UA145577U - Штам bacillus sp. imb b-7883 - продуцент позаклітинної протеїнази з фібриногенолітичною активністю - Google Patents
Штам bacillus sp. imb b-7883 - продуцент позаклітинної протеїнази з фібриногенолітичною активністю Download PDFInfo
- Publication number
- UA145577U UA145577U UAU202003924U UAU202003924U UA145577U UA 145577 U UA145577 U UA 145577U UA U202003924 U UAU202003924 U UA U202003924U UA U202003924 U UAU202003924 U UA U202003924U UA 145577 U UA145577 U UA 145577U
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- fibrinogenolytic
- activity
- producer
- strain
- imb
- Prior art date
Links
- 230000001471 fibrinogenolytic effect Effects 0.000 title claims abstract description 28
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 title claims abstract description 21
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 title claims abstract description 21
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 title claims abstract description 19
- 241000194110 Bacillus sp. (in: Bacteria) Species 0.000 title abstract 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 20
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 20
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 20
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 10
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 9
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 5
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 3
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000003998 snake venom Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N (R)-amygdalin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H](C#N)C=2C=CC=CC=2)O1 XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010053172 Fatal outcomes Diseases 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010090109 Fibrolase Proteins 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- -1 I-arabinose Chemical compound 0.000 description 1
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L Malonate Chemical compound [O-]C(=O)CC([O-])=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 1
- 235000011449 Rosa Nutrition 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 description 1
- 208000001435 Thromboembolism Diseases 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940089837 amygdalin Drugs 0.000 description 1
- YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N amygdalin Natural products OCC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC(C#N)c3ccccc3 YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000003366 colagenolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 1
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 1
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N eucalyptosin A Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(OC(C#N)C=2C=CC=CC=2)OC(CO)C(O)C1O YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 229940086319 nattokinase Drugs 0.000 description 1
- 108010073682 nattokinase Proteins 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 150000002826 nitrites Chemical class 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000002708 spider venom Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Штам Bacillus sp. - продуцент позаклітинної протеїнази з фібриногенолітичною активністю, що зареєстрований в Депозитарії Інституту мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України під номером IMB В-7883.
Description
Корисна модель належить до біотехнологічної промисловості, а саме до одержання нового штаму, продуцента фібриногенолітичної протеїнази.
Фібриноген - білок плазми крові, попередник фібрину, волокна якого складають основу тромбу. Надмірне тромбоутворення призводить до розвитку тромбоемболічних захворювань з можливим летальним наслідком. Видалення тромбів з судин можливо хірургічно або ферментативно. Фібриногенолітичні протеїнази виявлено у численних біологічних рідинах, серед яких отрута змій та павуків, а також культуральні рідини мікроорганізмів. Зокрема, ензими, які каталізують гідроліз фібриногену, здатні продукувати бігеріососсив руодепев,
Аеготопах Нуагорніїа, Мірпо мипітісив, беїтайа, Васійи5 пайцо, В. атуоїїдиегасепв, Асііпотусеїе5 в5р., ЕРивзагпйшт охуврогит, Мисог о5р. (1). Утворення фібриногенолітичних ензимів мікроорганізмами не пов'язане із їхніми патогенними властивостями, а дія таких ензимів на фібриноген обумовлена насамперед особливостями первинної й вторинної структури ділянок фібриногену як субстрату ензиматичної реакції, які комплементарні активному центру ензиму.
Унікальна специфічність фібриногенолітичних ензимів дозволяє отримувати з їх допомогою нефізіологічні фрагменти молекули фібриногену, які за своїми властивостями відрізняються від фізіологічних продуктів плазмінового гідролізу. Вивчаючи функціонування окремих фрагментів молекули можна зробити висновок щодо значення окремих її ділянок у протеїн-протеїнових та протеїн-клітинних взаємодіях |2, ЗІ.
