WO1995017661A1 - Dispositif d'elevation du niveau d'un liquide dans un alveole pour la mesure de la densite - Google Patents

Dispositif d'elevation du niveau d'un liquide dans un alveole pour la mesure de la densite Download PDF

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WO1995017661A1
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Inventor
Marc Dumas
Frédéric Bonte
Alain Meybeck
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Lvmh Recherche
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Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/01—Arrangements or apparatus for facilitating the optical investigation
    • G01N21/03—Cuvette constructions
    • G01N21/0303—Optical path conditioning in cuvettes, e.g. windows; adapted optical elements or systems; path modifying or adjustment

Definitions

  • the present invention essentially relates to a device for raising the level of a liquid, in a cell, well or the like.
  • Cell or multiple well plates frequently intended to contain one or more substances to be analyzed are frequently used in biology, in particular in cell biology.
  • - ⁇ is the molar extinction coefficient, the value of which depends on the wavelength of the light used and the nature of the dissolved substance.
  • C is the concentration of the substance in the solution
  • 1 0 is the length of the optical path in the solution sample.
  • the object of the present invention is to solve the above problems. To this end, it relates to a device for raising the level of a liquid containing a dissolved substance, in a cell, well or the like, characterized by a wall sleeve of variable thickness and open at its two ends, which is insertable into said cell or well.
  • the sleeve is integral with an element comprising a plurality of such sleeves.
  • This element can be a bar or a plate.
  • It can include notching lines between the sleeves to allow their separation so as to use only part of the set of sleeves.
  • the invention also relates to a plate with cells or multiple wells allowing for example the culture of cells or the microtitration of samples, characterized in that it is provided with a device corresponding to the preceding characteristics.
  • This plate can be covered by a plate comprising 'on one side as many sleeves as wells in the plate.
  • the invention also relates to the use of the above device or plate for measuring the optical density of a substance dissolved in this liquid.
  • this device relates more particularly to the use of this device for the dosing of substances contained in a cell culture medium, these substances having for example been produced by cells in culture, or else having been released into the medium after solubilization of cells, these possibly having received an immunological labeling.
  • Figure 1 is a perspective view of a sleeve inserted into a well.
  • Figure 2 is a perspective view of a bar provided with such sleeves.
  • Figure 3 is a perspective view similar to Figure 2 but showing individually separable sleeves of the bar.
  • Figure 4 is a sectional view of the bar of Figure 2, passing through the axis of the sleeves, and illustrated in the mounted position on a row of wells.
  • Figure 5 is a partial perspective view of a multiwell plate ready to receive a plate having on one side of the sleeves 1 according to the invention.
  • a device according to the invention is, in general, constituted by a sleeve 1 which can be inserted into a cell or well 2 formed in an element 3 and which may contain a liquid in which any substance is dissolved.
  • the sleeve 1 is open at its two ends to allow the passage of the light beam, and its wall 4 can have a variable thickness, which characterizes the caliber of the sleeve 1.
  • the sleeve 1 once introduced into the well 2, will reduce the volume of this well as a function of the thickness of the wall 4 and will therefore allow the liquid to rise in the well 2 of the desired height depending on the size used.
  • the sleeve 1, as well as the element 3 may be of any material such as for example a transparent plastic material for single use or reusable from one measurement to another after cleaning.
  • a light beam passing through the well and the liquid it contains preferably in a direction substantially parallel to the axis of the well which is generally substantially cylindrical, will allow a measurement of the optical density of the substance dissolved in the liquid whose the height in the well will be large enough to provide the desired sensitivity, accuracy and efficiency of the measurement.
  • the sleeve 1 may be integral with a support 5 having a plurality of such sleeves projecting from one side of said support.
  • the support 5 can consist of a bar carrying a plurality of sleeves 1, the spacing of which corresponds to the spacing between the wells 2 of a line of wells made in the element 3.
  • the bar-shaped support 5 can include notching lines 6 between the sleeves 1, which makes it easy to separate them from one another so as to insert them into such and such a well formed in the element 3.
  • FIG. 4 shows a linear set of sleeves 1 belonging to a bar 5, as shown in FIG. 2, which line of sleeves is inserted into the wells 2 with corresponding spacing, formed in the element 3.
  • the sleeves 1 can also be secured to a support in the form of a plate or plate 7, as can be seen in FIG. 5 where said sleeves 1 project from the same face of the plate 7.
  • This plate 7 with associated sleeves may comprise as many sleeves 1 as there are cells or wells 2, provided in a plate P with multiple wells allowing, for example, cell culture, microtitration of samples, assay operations or even other uses.
  • sleeves 1 can be used in only certain wells 2 of plate P, for example using a bar 5 with breakable or non-breaking sleeves, as seen in FIGS. 2 and 3 .
  • the material and the wall thickness of the sleeves 1 can be any, as well as the geometrical position of the sleeves on a plate, a bar or any other support.

