UA21785U - A strain of bacteria of rhizobium leguminosarum bv. trifolii - Google Patents

A strain of bacteria of rhizobium leguminosarum bv. trifolii Download PDF

Info

Publication number
UA21785U
UA21785U UAA200611046U UAU200611046U UA21785U UA 21785 U UA21785 U UA 21785U UA A200611046 U UAA200611046 U UA A200611046U UA U200611046 U UAU200611046 U UA U200611046U UA 21785 U UA21785 U UA 21785U
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
strain
clover
bacteria
nitrogen
wmo
Prior art date
Application number
UAA200611046U
Other languages
Ukrainian (uk)
Inventor
Nadiia Anatoliivna Vorobei
Serhii Yaroslavovych Kots
Original Assignee
Inst Of Plant Physiology And G
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Inst Of Plant Physiology And G filed Critical Inst Of Plant Physiology And G
Priority to UAA200611046U priority Critical patent/UA21785U/en
Publication of UA21785U publication Critical patent/UA21785U/en

Links

Landscapes

  • Fertilizers (AREA)
  • Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)

Abstract

A strain of bacteria Rhizobium leguminosarum bv. trifolii BN9 for making bacterial fertilizers for trefoil.

Description

Опис винаходуDescription of the invention

Корисна модель відноситься до сільського господарства до мікробіологічних засобів підвищення продуктивності конюшини, а саме до нових штамів КПігорішт Іедиптіпозагит Бу. (гПйоїЇї для виготовлення бактеріальних добрив під згадану культуру.A useful model applies to agriculture to microbiological means of improving the productivity of clover, namely to new strains of KPigorisht Iediptiposagyt Bu. (producers for the production of bacterial fertilizers for the mentioned culture.

У нашій країні конюшина червона у районах із помірним і вологим кліматом є основною багаторічною бобовою культурою. Підвищення урожайності конюшини може бути здійснено завдяки підсиленню у неї процесу біологічної азотфіксації шляхом обробки насіння селекційними штамами бульбочкових бактерій, здатних 70 формувати високоактивний симбіоз із цією рослиною. У виробничих умовах основою азотфіксуючих бактеріальних препаратів здебільшого є виробничі штами бульбочкових бактерій, перелік яких за комплементарністю до певних сортів обмежений або навіть недостатній.In our country, red clover is the main perennial leguminous crop in areas with a moderate and humid climate. Increasing the productivity of clover can be achieved by strengthening the process of biological nitrogen fixation in it by treating seeds with selective strains of nodule bacteria capable of forming a highly active symbiosis with this plant. In production conditions, the basis of nitrogen-fixing bacterial preparations are mostly production strains of nodule bacteria, the list of which is limited or even insufficient in terms of complementarity with certain varieties.

Відомий штам бактерій КПігобрішт ігітоїї 1360 виділений із бульбочок конюшини лугової |Авторське свідоцтво ЗО 1555320 А17 5С О5Е 11/08, С 12М 1/20,1983 Вежайський філіал Литовського н.-д. Інституту 12 землеробства. А.Б. Лапинскасі, що використовується для отримання нітрагіну під конюшину лугову і збільшує її врожай на 12,6 95.The known strain of bacteria KPygobrisht ihitoii 1360 was isolated from nodules of meadow clover | Author's certificate ЗО 1555320 А17 5С О5Е 11/08, С 12М 1/20, 1983 Vezhai branch of Litovskogo n.-d. Institute 12 of agriculture. A.B. Lapinskasi, which is used to obtain nitrogen for meadow clover and increases its yield by 12.6 95.

Серед штамів, що використовуються у країнах Західної Європи, відомий штам МЕТІ 1163 І|ГДР, економічний патент М 247142 АО1С1/06, А 01 М63/00, С 12 К1/411, який підвищує врожай сухої маси і сирого протеїну без додаткового внесення азотного добрива, а також штам для інокуляції білої конюшини КПігобіцт (ігігоїї 7)Мет11255 (ГДР економічний патент М266256 АО1 Сі/О6 ), який без додаткових добрив підвищує вихід сухої маси і підвищує вміст азоту в рослинах у вегетаційних і польових умовах.Among the strains used in the countries of Western Europe, the well-known strain METI 1163 I | GDR, economic patent M 247142 АО1С1/06, А 01 М63/00, С 12 К1/411, which increases the yield of dry mass and crude protein without additional nitrogen fertilizers, as well as a strain for inoculation of white clover KPigobitst (higoii 7) Met11255 (GDR economic patent M266256 АО1 Си/О6), which without additional fertilizers increases the yield of dry matter and increases the nitrogen content in plants in growing and field conditions.

Протягом багатьох років для виробництва нітрагіну в Україні використовуються штами К. Іедитіпозагит Бу. ігігоїїї 3446 і 340 (ІНМІ АН Білорусі), 34ва (ВНДІСГМ, Росія), які сприяють збільшенню урожайності конюшини червоної. Недоліком їх є те, що на ряді районованих в Україні сортів конюшини їх азотфіксувальна активність 29 недостатньо висока і не завжди стабільна. Найближчим до пропонованого штаму є К. Іедитіповагит Бу. (ОЇ пт») 34в8а (ВЩЦеСГМ, Росія), отриманий у результаті аналітичної селекції. При бактеризації штамом 348ва К.For many years, strains of K. Ieditipozagyt Bu have been used for the production of nitragin in Ukraine. igigoii 3446 and 340 (INMI AN of Belarus), 34va (VNDISGM, Russia), which help to increase the yield of red clover. Their disadvantage is that in a number of clover varieties zoned in Ukraine, their nitrogen-fixing activity 29 is not high enough and not always stable. The closest to the proposed strain is K. Iedytipovagyt Bu. (ОЙ пт») 34v8a (VshTseSGM, Russia), obtained as a result of analytical selection. During bacteriization with strain 348va K.

