TW202304482A - 於個體中增加nkg2d陽性淋巴球之方法及其用途 - Google Patents

Abstract

本文提供於有需要的個體中增加NKG2D陽性淋巴球之方法，及其用途。

Description

於個體中增加NKG2D陽性淋巴球之方法及其用途

相關申請案的交叉引用

本申請案請求於2021年3月14日提申的美國臨時專利申請案第63/160,858號的優先權。這件先前申請案的揭示內容被視為本申請案揭示內容的一部分，且以其全文被併入本申請案。

本發明大體上是有關向個體投予去核類紅血球的方法、於個體中增加NKG2D陽性淋巴球的方法，以及於個體中治療MICA陽性癌症、MICB陽性癌症或MICA/MICB陽性癌症的方法。 序列表

本申請案含有一份序列表，該份序列表已按電子方式，以一份名為47472.0083WO1_ST25.txt的ASCII文本檔案提交。ASCII文本檔案創建於2022年3月1日，大小為106個千位元組。ASCII文本檔案中的材料以全文引用的方式併入本文。

正在開發經改造的去核類紅血球作為治療劑，其為有需要的患者攜帶或呈遞外源性蛋白。

本發明是有關使用MHC第I類多肽相關序列A(MICA)及/或MHC第I類多肽相關序列B(MICB)作為生物標記，以供鑑定用去核類紅血球治療的個體，該等去核類紅血球包括有第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本發明至少部分是基於發現到：向個體投予去核類紅血球會導致個體中NKG2D陽性NK細胞的數量增加，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽及在其細胞外表面上的第二外源性多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段，該二外源性多肽包括4-1BBL或其功能片段。因此，於個體中測定癌症的MICA陽性及/或MICB陽性對於鑑別出可能對使用這些細胞治療有反應的患者特別有用。有鑑於這個發現，本文提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症、MICB陽性癌症或MICA/MICB陽性癌症的個體中增加NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量的方法；治療先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症、MICB陽性癌症或MICA/MICB陽性癌症的個體的方法；於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體中減少MICA陽性癌細胞的數量及/或增生的方法；於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體中減少MICB陽性癌細胞的數量及/或增生的方法；於先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症的個體中減少MICA/MICB陽性癌細胞的數量及/或增生的方法；於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體中殺死MICA陽性癌細胞的方法；於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體中殺死MICB陽性癌細胞的方法；於先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症的個體中殺死MICA/MICB陽性癌細胞的方法；以及於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症、MICB陽性癌症或MICA/MICB陽性癌症的個體中減少實體腫瘤體積的方法。本文還提供了針對先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症、MICB陽性癌症或MICA/MICB陽性癌症的個體，選擇在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽的去核類紅血球的方法，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體中增加NKG2D陽性淋巴球數量的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文所述任何方法的一些實施例進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症。在一些實施例中，MICA陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA陽性癌症是MICA陽性/HLA-E陰性癌症。

本文提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體中增加NKG2D陽性淋巴球數量的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。在本文所述任何方法的一些實施例中，該方法進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性癌症。在一些實施例中，MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICB陽性癌症是MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

本文提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症的個體中增加NKG2D陽性淋巴球數量的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。在本文所述任何方法的一些實施例中，該方法進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA/MICB陽性癌症是選自由以下組成之群：腎上腺皮質癌、急性骨髓性白血病、胰腺癌、膽管癌、腎癌、子宮頸鱗狀細胞癌、子宮頸內癌、結腸直腸癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤，和肺癌。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA/MICB陽性癌症是MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中NKG2D陽性淋巴球的數量相比，投予導致個體中NKG2D陽性淋巴球的數量增加至少5%。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中NKG2D陽性淋巴球的數量相比，投予導致個體中NKG2D陽性淋巴球的數量增加至少10%。

在本文所述任何方法的一些實施例中，NKG2D陽性淋巴球是NKG2D陽性NK細胞。

在本文所述任何方法的一些實施例中，該方法導致個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球的數量增加。在本文所述任何方法的一些實施例中，投予步驟導致個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球的數量增加至少5%。在本文所述任何方法的一些實施例中，投予步驟導致個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球的數量增加至少10%。在本文所述任何方法的一些實施例中，投予步驟導致個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球的數量增加至少15%。

在本文所述任何方法的一些實施例中，NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球是NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞。

在本文所述任何方法的一些實施例中，該方法進一步包括向個體投予NKG2A抑制劑。在本文所述任何方法的一些實施例中，NKG2A抑制劑是特異地結合至NKG2A的拮抗性抗體。

本文也提供了治療先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體的方法，包括向先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性多肽，該第一外源性多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。在本文所述任何方法的一些實施例中，該方法進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA陽性癌症是MICA陽性/HLA-E陰性癌症。

本文還提供了治療先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體的方法，包括向先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性多肽，該第一外源性多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文所述任何方法的一些實施例進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICB陽性癌症是MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

本文還提供了治療先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症的個體的方法，包括向先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症的個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性多肽，該第一外源性多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文所述任何方法的一些實施例進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA/MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、急性骨髓性白血病、胰腺癌、膽管癌、腎癌、子宮頸鱗狀細胞癌、子宮頸內癌、結腸直腸癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤，和肺癌。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA/MICB陽性癌症是MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

在本文所述任何方法的一些實施例中，投予導致個體中NKG2D陽性淋巴球的數量增加及/或個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球的數量增加。在本文所述任何方法的一些實施例中，NKG2D陽性淋巴球是NKG2D陽性NK細胞。在本文所述任何方法的一些實施例中，NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球是NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括向個體投予NKG2A抑制劑。在本文所述任何方法的一些實施例中，NKG2A抑制劑是特異地結合至NKG2A的拮抗性抗體。

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體中減少MICA陽性癌細胞的數量及/或增生的方法，包括投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性多肽，該第一外源性多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

在本文所述任何方法的一些實施例中，投予導致個體中MICA陽性癌細胞的數量減少。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA陽性癌細胞的數量相比，投予導致個體中MICA陽性癌細胞的數量減少至少5%。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA陽性癌細胞的數量相比，投予導致個體中MICA陽性癌細胞的數量減少至少10%。

在本文所述任何方法的一些實施例中，投予導致個體中MICA陽性癌細胞的增生減少。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA陽性癌細胞的增生相比，投予導致個體中MICA陽性癌細胞的增生減少至少5%。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA陽性癌細胞的增生相比，投予導致個體中MICA陽性癌細胞的增生減少至少10%。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA陽性癌症是MICA陽性/HLA-E陰性癌症。

在本文所述任何方法的一些實施例中，投予導致個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比，投予導致個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少至少5%。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比，投予導致個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少至少10%。

在本文所述任何方法的一些實施例中，投予導致個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比，投予導致個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少至少5%。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比，投予導致個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少至少10%。

本文還提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體中減少MICB陽性癌細胞的數量及/或增生的方法，包括投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性多肽，該第一外源性多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

在本文所述任何方法的一些實施例中，投予導致個體中MICB陽性癌細胞的數量減少。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICB陽性癌細胞的數量相比，投予導致個體中MICB陽性癌細胞的數量減少至少5%。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICB陽性癌細胞的數量相比，投予導致個體中MICB陽性癌細胞的數量減少至少10%。

在本文所述任何方法的一些實施例中，投予導致個體中MICB陽性癌細胞的增生減少。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICB陽性癌細胞的增生相比，投予導致個體中MICB陽性癌細胞的增生減少至少5%。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICB陽性癌細胞的增生相比，投予導致個體中MICB陽性癌細胞的增生減少至少10%。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICB陽性癌症是MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

在本文所述任何方法的一些實施例中，投予導致個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比，投予導致個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少至少5%。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比，投予導致個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少至少10%。

在本文所述任何方法的一些實施例中，投予導致個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比，投予導致個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少至少5%。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比，投予導致個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少至少10%。

本文還提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症的個體中減少MICA/MICB陽性癌細胞的數量及/或增生的方法，包括投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性多肽，該第一外源性多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

在本文所述任何方法的一些實施例中，投予導致個體中MICA/MICB陽性癌細胞的數量減少。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA/MICB陽性癌細胞的數量相比，投予導致個體中MICA/MICB陽性癌細胞的數量減少至少5%。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA/MICB陽性癌細胞的數量相比，投予導致個體中MICA/MICB陽性癌細胞的數量減少至少10%。

在本文所述任何方法的一些實施例中，投予導致個體中MICA/MICB陽性癌細胞的增生減少。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA/MICB陽性癌細胞的增生相比，投予導致個體中MICA/MICB陽性癌細胞的增生減少至少5%。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA/MICB陽性癌細胞的增生相比，投予導致個體中MICA/MICB陽性癌細胞的增生減少至少10%。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA/MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、急性骨髓性白血病、胰腺癌、膽管癌、腎癌、子宮頸鱗狀細胞癌、子宮頸內癌、結腸直腸癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤，和肺癌。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA/MICB-陽性癌症是MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

在本文所述任何方法的一些實施例中，投予導致個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比，投予導致個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少至少5%。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比，投予導致個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少至少10%。

在本文所述任何方法的一些實施例中，投予導致個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比，投予導致個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少至少5%。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比，投予導致個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少至少10%。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比，投予導致個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少至少15%。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括向個體投予NKG2A抑制劑。在本文所述任何方法的一些實施例中，NKG2A抑制劑是特異地結合至NKG2A的拮抗性抗體。

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體中誘導殺死MICA陽性癌細胞的方法，包括投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA陽性癌細胞是選自由以下組成之群組的癌細胞：腎上腺皮質癌細胞、膽管癌細胞、胰腺癌細胞、腎癌細胞、甲狀腺癌細胞、間皮瘤癌細胞、皮膚表皮黑色素瘤癌細胞、結腸直腸癌細胞、子宮頸鱗狀細胞癌細胞，和子宮頸內腺癌細胞。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。

在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA陽性癌症是MICA陽性/HLA-E陰性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA陽性癌細胞是MICA陽性和HLA-E陰性癌細胞。

本文還提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體中誘導殺死MICB陽性癌細胞的方法，包括投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICB陽性癌細胞是選自由以下組成之群組的癌細胞：急性骨髓性白血病癌細胞、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤癌細胞、睪丸生殖細胞腫瘤癌細胞、胃腺癌細胞、卵巢漿液性囊腺癌細胞、食道癌細胞，和肺癌細胞。

在本文所述任何方法的一些實施例中，MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。

在本文所述任何方法的一些實施例中，MICB陽性癌症是MICB陽性/HLA-E陰性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICB陽性癌細胞是MICB陽性和HLA-E陰性癌細胞。

本文還提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症的個體中誘導殺死MICA/MICB陽性癌細胞的方法，包括投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包刮去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA/MICB陽性癌細胞是選自由以下組成之群組的癌細胞：腎上腺皮質癌細胞、急性骨髓性白血病癌細胞、胰腺癌細胞、膽管癌細胞、腎癌細胞、子宮頸鱗狀細胞癌細胞、子宮頸內癌細胞、結腸直腸癌細胞、間皮瘤癌細胞、皮膚表皮黑色素瘤癌細胞，和肺癌細胞。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA/MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、急性骨髓性白血病、胰腺癌、膽管癌、腎癌、子宮頸鱗狀細胞癌、子宮頸內癌、結腸直腸癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤，和肺癌。

在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA/MICB陽性癌症是MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA/MICB陽性癌細胞是MICA/MICB陽性和HLA-E陰性癌細胞。

在本文所述任何方法的一些實施例中，殺死包括壞死。在本文所述任何方法的一些實施例中，殺死包括細胞凋亡。在本文所述任何方法的一些實施例中，殺死是經由NK細胞介導的細胞溶解所介導的。在本文所述任何方法的一些實施例中，投予亦導致殺死個體體內的非MICA陽性和非MICB陽性癌細胞。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括向個體投予NKG2A抑制劑。在本文所述任何方法的一些實施例中，NKG2A抑制劑是特異地結合至NKG2A的拮抗性抗體。

本文還提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體中減少實體腫瘤體積的方法，包括投予治療有效量的去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文所述方法的一些實施例進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA陽性癌症是MICA陽性/HLA-E陰性癌症。

本文還提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體中減少實體腫瘤體積的方法，包括投予治療有效量的去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICB陽性癌症是MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

本文還提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症的個體中減少實體腫瘤體積的方法，包括投予治療有效量的去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA/MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、急性骨髓性白血病、胰腺癌、膽管癌、腎癌、子宮頸鱗狀細胞癌、子宮頸內癌、結腸直腸癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤，和肺癌。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA/MICB-陽性癌症是MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中實體腫瘤體積相比，投予導致實體腫瘤體積減少至少5%。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中實體腫瘤體積相比，投予導致實體腫瘤體積減少至少10%。在本文所述任何方法的一些實施例中，與投予前個體中實體腫瘤體積相比，投予導致實體腫瘤體積減少至少15%。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括向個體投予NKG2A抑制劑。在本文所述任何方法的一些實施例中，NKG2A抑制劑是特異地結合至NKG2A的拮抗性抗體。

在本文所述任何方法的一些實施例中，去核類紅血球包括至少1,000個複本的第一外源性融合多肽。

在本文所述任何方法的一些實施例中，去核類紅血球是藉由包括以下的方法製造：將編碼第一外源性融合多肽的核酸引入有核類紅血球前驅細胞中；以及在足以表現第一外源性融合多肽並使有核類紅血球前驅細胞去核的條件下培養有核類紅血球前驅細胞。

在本文所述任何方法的一些實施例中，去核類紅血球進一步包括包括4-1BBL或其功能片段的第二外源性多肽，其中該第二外源性多肽存在於去核類紅血球的細胞外表面上。在一些實施例中，去核類紅血球包括至少1,000個複本的第二外源性多肽。

在本文所述任何方法的一些實施例中，去核類紅血球是藉由包括以下的方法製造：將編碼第一外源性融合多肽或其功能片段的核酸和編碼第二外源性多肽的核酸引入有核類紅血球前驅細胞中；以及在足以表現第一外源性融合多肽和第二外源性多肽並使有核類紅血球前驅細胞去核的條件下培養有核類紅血球前驅細胞。

在本文所述任何方法的一些實施例中，去核類紅血球不是低滲透析細胞。在本文所述任何方法的一些實施例中，去核類紅血球不包括經分選酶轉移的特徵(sortase-transfer signature)。

在本文所述任何方法的一些實施例中，個體是人類且去核類紅血球是人類細胞。

本文還提供了套組，其包括：醫藥組成物以及用於實施本文所述任何方法的說明書，該醫藥組成物包括在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽的去核類紅血球，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

在本文所述任何套組的一些實施例中，去核類紅血球包括至少1,000個複本的第一外源性融合多肽。

在本文所述任何套組的一些實施例中，去核類紅血球是藉由包括以下的方法製造：將編碼第一外源性融合多肽的核酸引入有核類紅血球前驅細胞中；以及在足以表現第一外源性融合多肽並使有核類紅血球前驅細胞去核的條件下培養有核類紅血球前驅細胞。

在本文所述任何套組的一些實施例中，去核類紅血球進一步包括包括4-1BBL或其功能片段的第二外源性多肽，其中第二外源性多肽存在於去核類紅血球的細胞外表面上。在本文所述任何套組的一些實施例中，去核類紅血球包括至少1,000個複本的第二外源性多肽。

在本文所述任何套組的一些實施例中，去核類紅血球是藉由包括以下的方法製造：將編碼第一外源性融合多肽的核酸和編碼第二外源性多肽的核酸引入有核類紅血球前驅細胞中；以及在足以表現第一外源性融合多肽和第二外源性多肽以及使有核類紅血球前驅細胞去核的條件下培養有核類紅血球前驅細胞。

在本文所述任何套組的一些實施例中，去核類紅血球不是低滲透析細胞。在本文所述任何套組的一些實施例中，去核類紅血球不包括經分選酶轉移的特徵。在本文所述任何套組的一些實施例中，去核類紅血球是人類細胞。

本文還提供了選擇醫藥組成物的方法，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段，以供用於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體。

在本文所述任何方法的一些實施例中，進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。在本文所述方法的一些實施例中，MICA陽性癌症是MICA陽性/HLA-E陰性癌症。

本文還提供了選擇醫藥組成物的方法，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段，以供用於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICB陽性癌症是MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

本文還提供了選擇醫藥組成物的方法，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段，以供用於先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症的個體。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性癌症。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA/MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、急性骨髓性白血病、胰腺癌、膽管癌、腎癌、子宮頸鱗狀細胞癌、子宮頸內癌、結腸直腸癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤，和肺癌。在本文所述任何方法的一些實施例中，MICA/MICB-陽性癌症是MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

術語「經改造的去核類紅血球」是指去核類紅血球(例如，人類去核類紅血球)，其包括一或多個(例如，兩個、三個、四個，五個或六個)外源性多肽(例如，本文所述或本領域中已知的例示性外源性多肽的任何組合)。例如，經改造的去核類紅血球可具有一或多個外源性多肽存在於其細胞質中。在一些實例中，經改造的去核類紅血球可具有一或多個外源性多肽存在於其細胞外表面上。在一些實例中，經改造的去核類紅血球可具有(i)存在於其細胞質中的一或多個外源性多肽，以及(ii)存在於其細胞外表面上的一或多個外源性多肽。經改造去核類紅血球的非限制性實例包括點擊接合的去核類紅血球、已被低滲加載的去核類紅血球，以及已藉由物理操作(例如，本文所述或本領域中已知的任何例示性類型的物理操作)被加載的去核類紅血球。本文描述經改造的去核類紅血球的其他非限制性態樣。

術語「接合的去核類紅血球」表示一種經改造的去核類紅血球，其具有至少一個外源性多肽透過酶及/或肽序列的催化活性，及/或化學反應而接合至另一個存在於經改造去核類紅血球的細胞外表面上的多肽(例如，去核類紅血球的內源性多肽或不同的外源性多肽)。

「經低滲加載的去核類紅血球」是指一種經改造的去核類紅血球，其至少一部分是透過將包括一或多個外源性多肽的去核類紅血球或類紅血球前驅細胞暴露於低離子強度緩衝劑(例如，本文所述的任何例示性低離子強度緩衝劑)而生成。本文描述了可用於生成經低滲加載的去核類紅血球的方法的非限制性實例。生成經低滲加載去核類紅血球的額外方法是本領域中已知的。

術語「藉由物理操作而被加載的去核類紅血球」是指一種去核類紅血球，其至少一部分是透過將編碼一或多個外源性多肽(例如本文所述或本領域中已知的任何例示性外源性多肽)及/或外源性多肽之核酸引入類紅血球前驅細胞中的方式來物理操作類紅血球前驅細胞而生成。可以用於將編碼一或多個外源性多肽的核酸引入類紅血球前驅細胞中的物理操作的非限制性實例包括電穿孔和顆粒介導的轉染。可用於將編碼一或多個外源性多肽的核酸引入類紅血球前驅細胞中的物理操作的額外實例是本領域中已知的。

術語「外源性多肽」是指一種多肽，其被引入細胞之內或之上，或藉由將編碼該多肽的外源性核酸引入細胞或引入細胞之前驅細胞中而被細胞表現。在一些實施例中，外源性多肽是由被引入細胞或細胞之前驅細胞中的外源性核酸所編碼的多肽，該核酸視情況不被細胞所保留。在一些實施例中，外源性多肽是藉由化學或酶促方式結合至細胞表面的多肽。外源性多肽的非限制性類別包括酶、介白素、細胞激素受體、Fc結合分子、T細胞活化配體、T細胞受體、免疫抑制性分子、MHC分子、APC結合分子、自體抗原、過敏原、毒素、靶向劑、受體配體(例如受體促效劑或受體拮抗劑)，以及抗體或抗體片段。

