UA127738C2

UA127738C2 - Проліки дантролену і способи їх застосування

Info

Publication number: UA127738C2
Application number: UAA202002979A
Authority: UA
Inventors: Чарльз Уескотт; Едріан Гепнер; Эдриан Гепнер; Алісса Ларсон; Алисса Ларсон
Original assignee: Іґл Рісерч Лебс Лімітед; Игл Рисерч Лебс Лимитед
Priority date: 2017-10-20
Filing date: 2018-10-19
Publication date: 2023-12-20
Also published as: RU2020116367A; JP2023061949A; CN111344286A; MA50403A; MX2023010501A; JP7252963B2; SG11202003452XA; IL274045A; EP3697779A1; CO2020006193A2; AU2018351494B2; AU2018351494A1; US11352347B2; IL274045B2; US20220324850A1; RU2020116367A3; WO2019079721A1; ZA202002779B; IL274045B1; BR112020007858A2

Abstract

Винахід стосується проліків дантролену, їх композицій і способів їх застосування для лікування захворювання.

Description

Проліки з плином часу ! Ж ВО0ЮЮЮ генннннярнт тн нт тт в о

ЕЕ 00 50 102 158 204 ВО

Час (години) "ее Лужна фосфатаза у РВ5 чееРВУ

Фіг. 1

ПЕРЕХРЕСНЕ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНІ ЗАЯВКИ

Даною заявкою запитується пріоритет за попередньою заявкою США Мо 62/575124, поданою 20 жовтня 2017 року, і попередньою заявкою США Мо 62/674422, поданою 21 травня 2018 року, зміст якої включений в даний опис як посилання.

ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ

РІВЕНЬ ТЕХНІКИ

Проліки, як правило, є альтернативними формами активних лікарських засобів, зворотно модифікованими або дериватизованими хімічною групою, яка робить проліки неактивними або забезпечує розчинність, стабільність або біодоступність, або змінює деяку іншу властивість активної лікарської речовини. Як правило, хімічна група проліків відщеплюється від проліків під дією нагрівання, кавітації, тиску, зміни рН, відновлення-окиснення, і/або ферментативної активності, яка діє на проліки, тим самим вивільняючи активний лікарський засіб. Відщеплення хімічної групи проліків може відбуватися до доставки лікарського засобу індивідууму, але, як правило, воно відбувається іп мімо за допомогою ферментативних процесів у індивідуума.

Дантролен (1-Ц5-(4-нітрофеніл)-2-фурил|метиліденаміно)імідазолідин-2,4-діон), має структуру формули (1): о

Оу г о хх м МН хи Єт о

Дантролен є переважним для вибору засобом порятунку при лікуванні злоякісної гіпертермії («МН»), і він широко доступний в більшості регіонів, в які постачаються анестетики. Уперше синтезований в 1967 році, дантролен спочатку використовували для лікування м'язових спазмів 1975 року, і пізніше в 1979 році він отримав схвалення ЕОА для лікування МН. Дантролен визнаний як потужний м'язовий релаксант і як засіб для лікування нервової спастичності. З його первинного відкриття дантролен був досліджений для профілактики і лікування інших станів, які загрожують життю, таких як передозування рекреаційних наркотиків, таких як «екстазі» (М- метил-3,4-метилендіоксифенілізопропіламін), тепловий удар, злоякісний нейролептичний

Зо синдром і ішемічне пошкодження периферичної нервової системи, і він може бути важливим для профілактики синдрому раптової дитячої смерті (5ІО5).

Дантролен дуже слабко розчинний у воді. Слабка розчинність дантролену значно впливає на його введення. Наприклад, ОАМТВІОМ'М являє собою дантролен натрій, що надається в 20- мг флаконах, який повинен бути розбавлений 60 мл стерильної води перед внутрішньовенним введенням. Рекомендована доза дантролену для лікування МН становить від 1 мг/кг до приблизно 10 мг/кг. По суті, індивідууму масою 80 кг може бути потрібна швидка інфузія аж до 2400 мл для лікування МН.

На доповнення до його слабкої розчинності, розчини дантролену мають високе значення рН. рН РАМТАЇШМ"М становить приблизно 9,5. ЕХМАМООЕХФ), вдосконалений склад дантролену натрію, який можна розбавляти до 50 мг/мл, значно поліпшує швидкість, з якою можна вводити дантролен натрій. Однак розбавлений ЕХАМООЕХО також має високе значення рН - приблизно 10,3. Внаслідок їх високих значень рН сучасні склади дантролену не можна вводити підшкірно або внутрішньом'язово - тільки внутрішньовенно. Дійсно, необхідно попереджати екстравазацію в навколишні тканини для уникнення некрозу тканин.

Хоча проліки дантролену можуть бути корисними для вирішення проблем із розчинністю лікарського засобу і рН, ідентифікація придатної пролікарської частини ускладнена кількома факторами, властивими молекулі дантролену. Наприклад, передбачається, що низька розчинність дантролену пов'язана з його широкою ароматичною системою, яка може залучатися до гідрофобної пі-стекинг поведінки. Навіть заряджена нітрочастина дантролену не може підвищити розчинність сполуки у воді.

Дантролен включає гідантоїнову частину, яка присутня в інших фармацевтичних сполуках, наприклад, таких як фенітоїн. Однак, в той час як описані стратегії для підвищення розчинності у воді проліків у вигляді інших гідантоїн-вмісних сполук, незрозуміло, чи можна схожі стратегії успішно використовувати для дантролену, враховуючи його унікальну хімічну структуру і фізичні властивості.

Існує потреба в нових складах дантролену, які мають придатну концентрацію і рн, які роблять їх придатними для внутрішньом'язового або підшкірного застосування, а також перорального, трансмукозального (наприклад, інтраназального) і внутрішньокісткового введення.

СУТЬ ВИНАХОДУ

Винахід стосується сполук формули о ол о М сутв

Х / ше о І, де К являє собою -Р(ІФ)ХОН)» або -Р(ІОХОН)ОН»); Ві являє собою Н, -Сі-гвалкіл, арил, Сч- валкС(0)О-Сі-валкіл, -«СлталкоС(О)С:-гвалкіл або СталкосС(О)Осі: гвалкіл; і В» являє собою -С..- гвалкіл, арил, Сі-валкС(0)О-Сі-гвалкіл, -СхалкоС(О)С:і-валкіл або СіалкоС(О)Осі:-валкіл, а також їх фармацевтично прийнятних солей. Також описані фармацевтичні композиції, які містять сполуку формули І, а також способи їх застосування.

Також винахід стосується сполук формули ЇЇ о ол о х сут, хи р " о І. де Ез являє собою Н, -С(0)-2-М(Ва)(В5), -«С(0)2-С(0)-ОН або -С(0)-МН-У-СН2г-ОС(0)-2-6(0)-

ОН; 7 являє собою С:-валк; У являє собою арилен; Сі-валкіл; Н5 являє собою Н або С.-валкіл; або В; і В5, разом з атомом азоту, до якого вони приєднані, утворюють гетероциклоалкіл; а також їх фармацевтично прийнятних солей. Також описані фармацевтичні композиції, які містять сполуку формули ЇЇ, а також способи їх застосування.

КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ

На фіг. 1 представлена площа піку з плином часу для конвертування проліків за винаходом у дантролен лужною фосфатазою при 2576.

На фіг. 2 представлена площа піку з плином часу для конвертування проліків за винаходом (2а) у дантролен лужною фосфатазою при 25760.

Зо На фіг. З представлена площа піку з плином часу для конвертування проліків за винаходом у дантролен у плазмі щура при 2276.

На фіг. 4 представлена площа піку з плином часу для конвертування проліків за винаходом у дантролен у плазмі щура при 37"С.

На фіг. 5 представлене конвертування сполуки 2а у дантролен в плазмі щура. Плазму щура інкубували з 100 мкг/мл сполуки 2а при 37"С. Площа під піками проліків і дантролену на хроматограмах, отриманих при 385 нм, нанесена на графік проти часу реакції. Кола відповідають пролікам. Трикутники відповідають дантролену.

На фіг. 6 представлена середня концентрація дантролену в плазмі щура від тварин, яким дозували 7,5 мг/кг проліків 2а (п-5255ЕМ (стандартна помилка середнього значення)). Кількісне визначення з поглинання при 385 нм.

На фіг. 7 представлена середня концентрація дантролену в цільній крові щура від тварин, яким вводили 7,5 мг/кг проліків 2а (п--3). Кількісне визначення з поглинання при 385 нм.

На фіг. 8 представлена середня концентрація дантролену в плазмі щура від тварин, яким дозували 7,5 мг/кг проліків 2а (п-5 - 5ЕМ). Кількісне визначення з поглинання при 385 нм.

На фіг. 9 представлена середня концентрація дантролену в цільній крові щура від тварин, яким дозували 7,5 мг/кг проліків 2а (п-:5 - 5ЕМ). Кількісне визначення з поглинання при 385 нм.

На фіг. 10 представлене конвертування сполуки 265 у дантролен у плазмі щура. Плазму щура інкубували зі 100 мкг/мл сполуки 25 при 37"С. Площа під піками проліків і дантролену на хроматограмах, отриманих при 385 нм, нанесена на графік проти часу реакції. Кола відповідають пролікам. Трикутники відповідають дантролену.

На фіг. 11 представлена середня концентрація дантролену в плазмі щура від тварин, яким дозували 10,6 мг/кг 26 (п-5245ЄЕМ). Кількісне визначення з поглинання при 385 нм.

На фіг. 12 представлене конвертування 10с у дантролен в плазмі щура. Плазму щура інкубували зі 100 мкг/мл сполуки 10с при 37"С. Площа під піками проліків і дантролену на хроматограмах, отриманих при 385 нм, нанесена на графік проти часу реакції. Кола відповідають пролікам. Трикутники відповідають дантролену.

На фіг. 13 представлене конвертування 12а у дантролен у плазмі щура. Плазму щура інкубували з 100 мкг/мл 12а при 37"С. Площа під піками проліків і дантролену на хроматограмах, отриманих при 385 нм, нанесена на графік проти часу реакції. Кола відповідають пролікам. Трикутники відповідають дантролену.

На фіг. 14 представлена середня концентрація дантролену у цільній крові від тварин, яким дозували 4 мг/кг проліків 12а (п-3 - 5ЕМ). Кількісне визначення з поглинання при 385 нм.

На фіг. 15 представлена версія конвертування 176 у дантролен в плазмі щура. Плазму щура інкубували зі 100 мкг/мл 175 при 37"С. Площа під піками проліків і дантролену на хроматограмах, отриманих при 385 нм, нанесена на графік проти часу реакції. Кола відповідають пролікам. Трикутники відповідають дантролену.

На фіг. 16 представлене конвертування 22с у дантролен в плазмі щура. Плазму щура інкубували зі 100 мкг/мл 22с при 37"С. Площа під піками проліків і дантролену на хроматограмах, отриманих при 385 нм, нанесена на графік проти часу реакції. Кола відповідають пролікам. Трикутники відповідають дантролену.

На фіг. 17 представлена середня концентрація дантролену в цільній крові від тварин, яким дозували 4 мг/кг проліків 22с (п-З3 хх БЕМ). Кількісне визначення з поглинання при 385 нм.

ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ІЛЮСТРАТИВНИХ ВАРІАНТІВ ЗДІЙСНЕННЯ

Даний винахід може стати більш зрозумілим за допомогою наведеного нижче детального опису спільно з прикладеними кресленнями і прикладами, які формують частину даного винаходу. Потрібно розуміти, що даний винахід не обмежується конкретними композиціями, пристроями, способами, застосуваннями, умовами або параметрами, описаними і/або

Зо представленими в даному описі, ії що термінологія, яка використовується в даному описі, призначена для опису конкретних варіантів здійснення тільки за допомогою прикладу і не призначена для обмеження заявленого винаходу.

Як використовують в описі, зокрема в прикладеній формулі винаходу, форма однини включає форму множини, і вказівка на конкретну числову величину включає щонайменше цю конкретну величину, якщо контекст явно не вказує на інше.

Коли наведений діапазон величин, ілюстративний варіант здійснення включає діапазон від однієї конкретної величини і/або до іншої конкретної величини. Всі діапазоні є інклюзивними і комбінованими. Крім того, вказівка на величини, вказані в діапазонах, включає кожну величину в цьому діапазоні. Коли величини виражені у вигляді наближених значень із використанням попереднього слова «приблизно», буде зрозуміло, що ця конкретна величина становить інший варіант здійснення. Термін «приблизно», як використовують в рамках винаходу, при вказівці на величину, що піддається вимірюванню, таку як кількість, період часу і т. п., охоплює прийнятне коливання даної величини, наприклад, таке як 51095, від вказаної величини. Наприклад, вираз «приблизно 5095» може включати 1095 від 50, або від 4595 до 5595, включаючи 5095.

Повинно бути зрозуміло, що певні ознаки винаходу, які для ясності описані в даному описі в контексті окремих варіантів здійснення, також можуть бути надані в комбінації в одному варіанті здійснення. Навпаки, різні ознаки винаходу, які скорочено описані в контексті одного варіанта здійснення, також можуть бути надані окремо або в будь-якій підкомбінації.

Як використовують у межах винаходу, як само по собі, так і спільно з іншим терміном або термінами, потрібно розуміти, що вираз «спосіб проведення лікування» і «спосіб лікування» можуть використовуватися взаємозамінно з виразом «для застосування для лікування» конкретного захворювання.

Як використовують у межах винаходу, як само по собі, так і спільно з іншим терміном або термінами, «фармацевтично прийнятний» вказує на те, що об'єкт, що вказується, наприклад, такий як фармацевтично прийнятний ексципієнт, є в основному хімічно і/або фізично сумісним з іншими інгредієнтами в композиції, і/або загалом фізіологічно сумісним із його реципієнтом.

Як використовують у межах винаходу, «фармацевтична композиція» стосується композиції, отриманої шляхом комбінування будь-якого зі складів, включаючи суспензії, або дисперсій, описаних в даному описі, з одним або кількома фармацевтично прийнятними ексципієнтами. бо «Фармацевтично прийнятний ексципієнт» стосується розріджувача, ад'юванта, ексципієнта або носія, з яким вводять сполуку за винаходом. «Фармацевтично прийнятний ексципієнт» стосується речовини, яка є нетоксичною, біологічно переносимою і іншим чином біологічно придатною для введення індивідууму, такого як інертна речовина, що додається в фармакологічну композицію або іншим чином використовується як наповнювач, носій або розріджувач для полегшення введення засобу, і яка сумісна з ним. Приклади ексципієнтів наведені, наприклад, в Кептіпдіоп'є Рпаптасешіса! Зсіепсе5, 17 ейд., Маск Рибіїєпіпд Со. (1985).

Як використовують у межах винаходу, як само по собі, так і спільно з іншим терміном або термінами, «суб'єкт(и)», «індивідуум(и)» і «пацієнт(и)» стосуються ссавців, зокрема - людини.

Термін людина(люди) стосується і включає людську дитину, підлітка або дорослого.

Як використовують у межах винаходу, як само по собі, так і спільно з іншим терміном або термінами, «лікувати», «що лікує», «підданий лікуванню» і «лікування» стосуються і включають застосування для пом'якшення, тимчасового полегшення і/або лікування, або будь-яку їх комбінацію, або його результат. У інших варіантах здійснення способи, описані в даному описі, можна використовувати профілактично. Потрібно розуміти, що «профілактика» або профілактичне застосування або результат не стосуються і не вимагають абсолютного або повного попередження (тобто 10095 превентивне або захисне застосування або результат). Як використовують у межах винаходу, профілактика або профілактичне застосування або результат стосуються застосувань і результатів, при яких введення сполуки або композиції зменшує або знижує тяжкість конкретного стану, симптому, порушення або захворювання, описаного в даному описі; зменшує або знижує імовірність бути підданим конкретному стану, симптому, порушенню або захворюванню, описаному в даному описі; або сповільнює виникнення або рецидив (повторне виникнення) конкретного стану, симптому, порушення або захворювання, описаного в даному описі; або будь-якої комбінації вищезгаданих.

Як використовують у межах винаходу, як само по собі, так і спільно з іншим терміном або термінами, «терапевтичний» і «терапевтично ефективна кількість» стосуються кількості сполуки або композиції, що (а) лікує конкретний стан, симптом, порушення або захворювання, описаний в даному описі; (5) послаблює, пом'якшує або усуває один або кілька симптомів конкретного стану, порушення або захворювання, описаного в даному описі; (с) сповільнює виникнення або

Зо рецидив (повторне виникнення) конкретного стану, симптому, порушення або захворювання, описаного в даному описі. Потрібно розуміти, що терміни «терапевтичний» і «терапевтично ефективний» охоплюють будь-який з вищезазначених ефектів (а)-(с), або окремо, або в комбінації з будь-яким з інших (а)-(с).

Термін «С:і-Свалк» стосується аліфатичного лінкеру, що має 1, 2, 3, 4, 5 або 6 атомів вуглецю, і він включає, наприклад, -СНе-, -СН(СНз)-, -«СН(СНз)-СнНе- і -«С(СНз)2-. Термін "-Соалк-" стосується зв'язку.

Термін «алкіл» стосується прямої або розгалуженої вуглеводневої групи, що має від 1 до 12 атомів вуглецю ( «С1-Сі2г»), переважно від 1 до 6 атомів вуглецю («С:1-Св»), в групі. Приклади алкільних груп включають метил (Ме, Сзіалкіл), етил (Еї, Сгалкіл), н-пропіл (Сзалкіл), ізопропіл (Сзалкіл), бутил (Сзалкіл), ізобутил (Сзалкіл), втор-бутил (Сзалкіл), трет-бутил (Сзалкіл), пентил (Свалкіл), ізопентил (Свалкіл), трет-пентил (Свалкіл), гексил (Свалкіл), ізогексил (Свалкіл) і т. п.

Термін «гетероциклоалкіл» стосується будь-якого від три- до десятичленної моноциклічної або біциклічної насиченої кільцевої структури, що містить щонайменше один гетероатом, вибраний з групи, яка складається з 0, М і 5. Приклади придатних гетероциклоалкільних груп включають, але не обмежуються ними, азепаніл, азиридиніл, азетидиніл, піролідиніл, піперазиніл, піперидиніл, морфолініл, тіоморфолініл і т. п.

Термін «арил», коли його використовують окремо або як частину групи замісника, стосується моно- або біциклічної ароматичної вуглеводневої кільцевої структури, що має 6 або 10 атомів вуглецю в кільці. Переважні арильние частини включають феніл і нафтил.

Термін «арилен» стосується моно- або біциклічної ароматичної вуглеводневої кільцевої структури, що має 6 або 10 атомів вуглецю в кільці. Переважні ариленові частини включають фенілен і нафтилен. Сполуки за винаходом можуть бути хіральними і в результаті можуть існувати як єдиний енантіомер або суміш енантіомерів. Всі енантіомери і їх суміші охоплюються даним винаходом.

Також в обсяг винаходу входять ізотопні варіанти сполук формули І і ІІ. Як використовують у межах винаходу, термін «ізотопний варіант» стосується сполуки, яка містить частки ізотопів одного або кількох атомів, які складають сполуку, в кількості що перевищує природну.

