TWI756663B - 逆轉及/或抑制動脈粥狀硬化的方法及組合物 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及一種抑制、減少或逆轉動脈粥狀硬化的方法或一種用於預防或治療動脈粥狀硬化疾病的組合物或醫藥組合物，包含一樟芝製劑及/或從樟芝分離出之一種或多種活性化合物。

Description

逆轉及/或抑制動脈粥狀硬化的方法及組合物
本申請案主張於2019年4月18日申請之美國臨時申請案第62/835,663號之利益與優先權，其全部內容透過引用合併於本文。
本發明提供一種逆轉及/或抑制動脈粥狀硬化的方法及組合物。
動脈粥狀硬化是一種基本的病理過程，已知會引起一些嚴重的心血管疾病，包括中風與冠狀動脈疾病。儘管動脈粥狀硬化的典型危險因子可能包括血脂異常、糖尿病、吸煙、高血壓以及遺傳異常，但高膽固醇血症被認為是動脈粥狀硬化的主要誘發因素之一。血漿膽固醇含量的升高導致動脈內皮滲透性的改變，進而使脂質，尤其是低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）顆粒遷移到動脈壁上形成斑塊。當斑塊覆蓋血管的內部彈性層的40%以上時，動脈通道被認為已被佔用，進而阻礙血液流動。
目前動脈粥狀硬化的治療方法包括降低膽固醇或減少凝血的藥物以及外科治療。手術療法僅能治療單獨的病灶，而治療病灶下游的斑塊可能會繼續阻礙血流。此外，外科手術治療與再狹窄(restenosis)的晚期併發症有關。另一方面，降低膽固醇的藥物，例如他汀類藥物，只能使心血管事件減少約20%-40%。
動脈粥狀硬化治療所需要的不僅是減緩病灶的進展，而且還需要使已形成的斑塊消退並縮小。
於本發明中出乎意料地發現樟芝的製劑及樟芝的有效成分可有效逆轉及/或抑制動脈粥狀硬化。
於實施例中確定樟芝的製劑能夠逆轉並抑制主動脈脂肪斑紋病變、斑塊形成，以及血管再狹窄。
本發明之一目的為提供一種預防及/或治療動脈粥狀硬化之方法，該方法包含對一有需要的個體施用一樟芝製劑及/或樟芝的活性成分。
實際上，由該發現可推知，透過抑制主動脈脂肪斑紋病變、斑塊形成以及血管再狹窄，以抑制缺血性中風、心血管疾病、周邊動脈疾病以及主要器官血管粥狀硬化來逆轉或抑制動脈粥狀硬化。
於另一目的，本發明提供一種用於預防及/或治療動脈粥狀硬化的醫藥組合物，其包含一治療有效量的樟芝製劑及/或樟芝的活性成分，以及一醫藥上可接受的載體。
於本發明之一具體實施例中，該樟芝製劑包括但不限於一樟芝萃取物、一皿培式樟芝萃取物、一樟芝子實體萃取物，以及分離自上述萃取物之活性化合物。
於本發明之一實施例中，該活性化合物可為一或多種選自由下列所組成之群組：
Figure 02_image001
(Ia)，
Figure 02_image003
(Ib)，
Figure 02_image005
(Ic)，
Figure 02_image007
(Id)，以及
Figure 02_image009
(Ie)； 其中R1 為O、α-OH或β-H；R2 為H或OH；R3 為O、α-H、β-OAc或H2 ；R4 為H或OH；R5 為H或OH；R6 為COOH或COO (CH2 )n-CH3 ；R7 為H、OH或OAc；R8 為CH3 或COOH；虛線表示一單鍵或一雙鍵；n為一0至3的整數。
於本發明之一特定實施例中，該化合物為去氫齒孔酸 (dehydroeburicoic acid)：
Figure 02_image011
於本發明之另一實施例中，該化合物為去氫硫色多孔菌酸 （dehydrosulphurenic acid；dehydrosulfurenic acid）：
Figure 02_image013
於本發明之一實施例中，該化合物為樟芝酸A（antcin A）：
Figure 02_image015
於本發明之一實施例中，該化合物為樟芝酸B（antcin B）：
Figure 02_image017
於本發明之一實施例中，該化合物為樟芝酸C（antcin C）：
Figure 02_image019
於本發明之一實施例中，該化合物為樟芝酸H（antcin H）：
Figure 02_image021
於本發明之一實施例中，該化合物為樟芝酸K（antcin K）：
Figure 02_image023
於另一方面，本發明提供一種用於預防或治療動脈粥狀硬化疾病的方法，包含對一有需要的個體施用一治療有效量的如本文所公開之組合物/醫藥組合物，以及至少一種額外的動脈粥狀硬化治療劑。
