TW202325742A - 使用 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑治療癌症 - Google Patents
使用 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑治療癌症 Download PDFInfo
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Abstract
本發明涉及治療癌症，特定而言涉及使用 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑治療癌症。
Description
本發明涉及治療癌症，特定而言涉及使用 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑治療癌症。
T 細胞活化雙特異性抗體是一類有前景的癌症療法，旨在讓細胞毒性 T 細胞對抗腫瘤細胞。這種抗體與 T 細胞上的 CD3 及腫瘤細胞上表現的抗原同時結合將迫使腫瘤細胞與 T 細胞之間發生暫時的相互作用，從而導致 T 細胞的活化及隨後腫瘤細胞的裂解。
WT1 (Wilms 腫瘤 1，Wilms 腫瘤蛋白) 是一種致癌轉錄因子，涉及細胞增生、分化以及細胞凋亡和器官發育，其在正常成人組織中的表現很少 (Hinrichs 及 Restifo, Nat Biotechnol (2013) 31, 999-1008)。然而，據報導，WT1 在若干類型之血液學惡性腫瘤及廣泛的實性瘤中過度表現 (Van Driessche 等人, Oncologist (2012) 17, 250-259)。WT1 為核蛋白，位於細胞內。細胞內蛋白質可在蛋白酶體中降解，加工並藉由主要組織相容性複合物 (MHC) I 作為 T 細胞抗原決定基呈現在細胞表面上，並由 T 細胞受體 (TCR) 識別。因此，源自 WT1 的肽在 HLA-A2 環境中呈現在細胞表面上，且可觸發 T 細胞識別。
WO 2019/122052 中已描述靶向 HLA-A2/WT1 的 T 細胞活化雙特異性抗體。此類 T 細胞活化雙特異性抗體可用於例如治療急性骨髓性白血病 (AML)。HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體 (「WT1-TCB」) 目前正在復發性/難治性 (r/r) AML 患者的 I 期臨床試驗中進行研究 (Augsberger 等人, Blood (2021) doi: 10.1182/blood.2020010477; NCT04580121)。
針對基於 T 細胞之免疫療法的可能的免疫逃脫機制是由骨髓的腫瘤微環境 (TME) 藉由共抑制 (co-inhibition) T 細胞或基質細胞遮蔽白血病細胞不受免疫效應細胞影響並減少 T 細胞活化。
為了最大限度地提高 HLA-A2/WT1 靶向 T 細胞活化抗體的治療效果，例如在 AML 中，因此需要克服 TME 的免疫抑制作用。
本發明藉由 HLA-A2/WT1 靶向 T 細胞活化雙特異性抗體與向 T 細胞提供正性共刺激訊息 (4-1BBL) 的 4-1BB (CD137) 促效劑 (特定而言為靶向諸如纖維母細胞活化蛋白 (FAP) 之類的基質 抗原的 4-1BB (CD137) 促效劑) 之組合治療，來克服 TME 的上述免疫抑制作用並增強 T 細胞反應。在白血病細胞重構骨髓微環境 (niche) 後，FAP 在癌症相關纖維母細胞上被上調，且因此 4-1BB (CD137) 促效劑的 FAP 特異性提供了嚴格限制於腫瘤微環境的 T 細胞共刺激。
本發明人發現，與單獨使用 HLA-A2/WT1 靶向 T 細胞活化雙特異性抗體相比，HLA-A2/WT1 靶向 T 細胞活化雙特異性抗體與 4-1BB (CD137) 促效劑的組合導致在 AML 中的活性增強。
使用原發性 AML 細胞，本發明人驚訝地發現，在表現 FAP 的纖維母細胞存在下由 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體誘導的腫瘤細胞裂解不僅得到恢復，而且藉由添加 4-1BB 促效劑 FAP-4-1BBL 甚至得以增強。
因此，在第一態樣中，本發明提供了一種用於治療個體的癌症之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體，其中該治療包含將 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體與 4-1BB (CD137) 促效劑組合投予。
在又一態樣中，本發明提供了一種用於治療個體的癌症之 4-1BB (CD137) 促效劑，其中該治療包含將 4-1BB (CD137) 促效劑與 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體組合投予。
在一個態樣中，本發明提供了一種 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體在製造用於治療個體的癌症之藥物中的用途，其中該治療包含將 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體與 4-1BB (CD137) 促效劑組合投予。
在又一態樣中，本發明提供了一種 4-1BB (CD137) 促效劑在製造用於治療個體的癌症之藥物中的用途，其中該治療包含將 4-1BB (CD137) 促效劑與 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體組合投予。
在又另一態樣中，本發明提供了一種治療個體的癌症之方法，其包含向個體投予 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑。
在一個態樣中，本發明還提供了一種套組，其包含含有 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體的第一藥物及含有 4-1BB (CD137) 促效劑的第二藥物，且視情況進一步包含藥品仿單，該藥品仿單包含用於將第一藥物與第二藥物組合投予以治療個體的癌症之說明。
以上及本文所述的 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BB (CD137) 促效劑、方法、用途或套組可以單獨或組合地併入以下描述的任何特徵 (除非上下文另有說明)。
本文所述的 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體為特異性結合至 CD3 及 HLA-A2/WT1，特定而言 HLA-A2/WT1
RMF的雙特異性抗體。用於本發明的特別有用的 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體描述於例如 PCT 公開案第 WO 2019/122052 號 (該公開案全文以引用方式併入本文) 中。
術語「雙特異性 (bispecific)」意指抗體能夠與至少二個不同的抗原決定位特異性結合。通常，雙特異性抗體包含兩個抗原結合位點，其中每個抗原結合位點對不同抗原決定位具有特異性。在某些方面，雙特異性抗體能夠同時結合兩個抗原決定位，特定而言在兩種不同細胞上表現之兩個抗原決定位。
如本文所使用，術語「抗原決定位」與「抗原」及「表位」同義，且是指多肽大分子上與抗原結合部分結合，形成抗原結合部分-抗原複合物的位點(例如，胺基酸之相鄰延伸或由非相鄰胺基酸之不同區域組成的構形組態)。例如，可用之抗原決定位可存在於腫瘤細胞之表面上、受病毒感染之細胞之表面上、其他患病細胞之表面上、免疫細胞的表面上，不存在於血清中，及/或存在於細胞外基質 (ECM) 中。
如本文中所使用的術語「抗原結合部分 (antigen binding moiety)」，係指特異性結合抗原決定位之多肽分子。在一個態樣中，抗原結合部分能夠將其所附著的實體 (例如第二抗原結合部分) 導引至標靶位點，例如導引至載有抗原決定位的特定類型之腫瘤細胞。在另一態樣中，抗原結合部分能夠藉由其標靶抗原 (例如 T 細胞受體複合體抗原) 活化傳訊。抗原結合部分包括如本文進一步定義的抗體及其片段。特定抗原結合部分包括抗體之抗原結合域，其包含抗體重鏈可變區及抗體輕鏈可變區。在某些方面，抗原結合部分可包括如本文進一步定義及本技術中已知之抗體恆定區。可用之重鏈恆定區包括五種同型 (isotype) 中之任一者：α、δ、ε、γ 或 μ。可用之輕鏈恆定區包括二種同型中之任一者：κ 及 λ。
「特異性結合」意指結合對抗原具有選擇性且可區分出非所欲或非特定之相互作用。抗原結合部分結合特異性抗原決定位之能力可藉由酶聯免疫吸附檢定 (ELISA) 或熟習此項技術者熟悉的其他技術，例如表面電漿子共振 (SPR) 技術 (例如於BIAcore儀器上分析) (Liljeblad 等人，Glyco J 17，323-329 (2000)) 及傳統的結合檢定 (Heeley，Endocr Res 28，217-229 (2002)) 來測定。在一個態樣中，抗原結合部分結合不相關的蛋白質之程度小於抗原結合部分結合抗原的約 10%，例如藉由 SPR 測定。在某些方面，與抗原結合之抗原結合部分或包含該抗原結合部分之抗體具有 ≤ 1 μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM 或 ≤ 0.001 nM（例如 10
-8M 或更小，例如 10
-8M 至 10
-13M，例如，10
-9M 至 10
-13M）之解離常數 (K
D)。
「親和力」指分子 (例如受體) 之單個結合位點與其結合配偶體 (例如配體) 之間的非共價相互作用總和的強度。除非另有說明，否則如本文中所使用的「結合親和力」，是指反映結合對成員 (例如，抗原結合部分及抗原或受體及其配體) 之間 1:1 相互作用之內在結合親和力。分子 X 對其搭配物 Y 之親和力通常可以解離常數 (K
D)表示，其是解離速率常數與締合速率常數 (分別為 k
off及 k
on) 之比。因此，等效親和力可包括不同速率常數，只要速率常數比保持相同即可。可透過本領域已知的既定方法測量親和力，該方法包括那些本文所述之方法。用於測定親和力之特定方法為表面電漿子共振 (SPR)。
除非另有說明，否則「CD3」係指源自任何脊椎動物的任何天然 CD3，該脊椎動物包括哺乳動物，諸如靈長類動物 (例如人)、非人靈長類動物 (例如食蟹獼猴) 及囓齒動物 (例如小鼠及大鼠)。該術語涵蓋「全長」、未處理之 CD3 以及在細胞處理中得到的任何形式的 CD3。該術語亦涵蓋天然 CD3 變異體，例如剪接變異體或等位基因變異體。在一個方面中，CD3 是人 CD3，特定而言人 CD3 的 ε 次單元 (CD3ε)。人類 CD3ε 的胺基酸序列顯示於 UniProt (www.uniprot.org) 登錄號 P07766 (版本 144) 或 NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_000724.1。亦可參見 SEQ ID NO: 27。食蟹獼猴 [Macaca fascicularis] CD3ε 的胺基酸序列顯示於 NCBI GenBank 號 BAB71849.1。亦可參見 SEQ ID NO: 28。
除非另有說明，否則「WT1」，亦稱為「Wilms 腫瘤 1」或「Wilms 腫瘤蛋白」係指來自任何脊椎動物來源之任何天然 WT1，該脊椎動物來源包括哺乳動物，諸如靈長類動物 (例如人)、非人靈長類動物 (例如食蟹獼猴) 及囓齒動物 (例如小鼠及大鼠)。該術語涵蓋「全長」、未處理之 WT1 以及在細胞處理中得到的任何形式的 WT1。該術語亦涵蓋天然 WT1 變異體，例如剪接變異體或等位基因變異體。在一個方面，WT1 是人 WT1，特定而言 SEQ ID NO: 23 之蛋白質。人 WT1 描述於 UniProt (www.uniprot.org) 登錄號 P19544 (輸入版本 215) 中，且人 WT1 之胺基酸序列亦示於 SEQ ID NO: 23 中。
「VLD」、「VLD 肽」或「WT1
VLD」意指具有胺基酸序列 VLDFAPPGA (SEQ ID NO: 24；SEQ ID NO: 23 之 WT1 蛋白質的位置 37-45) 之 WT1 衍生肽。
「RMF」、「RMF 肽」或「WT1
RMF」意指具有胺基酸序列 RMFRNAPYL (SEQ ID NO: 25；SEQ ID NO: 23 之 WT1 蛋白質的位置 126-134) 之 WT1 衍生肽。
「HLA-A2」、「HLA-A*02」、「HLA-A02」或「HLA-A*2」 (可互換使用) 係指 HLA-A 血清型組中之人白血球抗原血清型。HLA-A2 蛋白質 (由相應的 HLA 基因編碼) 構成相應的 I 類 MHC (主要組織相容性複合物) 蛋白質之 α 鏈，其進一步包含 β2 微球蛋白次單元。特異性 HLA-A2 蛋白質是 HLA-A201 (亦稱為 HLA-A0201、HLA-A02.01 或 HLA-A*02:01)。在特定態樣中，本文所述的 HLA-A2 蛋白質是 HLA-A201。人 HLA-A2 之例示性序列於 SEQ ID NO: 26 中給出。
「HLA-A2/WT1」係指 HLA-A2 分子與 WT1 衍生肽 (在本文中亦稱為「WT1 肽」)，具體而言 RMF 或 VLD 肽 (分別為「HLA-A2/WT1
RMF」及「HLA-A2/WT1
VLD」) 的複合物。本發明中使用的雙特異性抗體可以與 HLA-A2/WT1
RMF或 HLA-A2/WT1
VLD複合物特異性結合。
如本文中所使用的關於 Fab 分子等的術語「第一」、「第二」或「第三」，係用於方便區分每一類型之部分何時存在多於一個。除非明確說明，否則使用此等術語並非旨在賦予雙特異性抗體特定之順序或方向。
如本文中所使用的術語「化合價 (valent)」，表示抗體中存在指定數量之抗原結合位點。因此，術語「單價結合抗原 (monovalent binding to an antigen)」表示抗體中存在對抗原具有特異性之一個 (且不超過一個) 抗原結合位點。
本文中的術語「抗體」以最廣義使用且涵蓋各種抗體結構，包括但不限於單株抗體、多株抗體、多特異性抗體 (例如雙特異性抗體) 及抗體片段，只要其等展示出預期抗原-結合活性即可。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用，係指具有與天然抗體結構大致類似的結構之抗體。
「抗體片段」係指除完整抗體以外的分子，其包含結合完整抗體所結合的抗原之完整抗體的一部分。抗體片段之實例包括 (但不限於) Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F (ab')
2、雙功能抗體、線性抗體、單鏈抗體分子 (例如 scFv) 及單域抗體。關於某些抗體片段的綜述，參見 Hudson 等人，Nat Med 9，129-134 (2003)。關於 scFv 片段的綜述，請參見 Pluckthün，The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第 113 卷，Rosenburg 及 Moore 編，Springer-Verlag，New York，第 269-315 頁 (1994)；亦可參見 WO 93/16185；及美國專利第 5,571,894 號及第 5,587,458 號。關於包含補救受體結合抗原決定位殘基且具有增加的體內半衰期之 Fab 及 F(ab')
