TW208703B

TW208703B -

Info

Publication number: TW208703B
Application number: TW081100973A
Authority: TW
Inventors: Shuttleworth Alan; Geoffrey Wildman Howard
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 1991-01-09
Filing date: 1992-02-12
Publication date: 1993-07-01
Also published as: JPH06505472A; IE920058A1; ATE121090T1; IL100611A0; DE69202050D1; AU1157792A; WO1992012156A1; EP0568546A1; US5409950A; ZA92116B; US5278067A; IL100611A; EP0568546B1; MX9200067A; GB9100437D0

Description

本發明係有醑於具降血中臢固觯，降血脂及/或抗徽菌活性之新穎化合物，此等化合物之製備方法，含此等化合物之藥學姐合物，及此等化合物之K蕖用途•特別是用於動脈粥樣硬化及相醑心臓血管疾病之治療及/或預防。本發明亦有關於可做為製備具降血膽固酵*降血脂及/或抗徽菌活性之化合物新穎中間產物。高血膽固醇及血脂量係與血管壁疾病肇始有闥之狀況。降低向漿膽固醇量的有效方法因而高度引人注目。例如，可藉降低固酵之膳食攝取•藉加速膽固酵新陳代謝及排除或降低暖固酵生物合成率而降低膽固酵之濃度。因為嫌固醇合成係受回纊作用調節•降低生理性_固酵量的最有效方法可能包括抑制膽固酵生物合成-之一姐成分*如此· _ 固酵量之降低可使生物合成增加而得K補償。由3-羥基-3-甲戊二醯基輔酶A(HMG CoA)形成火落酸係膽固醇生物合成過程之一個速率控制步驟，而M HMG Co A 堪原酶之me vinic酸族抑制劑治療血膽固酵遇高症已獲臨床成就。然而，火落酸為包括動物輔，血基質A及多萜醇類等所有異戊二烯基衍生物之共同前驅物。第二個調節位置在於生成固醇之第一生物合成步驟，亦即縮合兩焦磷酸法昵酯以生成鯊烯。由焦磷酸法呢酯生鯊烯涉及一種可分雔之中間產物，即前焦磷酸鯊烯酯，且整個合成過程係受一種细胞膜结合酶鯊烯合成梅（磷酸氳法呢酯：磷酸氫法呢酯法基轉移酶，EC 2. 5. 1 . 21)催化。是以，可抑制鯊烯合成酶之藥劑係腰固酵生成作用調節的可能藥物。 3 甲 4(210X297 公发） {請先閲讀背面之注意事項再填寫本页) •装. .打· •線· 208^03 Λ 6η c 五、發明説明（2) 此等蕖劑之使用是吸引人k因為非類固酵通路應極少受影響0 徽菌细胞壁主要固酵成分麥角固酵之生合成與哺乳類包括人類之膽固酵生合成是類似的*因而也同受鯊烯合成_ 調節，在嫌菌细胞内抑制鯊烯合成酶之第物因而成抗徽菌化學治療的可能藥物。我們已發現一姐作為酵素鯊烯合成酶之抑制劑及/或係作為酵素鯊烯合成酶抑制劑化合物製備的中間產物。因此就本發明第一方面言•我們提供化學通式（I )之化合物

(請先閲讀背而之注意事項#蜞窩本頁) 經濟部屮央桴準局A工消贽合作社印製式中Ri代表氫原子羥基或下述姐成之基 -0C0CH含CHCH (CH3> (CH2)3CH3 , ί ζ -ococh=chc(ch3)=chch(ch3>-ch2ch3·或 -oco-x-ch2ch(ch3)ch2ch3[式中 χ為-ch€chch(ch3)-, -CHzCH (0H)CH(CH3)-,-CH^CHC(OH) (CH3)-, -CH2CH(0H)CH2-或-CH2CH2CH(CH3)-]; R2代表氫原子或羥基； 1?3代表選自下述姐成之基 -4 - 本紙張尺度边用中國Η家楳準（CNS) T4規怙（2丨0X297公龙) 208703 Λ 6 η 6__ 五、發明説明（3 ) -_C( = CH2)CH(0R7)CH(CH3)CH2Ph(式中為氫原子或乙醣基 )，-C(CH3)€cHCH(CH2Re)CH2Ph(式中 Re 為氫或羥基）， -C (CH20H)=CHCH (CHa)CHzPh , -C ( = CH2)CH (OH)CH(CH2〇H)CH2Ph, -C(=CH2)CH(NHCOCH3)CH(CH3)CH2Ph, £ -C(CH2NHCOCH3)=CHCH(CH3)CH2Ph或 (請先閲讀背而之注意革項#填寫木頁)

經濟部中央標準局A工消仲合作社印31 及1可分別代表氫原子或甲基及其鹽類；但當 1^或1^ 一者代表氢原子時R3為選自下述姐成之基 -C(=CH2)CH(OR7)CH(CH3)CH2Ph及 -C(CH3)^CHCH(CH3)CH2Ph及當1及1?2兩者皆代表氫原子時 R3代表-C(CH3)lcHCH(CH3)CH2Ph。就本發明之第二方面言，我們提供前述化學式（I)所示之化合物除了其中化表 £ -OCOCH = CHCH(CH3)CH2CH(CH3)CH2CH3，R2代表理基· R3代表-C(CH2)CH(0C0CH3)CH(CH3)CH2Ph 且 IU、，RB&Re 分別代表氫或甲基之化合物外。就本發明之具贈例我們提供具化學通式（Ia>所示之化合物 -5- 本紙张又度边用中团B家楳準（CNS)T4規格（210x297公；«：) 208703 五、發明説明（4)

式中Ri，R2，R4及悉定義如前，但當卩2代表氫原子時則 £

Ri代表下式之基-〇COCH=CHCH(CH3)CH2CH(CH3)CH2CH3。就本發明之另一具體例我們提供具化學通式（lb)所示之化_合物 (請先閲讀背而之注意事項孙蜞窍木頁) '

經濟部中央橾準局只工消奸合作社印5i 式中IU代表氩原子，羥基或下式之基

〇代表氫原子或羥基；代表g自下述姐成之基- c(CH3)=CHCH(CH2Ra)CH2Ph (式中 Re 為氫原子或羥基），-C(CH2OH)icHCH(CH3)CH2Ph， -C(=CH2)CH(OH)CH(CH2〇H)CH2Ph, 本紙张尺度边用中a B家楳準（CNS)Ή規怙（210x297公龙） 208703 Λ 6 II 6 五、發明説明（5 ) -C(=CH2)CH(NHCOCH3)CH(CH3)CH2Ph, έ -C(CH2NHCOCH3)=CHCH(CH3)CH2Ph或

R 4代表氫原子或甲基；及其鹽類，但⑴當R i代表氫原子時則 R3代表-C(CH3)=CHCH(CH3)CH2Ph⑵當 IU代表

(請先閲讀背而之注意事項典堝寫本頁) 裝- 訂-

經濟部中央標準局β工消伢合作杜印M 時，則R 3必代表選自 t 下述姐成之基-C(CH3)=CHCH(CH3)CH2Ph, -C(=CH2)CH(0H)CHCH20H)CH2Ph, -C(=CH2)CH(NHCOCH3)CH(CH3)CH2Ph或5 C(CH2NHCOCH3)=CHCH(CH3)CH2Ph ⑶當 152代表氧原子時則 1?3必代表下述之基- C(CH3)=CHCH(CH3)CH2Ph。式中R2代表羥基之本發明化合物為一般較佳。 · 式中R*，Rs及Re代表氫原子或生理學可'接受陽離子之本發明化合物為一般較佳。式中代表氫原子或羥基之化學式（lb)所示化合物係有用於作為具鯊烯合成酶抑制活性之相關结構的製備中間產物。 ( 本紙張尺度边用中困Β家樣準(CNS)亇4規格（2丨〇Χ29γ公货) 20870c 五、發明説明（6) Λ 6 η 6 化學式（la)所示化合物，式中代表羥基或下式之.基

Ο h代表羥基且R4代表氫原子及其鹽類為待別有用於作為具鯊烯合成_抑制活性之相闞结構的製備中間產物。本發明涵蓋前述特別的及較佳的姐成是必需予了解的。特別宜作為结構相醏化合物製備中間產物亦具鯊烯合成酶抑制活性的本發明活性化合物係下文所述之化合物A及其鹽類。特別宜作為结構相闞化合物製備中間產物具鯊烯合成酶抑制活性的本發明其他化合物係下文所述化合物B及C及其鹽類。下表I列出相閭於化學式（la)及化學式（lb)之本發明特SU 化合物。所述各化合物各表本發明更佳方面。 (請先閲讀背而之注意事項孙填寫本页) _!_L_

T % 經濟部屮央榀準局只工消仲合作杜印製本紙尺度边用中困Η家樣毕（CNS)規格（210χ29γ公龙） 208703A6B6 五、發明説明（） 50D Η X Η -H3S Η -3S-3 Η Η -35 Η 、H°°3 Η 一請先聞讀背面之注意事項再填窵本瓦) ^1^

HO

HO Η° Η° Η° Η0 Η° Η0 -装· ;"5H^H3 HO H°M 58 〇A i 3 "χο "δ ”5" SH^H;355=H:KOO «δ-"o -s - S5^555UXU000A Γ ”5-- -^5Η3-σ55Η50υ01 Γ . -3-0 χο Η° 一 5--3)(-3)55=508 ¢5(-3)55=(-3)35=5030 .訂· *緣· ωΙ "

-中一 - roI ωΙ

®I 甲 4 (210X297 公潘) 208703 · a6B6 五、發明説明（）

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•5°3 H

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-503 H sl 撇丨 xo ”5-3(--a)5-°-5)5(HsH:/‘5030 _-Iwffl HO ί 3(〔5)5ϋ3)15=Η303〇 xo CH3-H3)H^5(-5)(H0)35=5S0

HO 『·5-3(〔5)5-^5(HO)H^5so Η Μ/5(Η0-0)Η0(Η0)5(-3=)°HO H . "HuC5 xo-^5(〔5)5-0(〔5)5(工0)|0-800

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M~5(〔H3)5H3=(H°-3)：I HO

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Md、Hu{〔H3)5H3=(「50°ΗΝ-ώ)〕 HO

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QI £ p 甲 4(210X297 公潘） 208703 A6 B6 明议明發 ' 五 C.1C.1

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4/5-5)55= (-3 )3 HO

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£、5(-5)55=(「5)0H 4°:-,5(〔5)55=(”50Η0 Η Μ/·5(〔5)Η3(Χ(_)03ΗΝ)Η3(~5=)(_)Ηο Η Η {請先閑讀背面之注意事項再填茸本頁) .¾. ϋΗ3(〔H3)H~5(p5)HyH^5030 -ID-l--ID-io-rJ-5HO) Hy+H-o-0 H° - - £

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-°I fHy5HO“5SHo=580£i i 3 "s "s "H^SH^Ho5sJLG030 Q1ir -0-s Η0 「5~5(〔Η3)5ΠΓο'5ΚΗΟοΗ3=Η830

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IV 19 Τ3 _Π 甲 4 (210X297 公潘）經濟部屮央櫺準局A工消"合作社印製 * Λ Λ 62〇R703_ W__ 五、發明説明（10) 上文化合物A，B，C，D，E，F，0及V具所賦與特定之絕對姐態。因而化合物A為化合物[lS-[la (4R*,5S*),3a ,4α ,5α ,6α (2E，4R*，6R*),7/9 ]]l-(4-乙醯氧基-5-甲基 -3-亞甲基-6-苯己基）-4,6,7-三羥基-2,8-二腭二環 [3.2.1]辛烷-3,4,5 -三羧酸6-(4,6-二甲基-2-辛烯酸酯） ;化合物 B 為化合物[lS-[la (4R*,5S*).3a ,4/3 ,5α ,6 ct (2E,4R'6R”，7>9 ]]1-(4-羥基-5-甲基-3-亞甲基-6-苯己基）-4,6,7-三羥基-2,8-二吗二環[3.2.1]辛烷- 3,4,5-三羧酸6-(4,6-二甲基-2-辛烯酸酯）；化合物C為化合物 [lS-[la (4R'5S*)，3cr ,4/3 ,5ct .6a ,7卢]]1-(4-乙醸氧基-5-甲基-3-亞甲基-6-笨己基）-4, 6,7-三羥基-2,8-二鸣二環[3.2.1]辛烷-3,4,5 -三羧酸；化合物D為化合物 [lS-[la (4R*,5S*),3a ,Αβ ,5α ,6α ( 2 Ε , 4 R β , 6 R * ) , 7/9 ]]1-(4-乙醯氧基-5-甲基-3-亞甲基-6-笨己基）-4,6,7-三羥基-2,8-二喟二環[3.2.1]辛烷-3,4,5-三羧酸 6-(4,6-二甲基-2-辛烯酸酯），3 -甲基酯；化合物E為化合物 [lS-[la (4R5* , 5Se) , 3 α ,Αβ ,5α ,6α ( 2 Ε , 4 R * , 6 R * ) , 7/3 ]]1-(4-羥基-5-甲基-3-亞甲基-6-笨己基）-4,6,7-三羥基 -2,8-二晖二環[3.2.1]辛烷-3,4,5-三羧酸 6-(4.6-二甲基 -2 -辛烯酸酯），3 -甲基酯；化合物F為化 '合物[1 S - [ 1 a 參 (4R'5S*),3a ,4/3，5a，6a，7/S ]]1-(4-羥基-5-甲基 -3-亞甲基-6-笨己基）-4,6,7-三羥基-2,8-二噚二環 '[3.2.1]辛烷-3,4,5-三羧酸；化合物0為化合物[15-[1〇( (4R*，5S*),3a ,4/9 ,5a ,6a (2E,4R*,6R*)]]l-(4-乙醯氧 (請先閲請背而之注意事項再塡寫木頁) 裝· 訂_ 線- 本紙張尺度边用中國國家標準（CHS) ΤΊ規格（210x297公龙） Λ () It 6 08703 五、發明説明（11) 基-5-甲基-3-亞甲基-6-苯己基）-4,6-二羥基-2.8-二嗶二環[3.2.1]辛烷-3,4,5-三羧酸，6-(4,6-二甲基-2-辛烯酸醋）及化合物 V 為化合物[is-[ia (4R*,5S*),3a ,4/3 ,5α ，7α 乙醣氧基-5 -甲基-3_亞甲基-6-苯己基 )-4,7-二羥基-2,8-二晖二瑁[3.2.1]辛烷-3,4,5-三羧酸 Ο - 化合物G，H，I，J，K，L，Μ，ϋ，W及C1為如述化合物 c或化合物F之6 -醢基衍生物。因而就化合物G，Η，I，J • K’ L’ Μ，ϋ，W及C1與化合物C或化合物F共同單位具化合物C或化合物F所定義的絕對立艟化學。化合物Ν. Τ，Α1及Β1為結構上相關於化合物Β因而就化合物Η，Τ，Α1及Β1與化合物Β共同單位具化合物Β所定義的絕對立體化學，然而化合物Ν，Τ，Α1及Β1内C-1側鍵與化合物Β内側鍵不同且各化合物H，Τ，Α1及Β1内C-1側鏈取代物之立體化學未予界定。經濟部中央標準局Α工消作合作社印製化合物P，Q，R，及S為结構上相Μ於化合物C。因而就化合物P，Q，R，及S與化合物C共同單位具化合物C所定義的絕對立體化學。然而化合物P，Q，R，及S内C-1側鐽與化合物C內側鏈顯著不同且各化合物及P，Q，R*及S内 C-1側鐽取代物之立體化學未予界定。、化合物X為结構上相關於化合物V。因而就化合物X與化合物V共同單位具化合物V所定義的絕對立體化學。然而化合物X内C-1側鏈與化合物V内側鐽顯著不同且化合物X 内C-1側鏈取代物之立體化學未予界定。 -13-

Λ (j η 6 208703 五、發明説明（12) 化合物Υ為化合物V 7-去羥基化類似物。因而躭化合物 Υ與化合物C共同單位具化合物C所定義的絕對立《化學 ’然而化合物Υ内C-1側鍵與化合物C内側鍵顯著不同且化合物Υ内C-1側鐽取代物之立體化學未予界定。化合物Ζ為化合物V 7-去羥基化類似物。因而就化合物 Ζ與化合物V共同單位具化合物V所定義的絕對立體化學，然而化合物Ζ内C-1側鏈與化合物V内側鐽顯著不同且化合物Ζ内C-1側鐽取代物之立體化學未予界定。化合物Α之絕對姐態已藉降解作用探討予確立。特別是化合物A水解而得化合物F。由對化合物S(R*,R*)甲基 2,4-二甲基辛烯酸酯（即（2S,4S)-2,4-二甲基辛烯酸甲基酯）之二步驟轉化作用藉水解作用去除之俩鍵予分離且確認為S(R*,R*)-(E)-4,6 -二甲基-2-辛烯酸（即 [4S,6S(E)]-4,6-二甲基-2-辛烯酸。合併光譜學與X-光線對側链S(R*,R*)-(E)-4,6 -二甲基-2-辛烯酸確認之共同探討確立化合物A具有此文所賦予之结構及絕對姐態。下文內圖1為化合物A之三度空間结構示意圖。本發明化合物可與無機或有櫬基質形成鹽類。生理學可請先閲讀背而 - 之 i -事 '項孙 % 本頁經濟部屮央楛準局A工消仲合作社印31 鹽臛金 0 如例)* 類類鹽鹽受鉀接三如類有鹽宜鹽屬金土鹵類二胺 ,及納類三盥括銨包*, 類丨鹽鉀及納 SR 0 0 鈣如三括包類胺鹽基酸烷胺三精如及例酸類胺鹽，離質} 如基胺 <機己胺乙三如 >胺類基鹽烷酸二胺，維— 及酸逋如钾基。ί 基甲羥環β 二參及胺基甲笨溴對如 /|\ 胺基甲笨之代。取類要鹽需胺視基 , 甲本紙張尺度边用中國國家楳準（CNS)T4規格（210x297公让) 0870¾ Λ 6 η 6 五、發明説明（13) 本發明化合物已予發現抑制酵素鯊烯合成酶及膽固酵生合成因而有用於翳藥特別為於動物（尤其是人類）降低血漿內腰固酵量之多種狀況是有效的。此等狀況之實例包括與血膽固酵過高症及血脂質過高症相關疾病•特別是動脈粥瘤硬化及心臓血管疾病（例如心臓缺血疾病，腦缺血疾病及末梢動脈疾病）。抑制鯊烯合成酶之本發明化合物亦可使用以對抗動物包括人類之徽菌感染。例如此等化合物用於治療由例如假絲酵a臛(如白假紱睹杻.光洧技假絡思i a，折平湛假絡睹 fi_S. m m m m m & )，新铟皤珐睹a .曲s驅(如薈曲笛及煙曲霉），gJLSLSJL(如%泊技鼸路a ),折技囊醆a 臑L(如巴西祈技囊睹杻）I日镟稂雎宏鼷（加拥囊姐«稚雎恕 )或芽酵母匾（如皮炎穿酵杻）所致糸统性感染是有用的。此等化合物用於治療由祭癬蔺鼷小孢笛鼸或防宪皮癬菌睡之菌種（如m mmm，询小獺密成努狀蛊皮癬μ )所引致局部性感染亦是有用的。此等化合物亦可用於治療由光滑球擬酵母及瓶形酵母所引致徽菌性疾病。經濟部+央橾準局CX工消赀合作社印製

