WO1996025386A1 - Phosphodiesterase inhibitor and process for producing the same - Google Patents

Phosphodiesterase inhibitor and process for producing the same Download PDF

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WO1996025386A1
WO1996025386A1 PCT/JP1996/000316 JP9600316W WO9625386A1 WO 1996025386 A1 WO1996025386 A1 WO 1996025386A1 JP 9600316 W JP9600316 W JP 9600316W WO 9625386 A1 WO9625386 A1 WO 9625386A1
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WO
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general formula
substituted
compound
acid derivative
group
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Application number
PCT/JP1996/000316
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French (fr)
Japanese (ja)
Inventor
Koichi Ishida
Mitsuo Enomoto
Shinji Fujita
Hiroko Oka
Original Assignee
Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
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Publication date
Application filed by Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha filed Critical Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/62—Carboxylic acid esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/76—Esters of carboxylic acids having a carboxyl group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C07C69/84—Esters of carboxylic acids having a carboxyl group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of monocyclic hydroxy carboxylic acids, the hydroxy groups and the carboxyl groups of which are bound to carbon atoms of a six-membered aromatic ring
    • C07C69/88—Esters of carboxylic acids having a carboxyl group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of monocyclic hydroxy carboxylic acids, the hydroxy groups and the carboxyl groups of which are bound to carbon atoms of a six-membered aromatic ring with esterified carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/76—Esters of carboxylic acids having a carboxyl group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C07C69/84—Esters of carboxylic acids having a carboxyl group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of monocyclic hydroxy carboxylic acids, the hydroxy groups and the carboxyl groups of which are bound to carbon atoms of a six-membered aromatic ring
    • C07C69/90—Esters of carboxylic acids having a carboxyl group bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring of monocyclic hydroxy carboxylic acids, the hydroxy groups and the carboxyl groups of which are bound to carbon atoms of a six-membered aromatic ring with esterified hydroxyl and carboxyl groups

Definitions

  • the present invention relates to cyclic adenosine 3,5, monophosphate phosphodiesterase inhibitors.
  • These inhibitors include, for example, antiasthmatics, bronchodilators, antiallergics, antiinflammatory, antirheumatics, antihypertensives, angina pectoris, arrhythmias, platelet aggregation inhibitors, cerebral circulatory metabolism It is expected to be used as a remedy and antidepressant.
  • m represents 0 or 1
  • R and R 2 and R 3 are lower alkyl groups
  • R 4 and R 5 are hydrogen atoms or halogen atoms
  • R 6, R 7, R 8 and R 9 are hydrogen atoms or Each represents a lower alkyl group.
  • NF 006 34-1 a compound in which m is 0, R 1 and R 3 are each a propyl group, and R 4, R 5, R 6, R 7 and R 9 are all hydrogen atoms
  • NF 00634-2 a compound in which m is 0, R 1 is a pentyl group, R 3 is a propyl group, and R 4, R 5, R 6, R 7 and R 9 are all hydrogen atoms
  • (V) a compound wherein m is 0, R 1 and R 3 are propyl groups, R 5 is a chlorine atom, and R 4, R 6, R 7 and R 9 are all hydrogen atoms;
  • R 1 and R 3 are propyl groups
  • R 4 is a chlorine atom
  • R 6 is a methyl group
  • R 5, R 7 and R 9 are all hydrogen atoms
  • (X) m is 0, R 1 and R 3 are each a methyl group, R 4, R 5, R 6, A compound in which R 7 and R 9 are all hydrogen atoms (hereinafter referred to as PD-003) has histidine decarboxylase inhibitory activity and inhibits histamine biosynthesis JP-1 A- 48-6 1690
  • R 1 and R 3 are each a pentyl group, and R 4, R 5, R 6, R 7 and R 9 are all compounds having a hydrogen atom.
  • the power of possession is described in PROSTAGLANDINS, Vol. 21, p. 21 (1982).
  • Cyclic adenosine 3 ', 5'-monophosphate (hereinafter abbreviated as c-AMP) is involved in cell function, cell proliferation and cell differentiation as a second messenger in vivo.
  • An enzyme that degrades c-AMP to adenosine 5, monophosphate (hereinafter abbreviated as 5'-AMP) is a cyclic adenosine 3 ', 5'-monophosphate phosphodiesterase (hereinafter referred to as phospho-adenosine). It is abbreviated as fodiesterase.
  • Substances that inhibit the activity of this enzyme increase the amount of c-AMP and c-GMP in cells. It has the effect of controlling the cellular response. Specifically, it is generally known that such a phosphogesterase inhibitor exhibits a smooth muscle relaxing action, a leukocyte cell activation suppressing action, and the like.
  • the inventors of the present invention have found a phosphodiesterase inhibitor that solves the above-mentioned inconvenience, and as a result of intensive studies, completed the present invention.
  • the present invention relates to the following (1) to (14):
  • m represents 0 or 1
  • R 1, R 2 and R 3 are lower alkyl groups
  • R 4 and R 5 are hydrogen atoms or halogen atoms
  • R 6, R 7, R 8 and R 9 are hydrogen Represents an atom or a lower alkyl group, respectively.
  • a phosphodiesterase inhibitor comprising, as an active ingredient, a 6-substituted 1 / S-resornulic acid derivative or a pharmacologically acceptable salt thereof represented by
  • n 0 or 1
  • R1, R2 and R3 each represent a lower alkyl group.
  • m is 1, and R1, R2, and R3 forces are each selected from the group consisting of methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, and isobutyl.
  • a bronchodilator comprising as an active ingredient a 6-substituted-13-resorcylic acid derivative represented by the general formula [1] described in (1) and a pharmacologically acceptable salt thereof,
  • n and n 3 are each 2, n, is 4, n 3 is 2, or n, is 0 and n 3 is 2 as a bronchial system.
  • one (CH 2) ", CH 3 , one (CH 2) n2 CH 3 and one (CH 2)" is a group represented by 3 CH 3, wherein n,, n 2 and n 3 are each 2 or
  • a method for producing a 6-substituted- ⁇ -resorcylic acid derivative comprising culturing a microorganism having an ability to produce the above-mentioned derivative representing 4, and collecting the above-mentioned 6-substituted-resorcylic acid derivative from the obtained culture.
  • FIG. 1 shows the mass spectrum of compound NF00634-4.
  • FIG. 2 shows the mass spectrum of compound NF00634-5.
  • FIG. 3 shows the mass spectrum of compound PD-001.
  • FIG. 4 shows the mass spectrum of compound PD-004.
  • Phosphogesterase inhibitors containing a 6-substituted mono-S-resorcylic acid derivative represented by the above general formula [1] or a salt thereof (hereinafter referred to as the present compound) as an active ingredient include, for example, tracheal smooth muscle relaxing action, eosinophils, It has an inhibitory effect on the activation of leukocytes such as bronchial diseases such as bronchial asthma and bronchitis, antiallergic drugs, antiinflammatory drugs, antirheumatic drugs, antihypertensive drugs, angina pectoris, etc.
  • the lower alkyl group represented by each include an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms which may have a side chain, and preferably 1 to 5 carbon atoms.
  • the halogen atom represented by R 4 and R 5 in the general formula [1] includes, for example, fluorine, chlorine, bromine and iodine.
  • the compounds represented by the general formula [1] preferred are the compounds represented by the general formula [1 ']. More preferably, in the general formula [1 ′], m is 0 or 1, and R 1, R 2 and R 3 are each — (CH 2 ) n .CH 3 ,
  • n 2 and n 3 0-5 preferably represents. An integer from 0 to 3 is a group shown by the compound.
  • 6-substituted 1 ⁇ resorcylic acid derivatives according to the present invention are exemplified below: 2-Hydroxy-1- (2,4-dihydroxy-6-propylbenzoyloxy) — 6-propylbenzoic acid (hereinafter referred to as NF 0 6 3 4-1),
  • NF 0 6 3 4-1 From the viewpoint of being excellent in at least one of the following, NF 0 6 3 4-1, NF 0 6 3 4-2, NF 0 6 3 4-3, and PD-0 4.
  • compounds included in the general formula [1] include the following compounds:
  • the compound When the compound is used as a phosphodiesterase inhibitor, the compound may be used alone or in combination with an excipient or carrier, for injection, inhalation, tablet, granule, fine granule, powder, capsule, suppository. Or ophthalmic solution, patch, ointment, spray, etc., and administer this formulation orally or parenterally.
  • Pharmaceutically acceptable additives are selected as excipients or carriers, and the type and composition are determined by the administration route and the administration method. For example, in the case of an injection, a salt or a saccharide such as glucose or mannitol is generally desirable. In the case of oral preparations, starch, lactose, crystalline cellulose, magnesium stearate and the like are desirable.
  • the content of the present compound in the preparation varies depending on the preparation, it is usually 0.1 to 100% by weight, preferably 1 to 98% by weight.
  • the content of the present compound is usually 0.1 to 30% by weight, preferably 1 to 10% by weight.
  • the compound is used together with additives in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids, dry drops, etc.
  • the content of the compound is generally 5 to 100% by weight, preferably 25 to 98% by weight.
  • the dosage is determined according to the age, weight, symptoms, treatment purpose, etc. of the patient, but the therapeutically effective dose is generally 1 to 10 O mg / kgday for parenteral administration and 5 to 5 for oral administration. 0 0 mg / kg ⁇ day.
  • the compounds are characterized by low toxicity and low accumulation of toxicity by continuous administration. For example, even when the compound was administered once intraperitoneally to mice at a dose of 100 mg / kg, no signs of toxicity were observed.
  • microorganism having the ability to produce the present compound examples include those belonging to the genus Dendrodochium.
  • the strain NF 0 6 3 4 isolated by the present inventors is an example of the strain most effectively used in the present invention, and is available from the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology. 5 Deposit No. FE RM P— 1 4 2 7 4 on April 12, 1904, Higashi 1-3-1, Higashi 1-chome, Tsukuba-shi, Ibaraki Pref., February 1, 1996 The original deposit was transferred to the International Deposit under the Budapest Treaty under the accession number FE RM BP—5379.
  • the bacteriological properties of this strain are as follows.
  • Peripheral hyphae are needle-like and colorless and pointed. The inside is deeply dug in a cup shape. Peripheral hyphae are 150-300 m in height, 105-264 m in width, average 210 x 160 m, and are white to milky or light brown.
  • the conidiophores originate from the basal hypha or the constellation layer and branch repeatedly, giving rise to two to four branches at the branch.
  • the width of the conidiophores ranges from 1.6 to 2.8 zm.
  • the conidium-forming cells are phialidated and have two to several rings, and have a cylindrical shape of 5.6 to 16 ⁇ mx l. 0 to 1.6 m.
  • the conidium is a filamentous conidium and is an elongated spindle or crescent with a size of 4.0 to 7.2 X 1.0 to 1.6 m. Both ends are sharp. Many collect as milky viscous masses on the constellation.
  • the optimal growth temperature of this strain is around 25 ° C and does not grow at 37 ° C.
  • the range of growth pH is as wide as 3 to 11 and the optimum pH is 5 to 6.
  • this strain was identified as fungal phylum, incomplete according to DL Hawksworth BC Sutton and GG Ainsworth, "Ains orth and Bisby's Dictionary of the Fungi", 7th ed., CMI, Kew, (1983). It was identified as the genus Dendrodochiuip of the mycophyta and incomplete filamentous fungi. Species search was further performed, but the species was not identified. Therefore, this strain was named Dendrodochium sp. NF00634.
  • a microorganism belonging to the genus Dendrodochim and having the ability to produce the present compound is cultured in a medium to produce and accumulate the present compound in the culture, and then this is collected. Good.
  • the culture method is basically the same as the culture method of filamentous fungi, but usually deep Culture methods are advantageous.
  • the medium used for the culture may be any medium containing a nutrient used by the strain NF 06634.
  • Known nutrient sources that have been conventionally used for cultivation of filamentous fungi can be used. Examples of carbon sources include glucose, galactose, mannitol, dextrin, starch, starch syrup (starch malt saccharified product), and soybean oil. Can be used alone or in combination.
  • Sources of inorganic and organic nitrogen include ammonium chloride, ammonium sulfate, urea, ammonium nitrate, sodium nitrate, peptone, meat extract, yeast extract, dried yeast, corn steep liquor, soybean oil cas, sotitol, casamino acid , Bacto Soi Ton, Soluble Vegetable Protein, etc. can be used alone or in combination.
  • inorganic salts such as salt, magnesium sulfate, copper sulfate, zinc sulfate, manganese chloride, calcium carbonate, phosphate, etc. can be added, as well as the growth of the bacterium and inhibition of phosphodiesterase.
  • Organic substances such as nucleic acids, amino acids, vitamins and inorganic substances, which promote the production of the agent can be added appropriately.
  • the cultivation is usually carried out under aerobic conditions such as shaking culture or aeration and stirring culture. Practically, deep aeration stirring culture is preferable.
  • the pH of the medium is, for example, 5.0 to 8.0, but is preferably around neutral.
  • the culture temperature is preferably from 25 to 28 ° C.
  • culture time in the case of liquid culture, culture is usually performed for 2 to 4 days, and the culture is terminated when the accumulated amount of the compound in the culture reaches the maximum.
  • Culture conditions such as medium composition, medium liquidity, culture temperature, agitation speed, aeration rate, etc. can be appropriately adjusted and selected so as to obtain preferable results depending on the type of bacterial strain used and external conditions. Needless to say.
  • an antifoaming agent such as silicone oil, vegetable oil, or a surfactant is appropriately used.
  • the present compound accumulated in the culture thus obtained is usually produced in cultured cells.
  • the means usually used for collecting metabolites from the culture solution of microorganisms are used alone, in any combination, or repeatedly applied.
  • this compound Since this compound is mainly produced and accumulated in cultured cells, it can be collected from the cell pellet obtained by filtering or centrifuging the culture solution.
  • the cultured cells remaining after removing the liquid components from the culture are extracted with methanol, the obtained extract is concentrated, extracted with ethyl acetate, silica gel column chromatography, Sephadex LH-20 chromatography. This compound can be isolated by chromatography or the like.
  • the main compounds NF 0 6 3 4 — 1, NF 0 6 3 4-2, NF 0 6 3 4-3, NF 0 0 6 3 4-4 and NF 0 6 3 4-5 show the following physicochemical properties, respectively. It was confirmed that the compounds N F 0 634-1, N F 0 6 0 3-4-2 and N F 0 0 6 3 4-3 corresponded to the physicochemical properties described in publicly known documents, respectively.
  • NF 066 34 and NF 066 4-5 the structural formulas estimated from data obtained by mass spectrometry and the like are shown.
  • This compound can also be produced by synthesis, and the synthesis method is specifically described below.
  • R 3 and R 9 represent the same meaning as described above, and R 11 represents a protecting group for a carboxyl group.
  • R 2 and R 8 represent the same meaning as described above, and R 12 represents a carboxyl-protecting group.
  • R ′ represents a lower alkyl group
  • R ⁇ represents a carboxyl-protecting group
  • R and R ′ have the same meanings as described above.
  • R and R ′ are a propyl group or a methyl group, and R ′ and are each a benzyl group.
  • Examples of the benzoic acid having a substituent represented by the above general formula [6], [8] or [3] as a starting material include, for example, a hydroxyl group at the 4-position of the following compound, Those protected with protecting groups include:
  • P-hydroxybenzoic acid derivative represented by the above general formula [7], [9] or [2], which is also a starting material include, for example, carboxyl groups of the following p-hydroxybenzoic acid derivatives Is protected by a commonly used suitable protecting group:
  • the compound represented by the general formula [6], [8] or [3] or [7], [9] or [2], which is the above-mentioned starting material, is obtained by, for example, using Meldrum's acid and carboxylic acid chloride as starting materials.
  • the main compounds PD—01, PD—002, PD—003, PD—004, PD—005, PD— 06 and PD-07 show the following physicochemical properties, respectively.
  • PD-001 is the same compound as the above-mentioned NF 066 34-1, but hereinafter, the compound obtained by the synthesis is distinguished as PD-001.
  • Phosphodiesterase isozymes of the types (I) to (V) are known, which are described in Biochemical Pharmacology, Vol. 42, No. 3, pp. 663-677 (1991) and Biochemica et Biophysica. Acta, Vol. 429, pp. 461-473 (1976).
  • isozymes (I) to (IV) are prepared according to the method of the literature to inhibit the activity of inhibiting phosphodiesterase, the activity of inhibiting bronchial smooth muscle contraction and the activity of eosinophil activation. The activity was examined.
  • the mixture was centrifuged at 000 xg for 20 minutes, and the resulting supernatant was used as a crude enzyme solution of soluble phosphodiesterase. Further, a soluble crude enzyme fraction was added to Q-Sepharose 'Fastfum® (100 ml), washed with the above buffer, and eluted with a concentration gradient of 50 mM to 1 M sodium acetate. Phosphodiesterase eluted with 0.3 M sodium acetate was used for crude enzyme fraction of isozyme (I), and phosphodiesterase eluted with 0.5 M sodium acetate was used for crude enzyme fraction of isozyme (II). Phosphogesterase eluted with 8M sodium acetate was used as a crude enzyme fraction of isozyme (III).
  • the phosphodiesterase inhibitory activity was measured by performing an enzymatic reaction using c-AMP (manufactured by Sigma, USA) as a substrate, and then quantifying the remaining c-AMP by high performance liquid chromatography.
  • c-AMP manufactured by Sigma, USA
  • 0.3 m 1 volume plastic tube Add the following additives: 0.0 2 mg / m 1 c-AMP. 2.5 mM dithioslate, 6 mM magnesium chloride, 5 OmM Tris buffer (pH 8.0), 1
  • One phosphodiesterase isozyme and the compound were added, and the final volume was adjusted to 200 u1 with water. The mixture was agitated and incubated at 37 ° C for 60 minutes.
  • the reaction was stopped by adding 20 ⁇ l of a 20 OmM EDTA aqueous solution to each tube.
  • This solution 201 was subjected to high performance liquid chromatography (ODS column: 150 mm ⁇ 3.9 mm, manufactured by WATERS, USA), and the amount of remaining c-AMP was measured to calculate a 50% inhibitory concentration.
  • the test was performed twice, and the phosphodiesterase isozymes (I) to (IV) used in each test were prepared for each test by the method described above.
  • Tables 1 and 2 show the 50% inhibitory concentrations (IC 5 ) of each compound for each phosphodiesterase isozyme.
  • Test 1 I C phosphodiesterase isozyme of each compound against phosphodiesterase isozyme
  • the compounds NF 00634-1, NF 00634-2 and PD-004 have strong inhibitory activity against Phosphogesterase isozyme (IV) and compounds against Phosphodiesterase isozyme (III). Poor inhibitory activity It is expected to be used as a therapeutic agent for bronchial diseases with few side effects on the power, heart, etc.
  • the compounds NF00634-1 and PD-004 are considered to be the most preferred compounds because of their large difference in activity against phosphogestellar zeaisozymes (III) and (IV).
  • Trachea were isolated from male Hartley guinea pigs weighing about 400-500 g. The trachea was cut off at the cartilage section opposite to the smooth muscle and cut into lmm-wide pieces. Five of these small pieces were tied with a silk thread to make one piece, and both ends were tied with a sewing thread, and then suspended in an organ bath with a tension of 0.5 g. At this time the bath temperature was set to 3 7 ° C, the nutrient solution is Krebs - Henseleit buffer (118mM NaCl, 4.6mM KC1, 1. lmM MgS0 4 - 7H 2 0, 1.8mM CaC - 2H 2 0, 24.9mM NaHC0 3) 1.
  • OmM KH 2 P0 4 ⁇ 2H 2 0, was used 11. LMM glucose). Also the nutrient solution 5 Zetamyu of indomethacin was added and thoroughly aerated with 95% 0 2 + 5% C0 2 gas mixture. The suspended tissue was incubated in an organ bath for about 2 hours to adjust to the external environment and contracted with 10 M histamine. After the contraction was stabilized, the compound (hereinafter referred to as drug) was added to a concentration of 0.1, 0.3, 1.0, 3.0, 10, or 30 gZml (concentration in organ bath). The reaction at each concentration is performed until the relaxation reaction becomes stable.If no relaxation reaction is observed 10 minutes after application of the drug, the drug is placed in an organ bath so that the next higher concentration is reached.
  • drug concentration in organ bath
  • DMSO dimethylsulfoxide
  • the maximum contraction position of 100 ⁇ M histamine was set at 100%, and the maximum relaxation position of 0.2 mM papaverine was set at 0%, and the 50% contraction inhibitory concentration (IC 5 ) of each drug was measured. Table 3 shows the results.
  • Guinea pigs (Hartley, 6 weeks old) were intraperitoneally administered with 1 mg of polymyxin B (Sigma). The administration was performed once a week for 6 to 8 weeks. After the final administration of polymyxin B, 5 Oml of PBS (phosphate-buffered saline) was injected into the peritoneal cavity of guinea pigs, and the cells were collected.
  • polymyxin B polymyxin B
  • the collected cells were centrifuged at 800 rpm for 5 minutes at Z minute, and the cells infiltrating the peritoneal cavity were collected as a precipitate.
  • the precipitated cells were suspended in lml of 40% Ficoll solution (Pharmacia), HBS S (Hanks' adjusted salt solution) and layered on a Ficoll discontinuous density gradient (40-90%).
  • This ficoll solution was centrifuged at 1500 rpm for 40 minutes, and the eosinophil fraction was collected. Usually, eosinophils with a purity of 99% or more were obtained by this operation.
  • RPMI 1640 medium (10% BSA (Pseudoserum albumin-Behringer Mannheim)), resuspended to a certain cell concentration, and used for the intended experiment. .
  • the measured value was obtained by measuring the amount of chemiluminescence for 5 minutes, and the 50% inhibitory concentration (IC 5 ) was calculated. Table 3 shows the results.
  • the drugs used in Experimental Examples 2 and 3 include the compounds PD-001, PD-002, PD-003, PD-004, and PD-001, obtained in Examples 2 to 8 described below.
  • PD-005, PD-006 and PD-07 were used.
  • PD-0 0 1 is the above-mentioned NF 0
  • the residual rate in the blood after administration was high, and a sustained drug effect could be expected.
  • PD-004 maintained a residual rate of 60% at 4 minutes after administration and 27% at 12 minutes, especially PD-001 was 86% at 4 minutes after administration. A retention rate of 51% was maintained in 12 minutes, which proved to be more favorable.
