WO1982004201A1 - Test-tube for the centrifuging and collecting of a liquid - Google Patents

Test-tube for the centrifuging and collecting of a liquid Download PDF

Info

Publication number
WO1982004201A1
WO1982004201A1 PCT/CH1982/000073 CH8200073W WO8204201A1 WO 1982004201 A1 WO1982004201 A1 WO 1982004201A1 CH 8200073 W CH8200073 W CH 8200073W WO 8204201 A1 WO8204201 A1 WO 8204201A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
test
piston
centrifugation
sections
liquid
Prior art date
Application number
PCT/CH1982/000073
Other languages
French (fr)
Inventor
Memorial Inst Battelle
Original Assignee
Ringrose Anthony
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ringrose Anthony filed Critical Ringrose Anthony
Publication of WO1982004201A1 publication Critical patent/WO1982004201A1/en

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5021—Test tubes specially adapted for centrifugation purposes

Definitions

  • the present invention relates to a test tube for separation by centrifugation of a physiological liquid and for the collection of at least one of the constituents of given density, having two parts of different circular sections connected by a connecting part whose section progressively passes from one to the other of said sections.
  • This test piece is characterized in that it is open at its two ends, the sections of these openings corresponding to said respective sections, the opening having the largest of these sections forming the end of a centrifugation cylinder which receives a piston tightly fitted and the other of these openings, having the smallest section, constituting the opening through which said separate constituents in said cylinder can be collected, following the movement of said piston in the direction of this opening.
  • the single figure of the attached drawing illustrates, schematically and by way of example, an embodiment of a device for implementing the method which is the subject of the invention.
  • This device comprises a transparent test piece 1 having a portion 1a of diameter greater than a portion 1b, connected by a portion 1d in which the section varies gradually.
  • the bottom of the part la is constituted by a piston 2 retained by a flange lc.
  • the piston 2 is arranged coaxially with a rack drive rod 3 engaged with a pinion 4 secured to the output shaft of an electric motor 5 connected to a control station 6.
  • the length of the part lb is immaterial and the exit opening can therefore lie directly at the level where part ld has its weakest section corn.
  • the rim 1 intended to retain the piston 2 during centrifugation is not essential insofar as, during centrifugation, the test piece can be placed in a cylindrical housing oriented radially to the centrifugation axis and the bottom of which, facing outwards, is used to hold the piston 2.
  • the collection of the lyirphocytes was carried out using the test tube which is the subject of the invention, using a 10 ml sample of blood diluted to 50% in a solution of Hank's salts (Hank's BSS) and treated. prior to heparin centers coagulation. These 10 ml were placed in a test tube whose body is 20.3 mm in diameter and the outlet opening of the lb portion 8 mm by adding 5 ml of Ficoll-Paque (registered trademark). This specimen was placed in a cylindrical support tooth the bottom has an opening of diameter smaller than that of the piston 2 and this sample was centrifuged at 400 g for 35 minutes.
  • Hank's BSS Hank's salts
  • test object of the invention makes it possible to obtain hold a very noticeable improvement in these performances.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Spark Plugs (AREA)
  • Centrifugal Separators (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

The test-tube comprises a cylindrical portion (1$i(a)) having a large cross-section and of which the bottom is closed by a piston (2), and is intended to receive a liquid to be centrifuged. This cylindrical portion (1$i(a)) is connected to a cylindrical portion (1$i(b)) of a smaller cross-section by a linking portion (1$i(d)). When the liquid is centrifuged, an actuating rod (3) pushes the piston (2) which brings the separate constituants into the portion (1$i(b)) thereby increasing the height of the different layers proportionally to the square of the ratio between the radii between the cross-sections of the portions (1$i(a)) and (1$i(b)). The constituants may be collected as the piston (2) moves at the outlet of the portion (1$i(b)).