Іедитіпозагит ру. ігіоїїї конюшини районованих сортів Дарунок і Кумач виявилось, що згаданий штам проявляє слабку вірулентність, що позначається у подальшому на ефективності утворених симбіотичних систем конюшини. У результаті це призводить до зниження ефективності і отримання нестабільного урожаю конюшини. оIeditipozagyt ru. of clovers of the regional varieties Darunok and Kumach, it turned out that the mentioned strain shows weak virulence, which subsequently affects the effectiveness of the created symbiotic clover systems. As a result, this leads to a decrease in efficiency and an unstable crop of clover. at

Поряд із селекцією, спрямованою на генетичну комплементарність симбіопартнерів, доцільно проводити с добір штамів бульбочкових бактерій, які б утворювали високоефективні симбіотичні системи із ширшим колом районованих сортів та були б пристосованими до екологічних умов довкілля. -Along with the selection aimed at the genetic complementarity of symbiopartners, it is advisable to select strains of nodule bacteria that would form highly effective symbiotic systems with a wider range of zoned varieties and would be adapted to the ecological conditions of the environment. -

Задачею корисної моделі є одержання штаму бульбочкових бактерій конюшини з високою азотфіксувальною -с пе активністю і вірулентністю, який би дозволяв підсилити процес симбіотичної азотфіксації у декількох 3о районованих сортів конюшини, підвищити їх продуктивність і покращити якість надземної маси. счThe task of a useful model is to obtain a strain of nodular clover bacteria with high nitrogen-fixing activity and virulence, which would allow to strengthen the process of symbiotic nitrogen fixation in several 3o zoned clover varieties, increase their productivity and improve the quality of the above-ground mass. high school

Ця задача вирішується завдяки запропонованому штаму Кпігобімп Іедитіпозагит бу. ігіоїїї ВМО. Новий штам отриманий методом гібридизації: у результаті міжродової кон'югації між штамом-донором Езспепісніа сої С 5466 і штамом-реципієнтом Кпігорічт Іедитіпозагит Бу. ігйоїйї В. (1000)ММ. У результаті ступеневого відбору « за підвищеними симбіотичними показниками з-поміж інших кон'югантів був відібраний штам ВМО. Особливістю З 50 штаму є те, що після зберігання протягом 10 років в умовах музейної колекції він зберігає стабільність за с генетичними маркерами (стійкість до антибіотиків), високу вірулентність і азотфіксувальну активність.This task is solved thanks to the proposed strain Kpigobimp Ieditipozagyt bu. igioiiii WMO. The new strain was obtained by the hybridization method: as a result of intergeneric conjugation between the donor strain Ezspepisnia soi C 5466 and the recipient strain Kpigoricht Ieditiposagyt Bu. igyoiyi V. (1000) MM. As a result of graded selection, the VMO strain was selected from among other conjugants based on increased symbiotic indicators. The peculiarity of Z 50 strain is that after storage for 10 years in the conditions of a museum collection, it retains stability according to genetic markers (resistance to antibiotics), high virulence and nitrogen-fixing activity.

Із» Штам К. Іедитіпозагит Бу. ігпйоЇйї ВМО депонований у колекції Інституту мікробіології і вірусології НАНFrom" Strain K. Ieditipozagyt Bu. The WMO specimen is deposited in the collection of the Institute of Microbiology and Virology of the National Academy of Sciences

України (м. Київ) та зберігається під реєстраційним номером 1МВ В-7196. Штам характеризується наступними фізіолого-біохімічними ознаками: культура бактерій швидкоросла, не спороносна, грам-негативна. Клітини мають форму дрібних паличок розміром 0,7-1,0Х2,5-3,0мкм, палички рухливі. Бактерії пігмент не продукують. Колонії ді помірно-випуклі, слизисті, напівпрозорі з часом розростаються на поверхні агаризованого середовища. - Запропонований штам є мікроаерофілом. Температурний діапазон росту: 20-28. Оптимальна температура росту - 272С. Діапазон рН 6,5-7,4. Оптимальна рнН-7,2. Генетичні особливості: прототроф, стійкий до ряду їх антибіотиків (стрептоміцину сульфат - 250 мкг/мл, канаміцину сульфат - 25мкг/мл, тетрацикліну гідрохлорид - (ее) 50 15 мкг/мл). Штам непатогенний. сп Штам ідентифікований за визначником Берги, 1980, М.: "Мир". - С. 495.of Ukraine (Kyiv) and is stored under the registration number 1МВ В-7196. The strain is characterized by the following physiological and biochemical features: the culture of bacteria is fast-growing, non-spore-bearing, gram-negative. The cells have the form of small rods with a size of 0.7-1.0X2.5-3.0 μm, the rods are mobile. Bacteria do not produce pigment. Colonies that are moderately convex, slimy, and translucent grow over time on the surface of the agar medium. - The proposed strain is a microaerophile. Temperature range of growth: 20-28. The optimal growth temperature is 272C. The pH range is 6.5-7.4. The optimal pH is 7.2. Genetic features: prototroph resistant to a number of their antibiotics (streptomycin sulfate - 250 μg/ml, kanamycin sulfate - 25 μg/ml, tetracycline hydrochloride - (ee) 50 15 μg/ml). The strain is non-pathogenic. sp. The strain was identified by Berga, 1980, M.: "Mir". - P. 495.