  • FERM P-1 4 2 7 was inoculated from the slant culture by one loopful of platinum loop, and cultured by rotary shaking at 27 for 2 days to obtain a seed.
  • the active fraction was collected and concentrated under reduced pressure to obtain 30 Omg of a dried product.
  • High-performance liquid chromatography ( ⁇ 2 x 25 cm: flow rate 16 ml / min) was applied to this, using a buffer of ammonium formate, and acetonitrile concentration of 10% at the start of elution, and 110 minutes after elution.
  • a compound exhibiting phosphodiesterase inhibitory activity was isolated by elution with a linear concentration gradient of acetonitrile at a concentration of 100%.
  • the yield of each compound was 40 mg for NF 0 6 3 4—1, 40 mg for NF 0 6 3 4—2, 40 mg for NF 0 6 3 4—3, and NF 0 6 3 4— 4 was 20 mg, NF 066 34-5 was 20 mg, and the purity was 90% or more, respectively.
  • the compound (1.28 g) obtained above was dissolved in acetone (60 ml), and anhydrous potassium carbonate (2.37 g) and benzyl bromide (0.7 ml) were added thereto. The mixture was stirred at ° C for 3.5 hours. 1N HC1 was added to the obtained mixture, and the mixture was extracted with a ether. The obtained organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, and dried under reduced pressure. Concentrated. The residue was subjected to silica gel chromatography to obtain the desired compound (1.43 g).
  • the compound (0.23 g) obtained above was dissolved in dimethyl sulfoxide (2.4 ml) and water (0.5 ml), and potassium hydroxide (0.22 g) was added thereto. Stirred at ° C. To the mixture was added INHC1, and the mixture was extracted with ether. The obtained organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure. The residue was subjected to silica gel gel chromatography to obtain the desired compound (0.134 g).
  • a PD-002 compound was obtained in the same manner as in Example 2 above. Specifically, the same procedure as in Example 2 was repeated, except that n-butyric acid chloride was used instead of n-butyric acid chloride in the step of 1) in Example 2, and finally 4-benzyloxy-1-hydroxy was used. — Condensation reaction of 6-ethylbenzoic acid and benzyl 2,4-dihydroxy-1-6-ethylbenzoate yields the target compound PD-002 (2-hydroxy_4- (2,4-dihydroxy-1-6-ethylbenzo). 1-ethylbenzoic acid).
  • Example 4 (manufacturing by synthesis)
  • the PD-003 compound was obtained in the same manner as in Example 2 above. Specifically, without synthesizing ethyl butyl acetate in the step of 1) in Example 2, in the step of 2); commercially available ethyl acetoacetate as an 8-ketoester (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) In the same manner as in Example 2, except that benzene was used, 4-benzyloxy-2-hydroxy-16-methylbenzoic acid and benzyl 2,4-dihydroxy-16-methylbenzoate were finally subjected to a condensation reaction. The target compound PD-003 (2-hydroquine-4- (2,4-dihydroxy-16-methylbenzoyloxy) -16-methylbenzoic acid) was obtained.
  • the compound (8.37 g) obtained above was dissolved in dimethyl sulfoxide (90 ml) and water (20 ml), and potassium hydroxide (8.67 g) was added thereto, followed by stirring at 90 ° C. To the mixture was added INHC1, and the mixture was extracted with ether. The obtained organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure. The residue was subjected to silica gel column chromatography to obtain the desired compound (6.92 g).
  • Synthesis of the PD-005 compound was obtained in the same manner as in Example 2 above. Specifically, the same procedure as in Example 2 was repeated except that benzyl acetate acetate was used in place of benzyl butyryl acetate in the step 5) of Example 2, and finally 4-benzyloxy-2-hydroxy-l-6 -Condensation reaction of propylbenzoic acid and benzyl 2,4-dihydroquinone 16-methyl benzoate to give the target compound PD-05 (2-hydroxy-4- (2,4-dihydroxy-16-propylbenzoy) Roxy) 1-2-hydroxy xy-6-methylbenzoic acid) was obtained.
  • the PD-006 compound was obtained in the same manner as in Example 2 above. More specifically, Example 2 was repeated except that i-butyric acid was used instead of n-butyric acid in the step of 1) in Example 2. In the same manner as described above, finally, 4-benzyloquin-12-hydroxy-16-isopropylbenzoic acid and benzyl 2,4-dihydroxy-16-isopropylbenzoate are subjected to a condensation reaction to obtain the target compound PD-0 06 (2-Hydroxy-4- (2,4-dihydroxy-16-isopropylbenzoyloxy) -16-isopropylbenzoic acid) was obtained.
  • PD-07 compound power was obtained in the same manner as in Example 2 above. Specifically, the same procedure as in Example 2 was repeated except that benzylisopropionyl acetate was used in place of benzylbutyryl acetate in step 5) of Example 2, and finally 4-benzyloxy-2-hydroxy was used. Condensation reaction of 1-6-propylbenzoic acid and benzyl 2,4-dihydroxy-1 6-isobutylbenzoate to obtain the target compound PD-0 7 (2-hydroxy-14- (2,4-dihydroxy-6-propylbenzoyloxy) One 6-isobutylbenzoic acid) was obtained.
  • Purified water was added to 30 parts by weight of the compound, 18 parts by weight of sodium chloride and 100 parts by weight of glucose to make the total amount 2000 parts by weight, and after dissolving them, the solution was millipore filter GS type ( (Registered trademark). 2 g of this filtrate was dispensed into a vial, stoppered and rolled to obtain an injection containing 30 mg of the present compound.
  • Example 10 (Formulation example: tablet)
  • the present compound having a phosphodiesterase inhibitory activity has a phosphodiesterase inhibitory activity selectively against isozyme, and has a bronchodilator action, an eosinophil activation inhibitory action, and the like.

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Abstract

A phosphodiesterase inhibitor comprising as the active ingredient 6-substituted-β-resorcyclic acid derivatives representd by general formula (I) or pharmacologically acceptable salts thereof: wherein m represents 0 or 1; R1, R2 and R3 represent each lower alkyl; R4 and R5 represent each hydrogen or halogeno; and R6, R7, R8 and R9 represent each hydrogen or lower alkyl. The phosphodiesterase inhibitor is expected to be applicable to, for example, remedies for bronchial asthma, bronchitis, allergic diseases, cardiac circulatory diseases, brain diseases, immune diseases, inflammatory diseases, etc.

Description

明 細 書 フォスフォジエステラーゼ阻害剤及びその製造法 技術分野  Description Phosphodiesterase inhibitor and method for producing the same
本発明は環状アデノシン 3，， 5， 一一リン酸フォスフォジエステラーゼ阻害剤 に関するものである。 この阻害剤は、 例えば抗喘息薬、 気管支拡張薬、 抗アレル ギー薬、 抗炎症薬、 抗リウマチ薬、 降圧薬、 狭心症治療薬、 不整脈治療薬、 血小 板凝集阻害薬、 脳循環代謝改善薬、 抗うつ薬として使用することが期待される。 背景技術  The present invention relates to cyclic adenosine 3,5, monophosphate phosphodiesterase inhibitors. These inhibitors include, for example, antiasthmatics, bronchodilators, antiallergics, antiinflammatory, antirheumatics, antihypertensives, angina pectoris, arrhythmias, platelet aggregation inhibitors, cerebral circulatory metabolism It is expected to be used as a remedy and antidepressant. Background art
本発明で使用される一般式 〔1〕 ：  General formula [1] used in the present invention:
〔1〕 [1]
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(式中、 mは 0又は 1を表し、 Rし R 2及び R 3は低級アルキル基、 R4及 び R 5は水素原子又はハロゲン原子、 R6， R 7, R 8及び R 9は水素原子又は 低級アルキル基をそれぞれ表す。 ）  (In the formula, m represents 0 or 1, R and R 2 and R 3 are lower alkyl groups, R 4 and R 5 are hydrogen atoms or halogen atoms, R 6, R 7, R 8 and R 9 are hydrogen atoms or Each represents a lower alkyl group.)
で示される 6—置換— ーレゾルシル酸誘導体のうち、 Of the 6-substituted-resorcylic acid derivatives represented by
例えば、 For example,
( i ) mが 0であり、 R 1及び R 3は各々プロピル基、 R4, R 5, R 6, R 7 及び R 9が全て水素原子である化合物 （以下 NF 006 34 - 1という。 ） 、 (ii) mが 0であり、 R 1がペンチル基、 R3がプロピル基、 R4， R 5, R6， R 7及び R 9が全て水素原子である化合物 （以下 NF 00634一 2という。 ） 、 (i) a compound in which m is 0, R 1 and R 3 are each a propyl group, and R 4, R 5, R 6, R 7 and R 9 are all hydrogen atoms (hereinafter referred to as NF 006 34-1); (ii) a compound in which m is 0, R 1 is a pentyl group, R 3 is a propyl group, and R 4, R 5, R 6, R 7 and R 9 are all hydrogen atoms (hereinafter referred to as NF 00634-2);
(iii) mが 0であり、 R 1及び R 3は各々ペンチル基、 R4， R 5, R 6, R 7 及び R 9が全て水素原子である化合物 （以下 NF 00634— 3という。 ） 、(iii) a compound in which m is 0, R 1 and R 3 are each a pentyl group, and R 4, R 5, R 6, R 7 and R 9 are all hydrogen atoms (hereinafter referred to as NF 00634-3);
(iv) mが 0であり、 R 1及び R 3がプロピル基、 R 7がメチル基、 R4， R 5, R 6及び R 9が全て水素原子である化合物、 (iv) m is 0, R 1 and R 3 are propyl groups, R 7 is a methyl group, R 4, R 5 A compound wherein R 6 and R 9 are all hydrogen atoms,
(V) mが 0であり、 R 1及び R 3がプロピル基、 R 5が塩素原子、 R4， R 6, R 7及び R 9が全て水素原子である化合物、  (V) a compound wherein m is 0, R 1 and R 3 are propyl groups, R 5 is a chlorine atom, and R 4, R 6, R 7 and R 9 are all hydrogen atoms;
(vi) mが 0であり、 R 1がプロピル基、 R 3がペンチル基、 R 6及び R 7が各 各メチル基、 R4， R 5及び R 9が全て水素原子である化合物、  (vi) a compound wherein m is 0, R 1 is a propyl group, R 3 is a pentyl group, R 6 and R 7 are each methyl groups, and R 4, R 5 and R 9 are all hydrogen atoms,
(v5) mが 0であり、 R 1及び R 3がペンチル基、 R 4及び R 5が塩素原子、 R 9がメチル基、 R 6及び R 7が水素原子である化合物、  (v5) a compound wherein m is 0, R 1 and R 3 are a pentyl group, R 4 and R 5 are a chlorine atom, R 9 is a methyl group, and R 6 and R 7 are a hydrogen atom,
(vfi) mが 0であり、 R 1及び R 3がプロピル基、 R 6がメチル基、 R 4, R 5， R 7及び R 9が全て水素原子である化合物、  (vfi) a compound wherein m is 0, R 1 and R 3 are propyl groups, R 6 is a methyl group, and R 4, R 5, R 7 and R 9 are all hydrogen atoms;
(ix) が 0であり、 R 1及び R 3がプロピル基、 R 4力く塩素原子、 R 6がメチ ル基、 R 5, R 7及び R 9が全て水素原子である化合物、  (ix) is 0, R 1 and R 3 are propyl groups, R 4 is a chlorine atom, R 6 is a methyl group, and R 5, R 7 and R 9 are all hydrogen atoms,
は、 オーストラリアン · ジャーナル ·ォブ 'ケミストリ一（Australian Journal of Chemistry) 、 第 38巻、 第 1863頁 (1985年) 及び同誌第 30巻、 第 2333頁 (1977 年） に記載されている公知化合物である。 Are known compounds described in Australian Journal of Chemistry, Vol. 38, p. 1863 (1985) and Vol. 30, p. 2333 (1977). It is.
また、 一般式 〔I〕 で示される 6—置換一^一レゾルシル酸誘導体のうち、 (X) mが 0であり、 R 1及び R 3が各々メチル基、 R 4， R 5, R 6, R 7及 び R 9が全て水素原子である化合物 （以下 PD— 0 0 3という。 ） がヒスチジン デカルボキシラ一ゼ阻害活性を有し、 ヒスタミン生合成を阻害すること力 J P 一 A— 4 8 - 6 1 6 9 0に記載されており、 さらに  Further, among the 6-substituted mono-resorcylic acid derivatives represented by the general formula [I], (X) m is 0, R 1 and R 3 are each a methyl group, R 4, R 5, R 6, A compound in which R 7 and R 9 are all hydrogen atoms (hereinafter referred to as PD-003) has histidine decarboxylase inhibitory activity and inhibits histamine biosynthesis JP-1 A- 48-6 1690
( 1) 111が0でぁり、 R 1及び R 3が各々ペンチル基、 R4, R 5, R 6, R 7及び R 9力《全て水素原子である化合物がプロスタグランジン生合成阻害活性 を有すること力 プロスタグランジン （PROSTAGLANDINS) 、 第 21巻、 第 21頁 （19 82 ) 年に記載されている。  (1) 111 is 0, R 1 and R 3 are each a pentyl group, and R 4, R 5, R 6, R 7 and R 9 are all compounds having a hydrogen atom. The power of possession is described in PROSTAGLANDINS, Vol. 21, p. 21 (1982).
環状アデノシン 3'， 5' —一リン酸 （以下 c一 AMPと略記する。 ） は、 生体 内のセカンドメッセンジャーとして細胞機能、 細胞増殖及び細胞分化に関与して いる。 この c—AMPを分解してアデノシン 5， 一一リン酸 （以下 5' -AMP と略記する。 ） に変換する酵素が、 環状アデノシン 3 '， 5' —一リン酸フォスフ ォジエステラーゼ （以下フォスフォジエステラーゼと略記する。 ） である。 この 酵素の活性を阻害する物質は、 細胞内の c一 AMP及び c—GMPの量を増加さ せ、 細胞応答を制御する作用を有する。 具体的には、 このようなフォスフオジェ ステラーゼ阻害剤は、 平滑筋の弛緩作用、 白血球の細胞活性化の抑制作用等を示 すことが一般的に知られている。 Cyclic adenosine 3 ', 5'-monophosphate (hereinafter abbreviated as c-AMP) is involved in cell function, cell proliferation and cell differentiation as a second messenger in vivo. An enzyme that degrades c-AMP to adenosine 5, monophosphate (hereinafter abbreviated as 5'-AMP) is a cyclic adenosine 3 ', 5'-monophosphate phosphodiesterase (hereinafter referred to as phospho-adenosine). It is abbreviated as fodiesterase. Substances that inhibit the activity of this enzyme increase the amount of c-AMP and c-GMP in cells. It has the effect of controlling the cellular response. Specifically, it is generally known that such a phosphogesterase inhibitor exhibits a smooth muscle relaxing action, a leukocyte cell activation suppressing action, and the like.
これらの作用は、 種々の細胞および組織に分布するフォスフォジエステラーゼ アイソザィムの個々の抑制に起因することが一般的に知られている。  It is generally known that these effects result from individual suppression of phosphodiesterase isozymes distributed in various cells and tissues.
従来のフォスフォジエステラーゼ阻害剤は、 その阻害活性が満足すべきもので なかったり、 あるいはアイソザィムに対する選択性が低いため実際の使用にあた つて副作用の面で満足すべきものではなかった。 したがって、 低濃度でもフォス フォジエステラーゼ阻害活性が強く、 好ましくはさらにアイソザィムに対する選 択性の高いフォスフォジエステラーゼ阻害剤の開発が望まれている。  Conventional phosphodiesterase inhibitors have either been unsatisfactory in their inhibitory activity or have low selectivity for isozymes, so that they have not been satisfactory in terms of side effects in actual use. Therefore, it is desired to develop a phosphodiesterase inhibitor which has a strong phosphodiesterase inhibitory activity even at a low concentration and preferably has a high selectivity for isozymes.
発明の開示 Disclosure of the invention
本発明者らは上記不都合を解消するフォスフォジエステラーゼ阻害剤を見出す ベく鋭意検討した結果、 本発明を完成するに至った。  Means for Solving the Problems The inventors of the present invention have found a phosphodiesterase inhibitor that solves the above-mentioned inconvenience, and as a result of intensive studies, completed the present invention.
本発明は次の （1 ) 〜 （1 4 ) に関する：  The present invention relates to the following (1) to (14):
( 1 ) 下記一般式 〔 1〕  (1) The following general formula (1)
〔1〕 [1]
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(式中、 mは 0又は 1を表し、 R 1 , R 2及び R 3は低級アルキル基、 R 4及び R 5は水素原子又はハロゲン原子、 R 6， R 7 , R 8及び R 9は水素原子又は低 級アルキル基をそれぞれ表す。 ）  (In the formula, m represents 0 or 1, R 1, R 2 and R 3 are lower alkyl groups, R 4 and R 5 are hydrogen atoms or halogen atoms, R 6, R 7, R 8 and R 9 are hydrogen Represents an atom or a lower alkyl group, respectively.
で示される 6—置換一 /S—レゾルンル酸誘導体又はその薬理学上許容される塩を 有効成分とするフォスフォジエステラーゼ阻害剤、 A phosphodiesterase inhibitor comprising, as an active ingredient, a 6-substituted 1 / S-resornulic acid derivative or a pharmacologically acceptable salt thereof represented by
( 2 ) 下記一般式 〔 1 ' 〕 〔1 ' 〕
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(2) The following general formula [1 '] [1 ']
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(式中、 mが 0又は 1であり、 R l， R 2及び R 3は各々低級アルキル基を 表す。 )  (In the formula, m is 0 or 1, and R1, R2 and R3 each represent a lower alkyl group.)
で示される 6—置換— /5—レゾルシル酸誘導体又はその薬理学上許容される塩を 有効成分とする上記 (1) 記載のフォスフォジエステラーゼ阻害剤、 The phosphodiesterase inhibitor according to the above (1), wherein the 6-substituted-5 / 5-resorcylic acid derivative represented by or a pharmacologically acceptable salt thereof is used as an active ingredient.
(3) —般式 〔1 ' 〕 において、 mが 0又は 1であり、 R l， R 2及び R 3がこ の順に— （CH2 ) n, CH3 、 - (CH2 ) n2CH3 及び— （CH2 ) n3CH3 (式中、 n, ， n2 及び n3 は各々 0〜 5の整数を表す。 ） で示される基である、 上記 （2) 記載のフォスフォジエステラーゼ阻害剤、 (3) —In the general formula [1 ′], m is 0 or 1, and R l, R 2 and R 3 are in this order— (CH 2 ) n , CH 3 ,-(CH 2 ) n 2 CH 3 and — (CH 2 ) n3 CH 3 (wherein, n ,, n 2 and n 3 each represent an integer of 0 to 5), wherein the phosphodiesterase according to the above (2) is Inhibitors,
(4) - (CH2 ) n,CH3 ， 一 (CH2 ) „2CH3 及び— （CH2 ) n3CH3 の各基において、 η, , n2 及び n3 が各々 0又は 2である、 上記 （3) 記載の フォスフォジエステラーゼ阻害剤、 (4)-(CH 2 ) n, CH 3 , 1 (CH 2 ) „ 2 CH 3 and — (CH 2 ) n3 In each group of CH 3 , η, n 2 and n 3 are each 0 or 2, The phosphodiesterase inhibitor according to (3) above,
( 5 ) 上記 （ 2 ) 記載の一般式 〔 1 ' 〕 において、 mが 1であり、 R 1， R 2及 び R3力、 各々メチル、 ェチル、 プロピル、 イソプロピル、 ブチル及びイソブチ ルからなる群より選ばれる基である化合物を有効成分として含む医薬品、  (5) In the general formula [1 '] described in the above (2), m is 1, and R1, R2, and R3 forces are each selected from the group consisting of methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, and isobutyl. A drug containing, as an active ingredient, a compound that is a selected group,
(6) 上記 （1) 記載の一般式 〔1〕 で示される 6—置換一 3—レゾルシル酸誘 導体及びその薬理学上許容される塩を有効成分として含む気管支拡張剤、  (6) a bronchodilator comprising as an active ingredient a 6-substituted-13-resorcylic acid derivative represented by the general formula [1] described in (1) and a pharmacologically acceptable salt thereof,
(7) 上記 （2) 記載の一般式 〔1 ' 〕 において、 mが 0であり、 1 1及び1¾3 がそれぞれ— （CH2 ) n.CH3 及び一 （CH2 ) „3CH3 で示される基であり、 式中 及び n3 が各々 2であるか、 n, が 4、 n3 が 2であるか、 又は n, が 0、 n3 が 2である化合物を有効成分として含む気管支系疾患の治療又は予防剤、(7) In the general formula [1 ′] described in the above (2), m is 0, and 11 and 1¾3 are represented by — (CH 2 ) n.CH 3 and 1 (CH 2 ) „ 3 CH 3 , respectively. Wherein n and n 3 are each 2, n, is 4, n 3 is 2, or n, is 0 and n 3 is 2 as a bronchial system. Agent for treating or preventing a disease,
(8) 2—ヒドロキシ一 4— (2, 4—ジヒドロキシ一 6—プロピルベンゾィル ォキシ） 一 6—プロピル安息香酸又はその薬理学上許容される塩を有効成分とす るフォスフオジェステラーゼ阻害剤、 (8) 2-hydroxy-14- (2,4-dihydroxy-1-6-propylbenzoyloxy) -phosphogesterase inhibitor containing 16-propylbenzoic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient Agent,
(9) 2—ヒドロキシー 4一 (2, 4—ジヒ ドロキシ一 6—メチルベンゾィルォ キシ） — 6—プロピル安息香酸又はその薬理学上許容される塩を有効成分とする フォスフォジエステラーゼ阻害剤、 (9) 2-Hydroxy-41- (2,4-dihydroxy-1-6-methylbenzoyl) Xix) — a phosphodiesterase inhibitor comprising 6-propylbenzoic acid or a pharmacologically acceptable salt thereof as an active ingredient;
(1 0) デンドロドキゥム （Dendrodochium)属に属し、 一般式 〔1 ' 〕 で示され る 6—置換—^—レゾルシル酸誘導体において、 mが 0又は 1であり、 R 1, R2及び R3がこの順に一 （CH2 ) „,CH3 ， 一 (CH2 ) n2CH3 及び 一 (CH2 ) „3CH3 で示される基であり、 式中 n, ， n2 及び n3 が各々 2又 は 4を表す上記誘導体を産生する能力を有する微生物を培養し、 得られた培養物 から上記 6—置換— ーレゾルシル酸誘導体を採取することからなる 6—置換一 β一レゾルシル酸誘導体の製造法、 (10) In a 6-substituted-^-resorcylic acid derivative represented by the general formula [1 '], which belongs to the genus Dendrodochium, m is 0 or 1, and R1, R2 and R3 are in this order. one (CH 2) ", CH 3 , one (CH 2) n2 CH 3 and one (CH 2)" is a group represented by 3 CH 3, wherein n,, n 2 and n 3 are each 2 or A method for producing a 6-substituted-β-resorcylic acid derivative, comprising culturing a microorganism having an ability to produce the above-mentioned derivative representing 4, and collecting the above-mentioned 6-substituted-resorcylic acid derivative from the obtained culture.