先閲背而 Γ之意項再填寫本 I 本發明化合物抗徽菌活性之活體外評估可藉测定於適宜培養基上特定微生物未見出現時受測化合物濃度之最低抑制澹度（MIC)予實施。、對此等化合物於抗黴菌性治療潛力言，抑制鯊烯合成梅 2本發明化合物可說明此等化合物用於人類及動物多種徽菌感染之治療。此等感染包括黴菌病感染如假絲菌症及慢性黏膜假絲菌症（如鹅口瘡及***蝦絲菌症）及由徽菌引致 -15 - 本紙張尺度边用中S Η家標準（CNS) T4規格（210X297公;«：) Λ ί) η 6 經濟部屮央標準局A工.消费合作社印製五、發明説明（14) 皮虜感染。皮下及黏膜皮虜假絲菌症，皮癖菌病包括癖及圓癖感染，香港脚，甲溝炎，箱！疹，vercicolor，紅癖* 擦疹，徽菌毛樣皮疹，念珠菌女陰炎，念珠菌_頭炎及外耳炎。此等化合物用為避免系統性及局部性徽菌感染之預防劑亦可為有用的。用為預防劑可例如適宜於作為免疫不適性病患用選擇性腸道部分淨化劑Μ預防感染。亦可用為某些疾病徴候或轚原情況在抗生素療程中預防徽菌過度生長。本發明化合物於動物及徽菌抑制鯊烯合成_之能力可利用[2-14i：]焦磷酸法呢酯為酵解質在類似於5.纟.比勒等人於轚藥化學期刊31卷10期1869頁-1871頁（1988US.A. Biller e_L a 1 . in J . Medicinal C! h e m ί s t r y 31 (1 0 ), 1869-1871 (1988))所述分析條件活體外予論證，將[14C] 鯊烯自層析板薄層上未反應酵解質內收集並以液«閃爍計數法測定。本發明化合物抑制膽固酵生合成之能力可利用類似於 Y.田等人於生物化學生物物理雜誌877卷50至60頁（1986) (Y. Ts u j i t a e t a 1 . , i_n_ B i o c h e m . Biophvs. Acta. Volume 877, 50-60(1986))所述且經修飾包括W高效液相層析測定膽固酵的方法從威士達（Wistar)雄大鼠肝切片内由[14C]_乙酸酯測定抑制予論證。抑制鯊烯合成酶之本發明化合物雖然可以用原化合物施槩用於治療，但此等化合物作為藥學調配方之活性成分為較佳。因而本發明提供含抑制鯊烯合成酶之本發明化合物 -1 6 - 各紙張尺度逍用中a Η家標毕（CHS) 規格（210X297公*) (請先閲讀背而之注意事項#填寫本頁) -裝- 線_ 五、發明説明（15) 經 jif· 部中央準Μ, β 工消合作社印 51 與一或多種其槩學許可載劑及視需要其他治療劑及/或預防成分之藥學調配方，載劑須為"許可的"意指與調配方内其他成分為相容的且不得有害於其受用者。本發明姐成物包括特別調配成經口服非經腸*經植入經直腸*掛局部，經眼或經生殖泌尿道施蕖之形式或適於以吸入或吹氣施藥之形式言。口服施藥用錠劑及膠囊劑可含習知賦形劑如黏合劑例如糖漿，***膠，明膠，葡萄糖酵，山羊剌樹膠，澱粉黏液或聚乙烯吡咯啶填充劑例如乳糖，糖*微晶埋維素，玉米澱粉，磷酸鈣或葡萄糖醇；或潤滑劑，例如硬脂酸鎂，硬脂酸•滑石，聚乙二酵或二氧化矽；崩解劑例如馬羚薯澱粉或羥乙酸澱粉酯化納；或濕滴劑如硫酸月桂酷化納。錠劑可依熟諸此S热知方法予包覆。口服液製劑可為例如水溶性或油性懸浮劑，乳劑糖漿劑或酏劑之形式*或可為使用前與水或其他適宜載劑重姐用乾堍產品形式存在。此等液態製劑可含習知添加劑如懸浮劑，例如葡萄糖醇，糖漿，甲基娥維素，葡萄糖漿，白明膠*羥乙基缳維素，羥甲基纖維素·硬脂酸鋁凝膠或氫化食用油脂類；乳化劑•例如卵黃素，脫水山梨酵單油酸酯或***膠；可包括食用油脂類之非水溶性載劑，例如杏仁袖，分餾椰子油，油脂類，丙乙二酵或乙酵；及保藏劑，例如對羥笨甲酸甲酯或丙酯或山梨酸。姐成物亦可予調配為栓劑如含習知的栓劑基質如可可奶油或其他甘油酯。 -17- 本紙張尺度边用中S Η家榀準（CNS) T4規怙（2丨0X297公；《：) (請先閲讀背而之注意事項洱蜞寫本頁) _____—Ik_______ -_________ 經濟部中央標準局貝工消伢合作社印製 2_3 五、發明説明（I6) 就經頰施藥言，姐成物可採以習知方法調配成錠劑或片劑之形式。依據本發明之姐成物可予調配為Μ注射或連縝注入式備非經腸施藥用。注射用調配方可以安瓿内單一劑量形式，或為多劑量容器與添加保藏劑裝。姐成物可採如油性或水溶性載劑内懸浮液溶液或乳液形式且可含配方劑如懸浮劑穩定劑及/或分散劑。或者為活性成分可為使用前與適宜載劑如滅菌無熱源水重建的粉劑形式。就Μ經吸入施藥言，依據本發明之姐成物係以由利用逋宜推進劑如二氛二氟甲烷三氯氟甲烷二氣四氟乙烷，二氧化碳或其他適宜氣體施壓裝填之氣溶膠噴霧之形式或以噴霧器予逋宜送藥。當Μ施壓氣溶膠之情況時，劑霣單位可依送出計測量之装置闕而決定。或者經吸人施藥言，依據本發明姐成物可採乾粉末姐成物之形式*例如化合物之粉末混合物與逋宜粉末基質如乳糖或澱粉*粉末姐成物可Μ單一劑量形式存在於例如膠囊或如白明膠匣，或粉末可依吸入器或吹藥器之助施藥之發泡藥包裝内。姐成物可予採栓劑形式如含習知栓劑用基質或***栓劑形式如含習知***栓劑基質。、姐成物亦可予調配為软膏乳劑，乳膠體，洗劑，洗髮劑，粉劑（包括噴孩粉劑），***栓劑，垓塞劑，唄霧劑，浸劑，氣溶膠劑，滴劑（如眼，耳或舞滴劑）或傾劑之形式用 Μ局部施藥，软膏及乳劑可例如與水溶性或油性基質加上 -18- (請先Ml讀背而之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂_ 線- 本尺度边用中SS家4iiMCNS)T4規格（210X297公没） Λ 6 Ιϊ 6 經才部屮央標準而员工消伢合作社印5i 9 08㈧ 3 五、發明説明（17) 適宜的增稠劑及/或凝膠劑調配而得。對眼施藥用软膏可 K滅菌方法利用經滅菌姐成分製得。傾劑可例如予調配於含有機溶劑之油内視箱要與調配劑如蒱定劑及肋溶劑調配供獸醫用。供***填塞用***栓劑及填塞劑可利用習知技藝予調配且倘適宜可含起泡性載劑予調配。此等姐成物亦可含其他活性成分如腎上腺皮質類固酵*抗生素或倘逋宜抗寄生蟲劑。經鼻腔施藥用液態製劑可採溶液或懸浮液形式且可含習知賦形劑如強直性調節劑例如氯化納•右旋葡萄糖或甘霓糖醇；保贜劑，例如氛化苯甲烴銨，唪汞撒苯乙醇；及其他調配劑如懋浮劑|緩衝劑，種定劑及/或分散劑。皮膚穿·透施藥可受促進活性化合物經皮虜吸附之逋宜糸铳設計予影響及需典型地由基質調配方附於包括背面薄膜背膜及釋出線之黏貼敷布上。依據本發明姐成物亦可予調配成鍰釋出製劑。此等長期作用配方可藉植入作用（例如皮下或肌内）或藉肌肉内注射施藥。因而，例如本發明化合物可與逋宜聚合性或厭水性物質（例如為可接受油内乳劑）或離子交換樹脂或為難溶衍生物，例如難溶鹽為緩釋出用。當本發明化合物予口服施藥時，姐成物'所含劑最單位，各單位較佳含0.001奄克至1000毫克，更佳含0.01毫克至 40 0毫克活性成分。就使用於成人治療用日劑量較佳自 0.001毫克至5000奄克活性成分，最佳自〇.〇1亳克至2000 毫克*例如視施蔡徑及視病患及所治療疾病狀況每日分一 (請先閲誚背而之注意事項#蜞寫本頁) ______-___ 本紙張尺度边用中a ffl家楳準(CNS)甲4規格（210x297公Λ) £08703 Λ 6 Β6 經濟部屮央櫺準局员工消费合作社印奴五、發明説明（18) 至四次施藥。化合物可藉靜脈內输入施藥使用，例如高達每公斤體重每日50毫克活性成分。治療期長將視病患反應情況而非治療天數而定。抑制鯊烯合成酶之本發明化合物可與其他治療合併使用。因而本發明另一方面提供包括抑制鯊烯合成酶之本發明化合物併同其他治療用活性劑如3 -羥基-3-甲戊二醸基輔酶A (HMG CoA)堪原酶之抑制劑或其他降低血清膽固酵及 /或抑制膽固酵生合成劑，例如膽酸隔離劑或抗高血脂蛋白劑或抗高血胞劑如普羅布可醇（probucol)*珍懐布羅齊 (gemfibrozil)，柯羅懐勃酸酯（clofibrate)，右旋甲狀腺素或其納鹽，柯力斯蒂普醇（colestipol)或其鹽酸鹽膽安息番胺，菸驗酸新嫌素，對胺水楊酸，阿司匹林DEAE -塞發得士（Sephadex)聚（二烯丙甲胺）衍生物，芷香烯或氯化聚二烯丙甲銨。前述合併劑可適宜存在使用K藥學調配方之形式且因而包括前定義合併劑與其槩學許可載劑包含於本發明另一方面。此等合併劑之各別成分可各連鑛成分開或合併同時施藥。 · 當本發明化合物與第二種治療劑合併使用對抗相同狀況時，各化合物使用劑量與各化合物單獨使用時不同。通宜劑量為热諸此技藝者所热知的。依據本發明另一方面*我們提供本發明適宜化合物或包括適宜的前定義本發明化合物之姐成物用於治療動物（尤 -20- (請先閲請背而之注意事項#填寫本頁) *-.丨 ___ 本紙诋尺度边用中a Η家棕毕（CNS) Ή規格（210x297公;《：) 208703 Λ 6 Π 6 五、發明説明（19) 的益有為量酵。固療膽治漿之血染低感降菌 }黴類} 人類為人為尤 /|\ 物動於用或或膽物血合療化治宜於缠用之物明成發姐本學供蔡提之們物我合，化面宜方迪定明特發之本明義發定本前於括包瘤末粥及，脈病動疾為血尤絕病腦疾大闞病相疾症血高絕遇臟白心蛋如 6 ( I 血病或疾/ 管。及血 > 症臓病高心疾過及脈酵化動固硬梢製於。用染物感合菌化嫌明之發患本病供物提動們類我人，非面或方類一人另療之治明以發用本使據物依藥成面及方症 1 高再遇之酵硬明固瘤發膽粥本血脈據與動依抗為對尤病疾管血臓心及化物，腦動病大類疾病人R8疾非相血或症絕類高臓人遇心對白如供蛋ί 提脂們血我或，物法合方化療明治發之本染之感酶菌成徽合抗烯對鯊或制 } 抑病量疾效脈有動將梢括末包。及法患病方病疾療於血治藥絕此施的療治染感或況狀立 0 所防。預的至知伸認延者療_ 治技 Μ此用諳引熟所為發將本考參 (請先閱讀背而之注意事項再蜞窍本頁) 裝· 訂_ 經濟部屮央榣準局ex工消费合作社印5i US1 產生能養培括包供提。們備我製 . 法面製方述一下再藉之可明物發合本化據明依發而本因離或分\ 内及物用養作培化由基後醯其去及予物物生合微化之該物將合要化需明倘發及本物種合多化或欲種所一出合分化及明試發測本棋備規之用驟利步藉酯可甲物應生對微成之用物作合化化酯明 Μ 發物本合。產化法生該製能將物边度尺 ft 紙一本 (CN 準 ti 家

I * 公 197

208703 · 81.KU3 U 五、發明説明（20) 析用蟫準方法學由微生物醱酵得來测試樣品簡易地加以驗明。、.丨- . 特別是，習用的微生物係1989年5月31日寄存於英國米得塞司格棱福得格棱福得路格拉索菌種研究公司微生物學部門 UB60HE (Glaxo Group Research Limited,

Microbiology Division, Greenford Road, Greenford,

Middlesex, England, UB60HE)的菌株，寄存號碼為C2932或其突變種（1982年，館長哈里斯小姐，微生物培養總集世界指引內收集邊碼202 號（collection number 202 in the World Directory of Collections of Cultures of Microorganisms, 1982; curator : Miss A M Harris)。必須了解的是，前述.培養總集中心依據198許大英國協專利法規第17條規定，已允諾任何提出有效申請的人均可獲得上述寄存之微生物。 Μ承繼號碼C2932寄存於格梭福得之菌株亦已烴予寄存於英國蘇瑞郡庫村斐利路CAB國際徽菌學研究所（CAB International Hycological Institue, Ferry Road,

Kew, Surrey, England)為永遠培養收集。此菌株係研究所於1989年5月25日所接收且接著賦予寄存煸號IMI 332962號及1989年6月27日寄存日期（存活'證明日期），此文寄存菌株係參照研究所寄存號碼IMI 332962號菌株予確認。因而對IMI 332962深確認特徴述於下文實胞例40內。本發明另一方面提供微生物IMI 332962本身及其突變種 -22 本紙5良疋度边用中S困家榀iMCHS) Τ4規格（210X297公；«：) 先間背而 -之注意 •求項 % 本裝線

經濟部屮央榀準沁Λ工消赀合作社印M 五、發明説明（21) IMI 332962之突變種可自然產生或可藉多種方法包括 H.I.阿得勒（H.I. Adler*〉於1973年維也納國際原子能榷威 (I n t e I-n a t i ο n a 1 A t 〇 m i c E n e r g y A u t h 〇 r i t y )研討會先進 (Proceeding of the Synposiun ”用於工業微生物之輻射及同位素 ”（R a d i a t i ο n a n d R a d ί 〇 i s 〇 t 〇 p e s f 〇 r I n d u s t r i a 1 M i c r ο o r g a n i s m s )内2 4 1頁微生物發展用技術 (Techniques for the Development of

Micro-organism)所概述方法。此等方法包括游離傾射，化學方法如以N-甲基-N-硝基-N-硝M (NTG)，热處理埴傳技術如重姐及轉化，及自發性突變種用選擇性技術。依據本發明之再一方面，我們提供ΙΜΙ 33 296 2及其突變種之遺傳物質由此參與一種或多種本發明化合物之合成。此等遺傳物質可利用習知遺傳工程技術包括由藍波謝克及李奇於CRC生物技術評論1987年卷6，357-393頁絲狀嫌菌内重姐體去氧核糖核酸；進步與展望（Rambosek and Leach in "Recombinant DNA in Filamentous fungi: progress and prospects" , CRC Critical Reviews in Biotechnology 1987, pages 357-393)所概述技術而得。

經濟部屮央標準局CX工消坨合作社印M (請先閲讀背而之注意事項#塡寫本頁) -K * . 此等技術可K於前述用於flr:rftmoniuni Chrvsngpnum内召-内醢胺抗生性生合成用抗生性生合成基因分株之類似方法予使用（見伸松S.M.等人1985年自然雜誌318期 1 9 1 - 1 9 4 頁）（S a n s 〇 m，S · M . e t a 1 . , 1 9 8 5 H a t u r e , 3 1 8 , Pl9卜194)由此所得遺傅物質可使用於例如（司卡粗德 P.L.等人，1989,生物技術 7期 477-485頁）（51(31^11(1, -23- 本紙張尺度边用中a Η家樣1MCNS) T4規怙（210x29·/公；¢) 208703 δΙΙ〇.；>9 Α6 Β6 五、發明说明（） P.L. et al.， 1989, Bio/Technology L. pages 477-485)所述K菌株改良，用M產製活體外應用生合成酶，或藉將此等物質引人IMI 332962 Μ外生物用Μ產製新穎化合物。於本發明再一方面我們提供得自ΙΜΙ 332962.或其突變種醱酵作用•而後其去醯基化衍生物及其甲酯類的橋式環縮酮衍生物。於本發明特定方面，我們提供得自ΙΜΙ 33296 2或其突變種醱酵作用，而後其去醯基化衍_物及其甲酯類具鯊烯合成酶抑制作甩之化合物。藉適宜生物之餓酵作用產製本發明化合物可以習知方法如在碳，氮及無機鹽類可同化來源存在下培養生物予實施 Ο 碳，氮及碩物質之可同化來源可藉單纯或複合營養物提供。碳源一般包括葡萄糖，麥穿糖，澱粉，甘、油糖蜜，糊精’乳糖’糖糖’果糖，半乳楗，肌醇，右甘兹酵趋油，羧酸，胺基酸甘油酯醇類，烷類及植物油脂。碳源一般包括酸Βί培養基重最計0.5至10%。果糖，葡萄糖及蔗糖代 >4 {請先《讀背面之注意事項再填其本頁) •装♦ .打· •綠· 甲 4(210X297父沒） ΟΠ8703 五、發明説明（23) 表較佳碳源。氮源一般包括大豆粉，玉米漿皤器可溶物，酵母抽提物 ’棉籽粉，果核研磨粉’麥芽抽提物，糖蜜酪蛋白* 胺基酸混合物*氨（氣體或溶液），銨鹽或硝酸麴，尿素及其他醯胺類亦可予使用。氮源一般包括醱酵培養基重量計 0 . 1 至 10%。可合併入營養物培養基之營養性無機鹽類包括能生成納，鉀銨，娥，鎂，鋅，辣，鈷，錳，釩，鉻•鈣，銅，鉗，硼，磷酸鹽，硫酸鹽，氯及碳酸鹽離子之一般使用鹽類 0 經濟部屮央桴準局Μ工消费合作社印5i 生物之培養一般於溫度自20至40t較佳為20至35t：特別為25至28 =附近實施，且令人期望地Μ曝氣及携拌如Μ搖動或攪拌下實施。培養基初始可以少最菌絲及/或孢子接種。所得有生長力之接種物可於轉移至主要醱酵培養基發生再生長之一或多個菌種階段予轉移至醗酵培養基。醱酵作用一般於酸鹼值3.5至9.5範圍内，較佳為4.5至7.5範圍內進行，於醱酵培養液添加鹼或酸Μ保持酸鹸值於期望範圍内可為必要的。可予添加之適宜《(類包括鹼金屬氫氧化物如氫氧化納或氫氧化鉀水溶液。適宜酸類包括無機酸如鹽酸*硫酸或磷酸。 ' 醱酵作用可予實施經4至30天期間較佳約7-18天。防沫劑可予存在以控制過度發泡且視所箱時間間隔添加。碳源及/或氮源亦可視需要添加入醱酵培養液內。本發明化合物可存在於醱酵液及菌絲部分二者內。化合本紙張尺度逍用中B困家榀毕（CHS) TM規格（210x297公放) a 6 “ _ η 6___ 五、發明説明（24) (請先閲讀背而之注意事項孙璜寫本I _____ _____ - , ______Γ_____ 物可適宜地利用過滹作用或離心作用予分開。其後醱酵液可視需要Μ酸如硫酸於有機溶劑存在下予處理直至酸鹼值低於6Μ下（如約3)。本發明化合物可藉習知單離及分離技術自醱酵液內予分離。分離技術之選擇可予大改變仍為認同的。本發明化合物可藉多種分離技術如可將不同方法合併的吸附-溶析作用，沈澱作用，分段结晶作用，溶劑萃取作用及液態分配作用予分離及纯化。 •吸附於固態載體接著溶析作用已予發現適宜用Κ分離及純化本發明化合物。本發明化合物可由细胞及液相Μ適宜有機溶劑如嗣類（如丙酮，甲基乙基萌或甲基異丁基_)，氛化烴酵，二醇 (如1,2 -丙二酵或1,3 -丁二酵）或酯類（如乙酸甲酯或乙酸乙酯）予萃取。缌之，一次Μ上萃取可為期望得到最佳回收。水不混合溶劑萃出液本身可以鹼性水溶液予萃取，且經此等鹼性溶液之酸化作用後所欲化合物可予再萃取入水不混合有機層内。自有機萃出液內去除溶劑（如藉蒸發）後產得所欲化合物之物質。經濟部中央榡準^工消扑合作社印製曆析術（包括高效液相層析術）可在適宜載體如二氧化矽，非功能性大網狀吸附樹脂如交_的苯乙烯二乙烯基笨聚合物樹脂如安百來（Araberlite)XAD-2， XAD-4， XAD-16 或 XAD-1180樹脂（羅門哈斯有限公司）（R〇hn & Haas Ltd,)或凱司妥（kastell)S-112(蒙特迪生MMontedison);取代的笨乙烯-二乙烯基苯聚合物，例如鹵化（如溴化）笨乙烯- -26- 本紙张尺度边用中國困家樣孕（CNS) T4規格(210x297公tf) A 6 Η 6 08703 五、發明説明（25) (請先閲-背而之注意事項孙项寫本頁) * - 二乙烯基苯聚合物如戴艾恩（Diaion)SP 207 (三菱） (Mitsubishi)，陰離子交換器（如IRA-35或IRA-68)，有機溶劑相容交聯聚葡萄糖如塞發得士（Sephadex)LH20 (英國法瑪席有限公司（（Pharmacia UK Ltd)，或在逆相載體如烴鍵聯二氧化矽上實施。另擇用K纯化/分離本發明化合物之層析方法為利用圈式萃取器如多層圈式萃取器之逆流層析術。本發明化合物亦可利用液態陰雜子交換器如LA2予分離纯化。當使用IRA-68或特別是IRA-35為固態吸附物時細胞萃出物毋須去除溶劑可予直接負載，萃出液予濾除固態雜質後可於約酸鹼值3或於酸鹼值8直接予負載。用於層析純化/分雜本發明化合物之適宜溶劑/溶析液當然視層析柱型及載體之性質而定。當使用逆流層析術時我們巳發現包括乙酸乙酯·甲酵及水性酸（如水性硫酸）之溶劑糸是特別適宜的。當使用陰離子交換器如IRA-35時樹脂可合宜地Μ水性丙嗣清洗接著K溶於水性丙嗣之硫酸溶析。經濟部中央櫺準扃员工消伢合作社印製於萃取/分離過程中本發明化合物之存在可藉習知技術如高效液相曆析或紫外光譜測定法或藉利'用化合物性質予監測。當本發明化合物以溶於有機溶劑之溶液形式例如經層析純化而得時，溶劑可藉習知方法如予蒸發去除而產得所欲化含物。倘需要可藉前述層析技術再予純化。 27- 尺度边用中a Η家楳準（CNS) Τ4規格（210X297公度） q37〇3 Λ 6 η 6 經濟部屮央榣準局GX工消ίν合作社印製五、發明説明（26) 本發明化合物之去醢基化作用可藉酸或鹼催化性水解作用予實施。適宜鹼類包括S氧化物如氫氧化納及氫氧化鉀與烷基氧化物（如甲氧基化物）。鹸催化性水解作用可於水中視需要於有機共溶劑如醚（如四氫呋喃）或酵（如甲醇）之存在下於ου至1001C溫度範圍，較宜於昇高溫度下進行。當使用烷基氧化物為鹼時反應可適宜地於醇溶劑（如甲醇內於Ot：至100它範圍溫度下予實施。適宜酸類包括無機酸 (如鹽酸）及有機酸（如對甲笨磺酸）。酸催化性水解作用可於水視需要於有機共溶劑如醚（如二啤烷或四氫呋喃）或酮 (如丙酮）之存在下於0¾至100¾範圍溫度，較佳於室溫予進行。 h代表羥基之本發明化合物可由前述化學式（I )， (la)及（lb)所定義匕代表醢氧基之對應化合物予適宜地製備而得。因而，例如當1^代表取代的2(E) -辛烯醯氧基之基可藉與羥胺（如N -甲基羥胺）於鹼（如有機鹼如三乙胺）存在下於適宜有機溶劑（如二甲基甲醢胺）內於例如自0 ° 至50Ό'，較佳於20°至301C溫度範圍予處理轉化為羥基。本發明化合物酯化成對應甲酯類之酯化作用可適宜地藉與甲基化劑如鹵化甲烷（如碘甲烷）或硫酸'二甲酯於適宜有機溶劑如醯胺（如二甲基乙醯胺或較佳為二甲基甲醯胺）於鹼如碳酸氫鹽（如碳酸氫納）之存在下處理予實腌。此反應可適地於自0°至lOOt，較佳自20°至30C溫度範圍内予進行。或者，酯化作用可藉與溶於適當溶劑如甲醇之疊 -28- (請先閲讀背而之注意事項再塡寫本頁) -- 本紙張尺度遑用中S國家«準(CNS) 1Μ規格（2丨0X297公龙） Λ 6 Π 6 208703 五、發明説明（27 ) (請先閲讀背而之注意事項^:蜞寫本頁) Γ ~ . 氮甲烷之醚溶液處理予實施。酯化作用亦可藉與甲酵於適宜酸如無機酸（如鹽酸）之存在下於約室溫下予實施。本發明化合物甲基酯成為本發明化合物不同甲基酯之轉化作用可藉適宜的酯化作用/去酯化作用步驟予進行*去酯化作用可於標準狀況例如藉鐮水解作用予實施。去醢基化作用及酯化作用過程可視需要予合併為連續或同時反應步驟。本發明化合物之鹽類可適宜地藉將本發明化合物與適宜鹽或鹼反應予形成。因而，例如鹽類可藉將化學式（I )所示化合物與鹽或選自納或鉀氫氧化物，碳酸氫鹽，碳酸鹽或乙酸鹽（如氫氧化鉀，碳酸氫鉀，碳酸氫納或乙酸鉀），乙酸銨，乙酸鈣倘需要及L-離胺酸反應製備而得。鹽可例如藉添加適宜鹽或鹼（倘必要為水溶液）入本發明化合物溶於適宜溶劑如水及/或共溶劑如酵（如甲酵），腈（如乙腈）或酮（如丙嗣）之溶液或懸浮液内於例如0 。至8〇υ且宜於約室溫之溫度下予製備而得。化合物Α之二鉀鹽可視需要於乙酸钾之存在下藉將氫氧化鉀水溶液添加入佃胞萃出液内K調整酸鹼值至約8 > m 經濟部屮央標準局CX工消费合作社印^ 除固態雑質後，將滹液經吸附-溶析，例如於IRA-35接著以酸性丙酮溶析及然後藉鉀溶液（如氫氧、化鉀水溶液）添加入溶析液調整酸鹼值至約6 ，沈澱的粗二鉀鹽然後可以吸附-·溶析或液體-液體分配法予純化。倘適宜鹽形成作用可藉之將本發明化合物不溶性鹽水溶液與無機酸（如馥酸或硫酸）稀釋水溶液作用接著藉分批 -29- 本紙張尺度边用中《國家榀準(CNS) Ή規格（210X297公;«：) — Λ 6 Η 6 208703 五、發明説明（28) 吸附於逆相二氧化矽上並經適宜有機溶劑溶析的本發明化合物之游雔予完成。經分離的本發明化合物及其鹽類可藉於滅菌狀況下過滹化合物溶液（如丙酮溶液）並由滹液再结晶化合物。因而就較少量的變旋異構物所測得光譜學數據提供於下文表3及表4内記於方括弧内。 (請先間請背而之注意事碩#项窍木|\ 裝- 經濟部中央榀準局A工消作合作社印3i -30- 本紙汝尺度边用中Β Η家榀iHCNS) 1Μ规格（2丨0父297公龙) ? 〇扪 03 ‘ .A6 B6 五、發明説明（）〔vv”3 hT°hh5 i。J s°i 工：- 5°:v『3 S°9h-- h5He° UQ? J -vv- r I〇oe:s- 〔vs *si TP TU 669 6Τς S9 LILm U9s-cu 689 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本页) ί •装· -9 .打. —〔〒HJ 埏钿蕤辘»8£丨 P9 C99 ς99 s i^s-SL S2.59 6£93.-9 5$ 叫99 § £m-s 80=-3 68=-89 •線· -9 39 999 -9 s-:9°二 _ι,- §9 -9 95 199 I 8-i 069 / 甲 4(210X 297 公沒） 08'柳 A6 B6 五、發明说明（ 0^0 a坭佃應軀蜞sv^ ♦ ?H】斑昶展鹣放芝士丨¥5垅佃騵軀縝°°ν· 萑<0安二 osu ΝΤ°α「-7·° h-ο?工 ςε〇二 οϋ『° 「055 ποϋ ίοϋ -vs °ίΗ 二 3 (請先聞讀背面之注意事項再填w本页) u~ 卜89 k. §