Відношення до джерел азоту - культура бактерій К. Іедитіпозагит Бу. (ої ВМО відновлює нітрати і нітрити, засвоює амонійні солі. Використовує казеїн та гідролізат лактальбуміну, має каталазну та уреазну активність (засвоює сечовину). Культура не розріджує желатину, не утворює сірководень (Ньб5), слабо 59 пептонізує молоко. с Відношення до вуглеводів - культура засвоює сахарозу, І -арабінозу, ЮО-арабінозу, рибозу, ЮО-ксилозу,Relationship to nitrogen sources - bacterial culture K. Ieditipozagyt Bu. (Oi WMO reduces nitrates and nitrites, assimilates ammonium salts. Uses casein and hydrolyzate of lactalbumin, has catalase and urease activity (assimilates urea). The culture does not dilute gelatin, does not form hydrogen sulfide (Hb5), weakly peptonizes milk. c Relation to carbohydrates - the culture assimilates sucrose, I-arabinose, ХО-arabinose, ribose, ХО-xylose,

О-фукозу, І-фукозу, мальтозу, галактозу, ксилозу, мелібіозу, целобіозу, фруктозу, маніт із утворенням кислих продуктів і слабо - лактозу і глюкозу. Рафінозу, декстрин, сорбозу, | -ксилозу штам не засвоює. Полісахариди - крохмаль і глікоген не гідролізує. Із багатоатомних спиртів засвоює маніт. Не засвоює манітол, сорбітол, 60 інозітол. Відмінним джерелом вуглецю для досліджуваного штаму є меляса. Не утворює індол, не росте наO-fucose, I-fucose, maltose, galactose, xylose, melibiose, cellobiose, fructose, mannitol with the formation of acidic products and to a lesser extent lactose and glucose. Raffinose, dextrin, sorbose, | - xylose is not assimilated by the strain. Polysaccharides - starch and glycogen do not hydrolyze. From polyatomic alcohols, mannitol is absorbed. Does not absorb mannitol, sorbitol, 60 inositol. An excellent source of carbon for the studied strain is molasses. Does not form indole, does not grow on

МПБ6,5 95 Масі, має ріст на МПБ2,5 95 Масі, добре росте на м'ясо-пептонному агарі (МЛА), на середовищіMPB6.5 95 Mass, has growth on MPB2.5 95 Mass, grows well on meat-peptone agar (MLA), on medium

Ешобі. Ріст на м'ясо-пептонному бульйоні при 272С характеризується помутнінням середовища, колір якого не змінюється. Культура добре культивується на середовищах наступного складу: гороховий агар (г/л: горох - 100, в5 сахароза - 20,0, Масі -1,0, агар - 15-18,0, рН 6,8-7,0. В 1 л води кип'ятити 100 г гороху протягом З0 хв, настояти 20 хв. Відвар відцідити, розчинити добавки. Стерилізувати при 1 атм 30 хв, рН 68-72.Ashobi Growth on meat-peptone broth at 272C is characterized by turbidity of the medium, the color of which does not change. The culture is well cultivated on media with the following composition: pea agar (g/l: pea - 100, v5 sucrose - 20.0, Mass -1.0, agar - 15-18.0, pH 6.8-7.0. Boil 100 g of peas in 1 liter of water for 30 minutes, infuse for 20 minutes, strain the broth, dissolve additives, sterilize at 1 atm for 30 minutes, pH 68-72.

Манітно-дріжджовий агар (МДА) (г/л: КЯНРО, - 0,5, Мо5О,.7НьО - 0,2, Масі - 01, маніт - 10,0, дріжджовий екстракт - 1,0, агар - 15,0-17,0, диет. вода, рН - 7,0. Стерилізувати при 1 атм ЗО хв, рН 6,8-7,2.Mannitol-yeast agar (MDA) (g/l: KYANRO, - 0.5, Mo5O,.7NhO - 0.2, Masi - 01, mannitol - 10.0, yeast extract - 1.0, agar - 15.0 -17.0, dietary water, pH - 7.0 Sterilize at 1 atm 30 min, pH 6.8-7.2.

Синтетичне середовище 79 (г/л: КоОНРО, - 0,5, Ма5зО,.7НоО - 0,2, Масі - 01, СасСо» - сліди, казамінокислоти (або гідролізат лактальбуміну) - 0,1 905 (1 г), маніт - 10,0, агар - 17,0, диет. вода - 1 літр). Стерилізувати при 0,75 атм 40 хв, рН 6,8-7,2. Має слабкий ріст на картопляному агарі.Synthetic medium 79 (g/l: CoOHPO, - 0.5, Ma5zO,.7NoO - 0.2, Massi - 01, CaSSO" - traces, casamino acids (or lactalbumin hydrolyzate) - 0.1 905 (1 g), mannitol - 10.0, agar - 17.0, dietary water - 1 liter). Sterilize at 0.75 atm for 40 min, pH 6.8-7.2. Has weak growth on potato agar.

Культура добре зберігається на манітно-дріжджовому агарі (МДА, рН 7,0) або середовищі 79 (рН 7,2) під мінеральним маслом при кімнатній температурі або у холодильнику при температурі 4-59С0 на цих же середовищах без масла. Пересівають 1-2 рази на рік, добавляють у середовище антибіотики - стрептоміцину 70 сульфат - 250 мкг/мл, канаміцину сульфат - 25мкг/мл, тетрацикліну гідрохлорид - 15мкг/мл. Після 20 пересівів на середовищі 79 без антибіотиків штам К. Іедитіпозагит бу. ігіоїїї ВМО добре росте на цьому ж середовищі із додаванням антибіотиків - стрептоміцину, канаміцину і тетрацикліну, утворює білуваті напівпрозорі колонії, які швидко продукують слиз.The culture is well stored on mannitol-yeast agar (MDA, pH 7.0) or medium 79 (pH 7.2) under mineral oil at room temperature or in a refrigerator at a temperature of 4-59C0 on the same medium without oil. Transplant 1-2 times a year, antibiotics are added to the environment - streptomycin 70 sulfate - 250 μg/ml, kanamycin sulfate - 25 μg/ml, tetracycline hydrochloride - 15 μg/ml. After 20 transplants on medium 79 without antibiotics, strain K. Ieditipozagyt bu. igioiyii VMO grows well on the same medium with the addition of antibiotics - streptomycin, kanamycin and tetracycline, forms whitish translucent colonies that quickly produce mucus.