(1 1) デンドロドキゥム属に属する 6—置換一 S—レゾルシル酸誘導体産生能 を有する微生物が、 デンドロドキゥム S p. NF 00634株である上記 （1 0 ) 記載の製造法、  (11) The method according to the above (10), wherein the microorganism having an ability to produce a 6-substituted mono-S-resorcylic acid derivative belonging to the genus Dendrodochim is Dendrododium Sp. NF00634 strain.
(1 2) 上記 （2) 記載の一般式 〔1 ' 〕 において、 mが 1であり、 R l, R 2 及び R3がこの順に— （CH2 ) n,CH3 、 一 (CH2 ) n2CH3 及び (1 2) In the general formula [1 ′] described in the above (2), m is 1, and R l, R 2 and R 3 are in this order — (CH 2 ) n , CH 3 , one (CH 2 ) n 2 CH 3 and
- (CH2)„3CH3 で示される基であり、 式中 n, 力 2、 n2 が 2、 n3 力 で ある力、、 又は n, が 4、 n2 が 4、 n3 が 2である 6—置換—；3—レゾルシル酸 誘導体、 -(CH 2 ) „ 3 A group represented by CH 3 , wherein n, force 2, n 2 is 2, n 3 force, or n, is 4, n 2 is 4, n 3 is 2 is 6-substituted; 3-resorcylic acid derivative,
(1 3) 上記 (2) 記載の一般式 〔1 ' 〕 において、 mが 0であり、 R 1及び R 3が各々— （CH2 ) „iCH3 又は一 （CH2 ) „3CH3 で示される基であり、 式中 n, 及び n3 力《各々 1である力、、 n, が 0、 n3 が 2であるか、 又は n, 力く 2、 n 3 力く 0である 6—置換一^ーレゾルシル酸誘導体、 ならびに (1 3) In the general formula [1 ′] described in the above (2), m is 0, and R 1 and R 3 are each — (CH 2 ) „iCH 3 or one (CH 2 )„ 3 CH 3 a group represented force ,, n is wherein n, and n 3 force "each 1, but 0, or n 3 is 2, or n, is Chikaraku 2, n 3 Chikaraku 0 6 —Substituted mono-resorcylic acid derivatives, and
(1 4) 上記 （2) 記載の一般式 〔 〕 において、 mが 0であり、 R 1及び R 3が各々イソプロピル基である力、、 又は R 1がプロピル基、 R 3がイソブチル基 である 6—置換— 9ーレゾルシル酸誘導体。  (14) In the general formula [] according to the above (2), m is 0, and R 1 and R 3 are each an isopropyl group, or R 1 is a propyl group, and R 3 is an isobutyl group. 6-substituted 9-resorcylic acid derivative.
図面の簡単な説明 BRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES
図 1は化合物 NF 00634 - 4の質量スぺク トルを示す。  FIG. 1 shows the mass spectrum of compound NF00634-4.
図 2は化合物 N F 00634 - 5の質量スぺクトルを示す。  FIG. 2 shows the mass spectrum of compound NF00634-5.
図 3は化合物 PD— 00 1の質量スぺクトルを示す。  FIG. 3 shows the mass spectrum of compound PD-001.
図 4は化合物 PD— 004の質量スぺク トルを示す。 発明を実施するための最良の形態 FIG. 4 shows the mass spectrum of compound PD-004. BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
本発明について、 更に詳しく述べる。  The present invention will be described in more detail.
前記一般式 〔1〕 で示される 6—置換一 S—レゾルシル酸誘導体又はその塩 (以下本化合物という） を有効成分とするフォスフオジェステラーゼ阻害剤は、 例えば気管平滑筋弛緩作用、 好酸球等の白血球の活性化抑制作用等を有している ので、 気管支喘息や気管支炎等の気管支系疾患の予防又は治療薬、 抗アレルギー 薬、 抗炎症薬、 抗リウマチ薬、 降圧薬、 狭心症治療薬、 不整脈治療薬、 血小板凝 集阻害薬、 脳循環代謝改善薬、 抗うつ薬等として使用することが期待されている c なお、 本化合物は、 前述のオーストラリアン'ジャーナル'ォブ ·ケミストリ一 (Australian Journal of Chemistry) 、 第 38巻、 第 1863頁 (1985年) に記載の方 法又はそれに準じた方法により合成するか、 又は後述のように微生物を用いる培 養によつても製造することができる。 Phosphogesterase inhibitors containing a 6-substituted mono-S-resorcylic acid derivative represented by the above general formula [1] or a salt thereof (hereinafter referred to as the present compound) as an active ingredient include, for example, tracheal smooth muscle relaxing action, eosinophils, It has an inhibitory effect on the activation of leukocytes such as bronchial diseases such as bronchial asthma and bronchitis, antiallergic drugs, antiinflammatory drugs, antirheumatic drugs, antihypertensive drugs, angina pectoris, etc. therapeutic agents, antiarrhythmics, platelet agglutination inhibitors, cerebral circulation metabolism improving agents, Note c be used as an antidepressant and the like are expected, the compound is the aforementioned Australian 'journal' O Bed chemistry (Australian Journal of Chemistry), vol. 38, p. 1863 (1985), or by a method analogous thereto, or by culturing using a microorganism as described below. thing It can be.
本発明において一般式 〔1〕 の R l， R 2, R3， R6， R 7, 1^ 8及び1¾9、 一般式 〔2〕 の R' ， R〃 、 一般式 〔3〕 の R， R "が各々表す低級アルキル基 としては、 例えば側鎖を有していてもよい炭素数 1〜6、 好ましくは炭素数 1〜 5のアルキル基が挙げられる。 具体的にはメチル、 ェチル、 プロピル、 イソプロ ピル、 ブチル、 イソブチル、 ペンチル及びイソペンチル基が挙げられる。 これら の基は本発明の阻害剤の活性を失活させない限り、 ハロゲン等の置換基で置換さ れていてもよい。  In the present invention, Rl, R2, R3, R6, R7, 1 ^ 8 and 1¾9 of the general formula [1], R ', R〃 of the general formula [2], and R, R "of the general formula [3] Examples of the lower alkyl group represented by each include an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms which may have a side chain, and preferably 1 to 5 carbon atoms.Specifically, methyl, ethyl, propyl, and isopro Pill, butyl, isobutyl, pentyl and isopentyl groups, which may be substituted with a substituent such as halogen, as long as the activity of the inhibitor of the present invention is not inactivated.
また、 一般式 〔1〕 の R 4及び R 5が表すハロゲン原子としては、 例えばフッ 素、 塩素、 臭素及びヨウ素が挙げられる。  The halogen atom represented by R 4 and R 5 in the general formula [1] includes, for example, fluorine, chlorine, bromine and iodine.
一般式 〔1〕 で示される化合物のうち、 好ましいものは、 一般式 〔1 ' 〕 で示 される化合物である。 より好ましくは一般式 〔1 ' 〕 において mが 0又は 1であ り、 R l， R2及び R3がそれぞれ— （CH2 ) n.CH3， Among the compounds represented by the general formula [1], preferred are the compounds represented by the general formula [1 ']. More preferably, in the general formula [1 ′], m is 0 or 1, and R 1, R 2 and R 3 are each — (CH 2 ) n .CH 3 ,
― (CH2 ) „2 CH3 及び— （CH2 ) n 3CH3 - (CH 2) "2 CH 3 and - (CH 2) n 3 CH3
(式中、 ， n2 及び n3 は 0〜5、 好ましくは 0〜 3の整数を表す。 ） で示 される基である化合物である。 (Wherein,, n 2 and n 3 0-5 preferably represents. An integer from 0 to 3) is a group shown by the compound.
本発明における好ましい 6—置換一^一レゾルシル酸誘導体を以下に例示す る： 2—ヒドロキシ一 4— (2, 4—ジヒドロキシー 6—プロピルべンゾィルォキ シ） — 6—プロピル安息香酸 （以下 NF 0 0 6 3 4 - 1という。 ） 、 The preferred 6-substituted 1 ^ resorcylic acid derivatives according to the present invention are exemplified below: 2-Hydroxy-1- (2,4-dihydroxy-6-propylbenzoyloxy) — 6-propylbenzoic acid (hereinafter referred to as NF 0 6 3 4-1),
2—ヒドロキシー 4— (2, 4ージヒドロキシー 6—ペンチルベンゾィルォキ シ） — 6—プロピル安息香酸 （以下 NF 0 0 6 3 4— 2という。 ） 、  2-Hydroxy-4- (2,4-dihydroxy-6-pentylbenzoyloxy)-6-propylbenzoic acid (hereinafter referred to as NF0634-2)
2—ヒドロキシー 4— (2， 4—ジヒドロキシー 6—ペンチルベンゾィルォキ シ） 一 6—ペンチル安息香酸 （以下 NF 0 0 6 3 4一 3という。 ） 、  2-hydroxy-4- (2,4-dihydroxy-6-pentylbenzoyloxy) -16-pentylbenzoic acid (hereinafter referred to as NF-0634-13)
2—ヒドロキシー 4— (4一 （2， 4) —ジヒドロキシー 6—プロピルべンゾ ィルォキシ） 一 2—ヒドロキシ一 6—プロピルべンゾィルォキシ） 一 6—ペンチ ノレ安息香酸 （以下 NF 0 0 6 3 4— 4という。 ） 、  2-Hydroxy-4- (4- (2,4) -dihydroxy-6-propylbenzoyloxy) -1-2-Hydroxy-6-propylbenzoyloxy-1-6-pentynolebenzoic acid (NF 006) — 4)),
2—ヒドロキシ一 4— (4一 （2, 4 ) —ジヒドロキシ一 6—ペンチルベンゾ ィルォキシ） 一 2—ヒドロキシー 6—ペンチルベンゾィルォキン） 一 6—プロピ ル安息香酸 （以下 NF 0 0 6 3 4 - 5という。 ） 、  2-hydroxy-1- (4- (2,4) -dihydroxy-1-6-pentylbenzoyloxy) -1-hydroxy-6-pentylbenzoylokine-1-6-propylbenzoic acid (NF 006) -It is 5.)
2—ヒドロキシ一 4— (2, 4ージヒドロキシ一 6—ェチルベンゾィルォキ シ） ― 6—ェチル安息香酸 （以下 PD— 0 0 2という。 ） 、  2-hydroxy-1- (2,4-dihydroxy-6-ethylbenzoyloxy)-6-ethylbenzoic acid (hereinafter referred to as PD-002),
2—ヒドロキシ一 4一 （2, 4—ジヒドロキシ一 6—メチルベンゾィルォキ シ） 一 6—メチル安息香酸 （以下 PD— 0 0 3という。 ） 、  2-hydroxy-14- (2,4-dihydroxy-16-methylbenzoyloxy) -16-methylbenzoic acid (hereinafter referred to as PD-003),
2—ヒドロキシー 4— (2， 4—ジヒドロキシ一 6—メチルベンゾィルォキ シ） 一 6—プロピル安息香酸 （以下 PD— 0 0 4という。 ） 、  2-hydroxy-4- (2,4-dihydroxy-1-6-methylbenzoyloxy) -1-6-propylbenzoic acid (hereinafter referred to as PD-004),
2—ヒドロキシ一 4— (2, 4ージヒドロキシ一 6—プロピルべンゾィルォキ シ） 一 6—メチル安息香酸 （以下 PD— 00 5という。 ） 、  2-hydroxy-1- (2,4-dihydroxy-16-propylbenzoyloxy) -1-methylbenzoic acid (hereinafter referred to as PD-005),
2—ヒドロキシ一 4— (2， 4ージヒドロキシー 6—イソプロピルベンゾィル ォキシ） 一 6—イソプロピル安息香酸 （以下 PD— 0 0 6という。 ） 、  2-hydroxy-14- (2,4-dihydroxy-6-isopropylbenzoyloxy) -16-isopropylbenzoic acid (hereinafter referred to as PD-06)
2—ヒドロキシー 4一 （2， 4ージヒドロキシ一 6—プロピルべンゾィルォキ シ） — 6—イソブチル安息香酸 （以下 PD— 0 0 7という。 ） 。  2-Hydroxy-41 (2,4-dihydroxy-1-6-propylbenzoyloxy) — 6-isobutylbenzoic acid (PD-07).
上記化合物のうち、 より好ましいものは、 フォスフォジエステラーゼアイソザ ィムの阻害活性が強く、 下記 （i)〜（HO ：  Among the above compounds, more preferable ones have strong inhibitory activity on phosphodiesterase isozymes and have the following (i) to (HO:
( i ) フォスフォジエステラーゼアイソザィム （I V) に対する活性が強く、 ァ イソザィム （I I I) に対する活性は、 （I V) に比して弱く、 かつその差が大 きい、 ( ii ) 体内での安定性がよい、 (i) The activity against phosphodiesterase isozyme (IV) is strong, and the activity against isozyme (III) is weaker and the difference is larger than that of (IV). (ii) good stability in the body,
Cm ) 活性の発現が早い、  Cm) activity is rapidly expressed,
の少なくとも一つの点で優れているという観点から、 N F 0 0 6 3 4— 1， N F 0 0 6 3 4 - 2 , N F 0 0 6 3 4— 3及び P D— 0 0 4である。 From the viewpoint of being excellent in at least one of the following, NF 0 6 3 4-1, NF 0 6 3 4-2, NF 0 6 3 4-3, and PD-0 4.
上記の好ましい化合物の他に、 一般式 〔1〕 に含まれる化合物として以下の化 合物が挙げられる：  In addition to the above preferred compounds, compounds included in the general formula [1] include the following compounds:
2—ヒドロキシ一 4一 （2， 4 —ジメ トキシー 6 —プロピルべンゾィルォキ シ） — 6—プロピル安息香酸、  2-hydroxy-1- (2,4-dimethoxy-6-propylbenzoyloxy) — 6-propylbenzoic acid,
2 —ヒドロキシ一 4— ( 2—ヒドロキシ一 3—クロロー 4—メ トキシ一 6—プ 口ピルべンゾィルォキシ） 一 6—プロピル安息香酸、  2-hydroxy-1- (2-hydroxy-3-chloro-4-methoxy-16-pyruvenzyloxy) 1-6-propylbenzoic acid,
2—ヒドロキシー 4 一 ( 2 , 4 —ジメ トキシ一 6 —プロピルべンゾィルォキ シ） — 6—プロピル安息香酸、  2-Hydroxy-4 mono (2,4-dimethoxy-6-propylbenzoyloxy) — 6-propylbenzoic acid,
2—メ トキシ一 4— ( 2 , 4—ジヒドロキシ一 3， 5—ジクロロ一 6—ペンチ ルべンゾィルォキシ） 一 6—プロピル安息香酸、  2-Methoxy-1 4- (2,4-dihydroxy-1,3,5-dichloro-1-6-pentylbenzyloxy) 1-6-propylbenzoic acid,
2 —ヒドロキシ一 4一 （2 —ヒドロキシ一 4—メ トキシ一 6 —プロピルべンゾ ィルォキシ） — 6—プロピル安息香酸、  2-hydroxy-14- (2-hydroxy-14-methoxy-6-propylbenzoyloxy)-6-propylbenzoic acid,
2 —ヒドロキシ一 4一 （2 —ヒドロキシ一 4—メ トキシ一 5 —クロ口一 6—プ 口ピルべンゾィルォキシ） — 6—プロピル安息香酸。  2 —Hydroxy-1-4 (2-Hydroxy-1-4—Methoxy-5 —Chloro-1-6-pyruvenzyloxy) — 6-Propylbenzoic acid.
本化合物をフォスフォジエステラーゼ阻害剤として用いる場合は、 本化合物を 単独で又は賦形剤もしくは担体と混合して注射剤、 吸入剤、 錠剤、 顆粒剤、 細粒 剤、 散剤、 カプセル剤、 坐剤、 点眼剤、 貼付剤、 軟膏剤、 スプレー剤等の製剤と し、 この製剤を経口的に、 又は非経口的に投与する。 賦形剤又は担体等の添加剤 としては薬剤学的に許容されるものが選ばれ、 その種類及び組成は投与経路ゃ投 与方法によって決定される。 例えば注射剤の場合、 一般に食塩又はグルコース、 マンニトール等の糖類が望ましい。 経口剤の場合、 でんぶん、 乳糖、 結晶セル口 ース、 ステアリン酸マグネシウム等が望ましい。  When the compound is used as a phosphodiesterase inhibitor, the compound may be used alone or in combination with an excipient or carrier, for injection, inhalation, tablet, granule, fine granule, powder, capsule, suppository. Or ophthalmic solution, patch, ointment, spray, etc., and administer this formulation orally or parenterally. Pharmaceutically acceptable additives are selected as excipients or carriers, and the type and composition are determined by the administration route and the administration method. For example, in the case of an injection, a salt or a saccharide such as glucose or mannitol is generally desirable. In the case of oral preparations, starch, lactose, crystalline cellulose, magnesium stearate and the like are desirable.
製剤中における本化合物の含量は製剤により異なるが、 通常 0 . 1〜1 0 0重 量％、 好ましくは 1〜9 8重量％である。 例えば注射剤の場合、 本化合物の含量 は、 通常 0 . 1〜3 0重量％、 好ましくは 1〜 1 0重量％である。 経口剤の場合、 本化合物は添加剤とともに、 錠剤、 カプセル剤、 散剤、 顆粒剤、 液剤、 ドライシ 口ップ剤等の形態で用いられ、 本化合物の含量は、 一般に 5〜1 0 0重量％、 好 ましくは 2 5〜 9 8重量％である。 Although the content of the present compound in the preparation varies depending on the preparation, it is usually 0.1 to 100% by weight, preferably 1 to 98% by weight. For example, in the case of an injection, the content of the present compound is usually 0.1 to 30% by weight, preferably 1 to 10% by weight. For oral preparations, The compound is used together with additives in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids, dry drops, etc. The content of the compound is generally 5 to 100% by weight, preferably 25 to 98% by weight.
投与量は、 患者の年令、 体重、 症状、 治療目的等により決定されるが、 治療有 効量は一般に、 非経口投与で 1〜1 0 O mg/kg ·日、 経口投与で 5〜5 0 0 mg/kg ·日である。  The dosage is determined according to the age, weight, symptoms, treatment purpose, etc. of the patient, but the therapeutically effective dose is generally 1 to 10 O mg / kgday for parenteral administration and 5 to 5 for oral administration. 0 0 mg / kg · day.
本化合物は低毒性であり、 また、 いずれの化合物も連続投与による毒性の蓄積 が少ないことが特徴である。 例えば、 本化合物をマウス腹腔内に 1 0 O mg/kgの 投与量で 1回投与しても何ら毒性発現の徴候は見られなかった。  The compounds are characterized by low toxicity and low accumulation of toxicity by continuous administration. For example, even when the compound was administered once intraperitoneally to mice at a dose of 100 mg / kg, no signs of toxicity were observed.
本化合物産生能を有する微生物としては、 デンドロドキゥム（Dendrodochium) 属に属するもの等が挙げられる。 例えば、 本発明者らが分離した菌株 N F 0 0 6 3 4は、 本発明に最も有効に使用される菌株の一例であり、 工業技術院生命工学 工業技術研究所 （N I B H) (：〒 3 0 5 茨城県つくば市東 1丁目 1番 3号） に、 1 9 9 4年 4月 1 2日に受託番号 F E RM P— 1 4 2 7 4として国内寄託され、 1 9 9 6年 2月 1日にこの原寄託よりブダペスト条約に基づく国際寄託へ受託番 号 F E RM B P— 5 3 7 9として移管された。  Examples of the microorganism having the ability to produce the present compound include those belonging to the genus Dendrodochium. For example, the strain NF 0 6 3 4 isolated by the present inventors is an example of the strain most effectively used in the present invention, and is available from the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology. 5 Deposit No. FE RM P— 1 4 2 7 4 on April 12, 1904, Higashi 1-3-1, Higashi 1-chome, Tsukuba-shi, Ibaraki Pref., February 1, 1996 The original deposit was transferred to the International Deposit under the Budapest Treaty under the accession number FE RM BP—5379.
本菌株の菌学的性質を示すと次のとおりである。  The bacteriological properties of this strain are as follows.
N F 0 0 6 3 4の菌学 ^性达 Mycology of N F 0 0 6 3 ^ ^
1 . ポテト ·デキストロース寒天培地 （2 5て） 上での生育は極めて良く、 7日 間で集落の径は 4 8〜5 2 mmに達する。 集落は基底菌糸が発達し、 表面には気 生菌糸が薄く平坦に広がる。 培養日数に応じて集落は白色〜乳白色又は淡褐色を 呈し、 分生子の形成に伴い中央部は湿性となる。 裏面は乳白色を呈する。  1. Growing on potato dextrose agar medium (25-t) is very good, and colonies reach 48-52 mm in 7 days. In the colonies, the basal hypha develops, and the aerial hypha spreads thinly and flatly on the surface. Depending on the number of days in culture, the colony is white to milky or light brown, and the central part becomes moist with the formation of conidia. The back surface is milky white.
2 . 麦芽エキス寒天培地 （2 5 ) 上での生育も良く、 7日間で集落の径は 3 8 〜5 7 mmに達する。 集落においては基底菌糸が発達し気生菌糸は乏しく、 表面 は平坦で湿性となり集落周縁は不整となる。 培養日数に応じて集落は白色〜乳白 色又は淡褐色を呈し、 裏面は乳白色を呈する。 分生子の形成は良好である。  2. It grows well on malt extract agar medium (25), and the diameter of the colony reaches 38-57 mm in 7 days. In the settlement, the basal hypha develops and the aerial hypha is scarce, the surface is flat and moist, and the periphery of the settlement is irregular. The colonies are white to milky white or light brown depending on the number of culture days, and the back surface is milky white. Conidium formation is good.
