UA124183C2 - Спосіб зниження імуногенності фізіологічно активного білка або пептиду - Google Patents
Спосіб зниження імуногенності фізіологічно активного білка або пептиду Download PDFInfo
- Publication number
- UA124183C2 UA124183C2 UAA201611826A UAA201611826A UA124183C2 UA 124183 C2 UA124183 C2 UA 124183C2 UA A201611826 A UAA201611826 A UA A201611826A UA A201611826 A UAA201611826 A UA A201611826A UA 124183 C2 UA124183 C2 UA 124183C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- peptide
- exendin
- physiologically active
- active protein
- derivative
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 215
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 141
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 141
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 63
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 title claims abstract description 45
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 title abstract 2
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 50
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 49
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 16
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 claims abstract description 9
- JUFFVKRROAPVBI-PVOYSMBESA-N chembl1210015 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO[C@]3(O[C@@H](C[C@H](O)[C@H](O)CO)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C3)C(O)=O)O2)O)[C@@H](CO)O1)NC(C)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 JUFFVKRROAPVBI-PVOYSMBESA-N 0.000 claims description 102
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 89
- 229960001519 exenatide Drugs 0.000 claims description 85
- 108010011459 Exenatide Proteins 0.000 claims description 75
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 56
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 56
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 51
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 39
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 38
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 38
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 38
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 claims description 28
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 claims description 26
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 claims description 26
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 claims description 26
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 claims description 26
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 24
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 23
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 21
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 19
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 19
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 229940125542 dual agonist Drugs 0.000 claims description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 13
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims description 11
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 9
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 claims description 8
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 claims description 7
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 claims description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 claims description 6
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 6
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 6
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 6
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 6
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 6
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 6
- 229920001583 poly(oxyethylated polyols) Polymers 0.000 claims description 6
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 claims description 6
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 6
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 6
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 6
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 claims description 6
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 5
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 5
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 claims description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000003509 long acting drug Substances 0.000 claims description 3
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 claims description 2
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 11
- 230000028993 immune response Effects 0.000 abstract description 9
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 abstract description 3
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 abstract description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 121
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 61
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 60
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 60
- 230000002473 insulinotropic effect Effects 0.000 description 35
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 32
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 30
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 27
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 20
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 17
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 16
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 14
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 14
- 239000004026 insulin derivative Substances 0.000 description 12
- -1 a-lactalbumin Proteins 0.000 description 11
- 230000006870 function Effects 0.000 description 11
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 10
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 10
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 9
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 9
- 230000009471 action Effects 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- PXZWGQLGAKCNKD-DPNMSELWSA-N molport-023-276-326 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 PXZWGQLGAKCNKD-DPNMSELWSA-N 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 8
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 8
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 8
- 101000906927 Homo sapiens N-chimaerin Proteins 0.000 description 7
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 7
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 7
- 102100023648 N-chimaerin Human genes 0.000 description 7
- 102400000319 Oxyntomodulin Human genes 0.000 description 7
- 101800001388 Oxyntomodulin Proteins 0.000 description 7
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 7
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 7
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 6
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 5
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 5
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 5
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 5
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 5
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 5
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 101710117545 C protein Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001299 aldehydes Chemical group 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 4
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000010437 erythropoiesis Effects 0.000 description 4
- 108010015174 exendin 3 Proteins 0.000 description 4
- LMHMJYMCGJNXRS-IOPUOMRJSA-N exendin-3 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@H](C)O)[C@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 LMHMJYMCGJNXRS-IOPUOMRJSA-N 0.000 description 4
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010004460 Gastric Inhibitory Polypeptide Proteins 0.000 description 3
- 102100039994 Gastric inhibitory polypeptide Human genes 0.000 description 3
- 108010088406 Glucagon-Like Peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000016261 Long-Acting Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108010092217 Long-Acting Insulin Proteins 0.000 description 3
- 229940100066 Long-acting insulin Drugs 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N Propionic aldehyde Chemical group CCC=O NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 3
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 3
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 3
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical class O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HFDKKNHCYWNNNQ-YOGANYHLSA-N 75976-10-2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](C)N)C(C)C)[C@@H](C)O)C1=CC=C(O)C=C1 HFDKKNHCYWNNNQ-YOGANYHLSA-N 0.000 description 2
- 101800001401 Activation peptide Proteins 0.000 description 2
- 102400000069 Activation peptide Human genes 0.000 description 2
- 102000009840 Angiopoietins Human genes 0.000 description 2
- 108010009906 Angiopoietins Proteins 0.000 description 2
- 102400000068 Angiostatin Human genes 0.000 description 2
- 108010079709 Angiostatins Proteins 0.000 description 2
- 108010064733 Angiotensins Proteins 0.000 description 2
- 102000015427 Angiotensins Human genes 0.000 description 2
- 102100029470 Apolipoprotein E Human genes 0.000 description 2
- 101710095339 Apolipoprotein E Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002723 Atrial Natriuretic Factor Human genes 0.000 description 2
- 101800001288 Atrial natriuretic factor Proteins 0.000 description 2
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 2
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 2
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N Butyraldehyde Chemical group CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 2
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 2
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 2
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 101800005309 Carboxy-terminal peptide Proteins 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 101800001982 Cholecystokinin Proteins 0.000 description 2
- 102100025841 Cholecystokinin Human genes 0.000 description 2
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 2
- 108010022152 Corticotropin-Releasing Hormone Proteins 0.000 description 2
- 102000012289 Corticotropin-Releasing Hormone Human genes 0.000 description 2
- 239000000055 Corticotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 2
- HTQBXNHDCUEHJF-XWLPCZSASA-N Exenatide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CO)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 HTQBXNHDCUEHJF-XWLPCZSASA-N 0.000 description 2
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 2
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 2
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 2
- 108090001053 Gastrin releasing peptide Proteins 0.000 description 2
- 102000004862 Gastrin releasing peptide Human genes 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 2
- 102100039939 Growth/differentiation factor 8 Human genes 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 108010007267 Hirudins Proteins 0.000 description 2
- 102000007625 Hirudins Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 2
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 2
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 2
- 102000001617 Interferon Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010054267 Interferon Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 2
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 2
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 2
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 2
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 108010056852 Myostatin Proteins 0.000 description 2
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 2
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 2
- 102000018886 Pancreatic Polypeptide Human genes 0.000 description 2
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 2
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 2
- 108010001014 Plasminogen Activators Proteins 0.000 description 2
- 102000001938 Plasminogen Activators Human genes 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108090000103 Relaxin Proteins 0.000 description 2
- 102000003743 Relaxin Human genes 0.000 description 2
- 108010086019 Secretin Proteins 0.000 description 2
- 102100037505 Secretin Human genes 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 2
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 2
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 2
- 101000983124 Sus scrofa Pancreatic prohormone precursor Proteins 0.000 description 2
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 2
- 102000003790 Thrombin receptors Human genes 0.000 description 2
- 108090000166 Thrombin receptors Proteins 0.000 description 2
- 108010079274 Thrombomodulin Proteins 0.000 description 2
- 102000012607 Thrombomodulin Human genes 0.000 description 2
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 2
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 2
- 102100030951 Tissue factor pathway inhibitor Human genes 0.000 description 2
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 2
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 2
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000003470 adrenal cortex hormone Substances 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- FZCSTZYAHCUGEM-UHFFFAOYSA-N aspergillomarasmine B Natural products OC(=O)CNC(C(O)=O)CNC(C(O)=O)CC(O)=O FZCSTZYAHCUGEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 2
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 description 2
- 230000008468 bone growth Effects 0.000 description 2
- 229940112869 bone morphogenetic protein Drugs 0.000 description 2
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 2
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N carperitide Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N 0.000 description 2
- 229950008486 carperitide Drugs 0.000 description 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 229940107137 cholecystokinin Drugs 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 102000026898 cytokine binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091008470 cytokine binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000000062 effect on obesity Effects 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 2
- PUBCCFNQJQKCNC-XKNFJVFFSA-N gastrin-releasingpeptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CNC=N1 PUBCCFNQJQKCNC-XKNFJVFFSA-N 0.000 description 2
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 description 2
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 description 2
- 229940006607 hirudin Drugs 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 2
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 2
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 2
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 102000002467 interleukin receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010093036 interleukin receptors Proteins 0.000 description 2
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 2
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 2
- 108010013555 lipoprotein-associated coagulation inhibitor Proteins 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 2
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 description 2
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 description 2
- 238000012510 peptide mapping method Methods 0.000 description 2
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229940127126 plasminogen activator Drugs 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 2
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002461 renin inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229940086526 renin-inhibitors Drugs 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 229960002101 secretin Drugs 0.000 description 2
- OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N secretin human Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N 0.000 description 2
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 2
- 229960005202 streptokinase Drugs 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 2
- 229960000874 thyrotropin Drugs 0.000 description 2
- 230000001748 thyrotropin Effects 0.000 description 2
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 2
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 2
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 230000001875 tumorinhibitory effect Effects 0.000 description 2
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 2
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- ZJIFDEVVTPEXDL-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) hydrogen carbonate Chemical compound OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZJIFDEVVTPEXDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AASBXERNXVFUEJ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) propanoate Chemical compound CCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O AASBXERNXVFUEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102100033367 Appetite-regulating hormone Human genes 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108010063919 Glucagon Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100040890 Glucagon receptor Human genes 0.000 description 1
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 description 1
- 101800000224 Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 239000000095 Growth Hormone-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 101000666896 Homo sapiens V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100036721 Insulin receptor Human genes 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000010445 Lactoferrin Human genes 0.000 description 1
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 1
- XVVOERDUTLJJHN-UHFFFAOYSA-N Lixisenatide Chemical compound C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1C(CCC1)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CO)C(=O)NCC(=O)NC(C)C(=O)N1C(CCC1)C(=O)N1C(CCC1)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CCCCN)C(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CCCNC(N)=N)NC(=O)C(NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(CCSC)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC(O)=O)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(NC(=O)C(CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)C(NC(=O)CNC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)C(N)CC=1NC=NC=1)C(C)O)C(C)O)C(C)C)CC1=CC=CC=C1 XVVOERDUTLJJHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 241000989747 Maba Species 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 102100040918 Pro-glucagon Human genes 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010026951 Short-Acting Insulin Proteins 0.000 description 1
- 229940123958 Short-acting insulin Drugs 0.000 description 1
- 102100022831 Somatoliberin Human genes 0.000 description 1
- 101710142969 Somatoliberin Proteins 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 102000000479 TCF Transcription Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010016283 TCF Transcription Factors Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 241000656145 Thyrsites atun Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100038282 V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Human genes 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 description 1
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 description 1
- 229940024142 alpha 1-antitrypsin Drugs 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000003579 anti-obesity Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000022811 deglycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000029036 donor selection Effects 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000006126 farnesylation Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010077689 gamma-aminobutyryl-2-methyltryptophyl-2-methyltryptophyl-2-methyltryptophyl-lysinamide Proteins 0.000 description 1
- 230000030136 gastric emptying Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920006158 high molecular weight polymer Polymers 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000014705 isoleucine Nutrition 0.000 description 1
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 description 1
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 description 1
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 108010004367 lixisenatide Proteins 0.000 description 1
- 229960001093 lixisenatide Drugs 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000021121 meiosis Effects 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 238000007500 overflow downdraw method Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- LQRJAEQXMSMEDP-XCHBZYMASA-N peptide a Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCCCC[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(\NC(=O)[C@@H](CCCCN)NC(=O)CNC(C)=O)=C/C=1C=CC=CC=1)C(N)=O)C(=O)C(\NC(=O)[C@@H](CCCCN)NC(=O)CNC(C)=O)=C\C1=CC=CC=C1 LQRJAEQXMSMEDP-XCHBZYMASA-N 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 201000010065 polycystic ovary syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011403 purification operation Methods 0.000 description 1
- 238000005932 reductive alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000002020 sage Nutrition 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011191 terminal modification Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000014393 valine Nutrition 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/26—Glucagons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/28—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Винахід стосується способу зниження імуногенності фізіологічно активного білка або пептиду порівняно з імуногенністю фізіологічно активного білка або пептиду, до якого не приєднано носія, в якому інгібують активацію Т-клітин і реакцію продукування антитіл за рахунок зв'язування фізіологічно активного білка або пептиду з носієм, і який полягає у зв'язуванні носія з некінцевим внутрішнім залишком цього фізіологічно активного білка або пептиду; та інгібуванні активації Т-клітин і реакції вироблення антитіл фізіологічно активним білком або пептидом, пов'язаним з носієм, де фізіологічно активний білок або пептид вибирають із групи, що складається з ексендіну-4, похідної ексендіну-4, GLP-1, агоніста GLP-1, інсуліну та подвійного агоніста GLP-1/глюкагону і де носій є Fc-регіоном імуноглобуліну або поліетиленгліколем. Також винахід стосується композиції для зниження імуногенності.
Description
(54) СПОСІБ ЗНИЖЕННЯ ІМУНОГЕННОСТІ ФІЗІОЛОГІЧНО АКТИВНОГО БІЛКА АБО ПЕПТИДУ (57) Реферат:
Винахід стосується способу зниження імуногенності фізіологічно активного білка або пептиду порівняно з імуногенністю фізіологічно активного білка або пептиду, до якого не приєднано носія, в якому інгібують активацію Т-клітин і реакцію продукування антитіл за рахунок зв'язування фізіологічно активного білка або пептиду з носієм, і який полягає у зв'язуванні носія з некінцевим внутрішнім залишком цього фізіологічно активного білка або пептиду; та інгібуванні активації Т-клітин і реакції вироблення антитіл фізіологічно активним білком або пептидом, пов'язаним з носієм, де фізіологічно активний білок або пептид вибирають із групи, що складається з ексендіну-4, похідної ексендіну-4, Сі Р-1, агоніста СІ Р-1, інсуліну та подвійного агоніста І Р-1ї1/глюкагону і де носій є Ес-регіоном імуноглобуліну або поліетиленгліколем. Також винахід стосується композиції для зниження імуногенності.
Винахід стосується способу збільшення часу напівжиття білка або пептиду у сироватці та зниження його імуногенності за рахунок сайт-специфічного зв'язування носія з цим білком або пептидом та застосування цього способу.
Для білків, як людського, так і тваринного походження, можна значною мірою отримати імунні відповіді, викликані дією біологічних терапевтичних засобів. Ці відповіді можуть послаблювати їх клінічні дії, обмежувати їх ефективність та інколи призводити до виникнення патологічних захворювань або навіть викликати смерть пацієнта. Зокрема отримання нейтралізуючих антитіл, спрямованих до власного рекомбінантного білка може викликати перехресну реакцію з білком організму пацієнта, отже призвести до небезпечних наслідків (див.,
Мт І Сб. Нетаїйоіоаду 2005 10(3):255-9). Хоча завдяки розвитку молекулярної біології зараз значно знижено кількість проблем, які пов'язані із застосуванням біологічних фармацевтичних засобів, як-то моноклональних антитіл, однак багато фармацевтичних засобів, отриманих на основі рекомбінантних білків мають білкові послідовності, які є ідентичними з білковими послідовностями, експресія яких відбувається в організмі, отже можливе викликання ними нейтралізуючої імунної відповіді (див., МатакКа М еї аїЇ, Сцт Мей Рез Оріп 2006 22(2):223-39).