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069s 6S •打· s S9 -9 m i9t? 9 -9 πς 169. 889 § 65 -々 -17 i 689 -9 m m m -9 s Is 699 96*7 08 V 96Ϊ; 9- T3 I,n •綠. 4)七甲 4(210X297 公潘） 208^03 A6B6 五、發明說明（） (s -卜J·) ί·ΖΎ -(HI 7J-)2,·卜-(s 7-p) nr:-(HT -8 -9Ϊ -pp) 88·9 -(HT -s) s-ς -(5 -91 -p)cors -(HT -s) οί·ς -(HI -17 -p) 9ο-ς -(HT-S) 96-17 -(HI -s) 176.17 -(HT -s) ςο<ί-(ΗΤ -ς -a -pp) 69-z -(HI -e) OVCJ -(H£ -s) 6D-Z -(Hz-e) SI-T Ols-T -{Hi 7 -p) 00-T -{H6e')soow 6Γ0 £0J2cnJCv0J3:l2p UT) (s 7-υί,-Γ---(ΗΖ -39卜-$ -(HT -s) Z.Z.S *(HT 9rOJ-(Hi -6 -a -ρρ)£ί·ζ 3： 05 T3 t—i —-\ I «rv r-

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甲4(210父297公潘） t請先聞讀背面之注意事項再填鸾本頁) .装· •打. •線. 208703 A6B6 五、發明説明（） isgiiiglillill r-'JMZ;-(s 7 -p) 6Tr:-(HT 7J·) α^-ΐΐ -z3cc_9 '(HT 9T -(HI -s) s-ς -(HT -ς -p) 80-lr\-(HT -s) s-ξ -(HTift? -(HI -2 -p) -aa -ej ic-s -(HiE')I7<NI<S:-(S-S) OT-tvl-ic -T -p)ooo-r -(s7 -p)

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(ο Γ9Τ -(0 Z-R u) 9-ii -u) ο-ςί -u) 6-ςί -(itp'-si; -u)o;<r-(T) rp-(o) o-vo-i -(1) z-9i -(0)^.5-(0)1-51 -a) ί·92 -a) 6·8ΖΤ'Τ) i.oa -a) C.Ta -(0) rsa -(0) ΓΖ3-(0) 6.ST -ο) 6·τα'0) O.UT u) 9·Η -(Ι)8-ςί (ί)^9口乂0 0

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S 甲 4(210X 297公沒） Λ 6 Β 6 户Β邮- 五、發明説明（42)

下述實施例用Μ例解本發明且絕非用Κ侷限本發明。管施例1 化合物Α及R 將IMI 332962菌培養於下述姐成之瓊脂培養板上：麥芽抽提物（吗綏L39) (Oxo id L39) 30克徽菌學(晖綏L40) (Oxoid L40) 5克酵母抽提物（噚绥L21) (Oxo i d L21) 0.5克瓊脂（噚餒3號）（Oxoid No . 3) 20克蒸餾水加至1升高壓滅菌前培養基酸鹼值為5.3 - 5.5範圍内。將已接棰培養板於28C培育14天。將數個經徽菌菌絲覆蓋直徑6毫米之瓊脂塊由培養物生長邊緣切下且將兩塊瓊脂塊轉移入數個各含1.6毫升滅菌，蒸餾水之極冷試管内。各試管予封蓋且於室溫予儲存直至所需。使用兩塊~琪脂塊接種於各含50毫升菌種培養基（Α)液層之容量250毫升维形燒瓶内：菌種培養液（Α):

Wc L34) (Oxo id L34) 10 克麥芽油提物（曙餒L39) (Oxo id L39) 21克甘油 ' 40克尊隆（Junl〇n)110(哈昵威爾史坦有限公司，1克華林頓，休瑞（Honeyvill & Stein Ltd·，

Wal lington, Surrey) 蒸餾水加至1升 -44- 本紙张尺度边用中a Η家楳準（CNS) T4規怙（210X29·/公;《:) (請先閲讀背而之注意事項再塡寫本頁) 裝. 經濟部屮央楛準局β工消赀合作社印5i Λ ίί Π 6 〇Sl〇3 五、發明説明（43) (請先閲讀背而之注意事項#蜞寫本頁) ' · * 高壓滅菌前，培餐液之酸鹸值K氫氧化納水溶液予調整至 6 . 3 - 6 . 5 〇將經接種菌種培養液之燒瓶於Κ直徑50毫米軌道運轉，轉速每分鐘250轉之搖動平台上培甭5天。燒瓶中内含予共混並予均質化。將已均質化菌種培養液以涠積比3%分別接種於含120毫升及50毫升醱酵培養液® 液靥之容量250奄升维形燒瓶内。醱酵培養液@ : 甘油 50克大豆油 30克棉籽粉（西格瑪）（Sigma) 10克蒸餾水加至1升培養液之酸鹸值於高壓滅菌前為6.1- 6.3範圍内。燒瓶如前述Μ搖動培育8天。經濟部中央榀準灼貝工消伢合作社印级 (a>將經燒瓶培育8天之培養液(接近4升）濾除菌絲及將濾液K體積比20%硫酸調鏊酸«!值至2.8及Μ乙酸乙酯予萃取三次，將乙酸乙酯萃出液收集並Μ重量/體積比1%碳酸氫納水溶液逆萃取兩次。將逆萃出水溶液收集，將酸鹼值如前述調整至2.8及以800毫升乙酸乙酯再萃取兩次。將此等萃出液合併及蒸發至乾而生成棕色油狀'物。將此油狀物利用依多（I to)多層圈式萃取器（P.C公司美國馬里蘭州波多馬克市）（P.C. Inc., Potomac, Maryland, USA)藉逆流層析法再製。所使用線圈為由内徑2.6毫米長度接近70米提供總容量約380奄升之PTFE细管所姐成標準製備線圈。 -45- ___ί\β_ 五、發明説明（44) 所使用溶劑系為乙酸乙酯，己烷甲酵及0.01當畺澹度硫酸以體積比6:5:5:6比例相混合之混合物。維持較低層相不動。線圈內利用吉而生303型（Gilson Model 303)泵及 80 4C型壓差計棋式（法固樂具爾，威利而斯，吉而生） (G ί 1 s ο η，V i 1 1 i e r s , L e B e 1 , F r a n c e )充滿較低相。將油狀物（4 97毫克於4毫升較上層相内及4毫升較下層相内）然後注入管柱尾端。然後以每分鐘8 00轉速率離心及將上層流動相由管柱尾端Μ每分鐘4奄升流速泵出。經185分鐘後停止離心且以每分鐘20毫升流速將甲酵泵入替代管柱內 ^物。將20毫升部分收集並藉测定對鯊烯合成酶抑制作用監測。經濟部中央榀準局工消伢合作杜印製 (請先間讀背而之注*事項#碼舄木頁) ______#1____ : ' L._____ 將對鯊烯合故酶顦示抑制活性之連續部分收集。將較早期部分蒸發至乾而得90毫克呈淡黃色油狀之化合物A 〇將較晩期部分合併。蒸發成1/4體積並經兩體積乙酸乙酯萃取兩次。將乙酸乙酯萃出液蒸發至乾而得40毫克黃色油狀物。將油狀物與由如下述實施例3所述而生成另一批 5升醱酵液藉類似製法而得額外46毫克產物合併。將合併物質藉逆流層析術利用乙酸乙酯，己烷，甲酵及0.01當量灌度硫酸以體積比3 :2:2:3比例相混合之溶劑混合物於維持較低層相靜止下再製。將儀器操作及將部分收集且如上述監測並將較上層流動相Μ每分鐘5毫升流速泵出。將生物學活性部分收集及蒸發至乾而得33毫克圼淡黃色油吠物之化合物Β :電子撞擊質譜測定法得下述碎體離子：Μ/2 91. 170, 497且亦具如表2-4所示進一步特徴。 -4 6 _ 經濟部屮央榀準局！3：工消费合作社印製五、發明説明（45) ⑸將經培育8天堍瓶内6升培養液分離而得菌絲M3升甲醇萃取兩次及過濾。將漶液蒸發濃縮至約500毫升，以甲酸調整酸鹼值至3.0並以500奄升乙酸乙酯萃取三次。將乙酸乙酯萃出液收集及Μ 20 0奄升重量/體積比1%碳酸氫納溶液予逆萃取兩次。將逆萃出液收集，調整酸值為3.0 並以500毫升乙酸乙酯再萃取兩次。將所有有機部分合併及利用旋轉蒸發器蒸發減量至乾而生成棕色油狀物。將 578毫克油狀物K高效液相層析術利用由三部吉而生303 型溶劑移液泵，811動力混合器及802C壓差計棋式所姐成之吉而生自動製備系铳再製。層析術係於戴芮美司微吸 C18 (Lynanax Micrsorb C18)直徑 5 微米半製備管柱（250 xlO毫米）進行，流動相為由乙腈及體積比0.1 %甲酸至酸鹼值3.15與乙酸铵所姐成（濃度比1:3->4:1->1:3)濃度梯度Μ每分鐘2.8 - 5.6毫升流速泵出經65分鐘運轉時間。將此方法重複16次。將於4.95分鐘析出部分13次收集且藉測定對鯊烯合成酶抑制活性監測。去除有櫬曆及蒸發至乾而得172毫克淡黃色油狀物之化..合物Α。窗倫例2 使用90毫升如實施例1所製備經培育3天菌種培養均質液接種於容量5升醱酵容内3升醱酵培養漉©内。將經接種培養液維持於25"0且以兩個6片直徑70奄米渦輪葉輪Μ 每分鐘800旋轉速率攪拌。將培養液以每分鐘3升滅菌空氣未充足通氣。倘需要添加矽酮防沫劑（道康寧1520) (Dow Corning 1520)控制培養液遇度起泡現象。本紙尺度边用中as家標準(CNS)T4規怙（210x297公没) (請先閲讀背而之注意事項孙堝寫本頁) 裝- 線- Λ 6 Η 6 r ___ 五、發明説明（46) 經培養6天後培養液收存·。奮掄例3 使用8份0.5毫升如實施例1所述進行醱酵5夭期醱酵液分別接種於8個容量250毫升錐形瓶内各含50毫升菌種培養液（Α)液層内。將燒瓶於25υ置於Μ50奄米直徑軌道Κ每分鐘250轉運轉之搖動平台培養4天，收集燒瓶内容物並均質化。使用體積比3 %均質化菌種培養液接種於容量250奄升碓形瓶內含120毫升與50毫升醱酵培養液（Β液層内。將燒瓶Μ前述搖動下培養10天。

當fe例4 化会物A 使用體積比3%如實施例3所製備均質化菌種培養液接種於容量各為5升内含3升醱酵培養液⑭的醱酵容器内、將經接種培養液維持於25¾且以兩個6片直徑70奄米渦輪絜輪以每分鐘5 00旋轉速率播拌•將培養液Μ每分鐘3升滅菌空氣未充足通氣。添加矽酮防沫劑（道康寧1520)(Dow Corning 1520)控制培養液過度起發泡現象。將兩培養容量内容物經11天生長後合併且藉依據前述實施例1(a)所述步驟逆流層析法再製而得137毫克合物及；氘-甲酵内 500百萬Hz質子核磁共振譜包括訊號於約0.84-0.90 (m,9H), 1.03 (d,7,3H), 1.09-1.19 (in , 2 Η ) . 2.10 (s,3H), 2.24 (m.lH), 2.34 (m , 1 Η) , 2.68 (dd, 13,6, 1H) , 4.04 (d,2,lH), 4.97 (s.lH), 5.08 _ 4 8 ** (請先閲讀背而之注意事項#填寫本頁) 裝· 線_ 經濟部屮央標準局员工消赀合作社印^. 經濟部屮央梂準局CX工消价合作杜印λ'ια ^ 五、發明説明（47) (d.5.1H), 5.27 (s.lH), 5.80 (d.lb.lH), 6.31 (d,2,lH), 6.85 (dd,16,8, 1H) , 7.14 (t,7,lH), 7.19 (d, 7,2H), 7.26 (t,7,2H);於氘-甲酵內 125.75百萬 Hz碳 -13核磁共振合成去偶脈包括峰於約S 172.5(0), 172.1(0), 170.1(0), 168.5(0), 166.5(0), 157.6(1), 147.7(0), 141.6(0), 130.2(1), 129.3(1), 129.3(1), 126.9(1), 119.8(1), 111.5(2), 106.8(0), 91.1(0), 82.5(1), 81.0(1), 80.1(1), 76.6(1), 75.6(0), 44.4(2), 40.9(2), 37.7(1), 35.6(1), 34.9(2), 33.1(1), 30.8(2), 26.5(2), 20.9(3), 20.5(3), 19.2 (3) , 14.1 (3)，11 . 4(3)。

窗淪例R 由實施例1所述進行醱酵5天期所製得接種菌冷凍儲存品。將培養液樣品離心10分鐘並將菌絲K15%甘油及0.01% 吐溫80 (Tween 80)再懸浮為原有體積。將菌絲扭出並再懸浮然後K 1.8毫升量分配入塑膠管內且於-20 儲存。使用8份各0.5毫升冷凍接種菌種液各接種於8個容量250毫升錐形燒瓶内含50毫升菌種培養液㊇液層。將燒瓶於25 υ 置於以50毫米直徑軌道以每分鐘250轉運轉之搖動平台培養4天。將菌種燒瓶內容物收集且使用體積比3 %菌種培養液接種於120涸容量250毫升维形燒瓶内含50毫升醱酵培養液©液層。將燒瓶Μ如前述搖動下培養9天。

啻倫例fi 化合物C -49- 本紙尺度边用中a Η家楳毕（CNS)甲4規怙（210X297公犮） (請先閲讀背而之注意事項再填寫本頁) 裝* 線< Q C Γ a ΛΓ £ 6 6 ΛΠ 五、發明説明（48) 將由前述實施例3而得5升醱酵液過滹去除菌絲及將逋液Μ硫酸調整酸鹼值至2.8並經乙酸乙酯萃取。將乙酸乙酯萃出液經碳酸氫納溶液逆萃取。將逆萃出水溶液收集，如前述調整酸驗值至2.8及經乙酸乙酯再萃取。將此等萃出液合併及蒸發至乾而得油狀物。將油狀物藉依據前述賁施例1(a)所述方法利用乙酸乙酯，己烷，甲酵及〇.〇1當量濃度硫酸Μ體積比6 : 5 : 5 : 6所姐成混合物溶劑系Μ前述逆流層析術再製。將顯示對鯊烯合成酶抑制活性之連續部分但於逆流層析管柱内顯示掻低流動性（只有在管柱內完全取代靜止相後回收）之部分收集，蒸發為1/4容積並Κ兩倍量乙酸乙酯萃取三次。經濟部中央榀準局ex工消作合作杜印5i (請先wl-ifi背而之注意事項Λ蜞窍本頁) 將此物質與由前述寅施例4或5醱酵液以前述製程製得兩批類似物質合併。將經合併物質藉依據前述實施例1® 所述方法及利用乙酸乙酯，己烷*甲酵及0.01當量濃度硫酸以體積比6:1:1:6所姐成混合物溶劑系及較下層相靜止Μ 前述逆流靥析術再製。將流動相以每分鐘4毫升流速泵出且將生物學活性部分收集及蒸發至乾而得95毫克淡黃色油狀物具如表2-4所示物理特徴之化合物C。普淪例7 、化合物I) 將由如實施例3所述產生6升醱酵液分雔而得菌絲甲酵萃出液（約3克）與由如實腌例5所得5升醱酵液分離而得菌絲甲酵萃出液（約5克）合併。將此8克油狀物利用吉而 -50- 本紙張尺度边用中a困家標準（cnwt 4規格（210χ29γ公没） Λ 6 η 6 咖〇3 五、發明説明（49) 生自動製備儀器及Μ前述實施例1 fc)所述操作條件下藉高效液相層析再纯化18回。將第7號部分K硫酸酸化為酸驗值至3.0後經乙酸乙酯萃取及蒸發為黏稠油狀物。將此 190毫克油狀物接受利用由乙腈及5毫莫耳濃度硫酸水溶液所姐成濃度梯度為流動相高效液相層析条統* Μ每分鐘 2.8毫升流速運轉20分鐘，將16部分收集。將部分11Κ硫酸酸化至酸鹼值3.0後經乙酸乙酯萃取及減壓去除溶劑而得約6毫克化会物I D 。

奮倫例8 化合物A 將如實施例5所生長培養7天4個最終階段燒瓶內容物收集及均質化供為120涸如實施例3及5所述培養8天含50毫升醱酵液®之燒瓶的菌種。將由培養8天燒瓶內接近6升醱酵液過滹去除菌絲。將滹液Μ體積比20 %硫酸調整酸鹼值為2.8及經乙酸乙酯萃取5經碳酸氫納逆萃取且如實施例1(a)所述於酸鹼值2.8經乙酸乙醋再萃取。將乙酸乙醅萃出液減壓濃縮而得黃色油狀物，將此油狀物溶解於10毫升甲酵內。將溶液蒸發為3毫升且使經0DS-3華特曼帕地休生）製備（Whatman Partis丨 1 Bioprep) 40，75埃，於乙腈 -水20: 80内混漿裝）管柱（32x 2.5厘米），' 管柱K乙腈及水之混合物濃度梯度，增加乙腈部分如下1:4，3:7, 1:1 ，3: 2逐步溶析。部分藉高效液相層析監測且將含化合物 A之部分蒸發去除乙腈。將所得水溶懸浮液部分收集及冷凍乾燥過夜而得59毫克雜白色固體之化合物A 。 -5 1 - 本紙張尺度边用中SB家楳华（CNS)<P4規枋（2丨0X297公;！!) (請先閲讀背而之注意事項再填寫本頁) 裝- 線- 經濟部屮央榀準局只工消伢合作社印λ,,4 η 08703 Λ 6 116 經濟部屮央標準局Α工消仲合作社印^ 五、發明説明（50) 化合物B，C及D亦可利用類似冷凍乾燥技術製得為固體〇表2-4所示對化合物A之數據與由實施例1，4及8所製備化合物A之數據相一致。啻施例g 化合物1)及F 將4克實胞例8產物溶解於500毫升甲酵及5毫升濃鹽酸内。將所得溶液置室溫22小時及然後M500毫升甲酵稀釋並儲存於-20¾過夜。將溶液於30 t：減壓湄縮至約100毫升髏積及以每升含2毫升濃硫酸之100毫升乙腈：水（1:1)稀釋。經分析高效液相層析[斯斐利朔（Spheris〇rb)0DS-2管柱流速每分鐘2奄升，每升含150微升濃硫酸之乙腈：水 (1:1)]顯示存在有兩棰可藉製備高效液相層析[斯斐利朔 0DS-2 2英吋管柱，流速每分鐘50毫升，每升含2毫升濃硫酸之乙腈：水（1:1)]分離之主要成分。將含較先運行成分之部分合併及於30t：減壓蒸發去除乙腈。將混濁水溶相 Μ 150毫升二氯甲烷萃取十次且將有機萃出液合併。乾燥及蒸發而得1.476克淡黃色泡沬之化合物Κ ;溴仿内紅外光譜分析包括於約1765，1729，1249厘米-1峰；石臘内紅外光譜分析於約3450，1740厘米峰；[a]D+ 36.02。（c 0.0103甲醇）且具如表2 - 4所示進一步特徵。奩掄例1 0 化合物F 將20毫升0.8莫耳濃度氫氧化纳水溶液添加入由1.38克 -52- (請先閲讀背而之注意事項#填寫木頁) 裝· 訂_ 線_ 本扒張尺度边用中a Η家樣準(CNS)T4規15(210x297公没) 經濟部屮央橾準xjA工消#合作社印¾ λ ei