3 . ッァペック寒天培地 （2 5 °C) 上での生育は悪く、 7日間で集落の径は 1 2 〜1 4 mmに達する。 集落の表面は平坦で無色〜白色を呈し、 裏面は表面と同色 を呈する。 4. コーンミール寒天培地 （2 5°C) 上での生育はやや悪く、 7日間で集落の径 は 3 6〜4 1 mmに達する。 集落の表面は気生菌糸が乏しく平坦に広がる。 培養 日数に応じて集落は無色〜白色を呈する。 3. Poor growth on Wapek agar (25 ° C), colonies reach 12 to 14 mm in 7 days. The surface of the settlement is flat and colorless to white, and the back surface is the same color as the front surface. 4. Growth on cornmeal agar (25 ° C) is rather poor, with colonies reaching 36-41 mm in 7 days. The aquatic mycelium is scarce and the surface of the settlement spreads flat. The colonies are colorless to white depending on the number of culture days.
5. オートミール寒天培地 ( 2 5 °C) 上での生育は良く、 分生子の形成も極めて 良い。 7日間で集落の径は 3 6〜4 1 mmに達する。 集落の表面は気生菌糸が薄 く平坦に広がる。 培養日数に応じて集落は白色〜乳白色又は淡褐色を呈し、 分生 子の形成に伴 、中央部は湿性となる。  5. Good growth on oatmeal agar (25 ° C) and extremely good conidial formation. In 7 days, the diameter of the settlement reaches 36 to 41 mm. The aerial mycelium spreads thin and flat on the surface of the settlement. Depending on the number of days of culture, the colony exhibits a white to milky white or light brown color, and the central part becomes wet with the formation of conidia.
6. 本菌株は、 オートミール寒天培地上で速やかに生育し、 集落中央部に分生子 座を豊富に形成する。 菌糸は幅 0. 8〜2. 8 m、 無色〜淡褐色、 滑面で隔壁 を有する。 分生子座の大きさ及び形状は不同で多くは卵形、 洋梨形、 半球形、 基 部はくびれて柱状となる。 周縁菌糸は針状で無色、 先は尖る。 内部はカップ状に 深く掘れている。 周縁菌糸は、 高さ 1 5 0〜3 0 0〃m、 幅 1 0 5〜2 6 4〃m、 平均 2 1 0 X 1 6 0 mで、 白色〜乳白色又は淡褐色を呈する。 分生子柄は、 基 底菌糸または子座層から生じ、 繰り返し分枝し、 分枝部で 2〜4本の分枝を生じ る。 分生子柄の幅は 1. 6〜2. 8 zmである。 分生子形成細胞はフィアライド 型で 2〜数本輪生し、 5. 6〜1 6 ^mx l. 0〜1. 6〃mの円筒形である。 分生子はフィァ口型分生子で、 4. 0〜7. 2 X 1. 0〜 1. 6 mの細長い紡 錘形又は三日月形である。 両端は尖る。 多くは子座上に乳白色の粘塊となって集 まる。 本菌株の至適生育温度は 2 5°C前後で、 3 7 °Cでは生育しない。 生育 pH の範囲は 3〜1 1と広く、 至適 pHは 5〜6である。  6. This strain grows quickly on oatmeal agar medium and forms abundant conidia at the center of the colony. The hypha is 0.8 to 2.8 m wide, colorless to light brown, with smooth walls and septum. The size and shape of the conidium are not uniform, and are often ovoid, pear-shaped, hemispherical, and their bases are constricted and columnar. Peripheral hyphae are needle-like and colorless and pointed. The inside is deeply dug in a cup shape. Peripheral hyphae are 150-300 m in height, 105-264 m in width, average 210 x 160 m, and are white to milky or light brown. The conidiophores originate from the basal hypha or the constellation layer and branch repeatedly, giving rise to two to four branches at the branch. The width of the conidiophores ranges from 1.6 to 2.8 zm. The conidium-forming cells are phialidated and have two to several rings, and have a cylindrical shape of 5.6 to 16 ^ mx l. 0 to 1.6 m. The conidium is a filamentous conidium and is an elongated spindle or crescent with a size of 4.0 to 7.2 X 1.0 to 1.6 m. Both ends are sharp. Many collect as milky viscous masses on the constellation. The optimal growth temperature of this strain is around 25 ° C and does not grow at 37 ° C. The range of growth pH is as wide as 3 to 11 and the optimum pH is 5 to 6.
7. 以上の菌学的性状により本菌株は、 D.L Hawksworth B. C. Sutton and G. G. Ainsworth, "Ains orth and Bisby's Dictionary of the Fungi", 7th ed. , C. M. I., Kew, (1983) に従い 、 真菌門、 不完全菌亜門、 不完全糸状菌綱のデンドロ ドキゥム (Dendrodochiuip ) 属菌と同定した。 さらに種の検索を行ったが、 種の 同定にまでは至らなかつたので本菌株を Dendrodoch i um sp. NF00634と命名した。  7. Based on the above mycological properties, this strain was identified as fungal phylum, incomplete according to DL Hawksworth BC Sutton and GG Ainsworth, "Ains orth and Bisby's Dictionary of the Fungi", 7th ed., CMI, Kew, (1983). It was identified as the genus Dendrodochiuip of the mycophyta and incomplete filamentous fungi. Species search was further performed, but the species was not identified. Therefore, this strain was named Dendrodochium sp. NF00634.
本発明により本化合物を製造するには、 デンドロドキゥム属に属し、 本化合 物産生能を有する微生物を培地中で培養して培養物中に本化合物を生成蓄積せし め、 次いでこれを採取すればよい。  In order to produce the present compound according to the present invention, a microorganism belonging to the genus Dendrodochim and having the ability to produce the present compound is cultured in a medium to produce and accumulate the present compound in the culture, and then this is collected. Good.
培養方法は原則的に糸状菌の培養方法に準ずるが、 通常は液体培養による深部 培養法が有利である。 培養に用いられる培地としては、 菌株 N F 0 0 6 3 4が利 用する栄養源を含有する培地であればよい。 栄養源としては従来から糸状菌の培 養に利用されている公知のものが使用でき、 例えば、 炭素源として、 グルコース、 ガラクトース、 マンニトール、 デキストリン、 澱粉、 水飴 （殿粉麦芽糖化物） 、 大豆油などを単独で又は組合わせて用いることができる。 The culture method is basically the same as the culture method of filamentous fungi, but usually deep Culture methods are advantageous. The medium used for the culture may be any medium containing a nutrient used by the strain NF 06634. Known nutrient sources that have been conventionally used for cultivation of filamentous fungi can be used. Examples of carbon sources include glucose, galactose, mannitol, dextrin, starch, starch syrup (starch malt saccharified product), and soybean oil. Can be used alone or in combination.
無機および有機窒素源としては、 塩化アンモニゥム、 硫酸アンモニゥム、 尿素、 硝酸アンモニゥム、 硝酸ソーダ、 ペプトン、 肉エキス、 酵母エキス、 乾燥酵母、 コーン ·スチープ · リカ一、 大豆油カス、 ォ一トミル、 カザミノ酸、 バクトソィ トン、 ソリュブルベジタブルプロティンなどを単独で又は組合わせて用いること ができる。  Sources of inorganic and organic nitrogen include ammonium chloride, ammonium sulfate, urea, ammonium nitrate, sodium nitrate, peptone, meat extract, yeast extract, dried yeast, corn steep liquor, soybean oil cas, sotitol, casamino acid , Bacto Soi Ton, Soluble Vegetable Protein, etc. can be used alone or in combination.
その他必要に応じて、 食塩、 硫酸マグネシウム、 硫酸銅、 硫酸亜鉛、 塩化マン ガン、 炭酸カルシウム、 リン酸塩などの無機塩を添加することができるほか、 本 菌の生育や、 フォスフォジエステラーゼ阻害剤の生産を促進する有機物、 例えば 核酸類、 アミノ酸、 ビタミン類や無機物を適当に添加することができる。  In addition, if necessary, inorganic salts such as salt, magnesium sulfate, copper sulfate, zinc sulfate, manganese chloride, calcium carbonate, phosphate, etc. can be added, as well as the growth of the bacterium and inhibition of phosphodiesterase. Organic substances, such as nucleic acids, amino acids, vitamins and inorganic substances, which promote the production of the agent can be added appropriately.
培養は、 通常、 振とう培養又は通気攪拌培養などの好気的条件下で行う。 実用 的には、 深部通気攪拌培養が好ましい。 培地の p Hは、 例えば 5 . 0〜8 . 0で あるが、 中性付近が好ましい。 培養温度は 2 5〜2 8 °Cが好ましい。 培養時間に 関しては、 液体培養の場合、 通常 2〜4日培養を行ない、 培養物中の本化合物の 蓄積量が最大に達したときに培養を終了する。  The cultivation is usually carried out under aerobic conditions such as shaking culture or aeration and stirring culture. Practically, deep aeration stirring culture is preferable. The pH of the medium is, for example, 5.0 to 8.0, but is preferably around neutral. The culture temperature is preferably from 25 to 28 ° C. Regarding the culture time, in the case of liquid culture, culture is usually performed for 2 to 4 days, and the culture is terminated when the accumulated amount of the compound in the culture reaches the maximum.
培地組成、 培地の液性、 培養温度、 援拌速度、 通気量等の培養条件は、 使用す る菌株の種類や外部の条件等に応じて、 好ましい結果が得られるように適宜調節、 選択できることはいうまでもない。 液体培養において発泡があるときは、 シリコ ン油、 植物油、 界面活性剤などの消泡剤が適宜使用される。  Culture conditions such as medium composition, medium liquidity, culture temperature, agitation speed, aeration rate, etc. can be appropriately adjusted and selected so as to obtain preferable results depending on the type of bacterial strain used and external conditions. Needless to say. When foaming occurs in the liquid culture, an antifoaming agent such as silicone oil, vegetable oil, or a surfactant is appropriately used.
このようにして得られた培養物中に蓄積された本化合物は、 通常は培養菌体中 に生成される。  The present compound accumulated in the culture thus obtained is usually produced in cultured cells.
培養ろ液から本化合物を採取するには、 通常微生物の培養液から代謝物を採取 するのに用いられる手段を単独で又は任意の順序に組み合わせて、 または繰り返 し適用して用いられる。 例えば、 ろ過、 溶剤抽出、 遠心分離、 透析、 濃縮、 乾燥、 凍結、 吸着、 脱着、 各種溶媒に対する溶解度の差を利用する方法 （例えば、 沈澱、 結晶化、 再結晶、 転溶、 向流分配等） 、 クロマトグラフィー等の手段が用いられ る。 In order to collect the present compound from the culture filtrate, the means usually used for collecting metabolites from the culture solution of microorganisms are used alone, in any combination, or repeatedly applied. For example, filtration, solvent extraction, centrifugation, dialysis, concentration, drying, freezing, adsorption, desorption, and methods utilizing differences in solubility in various solvents (eg, precipitation, Crystallization, recrystallization, phase transfer, countercurrent distribution, etc.) and chromatography.
本化合物は、 主として培養菌体中に生成蓄積されるので、 培養液をろ過あるい は遠心して得られた菌体べレットから採取することができる。  Since this compound is mainly produced and accumulated in cultured cells, it can be collected from the cell pellet obtained by filtering or centrifuging the culture solution.
例えば、 培養物から液体成分を除去した後に残る培養菌体をメタノールで抽出 し、 得られた抽出液を濃縮し、 酢酸ェチルで抽出して、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィー、 セフアデックス LH— 2 0クロマトグラフィー等によって本化合 物を単離することができる。  For example, the cultured cells remaining after removing the liquid components from the culture are extracted with methanol, the obtained extract is concentrated, extracted with ethyl acetate, silica gel column chromatography, Sephadex LH-20 chromatography. This compound can be isolated by chromatography or the like.
以上のようにして得られた本化合物のうち、 主な化合物である NF 0 0 6 3 4 — 1， NF 0 0 6 3 4 - 2, NF 0 0 6 3 4 - 3, N F 0 0 6 3 4— 4及び N F 0 0 6 3 4— 5は、 それぞれ下記に示すような物理化学的性状を示す。 化合物 N F 0 0 6 34 - 1 , NF 0 0 6 3 4 -2及び N F 0 0 6 3 4 - 3はそれぞれ公知 の文献に記載された物理化学的性状と一致することが確認された。 また、 NF 0 0 6 3 4一 4及び NF 0 0 6 3 4 - 5については、 質量分析等によるデータから 推定される構造式を示している。  Among the compounds obtained as described above, the main compounds NF 0 6 3 4 — 1, NF 0 6 3 4-2, NF 0 6 3 4-3, NF 0 0 6 3 4-4 and NF 0 6 3 4-5 show the following physicochemical properties, respectively. It was confirmed that the compounds N F 0 634-1, N F 0 6 0 3-4-2 and N F 0 0 6 3 4-3 corresponded to the physicochemical properties described in publicly known documents, respectively. For NF 066 34 and NF 066 4-5, the structural formulas estimated from data obtained by mass spectrometry and the like are shown.
( i ) NF 0 06 3 4— 1  (i) NF 0 06 3 4— 1
1 ) 外観：白色粉末  1) Appearance: white powder
2 ) 分子量 : 37 4  2) Molecular weight: 37 4
3) 分子式： C2。H220, 3) Molecular formula: C 2. H 22 0,
4 ) 構造式：  4) Structural formula:
Figure imgf000014_0001
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5 ) 溶解性：  5) Solubility:
易溶：ジメチルスルホキシド、 ジメチルホルムアミ ド、 クロ口ホルム 可溶： メタノール、 ァセ卜ン、 酢酸ェチル  Easily soluble: dimethyl sulfoxide, dimethylformamide, black form Soluble: methanol, acetate, ethyl acetate
不溶：水、 n—へキサン 6) シリカゲル薄層クロマトグラフィーによる R f値： 0 20Insoluble: water, n-hexane 6) R f value by silica gel thin layer chromatography: 0 20
(クロ口ホルム一メタノール （5 : 1) ) (Black mouth form-methanol (5: 1))
7) 紫外部吸収スぺクトル （メタノール中にて測定） ：  7) Ultraviolet absorption spectrum (measured in methanol):
Amax ： ε = 30 1 ： 8280  Amax: ε = 30 1: 8280
269 : 1 2 1 1 7  269: 1 2 1 1 7
2 1 4 : 1 8700  2 1 4: 1 8700
8) 水素核磁気共鳴スぺクトル （重 DM SO中にて測定）  8) Hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum (measured in heavy DM SO)
文献記載のものとほぼ一致した。  This was almost the same as that described in the literature.
9) 炭素核磁気共鳴スぺクトル （重 DMSO中にて測定）  9) Carbon nuclear magnetic resonance spectrum (measured in heavy DMSO)
文献記載のものとほぼ一致した。  This was almost the same as that described in the literature.
1 0 ) 呈色反応：  10) Color reaction:
陽性： ヨウ素、 クロル卜リジン、 ライ ドンスミス  Positives: iodine, chlortridine, Rydsmith
陰性：ニンヒ ドリン、 塩化第 2鉄  Negative: ninhydrin, ferric chloride
1 1 ) 塩基性、 酸性、 中性の区別：弱酸性  1 1) Basic, acidic and neutral: weakly acidic
(ii) NF 00634 -2 (ii) NF 00634 -2
1 ) 外観：白色粉末  1) Appearance: white powder
2 ) 分子量 : 402  2) Molecular weight: 402
3) 分子式： C22H2607 3) Molecular formula: C 22 H 26 0 7
4 ) 構造式：  4) Structural formula:
Figure imgf000015_0001
Figure imgf000015_0001
5 ) 溶解性： 5) Solubility:
易溶：ジメチルスルホキシド、 ジメチルホルムァ ド、 クロロホノレム 可溶： メタノール、 ァセトン、 酢酸ェチル  Easily soluble: dimethylsulfoxide, dimethylformad, chlorophonolem Soluble: methanol, acetone, ethyl acetate
不溶：水、 n—へキサン 6) シリカゲル薄眉クロマトグラフィーによる R f 値： 0 2 6 Insoluble: water, n-hexane 6) R f value by silica gel thin eye chromatography: 0 2 6
(クロ口ホルム一メタノール （5 : 1) )  (Black mouth form-methanol (5: 1))
7) 紫外部吸収スぺクトル （メタノール中にて測定） ：  7) Ultraviolet absorption spectrum (measured in methanol):
λ max ： ε = 3 04 ： 8 8 0 0  λ max: ε = 304: 8800
2 70 : 1 3 6 0 0  2 70: 1 3 6 0 0
2 1 8 : 2 8 0 0 0  2 1 8: 2 8 0 0 0
8) 水素核磁気共鳴スぺク トル （重 DM SO中にて測定）  8) Hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum (measured in heavy DM SO)
文献記載のものとほぼ一致した。  This was almost the same as that described in the literature.
9) 炭素核磁気共鳴スぺクトル （重 DM SO中にて測定）  9) Carbon nuclear magnetic resonance spectrum (measured in heavy DM SO)
文献記載のものとほぼ一致した。  This was almost the same as that described in the literature.
1 0 ) 呈色反応；  10) Color reaction;
陽性： ヨウ素、 クロルトリジン、 ライ ドンスミス  Positives: Iodine, Chlorthridine, Ride Smith
陰性：ニンヒドリン、 塩化第 2鉄  Negative: ninhydrin, ferric chloride
1 1 ) 塩基性、 酸性、 中性の区別：弱酸性  1 1) Basic, acidic and neutral: weakly acidic
(iii) NF 0 0 6 3 4 - 3 (iii) NF 0 0 6 3 4-3
1 ) 外観：白色粉末  1) Appearance: white powder
2) 分子量 4 3 0  2) Molecular weight 4 3 0
3) 分子式 レ H リ  3) Molecular formula
4) 構造式  4) Structural formula
Figure imgf000016_0001
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5 ) 溶解性： 5) Solubility:
易溶： ジメチルスルホキシド、 ジメチルホルムアミ ド、 クロ口ホルム 可溶： メタノール、 ァセトン、 醉酸ェチル  Easily soluble: dimethyl sulfoxide, dimethylformamide, black form Soluble: methanol, acetone, ethyl ethyl drone
不溶：水、 —へキサン 6) シリカゲル薄層クロマトグラフィーによる R f 値： 0 2 5 Insoluble: water, —hexane 6) R f value by silica gel thin layer chromatography: 0 2 5
(クロホルム一メタノール （5 : 1) )  (Chloform-methanol (5: 1))
7) 紫外部吸収スぺクトル （メタノール中にて測定） ：  7) Ultraviolet absorption spectrum (measured in methanol):
A max ： ε = 3 0 4 ： 9 7 0 0  A max: ε = 3 0 4: 9 7 0 0
2 7 1 : 1 5 7 0 0  2 7 1: 1 5 7 0 0
2 1 1 : 4 5 1 0 0  2 1 1: 4 5 1 0 0
8) 水素核磁気共鳴スぺク トル （重 DMSO中にて測定）  8) Hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum (measured in heavy DMSO)
文献記載のものとほぼ一致した。  This was almost the same as that described in the literature.
9) 炭素核磁気共鳴スぺク トル （重 DMSO中にて測定）  9) Carbon nuclear magnetic resonance spectrum (measured in heavy DMSO)
文献記載のものとほぼ一致した。  This was almost the same as that described in the literature.
1 0 ) 呈色反応：  10) Color reaction:
陽性： ヨウ素、 クロルトリジン、 ライ ドンスミス  Positives: Iodine, Chlorthridine, Ride Smith
陰性：ニンヒ ドリン、 塩化第 2鉄  Negative: ninhydrin, ferric chloride
1 1 ) 塩基性、 酸性、 中性の区別：弱酸性  1 1) Basic, acidic and neutral: weakly acidic
(iv) NF 0 0 6 3 4 -4 (iv) NF 0 0 6 3 4 -4
1 ) 外観：白色粉末  1) Appearance: white powder
2) 分子量 5 8 0  2) Molecular weight 5 8 0
3) 分子式  3) Molecular formula
4) 構造式  4) Structural formula
Figure imgf000017_0001
Figure imgf000017_0001
5 ) 溶解性： 5) Solubility:
易溶： ジメチルスルホキシド、 ジメチルホルムァ ト、 クロロホノレ厶 可溶： メタノ一ル、 ァセトン、 酢酸ェチル  Easily soluble: dimethyl sulfoxide, dimethylformate, chlorophonolme Soluble: methanol, acetone, ethyl acetate
不溶：水、 n—へキサン 6) シリカゲル薄層クロマトグラフィーによる R f値： 0 2 2 Insoluble: water, n-hexane 6) R f value by silica gel thin layer chromatography: 0 2 2
(クロ口ホルム一メタノール （5 : 1) )  (Black mouth form-methanol (5: 1))
7) 紫外部吸収スぺク トル （メタノール中にて測定） ：  7) Ultraviolet absorption spectrum (measured in methanol):
A max : £ = 3 0 2 1 2 3 0 0  A max: £ = 3 0 2 1 2 3 0 0
2 7 0 1 9 4 3 0  2 7 0 1 9 4 3 0
2 1 3 6 1 7 0 0  2 1 3 6 1 7 0 0
8) 質量スぺク トル （エレク トロスプレー法の negative mode で測定） 図 1に示す。  8) Mass spectrum (measured in the negative mode of the electrospray method).
9 ) 呈色反応：  9) Color reaction:
陽性： ヨウ素、 クロルトリジン、 ライ ドンスミス  Positives: Iodine, Chlorthridine, Ride Smith
陰性：ニンヒドリン、 塩化第 2鉄  Negative: ninhydrin, ferric chloride
1 0 ) 塩基性、 酸性、 中性の区別：弱酸性  10) Basic, acidic and neutral: weakly acidic
(V) NF 0 0 6 3 4 - 5 (V) NF 0 0 6 3 4-5
1 ) 外観：白色粉末  1) Appearance: white powder
2 ) 分子量 : 6 0 8  2) Molecular weight: 600
3) 分子式： C H O^  3) Molecular formula: C H O ^
4 ) 構造式：  4) Structural formula:
Figure imgf000018_0001
Figure imgf000018_0001
5 ) 溶解性：  5) Solubility:
易溶： ジメチルスルホキシド、 ジメチルホルムアミ ド、 クロ口ホルム 可溶： メタノ一ル、 ァセトン、 酢酸ェチル  Easily soluble: dimethyl sulfoxide, dimethylformamide, black form Soluble: methanol, acetone, ethyl acetate
不溶：水、 n—へキサン  Insoluble: water, n-hexane
6) シリカゲル薄層クロマトグラフィーによる R f値： 0. 24  6) R f value by silica gel thin layer chromatography: 0.24
(クロ口ホルム一メタノール （5 : 1) )  (Black mouth form-methanol (5: 1))
7) 紫外部吸収スぺク トル （メタノール中にて測定） ： A max : ε = 3 0 1 : 1 1 1 2 6 7) Ultraviolet absorption spectrum (measured in methanol): A max: ε = 3 0 1: 1 1 1 2 6
2 7 0 : 1 7 6 0 0  2 7 0: 1 7 6 0 0
2 1 3 : 6 1 6 0 0  2 1 3: 6 1 6 0 0
8) 質量スぺクトル （エレクトロスプレー法の negative modeで測定） 図 2に示す。  8) Mass spectrum (measured in the negative mode of the electrospray method).
