TW202330607A - 特異性結合ｃｇｒｐ和ｐａｃａｐ的抗原結合分子及其醫藥用途 - Google Patents
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Abstract
本揭露關於特異性結合CGRP和PACAP的抗原結合分子及其醫藥用途。該抗原結合分子可用於治療疼痛相關疾病。
Description
本申請要求2021年09月30日提交的專利申請202111157522.9的優先權。
本揭露屬於生物技術領域，更具體地，本揭露關於抗原結合分子及其應用。
這裡的陳述僅提供與本揭露有關的背景信息，而不必然地構成現有技術。
CGRP(降鈣素基因相關肽，Calcitonin Gene-related Peptide)是一種有效的血管舒張神經肽，由37個胺基酸組成。不同種屬的CGRP同源性非常高。CGRP受體由兩部分組成，一部分是單次跨膜的RAMP1，另一部分是七次跨膜的CALCRL。在偏頭痛的發作過程中，CGRP可藉由與其受體的結合來激活腺苷酸環化酶，從而使cAMP增加並導致血管舒張，產生疼痛。可以藉由抑制CGRP的釋放或阻止CGRP與其受體的結合來開發抗疼痛藥物。目前已上市的CGRP相關抗體均僅顯示出50%的臨床有效率。
PACAP(垂體腺苷酸環化酶激活肽，Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide)有兩種形式，90%的成分是38個胺基酸的形式(PACAP 38)，10%是27個胺基酸的形式(PACAP 27)。PACAP 27是PACAP 38的前27個胺基酸的剪切體形式。所有種屬的PACAP序列都是相同的。PACAP和血管活性肽(VIP)除序列上有68%的同源性外，還有三個有共同的受體，PACAP和VIP與兩個受體VPAC1和VPAC2有相同的親和力；但對受體PAC1，PACAP的親和力比VIP高1000倍。注射PACAP可以誘發偏頭痛發作，而VIP不能。目前尚未有PACAP相關抗體上市用於治療頭痛。
因此，具有更高活性的治療疼痛的藥物是尚未滿足的需要。
本揭露提供了一種特異性結合CGRP和PACAP的抗原結合分子。這些抗原結合分子能夠提供相比抗CGRP抗體和抗PACAP抗體更好的治療活性。
在一個方面，本揭露提供了一種抗原結合分子，其包含至少一個特異性結合CGRP的抗原結合模塊和至少一個特異性結合PACAP的抗原結合模塊，所述特異性結合CGRP的抗原結合模塊包含重鏈可變區(CGRP-VH)和輕鏈可變區(CGRP-VL)，該特異性結合PACAP的抗原結合模塊包含重鏈可變區(PACAP-VH)和輕鏈可變區(PACAP-VL)。
在一些實施方案中，該抗原結合分子在25℃條件下以小於1×10-10M的KD結合人CGRP，該KD是藉由表面電漿共振法測量的。
在一些實施方案中，該抗原結合分子在25℃條件下以小於1×10-9M的KD結合大鼠CGRP，該KD是藉由表面電漿共振法測量的。
在一些實施方案中，該抗原結合分子以小於1×10-8M的EC50結合人CGRP或大鼠CGRP，該EC50是藉由ELISA測量的。
在一些實施方案中，該抗原結合分子以小於1×10-9M的EC50結合PACAP38和PACAP27，該EC50是藉由ELISA所測量的。
在一些實施方案中，該抗原結合分子不結合VIP。在一些實施方案中，該抗原結合分子在CGRP誘導的條件下以小於4×10-8M的IC50抑制細胞產生cAMP。和/或，在一些實施方案中，該抗原結合分子在PACAP誘導的條件下以小於2×10-8M的IC50抑制細胞產生cAMP。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
(i)該CGRP-VH中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：83、46、76、77、78、79、80、81或82中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3的胺基酸序列，和該CGRP-VL中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：85、47或84中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3的胺基酸序列，或
(ii)該CGRP-VH中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：72、44、68、69、70或71中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3的胺基酸序列，和該CGRP-VL中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：75、45、73或74中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3的胺基酸序列，或
(iii)該CGRP-VH中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：40、54、55或56中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3的胺基酸序列，和該CGRP-VL中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：41、57或58中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3的胺基酸序列，或
(iv)該CGRP-VH中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：42、59、60、61、62、63、64、65或66中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3的胺基酸序列，和該CGRP-VL中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：43或67中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如上所述的抗原結合分子，該CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2、CGRP-HCDR3、CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3是根據Kabat、IMGT、Chothia、AbM或Contact編號規則定義的。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
(i)該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：106、23、103、104或105的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或
(ii)該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：101、17、100、102或192的胺基酸序列的CGRP-
HCDR2和包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或
(iii)該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：5、93、94或95的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：8的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或
(iv)該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：11、96、97、98或99的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：14的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列的CGRP-LCDR3。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或
該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列的CGRP-LCDR3。
在一些實施方案中，如上所述的抗原結合分子，該CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2、CGRP-HCDR3、CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3是根據Kabat編號規則定義的。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
(i)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：83、46、76、77、78、79、80、81或82的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：85、47或84的胺基酸序列，或
(ii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：72、44、68、69、70或71的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：75、45、73或74的胺基酸序列，或
(iii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：40、54、55或56的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：41、57或58的胺基酸序列，或
(iv)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：42、59、60、61、62、63、64、65或66的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：43或67的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
(i)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：83、76、77、78、79、80、81或82的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：85或84的胺基酸序列；或該
CGRP-VH包含SEQ ID NO：46的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：47的胺基酸序列；或
(ii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：72、68、69、70或71的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：75、73或74的胺基酸序列；或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列；或
(iii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：54、55或56的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：57或58的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列；或
(iv)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：59、60、61、62、63、64、65或66的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列；或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
(i)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：83的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：85的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：46的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：47的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：76的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：77的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：78的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：79的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：80的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：81的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：82的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列；或
(ii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：75的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：69的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：69的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：70的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列；或
(iii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：56的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：58的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：56的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：58的胺基酸序列；或
(iv)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：60的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：62的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：64的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：65的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：66的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
(i)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：83的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：85的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：81的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列；或
(ii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：75的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
(v)該PACAP-VH中的PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：87、48或86中的PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3的胺基酸序列，和該PACAP-VL中的PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：90、49、88或89中的PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3的胺基酸序列，或
(vi)該PACAP-VH中的PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：50或91中的PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3的胺基酸序列，和該PACAP-VL中的PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：51或92中的PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如上所述的抗原結合分子，該PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2、PACAP-HCDR3、PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3是根據Kabat、IMGT、Chothia、AbM或Contact編號規則定義的。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
(v)該PACAP-VH具有：包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的PACAP-HCDR1、包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列的PACAP-HCDR2和包含SEQ ID NO：107或30的胺基酸序列的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列的PACAP-LCDR1、包含SEQ ID NO：108或32
的胺基酸序列的PACAP-LCDR2和包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列的PACAP-LCDR3；或
(vi)該PACAP-VH具有：包含SEQ ID NO：34的胺基酸序列的PACAP-HCDR1、包含SEQ ID NO：35或109的胺基酸序列的PACAP-HCDR2和包含SEQ ID NO：36的胺基酸序列的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列的PACAP-LCDR1、包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列的PACAP-LCDR2和包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列的PACAP-LCDR3。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該PACAP-VH具有：包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的PACAP-HCDR1、包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列的PACAP-HCDR2和包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列的PACAP-LCDR1、包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列的PACAP-LCDR2和包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列的PACAP-LCDR3。
在一些實施方案中，如上所述的抗原結合分子，該PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2、PACAP-HCDR3、PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3是根據Kabat編號規則定義的。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
(v)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：87、48或86的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：90、49、88或89的胺基酸序列，或
(vi)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：50或91的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：51或92的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
(v)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：87或86的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：90、88或89的胺基酸序列；或該PACAP-VH包含SEQ ID NO：48的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：49的胺基酸序列；或
(vi)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：91的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：92的胺基酸序列；或該PACAP-VH包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
(v)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：87的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：90的胺基酸序列，或
該PACAP-VH包含SEQ ID NO：48的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：49的胺基酸序列，或
該PACAP-VH包含SEQ ID NO：86的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：88的胺基酸序列，或
該PACAP-VH包含SEQ ID NO：86的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：89的胺基酸序列；或
(vi)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列，或
該PACAP-VH包含SEQ ID NO：91的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：92的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
(v)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：87的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：90的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含Fc區(包括IgG Fc區或IgG1 Fc區)。在一些實施方案中，該Fc區包含一個或多個胺基酸取代，該胺基酸取代能夠增加抗原結合分子的血清半衰期。在一些實施方案中，該Fc區是人IgG1 Fc區，並且252位置的胺基酸殘基為Y、254位置的胺基酸殘基為T和256位置的胺基酸殘基為E，編號依據為EU索引。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中抗原結合分子包含兩個特異性結合CGRP的抗原結合模塊、兩個特異性結合PACAP的抗原結合模塊、和Fc區。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含兩條具有式(a)所示結構的第一鏈、和兩條具有式(b)所示結構的第二鏈，其中，
式(a) [PACAP-VH]-[CH1]-[CGRP-VH]-[連接子1]-[CGRP-VL]-[連接子2]-[Fc區的一個亞基]，
式(b) [PACAP-VL]-[CL]，
式(a)和式(b)所示的結構是從N端至C端排列的，該連接子1和該連接子2是相同或不同的肽連接子。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列的第二鏈；或
該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：194的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列的第二鏈；或