應當理解的是，以上的一般描述以及以下的詳細描述皆僅為示例性及說明性的，並非限制本發明。
將參考以下示例的具體實施例進一步描述本發明之以上概述。然而，不應理解為本發明之內容僅限於以下實施方式，而是基於本發明之上述內容的所有發明都屬於本發明之範圍。
除非另有定義，否則本文使用之所有技術及科學術語具有與本發明所屬領域的技術人員通常理解的相同含義。
如本文所用，單數形式的「一」、「一種」以及「該」包括複數指示物，除非上下文另外明確指出。因此，例如，提及「一樣品」包括本領域技術人員已知的多個這樣的樣品及其等同物。
本發明提供一種預防及/或治療動脈粥狀硬化的方法，該方法包含對一有需要的個體施用一樟芝製劑及/或樟芝的活性成分。
本發明還提供一種用於預防及/或治療動脈粥狀硬化的組合物/醫藥組合物，包含一治療有效量的樟芝製劑及/或樟芝的活性成分，以及一醫藥上可接受的載體。
根據本發明，該樟芝製劑包括但不限於一樟芝萃取物、一皿培式樟芝萃取物、一樟芝子實體萃取物，以及分離自上述萃取物之活性化合物，及其衍生物。
更具體而言，該分離自樟芝之活性化合物係一或多種選自由下列所組成之群組：
Figure 02_image001
(Ia)，
Figure 02_image003
(Ib)，
Figure 02_image005
(Ic)，
Figure 02_image007
(Id)，或
Figure 02_image009
(Ie)； 其中R1 為O、α-OH或β-H；R2 為H或OH；R3 為O、α-H、β-OAc或H2 ；R4 為H或OH；R5 為H或OH；R6 為COOH或COO (CH2 )n-CH3 ；R7 為H、OH或OAc；R8 為CH3 或COOH；虛線表示一單鍵或一雙鍵；n為一0至3的整數。
於本發明之實施例中，該化合物可為：
Figure 02_image030
  R1 R2 R3 R4 Δ
樟芝酸A O H H2 H  
樟芝酸B O H O H  
樟芝酸C O H β-OH H  
樟芝酸D O H O OH  
樟芝酸E O H H2   14
樟芝酸F O H β-OH   14
樟芝酸K α-OH OH β-OH H  
於本發明之另一實施例中，該化合物可為：
Figure 02_image032
R7 =H; R8 =CH3
  R1 R4 R5 R6
樟菇酸B  （Zhankuic acid B） β-H α-OH H H COOH
樟菇酸C β-H α-OH H OH COOH
樟菇酸D O H H COOEt
樟菇酸E β-H α-OH H OH COOEt
於本發明之又一個實施例中，該化合物可為：
Figure 02_image034
  R1 R3 R5
甲基樟芝酸B O O H
甲基樟芝酸G O β-OAc α-H H
甲基樟芝酸H β-H α-OH O OH
  O H2 H
於本發明之另一實施例中，該化合物可為：
Figure 02_image035
  R7 R8 Δ
去氫齒孔酸 H COOH 7.9 (11)
齒孔醇 H CH3 8
15α-乙醯去氫硫色多孔菌酸 OAc COOH 7.9 (11)
去氫硫色多孔菌酸 OH COOH 7.9 (11)
齒孔酸 H COOH 8
變孔㶷孔菌酸 OAc COOH 8
硫色多孔菌酸 OH COOH 8
於本發明之一特定實施例中，該化合物可為羊毛甾烷 （lanostane）：
Figure 02_image037
據此，該化合物係選自由下列所組成之群組：
Figure 02_image039
（去氫松二酸，dehydrotumolosaeure），
Figure 02_image041
（去氫土莫酸，dehydrotumulosic acid），
Figure 02_image043
（3-表-去氫土莫酸，3-epi-dehydrotumulosic acid），
Figure 02_image045
（去氫硫色多孔菌酸，dehydrosulphurenic acid），
Figure 02_image047
（去氫松二酸-甲酯，dehydrotumolosaeure-methylester），
Figure 02_image049