Наприклад, «ізотопний варіант» сполуки може бути радіоактивно міченим, тобто може містити один або кілька радіоактивних ізотопів або може бути міченим не радіоактивними ізотопами, 60 наприклад, такими як дейтерій ("Н або 0), вуглець-11ї (С), вуглець-13 (19303, азот-15 (15М),

фторид-18 (Р) і т. п. Буде зрозуміло, що в сполуці, де вносять таку ізотопну заміну, наступні атоми, коли вони присутні, можуть варіюватися, так що, наприклад, будь-який водень може являти собою "Н/О, будь-який вуглець може являти собою "С або "З3С, будь-який азот може являти собою ""М, або будь-який фторид (за наявності) може являти собою "ЗЕ, і що присутність і знаходження таких атомів можна визначати способами, відомими в даній галузі.

Сполуки формули І! ії І конвертуються у дантролен іп мімо. У деяких аспектах сполуки формули І і ІЇ конвертуються у дантролен іп мімо з часом напівжиття від приблизно 1 секунди або менше до приблизно від 1 хвилини до 90 хвилин. У деяких аспектах, сполуки формули | і ІЇ конвертуються в дантролен іп мімо з часом напівжиття менше 1 секунди. У інших аспектах, сполуки формули І ї ІЇ конвертуються у дантролен іп мімо з часом напівжиття, що становить секунди, тобто з часом напівжиття менше однієї хвилини, наприклад, з часом напівжиття приблизно 1, 2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, АЗ, 44, 45, 46, 47, А8, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 або приблизно 59 секунд. У інших аспектах сполуки формули І і ІЇ конвертуються у дантролен іп мімо з часом напівжиття від приблизно 1 до приблизно 5 хвилин, наприклад, приблизно 1, 2, 3, 4 або приблизно 5 хвилин. У інших аспектах сполуки формули | і 1 конвертуються у дантролен іп мімо з часом напівжиття від приблизно 1 до приблизно 10 хвилин.

У інших аспектах сполуки формули І і ІЇ конвертуються у дантролен іп мімо з часом напівжиття від приблизно 5 до приблизно 10 хвилин. У деяких аспектах сполуки формули | і 1Ї конвертуються в дантролен іп мімо з часом напівжиття приблизно від 1 хвилини до 60 хвилин. У деяких аспектах сполуки формули І і ІЇ конвертуються в дантролен іп мімо з часом напівжиття приблизно від 1 хвилини до 45 хвилин. У деяких аспектах сполуки формули І і ІЇ конвертуються у дантролен іп мімо з часом напівжиття приблизно від ї хвилини до 30 хвилин. У деяких аспектах сполуки формули І і Ії конвертуються в дантролен іп мімо з часом напівжиття приблизно від 1 хвилини до 20 хвилин. У деяких аспектах сполуки формули І і ІЇ конвертуються в дантролен іп мімо з часом напівжиття приблизно 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85 або приблизно 90 хвилин.

Винахід стосується проліків дантролену формули І: о ол о М о-в

Х / ве о де ЕВ являє собою -РІОХОН)» або -РІОХОВ ОН»);

Ві являє собою Н, -Сі-валкіл, арил, С:і-алкС(0)О-С:-валкіл, -СзалкоС(О)С:-гвалкіл або

СтіалкоС(О)Ос гвалкіл; і

Аг являє собою -Сі-гвалкіл, арил, Сі-валко(0)О-С:і-валкіл, -С1іалкоС(О)С:-валкіл. або

СтіалкоС(О)Ос гвалкіл; або їх фФармацевтично прийнятних солей.

У деяких аспектах проліки дантролену за винаходом являють собою проліки детролену, де

К являє собою -Р(ФО)(ОН)», івони мають формулу 1-А: о ом о о г о--в7

Х / Ки / "он но о ІА

Також в обсяг винаходу входять фармацевтично прийнятні солі сполук формули І1-А.

Переважні солі включають, наприклад, натрієві солі сполук формули І-А. Також в обсяг винаходу входять солі сполук формули 1-А з літієм, магнієм, кальцієм і калієм. Альтернативні сольові форми включають солі амонію, холіну і трометаміну. Переважною сіллю сполуки формули 1-А є сіль мононатрію. Іншою переважною сіллю сполуки формули 1-А є сіль динатрію.

Іншою переважною сіллю сполуки формули І-А є сіль монотрометаміну. Іншою переважною сіллю сполуки формули І-А є сіль дитрометаніну. Також в обсяг винаходу входять фармацевтично прийнятні органічні солі сполук формули 1І-А.

У деяких аспектах проліки дантролену за винаходом являють собою проліки, де К являє собою -РІФОХОН ОВ»), і вони мають формулу І-В: о

ОМ г / о о Оо--р 4

ТИ З у- - ов,

Ж ко о І-В

У деяких аспектах К: являє собою Н. В цих аспектах Во являє собою -С:-гвалкіл, арил, Сі- валкС(0)О-Сі-валкіл, -СіалкоС(О)Сівалкіл або СтіалкОС(О)ОСі-валкіл. Також в обсяг винаходу входять фармацевтично прийнятні солі таких сполук формули І-В. Переважні солі включають, наприклад, натрієві солі сполук формули І-В. Інші солі включають солі сполук формули І-В з літієм, магнієм, кальцієм і калієм. Альтернативні форми солей включають солі амонію, холіну і трометаміну. Також в обсяг винаходу входять фармацевтично прийнятні органічні солі сполук формули І1-В.

У деяких аспектах сполук формули І-В, Ві являє собою Н і В» являє собою -С:-гвалкіл.

Наприклад, у деяких аспектах В: являє собою Н і В2 являє собою -С:-валкіл. У інших аспектах В. являє собою Н і Вг являє собою -С.-1галкіл. У інших аспектах В: являє собою Н і Рг являє собою -С1ізвалкіл. У інших аспектах НВ: являє собою Н і Р» являє собою -С:вгвалкіл. У інших аспектах

В: являє собою Н і В2 являє собою -Сго-гвалкіл. У деяких аспектах В: являє собою Н і В2 являє собою -Сіалкіл. У деяких аспектах Ні являє собою Н і В» являє собою -Сгалкіл. У деяких аспектах НВ: являє собою Н і В являє собою -Сзалкіл. У деяких аспектах Ні: являє собою Н і В2 являє собою -Салалкіл. У деяких аспектах Ві являє собою Н і В2 являє собою -Сзалкіл. У деяких аспектах НВ: являє собою Н і В являє собою -Свалкіл. У деяких аспектах Ні: являє собою Н і В2 являє собою -С7алкіл. У деяких аспектах Ві являє собою Н і В2 являє собою -Свалкіл. У деяких аспектах НВ: являє собою Н і В являє собою -Сгзалкіл. У деяких аспектах Ні: являє собою Н і В2 являє собою -С:іоалкіл. У деяких аспектах НН: являє собою Н і Р2 являє собою -Сзалкіл. У деяких аспектах В: являє собою Н і В» являє собою -Сігалкіл. У деяких аспектах Н;: являє собою Н і В2 являє собою -Сізалкіл. У деяких аспектах Ні: являє собою Н і Р2 являє собою -С:4алкіл. У деяких

Зо аспектах В; являє собою Н і В2 являє собою -С:валкіл. У деяких аспектах В: являє собою Н і В» являє собою -Сзівалкіл. У деяких аспектах Ні: являє собою Н і Р2 являє собою -С7алкіл. У деяких аспектах В; являє собою Н і В2 являє собою -С:валкіл. У деяких аспектах В: являє собою Н і В» являє собою -Сзгалкіл. У деяких аспектах НН: являє собою Н і Р2 являє собою -Сгоалкіл. У деяких аспектах В: являє собою Н і В» являє собою -Сгіалкіл. У деяких аспектах Н;: являє собою Н і В2 являє собою -Сггалкіл. У деяких аспектах Ні: являє собою Н і Р2 являє собою -Сгзалкіл. У деяких аспектах В: являє собою Н і В» являє собою -Сглалкіл. У деяких аспектах Н;: являє собою Н і В2 являє собою -Сгзалкіл. У деяких аспектах В: являє собою Н і В2 являє собою Сгвалкіл.

У деяких аспектах сполук формули І-В, Ві являє собою Н і КЕ» являє собою арил. Наприклад, в деяких аспектах сполук формули І-В, Ві являє собою Н і Е2 являє собою феніл.

У деяких аспектах сполук формули І-В, Ві являє собою Н і В2 являє собою Сі-валкс(0)0-С.- гвалкіл. Наприклад, у деяких аспектах В: являє собою Н і В2 являє собою СіалкС(0)О-Сі-гвалкіл.

У інших аспектах В: являє собою Н і Рг являє собою СгалкС(0)О-С: гвалкіл. У інших аспектах В. являє собою Н і В2 являє собою СзалкС(0)О-С:-гвалкіл. У інших аспектах Ні являє собою Н і Рг являє собою Слалкс(0)О-С:і-гвалкіл. У інших аспектах Р: являє собою Н і В? являє собою

СвалкС(0)О-Сі-гвалкіл. У інших аспектах В: являє собою Н і В2 являє собою СвалкС(0)0О-Сч- гвалкіл. У інших аспектах В: являє собою Н і Рг являє собою С:і-валкс(0)О-Сі-валкіл. У інших аспектах Ні являє собою Н і Р2 являє собою С:валкс(0)0О-С:-1ігалкіл. У інших аспектах Ні являє собою Н і Аг являє собою СівалкС(0)О-Сіз-гвалкіл. У інших аспектах Ні являє собою Н і В2 являє собою С:-валкс(0)0О-Сиів-гвалкіл. У інших аспектах В: являє собою Н і В2 являє собою С.- валкс(0)О-Сго-гвалкіл.

У деяких аспектах сполук формули І-В, Ві являє собою Н і В? являє собою -С1алкосС(О)Сз- гвалкіл. Наприклад, у деяких аспектах НВ: являє собою Н і В2 являє собою -С1алкоС(О) Сі -валкіл.

У інших аспектах Ні являє собою Н і Рг являє собою -С1талкоС(О)С:-1ігалкіл. Ві являє собою Н і

Аг являє собою -С1іалкоС(О)Сіз-івалкіл. Ні являє собою Н і В» являє собою -С1іалкоС(О)Ств- б гвалкіл. В: являє собою Н і Рг являє собою -С1талкоС(О)Сго-валкіл.

У деяких аспектах сполук формули І-В, В: являє собою Н і В» являє собою -Схталкос(0)ОсС- гвалкіл. Наприклад, у деяких аспектах Рі являє собою Н і В? являє собою -С1їалкос(0)Ос.- валкіл. У інших аспектах В: являє собою Н і В? являє собою -С1талкосС(0)ОсС.-ігалкіл. У деяких аспектах АВ: являє собою Н і В? являє собою -СхалкосС(0)ОсСіз-валкіл. У деяких аспектах В. являє собою Н і В2 являє собою -С1талкоС(О)ОсСв-гвалкіл. У деяких аспектах Ні являє собою Н і

Аг являє собою -С1талкоС(0)ОсСго-гвалкіл.

У інших аспектах сполук формули І-В, Ві являє собою -Сі-гвалкіл, арил, Сі-єалкС(0)0-Сч- гвалкіл, -Счл-алкос(О)С:-гвалкіл, або СталкосС(О)Ос. -гвалкіл і В» являє собою -Сі-гвалкіл, арил, Сч- валкС(0)0-Суі-валкіл, -СталкосС(О)Сі-гвалкіл або СталкосС(О)Ос. -гвалкіл.

У деяких аспектах сполук формули І-В, Ві являє собою -Сі-гвалкіл і В?2 являє собою -С.- гвалкіл, арил, СівалкС(0)О-Сі-валкіл, -С1іалкоС(О)Сі-валкіл або СтіалкоС(О)Осі.-гвалкіл.

Наприклад, в цих аспектах Ні може являти собою -С:-валкіл. У інших аспектах В: являє собою -

Сі-ігалкіл. У інших аспектах Ні являє собою -Сіз-гвалкіл. У інших аспектах АН: являє собою -Сів- гвалкіл. У інших аспектах Ні являє собою -Сгогвалкіл. У деяких аспектах Рі являє собою -

С:алкіл. У деяких аспектах НВ: являє собою -Сгалкіл. У деяких аспектах НВ: являє собою -Сзалкіл.

У деяких аспектах Рі являє собою -Слалкіл. У деяких аспектах Ві являє собою -Сзалкіл. У деяких аспектах Ві являє собою -Свалкіл. У деяких аспектах НВ: являє собою -С7алкіл. У деяких аспектах Ні являє собою -Свалкіл. У деяких аспектах Ні являє собою -Сеалкіл. У деяких аспектах ФНї являє собою -Сіоалкіл. У деяких аспектах Ні являє собою -С:ізалкіл. У деяких аспектах Ф:ї являє собою -С:ігалкіл. У деяких аспектах Ні являє собою -С:ізалкіл. У деяких аспектах Фї являє собою -С:і4алкіл. У деяких аспектах Ні являє собою -С:ізалкіл. У деяких аспектах ФНї являє собою -Сівалкіл. У деяких аспектах Ні являє собою -С:і7алкіл. У деяких аспектах Ві -Сзівалкіл. У деяких аспектах НВ: являє собою -С:ігалкіл. У деяких аспектах В: являє собою -Сгоалкіл. У деяких аспектах Ві являє собою -С-залкіл. У деяких аспектах НВ: являє собою -Сггалкіл. У деяких аспектах Рі являє собою -Сгзалкіл. У деяких аспектах Ні являє собою -

Сг«алкіл. У деяких аспектах Ві являє собою -Сг5алкіл. У деяких аспектах Ві являє собою -

Сгвалкіл.

У деяких аспектах сполук формули І-В, Ві являє собою арил і В» являє собою -С:-гвалкіл, арил, Сі-валкС(0)О-С:-гвалкіл, -«Схалкос(О)С:-гвалкіл, або Сталкос(О)Ос;. гвалкіл. Наприклад, у деяких аспектах Ні являє собою феніл і В2 являє собою -С:-валкіл, арил, СіалкС(0)0-С- гвалкіл, -халкосС(О)С: -валкіл або Сталкос(0)Ос. гвалкіл.

У деяких аспектах сполук формули І-В, Ві являє собою С:і-валкс(0)О-Сі-гвалкіл і В» являє собою -Сі-гвалкіл, арил, СівалкС(0)0-С:і-валкіл, -С3лалкосС(О)С:-гвалкіл, або Сталкос(0)0с- гвалкіл. Наприклад, у деяких аспектах Ві являє собою СтіалкС(0)О0-С.:-гвалкіл. У інших аспектах

А: являє собою СгалкС(0)0О-С: гвалкіл. У інших аспектах ВР: являє собою СзалкС(0)О-С: гвалкіл.

У інших аспектах Рі являє собою СзалкС(0)О-С:-валкіл. У інших аспектах Ві являє собою

СвалкС(0)О-С:і-валкіл. У інших аспектах Ні являє собою СвалкС(0)О-Сі-гвалкіл. У інших аспектах Ні являє собою Сі-валкС(0)О-Сівалкіл. У інших аспектах Ні являє собою (С- валкС(0)О-Сі-галкіл. У інших аспектах Ні являє собою Сі-валкС(0)О-Сізговалкіл. У інших аспектах Ні являє собою Сі-валкС(0)О-Стівовалкіл. У інших аспектах Ні являє собою С- валкс(0)О-Сго-валкіл.

У деяких аспектах сполук формули І-В, Ві являє собою -СталкосС(О)С:-валкіл і В2 являє собою -Сі-гвалкіл, арил, СівалкС(0)0-С:і-валкіл, -С3лалкосС(О)С:-гвалкіл, або Сталкос(0)0с- гвалкіл. Наприклад, у деяких аспектах Ні являє собою СталкоС(О) С. -валкіл. У інших аспектах Ві являє собою -С1їалкос(О)С:-ігалкіл. У інших аспектах Ні являє собою -С1талкосС(О)Сіз-івалкіл. У інших аспектах Рі являє собою -Сх1талкосС(О)Стівгвалкіл. У інших аспектах Ні являє собою -

Сіалкос(О)Сго-валкіл.

У деяких аспектах сполук формули І-В, Ві являє собою -С1талкосС(0)ОсС. гвалкіл і В2 являє собою -Сі-гвалкіл, арил, Сі-алкс(0)О-Сі-валкіл, -СзалкосС(О)С:і-валкіл або СтіалкосС(0)Ос.- гвалкіл. Наприклад, у деяких аспектах Ві являє собою СталкоС(О)Осі.валкіл. У інших аспектах

Ві являє собою -С1алкОоС(0)ОсС:-1галкіл. У інших аспектах Рі являє собою -С1алкоС(О)Осіз.- твалкіл. У інших аспектах Ві являє собою -Сї:алкосС(О)ОсСв-гвалкіл. У інших аспектах Ні являє собою -Схталкос(О)ОсСго-гвалкіл.

У деяких аспектах Ні являє собою -Сі-валкіл і В? являє собою -С:-гвалкіл. Наприклад, у деяких аспектах кожний з В: і В? незалежно являє собою -С:.-валкіл, -С:-12алкіл, -Сіз-гвалкіл, -Ст1в- гвалкіл, -Сгогвалкіл, -Сзалкіл, -Сгалкіл, -Сзалкіл, -С4алкіл, -Схалкіл, -Свалкіл, -С7алкіл, -Свалкіл, -

Сгалкіл, -Стоалкіл, -Сіталкіл, -Счігалкіл, -Сізалкіл, -Счі4алкіл, -Сі5алкіл, -Ствалкіл, -С-17алкіл, -

Сзвалкіл, -Сізалкіл, -Сгоалкіл, -Сгзалкіл, -Сггалкіл, -Сгзалкіл, -Сгаалкіл, -Сг5;алкіл або -Сгвалкіл. 60 У деяких аспектах Ні являє собою арил (наприклад, феніл) і В? являє собою арил

(наприклад, феніл).

У деяких аспектах В: являє собою С:-валкс(0)О-Сі-гвалкіл і В? являє собою С:-валкС(0)0-Сч- гвалкіл. Наприклад, у деяких аспектах кожний з В: і В» незалежно являє собою СтіалкС(0)0-С.- гвалкіл, Сгалкс(0)О-С:-гвалкіл, СзалкС(0)О-С:-валкіл, Слалкс(0)О-Сі-валкіл, Свалкс(0)0-С- гвалкіл, Свалкс(О)О-Сі-гвалкіл, СіалкС(0)0О-С:-валкіл, СівалкС(0)0-С:-галкіл, Сі-валкс(0)0-

Сіз-гвалкіл, Сі-салкС(0)О-Св-гвалкіл або Сі-валкС(0)О-Сго-гвалкіл.

У деяких аспектах Ві являє собою -С1талкосС(О)Сі-гвалкіл і В2 являє собою -Сталкос(О)С:- гвалкіл. Наприклад, у деяких аспектах кожний з В: і В2 незалежно являє собою СталкосС(О)Сч- валкіл, -СхзалкосС(О)С:і-галкіл, -СталкОС(О)Сіз-валкіл, -СіалкОС(О)Сівовалкіл або -

СталкосС(О)Сго-валкіл.

У деяких аспектах Ні являє собою -СтьалкОС(О)ОСігвалкіл і Во являє собою -

Сіалкос(О)Ос. гвалкіл. Наприклад, у деяких аспектах кожний з В: і В2 незалежно являє собою

Сіалкос(О)Ос:-валкіл, -С1талкосС(0)ОсСі-ігалкіл,8 -Сх-алкос(О)ОсСіз-валкіл, -С1талкосС(О0)ОсСв- гвалкіл або -СталкосС(О)ОсСго-валкіл.

Сполуки формули І, які включають сполуки формули І-А і І-В, можуть бути надані як фармацевтично прийнятні солі, коли це застосовно. Ці солі включають солі натрію. Також передбачаються солі калію, літію, кальцію і магнію. Альтернативні форми солей включають солі амонію, холіну і трометаміну.

