WO2000032587A1 - Substances sf2809-i, ii, iii, iv, v et vi presentant une activite d'inhibition de la chymase - Google Patents

Description

明 細 書

キマ一ゼ阻害作用 を有する SF2809- I、 II、 III、 IV、 V および V I物質

技術分野

本発明は、 キマ ーゼ阻害活性を有す る新規化合物であ る SF2809 - I 物質、 SF2809 - II物質、 S F 2809 - 111物質、 SF 2809-IV物質、 SF2809 - V物質お よび SF2809- VI物質ま たは その塩に関する。 ま た、 本発明はそれ ら の SF2809- I 物質 〜 SF2809- VI物質の製造法に関する。 さ ら に、 本発明は SF2809- I 、 —11、 —111、 _IV、 — Vま た（ま— V I物質あ る レヽ ίま そ の製薬学的に許容 される塩を有効成分 と し て含む医薬 組成物、 な らびにキマ一ゼ阻害剤に関する。 さ ら にまた、 本発明は、 前記の SF2809- I 物質〜 SF2809- VI物質を生産 する特性を有する新規な微生物、 SF2809株を包含する。 背景技術

酵素キマ ーゼ （Chymase)は、主 と して肥満細胞顆粒中に 蓄え られ、 心臓、 血管、 皮膚等の組織に分泌さ れる キモ ト リ プシ ン様セ リ ンプロ テア一ゼであ る。 キマ ーゼの主 な作用の一つに、 ア ンジォテ ン シ ン I を基質 と してア ン ジォテ ン シ ン 11を産生す る作用が挙げ られる。

従来、 ア ンジォテ ン シ ン IIの産生はア ンジォテ ン シ ン 変換酵素 （ACE)が主体 と して作用 して行われる と 考え ら れてき た。 と こ ろが近年、 局所組織におけ る ア ンジォテ ン シ ン IIの産生系が解明 される研究の過程で、 ア ンジォ テ ン シ ン変換酵素 と は異な る セ リ ンプ ロ テ アーゼに よ る ア ンジォテ ン シ ン IIの産生系が示唆 さ れた。 特に、 ヒ ト 心臓の左心室では、 ア ン ジォテ ン シ ン 11の産生の 80 %以 上がセ リ ンプ ロ テ アーゼに よ る こ と 力 S 明 ら カゝ と な っ た（ U rataら 、 Circ. Res. , 66卷、 883— 890頁 、 1990年）。 こ の ヒ ト 心臓左心室にお け る セ リ ンプ ロ テ ア ーゼはその塩基 配列の決定がな さ れ、 分子量約 3 万の キマ ーゼ と 同定 さ れた （ Urataら 、 J. Biol . Chem. 、 266卷、 17173-17179 頁、 1991年）。 血管障害後の再狭窄進行時や心筋症では心臓でキマ一 ゼ活性が上昇す る こ と が知 ら れて い る 。 そ のた め 、 キマ —ゼ阻害剤は心肥大、 心不全あ る いは動脈硬化の治療薬 も し く は予防薬 と して期待 さ れる 。 ま たキマ ーゼは肥満 細胞の脱顆粒を促す こ と が知 ら れてお り 、 キマ一ゼ阻害 剤は抗炎症剤ゃ抗ア レルギー剤 と して も 有用 で あ る と 期 待 さ れ る。

キマ ーゼは、 上記の他に も 、 エ ン ドセ リ ンゃ コ ラ ゲナ 一ゼの産生、 プラ ジキニ ン、 サ ブ ス タ ン ス P 、 ニ ュ ー ロ テ ン シ ン 、 ソ マ ト ス タ チ ン 、 VIP、 LH- RH、 α 一 MSH等の各 種の生理活性ペプチ ドの代謝、 コ ラ ー ゲン、 フ イ ブ ロ ネ ク チ ン、 ビ ト ロ ネ ク チ ン等の細胞外マ ト リ ッ ク ス の 限定 分解、 ト ロ ン ビ ン等の血液凝固因子の分解、 気道粘膜分 泌腺の分泌反応の抗進お よ びマ ク 口 フ ァ ー ジの泡沫細胞 化の促進等の作用 を有す る こ と が知 ら れる 。 キマ ーゼ阻 害剤は喘息、 リ ウ マチ、 血栓症ま たは気管支炎等の治療 に も有用性が期待 さ れる 。

キマ ーゼ阻害活性を有す る 化合物 と して は、 国際特許 出願公開 W093/25574号、 W095/27053号、 W095/27055号に ぺプチ ド型のキマ ーゼ阻害剤が開示 さ れて い る。 一方、 非ぺプチ ド型の キマ ーゼ阻害剤が国際特許出願公開 W096 /04248号お よ び ョ 一 口 ッ パ特許公開第 713876号に開示 さ れ、 ま た微生物産物の型のキマ ーゼ阻害剤 は特開平 10-1 01666号公報が 開示 さ れて い る。

こ れま でに、 い く つかの キマ ーゼ阻害活性を有す る 化 合物が見い 出 さ れてい る が、 上述 した よ う な疾患の治療 薬 と して臨床で実用 さ れて い る キマ ーゼ阻害活性物質は ない。 従っ て臨床的に有用 であ る 新 し いキマ ーゼ阻害活 性物質の発見が求め られて いた。

本発明 の一つの 目 的は、 キマ ーゼに対 してす ぐれた酵 素阻害活性を有する 新 しい化合物 を提供す る に あ る 。

本発明 の別の 目 的は、 新 し いキマ ーゼ阻害活性化合物 の製造法を提供する にあ る。本発明の さ ら に別の 目 的は、 医薬 と して有用 であ る キマ ーゼ阻害活性を有す る新 しい 医薬組成物、な ら びにキマ ーゼ阻害剤 を提供す る に あ る 。 発明 の 開示

前記の本発明 の 目 的を達成する ため に 、 本発明者 ら は 種々 研究を行っ た。 その研究の一環 と して 、 本発明者 ら はキマ ーゼ阻害活性を有する 新規な化合物 を発見お よ び 開発す る た め、 微生物産物 を ソ ー ス に新規化合物の探索 を行っ た。 そ して本発明者 ら は、 本発明者 ら が東京都、 八丈島か ら採取 した土壌試料 よ り 分離 さ れた新規な微生 物であ っ て 、 SF2809株 と 命名 した ミ ク 口 モ ノ ス ポ ラ 科の 一菌株を培養 した。 そ の結果、 こ の SF2809株の培養物に ヒ ト型キマ ーゼ阻害活性が発現 した こ と を見い出 した。 さ ら に研究の結果、 SF2809株の培養物力ゝ ら 、 ヒ ト 型 キマ ーゼ阻害活性を有す る 6 種の活性物質を 単離 して精製す る こ と に成功 した。 さ ら に、 こ れ ら 6 種の活性物質がそ れぞれに後記の式 （I)〜 （IV)で表 さ れ る化学構造を有す る こ と を見出 し、 ま た こ れ ら 6 種の活性化合物のそれぞ れが新規な化合物であ る と 確認 した。 そ して 、 これ ら物 質を SF2809 - I 物質、 SF2809 - II物質、 S F 2809 - 111物質、 S F2809 - IV物質、 SF2809- V物質お よ び SF2809- VI物質 と そ れぞれ命名 した。 さ ら に、 後記の式 （I)で表わ さ れる SF2 809- I物質、 式 （II)で表わ さ れる SF2809- II物質、 式 （III) で表わ さ れ る SF2809 - III物質、 式 （IV)で表わ さ れ る SF28 09 - IV物質、 式 （V)で表わ さ れ る SF2809- V物質お よ び式 （V I)で表わ さ れる SF2809-VI物質は 、それぞれ ヒ ト型キマ 一 ゼ阻害活性を有する こ と を確認 した。 そ して 、 こ れ ら SF 2809- I物質〜 - VI物質は後記の一般式 （ VII) に よ り 総括 的に表 し得る と 認め られた。 こ れ ら の知見に基づいて本 発明を完成 した。

