WO2000047172A1 - Hair growth stimulants and method for screening substance having hair growth stimulating effect - Google Patents

Hair growth stimulants and method for screening substance having hair growth stimulating effect Download PDF

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WO2000047172A1
WO2000047172A1 PCT/JP2000/000694 JP0000694W WO0047172A1 WO 2000047172 A1 WO2000047172 A1 WO 2000047172A1 JP 0000694 W JP0000694 W JP 0000694W WO 0047172 A1 WO0047172 A1 WO 0047172A1
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adenosine
compound
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hair restorer
action
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PCT/JP2000/000694
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Yutaka Nakaya
Seiji Arase
Koji Imamura
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Taisho Pharmaceutical Co., Ltd.
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    • A61K2800/70—Biological properties of the composition as a whole

Definitions

  • the present invention relates to a hair restorer, particularly to a hair restorer which can be used as various external preparations and has a novel action mechanism exhibiting excellent efficacy.
  • the present invention also relates to a method for screening a substance having a hair-growth action, and more particularly to a method for screening a hair-growth substance having a novel action mechanism.
  • Such drugs include, for example, vasodilators, male hormone receptor inhibitors, steroid-5-hydroxylase inhibitors, vitamins, immunosuppressants and the like.
  • vasodilators include, for example, vasodilators, male hormone receptor inhibitors, steroid-5-hydroxylase inhibitors, vitamins, immunosuppressants and the like.
  • steroid-5-hydroxylase inhibitors include, for example, steroid-5-hydroxylase inhibitors, vitamins, immunosuppressants and the like.
  • the effectiveness of these drugs as hair restorers is not currently satisfactory.
  • mice such as mice, rats, egrets, and guinea pigs, especially C3H mice and C57BL mice of appropriate age, mainly shaved the back hair, and apply a test substance to determine the degree of hair growth.
  • Method of observing mouse hair, human hair, etc. culturing the obtained hair tissue in organs, adding a test substance to evaluate the degree of growth, or converting the hair tissue to the cellular level.
  • male hormones are involved in the onset of androgenetic hair loss in particular, male hormone receptor inhibition tests and the enzyme steroid-5, an enzyme that converts the male hormone testosterone to dihydrotestosterone, are considered.
  • a test for the inhibition of redakase has also been applied. Disclosure of the invention
  • An object of the present invention is to provide a hair restorer having a superior hair growth effect as compared with a conventional hair restorer.
  • Another object of the present invention is to provide a screening method for providing an excellent hair restorer having a novel action mechanism different from that of a conventional hair restorer.
  • One embodiment of the present invention enhances the action of a compound having a purine receptor stimulating action, a compound having a purine receptor stimulating action after application to a living body, or a compound having a purine receptor stimulating action. It is a hair restorer containing one or more compounds as active ingredients.
  • the “purine receptor stimulating action” refers to an action of stimulating a purine receptor to cause a certain phenomenon to cells, and usually such stimulation is caused by a purine receptor and the purine receptor. It is brought about by interaction with substances that can specifically bind to purine receptors.
  • a compound which releases a compound having a purine receptor stimulating action after being applied to a living body is a compound which has a purinergic receptor stimulating action after application or administration to skin, mucous membrane, body tissue, or the like.
  • a compound having a function of separating and releasing a compound and is usually a compound obtained by subjecting a compound having a purin receptor stimulating action to some chemical modification.
  • Specific examples of the chemical modification include operations such as esterification and amidation.
  • the compound having a purine receptor stimulating action of the present invention includes a compound having a stimulating action on adenosine receptor and / or ATP receptor.
  • Examples of the compound having the adenosine receptor stimulation of the present invention include adenosine, N 6 -cyclohexyl adenosine, N 6 -cyclopentyl adenosine, (R) -N 6 -phenylisopropyl adenosine, and (S) -N 6 -f Enylisoprovir adeno Synth, (R) -phenylisoproviradenosine, N— [R— (2-benzothiazolyl) thio-2-probyl] -1-chloroadenosine, 2-chloro-N6-cyclopentyladenosine, N— (methyl-phenene Til) Adenosine, minoprinii-Rudeoxy N-ethyl ribofuranuroamide, defibuchitide, 5,1-N-ethyl carboxamide adenosine, 2-chloroadenosine, N
  • the compound having the adenosine receptor stimulating action or the compound releasing the compound having the adenosine receptor stimulating action after application to the living body is represented by the following formula 1:
  • n is 0 or 1
  • 1 ⁇ to 11 2 each represent a hydrogen atom or a Ashiru group having 1 to 5 carbon atoms
  • R 3 represents a hydrogen atom or a protecting group. ] It may be the compound shown by these.
  • an uptake inhibitor of the compound having the adenosine receptor stimulating action is preferable.
  • the term “uptake inhibitor” refers to a compound having an action of inhibiting absorption and uptake of a target compound into cells or tissues.
  • the uptake inhibitor Preference is given to diviridamol, diracep, lidofrazine, hexobendine, carbochromene, chromonalic acid, cinepadizide, diazepam, papaverine, 6- (2,1-hydridoxoxynitrobenzyl) thioguanosine, and proventophilin.
  • the compound that enhances the action of the compound having the adenosine receptor stimulating action may be an inactivation inhibitor of the compound having the adenosine receptor stimulating action.
  • the term “inactivation inhibitor” refers to a compound having an action of inhibiting a decrease in a certain property, function or action of a target compound. Therefore, an inactivation inhibitor of a compound having an adenosine receptor stimulating action has a function of preventing a decrease in the adenosine receptor stimulating action of the compound.
  • the inactivation inhibitor of the compound having adenosine receptor stimulating activity 2, -deoxycoformycin and erythro 9_ (2-hydroxy-13-nonyl) adenine are preferable.
  • Another embodiment of the present invention is a hair restorer comprising, as an active ingredient, one or more compounds having an ATP receptor stimulating action.
  • Examples of the compound having an ATP receptor stimulating action of the present invention include adenosine diphosphate, adenosine triphosphate and derivatives thereof, and among them, adenosine_5, monophosphate, adenosine-15′-trilin Acids and their derivatives are preferred.
  • adenosine diphosphate adenosine triphosphate and derivatives thereof
  • adenosine_5 monophosphate
  • adenosine-15′-trilin Acids and their derivatives are preferred.
  • an ester derivative is preferable.
  • adenosine-15, diphosphate derivative and the adenosine-5, monotriphosphate derivative have the following formula 2:
  • n 2 or 3 1 ⁇ to 11 2 indicates it it hydrogen atom or Ashiru group having 1 to 5 carbon atoms
  • R 3 represents a hydrogen atom or a protecting group. It may be the compound shown by these.
  • adenosine mono- and mono-diphosphate derivatives examples include ⁇ ,? -Methylene adenosine-5, mono-diphosphate, 2-methylthioadenosine_5'-diphosphate, 2,1-benzoyl adenosine-15, mono-diphosphate, and 3-diphosphate.
  • 1-benzoyladenosine-15, dilic acid is preferred.
  • the adenosine 15-monotriphosphate derivatives include: -methyleneadenosine 15-monotriphosphate, 2-methylthioadenosine 15-monotriphosphate, 2,1-benzoyladenosine 15-, 1-monophosphate. Triphosphate, 3,1-benzoyladenosine-15'-triphosphate is preferred.
  • Another aspect of the present invention is a hair restorer containing, as an active ingredient, one or more compounds having an action of releasing a compound having a purine receptor stimulating action from cells.
  • the compound having a purine receptor stimulating action may be adenosine, an adenosine derivative or an adenosine metabolite, and may be ATP, an ATP derivative or AT. It may be a P metabolite.
  • Adenosine derivatives or adenosine metabolites released from cells can be adenosine monophosphate, adenosine diphosphate, or adenosine triphosphate.
  • a compound having a purine receptor stimulating action in particular, a compound having an action of releasing adenosine, adenosine derivative or adenosine metabolite from a cell, is a compound having a stimulating action on ABC transport enzyme existing in the cell. be able to.
  • the compound having a stimulating effect on ABC transporter can be a compound having a stimulating effect on a sulfonylurea receptor.
  • Compounds that have a stimulating effect on the sulfonylprea receptor include meglitinide, nicorandil, levocromakalim, cromakalim, pinacidil, diazoxide, disoviramide, chillisolol, apricam, bimacarim, MgATP, MnATP, CaATP, ZnATP, SrATP , MgADP, MnADP, CaADP, ZnADP, SrADP, MgAMP, MnAMP, CaAMP, ZnAMP, SrAMP, adenyl-5-ylimidodiphosphate, L-lysine, L-arginine. May be.
  • the compound having a stimulating action on the sulfonylprea receptor may be a salt containing a divalent cation selected from the group consisting of calcium, manganese, magnesium, zinc and strontium.
  • the compound having a stimulating effect on the sulfonyldiarea receptor is represented by the following formula 3:
  • the hair restorer of the present invention containing each of the above compounds as an active ingredient is preferably an external preparation, and the content of the active ingredient in the hair restorer of the present invention is 0.01 to 5% of the whole preparation. % By weight.
  • a test substance is added to cells transformed with an ABC transporter gene and a receptor gene for a purine derivative, and the amount of calcium influx into the cells at that time is used as an index. A method for screening a substance having a hair-growth action.
  • the ABC transporter gene may be a sulfonylprea receptor gene.
  • the receptor gene for the purine derivative can be an adenosine receptor gene or an ATP receptor gene.
  • Calcium influx into cells can be measured by fluorescence intensity using a fluorescent calcium indicator.
  • Transformation of the ABC transporter gene or the receptor gene for the purine derivative can be performed by a genetic modification technique using a host vector system.
  • FIG. 1 is an explanatory diagram showing the mechanism of action of the hair growth agent of the present invention and the substance screened by the method of the present invention.
  • FIG. 2 is a graph showing the results of an example of the screening method of the present invention.
  • FIG. 3 is a graph showing the results of the example of the screening method of the present invention. Detailed description of the invention
  • the present inventors have conducted intensive studies on hair-growth components having excellent efficacy, and surprisingly found that stimulating action on purine receptors including adenosine receptors and ATP receptors is closely related to hair-growth effects. It was found to have.
  • the present invention is based on this finding,
  • a compound having a purine receptor stimulating action a compound which releases a compound having a purine receptor stimulating action after application to a living body, and a compound which enhances the action of a compound having a purine receptor stimulating action
  • B A compound having an action of releasing a compound having a purine receptor stimulating action from cells, for example, a compound having an ABC transport stimulating action, particularly a compound having a sulfonyl urea receptor stimulating action;
  • hair restoration agents containing the above-mentioned compounds of the types A and B (hereinafter, referred to as the direct stimulation type of the purin receptor and the indirect stimulation type of the purine receptor, respectively) will be described in detail.
  • purine receptors are roughly classified into adenosine receptors and ATP receptors. Therefore, first, a hair restorer containing a compound that stimulates the adenosine receptor will be described.
  • Adenosine receptors are currently classified into four sub-groups, Al, A2a, A2b, and A3, based on their pharmacological and structural characteristics.
  • A1 receptor has anticonvulsant effect, neuroprotective effect, behavior suppression effect, sleep effect, etc.
  • A2 (A2a or A2b) receptor has behavior suppression effect, sleep effect, etc.
  • Adenosine receptors are distributed in various organs in the living body and are thought to be involved in the regulation of cell functions and physiological functions.
  • adenosine receptors distributed on the vascular smooth muscle of the heart are known to expand blood vessels and increase coronary blood flow by binding to compounds that stimulate adenosine receptors in blood. ing.
  • stimulation of adenosine receptors present on cells causes phenomena such as an increase in intracellular calcium ion concentration.
  • the present inventors have conducted various studies on the possibility that various phenomena caused by adenosine receptor stimulation may have an important role in regulating other functions of cell tissues.
  • one form of the hair restorer of the present invention is based on adenosine receptor stimulating action. It is a spider.
  • this hair restorer there are compounds having an adenosine receptor stimulating action.
  • One or more compounds that release a compound having adenosine receptor stimulating action after application to a living body, or one or more compounds that enhance the action of adenosine receptor stimulating action or Two or more are mentioned. These compounds may be used alone, or a plurality of types may be used as a mixture.
  • the compound having an adenosine receptor stimulating action is not particularly limited as long as it has an adenosine receptor stimulating action. However, in terms of adenosine receptor binding properties, adenosine, N 6- Cyclohexyl adenosine, N 6-cyclopentyl adenosine, (R) —N 6-phenylisopropyl adenosine,
  • the compound having the structure represented by the above formula 1 is that the compound having the adenosine receptor stimulating action or the compound releasing the compound having the adenosine receptor stimulating action after application to a living body is
  • R t to R 2 are preferably a hydrogen atom or an acyl group having 1 to 5 carbon atoms, respectively, and R 3 is preferably a hydrogen atom or a protecting group.
  • a compound having the adenosine receptor stimulating action enhances the action of the compound, which has the same effect as the compound having the adenosine receptor stimulating action.
  • Examples of the compound that enhances the action of the compound having the adenosine receptor stimulating action, which is combined with the hair restorer of the present invention include a compound having the adenosine receptor stimulating action.
  • Peptide inhibitors and inactivation inhibitors are preferred.
  • the inactivating agent include compounds that inhibit the enzymatic metabolism of a compound having an adenosine receptor stimulating action.
  • an inactivating agent that metabolizes adenosine to inosine that is inactive in a living body. Inhibitors of denosine deaminase may be used.
  • uptake inhibitors examples include diviridamol, dilacep, lidofrazine, hexobendine, carbochromene, chromonaric acid, cinepazide, diazepam, papaverine, 6- (2,1-hydroxynitrobe) in terms of the uptake inhibitory effect.
  • Nyl) thioguanosine and proventophilin are preferable, and as the inactivation inhibitor, 2'-dexoxyformycin, erythro 9-1 (2-hydroxy-13-nonyl) adenine are preferable in terms of their effects. Is preferred.
  • a hair restorer containing a compound of a type that particularly stimulates the ATP receptor will be described.
  • ATP receptors that transmit ligand stimulation into cells, one that utilizes the permeation of ions through the cell membrane and one that mediated by GTP-binding proteins. It is called Y type (each has 7 subtypes).
  • ATP receptors are distributed in various organs in the living body and are thought to be involved in signal transduction and function regulation. For example, it is thought to be responsible for synaptic modulation in the nervous system and blood pressure regulation in the aorta. However, the details and functions of the distribution have not yet been clarified. Since both adenosine and ATP (adenosine triphosphate) have a purine ring, the concept of a purine receptor includes adenosine receptor and ATP (adenosine triphosphate) receptor.
  • another form of the hair restorer of the present invention is based on a stimulatory action on purine receptors other than adenosine receptors, that is, ATP receptors.
  • the active ingredient of this type of hair restorer includes one or more compounds having an ATP receptor stimulating action. These compounds may be used alone, or a plurality of types may be used as a mixture.
  • the active ingredient of this hair restorer is not particularly limited as long as it has an ATP receptor stimulating action, and examples thereof include adenosine diphosphate, adenosine triphosphate and derivatives thereof.
  • the bonding position of the phosphate moiety is preferably a 5′-position carbon.
  • adenosine monophosphate 5 5 - diphosphate, adenosine monophosphate 5, single-triphosphate and derivatives thereof are preferred.
  • an ester derivative is preferred as the derivative of adenosine-5'-diphosphate or the derivative of adenosine-5'-triphosphate.
  • an oxygen atom bonded to the carbon at the 2 or 3 position of the adenosine moiety forms an ester together with an acyl group containing 1 to 10, preferably 1 to 5 carbon atoms. Is preferred.
  • the derivative of adenosine mono 5'-diphosphate and the derivative of adenosine_5'-triphosphate may be specifically a compound represented by the above formula 2, in which case, R t to R 2 it hydrogen atom or Ashiru group having a carbon number. 1 to 5, R 3 is also hydrogen atoms is preferably set to a suitable protecting group.
  • the adenosine-5′-diphosphate derivatives are: ⁇ -methyleneadenosine-15′-diphosphate ester derivatives, 2-methylthioadenosine-15, monophosphate phosphate derivatives, Preferably, it is a monobenzoyladenosine-15, monophosphate derivative or a 3, -benzoyladenosine-15, -diphosphate ester derivative.
  • the adenosine 15-monotriphosphate derivatives include: methylene adenosine 15-monophosphate, 2-methylthioadenosine 15-monotriphosphate, 2,1-monophosphate. Benzoyladenosine 1-5, 1 tolly Acid, or 3, -benzoyladenosine-15, monotriphosphate.
  • ABC transporter is a generic name for similar proteins that have the effect of causing intracellular release of ATP to the outside of the cell.As proteins, a part of the so-called ABC protein super family, ATP It is also called binding cassette, ATP binding protein, ABC binding transposon or ABC protein, MDR (P-glycoprotein, multidrug resistance protein), MRP (encompass-related protein), CFTR (cyctic fibrosis transmembrane conduct) ance regulator) and SU (sulfonyldiarea receptor) have been shown to play important roles in the expression and regulation of various cell functions.
  • MDR P-glycoprotein, multidrug resistance protein
  • MRP encompass-related protein
  • CFTR cyctic fibrosis transmembrane conduct
  • SU sulfonyldiarea receptor
  • the ABC transporter present in the cell membrane of the knee controls the opening and closing of the adjacent ATP-dependent force channel to regulate the release of force ions and the subsequent influx of calcium ions. It controls the secretion of insulin inside the cell vesicles to the outside of the cell.
  • the ABC transporter in the myocardium is located in the mitochondria, regulates the function of ATP-sensitive potassium channels also present in the mitochondria, and has a preconditioning effect during ischemia-reperfusion (cardioprotective effect). It has been clarified to be involved in the expression of.
  • the ABC transporter has become known to be present in various tissues of the living body, including the myocardium and vascular smooth muscle, and has a role as a transporter, that is, a cell. It has been speculated that the action of causing extracellular release of ATP in cells is also involved in various regulatory actions. It has also been clarified that the ABC transporter present in the // ⁇ cells, vascular smooth muscle and cardiac muscle of the brain is a sulfonylprea receptor.
  • the present inventors have reported that APC transfusions and ATP receptors or a PP 0
  • the denosine receptor was expressed. Conventionally, these receptors, that is, compounds having an action of releasing compounds having a purinergic receptor stimulating action from cells, particularly compounds which exert their action by stimulating ABC transvoi all over the cell, have been conventionally used. It has been found that it shows excellent efficacy not found in the hair growth component.
  • the compound having a purine receptor stimulating action includes a compound having an ATP receptor and / or adenosine receptor stimulating action. Specifically, ATP, an ATP inducer or an ATP metabolite, and / or adenosine And adenosine derivatives or adenosine metabolites.
  • ABC transporters such as sulfonyl-peryl receptors can be used.
  • ATP adenosine trilinate
  • adenosine generated by the degradation of ATP acts on the adenosine receptor, and the intracellular force It is thought to be responsible for the mechanism that causes the hair growth rate and the hair growth rate and hair cycle.
  • stimulation of mitochondrial sulfonylurea receptors may act on mitochondrial ATP-sensitive helium channels, which may release ATP, adenosine, their derivatives or metabolites from cells. .
  • still another form of the hair restorer of the present invention is based on the action of releasing a compound having a purine receptor stimulating action from cells.
  • the active ingredient of the hair restorer include one or more compounds having an action of releasing ATP, adenosine, a derivative or metabolite thereof from cells. These compounds may be used alone, or a plurality of types may be used as a mixture.
  • a specific example of the action of releasing a compound having a purine receptor stimulating action, such as adenosine and a derivative or metabolite thereof, from a cell is, for example, stimulating the ABC transporter present in the cell.
  • adenosine and its derivatives or metabolites include adenosine, adenosine monophosphate, adenosine diphosphate and adenosine. And triphosphate.
  • a compound having a stimulating action on ABC transport a compound having a stimulating action on any of MDR, MRP, CFTR, and sulfonyl-rea receptor can be used.
  • Compounds having a stimulatory action on the receptor are mentioned.
  • Examples of the compound having a stimulating action on the sulfonylprea receptor include, for example, meglitinide, nicorandil, levocromakalim, cromakalim, pinacidil, diazoxide, disoviramide, tilisolol, apricam, bimacarim, MgATP, MnATP, CaATP, ZnATP, SrATP, MgADP, MnADP, CaADP, ZnADP, SrADP, MgAMP, MnAMP, Ca AMP, ZnAMP, SrAMP, adenyl-5-ylimidodiphosphate, L-lysine, L-arginine, calcium, manganese, magnesium, zinc or stront A salt containing a divalent cation of Pum, and the following formula
  • R is a 14-30 carbon group which may be branched and contains 0-3 double bonds].
  • a long-chain acylchoenzyme A represented by 0 A Noretoyl_CoA, Oleyl-CoA, Myristoyl-CoA, Ben-Yu-Decanyl-CoA, Stearyl-CoA.
  • potassium channel openers eg, Takahashi et al., “K channel openers”, Pharmaceutical Journal, vol.34, Sl, P.70-74 (1998), and Endo et al. , “Potassium channel openers”, Pharmaceutical Journal, vol. 35, Sl, P. 112-119 (1999)
  • the sulfonylprea receptor functions as a regulator of ATP-sensitive potassium channels, and it is already known that potassium channel openers bind to sulfonylurea receptors (eg, Bray et al., Jounal of Bailogical Chemistry, vol.267, p.11689 (1992)).
  • the sulfonylurea receptor is involved in the release of ATP from inside the cell to outside the cell (Awqati et al., Science vol. 269, 805 (1995)).
  • the above substances known as potassium channel openers, are thought to bind to and stimulate the sulfonylprea receptor.
  • the action of stimulating sulfonylurea by binding of these substances to the sulfonylurea receptor is caused by the purine receptor such as ATP, adenosine, a derivative or metabolite thereof.
  • the hair restorer of the present invention is preferably an external preparation, and can be used by applying an appropriate amount to the scalp or skin once or several times a day.
  • the amount of each active ingredient contained in the hair restorer of the present invention is preferably 0.01 to 5% by weight, more preferably 0.1 to 5% by weight, and particularly preferably 0.1 to 5% by weight of the whole preparation. Is 1 to 5% by weight. If the amount is less than 0.01% by weight, the hair-growth effect is not sufficient, and if it exceeds 5% by weight, the dissolution stability of the active ingredient in the preparation often decreases. It is not preferable because adverse effects on quality such as crystal precipitation are sometimes observed.
  • the hair restorer of the present invention can be used as a dosage form usually used as an external preparation, for example, a lotion, an emulsion, a cream, a tonic, an ointment, a gel, an aerosol, and the like.
  • the dosage form is not limited to these.
  • the amount is set as described above with respect to the stock solution.
  • the hair restorer of the present invention includes, as necessary, water, lower alcohols (such as methanol, ethanol, denatured ethanol, and isopropyl alcohol), solubilizers, surfactants, emulsion stabilizers, gelling agents, Adhesives and other base ingredients that are commonly used to obtain the desired dosage form can be incorporated.
