TWI589594B

TWI589594B - 用以治療和/或預防自體免疫疾病和發炎疾病的短合成胜肽

Info

Publication number: TWI589594B
Application number: TW105111576A
Authority: TW
Inventors: 曹友平; 何宗權
Original assignee: 台灣基督長老教會馬偕醫療財團法人馬偕紀念醫院
Priority date: 2015-04-27
Filing date: 2016-04-14
Publication date: 2017-07-01
Also published as: CA2983962A1; EP3288960A1; KR102093003B1; JP2018515458A; CN107614513B; CN107614512B; EP3288961B1; US10463709B2; NZ736652A; TW201638104A; KR20170138547A; WO2016173402A1; CA2983977C; EP3288960B1; JP6529606B2; US20180140656A1; US20180099993A1; TWI589593B; EP3288961B8; EP3288961A4

Description

用以治療和/或預防自體免疫疾病和發炎疾病的短合成胜肽

本發明是有關於發現一種短合成胜肽，及其治療和/或預防發炎相關症狀、病徵或疾病的用途，例如，自體免疫疾病和發炎疾病。

許多人類疾病都是由異常的發炎反應所引起。由異常發炎反應直接引發的疾病包含：過敏、過敏性結膜炎(allergic conjunctivitis, AC)、氣喘、牛皮癬(psoriasis)、類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis, RA)和全身性硬化症(systemic sclerosis, SSc)等。雖然目前已有藥物可以治療這些發炎疾病，但現行療法的藥效不佳或可能產生副作用。

牛皮癬

牛皮癬是一慢性皮膚疾病，其病徵是皮膚發炎、角質細胞過度增殖和形成脫屑；在美國，患有此病症的人數高達總人口數的3％。牛皮癬患者中，有40%屬於中度到重度病症；且約有一至三成的患者會罹患關節炎(又稱牛皮癬性關節炎)，其會成骨頭和關節周圍的結締組織受損。目前有多種方法可用來治療牛皮癬，包含局部治療、光療和全身性治療(如，甲氨蝶呤(methotrexate)、環孢菌素(cyclosporine)或類視色素(retinoids))。然而，這些藥物通常只能抑制或緩解疾病，並無法完全治癒疾病。再者，許多治療方式不是造成使用者容貌上不雅、或不適合長期使用，就是具有顯著的毒性，會對末端器官造成嚴重傷害(例如，腎毒性、高血壓、骨髓毒性和肝毒性)。

過敏性結膜炎(AC)

過敏性結膜炎是指結膜出現發炎症狀，通常是由一或多種過敏原引起的過敏反應所致。過敏性結膜炎分為急性、中度或慢性結膜炎；這是由IgE-介導的發炎反應。此類疾病主要是由組織胺所引起，所以可藉由給予抗組織胺來拮抗由組織胺所引發的過敏性反應；然而，局部施用抗組織胺或皮質類固醇僅能暫時性減解病症。因此，目前仍須能減緩過敏性結膜炎症狀的較佳藥物。

過敏性氣喘

過敏性氣喘是一呼吸道慢性發炎疾病。過敏性氣喘的病徵為肺嗜伊紅性球增多、黏液過度分泌以及血清中過敏原特異性IgE的量增加。目前標準照護(Current standard of care, SoC)的目標是實現並維持氣喘控制，且包含單獨或合併施用吸入式皮質類固醇(ICS)和長效β-2促效劑(LABAs)。然而，採行SoC治療的患者有50%以上無法有效控制氣喘，此一不足也創造出顯著的醫療需求。再者，重度氣喘患者經常會出現皮質類固醇抗性的問題

類風濕性關節炎 (RA)

類風濕性關節炎是一種全身性的自體免疫疾病，其病徵為滑膜炎(synovial inflammation)和關節損傷(joint destruction)。傳統上，會透過全身性地投予甲氨蝶呤、環孢菌素等藥物來治療類風濕性關節炎。此外，已知作用於Janus激酶(JAK)的小分子抑制劑—托法替尼(Tofacitinib)能夠抑制多發炎細胞激素的產生，上述細胞介素是由Th1與Th17樹突細胞、以及活化的B細胞所產生。托法替尼最常見的不良反應為感染、出血、肝腎疾病以及具致癌性。因此，本領域急需一種療效更佳且副作用較少的新藥，來治療類風濕性關節炎。

全身性硬化(SSc)

全身性硬化是一種自體免疫疾病，其病徵為皮膚和內部器官纖維化。在美國，此一疾病為罕見疾病。疾病發生率為每一百萬成人中有240例，且每年的發生率為每一百萬成人中有20例。至今，醫學界能無法確認全身性硬化的致病機轉。全身性硬化的特徵包括發炎和自體免疫反應、內皮細胞功能障礙導致瀰漫性血管病變，以及進程性纖維化(progressive fibrosis)。目前尚無有效的治療方法能夠逆轉或中止進程性纖維化，故全身性硬化症患者的預後不佳。

有鑑於此，本領域亟需一種改良的醫藥品以及能治療和/或預防發炎相關症狀、病徵或疾病的方法。

發明內容旨在提供本揭示內容的簡化摘要，以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容並非本揭示內容的完整概述，且其用意並非在指出本發明實施例的重要/關鍵元件或界定本發明的範圍。

本揭示內容係有關於發展新穎化合物和/或用以治療發炎相關疾病和/或症狀的方法。

本揭示內容的第一態樣係提供一種能用以治療發炎相關疾病和/或症狀的短合成胜肽。所述短合成胜肽係由7個連續胺基酸殘基所組成，其序列為X₁ X₂ X₃ X₄ X₅ X₆ X₇ (序列編號：1)，其中， X₁ 是丙胺酸 (alanine, A)、天冬胺酸(aspartic acid, D)、天冬醯胺酸(asparagine, N)、白胺酸(leucine, L)、***酸(phenylalanine, F)或纈胺酸(valine, V)； X₂ 是丙胺酸(alanine, A)、異白胺酸(isoleucine, I)、白胺酸(leucine, L)或纈胺酸(valine, V)； X₃ 是***酸(phenylalanine, F)、酪胺酸(tyrosine, Y)或色胺酸(tryptophan, W)； X₄ 是精胺酸(arginine, R)或賴胺酸(lysine, K)； X₅ 是纈胺酸(valine, V)、甲硫胺酸(methionine, M)、異白胺酸(isoleucine, I)、白胺酸(leucine, L)或麩醯胺酸(glutamine, Q)； X₆ 是精胺酸(arginine, R)、麩醯胺酸(glutamine, Q)、賴胺酸(lysine, K)或脯胺酸(proline, P)； X₇ 是絲胺酸(serine, S)或酥胺酸(threonine, T)；以及 X₂ 、X₃ 、X₄ 、X₆ 和X₇ 分別是左旋胺基酸。

依據本揭示內容部分實施方式，其中X₁ 和X₅ 至少一胺基酸殘基為右旋胺基酸，且所述合成胜肽具有序列編號：2之胺基酸序列(本文以7-mer表示)。在一實施例中，X₁ 是右旋胺基酸，例如，D-天冬胺酸(本文以7-mer DD表示)。在其他實施例中，X₅ 是右旋胺基酸，例如，D-纈胺酸 (本文以7-mer DV表示)。

依據本揭示內容較佳的實施方式，所述合成胜肽具有序列編號：3、4、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一胺基酸序列。在一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：3之胺基酸序列(本文以7-mer Da表示)。在另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：4之胺基酸序列(本文以7-mer La表示)。在又一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：10之胺基酸序列(本文以7-mer MK表示)。在又一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：11之胺基酸序列(本文以7-mer KP表示)。在又另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：12之胺基酸序列(本文以7-mer WI表示)。在其他實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：13之胺基酸序列(本文以7-merIP表示)。在另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：14之胺基酸序列(本文以7-mer NV表示)。在其他的實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：15之胺基酸序列(本文以7-mer QK表示)。在又一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：16之胺基酸序列(本文以7-mer VFT表示)。在其他實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：17之胺基酸序列(本文以7-mer V"L表示)。在又一實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：18之胺基酸序列(本文以7-mer R2"Q表示)。在又一實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：19之胺基酸序列(本文以7-mer D"V表示)。在其他實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：20之胺基酸序列(本文以7-mer D"F表示)。在又一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：21之胺基酸序列(本文以7-mer D"L表示)。

本揭示內容的第二態樣為一種提供一醫藥品和/或一組合物，其係用以治療一發炎相關症狀、病徵或疾病。所述醫藥品或組合物包含一有效量的如上所述之合成胜肽，以及一藥學可接受載體。

依據本揭示內容部分較佳的實施方式，其中X₁ 、和X₅ 至少一胺基酸殘基為右旋胺基酸，且所述合成胜肽包含序列編號：2之胺基酸序列。在一實施例中，X₁ 是右旋胺基酸，例如，D-天冬胺酸(本文以7-mer DD表示)。在其他實施例中，X₅ 是右旋胺基酸，例如，D-纈胺酸(本文以7-mer DV表示)。

依據本揭示內容較佳實施方式，所述合成胜肽具有序列編號：3、4、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一胺基酸序列。在一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：3之胺基酸序列(本文以7-mer Da表示)。在另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：4之胺基酸序列(本文以7-mer La表示)。在又一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：10之胺基酸序列(本文以7-mer MK表示)。在又一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：11之胺基酸序列 (本文以7-mer KP表示)。在又另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：12之胺基酸序列(本文以7-mer WI表示)。在其他實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：13之胺基酸序列(本文以7-mer IP表示)。在另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：14之胺基酸序列(本文以7-mer NV表示)。在其他實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：15之胺基酸序列(本文以7-mer QK表示)。在又一實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：16之胺基酸序列(本文以7-mer VFT表示)。在又一實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：17之胺基酸序列(本文以7-mer V"L表示)。在其他實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：18之胺基酸序列(本文以7-mer R2"Q表示)。在其他實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：19之胺基酸序列(本文以7-mer D"V表示)。在其他實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：20之胺基酸序列(本文以7-mer D"F表示)。在又一實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：21之胺基酸序列(本文以7-mer D"L表示)。

本發明用以治療發炎相關症狀、病徵或疾病的醫藥品或組合物是選自以下所組成之群組：自體免疫疾病、痤瘡(acne rosacea)、消化性潰瘍(peptic ulcers)、胃炎(gastritis)、痛風(gout)、痛風性關節炎(gouty arthritis)、關節炎(arthritis)、腸炎疾病(inflammatory bowel disease)、克隆氏病(Crohn’s disease)、潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis)、潰瘍(ulcers)、慢性支氣管炎(chronic bronchitis)、氣喘(asthma)、過敏(allergy)、過敏性結膜炎(allergic conjunctivitis)、急性肺損傷(acute lung injury)、肺炎(pulmonary inflammation)、呼吸道過度敏感(airway hyper-responsiveness)、血管炎(vasculitis)、敗血性休克(septic shock)、異位性皮膚炎(atopic dermatitis)和濕疹(eczema)。

