TWI474833B - 胰島素阻抗性疾病之治療 - Google Patents

Description

胰島素阻抗性疾病之治療

本發明係關於胰島素阻抗性疾病之治療。詳言之，本發明係關於藉由投與IL-17(諸如IL-17A及/或IL-17F)拮抗劑(諸如抗IL-17A及/或抗IL-17F及/或抗IL-17Rc抗體，或抗體片段)進行之胰島素阻抗性疾病的治療。

IL-17家族

介白素-17A(IL-17A)為一種T細胞源性促炎性分子，其刺激上皮細胞、內皮細胞及纖維母細胞產生其他炎性細胞激素及趨化激素(包括IL-6、IL-8、G-CSF及MCP-1)(參見Yao,Z.等人，J. Immunol.,122(12): 5483-5486(1995)；Yao,Z.等人，Immunity,3(6): 811-821(1995)；Fossiez,F.,等人，J. Exp. Med.,183(6): 2593-2603(1996)；Kennedy,J.等人，J. Interferon Cytokine Res.,16(8): 611-7(1996)；Cai,X. Y.等人，Immunol. Lett,62(1): 51-8(1998)；Jovanovic,D.V.等人，J. Immunol.,160(7): 3513-21(1998)；Laan,M.等人，J. Immunol.,162(4): 2347-52(1999)；Linden,A.等人，Eur Respir J,15(5): 973-7(2000)；以及Aggarwal,S.及Gurney,A. L.,J Leukoc Biol. 71(1): 1-8(2002))。IL-17亦協同其他細胞激素(包括TNF-α及IL-1β)進一步誘導趨化激素表現(Chabaud,M.等人，J. Immunol. 161(1): 409-14(1998))。IL-17A在各種類型之細胞上展示多效性生物活性。IL-17A亦能夠誘導ICAM-1表面表現、T細胞增殖以及CD34⁺ 人類祖細胞生長及分化成嗜中性白血球。IL-17A亦已牽涉於骨代謝中，且已表明其在以存在經活化T細胞及TNF-α產生為特徵之病理病狀(諸如類風濕性關節炎及骨植入物鬆脫)中起重要作用(Van Bezooijen等人，J. Bone Miner. Res.,14: 1513-1521(1999))。已發現，源自類風濕性關節炎患者之滑膜組織的活化T細胞所分泌之IL-17A的量比源自正常個體或骨關節炎患者之彼等者高(Chabaud等人，Arthritis Rheum.,42: 963-970(1999))。表明在類風濕性關節炎中，此促炎性細胞激素會主動引起滑膜發炎。IL-17A除具有促炎性作用外，似乎亦經由另一機制引起類風濕性關節炎之病變。舉例而言，已顯示IL-17A可誘導造骨細胞中破骨細胞分化因子(ODF)mRNA之表現(Kotake等人，J. Clin. Invest.,103: 1345-1352(1999))。ODF刺激祖細胞分化成破骨細胞，該等細胞涉及骨再吸收。因為IL-17A之含量在類風濕性關節炎患者之滑液中顯著增加，所以IL-17A誘導之破骨細胞形成似乎在類風濕性關節炎中之骨再吸收中起至關重要的作用。亦咸信IL-17A在某些其他自體免疫疾病(諸如多發性硬化症(Matusevicius等人，Mult. Scler.,5: 101-104(1999)；Kurasawa,K.等人，Arthritis Rheu 43(11): 2455-63(2000))及牛皮癬(Teunissen,M. B.等人，J Invest Dermatol 111(4): 645-9(1998)；Albanesi,C.等人，J Invest Dermatol 115(1): 81-7(2000)；及Homey,B.等人，J. Immunol. 164(12): 6621-32(2000)))中起關鍵作用。

已進一步顯示，IL-17A藉由細胞內信號轉導，刺激人類巨噬細胞中之Ca²⁺ 流入及[cAMP]_i 減少(Jovanovic等人，J. Immunol.,160: 3513(1998))。用IL-17A處理的纖維母細胞會誘導NFκB之活化(Yao等人，Immunity,3:811(1995)；Jovanovic等人，同上文)，而用IL-17A處理的巨噬細胞會活化NF-κB及絲裂原活化之蛋白激酶(Shalom-Barek等人，J. Biol. Chem.,273: 27467(1998))。此外，IL-17A亦與骨及軟骨生長中所涉及之哺乳動物細胞激素樣因子7共有序列相似性。與IL-17A多肽共有序列相似性之其他蛋白質為人胚胎源性介白素相關因子(EDIRF)及介白素-20。

與IL-17A之效應眾多一致，已發現IL-17A之細胞表面受體在許多組織及細胞類型中廣泛表現(Yao等人，Cytokine,2: 794(1997))。儘管人類IL-17A受體(IL-R)(866個胺基酸)之胺基酸序列預示一種具有單一跨膜結構域及525個胺基酸長之細胞內結構域的蛋白質，但該受體序列為獨特的且與細胞激素/生長因子受體家族之任一受體的序列皆不相似。此現象與IL-17A本身與其他已知蛋白質缺乏相似性結合，指示IL-17A及其受體可能為新穎信號轉導蛋白及受體家族之一部分。已顯示IL-17A活性係經由結合於其獨特的細胞表面受體(本文中稱為人類IL-17R)而介導，其中先前之研究已顯示，T細胞與可溶形式之IL-17A受體多肽接觸將抑制T細胞增殖以及由PHA、刀豆球蛋白A及抗TCR單株抗體誘導之IL-2產生(Yao等人，J. Immunol.,155: 5483-5486(1995))。因此，如何鑑別及表徵與已知細胞激素受體(特定言之，IL-17A受體)具有同源性的新穎多肽引起了廣泛關注。

目前，介白素17A被視為新興細胞激素家族的原型成員。對人類基因組及其他脊椎動物基因組之大規模定序已揭示出存在編碼明顯與IL-17A相關之蛋白質的額外基因，由此確定一個新的細胞激素家族。在人類及小鼠中存在至少6個來自IL-17家族之成員，包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E及IL-17F，以及新穎受體IL-17RH1、IL-17RH2、IL-17RH3及IL-17RH4(參見2001年6月28號公開之WO 01/46420)。已顯示一個此類IL-17成員(稱為IL-17F)可結合於人類IL-17受體(IL-17R)(Yao等人，Cytokine,9(11): 794-800(1997))。最初的表徵表明，與IL-17A類似，若干種此等新近鑑別之分子能夠調節免疫功能。已針對若干種此等因子及與主要人類疾病之新近關聯而鑑別的強力發炎作用表明，此等蛋白質可在發炎過程中起重要作用且可為治療干預提供可能。

編碼人類IL-17F之基因位於IL-17A附近(Hymowitz,S. G.等人，Embo J,20(19): 5332-41(2001))。IL-17A與IL-17F共有約44%之胺基酸一致性，而IL-17家族之其他成員共有15-27%之更為有限之胺基酸一致性，表明IL-17A與IL-17F在IL-17家族內形成截然不同的子群(Starnes,T.等人，J. Immunol. 167(8): 4137-40(2001)；Aggarwal,S.及Gurney,A. L.,J. Leukoc Biol,71(1): 1-8(2002))。IL-17F似乎具有與IL-17A類似之生物作用且能夠促進多種細胞產生IL-6、IL-8及G-CSF。與IL-17A類似，IL-17F能夠誘導軟骨基質釋放且抑制新軟骨基質合成(參見2002年11月28號公開之U.S. 2002-0177188-A1)。因此，與IL-17A類似，IL-17F可潛在地引起發炎疾病之病變。據報導，經由介白素23(IL-23)之作用可誘導出T細胞中之IL-17A及IL-17F(Aggarwal,S.等人，J. Biol. Chem.,278(3): 1910-4(2003))。更具體言之，已暗示IL-17A及IL-17F均為人類病症之人類及鼠類模型中多種發炎及自體免疫病症進展及病變的助劑。實際上，已暗示IL-17A，及在較小程度上IL-17F，為引發發炎反應且由此引起多種自體發炎(自體免疫)性病症之效應細胞激素，該等病症包括多發性硬化症(MS)、類風濕性關節炎(RA)及發炎性腸病(IBD)。此細胞系已稱為Th₁₇ 且此等細胞之數目明顯與人類自體免疫病症之鼠類模型中病症之進展及嚴重性相關。雖然看起來很明顯在發炎性病症中涉及IL-17A及IL-17F(參見例如Kolls,J. K.,A. Linden. Immunity 21: 467-476(2004))，但部分歸因於尚未鑑別出IL-17F之受體的事實，而致使此等細胞激素之靶細胞尚未得到鑑別。IL-17A對IL-17RA具有親和力。人類IL-17RA之胺基酸序列可自NCBI GenBank寄存編號NP_055154.3獲得。迄今為止，基於與IL-17RA之序列同源性，已鑑別出IL-17R家族中至少4種額外受體(IL-17Rh1、IL-17Rc、IL-17RD及IL-17RE)，且其中，IL-17Rc已展示與IL-17RA以物理方式締合，表明IL-17Rc可能為IL-17R複合物中之功能性組份(Toy,D.等人，J. Immunol. 177: 36-39(2006))。近來已報導，IL-17Rc為IL-17A及IL-17F之受體(Presnell等人，J. Immunol. 179(8): 5462-73(2007))。

發炎及肥胖症

近來，吾人對肥胖症之理解之重要發展為，出現了發炎及糖尿病係以慢性低度發炎狀態為特徵之觀念。此觀點之依據為已增加之若干發炎標記物(促炎性細胞激素及急性期蛋白質)的循環含量在肥胖情況下進一步增加；此等標記物包括IL-6、TNFα系統、C反應性蛋白(CRP)及結合球蛋白。然而，關於發炎部位本身的含意，無論為全身性或局部的，皆不明確。

胰島素阻抗性定義為對既定劑量胰島素之生物反應小於預期，其與肥胖症普遍相關。實際上，認為肥胖症之許多病理結果均與胰島素阻抗性有關。此等病理結果包括高血壓、高脂質血症，且最為顯著為非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)。大多數NIDDM患者為肥胖的，且NIDDM發展中極為重要之早期組份為胰島素阻抗性(Moller等人，New Eng. J. Med.,325: 938(1991))。已顯示，除在胰島素阻抗性之初始階段期間，胰島素受體下調外，在此病症過程中亦會發展受體後異常(Olefsky等人，Diabetes Mellitus,Rifkin及Porte,Jr.編(Elsevier Science Publishing公司,New York,第4版,1990),第121-153頁)。

本發明至少部分係基於以下發現：IL-17家族成員，且特定言之IL-17A及IL-17F，在肥胖症、胰島素阻抗性及其他與肥胖症相關之疾病(諸如高脂質血症及代謝症候群)中起作用；以及IL-17拮抗劑，尤其IL-17A及IL-17F拮抗劑，可用於治療此等病狀。

在一態樣中，本發明係關於一種治療哺乳動物胰島素阻抗性疾病之方法，其包含向有需要的哺乳動物投與有效量之IL-17A及/或IL-17F拮抗劑。

在另一態樣中，本發明係關於一種用於治療胰島素阻抗性疾病之醫藥組合物，其包含IL-17A及/或IL-17F拮抗劑混合醫藥學上可接受之賦形劑。

在另一態樣中，本發明係關於IL-17A及/或IL-17F拮抗劑用於治療胰島素阻抗性疾病之用途。

在另一態樣中，本發明係關於一種治療胰島素阻抗性疾病之套組，該套組包含：(a)包含IL-17A及/或IL-17F拮抗劑之容器；及(b)關於投與該抗體以治療該疾病之標籤或說明書。

在所有態樣中，在一實施例中，該疾病係選自由非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)、肥胖症、卵巢雄激素過多症及高血壓組成之群。在另一實施例中，該疾病為NIDDM或肥胖症。

在另一實施例中，哺乳動物為人類且投藥為全身性的。

在另一實施例中，IL-17A及/或IL-17F拮抗劑為抗體或其片段，諸如選自由抗IL-17A抗體、抗IL-17F抗體、抗IL-17A/F抗體、抗IL-17Rc抗體及抗IL-17RA抗體組成之群的抗體，或其片段。

抗體較佳為單株抗體，包括嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體或交叉反應性抗體。

在另一實施例中，該方法包括投與有效量之胰島素阻抗性治療劑，諸如胰島素、IGF-1或磺醯脲。

在另一實施例中，該方法包括投與有效量之能夠治療該胰島素阻抗性疾病之另一藥劑，諸如Dickkopf-5(Dkk-5)。

A.　定義

術語「IL-17」一般用於指IL-17家族之成員，包括IL-17A、IL-17、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E、IL-17F及IL-17A/F。本文較佳之IL-17為IL-17A、IL-17F及IL-17A/F。

