TWI670068B - 花生膜萃取物於提升ptprd基因表現之應用 - Google Patents
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Abstract
一種使用花生膜萃取物於製備一組合物之用途，其中該組合物係用於
提升PTPRD基因表現，從而達到預防或治療與PTPRD基因相關之疾病的效果。
Description
本發明係關於花生膜萃取物之應用，尤其係關於花生膜水萃物之應用，包括使用該萃取物於預防或治療與PTPRD基因表現相關之疾病。
花生(學名：Arachis hypogaea)係常見的農作物，亦是油料主要作物之一，可製成多種加工食品，如花生糖、花生醬、花生油等。已知花生中含有醣類、脂肪、蛋白質、維生素B、礦物質等營養成分，其中，脂肪約佔花生組成分當中的50%，但係以不飽和脂肪酸為主，具有降低人體膽固醇、防止動脈硬化、預防心血管疾病等功效。因此，適量的攝取花生係有助於維持人體健康。然而，前述成分與效益均係著眼於花生果實，至於花生膜則通常被視為無用之廢棄物。
本案發明人透過研究意外發現，花生膜萃取物具有提升PTPRD基因表現的效果。於此，已知PTPRD基因係一抑癌基因(tumor suppressor gene)，並已於多種人類腫瘤中發現PTPRD基因的缺失、突變或表現低下，例如肝癌及胃癌等。基於本案發明人之發現，可以將以往被視為廢棄物之花生膜，運用於肝癌與胃癌之預防或治療。
本發明之一目的在於提供一種使用花生膜萃取物於製備一組合物的用途，其中該組合物係用於提升PTPRD
基因表現。較佳地，該萃取物係花生膜極性溶劑萃取物。更佳地，該萃取物係花生膜水萃物。
根據本發明所提供之組合物可以是一醫藥組合物或一食品組合物，其中，該醫藥組合物可用於以下之至少一者：預防肝癌、預防胃癌、治療肝癌、及治療胃癌。較佳地，該醫藥組合物係呈一選自以下群組之劑型：口服、靜脈注射、及皮下注射。
根據本發明所提供之食品組合物較佳係一健康食品、保健食品、機能性食品、營養補充品、或特殊營養食品。
本發明之另一目的，在於提供一種提升PTPRD
基因表現的方法，其係包含對一有需要之個體投予一有效量之花生膜萃取物。本發明方法可用於以下之至少一者：預防肝癌、預防胃癌、治療肝癌、及治療胃癌。於根據本發明之方法中，所採用之花生膜萃取物係可以上述醫藥或食品組合物的形式投予至該有需要之個體。
本發明之詳細技術內容及部分具體實施態樣，將描述於以下內容中，以供本發明所屬領域具通常知識者據以明瞭本發明之特徵。
以下將描述根據本發明之部分具體實施態樣；惟，在不背離本發明精神下，本發明尚可以多種不同形式之態樣來實踐，不應將本發明保護專利範圍解釋為限於說明書所具體陳述者或後附申請專利範圍所界定者。
除非文中有另外說明，於本說明書中（尤其是在後述專利申請範圍中）所使用之「一」、「該」及類似用語應理解為包含單數及複數形式；所謂「預防」係指抑制或防止一具體病況的發作、或維持敏感個體之良好健康狀態或建立該個體對疾病的耐受性；所謂「治療」，不應被解釋為治療一個體直至完全恢復，而應包括將一個體之疾病進展或症狀維持在一實質上靜態之程度、增加一個體之恢復速率、改善一具體病況的嚴重性、或提高一患者之生命品質；所謂「個體」係指哺乳動物，該哺乳動物可以為人類或非人動物。
PTPRD
基因係一抑癌基因，已於多種人類腫瘤中發現PTPRD
基因的缺失、突變或表現低下，例如肝癌、及胃癌等。此可參見例如：PTPRD
is homozygously deleted and epigenetically downregulated in human hepatocellular carcinomas.OMICS: A Journal of Integrative Biology.