HG 五、發明説明（51) 實施例8產物溶於25毫升甲醇之溶液内並將混合物加熱迴流3小時。使混合物冷卻至2010且將沈澱物過濾收集。將固態沈澱物溶解於40毫升2莫耳濃度鹽酸內及Μ 45毫升乙酸乙酯萃取四次。將有機溶液經硫酸鎂乾燦及蒸發而得 885毫克固體。將固體藉逆相高效液相層析[斯斐利朔 C-6 1英吋管柱，流速每分鐘15毫升，以每升含0.15毫升澹硫酸之7.5 %乙腈水溶液增至每升含0.15毫升濃硫酸之 50%乙腈水溶液湄度梯度溶析]將濃縮液經硫酸納飽和並經50毫升乙酸乙酯萃取五次。將乙酸乙酯萃出液減壓蒸發，將殘餘物溶解於水中且冷凍乾燥而得3 8 0毫克白色泡沫之ib_—合-物F .。石臘內紅外譜分析包括於約3408 , 1737厘米 -1峰；[a]° + 4.5° (c 0.883甲酵）且具如表2 - 4所示進一步特激。當施例1 1 化合物Α鈣敌將IMI 332962培養於含下述姐成之瓊脂培養板上；波利吉（Porridge)蒸麥 20克微量鹽類 1奄升 [0.1克硫酸亞鐵· ir水合物’ 0.1克.氣化録.四水合物及0.1克硫酸鋅·七水合物溶於100毫升蒸飽水之溶，液] 琪脂（吗按 3 號）（0xoid No.3) 18¾ 蒸餾水加至1升培養基之酸鹼值於髙壓滅菌前為5.3 - 。3|胃接種培養板於28"C培養14天。將數画經徽 -53- 本紙张尺度边用中8 8家榀準((^5)〒4規格（21〇父297公;《:) .................f .....裝· ·：訂·.：線.....A (請先閱請背而之注意事項朴填寫木頁) Λ 6 Π6 經濟部中央#準局β工消"合作杜印製五、發明説明（52) 6毫米之瓊脂瑰由培養物生長邊緣切下及將兩塊瓊脂塊轉移入数個各含1.6毫升滅菌蒸皤水之極冷試管内。將各試管封蓋且儲存於液態氮內直至所需。培養液妁：牌（吗綏 L34)(0x〇丨dL34) 10克麥芽油提物（啤餒L39) (Oxo id L39) 21克甘油 40克尊隆（Junlon)ll〇(哈昵威爾史坦有限公司）1克蒸餾水加至1升將培養疲之酸鹼值於高壓滅菌前以氫氧化納水溶液調整為約6 . 5。將經接棰培養液於25 t：置於M5厘米拋擲距離Μ每分鐘 250轉埋轉之旋轉搖動器内培養4天後，將培養液通過50毫升@茼崩解任何較大顆粒_。然後將體積比3 %培養液接種入容量250毫升錐形燒瓶内含50毫升培養液（Β內。甘油 50克大豆粉 30克棉籽粉 10克蒸豳水加至1升培養液之酸鹼值高壓滅菌前為6.2 - 6.3箣圍内。如前述培養7天後，將醗酵液離心1〇分鐘及將澄清液去除。將细胞積聚小球再懸浮於重量/體積比15%甘油及體積比0.01%吐溫80内離心如前且去除澄清液。將細胞小球再懸浮於重量/體積比1 5 %甘油及體積比0 . 0 1 %吐溫80內一 5 4 - 本紙張又度边用中a a家楳準(CNS) τ*1規怙（210x297公;¢) (請先間請背而之注意事項洱填寫木頁) 裝· 線-

經濟部屮央標準局β工消伢合作社印M 五、發明説明（53) 並分配入極冷試管且於-20它儲存。將各0.5毫升具生長力製品接種於4個容量250毫升维形燒瓶內含50毫升培養液㊇內。將烴接種燒於251置於5 厘米埋距以每分鐘250轉運轉之旋搖動器内培養4天。將燒瓶內容物收集及用Μ接種入容量7升醱酵器内4升培養液（Αί。將經接種培養液維持25*0且Μ三個6片渦輪葉輪Κ每分鐘500轉速旋轉搛拌48小時。附帶藉添加矽酮防沫劑（道康寧1520)控制醱酵器内培養液過度發泡現象。將此培養液Κ每分鐘4升速率通氣。經4S小時後，使用15升培養液接種於容量780升拜而拉斐特（8丨〇131*丨1:16)醱酵器内5〇〇升培養液0中。將經接捶培養液維持於25Ό，0.5巴頂壓力下並Μ三個6片渦輪葉輪Μ每分鐘500轉速旋轉攪拌17天。附帶藉添加矽酮防沫劑（道康寧1520)控制醱酵器内培養液過度發泡現象。將此培養液以每分鐘5 00升速率通氣。經17天後藉助約40升水清洗由醱酵器内收得約400升培養液及以7.5升0.880氨調整酸鹼值為10.5。將1 %戴克來 488L添加入經攪拌20分鐘之培養液内及然後經戴克來過漶。將濾液Μ濃硫酸調整酸鹼為6.8。將细胞懸浮於45 0升蒸餾水中及Μ0.880氨調整酸鹼值為10.6。混合物攪拌30 分鐘及經戴克來過滅。將滤液以濃硫酸調整酸鹼值為7.0 及滹液W每小時80升速率裝載於安百來（Amberlite) XAD-16交換樹脂之管柱（直徑9”，40升）。然後將管柱以重量/體積比1%硫酸銨溶液以每小時80升流速清洗直至流出 -55- (請先閲讀背而之注意事項再場寫木頁) 裝- 線· Λ 6 Η 6 五、發明説明（54) 液為澄清為止及然後以40升水'清洗將管柱Μ丙酮/水 (1:1)每小時30升流速溶析。及流經32升前運行後將87升部分收集。將200乙酸鈣溶於1.2升水之溶液攒拌添加入此部分。16小時後過濾收集所形成沈澱物。將沈澱物以2 升丙嗣/水（1:1)清洗，然後再Κ1升丙酮清洗且經五氧化二磷真空乾煉而得153克固體之化合物Α鈣篇。

窖施例1 2 化会物二鉀甜方法A 將20毫克乙酸鉀溶於0.25毫升水之溶液添加入由70毫克實施例8產物1毫升甲醇之溶液内。將混合物以1毫升甲醇及0.2 5毫升水溶液稀釋及將沈澱物過濾收集且將沈澱物真空乾燥而得55毫克無色固體之檁題化会物，υ ma>t (石臘）3482(0H)， 1724(C=0，酯），1649(C=C,烯烴），及 1 620公厘(C = 0,羧酸鹽）；分析值：C,51 . 18 ; H.5.48; Κ，9.4; H2〇,5.4%。C35H“K；2〇i42.5H20 需：C.51.77; H,6.08;K,9.63;H20;5.5%。

方法R 經濟部屮央榀準而CS：工消件合作社印製 (請先閲請背而之注意事項#蜞寫本頁) _Γ 1 .·-— — ---------- 將20毫克乙酸鉀溶於0.25毫升水之溶液添加入由70毫克實施例8產物溶於1毫升甲酵之溶液內。將混合物以1毫升甲酵及0.25毫升水溶液稀釋且將所形成沈澱物過滹收集及將沈澱物真空乾燥而得66毫克無色固體之樓顆仆会物，熔點 278-280t：(柯夫勒）（K〇fler)，υ (石臘） 34δ1(0Η)， 1724(C=0，酯），1649(C=C,烯烴），及 1620厘本紙张尺度边用中國Η家標準（CNS) T4規格（210x297公*) 經濟部+央櫺準局工消赀合作社印製五、發明説明（55) 米- MCzO,羧酸鹽）；分析值：C，51.37; H,5.49; K.9.9; H20,5.5% 。 C3BH44K2〇142.5H2〇需·· C’51.77; Η,6.08； K.9.6； Η2〇； 5.5¾°

方法C 將87奄克碳酸氫鉀溶於2毫升水之溶液添加入由300奄克實施例8產物溶於30毫升水之懸浮液内。將所得澄清溶液分成各16毫升兩部分。將第一部分接受冷凍乾燦而得136毫克無色泡沫狀標題化合物，熔點約280 T (柯夫勒），υ (石臘），3485 ( 非常寬，OH), 1724 (酯 00)，1649 (共軛 C = C)，1620 厘米 -1(羧酸，C = 0);分析值：C,52.24; H，5.86; K,9.4%。 C3eH“K2〇 …2Η2〇需：C, 52.35; Η.6.03; Κ，9.74%。將第二部分Κ100毫升甲酵稀釋及將凝膠狀沈澱物過濾收集且真空乾燥而得14毫克奶油色固體標顆彳h合物，熔點 285 υ (柯夫勒），υ (石腿），3478 (寬 OH), 1724 (酯 C = 0)，1647 (共軛C = C)，1622厘米-M羧酸鹽，C = 0);分析值：C，52.13; H，5.86; K，9.5% 。 C35H44K2〇14.2H2〇需 :C,52.35; Η,6.03; K,9.74%。 g淪例1 ^ 化合物Α三鉀铺 *

方.法A 將430毫克碳酸氫鉀溶於10毫升水之溶液添加人由1克實施例8產物溶於100毫升水之懸浮液内。將所得溶液接受冷凍乾燥而得1.08克亮灰裙色固腊傳頴彳h合物，υ ηβχ -57- 本紙5R尺度逍用中國Η家標毕（CNS)T4規格（210x297公;«:) (請先閲讀背而之注意事項孙填寫本頁) 裝- 線- ί：&β^3-----— 五、發明説明（56) (石臘），3491-3167(寬 OH), 1731(醏 C = 0)，1614 厘米 _1( 羧酸鹽，C = 〇及 c = C);分析值：C,48.65; Η , 5.70 ; Κ.14.1; Η2〇,6.2%。C3BH43K30 …3Η2〇需·· C.48.93; Η，5.75; Κ·13.65; Η2〇,6.29%。方法Β 將20 0毫克如前述方法Α所製備化合物Α三鉀鹽溶解於 2毫升約40它熱水內及將10毫升丙酮添加。將所得溶液儲存於冷凍機1小時及將所得沈澱物K過濾收集且真空乾燥而得183毫克無色顆粒狀固體標題化合物，熔點276-28 0T： ’ [a ]+18.9° (H2〇, 〇_1.045) , υ D (石腦），1719(酯 ’ C = 0)，1 607厘米 <(羧酸鹽，C = 0及C?C);分析值： C，48.88; H,5.59; K,13.8; H2〇,6.5%。 C35H43K3〇14.3H2〇需：C，48.93; Η,5.75; Κ，13·65; Η2·〇,6.29%。方法Π 經濟部中央標準工消伢合作社印奴將131克實施例11產物添加入含16毫升硫酸之500毫升乙腈/水（1:1)經攪拌混合物內。經10分鐘後，將固體過滤去除，以300毫升乙腈/水/硫酸（49 : 49 : 2)之混合物清洗及丟棄。將790毫升合併濾液Μ添加110毫升甲酵而呈均勻及裝載於以每升含2奄升硫酸之乙睛/水Π:1)裝華特曼柏地你0DS-3之管柱（9.6x82厘米）上。將管柱於相同溶劑糸内展開且於展開溶劑前運行12升後予改成每升含2毫升硫酸之乙腈/水（6: 4)展開溶劑系及將50毫升部分收集。將 26-102部分合併且與1.5升新鮮華特曼帕地你Ρ40 0DS-3 -58- 本紙张尺度边用中a a家標準（CNS)执格（2丨0><297公货）經试部屮央標準局：s：工消仲合作社印ft,,4 208703 五、發明説明（57) 及7升水攪拌。20分鐘後將吸附劑以過滹移出將吸附劑以水清洗直至無酸及然後以2.5升腈溶析。將水添加，蒸發去除乙睛及將所得懸浮液冷凍乾燥而得31.6克固體。將5克部分固體溶解於200毫升乙腈内及將200奄升水添加。將溶液熱至40t：並以0.77當量濃度氫氧化鉀水溶液滴定為酸鹼值9 。將2.13克乙酸鉀溶於10毫升水之溶液添加及將溶液過濾，加溫及Μ熱丙酮稀釋為2升。將溶液緩媛冷卻及16小時後滹出無色結晶固體，將固體Κ 15毫升丙嗣清洗及真空乾燥。將5.5克固體粉化及使其與大氣平衡而得檁題化合物；分析值：C,48.3; Η，5.5; Κ, 13.3; Η20,6.9%。（：3ΒΗ43Κ3〇14·3.5Η20 需：C.48.43; Η，5·81; K,13.51; H20,7.3% 。

方法R 以類似於方法D所述純化作用將由較大華特曼 (Whatman) P40層析用管柱而得來經合併部分分批吸附於新鲜華特曼P40 ，如前述將其K乙腈過濂，清洗及溶析，但將12.1升乙腈溶液蒸發為7升，滹除碎屑及然後將濾液添加水調整比重為0.9 。添加乙腈/水（1:1)將溶液內化合物A濃度調整為每升12.5克。將溶液熱至451C及以0.912 當量濃度氫氧化鉀水溶液將溶液酸鹼值滴定為9.2。將77 克乙酸鉀溶於200奄升之溶液添加接著將四倍體積丙酮於 45C添加同時將溶液攪拌。將溶液置一旁结晶及將结晶過滤於滤紙上經16小時後將滹紙M2升丙酮清洗，真空乾燦巨經20篩孔過篩而得標題化合物，[α ]+18.9° (H20， -59- 本紙尺度边用中8困家楳準（CNS) T4規格（210乂297公_«:) (請先閲讀背而之注意事項孙蜞寫本頁) 裝- 線- r Q3't〇3 經濟部屮央櫺準局cx工消#合作社印!ii 五、發明説明（58)〇_1.041);分析值：c，48.5; H,5.5; K，13.45; H2〇,6.9% ° C3BH43lU〇14.3.5H2〇霈：C.48.43; H.5.81; K>13.51· Ha〇,7.3% 0 g淪例1 4化合物A ，-1铊翰將246毫克乙酸铵溶於5毫升水之溶液添加入由1克霣施例8產物溶於40毫升甲酵之涪液內。將所得槳體攪拌 30分鐘及然後過滤及真空乾燦而得6 90毫克亮灰褐色固體標題―化合物〜，熔點193-195t：(柯夫勒），(石臘）， 32i6+(NH3), 1724(酯 C = 0) ,1651(共軛 C = C), 1602 厘米 -1(狻酸鹽 C = 〇);分析值：C,53.97; H,7.00; N.3.61; H20,5.17% 。 C35H52N20…3.25H20 需：C,53.66; Η，7·53; N.3.58; H20,5.4%。 g _ 例 1 5 化合物Α»三-丨肪醏敌將63.5毫克L -離胺酸添加入由100毫克實施例8產物溶於10毫升水之懸浮液內及將琨合物室溫攪拌30分鐘。將所得溶液接受冷凍乾煉而得157毫克無色凍乾固體標題化合物υ (石職），1717 (酯C = 0)，1602厘米-1 (寬，羧酸鹽 c = o,共軛 c = c); § (d2〇)包括、2 . 17 (s , 0 C 0 CJLs ),+2.61(d,J = 6Hz, Ph CJL· )， 3.01 (t,J = 6Hz, 3xNH3CJb.CH2 -), 3.75(t,J = 5Hz,3xHaNCtLC02H), 3.93(s,CJL(〇H)), 4·86-4.94(πι, QJL〇 C0CH3 及-〇. CJL- C 0 2 ) , 4 . 9 8 及 -6 0 - (請先閱讀背而之注愈事項洱填寫木頁) 裝. 訂線 f 本紙张尺度边用中國闽家樣芈（CNSilM規格（210x297公；《：) 08703___ η 6 _ 五、發明説明（59) 5.05(2s,C=diL·), 5.90(d,J=13H20,C0CL=CH), 6.17(s,QJL-〇COCH=CH-). 6.94(dd,J = 13Hz,7Hz,0C0CH = CJL)及 7.18-7.39U,芳族）。窨倫例1 R 化会物A，三納翰將365毫克碳酸氫納20毫升水溶液添加入由1克實施例 8產物溶於50毫升約40 t：熱水懸浮液内。將所得溶液置室溫30分鐘及冷凍，乾燥而得奶油色包沫。將泡沫溶解於 15毫升水中及添加60毫升丙酮且將所得溶液置於3 -C 48小時。將所形成结固體以過滹收集及於40 ·〇真空乾燥而得 555毫克奶油免固腊撢顆彳h合物》[« 3+19.6° (H2〇, c_1.109);分析值：C,51.28; H.5.76; D Na,8.5% 〇 C35H43Ha3〇14.3.5H2〇需：C, 51.28; H,6.15; Na, 8.41% o

窖觖例1 7 化合物G，H及T 經濟部屮央楛準而CX工消"合作杜印^ (請先閲請背而之注意枣項#填寫本頁) ___I__-;____Γ.____________ 將70克實施例11部分產物添加入含8毫升硫酸之1.2升乙腈/水（1:1)經攪捽溶液内。將12毫升另一部分硫酸添加及搅拌30分鐘後將所得懸浮液K聲波處理及離心30分鐘，將澄清液傾除及將殘留沈澱物Μ含1.6毫升硫酸之8 00毫升乙腈/水（1:1)清洗。然後將沈濺物Κ離心去除及將60克實施例11另部分產物加入經傾除之合併澄清液内。將18毫升硫酸添加入所得懸浮液内後將懸浮液攪拌及Μ轚波處理 -61 - 本紙尺度边用中8國家楳iMCNS) Ή規格（210x297公;《:) A 6 Π6 五、發明説明（60) 反應然後雔心。將900毫升澄清液施用於裝於每升含2毫升硫酸之乙腈/水（1 ·· 1)溶液内之華特曼帕地你P40 0DS-3精煉管柱（9. 6 X 82厘米）上。將管柱以每小時300奄升流速展開於相同溶劑内且經前運行8.33升後將1.07升部分收集。藉旋轉蒸發減量為500毫升後，將大部分紫外光吸收物質吸收於斯斐利朔0DS-2逆相液態層析5微米管柱（25厘米 X 21毫米）上。將管柱以水清洗及然後K乙詾脫吸附。將析出液體積減量為20毫升及然後將10毫升水及75微升濃硫酸添加。將此溶液接受用斯斐利朔0DS-2 5微米管柱（25 厘米X 21毫米）及每升含2毫升濃硫酸之乙腈/水（1:1)之流動相及每分鐘18毫升流速之製備高效液相層析。將15個注入2毫升溶液於管柱製備運行與系統經紫外光譜學於210 公沙波長監測實施。化合物G，Η及I如下文所述由對應紫外光峰以滯留時間29，32及18分鐘部分單離而得。 ⑻化合物I之塱鯓經濟部中央梂準扃κχ工消费合作社印製 (請先閲讀背而之注意事項朴塡寫本頁) ___________- -. 將對應於滯留時間18分鐘峰部分收集，Μ水稀釋及吸附於5微米斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米X 21毫米）上，經水清洗及經乙腈去吸附。將乙腈旋轉蒸發去除後*添加.水調整體積為30毫升及將樣品冷凍乾燥而得112毫克固體，將 100毫克固體溶解於每升含2毫升濃硫酸'之4毫升乙腈/水 (1:1)溶液内且埋行入斯斐利朔0DS-2 5微米管柱（25厘米 x21毫米）注入2毫升每升含2毫升濃硫酸之乙睛/水 (1:1)及以每分鐘25毫升流速將管柱展開於相同溶劑系。將各埋行於滞留時間20分鐘對懕於入為210公沙峰部分收 -62- 本紙法尺度边用中a Η家楳準（CNS) Ή規怙（210x297公;«：) Λ () Η 6 208703 五、發明説明（61) (請先閲讀背而之注意枣項孙堪寫木頁) _Γ·_Γ_ 經濟部屮央標準局A工消烀合作社印製集，Κ水稀釋，吸附於5微米斯斐利朔〇DS-2 5微米管柱 (25厘米x21毫米），經水清洗及經乙腈去吸附。將乙腈以旋轉蒸發去除及將水添加入所得混合物内而得20毫升體積懋浮液。將懋浮液冷凍乾堞而得80毫克固體。將60毫克此固體溶解於2.5毫升30%乙腈/ 0.1莫耳濃度正隣酸二氫銨鹽酸鹼值6.5溶液内及Μ每運行1 . 25毫升量注入5微米斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米X 21奄米）且將管柱Μ每鐘25毫升流速展開於相同溶劑。將由各埋行26 - 3 5分鐘析出物收集及合併及Μ水稀釋後吸附於5微米斯斐利朔0DS-2管柱 (25厘米X 21毫米），經水清洗及經乙腈.去吸附，將乙腈以旋轉蒸發去附及將水添加入所得混合物内而得體積30毫升懸浮液，然後將懸浮液冷凍乾燦而得46毫克固體。將此固體溶解於每升含2毫升湄碕酸之5毫升乙睛/水（1:1)溶液及每運行2.5毫升量注入5微米斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米X 21毫米）且Μ每分鐘25毫升流速將管柱展開於相同溶劑。將各運行滯留時間9.8分鐘對應於入為210公沙部分滯留及將合適部分合併，Μ水稀釋，吸附於5微米斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米x21毫米），經水清洗及經乙腈去吸附。將乙腈Μ旋轉蒸發去除。將水添加而得體積約20毫升溶液及將溶液冷凍乾燥而得2 4毫克具表2-'4所示特徵之也_ 合物Τ。 <h> Yh合物Π之塱雔將各蓮行滯留時間29分鐘對應峰部分合併K水稀釋及吸附於5微米斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米x21毫米）上，經 -63- 本紙張尺度边用中a B家櫺準（CNS) T 4規怙（2丨0X297公;it) £08^03 五、發明説明（62) 水清洗及經乙腈去吸附。將乙腈旋轉蒸發去除將水添加調整體積為30毫升及將溶液冷凍乾煉而得10毫克固體，將8 毫克此固體溶解於每升含2毫升澹硫酸之1毫升乙腈/水 (1:1)溶液且於每毫升8毫克濃度下將1毫升量注入斯斐利朔0DS-2製備高效液相.層析管柱（25厘米x21毫米）且以每分鐘25毫升流速將管柱展開於相同溶劑。將各運行滯留時間25分鐘對應於入為210公沙部分滯留及K水稀釋，吸附於5微米斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米X 21毫米），經水清洗及經乙腈旋轉蒸發去除且加水入所得混合物而得體積約20毫升溶.液◊將溶液冷凍乾烽而得5毫克具表2-4所示特徵之化合物「, (c>化合物η ^菌雜將對應於滯留時間32分鐘峰部分合併以水稀釋及吸附於 5微米斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米X 21毫米），將管柱以水清洗及經乙腈去吸附。將乙腈旋轉蒸發去除，將水添加入所得混合物而得約30毫升體積溶液，將此溶液冷凍乾燥而得12毫克具如表2-4所示特徵之化合物Η。窨釉例1 8

化合物.1，Κ，丨.，Μ及H 經濟部屮央標準局ΕΧ工消奸合作社印製 (請先閱讀背而之注意带項洱蜞窍木頁) _' 1-·__·____I__ 除自華特曼帕地你1)40 005-3管柱溶析、以8.89升前運行替代8.33升前運行外根據實施例17所述步驟得到兩部分第一部分L 1500毫升部分接著第二部分2_ 1220毫升部分。將1500毫升第一部分1與1升華特曼帕地你p4〇〇dS-3攪拌。Κ水稀釋為10升後 '，及將懸浮液攪拌1小時。將混合 -64- 本紙張尺度边用中《 Η家梂準(CNS)T4規怙（210X297公;¢) Λ 6 Π 6 208103 五、發明説明（63) 物用華特曼（Whatman) 54號滤器過濾移出Ρ40物質，Μ水清洗及然後Μ 1 500毫升乙腈去吸附，將體積減量為20毫升後’將15毫升乙腈添加入經過漶溶液内。將此溶液接受利用5微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米x21毫米），每升含2毫升濃硫酸之乙腈/水（35:65)之流動相，每分鐘 25毫升流速且糸統以波長210沙紫外光譜監测的製備高效液相層析。經10次製備運行將3.5毫升溶液注入管柱實施。經6 90毫升前運行後，將兩部分收集；400毫升X部分接著420毫升Y部分。將由各運行收集適宜部分合併而得 4.0升X部分及4.2升Y部分。