Протеолітичні ферменти, які мають фібриногенолітичну активність, можуть розглядатися як основа для створення лікарських засобів, спрямованих на зменшення загрози внутрішньосудинного тромбоутворення шляхом обмеженого протеолізу фібриногену, що циркулює у кровотоці пацієнта. У разі адресної доставки фібриногенолітичні ензими можуть бути застосовані для розщеплення внутрішньосудинних тромбів, що перешкоджають кровопостачанню органів за таких патологій як інфаркт міокарда, ішемічний інсульт, тромбоемболія легеневої артерії, тощо (1-41.
Протеази, що характеризуються фібриногенолітичною активністю, входять до складу препаратів, які запобігають згортанню крові та знижують артеріальний тиск |4, 5). Для цього застосовуються протеїнази тваринного, рослинного і мікробного походження з фібриногенолітичною активністю ІбЇ. Перевагу надають ферментним препаратам, які мають
Зо високу фібриногенолітичну активність (7|Ї, зокрема фібролаза, що отримується з отрути змії
Адкізітодоп сопіопгіх сопіопігіх (8) або наттокіназа з ВасПи5 5!,ибійів (91.
Найрозповсюдженішими продуцентами фібриногенолітичних пептидаз є бактерії роду
Васій 5, які виділені із грунту, прісної й морської води, а також із рослин. Більшість з цих ензимів є лужними сериновими пептидазами з найвищою активністю за рН 8,0-10,0 і температурою 30- 60 "С (10). Зацікавленість в дослідженні пептидаз з фібриногенолітичною активністю пов'язана також з їх участю в розвитку різноманітних захворювань запального генезу.
Найбільш близьким до корисної моделі за технічною суттю та результатом, що досягається, є пептидаза 2 Васійи5 ІПигіпдіепвіз ІМВ В-7324 (11), при глибинному культивуванні якого за певних умов можна отримати ензимний препарат з активністю 4,17 од/мг білка. Очищений ензимний препарат, отриманий з даного продуцента, проявляє фібриногенолітичну активність 54 од/мг білка, тоді як ферментний препарат, отриманий 90 95 осадженням сульфатом амонію з
Васійи5 зр. ІМВ В-7883, проявляє фібриногенолітичну активність 630 од/мг білка. В Україні на цей час високоактивні продуценти протеїназ з фібриногенолітичною активністю відсутні.
Запропонований штам Васійй5 5р. ІМВ В-7883 - продуцент позаклітинної протеїнази з фібриногенолітичною активністю 630 од/мг білка, ізольований з грунту, який відібрано у
Київській області. Знаходиться в депозитарії Інституту мікробіології і вірусології ім. Д.К.
Заболотного НАН України.
Культурально-морфологічні та фізіолого-біохімічні особливості.
Штам Васіїив 5р. ІМВ В-7883 добре росте на природних (картопляний агар, м'ясо-пептонний агар, м'ясо-пептонний бульйон) середовищах та на поживному агарі Миїлепі адаг, Нітевдіа.
Через 24 години росту на картопляному агарі (КА) або м'ясо-пептонному агарі (МПА) утворює непрозорі колонії сіро-білого кольору з хвилястим краєм матовою злегка зморшкуватою поверхнею діаметром 4-5 мм. За культивування на м'ясо-пептонному бульйоні (МПБ) культура росте у вигляді сіро-білої плівки на поверхні середовища. В мазках з колоній, що виросли на
МПА, через 18 год. можна побачити прямі поодинокі паличковидні клітини розміром 0,95-2,84 мкм. Клітини зафарбовуються за Грамом позитивно.
Спори в клітині розташовані центрально, спори не змінюють морфологію клітин. Утворення спор розпочинається на 18-24 год. культивування.
Використовує глюкозу в аеробних умовах без утворення газу, дає позитивну реакцію Фогес- бо Проскауеєра.
Асиміляція вуглеводів: штам не асимілює О-маніт, інозит, О-сорбіт, І -рамнозу, Ю-сахарозу,
О-мелібіозу, амігдалін, І -арабінозу, лактозу, трегалозу, ксилозу, малонат, галактозу, целобіозу.