9 ) 呈色反応：  9) Color reaction:
陽性：ヨウ素、 クロルトリジン、 ライ ドンスミス  Positives: iodine, chlortridine, Rydsmith
陰性：ニンヒ ドリン、 塩化第 2鉄  Negative: ninhydrin, ferric chloride
1 0 ) 塩基性、 酸性、 中性の区別：弱酸性  10) Basic, acidic and neutral: weakly acidic
本化合物は合成によっても製造することができ、 その合成法を以下に具体的に a¾明する。  This compound can also be produced by synthesis, and the synthesis method is specifically described below.
一般式 〔1〕 の化合物は、  The compound of the general formula (1)
下記一般式 〔6〕 ： The following general formula [6]:
〔6〕  [6]
Figure imgf000019_0001
Figure imgf000019_0001
(式中、 m， R 1, R2， R 4, R5, R 7及び R 8は前記と同じ意味を表し、 R 1 0は水酸基の保護基を表す。 ）  (In the formula, m, R1, R2, R4, R5, R7 and R8 have the same meaning as described above, and R10 represents a hydroxyl-protecting group.)
で示される、 置換基を有する安息香酸と、 下記一般式 〔7〕 ： A benzoic acid having a substituent represented by the following general formula [7]:
〔7〕
Figure imgf000019_0002
[7]
Figure imgf000019_0002
(式中、 R 3及び R 9は前記と同じ意味を表し、 R l 1はカルボキシル基の保 護基 ¾表す。 ） (In the formula, R 3 and R 9 represent the same meaning as described above, and R 11 represents a protecting group for a carboxyl group.)
で示される、 p—ヒドロキシ安息香酸誘導体とを縮合し、 次いで保護基を常法に より除去することにより得ることができる。 前記一般式 〔6〕 において mが 1である化合物は、 下記一般式 〔8〕 Can be obtained by condensing the compound with a p-hydroxybenzoic acid derivative represented by the following formula, and then removing the protecting group by a conventional method. In the general formula (6), the compound wherein m is 1 is a compound represented by the following general formula (8)
〔8〕
Figure imgf000020_0001
[8]
Figure imgf000020_0001
(式中、 R l ， R 4 , R 5 , 7及び1¾ 1 0は前記と同じ意味を表す。 ） で示される、 置換基を有する安息香酸と、 下記一般式 〔9〕 ：  (Wherein, R 1, R 4, R 5, 7 and 1¾10 have the same meanings as described above), and a substituted benzoic acid represented by the following general formula [9]:
〔9〕
Figure imgf000020_0002
[9]
Figure imgf000020_0002
(式中、 R 2及び R 8は前記と同じ意味を表し、 R 1 2はカルボキシル基の保護 基を表す。 ） (In the formula, R 2 and R 8 represent the same meaning as described above, and R 12 represents a carboxyl-protecting group.)
で示される、 Ρ—ヒドロキシ安息香酸誘導体とを縮合し、 次いで保護基を除去す ることにより得ることができる。 Can be obtained by condensing with a ヒ ド ロ キ シ -hydroxybenzoic acid derivative represented by the following formula, and then removing the protecting group.
これらの縮合反応及び保護基の除去は、  These condensation reactions and removal of protecting groups are
Aust. J. Chem，第 27巻， 第 1767頁（1974)， 第 31卷， 第 1041頁（1978)及び第 38卷， 第 1863頁（1985)に開示されている方法又はそれに準じた方法で合成される。 Aust. J. Chem, vol. 27, p. 1767 (1974), vol. 31, p. 1041 (1978) and p. 38, p. 1863 (1985), or a method analogous thereto. Synthesized.
さらに、 上に述べた合成法のうち好ましい一例を次に挙げる。  Further, a preferable example of the above-mentioned synthesis method is described below.
下記一般式 〔2〕 ：  The following general formula [2]:
〔 2〕
Figure imgf000020_0003
[2]
Figure imgf000020_0003
(式中、 R ' は低級アルキル基、 R〃 はカルボキシル基の保護基を表す。 ） で示される化合物と、  (Wherein, R ′ represents a lower alkyl group, and R〃 represents a carboxyl-protecting group.)
下記一般式 〔3〕 ： The following general formula [3]:
〔3〕
Figure imgf000020_0004
(式中、 Rは低級アルキル基、 R"は水酸基の保護基を表す。 ） で示される化合 物とを、 無水トリフルォロ酔酸の存在下に反応させて、 [3]
Figure imgf000020_0004
(Wherein, R represents a lower alkyl group and R ″ represents a protecting group for a hydroxyl group.) In the presence of trifluorosulfonic anhydride,
下記一般式 〔4〕 ： 〔4〕
Figure imgf000021_0001
The following general formula [4]: [4]
Figure imgf000021_0001
(式中、 R, R ' ， R " 及び は前記と同じ意味を表す。 ）  (Wherein, R, R ′, R ″ and have the same meaning as described above.)
で示される化合物を得、 この化合物の保護基を除去することによって、 下記一般 式 〔5〕 ： 〔 5〕
Figure imgf000021_0002
By removing the protecting group of this compound, a compound represented by the following general formula [5]: [5]
Figure imgf000021_0002
(式中、 R, R ' は前記と同じ意味を表す。 ） で示される化合物を得る。 上記の 反応において、 より好ましくは、 例えば、 R及び R ' はプロピル基又はメチル基 であり、 R〃 及び は各々ベンジル基である。  (Wherein, R and R ′ have the same meanings as described above.) In the above reaction, more preferably, for example, R and R ′ are a propyl group or a methyl group, and R ′ and are each a benzyl group.
出発原料である上記一般式 〔6〕 ， 〔8〕 又は 〔3〕 で示される、 置換基を有 する安息香酸としては、 例えば、 次に挙げる化合物の 4位の水酸基を、 通常用い られる適当な保護基で保護したものが挙げられる：  Examples of the benzoic acid having a substituent represented by the above general formula [6], [8] or [3] as a starting material include, for example, a hydroxyl group at the 4-position of the following compound, Those protected with protecting groups include:
2 , 4—ジヒドロキシー 6—プロピル安息香酸、  2,4-dihydroxy-6-propylbenzoic acid,
2 , 4—ジヒドロキシー 6—ペンチル安息香酸、  2,4-dihydroxy-6-pentylbenzoic acid,
4一 ( 2 , 4ージヒドロキシ一 6—プロピルべンゾィルォキシ） 一 2—ヒドロ キシ一 6—プロピル安息香酸、  4- (2,4-dihydroxy-1-6-propylbenzoyloxy) 1-2-hydroxy-16-propylbenzoic acid,
4— ( 2， 4—ジヒドロキシ一 6—ペンチルベンゾィルォキシ） 一 2—ヒドロ キシ一 6—ペンチル安息香酸、  4- (2,4-dihydroxy-1-6-pentylbenzoyloxy) -1-2-hydroxy-16-pentylbenzoic acid,
2 , 4—ジヒドロキシ一 6—ェチル安息香酸、  2,4-dihydroxy-1-6-ethylbenzoic acid,
2 , 4—ジヒドロキシー 6—メチル安息香酸、  2,4-dihydroxy-6-methylbenzoic acid,
2， 4ージヒドロキシ一 6—イソプロピル安息香酸、 2, 4—ジメ トキシ一 6—プロピノレ安息香酸、 2,4-dihydroxy-1-6-benzoic acid, 2, 4-dimethoxy-6-propynolebenzoic acid,
2—ヒドロキシ— 3—クロロー 4—メ トキシ一 6—プロピル安息香酸、  2-hydroxy-3-chloro-4-methoxy-6-propylbenzoic acid,
2， 4ージヒドロキシ一 3， 5—ジクロロ一 6—ペンチル安息香酸、 及び  2,4-dihydroxy-1,3,5-dichloro-1-6-pentylbenzoic acid, and
2—ヒドロキシ一 4—メ トキシ一 5—クロ口一 6—プロピル安息香酸。  2-hydroxy-1-methoxy-5-chloro-6-propylbenzoic acid.
また、 同じく出発原料である上記一般式 〔7〕 ， 〔9〕 又は 〔2〕 で示される P—ヒドロキシ安息香酸誘導体としては、 例えば、 次に挙げる p—ヒ ドロキシ安 息香酸誘導体のカルボキシル基を、 通常用いられる適当な保護基で保護したもの が挙げられる：  Examples of the P-hydroxybenzoic acid derivative represented by the above general formula [7], [9] or [2], which is also a starting material, include, for example, carboxyl groups of the following p-hydroxybenzoic acid derivatives Is protected by a commonly used suitable protecting group:
2, 4—ジヒドロキシー 6—メチノレ安息香酸、  2, 4-dihydroxy-6-methynolebenzoic acid,
2， 4—ジヒ ドロキシ— 6—ェチル安息香酸、  2,4-dihydroxy-6-ethylbenzoic acid,
2—メ トキシ— 4—ヒ ドロキシ— 6—イソブチル安息香酸、  2-Methoxy-4-Hydroxy-6-isobutylbenzoic acid,
2—メ トキシ— 4—ヒドロキシ一 6—プロピル安息香酸、  2-Methoxy-4-Hydroxy-6-propylbenzoic acid,
2—メ トキシー 4—ヒ ドロキン一イソプロピル安息香酸、 及び  2-Methoxy 4-hydroquinine monoisopropylbenzoic acid, and
2—メ トキシ一 4—ヒ ドロキシ一ペンチル安息香酸。  2-Methoxy 4- 4-Hydroxy-pentylbenzoic acid.
上記の出発原料である一般式 〔6〕 ， 〔8〕 もしくは 〔3〕 又は 〔7〕 ， 〔9〕 もしくは 〔2〕 で示される化合物は、 例えば、 メルドラム酸とカルボン酸 塩化物とを出発原料として、  The compound represented by the general formula [6], [8] or [3] or [7], [9] or [2], which is the above-mentioned starting material, is obtained by, for example, using Meldrum's acid and carboxylic acid chloride as starting materials. As
J. Org. Che ,第 43巻， 第 10号， 第 2087頁（1978)、 Chem, Pharm. Bull., 第 20巻， 第 7号， 第 1574-1578 頁（1972)  J. Org. Che, 43, 10, 2087 (1978), Chem, Pharm. Bull., 20, 7, 1574-1578 (1972).
に記載の方法に準じて製造することができる。 Can be produced according to the method described in (1).
以上のようにして得られた本化合物のうち、 主な化合物である PD— 0 0 1、 PD— 0 0 2、 PD— 0 0 3、 PD— 0 0 4、 PD— 0 0 5、 PD— 0 0 6及び PD— 0 0 7は、 それぞれ下記に示すような物理化学性状を示す。 なお、 PD— 0 0 1は前述の NF 0 0 6 3 4 - 1と同一の化合物であるが、 以下、 合成で得ら れたものを PD— 0 0 1として区別する。  Among the compounds obtained as described above, the main compounds PD—01, PD—002, PD—003, PD—004, PD—005, PD— 06 and PD-07 show the following physicochemical properties, respectively. Note that PD-001 is the same compound as the above-mentioned NF 066 34-1, but hereinafter, the compound obtained by the synthesis is distinguished as PD-001.
( i ) PD - 0 0 1  (i) PD-0 0 1
1) 〜4) 外観、 分子量、 分子式、 構造式は全て NF 0 0 6 3 4 - 1と一致した。  1) to 4) Appearance, molecular weight, molecular formula, and structural formula were all consistent with NF 0 6 3 4-1.
5) 水素核磁気共鳴スぺク トル （2 0 OMH z、 重 DM SO)  5) Hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum (20 OMHz, heavy DM SO)
文献記載のものとほぼ一致した。 5= 1 0. 1 4 (s， 1 H) This was almost the same as that described in the literature. 5 = 1 0.14 (s, 1 H)
9. 8 7 (b r. s， 1 H)  9.87 (b r.s, 1 H)
6. 5 7 (d， 1 H， J = 2. 0 8 Hz)  6.57 (d, 1 H, J = 2.08 Hz)
6. 4 9 (d, 1 H, J = 2. 1 2 Hz)  6.49 (d, 1 H, J = 2.12 Hz)
6. 2 4 (d， 1 H, J = 2. 2 0 H z)  6.24 (d, 1 H, J = 2.20 Hz)
6. 1 9 (d, 1 H, J = 2. 1 5 Hz)  6.19 (d, 1 H, J = 2.15 Hz)
2. 6 8〜2. 54 (m, 4 H)  2.68 to 2.54 (m, 4H)
1. 6 6〜 1. 4 6 (m， 4 H)  1.66 to 1.46 (m, 4H)
0. 9 5〜0. 8 4 (m， 6 H)  0.95 to 0.84 (m, 6H)
6) 質量スぺクトル （エレク トロスプレー法の negative mode で測定） m/z 3 7 3 〔M - H〕 一  6) Mass spectrum (measured in negative mode of electrospray method) m / z 3 7 3 [M-H]
7 4 7 [2M-H] - 図 3に示す。  7 4 7 [2M-H]-See Figure 3.
(ii) PD- 0 0 2  (ii) PD-0-02
1 ) 外 観：無色粉末  1) Appearance: colorless powder
2 ) 分子量： 3 4 6  2) Molecular weight: 3 4 6
3) 分子式： C18H1807 3) Molecular formula: C 18 H 18 0 7
4 ) 構造式：  4) Structural formula:
Figure imgf000023_0001
Figure imgf000023_0001
5) 水素核磁気共鳴スぺクトル （2 0 0 MHz、 重 DM SO)  5) Hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum (200 MHz, heavy DM SO)
5= 1 0. 1 5 (s， 1 H)  5 = 1 0.15 (s, 1 H)
9. 9 0 (s， 1 H)  9.90 (s, 1 H)
6. 5 8 (d, 1 H, J = 2. 0 8 Hz)  6.5 8 (d, 1 H, J = 2.08 Hz)
6. 54 (d， 1 H, J = 1. 9 5 H z)  6.54 (d, 1 H, J = 1.95 Hz)
6. 24 (d, 1 H, J = 2. 1 2 H z)  6.24 (d, 1 H, J = 2.12 H z)
6. 2 1 (d, 1 H, J = 2. 1 2 H z) 2. 74〜2. 56 (m, 4 H) 6.2 1 (d, 1 H, J = 2.12 Hz) 2.74 ~ 2.56 (m, 4H)
1. 2 卜 1. 08 (m, 6 H)  1.2 minutes 1.08 (m, 6 H)
6) 質量スぺク トル （エレク トロスプレー法の negative modeで測定） m/z 345 〔M - H〕 - (iii) PD - 003  6) Mass spectrum (measured in negative mode of electrospray method) m / z 345 [M-H]-(iii) PD-003
1 ) 外 観：無色粉末  1) Appearance: colorless powder
2 ) 分子量： 3 1 8  2) Molecular weight: 3 1 8
3) 分子式： C H OT  3) Molecular formula: CHOT
4 ) 構造式：  4) Structural formula:
Figure imgf000024_0001
Figure imgf000024_0001
5) 水素核磁気共鳴スぺク トル （200 MHz、 重 DM SO)  5) Hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum (200 MHz, heavy DM SO)
文献記載のものとほぼ一致した。  This was almost the same as that described in the literature.
5= 1 0. 3 5 (s， 1 H)  5 = 1 0.35 (s, 1 H)
1 0. 04 (b r, s， 1 H)  1 0.04 (b r, s, 1 H)
6. 60 (d, 1 H)  6.60 (d, 1 H)
6. 59 (d, 1 H)  6.59 (d, 1 H)
6. 23 (s, 2 H)  6.23 (s, 2 H)
2. 37 (s, 3 H)  2.37 (s, 3 H)
2. 35 (s, 3 H)  2.35 (s, 3 H)
6 ) 質量スぺク トル （エレク トロスプレー法の negative mode で測定） m/z 3 1 7 〔M— H〕 - (iv) PD - 004  6) Mass spectrum (measured in negative mode of electrospray method) m / z 3 17 [M-H]-(iv) PD-004
1) 外 観 無色粉末  1) Appearance colorless powder
2) 分子量 346  2) Molecular weight 346
3) 分子式 し' fl Γ 18リ '  3) Molecular formula
4) 構造式
Figure imgf000025_0001
) 水素核磁気共鳴スぺク トル （2 0 0 MHz、 重 DMSO) 4) Structural formula
Figure imgf000025_0001
) Hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum (200 MHz, heavy DMSO)
5= 1 0. 3 6 (s, 1 H)  5 = 1 0.3.6 (s, 1 H)
1 0 0 5 (b r s 1 H)  1 0 0 5 (b r s 1 H)
6 5 8 (d, 1 H, J = 2. 1 6 H z)  6 5 8 (d, 1 H, J = 2.16 H z)
66 5 6 (d 1 H, J = 2. 1 5 H z)  66 5 6 (d 1 H, J = 2.15 Hz)
6 2 4 (s, 2 H)  6 2 4 (s, 2 H)
2, 6 5 2. 6 0 (m 2 H)  2, 6 5 2.60 (m 2 H)
2, 3 7 (s, 3 H)  2, 3 7 (s, 3 H)
1 , 6 7 1. 4 6 (m 2 H)  1, 6 7 1.4.6 (m 2 H)
00, 9 1 (t 3 H, J = 7. 2 4 Hz) 00, 9 1 (t 3 H, J = 7.24 Hz)
) 質量スぺクトル （エレク トロスプレー法の negative mode で測定） ) Mass spectrum (measured in negative mode of electrospray method)
m/z 3 4 5 〔M— H〕 一  m / z 3 4 5 [M-H] one
6 9 1 〔2 M - H〕 - 図 4に示す。  6 9 1 [2M-H]-shown in Figure 4.
PD- 0 0 5 PD- 0 0 5
) 外 観：無色粉末 ) Appearance: colorless powder
) 分子量： 34 6) Molecular weight: 34 6
) 分子式： Cl 8H，807 ) Molecular formula: C l 8 H, 8 0 7
) 構造式： ) Structural formula:
Figure imgf000025_0002
5) 水素核磁気共鳴スぺク トル （2 0 0 MHz、 重 DMSO)
Figure imgf000025_0002
5) Hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum (200 MHz, heavy DMSO)
5= 1 0. 1 2 (s， 1 H)  5 = 1 0.12 (s, 1 H)
9. 8 8 (s, 1 H)  9. 8 8 (s, 1 H)
6. 5 8 (d， 1 H, J = 2. 0 8 H z)  6.58 (d, 1 H, J = 2.08 Hz)
6. 5 4 (d， 1 H, J = 2. 1 2 H z)  6.5 4 (d, 1 H, J = 2.12 H z)
6. 2 4 (d， 1 H, J = 2. 2 0 H z)  6.24 (d, 1 H, J = 2.20 Hz)
6. 1 9 (d， 1 H， J = 2. 1 5 H z)  6.19 (d, 1H, J = 2.15Hz)
2. 6 4〜2. 5 3 (m， 4 H)  2.64 to 2.5 3 (m, 4 H)
2. 3 6 (s， 3 H)  2.36 (s, 3H)
1. 6 3〜し 4 9 (m, 2 H)  1.6 3 ~ 4 9 (m, 2 H)
0. 8 9 ( t, 3 H, J = 7. 3 3 H z)  0.89 (t, 3 H, J = 7.33 Hz)
6 ) 質量スぺク トル （エレク トロスプレー法の negative mode で測定） 6) Mass spectrum (measured in negative mode of electrospray method)
/z 3 4 5 [M-H - (vi) PD- 0 0 6  / z 3 4 5 [M-H-(vi) PD-0 6
1 ) 外 観：無色粉末  1) Appearance: colorless powder
2 ) 分子量： 3 7 4  2) Molecular weight: 3 7 4
3) 分子式： C2。H2207 3) Molecular formula: C 2. H 22 0 7
4 ) 構造式：  4) Structural formula:
Figure imgf000026_0001
Figure imgf000026_0001
5) 水素核磁気共鳴スぺク トル （2 0 0 MHz、 重 DMSO) 5) Hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum (200 MHz, heavy DMSO)
5= 9. 9 1 (s, 1 H)  5 = 9.9 1 (s, 1 H)
9. 6 8 (s， 1 H)  9.68 (s, 1H)
6. 5 8 (d, 1 H, J = 2. 0 4 H z)  6.5 8 (d, 1 H, J = 2.04 Hz)
6. 5 4 (d， 1 H, J = 2. 0 0 H z)  6.5 4 (d, 1 H, J = 2.00 Hz)
6. 2 6 (d， 1 H, J = 2. 0 8 H z) 6. 2 3 (d, 1 H, J = 2. 0 7 H z) 3. 0 9〜2. 9 3 (m， 2 H) 6.26 (d, 1 H, J = 2.08 Hz) 6.23 (d, 1 H, J = 2.07 Hz) 3.09 to 2.93 (m, 2 H)
1. 2 2〜； I. 1 3 (m, 1 2 H)  1.22 ~; I. 13 (m, 12H)
6) 質量スぺク トル （エレク トロスプレー法の negative mode で測定） mZz 3 7 3 [M-H 一  6) Mass spectrum (measured in negative mode of electrospray method) mZz 3 7 3 [M-H
74 7 (2 M-HJ - 74 7 (2 M-HJ-
(vn) PD- 0 07 (vn) PD- 0 07
1 ) 外 観：無色粉末  1) Appearance: colorless powder
2 ) 分子量： 3 8 8  2) Molecular weight: 3 8 8
3) 分子式： C21H24O7 3) Molecular formula: C 21 H 24 O 7
4 ) 構造式：  4) Structural formula:
Figure imgf000027_0001
Figure imgf000027_0001
5) 水素核磁気共鳴スぺク トル （2 0 0 MHz、 重 DM SO) 5) Hydrogen nuclear magnetic resonance spectrum (200 MHz, heavy DM SO)
5= 1 0. 1 0 (s， 1 H)  5 = 1 0.10 (s, 1 H)
9. 8 5 (b r, s, 1 H)  9.85 (b r, s, 1 H)
6. 58 (d, 1 H, J = 2. 2 0 H z)  6.58 (d, 1 H, J = 2.20 Hz)
6. 4 5 (d， 1 H, J= 1. 9 5 H z)  6.45 (d, 1 H, J = 1.95 Hz)
6. 24 (d, 1 H, J = 2. 1 9 H z)  6.24 (d, 1 H, J = 2.19 H z)
6. 1 9 (d, 1 H， J = 2. 0 1 Hz)  6.19 (d, 1 H, J = 2.0 1 Hz)
2. 6 4〜2. 5 2 (m， 4 H)  2.64 to 2.52 (m, 4H)
1. 9 卜 1. 7 5 (m， 1 H)  1. 9 1.75 (m, 1H)
1. 6 3〜 1. 4 9 (m, 2 H)  1.63-1.49 (m, 2H)
0. 9 4〜0. 82 (m, 9 H)  0.94 to 0.82 (m, 9H)
6) 質量スぺクトル （エレク トロスプレー法の negative mode で測定） m/z 3 8 7 CM-H) 一 775 〔2M - H〕 - 以下に実験例を挙げて、 本化合物の生理活性について具体的に説明する。 6) Mass spectrum (measured in negative mode of electrospray method) m / z 3 8 7 CM-H) 775 [2M-H]-The biological activity of the present compound will be specifically described below with reference to experimental examples.
