TWI842689B

TWI842689B - 活性調節劑

Info

Publication number: TWI842689B
Application number: TW107142976A
Authority: TW
Inventors: 渋谷彰; 小田千草; 阿部史枝; 藤山聡
Original assignee: 國立大學法人筑波大學
Priority date: 2017-11-30
Filing date: 2018-11-30
Publication date: 2024-05-21

Abstract

本發明係關於一種活性調節劑，該活性調節劑係用以調節CD300b依賴性吞噬作用的活性之手段，本發明進一步關於一種用以治療或預防該活性所涉及的疾病或病狀之藥劑，該活性調節劑包含CD300a結締性物質，並且調節巨噬細胞中之CD300b依賴性吞噬訊號。

Description

活性調節劑

本發明係關於一種含有CD300a結締性物質之活性調節劑及缺血性疾病用藥劑。

在高齡化、生活習慣歐美化等背景下，日本國內存在著許多的缺血性疾病之罹病者，佔據死亡原因的上位並且在醫療經濟面成為負擔。缺血性疾病，係由於心臟、腦等臟器中的血管暫時性或持續性阻塞或狹窄而導致之由急遽的血流減少所致之氧、營養欠缺狀態所引起的疾病，就缺血性疾病的代表性疾病而言，可列舉例如，心肌梗塞、腦梗塞等。

細胞凋亡(apoptosis)係與維持生體內之恆常性等相關之細胞死亡的機構之一，已知係在惡化的生體內環境，例如，前述缺血性疾病中所引起之氧、營養欠缺狀態等中所暴露的細胞中被引發。引起細胞凋亡之細胞係藉由被巨噬細胞等吞噬細胞辨識進行吞噬處理，而被迅速地去除。

由巨噬細胞等所進行之藉由迅速地吞噬細胞凋亡的細胞去除，係在抑制缺血性疾病的病態進行中產生巨大的貢獻。細胞被引起細胞凋亡時，藉由巨噬細胞被引誘而將細胞凋亡細胞從體內去除(廓清)，而減輕周圍的細胞或組織之負荷。如此之細胞凋亡細胞的廓清不能被正常地引發時，由於細胞凋亡細胞及其內容物在周圍蓄積而對周圍的細胞及組織造成負荷，而引起周邊組織的損傷。據此可知，由巨噬細胞進行之細胞凋亡細胞的吞噬在維持生體的恆常性而言是極為重要的。

引起細胞凋亡之細胞，已知是將在正常細胞中存在於細胞膜內側之屬於磷脂質之磷脂醯絲胺酸(PS：phosphatidylserine)露出於細胞表面。該PS已知是對巨噬細胞等吞噬細胞，介導所謂的「吃我(eat me)」訊號，藉由巨噬細胞辨識細胞凋亡細胞上的PS而使巨噬細胞吞噬細胞凋亡細胞(非專利文獻1、2)。

在巨噬細胞中，就接受「吃我(eat me)」訊號之一因子而言，已知有屬於受體型酪胺酸激酶家族之Mer酪胺酸激酶(Mer tyrosine kinase，MerTK)。MerTK係經由屬於其配位體(ligane)之gas6、蛋白6(protein6)，藉由與細胞凋亡細胞表面之PS結締而使巨噬細胞的吞噬作用亢進。例如，已有從MerTK缺損之小鼠所調製出的巨噬細胞係不能吞噬細胞凋亡細胞的發現(非專利文獻3)。

再者，亦已報導有屬於受體家族蛋白質之CD300家族成員的CD300b(CLM7/LMIR5)，係將細胞凋亡細胞表面之PS作為配位體進行辨識，而調節細胞凋亡細胞的吞噬作用(非專利文獻4)。

另一方面，本發明者等亦已針對屬於相同CD300受體家族成員之CD300a進行報導，在屬於免疫系統細胞之肥大細胞等中，CD300a係藉由與PS結締而使免疫系抑制性訊號的傳達亢進(專利文獻1)，以及巨噬細胞的CD300a即使與PS結締也不會促進吞噬(非專利文獻5)。