  • lower alcohols such as methanol, ethanol, denatured ethanol, and isopropyl alcohol
  • solubilizers such as methanol, ethanol, denatured ethanol, and isopropyl alcohol
  • surfactants such as sodium ethanol, sodium ethanol, sodium metabisulfite, sodium metabisulfite, sodium metabisulfite, sodium metabisulfite, sodium metabisulfite, sodium metabisulfite, sodium metabisulfite, sodium metabisulfite, sodium metabisulfite, sodium metabisulfite, sodium metabisulfite, sodium metabisulfite, sodium metabisulfite, sodium metabisulfit
  • vasodilators such as minoxidil and carpronium chloride, spironolactone, fluuramide, and cyprote mouth Androgen inhibitors such as acetate and oxendrone, steroid inhibitors such as finasteride and ebilisteride, anti-inflammatory agents such as glycyrrhetinic acid and azulene, hydrocortisone acetate, dexamethasone acetate, etc.
  • vasodilators such as minoxidil and carpronium chloride, spironolactone, fluuramide, and cyprote mouth Androgen inhibitors such as acetate and oxendrone
  • steroid inhibitors such as finasteride and ebilisteride
  • anti-inflammatory agents such as glycyrrhetinic acid and azulene, hydrocortisone acetate, dexamethasone acetate, etc.
  • Corticosteroids keratolytics such as urea, salicylic acid, propylene Recall, 1, 3-butylene glyco Ichiru, macrogol, glycerin, dipropylene glyco Alcohols such as alcohol, ethanol, and isopropanol; glyceryl monopenic acid; fatty acid glycerin esters such as decanoate; antihistamines such as isopendyl hydrochloride; diphene hydrochloride; hydramine; chlorhexidine gluconate; isopropyl butylphenol; quaternary ammonium salts; Fungicides such as hinokitiol and bilocton olamine, moisturizers such as sodium hyaluronate, glycerin, and chondroitin sulfate, yew, buttony, kanzo, otogiriso, shrimp, beetle, potato mugwort, comfrey, ashiyuba, saffron
  • the hair growth agent of the present invention may contain both the above-mentioned A and B type compounds, if necessary, although it depends on the application target or the required degree of the hair growth effect.
  • the method for screening a hair growth substance of the present invention will be described.
  • the dermal papilla cells express the ABC transporter and the ATP receptor or adenosine receptor, which are considered to be closely related to each other and exhibit a hair-growth effect. It is.
  • stimulation of the ATP receptor or adenosine receptor through the stimulatory effect on ABC transporter increases hair growth with an increase in intracellular calcium concentration. It is thought that it shows the effect.
  • Hair papilla cells have a very low proliferative capacity, require a large amount of hair tissue to secure the number of cells required for screening, and require a great deal of labor and cost. Therefore, it has been desired to develop a simple method for finding a substance that acts on an ATP receptor or an adenosine receptor through the ABC transport system to find an effective substance.
  • the present inventors have conducted intensive studies and found that the ABC transporter gene and the ATP receptor gene or adenosine receptor gene were transformed into a transgenic cell by a genetic recombination technique using an appropriate host vector method, and calcium was transferred to this cell.
  • the present invention was completed by establishing a method for screening hair growth substances by measuring influx.
  • the method for screening a hair-growth substance of the present invention uses a cell in which a receptor gene for the ABC transport protein and a purine derivative is expressed by a host vector method, and detects calcium influx into the cell. It is characterized as an index.
  • the ABC transporter is a generic name for similar proteins that have the effect of causing the release of intracellular ATP outside the cell, and as a protein, constitutes the so-called ABC protein superfamily. Some are also referred to as ATP binding cassettes, ATP binding proteins, ABC binding transports or ABC proteins.
  • the ABCC transport examples include MDR (P-sugar protein multidrug resistance protein), MRP (thigh-related protem), CFT (cyctic fibrosis transmembrane conductance regulator), S UR (sulfonylurea receptor) Body) and the like.
  • the ATP binding transporter gene used in the present invention is particularly preferably a sulfonylprea receptor gene (hereinafter also referred to as SUR gene).
  • the sulfonyl receptor gene is known from SUR gene sequence information already known, for example, the Hamus Yuichi SUR gene sequence described in Y. Tokuyama et al., Biochemical and Biophysical Research Communications, ⁇ 20, p.532-538 (1996). It can be obtained by a well-known PCR method or a hybridization method from a cDNA library using a suitable probe prepared from the sequence based on the information.
  • the rat SUR cDNA sequence is also known (GenBank Accession No. L40624).
  • the hamster SUR gene transfer is described in Aguilar-Bryan et al., Science, vol. 268, p. 423 (1995). I have.
  • rat and mouse SUR The amino acid sequence of rat and mouse SUR is described in Inagaki et al., "Sulfonylurea Receptor” (Biochemistry Vol. 69, No. 9, p. 1067, 1997).
  • receptor gene for the adenosine derivative include a purine receptor gene and an adenosine receptor gene.
  • the human cDNA gene sequence is already known (GenBank Accession No. X68485).
  • the sulfonyl receptor gene it can be obtained by a well-known PCR method or a hybridization method from a cDNA library.
  • the human cDNA gene sequence is also known for the ATP receptor gene (GenBank Accession No. X83688).
  • the receptor gene for the ABC transporter gene or purine derivative a part of the gene sequence inside or at the end within a range that functions as a receptor for ABC transporter or purine derivative in transformed cells after transformation. But also includes those that have been inserted, replaced, or deleted.
  • the host used in the present invention is not particularly limited as long as the introduced gene is efficiently expressed and cultivation is easy.
  • Various strains of Escherichia coli which is a genus Escherichia and Bacillus spp.
  • Various strains of Bacillus subtilis various strains of Saccharomyces cerevisiae as yeast, C0S-7 cells, CHO cells, PC12 cells, NIH3T3 cells, NRK cells, CV-1 cells as animal cells, CO S-1 cells and the like are preferred.
  • the vector is not particularly limited as long as it is easy to prepare and can be efficiently introduced.
  • Plasmids derived from Escherichia coli eg, pBR322, pUC118, etc.
  • Plasmids derived from Bacillus subtilis eg, pUB110, pC194, etc.
  • yeast derived plasmids eg, pSH19, etc.
  • Animal viruses such as vaccinia virus are preferred.
  • an appropriate expression promoter is connected upstream of the gene to express the gene.
  • the mouth motor to be used may be selected according to the host.
  • the T7 promoter, the lac promoter, the trp promoter, the aPL promoter, and the SP0 promoter are used when the host is Bacillus.
  • the host is yeast, the PHO promoter, GAP promoter, ADH promoter, etc., and when the host is an animal cell, SV40-derived promoter, retrovirus promoter, etc. , It can use it.
  • Transformation means introducing DNA into an organism such that the DNA becomes replicable as an extrachromosomal element or by chromosomal integration.
  • Methods for transforming host cells using the above-described recombinant vector include transformation methods generally used for each host cell, for example, calcium treatment using calcium chloride, transfection by calcium phosphate method, electoporation, or Lipophexion and the like can be applied (Sambrook et al., Molecular Biology: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York 1989, etc.).
  • the transformed cells thus obtained are cultured in an appropriate selection medium and used for screening.
  • the culture for this screening is preferably performed by culturing the cells on a cover glass.
  • the transformed cells are suspended in a medium at a cell concentration of 3 ⁇ 10 7 / mL, an appropriate amount is placed on a cover glass, and cultured at about 37 ° C. for about 24 to 48 hours.
  • test substance solution is added to the cultured cells, and the amount of calcium flowing into the cells is measured.
  • a well-known fluorescent calcium indicator which is a calcium chelating agent and whose fluorescent property changes depending on the amount of calcium binding, such as fura-2, fura-2-AM, indo-1, quin2, fluo-3, rhod-2, etc.
  • fura-2-AM (l- (2--(5, -carboxoxazoyl-2, -yl ) -6-Aminobenzofuran-5-oxy) -2- (2, -amino-5, -methylphenoxy) -ethane- ⁇ , ⁇ , ⁇ ,, ⁇ , -tetraacetic acid ⁇
  • fura-2-AM l- (2--(5, -carboxoxazoyl-2, -yl ) -6-Aminobenzofuran-5-oxy
  • N-acetoxymethyl ester and Wako Pure Chemical Tokyo
  • the hair restorer of the present invention exerts a hair restorer effect by, for example, releasing ATP, ATP derivative, adenosine, adenosine derivative and the like from cells and stimulating ATP receptor and / or adenosine receptor. It is based on a novel mechanism of action and has a remarkable hair-growth effect.
  • a particularly high hair restorer can be obtained when an adenosine 15-monophosphate derivative or an adenosine 15-monophosphate derivative is used as the compound. The effect can be obtained.
  • a novel action of exerting a hair-growth effect by a purine receptor stimulating action through a stimulating action on ABC transport that is, an ATP receptor and / or adenosine receptor stimulating action. It is possible to easily screen a hair-growth substance having a mechanism. Examples Next, the present invention will be described in more detail with reference to Formulation Examples and Test Examples (Examples and Comparative Examples). Hair restorer
  • an external aerosol was prepared according to the usual method for producing an aerosol.
  • the hair growth test of the hair growth agents of Examples 1 to 15 was performed using C 3H / HeNCr J This was performed using mice.
  • the test method consisted of 10 mice per group, divided into Examples 1 to 15, Comparative Examples 1 and 2, and 17 groups of no-administration group, and the back of the mouse was shaved with a palycan and a power razor. Each sample was applied once, 100 L per 8 cm 2 of shaved back.
  • the hair restorers of Examples 1 to 15 and Comparative Examples 1 and 2 were prepared by stirring the components shown in Tables 1 and 2 until the whole was uniform as in Formulation Example 1.
  • Tables 3 and 4 show the hair regenerating area (after 15 days) with respect to the applied area of the hair-growing agents of Examples 1 to 15 and the hair-growing agents of Comparative Examples 1 and 2, and the non-administered group.
  • the hair restorer of the present invention has a high effect on hair regeneration.
  • Tritriphosphoric acid 10 0
  • Medium-chain fatty acid triglyceride 200 0
  • Isopropyl myristate 1 0
  • Formulation Example 7 (External gel): A cream for external use was prepared from the above ingredients according to the usual method for producing an emulsifier.
  • the hair growth tests of the hair restorers of Examples 16 to 22 were carried out using # 311 /; The test method consisted of 10 mice per group, divided into 9 groups: the hair restorer-administered group of Examples 16 to 22, the hair restorer-administered group of Comparative Example 3, and the non-administered group. Shaved on the back, shaved samples once a day 100 L was applied every 8 square cm.
  • the hair restorers of Examples 16 to 22 and Comparative Example 3 were prepared by stirring each component shown in Table 5 until the whole was uniform, as in Formulation Example 5.
  • Table 6 shows the hair regenerating area (after 15) with respect to the application area of the administration groups of the hair restorers of Examples 16 to 22 and the hair restorer of Comparative Example 3 and the non-administration group.
  • Example 16 Component name Example 16 Example 1 ⁇ Example 18 Example 19 Example 20 Example 21 Example 22 Comparative example 3
  • the hair restorer of the present invention has a high effect on hair regeneration.
  • their derivatives are more effective than adenosine-5'-diphosphate (Example 21) or adenosine-5, -triphosphate (Example 22). It became clear that it had a high hair growth effect.
  • a cream for external use was prepared according to the method of emulsifier, Formulation Example 1 1 (gel for external use)
  • an aerosol for external use was prepared according to the method for producing an aerosol, Example 23 (a lotion for external use) (Components) Compounding amount (W / V5 Nicorandil 1.0 propylene glycol 20.0 ethanol 50.0 Purified water 100 ml in total
  • Example 24 nicorandil in Example 23 was replaced with pinacidil (Example 24), cromakalim (Example 25), MnATP (Example 26), megrotinide (Example 27), and L-arginine (Example 28). ) was prepared in the same manner as in Example 23 except that the lotion was used instead. Comparative Example 4
  • Example 7 As shown in Table 7, an external lotion was prepared in the same manner as in Example 23 except that nicorandil in Example 23 was omitted.
  • Example 2 Component name Example 2 3 Example 2 4 Example 2 5 Example 2 6 Example 2 7 Example 2 8 Comparative example 4 Compound 23 1 g
  • the test method consisted of 10 mice per group, divided into 8 groups: a sample administration group and a non-administration group, and the back of the mouse was shaved with a clipper and a force razor, and each sample was shaved once. 100 L per 8 cm 2 of the back was applied.
  • Table 8 shows the hair regeneration area (after 15 days) with respect to the application area of the sample administration group of Examples 23-28, the sample administration group of Comparative Example 4, and the non-administration group. Table 8
  • COS-1 cells (3 ⁇ 10 5 cells / 35 mm diameter petri dish) were cultured in Dulbecco's modified MEM medium containing 10% fetal bovine serum at 37 ° C. in a 5% CO 2 atmosphere.
  • human adenosine receptor cDNA GenBank Accession No. X68485, reference: A. Kollias-Baker et al., The Journal of Pharmacology and Experimental Th erapeutics, 281 (2), 761-768 (1997)
  • rat sulfonyldiarea receptor cDNA GenBank Accession No.
  • L40624 References: Y ⁇ Tokuyama et al., Biochemical and Biophysical Research Communications, 220, 532- 538 (1996)) into pcDNA3.1 vector-1 (Invitrogen, California, USA) and pcDNA3.1 / Hygro vector-1 (Invitrogen, California, USA) according to standard methods.
  • 3.1 hAD and pc DNA 3.1 / Hygro raS UR were obtained.
  • pcDNA3.lhAD is obtained by inserting the HindIII / Xbal fragment (1.4 kb) of human adenosine receptor cDNA into the EcoRI / Notl site of pcDNA3.1 vector. .
  • pc DN A3.1 / Hygro raS UR is the nucleotide number of the rat sulfonylrea receptor cDNA at Hindlll / Xbal site of pcDNA3.1 / Hygro vector. DNA fragment was inserted. The thus obtained pCDNA3.1 hAD (1 ⁇ g) and pcDNA3.1 / Hygro raS UR (ljg) were lipofected into the previously cultured C0S-1 cells.
  • the cells were further cultured.
  • the cells were washed with phosphate buffered saline and treated with 0.05% trypsin and 0.53 mM EDTA solution.
  • Highly expressing cell lines were obtained using neomycin and hygromycin resistance as indices.
  • cells were cultured on a cover glass and provided.
  • the fluorescence intensity method using FURA-2 was used for measuring the intracellular force lucidum concentration. That is, 5 g / m1: fura—2 am loaded for 30 min, washed with iodine solution, then fluorescence at 340 nm and 380 nm as indicators of intracellular calcium concentration The intensity ratio was determined. Test example
  • nicorandil which is known as a sulfonylprea receptor stimulant.
  • nicorandil 25 and 100 M increases the intracellular calcium concentration. This effect is due to the pretreatment of the adenosine receptor inhibitor 8-sulfophenyltheophylline. Was confirmed to be suppressed.
  • Test example 2
  • the effects of nicorandil and adenosine were not observed in the calcium-free medium. From this, it is clear that the increase in intracellular calcium concentration is due to the influx of extracellular calcium.
  • the transformed cells obtained by the present invention have good proliferation ability and can be easily used for screening of hair growth agents.

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Abstract

Excellent hair growth stimulants having novel function mechanisms different from the conventional hair growth stimulants and a method for screening the same. The above-described hair growth stimulants contain as the active ingredient compounds exerting an effect of stimulating purine receptors (adenosine receptor, ATP receptor, etc.), an effect of potentiating the above effect, and an effect of liberating compounds having an effect of stimulating purine receptors (adenosine, adenosine derivatives, adenosine metabolites, etc.) from cells. The above-described screening method comprises adding a test substance to cells which have been transformed with an ABC transporter gene and a purine derivative receptor gene and using the calcium influx at this point as an indication.

Description

明細書 育毛剤及び育毛作用を有する物質のスクリーニング方法 技術分野  Description: Hair restorer and method for screening substance having hair restorer
本発明は、 育毛剤に関し、 特に各種の外用剤として使用可能であり、 優れた有 効性を示す新規な作用機構を有する育毛剤に関する。 また、 本発明は、 育毛作用 を有する物質のスクリーニング方法に関し、 特に新規作用機構を有する育毛作用 物質のスクリ一ニング方法に関する。 背景技術  The present invention relates to a hair restorer, particularly to a hair restorer which can be used as various external preparations and has a novel action mechanism exhibiting excellent efficacy. The present invention also relates to a method for screening a substance having a hair-growth action, and more particularly to a method for screening a hair-growth substance having a novel action mechanism. Background art
これまで、 ヒ 卜特に男性型脱毛を治療または予防する試みにおいて、 多くの薬 剤の使用が提案されてきた。 そのような薬剤としては、 例えば、 血管拡張剤、 男 性ホルモン受容体阻害剤、 ステロイ ド— 5ひ一レダク夕一ゼ阻害剤、 ビタミン類、 免疫抑制剤等が挙げられる。 しかし、 実際には、 これらの薬剤の育毛剤としての 有効性は十分満足できるものではないのが現状である。  To date, many agents have been proposed for use in treating or preventing humans, especially male pattern hair loss. Such drugs include, for example, vasodilators, male hormone receptor inhibitors, steroid-5-hydroxylase inhibitors, vitamins, immunosuppressants and the like. However, in practice, the effectiveness of these drugs as hair restorers is not currently satisfactory.
また、 これまで、 ヒト特に男性型脱毛を治療または予防する試みにおいて、 い くつかの育毛物質のスクリーニング方法が提案されてきた。 例えば、 マウス、 ラ ヅ ト、 ゥサギ、 モルモッ ト等の小動物、 特に適当な週齢の C 3 Hマウスや C 5 7 B Lマウス等の主として背部毛を剃り、 試験物質を塗布して発毛の程度を観察す る方法、 マウスのヒゲ、 ヒトの頭髪等を摘出し、 得られた毛組織を器官培養し、 試験物質を添加してその成長の程度を評価する方法、 または毛組織をさらに細胞 レベルにまで分画し、 特に毛乳頭細胞または外毛根鞘細胞を個別にまたは共存培 養した系に、 試験物質を添加して増殖促進効果を試験する方法、 適当な動物また はヒトでの血管拡張作用または血流促進効果を試験するもの等が試みられている。 また、 特に男性型脱毛においては、 その発症に男性ホルモンが関与していること から、 男性ホルモン受容体阻害試験や男性ホルモンであるテストステロンをジヒ ドロテス卜ステロンに変換させる酵素であるステロイ ドー 5ひ一レダク夕ーゼ阻 害試験等も応用されてきた。 発明の開示 In the past, several methods for screening hair growth substances have been proposed in an attempt to treat or prevent humans, especially male pattern hair loss. For example, small animals such as mice, rats, egrets, and guinea pigs, especially C3H mice and C57BL mice of appropriate age, mainly shaved the back hair, and apply a test substance to determine the degree of hair growth. Method of observing mouse hair, human hair, etc., culturing the obtained hair tissue in organs, adding a test substance to evaluate the degree of growth, or converting the hair tissue to the cellular level. A method for testing the growth promoting effect by adding a test substance to a system in which hair papilla cells or outer root sheath cells are separately or co-cultured, and vasodilation in an appropriate animal or human Tests of the action or blood flow promoting effect have been attempted. In addition, since male hormones are involved in the onset of androgenetic hair loss in particular, male hormone receptor inhibition tests and the enzyme steroid-5, an enzyme that converts the male hormone testosterone to dihydrotestosterone, are considered. A test for the inhibition of redakase has also been applied. Disclosure of the invention
本発明の目的は、 従来の育毛剤と比較して発毛効果に優れた育毛剤を提供する ごにめ 。  An object of the present invention is to provide a hair restorer having a superior hair growth effect as compared with a conventional hair restorer.
また、 本発明の他の目的は、 従来の育毛剤とは異なる新規な作用機構を有する、 優れた育毛剤を提供するためのスクリーニング方法を提供することにある。 本発明の 1つの形態は、 プリン受容体刺激作用を有する化合物、 生体に適用後 にプリン受容体刺激作用を有する化合物を遊離する化合物、 若しくは、 プリン受 容体刺激作用を有する化合物の当該作用を増強する化合物の 1種又は 2種以上を 有効成分として含有する育毛剤である。  Another object of the present invention is to provide a screening method for providing an excellent hair restorer having a novel action mechanism different from that of a conventional hair restorer. One embodiment of the present invention enhances the action of a compound having a purine receptor stimulating action, a compound having a purine receptor stimulating action after application to a living body, or a compound having a purine receptor stimulating action. It is a hair restorer containing one or more compounds as active ingredients.
本発明において、 「プリン受容体刺激作用」 とは、 プリン受容体を刺激して細 胞に対して何らかの現象を発生させる作用を指し、 通常は、 そのような刺激はプ リン受容体と、 該プリン受容体に特異的に結合可能な物質との相互作用によって もたらされる。  In the present invention, the “purine receptor stimulating action” refers to an action of stimulating a purine receptor to cause a certain phenomenon to cells, and usually such stimulation is caused by a purine receptor and the purine receptor. It is brought about by interaction with substances that can specifically bind to purine receptors.
また、 本発明において 「生体に適用後にプリ ン受容体刺激作用を有する化合物 を遊離する化合物」 とは、 皮膚、 粘膜又は体内組織等への塗布又は投与等の後に プリン受容体刺激作用を有する化合物を分離して放出する機能を有する化合物で あり、 通常は、 プリ ン受容体刺激作用を有する化合物に何らかの化学修飾が施さ れた化合物である。 前記化学修飾の例としては、 具体的には、 エステル化、 アミ ド化等の操作が挙げられる。  Further, in the present invention, "a compound which releases a compound having a purine receptor stimulating action after being applied to a living body" is a compound which has a purinergic receptor stimulating action after application or administration to skin, mucous membrane, body tissue, or the like. Is a compound having a function of separating and releasing a compound, and is usually a compound obtained by subjecting a compound having a purin receptor stimulating action to some chemical modification. Specific examples of the chemical modification include operations such as esterification and amidation.
