TWI721262B - 副乾酪乳酸桿菌株用於製備改善腸道菌相之組合物的用途 - Google Patents

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本發明係關於一種副乾酪乳酸桿菌株用於製備改善腸道菌相之組合物的用途，其中該副乾酪乳酸桿菌株為副乾酪乳酸桿菌株Yb (Lactobacillus paracasei Yb)，寄存編號為BCRC 910415。本發明所述之副乾酪乳酸桿菌株製備而得之組合物具有改善腸道菌相之效果。

Description

副乾酪乳酸桿菌株用於製備改善腸道菌相之組合物的用途
本發明係關於一種副乾酪乳酸桿菌株的用途，特別係指一種副乾酪乳酸桿菌株Yb (Lactobacillus paracasei Yb)，寄存編號為BCRC 910415，用於製備改善腸道菌相之組合物的用途。
腸道為人體最重要的消化器官及免疫器官，腸道內含有約100兆隻多達500種的腸道細菌，分別為益生菌、壞菌及中間菌；其中益生菌可透過在腸道中幫助多種維生素之合成、調節腸道免疫系統及幫助排便順暢避免體內毒素累積；該些腸道細菌彼此之間在腸道內相互競爭形成動態平衡，此種腸內菌共生於腸道內生態常被稱為「腸道菌相」。因腸道菌相係透過飲食而動態變化，若腸道內益生菌與壞菌之比例改變則會造成腸道菌相失衡，進而導致腸躁症、過敏、異味性皮膚炎或惡性腫瘤等疾病。
乳酸菌屬於益生菌的一種，最常被提及之乳酸菌主要有：(1)乳桿菌(Lactobacillus sp.)，如嗜酸乳桿菌 (Lactobacillus acidophilus )、乾酪乳酸桿菌 (Lactobacillus casei )及副乾酪乳酸桿菌 (Lactobacillus paracasei )；及(2)雙歧桿菌 (Bifidobacterium sp.)，如龍根菌 (Bifidobacterium longum )及比菲德氏菌(Bifidobacterium bifidum )等。其中許多研究指出副乾酪乳酸桿菌具有降低血液中膽固醇、調節免疫反應或治療過敏相關疾病之能力。中華民國專利第I403327號公告一種寄存編號為BCRC 910482之副乾酪乳酸桿菌及其用於製備降低血液中膽固醇之食品組成物或藥物組成物的用途；中華民國專利第I418356號公告一種可作為免疫調節劑之副乾酪乳酸桿菌LT12；中華民國專利第I398259號公告一種副乾酪乳酸桿菌GMNL-133用於改善異位性皮膚炎或其他過敏疾病之組合物及其用途。然而，先前技術中並不見副乾酪乳酸桿菌株Yb具有改善腸道菌相之功效。
雖然乳酸菌已被研究發展多年，但尚有許多菌種尚在鑑定分類中；即使為同菌種，也會因為不同菌株之間的基因序列表現不同，而造成其生化特徵及可達成之功效並不相同。
為因應大眾對於維護腸道健康之需求，本發明之目的在於提供一種副乾酪乳酸桿菌株用於製備改善腸道菌相之組合物的用途，其中該組合物具有改善腸道菌相之功效。
為達到上述之發明目的，本發明所採用的技術手段為提供一種副乾酪乳酸桿菌株用於製備改善腸道菌相之組合物的用途，其中該副乾酪乳酸桿菌株為副乾酪乳酸桿菌株Yb (Lactobacillus paracasei Yb)，寄存編號為BCRC 910415。
較佳的，所述之該組合物含有107 CFU/mL至108 CFU/mL之該副乾酪乳酸桿菌株Yb。
較佳的，所述之該副乾酪乳酸桿菌株為活體菌株。
依據本發明，所述之改善腸道菌相係指增加腸道乳酸桿菌之菌數含量、降低腸道中壞菌菌數的趨勢。其如本發明所例示者，改善腸道菌相可透過施予特定範圍量之含有副乾酪乳酸桿菌之組合物，並於特定時間範圍內測量腸道內菌相變化而得。
較佳的，所述之該組合物為飲品、零食或保健食品。更佳的，所述之該飲品為發酵乳。