依據某些實施方式，本揭示內容的醫藥品或組合物可用以治療自體免疫疾病，其係選自以下所組成之群組：牛皮癬(psoriasis)、類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis)、全身性紅斑性狼瘡(systemic lupus erythematosus)、潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis)、克隆氏病(Crohn’s disease)、移植排斥(transplant rejection)、與移植物移植排斥相關的免疫疾病(immune disorder associated with graft transplantation rejection)、良性淋巴細胞性血管炎(benign lymphocytic angiitis)、紅斑狼瘡(lupus erythematosus)、橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto’s thyroiditis)、原發性黏液水腫(primary myxedema)、格雷弗氏病(Graves’s disease)、惡性貧血(pernicious anemia)、自體免疫萎縮性胃炎(autoimmune atrophic gastritis)、艾迪森氏病(Addison’s disease)、胰島素依賴型糖尿病(insulin dependent diabetes mellitis)、古帕斯捷氏症(Good pasture’s syndrome)、重症肌無力(muasthenia gravis)、天皰瘡(pemphigus)、交感性眼炎(sympathetic ophthalmia)、自體免疫葡萄膜炎(autoimmune uveitis)、自體免疫溶血性貧血(autoimmune hemolytic anemia)、特發性血小板減少症(idiopathic thrombocytopenia)、原發性膽汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis)、慢性肝炎(chronic hepatitis)、潰瘍性結腸炎(ulcerates colitis)、修格連氏症(Sjogren’s syndrome)、韋格納氏類肉瘤症(Wegeners sarcoidosis)、抗磷脂質症候群(antiphospholipid syndrome)、發炎性肌肉病變(inflammatory myopathy)、多發性動脈炎(polyarteritis)、風濕性疾病(rheumatic disease)、多發性肌炎(polymyositis)、硬皮症(scleroderma)、混合性結締組織疾病(mixed connective tissue disease)、發炎性風濕病(inflammatory rheumatism)、退化性風濕病(degenerative rheumatism)、關節外風濕病(extra-articular rheumatism)、膠原疾病(collagen disease)、慢性多發性關節炎(chronic polyarthritis)、關節型乾癬(psoriasis arthropathica)、關節黏連性脊椎炎(ankylosing spondylitis)、幼年型類風濕性關節炎(juvenile rheumatoid arthritis)、肩周炎(periarthritis humeroscapularis)、結節性多發動脈炎(panarteriitis nodosa)、進行性全身性硬皮病(progressive systemic scleroderma)、痛風性關節炎(arthritis uratica)、皮肌炎(dermatomyositis)、風濕肌炎(muscular rheumatism)、肌炎(myositis)、肌結塊(myogelosis)、軟骨鈣化症(chondrocalcinosis)、甲狀腺炎(thyroiditis)、過敏性水腫(allergic oedema)、肉芽腫(granulomas)、阿茲海默症(Alzheimer’s disease)、帕金森氏症(Parkinson’s disease)、多發性硬化症(multiple sclerosis)和肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis, ALS)。

在某些實施例中，所述自體免疫疾病是牛皮癬。

在其他實施例中，所述自體免疫疾病是類風濕性關節炎。

依據某些實施方式，所述發炎相關症狀、病徵或疾病是氣喘。

依據其他實施方式，所述發炎相關症狀、病徵或疾病是過敏性結膜炎。

本揭示內容之醫藥品或組合物，可經由下列方式施用至所述個體：血管傳遞(intravascular delivery)(例如，注射(injection)或灌注(infusion))、經口(oral)、腸內(enteral)、直腸(rectal)、肺(pulmonary (例如，吸入(inhalation))、經鼻(nasal)、局部施用(topical)(包含經皮(transdermal)、經頰(buccal)以及舌下(sublingual))、膀胱內(intravesical)、玻璃體內(intravitreal)、腹膜內(intraperitoneal)、***(vaginal)、經腦傳遞(brain delivery)(例如，腦室注射(intracerebroventricular)和顱內注射(intracerebral))、經CNS傳遞(例如，鞘內(intrathccal)、椎旁(perispinal)和椎內(intra-spinal))或腸外(parenteral)(例如，皮下(subcutaneous)、肌肉內(intramuscular)、靜脈內(intravenous)和皮內(intradermal))、黏膜給藥(transmucosal administration)，或藉由移植(implant)或其他習知的給藥途徑施用。

本揭示內容第三態樣係有關於一種治療患有發炎相關症狀、病徵或疾病個體的方法。所述方法包含以下步驟：施用本揭示內容任一實施方式所示之醫藥品或組合物至所述個體，以改善或減緩發炎相關症狀、病徵或疾病。

依據較佳的實施方式，本方法所能治療的與發炎相關症狀、病徵或疾病是選自以下所組成之群組：自體免疫疾病、痤瘡、消化性潰瘍、胃炎、痛風、痛風性關節炎、關節炎、腸炎疾病、克隆氏病、潰瘍性結腸炎、潰瘍、慢性支氣管炎、氣喘、過敏、過敏性結膜炎(AC)、急性肺損傷、肺炎、呼吸道過度敏感、血管炎、敗血性休克、異位性皮膚炎和濕疹。

依據較佳的實施方方式，本方法所治療的自體免疫疾病係選自以下所組成之群組：牛皮癬、類風濕性關節炎、全身性紅斑性狼瘡、潰瘍性結腸炎、克隆氏病、移植排斥、與移植物移植排斥相關的免疫疾病、良性淋巴細胞性血管炎、紅斑狼瘡、橋本氏甲狀腺炎、原發性黏液水腫、格雷弗氏病、惡性貧血、自體免疫萎縮性胃炎、艾迪森氏病、胰島素依賴型糖尿病、古帕斯捷氏症、重症肌無力、天皰瘡、交感性眼炎、自體免疫葡萄膜炎、自體免疫溶血性貧血、特發性血小板減少症、原發性膽汁性肝硬化、慢性肝炎、潰瘍性結腸炎、修格連氏症、韋格納氏類肉瘤症、抗磷脂質症候群、發炎性肌肉病變、多發性動脈炎、風濕性疾病、多發性肌炎、硬皮症、混合性結締組織疾病、發炎性風濕病、退化性風濕病、關節外風濕病、膠原疾病、慢性多發性關節炎、關節型乾癬、關節黏連性脊椎炎、幼年型類風濕性關節炎、肩周炎、結節性多發動脈炎、進行性全身性硬皮病、痛風性關節炎、皮肌炎、風濕肌炎、肌炎、肌結塊、和軟骨鈣化症、甲狀腺炎、過敏性水腫、肉芽腫、阿茲海默症、帕金森氏症、多發性硬化症和肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)。

在某些實施例中，所述自體免疫疾病是牛皮癬。

在其他實施例中，所述自體免疫疾病是類風濕性關節炎。

依據較佳的實施方式，本方法更包含施用一有效量的非類固醇抗發炎劑至所述個體。在較佳的實施例中，所述抗發炎劑是一非類固醇抗發炎藥物(anti-inflammatory drug, NSAID)。

在所有的實施方式中，所述個體是人類。

在參閱下文實施方式後，本發明所屬技術領域中具有通常知識者當可輕易瞭解本發明之基本精神及其他發明目的，以及本發明所採用之技術手段與實施態樣。

為了使本揭示內容的敘述更加詳盡與完備，下文針對了本發明的實施態樣與具體實施例提出了說明性的描述；但這並非實施或運用本發明具體實施例的唯一形式。實施方式中涵蓋了多個具體實施例的特徵以及用以建構與操作這些具體實施例的方法步驟與其順序。然而，亦可利用其他具體實施例來達成相同或均等的功能與步驟順序。

1. 定義

除非本說明書另有定義，此處所用的科學與技術詞彙之含義與本發明所屬技術領域中具有通常知識者所理解與慣用的意義相同。

在此處「胜肽」(peptide)一詞係指胺基酸殘基所組成的聚合物。「合成胜肽」(synthetic peptide)一詞則代表此胜肽並未包含存在於自然界的完整蛋白質分子。此種胜肽之所以是「合成的」，表示其乃是由人類利用技術手段所得，譬如化學合成、重組遺傳技術或將整個抗原切段。於本說明書中，任何胺基酸殘基於一胜肽中的位置係由該胜肽的N端起算。當未具體指出胺基酸為右旋或左旋胺基酸，所述胺基酸可以是左旋胺基酸或者是右旋胺基酸，除非上下文明示所述胺基酸為特定異構物。所述「右旋胺基酸(D-amino acid)」和「左旋胺基酸(L-amino acid)」係指胺基酸的絕對構型，非為平面偏光的特定旋轉方向。本文中胺基酸的用法(usage)與相領域技術人士所使用的標準用法相同。本文中胺基酸可以1個字母或3個字母表示，例如以工業財產資訊和文件手冊內所示之ST. 25標準命名。

