Beschreibung
Verwendung von CIS-9-Heptadecensaeure zur Behandlung von Psoriasis, Allergien und AutoImmunerkrankungen
Gegenstand der Erfindung sind neue Verwendungen der cis-9-Heptadecensäure.
Gesättigte und ungesättigte Fettsäuren sind Bestandteile der Zellmembran von Zellen. Die Konzentration von ungesättigten Fettsäuren spielt eine Rolle bei den Barriereeigenschaften der Haut und bei der Reaktivität von Zellen in entzündlichen Prozessen.
In den deutschen Auslegeschriften 1 195 296 und 1 147 221 wurde eine entzündungs- und ödemhemmende Wirkung für die einfach ungesättigte Fettsäure cis-9-Heptadecensäure beschrieben. Sie soll eine Wirksamkeit in akuter und chronischer Der atitis, insbesondere bei Brandwunden und bei der Behandlung von "Ulcera cruris" haben. Beschrieben wurde eine Reduktion eines induzierten Granulomgewebes bei der Ratte unter Einfluß von cis-9-Heptadecensäure und eine Unwirksamkeit von Ölsäure in diesem Testansatz. Das steht im Gegensatz zu Befunden von Gor'kova et al. (Chemical Abstracts Vol. 68, (1968) 1909 u), die eine Wirksamkeit von Ölsäure und ein verstärktes zelluläres Infiltrat in ein induziertes Granulom bei der Ratte unter dem Einfluß von cis-9-Heptadecensäure fanden.
Überraschenderweise wurde nun gefunden, daß cis-9-Heptadecensäure- ( 1 ) bei Psoriasis, Allergien und Autoimmunerkrankungen wirksam ist.
Gegenstand der Erfindung ist die Verwendung von cis-9-Heptadecensäure und/oder ihren Salzen zur Prophylaxe und Behandlung von Psoriasis, Allergien und Autoimmunerkrankungen.
Die cis-9-Heptadecensäure ist bekannt und nach bekannten Verfahren oder durch Isolierung aus tierischem Gewebe erhältlich. Bevorzugt werden physiologisch verträgliche Salze der cis-9-Heptadecensäure.
Mit der Bezeichnung Psoriasis ist diese Hauterkrankung in allen Erscheinungsformen gemeint.
Allergien sind insbesondere die Atopie und Kontaktallergien. Die Atopie manifestiert sich z.B. als allergische Konjunctivitis , allergische Rhinitis, allergisches Asthma oder Neurodermitis .
Autoimmunerkrankungen sind insbesondere die Erkrankungen des rheumatischen Formenkreises.
überraschenderweise sind die erfindungsgemäßen Wirkstoffe gegenüber grundsätzlich so unterschiedlichen Krankheiten wie Psoriasis, Allergien und Autoimmunerkrankungen wirksam.
Zur Prophylaxe werden die Wirkstoffe verabreicht, um Manifestationen der Krankheiten in der Häufigkeit und Stärke zu mindern. Die Behandlung im manifesten Stadium führt zu dessen Verkürzung und zur Milderung der Symptome. Cis-9-Heptadecensäure kann die Freisetzung
wichtiger Auslöse-Mediatoren wie TNFα unterdrücken bzw. vermindern.
Bevorzugt werden wasserlösliche Salze der cis-9-Heptadecensäure, insbesondere die Alkalimetallsalze, z.B. das Natriumsalz oder das Kaliumsalz, und auch das Ammoniumsalz. Geeignet sind auch das Calziu -, Magnesium- und Aluminiumsalz sowie die Salze organischer Basen, z.B. Aminen wie Äthanola in, Äthylendiamin und Morpholin.
