TWI760901B - 具有穩定包覆效性成分能力的脂質體的製備方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種具有穩定包覆效性成分能力的脂質體的製備方法，其包括攪拌混合液，以及以300巴（Bar）~400巴均質混合液以形成脂質體懸浮液。混合液包括0.1重量%的卵磷脂、2重量%~5重量%的***膠及63.9125重量%~97.9重量%的溶劑。脂質體懸浮液包括多個脂質體。

Description

具有穩定包覆效性成分能力的脂質體的製備方法
本發明涉及一種脂質體的其製備方法，特別是關於一種具有穩定包覆效性成分能力的脂質體的製備方法。
由於飲食文化的改變，使得外食或食用加工食品的人數逐漸上升。為了攝取滿足人體的基本營養需求，有別於過去僅透過飲食天然食品獲得所需的養分，營養補充劑漸漸出現在人們的生活之中。
營養補充劑的種類繁多，且其形態、劑型、攝取方式亦有多種選擇。舉例來說，營養補充劑可以為水溶性維生素、脂溶性維生素、礦物質、膠原蛋白等。並且，常見的營養補充劑的型態可以為粉末、膠囊、錠狀(如，口服錠、嚼錠)、液態(如，氣泡錠、沖劑)等，而不同型態或劑型的營養補充劑會影響其在人體消化道的吸收率及吸收速度。理論上由快而慢依序為液態、粉狀、膠囊、錠狀。此外，近年來營養補充劑亦針對吸收力發展為速效劑型及緩釋劑型。
以維生素C(Vitamin C，又稱維他命C)為例。除了從蔬果中攝取到維生素C之外，也可從營養補充劑中攝取到維生素C。並且，常見的維生素C劑型包括口服錠、嚼錠、氣泡錠、沖劑、粉末等。
在一些實施例中，一種具有穩定包覆效性成分能力的脂質體的製備方法，其包括攪拌混合液，以及以300巴(Bar)~400巴均質混合液以形成脂質體懸浮液。混合液包括0.1重量%的卵磷脂、2重量%~5重量%的***膠及63.9125重量%~97.9重量%的溶劑。脂質體懸浮液包括多個脂質體。
在一些實施例中，溶劑為水。
在一些實施例中，混合液更包括5重量%~30重量%的效性成分。
在一些實施例中，效性成分的濃度為10重量%。
在一些實施例中，效性成分為維生素C。
在一些實施例中，攪拌混合液的步驟包括攪拌0.1重量%的卵磷脂、2重量%~5重量%的***膠及63.9125重量%~97.9重量%的溶劑以形成溶液；以及，以80目數(mesh)的網目過篩溶液以形成混合液。
在一些實施例中，均質混合液的步驟中的混合液的溫度為40~60℃，且均質混合液以形成脂質體懸浮液的步驟包括以95℃滅菌混合液30分鐘；以及，以300巴~400巴均質滅菌後的混合液以形成脂質體懸浮液，且脂質體懸浮液包括多個脂質體。
在一些實施例中，均質混合液的步驟中的均質溫度為室溫，且均質混合液以形成脂質體懸浮液的步驟包括以300巴~400巴均質混合液以形成脂質體懸浮液，且脂質體懸浮液包括多個脂質體；以及，以95℃滅菌脂質體懸浮液30分鐘。
在一些實施例中，各脂質體具有中空狀球體結構。
綜上所述，任一實施例的具有穩定包覆效性成分能力的脂質體的製備方法係透過混合特定比例的卵磷脂、***膠及水，並藉由特定壓力均質以形成脂質體懸浮液。其中，脂質體懸浮液含有結構穩定的多個脂質體。並且，任一實施例的具有穩定包覆效性成分能力的脂質體的製備方法可用以製備其內包覆有效性成分的脂質體。於此，所製備的脂質體的結構穩定，並可穩定包覆效性成分，且能用以提高其所包覆的效性成分的生物吸收率。
S100-S270:步驟
1:脂質體
10:包覆層/第一包覆層
101:第一磷脂質層
102:第二磷脂質層
20:內層空間/第一內層空間
11:第二包覆層
111:第一磷脂質層
112:第二磷脂質層
21:第二內層空間
13:第三包覆層
131:第一磷脂質層
132:第二磷脂質層
23:第三內層空間
L:外徑
圖1是任一實施例中具有穩定包覆效性成分能力的脂質體的製備流程圖；圖2是步驟S100的流程圖；圖3是一些實施例中步驟S200的流程圖；圖4是另一些實施例中步驟S200的流程圖；圖5是一些實施例中的脂質體的剖視圖；圖6是另一實施例中的脂質體的剖視圖；圖7是又一實施例中的脂質體的剖視圖；圖8是進行前殺處理的脂質體懸浮液靜置實驗圖；圖9是進行後殺處理的脂質體懸浮液靜置實驗圖；圖10是進行前殺處理的脂質體懸浮液離心實驗圖；圖11是進行後殺處理的脂質體懸浮液離心實驗圖； 圖12是一實施例的脂質體的電子顯微鏡照片；圖13是另一實施例的脂質體的電子顯微鏡照片；以及圖14是受體血液中維生素C含量數據圖。