ところで、 プリン受容体は P 1及び P 2受容体に大別されている。 P 1受容体 はアデノシンに対する親和性が高いことからアデノシン受容体とも称呼されてお り、 P 2受容体は A T Pに対する親和性が高いことから同様に A T P受容体とも 称呼される。 したがって、 本発明のプリン受容体刺激作用を有する化合物にはァ デノシン受容体及び/又は A T P受容体の刺激作用を有する化合物が含まれる。 本発明のアデノシン受容体刺激を有する化合物としては、 アデノシン、 N 6— シクロへキシルアデノシン、 N 6—シクロペンチルアデノシン、 （R ) — N 6— フエニルイソプロビルアデノシン、 （ S ) — N 6—フエニルイソプロビルアデノ シン、 （R) —フエ二ルーイソプロビルアデノシン、 N— [R— （2—べンゾチ ァゾリル） チォー 2—プロビル] 一 2—クロロアデノシン、 2—クロロー N6— シクロペンチルアデノシン、 N—（メチルーフエネチル） アデノシン、 ミノプリ二 ルーデォキシー N—ェチルリボフラヌロアミ ド、 デフイブ口チド、 5， 一 N—ェ チルカルボキサミ ドアデノシン、 2—クロロアデノシン、 N—ェチルー 1， ーデ ォキシ一 1， 一 [6—アミノー 2— [ 1— （ 3—ヒドロキシー 3—フエニル） プロ ピニル]— 9 H—プリン一 9ーィル]— ^一 D—リボフラン一 5， 一ゥロナミ ド、 N 6 - 2 - (4ーァミノフエニル） ェチルアデノシン、 5， 一 N—シクロプロビ ルカルボキサミ ドアデノシン、 N 6— （p—スルホフエニル） アデノシン、 1— デァザ一 2—クロ口一一 N6—シクロペンチルアデノシン、 8—ブチルアデノシ ン、 1ーシクロプロピルイソグアノシン、 6—シクロへキシルー 2， 一 0—メチ ルアデノシン、 2— /?— D—リボフラノシルォキサゾールー 4一カルボキサミ ド、 2—ョ―ド—N 6—シクロペンチルアデノシン、 N 6—シクロペンチルー 2， ― メチル一 2—クロロアデノシン、 N 6—シクロへキシル一 2， 一 0—メチルデノ シン、 2— [P— （ 2—カルボキシェチル） フエニルェチルァミノ] — 5， 一 N 一ェチルカルボキサミ ドアデノシン、 N 6— [4—[[[4— [[[2— [[[ (p—イソ チオシアナトフェニル） アミノ]チォカルボニル]アミノ]ェチル]アミノ]カルボ二 ル]メチル]ァミノカルボニル]メチル]フエニル]アデノシン、 N 6— [4一 [[[4— [[[2 -[[[ (m—イソチオシアナトフェニル） ァミノ]チォカルボニル]ァミノ]ェ チル]アミノ]カルボニル]メチル]アミノカルボニル]メチル]フエニル]アデノシン、 2 -[ ( 2—アミノエチルァミノ） カルボニルェチルフエニルェチルァミノ]— 5 ' 一ェチルカルボキサミ ドアデノシン、 2—へキシニルー 5—メチルカルボキサ ミ ドアデノシン、 2—シクロへキシルメチリデンヒドラジノアデノシン、 N—ェ チルカルボキサミ ドアデノシン、 N6—[2— （3， 5—ジメ トキシフエ二ル） 一 2 - (メチルフエニル） ェチル]アデノシン、 5， 一 （N—シクロプロビル） カル ポキサミ ドアデノシン、 N— [2— (3， 5—ジメ トキシフエ二ル） 一 2—フエ二 ルェチル]アデノシン、 N— （ 2—メチルベンジル） アデノシン、 2—ォクチニル アデノシン、 2—フエニルアミノアデノシン、 2— [2— （4一フルオロフェニ ル） エトキシ] アデノシン、 2— [ (シクロへキシルメチレン） ヒドラジノ] ァ デノシン、 2—クロ口一 N 6— （3—ョ一ドベンジル） アデノシン一 5， - N - メチルゥロナミ ド、 N 6— ( 3—イソチオシアナ一トベンジル） アデノシン一 5 ， 一N—メチルゥロナミ ド、 2—クロロー N 6— ( 3—ョ一ドベンジルアデノシ ンー 5， 一 N—メチルカルボキサミ ド、 ピナシジル、 デフイブロチド （短鎖デォ キシリボヌクレオチド） 、 アデノシン一 5， 一モノリン酸、 アデノシン一 5 ' - モノリン酸メチルエステル、 N 6—メチルアデノシン一 5， 一モノリン酸、 8— ブチルアミノアデノシン又はこれらの過ヨウ素酸酸化物が好ましい。 By the way, purine receptors are roughly classified into P1 and P2 receptors. The P1 receptor is also called an adenosine receptor because of its high affinity for adenosine, and the P2 receptor is also called an ATP receptor because of its high affinity for ATP. Therefore, the compound having a purine receptor stimulating action of the present invention includes a compound having a stimulating action on adenosine receptor and / or ATP receptor. Examples of the compound having the adenosine receptor stimulation of the present invention include adenosine, N 6 -cyclohexyl adenosine, N 6 -cyclopentyl adenosine, (R) -N 6 -phenylisopropyl adenosine, and (S) -N 6 -f Enylisoprovir adeno Synth, (R) -phenylisoproviradenosine, N— [R— (2-benzothiazolyl) thio-2-probyl] -1-chloroadenosine, 2-chloro-N6-cyclopentyladenosine, N— (methyl-phenene Til) Adenosine, minoprinii-Rudeoxy N-ethyl ribofuranuroamide, defibuchitide, 5,1-N-ethyl carboxamide adenosine, 2-chloroadenosine, N-ethyl 1,1-doxy 1-1,1 [6 —Amino-2 -— [1- (3-Hydroxy-3-phenyl) propynyl] —9H—Purine-1-yl] — ^-1-D—Ribofuran-1,5-peronamide, N 6-2- (4-aminophenyl) Tyladenosine, 5,1-N-cyclopropylcarboxamide adenosine, N6- (p-sulfophenyl) adenosine, 1-daza1-2-chloro-N11-cyclo Dimethyladenosine, 8-butyladenosine, 1-cyclopropylisoguanosine, 6-cyclohexyl 2,10-methyladenosine, 2-/?-D-ribofuranosyloxazole-41-carboxamide, 2 —Anode—N 6-cyclopentyl adenosine, N 6-cyclopentyl-2, -methyl-12-chloroadenosine, N 6-cyclohexyl-12,10-methyldenosine, 2 -— [P— (2-carboxy Ethyl) phenylethylamino] —5,1-N-Ethylcarboxamidoadenosine, N 6— [4 — [[4 — [[[2 -— [[(p-isothiocyanatophenyl ) Amino] thiocarbonyl] amino] ethyl] amino] carbonyl] methyl] aminocarbonyl] methyl] phenyl] adenosine, N 6— [4-1-[[[4 -— [[[2-[[[(m— Isothiocyanatophenyl) amino] thiocarbonyl] amino] ethyl] Mino] carbonyl] methyl] aminocarbonyl] methyl] phenyl] adenosine, 2-[(2-aminoethylamino) carbonylethylphenylethylamino] —5'-ethylcarboxamide adenosine, 2- Xinyl-5-methylcarboxamide adenosine, 2-cyclohexylmethylidenehydrazinoadenosine, N-ethylcarboxamide adenosine, N6- [2- (3,5-dimethylethoxyphenyl) 1-2- (methylphenyl) ethyl ] Adenosine, 5,1- (N-cyclopropyl) carpoxamide adenosine, N- [2- (3,5-Dimethoxyphenyl) -1-2-phenylethyl] adenosine, N- (2-Methylbenzyl) Adenosine, 2-octynyl adenosine, 2-phenylaminoadenosine, 2- [2-((4-fluorophenyl) ethoxy] adenosine, 2- [( Hexyl black methylene) hydrazino] § Denosine, 2-chloro-1-N6- (3-hydroxybenzyl) adenosine-5, -N-methylperonamide, N6- (3-isothiocyanatobenzyl) Adenosine-15,1-N-methylperonamide, 2-chloro- N 6— (3-benzylbenzyladenosine-5,1-N-methylcarboxamide, pinacidil, defibrotide (short-chain oxyribonucleotide), adenosine 1.5, monomonophosphate, adenosine 15′-monoline Preferred are acid methyl ester, N6-methyladenosine monomonophosphate, 8-butylaminoadenosine or periodate oxides thereof.
アデノシン受容体刺激作用を有する前記化合物又は生体に適用後にアデノシン 受容体刺激作用を有する化合物を遊離する化合物は、 下記式 1 ：  The compound having the adenosine receptor stimulating action or the compound releasing the compound having the adenosine receptor stimulating action after application to the living body is represented by the following formula 1:
式 1 Equation 1
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[式中、 nは 0または 1、 1^〜11 2はそれぞれ水素原子または炭素原子数 1〜5 のァシル基を示し、 R 3は水素原子または保護基を示す。 ] で示される化合物であ つてもよい。 Wherein, n is 0 or 1, 1 ^ to 11 2 each represent a hydrogen atom or a Ashiru group having 1 to 5 carbon atoms, R 3 represents a hydrogen atom or a protecting group. ] It may be the compound shown by these.
アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の当該作用を増強する前記化合物と しては、 アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の取り込み阻害剤が好ましい。 ここで、 「取り込み阻害剤」 とは、 対象となる化合物の細胞又は組織等への吸収、 取り込みを阻害する作用を有する化合物を指す。 前記取り込み阻害剤としては、 ジビリダモール、 ジラセヅプ、 リ ドフラジン、 へキソベンジン、 カルボクロメン、 クロモナ一ル酸、 シネパジド、 ジァゼパム、 パパべリン、 6— （2， 一ハイ ド口 キシニトロベンジル） チォグアノシン、 プロベントフィ リンが好ましい。 As the compound that enhances the action of the compound having the adenosine receptor stimulating action, an uptake inhibitor of the compound having the adenosine receptor stimulating action is preferable. Here, the term “uptake inhibitor” refers to a compound having an action of inhibiting absorption and uptake of a target compound into cells or tissues. As the uptake inhibitor, Preference is given to diviridamol, diracep, lidofrazine, hexobendine, carbochromene, chromonalic acid, cinepadizide, diazepam, papaverine, 6- (2,1-hydridoxoxynitrobenzyl) thioguanosine, and proventophilin.
また、 アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の当該作用を増強する化合物 は、 アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の不活性化阻害剤であってもよい。 ここで、 「不活性化阻害剤」 とは、 対象となる化合物のある特性、 機能又は作用 の減少を阻害する作用を有する化合物を指す。 したがって、 アデノシン受容体刺 激作用を有する化合物の不活性化阻害剤は、 当該化合物のアデノシン受容体刺激 作用の減少を妨げる機能を有する。 アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の 前記不活性化阻害剤としては、 2， —デォキシコホルマイシン、 エリスロー 9 _ ( 2—ハイ ドロキシ一 3—ノニル） アデニンが好ましい。 本発明の別の形態は、 A T P受容体刺激作用を有する化合物の 1種または 2種 以上を有効成分として含有する育毛剤である。  Further, the compound that enhances the action of the compound having the adenosine receptor stimulating action may be an inactivation inhibitor of the compound having the adenosine receptor stimulating action. Here, the term “inactivation inhibitor” refers to a compound having an action of inhibiting a decrease in a certain property, function or action of a target compound. Therefore, an inactivation inhibitor of a compound having an adenosine receptor stimulating action has a function of preventing a decrease in the adenosine receptor stimulating action of the compound. As the inactivation inhibitor of the compound having adenosine receptor stimulating activity, 2, -deoxycoformycin and erythro 9_ (2-hydroxy-13-nonyl) adenine are preferable. Another embodiment of the present invention is a hair restorer comprising, as an active ingredient, one or more compounds having an ATP receptor stimulating action.
本発明の A T P受容体刺激作用を有する化合物としては、 例えば、 アデノシン ジリン酸、 アデノシントリリン酸及びこれらの誘導体が挙げられるが、 その中で はアデノシン _ 5， 一ジリン酸、 アデノシン一 5 ' —トリリン酸及びこれらの誘 導体が好ましい。 なお、 アデノシン一 5， 一ジリン酸の誘導体又はアデノシン— 5 ' —トリ リン酸の誘導体としては、 エステル誘導体が好ましい。  Examples of the compound having an ATP receptor stimulating action of the present invention include adenosine diphosphate, adenosine triphosphate and derivatives thereof, and among them, adenosine_5, monophosphate, adenosine-15′-trilin Acids and their derivatives are preferred. As the derivative of adenosine mono-, monophosphate or adenosine-5'-triphosphate, an ester derivative is preferable.
前記アデノシン一 5， ージリン酸誘導体及び前記アデノシン— 5， 一トリリン 酸誘導体は、 下記式 2 ： The adenosine-15, diphosphate derivative and the adenosine-5, monotriphosphate derivative have the following formula 2:
式 2 Equation 2
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[式中、 nは 2または 3、 1^〜11 2はそれそれ水素原子または炭素原子数 1〜5 のァシル基を示し、 R 3は水素原子または保護基を示す。 ] で示される化合物であ つてもよい。 [In the formula, n 2 or 3, 1 ^ to 11 2 indicates it it hydrogen atom or Ashiru group having 1 to 5 carbon atoms, R 3 represents a hydrogen atom or a protecting group. ] It may be the compound shown by these.
前記アデノシン一 5， 一ジリン酸誘導体としては、 α、 ?—メチレンアデノシ ンー 5， 一ジリン酸、 2—メチルチオアデノシン _ 5 ' —ジリン酸、 2， 一ベン ゾィルアデノシン一 5， 一ジリン酸、 3， 一ベンゾィルアデノシン一 5， ージリ ン酸が好ましい。  Examples of the adenosine mono- and mono-diphosphate derivatives include α,? -Methylene adenosine-5, mono-diphosphate, 2-methylthioadenosine_5'-diphosphate, 2,1-benzoyl adenosine-15, mono-diphosphate, and 3-diphosphate. , 1-benzoyladenosine-15, dilic acid is preferred.
前記アデノシン一 5， 一トリリン酸誘導体としては、 ひ、 ?—メチレンアデノ シン一 5， 一 ト リ リン酸、 2—メチルチオアデノシン一 5， 一トリリン酸、 2， 一ベンゾィルアデノシン一 5， 一 ト リ リン酸、 3， 一ベンゾィルアデノシン一 5 ' 一ト リ リ ン酸が好ましい。 本発明の他の形態は、 プリン受容体刺激作用を有する化合物を細胞から放出さ せる作用を有する化合物の 1種又は 2種以上を有効成分として含有する育毛剤で ある。 プリン受容体刺激作用を有する化合物はアデノシン、 アデノシン誘導体ま たはアデノシン代謝物であってもよく、 また、 A T P、 A T P誘導体または A T P代謝物であってもよい。 The adenosine 15-monotriphosphate derivatives include: -methyleneadenosine 15-monotriphosphate, 2-methylthioadenosine 15-monotriphosphate, 2,1-benzoyladenosine 15-, 1-monophosphate. Triphosphate, 3,1-benzoyladenosine-15'-triphosphate is preferred. Another aspect of the present invention is a hair restorer containing, as an active ingredient, one or more compounds having an action of releasing a compound having a purine receptor stimulating action from cells. The compound having a purine receptor stimulating action may be adenosine, an adenosine derivative or an adenosine metabolite, and may be ATP, an ATP derivative or AT. It may be a P metabolite.
細胞から放出されるアデノシン誘導体またはアデノシン代謝物は、 アデノシン モノホスフエ一ト、 アデノシンジホスフェート、 またはアデノシント リホスフエ Adenosine derivatives or adenosine metabolites released from cells can be adenosine monophosphate, adenosine diphosphate, or adenosine triphosphate.
—卜でありうる。 —It could be Uru.
プリン受容体刺激作用を有する化合物、 特に、 アデノシン、 アデノシン誘導体 またはアデノシン代謝物、 を細胞から放出させる作用を有する化合物は細胞に存 在する AB Cトランスポー夕一への刺激作用を有する化合物とすることができる。  A compound having a purine receptor stimulating action, in particular, a compound having an action of releasing adenosine, adenosine derivative or adenosine metabolite from a cell, is a compound having a stimulating action on ABC transport enzyme existing in the cell. be able to.
AB Cトランスポー夕一への刺激作用を有する化合物は、 スルホニルウレァ受 容体への刺激作用を有する化合物とすることができる。  The compound having a stimulating effect on ABC transporter can be a compound having a stimulating effect on a sulfonylurea receptor.
スルホニルゥレア受容体への刺激作用を有する化合物は、 メグリチニド、 ニコ ランジル、 レボクロマカリム、 クロマカリム、 ピナシジル、 ジァゾキサイ ド、 ジ ソビラミ ド、 チリソロ一ル、 アプリカム、 ビマカリム、 MgATP、 MnATP、 CaATP、 ZnATP、 S rATP、 MgADP、 MnADP、 CaADP、 ZnADP、 S rADP、 MgAMP、 MnAMP、 CaAMP、 ZnAMP、 S r AMP, アデニル -5-ィルイミ ドジホスフェート、 L一リジン、 L—アルギ ニンからなる群より選択される化合物であってよい。  Compounds that have a stimulating effect on the sulfonylprea receptor include meglitinide, nicorandil, levocromakalim, cromakalim, pinacidil, diazoxide, disoviramide, chillisolol, apricam, bimacarim, MgATP, MnATP, CaATP, ZnATP, SrATP , MgADP, MnADP, CaADP, ZnADP, SrADP, MgAMP, MnAMP, CaAMP, ZnAMP, SrAMP, adenyl-5-ylimidodiphosphate, L-lysine, L-arginine. May be.
スルホニルゥレア受容体への刺激作用を有する化合物は、 カルシウム、 マンガ ン、 マグネシウム、 亜鉛、 およびストロンチウムからなる群より選ばれる二価陽 イオンを含む塩であってよい。  The compound having a stimulating action on the sulfonylprea receptor may be a salt containing a divalent cation selected from the group consisting of calcium, manganese, magnesium, zinc and strontium.
スルホニルゥレア受容体への刺激作用を有する化合物は、 下記式 3 ：  The compound having a stimulating effect on the sulfonyldiarea receptor is represented by the following formula 3:
R-S-C o A 式 3 R-S-C o A Equation 3
[式中、 Rは分岐しても良い炭素数 14〜30のァシル基で、 二重結合を 0~3個 含む]で示される長鎖ァシルコェンザィム Aであってよい。 上記の各化合物を有効成分として含有する本発明の育毛剤は、 外用剤であるこ とが好ましく、 また、 本発明の育毛剤において、 当該有効成分の含有量は、 製剤 全体の 0. 01〜5重量％であることが好ましい。 本発明の更なる他の形態は、 A B Cトランスポーター遺伝子とプリン誘導体に 対する受容体遺伝子で形質転換させた細胞に対して被験物質を添加し、 そのとき の細胞内へのカルシウム流入量を指標とすることを特徴とする、 育毛作用を有す る物質のスクリ一ニング方法である。 [Wherein, R is an optionally branched acryl group having 14 to 30 carbon atoms and contains 0 to 3 double bonds]. The hair restorer of the present invention containing each of the above compounds as an active ingredient is preferably an external preparation, and the content of the active ingredient in the hair restorer of the present invention is 0.01 to 5% of the whole preparation. % By weight. In still another embodiment of the present invention, a test substance is added to cells transformed with an ABC transporter gene and a receptor gene for a purine derivative, and the amount of calcium influx into the cells at that time is used as an index. A method for screening a substance having a hair-growth action.
上記 A B C トランスポーター遺伝子は、 スルホニルゥレア受容体遺伝子とする ことができる。  The ABC transporter gene may be a sulfonylprea receptor gene.
上記プリン誘導体に対する受容体遺伝子はアデノシン受容体遺伝子または A T P受容体遺伝子とすることができる。  The receptor gene for the purine derivative can be an adenosine receptor gene or an ATP receptor gene.
細胞内へのカルシウム流入量は蛍光カルシウム指示薬を用いた蛍光強度で測定 することができる。  Calcium influx into cells can be measured by fluorescence intensity using a fluorescent calcium indicator.
A B Cトランスポー夕一遺伝子またはプリン誘導体に対する受容体遺伝子の形 質転換を、 宿主べクタ一系による遺伝子組み換え技術によって行うことができる。 図面の簡単な説明  Transformation of the ABC transporter gene or the receptor gene for the purine derivative can be performed by a genetic modification technique using a host vector system. BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES
図 1 本発明の育毛剤及び本発明の方法によってスクリーニングされる物質の、 作用機構を示す説明図である。  FIG. 1 is an explanatory diagram showing the mechanism of action of the hair growth agent of the present invention and the substance screened by the method of the present invention.
図 2 本発明のスクリーニング方法の実施例の結果を示すグラフである。  FIG. 2 is a graph showing the results of an example of the screening method of the present invention.
図 3 本発明のスクリーニング方法の実施例の結果を示すグラフである。 発明の詳細な説明  FIG. 3 is a graph showing the results of the example of the screening method of the present invention. Detailed description of the invention
まず、 本発明の育毛剤について記述する。  First, the hair restorer of the present invention will be described.
本発明者らは、 優れた有効性を有する育毛成分について鋭意研究の結果、 驚く べきことに、 アデノシン受容体及び A T P受容体を含むプリン受容体への刺激作 用が育毛効果と密接な関連を有していることを見出した。 本発明は、 この知見に 基づくものであり、  The present inventors have conducted intensive studies on hair-growth components having excellent efficacy, and surprisingly found that stimulating action on purine receptors including adenosine receptors and ATP receptors is closely related to hair-growth effects. It was found to have. The present invention is based on this finding,
A . プリン受容体刺激作用を有する化合物、 生体に適用後にプリン受容体刺激作 用を有する化合物を遊離する化合物、 及び、 プリン受容体刺激作用を有する化合 物の当該作用を増強する化合物；及び B . プリン受容体刺激作用を有する化合物を細胞から放出させる作用を有する化 合物、 例えば、 A B Cトランスポー夕一刺激作用を有する化合物、 特にスルホ二 ルゥレア受容体刺激作用を有する化合物； A. A compound having a purine receptor stimulating action, a compound which releases a compound having a purine receptor stimulating action after application to a living body, and a compound which enhances the action of a compound having a purine receptor stimulating action; and B. A compound having an action of releasing a compound having a purine receptor stimulating action from cells, for example, a compound having an ABC transport stimulating action, particularly a compound having a sulfonyl urea receptor stimulating action;
を育毛成分として使用することを特徴とする。 以下、 上記 A及び Bのタイプの化合物をそれそれ含む育毛剤 （以下、 各々、 プ リン受容体直接刺激型、 及び、 プリン受容体間接刺激型と称する） について詳細 に説明を行う。 Is used as a hair growth component. Hereinafter, hair restoration agents containing the above-mentioned compounds of the types A and B (hereinafter, referred to as the direct stimulation type of the purin receptor and the indirect stimulation type of the purine receptor, respectively) will be described in detail.
1 . プリン受容体直接刺激型育毛剤 1. Purine receptor direct stimulation type hair restorer
既述したように、 プリン受容体はアデノシン受容体及び A T P受容体に大別さ れる。 そこで、 まずアデノシン受容体を特に刺激するタイプの化合物を含有する 育毛剤について説明する。  As described above, purine receptors are roughly classified into adenosine receptors and ATP receptors. Therefore, first, a hair restorer containing a compound that stimulates the adenosine receptor will be described.
アデノシン受容体は、 薬理学的及び構造的な特徴をもとに、 現在、 A l、 A 2 a、 A 2 b、 A 3の 4種類のサブ夕イブに分類されている。 そして、 A 1受容体は 抗けいれん効果、 神経保護効果、 行動抑制効果、 睡眠効果等を、 A 2 ( A 2 a又 は A 2 b ) 受容体は行動抑制効果、 睡眠効果等を、 そして A 3受容体は肥満細胞 の脱顆粒促進効果等の生理作用を有することが知られている。  Adenosine receptors are currently classified into four sub-groups, Al, A2a, A2b, and A3, based on their pharmacological and structural characteristics. A1 receptor has anticonvulsant effect, neuroprotective effect, behavior suppression effect, sleep effect, etc., and A2 (A2a or A2b) receptor has behavior suppression effect, sleep effect, etc., and A It is known that 3 receptors have physiological effects such as an effect of promoting mast cell degranulation.
