UA113289C2 - 1-PYRAZOLYL-3- (4 - ((2-ANYLINOPYRIMIDIN-4-IL) OXY) NAFTALIN-1-IL)-UREA AS P38 MAP KINASE INHIBITORS - Google Patents

Abstract

Винахід стосується сполуки формули (І), яка є інгібітором сімейства р38 міоген-активованих протеїнкіназних ферментів, і її застосування в лікуванні, зокрема в фармацевтичних комбінаціях, особливо в лікуванні запальних захворювань, зокрема запальних захворювань легень, таких як астма і ХОХЛ.The invention relates to a compound of formula (I), which is an inhibitor of the p38 family of myogen-activated protein kinase enzymes, and its use in the treatment, in particular in pharmaceutical combinations, in particular in the treatment of inflammatory diseases, in particular inflammatory lung diseases such as asthma and COPD.

Description

Галузь технікиThe field of technology

Даний винахід стосується сполук, які є інгібіторами сімейства р38 мітоген-активованих протеїнкіназних ферментів (що згадуються в даному документі як р38 МАР інгібітори кінази), наприклад, альфа і гамма кіназ їх підтипів, і ЗУК кіназ, і гос сімейства тирозинкіназ, і їх застосування в терапії зокрема в фармацевтичних комбінаціях, особливо при лікуванні запальних захворювань, зокрема, запальних захворювань легень, таких, як астма і ХОХЛ, так само, як і запальних захворювань шлунково-кишкового тракту, таких, як неспецифічний виразковий коліт і хвороба Крона, і очей, таких, як увеїт.The present invention relates to compounds that are inhibitors of the family of p38 mitogen-activated protein kinase enzymes (referred to in this document as p38 MAP kinase inhibitors), for example, alpha and gamma kinases of their subtypes, and ZUK kinases, and gos of the tyrosine kinase family, and their use in therapies in particular in pharmaceutical combinations, especially in the treatment of inflammatory diseases, in particular inflammatory diseases of the lungs, such as asthma and COPD, as well as inflammatory diseases of the gastrointestinal tract, such as non-specific ulcerative colitis and Crohn's disease, and eyes, such as uveitis.

Рівень технікиTechnical level

Для чотирьох р38 МАРК ізоформ (альфа-, бета-, гамма- і дельта- відповідно) було визначено, що кожна відображає різні моделі тканинної експресії у людини. РЗВ МАРК-альфа і бета-ізоформи виявлені повсюдно в тілі, присутні в багатьох різних типах клітин. Альфа- ізоформа добре описана з точки зору її ролі в запаленні. Хоча дослідження із застосуванням хіміко-генетичного підходу на мишах показали, що р38 МАРК-бета-ізоформа не грає ролі в запаленні (О'Кееге, 5... еї аї!., У. ВіоЇ. Спет., 2007, 282(48):34663-71.), вона може бути залучена до больових механізмів за допомогою регуляції експресії СОХ2 (Ейгвіттоп5, В.Г. еї аї.,For the four p38 MARK isoforms (alpha-, beta-, gamma- and delta-, respectively), it was determined that each reflects different patterns of tissue expression in humans. RZV MARK alpha and beta isoforms are found throughout the body, present in many different cell types. The alpha isoform is well described in terms of its role in inflammation. Although studies using a chemical-genetic approach on mice showed that the p38 MARK-beta isoform does not play a role in inflammation (O'Keege, 5... ei ai!., U. VioYi. Spet., 2007, 282(48 ):34663-71.), it can be involved in pain mechanisms with the help of regulation of COX2 expression (Eigvittop5, V.G. ei ai.,

Мецгогеро, 2010, 21(4):313-7). Ці ізоформи інгібуються рядом раніше описаних низькомолекулярних сполук. Ранні класи інгібіторів були високотоксичними внаслідок широкого розподілу в тканинах цих ізоформ, що призводило до багатьох побічних ефектів від цих сполук.Metzgogero, 2010, 21(4):313-7). These isoforms are inhibited by a number of previously described low molecular weight compounds. Early classes of inhibitors were highly toxic due to the wide tissue distribution of these isoforms, leading to many side effects from these compounds.

Крім того, розробка значної кількості інгібіторів була припинена в зв'язку з неприйнятними профілями безпеки в клінічних дослідженнях (Рейив, І..Н. апа Умигл, К.Р., Сит. Тор. Мед. Спет., 2008, 8(16):1452-67.). Всі ці несприятливі ефекти залежать від хемотипу, і сполуки мають різні моделі кіназної селективності, токсичності, які спостерігаються, можуть бути більше зв'язані зі структурою, ніж засновані на механізмі р38.In addition, the development of a significant number of inhibitors was stopped due to unacceptable safety profiles in clinical studies (Reyiv, I.N. apa Umigl, K.R., Sit. Thor. Med. Spet., 2008, 8(16 ):1452-67.). All of these adverse effects are chemotype-dependent, and the compounds have different patterns of kinase selectivity, the toxicities observed may be more structure related than based on the p38 mechanism.

Менше відомо про р38 МАРК-гамма і -дельта-ізоформи, які, на відміну від альфа- і бета- ізоферментів, експресуються в конкретних тканинах і клітинах. рЗ8 МАРК-дельта ізоформа експресується більш сильно в підшлунковій залозі, яєчках, легені, тонкій кишці і нирці. Вона також присутня в достатній кількості в макрофагах і визначається в нейтрофілах, СО4ж Т- клітинах і в ендотеліальних клітинах (Зптивєїї, О. еї аі., Сотрієз Непадиз Віоіодієв, 2003, 326(10-Less is known about p38 MARK gamma and delta isoforms, which, unlike alpha and beta isoenzymes, are expressed in specific tissues and cells. pZ8 MARK-delta isoform is expressed more strongly in the pancreas, testicles, lung, small intestine and kidney. It is also present in sufficient quantity in macrophages and is determined in neutrophils, СО4zh T-cells and in endothelial cells (Zptiveii, O. ei ai., Sotriez Nepadiz Viioodiev, 2003, 326(10-

Зо 11)1067-1072; Зтіїн, 5. у. Вг. У. Рпаптасої., 2006, 149:393-404; Наїе, К. К., 9. Іттипої., 1999, 162(7):4246-52; Мапа, Х. 5. еєї аї!., у. Віої. Спет., 1997, 272(38):23668-23674.). Дуже мало відомо про розподіл р3в МАРК-гамма, хоча вона експресується більш сильно в головному мозку, скелетних м'язах і серці, а також у лімфоцитах і макрофагах (5Птивії, О. еї аї., Сотріез ВепдивFrom 11) 1067-1072; Ztiin, 5. u. Hg. U. Rpaptasoi., 2006, 149:393-404; Naye, K. K., 9. Ittipoi., 1999, 162(7):4246-52; Mapa, H. 5. еей ай!., у. Vioi Spet., 1997, 272(38):23668-23674.). Very little is known about the distribution of p3 in MARK-gamma, although it is expressed more strongly in the brain, skeletal muscles and heart, as well as in lymphocytes and macrophages (5Ptivii, O. ei ai., Sotriez Vepdiv

Віоіодієз, 2003, 326(10-11):1067-1072; Наї!е, К. К., 9. Іттипої., 1999, 162(7):4246-52; Соц, М. МУ. еїаї.,». Мої. СеїІ. Сагаїйої, 2002, 34(4):413-26; Мепепв, 5. єї аІ., РЕВЗ І еіїї., 1996, 383(3):273-6.).Vioiodiez, 2003, 326(10-11):1067-1072; Nai!e, K. K., 9. Ittipoi., 1999, 162(7):4246-52; Social, M. MU. eyai.,». My. SeiI. Sagaiioi, 2002, 34(4):413-26; Mepepv, 5. eyi aI., REVZ I eiii., 1996, 383(3):273-6.).

Селективні низькомолекулярні інгібітори рЗ38 МАРК-гамма і рЗ38 МАРК-дельта зараз відсутні, хоч одна раніше відкрита сполука, ВІКВ 796, як відомо, має пан-ізоформну інгібуючу активність.Selective small molecule inhibitors of pZ38 MARK-gamma and pZ38 MARK-delta are currently lacking, although one previously discovered compound, VIKV 796, is known to have pan-isoform inhibitory activity.

Інгіібування рів МАРК-гамма і -дельта-ізоформ спостерігається при більш високих концентраціях цієї сполуки, ніж необхідних для інгібування рав МАРК-альфа і р38-бета (Кипта,Inhibition of MAPK-gamma and -delta isoforms is observed at higher concentrations of this compound than those required for inhibition of MAPK-alpha and p38-beta (Kipta,

МУ., у. Віої. Спет., 2005, 280:19472-194793. В доповнення, ВІВ 796 також порушував фосфорилування рів МАР-кіназ або ОМ-кіназ вищою кіназою МККбЄ або МКК4. Кума обговорював можливість того, що конформаційна зміна, спричинена зв'язуванням інгібітора зMU., u. Vioi Spet., 2005, 280:19472-194793. In addition, HIV 796 also disrupted the phosphorylation of MAP kinases or OM kinases by the higher kinase MKKbE or MKK4. Kuma discussed the possibility that the conformational change caused by the binding of the inhibitor to

МАРК-білком, може впливати на структуру і сайта фосфорилування, і сайта докінгу для вищого активатора, тим самим погіршуючи фосфорилування рів МАР-кіназ або ОМ-кіназ. рів МАР-кінази, як вважають, грають головну роль у багатьох сигнальних шляхах, які залучені до ініціювання і підтримки хронічного, постійного запалення при хворобі людини, наприклад, при важкій астмі і ХОХЛ (Спипоа, Е., Спеві, 2011, 139(6):Х1470-1479.). Зараз існує достатньо літератури, яка показує, що р38 МАР-кіназу активує ряд прозапальних цитокінів, і що її активація призводить до збільшення кількості і вивільнення додаткових прозапальних цитокінів. Дійсно, дані деяких клінічних досліджень демонструють позитивні зміни в активності захворювання у пацієнтів під час лікування інгібіторами р38 МАР-кінази. Наприклад, тій описує інгібуючий ефект інгібіторів р3З8 МАР-кінази на ТМЕ-альфа (але не ІІ-8), вивільнених ізby the MAP protein, can affect the structure of both the phosphorylation site and the docking site for the higher activator, thereby impairing the phosphorylation of MAP kinases or OM kinases. MAP kinases are believed to play a central role in many signaling pathways involved in the initiation and maintenance of chronic, persistent inflammation in human disease, such as severe asthma and COPD (Spypoa, E., Spevy, 2011, 139(6 ):X1470-1479.). There is now a substantial body of literature showing that p38 MAP kinase activates a number of pro-inflammatory cytokines, and that its activation leads to an increase in the number and release of additional pro-inflammatory cytokines. Indeed, data from some clinical trials demonstrate positive changes in disease activity in patients treated with p38 MAP kinase inhibitors. For example, it describes the inhibitory effect of p3Z8 MAP kinase inhibitors on TME-alpha (but not II-8) released from

МКПК людини.ICPC of a person.

Застосування інгібіторів р38 МАР-кінази для лікування хронічної обструктивної хвороби легень (ХОХЛ) також було запропоновано. Низькомолекулярні інгібітори, орієнтовані на рівThe use of p38 MAP kinase inhibitors for the treatment of chronic obstructive pulmonary disease (COPD) has also been proposed. Low-molecular-weight inhibitors targeting the riv

МАРК-альфа/-бета, довели ефективність у зниженні різних параметрів запалення в клітинах і в тканинах, отриманих від пацієнтів із ХОХЛ, які переважно несприйнятливі до кортикостероїдів (тій, 5.9., Вг. ). Рпаптасої., 2006, 149:393-404)), а також в різних іп мімо тваринних моделях (Опаеглоса, 0.0. єї а. Ат. 9. РНузіо!., 2000, 2791 895-902; Мат, Р. еї аї!., Еиг. У. Ріагтасої., бо 2006, 544:160-167.). Ігизеп і його колеги також запропонували можливе залучення різав МАРК-MARK-alpha/-beta have proven effective in reducing various parameters of inflammation in cells and tissues obtained from patients with COPD, who are mostly resistant to corticosteroids (that, 5.9., Vg. ). Rpaptasoi., 2006, 149:393-404)), as well as in various animal models (Opaeglosa, 0.0. eyi a. At. 9. Rnuzio!., 2000, 2791 895-902; Mat, R. eyi ai !., Eig. U. Riagtasoi., bo 2006, 544:160-167.). Igizep and his colleagues also suggested the possible involvement of the MARK-

альфа/-бета в кортикостероїдну несприйнятливість за допомогою зниження спорідненості глюкокортикоїдного рецептора (ГР) в ядрах (Ігизеп, Е. еї аї., У. АПегду Сіїп. Іттипої., 2002, 109:649-657.). Клінічний досвід з рядом інгібіторів р38 МАР-кінази, включаючи АМО548, ВІКВ 796, МХ702, 5010469 і 5СІ0О323, був описаний (ее, М.К. апа Юотіпдце, С., Сцтепі Мед.alpha/-beta in corticosteroid immunity by reducing the affinity of the glucocorticoid receptor (GR) in the nuclei (Igizep, E. ei ai., U. APegdu Siip. Ittipoi., 2002, 109:649-657.). Clinical experience with a number of p38 MAP kinase inhibitors, including AMO548, VIKV 796, MX702, 5010469, and 5CI0O323, has been described (ee, MK apa Yuotipdze, S., Sztepi Med.

Спет., 2005, 12:2979-2994.).Spet., 2005, 12:2979-2994.).

ХОХЛ являє собою стан, при якому основне запалення, як повідомляється, є істотно стійким до протизапальної дії інгаляційних кортикостероїдів. Отже, кращою стратегією для лікуванняCOPD is a condition in which the underlying inflammation is reported to be substantially resistant to the anti-inflammatory effects of inhaled corticosteroids. So, the best strategy for treatment

ХОХЛ буде розробка втручання, яке має як властиву протизапальну дію, так і здатність збільшувати чутливість тканини легень хворих ХОХЛ до інгаляційних кортикостероїдів. У недавній публікації Мегсадо (Мегсадо, М., еї аї., Мої. РНаптасої., 2011, 80(6):1128-1135.) показано, що заглушення р38 МАРК-у має потенціал, щоб відновити сприйнятливість до кортикостероїдів. Отже, може бути подвійна вигода для пацієнтів при застосуванні інгібітора р38COPD will be the development of an intervention that has both an inherent anti-inflammatory effect and the ability to increase the sensitivity of the lung tissue of COPD patients to inhaled corticosteroids. A recent publication by Megsado (Megsado, M., et al., Moi. RNaptasoi., 2011, 80(6):1128-1135.) shows that p38 MAPK silencing has the potential to restore corticosteroid sensitivity. Therefore, there may be a double benefit for patients with the use of a p38 inhibitor

МАР-кінази для лікування ХОХЛ і важкої форми астми. Проте, основною перешкодою на шляху використання інгібіторів р38 МАР-кінази при лікуванні хронічних запальних захворювань людини була гостра токсичність, яка спостерігається у пацієнтів, що привело до висновку з клінічного дослідження багатьох сполук, включаючи всі ті, спеціально згадані вище.MAP kinases for the treatment of COPD and severe asthma. However, a major obstacle to the use of p38 MAP kinase inhibitors in the treatment of human chronic inflammatory diseases has been the acute toxicity observed in patients, leading to the conclusion of the clinical trial of many compounds, including all those specifically mentioned above.

Багато пацієнтів із діагнозом астма або ХОХЛ продовжують страждати від неконтрольованих симптомів і від загострень їх медичного стану, що може призвести до госпіталізації. Це відбувається незважаючи на застосування найпрогресивніших схем лікування, які є в цей час, що включають комбіновані продукти з інгаляційних кортикостероїдів і р-агоністів тривалої дії. Дані, накопичені за останнє десятиріччя, показують, що нездатність ефективно керувати основним компонентом запального захворювання в легенях є найбільш імовірною причиною, яка спричинює загострення. Враховуючи встановлену ефективність кортикостероїдів як протизапальних агентів і, зокрема, інгаляційних кортикостероїдів при лікуванні астми, ці отримані дані спровокували інтенсивне вивчення. Отримані дослідження показали, що деякі несприятливі чинники навколишнього середовища викликають кортикостероїдо-несприйнятливі запальні зміни в легенях пацієнтів. Прикладом може бути реакція у відповідь, що виникає з вірусно-опосередкованих інфекцій верхніх дихальних шляхів (ІВДШ), яка має особливе значення в збільшенні захворюваності, пов'язаної з астмою і ХОХЛ.Many patients diagnosed with asthma or COPD continue to suffer from uncontrolled symptoms and exacerbations of their medical condition, which may lead to hospitalization. This is despite the use of the most advanced treatment regimens available at this time, which include combination products of inhaled corticosteroids and long-acting β-agonists. Evidence accumulated over the past decade indicates that failure to effectively manage the underlying inflammatory component of lung disease is the most likely cause of exacerbations. Given the established efficacy of corticosteroids as anti-inflammatory agents and, in particular, inhaled corticosteroids in the treatment of asthma, these findings have prompted intense study. The obtained studies showed that some adverse environmental factors cause corticosteroid-resistant inflammatory changes in the lungs of patients. An example would be the response arising from virally mediated upper respiratory infections (URIs), which is of particular importance in increasing the morbidity associated with asthma and COPD.

Зо Епідеміологічні дослідження виявили тісний зв'язок між вірусними інфекціями верхніх дихальних шляхів і значною частиною загострень, перенесених пацієнтами з уже діагностованими хронічними захворюваннями органів дихання. Деякі з найбільш переконливих даних в цьому відношенні виводяться з подовжніх досліджень дітей, які страждають від астми (Рарадороціов, М.О., Рарі, А., Рзагтав, 5. апа допп5іоп, 5.І.., Раєдіаїг. Везріг. Вем, 2004, 5(3)255- 260.). Різноманітність додаткових досліджень підтверджує висновок, що вірусна інфекція може прискорити загострення і збільшити тяжкість захворювання. Наприклад, експериментальні клінічні інфікування риновірусом, як повідомлялося, викликали бронхіальну гіперреактивність до гістаміну в астматиків, яка не відповідає на лікування кортикостероїдами (Сгипбрего, К., Зпагоп,Epidemiological studies have revealed a close connection between viral infections of the upper respiratory tract and a significant part of exacerbations experienced by patients with already diagnosed chronic diseases of the respiratory organs. Some of the most convincing data in this regard are derived from longitudinal studies of children suffering from asthma (Raradorotsiov, M.O., Rari, A., Rzagtav, 5. apa dopp5iop, 5.I.., Raediaig. Vezrig. Vem, 2004, 5(3)255-260.). A variety of additional studies confirm the conclusion that a viral infection can accelerate the exacerbation and increase the severity of the disease. For example, experimental clinical infections with rhinovirus have been reported to induce bronchial hyperreactivity to histamine in asthmatics unresponsive to corticosteroid treatment (Sgypbrego, K., Zpagop,

В.Е., ві а)., Ат. У). Везріг. Стії. Саге Мейа., 2001, 164(10):1816-1822.). Ще одне свідчення походить від зв'язку, який спостерігається між загостреннями захворювання у пацієнтів з кістозним фіброзом і РВЛ-інфекціями (Умаї, О., сеїдег, С., еї аї., У. Суві. Рібго5, . 2008, 7:320-328.). Також узгоджується з цим масивом даних виявлення того, що респіраторні вірусні інфекції, зокрема риновірус, являють собою незалежний чинник ризику, що негативно корелює з 12-місячним коефіцієнтом виживаності в педіатрії, у реципієнтів трансплантата легені (ім, М., ММогіеу, 5., еї а!., Ткгапзрі. Іптесі. бів. 2009, 11(4):304-312.).V.E., vi a)., At. IN). Vezrig Stia Sage May., 2001, 164(10):1816-1822.). Another evidence comes from the relationship observed between exacerbations of the disease in patients with cystic fibrosis and RVL infections (Umai, O., Seideg, S., ei ai., U. Suvi. Ribgo5, . 2008, 7:320 -328.). Also consistent with this body of data is the finding that respiratory viral infections, in particular rhinovirus, are an independent risk factor negatively correlated with the 12-month survival rate in pediatrics in lung transplant recipients (namely, M., MMoghieu, 5., ей а!., Tkgapzri. Iptesi. biv. 2009, 11(4):304-312.).

Клінічні дослідження показують, що вірусне навантаження пропорційне до симптомів, які спостерігаються, і ускладнень і, непрямо, до тяжкості запалення. Наприклад, після експериментального інфікування риновірусом симптоми нижніх дихальних шляхів і бронхіальна гіперреактивність значно корелюють із вірусним навантаженням (Меззаде, 5.0., | ага-їапса, УМ., еї аі,, РМАБ, 2008; 105(36):13562-13567.). Аналогічним чином, за відсутності інших вірусних агентів риновірусні інфекції були звичайно пов'язані з інфекціями нижніх дихальних шляхів і свистячого дихання, коли вірусне навантаження було високим в імунокомпетентних педіатричних пацієнтів (Сегпа, с., Рігава, А., еї а!., У. Меа. мігої, . 2009, 81(8):1498-1507.).Clinical studies show that viral load is proportional to observed symptoms and complications and, indirectly, to the severity of inflammation. For example, after experimental rhinovirus infection, symptoms of the lower respiratory tract and bronchial hyperreactivity are significantly correlated with viral load (Mezzade, 5.0., | aga-iapsa, UM., ei ai,, RMAB, 2008; 105(36):13562-13567.) . Similarly, in the absence of other viral agents, rhinovirus infections were commonly associated with lower respiratory tract infections and wheezing when the viral load was high in immunocompetent pediatric patients (Segpa, p., Rigawa, A., ei a!., U 2009, 81(8):1498-1507.).

Цікаво, недавно було повідомлено, що попередній вплив на риновірус знижував цитокінову відповідь, викликану бактеріальними продуктами в альвеолярних макрофагах людини (Оїмег,Interestingly, it was recently reported that pre-exposure to rhinovirus reduced the cytokine response induced by bacterial products in human alveolar macrophages (Oimeg,

В.С, іт, 5., еї аЇ., Тпогах, 2008, 63:519-525.). Крім того, інфікування носових епітеліальних клітин риновірусом, як було задокументовано, сприяє адгезії бактерій, зокрема 5. ацйгецв і Н. іпїшнепгає (УМапод, 9.Н., Кмоп, Н.У. апа Мопд, 9.9У., Те ІГагупдозсоре, 2009, 119(7):1406-1411.).V.S, it, 5., ei aYi., Tpogah, 2008, 63:519-525.). In addition, rhinovirus infection of nasal epithelial cells has been documented to promote bacterial adhesion, particularly 5. atsygetsv and N. ipishnepgae (UMapod, 9.N., Kmop, N.U. apa Mopd, 9.9U., Te IGagupdozsore, 2009 , 119(7):1406-1411.).

Такі клітинні ефекти можуть сприяти збільшенню імовірності пацієнтів, які страждають від бо інфекції нижніх дихальних шляхів, яка слідує за інфекцією у верхніх дихальних шляхах.Such cellular effects may contribute to the increased likelihood of patients suffering from a lower respiratory tract infection that follows an upper respiratory tract infection.

Відповідно, терапевтично обгрунтовано зосередити увагу на здатності нових втручань для зниження вірусного навантаження в різних іп міго системах, як сурогатного прогностичного чинника їх користі в клінічних умовах.Accordingly, it is therapeutically reasonable to focus attention on the ability of new interventions to reduce viral load in various immune systems as a surrogate predictor of their benefit in clinical settings.

Групи високого ризику, для яких риновірусна інфекція у верхніх дихальних шляхах може призвести до серйозних вторинних ускладнень, не обмежена пацієнтами з хронічними респіраторними захворюваннями. Вони включають в себе, наприклад, імунокомпрометованих, схильних до інфекції нижніх дихальних шляхів, а також пацієнтів, що перенесли хіміотерапію, які стикаються з гострою лихоманкою, яка загрожує життю. Крім того, було передбачено, що інші хронічні захворювання, такі, як діабет, пов'язані з компрометованою імунозахисною реакцією.High-risk groups for whom rhinovirus infection in the upper respiratory tract can lead to serious secondary complications are not limited to patients with chronic respiratory diseases. These include, for example, the immunocompromised, those prone to lower respiratory tract infections, as well as chemotherapy patients who are experiencing acute, life-threatening fever. In addition, other chronic diseases such as diabetes have been predicted to be associated with a compromised immune response.

Це збільшує як імовірність набування інфекції респіраторного тракту, так і госпіталізації в результаті (РеІєд, А.У., Меегагаїйна, ТГ., еї аї., Оіабеїез Меїар. Нев5. Нем., 2007, 23(1):3-13;This increases both the probability of acquiring a respiratory tract infection and hospitalization as a result (Reied, A.U., Meegagaiina, TG., ei ai., Oiabeiez Meiyar. Nev5. Nem., 2007, 23(1):3-13;

Когитпт, У.В., Веітаг, М/., єї а!., Оіареїез Саге, 2008, 31(8):1541-1545.).Kogitpt, U.V., Veitag, M., et al., Journal of Sage, 2008, 31(8):1541-1545.).

У той час, як вірусні інфекції верхніх дихальних шляхів є причиною значної захворюваності і смертності у пацієнтів з основним захворюванням або іншими чинниками ризику, вони також являють собою значний тягар охорони здоров'я у загальній популяції, і є основною причиною пропущених днів у школі і втраченого часу на робочому місці (РоїІйпдег, 9У.М. апа Зсптідіке, М.,While viral upper respiratory tract infections cause significant morbidity and mortality in patients with underlying disease or other risk factors, they also represent a significant health care burden in the general population, and are a major cause of missed days of school and lost time at the workplace (RoiIipdeg, 9U.M. apa Zsptidike, M.,

Мед. ВНев. Нем., 2010, ої 10.1002/теа.20176.). Ці міркування дають зрозуміти, що нові лікарські засоби, які мають підвищену ефективність порівняно з сучасними терапіями, терміново потрібні для профілактики і лікування риновірус-опосередкованих інфекцій верхніх дихальних шляхів.Honey. VNev. German, 2010, oi 10.1002/tea.20176.). These considerations make it clear that new drugs with increased efficacy compared to current therapies are urgently needed for the prevention and treatment of rhinovirus-mediated upper respiratory tract infections.

Загалом, стратегії, прийняті для відкриття поліпшених антивірусних агентів, орієнтовані на різні білки, які продукує вірус, як на точку терапевтичного втручання. Проте, широкий спектр риновірусних серотипів змушує продовжувати цей надзвичайно складний підхід і може пояснити, чому сьогодні лікарський засіб для профілактики і лікування риновірусних інфекцій досі не схвалений яким-небудь регулюючим органом.In general, the strategies adopted for the discovery of improved antiviral agents target the various proteins produced by the virus as a point of therapeutic intervention. However, the wide range of rhinovirus serotypes makes this extremely difficult approach to continue and may explain why today a drug for the prevention and treatment of rhinovirus infections is still not approved by any regulatory body.

Вхід вірусу в клітину-хазяїна пов'язаний з активацією ряду внутрішньоклітинних сигнальних шляхів, які, як належить, грають важливу роль в ініціюванні запальних процесів (огляд І пдм/д,The entry of the virus into the host cell is associated with the activation of a number of intracellular signaling pathways, which, as it should, play an important role in the initiation of inflammatory processes (review I pdm/d,

З, 2007; Зідпа! Ттапзаисійп, 7:81-88.) і вірусного поширення та подальшого вивільнення. Одним з таких механізмів, як було визначено, який грає роль у поширенні вірусу грипу іп міїго, є активація фосфоїнозитид-З-кінази/АКІ шляху. Повідомлялося, що цей сигнальний шляхZ, 2007; Get up! Ttapzaisiip, 7:81-88.) and viral spread and subsequent release. One such mechanism that has been identified as playing a role in the spread of the ip miigo virus is the activation of the phosphoinositide-Z-kinase/AKI pathway. It has been reported that this signaling pathway

Ко) активується М51-білком вірусу (Зпіп, М.К., Гм, ФО). еї аї., У. Сеп. Міго!., 2007, 88:13-18.), і що його інгібування знижує титри потомства вірусу (Епгпагаї, С., Магіскі, Н. еї аї!., Сеї! Містобріо!, 2006, 8:1336-1348.).Ko) is activated by the M51 protein of the virus (Zpip, M.K., Hm, FO). ei ai., U. Sep. Migo!., 2007, 88:13-18.), and that its inhibition reduces the titers of virus progeny (Epgpagai, S., Magiski, N. ei ai!., Sei! Mistobrio!, 2006, 8:1336-1348. ).