フォスフォジエステラーゼアイソザィムには （I)〜（V) のタイプが知られ ており、 それらは Biochemical Pharmacology, 第 42卷， 第 3号， 第 663- 677頁 (1991)及び Biochemica et Biophysica Acta, 第 429巻， 第 461- 473頁（1976)に 記載されている。 本発明においては、 該文献の方法に準じて、 アイソザィム （I) 〜（IV) を調製し、 フォスフォジエステラーゼの阻害活性を、 また、 気管支平 滑筋収縮抑制活性及び好酸球活性化抑制活性を調べた。  Phosphodiesterase isozymes of the types (I) to (V) are known, which are described in Biochemical Pharmacology, Vol. 42, No. 3, pp. 663-677 (1991) and Biochemica et Biophysica. Acta, Vol. 429, pp. 461-473 (1976). In the present invention, isozymes (I) to (IV) are prepared according to the method of the literature to inhibit the activity of inhibiting phosphodiesterase, the activity of inhibiting bronchial smooth muscle contraction and the activity of eosinophil activation. The activity was examined.
実験例 1 Experimental example 1
」1) フォスフォジエステラーゼ阻害活性 1) Phosphodiesterase inhibitory activity
(A) ゥシ ·フォスフォジエステラーゼ'アイソザィム （I) , (I I) , (I I I) の調製  (A) Preparation of Pseudophosphodiesterase 'Isozymes (I), (II), (II)
屠殺後のゥシ心筋 100 gをはさみ及びメスで細切して、 5倍容の EDTA1 mMを含む 2 OmMトリス緩衝液 （pH7. 4) に懸濁し、 ポリ トロンホモジナ ィザ一によつて破砕して、 フォスフォジエステラーゼ粗酵素液を調製した。 1 0 After sacrifice, 100 g of myocardium was cut into small pieces with scissors and a scalpel, suspended in 5 volumes of 2 mM Tris buffer (pH 7.4) containing 1 mM EDTA, and disrupted with a polytron homogenizer. Thus, a crude phosphodiesterase enzyme solution was prepared. Ten
000 xgにて 20分間遠心分離を行い、 得られた上清を可溶性フォスフオジェ ステラ一ゼ粗酵素液とした。 さらに、 Q—セファロース 'ファーストフ口一 ·力 ラム （100ml) に可溶性粗酵素画分を添加し、 上記緩衝液で洗浄後、 50 mM〜l M酢酸ナトリウムの濃度勾配にて溶出した。 0. 3 M酢酸ナトリウムで 溶出されたフォスフォジエステラーゼをァイソザィム （I) の粗酵素画分、 0. 5M酢酸ナトリウムで溶出されたフォスフォジエステラーゼをァイソザィム （I I) の粗酵素画分、 0. 8M酢酸ナトリウムで溶出されたフォスフオジェステラ 一ゼをァイソザィム （I I I) の粗酵素画分とした。 The mixture was centrifuged at 000 xg for 20 minutes, and the resulting supernatant was used as a crude enzyme solution of soluble phosphodiesterase. Further, a soluble crude enzyme fraction was added to Q-Sepharose 'Fastfum® (100 ml), washed with the above buffer, and eluted with a concentration gradient of 50 mM to 1 M sodium acetate. Phosphodiesterase eluted with 0.3 M sodium acetate was used for crude enzyme fraction of isozyme (I), and phosphodiesterase eluted with 0.5 M sodium acetate was used for crude enzyme fraction of isozyme (II). Phosphogesterase eluted with 8M sodium acetate was used as a crude enzyme fraction of isozyme (III).
(B) ゥシ ·フォスフォジエステラーゼ'アイソザィム （I V) の調製 屠殺後のゥシ気道平滑筋 50 gをはさみ及びメスで細切して、 5倍容の EDT A 1 mMを含む 20 mMトリス緩衝液 （ p H 7. 4) に懸濁し、 ポリ トロンホモ ジナイザーによって破砕して、 フォスフォジエステラーゼ粗酵素液を調製した。  (B) Preparation of Pseudophosphodiesterase 'isozyme (IV) After sacrifice, cut 50 g of Pseudoairway smooth muscle with scissors and a scalpel, and add 20 mM Tris containing 5 volumes of 1 mM EDTA. This was suspended in a buffer solution (pH 7.4) and crushed with a polytron homogenizer to prepare a phosphodiesterase crude enzyme solution.
10000 xgにて 20分間遠心分離を行い、 得られた上清を可溶性フォスフォ ジエステラーゼ粗酵素液とした。 さらに、 Q—セファロース 'ファーストフロー •カラム （ 1 00 m 1 ) に可溶性粗酵素画分を添加し上記緩衝液で洗浄後、 5 0 mM〜l M酔酸ナトリウムの濃度勾配にて溶出した。 0. 7 M酢酸ナトリウムで 溶出されたフォスフォジエステラーゼをァイソザィム （I V) の粗酵素画分とし た。 Centrifugation was performed at 10,000 xg for 20 minutes, and the obtained supernatant was used as a soluble phosphodiesterase crude enzyme solution. In addition, Q—Sepharose 'First Flow • The soluble crude enzyme fraction was added to the column (100 ml), washed with the above buffer, and eluted with a concentration gradient of 50 mM to 1 M sodium persulfate. Phosphodiesterase eluted with 0.7 M sodium acetate was used as a crude enzyme fraction of isozyme (IV).
(C) フォスフォジエステラーゼ阻害活性の測定  (C) Measurement of phosphodiesterase inhibitory activity
フォスフォジエステラーゼ阻害活性は、 c一 AMP (米国シグマ社製） を基質 として用いて酵素反応を行った後、 残存した c— AMPを高速液体クロマトグラ フィ一で定量することにより測定した。 0. 3m 1容量プラスチックチューブに 以下の添加物： 0. 0 2mg/m 1 c -AMP. 2. 5 mMジチオスレイト一 ノレ、 6 mM塩化マグネシウム、 5 OmMトリス緩衝液 （pH 8. 0) 、 1 1の フォスフォジエステラーゼアイソザィム及び本化合物を加え、 最終容量を水で 2 0 0 u 1に調製した。 混合物を攪拌し、 3 7°Cで 6 0分間インキュベートした。 各チューブに 2 0 OmMの EDTA水溶液 2 0 μ. 1を添加することによって反応 を停止させた。 本溶液 2 0 1をそれぞれ高速液体クロマトグラフィー （ODS カラム ： 1 5 0mmx 3. 9 mm、 米国 WA T E R S社製） にかけ、 残存する c — AMPの量を測定し、 50%阻害濃度を算出した。  The phosphodiesterase inhibitory activity was measured by performing an enzymatic reaction using c-AMP (manufactured by Sigma, USA) as a substrate, and then quantifying the remaining c-AMP by high performance liquid chromatography. 0.3 m 1 volume plastic tube Add the following additives: 0.0 2 mg / m 1 c-AMP. 2.5 mM dithioslate, 6 mM magnesium chloride, 5 OmM Tris buffer (pH 8.0), 1 One phosphodiesterase isozyme and the compound were added, and the final volume was adjusted to 200 u1 with water. The mixture was agitated and incubated at 37 ° C for 60 minutes. The reaction was stopped by adding 20 μl of a 20 OmM EDTA aqueous solution to each tube. This solution 201 was subjected to high performance liquid chromatography (ODS column: 150 mm × 3.9 mm, manufactured by WATERS, USA), and the amount of remaining c-AMP was measured to calculate a 50% inhibitory concentration.
なお、 試験は 2回行い、 各試験で用いたフォスフォジエステラーゼアイソザィ ム （I) 〜（I V) は、 前述の通りの方法で各試験ごとに調製した。  The test was performed twice, and the phosphodiesterase isozymes (I) to (IV) used in each test were prepared for each test by the method described above.
また、 本化合物としては、 試験 1においては後述の例 1で製造された NF 0 0 6 34— 1， NF 0 06 3 4 -2, NF 0 06 34 -3, NF 0 0 6 3 4— 4及 び NF 00 6 34— 5を用い、 試験 2においては後述の例 2に準じて得られた P D— 0 0 2, PD- 00 3, PD— 0 0 4， PD— 0 0 5, PD— 0 0 6及び？ D- 0 0 7を用いた。  In addition, in Test 1, NF 0 634 1, NF 0 06 3 4 -2, NF 0 06 34 -3, NF 0 06 3 4 4 And NF 00 6 34—5, and in Test 2, PD— 0 2, PD—00 3, PD— 0 4, 4, PD— 0 0 5, PD— 0 0 6 and? D-07 was used.
各化合物の、 各フォスフォジエステラーゼアイソザィムに対する 5 0%阻害濃 度 （I C5。） を表 1及び表 2に示す。 表 1 Tables 1 and 2 show the 50% inhibitory concentrations (IC 5 ) of each compound for each phosphodiesterase isozyme. table 1
試験 1 フォスフォジエステラーゼアイソザィムに対する各化合物の I C フォスフォジエステラーゼアイソザィム Test 1 I C phosphodiesterase isozyme of each compound against phosphodiesterase isozyme
(I C5。 ： M) 化合物 1 I )ノ τ Π i ノ V T 1 I 1 1 T )ノ ( V I 1 V V ノ (IC 5:. M) Compound 1 I) Bruno tau [pi i Roh VT 1 I 1 1 T) Bruno (VI 1 VV Bruno
NF 00634 - 1 4 8 2. 9 1 6 1 7 NF 00634-1 4 8 2.9 1 6 1 7
NF 00634-2 1. 5 2. 3 8. 0 2. 5 NF 00634-2 1.5 2.3 8. 0 2.5
NF 00634 -3 0. 93 1. 3 2. 8 1. 0 NF 00634 -3 0.993 1.3 2.8 1.0
NF 00634-4 0. 93 0. 78 1. 2 0. 97 NF 00634-4 0.93 0.78 1.2 0.97
NF 00634 - 5 0. 95 0. 67 1. 6 2. 1 NF 00634-5 0.95 0.67 1.6.2.1.
表 2 Table 2
試験 2 フォスフォジエステラーゼアイソザィムに対する各化合物の I C50 Test 2 IC 50 of each compound against phosphodiesterase isozyme
Figure imgf000031_0001
Figure imgf000031_0001
表 1及び表 2から明らかなように本化合物は低濃度でフォスフオジェステラー ゼを阻害し、 アイソザィムに対する選択性も示した。  As is clear from Tables 1 and 2, this compound inhibited phosphoagesterase at a low concentration and also showed selectivity for isozymes.
例えば、 化合物 NF 00634— 1、 NF 00634 - 2及び PD— 004は、 フォスフオジェステラ一ゼァイソザィム （I V) に対して阻害活性が強く、 かつ フォスフォジエステラーゼアイソザィム （I I I) に対して阻害活性が弱いこと 力、ら、 心臓などへの副作用の少ない気管支系疾患の治療剤として期待される。 特に化合物 NF 00634— 1及び PD— 004は、 フォスフオジェステラー ゼァイソザィム （I I I) と （I V) に対する活性の差が大きいことから、 最も 好ましい化合物と考えられる。 実験例 2 For example, the compounds NF 00634-1, NF 00634-2 and PD-004 have strong inhibitory activity against Phosphogesterase isozyme (IV) and compounds against Phosphodiesterase isozyme (III). Poor inhibitory activity It is expected to be used as a therapeutic agent for bronchial diseases with few side effects on the power, heart, etc. In particular, the compounds NF00634-1 and PD-004 are considered to be the most preferred compounds because of their large difference in activity against phosphogestellar zeaisozymes (III) and (IV). Experimental example 2
気管支平滑筋収縮抑制作用 Inhibition of bronchial smooth muscle contraction
マグヌス実験方法 Magnus experiment method
体重 4 00〜 5 0 0 g程度の Hartley系雄性モルモッ卜から気管を摘出した。 気管を平滑筋と反対側の軟骨部分で切り放し、 幅 l mmの小片とした。 この小片 5個を絹糸で縛って一本とし、 両端をミシン糸で縛った後、 オーガンバス中に 0. 5 gの張力をかけて懸垂した。 この時バスの温度は 3 7°Cとし、 栄養液は Krebs - Henseleit バッファー (118mM NaCl, 4.6mM KC1, 1. lmM MgS04 - 7H20, 1.8mM CaC - 2H20, 24.9mM NaHC03) 1. OmM KH2P04 · 2H20, 11. lmM グルコース) を使用 した。 また栄養液には 5 ζΜのインドメタシンを加え、 95% 02 + 5 %C02 混合 ガスを十分通気した。 懸垂した組織をオーガンバス中で約 2時間インキュベート して外的環境に慣らし、 1 0 Mヒスタミ ンにより収縮させた。 収縮の大きさが 安定した後、 0.1, 0.3， 1.0， 3.0， 10， 30〃gZm l濃度 （オーガンバス内濃度） になるように本化合物 （以下薬物という） を加えた。 各濃度での反応は、 弛緩反 応が安定するまで行い、 薬物適用後 1 0分を経過しても弛緩反応が認められない 時は、 次のより高い濃度になるように薬物をオーガンバスに加えた。 また薬物は ジメチルスルホキシド （DMSO) 溶液として調製したので、 本実験系に及ぼす DMSOの影響を調べるため、 薬物を添加していない以外は、 薬物を加えたとき と同じ濃度となるように DMSOをオーガンバスに加えて対照実験を行つた。 全反応が終了した後、 各組織の最大弛緩を調べるために、 0.2 mMのパパべリン を加元た。 Trachea were isolated from male Hartley guinea pigs weighing about 400-500 g. The trachea was cut off at the cartilage section opposite to the smooth muscle and cut into lmm-wide pieces. Five of these small pieces were tied with a silk thread to make one piece, and both ends were tied with a sewing thread, and then suspended in an organ bath with a tension of 0.5 g. At this time the bath temperature was set to 3 7 ° C, the nutrient solution is Krebs - Henseleit buffer (118mM NaCl, 4.6mM KC1, 1. lmM MgS0 4 - 7H 2 0, 1.8mM CaC - 2H 2 0, 24.9mM NaHC0 3) 1. OmM KH 2 P0 4 · 2H 2 0, was used 11. LMM glucose). Also the nutrient solution 5 Zetamyu of indomethacin was added and thoroughly aerated with 95% 0 2 + 5% C0 2 gas mixture. The suspended tissue was incubated in an organ bath for about 2 hours to adjust to the external environment and contracted with 10 M histamine. After the contraction was stabilized, the compound (hereinafter referred to as drug) was added to a concentration of 0.1, 0.3, 1.0, 3.0, 10, or 30 gZml (concentration in organ bath). The reaction at each concentration is performed until the relaxation reaction becomes stable.If no relaxation reaction is observed 10 minutes after application of the drug, the drug is placed in an organ bath so that the next higher concentration is reached. added. Since the drug was prepared as a dimethylsulfoxide (DMSO) solution, to examine the effect of DMSO on this experimental system, DMSO was added to an organ so that the concentration would be the same as when the drug was added, except that the drug was not added. Control experiments were performed in addition to the bath. After all reactions were completed, 0.2 mM papaverine was added to check the maximum relaxation of each tissue.
1 0〃Mヒスタミンの最大収縮位を 1 0 0 %とし、 0.2 mMパパベリンの最大 弛緩位を 0%として、 各薬物の 5 0%収縮阻害濃度 （I C5。） を測定した。 結果 を表 3に示す。 The maximum contraction position of 100 μM histamine was set at 100%, and the maximum relaxation position of 0.2 mM papaverine was set at 0%, and the 50% contraction inhibitory concentration (IC 5 ) of each drug was measured. Table 3 shows the results.
実験例 3 Experiment 3
好酸球活性化抑制活性 Eosinophil activation inhibitory activity
(A) 好酸球の調製法  (A) Eosinophil preparation method
モルモッ ト （ハートレー系、 6週齢） にポリ ミキシン B (シグマ社） を 1 mg腹腔投与した。 投与は 1週間に 1回、 6〜8週行った。 ポリミキシン B最終投与後、 モルモットの腹腔に 5 Om lの PB S (リン酸緩 衝生理食塩水） を注入し、 細胞を回収した。 Guinea pigs (Hartley, 6 weeks old) were intraperitoneally administered with 1 mg of polymyxin B (Sigma). The administration was performed once a week for 6 to 8 weeks. After the final administration of polymyxin B, 5 Oml of PBS (phosphate-buffered saline) was injected into the peritoneal cavity of guinea pigs, and the cells were collected.
回収した細胞を 8 0 0回転 Z分で 5分間遠心分離し、 腹腔浸潤細胞を沈澱とし て集めた。  The collected cells were centrifuged at 800 rpm for 5 minutes at Z minute, and the cells infiltrating the peritoneal cavity were collected as a precipitate.
沈殿した細胞を l m lの 4 0%フイコール溶液 （フアルマシア社） 、 HBS S (ハンクスの調整塩溶液） に懸濁させ、 フイコール不連続密度勾配 （4 0〜9 0 %) 上に重層した。  The precipitated cells were suspended in lml of 40% Ficoll solution (Pharmacia), HBS S (Hanks' adjusted salt solution) and layered on a Ficoll discontinuous density gradient (40-90%).
このフイコール溶液を 1 5 0 0回転 Z分で 4 0分間遠心分離し、 好酸球画分を 回収した。 通常この操作で 9 9%以上の純度の好酸球が得られた。  This ficoll solution was centrifuged at 1500 rpm for 40 minutes, and the eosinophil fraction was collected. Usually, eosinophils with a purity of 99% or more were obtained by this operation.
さらに、 RPM I 1 6 4 0培地 （1 0 %B S A (ゥシ血清アルブミン ·ベーリ ンガーマンハイム社） ） で細胞を 2回洗浄し、 一定の細胞濃度に再懸濁後、 目的 の実験に使用した。  Furthermore, the cells were washed twice with RPMI 1640 medium (10% BSA (Pseudoserum albumin-Behringer Mannheim)), resuspended to a certain cell concentration, and used for the intended experiment. .
(B) 好酸球の抑制作用  (B) Eosinophil inhibitory action
モルモット好酸球の活性酸素放出抑制作用  Inhibitory effect of guinea pig eosinophils on active oxygen release
上記 （A) のフイコール密度勾配法で得られた好酸球 （純度 9 9 %以上） を 4 X 1 05 個となるように緩衝液に懸濁させた。 （緩衝液： 0.136M NaCl, 2.7mM KC1, 1.8mM CaCh. 1. OmM MgCh, 5.5mM D- グルコース， 11.9m NaHC03， 5mM HEPES, 0.36mM NaH2P0 pH 7.2) It said suspended in Fuikoru density gradients obtained in eosinophils (purity 99% or higher) buffer to a 4 X 1 0 5 pieces of the (A). (Buffer:. 0.136M NaCl, 2.7mM KC1, 1.8mM CaCh 1. OmM MgCh, 5.5mM D- glucose, 11.9m NaHC0 3, 5mM HEPES, 0.36mM NaH 2 P0 pH 7.2)
あらかじめ 3 7°Cに保温しておいた 9 6穴マルチウヱルプレート （化学発光測 定用、 白色タイプ） に、 各薬物 2〃 1と細胞懸濁液 1 8 0 / 1とを加え、 3 7°C で 1 0分間保温した。  Add 2 91 of each drug and 180/1 of cell suspension to a 96-well multiwell plate (white type for chemiluminescence measurement) pre-incubated at 37 ° C. Incubated at 7 ° C for 10 minutes.
保温後、 P A F (血小板活性化因子） （ 5 X 1 0 M) 2 0 1とルミノール 溶液 2 0 1とを加え、 直ちに化学発光を測定した。 （Labosystems,  After the incubation, PAF (platelet activating factor) (5 × 10 M) 201 and luminol solution 201 were added, and chemiluminescence was measured immediately. (Labosystems,
Luminoskan¾ti¾) Luminoskan¾ti¾)
5分間の化学発光量を測定して測定値を得、 5 0%阻害濃度 （I C5。） を算出 した。 結果を表 3に示す。 The measured value was obtained by measuring the amount of chemiluminescence for 5 minutes, and the 50% inhibitory concentration (IC 5 ) was calculated. Table 3 shows the results.
