まれる。

本発明の徐放性ペーストに配合される骨形成促進物質としては、結晶粉末あるいは非晶質粉末などをそのまま用いることができる。また、上記例示した化合物自体若しくはその塩としても用いることができるが、これらを予め徐放性に製剤化したうえで本発明の徐放性ペース卜へ配合することもできる。骨形成促進物質を徐放性製剤とすることにより、前記した増粘剤の配合量を増減することによる骨形成促進物質の放出期間の制御に加えて、徐放性製剤自身としての放出制御効果を得ることができる。従って、求める骨形成促進物質の放出期間に応じて、増粘剤の配合量とペーストに配合される徐放性製剤の組成またはその配合量を適宜変更することができる。

非べプチド系骨形成促進物質を徐放性製剤とする場合、例えば前記した特開平

9 - 2 6 3 5 4 5号公報（WO 9 6 / 3 9 1 3 4号公報）に記載されるように、生体内分解性ポリマ一でマイクロカプセル化、あるいはマイクロスフェア化することが好ましい（後記参考例参照）。

本発明の徐放性ペーストは、生体内局所に適用した後も硬化を続けるため、局所への高い滞留性を示す。同時に、硬化したペーストは滞留部位で徐々に分解され、これに伴い骨形成促進物質が徐々に放出される。骨形成促進物質の徐放性製剤を用いた場合には製剤がそれ自体の徐放効果を示すため、局所での骨形成促進物質の放出期間をさらに長くすることができる。

本発明の徐放性ペーストにおいて、骨形成促進物質とカルシウム成分との配合比率に特に制限はないが、例えば骨形成促進物質 1重量部に対してカルシウム成分が約 1〜 5 0 0重量部であることができ、約 1〜 3 0 0重量部であることが好ましく、約 1〜1 0 0重量部であることがより好ましく、約 2〜1 0 0重量部であることがさらに好ましい。

本発明の徐放性べ一ストの調製に用いられる骨形成促進物質またはこれを徐放性に製剤化したものの形態は特に制限されず、室温で固体粉末であっても液体状であってもよい。固体粉末である場合には、予め上記カルシウム成分と均一に混和して用いることができる。一方、室温で液体状である場合には、本発明の徐放性ペーストを調製するために加える後述の液成分に溶解または懸濁して用いることができる。また、固体粉末を予め当該液成分に溶解または懸濁して用いることもできる。

本発明の徐放性ペーストは、上記カルシウム成分、増粘剤および骨形成促進物質の三成分を含有する組成物に、水からなる液成分を加えて練和することによつて調製することができる。このとき、例えば上記三成分がいずれも固体粉末の場合には、予め均一に混和した当該三成分に対して液成分を加え、液成分と固体粉末とが均一に分散されるまで練和する。また、増粘剤および骨形成促進物質が液成分に溶解若しくは懸濁されている場合には、かかる液成分をカルシウム成分に加えて、両者が均一に分散されるまで練和する。増粘剤が液成分に溶解若しくは懸濁されている場合には、かかる液成分をカルシウム成分および骨形成促進物質を含有する組成物に加えて、両者が均一に分散されるまで練和する。骨形成促進物質が液成分に溶解若しくは懸濁されている場合には、かかる液成分をカルシゥ 1

25

ム成分および増粘剤を含有する組成物に加えて、両者が均一に分散されるまで練和する。

練和に要する時間は、カルシウム成分および増粘剤の種類や配合量、さらには後述するように液成分の組成によっても変動するが、一般には数 10秒から約 5 分程度である。

練和された本発明の徐放性ペーストは徐々に硬化を始めるが、人工骨あるいは骨補填材として用いられているいわゆる自己硬化性セメントとは異なり、その硬化速度は極めて緩やかである。本発明の徐放性ペーストの硬化時間は、具体的には 1時間以上、より具体的には 1ないし 24時間、さらに具体的には 1ないし 1 8時間（とりわけ、 3ないし 12時間）である。前記硬化時間は、ビカー針法により、歯科用リン酸亜鉛セメントの測定法（JIST6602) に準じて測定される。具体的には、練和開始 3分後に、練和物を温度 37°C、相対湿度約 100%の恒温器中に移し、質量 300 gのビカー針を練和物表面に静かに落とし、針跡がつくかどうかを調べ、針跡を残さなくなった時を練和開始時から起算して硬化時間とする。

しかも本発明の徐放性ペーストは数時間経過後でも可塑性を維持し得る。具体的には、本発明の徐放性ペーストは、練和後 14時間経過してもその圧縮強度が 1. 5MP a以下（好ましくは IMP a以下）という値を示す（後記比較試験参照）。本発明の徐放性ペーストは、練和後 14時間経過してもその圧縮強度が、さらに具体的には 0. 05ないし 1. 5MP a、より具体的には 0. 1ないし 1 MP aという値を示す。本発明の徐放性ペーストは、練和後 2週間経過後の圧縮強度が、具体的には 3 MP a以下、さらに具体的には 0. 1ないし 3 MP a、より具体的には 0. 2ないし 2MP aという値を示す。圧縮強度は万能試験機（ INTESCO Model 205E) を用いて、練和後 37° (、相対湿度約 100 %の条件下で所 ¾時間経過後の硬化体（直径 1. 0 cm、高さ 1. 0 cmの円筒状に成形）の強度を測定することにより得られる。

