UA31448U - Спосіб одержання гідролітичного ферментного препарату "циторецифен-м" - Google Patents
Спосіб одержання гідролітичного ферментного препарату "циторецифен-м" Download PDFInfo
- Publication number
- UA31448U UA31448U UAU200713332U UAU200713332U UA31448U UA 31448 U UA31448 U UA 31448U UA U200713332 U UAU200713332 U UA U200713332U UA U200713332 U UAU200713332 U UA U200713332U UA 31448 U UA31448 U UA 31448U
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- differs
- enzyme
- immobilized
- concentration
- enzyme complex
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 title claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 title abstract description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title abstract description 11
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 title abstract 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 34
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 34
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 claims description 6
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 2
- 238000012876 topography Methods 0.000 claims 1
- 241000946779 Streptomyces recifensis Species 0.000 abstract 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 30
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 5
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 229910002012 Aerosil® Inorganic materials 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001420 bacteriolytic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002421 anti-septic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 208000035404 Autolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 208000035965 Postoperative Complications Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- DOIGHQCAQBRSKI-UHFFFAOYSA-N [3-(hydroxymethyl)-1-oxido-4-oxoquinoxalin-4-ium-2-yl]methanol Chemical compound C1=CC=C2N([O-])C(CO)=C(CO)[N+](=O)C2=C1 DOIGHQCAQBRSKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940064004 antiseptic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 108010041102 azocasein Proteins 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 1
- VXIVSQZSERGHQP-UHFFFAOYSA-N chloroacetamide Chemical compound NC(=O)CCl VXIVSQZSERGHQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- IAIWVQXQOWNYOU-FPYGCLRLSA-N nitrofural Chemical compound NC(=O)N\N=C\C1=CC=C([N+]([O-])=O)O1 IAIWVQXQOWNYOU-FPYGCLRLSA-N 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000028043 self proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Спосіб одержання гідролітичного ферментного препарату включає концентрування ферментного комплексу, отриманого при вирощуванні продуценту штаму Streptomyces recifensis var. lyticus 2435/M. Концентрований ферментний комплекс іммобілізують на аеросилі і виділяють іммобілізований ферментний комплекс центрифугуванням.
Description
Опис винаходу
Корисна модель відноситься до біотехнології, а саме до одержання гідролітичного ферментного препарату 2 циторецифену, що є бактеріолітичним ферментним комплексом, і може бути використана при виробництві ферментних препаратів для застосування в медицині та побуті.
Бактеріолітичні ферменти, що синтезуються мікроорганізмами, застосовуються у медицині, промисловості та науці. Ферменти цієї спрямованості здатні руйнувати клітинну стінку багатьох грампозитивних і грамнегативних бактерій, в тому числі патогенних, та дріжджів. Це дає змогу використовувати їх у складі протимікробних 70 (антисептичних) препаратів медичного та побутового призначення, а також для дослідження та виділення клітинних структур мікроорганізмів.
Особливістю мікробних продуцентів цієї групи ферментів є синтез не окремих речовин, а ферментних комплексів, що містять декілька індивідуальних ферментів, але максимальну активність виявляють при сумісній дії. 12 На світовому ринку значаться десятки лікарських форм препаратів, що містять ферменти з протимікробною дією. Більшість з них створена на основі тваринних ензимів трипсин та хімотрипсин. Частка іммобілізованих ферментних препаратів, однак, у загальному обсязі є незначною, що обумовлене складністю процесів та, насамперед, необхідністю встановлення оптимального методу та матеріалу іммобілізації.
На сьогоднішній день в Україні не відомі іммобілізовані протимікробні ферментні препарати поверхневого використання, що застосовуються у медичній практиці За наявною інформацією (|Современное медикаментозное лечение ран (ведомственная инструкция)". Составители: Шалимов А.А., Саенко В.Ф., Даценко
Б.Г., Ляпунов Н.А. и др. Институт хирургий и трансплантологим АМН Украиньі. - Киев, 2002. - с.38 препарати, що застосовуються для лікування інфекційних ран (в тому числі післяопераційних ускладнень) відносяться до антибіотиків (мікроцид, левоміцетин) та антисептиків різної хімічної природи (хлоргексидина биглюконат, перекис водню, фурацилін, діоксидин), що мають традиційні вади: розвиток у антибіотикорезистентності штамів-збудників запальних процесів, нетривалість дії, обмежені терміни зберігання після порушення герметичності упаковки, слабка дегідратуюча дія та інш.