（(20ξ)-3β,15α,16α-三羥基-24-甲基羊毛脂-7,9 (11),24 (241)-三烯-21-油酸；15α-羥基去氫土莫酸， (20ξ)-3β,15α,16α-trihydroxy-24-methyllanosta-7,9 (11),24 (241)-trien-21-oic acid; 15α-hydroxydehydrotumulosic acid），
Figure 02_image051
（甲基25-羥基-3-表去氫土莫鹽 (甲基)，methyl 25-hydroxy-3-epidehydrotumulosate (methyl) ），
Figure 02_image053
（去氫茯苓酸，dehydropachymic acid），
Figure 02_image055
（15α-乙醯去氫磺尿酸，15α-acetyldehydrosulfurenic acid），
Figure 02_image057
（15α-乙醯去氫硫色多孔菌酸，15α-acetyldehydrosulphurenic acid），
Figure 02_image059
（去氫硫色多孔菌酸，dehydrosulphurenic acid），
Figure 02_image061
（29-羥基去氫茯苓酸；(3β,16α)-3-(乙醯氧基)-16,29-二羥基-24-甲基亞胺基-7,9 (11)-二烯-21-油酸，29-hydroxydehydropachymic acid；(3β,16α)-3- (acetyloxy)-16,29-dihydroxy-24-methylidenelanosta-7,9 (11)-dien-21-oic acid），以及
Figure 02_image063
（去氫齒孔酸，dehydroeburicoic acid）。
根據本發明，該化合物係選自由下列所組成之群組：
Figure 02_image065
(樟芝酸A，antcin A)，
Figure 02_image067
(樟芝酸B，antcin B)，
Figure 02_image069
(樟芝酸C，antcin C)，
Figure 02_image071
(樟芝酸H，antcin H)，以及
Figure 02_image073
(樟芝酸K，antcin K)。
如本文所用，「動脈粥狀硬化疾病」乙詞係指動脈粥狀硬化、動脈硬化、動脈粥狀硬化性血管疾病、動脈閉塞性疾病、缺血性中風、心血管疾病、周邊動脈疾病，或主要器官血管粥狀硬化，且其特徵在於斑塊在血管壁上積聚且血管發炎。斑塊為動脈粥狀硬化疾病的標誌，由積累的細胞內與細胞外脂質、平滑肌細胞、結締組織、發炎細胞以及糖胺聚醣所組成。
本文所用之「預防（preventing）」、「預防（prevention）」或「預防（prevent）」等詞或任何其他形式的「預防」係指阻斷特定事件或特徵或疾病的機制或途徑的作用。穩定或延遲特定事件或特徵或疾病的發展或進程，或使特定事件或特徵發生的機會最小化。
如本文所用，「治療（treating）」、「治療（treatment）」或「治療（treat）」等詞或任何其他形式的「治療」係指用於補救疾病狀態或症狀的任何及所有用途，或以其他方式阻止、阻礙、遲延，或逆轉疾病或其他不良症狀的發展。
本文所用之「抑制（inhibiting）」、「抑制（inhibition）」或「抑制（inhibit）」等詞或任何其他形式的「抑制」係指減輕或停止事件或特徵（例如，動脈粥狀硬化）或疾病的特徵的作用。
本文所用之「減少（reducing）」、「減少（reduction）」或「減少（reduce）」等詞或任何其他形式的「減少」係指降低的作用或事件或特徵（例如，動脈粥狀硬化）。可以理解的是，這通常是與某個標準期望值有關，換言之，這是相對的，但是對於參考標準或相對值而言，並非總是必需的。
本文所用之「逆轉（reversing）」、「逆轉（reversal）」或「逆轉（reverse）」等詞或任何其他形式的「逆轉」係指使患有疾病的患者恢復到其初始健康狀態的動作。
如本文所用，「個體」乙詞包括人類或非人類動物，例如伴侶動物（例如，狗、貓等）、農場動物（例如，牛、羊、豬、馬等），或實驗動物 （例如，大鼠、小鼠、天竺鼠等）。
如本文所用，「治療有效量」乙詞係指，相較於沒有接受該量的相應個體，在治療、治癒、預防或改善一疾病、障礙，或副作用，或降低一疾病或障礙的進展速度方面有作用的一藥劑的量。該術語在其範圍內還包括有效增強正常生理功能的量。
為了用於治療，將該治療有效量的該化合物配製為用於給藥的一醫藥組合物。因此，本發明進一步提供一醫藥組合物，其包含一治療有效量的樟芝製劑或從樟芝中分離的活性化合物，以及一或多種醫藥上可接受的載體。