叫化合物h夕留SS 將4.0升X部分與200奄升華特曼帕地你P40 0DS-3攪拌。將水添加為10升且再播拌1小時後將P40物質以華特曼 54號滤器過滹移出。將P40物質Μ水清洗及JW200毫升乙腈去吸附。將乙臃溶液蒸發為1毫升後，將每升含2毫升濃硫酸之3毫升乙腈/水（2:3)混合物添加及離心將所得溶液接受利用5微奠耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米X 21毫米），每升含2毫升濃硫酸之乙腈/水（2:3)之流動相，每分鐘25毫升之流速及以波長210公沙紫外光偵檢的製備高效液相層析，將對應於滞留時間17.6分鐘峰部分滯留以水稀釋，吸附於5微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米 x21毫米）上，經水清洗及經乙腈去吸附。乙睛去除後，將水添加而得體積20毫升溶液，將溶液冷凍乾燥而得6毫克具如表2-4所示特徵之化合物H。 -65 - 本紙張尺度边用中a S家標準（CNS) ΙΜ規格（2丨0X297公龙） (請先閲讀背而之注意事項外蜞寫本頁) 裝· 線- 經浒部屮央梂準局β工消仲合作社印製 Λ 6 Π 6 208703 五、發明説明（64) (請先閲讀背而之注意事項#填寫本頁) -» -. (hUh合物Μ 留雔經濟部屮央楛準局CX工消伢合作杜印31 將4.2升Υ部分與200毫升華特曼帕地你Ρ 40 0DS-3攪拌。將水添加為10升及再捎拌1小時後，將P40物質K華特曼54號滤器過滤移出。將P40物質Μ水清洗及以200毫升乙腈去吸附。將乙腈溶液蒸發為1毫升後，將每升含2毫升澹疏酸之3毫升乙腈/水（2:3)混合物添加及離心。將所得溶液接受利用5微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米 x21毫米），每升含2毫升濃硫酸之乙腈/水（2:3)之流動相，每分鐘25毫升之流速及Μ波長210公沙紫外光偵檢的製餚高效液相層析，將對應於滞留時間23.0分鐘峰之部分滯留以水清洗吸附於5微莫耳湄度斯斐利朔0DS-2管柱（25 厘米x21毫永）上及經水清洗及經乙腈去吸附。乙腈蒸發去除後及將水添加入殘餘物而得20毫升懸浮液，將懸浮液冷凍乾燥而得16毫克固體。將16毫克固體溶解於每升150 微升濃硫酸之1毫升乙腈/水（2:3)混合物及接受5微莫耳濃度0DS-2管柱（25厘米x21毫米），每升含150微升濃硫酸之乙腈/水（2:3)混合物之流動相，每分鐘25毫升之流速及Μ波長210公沙紫外光偵檢的製備高效液相層析。將對應於滯留時間16分鐘之部分滯留*以水稀釋兩次，吸附於 5微奠耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米·χ21毫米）上經水清洗及經乙腈去吸附。將乙腈去除後，將水添加入殘餘物而得20毫升溶液。將溶液冷凍乾煉而得7.5毫克具如表 2-4所示特徵之化合物Μ。將1 . 22升部分2_蒸發為700毫升及將80毫升乙腈添加後 -6 6 一本紙張尺度边用中Β國家櫺準（CNS) >Γ4規怙（2丨0乂297公龙） Γ08703 五、發明説明（65) 將澄清溶液添加入500毫升華特曼帕地你P40 0DS-3內將混合物以水稀釋為10升及將所得懸浮液攪拌1小時。將 P40物質用華特曼54號滤器過滤移出。Μ水清洗及然後以 1300毫升乙腈去吸附。將體積減量為20毫升後將6 0微升濃硫酸及15毫升乙腈添加及將溶液過瀘。將此溶液接受利用 5微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米x21毫米）每升含2毫升濃硫酸之乙腈/水（2:3)物之流動相，每分鐘25毫升之流速及Μ波長210公沙紫外光偵檢的製備高效液相層析。各製備運行注射1毫升溶液入管柱及10次製備運行注射3毫升溶液入管柱貿施。 (〇化合物.丨之塱雜將對應於滯留時間25分鐘峰部分收集。Μ水稀釋兩次及將湄硫酸添加為每升2毫升之湄度。將所得溶液接受5微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米X 21毫米）。將管柱以水清洗及以乙腈溶析。然後將乙腈蒸發去除，將水添加調整體積為20毫升。將溶液冷凍乾燦而得2 3毫克具如表 2-4所示特徵之化..合物J。 (d)化合物Κ夕望餘經濟部屮央榣準而A工消"合作社印以 (請先間讀背而之注意事項外填寫木頁) 將對應於滞留時間27.6分鐘峰之部分合併及接受如前述 <〇内製程而得27毫克具如表2-4所示持徵之化合物JL。 (e>化合物I.夕塱餘將對應於滞留時間32.6分鐘峰之部分合併及接受如前述 (c)内製程而得12毫克固體，將此固體溶解於每升含150微升濃硫酸及20毫升經蒸餾四氫呋喃之1.6毫升乙腈/水 -67- 本紙張尺度边用中S國家標準（CNS) Ή規格（210X297公；《：) 經濟部中央捣準局貝工消1合作社印31 Γ08703 五、發明説明（66) (2:3)之混合物内及接受利用5微萁耳湄度斯斐利朔 0DS-2管柱（25厘米x21毫米），毎升含150微升濃硫酸及 20毫升烴蒸餾四氫呋喃之乙腈/水（2: 3)混合物之流動相， Μ每分鐘25毫升之流速及K波長210公沙紫外光偵檢的製備高效液相層析。兩次製備運行注射0.8毫升溶液人管柱實施將對應於滯留時間28分鐘峰之部分合併，且於下文註為合併的28分鐘。將對應於滞留時間34分鐘峰之部分合併及Κ水稀釋兩次。將濃硫酸添加為每升2毫升之濃度及將所得溶液通過5 微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米x21毫米）。將管柱Μ水清洗及Μ乙腈溶析。將乙腈蒸發去除*將水添加調整體積為20毫升及將溶液冷凍乾燦而得12毫克固體，將固體溶解於每升含2毫升澹硫酸之1毫升乙腈/水（2: 3)混合物内及接受利用5微莫耳澹度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米 x21毫米），每升含2毫升濃硫酸之乙/水（2:3)之流動相Μ 每分鐘25毫升之流速以波長210公沙紫外光偵檢的製備高效液相層析。將對應於滞留時間39分鐘之部減量為10毫升及將5毫升乙腈添加。將溶液接受利用5微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱，毎升含150微升濃硫酸及20毫升烴蒸餾四氫呋哺之乙腈/水（2:3)之流動相每分鐘25毫升之流速及以波長2 1 0公沙紫外光偵檢的製備高效液相靥析。將對應於滯留時間38 .5分鐘峰之部分滯留及與合併的28分鐘合併。然後將合併部分Κ水稀釋兩次及將200微升濃硫酸添加。將所得溶液通過5微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘 -68- 本紙尺度边用中a Η家榀iMCNS) ΤΊ規格（210x297公龙） (請先閱請背而之注意苹項孙填寫本頁) 裝· 線 0870¾_^ 0870¾_^ 經濟部屮央榀準局β工消伢合作社印製五、發明説明（6了）米x21毫米）。將管柱Μ水清洗及然後Μ乙腈溶析。將乙腈蒸發去除。將水添加調整體積為10毫升及將溶液冷凍乾燥而得3毫克具如表2-4所示特激之彳h合物I.。宣施例1 9 化合物η 將750克實施例11產物經華特曼Ρ40 0DS-3管柱（18厘米 x90厘米）利用每升含2毫升濃硫酸之乙腈/水（1:1)為溶劑層析。經100升溶劑初量後將6升部分收集。將6升部分添加入500克華特曼Ρ40 0DS-3内及將水添加調整體積為20升。然後將28毫升漶硫酸添加及將溶液捎拌1小時。將Ρ40物質用華特曼54號滅器過濾移出及Μ水清洗。然後將Ρ40物質M2升乙腈去吸附及將體積減量為30毫升。將 6 0微升濃硫酸添加，將溶液過濾及然後接受利用5微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米x21毫米），每升含2毫升濃硫酸之52.5%乙腈/水之流動相以每分鐘25奄升之流速及Μ波長2 1 0公沙紫外光偵檢的製備高效液相層析。一次製備的製餚運行注射6毫升溶液入管柱一次製備運行注射3毫升溶液入管柱及八次製備蓮行注射2毫升溶液入管柱實施。將對應於滯留時間24.6分鐘峰之部分合併，Μ水稀釋兩次及將濃硫酸添加而得每升2毫升酸全濃度。然後將溶液與100毫升華特曼Ρ40 0DS-3攪拌1小時。將Ρ40物質利用華特曼54號濾器過漶移出及Μ水清洗Μ乙腈溶析後，將乙腈蒸發去除及將水添加調整體積為20毫升。然後將溶液 -69- 本紙張尺度边用中a Η家標準（CNS) Τ4規怙（210x297公;«：) (請先W1讀背而之注意事項孙塡寫木頁) 裝- 線 ΠΓί703 五、發明説明（68) 冷凍乾燥而得177毫克具如表2-4所示特徵之务，会物η 經濟部屮央榣準局貝工消费合作社印Μ 化合物Β三鉀雔將500克實施例11產物添加入乙腈/水（1:1)內及攪拌15分鐘。移出及經100毫升乙睛：水：硫酸得固體經乃1000毫升新鲜混合物 500毫升甲醇添加入合併濾液内 60升乙腈：水：硫酸（500:500:2) 管柱（18厘米X 96厘米）上。將管近40升前蓮行後將2升部分收集 0.880氨調整酸鹼值為6.8以儲似管柱而得部分及176毫升硫酸華特曼帕地你Ρ40二氧化矽合併後將吸附劑以過漶回收，以蒸豳溶析。將6升析出液蒸發濃縮及 0.85升蒸餾水稀釋及然後以乙腈升。將溶液熱至50Τ： Κ 450毫升調整酸鹼值為9.1及將38克乙酸添加。然後將溶液Μ32升50Χ：熱结晶固體以過濾回收，以2升丙合物Β之三鉀鹽。將由化合物Β 於下文實施例2 2。含75毫升硫酸之將固體以纖維素 (500:500:2)清再萃取及過濾如及裝載於裝於乙平衡之華特曼帕柱以相同溶劑溶。將部分2-6合存。將此部分與 Κ每升4毫升比及將45升水攢拌水無酸清洗及Κ 過漶。將2 . 8 5升 /水（1 : 1)稀釋為 1萁耳濃度氫氧鉀溶於400毫升丙嗣稀釋'。使溶嗣清洗及真空乾三鉀鹽结晶母液 1200毫升滤紙過》洗，將所前。將腈内且與地你Ρ40 析。經接併及Μ 由三姐類例4公斤。1小時 6升乙腈濾液以總體積8 化鉀溶液水之溶液液冷卻及烽而得化滞留及用 (請先閲請背而之注意氺項#填寫本頁) 裝· 線. -70 本紙5良尺度边用中國因家橒iMCNS)T4規格（210X297公仗） Λ (5 Η 6 208703 五、發明説明（69) - ·- * * 化合物f，p，n，I?，s，1卜 V，w，X，y，z，ri岑 π 經濟部屮央楛芈而e：工消作合作社印Μ 將550克實施例11產物懸浮於1.6升乙腈/水（1:1)内及將〇·1升湄硫酸添加。將此懸浮液過滹及將每升含2毫升澹硫酸之乙睛/水（1:1)混合物添加使漶液成2.5升。亦將 0.5升甲醇添加而得均勻溶液。將溶液以每小時8升裝載於經每升2毫升濃硫酸之乙腈/水（1:1)混合物平衡及溶析之22升華特曼P40 0DS-3管柱。將10升，35升，20升及 12升部分收集及然後將溶析溶劑改為每升含2毫升濃硫酸之乙腈/水（S : 4 )混合物。將1 1 . 2 5升及6升更後部收集。將35升部分與1 . 5公斤華特曼P40 0 DS-3，0 . 2升濃硫酸及 35升蒸餾水搜拌1小時。將華特曼P40 0DS-3 Μ過滹移出 Μ 10升蒸餾水清洗，且將姐件以3升乙腈溶析。將乙腈蒸發至乾及將殘餘物溶解於0.3升蒸餾水中及冷凍乾燎。經冷凍乾燥固體溶解於每升含2毫升濃硫酸之〇.1升乙腈/水 (4:6)混合物內及裝載於經每升含2毫升濃硫酸之乙腈/ 水（4:6)混合物平衡及溶析之5.8升華特曼卩40〇[)5-3管柱。經2 . 4 4升前運行後將八個部分取出：⑴4 . 1升，⑵ 1·δ6升，⑶2.5升，⑷3. 35升，⑸2. 52升，⑹2. 64升，⑺ 5.7升及⑻9.24升。、 (a).化合物丨丨之Μ雛將6升部分添加人500克華特曼Ρ40 0DS-3内及將水添加調整賵積為2 0升。然後將2 8考升濃硫酸添加及將溶液搜拌1小時。將Ρ40物質利用華特曼54號滹器過滹移出及Κ -7卜 208703 Λ 6 l\6 經濟部屮央標準局员工消费合作社印製五、發明説明（70) 水清洗。然後將Ρ40物質Κ 2升乙腈去吸附及將體積減量為30毫升。將6〇微升濃硫酸添加，將溶液過滹及然後接受利用5微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米X 21毫米），每升含2毫升澹硫酸之52.5%乙腈/水之流動相，每分鐘25毫升之流速及以波長210公沙紫外光偵檢的製備高效液相層析。一次製備的製餚運行注射6奄升溶液入管柱一次製備運存注射3毫升溶液入管柱及八次製備運行注射2 毫升溶液入管柱實施。將各運行於15.2-17分鐘間後之部分收集。將此部分合併將水稀釋為兩倍體積及將濃硫酸添加使得每升2毫升酸之全濃度。然後將溶液與華特曼Ρ 40 0DS-3攪拌1小時。將華特曼Ρ40物質用華特曼54號滤器過滤移出及Κ水清洗，經乙腈溶析後，將乙腈蒸發去除及將水添加調整體積為 20毫升。然後將溶液冷凍冷燥為黑色油狀物。將油狀物溶解於每升含2毫升濃硫酸之4毫升52.5%乙腈/水混合物內及接受5微萁耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米X 21毫米），每升含2毫升濃硫酸之52.5%乙睛/水混合物之流動相，每分鐘25毫升之流速及以波長210公沙紫外光偵檢的製備高效液相層析。將管柱於17.0 - 18.6分鐘溶析成分收集，將水稀釋為兩倍體積及吸附於5微莫耳濃度斯斐利朔 0DS-2管柱（25厘米x21毫米），將管柱Κ水清洗後，Μ乙腈溶析。將乙腈蒸發去除而得10毫克淡黃色油狀物具如表 2-4所示特徵之化合物丨丨。 (b>化合物Ρ，Π，R及S之g雜 (請先閱讀背而之注意市項#项寫本頁) 裝- 訂- 線< 本紙5艮尺度逍用中B Η家樣準（CNS) T 4規怙（210X297公龙） Λ 6 η 6 cnfl703 五、發明説明（71) 將4.1升部分⑴與1升華特曼卩40 0DS-3及16升蒸飽水攪拌1小時，將吸附劑以華特曼54號濟紙過濟移出及將P40 0DS-3M2升乙腈溶析。將溶液蒸發至乾將褐色殘餘物溶解於每升含0.4毫升濃硫酸之25毫升乙腈/水（25:75)混合物內。將2.5毫升部分裝載於5微冥耳濃度斯斐利朔0DS-2 製備高效液相層析管柱（25厘米X 21毫米）上及將此部分Μ 每升含0.4毫升濃硫酸之乙腈/水（25:75)混合物以每分鐘 15毫升之流速溶析。將Κ波長210公沙偵檢得三成分收集。成分（i )於8.6與9.3分鐘間溶析出，成分（ii)於9.7與 10.4分鐘間溶析出及成分（iii )於13.6與15.5分鐘間溶析出。將製備層析術重複九次；將含有相同成分的部分合併。將含成分（i )之溶液以蒸餾水稀釋為四倍原體積及泵於 5微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米X 21毫米）平衡之水上。將管柱經0.2升水清洗及K50毫升乙腈溶析。將乙腈以蒸發去除；將殘餘物溶解於10毫升蒸餾水及冷凍乾燥而得0.5毫克如表2-4所示特徴之化合物P 。將成分（ ii )及（ili ) Μ相同於成分（i )所述方法回收分別得到丨2 . 1 毫克及100毫克如表2-4所示特徵之化合物s好化合物Π 〇 (c>化合物R及ν >茴觫、將1.80升部分⑵與1升華特曼P4〇 0DS_3及12升蒸餾水播拌1小時，將吸附劑Μ華特曼54號滤紙過濾移出及將已吸附化合物W1.5升乙腈溶析出。將乙腈析出液蒸發至乾及將殘餘物溶解於每升含0.4毫升湄硫酸之2〇毫升乙睛/ -73- 本紙張尺度边用中a S家榀毕（CNS)TM規格（210X297公龙） (請先閲讀背而之注意事項#填窍木頁) 裝· 線· 經濟部中央櫺準局κχ工消赀合作社印5i 經浒部屮央榀準灼β工消伢合作社印3i 20 叨 03 五、發明説明（72) 水（25:75)混合物內。將2毫升部分裝載於已經毎升含0.4 毫升濃硫酸之乙腈/水（25:75)混合物以每分鐘20毫升之流速及Μ波長210公沙紫外光偵檢所溶析之5微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2製備高效液相層析管柱（25厘米X 21毫米）上。將兩成分收集。成分（ί )於20.8與25.2分鐘間溶析出及成分（ii )於25.4與27. 5分鐘間溶析出。將製備層析術重複九次及將含有相同成分的部分合併。將含成分（i )之溶液K蒸餾水稀釋為五倍原體積及泵於已經K0.5升蒸餾水清洗及經50毫升乙腈溶析之5微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米X 21毫米）平衡之水上。將乙腈Μ蒸發去除及將殘餘物溶解於25毫升蒸餾水内及冷凍乾燥而得302毫克如表2-4所示特徵之化合物R 。將成分（ii)M相同如成分（i )的方法回收而得13.5毫克具如表2-4所示特徵之化合物V。 (d)化会物X及Y夕罝雜將2.5升部分©與1.1升華特曼卩40 005-3及14升蒸餾水攪拌1小時，將吸附劑以華特曼5 4號滤紙過濾移出及將已吸附化合物以2.5升乙腈溶析出。將乙睛析出蒸發至乾及將殘餘物溶解於每升含0.15毫升濃硫酸之25毫升乙睛/ 水（30:70)内。將2.5毫升部分裝載於5微奠耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米X 21毫米）及K每升含0.4毫升濃硫酸之乙腈/水（35:65)溶析的製備高效液相層析。管柱流速為每分鐘20毫升及波長210公沙偵檢成分。將兩成分收集。成分（i )於12.6與13.5分鐘間溶析出及成分（ii )於本紙張尺度边用中Η國家標準（CNS)>fM規怙（210X297公tf) .................ί .....^.....玎· ： i (請先閲讀背而之注意亊項#蜞窍本頁) -.* 2〇87〇3