Відомий спосіб одержання гідролітичного ферментного препарату включає біосинтез ферментного комплексу в процесі вирощування продуценту штаму Зігеріотусез гесігепвів маг. ІМіісив 2435/М, і виділення ферментного со комплексу в нативній формі |Годосійчук Т.С. Розробка технології гідролітичного ферментного препарату чЕ циторецифен: Автореферат дисертації на здобуття наукового ступеня к. т. н. - К., 2000, 25с..
Недоліком відомого препарату є незавершеність готової форми (незручність використання), і як наслідок ч відносно низька стабільність при зберіганні та застосуванні. «-
Задачею корисної моделі є удосконалення гідролітичного ферментного препарату, в якому за рахунок 3о запропонованої обробки утворюється зручна готова форма та збільшується протимікробна ефективність со препарату завдяки підвищенню стабільності ферментного комплексу та властивостях підібраного носія.
Поставлена задача вирішується запропонованим способом одержання гідролітичного ферментного препарату, що включає концентрування ферментного комплексу, отриманого при вирощуванні продуценту « штаму бігеріотусез гесігепзіз маг. ІМісив 2435/М, згідно корисної моделі, концентрований ферментний комплекс 50 іммобілізують на аеросилі і виділяють іммобілізований ферментний комплекс центрифугуванням. т с Як носій використовують аеросил марки А-300, іммобілізацію здійснюють при температурі 22...259С, "з концентрації аеросилу 5...795 мас, та перемішуванні протягом 30...б0хв., а центрифугування здійснюють при 500боб./хв. При цьому, концентрація ферментного комплексу становить 5тис. од/мл.
Експериментально було встановлено, що виділення ферментного комплексу, іммобілізованого певним чином на такому носії як аеросил, дозволяє підвищити бактеріостатичну дію, вірогідно, завдяки підвищеній о стабільності ферменту в реакційному середовищі. В результаті збільшується протимікробна ефективність - препарату циторецифен.
Спосіб здійснюється таким чином. т. До концентрованого ферментного комплексу у вигляді культурального фугату штаму Зігеріотусез гесітепвів т» 20 мак, Іуїїсиз 2435/М (Депозитарій Інституту мікробіології і вірусології номер 1МВ Ас-5001) вносили попередньо підсушений аеросил в кількості 5...79о від маси і перемішували протягом 30...бОхв. при температурі 20...2590 до со утворення гелю. Частка іммобілізації ферменту висока і становить біля 9095. Утворений гель центрифугували протягом 20...30 хвилин при 5000об/хв і видаляли надосадову рідину. Осад іммобілізованого препарату висушували контактним способом протягом 1...2 годин при температурі 3020. 59 Приклад. с До культурального фугату штаму 5ігеріотусевз гесітепвів маг. ІМіісиз 2435/М, отриманого при вирощуванні продуценту протягом 4 діб, з концентрацією ферментного комплексу 500бод./мл вносили попередньо підсушений при температурі 3002С аеросил марки А-300 в кількості 595 від маси і перемішували протягом бохв. во при температурі 2520. Утворений гель центрифугували протягом 20хв. при 5000об/хв і видаляли надосадову рідину. Осад іммобілізованого препарату висушували контактним способом протягом 1,5 годин при температурі 3096.
Активність препарату аналізували за літичною (ЛА) та протеолітичною (ПА) активностями.
У якості тест-культури для визначення літичної активності бактеріолітичного комплексу використовували 65 ліофілізовані клітини І асіорасійиз риЇдагісив 51 та добові живі культури Зіарнуіососсив ацгецйз, ЕвсНегісніа сої.