該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：111的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：112的胺基酸序列的第二鏈。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含一個特異性結合CGRP的抗原結合模塊、一個特異性結合PACAP的抗原結合模塊和Fc區，該Fc區包含能夠相互締合的第一亞基Fc1和第二亞基Fc2，該Fc1和Fc2各自獨立地具有一個或多個減少Fc區同源二聚化的胺基酸取代。
在一些實施方案中，該Fc1具有根據杵臼技術的凸起結構，和該Fc2具有根據杵臼技術的孔結構。
在一些實施方案中，該Fc1在366位置的胺基酸殘基為W；和該Fc2在366位置的胺基酸殘基為S、在368位置的胺基酸殘基為A、和在407位置的胺基酸殘基為V，編號依據為EU索引。
在一些實施方案中，該Fc1在354位置的胺基酸殘基為C；和該Fc2在349位置的胺基酸殘基為C，編號依據為EU索引。
在一些實施方案中，該特異性結合CGRP的抗原結合模塊和該特異性結合PACAP的抗原結合模塊兩者之一包含Titin鏈和Obscurin鏈，該Titin鏈和Obscurin鏈能夠形成二聚體。在一些實施方案中，該Titin鏈包含選自由SEQ ID NO：121至SEQ ID NO：139組成的組的胺基酸序列，該Obscurin鏈包含選自由SEQ ID NO：140至SEQ ID NO：180組成的組的胺基酸序列。在一些
實施方案中，該Titin鏈包含SEQ ID NO：137的胺基酸序列，該Obscurin鏈包含SEQ ID NO：175的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含一條具有式(c)所示結構的第一鏈、一條具有式(b)所示結構的第二鏈、一條具有式(d)所示結構的第三鏈和一條具有式(e)所示結構的第四鏈，
式(c) [PACAP-VH]-[CH1]-[Fc1]，
式(b) [PACAP-VL]-[CL]，
式(d) [CGRP-VH]-[連接子3]-[Titin鏈]-[Fc2]，
式(e) [CGRP-VL]-[連接子4]-[Obscurin鏈]，
式(c)、式(b)、式(d)和式(e)所示的結構是從N端至C端排列的，該連接子3和該連接子4是相同或不同的肽連接子。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子具有：包含SEQ ID NO：117的胺基酸序列的第一鏈、包含SEQ ID NO：118的胺基酸序列的第二鏈、包含SEQ ID NO：119的胺基酸序列的第三鏈和包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列的第四鏈。
在另一個方面，本揭露還提供一種分離的抗體，其能夠特異性結合CGRP，該抗體包含重鏈可變區CGRP-VH和輕鏈可變區CGRP-VL，其中
(i)該CGRP-VH中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：83、46、76、77、78、79、80、81或82中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3的胺基酸序列，和該CGRP-VL中的CGRP-
LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：85、47或84中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3的胺基酸序列，或
(ii)該CGRP-VH中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：72、44、68、69、70或71中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3的胺基酸序列，和該CGRP-VL中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：75、45、73或74中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3的胺基酸序列，或
(iii)該CGRP-VH中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：40、54、55或56中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3的胺基酸序列，和該CGRP-VL中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：41、57或58中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3的胺基酸序列，或
(iv)該CGRP-VH中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：42、59、60、61、62、63、64、65或66中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3的胺基酸序列，和該CGRP-VL中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：43或67中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的分離的抗體，其中
(i)該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：106、23、103、104或105的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：26的胺
基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或
(ii)該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：101、17、100、102或192的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或
(iii)該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：5、93、94或95的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：8的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或
(iv)該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：11、96、97、98或99的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：14的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列的CGRP-LCDR3。
在一些實施方案中，如前任一項所述的分離的抗體，其中
該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：24的
胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或
該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列的CGRP-LCDR3。
在一些實施方案中，如前任一項所述的分離的抗體，其中
(i)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：83、46、76、77、78、79、80、81或82的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：85、47或84的胺基酸序列，或
(ii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：72、44、68、69、70或71的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：75、45、73或74的胺基酸序列，或
(iii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：40、54、55或56的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：41、57或58的胺基酸序列，或
(iv)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：42、59、60、61、62、63、64、65或66的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：43或67的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的分離的抗體，其中
(i)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：83的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：85的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：46的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：47的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：76的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：77的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：78的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：79的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：80的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：81的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：82的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列；或
(ii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：75的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：69的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：69的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：70的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列；或
(iii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：56的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：58的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：56的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：58的胺基酸序列；或
(iv)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：60的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：62的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：64的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：65的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：66的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的分離的抗體，其中
(i)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：83的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：85的胺基酸序列，或
該CGRP-VH包含SEQ ID NO：81的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列；或
(ii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：75的胺基酸序列。
在另一個方面，本揭露還提供一種分離的抗體，其能夠特異性結合PACAP，該抗體包含重鏈可變區PACAP-VH和輕鏈可變區PACAP-VL，其中
(v)該PACAP-VH中的PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：87、48或86中的PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3的胺基酸序列，和該PACAP-VL中的PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：90、49、88或89中的PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3的胺基酸序列，或
(vi)該PACAP-VH中的PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：50或91中的PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3的胺基酸序列，和該PACAP-VL中的PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：51或92中的PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的分離的抗體，其中
(v)該PACAP-VH具有：包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的PACAP-HCDR1、包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列的PACAP-HCDR2和包含SEQ ID NO：107或30的胺基酸序列的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：包含
SEQ ID NO：31的胺基酸序列的PACAP-LCDR1、包含SEQ ID NO：108或32的胺基酸序列的PACAP-LCDR2和包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列的PACAP-LCDR3；或
(vi)該PACAP-VH具有：包含SEQ ID NO：34的胺基酸序列的PACAP-HCDR1、包含SEQ ID NO：35或109的胺基酸序列的PACAP-HCDR2和包含SEQ ID NO：36的胺基酸序列的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列的PACAP-LCDR1、包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列的PACAP-LCDR2和包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列的PACAP-LCDR3。
在一些實施方案中，如前任一項所述的分離的抗體，其中
該PACAP-VH具有：包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的PACAP-HCDR1、包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列的PACAP-HCDR2和包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列的PACAP-LCDR1、包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列的PACAP-LCDR2和包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列的PACAP-LCDR3。
在一些實施方案中，如前任一項所述的分離的抗體，其中
(v)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：87、48或86的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：90、49、88或89的胺基酸序列，或
(vi)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：50或91的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：51或92的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的分離的抗體，其中
(v)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：87的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：90的胺基酸序列，或
該PACAP-VH包含SEQ ID NO：48的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：49的胺基酸序列，或
該PACAP-VH包含SEQ ID NO：86的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：88的胺基酸序列，或
該PACAP-VH包含SEQ ID NO：86的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：89的胺基酸序列；或
(vi)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列，或
該PACAP-VH包含SEQ ID NO：91的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：92的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的分離的抗體，其中該PACAP-VH包含SEQ ID NO：87的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：90的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的分離的抗體，其中該分離的抗體是雙特異性抗體。在一些實施方案中，該雙特異性抗體特異性結合CGRP和PACAP。
在另一個方面，本揭露提供了一種醫藥組成物，其含有：治療有效量的前述任一項所述的抗原結合分子或前述任一項所述的分離的抗體，以及一種或更多種藥學上可接受的載體、稀釋劑、緩衝劑或賦形劑。在一些實施方案中，該醫藥組成物中還包含至少一種第二治療劑。
在另一個方面，本揭露還提供分離的核酸，其編碼前述任一項所述的抗原結合分子或前述任一項所述的分離的抗體。
在另一個方面，本揭露還提供一種宿主細胞，其包含前述的分離的核酸。
在另一個方面，本揭露還提供一種治療疾病的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的前述任一項所述的抗原結合分子或前述任一項所述的分離的抗體或其組成物。
在另一個方面，本揭露還提供前述任一項所述的抗原結合分子或前述任一項所述的分離的抗體或其組成物在製備治療或預防疾病的藥物中的用途。
在另一個方面，本揭露還提供用作藥物的前述任一項所述的抗原結合分子或前述任一項所述的抗體或其組成物。在一些實施方案中，該藥物用於治療疾病。
在一些實施方案中，如前任一項所述的疾病是疼痛。在一些實施方案中，如前任一項所述的疾病是PACAP和/或CGRP相關的疼痛。在一些實施方案中，該疾病是頭痛。在一些實施方案中，該疾病是偏頭痛或叢集性頭痛。
本揭露提供的抗原結合分子，具有治療活性、安全性、藥物代謝動力學特性和成藥性(如穩定性)好的特點。
圖1A為Format2+2的結構示意圖。
圖1B為Format1+1的結構示意圖。
術語
本文所用的術語只是為了描述實施方案的目的，並非旨在進行限制。除非另外定義，本文所用的全部技術術語和科學術語具有與本揭露所屬技術領域具有通常知識者通常所理解的相同意義。
除非上下文另外清楚要求，否則在整個說明書和申請專利範圍中，應將詞語“包含”、“具有”、“包括”等理解為具有包含意義，而不是排他性或窮舉性意義；也即，“包括但不僅限於”的意義。除非另有說明，“包含”包括了“由……組成”。例如，對於包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列的CGRP-HCDR1，其明確的涵蓋胺基酸序列如SEQ ID NO：22所示的CGRP-HCDR1。
本揭露所用胺基酸三字母代碼和單字母代碼如J.biol.chem，243，p3558(1968)中所述。
術語“和/或”，例如“X和/或Y”應當理解為意指“X和Y”或“X或Y”並且應當被用來提供對兩種含義或任一含義的明確支持。
術語“胺基酸”是指天然存在的和合成的胺基酸，以及以與天然存在的胺基酸類似的方式起作用的胺基酸類似物和胺基酸模擬物。天然存在的胺基酸是由遺傳密碼編碼的那些胺基酸，以及後來修飾的那些胺基酸，例如羥脯胺酸、γ-羧基谷胺酸和O-磷酸絲胺酸。胺基酸類似物是指與天然存在的胺基酸具有相同基本化學結構(即與氫、羧基、胺基和R基團結合的α碳)的化合物，例如高絲胺酸、正亮胺酸、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸甲基鋶。此類類似物具有修
飾的R基團(例如，正亮胺酸)或修飾的肽骨架，但保留與天然存在的胺基酸相同的基本化學結構。胺基酸模擬物是指具有與胺基酸的一般化學結構不同的結構，但是以與天然存在的胺基酸類似的方式起作用的化學化合物。
術語“胺基酸突變”包括胺基酸取代，缺失，***和修飾。可以進行取代、缺失、***和修飾的任意組合來獲得最終構建體，只要最終構建體擁有期望的特性，例如降低或對Fc受體的結合。胺基酸序列的缺失和***可以是在多肽鏈的胺基端和/或羧基端的缺失和***。具體的胺基酸突變可以是胺基酸取代。在一個實施方案中，胺基酸突變是非保守性的胺基酸取代，即將一個胺基酸用具有不同結構和/或化學特性的另一種胺基酸替換。胺基酸取代包括由非天然存在的胺基酸或由20種天然胺基酸的衍生物(例如4-羥脯胺酸、3-甲基組胺酸、鳥胺酸、高絲胺酸、5-羥賴胺酸)替換。可以使用本領域中公知的遺傳或化學方法生成胺基酸突變。遺傳方法可以包括定點誘變、PCR，基因合成等。預計基因工程以外的改變胺基酸側鏈基團的方法，如化學修飾也可能是可用的。本文中可使用各種名稱來指示同一胺基酸突變。本文中，可採用位置+胺基酸殘基的方式表示特定位點的胺基酸殘基，例如366W，則表示在366位點上的胺基酸殘基為W。T366W則表示第366位點上的胺基酸殘基由原來的T突變為了W。
術語“抗原結合分子”以最廣義使用，涵蓋各種特異性結合抗原(或其表位)的分子，包括但不限於抗體、具有抗原結合活性的多肽、以及兩者融合而成的抗體融合蛋白，只要它們展現出期望的抗原結合活性。本文的抗原結合分子包含可變區(VH)和可變區(VL)，其共同構成抗原結合域。示例性的，本文中的抗原結合分子是雙特異性抗原結合分子(例如：雙特異性抗體)。
術語“抗體”以最廣義使用，並且涵蓋各種抗體結構，包括但不限於單株抗體、多株抗體、單特異性抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)、全長抗體和抗體片段(或抗原結合片段或抗原結合部分)，只要它們展現出期望的抗原結合活性。例如，天然IgG抗體是約150,000道爾頓的異四聚蛋白，由二硫鍵結合的兩條輕鏈和兩條重鏈構成。從N至C端，每條重鏈具有一個可變區(VH，又稱作可變重域、重鏈可變區)，接著是三個恆定域(CH1、CH2和CH3)。類似地，從N至C端，每條輕鏈具有一個可變區(VL，又稱作可變輕域，或輕鏈可變區)，接著是一個恆定輕域(輕鏈恆定區、CL)。
術語“雙特異性抗體”指能夠對兩個不同抗原或同一抗原的至少兩個不同抗原表位特異性結合的抗體(包括抗體或其抗原結合片段，如單鏈抗體)。現有技術已公開了各種結構的雙特異性抗體。根據IgG分子的完整性可分為IgG樣雙特異性抗體和抗體片段型雙特異性抗體。根據抗原結合區域的數量可分為二價、三價、四價或更多價的雙特異性抗體。根據結構左右是否對稱可分為對稱結構雙特異性抗體和不對稱結構雙特異性抗體。
片段型雙特異性抗體，例如缺乏Fc片段的Fab片段，其藉由將2個或多個Fab片段結合在一個分子中形成雙特異性抗體，其具有較低的免疫原性，且分子量小，具有較高的腫瘤組織滲透性。該類型的典型的抗體結構如F(ab)2、scFv-Fab、(scFv)2-Fab等。IgG樣雙特異性抗體(例如具有Fc片段)，這類抗體相對分子量較大，Fc片段有助於抗體的純化，並提高其溶解性、穩定性，Fc部分還可能會與受體FcRn結合，增加抗體血清半衰期。典型的雙特異性抗體結構模型如KiH、CrossMAb、Triomab quadroma、Fc△Adp、ART-Ig、BiMAb、Biclonics、BEAT、DuoBody、Azymetric、XmAb、2：1TCBs、1Fab-IgG TDB、