為了遞送及吸收，可將一治療有效量的根據本發明之活性成分與一醫藥上可接受的載體一起以一合適的形式配製成為一醫藥組合物。基於給藥途徑，本發明之醫藥組合物較佳佔活性成分總重量的0.1重量%至100重量%。
本文所用之「醫藥上可接受的載體」係指與製劑的其他成分相容且對要與醫藥組合物一起給藥的個體無害的可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。根據醫藥製劑的要求，本領域中通常已知或使用的任何載體、稀釋劑或賦形劑均可用於本發明。根據本發明，該醫藥組合物可適於透過任何適當的途徑施用，包括但不限於口服、直腸、鼻部、局部、***，或腸胃外途徑。於本發明之一特定實施例中，將醫藥組合物配製為用於口服給藥。這樣的製劑可透過藥學領域中已知的任何方法來製備。
如本文所用，「醫藥上可接受的」係指載體與組合物中的活性成分相容，且較佳地可使該活性成分穩定且對於接受治療的個體是安全的。該載體可為活性成分的稀釋劑、載劑、賦形劑，或基質。合適的賦形劑的一些實例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖、甘露糖、澱粉、***膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃芪膠、明膠、矽酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、無菌水、糖漿以及甲基纖維素。該組合物可另外包含潤滑劑，例如滑石粉、硬脂酸鎂以及礦物油；潤濕劑；乳化劑以及助懸劑；防腐劑，例如，羥基苯甲酸甲酯以及羥基苯甲酸丙酯；甜味劑；以及調味劑。在對患者給藥後，本發明之組合物可提供活性成分的快速、持續或延遲釋放的效果。
根據本發明，該組合物的形式可為片劑、丸劑、粉劑、***錠、小包、片劑、酏劑、懸浮劑、洗劑、溶液、糖漿、軟及硬明膠膠囊、栓劑、無菌注射液，以及包裝的粉末。
本發明之組合物可透過任何生理上可接受的途徑遞送，例如口服、腸胃外 （例如，肌內、靜脈內、皮下，以及腹膜內）、透皮、栓劑，以及鼻內方法。關於腸胃外給藥，其較佳以無菌水溶液形式使用，其可包含足以使溶液與血液等滲的其他物質，例如鹽或葡萄糖。可根據需要適當地緩衝水溶液（較佳pH值為3至9）。在無菌條件下合適的腸胃外組合物的製備可透過本領域技術人員已知的標準藥理技術來完成。
根據本發明，本文所述之組合物/醫藥組合物還可以膳食補充劑施用於人類或非人類動物，以降低血液中LDL-膽固醇的濃度並增加HDL-膽固醇的濃度至降低動脈粥狀硬化與血管疾病的風險。可透過在製備食品的過程中對食品添加大豆異黃酮苷素以製備摻入組合物/醫藥組合物的膳食補充劑，而與組合物/醫藥組合物的來源無關。可對其中添加組合物/醫藥組合物的食物包括幾乎所有食物。例如，可將組合物/醫藥組合物添加到食物中，該食物包括但不限於，例如碎肉、乳化肉、醃製肉，以及注射大豆異黃酮苷素的肉等肉類；營養飲料、運動飲料、蛋白質強化飲料、果汁、牛奶、牛奶替代品，以及減肥飲料等飲料；硬乳酪與軟乳酪、奶油乳酪以及乾酪之類的乳酪；冷凍甜品，例如冰淇淋、冰牛奶、低脂冷凍甜品，以及非乳製品冷凍甜品；優格；湯品；布丁；烘焙食品；沙拉醬；以及蘸醬及抹醬，例如蛋黃醬以及薯條蘸醬。將該組合物/醫藥組合物以選擇的量添加到食品中，以將所需劑量的組合物/醫藥組合物遞送至食品的消費者。
根據本發明，本文所述之方法及組合物/醫藥組合物可與至少一種額外的動脈粥狀硬化治療劑組合給予個體。有效的示例性動脈粥狀硬化治療劑包括，但不限於，他汀類（statins）、纖維酸衍生物（fibrates）、菸酸、依澤替米貝（Ezetimibe）、膽酸螯合劑（例如，銷膽胺(cholestyramine）、colestipol，或colesevelam）、阿利珠單抗（alirocumab）、依洛尤單抗（evolocumab）、阿斯匹靈（aspirin）、氯吡格雷（clopidogrel）、替卡格雷（ticagrelor）、普拉格雷（prasugrel），以及華法林（warfarin）。
透過以下實施例進一步說明本發明，提供這些實施例係為說明而非限制。
實施例
材料與方法
1. 樟芝萃取物及其活性部分之製備
將100克樟芝子實體與甲醇熱再循環6小時，收集萃取物並減壓乾燥，以獲得15克樟芝甲醇萃取物。