「天然序列IL-17多肽」包含與源自自然界之相應IL-17多肽具有相同胺基酸序列的多肽。此等天然序列IL-17多肽可自自然界分離或可經由重組或合成方式製備。術語「天然序列IL-17多肽」特別涵蓋特定IL-17多肽之天然存在之截短形式或分泌形式(例如細胞外結構域序列)、該多肽之天然存在之變異體形式(例如其他剪接形式)及天然存在之對偶基因變異體。在本發明之各種實施例中，本文揭示之天然序列IL-17多肽為成熟多肽，或為包含圖2及圖4中所示之全長胺基酸序列(SEQ ID NO: 2及4)的全長天然序列人類IL-17A、IL-17F及IL-17A/F。起始及終止密碼子在各圖中係以粗體顯示且加下劃線。

術語「天然序列IL-17Rc多肽」或「天然序列IL-17Rc」係指與源自自然界之相應IL-17Rc多肽具有相同胺基酸序列的多肽。此等天然序列IL-17Rc多肽可自自然界分離，或可經由重組或合成方式製備。術語「天然序列IL-17Rc多肽」特別涵蓋特定IL-17Rc多肽之天然存在之截短形式或分泌形式、該多肽之天然存在之變異體形式(例如其他剪接形式)及天然存在之對偶基因變異體。在本發明之各種實施例中，本文揭示之天然序列IL-17Rc多肽為包含圖6中所示之全長胺基酸(SEQ ID NO: 6)的全長天然序列人類IL-17Rc。

「經分離」當用於描述本文揭示之各種多肽時，意謂已經鑑別且與其自然環境之組份分離及/或自其自然環境之組份回收之多肽。其自然環境之污染組份為通常會干擾多肽之診斷或治療用途的物質，且可包括酶、激素，及其他蛋白質或非蛋白質溶質。在較佳實施例中，多肽將純化至(1)藉由使用旋杯式定序儀(spinning cup sequenator)足以獲得N端或內部胺基酸序列中至少15個殘基的程度；或(2)藉由在非還原或還原條件下使用庫馬斯藍(Coomassie blue)或較佳銀染色進行SDS-PAGE測定為均質。經分離多肽包括重組細胞內之原位多肽，因為IL-17多肽自然環境之至少一種組份將不存在。然而，一般而言，將經由至少一個純化步驟來製備經分離多肽。

如本文所用，「肥胖症」係指哺乳動物之身體質量指數(BMI)為至少25.9之病狀，該BMI係以體重(kg)/身高² (m)計算。一般而言，體重正常的人之BMI為19.9至小於25.9。與胰島素阻抗性相關之肥胖症特別包括在此定義內。

「胰島素阻抗性」或「胰島素阻抗性疾病」或「胰島素阻抗性活性」為由周邊組織對外源胰島素作用之正常代謝反應缺乏(不敏感)引起之病症、病狀或疾病，亦即當存在胰島素時會產生亞正常生物反應之病狀。從臨床角度看，當正常或較高血糖含量持續面對正常或較高胰島素含量時，會出現胰島素阻抗性。其本質上代表著肝糖合成之抑制，而由於該肝糖合成之抑制，致使基礎肝糖合成或胰島素刺激之肝糖合成，或二者，降低至正常水準以下。如第2型糖尿病中存在之高血糖有時能藉由充分忌食或足夠的體重減輕明顯逆轉以恢復周邊組織對胰島素之敏感性的事實所顯示，胰島素阻抗性在第2型糖尿病中起主要作用。該術語包括異常的葡萄糖耐量，以及胰島素阻抗性起關鍵作用之許多疾病，諸如肥胖症、糖尿病、卵巢雄激素過多症及高血壓。

「糖尿病」係指長期高血糖之狀態，亦即由相對缺乏或完全缺乏胰島素作用而引起之血糖過高。存在3種基本類型之糖尿病，即第I型或胰島素依賴型糖尿病(IDDM)、第II型或非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)以及A型胰島素阻抗性，但A型相對少見。第I型或第II型糖尿病患者可經由多種機制而變得對外源胰島素之作用不敏感。A型胰島素阻抗性係由胰島素受體基因突變或對葡萄糖代謝至關重要之受體後作用位點之缺陷引起。醫師可輕易地識別糖尿病個體，且該等糖尿病個體之特徵為：高血糖、葡萄糖耐量減退、糖基化血紅素，及在某些情況下外傷或傷病會引起酮酸症。

「非胰島素依賴型糖尿病」或「NIDDM」係指第II型糖尿病。NIDDM患者當禁食時具有異常高的血糖濃度，且在餐後或在稱為葡萄糖耐量測試之診斷測試後葡萄糖之細胞吸收延遲。根據認可之準則(American Diabetes Association,Physician's Guide to Insulin-Dependent(Type I) Diabetes,1988；American Diabetes Association,Physician's Guide to Non-Insulin-Dependent(Type II) Diabetes,1988)來診斷NIDDM。

如本文所定義之欲作為疾病治療之糖尿病的症狀及併發症包括高血糖、不令人滿意之血糖控制、酮酸症、胰島素阻抗性、較高之生長激素含量、較高之糖基化血紅素及晚期糖基化終產物(AGE)含量、黎明現象(dawn phenomenon)、不令人滿意之脂譜、血管病症(例如動脈粥樣硬化)、微血管病症、視網膜疾病(例如增生性糖尿病性視網膜病變)、腎病、神經病、妊娠併發症(例如過早終止及先天缺陷)及其類似病症。治療之定義中包括諸如以下終點：增加胰島素敏感性；在保持血糖控制同時減少胰島素給藥；減少HbA1c；改良血糖控制；減少血管、腎、神經、視網膜及其他糖尿病併發症；預防或減少「黎明現象」；改良脂譜；減少妊娠併發症，及減少酮酸症。

如本文所用，「治療組合物」或「組合物」定義為包含Dkk-5及醫藥學上可接受之載劑(諸如水、礦物質、蛋白質)，以及其他熟習此項技術者已知之賦形劑。

為達到治療之目的，術語「哺乳動物」係指歸類為哺乳動物的任何動物，包括(但不限於)人類、齧齒動物、運動動物、動物園動物、寵物及家畜或農畜(諸如犬、貓、牛、羊、豬、馬)，以及非人類靈長類動物，諸如猴。齧齒動物較佳為小鼠或大鼠。哺乳動物較佳為人類，本文中亦稱之為患者。

如本文所用，「治療」描述為了達到對抗本發明之任一目標疾病或病狀(包括(不限於)胰島素阻抗性、糖尿病、高胰島素血症、低胰島素血症或肥胖症)之目的而對哺乳動物進行之管理及護理，且包括投藥以預防目標病症或病狀之症狀或併發症之發作、減輕其症狀或併發症，或消除目標病症或病狀。

為達到本發明之目的，減少胰島素阻抗性之有益或所需臨床「治療」結果包括(但不限於)減輕胰島素阻抗性相關之症狀、減低胰島素阻抗性症狀之程度、穩定(亦即不惡化)胰島素阻抗性之症狀(例如減少胰島素需求)、增加胰島素敏感性及/或胰島素分泌以防止胰島細胞失效(failure)，以及延遲或減慢胰島素阻抗性進展，例如糖尿病進展。

就肥胖症而言，「治療」一般係指將哺乳動物之BMI降低至小於約25.9且保持該體重至少6個月。該治療宜造成哺乳動物對食物或熱量之攝取減少。此外，若治療係在肥胖病狀發作之前投與，則治療係指預防肥胖症發生。治療包括抑制及/或完全遏止肥胖哺乳動物體內脂肪生成(亦即，脂質過度累積於脂肪細胞中，其為人類及動物肥胖症之主要特徵之一)，以及減輕總體重。

「需要治療」者包括已患有該疾病之哺乳動物，以及易患該疾病者，包括欲預防該疾病者。

「胰島素阻抗性治療劑」為除IL-17之拮抗劑以外其他可用於治療胰島素阻抗性之藥劑，諸如Dickkopf-5(Dkk-5)(參見例如美國申請公開案第2005/0170440號)以及降血糖劑。此類治療劑之實例包括胰島素(一或多種不同胰島素)；胰島素模擬劑，諸如小分子胰島素，例如L-783,281；胰島素類似物(例如胰島素(Eli Lilly Co.)、Lys_B28 胰島素、Pro_B29 胰島素或Asp_B21 胰島素，或例如美國專利第5,149,777號及第5,514,646號中描述者)或其生理學活性片段；胰島素相關肽(C肽、GLP-1、類胰島素生長因子-I(IGE-1)或IGF-1/IGFBP-3複合物)或其類似物或片段；溴麥角環肽(ergoset)；普蘭林肽(pramlintide)；瘦素(leptin)；BAY-27-9955；T-1095；胰島素受體酪胺酸激酶抑制劑之拮抗劑；TNF-α功能之拮抗劑；生長激素釋放劑；澱粉素(amylin)或澱粉素之抗體；胰島素增敏劑，諸如格列酮(glitazone)家族之化合物，包括美國專利第5,753,681號中描述者，諸如曲格列酮(troglitazone)、吡格列酮(pioglitazone)、恩格列酮(englitazone)及相關化合物；沉香醇(Linalol)單獨或與維生素E(美國專利第6,187,333號)；胰島素分泌增強劑，諸如那格列奈(nateglinide)(AY-4166)、二水合(2S)-2-苄基-3-(順-六氫-2-異吲哚啉基羰基)丙酸鈣(米格列奈(mitiglinide)，KAD-1229)及瑞格列奈(repaglinide)；磺醯脲藥物，例如乙醯苯磺醯環己脲、氯磺丙脲(chlorpropamide)、妥拉磺脲(tolazamide)、甲苯磺丁脲(tolbutamide)、格列吡脲(glyclopyramide)及其銨鹽、格列本脲(glibenclamide)、格列波脲(glibomuride)、格列齊特(gliclazide)、1-丁基-3-間胺基苯磺醯脲、胺磺丁脲(carbutamide)、格列吡嗪(glipizide)、格列喹酮(gliquidone)、格列派特(glisoxepid)、格列丁噻唑(glybuthiazole)、格列丁唑(glibuzole)、格列己脲(glyhexamide)、格列嘧啶(glymidine)、格列平脲(glypinamide)、苯磺丁脲(phenbutamide)、甲磺環已脲(tolcyclamide)、格列美脲(glimepiride)等；雙胍類(諸如苯乙雙胍(phenformin)、二甲雙胍(metformin)、丁雙胍(buformin)等)；α-葡糖苷酶抑制劑(諸如醣祿(acarbose)、伏格列波糖(voglibose)、米格列醇(miglitol)、乙格列酯(emiglitate)等)，以及諸如胰腺移植或自體免疫試劑之非典型性治療。

「減體重劑」係指適用於治療或預防肥胖症之分子。此等分子包括例如激素(兒茶酚胺、升糖素、ACTH，及生長激素組合IGF-1)；Ob蛋白；氯貝丁酯(clofibrate)；鹵化物；辛***(cinchocaine)；氯丙嗪；作用於去甲腎上腺素激導性神經傳遞素之食慾抑制藥物，諸如氯苯咪吲哚(mazindol)，及苯乙胺衍生物，例如苯丙醇胺、二乙胺苯丙酮、苯丁胺、苯二甲嗎啉(phendimetrazine)、苄非他明(benzphetamine)、安非他明(amphetamine)、***(methamphetamine)及苯甲嗎啉；作用於血清素神經傳遞素之藥物，諸如氟***(fenfluramine)、色胺酸、5-羥色胺酸、氟西汀(fluoxetine)及舍曲林(sertraline)；中樞活性藥物，諸如納洛酮(naloxone)、神經肽-Y、甘丙肽(galanin)、促皮質素釋放激素及膽囊收縮素(cholecystokinin)；膽鹼激導性促效劑，諸如吡斯的明(pyridostigmine)；鞘脂，諸如溶性鞘脂(lysosphingolipid)或其衍生物；生熱藥物，諸如甲狀腺激素；麻黃素(ephedrine)；β-腎上腺素激導性促效劑；影響胃腸道之藥物，諸如酶抑制劑(例如四氫利普司他汀(tetrahydrolipostatin))、難消化之食物(諸如蔗糖聚酯)及胃排空抑制劑(諸如蘇-氯代檸檬酸或其衍生物)；β-腎上腺素激導性促效劑，諸如異丙基腎上腺素(isoproterenol)及育亨賓(yohimbine)；增加育亨賓之類β-腎上腺素激導性作用之胺茶鹼(一種α₂ -腎上腺素激導性阻斷藥物)，諸如單獨氯壓定(clonidine)或氯壓定組合生長激素釋放肽；干擾腸吸收之藥物，諸如雙胍，例如二甲雙胍及苯乙雙胍；大塊填充劑，諸如甲基纖維素；代謝阻斷藥物，諸如羥基檸檬酸酯；孕酮；膽囊收縮素促效劑；擬似酮酸之小分子；促皮質素釋放激素之促效劑；減少身體脂肪儲存之抑制麥角相關促乳素之化合物(1988年11月8號頒予之美國專利第4,783,469號)；β-3促效劑；溴麥角環肽(bromocriptine)；類鴉片肽之拮抗劑；神經肽Y之拮抗劑；糖皮質激素受體拮抗劑；生長激素促效劑；其組合等。