19(4):220-9 (2015)、及Reduced expression of PTPRD correlates with poor prognosis in gastric adenocarcinoma.PLOS ONE.
9(11): e113754 (2014)，該等文獻之全文併於此處以供參考。因此，若可有效提升PTPRD
基因的表現，即可達到預防或治療肝癌及胃癌的效果。
本案發明人研究發現，花生膜萃取物具有提升PTPRD
基因表現的效果。因此，本發明係關於使用花生膜萃取物以提升PTPRD
基因表現的應用，此包括：使用花生膜萃取物於製備一組合物之用途、以及使用該花生膜萃取物的方法，包含對一有需要之個體投予一有效量之花生膜萃取物，以提升該個體之PTPRD
基因表現。
根據本發明所採用之花生膜萃取物，係可透過以極性溶劑萃取花生膜而提供，其中，該極性溶劑可以為水、醇（例如C1-C4醇類）、或其組合。此外，萃取溶劑的用量並無特殊限制，通常係採用可以分散原料之用量。舉例言之，可於萃取步驟中採用萃取溶劑：花生膜= 20~1：1的體積比。視需要地，可於萃取過程中搭配例如攪拌、低溫超音波震盪等操作，或者在進行萃取之前先細碎花生膜，以提升萃取效果。
於本發明之部分實施態樣中，係以10：1（水：花生膜）之體積比混合水與花生膜，並於20~30°C下對所得到之混合物進行超音波震盪歷時30~60分鐘以完成萃取。其中，該花生膜係於不高於90℃之溫度下對新鮮花生進行脫膜而提供。
根據本發明所採用之花生膜萃取物，可以為萃取所得之萃取原液，亦可為視需要對該萃取原液進行例如過濾、滅菌、濃縮、稀釋等一或多個步驟所提供者，以提升萃取液之使用便利性。舉例言之，透過例如減壓濃縮、濃縮乾燥、噴霧乾燥、或冷凍乾燥等操作，可由萃取液得到方便攜帶或方便儲存之濃縮液或粉末。於本發明一具體實施態樣中，係於45~70℃溫度下對所獲得之萃取液進行減壓濃縮後，再以噴霧乾燥方式移除水分，以提供所需之花生膜萃取物。
根據本發明所提供之組合物係一醫藥組合物或一食品組合物。其中，該根據本發明所提供之醫藥組合物係可用於預防或治療肝癌或胃癌。
根據本發明所提供之醫藥組合物係可呈任何合宜之形式，並無特殊限制，端視所欲之用途而呈對應之合宜劑型。舉例言之，但不以此為限，該醫藥組合物可以口服或非經口服（例如：靜脈注射及皮下注射）之投藥方式施用至有需要之個體上。其中，視使用形式及用途而定，可選用合宜之載劑以提供該醫藥組合物，其中，該載劑包括賦形劑、稀釋劑、輔助劑、安定劑、吸收延遲劑、崩散劑、增溶劑、乳化劑、抗氧化劑、黏合劑、結合劑、增黏劑、分散劑、懸浮化劑、潤滑劑、吸濕劑等。
以適於口服之劑型為例，於根據本發明所提供之醫藥組合物中係可含有任何不會不利影響活性成分（即，花生膜萃取物）之所欲效益的醫藥上可接受之載劑，例如：水、食鹽水、葡萄糖（dextrose）、甘油、乙醇或其類似物、纖維素、澱粉、糖膨潤土（sugar bentonite）、及前述之組合。可利用任何合宜之方法，將該醫藥組合物以適於口服投藥的劑型提供，例如：錠劑（如糖衣錠）、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、流浸膏劑、溶液劑、糖漿劑、懸液劑、酊劑等。
