TWI384218B

TWI384218B - 改良之生物晶片微流道分歧結構

Info

Publication number: TWI384218B
Application number: TW98102084A
Authority: TW
Inventors: I En Lin; Cheng Hao Hung
Original assignee: Univ Nat Formosa
Priority date: 2009-01-20
Filing date: 2009-01-20
Publication date: 2013-02-01
Also published as: TW201028686A

Description

改良之生物晶片微流道分歧結構

本發明係揭露一種改良之生物晶片微流道分歧結構，尤指一生物晶片微流道系統至少含有一主流道與兩個分流道，該二個分流道分別以相等角度之夾角與該主流道之同一端點連接，並且主流道與二個分流道之交會點係為一分歧結構，該分歧結構於每一流道間係為一圓弧形構造。

按，在傳統的生醫檢測技術中，檢驗蛋白質的方法很多，如SDS膠片電泳(SDS gel electrophoresis)、西方點漬法(Western bolt)、免疫沉降法(imunoprecipitation)以及酵素連結免疫吸附分析(enzyme-link immunosorbent assay，以下簡稱ELISA)等。其中，ELISA是一項非常普遍應用於免疫分析的技術，並且廣泛應用於偵測及定量化學及生物分子(特別為抗原，主要包含蛋白質及多肽鏈等)，因此ELISA對於臨床檢測、食物安全試驗以及環境監控等應用為越趨重要。

ELISA的原理是利用一抗原(antigen，就是蛋白質)與一抗體(antibody)結合的專一性，加上一酵素的呈色(或產生螢光反應)，來顯示一特定蛋白質是否存在。請參照如第一圖所示，係習知之ELISA步驟圖，ELISA的基本方法與步驟如下：首先，將依初級抗體(可專一性對抗一特定抗原之抗體)固定貼附在一檢測槽孔之壁面上(步驟A02)；接著加入一遮蔽劑(通常為蛋白質)(步驟A03)用來結合在未被該初級抗體結合之該槽孔壁面上，以減少該抗原或該抗體之非專一性結合；將一含有抗原之樣本或標準品接著加入檢測槽孔中(步驟A04)，並反應一足夠之時間(步驟A05)，使抗原與初級抗體產生免疫反應(即抗原抗體結合)；抗原與初級抗體產生足夠之反應後，加入一第一清洗劑洗掉多餘之樣本(步驟A06)；接著加入一結合有特定酵素之次級抗體(步驟A07)，次級抗體與抗原亦進行一足夠時間之反應(步驟A08)後，加入一第二清洗劑洗掉多餘之次級抗體(步驟A09)；最後加入一特定基質(步驟A10)，該基質可被次級抗體上之酵素催化反應而轉變成可偵測物質，例如含有特定顏色或螢光之物質，藉由偵測該物質之產量(步驟A11)即可判別樣本中含有抗原與否或樣本含有抗原之數量。

ELISA所使用的酵素包括horseradish peroxidase、alkaline phosphatase、lysozyme、and glucose 6-phosphate dehydrogenase等。這些酵素常利用glutaldehyde或dimaleimide等物質將其連接到抗原或抗體分子上，其特性是化性穩定，可溶於水，組織中含量低，如此方不致於干擾結果。ELISA常被用來偵測CEA(carcinoembryonic antigen)、steroid hormones、immunoglobulin、DNA、bacteria和virus的抗體等，其靈敏度高(ng/ml range)，操作簡便、試劑穩定、儀器價廉及不須要使用危險性高的放射線物質等優點，使其未來應用範圍日益增加。在ELISA的實驗中，常用的substrate的敏感性由低到高，分別為Colorimetric＜Fluorescent＜Chemiluminescent。而選擇substrate需要依據enzyme reporter system；以Alkaline phosphatase(AP)和horseradish peroxidase(HRP)為例，為常用於免疫反應的物質；而兩者酵素具有多種的substrate；且本身分子量小以及可以快速反應出訊號的產生，且所需的價格低系統穩定。目前常用於ELISA的substrate有QuantaBlu、Fluorogenic、Luminol，其所需的酵素分別為HRP、PNPP、Alkaline phosphatase(AP)。

ELISA在臨床診斷學上的應用包括：德國麻疹抗體之測定；CMV、HSV、measles、mumps、VZV等病毒抗體測定。HIV抗體測定(Rapid ELAVIA，SERODIA-HIV)及C型肝炎病毒抗體測定(C型肝炎病毒亦可用PCR來測定)。運用酵素連結免疫吸附分析法(ELISA)進行檢測之產品，將疑似感染之食物或是食物中毒病人之糞便檢體加以培養，再使用酵素免疫吸收法(ELISA)對菌種進行定性定量檢測，此產品適合衛生單位於檢驗實驗室進行檢測或是確認中毒菌種時使用。食品微生物測試系列，李斯特菌免疫檢驗試劑(Listeria monocytogenes ELISA)、腸炎弧菌免疫檢驗試劑(Vibrio parahaemolyticus ELISA)、仙人掌桿菌免疫檢驗試劑(Bacillus cereus ELISA)。植物病毒診斷試劑；黃化嵌紋、蕪菁嵌紋及胡瓜嵌紋等三種病毒診斷試劑，利用兔子製造出病毒抗血清，分離出來後製成病毒診斷試劑，由診斷試劑顏色顯現的深淺，斷定瓜果病毒強弱。另外細菌的檢驗，萊姆病、鉤端螺旋體感染症也可運用ELISA原理偵測；羊乳中牛乳摻假之快速檢測，自牛乳中分離純化酪蛋白作為抗原，用以免疫兔子及山羊免疫兔子經大量抽血並收集其血清後，以硫酸銨沈澱血清白質，並先後經DEAE-Sephacel陰離子交換管柱純化及連結有山羊酪蛋白之CNBr-activated Sepharose 4B親合性管柱純化出對牛乳酪蛋白具高專一性之抗體。此純化抗體經由間接型酵素連結吸附免疫分析法(indirect ELISA)檢測，結果顯示該抗體對牛乳酪蛋白之專一性及反應力，具有可偵測羊乳中2.5%牛乳摻入量之檢測能力，亦即此純化抗體可適用於indirect ELISA分析法之檢測方式，區分牛、羊乳酪蛋白。

然而，這樣的ELISA試驗步驟非常的冗長，進行一次試驗需要花費非常多的時間。另外，ELISA試驗通常使用96孔盤來進行，但是常會產生大量的誤差與實驗結果不穩定性，並且96孔盤、抗體以及藥劑非常的昂貴。因此，若能提升ELISA的檢測速度並減少檢驗成本，則對於生醫檢測方面會有非常大的進展。