Як джерело вуглецю культура використовує пептон, глюкозу, мальтозу, дріжджовий автолізат.
Штам росте на МПБ при концентрації хлориду натрію 7 95, не здатний рости при температурі 2 "С, не утворює сірководню, не утворює індол, редукує нітрати до нітритів, гідролізує желатин, ескулін.
Фізіолого-біохімічні властивості
Відношення до вуглецевого живлення: культура Васійи5 вр. ІМВ 8В-7883 синтезує позаклітинну фібриногенолітичну пептидазу на середовищах, що містять мальтозу, глюкозу та дріжджовий екстракт.
Відношення до азотного живлення: із органічних джерел азоту асимілює желатин, дріжджовий екстракт та дріжджовий автолізат, а з неорганічних (МНа)25505. Найбільшу фібриногенолітичну активність забезпечує поєднання желатини, дріжджового автолізату та (МНА2»6505, як джерел азоту в середовищі.
Відношення до кислотності поживного середовища: культура росте в діапазоні рН від 5,0 до 8,0. Оптимальне вихідне значення рН середовища для синтезу ферменту становить 6,0.
Штам Васійн5 5р. ІМВ В-7883 зберігається на косяках КА або МПА при температурі ж4 "С.
Пересів культури необхідно здійснювати кожні Є місяців.
Штам Васійшз 5р. ІМВ В-7883 було ізольовано із грунту, який відібрано у Київській області у 2019 р. Ідентифікація штаму проведена за визначником Вегадєу5 Мапиаі! ої Бузієетаїйс
ВасіепіоІоду, Мої. 3: 121.
Згідно з отриманими у гострих дослідах результатами та відповідними нормативними матеріалами, штам Васійй5 5р. ІМВ В-7883 належить до авірулентних мікроорганізмів, не здатних до інвазії у внутрішні органи досліджених теплокровних тварин - безпородних білих мишей. Середньолетальні та дієві дози не досягнуті (І До регов » 67109, | Дво вч » 67109, млн. клітин/"мишу). Штам належить до непатогенних мікроорганізмів ІМ класу небезпеки: мало небезпечних, практично без алергенної та загально токсичної дії (13-18). Мікроорганізми цього класу небезпеки дозволені МОЗ України до використання у виробництві (1 3.
Відношення до кисню: облігатний аероб.
Зо Відношення до температури: мезофіл, оптимальна температура для росту та біосинтезу ензиму з фібриногенолітичною активністю 25-28 "С.
Відношення до кислотності поживного середовища: культура росте в діапазоні рН від 5,0 до 8,0. Оптимальне вихідне значення рН середовища для синтезу ферменту становить 6,0, а в процесі росту та ферментації спостерігається зростання рнН до 8,0.
Поживним середовищем для ферментації є середовище наступного складу, (г/л): КНгРО4- 1,0; Мо5Охх7Н2гО-0,75;. 7п5Огх7Н2гО-0,25;. (МНа)2504-0,5; мальтоза - 1,0; желатина - 10,0; дріжджовий автолізат - 0,15; рН 7,0.
Вирощування бактеріальної культури проводять в глибинних умовах у пробірках або колбах
Ерленмейєра (750 мл) на качалці, що робить 244 об/хв. (рівень аерації 16,76 мг Ог/лхгод.) при 28 "С впродовж 72 год. Засів поживного середовища здійснюють 5 95 однодобовим інокулюмом.
Після культивування клітини відділяють центрифугуванням (5000 9, 20 хв.), ензиматичну активність визначають у супернатанті культуральної рідини. Фібриногенолітична активність у супернатанті культуральної рідині штаму-продуцента Васійй5 в5р. ІМВ В-7883 за цих умов складає 7,0 од/мл.