本発明の徐放性ペーストの練和後 14時間経過後の間接引っ張り強度（ Diametral tensile strength, DTS) は、具体的には 0. 4MP a以下、さらに具体的には 0. 01なぃし0. 4MP a、より具体的には 0. 02なぃし0. 2M P aという値を示す。前記間接引っ張り強度（Di amet ral tens i le s t rength, DTS ) は、直径 1 . 0 じ 111、高さ0 . 5 c mの円筒状に成形した硬化体を用いて圧縮強度と同様の条件で測定される。

本発明の徐放性ペーストの接着性は、具体的には 6ニュートン（N) 以上、さらに具体的には 6ないし 5 0 N、より具体的には 8ないし 3 O Nという値を示す。前記接着性は、練和 5分後に練和物 0 . l m 1を 2枚のガラス板で挟み、 2 9 . 4 Nで 1分間圧接後のガラス板引き剥がしに要する力を接着力として、上記万能試験機 UNTESCO Model 205E) を用いて測定される。

かかる特徴的な物性を示す点において、本発明の徐放性ペーストは従来の人工骨、骨補填材とは明確に区別できるものである。また、かかる特徴的な物性に基づき、骨折手術等の外科的処置に先立って調製しておくことが可能であり、練和完了の数分から数時間経過後であっても容易に患部に適用できるという特徴的な効果を発揮する。

本発明の徐放性ペーストの調製に用いられる液成分としては、例えば注射用蒸留水をそのまま用いることができるが、生理食塩水、リン酸緩衝液、無機酸若しくは有機酸またはこれらの塩の水溶液などを用いることもできる。

例えばカルシウム成分がリン酸塩である場合には、必要に応じて無機酸若しくは有機酸またはこれらの塩の水溶液を液成分として用いることによって、ペース卜の硬化速度を早めることができる。本発明の徐放性ペーストの硬化速度を速めることは、例えば出血部位やその近傍を処置する際に、ある程度の硬度を持つぺ —ストを適用することが好ましい場合に有利である。このときの水溶液に使用できる無機酸若しくは有機酸またはこれらの塩の種類に特に制限はないが、リン酸、酢酸、乳酸、クェン酸、コハク酸、リンゴ酸、マロン酸、ダル夕ル酸、グリコール酸、酒石酸等、あるいは乳酸ゃコハク酸のナトリウム塩等が好ましい。酸またはこれらの塩の濃度は生体に為害性のない範囲で適宜選択できる。

また、カルシウム成分がリン酸塩である場合は、 p Hがほぼ中性のリン酸緩衝液によっても硬化速度を早めることができる。この場合のリン酸塩の濃度に特に制限はなく、本発明の徐放性ペーストを調製してから生体内に適用するまでの所要時間等に合せて適宜選択することができ、例えば約 0 . 0 1 M〜1 Mの範囲であることができる。

また、カルシウム成分が硫酸塩の場合、液成分として蒸留水または生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩液を用いることによって、好ましい硬化速度を得ることができる。

本発明の徐放性ペーストに配合される骨形成促進物質、カルシウム成分および増粘剤の総重量に対する水分の容積比（gZm l ) は目的に応じて任意に変えることができ、たとえば約 0. 5〜15 (g/m 1 ) 、好ましくは約 1〜： L 0 (g /m l ) 、特に好ましくは約 1. 5〜7 (g/m l ) 、さらに好ましくは約 1. 5〜6 (g/m 1 ) である。

本発明のカルシウム成分（例、硫酸カルシウム半水和物や硬化性を示すリン酸カルシウムの組み合わせ等）には、徐放性ペーストの硬化速度や硬度（前述した硬化時間、圧縮強度および間接引っ張り強度等）を調節するために、骨伝導能および骨親和性に優れた硫酸カルシウム二水和物、アパタイト（例、ヒドロキシァパ夕イト、炭酸アパタイト、フルォロアパタイト）、リン酸八カルシウム、非晶質リン酸カルシウム等を添加することもできる。添加量は目的とする硬度や硬化時間に応じて任意に選ぶことができ、カルシウム成分 1重量部あたり、例えば約 0. 001ないし 10重量部、好ましくは約 0. 001ないし 7重量部、より好ましくは約 0. 001ないし 5重量部である。これらの組み合わせのうち、とりわけ、カルシウム成分としての硫酸カルシウム半水和物と硫酸カルシウム二水和物との組み合せが好ましい。

本発明の徐放性ペーストからの骨形成促進物質の放出を促進する必要がある場合には、上記必須の成分以外に、塩化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリゥム等の水溶性塩類を添加することもできる。これらの添加物の添加量は、カルシウム成分 1重量部に対して約 0. 005〜3重量部であり、好ましくは約 0. 01〜1重量部である。

本発明の徐放性ペーストは、骨形成促進物質を長期にわたって安定に徐放するため安定した薬効が得られ、力、つ骨に対する親和性、接着性があり、骨伝導性に優れているので、骨折や骨欠損症の治療に、あるいは骨移植における骨結合材として各種骨疾患の治療に適用することができる。また、口腔外科領域において、失われた歯槽骨の再生や歯槽骨の増量、口蓋部欠損への充填などの骨疾患の治療に適用することができる。