Передпосівну інокуляцію насіння проводили бактеріальною суспензією із титром 10 9 клітин/мл. Для її 75 отримання штам ВМО вирощували на манітно-дріжджовому агарі при 27 «С протягом 3-4 діб у пробірках.Pre-sowing seed inoculation was carried out with a bacterial suspension with a titer of 10 9 cells/ml. To obtain it, 75 WMO strains were grown on mannitol-yeast agar at 27 °C for 3-4 days in test tubes.

Культуру із агару змивали стерильною водою, готували густу суспензію (50 мл), якою засівали качалочні колби із 350 мл середовища. Інкубацію проводили протягом 3-4 днів при температурі 27 С і постійній аерації середовища вирощування.The agar culture was washed with sterile water, a thick suspension (50 ml) was prepared, which was used to inoculate shake flasks with 350 ml of the medium. Incubation was carried out for 3-4 days at a temperature of 27 C and constant aeration of the growing medium.

Для виготовлення препарату на твердому носії у пакети із перлітом (вермикулітом) (130 г/га) вводили 20 стерильно Б5Омл суспензії бульбочкових бактерій штаму ВМО і поживні добавки (мелясу, кукурудзяний екстракт, глюкозу) добре перемішували. Приготовлене таким чином бактеріальне добриво витримували при кімнатній температурі (18-2022) 10 діб. Після термостатування перевіряли титр бактерій - в 1 г бактеріального препарату на твердому носії (перліт, вермікуліт) повинно бути не менше 1-1,5 млрд. клітин К. Іедитіпозагит ру. їйоїйї ВМО і проводили інокуляцію насіння. Для цього гектарну норму насіння зволожували (1-2 95 води від 25 маси насіння), рівномірно перемішували із бактеріальним препаратом, підсушували в тіні і висівали в грунт. -оFor the preparation of the drug on a solid carrier, 20 sterile B5Oml of a suspension of nodule bacteria of the WMO strain were injected into bags with perlite (vermiculite) (130 g/ha) and nutritional supplements (molasses, corn extract, glucose) were mixed well. The bacterial fertilizer prepared in this way was kept at room temperature (18-2022) for 10 days. After thermostating, the titer of bacteria was checked - in 1 g of bacterial preparation on a solid medium (perlite, vermiculite) there should be at least 1-1.5 billion cells of K. Ieditipozagyt ru. the WMO and seed inoculation was carried out. To do this, the hectare rate of seeds was moistened (1-2 95 of water per 25 of the weight of seeds), evenly mixed with a bacterial preparation, dried in the shade and sown in the soil. -at

Інший спосіб передбачає обробку насіння конюшини водною витяжкою із бактеріального препарату на твердому носії. Для цього 250г препарату розводили у воді і фільтрували через марлю (грубі частинки перліту таким чином відділяли від основної суспензії). Отриманою суспензією інокулювали гектарну норму насіння.Another method involves treating clover seeds with an aqueous extract from a bacterial preparation on a solid carrier. For this, 250 g of the drug was diluted in water and filtered through cheesecloth (coarse pearlite particles were thus separated from the main suspension). The obtained suspension was inoculated with a hectare rate of seeds.

Ефективність штаму К. Іедитіпозагит Бу. (гої ВМО випробовували на сортах конюшини Дарунок і Кумач у о 30 вегетаційних (на промитому річковому піску з додаванням мінерального середовища Гельрігеля із 0,2 нормами Ге) азоту ), а також у польових умовах на темно-сірому опідзоленому (рН 5,3-5,7) грунті із вмістом гумусу 1,6-2,095 (Черкаська обл., 2003-2005 рр.) і на сірому лісовому супіщаному (рН 5,9-6,0, вміст гумусу 1,2-1,595) в грунті (Київська обл.) 2004-2006 рр). У цих грунтах розповсюджені досить агресивні раси спонтанних форм -е бульбочкових бактерій конюшини. Посів конюшини проводили у другій декаді квітня з шириною міжрядь 45 см на 35 глибину загортання насіння 1,5-2,0см. Передпосівну обробку проводили за 1 годину до висіву насіння в грунт с бактеріальною суспензією або препаратом на твердому носії. Насіння висівали із розрахунку 15кг/га.Effectiveness of strain K. Ieditipozagyt Bu. (goi WMO were tested on the varieties of clover Darunok and Kumach in about 30 growing seasons (on washed river sand with the addition of Gelrigel mineral medium with 0.2 He standards) of nitrogen), as well as in field conditions on dark gray podzolized (pH 5.3- 5.7) in soil with a humus content of 1.6-2.095 (Cherkassk region, 2003-2005) and on gray forest sandy loam (pH 5.9-6.0, humus content of 1.2-1.595) in soil ( Kyiv region) 2004-2006). Quite aggressive races of spontaneous forms of nodular clover bacteria are widespread in these soils. Clover was sown in the second decade of April with a row width of 45 cm by 35 and a seed wrapping depth of 1.5-2.0 cm. Pre-sowing treatment was carried out 1 hour before sowing the seeds in the soil with a bacterial suspension or a preparation on a solid carrier. Seeds were sown at the rate of 15 kg/ha.