取15克如上獲得的樟芝甲醇萃取物，填充二氧化矽，並在管柱分離 (3×12 cm)中以沖提劑「己烷/乙酸乙酯/甲醇」進行梯度沖提以獲得活性部分，包括ARH003與ARH004。進一步分離衍生自樟芝子實體萃取物的純化合物。
2. 實驗模型
將2至3公斤的雄性紐西蘭白兔單獨關在籠中，並飼養於控制溫度及濕度的房間內。光暗週期為每隔12小時。適應幾天後，將動物依次分為六個餵養組：標準兔飼料（ND）、含有0.5%膽固醇的標準兔飼料（HF），含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg洛伐他汀（Lovastatin）的標準兔飼料（L），含有0.5%膽固醇以及1% ARH003的標準兔飼料（ARH003），含有0.5%膽固醇以及1% ARH004的標準兔飼料（ARH004），含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg純化合物的標準兔飼料（P）。
除標準兔飼料外，其他各組均給予含0.5%膽固醇的標準兔飼料4週。每隻兔子的每日餵養量為每日50 g/kg體重。
在動物適應新環境後，節食了8週。在為期12週的研究開始與結束時，透過肌肉注射舒泰50 （Zoletil 50）（1 mL/kg）（Virbac Ltd.公司，法國）麻醉兔子，並採集血液樣品。最後，犧牲這些兔子以進行進一步的組織病理學分析之後，從這些兔子中收集主動脈（自主動脈弧至腸骨動脈的分叉）以及全部肝臟。
3. 血液化學分析
在抽血之前使動物禁食整夜。從兔子的邊緣耳靜脈收集血液到BD Vacutainer EDTA血液收集管中。透過在4o C下以3,000 rpm離心10分鐘來分離血漿。血液化學參數變化的測量包括低密度脂蛋白（LDL）、膽固醇（Chol）、三酸甘油酯（TG）、麩胺酸草乙酸轉胺酶（(glutamate oxaloacetate transaminase，GOT），以及麩胺酸丙酮酸轉胺酶（glutamate pyruvate transaminase，GPT）的血清含量。
4. 主動脈脂肪斑紋染色法
縱向打開主動脈以暴露內膜表面，並以生理鹽水輕輕沖洗。將主動脈在2% (w/v) Sudan IV中培養，以幾種濃度（100%、90%、80%、70%，以及60%）的乙醇沖洗1分鐘，然後以純水沖洗。使用數位相機（Nikon D80，日本）獲取照片，並在Alpha Imager 2200檔案系統（Alpha Innotech公司，美國）上進行量化。
5. 組織病理學檢查
本研究使用石蠟包埋組織切片以及蘇木精-伊紅（haematoxylin-eosin，HE）染色的常規技術。切下新鮮的標本，並以酒精或醛類固定劑固定。固定後，將組織標本以水沖洗。然後將組織標本以Mayer的蘇木精以及1%伊紅Y染色，並在明視野顯微鏡下進行檢查。
6. 肝組織的冷凍切片
以正常鹽水灌注兔的肝組織，並在10% (v/v)甲醛中和的溶液（J.T. Baker公司，美國）中固定24小時。之後，將組織包埋在Tissue Tek OCT Compound （型號4583；Sakura Finetek公司，美國）中。將包埋的組織切成10 μm厚的切片，並以Sudan IV以及蘇木精（Merck公司，美國）染色。簡言之，將切片以純水洗滌1分鐘以除去OCT化合物，以50% (v/v)乙醇洗滌30秒鐘，然後以2% (w/v)的Sudan IV染色1小時。以50% (v/v)乙醇及純水進一步洗滌2分鐘後，將切片以蘇木精複染。使用配備有10倍放大物鏡的顯微鏡獲取照片，並在Alpha Imager 2200檔案系統（Alpha Innotech公司，美國）上進行定量。脂肪肝進展的表現表示為油滴面積佔總肝組織（細胞）的百分比。
7. 統計分析
所有值均表示為平均值±SE。每個值為每個藥物體外實驗中至少三個實驗的平均值。學生氏t檢驗用於統計比較。*表示該值與對照組有顯著差異(*，p > 0.05; **，P > 0.01)。
實施例 1
樟芝子實體萃取物或衍生的純化合物對血清三酸甘油酯與總膽固醇含量的抑制作用
單獨或以洛伐他汀、樟芝子實體萃取物或衍生的純化合物補充兔子的高脂飲食，不會影響干預期間的體重增加（圖1）。此外，在治療期開始時，各組之間的三酸甘油酯及總膽固醇含量未顯示出明顯的變化（圖2）。然而，補充高脂飲食會導致血清中三酸甘油酯與總膽固醇含量顯著增加，但以樟芝子實體萃取物或衍生的純化合物處理的兔子的血清三酸甘油酯及總膽固醇含量顯著改善（圖 3）。值得注意的是，相較於高脂飲食組動物，洛伐他汀組兔子的血清總膽固醇含量更高。