本発明の徐放性ペーストは、単純骨折，骨癒合不全，再骨折，骨欠損等の骨疾患の治療に用いることができる。さらに本発明の徐放性ペース卜は、骨髄炎，骨 · 関節感染症，慢性関節疾患，代謝性骨疾患，外傷性骨疾患若しくは骨腫瘍の病巣搔爬後の骨形成促進；骨髄炎，骨 ·関節感染症，慢性関節疾患，代謝性骨疾患，外傷性骨疾患若しくは骨腫瘍の病巣搔爬後の治療のために自家骨移植を行った結果その欠損部位における骨形成促進；頭蓋欠損部若しくは骨窓部の骨形成促進；鼓室形成術における骨形成促進を目的とした骨疾患治療剤として用いることができる。

本発明の徐放性ペーストの適用量は、対象動物、適用しょうとする部位、および目的によって適宜選択することができる。またこの選択された適用量に対して、有効量の骨形成促進物質が配合される。例えば骨けい部骨折の骨折部位に化合物 Aを用いる場合、一ヶ所当たりの化合物 Aの投与量は、有効成分量として約 1 m gから 5 0 0 m g、好ましくは約 5 m gから 3 0 0 m gであり、徐放性ペーストの容量としては約 0 . 0 1〜5 0 m 1程度が好ましい。

本発明の徐放性ペーストには、その物性に影響を与えない限り、前記した骨形成促進物質以外の他の有効成分を配合することもできる。このような有効成分としては、例えば、抗生物質ゃ抗腫瘍剤、抗炎症剤、鎮痛剤等が挙げられる。

抗生物質としては、例えば、アミカシン、ディべカシン、ゲン夕マイシン、もしくはそれらの誘導体等のアミノダリコシド系抗生物質等が挙げられる。

抗腫瘍剤としては、例えば、夕キソール、塩酸トキソルビシン等のアントラサイクリン系抗悪性腫瘍剤、メソ卜レキセ一卜、エトポシド、 5—フルォロウラシル、ミトキサントロン、メスナ、ジメスナ、アミノグルテチミド、夕モキシフエン、ァクロライン、シスプラチン、カルポプラチン、シクロフォスフアミド、口ムスチン（C C N U) 、カルムスチン（B C N U) 等もしくはこれらの誘導体が挙げられる。

抗炎症剤としては、例えば、アスピリン等のサリチル酸系抗炎症薬、アミノビリン等のピラゾロン系抗炎症薬、フエナセチン、ァセトァミノフェン等のァニリン系抗炎症薬、フエ二ルブ夕ゾン、ケトフエニルブ夕ゾン等のピラゾリジンジォン系抗炎症薬、メフエナム酸等のアントラニル酸系抗炎症薬、インドメ夕シン等の酢酸系抗炎症薬、ブコローム等のトリオキソピリミジン系抗炎症薬、ベンジダミン、メピリゾ一ル、チアラミド、チノリジン等の塩基性抗炎症薬、消炎酵素剤、非ステロイド系抗炎症薬等が挙げられる。

鎮痛剤としては、キシロカイン等が挙げられる。

本発明の徐放性ペース卜は、その主たる基剤であるカルシウム成分が骨組織に対して為害性を全く示さず、高い親和性を持つものである。そのため、本発明の組成物は、低毒性なので哺乳動物（例えばヒト、マウス、ラッ卜、ゥサギ、ィヌ、ネコ、ゥシ、ゥマ、ブ夕など）に対して安全に用いることができる。また、基剤であるカルシウム成分が X線で造影可能であるため、充填箇所の確認などに利用でき、臨床上極めて有用である（後記比較試験参照）。

本発明の徐放性ペーストは、良好な展延性、塗工性、可塑性などを示すため使用時の操作性、ハンドリング性に優れており、さらにある程度の硬度を有しているため骨への接着性、滞留性が高く、それ自体局所投与に適している。更に、骨折手術の整復時にスぺ一サ一として、あるいは砕けた骨片や補填材として使用する人工骨顆粒を、骨折部、骨欠損部に詰める際に、これらを詰めた場所に留まらせるために糊あるいは接着剤として使用することも可能である。

更に、本発明の徐放性ペーストは、充分に練和して硬度を増した状態でその内部に更に骨形成促進物質やその他の生理活性物質を封入し、これを骨折局所へ適用することも可能である。更に、十分に練和した本発明の徐放性ペーストの表面に骨形成促進物質やその他の生理活性物質を付着させて、これを骨折局所へ適用することもまた、可能である。このような適用のバリエーションによって、必要な時期に必要な別々の生理活性物質を患部へ投与することが可能となる。

本発明の徐放性ペース卜の投与により、骨形成促進物質の骨形成促進作用が局所において効率的に発揮されるため、治癒期間を大幅に短縮させることが可能である。したがって患者の社会生活への復帰を早め、あるいは老年期の骨折に伴う種々の合併症の併発を未然に防ぐことが可能となる。そのため、本発明の徐放性ペーストは、骨折治療の外科的処置において、極めて有用な医薬品となるものである。実施例

以下に参考例、実施例および比較例、並びにこれらの比較試験結果を示して本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらの記載に何ら限定されるものではない。