Хоча досі не все зовсім зрозуміло щодо механізму можливого викликання ними імуногенності, все ж відомо, що протидію власних білків може бути подолано з допомогою введених пацієнту продуктів та різних пов'язаних з пацієнтом факторів (огляд див. у Спевзіег, К, ВаКег, МР апа
Мауєг А. Ехреп Вем Сіїп Іттипої 2005 1(4): 549-559, ВаКег МР апа допез ТО. Си. Оріп. ЮОгид
ОРівс Оєем 2007 19(2):219-227). Фактори імуногенності включають дозування, частоту та шлях введення, імуномодуляторну здатність білкових лікарських засобів, спосіб їх отримання тощо.
Найбільш важливим фактором викликання імунної відповіді є наявність сайту впізнавання антигена (епітопа), який може ефективно стимулювати відповідь Т - клітин СО4-. (огляд див. у
Вакег МР апа допез ТО. Сит. Оріп. Огид Оібвс Оєм 2007 19(2):219-227).
Стосовно ексендину-4 слід зазначити, що він є природним пептидом, знайденим у слинній залозі ящірки жилатьє та його послідовність має 52 95 тотожності до послідовності (С Р-1 (глюкагоноподібного пептиду-ї1) людини. Хоча ексендин-4 та (| Р-1 мають схожу функцію, пов'язану з секрецією інсуліну, однак с Р-1 швидко втрачає активність через дію дипептидилпептидази-ІМ (ОРР-ЇІМ), отже ця сполука має дуже короткий час напівжиття, тоді як
Зо ексендин-4 зберігає стійкість до ОРР-ЇМ завдяки присутності гліцину замість аланіну у другій амінокислотній послідовності, отже він може бути більш ефективним, як терапевтичний засіб, призначений для лікування цукрового діабету ІЇ типу. Крім того, інсулін або його аналоги та подвійні агоністи (І Р-1/глюкагону застосовують, як терапевтичні засоби для лікування цукрового діабету та ожиріння. Однак слід зазначити, що наявність цих амінокислотних послідовностей тваринного походження може діяти, як сайт впізнавання антигена Т-клітинами.
Дія препарату ексенатид (Вуейца), дозволеного до медичного застосування, як терапевтичного засобу для лікування цукрового діабету ІІ типу та який є синтетичним ексендином-4 призводить до появи антитіл до ексенатиду у більш, ніж 30 95 пацієнтів, якім вводили цей лікарський засіб у клінічних дослідженнях протягом року. Дія нещодавно дозволеного до медичного застосування препарату ліксизенатид призводить до вироблення антитіл у приблизно 60-71 95 пацієнтів (див., 7іптап, В. еї аї., Аппа!5 ої Іпіегтпа! Меадісіпе5. 2007 146(7): 477-486; Зсппабе! СА еї аї, Рерііде5 2006 27:1902-1910; ОеБгоп2о, В.А. єї аїЇ, Оіареїез Саге 2005 28:1092-1100; Визве, ..В. еї аї,
Ріареїє5 Саге 2004 27:2628-2635). Інакше кажучи, ексентид впізнається організмом, як чужорідна речовина, яка потребує лікування, що призводить до вироблення антитіл та з цієї причини стає все більш поширеною проблема, яка полягає в тому, що вже важко очікувати на досягнення надійної терапевтичної дії.
Отже, контроль імуногенності є важливим фактором у разі застосування фізіологічно активного білка або пептиду, який має бути введено в організм з метою лікування або профілактики протягом тривалого періоду часу. Зокрема, пов'язані з захворюванням у дорослих
БО осіб фізіологічно активні білки або пептиди, як-то інсулін або інсулінотропний пептид та білок, який негативно впливає на ожиріння досить часто розробляють у вигляді композицій тривалої дії, здатних перебувати в організмі тривалий час після введення. Крім того, навіть якщо ці продукти не є композиціями тривалої дії, все ж існує багато випадків, коли їх необхідно вводити кілька разів протягом тривалого періоду часу. Таким чином, важливим питанням є відсутність викликання імунної відповіді.
За цих обставин винахідники здійснили численні дослідження та експерименти з метою розробки фармацевтичних композицій з білком або пептидом, який не викликає імунної відповіді та виявили, таким чином здійснивши цей винахід, що імуногенність може бути знижено у разі сайт-специфічного зв'язування носія з білком або пептидом порівняно з імуногенністю 60 незв'язаного з носієм білка або пептиду.
Однією метою винаходу є надання способу зниження імуногенності фізіологічно активних білків або пептидів.
Іншою метою винаходу є надання композиції, яка містить кон'югат фізіологічно активного білка або пептиду, в якому носій зв'язано з некінцевим внутрішнім залишком фізіологічно активного білка або пептиду з допомогою непептидильного лінкера.
Іншою метою винаходу є надання способу отримання кон'югату фізіологічно активного білка або пептиду, в якому носій зв'язано з некінцевим внутрішнім залишком фізіологічно активного білка або пептиду.
У одному аспекті винахід стосується способу зниження імуногенності фізіологічно активного білка або пептиду порівняно з імуногенністю фізіологічно активного білка або пептиду, до якого не приєднано носій, який полягає у зв'язуванні носія з некінцевим внутрішнім залишком фізіологічно активного білка або пептиду.
У одному специфічному втіленні винаходу вищезазначений носій відрізняється тим, що його вибрано з групи, яка складається з поліетиленгліколю, жирної кислоти, холестерину, альбуміну або його фрагмента, альбумін-зв'язуючої речовини, полімеру, який містить одиниці певної амінокислотної послідовності, які повторюються, антитіла, фрагмента антитіла, ЕсКп -зв'язуючої речовини, іп-мімо сполучної тканини або її похідної, нуклеотиду, фібронектину, трансферину, еластиноподібного поліпептиду (ЕР), подовженого рекомбінантного поліпептиду (ХТЕМ- поліпептиду), карбокси-кінцевого пептиду (СТР), зонду, що викликає структурну індукцію (ЗІР), сахариду та полимеру з великою молекулярною масою.
У іншому специфічному втіленні винаходу ЕсКп-зв'язуюча речовина відрізняється тим, що вона має Ес-ділянку імуноглобуліну.
У іншому специфічному втіленні винаходу фізіологічно активний білок або пептид та носій відрізняються тим, що вони є зв'язаними з допомогою розташованого між ними лінкера.
У іншому специфічному втіленні винаходу лінкер відрізняється тим, що він є непептидильним лінкером.
У іншому специфічному втіленні винаходу непептидильний лінкер відрізняється тим, що його вибрано з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, кополімеру етиленгліколю та пропіленгліколю, поліоксіетилованого поліолу, полівінілового спирту,
Зо полісахариду, декстрану, полівінілового етилового етеру, біорозкладаного полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти та їх комбінації.
У іншому специфічному втіленні винаходу він відрізняється тим, що фізіологічно активний білок або пептид зв'язано з Ес-ділянкою імуноглобуліну з допомогою непептидильного полімеру, вибраного з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, кополімеру етиленгліколю та пропіленгліколю, поліоксіеєтилованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілового етилового етеру, біорозкладаного полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти та їх комбінації.
У іншому специфічному втіленні винаходу фізіологічно активний білок або пептид відрізняється тим, що його вибрано з групи, яка складається з пептиду, який негативно впливає на ожиріння, інсулінотропного пептиду або його аналога, лептину, інсуліну, аналога інсуліну, глюкагону, гормону росту людини, гормону, який вивільнює гормон росту, пептиду, який вивільнює гормон росту, інтерферону, рецептора інтерферону, колонієстимулюючого фактора, глюкагоноподібного пептиду, як-то С Р-1, подвійного агоніста СІ Р-1/глюкагону, шлункового інгібіторного поліпептиду (СІР), рецептора, з'єднаного з С-білком, інтерлейкіну, рецептора інтерлейкіну, ферменту, інтерлейкін - зв'язуючого білка, цитокін - зв'язуючого білка, фактора активування макрофагів, макрофагального пептиду, В - клітинного фактора, Т - клітинного фактора, А - білка, фактора пригнічення алергії, глікобілка клітинного некрозу, імунотоксину, лімфотоксину, фактора некрозу пухлин, інгібіторного фактора пухлин, фактора росту метастазів, альфа-1 антитрипсину, альбуміну, а-лактальбуміну, аполіпопротеїну-Е, фактора еритропоезу, високоглікозилованого фактора еритропоезу, ангіопоетину, гемоглобіну, тромбіну, пептиду активування рецептора тромбіну, тромбомодуліну, факторів згортання крові МІЇ, Ма,
МІ, ЇХ та ХХІ, фактора активування плазміногену, фібрин-зв'язуючого пептиду, урокінази, стрептокінази, гірудину, С-білка, С-реактивного білка, інгібітора реніну, супероксиддисмутази, тромбоцитарного фактор росту, фактора росту епітеліальних клітин, епідермального фактора росту, ангіостатину, ангіотензину, фактора росту кісткової тканини, кісткового морфогенетичного білка, кальцитоніну, атриопептину, хрящового фактора викликання імпульсної відповіді, елкатоніну, фактора активування сполучної тканини, інгібітора шляху тканевого фактора, фолітропіну, лютропіну, люліберину, фактора росту нервової тканини, паратиреоїдного гормону, релаксину, секретину, соматомедину, гормону кори надниркових залоз, глюкагону, бо холецистокініну, панкреатичного поліпептиду, гастрин-вивільнюючого пептиду, фактора вивільнення кортикотропіну, тиреотропіну, лактоферну, міостатину, рецептора?, антагоніста рецептора, антигену клітинної поверхні, вакцинного антигену вірусного походження, моноклонального антитіла, поліклонального антитіла та фрагмента антитіла.
У іншому специфічному втіленні винаходу фізіологічно активний білок або пептид відрізняється тим, що його вибрано з групи, яка складається з ексендину-4, похідної ексендину- 4, агоніста СІ Р-1, інсуліну та подвійного агоніста СІ Р-1/глюкагону.
У іншому специфічному втіленні винаходу похідна ексендину-4 відрізняється тим, що вона є похідною ексендину-4, в якій змінено заряд на М-кінці ексендину-4 та яку вибрано з групи, яка складається з похідної ексендину-4, в якій видалено М-кінцеву аміногрупу ексендину-4, з похідної ексендину-4, в якій М-кінцеву аміногрупу ексендину-4 заміщено гідроксигрупою, з похідної ексендину-4, в якій М-кінцеву аміногрупу ексендину-4 заміщено карбоксигрупою, з похідної ексендину-4, в якій М-кінцеву аміногрупу ексендину-4 модифіковано диметильною групою та з похідної ексендину-4, в якій видалено альфа-карбон М-кінцевого гістидинового залишку ексендину-4.
У іншому специфічному втіленні винаходу вищезазначений внутрішній залишок відрізняється тим, що він є лізиновим залишком у положенні 12 або 27 похідної ексендину-4, в якій змінено М-кінцевий заряд ексендину-4.
У іншому специфічному втіленні винаходу вищезазначений внутрішній залишок відрізняється тим, що він є лізиновим залишком у положенні 27 похідної ексендину-4, в якій змінено М-кінцевий заряд ексендину-4.
У іншому специфічному втіленні винаходу похідна ексендину-4, в якій змінено М-кінцевий заряд ексендину-4 відрізняється тим, що вона є похідною ексендину-4, в якій видалено альфа- карбон М-кінцевого гістидинового залишку ексендину-4.
У іншому аспект винахід стосується композиції, яка містить кон'югат фізіологічно активного білка або пептиду, в якому носій зв'язано з некінцевим внутрішнім залишком фізіологічно активного білка або пептиду з допомогою непептидильного лінкера, в якій цей кон'югат виявляє імуногенність, яка є зниженою порівняно з імуногенністю фізіологічно активного білка або пептиду, до якого не приєднано носій.
У одному специфічному втіленні винаходу вищезазначений кон'югат відрізняється тим, що
Зо він має знижену імуногенність, яка є побічною дією препарату тривалої дії.
У іншому специфічному втіленні винаходу непептидильний лінкер відрізняється тим, що він є поліетиленгліколем.
У іншому аспекті винахід стосується способу отримання кон'югату фізіологічно активного білка або пептиду, в якому носій зв'язано з некінцевим внутрішнім залишком фізіологічно активного білка або пептиду.
Кон'югат фізіологічно активного білка або пептиду за винаходом може значно знижувати імуногенність в організмі людини та таким чином знижує швидкість вироблення антитіл проти білків або пептидів. Отже, цей кон'югат має переваги через те, що явище знижених клінічних дій фізіологічно активного білка або пептиду є низьким та його може бути ефективно застосовано у розробці композицій тривалої дії з високим рівнем безпечності проти імунної відповіді.
Стислий опис фігур.
Фіг. є діаграмою, на якій зображено порівняння частоти генотипу НГА-ОК від донора у перевірці активності Т-клітин ех мімо Т клітин з подібною частотою, спостереженої для населення світу, Європи та Північної Америки.
Винахід стосується способу зниження імуногенності фізіологічно активного білка або пептиду порівняно з імуногенністю білка або пептиду, до якого не приєднано носій, який полягає у застосуванні операції приєднання носія до некінцевого внутрішнього залишку фізіологічно активного білка або пептиду.
В ході винаходу винахідниками було розроблено спосіб зниження імуногенності фізіологічно активного білка або пептиду, який полягає в тому, що непептидний лінкер та Ес - фрагмент замість зв'язування з кінцем фізіологічно активного білка або пептиду зв'язується з внутрішнім залишком, що таким чином пригнічує механізм дії бажаного білка або пептиду, як антигена.
Винахідники визначили, що у разі застосування вищезазначеного способу активування Т - клітин та реакція вироблення антитіл у тварин значно пригнічується порівняно зі способом отримання кон'югату шляхом модифікації інших ділянок пептиду, як-то його М-кінцевої частини.
В результаті винахідники виявили, що кон'югат фізіологічно активного білка або пептиду, застосований в якості загальноприйнятного білкового фармацевтичного препарату має нове застосування, як композиції та способу зниження імуногенності фізіологічно активного білка або пептиду. бо Зниження імуногенності в організмі може бути виміряно без обмеження із застосуванням відомого способу. Наприклад, відмінність імуногенності може бути підтверджено з допомогою способу вимірювання активності Т - клітин ех мімо, який полягає у приєднанні кожного з носіїв до
М-кінця або до інших, ніж М-кінець ділянок, включаючи С-кінець. Альдегідна реакційна група вибірково реагує з М-кінцем при низькому рН та також вона може утворювати ковалентний зв'язок з залишком лізину в умовах високого рН, наприклад рН 9,0. Реакція ПЕГлування відбувається з одночасним зміненням рн цієї реакції та потім з допомогою іонообмінної колонки з реакційної суміші можна буде відокремити позиційні ізомери.
У разі, якщо зв'язування відбувається у іншому, ніж М-кінцеве, положенні, яке є важливою ділянкою, потрібною для активності білка або пептиду іп мімо, до призначеного до модифікації амінокислотного залишку може бути введено хімічно активну тіолову групу, що призводить до отримання ковалентного зв'язку між білком або опептидом та малеіїмідною групою непептидильного полімеру.
У разі, якщо зв'язування відбувається у іншому, ніж М-кінцеве, положенні, яке є важливою ділянкою, потрібною для активності білка або пептиду іп мімо, до призначеного до модифікації амінокислотного залишку може бути введено аміногрупу, що також призводить до отримання ковалентного зв'язку між білком або пептидом та малеіїмідною групою непептидильного полімеру.