術語「在細胞外表面上」在使用於外源性多肽的上下文時表示：(1)以物理方式附接至或至少部分地嵌入去核類紅血球的膜的外源性多肽(例如，跨膜多肽、周邊膜多肽、脂質錨定多肽(例如GPI錨定、N-肉豆蔻醯化多肽或S-棕櫚醯化多肽))，或(2)穩定結合至其同源受體的外源性多肽，其中同源受體以物理方式附接至去核類紅血球的膜(例如，結合至其同源受體的配體，其中同源受體以物理方式附接至去核類紅血球的膜)。用於確定外源性多肽存在於去核類紅血球細胞外表面上的非限制性方法包括螢光活化細胞分選(FACS)、免疫組織化學、細胞分級分析，和西方墨點法。

術語「類紅血球前驅細胞」是指一種能夠最終分化/發育成去核類紅血球的哺乳動物細胞。在一些實施例中，類紅血球前驅細胞是臍帶血幹細胞、CD34 ⁺細胞、造血幹/前驅細胞(HSC、HSPC)、脾臟群落形成(CFU-S)細胞、共同骨髓前驅(CMP)細胞、胚細胞群落形成細胞、爆發性形成單位類紅血球/紅血球(BFU-E)、巨核細胞-類紅血球前驅(MEP)細胞、類紅血球群落形成單位或群落形成單位紅血球(CFU-E)、誘導多能性幹細胞(iPSC)，間質幹細胞(MSC)或其組合。

術語「個體」是指任何哺乳動物。在一些實施例中，個體或「需要治療的個體」可以是靈長類動物(例如，人類、猿猴(例如，猴子(例如，絨猿或狒狒)，或猿類(例如，大猩猩、黑猩猩、類紅毛猩猩，或長臂猿))、囓齒動物(例如，小鼠、天竺鼠、倉鼠或大鼠)、兔、狗、貓、馬、綿羊、牛，豬或山羊。在一些實施例中，個體或「適於治療的個體」可以是非人類哺乳動物，尤其可採用哺乳動物，其通常用作模型供證明在人類體內的治療功效(例如，小鼠、豬，大鼠或者非人類靈長類動物)。在一些實例中，個體可以經醫療專業人員(例如臨床醫師、實驗室技術人員、臨床醫師助理、護士，或臨床實驗室技術人員)事先診斷或鑑定為需要治療(例如先前被診斷或鑑定為患有MICA陽性癌症或先前被診斷或鑑定為患有MICA陽性與HLA-E陰性癌症；先前被診斷或鑑定為患有MICB陽性癌症或先前被診斷或鑑定為患有MICB陽性與HLA-E陰性癌症；或先前被診斷或鑑定患有MICA/MICB陽性癌症或先前被診斷或鑑定為患有MICA/MICB陽性與HLA-E陰性癌症)。

如本文所用，「治療」是指個體的醫學疾病或病況的一或多種症狀的數量、嚴重程度，頻率及/或持續時間減少。

如本文所用，術語「MICA」表示MICA多肽或MICA mRNA，包括野生型人類MICA多肽和野生型人類MICA mRNA，及其變體(例如，截短或突變形式)。術語「MICA」排除可溶性MICA多肽。本文描述了偵測MICA含量的方法的非限制性實例。

如本文所用，術語「MICA陽性癌症」是指包括MICA陽性癌細胞的癌症。本文描述了MICA陽性癌症的非限制性實例。

如本文所用，術語「MICA陽性癌細胞」是指MICA含量(MICA多肽或MICA mRNA)高於MICA參考含量的癌細胞。本文描述了MICA的參考含量的非限制性實例。本文也描述了MICA陽性癌細胞的非限制性實例。

如本文所用，術語「MICB」表示MICB多肽或MICB mRNA，包括野生型人類MICB多肽和野生型人類MICB mRNA，及其變體(例如，截短或突變形式)。術語「MICB」排除可溶性MICB多肽。本文描述了偵測MICB含量的方法的非限制性實例。

如本文所用，術語「MICB陽性癌症」是指包括MICB陽性癌細胞的癌症。本文描述了MICB陽性癌症的非限制性實例。

如本文所用，術語「MICB陽性癌細胞」是指MICB含量(MICB多肽或MICB mRNA)高於MICB參考含量的癌細胞。本文描述了MICB參考含量的非限制性實例。本文還描述了MICB陽性癌細胞的非限制性實例。

如本文所用，術語「MICA/MICB陽性癌症」是指包括MICA/MICB陽性癌細胞的癌症，或包括MICA/MICB陽性癌細胞的癌症。本文描述了MICA/MICB陽性癌症的非限制性實例。

如本文所用，術語「MICA/MICB陽性癌細胞」是指MICA含量(MICA多肽或MICA mRNA)高於MICA參考含量，且MICB含量(MICB多肽或MICB mRNA)高於MICB參考含量的癌細胞。本文也描述了MICA/MICB陽性癌細胞的非限制性實例。

如本文所用，術語「HLA-E」是指人類白血球抗原-E(HLA-E)多肽或HLA-E mRNA，包括野生型人類HLA-E多肽和編碼野生型人類HLA-E的mRNA，及其變體(例如，截斷或突變形式)。本文描述了偵測HLA-E含量的方法的非限制性實例。

如本文所用，術語「HLA-E陰性癌症」是指具有HLA-E陰性癌細胞的癌症。

如本文所用，術語「HLA-E陰性癌細胞」是指HLA-E含量(HLA-E多肽或HLA-E mRNA)低於HLA-E參考含量的癌細胞。本文描述了HLA-E參考含量的非限制性實例。

如本文所用，術語「NKG2D」是指NKG2D多肽或NKG2D mRNA，包括野生型人類NKG2D多肽和編碼野生型人類NKG2D的mRNA，及其變體(例如，截短或突變形式)。術語「NKG2D」還包括所有已知的NKG2D多肽的同型和NKG2D mRNA。本文描述了偵測NKG2D含量的方法的非限制性實例。

如本文所用，術語「NKG2D陽性淋巴球」是指NKG2D含量(NKG2D多肽或NKG2D mRNA)高於NKG2D參考含量的淋巴球。本文描述了NKG2D參考含量的非限制性實例。

如本文所用，術語「NKG2A」是指NK第2群成員A(NKG2A)多肽或NKG2A mRNA，包括野生型人類NKG2A多肽和編碼野生型人類NKG2A的mRNA，及其變體(例如，截短或突變形式)。本文還描述了偵測NKG2A含量的方法的非限制性實例。

nkg2a基因編碼兩種同型，NKG2A和NKG2B，後者缺少莖區。如本文所用，術語「NKG2A」不包括NKG2B多肽或編碼NKG2B多肽的mRNA轉錄本。

如本文所用，術語「NKG2A陰性淋巴球」表示NKG2A含量(NKG2A多肽或NKG2A mRNA)低於NKG2A參考含量的淋巴球。本文描述了NKG2A參考含量的非限制性實例。

如本文所用，術語「NKG2A陽性淋巴球」表示NKG2A含量(NKG2A多肽或NKG2A mRNA)高於NKG2A參考含量的淋巴球。本文描述了NKG2A參考含量的非限制性實例。

如本文所用，術語「NK細胞介導的細胞毒性」是指NK細胞誘導殺死其他細胞。在一些實施例中，「NK細胞介導的細胞毒性」是NK細胞用來誘導殺死癌細胞的一種機制。

如本文所用，術語「NK細胞介導的細胞溶解」表示能夠釋放溶解顆粒的NK細胞，其中溶解顆粒用於誘導殺死其他細胞。在一些實施例中，溶解顆粒至少包括穿孔素和顆粒酶。

如本文所用，術語「運輸」是指個體血液中的NK細胞。例如，「個體中NKG2D陽性NK細胞的運輸增加」是指個體血液中NKG2D陽性NK細胞增加。在另一個實例中，「個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞的運輸增加」是指個體血液中NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞增加。

如本文所用，術語「分選酶轉移特徵(sortase transfer signature)」是指包括可透過分選酶反應產生的序列的外源性多肽。缺少分選酶轉移特徵的多肽的非限制性實例如WO 2017/123646中所述，其以全文引用的方式併入。

除非另有定義，否則本文使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域中通常知識者通常所理解的相同含義。本文描述了用於本發明的方法和材料；也可以使用本領域中已知的其他合宜方法和材料。材料，方法和實例僅是說明性的，而非具有限制性的。本文提及的所有公開案、專利申請案、專利案、序列，數據庫條目和其他參考文獻以全文引用的方式併入。在相衝突的情況下，以本說明書(包括定義)為準。

根據以下詳細說明和圖式以及申請專利範圍，本發明的其他特徵和優點將顯而易見。

本文提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體中增加NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體中增加NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文還提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症的個體中增加NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性、MICB陽性，或MICA/MICB陽性癌症的個體中增加NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及在其細胞外表面上的第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL或其功能片段。這些方法的一些實施例導致個體中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量增加至少1%、增加至少2%、增加至少3%、增加至少4%、增加至少5%、增加至少6%，增加至少7%、增加至少8%、增加至少9%、增加至少10%、增加至少15%、增加至少20%、增加至少25%、增加至少30%、增加至少35%、增加至少40%、增加至少45%、增加至少50%、增加至少55%、增加至少60%、增加至少65%、增加至少70%、增加至少75%、增加至少80%、增加至少85%、增加至少90%、增加至少95%、增加至少100%、增加至少150%、增加至少200%、增加至少250%、增加至少300%、增加至少350%、增加至少400%、增加至少450%、增加至少500%、增加至少550%、增加至少600%、增加至少650%、增加至少700%、增加至少750%、增加至少800%、增加至少850%、增加至少900%、增加至少950%，或增加至少1000%(例如，與投予前個體中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量相比)。這些方法的一些實施例導致個體中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量增加約1%至增加約1000%、增加約1%至增加約900%、增加約1%至增加約800%、增加約1%至增加約700%、增加約1%至增加約600%、增加約1%至增加約500%、增加約1%至增加約400%、增加約1%至增加約300%、增加約1%至增加約200%、增加約1%至增加約150%、增加約1%至增加約100%、增加約1%至增加約90%、增加約1%至增加約80%、增加約1%至增加約70%、增加約1%至增加約60%、增加約1%至增加約50%、增加約1%至增加約40%、增加約1%至增加約30%、增加約1%至增加約20%、增加約1%至增加約10%、增加約1%至增加約5%、增加約5%至增加約1000%、增加約5%至增加約900%、增加約5%至增加約800%、增加約5%至增加約700%、增加約5%至增加約600%、增加約5%至增加約500%、增加約5%至增加約400%、增加約5%至增加約300%、增加約5%至增加約200%、增加約5%至增加約150%、增加約5%至增加約100%、增加約5%至增加約90%、增加約5%至增加約80%、增加約5%至增加約70%、增加約5%至增加約60%、增加約5%至增加約50%、增加約5%至增加約40%、增加約5%至增加約30%、增加約5%至增加約20%、增加約5%至增加約10%、增加約10%至增加約1000%、增加約10%至增加約900%、增加約10%至增加約800%、增加約10%至增加約700%、增加約10%至增加約600%、增加約10%至增加約500%、增加約10%至增加約400%、增加約10%至增加約300%、增加約10%至增加約200%、增加約10%至增加約150%、增加約10%至增加約100%、增加約10%至增加約90%、增加約10%至增加約80%、增加約10%至增加約70%、增加約10%至增加約60%、增加約10%至增加約50%、增加約10%至增加約40%、增加約10%至增加約30%、增加約10%至增加約20%、增加約20%至增加約1000%、增加約20%至增加約900%、增加約20%至增加約800%、增加約20%至增加約700%、增加約20%至增加約600%、增加約20%至增加約500%、增加約20%至增加約400%、增加約20%至增加約300%、增加約20%至增加約200%、增加約20%至增加約150%、增加約20%至增加約100%、增加約20%至增加約90%、增加約20%至增加約80%、增加約20%至增加約70%、增加約20%至增加約60%、增加約20%至增加約50%、增加約20%至增加約40%、增加約20%至增加約30%、增加約30%至增加約1000%、增加約30%至增加約900%、增加約30%至增加約800%、增加約30%至增加約700%、增加約30%至增加約600%、增加約30%至增加約500%、增加約30%至增加約400%、增加約30%至增加約300%、增加約30%至增加約200%、增加約30%至增加約150%、增加約30%至增加約100%、增加約30%至增加約90%、增加約30%至增加約80%、增加約30%至增加約70%、增加約30%至增加約60%、增加約30%至增加約50%、增加約30%至增加約40%、增加約40%至增加約1000%、增加約40%至增加約900%、增加約40%至增加約800%、增加約40%至增加約700%、增加約40%至增加約600%、增加約40%至增加約500%、增加約40%至增加約400%、增加約40%至增加約300%、增加約40%至增加約200%、增加約40%至增加約150%、增加約40%至增加約100%、增加約40%至增加約90%、增加約40%至增加約80%、增加約40%至增加約70%、增加約40%至增加約60%、增加約40%至增加約50%、增加約50%至增加約1000%、增加約50%至增加約900%、增加約50%至增加約800%、增加約50%至增加約700%、增加約50%至增加約600%、增加約50%至增加約500%、增加約50%至增加約400%、增加約50%至增加約300%、增加約50%至增加約200%、增加約50%至增加約150%、增加約50%至增加約100%、增加約50%至增加約90%、增加約50%至增加約80%、增加約50%至增加約70%、增加約50%至增加約60%、增加約60%至增加約1000%、增加約60%至增加約900%、增加約60%至增加約800%、增加約60%至增加約700%、增加約60%至增加約600%、增加約60%至增加約500%、增加約60%至增加約400%、增加約60%至增加約300%、增加約60%至增加約200%、增加約60%至增加約150%、增加約60%至增加約100%、增加約60%至增加約90%、增加約60%至增加約80%、增加約60%至增加約70%、增加約70%至增加約1000%、增加約70%至增加約900%、增加約70%至增加約800%、增加約70%至增加約700%、增加約70%至增加約600%、增加約70%至增加約500%、增加約70%至增加約400%、增加約70%至增加約300%、增加約70%至增加約200%、增加約70%至增加約150%、增加約70%至增加約100%、增加約70%至增加約90%、增加約70%至增加約80%、增加約80%至增加約1000%、增加約80%至增加約900%、增加約80%至增加約800%、增加約80%至增加約700%、增加約80%至增加約600%、增加約80%至增加約500%、增加約80%至增加約400%、增加約80%至增加約300%、增加約80%至增加約200%、增加約80%至增加約150%、增加約80%至增加約100%、增加約80%至增加約90%、增加約90%至增加約1000%、增加約90%至增加約900%、增加約90%至增加約800%、增加約90%至增加約700%、增加約90%至增加約600%、增加約90%至增加約500%、增加約90%至增加約400%、增加約90%至增加約300%、增加約90%至增加約200%、增加約90%至增加約150%、增加約90%至增加約100%、增加約100%至增加約1000%、增加約100%至增加約900%、增加約100%至增加約800%、增加約100%至增加約700%、增加約100%至增加約600%、增加約100%至增加約500%、增加約100%至增加約400%、增加約100%至增加約300%、增加約100%至增加約200%、增加約100%至增加約150%、增加約150%至增加約1000%、增加約150%至增加約900%、增加約150%至增加約800%、增加約150%至增加約700%、增加約150%至增加約600%、增加約150%至增加約500%、增加約150%至增加約400%、增加約150%至增加約300%、增加約150%至增加約200%、增加約200%至增加約1000%、增加約200%至增加約900%、增加約200%至增加約800%、增加約200%至增加約700%、增加約200%至增加約600%、增加約200%至增加約500%、增加約200%至增加約400%、增加約200%至增加約300%、增加約300%至增加約1000%、增加約300%至增加約900%、增加約300%至增加約800%、增加約300%至增加約700%、增加約300%至增加約600%、增加約300%至增加約500%、增加約300%至增加約400%、增加約400%至增加約1000%、增加約400%至增加約900%、增加約400%至增加約800%、增加約400%至增加約700%、增加約400%至增加約600%、增加約400%至增加約500%、增加約500%至增加約1000%、增加約500%至增加約900%、增加約500%至增加約800%、增加約500%至增加約700%、增加約500%至增加約600%、增加約600%至增加約1000%、增加約600%至增加約900%、增加約600%至增加約800%、增加約600%至增加約700%、增加約700%至增加約1000%、增加約700%至增加約900%、增加約700%至增加約800%、增加約800%至增加約1000%、增加約800%至增加約900%，或增加約900%至增加約1000%(例如，與投予前個體中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量相比)。