Крім того, МЕК-інгібітор 00126, як було задокументовано, інгібує вірусне поширення, не спричиняючи появи резистентних варіантів вірусу (І пам/ід, 5., УМО, Т. еї аІ.,, РЕВЗ Гей., 2004, 561(1-3):37-43.). Зовсім недавно дослідження, спрямовані на інгібування ЗукК-кінази, продемонстрували, що фермент грає важливу роль у забезпеченні входу риновірусу в клітини, а також вірус-індукованій запальній відповіді, зокрема підвищенні ІСАМ-1 (Запаегзоп, М.Р., І ай,In addition, the MEK inhibitor 00126 has been documented to inhibit viral propagation without causing the emergence of resistant variants of the virus (I pam/id, 5., UMO, T. eyi aI.,, REVZ Hey., 2004, 561(1- 3):37-43.). More recently, studies aimed at inhibiting ZukK kinase have demonstrated that the enzyme plays an important role in ensuring the entry of rhinovirus into cells, as well as the virus-induced inflammatory response, in particular the increase of ISAM-1 (Zapaegzop, M.R., I ay,

С.М. єї аї., ІпЧатт. АйПегау ЮОгид Тагодеєї5, 2009, 8:87-95.). Активність ЗУК, як повідомляється, контролюється с-5го у ролі вищої кінази при РВЛ-інфекції (а, С. еї аї., У. Іттипої., 2008, 180(2):870-880.). Невелика кількість досліджень показала, що пов'язує активацію клітинної го (9гс1 або рбо-5гс) або сімейства кіназ Згсо з інфікуванням вірусами. Вони включають в себе доповідь про те, що аденовірус викликає РіЗ-кіназну опосередковану активацію АКІ через с-5гс- залежний механізм. Крім того, було припущено, що індукування Риновірусом-39 продукції 1-8 в епітеліальних клітинах залежить від активації 5го-кінази (Вепіеу, 9У.К., Мем/сотрб, О.С., 9. Мігої., 2007, 81:1186-1194.). Нарешті, було запропоновано, що активація Зго-кінази залучена до індукції продукції муцину риновірусом-14 в епітеліальних клітинах і підслизових залозах (Іпоше,S.M. IpChat. IPegau YuOgid Tagodeei 5, 2009, 8:87-95.). The activity of ZUK, as reported, is controlled by c-5 as a higher kinase in RVL infection (a, S. ei ai., U. Ittipoi., 2008, 180(2):870-880.). A small number of studies have shown that activation of cellular go (9gs1 or rbo-5gs) or family of Zgso kinases is associated with virus infection. They include the report that adenovirus induces RiZ-kinase-mediated activation of AKI through a c-5gs-dependent mechanism. In addition, it was assumed that the induction of production 1-8 by Rhinovirus-39 in epithelial cells depends on the activation of 5-kinase (Vepieu, 9U.K., Mem/sotrb, O.S., 9. Migoi., 2007, 81: 1186-1194.). Finally, it has been proposed that activation of Zgo-kinase is involved in the induction of mucin production by rhinovirus-14 in epithelial cells and submucosal glands (Ipoche,

О. і Матауа, М., Кезріг. Рпузіої. Меигобіо!., 2006, 154(3):484-499.).O. and Mataua, M., Kezrig. Rpuzioi Meigobio!., 2006, 154(3):484-499.).

Раніше було відкрито, що сполуки, які інгібують активність обох с-бгс і Зук-кіназ, є ефективними засобами проти реплікації риновірусів (Спатоп, С.Е. еї аї., УМО 2011/158042), і що сполуки, які інгібують р59-НСК, ефективні проти реплікації вірусу грипу (Спатоп, С.Е. еї аіІ., УМО 2011/070369). З причин, викладених вище, сполуки, призначені для лікування хронічних респіраторних захворювань, які поєднують ці невід'ємні властивості з інгібуванням р38 МАРК, як очікується, будуть особливо ефективні.It was previously discovered that compounds that inhibit the activity of both c-bgs and Zuk kinases are effective agents against rhinovirus replication (Spatop, S.E. et al., UMO 2011/158042), and that compounds that inhibit p59- NSCs, effective against influenza virus replication (Spatop, S.E. ei ai., UMO 2011/070369). For the reasons set forth above, compounds intended for the treatment of chronic respiratory diseases that combine these inherent properties with inhibition of p38 MAPK are expected to be particularly effective.

Деякі інгібітори р38 МАРК також були описані як інгібітори реплікації респіраторно- синцитіального вірусу (Савз5, Ї.. еї аІ., УМО 2011/158039.).Some p38 MARK inhibitors have also been described as inhibitors of respiratory syncytial virus replication (Savz5, Yi.. ei aI., UMO 2011/158039.).

Крім того, потрібно зазначити, що інгібітор р38 МАРК, як було встановлено, забезпечує перевагу для пацієнтів із ЗЗ3ЗК після одного тижня лікування, яке не було стійким протягом чотирьох тижнів курсу лікування (5спгеірег, 5. еї аї., Сііп. Савіго. Нераф!оду, 2006, 4:325-334.).In addition, it should be noted that a p38 MARK inhibitor has been shown to provide an advantage for patients with CKD after one week of treatment that was not sustained over four weeks of treatment (5spgeireg, 5. ei ai., Siip. Savigo. Neraf! Odu, 2006, 4:325-334.).

У доповнення до виконання головної ролі в сигнальних подіях клітини, які контролюють бо активність прозапальних шляхів, кіназні ферменти в цей час також визнані такими, що регулюють активність низки клітинних функцій. Серед тих, які обговорювалися останнім часом, присутні підтримка цілісності ДНК (ЗпПЙйЙО, М. Маїиге Кеміем5 Сапсег, 2003, 31155-168.) і координація складних процесів клітинного поділу. Ілюстрацією останніх даних є публікація, що описує вплив набору інгібіторів, які діють на так звані "кінази Олахарські", на частоту утворення мікроядер іп міїго (ОіапагзКу, А... еї аІ., РГо5 Сотриї. Віої!., 2009, 5(7):61000446.). Формування мікроядер залучене в або пов'язане з порушенням мітотичних процесів, і тому небажаним є вияв потенційної токсичності. Інгібування глікоген синтази кінази За (Б5КЗа), як було виявлено, є надзвичайно важливим чинником, який збільшує імовірність інгібітора кінази сприяти утворенню мікроядер. Недавно також повідомлялося, що інгібування кінази 5КЗВ РНК- інтерференцією сприяє формуванню мікроядер (Тідне, А. еї аІ., ВМС Сеї Віоіоду, 2007, 8:34.).In addition to playing a central role in cell signaling events that control the activity of pro-inflammatory pathways, kinase enzymes are now also recognized as regulating the activity of a number of cellular functions. Among those discussed recently are the maintenance of DNA integrity (ZpPYyYO, M. Maiige Kemiem5 Sapseg, 2003, 31155-168.) and the coordination of complex processes of cell division. An illustration of the latest data is a publication that describes the effect of a set of inhibitors that act on the so-called "Olaharsky kinases" on the frequency of micronuclei formation in the umbilical cord (OiapagzKu, A...ei aI., RGo5 Sotryi. Vioi!., 2009, 5( 7):61000446.). The formation of micronuclei is involved in or associated with the disruption of mitotic processes, and therefore the manifestation of potential toxicity is undesirable. Inhibition of glycogen synthase kinase 3 (B5K3) has been found to be an extremely important factor that increases the likelihood of a kinase inhibitor promoting micronuclei formation. Recently, it was also reported that inhibition of the 5KZV kinase by RNA interference promotes the formation of micronuclei (Tidne, A. ei aI., VMS Sei Viiodu, 2007, 8:34.).

Може бути можливим пом'якшити негативні наслідки, які виникають від взаємодій лікарських засобів з кіназами Олахарські, такими, як зЗ5КЗа, шляхом оптимізації дози і/або шляхом зміни способу введення. Проте, було б більш вигідно визначити терапевтично корисні молекули, які демонструють низьку або невиявну активність відносно цих побічних ферментів і, отже, спричиняють малі або взагалі не спричиняють порушення мітотичних процесів, як було виміряно при аналізі мітозу.It may be possible to mitigate the negative consequences that arise from drug interactions with Olaharsky kinases, such as zZ5KZa, by optimizing the dose and/or by changing the route of administration. However, it would be more advantageous to identify therapeutically useful molecules that exhibit little or no detectable activity against these side enzymes and therefore cause little or no mitotic disruption as measured by the mitosis assay.

Як видно з обговорення літератури, цитованої вище в даному документі, залишається необхідність визначити і розробити нові інгібітори р38 МАР-кінази, які мають поліпшений терапевтичний потенціал порівняно з доступними зараз методами лікування. Бажаними є сполуки, які виявляють дуже добрий терапевтичний індекс, забезпечуючи, щонайменше, той же дійовий ефект, що і у попередніх агентів, але, в одному або декількох аспектах, є менш токсичними при відповідній терапевтичній дозі. Метою даного винаходу, отже, є надання таких нових сполук, які інгібують ферментативну активність р38 МАР-кінази, наприклад, з деякими особливостями підтипу разом з Зук-кіназою і тирозинкіназами в межах сімейства 5гс (зокрема, с-5гс), які за допомогою цього мають добрі протизапальні властивості, і є придатними для застосування в терапії.As can be seen from the discussion of the literature cited above in this document, there remains a need to identify and develop novel p38 MAP kinase inhibitors that have improved therapeutic potential compared to currently available treatments. Preferred are compounds that exhibit a very good therapeutic index, providing at least the same efficacy as the previous agents, but, in one or more respects, are less toxic at an appropriate therapeutic dose. It is an object of the present invention, therefore, to provide such novel compounds that inhibit the enzymatic activity of p38 MAP kinase, for example, with some subtype specificity together with Zuk kinase and tyrosine kinases within the 5gs family (in particular, c-5gs), which thereby have good anti-inflammatory properties and are suitable for use in therapy.

Сполука (І) виявляє велику тривалість дії і/або стійкість дії порівняно з раніше відкритим алостеричним інгібітором р38 МАР-кінази ВІКВ 796 (Рагоеїїїв5, С. еї аї., Маїиге Зігисі. Віої!., 2002, 9(4):268-272.. Додатковий варіант здійснення надає така нова сполука в одній або декількохCompound (I) exhibits a long duration of action and/or persistence of action compared to the previously discovered allosteric inhibitor of p38 MAP-kinase VIKV 796 (Ragoeyiv5, S. ei ai., Maiige Zigisi. Vioi!., 2002, 9(4):268- 272.. An additional embodiment provides such a new compound in one or more

Зо твердих кристалічних формах, які мають високу хімічну і фізичну стабільність, що придатна для приготування у вигляді інгаляційних лікарських засобів.From solid crystalline forms, which have high chemical and physical stability, suitable for preparation in the form of inhalation drugs.

Суть винаходуThe essence of the invention

Таким чином, в одному аспекті винаходу пропонується сполука формули (1):Thus, in one aspect of the invention, a compound of formula (1) is proposed:

ІВи о плоIVy about plo

М р М. м мм тм в і й й НМ. 7M r M. m mm tm v i y y NM. 7

Сполука (І)Compound (I)

Ме або її фармацевтично прийнятна сіль або сольват, включаючи всі її стереоізомери і таутомери. "Сполука формули (І)" також може згадуватися в даному документі як "Сполука (1)".Me or a pharmaceutically acceptable salt or solvate thereof, including all stereoisomers and tautomers thereof. "Compound of formula (I)" may also be referred to herein as "Compound (1)".

В іншому аспекті даного винаходу надається Сполука (І), як визначено вище, у вигляді вільної основи.In another aspect of the present invention, Compound (I) as defined above is provided as a free base.

В іншому аспекті даного винаходу надається Сполука (І), як визначено вище, у вигляді безводної вільної основи.In another aspect of the present invention there is provided Compound (I) as defined above in the form of an anhydrous free base.

В іншому аспекті даного винаходу надається Сполука (І), як визначено вище, у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній формі.Another aspect of the present invention provides Compound (I) as defined above in the form of an anhydrous free base in a solid crystalline form.

У ще одному аспекті даного винаходу надається Сполука (І), як визначено вище, у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі А.In yet another aspect of the present invention, Compound (I) as defined above is provided as the anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form A.

У ще одному аспекті даного винаходу надається Сполука (І), як визначено вище, у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В.In yet another aspect of the present invention, Compound (I) as defined above is provided as the anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B.

Короткий опис кресленьBrief description of the drawings

Фігура 1 показує спектр порошкової рентгенівської дифракції (ПРД), отриманий від зразкаFigure 1 shows the powder X-ray diffraction (PRD) spectrum obtained from the sample

Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі А.Compounds (I) in the form of an anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form A.

Фігура 2 відображає спектр ПРД, отриманий від зразка Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В після мікронізації.Figure 2 shows the PRD spectrum obtained from a sample of Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B after micronization.

Фігура З виявляє результати термогравіметричного аналізу зразка Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В після мікронізації.Figure C shows the results of thermogravimetric analysis of a sample of Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B after micronization.

Фігура 4 представляє графіки ізотерми динамічної сорбції парів (ДСП), отримані від зразкаFigure 4 presents dynamic vapor sorption isotherm (DSP) graphs obtained from the sample

Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В після мікронізації.Compounds (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B after micronization.

Фігура 5 представляє результати експерименту з визначення гістерезису, проведеного над зразком Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В після мікронізації, для того, щоб визначити ступінь і швидкість абсобції/десорбції вологи згодом проти змін у відносній вологості.Figure 5 presents the results of a hysteresis experiment conducted on a sample of Compound (I) as anhydrous free base in the solid crystalline polymorph form B after micronization, in order to determine the degree and rate of moisture absorption/desorption subsequently against changes in relative humidity.

Фігура 6 являє собою інфрачервоний (ІК) спектр, отриманий від зразка Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В після мікронізації.Figure 6 is an infrared (IR) spectrum obtained from a sample of Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B after micronization.

Фігура 7 показує термічний аналіз зразка Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В (мікронізований) шляхом диференціальної сканувальної калориметрії (ДСК).Figure 7 shows the thermal analysis of a sample of Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B (micronized) by differential scanning calorimetry (DSC).

Детальний опис винаходуDetailed description of the invention

Сполука формули (І), розкрита в даному описі, являє собою 1-(З-трет-бутил-1-п-толіл-1 Н- піразол-5-іл)-3-(4-(2-(феніламіно)піримідин-4-ілокси)нафталін-1-іл)усечовину. Приклади солейThe compound of formula (I) disclosed in this description is 1-(3-tert-butyl-1-p-tolyl-1H-pyrazol-5-yl)-3-(4-(2-(phenylamino)pyrimidine -4-yloxy) naphthalene-1-yl) uretate. Examples of salts

Сполуки (І) включають всі фармацевтично прийнятні солі, такі, як, без обмеження, кислотно- адитивні солі сильних мінеральних кислот, таких, як солі НСІ ії НВ»г, і адитивні солі сильних органічних кислот, таких, як метансульфонова кислота.Compounds (I) include all pharmaceutically acceptable salts, such as, without limitation, acid addition salts of strong mineral acids, such as salts of HCI and HB»g, and addition salts of strong organic acids, such as methanesulfonic acid.

У ролі використовуваного в даному документі нижче, визначення сполуки формули (1) призначене для включення солей, сольватів і всіх таутомерів вказаної сполуки, якщо контекст спеціально не вказує інше. Приклади сольватів включають гідрати.As used herein below, the definition of a compound of formula (1) is intended to include salts, solvates, and all tautomers of said compound, unless the context specifically indicates otherwise. Examples of solvates include hydrates.

Винахід, представлений в даному документі, поширюється на проліки за сполукою формули (І), тобто сполуки, які руйнуються і/або метаболізуються іп мімо, щоб надати активну сполукуThe invention presented herein extends to prodrugs of a compound of formula (I), i.e., compounds that are degraded and/or metabolized by the liver to yield the active compound

Зо формули (І). Загальні приклади проліків включають прості складні ефіри, і інші складні ефіри, такі, як змішані карбонатні складні ефіри, карбамати, глікозиди, прості ефіри, ацетали і кетали.From formula (I). Common examples of prodrugs include esters, and other esters such as mixed carbonate esters, carbamates, glycosides, esters, acetals, and ketals.

Винахід охоплює всі ізотопні похідні Сполуки (І). Таким чином, винахід охоплює сполуки, які є сполуками за Сполукою (І), що мають один або більше атомів, які були заміщені атомом, що має атомну масу або масове число, відмінні від атомної маси або масового числа, які найчастіше зустрічаються в природі, або в якому частка атома, що має атомну масу або масове число, які зустрічаються менш часто в природі, була збільшена (остання концепція називається "Іотопним збагаченням"). Таким чином, сполуки за даним винаходом включають ті, в яких певний атом є таким, що зустрічається в природі, або ізотопом, що не зустрічається в природі. В одному варіанті здійснення ізотоп являє собою стабільний ізотоп. Таким чином, сполуки за даним винаходом, включають, наприклад, сполуки, які містять дейтерій і тому подібні. Таким чином, в одному варіанті здійснення за винаходом Сполука (І) містить збагачений рівень дейтерію в одному або більше атомах водню (наприклад, для даного атома водню рівень ізотопу дейтерію перевищує 20 95, 50 9», 75 Уо, 90 95, 95 95 або 99 95 від числа). Приклади інших ізотопів, які можуть бути включені в Сполуку (І) або збагачені в Сполуці (І), включають ізотопи водню, вуглецю, азоту, кисню, фтору, йоду і хлору, такі, як ЗН, 71, 196, 1946, 15М, 18, 129) або 125І, які можуть бути такими, що зустрічаються в природі, або ізотопами, які не зустрічаються в природі.The invention covers all isotopic derivatives of Compound (I). Thus, the invention covers compounds which are compounds of Compound (I) having one or more atoms which have been replaced by an atom having an atomic mass or mass number different from the atomic mass or mass number most commonly found in nature, or in which the fraction of an atom having an atomic mass or mass number that occurs less frequently in nature has been increased (the latter concept is called "Iotope enrichment"). Thus, compounds of the present invention include those in which a particular atom is a naturally occurring or non-naturally occurring isotope. In one embodiment, the isotope is a stable isotope. Thus, the compounds of the present invention include, for example, compounds that contain deuterium and the like. Thus, in one embodiment of the invention, Compound (I) contains an enriched level of deuterium in one or more hydrogen atoms (for example, for a given hydrogen atom, the deuterium isotope level exceeds 20 95, 50 9", 75 Uo, 90 95, 95 95 or 99 95 from the number). Examples of other isotopes that may be included in Compound (I) or enriched in Compound (I) include isotopes of hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, fluorine, iodine, and chlorine, such as ZN, 71, 196, 1946, 15M, 18, 129) or 125I, which can be naturally occurring or non-naturally occurring isotopes.

У ще одному аспекті даного винаходу наданий один або більше метаболітів сполуки формули (І), зокрема, метаболіт, який зберігає одне або більше терапевтичних дій сполуки формули (І). Метаболіт, як використовується в даному описі, являє собою сполуку, яка продукується іп мімо внаслідок метаболізму сполуки формули (І), такі як, без обмеження, окислювальні метаболіти і/або метаболіти, отримані, наприклад, у результаті О-деалкілування.In yet another aspect of the present invention, one or more metabolites of a compound of formula (I) are provided, in particular, a metabolite that retains one or more therapeutic actions of a compound of formula (I). A metabolite, as used herein, is a compound that is produced spontaneously as a result of the metabolism of a compound of formula (I), such as, without limitation, oxidative metabolites and/or metabolites obtained, for example, as a result of O-dealkylation.

Даний винахід також поширюється на всі поліморфні форми сполук, визначених у даному документі.The present invention also extends to all polymorphic forms of the compounds defined herein.

Шлях, придатний для отримання сполуки формули (І), показаний нижче (Схема 1).A suitable route for the preparation of the compound of formula (I) is shown below (Scheme 1).

Схема щ М ра 1. РАМН» / у - ту ОН пн м Ин Ше: р-ТЗА туї нм | рви, Местю НМ Ї й 2. ЕМ ЙSchema щ M ra 1. RAMN» / у - tu ОН пн m Ін Ше: r-ТZA tui nm | ryvy, Mestyu NM Y and 2. EM Y

НС що | і | Стадія 2NS that | and | Stage 2

Стадія 1 хе сі ї іїStage 1 hesi yi ii

Ви РНОС(ОЇСІ / ВиYou RNOS (OISI / You

ГУ. Ма»СОз т Її - Ше: те шетнннннннннннннннннннннннннн нн Ж М іGu. Ma»SOz t Her - She: te shetnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn nn Z M i

М МН М М ОР Ж ж М. емM MN M M OR Zh same M. em

Стадія З н Нам Ї ! с НМ | с ряStage Z n Nam Y ! with NM | with rya

Ме Ме їд,Me Me food

ВиYou

ЕМ о Ше: м Й що ща М. МEM o She: m And what shcha MM

Стадія 4 ! тадія Н Н й о цеStage 4! that's it

Ме Спопука (І)Me Spopuka (I)

Захисні групи можуть бути необхідні, щоб захистити хімічно чутливі групи протягом однієї або декількох із реакцій, описаних вище, щоб забезпечити, що процес може бути проведений або є результативним. Таким чином, якщо бажано або необхідно, проміжні сполуки можуть бути захищені використанням звичайних захисних груп. Захисні групи і засоби для їх видалення описані в "Ргоїесіїме сгоиМирз іп Огдапіс Ззупіпевів" авторів Тпеодога МУ. Сгеепе і Ребег 5. М. УМуцї5, опубліковано Уопп Уміеу 8. 5опв Іпс; Ап Вем Еа., 2006, ІЗВІМ-10: 0471697540.Protecting groups may be necessary to protect chemically sensitive groups during one or more of the reactions described above to ensure that the process can be carried out or is effective. Thus, if desired or necessary, intermediate compounds can be protected using conventional protecting groups. Protective groups and means for their removal are described in "Rgoiesiime sgoiMyrz ip Ogdapis Zzupipeviv" by the authors of Tpeodog MU. Sgeepe and Rebeg 5. M. UMucsi5, published by Wopp Umieu 8. 5opv Ips; Ap Vem Ea., 2006, IZVIM-10: 0471697540.

Детальне отримання Сполуки (І) надане в Прикладі 1.Detailed preparation of Compound (I) is provided in Example 1.

Нові проміжні сполуки, як описано в даному описі, складають аспект даного винаходу.Novel intermediates as described herein form an aspect of the present invention.

В іншому аспекті даного винаходу надана Сполука (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній формі. У ще одному аспекті даного винаходу надана Сполука (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі А, яка може бути отримана, наприклад, шляхом кристалізації Сполуки (І) з ізопропілацетату. В окремому аспекті даного винаходу надана Сполука (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В, яка може бути отримана, наприклад, шляхом кристалізації Сполуки (І) з ацетону і води. Типове співвідношення ацетону і води, придатне для цього процесу, знаходиться між 5:1 і 20071, наприклад, близько 10:1. Крім того, форма В може бути отримана шляхом кристалізації Сполуки (І) з одного ацетону. Детальне отримання Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердих кристалічних поліморфних формах А і В надане вIn another aspect of this invention, Compound (I) is provided as an anhydrous free base in a solid crystalline form. In yet another aspect of the present invention, Compound (I) is provided in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form A, which can be obtained, for example, by crystallization of Compound (I) from isopropyl acetate. In a separate aspect of this invention, Compound (I) is provided in the form of an anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B, which can be obtained, for example, by crystallization of Compound (I) from acetone and water. A typical ratio of acetone to water suitable for this process is between 5:1 and 20071, for example around 10:1. In addition, form B can be obtained by crystallization of Compound (I) from acetone alone. Detailed preparation of Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic forms A and B is given in

Прикладах 1 і З Експериментального розділу відповідно.Examples 1 and C of the Experimental section, respectively.

У ще одному аспекті даного винаходу властивості твердого стану Сполуки (І) можуть бути поліпшені шляхом подальших стадій суспендування або перекристалізації, для отримання, наприклад, матеріалу з поліпшеною морфологією і/або такого, який містить знижений рівень залишкового розчинника. Наприклад, залишковий розчинник може бути видалений зі Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В шляхом суспендування Сполуки (І) в поліморфній формі В у воді або, як альтернатива, шляхом подальшої перекристалізації з ацетону. Детальний опис зразкової процедури суспендування наданий в Прикладі За Експериментального розділу.In yet another aspect of the present invention, the solid state properties of Compound (I) can be improved by further suspension or recrystallization steps to obtain, for example, a material with improved morphology and/or one that contains a reduced level of residual solvent. For example, the residual solvent can be removed from Compound (I) as an anhydrous free base in solid crystalline polymorph B by suspending Compound (I) in polymorph B in water or, alternatively, by subsequent recrystallization from acetone. A detailed description of an exemplary suspension procedure is provided in the Example of the Experimental section.

Зо В одному варіанті здійснення надана тверда кристалічна поліморфна форма А Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи, що має спектр ПРД по суті як показано на Фігурі 1. Метод отримання даних ПРД описаний в Аналітичних методах, і ці дані обговорені в Прикладі 5.In one embodiment, a solid crystalline polymorphic Form A of Compound (I) is provided as the anhydrous free base, having an APR spectrum essentially as shown in Figure 1. The method for obtaining the APR data is described in Analytical Methods, and these data are discussed in Example 5.

Таким чином, надана Сполука (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі А, що має спектр ПРД з щонайменше одним (наприклад, одним, двома, трьома, чотирма, п'ятьма, шістьома, сімома, вісьмома, дев'ятьма, десятьма, одинадцятьма, дванадцятьма, тринадцятьма, чотирнадцятьма, п'ятнадцятьма або всіма шістнадцятьма) піком(ами) при 7,8; 8,7; 10,3; 11,2; 12,4; 15,2; 16,2; 17,5; 19,7; 20,8; 22,6; 23,1; 24,6; 25,5; 26,7; 27,А (70,2 градуса, 2-тета значення), ці піки є характеристикою твердої кристалічної поліморфної форми А. Піки при 10,3; 15,2; 17,5; 23,1; 24,6; 26,7 і 27,4 особливо характерні для твердої кристалічної поліморфної форми А і, отже, є переважним, щоб щонайменше один (наприклад, один, два, три, чотири, п'ять, шість або всі сім) з цих піків спостерігався в спектріThus, Compound (I) is provided in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form A, having a PRD spectrum with at least one (e.g., one, two, three, four, five, six, seven, eight, nine seven, ten, eleven, twelve, thirteen, fourteen, fifteen or all sixteen) peak(s) at 7.8; 8.7; 10.3; 11.2; 12.4; 15.2; 16.2; 17.5; 19.7; 20.8; 22.6; 23.1; 24.6; 25.5; 26.7; 27.A (70.2 degrees, 2-theta value), these peaks are characteristic of the solid crystalline polymorphic form of A. Peaks at 10.3; 15.2; 17.5; 23.1; 24.6; 26.7 and 27.4 are particularly characteristic of the solid crystalline polymorph form A and therefore it is preferred that at least one (eg, one, two, three, four, five, six, or all seven) of these peaks is observed in spectrum

ПРД.PRD

В іншому варіанті здійснення надана тверда кристалічна поліморфна форма В Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи (мікронізованої), яка має спектр ПРД по суті як показано наIn another embodiment, solid crystalline polymorphic form B of Compound (I) is provided in the form of an anhydrous free base (micronized), which has a PRD spectrum essentially as shown in

Фігурі 2. Спосіб мікронізації описаний в Прикладі 4, і спосіб отримання даних ПРД описаний вFigure 2. The method of micronization is described in Example 4, and the method of obtaining PRD data is described in

Аналітичних методах, і ці дані обговорені в Прикладі 5.Analytical methods, and these data are discussed in Example 5.