接著提到生物微機電技術，生物微機電技術是二十世紀崛起的新興科技，是以先進國家，無不將生物技術列為國家重點科技，積極開發。民國七十一年政府頒佈『科學技術發展方案』，明訂生物技術為八大重點科技之一。十幾年來，已有相當的基礎，而目前在醫療檢測、農產食品檢驗和環境保護等方面，對不同種類檢體之各項生化檢驗工作需求越來越多。但基於儀器、技術、藥劑的消耗的問題，傳統的分析雖有不錯的靈敏度，但在檢測技術上還是有限制存在。如在醫學檢測方面，對於許多細微的生物資訊無法進行更深入的探討，因此必須要發展出新的偵測平台，以減少儀器、試劑消耗量的問題。

隨著基因圖譜定序之完成，接下來就是要瞭解數萬個基因代表的意義及相互關係，以及蛋白質組織功能研究與藥物研發等相關事項，因此以新的方法來增進分析基因或檢測之效率，是一項相當重要的研究。

研究顯示將檢測儀器設備微小化，可以增加其分析速度及簡化操作程序，因此利用微機電系統的製程技術，可以將傳統大型儀器微小化後製作在單一或多項晶片上，這樣不僅可以大幅降低檢測成本、增加檢測分析之速度，也大幅增加檢測之靈敏度。目前將發展的生物晶片，要將所有的檢測儀器微小化，此舉不僅能減少儀器、試劑消耗量的問題，可能加快檢測速度，將以往數天的檢測時間縮短到1～2小時，甚至在幾分鐘內就能完成。

另一方面，利用微機電系統之製程技術製作微元件，除了具有輕薄短小之優點外，其頻率響應高、空間解析度佳等特性，使其應用範圍更廣，且具有平行陣列化之潛能，使的在單一晶片上完成多項檢測及分析工作之目標得已達成。

目前已用來與生醫檢測技術結合之微機電系統包含：微機電系統(micro-Electro-Mechanical-Systems，MEMS)、光學微機電系統(micro-Optical-Electro-Mechanical-Systems，MOEME)及生物晶片系統(Bio-micro-Electro-Mechanical-Systems，BioMEMS)等。微機電系統主要利用半導體製程技術，整合電子及機械功能製作而成的微型裝置；其定義為一個智慧型微小化的系統，包含感測、處理或致動的功能，包含兩個或多個電子、機械、光學、化學、生物、磁學或其他性質整合到一個單一或多晶片上；光學微機電系統光學微機電系統而言，最常見的元件就是微面鏡，利用驅動微面鏡使光束偏折，達到調制光束之目的。一般的微面鏡都是以設計具彈性、易和微電子電路整合的面型微加工技術來製造，但研究顯示，薄膜沉積與生俱來的特性-殘餘應力，會使微面鏡彎曲變形。

生物晶片系統基因微陣列(Microarray)是發展及應用較為成熟的生物晶片技術之一，此晶片技術已廣泛的應用於生物醫學領域，如癌症、藥理、毒理學、感染、細胞分化、發育及生殖醫學等，亦將直接或間接的應用於疾病之診斷、分類、預後評估，並改善疾病之治療。植物界的基因組計畫雖已陸續於西元2000年完成模式植物***芥(Arabidopsis thaliana)基因組，並於2002年完成經濟作物水稻(Oryza sativa L. ssp. Indica)基因組計畫，然利用生物晶片技術於農業上的研究及應用仍相對的缺乏，在研究規模及探討的基因數目上，亦較生物醫學領域來得小且少。

生物晶片的應用範圍廣泛，可應用於細胞生化學的研究及疾病診斷上等等(例如癌症腫瘤學上的臨床診斷或者在各種不同病毒感染疾病的診斷，像是AIDS和腸病毒的診斷)，藉以得到快速又正確的診斷，以節省大量的人力及物力，並且可以搶在第一個時間點上救病人，以期做到早期發現，及早治療的功效。除了DNA外，蛋白質和一些細胞中的藥品之接受器(Receptors)也可放在晶片上，所以這些晶片統稱生物晶片。

生物晶片至少含有以下十種不同用途：

(1)基因表現的藍圖(Gene expression profiling)：部分的疾病通常會牽涉到多數基因的變化，而為了要了解在病人和正常人體中的蛋白合成的差異，就必須要觀察不同時間點上這些多數基因的表現。而經由這許多時間點上基因表現的形式，研究人員可以去了解我們複雜的人體如何去產生各種不同類型的蛋白。這種用途的生物晶片就是類似電流的示波器之功用。為了完成這種基因表現的藍圖，研究人員必需準備許多新鮮的細胞檢體，所以這類型的研究就必需用到非常高密度的DNA晶片，類似Affymetrix公司的Gene Chip系統。

(2)毒理學上的分析(Toxicology Analysis)：DNA晶片也可以用來檢測有機毒物對某些特定基因的表現，例如那些和肝臟毒害有關的基因。Affymetrix公司的發言人也聲明這方面應用的晶片已經成為他們公司的新重點產品。他們已經集結了許多專家的意見去收集那些最有可能代表某些人體器官毒素的基因，以期能快速分析一些有毒物質對人體所產生的影響。

(3)基因的定序(Gene Sequencing)：晶片有一天可以用來做大量的基因定序和發現的工作上。Hyseq公司是第一個把DNA晶片應用在基因定序上的公司。原理是把所有可能的核醣核酸排列放在晶片上，然後將未知的基因放在晶片上，應該只有順序完全相同的探針可以與之互補，因而得知未知基因的定序。但是最大的問題是可定出順序的長度。依常理推斷，定出一個mer需要四種組合(A，T，C，G)，而二個mer是16種組合，依此類推要定出五個mer則需要45(即1024)種組合之探針。而Hyseq公司的策略是使用兩步策略，一般長的未知的DNA片段先放在第一片DNA晶片上，而先找出五個mer的互補，然後將此晶片暴露在第二組的各種不同的五個mer的溶液中，將會和其他不曾互補的DNA片段產生互補，然後應用電腦程式輔助可將一段段10mer的片段組成一長串的DNA定序。

(4)單一核醣核酸的多形性的檢定(SNP Identification)：要找到個體的基因型態(genotype)以期知道個體的多形性(polymorphisms)是許多晶片公司的目標。但是為了要做這類型的工作，第一步就是需要做大量的基因定序的工作。所以利用Hyseq公司發展的DNA定序晶片，正在建立自己的基因多形性(genetic polymorphisms)的資料庫。此公司並和加州大學舊金山分校合作將目標鎖定在心臟血管疾病的個體上。他們期望能於一、二年之內將這種測定單一核醣核酸的多形性檢定用的晶片推向市場。