Також в обсяг винаходу входять проліки дантролену формули ЇЇ о о о ч о--в,

ХМ / але о І де

Аз являє собою Н, -2(0)-2-М(Ва)(В5), -«С(0)2-С(0)-ОН, або -2(0)-4-СН»-0О0(0)-2-С(0)-ОН; 7 являє собою Сз-валк;

У являє собою арил;

Ва являє собою Н або С .валкіл;

В5 являє собою Н або С .валкіл; або В; і В5, разом з атомом азоту, до якого вони приєднані, утворюють гетероциклоалкіл;

Зо або їх фармацевтично прийнятна сіль.

У переважних аспектах Кз являє собою Н і сполука формули ІЇ являє собою сполуку формули ІП-А о ом о ч он

М / ве о П-А або її фармацевтично прийнятну сіль.

У інших аспектах формули ЇЇ, Кз являє собою С(0)-2-М(Ва)(В5) і сполука формули ЇЇ являє собою сполуку формули 1І-В о в, ом г

М х Мм- Я-и йо

ЖК о и-в де

7 являє собою Сз-валк;

Ва являє собою Н або С .валкіл;

В5 являє собою Н або С .валкіл; або В; і В5, разом з атомом азоту, до якого вони приєднані, утворюють гетероциклоалкіл; або її фармацевтично прийнятну сіль.

У цих аспектах формули 1ІІ-В, 7 може являти собою Сзалк, Сгалк, Сзалк, Слалк, Сзалк або

Свалк. У деяких аспектах 7 являє собою С: -галк. У деяких аспектах 7 являє собою С:алк.

В цих аспектах формули ІІ-В, Ва являє собою Н. У інших аспектах ВН. являє собою С:-валкіл, наприклад, Сзалкіл, Сгалкіл, Сзалкіл, Сл.алкіл, Свсалкіл або Свалкіл. В переважних аспектах Ва являє собою метил, етил або ізопропіл.

В цих аспектах формули ІІ-В, В5 являє собою Н. У інших аспектах Н5 являє собою С:-валкіл, наприклад, Сзалкіл, Сгалкіл, Сзалкіл, Сл.алкіл, Свсалкіл або Свалкіл. В переважних аспектах В5 являє собою метил, етил або ізопропіл.

В деяких з цих аспектів формули ІІ-В, Ва являє собою Н і РВ5 являє собою Н. У інших аспектах Ва являє собою Н і В5 являє собою Сі-валкіл, наприклад, Стіалкіл, Сгалкіл, Сзалкіл,

Слалкіл, Свалкіл або Свалкіл. У інших аспектах кожний з Ва: і В5 незалежно являє собою С. валкіл, наприклад, Сзалкіл, Сгалкіл, Сзалкіл, Слалкіл, Свсалкіл або Свалкіл.

У деяких з цих аспектів формули 1І-В, Ва і К5, разом з атомом азоту, до якого вони приєднані, утворюють гетероциклоалкіл. Переважні гетероциклоалкільні частини включають, наприклад, морфолініл, піперазиніл, піперидиніл, піролідиніл, азетидиніл і азиридиніл.

Переважні сполуки формули ІІ-В включають, наприклад, о ом г щи о о 2 у М- ж о о о ол г сли о о о хх -М М- м й М,

ТИ М Ж о о і їх фармацевтично прийнятні солі.

У інших аспектах формули ЇЇ, Кз являє собою С(0)-2-С(0)-ОН і сполука формули ЇЇ являє собою сполуку формули 1І-С о он ом 7 о Хв в о о и-С де 7 являє собою Сз-валк; або її фармацевтично прийнятну сіль.

У цих аспектах формули 1ІІ-С, 7 може являти собою С:іалк, Сгалк, Сзалк, Слалк, Свалк або

Свалк. У деяких аспектах 7 являє собою С:і-галк. У деяких аспектах 7 являє собою Сзалк. У деяких аспектах 7 являє собою Сгалк.

Переважна сполука формули 1І-С являє собою о о о М о

КИ

Ж о і її фармацевтично прийнятні солі.

У інших аспектах формули ІІ Кз являє собою -С(0)-МН-У-СН2а-0ОС(0)-2-С(0)-ОН і сполука формули ІІ являє собою сполуку формули 1І-Ю о он у / о Н 2

У о М Ж

Х / ве о о и-о де

У являє собою арилен; і 7 являє собою Сз-валк; або її фармацевтично прийнятну сіль.

У цих аспектах формули ІІ-ЮО М може являти собою фенілен або нафтилен, переважно фенілен.

У цих аспектах формули 1І1-Ю 7 може являти собою Сзалк, Сгалк, Сзалк, Слалк, Сзалк або

Переважна сполука формули 1І-О являє собою но о

Р Н ол М о о х кт

Х / ве о о го о і її фармацевтично прийнятні солі.

У інших аспектах Кз являє собою -С2(0)-0О-У-СН»-ОС(0)-2-С(0)-ОН і сполука формули ЇЇ являє собою сполуку формули 1І-Е о он / о 2

У о М -Ж

Х / ве о о М-Е де

У цих аспектах формули ПІ-Е М може являти собою фенілен або нафтилен, переважно фенілен.

У цих аспектах формули ІІ1-Е 7 може являти собою Сзалк, Сгалк, Сзалк, Слалк, Сзалк або

Сполуки формули ІІ, які включають сполуки формули 1І-А, 1І-В, 11-С, 1І-О ї П-Е, можуть бути надані як фармацевтично прийнятні солі, у відповідних випадках. Вони включають солі натрію.

Також передбачаються солі калію, літію, кальцію і магнію. Альтернативні форми солей включають солі амонію, холіну і трометаміну. Також в обсяг винаходу входять фармацевтично прийнятні органічні солі сполук формули ЇЇ.

Сполуки формули І і Ії, які включають сполуки формули 1-А, І-В, ПІ-А, 1І-В, 11-С, 11-О ї П-Е ії їх фармацевтично прийнятні солі, можна отримувати як фармацевтичні композиції шляхом комбінування сполуки з фармацевтично прийнятним ексципієнтом. У деяких варіантах здійснення один або кілька додаткових фармацевтично прийнятних ексципієнтів вибрані з групи, яка складається з консервантів, антиоксидантів або їх сумішей. У інших варіантах здійснення винаходу додатковий фармацевтично прийнятний ексципієнт являє собою консервант, такий як, але не обмежуючись ними, фенол, крезол, складний ефір п- гідроксибензойної кислоти, хлорбутанол або їх суміші. У інших варіантах здійснення винаходу фармацевтично прийнятний ексципієнт являє собою антиоксидант, такий як, але не обмежуючись ними, аскорбінова кислота, піросульфіт натрію, пальмітинова кислота, бутилований гідроксіанізол, бутилований гідрокситолуол, токофероли або їх суміші.

Фармацевтичні композиції за винаходом можуть бути надані як суспензії. У інших варіантах здійснення фармацевтичні композиції за винаходом можуть бути надані як розчини.

У фармацевтичних композиціях за винаходом сполука за винаходом може бути присутня в концентрації від приблизно 1 мг/мл до приблизно 400 мг/мл, наприклад, від 1 мг/мл до приблизно 200 мг/мл, від 1 мг/мл до приблизно 300 мг/мл, від переважно 5 мг/мл до приблизно 125 мг/мл, переважно при фізіологічних значеннях рН. У конкретних варіантах здійснення винаходу сполука за винаходом присутня в концентрації що дорівнює або перевищує приблизно 5 мг/мл. У наступних варіантах здійснення сполука за винаходом присутня в концентрації приблизно від 10 до 25 мг/мл. У наступних варіантах здійснення сполука за винаходом присутня в концентрації приблизно 1 мг/мл, 5 мг/мл, 10 мг/мл, 15 мг/мл, 20 мг/мл, 25 мг/мл, 30 мг/мл, 35 мг/мл, 40 мг/мл, 45 мг/мл або 50 мг/мл. У наступних варіантах здійснення сполука за винаходом присутня в концентрації приблизно 125 мг/мл, 150 мг/мл, 175 мг/мл, 200 мг/мл, 225 мг/мл, 250 мг/мл, 275 мг/мл, 300 мг/мл, 325 мг/мл, 350 мг/мл, 375 мг/мл або приблизно 400 мг/мл.

У певних варіантах здійснення сполука за винаходом присутня в концентрації, що дорівнює або перевищує приблизно 55 мг/мл. У наступних варіантах здійснення сполука за винаходом присутня в концентрації приблизно від 55 до 125 мг/мл. У конкретних варіантах здійснення сполука за винаходом присутня в концентрації приблизно 75 мг/мл, 80 мг/мл, 85 мг/мл, 90 мг/мл, 95 мг/мл, 100 мг/мл, 105 мг/мл, 110 мг/мл, 115 мг/мл, 120 мг/мл або 125 мг/мл. У інших варіантах здійснення сполука за винаходом присутня в концентрації приблизно від 75 мг/мл до 95 мг/мл, від 80 мг/мл до 100 мг/мл, від 90 мг/мл до 110 мг/мл, від 95 мг/мл до 105 мг/мл, від 95 мг/мл до 115 мг/мл, від 100 мг/мл до 110 мг/мл, від 110 мг/мл до 125 мг/мл, включаючи всі діапазоні і піддіапазоні між ними.

У певних варіантах здійснення фармацевтичні композиції за винаходом можуть додатково містити стабілізатор або два або більше стабілізаторів. У наступних варіантах здійснення винаходу стабілізатор вибраний з групи, яка складається з поверхнево-активних речовин, полімерів, зшитих полімерів, буферних речовин, електролітів і неелектролітів. У наступних варіантах здійснення винаходу композиція містить комбінацію двох або більше стабілізаторів, вибраних із групи, яка складається з поверхнево-активних речовин, полімерів, зшитих полімерів, буферних речовин, електролітів і неелектролітів. У наступних варіантах здійснення винаходу стабілізатор являє собою поверхнево-активну речовину, таку як, але не обмежуючись ними, поліетиленоксид (РЕО), похідне РЕО, полісорбат 80, полісорбат 20, полоксамер 188, поліетоксиловані рослинні олії, лецитин, сироватковий альбуміном людини і їх суміші. У бо конкретних варіантах здійснення винаходу стабілізатор являє собою полімер, такий як, але не обмежуючись ними, полівінілліролідон (такий як, але не обмежуючись ними, повідон К12, повідон К17 і їх суміші), поліетиленгліколь 3350 і їх суміші. У інших варіантах здійснення винаходу стабілізатор являє собою електроліт, такий як, але не обмежуючись ними, хлорид натрію, хлорид кальцію і їх суміші. У інших варіантах здійснення винаходу стабілізатор являє собою неелектроліт, такий як, але не обмежуючись ними, декстроза, гліцерин, маніт або їх суміші. У інших варіантах здійснення винаходу стабілізатор являє собою зшитий полімер, такий як, але не обмежуючись ними, натрій карбоксиметилцелюлоза (СМС). У деяких варіантах здійснення винаходу стабілізатор являє собою СМС 71 Е, СМС 7МЕ, СМС 7НЕ або їх суміші.

У наступних варіантах здійснення винаходу можна використовувати комбінації неелектролітних стабілізаторів і електролітних стабілізаторів. У деяких варіантах здійснення комбінація стабілізаторів може містити два або більше неелектролітних стабілізаторів. У інших варіантах здійснення комбінація стабілізаторів може містити два або більше електролітних стабілізаторів. У наступних варіантах здійснення комбінація стабілізаторів може містити один або кілька неелектролітних стабілізаторів і один або кілька електролітних стабілізаторів. У наступних варіантах здійснення комбінація стабілізаторів може містити два або більше з маніту, декстрози і хлориду натрію.

У певних варіантах здійснення винаходу можна використовувати комбінації стабілізаторів на основі поверхнево-активних речовин і полімерних стабілізаторів. У деяких варіантах здійснення комбінація стабілізаторів може містити два або більше стабілізаторів на основі поверхнево- активних речовин. У інших варіантах здійснення комбінація стабілізаторів може містити два або більше полімерних стабілізаторів. У наступних варіантах здійснення комбінація стабілізаторів може містити один або кілька стабілізаторів на основі поверхнево-активних речовин і один або кілька полімерних стабілізаторів. У наступних варіантах здійснення комбінація стабілізаторів може містити два або більше з полісорбату 80, полісорбату 20 і полоксамеру 188. У наступних варіантах здійснення комбінація стабілізаторів може містити один або кілька з полісорбату 80, полісорбату 20 і полоксамеру 188 і один або кілька з повідону К1і2, повідону К17 і поліетиленгліколю 3350.

У певних варіантах здійснення винаходу композиція містить від приблизно 0,2 мг/мл до приблизно 75 мг/мл одного або кількох стабілізаторів і всі діапазоні і піддіапазоні між ними. У конкретних варіантах здійснення винаходу композиція містить приблизно від 0,2 до 0,7 мг/мл, від 0,5 до 1 мг/мл, від 1 до 5 мг/мл, від 2 до 8 мг/мл, від 5 до 6 мг/мл, від 5 до 10 мг/мл, від 8 до 12 мг/мл, від 10 до 15 мг/мл, від 15 до 20 мг/мл, від 20 до 30 мг/мл, від 30 до 40 мг/мл, від 40 до 50 мг/мл, від 45 до 55 мг/мл, від 50 до 60 мг/мл або від 60 до 75 мг/мл одного або кількох стабілізаторів і всі діапазоні і піддіапазоні між ними. У наступних варіантах здійснення винаходу композиція містить приблизно 0,2 мг/мл, 0,5 мг/мл, 1 мг/мл, 2 мг/мл, Зтад/мл, 4 мг/мл, 5 мг/мл, 5,5 мг/мл, 6 мг/мл, 7 мг/мл, 8 мг/мл, 9 мг/мл, 10 мг/мл, 12 мг/мл, 15 мг/мл, 17 мг/мл, 20 мг/мл, 25 мг/мл, 30 мг/мл, 35 мг/мл, 40 мг/мл, 45 мг/мл, 50 мг/мл, 55 мг/мл, 60 мг/мл, 65 мг/мл, 70 мг/мл або 75 мг/мл одного або кількох стабілізаторів.

У конкретних варіантах здійснення винаходу композиція додатково містить один або кілька буферних засобів, таких як, але не обмежуючись ними, МанНегРО- НгО, МанНегРО4:2НгО, безводний МанНгРоОх, цитрат натрію, лимонна кислота, Тгі5, гідроксид натрію, НСІ або їх суміші.

У певних варіантах здійснення винаходу композиція містить приблизно від ї мМ до 20 мМ одного або кількох буферних засобів, і всі діапазоні і піддіапазоні між ними. У конкретних варіантах здійснення винаходу композиція містить приблизно від 1 до 2 мМ, від 1 до З мМ, від 1 до 5 мМ, від 2 до 8 мМ, від 5 до 6 мМ, від 5 до 10 мМ, від 8 до 12 мМ, від 10 до 15 мМ, або від 15 до 20 мм одного або кількох буферних засобів, і всі діапазоні і піддіапазоні між ними. У наступних варіантах здійснення винаходу композиція містить приблизно 1 мМ, 2 мМ, З мМ, 4

ММ, 5 мМ, 6 мМ, 7 мМ, 8 мМ, 9 мМ, 10 мМ, 11тМ, 12 мМ, 13 мМ, 14 мМ, 15 мМ, 16 мМ, 17 мМ, 18 мМ, 19 мм або 20 мм одного або кількох буферних засобів.

У певних варіантах здійснення винаходу фармацевтична композиція має рН приблизно 3-10, наприклад, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10. У наступних варіантах здійснення винаходу композиція має рН приблизно 5-9. У наступних варіантах здійснення винаходу композиція має рН приблизно 6- 9. У наступних варіантах здійснення винаходу композиція має рН приблизно 6-7. У наступних варіантах здійснення винаходу композиція має рН приблизно 6-8,5. У наступних варіантах здійснення винаходу композиція має рН приблизно 7-8,5. У наступних варіантах здійснення винаходу композиція має рН від більш ніж 7 до 8,5. У певних варіантах здійснення винаходу композиція має рН приблизно від 6,0 до 8,0. У конкретних варіантах здійснення винаходу композиція має рН приблизно від 6,0 до 7,0, від 6,5 до 7,0, від 6,5 до 7,5, від б,7 до 7,2, від 7,0 до 7,2, від 7,0 до 7,5, від 7,0 до 8,0 або від 7,0 до 8,5. бо У певних варіантах здійснення винаходу фармацевтична композиція має осмолярність від приблизно 280 мосм/л до приблизно 310 мосм/л, наприклад, приблизно 280, 285, 290, 300, 305 або приблизно 310 мосм/л. У наступних варіантах здійснення винаходу композиція має осмолярність від приблизно 290 мосм/л до приблизно 300 мосм/л. У наступних варіантах здійснення винаходу композиція має осмолярність приблизно 290 мосм/л. У деяких варіантах здійснення осмолярність може бути вибрана за допомогою застосування належних кількостей одного або кількох стабілізаторів, які виступають як засоби, які змінюють тонічність, в композиції, такі як, але не обмежуючись ними, неелектролітні стабілізатори і електролітні стабілізатори, описані в даному описі. У деяких варіантах здійснення осмолярність може бути вибрана за допомогою застосування належних кількостей одного або кількох буферних засобів, які виступають як засоби, які змінюють тонічність, в композиції, такі як, але не обмежуючись ними, буферні засоби, описані в даному описі.

Фармацевтичні композиції за винаходом можна вводити внутрішньовенно. Альтернативно фармацевтичні композиції за винаходом можна вводити внутрішньом'язово. У інших варіантах здійснення фармацевтичні композиції за винаходом вводять підшкірно. Фармацевтичні композиції за винаходом також можна вводити перорально. У інших варіантах здійснення фармацевтичні композиції за винаходом вводять трансмукозальним шляхом, наприклад, за допомогою інтраназального введення. У інших варіантах здійснення фармацевтичні композиції за винаходом вводять внутрішньокістковим шляхом.

Сполуки і фармацевтичні композиції за винаходом можна використовувати для лікування порушень, які відповідають на дантролен. Наприклад, індивідуумам, які потребують лікування, можна вводити терапевтично ефективну кількість сполуки за винаходом або її солі. У інших аспектах індивідуумам, які потребують лікування, можна вводити терапевтично ефективну кількість фармацевтичної композиції за винаходом або її солі. У інших аспектах індивідуумам, які потребують лікування, можна вводити терапевтично ефективну кількість сполуки за винаходом, наприклад, сполуки формули 1-А, І-В, 1І-А, 1І-В, 1І-С, 1-0, П-Е або її фармацевтично прийнятної солі. Наприклад, індивідууму, який потребує лікування, можна вводити терапевтично ефективну кількість сполуки за винаходом, наприклад, сполуки формули ПІ-А, або її рармацевтично прийнятної солі.

Порушення, які відповідають на дантролен, включають, наприклад, злоякісну гіпертермію,

Зо хронічну спастичність, тепловий удар внаслідок виснажливого фізичного навантаження, аритмії серця, тахікардії, фібриляцію передсердь, зупинку серця, інфаркт міокарда, серцеву недостатність, пошкодження міокарда, кардіоміопатію, хворобу центральних волокон, бічний аміотрофічний склероз, рабдоміоліз, м'язову дистрофію Дюшенна, атаксію, гіперактивність детрузора, гіперактивний сечовий міхур, судоми, епілепсію, нейролептичний злоякісний синдром, стрес-реакцію людини, хворобу Альцгеймера, хворобу Гентингтона, розсіяний склероз, бічний аміотрофічний склероз, хворобу Паркінсона, пошкодження при ішемії- реперфузії, нейрональне пошкодження при реперфузії, гіпоксію, аневризму головного мозку, субарахноїдальний крововилив, інсульт, гіпертермію, асоційовану з пристрастю до наркотиків, або гіпертермію, асоційовану з передозування наркотиків.