Таким чином, тут надана Сполука (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В (мікронізованої, яка має порошкову дифракційну рентгенограму з щонайменше одним (наприклад, одним, двома, трьома, чотирма, п'ятьма, шістьома, сімома, вісьмома, дев'ятьма, десятьма, одинадцятьма, дванадцятьма, тринадцятьма, чотирнадцятьма, п'ятнадцятьма, шістнадцятьма, сімнадцятьма або всіма вісімнадцятьма) піком(ами) при 3,9; 6,1; 7,7; 8,6; 10,9; 11,8; 12,7; 14,3; 15,9; 16,7; 18,3; 18,7; 19,9; 20,9; 22,0; 22,6; 25,2; 28,9 (140,2 градуса, 2-т-ета значення), ці піки є характеристикою твердої кристалічної поліморфної форми В. Піки при 3,9; 6,1; 11,8; 14,3; 16,7; 18,3; 18,7 і 28,9 особливо характерні для твердої кристалічної поліморфної форми В і, отже, є переважним, щоб щонайменше один (наприклад, один, два, три, чотири, п'ять, шість, сім або всі вісім) з цих піків спостерігався в спектрі ПРД.Thus, provided herein is Compound (I) as the anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B (micronized) having a powder diffraction pattern with at least one (e.g., one, two, three, four, five, six, seven, eight, nine, ten, eleven, twelve, thirteen, fourteen, fifteen, sixteen, seventeen or all eighteen) peak(s) at 3.9; 6.1; 7.7; 8.6; 10, 9; 11.8; 12.7; 14.3; 15.9; 16.7; 18.3; 18.7; 19.9; 20.9; 22.0; 22.6; 25.2; 28.9 (140.2 degrees, 2-th-eta value), these peaks are characteristic of the solid crystalline polymorphic form of B. Peaks at 3.9; 6.1; 11.8; 14.3; 16.7; 18 ,3; 18.7 and 28.9 are particularly characteristic of the solid crystalline polymorphic form of B and, therefore, it is preferred that at least one (eg, one, two, three, four, five, six, seven or all eight) from these peaks was observed in the PRD spectrum.

Температури плавлення Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердих кристалічних поліморфних формах А і В ббули визначені із застосуванням методу диференціальної сканувальної калориметрії, як описано в Прикладі б. Сполука (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі А, як було виявлено, маєThe melting points of Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic forms A and B were determined using the method of differential scanning calorimetry, as described in Example b. Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form A was found to have

Зо температуру плавлення 191,6 "С, а Сполука (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В, як було виявлено, має температуру плавлення 21476.Z has a melting point of 191.6 "C, and Compound (I) in the form of an anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B was found to have a melting point of 21476.

Поліморфна форма В, як було також встановлено, має більш високу теплоту плавлення, ніж поліморфна форма А. Як пояснено в Прикладі 6, ці результати передбачають, що поліморфна форма В термодинамічно більш стабільна, ніж поліморфна форма А.Polymorph B was also found to have a higher heat of fusion than polymorph A. As explained in Example 6, these results suggest that polymorph B is thermodynamically more stable than polymorph A.

Фізична і хімічна стабільності Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В були досліджені, результати яких розкриті в даному документі.The physical and chemical stability of Compound (I) in the form of an anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B were investigated, the results of which are disclosed in this document.

Для того, щоб оцінити фізичну стабільність, Сполуку (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В було мікронізовано за методикою, описаною вIn order to evaluate the physical stability, Compound (I) in the form of anhydrous free base in the solid crystalline polymorph form B was micronized according to the method described in

Прикладі 4, і зразки отриманого матеріалу зберігали у відкритих контейнерах і піддавали різним температурам і відносній вологості навколишнього середовища. Фізичні властивості і стабільності зразків були досліджені за допомогою методів ТГА, ДСК, ДПС, ІК-спектроскопії іExample 4, and samples of the obtained material were stored in open containers and exposed to different temperatures and relative humidity of the environment. The physical properties and stability of the samples were investigated using TGA, DSC, DPS, IR spectroscopy and

ПРД. Повні експериментальні методики наведені в розділі Загальні Методики, і результати наведені в Прикладі 7 (Таблиця 8). Як обговорювалося в Прикладі 7, Сполука (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В (мікронізована), як було встановлено, має хорошу фізичну стабільність. Ті ж експериментальні методики були також проведені із застосуванням Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В у немікронізованій формі, і результати виявилися по суті аналогічні тим, які були отримані для мікронізованого матеріалу, тобто Сполука (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В ії в мікронізованій, і в немікронізованій формі, як було встановлено, має хорошу фізичну стабільність.PRD Complete experimental procedures are given in the General Procedures section, and the results are shown in Example 7 (Table 8). As discussed in Example 7, Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B (micronized) was found to have good physical stability. The same experimental techniques were also carried out using Compound (I) as the anhydrous free base in solid crystalline polymorph B in non-micronized form, and the results were essentially similar to those obtained for the micronized material, i.e., Compound (I) in the form of the anhydrous free base in the solid crystalline polymorphic form of B i in micronized and non-micronized form, as it was established, has good physical stability.

Для того, щоб оцінити хімічну стабільність, Сполуку (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В було мікронізовано за методикою, описаною вIn order to evaluate the chemical stability, Compound (I) in the form of anhydrous free base in the solid crystalline polymorph form B was micronized according to the method described in

Прикладі 4. Мікронізовані зразки зберігали у відкритих контейнерах і піддавали різним температурам і відносній вологості навколишнього середовища. Хімічні стабільності зразків аналізували методом ВЕРХ. Результати наведені в Прикладі 8 (Таблиця 9), де вказано, щоExamples 4. Micronized samples were stored in open containers and exposed to different temperatures and relative humidity of the environment. The chemical stabilities of the samples were analyzed by HPLC. The results are shown in Example 8 (Table 9), where it is indicated that

Сполука (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В після мікронізації, як було виявлено, хімічно стабільна, хоча деяка чутливість до світла була помічена.Compound (I) as the anhydrous free base in solid crystalline polymorph form B after micronization was found to be chemically stable, although some sensitivity to light was observed.

Внаслідок досліджень твердого стану, описаних в даному документі, можна зробити бо висновок, що Сполука (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В може бути мікронізована, і що отриманий в результаті матеріал має хорошу фізичну і хімічну стабільність.As a result of the solid state studies described in this document, it can be concluded that Compound (I) in the form of an anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B can be micronized, and that the resulting material has good physical and chemical stability.

Сполука формули (І) є інгібітором р38 МАР-кінази (особливо альфа-підтипу), і в одному аспекті ця сполука корисна при лікуванні запальних захворювань, наприклад, ХОХЛ і/або астми.A compound of formula (I) is an inhibitor of p38 MAP kinase (especially the alpha subtype), and in one aspect, this compound is useful in the treatment of inflammatory diseases, for example, COPD and/or asthma.

Несподівано виявилося, що ця сполука виявляє велику тривалість дії і/або стійкість дії порівняно з раніше описаним інгібітором рЗ38 МАР-кінази ВІКВ796.Unexpectedly, this compound was found to exhibit a longer duration of action and/or persistence of action compared to the previously described pZ38 MAR-kinase inhibitor VIKV796.

Стійкість дії в даному контексті стосується швидкості дисоціації або константи дисоціації сполуки від мішені (такої, як рецептор). Низька швидкість дисоціації може призвести до стійкості.Persistence in this context refers to the rate of dissociation or dissociation constant of a compound from a target (such as a receptor). A low dissociation rate may lead to persistence.

Низька швидкість дисоціації в поєднанні з високою швидкістю асоціації, як правило, надає сильнодіючі терапевтичні об'єкти.A low rate of dissociation combined with a high rate of association generally provides potent therapeutic targets.

Сполука формули (І), як очікується, буде сильнодіючою іп мімо.The compound of formula (I) is expected to be highly potent.

Як правило, сполуки попереднього рівня техніки, розроблені на сьогодні, були призначені для перорального введення. Ця стратегія включає оптимізацію сполук, які досягають своєї тривалості дії відповідним фармакокінетичним профілем, тим самим забезпечуючи те, що достатньо висока концентрація лікарського засобу встановлюється і підтримується між дозами, щоб надати клінічну перевагу. Неминучим наслідком такого підходу є те, що всі тканини тіла, а особливо печінка і кишечник, піддаються над-терапевтичним активним концентраціям препарату, в будь-якому випадку вони піддаються несприятливій дії при захворюванні, яке лікують.Generally, the prior art compounds developed to date have been designed for oral administration. This strategy involves optimizing compounds that achieve their duration of action with an appropriate pharmacokinetic profile, thereby ensuring that a high enough drug concentration is established and maintained between doses to provide clinical benefit. The inevitable consequence of such an approach is that all tissues of the body, and especially the liver and intestines, are exposed to super-therapeutic active concentrations of the drug, in any case, they are exposed to adverse effects in the disease being treated.

Альтернативна стратегія полягає в розробці парадигм лікування, в яких препарат подається безпосередньо до запаленого органу (місцева терапія). Хоч такий підхід не підходить для лікування всіх хронічних запальних захворювань, він був широко використаний при легеневих захворюваннях (астма, ХОХЛ), шкірних захворюваннях (атопічний дерматит і псоріаз), захворюваннях носа (алергічний риніт) і шлунково-кишкових розладах (неспецифічний виразковий коліт).An alternative strategy is to develop treatment paradigms in which the drug is delivered directly to the inflamed organ (local therapy). Although this approach is not suitable for the treatment of all chronic inflammatory diseases, it has been widely used in lung diseases (asthma, COPD), skin diseases (atopic dermatitis and psoriasis), nasal diseases (allergic rhinitis), and gastrointestinal disorders (nonspecific ulcerative colitis). .

При місцевій терапії ефективність може бути досягнута або шляхом забезпечення того, що лікарський засіб має стійку тривалість дії і зберігається у відповідному органі, щоб мінімізувати ризики системної токсичності, або шляхом отримання складу, який створює "резервуар"In topical therapy, efficacy can be achieved either by ensuring that the drug has a sustained duration of action and is retained in the relevant organ to minimize the risks of systemic toxicity, or by obtaining a formulation that creates a "reservoir"

Зо активного лікарського засобу, що здатний зберігати його бажані ефекти. Перший підхід підтверджений прикладом антихолінергічного лікарського засобу тіотропію (Спіріва). Цю сполуку вводять місцево в легені для лікування ХОХЛ, і вона має виключно високу спорідненість до свого рецептора-мішені, що призводить до дуже повільної швидкості дисоціації, і, отже, стійкої тривалості дії.From an active medicinal product capable of maintaining its desired effects. The first approach is confirmed by the example of the anticholinergic drug tiotropium (Spiriva). This compound is administered topically to the lungs for the treatment of COPD and has an exceptionally high affinity for its target receptor, resulting in a very slow dissociation rate and therefore a sustained duration of action.

В одному аспекті даного винаходу сполука формули (І) особливо підходить для місцевої доставки, такої як місцева доставка в легені, зокрема, для лікування респіраторних захворювань, наприклад, хронічних респіраторних захворювань, таких як ХОХЛ і/або астма.In one aspect of the present invention, a compound of formula (I) is particularly suitable for local delivery, such as local delivery to the lungs, in particular for the treatment of respiratory diseases, for example, chronic respiratory diseases such as COPD and/or asthma.

В одному варіанті здійснення сполука формули (І) є придатною для сенсибілізації пацієнтів до лікування кортикостероїдами, тих, хто стали несприйнятливі до таких схем лікування.In one embodiment, a compound of formula (I) is suitable for sensitizing patients to corticosteroid treatment who have become refractory to such treatment regimens.

Сполука формули (І) також може бути корисна для лікування ревматоїдного артриту.A compound of formula (I) may also be useful in the treatment of rheumatoid arthritis.

Сполука формули (І) може мати противірусні властивості, наприклад, здатність запобігати інфікуванню клітин (наприклад, респіраторних епітеліальних клітин) пікорнавірусами, зокрема, риновірусами, грипом або респіраторно-синцитіальним вірусом.A compound of formula (I) may have antiviral properties, for example, the ability to prevent infection of cells (eg, respiratory epithelial cells) by picornaviruses, in particular, rhinoviruses, influenza or respiratory syncytial virus.

Таким чином, сполука, як вважають, являє собою противірусний засіб, зокрема, придатний для профілактики, лікування або полегшення пікорнавірусних інфекцій, таких, як риновірусна інфекція, грип або респіраторно-синцитіальний вірус.Thus, the compound is believed to be an antiviral agent, in particular, suitable for the prevention, treatment or relief of picornavirus infections, such as rhinovirus infection, influenza or respiratory syncytial virus.

В одному варіанті здійснення сполука формули (І) здатна зменшувати запалення, індуковане вірусною інфекцією, такою, як риновірусна інфекція, і особливо вірусні інфекції, які призводять до вивільнення цитокінів, таких, як ІЇ/-8, особливо іп мімо. Ця активність може, наприклад, бути перевірена іп міго, використовуючи аналіз риновірус-індукованого ІІ/-8, як описано в Прикладах в даному документі.In one embodiment, a compound of formula (I) is capable of reducing inflammation induced by a viral infection, such as a rhinovirus infection, and particularly viral infections that lead to the release of cytokines such as IL-8, particularly ip mimo. This activity can, for example, be tested by IP using the rhinovirus-induced II/-8 assay, as described in the Examples herein.

В одному варіанті здійснення сполука формули (І) здатна зменшити експресію ІСАМ'І, індуковану риновірусом, особливо іп мімо. ІСАМІ являє собою рецепторний механізм, який застосовується так званою великою борозенкою риновірусних серотипів для інфікування клітин.In one embodiment, the compound of formula (I) is able to reduce the expression of ISAM'I induced by rhinovirus, especially ip mimo. ISAMI is a receptor mechanism used by the so-called major groove of rhinovirus serotypes to infect cells.

Ця активність може бути виміряна, наприклад, способом, описаним в Прикладах в даному документі.This activity can be measured, for example, by the method described in the Examples herein.

Очікується, що вказані вище властивості роблять сполуку формули (І) особливо придатною для застосування при лікуванні і/або профілактиці загострень запальних захворювань, зокрема, вірусних загострень у пацієнтів з одним або декількома з наступних хронічних захворювань,It is expected that the above properties make the compound of formula (I) particularly suitable for use in the treatment and/or prevention of exacerbations of inflammatory diseases, in particular, viral exacerbations in patients with one or more of the following chronic diseases,

таких, як застійна серцева недостатність, ХОХЛ, астма, діабет, рак і/або в імуносупресованих пацієнтів, наприклад, після трансплантації органа.such as congestive heart failure, COPD, asthma, diabetes, cancer and/or in immunosuppressed patients, such as after organ transplantation.

Зокрема, сполука формули (І) може бути корисна при лікуванні одного або більше порушень дихальних функцій, зокрема ХОХЛ (включаючи хронічний бронхіт і емфізему), астми, педіатричної астми, кістозного фіброзу, саркоїдозу, ідіопатичного фіброзу легень, алергічного риніту, риніту, синуситу, особливо астми і ХОХЛ (включаючи хронічний бронхіт і емфізему).In particular, a compound of formula (I) may be useful in the treatment of one or more respiratory disorders, including COPD (including chronic bronchitis and emphysema), asthma, pediatric asthma, cystic fibrosis, sarcoidosis, idiopathic pulmonary fibrosis, allergic rhinitis, rhinitis, sinusitis, especially asthma and COPD (including chronic bronchitis and emphysema).

Сполука формули (І) також може бути корисна при лікуванні одного або більше станів, які можна лікувати шляхом місцевої або локальної терапії, включаючи алергічний кон'юнктивіт, кон'юнктивіт, алергічний дерматит, контактний дерматит, псоріаз, неспецифічний виразковий коліт, запалення суглобів, вторинне відносно ревматоїдного артриту або остеоартриту.A compound of formula (I) may also be useful in the treatment of one or more conditions treatable by topical or topical therapy, including allergic conjunctivitis, conjunctivitis, allergic dermatitis, contact dermatitis, psoriasis, nonspecific ulcerative colitis, joint inflammation, secondary to rheumatoid arthritis or osteoarthritis.

Крім того, очікується, що сполука формули (І) може бути корисна при лікуванні деяких інших станів, включаючи ревматоїдний артрит, панкреатит, кахексію, інгібуванні росту і метастаз пухлин, включаючи недрібноклітинну карциному легені, карциному молочної залози, карциному шлунка, колоректальні карциноми і злоякісну меланому.In addition, it is expected that the compound of formula (I) may be useful in the treatment of certain other conditions, including rheumatoid arthritis, pancreatitis, cachexia, inhibition of growth and metastasis of tumors, including non-small cell lung carcinoma, breast carcinoma, gastric carcinoma, colorectal carcinoma and malignant melanoma

Сполука формули (І) може бути корисна при лікуванні очних захворювань або розладів, зокрема алергічного кон'юнктивіту, кон'юнктивіту, діабетичної ретинопатії, макулярного набряку (включаючи вологий макулярний набряк і сухий макулярний набряк), післяопераційного запалення катаракти або, зокрема, увеїту (зокрема заднього, переднього і панувеїту).A compound of formula (I) may be useful in the treatment of ocular diseases or disorders, including allergic conjunctivitis, conjunctivitis, diabetic retinopathy, macular edema (including wet macular edema and dry macular edema), postoperative cataract inflammation or, in particular, uveitis ( in particular posterior, anterior and panuveitis).

Сполука формули (І) може бути корисна при лікуванні шлунково-кишкових захворювань або розладів, включаючи неспецифічний виразковий коліт або хворобу Крона.A compound of formula (I) may be useful in the treatment of gastrointestinal diseases or disorders, including non-specific ulcerative colitis or Crohn's disease.

Сполука формули (І) може також повторно сенсибілізувати стан пацієнта для лікування кортикостероїдами, коли стан пацієнта став несприйнятливим до них.A compound of formula (I) can also re-sensitize the patient to corticosteroid treatment when the patient has become resistant to them.

Крім того, даний винахід надає фармацевтичну композицію, яка містить сполуку відповідно до даного винаходу, необов'язково в поєднанні з одним або більше фармацевтично прийнятними розріджувачами або носіями.In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition comprising a compound according to the present invention, optionally in combination with one or more pharmaceutically acceptable diluents or carriers.

Даний винахід також надає спосіб отримання такої фармацевтичної композиції, яка містить змішування інгредієнтів.The present invention also provides a method for obtaining such a pharmaceutical composition that contains a mixture of ingredients.

Розріджувачі і носії можуть включати ті, які придатні для парентерального, перорального, місцевого, через слизові оболонки і ректального введення.Diluents and carriers may include those suitable for parenteral, oral, topical, mucosal, and rectal administration.

Зо Як згадувалося вище, такі композиції можуть бути отримані, наприклад, для парентерального, підшкірного, внутрішньом'язового, внутрішньовенного, інтраартикулярного або періартикулярного введення, зокрема в формі рідких розчинів або суспензій; для перорального введення, зокрема в формі таблеток або капсул; для місцевого, наприклад, легеневого або інтраназального введення, зокрема у вигляді порошків, носових крапель або аерозолів, і трансдермального введення; для введення через слизову оболонку, наприклад, букального, сублінгвального або через слизову оболонку піхви, і для ректального введення, наприклад, у вигляді супозиторіїв.Zo As mentioned above, such compositions can be obtained, for example, for parenteral, subcutaneous, intramuscular, intravenous, intra-articular or peri-articular administration, in particular in the form of liquid solutions or suspensions; for oral administration, in particular in the form of tablets or capsules; for local, for example, pulmonary or intranasal administration, in particular in the form of powders, nasal drops or aerosols, and transdermal administration; for mucosal administration, such as buccal, sublingual, or vaginal administration, and for rectal administration, such as suppositories.

Композиції можуть бути зручним чином введені в одиничній дозованій формі, і можуть бути отримані будь-яким зі способів, добре відомих у фармацевтичній сфері, наприклад, як описано в Кетіпдіоп'є Рпагтасешіса! Зсіепсев, 17-е вид., Маск Рибіїзпіпд Сотрапу, Еавіоп, РА., (1985).The compositions may conveniently be administered in unit dosage form, and may be prepared by any of the methods well known in the pharmaceutical art, for example as described in Ketipdiopye Rpagtaseshisa! Zsiepsev, 17th ed., Musk Rybiizpipd Sotrapu, Eaviop, RA., (1985).

Склади для парентерального введення можуть містити як допоміжні речовини воду або фізіологічний розчин, алкіленгліколі, такі, як пропіленгліколь, поліалкіленгліколі, такі, як поліетиленгліколь, олії рослинного походження, гідрогенізований нафталін і їм подібні.Formulations for parenteral administration may contain as excipients water or saline, alkylene glycols such as propylene glycol, polyalkylene glycols such as polyethylene glycol, vegetable oils, hydrogenated naphthalene, and the like.

Композиції для назального введення можуть бути твердими і можуть містити допоміжні речовини, наприклад, лактозу або декстран, або можуть являти собою водні або масляні розчини для використання в формі назальних крапель або дозованих спреїв. Для букального введення типові допоміжні речовини включають цукор, стеарат кальцію, стеарат магнію, прежелатинізований крохмаль і їм подібні.Compositions for nasal administration can be solid and can contain excipients, for example, lactose or dextran, or can be aqueous or oily solutions for use in the form of nasal drops or metered sprays. For buccal administration, typical excipients include sugar, calcium stearate, magnesium stearate, pregelatinized starch, and the like.

Композиції, придатні для перорального введення, можуть містити один або більше фізіологічно сумісних носіїв і/або допоміжні речовини, і можуть бути в твердій або рідкій формі.Compositions suitable for oral administration may contain one or more physiologically compatible carriers and/or excipients, and may be in solid or liquid form.

Таблетки і капсули можуть бути приготовані зі зв'язувальними агентами, наприклад, сиропом, гуміарабіком, желатином, сорбітом, трагакантом або полівінілпіролідоном; наповнювачами, такими, як лактоза, сахароза, кукурудзяний крохмаль, фосфат кальцію, сорбіт або гліцин; змащувальними речовинами, такими, як стеарат магнію, тальк, поліетиленгліколь або діоксид кремнію; і поверхнево-активними речовинами, такими, як лаурилсульфат натрію. Рідкі композиції можуть містити звичайні добавки, такі, як суспендувальні агенти, наприклад, сироп сорбіту, метилцелюлозу, сироп цукру, желатин, карбоксиметилцелюлозу або харчові жири; емульгатори, такі, як лецитин або гуміарабік; рослинні олії, такі, як мигдалева олія, кокосова олія, масло печінки тріски або арахісова олія; консерванти, такі, як бутильований гідроксіанізолTablets and capsules can be prepared with binding agents, for example, syrup, gum arabic, gelatin, sorbitol, tragacanth or polyvinylpyrrolidone; fillers such as lactose, sucrose, corn starch, calcium phosphate, sorbitol or glycine; lubricants such as magnesium stearate, talc, polyethylene glycol or silicon dioxide; and surfactants such as sodium lauryl sulfate. Liquid compositions may contain conventional additives, such as suspending agents, for example, sorbitol syrup, methylcellulose, sugar syrup, gelatin, carboxymethylcellulose or edible fats; emulsifiers such as lecithin or gum arabic; vegetable oils such as almond oil, coconut oil, cod liver oil or peanut oil; preservatives such as butylated hydroxyanisole

(ВНА) і бутильований гідрокситолуол (ВНТ). Рідкі композиції можуть бути вміщені, наприклад, в желатинові капсули, щоб надати одиничну дозовану лікарську форму.(BNA) and butylated hydroxytoluene (BNT). Liquid compositions can be placed, for example, in gelatin capsules to provide a unit dosage form.

Тверді пероральні дозовані форми включають таблетки, капсули з твердими двостулковими оболонками і м'які еластичні желатинові (ЕС) капсули.Solid oral dosage forms include tablets, hard bivalve capsules, and soft elastic gelatin (ES) capsules.

Сухий склад оболонки звичайно містить приблизно 40-60 95-у масову концентрацію желатину, приблизно 20-30 95-у концентрацію пластифікатору (таких, як гліцерин, сорбіт або пропіленгліколь) і приблизно 30-40 95-у концентрацію води. Інші матеріали, такі, як консерванти, барвники, замутнювачі і ароматизатори також можуть бути присутнім. Рідкий наповнювальний матеріал включає твердий лікарський засіб, який був розчинений, солюбілізований або диспергований (із суспендувальними агентами, такими, як бджолиний віск, гідрогенізована рицинова олія або поліетиленгліколь 4000), або рідкий лікарський засіб у середовищах або комбінаціях середовищ, таких, як мінеральне масло, рослинні олії, тригліцериди, гліколі, поліоли і поверхнево-активні речовини.The dry composition of the shell usually contains about 40-60 95% by weight of gelatin, about 20-30% by weight of a plasticizer (such as glycerin, sorbitol, or propylene glycol) and about 30-40% by weight of water. Other materials such as preservatives, dyes, opacifiers and flavorings may also be present. A liquid bulking material includes a solid drug that has been dissolved, solubilized, or dispersed (with suspending agents such as beeswax, hydrogenated castor oil, or polyethylene glycol 4000), or a liquid drug in media or combinations of media such as mineral oil, vegetable oils, triglycerides, glycols, polyols and surfactants.

Відповідно, сполуку формули (І) вводять місцево в легені. Тому автори винаходу надали, відповідно до винаходу, фармацевтичну композицію, яка містить Сполуку (І) за винаходом, необов'язково в поєднанні з одним або більше прийнятними для місцевого застосування розріджувачами або носіями. Місцеве введення в легені може бути досягнуте шляхом використання аерозольного складу. Аерозольні склади звичайно містять активний інгредієнт, суспендований або розчинений у відповідному аерозольному пропеленті, такому, як хлорфторвуглець (СЕС) або гідрофторвуглець (НЕС). Придатні СЕС-пропеленти включають трихлормонофторметан (пропелент 11), дихлоротетрафторметан (пропелент 114) і дихлордифторметан (пропелент 12). Придатні НЕС-пропеленти включають тетрафторетан (НЕС-134а) і гептафторпропан (НЕС-227). Пропелент звичайно містить 40-99,5 95, наприклад, 40-90 95 за масою від загальної композиції для інгаляції. Склад може містити наповнювачі, включаючи співрозчинники (наприклад, етанол) і поверхнево-активні речовини (наприклад, лецитин, сорбітантріолеат і тому подібні). Аерозольні склади упаковані в балони, і придатна доза доставляється за допомогою дозуючого клапана (наприклад, запропонованим Везрак,Accordingly, the compound of formula (I) is injected locally into the lungs. Therefore, the inventors have provided, according to the invention, a pharmaceutical composition containing Compound (I) according to the invention, optionally in combination with one or more acceptable for local use diluents or carriers. Local administration to the lungs can be achieved by using an aerosol formulation. Aerosol formulations usually contain the active ingredient suspended or dissolved in a suitable aerosol propellant such as chlorofluorocarbon (CFC) or hydrofluorocarbon (HFC). Suitable SES propellants include trichloromonofluoromethane (propellant 11), dichlorotetrafluoromethane (propellant 114), and dichlorodifluoromethane (propellant 12). Suitable NES propellants include tetrafluoroethane (NES-134a) and heptafluoropropane (NES-227). The propellant usually contains 40-99.5 95, for example, 40-90 95 by weight of the total composition for inhalation. The composition may contain excipients, including co-solvents (eg, ethanol) and surfactants (eg, lecithin, sorbitan trioleate, and the like). Aerosol formulations are packaged in canisters, and the appropriate dose is delivered using a metering valve (e.g., proposed by Vezrak,

Маїоі5 або ЗМ).Maioi5 or ZM).