以下で用いられた化合物 Aは、特開平 8— 231569号公報（ヨーロッパ特許出願公開公報第 719782号公報）に記載の方法で製造されたものを用いた。参考例

化合物 Aの徐放性製剤を得るため、特開平 9一 236545号公報（W〇 96 /39134号公報）に記載の方法に従って、マイクロカプセル製剤を製造した。すなわち、 0. 55 gの乳酸ーグリコール酸共重合物（乳酸ーグリコール酸組成比 85 : 15、重量平均分子量 14, 000) と 4.45 gの化合物 Aを 8 mLのジクロルメタンに溶解して油相を調製した。この油相を 80 OmLの 0. 1 %ポリビニールアルコール水溶液（ 15°C)に急速に注入して o/wエマルシヨンとした。さらに室温で 3時間攪拌しジクロルメタンを揮発させて油相を固化させ、遠心分離器で捕集した。蒸留水で洗浄した後、 0. 6 gのマンニットを添加し、少量の蒸留水で懸濁し、凍結乾燥を行なった。得られたマイクロカプセルをさらに 42°C で真空乾燥して、残存するジクロルメタンを完全に除去した。実施例 1

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 48 Omg (化合物 Aを 4 8mg含む）をリン酸四カルシウム（太平化学産業製、商品名 TTCP) 544 mg、リン酸水素カルシウム二水和物（和光純薬製） 256mg、デキストラン (フアルマシアバイオテク製、商品名 T 70、平均分子量 7万） 40 Omgから成る粉末と混合し、 0. 5% (w/v) カルボキシメチルセルロースナトリウム含有リン酸緩衝液（0. 2M、 H 7. 4) 0. 4m lで練和して、本発明の徐放性べ一ストを得た。実施例 2

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 48 Omg (化合物 Aを 48 mg含む）を α型リン酸三カルシウム（太平化学産業製、商品名ひ— TCP) 7 6 Omg, リン酸水素カルシウム二水和物（和光純薬製） 40mg、デキストラン（フアルマシアバイオテク製、商品名 T 70、平均分子量 7万） 40 Omgから成る粉末と混合し、 0. 5% (w/v) カルポキシメチルセルロースナトリウム含有リン酸緩衝液（0. 2M、 pH7. 4) 0. 4m lで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。実施例 3

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 48 Omg (化合物 Aを 4 8mg含む）をリン酸四カルシウム（太平化学産業製、商品名 TTCP) 544 mg、リン酸水素カルシウム二水和物（和光純薬製） 256mg、デキストラン (フアルマシアバイオテク製、商品名 T 70、平均分子量 7万） 400mg、ヒドロキシプロピルセルロース（日本曹達製、商品名 HPC— H) 10 Omgから成る粉末と混合し、 0. 5% (w/v) カルポキシメチルセルロースナトリウム含有リン酸緩衝液（0. 2M、 pH7. 4) 0. 4m lで練和して、本発明の徐放性ペース卜を得た。実施例 4

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 48 Omg (化合物 Aを 4 8mg含む）をリン酸四カルシウム（太平化学産業製、商品名 TTCP) 544 mg、リン酸水素カルシウム二水和物（和光純薬製） 256mg、デキストラン

(フアルマシアバイオテク製、商品名 T 70、平均分子量 7万） 400mg、キシリトール（和光純薬製） 4 Omgから成る粉末と混合し、 0. 5% (w/v) カルボキシメチルセルロースナトリウム含有リン酸緩衝液（0. 2M、 pH7. 4) 0. 4m lで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。実施例 5

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 48 Omg (化合物 Aを 4 8mg含む）をリン酸四カルシウム（太平化学産業製、商品名 TTCP) 544 mg、リン酸水素カルシウム二水和物（和光純薬製） 256mg、デキストラン (フアルマシアバイオテク製、商品名 T 70、平均分子量 7万） 400mg、キシリトール（和光純薬製） 4 Omgから成る粉末と混合し、リン酸緩衝液（1. 0M、 H 7. 4) 0. 4mlで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。実施例 6

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 48 Omg (化合物 Aを 4 8mg含む）をリン酸四カルシウム（太平化学産業製、商品名 T TCP) 544 mg、リン酸水素カルシウム二水和物（和光純薬製） 256mg、デキストラン (フアルマシアバイオテク製、商品名 T 70、平均分子量 7万） 400mg、キシリトール（和光純薬製） 10 Omgから成る粉末と混合し、 0. 5% (w/v) カルポキシメチルセルロースナトリウム含有リン酸緩衝液（0. 2M、 pH7. 4) 0. 4m lで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。実施例 7

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 48 Omg (化合物 Aを 4 8mg含む）をリン酸四カルシウム（太平化学産業製、商品名 TTCP) 752mg 、炭酸カルシウム（和光純薬製） 208mg、リン酸二水素ナトリウム二水和物（和光純薬製） 640mg、デキストラン（フアルマシアバイオテク製、商品名 T70、平均分子量 7万） 40 Omgから成る粉末と混合し、 0. 5% (w/v) カルボキシメチルセルロースナトリウム含有リン酸緩衝液（0. 2M、 pH7. 4) 0. 4m lで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。実施例 8

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 48 Omg (化合物 Aを 4 8mg含む）をリン酸四カルシウム（太平化学産業製、商品名 TTCP) 544 - mg、リン酸水素カルシウム二水和物（和光純薬製） 256mg、デキストラン (フアルマシアバイオテク製、商品名 T 70、平均分子量 7万） 400mg、炭酸水素ナトリウム（和光純薬製） 10 Omgから成る粉末と混合し、リン酸緩衝液（1. 0M、 pH7. 4) 0. 4mlで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。実施例 9