2片段的論述，參見美國第 5,869,046 號專利。雙功能抗體為具有兩個抗原結合位點 (其可係二價或雙特異性的) 之抗體片段。參見例如 EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson 等人，Nat Med 9，129-134 (2003)；及 Hollinger 等人，Proc Natl Acad Sci USA 90，6444-6448 (1993)。Hudson 等人，Nat Med 9，129-134 (2003) 中亦描述三功能抗體及四功能抗體。單域抗體為包含抗體之重鏈可變域之全部或部分或抗體之輕鏈可變域之全部或部分之抗體片段。在某些方面，單域抗體為人單域抗體 (Domantis, Inc., Waltham, MA；參見例如美國專利號 6,248,516 B1)。抗體片段可透過各種技術製造，包括但不限於如本文所述之完整抗體的蛋白水解消化以及重組宿主細胞 (例如大腸桿菌或噬菌體) 的產生。
術語「可變區 (variable region)」或「可變域 (variable domain)」係指參與抗體與抗原結合的抗體重鏈或輕鏈之域。天然抗體之重鏈及輕鏈 (分別為 VH 及 VL) 之可變域通常具有類似的結構，且每個域均包含四個保守性骨架區 (FR) 及三個高度可變區 (HVR)。請參見 Kindt
等人，Kuby Immunology，第 6 版，W.H. Freeman 和 Co.，第 91 頁 (2007)。單個 VH 或 VL 域可能足以賦予抗原結合特異性。如在本文中結合可變區序列所使用的「Kabat 編號」，是指 Kabat 等人，
Sequences of Proteins of Immunological Interest，第 5 版 Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda, MD (1991) 描述的編號系統。
如本文中所使用的重鏈及輕鏈之所有恆定區及域之胺基酸位置，根據描述於 Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第 5 版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD (1991) 的 Kabat 編號系統 (在本文中稱為「根據 Kabat 編號」或「Kabat 編號」) 編號。具體言之，Kabat 編號系統 (參見 Kabat 等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第 5 版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD (1991) 的第 647-660 頁) 用於卡帕及蘭姆達同型之輕鏈恆定域 CL 及 Kabat 及 EU 索引編號系統 (參見第 661-723 頁) 用於重鏈恆定域 (CH1、鉸鏈、CH2 及 CH3)，在此情況中，其於本文中透過參考「根據 Kabat EU 索引編號」進一步闡明。
如本文所用，術語「高度可變區」或「HVR」是指抗體可變域中序列高度可變並確定抗原結合特異性的各個區，例如「互補決定區」(「CDR」)。通常，抗體包括六個 CDR：三個在 VH 中 (HCDR1、HCDR2、HCDR3)，及三個在 VL 中 (LCDR1、LCDR2、LCDR3)。在本文中，例示性 CDR 包括：
(a) 高度可變環存在於胺基酸殘基 26-32 (L1)、50-52 (L2)、91-96 (L3)、26-32 (H1)、53-55 (H2)、及 96-101 (H3) 處 (Chothia 及 Lesk，
J. Mol. Biol.196:901-917 (1987))；
(b) CDR 存在於胺基酸殘基 24-34 (L1)、50-56 (L2)、89-97 (L3)、31-35b (H1)、50-65 (H2)、及 95-102 (H3)處 (Kabat et al.
, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991))；及
(c) 抗原接觸存在於胺基酸殘基 27c-36 (L1)、46-55 (L2)、89-96 (L3)、30-35b (H1)、47-58 (H2)、及 93-101 (H3) 處 (MacCallum 等人
J. Mol. Biol.262: 732-745 (1996))。
除非另有說明，否則
CDR 根據 Kabat 等人在上述文獻中所述之方法來確定。本領域之技術人員將理解，也可以根據
Chothia 在上述文獻、McCallum 在上述文獻中所述之方法或任何其他科學上接受之命名系統來確定 CDR 名稱。
「骨架」或「FR」係指除高度可變區 (HVR) 殘基之外的可變域殘基。可變域之 FR 通常由四個 FR 域組成：FR1、FR2、FR3、及 FR4。因此，HVR 及 FR 序列通常以如下順序出現在 VH (或 VL) 中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
抗體或免疫球蛋白之「類別 (class)」是指為其重鏈所具有的恆定域或恆定區之類型。有五大類抗體：IgA、IgD、IgE、IgG 及 IgM，且該等種類中之若干種可進一步分為亞類 (同型)，例如 IgG
1、IgG
2、IgG
3、IgG
4、IgA
1及 IgA
2。對應於不同類別之免疫球蛋白的重鏈恆定域分別稱為 α、δ、ε、γ 及 μ。
「Fab 分子」係指由重鏈 (「Fab 重鏈」)之 VH 及 CH1 域及免疫球蛋白之輕鏈 (「Fab 輕鏈」)之 VL 及 CL 域組成之蛋白質。
「互換型 (crossover)」Fab 分子 (亦稱為「Crossfab」) 意指 Fab 分子，其中 Fab 重鏈及 Fab 輕鏈之可變域或恆定域被交換 (即彼此替換)，即，互換型 Fab 分子包含由輕鏈可變域 VL 及重鏈恆定域 1 CH1 組成之肽鏈 (VL-CH1，在 N 端至 C 端方向中)、及由重鏈可變域 VH 及輕鏈恆定域 CL 組成之肽鏈 (VH-CL，在 N 端至 C 端方向中)。為清楚起見，在 Fab 輕鏈及 Fab 重鏈之可變域被交換之互換型 Fab 分子中，包含重鏈恆定域 1 CH1 之肽鏈在本文中稱為 (互換型) Fab 分子之「重鏈」。相反地，在 Fab 輕鏈及 Fab 重鏈之恆定域被交換之互換型 Fab 分子中，包含重鏈可變域 VH 之肽鏈在本文中稱為 (互換型) Fab 分子之「重鏈」。
與此相反，「習用」 Fab 分子意指其自然形式 (即包含由重鏈可變域及恆定域組成之重鏈 (VH-CH1，在 N 端至 C 端方向中) 及由輕鏈可變域及恆定域組成之輕鏈 (VL-CL，在 N 端至 C 端方向中)) 之 Fab 分子。
術語「免疫球蛋白分子 (immunoglobulin molecule)」係指具有天然生成之抗體之結構之蛋白質。例如，IgG 類的免疫球蛋白為約 150,000 道耳頓、由二條輕鏈及二條重鏈經二硫鍵鍵合所構成之異四聚體糖蛋白。從 N 端至 C 端，每條重鏈具有可變域 (VH)，亦稱為重鏈可變域或重鏈可變區，接著係三個恆定域 (CH1、CH2 及 CH3)，亦稱為重鏈恆定區。類似地，從 N 端至 C 端，每條輕鏈具有可變域 (VL)，亦稱為輕鏈可變域或輕鏈可變區，接著為輕鏈恆定 (CL) 域，亦稱為輕鏈恆定區。免疫球蛋白之重鏈可被歸類為五種類型中的一種，稱為 α (IgA)、δ (IgD)、ε (IgE)、γ (IgG) 或μ (IgM)，其中一些可進一步分為亞型，例如γ
1(IgG
1)、γ
2(IgG
2)、γ
3(IgG
3)、γ
4(IgG
4)、α
1(IgA
1) 及 α
2(IgA
2)。基於其恆定域之胺基酸序列，免疫球蛋白之輕鏈可被歸類為兩種類型中的一種，稱為卡帕 (κ) 及蘭姆達 (λ)。免疫球蛋白基本上由經由免疫球蛋白鉸鏈區連接的二個 Fab 分子及一個 Fc 域組成。
本文中的術語「Fc 域」或「Fc 區域」，用於定義包含至少一部分恆定區的免疫球蛋白重鏈的 C 端區域。該術語包括天然序列 Fc 區域和變異體 Fc 區域。儘管 IgG 重鏈之 Fc 區之邊界可能略有變化，但通常將人 IgG 重鏈之 Fc 區定義為從 Cys226 或 Pro230 延伸至該重鏈之羧基端。但是，由宿主細胞產生的抗體可能經歷重鏈 C 端的一種或多種，特別是一種或兩種胺基酸之轉譯後切割。因此，由宿主細胞藉由表現編碼全長重鏈的特定核酸分子而產生的抗體可包括全長重鏈，或者可包括全長重鏈的切割變異體。可能是這種情況，其中重鏈的最後兩個 C 端胺基酸為甘胺酸 (G446) 及離胺酸 (K447，根據 Kabat EU 索引編號)。因此，可以存在或可以不存在 Fc 區域之 C 端離胺酸 (Lys447) 或 C 端甘胺酸 (Gly446) 及離胺酸 (K447)。除非本文另有說明，否則 Fc 區或恆定區中胺基酸殘基之編號根據 EU 編號系統 (也稱為 EU 索引) 進行，如 Kabat 等人所述 (Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991) (另見上文)。如本文中所使用的 Fc 域之「次單元」，是指形成二聚體 Fc 域之兩個多肽之一，即包含能夠穩定自締合之免疫球蛋白重鏈之 C 端恆定區之多肽。例如，IgG Fc 域之次單元包含 IgG CH2 及 IgG CH3 恆定域。
「促進 Fc 域之第一次單元及第二次單元之締合之修飾」係對胜肽主鏈的操作或對 Fc 域次單元之轉譯後修飾，其減少或阻止包含 Fc 域次單元之多肽與相同多肽之締合形成同源二聚體。本文所用之促進締合之修飾，特別包括對期望締合之兩個 Fc 域次單元 (即 Fc 域之第一次單元及第二次單元) 中的每一個所進行之單獨修飾，其中，該修飾彼此互補，以便促進兩個 Fc 域次單元之締合。例如，促進締合之修飾可改變一個或兩個 Fc 域次單元之結構或電荷，以分別使其在空間或靜電上有利。因此，(雜)二聚化發生在包含第一 Fc 域次單元之多肽與包含第二 Fc 域次單元之多肽之間，其就進一步融合到每個次單元 (例如，抗原結合部分) 的組分而言可能有所不同。在一些方面，促進締合之修飾包含 Fc 域中之胺基酸突變，特別是胺基酸取代。在特定態樣中，促進締合之修飾包含 Fc 域之兩個次單元的每一個中之單獨的胺基酸突變，特定而言胺基酸取代。
術語「效應功能」，係指歸因於抗體的 Fc 區的那些生物活性，其隨抗體同型而變化。抗體效用功能的實例包括：C1q 結合及補體依賴性細胞毒性 (CDC)、Fc 受體結合、抗體依賴型細胞媒介的細胞毒性 (ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用 (ADCP)、細胞激素分泌、抗原呈現細胞攝取之免疫錯合物媒介抗原、細胞表面受體 (例如，B 細胞受體) 降調及 B 細胞活化。
相對於參考多肽序列所述之「百分比 (%) 胺基酸序列同一性」，是指候選序列中胺基酸殘基與參考多肽序列中之胺基酸殘基相同之百分比，在比對序列並引入差異後 (如有必要)，可實現最大的序列同一性百分比，並且不考慮將任何保守取代作為序列同一性之一部分。為確定胺基酸序列同一性百分比之目的而進行的比對可透過本領域中技術範圍內之各種方式實現，例如，使用公開可用的電腦軟體諸如 BLAST、BLAST-2、Clustal W、Megalign (DNASTAR) 軟件或 FASTA 程式套件實現。本領域之技術人員可確定用於比對序列之合適參數，包括在所比較之序列全長上實現最大比對所需之任何算法。但是，出於本文之目的，使用 FASTA 封裝 36.3.8c 版或更高版本的 ggsearch 程式及 BLOSUM50 比較矩陣來生成 % 胺基酸序列同一性值。FASTA 程式包由以下作者開發：W. R. W. R. Pearson and D. J. Lipman (1988), “Improved Tools for Biological Sequence Analysis”, PNAS 85:2444-2448；W. R. Pearson (1996) “Effective protein sequence comparison” Meth. Enzymol. 266:227- 258；及 Pearson et. al.(1997) (Genomics 46:24-36)，並可從以下網址公開存取：http://fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/fasta_down.shtml。可替代地，可使用透過 http://fasta.bioch.virginia.edu/fasta_www2/index.cgi 存取的公用伺服器，使用 ggsearch (global protein:protein) 程式和預設選項 (BLOSUM50; open: -10; ext: -2; Ktup = 2) 比較序列，以確保執行全局而不是局部比對。胺基酸同一性百分比提供於輸出比對標題中。
「活化 Fc 受體」為在抗體之 Fc 域參與之後引起刺激受體攜帶細胞進行效應功能的傳訊事件的 Fc 受體。人活化 Fc 受體包括 FcγRIIIa (CD16a)、FcγRI (CD64)、FcγRIIa (CD32) 和 FcαRI (CD89)。
「減少結合」，例如減少結合 Fc 受體，係指 (例如) 藉由 SPR 測得各自相互作用之親和力降低。為清楚起見，該術語亦包括將親和力降低至零 (或低於分析方法的檢測限度)，即相互作用完全廢除。相反，「增加結合」係指各自相互作用之結合親和性增加。
「融合」意指組分 (例如 Fab 分子及 Fc 域次單元) 經肽鍵直接或經由一或多個肽連接子連接。
HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體包含特異性結合至 CD3 的第一抗原結合部分，及特異性結合至 HLA-A2/WT1，特定而言 HLA-A2/WT1
RMF的第二抗原結合部分。
在一個態樣中，第一抗原結合部分包含：含有 SEQ ID NO: 1 之重鏈 CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 2 之 HCDR2 及 SEQ ID NO: 3 之 HCDR3 的重鏈可變區；及含有 SEQ ID NO: 4 之輕鏈 CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 5 之 LCDR2 及 SEQ ID NO: 6 之 LCDR3 的輕鏈可變區。
在一個態樣中，第二抗原結合部分包含：含有 SEQ ID NO: 9 之重鏈 CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 10 之 HCDR2 及 SEQ ID NO: 11 之 HCDR3 的重鏈可變區；及含有 SEQ ID NO: 12 之輕鏈 CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 13 之 LCDR2 及 SEQ ID NO: 14 之 LCDR3 的輕鏈可變區。
在特定態樣中，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體包含
(i) 第一抗原結合部分，其特異性結合至 CD3 且包含：含有 SEQ ID NO: 1 之重鏈 CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 2 之 HCDR2 及 SEQ ID NO: 3 之 HCDR3 的重鏈可變區；及含有 SEQ ID NO: 4 之輕鏈 CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 5 之 LCDR2 及 SEQ ID NO: 6 之 LCDR3 的輕鏈可變區；以及