Місцеве введення в легені може бути також досягнуте шляхом застосування складу не під тиском, такого, як водний розчин або суспензія. Його можна вводити з допомогою небулайзера.Local administration to the lungs can also be achieved by using a non-pressurized formulation such as an aqueous solution or suspension. It can be administered using a nebulizer.

Небулайзери можуть бути портативними або непортативними. Місцеве введення в легені також може бути досягнуте шляхом застосування сухого порошкового складу. Сухий порошковий склад буде містити сполуку за винаходом у тонкоподрібненій формі, як правило, з мас- медіанним аеродинамічним діаметром (ММАД) 1-10 мкм. Склад звичайно містить прийнятний для місцевого введення розріджувач, такий, як лактоза, звичайно більшого розміру частинок, наприклад, ММАД 50 мкм або більше, наприклад, 100 мкм або більше. Альтернативним прийнятним для місцевого введення розріджувачем є маніт. Приклади систем доставки сухого порошку включають 5РІМНАГЕК, БІЗКНАГЕК, ТОКВОНАГЕК, РІЗКО і СИПІСКНАГЕК. Інші приклади систем сухих порошкових інгаляційних систем включають ЕСІІР5Е, ВОТАНАГЕВ,Nebulizers can be portable or non-portable. Local administration to the lungs can also be achieved by using a dry powder formulation. The dry powder composition will contain the compound according to the invention in a finely divided form, as a rule, with a mass median aerodynamic diameter (MMAD) of 1-10 μm. The composition usually contains an acceptable topical diluent, such as lactose, usually of a larger particle size, for example, MMAD of 50 μm or more, for example, 100 μm or more. An alternative diluent acceptable for topical administration is mannitol. Examples of dry powder delivery systems include 5RIMNAGEK, BIZKNAGEK, TOKVONAGEK, RIZKO, and SIPISKNAGEK. Other examples of dry powder inhalation systems include ESIIR5E, VOTANAGEV,

НАМОІНАГ ЕВ, АЕВОГІЗЕВ, СУСІ ОНАГ ЕВ, ВЕЕЯНАГЕВ/МЕОНАГЕРН, РІ ОМУСАРБ, ТУМІМСАРБ,NAMOINAG EV, AEVOGIZEV, SUSI ONAG EV, VEEYANAGEV/MEONAGERN, RI OMUSARB, TUMIMSARB,

Х-САРБ5, ТОВВОБРІМ, ЕГРЕМНАГЕВН, ТОАВИОНАЇГ ЕВ, МІАТНАГЕВ, ТУМІЗТНАГЕН, МОМОІ І2ЕВ,Kh-SARB5, TOVVOBRIM, EGREMNAGEVN, TOAVIONAIG EV, MIATNAGEV, TUMIZTNAGEN, MOMOI I2EV,

ЗКУЕНАЇ ЕВ, сухий порошковий інгалятор ОВІЄЇ, МІСВОБОБЕ, АССИОНАГ ЕВ, РИЇМІМАЇ,ZKUENAI EV, dry powder inhaler OVIEI, MISVOBOBE, ASSIONAG EV, RYIMIMAI,

ЕАБУНАГЕРН, ОГТРАНАГЕРН, ТАІРОМ, РОЇ МОЕТ, ОММІНАГ ЕВ, СУВОНАГЕРВ, ТАРЕВ, СОМІХ,EABUNAGERN, OGTRANAGERN, TAIROM, ROI MOET, OMMINAG EV, SUVONAGERV, TAREV, SOMYH,

ХСЕЇГОМАЇЕ і РЕОНАГ ЕК.HSEIGHOMAIE and REONAG EK.

Один аспект винаходу стосується сухого порошкового фармацевтичного складу для інгаляції, який містить: () Сполуку (І) ви гу. "Ша вOne aspect of the invention relates to a dry powder pharmaceutical composition for inhalation, which contains: () Compound (I) of the invention. "Sha v

Н нн шоN nn sho

Ме Сполука (|, яка являє собою 1-(З-трет-бутил-1-п-толіл-1Н-піразол-5-іл)-3-(4-(2-(феніламіно)піримідин-4- ілокси)нафталін-1-ілусечовину або її фармацевтично прийнятну сіль, включаючи всі її стереоізомери і таутомери, в конкретній формі (наприклад, тверда кристалічна Форма В) у ролі активного інгредієнта; (ії) мікрочастинки лактози у ролі носія; і (ії) мікрочастинки металевої солі стеаринової кислоти, такої, як магнію стеарат.Me Compound (|, which is 1-(3-tert-butyl-1-p-tolyl-1H-pyrazol-5-yl)-3-(4-(2-(phenylamino)pyrimidin-4-yloxy)naphthalene -1-ilurea or a pharmaceutically acceptable salt thereof, including all stereoisomers and tautomers thereof, in a specific form (e.g., solid crystalline Form B) as the active ingredient; (ii) lactose microparticles as a carrier; and (ii) stearic metal salt microparticles acid such as magnesium stearate.

Винахід також надає інгаляційний пристрій, який містить одну або більше доз вказаного складу.The invention also provides an inhalation device that contains one or more doses of the specified composition.

Сполука формули (І) має терапевтичну активність. У ще одному аспекті даний винахід надає сполуку за винаходом для застосування як лікарського засобу. Таким чином, у ще одному аспекті даний винахід надає сполуку, як описано в даному документі, для застосування в лікуванні одного або більше із вказаних вище станів.The compound of formula (I) has therapeutic activity. In yet another aspect, the present invention provides a compound of the invention for use as a medicament. Thus, in yet another aspect, the present invention provides a compound as described herein for use in the treatment of one or more of the above conditions.

У ще одному аспекті даний винахід надає застосування Сполуки (І), як описаний в даному документі, для виготовлення лікарського засобу для лікування одного або більше із вказаних вище станів.In yet another aspect, the present invention provides the use of Compound (I) as described herein for the manufacture of a medicament for the treatment of one or more of the above conditions.

У ще одному аспекті даний винахід надає спосіб лікування одного або більше із вказаних вище станів, який включає введення суб'єкту ефективної кількості Сполуки (І) за даним винаходом або фармацевтичної композиції, що містить цю сполуку.In yet another aspect, the present invention provides a method of treating one or more of the above conditions, which comprises administering to a subject an effective amount of a Compound (I) of the present invention or a pharmaceutical composition containing the compound.

Слово "лікування" призначене для охоплення як профілактики, так і терапевтичного лікування.The word "treatment" is intended to cover both prevention and therapeutic treatment.

Сполука (І) за даним винаходом також може бути введена в поєднанні з одним або більше іншими активними інгредієнтами, наприклад, активними інгредієнтами, придатними для лікування вказаних вище станів. Наприклад, можливі комбінації для лікування порушень дихальних функцій включають комбінації зі стероїдами (наприклад, будезонідом, беклометазону дипропіонатом, флутиказону пропіонатом, мометазону фуроатом, флутиказону фуроатом), бета-агоністами (наприклад, тербуталіном, сальбутамолом, сальметеролом, формотеролом) іМабо ксантинами (наприклад, теофіліном). Інші придатні активні інгредієнти включають антихолінергічні засоби, такі, як тіотропій, і противірусні агенти, такі, як, але не обмежуючись ними, занамівір або озельтамівір, наприклад, у вигляді фосфату. Інші противірусні засоби включають перамівір і ланінамівір. Інші можливі комбінації для лікування порушень дихальних функцій включають комбінації зі стероїдами, такими, як флунізолід, циклезонід і тріамцінолон;Compound (I) according to the present invention can also be administered in combination with one or more other active ingredients, for example, active ingredients suitable for the treatment of the conditions indicated above. For example, possible combinations for the treatment of respiratory disorders include combinations with steroids (eg, budesonide, beclomethasone dipropionate, fluticasone propionate, mometasone furoate, fluticasone furoate), beta-agonists (eg, terbutaline, salbutamol, salmeterol, formoterol), and maboxanthines (eg, theophylline). Other suitable active ingredients include anticholinergic agents such as tiotropium and antiviral agents such as, but not limited to, zanamivir or oseltamivir, for example in the form of phosphate. Other antivirals include peramivir and laninamivir. Other possible combinations for the treatment of respiratory disorders include combinations with steroids such as flunisolide, ciclesonide, and triamcinolone;

Зо бета-агоністами, такими, як бамбутерол, левалбутерол, кленбутерол, фенотерол, броксатерол, індакатерол, репротерол, прокатерол і вілантерол; мускариновими антагоністами (наприклад, іпратропієм, тіотропієм, окситропієм, глікопіронієм, глікопіролатом, аклідинієм, троспієм) і антагоністами лейкотрієнів (наприклад, зафірлукастом, пранлукастом, зілеутоном, монтелукастом). Потрібно розуміти, що будь-який із вищезазначених активних інгредієнтів може бути використаний у формі фармацевтично прийнятної солі.With beta-agonists such as bambuterol, levalbuterol, clenbuterol, fenoterol, broxaterol, indacaterol, reproterol, procaterol and vilanterol; muscarinic antagonists (for example, ipratropium, tiotropium, oxitropium, glycopyrronium, glycopyrrolate, aclidinium, trospium) and leukotriene antagonists (for example, zafirlukast, pranlukast, zileuton, montelukast). It should be understood that any of the above active ingredients may be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt.

В одному варіанті здійснення сполука формули (І) й інший активний |інгредієнт(и) скомбіновані в одному і тому ж фармацевтичному складі. В іншому варіанті здійснення інший активний інгредієнт(и) вводять в один або більше окремий фармацевтичний склад.In one embodiment, the compound of formula (I) and the other active ingredient(s) are combined in the same pharmaceutical composition. In another embodiment, the other active ingredient(s) is incorporated into one or more separate pharmaceutical formulations.

Таким чином, ще один аспект даного винаходу надає комбінований продукт, який містить: (А) сполуку за даним винаходом (тобто сполуку формули (І), як визначено вище, або її фармацевтично прийнятну сіль); і (В) інший терапевтичний засіб, в якому кожний із компонентів (А) і (В) приготовляється в суміші з фармацевтично прийнятним розріджувачем або носієм.Thus, another aspect of the present invention provides a combination product comprising: (A) a compound of the present invention (ie, a compound of formula (I) as defined above, or a pharmaceutically acceptable salt thereof); and (B) another therapeutic agent in which each of components (A) and (B) is prepared in admixture with a pharmaceutically acceptable diluent or carrier.

У цьому аспекті даного винаходу комбінований продукт може являти собою як одиночний (комбінація) фармацевтичний склад або набір-із-компонентів.In this aspect of the present invention, the combined product may be a single (combination) pharmaceutical formulation or a set-of-components.

Таким чином, цей аспект даного винаходу охоплює фармацевтичний склад, який містить сполуку за даним винаходом і інший терапевтичний засіб у суміші з фармацевтично прийнятним розріджувачем або носієм (цей склад далі в даному документі згадується як "комбінований препарат").Thus, this aspect of the present invention encompasses a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention and another therapeutic agent in admixture with a pharmaceutically acceptable diluent or carrier (this composition is hereinafter referred to as a "combination preparation").

Він також включає в себе набір компонентів, які містять компоненти: () фармацевтичний склад, який містить сполуку за даним винаходом в суміші з фармацевтично прийнятним розріджувачем або носієм, і (і) фармацевтичний склад, який містить інший терапевтичний засіб, в суміші з фармацевтично прийнятним розріджувачем або носієм, де кожний із компонентів (ії) та (і) наданий у формі, придатній для введення в поєднанні з іншим.It also includes a set of components comprising the components: (a) a pharmaceutical composition comprising a compound of the present invention in admixture with a pharmaceutically acceptable diluent or carrier, and (i) a pharmaceutical composition comprising another therapeutic agent in admixture with a pharmaceutically acceptable diluent or carrier, wherein each of component (ii) and (i) is provided in a form suitable for administration in combination with the other.

Компонент (ї) з набору компонентів являє собою, таким чином, компонент (А), вказаний вище, в суміші з фармацевтично прийнятним розріджувачем або носієм. Аналогічним чином,Component (s) of the set of components is, thus, component (A), specified above, in a mixture with a pharmaceutically acceptable diluent or carrier. Similarly,

компонент (її) являє собою компонент (В), вказаний вище, в суміші з фармацевтично прийнятним розріджувачем або носієм.component (its) is component (B), specified above, in a mixture with a pharmaceutically acceptable diluent or carrier.

Інший терапевтичний засіб (тобто компонент (В), вказаний вище) може являти собою, наприклад, будь-який з активних інгредієнтів, вказаних вище, для лікування порушень дихальних функцій. Дані, представлені нижче, відносно антивірусних властивостей сполуки формули (І), свідчать про те, що інші противірусні терапії в поєднанні зі сполукою формули (1), були б корисні при лікуванні або профілактиці вірусно-індукованих загострень (наприклад, респіраторних вірусних інфекцій), від яких страждають пацієнти із захворюваннями дихальних шляхів, такими, як ХОХЛ і/або астма і/або одним або більше показаннями, перерахованими вище. Таким чином, в одному аспекті надається застосування Сполуки (І) в поєднанні з антивірусною терапією, такою як, але не обмежуючись ними, занамівір або озельтамівір (наприклад, озельтамівіру фосфат) при лікуванні або профілактиці респіраторних вірусних інфекцій, від яких страждають пацієнти із захворюваннями дихальних шляхів, такими, як ХОХЛ іл або астма.Another therapeutic agent (ie, component (B) above) may be, for example, any of the active ingredients above for the treatment of respiratory disorders. The data presented below regarding the antiviral properties of a compound of formula (I) suggest that other antiviral therapies in combination with a compound of formula (1) would be useful in the treatment or prevention of virally induced exacerbations (eg, respiratory viral infections). suffering from patients with respiratory diseases such as COPD and/or asthma and/or one or more of the indications listed above. Thus, in one aspect, there is provided the use of Compound (I) in combination with antiviral therapy such as, but not limited to, zanamivir or oseltamivir (eg, oseltamivir phosphate) in the treatment or prevention of respiratory viral infections in patients with respiratory diseases. pathways such as COPD or asthma.

Автори даного винаходу також вважають, що інші противірусні терапії в поєднанні зіThe authors of this invention also believe that other antiviral therapies in combination with

Сполукою (І) могли би бути корисні для лікування або профілактики вірусно-індукованих загострень (наприклад, респіраторних вірусних інфекцій) у пацієнтів із хронічними станами, відмінними від захворювань дихальних шляхів, наприклад, такими станами, як застійна серцева недостатність, діабет, рак, або станами, від яких страждають імуносупресовані пацієнти, наприклад, після трансплантації органа. Таким чином, в іншому аспекті надане застосування сполуки за винаходом у комбінації з противірусною терапією, такою, як, але не обмежуючись ними, занамівір або озельтамівір (наприклад, озельтамівіру фосфат), при лікуванні або профілактиці респіраторних вірусних інфекцій у хворих із хронічними станами, такими, як застійна серцева недостатність, діабет, рак, або станами, від яких страждають імуносупресовані пацієнти, наприклад, після трансплантації органа.Compound (I) could be useful in the treatment or prevention of virally induced exacerbations (eg, respiratory viral infections) in patients with chronic conditions other than respiratory tract diseases, for example, conditions such as congestive heart failure, diabetes, cancer, or conditions from which immunosuppressed patients suffer, for example, after organ transplantation. Thus, in another aspect, there is provided the use of a compound of the invention in combination with antiviral therapy, such as, but not limited to, zanamivir or oseltamivir (eg, oseltamivir phosphate), in the treatment or prevention of respiratory viral infections in patients with chronic conditions such as , such as congestive heart failure, diabetes, cancer, or conditions that immunosuppressed patients suffer from, such as after organ transplantation.

ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНИЙ РОЗДІЛEXPERIMENTAL SECTION

Скорочення, які використовуються в даному описі, визначені нижче (Таблиця 1). Будь-які невизначені абревіатури призначені для передачі їх загальноприйнятого значення.Abbreviations used in this specification are defined below (Table 1). Any undefined abbreviations are intended to convey their generally accepted meaning.

Таблиця 1Table 1

Скорочення ад 77777111 |водний////////777777711111111111111111111111сСсСС до Їдублег//////1111111111111111111111111111111111111СAbbreviation of ad 77777111 |water///////777777711111111111111111111111сСсСС to Yidubleg//////11111111111111111111111111111111111111С

Коо)Coo)

Продовження таблиці 1Continuation of table 1

СкороченняAbbreviation

ЯМР 1 ядерниймагнітнийрезонанс(спектроскопія)дГ/ 1 фосфат-буферизований фізіологічний розчин ж. 10 Їквартвет7///////11111111111111111111111111111111сССNMR 1 nuclear magnetic resonance (spectroscopy) dH/ 1 phosphate-buffered saline w. 10 Yikvartvet7///////111111111111111111111111111111111сССС

Загальні методикиGeneral methods

Всі вихідні речовини і розчинники були отримані або з комерційних джерел, або приготовані відповідно до літератури, що цитується. Якщо не вказане інше, всі реакційні суміші перемішували. Органічні розчини звичайно сушили над безводним сульфатом магнію.All starting materials and solvents were either obtained from commercial sources or prepared according to the literature cited. Unless otherwise stated, all reaction mixtures were stirred. Organic solutions were usually dried over anhydrous magnesium sulfate.

Гідрування проводили в проточному реакторі Тпаіез Н-сире при вказаних умовах. Колонкову хроматографію проводили на заздалегідь наповнених силікагелем (230-400 тези, 40-63 мкм) картриджах із застосуванням вказаної кількості. ЗСХ був придбаний у Зиреїсо і оброблений 1М- ю соляною кислотою перед використанням. Якщо не вказане інше, реакційну суміш для очищення спочатку розбавляли Меон і підкисляли декількома краплями АсСОН. Цей розчин завантажували безпосередньо в 5СХ і промивали МеонН. Бажаний продукт потім елюювали промиванням 1 95-м МНз в Ммеон.Hydrogenation was carried out in the flow reactor Tpayez H-crude under the specified conditions. Column chromatography was performed on pre-filled silica gel (230-400 theses, 40-63 μm) cartridges using the indicated amount. ZSC was purchased from Zireiso and treated with 1 M hydrochloric acid before use. Unless otherwise specified, the reaction mixture for purification was first diluted with Meon and acidified with a few drops of AsSO. This solution was loaded directly into 5CX and washed with MeonN. The desired product was then eluted by washing with 1 95 MH in Mmeon.

Препаративна зворотно-фазова високоефективна рідинна хроматографія: колонка Адієепі зЗсаїаг С18, 5 мкм (21,2х50 мм), швидкість потоку 28 мл/хв., елюйована градієнтом Нго-месм, який містить 0,195 по об'єму мурашиної кислоти, протягом 10 хв., застосовуючи УФф- детектування при 215 і 254 нм. Інформація про градієнт: 0,0-0,5 хв.; 95 95 НгО-5 95 Месм; 0,5-7,0 хв.; змінили з 95 95 НгО-5 95 Месм до 5 95 НгО-95 55 Месм; 7,0-7,9 хв.; тримали при 5 95 НгО- 95 у65 Месм; 7,9-8,0 хв.; повернули до 95 95 НгО-5 95 Месм; 8,0-10,0 хв.; тримали при 95 95 НгО- 5 5 мес.Preparative reverse-phase high-performance liquid chromatography: Adieepi zZsaiag C18 column, 5 μm (21.2x50 mm), flow rate 28 ml/min., eluted with a Ngo-mesm gradient, which contains 0.195 by volume of formic acid, for 10 min. , using UV detection at 215 and 254 nm. Information about the gradient: 0.0-0.5 min.; 95 95 NgO-5 95 Mesm; 0.5-7.0 min.; changed from 95 95 NgO-5 95 Mesm to 5 95 NgO-95 55 Mesm; 7.0-7.9 min.; kept at 5 95 NgO- 95 u65 Mesm; 7.9-8.0 min.; returned to 95 95 NgO-5 95 Mesm; 8.0-10.0 min.; kept at 95 95 NgO-5 for 5 months.

Аналітичні методиAnalytical methods

Зворотно-фазова високоефективна рідинна хроматографія: (Спосіб 1): колонка Адійепі зЗсаїіаг С18, 5 мкм (4,6х50 мм) або У/асег5 Хбгідде С18, 5 мкм (4,6х50 мм), швидкість потоку 2,5 мл/хв., елюйована градієнтом Н2гО-Месм, що містить 0,195 по об'єму мурашиної кислоти (Спосіб 1 кислотний) або МНз (Спосіб 1 основний) протягом 7 хв., застосовуючи Уф- детектування при 215 і 254 нм. Інформація про градієнт: 0,0-0,1 хв., 95 95 НгО-5 95 Месм; 0,1-5,0 хв., змінили з 95 95 НгО-5 95 Месм до 5 95 НгО-95 55 МесмМ; 5,0-5,5 хв., тримали при 5 95 НгО- 95 95 Месм; 5,5-5,6 хв., тримали при 5 95 НгО-95 95 МесМм, швидкість потоку збільшили до 3,5 мл/хв.; 5,6-6,6 хв., тримали при 5 95 НгО-95 956 Месм, швидкість потоку 3,5 мл/хв.; 6,6-6,75 хв., повернули до 95 95 НгО-5 956 МесмМм, швидкість потоку 3,5 мл/хв.; 6,75-6,9 хв., тримали при 95 95Reverse-phase high-performance liquid chromatography: (Method 1): column Adiyepi zZsaiiiag C18, 5 μm (4.6x50 mm) or U/aseg5 Khbgidde C18, 5 μm (4.6x50 mm), flow rate 2.5 ml/min. , eluted with a Н2гО-Mesm gradient containing 0.195 by volume of formic acid (Method 1 acidic) or MHz (Method 1 basic) for 7 min., using UV detection at 215 and 254 nm. Information about the gradient: 0.0-0.1 min., 95 95 NgO-5 95 Mesm; 0.1-5.0 min., changed from 95 95 NgO-5 95 Mesm to 5 95 NgO-95 55 MesmM; 5.0-5.5 min., kept at 5 95 NgO- 95 95 Mesm; 5.5-5.6 min., kept at 5 95 NgO-95 95 MesMm, the flow rate was increased to 3.5 ml/min.; 5.6-6.6 min., kept at 5 95 NgO-95 956 Mesm, flow rate 3.5 ml/min.; 6.6-6.75 min., returned to 95 95 NgO-5 956 MesmMm, flow rate 3.5 ml/min.; 6.75-6.9 min., kept at 95 95

Нго-5956 Месм, швидкість потоку 3,5 мл/хв.; 6,9-7,0 хв., тримали при 95 95 Н2гО-5 95 Месм, швидкість потоку зменшили до 2,5 мл/хв.Ngo-5956 Mesm, flow rate 3.5 ml/min.; 6.9-7.0 min., kept at 95 95 H2gO-5 95 Mesm, the flow rate was reduced to 2.5 ml/min.

Зворотно-фазова високоефективна рідинна хроматографія: (Спосіб 2): колонка Адійепі оЗсаіаг С18, 1,8 мкм (4,6х30 мм) при 40 "С; швидкість потоку 2,5-4,5 мл/хв., елюйована градієнтом Н2гО-Месм, що містить 0,195 по об'єму мурашиної кислоти протягом 4 хв., застосовуючи УФ-детектування при 254 нм. Інформація про градієнт: 0-3,00 хв., змінили з 95 95Reverse-phase high-performance liquid chromatography: (Method 2): Adiyepi oZsaiag C18 column, 1.8 μm (4.6x30 mm) at 40 "C; flow rate 2.5-4.5 ml/min., eluted with a gradient of H2gO- Mesm containing 0.195 v/v formic acid for 4 min using UV detection at 254 nm Gradient information: 0-3.00 min changed from 95 95

НгОо-5956 МесмМм до 595 НгО-9595 Месм; 3,00-3,01 хв., тримали при 595 НгО-95 95 Месм, швидкість потоку збільшили до 4,5 мл/хв.; 3,01-3,50 хв., тримали при 5 95 НгО-95 95 Месм; 3,50- 3,60 хв., повернули до 95 95 НгО-5 96 Месм, швидкість потоку зменшили до 3,5 мл/хв.; 3,60-3,90 хв., тримали при 95595 Н2гО-595 Месм; 3,90-4,00 хв., тримали при 9595 Н2О-595 Месм, швидкість потоку зменшили до 2,5 мл/хв.NgOo-5956 MesmMm to 595 NgO-9595 Mesm; 3.00-3.01 min., kept at 595 NgO-95 95 Mesm, the flow rate was increased to 4.5 ml/min.; 3.01-3.50 min., kept at 5 95 NgO-95 95 Mesm; 3.50-3.60 min., returned to 95 95 NgO-5 96 Mesm, flow rate reduced to 3.5 ml/min.; 3.60-3.90 min., held at 95595 H2gO-595 Mesm; 3.90-4.00 min., kept at 9595 H2O-595 Mesm, the flow rate was reduced to 2.5 ml/min.

ІН ЯМР-спектроскопія: Спектри були отримані на спектрометрі ВгиКег Амапсе ПІ на частоті 400 МГц, застосовуючи залишковий недейтерований розчинник як зразок.IN NMR spectroscopy: Spectra were obtained on a VgyKeg Amapse PI spectrometer at a frequency of 400 MHz, using residual non-deuterated solvent as a sample.

Динамічна парова сорбція: Графіки були отримані із застосуванням Систем ПоверхневихDynamic vapor sorption: Graphs were obtained using Surface Systems

Вимірювань динамічної парової сорбції моделі ОМ5-1, використовуючи близько 10 мг зразка.Measurements of dynamic vapor sorption of the OM5-1 model, using about 10 mg of the sample.

Зміну маси записали з урахуванням вологості повітря при 25 "С і визначили, застосовуючи наступні параметри: сушка: 60 хв. під сухим азотом; рівновага: 60 хв./крок; інтервал даних: 0,05 95 або 2,0 хв. Точки вимірювання відносної вологості (КН 95| були наступними: перший набір: 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20,10, 5; другий набір: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10,5, 0.The mass change was recorded taking into account the air humidity at 25 "C and determined using the following parameters: drying: 60 min. under dry nitrogen; equilibrium: 60 min./step; data interval: 0.05 95 or 2.0 min. Measurement points of relative humidity (KH 95| were as follows: the first set: 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10, 5; second set: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20, 10.5, 0.

Порошкова рентгенівська дифракція: Графіки були отримані на дифрактометрі РАМаїуїіса! (Рпйїрх) ХРепРКО МРО, оснащеному Си ГЕЕ рентгенівською трубкою (45 кВ, 40 мА; Брегг-Powder X-ray Diffraction: Graphs were obtained on a RAMaiuis diffractometer! (Rpyirh) KhRepRKO MRO, equipped with Si GEE X-ray tube (45 kV, 40 mA; Bragg-

Брентано; обертальна установка), і були отримані із застосуванням Си Ка випромінювання при наступних умовах вимірювання: режим сканування: безперервний; діапазон сканування: від З до 507 28; розмір кроку: 0,02"/крок; час підрахунку: 30 сек./крок; час повороту обертача: 1 сек.; шлях падіння променя: програмна розбіжність щілини: 15 мм; щілина Солера: 0,04 рад; променевий шаблон: 15 мм; проміжна щілина: 1"; ножовий промінь: 4; дифрагований шлях променя: довгий проміжний щит: ж; щілина Солера: 0,04 рад; Мі фільтр: ж; детектор: Х'Сеїегафог. Зразки готували шляхом нанесення на тримач зразка з нульовим фоном.Brentano; rotary installation), and were obtained using SyKa radiation under the following measurement conditions: scanning mode: continuous; scanning range: from Z to 507 28; step size: 0.02"/step; count time: 30 sec/step; rotator rotation time: 1 sec; beam path: programmed slit divergence: 15 mm; Soler slit: 0.04 rad; beam pattern: 15 mm; intermediate gap: 1"; knife beam: 4; diffracted beam path: long intermediate shield: f; Soler slit: 0.04 rad; Mi filter: well; detector: H'Seiegaphog. Samples were prepared by plating on a sample holder with zero background.

