TW202409088A - 抗lilrb2抗體及其用途 - Google Patents

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王春年
趙金鳳
王穎
胡豔芬
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吳志浩
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Abstract

本公開關於與LILRB2（白血球免疫球蛋白樣受體B2）結合的抗體或其抗原結合片段，該抗LILRB2抗體或其抗原結合片段可阻斷訊息傳遞途徑並上調對LILRB2相關疾病、障礙或病症的免疫反應。

Description

抗LILRB2抗體及其用途
本申請要求於2022年7月8日提交的PCT國際申請案號PCT/CN2022/104494及2023年6月29日提交的中國專利申請案號202310787466.X的優先權。在先申請的公開內容被視為本申請公開內容的一部分，並以其整體併入本申請。標題為D-CF220833TW-Seqlisting.xml的序列表創建於2023年7月4日，大小為25,075位元組，特此藉由引用以其整體併入。本公開關於與LILRB2（白血球免疫球蛋白樣受體B2（ Leukocyte Immunoglobulin Like Receptor B2；LILRB2））結合的抗體或其抗原結合片段及其用途。
本部分中的陳述僅提供與本公開相關的背景資訊，並不一定構成先前技術。
白血球免疫球蛋白樣受體（LILR）家族的成員係先天性及適應性免疫反應的關鍵正調節因子（LILRA）及負調節因子（LILRB）。LILRB家族成員在免疫細胞上表現出不同的表現模式，其中LILRB2（白血球免疫球蛋白樣受體B2，UniProt：A2IXV5）主要局限於髓源性細胞，包括單核球、巨噬細胞、樹突細胞及顆粒球。LILRB2（也稱為單核球/巨噬細胞免疫球蛋白樣受體10（MIR-10）、免疫球蛋白樣轉錄物4（ILT4）或CD85抗原樣家族成員D（CD85D））係典型的I型跨膜蛋白，具有四個細胞外串聯Ig樣結構域、跨膜區及具有3個免疫受體酪胺酸抑制模體（immunoreceptor tyrosine inhibitory motif；ITIM）的胞質尾區（Aiqin Gao等人, ILT4 functions as a potential checkpoint molecule for tumor immunotherapy [ILT4作為腫瘤免疫療法的潛在檢查點分子]. Reviews on Cancer.[癌症綜述] 1869 (2018) 278-285）。
LILRB2與特定配體之間的相互作用係具有獨特生物學功能的分子過程所必需的。人LILRB2最初已被證明廣泛結合MHC-I分子（也稱為人白血球抗原（human leukocyte antigen；HLA）典型I類分子（HLA-A、HLA-B、HLA-C）及非典型HLA I類分子（HLA-E、HLA-F、HLA-G及HLA-H））。隨後的研究表明LILRB2與其他非HLA配體（包括血管生成素樣（angiopoietin-like；ANGPTL）家族、髓磷脂相關醣蛋白（MAG）及寡聚β-類澱粉蛋白）結合（William等人, LILRB receptor-mediated regulation of myeloid cell maturation and function [LILRB受體介導的骨髓細胞成熟及功能的調節]. Cancer Immunol Immunother.[癌症免疫學免疫療法] 2017; 66(8): 1079-1087）。
LILRB2係具有免疫抑制功能的強力抑制分子。最近的研究表明，LILRB2在腫瘤微環境以及來自造血腫瘤及實質固態瘤的惡性腫瘤細胞中過表現或高度誘導。臨床上，LILRB2在NSCLC及乳癌患者的腫瘤細胞中的表現水平與細胞分化不良、局部淋巴結轉移增加、癌症晚期及患者生存率低呈正相關（Aiqin Gao等人, ILT4 functions as a potential checkpoint molecule for tumor immunotherapy [ILT4作為腫瘤免疫療法的潛在檢查點分子]. Reviews on Cancer.[癌症綜述] 1869 (2018) 278-285）。越來越多的證據強調了LILRB2作為腫瘤免疫療法的新穎免疫檢查點的潛在作用。
免疫療法已經成為治療人癌症的突破性策略，但仍然需要更有效的利用免疫療法的癌症治療手段。更特別地，仍然需要新穎的抗LILRB2抗體、包含該抗體的組成物及方法。
出於上述目的，本文提供了與LILRB2結合的新穎抗體或其抗原結合片段及其用途。
在一方面，本公開提供了抗體或其抗原結合片段。該抗體或其抗原結合片段包含含有互補決定區（complementary determining region；CDR）1、2及3的重鏈可變區（VH），其中VH CDR1包含與序列識別號: 1所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列；VH CDR2包含與序列識別號: 2所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列；VH CDR3包含與序列識別號: 3所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列；以及含有CDR 1、2及3的輕鏈可變區（VL），其中VL CDR1包含與序列識別號: 4所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列；VL CDR2包含與序列識別號: 5所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列；VL CDR3包含與序列識別號: 6所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段的VH包含分別具有序列識別號: 1、2、3所示胺基酸序列的CDR 1、2及3；並且VL包含分別具有序列識別號: 4、5、6所示胺基酸序列的CDR 1、2及3。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段的VH與序列識別號: 7、8、9、10、11或12所示胺基酸序列至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%相同；並且VL與序列識別號: 13、14、15或16所示胺基酸序列至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%相同。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段的VH與序列識別號: 7、8、9、10、11或12所示胺基酸序列的差異不超過25、20、15、13、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸；VL與序列識別號: 13、14、15或16所示胺基酸序列的差異不超過20、15、13、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段的VH包含序列識別號: 7、8、9、10、11或12所示胺基酸序列；並且VL包含序列識別號: 13、14、15或16所示胺基酸序列。
在一些實施方式中，VH包含序列識別號: 7的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 13的胺基酸序列；VH包含序列識別號: 8的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 13的胺基酸序列；VH包含序列識別號: 9的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 13的胺基酸序列；VH包含序列識別號: 7的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 14的胺基酸序列；VH包含序列識別號: 8的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 14的胺基酸序列；VH包含序列識別號: 9的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 14的胺基酸序列；VH包含序列識別號: 10的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 15的胺基酸序列；或者VH包含序列識別號: 11的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 15的胺基酸序列；VH包含序列識別號: 12的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 16的胺基酸序列。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段與LILRB2特異性結合。在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段以小於20 nM、小於10 nM、小於5 nM或小於1 nM的EC 50值與LILRB2特異性結合。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與HLA-A2（主要組織相容性複合體，I類，A2(major histocompatibility complex, class I, A2；HLA-A2)）之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段以藉由FACS（螢光活化細胞分選法（fluorescence activated cell sorting；FACS））測定測量的小於20 nM、小於10 nM、小於5 nM、小於1 nM或小於0.6 nM的IC 50值阻斷人LILRB2與HLA-A2之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與HLA-G（主要組織相容性複合體，I類，G）之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段以藉由FACS（螢光活化細胞分選法）測定測量的小於10 nM、小於5 nM、小於1 nM、小於0.5 nM或小於0.3 nM的IC 50值阻斷人LILRB2與HLA-G之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人ANGPTL1（血管生成素樣蛋白（angiopoietin-like；ANGPTL）1）之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人ANGPTL2（血管生成素樣蛋白2）之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人ANGPTL4（血管生成素樣蛋白4）之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人ANGPTL7（血管生成素樣蛋白7）之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人MAG（髓磷脂相關醣蛋白）之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段能夠將人單核球來源的M2巨噬細胞重新編程為M1表現型（促發炎M1表現型）。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段能夠減輕M2巨噬細胞介導的T細胞抑制。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段能夠促進人樹突細胞進入成熟狀態。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段能夠促進人單核球進入促發炎狀態。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段能夠促進人PBMC（周邊血單核球（peripheral blood monocular cell；PMBC））進入促發炎狀態。在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段能夠增強促發炎細胞激素及/或趨化因子的表現。在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段能夠上調促發炎細胞激素及/或趨化因子的釋放。在一些實施方式中，促發炎細胞激素包含IL-2（介白素2（interleukin 2 ；IL-2））、IFN-γ（干擾素γ（interferon gamma；IFN-γ））及/或TNF-α（腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor；TNF-α））。在一些實施方式中，促發炎細胞激素及/或趨化因子選自由以下構成之群組：IL-2、IFN-γ、TNF-α、顆粒酶B、PDGF-AA、IL-3、IL-1β、IL-5、TGF-α、IFN-α、CCL4、鹼性FGF、IL-13、G-CSF、IL-4、PD-L1、CCL20、IL-15、GM-CSF、CCL5、CCL3、PDGF-AB、CCL19、CXCL2、IL-6、VEGF及其組合。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段能夠降低IL-10（介白素10）的表現。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段以藉由FACS（螢光活化細胞分選法）測定測量的小於15 nM、小於10 nM、小於8 nM或小於6 nM的KD（親和力常數）結合人LILRB2。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段係嵌合或人源化抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段係IgG1抗體、IgG2抗體、IgG3抗體或IgG4抗體或其抗原結合片段。
在一方面，本文提供了抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與包括序列識別號: 21所示胺基酸序列的肽結合。
在一方面，本文提供了分離的多核苷酸，其編碼與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段。
在一方面，本文提供了分離的載體，其包含編碼與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段的多核苷酸。
在一方面，本文提供了宿主細胞，其包含編碼與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段的分離的多核苷酸或包含上述多核苷酸的分離的載體。
在一方面，本文提供了藥物組成物，其包含與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段或編碼與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段的分離的多核苷酸、或本文提供的分離的載體、以及藥學上可接受的載劑。
在一方面，本公開提供了藥物組成物，其包含上文提供的抗體或其抗原結合片段以及抗PD-1抗體（例如，可瑞達（Keytruda））。
在一方面，本文提供了套組（kit），其包含與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段或編碼與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段的分離的多核苷酸、或本文提供的分離的載體、或本文提供的宿主細胞、或本文提供的藥物組成物。
在一方面，本文提供了本文提供的抗體或其抗原結合片段或分離的多核苷酸或分離的載體或宿主細胞或藥物組成物或套組在製造用於與人LILRB2結合的治療劑中之用途。