請參閱圖1及圖5。在一些實施例中，首先，攪拌混合液(步驟S100)，然後以300巴(Bar)~400巴均質混合液以形成包括多個脂質體1的脂質體懸浮液(步驟S200)。其中，混合液包括0.1重量%的卵磷脂、2重量%~5重量%的***膠及63.9125重量%~97.9重量%的溶劑。
在一些實施例中，卵磷脂可以為但不限於大豆卵磷脂(SOLEC F)。在一些實施例中，溶劑可以為但不限於水。在一些實施例中，混合液包括0.1重量%的大豆卵磷脂、2重量%~5重量%的***膠及63.9125重量%~97.9重量%的水。舉例來說，***膠的濃度可以為2重量%、3重量%、4重量%及5重量%。
在一些實施例中，混合液更包括效性成分。如此，形成的脂質體1中會包覆此效性成分。舉例來說，效性成分可以為維生素C(Vitamin C)、蝦青素、輔酶Q10等。在一些實施例中，混合液包括0.1重量%的卵磷脂、2重量%~5重量%的***膠、5重量%~30重量%的效性成分及63.9125重量%~92.9重量%的溶劑。舉例來說，效性成分的濃度為10重量%。
在一些實施例中，混合液更包括增稠劑。於此，增稠劑有助於保護脂質體1的結構。舉例來說，增稠劑可以為關華豆膠、三仙膠 (Xanthan gum，或稱玉米糖膠、黃原膠)或其組合。在一些實施例中，混合液包括0.1重量%的卵磷脂、2重量%~5重量%的***膠、5重量%~30重量%的效性成分、0.3175重量%~0.6175重量%的增稠劑及63.9125重量%~92.5825重量%的溶劑。舉例來說，0.3175重量%~0.6175重量%的增稠劑包括0.0675重量%的關華豆膠及0.25重量%~0.55重量%的三仙膠。在一些示範例中，混合液包括0.1重量%的卵磷脂、2重量%~5重量%的***膠、10重量%的效性成分、0.0675重量%的關華豆膠、0.25重量%~0.55重量%的三仙膠及83.9125重量%~87.5825重量%的水。
在一些實施例中，混合液可更包括食品添加物。食品添加物可為甜味劑、酸化劑、防腐劑等。其中，甜味劑可以為蔗糖素、酸化劑可以為單水檸檬酸、以及防腐劑可以為己二烯酸鉀。在一些實施例中，混合液包括0.1重量%的卵磷脂、2重量%~5重量%的***膠、5重量%~30重量%的效性成分、0.3175重量%~0.6175重量%的增稠劑、0.07重量%~0.37重量%的食品添加物及63.9125重量%~92.5125重量%的溶劑。舉例來說，0.35重量%的食品添加物可以為0.3重量%的酸化劑及0.05重量%的防腐劑之組合，或者0.07重量%的食品添加物可以為0.02重量%的甜味劑及0.05重量%的防腐劑之組合。在一些示範例中，混合液包括0.1重量%的卵磷脂、2重量%~5重量%的***膠、10重量%的效性成分、0.0675重量%的關華豆膠、0.25重量%的三仙膠、0.05重量%的防腐劑、0.02重量%的甜味劑及84.5125重量%~87.5125重量%的水。在另一些示範例中，混合液包括0.1重量%的卵磷脂、2重量%~5 重量%的***膠、10重量%的效性成分、0.0675重量%的關華豆膠、0.55重量%的三仙膠、0.05重量%的防腐劑、0.3重量%的酸化劑及83.9325重量%~86.9325重量%的水。
請參閱圖2。在一些實施例中，步驟S100包括下列步驟：攪拌0.1重量%的卵磷脂、2重量%~5重量%的***膠及63.9125重量%~97.9重量%的溶劑以形成預混溶液(步驟S110)，以及以80目數(mesh)的網目過篩預混溶液以形成混合液(步驟S120)。
於此，在一些實施例中，可依實際需求，利用力道較強的攪拌設備將除溶劑外的所有成分(以下稱溶質)完全溶解於溶劑中。舉例來說，可將所有溶質一次性加入溶劑中，抑或是將不同溶質依序加入至溶劑中逐一溶解。
在步驟S110的一實施態樣中，將0.1重量%的卵磷脂及2重量%~5重量%的***膠加入至63.9125重量%~97.9重量%的溶劑中，並攪拌均勻以形成預混溶液。