従っ て 、 第 1 の本発明 において は、 次の一般式 （VII)

〔式中 、 R¹は水素原子、 フ エ ニル基ま たは p — ヒ ド ロ キ シフ エ 二ノレ基であ り 、 R²はァセ チルァ ミ ノ 基 - NHC0CH₃ま たは ヒ ド ロ キ シノレ基であ り 、 そ し て SF2809— I物質では R¹ は水素原子で且つ！^はァセチノレ ア ミ ノ 基であ り 、 SF2809 - 11物質で は R ¹は P-ヒ ド ロ キ シ フ エ 二ノレ基で且つ R²はァ セチルァ ミ ノ 基であ り 、 SF2809- 111物質では R¹は水素原 子で且つ R²は ヒ ド ロ キ シル基であ り 、 SF2809-IV物質では R ¹は P-ヒ ド ロ キ シフ エニル基で且つ R²は ヒ ド ロ キ シル基 であ り 、 SF2809- V物質では R¹はフ エニ ル基で且つ ITはァ セ チルァ ミ ノ 基であ り 、 ま た SF2809- VI物質では R¹は フ エ ニル基で且つ R²は ヒ ド ロ キ シル基で あ る 〕 で表 さ れる S F 2809 I物質、 SF2809 - II物質、 SF2809 - 111物質、 SF2809- IV物質、 SF2809— V物質ま た ίま SF2809— VI物質で あ る ィ匕合物 . あ る い はそ の製薬学的に許容 さ れる塩が提供 さ れる。

第 1 の本発明 の化合物の第 1 の例 と して 、 次式 （ I)

で表わ さ れ る SF2809- I 物質ま たはそ の製薬学的に許容 さ れ る 塩が提供 さ れ る。

第 1 の本発明 の化合物の第 2 の例 と して は、 次式 （II)

で表わ さ れ る SF2809-II物質ま たはそ の製薬学的に許容 さ れる 塩が提供 さ れ る。

第 1 の本発明 の化合物の第 3 の例 と して は、次式 （ 111 )

で表わ さ れ る SF2809-III物質ま た はそ の製薬学的に許容 さ れる塩が提供 さ れ る。

第 1 の本発明 の化合物の第 4 の例 と して は、 次式 （IV)

で表わ さ れ る SF2809- IV物質ま た はそ の製薬学的に許容 さ れ る塩が提供 さ れ る。

ま た第 1 の本発明 の化合物の第 5 の例 と して は、 次式 (V)

で表わ さ れ る SF2809- V物質ま たはそ の製薬学的に許容 さ れる塩が提供 さ れる 。

第 1 の本発明 の化合物の第 6 の例 と して は、 次式 （VI)

で表わ さ れ る SF2809- VI物質ま たはそ の製薬学的に許容 さ れる塩が提供 さ れ る。

上記の式 （I)〜 （VI)でそれぞれ表 さ れる SF2809- I、 SF2 809 - I I、 SF2809- I I I、 SF2809 - IV、 SF2809 - Vお よ び SF280 9- VIの各物質の製薬学的に許容 さ れ る塩は、ナ ト リ ゥ ム 、 力 リ ゥ ム等のアル力 リ 金属塩あ る いはカ ノレ シ ゥ ム、 ノく リ ゥ ム等のアルカ リ 土類金属塩、 さ ら に製薬学的 に許容 さ れる無機酸、 有機酸等 と の酸付加塩も包含する 。

第 1 の本発明 に よ る SF2809-I、 一 11、 一 111、 一 IV、 一 Vお よ び一 VI物質は、 要約す る と 、 こ れ ら を総括的に示す 次の一般式 （VI I) ：

〔式中 、 R¹は水素原子、 フ エ ニル基ま た は ρ — ヒ ド ロ キ シフ エ 二ノレ基であ り 、 R²はァセチルァ ミ ノ 基 - NHC0CH₃ま たは ヒ ド ロ キ シノレ基であ る 〕 で表 さ れ る化合物であ る。

次に、 第 1 の本発明 に よ る SF2809- 1、 一 II、 — III、 一 IV、 一 Vお よ び一 VIの各物質の物理化学的性状を記載する， 第 1 の本発明 に よ る SF2809- I物質は前述の式 （ I) で表 わ さ れ、 下記の物理化学的性状を有す る。

( 1) 色お よ び性状 ： 淡黄色の粉末

( 2) 分子式 ： C₂₃H₂₃0₃N₃

( 3) マ ス ス ぺ ク ト ノレ （ FAB— MS) ： ra/z 390 (M + H)

( 4) 紫外線吸収ス ぺ ク ト ル

MeOH + lN HC1溶液で測定時に

λ _maXj nra ( ε ) : 227 (45900)， 277 (10900) , 284 (10900) ,

319 (6420)， 332 (5250)

MeOH+lN NaOH 溶液で測定時に

λ _max> nm ( ε ) ： 206 ( 54900 ) , 222 ( 54500 )， 257 s ( 14000 )，

292 (12100) , 310 ( 11700)

( 5) 赤外線吸収ス ぺ ク ト ル

m_ax KBr cm"¹ ： 1630， 1610, 1589, 1572, 1460, 1338,

1238， 1217, 1156, 1093, 1045, 748 ( 6) — NMRス ぺ ク ト ノレ （ CD₃0D， 400MHz)

δ (ppm) : l. 89 (3H, s) , 3. 09 (2H, t, J=7. 1Hz) ₎ 3.48 (2H, t , J = 7. 1Hz) , 3. 73 (3H, s) , 4. 17 (2H, s)， 6. 92 ( 1H, ddd, J=7. 8, 7. 1， 1. 2Hz) , 6. 96 (1H, ddd, J=7. 8, 7. 1, 1. 2Hz) , 7. 20 (lH, dd, J=7. 8, 1.2Hz) , 7.30 (1H, ddd, J = 8. 1, 7. 1， 1.0Hz) , 7.44 (lH, dd₎ J=7.8, 1.2Hz) , 7. 54 (lH, dd, J = 8.5， 1.0Hz) , 7.62 (1H, ddd, J = 8.5, 7. 1， 1.4Hz) , 8. 12 (1H, dd, J = 8. 1, 1.4 Hz)

( 7) ¹³C— NMRス ぺ ク ト ノレ （ CD₃OD， 100MHz)

δ (ppm) :22. 1 (t) , 22.6 (q) , 24.8 (t) , 30.2 (q) ,

41.5 (t) , 108.6 (s) , 110. 1 (s) , 111.6 (d) , 115.7 (d) , 118.5 (d) , 118. 5 (s) , 119.4 (d) , 121.5 (d) , 122.9 (d) , 124. 7 (d)， 129.7 (s) , 131.8 (d) , 136.5 (s) , 137. l (s) , 140.2 (s) ,

158.8 (s) , 166.2 (s) , 173.6 (s)

( 8) 溶解性 ： メ タ ノ ール、 酢酸ェチルお よ びジメ チル ス ル フ ォ キ シ ドに可溶で、 ク ロ 口 ホ ルム に難溶、 ま たへキ サ ン及び水に不溶であ る 。

第 1 の本発明 に よ る SF2809- II物質は前述の式 （ II) で 表わ さ れ、 下記の物理化学的性状 を有す る 。

( 1) 色お よ び性状 ： 淡赤色の粉末

( 2) 分子式 ： C₂₉H₂₇0₄N₃

( 3) マ ス スぺ ク 卜 ノレ （ FAB— MS) ： m/z 482 (M + H) ⁺ ( 4) 紫外線吸収 ス ぺ ク ト ル

Me0H + lN HC1溶液で測定時に

λ _raa„ nm ( ε ) : 227 (68600) , 278 (15500) , 286 (15500) ,

322 ( 10600)， 335 (7730)

MeOH+lN NaOH 溶液で測定時に

to o csi

( 8) 溶解性 ： メ タ ノ ール、 酢酸ェチルお よ びジメ チル ス ルフ ォ キ シ ドに可溶で、 ク ロ 口 ホルム に難溶、 ま たへキ サ ン及び水に不溶であ る 。