在一方面，本文提供了結合LILRB2的抗體或其抗原結合片段或分離的多核苷酸或分離的載體或宿主細胞或藥物組成物或套組在製造用於阻斷人LILRB2與HLA-A2、HLA-G、人ANGPTL1、人ANGPTL2、人ANGPTL4、人ANGPTL7及/或人MAG之間的相互作用的治療劑中之用途。
在一方面，本文提供了本文提供的與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段或分離的多核苷酸或分離的載體或宿主細胞或藥物組成物或套組在製造用於增強免疫反應的治療劑中之用途。
在一方面，本文提供了與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段、或本文提供的分離的多核苷酸、或本文提供的分離的載體、或本文提供的宿主細胞、或本文提供的藥物組成物、或套組在製造用於診斷、預防或治療疾病的治療劑中之用途。
在一方面，本文提供了增強有需要的受試者的免疫反應之方法，該方法包括向該受試者投予治療有效量的與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段、或本文提供的分離的多核苷酸、或本文提供的分離的載體、或本文提供的宿主細胞、或本文提供的藥物組成物、或本文提供的套組。
在一方面，本文提供了診斷或預防或治療有需要的受試者的疾病、障礙或病症之方法，該方法包括向該受試者投予治療有效量的與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段、或本文提供的分離的多核苷酸、或本文提供的分離的載體、或本文提供的宿主細胞、或本文提供的藥物組成物、或本文提供的套組。
在一些實施方式中，疾病、障礙或病症包含腫瘤，視需要地，至少一個腫瘤細胞表現LILRB2。
在一些實施方式中，受試者係哺乳動物，包括人。
在一方面，本文提供了LILRB2上的結合表位，其中該結合表位包含序列識別號: 21所示胺基酸序列。在一些實施方式中，LILRB2係人LILRB2。
下文將更詳細地解釋本公開。該說明書並非旨在成為可以實現本發明的所有不同方式的詳細目錄或者可以被添加至本發明的所有特徵的詳細目錄。例如，關於一個實施方式示出的特徵可以併入到其他實施方式中，並且關於特定實施方式示出的特徵可以從該實施方式中刪除。此外，在不脫離本發明的情況下，根據本公開，對本文所建議的各種實施方式的許多變化及添加對於熟悉該項技術者而言將是顯而易見的。因此，以下描述旨在說明本發明之一些特定實施方式，而不是詳盡地指定其全部置換、組合及變化。
除非另有定義，否則本文所用的全部技術及科學術語具有與本公開所屬技術領域中具有通常知識者通常所理解的相同的含義。儘管類似於或等同於本文所述之那些方法及材料的任何方法及材料可用於本公開的用於測試的實踐，但本文描述了較佳的材料及方法。在描述及要求本公開時，將使用以下術語。
LILRB2（白血球免疫球蛋白樣受體B2，也稱為MIR-10、ILT4或CD85D）係細胞表面受體，可藉由募集酪胺酸磷酸酶（tyrosine phosphatase）（如SHP1或SHP2）來負向調節免疫反應。LILRB2主要在單核球、巨噬細胞及骨髓細胞中表現，並由內皮細胞、胎盤滋胚層細胞及蛻膜巨噬細胞表現，這表明LILRB2可能在多種生理功能中發揮重要作用（Jian He等人, Overexpression of ANGPTL2 and LILRB2 as predictive and therapeutic biomarkers for metastasis and prognosis in colorectal cancer [ANGPTL2及LILRB2的過表現作為大腸直腸癌轉移及預後的預測及治療生物標誌物]. Int J Clin Exp Pathol.[國際臨床與實驗病理學雜誌] 2018; 11(5): 2281-2294）。
LILRB2的功能係抑制骨髓細胞活化、抗原呈現及免疫反應。ILT4還在TME（腫瘤微環境（tumor microenvironment））中的各種腫瘤細胞及基質細胞（如骨髓來源的抑制細胞（myeloid-derived suppressor cell；MDSC）及腫瘤相關巨噬細胞（tumor-associated macrophage；TAM））中高表現，直接調節腫瘤生長、進展及轉移（Aiqin Gao等人,Tumor-derived ILT4 induces T cell senescence and suppresses tumor immunity [腫瘤來源的ILT4誘導T細胞衰老並抑制腫瘤免疫]. J Immunother Cancer.[癌症免疫療法雜誌] 2021; 9(3): e001536）。
LILRB2係腫瘤免疫療法的潛在檢查點分子。LILRB2阻斷可促進抗腫瘤免疫。
本公開提供了與LILRB2結合的抗體及其抗原結合片段的示例，以及該等抗體及其抗原結合片段在製造用於與LILRB2結合的治療劑（例如藥物）中之用途。 定義
如本文所用，本文中術語「抗體」以最廣義使用，並且涵蓋多種抗體結構，該等抗體結構包括但不限於單株抗體、多株抗體、多特異性抗體（例如，雙特異性抗體）及抗體片段，只要該等結構表現出所需的抗原結合活性即可。
如本文所用，術語「抗原結合片段」係指全長抗體的一部分，其中抗體的該部分能夠與抗原特異性結合。在一些實施方式中，抗原結合片段含有至少一個可變結構域（例如，重鏈的可變結構域或輕鏈的可變結構域）。
如本文所用，術語「人源化抗體」係指含有源自非人（例如，小鼠）免疫球蛋白的最小序列並且含有源自人免疫球蛋白的序列的非人抗體。
如本文所用，術語「受試者」係指人及非人動物。非人動物包括如小鼠、大鼠、兔、貓、狗、豬、猴、黑猩猩、大猩猩等所有哺乳動物。除非另有說明，否則術語「患者」或「受試者」在本文中可互換使用。
如本文所用，術語「多核苷酸」係指具有至少兩個核苷酸的任何長度的核苷酸聚合物，並且包括但不限於DNA、RNA、DNA/RNA雜合體及其修飾形式。
如本文所用，術語「載體」係指可以被工程化以含有可在宿主細胞中繁殖的一或多個選殖多核苷酸的多核苷酸。載體可以包括以下元件中之一或多個：複製起點、調節目標多肽表現的一或多個調節序列（例如啟動子及/或增強子）及/或一或多個選擇性標記基因（例如抗生素抗性基因及可用於比色測定的基因，例如β-半乳糖苷酶）。
如本文所用，術語「宿主細胞」係指可為或已經是載體或分離的多核苷酸的受體的細胞。宿主細胞可為原核細胞或真核細胞。示例性真核細胞包括如靈長類或非靈長類動物細胞等哺乳動物細胞。
如本文所用，術語「IL-2」係介白素2，術語「IL-2」及「IL2」在本文中可互換使用。術語「IL-3」係介白素3，術語「IL-3」及「IL3」在本文中可互換使用。術語「IL-4」係介白素4，術語「IL-4」及「IL4」在本文中可互換使用。術語「IL-5」係介白素5，「IL-5」及「IL5」在本文中可互換使用。術語「IL-6」係介白素6，術語「IL-6」及「IL6」在本文中可互換使用。術語「IL-8」係介白素8，術語「IL-8」及「IL8」在本文中可互換使用。術語「IL-10」係介白素10，術語「IL-10」及「IL10」在本文中可互換使用。術語「IL-13」係介白素13，術語「IL-13」及「IL13」在本文中可互換使用。術語「IL-15」係介白素15，術語「IL-15」及「IL15」在本文中可互換使用。術語「IL-1β」或術語「IL-1F2」係介白素1β，術語「IL-1β（IL-1beta）」、「IL-1β」、「IL-1F2」、「IL1β（IL1beta）」、「IL1β」及「IL1F2」在本文中可互換使用。術語「IL-1α」或術語「IL-1Fa」係介白素1α，術語「IL-1α（IL-1alpha）」、「IL-1Fa」、「IL-1α」、「IL1α（IL1alpha）」、「IL1Fa」及「IL1α」在本文中可互換使用。
如本文所用，術語「IFNγ」係干擾素γ。術語「IFN-α」係干擾素α1，術語「IFN-α（IFN-alpha）」、「IFN-α」、「IFN α」及「IFNα」在本文中可互換使用。術語「IFN-β」係干擾素β，術語「IFN-β（IFN-beta）」、「IFN-β」、「IFN β」、「IFNβ」在本文中可互換使用。
如本文所用，術語「TNFα」係腫瘤壞死因子，術語「TNFα」及「TNF-α」在本文中可互換使用。
如本文所用，術語「PDGF-AA」係血小板衍生生長因子次單元A α，術語「PDGF-AB」係血小板衍生生長因子次單元A β，術語「PDGF-BB」係血小板衍生生長因子次單元B β。
如本文所用，術語「TGF-α」係轉化生長因子α，術語「TGFα」及「TGF-α」在本文中可互換使用。
如本文所用，術語「CCL2」或術語「MIP-1」或術語「JE」係C-C模體趨化因子配體2，術語「CCL3」或術語「MIP-1α」係C-C模體趨化因子配體3，術語「CCL4」或術語「MIP-1β」係C-C模體趨化因子配體4，術語「CCL5」係C-C模體趨化因子配體5，術語「CCL19」或術語「MIP-3β」係C-C模體趨化因子配體19，術語「CCL20」或術語「MIP-3α」係C-C模體趨化因子配體20，術語「MIP-3」係C-C模體趨化因子配體23，術語「RANTES」係C-C模體趨化因子配體5，術語「CCL22」或術語「MDC」係C-C模體趨化因子配體22，術語「CCL23」或術語「MPIF-1」係C-C模體趨化因子配體23。
如本文所用，術語「鹼性FGF」係纖維母細胞生長因子（fibroblast growth factor）2。
如本文所用，術語「G-CSF」係群落刺激因子（colony stimulating factor）3，術語「GM-CSF」係群落刺激因子2。
如本文所用，術語「B7-H1」或術語「PD-L1」係程式化細胞死亡1配體（programmed cell death 1 ligand）1。
如本文所用，術語「CXCL2」或術語「GROβ」係C-X-C模體趨化因子配體2，術語「CXCL8」係C-X-C模體趨化因子配體8。
如本文所用，術語「VEGF」係血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor）。 抗體及其抗原結合片段
本文提供了與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段或抗LILRB2抗體或其抗原結合片段。
通常，抗體由輕鏈及重鏈兩類多肽鏈構成。抗體可以包含輕鏈的兩個相同副本及重鏈的兩個相同副本。各自含有一個可變區（或可變結構域，VH）及多個恆定區（或恆定結構域）的重鏈在其恆定結構域內經由雙硫鍵彼此結合。各自含有一個可變區（或可變結構域，VL）及一個恆定區（或恆定結構域）的輕鏈分別經由雙硫鍵結合一條重鏈。輕鏈及重鏈的可變區都包含夾在更保守的框架區（FR）之間的三個高度變異區。
該等高度變異區（稱為互補決定區（CDR））形成了包含抗體主要抗原結合表面的環。CDR對於識別抗原表位很重要。如本文所用，「表位」係能夠被抗體的抗原結合結構域特異性結合的靶分子的最小部分。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段包含： 重鏈可變區（VH），該重鏈可變區包含互補決定區（CDR）1、2及3，其中該VH CDR1包含與序列識別號: 1所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列；VH CDR2包含與序列識別號: 2所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列；VH CDR3包含與序列識別號: 3所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列；以及 輕鏈可變區（VL），該輕鏈可變區包含CDR 1、2及3，其中該VL CDR1包含與序列識別號: 4所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列；VL CDR2包含與序列識別號: 5所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列；VL CDR3包含與序列識別號: 6所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列。
使用Kabat定義來定義CDR。Kabat定義係熟悉該項技術者所熟知的，參見例如，Kabat, E.A.等人 Sequences of Proteins of Immunological Interest [具有免疫學意義的蛋白質序列], 1991。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段可以具有包含CDR 1、2及3的VH，其中CDR 1、2及3分別如序列識別號: 1、2、3所示。
此外，抗體或其抗原結合片段可以具有包含CDR 1、2及3的VL，其中CDR 1、2及3分別如序列識別號: 4、5、6所示。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段具有VH，該VH包含序列識別號: 1的CDRH1（重鏈CDR1）、序列識別號: 2的CDRH2（重鏈CDR2）、序列識別號: 3的CDRH3（重鏈CDR3）。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段具有VL，該VL包含序列識別號: 4的CDRL1（輕鏈CDR1）、序列識別號: 5的CDRL2（輕鏈CDR2）、序列識別號: 6的CDRL3（輕鏈CDR3）。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段可以具有VH，其中該VH與序列識別號: 7、8、9、10、11或12所示胺基酸序列至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%相同。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段可以具有VL，其中該VL與序列識別號: 13、14、15或16所示胺基酸序列至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%相同。
關於如何確定兩個胺基酸序列的相同（同一性）百分比的方法係本領域已知的，包括但不限於NCBI上的BLAST（基本局部比對搜索工具（basic local alignment search tool；BLAST））。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段可以具有VH，其中該VH與序列識別號: 7、8、9、10、11或12所示胺基酸序列的差異不超過25、20、15、13、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸。
此外，在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段可以具有VL，其中該VL與序列識別號: 13、14、15或16所示胺基酸序列的差異不超過20、15、13、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段包含：選自序列識別號: 7、8、9、10及11之群組的VH；及及/或選自序列識別號: 13、14及15之群組的VL。
本公開提供的VH序列（序列識別號: 7-11）中之任一個可以與本公開提供的VL序列（序列識別號: 13-15）中之任一個配對。
在一些實施方式中，本文所述之抗體或其抗原結合片段可以具有以下序列的VH：具有0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸***、缺失或取代的序列識別號: 7；具有0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸***、缺失或取代的序列識別號: 8；具有0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸***、缺失或取代的序列識別號: 9；具有0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸***、缺失或取代的序列識別號: 10；或具有0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸***、缺失或取代的序列識別號: 11。