FynomAb、two-in-one/DAF、scFv-Fab-IgG、DART-Fc、LP-DART、CODV-Fab-TL、HLE-BiTE、F(ab)2-CrossMAb、IgG-(scFv)2、Bs4Ab、DVD-Ig、Tetravalent-DART-Fc、(scFv)4-Fc、CODV-Ig、mAb2、F(ab)4-CrossMAb等(參見Aran F.Labrijn等，Nature Reviews Drug Discovery volume 18，pages585-608(2019)；Chen S1等，J Immunol Res.2019 Feb 11；2019：4516041)。
術語“可變區”或“可變結構域”指抗原結合分子中參與抗原結合的域。本文中，特異性結合CGRP的抗原結合模塊中的重鏈可變區標示為CGRP-VH，輕鏈可變區標示為CGRP-VL。特異性結合PACAP的抗原結合模塊中的重鏈可變區標示為PACAP-VH，輕鏈可變區標示為PACAP-VL。VH和VL各包含四個保守的框架區(FR)和三個互補決定區(CDR)。
術語“互補決定區”或“CDR”指可變結構域內主要促成與抗原結合的區域。
“框架”或“FR”是指可變結構域中除CDR殘基之外的殘基。VH包含3個CDR區：HCDR1、HCDR2和HCDR3；VL包含3個CDR區：LCDR1、LCDR2和LCDR3。
本文中，CGRP-VH中的3個CDR區分別標示為CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3；CGRP-VL中的3個CDR區分別標示為CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3。
PACAP-VH中的3個CDR區分別標示為PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3；PACAP-VL中的3個CDR區分別標示為PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3。
每個VH和VL從N端到C端依次為：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
可以藉由各種公知方案來確定CDR的胺基酸序列邊界，例如：“Kabat”編號規則(參見Kabat等(1991)，“Sequences of Proteins of Immunological Interest”，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD)、“Chothia”編號規則、“ABM”編號規則、“contact”編號規則(參見Martin,ACR.Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains[J].2001)和ImMunoGenTics(IMGT)編號規則(Lefranc，M.P.等，Dev.Comp.Immunol.，27，55-77(2003)；Front Immunol.2018 Oct 16；9：2278)等；各種編號系統之間的對應關係是所屬技術領域具有通常知識者熟知的。本揭露的編號規則如下表1中所示。
表1. CDR編號系統之間的關係
除非另有說明，本揭露實施例中的可變區和CDR序列均適用“Kabat”編號規則。儘管在具體的實施方案中，採用了一種編號系統(如Kabat)來限定胺基酸殘基，但是其他編號系統所的對應技術方案將視為等同技術方案。
術語“抗體片段”用於區別於完整抗體，其保留了完整抗體的結合抗原的能力。抗體片段的實例包括但不限於Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab′)
2、單域抗體、單鏈Fab(scFab)、雙抗體、線性抗體、單鏈抗體分子(例如scFv)；以及由抗體片段形成的多特異性抗體。
術語“Fc區”或“片段可結晶區”用於定義抗體重鏈的C末端區域，包括天然Fc區和改造的Fc區。在一些實施方案中，Fc區包含了相同或不同的兩個亞基。在一些實施方案中，人IgG重鏈的Fc區定義為從Cys226位置處的胺基酸殘基或從Pro230延伸至其羧基末端。用於本文所述抗體的合適天然序列Fc區包括人IgG1、IgG2(IgG2A、IgG2B)、IgG3和IgG4。除非另有說明，Fc區的編號規則為EU索引。
術語“Titin鏈”是指Titin蛋白中一段長度為78-118個胺基酸的包含Titin Ig-樣152結構域的肽段或其功能變體。該Titin鏈能夠與Obscurin Ig-樣1或Obscurin-樣Ig-樣1結構域結合形成二聚化複合物。
術語“Obscurin鏈”是指Obscurin蛋白上一段長度為87-117個胺基酸的包含Obscurin Ig-樣1結構域的肽段或其功能變體，或Obscurin-樣1蛋白上一段長度為78-118個胺基酸的包含Obscurin-樣Ig-樣1結構域的肽段或其功能變體。該Obscurin鏈能夠與Titin Ig-樣152結構域結合形成二聚化複合物。
本揭露的Titin鏈與Obscurin鏈可用於分別替換Fab中的CH1和CL，形成經替換的Fab(Fab-S)，該替換不影響抗原結合分子與抗原或其表位的結合。
術語“嵌合”抗體指這樣的一種抗體，其中重和/或輕鏈的一部分源自特定的來源或物種，而重和/或輕鏈的剩餘部分源自不同來源或物種。
術語“人源化”抗體是保留非人抗體的反應性同時在人中具有較低免疫原性的抗體。例如，可以藉由保留非人CDR區、並用人對應物(即，恆定區以及可變區的框架區部分)替換抗體的其餘部分來實現人源化。
術語“親和力”是指分子(例如，抗原結合分子)的單個結合部位與其結合配體(例如，抗原或表位)之間非共價相互作用的總體的強度。除非另外指明，如本文所用，“結合親和力”是指內部結合親和力。分子X對其配體Y的親和力通常可以由平衡解離常數(KD)表示。親和力可以藉由本領域已知的常規方法(包括本文所述的那些)測量。術語“kassoc”或“ka”指特定抗體-抗原相互作用的締合速率，而如本文所使用的術語“kdis”或“kd”意在是指特定抗體-抗原相互作用的解離速率。如本文所使用的，術語“KD”指平衡解離常數，其獲得自kd與ka的比率(即kd/ka)並且表示為莫耳濃度(M)。可以使用本領域已知的方法測定抗體的KD值，例如表面電漿共振法、ELISA或溶液平衡滴定法(SET)。
術語“單株抗體”指基本上均質的抗體的群或其成員，即在該群中包含的抗體分子的胺基酸序列是相同的，除了可能少量存在的天然突變以外。相比之下，多株抗體通常包含在其可變結構域具有不同胺基酸序列的多種不同抗體，其通常特異性針對不同表位。“單株”表示從基本上均質的抗體群體獲得的抗體的特徵，並且不應解釋為要求藉由任何特定方法來生產抗體。在一些實施方案中，本揭露提供的抗體是單株抗體。
術語“抗原”是指能夠由抗原結合分子(例如抗體)選擇性識別或結合的分子或分子部分。抗原可具有一個或多個能夠與不同的抗原結合分子(例如抗體)相互作用的表位。
術語“表位”指能夠與抗體或其抗原結合片段特異性結合的抗原上的區域(area或region)。表位可以由連續胺基酸(線性表位)形成；或包含非連續胺基酸(構象表位)，例如因抗原的折疊(即藉由蛋白質性質的抗原的三級折疊)使得非連續的胺基酸在空間上得以接近。構象表位和線性表位的差別在於：在變性溶劑的存在下，抗體對構象表位的結合喪失。表位包含處於獨特空間構象的至少3、至少4、至少5、至少6、至少7或8-10個胺基酸。篩選結合特定表位的抗體(即那些結合相同表位的)可以使用本領域例行方法來進行，例如但不限於丙胺酸掃描、肽印跡(見Meth.Mol.Biol.248(2004)443-463)、肽切割分析、表位切除、表位提取、抗原的化學修飾(見Prot.Sci.9(2000)487-496)和交叉阻斷(見“Antibodies”，Harlow and Lane(Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harb.,NY))。
術語“能夠特異性結合”、“特異性結合”或“結合”是指相比其他抗原或表位，抗體能夠以更高的親和力結合至某個抗原或其表位。通常，抗體以約1×10-7M或更小(例如約1×10-8M、1×10-9M、1×10-10M或更小)的平衡解離常數(KD)結合抗原或其表位。在一些實施方案中，抗體與抗原結合的KD為該抗體結合至非特異性抗原(例如BSA、酪蛋白)的KD的10%或更低(例如1%)。可使用已知的方法來測量KD，例如藉由FACS或BIACORE®表面電漿共振測定法所測量的。然而，特異性結合至抗原或其表位的抗體不排除對其它相關的抗原具有交叉反應性，例如，對來自其它物種(同源)(諸如人或猴，例如食蟹獼猴(Macaca fascicularis)(cynomolgus，cyno)、黑猩猩(Pan troglodytes)(chimpanzee，chimp))或狨猴(Callithrix jacchus)(commonmarmoset，marmoset)的相應抗原具有交叉反應性。
術語“不結合”是指抗體不能夠以上述特異性結合的方式結合至某個抗原或其表位。例如，當抗體以約1×10-6M或更大的平衡解離常數(KD)結合抗原或其表位時，該抗體被認為和該抗原不結合。
術語“抗原結合模塊”指特異性結合目標抗原或其表位的多肽分子。具體的抗原結合模塊包括抗體的抗原結合域，例如包含重鏈可變區和輕鏈可變區。
術語“特異性結合CGRP的抗原結合模塊”是指能夠以足夠的親和力結合CGRP或其表位的模塊。例如，特異性結合CGRP的抗原結合模塊具有以下的平衡解離常數(KD)：<約1nM、<約0.1nM或<約0.01nM，其是藉由表面電漿共振測定法測量的。抗原結合模塊包括如本文定義的抗體片段，例如Fab，經替換的Fab或scFv。
術語“連接子”指連接兩個多肽片段的連接單元。在本文中，同一結構式中出現的連接子可以是相同或不同的。連接子可以是肽連接子，其包含一個或多個胺基酸，典型的約1-30個、2-24個或3-15個胺基酸。應用於本文的連接子可以是相同或不同的。當“-”出現在結構式中，其表示兩側的單元直接藉由共價鍵連接。
“Tm”是溶解變性溫度(內源螢光)。當蛋白質變性(加熱或變性劑作用)時，三級結構打開，芳香族胺基酸微環境發生變化，導致發射螢光光譜改變。本揭露中，Tm1是指螢光變化到最大值的一半時的溫度。
“Tonset”是變性起始溫度。意指蛋白質開始變性時的溫度，即螢光值開始變化時的溫度。
“Tagg”是聚集起始溫度。藉由靜態光散射，在266nm和473nm兩個波長下檢測聚集體，監測到樣品開始聚集時的溫度。Tagg 266指的是266nm下監測到聚集起始溫度。
術語“核酸”在本文中可與術語“多核苷酸”互換使用，並且是指呈單鏈或雙鏈形式的脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。該術語涵蓋含有已知核苷酸類似物或修飾的骨架殘基或連接的核酸，該核酸是合成的、天然存在的和非天然存在的，具有與參考核酸相似的結合特性，並且以類似於參考核苷酸的方式代謝。“分離的”核酸指已經與其天然環境的組分分開的核酸分子。分離的核酸包括在下述細胞中含有的核酸分子，該細胞通常含有該核酸分子，但該核酸分子存在於染色體外或存在於不同於其天然染色體位置的染色體位置處。編碼該抗原結合分子的分離的核酸指編碼抗體重鏈和輕鏈(或其片段)的一個或更多個核酸分子，包括在單一載體或分開的載體中的這樣的一個或更多個核酸分子，和存在於宿主細胞中一個或更多個位置的這樣的一個或更多個核酸分子。除非另有說明，否則特定的核酸序列還隱含地涵蓋其保守修飾的變體(例如，簡並密碼子取代)和互補序列以及明確指明的序列。具體地，如下詳述，簡並密碼子取代可以藉由產生如下序列而獲得，在這些序列中，一個或多個所選的(或全部)密碼子的第三位被混合鹼基和/或脫氧肌苷殘基取代。
術語“多肽”和“蛋白質”在本文中可互換使用，指胺基酸殘基的聚合物。該術語適用於胺基酸聚合物，其中一個或多個胺基酸殘基是相應天然存在的胺基酸的人工化學模擬物，以及適用於天然存在的胺基酸聚合物和非天然存在的胺基酸聚合物。除非另外說明，否則特定的多肽序列還隱含地涵蓋其保守修飾的變體。
術語序列“同一性”指，當對兩條序列進行最佳比對時，兩條序列的胺基酸/核酸在等價位置相同的程度(百分比)；其中在比對過程中，必要時允許引入間隙以獲取最大序列同一性百分比，但任何保守性取代不視為構成序列同一性的一部分。為測定序列同一性百分比，比對可以藉由本領域技術已知的技術來實現，例如使用公開可得到的計算機軟件，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2或Megalign(DNASTAR)軟件。所屬技術領域具有通常知識者可確定適用於測量比對的參數，包括在所比較的序列全長上達成最大比對所需的任何算法。
術語“融合”或“連接”是指部件(例如抗原結合模塊和Fc結構域)直接地或經由連接子共價連接。
術語“載體vector”意指能夠轉運與其連接的另一多核苷酸的多核苷酸分子。一種類型的載體是“質粒”，其是指環狀雙鏈DNA環，其中可以連接附加的DNA區段。另一種類型的載體是病毒載體，例如腺相關病毒載體(AAV或AAV2)，其中另外的DNA區段可以連接到病毒基因組中。某些載體能夠在引入它們的宿主細胞中自主複製(例如，具有細菌複製起點的細菌載體和附加型哺乳動物載體)。其他載體(例如，非附加型哺乳動物載體)可以在引入宿主細胞中後整合到宿主細胞的基因組中，從而與宿主基因組一起複製。術語“表達載體”或“表達構建體”是指適用於對宿主細胞進行轉化且含有指導和/或控制(連同宿主細胞一起)與其可操作地連接的一個或多個異源編碼區的表達的核酸序列的載體。表達構建體可以包括但不限於影響或控制轉錄、翻譯且在存在內含子時影響與其可操作地連接的編碼區的RNA剪接的序列。
術語“宿主細胞”、“宿主細胞系”和“宿主細胞培養物”可互換使用，並且指已經導入外源核酸的細胞，包括此類細胞的後代。宿主細胞包括“轉化體”和“經轉化的細胞”，其包括原代(primary)的經轉化的細胞及自其衍生的後代，而不考慮傳代(passage)的次數。後代在核酸內容物上可以與親本細胞不完全相同，而是可以含有突變。本文中，該術語包括突變體後代，其與在原代轉化細胞中篩選或選擇的細胞具有相同的功能或生物學活性。宿主細胞包括原核和真核宿主細胞，其中真核宿主細胞包括但不限於哺乳動物細胞、昆蟲細胞系植物細胞和真菌細胞。哺乳動物宿主細胞包括人、小鼠、大鼠、犬、猴、豬、山羊、牛、馬和倉鼠細胞，包括但不限於中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、NSO、SP2細胞、HeLa細胞、幼倉鼠腎(BHK)細胞、猴腎細胞(COS)、人肝細胞癌細胞(例如，Hep G2)、A549細胞、3T3細胞和HEK-293細胞。真菌細胞包括酵母和絲狀真菌細胞，包括例如巴氏畢赤酵母(Pichiapastoris)、芬蘭畢赤酵母(Pichia finlandica)、海藻畢赤酵母(Pichia trehalophila)、科克拉馬畢赤酵母(Pichia koclamae)、膜狀畢赤酵母(Pichia membranaefaciens)、小畢赤酵母(Pichia minuta)(Ogataea minuta、Pichia lindneri)、仙人掌畢赤酵母(Pichiaopuntiae)、耐熱畢赤酵母(Pichia thermotolerans)、柳畢赤酵母(Pichia salictaria)、Pichia guercuum、皮傑普畢赤酵母(Pichia pijperi)、具柄畢赤酵母(Pichia stiptis)、甲醇畢赤酵母(Pichia methanolica)、畢赤酵母屬、釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、釀酒酵母屬、多形漢遜酵母(Hansenula polymorpha)、克魯維酵母屬、乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces lactis)、白色念珠菌(Candida albicans)、構巢麯黴(Aspergillus nidulans)、黑麯黴(Aspergillus niger)、米麯黴(Aspergillus oryzae)、裡氏木黴(Trichoderma reesei)、勒克氏
菌(Chrysosporium lucknowense)、鐮刀菌屬(Fusarium sp.)、禾穀鐮刀菌(Fusarium gramineum)、菜鐮刀菌(Fusarium venenatum)、小立碗蘚(Physcomitrella patens)和粗糙脈孢菌(Neurospora crassa)。畢赤酵母屬、任何釀酒酵母屬、多形漢遜酵母(Hansenula polymorpha)、任何克魯維酵母屬、白色念珠菌(Candida albicans)、任何麯黴屬、裡氏木黴(Trichoderma reesei)、勒克黴菌(Chrysosporium lucknowense)、任何鐮刀菌屬、解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)和粗糙脈孢菌(Neurospora crassa)。本專利的宿主細胞不包括在專利法中不授權的客體。
“視需要”或“視需要地”意味著隨後所描述的特徵可以但不必發生，該指明包括該特徵發生或不發生的場合。
術語“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述的抗原結合分子或抗體與其他化學組分的混合物，該其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。
術語“藥學上可接受的載體(vehicle)”指藥學製劑中與活性成分不同的，且對受試者無毒的成分。藥學上可接受的載體包括但不限於緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
術語“受試者”或“個體”包括人類和非人類動物。非人動物包括所有脊椎動物(例如哺乳動物和非哺乳動物)例如非人靈長類(例如，食蟹猴)、綿羊、狗、牛、雞、兩棲動物和爬行動物。除非指出時，否則該術語“患者”或“受試者”在本文中可互換地使用。如本文所使用的，術語“食蟹猴(cyno)”或“食蟹猴(cynomolgus)”是指食蟹猴(Macaca fascicularis)。在某些實施方案中，個體或受試者是人。
“施用”或“給予”，當其應用於動物、人、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物流體時，是指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組成物與動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體的接觸。
術語“樣本”是指從受試者分離的採集物(如流體、細胞、或組織)，以及存在於受試者體內的流體、細胞或組織。示例性樣本為生物流體，諸如血液、血清和漿膜液、血漿、淋巴液、尿液、唾液、囊液、淚液、***物、痰、分泌組織的或分泌器官的黏膜分泌物、***分泌物、腹水、胸膜、心包、腹膜、腹腔和其它體腔的流體、由支氣管灌洗液收集的流體、滑液、與受試者或生物來源接觸的液體溶液，例如培養基(包括條件培養基)、灌洗液等，組織活檢樣本、細針穿刺、手術切除的組織、器官培養物或細胞培養物。
“治療(treatment或treat)”和“處理”(及其語法變型)指試圖改變所治療個體的臨床干預，並且可以為了預防或者在臨床病理學的過程期間實施。治療的期望效果包括但不限於預防疾病的發生或復發，減輕症狀，減輕/減少疾病的任何直接或間接病理後果，預防轉移，降低疾病進展速率，改善或減輕疾病狀態，和消退或改善的預後。在一些實施方案中，使用本揭露的分子來延遲疾病的形成或減緩疾病的進展。
“有效量”一般是足以降低症狀的嚴重程度和/或頻率、消除這些症狀和/或潛在病因、預防症狀和/或其潛在病因出現、和/或改良或改善由疾病狀態引起或與其相關的損傷的量。
在一些實施例中，有效量是治療有效量或預防有效量。
“治療有效量”是這樣的量，其足以治療疾病狀態或症狀、尤其與該疾病狀態相關的狀態或症狀，或者以其他方式預防、阻礙、延遲或逆轉該疾病狀態或以任何方式與該疾病相關的任何其他不理想症狀的進展。
“預防有效量”是這樣的量，當給予受試者時，將具有預定預防效應，例如預防或延遲該疾病狀態的發作(或復發)，或者降低該疾病狀態或相關症狀的發作(或復發)可能性。
完全治療或預防效未必在給予一個劑量之後便發生，可能在給予一系列劑量之後發生。因而，治療或預防有效量可以一次或多次給予的方式給予。“治療有效量”和“預防有效量”可取決於多種因素變化：諸如個體的疾病狀態、年齡、性別和體重，以及治療劑或治療劑組合在個體中引發期望的應答的能力。有效治療劑或治療劑組合的示例性指標包括例如受試者改善的健康狀況。
靶分子
“CGRP”應作廣泛的理解，旨在涵蓋CGRP在哺乳動物體內各階段中的各種形式的分子，例如但不限於CGRP基因在擴增、複製、轉錄、剪接、加工、翻譯、修飾過程中所產生的分子(例如前體BCMA、成熟CGRP、膜表達的CGRP、CGRP剪接變體、修飾的CGRP、或其片段)；該術語也涵蓋人工製備的或體外表達的CGRP。
“PACAP”應作廣泛的理解，旨在涵蓋PACAP在哺乳動物體內各階段中的各種形式的分子，例如但不限於PACAP基因在擴增、複製、轉錄、剪接、加工、翻譯、修飾過程中所產生的分子(例如前體PACAP、成熟PACAP、膜表達的PACAP、PACAP剪接變體、修飾的PACAP、或其片段)；該術語也涵蓋人工製備的或體外表達的PACAP。
本揭露的抗原結合分子
本揭露提供了抗原結合分子，其具有諸多有利的特性，例如親和力、抑制PACAP38與受體結合的活性、在CGRP或PACAP誘導條件下抑制細胞產生cAMP、治療活性、安全性、藥物代謝動力學特性和成藥性(如產率、純度和穩定性等)。
示例性的抗原結合分子
本揭露的抗原結合分子，包括特異性結合CGRP和PACAP的雙特異性抗原結合分子(例如雙特異性抗體)、抗CGRP抗體或抗PACAP抗體。特別的，本揭露的抗原結合分子具有如下a至d任一的性質或其組合：
a．針對CGRP的高親和力。在一些實施方案中，該抗原結合分子在25℃條件下以小於1×10-10M或小於1×10-11M的KD結合人CGRP，該KD是藉由表面電漿共振法測量的。在一些實施方案中，該抗原結合分子在25℃條件下以小於1×10-9M或小於1×10-10M的KD結合大鼠CGRP，該KD是藉由表面電漿共振法測量的。在一些實施方案中，該抗原結合分子以小於1×10-8M的EC50結合人CGRP或大鼠CGRP，該EC50是藉由ELISA測量的。在一些實施方案中，該抗原結合分子具有交叉結合人CGRP和大鼠CGRP的活性。
b．針對PACAP的高親和力與特異性。在一些實施方案中，該抗原結合分子以小於1×10-9M或小於0.5×10-9M的EC50結合PACAP38和PACAP27，該EC50是藉由ELISA所測量的。在一些實施方案中，該抗原結合分子不結合VIP。
c．在CGRP誘導的條件下抑制細胞產生cAMP。在一些實施方案中，該抗原結合分子在CGRP誘導的條件下以小於4×10-8M、小於1×10-8M或小
於5×10-9M的IC50抑制細胞產生cAMP。在一些實施方案中，該細胞是SK-N-MC。
d．在PACAP誘導的條件下抑制細胞產生cAMP。在一些實施方案中，該抗原結合分子在PACAP誘導的條件下以小於2×10-8M、小於1×10-8M或小於5×10-9M的IC50抑制細胞產生cAMP。在一些實施方案中，該細胞是SH-SY5Y。
在一個方面，本揭露提供了一種抗原結合分子，其包含至少一個特異性結合CGRP的抗原結合模塊和至少一個特異性結合PACAP的抗原結合模塊，該特異性結合CGRP的抗原結合模塊包含重鏈可變區CGRP-VH和輕鏈可變區CGRP-VL，該特異性結合PACAP的抗原結合模塊包含重鏈可變區PACAP-VH和輕鏈可變區PACAP-VL。在另一個方面，本揭露提供了一種抗原結合分子，其是抗CGRP抗體，其包含重鏈可變區CGRP-VH和輕鏈可變區CGRP-VL。在另一個方面，本揭露提供了一種抗原結合分子，其是抗PACAP抗體，其包含重鏈可變區PACAP-VH和輕鏈可變區PACAP-VL。
(i)在一些實施方案中，如前所述的抗原結合分子，其中該CGRP-VH具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：22所示的CGRP-HCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：106、23、103、104或105所示的CGRP-HCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：24所示的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：25所示的CGRP-LCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：26所示的CGRP-LCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：27所示的CGRP-LCDR3。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該CGRP-VH具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：22所示的CGRP-HCDR1、胺基酸
序列如SEQ ID NO：106所示的CGRP-HCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：24所示的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：25所示的CGRP-LCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：26所示的CGRP-LCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：27所示的CGRP-LCDR3。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，該CGRP-VH和/或該CGRP-VL是鼠源的或人源化的。在一些實施方案中，該CGRP-VH和/或該CGRP-VL是人源化的。在一些實施方案中，該人源化的CGRP-VH的FR1、FR2和FR3與SEQ ID NO：46的FR1、FR2和FR3具有至少60%、70%或80%的序列同一性，該人源化的CGRP-VH的FR4與SEQ ID NO：46的FR4具有至少80%或90%的序列同一性，該人源化的CGRP-VL的FR1、FR2和FR3與SEQ ID NO：47的FR1、FR2和FR3具有至少60%、70%或80%的序列同一性和/或該人源化的CGRP-VL的FR4與SEQ ID NO：47的FR4具有至少80%或90%的序列同一性。在一些實施方案中，該CGRP-VH具有來源於IGHV1-3*01的FR1、FR2、FR3和來源於IGHJ6*01的FR4，並且其重鏈可變區的框架區上是未被取代的或具有選自1E、44C、48I、67A、69L、71V、73K和94S組成的組中的一個或多個胺基酸取代；和/或該CGRP-VL具有來源於IGKV1-12*01的FR1、FR2、FR3和來源於IGKJ4*01的FR4，並且其輕鏈可變區的框架區上是未被取代的或具有選自43S、46A和100C組成的組中的一個或多個胺基酸取代。在一些實施方案中，上述可變區和CDR是根據Kabat編號規則定義的。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該CGRP-VH的胺基酸序列與SEQ ID NO：83、46、76、77、78、79、80、81或82具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性，和該CGRP-VL的