如本文所用，「胰島素」係指具有胰島素作用之任何及所有物質，且例如為自牛或豬之胰腺提取之動物胰島素、由自豬胰腺提取之胰島素以酶法合成的半合成人胰島素，及經由通常使用大腸桿菌或酵母之基因工程改造技術合成的人胰島素等。此外，胰島素可包括胰島素-鋅錯合物，其含有約0.45至0.9(w/w)%鋅、魚精蛋白-胰島素-鋅(自氯化鋅製備)、硫酸魚精蛋白及胰島素等。胰島素可呈其片段或衍生物之形式，例如INS-1。胰島素亦可包括類胰島素物質，諸如L83281及胰島素促效劑。雖然可獲得多種類型(諸如速效(super immediate-acting)、立即起效、雙峰式起效(bimodal-acting)、中效、長效等)之胰島素，但是此等類型須根據患者之病狀適當選擇。

如本文所用，「治療組合物」定義為包含IL-17拮抗劑(包括IL-17A及IL-17F拮抗劑)及醫藥學上可接受之載劑(諸如水、礦物質、蛋白質)以及其他熟習此項技術者已知之賦形劑。

在本發明之範疇內之表述「拮抗劑」、「IL-17(A及/或F)之拮抗劑」、「IL-17(A及/或F)拮抗劑」及其類似表述意欲包括經由任何方式(視所治療之適應症而定)干擾IL-17(諸如IL-17A及/或IL-17F)之功能，或阻斷或中和IL-17(諸如IL-17A及/或IL-17F)之相關活性的分子。其可防止IL-17(包括IL-17及IL-17F)與其一或多個受體之間的相互作用。此等試劑以多種方式達成此作用。舉例而言，如下文所定義，「中和」IL-17活性之拮抗劑種類將以足夠的親和力及特異性結合IL-17或IL-17之受體以干擾IL-17。「結合」IL-17或IL-17之受體(例如IL-17Rc)的抗體為能夠以足夠的親和力結合彼抗原之抗體，由此該抗體適用作靶向表現IL-17或IL-17受體之細胞的治療劑。術語「IL-17拮抗劑」用於指IL-17A、IL-17F及IL-17A/F拮抗劑中任一種及全部。

此拮抗劑群組內包括例如針對IL-17或其部分、可與IL-17或者IL-17受體或其部分反應之抗體，特別包括IL-17A及/或IL-17F及IL-17Rc之抗體。該術語亦包括會干擾IL-17A及/或IL-17F過度產生或拮抗至少一種IL-17(例如IL-17A及/或IL-17F)受體(諸如IL-17Rc)之任何試劑。此等拮抗劑可呈嵌合雜交體形式，其適用於組合該試劑與載體蛋白之功能，以增加治療劑之血清半衰期或賦予跨物種耐受性。因此，此等拮抗劑之實例包括生物有機分子(例如肽模擬物)、抗體、蛋白質、肽、醣蛋白、醣肽、醣酯、多醣、寡醣、核酸、藥劑及其代謝物、轉錄及轉譯控制序列，及其類似物。在一較佳實施例中，拮抗劑為具有所需之結合IL-17A及/或IL-17F且防止其與受體(較佳為IL-17Rc)相互作用之性質的抗體。

術語「抗體」係以廣義使用且特別涵蓋例如單一抗IL-17A/F或抗IL-17A或抗IL-17F單株抗體(包括促效劑、拮抗劑及中和抗體)、具有多抗原決定基特異性之相應抗體組合物、多株抗體、單鏈抗體，及抗體片段，只要其展現所需生物活性或免疫活性(參見下文)。

基本的4鏈抗體單元為由兩條相同輕(L)鏈及兩條相同重(H)鏈構成之異四聚體醣蛋白(IgM抗體由5個基本的異四聚體單元連同稱為J鏈之額外多肽組成，且因此含有10個抗原結合位點，而分泌之IgA抗體可聚合以形成包含2-5個基本4鏈單元連同J鏈之多價集合體)。在IgG之情況下，該4鏈單元一般為約150,000道爾頓(dalton)。各L鏈經由一個共價二硫鍵與H鏈連接，而兩條H鏈視H鏈同型而定，經由一或多個二硫鍵彼此連接。各H及L鏈亦具有規律間隔之鏈內二硫橋鍵。各H鏈在N端具有可變結構域(V_H )，其後為α及γ鏈各自之三個恆定結構域(C_H )，以及μ及ε同型之四個C_H 結構域。各L鏈在N端具有可變結構域(V_L )，其後為L鏈另一端為恆定結構域(C_L )。V_L 與V_H 對準且C_L 與重鏈之第一恆定結構域(C_H1 )對準。咸信特定胺基酸殘基在輕鏈與重鏈可變結構域之間形成界面。V_H 與V_L 一起配對形成單一抗原結合位點。有關不同種類抗體之結構及性質，參見例如Basicand Clinical Immunology ,第8版，Daniel P. Stites,Abba I. Terr及Tristram G. Parslow(編)，Appleton & Lange,Norwalk,Conn.,1994,第71頁及第6章。

任何脊椎動物物種之L鏈均可基於其恆定結構域之胺基酸序列而歸為稱為κ及λ之兩種明顯不同類型之一。視免疫球蛋白重鏈恆定結構域(C_H )之胺基酸序列而定，可將其歸為不同種類或同型。存在五種免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，分別具有指定為α、δ、ε、γ及μ的重鏈。基於C_H 序列及功能之相對較小差異，γ及α種類可進一步分為子類，例如人類表現以下子類：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。

術語「可變」係指各抗體可變結構域之某些區段的序列差異較大之事實。V結構域介導抗原結合且限定特定抗體對其特定抗原之特異性。然而，可變性並非均勻分布於可變結構域之全部110個胺基酸之範圍中。實際上，V區由具有15-30個胺基酸之稱作構架區(FR)之相對不變的延伸段間隔稱作「高變區」之具有極大可變性的較短區域(各為9-12個胺基酸長)組成。天然重鏈及輕鏈之可變結構域各包含四個FR，主要採用β折片構型，經由三個高變區連接，該等高變區形成連接β折片結構之環，且在一些情況下形成β折片結構之一部分。各鏈中之高變區藉由FR緊密固持在一起，且與另一鏈之高變區一起幫助形成抗體之抗原結合位點(參見Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md. 1991)。恆定結構域不直接涉及抗體與抗原之結合，而是展現各種效應功能，諸如抗體參與抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。

術語「高變區」當用於本文中時，指抗體中負責抗原結合之胺基酸殘基。高變區一般包含「互補決定區」或「CDR」之胺基酸殘基(例如V_L 中約殘基24-34(L1)、50-56(L2)及89-97(L3)周圍，及V_H 中約殘基1-35(H1)、50-65(H2)及95-102(H3)周圍；Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))及/或「高變環」之殘基(例如V_L 中之殘基26-32(L1)、50-52(L2)及91-96(L3)，及V_H 中之殘基26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)；Chothia及Lesk,J. Mol. Biol. 196: 901-917(1987))。

如本文中所用，術語「單株抗體」係指自實質上均質之抗體群體獲得的抗體，亦即除可以極少量存在之可能天然存在之突變以外，構成該群體之個別抗體為相同的。單株抗體係針對單一抗原位點具有高度特異性。此外，與包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體的多株抗體製劑不同，各單株抗體係針對抗原上之單一決定子。除特異性外，單株抗體之優勢亦在於，其可在無其他抗體污染的情況下合成。此等單株抗體通常包括包含結合標靶之可變區的抗體，其中該抗體係由包括自複數個抗體中選擇該抗體之方法獲得。舉例而言，選擇方法可為自複數個純系(例如融合瘤純系、噬菌體純系或重組DNA純系池)中選出唯一純系的方法。應瞭解，可進一步改變所選抗體，以例如改良對標靶之親和力、將該抗體人類化、改良其在細胞培養物中之產量、降低其在活體內之免疫原性、形成多特異性抗體等，且包含改變之可變區序列的抗體亦為本發明之單株抗體。除特異性之外，單株抗體製劑之優勢亦在於，其通常不受其它免疫球蛋白污染。修飾語「單株」指示抗體係自實質上均質之抗體群體獲得的特性，且其不應解釋為需要藉由任何特定方法產生該抗體。舉例而言，欲根據本發明使用之單株抗體可經由多種技術製備，包括融合瘤法(例如，Kohler等人，Nature,256: 495(1975)；Harlow等人，Antibodies: A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,第二版，1988)；Hammerling等人，Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681,(Elsevier,N.Y.,1981))、重組DNA法(參見例如，美國專利第4,816,567號)、噬菌體呈現技術(參見例如，Clackson等人，Nature,352: 624-628(1991)；Marks等人，J. Mol. Biol.,222: 581-597(1991)；Sidhu等人，J. Mol. Biol. 338(2): 299-310(2004)；Lee等人，J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093(2004)；Fellouse,Proc. Nat. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472(2004)；及Lee等人，J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004))，及自具有編碼人類免疫球蛋白序列之部分或全部人類免疫球蛋白基因座或基因之動物中產生人類或擬似人類抗體的技術(參見例如，WO98/24893、WO/9634096、WO/9633735及WO/91 10741；Jakobovits等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA,90: 2551(1993)；Jakobovits等人，Nature,362: 255-258(1993)；Bruggemann等人，Year in Immuno.,7: 33(1993)；美國專利第5,545,806號、第5,569,825號、第5,591,669號(皆屬於GenPharm公司)，第5,545,807號；WO 97/17852；美國專利第5,545,807號、第5,545,806號、第5,569,825號、第5,625,126號、第5,633,425號及第5,661,016號；及Marks等人，Bio/Technology,10: 779-783(1992)；Lonberg等人，Nature,368: 856-859(1994)；Morrison,Nature,368: 812-813(1994)；Fishwild等人，Nature Biotechnology,14: 845-851(1996)；Neuberger,Nature Biotechnology,14: 826(1996)；以及Lonberg及Huszar,Intern. Rev. Immunol.,13: 65-93(1995))。

本文之單株抗體包括「嵌合」抗體，其中重鏈及/或輕鏈之一部分與源自特定物種或屬於特定抗體種類或子類之抗體中的相應序列相同或同源，而該(該等)鏈之其餘部分與源自另一物種或屬於另一抗體種類或子類之抗體中的相應序列相同或同源；以及該等抗體之片段，只要其展現所需生物活性(參見美國專利第4,816,567號；及Morrison等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1984 81: 6851-6855(1984))。本文之相關嵌合抗體包括「靈長類化(primatized)」抗體，其包含源自非人類靈長類動物(例如舊世紀猴(Old World Monkey)、猿等)之可變結構域抗原結合序列及人類恆定區序列。

「完整」抗體為包含抗原結合位點以及C_L 及至少重鏈恆定結構域C_H1 、C_H2 及C_H3 者。恆定結構域可為天然序列恆定結構域(例如人類天然序列恆定結構域)或其胺基酸序列變異體。完整抗體較佳具有一或多種效應功能。

「抗體片段」包含完整抗體之一部分，較佳包含完整抗體之抗原結合區或可變區。抗體片段之實例包括Fab、Fab'、F(ab')₂ 及Fv片段；雙功能抗體；線性抗體(參見美國專利第5,641,870號，實例2；Zapata等人，Protein Eng. 8(10): 1057-1062[1995])；單鏈抗體分子；及由抗體片段形成之多特異性抗體。在一較佳實施例中，該片段為「功能性的」，亦即性質上保留相應完整抗體結合標靶IL-17A及IL-17F多肽之能力，且若該完整抗體亦抑制IL-17A/F之生物活性或功能，則該片段性質上亦保留此抑制性質。性質保留意謂活性種類得以保持，但結合親和力及/或活性之程度可能不同。

木瓜蛋白酶消化抗體將產生稱為「Fab」片段之兩個相同的抗原結合片段，及殘餘「Fc」片段，其名稱反映易於結晶之能力。Fab片段由完整L鏈連同H鏈之可變區結構域(V_H )及一條重鏈之第一恆定結構域(C_H1 )組成。各Fab片段對於抗原結合而言為單價的，亦即其具有單一抗原結合位點。用胃蛋白酶處理抗體產生單一較大的F(ab')₂ 片段，其大致對應於具有二價抗原結合活性之以兩個二硫鍵連接之Fab片段，且其仍可以交聯抗原。Fab'片段與Fab片段之不同處在於，其在C_H1 結構域之羧基端具有少數額外殘基，包括抗體鉸鏈區之一或多個半胱胺酸。Fab'-SH在本文中表示Fab'恆定結構域之半胱胺酸殘基帶有游離硫醇基。F(ab')₂ 抗體片段最初係製備為Fab'片段對形式，其中在該等片段對之間具有鉸鏈半胱胺酸。亦已知抗體片段之其他化學偶合。