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 48 Omg (化合物 Aを 4 8mg含む）をリン酸四カルシウム（太平化学産業製、商品名 TTCP) 544 mg、リン酸水素カルシウム二水和物（和光純薬製） 256mg、デキストラン（フアルマシアバイオテク製、商品名 T 70、平均分子量 7万） 400mg、ヒドロキシプロピルセルロース（日本曹達製、商品名 HPC— H) 10 Omgから成る粉末と混合し、リン酸緩衝液（1. 0M、 pH7. 4) 0. 4m lで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。実施例 10

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 48 Omg (化合物 Aを 4 8mg含む）を硫酸カルシウム半水和物（和光純薬製） 800mg、デキストラン（フアルマシアバイオテク製、商品名 T 70、平均分子量 7万） 40 Omgから成る粉末と混合し、生理食塩水 0. 4m lで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。実施例 1 1

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 48 Omg (化合物 Aを 4 8mg含む）を硫酸カルシウム半水和物（和光純薬製） 800mg、デキストラン（フアルマシアバイオテク製、商品名 T70、平均分子量 7万） 400mg、ヒドロキシプロピルセルロース（日本曹達製、商品名 HPC— H) l O Omgから成る粉末と混合し、生理食塩水 0. 4m lで練和して、本発明の徐放性ペース卜を得た。実施例 12

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 48 Omg (化合物 Aを 4 8mg含む）を硫酸カルシウム半水和物（和光純薬製） 400mg、デキストラン（フアルマシアバイオテク製、商品名 T70、平均分子量 7万） 400mg、ヒドロキシアパタイト（太平化学産業製、商品名1^八？_ 200、比表面積 1〜 2m²/g) 40 Omgから成る粉末と混合し、生理食塩水 0. 4mlで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。実施例 13

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 48 Omg (化合物 Aを 4 8mg含む）を硫酸カルシウム半水和物（和光純薬製） 400mg、デキストラン（フアルマシアバイオテク製、商品名 T 70、平均分子量 7万） 400mg、ヒドロキシアパタイト（太平化学産業製、商品名 HAP— 300、比表面積 50 〜55m²/g) 40 Omgから成る粉末と混合し、生理食塩水 0. 4mlで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。実施例 14

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 48 Omg (化合物 Aを 4 8mg含む）を硫酸カルシウム半水和物（和光純薬製） 800mg、デキストラン（フアルマシアバイオテク製、商品名 T70、平均分子量 7万） 400mg、炭酸水素ナトリウム（和光純薬製） 5 Omgから成る粉末と混合し、生理食塩水 0 . 4mlで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。実施例 15

化合物 Aの結晶粉末 44mgをリン酸四カルシウム（太平化学産業製、商品名 TTCP) 544mg、リン酸水素カルシウム二水和物（和光純薬製） 256m g、デキストラン（フアルマシアバイオテク製、商品名 T 70、平均分子量 7万 ) 40 Omgからなる粉末と混合し、 0. 5% (wZv) カルボキシメチルセルロースナトリウム含有リン酸緩衝液（0. 2M、 pH7. 4) 0. 3m lで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。比較例 1

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 48 Omg (化合物 Aを 4 8mg含む）を分散媒（D_ソルビトール 2. 5wZv%、塩化ナトリウム 0. 9wZv%、ポリソルべ一ト 80を 0. lwZv%、リン酸水素ナトリウム 0. 07 1 5w/v%, カルボキシメチルセルロースナトリウム 0. 5wZv%を溶解した蒸留水） 1. 6m 1に分散して懸濁液を得た。比較例 2

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 48 Omg (化合物 Aを 4 8mg含む）をリン酸四カルシウム（太平化学産業製、商品名 TTCP) 544 mg、リン酸水素カルシウム二水和物（和光純薬製） 256mgから成る粉末と混合し、 0. 5% (wZv) カルボキシメチルセルロースナトリウム含有リン酸緩衝液（0. 2M、 pH7. 4) 0. 6m lで練和して、均一な練和物を得た。比較例 3

リン酸四カルシウム（太平化学産業製、商品名 TTCP) 544mg、リン酸水素カルシウム二水和物（和光純薬製） 256mgから成る粉末を、 1. 0% ( w/v) アルギン酸ナトリウム（和光純薬製）含有リン酸緩衝液（0. 2M、 p H7. 4) 0. 4m lで練和して、均一な練和物を得た。比較例 4

リン酸四カルシウム（太平化学産業製、商品名 TTCP) 544mg、リン酸水素カルシウム二水和物（和光純薬製） 256mgから成る粉末を、 2. 0 % ( w/v) ァテロコラーゲン（フナコシ製）含有リン酸緩衝液（0. 2M、 pH 7 . 4) 0. 4m lで練和して、均一な練和物を得た。 O 11

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比較例 5

化合物 A の結晶粉末 44mgをリン酸四カルシウム（太平化学産業製、商品名 TTCP)544mg、リン酸水素カルシウム二水和物（和光純薬製） 256mgから成る粉末と混合し、 0.5% (w/v) カルボキシメチルセルロースナトリウム含有リン酸緩衝液 (0.2M, pH7.4) 0.5mLで練和して、均一な練和物を得た。比較試験 1 ：滞留性の確認

実施例 1で得られた本発明の徐放性ペーストを練和 20分後に 10週令 SD雄性ラットの大腿骨外側部に 0. 16ml (化合物 Aを約 5mg含む）投与し、投与 2時間後、 1日後、および 1週間後に投与部位を切開し、本発明の徐放性べ一ストの残存の有無を観察し、投与局所滞留性を評価した。