[先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]國際公開第2013/077186號

[非專利文獻]

[非專利文獻1]V.A.Fadok et al. J Immunol 148,2207 Apr 1,1992

[非專利文獻2]J.Savill,I.Dransfield, C.Gregory,C.Haslett, Nat Rev Immunol 2,965, 2002

[非專利文獻3]Nishi et al. Mol. Cell. Biol. April 2014 vol. 34 no. 8 1512-1520

[非專利文獻4]Murakami et al. Cell Death and Differentiation (2014) 21, 1746-1757

[非專利文獻5]Nakahashi-Oda et al. J. Exp. Med., 209, 1493-1503

本發明係以解明CD300b依賴性吞噬作用(dependent phagocytosis)之活化調控機制，並且提供屬於用以調節該CD300b依賴性吞噬作用之活性的手段之活性調節劑，進一步提供用以治療或預防該活性所涉及的疾病或病狀之藥劑為目的。

本發明者等，為了解明巨噬細胞的吞噬作用中之CD300b依賴性吞噬作用的活化調控機制經過精心研究的結果，發現藉由與PS結締，經活化的CD300a抑制巨噬細胞的CD300b依賴性吞噬作用。

本發明等推測在生體內產生缺血時，CD300b依賴性吞噬作用藉由CD300a受到抑制，由該缺血引發細胞凋亡之細胞及其細胞內物質在組織內蓄積之情形，係成為引發缺血性疾病或使缺血性疾病惡化的原因。據此，而思及使用抗CD300a抗體調節CD300a的活性，藉由調控CD300b依賴性吞噬作用而可治療缺血性疾病，以及抗CD300a抗體可成為用以治療缺血性疾病之工具，進而完成本發明。

藉由基於該等發現而完成的本發明，係可提供例如，下述[1]至[9]所示之活性調節劑及藥劑。

[1]一種活性調節劑，其係含有CD300a結締性物質，係用以調節巨噬細胞中之CD300b依賴性吞噬訊號。

[2]如[1]所述之活性調節劑，其中，前述CD300a結締性物質係阻礙巨噬細胞中之CD300a的活性者。

[3]如[1]或[2]所述之活性調節劑，其中，前述CD300a結締性物質係阻礙CD300a與磷脂醯絲胺酸的結締者。

[4]如[1]至[3]任一項所述之活性調節劑，其中，前述CD300a結締性物質係抗體或肽。

[5]如[1]至[3]任一項所述之活性調節劑，其中，前述CD300a結締性物質係抗CD300a抗體。

[6]如[5]所述之活性調節劑，其中，前述抗CD300a抗體係CD300a中和抗體。

[7]如[5]或[6]所述之活性調節劑，其中，前述抗CD300a抗體係抗CD300a單株抗體。

[8]一種缺血性疾病用藥劑，其係含有[1]至[7]中任一項所述之活性調節劑。

[9]如[8]所述之缺血性疾病用藥劑，其中，前述缺血性疾病用藥劑係用以治療或預防選自缺血性心臟疾病、缺血性腦疾病、缺血性腸疾病、缺血性腎臟疾病、四肢缺血、視網膜缺血、缺血性肺疾病及脊髓缺血中之一種以上者。

藉由本發明，可提供一種活性調節劑及缺血性疾病用藥劑，該活性調節劑係調節與巨噬細胞之CD300b依賴性吞噬作用相關的訊號傳達。

第1圖顯示在參考例1所得之流動式細胞測量術分析之結果。關於以抗MerTk抗體+對照抗體處理之細胞群的結果以圓形表示，關於以抗MerTk抗體+抗CD300a抗體處理之細胞群的結果以四方形表示。

第2圖A係顯示在參考例2中進行腎缺血處置，再灌流處置24小時後之CD300a^fL/fL小鼠(對照小鼠)及CD300a^fL/fLLysm-Cre小鼠中之尿素氮(BUN)及肌酸酐(Cre)之血清中濃度的測定值之圖。第2圖B係顯示關於各別小鼠之腎缺血處置、再灌流處置後之生存率的圖。