Λ f) BG 經濟部屮央榀準屌A工消许合作社印3i 五、發明説明（*73) 13.5與14.8分鐘間溶析出。將製備層析術重複九次及將含有相同成分的部分合併。將含成分（i )之溶液K水稀釋為五倍原體積及泵於已經 0. 5升水清洗及K 60毫升乙腈溶析之5微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米X 21毫米）平衡之水上。將乙腈蒸發去除。將殘餘物溶解於10毫升水及冷凍乾燥而得9毫克具如表2-4所示特徵之^LX〇將成分（ii)K相同於如成分 (i )方法處理而得到23 . 7毫克具如表2-4所示特徵之化会物X ° (eUh合物W之蜇馘將2.52升部分©與1.〇升華特曼[>40 005-3及12升蒸餾水攪拌1小時。將吸附劑K華特曼54號滹紙過滅移出及將已吸附成分K 2升乙腈溶析。將乙腈析出液蒸發至乾及將殘餘物溶解於每升含0.4毫升濃硫酸之25毫升乙腈/水 (30:60)內。將2.5毫升部分裝載於5微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2 (25厘米X 21毫米）製備高效液相層析管柱及K每升含0.4毫升濃硫酸之乙腈/水（35:65)溶析。管柱流速為每分鐘2 0毫升及Μ波長2 1 0公沙偵檢成分。將於3 1與 32.1分鐘間溶析出之成分收集。將製備高液相層析術重複九次及將含有相同成分的部分合併。將含有此成分之溶液以蒸餾水稀釋為五倍原體積及於已Μ0.5升清洗及40毫升乙腈溶析之5微莫耳濃度斯斐利朔〇DS-2(25厘米X 21毫米 )管柱平衡之水上。將乙腈蒸發去除。將殘餘物溶解於 10毫升蒸餾水及冷凍乾燥而得1.5毫克具如表2 - 4所示特 (請先閱請背而之注意事項再塡寫木页) 裝- 訂· 線- 本紙尺度边用中8困家榣毕（CNS)甲<1規怙（210X297公让） 20講3 61.10.2 9 A 6 η 6 五、發明説明C74) . *· 徵之化会物w。 (f) Yh 会物 Γ 1，_ - 將3.35升部分⑷與l.l升華特曼P40 0DS-3及10升蒸餾水搜拌。將吸附劑Μ華特曼5 4號滹紙過滹移出。將化合物K 2.5升乙腈自Ρ40 0DS-3溶析出。將乙腈析出液蒸發至乾。將殘餘物溶解於每升含〇.1 5毫升濃硫酸之30毫升乙腈/ 水（δ: 22)。將3毫升部分裝載於5微莫耳澹度斯斐利朔 0DS-2管柱製備高效液相層析管柱（25厘米χ 21毫米）及將. 此管柱以每升含0.4毫升濃硫酸之乙腈/水（35:65)以每分 '鐘20奄升之流速溶析。將Μ波長210公沙偵檢得四成分收集。成分（I )於1 3 . 1與1 3 . _8分鐘間溶析出，成分（][)於 15.7與16.7分鐘間溶析出及成分（J1 )於30.为與32.9分鐘間溶析出及成分（IV)於23.6與25.5分鐘間溶析出。將製備層析術重複九次•將含有相同成分之部分合併。將含有成分（F )之溶液Μ五倍蒸餾水稀釋及泵於已經以 0.5升水清洗及Μ100毫升乙腈溶析之5微其耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米x21毫米）平衡之清水上。將溶液蒸'發至乾及將殘餘物溶解於10毫升水及冷凍乾燥而得.11.3 毫克具如表2-4所示特微之化合物;Cl。 (請先閲請背而之注意亊項孙堝寫木ί、裝· ^• 線，經尔部中央標準而只工消合作杜印3ί 本紙張尺度边用中Η Η家標平（CNS) Ή規格（210X29/公没） 208703- · 81.10.2 9 A6 ____B6 五、發明説明（） (h)化合物 z < 里糖將2.64部分與1升華特曼P40 ODS-3及10升蒸镏水搰拌 1小時。將吸附劑以華特曼54號滹紙過滹移出。將P40 0DS-3以2. 5升乙腈溶析出化合物及將溶液蒸發至乾。將殘餘物溶解於每升含0.4毫升湄硫酸之25毫升乙腈/水 (40 : 60)內。將2 . 5毫升部分裝載於5微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2製備高效液相層析管柱（25厘米x21毫米）上及將 v 此管柱以每升含0.4毫升濃硫酸之乙腈/水（40:60)K每分鐘2 0毫升之流速溶析。 - 、將Κ波長210公沙偵檢得兩部分也集。成分（I )於U . 7 與1 3 . 5分鐘間予溶析出及成分（II )於1 3 . 7與1 5 · 1分鐘間予溶析出。將製備層析重複九次，將含有相同成分的部分合併° 將含有成分（I)之溶液以5倍蒸餾水稀釋及栗於已經以 0.5升水清洗及K150.毫升乙腈溶析之5微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米x21毫米）平衡之清水上。將乙睛旋轉蒸發去除，將殘餘物溶解於50毫升水中及冷凍乾燥而得12.1.毫克具如表2-4所示特徵之化合物JL。 (請先閲讀背面之注意事項再填駕本頁) •装* •訂. •緣甲 4 (210X297 公发） 208703 A6 B6 五、發明説明（）集。將八回運行所析出部分合併以等量水稀釋及吸附於5 微萁耳濃度斯斐利朔C6管柱（25厘米X 21毫米）。將管柱Μ 水清洗及以乙腈/水（90:10)去吸附。將乙腈旋轉蒸發去除及將水溶殘餘物冷凍乾燥而得8.7毫克具如表2-4所示特徵之化合物R 1 〇 (1)化会物F :> Μ雜依據前述（b>内製程於10.5與12.4分鐘間溶析出又一成分 (IV ) ° 將含有成分（IV)之溶液K五倍體積蒸水稀釋及泵於已烴以0 . 5升水清洗及Μ 1 0 0毫升乙.腈溶析之5微舆耳·濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米X 21毫米）平衡之清水上。將乙腈蒸發去除，將殘餘物溶解於25毫升蒸餾水内及冷凍乾燥而得149毫克白色固體具有與依據實施例10内製程以化學製備得化合物F具相同特徴之化合一I已。當施例2 化合物Τ 將華特曼帕地休Ρ40 0DS-3逆相二氧化矽添加入由賁施例20所得25升母液分成五個5升部分的各個5升部分内。將1 0 0克二氧化矽，1 5升水及2 0奄升濃硫酸添加入各部分内及將混合物搜拌30分鐘。將二氧化矽濾出及將滹液丟辩。將由各部分所滤出之二氧化矽合併’ Κ水清洗直至無肢及將經吸附物質以2升乙腈溶析。將析出液.Μ旋轉蒸發濃 {請先閲讀背面之注意事項再蜞^本頁) .装· •訂· .線· 甲 4(210X297公沒） j- -Vi.. 2< 208103_ 五、發明説明（8〇) 縮為90毫升體積。將濃縮液接受利用5微箕耳濃度斯斐利朔ODS-2管柱 (25厘米x21毫米）每升含2毫升·濃硫酸之乙腈/水 (45:55 )之流動相，Μ每分鐘20毫升之流速的製備高效液相層析。將湄縮液於注入管柱前以等賴積流動相稀釋。每回製備運行注射4.5毫升溶液入管柱，經二十回製備運行 \ 於Κ波長2 1 0公沙紫外光譜監測糸统下實施。將由各運行滞留時間1 7 . 6至1 8 · 8分鐘間所析出液收集。將由所有運行析出液合併，將合併析出液以等體積量水稀釋及吸附於5 微莫耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米X 21毫米）。將管柱以水清洗及以乙腈去吸附，將1 0毫升水添加，將乙腈蒸發去除及將水性殘餘物冷凍乾燥而得10.5毫克固體具如表 2 - 4所示特徵之化合物Τ。富例合物A 1 依據實施例19内製程將由5微莫耳湄度斯斐利朔0DS-2 管柱於1 8 . 6與2 2 · 8分鐘間所溶析出部分收集。將由各運行此滞留時間内所析出合併部分以等體積水稀釋及將濃硫gg 添加使酸全濃度達每升2毫升。將溶液與1 〇〇毫升華特曼帕地休P40 0DS-3搜拌1小時。將帕地休用華特曼54號滤紙過滤移出，K水清洗及K乙腈溶析。將乙聘旋轉蒸發去除及將20毫升水添加。將溶液冷涑乾爍而得307毫克固體。將此固艄接受利用5微箕耳濃_度斯斐利朔〇DS-2管柱（25 厘米X 2 1毫米）於每升含2毫升濃硫酸及40毫升四氫呋喃 -82 - 本紙尺度边用中Κ Η家详準（CNS) Ή規^(210X297公;it) (請先閲請背而之注意事項孙堝寫木一ί 裝· 訂- 經濟部屮央榀準而β工消伢合作社印κ 208703 81.10.29 A6 B6 五、發明説明（）之乙腈/水（45:55)之流動相K每分鐘25毫升之流速的製備高效液相層析。將此固體溶解於流動相Μ每毫升5毫克濃度注射入管柱内。四回製備運行。每回運行注射4毫升於 Κ波長2 1 0公沙紫外光譜監測下賁施。將由各運行於滯留時間55.2至57.2分鐘所溶析出（部分〗）及於58.5至61.5分鐘所溶析出（部分2)收集。將由各製備運行的相同部分合併。將330毫升部分2以等體積水稀釋及吸附於5微萁耳濃度斯斐利朔0DS-2管柱（25厘米X 21毫米）。將管柱以水清洗及以乙腈/水（90 : 1 〇 )去吸附e•將乙腈旋轉蒸發去除及將水性殘餘物冷凍乾燥而得113毫克具如表2_ 4所示特徵之化合物A 1。 (請先《讀背面之注意事項再填寫本頁) •装· •打· •線甲 4 (210X297 公发） 208703 81.10.2' 五、發明説明（83) 管掄例化合物A 依據賁施例5製程，除用體積比3 %合併的燒瓶内菌種培養液接種於容量7升醱酵器内4升菌種培養液ίΑ)外。將培養物如前述每分鐘500轉揹動及將培養物Κ每分鐘通氣 4升下培養2天。將1.2升培養液移出及用於接種於容量 70升醱酵器内裝40升菌種培養液W。將培養物如前述以每分鐘500轉搜動及將培養物Μ每分鐘通氣40升培養2天。將15升培養液移出及添加Λ容量780升内裝500升醱酵培養液Ο之醱酵器内。醱酵培養液Ο : 果糖 5 0克 (請先閲讀背而之注意事項洱堝窩木一·、經：沐部屮央榀準而只工消价合作社印rt,,4 大豆油 30克棉籽粉（西格馬）（Sigma) 20克天然酸鹼值將培養物如前述以每分鐘200轉及每分鐘500升通氣下培養450小時及Μ每日每升5克果糖虽之重量/體積比50% 溶液於1 20小時進飼增加為每日每升7 . 5克量於1 62小時進阏下培養450小時，將掊養液於培養450小時分析顯示化合物產虽每升1056¾克。將前述製程於小規横下重複得以選自葡萄糖，半乳掂，蔗糖，麥穿据，乳糖，肌醇，右旋甘茲槌酵及大豆油所姐 -85 本坻认尺度边用中H S JliiiMCNS) ΊΜ規格（210X297公:¢) Λ Π 6 0S703 五、發明説明（84) 成其他碳源替代果糖。由各實驗將培養450小時培養液分析顯示化合物Α之實質滴定量。窖淪例2ft 仆合物A，=钾翰將重量/體積1%肋濾劑戴克來（dicalite)488L添加人依實施例25所述方法所製得全培養液內及用體積比75%磷酸將培養液酸鹼值調整為2.5 。將细胞濾出及Μ水洗。將细胞與12.0升80%丙嗣-20C水於室溫下攪拌45分鐘。已經以188毫升重最/體積15%硫酸調整酸鹼值為3。將漿體過滹，及將细胞於酸鹼值為3時再混漿於1 2 . 0升80%丙嗣 -20 %水（需額外24.5毫升15%硫酸），每次過漶後將细胞Μ9000毫升80%丙銅-20 %水清洗。將11.1升部分滤液用20%氫氧化鉀攪拌下調整酸鹼值為8.0及將稀懸浮液過瀘及將滞留的不溶不纯物以150毫升80%丙酮-20%水清洗，將洗液與主滤液合併。將漶液以每小時1000毫升裝載於500毫升安百來IRA 35 -析出液循環，接著亦以每小時 1 000毫升用100毫升65%丙酮-35%水清洗。製得含275 毫升水，650毫升丙酮及81毫升重量/體積15%硫酸之溶析液及以毎小時500毫升通過管柱。將前運行1410毫升浸透液收集直至色帶出現，接著1680毫升大董析出液。藉揹拌下將59毫升20%氫氧化鉀水溶液添加使酸鹼值由1.9調整為6.0使固體自析出液内沈澱。將懸浮液於5 c冷卻2 小時及過滤。將濾泥Μ 60毫升6 5%丙酮-3 5%水清洗，接著Κ 60毫升丙酮清洗。將單離固體添加入58〇毫升乙酸丁本紙張尺度边用中Η Η家樣毕（CHS) Ή規格（210X297公tf) (請先間讀背而之注意枣項#填寫本頁) 裝· 線- 經濟部屮央榣準局C3：工消费合作社印51 λ ejη ο 經濟部中央櫺準局C5；工消饨合作社印51 五、發明説明（8彡） g旨及980毫升水中接著將15%硫酸激烈携拌下添加使酸鹼 m S 2 . 5 。將少量介面固體以過滹去除及將分離的水溶液 ®£棄。將富含乙酸丁酯層與500毫升蒸餾水攪拌同時用 20%氫氧化鉀水溶液將酸鹼值提昇為9. 1 。將半富含乙酸 Τ酉旨層以預先調整酸鹼值為9.2含5.1克乙酸鉀之100毫升蒸、IS水清洗及將分離的水溶液層與先前分離的水溶液層合併（萃出液2)。藉將萃出液2於40C攪拌添加入六倍體積量丙酮內使三钾鹽结晶。以間馱攪拌使溶液冷卻於5 1C攪拌冷卻2小時前使结晶作用加速進行。將漿體過濾，以25毫升丙嗣清洗及於301真空乾燥而得摁顆彳h会物。窨淪例27 L1-S-- Γ1 a ( 4 R * . R S a nf . Α β ·5α . R η111-(4 -乙醃氬某-R-申某-3- 茆甲某-6-¾ R某）-4.fi.7-三羥基-2.8 -二暉二損「H11辛烷-3.4.5-三羧辟， 6-(4.6-二申某-2-幸烯除酯），3.4.5-三田某酯將16毫升0.4奠耳濃度重氮甲烷溶於***之溶液添加入由940毫克化合物A溶於15毫升甲醇之溶液内。過童重氮甲烷以添加0.1毫升乙酸中止反應及將溶液減壓濃縮。將殘餘物以50克矽凝膠（默克，以6^1〇7734)層析以二氯甲烷增至2%甲醇/二氮甲烷溶析而得906毫克*標題化合物； [aU23 + 38.8° (c_ 0.962 甲酵內）；(三溴甲烷 )1760，1733厘米_1(酯類）：5(00(：13)包括0.8-0.9 (m.CLa), 1.04 (d , J7Hz , CH = CHCHCtL3) , 2.09 (s,CLaC〇2)，3.76,3.8Hn3.93(3s,C〇2CU_3),4.05 -87- (請先間讀背而之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂· 線· 本紙張尺度边用中a ffl家標準(CNS)V4規格（210乂297公_«:)

Λ 6 Π C 5：〇S7〇3 五、發明説明（86) (請先間讀背而之注意事項凡蜞窍本頁) _______________--. (d,J2Hz，7-H)，4.98*5.0(2s,C = CiLz)，5.10 (d,J6Hz,CL〇Ac), 5.26 (s,3-H), 5.75 (d,J16Hz,CH=CJLC〇2), 5.81 (d,J2Hz,6-H), 6.84 (dd, ji 16Hz , J 28.5Hz ,C IL= C H C 0 2 ) 9 7 . 13-7.28 (m，芳族）。宵施例 2d ns- π « i4R* .B S * ). 3 a . 4/3 ,5α . 6 a (2E.4R* .6R *) .7 θ 1 1 1 - (4 -筠某- 5 -申某 -3 - 菲申某 -6 -茏己蓽） -4 .β . 7 - m 華 -2 ,8 -二暉二 im r . 2.11 幸烷- 3 , 4 , ϋ-三羧醉，fi - U . fi- 一甲革 -?-幸烯膀Sg ) • 4 · 5 -三甲華酷將 438毫克實施例 27產物溶於含 1 毫升湄鹽酸之 100毫升甲酵之溶液於20Ό 播拌 68小時〇將碳酸氫納溶液添加使溶液酸鹼值提升為8 。將甲酵減壓蒸發去除 > 將殘餘物以水稀釋及Μ乙酸乙酯萃取。將有機溶液Κ碳酸氫納溶液清洗 t Μ 鹽水清洗。經硫酸鎂乾燥及經 50克矽凝膠（默克 (Merck)7734)層析以乙酸乙酯-環己烷（1:2)溶析而得248 毫克標題化合物；[〇]〇23 + 34.6 (£_ 0.943甲酵内）；經濟部屮央標準局A工消"合作社印製 (三溴甲烷）3535(醇），1767，1706(酯類），1647厘米-1(0 = 0;5(00(：13)包括0.8-0.9(111,(：113),1.〇4 (d,J7Hz,CH = CHCHClL3)，3.76,3.7Mt]3.9i (3s，C〇2CU_3)，4.06 (寬單一，7H) , 5.01 和 5.12 (2s,C = ClU), 5.27 (s,3H), 5.73 (d,J16Hz,CH = CJLC〇z). 5.86 (d,J2Hz , 6-H) , 6.82 (dd.JiieHz.Jd.SHz.Cii^CHCOz), 7.13-7.29 (m,芳族）。 -8 8 - 本紙张尺度边用中a Η家详準（CNS) T4規格（210x297公及） £08703 五、發明説明（87) 經沭部十央榀準局CX工消#合作杜印奴啻施例？q 「1S-「1» (4R,8,.5S,,,).3〇f .4/3 .5« ,6α .7θ ni-f/t-Z,RSg 基-5 -甲某-3-亞申某-ft-笼R某）-4.6.7-=禅甚8-二晖二環「.V?.11辛烷-H 5-三羧酸，3.4. 田甚酯（化合物 1~1 及 MS- Για ( 4 R * . R S * ) . 3 « . 4 β . 5 rr . fi 〇 . 7 β 111-(4-筠某-5-甲某田某- fi-笼R某-三羥某 -2.8 -二聘二損「3.2. 1Ί幸烷m-三羧酴，？ Λ. _R-三田基酯（化会物？. 1 將449奄克霣施例27產物添加人自60%油分散液内2.5 毫克氫化納製得甲醇納溶於45毫升甲酵之溶液内及將混合物於20它靜置18小時。將2毫升2奠耳濃度鹽酸溶液添加及將甲酵減壓蒸發去除。將殘餘物Μ乙酸乙酯稀釋及M2 莫耳濃度鹽酸，碳酸氫納，鹽水依序清洗，乾燥及經50克矽凝膠（默克（Merck)7734)層析以0-2%甲酵-二氯甲烷溶析而得231毫克檁頴彳h合物1 ; [ a ]d23 + 7. 4° (c_ 1 . 118甲醇內）；(三溴甲烷）3570, 3529(醇），1765，1732 厘米-M 酯類）；δ (CDCU)包括 0.86 (d,J7Hz，CH_3), 2.11(5,(：113(：〇2),3.74,3.79及3.91(35,(：〇2(：{13), 4.15 (寬單一，7-H), 4.99 和 5.02 (2s, C = Cb), 5.05 (d，J6Hz，CH = CJLO Ac), 5.11 (寬 d,J5Hz,6-H), 5.17 (s,3-H) , 7.11-7.32 (m,芳族）。將管柱M5%甲醇-二氯甲烷再溶析而得39毫克摁頴彳h合 H [〇c]d23 + 4.5° (〇_0.5 甲醇内）；5(CDC13)包括 89 本紙张尺度边用中a Η家榀準（CNS) T4規格（210x297兮;ϋτ) 先閲 in 背 -而之注意 L—事項 fh % 本裝玎線 £08703 Λ fi W 6 五、發明説明（88 ) 3.99 (d,J6Hz = CC Η_0 Η ) , 4.19 (寬單一，7-H), 5.05-5.09 (2s,3H，C=CL及 6-Η), 5.17 (s,3-H)， 7.12-7.30 (m，芳族）。管施例0 「IS-Π or (4R'5Sg) ,3α .4/?.firY ,7fl 锊某 :五-甲華-3 -__亞甲基- 6- ¾ R某）-4. 7 -三择某-2.8 -二聘二環.「3，2 , 1 1 辛焼-3 , 4 , 5二三羧賭，4-甚酯，3 . fi-二納狳先閲ifi 背 --而 ‘之注意項填寫 η 經濟部屮央標準而εχ工消伢合作社印5i 將9.6毫升0.1莫耳澴度氫氧化納水溶液添加入由259毫克實施例29產物溶於20毫升四氫呋喃之溶液内及將混合物於2〇υ攢拌1.5小時。將四氫呋喃減壓蒸發去除及將殘餘物冷凍乾燥而得266毫克標顆缶合物;[a]D23 + 0.6° (c_ 0 . 317甲醇内）；.υ (石臘）3420 (醇）1717(酯）， 1616厘米—（羧酸酯）；δ (CD30D)包括0.81 (d , J 7 H z，C H_a )，2 · 3 2 ( A B X , J ! 1 3 H z，J 2 1 2 H z , C L P h )及 2.79 (ABX , Ji 1 3Hz , J25Hz , ClUPh ) , 3.82 (s.COzCILa), 3.93 (d,J6Hz = CCH_0H), 4.08 (d,J2Hz,7-H), 4.88 (s,3-H),4.91(d，J2Hz，6-H)，5.0Q5.10 Qs.CKlLz), 7.13 (t,J7Hz,4-笨環質子）'. (^7只2,2-笨環質子），7.24(1*17[^.3_笨環質子），5 (13C)(CD30D) 174.6 (0), 1 74.〇(°)· 173.1(0), 152.2(0)， 142.5(0)· 130.2 ⑴，129·1(1)’ 126.6(1), 110.6(2), 106.4(〇)» 93.8(0), 83.2(1), -90 本紙張尺度边用中®困家標準（CNS) T4規格（210X297公;«:) 裝 η 線經沐部屮央橾準局cx工消费合作社印32. 2〇Bl〇a_ ^ 五、發明説明（89) 79.5(1), 79.3(1), 77.8(1)， 77.2(0), 53.4(3)， 41.3(2)， 39.2(1), 35.3(2)， 25.7(2), 14.1(3)。當fe例 fis-「1a .firr 111 - -5-申某-.?-亞用某-6-笼闩甚）-4.6.7-=.锊某>2,_8二^...噔. 二環「3.2. 11辛烷-3.4. 二.羧辟，4 -甲某酯將144.6毫克實施例27產物溶於2.5毫升經蒸餾四氫呋喃之溶液與3毫升3當量濃度氫氧化納水溶液於搅拌66 小時，然後濃縮及Μ濃鹽酸酸化為酸鹼值為6 。將10毫升水添加及將混合物Κ 10毫升***清洗三次。將水溶液層Κ 濃鹽酸酸化為酸鹼值1 ，以20毫升乙酸乙酯萃取然後經硫酸銨飽和及Κ15毫升乙酸乙酯萃取兩次。將合併萃出液經硫酸鎂乾燥及蒸發而得100.6毫克白色膠狀物撞 ;5 (C D 3 0 D )包括 0 . 8 1 ( d , 7 H z , 3 H , C La )，3 . 8 1 (s , 3H , C02CIU) , 3.93 (d , J 5 . 5 H z , 1 H , C 1L( 〇 H ) ) , 4.09 (d , J 2 · 5 H z , 1 H，7 - H ) , 5 . 1 2，5 . 0 0 (2 s , 1 H 各，=C La )， 5.04 (d,J2.5 Hz, 1H,6-H), 5.12 (s，lH，3-H)，7.1-7.3 (m,5H,Ph)。啻倫例32 「1S-「1nf ( 4 R * . 5 S ^ . 3 a . i β . S rt . R a . 7 β 111-(4 -筠芊 -5-申某-3- 亞甲某- 某）-H7 -三锊基-2.8 -—气二頊「.H11辛烷-3.4. 撖酴，2.4 -二甲基酯將98.4毫克實施例31產物溶於15毫升甲醇之溶液與1.5 毫升濃鹽酸搜拌48小時然後蒸發為黃色液體。將25毫升乙 -91 - 本紙5艮尺度边用中Β Η家樣準（CNS)T4規怙（210X297公；¢) (請先閲讀背而之注意事項#蜞寫本頁) 裝< 線- rQft^〇3_ini _ 五、發明説明（9〇) 酸乙酯及20毫升水添加。將水溶液相烴硫酸銨飽和及Μ 25毫升乙酸乙酯萃取兩次。將合併有機相經硫酸鎂乾燥及蒸發而得1〇〇毫克滑清洵法撢顬化合物；δ (cd3〇d)包括 0.81 (d,J6.3Hz,3H,CtU) , 1.99-2.3 (m，5H,CH^CH^C = CH_C(ClU)), 2.3-2,8 (m,2H,C{UPh), 3.70，3.81 (2s,3H各，2xC〇2CH3), 3.92 (d,J5.8.5Hz,lH,CH_(0H)), 4.09 (m,lH,7-H), 5.02 (s，1 H , 6 - H ) , 4.9 9 , 5 . 11 (2 s , 1 H 各，C = C tLz ) . 5 . 1 7 (s, 1H,3-H) , 7.1-7.3 (m,5H , Ph) ° 奩瓶例Μ lLS.-fla (4R5K.5Si>).3a .AB .5« .Rrr (2K.4Ra.fiRi*).7^ 乙醯氯某- Fi-g某-3-亞甲某-fi-笼R某羥基-2.8 -二晖二環「nil幸榜-h_r-三搿舫， 6-(4.6 -二甲某-2-辛锸酹酷），·Ί.4. 5 -二田某酯經濟部中央標準局只工消fr合作社印1i (請先閲讀背而之注意事項#填舄本頁) 一 ._Γ_ _ 將22.7克碳酸氫納接著將6.7毫升碘甲烷添加入由 13.34克化合物Α溶於200毫升無水二甲基甲醯胺之溶液内。播拌55小時後將440毫升水及550毫升***添加。分離兩相及將水溶液相K 220毫升***萃取。將合併有機相以 200毫升碳酸氫鈉飽和水溶液清洗四次，然後經硫酸鎂乾燥及蒸發而得13.82克白色玻璃狀固體標、題化合物；δ (CDC13)包括 0.81 (ill,9Η 3xCH3), 1.04 (d , 7 . 5Ηz , 3Η , CILs ) , 1.0-1.5 · (ηι,6Η>0Η_(0Η3)0{120ϋ(εΗ3)Π^0Η3), 2.05 (s，3 Η . C b C 0) , 3 . 7 6 » 3 . 8 1 , 3 . 9 3 (3 s，3 H 各，3 χ -92- 本紙5良尺度边用中Η Η家炫毕（CHS) T4規格（210x297公犮）經濟部屮央櫺準局IS：工消作合作社印¾ 五、發明説明（91) C〇2CL·)，4.05 (Ιί,1Η，7_Η), 4.98, 5.00 (2s，lH 各 .C = CiLa), 5.10 (d,J5Hz,lH,nL(0Ac)) . 5.26 (s,lH,3-H), 5.75 (d,J16.3Hz,lH,CH=CiLC〇2), 5.81 (d,J2,5H,lH,6-H), 6.84 (dd,J16.3,8.75Hz,lH,ClL=CHC02), 7.1-7.3 (m,5H,Ph) 〇分析值：C,62，13; H16;〇33}152014需：c,62.28; H7.15%。 liS- i「l Ut 5Sg) . 3 nr .4 A . fi a 7 θ 1 Η - (4-乙醯氬基-5-甲華二3_-亞甲某-6-荣戸.甚）_4 ^ 7_?鸦某-2.8-二腰二環「3,2,11辛烷- 3.4.5-二撖醏，2 as -二.田某酯將1 . 25毫升無水三乙胺添加入由2 199克實施例33產物及501毫克N -甲基羥胺鹽酸鹽溶於15毫升無水ν,Ν -二甲基甲醢胺之溶液内及將所得懸浮液於室溫播拌。經18.5小時後將反應混合物Κ150毫升水稀釋及以75奄升乙酸乙酯萃取三次。將合併萃出液以75毫升1莫耳濃度鹽酸清洗，經硫酸鎂乾燥及蒸發為膠狀物。將膠狀物接受以矽凝膠急驟層析Κ乙酸乙酯展開及溶析。將適宜析出部分合併及蒸發而得924毫克白色泡沫標題化合物；δ (D.MS0-cie)包括 0.79 (d,J6.25Hz,3H,CHa ) , 1.7-2.3 (m.SH.CiLzClLz.ClKCHa)), 2.1〇 (s,3H,CH_3C0), 2.3-2.7 (ra , 2 Η，C L Ρ h ) , 3 . 3 3，3 . 6 Ο , 3 · 7 1 (3 s , 3 Η 各，3 χ COaCLa), 3.89 (dd,J5Hz, 1 . 2Hz , 1Η,7-Η) , 4.85 -93- (請先閲讀背而之注意事項再埸寫木頁) 裝. 訂- 線· 本紙法尺度边用中a Η家炫準（CNS) 規怙（210x297公龙）五、發明説明（92) 經濟部中央#準局Α工消赀合作社印ft'14 (dd . J6.3Hz,1.2Hz,1H,6-H) , 4.95 (d,7.5Hz,lH，CL(CH3C0))，4.83, 4.99 (2s,2H，C = CD, 5.0 (s,lH,3-H), 5.78 (s,lH,4-〇H), 5.90 (d , J6 . 3Hz , 1H , 6-OH) , 5.97 (d , J5Hz , 1 H,7 - 0H), 7 . U - 7 · 3 3 ( m , 5 H , P h )。啻施例35 MS -「Ια ( 4 R * . 5 S c ) . 3 a . 4 β . 5 a . fi a . 7 β 111-(4 -乙隨 fl 某Ί田某Ί砟甲某-R_笼pr,某7 —二锊某- 2.8-二暉二頊「.V . 11幸摈-3 · 4 . 5 -三羧鹼，4 -申某酯將22毫升0」莫耳濃度氫氧化納溶液添加入由580毫克賁施例34產物溶於44毫升四氫呋喃之溶液内。經22 . 5小時後將混合物真空澹縮為約10毫升，以5毫升2莫耳濃度鹽酸溶液酸化，經氯化納飽和及Μ 20毫升乙酸乙酯萃取三次。將合併萃出液乾燥及蒸發而得560毫克白色泡沫標頴化合物；δ (CD30D)包括 0 · 84 (d,J6.3Hz,3Η，CH3), 1.95-2.4 (m, 5H , CH^CiLz , dL(CH3) ) , 2.10 (s,3H,C[UC0), 2.4-2.78 (m,2H,CH^Ph), 3.81 (s , 3H , C02CH^) , 4.06 (d , J2 . 5Hz , 1H , 7-H) , 4.95-5.11 (m , 4H, 6-H，C = Cb,CH(〇Ac)), 5.09 (s，lH,3-H), 7.：L-7.3(ra，5H,Ph)〇 ' 啻施例36 flS-「1a ( 4 R * . 5 S p ) . 3 a . 4 β . 5 a . 6 a . 7 β 111-(4 -锊基 -5 -申某-3-亞甲基-R-笼R基）- 4.fi.7-三锊某-2.8-二皞二頊11辛烷-3 . 4 . 5 -锊S#，3 . 4 . 5 -三甲基酯 -94- 本紙5良尺度逍用中困Η家榀毕（CNS) T4規格（210X297公犮) 先閲讀背 -而 -之注意項 /h 堝 % 本 Λ 6 Π6 208^03 五、發明説明（93) 將77毫克實施例34產物溶於10%鹽酸之溶疲溶於5毫升甲醇内。將混合物於室溫攪拌。三天後將混合物以碳酸氫納固體中和Κ15毫升水稀釋及Κ10毫升乙酸乙酯萃取三次。將合併出液經硫酸鎂乾燥及蒸發而得73毫克白色泡沫具質子核磁共振數據類似於實腌29化合物之所述數據之標頴化合物。