Літичну активність (ЛА) іммобілізованого та нативного ферментного препарату визначали за здатністю до лізису суспензії тест-культур та виражали у од/мл. За одиницю ЛА приймали кількість ферменту, яка знижує оптичну густину суспенії тест-культури на 0,001 за їхв в мл реакційної суміші, при розведенні ферменту, що забезпечує лізис суспензії на 25-3090.
Визначення проводили турбідіметричним методом у наступній модифікації: до 4мл суспензії тест-культури (оптичною густиною 0,7-0,8ОД при 5-54Онм) додавали 0,1-0,З3мл розчину ферменту та інкубували впродовж 10хв при 502С. Розчини препаратів готували у дистильованій воді у змінних концентраціях.
У контроль додавали 0,1-0,З3мл дистильованої води та інкубували у таких же умовах. За різницею оптичної густини суспензії до (ОДьих) та після (ОД р) інкубації визначали рівень ЛА. Оптичну густину визначали на 70 фотометрі КФК-3 при Х-54Онм у кюветі О,5см на фоні дистильованої води.
Літичну активність визначали за формулою: па - Одп ЗоДдкх СІЮ Мод лм, 0,004 х т де, С - коефіцієнт автолізу (відношення ОДп/ОДк контролю);
М - розведення проби в реакційній суміші, раз; т - час інкубації, хв; 0,001 - коефіцієнт перерахунку на одиницю активності;
Визначення протеолітичної активності (ПА) проводилось за азоказеїном. Метод заснований на гідролізі субстрату протеолітичними ферментами, зупиненні реакції шляхом додавання трихлороцтової кислоти, колориметричному визначенні неосаджених забарвлених тирозин-гістидинвмісних пептидів.
За одиницю активності приймають таку кількість ферменту, що за їхв утворює 1мкмоль вільних аміногруп.
Розрахунки проводили за формулою:
ПА - Одд од Кк К содімл.хв, ' т де ОДд - оптична густина дослідних розчинів; -
ОДк - оптична густина контрольних розчинів;
К - коефіцієнт перерахунку на мл; т - час інкубації, хв.
Порівняльна характеристика бактеріостатичної дії нативного та іммобілізованого препаратів циторецифен наведена у Таблиці. со ч
Концентрація ферменту при вирощуванні на м'ясо-пептонному бульйоні, мг/мл ЧЕ - зв Фо м 111177 не) с и Порівняння ефективності нативного та іммобілізованого препарату циторецифен показує підвищену є» ефективність останнього в межах 1,5-2 рази (по відношенню до різних тест-культур).
Отже, як видно з Таблиці, бактеріостатична дія іммобілізованого циторецифену виявляється в межах концентрації ЗбБмг/мл, а висока ефективність розпочинається з 25мг/мл, що майже вдвічі ефективніше, ніж при
ІФ) використанні нативного ферментного препарату. - їх
Claims (5)
- Формула винаходу т. 1. Спосіб одержання гідролітичного ферментного препарату, що включає концентрування ферментного о комплексу, отриманого при вирощуванні продуценту штаму Зігеріотусевз гесіїепвів маг. Іуісив 2435/М, який відрізняється тим, що концентрований ферментний комплекс іммобілізують на аеросилі і виділяють іммобілізований ферментний комплекс центрифугуванням.
- 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що використовують аеросил марки А-300.
- З. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що іммобілізацію здійснюють при температурі 22...25 296, с концентрації аеросилу 5...7 96 мас та перемішуванні протягом 30...60 хв.
- 4. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що центрифугування здійснюють при 5000 об./хв.