至於適於皮下或靜脈注射之針劑或點滴劑，則可於根據本發明所提供之醫藥組合物中含有一或多種例如等張溶液、鹽類緩衝液（如磷酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液）、增溶劑、乳化劑、5%糖溶液、以及其他載劑等成分，以靜脈輸注液、乳劑靜脈輸注液、乾粉注射劑、懸液注射劑、或乾粉懸液注射劑等劑型提供該醫藥組合物。或者，將該醫藥組合物製備成一注射前固體，以可溶於其他溶液或懸浮液中之劑型、或可乳化之劑型提供該注射前固體，並於投予至有需要之個體之前，將該注射前固體溶於其他溶液或懸浮液中或將其乳化，以提供所欲之注射劑。
根據本發明所提供之醫藥組合物係可以一日一次、一日多次、或數日一次等不同投藥頻率施用，端視投予個體之需求、年齡、體重、及健康狀況而異。於根據本發明所提供之醫藥組合物中，可視實際應用需求，調整花生膜萃取物於組合物中的含量比例。此外，該醫藥組合物可視需要另含一或多種其他活性成分，或者與含該一或多種其他活性成分之藥物併用，以進一步加強該醫藥組合物之功效或增加製劑配方的運用靈活性與調配度，只要該其他活性成分對本發明活性成分（即，花生膜萃取物）之效益沒有不利的影響即可。
視需要地，可於根據本發明所提供之醫藥組合物或食品組合物中另含有合宜用量之添加劑，例如可提高該醫藥組合物或食品組合物於服用時的口適感及視覺感受之調味劑、調色劑、著色劑等，以及可改善該醫藥組合物或食品組合物的穩定性及儲存性之緩衝劑、保存劑、防腐劑、抗菌劑、抗真菌劑等。
根據本發明所提供之食品組合物可以是健康食品、保健食品、機能性食品、營養補充品、或特殊營養食品，且可製成例如乳製品、肉類加工品、麵包類、麵食類、餅乾、***錠、膠囊、果汁類、茶類、運動飲料、營養飲料等產品，但不以此為限。較佳地，根據本發明所提供的食品組合物係以健康食品的型式提供。
根據本發明所提供之食品組合物係可以一日一次、一日多次、或數日一次等不同頻率食用，端視投予個體之年齡、體重、及健康狀況而異。亦可針對特定族群之需要，調整據本發明所提供之食品組合物中的花生膜萃取物的含量，例如，調整至每日應服用的量。
針對根據本發明所提供之健康食品、保健食品、機能性食品、營養補充品及／或特殊營養食品，可於其外包裝上標示建議使用量、特定族群（例如癌症患者、孕婦等）的使用標準及條件、或與其他食品或醫藥共同服用的建議事項等，以利使用者在無醫師、藥師或相關執事人員的指導下自行服用而無安全虞慮。於根據本發明所提供之食品組合物中，有關該花生膜萃取物之態樣以及相關之應用，係如上述之說明。
本發明亦提供一種提升PTPRD
基因表現的方法，其係包含對一有需要之個體投予一有效量之花生膜萃取物。較佳地，該方法係用於以下之至少一者：預防肝癌、預防胃癌、治療肝癌、及治療胃癌。於根據本發明之方法中，所採用之花生膜萃取物係可以一組合物的形式投予至該有需要之個體。有關該組合物之投予態樣、投予途徑、投予形式、施用頻率、以及相關之應用，均如上述之說明。
茲以下列實施例進一步例示說明本發明。其中該等實施例僅提供作為說明，而非用以限制本發明之保護範圍。本發明保護範圍係如後附申請專利範圍所示。
實施例
[
製備
實施例
]
A.