在一些實施方式中，本文所述之抗體或其抗原結合片段可以具有以下序列的VL：具有0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸***、缺失或取代的序列識別號: 13；具有0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸***、缺失或取代的序列識別號: 14；或具有0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸***、缺失或取代的序列識別號: 15。
在一些實施方式中，本文提供了抗體或其抗原結合片段，其中VH包含序列識別號: 7的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 13的胺基酸序列， VH包含序列識別號: 8的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 13的胺基酸序列， VH包含序列識別號: 9的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 13的胺基酸序列， VH包含序列識別號: 7的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 14的胺基酸序列， VH包含序列識別號: 8的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 14的胺基酸序列， VH包含序列識別號: 9的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 14的胺基酸序列， VH包含序列識別號: 10的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 15的胺基酸序列， VH包含序列識別號: 11的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 15的胺基酸序列；或者 VH包含序列識別號: 12的胺基酸序列並且VL包含序列識別號: 16的胺基酸序列。
抗體或其抗原結合片段可為任何類型（例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY）、類別（例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2）或亞類。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段係IgG1抗體、IgG2抗體、IgG3抗體或IgG4抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段係IgG抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方式中，抗原結合片段包括例如，Fab、Fab’、F (ab’) 2、Fv片段及scFv片段。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段係人源化抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段係嵌合抗體或其抗原結合片段。
在非限制性示例中，人源化抗體係人抗體，其中高度變異區（例如CDR）殘基被來自非人抗體（例如小鼠、大鼠或兔抗體）的高度變異區（例如CDR）殘基替代。在一些實施方式中，人源化抗體係人抗體，其中框架區殘基被對應的非人（例如小鼠）框架區殘基替代。
在一些實施方式中，人源化抗體還可以含有至少一部分人免疫球蛋白恆定區（Fc）。可以使用本領域已知的分子生物學方法產生人源化抗體。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段係多株、單株或多特異性抗體或其抗原結合片段。
在一些實施方式中，本公開提供的抗體或其抗原結合片段與LILRB2特異性結合，示例性LILRB2包括人LILRB2。
在一些實施方式中，抗LILRB2抗體或其抗原結合片段可以阻斷訊息傳遞途徑並上調免疫反應。在一些實施方式中，本文所述之抗體或其抗原結合片段係LILRB2促效劑。在一些實施方式中，本文所述之抗體或其抗原結合片段係LILRB2拮抗劑。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段以藉由例如八隅體法則（Octet rule）、Biacore或FACS等本領域標準技術測量的小於20 nM、小於10 nM、小於5 nM或小於1 nM的EC 50（半最大效應濃度）值與LILRB2特異性結合。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段以藉由例如八隅體法則、Biacore或FACS等本領域標準技術測量的小於15 nM、小於10 nM、小於8 nM或小於6 nM的KD（親和力常數）結合人LILRB2。
通常，KD值或親和力常數係抗體與其抗原之間的平衡解離常數或Kd/Ka比率。Kd係指解離常數，並且Ka係指締合常數。
此外，本文提供的抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與典型MHC（主要組織相容性複合體（major histocompatibility complex；MHC））I類分子之間的相互作用。在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與HLA-A2之間的相互作用。在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與HLA-G之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段以藉由例如FACS（螢光活化細胞分選法）測定等本領域標準技術測量的小於10 nM、小於5 nM、小於1 nM、小於0.5 nM或小於0.3 nM的IC 50值阻斷人LILRB2與HLA-G之間的相互作用。
通常，IC 50值代表物質發揮其最大抑制作用一半時的濃度。該值典型地用於表徵生物過程的拮抗劑。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段以藉由例如FACS（螢光活化細胞分選法）測定等本領域標準技術測量的小於20 nM、小於10 nM、小於5 nM、小於1 nM或小於0.6 nM的IC 50值阻斷人LILRB2與HLA-A2之間的相互作用。
抗體或其抗原結合片段阻斷LILRB2（例如，人LILRB2）與ANGPTL（血管生成素樣蛋白）家族分子（例如，人ANGPTL）的之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人ANGPTL1（血管生成素樣蛋白1）之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人ANGPTL2（血管生成素樣蛋白2）之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人ANGPTL3（血管生成素樣蛋白3）之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人ANGPTL4（血管生成素樣蛋白4）之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人ANGPTL6（血管生成素樣蛋白6）之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人ANGPTL7（血管生成素樣蛋白7）之間的相互作用。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人MAG（髓磷脂相關醣蛋白）之間的相互作用。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段不能或幾乎不能或可能不與LILRA1（白血球免疫球蛋白樣受體A1）結合。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段不能或幾乎不能或可能不與LILRA2（白血球免疫球蛋白樣受體A2）結合。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段不能或幾乎不能或可能不與LILRA3（白血球免疫球蛋白樣受體A3）結合。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段不能或幾乎不能或可能不與LILRA4（白血球免疫球蛋白樣受體A4）結合。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段不能或幾乎不能或可能不與LILRA5（白血球免疫球蛋白樣受體A5）結合。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段不能或幾乎不能或可能不與LILRB1（白血球免疫球蛋白樣受體B1）結合。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段不能或幾乎不能或可能不與LILRB3（白血球免疫球蛋白樣受體B3）結合。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段不能或幾乎不能或可能不與LILRB4（白血球免疫球蛋白樣受體B4）結合。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段不能或幾乎不能或可能不與LILRB5（白血球免疫球蛋白樣受體B5）結合。
在一些實施方式中，與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段能夠上調促發炎細胞激素及/或趨化因子（非限制性地，例如IL-2、IFN-γ及/或TNF-α）的釋放或增強促發炎細胞激素及/或趨化因子的表現。
在一些實施方式中，促發炎細胞激素及/或趨化因子選自由以下構成之群組：IL-2、IFN-γ、TNF-α、顆粒酶B、PDGF-AA、IL-3、IL-1β、IL-5、TGF-α、IFN-α、CCL4、鹼性FGF、IL-13、G-CSF、IL-4、PD-L1、CCL20、IL-15、GM-CSF、CCL5、CCL3、PDGF-AB、CCL19、CXCL2、IL-6、VEGF及其組合。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段藉由降低抗炎介白素（例如IL-10）的表現來上調免疫反應。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段能夠促進人PBMC進入促發炎狀態。在一些實施方式中，人PBMC的狀態可以藉由檢測抗炎介白素（例如IL-10）/或促發炎細胞激素（例如TNF-α）的釋放來測量。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段能夠促進人單核球進入促發炎狀態。在一些實施方式中，人PBMC的狀態可以藉由檢測抗炎介白素（例如IL-10）及/或促發炎細胞激素（例如TNF-α）的釋放來測量。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段能夠將人單核球來源的M2巨噬細胞重新編程為促發炎M1表現型。在一些實施方式中，上述抗體或其抗原結合片段對巨噬細胞表現型轉換的影響藉由定量CD86 高CD163 低群體的百分比（M1%）及TNFα的釋放來確定。CD86及CD163係表現在M1及M2巨噬細胞上的已知的標記物，本公開所屬技術領域中具有通常知識者知曉，藉由檢測CD86及CD163的表達水平可以區分M1及M2巨噬細胞。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段能夠減輕M2巨噬細胞的抑制功能。在一些實施方式中，藉由檢測IL-2、IFNγ、顆粒酶B、TNFα、PDGF-AA、IL-3、IL-1β、IL-1F2、IL-5、TGF-α、IFN-α、CCL4、MIP-1β、鹼性FGF、IL-13、G-CSF、IL-4、B7-H1、PD-L1、CCL20、MIP-3α、IL-15、GM-CSF、CCL5、RANTES、CCL3、MIP-1α、PDGF-AB、PDGF-BB、CCL19、MIP-3β、CXCL2、GROβ、IL-6及/或VEGF的釋放來測量減輕M2巨噬細胞抑制功能的作用。在一些實施方式中，藉由檢測IL-2、IFNγ及TNFα的釋放來測量減輕M2巨噬細胞抑制功能的作用。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段能夠促進未成熟樹突細胞（dendritic cell；DC）進入成熟狀態。藉由定量CD86 高CD163 低群體的百分比（M1%）及促發炎細胞激素及趨化因子的釋放來確定上述抗體或其抗原結合片段對樹突細胞成熟的影響，該等促發炎細胞激素及趨化因子選自以下群組：TNFα、IL-6、IL-8、CXCL8、IFN-β、IL-10、CCL2、JE、MCP-1、VEGF、CCL20、MIP-3α、CCL3、MIP-1α、CCL22、MDC、IL-1α、lL-1F1、CCL23、MPIF-1及其組合。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段上調對LILRB2相關疾病、障礙或病症（例如腫瘤）的免疫反應。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段藉由將人單核球來源的M2巨噬細胞重新編程為M1表現型來上調免疫反應。在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段藉由將腫瘤相關巨噬細胞自M2表現型重新編程為M1表現型來上調免疫反應。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段減輕M2巨噬細胞的抑制功能。在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段藉由減輕腫瘤相關巨噬細胞M2表現型介導的T細胞抑制來上調免疫反應。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段藉由促進樹突細胞（例如，人樹突細胞）進入成熟狀態來上調免疫反應。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段藉由促進單核球（例如，人單核球）進入促發炎狀態來上調免疫反應。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段藉由促進PBMC（例如，人PBMC）進入促發炎狀態來上調免疫反應。
在一些實施方式中，抗體或其抗原結合片段阻斷LILRB2與腫瘤相關巨噬細胞的結合。在一些實施方式中，LILRB2阻斷將腫瘤相關巨噬細胞（TAM）重新編程為促發炎表現型。在一些實施方式中，LILRB2阻斷抑制例如腫瘤微環境中的調節性T細胞（regulatory T cell；Treg）浸潤。
在一方面，本公開還提供了包含與LILRB結合的抗體或其抗原結合片段以及抗PD-1抗體的藥物組成物。示例性抗PD-1抗體係可瑞達。
上述抗體或其抗原結合片段與抗PD-1抗體組合可誘導促發炎細胞激素/趨化因子的更大釋放。
上述抗體或其抗原結合片段與抗PD-1抗體組合可減輕M2巨噬細胞的抑制功能。
上述抗體或其抗原結合片段與抗PD-1抗體協同重振T細胞功能。
上述抗體或其抗原結合片段與抗PD-1抗體組合可以改善免疫反應。
在一方面，本文提供了抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與包括序列識別號: 21所示胺基酸序列的肽結合。在一些實施方式中，序列識別號: 21的肽可為LILRB2上的結合表位。在一些實施方式中，序列識別號: 21的肽可為LILRB2上的部分結合表位。
在一方面，本文提供了LILRB2上的結合表位，其中該結合表位包含序列識別號: 21所示胺基酸序列。在一些實施方式中，LILRB2係人LILRB2。