Description

EPROUVETTE POUR LA CENTRIFUGATIONET LA COLLECTION D'UN LIQUIDETEST FOR CENTRIFUGATION AND COLLECTION OF A LIQUID
La présente invention se rapporte à une éprouvette de séparation par centrifugation d'un liquide physiologique et de collection d'au moins un des constituants de densité donnée.The present invention relates to a test tube for separation by centrifugation of a physiological liquid and collection of at least one of the constituents of given density.
La centrifugaticn est une méthode bien connue pour la sépara tion et la purification de cellules, de virus et de particules cellulaires. Généralement cette séparation s'opère dans un milieu de centrifugation capable d'engendrer un gradient de densité continu ou discontinu lorsqu'il est soumis à la force centrifuge. De tels substances sent fabriquées notaπment par Pharmacia Fine Chemicals AB à Uppsala en Suède et vendues sous les marques de commerce "Per coll" et "Ficoll-Paque".Centrifugation is a well known method for the separation and purification of cells, viruses and cellular particles. Generally this separation takes place in a centrifugation medium capable of generating a continuous or discontinuous density gradient when it is subjected to centrifugal force. Such substances are manufactured in particular by Pharmacia Fine Chemicals AB in Uppsala in Sweden and sold under the trade names "Per coll" and "Ficoll-Paque".
En pratique le tenps de centrifugation nécessaire à la séparation des particules, dans un milieu de viscosité donnée, est une fonction de la hauteur de la colonne de liquide dans le tube d'analyse. II est fréquent que les particules à séparer et à extraire forment, après centrifugation, une couche très mince, de l'ordre du millimètre ou irême moins. Il s'ensuit que l'extraction de ces particules constitue une opération délicate qui requiert une grande minutie et de l'habilité. Cette opération est réalisée manuellement et son automatisation pose évidemment des problèmes au niveau de la sensibilité des moyens nécessaires pour détecter une couche aussi mince, ainsi qu'à celui des moyens capables d'aspirer exclusivement mais totalement, ces particules.In practice, the centrifugation tenps necessary for the separation of the particles, in a medium of given viscosity, is a function of the height of the column of liquid in the analysis tube. It is common for the particles to be separated and extracted to form, after centrifugation, a very thin layer, of the order of a millimeter or less. It follows that the extraction of these particles is a delicate operation which requires great meticulousness and skill. This operation is carried out manually and its automation obviously poses problems in terms of the sensitivity of the means necessary to detect such a thin layer, as well as that of the means capable of exclusively but totally sucking up these particles.
Ccmne on l'a vu précédemment, la réduction du diamètre de l'é prouvette conduirait à un allongement proportionnel du tenps de centrifugation nécessaire pour obtenir la séparation. Or, une augmentation de l'épaisseur de la -couche de particules devrait être très sensible pour permettre d'effectuer la séparation et le prélèvement automatique de telles particules en utilisant des moyens de détection et de prélèvement simples.As we have seen above, the reduction in the diameter of the test piece would lead to a proportional lengthening of the centrifugation tenps necessary to obtain the separation. However, an increase in the thickness of the particle layer should be very sensitive to allow the separation and automatic removal of such particles using simple detection and sampling means.
Outre l'allongement du tenps de centrifugation, la réduction du diamètre de l'éprouvette donne une moins bonne séparation qui se traduit par une contamination des globules rouges par des lymphocytes ainsi que par une augmentation du noπbre de cellules mortes.In addition to the lengthening of the centrifugation tenps, the reduction in the diameter of the test tube gives a less good separation which results in contamination of the red blood cells by lymphocytes as well as in an increase in the number of dead cells.
Il a déjà été proposé dans le brevet US 3.513.976 de former une éprouvette avec une partie intermédiaire de section sensiblement plus faible, dont le volume et la position relativement aux autres parties de l'éprouvette sent choisis pour correspondre à peu près à la portion de volume de leucocytes contenus dans un échantillon correspondant au volume de sang que peut contenir l'éprouvette ainsi qu'à la position de ces leucocytes après centrifugation de l'éprouvette dont l'axe longitudinal est orienté radialement par rapport à l'axe de rotation. Il est prévu par ailleurs, d'ajuster finement le niveau des leucocytes en ajoutant du mercure dans le fond de l'éprouvette. La centrifugatien dans une telle éprouvette suppose un transfert des composants de densités différentes à travers l'étranglement de la partie intermédiaire. Si cet étranglement est important, la séparation par centrifugation peut s'avérer pratiquement irréalisable ou, pour le moins, nécessiter un allongement très considérable de la période de centrifugation.It has already been proposed in US Pat. No. 3,513,976 to form a test piece with an intermediate part of appreciably smaller section, the volume and position of which relative to the other parts of the test piece is chosen to correspond roughly to the portion of the volume of leukocytes contained in a sample corresponding to the volume of blood which the test tube can contain as well as to the position of these leukocytes after centrifugation of the test tube, the longitudinal axis of which is oriented radially with respect to the axis of rotation . It is also planned to finely adjust the level of the leukocytes by adding mercury to the bottom of the test tube. The centrifuge in such a test tube requires a transfer of the components of different densities through the throttle of the intermediate part. If this constriction is significant, separation by centrifugation may prove to be practically impractical or, at the very least, require a very considerable lengthening of the centrifugation period.