Fc片段包含兩條H鏈之羧基端部分由二硫鍵固持在一起。抗體之效應功能係由Fc區之序列決定，Fc區亦為由在某些細胞類型上發現之Fc受體(FcR)識別的部分。

「Fv」為含有完整抗原識別位點及抗原結合位點的最小抗體片段。此片段由緊密、非共價締合之一個重鏈可變區結構域與一個輕鏈可變區結構域之二聚體組成。此等兩個結構域摺疊產生六個高變環(H及L鏈各3個環)，其有助於胺基酸殘基進行抗原結合且賦予抗體抗原結合特異性。然而，即使單一可變結構域(或僅包含三個對抗原具有特異性之CDR之一半Fv)亦具有識別及結合抗原之能力，但親和力比完整結合位點低。

「單鏈Fv」亦縮寫為「sFv」或「scFv」，其為包含V_H 及V_L 抗體結構域連接成單一多肽鏈之抗體片段。sFv多肽較佳進一步在V_H 與V_L 結構域之間包含多肽連接子，其使sFv能夠形成抗原結合所需之結構。關於sFv之評述，參見Pluckthun,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷，Rosenburg及Moore編，Springer-Verlag,New York,第269-315頁(1994)；Borrebaeck 1995,見下文。

術語「雙功能抗體」係指藉由構築在V_H 與V_L 結構域之間具有短連接子(約5-10個殘基)之sFv片段(參見前述段落)以實現V結構域之鏈間而非鏈內配對，產生二價片段(亦即具有兩個抗原結合位點之片段)而製備的小抗體片段。雙特異性雙功能抗體為兩個「交越」sFv片段形成的異二聚體，其中該兩個抗體之V_H 及V_L 結構域係存在於不同多肽鏈上。雙功能抗體更完整描述於例如EP 404,097；WO 93/11161；及Hollinger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA,90: 6444-6448(1993)中。

「人類化」形式之非人類(例如齧齒動物)抗體為含有源自非人類抗體之最小序列的嵌合抗體。對於大部分而言，人類化抗體為受體高變區之殘基經具有所需抗體特異性、親和力及能力之非人類物種(供體抗體；諸如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物)高變區之殘基置換的人類免疫球蛋白(受體抗體)。在一些情況下，人類免疫球蛋白之構架區(FR)殘基經相應非人類殘基置換。此外，人類化抗體可包含在受體抗體或供體抗體中未發現之殘基。進行此等修飾以進一步改善抗體效能。一般而言，人類化抗體將包含實質上全部至少一個且通常兩個可變結構域，其中所有或實質上所有高變環對應於非人類免疫球蛋白之高變環，且所有或實質上所有FR為具有人類免疫球蛋白序列之FR。人類化抗體亦視情況包含至少一部分免疫球蛋白恆定區(Fc)，通常包含至少一部分人類免疫球蛋白之恆定區。欲知更多詳情，參見Jones等人，Nature 321: 522-525(1986)；Riechmann等人，Nature 332: 323-329(1988)；及Presta，Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593-596(1992)。

術語「多特異性抗體」係以廣義使用且特別涵蓋包含一個重鏈可變結構域(V_H )及一個輕鏈可變結構域(V_L )之抗體，其中V_H V_L 單元具有多抗原決定基特異性(亦即能夠結合一個生物分子上之兩個不同抗原決定基或不同生物分子上之各抗原決定基)。此等多特異性抗體包括(但不限於)全長抗體、具有兩個或兩個以上V_L 及V_H 結構域之抗體、抗體片段(諸如Fab、Fv、dsFv、scFv)、雙功能抗體、雙特異性雙功能抗體及三功能抗體、共價或非共價連接之抗體片段。

「多抗原決定基特異性」係指特異性結合相同或不同標靶上之兩個或兩個以上不同抗原決定基的能力。

「單特異性」係指僅結合一個抗原決定基之能力。根據一實施例，IgG1形式之多特異性抗體以5 μM至0.001 pM、3 μM至0.001 pM、1 μM至0.001 pM、0.5 μM至0.001 pM或0.1 μM至0.001 pM之親和力結合各抗原決定基。

「交叉反應性抗體」為識別一個以上抗原上之相同或相似抗原決定基的抗體。因此，本發明之交叉反應性抗體識別IL-17A及IL-17F上存在之相同或相似抗原決定基。在一特定實施例中，該交叉反應性抗體使用相同或基本上相同之互補位結合IL-17A及IL-17F。本文之交叉反應性抗體較佳亦阻斷IL-17A及IL-17F之功能(活性)。

術語「互補位」在本文中用於指抗體結合標靶抗原之一部分。

「物種依賴型抗體」(例如哺乳動物抗IL-17A/F抗體)為對來自第一哺乳動物物種之抗原的結合親和力比其對來自第二哺乳動物物種之該抗原同系物之結合親和力強的抗體。通常，物種依賴型抗體「特異性結合」人類抗原(亦即結合親和力(K_d )值不超過約1×10^-7 M，較佳不超過約1×10^-8 M且最佳不超過約1×10^-9 M)，但對來自第二非人類哺乳動物物種之該抗原同系物之結合親和力為其對人類抗原之結合親和力之至少約1/50，或至少約1/500，或至少約1/1000。物種依賴型抗體可為如以上定義之多類抗體中之任一者，但較佳為人類化抗體或人類抗體。

「結合」相關抗原之抗體為以足夠親和力結合抗原以致適用作靶向表現該抗原之細胞或組織的診斷劑及/或治療劑，且不會與其他蛋白質發生顯著交叉反應的抗體。在此等實施例中，如藉由螢光活化細胞分選(FACS)分析或放射免疫沈澱法(RIA)所測定，抗體結合「非標靶」蛋白質之程度將比該抗體結合其特定標靶蛋白質之程度低約10%。對於抗體結合靶分子，術語「特異性結合」或「特異性結合於」，或對特定多肽或特定多肽標靶上之抗原決定基具有「特異性」，均意謂結合與非特異性相互相用具有可量測之差異。特異性結合可例如藉由測定分子之結合與對照分子之結合的比較來量測，該對照分子一般為結構類似但不具有結合活性之分子。舉例而言，可藉由與類似於標靶之對照分子(例如過量之未經標記標靶)競爭來測定特異性結合。在此情況下，若過量之未經標記標靶競爭性抑制經標記標靶與探針之結合，則指示特異性結合。如本文所用，術語「特異性結合」或「特異性結合於」，或對特定多肽或特定多肽標靶上之抗原決定基具有「特異性」，可例如經由對標靶之K_d 值至少為約10^-4 M，或者至少為約10^-5 M，或者至少為約10^-6 M，或者至少為約10^-7 M，或者至少為約10^-8 M，或者至少為約10^-9 M，或者至少為約10^-10 M，或者至少為約10^-11 M，或者至少為約10^-12 M或更大的分子來展現。在一實施例中，術語「特異性結合」係指分子結合特定多肽或特定多肽上之抗原決定基而實質上不結合任何其他多肽或多肽抗原決定基的結合。在較佳實施例中，特異性結合親和力為至少約10^-10 M。

抗體之「效應功能」係指由抗體之Fc區(天然序列Fc區或胺基酸序列變異體Fc區)引起之生物活性，且其隨抗體同型而變化。抗體效應或功能之實例包括：Clq結合及補體依賴型細胞毒性、Fc受體結合、抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)、吞噬作用、細胞表面受體(例如B細胞受體)下調及B細胞活化。

「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」或「ADCC」係指分泌Ig結合於某些細胞毒性細胞(例如自然殺手(NK)細胞、嗜中性白血球及巨噬細胞)上存在之Fc受體(FcR)而使此等細胞毒性效應細胞能夠特異性結合帶有抗原之標靶細胞且隨後以細胞毒素殺死該標靶細胞的一種細胞毒性形式。抗體「武裝(arm)」細胞毒性細胞且完全為此殺死所需。介導ADCC之原代細胞NK細胞僅表現FcγRIII，而單核細胞表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。造血細胞上FcR之表現概述於Ravetch及Kinet,Annu. Rev. Immunol 9: 457-92(1991)第464頁上的表3中。為評估相關分子之ADCC活性，可執行活體外ADCC分析，諸如美國專利第5,500,362號或第5,821,337號中所述者。適用於此類分析的效應細胞包括末梢血液單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。或者，或另外，可例如在動物模型(諸如Clynes等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 652-656(1998)中所揭示之動物模型)中於活體內評估相關分子之ADCC活性。

「Fc受體」或「FcR」描述結合抗體Fc區之受體。FcR較佳為天然序列人類FcR。此外，FcR較佳為結合IgG抗體(γ受體)者且包括FcγRI、FcγRII及FcγRIII子類之受體，包括該等受體之等位變異體及其他剪接形式。FcγRII受體包括FcγRIIA(「活化受體」)及FcγRIIB(「抑制受體」)，其具有相似胺基酸序列，而主要不同之處在於其細胞質域。活化受體FcγRIIA在其細胞質域中含有基於免疫受體酪胺酸之活化基元(ITAM)。抑制受體FcγRIIB在其細胞質域中含有基於免疫受體酪胺酸之抑制基元(ITIM)(參見評述M. in Daeron,Annu. Rev. Immunol. 15: 203-234(1997))。FcR評述於Ravetch及Kinet,Annu. Rev. Immunol. 9:457-492(1991)；Capel等人，Immunomethods 4: 25-34(1994)；及de Haas等人，J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41(1995)中。其他FcR，包括有待將來鑑別之彼等FcR，皆涵蓋於本文之術語「FcR」中。該術語亦包括新生兒受體FcRn，其負責將母體IgG轉移至胎兒(Guyer等人，J. Immunol. 117: 587(1976)；及Kim等人，J. Immunol. 24: 249(1994))。

「人類效應細胞」為表現一或多個FcR且執行效應功能之白血球。該等細胞較佳表現至少FcγRIII且執行ADCC效應功能。介導ADCC之人類白血球之實例包括末梢血液單核細胞(PBMC)、自然殺手(NK)細胞、單核細胞、細胞毒性T細胞及嗜中性白血球；其中PBMC及NK細胞較佳。該等效應細胞可自天然來源(例如血液)分離。

「補體依賴性細胞毒性」或「CDC」係指在補體存在下標靶細胞之溶解。經典補體路徑之活化係由補體系統之第一組份(Clq)結合於與同源抗原結合之(適當子類的)抗體而起始。為評估補體活化，可執行CDC分析，例如Gazzano-Santoro等人，Immunol. Methods 202: 163(1996)中所描述。

本文使用術語「中和」及「中和...之活性」意謂例如經由任何機制阻斷、阻止、減少、抵消IL-17(例如IL-17A及/或IL-17F)之活性或使IL-17(例如IL-17A及/或IL-17F)無效。因此，拮抗劑可阻止IL-17活化所必需之結合事件。

「中和抗體」意謂能夠阻斷或顯著減弱IL-17(包括IL-17A及/或IL-17F)之效應功能的如本文所定義之抗體分子。舉例而言，中和抗體可抑制或降低IL-17(例如IL-17A及/或IL-17F)與IL-17受體(諸如IL-17Rc)相互作用的能力。或者，中和抗體可抑制或降低IL-17阻斷IL-17受體信號傳導路徑之能力。中和抗體亦可在針對IL-17活性之免疫分析中免疫特異性結合IL-17。本發明「中和抗體」之特徵在於，其在活體外及活體內情況下均保留其功能活性。

B.　實施方式

1.　治療性用途

胰島素阻抗性為胰島素之存在會產生亞正常生物反應之病狀。從臨床角度看，當正常或較高血糖含量持續面對正常或較高胰島素含量時，會出現胰島素阻抗性。其本質上代表著肝糖合成之抑制，而由於該肝糖合成之抑制，致使基礎肝糖合成或胰島素刺激之肝糖合成，或二者，降低至正常水準以下。如第2型糖尿病中存在之高血糖有時能夠經由充分忌食或足夠的體重減輕明顯逆轉以恢復周邊組織對胰島素之敏感性的事實所顯示，胰島素阻抗性在第2型糖尿病中起主要作用。

本發明係關於藉由投與IL-17A及/或IL-17F拮抗劑來治療胰島素阻抗性或第2型糖尿病。如先前所論述，IL-17A及/或IL-17F拮抗劑可為經由任何方式(視所治療之適應症而定)干擾IL-17A及/或IL-17F之功能，或阻斷或中和IL-17A及/或IL-17F之相關活性的任何分子。其可防止IL-17A及/或IL-17F與其一或多個受體(尤其IL-17Rc)之間相互作用。此等試劑以多種方式達成此作用。舉例而言，中和IL-17A及/或IL-17F活性之拮抗劑種類將以足夠的親和力及特異性結合IL-17A及/或IL-17F，或IL-17A及/或IL-17F之受體(尤其IL-17Rc)，以干擾L-17A及/或IL-17F。

2.　投藥與調配物

IL-17拮抗劑可經由任何適合途徑投與，包括非經腸投藥途徑，諸如(但不限於)靜脈內(IV)、肌肉內(IM)、皮下(SC)及腹膜內(IP)，以及經皮、頰、舌下、直腸內、鼻內及吸入途徑。可經由團注或輸注進行IV、IM、SC及IP投藥，且在SC之情況下，投藥亦可經由緩釋可植入式裝置進行，該裝置包括(但不限於)泵、緩釋調配物及機械裝置。投藥較佳為全身性的。