(5)法醫學上的應用(Forensics)：由於DNA晶片的檢定快速，準確且易於攜帶，不久的將來或許可以成為法醫現場辦案的工具之一。

(6)免疫反應分析(Immunoassays)：有些晶片公司發展的技術是可以將DNA以外的東西放在晶片上，例如：利用抗原、抗體之間的緊密結合，以期用來做一些免疫反應上的分析。目前已知，前述的Illumina公司和Nanogen公司均對此項產品的應用，產生高度的興趣。

(7)蛋白質晶片(Protein chip)：Ciphergen公司正在用他們研發出來的蛋白質晶片去實行範圍廣大的蛋白生物學上的研究。

(8)生物武器的偵測(Combat Biowarfare)：過去這幾年，美國國防部已經提供上百萬元的經費給一些生技公司，希望能找出一些對付生物武器的工具。但首先必備的是如何偵測和檢定它。所以，Nanogen公司已經收到國防部給的超過七百萬美金經費，去研發一種可攜式系統(例如：DNA晶片)，以期在戰場上可以快速、準確的檢定有害的生物武器。

(9)藥物的篩選(Drug screening)：Illumina公司相信藥品和它的接受器之間的結合也可以被應用上晶片，就類似DNA和互補探針之間的緊密結合一般。這種晶片的推出後，以期可以達到節省藥品篩選所耗費許多的時間和經費。

(10)電話硬體上的應用(hard drives and microprocessors)：Nanogen公司的子公司Nanotronics公司已經擁有這個專利權，可將這種DNA晶片技術應用到電腦上。由於利用DNA的自我組合性(Self-Assembles)，就是類似電腦程式的語言。所以合成的片段DNA可以結合在一些不是生物的物質上，例如一些光源或是一些微電子的零件上，以期利用DNA的這種特性，將這些物質帶到特定的位置上，而達成目標。

在生物晶片快速的進步且廣泛的使用之下，先前提到ELISA的缺點便可迎刃而解。目前已經有多種以生物晶片為基礎的ELISA檢測方法被發展出來，其原理是在生物晶片上設有微流道系統而達成ELISA的檢驗步驟，利用生物晶片微流道系統來進行ELISA檢驗可大大縮短每一次的檢測時間。

其中，BioLOC公司更將微流道系統與離心流體技術結合在一起，發展出一套檢驗平台及方法，稱之為光碟式ELISA(Compact-Disk Based ELISA，以下簡稱CD-ELISA)。此平台利用一CD形式的基板做為檢驗之工具，並在基板上精微製造出微流道系統、儲存槽以及閥門。利用CD-ELISA平台可平行且同時進行多組試驗，並擁有比傳統ELISA更高的精確度，目前CD-ELISA已可同時再一個CD基板上進行24組樣本的檢測。此平台結了數種微流道功能，包含幫浦及毛細管閥門控制，並將不同儲存槽中之抗體、藥劑及緩衝液經由微流道系統而與樣本混合或產生反應。藉由對於基板施以一離心力，此離心力可克服各閥門本身擁有之毛細管阻力，使儲存槽中的液體穿越閥門進入微流道系統中。各液體進入微流道系統之順序可依照ELISA傳統步驟做安排，當各液體依序進入微流道系統中與樣本作用後，便可達成ELISA的各項步驟。

雖然CD-ELISA平台可以較少的成本達成快速的檢測，但目前仍有一些問題有待克服與解決。例如傳統的ELISA檢測通常對於一個樣本會進行2～3次的重複試驗，CD-ELISA雖然可增設每個樣本的反應檢測區來達到重複試驗之目的，但是樣本或是其他液體在分流進入複數個檢測區前必須先流經一分岔點，由於流道本身也有表面張力，造成流體在分岔點時會因為某一邊先達到壓力點而先流入這邊的檢測區，使得另一邊之流道無法突破壓力而產生流體分佈不均，甚至是只有一邊有試劑流過。針對這樣的瓶頸，必須研發出解決之道，才得以使CD-ELISA檢測技術的精確度及實用度更加的提升。

故，有鑑於前述之問題與缺失，發明人以多年之經驗累積，並發揮想像力與創造力，在不斷試作與修改之後，始有本發明之一種改良之生物晶片微流道分歧結構。

本發明之第一目的係提供一種改良之生物晶片微流道分歧結構，該微流道系統至少含有一主流道及二個分流道，該二個分流道分別以相等角度之夾角與該主流道相連接，係形成一以主流道為中心軸之左右對稱結構，二個分流道與主流道間之夾角相等可使液體進入分流道之流量相等，以克服習知CD-ELISA在分歧結構容易出現流量分布不均之情形。

本發明之第二目的係提供一種改良之生物晶片微流道分歧結構，該微流道系統至少含有一主流道及二個分流道，該主流道與該二個分流道之間係為一分歧結構，該分歧結構係為一圓弧形構造，此種圓弧形構造可減緩液體流經分歧結構時對於流道壁面所產生之衝擊力，以亦可使液體進入分流道之流量相等，以克服習知CD-ELISA在分歧結構容易出現流量分布不均之情形。

本發明之第三目的係提供一種改良之生物晶片微流道分歧結構，該微流道系統至少含有一主流道、二個分流道、一樣本節點區及二個檢測區，該樣本節點區可用以注入及儲存樣本，經由施加離心力後樣本可通過閥門而流經該主流道、該二個分流道，並進入該二個檢測區，以進行二重覆之檢測。

本發明之第四目的係提供一種改良之生物晶片微流道分歧結構，該微流道系統至少含有一主流道、二個分流道、一樣本節點區、一第一清洗劑節點區、一抗體節點區、一第二清洗劑節點區、一基質節點區、二個檢測區及至少一廢液儲存區，其中每一節點區可分別注入一樣本、一第一清洗劑、一抗體、一第二清洗劑及一基質，並分別儲存於各節點區之儲存槽中，經由施加不同大小之離心力後，各液體可依序克服各節點閥門之不同阻力而進入該主流道及該二個分流道，並於該二個檢測區中進行ELISA的檢測步驟，反應後之各液體最後流入廢液儲存區中存放。