「lS-「1a U R ^ . S S " ) ..Ία .4/3 . 5 a . fi rr . ( 2 R . 4 R c . fi R * ) 7 111-(4-71瞌鐘甚-5-申某-2-亞甲某-6-笼？‘某）-4.6.7-二锊某-2.S -二聘二頊「3.2. 1Ί幸烷- .S.4. 三羧醏， (；-(4.6-二甲某-2-辛烯勝酯），4.5-二申某酯經濟部中央楳準局A工消伢合作社印製將2.36毫升0.1當量濃度氫氧化納水溶液於室溫添加入由173毫克實施例27產物溶於5毫升四氫呋喃之溶液内。 10分鐘後將大部分有機溶劑真空蒸發去除。將所得溶液Μ 20毫升水稀釋及Κ***清洗兩次。將水溶液Κ0.5莫耳濃度鹽酸水溶液酸化，Μ乙酸乙酯萃取三次，經硫酸鎂乾燥及過滹。將溶劑去除而得145.2毫克微褐色膠狀物標合物；δ (CDCU)包括 7.卜7.3 (m，5H,Ph)，6.85 (dd,lHCH=CHC02，J=15.5及 8.7Hz), 5.81 (d,lH,dL0C0CH = CH(J = 2Hz), 5.75 ' (d,lH,CH=nLC02,J=15.5Hz), 5.22 (s,1H,CLC〇2H), 5.08 (d.lH.AcOCL, J = 5Hz), 5.01 (s,2H,C = CH2), 5.0 ( 寬5，；^，01〇,4.06(扎：^,(：110}1，<]=21^),3.93及3.79 (2s，6H，2C〇2tt£j, 2.69 (dd,lH，PhCl·之一，J=13.7及 -95- 本紙張尺度边用中國a家標準（CNS)TM規格（210><297公及） Λ (ί Η 6 五、發明説明（94) 6.2 H z ) , 2 . 1 (s , 3 H , C La C 0 2 ) , 1 . 〇 5 (d , 3 Η , C Η = C H C H C La，J = 7 Η z ) . Ο . 8 - Ο . 9 (m，9 Η , 3 C MLa )。

置施例2 S ih__合物A 之甲某酷顆將84奄克碳酸氫納添加入由691毫克化合物A溶於5毫升 N，N -二甲基甲醯胺之溶液內。室溫搜拌1小時後將156微升碘甲烷添加並將混合物再攪拌24小時。將黃色溶液於 40t，1毫米汞柱壓力下蒸發去除大部分Ν,Ν-二甲基甲醢胺，將殘餘物以75毫升乙酸乙酯稀釋及Κ 7 5毫升1莫耳濃度鹽酸清洗，Μ75毫升水清洗四次及Κ75毫升鹽水清洗及經硫酸納乾燥。將溶劑蒸發而得黃色泡沫，將泡沫溶解於每升含0.15毫升硫酸之15毫升之乙腈/水（3:1)內。將溶液分成10批每批1.5毫升分批裝載於斯斐利朔0DS-2製備高效液相層析管柱（20厘米χ250毫米）。將管柱Κ每升含 0.15毫升硫酸之乙腈：水（3:1) Μ每分鐘15毫升之流速展開。將各埋行適宜部分合併及將大部分乙腈蒸發。將水溶液 Μ 150毫升乙酸乙酯萃取，Μ150毫升水清洗兩次及經硫酸納乾燥。將乙酸乙酯蒸發依溶析順序而得白色泡沫產物經濟部屮央捃準局A工消汾合作社印51

Th 先閲背 -而之注意事項塡 % 本 η i )將滯留時間8.5分鐘析出物收集回收得163毫克回收的起始物質。 ii)將滯留時間10.2分鐘析出物收集而得132毫克4-珥某醒_ ; 1 Η 核磁共振（C D 3 0 D )包括 δ 0 . 8 2 - 0 . 9 0 ( 9 H , m , 3 X Cb), 1.03 (3H,d，J9Hz,CH3), 2.11 (3H.S.0C0CIL3), 96 本紙5艮尺度边用中8 Η家楳準(CNS)T4規格（210X297公；《：) 經濟部中央標準局CX工消伢合作社印5i 208703 五、發明説明（95) 3 . 8 2 (3 Η，s , C 0 2 C L )，4 · 0 5 (1 H , d，J 2 · 5 H z，7 RJ , 4 . 9 7 及 5.03 (2H,2s,=CL2), 5.08 (lH,d,J5Hz,CL〇Ac), 5.21 (lH,s,3HJ, 5.80 (lH,d,J15H2,CL=CHCHMe), 6.28 (1H , d , J2 . 5Hz , 6tL) , 6.85 (lH,dd,J15Hz, J9Hz,CH = ClLCHMe) , 7.1-7.3 (SH.m.Ph); 13(：核磁共振（〇03〇〇)鑑別值3 53.4((：〇2(：1^),166.6 (〇C.〇CH = ), 168.6 (5-C.02H), 170.0 (3-(L〇2H), 172.1 (〇C.〇Me), 171.4 (4-C02Me)〇分析值：C.59.99 ; H,6.86;

CseH^ts.HsO需：C, 59.82; H,6.97%。 ffi)將滯留時間12.7分鐘析出物收集而得131毫克5 -甲某酷_ ; 1 Η 核磁共振（C D 3 0 D )包括 δ 0 . 8 2 - 0 . 9 0 (9 H , m , 3 X CiL3), 1.03 (3H，d，J9Hz，CH_3), 2.10 (3H，s,0C0CIL3)， 3.6 8 (3 H , s , C 0 2 C La ) , 4 . 0 3 (1 H , d , J 2 . 5 H z , 7 HJ , 4 . 9 7 及 5.03 (2H，2s，= CE_2)，5.08 (lH,d,J5Hz,C H_〇 Ac), 5.29 (lH,s,3H_), 5.78 (lH,d, J15Hz,CfL=CHCHMe) , 6.3 2 (1 H , d , J 2 . 5 H z , 6 HJ , 6 . 7 8 (lH,dd,J15Hz,J9Hz,CH = CILCHMe), 7.10-7.30 (5H，m，Ph); 13C核磁共振（CD3〇D)鑑別值包括δ 52.5 (C02CLa), 166.2 (0C_0CH = ), 167.4 (5-C.OzMe), 170.1 (3-C_02H)，172.0 (〇C_〇Me), 172.5 (4-ϋ〇2Η)。分析值：C,60.20; H,86; C3eH48〇i4.0.75H2〇需：C，60.20; H，6.95% 。 iv)將滯留時間14.1分鐘析出物收集而得is毫克·Ί . 4 -二申 -97- 本紙張尺度边用中S國家楳準（CHS) T4規格（210X297公垃） (請先閲讀背而之注意亊項洱艰寫木頁) 裝- 2〇BV〇3 A fi Π 6 五、發明説明（96) 基酯；核磁共振（CD3〇D)包括 5 Ο · 82-0 . 90 (9H , m , 3 X C ILa ) , 1 . Ο 3 ( 3 Η，d , J 9 Η z , C ILa ) , 2 · 11 (3 Η , s , 0 C 0 C )， 3.71 (3H , s,COzCLb) , 3.84 (3H,s,C02) , 4.04 (111,^2.5[12,7[1_),4.96及5.02(211,23,=(：112),5.08 (lH.d,J5Hz,CH_〇Ac), 5.27 (lH,s,3H_), 5.80 (lH,d,J15Hz,CtL=CHCHMe), 6.26 (lH,d,J2.5Hz,6iL), 6.86 (lH,dd,J15Hz,J9Hz,CH=CLCHMe), 7.10-7.30 (5H,ra,Ph)。 v)將滯留時間16.9分鐘析出物收集而得12毫克3.5-S_Sa_; "Η 核磁共振（CD3OD)包括 δ 0.82-0.91 (9H,m,3x CIU), 1.03 (3H , d , J9Hz , CLa) , 2.11 ( 3 H , s , 0 C 0 C ), 3 . 0 8 (3 H , s，C ◦ 2 C b )，3 . 7 2 ( 3 H , s，C 0 2 C La ) , 3 . 9 8 (1 H , 寬 s,7H), 4.97 及 5.02 (2H,2s = CD, 5.08 (lH,d,J5Hz,CL〇Ac), 5.37 (lH,s,3HJ, 5.78 (lH,d,J15Hz，CL=CHCHMe)， 6.42 (1H,寬 s,6H), 6.77 (lH,dd，J15Hz,J9Hz,CH=CHJ：HMe), 7.10-7.30 (5H,m,Ph) vi)將滞留時間17.6分鐘析出物收集而得147毫克4.5 (請先wl讀背而之注意事項再堝寫木頁) 裝. 線- 經："'部屮央標準A工消许合作社印51 甲基酯； xCl·^), 1.03 (3H , d , J9Hz , CH^) , 2.11 ( 3 Η , s , 0 C 0 C IL,), 3.67 (3H , s , COzCHa) , 3.83 ( 3H , s , C02C) , 4.04 (11(^2.5[^,7|1_),4.97及5.0 3(211,25，=(^),5.08 (lH,d,J5Hz,CtL〇Ac), 5.22 (lH,s,3HJ, 5.78 (lH,d,J15Hz,CH=CHCHMe), 6.28 (lH,d,J2.5Hz,6IL)( -98 本紙张尺度边用中a Η家標準（CNS) T4規格（210x297公;《：) 2ΔΕ103 五、發明説明（9Y) 6.79 (lH，dd,J15Hz,J9Hz，CH=CLCHMe), 7.10-7.30 (SfUnuPh); 13C核磁共振（CD3〇D)鑑別值包括δ 52.8 (COaCLa), 53.8 (C02CiU) . 166. 1 (〇C_〇CH = ). 167.3 (5-C02He), 170.3 (3-(L〇zH), 171.3 (4-C.OMe), 173.3 (OdOMe) ° 分析值：C,61.70 ; H,7.03; C 3 7 H 5。0 i 4 需：C , 6 1 ‘ 8 3 ; H , 7 . 0 1 %。 νϋ)將滯留時間25.5分鐘析出物收集而得18毫克3.4.5 -三里 AiS-; 1 Η 核磁共振（C D 3 0 D )包括 δ 0 . 8 2 - 0 . 9 0 ( 9 Η , m , 3 xCILa), 1.03 (3H, d, J9Hz, CLa) , 2.11 (3H , s , OCOCiLa ), 3.6 8，3 . 7 3 及 3 . 8 3 ( 9 H , 3 s , 3 x C 0 2 C La )，4 . 0 5 (1 H , d , J 2 . 5 H z，7 HJ , 4 . 9 7 及 5 . 0 2 (2 H , 2 s , = C D , 5 . 0 7 (lH,d，J5Hz,CL〇Ac), 5.28 (lH，s,3L), 5,78 (1H , d , J 15Hz , ClL=CHCHMe) , 6.29 (1 H , d , J 2 . 5 H z , 6 HJ . 6.79 (lH.dd,J15Hz,CH = C{LCHMe) , 7.10-7.30 (5H,m,Ph)

O * .5SV) .3 a .4/3 .S a .firy 111-(4 -7, 二基-3-扔基- 6- ¾ 己基）- 4.fi-二筠某-2.8-二晖二濟部中央準局工消合杜印 (請先閱誚背而之注意亊項#填寫木頁) ϋαΐ.11辛烷-.n 5 -三羧s专 ' 將11. 3毫克Μ-甲基羥胺鹽酸鹽及0.049毫升無水三乙胺添加入由45毫克化合物Α溶於0.8毫升無水二甲基甲醯胺之溶液内。將所得懋浮液於5 0 t：攪拌6小時。然後於室溫 * 5¾拌〗0小時。將溶液濃縮及將殘餘物溶解於1〇毫升水中。 -99- 本紙张疋度边用中a Η家樣毕（CNS) Ή規格（210x2974*) Λ 6 Π 6 2QB1⑽3-— 五、發明説明（98) (請先閲讀背而之注意事項#填寫木頁) 將此溶液Μ***清洗然後將2莫耳濃度鹽酸溶液添加調整酸鹼值為1 。將酸性溶液經氯化納飽和，將乙酸乙酯添加及將兩相混合物於室溫攪拌0.5小時。將有機層分離移出及將水溶液層以乙酸乙酯萃取。將合併有機層經硫酸鎂乾燥’過濾及將溶劑減壓去除。將殘餘物藉斯斐利朔00S-2 1英时管柱行逆相高效液相層析以每升含0.15毫升濃硫酸酸化之乙腈/水（43:57)溶析純化。將析出適宜部分合併及將乙腈真空濃縮去除而得水性溶液，然後將水性溶液經氯化納飽和及與乙酸乙酯攒拌0.5小時。然後將有機相分離移出’及將水溶液相Μ乙酸乙酯萃取。將合併有機溶液經硫酸鎂乾燥，過滹及濃縮合得31毫克白色固體樓頴彳h合物 ;5((：1)30[))包括0.8-1.0(|11，（：113),2.10(8，（：113(：02), 4.76(3,3-[〇,4.99及5.03(23,0 = (：11^),5.10 (d,J5Hz,CH3C02Cl·), 5.39-5.44 (m,6-H), 7.10-7.30 U,Celi5);利用斯斐利朔0DS-2管柱，以每升含0.15毫升湄硫酸之乙腈/水（14.2%至90.3%湄度梯度Μ每分鐘 1.5毫升之流速溶析超過25分鐘的高效液相層析）滯留時間1 0 . 7分鐘所析出部分。經濟部+央榣準而员工消仲合作社印驭富施例40 IMT 特徵 ' 將IMI 332962菌培養物於25 "C燕麥瓊脂培養2-3星期後，菌叢兩表面及其反面顔色由煙灰色至鼠灰色（見公共衛生雇業局（Commonwealth Argricultural Bureaux)出版雷那氏（Rayner’s)徽菌學色譜，1970年版）。 -100- 本扒張尺度边用中國國家毕（CNS)fM規格（210X297公;¢) Λ () η 6 208703 五、發明説明（99) (請先閲讀背而之注意事項洱填寫木頁) ___Γ_!_ 此菌株於251C燕麥瓊脂培養觀察係以光學顯微鏡為之。由於此諏菌不具有性生殖階段但卻形成分生孢子器，因而予分類置腔孢網。此徽菌產生具鬆散菌絲及無隔及單隔兩種分生孢子的分生孢子器。分生孢子為接近5-9微米X . 1.5-3微米大小（通常為7-9微米X 1.5025微米）。同時亦可觀察到大量多隔/多细胞類似厚垣孢子或原始分生孢子器的球狀構造。惟缺獨特的碑格厚垣抱子。

由菌株分離已經確認為莖點苺茴謳夕菌種，且此菌種確認已經CAB國際徽菌學會（CAB Intemational Hycological Institute)加以證實〇啻确例A 二甲棊-2-垒悌醏少莆雜經濟部中央榀準局ΙΞ：工消作合作社印製將實施例10原始據液減壓濃縮將10毫升2莫耳濃度鹽酸添加酸化，及Μ甲笨萃取。將甲笨溶液以鹽水清洗，乾燥及經矽凝膠層析Μ乙酸乙酯：環己烷（1: 3)溶析而得311 毫克標題化合物。[α ]+55. 7。l D 0_ 73 (甲酵内）υ .(溴仿）3400-2300 (0-Η)，1691 (C = 0) 1646 (C = C)厘米 _1。 δ (氘氯仿）6.95 (dd,J=15及 8Hz,CH=CHC02)， 5.80 (d，J=15Hz，CLC〇2)， 2.47 (m，CH-CH=C), 1.45-1.10 (ra.CHaCLz.CH^CHMeEt), 1.08 (ά,α = 8Ηζ.ΐΗΠ1^εΗ = ), 0.87 (m , C H_3 CH2) 1 C_6C ILa )。實·.施例 _Ci 二 W 甚將1.2克前述霣施例A辛烯酸於20t：溶於14毫升四氯化 -101 - 本紙法尺度边用中Η Η家榀iMCNS)T4規格（210x297公;«：)

Λ fj Π G 208703 五、發明説明（100) (請先閲^背而之注意事項洱堝寫木頁) _i 丨 >___ 碳14毫升乙腈及40毫克三氯化妨三水合物内。將混合物搜拌2小時，經矽蒲土過濾，及將殘餘物以二氯甲烷清洗。將《液及洗液移入分液漏斗，及將有機層分離移出。將有機溶液以10毫升水清洗，經硫鎂乾燎，蒸發及於體對體蒸餾器內減壓蒸餾而得400毫克撣頴务，会物，·於5微巴壓力熔點 125^^1^ + 32。〇_D 0.979(乙醇内〉(三溴甲烷）3400-2400, 1739 厘米羧酸），5 (CDCU) 11.5-10.0(寬，1H,C02HJ, 2.57 (m，lH,CH_C02H), 1.74 及 1.13 U,1H 各，CHCLCH), 1.33 (ni,lH，CH2CLCH2), 1.38 及 1 . 1 3 (m，1 Η 各，C L C Η 3 ) , 1 . 1 9 (d，J 6 Η z，3 Η，Ο 2 C Η 3 )， 0.89 (d , J7Hz,3H,C-4CH3) , 0.87 ( d , J6Hz , 3H , C - 2CH3) ° (ii ) S ( R ' R s )甲基2 . 4 -二田甚R勝酯經濟部屮央標準’^工消费合作社印5Ϊ 將0.4毫升5.5毫莫耳亞硫醸氯於〇1〇滴加入由385毫克前述部分（i )產物溶於10毫升甲醇之溶液內及然後將溶液室溫靜置過夜。將過剌甲醇藉大氣壓下蒸餾去除，及將殘餘物蒸餾而得216毫克槽頴彳h合物;[α]1β + 33° (液體 1 = 0 · 1 d m，d 2 2 = 0 . 8 7 1 ) . 1 i t1 [ a f ^ D D 3 2 . 2 ° (液體 1=0.2 dm), u„ax (三溴甲烷）1725 厘米 _1(酯），（5 (CDCU) 3.67 (s,3H,C02CH-3), 2.57 (m.'lH,CH2CILCH2), 1 . 3 3 及 1 . 1 3 U，1 Η 各，C L C Η 3 ) , 1 . 1 6 (d , J7Hz,3H,C-2H3), 0.89 (d , J7Hz , 3H , C - 4CH3) , 0.87 (t,J7Hz,3H，CH2CH3) lit2(核磁共振譜）。 1 · G .歐得翰，A「k i v 化 a 1 960 年 26 期 367 頁（G.Odham, -102- 本紙5k尺度边用中a Η家«UHCNS) 1Μ規怙（210><297公及) Λ (i Β 6 208703 五、發明説明（101)