一種尤佳之投與IL-17拮抗劑之方法為皮下輸注，尤其使用計量式輸注裝置(諸如泵)進行之皮下輸注。此類泵為可再使用或可拋棄的且可植入或可外部安裝。適用於此目的之藥物輸注泵包括例如美國專利第5,637,095號、第5,569,186號及第5,527,307號中所揭示之泵。組合物可由此等裝置連續地投與，或可間歇地投與。

適合儲存之IL-17拮抗劑之治療性調配物包括所需純度之該拮抗劑與醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑(Remington's Pharmaceutical Sciences,第16版，Osol,A.編(1980))的混合物，呈凍乾調配物或水溶液之形式。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所用劑量及濃度下對受體無毒，且包括緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如氯化十八烷基二甲基苄基銨；氯化六羥季銨；氯苄烷銨、苄索氯銨(benzethonium chloride)；苯酚、丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩胺醯胺、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、二醣，及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖類，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽型抗衡離子，諸如鈉；金屬錯合物，例如Zn-蛋白質錯合物；及/或非離子界面活性劑，諸如TWEEN^TM 、PLURONICS^TM 或聚乙二醇(PEG)。較佳之凍乾的抗IL-17抗體調配物描述於WO 97/04801中。此等組合物包含含有約0.1重量%至90重量%且更一般約10重量%至30重量%活性拮抗劑(較佳呈可溶形式)之IL-17拮抗劑。

活性成份亦可覆埋於例如經由凝聚技術或經由界面聚合製備之微囊(例如分別為羥基甲基纖維素或明膠微囊，及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微囊)中、膠體藥物傳遞系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊)中或於***液中。此等技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences(同上文)中。

亦可將IL-17A及/或IL-17F拮抗劑(諸如本文揭示之抗IL-17抗體)調配成免疫微脂體。含有該抗體之脂質體可經由此項技術中已知之方法來製備，諸如以下文獻中所述者：Epstein等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688(1985);3688(1985)；Hwang等人，Proc. Natl Acad. Sci. USA,77: 4030(1980)；美國專利第4,485,045號及第4,544,545號；及1997年10月23號公開之WO 97/38731。具有較長循環時間之脂質體揭示於美國專利第5,013,556號中。

特別適用之脂質體可用包含磷脂醯膽鹼、膽固醇及PEG衍生化之磷脂醯乙醇胺(PEG-PE)之脂質組合物經由逆相蒸發法產生。經由指定孔徑之過濾器擠出脂質體將產生具有所需直徑之脂質體。本發明抗體之Fab'片段可經由二硫鍵互換反應結合該等脂質體(如Martin等人，J. Biol. Chem.,257: 286-288(1982)中所述)。

可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑之合適實例包括含有抗體之固體疏水聚合物的半透性基質，該等基質呈成形物品(例如薄膜或微囊)之形式。持續釋放基質之實例包括聚酯、水凝膠(例如聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)或聚(乙烯醇))、聚丙交酯(美國專利第3,773,919號)、L-麩胺酸與L-麩胺酸γ乙酯之共聚物、不可降解之乙烯-乙酸乙烯酯、可降解之乳酸-乙醇酸共聚物(諸如LUPRON DEPOT^TM (由乳酸-乙醇酸共聚物及乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)構成之可注射微球體))及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。

任一特定拮抗劑均可與載體蛋白連接以增加治療性拮抗劑之血清半衰期。舉例而言，如美國專利第5,116,964號中所述，可獲得針對各特定IL-17拮抗劑或其拮抗性部分之可溶性免疫球蛋白嵌合體(諸如本文所述者)。易於經由結合IgG之蛋白質A-瓊脂糖凝膠層析純化免疫球蛋白嵌合體。該等嵌合體能夠形成伴隨具有較高親合力及血清半衰期之類免疫球蛋白二聚體。

供活體內投藥用之調配物必須無菌。其易於經由無菌過濾膜過濾實現。

必要時，本文之調配物亦可含有一種以上治療特定適應症之活性化合物，較佳為具有不會相互不利影響之互補活性者。又，此活性化合物可單獨投與所治療之哺乳動物。

舉例而言，可能需要進一步提供針對彼等適應症之胰島素阻抗性治療劑。此外，對忌食及體重減輕不能作出反應之第2型糖尿病患者可能對使用磺醯脲以及IL-17拮抗劑之療法作出反應。磺醯脲類藥物包括乙醯苯磺醯環已脲、氯磺丙脲、妥拉磺脲、甲苯磺丁脲、格列本脲、格列波脲、格列齊特、格列吡嗪、格列喹酮及格列嘧啶。實現此目的之其他藥劑包括自體免疫試劑、胰島素增敏劑(諸如格列酮家族之化合物，包括美國專利第5,753,681號中描述者，諸如曲格列酮、吡格列酮、恩格列酮及相關化合物)、胰島素受體酪胺酸激酶抑制劑(美國專利第5,939,269號及第5,939,269號)、IGF-1/IGFBP-3複合物(美國專利第6,040,292號)、TNF-α功能之拮抗劑(美國專利第6,015,558號)、生長激素釋放劑(美國專利第5,939,387號)及澱粉素之抗體(美國專利第5,942,227號)。其他可用化合物包括胰島素(一或多種不同胰島素)、胰島素模擬劑(諸如小分子胰島素)、如上所述之胰島素類似物或其生理活性片段、如上所述之胰島素相關肽或其類似物或片段。該等藥劑已於以上定義中進一步說明。

對於治療低胰島素血症，例如可一起投與或分別投與胰島素與IL-17拮抗劑。

此等額外分子宜以有效實現預定目的之量存在於組合中或以該組合形式投與，該等量通常小於在無IL-17拮抗劑情況下單獨投與此等額外分子所用之量。若將該等分子調配在一起，則其可根據例如適應症類型、個體、個體之年齡及體重、當前臨床狀況、投藥時間、劑型、投藥方法等確定之量調配。舉例而言，伴隨藥物較佳以相對於1重量份本文之IL-17拮抗劑約0.0001至10,000重量份之比例使用。

與單獨投與胰島素時的劑量相比，使用IL-17拮抗劑與胰島素之組合能夠減少胰島素之劑量。因此，誘發血管併發症及低血糖症(二者均為大量投與胰島素引起之問題)之風險較低。對於將胰島素投與成年糖尿病患者(體重約50 kg)，例如，每日劑量通常為約10至100 U(單位)，較佳10至80 U，但醫師可決定降低此每日劑量。對於將胰島素分泌增強劑投與同類型患者，例如，每日劑量較佳為約0.1至1000 mg，更佳為約1至100 mg。對於將雙胍投與同類型患者，例如，每日劑量較佳為約10至2500 mg，更佳為約100至1000 mg。對於將α-葡糖苷酶抑制劑投與同類型患者，例如，每日劑量較佳為約0.1至400 mg，更佳為約0.6至300 mg。可對此等患者投與較佳約0.1至2500 mg、更佳約0.5至1000 mg劑量之溴麥角環肽、普蘭林肽、瘦素、BAY-27-9955或T-1095。上述所有劑量可一日一次至一日數次投與。

IL-17拮抗劑亦可與針對胰島素阻抗性之適合非藥物治療(諸如胰腺移植)一起投與。

對患胰島素阻抗性或低胰島素血症哺乳動物投與拮抗劑的劑量將由醫師根據有關情況決定，包括哺乳動物之病狀、拮抗劑類型、適應症類型及所選擇之投藥途徑。該劑量較佳為足夠低以致不會使體重增加至任何顯著程度的量，且醫師可決定該量。經批准用於治療人類第2型糖尿病之格列酮(羅格列酮/梵帝雅(Avandia)及吡格列酮/愛妥糖(Actos))會引起體重少許增加，但仍可使用而不管副作用，因為已經由其治療指標證實為有益的。本文所提供之劑量範圍不意欲以任何方式限制本發明之範疇。為達本文之目的，針對低胰島素血症及胰島素阻抗性之「治療有效」量係由上述因素決定，但一般為每日每公斤體重約0.01至100 mg。該劑量較佳為約0.1-50毫克/公斤/日，更佳為約0.1至25毫克/公斤/日。更佳當每日投與IL-17拮抗劑時，用於人類之靜脈內或肌肉內劑量為每日每公斤體重約0.3至10 mg，更佳為約0.5至5 mg/kg。對於皮下投藥，劑量較佳大於靜脈內或肌肉內給與之治療相等劑量。對於兩種適應症，用於人類之每日皮下劑量較佳為約0.3至20 mg/kg，更佳為約0.5至5 mg/kg。

本發明涵蓋多種給藥時程。本發明涵蓋連續給藥時程，其中定期(每日、每週或每月，視劑量及劑型而定)投與IL-17拮抗劑而無實質中斷。較佳之連續給藥時程包括每日連續輸注，其中每日輸注IL-17拮抗劑；及連續團式(bolus)投藥時程，其中每日至少一次經由團式注射或吸入劑或鼻內途徑投與IL-17拮抗劑。本發明亦涵蓋不連續給藥時程。不連續投藥時程之確切參數將視調配物、傳遞方法及所治療哺乳動物的臨床需要而變化。舉例而言，若經由輸注投與IL-17拮抗劑，則投藥時程可包含第一投藥階段，接著不投與IL-17拮抗劑大於、等於或小於第一階段的第二階段。

當經由團式注射、尤其團式注射緩釋調配物進行投藥時，給藥時程亦可為連續的，即每日投與IL-17拮抗劑；或可為不連續的，其中第一及第二階段如上文所述。

利用任何方法之連續及不連續投藥時程亦包括在整個第一階段期間調節劑量之給藥時程，亦即例如，在第一階段開始時，劑量較低且漸增直至第一階段結束；初始劑量較高且在第一階段期間減少；初始劑量較低，增加至峰值劑量，接著減少直至第一階段結束，及其任何組合。

投與IL-17拮抗劑對胰島素阻抗性之影響可經由此項技術中已知之多種分析法來量測。最常見地，減輕糖尿病之影響將會改良血糖控制(如藉由一系列血糖測試所量測)、減少為保持良好血糖控制而對胰島素的需求、減少糖基化血色素、減少晚期糖基化終產物(AGE)之血液含量、減少「黎明現象」、減少酮酸症及改良脂質譜。或者，如血糖含量減小；胰島素需求減少；糖基化血色素及血AGE減少；血管併發症、腎臟併發症、神經併發症及視網膜併發症減少；妊娠併發症減少，及脂質譜改良所指示，投與IL-17拮抗劑可使糖尿病之症狀穩定。

可藉由測定投藥前後個體靜脈血漿中葡萄糖或Hb(血紅素)A_1c 之濃度，且隨後比較投藥前與投藥後所獲得之濃度，來評估IL-17拮抗劑降低血糖之作用。HbA_1c 意謂糖基化血紅素，且響應血糖濃度而逐漸產生。因此，認為HbA_1c 係不易受糖尿病患者血糖快速變化影響之重要的血糖控制指標。

治療低胰島素血症之證據例如經由患者體內胰島素循環含量增加來顯示。

使肌肉修復及再生之劑量視患者之病狀、所需肌肉修復之特定類型等而定，通常為每公斤體重約0.01至100 mg，更佳為1至10 mg/kg。給藥時程係根據此領域中臨床醫師所用之標準時程。肌肉修復或再生之證據係由此項技術中熟知之各種量測測試來顯示，該等測試包括關於肌細胞增殖及分化之分析，及聚合酶鏈反應測試(參見例如，Best等人，J. Orthop. Res.,19: 565-572(2001)，其提供一種使用定量反轉錄聚合酶鏈反應進行之癒合兔骨骼肌中肌母細胞源性及纖維母細胞源性基因產物之mRNA含量變化的分析)。

3.　製造物件及套組

本發明亦提供治療胰島素阻抗性及低胰島素血症，以及修復及再生肌肉之套組。本發明之套組包含一或多個含IL-17拮抗劑(較佳為抗體)之容器組合一套說明書(一般為書面說明書)，該說明書係關於IL-17拮抗劑治療胰島素阻抗性或低胰島素血症或任何其他與胰島素阻抗性相關之目標病症的用法及劑量。該套組中包括的說明書一般包括關於治療目標疾病(諸如胰島素阻抗性或低胰島素血病)之劑量、給藥時程及投藥途徑之資訊。含IL-17拮抗劑之容器可為單位劑量、散裝(例如多劑量包裝)或次單位劑量之形式。

製造物件包含一個容器及在該容器上或與該容器相聯之標籤或藥品說明書。合適容器包括例如瓶子、小瓶、注射器等。該等容器可由多種材料(諸如玻璃或塑膠)形成。該容器保存對治療病狀有效的組合物，且可具有無菌接取孔(例如該容器可能為具有皮下注射針可刺穿之塞子的靜脈內溶液袋或小瓶)。該組合物中至少一種活性劑為本發明之IL-17拮抗劑。標籤或藥品說明書指示該組合物用於治療特定病狀。該標籤或藥品說明書將進一步包含有關對患者投與該抗體組合物之說明書。亦涵蓋包含本文描述之組合療法之製造物件及套組。