於此，在另一些實施例中，當攪拌設備(如，震盪機)的力道較弱時，可依實際需求，將溶質之一的卵磷脂先行與部分溶劑以重量比(w/w)1：50混合，並於室溫(25℃)下攪拌以將卵磷脂溶解於部分溶劑中以形成預混溶液(以下稱第一預混溶液)。並且將除卵磷脂外的溶質溶解於其餘溶劑之中，以形成預混溶液(以下稱第二預混溶液)。待確認卵磷脂已完全溶解於部分溶劑，且其餘溶質已完全溶解於其餘溶劑後，將第一預混溶液與第二預混溶液二者混合並攪拌均勻以形成預混溶液(以下稱第三預混溶液)。換言之，將溶質(如，卵磷脂、 ***膠等)分別溶解於溶劑(如，水)中以形成第一預混溶液及第二預混溶液，接著將第一預混溶液及第二預混溶液混合以形成第三預混溶液。如此，有助於溶質充分溶解於溶劑。
在步驟S110的另一實施態樣中，將0.1重量%的卵磷脂溶解於至少5重量%的溶劑形成第一預混溶液，並將其餘溶質(如，2重量%~5重量%的***膠)溶解於其餘溶劑中(至多92.9重量%的溶劑)形成第二預混溶液後，將第一預混溶液及第二預混溶液再混合形成第三預混溶液，抑或是將0.1重量%的卵磷脂、2重量%~5重量%的***膠分別溶解於63.9125重量%~97.9重量%的溶劑中並逐一混合。
並且，於混合液形成後，以300巴~400巴均質混合液以形成脂質體懸浮液。於此，可分別於均質混合液的步驟(即，均質處理)之前或之後進行滅菌程序，如圖4及圖5所示。在一些實施例中，滅菌程序的設定值為87℃±2℃~95℃±5℃滅菌30分鐘。舉例來說，於產線上，滅菌程序的設定值為87℃±2℃滅菌30分鐘。
請參閱圖3。在一些實施例中，步驟S200包括：以95℃滅菌混合液30分鐘(步驟S210)，以及以300巴~400巴均質滅菌後的混合液以形成脂質體懸浮液，其中滅菌後的混合液的溫度為40℃~60℃(步驟S230)。換言之，於均質混合液的步驟之前進行滅菌程序的流程稱為「前殺處理」。於此，「前殺處理」中欲進行均質處理的混合液的溫度為40~60℃。舉例來說，「前殺處理」中欲進行均質處理的混合液溫度為50℃。
在一些示範例中，首先，將混合液以滅菌設備進行滅菌程 序(即，步驟S210)，待滅菌後的混合液降溫至40~60℃時(如，50℃)時可進行均質處理(即，步驟S230)，以形成脂質體懸浮液。
請參閱圖4。在一些實施例中，步驟S200包括：於室溫下，以300~400巴均質混合液以形成脂質體懸浮液(步驟S250)，以及以95℃滅菌脂質體懸浮液30分鐘(步驟S270)。換言之，於均質混合液的步驟之後進行滅菌程序的流程稱為「後殺處理」。於此，「後殺處理」中的均質處理是於室溫(25℃)下進行。
在一些示範例中，首先，將混合液於室溫(25℃)下進行均質處理(即，步驟S250)，以形成脂質體懸浮液。並於脂質體懸浮液形成後，進行滅菌程序(即，步驟S270)。
於此，透過300巴~400巴的壓力進行均質處理，可將含有0.1重量%的卵磷脂、2重量%~5重量%的***膠及63.9125重量%~97.9重量%的溶劑的混合液充分乳化以形成為脂質體懸浮液。並且，脂質體懸浮液含有結構穩定的多個脂質體1。並且，由於所製備的脂質體1的結構穩定，因此脂質體1具有可穩定包覆效性成分的能力。
再者，透過特定壓力(300巴~400巴)的均質處理，卵磷脂會形成有中空狀結構的脂質體1，如圖5至圖7所示。
請參閱圖5至圖7。在一些實施例中，脂質體1包括至少一包覆層10，各包覆層10具有雙層膜構成的中空球體結構。雙層膜包括第一磷脂質層101及第二磷脂質層102，第一磷脂質層101構成中空球體結構的外層，第二磷脂質層102構成中空球體結構的內層，且第一磷脂質層101與第二磷脂質層102並列。其中，第一磷脂質層101及第二磷脂質 層102分別由多個磷脂質所構成，且各磷脂質具有親水端及疏水端。舉例來說，包覆層10內外兩側主要為各磷脂質的親水端組成，而雙層膜結構的中段主要為疏水端組成。換言之，第一磷脂質層101的多個磷脂質的親水端朝外並構成包覆層10的外表面，且第二磷脂質層102的多個磷脂質的親水端朝內並構成包覆層10的內表面。並且，第一磷脂質層101的多個磷脂質的疏水端與第二磷脂質層102的多個磷脂質的疏水端彼此相鄰並排。
在一些實施例中，脂質體1包括1個包覆層10及1個內層空間20，如圖5所示。在一些示範例中，脂質體1包括一包覆層10及一內層空間20。於此，包覆層10的數量為1層，且此包覆層10的內側形成一內層空間20。