這些方法的一些實施例導致個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球(例如NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞)的數量增加至少1%、增加至少2%、增加至少3%、增加至少4%、增加至少5%、增加至少6%，增加至少7%、增加至少8%、增加至少9%、增加至少10%、增加至少15%、增加至少20%、增加至少25%、增加至少30%、增加至少35%、增加至少40%、增加至少45%、增加至少50%、增加至少55%、增加至少60%、增加至少65%、增加至少70%、增加至少75%、增加至少80%、增加至少85%、增加至少90%、增加至少95%、增加至少100%、增加至少200%、增加至少250%、增加至少300%、增加至少350%、增加至少400%、增加至少450%、增加至少500%、增加至少550%、增加至少600%、增加至少650%、增加至少700%、增加至少750%、增加至少800%、增加至少850%、增加至少900%、增加至少950%，或增加至少1000%(例如，與投予前個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球(例如NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞)的數量相比)。這些方法的一些實施例導致個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球(例如NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞)的數量增加約1%至增加約1000%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球(例如NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞)的數量相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的運輸增加至少1%、增加至少2%、增加至少3%、增加至少4%、增加至少5%、增加至少6%，增加至少7%、增加至少8%、增加至少9%、增加至少10%、增加至少15%、增加至少20%、增加至少25%、增加至少30%、增加至少35%、增加至少40%、增加至少45%、增加至少50%、增加至少55%、增加至少60%、增加至少65%、增加至少70%、增加至少75%、增加至少80%、增加至少85%、增加至少90%、增加至少95%、增加至少100%、增加至少200%、增加至少250%、增加至少300%、增加至少350%、增加至少400%、增加至少450%、增加至少500%、增加至少550%、增加至少600%、增加至少650%、增加至少700%、增加至少750%、增加至少800%、增加至少850%、增加至少900%、增加至少950%，或增加至少1000%(例如，與投予前個體中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的運輸相比)。本文所述任何方法的一些實施例導致個體中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的運輸增加約1%至增加約1000%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的運輸相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球(例如NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞)的運輸增加至少1%、增加至少2%、增加至少3%、增加至少4%、增加至少5%、增加至少6%，增加至少7%、增加至少8%、增加至少9%、增加至少10%、增加至少15%、增加至少20%、增加至少25%、增加至少30%、增加至少35%、增加至少40%、增加至少45%、增加至少50%、增加至少55%、增加至少60%、增加至少65%、增加至少70%、增加至少75%、增加至少80%、增加至少85%、增加至少90%、增加至少95%、增加至少100%、增加至少200%、增加至少250%、增加至少300%、增加至少350%、增加至少400%、增加至少450%、增加至少500%、增加至少550%、增加至少600%、增加至少650%、增加至少700%、增加至少750%、增加至少800%、增加至少850%、增加至少900%、增加至少950%，或增加至少1000%(例如，與投予前個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球(例如NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞)的運輸相比)。本文所述任何方法的一些實施例導致個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球(例如NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞)的運輸增加約1%至增加約1000%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球(例如NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞)的運輸相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)與NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)的比率的最大倍數變化增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍、增加至少5.0倍、增加至少5.5倍、增加至少6.0倍、增加至少6.5倍、增加至少7.0倍、增加至少7.5倍、增加至少8.0倍、增加至少8.5倍、增加至少9.0倍、增加至少9.5倍，或增加至少10倍(例如，與投予前個體血液中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)與NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)的比率相比)。本文所述方法的一些實施例導致個體血液中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)與NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)的比率的最大倍數變化增加約0.01倍至增加約10倍、增加約0.01倍至增加約9倍、增加約0.01倍至增加約8倍、增加約0.01倍至增加約7倍、增加約0.01倍至增加約6倍、增加約0.01倍至增加約5倍、增加約0.01倍至增加約4倍、增加約0.01倍至增加約3倍、增加約0.01倍至增加約2倍、增加約0.01倍至增加約1倍、增加約0.01倍至增加約0.5倍、增加約0.01倍至增加約0.1倍、增加約0.1倍至增加約10倍、增加約0.1倍至增加約9倍、增加約0.1倍至增加約8倍、增加約0.1倍至增加約7倍、增加約0.1倍至增加約6倍、增加約0.1倍至增加約5倍、增加約0.1倍至增加約4倍、增加約0.1倍至增加約3倍、增加約0.1倍至增加約2倍、增加約0.1倍至增加約1倍、增加約0.1倍至增加約0.5倍、增加約0.5倍至增加約10倍、增加約0.5倍至增加約9倍、增加約0.5倍至增加約8倍、增加約0.5倍至增加約7倍、增加約0.5倍至增加約6倍、增加約0.5倍至增加約5倍、增加約0.5倍至增加約4倍、增加約0.5倍至增加約3倍、增加約0.5倍至增加約2倍、增加約0.5倍至增加約1倍、增加約1倍至增加約10倍、增加約1倍至增加約9倍、增加約1倍至增加約8倍、增加約1倍至增加約7倍、增加約1倍至增加約6倍、增加約1倍至增加約5倍、增加約1倍至增加約4倍、增加約1倍至增加約3倍、增加約1倍至增加約2倍、增加約2倍至增加約10倍、增加約2倍至增加約9倍、增加約2倍至增加約8倍、增加約2倍至增加約7倍、增加約2倍至增加約6倍、增加約2倍至增加約5倍、增加約2倍至增加約4倍、增加約2倍至增加約3倍、增加約3倍至增加約10倍、增加約3倍至增加約9倍、增加約3倍至增加約8倍、增加約3倍至增加約7倍、增加約3倍至增加約6倍、增加約3倍至增加約5倍、增加約3倍至增加約4倍、增加約4倍至增加約10倍、增加約4倍至增加約9倍、增加約4倍至增加約8倍、增加約4倍至增加約7倍、增加約4倍至增加約6倍、增加約4倍至增加約5倍、增加約5倍至增加約10倍、增加約5倍至增加約9倍、增加約5倍至增加約8倍、增加約5倍至增加約7倍、增加約5倍至增加約6倍、增加約6倍至增加約10倍、增加約6倍至增加約9倍、增加約6倍至增加約8倍、增加約6倍至增加約7倍、增加約7倍至增加約10倍、增加約7倍至增加約9倍、增加約7倍至增加約8倍、增加約8倍至增加約10倍、增加約8倍至增加約9倍，或增加約9倍至增加約10倍(例如，與投予前個體血液中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)與NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)的比率相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中NK細胞的絕對數量增加至少1%、增加至少2%、增加至少3%、增加至少4%、增加至少5%、增加至少6%，增加至少7%、增加至少8%、增加至少9%、增加至少10%、增加至少15%、增加至少20%、增加至少25%、增加至少30%、增加至少35%、增加至少40%、增加至少45%、增加至少50%、增加至少55%、增加至少60%、增加至少65%、增加至少70%、增加至少75%、增加至少80%、增加至少85%、增加至少90%、增加至少95%、增加至少100%、增加至少150%、增加至少200%、增加至少250%、增加至少300%、增加至少350%、增加至少400%、增加至少450%、增加至少500%、增加至少550%、增加至少600%、增加至少650%、增加至少700%、增加至少750%、增加至少800%、增加至少850%、增加至少900%、增加至少950%，或增加至少1000%(例如，與投予前個體血液中NK細胞的絕對數量相比)。本文所述任何方法的一些實施例導致個體血液中NK細胞的絕對數量增加約1%至增加約1000%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體血液中NK細胞的絕對數量相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中NK細胞的絕對數量的最大倍數增加，增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍，或增加至少5.0倍(例如，與投予前個體血液中NK細胞的絕對數量的最大倍數增加相比)。本文所述方法的一些實施例導致個體血液中NK細胞的絕對數量的最大倍數增加，增加約0.01倍至增加約5倍、增加約0.01倍至增加約4.5倍、增加約0.01倍至增加約4倍、增加約0.01倍至增加約3.5倍、增加約0.01倍至增加約3倍、增加約0.01倍至增加約2.5倍、增加約0.01倍至增加約2倍、增加約0.01倍至增加約1.5倍、增加約0.01倍至增加約1倍、增加約0.01倍至增加約0.8倍、增加約0.01倍至增加約0.6倍、增加約0.01倍至增加約0.4倍、增加約0.01倍至增加約0.2倍、增加約0.01倍至增加約0.1倍、增加約0.01倍至增加約0.05倍、增加約0.05倍至增加約5倍、增加約0.05倍至增加約4.5倍、增加約0.05倍至增加約4倍、增加約0.05倍至增加約3.5倍、增加約0.05倍至增加約3倍、增加約0.05倍至增加約2.5倍、增加約0.05倍至增加約2倍、增加約0.05倍至增加約1.5倍、增加約0.05倍至增加約1倍、增加約0.05倍至增加約0.8倍、增加約0.05倍至增加約0.6倍、增加約0.05倍至增加約0.4倍、增加約0.05倍至增加約0.2倍、增加約0.05倍至增加約0.1倍、增加約0.1倍至增加約5倍、增加約0.1倍至增加約4.5倍、增加約0.1倍至增加約4倍、增加約0.1倍至增加約3.5倍、增加約0.1倍至增加約3倍、增加約0.1倍至增加約2.5倍、增加約0.1倍至增加約2倍、增加約0.1倍至增加約1.5倍、增加約0.1倍至增加約1倍、增加約0.1倍至增加約0.8倍、增加約0.1倍至增加約0.6倍、增加約0.1倍至增加約0.4倍、增加約0.1倍至增加約0.2倍、增加約0.2倍至增加約5倍、增加約0.2倍至增加約4.5倍、增加約0.2倍至增加約4倍、增加約0.2倍至增加約3.5倍、增加約0.2倍至增加約3倍、增加約0.2倍至增加約2.5倍、增加約0.2倍至增加約2倍、增加約0.2倍至增加約1.5倍、增加約0.2倍至增加約1倍、增加約0.2倍至增加約0.8倍、增加約0.2倍至增加約0.6倍、增加約0.2倍至增加約0.4倍、增加約0.4倍至增加約5倍、增加約0.4倍至增加約4.5倍、增加約0.4倍至增加約4倍、增加約0.4倍至增加約3.5倍、增加約0.4倍至增加約3倍、增加約0.4倍至增加約2.5倍、增加約0.4倍至增加約2倍、增加約0.4倍至增加約1.5倍、增加約0.4倍至增加約1倍、增加約0.4倍至增加約0.8倍、增加約0.4倍至增加約0.6倍、增加約0.6倍至增加約5倍、增加約0.6倍至增加約4.5倍、增加約0.6倍至增加約4倍、增加約0.6倍至增加約3.5倍、增加約0.6倍至增加約3倍、增加約0.6倍至增加約2.5倍、增加約0.6倍至增加約2倍、增加約0.6倍至增加約1.5倍、增加約0.6倍至增加約1倍、增加約0.6倍至增加約0.8倍、增加約0.8倍至增加約5倍、增加約0.8倍至增加約4.5倍、增加約0.8倍至增加約4倍、增加約0.8倍至增加約3.5倍、增加約0.8倍至增加約3倍、增加約0.8倍至增加約2.5倍、增加約0.8倍至增加約2倍、增加約0.8倍至增加約1.5倍、增加約0.8倍至增加約1倍、增加約1倍至增加約5倍、增加約1倍至增加約4.5倍、增加約1倍至增加約4倍、增加約1倍至增加約3.5倍、增加約1倍至增加約3倍、增加約1倍至增加約2.5倍、增加約1倍至增加約2倍、增加約1倍至增加約1.5倍、增加約1.5倍至增加約5倍、增加約1.5倍至增加約4.5倍、增加約1.5倍至增加約4倍、增加約1.5倍至增加約3.5倍、增加約1.5倍至增加約3倍、增加約1.5倍至增加約2.5倍、增加約1.5倍至增加約2倍、增加約2倍至增加約5倍、增加約2倍至增加約4.5倍、增加約2倍至增加約4倍、增加約2倍至增加約3.5倍、增加約2倍至增加約3倍、增加約2倍至增加約2.5倍、增加約2.5倍至增加約5倍、增加約2.5倍至增加約4.5倍、增加約2.5倍至增加約4倍、增加約2.5倍至增加約3.5倍、增加約2.5倍至增加約3倍、增加約3倍至增加約5倍、增加約3倍至增加約4.5倍、增加約3倍至增加約4倍、增加約3倍至增加約3.5倍、增加約3.5倍至增加約5倍、增加約3.5倍至增加約4.5倍、增加約3.5倍至增加約4倍、增加約4倍至增加約5倍、增加約4倍至增加約4.5倍，或增加約4.5倍至增加約5倍(例如，與投予前個體血液中NK細胞的絕對數量的最大倍數增加相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中CD56 ^bright淋巴球(例如CD56 ^brightNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加，增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍，或增加至少5.0倍(例如，與投予前個體血液中CD56 ^bright淋巴球(例如CD56 ^brightNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加相比)。本文所述方法的一些實施例導致個體血液中CD56 ^bright淋巴球(例如CD56 ^brightNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加，增加約0.01倍至增加約5倍(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體血液中CD56 ^bright淋巴球(例如CD56 ^brightNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中CD16 ⁺CD56 ^dim淋巴球(例如CD16 ⁺CD56 ^dimNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加，增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍，或增加至少5.0倍(例如，與投予前個體血液中CD16 ⁺CD56 ^dim淋巴球(例如CD16 ⁺CD56 ^dimNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加相比)。本文所述方法的一些實施例導致個體血液中CD16 ⁺CD56 ^dim淋巴球(例如CD16 ⁺CD56 ^dimNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加，增加約0.01倍至增加約5倍(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體血液中CD16 ⁺CD56 ^dim淋巴球(例如CD16 ⁺CD56 ^dimNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中HLA-DR ⁺淋巴球(例如HLA-DR ⁺NK細胞)的絕對數量的最大倍數增加，增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍，或增加至少5.0倍(例如，與投予前個體血液中HLA-DR ⁺淋巴球(例如HLA-DR ⁺NK細胞)的絕對數量的最大倍數增加相比)。本文所述方法的一些實施例導致個體血液中HLA-DR ⁺淋巴球(例如HLA-DR ⁺NK細胞)的絕對數量的最大倍數增加，增加約0.01倍至增加約5倍(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體血液中HLA-DR ⁺淋巴球(例如HLA-DR ⁺NK細胞)的絕對數量的最大倍數增加相比)。

本文提供了治療先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文也提供了治療先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及在其細胞外表面上的第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL或其功能片段。

本文提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體中減少MICA陽性癌細胞的數量及/或增生的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體中減少MICA陽性癌細胞的數量及/或增生的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及在其細胞外表面上的第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL或其功能片段。

這些方法的一些實施例導致個體中MICA陽性癌細胞的數量減少至少1%、減少至少2%、減少至少3%、減少至少4%、減少至少5%、減少至少6%，減少至少7%、減少至少8%、減少至少9%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、減少至少95%，或減少至少99%(例如，與投予前個體中MICA陽性癌細胞的數量相比)。這些方法的一些實施例導致個體中MICA陽性癌細胞的數量減少約1%至減少約99%、減少約1%至減少約90%、減少約1%至減少約80%、減少約1%至減少約70%、減少約1%至減少約60%、減少約1%至減少約50%、減少約1%至減少約40%、減少約1%至減少約30%、減少約1%至減少約20%、減少約1%至減少約10%、減少約5%至減少約99%、減少約5%至減少約90%、減少約5%至減少約80%、減少約5%至減少約70%、減少約5%至減少約60%、減少約5%至減少約50%、減少約5%至減少約40%、減少約5%至減少約30%、減少約5%至減少約20%、減少約5%至減少約10%、減少約10%至減少約99%、減少約10%至減少約90%、減少約10%至減少約80%、減少約10%至減少約70%、減少約10%至減少約60%、減少約10%至減少約50%、減少約10%至減少約40%、減少約10%至減少約30%、減少約10%至減少約20%、減少約20%至減少約99%、減少約20%至減少約90%、減少約20%至減少約80%、減少約20%至減少約70%、減少約20%至減少約60%、減少約20%至減少約50%、減少約20%至減少約40%、減少約20%至減少約30%、減少約30%至減少約99%、減少約30%至減少約90%、減少約30%至減少約80%、減少約30%至減少約70%、減少約30%至減少約60%、減少約30%至減少約50%、減少約30%至減少約40%、減少約40%至減少約99%、減少約40%至減少約90%、減少約40%至減少約80%、減少約40%至減少約70%、減少約40%至減少約60%、減少約40%至減少約50%、減少約50%至減少約99%、減少約50%至減少約90%、減少約50%至減少約80%、減少約50%至減少約70%、減少約50%至減少約60%、減少約60%至減少約99%、減少約60%至減少約90%、減少約60%至減少約80%、減少約60%至減少約70%、減少約70%至減少約99%、減少約70%至減少約90%、減少約70%至減少約80%、減少約80%至減少約99%、減少約80%至減少約90%，或減少約90%至減少約99%(例如，與投予前個體中MICA陽性癌細胞的數量相比)。

這些方法的一些實施例導致個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少至少1%、減少至少2%、減少至少3%、減少至少4%、減少至少5%、減少至少6%，減少至少7%、減少至少8%、減少至少9%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、減少至少95%，或減少至少99%(例如，與投予前個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比)。這些方法的一些實施例導致個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少約1%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比)。

這些方法的一些實施例導致個體中MICA陽性癌細胞的增生減少至少1%、減少至少2%、減少至少3%、減少至少4%、減少至少5%、減少至少6%，減少至少7%、減少至少8%、減少至少9%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、減少至少95%，或減少至少99%(例如，與投予前個體中MICA陽性癌細胞的增生相比)。這些方法的一些實施例導致個體中MICA陽性癌細胞的增生減少約1%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體中MICA陽性癌細胞的增生相比)。

這些方法的一些實施例導致個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少至少1%、減少至少2%、減少至少3%、減少至少4%、減少至少5%、減少至少6%，減少至少7%、減少至少8%、減少至少9%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、減少至少95%，或減少至少99%(例如，與投予前個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比)。這些方法的一些實施例導致個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少約1%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體中MICA陽性及HLA-E陰性癌細胞的增生相比)。

本文提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體中誘導殺死MICA陽性癌細胞的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體中殺死MICA陽性癌細胞的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及在其細胞外表面上的第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL或其功能片段。

本文提供了治療先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文也提供了治療先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及在其細胞外表面上的第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL或其功能片段。

本文提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體中減少MICB陽性癌細胞的數量及/或增生的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體中減少MICB陽性癌細胞的數量及/或增生的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及在其細胞外表面上的第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL或其功能片段。

這些方法的一些實施例導致個體中MICB陽性癌細胞的數量減少至少1%、減少至少2%、減少至少3%、減少至少4%、減少至少5%、減少至少6%，減少至少7%、減少至少8%、減少至少9%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、減少至少95%，或減少至少99%(例如，與投予前個體中MICB陽性癌細胞的數量相比)。這些方法的一些實施例導致個體中MICB陽性癌細胞的數量減少約1%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體中MICB陽性癌細胞的數量相比)。

這些方法的一些實施例導致個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少至少1%、減少至少2%、減少至少3%、減少至少4%、減少至少5%、減少至少6%，減少至少7%、減少至少8%、減少至少9%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、減少至少95%，或減少至少99%(例如，與投予前個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比)。這些方法的一些實施例導致個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少約1%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比)。

這些方法的一些實施例導致個體中MICB陽性癌細胞的增生減少至少1%、減少至少2%、減少至少3%、減少至少4%、減少至少5%、減少至少6%，減少至少7%、減少至少8%、減少至少9%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、減少至少95%，或減少至少99%(例如，與投予前個體中MICB陽性癌細胞的增生相比)。這些方法的一些實施例導致個體中MICB陽性癌細胞的增生減少約1%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體中MICB陽性癌細胞的增生相比)。

這些方法的一些實施例導致個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少至少1%、減少至少2%、減少至少3%、減少至少4%、減少至少5%、減少至少6%，減少至少7%、減少至少8%、減少至少9%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、減少至少95%，或減少至少99%(例如，與投予前個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比)。這些方法的一些實施例導致個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少約1%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比)。

本文提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體中誘導殺死MICB陽性癌細胞的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體中殺死MICB陽性癌細胞的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及在其細胞外表面上的第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL或其功能片段。

本文提供了治療先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症的個體的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文也提供了治療先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症的個體的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及在其細胞外表面上的第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL或其功能片段。

本文提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症的個體中減少MICA/MICB陽性癌細胞的數量及/或增生的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症的個體中減少MICA/MICB陽性癌細胞的數量及/或增生的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及在其細胞外表面上的第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL或其功能片段。

這些方法的一些實施例導致個體中MICA/MICB陽性癌細胞的數量減少至少1%、減少至少2%、減少至少3%、減少至少4%、減少至少5%、減少至少6%，減少至少7%、減少至少8%、減少至少9%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、減少至少95%，或減少至少99%(例如，與投予前個體中MICA/MICB陽性癌細胞的數量相比)。這些方法的一些實施例導致個體中MICA/MICB陽性癌細胞的數量減少約1%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體中MICA/MICB陽性癌細胞的數量相比)。

這些方法的一些實施例導致個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少至少1%、減少至少2%、減少至少3%、減少至少4%、減少至少5%、減少至少6%，減少至少7%、減少至少8%、減少至少9%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、減少至少95%，或減少至少99%(例如，與投予前個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比)。這些方法的一些實施例導致個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少約1%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比)。

這些方法的一些實施例導致個體中MICA/MICB陽性癌細胞的增生減少至少1%、減少至少2%、減少至少3%、減少至少4%、減少至少5%、減少至少6%，減少至少7%、減少至少8%、減少至少9%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、減少至少95%，或減少至少99%(例如，與投予前個體中MICA/MICB陽性癌細胞的增生相比)。這些方法的一些實施例導致個體中MICA/MICB陽性癌細胞的增生減少約1%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體中MICA/MICB陽性癌細胞的增生相比)。

這些方法的一些實施例導致個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少至少1%、減少至少2%、減少至少3%、減少至少4%、減少至少5%、減少至少6%，減少至少7%、減少至少8%、減少至少9%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、減少至少95%，或減少至少99%(例如，與投予前個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比)。這些方法的一些實施例導致個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少約1%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比)。