在本公開中，術語「結合表位」係指抗原（或治療標靶）表面上能夠引發免疫反應並與由這樣的反應產生的特異性抗體組合的分子區域。 多核苷酸、載體及宿主細胞
本公開提供了編碼與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段或抗LILRB2抗體或其抗原結合片段的分離的多核苷酸。
多核苷酸係DNA、RNA、DNA/RNA雜合體或其修飾形式的聚合物。在一些實施方式中，多核苷酸係DNA的聚合物。在一些實施方式中，多核苷酸係RNA的聚合物。
使用習知的程序（例如，藉由使用能夠與編碼抗體的重鏈及輕鏈的基因特異性結合的寡核苷酸探針），可以容易地對編碼與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段的DNA或RNA進行分離及定序。也可以藉由合成方法獲得編碼DNA或RNA。
使用本領域已知的重組技術，可以將編碼與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段的分離的多核苷酸***載體中，用於進一步選殖（DNA的放大）或表現。許多載體都是可用的。載體組分通常包括但不限於以下中之一或多種：訊息序列、複製起點、一或多種標記基因、增強子元件、啟動子（例如SV40、CMV、EF-1α）及轉錄終止序列。
在一方面，本文提供了分離的載體，其包含編碼與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段或抗LILRB2抗體或其抗原結合片段的多核苷酸。
本公開提供了包含本文提供的分離的多核苷酸的載體。在一些實施方式中，本文提供的載體編碼抗體或其抗原結合片段、與核酸序列可操作地連接的至少一個啟動子（例如SV40、CMV、EF-1α）及至少一個選擇標記。載體的示例包括但不限於反轉錄病毒（包括慢病毒）、腺病毒、腺相關病毒、疱疹病毒（例如，單純疱疹病毒）、痘病毒、桿狀病毒、乳突病毒、細小病毒（例如SV40）、λ噬菌體及M13噬菌體、質體pcDNA3.3、pMD18-T、pOptivec、pCMV、pEGFP、pIRES、pQD-Hyg-GSeu、pALTER、pBAD、pcDNA、pCal、pL、pET、pGEMEX、pGEX、pCI、pEGFT、pSV2、pFUSE、pVITRO、pVIVO、pMAL、pMONO、pSELECT、pUNO、pDUO、Psg5L、pBABE、pWPXL、pBI、p15TV-L、pPro18、pTD、pRS10、pLexA、pACT2.2、pCMV-SCRIPT.RTM、pCDM8、pCDNA1.1/amp、pcDNA3.1、pRc/RSV、PCR 2.1、pEF-1、pFB、pSG5、pXT1、pCDEF3、pSVSPORT、pEF-Bos等。
可將包含編碼上述抗體或其抗原結合片段的多核苷酸序列的載體引入宿主細胞，用於選殖或基因表現。用於在本文的載體中選殖或表現DNA或RNA的合適的宿主細胞係上述原核生物、酵母或高等真核生物細胞。用於此目的的合適的原核生物包括如革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物等真細菌，例如腸桿菌科（ Enterobacteriaceae），如艾氏菌屬（ Escherichia）（例如大腸桿菌）、腸桿菌屬（ Enterobacter）、伊文氏桿菌屬（ Erwinia）、克留氏菌屬（ Klebsiella）、變形桿菌屬（ Proteus）、沙氏桿菌屬（ Salmonella）（例如鼠傷寒沙氏桿菌（ Salmonella typhimurium））、沙雷氏菌屬（ Serratia）（例如黏質沙雷氏菌（ Serratia marcescens））及志賀氏菌屬（ Shigella）、以及芽孢桿菌屬（ Bacilli）（例如枯草芽孢桿菌（ B. subtilis）及地衣芽孢桿菌（ B. licheniformis））、假單胞菌屬（ Pseudomonas）（例如綠膿桿菌（ P. aeruginosa））及鏈黴菌屬（ Streptomyces）。
除了原核生物以外，如絲狀真菌或酵母等真核微生物亦為抗LILRB2抗體編碼載體的合適選殖或表現宿主。釀酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae）或普通麵包酵母係低等真核宿主微生物中最常用的。然而，許多其他屬、種及菌株常可獲得且可用於本文，如粟酒裂殖酵母（ Schizosaccharomyces pombe）；克魯維酵母屬（ Kluyveromyces）宿主，例如乳酸克魯維酵母（ K. lactis ）、脆壁克魯維酵母（ K. fragilis）（ATCC 12, 424）、保加利亞克魯維酵母（ K. bulgaricus）（ATCC 16, 045） 、威克曼氏克魯維酵母（ K. wickeramii）（ATCC 24, 178）、瓦爾特克魯維酵母（ K. waltii）（ATCC 56, 500） 、果蠅克魯維酵母（ K. drosophilarum）（ATCC 36, 906）、耐熱克魯維酵母（ K. thermotolerans）及馬克斯克魯維酵母（ K. marxianus）；耶氏酵母屬（ yarrowia）（EP 402, 226）；巴斯德畢赤酵母（ Pichia pastoris）（EP 183, 070）；念珠菌屬（ Candida）；裡氏木黴（ Trichoderma reesia）（EP 244, 234）；粗厚神經胞子菌（ Neurospora crassa）；如西方許旺酵母（ Schwanniomyces occidentalis）等許旺酵母屬（ Schwanniomyces）；以及絲狀真菌，如神經胞子菌屬（ Neurospora）、青黴菌屬（ Penicillium）、彎頸黴屬（ Tolypocladium）及麴黴屬（ Aspergillus）宿主，如小巢狀麴菌（ A. nidulans）及黑麴菌（ A. niger）。
在一方面，本文提供了包含上述分離的多核苷酸或上述分離的載體的宿主細胞。
本文提供的用於表現抗體（例如醣基化抗體）或其抗原片段的合適的宿主細胞來源於多細胞生物。然而，最感興趣的是脊椎動物細胞，在培養物（組織培養物）中繁殖脊椎動物細胞己經成為常規方法。有用的哺乳動物宿主細胞系的示例係由SV40轉化的猴腎CV1系（COS-7，ATCC CRL 1651）；人胚腎系（293 or 293 cells subcloned for growth in suspension culture [293或293細胞次選殖用於懸浮培養中生長], Graham等人, J. Gen Virol.[普通病毒學雜誌] 36: 59 (1977)）；幼倉鼠腎細胞（BHK、ATCC CCL 10）；中國倉鼠卵巢細胞/-DHFR（CHO, Urlaub等人, Proc. Natl. Acad. Sci.USA [美國國家科學院院刊] 77: 4216 (1980)）；小鼠賽托利（sertoli）細胞（TM4, Mather, Biol. Reprod.[生殖生物學]23: 243-251 (1980)）；猴腎細胞（CV1 ATCC CCL 70）；非洲綠猴腎細胞（VERO-76，ATCC CRL-1587）；人宮頸癌細胞（HELA，ATCC CCL 2）；犬腎細胞（MDCK，ATCC CCL 34）；水牛鼠肝細胞（BRL 3A，ATCC CRL 1442）；人肺細胞（W138，ATCC CCL 75）；人肝細胞（Hep G2，HB 8065）；小鼠***腫瘤（MMT 060562，ATCC CCL51）；TRI細胞（Mather等人, Annals N.Y.Acad. Sci.[紐約科學院年刊] 383: 44-68 (1982)）；MRC 5細胞；FS4細胞；以及人肝癌系（Hep G2）。在一些實施方式中，宿主細胞係哺乳動物培養的細胞系，如CHO、BHK、NS0、293及其衍生物。
使用用於產生與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段或抗LILRB2抗體或其抗原結合片段的上述表現或選殖載體轉化宿主細胞，並在習之營養培養基中培養，該培養基被修飾為適合誘導啟動子、選擇轉化體或放大編碼所需序列的基因。在另一個實施方式中，抗體可以藉由本領域已知的同源重組產生。在某些實施方式中，宿主細胞能夠產生本文提供的抗體或其抗原結合片段。
在一方面，本公開還提供了表現本文提供的抗體或其抗原結合片段之方法，該方法包括在表現本公開的載體的條件下培養本文提供的宿主細胞。用於產生本文提供的抗體或其抗原結合片段的宿主細胞可以在多種培養基中培養。如漢姆斯F10（Ham’s F10）（西格瑪公司（Sigma））、基本必需培養基（minimal essential medium；MEM）（西格瑪公司）、RPMI-1640（西格瑪公司）及杜爾貝科改良伊格爾培養基（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium；DMEM）（西格瑪公司）等可商購的培養基適用於培養宿主細胞。另外，Ham等人, Meth. Enz.[酶學方法]58: 44 (1979)；Barnes等人, Anal. Biochem.[生物化學年鑒] 102: 255 (1980)；美國專利案號4,767,704、4,657,866、4,927,762、4,560,655、或5,122,469；WO 90/03430；WO 87/00195；或美國專利Re.30, 985中描述的培養基中之任一種可用作宿主細胞的培養基。該等培養基中之任一種都可按需補充激素及/或其他生長因子（如胰島素、運鐵蛋白或表皮生長因子）、鹽（如氯化鈉、鈣鹽、鎂鹽及磷酸鹽）、緩衝液（如HEPES）、核苷酸（如腺苷及胸苷）、抗生素（如GENTAMYCIN TM藥物）、痕量元素（定義為通常以微莫耳級的最終濃度存在的無機化合物）及葡萄糖或等效的能量來源。還可以包括適當濃度的熟悉該項技術的通常知識者已知的任何其他必需補充物。培養條件（如溫度、pH等）係所選用於表現的宿主細胞先前所使用的條件，並且該等培養條件對於熟悉該項技術的通常知識者而言係顯而易見的。 藥物組成物
在一方面，本公開進一步提供了藥物組成物，該等藥物組成物包含上述抗體或其抗原結合片段、以及一或多種藥學上可接受的載劑。在一些實施方式中，本公開提供了藥物組成物，該等藥物組成物含有上述抗體或其抗原結合片段以及抗PD-1抗體（例如，可瑞達（Keytruda））。
在一些實施方式中，本公開進一步提供了藥物組成物，該等藥物組成物包含編碼與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段的分離的多核苷酸、以及一或多種藥學上可接受的載劑。
在一些實施方式中，本公開進一步提供了藥物組成物，該等藥物組成物包含含有編碼與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段或抗LILRB2抗體或其抗原結合片段的多核苷酸的分離的載體、以及一或多種藥學上可接受的載劑。
在一些實施方式中，本公開進一步提供了包含宿主細胞的藥物組成物，該宿主細胞含有編碼與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段（抗LILRB2抗體或其抗原結合片段）的多核苷酸、或包含上述多核苷酸的載體。
本文提供的藥物組成物能以本領域已知的任何方式配製，如本文提供的藥物組成物可以配製為以劑量單位形式（即，含有預定量活性化合物的物理離散單位，以便於投予及實現劑量均勻性）進行腸胃外（例如靜脈內、動脈內、肌內、皮內、皮下或腹膜內）投予。
將藥物組成物配製成與其預期投予途徑（例如靜脈內、動脈內、肌內、皮內、皮下或腹膜內）相容。
用於在本文公開的藥物組成物中使用的藥學上可接受的載劑可以包括例如藥學上可接受的液體、凝膠或固體載劑、水性運載體、非水性運載體、抗微生物劑、等滲劑、緩衝劑、抗氧化劑、麻醉劑、懸浮劑/分散劑、多價螯合劑（sequestering agent）或螯合劑、稀釋劑、佐劑、賦形劑或無毒輔助物質、本領域已知的其他組分或其各種組合。
合適的組分可包括例如抗氧化劑、填充劑、黏合劑、崩散劑、緩衝劑、防腐劑、潤滑劑、調味劑、增稠劑、著色劑、乳化劑或穩定劑（如糖及環糊精）。合適的抗氧化劑可以包括例如甲硫胺酸、抗壞血酸、EDTA（ehtylenediaminetetraacetic acid；EDTA）、硫代硫酸鈉、鉑、過氧化氫酶、檸檬酸、半胱胺酸、硫代甘油、巰基乙酸、硫代山梨糖醇、丁基羥基甲氧苯、丁基羥基甲苯及/或沒食子酸丙酯。如本文所公開，在包含本文提供的抗體或其抗原結合片段及綴合物的組成物中包含一或多種抗氧化劑（如甲硫胺酸）減少抗體或其抗原結合片段的氧化。這種氧化的減少可防止或減少結合親和力的損失，從而提高抗體穩定性並最大限度地延長貯藏期限。因此，在某些實施方式中，提供了包含如本文公開的一或多種抗體或其抗原結合片段及一或多種抗氧化劑（如甲硫胺酸）的藥物組成物。
為了進一步說明，藥學上可接受的載劑可包括例如水性運載體（如氯化鈉注射液、林格氏注射液、等滲右旋糖注射液、無菌水注射液或右旋糖及乳酸林格氏注射液）、非水性運載體（如植物來源的不揮發油、棉籽油、玉米油、芝麻油或花生油）、抑制細菌或抑制真菌濃度的抗微生物劑、等滲劑（如氯化鈉或右旋糖）、緩衝劑（如磷酸鹽或檸檬酸鹽緩衝劑）、抗氧化劑（如硫酸氫鈉）、局部麻醉劑（如鹽酸普魯卡因（procaine））、懸浮劑及分散劑（如羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮）、乳化劑（如聚山梨醇酯80（Tween-80））、多價螯合劑或螯合劑（如EDTA（乙二胺四乙酸）或EGTA（乙二醇四乙酸（ethylene glycol tetra acetic acid；EGTA）））、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、氫氧化鈉、鹽酸、檸檬酸或乳酸。用作載劑的抗微生物劑可以添加至多劑量容器中的藥物組成物中，多劑量容器中包含酚或甲酚、苯甲醇、氯丁醇、對羥基苯甲酸甲酯及丙酯、硫柳汞、苯基氯卡銨及苯扎氯銨。合適的賦形劑可以包括例如水、鹽水、右旋糖、甘油或乙醇。合適的無毒輔助物質可以包括例如潤濕劑或乳化劑、pH緩衝劑、穩定劑、溶解度增強劑或藥劑（如乙酸鈉、山梨糖醇酐單月桂酸酯、油酸三乙醇胺或環糊精）。
在一些實施方式中，藥物組成物可為液體溶液、懸浮液或乳液。
在一些實施方式中，藥物組成物被配製成可注射組成物。可注射藥物組成物能以任何習知形式製備，例如液體溶液、懸浮液、乳液或適合於產生液體溶液、懸浮液或乳液的固體形式。注射用製劑可以包括即用於注射的無菌及/或無熱原溶液，準備好在臨用前與溶劑組合的無菌乾燥可溶性產品（如凍乾粉末）（包括皮下注射用片劑），即用於注射的無菌懸浮液，準備好在臨用前與運載體組合的無菌乾燥不溶性產品，以及無菌及/或無熱原乳液。溶液可為水性的或非水性的。
在一些實施方式中，單位劑量的腸胃外製劑包裝在安瓿、小瓶或帶有針頭的注射器中。如本領域已知及實踐的，用於腸胃外投予的所有製劑都應該是無菌的，並且是無熱原的。
在一些實施方式中，藉由將本文公開的抗體或抗原結合片段溶解在合適的溶劑中來製備無菌凍乾粉末。溶劑可含有改善粉末或由粉末製備的重構溶液的穩定性或其他藥理學組分的賦形劑。可以使用的賦形劑包括但不限於水、右旋糖、山梨糖醇、果糖、玉米糖漿、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其他合適的藥劑。溶劑可以含有在一個實施方式中約中性pH的緩衝劑（如檸檬酸鹽、磷酸鈉或磷酸鉀）、或熟悉該項技術的通常知識者已知的其他這樣的緩衝劑。隨後對溶液進行無菌過濾，然後在熟悉該項技術者已知的標準條件下凍乾，得到了所需的配製物。在一個實施方式中，所得溶液將被分配到小瓶中用於凍乾。每個小瓶可以含有單劑量或多劑量的與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段，或其組成物。以高於一劑或一組劑量所需的少量（例如，約5%、10%或15%）過量灌裝小瓶係可以接受的，以促進準確的樣本抽取及準確的給藥。凍乾粉末可以在適當的條件下儲存，如在約4°C至室溫下。
用注射用水重構凍乾粉末提供了用於腸胃外投予的配製物。在一個實施方式中，將無菌及/或無熱原水或其他液體合適的載劑添加到凍乾粉末中進行重構。精確的量取決於給定的選擇療法並且可以憑經驗確定。 套組
在一方面，本公開提供了套組，其包含上述抗體或其抗原結合片段、上述分離的多核苷酸、上述分離的載體及/或本文提供的藥物組成物。