Окрім диметилування, способи захисту М-кінця полягають, але без обмеження, у метилуванні, дезамінуванні або ацетилюванні. "Фізіологічно активний білок або пептид" за винаходом стосується білка або пептиду, який може контролювати генетичну експресію або фізіологічну функцію. Фізіологічно активний білок або пептид може бути включено, без обмеження, до обсягу цього винаходу, допоки некінцевий внутрішній залишок фізіологічно активного білка або пептиду за винаходом буде зв'язано з носієм та внаслідок цього ця сполука буде виявляти знижену імуногенність порівняно з імуногенністю білка або пептиду, до якого не приєднано носій. Як описано нижче, цей носій може бути приєднано до фізіологічно активного білка або пептиду з допомогою лінкера, зокрема непептидильного лінкера.
Крім того, термін "фізіологічно активний білок або пептид" стосується, на додачу до природного біологічно активного білка або пептиду також його похідних, варіантів або
Зо фрагментів.
Приклади фізіологічно активного білка або пептиду включають, але без обмеження, пептид, який негативним чином впливає на ожиріння, інсулінотропний пептид або його аналог, лептин, інсулін, аналог інсуліну, глюкагон, гормон росту людини, гормон, який вивільнює гормон росту, пептид, який вивільнює гормон росту, інтерферон, рецептор інтерферону, колонієстимулюючий фактор, глюкагоноподібний пептид (І Р-1 тощо), подвійний агоніст (Сі Р-1/глюкагону, шлунковий інгібіторний поліпептид (СІР), рецептор, з'єднаний з С-білком, інтерлейкін, рецептор інтерлейкіну, фермент, інтерлейкін - зв'язуючий білок, цитокін - зв'язуючий білок, фактор активування макрофагів, макрофагальний пептид, В - клітинний фактор, Т - клітинний фактор, А - білок, фактор пригнічення алергії, глікобілок клітинного некрозу, імунотоксин, лімфотоксин, фактор некрозу пухлин, інгібіторний фактор пухлин, фактор росту метастазів, альфа-1 антитрипсин, альбумін, а-лактальбумін, аполіпопротеїн-Е, фактор еритропоезу, високоглікозилований фактор еритропоезу, ангіопоетин, гемоглобін, тромбін, пептид активування рецептора тромбіну, тромбомодулін, фактори згортання крові МІ, Ма, МІ, ЇХ та
ХІЇЇ, фактор активування плазміногену, фібрин-зв'язуючий пептид, урокіназу, стрептокіназу, гірудин, С-білок, С-реактивний білок, інгібітор реніну, супероксиддисмутазу, тромбоцитарний фактор росту, фактор росту епітеліальних клітин, епідермальний фактор росту, ангіостатин, ангіотензин, фактор росту кісток, кістковий морфо генетичний білок, кальцитонін, атриопептин, хрящовий фактор викликання імпульсної відповіді, елкатонін, фактор активування сполучної тканини, інгібітор шляху тканевого фактора, фолітропін, лютропін, люліберин, фактор росту нервової тканини, паратиреоїдний гормон, релаксин, секретин, соматомедин, гормон кори надниркових залоз, глюкагон, холецистокінін, панкреатичний поліпептид, гастрин-вивільнюючий пептид, фактор вивільнення кортикотропіну, тиреотропін, лактоферин, міостатин, рецептор, антагоніст рецептора, антиген клітинної поверхні вакцинного антигену вірусного походження, моноклональне антитіло, поліклональне антитіло та фрагмент антитіла.
Точніше кажучи, фізіологічно активний білок або пептид може включати, але без обмеження, інсулін, інсулінотропний пептид або подвійний агоніст СІ Р-1/глюкагону.
Термін "інсулін" за винаходом охоплює всі пептиди або модифіковані пептиди, які стимулюючим чином впливають на інсулінові рецептори. Цей інсулін може бути, наприклад, природним інсуліном, інсуліном короткої дії, базальним інсуліном, аналогом інсуліну, в якому 60 будь-яку амінокислоту природного інсулін змінено з допомогою будь-якого способу, вибраного з заміщення, додавання, делеції та модифікації або з допомогою комбінації цих способів або він може бути його фрагментом. Також застосований у винаході інсулін може бути інсуліном тривалої дії, отриманим із застосуванням способів пролонгованої дії, призначених для подолання короткого часу напівжиття. Зокрема інсулін може бути інсуліном тривалої дії або аналогом інсуліну тривалої дії, який може бути введено, але без обмеження, раз на тиждень.
Деякі певні приклади інсуліну за винаходом включають, але без обмеження, інсулін або аналог інсуліну та типи цих сполук тип тривалої дії, як наведено у Патенті Кореї Мо 10-1058290 (або у Міжнародній патентній публікації УМО 2008-082274) або у патентній публікації Кореї Мо 2014-0106452 ((або у Міжнародній патентній публікації МО 2014-133324), повний вміст яких включено сюди шляхом посилання.
Як тут застосовано, термін "аналог інсуліну" стосується речовини, яка зберігає таку ж саме функцію контролювання рівнів глюкози в крові іп мімо, як і природний інсулін. Зокрема, аналоги інсуліну включають речовини, які містять модифікацію однієї або кількох амінокислот природної послідовності інсуліну. Аналог інсуліну може бути аналогом інсуліну зі зміненням А- або В- амінокислотного ланцюга природного інсуліну. Амінокислотну послідовність природного інсуліну наведено нижче:
А - ланцюг:
Спу-Пе-МаІ-Спіи-СтТп-Сув-Сув- Гиг-5ег-Пе-Сув-5ег-І еи- Гут-С1п-Ї ей-С1ПІи-Авп- Туг-Субз-Азп (ЗЕО І
Мо 1)
В - ланцюг:
Ріпе-МаІ-Азп-С1п-Нів-Ї еи-Сувз-Спу-5ег-Нів-І еи-МаІ-Спи-Аїа-Ї еи- Тук- еи-МаІ-Сув-Спту-сп1и-Ага- сСіу-Рпе-РНе-Туг- Тиг-Рго-Гувз-ТАг (ЗЕО 10 Ме 2)
Зокрема принаймні одна амінокислота у складі природного інсуліну може мати модифікацію, вибрану з групи, яка складається з заміщення, додавання, делеції, змінення та їх комбінації, але не обмежуючись ними.
Для заміщення або додавання амінокислот може бути застосовано як 20 амінокислот, які звичайно є у складі людських білків, так і атипові амінокислоти та амінокислоти, які не зустрічаються в природі. Приватними постачальниками таких атипових амінокислот є компанії
Зідта-АїІдгісй, СпетРер та Сеплуте рпагтасеціїсаІі5. Пептиди, які містять ці амінокислоти та типові пептидні послідовності може бути синтезовано або отримано від приватних компаній, які займаються синтезом білків, наприклад, від компаній Атегісап реріїде сотрапу Іпс., Васпет (ОА) або Апудеп (Когеа).
Зокрема вищезазначені аналоги інсуліну включають "перевернутий" інсулін, варіант інсуліну, фрагмент інсуліну, агоніст інсуліну, похідну інсуліну тощо та способи отримання цих сполук полягають у застосуванні, але без обмеження, генетичної рекомбінації, твердофазного синтезу тощо.
Термін "похідна інсуліну" вказує на гомологію амінокислотної послідовності з А-ланцюгом та
В-ланцюгом природного інсуліну з одночасним збереженням функції контролю рівнів глюкози в крові в організмі та включає пептидну форму, яка може мати певні групи амінокислотних залишків, які є хімічно заміщеними (наприклад, шляхом альфа-метилування, альфа- гідроксилування), видаленими (наприклад, шляхом дезамінування) або зміненими (наприклад, шляхом М-метилування). Крім того, похідна інсуліну також може бути пептидоміметиком та низькомолекулярною або високомолекулярною сполукою, яка може зв'язуватися з інсуліновим рецептором для контролю рівнів глюкози в крові в організмі навіть без гомології з природним інсуліном та амінокислотною послідовністю.
Як тут застосовано, термін "фрагмент інсуліну" стосується фрагменту, який містить одну або більше амінокислот, видалених з інсуліну або доданих до нього. Додані амінокислоти можуть бути амінокислотами, які не існують у природному стані (наприклад, амінокислотами О-типу).
Цей фрагмент інсуліну зберігає функцію контролю рівнів глюкози в крові в організмі.
Як тут застосовано, термін "варіант інсуліну" є пептидом, який має одну або більше амінокислотних послідовностей, які відрізняються від амінокислотних послідовностей інсуліну та зберігає функцію контролю рівнів глюкози в крові в організмі.
Відповідно, способи отримання агоніста, похідної, фрагмента та варіанта інсуліну за винаходом може бути застосовано по окремості та у комбінації. Наприклад, винахід стосується пептиду, який має одну або більше амінокислотних послідовностей, які відрізняються від амінокислотних послідовностей природного інсуліну, має дезамінування на кінцевому амінокислотному залишку та зберігає функцію контролю рівнів глюкози в крові в організмі.
Опис цих агоністів, похідних, фрагментів та варіантів може бути також застосовано до інших типів білків або пептидів. бо Зокрема аналоги інсуліну можуть бути такими, в яких одну або кілька амінокислот вибрано з групи, яка складається з амінокислот у положенні 1, амінокислот у положенні 2, амінокислот у положенні 3, амінокислот у положенні 5, амінокислот у положенні 8, амінокислот у положенні 10, амінокислот у положенні 12, амінокислот у положенні 16, амінокислот у положенні 23, амінокислот у положенні 24, амінокислот у положенні 25, амінокислот у положенні 26, амінокислот у положенні 27, амінокислот у положенні 28, амінокислот у положенні 29, амінокислот у положенні 30 В-ланцюга; амінокислот у положенні 1, амінокислот у положенні 2, амінокислот у положенні 5, амінокислот у положенні 8, амінокислот у положенні 10, амінокислот у положенні 12, амінокислот у положенні 14, амінокислот у положенні 16, амінокислот у положенні 17, амінокислот у положенні 18, амінокислот у положенні 19 та амінокислот у положенні 21 А-ланцюга, заміщених іншими амінокислотами. Більш докладно кажучи, вони можуть бути такими, в яких одну або кілька амінокислот вибрано з групи, яка складається з амінокислот у положенні 8, амінокислот у положенні 23, амінокислот у положенні 24, амінокислот у положенні 25 В-ланцюга; амінокислот у положенні 1, амінокислот у положенні 2, амінокислот у положенні 14 та амінокислот у положенні 19 А-ланцюга, заміщених іншими амінокислотами.
Зокрема, серед вищезазначених амінокислот може бути застосовано, але без обмеження, ті з них, в яких іншими амінокислотами заміщено одну або більше, дві або більше, три або більше, чотири або більше, п'ять або більше, шість або більше, сім або більше, вісім або більше, дев'ять або більше, десять або більше, 11 або більше, 12 або більше, 13 або більше, 14 або більше, більш, ніж 15, 16 або більше, 17 або більше, 18 або більше, 19 або більше, 20 або більше, 21 або більше, 22 або більше, 23 або більше, 24 або більше, 25 або більше, 26 або більше або 27 або більше амінокислот.
Амінокислотні залишки у вищеописаних положеннях може бути заміщено аланіном, глютаміновою кислотою, аспарагіном, ізолейцином, валіном, глютаміном, гліцином, лізином, гістидином, цистеїном, фенілаланіном, триптофаном, проліном, серином, треоніном та/або аспарагіновою кислотою. "Інсулінотропний пептид" за винаходом стосується пептиду, який зберігає функцію секреції інсуліну. Інсулінотропний пептид може стимулювати синтез або експресію інсуліну у бета - клітинах підшлункової залози. Зокрема інсулінотропними пептидами, але без обмеження, є СІ Р (глюкагоноподібний пептид)-1, ексендин-3 або ексендин-4. Інсулінотропними пептидами також є природні інсулінотропні пептиди, їх попередники, агоністи, похідні, фрагменти та варіанти, а також до цієї групи може бути включено їх комбінації, як було попередньо описано.
СІ Р-1 є гормоном, секреція якого відбувається в тонкому кишечнику та він в цілому сприяє біосинтезу та секреції інсуліну, пригнічує секрецію глюкагону, а також сприяє клітинному поглинанню глюкози. Попередник глюкагону у тонкому кишечнику розкладається на три пептиди, тобто на глюкагон, СІ Р-1 та СІ Р-2. Під пептидом СІ Р-1 мається на увазі СІ Р-1 (1-37), який в природному стані існує у формі, яка не має інсулінотропної функції, але потім піддається обробці та перетворюється на активовані форми СІ Р-1 (7-37).
Ексендин-4 є пептидом, який має 39 амінокислот та виявляє 53 95 тотожності амінокислотної послідовності до СІ Р-1. Ексендин-4 може мати наступну послідовність, але без обмеження нею:
Ексендин-4:
Ні Спу Сіи Спу Тиг Рпе Тниг Зег Авр І єи 5ег Гув Сіп Меї Сіи Сіи Сім Аа Маї! Агу І єи РНе Пе
Сім Тгтр Геи Гуз Азп Су Су Рго 5ег Зег Су Аїа Рго Рго Рго Зег (ЗЕО ІЮО Мо 3)
Ексендин-3 є поліпептидом, який має інші, ніж у складі ексендину-4 амінокислоти у положеннях 2 та 3, які, на відміну від ексендину-4, є заміщеними відповідно серином та аспарагіновою кислотою, отже цю сполуку можна позначити, як бБеггАв5рз3-ексендин-4(1-39).
Ексендин-3 може мати наступну послідовність, але без обмеження нею:
Ексендин-3:
Ні бЗег А5вр Сіу Тит Ре Тит Зег Авр І єи 5ег Гуз Сип Меї Сім Спи Сім Ага Маї Ага Геи РНе Пе
Сім Тгтр Геи Гуз Азп Су Су Рго 5ег Зег Су Аїа Рго Рго Рго Зег (ЗЕО ІЮ Мо 4)
Вищезазначена похідна інсулінотропного пептиду може бути похідною з модифікованим М- кінцем цього інсулінотропного пептиду. Точніше кажучи, ця похідна інсулінотропного пептиду може викликати швидку дисоціацію рецептора завдяки зміненню заряду на М-кінці та вона може бути похідною, в якій додатній заряд на М-кінці змінено на нейтральний або фактично на від'ємний заряд.
Похідна інсулінотропного пептиду за винаходом може бути дезаміно-гістидиловою похідною, в якій видалено М-кінцеву аміно- (або амінну) групу інсулінотропного пептиду, бета- гідроксиімідазо-пропіонілловою похідною із заміщенням аміногрупи гідроксильною групою, диметил-гістидиловою похідною, в якій аміногрупу змінено на дві метильні групи, бета- бо карбоксиіїмідазо-пропіоніловою похідною із заміщенням М-кінцевої аміногрупи карбоксильною групою або імідазоадетиловою похідною, в якій видалено альфа-карбон М-кінцевого гістидинового залишку зі збереженням лише імідазоацетилової групи з усуванням таким чином позитивного заряду аміногрупи. До обсягу винаходу також включено й інші похідні з модифікацією М-кінцевої аміногрупи.
Наприклад, похідна інсулінотропного пептиду може бути похідною, в якій М-кінцева аміно- (або амінна) група або амінокислотний залишок ексендину-4 є хімічно модифікованою. Зокрема вона є похідною ексендину-4, яку було отримано шляхом заміщення або усунення альфа- аміногрупи, присутньої у альфа-карбоні М-кінцевого гістидинового залишку (першої амінокислоти) ексендину-4. Точніше кажучи, вона може містити дезаміно-гістидил-ексендин-4 (рА-ексендин-4) з усуненням М-кінцевої аміногрупи, бета-гідроксиімідазопропіл-ексендин-4 (НУ- ексендин-4), отриманий шляхом заміщення М-кінцевої аміногрупи гідроксильною групою, бета- карбокси-імідазопропіл-ексендин-4 (СХ-ексендин-4), отриманий шляхом заміщення М-кінцевої аміногрупи карбоксильною групою, диметил-гістидил-ексендин-4 (ОМ-ексендин-4), отриманий шляхом модифікації М-кінцевої аміногрупи двома метильними залишками або імідазоацетил- ексендин-4 (СА-ексендин-4), отриманий шляхом усунення альфа- карбону М-кінцевого гістидинового залишку тощо.