観察の結果、これらの徐放性ペーストはすべて、血液等の水分と接触しても崩壊せず、投与 1週間後においても投与局所への良好な滞留性を示した。

一方、前記比較例 1で得られた懸濁液を同様に大腿骨外側部に 0. 16ml ( 化合物 Aを約 5mg含む）投与し、投与局所滞留性を評価したところ、投与直後に流失してしまい、滞留性は認められなかつた。比較試験 2 ：骨形成の確認

実施例 1で得られた本発明の徐放性ペースト 0. 3m l (化合物 Aを約 9. 4 mg含む）を練和 15分後に、日本白色家兎の一側の脛骨外側部中央に開けた直径 5 mmの穿孔部とその周辺に塗布した。他側の脛骨穿孔には対照として、実施例 1と組成の同じリン酸カルシウム粉末に PL GA製のマイクロカプセル 480 mg (化合物 Aは含有されていない）を混合し同様に練和したものを 0. 3m l 塗布した。投与後、経時的に脛骨穿孔部近傍を X線撮影し、骨形成状況を比較した。

対照側、化合物 A投与側ともに投与直後から試験終了時まで、投与部位でのぺーストの高い滞留性が X線像で認められた。 7週後の脛骨穿孔部近傍の X線像を図 1及び 2に示す。対照側（図 1) では骨形成が認められなかったのに対し、化合物 A投与側（図 2) では有意な膜性骨化による骨形成が認められた。比較試験 3 ：徐放性の確認

実施例 1で得られた本発明の徐放性ペースト 0. 16m l (化合物 Aを約 5m g含む）を練和 10分後に 6週令 SD雄性ラット背部皮下に埋入した（n = 4) 。埋入後一定時間毎にラットを屠殺して埋入部位に残存するペーストを取り出し、残存ペースト中の化合物 A、および化合物 Aを含有するマイクロカプセルの成分である P L GAの量を HP L Cで測定した。

化合物 Aの残存率の推移を図 3に示す。図 3から、化合物 Aは 3ヶ月にわたつて徐放されていることが確認された。なお、 PLGAは 2ヶ月でほぼ消失した。比較試験 4 ：血中濃度の推移

実施例 1で得られた本発明の徐放性ペースト 0. 16m l (化合物 Aを約 5m g含む）を練和 10分後に 6週令 SD雄性ラット背部皮下に埋入した（n = 4) 。埋入後一定時間毎にラッ卜の尾静脈から採血し、血清中の化合物 A濃度を酵素免疫検定法（E I A法）で測定した。

化合物 Aの血清中濃度推移を図 4に示す。図 4から、化合物 Aは 3ヶ月にわたつて血清中に検出された。一方、同様の試験から、化合物 Aのマイクロカプセル単独では徐放期間は 1ヶ月であった。硬化性を有するカルシウム成分とマイクロカプセルを練和することにより、徐放期間がマイクロカプセル単独の徐放期間よりも長くなることが確認された。比較試験 5 ：物性の確認

上記実施例および比較例で得られたペーストのそれぞれの硬化時間、圧縮強度、間接引っ張り強度、接着性、および細孔分布の評価を行った。

ここで、硬化時間は、ビカー針法により、歯科用リン酸亜鉛セメントの測定法 (JIST6602) に準じて測定した。練和開始 3分後に、練和物を温度 37°C、相対湿度約 100%の恒温器中に移し、質量 300 gのビカー針を練和物表面に静かに落とし、針跡がつくかどうかを調べ、針跡を残さなくなった時を練和開始時から起算して硬化時間とした。圧縮強度は万能試験機（INTESCO Model 205E) を用いて、練和後 37°C、相対湿度約 100 %の条件下で 14時間経過後および 2週間経過後の硬化体（直径 1 . 0 cm、高さ 1. 0 cmの円筒状に成形）の強度を測定した。

間接引っ張り強度（Diametral tensile strength, DTS) は、直径 1. 0 c m、高さ 0. 5 cmの円筒状に成形した硬化体を用いて圧縮強度と同様の条件で測定した。

接着性は、練和 5分後に練和物 0. lm 1を 2枚のガラス板で挟み、 29. 4二ユートン（N) で 1分間圧接後のガラス板引き剥がしに要する力を接着力として、上記万能試験機（INTESCO Model 205E) を用いて測定した。

細孔分布は水銀ポロシメーター（オートポア II 9220、 SHIMADZU) を用いて測定した。結果を表にまとめて示す。

表から明らかなとおり、本発明の徐放性ペース卜の硬化時間はいずれも 1時間以上であり、アルギン酸ナトリウムやコラーゲンを添加した比較例 3や 4の練和物との明確な相違が確認された。また、本発明の徐放性べ一ストの 14時間後の圧縮強度はいずれも 1. 5 MP a以下と小さく、アルギン酸ナトリウムゃコラーゲンを添加した比較例 3や 4の練和物に比べ、強度が小さいことが確認できた。以上から明らかなとおり、増粘剤の配合比が本発明の範囲よりも小さい比較例においては、いずれも硬化時間が短く、かつ硬化後の圧縮強度が高いことが確認された。これは、比較例の練和物の処方が強度を要求される人工骨、骨修復材を目的として設計されているからに他ならない。一方、展延性や塗工性が要求される本発明の徐放性ペーストにおいては、長時間経過後でも必要な可塑性を維持していることが確認された。一方、本発明の徐放性ペーストの接着力は比較例のいずれょりも強く、本発明の徐放性ペース卜の優れた接着力が確認できた。