第3圖係參考例3中之腎缺血處置前(naive)、腎缺血處置及再灌流處置24小時後及72小時後之CD300a^fL/fL小鼠(對照小鼠)及CD300a^fL/fLLysm-Cre小鼠的腎臟組織切片中之蘇木精-伊紅(hematoxylin eosin)染色之染色影像、及缺血處置及再灌流處置24小時後之TUNEL染色之染色影像。

第4圖係顯示在實施例1中進行腎缺血處置，再灌流處置24小時後之尿素氮(BUN)及肌酸酐(Cre)的血清中濃度之測定值的圖表。抗CD300a抗體投予群以三角形表示，非投予群以四方形表示。

第5圖係顯示在參考例4中，進行暫時性腦缺血處置之CD300a^fL/fLLysm-Cre小鼠及CD300a^fL/fL小鼠(對照小鼠)中之神經學檢查(neurological observation)的分數之圖。

第6圖係顯示在實施例2中，進行暫時性腦缺血處置之小鼠中之神經學檢查的分數之圖。抗CD300a抗體投予群以四方形表示，非投予群以圓形表示。

第7A圖係顯示在實施例3中，進行暫時性腦缺血處置之小鼠中之神經學檢查的分數之圖。抗CD300a抗體投予群以四方形表示，非投予群以圓形表示。第7B圖係顯示在實施例3中製作之抗CD300a抗體投予或非投予小鼠中之大腦組織標本中的蘇木精-伊紅染色之染色影像及其解析結果的圖。

第8圖係顯示在參考例5中製作之使用CD300a^fL/fLLysm-Cre小鼠及野生型小鼠(C57BL/6J)的心肌梗塞模式之生存率的圖。

本發明之活性調節劑及缺血性疾病用藥劑，係以調節巨噬細胞中之CD300b依賴性吞噬訊號為特徵。具體而言，係關於藉由調節CD300b依賴性吞噬訊號傳達，而由缺血部位中之細胞凋亡細胞的吞噬所致之去除(廓清)。

關於本發明之活性調節劑及缺血性疾病用藥劑，於以下詳細地說明。

本明細書中所謂「缺血」，係指由於血管的狹窄或阻塞，導致供給至組織之動脈血量減少，藉此所引起之組織的氧、營養等欠缺的狀態，所謂「缺血性部位」，係指由於缺血導致動脈血量減少，其結果，使營養、氧等呈減少狀態之部位。

藉由由於缺血而引發細胞凋亡之細胞上的PS，而使巨噬細胞表面的CD300b被活化時，CD300b係與屬於連接器分子之DAP12締合。其結果，藉由存在於DAP12之ITAM(immunoreceptor tyrosine-based activating motif，免疫受體酪胺酸活化基序)之酪胺酸被磷酸化，而使具有SH₂域(domain)之Syk家族激酶被吸引並活化，藉由將其下流之PI3K/Akt路徑活化，而使巨噬細胞的吞噬作用亢進。

另一方面，藉由CD300a與PS結締而活化，藉由其細胞內區域之ITIM(免疫受體酪胺酸活化基序)序列而吸引屬於酪胺酸磷酸酯酶之SHP-1。其結果，藉由阻礙存在於前述DAP12之ITAM之酪胺酸的磷酸化，而抑制CD300b依賴性吞噬訊號。

<活性調節劑>

本發明之「活性調節劑」包含CD300a結締性物質，以調節巨噬細胞中之CD300b依賴性吞噬訊號為特徵。本發明之活性調節劑，具體而言，係藉由該活性調節劑所含有之CD300a結締性物質與CD300a結締，而阻礙(中和)CD300a與PS的結締，藉此而促進CD300b依賴性吞噬訊號傳達。

<CD300a結締性物質>

前述CD300a結締性物質較佳為阻礙巨噬細胞中之CD300a活性之物質，更佳為阻礙CD300a與PS結締之物質。阻礙CD300a活性之物質沒有特別的限定，較佳為抗體或肽，更佳為抗CD300a抗體。