(ii) 第二抗原結合部分，其特異性結合至 HLA-A2/WT1 且包含：含有 SEQ ID NO: 9 之重鏈 CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 10 之 HCDR2 及 SEQ ID NO: 11 之 HCDR3 的重鏈可變區；及含有 SEQ ID NO: 12 之輕鏈 CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 13 之 LCDR2 及 SEQ ID NO: 14 之 LCDR3 的輕鏈可變區。
在一個態樣中，第一抗原結合部分包含：重鏈可變區序列，其與 SEQ ID NO: 7 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同；及輕鏈可變區序列，其與 SEQ ID NO: 8 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同。
在一個態樣中，第一抗原結合部分包含 SEQ ID NO: 7 之重鏈可變區序列及 SEQ ID NO: 8 之輕鏈可變區序列。
在一個態樣中，第二抗原結合部分包含：重鏈可變區序列，其與 SEQ ID NO: 15 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同；及輕鏈可變區序列，其與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同。
在一個態樣中，第二抗原結合部分包含 SEQ ID NO: 15 之重鏈可變區序列及 SEQ ID NO: 16 之輕鏈可變區序列。
在一些方面，第一抗原結合部分和/或第二抗原結合部分為 Fab 分子。在一些方面，第一抗原結合部分是互換型 Fab 分子，其中 Fab 輕鏈和 Fab 重鏈的可變區或恆定區被交換。在此類方面，第二抗原結合部分較佳是習用 Fab 分子。
在一些態樣中，其中雙特異性抗體之第一抗原結合部分及第二抗原結合部分兩者均為 Fab 分子，並且在抗原結合部分之一 (特定而言第一抗原結合部分) 中，Fab 輕鏈及 Fab 重鏈之可變域 VL 和 VH 彼此取代，
i) 在第一抗原結合部分之恆定域 CL 中，位置 124 的胺基酸被帶正電荷之胺基酸 (根據 Kabat 編號) 取代，且其中，在第一抗原結合部分之恆定域 CH1 中，位置 147 的胺基酸或位置 213 的胺基酸被帶負電荷之胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 取代；或
ii) 在第二抗原結合部分之恆定域 CL 中，位置 124 的胺基酸被帶正電荷之胺基酸 (根據 Kabat 編號) 取代，且其中，在第二抗原結合部分之恆定域 CH1 中，位置 147 的胺基酸或位置 213 的胺基酸被帶負電荷之胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 取代。
雙特異性抗體不包含 i) 及 ii) 下所提及的修飾。具有 VH/VL 交換之抗原結合部分之恆定域 CL 和 CH1 未彼此取代 (即保留未交換狀態)。
在一個更具體之方面中，
i) 在第一抗原結合部分之恆定域 CL 中，位置 124 的胺基酸被離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或 組胺酸 (H) (根據 Kabat 編號) 獨立取代，並且在第一抗原結合部分之恆定域 CH1 中，位置 147 的胺基酸或位置 213 的胺基酸被麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) (根據 Kabat EU 索引編號) 獨立取代；或
ii) 在第二抗原結合部分之恆定域 CL 中，位置 124 的胺基酸被離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) (根據 Kabat 編號) 獨立取代，並且在第二抗原結合部分之恆定域 CH1 中，位置 147 的胺基酸或位置 213 的胺基酸被麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) (根據 Kabat EU 索引編號) 獨立取代。
在一個此類態樣中，在第二抗原結合部分之恆定域 CL 中，位置 124 處的胺基酸獨立地經離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 取代 (根據 Kabat 編號)，並且在第二抗原結合部分之恆定域 CH1 中，位置 147 處的胺基酸或位置 213 的胺基酸獨立地經麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。
在又一態樣中，在第二抗原結合部分之恆定域 CL 中，位置 124 處的胺基酸獨立地經離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 取代 (根據 Kabat 編號)，並且在第二抗原結合部分之恆定域 CH1 中，位置 147 處的胺基酸獨立地經麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。
在較佳的方面，在第二抗原結合部分之恆定域 CL 中，位置 124 處之胺基酸獨立地經離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) (根據 Kabat 編號) 取代，且位置 123 處之胺基酸獨立地經離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) (根據 Kabat 編號) 取代，並且在第二抗原結合部分之恆定域 CH1 中，位置 147 處之胺基酸獨立地經麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) (根據 Kabat EU 索引編號) 取代，且位置 213 處之胺基酸獨立地經麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) (根據 Kabat EU 索引編號) 取代。
在一個態樣中，在第二抗原結合部分之恆定域 CL 中，位置 124 的胺基酸經離胺酸 (K) 取代 (根據 Kabat 編號)，且位置 123 的胺基酸經離胺酸 (K) 取代 (根據 Kabat 編號)，並且在第二抗原結合部分之恆定域 CH1 中，位置 147 的胺基酸經麩胺酸 (E) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)，且位置 213 的胺基酸經麩胺酸 (E) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。
在一個態樣中，在第二抗原結合部分之恆定域 CL 中，位置 124 處的胺基酸經離胺酸 (K) 取代 (根據 Kabat 編號)，且位置 123 處的胺基酸經精胺酸 (R) 取代 (根據 Kabat 編號)，並且在第二抗原結合部分之恆定域 CH1 中，位置 147 處的胺基酸經麩胺酸 (E) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)，且位置 213 處的胺基酸經麩胺酸 (E) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。
在特定的方面，如果根據上述方面之胺基酸取代發生在第二抗原結合部分之恆定域 CL 及恆定域 CH1 中，則第二抗原結合部分之恆定域 CL 為 κ 同型。
在一些方面，第一抗原結合部分與第二抗原結合部分彼此融合，視情況經由肽連接子彼此融合。
在一些方面，第一抗原結合部分和第二抗原結合部分各自為 Fab 分子，且 (i) 第二抗原結合部分在 Fab 重鏈的 C 端與第一抗原結合部分的 Fab 重鏈的 N 端融合，或 (ii) 第一抗原結合部分在 Fab 重鏈的 C 端與第二抗原結合部分的 Fab 重鏈的 N 端融合。
在一些態樣中，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體提供與 CD3 之單價結合。
在特定態樣中，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體包含特異性結合至 CD3 之單個抗原結合部分及特異性結合至 HLA-A2/WT1 之兩個抗原結合部分。因此，在一些態樣中，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體包含特異性結合至 HLA-A2/WT1 的第三抗原結合部分，特定而言 Fab 分子，更特定而言習用 Fab 分子。第三抗原結合部分可以單獨或組合地併入上文描述的與第二抗原結合部分相關的所有特徵 (例如 CDR 序列、可變區序列及/或恆定區中的胺基酸取代)。在一些方面，第三抗原部分與第一抗原結合部分相同（例如也是習用 Fab 分子並包含相同的胺基酸序列）。
在特定態樣中，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體進一步包含 Fc 域，該 Fc 域由第一次單元及第二次單元構成。在一個態樣中，Fc 域為 IgG Fc 域。在特定態樣中，Fc 域為 IgG
1Fc 域。在另一方面中，Fc 域為 IgG
4Fc 域。在一個更具體之方面中，Fc 域為 IgG
4Fc 域，其包含在位置 S228 (根據 Kabat EU 索引編號) 的胺基酸取代，特定而言胺基酸取代 S228P。該胺基酸取代減少活體內
IgG
4抗體之 Fab 臂交換 (參見 Stubenrauch 等人，Drug Metabolism and Disposition 38，84-91 (2010))。在進一步特定態樣中，Fc 域為人 Fc 域。在特定較佳的態樣中，Fc 域為人 IgG
1Fc 域。人類 IgG
1Fc 區的一個示例性序列在 SEQ ID NO: 29 中給出。
在一些方面，其中該第一抗原結合部分、該第二抗原結合部分和 (在存在時之) 第三抗原結合部分各自為 Fab 分子，(a) 該第二抗原結合部分在該 Fab 重鏈的 C 端與該第一抗原結合部分的該 Fab 重鏈的 N 端融合，且該第一抗原結合部分在該 Fab 重鏈的 C 端與該 Fc 域的該第一次單元的 N 端融合，亦或是 (ii) 該第一抗原結合部分在該 Fab 重鏈的 C 端與該第二抗原結合部分的該 Fab 重鏈的 N 端融合，且該第二抗原結合部分在該 Fab 重鏈的 C 端與該 Fc 域的該第一次單元的 N 端融合；且 (b) 該第三抗原結合部分 (在存在時之) 在該 Fab 重鏈的 C 端與該 Fc 域的該第二次單元的 N 端融合。
在特定的方面，Fc 域包含促進 Fc 域之第一次單元與第二次單元之締合的修飾。人 IgG Fc 域之兩個次單元之間最廣泛的蛋白質-蛋白質相互作用位點在 CH3 域中。因此，於一個態樣中，該修飾在 Fc 域之 CH3 域中進行。
在一個具體態樣中，該促進 Fc 域之第一次單元及第二次單元之締合之修飾為所謂的「杵臼 (knob-into-hole)」修飾，其包括在 Fc 域之兩個次單元中的一個的「杵」修飾及 Fc 域之兩個次單元中的另一個的「臼」修飾。「杵臼」技術描述於例如：US 5,731,168；US 7,695,936；Ridgway 等人，Prot Eng 9，617-621 (1996)；及 Carter，J Immunol Meth 248，7-15 (2001)。通常，該方法包括在第一多肽之界面處引入一個突起 (「杵」)，並且在第二多肽之界面中引入一個對應的空腔 (「臼」)，以使該突起可定位於空腔中，從而促進異源二聚體形成並阻礙同源二聚體形成。透過用較大側鏈 (例如酪胺酸或色胺酸) 替換第一多肽界面上之較小的胺基酸側鏈來構建突起。透過將較大胺基酸側鏈替換為較小的胺基酸側鏈 (例如丙胺酸或蘇胺酸)，在第二多肽之界面中形成與突起具有相同或相近大小的互補空腔。
因此，在一些方面，該 Fc域的該第一次單元的該 CH3 域中的胺基酸殘基被具有較大側鏈體積的胺基酸殘基取代，從而在該第一次單元的該 CH3 域內產生突起，該突起為可位在該第二次單元的 CH3 域內的空腔中，並且該 Fc 域的該第二次單元的該 CH3 域中的胺基酸殘基被具有較小側鏈體積的胺基酸殘基取代，從而在該第二次單元的該 CH3 域內產生空腔，該第一次單元的該 CH3 域內的該突起為可位在該空腔內。較佳地，該具有較大側鏈體積的胺基酸殘基選自由以下所組成之群組：精胺酸 (R)、***酸 (F)、酪胺酸 (Y) 和色胺酸 (W)。較佳地，該具有較小側鏈體積的胺基酸殘基選自由以下所組成之群組：丙胺酸 (A)、絲胺酸 (S)、蘇胺酸 (T) 和纈胺酸 (V)。可透過改變編碼多肽的核酸 (例如透過針對特定位點之突變或透過胜肽合成) 來製備突起和空腔。
在具體的此類態樣中，在 Fc 域之第一次單元中，位置 366 處的蘇胺酸殘基被色胺酸殘基 (T366W) 取代，並且在該 Fc 域之第二次單元中，位置 407 處的酪胺酸殘基被纈胺酸殘基 (Y407V) 取代，並且視情況，位置 366 處的蘇胺酸殘基被絲胺酸殘基 (T366S) 取代，並且位置 368 處的白胺酸殘基被丙胺酸殘基 (L368A) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。在又一態樣中，在 Fc 域之第一次單元中，位置 354 處的絲胺酸殘基另外被胱胺酸殘基 (S354C) 取代或位置 356 處的麩胺酸殘基被胱胺酸殘基 (E356C) 取代 (特定而言位置 354 處的絲胺酸殘基被胱胺酸殘基取代)，並且在 Fc 域之第二次單元中，位置 349 處的酪胺酸殘基另外被胱胺酸殘基 (Y349C) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。在一較佳態樣中，Fc 域之第一次單元包含胺基酸取代 S354C 和 T366W，並且 Fc 域之第二次單元包含胺基酸取代 Y349C、T366S、L368A 和 Y407V (根據 Kabat EU 索引編號)。
在一些方面，Fc 域包含降低與 Fc 受體之結合及/或效應功能之一種或多種胺基酸取代。
於特定態樣中，Fc 受體為 Fcγ 受體。在一個方面中，Fc 受體為人 Fc 受體。在一個方面中，Fc 受體為活化 Fc 受體。在一個具體方面中，Fc 受體為活化人 Fcγ 受體，更具體而言人 FcγRIIIa、FcγRI 或 FcγRIIa，最具體而言 FcγRIIIa。在一個態樣中，效應功能是選自補體依賴性細胞毒性 (CDC)、抗體依賴性細胞介導的細胞毒性 (ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用 (ADCP) 及細胞激素分泌的群組中的一種或多種。於特定態樣中，該效應子功能為 ADCC。
通常，在 Fc 域之兩個次單元中的每個中都存在相同的一個或多個胺基酸取代。在一個態樣中，一個或多個胺基酸取代降低了 Fc 域與 Fc 受體的結合親和力。在一個態樣中，一個或多個胺基酸取代將 Fc 域與 Fc 受體的結合親和力降低至少 2 倍、至少 5 倍或至少 10 倍。
在一個方面中，Fc 域包含在選自 E233、L234、L235、N297、P331 和 P329 (根據 Kabat EU 索引編號) 的位置的胺基酸取代。在一個更具體之方面中，Fc 域包含在選自 L234、L235 和 P329 (根據 Kabat EU 索引編號) 的位置的胺基酸取代。在一些方面中，Fc 域包含 L234A 和 L235A (根據 Kabat EU 索引編號) 的胺基酸取代。在一個此類方面中，Fc 域為 IgG
1Fc 域，特定而言人 IgG