在一些實施方式中，本公開提供了套組，其包含本文提供的抗體或其抗原結合片段及第二治療劑。在一些實施方式中，第二治療劑選自由以下構成之群組：化學治療劑、抗癌藥、放射療法、免疫治療劑、抗血管生成劑、標靶療法、細胞療法、基因療法、激素療法、抗病毒劑、抗生素、止痛劑、抗氧化劑、金屬螯合劑及細胞激素。
如果需要，這樣的套組可以進一步包括多種習知藥物套組組件中之一或多種，例如具有一或多種藥學上可接受的載劑的容器、另外的容器等，對熟悉該項技術者而言係顯而易見。作為指示要投予的組分的量的插頁或標籤的說明書、投予指南及/或混合組分的指南也可以包括在套組中。
在一些實施方式中，本公開提供了套組，其包含本文提供的抗體或其抗原結合片段及/或本文提供的藥物組成物（視需要地與可檢測部分綴合），該可檢測部分可用於檢測LILRB2相關疾病、障礙或病症。套組可進一步包含使用說明書。 在製造治療劑中之用途
本公開提供了上述抗體或其抗原結合片段、分離的多核苷酸、分離的載體、宿主細胞、藥物組成物、或套組在製造用於與人LILRB2結合的治療劑中之用途。
在一些實施方式中，本文提供了抗體或其抗原結合片段在製造用於阻斷人LILRB2與HLA-A2、HLA-G、ANGPTL1、ANGPTL2、ANGPTL3、ANGPTL4、ANGPTL6、ANGPTL7及/或MAG之間的相互作用的藥物中之用途。
在一些實施方式中，治療劑包括但不限於藥物、抗體、融合蛋白、疫苗、CAR-T及抗體-藥物綴合物。在一些實施方式中，治療劑係生物活性物質，其可以治療或緩解LILRB2相關疾病、障礙或病症。
在一些實施方式中，本文提供了抗體或其抗原結合片段、分離的多核苷酸、分離的載體、宿主細胞、藥物組成物、或套組在製造用於上調或增強對疾病、障礙或病症（例如腫瘤）的免疫反應的治療劑中之用途。
在一些實施方式中，本文提供了抗體或其抗原結合片段、分離的多核苷酸、分離的載體、宿主細胞、藥物組成物、或套組在製造用於上調或增強對LILRB2相關疾病、障礙或病症（例如腫瘤）的免疫反應的治療劑中之用途。
在一些實施方式中，本文提供了上述抗體或其抗原結合片段、分離的多核苷酸、分離的載體、宿主細胞、藥物組成物、或套組在製造用於增強對腫瘤的免疫反應的治療劑中之用途。
在一些實施方式中，本文提供了上述抗體或其抗原結合片段在製造用於藉由將人單核球來源的M2巨噬細胞重新編程為M1表現型來增強免疫反應的治療劑中之用途。
在一些實施方式中，本文提供了上述抗體或其抗原結合片段在製造用於減輕M2巨噬細胞的抑制功能的治療劑中之用途。
在一些實施方式中，本文提供了上述抗體或其抗原結合片段在製造用於藉由將腫瘤相關巨噬細胞自M2表現型重新編程為M1表現型巨噬細胞來增強免疫反應，減輕腫瘤相關巨噬細胞M2表現型介導的T細胞抑制的治療劑中之用途。
在一些實施方式中，本文提供了上述抗體或其抗原結合片段在製造用於促進PBMC進入促發炎狀態的治療劑中之用途。此外，在一些實施方式中，本文提供了上述抗體或其抗原結合片段在製造用於促進人PBMC進入促發炎狀態的治療劑中之用途。
在一些實施方式中，本文提供了上述抗體或其抗原結合片段在製造用於促進樹突細胞（例如，人樹突細胞）進入成熟狀態的治療劑中之用途。
在一些實施方式中，本文提供了上述抗體或其抗原結合片段在製造用於促進單核球（例如，人單核球）進入促發炎狀態的治療劑中之用途。
在一些實施方式中，本文提供了上述抗體或其抗原結合片段在製造用於促進PBMC（例如，人PBMC）進入促發炎狀態的治療劑中之用途。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段藉由上調促發炎細胞激素（包括但不限於IL-2、IFN-γ、TNF-α、顆粒酶B、PDGF-AA、IL-3、IL-1β、IL-5、TGF-α、IFN-α、CCL4、鹼性FGF、IL-13、G-CSF、IL-4、PD-L1、CCL20、IL-15、GM-CSF、CCL5、CCL3、PDGF-AB、CCL19、CXCL2、IL-6及VEGF）的表現來增強免疫反應。
在一些實施方式中，本文提供的抗體或其抗原結合片段藉由下調抗炎介白素（如IL-10）的表現來增強免疫反應。
本公開提供了上述抗體或其抗原結合片段、上述分離的多核苷酸、上述分離的載體、或上述藥物組成物、或上述套組在製造用於診斷、預防或治療疾病、障礙或病症的治療劑中之用途。
在一些實施方式中，疾病、障礙或病症係LILRB2相關疾病。
在一些實施方式中，疾病包含腫瘤，非限制性地，該腫瘤可為血液腫瘤或實質固態瘤。在一些實施方式中，腫瘤可為惡性的或良性的。在一些實施方式中，疾病係癌症（例如，淋巴瘤）。 治療方法
本公開提供了診斷或預防或治療受試者的LILRB2相關疾病、障礙或病症之方法，該方法包括向該受試者投予治療有效量的本文提供的抗體或其抗原結合片段、本文提供的分離的多核苷酸、本文提供的分離的載體、本文提供的宿主細胞、本文提供的藥物組成物及/或本文提供的套組。
在一些實施方式中，LILRB2相關疾病、障礙或病症的特徵在於LILRB2的表現或過表現。
在一些實施方式中，LILRB2相關疾病、障礙或病症包含癌症。在一些實施方式中，癌症係表現LILRB2的癌症。術語「表現LILRB2的癌症」係指特徵在於在癌細胞、腫瘤浸潤性免疫細胞或免疫抑制細胞中表現LILRB2蛋白，或在癌細胞、腫瘤浸潤性免疫細胞或免疫抑制細胞中以顯著高於正常細胞的預期水平表現LILRB2的癌症。
在一些實施方式中，受試者已被鑒定為具有表現LILRB2的癌細胞或腫瘤浸潤性免疫細胞或免疫抑制細胞，視需要地，表現水平顯著高於通常在非癌細胞或非免疫抑制細胞上發現的水平。
本公開進一步提供了增強有需要的受試者的免疫反應之方法，該方法包括向該受試者投予治療有效量的與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段、或本文提供的分離的多核苷酸、或本文提供的分離的載體、或本文提供的宿主細胞、或本文提供的藥物組成物、或本文提供的套組。
在一些實施方式中，與LILRB2結合的抗體或其抗原結合片段、或本文提供的分離的多核苷酸、或本文提供的分離的載體、或本文提供的宿主細胞、或本文提供的藥物組成物、或本文提供的套組上調促發炎細胞激素的表現及/或下調抗炎介白素的表現。
非限制性地，在一些實施方式中，IL-2、IFN-γ及/或TNF-α的表現水平增強。在一些實施方式中，IL-10的表現水平降低。
在一些實施方式中，受試者可受益於LILRB2活性的調節。
在一些實施方式中，受試者係哺乳動物。在一些實施方式中，受試者包含人。在一些實施方式中，受試者係人（或人患者）並且可為成年人或少年（例如，年齡18歲以下的人）。在一些實施方式中，受試者係非人動物，包括但不限於非人靈長類（例如，猴、黑猩猩、大猩猩等）、齧齒類（例如，大鼠、小鼠、兔）、生豬（例如，豬）、馬科動物、犬科動物、貓科動物、牛科動物及其他家養、農場及動物園動物。
本文提供的抗體或抗原結合片段的治療有效量將取決於本領域已知的各種因素，例如體重、年齡、既往病史、目前的藥物治療、受試者的健康狀況及交叉反應的可能性、過敏、敏感性及不良副作用、以及投予途徑及疾病發展的程度。根據該等及其他情況或要求的指示，熟悉該項技術者（例如，醫生或獸醫）可以按比例減少或增加劑量。
在某些實施方式中，本文提供的抗體或抗原結合片段能以約0.01 mg/kg至約100 mg/kg的治療有效劑量投予。在某些實施方式中，投予劑量可以在治療過程中改變。例如，在某些實施方式中，初始投予劑量可能高於後續投予劑量。在某些實施方式中，根據受試者的反應，投予劑量可以在治療過程中變化。
可以調整劑量方案以提供最佳的期望反應（例如，治療性反應）。例如，可以投予單一劑量，或者可以隨時間投予幾個分開的劑量。
本文提供的抗體或其抗原結合片段可以藉由本領域已知的任何途徑投予，例如腸胃外（例如，皮下、腹膜內、靜脈內，包括靜脈內輸注、肌內或皮內注射）或非腸胃外（例如，口服、鼻內、眼內、舌下、直腸或局部）途徑。 實施例 實施例1.    試劑的產生 1.1       參考抗體
參考抗體1E1及J-19分別根據專利US 2018/0298096 A1（序列識別號: 69及77）及WO 2019/126514 A2（序列識別號: 13及14）產生。1E1及J-19的可變區序列顯示在表1中。它們都是在恆定區具有S228P突變的人IgG4單株抗體。 [表1]. 1E1及J-19的可變區序列
抗體 VH VL
1E1 QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEINHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARLPTRWVTTRYFDLWGRGTLVTVSS（1E1VH，序列識別號: 17） QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSVSKSGASASLAITGLQAEDEADYYCQSFDNSLSAYVFGGGTQLTVL（1E1VL，序列識別號: 18）
J-19 QVTLKESGPGILQPSHTLSLTCSFSGFSLNTYAMGVSWIRQPSGKGLEWLASIWWNGNKYNNPSLKSRLTVSKDTSNNQAFLKVTSVDTADTATYYCAHSRIIRFTDYVMDAWGQGASVTVSS（J-19VH，序列識別號: 19） DIQMTQSPASLSTFLGEPVTIECRASEDIYNDLAWYQQKPGKSPQLLIYNANSLHTGVPSRFSGSGSGTQYSLKINSLQSEDVASYFCQQYYDYPLTFGSGTKLEIK（J-19VL，序列識別號: 20）
1.2       穩定的細胞系
產生了穩定表現人LILRB2（序列識別號: 23）的細胞系293-F/LILRB2及EL4/LILRB2，用於融合瘤篩選及體外測定。用GFP標記的人LILRB2表現質體（義翹神州生物技術有限公司（Sino Biological））轉染HEK293-F細胞，並在含200 μg/mL潮黴素的培養基中選擇性培養2週，產生293-F/LILRB2。然後藉由有限稀釋分離單細胞殖株，並藉由FACS篩選，以獲得穩定表現人LILRB2的單株細胞系。用未標記的人LILRB2表現質體（Genery公司）轉染EL4細胞，並在含500 μg/mL潮黴素的培養基中選擇性培養，產生EL4/LILRB2穩定池。 1.3       重組蛋白
具有人Fc標籤（AAH36827.1，Gly24-His458）或6xHis-標籤（Q8N423.4，Gln22-His458）的人LILRB2細胞外結構域（extracellualar domain；ECD）重組蛋白購自R&D系統公司（R&D systems），用於免疫及融合瘤篩選。
還購買了一系列LILRA/LILRB家族成員的重組蛋白及LILRB2的潛在配體用於體外測定。具有6xHis-標籤的人LILRA1（NP_006854.1，Met1-Asn461）、LILRA3（AAH28208.1，Met1-Glu439）、LILRA4（P59901.2，Met1-Asn446）、LILRA5（NP_067073.1，Met1-Arg268）、LILRB1（ADJ55949.1，Met1-His458）、LILRB2（AAH36827.1，Met1-Val461）、LILRB3（AAI04994.1，Met1-Glu443）、LILRB4（AAI04994.1，Met1-Glu443）、LILRB5（NP_006831.1，Met1-Gly458）、及MAG（P20916-1，Met1-Pro516）ECD重組蛋白購自義翹神州生物技術有限公司。人LILRA2 ECD（NP_001124389，Gly24-Asn449）、ANGPTL2（Q9UKU9-1，Thr260-His493）、ANGPTL4（Q9BY76，Gly26-Ser406，Lys163Ala，Arg164Ala）、具有His-標籤的ANGPTL7（O43827，Met1-Pro346）及具有Flag標籤的ANGPTL1（O95841，Gly24-Asp491）的重組蛋白購自R&D系統公司。HLA-A2複合物（MHC-HM431）及HLA-G複合物四聚體（HLG-HM41CT）的重組蛋白購自愷佧公司（Kactus）。 實施例2.    融合瘤開發及篩選 2.1       免疫及融合
使用快速免疫策略用Fc標記的人LILRB2 ECD重組蛋白免疫來自不同品系（CD-1、NZB/w、C57BL/6、SJL）的四隻小鼠。以6xHis標記的人LILRB2 ECD重組蛋白為抗原，藉由ELISA分析檢測免疫小鼠的血清滴定量。當血清滴定量達到高水平時，進行最後的加強。最後的加強後三天，收穫合併的脾細胞及淋巴結細胞，並與SP2/0小鼠骨髓瘤細胞融合。然後將融合的細胞接種到384孔盤中進行篩選。 2.2       初篩及複篩
融合後10-12天，使用6xHis標記的人LILRB2 ECD重組蛋白作為抗原，藉由ELISA分析初篩從每孔融合瘤細胞中收穫的上清液。擴增陽性孔中的融合瘤細胞，並使用與初篩相同的測定進行複篩確認。然後對分泌具有最高人LILRB2結合活性的抗體的融合瘤細胞進行次選殖。 2.3       融合瘤亞選殖及篩選
將選擇的融合瘤細胞以1個細胞/孔的密度有限稀釋到96孔盤中，以獲得單株融合瘤細胞。藉由與實施例2.2相同的ELISA分析及使用293-F/LILRB2的FACS測定篩選從該等單株細胞收穫的上清液。藉由生物層干涉法對陽性殖株分泌的抗體進行定量，然後測定人LILRB2結合親和力及阻斷LILRB2與其配體之間相互作用的活性（參考實施例3.2.4中描述的方法）。如表2所示，殖株8G2F10分泌的單株抗體顯示出奈米莫耳人LILRB2結合親和力及良好的阻斷活性。 [表2]. 8G2F10表徵總結
殖株代碼 ka （1/Ms） kd （1/s） KD （nM） 一或多個配體/LILRB2相互作用阻斷（%）
HLA-G HLA-A2 ANGPTL1 ANGPTL2
8G2F10 1.04E+06 1.39E-03 1.35 100 99 100 100
對殖株8G2F10分泌的單株抗體的重鏈可變區（VH）及輕鏈可變區（VL）進行定序。它們的序列顯示為序列識別號: 12（VH）及序列識別號: 16（VL）。 實施例3.    嵌合抗體產生及表徵 3.1       嵌合抗體產生
根據殖株8G2F10分泌的單株抗體的定序結果（VH，序列識別號: 12；VL，序列識別號: 16），產生了在Fc區具有S228P突變的人IgG4嵌合抗體，並命名為043c，其中尾綴「c」代表嵌合。 3.2       嵌合抗體表徵 3.2.1    結合活性
使用6xHis標記的人LILRB2 ECD重組蛋白作為抗原，藉由ELISA分析檢測043c及兩種基準抗體（1E1及J-19）的人LILRB2結合活性。簡單而言，將0.5 µg/mL抗LILRB2抗體在人LILRB2 ECD重組蛋白包被的ELISA板中在37℃下培育1小時。洗滌後，添加辣根過氧化酶（horseradish peroxidase；HRP）標記的檢測抗體，在37℃下培育1小時。藉由添加100 μl/孔的TMB（3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺（3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine；TMB））溶液進行顯色。在室溫（RT）下培育10-15分鐘後，藉由添加100 μl 1N HCl停止反應。然後立即使用盤式分析儀讀取在450 nm處的光密度。如圖1所示，043c、1E1及J-19與人LILRB2 ECD重組蛋白強結合。
使用EL4/LILRB2及人初代單核球藉由FACS測定檢測043c與細胞膜人LILRB2的結合。043c與EL4/LILRB2細胞（圖2）及分離自健康人供體（供體#1045及#6004，圖3）的初代單核球強結合。表3總結了使用GraphPad Prism 9.0的四參數非線性擬合分析的EC 50及最高MFI值。 [表3]. 043c及1E1與膜LILRB2的結合
Ab代碼 EL4/LILRB2 供體#1045 供體#6004
EC 50（nM） 最高MFI EC 50（nM） 最高MFI EC 50（nM） 最高MFI
043c 0.73 21111 0.32 4240 0.29 5240
1E1 不適用 0.84 4690 0.91 5558
3.2.2    親和力檢測