Для визначення активності ензиму як субстрат використовують фібриноген. При вивченні фібриногенолітичної активності в дослідну пробірку додають 1 мг фібриногену, 1,8 мл 0,01 М
Трис-НСІ-буфера (рН 7,5) і 0,2 мл розчину досліджуваного препарату. Реакційну суміш інкубують впродовж 30 хв. при температурі 37 "С. Реакцію зупиняють додаванням 2 мл 10 95-го розчину три хлороцтової кислоти (ТХО). В контрольну пробу ТХО додають відразу ж. Зразки витримують при кімнатній температурі 20 хв., а потім центрифугують 10 хв. при 10000 д для видалення осадженого білка. Оптичну густину вимірюють на спектрофотометрі СФ-26 за поглинанням при 275 нм. За одиницю фібриногенолітичної активності приймали таку кількість ензиму, яка підвищує оптичну густину реакційної суміші на 0,01 за 1 хв. (191.
Перевагою запропонованого продуцента є його здатність синтезувати високоактивну та термостабільну фібриногенолітичну пептидазу, відсутність сезонності та токсичності, що є технологічно ефективно. Ензимний препарат, одержаний з культуральної рідини Васіїи5 5р. ІМВ
В-7883 здатний ефективно деградувати фібриноген при значеннях рН середовища (5,0-9,0) з помітним піком активності при рН 8,0. Фермент стабільний при зазначених значеннях рн.
Використання сульфату амонію в середовищі культивування дозволяє збільшити активність бо позаклітинної фібриногенолітичної активності майже у 100 разів. Препарат протеїнази з фібриногенолітичною активністю, що продукується культурою, активний у широкому діапазоні рН (від 5,0 до 9,0) та температури (4-80 "С), з максимумом активності при рН 8,0 та 50 "С.
Ферментний препарат відзначається високою термостабільністю (термостабільність препарату при 25 "С повністю зберігається впродовж доби; при 50 7-5 год.). Із глибинної культури запропонованого продуцента може бути одержаний фермент, придатний для застосування в медико-технологічних процесах.
Запропонований фермент може знайти використання у медико-технологічних процесах.
Таким чином, виділено новий штам-продуцент фібриногенолітичної пептидази, який, у порівнянні з відомими, має інші культуральні ознаки і є новою культурою зі стійкими біохімічними властивостями.
Джерела інформації: 1. Варбанець Л.Д., Мацелюх Е.В. Пептидазьі микроорганизмов и методь их исследования. -
К.: Наукова думка, 2014. - 161 с. 2. СіпепКо Т.М., КаривзійапепкКо І.С, МаїзепКо Т.А. вї а). Ріазтіподеп Ігадтепів К 1-3 апа К 5
Біпа ю айегепі 5іїтевіп Пбгіп тадтепі 00. ОКу. Віосне т У. - 2016. - 88. - З32-8.
З. боїкип О.М., І йміпом В.І., Мекіїсп М.І., М/еїізеї УМ. Іпіегасіп5 Медіаїед Бу Ше М-Тептіпиво ї
Еібгіподеп'з В ВД СНаїйп. Віоспетівігу. - 2006. - 45. - 14843-52. 4. Маївиї Т., Еціїтига У., Папі К. Зпаке мепот ргоїєазев анесіїпд Нетозіавзів апа Шготбровів // Віоспіт Віорпуз Асіа. - 2000. - 1477. - 1-2. - 146-56. 5. ЗНуп-Ногтту бС., Меп-Знап С. СПагасієггайоп ої їмо таіог Татійєев ої Пргіподепоїуїїс ргоїєазез їот Ше мепот ої Таїмап паби м/йй з5ресіа! гетегепсе (о ІПеїг тедісаї! арріїсайопв // Тохіп