アデノシン受容体は生体中において様々な臓器に分布しており、 細胞機能及び 生理機能の調節に関与しているものと考えられている。 例えば、 心臓の血管平滑 筋に分布するアデノシン受容体は、 血中のアデノシン受容体刺激作用を有する化 合物との結合により、 血管を拡張し、 冠血管の血流量を増大させることが知られ ている。 また、 近年、 細胞上に存在するアデノシン受容体の刺激が細胞内のカル シゥムイオン濃度を上昇させる等の現象を発生させることが明らかとなっている。 本発明者らは、 アデノシン受容体刺激作用がもたらす様々な現象が細胞組織の 他の機能の調節に重要な役割を有する可能性について様々な側面から研究を重ね た結果、 アデノシン受容体刺激作用が毛髪の生育に関して深く関与していること を突き止め、 この知見に基づき、 高い育毛効果を有する新規な育毛剤を開発した。 すなわち、 本発明の育毛剤の 1つの形態は、 アデノシン受容体刺激作用に基づ くものである。 Adenosine receptors are distributed in various organs in the living body and are thought to be involved in the regulation of cell functions and physiological functions. For example, adenosine receptors distributed on the vascular smooth muscle of the heart are known to expand blood vessels and increase coronary blood flow by binding to compounds that stimulate adenosine receptors in blood. ing. In recent years, it has been revealed that stimulation of adenosine receptors present on cells causes phenomena such as an increase in intracellular calcium ion concentration. The present inventors have conducted various studies on the possibility that various phenomena caused by adenosine receptor stimulation may have an important role in regulating other functions of cell tissues. They have found that they are deeply involved in hair growth, and based on this finding, have developed a new hair restorer with a high hair restorer effect. That is, one form of the hair restorer of the present invention is based on adenosine receptor stimulating action. It is a spider.
この育毛剤の有効成分としては、 アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の As an active ingredient of this hair restorer, there are compounds having an adenosine receptor stimulating action.
1種又は 2種以上の他に、 生体に適用後にアデノシン受容体刺激作用を有する化 合物を遊離する化合物、 若しくは、 アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の 当該作用を増強する化合物の 1種又は 2種以上が挙げられる。 これらの化合物は 単独で使用されてもよく、 また、 複数の種類が混合されて使用されてもよい。 アデノシン受容体刺激作用を有する前記化合物は、 アデノシン受容体を刺激す る作用を有するものであれば特に限定されるものではないが、 アデノシン受容体 との結合性の点では、 アデノシン、 N 6—シクロへキシルアデノシン、 N 6—シ クロペンチルアデノシン、 （R) —N 6—フエニルイソプロピルアデノシン、One or more compounds that release a compound having adenosine receptor stimulating action after application to a living body, or one or more compounds that enhance the action of adenosine receptor stimulating action or Two or more are mentioned. These compounds may be used alone, or a plurality of types may be used as a mixture. The compound having an adenosine receptor stimulating action is not particularly limited as long as it has an adenosine receptor stimulating action. However, in terms of adenosine receptor binding properties, adenosine, N 6- Cyclohexyl adenosine, N 6-cyclopentyl adenosine, (R) —N 6-phenylisopropyl adenosine,
( S) —N 6—フエニルイソプロビルアデノシン、 （R) —フエニル一イソプロ ビルアデノシン、 N— [R- (2—ベンゾチアゾリル） チォ— 2—プロビル] ― 2—クロロアデノシン、 2—クロ口一 N 6—シクロベンチルアデノシン、 N6— [4-[[[4-[[[2 -[[[ (p—イソチオシアナトフヱニル） ァミノ]チォカルボ二 ル]アミノ]ェチル]ァミノ]カルボニル]メチル]アミノカルボニル]メチル]フエ二 ル]アデノシン、 N 6— [4— [[[4— [[[2— [[[ (m—イソチオシアナトフヱ二 ル） アミノ]チォカルボニル]アミノ]ェチル]アミノ]カルボニル]メチル]アミノカ ルボニル]メチル]フエニル]アデノシン、 N— (メチルーフエネチル） アデノシン、 ミノプリ二ルーデォキシー N—ェチルリボフラヌロアミ ド、 5， 一 N—ェチルカ ルポキサミ ドアデノシン、 2—クロロアデノシン、 N—ェチルー 1 ' ーデォキシ - 15 — [ 6—ァミノ一 2— [ 1— ( 3—ヒドロキシ一 3—フエニル） プロビニ ル〗一 9 H—プリン一 9一ィル]一/? -D—リボフラン一 5， 一ゥロナミ ド、 N 6 一 2— （4ーァミノフエニル） ェチルアデノシン、 5， 一 N—シクロプロピル力 ルポキサミ ドアデノシン、 N 6— （p—スルホフエニル） アデノシン、 1—デァ ザ一 2—クロ口一一 N6—シクロペンチルアデノシン、 8—ブチルアデノシン、(S) —N 6-Phenylisopropyl adenosine, (R) —Phenyl-1-isopropyl adenosine, N— [R- (2-benzothiazolyl) thio—2-Provir] —2-chloroadenosine, 2-chloroadenosine N 6—cyclobentyl adenosine, N6— [4-[[[4-[[2-[[[(p-isothiocyanatophenyl) amino] thiocarbyl] amino] ethyl] amino] carbonyl] methyl ] Aminocarbonyl] methyl] phenyl] adenosine, N 6— [4 — [[[4 — [[[2 -— [[(m-isothiocyanatophenyl) amino] thiocarbonyl] amino] ethyl] Amino] carbonyl] methyl] aminocarbonyl] methyl] phenyl] adenosine, N- (methyl-phenethyl) adenosine, minoprinyl-doxy-N-ethyl ribofuranuroamide, 5,1-N-ethyl carboxamide adenosine, 2- Chloroadenosine, N-eti -1 'Dokishi - 1 5 -? [6- Amino one 2- [1- (3-hydroxy-one 3-phenyl) Purobini Le〗 one 9 H- purine one 9 one I le] one /-D-Ribofuran one 5 N-1-2- (4-aminophenyl) ethyl adenosine, 5,1-N-cyclopropyl lipoxamide adenosine, N 6- (p-sulfophenyl) adenosine, 1-aza-12-chloro mouth 11 N6-cyclopentyl adenosine, 8-butyl adenosine,
1ーシクロプロビルイソグアノシン、 6—シクロへキシルー 2， 一 0—メチルァ デノシン、 2— 一D—リボフラノシルォキサゾール一 4一力ルポキサミ ド、 2 ーョ一ドー N 6—シクロペンチルアデノシン、 N 6—シクロペンチル一 2， ーメ チルー 2—クロロアデノシン、 N 6—シクロへキシル一 2 ' — 0—メチルデノシ ン、 2— [ P— （2—カルボキシェチル） フエニルェチルァミノ] 一 5， - N - ェチルカルボキサミ ドアデノシン、 2— [ ( 2—アミノエチルァミノ） カルボニル ェチルフエニルェチルァミノ]— 5， 一ェチルカルボキサミ ドアデノシン、 2—へ キシニルー 5—メチルカルボキサミ ドアデノシン、 2—シクロへキシルメチリデ ンヒドラジノアデノシン、 N—ェチルカルボキサミ ドアデノシン、 5 ' — ( N - シクロプロピル） カルボキサミ ドアデノシン、 N— [ 2— ( 3 , 5—ジメ トキシフ ェニル） フエニルェチル]アデノシン、 N— ( 2—メチルベンジル） アデノシン、 2—才クチニルアデノシン、 2—フエニルアミノアデノシン、 2— [ 2— ( 4— フルオロフヱニル） エトキシ] アデノシン、 2— [ (シクロへキシルメチレン） ヒドラジノ] アデノシン、 2—クロ口一 N 6— ( 3—ョ一ドベンジル） アデノシ ン一 5， 一N—メチルゥロナミ ド、 N 6— （ 3—イソチオシアナ一トベンジル） アデノシン一 5， 一N—メチルゥロナミ ド、 2—クロロー N 6— ( 3—ョードベ ンジルアデノシン— 5， 一N—メチルカルボキサミ ド、 デフイブロチド （短鎖デ ォキシリボヌクレオチド） 、 ビナシジル、 アデノシン一 5， 一モノリン酸、 アデ ノシン一 5， 一モノリン酸メチルエステル、 N 6—メチルアデノシン一 5， ーモ ノリン酸、 8—ブチルアミノアデノシン又はこれらの過ヨウ素酸酸化物が好まし く、 また、 育毛効果の面では、 A 1及び A 2タイプのアデノシン受容体への刺激 作用が高い化合物がより好ましい。 1-cyclopropylisoguanosine, 6-cyclohexyl-2,10-methyladenosine, 2--1-D-ribofuranosyloxazole-14-l-potoxamide, 2-hydroxyl N 6-cyclopentyladenosine, N 6-cyclopentyl-1,2-methyl-2-chloroadenosine, N 6-cyclohexyl-12'-0-methyldenosine 2, 2- [P- (2-carboxyethyl) phenylethylamino] 1,5, -N-ethylcarboxamide adenosine, 2-[(2-aminoethylamino) carbonylethylphenyl Ethylamino] -5, 1-ethylcarboxamido adenosine, 2-hexynyl-5-methylcarboxamido adenosine, 2-cyclohexylmethylidenehydrazino adenosine, N-ethyl carboxamido adenosine, 5 '— (N-cyclopropyl) carboxamido adenosine, N- [2- (3,5-dimethoxyphenyl) phenylethyl] adenosine, N- (2-methylbenzyl) adenosine, 2-butynyl adenosine, 2-phenylamino Adenosine, 2- [2- (4-fluorophenyl) ethoxy] adenosine, 2-[(cyclohexylmethylene) hydrazino] adenosine, 2- N- (3-hydroxybenzyl) adenosine-1,5-N-methylperonamide, N6- (3-isothiocyanatobenzyl) adenosine-1,5-N-methylperonamide, 2-chloro-N6- (3-odobenzyl adenosine-5,1-N-methylcarboxamide, defibrotide (short-chain dexoxyribonucleotide), binacidil, adenosine-15, monomonophosphate, adenosine-15, monomonophosphate methyl ester, N 6-Methyladenosine 15-monophosphoric acid, 8-butylaminoadenosine or their periodate oxides are preferred, and in terms of hair-growth effect, they are used for A1 and A2 type adenosine receptors. Compounds that have a high stimulating effect on are preferred.
また、 育毛効果の点では、 アデノシン受容体刺激作用を有する前記化合物又は 生体に適用後にアデノシン受容体刺激作用を有する化合物を遊離する前記化合物 は、 上記式 1に示される構造を有する化合物であることが好ましく、 その場合は、 R t〜R 2はそれそれ水素原子又は炭素原子数 1〜 5のァシル基、 R 3は水素原子又 は保護基とされることが好ましい。 Further, in terms of the hair-growth effect, the compound having the structure represented by the above formula 1 is that the compound having the adenosine receptor stimulating action or the compound releasing the compound having the adenosine receptor stimulating action after application to a living body is In this case, R t to R 2 are preferably a hydrogen atom or an acyl group having 1 to 5 carbon atoms, respectively, and R 3 is preferably a hydrogen atom or a protecting group.
ところで、 アデノシンをはじめとするアデノシン受容体刺激作用を有する化合 物は、 生体の様々な組織においてその生成と代謝が行われている。 したがって、 アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の当該作用を増強する化合物にも、 ァ デノシン受容体刺激作用を有する化合物と同様の効果が存在する。 本発明の育毛 剤に配合されるアデノシン受容体刺激作用を有する化合物の当該作用を増強する 化合物としては、 具体的には、 アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の取り 込み阻害剤及び不活性化阻害剤が好ましい。 なお、 前記不活性化剤としては、 ァ デノシン受容体刺激作用を有する化合物の酵素による代謝を阻害する化合物を挙 げることができ、 例えば、 アデノシンを生体内で不活性なイノシンに代謝するァ デノシンデァミナーゼの阻害剤を使用してもよい。 By the way, compounds having adenosine receptor stimulating action such as adenosine are produced and metabolized in various tissues of a living body. Therefore, a compound having the adenosine receptor stimulating action enhances the action of the compound, which has the same effect as the compound having the adenosine receptor stimulating action. Examples of the compound that enhances the action of the compound having the adenosine receptor stimulating action, which is combined with the hair restorer of the present invention, include a compound having the adenosine receptor stimulating action. Peptide inhibitors and inactivation inhibitors are preferred. Examples of the inactivating agent include compounds that inhibit the enzymatic metabolism of a compound having an adenosine receptor stimulating action. For example, an inactivating agent that metabolizes adenosine to inosine that is inactive in a living body. Inhibitors of denosine deaminase may be used.
前記取り込み阻害剤としては、 取り込み阻害効果の点で、 がジビリダモール、 ジラセヅプ、 リ ドフラジン、 へキソベンジン、 カルボクロメン、 クロモナ一ル酸、 シネパジド、 ジァゼパム、 パパべリン、 6— ( 2， 一ハイ ドロキシニトロべンジ ル） チォグアノシン、 プロベントフィ リンが好ましく、 また、 前記不活性化阻害 剤としては、 その効果の点で、 2 ' —デォキシコホルマイシン、 エリスロー 9一 ( 2—ハイ ドロキシ一 3—ノニル） アデニンが好ましい。 次に、 A T P受容体を特に刺激するタイプの化合物を含有する育毛剤について 説明する。  Examples of the uptake inhibitors include diviridamol, dilacep, lidofrazine, hexobendine, carbochromene, chromonaric acid, cinepazide, diazepam, papaverine, 6- (2,1-hydroxynitrobe) in terms of the uptake inhibitory effect. Nyl) thioguanosine and proventophilin are preferable, and as the inactivation inhibitor, 2'-dexoxyformycin, erythro 9-1 (2-hydroxy-13-nonyl) adenine are preferable in terms of their effects. Is preferred. Next, a hair restorer containing a compound of a type that particularly stimulates the ATP receptor will be described.
A T P受容体には、 リガンドの刺激を細胞内に伝達する方法としてイオンの細 胞膜透過を利用するものと G T P結合蛋白を介するものの 2種類があるとされて おり、 P 2 X型及び P 2 Y型 （それそれ 7つのサブタイプを有する） と称呼され ている。  There are two types of ATP receptors that transmit ligand stimulation into cells, one that utilizes the permeation of ions through the cell membrane and one that mediated by GTP-binding proteins. It is called Y type (each has 7 subtypes).
A T P受容体は生体中では様々な臓器に分布しており、 情報伝達や機能調節に 関与しているものと考えられている。 例えば、 神経系ではシナプス変調作用、 大 動脈では血圧調節を担っているものと考えられている。 しかし、 いまだその分布 の詳細や機能については明確にされていないのが現状である。 アデノシン及び A T P (アデノシントリリン酸） はいずれもプリン環を有することから、 プリン受 容体の概念には、 アデノシン受容体及び A T P (アデノシントリ リン酸） 受容体 が含まれる。  ATP receptors are distributed in various organs in the living body and are thought to be involved in signal transduction and function regulation. For example, it is thought to be responsible for synaptic modulation in the nervous system and blood pressure regulation in the aorta. However, the details and functions of the distribution have not yet been clarified. Since both adenosine and ATP (adenosine triphosphate) have a purine ring, the concept of a purine receptor includes adenosine receptor and ATP (adenosine triphosphate) receptor.
ところで、 近年、 細胞上に存在する A T P受容体の刺激が細胞内のカルシウム イオン濃度の上昇を引き起こすこと等が明らかとなってきている。 本発明者らは、 A T P受容体刺激作用が細胞組織の他の機能の調節に重要な役割を有する可能性 について、 様々な側面から研究を重ねた結果、 A T P受容体刺激作用が毛髪の生 育に関して深く関与していることを突き止め、 この知見に基づき、 高い育毛効果 を有する新規な育毛剤を開発した。 In recent years, it has been revealed that stimulation of ATP receptors present on cells causes an increase in intracellular calcium ion concentration. The present inventors have conducted various studies on the possibility that ATP receptor stimulating action may play an important role in regulating other functions of cell tissues. Is deeply involved in A new hair restorer with
すなわち、 本発明の育毛剤の他の形態は、 アデノシン受容体以外のプリン受容 体、 すなわち A T P受容体への刺激作用に基づくものである。  That is, another form of the hair restorer of the present invention is based on a stimulatory action on purine receptors other than adenosine receptors, that is, ATP receptors.
このタイプの育毛剤の有効成分としては、 A T P受容体刺激作用を有する化合 物の 1種又は 2種以上が挙げられる。 これらの化合物は単独で使用されてもよく、 また、 複数の種類が混合されて使用されてもよい。  The active ingredient of this type of hair restorer includes one or more compounds having an ATP receptor stimulating action. These compounds may be used alone, or a plurality of types may be used as a mixture.
この育毛剤の有効成分は、 A T P受容体刺激作用を有するものであれば特に限 定されるものではないが、 例えば、 アデノシンジリン酸、 アデノシントリリン酸 又はそれらの誘導体を挙げることができる。 生体における機能の点では、 前記ァ デノシンジリン酸及び前記アデノシントリ リン酸において、 リン酸部分の結合位 は、 5 ' 位の炭素が好ましい。 したがって、 上記した例の中では、 アデノシン一 5 5 —ジリン酸、 アデノシン一 5， 一トリリン酸及びこれらの誘導体が好ましい。 また、 育毛効果の面では、 アデノシン— 5 ' —ジリン酸の誘導体又はアデノシ ンー 5 ' —トリ リン酸の誘導体としてエステル誘導体が好ましい。 なお、 エステ ル誘導体としては、 アデノシン部位の 2， 又は 3， 位の炭素に結合した酸素原子 が、 1 〜 1 0、 好適には 1〜 5の炭素原子を含むァシル基と共にエステルを形成 していることが好ましい。 The active ingredient of this hair restorer is not particularly limited as long as it has an ATP receptor stimulating action, and examples thereof include adenosine diphosphate, adenosine triphosphate and derivatives thereof. From the viewpoint of the function in a living body, in the adenosine diphosphate and the adenosine triphosphate, the bonding position of the phosphate moiety is preferably a 5′-position carbon. Thus, in the example described above, adenosine monophosphate 5 5 - diphosphate, adenosine monophosphate 5, single-triphosphate and derivatives thereof are preferred. From the viewpoint of hair-growth effect, an ester derivative is preferred as the derivative of adenosine-5'-diphosphate or the derivative of adenosine-5'-triphosphate. In the ester derivative, an oxygen atom bonded to the carbon at the 2 or 3 position of the adenosine moiety forms an ester together with an acyl group containing 1 to 10, preferably 1 to 5 carbon atoms. Is preferred.
アデノシン一 5 ' ジリン酸の誘導体及びアデノシン _ 5 ' —トリリン酸の誘導 体は、 具体的には、 上記式 2に示される化合物であってもよく、 その場合は、 R t〜R 2はそれそれ水素原子又は炭素原子数 1〜 5のァシル基、 R 3は水素原子また は適当な保護基とされることが好ましい。 The derivative of adenosine mono 5'-diphosphate and the derivative of adenosine_5'-triphosphate may be specifically a compound represented by the above formula 2, in which case, R t to R 2 it hydrogen atom or Ashiru group having a carbon number. 1 to 5, R 3 is also hydrogen atoms is preferably set to a suitable protecting group.
なお、 育毛効果の点では、 前記アデノシン— 5 ' —ジリン酸誘導体は、 ひ、 β ーメチレンアデノシン一 5 ' —ジリン酸エステル誘導体、 2—メチルチオアデノ シン一 5， 一ジリン酸エステル誘導体、 2， 一ベンゾィルアデノシン一 5， 一ジ リン酸エステル誘導体、 又は、 3， —ベンゾィルアデノシン一 5， —ジリン酸ェ ステル誘導体であることが好ましい。  In terms of the hair-growth effect, the adenosine-5′-diphosphate derivatives are: β-methyleneadenosine-15′-diphosphate ester derivatives, 2-methylthioadenosine-15, monophosphate phosphate derivatives, Preferably, it is a monobenzoyladenosine-15, monophosphate derivative or a 3, -benzoyladenosine-15, -diphosphate ester derivative.
同様に、 育毛効果の点では、 前記アデノシン一 5， 一トリリン酸エステル誘導 体は、 ひ、 —メチレンアデノシン一 5， 一トリリン酸エステル、 2—メチルチ オアデノシン一 5， 一トリリン酸、 2， 一ベンゾィルアデノシン一 5， 一トリリ ン酸、 又は、 3， —ベンゾィルアデノシン一 5， 一トリリン酸であってもよい。 Similarly, in terms of the hair-growth effect, the adenosine 15-monotriphosphate derivatives include: methylene adenosine 15-monophosphate, 2-methylthioadenosine 15-monotriphosphate, 2,1-monophosphate. Benzoyladenosine 1-5, 1 tolly Acid, or 3, -benzoyladenosine-15, monotriphosphate.
2. プリン受容体間接刺激型育毛剤 2. Purine receptor indirect stimulator
AB Cトランスポー夕一は、 細胞内の ATPの細胞外への放出を引き起こす作 用を有する類似タンパクの総称であり、 タンパクとしては、 いわゆる ABCタン パクスーパ一ファミリ一を構成する一部で、 ATPバインディングカセッ ト、 A T P結合夕ンパク、 AB C結合トランスポ一夕一または A B Cタンパクとも呼ば れており、 MDR (P糖タンパク質、 multidrug resistance protein) 、 MRP (賺- related protein) 、 CFTR (cyctic fibrosis transmembrane conduct ance regulator) 、 SU (スルホニルゥレア受容体） などが挙げられ、 様々な 細胞機能の発現やその調節に重要な役割を果たしていることが明らかになつてい る。  ABC transporter is a generic name for similar proteins that have the effect of causing intracellular release of ATP to the outside of the cell.As proteins, a part of the so-called ABC protein super family, ATP It is also called binding cassette, ATP binding protein, ABC binding transposon or ABC protein, MDR (P-glycoprotein, multidrug resistance protein), MRP (encompass-related protein), CFTR (cyctic fibrosis transmembrane conduct) ance regulator) and SU (sulfonyldiarea receptor) have been shown to play important roles in the expression and regulation of various cell functions.