在一些實施例中，脂質體1包括多個包覆層10及多個內層空間20，如圖6及圖7所示。請參閱圖6，在一些示範例中，當脂質體1包括二個包覆層(以下稱第一包覆層10及第二包覆層11)及二個內層空間(以下稱第一內層空間20及第二內層空間21)。作為最外層的第一包覆層10包覆外徑長度較小的第二包覆層11，且第一包覆層10及第二包覆層11之間形成第一內層空間20，並第二包覆層11的內側形成第二內層空間21。其中，第一包覆層10的雙層膜包括第一磷脂質層101及第二磷脂質層102，且第二包覆層11的雙層膜包括第一磷脂質層111及第二磷脂質層112。
請參閱圖7，在一些示範例中，當脂質體1包括三個包覆層(以下稱第一包覆層10、第二包覆層11及第三包覆層13)及三個內層空 間(以下稱第一內層空間20、第二內層空間21及第三內層空間23)。作為最外層的第一包覆層10包覆外徑長度較小的第二包覆層11，且第一包覆層10及第二包覆層11之間為第一內層空間20。並且，第二包覆層11包覆外徑長度更小的第三包覆層13，且第二包覆層11及第三包覆層13之間為第二內層空間21，並第三包覆層13的內側形成第三內層空間23。其中，第一包覆層10的雙層膜包括第一磷脂質層101及第二磷脂質層102，第二包覆層11的雙層膜包括第一磷脂質層111及第二磷脂質層112，且第三包覆層13的雙層膜包括第一磷脂質層131及第二磷脂質層132。
需要特別說明的是，包覆層10及內層空間20的數量可以為但不限於2、3、4個，於此為例示做說明，但並不以此為限。
在一些實施例中，至少一包覆層10的內側形成至少一內層空間20，且可用以包覆效性成分。因此，當脂質體1更包括效性成分時，效性成分可位於內層空間20中。
在一些實施例中，脂質體1為一中空狀球體結構，且具有一內層空間20，用以包覆效性成分。在一些實施例中，脂質體1包括多個具有中空狀球體結構的包覆層10，且各包覆層10依照體積大小由小至大依序包覆。並且，由於各包覆層10均為中空狀，因此各包覆層10之間形成多個內層空間20。於此，各內層空間20可用以包覆效性成分。
在一些實施例中，至少一包覆層10的外徑L長度為200奈米(nm)~400nm。舉例來說，脂質體1的外徑L可以為200nm、250nm、300nm、350nm及400nm。
於此，在一些實施例中，當以含有5重量%~30重量%的效性成分、0.1重量%的卵磷脂、2重量%~5重量%的***膠、63.9125重量%~92.9重量%的溶劑的混合液經由300巴~400巴均質處理形成含有結構穩定的多個脂質體1的脂質體懸浮液時，所得到的脂質體1，其結構穩定並可穩定包覆效性成分，進而可有效的保護其內的效性成分不受外在因素(如，消化液)影響。
並且，在一些實施例中，含有穩定包覆效性成分的多個脂質體1的脂質體懸浮液可作為食品(如，營養補充劑)、醫藥品等，或作為製作食品或醫藥品的材料。
於此，當受體服用含有其內包覆有效性成分(如，維生素C、蝦青素、輔酶Q10)的脂質體1的脂質體懸浮液所製成的營養補充劑時，脂質體1的穩定包覆結構能有效地降低受體消化環境對於效性成分的影響(如，破壞或降解)，且脂質體1的雙層磷脂質結構能使脂質體1能與受體細胞膜結合，並使脂質體1內的效性成分能有效地為受體腸道所吸收。
在一些示範例中，將0.1重量%的卵磷脂、2重量%~5重量%的***膠、10重量%的維生素C及84.9重量%~87.9重量%的水混合並攪拌均勻以形成預混溶液。接著，將預混溶液以80目數的網目過篩以形成混合液。
在一實施態樣中，將混合液以95℃±5℃滅菌30分鐘，並以300巴~400巴均質滅菌後的混合液以形成脂質體懸浮液，且此脂質體懸浮液含有其內包覆有維生素C的多個脂質體1。
在另一實施態樣中，以300巴~400巴均質混合液以形成脂質體懸浮液。接著，將脂質體懸浮液以95℃±5℃滅菌30分鐘。於此，脂質體懸浮液含有其內穩定包覆有維生素C的多個脂質體1。
例1：含有維生素C的脂質體1的製備(前殺處理)
於此，依照表1的配方成分及配方比例配置6組的混合液。其中，對照組為C1組至C4組，而實驗組為E1組至E2組。並且，C1至C4組及E1至E2組的滅菌程序是在均質處理之前進行。換言之，C1至C4組及E1至E2組的製備流程為前殺處理。
Figure 109136998-A0305-02-0014-1