使用生物層干涉法（Octet）確定043c、1E1及J-19與人LILRB2 ECD重組蛋白的結合親和力。締合及解離曲線用1 : 1結合模型擬合，計算每種抗體的Ka/Kd/KD值並總結在表4中。043c（KD = 0.74 nM）在測試中表現出比1E1（KD = 8.07 nM）及J-19（KD = 2.14 nM）更高的抗原結合親和力。 [表4]. 043c、1E1及J-19的人LILRB2結合親和力
Ab代碼 ka（1/Ms） kd（1/s） KD（nM）
043c 7.56E+05 5.57E-04 0.74
1E1 2.53E+05 2.04E-03 8.07
J-19 8.30E+05 1.78E-03 2.14
3.2.3    結合特異性
使用LILRA1（圖4A）、LILRA2（圖4B）、LILRA3（圖4C）、LILRA4（圖4D）、LILRA5（圖4E）、LILRB1（圖4F）、LILRB3（圖4G）、LILRB4（圖4H）、LILRB5（圖4I）ECD重組蛋白作為抗原，藉由ELISA分析檢測043c、1E1及J-19與LILRA/LILRB家族成員的結合（參考實施例3.2.1中描述的方法）。043c、1E1及J-19不與除LILRB2外的其他LILRA/LILRB家族成員結合，顯示了良好的結合特異性。 3.2.4    阻斷活性
藉由競爭性FACS評估043c、1E1及J-19阻斷LILRB2與其配體之間相互作用的活性。簡單而言，將EL4/LILRB2細胞與10 µg/mL 043c、1E1、J-19或IgG4同種型一起預培育30分鐘。然後添加HLA-A2複合物、HLA-G複合物四聚體、ANGPTL1、ANGPTL2、ANGPTL4、ANGPTL7或MAG ECD的重組蛋白再培育30分鐘。藉由對配體與EL4/LILRB2細胞結合的阻斷進行定量來確定阻斷活性。如圖5所示，043c、1E1及J-19幾乎可以完全阻斷LILRB2與HLA-A2、HLA-G、ANGPTL2或ANGPTL7之間的相互作用；可以部分阻斷LILRB2與ANGPTL1或ANGPTL4之間的相互作用。043c及1E1也表現出強烈的LILRB2/MAG相互作用阻斷活性，而J-19不能很好地阻斷這種相互作用。
此外，進行滴定測試以進一步評估043c、1E1及J-19阻斷LILRB2與MHC I類配體之間的相互作用的活性（圖6及圖7）。表5總結了使用GraphPad Prism 9.0的四參數非線性擬合分析的IC 50值及最高阻斷率。 [表5]. 043c、1E1及J-19的阻斷活性
Ab代碼 LILRB2/HLA-G相互作用阻斷 LILRB2/HLA-A2相互作用阻斷
IC 50（nM） 最高阻斷（%） IC 50（nM） 最高阻斷（%）
043c 0.10 100 0.48 100
1E1 0.32 100 不適用
J-19 0.04 100
3.2.5    人PBMC活化測定
研究了043c、1E1及J-19對PBMC活化的影響。簡單而言，將從健康人供體（供體#LP200714、LP200717、LP200818、LP200824）收集的周邊血單核球（PBMC）與6.67 µg/ml抗LILRB2抗體或hIgG4同種型對照在37℃下一起預培育過夜，然後藉由LPS（2 ng/ml）引發24小時。然後藉由HTRF套組（Cisbio公司）對收穫的上清液中釋放的TNFα（圖8A）及IL-10（圖8B）進行定量。043c、1E1及J-19上調促發炎細胞激素TNFα的釋放，而下調抗炎細胞激素IL-10的釋放，表明用043c阻斷LILRB2促進LPS引發的人PBMC進入促發炎狀態。 3.2.6    人單核球活化測定
還研究了043c、1E1及J-19對單核球活化的影響。簡單而言，將從健康供體（供體#LP200714、LP200717、LP200818、LP200824）的PBMC中分離的人單核球與6.67 µg/ml抗LILRB2抗體或hIgG4同種型對照在37℃下一起預培育過夜，然後藉由LPS（2 ng/ml）引發24小時。然後藉由HTRF套組（Cisbio公司）對收穫的上清液中釋放的TNFα（圖9A）及IL-10（圖9B）進行定量。與PBMC活化測定的結果相似，043c、1E1及J-19上調促發炎細胞激素TNFα的釋放，而下調抗炎細胞激素IL-10的釋放，表明用043c阻斷LILRB2促進LPS引發的人單核球進入促發炎狀態。 3.2.7    巨噬細胞極化測定
用巨噬細胞極化測定研究了043c、1E1及J-19對巨噬細胞分化的影響。簡而言之，在存在抗LILRB2抗體或hIgG4同種型對照的情況下，用M-CSF（群落刺激因子1）處理從健康供體的PBMC中分離的人單核球5天，然後再用IL-4及IL13極化2天，這通常用於抗炎M2巨噬細胞極化。在研究結束時，藉由定量CD86 高CD163 低群體的百分比（M1%）及TNFα的釋放來確定測試抗體對巨噬細胞表現型轉換的影響。使用GM-CSF及IFNγ作為系統對照（M1對照），將人單核球也直接極化成促發炎M1巨噬細胞。與M1對照相似，043c、1E1及J-19顯著上調M1巨噬細胞群體（圖10A）及促發炎細胞激素TNFα的釋放（圖10B），這表明用043c阻斷LILRB2將人單核球來源的M2巨噬細胞重新編程為促發炎M1表現型。 3.2.8    M2-T共培養測定
用M2巨噬細胞-T細胞（M2-T）共培養測定研究了043c、1E1及J-19減輕M2巨噬細胞介導的T細胞抑制的作用。簡單而言，在5 μg/ml抗LILRB2抗體或hIgG4同種型對照的存在下，將從健康供體的PBMC中分離的人單核球用M-CSF處理5天，然後再經2天用IL-4及IL13極化抗炎M2表現型。在10 ng/ml OKT3（免疫球蛋白IgG2a同種型的鼠單株抗體）存在下，將用或不用抗LILRB2抗體分化的單核球來源的巨噬細胞與自體T細胞以1: 0.5、1 : 1、1 : 2、1 : 4及1 : 8的不同比例混合。藉由HTRF套組（Cisbio公司）對共培養48小時後收穫的上清液中釋放的IL-2、共培養120小時後收穫的上清液中的IFNγ及TNFα進行定量。
在所有M2-T混合比例下，043c、1E1及J-19顯著上調IL-2（圖11A）、IFNγ（圖11B）及TNFα（圖11C）的釋放。也藉由Luminex測定等比例共培養（M2-T混合比例 = 1 : 1）120小時後收穫的上清液的細胞激素/趨化因子釋放曲線。如表6所示，在043c的處理下，發現更多的促發炎細胞激素及趨化因子（如顆粒酶B、IL-3、IL-5及CCL4）被上調。該等結果表明，用043c阻斷LILRB2減輕M2巨噬細胞的抑制功能。 [表6]. M2-T共培養測定中的細胞激素/趨化因子釋放
細胞激素 培養基 （pg/ml） 相對細胞激素/趨化因子水平
培養基 hIgG4 iso 1E1 J-19 043c
IL-2 72.4 1.0 1.6 8.2 5.2 17.8
IFN-γ 115.1 1.0 0.5 4.6 4.5 4.1
顆粒酶B 183.3 1.0 0.7 4.6 5.0 7.6
TNF-α 542.7 1.0 1.1 4.3 4.1 4.8
PDGF-AA 66.6 1.0 1.2 3.3 3.1 4.3
IL-3 279.6 1.0 1.4 3.0 3.0 3.6
IL-1β/IL-1F2 6.6 1.0 0.9 2.6 2.2 1.9
IL-5 14.4 1.0 1.1 2.5 3.3 2.3
TGF-α 47.8 1.0 1.0 2.1 2.1 3.2
IFN-α 4.1 1.0 1.1 1.7 1.6 2.2
CCL4/MIP-1β 536.2 1.0 1.0 1.7 1.7 2.4
鹼性FGF 14.2 1.0 1.0 1.6 1.2 1.3
IL-13 59.7 1.0 1.0 1.6 1.8 1.8
G-CSF 9.8 1.0 1.0 1.6 1.6 2.3
IL-4 3.0 1.0 1.1 1.5 1.6 1.6
B7-H1/PD-L1 289.2 1.0 0.9 1.5 1.5 1.8
CCL20/MIP-3α 18.2 1.0 0.8 1.4 1.4 2.2
IL-15 14.3 1.0 0.8 1.4 1.3 1.8
GM-CSF 457.7 1.0 1.0 1.3 1.4 1.6
CCL5/RANTES 75.0 1.0 1.2 1.3 1.4 3.8
CCL3/MIP-1α 186.2 1.0 1.1 1.3 1.2 1.3
PDGF-AB/BB 10.6 1.0 0.9 1.1 1.0 1.5
CCL19/MIP-3β 205.0 1.0 0.7 0.7 0.7 0.3
CXCL2/GROβ 712.4 1.0 0.8 0.5 0.5 0.4
IL-6 10200.5 1.0 1.1 0.7 0.6 0.2
VEGF 350.4 1.0 0.8 1.1 1.0 0.3
3.2.9    DC分化測定
用DC分化測定研究了043c、1E1及J-19對樹突細胞（DC）成熟的影響。簡單而言，用GM-CSF及IL-4處理從健康供體的PBMC中分離的人單核球六天，以分化成未成熟的DC細胞。然後將單核球來源的未成熟DC細胞與盤包被的或可溶性抗LILRB2抗體（5 μg/ml）一起再培育兩天，隨後藉由LPS（10 ng/ml）引發6小時。在研究結束時，藉由FACS定量CD86 高CD163 低群體的百分比，以及藉由Luminex定量促發炎細胞激素及趨化因子的釋放，來確定測試抗體對樹突細胞成熟的影響。如圖12及表7所示，043c、1E1及J-19顯著上調CD86 高CD163 低DC群體，以及促發炎細胞激素及趨化因子（如TNFα、IL-6、IFN-β及CCL3）的釋放，這表明用043c阻斷LILRB2促進未成熟DC進入成熟狀態。 [表7]. DC分化測定中的細胞激素/趨化因子釋放
處理形式 細胞激素 相對細胞激素水平
培養基 hIgG4 iso J-19 1E1 043c
預包被的 TNFα 0.83 1.00 2.13 2.33 5.38
IL-6 0.95 1.00 0.50 0.53 1.61
IFN-β 0.78 1.00 0.24 0.26 3.39
IL-10 0.92 1.00 0.86 1.16 2.16
VEGF 1.24 1.00 1.43 1.57 1.67
CCL20/MIP-3α 0.93 1.00 1.37 1.33 1.75
CCL3/MIP-1α 0.79 1.00 3.92 2.05 ＞5
CCL22/MDC 0.92 1.00 20.92 17.41 2.61
IL-1α/lL-1F1 0.95 1.00 1.81 1.95 1.71
CCL23/MPIF-1 1.02 1.00 0.25 0.25 0.48
可溶的 TNFα 1.19 1.00 4.43 3.81 4.71
IL6 1.08 1.00 1.69 1.67 1.93
IL-8/CXCL8 1.11 1.00 1.45 1.47 1.65
IFN-β 1.24 1.00 4.18 5.03 7.24
IL-10 1.05 1.00 1.51 1.59 1.69
CCL2/JE/MCP-1 1.07 1.00 1.84 1.85 2.36
VEGF 0.90 1.00 1.48 1.29 1.43
CCL20/MIP-3α 1.12 1.00 1.81 1.76 1.88
CCL3/MIP-1α 1.11 1.00 4.36 3.56 5.79
CCL22/MDC 1.06 1.00 2.41 1.70 2.03
IL-1α/lL-1F1 1.07 1.00 1.71 1.57 1.71
CCL23/MPIF-1 0.94 1.00 0.57 0.69 0.73
3.2.10  表位分析
043c、1E1及J19的表位鑒定藉由Octet進行。簡單而言，將HIS1K感測器水解10分鐘，隨後捕獲6xHis標記的人LILRB2 ECD重組蛋白至0.3 nm。然後將LILRB2捕獲的感測器暴露於串聯的Ab1及Ab2或直接暴露於Ab2。分別檢測不同條件下Ab2與LILRB2的結合訊息。最後，藉由標準化計算串聯的Ab2的相對結合訊息。高相對結合訊息表示Ab2與Ab1之間對結合抗原的低競爭。同樣，低相對締合訊息表示Ab2與Ab1之間的高競爭。如表8所示，J-19及1E1競爭與LILRB2結合，而043c沒有與J-19及1E1競爭。 [表8]. 043c、1E1及J-19的表位鑒定
Ab2 Ab1 J-19 1E1 043c
J-19 -3% 17% 100%
1E1 32% 3% 108%
043c 96% 100% 3%
使用氫氘交換質譜法（HDX-MS）進一步繪製了LILRB2上043c及1E1的結合表位。043c的結合導致肽「NGQFHIPSITWE」（結合位點1，序列識別號: 21）中氫氘交換減少，這表明LILRB2上的該區域對043c的結合至關重要（圖13A）。有趣的是，1E1的結合導致不同的肽「LYREKKSASWITRIRPEL」（結合位點2，序列識別號: 22）中氫氘交換減少（圖13B）。
綜合使用Octet及HDX-MS獲得的結果，可以得出結論，043c具有不同於1E1及J-19的獨特的結合表位。 實施例4.    抗體人源化 4.1       人源化設計
使用互補決定區（CDR）移植法對043c進行人源化。簡單而言，IGHV1-46*01（IMGT對偶基因名稱）及IGKV1-33*01（IMGT對偶基因名稱）基於它們與原始小鼠抗體序列的同源性，首先分別被選為重鏈及輕鏈的人源化模板。CDR使用Kabat定義來定義，重鏈CDR1除外，重鏈CDR1使用Kabat及Chothia系統的組合來定義。為了移植，將CDR及來自043c的典型殘基的不同組合移植到模板上。產生所得變體（恆定區中具有S228P突變的人IgG4抗體）並命名為hu043.01至hu043.08，其中前標「hu」表示「人源化」，尾綴中的數字表示序號。所有變體都在多個體外測定中進行了測試，以選擇保留親本抗體特性的最佳變體。 4.2       人源化變體的表徵 4.2.1    結合活性
使用EL4/LILRB2細胞藉由FACS測定檢測043c及043c來源的人源化變體與細胞膜人LILRB2的結合。如圖14所示，hu043.01、hu043.02、hu043.03、hu043.04、hu043.05及hu043.06保留了與親本抗體043c相同的人LILRB2結合活性。表9總結了使用GraphPad Prism 9.0的四參數非線性擬合分析的EC 50及最高MFI值。 [表9]. 043c及043c來源的人源化變體與EL4/LILRB2的結合
Ab代碼 043c hu043.01 hu043.02 hu043.03 hu043.04 hu043.05 hu043.06
EC 50（nM） 0.45 0.42 0.35 0.41 0.43 0.42 0.40
最高MFI 45273 45828 45663 46324 45027 45096 45722
4.2.2    親和力檢測
使用生物層干涉法（Octet）或表面電漿共振法（Biacore）確定043c來源的人源化變體與人LILRB2的結合親和力。締合及解離曲線用1:1結合模型擬合，計算每種抗體的Ka/Kd/KD值並總結在表10中。hu043.01、hu043.02、hu043.03、hu043.04、hu043.05、hu043.06、hu043.07及hu043.08保留了與親本抗體043c相同的人LILRB2結合親和力。 [表10]. 043c來源的人源化變體的人LILRB2結合親和力
檢測方法 Ab代碼 KD（nM） kd（1/s） ka（1/Ms）
Octet 043c 2.40 4.94E+05 1.19E-03
hu043.01 3.19 5.16E+05 1.64E-03
hu043.02 3.57 5.17E+05 1.84E-03
hu043.03 5.22 4.66E+05 2.43E-03
hu043.04 3.78 4.88E+05 1.85E-03
hu043.05 3.90 5.01E+05 1.99E-03
hu043.06 3.63 5.12E+05 1.86E-03
Biacore hu043.07 1.68 2.25E+06 3.79E-03
hu043.08 1.71 2.21E+06 3.78E-03
4.2.3    阻斷活性
藉由競爭性FACS評估043c及043來源的人源化變體阻斷LILRB2與HLA-G之間的相互作用的活性（圖15A及圖15B，參考實施例3.2.4中描述的方法）。表11總結了使用GraphPad Prism 9.0的四參數非線性擬合分析的IC 50值及最高阻斷率。hu043.01、hu043.02、hu043.03、hu043.04、hu043.05、hu043.06、hu043.07及hu043.08保留了與親本抗體043c相同的LILRB2/HLA-G相互作用阻斷活性。 [表11]. 043c及043c來源的人源化變體的阻斷活性