實施例 2
樟芝子實體萃取物或衍生的純化合物對脂肪斑紋形成的抑制作用
最早可見的動脈粥狀硬化病變為脂肪斑紋，隨著時間的推移，脂肪斑紋演變成纖維斑塊，這是已確立的動脈粥狀硬化的標誌。因此，對脂肪斑紋形成的研究顯示，樟芝子實體萃取物或衍生的純化合物顯著減少了動脈粥狀硬化病變，如圖4所示。
實施例 3
樟芝子實體萃取物或衍生的純化合物對新內膜形成的保護作用
高脂飲食組兔子的冠狀動脈的組織學特徵顯示，由於動脈粥狀硬化斑塊，內膜層變厚、腔直徑變小。樟芝子實體萃取物或衍生的純化合物組的兔子的冠狀動脈特徵顯示為幾乎沒有斑塊的正常動脈（圖5與圖6）。此外，樟芝子實體萃取物或衍生的純化合物組的兔子的新內膜與中間膜的比率降低了60%以上，新內膜與中間膜的比率代表血管再狹窄 （圖7）。
實施例 4
樟芝子實體萃取物或衍生的純化合物對肝脂質蓄積的保護作用
如上所述，高脂飲食餵養的兔子表現出較高的血清三酸甘油酯及總膽固醇含量。透過高脂飲食誘導的肝脂質蓄積的組織病理學分析進一步證明了相似的特徵，而透過樟芝子實體萃取物或衍生的純化合物的治療，這種現象得以減輕（圖8）。
總體而言，本文公開之樟芝子實體萃取物或衍生的純化合物對動脈粥狀硬化斑塊形成以及肝脂質蓄積提供保護作用，並且將有利於治療動脈粥狀硬化疾病。
上面的描述僅涉及本發明中的較佳具體實施例，應當指出，對於本領域的普通技術人員來說，在不背離本發明原理的前提下，還可以做出一些改進及修改，且這些改進及修改也應視為於本發明之保護範圍之內。
無
當結合附圖閱讀時，將更好地理解前述發明內容以及以下對本發明之詳細描述。為了說明本發明，於圖式中顯示了目前較佳的具體實施例。
於圖式中：
圖1所示為體重的變化。ND，標準兔飼料；HF，含有0.5%膽固醇的標準兔飼料；L，含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg洛伐他汀(Lovastatin)的標準兔飼料；ARH003，含有0.5%膽固醇以及1% ARH003的標準兔飼料；ARH004，含有0.5%膽固醇以及1% ARH004的標準兔飼料；P，含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg純化合物的標準兔飼料。
圖2所示為在第0週時三酸甘油酯(左圖)以及總膽固醇(右圖)的含量。ND，標準兔飼料；HF，含有0.5%膽固醇的標準兔飼料；L，含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg洛伐他汀的標準兔飼料；ARH003，含有0.5%膽固醇以及1% ARH003的標準兔飼料；ARH004，含有0.5%膽固醇以及1% ARH004的標準兔飼料；P，含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg純化合物的標準兔飼料。
圖3所示為在第12週時三酸甘油酯(左圖)以及總膽固醇(右圖)的含量。ND，標準兔飼料；HF，含有0.5%膽固醇的標準兔飼料；L，含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg洛伐他汀的標準兔飼料；ARH003，含有0.5%膽固醇以及1% ARH003的標準兔飼料；ARH004，含有0.5%膽固醇以及1% ARH004的標準兔飼料；P，含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg純化合物的標準兔飼料。+以及*分別表示相較於對照組及HF組的P > 0.05。
圖4所示為主動脈脂肪斑紋病變的組織病理學檢查。ND，標準兔飼料；HF，含有0.5%膽固醇的標準兔飼料；L，含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg洛伐他汀的標準兔飼料；ARH003，含有0.5%膽固醇以及1% ARH003的標準兔飼料；ARH004，含有0.5%膽固醇以及1% ARH004的標準兔飼料；P，含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg純化合物的標準兔飼料。