Gemäß der Erfindung werden auch pharmazeutische Präparate, Mittel oder Zusammensetzungen geschaffen, die die erfindungsgemäße Verbindung oder deren pharmazeutisch verträgliches Salz zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Verdünnungsmittel oder Träger enthalten.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können beim Menschen oral oder parenteral z.B. in einer Dosierung von 0,05 bis 500 mg, vorzugsweise 0,5 bis 50 mg, besonders bevorzugt 0,1 bis 10 mg pro Tag angewendet werden, insbesondere auch in unterteilten Dosen, zum Beispiel zweimal bis viermal täglich.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen lassen sich auch problemlos in übliche pharmazeutische und kosmetische Grundlagen für topische Applikationen einarbeiten und man erhält damit die entsprechenden topischen pharmazeutischen und kosmetischen Zubereitungen oder Mittel. Bevorzugt werden sie in Mengen von 0,001 bis 10 Gew.-°ό, insbesondere in Mengen von 0,01 bis 1 Gew.-°ό, jeweils bezogen auf das gesamte Gewicht des topischen Mittels, eingesetzt. Die Zubereitungen können mehrmals täglich in üblicher Weise angewendet werden.
Gegenstand der Erfindung ist auch die Verwendung der erfindungsgemäßen Wirkstoffe zur Herstellung von pharmazeutischen Mitteln, topischen pharmazeutischen und kosmetischen Mitteln zur Prophylaxe und Behandlung von Psoriasis, Allergien und Autoimmunerkrankungen.
Ebenfalls Gegenstend der Erfindung ist auch die Verwendung von pharmazeutischen Mitteln und topischen pharmazeutischen und kosmetischen Mitteln mit einem Gehalt an cis-9-Heptadecensäure und/oder ihren Salzen zur Prophylaxe und Behandlung von Psoriasis, Allergien und Autoimmunerkrankungen.
Überraschenderweise wurde gefunden, daß cis-9-Heptadecensäure im
Lymphozyten- :'ransformationstest die Aktivierung von Lymphozyten hemmt und somit Prozesse mit Beteiligung von Lymphozyten beeinflußt, z.B. bei Allergien und der Psoriasis und Autoimmunerkrankungen.
Die cis-9-Heptadecensäure zeigte im
Makrophagen-Differenzierungstest sowohl eine gewisse entzündliche Makrophagen stimulierende Potenz, wie auch eine antientzündliche Makrophagen stimulierende Potenz. Die Substanz besitzt also die Fähigkeit, in Prozessen, die durch ein gewisses Fehlen akut entzündlicher Makrophagen gekennzeichnet sind, z.B. Psoriasis, diese zu induzieren und damit den Entzündungsprozeß zu normalisieren. Dies gilt insbesondere aufgrund der weiterhin überraschenderweise gefundenen Fähigkeit, die Produktion von TNFα durch Makrophagen auf einen Reiz hin zu vermindern. Dadurch wird die Reaktivität von Zellen, auf einen Reiz zu reagieren, vermindert und die Reaktionsschwelle erhöht. Dies ist bei der Prophylaxe von zytokininduzierten Prozessen, wie z.B. Psoriasis
oder Atopie oder Allergien oder Autoimmunerkrankungen von Bedeutung.
Die vorstehenden Ergebnisse sind in einem anhängenden Versuchsbericht dargestellt.
Die Wirkstoffe gemäß der Erfindung können mit üblichen pharmazeutisch verträglichen Verdünnungsmitteln oder Trägern und gegebenenfalls mit anderen Hilfsmitteln vermischt und beispielsweise oral oder' parenteral verabreicht werden. Sie können vorzugsweise oral in Form von Granulaten, Kapseln, Pillen, Tabletten, Filmtabletten, Dragees, Sirupen, Emulsionen, Suspensionen, Dispersionen, Aerosolen und Lösungen sowie Flüssigkeiten, oder aber auch als Zäpfchen, Vaginalkugeln oder parenteral z.B. in Form von Lösungen, Emulsionen oder Suspensionen verabreicht werden. Oral zu verabreichende Präparate können einen oder mehrere Zusätze wie Süßungsmittel , Aromatisierungsmittel , Farbstoffe und Konservierungsmittel enthalten. Tabletten können den Wirkstoff mit üblichen pharmazeutisch verträglichen Hilfsmitteln vermischt enthalten, zum Beispiel inerten Verdünnungsmitteln wie Calciumcarbonat , Natriumcarbonat, Lactose und Talk, Granulierungsmitteln und Mitteln, die den Zerfall der Tabletten bei oraler Verabreichung fördern wie Stärke oder Alginsäure, Bindemitteln wie Stärke oder Gelatine, Gleitmitteln wie Magnesiumstearat, Stearinsäure und Talk.