例えば膝臓のベ一夕細胞膜に存在する AB Cトランスポー夕一は、 隣接する A TP依存性力リゥムチヤンネルの開閉をコントロールして力リウムィオンの細胞 外への放出とその後のカルシウムイオンの流入を調節し、 細胞小胞内のィンスリ ンの細胞外への分泌をコントロールしている。 さらに、 心筋の ABCトランスポ 一夕一はミ トコンドリアに存在し、 同じく ミ トコンドリアに存在する AT P感受 性カリゥムチャンネルの機能を調節し、 虚血再灌流時のプレコンディショニング 効果 （心筋保護効果） の発現に関与していることが明らかとなってきている。 一 方、 AB Cトランスポ一夕一は心筋や血管平滑筋をはじめとして、 生体の様々な 組織に存在していることが知られるようになつてきており、 トランスポーターと しての役割、 即ち細胞内の A TPの細胞外への放出を引き起こす作用も様々な調 節作用に関与していることが推察されている。 また、 滕臓の/?細胞、 血管平滑筋 及び心筋に存在する AB Cトランスポー夕一はスルホニルゥレア受容体であるこ とが明らかになつている。  For example, the ABC transporter present in the cell membrane of the knee controls the opening and closing of the adjacent ATP-dependent force channel to regulate the release of force ions and the subsequent influx of calcium ions. It controls the secretion of insulin inside the cell vesicles to the outside of the cell. Furthermore, the ABC transporter in the myocardium is located in the mitochondria, regulates the function of ATP-sensitive potassium channels also present in the mitochondria, and has a preconditioning effect during ischemia-reperfusion (cardioprotective effect). It has been clarified to be involved in the expression of. On the other hand, the ABC transporter has become known to be present in various tissues of the living body, including the myocardium and vascular smooth muscle, and has a role as a transporter, that is, a cell. It has been speculated that the action of causing extracellular release of ATP in cells is also involved in various regulatory actions. It has also been clarified that the ABC transporter present in the // 、 cells, vascular smooth muscle and cardiac muscle of the brain is a sulfonylprea receptor.
スルホニルゥレア受容体は、 AT P感受性力リウムチャネルの制御因子として 機能することが知られている （稲垣ら、 「スルホニル尿素受容体」 （生化学第 6 9巻第 9号 1067頁、 1997年） ） 。  It is known that the sulfonylurea receptor functions as a regulator of the ATP-sensitive potassium channel (Inagaki et al., "Sulfonylurea Receptor" (Biochemistry Vol. 69, No. 9, p. 1067, 1997) )).
本発明者らは、 毛乳頭細胞に AB Cトランスボー夕一と ATP受容体またはァ P P 0 The present inventors have reported that APC transfusions and ATP receptors or a PP 0
15  Fifteen
デノシン受容体が発現していることを見出した。 そして、 これらの受容体、 すな わちプリン受容体の刺激作用を有する化合物を細胞から放出させる作用を有する 化合物、 特に A B C トランスボ一夕一を刺激することによりその作用を発揮する 化合物が、 従来の育毛成分には見られなかった優れた有効性を示すことを見出し た。 プリン受容体刺激作用を有する化合物には、 A T P受容体及び/又はアデノ シン受容体刺激作用を有する化合物が含まれ、 具体的には、 A T P、 A T P誘導 体又は A T P代謝物、 及び/又は、 アデノシン、 アデノシン誘導体又はアデノシ ン代謝物が挙げられる。 It was found that the denosine receptor was expressed. Conventionally, these receptors, that is, compounds having an action of releasing compounds having a purinergic receptor stimulating action from cells, particularly compounds which exert their action by stimulating ABC transvoi all over the cell, have been conventionally used. It has been found that it shows excellent efficacy not found in the hair growth component. The compound having a purine receptor stimulating action includes a compound having an ATP receptor and / or adenosine receptor stimulating action. Specifically, ATP, an ATP inducer or an ATP metabolite, and / or adenosine And adenosine derivatives or adenosine metabolites.
プリン受容体刺激作用を有する化合物を細胞から放出させる作用と育毛効果と の関連性について、 本発明者らは、 図 1に示すように、 例えばスルホニルゥレア 受容体などの A B Cトランスポ一夕一を刺激することにより、 アデノシントリリ ン酸 （A T P ) が細胞内から放出され、 これが A T P受容体に作用するか、 また は A T Pが分解して生成したアデノシンがアデノシン受容体に作用し、 細胞内力 ルシゥム濃度の上昇を引き起こし、 毛成長速度や毛周期を調節する機構を司って いるものと考えている。 または、 ミ トコンドリアに存在するスルホニルウレァ受 容体の刺激がミ トコンドリアに存在する A T P感受性力リウムチャンネルに作用 し、 これが A T P、 アデノシン、 それらの誘導体又は代謝物を細胞から放出させ ることも考えられる。  Regarding the relationship between the action of releasing a compound having a purine receptor stimulating action from cells and the hair-growth effect, as shown in FIG. 1, the present inventors have shown that ABC transporters such as sulfonyl-peryl receptors can be used. Upon stimulation, adenosine trilinate (ATP) is released from the cell and acts on the ATP receptor, or adenosine generated by the degradation of ATP acts on the adenosine receptor, and the intracellular force It is thought to be responsible for the mechanism that causes the hair growth rate and the hair growth rate and hair cycle. Alternatively, stimulation of mitochondrial sulfonylurea receptors may act on mitochondrial ATP-sensitive helium channels, which may release ATP, adenosine, their derivatives or metabolites from cells. .
したがって、 本発明の育毛剤の更なる他の形態は、 プリン受容体刺激作用を有 する化合物を細胞から放出させる作用に基づくものである。 具体的には、 この育 毛剤の有効成分としては、 A T P、 アデノシン、 それらの誘導体または代謝物を 細胞から放出させる作用を有する化合物の 1種又は 2種以上が挙げられる。 これ らの化合物は単独で使用されてもよく、 また、 複数の種類が混合されて使用され てもよい。  Therefore, still another form of the hair restorer of the present invention is based on the action of releasing a compound having a purine receptor stimulating action from cells. Specifically, examples of the active ingredient of the hair restorer include one or more compounds having an action of releasing ATP, adenosine, a derivative or metabolite thereof from cells. These compounds may be used alone, or a plurality of types may be used as a mixture.
プリン受容体刺激作用を有する化合物、 例えばアデノシンおよびその誘導体ま たは代謝物、 を細胞から放出させる作用の具体例としては、 例えば当該細胞に存 在する A B Cトランスポー夕一を刺激することがあげられる。  A specific example of the action of releasing a compound having a purine receptor stimulating action, such as adenosine and a derivative or metabolite thereof, from a cell is, for example, stimulating the ABC transporter present in the cell. Can be
本発明において、 アデノシンおよびその誘導体または代謝物としては、 アデノ シン、 アデノシンモノホスフェート、 アデノシンジホスフェートおよびアデノシ ントリホスフェートなどが挙げられる。 In the present invention, adenosine and its derivatives or metabolites include adenosine, adenosine monophosphate, adenosine diphosphate and adenosine. And triphosphate.
AB Cトランスポー夕一への刺激作用を有する化合物としては、 MDR、 MR P、 CFTR、 スルホニルゥレア受容体のいずれかへの刺激作用を有する化合物 を用いることができるが、 好ましくはスルホニルゥレア受容体を刺激作用を有す る化合物が挙げられる。  As the compound having a stimulating action on ABC transport, a compound having a stimulating action on any of MDR, MRP, CFTR, and sulfonyl-rea receptor can be used. Compounds having a stimulatory action on the receptor are mentioned.
スルホニルゥレア受容体を刺激作用を有する化合物としては、 例えば、 メグリ チニド、 ニコランジル、 レボクロマカリム、 クロマカリム、 ピナシジル、 ジァゾ キサイ ド、 ジソビラミ ド、 チリソロール、 アプリカム、 ビマカリム、 MgATP、 MnATP、 CaATP、 ZnATP、 SrATP、 MgADP、 MnADP、 CaADP、 ZnADP、 SrADP、 MgAMP、 MnAMP、 C a AMP, Z n AMP, S rAMP、 アデニル - 5 -ィルイミ ドジホスフェート、 L—リジン、 L一アルギニン、 カルシウム、 マンガン、 マグネシウム、 亜鉛またはストロンチ ゥムの二価陽イオンを含む塩、 および下記式  Examples of the compound having a stimulating action on the sulfonylprea receptor include, for example, meglitinide, nicorandil, levocromakalim, cromakalim, pinacidil, diazoxide, disoviramide, tilisolol, apricam, bimacarim, MgATP, MnATP, CaATP, ZnATP, SrATP, MgADP, MnADP, CaADP, ZnADP, SrADP, MgAMP, MnAMP, Ca AMP, ZnAMP, SrAMP, adenyl-5-ylimidodiphosphate, L-lysine, L-arginine, calcium, manganese, magnesium, zinc or stront A salt containing a divalent cation of Pum, and the following formula
R-S-C o A R-S-C o A
[式中、 Rは分岐しても良い炭素数 14~30のァシル基で、 二重結合を 0〜3 個含む] で示される長鎖ァシルコェンザィム A、 その中でも特にォレオイル— C 0 A ノ レミ トイル _CoA、 ォレイル一 CoA、 ミリストイルー CoA、 ベン 夕デカノィル一 CoA、 ステアリル一 C o Aが挙げられる。 [Wherein, R is a 14-30 carbon group which may be branched and contains 0-3 double bonds]. A long-chain acylchoenzyme A represented by 0 A Noretoyl_CoA, Oleyl-CoA, Myristoyl-CoA, Ben-Yu-Decanyl-CoA, Stearyl-CoA.
これらの物質は、 カリウムチャネルの開口剤として知られている （例えば、 高 橋ら、 「Kチャネル開口薬」 、 医薬ジャーナル、 vol.34, S-l, P.70-74 (1998)、 および遠藤ら、 「カリウムチャネル開口薬」 、 医薬ジャーナル、 vol.35， S-l, P. 112-119 (1999)参照） 。 スルホニルゥレア受容体は、 A TP感受性カリウムチヤ ネルの制御因子として機能しており、 カリウムチャネルの開口剤が、 スルホニル ウレァ受容体に結合することはすでに知られている （例えば、 Brayら、 Jounal o f Bailogical Chemistry, vol.267, p.11689 (1992)参照） 。 そして、 スルホニル ウレァ受容体が、 細胞内より細胞外へ AT Pの放出に関与していることもすでに 提唱されている （Awqatiら、 Science vol.269, 805 (1995)参照) 。 したがって、 カリウムチャネルの開口剤として知られている上記物質は、 スル ホニルゥレア受容体に結合して、 これを刺激するものと考えられる。 本発明は、 これらの物質のスルホニルゥレア受容体への結合によるスルホニルウレァ刺激作 用、 すなわち A B Cトランスポーターへの刺激作用が、 A T P、 アデノシン、 そ れらの誘導体または代謝物等のプリン受容体刺激作用を有する化合物を細胞から 放出させ、 育毛効果を発揮させることに初めて着目したものである。 本発明の育毛剤は、 外用剤であることが好ましく、 1日 1〜数回、 適量を頭皮、 皮膚上に塗布して使用することができる。 また、 本発明の育毛剤に含有される各 有効成分の配合量は、 好ましくは製剤全体中 0 . 0 1〜 5重量％であり、 より好 ましくは 0 . 1〜5重量％、 特に好ましくは 1 ~ 5重量％である。 この配合量が 0 . 0 1重量％未満であると、 育毛効果が十分でなく、 5重量％を超えると、 有 効成分の製剤中での溶解安定性が低下することが多く、 例えば低温保存時に結晶 析出が認められるなど品質への悪影響が懸念されるため好ましくない。 These substances are known as potassium channel openers (eg, Takahashi et al., “K channel openers”, Pharmaceutical Journal, vol.34, Sl, P.70-74 (1998), and Endo et al. , “Potassium channel openers”, Pharmaceutical Journal, vol. 35, Sl, P. 112-119 (1999)). The sulfonylprea receptor functions as a regulator of ATP-sensitive potassium channels, and it is already known that potassium channel openers bind to sulfonylurea receptors (eg, Bray et al., Jounal of Bailogical Chemistry, vol.267, p.11689 (1992)). And it has already been proposed that the sulfonylurea receptor is involved in the release of ATP from inside the cell to outside the cell (Awqati et al., Science vol. 269, 805 (1995)). Thus, the above substances, known as potassium channel openers, are thought to bind to and stimulate the sulfonylprea receptor. According to the present invention, the action of stimulating sulfonylurea by binding of these substances to the sulfonylurea receptor, that is, the stimulating action on the ABC transporter, is caused by the purine receptor such as ATP, adenosine, a derivative or metabolite thereof. For the first time, we focused on releasing a compound having a body stimulating effect from cells to exert a hair growth effect. The hair restorer of the present invention is preferably an external preparation, and can be used by applying an appropriate amount to the scalp or skin once or several times a day. The amount of each active ingredient contained in the hair restorer of the present invention is preferably 0.01 to 5% by weight, more preferably 0.1 to 5% by weight, and particularly preferably 0.1 to 5% by weight of the whole preparation. Is 1 to 5% by weight. If the amount is less than 0.01% by weight, the hair-growth effect is not sufficient, and if it exceeds 5% by weight, the dissolution stability of the active ingredient in the preparation often decreases. It is not preferable because adverse effects on quality such as crystal precipitation are sometimes observed.
本発明の育毛剤は、 外用剤として通常用いられる剤形、 例えばローション剤、 乳剤、 クリーム剤、 トニック剤、 軟膏剤、 ゲル剤、 エアゾール剤等として使用する ことができるが、 外用剤として使用される剤形であればこれらに限定されるもの ではない。 なお、 エアゾール剤として使用する場合は、 原液に対して上記のよう に配合量が設定される。  The hair restorer of the present invention can be used as a dosage form usually used as an external preparation, for example, a lotion, an emulsion, a cream, a tonic, an ointment, a gel, an aerosol, and the like. The dosage form is not limited to these. When used as an aerosol, the amount is set as described above with respect to the stock solution.
なお、 本発明の育毛剤には、 それそれ、 必要に応じ水、 低級アルコール （メタ ノール、 エタノール、 変性エタノール、 イソプロピルアルコール等） 、 溶解補助 剤、 界面活性剤、 乳化安定剤、 ゲル化剤、 粘着剤、 その他、 所望する剤型を得る ために通常使用される基剤成分を配合でき、 使用目的に応じて、 ミノキシジル、 塩化カルプロニゥム等の血管拡張剤、 スピロノラク トン、 フル夕ミ ド、 シプロテ 口ンアセテート、ォキセンドロン等の男性ホルモン受容体阻害剤、 フイナステライ ド、 ェビリステライ ド等のステロイ ド一 5 ひ一レダク夕一ゼ阻害剤、 グリチルレ チン酸、 ァズレン等の抗炎症剤、 酢酸ヒドロコルチゾン、 酢酸デキサメサゾン等 の副腎皮質ホルモン、 尿素、 サリチル酸等の角質溶解剤、 プロピレングリコール、 1 , 3—ブチレングリコ一ル、 マクロゴール、 グリセリン、 ジプロピレングリコ ール、 エタノール、 イソプロパノール等のアルコール類、 グリセリルモノペン夕 デカノエート等の脂肪酸グリセリンエステル、 塩酸イソペンジル、 塩酸ジフェン ヒドラミン等の抗ヒスタミン剤、 グルコン酸クロルへキシジン、 イソプロビルべ チルフエノール、 第 4級アンモニゥム塩、 ヒノキチオール、 ビロクトンオラミン 等の殺菌剤、 ヒアルロン酸ナトリウム、 グリセリン、 コンドロイチン硫酸等の保 湿剤、 ィチイ、 ボタンビ、 カンゾゥ、 オトギリソゥ、 附子、 ビヮ、 力ワラョモギ、 コンフリー、 ァシ夕バ、 サフラン、 サンシン、 ローズマリ一、 セージ、 モッコゥ、 セィモッコゥ、 ホヅプ、 プラセン夕などの動植物の抽出物、 酢酸レチノール、 塩 酸ピリ ドキシン、 ァスコルビン酸、 硝酸チアミン、 シァノコバラミン、 ピオチン、 酢酸トコフエノール等のビタミン類、 ミリスチン酸イソプロピル、 パルチミン酸 イソプロビル、 スクヮラン、 流動パラフィン、 レシチン等の油分、 ポリエキシェ チレンソルビダン脂肪酸エステル、 ソルビダン脂肪酸エステル、 ポリオキシェチ レン脂肪酸エステル、 ポリエキシエチレン硬化ヒマシ油などの界面活性剤、 ジブ チルヒドロキシトルエン、 イソプロビルガレート等の抗酸化剤、 エチレンジアミ ンテトラアセテート等のキレート剤、 メントール、 カンフル等の清涼化剤、 色素、 香料、 経皮吸収促進剤等の成分を本発明の効果を損なわない範囲で配合すること ができる。 The hair restorer of the present invention includes, as necessary, water, lower alcohols (such as methanol, ethanol, denatured ethanol, and isopropyl alcohol), solubilizers, surfactants, emulsion stabilizers, gelling agents, Adhesives and other base ingredients that are commonly used to obtain the desired dosage form can be incorporated. Depending on the purpose of use, vasodilators such as minoxidil and carpronium chloride, spironolactone, fluuramide, and cyprote mouth Androgen inhibitors such as acetate and oxendrone, steroid inhibitors such as finasteride and ebilisteride, anti-inflammatory agents such as glycyrrhetinic acid and azulene, hydrocortisone acetate, dexamethasone acetate, etc. Corticosteroids, keratolytics such as urea, salicylic acid, propylene Recall, 1, 3-butylene glyco Ichiru, macrogol, glycerin, dipropylene glyco Alcohols such as alcohol, ethanol, and isopropanol; glyceryl monopenic acid; fatty acid glycerin esters such as decanoate; antihistamines such as isopendyl hydrochloride; diphene hydrochloride; hydramine; chlorhexidine gluconate; isopropyl butylphenol; quaternary ammonium salts; Fungicides such as hinokitiol and bilocton olamine, moisturizers such as sodium hyaluronate, glycerin, and chondroitin sulfate, yew, buttony, kanzo, otogiriso, shrimp, beetle, potato mugwort, comfrey, ashiyuba, saffron , Sanshin, Rosemary, Sage, Mokko, Simokko, Hop, Placenta, etc., animal and plant extracts, retinol acetate, pyridoxine hydrochloride, ascorbic acid, thiamine nitrate, cyanocoba Vitamins such as butane, piotin, tocophenol acetate, etc., oils such as isopropyl myristate, isoprovir palmitate, squalane, liquid paraffin, lecithin, polyethylene sorbidan fatty acid ester, sorbidan fatty acid ester, polyoxyethylene fatty acid ester, polyethoxyethylene cured castor Surfactants such as oils; antioxidants such as dibutylhydroxytoluene and isopropyl gallate; chelating agents such as ethylenediamintetraacetate; refreshing agents such as menthol and camphor; pigments, fragrances, and percutaneous absorption enhancers Components can be blended within a range that does not impair the effects of the present invention.
また、 適用対象又は必要とされる育毛効果の程度等にも依存するが、 必要であ れば、 本発明の育毛剤は、 上記 A及び Bのタイプの化合物の両方を含んでもよい。 次に、 本発明の育毛物質のスクリーニング方法について記述する。 図 1に関連して既に説明したとおり、 毛乳頭細胞には A B Cトランスポーター と A T P受容体又はアデノシン受容体が発現しており、 これらは相互に密接に関 連して育毛作用を示すものと思われる。 特に、 A B Cトランスポ一夕一に対する 刺激作用を有する化合物については、 この A B C トランスポー夕一に対する刺激 作用を介する A T P受容体またはアデノシン受容体の刺激により、 細胞内カルシ ゥム濃度の上昇を伴って育毛効果を示すのではないかと考えられる。  The hair growth agent of the present invention may contain both the above-mentioned A and B type compounds, if necessary, although it depends on the application target or the required degree of the hair growth effect. Next, the method for screening a hair growth substance of the present invention will be described. As already explained in connection with Fig. 1, the dermal papilla cells express the ABC transporter and the ATP receptor or adenosine receptor, which are considered to be closely related to each other and exhibit a hair-growth effect. It is. In particular, for compounds that have a stimulatory effect on ABC transporter, stimulation of the ATP receptor or adenosine receptor through the stimulatory effect on ABC transporter increases hair growth with an increase in intracellular calcium concentration. It is thought that it shows the effect.
そこで、 毛乳頭細胞を用いて育毛剤のスクリーニングを実施したが、 目的とす る毛乳頭細胞は、 増殖能が極めて悪く、 スクリーニングに必要な細胞数を確保す るには多量の毛組織が必要で、 その実施には多大な労力と費用を要した。 そのた め、 AB C トランスポ一夕一を介して AT P受容体またはアデノシン受容体に作 用して効果を示す物質を見出す簡便な方法の開発が望まれた。 Therefore, we conducted screening of hair growth agents using hair papilla cells. Hair papilla cells have a very low proliferative capacity, require a large amount of hair tissue to secure the number of cells required for screening, and require a great deal of labor and cost. Therefore, it has been desired to develop a simple method for finding a substance that acts on an ATP receptor or an adenosine receptor through the ABC transport system to find an effective substance.
そこで、 本発明者らは鋭意研究の結果、 AB C トランスポーター遺伝子と、 A T P受容体遺伝子またはアデノシン受容体遺伝子を適当な宿主ベクター法による 遺伝子組み替え技術によって遺伝子組み替え細胞とし、 この細胞へのカルシウム の流入を測定することにより育毛物質をスクリーニングする方法を確立し、 本発 明を完成させた。  Therefore, the present inventors have conducted intensive studies and found that the ABC transporter gene and the ATP receptor gene or adenosine receptor gene were transformed into a transgenic cell by a genetic recombination technique using an appropriate host vector method, and calcium was transferred to this cell. The present invention was completed by establishing a method for screening hair growth substances by measuring influx.
即ち、 本発明の育毛物質のスクリーニング方法は、 AB C トランスポー夕一遺 伝子およびプリン誘導体に対する受容体遺伝子を宿主ベクター法によって発現さ せた細胞を使用し、 細胞内へのカルシウムの流入を指標とすることを特徴とする。 上記したとおり、 AB C トランスポーターは、 細胞内の AT Pの細胞外への放 出を引き起こす作用を有する類似タンパクの総称であり、 タンパクとしては、 い わゆる AB Cタンパクスーパ一フアミリーを構成する一部で、 A TPバインディ ングカセッ ト、 AT P結合タンパク、 AB C結合トランスポー夕一または AB C タンパクとも呼ばれている。 AB Cトランスポー夕一としては、 例えば、 MDR (P糖夕ンノ ク質ヽ multidrug resistance protein) 、 MRP (腿 - related pr otem) 、 C F T (cyctic fibrosis transmembrane conductance regulator) 、 S UR (スルホニルゥレア受容体） などが挙げられる。 中でも、 本発明に用いら れる AT P結合トランスポー夕一遺伝子としては特にスルホニルゥレア受容体遺 伝子 （以下 SUR遺伝子ともいう） が好ましい。  That is, the method for screening a hair-growth substance of the present invention uses a cell in which a receptor gene for the ABC transport protein and a purine derivative is expressed by a host vector method, and detects calcium influx into the cell. It is characterized as an index. As described above, the ABC transporter is a generic name for similar proteins that have the effect of causing the release of intracellular ATP outside the cell, and as a protein, constitutes the so-called ABC protein superfamily. Some are also referred to as ATP binding cassettes, ATP binding proteins, ABC binding transports or ABC proteins. Examples of the ABCC transport include MDR (P-sugar protein multidrug resistance protein), MRP (thigh-related protem), CFT (cyctic fibrosis transmembrane conductance regulator), S UR (sulfonylurea receptor) Body) and the like. Among them, the ATP binding transporter gene used in the present invention is particularly preferably a sulfonylprea receptor gene (hereinafter also referred to as SUR gene).