藥品說明書係指通常包括在治療性產品之商業包裝中的說明書，其含有關於適應症、用法、劑量、投藥、禁忌症及/或有關使用此等治療性產品之警告的資訊。

另外，製造物件可進一步包含第二容器，其包含醫藥學上可接受之緩衝劑，諸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸鹽緩衝之生理鹽水、林格溶液(Ringer's solution)及右旋糖溶液。製造物件可進一步包括自商業及用戶觀點看合乎需要之其他材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針及注射器。

4.　抗體之製備

單株抗體

單株抗體可使用由Kohler等人，Nature,256: 495(1975)最先描述之融合瘤法來製備，或可經由重組DNA法(美國專利第4,816,567號)來製備。在融合瘤法中，如上文所述使小鼠或其他適當的宿主動物免疫以引起淋巴細胞產生或能夠產生將特異性結合用於免疫之蛋白質之抗體。或者，可於活體外免疫淋巴細胞。接著使用合適融合劑(諸如聚乙二醇)將淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，以形成融合瘤細胞(Goding,Monoclonal Antibodies: Principles and Practice,第59-103頁(Academic Press,1986))。

接種由此製備之融合瘤，並使其在較佳含有一或多種抑制未融合親本骨髓瘤細胞生長或存活之物質的合適培養基中生長。舉例而言，若親本骨髓瘤細胞缺乏酶次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶(HGPRT或HPRT)，則用於融合瘤之培養基中通常將包括次黃嘌呤、胺基蝶呤及胸苷(HAT培養基)，該等物質會阻止HGPRT缺陷型細胞生長。

骨髓瘤細胞較佳為有效融合、使所選抗體產生細胞穩定大量產生抗體且對諸如HAT培養基之培養基敏感的骨髓瘤細胞。在此等骨髓瘤細胞中，較佳之骨髓瘤細胞株為鼠類骨髓瘤株，諸如源自可自Salk Institute Cell Distribution Center,San Diego,Calif.購得之MOPC-21及MPC-11小鼠腫瘤的骨髓瘤株，及可自美國菌種保存中心(American Type Culture Collection,Rockville,Md. USA)獲得之SP-2或X63-Ag8-653細胞。亦已針對人類單株抗體之製備，描述人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞株(Kozbor,J. Immunol.,133: 3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,第51-63頁(Marcel Dekker公司，New York,1987))。

對融合瘤細胞生長培養基中針對抗原之單株抗體之產生進行分析。較佳經由免疫沈澱法，或經由活體外結合分析(諸如放射免疫分析(RIA)或酶聯免疫吸附分析(ELISA))，測定由融合瘤細胞產生之單株抗體的結合特異性。

在鑑別出產生具有所需特異性、親和力及/或活性之抗體的融合瘤細胞後，可藉由限制性稀釋程序次選殖純系，並藉由標準方法使其生長(Goding,Monoclonal Antibodies: Principles and Practice,第59-103頁(Academic Press,1986))。適用於此目的之培養基包括例如D-MEM或RPMI-1640培養基。此外，融合瘤細胞可在動物體內活體內生長為腹水性腫瘤的形式。

宜經由習知免疫球蛋白純化程序，諸如蛋白質A-瓊脂糖凝膠、羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析或親和層析，自培養基、腹水或血清中分離出次純系所分泌之單株抗體。

使用習知程序(例如，藉由使用能夠特異地結合編碼單株抗體之重鏈及輕鏈之基因的寡核苷酸探針)易於分離出編碼該等單株抗體之DNA並進行定序。融合瘤細胞充當此DNA之較佳來源。一旦分離，即可將該DNA置放入表現載體中，接著將該表現載體轉染至不另外產生免疫球蛋白的宿主細胞(諸如大腸桿菌細胞、猿COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或骨髓瘤細胞)中，以在重組宿主細胞內合成單株抗體。以下將更詳細地描述抗體之重組製備。

在另一實施例中，可自使用McCafferty等人，Nature,348: 552-554(1990)中描述之技術產生的抗體噬菌體文庫中分離抗體或抗體片段。

Clackson等人，Nature,352: 624-628(1991)及Marks等人，J. Mol. Biol.,222: 581-597(1991)分別描述使用噬菌體文庫分離鼠類及人類抗體。隨後之出版物描述藉由鏈改組製備高親和力(nM範圍)人類抗體(Marks等人，Bio/Technology 10: 779(1992))，以及作為構築極大噬菌體文庫之策略之組合感染及活體內重組(Waterhouse等人，Nuc. Acids. Res.,21: 2265-2266(1993))。因此，此等技術為分離單株抗體之傳統單株抗體融合瘤技術之可行性替代技術。

亦可例如藉由用人類重鏈及輕鏈恆定結構域之編碼序列取代同源鼠類序列(美國專利第4,816,567號；Morrison等人，Proc Natl Acad Sci USA 81: 6851(1984))，或藉由將非免疫球蛋白多肽之全部或部分編碼序列與免疫球蛋白編碼序列共價連接，來修飾DNA。

通常，用抗體之恆定結構域取代該等非免疫球蛋白多肽，或用抗體之一個抗原結合位點之可變結構域進行取代，以產生包含一個對一種抗原具有特異性之抗原結合位點及另一個對不同抗原具有特異性之抗原結合位點的嵌合二價抗體。

人類化及人類抗體

人類化抗體中引入一或多個來自非人類來源之胺基酸殘基。此等非人類胺基酸殘基通常稱為「輸入(import)」殘基，其通常係自「輸入」可變結構域獲得。

可基本上根據Winter及合作者之方法(Jones等人，Nature,321: 522-525(1986)；Riechmann等人，Nature,332: 323-327(1988)；Verhoeyen等人，Science,239: 1534-1536(1988))，藉由用齧齒動物CDR或CDR序列取代人類抗體之相應序列來執行人類化。因此，該等「人類化」抗體為嵌合抗體(美國專利第4,816,567號)，其中實質上少於完整之人類可變結構域已經非人類物種之相應序列取代。實際上，人類化抗體通常為一些CDR殘基及可能的一些FR殘基經齧齒動物抗體中類似位點之殘基取代的人類抗體。

欲用於製備人類化抗體之人類可變結構域(輕鏈與重鏈)之選擇對降低抗原性極其重要。根據所謂的「最佳擬合」方法，針對齧齒動物抗體之可變結構域序列篩選整個已知人類可變結構域序列文庫。接著，將最接近齧齒動物序列之人類序列當作人類化抗體之人類構架(FR)(Sims等人，J. Immunol.,151: 2296(1993)；Chothia等人，J. Mol. Biol.,196: 901(1987))。另一方法使用源自所有人類抗體特定輕鏈或重鏈子群之共同序列的特定構架。同一構架可用於若干不同人類化抗體中(Carter等人，Proc. Natl. Acad Sci. USA,89: 4285(1992)；Presta等人，J. Immnol.,151: 2623(1993))。

將抗體人類化且保留對抗原之高親和力及其他有利生物特性較為重要。為實現此目標，根據較佳方法，藉由使用親本及人類化序列之三維模型分析親本序列及各種概念性人類化產物的方法來製備人類化抗體。三維免疫球蛋白模型普遍可用且為熟習此項技術者熟知。可用說明及呈現所選候選免疫球蛋白序列之可能的三維構形結構的電腦程式。對此等呈現之檢查允許分析殘基在候選免疫球蛋白序列起作用過程中可能的作用，亦即，分析影響候選免疫球蛋白結合其抗原之能力的殘基。以此方式，可自受體及輸入序列選擇FR殘基且合併，由此獲得所需抗體特徵，諸如對標靶抗原之親和力增加。一般而言，CDR殘基直接且最實質上涉及影響抗原結合。

另外，現有可能產生能夠在免疫後，不產生內源免疫球蛋白而產生完全人類抗體譜系之轉殖基因動物(例如小鼠)。舉例而言，已描述嵌合及生殖系突變小鼠中抗體重鏈連接區(J_H )基因的純合缺失會導致內源抗體產生之完全抑制。將人類生殖系免疫球蛋白基因陣列轉移至此等生殖系突變小鼠中將會引起在抗原激發後產生人類抗體。參見例如Jakobovits等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA,90: 2551(1993)；Jakobovits等人，Nature,362: 255(1993)；Bruggermann等人，Year in Immunol.,7: 33(1993)；及Duchosal等人，Nature 355: 258(1992)。人類抗體亦可源自噬菌體呈現文庫(Hoogenboom等人，J. Mol. Biol.,227: 381(1991)；Marks等人，J. Mol. Biol.,222: 581-597(1991)；Vaughan等人，Nature Biotech 14: 309(1996))。以下將進一步描述自抗體噬菌體呈現文庫產生人類抗體。

抗體片段

已開發出各種技術用於製備抗體片段。傳統上，可經由完整抗體之蛋白水解消化獲得此等片段(參見例如Morimoto等人，Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24: 107-117(1992)；及Brennan等人，Science,229: 81(1985))。然而，現可由重組宿主細胞直接產生此等片段。舉例而言，可自上述抗體噬菌體文庫中分離抗體片段。或者，可直接自大腸桿菌回收Fab'-SH片段且化學偶聯以形成F(ab')₂ 片段(Carter等人，Bio/Technology 10: 163-167(1992))。在如以下實例中所述之另一實施例中，使用白胺酸拉鏈GCN4促進F(ab')₂ 分子之組裝來形成F(ab')₂ 。根據另一方法，可自重組宿主細胞培養物直接分離F(ab')₂ 片段。其他製備抗體片段之技術對於熟習此項技術者將顯而易見。在其他實施例中，所選抗體為單鏈Fv片段(scFv)。參見WO 93/16185。

多特異性抗體

多特異性抗體對至少兩種不同抗原決定基具有結合特異性，其中該等抗原決定基通常來自不同抗原。雖然此等分子通常僅結合兩種不同抗原決定基(亦即雙特異性抗體，BsAb)，但是當用於本文中時，此表述亦涵蓋具有額外特異性的抗體，諸如三特異性抗體。製備雙特異性抗體之方法在此項技術中為已知的。全長雙特異性抗體之傳統製備方法係基於兩個免疫球蛋白重鏈/輕鏈對之共表現，其中該兩條鏈具有不同特異性(Millstein等人，Nature,305: 537-539(1983))。歸因於免疫球蛋白重鏈及輕鏈之隨機分配，此等融合瘤(四源融合瘤(quadroma))產生含10種不同抗體分子之潛在混合物，其中僅一種具有正確的雙特異性結構。通常經由親合層析步驟進行之正確分子的純化相當麻煩，且產物之產率較低。類似程序揭示於WO 93/08829及Traunecker等人，EMBO J.,10: 3655-3659(1991)中。根據不同方法，將具有所需結合特異性之抗體可變結構域(抗體-抗原結合位點)與免疫球蛋白恆定結構域序列融合。該融合較佳係與包含鉸鏈區、C_H2 區及C_H3 區中至少一部分之免疫球蛋白重鏈恆定結構域進行。較佳在至少一個融合物中存在含有輕鏈結合必需之位點的第一重鏈恆定區(C_H1 )。將編碼免疫球蛋白重鏈融合物及(若需要)免疫球蛋白輕鏈之DNA***獨立表現載體中，且共轉染至合適宿主生物體中。在構築過程中使用不等比率之三條多肽鏈提供最佳產率的實施例中，此法可極為靈活地調整三條多肽片段之相互比例。然而，當相等比率之至少兩條多肽鏈的表現產生高產率或當該等比率並非特別重要時，可能將兩條或全部三條多肽鏈之編碼序列***一個表現載體中。

在本方法之一較佳實施例中，雙特異性抗體係由一臂中具有第一結合特異性之雜交免疫球蛋白重鏈以及另一臂中之雜交免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(提供第二結合特異性)構成。已發現由於免疫球蛋白輕鏈僅存在於一半雙特異性分子中提供一種簡便之分離方式，故此不對稱結構便利將所需雙特異性化合物與不合需要之免疫球蛋白鏈組合分離。此方法揭示於WO 94/04690中。關於產生雙特異性抗體之其他細節，參見例如Suresh等人，Methods in Enzymology ,121: 210(1986)。

根據WO 96/27011中描述之另一方法，可工程改造一對抗體分子間之界面以使自重組細胞培養物回收的異二聚體之百分比最大。較佳界面包含抗體恆定結構域中C_H3 結構域之至少一部分。以此方法，用較大側鏈(例如酪胺酸或色胺酸)置換第一抗體分子界面之一或多個小胺基酸側鏈。藉由用較小胺基酸側鏈(例如丙胺酸或蘇胺酸)置換較大胺基酸側鏈，於第二抗體分子之界面上產生尺寸與較大側鏈相同或相似之補償性「空穴」。此提供使異二聚體之產率增加超過其他不合需要之終產物(諸如同二聚體)的機制。