本發明之第五目的係提供一種改良之生物晶片微流道分歧結構，該微流道系統至少含有一主流道、二個初級分流道、四個次級分流道、二個樣本節點區、一第一清洗劑節點區、一抗體節點區、一第二清洗劑節點區、一基質節點區、二個檢測區及至少一廢液儲存區，其中，該二個樣本節點區可注入相同之樣本以進行四重覆之試驗，亦可分別注入不同樣本以同時進行二個樣本之二重複試驗，其他節點區可分別注入一第一清洗劑、一抗體、一第二清洗劑及一基質，並分別儲存於各節點區之儲存槽中，經由施加不同大小之離心力後，各液體可依序克服各節點閥門之不同阻力而進入該主流道、該二個初級分流道及該四個次級分流道，並於該四個檢測區中進行ELISA的檢測步驟，反應後之各液體最後流入廢液儲存區中存放。

本發明係提供一種改良之生物晶片微流道分歧結構，其係於一基板上成型一系列之檢測槽室，包含有：一主流道；二個分流道，該二個分流道分別以相等角度之夾角與該主流道相連接，係形成一以主流道為中心軸之左右對稱結構，主流道與二個分流道之間係有一分結構，該分歧結構於二個分流道之間為一圓弧形構造；一樣本節點區，該樣本節點區連結於主流道結合分歧結構端之相反端點，樣本節點區至少包含一樣本儲存槽及一樣本節點閥門，該樣本節點閥門設置於樣本儲存槽與主流道之間，用以阻隔樣本隨意流入主流道中；及二個檢測區，該二個檢測區分別連結於二個分流道結合分歧結構端之之相反端點；其中，可於該微流道系統之樣本儲存槽中施加一朝向樣本節點閥門之方向之離心力，當該離心力到達一特定之閥門阻力臨界值時，樣本儲存槽中之樣本便會突破樣本節點閥門之閥門阻力而流入主流道中，並經由分歧結構平均分流進入二個分流道中，樣本最後進入二個檢測區中進行檢測。

為達前述之目的與功效，發明人將生物晶片微流道系統與ELISA技術結合，並進行微流道系統結構之改良，始得到本發明之改良之生物晶片微流道分歧結構。茲分別以本發明一第一較佳實施例之改良之生物晶片微流道系統結構、一第二較佳實施例之改良之生物晶片微流道系統結構及一第三較佳實施例之改良之生物晶片微流道系統結構，對本發明之系統結構以及實施原理作詳細之介紹。

首先請參照如第二圖所示，係本發明之該第一較佳實施例之改良之生物晶片微流道系統結構圖，其係於一基板10上成型一系列之檢測槽室，包含有：一主流道100；二個分流道110a、110b，該二個分流道110a、110b分別以相等角度之夾角106a、106b與該主流道100相連接，係形成一以主流道100為中心軸之左右對稱結構，主流道100與二個分流道110a、110b之間為一分歧結構105，該分歧結構105於二個分流道110之間為一圓弧形構造；一樣本節點區120，該樣本節點區120連結於主流道100結合分歧結構105端之相反端點，樣本節點區120至少包含一樣本注入孔121、一樣本儲存槽122及一樣本節點閥門123，該樣本注入孔121係可用以注入一特定樣本，該注入之樣本經由樣本注入孔121可流入該樣本儲存槽122中備用，該樣本節點閥門123設置於樣本儲存槽122與主流道100之間，用以阻隔樣本隨意流入主流道100中；及二個檢測區130a、130b，該二個檢測區130a、130b分別連結於二個分流道110a、110b結合分歧結構105端之相反端點；其中，可於該微流道系統之樣本儲存槽122中施加一朝向樣本節點閥門123之方向之離心力，當該離心力到達一特定之閥門阻力臨界值時，樣本儲存槽122中之樣本便會突破樣本節點閥門123之閥門阻力而流入主流道100中，並經由分歧結構105平均分流進入二個分流道110a、110b中，樣本最後進入二個檢測區130a、130b中進行檢測。

接著請參照如第三圖所示，係本發明之該第二較佳實施例之改良之生物晶片微流道系統結構圖，其係於一圓形基板20上成型一系列之檢測槽室，包含有：一主流道200，該主流道200係徑向設置於該圓形基板20上，並且主流道200設置之位置介於圓形基板20之圓心21與圓周22之間；二個分流道210a、210b，該二個分流道210a、210b分別以相等角度之夾角206a、206b與該主流道200靠近圓形基板20圓周22之端點連接，係形成一以主流道200為中心軸之左右對稱結構，主流道200與二個分流道210a、210b之間有一分歧結構205，該分歧結構205於二個分流道210a、210b之間為一圓弧形構造；一樣本節點區220，該樣本節點區220至少包含一樣本注入孔221、一樣本儲存槽222、一樣本節點閥門223及一樣本節點匯流道224，該樣本注入孔221係可用以注入一特定樣本，該注入之樣本經由樣本注入孔221可流入該樣本儲存槽222中備用，該樣本節點閥門223設置於樣本儲存槽222與該樣本節點匯流道224之間，用以阻隔樣本隨意流入樣本節點匯流道224中，樣本節點匯流道224與主流道200相連接；一第一清洗劑節點區230，該第一清洗劑節點區230至少包含一第一清洗劑注入孔231、一第一清洗劑儲存槽232、一第一清洗劑節點閥門233及一第一清洗劑節點匯流道234，該第一清洗劑注入孔231係可用以注入一特定第一清洗劑，該注入之第一清洗劑經由第一清洗劑注入孔231可流入該第一清洗劑儲存槽232中備用，該第一清洗劑節點閥門233設置於第一清洗劑儲存槽232與該第一清洗劑節點匯流道234之間，用以阻隔第一清洗劑隨意流入第一清洗劑節點匯流道234中，第一清洗劑節點匯流道234與主流道200相連接；一抗體節點區240，該抗體節點區240至少包含一抗體注入孔241、一抗體儲存槽242、一抗體節點閥門243及一抗體節點匯流道244，該抗體注入孔241係可用以注入一特定抗體，該注入之抗體經由抗體注入孔241可流入該抗體儲存槽242中備用，該抗體節點閥門243設置於抗體儲存槽242與該抗體節點匯流道244之間，用以阻隔抗體隨意流入抗體節點匯流道244中，抗體節點匯流道244與主流道200相連接；一第二清洗劑節點區250，該第二清洗劑節點區250至少包含一第二清洗劑注入孔251、一第二清洗劑儲存槽252、一第二清洗劑節點閥門253及一第二清洗劑節點匯流道254，該第二清洗劑注入孔251係可用以注入一特定第二清洗劑，該注入之第二清洗劑經由第二清洗劑注入孔251可流入該第二清洗劑儲存槽252中備用，該第二清洗劑節點閥門253設置於第二清洗劑儲存槽252與該第二清洗劑節點匯流道254之間，用以阻隔第二清洗劑隨意流入第二清洗劑節點匯流道254中，第二清洗劑節點匯流道254與主流道200相連接；一基質節點區260，該基質節點區260至少包含一基質注入孔261、一基質儲存槽262、一基質節點閥門263及一基質節點匯流道264，該基質注入孔261係可用以注入一特定基質，該注入之基質經由基質注入孔261可流入該基質儲存槽262中備用，該基質節點閥門263設置於基質儲存槽262與該基質節點匯流道264之間，用以阻隔基質隨意流入基質節點匯流道264中，基質節點匯流道264與主流道200相連接；二個檢測區270a、270b，該二個檢測區270a、270b分別連結於二個分流道210a、210b結合分歧結構205端之相反端點，二個檢測區270a、270b更分別設有一檢測區匯流道271a、271b；及至少一廢液儲存區280，二檢測區270a、270b分別藉由該檢測區匯流道271a、271b與該廢液儲存區280相連接；其中，可於該圓形基板20上施加一由圓心21往圓周22方向之離心力，由於樣本節點閥門223、第一清洗劑節點閥門233、抗體節點閥門243、第二清洗劑節點閥門253及基質節點閥門263分別含有不同的閥門阻力，因此可藉由調整離心力之大小來控制樣本、第一清洗劑、抗體、第二清洗劑及基質突破閥門以進入主流道200之順序，液體進入主流道200後更經由分歧結構205平均分流進入二個分流道210a、210b中，並進入二個檢測區270a、270b中進行ELISA檢測，反應完之液體最後流入廢液儲存區280中存放。