実験例 2及び実験例 3で用いた薬物としては、 後述の例 2〜 8で得られた化合 物 PD - 0 0 1、 PD— 0 0 2、 PD - 0 0 3、 PD— 0 0 4、 PD - 0 0 5、 PD— 0 0 6及び PD— 0 0 7を用いた。 なお、 P D— 0 0 1は、 前述の NF 0 0 6 3 4 - 1と同じ化合物であるが、 合成法で得られたものである ( The drugs used in Experimental Examples 2 and 3 include the compounds PD-001, PD-002, PD-003, PD-004, and PD-001, obtained in Examples 2 to 8 described below. PD-005, PD-006 and PD-07 were used. Note that PD-0 0 1 is the above-mentioned NF 0 The same compound as 0 6 3 4-1, but obtained by a synthetic method (
表 3  Table 3
【
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Figure imgf000034_0002
表 3からわかるように、 特に PD— 0 0 1 (=NF 0 0 64 3— 1 ) と PD— 0 0 4は強い気管支平滑筋収縮抑制活性を示した。 さらに、 両者の最大弛緩到達 時間は短く、 薬効の発現が比較的早いことがわかった。 具体的には、 PD— 0 0 1は投与後 6 6分で最大弛緩状態に到達した。 特に PD— 00 4は投与後 2 6分 で最大弛緩状態に到達し、 より好ましいことがわかった。 [
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As can be seen from Table 3, in particular, PD-001 (= NF 064 3-1) and PD-004 showed strong bronchial smooth muscle contraction inhibitory activity. Furthermore, it was found that the maximum relaxation time of both was short, and the onset of the drug effect was relatively fast. Specifically, PD-001 reached maximal relaxation 66 minutes after administration. In particular, PD-004 reached the maximum relaxed state 26 minutes after administration, which proved to be more preferable.
また、 投与後の血中残存率が高く、 薬効の持続性が期待できた。 具体的には、 PD- 0 0 4が投与後 4分で 6 0%、 1 2分で 2 7%の残存率を維持し、 特に PD- 0 0 1は投与後 4分で 8 6%. 1 2分で 5 1 %の残存率を維持し、 より好 ましいことがわかった。  In addition, the residual rate in the blood after administration was high, and a sustained drug effect could be expected. Specifically, PD-004 maintained a residual rate of 60% at 4 minutes after administration and 27% at 12 minutes, especially PD-001 was 86% at 4 minutes after administration. A retention rate of 51% was maintained in 12 minutes, which proved to be more favorable.
以下に本発明を例により説明するが、 本発明はこれにより限定されるものでは ない。 Hereinafter, the present invention will be described by way of examples, but the present invention is not limited thereto. Absent.
例 1 (培養による製造） Example 1 (manufacturing by culture)
5 0 Om 1容三角フラスコに、 可溶性デンプン 2 %、 グルコース 2 %、 コーン スチイ一プリカ一 1. 5%、 ペプトン 0. 3%、 イーストエキス 0. 2%、 ΚΗ2 Ρ04 0. l %、 MgS04 · 7Η2 0 0. 0 5 %、 COC 12 · 6Η2 Ο 0. 000 1 %、 プロナ一ル · ST— l 0. 0 1 %, C a C03 0. 2%を含む液体培地 1 0 0m lを pH 6. 5に調整後分注し、 1 2 0°Cで 2 0分間蒸気滅菌し、 これにポテトデキストロース寒天斜面培地上で 2 7°Cで培養 したデンドロドキゥム（Dendrodochium) 属 NF— 0 0 6 3 4株 （寄託番号 To 5 0 Om 1 Erlenmeyer flask, 2% soluble starch, 2% glucose, corn Suchii one replica one 1.5%, peptone 0.3%, yeast extract 0. 2%, ΚΗ 2 Ρ04 0. l%, MgS0 4 · 7Η 2 0 0 .05%, COC 1 2 · 6Η 2 Ο 0.001%, Pronal · ST-l 0.01%, C a C0 3 0 .2% liquid medium 1 0 ml was adjusted to pH 6.5, dispensed, steam-sterilized at 120 ° C for 20 minutes, and then cultured on potato dextrose agar slant medium at 27 ° C for Dendrodochium sp. — 0 0 6 3 4 shares (Deposit number
FERM P- 1 4 2 7 4 ) をその斜面培養から 1白金耳ずつ接種し、 2 7でで 2日間回転振とう培養し、 種母を得た。 FERM P-1 4 2 7 4) was inoculated from the slant culture by one loopful of platinum loop, and cultured by rotary shaking at 27 for 2 days to obtain a seed.
5 0 0 m l容三角フラスコ 1 0 0本に上記液体培地を 1 0 0m lずつ仕込み、 1 2 0 °Cで 3 0分間蒸気滅菌した。 これに上記の種母を各々 1. 0m lずつ移植 し、 2 5 で 3日間回転振とう培養した。  100 ml of the above liquid medium was charged into 100 ml of 500 ml Erlenmeyer flasks, and steam sterilized at 120 ° C. for 30 minutes. 1.0 ml of each of the above seeds was transplanted to each, and the cells were subjected to rotary shaking culture at 25 for 3 days.
培養液をろ過して得た菌体にメタノール 1. 5 を加え、 攪拌後、 メタノール 抽出液をろ過により得た。 メタノール抽出液のメタノール部分を減圧除去し、 水 溶液を得た。 この溶液を齚酸ェチル 1. 5 で抽出し、 濃縮乾固物 6. 0 gを得 た。 これをシリカゲルカラム （ø 5 X 4 0 cm) に力、け、 CHC 13 ： Me OH = 9 8 : 2で溶出させた。 各フラクションのフォスフォジエステラーゼ阻害活性 を測定し、 活性画分を集め、 減圧濃縮し、 乾固物し 5 gを得た。 これを LH— 2 0カラム （02. 5 X 1 1 0 cm) にかけ、 メタノールで溶出させ、 活性画分 を集め、 減圧濃縮し、 乾固物 3 0 Omgを得た。 これに高速液体クロマトグラフ ィ一 （ø 2 X 25 cm：流速 1 6m l Z分） を適用し、 ギ酸アンモニゥムの緩衝 液を用い、 溶出開始時にァセトニトリル'濃度 1 0%、 1 1 0分後にァセトニトリ ル濃度 1 0 0%のァセトニトリル直線濃度勾配溶出により、 フォスフォジエステ ラーゼ阻害活性を示す化合物を単離した。 Methanol 1.5 was added to the cells obtained by filtering the culture solution, and after stirring, a methanol extract was obtained by filtration. The methanol portion of the methanol extract was removed under reduced pressure to obtain an aqueous solution. This solution was extracted with ethyl acetate 1.5 to obtain 6.0 g of a concentrated and dried product. Force it to silica gel column (ø 5 X 4 0 cm) , only, CHC 1 3: Me OH = 9 8: eluted with 2. The phosphodiesterase inhibitory activity of each fraction was measured, the active fractions were collected, concentrated under reduced pressure, and dried to obtain 5 g. This was applied to an LH-20 column (02.5 x 110 cm) and eluted with methanol. The active fraction was collected and concentrated under reduced pressure to obtain 30 Omg of a dried product. High-performance liquid chromatography (ø2 x 25 cm: flow rate 16 ml / min) was applied to this, using a buffer of ammonium formate, and acetonitrile concentration of 10% at the start of elution, and 110 minutes after elution. A compound exhibiting phosphodiesterase inhibitory activity was isolated by elution with a linear concentration gradient of acetonitrile at a concentration of 100%.
カラム溶出時間 3 9. 5分に溶出された化合物を NF 0 06 3 4— 1、 カラム 溶出時間 4 4. 6分に溶出された化合物を NF 0 0 6 3 4— 2、 カラム溶出時間 5 2. 5分に溶出された化合物を NF 0 0 6 3 4— 3、 カラム溶出時間 6 2. 0 分に溶出された化合物を NF 0 0 6 3 4— 4、 カラム溶出時間 6 8. 8分に溶出 された化合物を NF 0 0 6 3 4— 5とした。 各々の化合物の収量は N F 0 0 6 3 4— 1が 4 0mg、 NF 0 0 6 3 4— 2が 4 0mg、 NF 0 0 6 3 4— 3が 4 0 mg、 NF 0 0 6 3 4— 4が 2 0mg、 NF 0 0 6 3 4— 5が 2 0 mgであり、 純度は各々 9 0 %以上であった。 Compound eluted at column elution time 39.5 min NF 0 06 34-1, column elution time 44.6 Compound eluted at 4.6 min NF 0 6 3 4—2, column elution time 5 2 The compound eluted in 5 minutes was analyzed using NF 0 6 3 4—3, column elution time 62.0. The compound eluted in a minute was designated as NF 0 6 3 4-4, and the compound eluted in a column elution time of 68.8 minutes was designated as NF 0 6 3 4-5. The yield of each compound was 40 mg for NF 0 6 3 4—1, 40 mg for NF 0 6 3 4—2, 40 mg for NF 0 6 3 4—3, and NF 0 6 3 4— 4 was 20 mg, NF 066 34-5 was 20 mg, and the purity was 90% or more, respectively.
例 2 (合成による製造） Example 2 (synthesis)
PD- 0 0 1 ( = NF 0 0 6 3 4 - 1 ) 化合物の合成  Synthesis of PD-001 (= NF 0 0 6 3 4-1) compound
1) ェチルプチリルアセテートの合成  1) Synthesis of ethyl ptyryl acetate
メルドラム酸 （ 1 4. 2 8 g) を 5 0m 1のジクロロメタンに溶解し、 これに 氷冷下でピリジン 1 6. 3m lを滴下し、 次いでジクロロメタン 1 Om 1中の n 一酪酸クロリ ド 1 1. 7 2 gを氷冷下で滴下した。 さらに反応混合物を 1時間攢 拌し、 次いで室温で 1時間搜拌した。 この混合物に 3N HC 1を添加し、 これ をジクロ口メタンで抽出して得られた有機層を無水硫酸マグネシゥ厶上で乾燥し、 減圧下で濃縮した。 その残渣にエタノールを加え、 4時間加熱還流した。 蒸留精 製することにより目的化合物を得た。  Meldrum's acid (14.28 g) was dissolved in 50 ml of dichloromethane, to which 16.3 ml of pyridine was added dropwise under ice cooling, and then n-butyric acid chloride in 1 Om 1 of dichloromethane was added. .72 g was added dropwise under ice cooling. Further, the reaction mixture was stirred for 1 hour, and then stirred at room temperature for 1 hour. 3N HC1 was added to this mixture, and this was extracted with dichloromethane, and the organic layer obtained was dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure. Ethanol was added to the residue, and the mixture was heated under reflux for 4 hours. The target compound was obtained by distillation and purification.
2) ェチル 2， 4—ジヒドロキシ一 6—プロピルべンゾェ一卜の合成  2) Synthesis of ethyl 2,4-dihydroxy-1-6-propylbenzene
上で得られた /3—ケトエステル （4. 3 7 g) のテトラヒドロフラン溶液に、 氷冷下で水素化ナトリウム （1. 3 2 g) を加え、 次いでジケテン （2. 2m l ) を滴下した。 反応混合物を氷冷下で 1時間、 次いで室温で、 さらに加熱して攪拌 した。 この混合物に 2 N HC 1を添加し、 これを酢酸ェチルで抽出して得られ た有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、 減圧下で濃縮した。 その残渣をシ リカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、 目的の化合物を得た。 （ 1. 2 8 g)  To a solution of the / 3-ketoester (4.37 g) obtained above in tetrahydrofuran was added sodium hydride (1.32 g) under ice-cooling, and then diketene (2.2 ml) was added dropwise. The reaction mixture was stirred for 1 hour under ice cooling and then at room temperature with further heating. 2N HCl was added to this mixture, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The obtained organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure. The residue was subjected to silica gel column chromatography to obtain the desired compound. (1.28 g)
3) ェチル 4一ベンジルォキン一 2—ヒドロキシ一 6—プロピルベンゾェ一卜の 合成  3) Synthesis of ethyl 4-benzyloquinone 2-hydroxy-6-propyl benzoate
上で得られた化合物 （1. 2 8 g) をアセトン （6 0m l ) に溶解し、 これに 無水炭酸カリウム （2. 3 7 g) 、 ベンジルブロミ ド （0. 7 l m l ) を加え、 4 0°Cで 3時間半攪拌した。 得られた混合物に 1 N HC 1を添加し、 これをェ 一テルで抽出して得られた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、 減圧下で 濃縮した。 その残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、 目的の化合物を得 た （1. 43 g) 。 The compound (1.28 g) obtained above was dissolved in acetone (60 ml), and anhydrous potassium carbonate (2.37 g) and benzyl bromide (0.7 ml) were added thereto. The mixture was stirred at ° C for 3.5 hours. 1N HC1 was added to the obtained mixture, and the mixture was extracted with a ether. The obtained organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, and dried under reduced pressure. Concentrated. The residue was subjected to silica gel chromatography to obtain the desired compound (1.43 g).
4) 4一ベンジルォキシー 2—ヒドロキシー 6—プロピル安息香酸の合成  4) Synthesis of 4-benzyloxy-2-hydroxy-6-propylbenzoic acid
上で得られた化合物 （0. 23 g) をジメチルスルホキシド （2. 4m l) 及 び水 （0. 5m 1 ) に溶解し、 これに水酸化カリウム （0. 22 g) を加え、 9 0°Cで攪拌した。 この混合物に I N HC 1を加え、 これをエーテルで抽出して 得られた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、 減圧下で濃縮した。 その残 渣をシリ力ゲル力ラムクロマトグラフィーにかけ、 目的の化合物を得た （ 0. 1 34 g)  The compound (0.23 g) obtained above was dissolved in dimethyl sulfoxide (2.4 ml) and water (0.5 ml), and potassium hydroxide (0.22 g) was added thereto. Stirred at ° C. To the mixture was added INHC1, and the mixture was extracted with ether. The obtained organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure. The residue was subjected to silica gel gel chromatography to obtain the desired compound (0.134 g).
5) ベンジル 2， 4—ジヒドロキシ一 6—プロピルべンゾエー卜の合成 5) Synthesis of benzyl 2,4-dihydroxy-1-6-propylbenzoate
ベンジルプチリルアセテートを用いて、 上記 2) と同様に反応を行い目的化合 物を得た。  The reaction was carried out in the same manner as in 2) above using benzylbutyryl acetate to obtain the desired compound.
6) ベンジノレ 4 - (4一ベンジルォキシ一 2—ヒドロキシー 6—プロピルべンゾ ィルォキシ） 一 2—ヒドロキシー 6—プロピルべンゾエー卜の合成  6) Benzinole Synthesis of 4- (4-benzyloxy-2-hydroxy-6-propylbenzoyloxy) -1-hydroxy-6-propylbenzoate
上記 4) で得られた化合物 （0. 1 55 g) と 5) で得られた化合物 （0. 1 5 3 g) とをトルエン 3 m 1中に懸濁させ、 これに無水トリフルォロ酢酸 (0. 55ml) を加え、 室温で攪拌した。 反応混合物を減圧下で濃縮し、 その 残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、 目的の化合物を得た （0. 1 82 g)  The compound (0.155 g) obtained in 4) and the compound (0.153 g) obtained in 5) were suspended in 3 ml of toluene, and trifluoroacetic anhydride (0. . 55 ml) and stirred at room temperature. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and the residue was subjected to silica gel column chromatography to obtain the desired compound (0.182 g)
7 ) 2—ヒドロキシ一 4— (2， 4—ジヒドロキシ一 6—プロピルべンゾィルォ キシ） 一 6—プロピル安息香酸の合成 7) Synthesis of 2-hydroxy-1- (2,4-dihydroxy-1-6-propylbenzoyloxy) -1-6-propylbenzoic acid
上記 6) で得られた化合物 （0. 25 1 ) を酢酸ェチル （5m l ) に溶解し、 パラジウムカーボンを触媒に用 L、て、 水素添加を行うことにより目的化合物 P D 一 00 1 (NF 00634 - 1 ) を得た （0. 1 67 g) 。  The compound (0.251) obtained in 6) above was dissolved in ethyl acetate (5 ml), and palladium on carbon was used as a catalyst, followed by hydrogenation to give the target compound PD-1001 (NF00634). -1) was obtained (0.1 67 g).
'HNMR (20 OMH z， 重 DMSO)  'HNMR (20 OMH z, heavy DMSO)
5= 1 0. 1 4 (s， 1 H)  5 = 1 0.14 (s, 1 H)
9. 87 (b s, 1 H)  9.87 (b s, 1 H)
6. 57 (d, 1 H, J = 2. 08 H z)  6.57 (d, 1 H, J = 2.08 Hz)
6. 4 9 (d, 1 H, J = 2. 1 2 H z) 6. 2 4 (d， 1 H， J = 2. 2 0 H z) 6.49 (d, 1 H, J = 2.12 H z) 6.24 (d, 1H, J = 2.20Hz)
6. 1 9 (d， 1 H， J = 2. 1 5 H z)  6.19 (d, 1H, J = 2.15Hz)
2. 6 8〜2. 5 4 (m， 4 H)  2.68 to 2.54 (m, 4H)
1. 6 6〜し 4 6 (m, 4 H)  1.66 to 6 4 (m, 4 H)
0. 9 5〜0. 8 4 (m， 6 H)  0.95 to 0.84 (m, 6H)
質量スぺク トル  Mass spectrum
m/z 3 7 3 (M-H) - 7 4 7 ( 2 M-H) - 例 3 (合成による製造）  m / z 3 7 3 (M-H)-7 4 7 (2 M-H)-Example 3 (production by synthesis)
PD- 0 0 2化合物が上記例 2と同様の方法で得られた。 具体的には、 例 2の 1) の工程で n—酪酸クロリ ドの代わりに n—プロピオン酸クロリ ドを用いた以 外は例 2と同じ方法によって、 最終的に 4—ベンジルォキシ一 2—ヒドロキシ— 6一ェチル安息香酸及びべンジル 2， 4—ジヒドロキシ一 6—ェチルベンゾエー トを縮合反応させ、 目的化合物 PD— 0 0 2 (2—ヒドロキシ _ 4一 （2， 4— ジヒドロキシ一 6—ェチルベンゾィルォキシ） 一6—ェチル安息香酸） を得た。 例 4 (合成による製造）  A PD-002 compound was obtained in the same manner as in Example 2 above. Specifically, the same procedure as in Example 2 was repeated, except that n-butyric acid chloride was used instead of n-butyric acid chloride in the step of 1) in Example 2, and finally 4-benzyloxy-1-hydroxy was used. — Condensation reaction of 6-ethylbenzoic acid and benzyl 2,4-dihydroxy-1-6-ethylbenzoate yields the target compound PD-002 (2-hydroxy_4- (2,4-dihydroxy-1-6-ethylbenzo). 1-ethylbenzoic acid). Example 4 (manufacturing by synthesis)
PD- 0 0 3化合物が上記例 2と同様の方法で得られた。 具体的には、 例 2の 1 ) の工程でェチルブチルアセテートを合成することなく、 2) の工程で; 8—ケ トエステルとして市販のェチルァセトアセテート （東京化成工業 （株） 製） を用 いた以外は例 2と同様の方法によって、 最終的に 4—ベンジルォキシ— 2—ヒド 口キシ一 6—メチル安息香酸及びべンジル 2, 4—ジヒドロキシ一 6—メチルべ ンゾエートを縮合反応させ、 目的化合物 PD— 00 3 ( 2—ヒ ドロキン— 4— (2, 4—ジヒドロキシ一 6—メチルベンゾィルォキシ） 一 6—メチル安息香 酸） を得た。  The PD-003 compound was obtained in the same manner as in Example 2 above. Specifically, without synthesizing ethyl butyl acetate in the step of 1) in Example 2, in the step of 2); commercially available ethyl acetoacetate as an 8-ketoester (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) In the same manner as in Example 2, except that benzene was used, 4-benzyloxy-2-hydroxy-16-methylbenzoic acid and benzyl 2,4-dihydroxy-16-methylbenzoate were finally subjected to a condensation reaction. The target compound PD-003 (2-hydroquine-4- (2,4-dihydroxy-16-methylbenzoyloxy) -16-methylbenzoic acid) was obtained.
例 5 (合成による製造） Example 5 (manufacturing by synthesis)
PD- 0 0 4化合物の合成  Synthesis of PD-004 compound
1) ェチル 2， 4ージヒドロキシ一 6—メチルベンゾエー卜の合成  1) Synthesis of ethyl 2,4-dihydroxy-16-methylbenzoate
市販のェチルァセトァセテ一ト （東京化成工業 （株） 製） （2 5. 1 0 g) の テトラヒドロフラン溶液に、 氷冷下で水素化ナトリウム （9. 2 1 g) を加え、 次いでジケテン （1 4. 5m l) を滴下した。 反応混合物を氷冷下で 1時間、 次 いで室温でさらに加熱して攪拌した。 この混合物に 2N HC 1を添加し、 これ を酔酸ェチルで抽出して得られた有機層を無水硫酸マグネシゥム上で乾燥し、 減 圧下で濃縮した。 その残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、 目的 の化合物を得た。 （7. 59 g) 。 To a tetrahydrofuran solution of a commercially available ethyl acetate (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) (25.10 g) was added sodium hydride (9.21 g) under ice-cooling. Then diketene (14.5 ml) was added dropwise. The reaction mixture was stirred for 1 hour under ice-cooling and then further heated to room temperature. 2N HC1 was added to the mixture, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The obtained organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure. The residue was subjected to silica gel column chromatography to obtain the desired compound. (7.59 g).
2) ェチル 4—ベンジルォキシ一 2—ヒドロキシ一 6—メチルベンゾエー卜の合 成  2) Synthesis of ethyl 4-benzyloxy-2-hydroxy-16-methylbenzoate
上で得られた化合物 （7. 59 g) をアセトン （400 m l) に溶解し、 これ に無水炭酸カリウム （1 6. 54 g) 、 ベンジルブロミ ド （5. 0m l) を加え、 50 °Cで 2時間半攪拌した。 得られた混合物に 1 N HC 1を添加し、 これをェ 一テルで抽出して得られた有機層を無水硫酸マグネシゥム上で乾燥し、 減圧下で 濃縮した。 その残差をシリカゲルクロマトグラフィーにかけ、 目的の化合物を得 た （8. 37 g) o  The compound obtained above (7.59 g) was dissolved in acetone (400 ml), and anhydrous potassium carbonate (16.54 g) and benzyl bromide (5.0 ml) were added thereto. Stir for 2.5 hours. 1N HCl was added to the obtained mixture, and the mixture was extracted with a ether. The obtained organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure. The residue was subjected to silica gel chromatography to obtain the desired compound (8.37 g) o
3) 4—ベンジルォキシ— 2—ヒドロキシ一 6—メチル安息香酸の合成  3) Synthesis of 4-benzyloxy-2-hydroxy-16-methylbenzoic acid
上で得られた化合物 （8. 37 g) をジメチルスルホキシド （90m 1 ) 及び 水 （20m l) に溶解し、 これに水酸化カリウム （8. 67 g) を加え、 90 °C で攪拌した。 この混合物に I N HC 1を加え、 これをエーテルで抽出して得ら れた有機層を無水硫酸マグネシウム上で乾燥し、 減圧下で濃縮した。 その残渣を シリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、 目的の化合物を得た （6. 92 g) 。  The compound (8.37 g) obtained above was dissolved in dimethyl sulfoxide (90 ml) and water (20 ml), and potassium hydroxide (8.67 g) was added thereto, followed by stirring at 90 ° C. To the mixture was added INHC1, and the mixture was extracted with ether. The obtained organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure. The residue was subjected to silica gel column chromatography to obtain the desired compound (6.92 g).