Geeignete Trägerstoffe sind beispielsweise Milchzucker (Lactose), Gelatine, Maisstärke, Stearinsäure, Ethanol, Prophylenglycol , Ether des Tetrahydrofurfurylalkohols und Wasser.
Die Formulierungen werden beispielsweise hergestellt durch Verstrecken der Wirkstoffe mit Lösungsmitteln und/oder Trägerstoffen, gegebenenfalls unter Verwendung von Emulgiermitteln und/oder Dispergiermitteln, wobei z.B. im Fall der Benutzung von Wasser als Verdünnungsmittel gegebenenfalls organische Lösungsmittel als Hilfslösungsmittel verwendet werden können.
Die Applikation erfolgt in üblicher Weise, vorzugsweise oral oder parenteral, insbesondere perlingual oder intravenös. Im Falle der oralen Anwendung können Tabletten selbstverständlich außer den genannten Trägerstoffen auch Zusätze, wie Natriumeitrat, Calziumcarbonat und Dicalziumphosphat zusammen mit verschiedenen Zuschlagstoffen, wie Stärke, vorzugsweise Kartoffelstärke, Gelatine und dergleichen enthalten. Weiterhin können Gleitmittel wie Magnesiu stearat, Natriumlaurylsulfat und Talkum zum Tablettieren mitverwendet werden. Im Falle wäßriger Suspensionen und/oder Elixieren, die für orale Anwendungen gedacht sind, können die Wirkstoffe außer mit den obengenannten Hilfsstoffen mit verschiedenen Geschmacksaufbesserern oder Farbstoffen versetzt werden.
Für den Fall der parenteralen Anwendung können Lösungen der Wirkstoffe unter Verwendung geeigneter flüssiger Trägermaterialien eingesetzt werden.
Kapseln können den Wirkstoff als einzigen Bestandteil oder vermischt mit einem festen Verdünnungsmittel wie Calciumcarbonat, Calciumphosphat oder Kaolin enthalten. Die injizierbaren Präparate werden ebenfalls in an sich bekannter Weise formuliert.
Die pharmazeutischen Präparate können den Wirkstoff in einer Menge von 0,1 bis 90 Gewichtsprozent, insbesondere 1-90 Gew.-% enthalten. Kapseln werden besonders bevorzugt. Einzeldosen enthalten die Wirkstoffe vorzugsweise in einer Menge von 1 bis 10 mg,
Soweit Salze in Wasser schwer löslich sind, können sie in der Form von Aufschlämmungen verabreicht werden. Eine besonders gute Löslichkeit in Wasser besitzen die Natrium- und die Kaliumsalze der cis-9-Heptadecensäure, Beispielsweise werden Salze vorzugsweise in der Form einer wäßrigen Lösung, wie physiologische Kochsalzlösung, intravenös oder intramuskulär gespritzt. Die Ampullen enthalten z.B. 2,5 mg des fettsauren Salzes je 5 ml Lösung. Man kann auch Ampullen mit z.B. 45 mg fettsaurem Salz je Milliliter Lösung herstellen.
Die erfindungsgemäßen topischen Mittel können als flüssige, pastöse oder feste Zubereitungen formuliert werden, beispielsweise als wäßrige oder alkoholische Lösungen, wäßrige Suspensionen, Emulsionen, Salben, Cremes, öle, Pulver oder Stifte. In Abhängigkeit von der gewünschten Formulierung können die Wirkstoffe in pharmazeutische und kosmetische Grundlagen für topische Applikationen eingearbeitet werden, die als weitere Komponenten beispielsweise Ölkomponenten , Fett und Wachse, Emulgatoren, anionische, kationische, ampholytische, zwitterionische und/oder nichtionogene Tenside, niedere ein- und mehrwertige Alkohole, Wasser, Konservierungsmittel , Puffersubstanzen, Verdickungs ittel , Duftstoffe, Farbstoffe und Trübungsmittel enthalten. Bevorzugt werden Emulsionen, z.B. W/O-Emulsionen oder Salben verwendet.