在該第二較佳實施例之改良之生物晶片微流道系統結構圖中，樣本節點區220、第一清洗劑節點區230、抗體節點區240、第二清洗劑節點區250及基質節點區260與主流道200連接之方式並不以第二圖限定之，其上下游之關係可隨意排列組合，只要各節點閥門間之閥門阻力有階層關係，使各節點之液體依照ELISA檢測步驟之順序進入檢測區270即可。

最後，請參照如第四圖所示，係本發明之該第三較佳實施例之改良之生物晶片微流道系統結構圖，其係於一圓形基板30上成型一系列之檢測槽室，包含有：一主流道300，該主流道300係徑向設置於該圓形基板30上，並且主流道300設置之位置介於圓形基板30之圓心31與圓周32之間；二個初級分流道310a、310b，該二個初級分流道310a、310b分別以相等角度之第一夾角306a、306b與該主流道300靠近圓形基板30圓周32之端點連接，係形成一以主流道300為中心軸之左右對稱結構，主流道300與二個初級分流道310a、310b之間有一第一分歧結構305，該第一分歧結構305於二個分流道310a、310b之間為一圓弧形構造；四個次級分流道320a、320b、320c、320d，該四個次級分流道320a、320b、320c、320d係以兩兩一組分別連結於二個初級分流道310a、310b結合分歧結構305端之相反端點，詳細之連結情形為：次級分流道320a、320b以相等角度之第二夾角316a、316b與初級分流道310a連接，係形成一以初級分流道310a為中心軸之左右對稱結構，初級分流道310a與次級分流道320a、320b之間有一第二分歧結構315a，該第二分歧結構315a於二個次級分流道320a、320b之間為一圓弧形構造；而次級分流道320c、320d以相等角度之第二夾角316c、316d與初級分流道310b連接，係形成一以初級分流道310b為中心軸之左右對稱結構，初級分流道310b與次級分流道320c、320d之間有一第二分歧結構315b，該第二分歧結構315b於二個次級分流道320c、320d之間為一圓弧形構造；二個樣本節點區330a、330b，該二個樣本節點區330a、330b分別至少包含一樣本注入孔331a、331b、一樣本儲存槽332a、332b、一樣本節點閥門333a、333b及一樣本節點匯流道334a、334b，該樣本注入孔331a、331b係可用以注入一特定樣本，該注入之樣本經由樣本注入孔331a、331b流入該樣本儲存槽332a、332b中備用，該樣本節點閥門333a、333b設置於樣本儲存槽332a、332b與該樣本節點匯流道334a、334b之間，用以阻隔樣本隨意流入樣本節點匯流道334a、334b中，二個樣本節點區330a、330b之樣本節點匯流道334a、334b分別與二個初級分流道310a、310b相連接，其中，該二個樣本節點區330a、330b可注入相同之一特定樣本，以進行該特定樣本之多次重複檢測，亦可分別注入不同之樣本，以同時進行二個不同樣本之檢測；一第一清洗劑節點區340，該第一清洗劑節點區340至少包含一第一清洗劑注入孔341、一第一清洗劑儲存槽342、一第一清洗劑節點閥門343及一第一清洗劑節點匯流道344，該第一清洗劑注入孔341係可用以注入一特定第一清洗劑，該注入之第一清洗劑經由第一清洗劑注入孔341流入該第一清洗劑儲存槽342中備用，該第一清洗劑節點閥門343設置於第一清洗劑儲存槽342與該第一清洗劑節點匯流道344之間，用以阻隔第一清洗劑隨意流入第一清洗劑節點匯流道344中，第一清洗劑節點匯流道344與主流道300相連接；一抗體節點區350，該抗體節點區350至少包含一抗體注入孔351、一抗體儲存槽352、一抗體節點閥門353及一抗體節點匯流道354，該抗體注入孔351係可用以注入一特定抗體，該注入之抗體經由抗體注入孔351流入該抗體儲存槽352中備用，該抗體節點閥門353設置於抗體儲存槽352與該抗體節點匯流道354之間，用以阻隔抗體隨意流入抗體節點匯流道354中，抗體節點匯流道354與主流道300相連接；一第二清洗劑節點區360，該第二清洗劑節點區360至少包含一第二清洗劑注入孔361、一第二清洗劑儲存槽362、一第二清洗劑節點閥門363及一第二清洗劑節點匯流道364，該第二清洗劑注入孔361係可用以注入一特定第二清洗劑，該注入之第二清洗劑經由第二清洗劑注入孔361流入該第二清洗劑儲存槽362中備用，該第二清洗劑節點閥門363設置於第二清洗劑儲存槽362與該第二清洗劑節點匯流道364之間，用以阻隔第二清洗劑隨意流入第二清洗劑節點匯流道364中，第二清洗劑節點匯流道364與主流道300相連接；一基質節點區370，該基質節點區370至少包含一基質注入孔371、一基質儲存槽372、一基質節點閥門373及一基質節點匯流道374，該基質注入孔371係可用以注入一特定基質，該注入之基質經由基質注入孔371流入該基質儲存槽372中備用，該基質節點閥門373設置於基質儲存槽372與該基質節點匯流道374之間，用以阻隔基質隨意流入基質節點匯流道374中，基質節點匯流道374與主流道300相連接；四個檢測區380a、380b、380c、380d，該四個檢測區380a、380b、380c、380d分別連結於四個次級分流道320a、320b、320c、320d結合初級分流道310a、310b之相反端點，四個檢測區380a、380b、380c、380d更分別設有一檢測區匯流道381a、381b、381c、381d；及至少一廢液儲存區390，四個檢測區380a、380b、380c、380d分別藉由該檢測區匯流道381a、381b、381c、381d與該廢液儲存區390相連接；其中，可於該圓形基板30上施加一由圓心31往圓周32方向之離心力，由於二個樣本節點閥門333、第一清洗劑節點閥門343、抗體節點閥門353、第二清洗劑節點閥門363及基質節點閥門373分別含有不同的閥門阻力，因此可藉由調整離心力之大小來控制二個樣本、第一清洗劑、抗體、第二清洗劑及基質突破閥門以進入主流道300之順序，液體進入主流道300後更經由第一分歧結構305及第二分歧結構315平均分流進入二個初級分流道310a、310b及四個次級分流道320a、320b、320c、320d中，並進入四個檢測區380a、380b、380c、380d中進行ELISA檢測，反應完之液體最後流入廢液儲存區390中存放。