У переважних аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування злоякісної гіпертермії у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування хронічної спастичності у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування теплового удару внаслідок виснажливого фізичного навантаження.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування аритмій серця у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування тахікардій у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування фібриляції передсердь у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування зупинки серця у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування інфаркту міокарда у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування серцевої недостатності у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування пошкодження міокарда у індивідуума. бо У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування кардіоміопатії у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування хвороби центральних волокон у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування бічного аміотрофічного склерозу у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування рабдоміолізу у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування м'язової дистрофії Дюшенна у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування атаксії у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування гіперактивності детрузора у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування гіперактивного сечового міхура у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування епілептичних судом у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування епілепсії у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування нейролептичного злоякісного синдрому у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування стрес-реакції людини у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування хвороби Альцгеймера у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування хвороби Гентинітона у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування розсіяного склерозу у індивідуума.

Зо У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування хвороби Паркінсона у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування пошкодження при ішемії-реперфузії у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування нейронального пошкодження при реперфузії у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування гіпоксії у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування аневризми головного мозку у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування субарахноїдального крововиливу у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування інсульту у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування гіпертермії, асоційованої з пристрастю до наркотиків (наприклад, пристрастю до екстазі (3,4-метилендіоксиметамфетамін)) у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування гіпертермії, асоційованої з передозування наркотику (наприклад, передозування екстазі (3,4-метилендіоксиметамфетамін)) у індивідуума.

У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування накопичення ацетилхоліну у індивідуума. У інших аспектах сполуки і/або фармацевтичні композиції за винаходом використовують для лікування впливу нейротоксичної нервово-паралітичної речовини, наприклад, впливу нервово-паралітичного газу (наприклад, фосфорорганічні гази, такі як зарин, зоман і УХ) у індивідуума. Див., наприклад, попередню заявку США Мо 62/554049, подану 5 вересня 2017 року. Як використовують у рамках винаходу, «нейротоксична нервово-паралітична речовина» або «нервово-паралітична речовина» стосується сполук, які впливають на передачу нервових імпульсів у нервовій системі. Нервово- паралітичні речовини являють собою фосфорорганічні сполуки, тобто вони мають формулу (Е)зР(О), де всі групи К можуть бути однаковими або можуть відрізняватися. Нервово- бо паралітичні речовини «б»-типу включають О-пінаколілметилфосфонофлуоридат (зоман, СО),

етил М,М-диметилфосфорамідоціанідат (табун, СА), пропан-2-ілметилфосфонофлуоридат (зарин, СВ), циклогексилметилфосфонофлуоридат (циклозарин, СЕ) ії 2-(диметиламіно)етил (СМ). Нервово-паралітичні речовини «М»-типу включають О-циклопентил /-(5-(2- діетиламіноетилуметилфосфонотіолат (ЕА-3148), (5)-(етил/Ц2- (діеєтиламіно)детил|ісульфонілюетил)фосфонати), такі як (5)-(етил П2- (діеєтиламіно)етил|ісульфанілУетил)фосфінат) (МЕ), о, О-дієтил З-(2- (діетиламіно)етил|фосфоротіоат (МС), 5-(2-(діетиламіно)етил| О-етилметилфосфонотіоат (УМ),

М,М-діетил-2-(метил-(2-метилпропокси)фосфорил)сульфанілетанамін (УР) і етил((2-Ібіс(пропан- 2-іл)яаміно|етиліусульфаніл)ухметилуфосфінат (МХ). Способи, описані в даному описі, можна використовувати для лікування індивідуума, підданого впливу однієї нервово-паралітичної речовини. Способи, описані в даному описі, також можна використовувати для лікування індивідуума, підданого впливу двох або більше нервово-паралітичних речовин.

Як використовують у межах винаходу, вираз «внаслідок впливу нервово-паралітичної речовини» і «внаслідок впливу нервово-паралітичної речовини» стосуються ефектів, які є прямим налідком впливу нервово-паралітичної речовини, а також ефектів, які є вторинними наслідками впливу нервово-паралітичної речовини.

У деяких аспектах винахід стосується способів лікування індивідуума, підданого впливу нервово-паралітичної речовини, фармацевтичною композицією, яка містить певну кількість сполуки формули І, як описано в даному описі, або її фармацевтично прийнятної солі.

Наприклад, в деяких аспектах описані способи перешкоджають неврологічному пошкодженню, вторинному для впливу нервово-паралітичної речовини. У інших аспектах описані способи забезпечують нейропротективні ефекти після впливу нервово-паралітичної речовини. У інших аспектах описані способи пом'якшують пошкодження тканини головного мозку, яке є вторинним після впливу нервово-паралітичної речовини. У інших аспектах описані способи пом'якшують пошкодження тканини головного мозку, що є вторинним для епілептичного статусу, що є вторинним для впливу нервово-паралітичної речовини. У інших аспектах описані способи перешкоджають нейрональному некрозу внаслідок впливу нервово-паралітичної речовини. У інших аспектах описані способи пом'якшують нейрональний некроз внаслідок впливу нервово- паралітичної речовини. У інших аспектах описані способи лікують перевантаження

Зо внутрішньоклітинним кальцієм внаслідок впливу нервово-паралітичної речовини. У інших аспектах описані способи пом'якшують перевантаження внутрішньоклітинним кальцієм внаслідок впливу нервово-паралітичної речовини. У інших аспектах описані способи перешкоджають перевантаженню внутрішньоклітинним кальцієм внаслідок впливу нервово- паралітичної речовини.

Індивідууми, описані в даному описі, можуть піддаватися впливу нервово-паралітичної речовини за допомогою інгаляції. У інших аспектах індивідууми піддають впливу нервово- паралітичної речовини за допомогою черезшкірного перенесення речовини. У інших аспектах індивідууми піддають впливу нервово-паралітичної речовини за допомогою вживання рідини або їжі, контамінованної нервово-паралітичною речовиною. У інших аспектах індивідууми піддають впливу нервово-паралітичної речовини за допомогою підшкірного, внутрішньовенного або внутрішньом'язового введення речовини індивідууму.

У деяких аспектах способи стосуються способів захисту індивідуума від нейронального некрозу після впливу на індивідуума нервово-паралітичної речовини. У цих варіантах здійснення фармацевтичну композицію, яка містить певну кількість сполуки формули І або її фармацевтично прийнятної солі, вводять індивідууму після впливу на індивідуума нервово- паралітичної речовини. Як використовують у межах винаходу, «захист» від нейронального некрозу охоплює зменшення тяжкості ефектів нервово-паралітичної речовини або пом'якшення ефекту нервово-паралітичної речовини, або зменшення нейронального пошкодження внаслідок впливу нервово-паралітичної речовини. У деяких аспектах «захист» від нейронального некрозу охоплює попередження нейронального некрозу у індивідуума, підданого впливу нервово- паралітичної речовини. Таким чином, індивідууми, які «захищені» від нейронального некрозу за допомогою введення сполук і композицій, описаних в даному описі, краще проходять нейроповедінкові тести, порівняно з індивідуумами, підданими впливу нервово-паралітичної речовини, яким не вводили описані сполуки або композиції.

У деяких варіантах здійснення вся центральна нервова система індивідуума захищається від нейронального некрозу. У деяких варіантах здійснення від нейронального некрозу захищається лобно-тім'яна кора, гіпокамп і/або таламус. У інших аспектах від нейронального некрозу захищається лобно-тім'яна кора. У інших аспектах від нейронального некрозу захищається гіпокамп. У інших варіантах здійснення від нейронального некрозу захищається бо таламус.

Наявність і ступінь нейронального некрозу можна визначати з використанням способів, відомих у даній галузі, включаючи нейроповедінкові тести, радіологічні тести і патологічну оцінку.

Також винахід стосується способів захисту індивідуума від зниження функції центральної нервової системи внаслідок впливу нервово-паралітичної речовини. Ці способи включають введення індивідууму фармацевтичної композиції, яка містить певну кількість сполуки формули

Ї або її фармацевтично прийнятної солі, після впливу на індивідуума нервово-паралітичної речовини.

Також винахід стосується способів захисту індивідуума від дисфункція центральної нервової системи внаслідок впливу нервово-паралітичної речовини. Ці способи включають введення індивідууму фармацевтичної композиції, яка містить певну кількість сполуки формули

Ї як описано в даному описі, або її фармацевтично прийнятної солі, після впливу на індивідуума нервово-паралітичної речовини.

Також винахід стосується способів лікування змін поведінки у індивідуума внаслідок впливу нервово-паралітичної речовини. Ці способи включають введення індивідууму фармацевтичної композиції, яка містить певну кількість сполуки формули І або її фармацевтично прийнятної солі, після впливу на індивідуума нервово-паралітичної речовини.

Як використовують у межах винаходу, «захист» від зниження функції центральної нервової системи охоплює зменшення тяжкості ефектів нервово-паралітичної речовини на центральну нервову систему або пом'якшення ефектів на центральну нервову систему нервово- паралітичної речовини, або зниження ефектів на центральну нервову систему нервово- паралітичної речовини. Отже, індивідууми, які «захищені» від зниження функції центральної нервової системи за допомогою введення описаних композицій, які містять сполуки формули Ї, краще проходять нейроповедінкові тести порівняно з індивідуумами, підданими впливу нервово-паралітичної речовини, яким не вводили описані композиції.

Також винахід стосується способів лікування судом, індукованих нервовопаралітичним засобом, у індивідуума, підданого впливу нервово-паралітичної речовини. У деяких аспектах судоми, що піддаються лікуванню, являють собою епілептичний статус (ЗЕ). Ці способи включають введення індивідууму фармацевтичної композиції, яка містить певну кількість

Зо сполуки формули І або ІІ або її фармацевтично прийнятної солі. Як використовують у межах винаходу, лікування припадків, індукованих нервово-паралітичною речовиною, приводить до зменшення тяжкості або тривалості судом. У інших аспектах лікування приводить до зниження як тяжкості, так і тривалості судом.

Кількість сполуки формули І або ІЇ або її фармацевтично прийнятної солі, що є ефективною для лікування індивідуума відповідно до будь-якого з описаних способів, повинна визначатися фахівцем у даній галузі. Терапевтично ефективна кількість може являти собою кількість, необхідну для лікування індивідуума в однократній дозі. Альтернативно терапевтично ефективна кількість може являти собою сукупну кількість дантролену, необхідну для лікування індивідуума протягом тривалого курсу лікування.

У варіантах здійснення, де індивідуумом є людина, ефективна кількість сполуки формули або Ії являє собою кількість сполуки, еквівалентну від 1 мг/кг до 100 мг/кг дантролену, що вводиться в одній або кількох дозах. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули або ІІ еквівалентна від 1 мг/кг до приблизно 90 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ІІ еквівалентна від 1 мг/кг до приблизно 80 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули | або Ії еквівалентна від 1 мг/кг до приблизно 70 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ЇЇ еквівалентна від 1 мг/кг до приблизно 60 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ІІ еквівалентна від 1 мг/кг до приблизно 50 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ІЇ еквівалентна від 1 мг/кг до приблизно 40 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ЇЇ еквівалентна від 1 мг/кг до приблизно 30 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ІІ еквівалентна від 1 мг/кг до приблизно 20 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ІІ еквівалентна від приблизно 5 мг/кг до приблизно 30 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або

ІЇ еквівалентна від приблизно 10 мг/кг до приблизно 30 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ІІ еквівалентна від приблизно 15 мг/кг до приблизно

ЗО мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули ! або І еквівалентна від приблизно 20 мг/кг до приблизно 30 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ІЇ еквівалентна від приблизно 5 мг/кг до приблизно бо 20 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули ! або І еквівалентна від приблизно 5 мг/кг до приблизно 15 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ІЇ еквівалентна від приблизно 5 мг/кг до приблизно 10 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І! або І еквівалентна від приблизно 10 мг/кг до приблизно 20 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ІЇ еквівалентна від приблизно 2 мг/кг до приблизно мг/кг, переважно від приблизно 2 мг/кг до приблизно 6 мг/кг, дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ІІ еквівалентна від приблизно 15 мг/кг до приблизно 20 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули ! або І еквівалентна від 10 мг/кг до 100 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки 10 формули І або ІІ еквівалентна від 20 мг/кг до 100 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ІІ еквівалентна від 30 мг/кг до 100 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ІІ еквівалентна від 40 мг/кг до 100 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ІІ еквівалентна від 50 мг/кг до 100 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ЇЇ еквівалентна від 50 мг/кг до 75 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ІЇ еквівалентна від 25 мг/кг до 75 мг/кг дантролену. У деяких аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ІІ є приблизно еквівалентною 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33 або приблизно 34 мг/кг дантролену. У деяких аспектах ефективна кількість сполуки формули І або ІІ для лікування людини еквівалентна приблизно 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 або приблизно 100 мг/кг дантролену. У інших аспектах ефективна кількість сполуки формули | або І еквівалентна від приблизно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24,25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, Аб, 47, А8, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 або приблизно 100 мг/кг дантролену.

У деяких аспектах винаходу час введення фармацевтичної композиції, яка містить сполуку формули І! або ІІ або її фармацевтично прийнятну сіль, індивідууму після впливу нервово- паралітичної речовини може впливати на величину захисту від нейронального некрозу, що надається індивідууму.

У деяких аспектах винаходу час введення фармацевтичної композиції, яка містить сполуку формули І! або ІІ або її фармацевтично прийнятну сіль, індивідууму після впливу нервово- паралітичної речовини може впливати на величину зниження функції центральної нервової системи, що надається індивідууму.

У деяких аспектах винаходу час введення фармацевтичної композиції, яка містить сполуку формули І! або ІІ або її фармацевтично прийнятну сіль, індивідууму після впливу нервово- паралітичної речовини може впливати на лікування індукованих нервово-паралітичною речовиною судом у індивідуума.

Що стосується часу введення фармацевтичної композиції, яка містить сполуку формули І або І або її фармацевтично прийнятну сіль, в деяких аспектах щонайменше одну дозу фармацевтичної композиції, яка містить сполуку формули І або Ії або її фармацевтично прийнятну сіль, вводять індивідууму через 24 години або менше після впливу на індивідуума нервово-паралітичної речовини. У деяких аспектах щонайменше одну дозу фармацевтичної композиції, яка містить сполуку формули | або її фармацевтично прийнятну сіль, вводять індивідууму через 20 годин або менше після впливу на індивідуума нервово-паралітичної речовини. У деяких аспектах щонайменше одну дозу фармацевтичної композиції, яка містить сполуку формули І або її фармацевтично прийнятну сіль, вводять індивідууму через 16 годин або менше після впливу на індивідуума нервово-паралітичної речовини. У деяких аспектах щонайменше одну дозу фармацевтичної композиції, яка містить сполуку формули І або її фармацевтично прийнятну сіль, вводять індивідууму через 12 годин або менше після впливу на індивідуума нервово-паралітичної речовини. У деяких аспектах щонайменше одну дозу фармацевтичної композиції, яка містить сполуку формули І або її фармацевтично прийнятну сіль, вводять індивідууму через 8 годин або менше після впливу на індивідуума нервово- паралітичної речовини. У деяких аспектах щонайменше одну дозу фармацевтичної композиції, яка містить сполуку формули І або її фармацевтично прийнятну сіль, вводять індивідууму через 4 години або менше після впливу на індивідуума нервово-паралітичної речовини. У деяких аспектах щонайменше одну дозу фармацевтичної композиції, яка містить сполуку формули або її фармацевтично прийнятну сіль, вводять індивідууму через 2 години або менше після впливу на індивідуума нервово-паралітичної речовини. У деяких аспектах щонайменше одну бо дозу фармацевтичної композиції, яка містить сполуку формули І або її фармацевтично прийнятну сіль, вводять індивідууму через 1 годину або менше після впливу на індивідуума нервово-паралітичної речовини. У деяких аспектах щонайменше одну дозу фармацевтичної композиції, яка містить сполуку формули | або її фармацевтично прийнятну сіль, вводять індивідууму в межах приблизно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 або в межах приблизно 24 годин після впливу на індивідуума нервово-паралітичної речовини.

У деяких аспектах фармацевтична композиція, яка містить сполуку формули І або ЇЇ або її фармацевтично прийнятну сіль, може доставляти ефективну кількість сполуки формули І або ІЇ індивідууму, підданому впливу нервово-паралітичної речовини, в одній дозі. Тим часом, в інших аспектах може бути необхідно дві або більше дози фармацевтичної композиції для доставки ефективної кількості сполуки формули І або Ії індивідууму, підданому впливу нервово- паралітичної речовини. Наприклад, може бути необхідно 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10 доз фармацевтичної композиції для доставки ефективної кількості сполуки формули | або Ії індивідууму, підданому впливу нервово-паралітичної речовини. Це додаткове дозування можна вводити по суті одночасно з першою дозою. У інших аспектах додаткове дозування відділене у часі від першої дози. У тих аспектах, в яких вводять З або більше дози, кожна доза може бути відділена за часом від введення будь-якої іншої дози. Інтервали між дозами можуть становити 1 або більше години, наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 або 24 годин. У інших аспектах інтервали між дозами можуть становити 1 або кілька діб.

Відповідно до винаходу, введення сполуки формули І або ІІ індивідууму, підданому впливу нервово-паралітичної речовини, є допоміжною терапією при впливі нервово-паралітичної речовини. Індивідуумам, підданим впливу нервово-паралітичної речовини, також можна вводити один або кілька антидотів нервово-паралітичних речовин. Одним класом антидотів для впливу нервово-паралітичної речовини є реактиватори ацетилхолінестерази, наприклад, азоксиму хлорид (НІ-6). Іншим класом антидотів для впливу нервово-паралітичної речовини є оборотні антагоністи рецепторів ацетилхоліну, наприклад, атропіну метилнітрат. Індивідуумам, підданим впливу нервово-паралітичних речовин, також можна вводити протисудомний лікарський засіб.

Ілюстративні протисудомні лікарські засоби включають альдегіди (наприклад, паральдегід), ароматичні алілові спирти (наприклад, стирипентол), бензодіазепіни (наприклад, клобазам, клонезепам, клоразепат, діазепам, мідазолам, лоразепам, нітразепам, темазепам, німетазепам), барбітурати (наприклад, фенобарбітал, метилфенобарбітал, барбексаклон), броміди (наприклад, бромід калію), карбамати (наприклад, фелбамат), карбоксаміди (наприклад, карбамазепін, окскарбазепін, еслікарбазепіну ацетат), жирні кислоти (наприклад, вальпроєва кислота, вальпроат натрію, дивалпрекс натрій, вігабатрин, прогабід, тіагабиін), топірамат, аналоги САВА (наприклад, габапентин, прегабалін), гідантоїни (наприклад, етотоїн, фенітоїн, мефенітоїн, фосфенітоїн), оксазолідиндіони (наприклад, параметадіон, триметадіон, етадіон), пропіонати (наприклад, бекламід), піримідиндіони (наприклад, примідон), піролідини (наприклад, бриварацетам, левітирацетам, селетрацетам), сукциніміди (наприклад, етосуксимід, фенсуксимід, месуксимід), сульфонаміди (наприклад, ацетазоламід, султіам, метазоламід, зонісамід), триазини (наприклад, ламотригін), сполуки сечовини (наприклад, фенетурид, фенацемід), валпроїламіди (наприклад, вальпромід, валноктамід), перампанел і їх комбінації. У деяких аспектах протисудомний лікарський засіб являє собою бензодіазепін, наприклад, мідазолам. У інших аспектах протисудомний лікарський засіб являє собою барбітурат. У інших аспектах протисудомний лікарський засіб являє собою гідантоїн. У деяких аспектах протисудомний лікарський засіб являє собою паральдегід. У інших аспектах протисудомний лікарський засіб являє собою бромід калію. У деяких аспектах протисудомний лікарський засіб являє собою жирну кислоту. У інших аспектах протисудомний лікарський засіб являє собою топірамат.