Азотфіксувальну активність кореневих бульбочок рослин конюшини першого та другого років вегетації визначали за відновленням ацетилену в етилен за методом Харді зі співавт. (1968) на газовому хроматографі « "Спготайодгарн-504" із полум'яно-іонізаційним детектором. Корені із бульбочками клали у герметично закриті З 70 скляні флакони ємністю 75см?, через гумову мембрану до них вводили 10 95 ацетилену від загального об'єму. с Тривалість інкубації із ацетиленом - 1 година. Розділення газів проводили на колонці (0,40х13Осм) із Рагарак :з» М при температурі 802С. Як газ носій використовували азот (50 мл в 1 хв.). Об'єм проби для аналізу - 0,5-1см 3,Nitrogen-fixing activity of root nodules of clover plants of the first and second years of vegetation was determined by the reduction of acetylene to ethylene according to the method of Hardy et al. (1968) on a gas chromatograph "Spgotayodgarn-504" with a flame-ionization detector. Roots with nodules were placed in hermetically closed Z 70 glass vials with a capacity of 75 cm?, and 10 95 acetylene from the total volume was injected into them through a rubber membrane. c Duration of incubation with acetylene - 1 hour. Separation of gases was carried out on a column (0.40x13Osm) made of Ragarak:z" M at a temperature of 802С. Nitrogen (50 ml in 1 min.) was used as a carrier gas. Sample volume for analysis - 0.5-1 cm 3,

Кількість етилену, що утворився із ацетилену під дією нітрогенази інкубованого зразка, виражали у молярних одиницях (наномолях (нмоль) або мікромолях (мкмоль) утвореного етилену на 1 рослину за 1 годину). 7 Визначення стабільності за плазмідними маркерами стійкості до антибіотиків штаму К. Іедитіпозагит бу. ігїоїї ВМО в умовах симбіозу (вегетаційний дослід) показало, що реіїзоляти із бульбочок З0-денних рослин -й конюшини першого року вегетації мають задовільний ріст на селективному середовищі із заданими -1 концентраціями канаміцину, тетрацикліну, стрептоміцину.The amount of ethylene formed from acetylene under the action of nitrogenase of the incubated sample was expressed in molar units (nanomoles (nmol) or micromoles (μmol) of ethylene formed per 1 plant in 1 hour). 7 Determination of stability by plasmid markers of resistance to antibiotics strain K. Ieditipozagyt bu. igioii WMO in conditions of symbiosis (vegetation experiment) showed that reisolates from nodules of 30-day-old plants - and clovers of the first year of vegetation have satisfactory growth on a selective medium with specified -1 concentrations of kanamycin, tetracycline, streptomycin.

Результати впливу штаму ВМО на урожай зеленої маси конюшини сорту Дарунок в умовах вегетаційного (ее) досліду подані в таблиці 1. Рослини, інокульовані запропонованим штамом, за сумою двох укосів надземної маси сл переважали виробничий штам на 17,9 905 (28,1 г/посудину). У результаті активної фіксації азоту, не лише підвищується урожай зеленої маси конюшини, а й покращується якість урожаю за рахунок збільшення вмісту в ньому азоту (табл. 1). 5 Результати ефективності застосування запропонованого штаму ВМО у якості штама-інокулянта конюшини у різних грунтово-кліматичних зонах наведені в таблицях 2-5. В умовах польового досліду (Черкаська обл.) с конюшина сорту Дарунок, інокульована штамом ВМО у перший рік вегетації перевищувала штам-стандарт за азотфіксувальною активністю у 1,4 рази (табл. 2), у другий рік вегетації - у 1,5 раз (табл. 3). Інокуляція насіння конюшини сорту Кумач штамом ВМО сприяла зростанню азотфіксувальної активності у 9,2 рази (табл. 4) во порівняно із спонтанною інокуляцією і у 1,4 - з обробкою штамом 348а.The results of the influence of the WMO strain on the yield of the green mass of clover of the Darunok variety in the conditions of the vegetation (ee) experiment are presented in Table 1. The plants inoculated with the proposed strain, by the sum of two slopes of the above-ground mass of sl, prevailed over the production strain by 17.9,905 (28.1 g/ vessel). As a result of active nitrogen fixation, not only the yield of green mass of clover increases, but also the quality of the crop improves due to the increase in its nitrogen content (Table 1). 5 The results of the effectiveness of the proposed WMO strain as an inoculant strain of clover in different soil and climatic zones are shown in Tables 2-5. Under the conditions of a field experiment (Cherkasy region), clover of the Darunok variety inoculated with the WMO strain in the first year of vegetation exceeded the standard strain in terms of nitrogen-fixing activity by 1.4 times (Table 2), in the second year of vegetation - by 1.5 times ( table 3). Inoculation of clover seeds of the Kumach variety with the WMO strain contributed to an increase in nitrogen-fixing activity by 9.2 times (Table 4) compared with spontaneous inoculation and by 1.4 times with treatment with the 348a strain.