本文提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症的個體中誘導殺死MICA/MICB陽性癌細胞的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症的個體中殺死MICA/MICB陽性癌細胞的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及在其細胞外表面上的第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL或其功能片段。

本文提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症、MICB陽性癌症，或MICA/MICB陽性癌症的個體中減少實體腫瘤體積的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症、MICB陽性癌症，或MICA/MICB陽性癌症的個體中減少實體腫瘤體積的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及在其細胞外表面上的第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL或其功能片段。

這些方法的一些實施例導致個體中實體腫瘤體積減少至少1%、減少至少2%、減少至少3%、減少至少4%、減少至少5%、減少至少6%，減少至少7%、減少至少8%、減少至少9%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、減少至少95%，或減少至少99%(例如，與投予前實體腫瘤體積相比)。

這些方法的一些實施例導致個體中實體腫瘤體積減少約1%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前實體腫瘤體積相比)。

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性、MICB陽性，或MICA/MICB陽性癌症的個體中增加淋巴球細胞表面上NKG2D濃度與NKG2A濃度的比率的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性、MICB陽性，或MICA/MICB陽性癌症的個體中增加NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)濃度與NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)濃度的比率的方法，包括向個體投予醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及在其細胞外表面上的第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL或其功能片段。

這些方法的一些實施例導致個體中淋巴球(例如NK細胞)細胞表面上NKG2D濃度與NKG2A濃度的比率增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍、增加至少5.0倍、增加至少5.5倍、增加至少6.0倍、增加至少6.5倍、增加至少7.0倍、增加至少7.5倍、增加至少8.0倍、增加至少8.5倍、增加至少9.0倍、增加至少9.5倍，或增加至少10倍(例如，與投予前個體中淋巴球(例如NK細胞)細胞表面上NKG2D濃度與NKG2A濃度的比率相比)。這些方法的一些實施例導致個體中淋巴球(例如NK細胞)細胞表面上NKG2D濃度與NKG2A濃度的比率增加約0.01倍至增加約10倍(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體中淋巴球(例如NK細胞)細胞表面上NKG2D濃度與NKG2A濃度的比率相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)與NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)的比率的最大倍數變化增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍、增加至少5.0倍、增加至少5.5倍、增加至少6.0倍、增加至少6.5倍、增加至少7.0倍、增加至少7.5倍、增加至少8.0倍、增加至少8.5倍、增加至少9.0倍、增加至少9.5倍，或增加至少10倍(例如，與投予前個體血液中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)與NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)的比率相比)。本文所述方法的一些實施例導致個體血液中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)與NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)的比率的最大倍數變化增加約0.01倍至增加約10倍(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體血液中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)與NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)的比率相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中NK細胞的絕對數量增加至少1%、增加至少2%、增加至少3%、增加至少4%、增加至少5%、增加至少6%，增加至少7%、增加至少8%、增加至少9%、增加至少10%、增加至少15%、增加至少20%、增加至少25%、增加至少30%、增加至少35%、增加至少40%、增加至少45%、增加至少50%、增加至少55%、增加至少60%、增加至少65%、增加至少70%、增加至少75%、增加至少80%、增加至少85%、增加至少90%、增加至少95%、增加至少100%、增加至少150%、增加至少200%、增加至少250%、增加至少300%、增加至少350%、增加至少400%、增加至少450%、增加至少500%、增加至少550%、增加至少600%、增加至少650%、增加至少700%、增加至少750%、增加至少800%、增加至少850%、增加至少900%、增加至少950%，或增加至少1000%(例如，與投予前個體血液中NK細胞的絕對數量相比)。本文所述方法的一些實施例導致個體血液中NK細胞的絕對數量增加約1%至增加約1000%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體血液中NK細胞的絕對數量相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中NK細胞的絕對數量的最大倍數增加，增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍，或增加至少5.0倍(例如，與投予前個體血液中NK細胞的絕對數量的最大倍數增加相比)。本文所述方法的一些實施例導致個體血液中NK細胞的絕對數量的最大倍數增加，增加約0.01倍至增加約5倍(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體血液中NK細胞的絕對數量的最大倍數增加相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中CD56 ^bright淋巴球(例如CD56 ^brightNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加，增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍，或增加至少5.0倍(例如，與投予前個體血液中CD56 ^bright淋巴球(例如CD56 ^brightNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加相比)。本文所述方法的一些實施例導致個體血液中CD56 ^bright淋巴球(例如CD56 ^brightNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加，增加約0.01倍至增加約5倍(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體血液中CD56 ^bright淋巴球(例如CD56 ^brightNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中CD16 ⁺CD56 ^dim淋巴球(例如CD16 ⁺CD56 ^dimNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加，增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍，或增加至少5.0倍(例如，與投予前個體血液中CD16 ⁺CD56 ^dim淋巴球(例如CD16 ⁺CD56 ^dimNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加相比)。本文所述方法的一些實施例導致個體血液中CD16 ⁺CD56 ^dim淋巴球(例如CD16 ⁺CD56 ^dimNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加，增加約0.01倍至增加約5倍(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體血液中CD16 ⁺CD56 ^dim淋巴球(例如CD16 ⁺CD56 ^dimNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中HLA-DR ⁺淋巴球(例如HLA-DR ⁺NK細胞)的絕對數量的最大倍數增加，增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍，或增加至少5.0倍(例如，與投予前個體血液中HLA-DR ⁺淋巴球(例如HLA-DR ⁺NK細胞)的絕對數量的最大倍數增加相比)。本文所述方法的一些實施例導致個體血液中HLA-DR ⁺淋巴球(例如HLA-DR ⁺NK細胞)的絕對數量的最大倍數增加，增加約0.01倍至增加約5倍(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體血液中HLA-DR ⁺淋巴球(例如HLA-DR ⁺NK細胞)的絕對數量的最大倍數增加相比)。

下面描述這些組成物和方法的非限制性態樣。如那些本領域通常知識者所理解的，下面列出的例示性態樣可以呈任何組合來使用，並且可以與本領域中已知的其他態樣組合。 NKG2D

如本文所用，NKG2D多肽是指由殺手細胞凝集素樣受體K1(KLRK1)基因所編碼的胺基酸序列。KLRK1基因也稱為CD314、NKG2D和NKG2-D。例示性NKG2D多肽包括但不限於對應於NCBI參考序列：NP_031386.2的胺基酸序列。

在一些實施例中，NKG2D多肽包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的胺基酸序列： MGWIRGRRSRHSWEMSEFHNYNLDLKKSDFSTRWQKQRCPVVKSKCRENASPFFFCCFIAVAMGIRFIIMVTIWSAVFLNSLFNQEVQIPLTESYCGPCPKNWICYKNNCYQFFDESKNWYESQASCMSQNASLLKVYSKEDQDLLKLVKSYHWMGLVHIPTNGSWQWEDGSILSPNLLTIIEMQKGDCALYASSFKGYIENCSTPNTYICMQRTV (SEQ ID NO：1) (具有或不具有訊號序列)。

在一些實施例中，NKG2D多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGGGGTGGATTCGTGGTCGGAGGTCTCGACACAGCTGGGAGATGAGTGAATTTCATAATTATAACTTGGATCTGAAGAAGAGTGATTTTTCAACACGATGGCAAAAGCAAAGATGTCCAGTAGTCAAAAGCAAATGTAGAGAAAATGCATCTCCATTTTTTTTCTGCTGCTTCATCGCTGTAGCCATGGGAATCCGTTTCATTATTATGGTAACAATATGGAGTGCTGTATTCCTAAACTCATTATTCAACCAAGAAGTTCAAATTCCCTTGACCGAAAGTTACTGTGGCCCATGTCCTAAAAACTGGATATGTTACAAAAATAACTGCTACCAATTTTTTGATGAGAGTAAAAACTGGTATGAGAGCCAGGCTTCTTGTATGTCTCAAAATGCCAGCCTTCTGAAAGTATACAGCAAAGAGGACCAGGATTTACTTAAACTGGTGAAGTCATATCATTGGATGGGACTAGTACACATTCCAACAAATGGATCTTGGCAGTGGGAAGATGGCTCCATTCTCTCACCCAACCTACTAACAATAATTGAAATGCAGAAGGGAGACTGTGCACTCTATGCCTCGAGCTTTAAAGGCTATATAGAAAACTGTTCAACTCCAAATACGTACATCTGCATGCAAAGGACTGTGTAA (SEQ ID NO：2)。

在一些實施例中，該等方法包括偵測個體中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量。可以從個體獲得任何含有NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的適當樣品。在一些實施例中，可以獲取並評估全血樣品、血漿樣品、血清樣品、含有全血樣品的細胞級分(PBMC)的樣品、組織樣品、腫瘤樣品、切片樣品，和雷射捕獲切割的生物樣品(例如，腫瘤或組織樣品)，以確定NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量。在一些實施例中，在投予治療有效量的醫藥組成物之前、同時或之後偵測NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量，該醫藥組成物包括去核類紅血球群(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)。在一些實施例中，可以使用特異地結合至NKG2D的任何抗體或其抗原結合片段(例如，抗NKG2D抗體殖株149810 (R&D Systems)與抗-NKG2D mAb殖株1D11 (BD Biosciences))來測定NKG2D陽性細胞(例如NKG2D陽性NK細胞)。在一些實施例中，NKG2D多肽表現可以使用螢光輔助細胞分選(FACS) (例如使用補償珠(例如Bangs珠))來評估或透過其他基於免疫學的方法來評估，基於免疫學的方法包括但不限於西方墨點分析、免疫組織化學染色、ELISA、組織陣列分析、原位雜交，和免疫螢光，使用例如特異地結合至NKG2D的抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)可以透過測量NKG2D mRNA來測定。定量RNA的非限制性方法包括：qRT-PCR、RNA定序、螢光原位雜交結合流式細胞分析技術、微流體毛細管電泳和原位雜交。

如本文所述，藉由比較淋巴球(例如NK細胞)中的NKG2D含量與參考含量(例如，對照非活化或靜息淋巴球(例如NK細胞)中的NKG2D含量，或不是淋巴球(例如不是NK細胞)的細胞中的NKG2D含量)來確定NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)。在一些實施例中，NKG2D的參考含量可以是每一百萬個轉錄本中的一個轉錄本。在一些實施例中，NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)是基於流式細胞分析技術圈選策略使用螢光減一個對照樣品、螢光補償以及量化經驗來進行鑑定。 MICA

如本文所用，MICA多肽是指由MHC第I類多肽相關序列A(MICA)基因所編碼的胺基酸序列。例示性MICA多肽包括但不限於對應於NCBI參考序列：NP_000238.1、NP_001170990.1、NP_001276081.1，與NP_001276083.1的胺基酸序列。MICA是主要組織相容性複合物第I類的成員，是NKG2D的細胞表面配體。

在一些實施例中，MICA多肽可包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的序列： MGLGPVFLLLAGIFPFAPPGAAAEPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLTEVHLDGQPFLRCDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETKEWTMPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLKSGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICQGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAAAIFVIIIFYVRCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTSDHRDATQLGFQPLMSDLGSTGSTEGA (SEQ ID NO：3) (具有或不具有訊號序列)。上面SEQ ID NO：3畫底線的部分表示訊號肽。

在一些實施例中，MICA多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGGGGCTGGGCCCGGTCTTCCTGCTTCTGGCTGGCATCTTCCCTTTTGCACCTCCGGGAGCTGCTGCTGAGCCCCACAGTCTTCGTTATAACCTCACGGTGCTGTCCTGGGATGGATCTGTGCAGTCAGGGTTTCTCACTGAGGTACATCTGGATGGTCAGCCCTTCCTGCGCTGTGACAGGCAGAAATGCAGGGCAAAGCCCCAGGGACAGTGGGCAGAAGATGTCCTGGGAAATAAGACATGGGACAGAGAGACCAGAGACTTGACAGGGAACGGAAAGGACCTCAGGATGACCCTGGCTCATATCAAGGACCAGAAAGAAGGCTTGCATTCCCTCCAGGAGATTAGGGTCTGTGAGATCCATGAAGACAACAGCACCAGGAGCTCCCAGCATTTCTACTACGATGGGGAGCTCTTCCTCTCCCAAAACCTGGAGACTAAGGAATGGACAATGCCCCAGTCCTCCAGAGCTCAGACCTTGGCCATGAACGTCAGGAATTTCTTGAAGGAAGATGCCATGAAGACCAAGACACACTATCACGCTATGCATGCAGACTGCCTGCAGGAACTACGGCGATATCTAAAATCCGGCGTAGTCCTGAGGAGAACAGTGCCCCCCATGGTGAATGTCACCCGCAGCGAGGCCTCAGAGGGCAACATTACCGTGACATGCAGGGCTTCTGGCTTCTATCCCTGGAATATCACACTGAGCTGGCGTCAGGATGGGGTATCTTTGAGCCACGACACCCAGCAGTGGGGGGATGTCCTGCCTGATGGGAATGGAACCTACCAGACCTGGGTGGCCACCAGGATTTGCCAAGGAGAGGAGCAGAGGTTCACCTGCTACATGGAACACAGCGGGAATCACAGCACTCACCCTGTGCCCTCTGGGAAAGTGCTGGTGCTTCAGAGTCATTGGCAGACATTCCATGTTTCTGCTGTTGCTGCTGCTGCTATTTTTGTTATTATTATTTTCTATGTCCGTTGTTGTAAGAAGAAAACATCAGCTGCAGAGGGTCCAGAGCTCGTGAGCCTGCAGGTCCTGGATCAACACCCAGTTGGGACGAGTGACCACAGGGATGCCACACAGCTCGGATTTCAGCCTCTGATGTCAGATCTTGGGTCCACTGGCTCCACTGAGGGCGCCTAG (SEQ ID NO：4)。

在一些實施例中，MICA多肽可包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的序列： MGLGPVFLLLAGIFPFAPPGAAAEPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLAEVHLDGQPFLRYDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETEEWTVPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLESGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASSFYPRNIILTWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICRGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAGCCYFCYYYFLCPLL (SEQ ID NO：5) (具有或不具有訊號序列)。上面SEQ ID NO：5畫底線的部分表示訊號肽。

在一些實施例中，MICA多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGGGGCTGGGCCCGGTCTTTCTGCTTCTGGCTGGCATCTTCCCTTTTGCACCTCCGGGAGCTGCTGCTGAGCCCCACAGTCTTCGTTATAACCTCACGGTGCTGTCCTGGGATGGATCTGTGCAGTCAGGGTTTCTTGCTGAGGTACATCTGGATGGTCAGCCCTTCCTGCGCTATGACAGGCAGAAATGCAGGGCAAAGCCCCAGGGACAGTGGGCAGAAGATGTCCTGGGAAATAAGACATGGGACAGAGAGACCAGGGACTTGACAGGGAACGGAAAGGACCTCAGGATGACCCTGGCTCATATCAAGGACCAGAAAGAAGGCTTGCATTCCCTCCAGGAGATTAGGGTCTGTGAGATCCATGAAGACAACAGCACCAGGAGCTCCCAGCATTTCTACTACGATGGGGAGCTCTTCCTCTCCCAAAACCTGGAGACTGAGGAATGGACAGTGCCCCAGTCCTCCAGAGCTCAGACCTTGGCCATGAACGTCAGGAATTTCTTGAAGGAAGATGCCATGAAGACCAAGACACACTATCACGCTATGCATGCAGACTGCCTGCAGGAACTACGGCGATATCTAGAATCCGGCGTAGTCCTGAGGAGAACAGTGCCCCCCATGGTGAATGTCACCCGCAGCGAGGCCTCAGAGGGCAACATCACCGTGACATGCAGGGCTTCCAGCTTCTATCCCCGGAATATCATACTGACCTGGCGTCAGGATGGGGTATCTTTGAGCCACGACACCCAGCAGTGGGGGGATGTCCTGCCTGATGGGAATGGAACCTACCAGACCTGGGTGGCCACCAGGATTTGCCGAGGAGAGGAGCAGAGGTTCACCTGCTACATGGAACACAGCGGGAATCACAGCACTCACCCTGTGCCCTCTGGGAAAGTGCTGGTGCTTCAGAGTCATTGGCAGACATTCCATGTTTCTGCTGTTGCTGCTGGCTGCTGCTATTTTTGTTATTATTATTTTCTATGTCCGTTGTTGTAA (SEQ ID NO：6)。

在一些實施例中，MICA多肽可包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的序列： MTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETEEWTVPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLESGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASSFYPRNIILTWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICRGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAGCCYFCYYYFLCPLL (SEQ ID NO：7) (具有或不具有訊號序列)。

在一些實施例中，MICA多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGACCCTGGCTCATATCAAGGACCAGAAAGAAGGCTTGCATTCCCTCCAGGAGATTAGGGTCTGTGAGATCCATGAAGACAACAGCACCAGGAGCTCCCAGCATTTCTACTACGATGGGGAGCTCTTCCTCTCCCAAAACCTGGAGACTGAGGAATGGACAGTGCCCCAGTCCTCCAGAGCTCAGACCTTGGCCATGAACGTCAGGAATTTCTTGAAGGAAGATGCCATGAAGACCAAGACACACTATCACGCTATGCATGCAGACTGCCTGCAGGAACTACGGCGATATCTAGAATCCGGCGTAGTCCTGAGGAGAACAGTGCCCCCCATGGTGAATGTCACCCGCAGCGAGGCCTCAGAGGGCAACATCACCGTGACATGCAGGGCTTCCAGCTTCTATCCCCGGAATATCATACTGACCTGGCGTCAGGATGGGGTATCTTTGAGCCACGACACCCAGCAGTGGGGGGATGTCCTGCCTGATGGGAATGGAACCTACCAGACCTGGGTGGCCACCAGGATTTGCCGAGGAGAGGAGCAGAGGTTCACCTGCTACATGGAACACAGCGGGAATCACAGCACTCACCCTGTGCCCTCTGGGAAAGTGCTGGTGCTTCAGAGTCATTGGCAGACATTCCATGTTTCTGCTGTTGCTGCTGGCTGCTGCTATTTTTGTTATTATTATTTTCTATGTCCGTTGTTGTAA (SEQ ID NO：8)。

在一些實施例中，MICA多肽可包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的序列： MGQRDQGLDRERKGPQDDPGSYQGPERRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLESGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASSFYPRNIILTWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICRGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAGCCYFCYYYFLCPLL  (SEQ ID NO：9) (具有或不具有訊號肽)。

在一些實施例中，MICA多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGGGACAGAGAGACCAGGGACTTGACAGGGAACGGAAAGGACCTCAGGATGACCCTGGCTCATATCAAGGACCAGAAAGAAGGAATTTCTTGAAGGAAGATGCCATGAAGACCAAGACACACTATCACGCTATGCATGCAGACTGCCTGCAGGAACTACGGCGATATCTAGAATCCGGCGTAGTCCTGAGGAGAACAGTGCCCCCCATGGTGAATGTCACCCGCAGCGAGGCCTCAGAGGGCAACATCACCGTGACATGCAGGGCTTCCAGCTTCTATCCCCGGAATATCATACTGACCTGGCGTCAGGATGGGGTATCTTTGAGCCACGACACCCAGCAGTGGGGGGATGTCCTGCCTGATGGGAATGGAACCTACCAGACCTGGGTGGCCACCAGGATTTGCCGAGGAGAGGAGCAGAGGTTCACCTGCTACATGGAACACAGCGGGAATCACAGCACTCACCCTGTGCCCTCTGGGAAAGTGCTGGTGCTTCAGAGTCATTGGCAGACATTCCATGTTTCTGCTGTTGCTGCTGGCTGCTGCTATTTTTGTTATTATTATTTTCTATGTCCGTTGTTGTAA (SEQ ID NO：10)。