У аспектах, де індивідууму, підданому впливу нервово-паралітичної речовини, вводять антидот, сполуку формули | або І вводять після введення антидоту. Наприклад, сполуку формули І або ІІ можна вводити після введення реактиватора ацетилхолінестерази і/або після введення оборотного антагоніста рецепторів ацетилхоліну.

У аспектах, де індивідууму, підданому впливу нервово-паралітичної речовини, вводять протисудомний засіб, сполуку формули І або Ії можна вводити одночасно з введенням протисудомного засобу. Сполуку формули І або І можна вводити по суті одночасно із введенням протисудомного засобу, а також, наприклад, в межах приблизно 5 хвилин після введення протисудомного засобу. У інших варіантах здійснення сполуку формули І або ЇЇ вводять до введення протисудомного засобу. У інших варіантах здійснення сполуку формули або ІІ вводять після введення протисудомного засобу. бо Фармацевтичну композицію, яка містить сполуку формули І або ЇЇ або її фармацевтично прийнятну сіль, можна вводити внутрішньовенно. У інших аспектах фармацевтичну композицію, яка містить сполуку формули І або Ії або її фармацевтично прийнятну сіль, можна вводити трансдермальним шляхом. У інших аспектах фармацевтичну композицію, яка містить сполуку формули І або ІІ або її фармацевтично прийнятну сіль, можна вводити внутрішньом'язово. У інших аспектах фармацевтичну композицію, яка містить сполуку формули | або І або її фармацевтично прийнятну сіль, можна вводити внутрішньокістковим шляхом. У інших аспектах фармацевтичну композицію, яка містить сполуку формули І або Ії або її фармацевтично прийнятну сіль, можна вводити підшкірно.

Переважні фармацевтичні композиції для застосування в описаних способах включають сполуку формули І або І або її фармацевтично прийнятну сіль, і один або кілька фармацевтично прийнятних ексципієнтів. Переважні фармацевтичні композиції містять сполуку формули І або ІП або її фармацевтично прийнятну сіль, маніт, полісорбат (наприклад, полісорбат 80), повідон (наприклад, повідон К12), необов'язковий засіб для корекції рн (наприклад, Маон або НС), і воду.

Відповідно до винаходу, введення сполуки і/або фармацевтичної композиції, як описано в даному описі, може забезпечувати по суті еквівалентну АС у індивідуума порівняно з введенням еталонного продукту дантролену, такого як КУАМОЮОЕХФФ. У інших аспектах введення сполуки і/або фармацевтичної композиції, як описано в даному описі, може забезпечувати по суті еквівалентну АС у індивідуума порівняно з порівняльною композицією.

Наприклад, в деяких аспектах при введенні індивідууму 9090 довірчі інтервали (СІ) відносного середнього значення АОсСуіод ії АОСуо-«з дантролену описаної фармацевтичної композиції може становити в межах від 8095 до 12595 (наприклад, 8095, 8595, 9095, 9595, 10095, 10595, 110905, 11595, 12095 або 12595) від відносного середнього значення АШС(ою і АШОсСуо-г), відповідно, дантролену при введенні еталонного продукту дантролену, наприклад, КХАМООЕХФ). У деяких аспектах при введенні індивідууму 9090 довірчі інтервали (СІ) для відносного середнього значення АШС(ою і АОсС(о-гу дантролену описаної фармацевтичної композиції знаходиться в межах від 8095 до 12595 (наприклад, 8095, 8595, 9095, 9595, 10095, 10595, 11095, 11595, 12095 або 12595) від відносних середніх значень АсСуов і АОсСуо-«у, відповідно, дантролену при введенні порівняльного продукту.

Наведені нижче приклади надані для ілюстрації деяких з ідей, описаних в даному описі.

Хоча вважається, що кожний приклад відповідає конкретним індивідуальним варіантам здійснення винаходу, жоден із прикладів не треба вважати таким, що обмежує більш загальні варіанти здійснення, описані в даному описі. У наведених нижче прикладах були зроблені спроби забезпечити точність чисел, що використовуються (наприклад, кількості, температура і т. д.), однак потрібно враховувати деяку експериментальну похибку і відхилення.

ПРИКЛАДИ

Приклад 1. о

Ск к ато о

М, о бо

А бе корі й нн сяя- я ьо нс / Є

Суто в ча

Су» 1а 4

Натрій дантролен (1 екв.) розчиняли у безводному диметилформаміді. Додавали реагент З (1 екв.) і реакційну суміш перемішували при 60"С в атмосфері азоту. Через 4 год. додавали ще один еквівалент реагенту З і реакційну суміш перемішували при 60"С протягом ночі. Потім реакційну суміш розбавляли етилацетатом і промивали два рази насиченим хлоридом натрію.

Шари розділяли. Органічні шари сушили над сульфатом натрію і концентрували у вакуумі.

Неочищений продукт очищували з використанням хроматографії на силікагелі. Бажаний продукт виділяли з чистотою 90-9595. Дані "Н-'ЯМР узгоджувалися зі спрогнозованими для бажаного продукту.

Приклад 1, спосіб А: Та, сушили з Р2О5 протягом ночі. До суміші Та (500 мг, 1,48 ммоль) в

ОМЕ (10 мл) додавали З (0,84 мл, 3,72 ммоль), а потім Маї (245 мг, 1,63 ммоль) при 0"С.

Отриману суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 64 год. Суміш розбавляли

Ес (30 мл) і розсолом (20 мл). Органічний шар відділяли, промивали водою (2х15 мл), сушили над безводним Ма»5О4, фільтрували і упарювали. Неочищений залишок очищували флеш-хроматографією (два рази) елююючи 0-1095 МеоОнН/СНе2Сі» з отриманням бажаної сполуки 4 (355 мг, 4595) у вигляді жовтої твердої речовини.

Приклад 1, спосіб В: Та сушили з Рг2О5 протягом ночі. До суміші Та (8,0 г, 23,8 ммоль) в ОМЕ (160 мл) додавали З (6,5 мл, 28,79 ммоль), а потім Маї (4,28 г, 28,55 ммоль) при кімнатній температурі. Отриману суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 40 год. Суміш розбавляли ЕІЮАс (250 мл) і розсолом (60 мл). Органічний шар відділяли, промивали водою (2х75 мл), сушили над безводним Ма»5О:, фільтрували і упарювали. Залишок розтирали з

СНеСі2-гексаном з отриманням жовтої твердої речовини (7 г). Цю тверду речовину очищували флеш-хроматографією (два рази, інактивований 5іО2), елююючи 0-1095 Меон/СНесСіг, з отриманням бажаної сполуки 4 (1,92 г, 1595) у вигляді жовтої твердої речовини.

Приклад 2. о ок р РК о / то З о « он

М. о /г І А: У -о7 о х ух хо о ХМ М ле

Суто МИ то 2 4

Зразок сполуки 4 обробляли 1 мл суміші 9/1 трифтороцтової кислоти/води протягом 20-30 хв. при температурі навколишнього середовища. Надлишок ТЕА відразу видаляли з використанням високого вакууму і отриману тверду речовину збирали фільтрацією, промивали водою (5 мл) і сушили повітрям. Вихідний матеріал, реакційну суміш і кінцевий продукт аналізували за допомогою І С/М5 для визначення того, чи конвертується 2 назад дантролен в умовах видалення захисної групи. Не спостерігали зворотного конвертування 2 в дантролен.

Дані "Н-ЯМР продукту узгоджувалися зі спрогнозованими даними для бажаного продукту.

Приклад 2, спосіб А: до суміші 4 (886 мг, 1,65 ммоль) в СНеоСі» (9 мл) додавали ТЕА (9 мл).

Отриману суміш перемішували при кімнатній температурі протягом З год. Розчинник випарювали на роторному випарнику до сухого стану. Отриманий залишок розтирали з гексаном протягом 1 год. і жовту тверду речовину фільтрували і сушили з отриманням бажаної сполуки 2 (660 мг, 94965).

Приклад 3. - мІд В он ох / Ма ох Р

Р о / томах о / Тон М о о

М, о /9 А: і

М - 7 о у -еВ86е- в: М. Ле

С о КИ ит 2а 2 50 мг 2 змішували з З мл метанолу (повне розчинення) і наносили на 1 г Ма. іонообмінної колонки. Сполуку елюювали метанолом і після ліофілізації забезпечило 18 мг (вихід - Зб) оранжевої твердої речовини. Цей матеріал розчиняли у воді і обережно титрували до рН 8,5 додаванням невеликих аліквот 0,1 М Мабн, при перемішуванні. Потім розчин ліофілізували з отриманням оранжевої твердої речовини, сполука 2а. Дані І С/М5 зразка до і після ліофілізації були ідентичними, що вказує на те, що не відбувається зворотного конвертування в дантролен у ході іонного обміну. Дані "Н-ЯМР продукту узгоджувалися зі спрогнозованими даними для бажаного продукту.

Приклад 3, спосіб А: до суспензії 2, що перемішується (500 мг, 1,17 ммоль), у воді (63 мл, категорія ВЕРХ) додавали 0,1 Н Маон (23,6 мл, 2,34 ммоль) при кімнатній температурі аліквотами по 650 мкл, після чого відразу проводили швидке струшування доти, поки значення рН не досягало 8,5. Розчин фільтрували і фільтрат ліофілізували протягом ночі з отриманням вказаної в заголовку сполуки 2а (530 мг, 9695) у вигляді жовтої твердої речовини. М (СІ) т/2-424,9 МІ. "НН ММА (300 МГц, 020): б 8,08 (д, 9У-8,8 Гц, 2Н), 7,72 (д, 9-8,8 Гц, 2Н), 7,59 (с, 1Н), 6,98 (д, 9-3,6 Гу, 1Н), 6,86 (д, 9У-3,6 Гу, 1Н), 5,19 (д, У-6,0 Гц, 2Н), 4,32 (с, 2Н).

Приклад 4. Конвертування 2а у дантролен з допомогою лужної фосфатази при 2570

Інкубація з лужною фосфатазою

Проліки га інкубували з очищеною лужною фосфатазою при 25"С. Кінцева реакційна суміш містила приблизно 20 мкг/мл проліків і 50 мкО/мкл лужної фосфатази (з кишечнику теляти, зідта Ж11097075001) в 1Х РВ5, рН 7,4. Також отримували контрольну суміш, що містила 20 мкг/мл проліків без ферменту в їХ РВЗ рН 7,4. Реакційну суміш з ферментом зберігали при 2576 і аліквоти 10 мкл інжектували і аналізували за допомогою ВЕРХ через 0,9 год., 3,2 год., 5,5 год., 7,7 год. і 19,9 год. Контрольну суміш також зберігали при 25"С і аліквоти 10 мкл інжектували для аналізу за допомогою ВЕРХ через 1,5 год., 3,8 год., 6,6 год., 8,3 год. і 20,4 год.

Аналіз зразків за допомогою ВЕРХ

Аналіз проводили із використанням системи УМаїег5 2695 АЙШапсе бузіет, обладнаної детектором РОА ї колонкою Кевїек Ойга С18 (5 мкм, 250х4,6 мм), що підтримується при 2576.

Зразки аналізували з використанням градієнтного способу з рухомою фазою А, яка містила ацетонітрил, і рухомою фазою В, яка містила ацетонітрил:фосфатний буфер рН 6,9 33:67.

Колонку урівноважували 10095 рухомою фазою В, а потім тримали в цій композиції протягом 19 хв. Потім кількість рухомої фази А збільшували до 5595 за 5 хв. Колонку промивали 5595 А протягом 2 хв., повертали до 10095 В протягом 2 хв., а потім повторно врівноважували 10095 В протягом 5 хв. протягом загального часу 33 хв. 10 мкл зразка інжектували, і детекцію сполук, що аналізуються, проводили за допомогою УФ при 375 нм. Проліки елюювалися приблизно через 3,1 хвилини і дантролен елюювався приблизно через 15, хвилини. Проводили моніторинг зміни площі піку з плином часу для визначення конвертування проліків у дантролен.

Графіки для площі піку з плином часу подані на фіг. 1 ї фіг. 2.

Приклад 5. Конвертування 2а у дантролен в плазмі щура при 227"С

Інкубація з плазмою

Експеримент іп міго проводили за допомогою додавання 40 мкл приблизно 10 мг/мл 2а,

Зо розчиненої в ОМЕ, до 360 мкл попередньо замороженої плазми самців щурів Зргадиє ОаулЛеу при 22"С. Плазму з доданою сполукою зберігали при 22" і аліквоти 50 мкл відбирали через 25 хв., З год. і 20 год. після додавання. Аліквоти відразу обробляли 50 мкл ацетонітрилу і перемішували струшуванням з подальшим центрифугуванням при 4000 об./хв. протягом 5 хв. при 25"С. 50 мкл супернатанту розбавляли 50 разів у суміші ацетонітрил:росфатний буфер рн 6,9 33:67 і переносили в скляний флакон для аналізу за допомогою ВЕРХ.

Аналіз зразків за допомогою ВЕРХ

Аналіз проводили з використанням системи УмМаїег5 2695 АПШапсе Зузіет, обладнаної детектором РОА ї колонкою Кевїек Ойга С18 (5 мкм, 250х4,6 мм), що підтримується при 2576.

Зразки аналізували з використанням градієнтного способу з рухомою фазою А, що містила ацетонітрил, і рухомою фазою В, що містила ацетонітрил:фосфатний буфер рН 6,9 33:67.

Колонку врівноважували 10095 рухомою фазою В, а потім тримали в цій композиції протягом 19 хв. Потім кількість рухомої фази А збільшували до 5595 за 5 хв. Колонку промивали 5595 А протягом 2 хв., повертали до 10095 В протягом 2 хв., а потім повторно врівноважували 10095 В протягом 5 хв. протягом загального часу 33 хв. 10 мкл зразка інжектували, і детекцію сполук, що аналізуються, проводили за допомогою УФ при 375 нм. Проліки елюювалися приблизно через 3,1 хвилини і дантролен елюювався приблизно через 15, хвилини. Проводили моніторинг зміни площі піку з плином часу для визначення конвертування проліків у дантролен.

Див. фіг. 3.

Приклад 6. Конвертування 2а у дантролен у плазмі при 377С

Інкубація з плазмою

Експеримент іп міго проводили за допомогою додавання 60 мкл приблизно 10 мг/мл 2а, розчиненоїв ОМЕ, до 690 мкл попередньо замороженої плазми самців щурів 5ргадие ОаулЛеу при 37"С. Плазму з доданою сполукою зберігали при 37"С і аліквоти 50 мкл відбирали через 5, 10 хв., 20 хв., 30 хв., 40 хв., 50 хв., 60 хв., 100 хв., 2,5 год., З,5 год., 4 год., 5 год. і 6,5 год. після додавання. Аліквоти відразу обробляли 50 мкл ацетонітрилу і перемішували струшуванням з подальшим центрифугуванням при 4000 об./хв. протягом 5 хв. при 25"С. 50 мкл супернатанту переносили у скляний флакон для аналізу за допомогою ВЕРХ.

Аналіз зразків за допомогою ВЕРХ

Аналіз проводили з використанням системи УмМаїег5 2695 АПШапсе Зуз(ет, обладнаної бо детектором РОА і колонкою КезієК ОПйга С18 (5 мкм, 250х4,6 мм), що підтримується при 2576.

Зразки аналізували з використанням градієнтного способу з рухомою фазою А, що містила 0,195 трифтороцтову кислоту у воді, і рухомою фазою В, що містила 0,195 трифтороцтову кислоту в ацетонітрилі при швидкості потоку 1,0 мл/хв. Колонку врівноважували 6795 рухомої фази А/3395 рухомої фази В, а потім тримали в цій композиції протягом 19 хв. Потім кількість рухомої фази В збільшували до 7095 за 5 хв. Колонку промивали 7095 В протягом 2 хв., повертали до 3395 В протягом 2 хв., а потім повторно врівноважували 3395 В протягом 5 хв. протягом загального часу 47 хв. 5 мкл зразка інжектували, і детекцію сполук, що аналізуються, проводили за допомогою УФ при 375 нм. Проліки елюювалися приблизно через 6,5 хвилини і дантролен елюювався приблизно через 18,5 хвилини. Проводили моніторинг зміни площі піку з плином часу для визначення конвертування проліків у дантролен. Графік площі піку для проліків з плином часу поданий на фіг. 4.

Приклад 7. Біодоступність дантролену після введення га щурам

Способи

Сполуку га складають у концентрації 8 мг/мл у 595 водному розчині маніту (як модифікатора тонічності) при рН 8,0. Склад вводять в/в, п/ш або в/м канюльованим щурам Напап бргадиє

Бамеу (З щури/групу) від Епмідо КМ5, Іпс. (Іпаіапароїїв, ІМ). У кожній групі вводять 7,5 мг/кг 2а, що дорівнює 5 мг/кг еквівалентів дантролену (ОЕ). Проводять взяття цільної крові (0,1 мл) через катетер у яремній вені через 0, 0,033 (тільки для в/в), 0,083, 0,167, 0,33, 0,66, 1, 3,6 і 9 годин.

Відразу після взяття 0,1 мл цільної крові додають до 0,3 мл ацетонітрилу для зупинки реакції біоконвертування проліків. Потім зразки вміщують на вологий лід до центрифугування для видалення преципітату. Преципітований матрикс цільної крові аналізують відносно 2а, дантролену і метаболіту 5-ОН дантролену з використанням колонки 4-мкм Роїаг ЕР 804, 75х2 мм РПпепотепех Зупегді на системі УМаїег5 Асдийу ОРІ С, приєднаній до системи І С/М5/М5

Арріїєд Віозухтет5/МО5 Зсіех АРІ 6500. Зразки кількісно визначають, виходячи зі стандартних кривих, отриманих для кожної сполуки, що аналізується, в преципітованому матриксі цільної крові.

Аналогічно, концентрацію дантролену в плазмі з плином часу визначають після введення

Еуаподех внутрішньовенно щурам в дозі 5 мг кг". Оскільки Куаподех являє собою 3,5 гідрат дантролену натрію, це еквівалентно дозі 3,9 мг кг" дантролену на молярній основі (тобто 3,9 мг

Зо кг" еквівалентів дантролену (ОЕ)).

Площу під кривою (АС) обчислюють із використанням правила трапеції з використанням програмного забезпечення ЗідтаРіої 12.5.

Результати

Введення га щурам в/в, в/м і п/ш шляхом приводить до швидкої появи дантролену в крові.