また、本発明の徐放性ペーストの硬化後の細孔分布は、いずれも細孔直径 1 m から 20 / m付近に多くの細孔の存在が認められた。実施例 1 6

参考例に記載の方法で製造されたマイク口カプセル 480mg (化合物 Aを 48m g 含む）を α型硫酸カルシウム半水和物（サンエス石膏製） 400m g、デキストラン

(フアルマシアバイオテク製、商品名 T 7 0、平均分子量 7万） 400mgから成る粉末と混合し、リン酸緩衝生理食塩液（宝酒造製） 0. 2m 1で練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。実施例 1 7

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 480mg (化合物 Aを 48m g含む）を 3型硫酸カルシウム半水和物（サンエス石膏製） 400m g、デキストラン（フアルマシアバイオテク製、商品名 T 7 0、平均分子量 7万） 400m_gから成る粉末と混合し、リン酸緩衝生理食塩液（宝酒造製） 0. 24m lで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。実施例 1 8

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 480mg (化合物 Aを 48m g含む）をひ型硫酸カルシウム半水和物（サンエス石膏製） 200m g、硫酸カルシウム二水和物（和光純薬製） 200mg、デキストラン（フアルマシアバイオテク製、商品名 T 7 0、平均分子量 7万） 400mgから成る粉末と混合し、リン酸緩衝生理食塩液 (宝酒造製） 0. 2m lで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。実施例 1 9

参考例に記載の方法で製造されたマイクロカプセル 480mg (化合物 Aを 48m g含む）を ]3型硫酸カルシウム半水和物（サンエス石膏製） 200m g、硫酸カルシウム二水和物（和光純薬製） 200mg、デキストラン（フアルマシアバイオテク製、商品名 T 7 0、平均分子量 7万） 400mgから成る粉末と混合し、リン酸緩衝生理食塩液 (宝酒造製） 0. 24m lで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。実施例 2 0

化合物 A の結晶粉末 44mgをリン酸四カルシウム（太平化学産業製、商品名 TTCP) 544mg、リン酸水素カルシウム二水和物（和光純薬製） 256mg、デキストラン（フアルマシアバイオテク製、商品名 T70、平均分子量 7万） 400mgから成る粉末と混合し、 0. 5% (w/v) カルボキシメチルセルロースナトリウム含有リン酸緩衝液 (0. 2M, pH7. 4) 0. 74mLで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。実施例 2 1

化合物 A の結晶粉末 44mgをリン酸四カルシウム（太平化学産業製、商品名 TTCP) 544mg、リン酸水素カルシウム二水和物（和光純薬製） 256mg、デキストラン（フアルマシアバイオテク製、商品名 T70、平均分子量 7万） l OOOmgから成る粉末と混合し、 0. 5% (w/v) カルボキシメチルセルロースナトリウム含有リン酸緩衝液 (0. 2M, pH7. 4) 1. 09mLで練和して、本発明の徐放性ペーストを得た。試験例 1 ：徐放性の確認

実施例 16から実施例 19で得られた本発明の徐放性ペースト 0 . 1 4m l (化合物 Aを約 5 m g含む）を練和 20分後に 6週令 S D雄性ラット背部皮下に埋入した（ n = 4 ) 。埋入後一定時間毎にラットを屠殺して埋入部位に残存するペーストを取り出し、残存ペースト中の化合物 Aの量を H P L Cで測定した。化合物 Aの残存率の推移を図 5に示す。図 5から、化合物 Aは 1ヶ月にわたって徐放されていることが確認された。試験例 2 ：血中濃度の推移

実施例 18で得られた本発明の徐放性ペースト 0. 14m l (化合物 Aを約 5mg 含む）を練和 20分後に 6週令 SD雄性ラット背部皮下に埋入した（n==4) 。埋入後一定時間毎にラッ卜の尾静脈から採血し、血清中の化合物 A濃度を酵素免疫検定法（E I A法）で測定した。

化合物 Aの血清中濃度推移を図 6に示す。図 6から、化合物 Aは 1ヶ月にわたって血清中に検出された。試験例 3 ：徐放性の確認

実施例 18で得られた本発明の徐放性ペースト 0. 6m 1 (化合物 Aを約 21.4mg 含む）を練和 20分後に 6週令 SD雄性ラット背部皮下に埋入した（n = 4) 。埋入後一定時間毎にラットを屠殺して埋入部位に残存するペーストを取り出し、残存ペースト中の化合物 Aの量を H PLCで測定した。

化合物 Aの残存率の推移を図 7に示す。図 7から、化合物 Aは 1ヶ月にわたって徐放されていることが確認された。試験例 4 :血中濃度の推移

実施例 18で得られた本発明の徐放性ペースト 0. 6m l (化合物 Aを約 21.4mg 含む）を練和 20分後に 6週令 SD雄性ラット背部皮下に埋入した（n = 4) 。埋入後一定時間毎にラットの尾静脈から採血し、血清中の化合物 A濃度を酵素免疫検定法（E I A法）で測定した。