Інфрачервона спектроскопія: Мікро-затухаюче загальне відображення (тісгоАТК) було використане і зразок аналізували, застосовуючи придатне тісгоАТК-комплектуюче і наступні умови вимірювання: апарат: Тпегто Мехи5 670 ЕТІК спектрометр; кількість сканувань: 32; дозвіл: 1 см"; діапазон довжин хвиль: 4000-4000 см'; детектор: ЮТО5 з вікнами з КВ"Г; променерозщіплювач: Се на КВг; що мікро-АТА-комплектуюче: Наїтіск зріїй Реа з кристалом 51.Infrared spectroscopy: Micro-attenuated total reflection (tsgoATK) was used and the sample was analyzed using a suitable tisgoATK kit and the following measurement conditions: apparatus: Tpegto Mekhy5 670 ETIK spectrometer; number of scans: 32; resolution: 1 cm"; wavelength range: 4000-4000 cm'; detector: YuTO5 with windows from KV"H; beam splitter: Se per KVh; that micro-ATA-completing: Naitisk zriyy Rhea with crystal 51.

Диференціальна сканувальна калориметрія: Дані були зібрані на ТА-Іпвігитепіїє 01000Differential scanning calorimetry: Data were collected at TA-Ipvigitepije 01000

МТО5С, обладнаному блоком охолоджування КС5. Як правило, З мг кожної сполуки в стандартній алюмінієвій ТА-Іпбзігитепі кюветі для зразків нагрівали при 10 "С/хв. від 25 С до 300 "С. Продування азотом при 50 мл/хв. підтримували над зразком.MTO5S, equipped with a KS5 cooling unit. As a rule, 3 mg of each compound in a standard aluminum TA-Ipbzigite sample cuvette was heated at 10 °C/min from 25 °C to 300 °C. Blowing with nitrogen at 50 ml/min. supported over the sample.

Термогравіметричний аналіз: Дані були зібрані на термогравіметрі ТА-Іпбігитепів 0500. Як правило, 10 мг кожного зразка переносили в заздалегідь зважену алюмінієву кювету і нагрівали при 20 "С/хв. від навколишньої температури до 300 "С або «80 Імас./мас. 95|, якщо не вказано інше.Thermogravimetric analysis: Data were collected on a TA-Ipbigitepov 0500 thermogravimeter. Typically, 10 mg of each sample was transferred to a pre-weighed aluminum cuvette and heated at 20 "C/min from ambient temperature to 300 "C or "80 Imas/wt. 95|, unless otherwise specified.

Хімічна стабільність з допомогою ВЕРХ: Аналізи були виконані на колонці У/аїег5 ХбгіддеChemical stability by HPLC: Analyzes were performed on a U/aieg5 Xbgidde column

С18 (3,0х150 мм; 3,5 мкм), застосовуючи наступні умови роботи: температура колонки: 40 "С; температура зразка: 5 "С; швидкість потоку: 0,45 мл/хв.; об'єм вприску: 7 мкл; УФ-детектування при 260 нм; склад рухомої фази, який містить фазу А: 10 мМ ацетат амонію «- 0,1 95 за об'ємом трифтороцтової кислоти у воді і фазу В: ацетонітріл, застосовуючи градієнт, визначений параметрами нижче (Таблиця 2).C18 (3.0x150 mm; 3.5 μm), applying the following operating conditions: column temperature: 40 "C; sample temperature: 5 "C; flow rate: 0.45 ml/min.; injection volume: 7 μl; UV detection at 260 nm; the composition of the mobile phase, which contains phase A: 10 mM ammonium acetate "- 0.1 95 by volume of trifluoroacetic acid in water and phase B: acetonitrile, using a gradient defined by the parameters below (Table 2).

Таблиця 2Table 2

Умови градієнта для вивчення хімічної стабільності з допомогою ВЕРХ до Складу при часі пробігу (хв.)Gradient conditions for the study of chemical stability with the help of HPLC to the composition at the run time (min.)

Елюент 0 20 25 26 32Eluent 0 20 25 26 32

ФазаА 70 0 0 70 70PhaseA 70 0 0 70 70

Фаза В 30 100 100 20) 20)Phase B 30 100 100 20) 20)

Експериментальні методи для біологічного випробуванняExperimental methods for biological testing

Аналізи інгібування ферментівEnzyme inhibition assays

Зв'язувальні активності ферменту кінази зі сполуками, розкритими в даному документі, були визначені із застосуванням патентованого аналізу, який вимірює спрямоване на активний сайт конкурентне зв'язування з імобілізованим лігандом (Рабіап, МА. еї аї., Майиге Віоїесппої., 2005, 23:329-336). Ці аналізи були проведені Оізсомегх (Топпепу Атбрії; Зап Оіедо, СА). Значення Ка (значення константи дисоціації) розраховували як індекс спорідненості цих сполук до кожної кінази.The binding activities of the kinase enzyme to the compounds disclosed herein were determined using a proprietary assay that measures active site-directed competitive binding to an immobilized ligand (Rabiap, MA. et al., Mayige Wioiesppoi., 2005, 23 :329-336). These analyzes were performed by Oizsomegh (Toppepu Atbrii; Zap Oiedo, SA). The value of Ka (the value of the dissociation constant) was calculated as an index of the affinity of these compounds to each kinase.

Аналізи інгібування ферментівEnzyme inhibition assays

Активність за інгібуванням ферментів у сполуках, розкритих в даному документі, була визначена ФРПЕ із застосуванням синтетичних пептидів, помічених як донорними, так і акцепторними флуорофорами (2-І УТЕ, Іпмігодеп Ца., Раївієу, ОК).The enzyme inhibitory activity of the compounds disclosed herein was determined by HPLC using synthetic peptides labeled with both donor and acceptor fluorophores (2-I UTE, Ipmigodep Tsa., Raivieu, OK).

Інгібування ферменту рЗ38 МАРКаInhibition of pZ38 MARKA enzyme

Інгібуючі активності випробовуваних сполук проти р38 МАРКа-ізоформи (МАРКТ14:Inhibitory activities of the tested compounds against the p38 MARKA isoform (MARKT14:

Іпмйгтодеп) були оцінені непрямо, шляхом визначення рівня активаційфосфорилування нижчої молекули, МАРКАР-К2. Білок рЗв8 МАРКа (80 нг/мл, 2,5 мкл) змішували із випробовуваною сполукою (2,5 мкл на кожний 4 мкг/мл, 0,4 мкг/мл, 0,04 мкг/мл або 0,004 мкг/мл) протягом 2 годин при кімнатній температурі. Змішаний розчин (2,5 мкл) р3ва неактивної мішені МАРКАР-К2 (Іпмігодеп, 600 нг/мл) і білка ФРПЕ (8 мкМ, мішень фосфорилування для МАРКАР-К2) потімIpmygtodep) were evaluated indirectly, by determining the level of activation and phosphorylation of the lower molecule, MARKAR-K2. pZv8 MARKA protein (80 ng/ml, 2.5 μl) was mixed with test compound (2.5 μl for each 4 μg/ml, 0.4 μg/ml, 0.04 μg/ml, or 0.004 μg/ml) for 2 hours at room temperature. A mixed solution (2.5 μl) of the inactive target MARKAR-K2 (Ipmigodep, 600 ng/ml) and the protein FRPE (8 μM, the target of phosphorylation for MARKAR-K2) was then

Зо додали, і кіназну реакцію ініціювали доданням АТФ (40 мкМ, 2,5 мкл). Суміш інкубували протягом 1 години при кімнатній температурі. Проявний реагент (протеаза, 5 мкл) додали за 1 годину до детекції у флуоресцентному мікропланшетному рідері (МагіозКапФ Ріави,Zo was added, and the kinase reaction was initiated by the addition of ATP (40 μM, 2.5 μL). The mixture was incubated for 1 hour at room temperature. The developing reagent (protease, 5 μl) was added 1 hour before detection in a fluorescent microplate reader (MagiosKapF Riava,

Тпептоізпег Зсіепійіс).Tpeptoizpeg Zsiepiyis).

Інгібування ферменту рЗ3в8 МАРКУInhibition of the enzyme pZ3v8 MARKU

Інгібуючі активності сполук за винаходом проти рЗвМАРКУ (МАРКІ2: Іпмігодеп) були оцінені аналогічним способом, як описано вище в даному документі. Фермент (800 нг/мл, 2,5 мкл) інкубували з випробовуваною сполукою (2,5 мкл на кожний 4 мкг/мл, 0,4 мкг/мл, 0,04 мкг/мл або 0,004 мкг/мл) протягом 2 годин при кімнатній температурі. Білюи ФРПЕ (8 мкМ, 2,5 мкл) і відповідний розчин АТФ (2,5 мкл, 400 мкМ) потім додали до ферментів/сумішей сполук і інкубували протягом 1 години. Проявний реагент (протеаза, 5 мкл) додали за 1 годину до детекції у флуоресцентному мікропланшетному рідері (МагіозКапФ Ріази, ТпепгтоБвізпег зЗсіепійіс).The inhibitory activities of the compounds of the invention against pZvMARKU (MARKI2: Ipmigodep) were evaluated in a similar way as described above in this document. Enzyme (800 ng/ml, 2.5 μl) was incubated with test compound (2.5 μl at each 4 μg/ml, 0.4 μg/ml, 0.04 μg/ml, or 0.004 μg/ml) for 2 h at room temperature. Bilyuy FRPE (8 μM, 2.5 μL) and the corresponding ATP solution (2.5 μL, 400 μM) were then added to the enzyme/compound mixtures and incubated for 1 hour. The developing reagent (protease, 5 μl) was added 1 hour before detection in a fluorescent microplate reader (MagiosKapF Riase, TpepgtoBvizpeg zZsiepiis).

Інгібування ферментів с-5гс і ЗУКInhibition of c-5gs and ZUK enzymes

Інгібуючі активності сполук за винаходом проти с-5гс і 5ук ферментів (Іпмігодеп) були оцінені аналогічним способом, як описано вище в даному документі. Відповідний фермент (3000 нг/мл або 2000 нг/мл, відповідно, 2,5 мкл) інкубували з випробовуваною сполукою (або 4 мкг/мл, 0,4 мкг/мл, 0,04 мкг/мл, або 0,004 мкг/мл, 2,5 мкл кожний) протягом 2 годин при кімнатній температурі. Білки ФРПЕ (8 мкМ, 2,5 мкл) і відповідні розчини АТФ (2,5 мкл, 800 мкМ для с-51ггс і 60 мкм АТФ для бук) потім додали до ферментів/сумішей сполук і інкубували протягом 1 години. Проявний реагент (протеаза, 5 мкл) додали за 1 годину до детекції у рлуоресцентному мікропланшетному рідері (МагіозхКапе РІазп, Тпептовізпег Зсіепійіс).The inhibitory activities of the compounds of the invention against c-5gs and 5uk enzymes (Ipmigodep) were evaluated in a similar way as described above in this document. The corresponding enzyme (3000 ng/ml or 2000 ng/ml, respectively, 2.5 μl) was incubated with the test compound (either 4 μg/ml, 0.4 μg/ml, 0.04 μg/ml, or 0.004 μg/ml , 2.5 μl each) for 2 hours at room temperature. FRPE proteins (8 μM, 2.5 μL) and the corresponding ATP solutions (2.5 μL, 800 μM for c-51ggs and 60 μM ATP for buk) were then added to the enzyme/compound mixtures and incubated for 1 h. The developing reagent (protease, 5 μl) was added 1 hour before detection in a fluorescent microplate reader (MagiozhKape RIazp, Tpeptovizpeg Zsiepiis).

Інгібування ферменту О5К ЗаInhibition of the enzyme O5K Za

Інгібуючі активності випробовуваних сполук проти ферменту ЗК За-ізоформи (Іпмігодеп) були оцінені шляхом визначення рівня активації/фосфорилування білка-мішені. Білок З5К За білок (500 нг/мл, 2,5 мкл) змішували з тестованою сполукою (2,5 мкл на кожний 4 мкг/мл, 0,4 мкг/мл, 0,04 мкг/мл або 0,004 мкг/мл) протягом 2 годин при кімнатній температурі. Білок ФРПЕ (8The inhibitory activity of the tested compounds against the ZK Za-isoform enzyme (Ipmigodep) was evaluated by determining the level of activation/phosphorylation of the target protein. Z5K protein Per protein (500 ng/ml, 2.5 μl) was mixed with the test compound (2.5 μl for each 4 μg/ml, 0.4 μg/ml, 0.04 μg/ml, or 0.004 μg/ml) for 2 hours at room temperature. Protein FRPE (8

МКМ, 2,5 мкл), який є мішенню фосфорилування для 5КЗа, і АТФ (40 мкМ, 2,5 мкл) потім додали до ферменту/суміші сполук, і отриману суміш інкубували протягом 1 години. Проявний реагент (протеаза, 5 мкл) додали за 1 годину до детекції у флуоресцентному мікропланшетному рідері (МагіозКапФф Ріазіи, ТпептоРівНег Зсієпійіс).MKM, 2.5 μL), which is a phosphorylation target for 5KZa, and ATP (40 μM, 2.5 μL) were then added to the enzyme/compound mixture, and the resulting mixture was incubated for 1 hour. The developing reagent (protease, 5 μl) was added 1 hour before detection in a fluorescent microplate reader (MagiosKapFf Riazii, TpeptoRivNeg Zsiepiis).

У всіх випадках сайт-специфічна протеаза розщеплює тільки нефосфорилований пептид і усуває сигнал ФРПІБЕ. Рівні фосфорилування кожної реакції розрахували, застосовуючи відношення емісії кумарину (донор) до емісії флуоресцеїну (акцептор), для яких низькі відношення вказують на високий рівень фосфорилування, а високі відношення вказують на низькі рівні фосфорилування. Процентне інгібування кожної реакції обчислювали відносно не- інгібованого контролю і 50 95-ї інгібуючої концентрації (значення ІСво), потім розрахували із кривої концентрація-відповідь.In all cases, the site-specific protease cleaves only the unphosphorylated peptide and removes the FRPIBE signal. Phosphorylation levels of each reaction were calculated by applying the ratio of coumarin emission (donor) to fluorescein emission (acceptor), for which low ratios indicate high levels of phosphorylation and high ratios indicate low levels of phosphorylation. The percentage inhibition of each reaction was calculated relative to the non-inhibited control and 50 95th inhibitory concentration (ISvo value), then calculated from the concentration-response curve.

Клітинні аналізиCell analyses

ЛПсС-індуковане ТМЕс/ІІ-8 вивільнення в 4-0937 клітинах 0937 клітини, моноцитарну лінію клітин людини, диференціювали в клітини типу макрофагів шляхом інкубації з РМА (100 нг/мл) протягом 48-72 годин. Клітини заздалегідь інкубували з кінцевими концентраціями випробовуваної сполуки протягом 2 годин, а потім стимулювали ЛПС (0,1 мкг/мл; із Е.соїї: 0111:84, бідта) протягом 4 годин. Супернатант збирали для визначення концентрацій ТМЕа і ІЇ-8 методом сендвіч-ЕЇ ІЗА (ЮОцо-5еї, КУО 5узіетв). Інгібування продукціїLPsC-induced TMEs/II-8 release in 4-0937 cells 0937 cells, a human monocytic cell line, were differentiated into macrophage-type cells by incubation with PMA (100 ng/ml) for 48-72 hours. Cells were pre-incubated with the final concentrations of the test compound for 2 hours and then stimulated with LPS (0.1 μg/ml; from E. soy: 0111:84, bidta) for 4 hours. The supernatant was collected to determine the concentrations of TMEa and II-8 by the sandwich-EII IZA method (YUOtso-5ei, KUO 5uzietv). Inhibition of production

ТМЕа розраховували як процент від того, що досягнуто 10 мкг/мл ВІКВ79б при кожній концентрації випробовуваної сполуки, порівняно з контролем-носієм. Відносну 50 95-у ефективну концентрацію (КЕСвхо) визначали з отриманої в результаті кривої концентрація- відповідь. Інгібування продукції ІЇ-8 було розраховано при кожній концентрації випробовуваної сполуки порівняно з контролем-носієм. 50 95-у інгібуючу концентрацію (ІСво) визначали за отриманою в результаті кривою концентрація-відповідь.TMEa was calculated as a percentage of that achieved at 10 μg/ml HIV79b at each concentration of the test compound, compared to the vehicle control. The relative 50 95th effective concentration (KESvho) was determined from the resulting concentration-response curve. Inhibition of II-8 production was calculated at each concentration of the test compound compared to the vehicle control. 50 The 95th inhibitory concentration (IC) was determined by the resulting concentration-response curve.

ЛПсС-індуковане ТМЕа вивільнення в ТНР-1 клітинахLPsC-induced TMEa release in TNR-1 cells

Зо ТНР-1 клітини, моноцитарну лінію клітин людини, стимулювали З мкг/мл ЛПС (із Е.соїї:From TNR-1 cells, a human monocytic cell line, were stimulated with μg/ml of LPS (from E. soy:

О111:84, ідта) протягом 4 годин, і супернатант збирали для визначення концентрації ТМЕса методом сендвіч-ЕГІЗА (Юцо-зеї, КУО 5узтетв). Інгібування продукції ТМЕс розраховували при кожній концентрації випробовуваної сполуки, порівняно з контролем-носієм. 50 95-у інгібуючу концентрацію (ІСво) визначали за отриманою в результаті кривою концентрація-відповідь.O111:84, idta) for 4 hours, and the supernatant was collected to determine the concentration of TMEs by the sandwich EHISA method (Yutso-zei, KUO 5uztetv). Inhibition of TMEs production was calculated at each concentration of the tested compound, compared to the vehicle control. 50 The 95th inhibitory concentration (IC) was determined by the resulting concentration-response curve.

Роїу І:С-індукована ІСАМ-1 експресія в ВЕА5З2В клітинахRoiu I:C-induced ISAM-1 expression in BEA5Z2B cells

Роїу І:С був використаний в цих дослідженнях як проста імітація вірусної РНК. Роїу ГС- олігофектамінову суміш (1 мкг/мл Роїу ІС, ж 2 95 олігофектаміну, 25 мкл; Іпмімодеп Ца., ЗапRoiu I:C was used in these studies as a simple mimic of viral RNA. Roiu GS - oligofectamine mixture (1 μg/ml Roiu IS, w 2 95 oligofectamine, 25 μl; Ipmimodep Tsa., Zap

Оіеєдо, СА, і Іпмігодеп, Сагізрай, СА відповідно) трансфікували в клітини ВЕА5З2В (клітини бронхіального епітелію людини, АТСС). Клітини заздалегідь інкубували з кінцевими концентраціями випробовуваних сполук протягом 2 годин, і рівень експресії ІСАМ-1 на клітинній поверхні був визначений методом клітинного ЕГІ5А. У момент часу 18 годин після трансфекціїOyeedo, CA, and Ipmigodep, Sagizrai, CA, respectively) were transfected into BEA5Z2B cells (human bronchial epithelial cells, ATCC). The cells were pre-incubated with the final concentrations of the tested compounds for 2 hours, and the level of ISAM-1 expression on the cell surface was determined by the cellular EHI5A method. At a time point of 18 h post-transfection

Роїу І:С клітини фіксували 4 95 формальдегіду в РВЗ (100 мкл), а потім ендогенну пероксидазу придушували шляхом додавання промивного буфера (100 мкл, 0,05 95 Тмееп в РВ5: РВ5-Swarm I:C cells were fixed with 4 95 formaldehyde in RVZ (100 μl), and then endogenous peroxidase was suppressed by adding washing buffer (100 μl, 0.05 95 Tmeep in RV5: RV5-

Тмееп), який містить 0,1 фо-й азид натрію і 1 Уо-ю перекис водню. Клітини промивали промивним буфером (3х200 мкл), і після блокування комірок 5 95-м молоком в РВЗ-Тмееп (100 мкл) протягом 1 години, клітини інкубували з антилюдським ІСАМ-1 антитілом (50 мкл; СеїЇ БідпаїїпдTmeep), which contains 0.1% sodium azide and 1% hydrogen peroxide. Cells were washed with wash buffer (3x200 μl), and after blocking the cells with 95% milk in RVZ-Tmeep (100 μl) for 1 h, the cells were incubated with anti-human ISAM-1 antibody (50 μl; Seiyi Bidpaiipd

Тесппоіоду, Оапмегв5, МА) в 1 95-ому БСА РВ5 протягом ночі при 4 "С.Tesppoiodu, Oapmegv5, MA) in the 1 95th BSA RV5 during the night at 4 "С.

Клітини промивали РВ5З-Тмееп (3х200 мкл) і інкубували із вторинним антитілом (100 мкл;Cells were washed with RV5Z-Tmeep (3x200 μl) and incubated with the secondary antibody (100 μl;

НАР-кон'югований антикролячий Ідс, Оако, Ц., СіІовігир, Данія). Клітини потім інкубували з основи (50 мкл) протягом 2-20 хв. з подальшим додаванням стоп-розчину (50 мкл, їн Н25О).NAR-conjugated anti-rabbit Ids, Oako, Ts., SiIovigir, Denmark). Cells were then incubated with the base (50 μl) for 2-20 min. followed by the addition of a stop solution (50 μl, in H25O).

Сигнал ІСАМ-1 був детектований шляхом зчитування і зчитування поглинання при 450 нм проти контрольної довжини хвилі 655 нм, застосовуючи спектрофотометр. Клітини потім промилиThe ISAM-1 signal was detected by reading and reading the absorbance at 450 nm against a control wavelength of 655 nm using a spectrophotometer. The cells were then washed

РВ5-Тмееп (3х200 мкл), і загальну кількість клітин в кожній лунці визначили шляхом зчитування поглинання при 595 нм після фарбування кристалічним фіолетовим (50 мкл 2 95-го розчину вРВ5-Tmeep (3x200 μl), and the total number of cells in each well was determined by reading the absorbance at 595 nm after staining with crystal violet (50 μl of 2 95th solution in

РВ5) і елюювання 1 95-м розчином 505 (100 мкл) у дистильованій воді. Виміряні ОЮ 450-655 показання були скоректовані для кількості клітин шляхом ділення показання 00595 в кожній лунці. Інгібування експресії ІСАМ-1 розраховували при кожній концентрації випробовуваної сполуки порівняно з контролем-носієм. 50 95-у інгібуючу концентрацію (ІСво) визначали за отриманою в результаті кривою концентрація-відповідь. бо Аналіз клітинного мітозуРВ5) and elution with 1 95% solution of 505 (100 μl) in distilled water. The measured OU 450-655 readings were corrected for the number of cells by dividing the 00595 reading in each well. Inhibition of ISAM-1 expression was calculated at each concentration of the tested compound compared to the vehicle control. 50 The 95th inhibitory concentration (IC) was determined by the resulting concentration-response curve. bo Analysis of cell mitosis

Мононуклеарні клітини периферичної крові (МКПК) від здорових суб'єктів відділили від цільної крові (Оціпіе5, Гопдоп, ОК), використовуючи градієнт щільності (Нізіорадие?9-1077,Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from healthy subjects were separated from whole blood (Ocipie5, Hopdop, OK) using a density gradient (Nizioradie?9-1077,

Зідта-АїІдгісп, РооЇїе, ОК). МКПК (З мільйони клітин на зразок) потім послідовно обробили 2 95Zidta-AiIdgisp, RooYie, OK). MCPC (With millions of cells per sample) were then sequentially treated with 2 95

ФГА (5ідта-Аїайгісп, Рооіе, ОК) протягом 48 год., з подальшим 20-годинним впливом різними концентраціями випробовуваних сполук. За 2 години до збору МНПК обробили демеколцином (0,1 мкг/мл; Іпмігодеп, Раїхієу, ОК), щоб зупинити клітини в метафазі. Для спостереження мітотичних клітин МНПК пермеабілізували і фіксували додаванням Іпігаргер (50 мкл; ВесктапFGA (Fifty-Aliagisp, Rooie, OK) for 48 hours, followed by a 20-hour exposure to various concentrations of the test compounds. 2 h before collection of MNPs, they were treated with demecolcin (0.1 μg/ml; Ipmigodep, Raiheiu, OK) to arrest cells in metaphase. To observe mitotic cells, MNPs were permeabilized and fixed by adding Ipigarger (50 μl; Vesktap

Соцнег, Егапсе), і забарвлювали анти-фосфо-гістоном З (0,26 нг/л; Ж9701; Сеї! Зідпаїїпо,Sotsneg, Egapse), and stained with anti-phospho-histone C (0.26 ng/l; Zh9701; Sei! Zidpaiipo,

Оапмег5, МА) і пропідію іодидом (1 мг/мл; Зідта-Аїагісй, РооІїе, ОК), як раніше описано (Миейпірацег РА. апа 5спцег М.)., Мшайоп Везеєагси, 2003, 537:117-130). Флуоресценцію спостерігали, використовуючи проточний цитометр АТТОМЕ (Іпмігодеп, Раїзіеу, ОК), виділяючи вікна для лімфоцитів. Процентне інгібування мітозу розраховували для кожної обробки відносно обробки носієм (0,5 95 ЮОМ5О).Oapmeg5, MA) and propidium iodide (1 mg/ml; Zidta-Agiagis, Roseville, OK) as previously described (Mieypiraceg RA. apa 5spceg M.)., Mhayop Veseeagsy, 2003, 537:117-130). Fluorescence was observed using an ATTOME flow cytometer (Ipmigodep, Raizieu, OK) selecting windows for lymphocytes. Percent inhibition of mitosis was calculated for each treatment relative to vehicle treatment (0.5 95 UOM5O).

Індуковане риновірусом вивільнення І! -8 і експресія ІСАМ-1Rhinovirus-induced release of I! -8 and expression of ISAM-1

Риновірус людини РВЛІбЄ був отриманий з американської колекції типових культур (Мапабхза5, МА). Вихідні вірусні матеріали отримали шляхом інфікування клітин Неїа риновірусом людини, поки 80 95 клітин не піддалося цитопатичному впливу.Human rhinovirus RBLIbE was obtained from the American Type Culture Collection (Mapabhza5, MA). Initial viral materials were obtained by infecting Neia cells with human rhinovirus until 80 95 cells were cytopathically affected.

Клітини ВЕАЗ2В інфікували риновірусом людини при 5 МОЇ і інкубували протягом 2 годин при 33 "С при обережному струшуванні для того, щоб сприяти абсорбції. Потім клітини промилиVEAZ2B cells were infected with human rhinovirus at 5 MOI and incubated for 2 h at 33 °C with gentle shaking to promote uptake. Cells were then washed

РВ5, додали свіже середовище, і клітини інкубували ще протягом 72 годин. Супернатант збирали для кількісного визначення концентрації ІІ -8, застосовуючи дослідницький комплектPB5, fresh medium was added, and the cells were incubated for another 72 hours. The supernatant was collected for quantitative determination of II-8 concentration using a research kit

Оиозеї ЕГІБЗА (НУО 5узієтв, Міппеароїїв, ММ).Oiosei EGIBZA (NGO 5uzietv, Mippearoiv, MM).

Рівень експресії ІСАМ-1 на клітинній поверхні був визначений методом клітинного ЕГІЗА.The level of ISAM-1 expression on the cell surface was determined by the cellular EGISA method.