於此，混合液總重量為100克。首先，將大豆卵磷脂與部分水以重量比(w/w)1：50混合，並於室溫(25℃)下攪拌以確認卵磷脂溶解於部分水中，以形成第一預混溶液。並且，將***膠、關華豆膠、三仙膠、蔗糖素、己二烯酸鉀、維生素C及其餘水混合以形成第二預混溶液。並且將第一預混溶液及第二預混溶液混合並攪拌均勻以確保大豆卵磷脂、***膠、關華豆膠、三仙膠、蔗糖素、己二烯酸鉀、維生素C完全溶解於水中，並以水定量使總重量為100克，以形成第三預 混溶液。接著，將定量後的第三預混溶液以80目數的網目過篩以形成混合液。於此，所有組別的各混合液中，皆含有10重量%的維生素C。
接著，將混合液進行滅菌程序，且滅菌程序的設定值為95℃±5℃滅菌30分鐘。待滅菌後的混合液降溫至50℃時，以均質儀器(品牌：GEA Niro Soavi，型號：Panda Plus)將降溫後的混合液進行均質處理，以形成脂質體懸浮液，其中均質處理中設定的壓力值為350巴。於此，脂質體懸浮液含有其內包覆有維生素C的多個脂質體1。
例2：含有維生素C的脂質體1的製備(後殺處理)
於此，依照表2的配方成分及配方比例配置6組的混合液。其中，對照組為C5組至C8組，而實驗組為E3組至E4組。並且，C5至C8組及E3至E4組的滅菌程序是在均質處理之後進行。換言之，C5至C8組及E3至E4組的製備流程為後殺處理。
Figure 109136998-A0305-02-0015-2
於此，混合液總重量為100克。首先，將大豆卵磷脂與部分水以重量比1：50(w/w)混合，並於室溫(25℃)下攪拌以確認卵磷脂溶解於部分水中，以形成第一預混溶液。並且，將***膠、關華 豆膠、三仙膠、蔗糖素、己二烯酸鉀、維生素C及其餘水混合以形成第二預混溶液。並且將第一預混溶液及第二預混溶液混合並攪拌均勻以確保大豆卵磷脂、***膠、關華豆膠、三仙膠、蔗糖素、己二烯酸鉀、維生素C完全溶解於水中，並以水定量使總重量為100克，以形成第三預混溶液。接著，將定量後的第三預混溶液以80目數的網目過篩以形成混合液。於此，所有組別的混合液中，均含有10重量%的維生素C。
接著，將混合液於室溫(25℃)下以均質儀器(品牌：GEA Niro Soavi，型號：Panda Plus)進行均質處理以形成脂質體懸浮液，其中均質處理中設定的壓力值為350巴。並且，將脂質體懸浮液進行滅菌程序，且滅菌程序的設定值為95℃±5℃滅菌30分鐘。於此，脂質體懸浮液含有其內包覆有維生素C的多個脂質體1。
例3：靜置脂質體1穩定性測試
於此，將例1製備的各組脂質體懸浮液及例2製備的各組脂質體懸浮液於室溫(25℃)下靜置一天，以觀察脂質體懸浮液是否出現分層現象。並且，若脂質體懸浮液為均勻的無分層液體，代表其內的脂質體1結構較穩定。反之，若脂質體懸浮液有明顯分層且顏色較為混濁不均勻時，代表其含有的脂質體1的結構較不穩定。換言之，由於脂質體1的包覆層10破裂，並未形成脂質體1，進而使脂質體懸浮液產生明顯分層的現象。
請參閱圖8。C1組及C3組的脂質體懸浮液產生明顯分層，代表當混合液中含有1重量%的大豆卵磷脂時，無論是3重量%或是5重量%的***膠都無法將大豆卵磷脂與水混合均勻，即乳化作用不顯著， 且所得的脂質體1結構不穩定。C2組及C4組雖然無明顯分層，但相較於E1及E2組，C2組及C4組的脂質體懸浮液較混濁。E1組及E2組的脂質體懸浮液無明顯分層，代表當混合液中含有0.1重量%的大豆卵磷脂時，3重量%或是5重量%的***膠即可有效的將大豆卵磷脂與水混合均勻，即乳化作用顯著。由此可知，當混合液包含0.1重量%~0.5重量%的大豆卵磷脂及3重量%~5重量%的***膠，且混合液經由前殺處理所得的脂質體懸浮液無明顯分層。換言之，以0.1重量%的大豆卵磷脂及3重量%~5重量%的***膠所製得的脂質體1的結構穩定性較佳。
請參閱圖9。C5組、C6組、C7組及C8組的脂質體懸浮液均產生明顯分層，代表當混合液中含有0.5重量%或1重量%的大豆卵磷脂時，無論是3重量%或是5重量%的***膠都無法將大豆卵磷脂與水混合均勻，即乳化作用不顯著，且所得的脂質體1結構不穩定。相較於對照組，E3組及E4組的脂質體懸浮液無明顯分層，代表當混合液中含有0.1重量%的大豆卵磷脂時，3重量%或是5重量%的***膠即可有效的將大豆卵磷脂與水混合均勻，即乳化作用顯著。由此可知，當混合液包含0.1重量%的大豆卵磷脂及3重量%~5重量%的***膠，且混合液經由後殺處理所得的脂質體懸浮液無明顯分層。換言之，以0.1重量%的大豆卵磷脂及3重量%~5重量%的***膠所製得的脂質體1的結構穩定性較佳。