第 1 の本発明 に よ る SF2809- III物質は前述の式 （ III) で表わ さ れ、 下記の物理化学的性状を有す る。

( 1) 色お よ び性状 ： 淡黄色の粉末

( 2) 分子式 ： C₂₁H₂₍₎0₃N₂

( 3) マ ス ス ぺ ク 卜 ノレ （ FAB— MS) ： m/z 349 (M + H) ⁺

( 4) 紫外線吸収ス ぺ ク ト ル

MeOH + lN HC1溶液で測定時に

λ _maXi nra ( ε ) : 227 (47000) , 276 (10800) , 284 (11000) ,

319 (6450)， 332 (5050)

MeOH+lN NaOH 溶液で測定時に

λ _max_ nra ( ε ) : 205 (44300)， 223 (46300) , 257s (12200)，

292 ( 10500)， 310 (10100)

( 5) 赤外線吸収ス ぺ ク ト ル

V _raax KBr cm^{- 1} ： 1628， 1608, 1576， 1460, 1336, 1236,

1155, 1093, 1055， 1045, 758, 748

( 6) ¹H— NMRス ぺ ク ト ノレ （ CD₃0D, 400MHz)

δ (ppm)： 3. 09 (2Η, t, J=6. 6Hz) , 3. 75 (3H, s) , 3. 82

(2H, t₎ J=6. 6Hz) , 4. 2l (2H, s) , 6. 92 (lH, ddd, J=7. 1， 7. 1, 1. 2Hz) , 6. 96 ( 1H, d d d , J = 7. 1, 7. 1 , 1. 4Hz) , 7. 18 (1H, dd， J = 7. 1， 1. 2Hz) , 7. 28 (1H, ddd, J = 8. 1， 7. 1， 1. 2Hz) , 7. 41 ( 1 H , d d , J = 7. 1, 1. 4Hz) , 7. 55 (1H, dd, J = 8. 5, 1. 2Hz) , 7. 63 ( 1H, ddd, J=8. 5， 7. 1， 1. 2Hz)， 8. 05 ( 1H, dd, J = 8. 1 , 1. 2Hz)

( 7) ¹³C— NMRス ぺ ク ト ノレ （ CD₃OD， 100MHz)

δ (ppm) ： 22. 2 (t) , 28. 3 (t) , 30. 3 (q) , 63. 8 (t) ,

108. 8 (s) , 110. 0 (s) , 111. 5 (d) , 115. 6 (d) , 118. 2 (s) , 118. 4 (d) , 119. 4 (d) , 121. 5 (d) , 123. 1 (d) , 124. 4 (d) , 129. 6 (s) , 132. 0 (d) , 135. 6 (s) , 137. 1 (s) , 140. 0 (s)， 159. 7 (s) , 166. 2 (s)

( 8) 溶解性 ： メ タ ノ ール、 酢酸ェチルお よ び ジメ チル ス ノレ フ ォ キ シ ドに可溶で、 ク ロ ロ ホ ノレ ム に難溶、 ま たへキ サン及び水に不溶であ る 。

第 1 の本発明 に よ る SF2809- IV物質は前述の式 （ IV) で 表わ さ れ、 下記の物理化学的性状を有する 。

( 1 ) 色お よ び性状 ： 淡赤色の粉末

( 2) 分子式 ： C₂₇H₂₄0₄N₂

( 3) マ ス ス ぺ ク 卜 ノレ （ FAB— MS) ： ra/z 441 (M + H) ⁺

( 4) 紫外線吸収ス ぺ ク ト ル

MeOH + lN HC1溶液で測定時に

λ _ma.. nm ( ε ) : 228 (57400) , 280 ( 14500) , 323 (8020)，

334 (6170)

MeOH + lN NaOH 溶液で測定時に

又 … ntn( ε ) : 205 (75700)， 223 (58000) , 260s ( 16700)， 286 (16000) , 293 (16000) , 310 (13600) ( 5) 赤外線吸収ス ぺ ク ト ル

v _x KBr cm^-1 ： 1630, 1610, 1574, 1510, 1460, 1388,

1338， 1240, 1091， 1045, 756

( 6) 丄 1— NMRス ぺ ク ト ノレ （ CD₃0D， 400MHz)

δ ( ppm) ： 3.05 (lH, m) , 3. 13 (lH, m) , 3.71 (3H, s) ,

3.73 (2H, m) ， 6.27 (IH, s) ， 6.63 (2H, d， J=8.8Hz) , 6.83 (2H, d, J=8.8Hz) , 6.98 (1H， dd, J = 7.8, 7. 1Hz) , 7.04 (IH, d d , J=7.8, 7. 1Hz) , 7.29 (lH, d, J=7.8Hz) ,

7.33 (IH, ddd, J = 8. 1， 7. 1， 1.0Hz) , 7.52 (lH, d, J-7.8Hz) , 7.57 (lH, dd, J=8.5, 1.0Hz) , 7.65 (IH, ddd, J = 8.5, 7. 1，

1.4Hz) , 8.08 (IH, dd, J=8. 1， 1.4Hz) ( 7) ¹³C— NMRス ぺ ク ト ノレ （ CD₃0D, lOOMHz)

δ ( pm) ： 28.7 (t) , 30.3 (q) , 38. 1 (d) , 63.8 (t) ,

110.2 (s) , 111.9 (d) , 115. 1 (s) , 115.8 (d) 115.9 (d) , 115.9 (d) , 118. 1 (s) , 118.9 (d) 119.6 (d) , 122. 1 (d)， 123.3 (d) , 124.5 (d) 129. 1 (d) , 129. 1 (d) , 129.4 (s) , 132.2 (d)

134.3 (s) , 136.9 (s) , 137.7 (s) , 140.2 (s) 156.5 (s) , 159.9 (s) , 165.6 (s)

( 8) 溶解性 ： メ タ ノ ール、 酢酸ェチルお よ び ジメ チルス ノレ フ ォ キ シ ドに可溶で、 ク ロ ロ ホ ノレ ム に難溶、 ま たへ キ サ ン及び水に不溶であ る 。

第 1 の本発明 に よ る SF2809-V物質は前述の式 で表 わ さ れ、 下記の物理化学的性状を有す る。

( 1 ) 色お よ び性状 ： 無色の粉末

( 2) 分子式 ： C₂₉H₂₇0₃N₃

( 3) マ ス ス ぺ ク ト ノレ （ FAB— MS) ： m, z 466 (M+H)

( 4) 紫外線吸収ス ぺ ク ト ル

MeOH + lN HCl溶液で測定時に

λ _max nm ( ε ) : 227 (62800) , 278 (14400) , 284 (14000)，

323 (9120) , 335 (6980)

MeOH + lN NaOH溶液で測定時に

λ _maXj nm( ε ) :207 (83700) , 222 (75300) , 257s (23700)

284 (17700) , 292 (18100) , 310 (15800)

( 5) 赤外線吸収ス ぺ ク ト ル

V _max KBr cm—¹ : 1632, 1611, 1589, 1572, 1460, 1387,

1338, 1244, 1213, 1157， 1089, 754

( 6) - NMRス ク 卜 ノレ （ CD₃0D, 400MHz)

δ ( pm) 1.68 (3H, s) , 3.04 ( 1 H, m) , 3. 18 (l H, m) ,

3.33 (lH， m) ， 3.55 (lH， m) ， 3.67 (3H， s) , 6.42 (lH, s) ₎ 6.95 (lH₎.dd, J=7.6, 7. 1Hz) 7.01 (1H, dd, J = 8. 1, 7. 1Hz) , 7.02 (2H, ra) 7.06 (lH, ra) , 7. 14 (2H, m) , 7.23 (lH, ddd, J = 8. 1, 7. 1， 1.0) , 7.27 (1H, d, J = 8. 1Hz) , 7.47 (1H, dd, J = 8.5, 1.0Hz) , 7.52 (1H, d, J = 7. 6Hz) , 7. 56 (1H, ddd, J = 8. 5, 7. 1, 1. 2Hz) , 8. 11 (1H， dd, J = 8. 1， 1. 2Hz)