在此，蛋白質/胜肽胺基酸序列的些微變異皆為本發明權利範圍所涵蓋。舉例來說，變異的胺基酸序列至少保留70%、71%、72%、73%、75%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%以及99%的相似度。本發明合成胜肽可經由修飾以改變胜肽特徵且不影響其生理活性。舉例而言，某些胺基酸經改變和/或刪除後，不會影響本揭示內容所述胜肽之生理活性(即，治療發炎相關疾病和/或症狀的功效)。具體而言，胺基酸的保守性置換是可被預期的。所述保守性置換是指胺基酸側鏈被同一類的胺基酸所取代。一般而言，編碼的胺基酸分類如下：(1)酸性胺基酸=天門冬胺酸(aspartate)、麩胺酸(glutamate)；(2)鹼性胺基酸= 賴胺酸(lysine)、精胺酸(arginine)、組胺酸(histidine)； (3)非極性胺基酸=丙胺酸(alanine)、纈胺酸(valine)、白胺酸(leucine)、異白胺酸(isoleucine)、脯胺酸(proline)、***酸(phenylalanine)、甲硫胺酸(methionine)、色胺酸(tryptophan)；以及(4)未帶電極性胺基酸=甘胺酸(glycine)、天冬醯胺酸(asparagine)、麩醯胺、半胱胺酸(cysteine)、絲胺酸(serine)、酥胺酸(threonine)、酪胺酸(tyrosine)。在較佳的實施例中、所述胺基酸的分類為:絲胺酸(S)和酥胺酸(T)為脂肪族羥基族(aliphatic-hydroxy family)；天冬醯胺酸(N)以及麩醯胺為含醯胺族(amide-containing family)；丙胺酸(A)、纈胺酸(V)、白胺酸(L)以及異白胺酸(I)為脂肪族(aliphatic family)；以及***酸(F)、色胺酸(W)和酪胺酸(Y)為芳香族(aromatic family)。舉例而言，可以預期的是以異白胺酸(I)或纈胺酸(V)取代白胺酸(L)、以麩胺酸(E)取代天冬胺酸(D)、以絲胺酸(S)取代酥胺酸(T)、或以一結構相似的胺基酸取代一胺基酸，此一置換不會對胺基酸分子的結合或其特性產生重大影響，特別是所述置換並未包含胺基酸的框架區域(framework site)。可藉由分析胜肽衍生物的專一性活性，確定胺基酸的修飾是否改變一功能性胜肽。所屬技術領域中具有通常知識者可製備蛋白質/胜肽的片段或類似物。較佳的片段或衍生物的氨端或羧端發生於功能區域。在一實施例中，本發明合成胜肽中的一個胺基酸殘基(例如，纈胺酸(V))被保守性置換(例如，被白胺酸(L)置換)。在其他實施例中，本發明合成胜肽中的兩個胺基酸殘基被其他適當的胺基酸保守性置換；例如，纈胺酸(V)以及精胺酸(R)分別被其他對胺基酸所取代，包含，但不限於，甲硫胺酸(M)和賴胺酸(K)、賴胺酸(K)和脯胺酸(P)、色胺酸(W)和異白胺酸(I)、異白胺酸(I)和脯胺酸(P)、天冬醯胺酸(N)和纈胺酸(V)，以及麩醯胺(G)和賴胺酸(K)。

所述「治療(treatment)」一詞係指預防性(如，預防用藥)、療癒性或緩和性的處置，藉以達到所欲的藥學和/或生理學效果。上述的效果是指能夠部分或完全地治癒或預防個體出現所述疾病的症狀。所述「治療(Treatment)」包含預防、治療或減緩一哺乳類的疾病，尤其是人類。所述治療包含：(1)預防(如，預防用藥)、治療或減緩一個體的疾病或症狀，其中所述個體可能患有疾病但尚未被診斷；(2)抑制一疾病(即，降低發展出與該疾病、異常和/或病症相關之病理變化的風險)；或(3)治癒一疾病(即，減少與所述疾病相關的症狀)。

所述「施用(administered) (administering)(administraion)」一詞係指將本發明之胜肽或組合物提供給個體。所述傳遞方式包含，但不限於，靜脈內、肌肉內、腹膜內、動脈內、顱內、結膜內或皮下傳遞方式。

在此處，「有效量(effective amount)」一詞係指一成分的用量足以達成欲求的反應或效果，即，能有效治療疾病。以治療發炎為例，一藥劑(如，化合物、合成胜肽、編碼治療胜肽的核酸)，其能用以降低、預防、延緩或治癒發炎的相關症狀。一藥劑的有效量不必然能夠治癒一疾病或症狀，但能延緩、阻礙或預防疾病或症狀的發生，或延緩疾病或症狀相關的病徵。所術治療有效量可分成一、二或更多劑量於單一施用劑量型式，且可於一指定期間內施用一次、二次或更多次。

所述「個體(subject)」或「患者(patient)」一詞可交互使用，且在此係指可接受本揭示內容之合成胜肽和/或方法的動物(包含，人類)。所述「哺乳類(mammal)」一詞涵蓋哺乳綱的所有成員，包含：人類、靈長類動物、家畜和農畜。舉例而言，所述家畜或農畜可以是兔子、豬、羊和牛。所述哺乳類亦可涵蓋動物園或競賽用動物、寵物，以及齧齒類(如，小鼠和大鼠)。除非另有指明，「個體」或「患者」一般包含雄性與雌性。再者，所述「個體」或「患者」包含可從本揭示內容的治療方法得到良好治療效果的動物。舉例而言，所述「個體」或「患者」包含，但不限於，人類、大鼠、小鼠、天竹鼠、豬、猴子、豬、羊、牛、馬、狗、貓、鳥和禽類。在一實例中，所述患者為人類。

在一實施例中，「藥學上可接受載體、賦形劑或安定劑」一詞，係指一適合施用於皮膚或眼睛的載體、藥劑或化合物。「眼用組合物(ophthalmic composition)」一詞係指可施用於眼睛的組合物，或者可用以處理與眼睛接觸的裝置（例如，隱形眼鏡）。

在此，所述「發炎相關症狀、病徵或疾病」一詞係指疾病進程或表現病徵含發炎反應之病理學疾病和/或症狀。

雖然用以界定本發明較廣範圍的數值範圍與參數皆是約略的數值，此處已盡可能精確地呈現具體實施例中的相關數值。然而，任何數值本質上不可避免地含有因個別測試方法所致的標準偏差。在此處，「約」通常係指實際數值在一特定數值或範圍的正負10%、5%、1%或0.5%之內。或者是，「約」一詞代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內，視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定。除了實驗例之外，或除非另有明確的說明，當可理解此處所用的所有範圍、數量、數值與百分比（例如用以描述材料用量、時間長短、溫度、操作條件、數量比例及其他相似者）均經過「約」的修飾。因此，除非另有相反的說明，本說明書與附隨申請專利範圍所揭示的數值參數皆為約略的數值，且可視需求而更動。至少應將這些數值參數理解為所指出的有效位數與套用一般進位法所得到的數值。在此處，將數值範圍表示成由一端點至另一段點或介於二端點之間；除非另有說明，此處所述的數值範圍皆包含端點。

此外，在不和上下文衝突的情形下，本說明書所用的單數名詞涵蓋該名詞的複數型；而所用的複數名詞時亦涵蓋該名詞的單數型。

2. 較佳實施方式

本發明至少一部份係基於發現一短合成胜肽，其能用以治療和/或預防一個體發炎相關疾病和/或症狀的發展。再者，本發明提供一種用以治療和/或預防發炎相關疾病和/或症狀的方法和組合物，其中所述組合物包含在此新發現的合成胜肽。

2.1 本發明之合成胜肽

本揭示內容之短合成胜肽係由7個連續胺基酸殘基所組成，其序列為X₁ X₂ X₃ X₄ X₅ X₆ X₇ (序列編號：1)，其中， X₁ 是丙胺酸(A)、天冬胺酸(D)、天冬醯胺酸(N)、白胺酸(L)、***酸(F)或纈胺酸(V)； X₂ 是丙胺酸(A)、異白胺酸(I)、白胺酸(L)或纈胺酸(V)； X₃ 是***酸(F)、酪胺酸(Y)或色胺酸(W)； X₄ 是精胺酸(R)或賴胺酸(K)； X₅ 是纈胺酸(V)、甲硫胺酸(M)、異白胺酸(I)、白胺酸(L)或麩醯胺酸(Q)； X₆ 是精胺酸(R)、麩醯胺酸(Q)、賴胺酸(K)或脯胺酸(P)； X₇ 是絲胺酸(S)或酥胺酸(T)；以及 X₂ 、X₃ 、X₄ 、X₆ 和X₇ 分別為左旋胺基酸。

依據某些實施方式，本發明之合成胜肽中，其中X₁ 和X₅ 至少一胺基酸殘基為右旋胺基酸，且所述合成胜肽具有序列編號：2之胺基酸序列。在一實施例中，X₁ 是右旋胺基酸，例如，D-天冬胺酸(本文以7-mer DD表示)。在其他實施例中，X₅ 是右旋胺基酸，例如，D-纈胺酸(本文以7-mer DV表示)。

依據其他較佳的實施方式，所述合成胺基酸具有序列編號：3或4之胺基酸序列。在一實施例中，所述合成胺基酸具有序列編號：3之胺基酸序列(本文以7-mer Da表示)。在其他實施例中，所述合成胺基酸具有序列編號：4之胺基酸序列(本文以7-mer La表示)。

依據其他較佳的實施方式，所述合成胜肽具有序列編號10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一胺基酸序列。在一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：10之胺基酸序列(本文以7-mer MK表示)。在另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：11之胺基酸序列(本文以7-mer KP表示)。在又一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：12之胺基酸序列(本文以7-mer WI表示)。在又一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：13之胺基酸序列(本文以7-mer IP表示)。在又另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：14之胺基酸序列(本文以7-mer NV表示)。在其他實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：15之胺基酸序列(本文以7-mer V"QK表示)。在另一實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：16之胺基酸序列(本文以7-mer VFT表示)。在其他實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：17之胺基酸序列(本文以7-mer V"L表示)。在又一實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：18之胺基酸序列(本文以7-mer R2"Q表示)。在又一實施方式中，所述合成胜肽具有序列編號：19之胺基酸序列(本文以7-mer D"V表示)。在其他實施例中，所述合成胜肽具有序列編號：20之胺基酸序列(本文以7-mer D"F表示)。在又一實施例中，，所述合成胜肽具有序列編號：21之胺基酸序列(本文以7-mer D"L表示)。

依據部分實施方式，將位於序列編號：2的C-端上的絲胺酸(S)刪除後，所得到的修飾胜肽序列命名為對照胜肽(本文以DLYRVR表示，序列編號：22)，該胜肽不具有本揭示內容所述之生物活性。因此，位於C-端的絲胺酸(S)對於維持本發明合成胜肽治療和/或預防發炎相關疾病和/或症狀之活性非常重要，此一胺基酸殘基僅能被保守性胺基酸殘基取代，但不可被刪除。

依據本揭示內容某些實施方式，其中序列編號；2包含至少一右旋胺基酸殘基，所產生的7-mer右旋類似物 (例如，7-mer DD或7-mer DV)如本說明書實施例1之表1所示。在這些右旋類似物中，7-mer(序列編號：2)上的酪胺酸(Y)、精胺酸(R)，以及絲胺酸(S)必須為左旋胺基酸，否則會造成本發明合成胜肽失去對於治療自體免疫和/或發炎相關疾病和/或症狀的生物活性 (即，7-mer DL、7-mer DY、7-mer DR、7-mer DR2和7-mer DS，參見實施例1之表1)。