在一些實施例中，該等方法包括偵測個體中MICA陽性癌細胞的存在。可以從個體獲得任何含有MICA陽性癌細胞的適當樣品。在一些實施例中，可以獲取並評估全血樣品、血漿樣品、血清樣品、含有全血樣品的細胞級分(PBMC)的樣品、組織樣品、腫瘤樣品、切片樣品，和雷射捕獲切割的生物樣品(例如，腫瘤或組織樣品)，以確定MICA陽性癌細胞的數量。在一些實施例中，在投予去核類紅血球之前、同時或之後偵測MICA陽性癌細胞。在一些實施例中，可以使用特異地結合至MICA(例如在癌細胞的細胞表面上)的抗體或其抗原結合片段(例如，抗-MICA抗體ab62540 (Abcam)、LS-B9176 (LSBio)，與1E2C8 (ThermoFisher Scientific))來測定MICA陽性癌細胞。MICA多肽表現可以使用螢光輔助細胞分選(FACS)來評估或透過其他基於免疫學的方法來評估，基於免疫學的方法包括但不限於西方墨點法、免疫組織化學染色、ELISA，和免疫螢光。在一些實施例中，MICA陽性細胞可以透過測量MICA mRNA來測定。定量RNA的非限制性方法包括：qRT-PCR、RNA定序、螢光原位雜交結合流式細胞分析技術、微流體毛細管電泳和原位雜交。

可用於鑑定MICA陽性癌細胞或MICA陽性癌症的例示性MICA參考含量可以是非癌細胞中的MICA含量、多個腫瘤切片樣品中MICA中位數含量、高出同類型癌症或多個不同癌症的多個腫瘤切片樣品中MICA中位數含量的一個標準偏差、高出同類型癌症或多個不同癌症的多個腫瘤切片樣品中MICA中位數含量的四分之一個標準偏差、高出同類型癌症或多個不同癌症的多個腫瘤切片樣品中MICA中位數含量的二分之一個標準偏差、高出同類型癌症或多個不同癌症的多個腫瘤切片樣品中MICA中位數含量的四分之三個標準偏差、高出同類型癌症或多個不同癌症的多個腫瘤切片樣品中MICA中位數含量的一又二分之一個標準偏差，或高出同類型癌症或多個不同癌症的多個腫瘤切片樣品中MICA中位數含量的兩個標準偏差。在一些實施例中，MICA的參考含量可以是每一百萬個轉錄本中的一個轉錄本。

在一些實施例中，MICA的參考含量是相同類型的正常(非癌)組織中的MICA含量。在一些實施例中，MICA的參考含量是靠近實體腫瘤的健康組織中的MICA含量。在一些實施例中，參考含量是比鄰近組織或對應健康組織中的MICA含量高50%的含量。 MICB

如本文所用，MICB多肽是指由MHC第I類多肽相關序列B(MICB)基因所編碼的胺基酸序列。例示性MICB多肽包括但不限於對應於NCBI參考序列：NP_001276089.1、NP_001276090.1，與NP_005922.2的胺基酸序列。MICB是主要組織相容性複合物第I類的成員，是NKG2D的細胞表面配體。

在一些實施例中，MICB多肽可包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的序列： MVLSQDGSVQSGFLAEGHLDGQPFLRYDRQKRRAKPQGQWAENVLGAKTWDTETEDLTENGQDLRRTLTHIKDQKGGLHSLQEIRVCEIHEDSSTRGSRHFYYDGELFLSQNLETQESTVPQSSRAQTLAMNVTNFWKEDAMKTKTHYRAMQADCLQKLQRYLKSGVAIRRTVPPMVNVTCSEVSEGNITVTCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHNTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRIRQGEEQRFTCYMEHSGNHGTHPVPSGKALVLQSQRTDFPYVSAAMPCFVIIIILCVPCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTGDHRDAAQLGFQPLMSATGSTGSTEGT (SEQ ID NO：11) (具有或不具有訊號肽)。

在一些實施例中，MICB多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGGTGCTGTCCCAGGATGGATCTGTGCAGTCAGGGTTTCTCGCTGAGGGACATCTGGATGGTCAGCCCTTCCTGCGCTATGACAGGCAGAAACGCAGGGCAAAGCCCCAGGGACAGTGGGCAGAAAATGTCCTGGGAGCTAAGACCTGGGACACAGAGACCGAGGACTTGACAGAGAATGGGCAAGACCTCAGGAGGACCCTGACTCATATCAAGGACCAGAAAGGAGGCTTGCATTCCCTCCAGGAGATTAGGGTCTGTGAGATCCATGAAGACAGCAGCACCAGGGGCTCCCGGCATTTCTACTACGATGGGGAGCTCTTCCTCTCCCAAAACCTGGAGACTCAAGAATCGACAGTGCCCCAGTCCTCCAGAGCTCAGACCTTGGCTATGAACGTCACAAATTTCTGGAAGGAAGATGCCATGAAGACCAAGACACACTATCGCGCTATGCAGGCAGACTGCCTGCAGAAACTACAGCGATATCTGAAATCCGGGGTGGCCATCAGGAGAACAGTGCCCCCCATGGTGAATGTCACCTGCAGCGAGGTCTCAGAGGGCAACATCACCGTGACATGCAGGGCTTCCAGCTTCTATCCCCGGAATATCACACTGACCTGGCGTCAGGATGGGGTATCTTTGAGCCACAACACCCAGCAGTGGGGGGATGTCCTGCCTGATGGGAATGGAACCTACCAGACCTGGGTGGCCACCAGGATTCGCCAAGGAGAGGAGCAGAGGTTCACCTGCTACATGGAACACAGCGGGAATCACGGCACTCACCCTGTGCCCTCTGGGAAGGCGCTGGTGCTTCAGAGTCAACGGACAGACTTTCCATATGTTTCTGCTGCTATGCCATGTTTTGTTATTATTATTATTCTCTGTGTCCCTTGTTGCAAGAAGAAAACATCAGCGGCAGAGGGTCCAGAGCTTGTGAGCCTGCAGGTCCTGGATCAACACCCAGTTGGGACAGGAGACCACAGGGATGCAGCACAGCTGGGATTTCAGCCTCTGATGTCAGCTACTGGGTCCACTGGTTCCACTGAGGGCACCTAG (SEQ ID NO：12)。

在一些實施例中，MICB多肽可包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的序列： MGLGRVLLFLAVAFPFAPPAAAAEPHSLRYNLMVLSQDGSVQSGFLAEGHLDGQPFLRYDRQKRRAKPQGQWAENVLGAKTWDTETEDLTENGQDLRRTLTHIKDQKGVPQSSRAQTLAMNVTNFWKEDAMKTKTHYRAMQADCLQKLQRYLKSGVAIRRTVPPMVNVTCSEVSEGNITVTCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHNTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRIRQGEEQRFTCYMEHSGNHGTHPVPSGKALVLQSQRTDFPYVSAAMPCFVIIIILCVPCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTGDHRDAAQLGFQPLMSATGSTGSTEGT (SEQ ID NO：13) (具有或不具有訊號肽)。上面SEQ ID NO：13畫底線的部分表示訊號肽。

在一些實施例中，MICB多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGGGGCTGGGCCGGGTCCTGCTGTTTCTGGCCGTCGCCTTCCCTTTTGCACCCCCGGCAGCCGCCGCTGAGCCCCACAGTCTTCGTTACAACCTCATGGTGCTGTCCCAGGATGGATCTGTGCAGTCAGGGTTTCTCGCTGAGGGACATCTGGATGGTCAGCCCTTCCTGCGCTATGACAGGCAGAAACGCAGGGCAAAGCCCCAGGGACAGTGGGCAGAAAATGTCCTGGGAGCTAAGACCTGGGACACAGAGACCGAGGACTTGACAGAGAATGGGCAAGACCTCAGGAGGACCCTGACTCATATCAAGGACCAGAAAGGAGTGCCCCAGTCCTCCAGAGCTCAGACCTTGGCTATGAACGTCACAAATTTCTGGAAGGAAGATGCCATGAAGACCAAGACACACTATCGCGCTATGCAGGCAGACTGCCTGCAGAAACTACAGCGATATCTGAAATCCGGGGTGGCCATCAGGAGAACAGTGCCCCCCATGGTGAATGTCACCTGCAGCGAGGTCTCAGAGGGCAACATCACCGTGACATGCAGGGCTTCCAGCTTCTATCCCCGGAATATCACACTGACCTGGCGTCAGGATGGGGTATCTTTGAGCCACAACACCCAGCAGTGGGGGGATGTCCTGCCTGATGGGAATGGAACCTACCAGACCTGGGTGGCCACCAGGATTCGCCAAGGAGAGGAGCAGAGGTTCACCTGCTACATGGAACACAGCGGGAATCACGGCACTCACCCTGTGCCCTCTGGGAAGGCGCTGGTGCTTCAGAGTCAACGGACAGACTTTCCATATGTTTCTGCTGCTATGCCATGTTTTGTTATTATTATTATTCTCTGTGTCCCTTGTTGCAAGAAGAAAACATCAGCGGCAGAGGGTCCAGAGCTTGTGAGCCTGCAGGTCCTGGATCAACACCCAGTTGGGACAGGAGACCACAGGGATGCAGCACAGCTGGGATTTCAGCCTCTGATGTCAGCTACTGGGTCCACTGGTTCCACTGAGGGCACCTAG (SEQ ID NO：14)。

在一些實施例中，MICB多肽可包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的序列： MGLGRVLLFLAVAFPFAPPAAAAEPHSLRYNLMVLSQDGSVQSGFLAEGHLDGQPFLRYDRQKRRAKPQGQWAENVLGAKTWDTETEDLTENGQDLRRTLTHIKDQKGGLHSLQEIRVCEIHEDSSTRGSRHFYYDGELFLSQNLETQESTVPQSSRAQTLAMNVTNFWKEDAMKTKTHYRAMQADCLQKLQRYLKSGVAIRRTVPPMVNVTCSEVSEGNITVTCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHNTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRIRQGEEQRFTCYMEHSGNHGTHPVPSGKALVLQSQRTDFPYVSAAMPCFVIIIILCVPCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTGDHRDAAQLGFQPLMSATGSTGSTEGT (SEQ ID NO：15) (具有或不具有訊號肽)。上面SEQ ID NO：15畫底線的部分表示訊號肽。

在一些實施例中，MICB多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGGGGCTGGGCCGGGTCCTGCTGTTTCTGGCCGTCGCCTTCCCTTTTGCACCCCCGGCAGCCGCCGCTGAGCCCCACAGTCTTCGTTACAACCTCATGGTGCTGTCCCAGGATGGATCTGTGCAGTCAGGGTTTCTCGCTGAGGGACATCTGGATGGTCAGCCCTTCCTGCGCTATGACAGGCAGAAACGCAGGGCAAAGCCCCAGGGACAGTGGGCAGAAAATGTCCTGGGAGCTAAGACCTGGGACACAGAGACCGAGGACTTGACAGAGAATGGGCAAGACCTCAGGAGGACCCTGACTCATATCAAGGACCAGAAAGGAGGCTTGCATTCCCTCCAGGAGATTAGGGTCTGTGAGATCCATGAAGACAGCAGCACCAGGGGCTCCCGGCATTTCTACTACGATGGGGAGCTCTTCCTCTCCCAAAACCTGGAGACTCAAGAATCGACAGTGCCCCAGTCCTCCAGAGCTCAGACCTTGGCTATGAACGTCACAAATTTCTGGAAGGAAGATGCCATGAAGACCAAGACACACTATCGCGCTATGCAGGCAGACTGCCTGCAGAAACTACAGCGATATCTGAAATCCGGGGTGGCCATCAGGAGAACAGTGCCCCCCATGGTGAATGTCACCTGCAGCGAGGTCTCAGAGGGCAACATCACCGTGACATGCAGGGCTTCCAGCTTCTATCCCCGGAATATCACACTGACCTGGCGTCAGGATGGGGTATCTTTGAGCCACAACACCCAGCAGTGGGGGGATGTCCTGCCTGATGGGAATGGAACCTACCAGACCTGGGTGGCCACCAGGATTCGCCAAGGAGAGGAGCAGAGGTTCACCTGCTACATGGAACACAGCGGGAATCACGGCACTCACCCTGTGCCCTCTGGGAAGGCGCTGGTGCTTCAGAGTCAACGGACAGACTTTCCATATGTTTCTGCTGCTATGCCATGTTTTGTTATTATTATTATTCTCTGTGTCCCTTGTTGCAAGAAGAAAACATCAGCGGCAGAGGGTCCAGAGCTTGTGAGCCTGCAGGTCCTGGATCAACACCCAGTTGGGACAGGAGACCACAGGGATGCAGCACAGCTGGGATTTCAGCCTCTGATGTCAGCTACTGGGTCCACTGGTTCCACTGAGGGCACCTAG (SEQ ID NO：16)。

在一些實施例中，該等方法包括偵測個體中MICB陽性癌細胞的存在。可以從個體獲得任何含有MICB陽性癌細胞的適當樣品。在一些實施例中，可以獲取並評估全血樣品、血漿樣品、血清樣品、含有全血樣品的細胞級分(PBMC)的樣品、組織樣品、腫瘤樣品、切片樣品，和雷射捕獲切割的生物樣品(例如，腫瘤或組織樣品)，以確定MICB陽性癌細胞的數量。在一些實施例中，在投予去核類紅血球之前、同時或之後偵測MICB陽性癌細胞。在一些實施例中，可以使用特異地結合至MICB(例如在癌細胞的細胞表面上)的抗體或其抗原結合片段(例如，抗MICB抗體MM0473-3C37 (Abcam)、抗MICB抗體3C37 (Abcam)，與抗MICB抗體ARG56879 (Arigo Biolaboratories))來測定MICB陽性癌細胞。MICB多肽表現可以使用螢光輔助細胞分選(FACS)來評估或透過其他基於免疫學的方法來評估，基於免疫學的方法包括但不限於西方墨點法、免疫組織化學染色、ELISA，和免疫螢光。在一些實施例中，MICB陽性細胞可以透過測量MICB mRNA來測定。定量RNA的非限制性方法包括：qRT-PCR、RNA定序、螢光原位雜交結合流式細胞分析技術、微流體毛細管電泳和原位雜交。

可用於鑑定MICB陽性癌細胞或MICB陽性癌症的例示性MICB參考含量可以是非癌細胞中的MICB含量、多個腫瘤切片樣品中MICB中位數含量、高出同類型癌症或多個不同癌症的多個腫瘤切片樣品中MICB中位數含量的一個標準偏差、高出同類型癌症或多個不同癌症的多個腫瘤切片樣品中MICB中位數含量的四分之一個標準偏差、高出同類型癌症或多個不同癌症的多個腫瘤切片樣品中MICB中位數含量的二分之一個標準偏差、高出同類型癌症或多個不同癌症的多個腫瘤切片樣品中MICB中位數含量的四分之三個標準偏差、高出同類型癌症或多個不同癌症的多個腫瘤切片樣品中MICB中位數含量的一又二分之一個標準偏差，或高出同類型癌症或多個不同癌症的多個腫瘤切片樣品中MICB中位數含量的兩個標準偏差。在一些實施例中，MICB的參考含量可以是每一百萬個轉錄本中的一個轉錄本。

在一些實施例中，MICB的參考含量是相同類型的正常(非癌)組織中的MICB含量。在一些實施例中，MICB的參考含量是靠近實體腫瘤的健康組織中的MICB含量。在一些實施例中，參考含量是比鄰近組織或對應健康組織中的MICB含量高50%的含量。 NKG2A

如本文所用，NKG2A多肽是指由殺手細胞凝集素樣受體C1(KLRC1)基因所編碼的胺基酸序列。NKG2A與KLRD1/CD94形成複合物。例示性KLRC1多肽包括但不限於對應於NCBI參考序列：NP_001291377.1、NP_002250.2，與NP_998823.1的胺基酸序列。

在一些實施例中，NKG2A多肽可包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的序列： MDNQGVIYSDLNLPPNPKRQQRKPKGNKNSILATEQEITYAELNLQKASQDFQGNDKTYHCKDLPSAPEKLIVGILGIICLILMASVVTIVVIPSTLIQRHNNSSLNTRTQKARHCGHCPEEWITYSNSCYYIGKERRTWEESLLACTSKNSSLLSIDNEEEMKFLSIISPSSWIGVFRNSSHHPWVTMNGLAFKHEIKDSDNAELNCAVLQVNRLKSAQCGSSIIYHCKHKL (SEQ ID NO：17)。

在一些實施例中，NKG2A多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGGATAACCAAGGAGTAATCTACTCAGACCTGAATCTGCCCCCAAACCCAAAGAGGCAGCAACGAAAACCTAAAGGCAATAAAAACTCCATTTTAGCAACTGAACAGGAAATAACCTATGCGGAATTAAACCTTCAAAAAGCTTCTCAGGATTTTCAAGGGAATGACAAAACCTATCACTGCAAAGATTTACCATCAGCTCCAGAGAAGCTCATTGTTGGGATCCTGGGAATTATCTGTCTTATCTTAATGGCCTCTGTGGTAACGATAGTTGTTATTCCCTCTACATTAATACAGAGGCACAACAATTCTTCCCTGAATACAAGAACTCAGAAAGCACGTCATTGTGGCCATTGTCCTGAGGAGTGGATTACATATTCCAACAGTTGTTACTACATTGGTAAGGAAAGAAGAACTTGGGAAGAGAGTTTGCTGGCCTGTACTTCGAAGAACTCCAGTCTGCTTTCTATAGATAATGAAGAAGAAATGAAATTTCTGTCCATCATTTCACCATCCTCATGGATTGGTGTGTTTCGTAACAGCAGTCATCATCCATGGGTGACAATGAATGGTTTGGCTTTCAAACATGAGATAAAAGACTCAGATAATGCTGAACTTAACTGTGCAGTGCTACAAGTAAATCGACTTAAATCAGCCCAGTGTGGATCTTCAATAATATATCATTGTAAGCATAAGCTTTAG (SEQ ID NO：18)。

在一些實施例中，NKG2A多肽可包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的序列： MDNQGVIYSDLNLPPNPKRQQRKPKGNKSSILATEQEITYAELNLQKASQDFQGNDKTYHCKDLPSAPEKLIVGILGIICLILMASVVTIVVIPSTLIQRHNNSSLNTRTQKARHCGHCPEEWITYSNSCYYIGKERRTWEESLLACTSKNSSLLSIDNEEEMKFLSIISPSSWIGVFRNSSHHPWVTMNGLAFKHEIKDSDNAELNCAVLQVNRLKSAQCGSSIIYHCKHKL (SEQ ID NO：19)。