<抗CD300a抗體>

在本發明之活性調節劑中所使用之抗CD300a抗體，係將CD300a作為抗原並進行特異性辨識之抗體。抗CD300a抗體可為遊離的抗體，亦可為其他任意物質(例如，輔助藥劑等)被直接或間接地固定之抗體。在前述活性調節劑中所含有的可為特定一種類之單株抗體，亦可為二種類以上的單株抗體之組合(或多株抗體)，從特異性之觀點而言，較佳為含有一種類的單株抗體。

前述抗CD300a抗體係發揮本發明之作用效果的抗體，亦即，只要是具有阻礙或抑制CD300a與PS的結締之作用(中和作用)者，就沒有特別的限定，特佳為選擇針對CD300a之中和抗體。中和抗體係可藉由公知的方法進行製作。若為選擇單株抗體作為前述抗CD300a抗體時，一般而言，可藉由如，使用CD300a之免疫、融合瘤的製作，依篩選、培養、回收之順序，而製作抗CD300a單株抗體。該等之中，只要是選擇具有CD300a與PS之合適的中和作用，發揮本發明之作用效果的適當的單株抗體即可。

選擇多株抗體作為前述抗CD300a抗體時，就多株抗體而言，可使用將含有抗原分子的抗原決定區之特定序列部分作為免疫抗原而作成之一般的多株抗體，但不限定於此，例如，亦可使用2種類以上的單株抗體之混合物作為多株抗體的替代品(同等品)。此外，產生抗體之動物(免疫動物)的種類不是受到特別的限定者，只要是選自與以往同樣的小鼠、大鼠、天竺鼠、兔子、山羊、綿羊等即可。

前述抗CD300a抗體，只要是具有阻礙或抑制CD300a與PS之結締的作用(中和作用)，並且發揮本發明之作用效果的抗體，則不需要是如天然抗體之具有全長者，亦可為抗體片段或衍生物。亦即，在本明細書中之如「抗體」之用語中，不僅包含全長的抗體，亦包含抗體片段(Fab片段或F(ab')2等)、嵌合抗體(人源化抗體等)、多功能抗體等衍生物。

<肽>

本發明中作為CD300a結締性物質使用之肽，較佳為阻礙巨噬細胞中之CD300a活性之肽，更佳為阻礙CD300a與PS結締之肽。例如，較佳為選擇與CD300a特異性結締之肽，具體而言，是可成為CD300a之配位體的肽，較佳為阻礙巨噬細胞中之CD300a活性之肽。

<缺血性疾病用藥劑>

本發明之「缺血性疾病用藥劑」，係含有前述活性調節劑作為有效成分。利用該活性調節劑促進CD300b依賴性吞噬訊號傳達，藉此，缺血部位中之細胞凋亡細胞係藉由迅速地吞噬而被去除(廓清)，因此可抑制細胞凋亡細胞在組織內之蓄積，成為可進行缺血性疾病的治療、或預防。

此外，「治療」中包含治癒疾病或症狀，亦包含將疾病或症狀緩和(改良)，再者，「預防」中包含將疾病或症狀防範於未然，亦包含防止疾病或症狀在治癒後之復發。

本發明之缺血性疾病用藥劑的投予對象，無論是人類，或人類以外(例如，小鼠等哺乳類)，較佳為人類，更佳為罹患缺血性疾病或者是有罹病之虞的人類。

本發明之所謂屬於缺血性疾病用藥劑的對象疾病之「缺血性疾病」，係指無論有無自覺症狀，由於動脈狹窄或阻塞，導致組織持續缺血脂狀態、或由所述之缺血所引發的不良狀態。就缺血性疾病而言，沒有特別的限定特，可列舉例如，狹心症或心肌梗塞等缺血性心臟疾病；腦梗塞或毛毛樣腦血管病(Moyamoya disease)等缺血性腦疾病；腎功能不全等缺血性腎臟疾病；缺血性大腸炎或腸間膜動脈阻塞症等缺血性腸疾病；壞疽或阻塞性動脈硬化症等四肢缺血；糖尿病視網膜症等視網膜缺血；缺血性肺疾病；脊髓缺血；或有此等之跡象的狀態等。