依據本揭示內容其他實施方式，7-mer上任一胺基酸殘基可分別被丙胺酸(A)所取代，產生7-mer類似物(即，7-mer Da和7-mer La)，如本說明書實施例1之表1所述。在這些類似物中，7-mer(序列編號：2)上的天冬胺酸(D)或白胺酸可以被丙胺酸(A)取代，且不會失去其對於治療自體免疫和/或發炎相關疾病和/或症狀的生物活性，但7-mer上其他胺基酸殘基被取代(即，7-mer上第3個至第7個胺基酸位置)，則會造成7-mer胺基酸失去生物活性。

依據本揭示內容又一實施方式，7-mer上至少二胺基酸殘基分別被其他胺基酸取代，產生如實施例1中表1所示之7-mer類似物(即，7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer QK、7-mer VFT、7-mer (V"L)、7-mer (R2"Q)、7-mer (D"V)、7-mer (D"F)和7-mer (D"L))。以特定位置換所產生的7-mer類似物，仍保有7-mer胜肽之部分活性，其中7-mer VFT、7-mer (V"L)、7-mer (D"V)、7-mer (D"F)和7-mer (D"L)皆展現與7-mer類似的活性(序列編號：2)。

本發明合成胜肽可藉由先前技術中任一標準胜肽合成方法來製造。在一實施方式中，本發明合成胜肽係依據操作手冊以固相胜肽合成器(ABI433A胜肽合成器；Applied Biosystems Inc.；Life Technologies Corp.；Foster City, CA, USA)進行合成。

另外，本發明的合成胜肽可利用重組技術來製備。舉例而言，可利用重組技術將可編碼本發明胜肽的核酸序列嵌入至一表現載體中，且其中所述核酸序列係以可操作方式與一調控序列連結，以在宿主細胞內表現本發明胜肽。接著，可將所述載體送入一合適的宿主細胞內表現本發明胜肽。經表現的重組胜肽可以藉由硫酸銨沈澱法和管柱分劃色層分析法純化，並依據本揭示內容各實施例所示方法進行活性測試。

上述核酸或多核苷酸可利用已知的生物降解聚合物微粒或微囊傳遞裝置傳送。另外，亦可利用常規方法以脂質體包覆核酸，以供宿主吸收所述核酸。所述多核苷酸可單獨載入或與其他組織專一性抗體共同載入至所述傳遞載體中。此外，可製備一分子接合物(molecular conjugate)，其係由質體或其他載體以靜電或共價力連結聚-L-賴胺酸。此外，本發明亦可利用已知的組織專一性轉錄調節元件(tissue-specific transcriptional regulatory elementst)，進行組織專一性標定。也可在不使用傳遞載體的情形下將「裸DNA(naked DNA)」傳遞至肌肉內、皮內或皮下的位置，以進行胞內表現(in vivo expression)。

本發明合成胜肽的N端或C端可以進行修飾。舉例而言，N端修飾包含，但不限於，N-醣基化、N-烷基化和N-乙醯化胺基酸。一終端修飾包含聚乙烯二醇化(pegylation)。在一實例中，C端修飾為一C端胺基化胺基酸。在可任選的實施方式中，一或多個胜肽鍵結可以被一非胜肽鏈所取代，個別的胺基酸基團的修飾，可藉由試劑處理，以與特定的側鏈或終端殘基反應。

於所述合成胜肽可經由化學修飾，於多個不同的部位，加入不同的官能基。官能基可以被添加至所述合成胜肽的終端。在某些實施方式中，所述官能基能改善胜肽一或多個特性的活性，例如，改善合成胜肽的穩定性、效能或選擇性；改善所述合成胜肽通過細胞膜和/或組織屏障的穿透效率；改善組織定位能力；降低毒性或清除率；以及改善抵抗細胞幫浦的排除，以及其他類似的活性。在非限制的實施例中，適當的官能基能用以傳遞胜肽黏附至細胞上。舉例來說，降低胜肽的親水性，以及增加其親脂性，這些可任選地官能基於活體內裂解較佳，例如在胞內以水解或酵素分解的方式裂解皆可。水解保護基包含酯、碳酸酯以及氨基甲酸酯保護基。胺保護基包含烷氧基以及芳氧羰基。羧酸保護基包含脂族(aliphatic)、苯基(benzylic)和芳酯(aryl esters)。在某些可任選的實施方式中，於本發明合成胜肽之天冬胺酸(D)之側鏈的羧酸基是被保護的；較佳為，藉由甲基、乙基、苯基或經取代的苯酯基。

可以保守性或非保守性置換方式，以「擬胜肽有機基團(peptidomimetic organic moiety)」取代本發明合成胜肽中任一胺基酸殘基。在可任選的較佳實例中，所述擬胜肽有機基團與取代的胺基酸於必要的部位具有類似的立體空間、電子或構型特性，且被視為保守性置換。可任選地以擬胜肽來抑制酵素造成胜肽降解或其他降解過程。在可任選和較佳的實例中，所述胜肽可藉由有機合成技術產生。在非限制的實施例中，合適的擬胜肽包含醯胺之同電子排列體(isosteres of amide bonds)、3-氨-2-丙二酮-6-羧酸(3-amino-2-propenidone-6-carboxylic acid)、羥基-1,2,3,4-四氫異喹啉-3-羧酸乙酯(hydroxyl-1,2,3,4-tetrahydro-isoquinoline-3-carboxylate)，以及組氨酸異喹啉羧酸(histidine isoquinolone carboxylic acid)。

可非必要地對本發明合成胜肽的任一部分進行化學修飾，例如，添加官能基。所述修飾可於合成本發明胜肽的過程中進行。在非限制的實施例中，所述修飾的類型包含，但不限於，羧甲基化(carboxymethylation)、醯化(acylation)、磷酸化(phosphorylation)、糖基化(glycosylation)或脂醯化(fatty acylation)。醚鍵可任選地用以結合絲胺酸(S)或酥胺酸(T)羥基至一糖類的羥基。醯胺鍵可任選地用以結合麩胺酸或天門冬胺酸的羧基至一糖類的胺基。縮醛或酮鍵結可任選地形成於胺基酸與碳水化合物之間。

2.2 用以治療 發炎相關疾病和 / 或症狀的組合物

本發明合成胜肽能用以治療和/或預防一患有發炎相關症狀、病徵或疾病的個體。

再者，本發明另一態樣係提供一包含本發明合成胜肽的醫藥品，其係用以治療發炎相關症狀、病徵或疾病，其包含，但不限於，自體免疫疾病、痤瘡、消化性潰瘍、胃炎、痛風、痛風性關節炎、關節炎、腸炎疾病、克隆氏病、潰瘍性結腸炎、潰瘍、慢性支氣管炎、氣喘、過敏、過敏性結膜炎、急性肺損傷、肺炎、呼吸道過度敏感、血管炎、敗血性休克、異位性皮膚炎和濕疹。

在某些實施方式中，含有本發明胜肽之醫藥品可用以治療自體免疫疾病。在非限制的實施例中，含有本發明胜肽之醫藥品可用以治療的自體免疫疾病，例如，牛皮癬、類風濕性關節炎、全身性紅斑性狼瘡、潰瘍性結腸炎、克隆氏病、移植排斥、與移植物移植排斥相關的免疫疾病、良性淋巴細胞性血管炎、紅斑狼瘡、橋本氏甲狀腺炎、原發性黏液水腫、格雷弗氏病、惡性貧血、自體免疫萎縮性胃炎、艾迪森氏病、胰島素依賴型糖尿病、古帕斯捷氏症、重症肌無力、天皰瘡、交感性眼炎、自體免疫葡萄膜炎、自體免疫溶血性貧血、特發性血小板減少症、原發性膽汁性肝硬化、慢性肝炎、潰瘍性結腸炎、修格連氏症、韋格納氏類肉瘤症、抗磷脂質症候群、發炎性肌肉病變、多發性動脈炎、風濕性疾病、多發性肌炎、硬皮症、混合性結締組織疾病、發炎性風濕病、退化性風濕病、關節外風濕病、膠原疾病、慢性多發性關節炎、關節型乾癬、關節黏連性脊椎炎、幼年型類風濕性關節炎、肩周炎、結節性多發動脈炎、進行性全身性硬皮病、痛風性關節炎、皮肌炎、風濕肌炎、肌炎、肌結塊、和軟骨鈣化症、甲狀腺炎、過敏性水腫、肉芽腫、阿茲海默症、帕金森氏症、多發性硬化症或肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)。

在一實施例中，所述自體免疫疾病是牛皮癬。在其他實施例中，所述自體免疫疾病是類風濕性關節炎。

在其他實施方式中，含有本發明胜肽之醫藥品可用以治療的發炎相關的症狀、病徵或疾病是一過敏性疾病。在非限制的實施例中，所述含有本發明胜肽之醫藥品可用以治療的過敏性疾病是氣喘、過敏和過敏性結膜炎。

在一實施例中，所述過敏性疾病是氣喘。在其他實施例中，所述過敏性疾病是過敏性結膜炎。

所屬技術領域中已知的藥學可接受載體、賦形劑或安定劑與適量的本發明之合成胜肽混合，可製成一組合物。在特定的實施方式中，所述合成胜肽係選自於上述任一胜肽，包含但不限於，7-mer、7-mer DD、7-mer DV、7-mer Da、7-mer La、7-mer MK、7-mer KP,、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer V→L、7-mer QK、7-mer LQ、7-mer VFT及其組合。

所述醫藥品或組合物中本發明胜肽的含量隨著使用的胜肽而有所不同。所述組合物中的胜肽含量約為0.001%至10%(重量%)；例如，約0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2.、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.9、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9或10.0%。在一較佳的實施方式中，所述胜肽的含量約為0.001%至5%(重量%)；例如，約0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2.、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.9、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9或5.0%。

所屬技術領域中已知有多種藥學可接受載體、賦形劑或安定劑能夠適用於本發明之合成胜肽，包含但不限於，非毒性惰性固體、半固體或液體填充劑、稀釋劑、包封劑或配方助劑。一般的藥學可接受載體可以是水、或生理食鹽水。舉例而言，藥學可接受載體包含，但不限於，糖類，例如，乳糖、葡萄糖或蔗糖；澱粉，例如，玉米澱粉；纖維素及其衍生物，例如，羧甲基纖維素(carboxymethyl cellulose)、乙基纖維素(ethyl cellulose)和醋酸織維素(cellulose acetate)；黃蓍膠粉末(powdered tragacanth)；麥芽(malt)；明膠(gelatin)；滑石(talc)；賦形劑，例如，可可脂(cocoa butter)和栓劑蠟(suppository waxes)；油類，例如，花生油(peanut oil)、棉籽油(cottonseed oil)、紅花油(safflower oil)、芝麻油(sesame oil)、橄欖油(olive oil)、玉米油(corn oil)和大豆油(soybean oil)；二醇類(glycols)，例如，丙二醇(propylene glycol)；酯類(esters)，例如，油酸乙酯(ethyl oleate)和月桂酸乙酯(ethyl laurate)；瓊脂(agar)；緩衝劑(buffering agents)，例如，氫氧化鎂(magnesium hydroxide)和氫氧化鋁(aluminum hydroxide)；藻酸(alginic acid)；以及其它製劑，例如，非毒性潤滑劑(toxic lubricants)、月桂基硫酸鈉 (lauryl sulfate)、硬脂酸鎂(magnesium stearate)、著色劑(coloring agent)、釋放劑(releasing agents)、調味劑(flavoring agents)、防腐劑(preservative)以及抗氧化劑(antioxidants)。