Il a par ailleurs, été décrit par Harry Cutts en page 132 de son livre "Cell séparation methods in Bsmatology" publié par Académie Press New York — Londres une installation ecciprenant une éprouvette dans laquelle est centrifugé le sang. Cette éprouvette est placée à l'intérieur d'un support dont le fond est muni d'un joint de néoprène. Une aiguille creuse est enfoncée à travers le fond du support, le joint néoprène et la paroi de l'éprouvette. Cette aiguille est reliée à un réservoir de brcπobenzène lui-mime relié à un réservoir d'eau par une pompe péristaltique. En pompant l'eau dans le réservoir de brcαobenzène, celui-ci est chassé dans l' éprouvette à travers l'aiguille creuse. On a fixé au sonnet de l'-éprouvette un bouchon conique, dont le centre est traversé par un tube de petit diamètre, qui sert à récupérer les différentes phases liquides, au fur et à mesure qu'elles sont amenées à la sortie de ce tube de pe tit diamètre par le brαnobenzène.It was moreover, described by Harry Cutts on page 132 of his book "Cell separation methods in Bsmatology" published by Académie Press New York - London an installation including a test tube in which the blood is centrifuged. This test piece is placed inside a support, the bottom of which is provided with a neoprene seal. A hollow needle is inserted through the bottom of the support, the neoprene seal and the wall of the test piece. This needle is connected to a brcπobenzene tank itself connected to a water tank by a peristaltic pump. By pumping water into the brcαobenzene reservoir, it is expelled into the test tube through the hollow needle. A conical plug was fixed to the sonnet of the test tube, the center of which is crossed by a tube of small diameter, which serves to recover the various liquid phases, as they are brought out of this pe tube tit diameter by brαnobenzene.
Il est évident qu'une telle solution ne permet pas d'envisager le traitement automatique de séries d'échantillons, cαime ceci doit être fait dans des laboratoires bio-médicaux des hôpitaux et des cen très de transfusion sanguine, tant les opérations nécessaires sont délicates. En outre, une telle solution nécessite au moins la vidange et la recharge périodique du réservoir de brcmobenzène et le changement de l'aiguille creuse destinée à traverser le fond de l'éprouvette, dans la mesure où celle-ci vient en contact avec l'échantil lcn à analyser. Il est encore à signaler que le bouchon conique, rapporté dans l'ouverture de l'éprouvette, présente des arêtes vives qui sont susceptibles de créer des remous lors de l'écoulement du liquide à analyser et donc de mélanger les différentes phases séparées par la centrifugation. Le but de la présente invention est de remédier au moins en partie aux inconvénients susmentionnés de façon à faciliter le prélèvement des particules séparées par centrifugation sans augmenter le temps nécessaire à la séparation ou affecter la qualité de cette séparation, par une solution qui se prête particulièrement bien à l'au tαnatisation de ce prélèvement.It is obvious that such a solution does not make it possible to envisage the automatic treatment of series of samples, as this must be done in bio-medical laboratories in hospitals and blood transfusion centers, as the necessary operations are delicate . In addition, such a solution requires at least the emptying and periodic recharging of the brcmobenzene reservoir and the change of the hollow needle intended to pass through the bottom of the test piece, insofar as the latter comes into contact with the lcn sample to analyze. It should also be noted that the conical plug, added in the opening of the test piece, has sharp edges which are liable to create eddies during the flow of the liquid to be analyzed and therefore to mix the different phases separated by the centrifugation. The object of the present invention is to remedy at least in part the above-mentioned drawbacks so as to facilitate the removal of the particles separated by centrifugation without increasing the time necessary for the separation or affecting the quality of this separation, by a solution which is particularly suitable. well at the tαnatisation of this sample.
A cet effet, la présente invention a pour objet une éprouvette de séparation par centrifugation d'un liquide physiologique et de collection d'au moins un des constituants de densité donnée, présentant deux parties de sections circulaires différentes reliées par une partie de liaison dont la section passe progressivement de l'une à l'autre desdites sections. Cette éprouvette est caractérisée par le fait qu'elle est ouverte à ses deux extrémités, les sections de ces ouvertures correspondant auxdites sections respectives, l'ouverture présentant la plus grande de ces sections formant l'extrémité d'un cylindre de centrifugation qui reçoit un piston ajusté de façon étanche et l'autre de ces ouvertures, présentant la plus petite section, constituant l'ouverture par laquelle lesdits constituants séparés dans ledit cylindre peuvent être collectés, consécutivement au déplacement dudit piston en direction de cette ouverture.To this end, the present invention relates to a test tube for separation by centrifugation of a physiological liquid and for the collection of at least one of the constituents of given density, having two parts of different circular sections connected by a connecting part whose section progressively passes from one to the other of said sections. This test piece is characterized in that it is open at its two ends, the sections of these openings corresponding to said respective sections, the opening having the largest of these sections forming the end of a centrifugation cylinder which receives a piston tightly fitted and the other of these openings, having the smallest section, constituting the opening through which said separate constituents in said cylinder can be collected, following the movement of said piston in the direction of this opening.