本發明之缺血性疾病用藥劑的投予部位，係可因應作為投予對象之疾病或病狀而選擇，不是受到特別的限定者。例如，可為藉由血中投予而進行全身性投予，亦可為對產生缺血之部位的黏膜下組織、結締組織或其附近進行投予，也可為對產生缺血之部位直接投予。就投予方法而言，可為經口投予及非經口投予，惟，較佳為非經口投予，例如，可進行靜脈注射、皮下注射、局部注入、腦室內投予等，最佳為靜脈注射，亦即，全身投予。

本發明之缺血性疾病用藥劑可單獨地投予，或者是，與其他藥劑，例如血栓溶解藥等組合使用。

本發明之缺血性疾病用藥劑的投予量沒有特別的限制，從經濟上的觀點及盡可能迴避副作用之觀點而言，較佳為在可獲得必需的治療效果之範圍中盡可能少的量。具體而言，較佳為因應疾病的程度、患者的體重、年齡、性別進行適當地選擇，因應改善的程度等進行適當地增減。再者，投予次數較佳是設為每1日1次至數次。

同樣地，本發明之缺血性疾病用藥劑所含有的抗CD300a抗體之量亦可適當地選擇。例如，較佳為受投予之人類或動物每1kg，10至100mg，較佳為20至50mg。

本發明之缺血性疾病用藥劑的形態沒有特別的限定，例如，以成為期望黏度、含有成分之濃度之方式，溶解或分散在稀釋劑中而成的溶液或分散液，根據常法，亦可進行利用過濾器之過濾滅菌，也可藉由殺菌劑之調配等進行無菌化。再者，亦可為準備使用時的形態，例如，藉由冷凍乾燥法等調製成固體製劑，在使用前溶解或分散在稀釋劑後進行投予。

本發明之「缺血性疾病用藥劑」係因應所須可進一步含有藥學上容許之添加劑。例如，可含有稀釋劑、載體或賦形劑。

所謂藥學上容許之添加劑，只要是不會違反本發明之目的者的限制下即沒有特別的限定，可列舉例如，稀釋劑、載體、賦形劑、穩定劑、保存劑、緩衝劑、界面活性劑等乳化劑、著色劑、黏稠劑、二醇類等溶解輔助劑、氯化鈉或甘油等之等張劑等。

就具體的添加劑之例而言，可列舉乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、澱粉、***膠、磷酸鈣、惰性海藻酸類、黃蓍膠、明膠、矽酸鈣、結晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水糖漿、水、水/乙醇、水/二醇、水/聚乙烯、高張鹽水、二醇、丙二醇、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂、礦物油或硬質脂肪等脂肪性物質、或該等之適當的混合物。

可非經口投予之形態，須為經滅菌，沒有置入生理學上不容許之藥劑者，或者是，為了使投予時之刺激或其他副作用最小化，須為莫耳滲透壓濃度低者，因此，溶液較佳為等張，或者是須為僅些許高張者，例如高張鹽水(生理食鹽水)。

[實施例]

以下，根據實施例進一步具體地說明本發明之較佳態樣，惟，本發明不是被該等實施例所限定。

[參考例1]

從野生型小鼠(C57BL/6J)取出胸腺後經分離之胸腺細胞中，添加***(Dexamethasone)10μM並培養12小時培養，藉此誘導細胞凋亡，並進一步利用pHrodo(商標)色素進行標識。