Порівняно із виробничим штамом 348а, запропонований штам протягом всього періоду досліджень достовірно підвищував урожай зеленої маси конюшини сортів Кумач і Дарунок. Надбавка урожаю зеленої маси конюшини сорту Дарунок в перший рік вегетації при інокуляції новим штамом складала 31,7 ц/га (19,2 Об) - за відношенням до контролю і 28,8 ц/га (17,2) - за відношенням до штаму-стандарту З348а (табл. 2). У другий рік в5 вегетації ці величини становили відповідно 77,6 ц/га (26,0) і 51,9 ц/га (16,0 905) (табл. 3). Новий штам є високоефективним симбіопартнером і для конюшини сорту Кумач, що підтверджує приріст урожаю зеленої маси на 33,7 і 36,5 95 (59,9 і 62,1 ц/га) за відношенням до контролю і на 16,3 та 16,6 905 (33,3 і 33,1 ц/га) - за відношенням до рослин, інокульованих виробничим штамом 348а (табл. 4-5). Передпосівна обробка суспензією бульбочкових бактерій штаму ВМО сприяла більш ранньому (на 5 днів) проростанню насіння конюшини порівняно із рослинами обробленими виробничим штамом 348а К. Іедитіпозагит бу. ігітоїїї.Compared to the production strain 348a, the proposed strain reliably increased the yield of green mass of clover of Kumach and Darunok varieties during the entire period of research. The increase in the yield of green mass of clover of the Darunok variety in the first year of vegetation when inoculated with a new strain was 31.7 t/ha (19.2 Ob) - in relation to the control and 28.8 t/ha (17.2) - in relation to the strain - standard Z348a (Table 2). In the second year of the growing season, these values were 77.6 t/ha (26.0) and 51.9 t/ha (16.0 905), respectively (Table 3). The new strain is a highly effective symbiopartner for clover of the Kumach variety, which confirms an increase in the yield of green mass by 33.7 and 36.5 95 (59.9 and 62.1 c/ha) in relation to the control and by 16.3 and 16, 6,905 (33.3 and 33.1 c/ha) - in relation to plants inoculated with production strain 348a (Table 4-5). Pre-sowing treatment with a suspension of nodule bacteria of the VMO strain contributed to earlier (by 5 days) germination of clover seeds compared to plants treated with the production strain 348a K. Ieditipozagyt bu. igitoyii

Бактерії штаму 348а К. Іедитіпозагит бу. (гоїї. використовуються у виробничих умовах для виготовлення бактеріального добрива, оскільки мають хороші технологічні властивості. Результати, наведені в таблиці 6, свідчать про те, що запропонований штам ВМО К. Іедитіпозагит Бу. (гоїїї має високу технологічність і навіть перевищує штам-стандарт за основним технологічним параметром: інтенсивно розмножується на відповідних 7/о рідких середовищах і дає більш високий титр у препараті на твердому носії перліті (вермикуліті).Bacteria strain 348a K. Ieditipozagyt bu. (goyii) are used in production conditions for the production of bacterial fertilizer, as they have good technological properties. The results shown in Table 6 indicate that the proposed WMO strain K. Ieditiposagyt Bu. (goyii) has high manufacturability and even exceeds the standard strain of the main technological parameter: it reproduces intensively on the appropriate 7/o liquid media and gives a higher titer in the preparation on a solid carrier of perlite (vermiculite).

Таблиця 1.Table 1.

Ефективність інокуляцції і азотфіксувальна активність конюшини сорту Дарунок ("вегетаційний дослід, 2003 р.)Inoculation efficiency and nitrogen-fixing activity of Darunok variety clover ("vegetation experiment, 2003)

Штам-інокулянт Середній урожай зеленої Надбавка до |Азотфіксувальна активність, Вміст азоту у Вміст маси, г/посудину штаму 348а |мкмояь СоНа4 / (рослину.год) сухій надземній білка, 90 масі, 95 - - оStrain-inoculant Average yield of green Addition to |Nitrogen-fixing activity, Nitrogen content in Mass content, g/pot of strain 348a |μmoy SoNa4 / (plant.hour) dry above-ground protein, 90 mass, 95 - - o

Штам-стандарт К. 104,8-4,9 52,24) 157,0 1,95--0,31 2,50--0,052,32-0,05 15,62|14,50Standard strain K. 104.8-4.9 52.24) 157.0 1.95--0.31 2.50--0.052.32-0.05 15.62|14.50

Іедитіповагит бу. ігітоїйї 348а 0,6Ieditipovagyt was. igitoiyi 348a 0.6

Вихідний штам Кк. 114,4 |46,6- 161,0 4,0 2,6 2,225011 2,710-0,032,30-0,03 16,87 14,37The original strain Kk. 114.4 |46.6- 161.0 4.0 2.6 2.225011 2.710-0.032.30-0.03 16.87 14.37

Іедитіповагит бу. ігігоїїї 9,54 22 вІптОООММIeditipovagyt was. igigoiii 9.54 22 vIptOOOMM

Запропонований штам В. 126,30-- | БВ | 1851 28,1. (179 3,06-0,07 3,15--0,03| ,55-0,05 |19,68 15,81The proposed strain B. 126.30-- | BV | 1851 28.1. (179 3.06-0.07 3.15--0.03| .55-0.05 |19.68 15.81

Іедитіповагит Бу. ігітоїйї ВМУ | 3,02 0,7 вв 00111111 8535005 що 2Ieditipovagyt Bu. funds of the VMU | 3.02 0.7 vv 00111111 8535005 what 2

Таблиця 2.Table 2.

Урожай зеленої маси конюшини сорту Дарунок 1-го року вегетації, 2004 р. (Черкаська обл., польовий дослід).Harvest of the green mass of clover of the Darunok variety in the 1st year of vegetation, 2004 (Cherkasy region, field experiment).