( 7) ¹³C— NMRス ぺ ク ト /レ （ CD₃0D， 100MHz)

δ ( ppm) : 22. 4 (q)， 24. 9 (t) , 30. 1 (q)， 38· 2 (d)，

41. 7 (t) , 110. 2 (s) , 111. 8 (d) , 113. 5 (s) , 115. 5 (d) , 118. 9 (d) , 119. 4 (d) , 120. 8 (s) 121. 9 (d) , 122. 6 (d) , 125. 1 (d) , 126. 3 (d)

128. 0 (d)， 128. 0 (d) , 128. 9 (d) , 128. 9 (d)

129. 2 ）， 131. 6 (d) , 136. 9 (s) , 138. 7 (s) 140. 5 (s) , 144. 9 (s) , 165. 3 (s) , 166. 1 (s) 173. 4 (s)

( 8) 溶解性 ： メ タ ノ ーノレ 、 酢酸ェ チル 、 ジメ チ ノレ ス ノレ フ ォ キ シ ドお よびク 口 ロ ホ ノレム に可溶、 ま たへキサ ン及び 水に不溶であ る。

第 1 の本発明 に よ る SF2809- VI物質は前述の式 （ VI) で 表わ さ れ、 下記の物理化学的性状 を有する 。

( 1 ) 色お よ び性状 ： 無色の粉末

( 2) 分子式 ： C₂₇H₂₄0₃N₂

( 3) マ ス ス ぺ ク ト ノレ （ FAB— MS) ： m, z 425 ( +H)

( 4) 紫外線吸収ス ぺ ク ト ル

MeOH + lN HC1溶液で測定時に

λ _max nm ( ε ) : 227 (50200) , 278 (11900) ， 322 (7490)

334 (5960)

MeOH + lN NaOH溶液で測定時に λ _max> nm( ε ) :205 (51700)， 223 (51100)， 258s (13200) , 293 (10500)， 310 (9790)

( 5) 赤外線吸収ス ぺ ク ト ル

V _maY KBr cm—¹ ： 1624, 1610, 1589, 1574， 1460, 1395，

1386， 1338, 1214, 1157, 1091, 1043, 756

( 6) 丄11一 NMRス ぺ ク ト ノレ （ CD₃0D, 400MHz)

δ ( ppm) ： 3.08 (1Η， m)， 3. 18 (1Η， m)， 3· 68 (3Η, s) ,

3. 73 (2H， ra)， 6.41 (1H, s) , 6.96 (1H, ddd, J=7.8, 7. 1， 1.2Hz) , 7.00 (2H, m) , 7.01 (1H, ddd, J=7.8, 7. 1， 1.2Hz) , 7.06 (1H, ra)， 7. 14 (2H, m) , 7.25 (1H, ddd, J = 8. 1, 7. 1， 1. 0Hz) , 7.27 (lH， dd, J=7.8, 1.2Hz) : 7.49 (lH, dd, J=8.5, 1.0Hz), 7.51 (lH, dd_i J=7.8, 1.2Hz) , 7.57 (1H, ddd, J = 8.5, 7. 1: 1.4Hz) , 8. 12 (1H, dd, J = 8. 1， 1.4Hz)

( 7) ¹³C— NMRス ぺ ク ト ノレ （ CD₃0D， lOOMHz)

δ ( ppm) :28.8 (t) , 30. l (q) , 38.4 (d) , 63.9 (t) ,

109. 6 (s) , 111. 7 (d) , 113. 4 (s) , 115. 4 (d) ,

118. 8 (d) , 119. 3 (d) , 120. 9 (s) , 121. 7 (d) ,

122. 6 (d) , 125. 3 (d) , 126. 3 (d) , 128. 0 (d) ,

128. 0 (d) , 128. 8 (d) , 128. 8 (d) , 129. 4 (s) ,

131. 6 (d) , 136. 8 (s) 138. 8 (s) 140. 5 (s) ,

144. 9 (s) , 165. 4(s) , 166. 2 (s) ( 8) 溶解性 ： メ タ ノ ー ル 、 酢酸ェチル 、 ジメ チル ス ル フ ォ キ シ ドお よ びク ロ ロ ホ ノレム に可溶、 ま たへキサ ン及び 水に不溶であ る。

さ ら に、 第 2 の本発明 において は、 ダク チ ロ ス ポ ラ ン ギ ゥ ム属に属 して且つ前記の式 （I)の SF2809- I物質、前記 の式 （II)の SF2809 - II物質、 前記の式 （III)の SF2809- III 物質、 前記の式 （IV)の SF2809- IV物質、 前記の式 （V)の SF 2809- V物質お よ び前記の式 （VI)の SF2809- VI物質の う ち の少な く と も一 つ を生産する 菌 を培養 し、 その培養物か ら SF2809- I物質、 SF2809- II物質、 S F 2809 _ I 11物質、 SF2 809- IV物質、 SF2809- V物質お よ び SF2809 - VI物質の う ちの 少な く と も 一 つ を採取す る こ と を特徴 と す る 、 SF2809- 1 物質、 SF2809 - II物質、 SF2809 - III物質、 SF2809- IV物質、 SF2809— V物質お よ び （ま た fま） SF2809— VI物質の製造法力 提供さ れる。

第 2 の本発明方法に使用 さ れ る SF2809— I、 —11、 —111、 - IV、- Vお よび一 VI物質の少な く と も 一 つ を生産する 菌は 以下の記載で単に 「 SF2809物質生産菌」 と 略記する こ と 力 Sあ る。

上記の SF2809物質生産菌 と して 、 例 えば本発明者 ら が 東京都八丈島で採取 した土壌試料か ら 新たに分離 さ れて 且つ ミ ク 口 モ ノ ス ポ ラ 科に所属す る と 認め られ るー菌株 であ る SF2809株が挙げ ら れる 。 本 SF2809株の菌学的性状 は以下の と お り であ る。 なお、 本発明方法で用 い ら れ る SF2809物質生産菌は、 本明細書に記載の特定の微生物に限定 さ れ る も の ではな レヽ。 SF2809— I物質〜— VI物質の少な く と も 3 を生産す る能力 を有 して い る 菌であれば SF2809物質生産菌 と して いずれを用 いて も よ い。 使用 でき る微生物の好適な例 と して は、 SF2809株、 あ る いは こ れ ら の菌株の継代培養物、 人工変異株並びに 自 然変異株等が挙げ られ る。

次に 、 上記の SF2809株の諸性質を記載す る。

1 . SF2809株の菌学的性状

SF2809株の形態観察、 培養性状、 生理学的性質を調べ る ため に用 いた培地、 方法は主に シャ ー リ ン グ と ゴ ッ ト ϋ ーブ ( Shirling, E. B. and Gottl ieb, D. 、 Int. J. Syst. Bacterid. , 16卷、 313- 340頁、 1966年） と 、 ヮ ッ ク ス マ ン ( Waksman, S. A. 、 The actinoraycetes Vol. 2 : Classification, identification and description of genera and speci es. The Wi l l iams and W i 1 k i n s Co. , Baltimore, 1961年） の方法に従っ た。 ま た形態観 察のた め本菌株を ISP培地、 酵母エ キ ス · でんぷん寒天培 地 （酵母エ キ ス 0. 2%、 でんぷん 1. 0% 、 寒天 18g、 精製水 1 L 、 H 7. 0) 、 リ ン ゴ酸カ ノレ シ ゥ ム寒天培地、 リ ン ゴ酸 ナ ト リ ゥ ム寒天培地あ る いは コ ハ ク 酸ナ ト リ ゥ ム寒天培 地 ( Shomura, 丁. 、 A c t i n om y c e t o 1 _N 7卷、 88 - 98頁、 1993 年） で培養 し、 光学顕微鏡並びに走査型電子顕微鏡で観 察 した。 なお SF2809株は主に 28°Cで 14日 間培養 した。 色の表示は Color Harmony Manual (Container Cor por at ion of America, 1958. ) に従 っ た。 そ の他、 細胞壁ァ ミ ノ 酸分析はベ ッ カ ー等の方法 （ Becker, Β· ら 、 Appl. Microbiol. 、 12卷、 421 - 423頁、 1964年） 、 全菌体糖組成 は ,レ シ ェ /く リ エ等の方法 ( Lecheval i er, . P. ら 、 Int. J. Syst. Bacteriol. 、 20卷、 435— 443頁、 1970年） 、 細 胞壁ペプチ ド ダ リ カ ン の ァ シル型は内 田 ら の方法 （ Uch i da, Kら 、 J. Gen. Appl . Mi crobiol. 、 23卷、 249-260 頁、 1977年） に従っ て分析 した。 ま た遺伝学的な系統を 調べる ため に 16S rRNA遺伝子の塩基配列 を解析 した。