本揭示內容之醫藥品或組合物的施用途徑包括：經由血管傳遞(例如，注射或灌注)、經口、腸內、直腸、肺(例如，吸入)、經鼻、局部施用(包含經皮，經頰以及舌下)、膀胱內、玻璃體內、腹膜內、***、經腦傳遞(例如，腦室注射和顱內注射)、經CNS傳遞(例如，鞘內、椎旁和椎內)或腸外(例如，皮下、肌肉內、靜脈內和皮內)、黏膜給藥或藉由移植或其他習知的給藥途徑。

適用於口服的藥學組合物，可以是離散劑型，包含但不限於，丸劑、片劑、錠劑、硬式或軟式膠囊；或製成一分散粉末或顆粒；或製成一溶液或懸浮液，例如，溶液或懸浮液。舉例而言，水溶性或油性懸浮液、乳劑、糖漿、酏劑或腸內配方。所述組合物可以製成單一劑量或多劑量劑型，例如，密封瓶或安瓿，以凍乾條件並添加無菌液體載體(例如，水或食鹽水)儲存。

適用於腸外途徑施用的藥學組合物可以被製成液體或非液體無菌注射劑型，藉由混合或分散本發明合成胜肽與一無菌溶液，例如，林格氏溶液、食鹽水、1,3-丁二醇以及乙醇等。在可任選地實施例中，非揮發油、脂肪酸、合成單一或雙甘油酯皆可作為溶劑。所述組合物可藉由過濾器過濾使之無菌。

適用於局部和皮膚途徑施用的藥學組合物，可以被製成軟膏(ointments)、糊劑(pastes)、乳霜(creams)、乳液(lotions)、凝膠(gels)、貼片(patches)或噴霧劑(sprays)等劑型。眼部劑型、耳滴劑和眼滴劑皆屬於本發明涵蓋範疇。本發明的組合物可局部施用至眼部。隨著患者疾病的嚴重程度不一，本發明合成胜肽的施用劑量為約1微克/公斤體重至約50毫克/公斤體重(如，0.1-20毫克/公斤體重)。每日或每週的施用劑量為約1微克/公斤至約20毫克/公斤或更高。為達到上述任一局部施用之目的，所述局部施用量為約0.01至約100毫克/公斤體重(毫克/公斤)，每日施用一次至數次(如，每日施用4、6、8或更多次)。

藥學組合物可以製成適用於肺部施用的劑型，例如，粉塵(dusts)或氣霧(mists)，譬如可利用壓力定量(pressurized metered dose)裝置來產生氣溶膠、氣霧或粉塵。

本發明所提供的組合物可以是一套組。可以理解的是本發明所述套組係作為一產品，其包含本發明合成胜肽和/或其他治療性化合物，經包裝而形成所述組合物，以利組合物的運送、儲存和同時或連續施用。因此，本發明套組可包含一或多個含本發明之合成胜肽的安瓿，以將本發明胜肽製成單一劑量或多劑量形式。所述套組更包含一載體，用以溶解本發明所述合成胜肽；例如，水溶液介質物，即生理食鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)、葡萄糖和氯化鈉。水溶性介質，如，乙醇、聚乙二醇(polyethylene glycol)、丙基乙二醇(propylethylene glycol)。若有必要，非水溶性載體亦可適用本發明。本套組的其他物件為一包裝盒，用以包裝本發明之各組成物。適用於本發明之包裝盒的材料可以是玻璃、塑膠(聚乙烯，聚丙烯，聚碳酸酯極其類似物)、瓶子、小罐子、紙、束袋或其類似物。

本發明套組可更包含說明書，其中記載本發明各種配方的施用方式(如，同時施用、連續施用、個別施用)。因此，本發明之套組可更包含如何施用(如，同時施用、連續施用、個別施用)本發明中不同成分的說明書。所述說明書可以是紙張或為可被讀取的電子媒介物，例如，電子儲存媒體(磁碟、磁帶或其類似物)、光學媒體(CD-ROM，DVD)及其類似物。所述媒體可額外或非必要的附加網路頁面，以提供上述說明資訊。

2.3 預防和 / 或治療發炎相關相關症狀、病徵或疾病的方法

如上所述，本發明所揭示的內容能有效預防和/或治療發炎相關症狀、病徵或疾病。

因此，本發明係關於一種預防和/或治療發炎相關症狀、病徵或疾病的方法的方法，其包含施用一包含本發明之合成胜肽的一醫藥品或組合物至一有需要的個體，其中所述合成胜肽係由7個連續胺基酸殘基所組成，其序列為X₁ X₂ X₃ X₄ X₅ X₆ X₇ (序列編號：1)，其中， X₁ 是丙胺酸(A)、天冬胺酸(D)、天冬醯胺酸(N)、白胺酸(L)、***酸(F)或纈胺酸(V)； X₂ 是丙胺酸(A)、異白胺酸(I)、白胺酸(L)、或纈胺酸(V)； X₃ 是***酸(F)、酪胺酸(Y)或色胺酸(W)； X₄ 是精胺酸(R)或賴胺酸(K)； X₅ 是纈胺酸(V)、甲硫胺酸(M)、異白胺酸(I)、白胺酸(L)或麩醯胺酸(Q)； X₆ 是精胺酸(R)、麩醯胺酸(Q)、賴胺酸(K)或脯胺酸(P)；以及 X₇ 是絲胺酸(S)或酥胺酸(T)；以及 X₂ 、X₃ 、X₄ 、X₆ 、X₇ 分別為左旋胺基酸；以及一藥學可接受載體。當施用所述醫藥品和/或組合物至個體時，能改善或減緩發炎相關疾病和/或症狀。

在一具體的實施方式中，所述合成胜肽係選自於上述任一胜肽，包含但不限於，7-mer、7-mer DD、7-mer DV、7-mer Da、7-mer La、7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer QK、7-mer VFT、7-mer (V"L)、7-mer (R2"Q)、7-mer (D"V)、7-mer (D"F)、7-mer (D"L)及其組合。

所述發炎相關的症狀、病徵或疾病包含，但不限於、自體免疫疾病、痤瘡、消化性潰瘍、胃炎、痛風、痛風性關節炎、關節炎、腸炎疾病、克隆氏病、潰瘍性結腸炎、潰瘍、慢性支氣管炎、氣喘、過敏、過敏性結膜炎、急性肺損傷、肺炎、呼吸道過度敏感、血管炎、敗血性休克、異位性皮膚炎和濕疹。

在某些實施方式中，本方法治療的發炎相關的症狀、病徵或疾病是自體免疫疾病。在非限制的實施例中，本方法治療的自體免疫疾病是牛皮癬、類風濕性關節炎、全身性紅斑性狼瘡、潰瘍性結腸炎、克隆氏病、移植排斥、與移植物移植排斥相關的免疫疾病、良性淋巴細胞性血管炎、紅斑狼瘡、橋本氏甲狀腺炎、原發性黏液水腫、格雷弗氏病、惡性貧血、自體免疫萎縮性胃炎、艾迪森氏病、胰島素依賴型糖尿病、古帕斯捷氏症、重症肌無力、天皰瘡、交感性眼炎、自體免疫葡萄膜炎、自體免疫溶血性貧血、特發性血小板減少症、原發性膽汁性肝硬化、慢性肝炎、潰瘍性結腸炎、修格連氏症、韋格納氏類肉瘤症、抗磷脂質症候群、發炎性肌肉病變、多發性動脈炎、風濕性疾病、多發性肌炎、硬皮症、混合性結締組織疾病、發炎性風濕病、退化性風濕病、關節外風濕病、膠原疾病、慢性多發性關節炎、關節型乾癬、關節黏連性脊椎炎、幼年型類風濕性關節炎、肩周炎、結節性多發動脈炎、進行性全身性硬皮病、痛風性關節炎、皮肌炎、風濕肌炎、肌炎、肌結塊、和軟骨鈣化症、甲狀腺炎、過敏性水腫、肉芽腫、阿茲海默症、帕金森氏症、多發性硬化症、or肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)。

在其他實施方式中，本方法治療與發炎相關的症狀、病徵或疾病是過敏性疾病。在非限制的實施方式中，本方法所治療的過敏性疾病是氣喘、過敏和過敏性結膜炎。

在可任選的實施方式中，本發明之方法更包含施用一有效量的抗發炎劑至所述個體，其中該抗發炎劑為治療發炎相關的症狀、病徵或疾病。

依據本揭示內容之實施方式，所述抗發炎劑可以是類固醇(如，皮質類固醇(corticosteroid))、非類固醇抗發炎藥物(non-steroidal anti-inflammatory drug, NSAID)、免疫抑制劑或腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor, TNF)。

在非限制的實施例中，所述皮質類固醇包含，但不限於，普賴松(prednisone)、地塞松(dexamethasone)、氫化皮質酮(hydrocortisone)和甲基培尼皮質酮(methylprednisolone)。