另一方面，收取野生型或CD300b KO小鼠之腹腔滲出細胞，藉由培養30分鐘，使巨噬細胞黏附於培養皿中。

將1.5×10⁶個前述標識胸腺細胞與1.5×10⁵個巨噬細胞，在抗MerTk中和抗體(2B10C42，Biolegend)20ng/ml及抗CD300a抗體(TKA139，中外製藥股份有限公司)的存在下、或抗MerTk抗體(2B10C42，Biolegend社)20ng/ml及對照抗體(IC17-mouse IgG1 sFc，中外製藥股份有限公司)1ng/ml存在下培養90分鐘。之後，使用流動式細胞測量儀(BD FACSAria(商標)，BD Bioscience公司)，計測抗CD11b抗體(M1/70，TONBO bioscience社)及抗F4/80抗體(BM8，Biolegend公司)呈陽性之總巨噬細胞數、及pHrodo陽性細胞數。之後，算出後者相對於前者之比率，將該數值作為吞噬細胞凋亡細胞之巨噬細胞的比率(FlowJo(註冊商標)，FlowJo LLC公司)。

將結果示於第1圖。

相對於WT巨噬細胞，源自CD300b KO小鼠之巨噬細胞無論有無抗CD300a抗體，其細胞凋亡細胞之吞噬率皆顯著地較低。

在此，藉由抗CD300a抗體而中和CD300a之細胞中，在WT巨噬細胞中細胞凋亡細胞的吞噬率顯著地亢進，惟，在CD300b KO巨噬細胞中沒有觀察到吞噬率的亢進。

由此可知，由CD300b所致之巨噬細胞的吞噬作用，係藉由抗CD300a抗體而被亢進。

[參考例2]

藉由使CD300a^fL/fL小鼠(筑波大學生命科學動物資源中心製)與Lysm-Cre小鼠(Jackson laboratory社)交配，而製作出屬於巨噬細胞特異性之CD300a條件性剃除小鼠之CD300a^fL/fLLysm-Cre小鼠。

分別將8-14週齡之CD300a^fL/fL小鼠(對照小鼠)及CD300a^fL/fLLysm-Cre小鼠在麻醉下開腹，使用夾子將兩側腎動脈阻塞(腎缺血處置)。

在阻塞25分鐘或35分鐘後，去除夾子解除阻塞(再灌流處置)，並進行閉腹。

針對各個小鼠，測定再灌流處置24小時後之尿素氮(BUN)及肌酸酐(Cre)的血清中濃度。

再者，針對阻塞35分鐘後進行再灌流處置之小鼠，一併進行處置後之生存率的經過觀察。

將結果示於第2圖。

由此等結果可知，相對於對照組，在巨噬細胞中CD300a缺損之小鼠中，腎缺血處理後中之急性腎障礙受到抑制，生存率亦受到維持。

[參考例3]

使利用與參考例2同樣的方法所製作出之CD300a^fL/fLLysm-Cre小鼠及CD300a^fL/fL小鼠(對照小鼠)各自的兩側腎動脈阻塞30分鐘後，以與參考例2同樣的方法進行再灌流處置。收取再灌流處置後24小時、72小時之腎臟，根據常法製作組織標本，進行蘇木精-伊紅染色、或TUNEL染色(Apoptag，Millipore)。

將結果示於第3圖。由此等結果可知，相對於對照組，在巨噬細胞中CD300a缺損之小鼠中，腎缺血處理後組織中之細胞凋亡受到抑制，進一步組織內細胞凋亡細胞的蓄積亦受到抑制。

[實施例1]

對野生型小鼠(C57BL/6J)經靜脈投予對照抗體(IC17-mouse IgG1 sFc，中外製藥股份有限公司)或抗CD300a抗體(TKA139，中外製藥股份有限公司)20mg/kg。投予3小時後，以與參考例2同樣的方法，進行腎缺血處置、及30分後進行再灌流處置，進一步分別測定24小時後之尿素氮(BUN)及肌酸酐(Cre)的血清中濃度。

將結果示於第4圖。由結果可知，藉由事先對小鼠投予抗CD300a抗體，可抑制腎缺血處理後之急性腎障礙。

[參考例4]

分別針對以與參考例2同樣的方法所製作之CD300a^fL/fLLysm-Cre小鼠及CD300a^fL/fL小鼠(對照小鼠)，在麻醉下切開頸部，從頸動脈***並留置塗佈有矽之單絲導管(Doccol Corporation公司)而阻塞右中大腦動脈(暫時性腦缺血處理)，藉此，製作出中大腦動脈阻塞(MCAO：right middle cerebral artery occlusion)模式(Shichita et al.Nat Med 2016)。阻塞處理60分鐘後，拔除導管使腦血流再灌流，並關閉手術傷口。