雙特異性抗體包括交聯或「異型結合」抗體。舉例而言，異型結合物中之一個抗體可與抗生物素蛋白偶合，而另一個與生物素偶合。舉例而言，已提出此等抗體使免疫系統細胞靶向不合需要之細胞(美國專利第4,676,980號)，且治療HIV感染(WO 91/00360及WO 92/00373)。可使用任何便利的交聯方法製備異型結合抗體。合適交聯劑在此項技術中已為吾人所熟知，且連同多種交聯技術一起揭示於美國專利第4,676,980號中。

自抗體片段產生雙特異性抗體之技術已描述於文獻中。舉例而言，可使用化學鍵聯製備雙特異性抗體。Brennan等人，Science 229: 81(1985)描述蛋白水解裂解完整抗體產生F(ab')₂ 片段的程序。在二硫醇錯合劑亞砷酸鈉存在下，還原此等片段以使鄰近二硫醇穩定且防止分子間二硫鍵形成。接著將所產生之Fab'片段轉化為硫代硝基苯甲酸酯(TNB)衍生物。接著藉由用巰基乙胺還原，將一種Fab'-TNB衍生物再轉化為Fab'-硫醇，且與等莫耳量之另一Fab'-TNB衍生物混合以形成雙特異性抗體。所產生之雙特異性抗體可用作選擇性固定酶之試劑。

亦可直接自大腸桿菌回收Fab'-SH片段，且可將其化學偶合以形成雙特異性抗體。Shalaby等人，J. Exp. Med., 175: 217-225(1992)描述完全人類化雙特異性抗體F(ab')₂ 分子之製備。大腸桿菌分別分泌各Fab'片段且使其在活體外進行定向化學偶合以形成雙特異性抗體。

亦已描述直接自重組細胞培養物製備及分離雙特異性抗體片段之多種技術。舉例而言，已使用白胺酸拉鏈製備雙特異性抗體。Kostelny等人，J. Immunol., 148(5): 1547-1553(1992)。藉由基因融合將來自Fos及Jun蛋白之白胺酸拉鏈肽與兩種不同抗體之Fab'部分連接。還原抗體同二聚體之鉸鏈區以形成單體，且接著再氧化以形成抗體異二聚體。亦可利用此方法製備抗體同二聚體。Hollinger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA ,90: 6444-6448(1993)所述之「雙功能抗體」技術已提供一種製備雙特異性抗體片段之替代性機制。該等片段包含重鏈可變結構域(VH)經一種連接子連接至輕鏈可變結構域(VL)，該連接子過短而致使同一鏈上之兩個結構域之間無法配對。因此，迫使一個片段之VH及VL結構域與另一片段之互補VL及VH結構域配對，藉此形成兩個抗原結合位點。亦已報導另一藉由使用單鏈Fv(sFv)二聚體製備雙特異性抗體片段之策略。參見Gruber等人，J. Immunol. ,152: 5368(1994)。

涵蓋兩價以上的抗體。舉例而言，可製備三特異性抗體。Tuft等人，J. Immunol. 147: 60(1991)。

效應功能工程改造

關於效應功能，可能需要修飾本發明抗體，由此增強該抗體之效能。舉例而言，可將半胱胺酸殘基引入Fc區中，藉此允許在此區中形成鏈間二硫鍵。由此產生之同二聚抗體可具有改良之內化能力，及/或增加之補體介導之細胞殺死及抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。參見Caron等人，J. Exp Med. 176: 1191-1195(1992)；及Shopes,B. J. Immunol. 148: 2918-2922(1992)。亦可如Wolff等人，Cancer Research 53:2560-2565(1993)中所述，使用異雙功能交聯劑製備具有較強抗腫瘤活性之同二聚抗體。或者，可工程改造出具有雙Fc區且可藉此具有較強補體溶解及ADCC能力的抗體。參見Stevenson等人，Anti-Cancer Drug Design 3: 219-230(1989)。

抗體-救助受體結合抗原決定基融合物。

在本發明之某些實施例中，可能需要使用抗體片段而非完整抗體。在此情況下，可能需要修飾抗體片段以增加其血清半衰期。此可例如藉由將結合救助受體之抗原決定基併入抗體片段(例如，藉由使該抗體片段中之適當區域突變；或藉由將該抗原決定基併入肽標記中，隨後例如經由DNA或肽合成融合至該抗體片段之任一端或中間)而達成。

結合救助受體之抗原決定基較佳構成一個區域，其中來自Fc結構域一個或兩個環之任一個或多個胺基酸殘基轉移至抗體片段類似位置。甚至更佳地，轉移來自Fc結構域一個或兩個環之三個或三個以上殘基。更佳地，自Fc區(例如IgG之Fc區)之CH2結構域獲取抗原決定基且轉移至抗體之CH1、CH3或V_H 區或一個以上此類區域。或者，自Fc區之CH2結構域獲取抗原決定基且轉移至抗體片段之CL區或VL區或二者。

抗體之其他共價修飾

抗體之共價修飾包括在本發明之範疇內。適用時，可藉由化學合成或藉由抗體之酶促或化學裂解來進行抗體之共價修飾。可藉由使抗體之標靶胺基酸殘基與能夠與所選側鏈或者N端或C端殘基反應的有機衍生化試劑反應，將其他類型之抗體共價修飾引入分子中。共價修飾之實例描述於美國專利第5,534,615號中，其以引用的方式明確地併入本文中。較佳之抗體共價修飾類型包含以美國專利第4,640,835號、第4,496,689號、第4,301,144號、第4,670,417號、第4,791,192號或第4,179,337號中闡述之方式，將該抗體連接至多種非蛋白質聚合物(例如聚乙二醇、聚丙二醇或聚環氧烷類)中之一者。

自合成抗體噬菌體文庫基生抗體

在一較佳實施例中，本發明提供一種使用獨特的噬菌體呈現方法產生及選擇新穎抗體的方法。該方法涉及根據單一構架模板產生合成抗體噬菌體文庫；在可變結構域內設計足夠多樣性；呈現具有多樣化可變結構域之多肽；選擇對標靶抗原具有高親和力之候選抗體，及分離所選抗體。

噬菌體呈現方法之詳情可見於例如2003年12月11號公開之WO 03/102157，該專利之全部揭示內容明確地以引用的方式併入本文中。

在一態樣中，可藉由使抗體可變結構域至少一個CDR中之溶劑可及位置及/或高度多樣性位置突變，來產生本發明中所用之抗體文庫。可使用本文提供之方法使一些或全部CDR突變。在一些實施例中，較佳藉由使CDRH1、CDRH2及CDRH3中之位置突變以形成單一文庫，或藉由使CDRL3及CDRH3中之位置突變以形成單一文庫，或藉由使CDRL3以及CDRH1、CDRH2及CDRH3中之位置突變以形成單一文庫，來產生多樣化抗體文庫。

可產生例如在CDRH1、CDRH2及CDRH3之溶劑可及位置及/或高度多樣性位置具有突變的抗體可變結構域文庫。可產生在CDRL1、CDRL2及CDRL3中具有突變之另一文庫。此等文庫亦可彼此結合使用以產生具有所需親和力之結合子。舉例而言，在對結合標靶抗原之重鏈文庫進行一或多輪選擇後，可將輕鏈文庫代入重鏈結合子之群中再進行數輪選擇，由此增強結合子之親和力。

較佳藉由在重鏈序列可變區之CDRH3區中用變異胺基酸取代原始胺基酸來產生文庫。所得文庫可含有複數個抗體序列，其中該序列多樣性主要在重鏈序列之CDRH3區中。

在一態樣中，文庫係在人類化抗體4D5序列或人類化抗體4D5序列之構架胺基酸序列之情況下產生。較佳藉由用由DVK 密碼子組編碼之胺基酸取代重鏈之至少95-100a殘基來產生文庫，其中該DVK 密碼子組係用於編碼此等位置中每一者之一組變異胺基酸。適用於產生此等取代之寡核苷酸組之實例包含序列(DVK )₇ 。在一些實施例中，藉由用由DVK 及NNK 密碼子組編碼之胺基酸取代95-100a殘基來產生文庫。適用於產生此等取代之寡核苷酸組之實例包含序列(DVK )₆ (NNK )。在另一實施例中，藉由用由DVK 及NNK 密碼子組編碼之胺基酸取代至少95-100a殘基來產生文庫。

適用於產生此等取代之寡核苷酸組之實例包含序列(DVK )₅ (NNK )。適用於產生此等取代之寡核苷酸組之另一實例包含序列(NNK )₆ 。合適寡核苷酸序列之其他實例可由熟習此項技術者根據本文所述之準則來確定。

在另一實施例中，利用不同CDRH3設計來分離高親和力結合子且分離針對多個抗原決定基之結合子。此文庫中產生之CDRH3之長度範圍為11至13個胺基酸，但亦可產生與此不同於之長度。可藉由使用NNK 、DVK 及NVK 密碼子組，以及N及/或C端較為有限之多樣性，來擴展H3多樣性。

多樣性亦可在CDRH1及CDRH2中產生。CDR-H1及CDR-H2多樣性之設計遵循靶向如所述具有修飾之模擬天然抗體譜系的策略，該修飾集中於比先前設計更緊密匹配天然多樣性之多樣性。

對於CDRH3中之多樣性，可分別構築具有不同H3長度之多個文庫且接著將其合併以選擇標靶抗原之結合子。可使用如先前及下文所述之固體支撐物選擇(solid support selection)及溶液分選法(solution sorting method)，彙集多個文庫並進行分選。可採用多重分選策略。舉例而言，一種變體涉及對結合固體之標靶進行分選，接著對可能存在於融合多肽上之標籤(例如抗gD標籤)進行分選，且接著對結合固體之標靶再次進行分選。或者，可首先針對結合固體表面之標靶分選文庫，接著使用溶液相結合，利用濃度逐漸降低之標靶抗原，對經溶離之結合子進行分選。利用不同分選方法之組合使對僅高度表現之序列之選擇步驟減到最少且可選擇大量不同的高親和力純系。

可自文庫中分離出對標靶抗原具高親和力之結合子。限制H1/H2區之多樣性會使簡併減少約10⁴ 至10⁵ 倍，而允許更多H3多樣性則提供具有更高親和力之結合子。利用具有不同類型CDRH3多樣性(例如，利用DVK或NVT)之文庫可分離出可結合標靶抗原之不同抗原決定基之結合子。

在自如上文所述之彙集文庫分離之結合子中，已發現可藉由提供有限之輕鏈多樣性來進一步改良親和力。在此實施例中產生如下所示之輕鏈多樣性，在CDRL1中：胺基酸位置28由RDT編碼；胺基酸位置29由RKT編碼；胺基酸位置30由RVW編碼；胺基酸位置31由ANW編碼；胺基酸位置32由THT編碼；視情況胺基酸位置33由CTG編碼；在CDRL2中：胺基酸位置50由KBG編碼；胺基酸位置53由AVC編碼；且視情況胺基酸位置55由GMA編碼；在CDRL3中：胺基酸位置91由TMT或SRT或二者編碼；胺基酸位置92由DMC編碼；胺基酸位置93由RVT編碼；胺基酸位置94由NHT編碼；且胺基酸位置96由TWT或YKG或二者編碼。

在另一實施例中，產生在CDRH1、CDRH2及CDRH3區具有多樣性之文庫。在此實施例中，使用多種H3區長度且主要使用密碼子組XYZ 及NNK 或NNS 產生CDRH3之多樣性。可使用個別寡核苷酸形成文庫且彙集，或可彙集寡核苷酸以形成文庫子集。可針對結合固體之標靶對此實施例之文庫進行分選。可使用ELISA分析，針對特異性及親和力來篩選自多個類別分離之純系。對於特異性，可針對所需標靶抗原以及其他非標靶抗原對純系進行篩選。接著可在溶液結合競爭ELISA分析或斑點競爭分析(spot competition assay)中，關於針對標靶抗原之親和力來篩選結合子。可利用如上所述製備之XYZ 密碼子組，自文庫中分離高親和力結合子。可易於在細胞培養物中以高產率產生抗體或抗原結合片段形式之此等結合子。

在一些實施例中，可能需要產生CDRH3區長度具有較大多樣性之文庫。舉例而言，可能需要產生CDRH3區在約7至19個胺基酸範圍內之文庫。

自此等實施例之文庫中分離的高親和力結合子易於在細菌及真核細胞培養物中以高產率產生。載體可經設計成易於移除諸如gD標籤、病毒外殼蛋白組份序列之序列，及/或易於添加恆定區序列，以致可以高產率產生全長抗體或抗原結合片段。

CDRH3具有突變之文庫可與含有其他CDR(例如CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1及/或CDRH2)變異型式之文庫合併。因此，例如在一實施例中，CDRH3文庫與在使用預定密碼子組於位置28、29、30、31及/或32產生變異胺基酸的人類化4D5抗體序列之情況下產生的CDRL3文庫合併。在另一實施例中，CDRH3具有突變之文庫可與包含變異CDRH1及/或CDRH2重鏈可變結構域之文庫合併。在一實施例中，使用在位置28、30、31、32及33具有變異胺基酸之人類化抗體4D5產生CDRH1文庫。可使用預定密碼子組在位置50、52、53、54、56及58產生變異胺基酸之人類化抗體4D5序列來產生CDRH2文庫。