Arkiv Kemi , 1 966, ZL·, 367 ) ° 2. G.西米諾，G.索達諾及A.斯畢芮拉，有機化學期刊， .1987年 52期，5326頁（G. Simino G. Sodano and A. Spinel la, J . 0 r g . C h e m. 1 987，5 2. 5326 〇活髁外结里 ⑴本發明化合物抑制酵素鯊烯合成酶的能力利用[2-1 4C] 焦磷酸法昵酯作為酵解質於類似於S . A .比勒等人於發藥化學期刊31卷10期1869- 1871頁（1988年）（5.六.8丨11”£_!1_ a_L in Medicinal Chemistry 31(10) 1869 -1871 ( 1 988 ))所述分析條件下予論證。將[14C]鯊烯自層析板薄層未反應酵解質内分離並Μ液體閃爍計數法訂數加以測定。本發明化合物對鯊烯合成酶之抑制作用藉將大鼠肝臓均質液於[2-14C]焦磷酸法昵酯存在下與測試之不同濃度培養予以定量。將在30分鐘測定内對[14C]鯊烯提供50% 抑制作用的化合物濃度註為IC5〇值。於此測試内化合物A，B，C，D，E，G，H，I，J，K，L ，Μ * Ν * 0， T， U · V， W， Al - Β1 > 及 Cl 具 ICB〇值少於 100毫微莫耳澹度。 ⑵本發明化合物抗徽菌活性活體外評估係藉測定化合物使生長於適宜培養基上特定微生物未能存在、之最低抑制濃度 (MIC)加K測定。實務上將臨床相關病原菌例如將白假絲酵母接種於各個具測試化合物K不同特定湄度混併其内之瓊脂培養板系列上及然後將各培養板視病原菌類於37=0培養24至48小時。然後檢視培養板是否有徽菌存在及因此得 -103- 本紙尺度边用中Β B家標苹（CNS) Ή規怙（210x297公;«：) (請先閲讀背而之注意市項4·填筠本页) 裝- 線. 經濟部中央榀準局员工消价合作社印虹 2〇Sr^3

Λ 6 Π G 五、發明説明（102) 知適宜的最低抑制濃度（MIC)。於此測試中化合物A，B，D，Ε，Η，I* J，Κ，Μ，N，0 及A1對多種臨床相闞病原菌之最低抑制湄度（MIC)為每升 0.1至31微克範圍内。郵璲昔_例 K下實施例内”活性成分”辭意為本發明化合物例如前文賁施例所述化合物。管施倒_.：1-錠_ , a)活性成分 5.0毫克乳糖 95. 0毫克微晶纖維素 90.0毫克交聯聚乙烯吡咯啶嗣 8.0毫克硬脂酸鎂 2.0毫克壓縮重量 200.0毫克將活性成分，微晶孅維素，乳糖及交聯聚乙烯吡咯啶酮經500微米篩孔過篩及於適宜攪拌器内混合。將硬脂酸鎂經250微米篩孔過篩，及與混合物相混合。將混合物利用適宜製錠機壓縮為錠劑。 (請先間讀背而之注意事項#蜞寫木頁) ~- 經才部屮央榀準局CX工消合作杜印製 b)活性成分 5.0毫克乳糖 165 .Ό毫克預膠化澱粉 20,0毫克交聯聚乙烯吡咯啶酮 8.0毫克硬脂酸鎂 2 . 0毫克壓縮重量 200.0毫克 -104- 本紙張尺度边用中 a 五、發明説明（103) 將活性成分，乳糖及粒。將潮濕體乾燥及研啶酮篩經250微米過篩宜製錠機壓縮為錠劑。官施例2 -膠囊劑 Λ fi Π 6 預膠化澱粉相互混合及Μ水聚結顆磨。將硬脂酸鎂及交聯聚乙烯吡咯及與顆粒混合。將所得混合物Μ適經濟部屮央榀準工消价合作社印51 a) 活性預膠硬脂裝填將活，及Μ 填入適 b) 活性乳糖聚乙交聯硬脂裝填將活顆粒。咯啶酮裝填入啻施例成分化澱粉酸鎂重量性成分及預膠化經250微米篩孔宜大小硬明膠囊成分烯吡咯啶嗣聚乙烯吡咯啶酮酸鎂重量性成分^乳糖相將潮濕體乾燦及經250微米篩孔適宜大小硬明膠 5 . 0毫克 193 . 0毫克 2 . 0畜克 (請先閲請背而之注意事項再塡寫本頁) 摧聦 a )活性成分 200 . 0毫克澱粉經500微米篩孔過篩，相混合過篩之硬脂酸鎂潤滑。將混合物裝内。 5 . 0毫克 177 . 0毫克 8 . 0毫克 8 . 0毫克 2 . 0毫克 200 . 0毫克互混合及K聚乙烯吡咯啶_聚結為研磨。將硬脂酸鎂及交聯聚乙烯吡過篩及與顆粒混合。將所得混合物囊内。 5. 0毫克 105- 本紙張尺度边用中Η Η家標芈(CNS) Τ4規怙（210X297公没） 9. 五、發明說明（1〇4) 1 . 5毫克 0 . 7 5毫克 5. 0毫克 1 . 0毫克適量適量 10.0毫升 (請先間讀背而之注念事項#填寫木頁) --------- i ___ 一羥丙基甲基纖維素 45.0毫克羥笨甲酸丙酯羥苯甲酸丁酯納化糖精葡萄糖酵溶液適宜媛衝劑適宜矯味劑純水加至將羥丙基甲基纖維素分散入部分熱純水與羥基苯甲酸酯内及將溶液冷卻至室溫。將納化糖精，矯味劑及葡萄糖醇溶液添加入體溶液内。將活性成分溶解於部分剌餘水中及添加入體溶液内。將適宜緩衝劑可添加以控制最大安定性之酸鹼值區域。將溶液達到應有體積，過滤及裝填入適宜容器內。當8倫例4-癱腔爾浓液 a )保藏溶液經濟部屮央標準杓β工消#合作社印製雷蚤百分hh 0.1 5.0 Ό . 02 活性成分無水右旋葡萄糖氯化笨甲烴鞍適宜媛衝劑適量純水加至 10 0 將活性成分及右旋葡萄糖溶解於部分體溶液内。將適宜媛衝劑可添加以控制酸鹼值於最大安定區域内。將溶液達 -106- 本紙張尺度边用中a國家«UMCNS) T4規格（210x297公;Hr) Λ (i η 6 五、發明説明（1〇5) 到應有體積，過濾及裝填入適宜容器内。或者，將溶液Κ經滅菌的單一劑量形式提供使得調配方内免用保蔵劑。 b)未保藏滅菌溶液竜啬百分hh 活性成分 0.1 無水右旋葡萄糖 5.0 適宜緩衝劑適量純水加至 10 0 (請先閲誚背而之注意事項#塡窵本頁) 經濟部屮央榀準局β工消"合作杜印51 -107- 本紙张尺度边用中a Η家橒準（CNS) 規格（210x297公没)

Claims

虼尊刮肀請業正本（π年4月} A l ΒΊ C' Ό：補充本年月曰種具化學式（I )之化合物

(I) 部屮失 .¾ 消合式中I代表氫原子，羥基或選自下述组成之基 -0C0CH = CHCH (CH3) (CH2)3CH3 , -ococh^chc(ch3)Schch(ch3)-ch2c;!3,或 P -oco-x-ch2ch(ch3)ch2ch3 [式中 x為- ch€chch(ch3)-, ζ -CH2CH(OH)CH(CH3)-,-CH=CHC(OH)(CH3)-, -ch2ch(oh)ch2-或- ch2ch2ch(ch3)-]; -r2代表氫原子或羥基； R3代表選自下述姐成之基 -C( = CH2)CH(OR7)CH(CH3)CH2Ph(式中 R?為 1[原子或乙醯 B 基），-C(CH3)=CHCH(CH2R8)CH2Ph (式中 1為‘1[原子或羥基），-CKHaOH^CHCMCHdCUh, -C(=CH2)CH(OH)CH(CH2OH)CH3Ph, -C(=CH2)CH(NHC0CH3)CH(CH3)CIU.Ph.-C(CH3)NHC0CH3) CHCH(CH3)CH2Ph或 ί (¾先閲請^函之洼^事頊再填寫本百 *打. R 'Ά ：iC^ii(CNS)T4MI^(210x2y7^ii) 3 o 7 s 20 A 7 7 7 B c D m. 濟· 部中央搮準 A 印 a D

l5h 六'申請專利範面

R4，卩6及！1«»可各別代表氫原子或甲基及其鹽類；但當 1^或1{2之一者代表氫原子時* R3為埋自下述之基 -C(=CH2)CH(OR7)CH(CH3)CH2Ph及 -C(CH3)icHCH(CH3)CH2Ph及當RiftlU兩者皆代表氫原子時，R3代表-C(CH3)fcHCH(CH3)CH2Ph。根據申謫専利範ffl第1項之化合物，除了化學式（I )所示之化合物其中1U化表 -〇COCHfcHCH(CH3)CH2CH(CH3)CH2CH3， R2代表羥基， R3代表-C(CH2)CH(OCOCH3)CH(CH3)CH2Ph 且 Re及 R β分別代表氫或甲基之化合物外。根據申請專利範園第1項或第2項之化合物’具化學式 (la)结構 (la) 甲4(210X297 公廣) ..................................M...................R..............................*r........一 ...................#!. {請先«讀背面之注意事項再填1?本页) 3ο 7 8ο A B c D 六、申請專利範面 4. 式中iU* R2，R*及R7悉定義如申講専利範騸第1項及其鹽類；但當R2代表氫原子時•則h代表下式之基 -OCOCH会CHCH(CH3)CH2CH(CH3)CH2CH3。根據申請専利範_第1項或第2項之化合物，具化學式 (lb)结構 R,

(lb) 5 . 6 . 組濟部中央準 Μ 印及其鼸類，式中IU代表 -.OCOCH吾CHCH(CH3)CH2CH(CH3)CH2CH3，R2代表理基及 R3 代表- C( = CH2)CH(OH)CH(CH2〇H)CH2Ph. -C(=CH2)CH(NHCOCH3)CH(CH3)CH2Ph, -C(CH2NHCOCH3)吾CHCH(CH3)CH2Ph或 -C(CH3)=CHCH (CHa)CH2Ph ° 根據申請専利範鼷第1項或第2項之化合物羥基。根據申講専利範園第1項或第2項之化合物 ^及Re代表氫原子。根據申請専利範園第3項之化合物，其中代表羥基或下述之基其中R2代表其中R4， ..................................)...................¾...............................ίτ........^.....................#!. (請先聞讀背面之注意事項再填寫本页) 甲 4 (210X297 公廣）婭濟部中央搮準局印裝 -08703 ^ C7 _ - D7 六、申請專利範面一Ο

Ο R2代表羥基，R 4代表氫原子及R7代表氫原子或乙釀基；及其鼸類。 8. [lS-[la (4R*,5S*),3a ,Αβ ,5α ,6α (2 Ε . 4 R * . 6 R * ) , 7 /3]]1-(4-乙釀氧基-5-甲基-3-亞甲基-6-苯己基 )-4,6,7-三羥基-2,8-二嗶二環[3.2.1]辛烷-3,4,5-三羧酸6-(4,6-二甲基-2-辛烯酸酯），及其鹽類。 9. [lS-[la (4R*,5S*).3a ,4^ ,5a ,6a (2 Ε , 4R * , 6 R * ) , 7 泠]]1-(4-羥基-5-甲基-3-亞甲基-6-苯己基）-4,6,7-Ξ羥基-2,8-二嗶二瓖[3.2.1]辛烷-3,4,5-三羧酸， 6-(4,6-二甲基-2-辛烯酸酯），及其鹽類。 10. [lS-[la (4R*,5S*),3a ,4/3 ,5a ,6a ,7/9 ]]1-(4 -乙睡氧基-5-甲基-3-亞甲基-6-苯己基）4,6,7-三羥基 -2,8-二啤二環[3.2.1]辛烷- 3,4,5-三羧酸；及其鹽類 0 , 11. [lS-[la (4R*,5S*),3a .4^ ,5a ,6a ( 2 Ε , 4 R * , 6 R * ) , 7 /3 ] ] 1 - ( 4 -乙醢氧基-5 -甲基-3 -亞甲基-6 -苯己基基羥三環二二 (請先閑讀背面之注意事項再填宵本百) •装. .打. •線· 酸類羧》酯酸烯辛- 2 I 基甲二 -3酯说基辛甲三其及 α θ 4 f 4(210X297 公省） 3ο 7 8ο A'B'C'D' 六、申請專利葩面濟部中央橾準印 $1 召]1卜（4-羥基-5-甲基-3-亞甲基-6-笨己基）-4,δ,7-三羥基-2,8-二Bf二環[3.2.1]辛烷-3,4,5-三羧酸， 6-(4,6-二甲基-2-辛烯酸酯），3-甲基酯；及其鹽類。 13. [lS-[la (4R*,5S*),3a ,4/3 ,5a ,6a (2 E , 4R* , 6R*) . 7 泠]]1-(4-乙醣氧基-5-甲基-3-亞甲基-6-苯己基 )-4,6,-二羥基-2,8-二吗二瓌[3.2.1]辛烷-3,4,5-三羧酸· 6-(4,6-二甲基-2-辛烯酸酷）； [lS-[lct (4R*,5S*),3cx ,43 ,5a ,6a ,70 ]Π-(4-乙醣氧基-5-甲基-3-亞甲基-6-笨己基）-4,7-二羥基-2,δη啤二環 [3.2.1] 辛烷 -3,4,5-三羧酸； [lS-[la (4R*,5S*),3a ,4/3 ,5a ,6a (2E,4E,6R*(S*)]，7/3 ]]l-(4-乙醢氧基-5-甲基-3-亞甲基-6-苯己基）-4,6,7-三羥基-2, 8-二噚二環[3.2.1] 辛烷-3,4,5-三羧酸，6-(4,6-二甲基-2,4-辛二烯酸酯 )(化合物Η ); [lS-[la (4R*,5S*),3a ,4/3 ,5a ,6a [3R*(S-)，4R*(S*),(6R*(S*)],7/3]]l-(4-乙醯氧基 -5-甲基-3-亞甲基-6-笨己基）-4,6,7-三羥基-2,8-二啤二瓖[3.2.1]辛烷-3,4.5-三羧酸，6M3-羥基-4,6-二甲基辛酸酯）（化合物I); [1 S - [ 1 a ( 4 R · , 5 S * ) . 3 a , 4/?，5 a，6 a ( 2 E , 4 R · ( S * ) ] , 7 /3 ]]l-(4-乙醯氧基-5-甲基-3-亞甲基-6-苯己基 )-4,6,7-三羥基-2,8-二晖二環[3.2.1]辛烷-3,4,5-三羧酸，6-U -甲基-2-辛烯酸酯）（化合物G); (請先閲讀背面之注意事項再填宵本頁) .«.· .打· •綵. 甲 4(210X297 公濩） 3 ο ABC D 六'申請專利範面 [lS-[la (4R*,5S*),3a ,4/3 ,5a ,6a [2E,4R*(S*),(6R*(S*)],7/?]n-(4-乙醢氧基-5-甲基 -3-亞甲基-6-苯己基）-4,6,7-三羥基-2,8-二嗶二環 [3.2.1] 辛烷-3,4,5-三羧酸，6-(4-羥基-4,6-二甲基 -2-辛烯酸酯）異構物1(化合物J); [lS-[la (4R*,5S*),3a .4^ ,5a ,6a [2E,4R*(S*),(6R*(S*)],7/3]]l-(4-乙醯氧基-5-甲基 -3-亞甲基-6-笨己基）-4,6,7-三羥基- 2,8-二D?二環 [3.2.1] 辛烷-3,4,5-三羧酸，6-U-羥基-4,6-二甲基 -2-辛烯酸酯）異構物2(化合物K); ClS-[la (4R*,5S*).3a ,4^ ,5a ,6a [31{*(5*),(61{*(5*)],7/9]]1-(4-乙醢氧基-5-甲基-3-亞甲基-6-笨己基）-4,6,7-三羥基-2,8-二嗶二環 [3.2.1] 辛烷-3,4,5-三羧酸，6-(3-羥基-6-甲基辛酸酷 )(化合物L ); [lS-[la (4R*,5S*),3a ,Αβ ,5α ,6α [3R*(S*). (6R*(S*)],7;S ]]1-U-羥基-5-甲基-3-亞甲基-6-笨己基）-4,6,7-三羥基-2.8-二啤二環[3.2.1]辛备-3,4,5 -三羧酸，6-(3 -羥基-4,6 -二甲基辛酸酯）（化合物M); [lS-[la (4R* (S*) , 5R (S*) ] . 3 α ,Αβ ,5α ,6α (2E,4R*,6R*),7/3 ]]1-U-羥基-5-羥甲基-3-亞甲基 (請先閱讀背面之注意事項再填穽本页) •装· •打· .線經濟部中央標準局印义 4.酸 )-羧基三己5-苯4, 基羥三環二吗二酯酸烯辛 - 2 基甲烷物辛合 1]化 6 f 4(210X 297W廣） 208703 A B c D 部中準 Μ 印 KL 六、申請專利範® H)； ClS-[la (3E,5R(S*)],3a ,Αβ ,5α ,6α (2E,4R*,6R*),7/8 ]]1[3-(乙醢胺基）甲基-5-甲基-6-苯基-3-己烯基]-4,6,7-三羥基- 2,8-二嗶二環[3.2.1]辛 * 烷-3,4,5-三羧酸，6-(4,6-二甲基-2-辛烯酸醏）（化合物Τ); [lS-[la (4R*,5S*),3a .4/3 ,5a ,6a [3R*(S*),(6R*(S*)],7/3 ]]l-(4-羥基-5-甲基-3-亞甲基-6-苯己基）-4,6,7-三羥基-2,8 -二嗶二環[3.2.1]辛烷-3,4,5-三羧酸· 6-(3-羥基-6-甲基辛酸酯）（化合物 W)； [lS-[la (3E . , 5R* (S*) ] , 3 a ,4/3 ,5a ,6a (2E,4R*,6R*),7/3 ]]l-(3,5-二甲基-6-苯基-3-己烯基 )-4,6,7-三羥基-2,8-二嗶二環[3.2.1]辛烷-3,4,5-三羧酸· 6-(4,6 -二甲基-2-辛烯酸酯）（化合物A1); [lS-[la (4R*,5S*),3a .4^ .5a ,6a (2E,4R*(S*),6R*(S*)],7/3 ]]l-(4-羥基-5-甲基-3-亞甲基-6-笨己基）-4 ,6,7-三羥基-2,8-二吗二環[3.2.1] 辛烷-3,4,5-兰羧酸· 6-(4-羥基-4,6-二甲基-2-辛烯酸 4 酯）（化合物C 1); [lS-Cla (4R* (S*) . 5R (S-) ] , 3 α ,Αβ ,5α ,6α [2E.4R*,6R*),7yS ]]1-(4-乙醯胺基-5-甲基-3-亞甲基 -6 -苯己基）-4,6,7 -三羥基-2,8 -二吗二環[3.2.1]辛烷 -3,4,5-三羧酸* 6-(4,6-二甲基-2-辛烯酸酯）（化合物 -7 - (請先閑讀背面之注意事項再填穽本页) ，装， .打· *綵. f 4(210X297 公廣） 208703 at B7

六、申犄專利範面蚁濟部中央揉準局印X B1); [lS-[la (4R*.5S*).3a ,4/3 ,5a ,6a UR*(S*)，6I{)*) ()))]7/9 乙醢氧基-5_甲基·3_ 亞甲基-6-苯己基）-4,6,7-三羥基- 2,8-二〇?二環 [3.2.1]辛焼-3,4,5-三羧酸，6-(4,6-二甲基辛酸酯）（化合物ϋ); 及其鹽類。 14·根據申請專利範園第1項之化合物，用於治療降低包括人類之動物血漿膽固酵董為有益的病症。 15. 根據申謫専利範園第i項之化合物，用於治療人類或非人類動物病患徽菌感染。 16. —種用於治療降低包括人類之動物血漿譫固酵量為有益的病症之蕖學组成物•其包括有效量之根據申請專利範圍第1項之化合物。 17. —種用於治療人類或非人類動物病患徽菌感染之藥學姐成物•其包含有效量之根據申請專利範圔第1項之化合物。 18. 根據申請専利範圃第16或17項之藥學姐成物，係Μ通宜於烴口服，烴頰，經局部，非烴腸，經植入，纆肛門· 經眼或经生殖-泌尿道豳稱之形式或適宜以踁吸人或吹氣施藥之形式。 19. 根據申請専利範画第16或17項之槩學姐成物，Κ單一劑量形式。 20. 根據申請専利範圍第1項之化合物’係供為製成蕖物用 8 T4 (210X297 公尨） (請先閱讀背面之注意事項再填"本页) 5t. .打. -^08103 A7 B7 C7 D7 六、申請專利範圊於治療人類或非人類動物病患血膽固醇過高症及/或血脂蛋白過高症。 21. 根據申請專利範圍第1項之化合物•係供為製成_物用於治療人類或非人類動物病患徽菌感染。 22. —種製備根據申請專利範圍第1項之化合物之方法，包括培養IMI 332962或其突變種，而後由培養矻單離一或多種此等化合物，接著視需要藉去醯基化作用及/或轉化作用成甲基酯而得所欲化合物。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央揉準局印$1 甲4(210X297 公廣) 23-10-1992 Ιέ；28 GLAXOHOLDINGS PLC 0Θ1 .966 6838 P.03

A 3.6 B 4.5 C 5.7 D 7.1 E 4.3 G 18.9 H 24.75 I 10.5 J 8 K 8 L 30 M Π-9 N 24.4 〇 34.7 丁 77.9 u 38 V 34.8 w 8 A1 32 B1 5 Cl 19 © / 20870¾-10-1992 GLAXOHOLDINGS PLC 081 B6S 8838 P.04 81.1〇· 2 9 對抗真菌性病源之活性化主！ _病原.MICfup/mn A (A) 8 (B) 4 (C) 16 CD) 0.5 B (A) >62.0 (B) 31 (C) 62 (D) 1 D ㈧ >62.0 (B) 2 (C) 16 ⑼ NT E (A) >62.0 (B)-. 16 (C) >62.0 (D) NT H (A) 62 (B) 31 (C) 8 (D) 1 I (A) >62.0 (B) 31 (Q 31 (〇) 2 J (A) >62.0 (B) >62.0 (C) >62.0 CD) 31 K ㈧： >62.0 '(B) >62.0 (C) >62.0 (〇) 8 M (A) >31.0 © Ύ 〇87^^0〇92 1&29—GLftXOHOLDINGSPLC 81. 10.2 9 081 .966 8838 P.05 VI/ \nv Λν \ly \«/ \—/ \WMV \t/ \f/ \)x bcdabcdabcd ✓IV /1\ /IN /l\ /V /\ /fv ΓΛ /IN /IV /l\ οAl >31.0 >31.0 8 >31.0 >31.0 >31.0 1 >31.0 >31.0 16 4 其中：（Α〉=曰假絲酵母〔Candida albicans) (B) =： 4 滑球假▲酵母（Candida glabrata ) (C〉=煙曲霉（Aspergillus fumigatus) (D)=新型隱球酵母（Cryptococcus neoformans NT=未測試 © λ TOTPL P.G5