( 1 ) 形態的特徴

SF2809株の栄養菌糸 （直径 0. 4- 0. 5 μ m)は よ く 発達 し、 不規則 に分岐す る が、 断裂は しない。 ま た気菌糸 の形成 は見 られない。 栄養菌糸 に は単独で球状の胞子様構造体 が多数形成 さ れ る。 これ ら は直径 1.0- 1. 6 / mで、 表面は 平滑な い しわずかに粗面であ る。 ま た、 栄養菌糸か ら 気 中へ伸びる 指状又は棒状の胞子嚢はみ られない。

( 2) 培養性状及び生理的性質

SF2809株の培養性状及び生理的性質を下記の表 1 と 表 2 に、 ま た炭素源利用性を表 3 に示 した。 生育は多 く の 培地で普通か ら貧弱であ り 、 全て の培地で球状の胞子様 構造体が観察 さ れた。 栄養菌糸 の色調は、 橙一橙褐色で あ る 。 なお典型的な ミ ク ロ モ ノ ス ポ ラ 属で観察 さ れ る 熟 成に伴 う コ ロ ニー の黒変や、 湿潤化は SF2809株に は認め られない

SF2809株の培簦性状

表 2

SF2809株の生理的性質

表 3

SF28C8株の炭素源利用性

+ :利用する、 + - :ggぐ利用する、 -：利用しない

Basalmedium:lSP培地 No.9 ( 3 ) 化学分類学的性質

細胞壁に は、 メ ソ · ジア ミ ノ ピ メ リ ン酸お よ びグ リ シ ン の存在が確認 さ れ、 ま た全菌体の加水分解物 中 には、 ァ ラ ビ ノ ース と キ シ ロ ー ス が検出 さ れた こ と 力、 ら 、 SF28 09株はル シ ェ バ リ ェ等の分類に よ る 細胞壁化学型 I I D型 と 分類 さ れた。 ま たべプチ ド グ リ カ ン の ァ シル型は ダ リ コ レー ト 型で、 ミ コ ール酸は検出 さ れなかっ た。 主要な メ ナキ ノ ンは、 MK- 9 (H₆) と MK- 9 (H₈) ほぼ同量で計 90% を しめた。 主要菌体脂肪酸は iso- C16： 0, i so-C15： 0, anteiso - C17 : 0， anteiso - C15 : 0, iso- C17 : 0 の分岐脂肪 酸で約 80 % を 占 め 、 マイ ナー と してモ ノ 不飽和分岐脂肪 酸 と 直鎖飽和脂肪酸が各 々 5〜 10%含み、 10メ チル脂肪酸 やハイ ド ロ キ シ脂肪酸を含ま ない。

こ れ ら の形態的性質 と 化学分類学的性質か ら 、 SF2809 株 ίま 5. ク 口 モ ノ ス ポ フ 禾斗 ( family Micromonosporaceae) に所属する こ と が強 く 示唆 さ れた。

( 4 ) 遺伝学的解析

SF2809株の 16SrRNA遺伝子の全塩基酉己歹 IJ を角？読 し （ァ ク セ ッ シ ョ ンナ ン ノく一 ： AB017374 ) 、 公開 さ れて い る 細菌 のデー タ と 比較検討を行っ た結果、 本菌株はダク チ ロ ス ポラ ン ギ ゥ ム （ Dactylosporangium )属 の ク ラ ス タ ー に 収容 さ れた。 ま た塩基配列内 には ミ ク ロ モ ノ ス ポラ 科に 共通の シグネチ ユ ア領域の存在 も確認 さ れた。

上記の よ う な化学分類学的性質お よ び遺伝学的解析か ら は、 SF2809株 ίまダ ク チ ロ ス ポ ラ ンギ ゥ ム ( Dactylospo rangium) 属に属す る 大 き な可能性が示唆 さ れた。 しか し なが ら こ の ダク チ ロ ス ポ ラ ンギ ゥ ム属 の特徴であ る 指状 の胞子嚢の形成は各種の培地上で生育 し た SF2S09株 を検 討 した が観察 さ れず、 現在の放線菌分類侔系で は SF2809 株はダ ク チ ロ ス ポ ラ ンギ ゥ ム属で あ る と は完全には断定 で き な かっ た。 し；^ し SF2809袜は ミ ク 口 モ ノ ス ポ ラ 科 に 所属す る放線菌であ る と 認定で き る 。 他方、 SF2809株 は 球状の構造体を豊富に形成 してお り 、 こ の球状構造体は ダク チ ロ ス ボ ラ ンギ ゥ ム属の菌抹が し ば し ば形成す る 球 状の構造体であ る グ ロ ボー ス 'ボデ ィ 一 に類似 して レ、 る 。 ま たェ ンサイ ン ら の発表 に よ'れぱ、 グ ロ ボー ス · ボデ ィ 一は発芽する こ と が示 さ れ、 跑子の一種で あ る こ と を 明 ら カ に してレヽ る ( Ensign, J. C . , Ann. Rev. Microbiol、 32卷、 185 - 219頁、 1978年） ₀

こ れ ら を合わせて考察する と 、 SF2809株は跑子嚢の形 成能 を.失つ た タ" ク チ 口 ス ポ ラ ンギ ゥ ム ( Dactylosporang iura) 属に属す る 菌抹で あ る と 暫定的 に考 え ら れる。 なお 、 SF2809株が ダク チ ロ ス ポ ラ ンギ ゥ ム属 のー菌秣であ る と 決定で き る か研究 を続行 中で あ る 。

SF2809 は、 平成 10年 8月 31日 付 けで受託番号 FERM P

- 16975と して 日 本、 茨城県つくば市東 1丁目 1番 3号に在る工業技術院生 命工学工業技術研究所に寄託 レた。 し か し 、 1999年 9 月 16曰 以降は同所 にブ ダぺ ス ト 条約 の規約下 に FERM BP- 68 72の受託番号で寄託 さ れて い る 。

次 に、 第 2 の本発 明 の方法に よ っ て 、 SF2809- I物質 .〜 SF2S09-VI物質 の 少 な く と も 一つ を製造す る 具 ^的な 方 法を説明する。