При 72 годинах після зараження клітини фіксували 4 У6--ним формальдегідом в РВ5. Після придушення ендогенної пероксидази додаванням 0,1 95-го азиду натрію і 1 95-го перекису водню лунки промила промивним буфером (0,05 95 Тшееп в РВ5: РВ5З-Тмееп). Після блокування лунокAt 72 hours after infection, the cells were fixed with 4 U6 formaldehyde in PB5. After suppressing endogenous peroxidase by adding 0.1 95 sodium azide and 1 95 hydrogen peroxide, the wells were washed with washing buffer (0.05 95 Tsheep in РВ5: РВ5Z-Tmeep). After blocking the holes

Б У6-м молоком в РВ5-Ту"ееп протягом 1 години клітини інкубували з антилюдським ІСАМ-1 антитілом в 5 5-ому БСА РВ5-Тумееп (1:500) протягом ночі. Лунки промили РВ5-Тмееп і інкубували зі вторинним антитілом (НКР-кон'югований антикролячий Ід, бако, Ца.). СигналB U6 milk in РВ5-Tu"eep for 1 hour, the cells were incubated with anti-human ISAM-1 antibody in 5 5 BSA РВ5-Tumeep (1:500) overnight. The wells were washed with РВ5-Tmeep and incubated with the secondary antibody ( NKR-conjugated antirabbit Id, bako, Tsa.) Signal

Зо ІСАМ-1 був детектований шляхом додавання субстрату і зчитування при 450 нм проти контрольної довжини хвилі 655 нм, застосовуючи спектрофотометр. Потім лунки промили РВ5-ZOSAM-1 was detected by adding substrate and reading at 450 nm against a control wavelength of 655 nm using a spectrophotometer. Then the wells were washed with RV5-

Тмееп, і загальну кількість клітин в кожній лунці визначили шляхом зчитування поглинання при 595 нм після фарбування кристалічним фіолетовим і елюювання 1 У5-ним розчином 505.Tmeep and the total number of cells in each well were determined by reading the absorbance at 595 nm after staining with crystal violet and elution with 1 U5 solution 505.

Виміряні ОЮОво5 показання було скоректовані для кількості клітин шляхом ділення показанняThe measured OV5 readings were corrected for the number of cells by dividing the reading

ОО5о5 в кожній лунці. Сполуки були додані за 2 години до інфікування РВЛ і 2 години після інфікування, коли неінфікований РВЛ відмили.OO5o5 in each hole. Compounds were added 2 hours before infection of RVL and 2 hours after infection, when uninfected RVL were washed.

Оцінка РВЛІ16-індукованої СРЕ в МКС5 клітинахEvaluation of RVLI16-induced CPE in MKS5 cells

Клітини МЕКС-5 інфікували РВЛІ16 при 1 МОЇ в ОМЕМ, що містить 5 95 ФТС і 1,5 мМ МасСе, з подальшою інкубацією протягом 1 години при 33"С для того, щоб сприяти абсорбції.MEKS-5 cells were infected with RVLI16 at 1 MOI in OMEM containing 5 95 FTS and 1.5 mM Masse followed by incubation for 1 hour at 33°C to promote absorption.

Супернатанти відкачали, а потім додали свіже середовище з подальшою інкубацією протягом 4- х днів. Де було потрібно, клітини заздалегідь інкубували зі сполукою або ОМ5О протягом 2 годин, і сполуку і ОМ5О додали ще раз після відмивання вірусу.Supernatants were pumped off, and then fresh medium was added, followed by incubation for 4 days. Where necessary, cells were pre-incubated with compound or OM5O for 2 hours, and compound and OM5O were added again after washing the virus.

Супернатанти відкачали і інкубували з розчином метиленового синього (100 мкл, 2 95 формальдегіду, 10 95 метанолу і 0,175 95 метиленового синього) протягом 2 год. при кімнатній температурі. Після промивки 1 уо-ний 505 в дистильованій воді (100 мкл) додавали в кожну лунку, і планшети злегка струшували за 1-2 год. до зчитування поглинання при 660 нм.Supernatants were pumped off and incubated with methylene blue solution (100 μl, 2 95 formaldehyde, 10 95 methanol and 0.175 95 methylene blue) for 2 hours. at room temperature. After washing, 1 μl of 505 in distilled water (100 μl) was added to each well, and the tablets were shaken slightly for 1-2 h. before reading absorbance at 660 nm.

Розрахували процент інгібування для кожної лунки. Значення ІСво визначали за кривою концентрація-відповідь, створеною серійними розбавленнями випробовуваних сполук.The percentage of inhibition was calculated for each well. The ISvo value was determined by the concentration-response curve created by serial dilutions of the tested compounds.

Іп міго РСВ-вірусне навантаження в первинних клітинах бронхіального епітелію.The RSV viral load in the primary cells of the bronchial epithelium decreased.

Нормальні людські клітини епітелію бронхів (МЛКЕБ), вирощені в 96-лункових планшетах, потім інфікували РСВ А2 (51гаїп А2, НРА, зЗаїїзригу, ОК) при МОЇ 0,001 в середовищі І НС8:КРМІ- 1640 (50:50), яке містить 15 мМ хлорид магнію, і інкубували 1 годину при 37 "С для абсорбції.Normal human bronchial epithelial cells (BBCs) grown in 96-well plates were then infected with RSV A2 (51 gyp A2, NRA, from Zayizrig, OK) at an IU of 0.001 in medium I HC8:KRMI-1640 (50:50) containing 15 mm magnesium chloride, and incubated for 1 hour at 37 "C for absorption.

Потім клітини промили РВ5 (3х200 мкл), додали свіже середовище (200 мкл), і інкубування продовжили протягом 4-х днів. Де було потрібно, клітини заздалегідь інкубували зі сполукою абоThen the cells were washed with PB5 (3x200 μl), fresh medium (200 μl) was added, and the incubation was continued for 4 days. Where necessary, cells were pre-incubated with compound or

ОМ5О протягом 2 годин, і потім додавали знову після відмивання вірусу.OM5O for 2 hours and then added again after washing the virus.

Клітини фіксували 4 У5-ним формальдегідом в розчині РВЗ (50 мкл) протягом 20 хв., промивали промивальним буфером (3х200 мкл; РВЗ включає 0,5 95-ний БСА і 0,05 9У5-нийCells were fixed with 4 U5 formaldehyde in a solution of RVZ (50 μl) for 20 min., washed with washing buffer (3x200 μl; RVZ includes 0.5 95-BSA and 0.05 9U5

Тмееп-20) і інкубували з блокуючим розчином (5 95-е конденсоване молоко в РВ5) протягом 1 години. Потім клітини промили промивним буфером (3х200 мкл) і інкубували протягом 1 години бо при кімнатній температурі з анти-РСВ (2Е7) Е-синтезованого білка антитілом (40 мкл; мишачі моноклональні, Ії 798760, Саї. Мо. ар43812, Абсат) в 5 95-ому БСА в РВ5З-Тмееп. Після промивки клітини інкубували з НЕР-кон'югованим розчином вторинних антитіл (50 мкл) в 5 9р5- ому БСА в РВЗ-Тмеєп (Ії 00053170, Саї. Мо. РО447, Бако), а потім субстрат ТМВ (50 мкл; упаковка субстратного реагенту, ої 269472, Саї. Мо. 0У999, КО бузіетв, Іпс.) був доданий. Цю реакцію зупинили додаванням 2н Н2а25Ої (50 мкл) і отриманий сигнал був визначений колориметрично (оптична іщільністьх 450 нм довжина хвилі порівняно з 655 нм) в мікропланшетному рідері (МагіозхКапе РІазп, Тпептовізпег Зсіепійіс).Tmeep-20) and incubated with blocking solution (5 95th condensed milk in RV5) for 1 hour. Then the cells were washed with washing buffer (3x200 μl) and incubated for 1 hour at room temperature with an anti-RSV (2E7) E-synthesized protein antibody (40 μl; mouse monoclonal, Ii 798760, Sai. Mo. ar43812, Absat) in 5 95th BSA in RV5Z-Tmeep. After washing, the cells were incubated with an HER-conjugated solution of secondary antibodies (50 μl) in 5% BSA in RVZ-Tmeep (Ii 00053170, Sai. Mo. RO447, Bako), and then TMB substrate (50 μl; package of substrate of the reagent, oi 269472, Sai. Mo. 0U999, KO buzietv, Ips.) was added. This reaction was stopped by the addition of 2n H2a25Oi (50 μl) and the resulting signal was determined colorimetrically (optical density x 450 nm wavelength compared to 655 nm) in a microplate reader (MagiozhKape RIazp, Tpeptovizpeg Zsiepiis).

Потім клітини промили і 2,5 уо-ний розчин кристалічного фіолетового (50 мкл; Іої 8656, Саї.Then the cells were washed with a 2.5 U solution of crystal violet (50 μl; Ioi 8656, Sai.

Мо. РІ7000, Рго-бар Оіадповзійс5) використовували протягом 30 хв. Після промивки промивальним буфером 1 95-ний 5О5 в дистильованій воді (100 мкл) додавали в кожну лунку, і планшети злегка струшували на шейкері за 1 годину до зчитування поглинання при 595 нм.Mo. RI7000, Rgo-bar Oiadpovziys5) were used for 30 min. After washing with wash buffer 1, 95% 5O5 in distilled water (100 μl) was added to each well, and the plates were gently shaken on a shaker for 1 hour before the absorbance was read at 595 nm.

Виміряні ОЮз450-655 показання було скоректовані для кількості клітин шляхом ділення показанняThe measured ОЯз450-655 readings were corrected for the number of cells by dividing the reading by

ОЮз450-655 на показання ОЮ5о5. Процентне інгібування для кожної лунки мітозу розрахували, і значення ІСво розрахували за кривою концентрація-відповідь, створеною серійними розбавленнями випробовуваних сполук.ОЮз450-655 on the testimony of ОЮ5о5. Percent inhibition for each well of mitosis was calculated, and IC values were calculated from a concentration-response curve generated by serial dilutions of the test compounds.

Вплив випробовуваних сполук на життєздатність клітин: МТТ аналізEffect of tested compounds on cell viability: MTT analysis

Диференційовані клітини 0937 заздалегідь інкубували з кожною випробовуваною сполукою (кінцева концентрація 1 мкг/мл або 10 мкг/мл в 200 мкл середовища, вказаного нижче) за двома протоколами: перший протягом 4 годин в 5 У5-ому ФС КРМІ1640 середовищі і другий в 10 95- ому ФТС КРМІ1640 середовищі протягом 24 годин. Супернатант замінили новим середовищем (200 мкл) і вихідний розчин МТТ (10 мкл, 5 мг/мл) додали в кожну лунку. Після інкубації протягом 1 години середовище видалили, ОМ5О (200 мкл) додали в кожну лунку, і планшети злегка струшували протягом 1 години до зчитування поглинання при 550 нм. Процентне відношення втрати життєздатності клітин розрахували для кожної лунки відносно до обробки носієм (0,5 95Differentiated 0937 cells were pre-incubated with each test compound (final concentration of 1 μg/ml or 10 μg/ml in 200 μl of the medium indicated below) according to two protocols: the first for 4 hours in 5 U5 FS KRMI1640 medium and the second in 10 95 - the same FTS KRMI1640 environment within 24 hours. The supernatant was replaced with fresh medium (200 μl) and MTT stock solution (10 μl, 5 mg/ml) was added to each well. After incubation for 1 hour, the medium was removed, OM 5 O (200 μl) was added to each well, and the plates were gently shaken for 1 hour until the absorbance was read at 550 nm. The percentage loss of cell viability was calculated for each well relative to vehicle treatment (0.5 95

РМ5О). Отже, помітне збільшення життєздатності клітин завдяки лікарській обробці відносно носія наведене в таблиці у вигляді негативного процентного відношення.PM5O). Therefore, a noticeable increase in cell viability due to drug treatment relative to the carrier is shown in the table as a negative percentage.

Продукція цитокінів у макрофагів у мокротинні при ХОХЛ.Cytokine production by macrophages in sputum in COPD.

Пацієнтам з ХОХЛ робили інгаляцію з небулізованним розчином З 95-ного (маса/об'єм) гіпертонічного сольового розчину з допомогою ультразвукового небулайзера (Оеміїбів5,Patients with COPD were inhaled with a nebulized solution of Z 95 (mass/volume) hypertonic saline solution using an ultrasonic nebulizer (Oemiibiv5,

Зо Саппаде, МО) з кількістю повітря, що обмінюється за одне дихання, протягом 5 хв. Цю процедуру повторювали максимум три рази, поки достатньо мокротиння не було отримано.From Sappade, MO) with the amount of air exchanged in one breath for 5 min. This procedure was repeated a maximum of three times until sufficient sputum was obtained.

Зразки мокротиння гомогенізували і енергійно перемішували з допомогою вихрової мішалки в 0,02 9У5-ому за об'ємом розчині дитіотреїтолу (0ОТТ). Зразки ресуспендували в РВ5 (40 мл) з подальшим центрифугуванням при 1500 об./хв. при 4 "С протягом 10 хв., щоб отримати осадки клітин мокротиння. Осадки двічі промивали РВ5 (40 мл). Клітини мокротиння потім ресуспендували в макрофагальному безсироватковому середовищі (тасгорпаде-ЗЕМ, Пе їесппоЇодіє5, Раїбіеу, ОК; для отримання 2х106/лунка в 24-лунковому планшеті), яке містить 20Sputum samples were homogenized and vigorously mixed with a vortex mixer in a 0.02 9U5 volume solution of dithiothreitol (OTTT). The samples were resuspended in RV5 (40 ml) followed by centrifugation at 1500 rpm. at 4°C for 10 min to obtain a pellet of sputum cells. The pellet was washed twice with PB5 (40 mL). The sputum cells were then resuspended in macrophage serum-free medium (Tashorpade-ZEM, Peyspoiodie5, Raibieu, OK; to obtain 2x106/well in 24-well plate), which contains 20

Ед/мл пеніциліну, 0,02 мг/мл стрептоміцину їі 5 мкг/мл амфотерицину В, і висівали на верхній межі 96-лункового планшета з подальшою інкубацією протягом 2 годин при 37 "С і 5 956 СО», щоб дозволити макрофагам прикріпитися до нижньої частини планшета. Клітини на планшеті промили свіжою тасгорпаде-ЗЕМ (200 мкл/лунка), щоб видалити нейтрофіли і інші контаміновані клітини. Закріплені клітини (в основному, макрофаги мокротиння) на планшеті використали для подальшого аналізу. Індукція і ізоляція мокротиння були проведені в ОціпшШевunits/ml of penicillin, 0.02 mg/ml of streptomycin and 5 μg/ml of amphotericin B, and seeded on the upper border of a 96-well plate followed by incubation for 2 hours at 37°C and 5956°C to allow macrophages to attach to the bottom of the plate. Cells on the plate were washed with fresh Tashorpade-ZEM (200 μL/well) to remove neutrophils and other contaminating cells. Fixed cells (mainly sputum macrophages) on the plate were used for further analysis. Sputum induction and isolation were performed in OtsipshShev

Огид Кезеагсп Опії в цу Нозрпаї, і схвалення комісії з етики та письмова інформована згода були отримані ОціпіПев.Opiy's Kezeagsp disgust in tsu Nozrpai, and ethics committee approval and written informed consent were obtained by OtsipiPev.

У разі необхідності, 1 мкл розчину, що містить або випробовувану сполуку, або відповідну речовину у вказаних концентраціях, або, як альтернатива, 1 мкл ЮОМ5О як контроль-носій, був доданий в кожну лунку (200 мкл в середовищі), і клітини інкубували протягом 2-х годин. Клітини стимулювали за допомогою розчину ЛПС (50 мкл, кінцева концентрація: 1 мкг/мл) і інкубували протягом 4-х годин при 37 "С і 595 СО». Потім супернатант збирали і зберігали при -80 "С.If necessary, 1 μl of a solution containing either the test compound or the corresponding substance at the indicated concentrations, or alternatively, 1 μl of HOM5O as a vehicle control, was added to each well (200 μl in medium), and the cells were incubated for 2 hours. Cells were stimulated with LPS solution (50 μl, final concentration: 1 μg/ml) and incubated for 4 hours at 37 °C and 595 °C. Then the supernatant was collected and stored at -80 °C.

Комплекти Мійроге Гитіпех використовували для вимірювання чотирьох аналітів. Після розморожування супернатанта магнітні кульки, покриті антитілами, мультиплексували і інкубували в 96-комірковому планшеті зі стандартом, основним розчином або відповідним об'ємом зразка, протягом ночі при струшуванні при 4 "С. Після дворазової промивки 200 мкл промивального буфера, наданого в комплекті, на лунку, застосовуючи промивач за допомогою магнітних частинок, кульки інкубували протягом 1 години при кімнатній температурі з 25 мкл кон'югованого з біотином розчину антитіл, наданим в комплекті, при струшуванні. Розчин стрептавідину додавали протягом 30 хв. при струшуванні при кімнатній температурі. Після промивки 200 мкл промивального буфера на лунку кульки ресуспендували в проточній рідині бо (150 мкл) і негайно аналізували. Рівень кожного аналіта в супернатанті розрахували з використанням програмного забезпечення Хсеі! Ей за допомогою рівняння з 4-ма або 5-ма параметрами, застосовуючи для кожного стандартну криву. Інгібування кожної продукції цитокінів були розраховані при кожній концентрації порівняно з контролем-носієм. Значення ІСвхо визначили за кривими концентрація-відповідь, застосовуючи ХІ-РЇїї (ідбЬ5, Сийатога, ОК).Miroghe Gitipeh kits were used to measure four analytes. After thawing the supernatant, the antibody-coated magnetic beads were multiplexed and incubated in a 96-well plate with a standard, stock solution, or an appropriate volume of sample overnight with shaking at 4°C. After washing twice with 200 μl of the wash buffer provided in the kit, per well using a magnetic particle washer, the beads were incubated for 1 hour at room temperature with 25 μl of the biotin-conjugated antibody solution provided in the kit, with shaking. The streptavidin solution was added for 30 min with shaking at room temperature. washes of 200 μl of wash buffer per bead well were resuspended in flow-through fluid (150 μl) and immediately analyzed. The level of each analyte in the supernatant was calculated using Hsei!ei software using a 4- or 5-parameter equation, applying for each standard curve.Inhibition of each cytokine production was calculated at k at each concentration compared to the vehicle control. IC values were determined by concentration-response curves, using X-RIII (IDB5, Silatoga, OK).

Продукція цитокінів у первинних клітинах бронхіального епітелію при ХОХЛ.Cytokine production in primary cells of the bronchial epithelium in COPD.

Первинні клітини епітелію дихальних шляхів, отримані від пацієнтів 3 ХОХЛ, придбали уPrimary cells of the epithelium of the respiratory tract, obtained from 3 patients with COPD, were purchased from

Авіегапа (Коувіоп, ОК), і підтримували в середовищі для росту клітин бронхіального епітелію, яке приготували шляхом змішування ГНСЗВ (Іпмігодеп) (500 мл) з ГНС-У (Іпмігодеп) (500 мл) і З мкл розчину ретиноєвої кислоти (5 мг/мл у чистому ОМ5О). Середовище видалили шляхом аспірації і свіжий ВЕСМ (200 мкл) додали в кожну лунку. Де необхідно, додали 1 мкл розчину випробовуваної сполуки у вказаних концентраціях, або 1 мкл ОМ5О як контроль-носій додали, і клітини інкубували протягом 2-х годин. Клітини стимулювали ТМЕса (50 мкл; кінцева концентрація 50 нг/мл) і потім інкубували протягом 4-х годин при 37 "С і 595 СО». Супернатант потім збирали і зберігали при -20 "С.Aviegap (Kouviop, OK), and maintained in medium for the growth of bronchial epithelial cells, which was prepared by mixing HNSZV (Ipmigodep) (500 ml) with HNS-U (Ipmigodep) (500 ml) and 3 μl of retinoic acid solution (5 mg/ ml in pure OM5O). The medium was removed by aspiration and fresh VESM (200 μl) was added to each well. Where necessary, 1 μl of a solution of the test compound at the indicated concentrations was added, or 1 μl of OM5O as a control carrier was added, and the cells were incubated for 2 hours. Cells were stimulated with TMEs (50 μl; final concentration 50 ng/ml) and then incubated for 4 hours at 37 °C and 595 °C. The supernatant was then collected and stored at -20 °C.

Рівні 1-6 і І--8 визначали методом ЕГІЗА, застосовуючи КУО Зузіет5 людський ІІ -6 і 1-8 риозеї? набори для ЕГІЗА. Інгібування продукції ІІ. -6 і 1-8 розрахували при кожній концентрації порівняно з контролем-носієм. 50 95-у інгібуючу концентрацію (ІСво) визначили за кривими концентрація-відповідь, застосовуючи ХІ -РЇї (ідрв, сзиатога, ОК).Levels 1-6 and I--8 were determined by the EGISA method, using CFU Zuziet5 human II-6 and 1-8 rhizomes? sets for EGISA. Inhibition of products II. -6 and 1-8 were calculated at each concentration compared to the vehicle control. 50 The 95th inhibitory concentration (ISvo) was determined by concentration-response curves, using XI -RIi (idrv, sziatoga, OK).

Іп мімо скринінг: фармакодинаміка і протизапальна активністьIP mimo screening: pharmacodynamics and anti-inflammatory activity

ЛПсС-індуковане накопичення нейтрофілів у мишейLPsC-induced accumulation of neutrophils in mice

Мишам лінії ВАГ. В/С, які не голодували, вводили дозу по інтратрахеальному шляху або з носієм, або з випробовуваною речовиною у вказані моменти часу (в межах 2-8 годин) до стимуляції запальної відповіді шляхом прикладання ЛПС. При Т-0 мишей вмістили в затравкову камеру і піддали ЛІС (7,0 мл, розчин 0,5 мг/мл в РВ5) протягом 30 хв. Ще через 8 годин тваринних анестезували, їхні трахеї канюлювали і РБАЛ екстрагували шляхом інфузії, а потім витягли з їхніх легень 1,0 мл РВ5 через трахеальний катетер. Загальний і диференціальний підрахунки білих клітин у РБАЛ виміряли з допомогою гемоцитометра Меибаиг. Мазки-цитоспіни зразків РБАЛ отримали шляхом центрифугування при 200 об./хв. протягом 5 хвилин при кімнатній температурі і зафарбували, застосовуючи систему забарвлення рійоцік (ОадеMice of the VAG line. V/S, who were not fasted, were dosed by the intratracheal route either with the vehicle or with the test substance at the indicated time points (within 2-8 hours) before the stimulation of the inflammatory response by the application of LPS. At T-0, mice were placed in an inoculation chamber and exposed to LIS (7.0 ml, a solution of 0.5 mg/ml in PB5) for 30 min. After another 8 hours, the animals were anesthetized, their tracheas cannulated, and RBAL was extracted by infusion, and then 1.0 mL of PB5 was withdrawn from their lungs via a tracheal catheter. Total and differential white cell counts in RBAL were measured using a Meibaig hemocytometer. Cytospin smears of RBAL samples were obtained by centrifugation at 200 rpm. for 5 minutes at room temperature and stained using the Riotsik staining system (Oade

Зо Вепгіпод). Клітини підраховували, використовуючи масляну імерсійну мікроскопію. Дані з кількості нейтрофілів у РБАЛ показані як середнє значення х 5.Е.М. (стандартна помилка середнього).From Vephipoda). Cells were counted using oil immersion microscopy. Data on the number of neutrophils in RBAL are shown as the mean value x 5.E.M. (standard error of the mean).

Процент інгібування накопичення нейтрофілів був розрахований для кожної обробки відносно до обробки носієм.Percent inhibition of neutrophil accumulation was calculated for each treatment relative to vehicle treatment.

Модель сигаретного димуModel of cigarette smoke

Мишей лінії А/У (самці, вік 5 тижнів) піддали впливу сигаретного диму (4 95-ний сигаретний дим, розбавлений повітрям) протягом 30 хв./день протягом 11 днів, використовуючи експериментальну систему інгаляції тютюнового диму для дрібних тварин (модель 515-095; 5ібайа бсіепійіс ТесппоЇоду, ТоКуо, дарап). Випробовувані речовини вводили інтраназально (35 мкл розчину в 50 96 ОМ5ЗО/РВ5) один раз на день протягом 3-х днів після остаточного впливу сигаретного диму. На 12-й годину після останньої дози кожну з тварин анестезували, її трахею канюлювали і РБАЛ збирали. Кількість альвеолярних макрофагів і нейтрофілів визначили за допомогою аналізу РАС (ЕРІСВУ АГ ТВА ІІ, ВесКтап Соицйег, Іпс., ЕшІепоп, СА, О5А), використовуючи антимишаче МОМА2 антитіло (макрофаг) або антимишаче 7/4 антитіло (нейтрофіл)у. РБАЛ центрифугували і супернатант збирали. Рівень кератиноцитового хемоатрактанта (КС; СХСІ 1) в РБАЛ визначили кількісно, використовуючи комплект Оцепійкіпе? для мишей КС ЕГІЗА (КО 5узіетв, Іпс, Міппеароїї5, ММ, ОА).A/U mice (male, 5 weeks of age) were exposed to cigarette smoke (495% air-diluted cigarette smoke) for 30 min/day for 11 days using an experimental small animal smoke inhalation system (model 515- 095; 5ibaya bsiepiyis TesppoYodu, ToKuo, darap). Test substances were administered intranasally (35 μl of a solution in 50 96 OM5ZO/РВ5) once a day for 3 days after the final exposure to cigarette smoke. At 12 hours after the last dose, each animal was anesthetized, its trachea was cannulated, and RBAL was collected. The number of alveolar macrophages and neutrophils was determined by RAS analysis (ERISVU AG TVA II, VesKtap Soitsyeg, Ips., EshIepop, SA, O5A), using anti-mouse MOMA2 antibody (macrophage) or anti-mouse 7/4 antibody (neutrophil). RBAL was centrifuged and the supernatant was collected. The level of keratinocyte chemoattractant (KS; SCHI 1) in RBAL was determined quantitatively using the Otsepiikipe? for mice CS EGIZA (KO 5uzietv, Ips, Mippearoii5, MM, OA).

Приклад 1: Отримання Сполуки (І)Example 1: Preparation of Compound (I)

Наступні проміжні сполуки, які застосовуються для отримання Сполуки (І) за даним винаходом, були описані раніше і були отримані із застосуванням методик, що містяться в посиланнях, наведених нижче (Таблиця 3).The following intermediate compounds, which are used to obtain Compound (I) according to the present invention, have been described previously and were obtained using the techniques contained in the references below (Table 3).

Таблиця ЗTable C

Раніше описані проміжні сполукиPreviously described intermediate compounds

С Проміжва.Ї 00000000 дяця пит яма 00000 сполука Структура Назва, дані І СМ5 і посилання "ВиС Intermediate.Y 00000000 dyatsia pit yama 00000 compound Structure Name, data I CM5 and reference "You

М. МН» З-трет-бутил-1-п-толіл-1Н-піразол-5-амін.M. MH» 3-tert-butyl-1-p-tolyl-1H-pyrazol-5-amine.

А М В! 2,46 хв. (Спосіб 1 основний); іт/72 230 (МАН), (ЕБ"). ? СігШо, Р. Е. еї аїІ., УМО 2000/43384, 27 липня 2000.And M V! 2.46 min. (Method 1 is basic); it/72 230 (MAN), (EB"). ? SigSho, R. E. ei aiI., UMO 2000/43384, July 27, 2000.

МеMe

Ше 4-(2-хлорпіримідин-4-іл)уокси)нафталін-1-амін. в М. м А 1,80 хв. (Спосіб 2); т/2 272/274 (МЕН), (Е5").It is 4-(2-chloropyrimidin-4-yl)oxy)naphthalene-1-amine. in M. m A 1.80 min. (Method 2); t/2 272/274 (MEN), (E5").

Нам ТО сіно, Р. Р. еїаї., УМО 2002/92576, 21 листопадаNam TO sino, R.R. eiai., UMO 2002/92576, November 21

СІ 2000.SI 2000.

Проміжна сполука С: 4-(4-амінонафталін-1-іл)уокси)-М-фенілпіримідин-2-амін. с, оIntermediate compound C: 4-(4-aminonaphthalen-1-yl)oxy)-N-phenylpyrimidin-2-amine. with, o

Ані й: оNor: o

Проміжна сполука В ММ ж | р КВ Проміжна сполука ЄIntermediate compound B MM same | r KV Intermediate compound E

РА нм ваRA nm va

ШиShi

З-WITH-

До розчину суміші Проміжної сполуки В (50,0 г, 184 ммоль) і аніліну (42,0 мл, 460 ммоль) вTo a solution of a mixture of Intermediate B (50.0 g, 184 mmol) and aniline (42.0 mL, 460 mmol) in

ТНЕ (200 мл), що продувається азотом, додали ртТзА (17,5 г, 92,0 ммоль) в одній порції.To TNE (200 mL) purged with nitrogen, rtT3A (17.5 g, 92.0 mmol) was added in one portion.