所述NSAID可以選自以下所組成之群組：那普洛辛(naproxen)、伊布洛芬(ibuprofen)、克多炎(ketorolac)、凱妥普洛芬(ketoprofen)、非諾洛芬(fenoprofen)、氟白普洛芬(flurbiprofen)、奧賽普芬(oxaprofen)、雙氯氛酸(diclofenac)、托美汀(tolmetin)、托芬那酸(tolfenamic acid)、甲芬那酸(mefenamic acid)、舒林達酸(sulindac)、吲美洒辛(indomethacin)、水揚酸(salicylic acid)、乙醯水楊酸(acetylsalicylic acid)、二氟尼索(diflunisal)、洛索洛芬(loxoprofen)、吲哚洛芬(indoprofen)、砒洛芬(pirprofen)、環氯茚酸(clidanac)、苯克洛酸(fenclorac)、甲氯芬那(meclofenamate)、苯惡洛芬(benoxaprofen)、卡洛芬(carprofen)、三苯唑酸(isofezolac)、醋氯芬酸(aceclofenac) 、芬布芬(fenbufen)、依托度酸(etodolac acid)、夫克辛酸(fleclozic acid)、氨芬酸(amfenac)、甲芬那酸(mefenamic adic)、溴芬酸(bromfenac)、夫克芬酸(flenclofenac)、阿氯芬酸(alcofenac)、奧帕諾辛(orpanoxin)、佐美酸(zomepirac)、氟芬那酸(flufenamic acid)、尼氟酸(niflumic acid)、普拉洛芬(pranoprofen)、扎托洛芬(zaltoprofen)和舒洛芬(suprofen)。在較佳的實施方式中，所述NSAID是雙氯氛酸、那普洛辛或伊布洛芬，上述任一藥物為最有效且為NSAID處方藥物。

所述免疫抑制劑可以是糖皮質素(glucocorticoids)、細胞抑製劑(cytostatics) (如，烷化劑(alkylating agents)或抗代謝物(antimetabolites))、抗體、作用於免疫親和配體(immunophilins)的藥物(如，環孢素(cyclosporine)、他克莫司(Tacrolimus)、雷帕黴素(Sirolimus))、干擾素(interferons)、TNF-結合蛋白和黴酚酸酯(mycophenolate mofetil)等。在非限制的實施方式中，所述烷化劑包含，但不限於，環磷醯胺(cyclophosphamides)，亞硝基尿素(nitrosoureas)和鉑化合物(platinum compounds)。在非限制的實施例中，所述抗代謝物包含，但不限於，甲氨蝶呤(methotrexate)、硫唑嘌呤(azathiopurine)、，硫醇嘌呤(mercaptopurine)和氟尿嘧啶(fluorouracil)。

在所有實施方式中，所述適合用以治療的個體是人類。

下文提出多個實驗例來說明本發明的某些態樣，以利本發明所屬技術領域中具有通常知識者實作本發明，且不應將這些實驗例視為對本發明範圍的限制。據信習知技藝者在閱讀了此處提出的說明後，可在不需過度解讀的情形下，完整利用並實踐本發明。此處所引用的所有公開文獻，其全文皆視為本說明書的一部分。

實施例

材料與方法

材料

杜氏培養基(Dulbecco’s modified Eagle’s medium, DMEM)、胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)、0.25%胰蛋白酶、抗生素-抗真菌劑溶液購自Invitrogen (Carlsbad, CA)。3-（4,5-二甲基吡啶-2-基）-2,5-二苯基四唑鎓溴化物(簡稱MTT)購自Merck(產品目錄編號：1.11714.0001)。二甲亞碸 (Dimethyl sulfoxide, DMSO)、次氯酸、5-溴-2'-去氧尿苷(5-bromo-2'-deoxyuridine, BrdU)、Hoechst 33258染劑、NaClO溶液和過碘酸雪夫氏(Periodic acid-Schiff, PAS)試劑皆購自Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)。抗-BrdU 購自GeneTex (台北，台灣)。IMQ乳霜 (ALDARA乳霜 5%) 購自DKSH (台北，台灣)。

所有胜肽係以GenScript (Piscataway, NJ, USA)合成，其中每一胜肽的N端及C端分別經乙醯化和胺基化修飾，以改善其穩定性，接著以質譜儀定性(純度：＞95%)。

細胞培養及處理

鼠巨噬細胞珠(murine macrophage cell line) RAW264.7 (ATCC, Rockville, MD)培養於DMEM培養基(添加10% FBS和抗生素-抗真菌劑溶液。細胞培養於37°C和5% CO2環境中。

實驗動物

所有實驗動物飼養於動物房中，實驗過程經馬偕紀念醫院審查委員會同意。再者，所有動物實驗過程係遵循視覺及眼科學學術研究會議(ARVO)所訂定的動物實驗眼科和視覺研究相關規定。

MTT 分析

將RAW264.7細胞接種於48-孔培養盤 (2 × 10⁴ 細胞/孔)培養24小時，於刺激前再以無血清DMEM培養基培養24小時。於治療組中，將細胞置於0.5毫升之無血清DMEM培養基(含25 μM 胜肽）中24小時。為了測定細胞存活率，添加50微升MTT儲存溶液 (5毫克MTT溶於1毫升之無菌PBS)至每一培養孔中。另外，添加50微升之MTT儲存溶液至500微升之培養基中，作為陰性對照組。將培養盤置於37°C，培養4小時。分別從每個樣本中取450微升之分液至新的48孔培養盤，添加100微升之DMSO，利用移液管混合，於37°C下，反應20分鐘，並在570 nm波長下測定吸光值。

牛皮癬樣皮膚炎之小鼠模型

所有實驗過程經馬偕紀念醫院審查委員會同意且遵循國家動物實驗管理辦法的相關規定。牛皮癬樣皮膚炎的小鼠模型是依據van der Fits等人(J Immunol . (2009), 182, 5836-5845)所揭示的步驟，以咪喹莫特 (Imiquimod, IMQ)處理小鼠皮膚而誘發產生牛皮癬樣皮膚炎。每日局部施用62.5毫克之市售IMQ乳霜至每一隻BALB/c小鼠(8週齡)裸背和右耳上，連續施用6天；其中對照組小鼠(正常組)則處以對照乳霜。在治療組中，將7-mer類似物與IMQ乳霜混合，濃度為100μM。

以BrdU標記測定角質細胞增殖。利用DMSO配置BrdU(Sigma-Aldrich)儲存溶液 (Sigma-Aldrich)(80 mM)。將10微升之BrdU與90微升之PBS混合，並將其以腹腔注射之方式注入至每一小鼠中，經24小時後，將小鼠安樂死。將小鼠背部皮膚置於4%多聚甲醛(paraformaldehyde)中固定，並以石蠟(paraffin)包埋，再進行免疫組織化學染色。

類風濕性關節炎之大鼠模型

在此實驗例中，依據Pan RY等人 (J Virol. (1999) 73, 3410-3417)所揭示的步驟，將脂多醣(lipopolysaccharide, LPS)注入至大鼠關節引發急性關節炎。簡言之，將賽拉嗪(Xylazine)(10 毫克/公斤)以腹腔注射的方式施用至Sprague-Dawley 成鼠(公鼠) (約10週齡) (初始體重=312 ± 11克)中進行麻醉，接著，將大鼠隨機分配至各實驗組中；以單次關節內注射施用25微升之5%玻尿酸(hyaluronic acid, HA)(含LPS (2微克和10微克)或LPS+7-mer)至大鼠的右膝。將7-mer (10 mM儲存溶液)溶於25微升之5% HA，最終濃度為1 mM。在第2天，LPS+7-mer組或LPS+7-mer類似物組的大鼠，再以單次關節內注射的方式施用7-mer至大鼠中。於第3天，將大鼠解剖，摘取膝關節，並將其固定於4% 多聚甲醛(PFA)溶液中，接著，以Shandon TBD-2脫鈣液(Thermo Scientific, Logan, UT)脫鈣。將處理後的關節包埋在石蠟中，並以矢狀切(mid-sagittally)的方式切片。利用縱向切片的方式得到的各切片(厚度：5 微米)，以H&E染色。

過敏性結膜炎之小鼠模型

分別以腹腔注射的方式在第0天和第7天施用1微克之卵蛋白(OVA)和200 微升之1.5%氫氧化鋁(aluminum hydroxide, ALUM)至BALB/c小鼠(4至5週齡的母鼠)，使其產生過敏(即，致敏化)，接著在第15天和第18天以局部施用之方式將250微克之OVA施用至小鼠結膜囊中，共刺激二次。控制組小鼠在致敏化階段施用OVA和ALUM，接著在刺激階段以PBS取代OVA。於治療組中，將7-mer與1% CMC眼滴劑混合，最終濃度為100 μM。於OVA刺激 (第15天)後，將小鼠隨機分配至2實驗組(每組n=6)中，接著以20微升之7-mer或眼滴劑載體處理小鼠，每天兩次，持續施用4天(至第18天)。於OVA最終刺激後24小時(第19天) ，將小鼠安樂死並摘除小鼠眼球，將其固定於4%多聚甲醛，且以石蠟包埋。為了評估嗜伊紅球浸潤的程度，將含眼瞼的切片(厚度5微米)去石蠟化，接著以酸性金沙(acid-giemsa)染色偵測嗜伊紅性球。

過敏性氣喘之小鼠模型

以腹腔注射的方式於第0天和第7天分別施用1微克之卵蛋白(OVA)和1.5%氫氧化鋁至BALB/c小鼠(4至5週齡母鼠)，使其產生過敏，接著分別於第21、22和23天以鼻腔內注射250微克之OVA共刺激三次。控制組小鼠於致敏化階段施用OVA和ALUM，接著，在刺激階段以PBS取代OVA。在治療組中，將7-mer類似物與1% CMC眼滴劑混合，最終濃度為100 μM。在第20天和OVA刺激後(第21天)，將小鼠隨機分配至二實驗組中(每組n=6)，接著注射20 微升之7-mer或載體滴劑至小鼠鼻腔中，每日兩次，共施用4天(至第23天)至小鼠鼻腔。於OVA最終刺激後24小時 (第24天)，將小鼠安樂死並摘取其眼球，以4%多聚甲醛固定，隔夜處理，並以石蠟包埋。

全身性硬化之小鼠模型(SSc)

每日以皮下注射的方式將過氧化試劑(如，次氯酸(HOCl)施用至BALB/c小鼠體內，共持續6週，即可成功建立全身性硬化小鼠模型 (Servettaz A 等。J Immuno. 2009； 182: 5855)。

將166微升之NaClO溶液 (2.6%作為活性氯)添加至11.1毫升之KH₂ PO₄ 溶液(100 mM； pH 7.2)中以製備出HOCl。以分光光度計於波長292 nm下測定HOCl濃度 (莫耳吸光係數350 M-1 公分-1)。BALB/c母鼠(6週齡)隨機分配至實驗組和對照組(每組n=6)。每日取100 微升之HOCl(混合7-mer載體或7-mer；最終濃度為0.2 mM)，並以27號針頭經皮下注射至老鼠的裸背，共持續6週。另外，以皮下注射磷酸緩衝液(PBS)的小鼠作為正常對照組。將小鼠安樂死，摘除其皮膚，以4%多聚甲醛固定至隔夜，再以石蠟包埋。將去石蠟化的皮膚切片，以製造商所述之步驟以梅森氏染色法(Masson's Trichrome) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)進行染色。