例4：離心脂質體1穩定性測試
於此，自例1製備的各組脂質體懸浮液及例2製備的各組脂質體懸浮液分別取1毫升至微量離心管中。並於20℃±5℃下以轉速 2000rpm離心1小時，以將脂質體懸浮液分離為上清液及沉澱物，如圖10及圖11所示。於此，當沉澱物與上清液的顏色明顯差異時，代表脂質體懸浮液的乳化作用不佳，其含有的多個脂質體1的結構較不穩定。
請參閱圖10。C1組、C2組、C3組及C4組的脂質體懸浮液在離心後可見明顯沉澱物，且沉澱物於上清液的顏色差異較明顯，代表***膠並未將大豆卵磷脂與水混合均勻，進而使所得的脂質體懸浮液產生分層的現象。相較於對照組，E1組及E2組的沉澱物較不明顯，其沉澱物的顏色與其上清液的顏色差異較小，代表***膠已將大豆卵磷脂與水混合均勻，進而使所得的脂質體懸浮液無產生分層的現象。由此可知，以0.1重量%的大豆卵磷脂及3重量%~5重量%的***膠所製得的脂質體1的結構穩定性較佳。
請參閱圖11。C5組、C6組、C7組及C8組的脂質體懸浮液在離心後可見明顯沉澱物，且沉澱物於上清液的顏色差異較明顯，代表***膠並未將大豆卵磷脂與水混合均勻，進而使所得的脂質體懸浮液產生分層的現象。相較於對照組，E3組及E4組的沉澱物較不明顯，其沉澱物的顏色與其上清液的顏色差異較小，代表***膠已將大豆卵磷脂與水混合均勻，進而使所得的脂質體懸浮液無產生分層的現象。由此可知，以0.1重量%的大豆卵磷脂及3重量%~5重量%的***膠所製得的脂質體1的結構穩定性較佳。
於此可知，無論製備流程中滅菌程序為前殺處理或後殺處理，以0.1重量%的大豆卵磷脂及3重量%~5重量%的***膠所製得的脂質體懸浮液均無浮油現象，且其含有的多個脂質體1的結構均具有較 高的穩定性。
例5：維生素C含量測試
於此，將例4離心後的各組脂質體懸浮液所得到的上清液及沉澱物作為檢體分別進行維生素C含量檢測。
首先，將維生素C(L-Ascorbic acid sodium；品牌：SIGMA-ALORICH)標準品配置成10ppm、25ppm、50ppm、100ppm及200ppm的各標準溶液。
接著，將各組上清液(檢體)分別取1毫升至100毫升定量瓶中，以及將各組沉澱物(檢體)分別取0.1克至100毫升定量瓶中，並將檢體與100毫升的純水混合後進行超音波震盪(品牌：DELTA，型號：DC600H)。接著，於超音波震盪後再次以純水重新定量至100毫升後形成待測物，並將待測物以0.22μm濾膜過濾後形成檢液(即，上清液(檢液)及沉澱物(檢液))。
分別取2μL的各標準溶液及各組檢液，以超高效能液相層析儀(品牌：WATERS，型號：H-class)進行分析。其中，超高效能液相層析儀的層析管為C18管柱(Ascentis® Exprcss C18 column,2μm,2.1*100mm(管柱編號17025-LC-037))、超高效能液相層析儀內使用的移動相為0.1%草酸水溶液(以草酸(Oxalic acid；純度≧98%)配置；品牌SIGMA-ALORICH)。並且，超高效能液相層析儀的設定為：流速0.2毫升/分鐘、進樣體積2μL、偵測波長245奈米(nm)、管柱溫度30℃，以及進樣次數為三重覆。
接著，比較標準溶液與檢液所得的波峰滯留時間及吸收圖 譜可得到檢液中維生素C的含量，並利用下列公式(1)，即可得到上清液(檢體)及沉澱物(檢體)中維生素C的含量，如表3所示。
公式(1)檢體中維生素C的含量(ppm)=C×V÷M (1)
其中，C代表由標準曲線求得檢液中維生素C之濃度(ppm)，V代表檢體最後定容之體積(mL)，以及M代表取樣分析檢體之沉澱物重量(g)或上清液體積(ml)。
Figure 109136998-A0305-02-0020-3
由表3可知，無論是前殺處理的組別(C1組-C4組及E1組-E2組)，或是後殺處理的組別(C5組-C8組及E3組-E4組)的上清液(檢液或檢體)內所量測到的維生素C的含量差異均不大。接著，進一步比較前殺處理及後殺處理各組的沉澱物(檢液或檢體)。在前殺處理的組別(C1組-C4組及E1組-E2組)中，實驗組(E1組-E2組)的沉澱物內所量測到的維生素C的含量均高於對照組(C1組-C4組)的沉澱物內所量測到的維生素C的含量。而在後殺處理的組別(C5組-C8組及E3組-E4 組)中，E4組的沉澱物所量測到的維生素C的含量遠高於其他組別的沉澱物內所量測到的維生素C的含量，而E3組的沉澱物所量測到的維生素C的含量則高於C5組-C7組的沉澱物所量測到的維生素C的含量。由此可知，在同樣的處理條件下，實驗組的沉澱物所量測到的維生素C的含量明顯高於對照組的沉澱物所量測到的維生素C的含量。