Ab代碼 LILRB2/HLA-G相互作用阻斷
IC 50（nM） 最高阻斷（%）
J-19 0.07 100
043c 0.11 100
hu043.01 0.11 100
hu043.02 0.10 100
hu043.03 0.10 100
hu043.04 0.11 100
hu043.05 0.09 100
hu043.06 0.11 100
hu043.07 0.19 100
hu043.08 0.19 100
4.2.4    功能驗證
使用單核球活化測定（參考實施例3.2.6中描述的方法）及巨噬細胞極化測定（參考實施例3.2.7中描述的方法）驗證hu043.07及hu043.08的功能。hu043.07及hu043.08在單核球活化測定中上調促發炎細胞激素TNFα的釋放（圖16）。它們還顯著上調M1巨噬細胞群體（圖17A）及抗炎細胞激素TNFα的釋放（圖17B）。在兩項研究中，hu043.07及hu043.08表現出與1E1、J-19及親本抗體043c相似的效力。
使用M2-T共培養測定進一步探索了hu043.08或hu043.08與可瑞達（抗PD-1）組合的功能。簡單而言，在50 nM hu043.08或hIgG4同種型對照的存在下，將從健康供體的PBMC中分離的人單核球用M-CSF處理5天，然後再經2天用IL-4及IL13極化抗炎性M2表現型。在10 ng/ml OKT3存在下，將用或不用hu043.08分化的單核球來源的巨噬細胞與自體T細胞以1 : 1的比例混合，加入或不加入5 nM可瑞達。藉由HTRF套組（Cisbio公司）對共培養24小時後收穫的上清液中釋放的IL-2、共培養96小時後收穫的上清液中的IFNγ及TNFα進行定量。在測試中，Hu043.08顯著上調IL-2（圖18A）、IFNγ（圖18B）及TNFα（圖18C）的釋放。而單獨的可瑞達僅輕度上調該等促發炎細胞激素的釋放（圖18）。有趣的是，在測試中，hu043.08與可瑞達的組合誘導了該等促發炎細胞激素的更多釋放（圖18）。該等結果表明，hu043.08減輕了M2巨噬細胞的抑制功能，並且hu043.08與抗PD-1抗體協同重振T細胞的功能。
043c來源的人源化抗體（即hu043.01、hu043.02、hu043.03、hu043.04、hu043.05、hu043.06、hu043.07及hu043.08）的示例性重鏈可變區及輕鏈可變區如表12所示。 [表12]. 043c來源的人源化抗體的VL及VH
代碼 重鏈代碼 輕鏈代碼
hu043.01 hu043VH6 hu043VL4
hu043.02 hu043VH7 hu043VL4
hu043.03 hu043VH8 hu043VL4
hu043.04 hu043VH6 hu043VL2
hu043.05 hu043VH7 hu043VL2
hu043.06 hu043VH8 hu043VL2
hu043.07 hu043VH9 hu043VL1
hu043.08 hu043VH10 hu043VL1
*前標「hu」表示「人源化」，「VH」表示「重鏈可變區」，「VL」表示「輕鏈可變區」，尾綴中的數字表示序號。
本公開中的胺基酸序列列於表13。VH及VL的CDR加底線，CDR使用Kabat定義來定義。 [表13]. 胺基酸序列
序列識別號 名稱 胺基酸序列（單字母代碼）
序列識別號: 1 VH CDR1 SYWMY
序列識別號: 2 VH CDR2 HINPSSGYTKYNQKFKD
序列識別號: 3 VH CDR3 DPNWDNY
序列識別號: 4 VL CDR1 KASQDVSIAVA
序列識別號: 5 VL CDR2 SASYRYT
序列識別號: 6 VL CDRL3 QQHYSTPYT
序列識別號: 7 hu043VH6 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT SYWMYWVRQAPGQGLEWIG HINPSSGYTKYNQKFKDRATLTADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR DPNWDNYWGQGTTVTVSS
序列識別號: 8 hu043VH7 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT SYWMYWVRQAPGQGLEWIG HINPSSGYTKYNQKFKDRVTMTADTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR DPNWDNYWGQGTTVTVSS
序列識別號: 9 hu043VH8 QVQLQQSGAEVKKPGASVKLSCKASGYTFT SYWMYWVRQRPGQGLEWIG HINPSSGYTKYNQKFKDRATLTADTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR DPNWDNYWGQGTTVTVSS
序列識別號: 10 hu043VH9 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT SYWMYWVRQAPGQGLEWIG HINPSSGYTKYNQKFKDKATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR DPNWDNYWGQGTTVTVSS
序列識別號: 11 hu043VH10 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT SYWMYWVRQAPGQGLEWIG HINPSSGYTKYNQKFKDKATLTADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR DPNWDNYWGQGTTLTVSS
序列識別號: 12 融合瘤/043cVH QVQLQQSGAELAKPGASVKLSCKASGYTFT SYWMYWVKQRPGQGLEWIG HINPSSGYTKYNQKFKDKATLTADKSSSTAYMQLSSLTYEDSAVYYCAR DPNWDNYWGQGTTLTVSS
序列識別號: 13 hu043VL4 DIVMTQSPSSLSASVGDRVSITC KASQDVSIAVAWYQQKPGKAPKLLIY SASYRYTGVPDRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYC QQHYSTPYTFGGGTKLEIK
序列識別號: 14 hu043VL2 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASQDVSIAVAWYQQKPGKAPKLLIY SASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYC QQHYSTPYTFGGGTKLEIK
序列識別號: 15 hu043VL1 DIQMTQSPSSMSASVGDRVTITC KASQDVSIAVAWYQQKPGKAPKLLIY SASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSVQPEDIATYYC QQHYSTPYTFGGGTKLEIK
序列識別號: 16 融合瘤/043cVL DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITC KASQDVSIAVAWYQQKPGQSPKLLIY SASYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYC QQHYSTPYTFGGGTKLEIK
序列識別號: 23 野生型人LILRB2 MTPIVTVLICLGLSLGPRTRVQTGTIPKPTLWAEPDSVITQGSPVTLSCQGSLEAQEYRLYREKKSASWITRIRPELVKNGQFHIPSITWEHTGRYGCQYYSRARWSELSDPLVLVMTGAYPKPTLSAQPSPVVTSGGRVTLQCESQVAFGGFILCKEGEDEHPQCLNSQPHARGSSRAIFSVGPVSPNRRWSHRCYGYDLNSPYVWSSPSDLLELLVPGVSKKPSLSVQPGPVMAPGESLTLQCVSDVGYDRFVLYKEGERDLRQLPGRQPQAGLSQANFTLGPVSRSYGGQYRCYGAHNLSSECSAPSDPLDILITGQIRGTPFISVQPGPTVASGENVTLLCQSWRQFHTFLLTKAGAADAPLRLRSIHEYPKYQAEFPMSPVTSAHAGTYRCYGSLNSDPYLLSHPSEPLELVVSGPSMGSSPPPTGPISTPGPEDQPLTPTGSDPQSGLGRHLGVVIGILVAVVLLLLLLLLLFLILRHRRQGKHWTSTQRKADFQHPAGAVGPEPTDRGLQWRSSPAADAQEENLYAAVKDTQPEDGVEMDTRAAASEAPQDVTYAQLHSLTLRRKATEPPPSQEREPPAEPSIYATLAIH
*前標「hu」表示「人源化」，「VH」表示「重鏈可變區」，「VL」表示「輕鏈可變區」，「H」表示「重鏈」，「L」表示「輕鏈」，「CDR」表示「互補決定區」，尾綴中的數字表示序號。
根據標準IUPAC（國際純化學暨應用化學聯合會（International Union of Pure ans Applied Chenistry；IUPAC））胺基酸縮寫，胺基酸表示為標準單字母代碼。
雖然已經描述了某些實施方式，但申請人或本發明所屬技術領域中具有通常知識者可能會想到目前無法預見或可能無法預見的替代方案、修改、變化、改進及實質等同物。因此，所提交的及可能被修改的所附申請專利範圍旨在包含所有這樣的替代方案、修改、變化、改進及實質等同物。
無
以下係附圖的簡要說明，該等附圖呈現的目的係為了說明本文公開的示例性實施方式而不是為了限制該等實施方式的目的。
[圖1]顯示了藉由ELISA測量的043c、1E1及J-19與LILRB2 ECD重組蛋白的結合。用指定的抗體獲得的平均OD450值列於每個柱形的頂部。OD450係450 nm處的光密度的縮寫。hIgG4 iso代表人IgG4同種型對照。 [圖2]顯示了藉由FACS測量的043c與EL4（EL4鼠腫瘤細胞系）-LILRB2細胞的結合。MFI係平均螢光強度(mean fluorescence intensity)的縮寫，並且Ab conc. 係抗體的濃度（μg/ml）的縮寫。hIgG4 iso代表人IgG4同種型對照。 [圖3A-3B]顯示了043c及1E1與從健康供體#1045（圖3A）及#6004（圖3B）分離的人初代單核球的結合。MFI係平均螢光強度的縮寫，並且Ab conc.係抗體的濃度（μg/ml）的縮寫。hIgG4 iso代表人IgG4同種型對照。 [圖4A-4I]顯示了藉由ELISA測量的043c、1E1及J-19與LILRA1（圖4A）、LILRA2（圖4B）、LILRA3（圖4C）、LILRA4（圖4D）、LILRA5（圖4E）、LILRB1（圖4F）、LILRB3（圖4G）、LILRB4（圖4H）、LILRB5（圖4I）ECD重組蛋白的結合。用指定的抗體獲得的平均OD450值列於每個柱形的頂部。OD450係450 nm處的光密度的縮寫。hIgG4 iso代表人IgG4同種型對照，並且PC代表陽性對照。 [圖5]顯示了藉由基於FACS的競爭測定測量的043c、1E1及J-19阻斷LILRB2與HLA-A2、HLA-G、ANGPTL1、ANGPTL2、ANGPTL4、ANGPTL7或MAG之間相互作用的活性。用指定的抗體獲得的抑制率列於每個柱形的頂部。hIgG4 iso代表人IgG4同種型對照。 [圖6]顯示了藉由基於FACS的競爭測定測量的043c、1E1及J-19阻斷LILRB2與HLA-G之間相互作用的活性。用指定的抗體獲得的IC 50值列於每個曲線圖例的右側。Ab conc. 係抗體的濃度（μg/ml）的縮寫。 [圖7]顯示了藉由基於FACS的競爭測定測量的043c阻斷LILRB2與HLA-A2之間相互作用的活性。用043c獲得的IC 50值列於曲線圖例的右側。Ab conc. 係抗體的濃度（μg/ml）的縮寫。 [圖8A-8B]顯示了043c、1E1及J-19促進人PBMC進入促發炎狀態的作用。藉由HTRF（螢光共振能量轉移（fluorescence resonance energy transfer；HTRF））檢測在所指定抗體的處理下LPS（脂多醣（lipopolysaccharide；LPS））引發的人PBMC的TNFα（圖8A）及IL10（圖8B）分泌。細胞激素水平值列於每個柱形的頂部。hIgG4 iso代表人IgG4同種型對照，培養基代表未經任何抗體處理的陰性對照。 [圖9A-9B]顯示了043c、1E1及J-19促進人單核球進入促發炎狀態的作用。藉由HTRF（螢光共振能量轉移）檢測在所指定抗體的處理下LPS（脂多醣）引發的人初代單核球的TNFα（圖9A）及IL10（圖9B）分泌。細胞激素水平值列於每個柱形的頂部。hIgG4 iso代表人IgG4同種型對照，培養基代表未經任何抗體處理的陰性對照。 [圖10A-10B]顯示了043c、1E1及J-19將人單核球來源的M2巨噬細胞重新編程為促發炎M1表現型的作用。分別藉由FACS或HTRF（螢光共振能量轉移）檢測所指定抗體處理下的M1巨噬細胞群體轉換（CD86 高CD163 低，圖10A）及TNFα分泌（圖10B）。M1巨噬細胞群體百分比及TNFα水平的值列於每個柱形的頂部。hIgG4 iso代表人IgG4同種型對照，培養基代表未經任何抗體處理的陰性對照，M1對照代表使用單核球來源的M1巨噬細胞的陽性對照。 [圖11A-11C]顯示了043c、1E1及J-19減輕M2巨噬細胞介導的T細胞抑制的作用。藉由HTRF（螢光共振能量轉移）檢測在所指定抗體的處理下IL-2（圖11A）、IFNγ（圖11B）及TNFα（圖11C）的分泌。細胞激素水平值列於每個柱形的頂部。M2 : T = 1 : 0.5、M2 : T = 1 : 1、M2 : T = 1 : 2、M2 : T = 1 : 4及M2 : T = 1 : 8表示M2巨噬細胞與自體T細胞以不同比例混合。hIgG4 iso代表人IgG4同種型對照，培養基代表未經任何抗體處理的陰性對照。 [圖12]顯示了043c、1E1及J-19促進人單核球來源的樹突細胞進入成熟狀態的作用。藉由FACS檢測所指定抗體處理下的CD86 高CD163 低樹突細胞群體轉換。群體百分比值列於每個柱形的頂部。hIgG4 iso代表人IgG4同種型對照，培養基代表未經任何抗體處理的陰性對照。 [圖13A-13B]顯示了藉由HDX-MS（氫氘交換質譜法（hydrogen-deuterium exchange mass spectrometry；HDX-MS））檢測的LILRB2上043c（圖13A）及1E1（圖13B）的結合表位。HDX氘化%係氫氘交換的百分比的縮寫。 [圖14]顯示了043c及043c來源的人源化變體（hu043.01、hu043.02、hu043.03、hu043.04、hu043.05及hu043.06）與EL4（EL4鼠腫瘤細胞系）-LILRB2細胞的結合。用指定的抗體獲得的EC 50值列於每個曲線圖例的右側。MFI係平均螢光強度的縮寫，並且Ab conc. 係抗體的濃度（μg/ml）的縮寫。hIgG4 iso代表人IgG4同種型對照。 [圖15A-15B]顯示了藉由基於FACS的競爭測定測量的043c、hu043.01、hu043.02、hu043.03、hu043.04、hu043.05、hu043.06、J-19（圖15A）及hu043.07、hu043.08（圖15B）阻斷LILRB2與HLA-G之間相互作用的活性。用指定的抗體獲得的IC 50值列於每個曲線圖例的右側。Ab conc. 係抗體的濃度（μg/ml）的縮寫。hIgG4 iso代表人IgG4同種型對照。 [圖16]顯示了hu043.07、hu043.08、043c、1E1及J-19促進人單核球進入促發炎狀態的作用。藉由HTRF（螢光共振能量轉移）檢測在所指定抗體的處理下LPS（脂多醣）引發的人初代單核球的TNFα分泌。細胞激素水平值列於每個柱形的頂部。hIgG4 iso代表人IgG4同種型對照，培養基代表未經任何抗體處理的陰性對照。 [圖17A-17B]顯示了hu043.07、hu043.08、043c、1E1及J-19將人單核球來源的M2巨噬細胞重新編程為促發炎M1表現型的作用。分別藉由FACS或HTRF（螢光共振能量轉移）檢測所指定抗體處理下的M1巨噬細胞群體轉換（CD86 高CD163 低，圖17A）及TNFα分泌（圖17B）。M1巨噬細胞群體百分比及TNFα水平的值列於每個柱形的頂部。hIgG4 iso代表人IgG4同種型對照，培養基代表未經任何抗體處理的陰性對照，M1對照代表使用單核球來源的M1巨噬細胞的陽性對照。 [圖18A-18C]顯示了hu043.08在單一療法中以及與可瑞達組合對減輕M2巨噬細胞介導的T細胞抑制的作用。藉由HTRF檢測所指定的處理下IL-2（圖18A）、IFNγ（圖18B）及TNFα（圖18C）的分泌。細胞激素水平值列於每個柱形的頂部。hIgG4 iso代表人IgG4同種型對照，培養基代表未經任何抗體處理的陰性對照。