較佳的，所述之該組合物係將15%至17%(重量體積比)之脫脂奶粉、0.05%至0.2%(重量體積比)之酵母粉及8%至10%(體積比)之高果糖液溶於水中並混合均勻，得到一***，將***在180 kg/cm2 條件下均質，而後於120ºC、4秒進行殺菌步驟；於90ºC至100ºC條件下(較佳為93ºC至95ºC)將該***進行褐化反應1.5小時至3小時(較佳為2小時)，得到一褐化後***；而後以副乾酪乳酸桿菌株Yb接菌量106 CFU/mL至107 CFU/mL加入該褐化後***中於34ºC至36ºC條件下進行發酵48小時，以獲得組合物。
更佳的，前述之該組合物進行發酵48小時的發酵條件為35±1ºC，至發酵終點時該組合物之酸度為2.4±0.2%，而後攪拌冷卻至10ºC以下，以獲得組合物。
依據本發明，所述之褐化反應係指非酵素性的褐化反應，該***於加熱處理過程中，該***中之糖類會與胺基酸進行梅納反應(Maillard reaction)及焦糖化(caramelization)，使得該褐化後***具有加熱焦味及濃厚味道。
本發明之副乾酪乳酸桿菌株Yb具有改善腸道菌相之效果，且本發明證實含有副乾酪乳酸桿菌株Yb之組合物可使腸道內乳酸桿菌之菌叢增加以改善腸道菌相。
以下配合圖式及本發明之較佳實施例，進一步闡述本發明為達成目的所採取的技術手段，但該些實施例並不限於本發明前述所揭示之內容，習之本發明之技藝者，可以做些許之改良與修飾，但不脫離本發明之範疇。
製備例 1 以 副乾酪乳酸桿菌株 Yb 製備改善腸道菌相之組合物
將15%至17%之脫脂奶粉、0.05%至0.2%之酵母粉及8%至10%之高果糖液溶於水中並混合均勻，得到一***；於90ºC至100ºC條件下將該***進行褐化反應2小時至3小時，得到一褐化後***；而後以副乾酪乳酸桿菌株Yb接菌量106 CFU/mL至107 CFU/mL加入該褐化後***中於34ºC至36ºC條件下進行發酵48小時，以獲得含有副乾酪乳酸桿菌株Yb之組合物。
實施例 1 以 副乾酪乳酸桿菌株 Yb 製備之發酵乳對於改善腸道菌相變化之影響
本實施例係請30名具有中度至重度便秘症狀之受試者進行為期共40天之實驗：於實驗開始前，首先需要經過10天至15天之穩定期，於穩定期期間受試者需配合飲食指導，服從受試者宣傳手冊之「每日飲食指南」及「國民飲食指標」之內容，並避免暴飲暴食或其他特殊食物之攝取，且亦不可服用整腸健胃藥物、補充劑、抗生素、組織胺-2拮抗劑、抗氧化劑、強調整腸健胃的機能性食品，亦或中草藥及其他不明藥物等。若受試者無法因嚴重便秘、感冒或其他疾病而無法繼續進行實驗時，需由參與本研究之腸胃科醫師評估診斷後，在予以判定是否需退出本研究。本實驗為單盲試驗，即受試者通過篩選後，實驗期間需配合飲食指導，實驗期程規劃為前、中、後三階段。即實驗前10天為穩定期，即實驗第-10天至第0天，在於調整受試者之飲食習慣且不可違背說明會之飲食指導原則，以及開始填寫排便問卷藉以觀察受試者之配合度等，嚴格挑選配合度不佳者於此期即予以排除；接著為安慰劑飲用期，第1天至第10天為安慰劑期(共10天)，受試者於安慰劑期間每日飲用300 mL不含副乾酪乳酸桿菌株Yb之發酵乳；而後進入第11天至第30天之實驗期(共20天)，受試者於實驗期間每日飲用300 mL含副乾酪乳酸桿菌株Yb之發酵乳(副乾酪乳酸桿菌株Yb之菌數為107 -108 CFU/mL)；最後進入第31天至第40天之排空期(共10天)，受試者於排空期起10天內停止飲用含副乾酪乳酸桿菌株Yb之發酵乳。於實驗期間採集受試者之糞便，檢測糞便檢體中屬於益生菌的乳酸桿菌 (Lactobacillus sp.)之菌數變化；屬於壞菌的產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens )及大腸桿菌(Escherichia coli )之菌數變化，並進行統計分析。