於此，可知以0.1重量%的大豆卵磷脂及3重量%-5重量%的***膠所製得的脂質體懸浮液中，含有穩定包覆維生素C的脂質體1且此脂質體1的結構穩定性較佳。並且，所含有的脂質體1可包覆較多的效性成分(如，維生素C)。
例6：電子顯微鏡
於此，依照表4的配方配置二組混合液，分別為實驗組1及實驗組2。其中，實驗組1及實驗組2的差異在於實驗組1的混合液含有的***膠為5克(5重量%)、水為84.5125克，而實驗組2的混合液含有的***膠為2克(2重量%)、水為87.5125克。其餘成分的含量皆相同。接著，透過例2所述的製備步驟將配置好的混合液進行均質處理、滅菌程序等步驟，以形成脂質體懸浮液。
Figure 109136998-A0305-02-0021-4
Figure 109136998-A0305-02-0022-5
接著，利用低溫穿透式電子顯微鏡(cryo-electron transmission microscopy,cryo-TEM；品牌：JEOL，型號：JEM-1400)觀察二組脂質體懸浮液中的脂質體1，如圖12及圖13所示。請參閱圖12，脂質體1是以實驗組1的配方配置的混合液(含有5重量%***膠)所製得，其外形為球狀，且外徑L長度約為200nm~400nm。並且，由圖12可知，同一組脂質體懸浮液中含有不同外徑L長度的多個脂質體1。請參閱圖13，脂質體1是以實驗組2的配方配置的混合液(含有2重量%***膠)所製得，其外形為球狀，可明顯觀察到包覆層10及內層空間20。換言之，脂質體1的結構為中空狀球體結構。並且，內層空間20中含有的深色物質為維生素C。由此可知，實驗組1及實驗組2所製得的脂質體懸浮液中均含有穩定包覆維生素C的脂質體1，且此脂質體1的結構穩定。
於此，可知以0.1重量%的大豆卵磷脂及2重量%~5重量%的***膠所製得的脂質體懸浮液中，均能含有穩定包覆維生素C的脂質體1且此脂質體1的結構為中空球體結構。
例7：人體試驗
於此，依照表5的配方製備實驗組及對照組的維生素C補充品(以下稱待測樣品)。其中實驗組的待測樣品是以脂質體型式包覆維生素C，而對照組的待測樣品為單純的維生素C溶液(非以脂質體型式包覆維生素C)。
Figure 109136998-A0305-02-0022-6
Figure 109136998-A0305-02-0023-7
其中，實驗組的配置流程如下：將10mg的卵磷脂、500mg的***膠、6.75mg的關華豆膠、55mg的玉米糖膠、30mg的檸檬酸、5mg的己二烯酸鉀及1000mg的維生素C溶於8393.25mg的水中，並攪拌均勻以形成混合液。並將混合液於室溫(25℃)下以350巴均質處理以形成脂質體懸浮液，接著將脂質體懸浮液以95℃±5℃滅菌30分鐘。於此，將脂質體懸浮液製成液態包(10mL/包)作為實驗組待測樣品供受試者服用。
其中，對照組的配置流程如下：將500mg的***膠、6.75mg的關華豆膠、55mg的玉米糖膠、30mg的檸檬酸、5mg的己二烯酸鉀及1000mg的維生素C溶於8403.25mg的水中，並攪拌均勻以形成混合液。接著將混合液以95℃±5℃滅菌30分鐘。基此，將滅菌後的混合液製成液態包(10mL/包)作為對照組待測樣品供受試者服用。
受試者條件：20~60歲的健康成年人。
受試者人數：10人。
試驗設計：受試者自身對照交叉試驗。於服用其中一待測樣品(實驗組或對照組的液態包)後進行一次檢測，接著於相隔14天後再服用另一待測樣品(對照組或實驗組的液態包)，並進行二次檢測。 其中，每次檢測前一天受試者需空腹8小時；檢測當天將服用待測樣品前視為0小時，並於服用待測樣品後的0.5小時、1小時、2小時、3小時、4小時和8小時分別採血檢測血液中維生素C濃度。