1Fc 域。於一個態樣中，Fc 域包含在位置 P329 的胺基酸取代。在一個更具體之方面中，胺基酸取代為 P329A 或 P329G，特定而言 P329G (根據 Kabat EU 索引編號)。在一個方面中，Fc 域包含在位置 P329 的胺基酸取代，以及在選自 E233、L234、L235、N297 和 P331 (根據 Kabat EU 索引編號) 的位置的另一個胺基酸取代。在一個更具體之方面中，該另一個胺基酸取代為 E233P、L234A、L235A、L235E、N297A、N297D 或 P331S。在特定方面，Fc 域包含在位置 P329、L234 和 L235 (根據 Kabat EU 索引編號) 的胺基酸取代。在更特定的方面，Fc 域包含胺基酸突變 L234A、L235A 和 P329G (「P329G LALA」、「PGLALA」 或 「LALAPG」)。具體而言，在較佳方面中，Fc 域之每個次單元包含胺基酸取代 L234A、L235A 和 P329G (根據 Kabat EU 索引編號)，即在 Fc 域之第一次單元及第二次單元中的每個中，位置 234 的白胺酸殘基被丙胺酸殘基替換 (L234A)，位置 235 的白胺酸殘基被丙胺酸殘基替換 (L235A)，並且位置 329 的脯胺酸殘基被甘胺酸殘基替換 (P329G) (根據 Kabat EU 索引編號)。在一個此類方面中，Fc 域為 IgG
1Fc 域，特定而言人 IgG
1Fc 域。
在較佳的態樣中，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體包含
(i) 特異性結合至 CD3 的第一抗原結合部分，其包含：含有 SEQ ID NO: 1 之重鏈 CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 2 之 HCDR2 及 SEQ ID NO: 3 之 HCDR3 的重鏈可變區；及含有 SEQ ID NO: 4 之輕鏈 CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 5 之 LCDR2 及 SEQ ID NO: 6 之 LCDR3 的輕鏈可變區，其中第一抗原結合部分為互換型 Fab 分子，其中 Fab 輕鏈與 Fab 重鏈的可變區或恆定區，特定而言可變區係經交換的；
(ii) 特異性結合至 HLA-A2/WT1 之第二抗原結合部分及第三抗原結合部分，其包含：含有 SEQ ID NO: 9 之重鏈 CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 10 之 HCDR2 及 SEQ ID NO: 11 之 HCDR3 的重鏈可變區；及含有 SEQ ID NO: 12 之輕鏈 CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 13 之 LCDR2 及 SEQ ID NO: 14 之 LCDR3 的輕鏈可變區，其中該第二抗原結合部分及該第三抗原結合部分各為 Fab 分子，特定而言習用 Fab 分子；
(iii) 由第一次單元及第二次單元所構成的 Fc 域，
其中該第二抗原結合部分係在該 Fab 重鏈的 C 端融合至該第一抗原結合部分之該 Fab 重鏈的 N 端，且該第一抗原結合部分係在該 Fab 重鏈的 C 端融合至該 Fc 域之該第一次單元的 N 端，且其中該第三抗原結合部分係在該 Fab 重鏈的 C 端融合至該 Fc 域之該第二次單元的 N 端。
在一個態樣中，第一抗原結合部分包含：重鏈可變區序列，其與 SEQ ID NO: 7 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同；及輕鏈可變區序列，其與 SEQ ID NO: 8 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同。
在一個態樣中，第一抗原結合部分包含 SEQ ID NO: 7 之重鏈可變區序列及 SEQ ID NO: 8 之輕鏈可變區序列。
在一個態樣中，第二抗原結合部分及第三抗原結合部分包含：重鏈可變區序列，其與 SEQ ID NO: 15 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同；及輕鏈可變區序列，其與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同。
在一個態樣中，第二抗原結合部分及第三抗原結合部分包含 SEQ ID NO: 15 之重鏈可變區及 SEQ ID NO: 16 之輕鏈可變區。
根據上述方面的 Fc 域可以單獨或組合地併入上文關於 Fc 域描述的所有特徵。
在一個態樣中，抗原結合部分與 Fc 區藉由肽連接子，特定而言藉由 SEQ ID NO: 18 及 SEQ ID NO: 20 中的肽連接子彼此融合。
在一個態樣中，在 (ii) 下之第二 Fab 分子及第三 Fab 分子的恆定域 CL 中，位置 124 處的胺基酸被離胺酸 (K) 取代 (根據 Kabat 編號)，且位置 123 處的胺基酸被離胺酸 (K) 或精胺酸 (R) (特定而言被精胺酸 (R)) 取代 (根據 Kabat 編號)，並且在 (ii) 下之第二 Fab 分子及第三 Fab 分子的恆定域 CH1 中，位置 147 處的胺基酸被麩胺酸 (E) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)，且位置 213 處的胺基酸被麩胺酸 (E) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。
在一個態樣中，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體包含：含有與 SEQ ID NO: 17 的序列至少 80%、85%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 相同的序列的多肽 (特定而言兩種多肽)；含有與 SEQ ID NO: 18 的序列至少 80%、85%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 相同的序列的多肽；含有與 SEQ ID NO: 19 的序列至少 80%、85%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 相同的序列的多肽；以及含有與 SEQ ID NO: 20 的序列至少 80%、85%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 相同的序列的多肽。
在一個態樣中，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體包含：含有 SEQ ID NO: 17 之序列的多肽 (特定而言兩種多肽)；含有 SEQ ID NO: 18 之序列的多肽；含有 SEQ ID NO: 19 之序列的多肽；以及含有 SEQ ID NO: 20 之序列的多肽。
本文中的 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體與 4-1BB (CD137) 促效劑組合使用。
除非另有說明，否則如本文所使用之術語「4-1BB」或「CD137」指代來自任何脊椎動物來源之任何天然 4-1BB，該脊椎動物包括哺乳動物，諸如靈長類動物 (例如，人) 以及囓齒動物 (例如，小鼠及大鼠)。該術語涵蓋「全長」、未處理之 4-1BB 以及在細胞處理中得到的任何形式的 4-1BB。該術語亦涵蓋天然 4-1BB 變異體，例如剪接變異體或等位基因變異體。人 4-1BB 的胺基酸序列顯示於 UniProt 登錄號 Q07011 (條目版本 185)。
「4-1BBL」或「4-1BB 配體」或「CD137L」為共刺激 TNF 配體家族成員，其能夠共刺激 T 細胞的增生及細胞激素產生。共刺激 TNF 家族配體在與其相應的 TNF 受體相互作用後可以共刺激 TCR 訊號，並且與其受體的相互作用導致 TNFR 相關因子 (TRAF) 的募集，從而啟動導致 T 細胞活化的傳訊級聯反應。4-1BBL 為 II 型跨膜蛋白。業經揭示，具有顯示於 UniProt 登錄號 P41273 (條目版本 153) 之胺基酸序列的完整或全長度 4-1BBL 在細胞表面形成三聚體。三聚體的形成能藉由 4-1BBL 胞外域的特定目的促成。該動機在本文中被指定為「三聚化區域」。人 4-1BBL 序列 (SEQ ID NO：30) 的胺基酸 50-254 形成 4-1BBL 的胞外域，但即使是其片段也能形成三聚體。
「胞外域」為膜蛋白質中延伸至細胞外空間 (亦即細胞外之空間) 的域，也稱為「細胞外域」。如本文所定義之 4-1BBL 的胞外域是指 4-1BBL 蛋白，特定而言人 4-1BBL 蛋白 (UniProt 登錄號 P41273 (條目版本 153)) 延伸至細胞外空間 (細胞外域) 的部分，但也包括負責三聚化及負責與相應受體 4-1BB 結合的較短部分或其片段。
因此，術語「4-1BBL 之胞外域或其片段」是指 4-1BBL 的細胞外域，或能夠與 4-1BB 結合並能夠三聚化的部分。在本發明的具體態樣中，術語「4-1BBL 之胞外域或其片段」是指具有選自 SEQ ID NO: 34 (人 4-1BBL 的胺基酸 52-254)、SEQ ID NO: 31 (人 4-1BBL 之胺基酸 71-254)、SEQ ID NO: 33 (人 4-1BBL 之胺基酸 80-254)、SEQ ID NO: 32 (人 4-1BBL 之胺基酸 85-254)、SEQ ID NO: 35 (人 4-1BBL 之胺基酸 71-248)、SEQ ID NO: 36 (人 4-1BBL 之胺基酸 85-248)、SEQ ID NO: 37 (人 4-1BBL 的胺基酸 80-248) 及 SEQ ID NO: 38 (人 4-1BBL 的胺基酸 52-248) 之胺基酸序列的多肽。
如本文所用，術語「抗原結合分子」在其最寬廣意義上是指特異性結合抗原決定位之分子。抗原結合分子之實例為抗體、抗體片段及支架抗原結合蛋白。
除非另有說明外，否則「纖維母細胞活化蛋白 (FAP)」亦稱為脯胺醯內肽酶 FAP 或 Seprase (EC 3.4.21)，是指來自任何脊椎動物來源之任何天然 FAP，該脊椎動物包括哺乳動物，例如靈長類動物 (例如，人)、非人靈長類動物 (例如，食蟹猴) 及囓齒動物 (例如，小鼠及大鼠)。該術語涵蓋「全長」、未處理之 FAP 以及在細胞處理中得到的任何形式 FAP。該術語亦涵蓋天然生成之 FAP 變異體，例如，剪接變異體或對偶基因變異體。人 FAP 的胺基酸序列顯示於 UniProt (www.uniprot.org) 登錄號 Q12884 (條目版本 197)。人 FAP 之胞外域 (ECD) 從胺基酸位置 26 處延伸至位置 760 處。如本文所用，結合至 FAP 的抗原結合部分較佳結合至 FAP 的細胞外域。例示性抗 FAP 結合分子描述於例如 PCT 公開案第 WO 2012/020006 號。
用於本發明的特別有用的 4-1BB (CD137) 促效劑描述於例如 PCT 公開案第 WO 2016/075278 號或 PCT 公開案第 WO 2016/156291 號 (以全文引用之方式併入本文)。
在一個態樣中，4-1BB (CD137) 促效劑包含 4-1BBL (特定而言人 4-1BBL) 或其片段，特定而言 4-1BBL 的胞外域或其片段。在一個態樣中，4-1BB (CD137) 促效劑包含 4-1BBL 的三個胞外域或其片段 (即，4-1BBL 的第一胞外域、第二胞外域及第三胞外域或其片段)。在一個態樣中，4-1BBL 的胞外域或其片段包含與選自由 SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 37 及 SEQ ID NO: 38 所組成之群組的胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列。在一個態樣中，4-1BBL 的胞外域或其片段包含與 SEQ ID NO: 35 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列。在一個態樣中，4-1BBL 的胞外域或其片段包含 SEQ ID NO: 35 之胺基酸序列。在一個態樣中，4-1BBL 的胞外域或其片段由 SEQ ID NO: 35 之胺基酸序列組成。
在特定態樣中，4-1BB (CD137) 促效劑為包含 4-1BBL 的三個胞外域或其片段的分子，其中 4-1BBL 的胞外域或其片段包含 SEQ ID NO: 35 之胺基酸序列 (或由其組成)。
在一個態樣中，4-1BB (CD137) 促效劑包含 4-1BBL 的三個胞外域或其片段 (即，4-1BBL 的第一胞外域、第二胞外域及第三胞外域或其片段)，其中 4-1BBL 的第一胞外域及第二胞外域或其片段彼此融合，視情況經由肽連接子彼此融合 (即，4-1BBL 的第一胞外域及第二胞外域或其片段在同一多肽上)，以及 4-1BBL 的第三胞外域或其片段不與 4-1BBL 的第一胞外域或第二胞外域或其片段融合 (即，4-1BBL 的第三胞外域或其片段位於與 4-1BBL 的第一胞外域及第二胞外域或其片段分離的多肽上)。
在一個態樣中，4-1BB (CD137) 促效劑為分子，該分子包含：第一多肽，其包含 4-1BBL 的第一胞外域及第二胞外域或其片段，及第二多肽，其包含 4-1BBL 的第三胞外域或其片段。在一個態樣中，4-1BBL 的第一胞外域及第二胞外域或其片段經由肽連接子，特定而言 (G
4S)
2肽連接子融合。在一個態樣中，第一多肽及第二多肽藉由雙硫鍵連接。在一個態樣中，第一多肽包含與 SEQ ID NO: 47 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列。在一個態樣中，第一多肽包含 SEQ ID NO: 47 之胺基酸序列。在一個態樣中，第二多肽包含與 SEQ ID NO: 35 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列。在一個態樣中，第二多肽包含 SEQ ID NO: 35 之胺基酸序列。
在又一態樣中，4-1BB (CD137) 促效劑包含特異性結合至腫瘤相關抗原，特定而言腫瘤基質抗原 (即，與腫瘤基質相關的抗原)，更特定而言腫瘤纖維母細胞抗原 (即在癌症相關纖維母細胞上表現的抗原) 的抗原結合部分。
在一個較佳的態樣中，抗原結合部分特異性結合至纖維母細胞活化蛋白 (FAP)，特定而言人 FAP。
在一個態樣中，抗原結合部分為 Fab 分子，特定而言習用 Fab 分子。
因此，在特定態樣中，4-1BB (CD137) 促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含 4-1BBL 的三個胞外域或其片段，及至少一個特異性結合至腫瘤相關抗原的抗原結合部分，特定而言特異性結合至 FAP 的抗原結合部分。
在一個態樣中，特異性結合至 FAP 的抗原結合部分包含：含有 SEQ ID NO: 39 之重鏈 CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 40 之 HCDR2 及 SEQ ID NO: 41 之 HCDR3 的重鏈可變區 (VH)；及含有 SEQ ID NO: 42 之輕鏈 CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 43 之 LCDR2 及 SEQ ID NO: 44 之 LCDR3 的輕鏈可變區。