L'avantage de l'éprouvette objet de l'invention réside essentiellement dans soi autonomie, puisqu'elle comporte les éléments qui permettent de séparer les constituants par centrifugation et ceux qui permettent d'amener ensuite ces constituants au niveau de l'ouverture de section réduite en vue de les collecter, cette ouverture de section réduite augmentant considérablement l'épaisseur des différentes couches et réduisant leur interfaces en fonction du carré du rapport des rayons entre le corps cylindrique de l'éprouvette et l'ouverture de section réduite où se fait la collecte de ces constituants. Elle se prête donc bien à une installation automatique qui coπporterait un poste de centrifugation et un poste de collection des constituants après quoi l'éprouvette peut être jetée, vu le très faible ccût qu'elle représente.The advantage of the test tube which is the subject of the invention essentially resides in itself autonomy, since it comprises the elements which allow the constituents to be separated by centrifugation and those which then allow these constituents to be brought to the level of the reduced section opening with a view to collecting them, this reduced section opening considerably increasing the thickness of the different layers and reducing their interfaces in function of the square of the ratio of the rays between the cylindrical body of the test piece and the reduced section opening where these constituents are collected. It therefore lends itself well to an automatic installation which would include a centrifugation station and a collection station for the constituents after which the test piece can be discarded, given the very low cost that it represents.
La figure unique du dessin «annexé illustre, schématiquement et à titre d'exemple, une forme d'exécution d'un dispositif pour la mise en oeuvre du procédé objet de l'invention. Ce dispositif conçorte une éprouvette 1 transparente présentant une partie la de diamètre supérieur à une partie lb, reliées par une portion ld dans laquelle la section varie progressivement. Le fond de la partie la est constitué par un piston 2 retenu par un rebord lc. Pour l'opération de prélèvement, le piston 2 est disposé coaxialement à une tige d'entraînement à crémaillère 3 en prise avec un pignon 4 solidaire de l'arbre de sortie d'un moteur électrique 5 relié à un poste de commande 6. Ce poste de cαrmande est relié à une cellule photo-électrique 7 disposée vis-à-vis d'une source de lumière 8, ces deux éléments se trouvant de part et d'autre de la partie 1b de l'éprouvette 1 à proximité de sa sortie et servant à détecter le niveau des différents produits issus de la séparation du liquide physiologique introduit dans l'éprouvette. Deux pointes de pipettes 9 et 10 sont introduites dans l'extrémité ouverte de l'éprouvette 1 et sont reliées au poste de commande 6. L'une de ces pipettes est destinée à prélever les parties de liquide situées au-dessus de la couche de particules à prélever tandis que l'autre pipette recueillera ces particules.The single figure of the attached drawing illustrates, schematically and by way of example, an embodiment of a device for implementing the method which is the subject of the invention. This device comprises a transparent test piece 1 having a portion 1a of diameter greater than a portion 1b, connected by a portion 1d in which the section varies gradually. The bottom of the part la is constituted by a piston 2 retained by a flange lc. For the sampling operation, the piston 2 is arranged coaxially with a rack drive rod 3 engaged with a pinion 4 secured to the output shaft of an electric motor 5 connected to a control station 6. This control station is connected to a photoelectric cell 7 placed opposite a light source 8, these two elements being on either side of part 1b of the test piece 1 near its outlet and used to detect the level of the various products resulting from the separation of the physiological liquid introduced into the test tube. Two pipette tips 9 and 10 are introduced into the open end of the test piece 1 and are connected to the control station 6. One of these pipettes is intended to take the parts of liquid situated above the layer of particles to be sampled while the other pipette will collect these particles.
Etant donné que les constituants du liquide centrifugé sont destinés à être recueillis au fur et à mesure de leur écoulement à travers l'ouverture de sortie de l'éprouvette, la longueur de la partie lb est sans importance et l'ouverture de sortie peut donc se situer directement au niveau où la partie ld a sa section la plus fai ble. Par ailleurs, le rebord le destiné à retenir le piston 2 lors de la centrifugatien n'est pas indispensable dans la mesure où, lors de la centrifugation, l'éprouvette peut être disposée dans un logement cylindrique orienté radialement à l'axe de centrifugation et dont le fond, tourné vers l'extérieur, sert lui-même à retenir le piston 2.Since the constituents of the centrifuged liquid are intended to be collected as they flow through the exit opening of the test piece, the length of the part lb is immaterial and the exit opening can therefore lie directly at the level where part ld has its weakest section corn. Furthermore, the rim 1 intended to retain the piston 2 during centrifugation is not essential insofar as, during centrifugation, the test piece can be placed in a cylindrical housing oriented radially to the centrifugation axis and the bottom of which, facing outwards, is used to hold the piston 2.