( 1 ) SF2809物質生産菌の培養

第 2 の本発明 の方法では、 SF2809物質生産菌、 好ま し く は例え ば SF2809株を適 当 な炭素源お よ び窒素源を含む 栄養培地で培養する 。 使用 さ れ る 培地は天然培地、 合成 培地のいずれで も よ い。 炭素源 と して は、 グル コ ー ス 、 フ ラ ク ト ース 、 シュ ク ロ ー ス 、 糖蜜、 でんぷん あ る いは でんぷん加水分解物等の炭水化物、 並びに酢酸、 プ ロ ピ オン酸等の有機酸も し く はグ リ セ リ ン等の ア ル コ ー ル類 が用 い られる。 一方、 窒素源 と して は、 通常ペプ ト ン、 肉エ キ ス 、 酵母エ キ ス 、 コ ー ン ス チープ リ カ ー、 オー ト ミ ール、 小麦胚芽、 カ ゼイ ン加水分解物、 大豆粕お よ び 大豆粕加水分解物等を使用す る が、 ア ンモ ニ ゥ ム塩 （例 えば、 塩化ア ンモ ニ ゥ ム 、 硫酸ア ンモ ニ ゥ ム 、 硝酸ア ン モニ ゥ ム 、 リ ン酸ア ンモニ ゥ ム等） 、 尿素、 ア ミ ノ 酸等 の無機お よ び有機の窒素化合物 も 有効であ る。 なお こ れ ら の炭素源及び窒素源はそれぞれ併用する こ と がで き る 必要あ る 場合には、 リ ン酸第一カ リ ウ ム 、 リ ン酸第二 カ リ ウ ム 、 リ ン酸マ グネ シ ウ ム 、 硫酸マ グネ シ ウ ム 、 塩 化ナ ト リ ウ ム 、 硫酸第一鉄、 硫酸マ ン ガ ン 、 硫酸銅、 炭 酸カ ル シ ウ ムま たはその他の無機塩類を培地に添加 して も よ い。 ま た培地が発泡する 場合 には、 液体パ ラ フ ィ ン 、 動物油 、 植物油 、 鉱物油 ま た はシ リ コ ン等 を添加す る こ と がで き る。 SF2809物質生産菌の培養は、 振盪培養ま たは深部通気 撹拌培養等に よ り 好気的条件下で行 う 。 培養温度は、 SF

2809物質生産菌が 目 的物質を生産す る 範囲内で適宜変更 し う る 力 ^s、 好ま し く は 15〜 37 °Cが よ い。 培養時間 は通常 1 〜 10日 間であ る 。 培養終了後 、 培養物か ら 目 的物質であ る SF2809物質の少な く と も 一 つ を採取 してか ら精製する _c ( 2 ) SF2809物質の採取 と 精製

微生物培養物か ら の本発明 の SF2809物質の採取に 当 た つ ては、 先づ該培養物を濾過 ま た は遠心分離法に よ っ て 菌体 と 培養濾液に分け る 。 次いで、 SF2809物質の性状を 利用 した通常の分離手段、 例 えば溶剤抽出法、 吸着剤 を 用 いた吸脱着法、 各種樹脂 を用 いた ク ロ マ ト グ ラ フ 法、 沈殿法等を適宜組み合わせて SF2809物質を分離 し、 さ ら に精製する こ と がで き る 。 例 え ば、 SF2809株の培養液に ア セ ト ン を加 え て菌体力ゝ ら SF2809物質を抽出 し 、 濾過す る。 さ ら にその濾液か ら アセ ト ン を留去 した後 に酢酸ェ チルで抽出する。 そ の後 、 酢酸ェ チル抽出液を シ リ カ ゲ ノレ 、 セ フ ア デ ッ ク ス LH- 20、 0DSの各カ ラ ム で順次に ク ロ マ ト グ ラ フ ィ 一 に よ る精製をすすめ る 。 最後 に HPLCあ る いは TLCに よ る 分画操作を行 な う こ と に よ り SF2809- I物 質〜 SF2809- VI物質の各 々 を 単離す る こ と 力 Sで き る。

前述 した よ う に、第 1 の本発明 に よ る SF2809- I物質〜 S F2809-VI物質の各々 はキマ ーゼ に対 して阻害活性を有す る。 SF2809物質の キマ ーゼ阻害活性を 次の試験例 に よ り 調べた。

試験例 1 本例 において は、 SF2809物質の キマ ーゼ阻害 活性を下記の よ う に測定 した。

( 1 ) 酵素キマ ーゼ の調製

用 い る組換えプ ロ 型 ヒ ト キマ ーゼは浦 田 ら の報告 （ Ur ata ら 、 J. Biol. Chem. , 266卷 17173頁、 1991年） に従つ て調製 した。 すなわち ヒ ト キマ ーゼ を コ 一 ドす る cDNAを 含有す る組換えバキ ュ 口 ウ イ ノレ ス を感染 さ せた昆虫細胞 ( Tn5) を培養 し、 得 ら れた培養上清か ら へパ リ ンセ フ ァ ロ ー ス （ フ ア ルマ シ ア社製） に よ り キマ ーゼ を採取 して 精製 した。 さ ら に、 ネオ上 ら の報告 （Murakamiら J. Biol. Chem. , 270卷 2218頁、 1991年） ίこ従レヽキマ ーゼ精製ロ¾ を 活性化 した後、 へパ リ ン セ フ ァ ロ ー ス で精製 し、 活性型 ヒ ト キマ ーゼ を得た。

( 2 ) キマ ーゼ阻害活性の測定

前項の方法で得 ら れた 1〜 5 ngの活性型 ヒ ト キ マ ーゼ を含む 50 ；/ 1の ノく ッ フ ァ ー （0.5〜 3.0 M NaCl , 50 mM ト リ ス塩酸 pH 8.0)に、被検物質 と し て の SF2809物質を 含むジ メ チル ス ノレ フ ォ キ シ ド （ DMS0) 溶液 2 1をカロ え た。 そ の後 、 基質 と して 0.5 mMス ク シ二ノレ -ァ ラ ニノレ-ヒ ス チ ジ ノレ—プ ロ リ ル -フ エ ニ ノレ ア ラ ニ ノレ -パ ラ 二 ト ロ ア 二 リ ド （ ノく ッ ケ ム社製） を含む 50 1の ノ ッ フ ァ ー Aを加 えて室温にて 5 分間反応 させた。 反応液の 405 n mの吸 光 度の経時変化を測定 し 、 キマ ーゼ阻害活性 を調べた。 ( 3 ) 結果

本発明 に よ る SF2809— I物質〜 SF2809-VI物質の レヽずれ も ヒ ト キマ ーゼ活性の 50%阻害濃度 （IC₅₀)が 7. 3 X 10~⁶M 〜 1.4 X 10— ⁸Mの範囲で あ り 、 強いキマ ーゼ阻害活性が認 め られた。

具体的には、 前記の ヒ ト キマ ー ゼ の酵素活性を 50 % 阻 害する の に要す る SF2809 - I物質、 —II物質、 —III物質、 一 IV物質、 - V物質お よ び- VI物質の IC₅₍₎値は、 それぞれに、 7.3 X 10— ⁶M、 4. 1 X 10—。M、 2. 1 X 10— ⁶M、 8. 1 X 10— ^UM、 4. 3 X 10^_8Mお よ び 1.4 X 10^_8Mであ る こ と が認め ら れた。

以上の試験例力 ら 明 ら 力、な よ う に、 SF2809-I、 SF2809 - II、 SF2809 - III、 SF2809 - IV、 SF2809 - Vお よ び SF2809 - V I物質ほいずれ も キマ ーゼ阻害活性を示す。 従っ て 、 これ ら SF2809— I物質〜 SF2809— VI物質の各物質はキマーゼ 阻 害活性を利用 して、 た と えば心筋梗塞、 心肥大、 心不全、 心筋症、 動脈硬化、 高血圧、 血管内膜肥厚、 末梢循環器 障害、 腎不全、 ア レル ギー 、 各種の炎症、 ア ト ピー性皮 膚炎、 リ ウ マチ、 喘息、 気管支炎 の治療 も し く は予防に 有用 であ る 。 本発明 に よ る SF2809各物質は慣用 さ れ る 製 薬学的 に許容で き る 固体ま た は液体状の担体 と 混和 さ れ て医薬組成物に調合で き る。

従っ て 、 第 3 の本発明 において は、 前記の SF2809- I物 質、 SF2809 - II物質、 SF2809 - III物質、 SF2809 - IV物質、 SF2809— V物質ま た ίま SF2809— VI物質、あ る レヽ ίまそ の製薬学 的に許容 さ れる塩を 、 製薬学上許容 し得る 担体 と と も に 含んでな る 医薬組成物が提供 さ れ る。