圖5所示為冠狀動脈切片的HE染色。ND，標準兔飼料；HF，含有0.5%膽固醇的標準兔飼料；洛伐他汀，含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg洛伐他汀的標準兔飼料；ARH003，含有0.5%膽固醇以及1% ARH003的標準兔飼料；ARH004，含有0.5%膽固醇以及1% ARH004的標準兔飼料；純化合物，含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg純化合物的標準兔飼料。
圖6所示為冠狀動脈切片的HE染色放大。ND，標準兔飼料；HF，含有0.5%膽固醇的標準兔飼料；洛伐他汀，含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg洛伐他汀的標準兔飼料；ARH003，含有0.5%膽固醇以及1% ARH003的標準兔飼料；ARH004，含有0.5%膽固醇以及1% ARH004的標準兔飼料；純化合物，含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg純化合物的標準兔飼料；N，新內膜層；M，中間膜。
圖7所示為以新內膜與中間膜面積之比率表示的血管再狹窄的表現。ND，標準兔飼料；HF，含有0.5%膽固醇的標準兔飼料；Lova，含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg洛伐他汀的標準兔飼料；ARH003，含有0.5%膽固醇以及1% ARH003的標準兔飼料；ARH004，含有0.5%膽固醇以及1% ARH004的標準兔飼料；P，含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg純化合物的標準兔飼料。*P > 0.05；**，P > 0.01。
圖8所示為在12週研究後的高膽固醇血症兔模型中肝臟組織的組織病理學檢查。ND，標準兔飼料；HF，含有0.5%膽固醇的標準兔飼料；洛伐他汀，含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg洛伐他汀的標準兔飼料；ARH003，含有0.5%膽固醇以及1% ARH003的標準兔飼料；ARH004，含有0.5%膽固醇以及1% ARH004的標準兔飼料；純化合物，含有0.5%膽固醇以及10 mg/kg純化合物的標準兔飼料。
無

Claims (5)

  1. 一種樟芝製劑用於製備抑制、減少或逆轉動脈粥狀硬化藥物的用途，其中該樟芝製劑係自樟芝分離或萃取而得之產物，或一或多種活性化合物的組合物，其中該分離或萃取自樟芝之產物或活性化合物係一或多種選自由下列所組成之群組：
    Figure 109113093-A0305-02-0027-1
    Figure 109113093-A0305-02-0027-2
    Figure 109113093-A0305-02-0027-3
    Figure 109113093-A0305-02-0028-4
    Figure 109113093-A0305-02-0028-6
     其中R1為O、α-OH或β-H；R2為H或OH；R3為O、α-H、β-OAc或H2；R4為H或OH；R5為H或OH；R6為COOH或COO(CH2)n-CH3；R7為H、OH，或OAc；R8為CH3或COOH；虛線表示一單鍵或一雙鍵；n為一0至3的整數。
  2. 一種樟芝製劑用於製備用於治療或預防動脈粥狀硬化疾病藥物的用途，其中該樟芝製劑係自樟芝分離或萃取而得之產物，或一或多種活性化合物的組合物，其中該分離或萃取自樟芝之產物或活性化合物係一或多種選自由下列所組成之群組：
    Figure 109113093-A0305-02-0028-7
    Figure 109113093-A0305-02-0029-8
    Figure 109113093-A0305-02-0029-9
    Figure 109113093-A0305-02-0029-10
    Figure 109113093-A0305-02-0029-11
     其中R1為O、α-OH或β-H；R2為H或OH；R3為O、α-H、β-OAc或H2；R4為H或OH；R5為H或OH；R6為COOH或COO(CH2)n-CH3；R7為H、OH，或OAc；R8為CH3或COOH；虛線表示一單鍵或一雙鍵；n為一0至3的整數。
  3. 如請求項2之用途，其中該動脈粥狀硬化疾病選自動脈粥狀硬化性血管疾病、動脈閉塞性疾病、缺血性中風、動脈粥狀硬化性周邊動脈疾病，或主要器官血管粥狀硬化，以及其特徵在於斑塊在血管壁上積聚及血管發炎。