Weiterhin ist es erfindungsgemäß bevorzugt, den Wirkstoffen und den pharmazeutischen und topischen Mitteln Antioxidantien zuzufügen. Besonders bevorzugt ist hierbei die Verwendungen natürlicher oder naturidentischer Verbindungen wie beispielsweise Tocopherolen. Die genannten Antioxidantien sind in den erfindungsgemäßen Mitteln z.B. in Mengen von 0,01 - 5 Gew.-., insbesondere von 0,5 - 2 Gew.-%, bezogen auf das gesamte Mittel, enthalten. Sie dienen zur Stabilisierung des Wirkstoffes.
Im Rahmen der vorliegenden Anmeldung sind, soweit nicht anders angegeben, Mengen und Prozentangaben auf das Gewicht und die Gesamtzusammensetzung der Zubereitung bezogen .
Beispiel 1
Creme:
Gewichtsteile
Polyoxyethylen(20)sorbitan- monostearat (Polysorbat 60) 5
Cetylstearylalkohol 10
Glycerol 85% 10
Weißes Vaselin 25 a-D-Tocopherol 1 cis-9-Heptadecensäure-Na-Salz 1 gegebenenfalls Farbstoffe, Duftstoffe
Wasser ad 100
Die Herstellung erfolgt in an sich bekannter Weise. Die Fettphase und die Wasserphase werden separat durch Mischen der Bestandteile hergestellt, gegebenenfalls unter geringer Erwärmung. Dann werden die Phasen gemischt und emulgiert.
Beispiel 2
Creme:
Gewichtsteile Polyoxyethylen(20)sorbitan- onostearat (Polysorbat 60) 5
Cetylstearylalkohol 10
Glycerol 85% 10
Weißes Vaselin 25 a-D-Tocopherol 1 cis-9-Heptadecensäure 0,1 gegebenenfalls Farbstoffe, Duftstoffe,
Wasser ad 100
Die Herstellung erfolgt in an sich bekannter Weise. Die Fettphase und die Wasserphase werden separat durch Mischen der Bestandteile hergestellt, gegebenenfalls unter geringer Erwärmung. Dann werden die Phasen gemischt und emulgiert.
Herstellung von Tabletten und Kapseln
Tabletten und Kapseln, welche die nachstehend angegebenen Bestandteile enthalten, werden nach bekannten Arbeitsweisen hergestellt. Diese sind für die Behandlung der vorstehend genannten Krankheiten in Dosierungsmengen von jeweils einer Tablette oder Kapsel einmal oder mehrmals täglich geeignet.
Bei sp i el 3
Bestandteile Gewicht (mg) Tablette Kapsel
cis-9-Heptadecensäure 5 10
Tragacanth 10
Lactose Maisstärke 247,5
Maisstärke 25
Talk 15
Magnesiumstearat 2,5
Ascorbinsäure 1 0,1
Beispiel 4
Bestandteile Gewicht (mg) Tablette Kapsel
cis-9-Heptadecensäure-Na-Salz 10
Tragacanth 10
Lactose Maisstärke 247,5
Maisstärke 25
Talk 15
Magnesiumstearat 2,5
Ascorbinsäure 1 0,1
Herstellung von Ampullen
Ampullen, die die im folgenden genannten Bestandteile enthalten, lassen sich in bekannter Weise herstellen. Der Wirkstoff wird in Wasser gelöst und unter Stickstoff in Glasampullen abgefüllt.
Bei sp iel 5
cis-9-Heptadecensäure-Na-Salz 5 mg dest. Wasser ad 5 ml
Beispiel 6
cis-9-Heptadecensäure-Na-Salz 2,5 mg dest. Wasser ad 2 ml
Testergebnisse
a) Lymphozyten-Transformationstest nach Al-Tawil et al.