Штам-інокулянт Урожай за повтореннями, | Середній Надбавка до Надбавка до Азотфіксувальна активність, нмоль т)Inoculant strain Harvest by repetitions, | Average Addition to Addition to Nitrogen-fixing activity, nmol t)

Зо ц/га урожай, ц/га контролю штаму-стандарту |СоНа / (рослину.-год) со ниттяFrom t/ha yield, t/ha of standard strain control |SoNa / (plant.-hour) so

Контроль (без 149,1 175,41162,6173,8 165,2-61 117,7-224 - інокуляції)Control (without 149.1 175.41162.6173.8 165.2-61 117.7-224 - inoculation)

Знювнкий штм Ге3о Що Що 7 ли ВИ ШИ І 348а сZnyunky shtm Ge3o What What 7 li YOU SHY I 348a p

Запропонований штам 197,4 205,4 |200,5)184,2) 196,9-4,5 ) 31,7 | 192 28,8 17,2 513,9-49,7 вм ово 1The proposed strain 197.4 205.4 |200.5)184.2) 196.9-4.5 ) 31.7 | 192 28.8 17.2 513.9-49.7 vm ovo 1

Таблиця 3. о) с Урожай зеленої маси конюшини сорту Дарунок 2-го т » року вегетації 2005 р. (Черкаська обл., польовий дослід). щі Штам-інокулянт Урожай за повтореннями, | Середній Надбавка до Надбавка до Азотфіксувальна активність, нмоль ц/га урожай, ц/га контролю штаму-стандарту | СоНа / (рослину-год) 1 ниття ке Контроль (без 213,2 273,6 338,0 1369,0) 298,5-34,7 54,6-6,3 інокуляції) - Виробничий штам 324,0 310,0/346,81316,0) 3242-81 304,8-36,1 -1 348аTable 3. o) c Harvest of the green mass of clover of the Darunok variety in the 2nd year of the growing season in 2005 (Cherkasy region, field experiment). schi Inoculant strain Harvest by repetitions, | Average Addition to Addition to Nitrogen-fixing activity, nmol c/ha yield, c/ha control strain-standard | SoNa / (plant-h) 1 year Control (without 213.2 273.6 338.0 1369.0) 298.5-34.7 54.6-6.3 inoculation) - Production strain 324.0 310, 0/346.81316.0) 3242-81 304.8-36.1 -1 348a

Запропонований штам 390,4 372,0 |366,01376,0) 376,1-5,2 77,6) 26,0 51,9 16,0 449,6-21,6 бо о вм ов слThe proposed strain 390.4 372.0 |366.01376.0) 376.1-5.2 77.6) 26.0 51.9 16.0 449.6-21.6 bo o vm ov sl

Таблиця 4.Table 4.

Урожай зеленої маси та азотфіксувальна активність конюшини сорту Кумач 1-го року вегетації 2006 р. (Київська обл., польовий дослід). с Штам-інокулянт Урожай за повтореннями, ц |Середній Надбавка до Надбавка до Азотфіксувальна активність, нмоль /га, 1 укіс урожай, ц/га контролю штаму-стандарту |СоНа4 / (рослину-год) пили ТЛ УЗ во Контроль (без 154,9 185,3 /194,91176,0) 177,8-8,5 89,1-9,3 інокуляції)Green mass yield and nitrogen-fixing activity of clover of the Kumach variety in the 1st growing year of 2006 (Kyiv region, field experiment). c Strain-inoculant Yield by repetitions, c |Average Addition to Addition to Nitrogen-fixing activity, nmol/ha, 1 harvest, c/ha of the standard strain control |CoNa4 / (plant-h) saw TL UZ in Control (without 154, 9 185.3 /194.91176.0) 177.8-8.5 89.1-9.3 inoculations)

Виробничий штам) 213,0 |210,0 | 192,2 1202,0) 2044-47 595,6-57,3 348аProduction strain) 213.0 |210.0 | 192.2 1202.0) 2044-47 595.6-57.3 348a

Запропонований 247,0 1239,0 237,4 227,0) 2377-41 59,9. 33,7 33,3 16,3 822,0-49,1 штам ВМО ве ГСТУ ПОН ПОЛО УНН НОЯ НОProposed 247.0 1239.0 237.4 227.0) 2377-41 59.9. 33.7 33.3 16.3 822.0-49.1 strain WMO in GSTU MON POLO UNN NOV NO

Таблиця 5.Table 5.

Урожай зеленої маси сорту Кумач 1-го року вегетації 2006 р. (Київська обл.)Harvest of green mass of the Kumach variety in the 1st year of vegetation, 2006 (Kyiv region)

Штам-інокулянт Урожай за повтореннями, ц/га, І! укіс | Середній урожай, ціга|Надбавка до контролю Надбавка до штаму-стандарту пили т ПОТ ПУInoculant strain Harvest by repetitions, c/ha, I! slope | Average yield, tiga

Контроль (без інокуляції) 180,0 155,0 170,0 175,0 170,0-54 п І ОАControl (without inoculation) 180.0 155.0 170.0 175.0 170.0-54 p I OA

Виробничий штем зва 1960022 01720 0 202000лявоно 0101Production strain zva 1960022 01720 0 202000lavono 0101

Запропонований штам ВМО 238,0 211,0 234,5 245,0 232,1-- А юовов11вя1Proposed WMO strain 238.0 211.0 234.5 245.0 232.1-- A yuovov11vya1

Таблиця 6.Table 6.

Збереження титру штамами 348а і ВМО Кпігобішт Іегдитіповатт Бу. 75 ігітоїїї у бактеріальному препараті залежно від часу зберігання (млрд.клітин/1 г препарату)Preservation of titer by strains 348a and WMO Kpigobisht Iegdytipovatt Bu. 75 bacteria in the bacterial preparation depending on the storage time (billion cells/1 g of the preparation)

Штами Тривалість зберігання (доба)Strains Duration of storage (days)

Титр бактерій у препараті на перлітіTiter of bacteria in the preparation on perlite

Кпігорішт Іедитіповагит бу. ігітоїї З4ва 1,8--0,01 9,1-0,2 49,0-1,0) 72,0-2,0 ) 86,0--1,0Kpigorisht Iedytipovagyt bu. 1.8--0.01 9.1-0.2 49.0-1.0) 72.0-2.0 ) 86.0--1.0

Транскон'югант ВМО 3,302 16,2--1,0152,5--1,51100,0-5,51122,5--7,5Transconjugant WMO 3.302 16.2--1.0152.5--1.51100.0-5.51122.5--7.5