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Claims (48)

  1. 一種與LILRB2（白血球免疫球蛋白樣受體B2）結合的抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段包含： 重鏈可變區（VH），該重鏈可變區包含互補決定區（CDR）1、2及3，其中該VH CDR1包含與序列識別號: 1所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列；該VH CDR2包含與序列識別號: 2所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列；該VH CDR3包含與序列識別號: 3所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列；以及 輕鏈可變區（VL），該輕鏈可變區包含CDR 1、2及3，其中該VL CDR1包含與序列識別號: 4所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列；該VL CDR2包含與序列識別號: 5所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列；該VL CDR3包含與序列識別號: 6所示序列至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%相同的胺基酸序列。
  2. 如請求項1所述之抗體或其抗原結合片段，其中該VH包含分別具有序列識別號: 1、2、3所示胺基酸序列的CDR 1、2及3， 並且該VL包含分別具有序列識別號: 4、5、6所示胺基酸序列的CDR 1、2及3。
  3. 如請求項1或2所述之抗體或其抗原結合片段，其中該VH與序列識別號: 7、8、9、10、11或12所示胺基酸序列至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%相同；以及 該VL與序列識別號: 13、14、15或16所示胺基酸序列至少80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%相同。
  4. 如請求項1-3中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該VH與序列識別號: 7、8、9、10、11或12所示胺基酸序列的差異不超過25、20、15、13、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸； 該VL與序列識別號: 13、14、15或16所示胺基酸序列的差異不超過20、15、13、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個胺基酸。
  5. 如請求項1-4中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該VH包含序列識別號: 7、8、9、10、11或12所示胺基酸序列；以及 該VL包含序列識別號: 13、14、15或16所示胺基酸序列。
  6. 如請求項1-5中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該VH包含序列識別號: 7的胺基酸序列並且該VL包含序列識別號: 13的胺基酸序列， 該VH包含序列識別號: 8的胺基酸序列並且該VL包含序列識別號: 13的胺基酸序列， 該VH包含序列識別號: 9的胺基酸序列並且該VL包含序列識別號: 13的胺基酸序列， 該VH包含序列識別號: 7的胺基酸序列並且該VL包含序列識別號: 14的胺基酸序列， 該VH包含序列識別號: 8的胺基酸序列並且該VL包含序列識別號: 14的胺基酸序列， 該VH包含序列識別號: 9的胺基酸序列並且該VL包含序列識別號: 14的胺基酸序列， 該VH包含序列識別號: 10的胺基酸序列並且該VL包含序列識別號: 15的胺基酸序列； 該VH包含序列識別號: 11的胺基酸序列並且該VL包含序列識別號: 15的胺基酸序列；或者 該VH包含序列識別號: 12的胺基酸序列並且該VL包含序列識別號: 16的胺基酸序列。
  7. 如請求項1-6中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段與LILRB2特異性結合，或者 該抗體或其抗原結合片段以小於20 nM、小於10 nM、小於5 nM或小於1 nM的EC 50值與LILRB2特異性結合。
  8. 如請求項1-7中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與HLA-A2之間的相互作用。
  9. 如請求項8所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段以小於20 nM、小於10 nM、小於5 nM、小於1 nM或小於0.6 nM的IC 50值阻斷人LILRB2與HLA-A2之間的相互作用。
  10. 如請求項1-9中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與HLA-G之間的相互作用。
  11. 如請求項10所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段以小於10 nM、小於5 nM、小於1 nM、小於0.5 nM或小於0.3 nM的IC 50值阻斷人LILRB2與HLA-G之間的相互作用。
  12. 如請求項1-11中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人ANGPTL1之間的相互作用。
  13. 如請求項1-12中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人ANGPTL2之間的相互作用。
  14. 如請求項1-13中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人ANGPTL4之間的相互作用。
  15. 如請求項1-14中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人ANGPTL7之間的相互作用。
  16. 如請求項1-15中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段阻斷人LILRB2與人MAG之間的相互作用。
  17. 如請求項1-16中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段能夠將人單核球來源的M2巨噬細胞重新編程為M1表現型。
  18. 如請求項1-17中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段減輕M2巨噬細胞介導的T細胞抑制。
  19. 如請求項1-18中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段促進人樹突細胞進入成熟狀態。
  20. 如請求項1-19中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段促進人單核球進入促發炎狀態。
  21. 如請求項1-20中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段促進人PBMC進入促發炎狀態。
  22. 如請求項1-21中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段上調促發炎細胞激素及/或趨化因子的釋放。
  23. 如請求項22所述之抗體或其抗原結合片段，其中該促發炎細胞激素及/或趨化因子選自由以下構成之群組：IL-2、IFN-γ、TNF-α、顆粒酶B、PDGF-AA、IL-3、IL-1β、IL-5、TGF-α、IFN-α、CCL4、鹼性FGF、IL-13、G-CSF、IL-4、PD-L1、CCL20、IL-15、GM-CSF、CCL5、CCL3、PDGF-AB、CCL19、CXCL2、IL-6、VEGF及其組合。
  24. 如請求項1-23中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段降低IL-10的表現。
  25. 如請求項1-24中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段以小於15 nM、小於10 nM、小於8 nM或小於6 nM的KD（親和力常數）結合人LILRB2。
  26. 如請求項1-25中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係嵌合或人源化抗體或其抗原結合片段。
  27. 如請求項1-26中任一項所述之抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段係IgG1抗體、IgG2抗體、IgG3抗體或IgG4抗體或其抗原結合片段。
  28. 一種抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與含有序列識別號: 21所示胺基酸序列的肽結合。
  29. 一種分離的多核苷酸，該分離的多核苷酸編碼如請求項1-28中任一項所述之抗體或其抗原結合片段。
  30. 一種分離的載體，該分離的載體包含如請求項29所述之分離的多核苷酸。
  31. 一種宿主細胞，該宿主細胞包含如請求項29所述之分離的多核苷酸或如請求項30所述之分離的載體。
  32. 一種藥物組成物，該藥物組成物包含如請求項1-28中任一項所述之抗體或其抗原結合片段或如請求項29所述之分離的多核苷酸或如請求項30所述之分離的載體或如請求項31所述之宿主細胞，以及藥學上可接受的載劑。
  33. 一種套組，該套組包含如請求項1-28中任一項所述之抗體或其抗原結合片段或如請求項29所述之分離的多核苷酸或如請求項30所述之分離的載體或如請求項31所述之宿主細胞或如請求項32所述之藥物組成物。
  34. 一種藥物組成物，該藥物組成物包含如請求項1-28中任一項所述之抗體或其抗原結合片段以及抗PD-1抗體。
  35. 如請求項1-28中任一項所述之抗體或其抗原結合片段或如請求項29所述之分離的多核苷酸或如請求項30所述之分離的載體或如請求項31所述之宿主細胞或如請求項32所述之藥物組成物或如請求項33所述之套組或如請求項34所述之藥物組成物在製造用於與人LILRB2結合的治療劑中之用途。
  36. 如請求項35所述之用途，其中結合LILRB2的如請求項1-28中任一項所述之抗體或其抗原結合片段或如請求項29所述之分離的多核苷酸或如請求項30所述之分離的載體或如請求項31所述之宿主細胞或如請求項32所述之藥物組成物或如請求項33所述之套組或如請求項34所述之藥物組成物在製造用於阻斷人LILRB2與HLA-A2、HLA-G、人ANGPTL1、人ANGPTL2、人ANGPTL4、人ANGPTL7及/或人MAG之間的相互作用的治療劑中之用途。
  37. 如請求項1-28中任一項所述之抗體或其抗原結合片段或如請求項29所述之分離的多核苷酸或如請求項30所述之分離的載體或如請求項31所述之宿主細胞或如請求項32所述之藥物組成物或如請求項33所述之套組或如請求項34所述之藥物組成物在製造用於增強免疫反應的治療劑中之用途。
  38. 如請求項1-28中任一項所述之抗體或其抗原結合片段或如請求項29所述之分離的多核苷酸或如請求項30所述之分離的載體或如請求項31所述之宿主細胞或如請求項32所述之藥物組成物或如請求項33所述之套組或如請求項34所述之藥物組成物在製造用於診斷、預防或治療疾病的治療劑中之用途。
  39. 如請求項38所述之用途，其中該疾病包含腫瘤，視需要地，至少一腫瘤細胞表現LILRB2。
  40. 一種增強有需要的受試者的免疫反應之方法，該方法包括向該受試者投予治療有效量的如請求項1-28中任一項所述之抗體或其抗原結合片段或如請求項29所述之分離的多核苷酸或如請求項30所述之分離的載體或如請求項31所述之宿主細胞或如請求項32所述之藥物組成物或如請求項33所述之套組或如請求項34所述之藥物組成物。
  41. 如請求項40所述之方法，其中該抗體或其抗原結合片段將人單核球來源的M2巨噬細胞重新編程為M1表現型， 該抗體或其抗原結合片段減輕腫瘤相關巨噬細胞M2表現型介導的T細胞抑制， 該抗體或其抗原結合片段促進人樹突細胞進入成熟狀態， 該抗體或其抗原結合片段促進人單核球進入促發炎狀態，及/或 該抗體或其抗原結合片段促進人PBMC進入促發炎狀態。
  42. 如請求項40或41所述之方法，其中該抗體或其抗原結合片段上調促發炎細胞激素及/或趨化因子的釋放，該促發炎細胞激素及/或趨化因子選自由以下構成之群組：IL-2、IFN-γ、TNF-α、顆粒酶B、PDGF-AA、IL-3、IL-1β、IL-5、TGF-α、IFN-α、CCL4、鹼性FGF、IL-13、G-CSF、IL-4、PD-L1、CCL20、IL-15、GM-CSF、CCL5、CCL3、PDGF-AB、CCL19、CXCL2、IL-6、VEGF及其組合。
  43. 如請求項40-42中任一項所述之方法，其中該抗體或其抗原結合片段降低IL-10的表現。
  44. 一種診斷或預防或治療有需要的受試者的疾病、障礙或病症之方法，該方法包括向該受試者投予治療有效量的如請求項1-28中任一項所述之抗體或其抗原結合片段或如請求項29所述之分離的多核苷酸或如請求項30所述之分離的載體或如請求項31所述之宿主細胞或如請求項32所述之藥物組成物或如請求項33所述之套組或如請求項34所述之藥物組成物。
  45. 如請求項40-44中任一項所述之方法，其中該疾病、障礙或病症包含腫瘤，視需要地，至少一腫瘤細胞表現LILRB2。
  46. 如請求項40-45中任一項所述之方法，其中該受試者係哺乳動物，包括人。
  47. 一種LILRB2上的結合表位，其中該結合表位包含序列識別號: 21所示胺基酸序列。
  48. 如請求項47所述之LILRB2上的結合表位，其中該LILRB2係人LILRB2。
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TWI796329B (zh) * 2017-04-07 2023-03-21 美商默沙東有限責任公司 抗－ilt4抗體及抗原結合片段
KR20200103706A (ko) * 2017-12-22 2020-09-02 조운스 테라퓨틱스, 인크. Lilrb2에 대한 항체
PE20211604A1 (es) * 2018-07-09 2021-08-23 Five Prime Therapeutics Inc Anticuerpos de union a ilt4
US20230068663A1 (en) * 2020-02-05 2023-03-02 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Novel lilrb2 antibodies and uses thereof
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