在一個態樣中，特異性結合至 FAP 的抗原結合部分包含：重鏈可變區序列，其與 SEQ ID NO: 45 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同；及輕鏈可變區序列，其與 SEQ ID NO: 46 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同。
在一個態樣中，特異性結合至 FAP 的抗原結合部分包含 SEQ ID NO: 45 之重鏈可變區序列及 SEQ ID NO: 46 之輕鏈可變區序列。
在又一態樣中，4-1BB (CD137) 促效劑包含 Fc 域，該 Fc 域由第一次單元及第二次單元構成。
包含在 4-1BB (CD137) 促效劑中的 Fc 域可以單獨或組合地併入上文所述與包含在 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體中的 Fc 域相關的所有特徵。
特定而言，在一個態樣中，包含在 4-1BB (CD137) 促效劑中的 Fc 域為 IgG Fc 域。在特定態樣中，Fc 域為 IgG
1Fc 域。在進一步特定態樣中，Fc 域為人 Fc 域。在特定較佳的態樣中，Fc 域為人 IgG
1Fc 域。
在特定態樣中，Fc 域包含促進 Fc 域之第一次單元與第二次單元之締合的修飾 (諸如「杵臼 (knob-into-hole)」修飾)，如上文關於 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體所描述的。
在另一特定態樣中，Fe 域包含降低與 Fc 受體之結合及/或效應功能的一種或多種胺基酸取代 (諸如「P329G LALA」、「PGLALA」或「LALAPG」胺基酸取代)，如上文關於 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體所描述的。
在一個特定較佳的態樣中，包含在 4-1BB (CD137) 促效劑中的 Fc 域為人 IgG
1Fc 域，其中 Fc 域之每個次單元包含胺基酸取代 L234A、L235A 及 P329G (根據 Kabat EU 索引編號)。
在一個態樣中，4-1BBL (CD137) 促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含
(i) 4-1BBL 的三個胞外域或其片段；
(ii) 特異性結合至 FAP 的抗原結合部分，特定而言其中該抗原結合部分為 Fab 分子；以及
(iii) 由第一次單元及第二次單元構成的 Fc 域，特定而言其中 Fc 域包含促進 Fc 域的第一次單元與第二次單元之締合的修飾，及/或降低與 Fc 受體之結合及/或效應功能的一種或多種胺基酸取代。
在特定態樣中，4-1BBL (CD137) 促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含
(i) 4-1BBL 之第一胞外域、第二胞外域及第三胞外域或其片段；
(ii) 特異性結合至 FAP 的抗原結合部分，其中該抗原結合部分為 Fab 分子；
(iii) 由第一次單元及第二次單元構成的 Fc 域，特定而言其中 Fc 域包含促進 Fc 域的第一次單元與第二次單元之締合的修飾，及/或降低與 Fc 受體之結合及/或效應功能的一種或多種胺基酸取代；
(iv) CL 域及 CH1 域；
其中該抗原結合分子由以下所構成：
(a) 第一多肽，其包含：(a1) 4-1BBL 之第一胞外域或其片段，其在 C 端融合至 4-1BBL 之第二胞外域或其片段的 N 端；(a2) 4-1BBL 之第二胞外域或其片段，其在 C 端融合至 CL 域的 N 端；(a3) CL 域，其在 C 端融合至 Fc 域之次單元中之一者 (例如第一次單元) 的 N 端；及 (a4) Fc 域之次單元中之一者 (例如第一次單元)；
(b) 第二多肽，其包含：(b1) 4-1BBL 之第三胞外域或其片段，其在 C 端融合至 CH1 域的 N 端；及 (b2) CH1 域；
(c) 第三多肽，其包含：(c1) Fab 分子的重鏈，其在 C 端融合至 Fc 域之次單元中之另一者 (例如第二次單元) 的 N 端；及 (c2) Fc 域之次單元中之另一者 (例如第二次單元)；以及
(d) 第四多肽，其包含 Fab 分子的輕鏈。
抗原結合分子之不同域之間的融合較佳地經由肽連接子，其也可以包含免疫球蛋白鉸鏈區或由 (部分) 免疫球蛋白鉸鏈區組成。特定而言，4-1BBL 的第一胞外域及第二胞外域或其片段經由肽連接子，特定而言 (G4S)
2肽連接子融合。
在一個態樣中，第一多肽與第二多肽藉由二硫鍵，特定而言 CL 域與 CH1 域之間的二硫鍵彼此連接。
在一個態樣中，在第一多肽之 CL 域中，位置 124 處的胺基酸獨立地經離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 取代 (根據 Kabat 編號)，且位置 123 處的胺基酸獨立地經離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 取代 (根據 Kabat 編號)，並且在第二多肽之 CH1 域中，位置 147 處的胺基酸獨立地經麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)，且位置 213 處的胺基酸獨立地經麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。
在一個態樣中，在第一多肽之 CL 域中，位置 124 處的胺基酸經離胺酸 (K) 取代 (根據 Kabat 編號)，且位置 123 處的胺基酸經離胺酸 (K) 取代 (根據 Kabat 編號)，並且在第二多肽之 CH1 域中，位置 147 處的胺基酸經麩胺酸 (E) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)，且位置 213 處的胺基酸經麩胺酸 (E) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。
在特定態樣中，在第一多肽之 CL 域中，位置 124 處的胺基酸被離胺酸 (K) 取代 (根據 Kabat 編號)，且位置 123 處的胺基酸被精胺酸 (R) 取代 (根據 Kabat 編號)，並且在第二多肽之 CH1 域中，位置 147 處的胺基酸被麩胺酸 (E) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)，且位置 213 處的胺基酸被麩胺酸 (E) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。
在特定態樣中，如果根據上述態樣之胺基酸取代發生在第一多肽及第二多肽之 CL 及 CH1 域中，則第一多肽之 CL 域為 κ 同型。
在一個態樣中，CL 域為人 CL 域，特定而言 κ 同型的人 CL 域。在又一態樣中，CH1 域為人 CH1 域，特定而言 γ 同型的人 CH1 域，最特定而言 γ1 同型的人 CH1 域。
在一個態樣中，第一多肽包含與 SEQ ID NO: 48 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列。
在一個態樣中，第二多肽包含與 SEQ ID NO: 49 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列。
在一個態樣中，第三多肽包含與 SEQ ID NO: 50 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列。
在一個態樣中，第四多肽包含與 SEQ ID NO: 51 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列。
在一個態樣中，4-1BBL (CD137) 促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含：含有與 SEQ ID NO: 48 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列的第一多肽，含有與 SEQ ID NO: 49 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列的第二多肽，含有與 SEQ ID NO: 50 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列的第三多肽，以及含有與 SEQ ID NO: 51 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同之胺基酸序列的第四多肽。
在一替代態樣中，4-1BB 促效劑可以為抗 4-1BB 抗體，特定而言抗 FAP/抗 4-1BB 雙特異性抗體。
術語「癌症」是指通常以不受調節的細胞增生為特徵的哺乳動物生理狀況。癌症的實例包括但不限於癌、淋巴瘤、胚細胞瘤、肉瘤和白血病。癌症的更多非限制性實例包括血液學癌症（諸如白血病）、膀胱癌、腦癌、頭頸癌、胰臟癌、膽管癌、甲狀腺癌、肺癌、乳癌、卵巢癌、子宮癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、食管癌、大腸癌、大腸直腸癌、直腸癌、胃癌、***癌、皮膚癌、鱗狀細胞癌、肉瘤、骨癌和腎癌。其他細胞增生性疾患包括但不限於位在以下部位中的腫瘤：腹部、骨骼、***、消化系統、肝、胰臟、腹膜、內分泌腺 (腎上腺、副甲狀腺、垂體、睾丸、卵巢、胸腺、甲狀腺)、眼、頭和頸、神經系統 (中樞和周邊)、淋巴系統、骨盆、皮膚、軟組織、脾臟、胸部和泌尿生殖系統。還包括癌前狀況或病變和癌症轉移。
在本發明的 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BB (CD137) 促效劑、方法、用途及套組的一些態樣中，癌症為血液學癌症。血液學癌症的非限制性實例包括：白血病（例如急性淋巴球性白血病（ALL）、急性骨髓性白血病（AML）、慢性淋巴球性白血病（CLL）、慢性骨髓性白血病（CML）、毛細胞白血病（HCL））、淋巴瘤（例如非何杰金氏淋巴瘤（NHL）、何杰金氏淋巴瘤）、骨髓瘤（例如多發性骨髓瘤（MM））、骨髓增生異常症候群（MDS）和骨髓增生性疾病。
在某些態樣中，癌症選自由以下所組成之群組：血液學癌症 (諸如白血病)、腎癌、膀胱癌、皮膚癌、肺癌、大腸直腸癌、乳癌、腦癌、頭頸癌及***癌。
在特定方面，癌症是血液學癌症，特定而言是白血病，最特定而言是急性淋巴球性白血病 (ALL) 或急性骨髓性白血病 (AML)。
在較佳的方面，癌症是急性骨髓性白血病 (AML)。
在另外的特定方面，癌症是骨髓增生異常症候群 (MDS)。
在一些態樣中，癌症為 WT1 陽性癌症。「WT1 陽性癌症」或「表現 WT1 的癌症」是指特徵在於癌細胞中 WT1 表現或過表現的癌症。WT1 的表現可以藉由例如定量即時 PCR (測量 WT1 mRNA 含量)、免疫組織化學 (IHC) 或西方墨點測定法來確定。在一個態樣中，癌症表現 WT1。在一個態樣中，癌症在至少 20%、較佳至少 50% 或至少 80% 的腫瘤細胞中表現 WT1，如使用 WT1 特異性抗體藉由免疫組織化學 (IHC) 確定。
在一些態樣中，癌症包含表現 FAP 的細胞 (例如纖維母細胞)。在一些態樣中，癌症表現 FAP，特定而言在腫瘤基質中。
本文中的「患者」、「受試者」或「個體」是正在經歷或已經經歷癌症的一種或多種徵象、症狀或其他指標的適格接受治療的任何單個人受試者。在一些態樣中，患者患有癌症或已被診斷患有癌症。患者之前可能已經接受過 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體或另一種藥物治療，或者沒有接受過這種治療。在特定態樣中，患者之前沒有接受過 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體治療。在開始 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體療法之前，患者可能已經接受過包含一種或多種藥物而不是 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體的療法的治療。在特定態樣中，患者攜帶 HLA-A2 等位基因，特定而言 HLA-A*02:01 等位基因。
如本文中所使用的「治療」(及其語法變異體，諸如「治療過程」或「治療中」)，係指試圖改變受治療個體之疾病自然病程的臨床干預，並且可進行預防或在臨床病理過程中執行。期望之治療效果包括但不限於預防疾病之發生或複發、減輕症狀、減輕疾病之任何直接或間接病理後果、預防轉移、降低疾病進展之速度、改善或減輕疾病狀態、緩解或改善預後。
HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑以有效量投予。
藥劑例如醫藥組成物的「治療有效量」係指在所需之給藥劑量和時間段內有效實現所需的治療或預防效果的量。
在一個態樣中，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體的投予導致 T 細胞，特定而言細胞毒性 T 細胞，特定而言在癌症部位的活化。該活化可包含 T 細胞增生、T 細胞分化、T 細胞分泌細胞激素、T 細胞釋放細胞毒性效應分子、T 細胞的細胞毒殺活性和 T 細胞活化標誌物的表現。在一個態樣中，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體的投予導致癌症部位的 T 細胞，特定而言細胞毒性 T 細胞的數量增加。
以上及本文所述的 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BB (CD137) 促效劑、方法、用途或套組的一些態樣中，與單獨投予或用 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體治療相比，投予或用 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑治療導致 T 細胞，特定而言細胞毒性 T 細胞，特定而言在癌症部位的活化增加。在特定態樣中，活化包含 T 細胞的細胞毒殺活性 (特定而言癌細胞的裂解) 及/或由 T 細胞分泌的細胞激素 (特定而言 IL-2、TNF-α 及/或干擾素-γ)。
以上及本文所述的 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BB (CD137) 促效劑、方法、用途或套組的一些態樣中，與單獨投予或用 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體治療相比，投予或用 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑治療導致初始 T 細胞向記憶 T 細胞，特定而言在癌症部位的分化增加。在一個態樣中，藉由測量 CD45RA 表現來檢測分化，例如使用流式細胞分析技術。
以上及本文所述的 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BB (CD137) 促效劑、方法、用途或套組的一些態樣中，投予或用 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑治療可導致個體中的反應。在一些方面，反應可以是完全反應。在一些方面，反應可以是治療停止後的持續反應。在一些方面，反應可以是治療停止後持續的完全反應。在其他方面，反應可以是部分反應。在一些方面，反應可以是治療停止後持續的部分反應。在一些態樣中，與單獨投予或用 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體 (即，不使用 4-1BB (CD137) 促效劑) 治療相比，投予或用 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑治療可以改善反應。