Веміємув. - 2005. - 24. - 1. - 43-61. 6. Стаік С.5., Раде М.)., Мадізоп Е.І... Ргоїєазез аз Шегарешісзв // Віоснет .). - 2011. - 435. - 1. - 1-16. 7. Мем/ Тнегарешіс Адепів іп Гпготбровзіз апа ГТипготбоїувів / Ед. У.Е. Егевдтанп, 9. І озсаї1?2о, 2009, "Іптопта пеайнсаге", МУ Гопаоп, 690 р. 8. Аптей М.К., Садаів В.В., Теппапі К.О., І ас У.Р. Віоіодіса! апа (пготброїуїїс ргорепієв ої
Тіргоїазе-а пему Пргіпоїуїіс ргоївазе тот 5паКе мепот // Наєтозвіавів. - 1990. - 20. - 6. - 3344-40. 9. Хіао Р., Мао 5., Вігмап-ши-тейтап, Капа В., Мапд У. А ПТргіпоїуїйс епгуте ргодисед ру
Коо) Васійив вибійїйв ивіпд СпісКреа (Сісег агієїїпит І.) а5 вирвігаїе // Адмапсе доштпаї ої Роса Зсіепсе апа Тесппоіоду. - 2014. - 6. - 12. - 1294-1300. 10. Ландау Н.С., Кураков А.В., Туликова О.М., Батомункуева Б.П., Струкова С.М., Егоров
Н.С. Зкстрацеллюларнье протеиназьь микромицетов с о фибринолитическими (и антикоагулянтньіми свойствами // Микробиология. - 1998. - 67. - 2. - 215-220. 11. Нідялкова Н.А., Мацелюх О.В., Варбанець Л.Д. Оптимізація середовища для синтезу фібринолітичної пептидази Васійив ІПигіпдіепвів ІМВ В-7324 // Біотехнологія. - 2012. - Т.5, Мо 4. -
С. 74-81. 12. Вегдеу5 Мапиаї ої Зузіетаїййс Васіегіоіоду, Мої. З: Те Рігтісшіев5, Мов, Р., СЧаптйу, а.,
УдЧопев, 0., Кпед, М.В., І пам/а, М/., Ваїпеу, Р.А., 5спієїйег, К.-Н., апа МУнійтап, МУ.В., Едв»., Мем/
Мої: 5ргіпдег, 2009. 13. Медико-біологічні дослідження виробничих штамів мікроорганізмів і токсико-гігієнічна оцінка мікробних препаратів, визначення їх безпеки та обгрунтування гігієнічних нормативів і регламентів. Методичні вказівки МОЗ України. - К., 2004. 14. Методическиеє рекомендации по вьіделению и идентификации бактерий группь! Васіи5 5МИБій5-тезепіеїтіси5 из организма человека и животньіх. - К.: Наукова думка, 1980. 15. Методические указания по гигиенической оценке микробньїх средств защить! растений от насекомьїх и болезней на основе неспорообразующих микроорганизмов. - К., 1982. 16. Методические указания по зкспериментальному обоснованию ПДК микроорганизмов- продуцентов и содержащих их готовьіх форм препаратов в обьектах производственной и окружающей средь!. - М., 1991. 17. Постановка исследований для обоснования предельно-допустимьїх концентраций производственньїх штаммов микроорганизмов и на их основе готовьіх форм препаратов в воздухе рабочей зоньі. Методическиеє указания. - М., 1983. 18. Смирнов В.В., Резник С.Р., Василевская И.А. Спорообразующие азробнье бактерии - продуценть!ї биологически активньх веществ. - К.: Наукова думка, 1982. 19. Осмоловский А.А. Попова Е.А., Крейер В.Г., Баранова Н.А. Егоров Н.С.
Фибринолитическая и коллагенолитическая активность внеклеточньїх протеиназ штаммов микромицетов Азрегайи5 оспгасеив 1-1 и Аврегдійиє ивіи5 1 // Вестн. Моск. Ун-та. Сер. 16.