在一些實施例中，NKG2A多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGGATAACCAAGGAGTAATCTACTCAGACCTGAATCTGCCCCCAAACCCAAAGAGGCAGCAACGAAAACCTAAAGGCAATAAAAACTCCATTTTAGCAACTGAACAGGAAATAACCTATGCGGAATTAAACCTTCAAAAAGCTTCTCAGGATTTTCAAGGGAATGACAAAACCTATCACTGCAAAGATTTACCATCAGCTCCAGAGAAGCTCATTGTTGGGATCCTGGGAATTATCTGTCTTATCTTAATGGCCTCTGTGGTAACGATAGTTGTTATTCCCTCTACATTAATACAGAGGCACAACAATTCTTCCCTGAATACAAGAACTCAGAAAGCACGTCATTGTGGCCATTGTCCTGAGGAGTGGATTACATATTCCAACAGTTGTTACTACATTGGTAAGGAAAGAAGAACTTGGGAAGAGAGTTTGCTGGCCTGTACTTCGAAGAACTCCAGTCTGCTTTCTATAGATAATGAAGAAGAAATGAAATTTCTGTCCATCATTTCACCATCCTCATGGATTGGTGTGTTTCGTAACAGCAGTCATCATCCATGGGTGACAATGAATGGTTTGGCTTTCAAACATGAGATAAAAGACTCAGATAATGCTGAACTTAACTGTGCAGTGCTACAAGTAAATCGACTTAAATCAGCCCAGTGTGGATCTTCAATAATATATCATTGTAAGCATAAGCTTTAG (SEQ ID NO：20)。

在一些實施例中，該等方法包括偵測個體中淋巴球(例如NK細胞)的NKG2A含量。可以從個體獲得任何含有NKG2A陰性或NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球(例如NKG2A陰性或NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞)的適當樣品。在一些實施例中，可以獲取並評估全血樣品、血漿樣品、血清樣品、含有全血樣品的細胞級分(PBMC)的樣品、組織樣品、腫瘤樣品、切片樣品，和雷射捕獲切割的生物樣品(例如，腫瘤或組織樣品)，以確定NKG2A陰性或NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球(例如NKG2A陰性或NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞)的數量。在一些實施例中，在投予去核類紅血球之前、同時或之後偵測淋巴球(例如NK細胞)中的NKG2A含量。在一些實施例中，可以使用特異地結合至NKG2A的抗體或其抗原結合片段(例如，Beckman Coulter，殖株Z199.1，與抗NKG2A mAb殖株131411 (BD Biosciences))來測定NKG2A陰性淋巴球(例如NKG2A陰性NK細胞)。在一些實施例中，淋巴球(例如NK細胞)中的NKG2A含量可以使用螢光輔助細胞分選(FACS)來評估。淋巴球(例如NK細胞)中的NKG2A含量可藉由其他基於免疫學的方法進行評估，其他基於免疫學的方法包括但不限於西方墨點法、免疫組織化學染色、ELISA，和免疫螢光。在一些實施例中，NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)可以透過測量NKG2A mRNA來測定。定量RNA的非限制性方法包括：qRT-PCR、RNA定序、螢光原位雜交結合流式細胞分析技術、微流體毛細管電泳和原位雜交。

用於鑑定NKG2A陰性淋巴球(例如NKG2A陰性NK細胞)的例示性NKG2A參考含量為本領域中已知的。例如，NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)是基於流式細胞分析技術圈選策略使用螢光減一對照樣品、螢光補償以及量化經驗來進行鑑定。

在一些實施例中，該等方法包括調節NKG2A多肽的活性。在一些實施例中，該方法還包括向個體投予NKG2A抑制劑(例如拮抗性抗體)。例如，該方法可包括在投予本文所述任何去核類紅血球之前、同時或之後向個體投予莫那珠單抗(monalizumab) (參見，Andre et al., Cell175(7):1731-1743; 2018)、達沙替尼(dasatinib) (Chang et al., Front. Immunol.9:3152l; 2019)、HY-0102，或S095029 (NCT05162755)。 HLA-E

如本文所用，HLA-E多肽是指由主要組織相容性複合物第I類E(HLA-E)基因所編碼的胺基酸序列。例示性HLA-E多肽包括但不限於對應於NCBI參考序列：NP_005507.3的胺基酸序列。

在一些實施例中，HLA-E多肽可包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的胺基酸序列： MVDGTLLLLLSEALALTQTWAGSHSLKYFHTSVSRPGRGEPRFISVGYVDDTQFVRFDNDAASPRMVPRAPWMEQEGSEYWDRETRSARDTAQIFRVNLRTLRGYYNQSEAGSHTLQWMHGCELGPDGRFLRGYEQFAYDGKDYLTLNEDLRSWTAVDTAAQISEQKSNDASEAEHQRAYLEDTCVEWLHKYLEKGKETLLHLEPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQQDGEGHTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPEPVTLRWKPASQPTIPIVGIIAGLVLLGSVVSGAVVAAVIWRKKSSGGKGGSYSKAEWSDSAQGSESHSL (SEQ ID NO：21) (具有或不具有訊號肽)。SEQ ID NO：21中畫底線的部分表示訊號肽。

在一些實施例中，HLA-E多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGGTAGATGGAACCCTCCTTTTACTCCTCTCGGAGGCCCTGGCCCTTACCCAGACCTGGGCGGGCTCCCACTCCTTGAAGTATTTCCACACTTCCGTGTCCCGGCCCGGCCGCGGGGAGCCCCGCTTCATCTCTGTGGGCTACGTGGACGACACCCAGTTCGTGCGCTTCGACAACGACGCCGCGAGTCCGAGGATGGTGCCGCGGGCGCCGTGGATGGAGCAGGAGGGGTCAGAGTATTGGGACCGGGAGACACGGAGCGCCAGGGACACCGCACAGATTTTCCGAGTGAATCTGCGGACGCTGCGCGGCTACTACAATCAGAGCGAGGCCGGGTCTCACACCCTGCAGTGGATGCATGGCTGCGAGCTGGGGCCCGACGGGCGCTTCCTCCGCGGGTATGAACAGTTCGCCTACGACGGCAAGGATTATCTCACCCTGAATGAGGACCTGCGCTCCTGGACCGCGGTGGACACGGCGGCTCAGATCTCCGAGCAAAAGTCAAATGATGCCTCTGAGGCGGAGCACCAGAGAGCCTACCTGGAAGACACATGCGTGGAGTGGCTCCACAAATACCTGGAGAAGGGGAAGGAGACGCTGCTTCACCTGGAGCCCCCAAAGACACACGTGACTCACCACCCCATCTCTGACCATGAGGCCACCCTGAGGTGCTGGGCCCTGGGCTTCTACCCTGCGGAGATCACACTGACCTGGCAGCAGGATGGGGAGGGCCATACCCAGGACACGGAGCTCGTGGAGACCAGGCCTGCAGGGGATGGAACCTTCCAGAAGTGGGCAGCTGTGGTGGTGCCTTCTGGAGAGGAGCAGAGATACACGTGCCATGTGCAGCATGAGGGGCTACCCGAGCCCGTCACCCTGAGATGGAAGCCGGCTTCCCAGCCCACCATCCCCATCGTGGGCATCATTGCTGGCCTGGTTCTCCTTGGATCTGTGGTCTCTGGAGCTGTGGTTGCTGCTGTGATATGGAGGAAGAAGAGCTCAGGTGGAAAAGGAGGGAGCTACTCTAAGGCTGAGTGGAGCGACAGTGCCCAGGGGTCTGAGTCTCACAGCTTGTAA (SEQ ID NO：22)。

在一些實施例中，該等方法包括偵測癌細胞中或個體癌細胞中的HLA-E含量。可以從個體獲得任何含有HLA-E癌細胞的適當樣品。在一些實施例中，可以獲取並評估全血、血漿、全血的細胞級分(PBMC)、組織樣品、切片樣品，和雷射捕獲顯微切割組織樣品或切片樣品，以鑑定個體癌細胞中的HLA-E含量。在一些實施例中，在投予去核類紅血球之前、同時或之後偵測癌細胞中的HLA-E含量。在一些實施例中，可以使用特異地結合至HLA-E的抗體或其抗原結合片段(例如，Beckman Coulter，殖株Z199.1)來測定HLA-E陰性癌細胞。在一些實施例中，癌細胞中的HLA-E含量可以使用螢光輔助細胞分選來測定。癌細胞中的HLA-E含量也可以藉由其他基於免疫學的方法來評估，包括但不限於西方墨點法、免疫組織化學染色、ELISA，和免疫螢光。在一些實施例中，HLA-E陰性癌細胞可以透過測量HLA-E mRNA來測定。定量RNA的非限制性方法包括：qRT-PCR、RNA定序、螢光原位雜交結合流式細胞分析技術、微流體毛細管電泳和原位雜交。在一些實施例中，HLA-E陰性癌細胞是在HLA-E基因座處喪失異合性的癌細胞。

可用於鑑定HLA-E陰性癌細胞的例示性HLA-E參考含量可以是存在於非癌細胞或在HLA-E基因座處沒有喪失異合性的癌細胞中的HLA-E含量。HLA-E的例示性含量可以使用Seliger et al., Oncotarget7(41):67360-67372, 2016中所述的方法來測定。在一些實施例中，HLA-E的參考含量是靠近實體腫瘤的健康組織中的HLA-E含量。在一些實施例中，參考含量是比鄰近組織或對應健康組織中的HLA-E含量少50%的含量。 第一外源性多肽

在一些實施例中，本發明的特徵在於在其細胞外表面上包括第一外源性多肽的去核類紅血球，該第一外源性多肽包括(i)介白素15(IL-15)或其功能片段，及(ii)介白素15受體α(IL-15RA)或其功能片段。

在一些實施例中，IL-15包括未成熟形式的野生型人類IL-15。在一些實施例中，IL-15包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的胺基酸序列： MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS  (SEQ ID NO：23)，或其功能片段。在一些實施例中，IL-15包括SEQ ID NO：23的序列。

在一些實施例中，IL-15包括成熟形式的野生型人類IL-15或其功能片段。在一些實施例中，IL-15包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的胺基酸序列： NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS  (SEQ ID NO：16)，或其功能片段。在一些實施例中，IL-15包括SEQ ID NO：24的序列。

在一些實施例中，IL-15由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： AACTGGGTGAACGTTATTAGTGACCTTAAAAAGATCGAAGATTTGATACAGTCAATGCACATAGACGCGACGCTTTATACAGAATCTGATGTACATCCTTCATGCAAGGTTACTGCTATGAAGTGTTTTCTTCTCGAACTCCAAGTAATAAGTCTTGAGAGCGGAGATGCGAGCATTCATGACACCGTTGAGAATCTTATTATATTGGCTAACAACTCTCTGTCCAGCAATGGTAATGTGACAGAAAGCGGGTGTAAGGAGTGCGAGGAACTCGAGGAGAAGAACATCAAAGAGTTCTTGCAGTCTTTCGTCCATATTGTCCAGATGTTCATAAATACTAGC (SEQ ID NO：25)。

在一些實施例中，IL-15多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： AACTGGGTAAACGTCATAAGCGACCTCAAAAAGATCGAGGACCTTATACAGTCTATGCACATAGATGCGACACTTTACACGGAATCAGACGTGCACCCGTCCTGCAAAGTCACAGCCATGAAGTGCTTTCTTCTCGAACTGCAGGTAATTTCTCTCGAATCAGGTGACGCATCTATCCACGACACAGTTGAAAATCTTATTATCCTGGCTAATAACTCCCTTAGCTCAAACGGCAATGTCACCGAGAGTGGATGTAAAGAATGTGAGGAACTTGAAGAGAAAAACATAAAGGAATTCTTGCAGAGTTTCGTTCATATTGTGCAAATGTTCATCAATACTAGT (SEQ ID NO：26)。

在一些實施例中，IL-15的功能片段包括至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150或160個胺基酸。在一些實施例中，IL-15的功能片段包括少於20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150或160個胺基酸。在一些實施例中，IL-15的功能片段保有野生型人類IL-15多肽結合IL-15RA多肽的能力至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%，經藉由本領域中熟知的分析所測量的，例如ELISA和表面電漿共振(SPR)結合分析，或共免疫沉澱。在一些實施例中，IL-15多肽的功能片段保有野生型人類IL-15多肽誘導IL-15介導之訊息傳遞的能力至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%，經藉由本領域中熟知的分析所測量的，例如電泳遷移分析(electromobility shift assay)、ELISA，和其他免疫分析。在一些實施例中，IL-15多肽的功能片段可以是IL-15多肽的IL-15受體結合片段。

在一些實施例中，介白素-15受體α(IL-15RA)或其功能片段可包括未成熟形式的野生型人類IL-15RA。在一些實施例中，IL-15RA可包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的序列： MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL (SEQ ID NO：27)或其功能片段。在一些實施例中，IL-15RA多肽包括SEQ ID NO：27的序列。

在一些實施例中，IL-15RA包括成熟形式的野生型人類IL-15RA。在一些實施例中，IL-15RA包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的胺基酸序列： ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL  (SEQ ID NO：28)或其功能片段。在一些實施例中，IL-15RA包括SEQ ID NO：28的序列。

在一些實施例中，IL-15RA包括IL-15RA多肽的細胞外部分。例如，IL-15RA多肽可能缺少野生型IL-15RA的跨膜結構域，並視情況缺少野生型IL-15RA的細胞內結構域。在一些實施例中，IL-15RA包括未成熟形式的細胞外野生型人類IL-15RA。在一些實施例中，IL-15RA多肽可包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的序列： MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTT (SEQ ID NO：29)或其功能片段。在一些實施例中，IL-15RA多肽包括SEQ ID NO：29的序列。

在一些實施例中，IL-15RA包括成熟形式的細胞外野生型人類IL-15RA。在一些實施例中，IL-15RA可包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的序列： ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTT  (SEQ ID NO：30)或其功能片段。在一些實施例中，IL-15RA多肽包括SEQ ID NO：30的序列。

在一些實施例中，IL-15RA由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATCACATGCCCACCGCCCATGTCTGTTGAACACGCAGACATTTGGGTTAAAAGTTACTCACTTTACTCACGCGAGAGATATATATGCAACAGCGGCTTCAAGCGCAAAGCAGGCACTAGTAGTCTTACAGAGTGCGTGCTCAATAAAGCTACAAATGTAGCTCATTGGACTACTCCTAGTCTCAAATGCATTCGGGACCCCGCGCTTGTGCACCAGAGACCTGCGCCGCCGTCCACAGTGACGACAGCTGGTGTAACCCCCCAACCTGAATCCCTTAGTCCGTCTGGTAAAGAACCGGCGGCGTCTTCACCTTCCAGCAATAATACTGCGGCGACAACAGCCGCGATAGTTCCTGGATCCCAACTCATGCCGTCAAAGTCTCCTTCAACGGGAACGACAGAGATCTCTTCACATGAAAGTTCTCATGGAACACCGAGCCAAACTACGGCAAAGAACTGGGAACTGACTGCCTCAGCAAGCCACCAGCCGCCAGGGGTGTACCCGCAAGGGCACTCAGATACTACT  (SEQ ID NO：31)。

在一些實施例中，IL-15RA或其功能片段包括受體細胞外結構域的外顯子2中的「sushi結構域」(Wei et al., J Immunol.2001; 167:277-282)。在一些實施例中，包括野生型人類IL-15RA的sushi結構域的IL-15RA或其功能片段包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的胺基酸序列： ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR  (SEQ ID NO：32)，或其功能片段。在一些實施例中，IL-15RA或其功能片段包括野生型人類IL-15RA的sushi結構域，該野生型人類IL-15RA包括SEQ ID NO：32的序列。

在一些實施例中，IL-15RA包括野生型人類IL15RA或其功能片段的sushi結構域和野生型人類IL-15RA的額外至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90或100個胺基酸。在一些實施例中，IL-15RA或其功能片段包括野生型人類IL15RA的sushi結構域和野生型人類IL-15RA的額外13個胺基酸。在一些實施例中，IL-15RA包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的胺基酸序列： ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPS  (SEQ ID NO：33)或其功能片段。在一些實施例中，IL-15RA多肽包括SEQ ID NO：33的序列。

在一些實施例中，IL-15RA由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATCACCTGCCCGCCTCCCATGAGCGTGGAACACGCGGACATTTGGGTTAAGAGCTACAGTCTTTACAGCCGGGAGCGCTATATCTGCAACTCAGGGTTTAAGCGGAAAGCAGGGACATCAAGTTTGACAGAATGTGTGTTGAACAAGGCTACAAATGTTGCTCACTGGACCACGCCATCTTTGAAGTGTATCCGAGATCCCGCGCTTGTCCATCAGCGCCCAGCGCCTCCCTCC  (SEQ ID NO：34)。

在一些實施例中，IL-15RA的功能片段包括至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190，或200個胺基酸。在一些實施例中，IL-15RA的功能片段包括至少10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190，或200個胺基酸，並包括IL-15RA sushi結構域。在一些實施例中，IL-15RA片段或變體保有野生型人類IL-15RA結合IL-15的能力至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%，經藉由本領域中熟知的分析所測量的，例如ELISA、表面電漿共振(SPR)結合分析，或共免疫沉澱。在一些實施例中，IL-15RA變體或片段保有野生型人類IL-15RA多肽誘導IL-15介導的訊息傳遞的能力至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%，經藉由本領域中熟知的分析所測量的，例如電泳遷移分析、ELISA，和其他免疫分析。在一些實施例中，IL-15RA多肽的功能片段包括IL-15RA多肽sushi結構域與跨膜結構域中的一或兩者。在一些實施例中，IL-15RA多肽的功能片段包括sushi結構域。在一些實施例中，IL-15RA多肽的功能片段包括跨膜結構域。

在一些實施例中，第一外源性多肽進一步包括訊號肽。在一些實施例中，第一外源性多肽包括訊號肽，該訊號肽包括表3中列出的胺基酸序列。在一些實施例中，第一外源性多肽包括訊號肽，該訊號肽包括GPA訊號肽。在一些實施例中，第一外源性多肽包括具有胺基酸序列SEQ ID NO：35的訊號肽。在一些實施例中，第一外源性多肽包括前導(訊號)序列，其包括胺基酸序列SEQ ID NO：35、IL-15多肽和IL-15RA多肽。在一些實施例中，第一外源性多肽包括有包括胺基酸序列SEQ ID NO：35的前導(訊號)序列、包括胺基酸序列SEQ ID NO：24的成熟人類IL-15多肽，和包括胺基酸序列SEQ ID NO：30的IL-15RA多肽。在一些實施例中，成熟人類IL-15多肽和IL-15RA多肽是藉由具有胺基酸序列SEQ ID NO：37的彈性連接子連接。

在一些實施例中，一或多個連接子設置在IL-15或其功能片段與IL-15RA或其功能片段之間。可以使用本文提供的任何連接子。在一些實施例中，連接子是長度為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或更多個胺基酸的肽。在一些實施例中，連接子的長度足以保有IL-15結合至IL-15RA的能力。在其他實施例中，連接子的長度足以保有IL-15/IL-15RA複合物結合至βγ IL-15受體複合物的能力並充當介導IL-15訊息傳遞的促效劑。在一些實施例中，連接子包括表2中列出的胺基酸序列。在一些實施例中，連接子包括胺基酸序列(GGGGS) _n(SEQ ID NO：38)，其中n是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，連接子由(GGGGS) _n連接子(SEQ ID NO：30)組成，其中n是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，連接子包括胺基酸序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：37)。

本領域通常知識者熟知的其他合適連接子可用於連接IL-15和IL-15RA多肽。在一些實施例中，連接子的長度可為5至25個胺基酸、5至20個胺基酸、10至25個胺基酸、或10至20個胺基酸。在一些實施例中，連接子的長度可以是10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸。在一些實施例中，連接子是非免疫原性的。

在一些實施例中，第一外源性多肽包括IL-15多肽或其功能片段，和IL-15Ra多肽的細胞外區。在一些實施例中，第一外源性多肽包括胺基酸序列SEQ ID NO：39。在一些實施例中，第一外源性多肽包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的序列： NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTT  (SEQ ID NO：39)。