Також зрозуміло, що до обсягу цього винаходу включено інсулінотропний пептид, зазначений у публікації патентної заявки Кореї Мо 10-2012-0135123 (або у Міжнародній патентній публікації М/О 2012/165915) або у Міжнародній патентній публікації ЛО 2014/107035.
Повний зміст цих публікацій включено сюди шляхом посилання.
Термін "подвійний агоніст (І Р-1/глюкагону" за винаходом включає пептиди або їх фрагменти, попередники, варіанти або похідні, які мають подвійну активність СІ Р-1/глюкагону, як-то оксинтомодулін, який є природним подвійним агоністом сі Р-1/глюкагону. Подвійний агоніст СІ Р-1/глюкагону за винаходом може бути подвійним агоністом сі Р-1/глюкагону, до якого застосовано способи надання довготривалої дії з метою подолання короткого часу напівжиття та переважно він може бути, але без обмеження, подвійним агоністом сі Р- 1/глюкагону тривалої дії, який може бути введено раз на тиждень.
Подвійний агоніст СІ Р-1/глюкагону включає оксинтомодулін. "Оксинтомодулін" стосується пептиду, отриманого з пре-глюкагону, який є попередником
Зо глюкагону. Оксинтомодулін за винаходом може бути, як було попередньо описано, природним оксинтомодуліном, його попередником, похідною, фрагментом або варіантом.
Як правило, але без обмеження, оксинтомодулін може мати амінокислотну послідовність
НЗОСТЕТОУЗКМ ОБАКАОВЕМОУМ ММ ТКАМАММІА (ЗЕО ІЮ Мо 5).
Похідна оксинтомодуліну може бути пептидом, похідною пептиду або пептидоміметиком, отриманим шляхом додавання, делеції або заміщення будь-якої амінокислоти у складі послідовності оксинтомодуліну та може активувати як рецептор СІ Р-1, так і рецептор глюкагону та зокрема може активувати кожен рецептор на більш високому рівні, ніж його активування з допомогою природного оксинтомодуліну.
Деяк певні приклади подвійного агоніста (сі Р-1/глюкагону за винаходом включають подвійний агоніст І Р-1/глюкагону та його похідні або цю речовину тривалої дії, як зазначено у публікації патентної заявки Кореї МоМо 10-20125-01372771 (або у Міжнародній патентній публікації УМО 2012-169798) та 10-2012-01639579 (або у Міжнародній патентній публікації УМО 2012-173422), повний вміст яких включено сюди з допомогою посилання.
Носій, який є зв'язаним з фізіологічно активним білююом або пептидом може за винаходом бути матеріалом, який може збільшувати час напівжиття фізіологічно активного білка або пептиду іп мімо.
Приклади фізіологічно активного білка або пептиду включають різні речовини, здатні знижувати нирковий кліренс фізіологічно активного білка або пептиду, наприклад, поліеєтиленгліколь, жирні кислоти, холестерин, альбумін або його фрагмент, альбумін-зв'язуючу речовину, полімер, який містить одиниці певної амінокислотної послідовності, які повторюються, антитіло, фрагмент антитіла, ЕсКп - зв'язуючу речовину, іп-мімо сполучну тканину або її похідну, нуклеотиди, фібронектин, трансферин, еластиноподібний поліпептид (ЕГ Р), ХТЕМ-поліпептид, карбокси-кінцевий пептид (СТР), зонд, що викликає структурну індукцію (5ІР), сахарид, високомолекулярний полімер, певну амінокислотну послідовність тощо. Крім того, зв'язок між фізіологічно активним білюом або пептидом та носієм включає, але без обмеження, зв'язок, отриманий шляхом генетичної рекомбінації та зв'язок, отриманий іп міїго.
Носій може бути ковалентно або нековалентно зв'язано з фізіологічно активним білком або пептидом. Вищезазначеною ЕсКп - зв'язуючою речовиною може бути Ес-ділянка імуноглобуліну, наприклад, Ес-ділянка імуноглобуліну дос. бо У разі застосування поліетиленгліколю, як носія може бути застосовано технологію Кесоде від компанії Атбргх Іпс., яка дозволяє здійснити сайт-специфічне зв'язування з поліетиленгліколем. Також може бути застосовано глікоПЕГілування, запропоноване компанією
Меозе, яке дозволяє здійснити специфічне зв'язування з глікозилованою групою. Крім того може бути вжито, але без обмеження, спосіб із застосуванням здатного до вивільнення полієтиленгліколя, який полягає у повільному усуванні ПЕГ в організмі. Також у винаході може бути застосовано способи, які збільшують біодоступність у разі застосування ПЕГ. На додачу слід зазначити, що з допомогою вищезазначених способів також може бути здійснено зв'язування непептидильних полімерів, як-то поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, кополімеру етиленгліколю та пропіленгліколю, поліоксиетилованого поліолу, полівінілового спирту, полісахаридів, декстрану, полівінілового етилового етеру, біорозкладаного полімеру, ліпідного полімеру, хітинів або гіалуронової кислоти з фізіологічно активним білком або пептидом.
У разі застосування альбуміну, як носія, у винаході бути застосовано спосіб, який полягає у безпосередньому ковалентному зв'язуванні альбумінів або їх фрагментів з фізіологічно активним білююм або пептидом для збільшення стійкості іп мімо. Навіть у випадках, коли альбумін не є безпосередньо зв'язаним може бути застосовано спосіб, який забезпечує зв'язування з альбуміном шляхом приєднання до фізіологічно активного білка або пептиду певних альбумін - зв'язуючих матеріалів, наприклад, антитіл або фрагментів антитіл, які специфічно зв'язуються з альбуміном. Також може бути застосовано спосіб, який полягає у зв'язуванні з фізіологічно активним білком або пептидом певного пептиду / білка зі зв'язувальною спорідненістю до альбуміну. Крім того може бути застосовано, але без обмеження, спосіб, який полягає у зв'язуванні з фізіологічно активним білком або пептидом жирної кислоти, яка має зв'язувальну спорідненість до альбуміну. Також сюди може бути включено будь-яку процедуру або спосіб зв'язування, який може збільшити стійкість у разі застосування альбуміну іп мімо.
Також до цього винаходу може бути включено спосіб зв'язування з фізіологічно активним білком або пептидом із застосуванням антитіла або фрагмента антитіла, як носія з метою збільшення часу напівжиття іп мімо. Для цього може бути застосовано антитіло або фрагмент антитіла, який має сайт зв'язування ЕсКп та будь-який фрагмент антитіла, який не містить цього
Зо сайту зв'язування, як-то фрагмент Раб. Також до цього винаходу може бути включено технологію СомХ-Боду від компанії СомХ із застосуванням каталітичних антитіл та спосіб збільшення часу напівжиття іп мімо із застосуванням Ес-ділянки імуноглобуліну.
У разі застосування Ес-ділянки імуноглобуліну, лінкерне зв'язування з Ес - ділянкою та фізіологічно активним білком або пептидом та спосіб їх зв'язування можуть полягати, але без обмеження, у застосуванні пептидного зв'язку або поліетиленгліколю тощо та у цьому разі може бути прийнятним будь-який спосіб хімічного зв'язування. До того ж, коефіцієнт зв'язування Ес - ділянки та аналога інсуліну може складати, але без обмеження, 1:1 або 1:2.
Стала ділянка імуноглобуліну, яка містить Ео-ділянку є біорозкладаним поліпептидом, здатним до метаболізації іп мімо, отже її може безпечно бути застосовано, як носія лікарського засобу. Крім того, завдяки її відносно зниженій молекулярній масі застосування Ес-ділянки імуноглобуліну є більш бажаним, ніж застосування цілої молекули імуноглобуліну з точки зору отримання, очищення та виходу продукції. Також застосування окремої Ес-ділянки імуноглобуліну передбачає отримання комплексу зі значно збільшеним рівнем гомогенності та зниженням можливості викликання антигенності в крові, оскільки ця ділянка є позбавленою Еар- фрагмента, який має високу гетерогенність через відмінності амінокислотної послідовності у різних антитіл.
Стосовно вищезгаданого ПЕГ слід зазначити, що ця сполука неспецифічно зв'язується у певному сайті або у різних сайтах цільового пептиду та тим самим збільшує його молекулярну масу. Завдяки цьому ПЕГ є ефективним у пригніченні ниркового кліренсу та запобіганні гідролізу та його застосування також не викликає особливих побічних дій. До того ж, у разі зв'язування
ПЕГ з екзогенним пептидом він може пригнічувати впізнавання присутніх у екзогенному пептиді антигенних сайтів з допомогою імунних клітин. Зокрема ПЕГ може пригнічувати фагоцитоз пептиду антиген-презентуючими клітинами та його протеоліз, тобто ПЕГ є здатним знижувати ефективність антигенної дії пептиду. Зокрема для стимулювання антигенного активування
СО4-Т7 клітин екзогенним білком необхідна наявність приблизно 14-24 коротких пептидів, зв'язаних з молекулами МНС (головного комплексу гістосумісності) другого класу та присутніх на антиген-презентуючих клітинах. Цей процес може бути пригнічено протягом деградації, починаючи з певного розміру в залежності від сайту зв'язування ПЕГ.
У одному втіленні за винаходом носій та фізіологічно активний білок або пептид приєднано з 60 допомогою лінкера, зокрема непептидильного лінкера.
Непептидильний лінкер за винаходом стосується біосумісного полімеру, який містить дві або більше одиниці, які повторюються та які зв'язано між собою з допомогою будь-якого ковалентного зв'язку, виключаючи пептидний зв'язок. Непептидильний лінкер може бути взаємозамінно застосовано з непептидильним полімером.
Корисний для винаходу непептидильний лінкер може бути вибрано з групи, яка складається з біорозкладаного полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти та їх комбінації.
Застосований тут біорозкладаний полімер може бути поліетиленгліколем, поліпропіленгліколем, кополімером етиленгліколю та пропіленгліколю, поліоксиетилованим поліолом, полівініловим спиртом, полісахаридом, декстраном, полівініловим етиловим етером, полімолочною кислотою (РГА) або полілактид-ко-гліколідом (РІЗА). У одному специфічному втіленні за винаходом непептидильним полімером є поліетиленгліколь. Додатково до обсягу цього винаходу може бути включено відомі у цій галузі їх похідні та похідні, які може бути легко отримано з допомогою відомого у цій галузі способу.
Пептидний лінкер для застосування у злитому білку, отриманому з допомогою загальноприйнятного способу злиття без порушення рамки зчитування має певні недоліки через те, що він легко розщеплюється протеолітичними ферментами іп мімо, внаслідок чого з допомогою цього носія не може бути досягнуто очікуваного достатнього збільшення часу напівжиття активного лікарського засобу в сироватці. Однак, оскільки непептидильний полімер за винаходом є речовиною, позбавленою пептидних зв'язків, він може мати суттєву стійкість до дії протеолітичного ферменту, що таким чином збільшує сироватковий час напівжиття пептиду.
Молекулярна маса застосованого у винаході непептидильного полімеру може складати 1-100 кДа та переважно 1-20 кДа. Непептидильний полімер за винаходом, зв'язаний з Ес-ділянкою імуноглобуліну може бути одним типом полімеру або комбінацією різних типів полімерів.
Застосований у винаході носій відрізняється тим, що він є зв'язаним з некінцевим внутрішнім залишком фізіологічно активного білка або пептиду. У цьому разі, як описано вище, цей носій може бути зв'язано з некінцевим внутрішнім залишком фізіологічно активного білка або пептиду з допомогою лінкера.
Некінцевий внутрішній залишок фізіологічно активного білка або пептиду може включати, без обмеження, будь-який залишок, спроможний у випадку, коли носій зв'язано з фізіологічно активним білком або пептидом, до зниження його імуногенності порівняно з подібним залишком білка або пептиду, до якого не приєднано носій або в якому носій зв'язано з кінцевим сайтом білка або пептиду.
Некінцевою внутрішньою амінокислотою фізіологічно активного білка або пептиду може бути лізин, цистеїн тощо.
Точніше кажучи, якщо фізіологічно активний білок або пептид є інсулінотропним пептидом, зокрема ексендином-4 або похідною ексендину-4, то його внутрішній залишок може бути, але без обмеження, лізиновими залишками у положеннях 12 або 27.
Додатково, у випадку застосування альдегідного лінкера, як непептидильного полімеру відбувається реакція М-кінцевої групи з аміногрупою лізинового залишку та модифіковану форму інсулінотропного пептиду може бути застосовано для збільшення виходу продукту реакції. Наприклад, може бути здійснено підтримання хімічно активної аміногрупи у бажаному положенні з допомогою способу блокування М-кінця, способу заміщення лізинового залишку, способу введення аміногрупи та додатково може бути покращено ПЕГілування та збільшення виходу зв'язаної сполуки.
У бажаному втіленні за винаходом кон'югат інсулінотропного пептиду, в якому носій зв'язано з некінцевим внутрішнім залишком інсулінотропного пептиду за винаходом стосується кон'югату інсулінотропного пептиду, в якому Ес-ділянку імуноглобуліну специфічно зв'язано з аміногрупою, яка не знаходиться на М-кінці інсулінотропного пептиду.
У одному специфічному втіленні винахідники здійснили серії експериментів; а саме у способі вибіркового зв'язування ПЕГ з лізиновим залишком інсулінотропного пептиду, у разі зв'язування
ПЕГ з природним ексендином-4 реакція відбувалася з рН 9,0, при якому було викликано
ПЕГілування з лізиновим залишком; тоді як у іншому способі реакція зв'язування ПЕГ з похідною ексендину-4 з відокремленим або захищеним М-кінцем відбувалася з рН 7,5, при якому було викликано ПЕГілування з лізиновим залишком. В результаті було підтверджено, що відміну від М-кінцевого зв'язування, зв'язування з лізиновим залишком значно пригнічує активні властивості Т-клітин ех мімо (Таблиці 2-4).
Термін "Рсо-ділянка імуноглобуліну", як тут застосовано, також стосується важколанцюгової сталої ділянки 2 (СН2) та важколанцюгової сталої ділянки З (СНЗ) імуноглобуліну, виключаючи змінні ділянки важкого та легкого ланцюгів, важколанцюгову сталу ділянку 1 (СНІ) та бо легколанцюгову сталу ділянку 1 (СІ 1) імуноглобуліну. Він також може включати шарнірну ділянку у складі важколанцюгової сталої ділянки.
Ес-ділянка імуноглобуліну за винаходом також може містити частину або всі Ес -ділянки, які містять важколанцюгову сталу ділянку 1 (СНІ) та/або легколанцюгову сталу ділянку 1 (СІ 1) за виключенням змінних ділянок важкого та легкого ланцюгів імуноглобуліну, допоки вони зберігають фізіологічну дію, яка є суттєво подібною або кращою, ніж дія природного білка. Крім того, Рс-ділянка імуноглобуліну може бути фрагментом, який має делецію у відносно великій частині амінокислотної послідовності СН2 та/або СНЗ. Інакше кажучи, Ес-ділянка імуноглобуліну за винаходом може містити 1) домен СНІ, домен СН2, домен СНЗ та домен СНА, 2) домен СНІ1 та домен СНІ, 3) домен СНІ та домен СНЗ, 4) домен СН2 та домен СНЗ, 5) комбінацію одного або більше доменів та шарнірної ділянки імуноглобуліну (або частини шарнірної ділянки) та 6) димер кожного домену важколанцюгових сталих ділянок та легколанцюгову сталу ділянку.