Приклад 8. Біодоступність дантролену після введення сполук за винаходом щурам

Способи

Сполуки за винаходом складають у 595 водному розчині маніту (як модифікатора тонічності). Склад вводять в/в, п/ш або в/м канюльованим щурам Напап бргадне бам/еу (З щури/групу) від Епмідо КМ, Іпс. (Іпаіапароїї5, ІМ). У кожній групі вводять кількість, еквівалентну 5 мг/кг еквівалентів дантролену (ОЕ). Проводять взяття цільної крові (0,1 мл) через катетер в яремній вені через 0, 0,033 (тільки для в/в), 0,083, 0,167, 0,33, 0,66, 1, 3, 6 і 9 годин. Відразу після взяття 0,1 мл цільної крові додають до 0,3 мл ацетонітрилу для зупинки реакції біоконвертування проліків. Потім зразки вміщують на вологий лід до центрифугування для видалення преципітату. Преципітований матрикс цільної крові аналізують відносно вихідних проліків, дантролену і метаболіту 5-ОН дантролену з використанням колонки 4-мкм Роїаг КЕР 80А, 75х2 мм Рпепотепех БЗупегді на системі УМаїег Асдийу ОРІ С, приєднаній до системи

ГС/М5/М5 Арріїей Віозуєтет5/МО5 Зсіех АРІ 6500. Зразки кількісно визначають, виходячи зі стандартних кривих, отриманих для кожної сполуки, що аналізується, в преципітованому матриксі цільній крові.

Еуаподех внутрішньовенно щурам в дозі 5 мг кг". Оскільки Куаподех являє собою 3,5 гідрат дантролену натрію, це еквівалентно дозі 3,9 мг кг" дантролену на молярній основі (тобто 3,9 мг кг" еквівалентів дантролену (ОЕ)).

Площу під кривою (АС) обчислюють з використанням правила трапеції з використанням програмного забезпечення ЗідтаРіої 12.5.

Результати

Введення сполук за винаходом щурам в/в, в/м і п/ш шляхом приводить до швидкої появи дантролену в крові.

Приклад 9 60 Огляд дослідження

Задачею дослідження є визначення того, чи має сполука за винаходом (наприклад, сполука га) нейропротективні ефекти в моделі виживання у ссавців, наприклад, собак, свиней, кроликів, гризунів (наприклад, щурів, мишей, морських свинок) і приматів (наприклад, мавпи, шимпанзе).

Однією з ілюстративних моделей є модель виживання у щурів при введенні СО (зоман).

Однократні дози сполуки за винаходом вводять після початку індукованих нервово- паралітичною речовиною судом. Наприклад, вводять однократні дози сполуки, еквівалентні від 1 мг/мг до 30 мг/кг дантролену (наприклад, 10 мг/кг або 30 мг/кг). Введення сполуки за винаходом можна провести внутрішньовенно, підшкірно, внутрішньом'язово, трансдермальним шляхом, внутрішньокістковим шляхом. Наприклад, дозу можна вводити внутрішньовенно.

Виживанню можна сприяти за допомогою введення антидоту нервово-паралітичної речовини. Наприклад, азоксиму хлорид (НІ-6) можна вводити до впливу нервово-паралітичної речовини, наприклад, за тридцять хвилин до підшкірної ін'єкції (п/ш) зоману, атропіну метилнітрат можна вводити через одну хвилину після п/ш ін'єкції зоману і мідазолам можна вводити через двадцять хвилин після початку індукованих зоманом судом, які досягають показника Касіпе щонайменше 3.

Контролі включають одну групу тварин без введення (наївні), а в іншій групі вводять стерильну воду після початку індукованих нервово-паралітичною речовиною судом (наприклад, через 50 хвилин після початку індукованих нервово-паралітичною речовиною судом).

Проводять серію нейроповедінкових тестів протягом певного періоду часу, наприклад, приблизно через 28 діб після впливу однократної дози нервово-паралітичної речовини. Через день після періоду тестування (наприклад, на 29 добу) всіх тварин умертвляють під анестезією, наприклад, за допомогою кровопускання або інтракардіальної перфузії. Головний мозок витягують з кожної тварини для мікроскопічної оцінки нейропатології, і серце витягують з кожної тварини для дослідження можливої патології.

Матеріали

Зоман (20) - розбавлений 0,995 хлоридом натрію. Зоман являє собою фосфорорганічну нервово-паралітичну речовину, яка інактивує ацетилхолінестеразу (АСПЕ) шляхом утворення аддукту з ферментом. - Хімічна назва: пінаколілметилфосфонофлуоридат - Формула: С7НівбБО2Р - Молекулярна маса: 182,17 - МАІСіоваї партія Ж 50090415-600-1 - ІО первинного стандарту: 13972-49-3 - Чистота: 10090 - Умови зберігання « 47С

НІ-6: Хімічна назва: КЕ)-11-К4-карбамоїлпіридин-1-ій-1-ілуметоксиметилі|піридин-2- іліденіметилІоксоазанію метансульфонат (азоксиму хлорид)

Структура: її"

М й Кто тн сх

ХУ р о с" с

Мн,

Формула: С14НівєСі2МаОз

Молекулярна маса: 359,207

Атропіну метилнітрат: Хімічна назва: (8,8-диметил-8-азоніабіциклоЇ3.2.1|октан-З-іл) 3- гідрокси-2-фенілпропаноату нітрат

Структура:

«І.

М

Н о де

Формула: СівНовМгОвє

Молекулярна маса: 366,414 5 Мідазолам: хімічна назва: 8-хлор-6-(2-фторфеніл)-1-метил-4Н-імідазо|1,5- а|П1,бензодіазепін

Структура:

Со -М

А

М ке й

Формула: СівНізСТЕМз

Молекулярна маса: 325,771

Дози

НІ-Є6, зоман, атропіну метилнітрат і мідазолам: можуть бути вибрані однократні дози НІ-6 (в/ч, 125 мг/кг); зоману (п/ш, 154 мкг /кг, 1,4хІ О5о), атропіну метилнітрату (в/м, 2 мг/кг) і мідазоламу (в/м, 2 мг/кг). Очікується, що цей режим викличе судоми, які досягнуть показника

Васіпе щонайменше 3 і прийнятної кількості тих, що вижили, для випробування для спостереження.

Сполуки за винаходом: можна вводити сполуку за винаходом або її фармацевтично прийнятну сіль, як описано в даному описі. Переважною сполукою є сполука га.

Отримання дози

У експериментах з використанням 50, 50 отримують в крижаному 0,995 хлориді натрію згідно з «ЗОР МКІ-5821 Ргерагайоп ої біапдагаз апа Затрієз пот Везєагсі ОемеІортепі апа

Тевііпд ЕмаїІпайоп (ВОТЕ) Оіїше ЗоіІшіоп5».

Шкала Касіпе 1-знерухомлення і погляд впритул 2-кивання головою, «обтрушування мокрої собаки»

З-клонус передньої кінцівки 4-двосторонній клонус передніх кінцівок

Зо Б-двосторонній клонус передніх кінцівок, піднімання на задні кінцівки і втрата рівноваги

Нейроповедінкові тести

Ділянки головного мозку, які пошкоджуються в результаті впливу зоману, можуть включати гіпокомп і енторинальну, лобну і тім'яну кору. Ці ділянки містять структури і нервові ланцюги для навчання, формування спогадів, переробки інформації й інших когнітивних процесів. Для оцінки потенційних нейропротективних ефектів сполуки за винаходом тварину оцінюють з використанням серії поведінкових тестів, які задіюють навчання, пам'ять, сенсорно-моторну інтеграцію і адаптивні відповіді. Приклади таких тестів включають: 1) тест на перевагу сахарози і 2) тест примусового плавання.

Тест на перевагу сахарози

У тесті на перевагу сахарози (5РТ) використовується природна схильність щурів віддавати перевагу солодкій воді над звичайною водою. Він є загальноприйнятим тестом для визначення поведінки прагнення задоволення (гедонія) або його відсутності (ангедонія) і вимагає, щоб тварина пристосовувалася до зміни розміщення зліва або справа пляшок, які містять водопровідну воду і воду з 195 сахарозою.

Щурів утримують окремо з доступом до їжі і води без обмежень (одна пляшка води в кожній клітці) перед 5РТ. Для акліматизаційної частини 5РТ 2 пляшки води вміщують у домашню клітку кожного зі щурів на 5-6 діб. Пляшки з водою обладнані напувалками, які мінімізують протікання, і їх зважують приблизно кожні 24 години. Після фази акліматизації одну пляшку для води заповнюють приблизно 200 мл 195 розчину сахарози, а іншу пляшку заповнюють приблизно 200 мл водопровідної води. Через двадцять чотири години кількість рідини, що залишилася в кожній пляшці, реєструють. Розміщення пляшок зліва/справа потім міняють і кількість рідини, що залишилася в кожній пляшці, знову реєструють через двадцять чотири години. Кількість (мл) вжитого розчину сахарози виражають як процент від загального об'єму вжитої рідини (вода з сахарозою плюс вода) протягом кожного з двох періодів по 24 години і порівнюють по групах і добах.

Тест примусового плавання

Тест форсованого плавання (Е5Т) був розроблений Рогзої в пізні 1970-ті як швидкий спосіб скринінгу ефективності антидепресантних лікарських засобів у гризунів. Збільшена знерухомленість, яка виникає в кінці 5-хвилинного Е5Т у гризунів без лікування («нормальних») інтерпретувалася як «поведінковий відчай» і вона поверталася назад антидепресантними лікарськими засобами, що корелювало з антидепресантною ефективністю цих засобів у людей.

Однак конструктивна валідність цього тесту була піддана сумніву з багатьох причин, що включають: 1) в Е5Т тестуються гострі ефекти антидепресантів, в той час як у пацієнтів з клінічною депресією лікарські засоби потребують 4-6 тижнів для клінічного поліпшення; 2) залежною змінною в Е5Т є гостра відповідь тварини на тест і не характеристику тварини; і 3)

Зо інтерпретація поведінки плавання як «поведінковий відчай» є антропоморфічною. Зараз вважається, що прогресуюча знерухомленість, що спостерігається у щурів без лікування, відображає адаптивну відповідь на гострий стрес внаслідок вміщення у контейнер без можливості вибратися.

При Е5Т активність плавання і знерухомленість визначають у скляній циліндричній камері (46 см Нх30 см 0), заповненою водою (висота 30 см, 25"С). Термометри використовують, щоб пересвідчитися в тому, що температура води є постійною 24-26"С для всіх тварин. Проводять два сеанси плавання, один як первинний «попередній тест» протягом 15 хв., за яким слідує другий «тест» протягом 5 хв. через 24 години. Сеанси тесту реєструють на відео. Час, витрачений на активне плавання, і час, витрачений в знерухомленому стані, оцінюють для кожної хвилини Е5Т.

Нейропатологія 7 зрізів головного мозку кожної тварини оцінюють мікроскопічно з використанням напівкількісної оцінної системи з б точок. Мікроскопічні вогнища пошкодження оцінюють за шкалою з 6 точок:

О-норма 1-1-5 уражених клітин на мікроскопічне поле 40Х 2-6-20 уражених клітин на мікроскопічне поле 40Х 3-21-50 уражених клітин на мікроскопічне поле 40Х 4-5096-8090 уражених клітин на мікроскопічне поле 40Х 5 - »8095 уражених клітин на мікроскопічне поле 40Х

Приклад 10. Отримання 2р

НА З око ори й 5 З о ї тон а и "он но Ах і . о о о и КД лу з, но о о М х / м но

Суп . 26 нм 2 но но

До суспензії 2, що перемішується (100 мг, 0,23 ммоль), у воді (12 мл, категорія ВЕРХ) краплинно додавали Тіз (5, 57 мг, 0,47 ммоль), розчинений у воді (5 мл), при кімнатній температурі. Значення рН кінцевого розчину становило 6,6. Розчин фільтрували і фільтрат ліофілізували протягом ночі з отриманням вказаної в заголовку сполуки 260 (150 мг, 95965) у вигляді жовтої твердої речовини. М5 (СІ) т/2-424,9 МІ. "Н-ЯМР (300 МГц, ОМ50О-ав): 6 8,24 (м, 2Н), 7,93 (м, 2Н), 7,73 (м, 1Н), 7,12 (м, 1Н), 6,97 (м, 1Н), 5,20 (м, 2Н), 4,40 (м, 2Н), 3,63 (м, 15 Н).

Приклад 11.

М ЯВ-оі о

Мі / М хо о ХМ

Х / по 6

ЇЇ М І Ії о угон - о а о -

М У А МН К у о о о о --- о о. ен, Стадія 1 Су, Стадія 2 Х / 5 но а 7 з

М сі

М". 5 / ди / М

Стадія З " Су в

Стадія 1: Та сушили з Р2О5 протягом ночі. До суміші Та (1,0 г, 2,97 ммоль) в ОМЕ (20 мл) додавали крижану оцтову кислоту (340 мкл, 5,95 ммоль) при кімнатній температурі. Суміш перемішували протягом ночі при кімнатній температурі. Суміш переливали на роздроблений лід, тверду речовину відфільтровувати і промивали водою. Отриману вологу тверду речовину сушили над безводним Рг2О5 протягом ночі з отриманням бажаної сполуки 7 (920 мг, 9895) у вигляді жовтої твердої речовини.

Стадія 2: до суспензії 7 (1,35 г, 4,29 ммоль) у воді (45 мл) додавали формалін (4,35 мл, 57,45 ммоль, 3795 формальдегід у воді), а потім К»бОз (51 мг, 0,37 ммоль). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 24 год. Реакційну суміш фільтрували і жовту тверду речовину промивали 395 водним розчином формальдегіду і сушили повітрям протягом 24 год. з отриманням бажаної сполуки 9 (1,2 г, 8295).

Стадія 3: До розчину 9 (615 мг, 1,78 ммоль) в суміші ОМЕ:ацетон (40 мл, 15:25 мл) повільно додавали Рсіз (1,2 мл, 13,71 ммоль) при 0"С. Реакційну суміш перемішували протягом 10 хв.

Зо при 0"С і протягом 2 год. при кімнатній температурі. Потім суміш переливали на роздроблений лід і отриману тверду речовину відфільтровувати, промивали водою (3х50 мл) і сушили над

Р2О5 у вакуумі протягом 16 год. з отриманням бажаної сполуки 6 (600 мг, 9295). "Н-ЯМР (300

МГц, ОМ50О-ав): 6 8,33 (д, У-8,5 Гц, 2Н), 8,03 (д, У-8,8 Гц, 2Н), 7,87 (с, 1Н), 7,48 (д, 9-33 Гц, 1Н), 1,11 (д, 93,6 Гц, 1Н), 5,42 (с, 2Н), 4,53 (с, 2Н).

Приклад 12.

М он о /

МІ

/ М хо о ч

М / 1 ло 9

ЇЇ М І Ії о ул - о а о -

М У й МН М ух о о що о у стадят о ую, Стадія 2 Х Й но а 7 З

СТАДІЯ 1: Та сушили з РО протягом ночі. До суміші Та (1,0 г, 2,97 ммоль) в ОМЕ (20 мл) додавали крижану оцтову кислоту (340 мкл, 5,95 ммоль) при кімнатній температурі. Реакційну суміш перемішували протягом ночі при кімнатній температурі. Суміш переливали на роздроблений лід, отриману тверду речовину фільтрували і промивали водою. Вологу тверду речовину сушили над безводним РгО5 протягом ночі з отриманням бажаної сполуки 7 (920 мг, 9895) у вигляді жовтої твердої речовини.

СТАДІЯ 2: До суспензії 7 (90 мг, 0,28 ммоль) у воді (2,6 мл) додавали формалін (0,29 мл, 3,83 ммоль, 3795 формальдегід у воді), а потім К»СОз (3,4 мг, 0,02 ммоль). Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 24 год. Реакційну суміш фільтрували і жовту тверду речовину промивали 395 водним розчином формальдегіду і сушили на повітрі протягом 24 год. з отриманням бажаної сполуки 9 (86 мг, 8895). М5 (СІ) т/2-343 МІ. "Н-ЯМР (300 МГц, ОМ5О-

Ов): б 8,32 (д, 9У-9,0 Гц, 2Н), 8,03 (д, 9-91 Гу, 2Н), 7,83 (с,1Н), 7,47 (д, 9-3,6 Гц, 1Н), 7,08 (д, 9У-3,6

Гц, 1Н), 6,52 (т, 1Н), 4,85 (д, 9-71 Гц, 2Н), 4,45 (с, 2Н).

Приклад 13. о о М, о ММ о /-90

І М о о е НСІ 5 но

М / 10с і (7 но стадія 1 о /

Її. о ут о . Ї, о НИ ої о х ух 5 й Я /л о о . у

Сун» вч М / Суто 0оссякт 9 11 10

Стадія 2 ( о / ї о їд на пай

Суто 10с

СТАДІЯ 1: Безводний ЮОМЕ (0,8 мл, 10,33 ммоль) розчиняли в безводному тетрагідрофурані (13 мл). Цей розчин краплинно додавали до розчину, що перемішується, тіонілхлориду (0,75 мл, 10,33 ммоль) в тетрагідрофурані (9 мл) і охолоджували на крижаній бані. Після повного додавання і 30 хвилин на льоду крижану баню видаляли і додавали твердий М- гідроксисукцинімід (832 мг, 7,23 ммоль) (який повністю розчинявся), а потім відразу додавали тверду попередньо порошкованну морфоліноцтову кислоту (1,0 г, 6,88 ммоль).

Морфоліноцтова кислота розчинялася повільно з утворенням однорідного розчину, який швидко ставав каламутним. Реакційну суміш залишали енергійно перемішуватися у плині при кімнатній температурі. Білу тверду речовину промивали тетрагідрофураном і сушили у вакуумі з отриманням бажаної сполуки 11 (1,6 г, 9695) у вигляді білої твердої речовини.

СТАДІЯ 2: до розчину 9 (660 мг, 1,92 ммоль) і 11 (928 мг, 3,83 ммоль) у безводному ОМЕ (12 мл) додавали триєтиламін (0,39 мл, 2,8 ммоль). Отриману суміш перемішували протягом ночі при 60"С. Реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури і очищували обернено- фазовою колонковою хроматографією з використанням суміші ацетонітрил-вода як елюента.

Фракції колонки аналізували за допомогою ВЕРХ і фракції, що містили продукт, ліофілізували з отриманням неочищеної сполуки, що мала чистоту 5095. Цей неочищений продукт знову очищували за допомогою препаративної ВЕРХ з використанням суміші ацетонітрил-вода.

Ліофілізація очищених фракцій дала вказану в заголовку сполуку 10 (100 мг, 10905) у вигляді жовтої твердої речовини.

СТАДІЯ 3: До розчину 10, що перемішується (75 мг, 0,16 ммоль), в безводному 1,4-діоксані (4 мл) додавали НСІ (0,3 мл, 4 Н в 1,4-діоксані) при кімнатній температурі і отриману суміш перемішували протягом 2 год. Розчинники випарювали на роторному випарнику до сухого стану. Отриманий залишок розчиняли у воді і ліофілізували протягом ночі з отриманням 10с (75 мг, 9496).

М5 (СІ) т/2-4721 (МІ. "Н-ЯМР (300 МГц, ОМ50-ав): б 8,33 (д, 9У-8,8 Гц, 2Н), 8,03 (д, 9-91

Гу, 2Н), 7,89 (с, 1Н), 7,49 (д, 9-3,6 Гу, 1Н), 7,11 (д, 9-41 Гу, 1Н), 5,60 (с, 2Н), 4,54 (с, 2Н), 3,32-

Зо 3,81 (м, 10Н). "Н ММА (300 МГц, 020): б 8,17 (д, 9-8,5 Гц, 2Н), 7,81 (д, 9У-8,8 Гц, 2Н), 7,60 (с, 1Н), 6,93-7,02 (м, 1Н), 6,88-6,92 (м, 1Н), 5,73 (с, 2Н), 4,39 (с, 2Н), 4,26 (с, 2Н), 3,90-4,09 (м, 4Н), 3,30- 3,52 (м, 4Н).