在該第三較佳實施例之改良之生物晶片微流道系統結構圖中，第一清洗劑節點區340、抗體節點區350、第二清洗劑節點區360及基質節點區370與主流道300連接之方式並不以第三圖限定之，其上下游之關係可隨意排列組合，只要各節點閥門間之閥門阻力有階層關係，使各節點之液體依照ELISA檢測步驟之順序進入檢測區380即可。

除了本發明之改良之微流道分歧結構以外，由於微流道之粗糙度可能會影響流體經由轉速產生之離心力與流道間的摩擦力關係，而半圓分歧結構的半徑亦可能對流體之分流產生影響，因此發明人針對微流道之粗糙度以及半圓分歧結構之半徑做量測，看看這些因素是否會影響流體在微流道中之分流。首先看到粗糙度之量測，經由實驗得知，在一流道中，若流道各點表面之粗糙程度接近，由於流體之流速穩定，流體經由分歧結構之分流比例較為相近，非常接近1：1之比例；若一流道各點之粗糙程度差異較大，則流體之流速忽快忽慢而不穩定，因此流體經由分歧結構之分流比例差異較大，可能會到達1：1.4以上之現象。因此流道之粗糙程度越穩定，對流體之分流比例越接近。

接著進行半圓分歧結構之半徑對流體分流之影響，利用兩個粗糙程度非常接近之分歧結構，並且轉速、流道寬度以及其他參數都相同的條件之下，比較半圓分歧結構之半徑為0.3mm及0.4mm對於流體分流之影響。實驗結果顯示，半圓分歧結構半徑為0.3mm對於流體分流之比例數據比半徑為0.4mm之數據來的好，因此可知，半圓分歧結構之半徑為0.3mm時可達到較佳之分流比例。

以上所述之實施例僅係說明本發明之技術思想與特點，其目的在使熟習此項技藝之人士能夠瞭解本發明之內容並據以實施，當不能以之限定本發明之專利範圍，若依本發明所揭露之精神作均等變化或修飾，仍應涵蓋在本發明之專利範圍內。

發明人經過不斷的構想與修改，最終得到本發明之設計，並且擁有上述之諸多優點，實為優良之發明，應符合申請發明專利之要件，特提出申請，盼　貴審查委員能早日賜與發明專利，以保障發明人之權益。

A01．．．步驟開始

A02．．．將初級抗體(可專一性對抗特定抗原之抗體)固定貼附在檢測槽孔之壁面上

A03．．．加入遮蔽劑(通常為蛋白質)