Також ЕРс-ділянка імуноглобуліну за винаходом містить природну амінокислотну послідовність, а також похідну цієї послідовності (отриману внаслідок мутації). Ця похідна амінокислотної послідовності має іншу послідовність через делецію, вставку, неконсервативне або консервативне заміщення або комбінацію подібних змінень одного або кількох амінокислотних залишків природної амінокислотної послідовності. Наприклад, як прийнятну мішень для модифікації можна застосувати амінокислотні залишки Ес-ділянки імуноглобуліну дО у положеннях 214-238, 297-299, 318-322 або 327-331, які, як відомо, відіграють важливу роль у зв'язуванні. Також можливо застосування різних видів похідних, включаючи похідні з делецією ділянки, здатної утворювати дисульфідний зв'язок або з вилученням певних амінокислотних залишків на М-кінці природної Ес - форми або з додаванням до них залишку метіоніну. Також може бути здійснено делецію у сайті зв'язування комплементу, як-то у сайті зв'язування Сід та у сайті залежної від антитіл клітинно-опосередкованої цитотоксичності (АрСС) для усунення ефекторних функцій. Способи отримання цих похідних послідовності Ес- ділянки імуноглобуліну наведено у Міжнародних патентних публікаціях МО 97/34631 та УМО 96/32478 тощо.
Також у цій галузі відомо про існування амінокислотних заміщень у складі білків та пептидів, які суттєво не впливають на змінення активності цих молекул (Н. Меншгаїй, В. Г. НІіЇїї, Тпе Ргоївїп5 ("Білки"), Асадетіс Рге55, Мем/ МогК, 1979). Найбільш поширеними заміщеннями є заміщення амінокислотних залишків АїЇа/5Зег, мае, Азр/ЗіІм, Тпиг/Зег, АїІа/сІу, Аїа/Тпг, Зег/Азп, Аїалиаї,
Зег/Сіу, Тну/РНе, АїІа/Рго, І уз/Аго, Азр/Азп, І ешЛіє, І еи/ллаї, АІа/сІм та Азр/с1у.
Додатково, якщо це бажано, Ес-ділянку може бути модифіковано з допомогою фосфорилювання, сульфатування, акрилування, глікозилування, метилювання, фарнезилування, ацетилювання, амідування тощо.
Вищезазначені похідні Ес-ділянки можуть бути похідними, які виявляють таку ж саме біологічну активність, як і Ес-ділянка винаходу або покращувати структурну стійкість проти нагрівання, дії рН тощо.
Крім того, ці Рс-ділянки може бути отримано з природних форм, отриманих від людини та інших тварин, як-то корів, кіз, свиней, мишей, кролів, хом'яків, щурів або морських свинок або вони можуть бути їх рекомбінантами або похідними, отриманими від трансформованих тваринних клітин або мікроорганізмів. Зазначений тут спосіб їх отримання з природного імуноглобуліну полягає у виділенні цілих імуноглобулінів з організму людини або тварини та наступної їх обробки протеолітичним ферментом. Обробка папаїном призводить до розщеплення природного імуноглобуліну на фрагменти Бар та Ес та обробка пепсином призводить до отримання фрагментів рЕс' та Е(ар)2. Для виділення фрагментів Ес або рЕс' їх може бути піддано ексклюзійній хроматографії тощо.
Звичайно Ес - ділянка людського походження є рекомбінантною Ес-ділянкою імуноглобуліну, отриманою від мікроорганізму.
Також Ес-ділянка імуноглобуліну існує у формі ділянки, яка має природні цукрові ланцюги, збільшені порівняно з природною формою цукрові ланцюги або знижені порівняно з природною формою цукрові ланцюги або вона може бути у деглікозилованій формі. Збільшення, зниження або усунення цукрових ланцюгів Ес-фрагменту імуноглобуліну може бути здійснено з допомогою загальноприйнятних у цій галузі способів, як-то хімічний або ферментативний спосіб, а також з допомогою генно-інженерних технологій із застосуванням мікроорганізмів.
Усунення цукрових ланцюгів з Ес-ділянки імуноглобуліну призводить до різкого зниження зв'язувальної спорідненості до частини Сід компонента комплементу та до зниження або усунення залежної від антитіл клітинно-опосередкованої цитотоксичності або комплемент- залежної цитотоксичності та у зв'язку з цим не викликає небажаних імунних відповідей іп мімо. У цьому разі для мети винаходу може бути більш прийнятним застосування ГЕс-ділянки бо імуноглобуліну у деглікозилованій або аглікозилованій формі, як носія лікувального засобу.
Як тут застосовано, термін "деглікозилування" стосується ферментативного усунення цукрових груп від Ес - ділянки та під терміном "аглікозилування" мається на увазі отримання Ес - ділянки у неглікозилованій формі в результаті експресії з допомогою прокаріотів, зокрема Е. соїї.
Слід зазначити, що Ес-ділянку імуноглобуліну може бути отримано з організму людини або інших тварин, як-то корів, кіз, свиней, мишей, кролів, хом'яків, щурів або морських свинок та переважно з організму людини.
Також Ес-ділянка імуноглобуліну може бути Ес - ділянкою, отриманою з імуноглобуліну Ідс,
ІЧА, ІдО, ІДЕ та ІдМ або її може бути отримано з допомогою їх комбінацій або гібридів. Звичайно її отримують з імуноглобуліну дО або ІдМ, які є одними з серед найбільш поширених білків в крові людини та більш переважно, але без обмеження, її отримують з імуноглобуліну дос, який, як відомо, збільшує час напівжиття ліганд -зв'язуючих білків.
З іншого боку, під терміном "комбінація", як тут застосовано, мається на увазі, що поліпептиди, які кодують одноланцюгові Ес-ділянки імуноглобуліну однакового походження є зв'язаними з одноланцюговим поліпептидом іншого походження з утворенням димеру або мультимеру. Інакше кажучи, димер або мультимер може бути утворено з двох або більше фрагментів, вибраних з групи, яка складається з Ес-ділянок імуноглобулінів ідо, ІдА, ІМ, дО та
І9ЗЕ.
Під терміном "гібрид" за винаходом мається на увазі, що у одноланцюговій Ес-ділянці імуноглобуліну присутня послідовність, яка відповідає принаймні двом Ес - фрагментам різного походження та за цим винаходом можливо застосування різних типів гібридів. Точніше кажучи, гібрид складається з 1-4 доменів, вибраних з групи, яка складається з доменів СНІ, СН2, СНЗ та СНа4 РЕс-ділянок імуноглобулінів Ід, ДМ, ІдА, ДЕ та ДО та також може включати шарнірну ділянку. З іншого боку, імуноглобуліни класу Ід також можна розділити на підкласи Ідс1, Ідса2,
ДОЗ та Ідс4 та у цьому винаході можливо застосування їх комбінації або гібридизації. Бажаним є застосування зокрема підкласів Ідс2 та Ідо4, точніше кажучи Ес - ділянки Ідс4, яка рідко має ефекторні функції, як-то функцію комплемент - залежної цитотоксичності (СОС).
Інакше кажучи, призначеною для носія лікарського засобу за винаходом Ес-ділянкою імуноглобуліну може бути, наприклад, але без обмеження, аглікозилована Ес - ділянка, яка походить від людського імуноглобуліну Ід4. Ес - ділянка людського походження має перевагу порівняно з Ес - ділянкою тваринного походження, яка може викликати небажані імунні відповіді, наприклад, яка може діяти, як антиген в організмі людини, що призведе до вироблення нових антитіл.
Застосований у одному специфічному втіленні винаходу непептидильний полімер має реакційну групу, здатну до зв'язування з Ес-ділянкою імуноглобуліну та фізіологічно активний білок або пептид. У іншому специфічному втіленні цю реакційну групу розташовано на обох кінцевих ділянках. Ці обидві кінцеві реакційні групи непептидильного полімеру є переважно вибраними з групи, яка складається з хімічно активної альдегідної групи, пропіональдегідної групи, бутиральдегідної групи, малеїмідної групи та сукцинімідної похідної. Ця сукцинімідна похідна може бути сукцинімідил пропіонатом, гідроксисукцинімідилом, сукцинімідил карбоксиметилом або сукцинімідил карбонатом. Зокрема, якщо непептидильний полімер на обох кінцях має реакційну групу, яка являє собою хімічно активну альдегідну групу, вона є ефективною для зв'язування з фізіологічно активним поліпептидом та імуноглобуліном на обох кінцевих ділянках з мінімальними неспецифічними реакціями. Кінцевий продукт, отриманий шляхом відновного алкілування з допомогою альдегідного зв'язування є набагато стійкішим, ніж приєднаний з допомогою амідного зв'язку. Альдегідна реакційна група вибірково вступає в реакцію на М-кінці при низькому значенні рН та утворює ковалентний зв'язок з лізиновим залишком при високому значенні рн, як-то рН 9,0.
Обидві кінцеві реакційні групи непептидильного полімеру можуть бути однаковими або різними.
Наприклад, непептгидильний полімер може містити малеімідну групу на одному кінці та альдегідну групу, пропіональдегідну групу або бутиральдегідну групу на іншому. Якщо в якості непептидильного полімеру застосовано поліетиленгліколь, який має хімічно активну гідроксигрупу на обох кінцях, то цю гідроксигрупу може бути активовано різними реакційними групами з допомогою відомих хімічних реакцій або поліетиленгліколю з наявною у продажу модифікованою реакційною групою з отриманням таким чином фізіологічно активного білка або пептидного кон'югату, зокрема кон'югату інсулінотропного пептиду за винаходом.
Кон'югат інсулінотропного пептиду за винаходом може не тільки підтримувати активні властивості загальноприйнятного інсулінотропного пептиду іп мімо, як-то сприяння синтезу та секреції інсуліну, пригнічення апетиту та збільшення маси тіла, збільшення чутливості бета- бо клітин до глюкози в крові, сприяння проліферації бета- клітин або уповільнення спорожнення шлунка, але й також він може різко збільшувати сироватковий час напівжиття інсулінотропного пептиду, тобто збільшувати тривалість його дії іп мімо. Відповідно, цей кон'югат інсулінотропного пептиду є корисним у лікуванні цукрового діабету, ожиріння, гострого коронарного синдрому або синдрому полікістозних яєчників.
У іншому втіленні винахід стосується композиції, яка містить кон'югат фізіологічно активного білка або пептиду, в якому носій зв'язано з некінцевим внутрішнім залишком фізіологічно активного білка або пептиду з допомогою непептидильного лінкера, композиції, в якій цей кон'югат виявляє імуногенність, яка є зниженою порівняно з імуногенністю фізіологічно активного білка або пептиду до якого не приєднано носій.
Зокрема вищезазначений кон'югат відрізняється тим, що він знижує імуногенність, яка є побічним проявом препарату тривалої дії.
Також непептидильним лінкером може бути поліетиленгліколь.
Фізіологічно активний білок або пептид, лінкер та кон'югат є такими, як описано вище.
У іншому аспекті, винахід стосується способу отримання кон'югату фізіологічно активного білка або пептиду.
Бульш детально, винахід стосується способу отримання кон'югату фізіологічно активного білка або пептиду, який полягає у застосуванні наступних операцій: (1) ковалентне зв'язування непептидильного полімеру з альдегідними, малеіїмідними або сукцинімідними реакційними групами на обох кінцях з аміногрупою або тіоловою групою фізіологічно активного білка або пептиду; (2) відокремлення фізіологічно активного білка або пептиду, який є ковалентно зв'язаним з непептидильним полімером у іншому місці, ніж М-кінець цього фізіологічно активного білка або пептиду від отриманої внаслідок операції (1) реакційної суміші; та (3) ковалентне зв'язування Ес-ділянки імуноглобуліну з іншим кінцем непептидильного полімеру, ковалентно зв'язаного з фізіологічно активним білюом або пептидом з отриманням кон'югату фізіологічно активного білка або пептиду, в якому обидва кінці непептидильного полімеру зв'язано, відповідно, з Ес-ділянкою імуноглобуліну та фізіологічно активним білком або пептидом.
У бажаному аспекті винахід стосується способу отримання білкового кон'югату, який полягає
Зо у застосуванні наступних операцій: (1) ковалентного зв'язування непептидильного полімеру, який на обох кінцях має альдегідні хімічно активні групи з лізиновим залишком фізіологічно активного білка або пептиду; (2) відокремлення фізіологічно активного білка або пептиду, ковалентно зв'язаного з непептидильним полімером через власний лізиновий залишок від отриманої внаслідок операції (1) реакційної суміші; та (3) ковалентного зв'язування Ес-ділянки імуноглобуліну з іншим кінцем непептидильного полімеру, ковалентно зв'язаного з фізіологічно активним білком або пептидом з утворенням кон'югату, в якому обидва кінці непептидильного полімеру зв'язано, відповідно, з Ес-ділянкою імуноглобуліну та фізіологічно активним білком або пептидом.
Точніше кажучи, зазначений у операції (1) непептидильний полімер та лізиновий залишок інсулінотропного пептиду, який є фізіологічно активним білком або пептидом зв'язуються при рН 7,5 або вище.
Далі винахід буде більш детально описано з допомогою наступних прикладів. Однак слід зазначити, що наступні приклади призначено лише для ілюстрації винаходу та не повинні обмежувати його обсяг.
Приклад 1: ПЕГілування ексендину-4 та відокремлення позиційного ізомеру ПЕГілованого ексендину-4.
Для ПЕГілування М-кінця природного ексендину-4 (Атегісап Рерійдевх) із застосуванням 3,4К
РгоріопА! О (2) ПЕГ (ПЕГ з двома пропіональдегідними групами з молекулярною масою 3,4 кДа від компанії ІОВ Іпс., Когеа) було здійснено хімічну реакцію між пептидом (концентрація пептиду складала З мг/ мл) та ПЕГ з молярним відношенням (1:15) при температурі 4" С, яка тривала протягом 90 хв. Цю реакцію було здійснено у 100 мМ буфері МабАс (рн 4,0) з додаванням відновника, тобто 20 мм ЗОВ (МасмВн3.).
Також для ПЕГілування лізину (Гуз) у складі ексендину-4 із застосуванням 3,4К РгоріопАГ О (2) було здійснено хімічну реакцію між пептидом (концентрація пептиду складала З мг/ мл) та
ПЕГ з молярним відношенням (1:30) при температурі 4" С, яка тривала протягом З год. Цю реакцію було здійснено у 100 мМ Ма-фосфатному буфері (рН 9,0) з додаванням відновника, тобто 20 мМ 5СВ. Моно-ПЕГілований пептид спочатку було очищено від реакційного розчину на колонці ЗОШСЕКСЕ О (ХК 16 мл, Атегепат Віозсіепсе5) та ізомер було відокремлено на колонці 60 ЗОЦКСЕ 5 (ХК 16 мл, Атегзпат Віозсіепсе5). Можна було побачити, що пік М-кінцевого-
ПЕГілування з'явився раніше та потім по черзі з'явилися ще два піки ПЕГілування з лізином.
Наявність ПЕГілованих сайтів було підтверджено шляхом спостереження піку елюату із застосуванням способу пептидного картування.