4) ベンジル 2， 4—ジヒドロキシー 6—プロピルべンゾエー卜の合成  4) Synthesis of benzyl 2,4-dihydroxy-6-propylbenzoate
ベンジルプロピルアセテートを用いて、 2) と同様に反応を行い目的化合物を 得た。  The reaction was carried out in the same manner as in 2) using benzylpropyl acetate to obtain the desired compound.
5) ベンジル 4一 （4—ベンジルォキシ一 2—ヒドロキシー 6—メチルベンゾィ ルォキシ） — 2—ヒドロキシ一 6—プロピルべンゾエー卜の合成  5) Synthesis of benzyl 4- (4-benzyloxy-2-hydroxy-6-methylbenzoyloxy) — 2-hydroxy-16-propylbenzoate
上記 3) で得られた化合物 （5. 70 g) と 4) で得られた化合物 （6. 3 1 g) とをトルエン 1 20ml中に懸濁させ、 これに無水トリフルォロ酢酸 （2 1 m l) を加え、 室温で攪拌した。 反応混合物を減圧下で濃縮し、 その残渣をシリ 力ゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、 目的の化合物を得た （7. 1 2 g) 。 6) 2—ヒドロキン一 4— (2， 4ージヒ ドロキシ一 6—メチルベンゾィルォキ シ） 一 6—プロピル安息香酸の合成 The compound (5.70 g) obtained in 3) and the compound (6.31 g) obtained in 4) were suspended in 120 ml of toluene, and trifluoroacetic anhydride (21 ml) was added thereto. Was added and stirred at room temperature. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure, and the residue was subjected to silica gel column chromatography to obtain the desired compound (7.12 g). 6) Synthesis of 2-Hydroquinone 4- (2,4-dihydroxy-16-methylbenzoyloxy) -1-6-propylbenzoic acid
上記 5) で得られた化合物 （7. 1 2 g) を酢酸ェチル （1 8 0m l ) に溶解 し、 パラジウムカーボンを触媒に用いて、 水素添加を行うことにより目的化合物 PD- 0 0 4を得た （4. 5 6 g) 。  The compound (7.12 g) obtained in 5) above was dissolved in ethyl acetate (180 ml), and hydrogenation was performed using palladium carbon as a catalyst to obtain the target compound PD-004. Was obtained (4.56 g).
'HNMR ( 2 0 0 MHz, 重 DMSO)  'HNMR (200 MHz, heavy DMSO)
δ= 1 0. 3 6 (s， 1 H)  δ = 1 0.36 (s, 1 H)
1 0 0 5 (b r. s， 1 H)  1 0 0 5 (b r. S, 1 H)
6 5 8 (d, 1 H, J = 2 1 6 H z)  6 5 8 (d, 1 H, J = 2 16 H z)
6 5 6 (d, 1 H, J = 2 1 5Hz)  6 5 6 (d, 1 H, J = 2 15 Hz)
6 2 4 (s, 2 H)  6 2 4 (s, 2 H)
2 6 5〜2. 6 0 (m, 2 H)  2 6 5 to 2.60 (m, 2 H)
2 3 7 (s, 3 H)  2 3 7 (s, 3 H)
1 6 7〜 1. 4 6 (m， 2 H)  1 67 to 1.46 (m, 2 H)
0 9 1 (t, 3 H, J = 7. 2 4 H z)  0 9 1 (t, 3 H, J = 7.2 4 H z)
質量スぺク トル  Mass spectrum
m/ z 3 4 5 [M-H) - 6 9 1 〔2M— H〕 - 例 6 (合成による製造）  m / z 3 4 5 [M-H)-691 [2M-H]-Example 6 (production by synthesis)
PD- 0 0 5化合物の合成が上記例 2と同様の方法で得られた。 具体的には、 例 2の 5) の工程でベンジルブチリルァセテ一卜の代わりにベンジルァセトァセ テートを用いた以外は例 2と同じ方法によって、 最終的に 4一ベンジルォキシー 2—ヒドロキシ一 6—プロピル安息香酸及びべンジル 2， 4ージヒ ドロキン一 6 —メチルペンゾエートを縮合反応させ、 目的化合物 PD— 0 0 5 ( 2—ヒドロキ シ一 4— (2， 4ージヒドロキシ一 6—プロピルベンゾィルォキシ） 一 2—ヒド 口キシ— 6—メチル安息香酸） を得た。  Synthesis of the PD-005 compound was obtained in the same manner as in Example 2 above. Specifically, the same procedure as in Example 2 was repeated except that benzyl acetate acetate was used in place of benzyl butyryl acetate in the step 5) of Example 2, and finally 4-benzyloxy-2-hydroxy-l-6 -Condensation reaction of propylbenzoic acid and benzyl 2,4-dihydroquinone 16-methyl benzoate to give the target compound PD-05 (2-hydroxy-4- (2,4-dihydroxy-16-propylbenzoy) Roxy) 1-2-hydroxy xy-6-methylbenzoic acid) was obtained.
例 7 (合成による製造） Example 7 (synthesis)
PD- 0 06化合物が上記例 2と同様の方法で得られた。 具体的には、 例 2の 1 ) の工程で n—酪酸ク口リ ドの代わりに i—酪酸ク口リ ドを用いた以外は例 2 と同じ方法によって、 最終的に 4一ベンジルォキン一 2—ヒドロキシ一 6—イソ プロピル安息香酸及びべンジル 2 , 4—ジヒドロキシ一 6—イソプロピルべンゾ エートを縮合反応させ、 目的化合物 P D— 0 0 6 ( 2—ヒドロキシー 4— ( 2， 4—ジヒドロキシ一 6—イソプロピルべンゾィルォキシ） 一 6—イソプロピル安 息香酸） を得た。 The PD-006 compound was obtained in the same manner as in Example 2 above. More specifically, Example 2 was repeated except that i-butyric acid was used instead of n-butyric acid in the step of 1) in Example 2. In the same manner as described above, finally, 4-benzyloquin-12-hydroxy-16-isopropylbenzoic acid and benzyl 2,4-dihydroxy-16-isopropylbenzoate are subjected to a condensation reaction to obtain the target compound PD-0 06 (2-Hydroxy-4- (2,4-dihydroxy-16-isopropylbenzoyloxy) -16-isopropylbenzoic acid) was obtained.
例 8 (合成による製造） Example 8 (production by synthesis)
P D - 0 0 7化合物力、'上記例 2と同様の方法で得られた。 具体的には、 例 2の 5 ) の工程でベンジルブチリルァセテー卜の代わりにベンジルイソプロピオニル ァセテ一トを用いた以外は例 2と同じ方法によって、 最終的に 4—ベンジルォキ シ一 2—ヒドロキシ一 6—プロピル安息香酸及びべンジル 2， 4—ジヒ ドロキシ 一 6—イソブチルベンゾエートを縮合反応させ、 目的化合物 P D— 0 0 7 ( 2— ヒドロキシ一 4— ( 2， 4ージヒドロキシー 6—プロピルべンゾィルォキシ） 一 6—イソブチル安息香酸） を得た。  PD-07 compound power was obtained in the same manner as in Example 2 above. Specifically, the same procedure as in Example 2 was repeated except that benzylisopropionyl acetate was used in place of benzylbutyryl acetate in step 5) of Example 2, and finally 4-benzyloxy-2-hydroxy was used. Condensation reaction of 1-6-propylbenzoic acid and benzyl 2,4-dihydroxy-1 6-isobutylbenzoate to obtain the target compound PD-0 7 (2-hydroxy-14- (2,4-dihydroxy-6-propylbenzoyloxy) One 6-isobutylbenzoic acid) was obtained.
例 9 (製剤例：注射剤） Example 9 (Formulation example: injection)
本化合物 3 0重量部、 食塩 1 8重量部及びグルコース 1 0 0重量部に精製水を 加え、 全量を 2 0 0 0重量部とし、 これらを溶解させた後、 溶液をミリポアフィ ルタ— GSタイプ （登録商標） を用いて除菌ろ過した。 このろ液 2 gをバイアル瓶 に分注、 打栓、 巻締し、 3 O m gの本化合物を含む注射剤を得た。  Purified water was added to 30 parts by weight of the compound, 18 parts by weight of sodium chloride and 100 parts by weight of glucose to make the total amount 2000 parts by weight, and after dissolving them, the solution was millipore filter GS type ( (Registered trademark). 2 g of this filtrate was dispensed into a vial, stoppered and rolled to obtain an injection containing 30 mg of the present compound.
例 1 0 (製剤例：錠剤） Example 10 (Formulation example: tablet)
本化合物 1 0重量部、 馬れ 、しよでんぷん 3 0重量部、 結晶乳糖 1 5 0重量部、 結晶セルロース 1 0 8重量部及びステアリン酸マグネシウム 2重量部を V型混合 機で混合し、 1錠 6 O m gの量で打錠し、 1 錠あたり 2 m gの本化合物を含有す る錠剤とした。  10 parts by weight of the present compound, 30 parts by weight of bean and starch, 150 parts by weight of crystalline lactose, 108 parts by weight of crystalline cellulose and 2 parts by weight of magnesium stearate are mixed with a V-type mixer, and Tablets Tablets were pressed at an amount of 6 O mg to give tablets containing 2 mg of the compound per tablet.
産業上の利用可能性 Industrial applicability
上記の通り、 フォスフォジエステラーゼ阻害活性を有する本化合物は、 ァイソ ザィムに対して選択的にフォスフオジェステラーゼ阻害活性を有し、 気管支拡張 作用、 好酸球活性化抑制作用等を有するので、 抗喘息薬、 気管支拡張薬、 抗ァレ ルギー薬、 抗炎症薬、 抗リウマチ薬、 降圧薬、 狭心症治療薬、 不整脈治療薬、 血 小板凝集阻害薬、 脳循環代謝改善薬、 抗うつ薬として使用することが期待される。  As described above, the present compound having a phosphodiesterase inhibitory activity has a phosphodiesterase inhibitory activity selectively against isozyme, and has a bronchodilator action, an eosinophil activation inhibitory action, and the like. Anti-asthmatic, bronchodilator, anti-allergy, anti-inflammatory, anti-rheumatic, antihypertensive, angina pectoris, arrhythmia, platelet aggregation inhibitor, cerebral circulation metabolism improver, antidepressant It is expected to be used as a medicine.

Claims

請 求 の 範 囲 The scope of the claims
1. 下記一般式 〔1〕 1. The following general formula [1]
〔1〕 [1]
Figure imgf000042_0001
Figure imgf000042_0001
(式中、 mは 0又は 1を表し、 R l, R 2及び R 3は低級アルキル基、 R4及び R 5は水素原子又はハロゲン原子、 R6， R 7, R 8及び R 9は水素原子又は低 級アルキル基をそれぞれ表す。 ） (In the formula, m represents 0 or 1, R1, R2 and R3 are lower alkyl groups, R4 and R5 are hydrogen atoms or halogen atoms, R6, R7, R8 and R9 are hydrogen atoms or Represents a lower alkyl group.)
で示される 6—置換一 —レゾルシル酸誘導体又はその薬理学上許容される塩を 有効成分とするフォスフォジエステラーゼ阻害剤。 A phosphodiesterase inhibitor comprising, as an active ingredient, a 6-substituted 1-resorcylic acid derivative represented by the formula (I) or a pharmacologically acceptable salt thereof.
2. 下記一般式 〔 1 ' 〕  2. The following general formula [1 ']
〔1 ' 〕 [1 ']
Figure imgf000042_0002
Figure imgf000042_0002
(式中、 mが 0又は 1を表し、 R l, R 2及び R 3は各々低級アルキル基を表 す。 ） (In the formula, m represents 0 or 1, and R1, R2 and R3 each represent a lower alkyl group.)
で示される 6—置換一 —レゾルシル酸誘導体又はその薬理学上許容される塩を 有効成分とする請求項 1記載のフォスフォジエステラーゼ阻害剤。 2. The phosphodiesterase inhibitor according to claim 1, which comprises a 6-substituted mono-resorcylic acid derivative represented by or a pharmacologically acceptable salt thereof as an active ingredient.
3. —般式 〔1 ' 〕 において、 mが 0又は 1であり、 R l, R 2及び R 3がこ の順に— （CH2 ) n,CH3， ― (CH2 ) n2CH3 及び— （CH2 ) n3CH3 (式中、 n, ， n2 及び n3 は各々 0〜 5の整数を表す。 ） で示される基である、 請求項 2記載のフォスフォジエステラーゼ阻害剤。 3. In the general formula [1 '], m is 0 or 1, and Rl, R2 and R3 are In the order of — (CH 2 ) n , CH 3 , — (CH 2 ) n2 CH 3 and — (CH 2 ) n3 CH 3 (where n,, n 2 and n 3 each represent an integer of 0 to 5) 3. The phosphodiesterase inhibitor according to claim 2, which is a group represented by:
4. - (CH2 ) n,CH3 , - (CH2 ) „2CH3 及び一 （CH2 ) n3CH3 の各基において、 n, ， n2 及び n3 が各々 0又は 2である、 請求項 3記載のフ ォスフオジェステラーゼ阻害剤。 4.-(CH 2 ) n , CH 3 ,-(CH 2 ) „ 2 In each of CH 3 and (CH 2 ) n3 CH 3 , n ,, n 2 and n 3 are each 0 or 2 The phosphodiesterase inhibitor according to claim 3.
5. 請求項 2記載の一般式 〔1 ' 〕 において、 mが 1であり、 R l, R 2及び R3力く、 各々メチル、 ェチル、 プロピル、 イソプロピル、 ブチル及びイソブチル からなる群より選ばれる基である化合物を有効成分として含む医薬品。  5. In the general formula [1 ′] according to claim 2, m is 1, R 1, R 2 and R 3 are each a group selected from the group consisting of methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl and isobutyl. A pharmaceutical comprising the compound of formula (I) as an active ingredient.
6. 請求項 1記載の一般式 〔1〕 で示される 6—置換— /3—レゾルシル酸誘導 体又はその薬理学上許容される塩を有効成分として含む気管支拡張剤。  6. A bronchodilator comprising, as an active ingredient, a 6-substituted / 3-resorcylic acid derivative represented by the general formula [1] according to claim 1 or a pharmacologically acceptable salt thereof.
7. 請求項 2記載の一般式 〔1 ' 〕 において、 mが 0であり、 尺 1及び1¾3が それぞれ— （CH2 ) niCH3 及び一 （CH2 ) „3CH3 で示される基であり、 式中 n, 及び n3 が各々 2であるか、 n, が 4、 n3 が 2であるか、 又は n, が 0 , n 3 力、' 2である化合物を有効成分として含む気管支系疾患の治療又は予防剤。 7. In the general formula [1 ′] according to claim 2, m is 0, and the scales 1 and 1 to 3 are groups represented by — (CH 2 ) niCH 3 and 1 (CH 2 ) „ 3 CH 3 , respectively. Wherein n, and n 3 are each 2, n, is 4, n 3 is 2, or n, is 0, n 3 force, a bronchial system containing as an active ingredient a compound that is' 2 An agent for treating or preventing a disease.
8. 2—ヒドロキシー 4— (2， 4—ジヒドロキシー 6—プロピルベンゾィル ォキシ） 一 6—プロピル安息香酸又はその薬理学上許容される塩を有効成分とす るフォスフォジエステラーゼ阻害剤。  8. 2-Hydroxy-4- (2,4-dihydroxy-6-propylbenzoyloxy) A phosphodiesterase inhibitor containing 1-propylbenzoic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
9. 2—ヒドロキシ一 4— (2， 4ージヒドロキシ一 6—メチルベンゾィルォ キシ） 一6—プロピル安息香酸又はその薬理学上許容される塩を有効成分とする フォスフォジエステラーゼ阻害剤。  9. A phosphodiesterase inhibitor comprising, as an active ingredient, 2-hydroxy-14- (2,4-dihydroxy-16-methylbenzoyloxy) -16-propylbenzoic acid or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
10. デンドロドキゥム （Dendrodochium)属に属し、 一般式 〔1 ' 〕 で示される 6—置換—) S—レゾルシル酸誘導体において、 mが 0又は 1であり、 R l， R 2 及び R3がこの順に— （CH2 ) „,CH3 , - (CH2 ) n2CH3 及び 10. A 6-substituted S-resorcylic acid derivative belonging to the genus Dendrodochium represented by the general formula [1 '], where m is 0 or 1, and R1, R2 and R3 are in this order: (CH 2 ) „, CH3,-(CH 2 ) n2 CH 3 and
- (CH2 ) „3CH3 で示される基であり、 式中 , n2 及び n3 が各々 2又 は 4を表す上記誘導体を産生する能力を有する微生物を培養し、 得られた培養物 から該 6—置換— —レゾルシル酸誘導体を採取することからなる 6—置換一 /S 一レゾルシル酸誘導体の製造法。 -(CH 2 ) „ 3 A group represented by CH 3 , wherein n 2 and n 3 each represent 2 or 4, and a microorganism having the ability to produce the above derivative is cultured, and the resulting culture is obtained. A method for producing a 6-substituted mono / S-resorsylic acid derivative, comprising collecting the 6-substituted-resorsylic acid derivative from the compound.
11. デンドロドキゥム属に属する 6—置換— yS—レゾルシル酸誘導体産生能を 有する微生物が、 デンドロドキゥム S p. NF 00634株である請求項 1 0 記載の製造法。 11. The ability to produce 6-substituted-yS-resorcylic acid derivatives belonging to the genus Dendrododium The production method according to claim 10, wherein the microorganism having the strain is Dendrododium Sp. NF00634 strain.
12. 請求項 2記載の一般式 〔1 ' 〕 において、 mが 1であり、 R l, R 2及び R3がこの順に— （CH2 ) „,CH3， ― (CH2 ) „2CH3 及び 12. In the general formula [1 ′] according to claim 2, m is 1, and R l, R 2 and R 3 are in this order— (CH 2 ) „, CH 3 , — (CH 2 )„ 2 CH 3 as well as
- (CH2 ) „3CH3 で示される基であり、 式中 n, 力く 2、 n2 が 2、 n3 が 4 であるか、 又は ηι が 4、 τ\ 2 が 4、 η3 が 2である 6—置換— ーレゾルシル 酸誘導体。 -(CH 2 ) „ 3 is a group represented by CH 3 , wherein n, n is 2, n 2 is 2, n 3 is 4, or ηι is 4, τ \ 2 is 4, η 3 Is a 6-substituted-resorcylic acid derivative.
13. 請求項 2記載の一般式 〔1 ' 〕 において、 mが 0であり、 1¾ 1及び1¾3が それぞれ一 （CH2 ) „,CH3 及び— （CH2 ) „3CH3 で示される基であり、 式中 n, 及び n3 が各々 1であるか、 又は n, が 0、 n3 が 2であるか、 又は n 1 力く 2、 n3 力く 0である 6—置換一 S—レゾルシノレ酸誘導体。 13. In the general formula [1 ′] according to claim 2, m is 0, and 1¾1 and 1¾3 are each a group represented by (CH 2 ) „, CH 3 and — (CH 2 )„ 3 CH 3. Where n, and n 3 are each 1, or n, is 0, n 3 is 2, or n 1 is 2, n 3 is 0 6-substituted-S —Resorcinoleic acid derivatives.
14. 請求項 2記載の一般式 〔1 ' 〕 において、 mが 0であり、 尺 1及び1¾ 3が 各々ィソプロピル基である力、、 又は R 1がプロピル基、 R 3がィソブチル基であ る 6—置換— —レゾルシル酸誘導体。  14. In the general formula [1 ′] according to claim 2, m is 0, and the scales 1 and 1 及 び are each an isopropyl group, or R 1 is a propyl group, and R 3 is an isobutyl group. 6—Substitution— —Resorcylic acid derivative.
15. 請求項 1 3〜1 5のいずれか 1項記載の 6—置換一; 8—レゾルシル酸誘導 体又はその薬理学上許容される塩を有効成分として含む医薬品。  15. A pharmaceutical comprising the 6-substituted mono- or 8-resorcylic acid derivative according to any one of claims 13 to 15 or a pharmacologically acceptable salt thereof as an active ingredient.
16. 請求項 1記載の一般式 〔 1〕 で示される 6—置換— 5—レゾルシル酸誘導 体又はその薬理学上許容される塩の、 フォスフォジエステラーゼ阻害剤の製造の ための使用。  16. Use of a 6-substituted-5-resorcylic acid derivative represented by the general formula [1] according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof for the production of a phosphodiesterase inhibitor.
17. 請求項 1記載の一般式 〔 1〕 で示される 6—置換— β一レゾルシル酸誘導 体又はその薬理学上許容される塩の治療有効量を投与することからなる、 生体内 におけるフォスフォジエステラーゼの阻害方法。  17. An in vivo phosphodiester comprising administering a therapeutically effective amount of a 6-substituted-β-resorcylic acid derivative represented by the general formula [1] according to claim 1 or a pharmacologically acceptable salt thereof. A method for inhibiting a esterase.
18. 請求項 1記載の一般式 〔 1〕 で示される 6—置換一 —レゾルシル酸誘導 体又はその薬理学上許容される塩の治療有効量を投与することからなる、 気管支 系疾患の予防もしくは治療、 又はアレルギー、 炎症、 リウマチ、 高血圧、 狭心症、 不整脈、 血小板凝集、 脳循環代謝不全及びうつ病の治療方法。  18. Prevention or prevention of bronchial diseases, which comprises administering a therapeutically effective amount of a 6-substituted 1-resorcylic acid derivative represented by the general formula [1] according to claim 1 or a pharmacologically acceptable salt thereof. A method for treating or treating allergies, inflammation, rheumatism, hypertension, angina, arrhythmias, platelet aggregation, cerebral circulatory metabolic dysfunction and depression.
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