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Abstract

La présente invention concerne un dispositif d'élévation du niveau d'un liquide contenant une substance dissoute, dans un alvéole, puits ou analogue ainsi qu'une plaque à puits multiples équipée de ce dispositif. Ce dispositif est caractérisé par une pluralité de manchons (1) à paroi (4) d'épaisseur variable et ouverts à leurs deux extrémités, ces manchons appartenant à un support (7) et pouvant être insérés dans les puits ou alvéoles (2) d'une plaque (P). Ce dispositif permet une élévation du niveau d'un liquide dans un puits pour permettre par exemple une mesure de densité optique, et peut notamment être utilisé pour la mesure de la densité optique d'une substance dissoute dans un milieu de culture cellulaire.

Description

DISPOSITIF D'ELEVATION DU NIVEAU D'UN LIQUIDE DANS UN ALVEOLE POUR LA MESURE DE LA DENSITE.
La présente invention a essentiellement pour objet un dispositif d'élévation du niveau d'un liquide, dans un alvéole, puits ou analogue.
5 Elle vise également une plaque à puits multiples pour la culture de cellules, la microtitration ou autre usage, équipée de ce dispositif.
On utilise fréquemment en biologie, en particulier en 0 biologie cellulaire, des plaques à alvéoles ou puits multiples destinés à contenir une ou des substances à analyser.
Mais lorsqu'on veut mesurer la densité optique d'une 5 substance en solution dans un liquide et contenue dans un puits, par exemple selon la méthode décrite par F. BURMEISTER et al., dans "Preprints of the XlVth IFSCC Congress, Barcelone, 1986, vol. I, il faut que la hauteur du liquide soit assez grande pour permettre une 0 mesure de densité optique qui soit suffisamment précise, et donc fiable.
En effet, la densité optique qui se mesure en éclairant un échantillon transparent ou translucide par un 5 faisceau lumineux généralement monochromatique, est fonction de la longueur du trajet optique du faisceau lumineux, de la concentration de la substance dans la solution à mesurer et du coefficient d'absorption de la lumière propre à la substance, comme établi par la 0 formule suivante : D0 = ε c l0 dans laquelle :
- D0 est la densité optique.
- ε est le coefficient d'extinction molaire, dont la valeur dépend de la longueur d'onde de la lumière utilisée et de la nature de la substance dissoute.
C est la concentration de la substance dans la solution, et
10 est la longueur du trajet optique dans l'échantillon de solution.
Or, bien souvent, on se trouve en face d'échantillons de très faible volume et dont la hauteur dans le puits et par conséquent le trajet optique, est très petite, ce qui constribue à une imprécision notable de la mesure de densité optique. Cette imprécision devient encore beaucoup plus importante, donc beaucoup plus gênante dans le cas où la valeur du coefficient d'extinction molaire de l'échantillon analysé est faible. Par ailleurs, l'augmentation de la hauteur de l'échantillon dans le puits par apport de liquide supplémentaire, ne constitue pas une solution au problème de l'amélioration de la précision des mesures, car cet apport a pour effet de diminuer la concentration de la substance du fait de la dilution réalisée.
La présente invention a pour objet de résoudre les problèmes ci-dessus. A cet effet, elle a pour objet un dispositif d'élévation du niveau d'un liquide contenant une substance dissoute, dans un alvéole, puits ou analogue, caractérisé par un manchon à paroi d'épaisseur variable et ouvert à ses deux extrémités, qui est insérable dans ledit alvéole ou puits.
Suivant une autre caractéristique de ce dispositif, le manchon est solidaire d'un élément comportant une pluralité de tels manchons.
Cet élément peut être une barrette ou une platine.
Il peut comporter des lignes d'entaillage entre les manchons pour permettre leur séparation de façon à n'utiliser qu'une partie de l'ensemble des manchons.
L'invention vise encore une plaque à alvéoles ou puits multiples permettant par exemple la culture de cellules ou la microtitration d'échantillons, caractérisée en ce qu'elle est munie d'un dispositif répondant aux caractéristiques précédentes.
Cette plaque peut être recouverte par une platine comportant' sur une face autant de manchons que de puits dans la plaque.
L'invention vise également l'utilisation du dispositif ou de la plaque ci-dessus pour la mesure de la densité optique d'une substance dissoute dans ce liquide.
Elle vise plus particulièrement l'utilisation de ce dispositif pour le dosage de substances contenues dans un milieu de culture cellulaire, ces substances ayant été par exemple produites par des cellules en culture, ou bien ayant été libérées dans le milieu après solubilisation de cellules, celles-ci ayant éventuellement reçu un marquage immunologique.
Mais d'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux dans la description détaillée qui suit et se réfère aux dessins annexés, donnés uniquement à titre d'exemple, et dans lesquels.
La figure 1 est une vue en perspective d'un manchon inséré dans un puits.
La figure 2 est une vue en perspective d'une barrette munie de tels manchons .
La figure 3 est une vue en perspective similaire à la figure 2 mais montrant des manchons individuellement séparables de la barrette.
La figure 4 est une vue en coupe de la barrette de la figure 2, passant par l'axe des manchons, et illustrée en position montée sur une rangée de puits.
La figure 5 est une vue en perspective partielle d'une plaque à puits multiples prête à recevoir une platine comportant sur une face des manchons suivant 1 ' invention.
En se reportant tout particulièrement à la figure 1, on voit qu'un dispositif selon l'invention est, d'une manière générale, constitué par un manchon 1 insérable dans un alvéole ou puits 2 ménagé dans un élément 3 et pouvant contenir un liquide dans lequel est dissoute une substance quelconque.
Le manchon 1 est ouvert à ses deux extrémités pour permettre le passage du faisceau lumineux, et sa paroi 4 peut avoir une épaisseur variable, ce qui caractérise le calibre du manchon 1.
Ainsi, comme on le comprend aisément, le manchon 1, une fois introduit dans le puits 2, réduira le volume de ce puits en fonction de l'épaisseur de la paroi 4 et permettra par conséquent la remontée du liquide dans le puits 2 de la hauteur désirée en fonction du calibre utilisé.
Le manchon 1, de même que l'élément 3 peuvent être en une matière quelconque telle que par exemple une matière plastique transparente à usage unique ou réutilisable d'une mesure à une autre après nettoyage.
Ainsi, un faisceau lumineux traversant le puits et le liquide qu'il contient, de préférence selon une direction sensiblement parallèle à l'axe du puits qui est généralement sensiblement cylindrique, permettra une mesure de la densité optique de la substance dissoute dans le liquide dont la hauteur dans le puits sera suffisamment importante pour procurer la sensibilité, la précision et l'efficacité voulues de la mesure.
Comme on le voit sur les figures 2 et 3, le manchon 1 peut être solidaire d'un support 5 comportant une pluralité de tels manchons faisant saillie d'un côté dudit support .
Comme on le voit sur la figure 2, le support 5 peut être constitué par une barrette portant une pluralité de manchons 1 dont 1 ' espacement correspondra à l'espacement entre les puits 2 d'une ligne de puits ménagée dans l'élément 3. Le support en forme de barrette 5 peut comporter des lignes d'entaillage 6 entre les manchons 1, ce qui permet aisément de les séparer les uns des autres pour les insérer dans tel ou tel puits ménagé dans 1 ' élément 3.
On a montré sur la figure 4, un ensemble linéaire de manchons 1 appartenant à une barrette 5, comme montré sur la figure 2, laquelle ligne de manchons est insérée dans les puits 2 d'espacement correspondant, ménagés dans 1 'élément 3.
Les manchons 1 peuvent aussi être solidaires d'un support en forme de plaque ou de platine 7, comme on le voit bien sur la figure 5 où lesdits manchons 1 font saillie d'une même face de la platine 7.
Cette platine 7 avec manchons associés pourra comporter autant de manchons 1 que d'alvéoles ou puits 2, prévus dans une plaque P à puits multiples permettant par exemple la culture de cellules, la microtitration d'échantillons, des opérations de dosage ou encore d'autres utilisations.
II va de soi que l'on peut utiliser des manchons 1 dans seulement certains puits 2 de la plaque P, par exemple à l'aide d'une barrette 5 avec manchons sécables ou insécables, comme on le voit sur les figures 2 et 3.
Bien entendu, l'invention n'est nullement limitée au mode de réalisation décrit et illustré qui n'a été donné qu'à titre d'exemple.
C'est ainsi que la matière et l'épaisseur de paroi des manchons 1 peuvent être quelconques, de même que la position géométrique des manchons sur une platine, une barrette ou autre support quelconque.
C'est dire que l'invention comprend tous les équivalents techniques des moyens décrits ainsi que leurs combinaisons si celles-ci sont effectuées suivant son esprit.