第 3 の本発明組成物はキマ ーゼ阻害活性を有 し、 ヒ ト を含む動物に医薬 と して投与す る こ と がで き る 。 具体的 には第 3 の本発明組成物は心筋梗塞、 心肥大、 心不全、 心筋症、 動脈硬化、 高血圧、 血管内膜肥厚、 末梢循環器 障害、 腎不全、 ア レルギー、 各種の炎症、 ア ト ピー性皮 膚炎、 リ ウ マチ、 喘息、 気管支炎等の治療 も し く は予防 に効果力 S あ る。

第 3 の本発明 に よ る 医薬組成物において 、 配合 さ れ る 担体は製薬学技術で慣用 さ れ る 固体ま たは液体状の担体 であ る こ と がで き る 。 固体状担体は例 えば、 デ ンプン、 乳糖、 結晶セ ル ロ ー ス 、 炭酸カ ル シ ウ ムであ る こ と がで き 、 ま た液体状担体は例 えば生理食塩水、 含水エ タ ノ ー ルま たはエ タ ノ ールであ る こ と ができ る 。 本組成物にお け る 有効成分 と し て の S F 2 8 0 9物質の含量は、 疾病を治療 する の に充分な量であれば特に限定 さ れな いが 、 例 えば 組成物全体の重量に基づいて 0 . 0 1 %以上 1 0 0 %未満、好ま し く は 0 . 1 %以上 8 0 %以下の範囲であ る こ と が でき る。 第 3 の本発明 に よ る 医薬組成物は、 こ れを投与する 場 合、 種 々 の使用担体、 投与形態あ る いは使用形態に合わ せて、 常法に従い製剤化 さ れ る。

経 口 投与のた めの製剤 と して は、 錠剤、 丸剤、 顆粒剤、 カ プセル剤、 散剤、 液剤、 懸濁剤、 シ ロ ッ プ剤、 舌下剤 等が挙げ られる 。ま た非経 口 投与のた めの製剤 と して は、 注射剤、 経皮吸収剤、 吸入剤、 坐剤等が挙げ られる 。 製 剤化に際 して は、 界面活性剤、 賦形剤 、 安定化剤、 湿潤 剤、 崩壊剤、 溶解補助剤、 等張剤、 緩衝剤、 着色料、 着 香料等の医薬用添加剤を適宜使用する 。

医薬 と し て の SF2809 - I物質〜 SF2809— VI物質の投与量 は、 患者の年齢、 体重、 疾病の種類や程度、 投与経路に よ り 異な る が、 ヒ ト に経 口 投与す る 場合に は成人一人 当 た り 一 日 に 0.01〜 1000mg/kgの範囲であ り 、ま た静脈投与 の場合に は同 じ く 0. 001〜 100 rag/kgの範囲 内で投与する _c さ ら に、 第 4 の本発明 において は、 前記の式 （I)の SF2 809 - I物質、 式 （II)の SF2809- II物質、 式 （ 111 )の S F2809 - III物質、 式（IV)の SF2809 - IV物質、 式 （V)の SF2809 - V物質 ま たは式 （VI)の SF2809- VI物質、あ る いはその製薬学的に 許容 さ れる塩よ り な る キマーゼ阻害剤が提供さ れる。 第 4 の本発明 に よ る'キマーゼ阻害剤では、SF2809- I物質〜 S F2809- VI物質の各々 、 あ る いはそ の塩がそ のま ま 単独に 使用 でき 、 例え ば酵素に対す る試薬 と して利用 でき る。

さ ら にま た、 第 5 の本発明 において は、 有用 で新規な 微生物 と して、 前記 さ れた菌学的性質を有 して ダク チ 口 ス ポラ ンギ ゥ ム属 に属す る微生物であ っ て 、前記の式 （I) の SF2809- I物質、 式 （II)の SF2809 - 11物質、 式 （III)の SF 2809 - III物質、 式 （IV)の SF2809-IV物質、 式 （V)の SF2809 -V物質お よ び式 （VI)の SF2809- VI物質を生産す る 特性 を 有 し、ま た工業技術院生命工学工業技術研究所にお け る F ERM BP 6872の受託番号を有する SF2809株力 S提供 さ れ る。 発明 を 実施する ため の最良の形態

以下に本発明 の実施例 を示すが 、 本発明 は こ れに限定 さ れ る も のではな く 、 こ こ に示 さ なかっ た変法あ る レヽは 修飾手段の全て を包括す る。

実施例 1 SF2809物質の生産

( 1 ) SF2809物質生産菌 の培養

グル コ ー ス 1.0 % 、 可溶性澱粉 2.0 % 、 酵母エ キ ス 0.3 % ポ リ ペプ ト ン 0. 5 %、小麦胚芽 0.6 %、 ソ ィ ビー ン ミ ール 0. 2 %お よ び炭酸カ ル シ ウ ム 0.2 % を含み、 6N NaOHで pH 7. 0に調整 した前培養培地 を 100 ml容エ レ ンマイ ヤー フ ラ ス コ 3本に 20 mlずつ分注 し、 120°Cで 20分間滅菌 した。 こ れに寒天平板で培養 した SF2809株 ( FERM BP— 6872と して 寄託） を一 白金耳ずっ植菌 し、 28°Cで 4日 間振盪培養 した , 次いで別量の前培養培地を 2 L 容エ レ ンマ イ ヤー フ ラ ス コ 3本に 200 mlずつ分注 して 120°Cで 20 分間滅菌処理 し 、 これに前述の振 と う 培養 で得た培養液の全量を移植後 2 8°Cで 2日 間振盪培養 し て種培養液 と し て用 いた。

一方、 グル コ ー ス 2.0 %、 可溶性澱粉 1.0 % 、 ソ ィ ビー ン ミ ー ル 1.5 % 、 ポ リ ペ プ ト ン 0. 1 % 、 小麦胚芽 0.8 % 、 ス タ ミ ノ ール 0. 1 %、 塩化ナ ト リ ゥ ム 0. 1 %お よ び炭酸カ ル シ ゥ ム 0.2% を含み、 6N NaOHで pH 8.0に調整 した生産用 培地 30 Lを、 50 L容の ジ ャ ー フ ア ー メ ンタ ー 4基に注入 し 120°Cで 20分間滅菌 した。 そ の後、 先 に得た種培養液の全 量を無菌的に接種 し、 28°Cで 5日 間培養 した。 撹拌は、 2 50 rpm、 通気量は 17.5 L ノ m i n で行っ た。

( 2 ) SF2809物質の採取 と 精製

こ う して得 ら れた培養物 120 Lを遠心ろ過で菌体 と 上 清に分離 した。上清に酢酸ェチル 100 Lを加えて撹拌抽出 した。 ま た菌体に 50%ァセ ト ン 50 Lを力 B えて抽出 し 、 そ の ろ液カゝ ら減圧下でァセ ト ン を留去 した後 、 30 Lの酢酸 ェチルで抽出 した。 こ う して得 られた酢酸ェチル層 を合 わせて減圧下濃縮 し 、 粗抽出物 56 gを得た。 粗抽出物は 2 Lのへキサ ンで洗浄後、 メ タ ノ ール 500 mlに溶解 し 、 15 0 gの シ リ カ ゲル （ ヮ コ一ゲル C300、 和光純薬） を加 えて 減圧下乾固 した。

こ う して シ リ カ ゲルに吸着 さ せた粗抽出物を グラ ス フ ィ ルタ ー上の シ リ カ ゲノレ 300 gに重層 し、 ク ロ ロ ホ /レ ム 3 Lで洗浄後、 3 %メ タ ノ ー ル /ク 口 口 ホ ル ム 4 Lで溶出 した , 溶出液を減圧下濃縮乾固 して 20 gの乾固物 を得た。 こ れ を少量の メ タ ノ ールに溶解後 、 そ の溶液を メ タ ノ ールで 充填 したセ フ ア デ ッ ク ス LH- 20 ( 2000 ml、 フ ァ ノレマ シ ア 社） カ ラ ム に 3回に分けて供与 し、 それぞれメ タ ノ ー ル で 溶出 して活性分画を集め乾固 した （ 1.9 g) 。