Биология, 2016. - 1. - 71-75. (516)
Claims (1)
- ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Штам Васійив р. - продуцент позаклітинної протеїнази з фібриногенолітичною активністю, що зареєстрований в Депозитарії Інституту мікробіології і вірусології ім.Д.К.Заболотного НАН України під номером ІМВ В-7883.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
UAU202003924U UA145577U (uk) | 2020-06-30 | 2020-06-30 | Штам bacillus sp. imb b-7883 - продуцент позаклітинної протеїнази з фібриногенолітичною активністю |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
UAU202003924U UA145577U (uk) | 2020-06-30 | 2020-06-30 | Штам bacillus sp. imb b-7883 - продуцент позаклітинної протеїнази з фібриногенолітичною активністю |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
UA145577U true UA145577U (uk) | 2020-12-28 |
Family
ID=74105385
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
UAU202003924U UA145577U (uk) | 2020-06-30 | 2020-06-30 | Штам bacillus sp. imb b-7883 - продуцент позаклітинної протеїнази з фібриногенолітичною активністю |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
UA (1) | UA145577U (uk) |
-
2020
- 2020-06-30 UA UAU202003924U patent/UA145577U/uk unknown
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Pant et al. | Production, optimization and partial purification of protease from Bacillus subtilis | |
Wang et al. | Screening of a high fibrinolytic enzyme producing strain and characterization of the fibrinolytic enzyme produced from Bacillus subtilis LD-8547 | |
Sukkhum et al. | A novel poly (L-lactide) degrading actinomycetes isolated from Thai forest soil, phylogenic relationship and the enzyme characterization | |
Chitte et al. | Production, purification, and biochemical characterization of a fibrinolytic enzyme from thermophilic Streptomyces sp. MCMB-379 | |
Tang et al. | Screening and isolation of an organic solvent-tolerant bacterium for high-yield production of organic solvent-stable protease | |
Odu et al. | Protease production capabilities of Micrococcus luteus and Bacillus species isolated from abattoir environment | |
AU689851B2 (en) | Ancient organisms | |
Obeid et al. | Isolation and characterization of bacillus subtillus with potential production of nattokinase | |
Eldeen et al. | Optimization of culture conditions to enhance nattokinase production using RSM | |
UA145577U (uk) | Штам bacillus sp. imb b-7883 - продуцент позаклітинної протеїнази з фібриногенолітичною активністю | |
Anil et al. | Production, characterization & optimization of potent protease (serratiopeptidase) from Serratia marcescens e 15 | |
RU2664468C2 (ru) | Способ получения протеиназ с фибринолитической и фибриногенолитической активностями | |
CN108676738A (zh) | 一株产碱性蛋白酶嗜盐菌及其应用 | |
Gad et al. | Studies on a fibrinolytic enzyme from Bacillus species | |
RU2310685C1 (ru) | Штамм бактерий serratia marcescens, продуцирующий липолитические ферменты, для получения препарата для очистки сточных вод от жиров | |
RU2193063C2 (ru) | Бактериолитический комплекс, способ его получения и штамм для осуществления способа | |
WO2009002209A1 (en) | Substance for dermatological medicinal agents based on microbiotic collagenase 'ultra-lisin' | |
Mohamed et al. | Screening of bacterial isolates for protease production with special reference to molecular identification of highly producer strains | |
Margino et al. | Purification and Characterization of Protease from Bacillus sp. TBRSN-1 | |
Al Hasan | Isolation and identification of extracellular keratinase producing bacteria from soil | |
Otroshi et al. | Study on Activity and Stability of Proteases from Bacillus sp. Produced by Submerged fermentation | |
CN114507615A (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌及其生产纤溶酶的应用 | |
RU2684220C1 (ru) | Штамм clostridium histolyticum - продуцент коллагеназы | |
RU2266323C2 (ru) | Штамм бактерий sphingobacterium mizutae-32 - продуцент эндонуклеазы рестрикции spmi, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-ат'cgat-3' | |
Ryazanova et al. | Effect of the proteolytic enzymes of Bacillus licheniformis and the lysoamidase of Lysobacter sp. XL1 on Proteus vulgaris and Proteus mirabilis cells |