Спочатку відбулося елюювання Іуз512-ПЕГілованого кон'югату, а елюювання (І уз27-
ПЕГілованого кон'югату відбулося у останній фракції. За результатами цих досліджень було можливо здійснити ідеальне відокремлення піків М-кінцевого позиційного ізомеру та Гуз12 - позиційного ізомеру.
Колонка: БООКСЕ О (ХК 16 мл, Атегепат Віозсіепсе5) 58-27
Швидкість потоку: 2,0 мл/хв
Градієнт: 0 -- 40 95 80 хв. В (А: 20 мМ Ттгіз рН 8,5, В: - 0,5М Масі)
Колонка: ФОШКСЕ 5 (ХК 16 мл, Атегепат Віозсіепсев5)
Швидкість потоку: 2,0 мл / хв
Градієнт: О --» 100 95 50 хв. В (А: 20 мМ лимонна кислота, рН 3,0, В: ж 0,5М КСІ)
Приклад 2: ПЕГілування лізинового залишку СА ексендину-4 та відокремлення позиційного ізомеру.
Для ПЕГілування лізинового (Гуз) залишку СА ексендину-4 (Атегісап Рерійде5) із застосуванням 3,4К Ргоріоп АГО (2) ПЕГ було здійснено хімічну реакцію між СА ексендином-4 (концентрація СА ексендину-4 складала З мг/ мл) та ПЕГ у молярному відношенні 1:30 при температурі 4" С, яка тривала протягом З год. СА ексендин-4 є ексендином-4 з М-кінцевою модифікацією, в якому видалено альфа - карбон М-кінцевого гістидинового залишку природного ексендину та В-карбон бічного ланцюга безпосередньо зв'язано з карбоксильним карбоном. Цю реакцію було здійснено у 100 мМ Ма-фосфатному буфері (рН 9,0) з додаванням відновника, тобто до реакційної суміші було додано 20 мМ 5СВ. Моно-ПЕГілований пептид спочатку було очищено від реакційного розчину на колонці БОШКСЕ О (ХК 16 мл, Атегзпат Віозсіепсев) та ізомер було відокремлено на колонці ЗОШЕСЕ 5 (ХК 16 мл, Атегейпат Віозсіепсев).
Протягом цих досліджень можна було спостерігати появу двох піків ПЕГілування лізинового (Гуз) залишку. Наявність ПЕГілованих сайтів було підтверджено шляхом спостереження піків елюату із застосуванням способу пептидного картування.
Спочатку відбулося елюювання Іуз512-ПЕГілованого кон'югату, а елюювання (І уз27-
Зо ПЕГілованого кон'югату відбулося у останній фракції. За результатами цих досліджень було можливо здійснити ідеальне відокремлення піків М-кінцевого позиційного ізомеру та Гугх12 - позиційного ізомеру.
Колонка: БООКСЕ О (ХК 16 мл, Атегзпат Віозсіепсев)
Швидкість потоку: 2,0 мл / хв
Градієнт: 0 -- 40 95 80 хв. В (А: 20 мМ Ттгіз рНаВ,5, В: ж 0,5М Масі)
Колонка: ФОШКСЕ 5 (ХК 16 мл, Атегепат Віозсіепсев5)
Швидкість потоку: 2,0 мл / хв
Градієнт: О --» 100 95 50 хв. В (А: 20 мМ лимонна кислота, рН 3,0, В: ж 0,5М КСІ)
Приклад 3: Отримання кон'югату імідазо-ацетил ексендин-4 (Іува27)-Ес-фрагмента імуноглобуліну.
Спочатку було здійснено хімічну реакцію між 3,4К РгоріопА! Д(2) ПЕГ та лізиновим залишком (Гуз) СА ексендину-4 із застосуванням імідазо-ацетил-ексендину-4 (СА ексендин-4, АР, О5А) таким саме чином, як наведено у Прикладі 2. Потім було здійснено реакцію зв'язування із застосуванням ізомеру останнього піку (позиційний ізомер Гуз 27), який з двох отриманих лізинових ізомерних піків виявив велику реакційну здатність та якого можна було легко відрізнити від М-кінцевого ізомеру. Потім було здійснено хімічну реакцію між пептидом та Ес- фрагментом імуноглобуліну (загальна концентрація білка - 60 мг/мл) у молярному відношенні 1:8 при температурі 4"С, яка тривала протягом 20 год. Цю реакцію було здійснено у розчині 100
ММ К-Р (рн 6,0) з додаванням відновника, тобто до реакційної суміші було додано 20 мМ 5СВ.
Після здійснення реакції зв'язування було здійснено дві операції очищення із застосуванням колонки БОШОКСЕ О (16 мл) та колонки БОШОКСЕ ІБЗО (16 мл) так саме, як і у Прикладі 2.
Результат ВЕРХ-хроматографічного аналізу зі зворотною фазою виявив 95,8905 чистоту отриманого зразка.
Приклад 4: Відокремлення мононуклеарних клітин периферичної крові людини (МКПК) для перевірки ех мімо та відбір донорів.
Відокремлення мононуклеарних клітин периферичної крові людини (МКПК) з крові, отриманої від здорових донорів (отримано від Національної служби переливання крові
Великобританії (ШК Маїйопа! Віоо4 Тгапеїивіоп бегмісе (АддепргооКе Нозріа!), Сатрбгідде, ОК)) було здійснено протягом 24 год. Мононуклеарні клітини периферичної крові було відокремлено бо від лейкотромбоцитарного шару, отриманого з допомогою центрифугування у градієнті щільності із застосуванням середовища Гутрпоргер'"М (Ахів-5пієіїЯ, Оипадее, ЗсоМапа). В тому числі, Т-клітини СО8- було відокремлено із застосуванням способу виділення клітин
СО8-Возеневбер'"М (ЗетсСеї! Тесппоіодіе5 Іпс, Гопдоп, ОК). Отримані мононуклеарні клітини периферичної крові кожного донора перед застосуванням зберігали у рідкому азоті. Гаплоїдний генотип антигену НГА-ОК донорських клітин було піддано аналізу із застосуванням набору для
НГА-типування із застосуванням ПЛР з сиквенс-специфічними праймерами (55Р-РСВ) (Віоїеві, зоЇЇпчії, ОК). Реакційну здатність Т - клітин було перевірено із застосуванням антигенного пептиду КІН (Кеупоїе Гітреї Наетосуапіп, Ріегсе (Регріо), Могіпитбепгапа, ОК), отриманого з вірусу грипу та вірусу Епштейна-Барр.
Для участі у дослідженнях було відібрано 50 донорів, які відображали частоту типу НГА-ОВ у населенні світу, з яких було сформовано одну піддослідну групу. У наведеній нижче Таблиці 1 вказано гаплоїдні генотипи антигенів МНС класу ІІ та величину реакційної активності Т - клітин для кожного донора у складі відібраної піддослідної групи. Частоту виникнення генотипу донора було порівняно з цією частотою у світовій популяції та отримані результати наведено на Фіг. У наведеній нижче Таблиці 1 показано генотипи антигену НІ А-ОЕ та реакційну активність Т-клітин до антигенних пептидів КІН для кожного донора.
Таблиця 1 6 оввгобоввІчЗОоВВУї 77777777 77771436 111147 8 оввгозоввІчЗОоВВУ" 77777777 77771885. | ДЮ 457 щЩГ-БМ
И9 оввгобоввВІчЧарввУуї 77777777 77771479 | 8450 24 ОовВІлЗОовВІчеОвВВУїОвВО" | 7893 2 щЩ | 666
У наведеній вище Таблиці 1 жирним шрифтом (донори 17, 18, 27, 30 та 50) виділено випадки, в яких реактивність з КІН значно відрізнялася перед та після відтавання донорних клітин.
Приклад 5: Тест проліферації Т - клітин ех мімо Ерібстееп"М,
Для визначення механізму пригнічення імуногенності в залежності від ПЕГілованих сайтів інсулінотропних пептидів, які є характерними фізіологічно активними білками або пептидами було здійснено порівняння проліферативних здатностей Т - клітин незв'язаного природного ексендину-4 та незв'язаного СА ексендину-4 (аналога, отриманого в результаті модифікації ексендину-4), СА ексендину-4 з ПЕГілуванням по внутрішньому лізиновому залишку (СА
Ексендин-4-ПЕГ(іпіег) та природного ексендину-4 з М-кінцевим ПЕГілуванням (Ексендин-4-
ПЕГ(М-їепт)). На цей час ще не було отримано М-кінцевого ПЕГілування для СА ексендину-4, оскільки ця сполука не має здатного до ПЕГілування М-кінцевого залишку.
Для перевірки Т - клітинної проліферації, донорські мононуклеарні клітини периферичної крові (МКПК) піддали відтаванню для вимірювання кількості та життєздатності клітин. Клітини спочатку розвели до концентрації 4-6 х 105 клітин/мл у культуральному середовищі АІМ-У. Після нанесення клітин з кожного донора на 24-луночні культуральні планшети до них було додано досліджувані зразки до кінцевої концентрації у 50 мкг/мл (п-3). Для визначення відтворюваності кожної донорної клітини було також досліджено групу, оброблену антигенним пептидом КІ Н. Всі досліджувані та контрольні групи культивували протягом 8 днів при температурі 37" С в інкубаторних умовах у середовищі з 5 95 СО». Відбір частини клітин було здійснено на 5, 6, 7 та 8 день досліджень та відібрані зразки було перенесено на 96-луночні культуральні планшети для вимірювання швидкості клітинної проліферації. Для цього вимірювання у кожну лунку було додано по 0,75 мкл І"НіІ-тимідину (РегКкіп ЕІтег ВисКіпоапатєвпіге, ОК) та зразки культивували ще 18 год., після чого клітини було зібрано з 96-луночних планшетів на фільтри із застосуванням колектора клітин ТоттТес Маси ПІ.
Величину радіоактивності в кожній лунці (число імпульсів на хвилину, імп./хв.) було виміряно із застосуванням лічильника 1450 Містореїа У/аїїас Тих Гідшіа ЗсіпійПайоп Сошпіег (Регкіп ЕІтег
Зо ВисКіпопатєепіге, ОК). Визначення результатів було здійснено на основі експериментальних граничних значень індексу симуляції (5І), який вважався позитивним у разі 5122, р «0,05. У випадку включення граничних значень, відповідних 51І21,9 їх було окремо помічено, як (РУ). В результаті було виявлено наявність позитивних результатів для СА ексендину-4 та ексендину-4, відповідно, у 12 95 та 10 95 донорів. Однак слід зазначити, що СА ексендин-4 з ПЕГілуванням внутрішнього пептидного залишку пептиду показав негативний результат у всіх донорів та з іншого боку, ексендин-4 з М-кінцевим ПЕГілуванням мав позитивний результат у 6 95 донорів.
Згідно з цим було виявлено пригнічення імуногенності пептиду у разі наявності ПЕГілування у внутрішньому лізиновому пептидному залишку замість ПЕГілування в М-кінцевій ділянці (Таблиця 2).
У Таблиці 2 наведено результати дослідження Т-клітинної проліферації та секреції інтерлейкіну-2 (ІІ--2).
Таблиця 2.
СА СА Ексен- ІЕксендин-4- Гуманізовані
Е | Ексендин-4| дин-4--ПЕГ| ПЕГ (М- й КІ Н ксендин-4 іп іеті антитіла АЗЗ
Донор! | РЕ | | ЇЇ 9 Щ Ї | РЕ
Донораї//// | Ї77777777717171711111111171СГ111111171Є11111111171Є1
Донор3./////|Ї77777777/Ї7777777771717171771111111111171ЇГ111111711111 | РЕ (
Донор4//-/:/ | 7 Ї777777771717171771717111111111ЇР | Е ЇЇ | РЕ (
Донор5////|7777777/Ї7777777717117171711111111111Г1111111711111111111Ї11РЕ
Донорб/////|77777777/Ї7777777717171717111111111171Г11111117111111111111Ї11РЕ
Донор7 //-/-/-:/ | ЇЇ 77777777 ЕЕ РЕ | РЕ (
Донорв.////|777777/Ї7777777711717171111111171СГ111111171Є11111111171Ї1Р
Доноре | РЕ? | РЕ (7 Ї 77777777 | Е ЇЇ | РЕ (
Донор!0//// | 77777777 Ї7777777717171717111111171СГ111111171Є1111111171Ї1Р
Донор!її | 777777/Ї7777777717171717111111171Г111111171111111111111РЕ
Донор!ї2 //-/-:/ | | щЩ((1/ЇЇ11| РЕ
Донор!ї3./////|Ї77777777717Ї77777771717171717177171111111111Ї РЕ | 7 | РЕ (
Донорї4 //-/-/-:/ | | її 9 ЇЇ ЇЇ
Донор!ї5ї//:/ | ЇЇ Щ її Її | Р
Доноріб,.//// | 77777 | РЕ 1 | РЕ | | РЕ (
Донор!ї7. //-/-/-:/ | Р | РЕ | | | РЕ | РЕ /
Донорів. | 77777777 Ї7777777717171717177711111111117Ї111117111 РЕ | РЕ (
Донор!ї9. //-/-/-:/ | ЇЇ 77777777777177777111111117Г1117171711111111111Ї11РЕ
Донор2ої//:/ | /Ї77777777171717177111111111171Г1111111711111111111Ї11РЕ
Донор! | 7777 | ЕЕ 177 ЕЕ Ї | РЕ | РЕ
Донор22//-/:/ | ГГ /Ї77777777771717717171717111111171Ї171171717171717111 РЕ | РЕ (
Донор23.ї///| ЕЕ ЇЇ /17777777777717Ї777171717171717171717111717171717171Ї11РЕ
Донор24.//:/ | (ОЇ 7777777777/7177777111111117Г11117171711111111111РЕ
Донор25.//:/ | (| 777777/717777777717117Ї7717171717171717171711717171717171Ї11РЕ
Донор2?бї//:/Г/| ОО Ї777777777717177711111111171С1111111171Є1111111111Ї11РЕ
Донор27. | РЕ | РЕ (ЇЇ 17777777
Донор2в.//:/ | ГГ /Ї777777777717177711111111171Г1111111711111111111Ї11РЕ
Донор29.//:/ | РЕ | /777777777777Ї7771717171717117Ї177717171717171717171Ї11РЕ
Донор30ї//-/ | /Ї777777777717177711111111171СГ111111171Є11111111171Ї1Р
Донор3її////|Ї77777777/Ї7777777717171717111111111171Г1111111711111111111Ї111РЕ
Донор32//-/ | 7 /Ї7777777777717177711111111171Г11111117111111111111|11 РЕ
Донор33.// | 7777/Ї77777777717171717711111111111Ї1111111111111 РЕ | РЕ
Донор34.// | /Ї777777777717177711111111171Г1111111711111111111Ї11РЕ
Донор35.//-/:/ | - | (77/77/7177 РЕ
Донор3б.//:/ | | (0777777 77777171 РЕ | РЕ
Донор37//-/-/:/ | ((: | 77/ї77777777777/7Ї177717777171171777171717171717171717|1 1 РЕ
Донор38.ї//:/ | (: | ((/ї77777777777/7Ї7777777117ї17111111711717Ї1 Р
Донор39. /-/-:/ | | (77777771 77771777 РЕ
Донор4б//:/ | /Ї777777777171717177111111111171Г111111171Ї1 ЕР | РЕ
Донор! |Ї77777777717Ї7777777717171717171111111111171Ї1111111111 РЕ | РЕ (
Донор42//:/ | (| 77/7177777777771171Ї711111171171С111111111171Ї1вР
Донор43 | РЕ | /177777777777717Ї7771717171717171711 РЕ | РЕ (
Донор44./:/О/О| ////Ї7777777771717171771717171111111171Ї171117171717111 РЕ | РЕ (
Донор45.//-/-:/ | | (07777177 РЕ
Донор4б.//:/ | ОЇ 77777777777/717717171717111111171Ї11111111111 РЕ | РЕ (
Донор47.//:/ | (ЇЇ 77777777/7177177777711117Ї177171717171717171711111111111РЕ
Донор48 //-/:/ | | РЕ 1 ЇЇ РЕ
Донор49/:/ | ЇСТЕ (Донор5бої///-/-/:/ | (| є | ЇЇ ЇЇ | РЕ /
с МЕН я
Ексендин-4| дин-4-ПЕГ| ПЕГ (М- : КІН
Ексендин-4 . антитіла АЗЗ іпїег ї6тт
Збпроліферацї | 712 | 710 | 0 | 6 | 22 | 92 зеБОБроїї | 712 | 16 | 2 | 6 | 30 | 86 /
Фо проліферації тав 0119141
Фо ЕПІбЗрої - результати досліджень, отримані із застосуванням способу визначення імуноферментних плям (ЕГІ5РОТ).