A titre d'exemple, le dispositif décrit peut être utilisé en vue de séparer et de prélever les lymphocytes d'un échantillon de sang d'un patient en vue de procéder à un test de mobilité électro phorétique macrophage basé sur la détection de la sensibilité des lymphocytes vis-à-vis d'un antigène issu d'une tumeur.For example, the device described can be used to separate and collect lymphocytes from a patient's blood sample in order to carry out a macrophage electrophoretic mobility test based on the detection of sensitivity. lymphocytes vis-à-vis an antigen from a tumor.
Le rapport entre l'épaisseur ou la hauteur de la couche de lymphocytes et sa section est une fonction inverse de la quatrième puissance du diamètre du tube. En effet, si h = hauteur de la couche, s = section transversale de cette couche, v = volume de la couche, ra = h/s, c = constante, f = fonction.The ratio between the thickness or the height of the layer of lymphocytes and its section is an inverse function of the fourth power of the diameter of the tube. Indeed, if h = height of the layer, s = cross section of this layer, v = volume of the layer, ra = h / s, c = constant, f = function.
v = h x s = cv = h x s = c
Figure imgf000007_0001
Figure imgf000007_0001
ra
Figure imgf000007_0003
Figure imgf000007_0002
ra
Figure imgf000007_0003
Figure imgf000007_0002
En pratique, si, par exemple, le diamètre du tube diminue de 20 mm à 5 mm (un facteur de 4) , la hauteur de la couche de lymphocytes augmente d'un facteur de 16, soit de l'ordre de 2 mm à 32 mm et le rapport h/s augmente d'un facteur de 256 ou passe de 0,006 à 1,54.In practice, if, for example, the diameter of the tube decreases from 20 mm to 5 mm (a factor of 4), the height of the layer of lymphocytes increases by a factor of 16, that is to say of the order of 2 mm. 32 mm and the h / s ratio increases by a factor of 256 or goes from 0.006 to 1.54.
Pour réaliser cette séparation et ce prélèvement de lymphocytes selon l'invention, on procède tout d'abord selon la technique habituelle, à savoir, on dilue l'échantillon de sang du patient, par exemple, avec une solution de sels de Bank (Hank's BSS) , on introduit ensuite 5 ml de Ficoll-Paque (marque déposée) qui est une so- luticn aqueuse de densité 1,077+0,001 g/cm3 contenant 5,7 g de Ficoll 400 qui est un polymère synthétique de poids moléculaire élevé (Mw 400 000) de saccharose et d'épychlorohydrine facilement so lubie dans l'eau et 9 g d'un agent anti-bactérien, le diatrizoate de sodium, pour 100 ml, dans une éprouvette 1 de 20 ml. On additionne ensuite 10 ml de sang dilué dans l'éprouvette 1. On centrifuge cette éprouvette avec son axe incliné ou horizontal et le piston 2 dirigé vers l'extérieur, à 400 g durant 30 à 40 min.To carry out this separation and this removal of lymphocytes according to the invention, the procedure is first of all carried out according to the usual technique, namely, the patient's blood sample is diluted, for example, with a solution of Bank salts (Hank's BSS), 5 ml of Ficoll-Paque (registered trademark), which is a so- aqueous luticn with a density of 1.077 + 0.001 g / cm 3 containing 5.7 g of Ficoll 400 which is a synthetic polymer of high molecular weight (M w 400,000) of sucrose and epychlorohydrin easily soluble in water and 9 g of an anti-bacterial agent, sodium diatrizoate, per 100 ml, in a test tube 1 of 20 ml. 10 ml of diluted blood are then added to the test tube 1. This test tube is centrifuged with its inclined or horizontal axis and the piston 2 directed outwards at 400 g for 30 to 40 min.
A la suite de la séparation par centrifugation, quatre couches se sont formées dans l'éprouvette. la couche supérieure conporte essentiellement le plasma, ensuite vient la mince couche cαrprenant des lymphocytes, puis le milieu de séparation formé dans cet exemple par le Ficoll-Paque et enfin les globules rouges et autres particules cellulaires. Eïnsuite, on dispose cette éprouvette 1 vis-à-vis de la tige d'entraînement à crémaillère 3.Following separation by centrifugation, four layers formed in the test piece. the upper layer essentially contains the plasma, then comes the thin layer containing lymphocytes, then the separation medium formed in this example by Ficoll-Paque and finally the red blood cells and other cellular particles. Then, this test piece 1 is placed with respect to the rack drive rod 3.
En poussant le piston 2 vers le haut, la tige d'entraînement à crémaillère 3 amène le sormmet de la couche de plasma dans la partie rétrécie lb de l'éprouvette 1. Lorsque le sommet de cette couche arrive vis-à-vis du détecteur photo-électrique 7, le poste de commande 6 met en marche une des pipettes 9 et 10 qui est destinée à aspirer le plasma au fur et à mesure de son ascension dans la partie lb de l'éprouvette. Dès que l'interface plasma lymphocyte arrive au niveau du détecteur photo-électrique 7, le poste de commande 6 arrête la pipette aspirant le plasma et met en marche l'autre pipette qui aspire alors la couche de lymphocytes jusqu'à ce que le détecteur photo-électrique 7 détecte l'arrivée du bas de cette couche, marient auquel la pipette aspirant les lynrohocytes est arrêtée ainsi que le moteur 5.By pushing the piston 2 upwards, the rack drive rod 3 brings the sormmet of the plasma layer into the constricted part 1b of the test tube 1. When the top of this layer comes towards the detector photoelectric 7, the control station 6 starts one of the pipettes 9 and 10 which is intended to aspirate the plasma as it rises in the part lb of the test piece. As soon as the lymphocyte plasma interface arrives at the photoelectric detector 7, the control station 6 stops the pipette aspirating the plasma and starts the other pipette which then sucks the layer of lymphocytes until the detector photoelectric 7 detects the arrival of the bottom of this layer, marries which the pipette aspirating the lynrohocytes is stopped as well as the motor 5.