在一些實施例中，第一外源性多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： AACTGGGTGAACGTTATTAGTGACCTTAAAAAGATCGAAGATTTGATACAGTCAATGCACATAGACGCGACGCTTTATACAGAATCTGATGTACATCCTTCATGCAAGGTTACTGCTATGAAGTGTTTTCTTCTCGAACTCCAAGTAATAAGTCTTGAGAGCGGAGATGCGAGCATTCATGACACCGTTGAGAATCTTATTATATTGGCTAACAACTCTCTGTCCAGCAATGGTAATGTGACAGAAAGCGGGTGTAAGGAGTGCGAGGAACTCGAGGAGAAGAACATCAAAGAGTTCTTGCAGTCTTTCGTCCATATTGTCCAGATGTTCATAAATACTAGCGGGGGAGGTGGCTCTGGTGGAGGCGGGAGTGGCGGGGGCGGCTCAATCACATGCCCACCGCCCATGTCTGTTGAACACGCAGACATTTGGGTTAAAAGTTACTCACTTTACTCACGCGAGAGATATATATGCAACAGCGGCTTCAAGCGCAAAGCAGGCACTAGTAGTCTTACAGAGTGCGTGCTCAATAAAGCTACAAATGTAGCTCATTGGACTACTCCTAGTCTCAAATGCATTCGGGACCCCGCGCTTGTGCACCAGAGACCTGCGCCGCCGTCCACAGTGACGACAGCTGGTGTAACCCCCCAACCTGAATCCCTTAGTCCGTCTGGTAAAGAACCGGCGGCGTCTTCACCTTCCAGCAATAATACTGCGGCGACAACAGCCGCGATAGTTCCTGGATCCCAACTCATGCCGTCAAAGTCTCCTTCAACGGGAACGACAGAGATCTCTTCACATGAAAGTTCTCATGGAACACCGAGCCAAACTACGGCAAAGAACTGGGAACTGACTGCCTCAGCAAGCCACCAGCCGCCAGGGGTGTACCCGCAAGGGCACTCAGATACTACT  (SEQ ID NO：40)。

在一些實施例中，第一外源性多肽包括IL-15多肽和IL-15RA多肽的sushi結構域。在一些實施例中，第一外源性多肽包括胺基酸序列SEQ ID NO：41。在一些實施例中，第一外源性多肽包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的序列： NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPS (SEQ ID NO：41)。

在一些實施例中，第一外源性多肽是由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： AACTGGGTAAACGTCATAAGCGACCTCAAAAAGATCGAGGACCTTATACAGTCTATGCACATAGATGCGACACTTTACACGGAATCAGACGTGCACCCGTCCTGCAAAGTCACAGCCATGAAGTGCTTTCTTCTCGAACTGCAGGTAATTTCTCTCGAATCAGGTGACGCATCTATCCACGACACAGTTGAAAATCTTATTATCCTGGCTAATAACTCCCTTAGCTCAAACGGCAATGTCACCGAGAGTGGATGTAAAGAATGTGAGGAACTTGAAGAGAAAAACATAAAGGAATTCTTGCAGAGTTTCGTTCATATTGTGCAAATGTTCATCAATACTAGTGGCGGGGGGGGAAGCGGTGGTGGAGGGAGCGGGGGTGGTGGATCCATCACCTGCCCGCCTCCCATGAGCGTGGAACACGCGGACATTTGGGTTAAGAGCTACAGTCTTTACAGCCGGGAGCGCTATATCTGCAACTCAGGGTTTAAGCGGAAAGCAGGGACATCAAGTTTGACAGAATGTGTGTTGAACAAGGCTACAAATGTTGCTCACTGGACCACGCCATCTTTGAAGTGTATCCGAGATCCCGCGCTTGTCCATCAGCGCCCAGCGCCTCCCTCC  (SEQ ID NO：42)。

在一些實施例中，第一外源性多肽包括IL-15多肽或其功能片段，和IL-15RA多肽或其功能片段(例如，IL-15結合片段)。本文所述任何IL-15多肽可以與本文所述任何IL-15RA多肽組合以形成第一外源性多肽。在一些實施例中，IL-15多肽或其功能片段與IL-15RA多肽或其功能片段的細胞外部分以複合物存在。在一些實施例中，IL-15多肽與IL-15RA多肽的細胞外部分以融合多肽(例如，第一外源性融合多肽)存在。在一些實施例中，IL-15多肽藉由連接子連接至IL-15RA多肽的細胞外部分。在一些實施例中，IL-15多肽和IL-15RA多肽以複合物存在。IL-15/IL-15RA複合物的組分可以使用非共價鍵或共價鍵(例如，經由肽鍵組合胺基酸序列)直接融合。

在一些實施例中，第一外源性多肽、IL-15多肽、IL-15RA多肽或IL-15/IL-15RA複合物不是從類紅血球(例如，去核類紅血球)釋放。在一些實施例中，IL-15多肽、IL-15RA多肽或IL-15/IL-15RA複合物或融合多肽附接於類紅血球膜(例如，去核類紅血球的膜)。在一些實施例中，第一外源性多肽進一步包括將多肽錨定至類紅血球膜的多肽序列(例如跨膜區) (本文稱為錨定或跨膜結構域)。在一些實施例中，將第一外源性多肽錨定至類紅血球膜的多肽序列與第一外源性多肽中的另一多肽是異源的。在一些實施例中，將多肽錨定至類紅血球膜的多肽序列與IL-15多肽及/或IL-15RA多肽是異源的。在一些實施例中，將多肽錨定至類紅血球膜的多肽序列是GPA序列。

在一些實施例中，用於將第一外源性多肽錨定至類紅血球膜(例如，去核類紅血球的膜)的其他多肽是本領域通常知識者熟知的並且預期包括在包括IL-15、IL-15RA，或IL-15/IL-15RA融合體的外源性多肽中。非限制性實例包括小型整合膜蛋白1(SMIM1)、運鐵蛋白受體、Fas配體(FasL)、凱爾(Kell)和帶3(Band 3)。

在一些實施例中，錨定或跨膜結構域可包括第1型膜多肽或其跨膜部分。例如，在第一外源性多肽的一些實施例中，錨定或跨膜結構域包括選自由以下組成之群組的第I型膜多肽或其跨膜部分：血型糖蛋白A(GPA)；血型糖蛋白B(GPB)；基礎免疫球蛋白(basigin) (也稱為CD147)；CD44；CD58(也稱為LFA3)；細胞間黏附分子4(ICAM4)；基底細胞黏附分子(BCAM)；CR1；CD99；紅血球母細胞膜相關蛋白(ERMAP)；連接黏附分子A(JAM-A)；神經澱粉蛋白(neuroplastin，NPTN)；AMIGO2；和DS細胞黏附分子樣1(DSCAML1)。在一些實施例中，錨定或跨膜結構域包括第2型膜多肽或其跨膜部分或由其組成。例如，在第一外源性多肽的一些實施例中，錨定或跨膜結構域包括選自由以下組成之群組的第2型膜多肽或其跨膜部分：小型整合膜蛋白1(SMIM1)、運鐵蛋白受體(CD71)；Fas配體(FasL)跨膜；和凱爾。在第一外源性多肽的一些實施例中，錨定是GPI連接的膜多肽。在第一外源性多肽的一些實施例中，GPI連接的膜多肽錨定是選自由以下組成之群：CD59；CD55；和信號素(Semaphorin) 7A(SEMA7A)。

在一些實施例中，錨定或跨膜結構域可包括小型整合膜蛋白1(SMIM1)或其跨膜部分。在一些實施例中，錨定或跨膜結構域包括血型糖蛋白A(GPA)，或其片段(例如，其跨膜部分)。在一些實施例中，錨定或跨膜結構域包括表1中提供的胺基酸序列。

在一些實施例中，第一外源性多肽包括IL-15多肽或其功能片段和野生型人類IL-15RA的跨膜區。在一些實施例中，第一外源性多肽包括IL-15多肽或其功能片段和跨膜區(例如，本文所述任何例示性跨膜區或跨膜結構域)。

在一些實施例中，連接子設置在錨定或跨膜結構域與IL-15多肽、IL-15RA多肽或IL-15/IL-15RA多肽之間。合適的連接子包括但不限於表2中提供的任何連接子胺基酸序列。在一些實施例中，錨定或跨膜結構域(例如GPA)與IL-15多肽、IL-15RA多肽或IL-15/IL-15RA融合多肽之間的連接子包括HA連接子或由其組成。在一些實施例中，連接子包括胺基酸序列SEQ ID NO：41或由其組成。

在一些實施例中，第一外源性多肽可進一步包括錨定。在一些實施例中，第一外源性多肽可包括胺基酸序列SEQ ID NO：44 (其由核酸序列SEQ ID NO：45所編碼)、介白素-15(IL-15)多肽和介白素15受體α (IL-15RA)多肽的細胞外部分。在一些實施例中，第一外源性多肽可包括包括胺基酸序列SEQ ID NO：44的錨定、包括胺基酸序列SEQ ID NO：24的成熟人類IL-15，和包括胺基酸序列SEQ ID NO：30的成熟人類細胞外IL-15RA，由此成熟人類IL-15胺基酸序列和成熟人類細胞外IL-15 RA胺基酸序列藉由包括胺基酸序列SEQ ID NO：37的彈性連接子連接。

在一些實施例中，外源性融合多肽包括：包括胺基酸序列SEQ ID NO：35的訊號肽(例如，GPA訊號肽)、包括胺基酸序列SEQ ID NO：24的成熟人類IL-15、包括胺基酸序列SEQ ID NO：37的彈性連接子(例如，連接成熟人類IL-15和成熟人類細胞外IL-15RA)、包括胺基酸SEQ ID NO：30的成熟人類細胞外IL-15RA、包括胺基酸序列SEQ ID NO：43的連接子，及包括胺基酸序列SEQ ID NO：44的錨定。在一些實施例中，外源性融合多肽包括(例如，從N端到C端)：包括胺基酸序列SEQ ID NO：24的成熟人類IL-15、包括胺基酸序列SEQ ID NO：37的彈性連接子(例如，連接成熟人類IL-15和成熟人類細胞外IL-15RA)、包括胺基酸序列SEQ ID NO：30的成熟人類細胞外IL-15RA、包括胺基酸序列SEQ ID NO：43的連接子，及包括胺基酸序列SEQ ID NO：44的錨定。在一些實施例中，外源性融合多肽包括SEQ ID NO：54的序列。

在一些實施例中，第一外源性多肽包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的胺基酸序列： MYGKIIFVLLLSEIVSISANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGSGGSGGYPYDVPDYAGGGSGGGSLSTTEVAMHTSTSSSVTKSYISSQTNDTHKRDTYAATPRAHEVSEISVRTVYPPEEETGERVQLAHHFSEPEITLIIFGVMAGVIGTILLISYGIRRLIKKSPSDVKPLPSPDTDVPLSSVEIENPETSDQ (SEQ ID NO：46)或其功能片段。

在一些實施例中，第一外源性多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGTATGGAAAAATAATCTTTGTATTACTATTGTCAGAAATTGTGAGCATATCAGCAAACTGGGTAAATGTGATTTCAGACCTGAAAAAAATCGAAGACCTTATTCAATCCATGCACATCGACGCGACACTTTATACTGAATCAGACGTACACCCGTCCTGTAAGGTTACTGCGATGAAGTGCTTTCTGTTGGAATTGCAAGTGATCTCCCTCGAATCAGGGGATGCATCCATTCATGATACCGTCGAGAATTTGATCATTCTGGCAAATAACTCCCTCAGTAGTAACGGGAATGTGACCGAGTCTGGGTGTAAGGAGTGCGAAGAGTTGGAGGAAAAGAATATCAAAGAATTCCTTCAGTCCTTTGTTCACATCGTGCAAATGTTTATTAATACATCTGGAGGATCTGGCGGGTCTGGAGGCTACCCCTATGACGTGCCCGACTATGCCGGCGGAGGGTCTGGAGGCGGTTCCTTAAGTACCACTGAGGTGGCAATGCACACTTCAACCTCTTCTTCAGTCACAAAGAGTTACATCTCATCACAGACAAATGATACGCACAAACGGGACACATATGCAGCCACTCCTAGAGCTCATGAAGTTTCAGAAATTTCTGTTAGAACTGTTTACCCTCCAGAAGAGGAAACCGGAGAAAGGGTACAACTTGCCCATCATTTCTCTGAACCAGAGATAACACTCATTATTTTTGGGGTGATGGCTGGTGTTATTGGAACGATCCTCTTAATTTCTTACGGTATTCGCCGACTGATAAAGAAAAGCCCATCTGATGTAAAACCTCTCCCCTCACCTGACACAGACGTGCCTTTAAGTTCTGTTGAAATAGAAAATCCAGAGACAAGTGATCAA (SEQ ID NO：47)。

在一些實施例中，第一外源性多肽包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的胺基酸序列： MYGKIIFVLLLSEIVSISANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTGGSGGSGGYPYDVPDYAGGGSGGGSLSTTEVAMHTSTSSSVTKSYISSQTNDTHKRDTYAATPRAHEVSEISVRTVYPPEEETGERVQLAHHFSEPEITLIIFGVMAGVIGTILLISYGIRRLIKKSPSDVKPLPSPDTDVPLSSVEIENPETSDQ (SEQ ID NO：48)或其功能片段。

在一些實施例中，第一外源性多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGTATGGAAAAATAATCTTTGTATTACTATTGTCAGAAATTGTGAGCATATCAGCAAACTGGGTGAACGTTATTAGTGACCTTAAAAAGATCGAAGATTTGATACAGTCAATGCACATAGACGCGACGCTTTATACAGAATCTGATGTACATCCTTCATGCAAGGTTACTGCTATGAAGTGTTTTCTTCTCGAACTCCAAGTAATAAGTCTTGAGAGCGGAGATGCGAGCATTCATGACACCGTTGAGAATCTTATTATATTGGCTAACAACTCTCTGTCCAGCAATGGTAATGTGACAGAAAGCGGGTGTAAGGAGTGCGAGGAACTCGAGGAGAAGAACATCAAAGAGTTCTTGCAGTCTTTCGTCCATATTGTCCAGATGTTCATAAATACTAGCGGGGGAGGTGGCTCTGGTGGAGGCGGGAGTGGCGGGGGCGGCTCAATCACATGCCCACCGCCCATGTCTGTTGAACACGCAGACATTTGGGTTAAAAGTTACTCACTTTACTCACGCGAGAGATATATATGCAACAGCGGCTTCAAGCGCAAAGCAGGCACTAGTAGTCTTACAGAGTGCGTGCTCAATAAAGCTACAAATGTAGCTCATTGGACTACTCCTAGTCTCAAATGCATTCGGGACCCCGCGCTTGTGCACCAGAGACCTGCGCCGCCGTCCACAGTGACGACAGCTGGTGTAACCCCCCAACCTGAATCCCTTAGTCCGTCTGGTAAAGAACCGGCGGCGTCTTCACCTTCCAGCAATAATACTGCGGCGACAACAGCCGCGATAGTTCCTGGATCCCAACTCATGCCGTCAAAGTCTCCTTCAACGGGAACGACAGAGATCTCTTCACATGAAAGTTCTCATGGAACACCGAGCCAAACTACGGCAAAGAACTGGGAACTGACTGCCTCAGCAAGCCACCAGCCGCCAGGGGTGTACCCGCAAGGGCACTCAGATACTACTGGAGGATCTGGCGGGTCTGGAGGCTACCCCTATGACGTGCCCGACTATGCCGGCGGAGGGTCTGGAGGCGGTTCCTTAAGTACCACTGAGGTGGCAATGCACACTTCAACCTCTTCTTCAGTCACAAAGAGTTACATCTCATCACAGACAAATGATACGCACAAACGGGACACATATGCAGCCACTCCTAGAGCTCATGAAGTTTCAGAAATTTCTGTTAGAACTGTTTACCCTCCAGAAGAGGAAACCGGAGAAAGGGTACAACTTGCCCATCATTTCTCTGAACCAGAGATAACACTCATTATTTTTGGGGTGATGGCTGGTGTTATTGGAACGATCCTCTTAATTTCTTACGGTATTCGCCGACTGATAAAGAAAAGCCCATCTGATGTAAAACCTCTCCCCTCACCTGACACAGACGTGCCTTTAAGTTCTGTTGAAATAGAAAATCCAGAGACAAGTGATCAA (SEQ ID NO：49)。

在一些實施例中，第一外源性多肽包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的胺基酸序列： MYGKIIFVLLLSEIVSISANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGSGGSGGYPYDVPDYAGGGSGGGSLSTTEVAMHTSTSSSVTKSYISSQTNDTHKRDTYAATPRAHEVSEISVRTVYPPEEETGERVQLAHHFSEPEITLIIFGVMAGVIGTILLISYGIRRLIKKSPSDVKPLPSPDTDVPLSSVEIENPETSDQ (SEQ ID NO：50)或其功能片段。

在一些實施例中，第一外源性多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGTATGGAAAAATAATCTTTGTATTACTATTGTCAGAAATTGTGAGCATATCAGCAAACTGGGTAAACGTCATAAGCGACCTCAAAAAGATCGAGGACCTTATACAGTCTATGCACATAGATGCGACACTTTACACGGAATCAGACGTGCACCCGTCCTGCAAAGTCACAGCCATGAAGTGCTTTCTTCTCGAACTGCAGGTAATTTCTCTCGAATCAGGTGACGCATCTATCCACGACACAGTTGAAAATCTTATTATCCTGGCTAATAACTCCCTTAGCTCAAACGGCAATGTCACCGAGAGTGGATGTAAAGAATGTGAGGAACTTGAAGAGAAAAACATAAAGGAATTCTTGCAGAGTTTCGTTCATATTGTGCAAATGTTCATCAATACTAGTGGCGGGGGGGGAAGCGGTGGTGGAGGGAGCGGGGGTGGTGGATCCATCACCTGCCCGCCTCCCATGAGCGTGGAACACGCGGACATTTGGGTTAAGAGCTACAGTCTTTACAGCCGGGAGCGCTATATCTGCAACTCAGGGTTTAAGCGGAAAGCAGGGACATCAAGTTTGACAGAATGTGTGTTGAACAAGGCTACAAATGTTGCTCACTGGACCACGCCATCTTTGAAGTGTATCCGAGATCCCGCGCTTGTCCATCAGCGCCCAGCGCCTCCCTCCGGAGGATCTGGCGGGTCTGGAGGCTACCCCTATGACGTGCCCGACTATGCCGGCGGAGGGTCTGGAGGCGGTTCCTTAAGTACCACTGAGGTGGCAATGCACACTTCAACCTCTTCTTCAGTCACAAAGAGTTACATCTCATCACAGACAAATGATACGCACAAACGGGACACATATGCAGCCACTCCTAGAGCTCATGAAGTTTCAGAAATTTCTGTTAGAACTGTTTACCCTCCAGAAGAGGAAACCGGAGAAAGGGTACAACTTGCCCATCATTTCTCTGAACCAGAGATAACACTCATTATTTTTGGGGTGATGGCTGGTGTTATTGGAACGATCCTCTTAATTTCTTACGGTATTCGCCGACTGATAAAGAAAAGCCCATCTGATGTAAAACCTCTCCCCTCACCTGACACAGACGTGCCTTTAAGTTCTGTTGAAATAGAAAATCCAGAGACAAGTGATCAA (SEQ ID NO：51)。