Реакційну суміш нагрівали до 70 "С протягом 1,5 години, протягом яких вона утворила осад.The reaction mixture was heated to 70 "C for 1.5 hours, during which it formed a precipitate.

Суміш охолодили до кімнатної температури і розбавили ТНЕ (200 мл). Осад зібрали фільтруванням, промили ТНЕ (2х100 мл), а потім суспендували в гетерогенній суміші ОСМ (600 мл) і водн. Маон (2М, 200 мл) і інтенсивно перемішували протягом 1 години, протягом якої суспендовані тверді частинки розчинилися. Шари розділили і водний шар екстрагували ОСМ (200 мл). Екстракти ОСМ об'єднали, висушили і упарили у вакуумі. Залишок розтирали з ефіром (150 мл) і отриману в результаті тверду речовину промивали ефіром (2х50 мл) для отриманняThe mixture was cooled to room temperature and diluted with TNE (200 ml). The precipitate was collected by filtration, washed with TNE (2x100 ml), and then suspended in a heterogeneous mixture of OSM (600 ml) and aq. Mahon (2M, 200 mL) and stirred vigorously for 1 hour during which the suspended solids dissolved. The layers were separated and the aqueous layer was extracted with OSM (200 mL). The OSM extracts were combined, dried and evaporated in a vacuum. The residue was triturated with ether (150 mL) and the resulting solid was washed with ether (2x50 mL) to obtain

Проміжної сполуки С у вигляді брудно-білої твердої речовини (26 г, 43 95); В' 1,95 хв. (Спосіб 2); т/2 329 (МН), (Е5").Intermediate compound C as an off-white solid (26 g, 43 95); In 1.95 min. (Method 2); t/2 329 (MN), (E5").

Сполука (): 1-(3-(трет-бутил)-1-п-толіл-1Н-піразол-5-іл)-3-(4-(2-(феніламіно)піримідин-4- іл)уокси)нафталін-1-іл)усечовина. "и 0. 1. РПОСОЇСІ ГУ. гм неCompound (): 1-(3-(tert-butyl)-1-p-tolyl-1H-pyrazol-5-yl)-3-(4-(2-(phenylamino)pyrimidin-4-yl)uoxy)naphthalene -1-il) section. "y 0. 1. RPOSOYSI GU. um no

Проміжна сполука А ------------ М ри ра ММ ? Проміжна М М М ! Е ! "спопука Є - | З то ек вIntermediate compound A ------------ M ry ra MM ? Intermediate M M M ! IS ! "supuka E - | Z to ek v

Ме Спопука (|)Me Spopuka (|)

Гетерогенну суміш розчину МагСОз (3,84 г, 36 ммоль) у воді (42 мл) і Проміжної сполуки А (10,5 г, 45,7 ммоль) в ізопропілацетаті (130 мл, 1,082 моль) енергійно перемішували при кімнатній температурі протягом 5 хв., і потім обробили фенілкарбонохлоридатом (5,77 мл, 45,7 ммоль). Перемішування суміші продовжували протягом ще 4 годин, після чого шари розділили.A heterogeneous mixture of a solution of MgCO3 (3.84 g, 36 mmol) in water (42 mL) and Intermediate A (10.5 g, 45.7 mmol) in isopropyl acetate (130 mL, 1.082 mol) was vigorously stirred at room temperature for 5 min., and then treated with phenylcarbonochloridate (5.77 mL, 45.7 mmol). Stirring of the mixture was continued for another 4 hours, after which the layers were separated.

Органічну фазу додали до розчину Проміжної сполуки С (10,0 г, 30,5 ммоль) і триетиламіну (423 мкл, 3,05 ммоль) в ізопропілацетаті (60 мл, 511 ммоль). Реакційну суміш нагрівали до 48 С протягом 1 години, потім розбавили ізопропілацетатом (190 мл) і охолоджували до кімнатної температури протягом ще 18 годин, протягом яких утворився осад. Осад відділили фільтруванням, промили ізопропілацетатом, а потім сушили у вакуумі при 40 "С, для отримання вказаної в заголовку Сполуки (І) у вигляді білої твердої речовини (безводна вільна основа, поліморфна форма А) (16,5 г, 92 Об); В! 2,74 хв. (Спосіб 2); т/2 584 (МАН): (Е5"); "Н ЯМР (400The organic phase was added to a solution of Intermediate C (10.0 g, 30.5 mmol) and triethylamine (423 μL, 3.05 mmol) in isopropyl acetate (60 mL, 511 mmol). The reaction mixture was heated to 48 C for 1 hour, then diluted with isopropyl acetate (190 mL) and cooled to room temperature for another 18 hours, during which a precipitate formed. The precipitate was separated by filtration, washed with isopropyl acetate, and then dried under vacuum at 40 "C to obtain the title Compound (I) as a white solid (anhydrous free base, polymorph form A) (16.5 g, 92 Vol); B! 2.74 min. (Method 2); t/2 584 (MAN): (E5"); "H NMR (400

МГц, ОМ5О-ав6)0: 1,30 (9Н, с), 2,41 (ЗН, с), 6,43 (1Н, с), 6,58 (ІН, д), 6,78 (1Н, т), 6,97 (2Н, т), 7,28 (2Н, уш.м), 7,39 (2Н, д), 7,40 (1Н, д), 7,49 (2Н, д), 7,56 (1Н, м), 7,63 (1Н, м), 7,82 (1Н, дд), 7,95 (ІН, д), 8,10 (1Н, д), 8,40 (1Н, д), 8,77 (1Н, с), 9,16 (ІН, уш.с), 9,50 (ІН, уш.с).MHz, ОМ5О-ав6)0: 1.30 (9Н, s), 2.41 (ЗН, s), 6.43 (1Н, s), 6.58 (IN, d), 6.78 (1Н, t), 6.97 (2H, t), 7.28 (2H, ush.m), 7.39 (2H, d), 7.40 (1H, d), 7.49 (2H, d), 7.56 (1H, m), 7.63 (1H, m), 7.82 (1H, dd), 7.95 (IN, d), 8.10 (1H, d), 8.40 (1H , d), 8.77 (1H, s), 9.16 (IN, ush.s), 9.50 (IN, ush.s).

Приклад 2: Короткий виклад результатів скринінгу іп міїго та іп мімоExample 2: Summary of ip miigo and ip mimo screening results

Іп міго профіль Сполуки (І), описаної в даному документі, як визначено з використанням протоколів, описаних вище, представлені нижче (Таблиці 4а-ї) порівняно зі структурно спорідненою Еталонною сполукою, яка являє собою М-(4-(4-(3-(З-трет-бутил-1-п-толіл-1 Н- піразол-5-ілу)уреїдо)нафталін-1-ілокси)пірідин-2-іл)-2-метоксіацетамід, який раніше був описаний як потужний протизапальний агент із противірусною активністю (МО, К. еї аї., УМО 2010/112936, РСТ/582010/050575, 7 жовтня 2010 апа Мо, К. еї аї.,, УМО 2010/067130,The Ip migo profile of Compound (I) described herein, as determined using the protocols described above, is presented below (Tables 4a-i) compared to the structurally related Reference Compound, which is M-(4-(4-(3 -(3-tert-butyl-1-p-tolyl-1H-pyrazol-5-yl)ureido)naphthalene-1-yloxy)pyridin-2-yl)-2-methoxyacetamide, which was previously described as a potent anti-inflammatory agent with antiviral activity (MO, K. ei ai., UMO 2010/112936, PCT/582010/050575, October 7, 2010 apa Mo, K. ei ai.,, UMO 2010/067130,

РСТ/582009/051702, 17 червня 2010).PCT/582009/051702, June 17, 2010).

Сполука за даним винаходом демонструє дуже схожий профіль інгібування відносноThe compound of the present invention exhibits a very similar inhibition profile relative to

Еталонної сполуки в діапазоні аналізів кіназних ферментів з помітним виключенням інгібуючої активності Сполуки (І) відносно ферменту СО5К5а, що значно слабше, ніж у Еталонної сполуки (Таблиця 4а).Reference compound in the range of analyzes of kinase enzymes with a notable exception of the inhibitory activity of Compound (I) against the enzyme СО5К5а, which is significantly weaker than that of the Reference compound (Table 4a).

Таблиця 4аTable 4a

Інгібування ЛІПС-індукованого вивільнення ТМЕа та ІІ--8 і РоїУІС-індукованаInhibition of LIPS-induced release of TMEa and II--8 and RoiUIS-induced

ІСАМ-експресія для Сполуки (І)ISAM expression for Compound (I)

ЛПС-індуковане вивільнення (НМ) РОМІС/ ІСАМІ1LPS-induced release (NM) ROMIS/ ISAMI1

ТМЕа І--8 (НМ) о ІСво (ТНРІ) ВЕС»о (40937) ІСво (40937) ІСво (ВЕА52В)TMEa I--8 (NM) o ISvo (TNRI) VES»o (40937) ISvo (40937) ISvo (VEA52B)

Сполука (І) 3,4 2,3 2,2 102Compound (I) 3.4 2.3 2.2 102

Еталонна сполука 13 013 1,3 21Reference compound 13 013 1.3 21

Профіль зв'язування кінази Сполуки (І) за даним винаходом також порівнювали з профілемThe kinase binding profile of Compound (I) according to the present invention was also compared with the profile

Еталонної сполуки проти р3З8 МАРК, НСК, с-5гс, Зук і 5КЗа/В. Сполука (І) показала дуже різний фенотип, демонструючи глибоке інгібування зв'язування із рРЗВМАРК, НСК, с-542С і Бук кіназами, без істотного ефекту відносно С5КЗа (Таблиця 46).Reference compound against p3Z8 MARK, NSC, c-5gs, Zuk and 5KZa/V. Compound (I) showed a very different phenotype, showing profound inhibition of binding to pRZVMARK, NSC, c-542C and Buk kinases, with no significant effect on C5KZa (Table 46).

Коо)Coo)

Таблиця 4рTable 4

Порівняння профілю зв'язування ферменту Сполуки (І) з егалонною сполукоюComparison of the enzyme binding profile of Compound (I) with the analog compound

Випробовувані Значення Ка для зв'язування кінази (нМ) сполуки рЗ3ВМАРКа рів МАРКУ нок с-9Іс зук аЗКЗа азкзрTested Ka values for kinase binding (nM) of the compound pZ3VMARKa riv MARKU nok s-9Is zuk aZKZa azkzr

Сполука (І) 20 43 8 10 14 20000 1200Compound (I) 20 43 8 10 14 20000 1200

Еталонна сполука 1 5 5 4 9 180 24Reference compound 1 5 5 4 9 180 24

Сполука за даним винаходом демонструє профіль, схожий із профілем Еталонної сполуки при клітинних аналізах, які виявляють протизапальні властивості проти ендотоксинів опосередкованого вивільнення як ТМРа, так і 1-8 (Таблиця 4с). Профілі сполук також подібні в клітинних системах, які вимірюють їх впливи на реплікацію респіраторного вірусу (РВЛ- індукований ІСАМІ і СРЕ-експресія і РОВ-стимульована експресія Е-білка), так само, як і вірус- індуковане запалення (РВЛ спричинив вивільнення ІІ -8; Таблиця 44).The compound of the present invention exhibits a profile similar to that of the Reference compound in cellular assays showing anti-inflammatory properties against endotoxin-mediated release of both TMRa and 1-8 (Table 4c). Compound profiles are also similar in cellular systems measuring their effects on respiratory virus replication (RVL-induced ISAMI and CPE expression and ROM-stimulated E-protein expression), as well as virus-induced inflammation (RVL induced the release of II - 8; Table 44).

Таблиця 4сTable 4p

Інгібування ЛПС-індукованого вивільнення ТМЕа та ІС-8 ї РоумІС-індукована ІСАМ-експресія для Сполуки (І)Inhibition of LPS-induced release of TMEa and IS-8 and RoamIS-induced ISAM expression for Compound (I)

ЛПС-індуковане вивільнення (НМ) РОМІС/ ІСАМІ1LPS-induced release (NM) ROMIS/ ISAMI1

ТМЕа І--8 (НМ) о ІСво (ТНРІ) ВЕС»о (40937) ІСво (40937) ІСво (ВЕА52В)TMEa I--8 (NM) o ISvo (TNRI) VES»o (40937) ISvo (40937) ISvo (VEA52B)

Сполука (|) 34 2,3 2,2 102Compound (|) 34 2.3 2.2 102

Еталонна сполука 13 013 1,3 21Reference compound 13 013 1.3 21

Таблиця 4аTable 4a

Вплив Сполуки (І) на поширення РВЛ-16 (СРЕ) і запалення (експресія ІСАМ-1 і вивільнення ІІ -8) і на поширення РСВ (Експресія Е-білка)The effect of Compound (I) on the spread of RVL-16 (CRE) and inflammation (expression of ISAM-1 and release of II-8) and on the spread of RSV (E-protein expression)

Випробовувана Значення ІСво (НМ) для стимульованих РВЛ Значення ІСво (НМ) для речовина вивільнення/експресії стимульованої РСВ експресіїTested Value of ISvo (NM) for stimulated RVL Value of ISvo (NM) for substance release/expression of stimulated RSV expression

ІСАМ-1 СРЕ .ISAM-1 SRE.

І--8 (ВЕА52В) (ВЕАЗОВІ (МАС) Е-білок (ЛКЕБ)I--8 (VEA52B) (VEAZOVI (MAS) E-protein (LKEB)

Сполука (І) 0,036 0,023 17,1 15,4Compound (I) 0.036 0.023 17.1 15.4

Еталонна сполука 0,065 0,37 4,7 22,0Reference compound 0.065 0.37 4.7 22.0

Сполука за даним винаходом демонструвала більш високу ефективність при прозапальній продукції цитокінів у макрофагах мокротиння і клітинах бронхіального епітелію, отриманих від пацієнтів із ХОХЛ, які були значною мірою несприйнятливі до флутиказону пропіонату, кортикостероїду (Таблиця 4е).The compound of the present invention demonstrated greater efficacy in pro-inflammatory cytokine production in sputum macrophages and bronchial epithelial cells obtained from patients with COPD who were largely resistant to fluticasone propionate, a corticosteroid (Table 4e).

Таблиця 4еTable 4e

Вплив Сполуки (І) і флутиказону пропіонату на прозапальне вивільнення цитокінів у макрофагах мокротиння і клітинах бронхіального епітелію, отриманих від пацієнтів із ХОХЛEffect of Compound (I) and fluticasone propionate on proinflammatory cytokine release in sputum macrophages and bronchial epithelial cells obtained from patients with COPD

Значення ІСво (нМ) і/або Е-тах (95 у відхиленні)! для вказаної випробовуваної речовиниValue of ISvo (nM) and/or E-tach (95 in deviation)! for the specified test substance

Тип клітини Цитокін Сполука (І) Флутиказону пропіонатCell type Cytokine Compound (I) Fluticasone propionate

І -6 43 (79) (26)And -6 43 (79) (26)

Макрофаг мокротиння П-8 58 (64 1З й р ТМЕа 17 (86) (18)Sputum macrophage P-8 58 (64 1Z and r TMEa 17 (86) (18)

МІРТа 7,5 (89) (20)MIRTA 7.5 (89) (20)

Клітина бронхіального І -6 1,7 (100) (38) епітелію І -8 0,85 (100) (17) 1. Значення Е-тах (максимальне інгібування) розраховували як 95 інгібування, отриманого при 0,1 мкг/мл.Bronchial cell I -6 1.7 (100) (38) epithelium I -8 0.85 (100) (17) 1. The value of E-takh (maximum inhibition) was calculated as 95 inhibition obtained at 0.1 μg/ml .

Проте, переважно, Сполука (І) показує помітно меншу активність у аналізованих системах, які вимірюють її вплив на життєздатність клітин і клітинне ділення (мітоз), що вказує на те, що ця сполука ймовірно має перевершувальний терапевтичний індекс порівняно з Еталонною сполукою (Таблиця 41).However, predominantly, Compound (I) shows significantly less activity in assay systems measuring its effects on cell viability and cell division (mitosis), indicating that this compound likely has a superior therapeutic index compared to the Reference Compound (Table 41 ).

Таблиця 4їTable 4

Вплив Сполуки (І) на життєздатність клітин і клітинне діленняEffect of Compound (I) on cell viability and cell division

Аналіз МТТ!' Аналіз мітозуMTT analysis!' Analysis of mitosis

Випробовувана Життєздатність клітин у момент часу, Фо інгібування при 5 мкг/мл у речовина визначена в клітинах 4-0937 клітинах МКПК 4 години 24 годиниTested Viability of cells at the time point, Fo inhibition at 5 μg/ml of the substance determined in cells 4-0937 cells MKPC 4 hours 24 hours

Сполука (І) ув ме 0С0Ш0Ї3Ї1313131333318-Compound (I) in formula 0С0Ш0Ї3Ї1313131333318-

Еталонна сполука -ме че 87,8 1. Дослідження життєздатності клітин: -ме и «ме вказують значення, яке знаходиться нижче і вище, відповідно, ніякого суттєвого порогового ефекту, визначеного як 30 95-е інгібування при 1 мкг/мл у момент часу, не вказано.Reference compound -me che 87.8 1. Cell viability study: -me and "me indicate the value that is below and above, respectively, no significant threshold effect, defined as 30 95th inhibition at 1 μg/ml at the time point , not specified.

Вплив на мишей Сполукою (І), як було виявлено, викликає дозозалежне інгібування ЛПС- індукованого накопичення нейтрофілів, і час протікання експерименту показав, що лікарськийExposure of mice to Compound (I) was found to cause a dose-dependent inhibition of LPS-induced neutrophil accumulation, and the time course of the experiment showed that the drug

Б засіб мав велику тривалість дії (Таблиця 5).B means had a long duration of action (Table 5).

Таблиця 5Table 5

Вплив дії Сполуки (І) на ЛПС-індуковану нейтрофілію дихальних шляхів у мишейThe effect of Compound (I) on LPS-induced neutrophilia of the respiratory tract in mice

Кількість нейтрофілів у РБАЛ (х105/мл) в указаний час перед введеннямThe number of neutrophils in RBAL (x105/ml) at the indicated time before administration

Сполука (І) (мг/мл) дози (95 інгібування)! 18,922,5 ннниншншншшш 15,6221 (18 ннниншншншшш 9,821,6 (48 нннниннннннннннЕ 4,4х0,89 (77 9,9ж1,8 (48 18,32,3 (4 1. М-8 на групу.Compound (I) (mg/ml) dose (95 inhibition)! 18,922.5 mm 15.6221 (18 mm 9,821.6 (48 mm) 4.4x0.89 (77 9.9x1.8 (48 18.32.3 (4 1. M-8 per group).

Результат впливу Сполуки (І) на накопичення макрофагів і нейтрофілів у РБАЛ на моделі сигаретного диму з мишами був досліджений (Таблиця ба). Модель сигаретного диму, що застосовувалася для цього дослідження, як повідомляється, являє собою несприйнятливу до кортикостероїдів систему (Меаіспегіа 5. еї аїЇ., У. Рпаптасої. Ехр. Тпег., 2008, 324(3):921-9.), і було підтверджено, що флутиказону пропіонат не інгібує накопичення ні нейтрофілів, ні макрофагів у дихальних шляхах при 1,75 мкг/миша (35 мкг, двічі на день, інтраназально), при тій же дозі, при якій зроблене »80 95-не інгібування ЛПС-індуковане накопичення нейтрофілів.The effect of Compound (I) on the accumulation of macrophages and neutrophils in RBAL in the cigarette smoke model with mice was investigated (Table ba). The cigarette smoke model used for this study is reportedly a corticosteroid-resistant system (Meaispegia 5. ei aiYi., U. Rpaptasoi. Ehr. Tpeg., 2008, 324(3):921-9.), and it was confirmed that fluticasone propionate did not inhibit the accumulation of either neutrophils or macrophages in the respiratory tract at 1.75 μg/mouse (35 μg, twice daily, intranasally), at the same dose at which the »80 95-no inhibition of LPS was performed - induced accumulation of neutrophils.

Вплив на мишей Сполукою (І), як було виявлено, викликає дозозалежне інгібування накопичення як макрофагів, так і нейтрофілів в РБАЛ, індукованого сигаретним димом.Exposure of mice to Compound (I) was found to cause a dose-dependent inhibition of the accumulation of both macrophages and neutrophils in RBAL induced by cigarette smoke.

Таблиця баTable ba

Вплив дії Сполуки (І) в моделі тютюнового диму на мишах . Кількість клітин у РБАЛ х10/мл (95 інгібування)The effect of Compound (I) in the model of tobacco smoke on mice. Number of cells in RBAL x10/ml (95 inhibition)

Діюча сполука (І) (мкг/мл) З Макрофдаг 70037331 Нейтрофл./ 35- НейтрофілActive compound (I) (μg/ml) Z Makrofdag 70037331 Neutrophil./ 35- Neutrophil

Носій я повітря 4,330,45 2,650,21I carry air 4,330.45 2,650.21

Носій т тютюновий дим 14,430,33 13,750,31 0,32 13,320,20 (11) 12,420,32 (12) 1,6 11,6:0,42 (28) 10,5:20,06 (29) 8,0 10,120,42 (43) 9,150,28 (41) 7,920,20 (64) 7,9--0,34 (52)Carrier t tobacco smoke 14,430.33 13,750.31 0.32 13,320.20 (11) 12,420.32 (12) 1.6 11.6:0.42 (28) 10.5:20.06 (29) 8, 0 10,120.42 (43) 9,150.28 (41) 7,920.20 (64) 7.9--0.34 (52)

Дані для кількості клітин показані як середнє хх ЕМ, М-5.Data for cell counts are shown as mean xx EM, M-5.

Вплив на мишей Сполукою (І) також інгібує індуковану сигаретним димом продукцію СХСІ 1 (КС) у РБАЛ дозозалежним чином (Таблиця 66).Exposure of mice to Compound (I) also inhibited cigarette smoke-induced production of SCHI 1 (CS) in RBAL in a dose-dependent manner (Table 66).

Таблиця 6рTable 6

Вплив дії Сполуки (І) на вивільнення СХСІ 1 (КС) уThe effect of the action of Compound (I) on the release of SHSI 1 (KS) in

РБАЛ у моделі тютюнового диму на мишах : СХОЇ 1 (КО) у РБАЛRBAL in the tobacco smoke model on mice: SCHOI 1 (KO) in RBAL

Діюча ополуга () (иктіл) 80111111Active help () (iktil) 80111111

Дані для рівня СХСЇ показані як середнє хх ЕМ, М-5.Data for the level of SCHSI are shown as the average xx EM, M-5.

Таким чином, ці результати показують, що Сполука (І) має протизапальні властивості, аналогічні Еталонній сполуці, описаній вище, і, переважно, пов'язані з перевершувальним терапевтичним індексом.Thus, these results show that Compound (I) has anti-inflammatory properties similar to the Reference compound described above, and preferably associated with a superior therapeutic index.

Приклад 3: Отримання Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі ВExample 3: Preparation of Compound (I) in the form of an anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B

Сполуку (І) (398 г, в поліморфній формі А) розчинили в ацетоні (3,98 л) і розчин нагріли до 50 "С. МОКІТ А БОРКА (19,9 г, активоване вугілля) і діатоміт, флюсований-прожарений(3,98 г; фільтруючий агент), потім додали і суміш нагрівали зі зворотним холодильником (56 С) протягом 15 хв. Суміш фільтрували і отриману в результаті тверду речовину промивали ацетоном (100 мл). Об'єднані фільтрат і промивний ацетон нагрівали зі зворотним холодильником (56 "С) і 900 мл розчинника видалили перегонкою при атмосферному тиску при 56"С. Суміш охолодили до 50 "С і воду (398 мл) потім додали протягом 1 години, поки температура підтримувалася на рівні 50 "С. Після додаткових ЗО хв. при 50 "С гетерогенну суміш охолодили до 20 "С протягом 6 годин, і потім перемішували при 20 "С протягом 10 годин.Compound (I) (398 g, in polymorphic form A) was dissolved in acetone (3.98 L) and the solution was heated to 50 °C. .98 g; filtering agent) was then added and the mixture was heated under reflux (56 C) for 15 min. The mixture was filtered and the resulting solid was washed with acetone (100 mL). The combined filtrate and washing acetone were heated under reflux (56 "C) and 900 mL of the solvent was removed by distillation at atmospheric pressure at 56 "C. The mixture was cooled to 50 "C and water (398 mL) was then added over 1 hour while the temperature was maintained at 50 "C. After an additional 30 min . at 50 "C, the heterogeneous mixture was cooled to 20 "C for 6 hours, and then stirred at 20 "C for 10 hours.

Отриманий в результаті продукт фільтрували і осад промили ацетоном (318 мл). Продукт сушили у вакуумі при 45 "С протягом 20 годин для отримання Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В (240,9 г, вихід 60,5 Об).The resulting product was filtered and the precipitate was washed with acetone (318 ml). The product was dried in a vacuum at 45 "C for 20 hours to obtain Compound (I) in the form of an anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B (240.9 g, yield 60.5 O).

Вказаний вище спосіб може бути додатково адаптований, щоб сприяти кристалізації із затравкою.The above method can be further adapted to facilitate seeded crystallization.

Приклад За: Отримання Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В, яка містить зменшений залишковий розчинникExample For: Preparation of Compound (I) in the form of an anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B, which contains a reduced residual solvent

Додатково, Сполука (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В, отримана відповідно до процедури, описаної вище (Приклад 3), або подібним методом, може бути ресуспендована з води, щоб зменшити залишковий розчинник, таким чином:Additionally, Compound (I) as the anhydrous free base in the solid crystalline polymorph form B obtained according to the procedure described above (Example 3) or a similar method may be resuspended from water to reduce the residual solvent, as follows:

Зо Сполуку (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В (230 г, отримана відповідно до Прикладу 3) суспендували в деїіонізованій воді (2,30 л) і перемішували при 20 С протягом 4-х годин. Суміш фільтрували і продукт промивали деіонізованою водою (2х115 мл), а потім сушили при 45 "С у вакуумі для отримання Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В, яка містить зменшений залишковий розчинник (227 г, 98,7 У).From Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B (230 g, obtained according to Example 3) was suspended in deionized water (2.30 l) and stirred at 20 C for 4 hours. The mixture was filtered and the product was washed with deionized water (2 x 115 mL) and then dried at 45 °C under vacuum to obtain Compound (I) as the anhydrous free base in the solid crystalline polymorph form B, which contains reduced residual solvent (227 g, 98, 7 U).

Приклад 4: Мікронізація Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі ВExample 4: Micronization of Compound (I) in the form of an anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B

Мікронізовану кристалічну поліморфну форму В Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи отримували з допомогою мікронізуючого пристрою струминного млина (1,5 бар із застосуванням ручної подачі з тиском форсунки 1,5 бар) (виробництва НозоКама АЇїріпе).Micronized crystalline polymorphic form B of Compound (I) in the form of an anhydrous free base was obtained with the help of a micronizing device of a jet mill (1.5 bar with the use of manual feed with a nozzle pressure of 1.5 bar) (manufactured by NozoKama Aiiripe).