測量總膠原蛋白量

利用約20%皮膚均質物測定可溶性膠原蛋白的含量。所述膠原蛋白可利用Sircol^TM 可溶性膠原蛋白分析 (Biocolor Ltd., Newtownabbey)並依照製造商所提供的步驟進行定量。簡而言之，取100微升之收集的上清液與1毫升的Sircol染劑混合30分鐘，接著在室溫下以轉速10,000 rpm，離心10分鐘，以沈澱膠原蛋白-染劑複合物。去除上層液，將沈澱物溶於1毫升鹼性試劑，並進行震盪混合。於波長540 nm下測量相對吸光值。

統計

結果以平均值±標準誤(mean ± standard error of the mean, SEM)表示。以單因子變異數分析(1-way ANOVA)進行統計分析。P ＜ 0.05為具有顯著性。

實施例 1 鑑別本發明合成胜肽之功能性殘基

在此實施例中，依據「材料與方法」所述之步驟合成7-mer胜肽(序列編號：2)。利用「丙胺酸掃瞄」、「右旋胺基酸取代」或「特定位置換」產生7-mer類似物，其中每一指定的胺基酸殘基被丙胺酸(A)、其右旋胺基酸或是特定胺基酸殘基所置換。

本實施例共合成25種胜肽，具體而言，其中7種類似物是以「丙胺酸掃瞄」所產生的，分別命名為7-mer Da、7-mer La、7-mer Ya、7-mer Ra、7-mer Va、7-mer R2a和7-mer Sa；7種類似物是以「右旋胺基酸取代」所產生的，分別命名為7-mer DD、7-mer DL、7-mer DY、7-mer DR、7-mer DV、7-mer DR2和7-mer DS；以及其他12種類似物是利用特定位置換所產生的，分別命名為7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer QK、7-mer VFT、7-mer (V"L)、7-mer (R2"Q)、7-mer (D"V)、7-mer (D"F)和7-mer (D"L)。再者，本發明亦合成一6-mer對照胜肽，其刪除7-mer胜肽上的絲胺酸(S)。本實施例合成胜肽(即，7-mer和其類似物)如表1所示。

表1 本發明合成胜肽表中以粗體表示的胺基酸代表其為右旋(D-form)胺基酸

利用MTT 分析測定合成胜肽對於Raw284.7巨噬細胞存活率的影響。結果示於表2。

表2的結果證實，7-mer會降低Raw284.7細胞 (55.7±4.24 v.s. 100±0.60，對照未處理細胞)的存活率。所述7-mer胜肽上第1和2個胺基酸殘基以丙胺酸(A)取代所產生的7-mer類似物(即，7-mer Da和7-mer La)保留和7-mer胜肽相同的抑制活性。相對地，7-mer胜肽上第3、4、5、6和7個胺基酸殘基以丙胺酸(A)取代所產生的7-mer類似物，失去其抑制活性，由此結果可以得知，該些特定胺基酸殘基的側鏈與7-mer生物活性相關。結果顯示7-mer胜肽第一個胺基酸殘基(以丙胺酸(A)取代天冬胺酸(D))和第二個胺基酸殘基(以丙胺酸(A)取代白胺酸(L))皆被取代的胜肽，對於7-mer生物活性僅會產生相對輕微的影響，故7-mer主鏈上第一個和第二個殘基之可置換性(main chain flexibility)使其成為7-mer主鏈上可被修飾的區域。

表2 含丙胺酸7-mer胜肽對於Raw264.7巨噬細胞存活率的影響本發明合成胜肽的濃度為25 μM。數據以平均值±S.E. 表示(2次實驗進行2重複)。 * p＜0.05 vs.　未處理細胞。

天然的左旋胺基酸為代謝不穩定胺基酸，其易被胜肽酶裂解。因此，在此以右旋胺基酸對稱物取代左旋胺基酸產生7-mer類似物。本實驗例的結果發現，7-mer上第2、3、4、6和7個殘基被右旋胺基酸取代，會使其失去抑制活性(表3)。僅於7-mer胜肽第一個胺基酸殘基(以右旋天冬胺酸取代左旋天冬胺酸)和第二個胺基酸殘基(以右旋纈胺酸取代左旋纈胺酸)仍可保留7-mer的抑制活性。

表3 7-mer右旋類似物對於Raw264.7巨噬細胞存活率的影響本發明合成胜肽的濃度為20 μM。數據以平均值±S.E. 表示(2次實驗進行2重複)。 * p＜0.05 vs.　未處理細胞。

為了進一步研究7-mer主鏈上可被置換的胺基酸殘基，本實驗例也進行7-mer主鏈上特定位置胺基酸的取代置換，結果示於表4。結果顯出，透過特定位置取代置換所產生的7-mer類似物，包含7-mer QK、7-mer MK、7-mer KP、7-mer WI、7-mer IP、7-mer NV、7-mer VFT、7-mer (V"L)、7-mer (R2"Q)、7-mer (D"V)、7-mer (D"F)和7-mer (D"L)，能保留7-mer的部分生物活性。

表4 7-mer類似物對於Raw264.7巨噬細胞存活率的影響本發明合成胜肽的濃度為20 μM。數據以平均值±S.E. 表示(2次實驗進行2重複)。 * p＜0.05 vs.　未處理細胞。

由上述結果可以得知，7-mer上的第1和第2個胺基酸殘基非為其抑制活性的關鍵，且第1和5個殘基可以是左旋胺基酸或右旋胺基酸，其他殘基(如，7-mer上第2、3、4、6和7個殘基)則必須為左旋胺基酸。

實施例 2 本發明合成胜肽能減緩 IMQ- 誘導牛皮癬樣皮膚炎

在此實施例中，測定本發明實施例1所揭示的合成胜肽對於IMQ-誘導牛皮癬樣皮膚炎的影響。為達此目的，每日局部施用IMQ乳霜至實驗動物(8週齡小鼠)的裸背上，連續施用6日，以誘導牛皮癬樣皮膚炎和脫屑(第1圖；圖左)。局部施用含IMQ和7-mer 胜肽(100 μM)乳霜的小鼠，其皮膚炎和脫屑的症狀顯著的減少(第1圖；圖中)。此外，以氯倍他松(0.02%；極有效的合成皮質類固醇)作為參考化合物，其同樣地能減緩脫屑形成(第1圖；圖右)。然而，不同於7-mer胜肽，氯倍他松會造成試驗動物整個背部皮膚萎縮。

牛皮癬是由角質細胞異常增殖所造成的疾病，因此，依據「材料和方法」所述的步驟測定本發明合成胜肽對於角質細胞增殖的影響。結果示於第2圖。

第2圖中的照片(A)顯示，在IMQ治療後，有大量的BrdU 嵌入至組織中，其為細胞大量增殖的指標。相對地，經過7-mer處理的皮膚，無論是經由局部施用或是腹腔注射方式，其皮膚組織中BrdU-陽性的角質細胞量顯著的減少(第2圖(B))。

綜合以上，本實施例的結果確認7-mer胜肽能夠減緩牛皮癬樣皮膚炎。

實施例 3 本發明合成胜肽能夠減緩 HOCl- 誘導皮膚纖維化

全身性硬化(SSc)是一結締組織疾病，其病徵為皮膚和內臟纖維化、微血管損傷，以及自體免疫反應。 HOCl-誘導的小鼠全身性硬化是一模仿人類主要病徵的鼠類動物模型，特別是皮膚纖維母細胞的活化與增生率。在此實施例中，依據材料與方法所揭示的步驟，利用HOCl-誘導小鼠SSc動物模型，來測定本發明合成胜肽對於皮膚纖維化的影響。結果示於第3圖。

如第3圖(A)的照片所示，相較於經PBS處理的小鼠，SSc小鼠(即，注射HOCl/載體的小鼠)真皮層中膠原蛋白基質異常緻密，且膠原纖維更為緊密堆積。再者，相較於未處理的SSc小鼠(即，HOCl/經載體處理的小鼠)，以7-mer處理過的SSc小鼠，其真皮膠原蛋白的量顯著的減少，此一結果和未經處理的正常對照組小鼠的量相似。

本實驗例還測量了每毫克正常皮膚或直接暴露於HOCl的皮膚中，酸性和胃蛋白酶可溶性膠原蛋白含量，這些測量結果亦可支持第3圖(A)所示的實驗結果。SSc小鼠的皮膚組織中出現大量的膠原蛋白(膠原蛋白(微克)/皮膚(毫克))，其中經7-mer 胜肽治療後的小鼠其膠原蛋白量顯著地減少(第3圖(B)，經HOCl處理的SSc小鼠為169.9±7.75，經7-mer處理的SSC小鼠為99.0±5.43)。

實施例 4 本發明合成胜肽可預防脂多醣 (LPS) 誘導的關節炎

類風濕性關節炎(RA)是一慢性發炎疾病，其病徵為滑膜發炎導致關節軟骨受損，最終造成關節功能損壞。在此實施例中，關節炎動物模型的建立是將25微升含LPS (2或10微克)之2%玻尿酸玻尿酸(載體)注射至Sprague-Dawley大鼠的膝蓋中；其中實驗組的實驗動物是注射LPS和7-mer (1mM)。於注射後3天，取下滑膜組織，經固定和H&E染色，進行組織分析。結果示於第4圖。

如第4圖的照片顯示，控制組的動物(即，2% HA載體)未發生白血球浸潤，此為一發炎反應的指標。相反地，於LPS注射後3天後所拍攝的照片顯示，滑膜中發生滑膜細胞增殖堆積和白血球浸潤的現象，此為膝蓋發生發炎反應的明確指標；若施用LPS和7-mer 胜肽，能夠顯著的緩解發炎反應。

綜合以上結果可以得知，本發明的合成胜肽能夠預防動物關節炎的發生。

實施例 5 本發明合成胜肽可預防過敏性結膜炎 (AC) 的發展

過敏性結膜炎(AC)的病徵是結膜嗜伊紅性球浸潤。在此實施例中，本實驗例測定了本發明合成胜肽對於AC動物模型中，OVA過敏反應的影響，本實驗例依據「材料與方法」所述的步驟進行，結果示於第5圖(A)。

依據組織染色分析的結果(第5圖(B))可以得知，經OVA全身性和局部刺激後，小鼠結膜發生大量嗜伊紅性球浸潤的現象。然而，經7-mer處理的小鼠，其結膜中嗜伊紅性球浸潤的現象顯著的降低(第5圖，(C))。所述結果顯示7-mer能夠抑制OVA誘導過敏性動物模型中的嗜伊紅性球浸潤。