У Таблиці З показано силу та частоту Т-клітинної проліферативної відповіді (включаючи граничну величину 5121,9).
Таблиця З 00000011 Дсеюлние охюще | Честюедювдою
СА Ексендин-4-ПЕГ(ЩЄе) 111 МА ОЇ 7 МА Ї77777777701сСсСсСсСшС ексендин-4-ПЕГ(М-кінцев.) 17723307 Ї777111111716ссС1С
Вищезазначені результати свідчать про пригнічення імуногенності фізіологічно активного білка або пептиду, зв'язаного з непептидильним полімером, зокрема ПЕГ, через внутрішній залишок фізіологічно активного білка або пептиду, якій не є його кінцевим залишком.
Приклад 6: Перевірка секреції інтерлейкіну-2 (1/-2) ех мімо із застосуванням технології
Ерібстеєп М,
Для визначення механізму пригнічення імуногенності в залежності від ПЕГілованих сайтів інсулінотропних пептидів, які є типовими білками або пептидами було здійснено порівняння впливу незв'язаного ексендину-4 та ПЕГілованого ексендину-4 за Прикладом 5 на секреторні властивості інтерлейкіну 1І--2, яке було виміряно із застосуванням донорних клітин та зразків, які були подібними до застосованих у дослідженнях проліферації Т - клітин із застосуванням технології Ерізстееп"М., Спочатку було здійснено зв'язування антитіл до інтерлейкіну-2г (А 0 зузівтв5, Аріпддоп, ОК) на планшетах для ЕГІЗрої-аналіза (МіПроге, Негі5, ОК). Далі планшети було тричі промито буфером РВЗ (фосфатно-сольовий буфер) та потім до них було додано буфер РВ5, доповнений 1 95 бичачим сироватковим альбуміном та розпочато реакцію. Після промивання культуральним середовищем АЇМ-У, донорні клітини було розведено у середовищі
АІМ-М до концентрації 4-6 х 106 клітин / мл та отриманий розчин нанесли у лунки (100 мкл/лунку). Кожен досліджуваний зразок було додано в кількості 50 мкл (п-б), щоб кінцева концентрація складала 50 мкг/мл (п-б). Після 8-денного культурування було здійснено послідовне зв'язування біотинільованих антитіл для визначення ІІ -2 та кон'югату стрептавидину з лужною фосфотазою (К 85 О Зузіет5, АбБіпддоп, ОК) на планшетах для ЕГ ІЗрої-аналіза, до яких потім було додано барвник ВСІР/МВТ (КО бузіет5, Абіпддоп, ОК) для відображення
Зо плям. Реакцію було закінчено шляхом промивання дистильованою водою та потім планшети піддали сушінню. Для сканування та аналізу отриманих з кожної лунки плям (5рм/) було застосовано аналізатор Іттипозсап. Результати перевірки вимірювання активності Т-клітин ех мімо було визначено на основі застосування експериментального граничного значення індексу симуляції (51), якій вважався позитивним у разі 5122, р «0,05. У випадку включення граничних значень, відповідних 5І21,9 їх було окремо помічено, як (Р"). В результаті було виявлено позитивну дію СА ексендину-4 та ексендину-4 відповідно у 1295 та 16 95 донорів, проте позитивну дію СА ексендину-4 з ПЕГілуванням у внутрішньому пептидному залишку було виявлено лише у 295 донорів. З іншого боку, позитивну дію ексендину-4 з М-кінцевим
ПЕГілуванням було виявлено у 6 95 донорів. Відповідно можна зробити висновок про значне пригнічення імуногенності у випадку ПЕГілування на внутрішньому лізині у складі пептиду на відміну від ПЕГілування у М-кінцевій ділянці (Таблиці 2-4). У Таблиці 4 показано силу та частоту
Т-клітинної відповіді (включаючи граничну величину 51І21,9), тобто секреції інтерлейкіну-2 (ІІ--2).
Таблиця 4 пен р Денннтатннся чтение. 3,АК ПЕГ (інше екюендиня | 2091716
НС ПО ОН: Ж: ПОН НО М: У УДО ОН: ГО
Отримані вище результати свідчать про пригнічення імуногенності фізіологічно активного білка або пептиду, зв'язаного з непептгидильним полімером, зокрема ПЕГ, через внутрішній залишок фізіологічно активного білка або пептиду, якій не є його кінцевим залишком.
Приклад 7: Отримання антитіл проти інсулінотропних пептидів тривалої дії у здорових щурів.
На початку досліджень було здійснено підшкірне введення отриманих у Прикладі З кон'югатів, в яких СА ексендин-4 було зв'язано з допомогою ПЕГ з Рс-фрагментом імуноглобуліну здоровим щурам лінії Спрег Доулі (50), яке тривало протягом 26 тижнів (введення раз на тиждень, низький, помірний або високий рівень дозування), після чого тварин утримували протягом 4--тижневого відновлювального періоду (п (кількість тварин) - 40-60/групу). Відбір зразків крові було здійснено перед та після введення, на 13, 19 та 26 тиждень та наприкінці відновлювального періоду з наступним отриманням з них сироватки.
Було визначено спроможність тварин виробляти антитіла проти інсулінотропного пептиду.
В результаті, після 13-тижневого відновлювального періоду було виявлено антитіла лише у двох з 160 тварин, яким було введено лікувальний засіб. Однак виявлення цих антитіл підтверджує відсутність нейтралізуючих антитіл до лікувального засобу (Таблиця 5).
У Таблиці 5 наведено результати досліджень по отриманню антитіл протягом 26-тижневого введення у щурів (щури 50).
Таблиця 5. оте) ян ре КАМИ ення КУТИ "ЖИ
Позитивний о позитивних| Нейтралізуючі
Група Доза тварин на Точка часу й . результат результатів антитіла групу 71 Тносій | 60 | 0 | - | 0 |! 0 2 |низькадоза | 40 | 1 |їЗтижденьбн|./ 25 | 0 |/ 3 (помірнадозаїЇ 40 | 0 | - | 0 | 0 пінки я іо ре в
Загальнакільість | 200 | 2 | | 10 !/| 0
Приклад 8: Контрольні дослідження антитіл проти пептиду, який викликає довготривалу секрецію інсуліну у макаки-крабоїда.
На початку досліджень макакам-крабоїдам було підшкірно введено отримані у Прикладі З кон'югати, в яких СА ексендин-4 було зв'язано з Ес-фрагментом імуноглобуліну з допомогою
ПЕГ. Введення було здійснено раз на тиждень протягом 26 тижнів, після чого тварин утримували протягом 4-тижневого відновлювального періоду (п (кількість тварин) -8-12/групу).
Відбір зразків крові було здійснено перед та після введення, на 13, 19 та 26 тиждень та наприкінці відновлювального періоду з наступним отриманням з них сироватки. Було визначено
Зо спроможність тварин виробляти антитіла проти інсулінотропного пептиду.
В результаті цих досліджень у піддослідних тварин не було виявлено жодного випадку вироблення антитіл (Таблиця 6).
У Таблиці 6 наведено результати досліджень по отриманню антитіл протягом 26-тижневого введення у макак-крабоїдів
Таблиця 6.
Кількість тварин на позитивних Чо
Група Доза . . групу результатів до позитивних результатів загальної кількості 11 Ф0носїій////// | 77777712 |Ї777717117101111171111111110с1 12 ф|низькадоза | -:/ 8 /| 0 | 0 119 |помірнадоза|//-/:/ 8 ЇЇ (0 гюЮ | 0 г Ж КчЗ( 14 |високадоза | - 12 | 0 2 2 щЩщ щ | 0
Загальнакільість | 40 ЇЇ 77777071 0 су
Приклад 9: Виявлення антитіл до лікувального засобу в крові та оцінка нейтралізуючої здатності.
Для визначення спроможності наведеного у Прикладі З кон'югату викликати утворення антитіл до лікарського засобу (АВА) в організмі щурів або макаки-крабоїда, цей кон'югат було перевірено із застосуванням способу місткового ІФА-аналізу. Спочатку було здійснено зв'язування біотинільованого кон'югату Прикладу З з мікропланшетом, який мав 96 лунок, покритих стрептавідином та планшет промили водою, а потім для здійснення реакції у лунки додали мічений дигоксигеніном (01) кон'югат Прикладу З (надалі позначений, як НМ11260С) разом з отриманими від щурів або мавп сироватковими зразками та потім планшет знову промили водою. Потім до зразків було додано зв'язані з пероксидазою хріну анти-ОІо антитіла (анти-012-РОО антитіла) та розвиток забарвлення було отримано з допомогою субстрату ТМВ (3,3',5,5'-тетраметилбензидину).
Показником чутливості у сироватці щурів була концентрація у 3,1 нг/мл та показником чутливості у мавпячій сироватці була концентрація у 12,5 нг/мл. Для оцінки здатності визначених анти-НМ11260С антитіл нейтралізовувати НМ11260С, до людських клітин, які належали до клітинної лінії з надлишковою експресією (сі Р-1 (клітини СІ Р-1ТК/СНО) додали зразки сироватки та НМ11260С, після чого було виміряно швидкість індукції циклічного аденозинмонофосфату (цАМФ). Наявність вироблення антитіл лише у двох зі 160 піддослідних тварин підтверджує відсутність нейтралізуючої здатності.
Наведені вище результати свідчать про те, що імуногенність фізіологічно активного білка або пептиду було знижено шляхом зв'язування непептидного лінкера та Ес-фрагмента до внутрішнього залишку, який відрізнявся від кінцевої частини фізіологічно активного білка або пептиду, тим самим пригнічуючи механізм дії бажаного пептиду, як антигена. Отримані результати також підтверджують, що у разі застосування описаного вище способу отримання відбувається значне пригнічення активування Т - клітин та реакції вироблення антитіл у тварин.
З вищенаведеного опису фахівцям у цій галузі слід розуміти, що цей винахід може бути втілено в інших специфічних формах без змінення технічного духу або суттєвих характеристик винаходу. У цьому відношенні слід зазначити, що вищезазначені втілення наведено з ілюстративною метою та їх не слід розуміти в обмежувальному сенсі, а слід інтерпретувати охоплюючими всі змінення або модифіковані форми, отримані від їх розуміння та їх діапазону та еквівалентів, які скоріше стосуються доданої Формули Винаходу, ніж вищенаведеного детального опису.
Грек послідовностей. «тд» ЖХАНМЕФАРМ КО. ЛТД. «Тв спос зниження ун ечнсті БІЗКа Та ВепТеДУ «130 ОРАЖМНЮВ
ТБ ОТО ОВ
«ТВО З
Те море о «Вій
Ж
«ИТЯх ЛО «ВІ» штучна послідовність «ДО» яаййж вифачанцю" зеулу «Ох З
Су Мер ха и св ув Сук ТЯ Не сСує екв Ту сни Се се Ази Тут Сує Ава
«ей лок «а» сртухна послідовність ее 0 бувала ВНУКЛМУ «щук 8 ле У АВиИ СО Нів ва був РУ ет Ні би Уві нн Ай ви Тут іч У су ау а Ага лу Бе бе Гук Тег го ую ТЕ «ій й «їз З «ий Ще
Ка плучма послІдоВНиь «Ма вки диний «ох З
Нів Сру Ям Сх ЗУ Ре Те бБег бери бат і уз Си Ме св СВ : 5 та 15
СІ АВ МВ Аг бец Ре Це о Тер ви ув Ази У Су Бгто бег ше оу Ма біо то го Зої «их в «ії ЗВ «йї1и» Віл «213х штучна послідовність «ОЦ «Май вкпенДдиа сфе 8
Нв Заг Ав ЧУ Те На Тр бас дер Цен бебі ув С Ме СЧЮ СИ 5 ме 15
См ів УВІ Ага бе ре пе сно тю бе ух Аа КМУ КУ то Баг с ЛУ Ма бик Кто го Бог 5 «ее 5 катів З «війт лек «А» тучна послідовмістіь
У ик кита хан 5
Нв Ве ав Му ТР Рие ТиеБег Ар тує Бегі ув Тут це Ар дег
З 5 чо 5
Ав Аа Во Аве бке уві С те ви Ме Ав ТКУ АК АЖИ ка 55 0
З дви дес Не Ка
Claims (14)
1. Спосіб зниження імуногенності фізіологічно активного білка або пептиду порівняно з імуногенністю фізіологічно активного білка або пептиду, до якого не приєднано носія, в якому інгібують активацію Т-клітин і реакцію продукування антитіл за рахунок зв'язування фізіологічно активного білка або пептиду з носієм, і який полягає у зв'язуванні носія з некінцевим внутрішнім залишком цього фізіологічно активного білка або пептиду та інгібуванні активації Т-клітин ії реакції вироблення антитіл фізіологічно активним білком або пептидом, пов'язаним з носієм, де фізіологічно активний білок або пептид вибирають із групи, що складається з ексендину-4, похідної ексендину-4, СІ Р-1, агоніста СІ Р-1, інсуліну та подвійного агоніста СІ Р-1/глюкагону, і де носій є Ес-регіоном імуноглобуліну або поліетиленгліколем.
2. Спосіб за п. 1, в якому фізіологічно активний білок або пептид та носій зв'язані розташованим між ними лінкером.
3. Спосіб за п. 2, в якому лінкер є непептидильним лінкером.
4. Спосіб за п. 3, в якому непептидильний лінкер вибирають з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, кополімеру етиленгліколю та пропіленгліколю, поліоксіетгилованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілового етилового етеру, біорозпадного полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти та їх комбінації.
5. Спосіб за п. 2, в якому фізіологічно активний білок або пептид зв'язано з Ес-ділянкою імуноглобуліну за допомогою непептидильного полімеру, вибраного з групи, яка складається з поліетиленгліколю, поліпропіленгліколю, кополімеру етиленгліколю та пропіленгліколю, поліоксіетилованого поліолу, полівінілового спирту, полісахариду, декстрану, полівінілового етилового етеру, біорозпадного полімеру, ліпідного полімеру, хітину, гіалуронової кислоти та їх комбінації.
6. Спосіб за п. 1, де молекулярна маса полієтиленгліколю становить від 1 до менше ніж 20 кД. Ко)
7. Спосіб за п. 1, в якому фізіологічно активний білок або пептид є ексендином-4 або похідною ексендину-4.