胺基酸序列與SEQ ID NO：85、47或84具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性。在一些實施方案中，該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：83、46、76、77、78、79、80、81或82所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：85、47或84所示。在一些實施方案中，該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：83、76、77、78、79、80、81或82所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：85或84所示。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：83所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：85所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：46所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：47所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：76所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：84所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：77所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：84所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：78所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：84所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：79所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：84所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：80所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：84所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：81所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：84所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：82所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：84的所示。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：83所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：85所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：81所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：84所示。
(ii)在一些實施方案中，如前所述的抗原結合分子，其中該CGRP-VH具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：16所示的CGRP-HCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：101、17、100、102或192所示的CGRP-HCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：18所示的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：19所示的CGRP-LCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：20所示的CGRP-LCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：21所示的CGRP-LCDR3。
在一些實施方案中，如前所述的抗原結合分子，其中該CGRP-VH具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：16所示的CGRP-HCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：101所示的CGRP-HCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：18所示的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：19所示的CGRP-LCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：20所示的CGRP-LCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：21所示的CGRP-LCDR3。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，該CGRP-VH和/或該CGRP-VL是鼠源的或人源化的。在一些實施方案中，該CGRP-VH和/或該CGRP-VL是人源化的。在一些實施方案中，該人源化的CGRP-VH的FR1、FR2和FR3與SEQ ID NO：44的FR1、FR2和FR3具有至少60%、70%或80%的序列同一性，該人源化的CGRP-VH的FR4與SEQ ID NO：44的FR4具有至少80%或90%的序列同一性，該人源化的CGRP-VL的FR1、FR2和FR3與SEQ ID NO：45的FR1、FR2和FR3具有至少60%、70%或80%的序列同一性和/或該人源化的CGRP-VL的FR4與SEQ ID NO：45的FR4具有至少80%或90%的序列同一性。
在一些實施方案中，該CGRP-VH具有來源於IGHV1-3*01的FR1、FR2、FR3和來源於IGHJ6*01的FR4，並且其重鏈可變區的框架區上是未被取代的或具有選自1E、44C、48I、67A、69L、71V、73K和94S組成的組中的一個或多個胺基酸取代；和/或該CGRP-VL具有來源於IGKV1-16*01的FR1、FR2、FR3和來源於IGKJ4*01的FR4，並且其輕鏈可變區的框架區上是未被取代的或具有選自43S、46A和100C組成的組中的一個或多個胺基酸取代。在一些實施方案中，上述可變區和CDR是根據Kabat編號規則定義的。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該CGRP-VH的胺基酸序列與SEQ ID NO：72、44、68、69、70或71具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性，和該CGRP-VL的胺基酸序列與SEQ ID NO：75、45、73或74具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性。在一些實施方案中，該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：72、44、68、69、70或71所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：
75、45、73或74所示。在一些實施方案中，該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：72、68、69、70或71所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：75、73或74所示。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：72所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：75所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：44所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：45所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：68所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：73所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：68所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：74所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：69所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：73所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：69所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：74所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：70所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：73所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：71所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：73所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：71所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：74所示。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：72所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：75的胺基酸序列。
(iii)該CGRP-VH具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：4所示的CGRP-HCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：5、93、94或95所示的CGRP-HCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：6所示的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：7所示的CGRP-LCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：8所示的CGRP-LCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：9所示的CGRP-LCDR3。
在一些實施方案中，如前所述的抗原結合分子，該CGRP-VH和/或該CGRP-VL是鼠源的或人源化的。在一些實施方案中，該CGRP-VH和/或該CGRP-VL是人源化的。在一些實施方案中，該人源化的CGRP-VH的FR1、FR2和FR3與SEQ ID NO：40的FR1、FR2和FR3具有至少60%、70%或80%的序列同一性，該人源化的CGRP-VH的FR4與SEQ ID NO：40的FR4具有至少80%或90%的序列同一性，該人源化的CGRP-VL的FR1、FR2和FR3與SEQ ID NO：41的FR1、FR2和FR3具有至少60%、70%或80%的序列同一性和/或該人源化的CGRP-VL的FR4與SEQ ID NO：41的FR4具有至少80%或90%的序列同一性。在一些實施方案中，該CGRP-VH具有來源於IGHV1-69*02的FR1、FR2、FR3和來源於IGHJ6*01的FR4，並且其重鏈可變區的框架區上是未被取代的或具有選自1E、27Y和94G組成的組中的一個或多個胺基酸取代；和/或該CGRP-VL具有來源於IGKV2-40*01的FR1、FR2、FR3和來源於IGKJ2*01的FR4，並且其輕鏈可變區的框架區上是未被取代的或具有28S的胺基酸取代。在一些實施方案中，上述可變區和CDR是根據Kabat編號規則定義的。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該CGRP-VH的胺基酸序列與SEQ ID NO：40、54、55或56具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性，和該CGRP-VL的胺基酸序列與SEQ ID NO：41、57或58具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性。在一些實施方案中，該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：40、54、55或56所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：41、57或58所示。在一些實施方案中，該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：54、55或56所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：57或58所示。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：40所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：41所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：54所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：57所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：55所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：57所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：56所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：57所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：54所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：58所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：56所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：58所示。
(iv)該CGRP-VH具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：10所示的CGRP-HCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：11、96、97、98或99所示的CGRP-HCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：12所示的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：13所示的CGRP-LCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：14所示的CGRP-LCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：15所示的CGRP-LCDR3。
在一些實施方案中，如前所述的抗原結合分子，該CGRP-VH和/或該CGRP-VL是鼠源的或人源化的。在一些實施方案中，該CGRP-VH和/或該CGRP-VL是人源化的。在一些實施方案中，該人源化的CGRP-VH的FR1、FR2和FR3與SEQ ID NO：42的FR1、FR2和FR3具有至少60%、70%或80%的序列同一性，該人源化的CGRP-VH的FR4與SEQ ID NO：42的FR4具有至少80%或90%的序列同一性，該人源化的CGRP-VL的FR1、FR2和FR3與SEQ ID NO：43的FR1、FR2和FR3具有至少60%、70%或80%的序列同一性和/或該人源化的CGRP-VL的FR4與SEQ ID NO：43的FR4具有至少80%或90%的序列同一性。在一些實施方案中，該CGRP-VH具有來源於IGHV1-3*01的FR1、FR2、FR3和來源於IGHJ6*01的FR4，並且其重鏈可變區的框架區上是未被取代的或具有選自1E、48I、67A、69L、71V、73K和94S組成的組中的一個或多個胺基酸取代；和/或該CGRP-VL具有來源於IGKV1-27*01的FR1、FR2、FR3和來源於IGKJ2*01的FR4，並且其輕鏈可變區的框架區上是未被取代的或具有選自43S、46A和87H組成的組中的一個或多個胺基酸取代。在一些實施方案中，上述可變區和CDR是根據Kabat編號規則定義的。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該CGRP-VH的胺基酸序列與SEQ ID NO：42、59、60、61、62、63、64、65或66具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性，和該CGRP-VL的胺基酸序列與SEQ ID NO：43或67具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性。在一些實施方案中，該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：42、59、60、61、62、63、64、65或66所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：43或67所示。在一些實施方案中，該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：59、60、61、62、63、64、65或66所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：67所示。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：42所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：43所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：59所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：67所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：60所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：67所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：61所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：67所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：62所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：67所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：63所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：67所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：64所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：67所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：65所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：67所示，或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：66所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：67所示。
(v)在一些實施方案中，如前所述的抗原結合分子，其中該PACAP-VH具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：28所示的PACAP-HCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：29所示的PACAP-HCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：107或30所示的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：31所示的PACAP-LCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：108或32所示的PACAP-LCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：33所示的PACAP-LCDR3。
在一些實施方案中，如前所述的抗原結合分子，其中該PACAP-VH具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：28所示的PACAP-HCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：29所示的PACAP-HCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：107所示的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：31所示的PACAP-LCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：108所示的PACAP-LCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：33所示的PACAP-LCDR3。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，該PACAP-VH和/或該PACAP-VL是鼠源的或人源化的。在一些實施方案中，該PACAP-VH和/或該PACAP-VL是人源化的。在一些實施方案中，該人源化的PACAP-VH的FR1、FR2和FR3與SEQ ID NO：48的FR1、FR2和FR3具有至少60%、