實施例 6 本發明合成胜肽可預防過敏性氣喘發展

在此實驗例中，利用已充分了解特性之過敏性呼吸道鼠動物模型來測定本發明合成胜肽對於過敏性氣喘的影響，其中以卵蛋白作為抗原。依據「材料和方法」所揭示的步驟建立實驗用鼠氣喘動物模型，結果示於第6圖(A)。

利用H&E染色進行組織學分析，結果顯示經OVA刺激的小鼠，其支氣管周圍和血管周圍間隙發生白血球浸潤的現象 (第6圖(B)，H&E染色)。浸潤的發炎細胞主要是巨噬細胞和嗜伊紅性球。然而，相較於OVA刺激的小鼠，經7-mer處理的小鼠中，發炎細胞浸潤的現象顯著的減少。此外，杯狀細胞增生造成過多的黏液產生是呼吸道阻塞和重建的特徵。相較於OVA刺激的小鼠，經7-mer處理的小鼠，其黏液顯著的減少(第6圖，(B)，PAS染色)。

本實驗例的結果顯示，7-mer能夠抑制OVA-誘導過敏性肺炎發生。

雖然上文實施方式中揭露了本發明的具體實施例，然其並非用以限定本發明，本發明所屬技術領域中具有通常知識者，在不悖離本發明之原理與精神的情形下，當可對其進行各種更動與修飾，因此本發明之保護範圍當以附隨申請專利範圍所界定者為準。

無

為讓本發明的上述與其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下：

第1圖為依據本發明一實施方式所示7-mer對於IMQ-誘導牛皮癬樣皮膚炎之影響的照片，每一張照片皆為高功率亮視野照相機(high-powered light-field camera)所拍攝的小鼠背部皮膚影像；第2圖為依據本發明一實施方式所示7-mer對於IMQ-誘導牛皮癬樣表皮增生的影響，其中(A)為利用BrdU標記測定7-mer對於角質細胞增生的影響，以及(B)為直條圖，顯示每隻小鼠於四個高倍率視野下的BrdU陽性細胞±S.D.的平均數目；第3圖為依據本揭示內容一實施方式所示7-mer對於HOCl-誘導皮膚纖維化的影響，其中(A)是組織切片經由梅森氏染色法(Masson’s trichrome)染色的照片(放大200倍)，所述染色可突顯經HOCl注射後的膠原纖維；以及(B)是一直線圖，顯示分別利用載體、HOCl和HOCl/7-mer處理的皮膚，其膠原的總含量；第4圖為依據本揭示內容一實施方式所示本發明合成胜肽對於LPS-誘導的關節炎之影響；第5圖為依據本揭示內容所示7-mer胜肽對於OVA-誘導的過敏性結膜炎 (AC)的影響，其中(A)為建立實驗用AC動物模型的流程圖，(B)為組織染色的照片，以及(C)為直條圖，其顯示有/無經7-mer處理的AC小鼠中，嗜伊紅性球的數量，*P＜0.05 v.s. OVA-刺激；以及第6圖為依據本揭示內容一實施方式所示，7-mer胜肽對於過敏性氣喘發生的影響，其中(A)是建立實驗用過敏性氣喘動物模型的流程圖，(B)為分別以蘇木素和伊紅(H&E)，以及PAS染色的組織染色照片。

＜110＞財團法人臺灣基督長老教會馬偕紀念社會事業基金會馬偕紀念醫院＜120＞用以治療和/或預防自體免疫疾病和發炎疾病的短合成胜肽＜130＞ P2868-2-TW ＜160＞ 22 ＜170＞ BiSSAP 1.3 ＜210＞ 1 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜221＞ VARIANT ＜222＞ 1 ＜223＞ Xaa is Ala, Asp, Asn, Leu, Phe or Val ＜220＞＜223＞ X1X2X3X4X5X6X7 ＜220＞＜221＞ VARIANT ＜222＞ 2 ＜223＞ Xaa is Ala, Ile, Leu or Val ＜220＞＜221＞ VARIANT ＜222＞ 3 ＜223＞ Xaa is Phe, Tyr or Trp ＜220＞＜221＞ VARIANT ＜222＞ 4 ＜223＞ Xaa is Arg or Lys ＜220＞＜221＞ VARIANT ＜222＞ 5 ＜223＞ Xaa is Val, Met, Ile, Leu or Gln ＜220＞＜221＞ VARIANT ＜222＞ 6 ＜223＞ Xaa is Arg, Gln, Lys or Pro ＜220＞＜221＞ VARIANT ＜222＞ 7 ＜223＞ Xaa is Ser or Thr ＜400＞ 1 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 ＜210＞ 2 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer ＜400＞ 2 Asp Leu Tyr Arg Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 3 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer Da ＜400＞ 3 Ala Leu Tyr Arg Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 4 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer La ＜400＞ 4 Asp Ala Tyr Arg Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 5 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer Ya ＜400＞ 5 Asp Leu Ala Arg Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 6 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer Ra ＜400＞ 6 Asp Leu Tyr Ala Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 7 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer Va ＜400＞ 7 Asp Leu Tyr Arg Ala Arg Ser 1 5 ＜210＞ 8 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer R2a ＜400＞ 8 Asp Leu Tyr Arg Val Ala Ser 1 5 ＜210＞ 9 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer Sa ＜400＞ 9 Asp Leu Tyr Arg Val Arg Ala 1 5 ＜210＞ 10 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer MK ＜400＞ 10 Asp Leu Tyr Arg Met Lys Ser 1 5 ＜210＞ 11 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer KP ＜400＞ 11 Asp Leu Tyr Lys Val Pro Ser 1 5 ＜210＞ 12 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer WI ＜400＞ 12 Asp Leu Trp Arg Ile Arg Ser 1 5 ＜210＞ 13 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer IP ＜400＞ 13 Asp Ile Tyr Arg Val Pro Ser 1 5 ＜210＞ 14 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer NV ＜400＞ 14 Asn Val Tyr Arg Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 15 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer QK ＜400＞ 15 Asp Leu Tyr Arg Gln Lys Ser 1 5 ＜210＞ 16 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer VFT ＜400＞ 16 Asp Val Phe Arg Val Arg Thr 1 5 ＜210＞ 17 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer VL ＜400＞ 17 Asp Leu Tyr Arg Leu Arg Ser 1 5 ＜210＞ 18 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer R2Q ＜400＞ 18 Asp Leu Tyr Arg Val Gln Ser 1 5 ＜210＞ 19 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer DV ＜400＞ 19 Val Leu Tyr Arg Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 20 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer DF ＜400＞ 20 Phe Leu Tyr Arg Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 21 ＜211＞ 7 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 7-mer DL ＜400＞ 21 Leu Leu Tyr Arg Val Arg Ser 1 5 ＜210＞ 22 ＜211＞ 6 ＜212＞ PRT ＜213＞人工序列＜220＞＜223＞ 6-mer ＜400＞ 22 Asp Leu Tyr Arg Val Arg 1 5

Claims

一種合成胜肽的用途，其係用以製造治療一與發炎相關症狀、病徵或疾病的醫藥品，其中該合成胜肽由7個連續胺基酸殘基所組成其序列為X₁X₂X₃X₄X₅X₆X₇(序列編號：1)，其中，X₁是丙胺酸、天冬胺酸、天冬醯胺酸、白胺酸、***酸或纈胺酸；X₂是是丙胺酸、異白胺酸、白胺酸或纈胺酸；X₃是***酸、酪胺酸或色胺酸；X₄是精胺酸或賴胺酸；X₅是纈胺酸、甲硫胺酸、異白胺酸、白胺酸或麩醯胺酸；X₆是精胺酸、麩醯胺酸、賴胺酸或脯胺酸；X₇是絲胺酸或酥胺酸；以及X₂、X₃、X₄、X₆和X₇分別為左旋胺基酸。
如請求項1所述之用途，其中X₁和X₅至少一胺基酸殘基為右旋胺基酸。
如請求項1所述之用途，其中該合成胜肽具有序列編號：2之胺基酸序列。
如請求項3所述之用途，其中X₁是右旋胺基酸。
如請求項3所述之用途，其中X₅是右旋胺基酸。
如請求項1所述之用途，其中該合成胜肽具有序列編號：3、4、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21中任一胺基酸序列。
如請求項3所述之用途，其中該與發炎相關的症狀、病症或疾病是選自於以下所組成之群組：自體免疫疾病、痤瘡、消化性潰瘍、胃炎、痛風、痛風性關節炎、關節炎、腸炎疾病、克隆氏病、潰瘍性結腸炎、潰瘍、慢性支氣管炎、氣喘、過敏、過敏性結膜炎、急性肺損傷、肺炎、呼吸道過度敏感、血管炎、敗血性休克、牛皮癬、異位性皮膚炎和濕疹。
如請求項7所述之用途，其中該自體免疫疾病是牛皮癬、類風濕性關節炎、全身性紅斑性狼瘡、潰瘍性結腸炎、克隆氏病、移植排斥、與移植物移植排斥相關的免疫疾病、良性淋巴細胞性血管炎、紅斑狼瘡、橋本氏甲狀腺炎、原發性黏液水腫、格雷弗氏病、惡性貧血、自體免疫萎縮性胃炎、艾迪森氏病、胰島素依賴型糖尿病、古帕斯捷氏症、重症肌無力、天皰瘡、交感性眼炎、自體免疫葡萄膜炎、自體免疫溶血性貧血、特發性血小板減少症、原發性膽汁性肝硬化、慢性肝炎、潰瘍性結腸炎、修格連氏症、韋格納氏類肉瘤症、抗磷脂質症候群、發炎性肌肉病變、多發性動脈炎、風濕性疾病、多發性肌炎、硬皮症、混合性結締組織疾病、發炎性風濕病、退化性風濕病、關節外風濕病、膠原疾病、慢性多發性關節炎、關節型乾癬、關節黏連性脊椎炎、幼年型類風濕性關節炎、肩周炎、結節性多發動脈炎、進行性全身性硬皮病、痛風性關節炎、皮肌炎、風濕肌炎、肌炎、肌結塊、和軟骨鈣化症、甲狀腺炎、過敏性水腫、肉芽腫、阿茲海默症、帕金森氏症、多發性硬化症和肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)。
如請求項8所述之用途，其中該自體免疫疾病是牛皮癬。
如請求項8所述之用途，其中該自體免疫疾病是類風濕性關節炎。
如請求項7所述之用途，其中該發炎相關症狀、病徵或疾病是氣喘。
如請求項7所述之用途，其中該發炎相關症狀、病徵或疾病是過敏性結膜炎。