在一些態樣中，與單獨使用 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體 (即，不使用 4-1BB (CD137) 促效劑) 治療的相應患者群體相比，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑的治療或投予可以增加患者群體中的反應率。
本發明的組合療法包含投予 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑。
如本文所用，「組合 (combination)」(及其文法變化，諸如「組合」(「combine」或「combining」)) 涵蓋根據本發明的 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體與 4-a 1BB (CD137) 促效劑的組合，其中 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體與 4-1BB (CD137) 促效劑在相同或不同容器中、在相同或不同藥物製劑中、一起或單獨投予、同時或依序投予 (以任何順序)，及藉由相同或不同的途徑投予，前提是 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑能在體內同時發揮其生物學效應。例如，根據本發明的「組合」HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑可意味著首先投予在特定藥物製劑中的 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體，然後投予在另一藥物製劑中的 4-1BB (CD137) 促效劑，或
反之亦然。
HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑可以本領域已知的任何合適方式投予。在一個態樣中，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑依序 (在不同時間) 投予。在另一態樣中，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑同時 (在同一時間) 投予。不希望受理論束縛，在 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體之前及/或同時投予 4-1BB (CD137) 促效劑可能是有利的。在一些態樣中，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體與 4-1BB (CD137) 促效劑在單獨的組成物中。在一些態樣中，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體與 4-1BB (CD137) 促效劑在相同的組成物中。
HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑可以藉由任何合適的途徑投予，並且可以藉由相同的投予途徑或藉由不同的投予途徑來投予。在一些態樣中，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體係經靜脈內、肌內、皮下、局部、口服、經皮、腹膜內、眶內、藉由植入、藉由吸入、鞘內腔、心室內或鼻內投予。在特定態樣中，HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體係經靜脈內投予。在一些態樣中，4-1BB (CD137) 促效劑係經靜脈內、肌內、皮下、局部、口服、經皮、腹膜內、眶內、藉由植入、藉由吸入、鞘內腔、心室內或鼻內投予。在特定態樣中，4-1BB (CD137) 促效劑係經靜脈內投予。可投予有效量的 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑以預防或治療疾病。HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及/或 4-1BB (CD137) 促效劑的適當投予途徑和劑量可基於待治療的疾病類型、HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體的類型、4-1BB (CD137) 促效劑的類型、疾病的嚴重程度及病程、個體的臨床狀況、個體的臨床病史及對治療的反應，以及主治醫生的判斷力來確定。投藥可藉由任何適宜途徑進行，例如藉由注射，諸如靜脈內或皮下注射，此部分地取決於短暫投予抑或長期投予。本文中考慮各種給藥方案，其包括但不限於在多種時間點單次或多次投予、快速注射投予和脈衝輸注。HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑適當地以一次或在一系列治療中向患者投予。
本發明的組合可單獨或與其他藥劑一起用於治療。例如，本發明之組合可以與至少一種附加治療劑聯合投予。在某些方面，附加治療劑是抗癌劑，例如化療劑、腫瘤細胞增生抑制劑或腫瘤細胞凋亡活化劑。本發明之組合亦可與放射療法組合使用。
如本文所提供之套組通常包含一個或多個容器及容器上或與容器相關之標示或藥品仿單。合適的容器包括例如，瓶、小瓶、注射器、IV 溶液袋等。該等容器可以由多種材料例如，玻璃或塑膠形成。該容器可容納組成物，該組成物本身或與有效治療、預防及/或診斷症狀的另一組成物結合使用，並可能具有無菌入口 (例如，容器可為具有可透過皮下注射針頭穿孔的塞子的靜脈內溶液袋或小管)。組成物中的至少一種活性劑為用於本發明之組合的 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體。另一活性劑為用於本發明之組合的 4-1BB (CD137) 促效劑，其可以與雙特異性抗體一樣在相同的組成物及容器中，或可以在不同的組成物及容器中提供。標示或藥品仿單指示該組成物用於治療所選擇的病況 (諸如癌症)。
在一個態樣中，本發明提供了一種用於治療癌症的套組，其在相同或單獨的容器中包含 (a) HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體，及 (b) 4-1BB (CD137) 促效劑，且視情況進一步包含 (c) 藥品仿單，其包含指導使用組合治療作為治療癌症之方法的列印說明。此外，該套組可以包含 (a) 其中含有組成物之第一容器，其中該組成物包含 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體；(b) 其中含有組成物之第二容器，其中該組成物包含 4-1BB (CD137) 促效劑；且視情況包含 (c) 其中含有組成物之第三容器，其中該組成物包含另一細胞毒性劑或其他治療劑。本發明之這些態樣中之套組可以進一步包含指示組成物可以用於治療癌症之藥品仿單。替代性地或另外地，套組可進一步包含第三（或第四）容器，期包含醫藥上可接受之緩衝劑，諸如抑菌注射用水 (BWFI)、磷酸鹽緩衝生理食鹽水、林格氏溶液及右旋糖溶液。從商業和使用者的角度來看，它可以進一步包含其他材料，其中包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭和注射器。
胺基酸序列
實例
| 序列 | SEQ ID NO | |
| CD3 HCDR1 | GYTMN | 1 |
| CD3 HCDR2 | LINPYKGVSTYNQKFKD | 2 |
| CD3 HCDR3 | SGYYGDSDWYFDV | 3 |
| CD3 LCDR1 | RASQDIRNYLN | 4 |
| CD3 LCDR2 | YTSRLES | 5 |
| CD3 LCDR3 | QQGNTLPWT | 6 |
| CD3 VH | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFTGYTMNWVRQAPGKGLEWVALINPYKGVSTYNQKFKDRFTISVDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTLVTVSS | 7 |
| CD3 VL | DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQGNTLPWTFGQGTKVEIK | 8 |
| WT1 HCDR1 | SYAIS | 9 |
| WT1 HCDR2 | GIIPIFGTANYAQKFQG | 10 |
| WT1 HCDR3 | SIELWWGGFDY | 11 |
| WT1 LCDR1 | RASQSISSWLA | 12 |
| WT1 LCDR2 | DASSLES | 13 |
| WT1 LCDR3 | QQYEDYTT | 14 |
| WT1 VH | QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSIELWWGGFDYWGQGTTVTVSS | 15 |
| WT1 VL | DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTIGSLQPDDFATYYCQQYEDYTTFGQGTKVEIK | 16 |
| WT1 VL-CL(RK) | DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTIGSLQPDDFATYYCQQYEDYTTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDRKLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 17 |
| WT1 VH-CH1(EE)–Fc（臼，PGLALA） | QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSIELWWGGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP | 18 |
| CD3 VH-CL | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYSFTGYTMNWVRQAPGKGLEWVALINPYKGVSTYNQKFKDRFTISVDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARSGYYGDSDWYFDVWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 19 |
| WT1 VH-CH1(EE)-CD3 VL-CH1-Fc (杵，PGLALA) | QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSIELWWGGFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDGGGGSGGGGSDIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRLESGVPSRFSGSGSGTDYTLTISSLQPEDFATYYCQQGNTLPWTFGQGTKVEIKSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP | 20 |
| 非標靶 VH | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGSGFDYWGQGTLVTVSS | 21 |
| 非標靶 VL | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGQGTKVEIK | 22 |
| 人 WT1 | MGSDVRDLNALLPAVPSLGGGGGCALPVSGAAQWAPVLDFAPPGASAYGSLGGPAPPPAPPPPPPPPPHSFIKQEPSWGGAEPHEEQCLSAFTVHFSGQFTGTAGACRYGPFGPPPPSQASSGQARMFPNAPYLPSCLESQPAIRNQGYSTVTFDGTPSYGHTPSHHAAQFPNHSFKHEDPMGQQGSLGEQQYSVPPPVYGCHTPTDSCTGSQALLLRTPYSSDNLYQMTSQLECMTWNQMNLGATLKGVAAGSSSSVKWTEGQSNHSTGYESDNHTTPILCGAQYRIHTHGVFRGIQDVRRVPGVAPTLVRSASETSEKRPFMCAYPGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTGEKPYQCDFKDCERRFSRSDQLKRHQRRHTGVKPFQCKTCQRKFSRSDHLKTHTRTHTGKTSEKPFSCRWPSCQKKFARSDELVRHHNMHQRNMTKLQLAL | 23 |
| VLD 肽 | VLDFAPPGA | 24 |
| RMF 肽 | RMFPNAPYL | 25 |
| HLA-A2 | GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGYYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWE | 26 |
| 人 CD3 | MQSGTHWRVLGLCLLSVGVWGQDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCENCMEMDVMSVATIVIVDICITGGLLLLVYYWSKNRKAKAKPVTRGAGAGGRQRGQNKERPPPVPNPDYEPIRKGQRDLYSGLNQRRI | 27 |
| 食蟹獼猴 CD3 | MQSGTRWRVLGLCLLSIGVWGQDGNEEMGSITQTPYQVSISGTTVILTCSQHLGSEAQWQHNGKNKEDSGDRLFLPEFSEMEQSGYYVCYPRGSNPEDASHHLYLKARVCENCMEMDVMAVATIVIVDICITLGLLLLVYYWSKNRKAKAKPVTRGAGAGGRQRGQNKERPPPVPNPDYEPIRKGQQDLYSGLNQRRI | 28 |
| hIgG1 Fc 區 | DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP | 29 |
| hu 4-1BBL (50-254) | ACPWAVSGARASPGSAASPRLREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE | 30 |
| hu 4-1BBL (71-254) | REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE | 31 |
| hu 4-1BBL (85-254) | LDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE | 32 |
| hu 4-1BBL (80-254) | DPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE | 33 |