スルホニル受容体遺伝子は、 すでに知られている SUR遺伝子配列の情報、 例えば Y.Tokuyamaら、 Biochemical and Biophysical Research Communications, ύ20, p.532-538 ( 1996 )に記載されたハムス夕一 SUR遺伝子配列の情報を元に該配列から 作成した適当なプローブを用いて、 周知の PCR法や cDNAライブラリ一からのハイ ブリダィゼーシヨン法などにより得られることができる。 また、 ラットの SURcDN A配列も知られている （GenBank Accession No.L40624) 。 ハムスター SUR遺伝子導 入に関しては、 Aguilar-Bryanら、 Science, vol.268, p.423 (1995)に記載されて いる。 ラッ ト、 マウス SURのアミノ酸配列については、 稲垣ら、 「スルホニル尿素 受容体」 （生化学第 6 9卷、 第 9号、 1067頁、 1 9 97年） に記載されている。 上記アデノシン誘導体に対する受容体遺伝子としては、 プリン受容体遺伝子ま たはアデノシン受容体遺伝子が挙げられる。 The sulfonyl receptor gene is known from SUR gene sequence information already known, for example, the Hamus Yuichi SUR gene sequence described in Y. Tokuyama et al., Biochemical and Biophysical Research Communications, ύ20, p.532-538 (1996). It can be obtained by a well-known PCR method or a hybridization method from a cDNA library using a suitable probe prepared from the sequence based on the information. The rat SUR cDNA sequence is also known (GenBank Accession No. L40624). The hamster SUR gene transfer is described in Aguilar-Bryan et al., Science, vol. 268, p. 423 (1995). I have. The amino acid sequence of rat and mouse SUR is described in Inagaki et al., "Sulfonylurea Receptor" (Biochemistry Vol. 69, No. 9, p. 1067, 1997). Examples of the receptor gene for the adenosine derivative include a purine receptor gene and an adenosine receptor gene.
アデノシン受容体遺伝子としては、 すでにヒトの cDNA遺伝子配列が知られてい る （GenBank Accession No.X68485) 。 あるいはスルホニル受容体遺伝子と同様に、 周知の PCR法または cDNAライブラリーからのハイプリダイゼ一ション法などにより 得られることができる。  As the adenosine receptor gene, the human cDNA gene sequence is already known (GenBank Accession No. X68485). Alternatively, similarly to the sulfonyl receptor gene, it can be obtained by a well-known PCR method or a hybridization method from a cDNA library.
AT P受容体遺伝子についても、 ヒ卜の cDNA遺伝子配列が知られている (GenBank Accession No.X83688) 。  The human cDNA gene sequence is also known for the ATP receptor gene (GenBank Accession No. X83688).
これらの遺伝子の種に関しては特に制限はなく、 例えば、 ヒ卜、 ラッ ト、 マウ ス、 ハムスター由来のものが挙げられる。  There are no particular limitations on the species of these genes, and examples include those derived from humans, rats, mice, and hamsters.
これらの遺伝子をクローン化する方法としては、 例えば、 Sambrookら， Molecu lar Biology: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York 1989等に記載された一般的な方法を用いることができる。  As a method for cloning these genes, for example, a general method described in Sambrook et al., Molecular Biology: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York 1989, etc. can be used. .
上記 AB Cトランスポー夕一遺伝子またはプリン誘導体に対する受容体遺伝子 としては、 形質転換後に形質転換細胞内で A B Cトランスポーターまたはプリン 誘導体に対する受容体として機能する範囲で、 遺伝子配列の内部または末端の一 部が、 挿入、 置換あるいは削除されたものも含む。  As the receptor gene for the ABC transporter gene or purine derivative, a part of the gene sequence inside or at the end within a range that functions as a receptor for ABC transporter or purine derivative in transformed cells after transformation. But also includes those that have been inserted, replaced, or deleted.
また、 本発明に用いられる宿主としては導入した遺伝子が効率よく発現され、 培養が容易なものであれば特に限定されないが、 ェシェリヒア属菌である Escher ichia coliの各種菌株、 バチルス属菌種である Bacillus subtilisの各種菌株、 酵 母としては Saccharomyces cerevisiaeの各種菌株、 動物細胞としては C 0 S— 7 細胞、 CHO細胞、 PC 12細胞、 N I H3 T 3細胞、 NRK細胞、 CV— 1細 胞、 CO S— 1細胞等が好ましい。  The host used in the present invention is not particularly limited as long as the introduced gene is efficiently expressed and cultivation is easy.Various strains of Escherichia coli which is a genus Escherichia and Bacillus spp. Various strains of Bacillus subtilis, various strains of Saccharomyces cerevisiae as yeast, C0S-7 cells, CHO cells, PC12 cells, NIH3T3 cells, NRK cells, CV-1 cells as animal cells, CO S-1 cells and the like are preferred.
ベクタ一としては、調製が容易で効率よく導入できるものであれば特に限定され ないが、 大腸菌由来のプラスミ ド （例 ： pBR 322、 pUC 1 18など） 、 枯 草菌由来のプラスミ ド （例： pUB 1 10、 p C 194など） 、 酵母由来のブラ スミ ド （例 ： pSH 19など） 、 さらにパクテリオファージゃレトロウィルスや ワクシニアウィルス等の動物ウィルス等が好ましい。 さらに、 該当遺伝子を発現 させるために、 遺伝子の上流に適当な発現プロモーターを接続する。 使用するブ 口モータ—は、 宿主に応じて選択すればよい。 例えば、 宿主が大腸菌である場合 には、 T7プロモーター、 l acプロモータ一、 t rpプロモーター、 ァ PLプ 口モー夕一などが、 宿主がバチルス属菌である場合には S P 0系プロモ一夕一等 が、 宿主が酵母である場合には P HOプロモータ一、 GAPプロモーター、 AD Hプロモーター等が、 宿主が動物細胞である場合には SV40由来プロモ一夕一、 レ トロウイルスプロモ一夕一等が、 それそれ使用できる。 The vector is not particularly limited as long as it is easy to prepare and can be efficiently introduced. Plasmids derived from Escherichia coli (eg, pBR322, pUC118, etc.) and plasmids derived from Bacillus subtilis (eg, pUB110, pC194, etc.), yeast derived plasmids (eg, pSH19, etc.) Animal viruses such as vaccinia virus are preferred. In addition, an appropriate expression promoter is connected upstream of the gene to express the gene. The mouth motor to be used may be selected according to the host. For example, when the host is Escherichia coli, the T7 promoter, the lac promoter, the trp promoter, the aPL promoter, and the SP0 promoter are used when the host is Bacillus. When the host is yeast, the PHO promoter, GAP promoter, ADH promoter, etc., and when the host is an animal cell, SV40-derived promoter, retrovirus promoter, etc. , It can use it.
形質転換は、 DNAが、 染色体外要素として、 あるいは染色体組み込みにより DN Aが複製可能となるように、 DN Aを生体内に導入することを意味する。 上記組み替えベクターを用いて宿主細胞を形質転換する方法としては、 各宿主 細胞に対して一般に用いられる形質転換方法、 例えば塩化カルシウムを使用する カルシウム処理、 リン酸カルシウム法によるトランスフエクシヨン、 エレクト口 ポレーシヨン、 またはリポフエクシヨンなどが適用できる （Sambrookら， Molecu lar Biology: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York 1989など） 。  Transformation means introducing DNA into an organism such that the DNA becomes replicable as an extrachromosomal element or by chromosomal integration. Methods for transforming host cells using the above-described recombinant vector include transformation methods generally used for each host cell, for example, calcium treatment using calcium chloride, transfection by calcium phosphate method, electoporation, or Lipophexion and the like can be applied (Sambrook et al., Molecular Biology: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York 1989, etc.).
こうして得られた形質転換細胞を適当な選択培地で培養してスクリーニングに 供する。 このスクリーニングのための培養は、 細胞をカバ一グラス上で培養して 供することが好ましい。 例えば、 形質転換細胞を細胞濃度 3 X 107/mLとなる ように培地に懸濁し、 適量をカバ一グラス上に載せ、 24〜48時間程度、 約 3 7 °Cで培養する。 The transformed cells thus obtained are cultured in an appropriate selection medium and used for screening. The culture for this screening is preferably performed by culturing the cells on a cover glass. For example, the transformed cells are suspended in a medium at a cell concentration of 3 × 10 7 / mL, an appropriate amount is placed on a cover glass, and cultured at about 37 ° C. for about 24 to 48 hours.
スクリーニングの方法としては、 培養細胞に、 被験物質溶液を添加し、 細胞内 へのカルシウムの流入量を測定することにより行う。  As a screening method, a test substance solution is added to the cultured cells, and the amount of calcium flowing into the cells is measured.
細胞内カルシウム濃度測定法としては、 カルシウムキレート剤でありカルシゥ ム結合量に応じてその蛍光特性が変化する周知の蛍光カルシウム指示薬、 例えば f u r a- 2, f ura - 2— AM、 indo— 1、 quin2、 f luo - 3、 r ho d— 2などを用いることができるが、 なかでも： f u r a— 2— AM (l-(2 -(5， -カルボキシォキサゾ一ル- 2， -ィル） -6-アミノベンゾフラン- 5-ォキシ）-2-(2 ，-アミノ -5，-メチルフエノキシ） -ェタン- Ν,Ν,Ν，，Ν，-テトラァセチックァシッ ドぺ ン夕ァセトキシメチルエステル、 和光純薬 （東京） ） を使用した蛍光強度法を用 いることが好ましい （唐木、 実験医学、 7 (6) 、 626 (1989) ) 。 As a method for measuring the intracellular calcium concentration, a well-known fluorescent calcium indicator which is a calcium chelating agent and whose fluorescent property changes depending on the amount of calcium binding, such as fura-2, fura-2-AM, indo-1, quin2, fluo-3, rhod-2, etc. can be used, but among them: fura-2-AM (l- (2--(5, -carboxoxazoyl-2, -yl ) -6-Aminobenzofuran-5-oxy) -2- (2, -amino-5, -methylphenoxy) -ethane-Ν, Ν, Ν ,, Ν, -tetraacetic acid ァ It is preferable to use the fluorescence intensity method using N-acetoxymethyl ester and Wako Pure Chemical (Tokyo) (Karaki, Experimental Medicine, 7 (6), 626 (1989)).
例えば、 1〜20 /1111の 111¾ &ー2—八1^を20~40分間口一ドし、 夕イロ一ド液 （135mM NaCl， 5. 6mM KC 1, 1. 2 mM MgSO 2. 2mM C a C 1 l OmMグルコース， 20mM H E P E S ( [4-(2-ヒ ドロキシェチル） -卜ビペラジン]エタンスルホン酸）/ N aOH (pH 7. 4) ) にて洗浄した後、 細胞内カルシウム濃度の指標として 340 nmおよび 380 η mの蛍光強度の比を求める。 これには、 例えばカバ一ガラスを循環定温チャンバ —付蛍光測定装置 （ARGUS-50、 浜松フォ トニクス社、 浜松） を用いることが できる。 産業上の利用可能性 For example, 1 11120/1111 of 111 ¾ & -2-111 ^ is vortexed for 20 to 40 minutes, and the mixture is diluted with evening solution (135 mM NaCl, 5.6 mM KC 1, 1.2 mM MgSO 2.2 mM After washing with C a C 1 l OmM glucose, 20 mM HEPES ([4- (2-hydroxyxethyl) -tobiperazine] ethanesulfonic acid) / NaOH (pH 7.4), an index of intracellular calcium concentration To determine the ratio of the fluorescence intensities at 340 nm and 380 ηm. For this, for example, a fluorescence measuring device (ARGUS-50, Hamamatsu Photonics, Hamamatsu) with a constant temperature chamber circulating a cover glass can be used. Industrial applicability
本発明により、 従来の育毛剤よりも高い育毛効果を有する育毛剤を提供するこ とが可能である。  According to the present invention, it is possible to provide a hair restorer having a higher hair restorer effect than conventional hair restorers.
特に、 本発明の育毛剤は、 例えば、 ATP、 ATP誘導体、 アデノシン、 アデ ノシン誘導体等を細胞から放出させて、 A TP受容体及び/又はアデノシン受容 体を刺激して、 育毛効果を発揮するという新規な作用機構に基づいており、 顕著 な育毛効果を奏するものである。  In particular, the hair restorer of the present invention exerts a hair restorer effect by, for example, releasing ATP, ATP derivative, adenosine, adenosine derivative and the like from cells and stimulating ATP receptor and / or adenosine receptor. It is based on a novel mechanism of action and has a remarkable hair-growth effect.
なお、 ATP受容体刺激作用を有する化合物を有効成分とする育毛剤では、 当 該化合物としてアデノシン一 5， 一ジリン酸誘導体又はアデノシン一 5， 一トリ リン酸誘導体を用いた場合に、 特に高い育毛効果を得ることができる。  In the case of a hair restorer containing a compound having an ATP receptor stimulating action as an active ingredient, a particularly high hair restorer can be obtained when an adenosine 15-monophosphate derivative or an adenosine 15-monophosphate derivative is used as the compound. The effect can be obtained.
また、 本発明により、 AB Cトランスポー夕一への刺激作用を介するプリン受 容体刺激作用、 すなわち A TP受容体及び/又はアデノシン受容体刺激作用、 に より、 育毛効果を発揮するという新規な作用機構を有する育毛作用物質のスクリ 一二ングを、 容易に行うことが可能である。 実施例 次に、 製剤例及び試験例 （実施例及び比較例） を挙げて本発明を更に詳細に説明 する。 育毛剤 Further, according to the present invention, a novel action of exerting a hair-growth effect by a purine receptor stimulating action through a stimulating action on ABC transport, that is, an ATP receptor and / or adenosine receptor stimulating action. It is possible to easily screen a hair-growth substance having a mechanism. Examples Next, the present invention will be described in more detail with reference to Formulation Examples and Test Examples (Examples and Comparative Examples). Hair restorer
製剤例 1 (外用ローション剤） ： Formulation Example 1 (External lotion):
(成分） 配合量 (W/ ) (Components) Compounding amount (W /)
2- [P- ( 2-カルホ、、キシェチル )フェニル Iチルァミノ ) 0 . 5 2- [P- (2-carbo, xyshetyl) phenyl I-tylamino) 0.5
-5， -N-Iチルカルホ、、キサミドアテ、、ノシン -5, -N-I tilcalho, kisamidoate, nosin
プロピレングリコール 1 0 . 0 ェ夕ノ一ル 5 0 . 0 精製水 全 1 0 0 m ] Propylene glycol 10.0 Ethanol 50.0 Purified water 100 m in total]
上記成分を撹拌し、 均一に溶解させ外用ローション剤を調製した, 製剤例 2 (外用クリーム剤） ：  The above ingredients were stirred and uniformly dissolved to prepare a lotion for external use, Formulation Example 2 (cream for external use):
(成分） 配合量 (W/W5 アデノシン 1 0 中鎖脂肪酸トリグリセリ ド 1 8 0 ミ リスチン酸ィソプロピル 1 0  (Components) Compounding amount (W / W5 Adenosine 10 Medium-chain fatty acid triglyceride 18 0 Isopropyl myristate 10
2—へキシルドデカノール 4 0 ポリオキシエチレン （ 2 0 ) ソルビ夕ンモノステアレ 5 0 ソルビ夕ンモノステアレート 3 0 グリセリンモノステアレート 6 0 セタノ一ル 0 ステアリルアルコール 2 0 プロビレングリコール 5 0 2-Hexyl decanol 4 0 Polyoxyethylene (20) Sorbiane monostearate 5 0 Sorbiane monostearate 3 0 Glycerin monostearate 6 0 Cetanol 1 Stearyl alcohol 2 0 Provylene glycol 5 0
P—ァミノ安息香酸メチル 0 0 5 P-Amino methyl benzoate 0 0 5
P—ァミノ安息香酸プロビル 0 0 5 精製水 全 100 g 上記成分について、 乳化剤の通常の製法に準じて外用クリーム剤を調製した < 製剤例 3 (外用ゲル剤） ： P-Amino benzoate 0 0 5 Purified water A total of 100 g. For the above ingredients, an external cream was prepared according to the usual method for preparing an emulsifier. <Formulation Example 3 (External gel):
(成分） 配合量 (w/w%)  (Component) Amount (w / w%)
N 6 - (L— 2—フエニルイソプロビル） アデノシン 0. 5  N 6-(L-2-phenylisopropyl) adenosine 0.5
ポリエチレングリコール （ 10) モノステアレート 1. 0 Polyethylene glycol (10) Monostearate 1.0
1， 3—ブチレングリコール 7. 0  1,3-butylene glycol 7.0
カルボキシビニルポリマ一 1. 5 Carboxyvinyl polymer 1.5
ジイソプロパノールアミン Diisopropanolamine
ェ夕ノ一ル 40. 0 夕 40. 0
精製水 全 100 g 100 g of purified water
上記成分について、 ゲル剤の通常の製法に準じて外用ゲル剤を調製した。 製剤例 4 (エアゾール剤）  For the above components, a gel for external use was prepared according to the usual method for producing a gel. Formulation Example 4 (Aerosol)
(成分） 配合 1(W/W¾) ピナシジル 0 ， 1  (Ingredients) Formulation 1 (W / W¾) Pinacidil 0, 1
ポリオキシエチレン （20) ソルビ夕ンモノステアレ- -卜 1 . 0 Polyoxyethylene (20) Sorbi monostearate 1.0
グリセリン 3 . 0 Glycerin 3.0
ェ夕ノ一ル 20 . 0 20.0
精製水 1 5 . 0 Purified water 15.0
イソペンタン 1 0 . 0 Isopentane 10.0
液化石油ガス 3 . 0 Liquefied petroleum gas 3.0
ジメチルェ一テル 48 . 0 Dimethyl ether 48.0
上記成分について、 エアゾール剤の通常の製法に準じて外用エアゾール剤を調 製した。 試験例：  For the above components, an external aerosol was prepared according to the usual method for producing an aerosol. Test example:
実施例 1〜 1 5 (表 1及び表 2) の育毛剤の発毛試験を C 3H/HeNCr J マウスを用い行った。 試験法はマウスを 1群 1 0匹とし、 実施例 1〜 1 5、 比較 例 1及び 2、 並びに、 無投与群の 1 7群に分け、 マウスの背部をパリカンおよび 力ミソリにて剃毛し、 それそれのサンプルを 1曰 1回、 剃毛した背部 8平方 c m 当たり 1 0 0 Lずつ塗布した。 実施例 1〜1 5、 比較例 1及び 2の育毛剤は製 剤例 1と同様に、 表 1及び表 2に示す各成分を全体が均一な状態となるまで攪拌 して調製した。 実施例 1〜 1 5の育毛剤及び比較例 1、 2の育毛剤の投与群、 並 びに無投与群の塗布面積に対する毛の再生面積 （ 1 5日後） を表 3及び表 4に示 す。 The hair growth test of the hair growth agents of Examples 1 to 15 (Tables 1 and 2) was performed using C 3H / HeNCr J This was performed using mice. The test method consisted of 10 mice per group, divided into Examples 1 to 15, Comparative Examples 1 and 2, and 17 groups of no-administration group, and the back of the mouse was shaved with a palycan and a power razor. Each sample was applied once, 100 L per 8 cm 2 of shaved back. The hair restorers of Examples 1 to 15 and Comparative Examples 1 and 2 were prepared by stirring the components shown in Tables 1 and 2 until the whole was uniform as in Formulation Example 1. Tables 3 and 4 show the hair regenerating area (after 15 days) with respect to the applied area of the hair-growing agents of Examples 1 to 15 and the hair-growing agents of Comparative Examples 1 and 2, and the non-administered group.
成 分 名 実施例 1 実施例 2 実施例 3 実施例 4 実施例 5 実施例 6 実施例 7 比較例 1 化合物 1 1 S Component name Example 1 Example 2 Example 3 Example 4 Example 5 Example 6 Example 7 Comparative example 1 Compound 11 S
化合物 2 1 g Compound 2 1 g
化合物 3 1 g Compound 3 1 g
化合物 4 1 g Compound 4 1 g
化合物 5 1 g Compound 5 1 g
化合物 6 1 Compound 6 1
化合物 7 1 g Compound 7 1 g
フ。ロ レンク"リコール 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g エタ ノール 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g 精製水 全 1 0 0 raL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 O mL 全 1 0 0 mL 化合物 1 : N 6—シクロへキシルアデノシン H. Lorenk "recall 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g ethanol 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 5 0 g Purified water Total 1 0 0 raL Total 1 0 0 mL Total 1 0 0 mL Total 1 0 0 mL Total 1 0 0 mL Total 1 0 0 mL Total 1 0 0 mL Total 1 0 0 mL Compound 1: N 6-cyclohexyl adenosine
化合物 2 ： 2 —クロ口一 N 6 —シクロペンチルアデノシン  Compound 2: 2-N-cyclopentyl adenosine
化合物 3 ： 5 ' N—エヂルカルポキサミ ドアデノシン  Compound 3: 5 'N-Delcarpoxamide adenosine
化合物 4 ： アデノシン一 5 ' —モノリン酸  Compound 4: Adenosine mono 5'-monophosphate
化合物 5 ： アデノシン一 5 ' —モノ リン酸メチルエステル  Compound 5: Adenosine mono 5'-monophosphate methyl ester
化合物 6 ： N 6—メチルアデノシン一 5 ' —モノ リ ン酸  Compound 6: N 6-methyladenosine 1'-monophosphate
化合物 7 ： 8—ブチルアミノアデノシン Compound 7: 8-butylaminoadenosine
成 分 名 実施例 8 実施例 9 実施例 10 実施例 11 実施例 12 実施例 13 実施例 14 実施例 15 比較例 2 化合物 8 1 g Component name Example 8 Example 9 Example 10 Example 11 Example 12 Example 13 Example 14 Example 15 Comparative example 2 Compound 8 1 g
化合物 9 1 Compound 9 1
化合物 1 0 1 Compound 1 0 1
化合物 1 1 1 g Compound 1 1 1 g
化合物 1 2 1 Compound 1 2 1
化合物 13 1 g Compound 13 1 g
化合物 14 1 to 化合物 1 5 1 Compound 14 1 to Compound 1 5 1
フ °ロヒ。レンク"リコ-ル 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g エタノール 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 精製水 全 100 mL 全 1 00 mL 全 1 00 raL 全 1 00 mL 全 1 00 mL 全 1 0 0 mL 全 1 00 mL 全 1 00 mL 全 1 00 mL 化合物 8 ： N 6—シクロへキシル一 2 ' —0—メチルアデノシン Frohi. Lenk® Recol 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g Ethanol 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g Purified water Total 100 mL Total 100 mL Total 100 raL Total 100 mL Total 100 mL Total 100 mL Total 100 mL Total 100 mL Total 100 mL Compound 8: N 6-cyclohexyl mono 2'—0-methyladenosine
化合物 9 ： R—フエニルイソプロピルアデノシン  Compound 9: R-phenylisopropyladenosine
化合物 1 0 ： 2— [p— ( 2—カルボキシェチル） フエニルェチルァミノ ]一 5' —N—ェチルカルポキサミ ドアデノシン  Compound 10: 2— [p— (2-carboxyethyl) phenylethylamino] -1 5′—N-ethylcarpoxamide adenosine
化合物 1 1 ： 2—フヱニルアミノアデノシン  Compound 11: 2-Phenylaminoadenosine
化合物 12 ： 2—クロロー N 6— （3—ョードベンジル） アデノシン一 5 N—メチルゥロナミ ド  Compound 12: 2-chloro-N6- (3-iodobenzyl) adenosine-5N-methylperonamide
化合物 13 ： ジピリダモール  Compound 13: dipyridamole
化合物 14 :エリス口一 9— (2—ハイ ド口キシ— 3—ノニル） アデニン  Compound 14: Ellis mouth 9- (2-Hide mouth xy-3-nonyl) adenine
化合物 1 5 : 2—ォクチニルアデノシン Compound 15: 2-octynyl adenosine
JP /00694 JP / 00694
28  28
表 3  Table 3
Figure imgf000030_0001
Figure imgf000030_0001
表 4 Table 4
Figure imgf000030_0002
Figure imgf000030_0002
表 1乃至表 4の結果から明らかなように、 本発明の育毛剤は毛の再生に関して 高い効果を有する。 As is clear from the results in Tables 1 to 4, the hair restorer of the present invention has a high effect on hair regeneration.