Титр бактерій у препараті на вермикулітіTiter of bacteria in the preparation on vermiculite

Кпігорішт Іедитіповагит бу. ігітоїї З4ва 3,8-0,2 9,0-0,0 41,5-3,5 88,5-6,5 ) 90,0-5,0Kpigorisht Iedytipovagyt bu. igitoiy Z4va 3.8-0.2 9.0-0.0 41.5-3.5 88.5-6.5 ) 90.0-5.0

Транскон'югант ВМО 4,8-0,5 13,6--41,1161,0-41,01112,5-3,5/119,5-0,5 що 2Transconjugant WMO 4.8-0.5 13.6--41.1161.0-41.01112.5-3.5/119.5-0.5 that 2

Claims (1)

Формула винаходу Штам бактерій Кпіг2обішт Іедитіпозагит Бу. їгоїї для одержання бактеріального добрива під конюшину. ю Зо со Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2007, М 4, 15.04.2007. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і р. науки України. ч сThe formula of the invention Bacterial strain Kpig2obisht Ieditiposagyt Bu. it is used for the production of bacterial fertilizer for clover. Official Bulletin "Industrial Property". Book 1 "Inventions, useful models, topographies of integrated microcircuits", 2007, M 4, 15.04.2007. State Department of Intellectual Property of the Ministry of Education and Science of Ukraine. h p - . и? ко шо - (ее) сл 60 б5- and? ko sho - (ee) sl 60 b5
UAA200611046U 2006-10-19 2006-10-19 A strain of bacteria of rhizobium leguminosarum bv. trifolii UA21785U (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAA200611046U UA21785U (en) 2006-10-19 2006-10-19 A strain of bacteria of rhizobium leguminosarum bv. trifolii

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
UAA200611046U UA21785U (en) 2006-10-19 2006-10-19 A strain of bacteria of rhizobium leguminosarum bv. trifolii

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA21785U true UA21785U (en) 2007-04-10

Family

ID=38022448

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA200611046U UA21785U (en) 2006-10-19 2006-10-19 A strain of bacteria of rhizobium leguminosarum bv. trifolii

Country Status (1)

Country Link
UA (1) UA21785U (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108841761A (en) * 2018-07-20 2018-11-20 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 The method and its microbial inoculum used of promotion Growth of Red Clover and/or raising clover yield
CN108841762A (en) * 2018-07-20 2018-11-20 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 One plant of acidproof clover rhizobia and its application
PL424967A1 (en) * 2018-03-20 2019-09-23 Uniwersytet Marii Curie-Skłodowskiej Rhizobium leguminosarum bv. trifolii KC3 bacterial strain and its application for legumes fertilization in the process of biological reclamation of the heavy metals polluted soils

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL424967A1 (en) * 2018-03-20 2019-09-23 Uniwersytet Marii Curie-Skłodowskiej Rhizobium leguminosarum bv. trifolii KC3 bacterial strain and its application for legumes fertilization in the process of biological reclamation of the heavy metals polluted soils
CN108841761A (en) * 2018-07-20 2018-11-20 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 The method and its microbial inoculum used of promotion Growth of Red Clover and/or raising clover yield
CN108841762A (en) * 2018-07-20 2018-11-20 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 One plant of acidproof clover rhizobia and its application

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106987541B (en) Efficient alfalfa rhizobium with stress resistance and growth promotion performance and application thereof
CN109852565B (en) Saline-alkali soil composite modifier and application method thereof
Keneni et al. Characterization of acid and salt tolerant rhizobial strains isolated from faba bean fields of Wollo, Northern Ethiopia
CN109810924B (en) Method for improving severe saline-alkali soil
CN106164247A (en) Inoculation microbial inoculum for stress soil
Roughley et al. The number of Bradyrhizobium sp.(Lupinus) applied to seed and its effect on rhizosphere colonization, nodulation and yield of lupin
CN106754484A (en) One plant of rhizobium leguminosarum and its fermentation culture method and application
PT2324108E (en) Microorganism capable of solubilizing phosphate and iron and its applications
CN114262673B (en) Bacillus belgii and application thereof in preventing and treating crop diseases
CN104911127A (en) Rhizobium and microbial inoculum, preparation method and application thereof
CN108504595A (en) One plant of plant growth-promoting rhizobacteria rahnella aquatilis Gro and its application
CN113699068B (en) Burkholderia pyrrocinia strain and application thereof
CN109055274B (en) Caragana rhizobium and fermentation culture method and application thereof
CN104789494B (en) The method for improving turf salt-resistance using garbage compost microbial bacterial agent is strengthened
CN109182194A (en) One plant of Yang Ling rhizobium for promoting coronule flower growth and its cultural method and application
UA21785U (en) A strain of bacteria of rhizobium leguminosarum bv. trifolii
CN107099486B (en) Bacillus amyloliquefaciens GN03 and application thereof
CN111205998A (en) Bacillus amyloliquefaciens CGMCC No.17841 and application thereof
CN106591173A (en) Bacillus flexus HL-37 capable of activating soil heavy metal cadmium, and applications thereof
CN108841761A (en) The method and its microbial inoculum used of promotion Growth of Red Clover and/or raising clover yield
Roughley Legume inoculants; their technology and application
CN108570426B (en) Bacterial strain with phosphate solubilizing function, preparation method of microbial inoculum and microbial inoculum
KR100577717B1 (en) 07691049 Bacillus megaterium KR076KACC91049 promoting the growth of crops and the microbial agent containing the same
CN117431195B (en) Saline-alkali resistant growth-promoting bacterium, growth-promoting bacterium agent and application thereof
Nasrin et al. Isolation and characterization of rhizosphere bacteria and their effect on germination of rice seeds and growth of seedlings