70%或80%的序列同一性，該人源化的PACAP-VH的FR4與SEQ ID NO：48的FR4具有至少80%或90%的序列同一性，該人源化的PACAP-VL的FR1、FR2和FR3與SEQ ID NO：49的FR1、FR2和FR3具有至少60%、70%或80%的序列同一性和/或該人源化的PACAP-VL的FR4與SEQ ID NO：49的FR4具有至少80%或90%的序列同一性。在一些實施方案中，該PACAP-VH具有來源於IGHV3-21*01的FR1、FR2、FR3和來源於IGHJ6*01的FR4，並且其重鏈可變區的框架區上是未被取代的或具有選自13Q、28A、30N和49A組成的組中的一個或多個胺基酸取代；和/或該PACAP-VL具有來源於IGKV4-1*01的FR1、FR2、FR3和來源於IGKJ4*01的FR4，並且其輕鏈可變區的框架區上是未被取代的或具有選自4L和58I組成的組中的一個或多個胺基酸取代。在一些實施方案中，上述可變區和CDR是根據Kabat編號規則定義的。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該PACAP-VH的胺基酸序列與SEQ ID NO：87、48或86具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性，和該PACAP-VL的胺基酸序列與SEQ ID NO：90、49、88或89具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性。在一些實施方案中，該PACAP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：87、48或86所示，和該PACAP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：90、49、88或89所示。在一些實施方案中，該PACAP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：87或86所示，和該PACAP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：90、88或89所示。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
該PACAP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：87所示，和該PACAP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：90所示，或
該PACAP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：48所示，和該PACAP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：49所示，或
該PACAP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：86所示，和該PACAP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：88所示，或
該PACAP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：86所示，和該PACAP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：89所示。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該PACAP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：87所示，和該PACAP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：90的胺基酸序列。
(vi)在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該PACAP-VH具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：34所示的PACAP-HCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：35或109所示的PACAP-HCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：36所示的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：37所示的PACAP-LCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：38所示的PACAP-LCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：39所示的PACAP-LCDR3。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，該PACAP-VH和/或該PACAP-VL是鼠源的或人源化的。在一些實施方案中，該PACAP-VH和/或該PACAP-VL是人源化的。在一些實施方案中，該人源化的PACAP-VH的FR1、FR2和FR3與SEQ ID NO：50的FR1、FR2和FR3具有至少60%、70%或80%的序列同一性，該人源化的PACAP-VH的FR4與SEQ ID NO：50的FR4具有至少80%或90%的序列同一性，該人源化的PACAP-VL的FR1、FR2和FR3與SEQ ID NO：51的FR1、FR2和FR3具有至少60%、70%或80%的序
列同一性和/或該人源化的PACAP-VL的FR4與SEQ ID NO：51的FR4具有至少80%或90%的序列同一性。在一些實施方案中，該PACAP-VH具有來源於IGHV1-69-2*01的FR1、FR2、FR3和來源於IGHJ6*01的FR4，並且其重鏈可變區的框架區上是未被取代的或具有選自24A、27F、28N、29I、30K、71T、76N、93V和94F組成的組中的一個或多個胺基酸取代；和/或該PACAP-VL具有來源於IGLV7-43*01的FR1、FR2、FR3和來源於IGLJ2*01的FR4，並且其輕鏈可變區的框架區上是未被取代的或具有選自36V、44F、46G、49G、57G和58A組成的組中的一個或多個胺基酸取代。在一些實施方案中，上述可變區和CDR是根據Kabat編號規則定義的。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中該PACAP-VH的胺基酸序列與SEQ ID NO：50或91具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性，和該PACAP-VL的胺基酸序列與SEQ ID NO：51或92具有至少90%、95%、96%、97%、98%或99%的序列同一性。在一些實施方案中，該PACAP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：50或91所示，和該PACAP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：51或92所示。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
該PACAP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：50所示，和該PACAP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：51所示，或
該PACAP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：91所示，和該PACAP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：92的胺基酸序列。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
該CGRP-VH具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：22所示的CGRP-HCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：106所示的CGRP-HCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：24所示的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：25所示的CGRP-LCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：26所示的CGRP-LCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：27所示的CGRP-LCDR3，或
該CGRP-VH具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：16所示的CGRP-HCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：101所示的CGRP-HCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：18所示的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：19所示的CGRP-LCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：20所示的CGRP-LCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：21所示的CGRP-LCDR3；和
該PACAP-VH具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：28所示的PACAP-HCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：29所示的PACAP-HCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：107所示的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：胺基酸序列如SEQ ID NO：31所示的PACAP-LCDR1、胺基酸序列如SEQ ID NO：108所示的PACAP-LCDR2和胺基酸序列如SEQ ID NO：33所示的PACAP-LCDR3。
在一些實施方案中，如前任一項所述的抗原結合分子，其中
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：83所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：85所示；或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：81所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：84所示；或
該CGRP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：72所示，和該CGRP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：75的胺基酸序列；和
該PACAP-VH的胺基酸序列如SEQ ID NO：87所示，和該PACAP-VL的胺基酸序列如SEQ ID NO：90的胺基酸序列。
抗原結合分子的結構
本揭露的雙特異性抗原結合分子的功能並不受限於特定的分子結構。
本揭露提供一種四價(Format 2+2)的抗原結合分子，其包含兩個特異性結合CGRP的抗原結合模塊、兩個特異性結合PACAP的抗原結合模塊、和Fc區。示例性的，該抗原結合分子包含兩條具有式(a)所示結構的第一鏈和兩條具有式(b)所示結構的第二鏈，
式(a) [PACAP-VH]-[CH1]-[CGRP-VH]-[連接子1]-[CGRP-VL]-[連接子2]-[Fc區的一個亞基]，
式(b) [PACAP-VL]-[CL]，
式(a)和式(b)所示的結構是從N端至C端排列的，該連接子1和該連接子2是相同或不同的肽連接子；其示意圖見圖1A。
本揭露還提供一種二價(Format 1+1)的抗原結合分子，其包含一個特異性結合CGRP的抗原結合模塊、一個特異性結合PACAP的抗原結合模塊和Fc區。示例性的，該抗原結合分子包含一條具有式(c)所示結構的第一鏈、一條具有式(b)所示結構的第二鏈、一條具有式(d)所示結構的第三鏈和一條具有式(e)所示結構的第四鏈，
式(c) [PACAP-VH]-[CH1]-[Fc1]，
式(b) [PACAP-VL]-[CL]，
式(d) [CGRP-VH]-[連接子3]-[Titin鏈]-[Fc2]，
式(e) [CGRP-VL]-[連接子4]-[Obscurin鏈]，
式(c)、式(b)、式(d)和式(e)所示的結構是從N端至C端排列的，該連接子3和該連接子4是相同或不同的肽連接子；其示意圖見圖1B。
該肽連接子可以是任意適宜的肽鏈，只要抗原結合分子能夠展現出期望的抗原結合活性。例如，肽連接子可以是1-50、或3-20個胺基酸殘基的柔性肽。在一些實施方案中，該肽連接子各自獨立地具有L1-(GGGGS)n-L2的結構，其中，L1是鍵、A、GS、GGS或GGGS，n是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，L2是鍵、G、GG、GGG或GGGG，並且該肽連接子不是鍵。在一些實施方案中，該肽連接子的長度為3-15個胺基酸殘基。在一些實施方案中，該肽連接子各自獨立地具有(GGGGS)n的結構，其中n是1、2或3。在一些實施方案中，該肽連接子是GGG(SEQ ID NO：186)、GGGGS(SEQ ID NO：187)、GGGGSGGGGS(SEQ ID NO：188)或GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：189)。在一些實施方案中，該肽連接子1是GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：189)，肽連接子2是GGG(SEQ ID NO：186)。在一些實施方案中，該肽連接子3和肽連接子4均是GGGGS(SEQ ID NO：187)。
在一些實施方案中，式(a)是：
[PACAP-VH]-[CH1]-[CGRP-VH]-[GGGGSGGGGSGGGGS]-[CGRP-VL]-[GGG]-[Fc區的一個亞基]。
在一些實施方案中，式(d)是：[CGRP-VH]-[GGGGS]-[Titin鏈]-[Fc2]。
在一些實施方案中，式(e)是：[CGRP-VL]-[GGGGS]-[Obscurin鏈]。
示例性的四價抗原結合分子具有：
兩條胺基酸序列如SEQ ID NO：113所示的第一鏈和兩條胺基酸序列如SEQ ID NO：114所示的第二鏈；或
該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：194的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列的第二鏈；或
兩條胺基酸序列如SEQ ID NO：111所示的第一鏈和兩條胺基酸序列如SEQ ID NO：112所示的第二鏈。
示例性的二價抗原結合分子具有胺基酸序列如SEQ ID NO：117所示的第一鏈、胺基酸序列如SEQ ID NO：118所示的第二鏈、胺基酸序列如SEQ ID NO：119所示的第三鏈和胺基酸序列如SEQ ID NO：120所示的第四鏈。
本揭露的單特異性抗原結合分子可以是嵌合抗體或人源化抗體。
抗原結合分子的變體
在某些實施方案中，涵蓋本文中提供的抗原結合分子的胺基酸序列變體。例如，可以期望改善抗體的結合親和力和/或其它生物學特性。可以藉由將合適的修飾引入編碼抗體的核苷酸序列中，或者藉由肽合成來製備抗體的胺基酸序列變體。此類修飾包括例如對抗原結合分子的胺基酸序列內的殘基的刪除、和/或***、和/或取代。可以進行刪除、***、和取代的任何組合以得到最終的構建體，只要最終的構建體擁有期望的特徵，例如抗原結合特性。
取代、***、和刪除變體
在某些實施方案中，提供了具有一處或多處胺基酸取代的抗原結合分子變體。在感興趣的位點進行取代，包括CDR和FR。保守取代在表2中在“較佳的取代”的標題下顯示。更實質的變化在表2中在“示例性取代”的標題下提供，
並且如下文參照胺基酸側鏈類別進一步描述的。可以將胺基酸取代引入感興趣的抗體中，並且對產物篩選期望的活性，例如保留/改善的抗原結合，降低的免疫原性，或改善的ADCC或CDC。
表2. 胺基酸的取代
依照常見的側鏈特性，胺基酸可以如下分組：
(1)疏水性的：正亮胺酸，Met，Ala，Val，Leu，Ile；
(2)中性，親水性的：Cys，Ser，Thr，Asn，Gln；
(3)酸性的：Asp，Glu；
(4)鹼性的：His，Lys，Arg；
(5)影響鏈取向的殘基：Gly，Pro；
(6)芳香族的：Trp，Tyr，Phe。
非保守取代是指一種類別的成員替換另一類別的成員。
一類取代變體涉及取代親本抗體(例如人源化或人抗體)的一個或多個CDR殘基。一般地，經選擇用於進一步研究的所得變體相對於親本抗體會具有某些生物學特性(例如升高的親和力，降低的免疫原性)的改變(例如改善)，和/或會基本上保留親本抗體的某些生物學特性。一種示例性的取代變體是親和力成熟的抗體，可以例如使用基於噬菌體展示的親和力成熟技術(如本文所述的那些技術)，便利地產生該抗體。簡言之，將一個或多個CDR殘基突變，並將變體抗體在噬菌體上展示，並對其篩選特定的生物學活性(例如結合親和力)。可以對CDR做出改變(例如取代)，例如以改善抗體親和力。可以對CDR“熱點”，即在體細胞成熟過程期間以高頻率經歷突變的密碼子所編碼的殘基，和/或接觸抗原的殘基做出此類改變，同時對所得的變體VH或VL測試結合親和力。在親和力成熟的一些實施方案中，藉由多種方法(例如易錯PCR、鏈改組、或寡核苷酸指導的誘變)的任一種，將多樣性引入所選擇用於成熟的可變基因中。然後，創建次級文庫。然後，篩選文庫以鑑定具有期望的親和力的任何抗體變體。另一種引入多樣性的方法涉及CDR定向的方法，其中將幾個CDR殘基(例如一次4-6個殘基)隨機化。可以例如使用丙胺酸掃描誘變或建模來特異性鑑定涉及抗原結合的CDR殘基。特別地，經常靶向HCDR3和LCDR3。
在某些實施方案中，取代、***或缺失可以在一個或多個CDR內發生，只要此類變化不實質性降低抗體結合抗原的能力。例如，可以對CDR做出保守變化(例如保守取代，如本文中提供的)，其不實質性降低結合親和力。
此類變化可以例如在抗原接觸殘基以外的區。在上文提供的變體VH和VL序列的某些實施方案中，每個CDR是未改變的，或者含有不超過1、2或3處胺基酸取代。
一種可用於鑑定抗體中可以作為誘變靶位的殘基或區域的方法稱作“丙胺酸掃描誘變”。在這種方法中，一個殘基或殘基組(例如帶電荷的殘基，諸如Arg、Asp、His、Lys和Glu)被替換為中性或帶負電荷的胺基酸(例如，Ala或聚丙胺酸)時，確定該抗體與抗原的相互作用是否受影響。可以在對初始取代顯示功能敏感性的胺基酸位置引入進一步的取代。此外，可藉由研究抗原-抗體複合物的晶體結構來鑑定抗體與抗原間的接觸點。這些接觸殘基及鄰近殘基可以作為取代候選物被打靶或消除。可以篩選變體以確定它們是否含有期望的特性。
胺基酸序列***包括：在胺基和/或羧基端融合長度為1個殘基至100或更多個殘基的多肽，和單個或多個胺基酸殘基的序列內***。末端***的例子包括：具有N端甲硫胺醯基殘基的抗體。其它***變體包括在抗體的N或C端融合有酶或延長抗體的血清半衰期的多肽的融合物。
Fab的改造
在一個方面，本揭露的抗原結合分子中，該特異性結合CGRP的抗原結合模塊和該特異性結合PACAP的抗原結合模塊兩者之一是經替換的Fab，該經替換的Fab包含重鏈可變區、輕鏈可變區、Titin鏈和Obscurin鏈。在經替換的Fab中，Fab原有的CH1和CL被Titin鏈和Obscurin鏈所替換。示例性的，Titin鏈和Obscurin鏈的序列如表3-1和表3-2所示。
表3-1. Titin鏈的胺基酸序列
表3-2. Obscurin鏈的胺基酸序列
Fc區的改造
在一個方面，本揭露的抗原結合分子的Fc區包含一個或多個胺基酸取代。該一個或多個胺基酸取代減少抗原結合分子與Fc受體的結合，例如其與Fcγ受體的結合，並且降低或消除效應子功能。天然IgG Fc區，具體地是IgG1 Fc區或IgG4 Fc區，可能導致本揭露的抗原結合分子靶向表達Fc受體的細胞，而不是表達抗原的細胞。本揭露改造的Fc區表現出對Fc受體降低的結合親和力和/或降低的效應子功能。在一些實施方案中，改造的Fc區與天然Fc區相比，對Fc受體的結合親和力下降50%、80%、90%或95%以上。在一些實施方案中，該Fc受體是Fcγ受體。在一些實施方案中，該Fc受體是人Fcγ受體，例如FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIB、FcγRIIIa。在一些實施方案中，改造的Fc區與天然Fc區相
比，對補體，如C1q的結合親和力也降低。在一些實施方案中，改造的Fc區與天然Fc區相比，對新生兒Fc受體(FcRn)的結合親和力不降低。在一些實施例中，改造的Fc區具有降低的效應子功能，該降低的效應子功能可以包括但不限於以下中的一個或多個：降低的補體依賴性細胞毒性(CDC)、降低的抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)、降低的抗體依賴性細胞吞噬(ADCP)、減少的細胞因子分泌、減少的免疫複合物介導的抗原呈遞細胞的抗原攝取、減少的與NK細胞的結合、減少的與巨噬細胞的結合、減少的與單核細胞的結合、減少的與多形核細胞的結合、減少的直接信號傳導誘導性細胞凋亡、降低的樹突細胞成熟或減少的T細胞引發。對於IgG1 Fc區，在238、265、269、270、297、327和329等位置的胺基酸殘基取代可降低的效應子功能。在一些實施方案中，該Fc區是人IgG1 Fc區，並且在234和235位置的胺基酸殘基為A，編號依據為EU索引。對於IgG4 Fc區，在228等位置的胺基酸殘基取代可降低的效應子功能。
抗原結合分子還可包含二硫鍵改造，例如第一亞基的354C和第二亞基的349C。為增加抗原結合分子的血清半衰期，可以引入252Y、254T和256E的突變。
當抗原結合分子的不同抗原結合模塊分別融合至Fc區的兩個亞基時，可能導致不期望的同源二聚化。為了提高產率和純度，因此在本揭露的抗原結合分子的Fc區中引入促進異源二聚化的修飾將是有利的。在一些實施方案中，本揭露的Fc區包含根據杵臼(knob-into-hole，KIH)技術的改造，該方法涉及在第一亞基的界面處引入凸起結構(knob)以及在第二亞基的界面處引入孔結構(hole)。使得該凸起結構可以定位在孔結構中，促進異源二聚體的形成並抑制同源二聚體的產生。凸起結構是藉由用較大側鏈(例如酪胺酸或色胺酸)取代
來自第一亞基的界面的小胺基酸側鏈而構建的。而孔結構是藉由用較小的胺基酸側鏈(例如丙胺酸或蘇胺酸)取代大胺基酸側鏈而在第二亞基的界面中創建的。凸起結構和孔結構藉由改變編碼多肽的核酸來製備，可選的胺基酸取代如下表所示：
表4. KIH突變組合
除了杵臼技術外，用於修飾重鏈的CH3結構域以實現異源二聚化的其他技術也是本領域中已知的，例如WO96/27011、WO98/050431、EP1870459、WO2007/110205、WO 007/147901、WO2009/089004、WO2010/129304、WO2011/90754、WO2011/143545、WO2012/058768、WO2013/157954和WO 013/096291。
Fc區的C末端可以是完整C末端(其以胺基酸殘基PGK結束)；也可以是截短的C末端，例如在該截短的C末端中已經去除了一個或兩個C末端胺基酸殘基。在一個較佳的方面中，重鏈的C末端是以PG結束的截短的C末端。因此，在一些實施方案中，完整抗體可以包括去除了K447殘基和/或G446+K447殘基的抗體。在一些實施方案中，完整抗體可以包括沒有去除K447殘基和/或G446+K447殘基的抗體。在一些實施方案中，完整抗體具有帶有和不帶有K447殘基和/或G446+K447殘基的抗體混合物的抗體群體。
重組方法
抗原結合分子可以使用重組方法來產生。對於這些方法，提供編碼抗原結合分子的一個或更多個分離的核酸。
在天然抗體、天然抗體片段或具有同源二聚體重鏈的雙特異性抗體的情況下，需要兩個核酸，一個用於輕鏈或其片段，一個用於重鏈或其片段。此類核酸編碼包含抗體VL的胺基酸序列和/或包含抗體VH的胺基酸序列(例如抗體的輕鏈和/或重鏈)。這些核酸可以在相同的表達載體上或在不同的表達載體上。
在具有異二聚體重鏈的雙特異性抗體的情況下，需要四個核酸，一個用於第一輕鏈，一個用於包含第一異源單體Fc區多肽的第一重鏈，一個用於第二輕鏈，並且一個用於包含第二異源單體Fc區多肽的第二重鏈。這四個核酸可包含在一個或更多個核酸分子或表達載體中，通常這些核酸位於兩個或三個表達載體上，即一個載體可包含這些核酸中的多於一個。
在一個實施方案中，本揭露提供了編碼如前所述的抗體的分離的核酸。此類核酸可以給自獨立的編碼前述的任一多肽鏈。在另一方面中，本揭露提供了包含此類核酸的一種或多種載體(例如表達載體)。在另一方面中，本揭露提供了包含此類核酸的宿主細胞。在一個實施方案中，提供製備抗原結合分子的方法，其中該方法包括，在適合抗體表達的條件下，培養包含編碼該抗體的核酸的宿主細胞，如上文所提供的，和視需要地從宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收該抗體。
為了重組產生抗原結合分子，將編碼蛋白的核酸分離並***一個或更多個載體中，用於在宿主細胞中進一步選殖和/或表達。此類核酸可以使用
常規程序容易地分離和測序(例如藉由使用能夠與編碼抗體重鏈和輕鏈的基因特異性結合的寡核苷酸探針)，或者藉由重組方法產生或藉由化學合成獲得。
用於選殖或表達編碼抗體的載體的適當宿主細胞包括本文描述的原核或真核細胞。例如，抗體可在細菌中產生，特別是當抗體不需要糖基化和Fc效應子功能時。在表達後，抗體可以在可溶級分中從細菌細胞糊狀物分離，並且可進一步純化。
除了原核生物以外，真核微生物諸如絲狀真菌或酵母也是用於編碼抗體的載體的合適的選殖或表達宿主，包括真菌和酵母菌株，其糖基化途徑已經“人源化”，導致產生具有部分或完全人糖基化模式的抗體。適於表達(糖基化)抗體的合適的宿主細胞也可源自多細胞生物體(無脊椎動物和脊椎動物)；無脊椎動物細胞的例子包括植物和昆蟲細胞。已經鑑定了許多杆狀病毒株，其可與昆蟲細胞聯合使用，特別是用於草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda)細胞的轉染；還可利用植物細胞培養物作為宿主，例如US5959177、US 6040498、US6420548、US 7125978和US6417429；也可將脊椎動物細胞用作宿主，例如適應於在懸浮液中生長的哺乳動物細胞系。適宜的哺乳動物宿主細胞系的其它例子是經SV40轉化的猴腎CV1系(COS-7)；人胚腎系(293或293T細胞)；幼倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠塞托利(sertoli)細胞(TM4細胞)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK)；水牛鼠(buffalo rat)肝細胞(BRL3A)；人肺細胞(W138)；人肝細胞(Hep G2)；小鼠***腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞；MRC 5細胞；和FS4細胞。其它適宜的哺乳動物宿主細胞系包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR-CHO細胞；以及骨髓瘤細胞系，如Y0、NS0和Sp2/0。關於適合產生抗體的某