製剤例 5 (外用ローション剤） ： Formulation Example 5 (External lotion):
(成分） 配合量 (W/V50 ひ、 /?—メチレンアデノシン一 5， 一 ト リ リン酸 0. 5 プロビレングリコール 1 0 . 0 エタノール 5 0 . 0 精製水 全 1 0 0 m ] (Ingredients) Compounding amount (W / V50, /?-Methylene adenosine 1.5, monotriphosphoric acid 0.5 Provylene glycol 10.0 ethanol 50.0 purified water total 100 m]
上記成分を撹拌し、 均一に溶解させ外用ローション剤を調製した 製剤例 6 (外用クリーム剤） ：  Formulation Example 6 (External cream) in which the above components were stirred and uniformly dissolved to prepare an external lotion.
(成分） 配合量 (W/W¾) (Components) Compounding amount (W / W¾)
2ーメチルチオアデノシン一 5 一トリリン酸 1 0 中鎖脂肪酸トリグリセリ ド 2 0 0 ミ リスチン酸ィソプロピル 1 0 2-Methylthioadenosine 1-5 Tritriphosphoric acid 10 0 Medium-chain fatty acid triglyceride 200 0 Isopropyl myristate 1 0
2—へキシルドデカノール 4 0 ポリオキシエチレン （ 2 0 ) ソルビ夕ンモノステアレート 5 0 ソルビ夕ンモノステアレート 3 0 グリセリンモノステアレート 6 0 セ夕ノール 1 0 ステアリルアルコール 2 0 プロピレングリコール 1 5 0 2-Hexyl decanol 4 0 Polyoxyethylene (20) Sorbiane monostearate 5 0 Sorbiane monostearate 3 0 Glycerin monostearate 6 0 Senoyl 1 0 Stearyl alcohol 2 0 Propylene glycol 1 5 0
P—ァミノ安息香酸メチル 0 0 5 P—ァミノ安息香酸プロビル 0 0 5 精製水 全 1 0 0 g Methyl P-aminobenzoate 0 0 5 P-aminopropyl benzoate 0 0 5 Purified water Total 100 g
上記成分について、 乳化剤の通常の製法に準じて外用クリーム剤を調製した 製剤例 7 (外用ゲル剤） ：  Formulation Example 7 (External gel): A cream for external use was prepared from the above ingredients according to the usual method for producing an emulsifier.
(成分） 配合量 (W/W%) (Component) Compounding amount (W / W%)
2， —ベンゾィルアデノシン— 5， 一ジリン酸 5 . 0 2, -Benzoyl adenosine- 5 , monodiphosphate 5.0
ボリエチレングリコール （ 1 0 ) モノステアレート 1 . 0 Polyethylene glycol (10) monostearate 1.0
1， 3—ブチレングリコール 7 . 0  1,3-butylene glycol 7.0
カルボキシビ二ルポリマ一 1 . 5 Carboxyvinyl polymer 1.5
ジィソプロパノールアミン エタノール 40. 0 Disopropanolamine Ethanol 40.0
精製水 全 100 g 100 g of purified water
上記成分について、 ゲル剤の通常の製法に準じて外用ゲル剤を調製した, 製剤例 8 (エアゾール剤） ：  For the above ingredients, a gel for external use was prepared according to the usual manufacturing method for gels, Formulation Example 8 (aerosol):
(成分） 配合量 (W/W¾)  (Components) Compounding amount (W / W¾)
3， 一ベンゾィルアデノシン一 5， 一ジリン酸 0 1  3, 1-benzoyl adenosine 1, 5-diphosphoric acid 0 1
ポリオキシエチレン （20) ソルビ夕ンモノステアレート 1 0 Polyoxyethylene (20) Sorbine monostearate 10
グリセリン 3 0 Glycerin 3 0
ェ夕ノール 20 0 夕 ノ ー ル ノ ー ル 20 0
精製水 15 0 Purified water 150
イソペンタン 10 0 Isopentane 10 0
液化石油ガス 3 0 Liquefied petroleum gas 3 0
ジメチルエーテル 48 0 Dimethyl ether 48 0
上記成分について、 エアゾール剤の通常の製法に準じて外用エアゾール剤を調 製した。 製剤例 9 (外用ローション剤） ：  For the above components, an external aerosol was prepared according to the usual method for producing an aerosol. Formulation Example 9 (External lotion):
(成分） 配合量 (W/V5 アデノシン一 5， 一トリ リン酸メチル 0. 01 プロビレングリコール 10. 0 ェ夕ノ一ル 50. 0 精製水 全 100 ml 試験例：  (Ingredients) Compounding amount (W / V5 Adenosine 1.5, methyl monotriphosphate 0.01 Pyrylene glycol 10.0 Ethanol 50.0 Purified water Total 100 ml Test example:
実施例 16〜22 (表 5) の育毛剤の発毛試験を〇311/；« 6 〇 1-«7マゥス を用い行った。 試験法はマウスを 1群 10匹とし、 実施例 16~22の育毛剤投 与群、 比較例 3の育毛剤投与群及び無投与群の 9群に分け、 マウスの背部をバリ カンおよび力ミソリにて剃毛し、 それそれのサンプルを 1日 1回、 剃毛した背部 8平方 c m当たり 1 0 0 Lずつ塗布した。 実施例 1 6〜2 2及び比較例 3の育 毛剤は、 製剤例 5と同様に、 表 5に示す各成分を全体が均一な状態となるまで攪 拌して調製した。 実施例 1 6〜2 2の育毛剤及び比較例 3の育毛剤の投与群並び に無投与群の塗布面積に対する毛の再生面積 （ 1 5曰後） を表 6に示す。 The hair growth tests of the hair restorers of Examples 16 to 22 (Table 5) were carried out using # 311 /; The test method consisted of 10 mice per group, divided into 9 groups: the hair restorer-administered group of Examples 16 to 22, the hair restorer-administered group of Comparative Example 3, and the non-administered group. Shaved on the back, shaved samples once a day 100 L was applied every 8 square cm. The hair restorers of Examples 16 to 22 and Comparative Example 3 were prepared by stirring each component shown in Table 5 until the whole was uniform, as in Formulation Example 5. Table 6 shows the hair regenerating area (after 15) with respect to the application area of the administration groups of the hair restorers of Examples 16 to 22 and the hair restorer of Comparative Example 3 and the non-administration group.
成 分 名 実施例 1 6 実施例 1 Ί 実施例 18 実施例 1 9 実施例 20 実施例 2 1 実施例 22 比較例 3 Component name Example 16 Example 1 Ί Example 18 Example 19 Example 20 Example 21 Example 22 Comparative example 3
化合物 1 6 1 Compound 1 6 1
化合物 1 7 1 g Compound 17 1 1 g
化合物 1 8 1 Compound 1 8 1
化合物 1 9 1 s Compound 19 1 s
化合物 20 1 g Compound 20 1 g
化合物 2 1 1 g Compound 2 1 1 g
化合物 22 1 g Compound 22 1 g
7°ロ レンク"リコ-ル 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g エタノール 50 g 50 g 50 g 5 0 g 50 g 50 g 50 g 50 g 精製水 全 1 00 mL 全 1 00 mL 全 1 00 raL 全 100 mL 全 1 00 mL 全 1 00 mL 全 1 00 mL 全 100 mL 化合物 1 6 : ひ、 <5—メチレンアデノシン一 5 ' — ト リ リ ン酸  7 ° lorenk “Rekor” 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g Ethanol 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g Purified water Total 100 mL Total 1 00 mL total 100 raL total 100 mL total 100 mL total 100 mL total 100 mL total 100 mL Compound 16: HI, <5—methylene adenosine 1 5'-trilinic acid
化合物 1 7 : 2—メチルチオアデノシン一 5 ' — ト リ リン酸  Compound 17: 2-Methylthioadenosine 1 5'-triphosphate
化合物 1 8 : 2 ' —ベンゾィルアデノシン一 5 ' — ト リ リン酸  Compound 18: 2'-Benzoyladenosine 1'-triphosphate
化合物 19 : 3' —ベンゾィルアデノシン一 5 ' —ジリ ン酸  Compound 19: 3'-benzoyl adenosine 1 5'-dilonic acid
化合物 20 ： アデノシン一 5 ' —ジリ ン酸メチル  Compound 20: Adenosine mono 5'-methyl diphosphate
化合物 2 1 ： アデノシン一 5 ' —ジリ ン酸  Compound 21: adenosine mono-5'-diphosphate
化合物 22 ： アデノシン一 5 ' — ト リ リ ン酸  Compound 22: Adenosine 5'-trilinic acid
≠ 5 表 6 ≠ 5 Table 6
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Figure imgf000035_0001
表 5及び表 6の結果から明らかなように、 本発明の育毛剤は毛の再生に関して 高い効果を有する。 また、 本発明の化合物群の中では、 アデノシン— 5 ' —ジリ ン酸 （実施例 2 1 ) 又はアデノシン— 5， —トリリン酸（実施例 2 2 ) と比べて、 それらの誘導体の方がより高い育毛効果を有することが明らかとなった。 As is clear from the results in Tables 5 and 6, the hair restorer of the present invention has a high effect on hair regeneration. In addition, in the compound group of the present invention, their derivatives are more effective than adenosine-5'-diphosphate (Example 21) or adenosine-5, -triphosphate (Example 22). It became clear that it had a high hair growth effect.
製剤例 1 0 (外用クリーム剤） Formulation Example 10 (External cream)
(成分） 配合量 (W/W¾) クロマカリム 1 0  (Components) Compounding amount (W / W¾) Cromakalim 1 0
中鎖脂肪酸トリグリセリ ド 1 8 0 Medium-chain triglycerides 1 8 0
ミ リスチン酸ィソプロビル 1 0 Isoprovir myristate 1 0
2—へキシルドデカノ一ル 4 0  2—hexyldecanol 4 0
ポリオキシエチレン （ 2 0 ) ソルビ夕ンモノステアレ一ト 5 0 Polyoxyethylene (20) Sorbine Monostearate 50
ソルビタンモノステアレート 3 0 Sorbitan monostearate 3 0
グリセリンモノステアレート 6 0 Glycerin monostearate 6 0
セ夕ノール 1 0 SEUNO NORD 1 0
ステアリルアルコール 2 0 Stearyl alcohol 2 0
プロピレングリコール 1 5 0 p—ァミノ安息香酸メチル 0. 05 Propylene glycol 1 5 0 p-Methyl methyl benzoate 0.05
P—ァミノ安息香酸プロビル 0. 05 精製水 全 100 g  P-Amino benzoate provyl 0. 05 Purified water Total 100 g
上記成分について、 乳化剤の製法に準じ、 外用クリーム剤を調製した, 製剤例 1 1 (外用ゲル剤）  For the above ingredients, a cream for external use was prepared according to the method of emulsifier, Formulation Example 1 1 (gel for external use)
(成分） 配合量 (W/W%)  (Component) Compounding amount (W / W%)
MgATP 1. 0 MgATP 1.0
ポリエチレングリコール （ 10) モノステアレート 1. 0 Polyethylene glycol (10) Monostearate 1.0
1 , 3—ブチレングリコール 7. 0  1, 3-butylene glycol 7.0
カルボキシビニルポリマ一 1 - 5 Carboxyvinyl polymer 1-5
ジィソプロパノールアミン Disopropanolamine
エタノール 40. 0 Ethanol 40.0
精製水 全 1 00 g 100 g purified water
上記成分について、 ゲル剤の製法に準じ、 外用ゲル剤を調製した, 製剤例 12 (エアゾール剤）  For the above ingredients, a gel for external use was prepared according to the gel preparation method, Formulation Example 12 (aerosol)
(成分） 配合量 (W/W5  (Components) Compounding amount (W / W5
ォレオイル一 C oA 0. 5 Ole oil one CoA 0.5
ポリオキシエチレン （20) ソルビ夕ンモノステアレ 卜 1 0 Polyoxyethylene (20) Sorbi monostearate 1 0
グリセリン 3 0 Glycerin 3 0
ェ夕ノ一ル 20 0 夕 夕 20 0
精製水 1 5 0 Purified water 1 5 0
イソペンタン 1 0 0 Isopentane 1 0 0
液化石油ガス 3 0 Liquefied petroleum gas 3 0
ジメチルエーテル 48 0 Dimethyl ether 48 0
上記成分について、 エアゾール剤の製法に準じ、 外用エアゾール剤を調製した, 実施例 23 (外用ローション剤） (成分） 配合量 (W/V5 ニコランジル 1. 0 プロピレングリコール 20. 0 エタノール 50. 0 精製水 全 100 ml For the above components, an aerosol for external use was prepared according to the method for producing an aerosol, Example 23 (a lotion for external use) (Components) Compounding amount (W / V5 Nicorandil 1.0 propylene glycol 20.0 ethanol 50.0 Purified water 100 ml in total
上記成分を撹拌し、 均一に溶解させ外用ローション剤を調製した。 実施例 24— 28  The above components were stirred and uniformly dissolved to prepare an external lotion. Example 24-28
表 7に示すように、 実施例 23におけるニコランジルを、 ピナシジル （実施例 24) 、 クロマカリム （実施例 25) 、 MnATP (実施例 26) 、 メグロチニ ド （実施例 27) 、 L一アルギニン （実施例 28) に代えた以外は実施例 23と 同様に外用ローション剤を調製した。 比較例 4  As shown in Table 7, nicorandil in Example 23 was replaced with pinacidil (Example 24), cromakalim (Example 25), MnATP (Example 26), megrotinide (Example 27), and L-arginine (Example 28). ) Was prepared in the same manner as in Example 23 except that the lotion was used instead. Comparative Example 4
表 7に示すように、 実施例 23におけるニコランジルを除いた以外は実施例 2 3と同様に外用ローション剤を調製した。 As shown in Table 7, an external lotion was prepared in the same manner as in Example 23 except that nicorandil in Example 23 was omitted.
成 分 名 実施例 2 3 実施例 2 4 実施例 2 5 実施例 2 6 実施例 2 7 実施例 2 8 比較例 4 化合物 2 3 1 g Component name Example 2 3 Example 2 4 Example 2 5 Example 2 6 Example 2 7 Example 2 8 Comparative example 4 Compound 23 1 g
化合物 2 4 1 S Compound 2 4 1 S
化合物 2 5 1 g Compound 25 1 g
化合物 2 6 1 Compound 2 6 1
化合物 2 7 1 g Compound 27 1 g
化合物 2 8 1 Compound 2 8 1
7° Πヒ。レンク"リコ-ル 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g 2 0 g  7 ° Π. Renk "Recoil 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g 20 g
エタノール 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g 5 0 g Ethanol 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g 50 g
精製水 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 全 1 0 0 mL 化合物 2 3 ニコランジル Purified water Total 1 0 0 mL Total 1 0 0 mL Total 1 0 0 mL Total 1 0 0 mL Total 1 0 0 mL Total 1 0 0 mL Total 1 0 0 mL Compound 2 3 Nicorandil
化合物 2 4 ピナシジル  Compound 24 Pinacidyl
化合物 2 5 クロマカリム  Compound 25 Cromakalim
化合物 2 6 M n A T P  Compound 26 Mn A T P
化合物 2 7 メグロチニ ド  Compound 27 megrotinide
化合物 2 8 L一アルギニン  Compound 2 8 L-Arginine
»7 試験例 »7 Test example
実施例 23〜28と比較例 4の外用ローション剤を用いた発毛試験を、 C 3 H /H e NC r Jマウスを用い、 以下の通り行った。  Hair growth tests using the external lotion preparations of Examples 23 to 28 and Comparative Example 4 were performed using C3H / HeNCrJ mice as follows.
試験法はマウスを 1群 10匹とし、 試料投与群および無投与群の 8群に分け、 マウスの背部をバリカンおよび力ミソリにて剃毛し、 それそれのサンプルを 1曰 1回、 剃毛した背部 8平方 cm当たり 100 Lずつ塗布した。 実施例 23-2 8の試料投与群、 比較例 4の試料投与群および無投与群の塗布面積に対する毛の 再生面積 （ 1 5日後） を表 8に示す。 表 8  The test method consisted of 10 mice per group, divided into 8 groups: a sample administration group and a non-administration group, and the back of the mouse was shaved with a clipper and a force razor, and each sample was shaved once. 100 L per 8 cm 2 of the back was applied. Table 8 shows the hair regeneration area (after 15 days) with respect to the application area of the sample administration group of Examples 23-28, the sample administration group of Comparative Example 4, and the non-administration group. Table 8
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上記試験例より、 本発明の育毛剤は、 毛の再生に関して、 高い効果を持つこと が確認された。 スクリ一二ング方法 From the above test examples, it was confirmed that the hair restorer of the present invention had a high effect on hair regeneration. Screening method
<目的遺伝子の細胞への形質転換 >  <Transformation of target gene into cells>
CO S— 1細胞 （3 x 105個 /直径 35 mmシャーレ） を 10%牛胎児血清 を含んだダルベッコ変性 MEM培地にて 5 %C02雰囲気下、 37 °Cで培養した。 別に、 ヒ トアデノシン受容体 c DNA (GenBank Accession No.X68485, 参考文 献： A.Kollias - Bakerら、 The Journal of Pharmacology and Experimental Th erapeutics,281(2)， 761-768(1997)) とラッ トスルホニルゥレア受容体 c D N A ( GenBank Accession No.L40624、 参考文献： Y · Tokuyamaら、 Biochemical and B iophysical Research Communications, 220, 532-538 (1996)) を p c DNA 3. 1ベクタ一 （インビトロジェン社、 カリフォルニア、 米国） と p cDNA 3. 1 /Hygroベクタ一 （インビトロジェン社、 カリフォルニア、 米国） に常法に従って それそれ導入し、 p c DNA 3. 1 hADおよび p c DNA 3. 1 /Hygro raS U Rを得た。 p c DN A 3. l hADは、 p c DNA 3. 1ベクターの EcoRI/Notl部位に、 ヒトアデノシン受容体 c DNAの H i nd l l l/Xb a l断片 （ 1. 4 kb) が 挿入されたものである。 COS-1 cells (3 × 10 5 cells / 35 mm diameter petri dish) were cultured in Dulbecco's modified MEM medium containing 10% fetal bovine serum at 37 ° C. in a 5% CO 2 atmosphere. Separately, the human adenosine receptor cDNA (GenBank Accession No. X68485, reference: A. Kollias-Baker et al., The Journal of Pharmacology and Experimental Th erapeutics, 281 (2), 761-768 (1997)) and rat sulfonyldiarea receptor cDNA (GenBank Accession No. L40624, References: Y · Tokuyama et al., Biochemical and Biophysical Research Communications, 220, 532- 538 (1996)) into pcDNA3.1 vector-1 (Invitrogen, California, USA) and pcDNA3.1 / Hygro vector-1 (Invitrogen, California, USA) according to standard methods. 3.1 hAD and pc DNA 3.1 / Hygro raS UR were obtained. pcDNA3.lhAD is obtained by inserting the HindIII / Xbal fragment (1.4 kb) of human adenosine receptor cDNA into the EcoRI / Notl site of pcDNA3.1 vector. .
p c DN A 3. 1 /Hygro raS URは、 p c DNA 3. 1 /Hygroベクタ一の Hin dlll/Xbal部位に、 ラヅ トスルホニルゥレア受容体 c DNAの塩基番号 2 0 8 - 5 0 8 6の DNA断片が挿入されたものである。 こうして得られた p C DNA 3. 1 hAD ( 1 ^ g) および p c DNA 3. 1 /Hygro raS UR ( l j g) を、 先に培養しておいた C 0 S— 1細胞中に、 リポフ ェク夕ミンと O p t i— ME M I試薬、 Nobuya Inagakiら、 Science, 270, 1166 -1170 (1995)に記載された方法に準じて、 トランスフエクトした。  pc DN A3.1 / Hygro raS UR is the nucleotide number of the rat sulfonylrea receptor cDNA at Hindlll / Xbal site of pcDNA3.1 / Hygro vector. DNA fragment was inserted. The thus obtained pCDNA3.1 hAD (1 ^ g) and pcDNA3.1 / Hygro raS UR (ljg) were lipofected into the previously cultured C0S-1 cells. Yumin and Opti—ME MI reagent, transfected according to the method described in Nobuya Inagaki et al., Science, 270, 1166-1170 (1995).
その後、 細胞をさらに培養し、 コンフル一ェントに達したところでリン酸緩衝 生理食塩水で洗浄し、 0. 0 5 %トリプシンと 0. 5 3 mMの ED T A溶液で処 理した。  Thereafter, the cells were further cultured. When the cells reached confluence, the cells were washed with phosphate buffered saline and treated with 0.05% trypsin and 0.53 mM EDTA solution.
ネオマイシンおよびハイグロマイシン耐性を指標にして高発現細胞株を得た。 スクリーニングには細胞をカバーグラス上で培養して供した。 また、 細胞内力 ルシゥム濃度の測定には、 FURA— 2を使用した蛍光強度法を用いた。 すなわ ち 5 g/m 1の: f u r a— 2 amを 3 0分間ロードし、 夕イロ一ド液にて洗浄 した後、 細胞内カルシウム濃度の指標として 3 4 0 nmおよび 3 8 0 nmの蛍光 強度の比を求めた。 試験例 Highly expressing cell lines were obtained using neomycin and hygromycin resistance as indices. For screening, cells were cultured on a cover glass and provided. In addition, the fluorescence intensity method using FURA-2 was used for measuring the intracellular force lucidum concentration. That is, 5 g / m1: fura—2 am loaded for 30 min, washed with iodine solution, then fluorescence at 340 nm and 380 nm as indicators of intracellular calcium concentration The intensity ratio was determined. Test example
上記操作によって得られた細胞を用いて、 以下の試験を行った。  The following test was performed using the cells obtained by the above operation.