花生膜萃取物之製備
將台灣雲林縣北港台南11號花生（購自台灣新北市大佳花生菱角批發）脫殼、篩去土塊及不良品，再經由脫膜機進行脫膜（溫度不超過90℃）後，將花生膜碾碎以提供花生膜原料。
對上述花生膜原料進行以下操作處理，以提供花生膜萃取物： 1. 將花生膜原料與水均勻混和（花生膜原料與水之體積比為1：10），並於25℃下進行超音波萃取，歷時45分鐘，以提供一粗萃液； 2. 過濾該粗萃液，以提供一濾液； 3. 以每分鐘4,800轉之條件對該濾液進行離心，收集上清液； 4. 於45~70℃，對該上清液進行減壓濃縮，直到該上清液體積減少為原體積的十分之一，以提供一濃縮萃取液； 5. 以超高溫商業滅菌法（ultra high temperature processing，UHT）對該濃縮萃取液進行滅菌，其後進行噴霧乾燥，以提供一乾燥粉末。
實施例
1
：花生膜萃取物於提升
PTPRD
基因表現的效果
將杜氏改良依格爾培養液（Dulbecco's Modified Eagle's Medium，DMEM；購自Gibco）及胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS；購自Gibco）以體積比9：1之比例均勻混和，以提供本實施例所使用之細胞培養液（以下稱「DMEM培養液」）。
於6孔盤之各孔中加入2毫升之DMEM培養液，再於各孔中加入1x105
個HepG2細胞（一人類肝癌細胞株；購自ATCC，產品編號：HB-8065™），將6孔盤置於37℃下培養24小時後，將細胞分成控制組及萃取物組，並分別進行以下處理： 1. 控制組：更換新鮮之DMEM培養液，繼續培養48小時；以及 2. 萃取物組：更換新鮮之DMEM培養液，於其中加入用量為0.75毫克／毫升之由[製備實施例A]所獲得的粉末（以乾重計），繼續培養48小時。
分別收集上述各組細胞，以RNA萃取套組（RNA extraction kit；購自Geneaid）進行RNA萃取，再以反轉錄酶套組（SuperScript™ Reverse Transcriptase kit；購自Invitrogen）將各組RNA反轉錄為cDNA。接著，以qPCR套組（KAPA SYBR FAST qPCR Kit (2x)；購自KAPA Biosystems）及ABI StepOne Plus™ System對前述之cDNA進行qPCR（quantitative polymerase chain reaction），以檢測各組細胞之PTPRD
基因的表現量。
上述實驗係進行三重複，將該三重複之結果平均後，再以控制組的結果為基準（即，將控制組之PTPRD
基因表現量設定為1倍），計算萃取物組之細胞的基因相對表現量。結果示於圖1。
由圖1結果可知，相較於控制組，萃取物組的PTPRD
基因表現量顯著上升，顯示本發明花生膜萃取物可有效提升PTPRD
基因表現，故可用於以下之至少一者：預防肝癌、預防胃癌、治療肝癌、及治療胃癌。
圖1顯示花生膜萃取物於提升PTPRD
基因表現的效果，其中，「控制組」係於不含花生膜萃取物之細胞培養液中培養48小時的HepG2細胞，「萃取物組」則係於含有花生膜萃取物之細胞培養液中培養48小時的HepG2細胞（*表示與控制組具有顯著差異，p＜0.05）。
Claims (8)
- 一種使用花生膜萃取物於製備一組合物的用途，其中該萃取物係一水萃物，且該組合物係用於提升PTPRD基因表現。
- 如請求項1之用途，其中該組合物係一醫藥組合物或食品組合物。
- 如請求項2之用途，其中該組合物係醫藥組合物，用於預防或治療肝癌。
- 如請求項2之用途，其中該組合物係醫藥組合物，用於預防或治療胃癌。
- 如請求項3之用途，其中該組合物係醫藥組合物，且該醫藥組合物係呈一選自以下群組之劑型：口服、靜脈注射、及皮下注射。
- 如請求項4之用途，其中該組合物係醫藥組合物，且該醫藥組合物係呈一選自以下群組之劑型：口服、靜脈注射、及皮下注射。
- 如請求項2之用途，其中該組合物係食品組合物。
- 如請求項7之用途，其中該食品組合物係一健康食品、保健食品、機能性食品、營養補充品或特殊營養食品。
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