Приклад 14.

ОМа о о о

М. о /,/79 / и 7 7 х Ф-

М

М ж о 12а х хи . жд р си ово о 7 ун А о У ул -ит у/ -Щн---0- 65 5654 - х З кно но 13 а 16 " он Ома о о,

У а у -- , ' -|ЦШ.ц-з- -ж - о ут М. о /7

Стадія З м о М Стою о о Ук ун, урн, 12 12а

СТАДІЯ 1: До суміші К»2СОз (4,0 г, 28,94 ммоль) і ТВАН5ЗО» (240 мг, 0,70 ммоль) у воді (8 мл) додавали 13 (2,0 г, 11,48 ммоль) в СНоСі» (8 мл) при 0"С. Отриману суміш перемішували протягом 20 хв. при 0"С, а потім додавали 14 (1,3 мл, 12,85 ммоль) і знову перемішували протягом З год. Органічний шар відділяли і промивали водою (2х5 мл) і насиченим водним розсолом (5 мл). Шар СНеСі» сушили над безводним Маг25О», фільтрували і концентрували у вакуумі. Неочищений залишок очищували флеш-хроматографією, елююючи 0-100905

ЕОАс/гексаном з отриманням бажаної сполуки 15 (2,2 г, 8695) у вигляді безбарвної камеді.

СТАДІЯ 2: Та сушили з РО протягом ночі. До суміші 15 (2,2 г, 9,87 ммоль) в ОМЕ (35 мл) додавали а (1,66 г, 4,93 ммоль) при кімнатній температурі. Отриману суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 20 год. Суміш розбавляли ЕАс (50 мл) і промивали водою (2х25 мл) і насиченим водним розсолом (15 мл). Шар ЕЮАс сушили над безводним Ма»5Ох, фільтрували і упарювали у вакуумі. Неочищений залишок очищували флеш-хроматографією, елююючи 0-10095 ЕТОАсС/СНаСі» (два рази) з подальшим розтиранням з СНеСіг-гексаном з отриманням бажаної сполуки 16 (500 мг, 2095) у вигляді жовтої твердої речовини.

СТАДІЯ 3: до суміші 16 (340 мг, 0,68 ммоль) в СНоСі» (18 мл) додавали ТЕА (1,8 мл).

Отриману суміш перемішували протягом ночі при кімнатній температурі. Розчинники випарювали на роторному випарнику до сухого стану. Отриманий залишок розтирали з гексаном протягом 1 год. і жовту тверду речовину відфільтровувати і сушили з отриманням бажаної сполуки 12 (300 мг, 9995).

СТАДІЯ 4: До суспензії 6, що перемішується, (260 мг, 0,58 ммоль) у воді (36 мл, категорія

ВЕРХ) додавали 0,1 Н Маон (5,85 мл, 0,58 ммоль) при кімнатній температурі аліквотами по 400 мкл, а відразу після цього проводили швидке струшування. Значення рН кінцевого розчину становило 6,73. Розчин фільтрували і фільтрат ліофілізували протягом ночі з отриманням вказаної в заголовку сполуки 12а (150 мг, 5595) у вигляді жовтої твердої речовини. М5 (СІ) т/2-445,1 (МІ. "Н-ЯМР (300 МГц, ОМ50-ав): б 8,34 (д, 9-8,8 Гц, 2Н), 8,04 (д, У-8,8 Гц, 2Н), 7,87 (с, 1Н), 7,49 (д, 9-3,6 Гц, 1Н), 7,11 (д, 9У-3,8 Гц, 1Н), 5,43 (с, 2Н), 4,51 (с, 2Н), 2,40 (м, 2Н), 2,15 (м, 2Н).

Приклад 15.

он о о о

ОО я о

У й о о о ен ом У- / и

М он он

Суто 175 отв5 отв5 ве о о он ол о і 18 о є х 7 5 но Стадія 1 ом о і " Х / Ще ло 19 он о о о о

М й В

Стадія 2 ОМ о 3 М Стадія З хх

М пи 20

Оу й Стадія 4 У Моди Се о, хі ; од. о к он х / м ва ух, 1ть

СТАДІЯ 1: До розчину сполука 9 (500 мг, 1,45 ммоль) в безводному ОМЕ (10 мл) додавали сполуку 18 (488 мг, 1,85 ммоль) в ОМЕ (2 мл), а потім ТЕА (0,3 мл, 2,2 ммоль). Отриману суміш перемішували протягом 16 год. при кімнатній температурі. Суміш розбавляли ЕАс (50 мл), промивали водою (2х15 мл). Органічний шар сушили над безводним Ма»5О», фільтрували і упарювали до сухого стану. Неочищений продукт очищували два рази флеш-хроматографією, елююючи 0-1095 МеОнН/СНесСІіг, з отриманням бажаної сполуки 19 (350 г, 4095) у вигляді жовтої твердої речовини.

СТАДІЯ 2: До розчину сполуки 19 (200 мг, 0,32 ммоль) в суміші МеОнН:1,4-діоксан (11, б мл) додавали моногідрат п-толуолсульфонової кислоти (63 мг, 0,32 ммоль). Прозорий розчин перемішували протягом 16 год. при кімнатній температурі. Розчинники випарювали на роторному випарнику до сухого стану. Залишок очищували флеш-хроматографією, елююючи

Зо

0-1095 МеОН/СНегсСіг, з отриманням бажаної сполуки 20 (125 г, 7795) у вигляді жовтої твердої речовини.

СТАДІЯ 3: До розчину сполуки 20 (120 мг, 0,24 ммоль) і сполуки 21 (26,4 мг, 0,26 ммоль) в суміші м-ксилол:1,4-діоксан (171, 16 мл) додавали моногідрат п-толуолсульфонової кислоти (15 мг, 0,07 ммоль) і молекулярні сита 4А (100 мг). Отриману суміш кип'ятили зі зворотним холодильником протягом 16 год. Реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури, розбавляли 1,4-діоксаном (30 мл) і фільтрували. Фільтрат випарювали і неочищений залишок очищували два рази флеш-хроматографією, елююючи 0-1095 Меон/сСНесСі», з отриманням бажаної сполуки 17 (16 мг, 1195) у вигляді жовтої твердої речовини.

СТАДІЯ 4: До суспензії 17, що перемішується (5 мг, 8,4 мкмоль), у воді (3 мл, категорія

ВЕРХ) краплинно додавали 0,1 Н Тгі5 (90 мкл, 8,9 мкмоль) при кімнатній температурі. Суміш перемішували при кімнатній температурі протягом З год. Розчин фільтрували і фільтрат ліофілізували протягом ночі з отриманням вказаної в заголовку сполуки 170 (6 мг, 10095) у вигляді жовтої твердої речовини. М5 (СІ) т/2-594,1 ІМ. "Н-ЯМР (300 МГц, ОМ50О-ав): б 9,96 (ушир. с, 1Н), 8,34 (д, 9У-8,8 Гц, 2Н), 8,05 (д, 9-8,5 Гц, 2Н), 7,89 (с, 1Н), 7,5 (д, 9-3,2 Гц, 1Н), 7,46 (д, У-8,8 Гц, 2Н), 7,29 (д, 9У-8,5 Гц, 2Н), 7,12 (д, У-3,5 Гц, 1Н), 5,57 (с, 2Н), 4,99 (с, 2Н), 4,55 (с, 2Н), 3,23-3,32 (м, 9Н), 2,33-2,36 (м, 4Н).

Приклад 16. о МН,

Ті у о /-0

А М о о М і "неї

М

КИ є й 226 й к а у: зм о 7 х д - си о 0 НВос х М о о Ню-Вос у / 1а -- -- ---я-- : 17 ії Ш. дод Ав р

У Стадія 1 о Стадія 2

Но 23 КД

ОО НМ-Вос 9 Мн, о М / о и

М, о /-9 М. о уче в о ух --797 о х ух "Неї

Х / лк Стадія З Х / нин 26 226

СТАДІЯ 1: до суміші 23 (2,5 г, 14,28 ммоль) в ОМЕ (30 мл) додавали триєтиламін (3,47 мл, 25 24,93 ммоль), а потім 24 (3,92 мл, 53,9 ммоль) при кімнатній температурі. Отриману суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 40 год. Суміш розбавляли ЕІЮАс (100 мл) і водою (50 мл). Шар ЕІОАс промивали водою (2х25 мл), 595 МаНсСоО: (25 мл) і насиченим водним розсолом (15 мл). Шар ЕЮАс сушили над безводним Ма»25О: і концентрували у вакуумі.

Неочищений залишок очищували флеш-хроматографією, елююючи 0-10095 ЕАс/гексаном, з

Зо отриманням бажаної сполуки 25 (657 мг, 2195) у вигляді безбарвного масла.

СТАДІЯ 2: 1а сушили з Р»бО5 протягом ночі. До суміші Та (647 мг, 1,92 ммоль) в ОМЕ (12 мл) додавали 25 (647 мг, 2,89 ммоль) при кімнатній температурі. Отриману суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 110 год. Суміш розбавляли ЕАс (40 мл), промивали водою (2х15 мл) і насиченим водним розсолом (15 мл). Шар ЕЮАс сушили над безводним

Маг5О., фільтрували і упарювали у вакуумі. Неочищений залишок очищували флеш- хроматографією, елююючи 0-10095 ЕТОАс/СНеСі2», з отриманням бажаної сполуки 26 (260 мг, 27906) у вигляді жовтої твердої речовини.

СТАДІЯ 3: До розчину 26, що перемішується (210 мг, 0,41 ммоль), в безводному 1,4-діоксані (4 мл) додавали НСІ (4 мл, 4 Н в 1,4-діоксані) при кімнатній температурі і отриману суміш перемішували протягом ночі. Розчинники випарювали на роторному випарнику до сухого стану.

Отриманий залишок розтирали з гексаном протягом 1 год. і жовту тверду речовину фільтрували і сушили з отриманням вказаної в заголовку сполуки 22с (153 мг, 8396). М5 (СІ) т/2-402,1 МІ. "Н-ЯМР (300 МГц, ОМ50О-ав): б 8,47 (ушир. с, ЗН), 8,34 (д, 9У-8,8 Гц, 2Н), 8,04 (д, 928,6 Гц, 2Н), 7,91 (с, 1Н), 7,50 (д, 9У-3,6 Гу, 1Н), 7,12 (д, 9У-3,6 Гу, 1Н), 5,61 (с, 2Н), 4,56 (с, 2Н), 3,85 (с, 2Н).

Приклад 17. Основні матеріали і способи ОРІ С

Аналіз ГС-М5 проводили з використанням системи рідинної хроматографії Адієпі 1290

Іпїпйу Ії ОКга Регогтапсе Гідцідй Спготайїодгарпу Зузіет, обладнаної колонкою Адііепі 2ограх

Есіїрзхе Ріиз С18 Соїштп (2,1х50 мм, 1,8 мкм). Моніторинг елюювання проводили при 210 нм і 385 нм з використанням детектора діодних матриць. Рухома фаза А являла собою воду з 0,195 (о06б./06.) трифтороцтовою кислотою, і рухома фаза В являла собою ацетонітрил з 0,195 трифтороцтовою кислотою. Для кожного зразка ін'єктували 10 мкл і елюювання проводили з використанням лінійного градієнта, який починався з 2595 В і зростав до 4395 В протягом 4 хвилин при швидкості потоку 0,5 мл/хв. Система рідинної хроматографії була приєднана до триквадрупольного мас-спектрометра Адіїепі 6420.

Стандартні криві ВЕРХ для вимірювання концентрації

Приблизно 1 мг сполуки, яка становить інтерес, зважували і розчиняли до 1 мг/мл з використанням 2595 ацетонітрилу (у воді об./06.). Проводили 10-кратне розбавлення проліків з використанням 2595 ацетонітрилу з отриманням розчину 100 мкг/мл розчин. Серію 2-кратного розбавлення з використанням 2595 ацетонітрилу проводили для отримання розчинів 50, 25, 12,5 і 6,25 мкг/мл. Для кожного зразка аналізували 10 мкл з використанням обладнання і градієнта, описаних в розділі «Основні матеріали і способи ОРІ С». Стандартну криву для концентрації будували вручну, інтегруючи хроматограми при 385 нм і будуючи графік площі піку залежно від концентрації.

Фармакокінетичний аналіз

У кожний заданий момент часу проводили взяття 400 мкл в пробірку К2ЕОТА, а потім

Зо вміщували на лід до центрифугування. Після центрифугування 100 мкл плазми комбінували з

З00 мкл ацетонітрилу, а потім проводили центрифугування для видалення преципітованого матеріалу. Зразки аналізували з використанням градієнта, описаного в розділі «Основні матеріали і способи ОРІ С». Стандартну криву для дантролену будували для кожного експерименту шляхом розчинення 3,8 мг дантріуму в 14,9 мл 5095 метанолі (об./06.) у воді.

Дантріум розбавляли в супернатанті суміші преципітовані клітини крові щура:ацетонітрил 1:3 з отриманням зразків для стандартної кривої. Діапазон стандартної кривої становив від 5000 до 5 нг/мл. Моніторинг поглинання дантролену проводили при 385 нм з використанням детектора на діодній матриці ії функціональності моніторингу множинних реакцій мас-спектрометра.

Зворотне конвертування сполуки 2а в плазмі і фармакокінетика

Для визначення конвертування сполуки 2а в дантролену в плазму щура 1 мг сполуки га розчиняли до 1 мг/мл у воді. Аліквоту об'ємом 100 мкл сполуки 2а комбінували з 900 мкл плазми, взятої від щурів Зргадие Юаулеу. Потім реакційну суміш з плазмою вміщували на водяну баню при 37"С. Первинна концентрація сполуки 2а в плазмі становила 100 мкг/мл.

Первинний зразок отримували, відразу витягуючи 100 мкл з реакційної суміші з плазмою і перемішуючи їх зі 100 мкл ацетонітрилу для гасіння реакції, що викликало преципітацію.

Нерозчинний матеріал осаджували центрифугуванням при 15000 об./хв. протягом 5 хвилин при 25"С. Зразок для аналізу | С-М5 отримували шляхом комбінування 75 мкл супернатанту з 75 мкл води. Аналіз ЇС-М5 проводили шляхом інжектування 10 мкл і зразки елюювали з використанням обладнання і градієнта, описаних в розділі «Основні матеріали і способи

ОРІС». Додаткові зразки отримували через 10, 30, 45, 60, 120, 180 їі 240 хвилин. Втрату сполуки, що тестується, і збільшення рівня дантролену кількісно визначали шляхом інтеграції вручну піків на хроматограмах для 385 нм (фіг. 5). Час напівжиття сполуки 2а в цих умовах отримували шляхом апроксимації експонентної функції до цих даних. Час напівжиття сполуки 2а становив 82 хвилини. Також отримували негативний контроль, де замість плазми щура використовували фосфатно-сольовий буфер, і не спостерігали конвертування.

Фармакокінетику дантролену в плазмі після введення сполуки 2га живим щурам аналізували за допомогою введення щурам бЗргадие-Оаулеу з канюльованими венами і аналізу плазми на дантролен з використанням І С-М5 (фіг. 6 і таблиця 1). Дозування, взяття зразків і аналіз проводилися МРІ Кезеагсі. Внутрішньовенні дози вводили через канюлю в яремній вені. бо Внутрішньом'язові дози вводили шляхом ін'єкції половини дози у велику м'язову масу лівої задньої кінцівки, а іншу половину дози вводили в праву задню кінцівку. У кожної групи, що досліджується, було п'ять щурів. Сполуку 2а розчиняли до 8 мг/мл в підданому стерилізації фільтруванням 5595 маніті (мас./об.) з отриманням рівня дози 7,5 мг/кг і об'єму дози 0,94 мл/кг.

Збирання плазми проводили до введення і через 0,033, 0,083, 0,167 і 0,33, 0,66,1,2, 3,6, 9 годин після введення.

У кожному експерименті спостерігали тільки слідові кількості 2а після введення за допомогою в/в, в/м або п/ш шляхів. Отже, для визначення фармакокінетики відстежували тільки концентрацію дантролену.

Таблиця 1

Біодоступність дантролену в плазмі після введення сполуки 2а внутрішньовенним і внутрішньом'язовим шляхами

У другому аналізі проводили аналіз фармакокінетики сполуки 2 в цільній крові живих щурів (фіг. 7 і таблицю 2). Кожна група, що досліджується, включала трьох щурів. Сполуку га розчиняли до 8 мг/мл підданому стерилізації фільтруванням 595 маніті (мас./06б.) з отриманням рівня дози 7,5 мг/кг і об'єму дози 0,94 мл/кг. Взяття крові проводили до введення, через 0,033, 0,083,0,167 10,33, 0,66, 1, 2, 3, 6, 9 годин після введення. Зразки цільної крові розбавляли в 4 рази в ацетонітрилі і центрифугували для видалення преципітату.

Таблиця 2

Біодоступність дантролену в цільній крові після введення сполуки 2а внутрішньовенним і внутрішньом'язовим шляхами

Проводили інший фармакокінетичний аналіз сполуки га у живих щурів (фіг. 8 і 9, таблиці 3).

Кожна група, що досліджується, включала п'ять щурів. Сполуку 2а розчиняли до 8 мг/мл в підданому стерилізації фільтруванням 595 водному розчині маніту (мас./об.) до рівня дози 7,5 мг/кг і об'єм дози 0,94 мл/кг. Взяття крові проводили до введення і через 0,033, 0,083, 0,167 і 0,33, 0,66, 1, 2, 3, 6, 9 годин після введення. Зразки крові розбавляли в 4 рази в ацетонітрилі і центрифугували для видалення преципітату. Зразки плазми отримували шляхом віщення крові в пробірки К2ЕОТА, а потім центрифугування. Потім отриману плазму аспірували і розбавляли в 4 рази в ацетонітрилі перед іншим раундом центрифугування для видалення преципітованого матеріалу.

Таблиця З

Біодоступність дантролену після введення сполуки 2а внутрішньовенним, внутрішньом'язовим і підшкірним шляхами а Аналіз цільної крові ? Аналіз плазми

Зо Зворотне конвертування сполуки 260 в плазмі і фармакокінетика

Для визначення конвертування сполуки 205 у дантролен в плазмі щура 1 мг сполуки 205 розчиняли до 1 мг/мл у воді. Аліквоту 100 мкл сполуки 25 комбінували з 900 мкл плазми, взятої від щурів Зргадие Юам/леу. Потім реакційну суміш з плазмою вміщували на водяну баню при

37"С. Первинна концентрація сполуки 205 в плазмі становила 100 мкг/мл. Первинний зразок отримували, відразу витягуючи 100 мкл з реакційної суміші з плазмою і перемішуючи їх зі 100 мкл ацетонітрилу для гасіння реакції, що викликало преципітацію. Нерозчинний матеріал осаджували центрифугуванням при 15000 об./хв. протягом 5 хвилин при 25"С. Зразок для аналізу | С-М5 отримували шляхом комбінування 75 мкл супернатанту з 75 мкл води. Аналіз

ЇС-М5 проводили шляхом інжектування 10 мкл і зразки елюювали з використанням обладнання і градієнта, описаних в розділі «Основні матеріали і способи ОРІ С». Додаткові зразки отримували через 15, 30, 45, 60, 120, 180 і 240 хвилин. Втрату сполуки 2 і збільшення рівня дантролену кількісно визначали шляхом інтеграції вручну піків на хроматограмах для 385 нм (фіг. 10). Час напівжиття сполуки 20 в цих умовах отримували шляхом апроксимації експонентної функції до цих даних. Час напівжиття сполуки 205 становив 77 хвилин. Також отримували негативний контроль, де замість плазми щура використовували фосфатно- сольовий буфер, і не спостерігали конвертування.