- 5. Спосіб за будь-яким з пп. 1-4, який відрізняється тим, що концентрація ферментного комплексу становить бо 5 тис. од/мл. Офіційний бюлетень "Промислова власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2008, М 7, 10.04.2008. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України. б5
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU200713332U UA31448U (uk) | 2007-11-30 | 2007-11-30 | Спосіб одержання гідролітичного ферментного препарату "циторецифен-м" |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| UAU200713332U UA31448U (uk) | 2007-11-30 | 2007-11-30 | Спосіб одержання гідролітичного ферментного препарату "циторецифен-м" |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| UA31448U true UA31448U (uk) | 2008-04-10 |
Family
ID=39819492
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| UAU200713332U UA31448U (uk) | 2007-11-30 | 2007-11-30 | Спосіб одержання гідролітичного ферментного препарату "циторецифен-м" |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| UA (1) | UA31448U (uk) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2526970C2 (ru) * | 2012-09-04 | 2014-08-27 | Александр Сосиевич Колхиев | Седло для лечения детского церебрального паралича |
-
2007
- 2007-11-30 UA UAU200713332U patent/UA31448U/uk unknown
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2526970C2 (ru) * | 2012-09-04 | 2014-08-27 | Александр Сосиевич Колхиев | Седло для лечения детского церебрального паралича |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Aqeel et al. | Microbial dynamics and properties of aerobic granules developed in a laboratory-scale sequencing batch reactor with an intermediate filamentous bulking stage | |
| Rao et al. | Alkaline protease from Bacillus firmus 7728 | |
| Ueda et al. | Characterization of the ability to form biofilms by plant-associated Pseudomonas species | |
| Maghsoodi et al. | Alkaline protease production by immobilized cells using B. licheniformis | |
| Andreani et al. | Coating polypropylene surfaces with protease weakens the adhesion and increases the dispersion of Candida albicans cells | |
| Dobrynina et al. | Disruption of bacterial biofilms using recombinant dispersin B | |
| Shabtai | Isolation and characterization of a lipolytic bacterium capable of growing in a low-water-content oil-water emulsion | |
| Kizhakedathil et al. | Calcium oxalate degrading thermophilic oxalate oxidase from newly isolated Fusarium oxysporum RBP3 | |
| UA31448U (uk) | Спосіб одержання гідролітичного ферментного препарату "циторецифен-м" | |
| KR20150101789A (ko) | 복합 효소 생산능 및 항균 활성을 갖는 바실러스 서브틸리스 bk418 균주 및 이의 용도 | |
| Szczesna et al. | PVA-biocatalyst with entrapped viable Bacillus subtilis cells | |
| Akhtar et al. | Effects of cultural conditions on the production of extracellular protease by Streptomyces albolongus and Streptomyces aburaviensis | |
| Shamel Omer et al. | Qualitative and quantitative screening of alkaline protease production from some pathogenic bacteria | |
| CN112159802A (zh) | 一种利用肉桂醛偶联修饰的溶菌酶及其修饰方法 | |
| KR100443156B1 (ko) | 악취제거용 에멀젼 액상 미생물 제제 및 이의 제조방법 | |
| RU2193063C2 (ru) | Бактериолитический комплекс, способ его получения и штамм для осуществления способа | |
| Singh et al. | Isolation and characterization of protease producing marine eubacteria | |
| Raju et al. | Production and Optimization Studies of Protease by Soil Isolate Actinomycetes Using Mixed Substrate of Pomegranate Peel Powder and Banana Peel Powder under Solid State Fermentation | |
| Salih | Production, Purification and Characterization of Collagenase produced from locally isolated Staphylococcus aureus HN77 | |
| Arafa | Immobilization and characterization of lipase loaded on Fe3O4 nanoparticles and produced from haloalkalophilis Kocuria Polaris-WRS3 | |
| RU2144079C1 (ru) | Штамм бактерий pseudomonas cepacia вдк вкпм в-7559 - деструктор фенола и формальдегида | |
| Abdulwahhab et al. | Effect of cultivation conditions on hemolysin production from clinical isolates of Serratia marcescens | |
| Jayaraman et al. | Application studies of the halotolerant protease from a newly isolated Virgibacillus dokdonensis VIT P14 | |
| Krarup et al. | Some characteristics of extracellular proteases produced by members of the Chytridiales and the Spizellomycetales (Chytridiomycetes) | |
| Tawfeeq | The effect of D and L-amino Acids on Biofilm Formation in Different Microorganisms |