些哺乳動物宿主細胞系的綜述參見例如Yazaki，P.和Wu，A.M.，Methods in Molecular Biology，Vol.248，Lo，B.K.C.(編)，Humana Press，Totowa，NJ(2004)第255-268頁。
診斷與治療組成物
在某些實施方案中，本揭露提供的抗原結合分子可用於檢測生物學樣品中CGRP和/或PACAP的存在。在用於本文時，術語“檢測”涵蓋定量或定性檢測。在某些實施方案中，生物學樣品包含細胞或組織，諸如腫瘤組織。
在一個實施方案中，提供了在診斷或檢測方法中使用的抗原結合分子。在又一方面，提供了檢測生物學樣品中CGRP和/或PACAP的存在的方法。在某些實施方案中，該方法包括在適宜條件下使生物學樣品與抗原結合分子接觸，並檢測是否在檢測試劑與抗原之間形成複合物。此類方法可以是體外或體內方法。在一個實施方案中，使用抗原結合分子來選擇適合治療的受試者，例如CGRP和/或PACAP是用於選擇受試者的生物標誌物。
可使用本揭露的抗原結合分子來診斷的示例性病症，例如頭痛或偏頭痛。
在某些實施方案中，提供了經標記的抗原結合分子。標記物包括但不限於直接檢測的標記物或模塊(諸如螢光、發色、電子緻密、化學發光、和放射性標記物)，和間接檢測的模塊(例如，經由酶反應或分子相互作用間接檢測的模塊，諸如酶或配體)。
在另外的方面，提供包含該抗原結合分子的醫藥組成物，例如，用於以下任何治療方法。在一個方面，醫藥組成物包含本文提供的任何抗原結合
分子和藥學上可接受的載體。在另一個方面，醫藥組成物包含本文提供的任何抗原結合分子和至少一種另外的治療劑。
本揭露所述的抗原結合分子的醫藥組成物藉由以下製備：將具有所需純度的此類抗原結合分子與一種或更多種視需要的藥學上可接受的載體混合，該醫藥組成物為凍乾組成物或水溶液的形式。用於體內施用的配製劑一般是無菌的。無菌性可容易地實現，例如藉由穿過無菌濾膜過濾。
治療方法與施用途徑
本文提供的任何抗原結合分子可用於治療方法。
在又一個方面，本揭露提供抗原結合分子在藥物的製造或製備中的用途。在一個實施方案中，該藥物用於治療頭痛或偏頭痛。並且該藥物是以對上述疾病的有效量的形式存在的。在一些實施方案中，該有效量是單位日劑量或單位週劑量。在一個此類實施方案中，該用途進一步包括向受試者施用有效量的至少一種另外的治療劑(例如一種、兩種、三種、四種、五種或六種另外的治療劑)。
根據任意以上實施方案的“受試者”可以是人。
在具體的實施方案中，受試者是已經患有、疑似患有、或易感於頭痛或偏頭痛的個體。
在又一個方面，提供包含該抗原結合分子的醫藥組成物，例如，其用於以上任何製藥用途或治療方法。在另一個實施方案中，醫藥組成物還包含至少一種另外的治療劑。
本揭露的抗原結合分子可單獨使用或與其他試劑聯合用於治療。例如，本揭露的抗原結合分子可與至少一種另外的治療劑共同施用。
本揭露的抗原結合分子(和任何另外的治療劑)可藉由任何合適的手段施用，包括腸胃外、肺內和鼻內，並且如果需要局部治療，則病灶內施用。腸胃外輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下施用。給藥可以藉由任何適當的途徑，例如，藉由注射，諸如靜脈內或皮下注射，這部分取決於施用是短期的還是長期的。本文考慮多種給藥時間方案，包括但不限於，單次或在多個時間點多次施用，推注施用和脈衝輸注。
本揭露的抗原結合分子將以符合良好醫療實踐的方式配製、給藥和施用。在此背景下考慮的因素包括所治療的具體病症、所治療的具體哺乳動物、個體受試者的臨床狀況、病症的起因、試劑的遞送部位、施用方法、施用時間安排以及醫學從業者已知的其他因素。抗原結合分子無需但視需要地與目前用於預防或治療該病症的一種或更多種試劑一起配製。此類其它試劑的有效量取決於醫藥組成物中存在的抗原結合分子的量、病症或治療的類型以及上文討論的其它因素。這些通常以與本文所述相同的劑量和施用路徑使用，或以本文所述劑量的約1至99%使用，或以任何劑量使用，並藉由經驗/臨床確定為合適的任何途徑使用。
為了預防或治療疾病，本揭露的抗原結合分子(當單獨使用或與一種或更多種其他另外的治療劑組合使用時)的適當的劑量將取決於待治療的疾病的類型，治療分子的類型，疾病的嚴重性和病程，是為預防還是治療目的施用，之前的治療，受試者的臨床病史和對治療分子的響應，和主治醫師的判斷。治療分子恰當地以一次或經過一系列治療施用於受試者。取決於疾病的類型和嚴重性，約1μg/kg至15mg/kg的抗原結合分子可以是用於施用至受試者的初始候選劑量，不管例如是藉由一次或更多次分開的施用還是藉由連續輸注。一種典
型的每日劑量可能在約1μg/kg至100mg/kg或更多的範圍內，這取決於上文提及的因素。相應的，以50kg體重為例，示例性的單位日劑量為50μg-5g。
製品
在本揭露的另一方面中，提供一種製品(例如藥盒、試劑盒)，該製品包含本揭露的抗原結合分子、和視需要可用於治療、預防和/或診斷上述病症的材料。該製品包含一個或多個容器、和在容器上或與容器聯合的標簽或包裝插頁(package insert)。合適的容器包括，例如，瓶子、管形瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可以自各種材料諸如玻璃或塑料形成。容器裝有單獨的本揭露的抗原結合分子、或本揭露的抗原結合分子與另一種用於治療、預防和/或診斷疾患的組成物。容器可具有無菌的存取口(例如，容器可以是靜脈內溶液袋或管形瓶)。組成物中的至少一種活性試劑是本揭露的抗原結合分子。標簽或包裝插頁指示使用該組成物是來治療選擇的病況。
此外，製品可以包含：
(a)其中裝有組成物的第一容器，其中該組成物包含本揭露的抗原結合分子；和
(b)其中裝有組成物的第二容器，其中該組成物包含另外的治療劑。
備選地，或另外地，製品可進一步包含第二(或第三)容器，該第二(或第三)容器包含藥學上可接受的緩衝液。從商業和用戶立場，它可進一步包括所需的其他材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、濾器、針頭和注射器。
實施例與測試例
以下結合實施例和測試例進一步描述本揭露，但這些實施例和測試例並非限制著本揭露的範圍。本揭露實施例和測試例中未註明具體條件的實驗方法，通
常按照常規條件，如冷泉港的抗體技術實驗手冊，分子選殖手冊；或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。未註明具體來源的試劑，為市場購買的常規試劑。
實施例1. 含有Titin鏈/Obscurin鏈的抗原結合分子
本揭露的Titin鏈/Obscurin鏈可以來源於任意適宜的多肽，包括來源於WO2021139758(藉由援引完整收入本文)和CN202110527339.7及將其作為優先權文件的專利(藉由援引完整收入本文)中的多肽。構建雙特異性抗體，其中CL為WO2021139758中的kappa輕鏈恆定區，Titin鏈和Obscurin鏈的胺基酸序列見表3-1和表3-2，連接子序列包括GGGGS(SEQ ID NO：187)、ASTKG(SEQ ID NO：190)或RTVAS(SEQ ID NO：191)，本實施例中的Fc1、Fc2、CH1的胺基酸序列如下所示。
>Fc1(knob，SEQ ID NO：181)
>Fc2(hole，SEQ ID NO：182)
>CH1(SEQ ID NO：183)
1.1 DI雙特異性抗體
參照WO2021139758的實施例5，構建抗hNGF和hRANKL的DI雙特異性抗體：DI-2至DI-20，其包含如下所述的第一重鏈、第二重鏈、第一輕鏈和第二輕鏈：
第一重鏈：從N端到C端依次為：[VH1-I]-[連接子1]-[Obscurin鏈]-[Fc2]，
第一輕鏈：從N端到C端依次為：[VL1-I]-[連接子2]-[Titin鏈]，
第二重鏈：從N端到C端依次為：[VH2-D]-[CH1]-[Fc1]，和
第二輕鏈：從N端到C端依次為：[VL2-D]-[CL]；
其中，VH1-I和VL1-I分別為WO2021139758中I0的重鏈可變區和輕鏈可變區，VH2-D和VL2-D分別為WO2021139758中D0的重鏈可變區和輕鏈可變區。本實施例中DI雙特異性抗體中Obscurin鏈、Titin鏈、連接子1、連接子2結構見下表。
表5. DI雙特異性抗體中Obscurin鏈/Titin鏈和連接子對應表
採用WO2021139758的測試例4中的方法檢測DI-2至DI-20雙特異性抗體與其抗原的結合活性。對抗體進行熱穩定性研究。研究方法：用PBS將抗體的濃度稀釋至5mg/mL，採用高通量微分掃描螢光儀(UNCHAINED，規格型號：Unit)測定其熱穩定性。實驗結果表明，改造後的雙特異性抗體對抗原的結合活性沒有顯著變化；並且，與DI-2相比，DI-4至DI-8、DI-10至DI-16、DI-20的Tm1(℃)、Tonset(℃)有明顯的提升，雙特異性抗體的熱穩定性更優。
表6. DI雙特異性抗體的結合活性檢測
表7. DI雙特異性抗體的熱穩定性實驗結果
採用10mM乙酸，pH5.5，9%蔗糖的緩衝液配製含DI雙特異性抗體的溶液，將溶液置於40℃恆溫箱中孵育四週，結束後將抗體濃度濃縮至孵育開始時濃度，觀察溶液沉澱情況。實驗結果表明，DI-2雙特異性抗體組溶液出現沉澱，DI-3至DI-7相比DI-2具有更好的穩定性。
表8. DI雙特異性抗體的沉澱
1.2 PL雙特異性抗體
構建抗hPDL1和hCTLA4的PL雙特異性抗體：PL-1至PL-19，其包含如下所述的第一重鏈、第二重鏈、第一輕鏈和第二輕鏈：
第一重鏈：從N端到C端依次為：[VH1-P]-[連接子1]-[Obscurin鏈]-[Fc1]，
第一輕鏈：從N端到C端依次為：[VL1-P]-[連接子2]-[Titin鏈]，
第二重鏈：從N端到C端依次為：[VH2-L]-[CH1]-[Fc2]，和
第二輕鏈：從N端到C端依次為：[VL2-L]-[CL]；
其中，VH1-P和VL1-P分別為WO2020177733A1中h1831K抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區，VH2-L和VL2-L的胺基酸序列如下所示。
>VH2-L(SEQ ID NO：184)
>VL2-L(SEQ ID NO：185)
本實施例中PL雙特異性抗體中Obscurin鏈、Titin鏈、連接子1、連接子2結構見下表。
表9. PL雙特異性抗體中Obscurin鏈/Titin鏈和連接子對應表
參照WO2021139758中測試例4中的ELISA方法檢測PL雙特異性抗體的結合活性，其中hPDL1、hCTLA4抗原購自：Sino biology。對抗體進行熱穩定性研究。方法：用PBS將抗體的濃度稀釋至1.4-3mg/mL，採用高通量微分掃描螢光儀(UNCHAINED，規格型號：Unit)測定其熱穩定性。實驗結果表明，PL雙特異性抗體對抗原仍具有良好的結合活性；並且，與PL-1相比，PL-2至PL-19的Tm1(℃)、Tagg 266(℃)、Tonset(℃)有明顯的提升，雙特異性抗體的熱穩定性更優。
表10. PL雙特異性抗體的結合活性檢測
表11. PL雙特異性抗體的熱穩定性實驗結果
1.3 HJ雙特異性抗體
構建抗hIL5和hTSLP的HJ雙特異性抗體：HJ-3至HJ11，其包含如下所述的第一重鏈、第二重鏈、第一輕鏈和第二輕鏈：
第一重鏈：從N端到C端依次為：[VH1-H]-[連接子1]-[Titin鏈]-[Fc1]，
第一輕鏈：從N端到C端依次為：[VL1-H]-[連接子2]-[Obscurin鏈]，
第二重鏈：從N端到C端依次為：[VH2-J]-[CH1]-[Fc2]，和
第二輕鏈：從N端到C端依次為：[VL2-J]-[CL]；
其中，VH1-H和VL1-H分別為WO2021139758中H0的重鏈可變區和輕鏈可變區，VH2-J和VL2-J分別為WO2021139758中J1的重鏈可變區和輕鏈可變區。本實施例中HJ雙特異性抗體中Obscurin鏈、Titin鏈、連接子1、連接子2結構見下表。
表12. HJ雙特異性抗體中Obscurin鏈/Titin鏈和連接子對應表
參照WO2021139758中測試例4中的方法檢測HJ雙特異性抗體的抗原結合活性。對抗體的熱穩定性進行研究，方法：用10mM乙酸pH5.5、9%蔗糖的緩衝液配製HJ雙特異性抗體稀釋溶液，然後藉由超濾濃縮的方法將雙特異性抗體濃縮，獲得不同濃度的HJ雙特異性抗體溶液(HJ雙特異性抗體的濃度見表13-2)，然後將濃縮溶液置於40℃恆溫箱中孵育，第0天(也即40℃孵育開始前，D0)，第7天(40℃孵育第7天，D7)，第14天(40℃孵育第14天，D14)，第21天(40℃孵育第21天，D21)和第28天(40℃孵育第28天，D28)檢測樣品的SEC純度，40℃孵育28天後，馬上取樣檢測樣品CE-SDS純度。實驗結果表明，本揭露構建的HJ雙特異性抗體對抗原的結合活性沒有顯著變化；並且，與HJ-3相比，HJ-5至HJ-11雙特異性抗體的熱穩定性更優。
表13-1. HJ雙特異性抗體的結合活性檢測
表13-2. HJ雙特異性抗體加速穩定性實驗結果
實施例2. PACAP的受體PAC1、VPAC1和VPAC2的表達
將編碼含IgG1-Fc標簽的人PACAP受體PAC1、VPAC1和VPAC2胞外區序列***到phr載體中，構建成表達質粒，然後轉染HEK293。具體轉染步驟為：將HEK293E細胞以0.8×106個/mL的密度接種於FreeStyleTM表達培養基(含有1% FBS)，並放置於37℃恆溫搖床(120rpm)培養24小時。將質粒和PEI進行混勻，靜置15分鐘。將質粒和PEI混合物緩慢加入200mLHEK293E的細胞中，放入8% CO2，120rpm，37℃的搖床中培養。轉染第3天，補充10%體積的培養基。轉染第6天，離心收集細胞上清。
>PAC1胞外區-Fc(SEQ ID NO：1)
>VPAC1胞外區-Fc(SEQ ID NO：2)
>VPAC2胞外區-Fc(SEQ ID NO：3)
註：下劃線部分為PAC1、VPAC1和VPAC2的胞外區，斜體部分為人IgG1Fc標簽。
將PAC1、VPAC1和VPAC2細胞表達上清樣品高速離心去除雜質，重組抗體表達上清用ProteinA管柱進行純化。用PBS沖洗管柱，至A280讀數降至基線。用100mM乙酸pH3.5沖提目的蛋白，用1MTris-HCl，pH8.0中和，並換液到PBS溶液中。質譜鑑定為正確後分裝備用。
實施例3. CGRP和PACAP抗體的融合瘤篩選
本揭露藉由融合瘤技術，分別篩選出了針對CGRP和PACAP的單株抗體。
目標CGRP抗體的篩選指標為：與人CGRP特異性結合，與大鼠CGRP有交叉反應，以及抑制SK-N-MC細胞產生cAMP。
目標PACAP抗體的篩選指標為：與PACAP38、PACAP27有特異性結合，不與VIP結合，阻斷PACAP38結合其受體PAC1、VPAC1和VPAC2的活性，以及抑制SH-SY5Y細胞產生cAMP。
將KLH分別與人CGRP、大鼠CGRP和PACAP38進行偶聯作為免疫試劑，TiterMax® Gold Adjuvant(Sigma Cat No.T2684)與Thermo Imject® Alum(Thermo Cat No.77161)作為佐劑交叉免疫小鼠。選擇血清中抗體滴度高的小鼠進行脾細胞融合。融合後根據融合瘤細胞生長密度，對融合瘤培養上清進行檢測，並篩選特異性結合CGRP和PACAP的抗體。
篩選得到活性好的單株融合瘤細胞株C1#、C9#、C21#和C28#，P14#、P96#。分別收集對數生長期融合瘤細胞，用NucleoZol(MN)提取RNA，並進行反轉錄(PrimeScriptTM Reverse Transcriptase，Takara,cat # 2680A)。將反轉錄得到的cDNA採用鼠Ig-Primer Set(Novagen，TB326 Rev.B 0503)進行PCR擴增後測序。C1#、C9#、C21#和C28#，P14#、P96#的CDR和可變區的胺基酸序列如下：
表14. CGRP和PACAP抗體CDR
>C1#鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：40)
>C1#鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：41)
>C9#鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：42)
>C9#鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：43)
>C21#鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：44)
>C21#鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：45)
>C28#鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：46)
>C28#鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：47)
>P14#鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：48)
>P14#鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：49)
>P96#鼠源重鏈可變區(SEQ ID NO：50)
>P96#鼠源輕鏈可變區(SEQ ID NO：51)
將上述抗體的可變區融合至人恆定區，形成嵌合抗體，分別標記為C1#-CHI、C9#-CHI、C21#-CHI、C28#-CHI，P14#-CHI和P96#-CHI。
>重鏈恆定區(SEQ ID NO：52)
>輕鏈恆定區(SEQ ID NO：53)
實施例4. 抗人CGRP和PACAP單株抗體的人源化設計
本揭露將C1#、C9#、C21#和C28#，P14#、P96#抗體進行了人源化。鼠源抗人CGRP和PACAP單株抗體人源化按照本領域許多文獻公示的方法進行。簡言之，在所獲得的鼠源抗體VH/VLCDR典型結構的基礎上，從人源種系數據庫中搜索輕鏈可變區(VL)和重鏈可變區(VH)的同源序列，按FR的同源性由高到低排序，選取FR同源性最高的種系作為模板，將鼠源抗體的CDR區移植到人源模板上，然後部分胺基酸殘基進行突變，將鼠源抗體的恆定區替換為人恆定區，得到最終的人源化分子。
1. C1#的人源FR區的選擇和突變
C1#的人源化抗體選擇IGHV1-69*02的FR1、FR2、FR3，和IGHJ6*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV2-40*01的FR1、FR2、FR3和IGKJ2*01
的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的重鏈可變區上第1、27、94，60和/或61位的胺基酸殘基進行取代；和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第28位的胺基酸殘基進行取代，該位置根據Kabat編號系統確定，見下表：
表15. C1#人源化抗體的突變
示例性的，R94G表示依照Kabat編號系統，將94位R突變回G；N60或G61位的突變是對CDR區的優化。下同。
鼠源抗體C1#人源化得到的抗體可變區具體序列如下：
>C1H1(SEQ ID NO：54)
>C1H2(SEQ ID NO：55)
>C1H3(SEQ ID NO：56)
>C1L1(SEQ ID NO：57)
>C1L2(SEQ ID NO：58)
2. C9#的人源FR區的選擇和突變
C9#的人源化抗體選擇IGHV1-3*01的FR1、FR2、FR3，和IGHJ6*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV1-27*01的FR1、FR2、FR3和IGKJ2*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的重鏈可變區上第1、48、67、69、71、73、94、54和/或55位的胺基酸殘基進行取代；和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第43、46和/或87位的胺基酸殘基進行取代，該位置根據Kabat編號系統確定，見下表：
表16. C9#人源化抗體的突變
鼠源抗體C9#人源化得到的抗體可變區具體序列如下：
>C9H1(SEQ ID NO：59)
>C9H2(SEQ ID NO：60)
>C9H3(SEQ ID NO：61)
>C9H4(SEQ ID NO：62)
>C9H5(SEQ ID NO：63)
>C9H6(SEQ ID NO：64)
>C9H7(SEQ ID NO：65)
>C9H8(SEQ ID NO：66)
>C9L1(SEQ ID NO：67)
3. C21#的人源FR區的選擇和突變
C21#的人源化抗體選擇IGHV1-3*01的FR1、FR2、FR3，和IGHJ6*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV1-16*01的FR1、FR2、FR3和IGKJ4*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的重鏈可變區上第1、44、48、67、69、71、73、94、54和/或55位的胺基酸殘基進行取代；和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第43、46和/或100位的胺基酸殘基進行取代，該位置根據Kabat編號系統確定，見下表：
表17. C21#人源化抗體的突變
鼠源抗體C21#人源化得到的抗體可變區具體序列如下：
>C21H1(SEQ ID NO：68)
>C21H2(SEQ ID NO：69)
>C21H3(SEQ ID NO：70)
>C21H4(SEQ ID NO：71)
>C21H5(SEQ ID NO：72)
>C21L1(SEQ ID NO：73)
>C21L2(SEQ ID NO：74)
>C21L3(SEQ ID NO：75)
4. C28#的人源FR區的選擇和突變
C28#的人源化抗體選擇IGHV1-3*01的FR1、FR2、FR3，和IGHJ6*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV1-12*01的FR1、FR2、FR3和IGKJ4*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的重鏈可變區上第1、44、48、67、69、71、73、94、54和/或55位的胺基酸殘基進行取代；和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第43、46和/或100位的胺基酸殘基進行取代，該位置根據Kabat編號系統確定，見下表：
表18. C28#人源化抗體的突變
鼠源抗體C28#人源化得到的抗體可變區具體序列如下：
>C28H1(SEQ ID NO：76)
>C28H2(SEQ ID NO：77)
>C28H3(SEQ ID NO：78)
>C28H4(SEQ ID NO：79)
>C28H5(SEQ ID NO：80)
>C28H6(SEQ ID NO：81)
>C28H7(SEQ ID NO：82)
>C28H8(SEQ ID NO：83)
>C28L1(SEQ ID NO：84)
>C28L2(SEQ ID NO：85)
5. P14#的人源FR區的選擇和突變
P14#的人源化抗體選擇IGHV3-21*01的FR1、FR2、FR3，和IGHJ6*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGKV4-1*01的FR1、FR2、FR3和IGKJ4*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的重鏈可變區上第13、28、30、49和/或96位的胺基酸殘基進行取代；和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第4、58和/或53位的胺基酸殘基進行取代，該位置根據Kabat編號系統確定，見下表：
表19. P14#人源化抗體的突變
鼠源抗體P14#人源化得到的抗體可變區具體序列如下：
>P14H1(SEQ ID NO：86)
>P14H2(SEQ ID NO：87)
>P14L1(SEQ ID NO：88)
>P14L2(SEQ ID NO：89)
>P14L3(SEQ ID NO：90)
6. P96#的人源FR區的選擇和突變
P96#的人源化抗體選擇IGHV1-69-2*01的FR1、FR2、FR3，和IGHJ6*01的FR4作為重鏈框架區模板；選擇IGLV7-43*01的FR1、FR2、FR3和IGLJ2*01的FR4作為輕鏈框架區模板。視需要地，對人源化抗體的重鏈可變區上第24、27、28、29、30、71、76、93、94和/或55位的胺基酸殘基進行取代；和/或對人源化抗體的輕鏈可變區上第36、44、46、49、57和/或58位的胺基酸殘基進行取代，該位置根據Kabat編號系統確定，見下表：
表20. P96#人源化抗體的突變
鼠源抗體P96#人源化得到的抗體可變區具體序列如下：
>P96H1(SEQ ID NO：91)
>P96L1(SEQ ID NO：92)
人源化抗體中經替換的CDR的胺基酸序列見下表：
表21. 替換的CDR的胺基酸序列
上述各組的重鏈可變區和輕鏈可變區人源化後，可任意配對並融合至人恆定區，形成人源化抗體。該人源化抗體的重鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO：52所示，輕鏈恆定區的胺基酸序列如SEQ ID NO：53所示。C1H1L1表示採用C1的H1(C1H1)和L1(C1L1)的人源化抗體，以此類推。