Claims

Revendications
1. Dispositif d'élévation du niveau d'un liquide contenant une substance dissoute, dans un alvéole, puits ou analogue (2) , caractérisé par un manchon (1) à paroi (4) d'épaisseur variable et ouvert à ses deux extrémités, qui est insérable dans ledit alvéole ou puits (2) .
2. Dispositif selon la revendication 1, caractérisé en ce que le manchon (1) est solidaire d'un support comportant une pluralité de tels manchons (1) .
3. Dispositif selon la revendication 2, caractérisé en ce que le support précité est une barrette (5) ou une platine (7) .
4. Dispositif selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en que le support précité comporte des lignes d'entaillage (6) entre les manchons (1) pour permettre leur séparation.
5. Plaque à alvéoles ou puits multiples (2) permettant par exemple la culture de cellules ou la microtitration d'échantillons, caractérisé en ce qu'elle est munie d'un dispositif selon l'une des revendications 1 à 4.
6. Plaque selon la revendication 5, caractérisée en ce qu'elle est recouverte par une platine (7) comportant sur une face autant de manchons (1) que de puits (2) dans la plaque (P) .
7. Utilisation du dispositif ou de la plaque selon l'une des revendications 1 à 6 pour la mesure de la densité optique d'une substance dissoute dans ce liquide.
8. Utilisation selon la revendication 7, pour le dosage de substances contenues dans un milieu de culture cellulaire .
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