得 られた乾固残渣を少量の メ タ ノ ールに溶解 し、 2倍容 量の水 をカ卩 えた後、 得 ら れた溶液を 、 30%ァセ ト ニ ト リ ル /水で充填 した コ スモ シ一ノレ（ 300 ml、ナカ ラ イ テ ス ク ） カ ラ ム に重層 した。 初め は 30%ァセ ト ニ ト リ ル、 続いて 7 0%ァセ ト ニ ト リ ルで溶出 し、活性分画を集めて乾固 した ( 107 mg) 。 得 られた活性分画は少量の メ タ ノ ール に溶 解後、 その溶液を、 3回に分けて HPLC (カ ラ ム ： イ ナー ト シ ゾレ 0DS— 2、 内径 2 cm X 25 cm, ジーェ ノレサイ エ ン ス社） に注入 し、 40 %〜 65 %ァセ ト ニ ト リ ル /水の グ ラ ジェ ン ト をかけて溶出 した。 活性分画 と して 6分画が得 られた。 こ れ ら 6 分画を、 それぞれに乾固 した。 こ う して HPLCの溶 出順に SF2809— I物質 （ 2.3 mg) 、 SF2809— II物質

( 1.3 mg) 、 SF2809- III物質 （ 2.3 mg) 、 SF2809- IV物質 ( 2.7 mg) 、 SF2809- V物質 （ 1. 1 mg) お よ び SF2809- VI 物質 （ 1.0 mg) を得た。

産業上の利用可能性

以上、 説明 した と お り 、 本発明 においては、 キマ ーゼ 阻害活性を有する SF2809 1物質、 SF2809- II物質、 SF280 9-III物質、 SF2809- IV物質、 SF2809-V物質お よ び SF2809 -VI物質、あ る いはそれ ら の製薬上許容 さ れる塩が得 られ た。 ま た、 SF2809- I〜 - VI物質の製造方法が提供 さ れる。 本発明 に よ る SF2809- I〜 - VI物質は、キマ ーゼカ S関与す る 各種の病気の治療ま たは予防に有効であ る と 期待 さ れる ，

Claims

請求の範囲

次の一般式 （VII)

〔式中 、 R¹は水素原子、 フ エ 二ノレ基ま たは p — ヒ ド ロ キ シフ エ 二ル基で あ り 、 R²はァセ チルァ ミ ノ 基- NHC0CH₃ま たは ヒ ド ロ キ シル基であ り 、 そ し て SF2809- I物質では R¹ は水素原子で且つ R²はァセチルァ ミ ノ 基であ り 、 SF2809 - 11物質では R ¹は P-ヒ ド ロ キ シ フ エ ニル基で且つ R²はァ セチルァ ミ ノ 基であ り 、 SF2809- 111物質では R¹は水素原 子で且つ R²は ヒ ド ロ キ シル基であ り 、 SF2809- IV物質では R ¹は p -ヒ ド ロ キ シフ エニル基で且つ R²は ヒ ド ロ キ シル基 であ り 、 SF2809- V物質では R¹はフエニル基で且つ R²はァ セチルア ミ ノ 基であ り 、 ま た SF2809-VI物質では R¹は フエ ニル基で且つ R²は ヒ ド ロ キ シル基であ る 〕 で表 さ れ る SF 2809 - I物質、 SF2809 - II物質、 S F 2809 - I 11物質、 SF2809- IV物質、 SF2809— V物質ま たは SF2809— VI物質であ るィ匕合物 あ る いはその製薬学的に許容 さ れ る塩。

2 . 次式 （ I )

で表わ さ れ る SF2809- I物質であ る 請求の範囲 1 に記載の 化合物、 ま たはその製薬学的 に許容 さ れる塩。

3 . 次式 （ 11 )

で表わ さ れ る SF2809- II物質であ る 請求の範囲 1 5C載 の化合物、 ま た はそ の製薬学的に許容 さ れ る塩

4 . 次式 （ 111 )

(ΠΙ)

で表わ さ れ る SF2809- III物質であ る請求の範囲 1 に記載 の化合物、 ま た はそ の製薬学的に許容 さ れる塩。

5 . 次式 （IV)

で表わ さ れ る SF2809- IV物質であ る 請求の範囲 1 に記載 の化合物、 ま た はそ の製薬学的に許容 さ れ る塩。

6 . 次式 （V)

で表わ さ れる SF2809- V物質であ る請求の範囲 1 に記載 の化合物、 ま た はそ の製薬学的に許容 さ れ る塩。

7 . 次式 （VI)

で表わ さ れ る SF2809- VI物質であ る 請求の範囲 1 に記载 の化合物、 ま た はそ の製薬学的 に許容 さ れ る塩。

8 . ダク チ ロ ス ポ ラ ン ギ ゥ ム属 に属 して且つ請求の範 囲 2 に記載の式 （I)の SF2809- I 物質、 請求の範囲 3 に記 載の式 （II)の SF2809- II物質、 請求の範囲 4 に記載の式 (III)の SF2809- III物質、 請求の範囲 5 に記載の式 （IV) の SF2809 - IV物質、 請求の範囲 6 に記載の式 （V)の SF2809 - V物質お よ び請求の範囲 7 に記載の式 （VI)の SF2809-VI 物質の う ち の少な く と も 一 つ を生産す る 菌 を培養 し、 そ の培養物力 ら SF2809— I物質、 SF2809— II物質、 SF2809-II I物質、 SF2809 - IV物質、 SF2809 - V物質お よ び SF2809 - VI 物質の少な く と も一 つを採取する こ と を特徴 と する 、 SF 2809 - I 物質、 SF2809 - II物質、 S F 2809 - 111物質、 SF2809 -IV物質、 SF2809 - V物質お よ び （ま た は） SF2809- VI物質 の製造法。

9 .使用 さ れ る SF2809- I 〜 VI物質の少 く と も 一つ を生 産す る 生産菌が工業技術院生命工学工業技術研究所に FE RM BP- 6872の受託番号で寄託 さ れて あ る SF2809株であ る 請求の範囲 8 に記載の方法。

1 0 . 請求の範囲 2 〜 7 にそれぞれ記載の式 （ I )の SF 2809- I 物質、 式 （II)の SF2809-II物質、 式 （III)の SF280 9 - III物質、 式 （IV)の SF2809-IV物質、 式 （V )の SF2809- V物質ま たは式 （VI)の SF2809- VI物質、あ る レ、 はそ の製薬 学的に許容 さ れ る塩を、 製薬学上許容 し得 る 担体 と と も に含んでな る 医薬組成物。

1 1 . 心筋梗塞、 心肥大、 心不全、 心筋症、 動脈硬化、 高血圧、 血管内膜肥厚、 末梢循環器障害、 腎不全、 炎症、 ア レル ギー 、 ア ト ピー性皮膚炎、 リ ウ マチ、 喘息ま たは 気管支炎の治療 も し く は予防に用 い ら れる 請求の範囲

1 0 に記載の医薬組成物。

1 2 . 請求の範囲 2 〜 7 にそれぞれ記載の式 （I)の SF 2809- 1 物質、 式 （II)の SF2809- II物質、 式 （III)の SF 2809- III物質、 式（IV)の SF2809 - IV物質、 式 （V)の SF2809 -V物質ま たは式 （VI)の SF2809- VI物質、 あ る いはそ の製 薬学的 に許容 さ れる塩よ り な る キマ ーゼ阻害剤。

1 3 . 前記 さ れる 菌学的性質を有 し て ダ ク チ ロ ス ボ ラ ンギ ゥ ム属 に属する微生物であっ て、 請求の範囲 2 〜 7 にそれぞれ記載の式 （I)の SF2809- 1物質、 式 （II)の SF280 9- II物質、 式 （III)の SF2809 - III物質、 式 （ IV)の SF2809 - IV物質、 式 （V)の SF2809- V物質お よ び式 （VI)の SF2809 - V I物質を生産す る 特性を有 し、ま た工業技術院生命工学ェ 業技術研究所におけ る FERM BP- 6872の受託番号を有す る SF - 2809株。