Фармакокінетику дантролену в плазмі після введення сполуки 20 живим щурам аналізували за допомогою введення щурам бЗргадие-Оаулеу з канюльованими венами і аналізу плазми на дантролен з використанням І С-М5 (фіг. 11 і таблиця 4). Дозування, взяття зразків і аналіз проводилися МРІ Кезеагсі. Внутрішньовенні дози вводили через канюлю в яремній вені.

Внутрішньом'язові дози вводили шляхом ін'єкції половини дози у велику м'язову масу лівої задньої кінцівки, а іншу половину дози вводили в праву задню кінцівку. У кожної групи, що досліджується, було п'ять щурів. Сполуку 25 розчиняли до 11,4 мг/мл в підданому стерилізації фільтруванням 5595 маніті (мас./об.) з отриманням рівня дози 10,6 мг/кг і об'єму дози 0,94 мл/кг.

Таблиця 4

Біодоступність дантролену в плазмі після введення сполуки 26 внутрішньовенним і внутрішньом'язовим шляхами.

Приклад 18. Зворотне конвертування сполуки 10с в плазмі

Для визначення конвертування сполуки 10с у дантролен в плазмі щура 0,9 мг 10с розчиняли до 1 мг/мл у воді. Аліквоту 100 мкл сполуки 10с комбінували з плазмою, взятою від щурів

Зргадцие ЮаулЛеу. Потім реакційну суміш з плазмою вміщували на водяну баню при 37"С.

Зо Первинна концентрація сполуки 10с в плазмі становила 100 мкг/мл. Первинний зразок отримували, відразу витягуючи 100 мкл з реакційної суміші з плазмою і перемішуючи їх зі 100 мкл ацетонітрилу для гасіння реакції що викликало преципітацію. Нерозчинний матеріал осаджували центрифугуванням при 15000 об./хв. протягом 5 хвилин при 25"С. Зразок для аналізу | С-М5 отримували шляхом комбінування 75 мкл супернатанту з 75 мкл води. Аналіз

ЇС-М5 проводили шляхом інжектування 10 мкл і зразки елюювали з використанням обладнання і градієнта, описаних в розділі «Основні матеріали і способи ОРІ С». Додаткові зразки отримували через 10, 20, 35, 45 і 60 хвилин. Втрату сполуки 10с і збільшення рівня дантролену кількісно визначали шляхом інтеграції вручну піків на хроматограмах для 385 нм.

Протягом перших 10 хвилин інкубації з плазмою 10с повністю конвертувалася в дантролен.

Оцінений час напівжиття становив 1,9 хв. Також отримували негативний контроль, де фосфатно-сольовий буфер використовували замість плазми щура, і спостерігали повільне конвертування в дантролен. Час напівжиття 10с в фосфатно-сольовому буфері становив 294 хвилини. Див. фіг. 12.

Приклад 19. Конвертування сполуки 12а в плазмі і фармакокінетика

Для визначення конвертування сполуки 12а у дантролен в плазмі щура отримували розчин 12а 1 мг/мл у воді. Аліквоту 100 мкл 12а комбінували з плазмою, взятою від щурів бргадиє

БаулЛеу. Потім реакційну суміш з плазмою вміщували на водяну баню при 37"С. Первинна концентрація сполуки 12а в плазмі становила 100 мкг/мл. Первинний зразок отримували, відразу витягуючи 100 мкл з реакційної суміші з плазмою і перемішуючи їх зі 100 мкл ацетонітрилу для гасіння реакції що викликало преципітацію. Нерозчинний матеріал осаджували центрифугуванням при 15000 об./хв. протягом 5 хвилин при 25"С. Зразок для аналізу | С-М5 отримували шляхом комбінування 75 мкл супернатанту з 75 мкл води. Аналіз

ЇС-М5 проводили шляхом інжектування 10 мкл і зразки елюювали з використанням обладнання і градієнта, описаних в розділі «Основні матеріали і способи ОРІ С». Додаткові зразки отримували через 10, 20, 35, 45, 60, 75 і 150 хвилин. Втрату сполуки 12а і збільшення рівня дантролену кількісно визначали шляхом інтеграції вручну піків на хроматограмах для 385 нм (фіг. 13). Час напівжиття 12а в цих умовах отримували шляхом апроксимації експонентної функції до даних. Обчислений час напівжиття становив 12,2 хв. Для негативного контролю, де фосфатно-сольовий буфер використовували замість плазми щура, час напівжиття становив більше 150 хвилин.

Фармакокінетичні властивості 12а аналізували аналогічно тому, як і для 22с, за винятком того, що сполуку розчиняли до 5 мг/мл в 595 маніті з отриманням рівня дози 4 мг/кг і об'єму дози 0,8 мл/кг (фіг. 14).

Приклад 20. Конвертування сполуки 176 в плазмі

Для побудови стандартної кривої для обчислення концентрації 176 1 мг сполуки розчиняли в 200 мкл диметилформаміду з отриманням розчину 5 мг/мл. Розчин 5 мг/мл розбавляли в 5 разів у воді, а потім центрифугували при 15000 об./хв. 25"С, 5 хв. Супернатант використовували для отримання 10-кратного розбавлення в 2595 ацетонітрилі у воді з отриманням розчину 100 мкг/мл. Проводили серію 2-кратного розбавлення з використанням 2590 ацетонітрилу з отриманням розчинів 50, 25, 12,5 і 6,25 мкг/мл. Ці розчини аналізували, як описано в розділі «Основні матеріали і способи ОРІС» за винятком того, що градієнт продовжували до кінця з 9095 ацетонітрилом через 14,4 хвилини.

Для визначення конвертування 17р у дантролен в плазмі щура отримували розчин 17р 1 мг/мл у воді. Аліквоту 100 мкл 170 комбінували з 900 мкл плазми, взятої від щурів бргадиє

БаулЛеу. Потім реакційну суміш з плазмою вміщували на водяну баню при 37"С. Первинна концентрація сполуки 170 в плазмі становила 100 мкг/мл. Первинний зразок отримували, відразу витягуючи 100 мкл з реакційної суміші з плазмою і перемішуючи їх зі 100 мкл ацетонітрилу для гасіння реакції що викликало преципітацію. Нерозчинний матеріал осаджували центрифугуванням при 15000 об./хв. протягом 5 хвилин при 25"С. Зразок для аналізу | С-М5 отримували шляхом комбінування 75 мкл супернатанту з 75 мкл води. Аналіз

ЇС-М5 проводили шляхом інжектування 10 мкл і зразки елюювали з використанням обладнання і градієнта, описаних в розділі «Основні матеріали і способи ОРІ С». Додаткові

Зо зразки отримували через 15, 30, 45, 60, 180, 240 і 300 хвилин. Втрату сполуки 1765 і збільшення рівня дантролену кількісно визначали шляхом інтеграції вручну піків на хроматограмах для 385 нм (фіг. 15). Час напівжиття 176 в цих умовах отримували шляхом апроксимації експонентної функції до даних. Обчислений час напівжиття становив 94,5 хв. Для негативного контролю, де фосфатно-сольовий буфер використовували замість плазми щура, час напівжиття становив більше 447 хвилин.

Приклад 21. Конвертування сполуки 22с в плазмі і фармакокінетика

Для визначення конвертування 22с у дантролен в плазмі щура отримували розчин 22с 1 мг/мл у воді. Аліквоту 100 мкл 22с комбінували з 900 мкл плазми, взятої від щурів бргадиє

БаулЛеу. Потім реакційну суміш з плазмою вміщували на водяну баню при 37"С. Первинна концентрація сполуки 220 в плазмі становила 100 мкг/мл. Первинний зразок отримували, відразу витягуючи 100 мкл з реакційної суміші з плазмою і перемішуючи їх зі 100 мкл ацетонітрилу для гасіння реакції що викликало преципітацію. Нерозчинний матеріал осаджували центрифугуванням при 15000 об./хв. протягом 5 хвилин при 25"С. Зразок для аналізу | С-М5 отримували шляхом комбінування 75 мкл супернатанту з 75 мкл води. Аналіз

ЇС-М5 проводили шляхом інжектування 10 мкл і зразки елюювали з використанням обладнання і градієнта, описаних в розділі «Основні матеріали і способи ОРІ С». Додаткові зразки отримували через 10, 20, 35, 45, 60, 75 і 150 хвилин. Втрату сполуки 22с і збільшення рівня дантролену кількісно визначали шляхом інтеграції вручну піків на хроматограмах для 385 нм (фіг. 16). Час напівжиття 22с в цих умовах отримували шляхом апроксимації експонентної функції до даних. Протягом перших 10 хвилин інкубації з плазмою 22с повністю конвертувалася в дантролен. Оцінений час напівжиття становив 3,2 хв. Також проводили випробування негативного контролю, де фосфатно-сольовий буфер використовували замість плазми щура, і спостерігали 8595 зворотне конвертування через 150 хвилин.

Фармакокінетику 22с у живих щурів аналізували за допомогою дозування щурам 5ргадие-

Бамлеу з канюлей у вені і аналізу крові відносно дантролену з використанням І С-М5 (фіг. 17).

Внутрішньовенні дози вводили через канюлю в яремній вені. Підшкірні дози вводили за допомогою ін'єкції між шкірою і шарами тканини, які лежать нижче, в лівій задній кінцівці кожної тварини. Внутрішньом'язові дози вводили шляхом ін'єкції половини дози у велику м'язову масу лівої задньої кінцівки, а іншої половини дози в праву задню кінцівку. У кожній групі, що бо досліджується, було три щури. 22с розчиняли до З мг/мл підданому стерилізації фільтруванням

595 водному розчині маніту (мас./06.) з 1095 ОМ5О з отриманням рівня дози 4 мг/кг і об'єму дози 1,33 мл/кг. Взяття крові проводили до введення і через 0,167, 0,33, 0,66 і 1,33 годин після введення. У кожний момент часу проводили взяття 100 мкл крові у флакон, в який було вміщено 300 мкл ацетонітрилу. Зразки крові центрифугували для осадження якого-небудь нерозчинного матеріалу. Супернатанти швидко заморожували і зберігали на сухому льоду.

Зразки аналізували з використанням способів, описаних в розділах «Основні матеріали і способи ОРІ С» і «Фармакокінетичний аналіз».

Claims

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Сполука формули І: о ом о М ех о-в Х / ле о ;() де ЕВ являє собою -РІОХОН)» або -РІОХОВ ОН»); Ві являє собою Н, -Сі-валкіл, арил, СівалкС(0)О-Сі-валкіл, -СтїалкоС(О)Сі-валкіл або Сіалкос(О)Ос гвалкіл; і Аг являє особою -Сі-гвалкіл, арил, СівалкС(0)О-С:і-валкіл, -СіїалкоС(О)С:і-валкіл або Схіалкос(О)ОС. гвалкіл; або її фармацевтично прийнятна сіль.

2. Сполука за п. 1, де К являє собою -Р(Ф)(ОН)».

3. Сполука за п. 1, де К являє собою РІ(ІОХОК (ОН).

4. Сполука за п. 3, де В: являє собою Н.

5. Сполука за п. 3, де Кі являє собою -С1-гвалкіл.

6. Сполука за п. 3, де К: являє собою арил.

7. Сполука за п. 3, де Кі являє собою Сі-валкС(0)О-Сі-гвалкіл. Зо 8. Сполука за п. 3, де Кі являє собою -С1талкоС(О)Сі-гвалкіл.

9. Сполука за п. 3, де Кі являє собою Стіалкос(Ф0)Ос -гвалкіл.

10. Сполука за будь-яким із пп. 4-9, де ЕК» являє собою -Сі-гвалкіл, арил.

11. Сполука за будь-яким із пп. 4-9, де К2 являє собою С:і-валкс(0)О-Сі-гвалкіл.

12. Сполука за будь-яким із пп. 4-9, де Ко? являє собою -С1талкосС(О) Сі -гвалкіл.

13. Сполука за будь-яким із пп. 4-9, де Ко? являє собою СталкосС(О)Ос.-гвалкіл.

14. Сполука за будь-яким із попередніх пунктів у формі фармацевтично прийнятної солі.

15. Фармацевтична композиція, яка містить сполуку за будь-яким із попередніх пунктів або її фармацевтичну сіль і фармацевтично прийнятний ексципієнт.

16. Спосіб лікування порушення, яке відповідає на дантролен, у індивідуума, який включає введення індивідууму терапевтично ефективної кількості сполуки за будь-яким із пп. 1-13 або її фармацевтично прийнятної солі.

17. Спосіб за п. 16, де порушення являє собою злоякісну гіпертермію, хронічну спастичність, тепловий удар внаслідок виснажливого фізичного навантаження, аритмії серця, тахікардії, фібриляцію передсердь, зупинку серця, інфаркт міокарда, серцеву недостатність, пошкодження міокарда, кардіоміопатію, хворобу центральних волокон, бічний аміотрофічний склероз, рабдоміоліз, м'язову дистрофію Дюшенна, атаксію, гіперактивність детрузора, гіперактивний сечовий міхур, судоми, епілепсію, нейролептичний злоякісний синдром, стрес-реакцію людини, хворобу Альцгеймера, хворобу Гентінггона, розсіяний склероз, хворобу Паркінсона, пошкодження при ішемії-реперфузії, нейрональне пошкодження при реперфузії, гіпоксію, аневризму головного мозку, субарахноїдальний крововилив, інсульт, гіпертермію, асоційовану зі зловживанням наркотиків, або гіпертермію, асоційовану з передозуванням наркотиків, вплив нервово-паралітичної речовини, вплив нервово-паралітичного газу або накопичення ацетилхоліну.

18. Спосіб за п. 16 або 17, де введення являє собою внутрішньовенне введення. Зб

19. Спосіб за п. 16 або 17, де введення являє собою внутрішньом'язове введення.

20. Спосіб за п. 16 або 17, де введення являє собою пероральне введення.

21. Спосіб за п. 16 або 17, де введення є підшкірним.

22. Спосіб за п. 16 або 17, де введення є інтраназальним.

23. Спосіб за п. 16 або 17, де введення є внутрішньокістковим.

24. Сполука формули ІІ-А о ом о М он Х / ве о П-А або її фармацевтично прийнятна сіль.

25. Сполука за п. 24, де сполука формули ІІ-А являє собою о ом о М он Х / ве о .

26. Застосування сполуки формули ІІ-А о ом о М он Х / ве о П-А для лікування порушення, яке відповідає на дантролен. : Проліки зІлином часу : : їх муки ; : ма Ї зво п І : : в Од їх і : : ' ше я 00000 ве фуд нення вона в мання ня ЕЕ 00 Бо 100 150 200 250. : Час (години) : - Лужна фосфатаза у РВБ хе-РВЕ

Фіг. 1

Дантролен з плином часу ї в па г Е ' ; - ! ! т : ! ! | : ще сш : : І : і ! : : по- ї : : : : : : : 00 50 100 150 200 БО ! Час (години) : ! -е- Дужна фосфатаза у РВ5 «РВЕ

Фіг. 2 Інкубація проліків із плазмою, 22" ! щ 230000. СКД 2оо90ю ще: | : Ге МОМЮ : Б захо. : : о 5 НЗ ГБ 20 ЗЕ Час (години) :

Фіг. З

Конвертування проліків у плазмі шура при 3776 ж Проліки 2а мо зев. КОХ Дантропен со | х - | Ж х. юю м : х !

шов. и Е х ж Вей Е жа ! Хвилини

Фіг. 4 1600. птн 1100, А ' 1800 е є зе в 1000 " А Я дня .

ВО. г : - во. ь . й і 400 ак зп й 200, е 0 5щ 0 150 200 250 з00 Час (хв.)

Фіг. 5

- ВО. пре тт тт тт В т

- С. І 1500 --й- В/М ИЙ т І 8 10000. Ох, ще і А ; У ! Е ож юю Й Ів. щ 00 й коня : я | Зк: СВснн . І ща і . на з і го й ще утекти фена коре отчет п 1 223456 789 Час (години)

Фіг. 6 сет с ЗО пня - в бля ! Ж екпай яку що -й- В/М 20000 є 5 є -515000- да х 10000 - Ух б вою. 7 ш 0. сс : й 2 З і 012 34567859 Час (години)

Фіг. 7 шо 25000 тен, т : ! 7 20000 5 й --- В/В оооошятях же П/К . З 15000 5. т ПК х дО д, | Я : хо 5000 ссср б щ у ши НИ : я и дров і 0 2 й б В о Час (години)

Фіг. 8 зрананом . ке Тих . З Е щ їх сей ВД іх мая. еп ; я 9000, що , е ж Е

ЗК. ! кв їх ї х х то БОро СЯЄ ов 0 1 2 53458789 Час (години)

Фіг. 9 м

1203 р 00 а я 800. е я 800 . 400 | х й а . 20 ! Ж, а ї о Бо 0 150 2300550 о Час (години)

Фіг. 10 Фени 20000. --в-- ВІВ с : сей» В/М му ч Ї щ Ех г т я Же ще ї у в і ще -е Ж пк й : бовюрі й : Є: ше щ : : рем : : Я і : п 1 33345678 Час (години)

Фіг. 11 до й Во тт Ж 1000. ве ча. я щю . о доп т 500 АЦО 1 і ОО Її

З . а е а а . нн упав пономеіннокотві каток чинник інно 0 10 20 530 40 50 80 7 Час (години)

Фіг. 12 1210 у ШО 1 ж к 1000 А і й » ВО | а в оц ж їдою А Е Ге З | е ШО 200 ) г, а Ї ФУ ва в нн орнннреснронннннн по 50 40 650 80 7100 120 40 1600 Час (години)

Фіг. 13

Її ЗО нн нн нн НП о : : - ОО Я : м ех ВІВ . х і г... : зекеннфення Вл ; Ї ї Я Й у що ; | а ее ПИЛИ і іх з м ї ї й их - 7 х о 2000 - х он щ : «В Ша і ї - їх і Кон ! т 1500. ше . - і вх ект Я по, ї ї Кк : й «фан те г - : у в я вною С ко й ї до 4 а в А | Пор оксонкжене | Покка й ї . оду хх Хеие сх ї що УМ .ї Ж Пк ннсн КЇ : У ' Е щ- ай. не ах і х рані Ї г з т о о КЗ ї а ? Пнхххндкю мк мм Кф и ик ми ки фа М УНК ю сн фани Ак н Ак р поси ах нн няні пух А Кхе одну ян мідкютннк зп 02 04 06 п 1019 14 СО Ко Ж Ж ж х х. хін х Час (години) їх

Фіг. 14 і : 1204 к ! В і : в й : 100» ок | е в Ва. . . що ї й й

-к . 3 ; х вра їх і Ї рай ІЗ їх свв Н 3 особ ї ї : 0 50 00 150 500 250 30035 Час (години) -

Фіг. 15

Я ап дреннененннт нт нт вечер ннннсуеветтннте 1200 ! кА » ше ' 1000, є во В00. я - БО. я З «00 3 ї і

200. " У ві а Ф з і 3 0 10 950 30 40 50 80 70 Час (хвилини)

Фіг. 16 -к ! - 2500 сяк ВІВ Е | я пл 2000. ж пли З ; ту т я ї Ше І Н 5 1500. Ба се : і по ж ; і дн М: Е то : й мії - ех. | пр о дюефрннте нн т : я | " «рент фони о З ї : тв В нн и а Кк М и и М а и и КК ро 02 04 86 985 1015 14 Час(години)

Фіг. 17