檢測方式：於服用待測樣品後的0.5小時、1小時、2小時、3小時、4小時和8小時的6個時間點，使用含抗凝劑之綠頭採血管收集受試者4毫升靜脈血作為檢體。將檢體避光於室溫(25℃)下靜置30分鐘。接著將靜置後的檢體於4℃以轉速3500rpm離心10分鐘以收集檢體上清液(血漿)，並將收集的血漿以生化比色法檢測其內的維生素C含量。
請參閱圖14。受試者服用實驗組待測樣品8小時後，檢測到的血液中維生素C含量為86.29μg×hr/mL，而受試者服用對照組待測樣品8小時後，檢測到的血液中維生素C含量為37.08μg×hr/mL。換言之，受試者吸收實驗組的待測樣品中的維生素C含量相較於對照組多了133%，代表以脂質體型式包覆維生素C的維生素C補充品能提高生物吸收率。
由此可知，當以脂質體1包覆效性成分並製備效性成分的營養補充品時，脂質體1的包覆層10可保護位於內層空間20的效性成分，且以雙層磷脂質構成的包覆層10有助於提高受體對於效性成分的生物吸收率。
綜上所述，根據本發明任一實施例的具有穩定包覆效性成分能力的脂質體1的製備方法可製備結構穩定的脂質體1，且此脂質體1具有良好且穩定的包覆能力。並且，任一實施例的具有穩定包覆效性成分能力的脂質體1的製備方法可用於製備結構穩定且可穩定包覆效性成 分的脂質體1。藉此，透過任一實施例的具有穩定包覆效性成分能力的脂質體1的製備方法可提高脂質體1所包覆的效性成分的含量，且所製得脂質體1可提高受體對於此效性成分的生物吸收率。
雖然本發明的技術內容已經以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神所作些許之更動與潤飾，皆應涵蓋於本發明的範疇內，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
1:脂質體
10:包覆層
101:第一磷脂質層
102:第二磷脂質層
20:內層空間
L:外徑

Claims (9)

  1. 一種具有穩定包覆效性成分能力的脂質體的製備方法，包括： 攪拌一混合液，其中該混合液包括0.1重量%的卵磷脂、2重量%~5重量%的***膠及63.9125重量%~97.9重量%的溶劑；以及 以300巴（Bar）~400巴均質該混合液以形成一脂質體懸浮液，該脂質體懸浮液包括多個脂質體。
  2. 如請求項1所述之製備方法，其中該溶劑為水。
  3. 如請求項1所述之製備方法，其中該混合液更包括5重量%~30重量%的效性成分。
  4. 如請求項3所述之製備方法，其中該效性成分的濃度為10重量%。
  5. 如請求項3或4所述之製備方法，其中該效性成分為維生素C。
  6. 如請求項1所述之製備方法，其中攪拌該混合液的步驟，包括： 攪拌0.1重量%的該卵磷脂、2重量%~5重量%的該***膠及63.9125重量%~97.9重量%的該溶劑以形成一預混溶液；以及 以80目數（mesh）的網目過篩該預混溶液以形成該混合液。
  7. 如請求項1所述之製備方法，其中均質該混合液的步驟中的該混合液的溫度為40℃~60℃，且均質該混合液以形成該脂質體懸浮液的步驟，包括： 以95℃滅菌該混合液30分鐘；以及 以300~400巴均質滅菌後的該混合液以形成該脂質體懸浮液，該脂質體懸浮液包括該多個脂質體。
  8. 如請求項1所述之製備方法，其中均質該混合液的步驟中的均質溫度為室溫，且均質該混合液以形成該脂質體懸浮液的步驟，包括： 以300巴~400巴均質該混合液以形成該脂質體懸浮液，該脂質體懸浮液包括該多個脂質體；以及 以95℃滅菌該脂質體懸浮液30分鐘。
  9. 如請求項1所述之製備方法，其中各該脂質體具有中空狀球體結構。
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Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20070082042A1 (en) * 2004-08-06 2007-04-12 Deok-Hoon Park Multiple-layered liposome and preparation method thereof
CN102805730A (zh) * 2012-03-14 2012-12-05 陆培华 神经酰胺脂质体及其制备方法和用途

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