Розподіл частинок за розмірами вимірювали за допомогою лазерної дифракції (МаїмегпThe size distribution of particles was measured using laser diffraction (Mayimegp

Маєвхіегхігег 20005 інструмент). Розподіли частинок за розмірами можуть бути представлені із застосуванням ЮО:о, Озо і Юго значень. Медіанне значення ЮО5о розподілу частинок за розмірами визначається як розмір частинки в мікронах, який ділить розподіл навпіл. Вимірювання, отримане методом лазерної дифракції, більш точно охарактеризоване як об'ємний розподіл, і,Maevhiegghigeg 20005 tool). Particle size distributions can be represented using ЮО:о, Озо and Юго values. The median ХО5о value of the particle size distribution is defined as the particle size in microns that bisects the distribution. The laser diffraction measurement is more accurately characterized as a volume distribution, and,

отже, значення Ю»5о, отримане за допомогою цієї процедури, більш значуще відносно згадуваного значення Юм5о (медіана для об'ємного розподілу). Використовувані у даному документі значення Юм стосуються розподілів частинок за розміром, виміряних за допомогою лазерної дифракції. Аналогічним чином, значення ЮО:о і Юоо, які використовуються в контексті лазерної дифракції, мають на увазі значення ЮОміо і Юмоео, і стосуються розміру частинок, внаслідок чого 10 95 розподілу лежить нижче значення Ото і 90 95 розподілу лежить нижче значення Озго відповідно. Мікронізована кристалічна поліморфна форма В Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи мала наступний розподіл частинок за розмірами: О:о по 0,850 мкм; О5о по 1,941 мкм і Юоо по 4,563 мкм.therefore, the value of Yu»5o obtained by this procedure is more significant relative to the mentioned value of Yum5o (the median for the volume distribution). Hume values used herein refer to particle size distributions measured by laser diffraction. Similarly, the values UO:o and Uoo, used in the context of laser diffraction, refer to values of UOmio and Umoeo, and refer to particle size, resulting in 10 95 of the distribution lying below the Oto value and 90 95 of the distribution lying below the Ozgo value, respectively. Micronized crystalline polymorphic form B of Compound (I) in the form of an anhydrous free base had the following particle size distribution: О:о 0.850 μm; O5o at 1.941 μm and Yuoo at 4.563 μm.

Приклад 5: ПРД-аналіз Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердих кристалічних поліморфних формах А і ВExample 5: PRD analysis of Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic forms A and B

ПРД-аналіз Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердих кристалічних поліморфних формах А і В (поліморфну форму В мікронізували, слідуючи методиці Прикладу 4) був проведений із застосуванням способу, описаного в розділі Загальні методики. Отримані дифракційні рентгенограми показані на фігурах 1 їі 2 відповідно. Обидві дифракційні рентгенограми показали піки дифракції без присутності галогену, тим самим вказуючи, що обидва матеріали є кристалічними. Піки і їх інтенсивність перераховані нижче (Таблиця 7а іPRD analysis of Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic forms A and B (polymorphic form B was micronized following the method of Example 4) was carried out using the method described in the General Methods section. The resulting X-ray diffraction patterns are shown in Figures 1 and 2, respectively. Both X-ray diffraction patterns showed diffraction peaks without the presence of halogen, thereby indicating that both materials are crystalline. Peaks and their intensity are listed below (Table 7a and

Таблиця 76).Table 76).

Таблиця 7аTable 7a

Характеристичні ПРД піки і їх інтенсивності для Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній формі АCharacteristic PRD peaks and their intensities for Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline form A

ПРД пікиPRD peaks

Значення 2-Тета! Інтенсивності 7,68 19,7 8,7 20,8 10,3 22,6 11,2 23,1 12,4 24,6 15,2 25,5 16,2 26,7 17,5 2174 1. Значення х 0,2 градуса.The value of 2-Theta! Intensities 7.68 19.7 8.7 20.8 10.3 22.6 11.2 23.1 12.4 24.6 15.2 25.5 16.2 26.7 17.5 2174 1. Value x 0.2 degrees.

Таблиця 7рTable 7

Характеристичні ПРД піки для Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній формі В після мікронізаціїCharacteristic PRD peaks for Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline form B after micronization

ПРД пікиPRD peaks

Значення 2-Тета! Інтенсивності 3,9 16,7 б 18,3 7,7 18,7 8,6 19,9 10,9 20,9 11,8 22,0 12,7 22,6 п760-о 14,3 гг, ни 15,9 28,9 1. Значення х 0,2 градуса.The value of 2-Theta! Intensities 3.9 16.7 b 18.3 7.7 18.7 8.6 19.9 10.9 20.9 11.8 22.0 12.7 22.6 p760-o 14.3 h, n 15.9 28.9 1. Value x 0.2 degrees.

Приклад 6: Визначення точки плавлення Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердих кристалічних поліморфних формах А і ВExample 6: Determination of the melting point of Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic forms A and B

Точки плавлення Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердих кристалічних поліморфних формах А і В (остання після мікронізації) були отримані із застосуванням диференціальної сканувальної калориметрії (ДСК), як описано в розділі Загальні методики.Melting points of Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic forms A and B (the latter after micronization) were obtained using differential scanning calorimetry (DSC) as described in the General Methods section.

Поліморфна форма А плавилася при 191,6 "С, а поліморфна форма В плавилася при 214,0 с.Polymorphic form A melted at 191.6 °C, and polymorphic form B melted at 214.0 °C.

З даних ДСК було підраховано, що форма В мала більшу теплоту плавлення, ніж форма А. Так як форма В також мала більш високу температуру плавлення, ніж форма А, це вказує, що поліморфні форми А і В монотропно зв'язані, що означає, що більш високоплавка поліморфна форма В буде більш стабільною, ніж більш нижчеплавка поліморфна форма А, при всіх температурах. Таким чином, можна очікувати, що поліморфна форма В є термодинамічно більш стабільною, ніж поліморфна форма А.From the DSC data, it was calculated that form B had a higher melting point than form A. Since form B also had a higher melting point than form A, this indicates that the polymorphic forms A and B are monotropically linked, meaning that that the higher melting polymorphic form B will be more stable than the lower melting polymorphic form A at all temperatures. Thus, it can be expected that polymorphic form B is thermodynamically more stable than polymorphic form A.

Приклад 7: Термічний аналіз Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В після мікронізаціїExample 7: Thermal analysis of Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B after micronization

Термічний аналіз Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в кристалічній поліморфній формі В (мікронізованої) проводили із застосуванням аналізів ТГА, ДСП, ПРД, ІК-спектроскопії іThermal analysis of Compound (I) in the form of an anhydrous free base in crystalline polymorphic form B (micronized) was carried out using analyzes of TGA, DSP, PRD, IR spectroscopy and

ДСК, як описано в розділі Загальні методики. У разі необхідності, зразок при температурі навколишнього середовища і відносній вологості (еталонний зразок/"0 днів") порівнювали зі зразками, які зберігалися при різних температурах і відносній вологості (порівняльні зразки).DSC as described in the General Methods section. If necessary, a sample at ambient temperature and relative humidity (reference sample/"0 days") was compared with samples stored at different temperatures and relative humidity (reference samples).

Термогравіметричний аналіз: Еталонний зразок (1-0) і порівняльні зразки, які до аналізу були піддані різним умовам зберігання, нагрівали зі швидкістю 20 "С/хв. від кімнатної температури до 300 "С. Крива ТГА для контрольного зразка (1-0) ілюструється на Фігурі 3, і результати для всіх зразків наведені нижче (Таблиця 8). Як видно на Фігурі 3, втрата маси на 0,6 95 спостерігалася в діапазоні температур від кімнатної до 180 "С, що було зумовлено випаровуванням розчинника.Thermogravimetric analysis: The reference sample (1-0) and comparative samples, which were subjected to different storage conditions before the analysis, were heated at a rate of 20 °C/min. from room temperature to 300 °C. The TGA curve for the control sample (1-0) is illustrated in Figure 3, and the results for all samples are shown below (Table 8). As can be seen in Figure 3, a mass loss of 0.6 95 was observed in the temperature range from room to 180 "C, which was due to the evaporation of the solvent.

Втрата маси, яка трапилася вище 180 "С, була зумовлена випаровуванням і розкладанням продукту. При порівнянні цього профілю втрати маси з профілями порівняльних зразків вThe mass loss that occurred above 180 "C was due to evaporation and decomposition of the product. When comparing this mass loss profile with the profiles of the comparative samples in

Таблиці 8 не спостерігалося ніяких істотних відмінностей.Table 8 did not observe any significant differences.

Динамічна сорбція парів: Ділянка ізотерми ДСП для мікронізованого еталонного зразка показана на фігурі 4, і зміна ДСП в ділянці маси для мікронізованого еталонного зразка показана на фігурі 5. В ході початкової стадії сушки втрати маси не було зареєстровано, і продукт не показав гігроскопічної поведінки. Продукт адсорбував до 0,4 95 вологи залежно відDynamic Vapor Sorption: The particleboard isotherm plot for the micronized reference sample is shown in figure 4, and the change in particleboard mass plot for the micronized reference sample is shown in figure 5. During the initial drying stage, no mass loss was recorded and the product did not show hygroscopic behavior. The product adsorbed up to 0.4 95 moisture depending on

Зо вологості повітря. Продукт, як було виявлено, повністю висихає і залишається в тому ж кристалічному твердому стані (форма В) під час випробування, як свідчать ІК-спектр і спектрFrom air humidity. The product was found to completely dry and remain in the same crystalline solid state (form B) during the test as evidenced by IR and spectrum

ПРД, являє собою, по суті, той же самий продукт до і після аналізу ДСП.PRD is, in fact, the same product before and after chipboard analysis.

ПРД аналіз і ІК-спектроскопія: Дифракційна рентгенограма еталонного зразка (1-0) показана на фігурі 2, а ІК-слід показаний на фігурі 6. Дифракційну рентгенограму і ІК-слід порівнювали з тими ж для порівняльних зразків (підданих впливу різних умов зберігання), і результати наведені в Таблиці 8. Дифракційна рентгенограма і ІК-слід були ідентичні для всіх зразків.DPR analysis and IR spectroscopy: The diffraction pattern of the reference sample (1-0) is shown in Figure 2, and the IR trace is shown in Figure 6. The diffraction pattern and IR trace were compared with those of the reference samples (exposed to different storage conditions) , and the results are shown in Table 8. The X-ray diffraction pattern and IR trace were identical for all samples.

Диференціальна сканувальна калориметрія: Еталонний зразок (1-0) і порівняльні зразки, заздалегідь піддані впливу різних умов зберігання, нагрівали зі швидкістю 10 "С/хв. від 25 "С до 300 "С. Крива ДСК еталонного зразка показана на Фігурі 7, і результати для всіх зразків наведені нижче (Таблиця 8). З Фігури 7 видно, що еталонний зразок плавиться із розкладанням при 214,0 76.Differential scanning calorimetry: The reference sample (1-0) and comparative samples previously exposed to various storage conditions were heated at a rate of 10 °C/min from 25 °C to 300 °C. The DSC curve of the reference sample is shown in Figure 7, and the results for all samples are shown below (Table 8).It can be seen from Figure 7 that the reference sample melts with decomposition at 214.0 76.

Таблиця 8Table 8

Термічний аналіз Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В після мікронізації. во 77777171 171111111110,6 |Стуві Неї Стуві Неї) 214 | брудно-білий - 577 поенееелни де ов | сви | сяк | си) вають. - 570--Thermal analysis of Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B after micronization. in 77777171 171111111110,6 |Stuvi Nei Stuvi Nei) 214 | dirty white - 577 poeneelny de ov | svi | like | are) are - 570--

Продовження Таблиці 8 поенетнтянк се те | сви | ся Ге) вдювня (4 тижд./40 С/756відн.вол. | 0,8 | 0,3 | -Нем | Неї | 214 | брудно-білий 1. Стуві.: кристалічний; 2. «Кеї: спектр ідентичний еталонному зразку; 3. тах (С); МТ: не випробовувалося у даному аналізі.Continuation of Table 8 poenetntyank se te | svi | sia Ge) widow (4 weeks/40 C/756 relative vol. | 0.8 | 0.3 | -Nem | Nei | 214 | off-white 1. Stuvi.: crystalline; 2. "Kei: spectrum identical to the reference sample; 3. tach (C); MT: not tested in this analysis.

Таким чином, очевидно, що Сполука (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В має хорошу фізичну стабільність.Thus, it is obvious that Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B has good physical stability.

Приклад 8: ВЕРХ-аналіз Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В після мікронізації.Example 8: HPLC analysis of Compound (I) as anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B after micronization.

Хімічну стабільність Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В після мікронізації визначали шляхом порівняння зразка, який містився при температурі навколишнього середовища і відносній вологості (еталонний зразок), зі зразками, які зберігалися при різних температурах і відносних вологостях, як викладено вище в даному документі (порівняльні зразки, Таблиця 8). Еталонний і порівняльні зразки потім аналізували методом ВЕРХ, застосовуючи спосіб, описаний в розділі Загальні методики, і за візуальним контролем. Результати цього дослідження (дані наведені в Таблиці 9) показують, що Сполука (І), отримана у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В, є хімічно стабільною, хоча спостерігалася певна чутливість до світла.The chemical stability of Compound (I) in the form of an anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B after micronization was determined by comparing a sample that was kept at ambient temperature and relative humidity (reference sample) with samples that were stored at different temperatures and relative humidity. as outlined above in this document (comparative samples, Table 8). The reference and reference samples were then analyzed by HPLC using the method described in the General Methods section and under visual control. The results of this study (data shown in Table 9) show that Compound (I) obtained as anhydrous free base in solid crystalline polymorph form B is chemically stable, although some sensitivity to light was observed.

Таблиця 9Table 9

Хімічна стабільність Сполуки (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В після мікронізації во 77777717 171110,66 | М' | бруднобілий | М "( 40С/7596відн.вол. | 0,66 | 068 | брудно-білий | брудно-білийChemical stability of Compound (I) in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B after micronization in 77777717 171110.66 | M' | dirty white | M "( 40С/7596relative vol. | 0.66 | 068 | off-white | off-white

БОС 77777771 171110.69, | 066 | брудно-білий | брудно-білий 1. Не випробовувалося в даній системі аналізу; 2. Стимульоване денне світло: світлова камера 700 Вт/м.BOS 77777771 171110.69, | 066 | dirty white | off-white 1. Not tested in this analysis system; 2. Stimulated daylight: light chamber 700 W/m.

Приклад 9: Отримання фармацевтичних складівExample 9: Obtaining pharmaceutical compositions

Зразковий фармацевтичний склад за винаходом буде складатися з 0,4 мас. 95 Сполуки (І) (у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній поліморфній формі В), 98,6 мас. 95 лактози моногідрату (інгаляційний сорт) і 1,0 мас. 95 магнію стеарату, в якому мас. 95 всіх компонентів оснований на масі сухого фармацевтичного складу.An exemplary pharmaceutical composition according to the invention will consist of 0.4 wt. 95 Compounds (I) (in the form of anhydrous free base in solid crystalline polymorphic form B), 98.6 wt. 95 lactose monohydrate (inhalation grade) and 1.0 wt. 95 magnesium stearate, in which the mass 95 of all components are based on the weight of the dry pharmaceutical composition.

В описі і формулі винаходу, які слідують, якщо контекст не вимагає іншого, слово "містити" і його варіації, такі, як "містить" і "такий, що містить в собі", потрібно розуміти як значення включення вказаного цілого числа, стадії, групи цілих чисел або групи стадій, але не виключення будь-якого іншого цілого числа, стадії, групи цілих чисел або групи стадій.In the description and claims that follow, unless the context requires otherwise, the word "comprise" and its variations, such as "comprises" and "that which contains", should be understood as meaning the inclusion of the specified integer, stage, group of integers or group of stages, but not to the exclusion of any other integer, stage, group of integers or group of stages.

Всі патенти і патентні заявки, згадані в даному документі, включені шляхом посилання у всій їх повноті.All patents and patent applications mentioned herein are incorporated by reference in their entirety.

Claims (11)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУFORMULA OF THE INVENTION 1. Сполука формули (І) Ви о1. The compound of formula (I) You about ГУ. з Ф В М рі М М у Н Н нм Ме () або її фармацевтично прийнятна сіль, включаючи всі її стереоізомери і таутомери.Gu. with FVM ri MM M u NN nm Me () or its pharmaceutically acceptable salt, including all its stereoisomers and tautomers. 2. Сполука за п. 1 у вигляді вільної основи.2. The compound according to claim 1 in the form of a free base. 3. Сполука за п. 2 у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній формі.3. The compound according to claim 2 in the form of an anhydrous free base in solid crystalline form. 4. Сполука за п. 3, де сполука формули (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній формі характеризується порошковою дифракційною рентгенограмою, як показано на Фігурі 1 (Форма А).4. The compound according to claim 3, where the compound of formula (I) in the form of an anhydrous free base in a solid crystalline form is characterized by a powder diffraction X-ray pattern, as shown in Figure 1 (Form A). 5. Сполука за п. 3, де сполука формули (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній формі характеризується порошковою дифракційною рентгенограмою, яка має один, два, три, чотири, п'ять, шість або сім піків, вибраних із (- 0,2) 10,3, 15,2, 17,5, 23,1, 24,6, 26,7 і 27,4 градусів 2-тета.5. The compound according to claim 3, where the compound of formula (I) in the form of an anhydrous free base in a solid crystalline form is characterized by a powder diffraction pattern having one, two, three, four, five, six or seven peaks selected from (- 0.2) 10.3, 15.2, 17.5, 23.1, 24.6, 26.7 and 27.4 degrees 2-theta. б. Сполука за п. 3, де сполука формули (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній формі характеризується порошковою дифракційною рентгенограмою, як показано на Фігурі 2 (Форма В).b. The compound according to claim 3, wherein the compound of formula (I) in the form of an anhydrous free base in a solid crystalline form is characterized by a powder diffraction pattern as shown in Figure 2 (Form B). 7. Сполука за п. 3, де сполука формули (І) у вигляді безводної вільної основи в твердій кристалічній формі характеризується порошковою дифракційною рентгенограмою, яка має один, два, три, чотири, п'ять, шість, сім або всі вісім піків, вибраних із (ж 0,2) 3,9, 6,1, 11,8, 14,3, 16,7, 18,3, 18,7 і 28,9 градусів 2-тета.7. The compound according to claim 3, where the compound of formula (I) in the form of an anhydrous free base in a solid crystalline form is characterized by a powder diffraction pattern having one, two, three, four, five, six, seven or all eight peaks selected with (w 0.2) 3.9, 6.1, 11.8, 14.3, 16.7, 18.3, 18.7 and 28.9 degrees of 2-theta. 8. Фармацевтична композиція, яка містить сполуку за будь-яким з пп. 1-7, в поєднанні з одним або більше фармацевтично прийнятними розчинниками або носіями.8. A pharmaceutical composition comprising a compound according to any one of claims 1-7 in combination with one or more pharmaceutically acceptable solvents or carriers. 9. Спосіб лікування стану, вибраного з групи: ХОХЛ (включаючи хронічний бронхіт і емфізему), астма, бронхіальна астма у дітей, кістозний фіброз, саркоїдоз, ідіопатичний легеневий фіброз, алергічний риніт, риніт, синусит, алергічний кон'юнктивіт, кон'юнктивіт, алергічний дерматит, Зо контактний дерматит, псоріаз, неспецифічний виразковий коліт, запалення суглобів, вторинне відносно ревматоїдного артриту або остеоартриту, ревматоїдний артрит, панкреатит, кахексія, інгібування росту і метастаз пухлин, включаючи недрібноклітинну карциному легені, карциному молочної залози, карциному шлунка, колоректальні карциноми, злоякісну меланому і респіраторні вірусні інфекції у пацієнтів із хронічними станами або у імунокомпрометованих пацієнтів, який включає введення пацієнту ефективної кількості сполуки формули (І) за будь- яким із пп. 1-7.9. A method of treating a condition selected from the group: COPD (including chronic bronchitis and emphysema), asthma, bronchial asthma in children, cystic fibrosis, sarcoidosis, idiopathic pulmonary fibrosis, allergic rhinitis, rhinitis, sinusitis, allergic conjunctivitis, conjunctivitis , allergic dermatitis, Zo contact dermatitis, psoriasis, nonspecific ulcerative colitis, joint inflammation, secondary to rheumatoid arthritis or osteoarthritis, rheumatoid arthritis, pancreatitis, cachexia, inhibition of growth and metastasis of tumors, including non-small cell lung carcinoma, breast carcinoma, gastric carcinoma, colorectal carcinomas, malignant melanoma and respiratory viral infections in patients with chronic conditions or in immunocompromised patients, which comprises administering to the patient an effective amount of a compound of formula (I) according to any one of claims 1-7. 10. Комбінований продукт, який містить: (А) сполуку формули (І) за будь-яким з пп. 1-7; і (В) інший терапевтичний засіб, де кожний із компонентів (А) і (В) приготований в суміші з фармацевтично прийнятним розріджувачем або носієм; де вказана комбінація може являти собою як одиночний фармацевтичний склад, так і набір-із- компонентів.10. A combined product that contains: (A) a compound of formula (I) according to any of claims 1-7; and (B) another therapeutic agent, wherein each of components (A) and (B) is prepared in admixture with a pharmaceutically acceptable diluent or carrier; where the specified combination can be both a single pharmaceutical composition and a set of components. 11. Комбінований продукт за п. 10, який відрізняється тим, що іншим терапевтичним засобом є антивірусною терапією, такою як занамівір або озельтамівір.11. The combination product of claim 10, wherein the other therapeutic agent is an antiviral therapy such as zanamivir or oseltamivir. - о т- в ж Б зоо нт Іі- ке т а 85 400 о й ш і- -- 000 200 1000 о З 35 дп АБ 2ТЕТА о- o t- in z B zoo nt Iike t a 85 400 o y sh i- -- 000 200 1000 o Z 35 dp AB 2TETA o Фіг. 1 200 о Б, ж З Гі 8 -а і- юю т ГТ т- о ча Ф і- З во и о 20 0 5 юю в р и Кк Кг ГІ г: Й 2-ТЕТА 0Fig. 1 200 o B, zh Z Gi 8 -a i- yuyu t GT t- o cha F i- Z vo i o 20 0 5 yuyu v r y Kk Kg GI g: Y 2-THETA 0 Фіг. 2Fig. 2 2.0 нн ОД 180072.0 nn OD 18007 1.5 ри а 5) С в - - ря 2 З в а ЗОВ 10 2 ге й -к ш шЕ хе б 97 рн) а5 б оо о 75 5 75 100 125 150 175 200 295 250 У Температура (С) Опімегва! МА.БА ТА Іпвілапепів1.5 ry a 5) S v - - rya 2 Z v a ZOV 10 2 ge y -k sh shE he b 97 rn) a5 b oo o 75 5 75 100 125 150 175 200 295 250 U Temperature (C) Opimegva! MA.BA AND Ipvilapepiv Фіг. З нн п нн нн Ев и І і Н І Ізотерми ДСП при 25 ! Е і Ї і де тб-гжвіуню сука 1жщхз хо жщлЬІ МІ бЖнЕмя ТЕНи і : Е : І і ЕК й ой Я ій: Я й с о : ий : о 4 й Н що М До а й Ж : т Я кий Н хг : шов Н в 025 ра Е т Я дик І Га ! ж Н ІМ а. й : х : и водо ши. й : пн Ше І Е : ет НТ Н : ше Ме Є Н ї Я в и МИ Н : о М ! ше : : ; ; Н Й 5 ГЕ 26 що ща 5 і РЕ 6 зо 1 Е ї : і ; 84: зе відносної вологості І і Н Е і їмЗ-пемиухк мілих Ж бота Маміманеклуникімн Ме жКя І впав н Ой і ТТН ДРТ СЕРЕ Є КАТА ВАЖКЕ РЕ ВІ КСВ АРТ Ю ВТІК ВВЕ ТАТ ТАТ ТТ АКТІВ У ТВ ВГ ВВЕ ВЕК НІВ ТВ НКТ КІТ Р КТ ЧАТ КОТ РЛЄ КВ ТТ В РОК КАВЖТ ЛЕ АВМ.Fig. Z nn p nn nn Ev i I i N I Chipboard isotherms at 25! E i Y i de tb-gzhviunyu suka 1zhshkhz ho zhshchl'I MI bZhnEmya TENy i : E : I i EK i oi I iy: I i s o : iy : o 4 i N that M Do a i Z : t I kiy N hg : seam N in 025 ra E t I dyk I Ga ! same N IM a. y : x : y vodo shi. y : pn She I E : et NT N : she Me E N y I v y MY N : o M ! what : : ; ; N Y 5 GE 26 ch shcha 5 i RE 6 zo 1 E i : i ; 84: ze relative humidity I and N E and imZ-pemiuhk milyh Z bota Mamimaneklunykimn Me zhKya I vpav n Oi and TTN DRT SERE E KATA VAZHKE RE VI KSV ART U TIK VVE TAT TAT TT ACTIV U TV VG VVE VEK NIV TV NKT KIT R KT CHAT KOT RLE KV TT V ROK KAVZHT LE AVM. Фіг. 4 о о Кінетичний графікFig. 4 o o Kinetic graph 9.45 з - 100 А ще це 80 : 035 Я і и ії в 8 03. пн нище ТУ ! Кк щ шо ут " Е ! ПИ і ' й ня Еоов. І наш 5 Щ г ше М 5 шо 02. й й я і а я не - яв ї- сю ва І о. щі : ще й - г Ще «м а9:45 a.m. - 100. And this is 80:035. Kk sh sho ut " E ! PY i ' y nya Eoov. And our 5 Sh g she M 5 sho 02. y y i and a I ne - yav yi- syu va I o. shchi : sche y - sche "m and ОМ. й ТІ щи м ж о я. 5 щ. б дов. и йе Ще Ще шо Ши ке 1 во З в й г й 500 1000 т500 2000 2500 000 ПУ трж Богрпол бопихоп Час/хв ЕЕ бипасЕМевертвпльегх Бупаті ПУУК ІЗЯЕ- ТВOHM. and those are the same. 5 sh. b dov. y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y 500 1000 t500 2000 2500 000 PU trzh Bogrpol bopyhop Time/min EE bypassEMevertvpliegh Bupati PUUK IZYAE-TV Фіг. 5 026 Н Н Н НИ НІ нини і 1 : 0 ви, мА - ; 8- - - т - ж----2-5--- 511-520 ЗШ «НЕ ші А-Щ------ 5 НА ПО ПО ПО ПО ПО ПНО ОТТО НАННЯ ГАННА НАХ НН ЧО НА НАННЯ НА ЗИ решшн пИННЛЕ ВАТ. о Р нн НН НГ Б ки ПАТО ТО ПО НИ ННЯ КОТА НАННЯ А ші ШІ с ші М З ща: мі 3 МВЗАЕББ Бе Ж Ж 2-- - - -:тю «5 ЛИ А ші КІ ними я и ПИ ТТ по ЕВ Я ЧМТ ей пиши нини шаг ше 1МТЯ) шо й ри ші 0 пев Й По ДИ В НИ ОО ОО НИ ПО ОО ОО ОО ВО 4000 3000 2000 1500 1000 500 Хвильові числа (см-1)Fig. 5 026 N N N NI NI now and 1: 0 you, mA - ; 8- - - т - ж----2-5--- 511-520 ЗШ "НЕ ши А-Щ------ 5 NA PO PO PO PO PO PO PO OTTO NANNYA HANNA NAH NN CHO NA NANNYA NA ZY solution of PINNLE OJSC. o R nn NN NG B ki PATO TO PO NI NNYA KOTA NANNYA A shi SHI s shi M Z shcha: mi 3 MVZAEBB Be J J 2-- - - -:tyu «5 LY A shi KI nim i i PI TT po EV Я ЧМТ ей пиш нины шаг ше 1МТЯ) шо и ры ши 0 pev Y Po DY V NI OO OO NI PO OO OO OO OO VO 4000 3000 2000 1500 1000 500 Wave numbers (cm-1) Фіг. 6Fig. 6 ' 05 -- -05 то-5 Е С-Я ж Е Е що 7 іо З г о еЕ Е во -5 -55 -65 БО 75 100 125 150 175 200 225 250 275 Зо вер Температура (с) Шпімегва! МА. БА ТА Іпегителів' 05 -- -05 to-5 E S-I same E E what 7 io Z h o eE E vo -5 -55 -65 BO 75 100 125 150 175 200 225 250 275 Zo ver Temperature (s) Shpimegwa! MA. BA AND Ipegitelov Фіг. 7Fig. 7