之後，針對小鼠進行日復一日的觀察，關於神經學檢查，參考Bederson et al.Stroke 1986，依據下述神經學的分數進行評估。

0：沒有明顯的症狀，1：前肢彎曲，2：沒有旋轉但從側方推時容易倒下，3：進行旋轉，4：強制性地旋轉，5：幾乎不動，6：死亡。

將結果示於第5圖。相對於使用對照小鼠製作出的MCAO模式小鼠，在使用巨噬細胞中CD300a缺損小鼠所製作出之MCAO模式小鼠中，由腦缺血引發之神經障礙判定為輕度。

[實施例2]

針對野生型小鼠(C57BL/6J)，以與參考例4同樣的方法進行暫時性腦缺血處理。處理60分鐘後，經靜脈投予對照抗體(IC17-mouse IgG1 sFc，中外製藥股份有限公司)或抗CD300a抗體20mg/kg。關於之後各個小鼠中之神經學檢查，依據與參考例4同樣的分數進行評估。

將結果示於第6圖。相對於投予對照抗體之小鼠群，在投予抗CD300a抗體之小鼠群中，由暫時性腦缺血處理引發之神經障礙判定為相對輕度。由此暗示，藉由抗CD300a抗體，可預防由腦梗塞等腦缺血所引發之神經障礙。

[實施例3]

對野生型小鼠(C57BL/6J)以與參考例4同樣的方法進行暫時性腦缺血處理。處理3小時後，選擇上述神經學的分數為3(進行旋轉)之小鼠，分別經靜脈投予對照抗體或抗CD300a抗體20mg/kg，關於之後的神經學檢查，依據參考例4所示之神經學的分數進行評估。

在抗CD300a抗體投予後第5日將小鼠宰殺，採取大腦製作大腦組織標本，進行蘇木精-伊紅染色並利用光學顯微鏡(keyence公司)進行觀察，計測梗塞區域的面積。

將結果示於第7圖。相對於投予對照抗體之小鼠群，在投予抗CD300a抗體之小鼠群中，神經學的分數獲得大幅地改善，且從染色結果判定梗塞區域的面積顯著地變窄。

由此暗示藉由抗CD300a抗體，可治療由腦梗塞等腦缺血所引發之神經障礙。

[參考例5]

分別針對以與參考例2同樣的方法製作出之CD300a^fL/fLLysm-Cre小鼠及野生型小鼠(C57BL/6J)，進行全身麻醉後，進行呼吸器補助並開胸，藉由將左冠狀動脈左前降支利用6-0 PROLENE(註冊商標)線進行結紮而製作出心肌梗塞模式(Mahmoud et al.Nat Prot 2014)。在術後1週後將梗塞巢利用都卜勒超音波(Doppler echo)進行確認，針對梗塞巢經確認隻小鼠觀察之後的生存率。

將結果示於第8圖。相對於使用對照小鼠製作出之心肌梗塞模式小鼠，使用巨噬細胞中CD300a缺損之小鼠製作出之心肌梗塞模式小鼠，係判定生存率顯著地較高。

Claims

一種抗CD300a抗體的用途，係用於製造用以調節巨噬細胞中之CD300b依賴性吞噬訊號的活性調節劑，其中，前述抗CD300a抗體係CD300a中和抗體。
如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，前述抗CD300a抗體係抗CD300a單株抗體。
如申請專利範圍第1或2項所述之用途，其中，前述抗CD300a抗體係治療或預防缺血性疾病。
如申請專利範圍第3項所述之用途，其中，前述缺血性疾病係選自缺血性心臟疾病、缺血性腦疾病、缺血性腸疾病、缺血性腎臟疾病、四肢缺血、視網膜缺血、缺血性肺疾病及脊髓缺血中之一種以上者。