A04．．．將含有抗原之樣本或標準品加入檢測槽孔中

A05．．．反應一足夠之時間

A06．．．加入一第一清洗劑洗掉多餘之樣本

A07．．．加入一結合有特定酵素之次級抗體

A08．．．次級抗體與抗原進行一足夠時間之反應

A09．．．加入一第二清洗劑洗掉多餘之次級抗體

A10．．．加入一特定基質，該基質可被次級抗體上之酵素催化反應而轉變成可偵測物質，例如含有特定顏色或螢光之物質

A11．．．偵測該物質之產量即可判別樣本中含有抗原與否或樣本含有抗原之數量

A12．．．步驟結束

10．．．基板

100．．．主流道

105．．．分歧結構

106a、106b．．．夾角

110a、110b．．．分流道

120．．．樣本節點區

121．．．樣本注入孔

122．．．樣本儲存槽

123．．．樣本節點閥門

130a、130b．．．檢測區

20．．．圓形基板

200．．．主流道

205．．．分歧結構

206a、206b．．．夾角

21．．．圓心

210a、210b．．．分流道

22．．．圓周

220．．．樣本節點區

221．．．樣本注入孔

222．．．樣本儲存槽

223．．．樣本節點閥門

224．．．樣本節點匯流道

230．．．第一清洗劑節點區

231．．．第一清洗劑注入孔

232．．．第一清洗劑儲存槽

233．．．第一清洗劑節點閥門

234．．．第一清洗劑節點匯流道

240．．．抗體節點區

241．．．抗體注入孔

242．．．抗體儲存槽

243．．．抗體節點閥門

244．．．抗體節點匯流道

250．．．第二清洗劑節點區

251．．．第二清洗劑注入孔

252．．．第二清洗劑儲存槽

253．．．第二清洗劑節點閥門

254．．．第二清洗劑節點匯流道

260．．．基質節點區

261．．．基質注入孔

262．．．基質儲存槽

263．．．基質節點閥門

264．．．基質節點匯流道

270a、270b．．．檢測區

271a、271b．．．檢測區匯流道

280．．．廢液儲存區

30．．．圓形基板

300．．．主流道

305．．．第一分歧結構

306a、306b．．．第一夾角

31．．．圓心

310a、310b．．．初級分流道

315a、315b．．．第二分歧結構

316a、316b、316c、316d．．．第二夾角

32．．．圓周

320a、320b、320c、320d．．．次級分流道

330a、330b．．．樣本節點區

331a、331b．．．樣本注入孔

332a、332b．．．樣本儲存槽

333a、333b．．．樣本節點閥門

334a、334b．．．樣本節點匯流道

340．．．第一清洗劑節點區

341．．．第一清洗劑注入孔

342．．．第一清洗劑儲存槽

343．．．第一清洗劑節點閥門

344．．．第一清洗劑節點匯流道

350．．．抗體節點區

351．．．抗體注入孔

352．．．抗體儲存槽

353．．．抗體節點閥門

354．．．抗體節點匯流道

360．．．第二清洗劑節點區

361．．．第二清洗劑注入孔

362．．．第二清洗劑儲存槽

363．．．第二清洗劑節點閥門

364．．．第二清洗劑節點匯流道

370．．．基質節點區

371．．．基質注入孔

372．．．基質儲存槽

373．．．基質節點閥門

374．．．基質節點匯流道

380a、380b、380c、380d．．．檢測區

381a、381b、381c、381d．．．檢測區匯流道

390．．．廢液儲存區

第一圖　係習知之ELISA步驟圖；

第二圖　係本發明之一第一較佳實施例之改良之生物晶片微流道系統結構圖；

第三圖　係本發明之一第二較佳實施例之改良之生物晶片微流道系統結構圖；

第四圖　係本發明之一第三較佳實施例之改良之生物晶片微流道系統結構圖；

10．．．基板

100．．．主流道

105．．．分歧結構

106a、106b．．．夾角

110a、110b．．．分流道

120．．．樣本節點區

121．．．樣本儲存槽

122．．．樣本節點閥門

123．．．樣本注入孔

130a、130b．．．檢測區

Claims

一種改良之生物晶片微流道分歧結構，其係於一基板上成型一系列之檢測槽室，包含有：一主流道；二個分流道，該二個分流道分別以相等角度之夾角與該主流道相連接，係形成一以主流道為中心軸之左右對稱結構，主流道與二個分流道之間有一分歧結構，該分歧結構於二個分流道之間為一圓弧形構造；一樣本節點區，該樣本節點區連結於主流道結合分歧結構端之相反端點，樣本節點區至少包含一樣本儲存槽及一樣本節點閥門，該樣本節點閥門設置於樣本儲存槽與主流道之間，用以阻隔樣本隨意流入主流道中；及二個檢測區，該二個檢測區分別連結於二個分流道結合分歧結構端之相反端點；其中，可於該微流道系統之樣本儲存槽中施加一朝向樣本節點閥門之方向之離心力，當該離心力到達一特定之閥門阻力臨界值時，樣本儲存槽中之樣本便會突破樣本節點閥門之閥門阻力而流入主流道中，並經由分歧結構平均分流進入二個分流道中，樣本最後進入二個檢測區中進行檢測。
如申請專利範圍第1項所述之改良之生物晶片微流道分歧結構，其中，該樣本節點區更包含一樣本注入孔，該樣本注入孔係可用以注入一特定樣本，該注入之樣本經由樣本注入孔可流入該樣本儲存槽中備用。
一種改良之生物晶片微流道分歧結構，其係於一圓形基板上成型一系列之檢測槽室，包含有：一主流道，該主流道係徑向設置於該圓形基板上，並且主流道設置之位置介於圓形基板之圓心與圓周之間；二個分流道，該二個分流道分別以相等角度之夾角與該主流道靠近圓形基板圓周之端點連接，係形成一以主流道為中心軸之左右對稱結構，主流道與二個分流道之間為一分歧結構，該分歧結構於二個分流道之間為一圓弧形構造；一樣本節點區，該樣本節點區至少包含一樣本儲存槽、一樣本節點閥門及一樣本節點匯流道，該樣本節點閥門設置於樣本儲存槽與該樣本節點匯流道之間，用以阻隔樣本隨意流入樣本節點匯流道中，樣本節點匯流道與主流道相連接；一第一清洗劑節點區，該第一清洗劑節點區至少包含一第一清洗劑儲存槽、一第一清洗劑節點閥門及一第一清洗劑節點匯流道，該第一清洗劑節點閥門設置於第一清洗劑儲存槽與該第一清洗劑節點匯流道之間，用以阻隔第一清洗劑隨意流入第一清洗劑節點匯流道中，第一清洗劑節點匯流道與主流道相連接；一抗體節點區，該抗體節點區至少包含一抗體儲存槽、一抗體節點閥門及一抗體節點匯流道，該抗體節點閥門設置於抗體儲存槽與該抗體節點匯流道之間，用以阻隔抗體隨意流入抗體節點匯流道中，抗體節點匯流道與主流道相連接；一第二清洗劑節點區，該第二清洗劑節點區至少包含一第二清洗劑儲存槽、一第二清洗劑節點閥門及一第