  4. 如請求項1或2之用途，其中該樟芝製劑係一或多種選自由下列所組成之群組：一樟芝萃取物、一皿培式樟芝萃取物、一樟芝子實體萃取物，以及分離自上述萃取物之活性化合物，及其藥學上可接受之鹽、異構物、水合物。
  5. 如請求項4之用途，其中該分離自樟芝之活性化合物為：
    Figure 109113093-A0305-02-0030-12
    (去氫松二酸，dehydrotumolosaeure)，
    Figure 109113093-A0305-02-0030-13
    (去氫土莫酸，dehydrotumulosic acid)，
    Figure 109113093-A0305-02-0030-15
    (3-表-去氫土莫酸，3-epi-dehydrotumulosic acid)，
    Figure 109113093-A0305-02-0031-17
    (去氫硫色多孔菌酸，dehydrosulphurenic acid)，
    Figure 109113093-A0305-02-0031-21
    (去氫松二酸-甲酯， dehydrotumolosaeure-methylester)，
    Figure 109113093-A0305-02-0031-20
    (20ξ)-3β,15α,16α-三羥基-24-甲基羊毛脂-7,9 (11),24(241)-三烯-21-油酸；15α-羥基去氫土莫酸，(20ξ)-3β,15α,16α-trihydroxy-24-methyllanosta-7,9(11),24(241)-trien-21-oic acid；15α-hydroxydehydrotumulosic acid)，
    Figure 109113093-A0305-02-0031-23
    (甲基25-羥基-3-表去氫土莫鹽(甲基)， methyl 25-hydroxy-3-epidehydrotumulosate(methyl))，
    Figure 109113093-A0305-02-0032-24
    (去氫茯苓酸，dehydropachymic acid)，
    Figure 109113093-A0305-02-0032-26
    (15α-乙醯去氫磺尿酸， 15α-acetyldehydrosulfurenic acid)，
    Figure 109113093-A0305-02-0032-28
    (15α-乙醯去氫硫色多孔菌酸， 15α-acetyldehydrosulphurenic acid)，
    Figure 109113093-A0305-02-0032-29
    (去氫硫色多孔菌酸，dehydrosulphurenic acid)，
    Figure 109113093-A0305-02-0033-31
    (29-羥基去氫茯苓酸；(3β,16α)-3-(乙醯 氧基)-16,29-二羥基-24-甲基亞胺基-7,9(11)-二烯-21-油酸，29-hydroxydehydropachymic acid；(3β,16α)-3-(acetyloxy)-16,29-dihydroxy-24-methylidenelanosta-7,9(11)-dien-21-oic acid)，
    Figure 109113093-A0305-02-0033-32
    (去氫齒孔酸，dehydroeburicoic acid)，
    Figure 109113093-A0305-02-0033-33
    (樟芝酸A，antcin A)，
    Figure 109113093-A0305-02-0034-34
    (樟芝酸B，antcin B)，
    Figure 109113093-A0305-02-0034-35
    (樟芝酸C，antcin C)，
    Figure 109113093-A0305-02-0034-37
    (樟芝酸H，antcin H)，或
    Figure 109113093-A0305-02-0034-38
    (樟芝酸K，antcin K)。
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