乳酸桿菌 (Lactobacillus sp.)之菌數變化如圖1所示，可看出與安慰劑期相比，進入實驗期之受試者糞便檢體之乳酸桿菌菌數顯著增加，此結果表示含副乾酪乳酸桿菌株Yb之發酵乳具有增加人體腸道內乳酸桿菌菌數之功效，即具有增加腸道內之益生菌來改善腸道菌相之效果。此外，排空期之糞便檢體之乳酸桿菌與安慰劑組相比乳酸桿菌菌數亦為顯著增加，並且與實驗期組之乳酸桿菌菌數結果相近，其可推論於副乾酪乳酸桿菌株Yb可於期間內在人體腸道內穩定生長，並進一步平衡腸道內菌相。產氣莢膜梭菌及大腸桿菌之菌數變化分別如圖2及圖3所示，可看出兩種壞菌在受試者飲用含副乾酪乳酸桿菌株Yb之發酵乳後有逐漸下降的趨勢，可推論除了增加益生菌數以外，副乾酪乳酸桿菌株Yb也具有降低壞菌的效果。
實施例 1 副乾酪乳酸桿菌株 Yb 製備之發酵乳之耐酸性、耐膽鹽性試驗
本實施例進一步將含副乾酪乳酸桿菌株Yb之發酵乳與含有代田菌之發酵乳(市售養樂多)以及含有LP33益生菌之發酵乳進行耐酸性與耐膽鹽測試比較。
耐酸性測驗步驟為本領域習知技術，故以下簡略敘述實驗步驟：挑取單一菌落接種於MRS broth中，於37ºC隔夜培養，而後取代測菌液1 ml，以6000 rpm、5分鐘離心，且分別加入不同pH值(以0.1 N鹽酸調整)的9 ml PBS中，並充分混合，於37ºC培養1小時。培養完畢後取1 ml混合液加入9 ml無菌水中稀釋，再取100 µl稀釋菌液接種於MRS培養盤上，以37ºC培養48小時，最後計算存活菌落菌數。
耐膽鹽性測驗步驟為本領域習知技術，故以下簡略敘述實驗步驟：挑取單一菌落接種於MRS broth中，於37ºC隔夜培養，而後取代測菌液1 ml，以6000 rpm、5分鐘離心，且分別加入含0.3%膽鹽之MRS broth中，培養0、4、8及24小時後，各取1 ml混合液加入9ml無菌水稀釋再取100µl稀釋菌液接種於MRS培養盤上，以37ºC培養48小時，最後計算存活菌落菌數，測量殘存之菌數，測試乳酸菌株在含膽鹽的培養條件下之存活情形，並評估其在含膽鹽的培養基中生長是否受到抑制。
結果如下表1及表2所示。不論是耐酸性試驗或是耐膽鹽試驗結果，副乾酪乳酸桿菌株Yb相較於其他兩種菌株都有較佳的耐酸性及耐膽鹽性。
表1　耐酸性試驗結果
Figure 107112643-A0304-0001
表2　耐膽鹽性試驗結果
Figure 107112643-A0304-0002
圖1為受試者於不同實驗期間之糞便中乳酸桿菌菌數變化之柱狀圖；安慰劑期為飲用未含有副乾酪乳酸桿菌Yb之發酵乳之時期 (共10天)，實驗期為飲用含有副乾酪乳酸桿菌Yb之發酵乳之時期 (共20天)，排空期為連續飲用20天含有副乾酪乳酸桿菌Yb之發酵乳後停止飲用之時期 (共10天)；圖中字母不同表示兩者之間相比具顯著差異p ＜0.05。 圖2為受試者於不同實驗期間之糞便中產氣莢膜梭菌之柱狀圖；同圖1之實驗敘述說明。 圖3為受試者於不同實驗期間之糞便中大腸桿菌之柱狀圖；同圖1之實驗敘述說明。
副乾酪乳酸桿菌株Yb已於2008年12月17日寄存於財團法人食品工業發展研究所生物資源保存中心，副乾酪乳酸桿菌株Yb之寄存編碼為BCRC 910415。

Claims (4)

  1. 一種副乾酪乳酸桿菌株用於製備改善腸道菌相之組合物的用途，其中該副乾酪乳酸桿菌株為副乾酪乳酸桿菌株Yb(Lactobacillus paracasei Yb)，寄存編號為BCRC 910415，其中該組合物含有107CFU/mL至108CFU/mL之該副乾酪乳酸桿菌株Yb，且所述改善腸道菌相包括增加糞便乳酸桿菌菌數。
  2. 如請求項1所述之用途，其中該副乾酪乳酸桿菌株為活體菌株。
  3. 如請求項1所述之用途，其中該組合物為飲品、零食或保健食品。
  4. 如請求項3所述之用途，其中該飲品為發酵乳品。
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