化合物 Aの血清中濃度推移を図 8に示す。図 8から、化合物 Aは 1ヶ月にわたって血清中に検出された。試験例 5 ：骨形成の確認

実施例 18で得られた本発明の徐放性ペースト 0. 6m l (化合物 Aを約 21.4mg 含む）を練和 20分後に、日本白色家兎の一側の脛骨内側部中央に開けた直径 5 m mの穿孔部とその周辺に塗布した。他側の脛骨穿孔には対照として、実施例 18と組成の同じ硫酸カルシウム粉末に乳酸ーグリコール酸共重合物（乳酸ーグリコール酸組成比 8 5 : 1 5、重量平均分子量 1 4 , 0 0 0 )製のマイクロカプセル 4 8 O m g (化合物 Aは含有されていない）を混合し同様に練和したものを 0 . 6m l 塗布した。投与後、経時的に脛骨穿孔部近傍を X線撮影し、骨形成状況を比較した。 2週後および 4週後の脛骨穿孔部近傍の X線像を確認したところ、対照側、化合物 A投与側ともに投与直後から投与 2週後まで、投与部位でのペーストの高い滞留性が X線像で認められた。投与 4週後において、対照側では骨形成が認められなかったのに対し、化合物 A投与側では有意な膜性骨化による骨形成が認められた

試験例 6

比較例 5で得られた練和物 0. 09mL (化合物 Aを約 5mg含む）および実施例 20で得られたペースト 0. 13niL (化合物 Aを約 5mg含む）および実施例 21で得られたペース卜 0. 0mL (ィ匕合物 Aを約 5mg含む）を練和 30分後に、 0. 3¾ へキサデシルトリメチルアンモニゥムブロミドを含む 20mMリン酸 /15mM酢酸緩衝液（pH 7. 0)からなる試験液 900mL中に添加し、パドル法で i n v i t ro放出試験を行った。回転数は Ι Ο Ο Ι ΠΙとし、試験液の温度は 47°Cとした。経時的に試験液を採取し、試験液中にペーストあるレ ^は練和物から放出された化合物 Aの量を HPLCで測定した。ィニシャルの化合物 Aの量に対する放出された化合物 Aの量の割合を放出率 tt)として表した。結果を図 9に示す。

化合物 Aの放出量はデキストランの添加量に依存しており、デキストランの添加量が多くなるほど、化合物 Aの放出率が高くなつた。産業上の利用可能性

本発明の骨形成促進物質徐放性ペーストは、骨伝導性が良好であり、骨に良く接着するとともに骨形成促進物質を徐放するため、骨折部位、骨欠損部の骨修復材として、および人工骨の移植手術、あるいは人工関節置換手術における骨結合材として、また口腔外科領域において、失われた歯槽骨の再生や歯槽骨の増量などにも適用が可能で臨床上極めて有用である。また人工骨、人工関節、骨充填材

、骨置換材、骨接合材などとの併用も可能で、骨折をはじめとする手術を要する骨疾患の治癒期間を大幅に短縮させることが可能である。

従って患者の社会生活への復帰を早めることができ、あるいは老年期の骨折に伴う種々の合併症の併発を未然に防ぐことが可能になる。

Claims

請求の範囲

1. 骨形成促進物質、カルシウム成分および増粘剤が配合されることを特徴とする骨形成促進物質徐放性ペースト。

2. カルシウム成分が、カルシウムのリン酸塩、硫酸塩および炭酸塩の中から選択される一または二以上の組み合わせである請求項 1に記載のペースト。

3. カルシウム成分がリン酸水素カルシウム無水和物若しくは二水和物とリン酸四カルシウムとの組み合わせである請求項 1に記載のペースト。

4.カルシウム成分が硫酸カルシウム半水和物である請求項 1に記載のペースト。

5. さらに硫酸カルシウム二水和物が配合されることを特徴とする請求項 4に記載のペース卜。

6. カルシウム成分が、骨形成促進物質 1重量部に対して約 1〜500重量部である請求項 1に記載のペースト。

7. 増粘剤が生体適合性高分子である請求項 1に記載のペースト。

8. 増粘剤がデキストランである請求項 1に記載のペースト。

9. 増粘剤がカルシウム成分 1重量部に対して約 0. 05〜4重量部である請求項 1に記載のペース卜。

10. 骨形成促進物質が非ペプチド系低分子化合物である請求項 1に記載のベース卜。

1 1. 骨形成促進物質がベンゾチォピランもしくはベンゾチェピン誘導体である請求項 1に記載のペースト。

12. 骨形成促進物質が（2 R, 4 S) — （―） -N- [4- (ジエトキシホスホリルメチル）フエニル] — 1， 2， 4， 5—テトラヒドロー 4—メチル— 7， 8—メチレンジォキシー 5—ォキソ _ 3—ベンゾチェピン— 2—カルボキサミド若しくはその塩またはこれらの徐放性製剤である、請求項 1に記載のペースト。

13. 骨形成促進物質が生体内分解性ポリマーによって徐放性に製剤化されている請求項 1に記載のペースト。

14. カルシウム成分および増粘剤を含有する、請求項 1に記載のペーストを製造するための組成物。

15. 骨形成促進物質またはその徐放性製剤、カルシウム成分および増粘剤を含有する、請求項 1に記載のペーストを製iするための組成物。

16. 骨形成促進物質、カルシウム成分、増粘剤および水を練和することを特徴とする骨形成促進物質徐放性ペース卜の製造法。

17. 骨疾患治療剤である請求項 1ないし 13に記載のペースト。

18. 請求項 1ないし 13に記載のペーストを投与することを特徴とする骨疾患治療方法。

19. 骨疾患治療剤の製造のための請求項 14ないし 1 5に記載の組成物の使用