實施例5. 抗CGRP-PACAP雙特異性抗體的製備
將C21H5L3、C28H8L2、C28H6L1分別與P14H2L3的可變區以及IgG1突變體IgG1(YTE)(M252Y/S254T/T256E)組合，形成三個雙特異性抗體，分別為CP-1、CP-2和CP-3；將C28H8L2與P14H2L3的可變區以及IgG1組合，形成雙特異性抗體CP-4。
CP-1為對稱結構分子，包含兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈。
重鏈：[VH(P14H2)]-[IgG1(CH1)]-[VH(C21H5)]-[連接子1]-[VL(C21L3)]-[連接子2]-[IgG1(YTE)Fc]；
輕鏈：[VL(P14L3)]-[CL]，其示意圖如圖1A所示。
CP-2為對稱結構分子，包含兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈。
重鏈：[VH(P14H2)]-[IgG1(CH1)]-[VH(C28H8)]-[連接子1]-[VL(C28L2)]-[連接子2]-[IgG1(YTE)Fc]；
輕鏈：[VL(P14L3)]-[CL]，其示意圖如圖1A所示。
CP-4為對稱結構分子，包含兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈。
重鏈：[VH(P14H2)]-[IgG1(CH1)]-[VH(C28H8)]-[連接子1]-[VL(C28L2)]-[連接子2]-[IgG1 Fc]；
輕鏈：[VL(P14L3)]-[CL]，其示意圖如圖1A所示。
>IgG1(YTE)Fc(SEQ ID NO：110)
>連接子1：GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：189)；
>連接子2：GGG(SEQ ID NO：186)；
>CP-1重鏈(SEQ ID NO：111)
>CP-1輕鏈(SEQ ID NO：112)
>CP-2重鏈(SEQ ID NO：113)
>CP-2輕鏈(SEQ ID NO：114)
>IgG1 Fc(SEQ ID NO：193)
>CP-4重鏈(SEQ ID NO：194)
>CP-4輕鏈(SEQ ID NO：114)。
CP-3為非對稱結構分子，完整分子共四條鏈。
鏈1：[VH(P14H2)]-[IgG1(CH1)]-[IgG1Fc(S354C、T366W、YTE)]
鏈2：[VL(P14L3)]-[CL]
鏈3：[VH(C28H6)]-[連接子3]-[Titin鏈]-[IgG1Fc(Y349C、T366S、L368A、Y407V、YTE)]
鏈4：[VL(C28L1)]-[連接子4]-[Obscurin鏈]，其示意圖如圖1B所示，其中Obscurin簡稱Ob。
其中，
>Titin鏈：(T.16，SEQ ID NO：137)
>Ob鏈：(O28，SEQ ID NO：175)
>IgG1Fc(S354C、T366W、YTE)(SEQ ID NO：115)
>IgG1Fc(Y349C、T366S、L368A、Y407V、YTE)(SEQ ID NO：116)
>連接子3和連接子4：GGGGS(SEQ ID NO：187)；
>CP-3鏈1(SEQ ID NO：117)
>CP-3鏈2(SEQ ID NO：118)
>CP-3鏈3(SEQ ID NO：119)
>CP-3鏈4(SEQ ID NO：120)
本揭露將Fremanezumab作為CGRP端的陽性對照，將LY-3451838、ALD-1910作為PACAP端的陽性對照。
測試例
測試例1. ELISA檢測C1#、C9#、C21#、C28#，P14#的嵌合抗體以及人源化抗體分別與CGRP和PACAP、VIP的結合活性
本測試例用ELISA方法檢測了C1#、C9#、C21#、C28#的嵌合抗體以及人源化抗體與人CGRP和大鼠CGRP的結合能力，分別包被人CGRP和大鼠CGRP各1μg/mL，封閉後，加入梯度稀釋的抗體孵育1小時，洗板後加入辣根過氧化物酶標記的抗人Fc的二抗孵育後顯色。用ELISA方法檢測P14#的嵌合抗體以
及人源化抗體與PACAP38、PACAP27、VIP的結合能力，包被鏈黴親和素2μg/mL，封閉後，分別加入生物素化的PACAP38、PACAP27、VIP孵育1小時，洗板後加入梯度稀釋的抗體孵育1小時，洗板後加入辣根過氧化物酶標記的鏈黴親和素二抗孵育後顯色。各抗體與相應抗原結合的EC50(nM)如下表所示。
表22. 抗體結合CGRP的活性
表23. 抗體結合PACAP、VIP的活性
結果顯示，本揭露所篩選的CGRP的抗體皆有很好結合CGRP的能力，且與大鼠CGRP有較好的交叉結合活性。本揭露所篩選的PACAP的抗體皆有很好結合PACAP38、PACAP27的能力，與VIP不結合，安全性優於兩個陽性抗體。
測試例2. P14#、P96#的嵌合抗體以及人源化抗體抑制PACAP38與受體PAC1、VPAC1和VPAC2的結合
本測試例用ELISA方法檢測了P14#、P96#嵌合抗體以及人源化抗體抑制PACAP38與受體PAC1、VPAC1和VPAC2的結合能力。分別包被PAC1、VPAC1和VPAC 22μg/mL，封閉後，加入梯度稀釋的抗體與生物素化的PACAP38混合物，孵育1小時，洗板後加入辣根過氧化物酶標記的鏈黴親和素的二抗孵育後顯色。各抗體抑制抗原與受體結合的IC50(nM)如下表所示。
表24. 抗體抑制PACAP38與受體結合的活性
結果顯示，本揭露所篩選的PACAP的抗體皆能很好地抑制PACAP38與受體PAC1、VPAC1和VPAC2的結合。
測試例3. C1#、C9#、C21#、C28#，P14#、P96#的嵌合抗體以及人源化抗體抑制細胞產生cAMP
本測試例檢測了C1#、C9#、C21#、C28#的嵌合抗體以及人源化抗體抑制SK-N-MC細胞產生cAMP的能力，以及P14#、P96#嵌合抗體以及人源化抗體抑制SH-SY5Y細胞產生cAMP的能力。將細胞與待測抗體室溫孵育半小時，隨後分別加入激動劑CGRP和PACAP38室溫孵育半小時，再分別加入用細胞裂解液配製的cAMP-d2和AnticAMP-Eu-Cryptate，30℃避光孵育1小時後讀數。各抗體抑制細胞產生cAMP的IC50(nM)如下表所示：
表25. 抗體抑制SK-N-MC產生cAMP的活性
表26. 抗體抑制SH-SY5Y產生cAMP的活性
結果顯示，本揭露所篩選的CGRP和PACAP的抗體皆能很好地抑制細胞產生cAMP，其效果優於對照抗體Fremanezumab。
測試例4. 抗體與不同種屬CGRP的親和力
在25℃條件下，用Biacore 8K儀器測定CP-1、CP-2和CP-3雙特異性抗體與人、大鼠CGRP的親和力。首先將生物素化的各待測抗體(單抗2μg/mL，雙抗4μg/mL，生物素化表示為Biotin-)偶聯到SA生物傳感芯片上。再將抗原人
CGRP樣品從低到高依次進樣180秒，解離。試驗結束後採用1：1結合模型擬合。各抗體與人CGRP的親和力見下表。
表27. 抗體與人CGRP的親和力
用Protein A生物傳感芯片親和捕獲IgG，然後於芯片表面流經分子樣品，用Biacore 8K儀器實時檢測反應信號獲得結合和解離曲線。在每個實驗循環解離完成後，用50mMNaOH將生物傳感芯片洗淨再生3次。數據擬合模型採用1：1。各抗體與大鼠CGRP的親和力見表28。
表28. 抗體與大鼠CGRP的親和力
測試例5. 抗體對PACAP38以及PACAP27的親和力
本測試例用ELISA方法檢測了CP-1、CP-2和CP-3雙特異性抗體對PACAP38、PACAP27的結合能力。包被抗人Fc 1μg/mL，封閉後，加入梯度稀釋的抗體孵育1小時，洗板後再分別加入生物素化的PACAP38和PACAP27孵育1小時，洗板後加入辣根過氧化物酶標記的鏈黴親和素二抗孵育後顯色。各抗體與相應抗原結合的EC50(nM)如下表所示，CP-1、CP-2和CP-3對PACAP38、PACAP27均有較高的親和力。
表29. 抗體結合PACAP38、PACAP27的能力測定
測試例6. 雙特性抗體CP-1、CP-2和CP-3抑制細胞產生cAMP
本測試例檢測了CP-1、CP-2和CP-3雙特異性抗體抑制SK-N-MC細胞和SH-SY5Y細胞產生cAMP的能力。將細胞與待測抗體室溫孵育半小時，隨後分別加入激動劑CGRP和PACAP38室溫孵育半小時，再分別加入用細胞裂解液配製的cAMP-d2和AnticAMP-Eu-Cryptate，30℃避光孵育1小時後讀數。各抗體抑制細胞產生cAMP的IC50(nM)如下表所示，CP-1、CP-2和CP-3均能很好地抑制細胞產生cAMP。
表30. 抗體抑制細胞產生cAMP的能力測定
測試例7. 雙特異性抗體CP-1、CP-2和CP-3的大鼠藥物代謝動力學評價
SD大鼠24隻，分成6組，雄性，分別進行靜脈注射給藥(IV)和皮下給藥(SC)後，不同時間點採集全血，採用ELISA測定血清中的雙特異性抗體和IgG部分的濃度。其藥物代謝動力學參數和代謝曲線分別如下表所示。
表31. 雙特異性抗體的藥物代謝動力學參數
結果表明，本揭露雙特異性分子在大鼠體內無論是靜脈注射還是皮下注射，半衰期沒有明顯差異，且都較長，生物利用度較高，分子完整性和穩定性較好，顯示出優異的藥物代謝動力學特徵。
體內活性生物學評價
測試例8. PACAP38誘導的小鼠cAMP升高模型
本測試例利用PACAP38誘導小鼠血漿cAMP升高模型，來評估受試抗體對抑制小鼠血漿cAMP升高的體內藥效作用。
將實驗動物按照體重隨機分組，腹腔給予各抗體或PBS，10mL/kg，給藥24小時後，尾靜脈注射PACAP38-咯利普蘭溶液或者PBS-咯利普蘭溶液(對照組)，5mL/kg，給PACAP38後10分鐘採血，EDTA抗凝，後續
檢測血漿中cAMP的水平。各抗體抑制小鼠血漿cAMP升高的藥效作用如下表所示。結果表明，CP-1、CP-2和CP-3與空白組相比，高低劑量均能抑制cAMP的產生。
表32. 雙特異性抗體在誘導小鼠cAMP升高模型中的藥效
測試例9. 評價雙特性抗體CP-1、CP-2和CP-3在辣椒素誘導的大鼠皮膚血流模型中的藥效
本測試例利用SD大鼠辣椒素皮膚血管擴張模型，研究CP-1、CP-2和CP-3對血流的影響。
在大鼠腹中線兩側畫1直徑約為6mm的O型圈，O-型圈避開可見明顯血管的區域，對O型圈內皮膚血流量基線進行採集後在圈內給以4μL辣椒素溶液，並塗抹均勻，於不同時間點分別採集O型圈內的皮膚血流量數據。根據各時間點血流值(血流t)計算各檢測點血流上升百分率(%)=(血流t-血流基線)/血流基線×100，並計算血流綜合增長率(%)=辣椒素處理側血流上升百分率-對照側血流上升百分率；根據血流綜合增長率計算各組血流量上升抑制
率(%)=(模型對照組血流綜合增長率平均值-給藥組血流綜合增長率)/模型對照組血流綜合增長率平均值×100。各抗體的血流綜合增長率以及血流上升抑制率如下表。
表33. 血流綜合增長率以及血流上升抑制率
結果表明，CP-3、CP-2和CP-1對辣椒素誘導的血流上升具有顯著的抑制效果。在可比的劑量條件下，CP-2相對於單特異性抗體C21H2L1具有顯著更好的活性，提示CGRP/PACAP雙特異性抗體具有協同效果。
雖然為了清楚的理解，已經借助於圖式和實例詳細描述了上述發明，但是描述和實例不應當解釋為限制本揭露的範圍。本文中引用的所有專利和科學文獻的公開內容藉由引用完整地清楚結合。
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Claims (20)
- 一種特異性結合CGRP和PACAP的抗原結合分子，其包含至少一個特異性結合CGRP的抗原結合模塊和至少一個特異性結合PACAP的抗原結合模塊，該特異性結合CGRP的抗原結合模塊包含重鏈可變區CGRP-VH和輕鏈可變區CGRP-VL，該特異性結合PACAP的抗原結合模塊包含重鏈可變區PACAP-VH和輕鏈可變區PACAP-VL；較佳地，該抗原結合分子在25℃條件下以小於1×10-10M的KD結合人CGRP，該KD是藉由表面電漿共振法測量的，和/或該抗原結合分子在25℃條件下以小於1×10-9M的KD結合大鼠CGRP，該KD是藉由表面電漿共振法測量的，和/或該抗原結合分子以小於1×10-9M的EC50結合PACAP38和PACAP27，該EC50是藉由ELISA所測量的，和/或該抗原結合分子不結合VIP，和/或該抗原結合分子在CGRP誘導的條件下以小於4×10-8M的IC50抑制細胞產生cAMP，和/或該抗原結合分子在PACAP誘導的條件下以小於2×10-8M的IC50抑制細胞產生cAMP。
- 如請求項1所述的抗原結合分子，其中(i)該CGRP-VH中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：83、46、76、77、78、79、80、81或82中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3的胺基酸序列，和該CGRP-VL中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：85、47或84中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3的胺基酸序列，或(ii)該CGRP-VH中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：72、44、68、69、70或71中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3的胺基酸序列，和該CGRP-VL中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：75、45、73或74中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3的胺基酸序列，或(iii)該CGRP-VH中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：40、54、55或56中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3的胺基酸序列，和該CGRP-VL中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：41、57或58中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3的胺基酸序列，或(iv)該CGRP-VH中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：42、59、60、61、62、63、64、65或66中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3的胺基酸序列，和該CGRP-VL中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：43或67中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3的胺基酸序列；較佳地，(i)該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：106、23、103、104或105的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或(ii)該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：101、17、100、102或192的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或(iii)該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：5、93、94或95的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：8的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或(iv)該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：11、96、97、98或99的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：14的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列的CGRP-LCDR3；更佳地，該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列的CGRP-LCDR3。
- 如請求項2所述的抗原結合分子，其中，(i)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：83、46、76、77、78、79、80、81或82的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：85、47或84的胺基酸序列，或(ii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：72、44、68、69、70或71的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：75、45、73或74的胺基酸序列，或(iii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：40、54、55或56的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：41、57或58的胺基酸序列，或(iv)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：42、59、60、61、62、63、64、65或66的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：43或67的胺基酸序列；較佳地，(i)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：83的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：85的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：46的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：47的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：76的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：77的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：78的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：79的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：80的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：81的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：82的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列；或(ii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：75的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：69的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：69的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：70的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列；或(iii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：56的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：58的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：56的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：58的胺基酸序列；或(iv)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：60的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：62的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：64的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：65的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：66的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列；更佳地，(i)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：83的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：85的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：81的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列；或(ii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：75的胺基酸序列。
- 如請求項1至3中任一項所述的抗原結合分子，其中(v)該PACAP-VH中的PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：87、48或86中的PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3的胺基酸序列，和該PACAP-VL中的PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：90、49、88或89中的PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3的胺基酸序列，或(vi)該PACAP-VH中的PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：50或91中的PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3的胺基酸序列，和該PACAP-VL中的PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：51或92中的PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3的胺基酸序列；較佳地，(v)該PACAP-VH具有：包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的PACAP-HCDR1、包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列的PACAP-HCDR2和包含SEQ ID NO：107或30的胺基酸序列的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列的PACAP-LCDR1、包含SEQ ID NO：108或32的胺基酸序列的PACAP-LCDR2和包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列的PACAP-LCDR3；或(vi)該PACAP-VH具有：包含SEQ ID NO：34的胺基酸序列的PACAP-HCDR1、包含SEQ ID NO：35或109的胺基酸序列的PACAP-HCDR2和包含SEQ ID NO：36的胺基酸序列的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列的PACAP-LCDR1、包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列的PACAP-LCDR2和包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列的PACAP-LCDR3；更佳地，該PACAP-VH具有：包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的PACAP-HCDR1、包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列的PACAP-HCDR2和包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列的PACAP-LCDR1、包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列的PACAP-LCDR2和包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列的PACAP-LCDR3。