試験例 1 Test example 1
スルホニルゥレア受容体刺激剤として知られているニコランジルを用いて、 本 発明のスクリーニング法の有効性を確認した。 その結果、 図 2に示す通り、 ニコ ランジル 2 5、 1 0 0 M添加により細胞内カルシウム濃度が上昇するが、 この 作用はアデノシン受容体の阻害剤である 8—スルホフェニルテオフィ リン の前処理により抑制されることが確認された。 試験例 2  The efficacy of the screening method of the present invention was confirmed using nicorandil, which is known as a sulfonylprea receptor stimulant. As a result, as shown in Fig. 2, the addition of nicorandil 25 and 100 M increases the intracellular calcium concentration. This effect is due to the pretreatment of the adenosine receptor inhibitor 8-sulfophenyltheophylline. Was confirmed to be suppressed. Test example 2
アデノシン受容体刺激剤としてアデノシン 1 . 0および 1 0 . 0 z Mを添加す ると、 図 3に示す通り、 細胞内カルシウム濃度は濃度依存的に上昇した。 この作 用はアデノシン受容体阻害剤である 8—スルホフェニルテオフィ リン 1 Mの前 処理により抑制された。  Addition of adenosine 1.0 and 10.0 zM as adenosine receptor stimulants increased the intracellular calcium concentration in a concentration-dependent manner, as shown in FIG. This effect was suppressed by pretreatment with 1 M of the adenosine receptor inhibitor 8-sulfophenyltheophylline.
試験例 1および 2の結果から、 本発明の形質導入細胞では、 スルホニルゥレア 受容体とアデノシン受容体が発現し、 機能していることが確認できた。  From the results of Test Examples 1 and 2, it was confirmed that in the transduced cells of the present invention, the sulfonylprea receptor and the adenosine receptor were expressed and functioned.
なお、 カルシウム除去培地ではニコランジルおよびアデノシンの作用は認めら れなかった。 このことから、 細胞内カルシウム濃度の増大は、 細胞外カルシウム の流入によるものであることは明らかである。 本発明で得られた形質転換細胞は、 増殖能も良好で、 育毛剤のスクリーニングに容易に使用することができる。  The effects of nicorandil and adenosine were not observed in the calcium-free medium. From this, it is clear that the increase in intracellular calcium concentration is due to the influx of extracellular calcium. The transformed cells obtained by the present invention have good proliferation ability and can be easily used for screening of hair growth agents.

Claims

請求の範囲 The scope of the claims
1. ブリン受容体刺激作用を有する化合物、 生体に適用後にブリン受容体刺激作 用を有する化合物を遊離する化合物、 若しくは、 プリン受容体刺激作用を有する 化合物の当該作用を増強する化合物の 1種又は 2種以上を有効成分として含有す る育毛剤。 1. One of the compounds having a stimulating action on a brin receptor, a compound releasing a compound having a stimulating action on a purine receptor after application to a living body, or a compound enhancing the action of a compound having a stimulating action on a purine receptor or A hair restorer containing two or more active ingredients.
2. 前記プリン受容体刺激作用を有する化合物がアデノシン受容体刺激作用を有 する化合物である請求項 1記載の育毛剤。 2. The hair restorer according to claim 1, wherein the compound having a purine receptor stimulating action is a compound having an adenosine receptor stimulating action.
3. アデノシン受容体刺激作用を有する前記化合物が、 アデノシン、 N6—シク 口へキシルアデノシン、 N 6—シクロペンチルアデノシン、 （R) — N 6—フエ ニルイソプロビルアデノシン、 （S) —N 6—フエニルイソプロピルアデノシン、3. The compounds having adenosine receptor stimulating activity include adenosine, N6-cyclohexyladenosine, N6-cyclopentyladenosine, (R) -N6-phenylisopropyladenosine, and (S) -N6-f Enyl isopropyl adenosine,
(R) —フエ二ルーイソプロピルアデノシン、 N— [R— （ 2—ベンゾチアゾリ ル） チォ一 2—プロビル] — 2—クロロアデノシン、 2—クロロー N 6—シクロ ペンチルアデノシン、 N 6— [4— [[[4— [[[2— [[[ (p—イソチオシアナトフ ェニル） アミノ ]チォカルボニル]アミノ]ェチル]アミノ ]カルボニル]メチル]アミ ノカルボニル]メチル]フエニル]アデノシン、 N 6— [4一 [[[4— [[[2— [[[ (m ーィソチオシアナトフェニル） ァミノ ]チォカルボニル]アミノ ]ェチル]アミノ ]力 ルボニル]メチル]アミノカルボニル]メチル]フエニル]アデノシン、 N— (メチル ーフエネチル） アデノシン、 ミノプリ二ルーデォキシ一 N—ェチルリボフラヌロ アミ ド、 5， 一N—ェチルカルボキサミ ドアデノシン、 2—クロロアデノシン、 N—ェチル一 1， 一デォキシ一 1， 一 [ 6—アミノー 2— [ 1— ( 3—ヒ ドロキシ — 3—フエニル） プロビニル]— 9 H—プリン一 9一ィル]— 3— D—リボフラン — 5， 一ゥロナミ ド、 N 6— 2— (4—ァミノフエニル） ェチルアデノシン、 5 ， 一N—シクロプロピルカルボキサミ ドアデノシン、 N 6— （p—スルホフエ二 ル） アデノシン、 1ーデァザ一 2—クロ口一一 N 6—シクロペンチルアデノシン、 8—ブチルアデノシン、 1ーシクロプロビルイソグアノシン、 N 6—シクロへキ シルー 2， 一0—メチルアデノシン、 2 — D—リボフラノシルォキサゾール 一 4一カルボキサミ ド、 2—ョードー N 6—シクロペンチルアデノシン、 N 6— シクロペンチルー 2， ーメチルー 2—クロロアデノシン、 N 6—シクロへキシル — 2， 一0—メチルデノシン、 2— [ P - ( 2—カルボキシェチル） フエニルェ チルァミノ] 一 5， 一N—ェチルカルボキサミ ドアデノシン、 2— [ ( 2—ァミノ ェチルァミノ） カルボニルェチルフエニルェチルァミノ]— 5， —ェチルカルボキ サミ ドアデノシン、 2—へキシニルー 5—メチルカルポキサミ ドアデノシン、 2 —シクロへキシルメチリデンヒドラジノアデノシン、 N—ェチルカルボキサミ ド アデノシン、 5， 一 （N—シクロプロビル） カルボキサミ ドアデノシン、 N— [ 2 - ( 3， 5—ジメ トキシフエ二ル） フエニルェチル]アデノシン、 N— ( 2—メチ ルベンジル） アデノシン、 2—ォクチニルアデノシン、 2—フエニルァミノアデ ノシン、 2— [ 2— （4一フルオロフェニル） エトキシ] アデノシン、 2— (R) -phenyl-2-isopropyladenosine, N- [R- (2-benzothiazolyl) thio-1-propyl] -2-chloroadenosine, 2-chloro-N6-cyclopentyladenosine, N6- [4— [ [[4 -— [[[2-[[[(p-isothiocyanatophenyl) amino] thiocarbonyl] amino] ethyl] amino] carbonyl] methyl] aminocarbonyl] methyl] phenyl] adenosine, N 6— [4 I [[[4 -— [[[2-[[[(m-isothiocyanatophenyl) amino] thiocarbonyl] amino] ethyl] amino] force rubonyl] methyl] aminocarbonyl] methyl] phenyl] adenosine, N— (Methyl-phenethyl) adenosine, minoprine rudoxy-1-N-ethylribofuranuroamide, 5,1-N-ethylcarboxamide adenosine, 2-chloroadenosine, N-ethyl-11,1-dexoxy-1,1, [ 6— Amino-2— [1— (3-hydroxy—3-phenyl) provinyl] —9H—purine-1-yl] —3—D—ribofuran—5,1-ronamide, N 6—2— (4— Aminophenyl) ethyladenosine, 5,1-N-cyclopropylcarboxamide adenosine, N6- (p-sulfophenyl) adenosine, 1-daza1-2-chloro-N-cyclopentyladenosine, 8-butyladenosine, 1-cyclopropylisoguanosine, N 6-cyclohexyl 2,10-methyladenosine, 2—D-ribofuranosyloxazole 1-41-Carboxamide, 2-odo-N6-cyclopentyladenosine, N6-cyclopentyl-2, -methyl-2-chloroadenosine, N6-cyclohexyl-2,10-methyldenosine, 2- [P- (2 —Carboxyethyl) phenylethylamino] 1,5,1-N-ethylcarboxamidoadenosine, 2-[(2-aminoethylamino) carbonylethylphenylethylamino] —5, —ethylcarboxamidoadenosine, 2 —Hexynyl-5-methylcarpoxamide adenosine, 2—Cyclohexylmethylidenehydrazinoadenosine, N-ethylcarboxamide adenosine, 5,1- (N-cyclopropyl) carboxamide adenosine, N— [2 -(3,5-dimethoxyphenyl) phenylethyl] adenosine, N- (2-methylbenzyl) adenosine, 2 O Chi cycloalkenyl adenosine, 2-phenylalanine § Minoan de Noshin, 2- [2- (4 one-fluorophenyl) ethoxy] adenosine, 2-
[ (シクロへキシルメチレン） ヒ ドラジノ] アデノシン、 2—クロロー N 6 - ( 3—ョ一ドベンジル） アデノシン一 5， 一N—メチルゥロナミ ド、 N 6— （ 3 —イソチオシアナ一トベンジル） アデノシン一 5， 一N—メチルゥロナミ ド、 2 —クロロー N 6— ( 3—ョ一ドベンジルアデノシン一 5， 一N—メチルカルボキ サミ ド、 デフイブロチド （短鎖デォキシリボヌクレオチド） 、 ピナシジル、 アデ ノシン一 5， 一モノ リン酸、 アデノシン一 5， 一モノリン酸メチルエステル、 N 6—メチルアデノシン一 5， 一モノリン酸、 8—ブチルアミノアデノシン又はこ れらの過ヨウ素酸酸化物である請求項 2記載の育毛剤。  [(Cyclohexylmethylene) hydrazino] adenosine, 2-chloro-N 6-(3-iodobenzyl) adenosine 1.5,1-N-methylperonamide, N 6- (3-isothiocyanatobenzyl) adenosine 1,5,1 N-methylperonamide, 2-chloro-N6- (3-iodobenzyladenosine-15,1-N-methylcarboxamide, defibrotide (short-chain deoxyribonucleotide), pinacidil, adenosine-5,1-mono 3. The hair restorer according to claim 2, which is phosphoric acid, adenosine 15-monomonophosphate methyl ester, N6-methyladenosine 15-monomonophosphate, 8-butylaminoadenosine or a periodate oxide thereof.
4 . アデノシン受容体刺激作用を有する前記化合物又は生体に適用後にアデノシ ン受容体刺激作用を有する化合物を遊離する前記化合物が、 式 4. The compound having the adenosine receptor stimulating action or the compound which releases the compound having the adenosine receptor stimulating action after application to a living body is represented by the formula:
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[式中、 nは 0または 1、 R i〜R 2はそれそれ水素原子または炭素原子数 1〜5 のァシル基を示し、 R 3は水素原子または保護基を示す。 ] で示される化合物であ る請求項 2記載の育毛剤。 [In the formula, n is 0 or 1, R i to R 2 are each a hydrogen atom or an acyl group having 1 to 5 carbon atoms, and R 3 is a hydrogen atom or a protecting group. 3. The hair restorer according to claim 2, which is a compound represented by the formula:
5 . アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の当該作用を増強する前記化合物 が、 アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の取り込み阻害剤若しくはアデノ シン受容体刺激作用を有する化合物の不活性化阻害剤である請求項 2乃至 4のい ずれかに記載の育毛剤。 5. The compound that enhances the action of a compound having adenosine receptor stimulating action is an uptake inhibitor of a compound having an adenosine receptor stimulating action or an inactivation inhibitor of a compound having an adenosine receptor stimulating action. A hair restorer according to any one of claims 2 to 4.
6 . アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の前記取り込み阻害剤がジビリダ モール、 ジラセヅプ、 リ ドフラジン、 へキソベンジン、 カルボクロメン、 クロモ ナ一ル酸、 シネパジド、 ジァゼパム、 パパべリン、 6— （2， 一ハイ ド口キシニ トロベンジル） チォグアノシン、 プロベントフィ リンである請求項 5記載の育毛 剤。 6. The uptake inhibitor of a compound having an adenosine receptor stimulating action is diviridamol, dilacep, lidofrazine, hexobendine, carbochromene, chromonic acid, cinepazide, diazepam, papaverine, 6- (2,1 The hair restorer according to claim 5, wherein the agent is thioguanosine or proventophilin.
7 . アデノシン受容体刺激作用を有する化合物の前記不活性化阻害剤が、 2 ' デォキシコホルマイシン、 エリス口一 9一 （2—ハイ ドロキシ一 3—ノニル） ァ デニンである請求項 5記載の育毛剤。 7. The inactivation inhibitor of a compound having an adenosine receptor stimulating action is 2 ′ 6. The hair restorer according to claim 5, which is deoxycoformycin, eryth-l-9-1 (2-hydroxyl-3-nonyl) adenine.
8. 前記プリン受容体刺激作用を有する化合物が ATP受容体刺激作用を有する 化合物である請求項 1記載の育毛剤。 8. The hair restorer according to claim 1, wherein the compound having a purine receptor stimulating action is a compound having an ATP receptor stimulating action.
9. ATP受容体刺激作用を有する前記化合物が、 アデノシンジリン酸、 アデノ シントリリン酸又はこれらの誘導体である請求項 8記載の育毛剤。 9. The hair restorer according to claim 8, wherein the compound having ATP receptor stimulating activity is adenosine diphosphate, adenosine triphosphate or a derivative thereof.
10. AT P受容体刺激作用を有する前記化合物が、 アデノシン— 5， —ジリン 酸、 アデノシン— 5， 一トリ リン酸又はこれらの誘導体である請求項 8記載の育 毛剤。 10. The hair restorer according to claim 8, wherein the compound having an ATP receptor stimulating action is adenosine-5, -diphosphate, adenosine-5, monotriphosphate or a derivative thereof.
1 1. 前記アデノシン— 5' —ジリン酸誘導体又は前記アデノシン一 5， — ト リ リン酸誘導体がエステル誘導体である請求項 1 0記載の育毛剤。 11. The hair restorer according to claim 10, wherein the adenosine-5'-diphosphate derivative or the adenosine-15, -triphosphate derivative is an ester derivative.
12. 前記アデノシン一 5， —ジリン酸誘導体及び前記アデノシン— 5， 一トリ リン酸誘導体が、 式 12. The adenosine-1,5-diphosphate derivative and the adenosine-5, triphosphate derivative are represented by the formula
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OR2 [式中、 nは 2または 3、
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はそれそれ水素原子または炭素原子数 1〜5 のァシル基を示し、 R3は水素原子または保護基を示す。 ] で示される化合物であ る請求項 1 0記載の育毛剤。 OR 2 [Where n is 2 or 3,
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Each represents a hydrogen atom or an acyl group having 1 to 5 carbon atoms, and R 3 represents a hydrogen atom or a protecting group. 10. The hair restorer according to claim 10, which is a compound represented by the formula:
1 3. 前記アデノシン一 5， 一ジリン酸誘導体が、 ひ、 —メチレンアデノシン — 5， 一ジリン酸、 2—メチルチオアデノシン一 5， ージリン酸、 2， 一ベンゾ ィルアデノシン一 5， 一ジリン酸、 又は、 3， 一ベンゾィルアデノシン一 5， 一 ジリン酸である請求項 10記載の育毛剤。 1 3. The adenosine mono-, mono-diphosphate derivative is: -methylene adenosine--5, mono-diphosphate, 2-methylthioadenosine-1.5, diphosphate, 2, -benzoyl adenosine-1.5, mono-diphosphate, or 11. The hair restorer according to claim 10, which is 3,1-benzoyladenosine-15,1-diphosphate.
14. 前記アデノシン一 5， 一トリリン酸誘導体が、 ひ、 ?—メチレンアデノシ ン一 5， 一トリ リン酸、 2—メチルチオアデノシン一 5， 一トリ リン酸、 25 一 ベンゾィルアデノシン _ 5， 一トリリン酸、 又は、 3， 一ベンゾィルアデノシン - 5 ' —トリリン酸である請求項 10記載の育毛剤。 14. The adenosine mono- and mono-triphosphate derivatives are: -methylene adenosine mono- and mono-triphosphate, 2-methylthioadenosine mono- and mono-triphosphate, and 25- benzoyl adenosine. 11. The hair restorer according to claim 10, which is, monotriphosphate or 3, monobenzoyladenosine-5'-triphosphate.
1 5. プリン受容体刺激作用を有する化合物を細胞から放出させる作用を有する 化合物の 1種又は 2種以上を有効成分として含有する育毛剤。 1 5. A hair restorer containing, as an active ingredient, one or more compounds having an action of releasing a compound having a purine receptor stimulating action from cells.
1 6. プリン受容体刺激作用を有する前記化合物が AT P、 ATP誘導体または A TP代謝物である、 請求項 1 5記載の育毛剤。 16. The hair restorer according to claim 15, wherein the compound having a purine receptor stimulating action is ATP, an ATP derivative or an ATP metabolite.
17. プリン受容体刺激作用を有する前記化合物がアデノシン、 アデノシン誘導 体またはアデノシン代謝物である、 請求項 15記載の育毛剤。 17. The hair restorer according to claim 15, wherein the compound having a purine receptor stimulating action is adenosine, adenosine derivative or adenosine metabolite.
1 8. 細胞から放出されるアデノシン誘導体またはアデノシン代謝物が、 アデノ シンモノホスフェート、 アデノシンジホスフェートおよびアデノシントリホスフ エートからなる群より選択される物質である請求項 17記載の育毛剤。 18. The hair restorer according to claim 17, wherein the adenosine derivative or adenosine metabolite released from the cell is a substance selected from the group consisting of adenosine monophosphate, adenosine diphosphate, and adenosine triphosphate.
1 9. プリン受容体刺激作用を有する化合物を細胞から放出させる作用を有する 前記化合物が、 細胞に存在する ABCトランスポ一ターへの刺激作用を有する化 合物である請求項 15乃至 18のいずれかに記載の育毛剤。 1 9. Has the effect of releasing compounds with purine receptor stimulating activity from cells 19. The hair restorer according to any one of claims 15 to 18, wherein the compound is a compound having a stimulating effect on ABC transporters present in cells.
20. AB Cトランスポ一ターへの刺激作用を有する化合物が、 スルホニルウレ ァ受容体への刺激作用を有する化合物である請求項 19記載の育毛剤。 20. The hair restorer according to claim 19, wherein the compound having a stimulating action on the ABCC transporter is a compound having a stimulating action on a sulfonylurea receptor.
21. スルホニルゥレア受容体への刺激作用を有する化合物が、 メグリチニド、 ニコランジル、 レポクロマカリム、 ク Gマカリム、 ビナシジル、 ジァゾキサイ ド、 ジソビラミ ド、 チリソロ一ル、 アプリカム、 ビマカリム、 MgATP、 MnAT P、 CaATP、 ZnATP、 SrATP、 MgADP, MnADP、 C a AD P、 ZnADP、 S r AD P, MgAMP、 MnAMP、 C a AMP, ZnAM P、 S r AMP, アデニル -5-ィルイミ ドジホスフエ一ト、 L一リジン、 L—ァ ルギニンからなる群より選択される化合物である請求項 20記載の育毛剤。 21. Compounds that have a stimulant activity on the sulfonylprea receptor include meglitinide, nicorandil, repochromalim, kuGmacarim, binacidyl, diazoxide, disoviramide, chillisolol, apricam, bimacarim, MgATP, MnATP, CaATP , ZnATP, SrATP, MgADP, MnADP, Ca AD P, ZnADP, S r AD P, MgAMP, MnAMP, Ca AMP, ZnAM P, S r AMP, adenyl-5-ylimididodiphosphate, L-lysine, L 21. The hair restorer according to claim 20, which is a compound selected from the group consisting of arginine.
22. スルホニルゥレア受容体への刺激作用を有する化合物が、 カルシウム、 マ ンガン、 マグネシウム、 亜鉛、 およびストロンチウムからなる群より選択される 二価陽イオンを含む塩である請求項 20記載の育毛剤。 22. The hair restorer according to claim 20, wherein the compound having a stimulating action on the sulfonylprea receptor is a salt containing a divalent cation selected from the group consisting of calcium, manganese, magnesium, zinc, and strontium. .
23. スルホニルゥレア受容体への刺激作用を有する化合物が、 下記式 23. A compound having a stimulating effect on a sulfonylprea receptor is represented by the following formula:
R- S - C o A R-S-CoA
[式中、 Rは、 分岐しても良い炭素数 14〜30のァシル基で、 二重結合を 0〜3 個含む]で示される長鎖ァシルコェンザィム Aである請求項 20記載の育毛剤。 21. The long-chain isacylenzyme A represented by the formula: wherein R is an optionally branched alkenyl group having 14 to 30 carbon atoms and containing 0 to 3 double bonds. Hair restorer.
24. 外用剤である請求項 1乃至 23のいずれかに記載の育毛剤。 24. The hair restorer according to any one of claims 1 to 23, which is an external preparation.
25. 前記有効成分の含有量が製剤全体の 0. 01〜 5重量％である請求項 1乃 至 24のいずれかに記載の育毛剤。 25. The hair restorer according to any one of claims 1 to 24, wherein the content of the active ingredient is 0.01 to 5% by weight of the whole preparation.
26. AB Cトランスポーター遺伝子とプリン誘導体に対する受容体遺伝子で形 質転換させた細胞に対して被験物質を添加し、 そのときの該細胞内へのカルシゥ ム流入量を指標とすることを特徴とする、 育毛作用を有する物質のスクリーニン グ方法。 26. A test substance is added to cells transformed with an ABC transporter gene and a receptor gene for a purine derivative, and the amount of calcium inflow into the cells at that time is used as an index. A method for screening a substance having a hair-growth action.
27. AB Cトランスポ一夕一遺伝子がスルホニルゥレア受容体遺伝子である請 求項 26記載のスクリーニング方法。 27. The screening method according to claim 26, wherein the overnight ABCC gene is a sulfonylprea receptor gene.
28. プリン誘導体に対する受容体遺伝子がアデノシン受容体遺伝子である請求 項 26または 27記載のスクリーニング方法。 28. The screening method according to claim 26 or 27, wherein the receptor gene for the purine derivative is an adenosine receptor gene.
29. プリン誘導体に対する受容体遺伝子が ATP受容体遺伝子である請求項 2 6または 27記載のスクリーニング方法。 29. The screening method according to claim 26 or 27, wherein the receptor gene for the purine derivative is an ATP receptor gene.
30. 細胞内へのカルシウム流入量を、 蛍光カルシウム指示薬を用いた蛍光強度 で測定することを特徴とする請求項 26から 29のいずれかに記載のスクリー二 ング方法。 30. The screening method according to any one of claims 26 to 29, wherein the amount of calcium influx into cells is measured by fluorescence intensity using a fluorescent calcium indicator.
3 1. AB Cトランスポー夕一遺伝子またはプリン誘導体に対する受容体遺伝子 の形質転換を、 宿主べク夕一系による遺伝子組み換え技術によって行うことを特 徴とする請求項 26から 30のいずれかに記載のスクリーニング方法。 31. The method according to any one of claims 26 to 30, wherein the transformation of the receptor gene for the ABC transport gene or the purine derivative is performed by a genetic recombination technique using a host vector. Screening method.
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