Cis-9-Heptadecensäure wurde in verschiedenen Konzentrationen (0,00156 - 0,0125 Gew.-%) im Lymphozyten-Transformationstest untersucht. Die Substanz zeigte eine deutliche Hemmung der mitogeninduzierten Proliferation von Lymphozyten und hat damit eine antientzündliche immunmodulierende Potenz.
Tabelle 1 :
Konzentration von Hemmung der cis-9-Heptadecensäure Lymphozyten- im LTT-Test in Gew.-°ό Aktivierung in
0,01250 100 0,00625 90
0,00312 20
0,00156 5
Einfluß von cis-9-Heptadecensäure auf die Makrophagen-Differenzierung
Humane Monozyten wurden durch
Dichte-Gradienten-Zentrifugation aus heparinisiertem Blut gesunder Spender isoliert und
4 in 96-Loch Gewebekulturplatten zu 5x10
Zellen/Loch in McCoy's Medium mit 10% humanem AB
Serum in Kultur genommen. Den Zellen wurden
Konzentrationen von 0,01 bis 0,00001 Gew.-0» cis-9-Heptadecensäure zugesetzt und die Zellen 96
Stunden bei 37°C (7% CO-) inkubiert. Danach wurden die Zellen fixiert und mit Hilfe monoklonaler
Antikörper durch indirekte Immunperoxidase-Färbung die Expression von Differenzierungsantigenen gemessen. Die verstärkte Expression des einen
Antigens (Akut Marker), charakterisiert durch den monoklonalen Antikörper 27E10, ist typisch für akut entzündliche Makrophagen, die verstärkte
Expression eines anderen Antigens (Mittlerer
Marker), charakterisiert durch den monoklonalen
Antikörper RM 3/1, ist typisch für Makrophagen in der Heilungsphase von Entzündungen.
Cis-9-Heptadecensäure stimuliert sowohl den Akut- wie den Mittleren Marker. In chronischen Prozessen kann der Wirkstoff durch eine gewisse erneute Aktivierung den festgefahrenen Verlauf durchbrechen und eine Abheilung induzieren. Die Stimulation des Mittleren Markers zeigt die Potenz, in akut entzündlichen Prozessen entzündungshemmend zu wirken.
Tabelle 2
Konzentration von Verstärkung der Expression cis-9-Heptadecensäure von Differenzierungs¬ in Gew.-% im Medium antigenen auf Makrophagen gegenüber Kontrolle
Akut Marker Mittl. Marker
0,01 0 0,001 + + 0,0001 ++ + 0,00001 ++ ++
-: Verminderung,
0: wie Kontrolle,
+: schwache Verstärkung
++: deutliche Verstärkung
c) Lipopolysaccharid-induzierte TNFα-Freisetzung von humanen Makrophagen
Humane Monozyten wurden durch
Dichte-Gradienten-Zentrifugation aus heparinisiertem Blut gesunder Spender isoliert und
4 in 96-Loch Gewebekulturplatten zu 5x10
Zellen/Loch in McCoy's Medium mit 10% humanem AB
Serum in Kultur genommen. 30 min. vor der
Stimulation der in Kultur genommenen Zellen durch
0,0001 bis 0,1 Ug/ml Lipopolysaccharid (LPS) aus
S. minnesota (Sigma Bestell Nr. 7645) wurde den
Zellen 0,001 Gew.- Wirkstoff zugesetzt. Nach
96 Stunden wurden die überstände von den Zellen entfernt und darin der TNFα-Gehalt mit Hilfe eines
Elisa-Tests (Genzyme) bestimmt.
Cis-9-Heptadecensäure vermindert signifikant die
TNFα-Konzentration in den Zellüberständen (Tabelle 3).
Tabelle 3:
ug/ml LPS % Verminderung der
TNFα-Konzentration im Überstand durch 0,001% cis-9-Heptadecensäure
0, 1 21
0,01 19
0,001 83
0,0001 100