On procède alors au lavage des lymphocytes selon le processus classique qui consiste à ajouter de nouveau un milieu électrophorétique macrophage, à centrifuger à 250 g pendant 10 minutes, à éliminer le liquide surnageant et à répéter cette opération autant de fois que nécessaire, par exerrple trois fois.The lymphocytes are then washed according to the conventional process which consists in again adding a macrophage electrophoretic medium, in centrifuging at 250 g for 10 minutes, in eliminating the supernatant liquid and in repeating this operation as many times as necessary, for example three time.
Ensuite, les lyirphocytes sont comptés, incubés avec l'antigène et le test de mobilité électrophorétique macrophage susmentionné est réalisé.Then, the lyirphocytes are counted, incubated with the antigen and the above-mentioned macrophage electrophoretic mobility test is carried out.
Des essais comparatifs ont été réalisés avec le sang d'un don neur masculin en utilisant la méthode manuelle de prélèvement avec éprouvette classique et par ailleurs, en utilisant également la mé thode de prélèvement manuelle mais avec l'éprouvette objet de la présente invention. Un étalonnage des cσπposants du sang à tester a été réalisé par différents coπptages au microsccpe et en établissant la moyenne de ces comptages. Le coπptage moyen des globules blancs basé sur six comptages distincts a donné 6650 œllules/mnr ou 6,65 x 106/ml. On a ensuite déterminé le taux moyen de lyπphocytes à l'aide de trois comptages, ce qui a donné 52% de lyizphocytes soit 6,65 x 52% x 106/ml = 3,46 x 106.Comparative tests were carried out with the blood of a donation male neur using the manual method of sampling with conventional test tube and moreover, also using the manual method of sampling but with the test object of the present invention. A calibration of the components of the blood to be tested was carried out by various microspace counts and by establishing the average of these counts. The average white blood cell count based on six separate counts gave 6650 cells / mnr or 6.65 x 10 6 / ml. The average rate of lyπphocytes was then determined using three counts, which gave 52% of lyizphocytes, ie 6.65 x 52% x 10 6 / ml = 3.46 x 10 6 .
Ensuite, on a procédé à la collection des lyirphocytes à l'aide de l'éprouvette objet de l'invention, en utilisant un échantillon de 10 ml de sang dilué à 50% dans une solution de sels de Hank (Hank's BSS) et traité préalablement à l'héparine centre la coagulation. On a placé ces 10 ml dans une éprouvette dont le corps la a 20,3 mm de diamètre et l'ouverture de sortie de la partie lb 8 mm en ajoutant 5 ml de Ficoll-Paque (marque déposée). On a placé cette éprouvette dans un support cylindrique dent le fond présente une ouverture de diamètre inférieur à celui du piston 2 et on a centrifugé cet échantillon à 400 g pendant 35 minutes.Then, the collection of the lyirphocytes was carried out using the test tube which is the subject of the invention, using a 10 ml sample of blood diluted to 50% in a solution of Hank's salts (Hank's BSS) and treated. prior to heparin centers coagulation. These 10 ml were placed in a test tube whose body is 20.3 mm in diameter and the outlet opening of the lb portion 8 mm by adding 5 ml of Ficoll-Paque (registered trademark). This specimen was placed in a cylindrical support tooth the bottom has an opening of diameter smaller than that of the piston 2 and this sample was centrifuged at 400 g for 35 minutes.
Ensuite, en a placé l'éprouvette sur un appareil muni d'une tige d'entraînement à crémaillère 3, mais la collecte a été réalisée manuellement au niveau de l'ouverture de sortie de l'éprouvette. On a constaté que le déplacement de la couche de lymphocytes est obtenu avec une remarquable stabilité de ses interfaces.Then, the test piece was placed on a device fitted with a rack drive rod 3, but the collection was carried out manually at the exit opening of the test piece. It has been found that the displacement of the lymphocyte layer is obtained with remarkable stability of its interfaces.
Les résultats obtenus sont 3,07 x 106/ml de globules blancs total dont 92% de lymphocytes soit un rendement de 3,07 x 92/3,46 = 81,6% par rapport au comptage de référence, avec moins de 2% de celIules mortes. Le même test réalisé avec une éprouvette classique a donné 2,4 x 106/ml de globules blancs total dont 82% de lymphocytes soit un rendement de 2,4 x 82/3,46 = 56,8% et environ 1% de cellules mortes.The results obtained are 3.07 x 10 6 / ml of total white blood cells of which 92% of lymphocytes is a yield of 3.07 x 92 / 3.46 = 81.6% compared to the reference count, with less than 2 % of dead cells. The same test carried out with a conventional test tube gave 2.4 × 10 6 / ml of total white blood cells of which 82% of lymphocytes is a yield of 2.4 × 82 / 3.46 = 56.8% and approximately 1% of dead cells.
A titre indicatif, le fabricant du Ficoll-Paque, les laboratoires Pharmacia Fine Chemicals AB, indique un rendement normal de 50% + 15%.As an indication, the manufacturer of Ficoll-Paque, Pharmacia Fine Chemicals AB laboratories, indicates a normal yield of 50% + 15%.
On constate que l'éprouvette objet de l'invention permet d'ob tenir une très sensible amélioration de ces performances.It is noted that the test object of the invention makes it possible to obtain hold a very noticeable improvement in these performances.
Bien entendu, l'invention n'est pas limitée à la séparation des lymphocytes mais est utilisable chaque fois que l'on veut séparer ou purifier des virus, des bactéries, des particules cellulaires dans un liquide physiologique. Of course, the invention is not limited to the separation of lymphocytes but can be used each time it is desired to separate or purify viruses, bacteria, cell particles in a physiological liquid.