| hu 4-1BBL (52-254) | PWAVSGARASPGSAASPRLREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE | 34 |
| hu 4-1BBL (71-248) | REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGL | 35 |
| hu 4-1BBL (85-248) | LDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGL | 36 |
| hu 4-1BBL (80-248) | DPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGL | 37 |
| hu 4-1BBL (52-248) | PWAVSGARASPGSAASPRLREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGL | 38 |
| FAP HCDR1 | SYAMS | 39 |
| FAP HCDR2 | AIIGSGASTYYADSVKG | 40 |
| FAP HCDR3 | GWFGGFNY | 41 |
| FAP LCDR1 | RASQSVTSSYLA | 42 |
| FAP LCDR2 | VGSRRAT | 43 |
| FAP LCDR3 | QQGIMLPPT | 44 |
| FAP VH | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIIGSGASTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGWFGGFNYWGQGTLVTVSS | 45 |
| FAP VL | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVTSSYLAWYQQKPGQAPRLLINVGSRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQGIMLPPTFGQGTKVEIK | 46 |
| hu 4-1BBL (71-248)-(G 4S) 2-hu 4-1BBL (71-248) | REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGL | 47 |
| hu 4-1BBL (71-248)-(G 4S) 2-hu 4-1BBL (71-248)-CL(RK)-Fc (杵，PGLALA) | REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLGGGGSGGGGSREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLGGGGSGGGGSRTVAAPSVFIFPPSDRKLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP | 48 |
| hu 4-1BBL (71-248)-CH1(EE) | REGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLGGGGSGGGGSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSC | 49 |
| FAP VH-CH1- Fc (臼，PGLALA) | EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAIIGSGASTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGWFGGFNYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP | 50 |
| FAP VL-CL | EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVTSSYLAWYQQKPGQAPRLLINVGSRRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQGIMLPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC | 51 |
以下為本發明之方法和組成物的實例。應當理解，鑒於上文給出的一般描述，可以實施各種其他方面。
WT1-TCB 與 FAP-4-1BBL 的組合 實驗設置 患者樣品的細胞毒性測定
最初診斷的原發性 HLA-A*02
+AML 患者樣品在 12 孔盤中以 1.5x10
6細胞/mL 的濃度，在每孔 1.2x10
5鼠 MS5 細胞 (用 60 Gy 照射) 的飼養層上預培養 2 天。對於細胞毒性評估，隨後將 4.0x10
4AML 細胞與 8.0x10
4健康供體 T 細胞 (使用 Pan T 細胞分離套組負分離，人；Miltenyi Biotec，Bergisch Gladbach，德國) 在 96 孔盤中與在不同水平 (3T3 huFAP
high或 3T3 huFAP
low) 穩定表現人 FAP 的 NIH-3T3 纖維母細胞株一起培養。包括缺乏 FAP 表現的野生型 NIH-3T3 細胞作為對照。NIH-3T3 細胞株用 50 Gy 照射，且每孔添加 1.0x10
4細胞。用 1 μg/mL WT1-TCB 及 2 nM FAP-4-1BBL 培養共培養物。包括與非靶向對照抗體構建體 (DP47-TCB 及 DP47-41BBL) 的組合作為對照。96 小時後分析細胞毒性測定，以了解 (1) AML 細胞的特異性裂解、(2) T 細胞增生、(3) T 細胞活化及 (4) T 細胞的細胞激素分泌。
基於藉由流式細胞分析技術確定的活 AML 細胞計數，相對於含有 DP47-TCB 的相應對照計算 WT1-TCB 對 AML 細胞的特異性裂解。基於活 T 細胞計數，相對於第 0 天計算 96 小時後 T 細胞的增生。藉由分析 CD25、4-1BB (CD137) 及 PD-1 (CD279) 的表現來監測 T 細胞活化。相對於同型染色對照計算中值熒光強度 (MFI) 比率。根據製造商的說明，使用 LEGENDplex Human CD8/NK panel (Biolegend, San Diego, CA, USA) 分析細胞毒性測定的細胞培養上清液中分泌的細胞激素。
長期培養實驗中的 FAP-4-1BBL
對於 14 天的長期培養系統，用 50 Gy 照射 3T3 huFAP
high細胞，並在實驗開始前一天，將 3.0x10
5細胞接種於 6 孔盤中作為飼養層。隨後，添加 1.8x10
6健康供體 T 細胞 (使用 Pan T 細胞分離套組負分離，人；Miltenyi Biotec) 與 AML 細胞株 SKM1 (3.6x10
6細胞) 及 0.1 µg/mL WT1-TCB ± 2 nM FAP-4-1BBL。培養三天後，補充 SKM1 細胞、WT1-TCB 及 FAP-4-1BBL。在第 7 天，藉由用人 CD33 微珠 (Miltenyi Biotec) 消耗靶細胞從培養物中分離 T 細胞，並如下所述進行功能檢驗。剩餘的 T 細胞與 SKM1、WT1-TCB 及 FAP-4-1BBL 在 3T3 huFAP
high細胞上再培養 7 天，如上所述。
對於功能檢驗，在第 0、7 及 14 天分離的 T 細胞與 SKM1 細胞在 0.01 µg/mL WT1-TCB 或對照抗體 (DP47-TCB) 存在下以 1:2 的效應物：標靶比率共培養。72 小時後分析功能測定以了解 SKM1 細胞的特異性裂解及 T 細胞增生。基於藉由流式細胞分析技術確定的活 SKM1 細胞計數，相對於含有 DP47-TCB 的相應對照計算 WT1-TCB 對 SKM1 細胞的特異性裂解。基於活 T 細胞計數，相對於第 0 天計算 72 小時後 T 細胞的增生。(另請參見
圖 5A以獲取實驗設置的示意圖)。
結果
共培養 4 天後，我們觀察到由健康供體 T 細胞及 WT1-TCB 介導的原發性 AML 細胞的平均特異性裂解為 53.6±8.3%。值得注意的是，在 NIH-3T3 細胞存在的情況下，該值降至 21.8±4.5%。然而，在存在 3T3-huFAP
high細胞的情況下，AML 細胞裂解不僅得到恢復，而且藉由添加 FAP-4-1BBL 得以增強 (67.4±6.5%) (
圖 1及
表 1)。重要的是，WT1-TCB 與 FAP-4-1BBL 的組合改善了 T 細胞增生，尤其是 CD8
+T 細胞 (第 4 天與第 0 天的倍數變化：6.6±1.5 對. 3.0±0.8) (
圖 2)。同時，FAP-4-1BBL 導致活化分子 CD25 (MFI 比率：18.4±5.6 對 11.9±2.8) (
圖 3A) 及 4-1BB (MFI 比率：8.6±5.0 對 3.0±1.2) (
圖 3B) 在 CD3
+T 細胞上的表現增加。FAP-4-1BBL 與 WT1-TCB 之組合未調節共抑制受體 PD-1 的表現 (
圖 3C)。裂解還伴隨著顆粒酶 B (1.4x10
3±1.0x10
3pg/mL 對 6.1x10
1±2.2x10
1pg/mL)、IFNγ (6.0x10
3±3.3x10
3pg/mL 對 3.1x10
2±2.0x10
2pg/mL) 及 TNFα (1.7x10
2±1.1x10
2pg/mL 對 3.7x10
1±2.5x10
1pg/mL) 的分泌增加 (
圖 3 D-F)。在存在 3T3-huFAP
low細胞的情況下，觀察到了總體類似的結果，支持在 AML 中 WT1-TCB 與 FAP-4-1BBL 的組合療法。
表 1.在表現不同水平的人 FAP 的 NIH-3T3 細胞株存在下，FAP-4-1BBL 增強了 WT1-TCB 介導的 HLA-A*02
+AML 細胞的特異性裂解 (n=6)。
| FAP-4-1BBL + WT1-TCB | DP47-4-1BBL + WT1-TCB | 僅 WT1-TCB | 僅 FAP-4-1BBL | |||||
| 均值 | SEM | 均值 | SEM | 均值 | SEM | 均值 | SEM | |
| 3T3-huFAP low | 67.4 | 6,5 | 49,3 | 9,7 | 39,1 | 10,2 | -3,8 | 11,4 |
| 3T3-huFAP high | 69.3 | 6,9 | 43,4 | 10,7 | 35,8 | 12,9 | -11,5 | 12,5 |
| NIH-3T3 | 30,7 | 10,0 | 20,4 | 5,0 | 21,8 | 4,5 | -14,2 | 27,4 |
| 不含 NIH-3T3 | n.a. | n.a. | n.a. | n.a. | 53,6 | 8,3 | n.a. | n.a. |
在 AML 細胞株的長期培養實驗中，我們觀察到由新鮮分離的健康供體 T 細胞及 WT1-TCB 介導的 SKM1 細胞的平均特異性裂解率為 62.9±12.4% (±SEM, n=3)。在用 WT1-TCB 慢性刺激 7 天後，觀察到的 T 細胞特異性裂解相當 (64.0±15.7%)，且刺激 14 天後降至 27.4±7.8%。值得注意的是，如果用 FAP-4-1BBL 額外刺激 T 細胞，則 T 細胞的細胞毒殺能力顯著提高且延長 (第 7 天及第 14 天的平均特異性裂解：分別為 91.8±5.3% 及 75.6±8.0%，n=5) (
圖 5B)。與單獨使用 WT1-TCB 相比，藉由添加 FAP-4-1BBL 改善了細胞毒性還伴隨著 CD8+ T 細胞之增生的改善 (第 7 天的平均倍數變化：10.6±3.1 對 6.1±1.6，n=3) (
圖 5C)。
* * *
儘管為了清楚理解起見，藉由圖示及實例的方式對上述發明進行了詳細描述，但是此等描述及實例不應被解釋是限製本發明之範圍。本文引用的所有專利及科學文獻的揭露內容皆以引用的方式明確納入其所有內容。
圖 1.(A)實例中使用的 HLA-A2/WT1 靶向 T 細胞雙特異性 (TCB) 抗體分子之示意圖 (「WT1 TCB」)。該分子包含針對 CD3 的單個抗原結合部分、針對 HLA-A2/WT1 的兩個抗原結合部分及 Fc 域。
(B)實例中使用的 FAP 靶向 4-1BB (CD137) 促效劑之示意圖 (「FAP-4-1-BBL」)。該分子包含 4-1BBL 胞外域三聚體、針對 FAP 的抗原結合部分及 Fc 域。黑點：Fc 域中的修飾，其促進異源二聚化 (heterodimerization)。*：在 CH 和 CL 域中引入相反電荷的胺基酸。
圖 2.在表現不同水平的人 FAP 的 NIH-3T3 細胞株存在下，FAP-4-1BBL 增強了 WT1-TCB 介導的 HLA-A*02
+AML 細胞的特異性裂解 (n=6)。柱條代表平均值 ± SEM。
圖 3.WT1-TCB 與 FAP-4-1BBL 的組合改善了 T 細胞增生 (n=6)。柱條代表平均值 ± SEM。
(A)CD3
+T 細胞增生對比第 0 天，
(B)CD8
+T 細胞增生對比第 0 天，
(C)CD4
+T 細胞增生對比第 0 天。
圖 4.(A-B)在表現 FAP 的 NIH-3T3 細胞株存在下，WT1-TCB 與 FAP-4-1BBL 組合，T 細胞活化標記物 CD25
(A)及 4-1BB
(B)在 CD3
+T 細胞上的表現增加。
(C)FAP-4-1BBL 未修飾 WT1-TCB 對 PD-1 之上調 (n=6)。
(D-F)WT1-TCB 與 FAP-4-1BBL 組合，顆粒酶 B
(D)、IFNγ
(E)及 TNFα
(F)的分泌增加 (n=4)。柱條代表平均值 ± SEM。
圖 5.(A)用於在有 WT1-TCB 及有和沒有 FAP-4-1BBL 的長期培養系統中監測 T 細胞功能之示意圖。
(B-C)與 FAP-4-1BBL 的共刺激可延長 T 細胞功能，如 CD8
+T 細胞的細胞毒性及增生增加所觀察到的 (n=2-5)。柱條代表平均值 ± SEM。統計檢驗：使用 Tukey 多重對比檢驗的雙向 ANOVA。*p＜0.05。
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Claims (26)
- 一種用於治療個體的癌症之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體，其中該治療包含將該 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體與 4-1BB (CD137) 促效劑組合投予。
- 一種用於治療個體的癌症之 4-1BB (CD137) 促效劑，其中該治療包含將該 4-1BB (CD137) 促效劑與 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體組合投予。
- 一種 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體在製造用於治療個體的癌症之藥物中的用途，其中該治療包含將該 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體與 4-1BB (CD137) 促效劑組合投予。
- 一種 4-1BB (CD137) 促效劑在製造用於治療個體的癌症之藥物中的用途，其中該治療包含將該 4-1BB (CD137) 促效劑與 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體組合投予。