二清洗劑節點匯流道，該第二清洗劑節點閥門設置於第二清洗劑儲存槽與該第二清洗劑節點匯流道之間，用以阻隔第二清洗劑隨意流入第二清洗劑節點匯流道中，第二清洗劑節點匯流道與主流道相連接；一基質節點區，該基質節點區至少包含一基質儲存槽、一基質節點閥門及一基質節點匯流道，該基質節點閥門設置於基質儲存槽與該基質節點匯流道之間，用以阻隔基質隨意流入基質節點匯流道中，基質節點匯流道與主流道相連接；二個檢測區，該二個檢測區分別連結於二個分流道結合主流道之相反端點，二個檢測區更分別設有一檢測區匯流道；及至少一廢液儲存區，二檢測區分別藉由該檢測區匯流道與該廢液儲存區相連接；其中，可於該圓形基板上施加一由圓心往圓周方向之離心力，由於樣本節點閥門、第一清洗劑節點閥門、抗體節點閥門、第二清洗劑節點閥門及基質節點閥門分別含有不同的閥門阻力，因此可藉由調整離心力之大小來控制樣本、第一清洗劑、抗體、第二清洗劑及基質突破閥門以進入主流道之順序，液體進入主流道後更經由分歧結構平均分流進入二個分流道中，並進入二個檢測區中進行檢測，液體最後流入廢液儲存區中存放。
如申請專利範圍第3項所述之改良之生物晶片微流道分歧結構，其中，該樣本節點區更包含一樣本注入孔，該樣本注入孔係可用以注入一特定樣本，該注入之樣本經由樣本注入孔可流入該樣本儲存槽中備用。
如申請專利範圍第3項所述之改良之生物晶片微流道分歧結構，其中，該第一清洗劑節點區更包含一第一清洗劑注入孔，該第一清洗劑注入孔係可用以注入一特定第一清洗劑，該注入之第一清洗劑經由第一清洗劑注入孔可流入該第一清洗劑儲存槽中備用。
如申請專利範圍第3項所述之改良之生物晶片微流道分歧結構，其中，該抗體節點區更包含一抗體注入孔，該抗體注入孔係可用以注入一特定抗體，該注入之抗體經由抗體注入孔可流入該抗體儲存槽中備用。
如申請專利範圍第3項所述之改良之生物晶片微流道分歧結構，其中，該第二清洗劑節點區更包含一第二清洗劑注入孔，該第二清洗劑注入孔係可用以注入一特定第二清洗劑，該注入之第二清洗劑經由第二清洗劑注入孔可流入該第二清洗劑儲存槽中備用。
如申請專利範圍第3項所述之改良之生物晶片微流道分歧結構，其中，該基質節點區更包含一基質注入孔，該基質注入孔係可用以注入一特定基質，該注入之基質經由基質注入孔可流入該基質儲存槽中備用。
一種改良之生物晶片微流道分歧結構，其係於一圓形基板上成型一系列之檢測槽室，包含有：一主流道，該主流道係徑向設置於該圓形基板上，並且主流道設置之位置介於圓形基板之圓心與圓周之間；二個初級分流道，該二個初級分流道分別以相等角度之第一夾角與該主流道靠近圓形基板圓周之端點連接，係形成一以主流道為中心軸之左右對稱結構，主流道與二個初級分流道之間係為一第一分歧結構，該第一分歧結構於二個初級分流道之間為一圓弧形構造；四個次級分流道，該四個次級分流道係以兩兩一組分別連結於二個初級分流道結合第一分歧結構端之相反端點，每組之二個次級分流道分別以相等角度之第二夾角與初級分流道連接，係形成一以初級分流道為中心軸之左右對稱結構，初級分流道與次級分流道之間係為一第二分歧結構，該第二分歧結構於二個次級分流道之間為一圓弧形構造；二個樣本節點區，該二個樣本節點區分別至少包含一樣本儲存槽、一樣本節點閥門及一樣本節點匯流道，該樣本節點閥門設置於樣本儲存槽與該樣本節點匯流道之間，用以阻隔樣本隨意流入樣本節點匯流道中，二個樣本節點區之樣本節點匯流道分別與二個初級分流道相連接；一第一清洗劑節點區，該第一清洗劑節點區至少包含一第一清洗劑儲存槽、一第一清洗劑節點閥門及一第一清洗劑節點匯流道，該第一清洗劑節點閥門設置於第一清洗劑儲存槽與該第一清洗劑節點匯流道之間，用以阻隔第一清洗劑隨意流入第一清洗劑節點匯流道中，第一清洗劑節點匯流道與主流道相連接；一抗體節點區，該抗體節點區至少包含一抗體儲存槽、一抗體節點閥門及一抗體節點匯流道，該抗體節點閥門設置於抗體儲存槽與該抗體節點匯流道之間，用以阻隔抗體隨意流入抗體節點匯流道中，抗體節點匯流道與主流道相連接；一第二清洗劑節點區，該第二清洗劑節點區至少包含一第二清洗劑儲存槽、一第二清洗劑節點閥門及一第二清洗劑節點匯流道，該第二清洗劑節點閥門設置於第二清洗劑儲存槽與該第二清洗劑節點匯流道之間，用以阻隔第二清洗劑隨意流入第二清洗劑節點匯流道中，第二清洗劑節點匯流道與主流道相連接；一基質節點區，該基質節點區至少包含一基質儲存槽、一基質節點閥門及一基質節點匯流道，該基質節點閥門設置於基質儲存槽與該基質節點匯流道之間，用以阻隔基質隨意流入基質節點匯流道中，基質節點匯流道與主流道相連接；四個檢測區，該四個檢測區分別連結於四個次級分流道結合初級分流道之相反端點，四個檢測區更分別設有一檢測區匯流道；及至少一廢液儲存區，四個檢測區分別藉由該檢測區匯流道與該廢液儲存區相連接；其中，可於該圓形基板上施加一由圓心往圓周方向之離心力，由於二個樣本節點閥門、第一清洗劑節點閥門、抗體節點閥門、第二清洗劑節點閥門及基質節點閥門分別含有不同的閥門阻力，因此可藉由調整離心力之大小來控制二個樣本、第一清洗劑、抗體、第二清洗劑及基質突破閥門以進入主流道之順序，液體進入主流道後更經由分歧結構平均分流進入二個初級分流道及四個次級分流道中，並進入四個檢測區中進行檢測，液體最後流入廢液儲存區中存放。
如申請專利範圍第9項所述之改良之生物晶片微流道分歧結構，其中，該二個樣本節點區更分別包含一樣本注入孔，該樣本注入孔係可用以注入一特定樣本，該注入之樣本經由樣本注入孔可流入該樣本儲存槽中備用。
如申請專利範圍第9項所述之改良之生物晶片微流道分歧結構，其中，該二個樣本節點區可注入相同之一特定樣本，以進行該特定樣本之多次重複檢測。
如申請專利範圍第9項所述之改良之生物晶片微流道分歧結構，其中，該二個樣本節點區可分別注入不同之樣本，以同時進行二個不同樣本之檢測。
如申請專利範圍第9項所述之改良之生物晶片微流道分歧結構，其中，該第一清洗劑節點區更包含一第一清洗劑注入孔，該第一清洗劑注入孔係可用以注入一特定第一清洗劑，該注入之第一清洗劑經由第一清洗劑注入孔可流入該第一清洗劑儲存槽中備用。
如申請專利範圍第9項所述之改良之生物晶片微流道分歧結構，其中，該抗體節點區更包含一抗體注入孔，該抗體注入孔係可用以注入一特定抗體，該注入之抗體經由抗體注入孔可流入該抗體儲存槽中備用。
如申請專利範圍第9項所述之改良之生物晶片微流道分歧結構，其中，該第二清洗劑節點區更包含一第二清洗劑注入孔，該第二清洗劑注入孔係可用以注入一特定第二清洗劑，該注入之第二清洗劑經由第二清洗劑注入孔可流入該第二清洗劑儲存槽中備用。
如申請專利範圍第9項所述之改良之生物晶片微流道分歧結構，其中，該基質節點區更包含一基質注入孔，該基質注入孔係可用以注入一特定基質，該注入之基質經由基質注入孔可流入該基質儲存槽中備用。