Claims

REVEND I CAT I ONRESELL I CAT I ON
Eprouvette de séparation par centrifugation d'un liquide physiologique et de collection d'au moins un des constituants de densité donnée, présentant deux parties de sections circulaires différentes reliées par une partie de liaison dont la section passe progressivement de l'une à l'autre desdites sections, caractérisée par le fait qu'elle est ouverte à ses deux extrémités, les sections de ces ouvertures correspondant auxdites sections respectives, l'ouverture présentant la plus grande de ces sections formant l'extrémité d'un cylindre de centrifugation qui reçoit un piston ajusté de façon étanche et l'autre de ces ouvertures présentant la plus petite section, constituant l'ouverture par laquelle lesdits constituants séparés dans ledit cylindre peuvent être collectés, consécutivement au déplacement dudit piston en direction de cette ouverture. Test tube for separation by centrifugation of a physiological liquid and collection of at least one of the constituents of given density, having two parts of different circular sections connected by a connecting part whose section passes progressively from one to the other of said sections, characterized in that it is open at its two ends, the sections of these openings corresponding to said respective sections, the opening having the largest of these sections forming the end of a centrifuge cylinder which receives a piston tightly adjusted and the other of these openings having the smallest section, constituting the opening through which said separate constituents in said cylinder can be collected, following the movement of said piston in the direction of this opening.
PCT/CH1982/000073 1981-05-29 1982-05-25 Test-tube for the centrifuging and collecting of a liquid WO1982004201A1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CH351881 1981-05-29
CH3518/81810529 1981-05-29

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO1982004201A1 true WO1982004201A1 (en) 1982-12-09