- 一種治療個體的癌症之方法，其包含向該個體投予 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體及 4-1BB (CD137) 促效劑。
- 一種套組，其包含含有 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體的第一藥物及含有 4-1BB (CD137) 促效劑的第二藥物，且視情況進一步包含藥品仿單 (package insert)，該藥品仿單包含用於將該第一藥物與該第二藥物組合投予以治療個體的癌症之說明。
- 如前述請求項中任一項之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、方法或套組，其中該 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體包含 (i) 第一抗原結合部分，其特異性結合至 CD3 且包含：含有 SEQ ID NO: 1 之重鏈 CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 2 之 HCDR2 及 SEQ ID NO: 3 之 HCDR3 的重鏈可變區；及含有 SEQ ID NO: 4 之輕鏈 CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 5 之 LCDR2 及 SEQ ID NO: 6 之 LCDR3 的輕鏈可變區；以及 (ii) 第二抗原結合部分，其特異性結合至 HLA-A2/WT1 且包含：含有 SEQ ID NO: 9 之重鏈 CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 10 之 HCDR2 及 SEQ ID NO: 11 之 HCDR3 的重鏈可變區；及含有 SEQ ID NO: 12 之輕鏈 CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 13 之 LCDR2 及 SEQ ID NO: 14 之 LCDR3 的輕鏈可變區。
- 如前述請求項中任一項之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、用途、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、方法或套組，其中該 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體包含第三抗原結合部分，該第三抗原結合部分特異性結合至 HLA-A2/WT1 及/或由第一次單元及第二次單元所構成的 Fc 域。
- 如前述請求項中任一項之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、用途、方法或套組，其中該 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體包含 (i) 特異性結合至 CD3 之第一抗原結合部分，其包含：含有 SEQ ID NO: 1 之重鏈 CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 2 之 HCDR2 及 SEQ ID NO: 3 之 HCDR3 的重鏈可變區；及含有 SEQ ID NO: 4 之輕鏈 CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 5 之 LCDR2 及 SEQ ID NO: 6 之 LCDR3 的輕鏈可變區，其中該第一抗原結合部分為互換型 Fab 分子，其中 Fab 輕鏈與 Fab 重鏈之可變區或恆定區係經交換的； (ii) 特異性結合至 HLA-A2/WT1 之第二抗原結合部分及第三抗原結合部分，其包含：含有 SEQ ID NO: 9 之重鏈 CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 10 之 HCDR2 及 SEQ ID NO: 11 之 HCDR3 的重鏈可變區；及含有 SEQ ID NO: 12 之輕鏈 CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 13 之 LCDR2 及 SEQ ID NO: 14 之 LCDR3 的輕鏈可變區，其中該第二抗原結合部分及該第三抗原結合部分各為 Fab 分子，特定而言習用 Fab 分子； (iii) 由第一次單元及第二次單元所構成的 Fc 域， 其中該第二抗原結合部分係在 Fab 重鏈的 C 端融合至該第一抗原結合部分之該 Fab 重鏈的 N 端，且該第一抗原結合部分係在該 Fab 重鏈的 C 端融合至該 Fc 域之該第一次單元的 N 端，且其中該第三抗原結合部分係在 Fab 重鏈的 C 端融合至該 Fc 域之該第二次單元的 N 端。
- 如前述請求項中任一項之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、用途、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、方法或套組，其中該 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體之該第一抗原結合部分包含與 SEQ ID NO: 7 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的重鏈可變區序列及與 SEQ ID NO: 8 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的輕鏈可變區序列；及/或該 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體之該第二抗原結合部分及 (在存在時之) 該第三抗原結合部分包含與 SEQ ID NO: 15 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的重鏈可變區序列及與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的輕鏈可變區序列。
- 如前述請求項中任一項之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、用途、方法或套組，其中該 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體之該第一抗原結合部分為互換型 Fab 分子，其中該 Fab 輕鏈與該 Fab 重鏈之該等可變區係經交換的，且其中該 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體之該第二抗原結合部分及 (在存在時之) 該第三抗原結合部分為習用 Fab 分子，其中在恆定域 CL 中，位置 124 處的胺基酸獨立地經離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 取代 (根據 Kabat 編號) 且位置 123 處的胺基酸獨立地經離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 取代 (根據 Kabat 編號)，且在恆定域 CH1 中，位置 147 處的胺基酸獨立地經麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號) 且位置 213 處的胺基酸獨立地經麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。
- 如前述請求項中任一項之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、用途、方法或套組，其中該 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體之該 Fc 域包含促進該 Fc 域的該第一次單元與該第二次單元之締合的修飾，及/或該 Fc 域包含降低與 Fc 受體之結合及/或效應功能的一種或多種胺基酸取代。
- 如前述請求項中任一項之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、用途、方法或套組，其中該 4-1BB (CD137) 促效劑包含 4-1BBL 之胞外域或其片段，特定而言 4-1BBL 之三個胞外域或其片段。
- 如前述請求項中任一項之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、用途、方法或套組，其中 4-1BBL 之該胞外域或其片段包含與選自由 SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 37 及 SEQ ID NO: 38 所組成之群組的胺基酸序列，特定而言 SEQ ID NO: 35 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列。
- 如前述請求項中任一項之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、用途、方法或套組，其中該 4-1BB (CD137) 促效劑包含特異性結合至腫瘤相關抗原，特定而言纖維母細胞活化蛋白 (FAP) 的抗原結合部分。
- 如請求項 15 之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、用途、方法或套組，其中特異性結合至 FAP 的該抗原結合部分包含：含有 SEQ ID NO: 39 之重鏈 CDR (HCDR) 1、SEQ ID NO: 40 之 HCDR2 及 SEQ ID NO: 41 之 HCDR3 的重鏈可變區 (VH)；及含有 SEQ ID NO: 42 之輕鏈 CDR (LCDR) 1、SEQ ID NO: 43 之 LCDR2 及 SEQ ID NO: 44 之 LCDR3 的輕鏈可變區。
- 如請求項 15 或 16 之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、用途、方法或套組，其中特異性結合至 FAP 的該抗原結合部分包含：與 SEQ ID NO: 45 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的重鏈可變區序列；及與 SEQ ID NO: 46 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的輕鏈可變區序列。
- 如前述請求項中任一項之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、用途、方法或套組，其中該 4-1BB (CD137) 促效劑包含由第一次單元及第二次單元所構成的 Fc 域。
- 如請求項 18 之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、用途、方法或套組，其中 4-1BB (CD137) 促效劑之該 Fc 域包含促進該 Fc 域的該第一次單元與該第二次單元之締合的修飾，及/或該 Fc 域包含降低與 Fc 受體之結合及/或效應功能的一種或多種胺基酸取代。
- 如前述請求項中任一項之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、用途、方法或套組，其中該 4-1BBL (CD137) 促效劑為抗原結合分子，該抗原結合分子包含 (i) 4-1BBL 之第一胞外域、第二胞外域及第三胞外域或其片段； (ii) 特異性結合至 FAP 的抗原結合部分，其中該抗原結合部分為 Fab 分子； (iii) 由第一次單元及第二次單元所構成的 Fc 域； (iv) CL 域及 CH1 域； 其中該抗原結合分子由以下所構成： (a) 第一多肽，其包含：(a1) 4-1BBL 之該第一胞外域或其片段，其在 C 端融合至 4-1BBL 之該第二胞外域或其片段的 N 端；(a2) 4-1BBL 之該第二胞外域或其片段，其在 C 端融合至該 CL 域的 N 端；(a3) 該 CL 域，其在 C 端融合至該 Fc 域之該等次單元中之一者 (例如該第一次單元) 的 N 端；及 (a4) 該 Fc 域之該等次單元中之一者 (例如該第一次單元)； (b) 第二多肽，其包含：(b1) 4-1BBL 之該第三胞外域或其片段，其在 C 端融合至該 CH1 域的 N 端；及 (b2) 該 CH1 域； (c) 第三多肽，其包含：(c1) 該 Fab 分子的重鏈，其在 C 端融合至該 Fc 域之該等次單元中之另一者 (例如該第二次單元) 的 N 端；及 (c2) 該 Fc 域之該等次單元中之另一者 (例如該第二次單元)；以及 (d) 第四多肽，其包含該 Fab 分子的輕鏈。
- 如請求項 20 之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、用途、方法或套組，其中在該第一多肽之該 CL 域中，位置 124 處之胺基酸獨立地經離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 取代 (根據 Kabat 編號) 且位置 123 處之胺基酸獨立地經離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 取代 (根據 Kabat 編號)，且在該第二多肽之該 CH1 域中，位置 147 處之胺基酸獨立地經麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號) 且位置 213 處之胺基酸獨立地經麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。
- 如請求項 20 或 21 之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、用途、方法或套組，其中該第一多肽包含與 SEQ ID NO: 48 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列，該第二多肽包含與 SEQ ID NO: 49 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列，該第三多肽包含與 SEQ ID NO: 50 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列，且該第四多肽包含與 SEQ ID NO: 51 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列。
- 如請求項 1 至 12 中任一項之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、用途、方法或套組，其中該 4-1BB (CD137) 促效劑為抗 4-1BB 抗體，特定而言抗 FAP/抗 4-1BB 雙特異性抗體。
- 如前述請求項中任一項之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、用途、方法或套組，其中該癌症為 WT1 陽性癌症。
- 如前述請求項中任一項之 HLA-A2/WT1 x CD3 雙特異性抗體、4-1BBL (CD137) 促效劑、用途、用途、方法或套組，其中該癌症為急性骨髓性白血病 (AML)。
- 如前文所述之本發明。
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