8. Спосіб за п. 7, в якому похідна ексендину-4 є похідною ексендину-4, в якій модифіковано заряд на М-кінці ексендину-4, та яку вибирають з групи, яка складається з похідної ексендину-4, в якій видалено М-кінцеву аміногрупу ексендину-4; похідної ексендину-4, в якій М-кінцеву аміногрупу ексендину-4 заміщено гідроксильною групою; похідної ексендину-4, в якій М-кінцеву аміногрупу ексендину-4 заміщено карбоксильною групою; похідною ексендину-4, в якій М- кінцеву аміногрупу ексендину-4 модифіковано диметильною групою; та похідну ексендину-4, в якій видалено альфа-карбон М-кінцевого гістидинового залишку ексендину-4.
9. Спосіб за п. 7 або 8, в якому внутрішній залишок є лізиновим залишком у положенні 12 або 27 похідної ексендину-4, в якій змінено М-кінцевий заряд ексендину-4.
10. Спосіб за п. 9, в якому внутрішній залишок є лізиновим залишком у положенні 27 похідної ексендину-4, в якій змінено М-кінцевий заряд ексендину-4.
11. Спосіб за п. 9, в якому похідна ексендину-4 з модифікованим зарядом на М-кінці ексендину-4 є похідною ексендину-4, в якій видалено альфа-карбон М-кінцевого гістидинового залишку ексендину-4.
12. Композиція для зниження імуногенності, яка містить кон'югат фізіологічно активного білка або пептиду, в якому носій зв'язано з некінцевим внутрішнім залишком фізіологічно активного білка або пептиду за допомогою непептидильного лінкера, в якій цей кон'югат виявляє імуногенність, яка є зниженою порівняно з імуногенністю фізіологічно активного білка або пептиду, до якого не приєднано носій; та інгібує активацію Т-клітин і реакцію вироблення антитіл фізіологічно активним білком або пептидом, зв'язаним з носієм, де фізіологічно активний білок або пептид вибирають із групи, що складається з ексендіну-4, похідної ексендіну-4, СІ Р-1, агоніста СІ Р-1, інсуліну та подвійного агоніста СІ Р-1/глюкагону і де носій є Ес-регіоном імуноглобуліну або поліетиленгліколем.
13. Композиція за п. 12, в якій кон'югат має знижену імуногенність, яка є побічним проявом застосування препарату тривалої дії.
14. Композиція за п. 12, в якій непептидильним лінкером є поліетиленгліколь. а донопи НАМОЇ (С населення світу і Ж мешканці Єзоови та Північної Америки | ши плн : що : зе ай нн В В ОО щі нн Бе і я Е ж : І. . 5 зо і шия Нв ріж УНН НННННННК Ж ка щк Ж КУ із мої Ех У В я І . Б в І. ї ї : з ШЕ ШЕ: ШЕ о т іЕш З зв. шк за ПИ и Ж НЕ ХНН С ВНВКО З Мк; . з ЕІ Бо г ЕН ОО киш щ ї ТЕН. і в ЗЕ ! о БЕ ЕЕ ЯН п Як ІЗ «- щої В 5 ще КЕ ВЕС Е: ЕХ БО - ни щі шт шини. Кк ши. ши ІВ ШК ВЕ ВЕ Ж. 5 жк БЕ шен и инші. ЕШЕШЕ дель На а Во а " же - й 5 В шо зва ча Си ВИ не ЗИ чи З че ВИ НЕ ох В о ВИК зо НИ оо ЗНО ок МНН оо ех Нв НИК ВЕ З як. як кА СН оо -к Ку я дк Ж яке Я ге Те де «о ен нні ог 2 й С. й З х и ше ще ши ше Ши Ше Ше ШИ Щи. Ше
Фіг.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020140068660A KR20150140177A (ko) | 2014-06-05 | 2014-06-05 | 단백질 및 펩타이드의 면역원성을 감소시키는 방법 |
PCT/KR2015/005651 WO2015186988A1 (en) | 2014-06-05 | 2015-06-05 | Method for decreasing immunogenicity of protein and peptide |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
UA124183C2 true UA124183C2 (uk) | 2021-08-04 |
Family
ID=54767003
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
UAA201611826A UA124183C2 (uk) | 2014-06-05 | 2015-06-05 | Спосіб зниження імуногенності фізіологічно активного білка або пептиду |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20170100488A1 (uk) |
EP (2) | EP3152236A4 (uk) |
JP (2) | JP7125249B2 (uk) |
KR (3) | KR20150140177A (uk) |
CN (1) | CN106661118A (uk) |
AR (1) | AR100768A1 (uk) |
AU (1) | AU2015269039B2 (uk) |
BR (1) | BR112016028227A2 (uk) |
CA (1) | CA2950576A1 (uk) |
EA (1) | EA035964B1 (uk) |
HU (1) | HUP1700024A2 (uk) |
IL (1) | IL249131A0 (uk) |
MX (2) | MX2016015668A (uk) |
MY (1) | MY193519A (uk) |
NO (1) | NO20161980A1 (uk) |
PH (1) | PH12016502430A1 (uk) |
SG (2) | SG10202104313PA (uk) |
TW (1) | TW201625314A (uk) |
UA (1) | UA124183C2 (uk) |
WO (1) | WO2015186988A1 (uk) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20130049671A (ko) | 2011-11-04 | 2013-05-14 | 한미사이언스 주식회사 | 생리활성 폴리펩타이드 결합체 제조 방법 |
AR090281A1 (es) | 2012-03-08 | 2014-10-29 | Hanmi Science Co Ltd | Proceso mejorado para la preparacion de un complejo polipeptidico fisiologicamente activo |
CA2944138C (en) * | 2014-03-31 | 2023-06-20 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | Method for improving solubility of protein and peptide by using immunoglobulin fc fragment linkage |
KR20150140177A (ko) * | 2014-06-05 | 2015-12-15 | 한미약품 주식회사 | 단백질 및 펩타이드의 면역원성을 감소시키는 방법 |
CN109475639A (zh) * | 2016-07-22 | 2019-03-15 | 尼克塔治疗公司 | 具有含肟键联的因子viii部分的轭合物 |
EP3549950A4 (en) * | 2016-12-05 | 2020-08-19 | Hanmi Pharm. Co., Ltd. | CONJUGATE WITH MITIGATED IMMUNE RESPONSE |
CN110545849A (zh) * | 2017-02-03 | 2019-12-06 | 韩美药品株式会社 | 具有增加的持续性的生理活性物质的缀合物及其应用 |
CN111263659A (zh) * | 2017-08-18 | 2020-06-09 | 约翰霍普金斯大学 | 用于蛋白纯化的超分子丝状组装体 |
EP3672986A1 (en) | 2017-08-22 | 2020-07-01 | Sanabio, LLC | Soluble interferon receptors and uses thereof |
CN111406073A (zh) * | 2017-09-29 | 2020-07-10 | 韩美药品株式会社 | 具有提高功效的持久性蛋白质缀合物 |
Family Cites Families (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6096871A (en) | 1995-04-14 | 2000-08-01 | Genentech, Inc. | Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life |
CA2249195A1 (en) | 1996-03-18 | 1997-09-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunoglobin-like domains with increased half lives |
DK1438966T3 (da) * | 1999-12-08 | 2007-06-11 | Cyclacel Pharmaceuticals Inc | Anvendelse af depsipeptid og analoger deraf som immunsupressive forbindelser til behandling af en infektiös sygdom, en autoimmun sygdom, allergiske reaktioner eller hyperproliferativ hudsygdom |
EP1353701B1 (en) * | 2000-10-31 | 2011-12-21 | PR Pharmaceuticals, Inc. | Methods for producing compositions for enhanced delivery of bioactive molecules |
KR20040074587A (ko) * | 2001-02-19 | 2004-08-25 | 메르크 파텐트 게엠베하 | 감소된 면역원성을 갖는 인공 단백질 |
US8263084B2 (en) * | 2003-11-13 | 2012-09-11 | Hanmi Science Co., Ltd | Pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate |
JP2008169195A (ja) * | 2007-01-05 | 2008-07-24 | Hanmi Pharmaceutical Co Ltd | キャリア物質を用いたインスリン分泌ペプチド薬物結合体 |
WO2008130066A1 (en) * | 2007-04-20 | 2008-10-30 | Kang Choon Lee | Mono modified exendin with polyethylene glycol or its derivatives and uses thereof |
RU2495881C2 (ru) * | 2009-03-20 | 2013-10-20 | Ханми Холдингс Ко., Лтд. | Способ регулирования условий для сайт-специфического связывания полипептида и непептидильного полимера |
KR101382593B1 (ko) * | 2010-07-21 | 2014-04-10 | 한미사이언스 주식회사 | 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물 |
UA113626C2 (xx) | 2011-06-02 | 2017-02-27 | Композиція для лікування діабету, що містить кон'югат інсуліну тривалої дії та кон'югат інсулінотропного пептиду тривалої дії | |
JP2012256007A (ja) | 2011-06-10 | 2012-12-27 | Nippon Zeon Co Ltd | パターン位相差フィルム用液晶組成物、パターン位相差フィルム及び立体表示装置 |
PE20140765A1 (es) | 2011-06-10 | 2014-06-14 | Hanmi Science Co Ltd | Derivados de oxintomodulina novedosos y composicion farmaceutica para tratar la obesidad que comprende los mismos |
ES2710356T3 (es) | 2011-06-17 | 2019-04-24 | Hanmi Science Co Ltd | Conjugado que comprende oxintomodulina y un fragmento de inmunoglobulina, y uso del mismo |
KR20140088837A (ko) | 2013-01-03 | 2014-07-11 | 한미약품 주식회사 | N-말단 전하가 변형된 인슐린 분비 펩티드 유도체 |
PE20151409A1 (es) | 2013-02-26 | 2015-10-07 | Hanmi Pharm Ind Co Ltd | Analogo de insulina novedoso y su uso |
KR20150140177A (ko) * | 2014-06-05 | 2015-12-15 | 한미약품 주식회사 | 단백질 및 펩타이드의 면역원성을 감소시키는 방법 |
-
2014
- 2014-06-05 KR KR1020140068660A patent/KR20150140177A/ko not_active IP Right Cessation
-
2015
- 2015-06-05 AU AU2015269039A patent/AU2015269039B2/en active Active
- 2015-06-05 JP JP2016570961A patent/JP7125249B2/ja active Active
- 2015-06-05 US US15/315,992 patent/US20170100488A1/en not_active Abandoned
- 2015-06-05 AR ARP150101804A patent/AR100768A1/es unknown
- 2015-06-05 CN CN201580030057.9A patent/CN106661118A/zh active Pending
- 2015-06-05 TW TW104118269A patent/TW201625314A/zh unknown
- 2015-06-05 HU HU1700024A patent/HUP1700024A2/hu unknown
- 2015-06-05 SG SG10202104313PA patent/SG10202104313PA/en unknown
- 2015-06-05 SG SG11201610098YA patent/SG11201610098YA/en unknown
- 2015-06-05 MY MYPI2016002124A patent/MY193519A/en unknown
- 2015-06-05 CA CA2950576A patent/CA2950576A1/en active Pending
- 2015-06-05 UA UAA201611826A patent/UA124183C2/uk unknown
- 2015-06-05 EA EA201692279A patent/EA035964B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2015-06-05 EP EP15802343.2A patent/EP3152236A4/en not_active Ceased
- 2015-06-05 MX MX2016015668A patent/MX2016015668A/es unknown
- 2015-06-05 WO PCT/KR2015/005651 patent/WO2015186988A1/en active Application Filing
- 2015-06-05 BR BR112016028227A patent/BR112016028227A2/pt active Search and Examination
- 2015-06-05 EP EP23161874.5A patent/EP4219565A1/en active Pending
-
2016
- 2016-11-22 IL IL249131A patent/IL249131A0/en active IP Right Grant
- 2016-11-29 MX MX2021006021A patent/MX2021006021A/es unknown
- 2016-12-05 PH PH12016502430A patent/PH12016502430A1/en unknown
- 2016-12-14 NO NO20161980A patent/NO20161980A1/en unknown
-
2020
- 2020-10-26 JP JP2020179064A patent/JP2021028329A/ja active Pending
-
2021
- 2021-08-20 KR KR1020210110349A patent/KR20210111190A/ko not_active IP Right Cessation
- 2021-12-30 US US17/566,368 patent/US20220118103A1/en not_active Abandoned
-
2023
- 2023-02-03 KR KR1020230014950A patent/KR20230023691A/ko not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20150140177A (ko) | 2015-12-15 |
JP2021028329A (ja) | 2021-02-25 |
SG10202104313PA (en) | 2021-06-29 |
SG11201610098YA (en) | 2016-12-29 |
EP3152236A4 (en) | 2018-07-04 |
PH12016502430A1 (en) | 2017-03-06 |
MX2021006021A (es) | 2021-07-06 |
JP2017521381A (ja) | 2017-08-03 |
JP7125249B2 (ja) | 2022-08-24 |
MX2016015668A (es) | 2017-02-27 |
CA2950576A1 (en) | 2015-12-10 |
IL249131A0 (en) | 2017-01-31 |
EA201692279A1 (ru) | 2017-05-31 |
EP4219565A1 (en) | 2023-08-02 |
KR20230023691A (ko) | 2023-02-17 |
HUP1700024A2 (en) | 2017-05-29 |
CN106661118A (zh) | 2017-05-10 |
NO20161980A1 (en) | 2016-12-14 |
WO2015186988A1 (en) | 2015-12-10 |
MY193519A (en) | 2022-10-17 |
US20220118103A1 (en) | 2022-04-21 |
BR112016028227A2 (pt) | 2017-10-24 |
EA035964B1 (ru) | 2020-09-07 |
KR20210111190A (ko) | 2021-09-10 |
AU2015269039B2 (en) | 2020-12-10 |
AU2015269039A1 (en) | 2016-12-08 |
EP3152236A1 (en) | 2017-04-12 |
US20170100488A1 (en) | 2017-04-13 |
AR100768A1 (es) | 2016-11-02 |
TW201625314A (zh) | 2016-07-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
UA124183C2 (uk) | Спосіб зниження імуногенності фізіологічно активного білка або пептиду | |
RU2606840C2 (ru) | Композиция для лечения диабета, содержащая конъюгат инсулина длительного действия и конъюгат инсулинотропного пептида длительного действия | |
TWI802396B (zh) | 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途 | |
KR101382593B1 (ko) | 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물 | |
TWI708782B (zh) | 新穎胰島素類似物及其用途 | |
JP6063450B2 (ja) | 治療用ヌクレアーゼ組成物および方法 | |
KR101665009B1 (ko) | 비알콜성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
TW200930408A (en) | An insulinotropic complex using an immunoglobulin fragment | |
CA2747678A1 (en) | Soluble polypeptides for use in treating autoimmune and inflammatory disorders | |
JP2023543835A (ja) | 抗cd94抗体及びその使用方法 | |
EP4069724A1 (en) | Methods of treatment using g-csf protein complex | |
WO2022040073A1 (en) | Novel methods of treating neutropenia using g-csf protein complex | |
WO2020243755A1 (en) | Methods of treatment using g-csf protein complex | |
US11684655B2 (en) | Methods of treating neutorpenia using G-CSF protein complex | |
KR20170100908A (ko) | 지속형 fgf21 수용체 아고니스트 결합체 및 지속형 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 대사증후군 치료용 조성물 | |
EP4364750A1 (en) | Therapeutic use of combination comprising triple activator having activity on all of glucagon, glp-1 and gip receptor | |
TW202317607A (zh) | 融合蛋白及其應用 | |
NZ733478B2 (en) | A conjugate comprising oxyntomodulin and an immunoglobulin fragment, and use thereof |