Family

ID=4257732

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CH1982/000073 WO1982004201A1 (en) 1981-05-29 1982-05-25 Test-tube for the centrifuging and collecting of a liquid

Country Status (2)

Country Link
EP (1) EP0069053A1 (en)
WO (1) WO1982004201A1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0742735A1 (en) * 1994-01-31 1996-11-20 Applied Imaging Corp. Centrifuge tube and adaptor

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100765121B1 (en) * 2001-11-24 2007-10-11 엘지전자 주식회사 Polling method of Protocol Data Unit of transmission buffer

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE608010C (en) * 1932-07-22 1935-01-15 Ernst Fischer Dr Ing Centrifuge glass
US3513976A (en) * 1968-03-19 1970-05-26 William C James Leukocyte flask and method of obtaining white cells from whole blood
DE2343987B1 (en) * 1973-08-31 1975-01-16 Sarstedt Kunststoff Collection container for blood samples
GB1443524A (en) * 1972-10-27 1976-07-21 Merten U P Multi-purpose syringe
FR2314486A1 (en) * 1975-06-09 1977-01-07 Icl Scient METHOD AND DEVICE FOR THE PREPARATION OF LIQUIDS CONTAINING SUSPENSION MATERIALS, FOR EXAMINATION
US4040959A (en) * 1976-06-22 1977-08-09 Berman Irwin R Multi-purpose blood bag

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE608010C (en) * 1932-07-22 1935-01-15 Ernst Fischer Dr Ing Centrifuge glass
US3513976A (en) * 1968-03-19 1970-05-26 William C James Leukocyte flask and method of obtaining white cells from whole blood
GB1443524A (en) * 1972-10-27 1976-07-21 Merten U P Multi-purpose syringe
DE2343987B1 (en) * 1973-08-31 1975-01-16 Sarstedt Kunststoff Collection container for blood samples
FR2314486A1 (en) * 1975-06-09 1977-01-07 Icl Scient METHOD AND DEVICE FOR THE PREPARATION OF LIQUIDS CONTAINING SUSPENSION MATERIALS, FOR EXAMINATION
US4040959A (en) * 1976-06-22 1977-08-09 Berman Irwin R Multi-purpose blood bag

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0742735A1 (en) * 1994-01-31 1996-11-20 Applied Imaging Corp. Centrifuge tube and adaptor
EP0742735A4 (en) * 1994-01-31 1998-06-10 Applied Imaging Corp Centrifuge tube and adaptor

Also Published As

Publication number Publication date
EP0069053A1 (en) 1983-01-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3068515B1 (en) Novel filter medium for obtaining plasma, and associated filtration device and method
JPS63182055A (en) Pipet nose and separating method for liquid, etc. using said nose
EP0191257B1 (en) Dynamic pipetting rotor for a centrifugal-analysis device
US4356958A (en) Blood cell separator
US4419089A (en) Blood cell separator
JP3916869B2 (en) Filtration extraction apparatus and method of using the apparatus
US5248480A (en) Apparatus for drawing fluid sample and components thereof
EP1152241A2 (en) Liquid separation apparatus and method
US5393494A (en) Apparatus for drawing fluid sample, components thereof, and slide assembly for use therewith
JPH076978B2 (en) Piston type filter, dispenser vial
WO2004113878A2 (en) Method and device for drawing and mixing liquid samples
CA1253811A (en) Device for extracting the liquid phase of a suspension
US6387277B1 (en) Method for removing contaminants from a fluid stream
US5645715A (en) Collection tip for fractionating solution gradients
FR2617286A1 (en) Sampling device comprising a sampling head which can be sterilised in position mounted on a bioreactor
WO1982004201A1 (en) Test-tube for the centrifuging and collecting of a liquid
JPH0217223B2 (en)
US4346608A (en) Float device for density gradient fractionation
EP0335789B1 (en) Simplified automatic blood analysis system
EP0477259B1 (en) Method and device for the quantification of a volume of a sediment or of a volume of a fluid with bad flow properties
FR2559075A1 (en) METHOD AND DEVICE FOR THE SEPARATION OF PARTICLES, BIOLOGICAL CELL SYSTEMS AND COLLOIDS BY CENTRIFUGATION
EP0069052A1 (en) Method of manufacturing an ignition device for an internal-combustion engine
EP0351256B1 (en) Simplified drawing and discharging device for an automatic blood analysis system
CN215525183U (en) Saliva collection, pretreatment and storage device
WO2009010662A2 (en) System and method for the continuous extraction of a liquid phase of microsamples, and automated installation for the withdrawal thereof, for carrying out the extraction and taking measurements that relate thereto

Legal Events

Date Code Title Description
AK Designated states

Designated state(s): JP US