- 如請求項4所述的抗原結合分子，其中，(v)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：87、48或86的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：90、49、88或89的胺基酸序列，或(vi)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：50或91的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：51或92的胺基酸序列；較佳地，(v)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：87的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：90的胺基酸序列，或該PACAP-VH包含SEQ ID NO：48的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：49的胺基酸序列，或該PACAP-VH包含SEQ ID NO：86的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：88的胺基酸序列，或該PACAP-VH包含SEQ ID NO：86的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：89的胺基酸序列；或(vi)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列，或該PACAP-VH包含SEQ ID NO：91的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：92的胺基酸序列；更佳地，(v)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：87的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：90的胺基酸序列。
- 如請求項1至5中任一項所述的抗原結合分子，其中，該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列的CGRP-LCDR3；和該PACAP-VH具有：包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的PACAP-HCDR1、包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列的PACAP-HCDR2和包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列的PACAP-LCDR1、包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列的PACAP-LCDR2和包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列的PACAP-LCDR3；較佳地，該CGRP-VH包含SEQ ID NO：83的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：85的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：81的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：75的胺基酸序列；和該PACAP-VH包含SEQ ID NO：87的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：90的胺基酸序列。
- 如請求項1至6中任一項所述的抗原結合分子，其中，該抗原結合分子還包含Fc區，該Fc區較佳為IgG Fc區，更佳為IgG1 Fc區；較佳地，該Fc區包含一個或多個胺基酸取代，所述的胺基酸取代能夠增加抗原結合分子的血清半衰期；更佳地，該Fc區是人IgG1 Fc區，並且252位置的胺基酸殘基為Y、254位置的胺基酸殘基為T和256位置的胺基酸殘基為E，編號依據為EU索引。
- 如請求項1至7中任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：- 兩個特異性結合CGRP的抗原結合模塊、- 兩個特異性結合PACAP的抗原結合模塊、和- Fc區：較佳地，該抗原結合分子包含：- 兩條具有式(a)所示結構的第一鏈、和- 兩條具有式(b)所示結構的第二鏈，式(a) [PACAP-VH]-[CH1]-[CGRP-VH]-[連接子1]-[CGRP-VL]-[連接子2]-[Fc區的一個亞基]，式(b) [PACAP-VL]-[CL]，式(a)和式(b)所示的結構是從N端至C端排列的，所述連接子1和該連接子2是相同或不同的肽連接子；更佳地，該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：113的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列的第二鏈；或該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：194的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：114的胺基酸序列的第二鏈；或該抗原結合分子具有：兩條包含SEQ ID NO：111的胺基酸序列的第一鏈和兩條包含SEQ ID NO：112的胺基酸序列的第二鏈。
- 如請求項1至7中任一項所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：- 一個特異性結合CGRP的抗原結合模塊、- 一個特異性結合PACAP的抗原結合模塊、和- Fc區，該Fc區包含能夠相互締合的第一亞基Fc1和第二亞基Fc2，該Fc1和Fc2各自獨立地具有一個或多個減少Fc區同源二聚化的胺基酸取代：較佳地，該Fc1具有根據杵臼技術的凸起結構，和該Fc2具有根據杵臼技術的孔結構；更佳地，該Fc1在366位置的胺基酸殘基為W；和該Fc2在366位置的胺基酸殘基為S、在368位置的胺基酸殘基為A、和在407位置的胺基酸殘基為V，編號依據為EU索引。
- 如請求項9所述的抗原結合分子，其中該特異性結合CGRP的抗原結合模塊和該特異性結合PACAP的抗原結合模塊兩者之一包含Titin鏈和Obscurin鏈，該Titin鏈和Obscurin鏈能夠形成二聚體；較佳地，該Titin鏈包含選自由SEQ ID NO：121至SEQ ID NO：139組成的組的胺基酸序列，該Obscurin鏈包含選自由SEQ ID NO：140至SEQ ID NO：180組成的組的胺基酸序列；更佳地，該Titin鏈包含SEQ ID NO：137的胺基酸序列，該Obscurin鏈包含SEQ ID NO：175的胺基酸序列。
- 如請求項10所述的抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含：- 一條具有式(c)所示結構的第一鏈、- 一條具有式(b)所示結構的第二鏈、- 一條具有式(d)所示結構的第三鏈、和- 一條具有式(e)所示結構的第四鏈；式(c) [PACAP-VH]-[CH1]-[Fc1]，式(b) [PACAP-VL]-[CL]，式(d) [CGRP-VH]-[連接子3]-[Titin鏈]-[Fc2]，式(e) [CGRP-VL]-[連接子4]-[Obscurin鏈]，式(c)、式(b)、式(d)和式(e)所示的結構是從N端至C端排列的，該連接子3和該連接子4是相同或不同的肽連接子；較佳地，該抗原結合分子具有：包含SEQ ID NO：117的胺基酸序列的第一鏈、包含SEQ ID NO：118的胺基酸序列的第二鏈、包含SEQ ID NO：119的胺基酸序列的第三鏈和包含SEQ ID NO：120的胺基酸序列的第四鏈。
- 一種分離的抗體，其能夠特異性結合CGRP，該抗體包含重鏈可變區CGRP-VH和輕鏈可變區CGRP-VL，其中(i)該CGRP-VH中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：83、46、76、77、78、79、80、81或82中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3的胺基酸序列，和該CGRP-VL中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：85、47或84中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3的胺基酸序列，或(ii)該CGRP-VH中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：72、44、68、69、70或71中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3的胺基酸序列，和該CGRP-VL中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：75、45、73或74中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3的胺基酸序列，或(iii)該CGRP-VH中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：40、54、55或56中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3的胺基酸序列，和該CGRP-VL中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：41、57或58中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3的胺基酸序列，或(iv)該CGRP-VH中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：42、59、60、61、62、63、64、65或66中的CGRP-HCDR1、CGRP-HCDR2和CGRP-HCDR3的胺基酸序列，和該CGRP-VL中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：43或67中的CGRP-LCDR1、CGRP-LCDR2和CGRP-LCDR3的胺基酸序列；較佳地，(i)該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：106、23、103、104或105的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或(ii)該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：101、17、100、102或192的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：19的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO： 20的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或(iii)該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：4的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：5、93、94或95的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：8的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：9的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或(iv)該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：11、96、97、98或99的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：14的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列的CGRP-LCDR3；更佳地，該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：22的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：106的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：25的胺基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列的CGRP-LCDR3，或該CGRP-VH具有：包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列的CGRP-HCDR1、包含SEQ ID NO：101的胺基酸序列的CGRP-HCDR2和包含SEQ ID NO：18的胺基酸序列的CGRP-HCDR3，和該CGRP-VL具有：包含SEQ ID NO：19的胺 基酸序列的CGRP-LCDR1、包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列的CGRP-LCDR2和包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列的CGRP-LCDR3。
- 如請求項12所述的分離的抗體，其中(i)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：83、46、76、77、78、79、80、81或82的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：85、47或84的胺基酸序列，或(ii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：72、44、68、69、70或71的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：75、45、73或74的胺基酸序列，或(iii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：40、54、55或56的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：41、57或58的胺基酸序列，或(iv)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：42、59、60、61、62、63、64、65或66的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：43或67的胺基酸序列；較佳地，(i)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：83的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：85的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：46的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：47的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：76的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：77的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：78的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：79的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：80的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：81的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：82的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列；或(ii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：75的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：69的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：69的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：70的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：73的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：74的胺基酸序列；或(iii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：55的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：56的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：57的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：58的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：56的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：58的胺基酸序列；或(iv)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：60的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：61的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：62的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：64的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：65的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：66的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列；更佳地，(i)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：83的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：85的胺基酸序列，或該CGRP-VH包含SEQ ID NO：81的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：84的胺基酸序列；或(ii)該CGRP-VH包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列，和該CGRP-VL包含SEQ ID NO：75的胺基酸序列。
- 一種分離的抗體，其能夠特異性結合PACAP，該抗體包含重鏈可變區PACAP-VH和輕鏈可變區PACAP-VL，其中(v)該PACAP-VH中的PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：87、48或86中的PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3的胺基酸序列，和該PACAP-VL中的PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：90、49、88或89中的PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3的胺基酸序列，或(vi)該PACAP-VH中的PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3分別包含SEQ ID NO：50或91中的PACAP-HCDR1、PACAP-HCDR2和PACAP-HCDR3的胺基酸序列，和該PACAP-VL中的PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3分別包含SEQ ID NO：51或92中的PACAP-LCDR1、PACAP-LCDR2和PACAP-LCDR3的胺基酸序列；較佳地，(v)該PACAP-VH具有：包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的PACAP-HCDR1、包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列的PACAP-HCDR2和包含SEQ ID NO：107或30的胺基酸序列的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列的PACAP-LCDR1、包含SEQ ID NO：108或32的胺基酸序列的PACAP-LCDR2和包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列的PACAP-LCDR3；或(vi)該PACAP-VH具有：包含SEQ ID NO：34的胺基酸序列的PACAP-HCDR1、包含SEQ ID NO：35或109的胺基酸序列的PACAP-HCDR2和包含SEQ ID NO：36的胺基酸序列的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：包含 SEQ ID NO：37的胺基酸序列的PACAP-LCDR1、包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列的PACAP-LCDR2和包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列的PACAP-LCDR3；更佳地，該PACAP-VH具有：包含SEQ ID NO：28的胺基酸序列的PACAP-HCDR1、包含SEQ ID NO：29的胺基酸序列的PACAP-HCDR2和包含SEQ ID NO：107的胺基酸序列的PACAP-HCDR3，和該PACAP-VL具有：包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列的PACAP-LCDR1、包含SEQ ID NO：108的胺基酸序列的PACAP-LCDR2和包含SEQ ID NO：33的胺基酸序列的PACAP-LCDR3。
- 如請求項14所述的分離的抗體，其中，(v)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：87、48或86的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：90、49、88或89的胺基酸序列，或(vi)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：50或91的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：51或92的胺基酸序列；較佳地，(v)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：87的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：90的胺基酸序列，或該PACAP-VH包含SEQ ID NO：48的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：49的胺基酸序列，或該PACAP-VH包含SEQ ID NO：86的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：88的胺基酸序列，或該PACAP-VH包含SEQ ID NO：86的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：89的胺基酸序列；或(vi)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：50的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：51的胺基酸序列，或該PACAP-VH包含SEQ ID NO：91的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：92的胺基酸序列；更佳地，(v)該PACAP-VH包含SEQ ID NO：87的胺基酸序列，和該PACAP-VL包含SEQ ID NO：90的胺基酸序列。
- 如請求項12至15中任一項所述的分離的抗體，其中該抗體是雙特異性抗體；較佳地，該雙特異性抗體特異性結合CGRP和PACAP。
- 一種醫藥組成物，其含有：治療有效量的如請求項1至11中任一項所述的抗原結合分子或如請求項12至16中任一項所述的分離的抗體，以及一種或更多種藥學上可接受的載體、稀釋劑、緩衝劑或賦形劑；較佳地，該醫藥組成物中還包含至少一種第二治療劑。
- 一種分離的核酸，其編碼如請求項1至11中任一項所述的抗原結合分子或如請求項12至16中任一項所述的分離的抗體。
- 一種宿主細胞，其包含如如請求項18所述的分離的核酸。
- 一種治療疾病的方法，該方法包括步驟：向受試者施用治療有效量的如請求項1至11中任一項所述的抗原結合分子、如請求項12至16中任一項所述的分離的抗體、或如請求項17所述的醫藥組成物；較佳地，該疾病是疼痛；更佳地，該疾病是頭痛；最佳地，該疾病是偏頭痛或叢集性頭痛。
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