吾人認為上述書面描述足以使熟習此項技術者能夠實踐本發明。以下實例僅為說明的目的提供，且不意欲以任何方式限制本發明之範疇。實際上，除本文展示及描述之修改外，本發明之各種修改亦將自上文描述而為熟習此項技術者顯而易知且在隨附申請專利範圍之範疇內。

除非另有指示，否則實例中所提及之市售試劑係根據製造者說明書使用。以下實例中及整個說明書中以ATCC寄存編號標識之細胞來源均為美國菌種保存中心(American Type Culture Collection,Manassas,VA)。除非另作說明，否則本發明使用重組DNA技術之標準程序，諸如本文上文及以下教程中所述者：Sambrook等人，同上文；Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology (Green Publishing Associates and Wiley Interscience,N.Y.,1989)；Innis等人，PCR Protocols: A Guide to Methods and AppIications (Academic Press公司：N.Y.,1990)；Harlow等人，Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Press: Cold Spring Harbor,1988)；Gait,Oligonucleotide Synthesis (IRL Press: Oxford,1984)；Freshney,Animal Cell Culture ,1987；Coligan等人，Current Protocols in Immunology ,1991。

本發明之其他細節將於以下非限制性實例中提供。

在整個本發明中所引用之所有文獻均明確地以引用的方式全部併入本文中。

實例1IL-17家族成員在糖尿病及胰島素阻抗性中之作用。

IL-17Rc KO小鼠及高脂肪飲食模型研究

用常規飲食或60%高脂肪飲食(HFD)餵食8週齡之雄性IL-17Rc(UNQ6118.KO.lex)基因剔除小鼠及同窩野生型(WT)對照小鼠。

第1組：餵以高脂肪飲食之IL-17Rc基因剔除(KO)小鼠(5隻動物)

第2組：餵以高脂肪飲食之IL-17Rc WT同窩對照組(5隻動物)

第3組：餵以常規飲食之IL-17Rc KO小鼠(3隻動物)

第4組：餵以常規飲食之IL-17Rc WT同窩對照組(3隻動物)。

圖7中展示實驗設計。

對小鼠進行葡萄糖耐量測試(GTT)以得到其胰島素阻抗性狀態。

使用以下方法執行GTT。

血糖及胰島素量測：藉由隱靜脈放血獲得血液樣本，且立即使用血糖計(由Lifescan(USA)製造之OneTouch血糖計)分析葡萄糖濃度。使用ELISA法量測血清胰島素。

葡萄糖耐量測試(GTT)：在禁食隔夜(14 h)後，在早晨(9:00 am)對動物進行測試。在腹膜內注射每公克各動物體重1.5 mg葡萄糖之前以及投與葡萄糖之後30、60、120及150分鐘時，量測自隱靜脈放血獲得之樣本的血糖。值係以mg/dL葡萄糖計。

對基線(對動物施加高脂肪飲食之前)以及在高脂肪飲食組之後第8週、第10週、第12週及第14週執行GTT。餵食常規飲食的小鼠用作對照組。在基因剔除型與野生型(WT)同窩對照小鼠中，其餘條件均類似。

除GTT外，每週亦監測動物之總體重以及禁食血清胰島素及葡萄糖含量。

結果展示於圖8-11中。

IL-17Rc WT同窩對照小鼠顯示明顯的體重增加且發展胰島素阻抗性表型，而IL-17Rc基因剔除小鼠明顯比其WT同窩對照組瘦，且具有比其WT同窩對照組好得多的葡萄糖清除率。甚至在餵食高脂肪飲食超過12週後，基因剔除小鼠之體重亦未增加。兩組顯示類似的禁食循環胰島素含量。在對照飲食餵食組中，未觀測到KO與WT小鼠間之顯著差異。

除上述使用IL-17 Rc KO小鼠進行之實驗外，亦進行兩個獨立研究來確定促炎性細胞激素I1-17A及IL-17F在糖尿病及胰島素阻抗性中之作用。

實例2抗IL-17 mAb及抗IL-17F mAb對胰島素阻抗性高脂肪飲食小鼠模型之影響。

此研究之目的在於研究抗IL-17 mAb及抗IL-17F mAb在預防胰島素阻抗性及已產生胰島素阻抗性之模型中的功效，且與muTNFRII-Fc之治療作用相比較。

實驗設計及組：

第1組：100 μl含豬草6 mg/kg之生理鹽水，腹膜內(ip)，3次/週，持續10週(n=10)。

第2組：100 μl含Mutnfrii-IgG2a 4 mg/kg之生理鹽水，3次/週，持續10週(n=10)。

第3組：100 μl含Mu抗IL-17 6 mg/kg之生理鹽水，腹膜內，3次/週，持續10週(n=10)。

第4組：100 μl含Mu抗IL-17+Mu抗IL-17F mAb 6 mg/kg之生理鹽水，腹膜內，3次/週，持續10週(n=10)。

第5組：在第18週及第24週時，MuTNFRII-Fc 4 mg/kg=Mu抗IL-17 6 mg/kg+Mu抗IL17FmAb 6 mg/kg(10隻動物)。

所有組皆餵食高脂肪飲食。為了評估小鼠之胰島素阻抗性狀態，在HFD及給與抗體後，每2週執行葡萄糖耐量測試(GTT)。

該方案在圖12中加以說明。圖13中展示給藥9週後抗IL-17A MAb及抗IL-17F MAb對葡萄糖耐量之影響。

實例3經由GTT評估之IL-17過度表現對胰島素阻抗性狀態之影響。

該研究係基於在餵食正常及高脂肪飲食之小鼠中流體動力法尾靜脈(HTV)注射表現天然鼠類IL-17A及IL-17F蛋白之質體DNA，以在小鼠中表現高含量之促炎性細胞激素鼠類IL-17A及IL-17F，由此研究其在胰島素阻抗性中之作用。

第1組：無質體

第2組：單獨pRK載體

第3組：pRK-IL-17A

第4組：pRK-IL-17F

對各組內的5個小鼠子組進行注射，在各種時間點(攝取DNA後0小時、2小時、6小時、24小時及72小時)抽血，以量測血清中之循環細胞激素含量。在確定DNA攝取後，IL-17A及I1-17F即在高脂肪飲食(HFD)小鼠中過度表現，得到胰島素阻抗性狀態之變化。

尾靜脈注射實驗：

1)　在生理鹽水(較佳為林格氏溶液)中將DNA構築體(pRK載體或pRK-IL-17A及pRK-IL-17F)稀釋至將得到50微克/小鼠/注射之最終劑量之濃度。

2)　在各小鼠之尾靜脈中靜脈內注射約1.6 ml含有DNA之生理鹽水溶液或林格氏溶液。

3)　歷時4至5秒(最多8秒)時間經團式靜脈內注射(尾靜脈)投與劑量以實現DNA之最大吸收。

圖14中展示結果。A)對八週齡之c57BL/6小鼠注射50 μg質體DNA(pRK-IL-17A)或單獨pRK載體。48小時後，自兩組收集血清且經由ELISA量測血清中之I1-17含量。B)使三組小鼠禁食隔夜(O/N)且在葡萄糖注射後進行腹膜內GTT，且將結果對葡萄糖注射後的時間繪圖。(*p>0.05)。

雖然已參考視為特定實施例之內容描述本發明，但應瞭解本發明不侷限於此等實施例。相反，本發明意欲涵蓋隨附申請專利範圍之精神及範疇內所包括的各種修改及等效物。

<110>　美商建南德克公司

<120>胰島素阻抗性疾病之治療

<130>　GNE-0344.PCT

<140>　099109698

<141>　2010-03-30

<150>　61/165,677

<151>　2009-04-01

<160>　6

<170>　PatentIn version 3.5

<210>　1

<211>　1859

<212>　DNA

<213>　智人

<400>　1

<210>　2

<211>　155

<212>　PRT

<213>　智人

<400>　2

<210>　3

<211>　535

<212>　DNA

<213>　智人

<400>　3

<210>　4

<211>　163

<212>　PRT

<213>　智人

<400>　4

<210>　5

<211>　2380

<212>　DNA

<213>　智人

<400>　5

<210>　6

<211>　705

<212>　PRT

<213>　智人

<400>　6

圖1展示天然序列人類IL-17A cDNA之核苷酸序列(SEQ ID NO:1)；

圖2展示衍生自圖1中所示之編碼序列SEQ ID NO:1的天然序列人類IL-17A之胺基酸序列(SEQ ID NO:2)；

圖3展示天然序列人類IL-17F cDNA之核苷酸序列(SEQ ID NO:3)；

圖4展示衍生自圖3中所示之編碼序列SEQ ID NO:3的天然序列人類IL-17F之胺基酸序列(SEQ ID NO:4)；

圖5展示編碼天然序列人類IL-17受體C(IL-17Rc)多肽之核苷酸序列(SEQ ID NO: 5)，其亦被稱為指定為「DNA164625-2890」之純系；

圖6展示天然序列人類IL-17Rc多肽(亦稱為IL-17RH2受體)之胺基酸序列(SEQ ID NO: 6)；圖7為使用IL-17Rc KO小鼠進行高脂肪飲食(HFD)模型研究之實驗設計。禁食隔夜後執行葡萄糖耐量測試(GTT)。腹膜內注射葡萄糖且每30分鐘使用葡萄糖計監測血糖含量；圖8A及8B為使用IL-17Rc KO小鼠進行高脂肪飲食(HFD)模型研究第8週之結果；圖9A為對照組及高脂肪飲食組中野生型及IL-17Rc KO小鼠之葡萄糖含量。圖9B為IL-17Rc KO小鼠對高脂肪飲食(HFD)誘導之胰島素阻抗性具有抗性；圖10為第10週時之曲線下面積；圖11A及11B為體重結果；圖12為抗IL-17 mAb及抗IL-17F mAb對胰島素阻抗性高脂肪飲食模型之影響；圖13為9週之給藥期後進行之葡萄糖耐量測試(GTT)，經由GTT評估之抗IL-17抗體治療對HFD模型中胰島素阻抗性狀態的影響；及圖14A及14B為經由注射質體DNA引起IL-17A異位表現之後進行的葡萄糖耐量測試(GTT)。經由GTT評估IL-17過度表現對胰島素阻抗性狀態的影響。

(無元件符號說明)

Claims (22)

1. 一種IL-17A及/或IL-17F拮抗劑的用途，其用於製造治療哺乳動物之胰島素阻抗性之藥劑。
2. 如請求項1之用途，其中該藥劑係以含有效量IL-17A及/或IL-17F拮抗劑投藥給有需要之哺乳動物。
3. 如請求項2之用途，其中該哺乳動物為人類且投藥為全身性。
4. 如請求項1之用途，其中該哺乳動物患有之疾病係選自由非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)、肥胖症、卵巢雄激素過多症及高血壓組成之群。
5. 如請求項4之用途，其中該疾病為NIDDM或肥胖症。
6. 如請求項1至5中任一項之用途，其中該IL-17A及/或IL-17F拮抗劑為抗體或其片段。
7. 如請求項6之用途，其中該抗體為選自由抗IL-17A抗體、抗IL-17F抗體、抗IL-17A/F抗體、抗IL-17Rc抗體及抗IL-17RA抗體組成之群的抗體。
8. 如請求項7之用途，其中該抗體為單株抗體。
9. 如請求項8之用途，其中該抗體為嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。
10. 如請求項9之用途，其中該抗體為雙特異性抗體、多特異性抗體或交叉反應性抗體。
11. 如請求項7之用途，其中該藥劑進一步包含有效量之胰島素阻抗性治療劑。
12. 如請求項11之用途，其中該胰島素阻抗性治療劑為胰島 素、IGF-1或磺醯脲。
13. 如請求項11之用途，其中該藥劑進一步包含有效量之能夠治療該胰島素阻抗性之另一藥劑。
14. 如請求項13之用途，其中該另一藥劑為Dickkopf-5(Dkk-5)。
15. 如請求項12之用途，其中該藥劑進一步包含有效量之能夠治療該胰島素阻抗性之另一藥劑。
16. 如請求項15之用途，其中該另一藥劑為Dickkopf-5(Dkk-5)。
17. 如請求項1至5中任一項之用途，其中該藥劑減少哺乳動物之胰島素阻抗性。
18. 如請求項1至5中任一項之用途，其中該藥劑降低哺乳動物之血糖含量。
19. 如請求項6之用途，其中該藥劑減少哺乳動物之胰島素阻抗性。
20. 如請求項6之用途，其中該藥劑降低哺乳動物之血糖含量。
21. 如請求項11之用途，其中該藥劑減少哺乳動物之胰島素阻抗性。
22. 如請求項11之用途，其中該藥劑降低哺乳動物之血糖含量。