在一些實施例中，第一外源性多肽包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的胺基酸序列： MYGKIIFVLLLSEIVSISANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGSGGSGGGGGSGGGSGGGSGGGSLSTTEVAMHTSTSSSVTKSYISSQTNDTHKRDTYAATPRAHEVSEISVRTVYPPEEETGERVQLAHHFSEPEITLIIFGVMAGVIGTILLISYGIRRLIKKSPSDVKPLPSPDTDVPLSSVEIENPETSDQ (SEQ ID NO：52)或其功能片段。

在一些實施例中，第一外源性多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGTATGGAAAAATAATCTTTGTATTACTATTGTCAGAAATTGTGAGCATATCAGCAAACTGGGTAAATGTGATTTCAGACCTGAAAAAAATCGAAGACCTTATTCAATCCATGCACATCGACGCGACACTTTATACTGAATCAGACGTACACCCGTCCTGTAAGGTTACTGCGATGAAGTGCTTTCTGTTGGAATTGCAAGTGATCTCCCTCGAATCAGGGGATGCATCCATTCATGATACCGTCGAGAATTTGATCATTCTGGCAAATAACTCCCTCAGTAGTAACGGGAATGTGACCGAGTCTGGGTGTAAGGAGTGCGAAGAGTTGGAGGAAAAGAATATCAAAGAATTCCTTCAGTCCTTTGTTCACATCGTGCAAATGTTTATTAATACATCTGGAGGATCTGGCGGGTCTGGAGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGGTCTGGAGGCGGTTCCTTAAGTACCACTGAGGTGGCAATGCACACTTCAACCTCTTCTTCAGTCACAAAGAGTTACATCTCATCACAGACAAATGATACGCACAAACGGGACACATATGCAGCCACTCCTAGAGCTCATGAAGTTTCAGAAATTTCTGTTAGAACTGTTTACCCTCCAGAAGAGGAAACCGGAGAAAGGGTACAACTTGCCCATCATTTCTCTGAACCAGAGATAACACTCATTATTTTTGGGGTGATGGCTGGTGTTATTGGAACGATCCTCTTAATTTCTTACGGTATTCGCCGACTGATAAAGAAAAGCCCATCTGATGTAAAACCTCTCCCCTCACCTGACACAGACGTGCCTTTAAGTTCTGTTGAAATAGAAAATCCAGAGACAAGTGATCAA (SEQ ID NO：53)。

在一些實施例中，第一外源性多肽包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的胺基酸序列： MYGKIIFVLLLSEIVSISANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTGGSGGSGGGGGSGGGSGGGSGGGSLSTTEVAMHTSTSSSVTKSYISSQTNDTHKRDTYAATPRAHEVSEISVRTVYPPEEETGERVQLAHHFSEPEITLIIFGVMAGVIGTILLISYGIRRLIKKSPSDVKPLPSPDTDVPLSSVEIENPETSDQ (SEQ ID NO：54)或其功能片段。

在一些實施例中，第一外源性多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGTATGGAAAAATAATCTTTGTATTACTATTGTCAGAAATTGTGAGCATATCAGCAAACTGGGTGAACGTTATTAGTGACCTTAAAAAGATCGAAGATTTGATACAGTCAATGCACATAGACGCGACGCTTTATACAGAATCTGATGTACATCCTTCATGCAAGGTTACTGCTATGAAGTGTTTTCTTCTCGAACTCCAAGTAATAAGTCTTGAGAGCGGAGATGCGAGCATTCATGACACCGTTGAGAATCTTATTATATTGGCTAACAACTCTCTGTCCAGCAATGGTAATGTGACAGAAAGCGGGTGTAAGGAGTGCGAGGAACTCGAGGAGAAGAACATCAAAGAGTTCTTGCAGTCTTTCGTCCATATTGTCCAGATGTTCATAAATACTAGCGGGGGAGGTGGCTCTGGTGGAGGCGGGAGTGGCGGGGGCGGCTCAATCACATGCCCACCGCCCATGTCTGTTGAACACGCAGACATTTGGGTTAAAAGTTACTCACTTTACTCACGCGAGAGATATATATGCAACAGCGGCTTCAAGCGCAAAGCAGGCACTAGTAGTCTTACAGAGTGCGTGCTCAATAAAGCTACAAATGTAGCTCATTGGACTACTCCTAGTCTCAAATGCATTCGGGACCCCGCGCTTGTGCACCAGAGACCTGCGCCGCCGTCCACAGTGACGACAGCTGGTGTAACCCCCCAACCTGAATCCCTTAGTCCGTCTGGTAAAGAACCGGCGGCGTCTTCACCTTCCAGCAATAATACTGCGGCGACAACAGCCGCGATAGTTCCTGGATCCCAACTCATGCCGTCAAAGTCTCCTTCAACGGGAACGACAGAGATCTCTTCACATGAAAGTTCTCATGGAACACCGAGCCAAACTACGGCAAAGAACTGGGAACTGACTGCCTCAGCAAGCCACCAGCCGCCAGGGGTGTACCCGCAAGGGCACTCAGATACTACTGGAGGATCTGGCGGGTCTGGAGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGGTCTGGAGGCGGTTCCTTAAGTACCACTGAGGTGGCAATGCACACTTCAACCTCTTCTTCAGTCACAAAGAGTTACATCTCATCACAGACAAATGATACGCACAAACGGGACACATATGCAGCCACTCCTAGAGCTCATGAAGTTTCAGAAATTTCTGTTAGAACTGTTTACCCTCCAGAAGAGGAAACCGGAGAAAGGGTACAACTTGCCCATCATTTCTCTGAACCAGAGATAACACTCATTATTTTTGGGGTGATGGCTGGTGTTATTGGAACGATCCTCTTAATTTCTTACGGTATTCGCCGACTGATAAAGAAAAGCCCATCTGATGTAAAACCTCTCCCCTCACCTGACACAGACGTGCCTTTAAGTTCTGTTGAAATAGAAAATCCAGAGACAAGTGATCAA (SEQ ID NO：55)。

在一些實施例中，外源性融合多肽包括胺基酸序列SEQ ID NO：46。在一些實施例中，外源性融合多肽包括胺基酸序列SEQ ID NO：48。在一些實施例中，外源性融合多肽包括胺基酸序列SEQ ID NO：50。在一些實施例中，外源性融合多肽包括胺基酸序列SEQ ID NO：52。在一些實施例中，外源性融合多肽包括胺基酸序列SEQ ID NO：54。

在一些實施例中，第一外源性多肽如美國專利申請公開案第2019/0298769號中所述，其以全文引用的方式併入本文。 第二外源性多肽

在一些實施例中，去核類紅血球可進一步在其細胞外表面上包括外源性多肽。在一些實施例中，去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性多肽及在其細胞外表面上包括第二外源性多肽，第一外源性多肽包括(i)介白素15(IL-15)或其功能片段，及(ii)介白素15受體α(IL-15RA)或其功能片段，而第二外源性多肽包括4-1BBL多肽或其功能片段。

如本文所用，4-1BBL多肽是指由腫瘤壞死因子超家族成員9(TNFSF9或CD137L)基因所編碼的胺基酸序列。4-1BBL是4-1BB(也稱為腫瘤壞死因子受體超家族，成員9(TNFRSF9)或CD137)的配體，它是一個在免疫系統細胞表面上所發現的受體家族成員。參見Alderson et al., 1994, Eur. J. Immunol.24:2219-2227。

在一些實施例中，4-1BBL呈其天然三聚體形式。

在一些實施例中，4-1BBL包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的胺基酸序列： ACPWAVSGARASPGSAASPRLREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE  (SEQ ID NO：56)或其功能片段。在一些實施例中，4-1BBL包括SEQ ID NO：56的序列。

在一些實施例中，4-1BBL由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： GCCTGCCCCTGGGCCGTGTCCGGGGCTCGCGCCTCGCCCGGCTCCGCGGCCAGCCCGAGACTCCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA  (SEQ ID NO：57)。

在一些實施例中，第二外源性多肽包括與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的胺基酸序列： MYGKIIFVLLLSEIVSISAACPWAVSGARASPGSAASPRLREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSEGGSGGSGGGPEDEPGSGSGGGSGGGSLSTTEVAMHTSTSSSVTKSYISSQTNDTHKRDTYAATPRAHEVSEISVRTVYPPEEETGERVQLAHHFSEPEITLIIFGVMAGVIGTILLISYGIRRLIKKSPSDVKPLPSPDTDVPLSSVEIENPETSDQ  (SEQ ID NO：58)。在一些實施例中，4-1BBL多肽包括SEQ ID NO：58的序列。

在一些實施例中，第二外源性多肽由與以下序列至少70%一致(例如至少75%一致、至少80%一致、至少85%一致、至少90%一致、至少95%一致、至少99%一致，或100%一致)的核酸序列所編碼： ATGTATGGAAAAATAATCTTTGTATTACTATTGTCAGAAATTGTGAGCATATCAGCAGCCTGCCCCTGGGCCGTGTCCGGGGCTCGCGCCTCGCCCGGCTCCGCGGCCAGCCCGAGACTCCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAAGGAGGATCTGGCGGGTCTGGAGGCGGCCCCGAGGACGAGCCCGGCAGCGGCAGCGGCGGAGGGTCTGGAGGCGGTTCCTTAAGTACCACTGAGGTGGCAATGCACACTTCAACCTCTTCTTCAGTCACAAAGAGTTACATCTCATCACAGACAAATGATACGCACAAACGGGACACATATGCAGCCACTCCTAGAGCTCATGAAGTTTCAGAAATTTCTGTTAGAACTGTTTACCCTCCAGAAGAGGAAACCGGAGAAAGGGTACAACTTGCCCATCATTTCTCTGAACCAGAGATAACACTCATTATTTTTGGGGTGATGGCTGGTGTTATTGGAACGATCCTCTTAATTTCTTACGGTATTCGCCGACTGATAAAGAAAAGCCCATCTGATGTAAAACCTCTCCCCTCACCTGACACAGACGTGCCTTTAAGTTCTGTTGAAATAGAAAATCCAGAGACAAGTGATCAA (SEQ ID NO：59)。

在一些實施例中，第二外源性多肽包括前導(訊號)序列。在一些實施例中，4-1BBL或其功能片段融合至前導(訊號)序列。前導(訊號)序列的非限制性實例包括表4中列出的胺基酸序列。在一些實施例中，前導(訊號)序列包括GPA訊號肽。在一些實施例中，前導(訊號)序列包括SEQ ID NO：35胺基酸序列。在一些實施例中，第二外源性多肽包括4-1BBL或其功能片段，及胺基酸序列SEQ ID NO：35的前導(訊號)序列。在一些實施例中，第二外源性多肽包括包括胺基酸序列SEQ ID NO：35的前導(訊號)序列，和具有胺基酸序列SEQ ID NO：56的4-1BBL。

在一些實施例中，第二外源性多肽附接至類紅血球膜(例如，去核類紅血球的膜)。在一些實施例中，第二外源性多肽附接至去核類紅血球的細胞外表面。在一些實施例中，第二外源性多肽進一步包括將第二外源性多肽錨定至類紅血球膜(例如，去核類紅血球的膜)的錨定或跨膜結構域。在一些實施例中，錨定或跨膜結構域與第二外源性多肽(例如，4-1BBL)是異源的。在一些實施例中，錨定或跨膜結構域包括內源性紅血球跨膜多肽或其片段或跨膜部分。在某些實施例中，錨定或跨膜結構域包括GPA或其跨膜部分。在一些實施例中，錨定或跨膜結構域包括小型整合膜蛋白1(SMIM1)、運鐵蛋白受體、Fas配體(FasL)、凱爾帶3(Kellor Band 3)或其跨膜部分(例如，跨膜結構域)。在一些實施例中，第二外源性多肽可包括本文所述任何錨定或跨膜結構域。在一些實施例中，第二外源性多肽包括表1中列出的錨定或跨膜結構域。

在一些實施例中，第二外源性多肽包括一或多個連接子(例如，本文所述任何例示性連接子)。例如，第二外源性多肽可包括表2中提供的一或多個連接子。在一些實施例中，連接子設置在4-1BBL或其功能片段與第二外源性多肽中的錨定結構域或跨膜結構域之間。在一些實施例中，第二外源性多肽可進一步包括訊號肽(例如，本文所述任何例示性訊號肽)。例如，第二外源性多肽可包括表3中提供的訊號肽。

在一些實施例中，第二外源性多肽包括訊號肽、4-1BBL或其功能片段，和錨定。在一些實施例中，第二外源性多肽包括訊號肽、4-1BBL或其功能片段、連接子，和錨定。在一些實施例中，第二外源性多肽包括(例如，從N端到C端)包括胺基酸序列SEQ ID NO：35的訊號肽、包括胺基酸序列SEQ ID NO：54的4-1BBL或其功能片段、包括胺基酸序列SEQ ID NO：60的連接子(例如，安置於4-1BBL或其功能片段和錨定之間)，及包括胺基酸序列SEQ ID NO：44的錨定。在一些實施例中，第二外源性多肽包括4-1BBL或其功能片段、連接子和錨定。在一些實施例中，第二外源性多肽包括(例如，從N端到C端)包括胺基酸序列SEQ ID NO：56的4-1BBL或其功能片段、包括胺基酸序列SEQ ID NO：60的連接子(例如，安置於4-1BBL或其功能片段和錨定之間)，以及包括胺基酸序列SEQ ID NO：44的錨定。在一些實施例中，第二外源性多肽包括胺基酸序列SEQ ID NO：58或由其組成。

在一些實施例中，第一及/或第二外源性多肽可具有真核細胞(例如哺乳動物細胞，例如人類細胞)的轉譯後修飾特徵。在一些實施例中，一或多個(例如，2、3、4、5個或更多個)外源性多肽被醣基化、磷酸化或兩者兼有。糖蛋白的活體外偵測通常在SDS-PAGE凝膠和西方墨點法上使用經修改的高碘酸席夫(Periodic acid-Schiff，PAS)方法完成。醣蛋白的細胞定位可以利用本領域中已知的凝集素螢光接合物來完成。磷酸化可以藉由西方墨點法使用磷酸特異性抗體進行評估。轉譯後修飾還包括接合至疏水性基團(例如，肉豆蔻醯化、棕櫚醯化、異戊二烯化、聚異戊二烯化或醣基化)、接合至輔因子(例如，脂醯化、黃素部分(例如，FMN或FAD)、血紅素C附接、磷酸泛硫醇化或視黃亞基希夫鹼(Schiff base)形成)、二苯甲醯胺形成、乙醇胺磷酸甘油附接、腐胺離胺酸(hypusine)形成、醯化(例如O-醯化、N-醯化或S-醯化)、甲醯化、乙醯化、烷基化(例如甲基化或乙基化)、醯胺化、丁醯化、γ-羧化、丙二醯化、羥基化、碘化、核苷酸加成(諸如ADP-核醣基化)、氧化、磷酸酯(O-連接)或胺基磷酸酯(N-連接)形成、(例如，磷酸化或腺苷酸化)、丙醯化、焦麩胺酸形成、S-麩胱甘肽化、S-亞硝基化、琥珀醯化、硫酸化、ISG化(ISGylation)、SUMO化(SUMOylation)、泛素化、類泛素化(Neddylation)、或胺基酸的化學修飾(例如瓜胺酸化、脫醯胺化、去亞胺化或胺甲醯化)、雙硫鍵形成、(例如脯胺酸、絲胺酸、丙胺酸或甲硫胺酸的)外消旋化。在實施例中，醣基化包括向精胺酸、天冬醯胺酸、半胱胺酸、羥基離胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸或色胺酸添加糖基，產生醣蛋白。在實施例中，醣基化包括例如O-連接醣基化或N-連接醣基化。

在一些實施例中，第一和第二外源性多肽是融合蛋白，例如，是具有內源性紅血球多肽或其片段(例如跨膜多肽，例如GPA或其跨膜片段)的融合體。在一些實施例中，一或多個外源性多肽與促進二聚化或多聚化的結構域融合，例如與視情況包括二聚化結構域的第二融合外源性多肽融合。在一些實施例中，二聚化結構域包括抗體分子的一部分，例如Fc結構域或CH3結構域。在一些實施例中，第一和第二二聚化結構域包括孔內旋鈕突變(例如，T366Y旋鈕和Y407T孔)以促進異二聚化。 錨定 / 跨膜結構域

在一些實施例中，跨膜結構域包括第1型膜多肽的跨膜結構域或由其組成。在一些實施例中，第1型膜多肽選自由以下組成之群組：血型糖蛋白A(GPA)；血型糖蛋白B(GPB)；基礎免疫球蛋白(也稱為CD147)；CD44；CD58(也稱為LFA3)；細胞間黏附分子4(ICAM4)；基底細胞黏附分子(BCAM)；CR1；CD99；紅血球母細胞膜相關蛋白(ERMAP)；連接黏附分子A(JAM-A)；神經澱粉蛋白(NPTN)；AMIGO2；和DS細胞黏附分子樣1(DSCAML1)。在一些實施例中，跨膜結構域包括第2型膜多肽的跨膜結構域或由其組成。在一些實施例中，第2型膜多肽選自由以下組成之群組：小型整合膜蛋白1(SMIM1)、運鐵蛋白受體(CD71)；Fas配體(FasL)跨膜；和凱爾。在一些實施例中，將外源性多肽錨定至去核類紅血球膜的多肽序列包括GPI連接的膜多肽、由其組成或衍生自GPI連接的膜蛋白(例如其片段)。在一些實施例中，GPI連接的膜多肽選自由以下組成之群組：CD59；CD55；和信號素7A(SEMA7A)。

在特定實施例中，跨膜結構域包括GPA或其跨膜部分。在不受到理論囿限的情況下，在某些實施例中，GPA是較佳的，因為它具有與網狀細胞細胞骨架交互作用的細胞質結構域，其在細胞分化和成熟時具有保留GPA的作用。在一些實施例中，跨膜結構域包括小型整合膜蛋白1(SMIM1)或其跨膜部分。在一些實施例中，錨定選自表1中列出的胺基酸序列。 表1. 錨定序列

SEQ ID NO ：	序列名稱	序列說明	胺基酸序列
62	GPA	全長GPA	MYGKIIFVLLLSAIVSISALSTTEVAMHTSTSSSVTKSYISSQTNDTHKRDTYAATPRAHEVSEISVRTVYPPEEETGERVQLAHHFSEPEITLIIFGVMAGVIGTILLISYGIRRLIKKSPSDVKPLPSPDTDVPLSSVEIENPETSDQ
44	GPA	包括跨膜結構域之GPA的片段	LSTTEVAMHTSTSSSVTKSYISSQTNDTHKRDTYAATPRAHEVSEISVRTVYPPEEETGE RVQLAHHFSEPEITLIIFGVMAGVIGTILLISYGIRRLIKKSPSDVKPLPSPDTDVPLSS VEIENPETSDQ
63	SMIM1	SMIM1	MQPQESHVHYSRWEDGSRDGVSLGAVSSTEEASRCRRISQRLCTGKLGIAMKVLGGVALFWIIFILGYLTGYYVHKCK

在去核類紅血球包括第一和第二外源性多肽的一些實施例中，第一外源性多肽(例如本文所述任何外源性融合多肽)或第二外源性多肽(例如本文所述任何外源性多肽)包括內源性紅血球多肽或其片段(例如跨膜多肽，例如GPA或其跨膜片段)。在一些實施例中，外源性融合多肽或一或多個外源性多肽(例如，本文所述任何外源性多肽)與促進二聚化或多聚化的結構域融合，例如與視情況包括二聚化結構域的第二外源性多肽融合。在一些實施例中，二聚化結構域包括抗體分子的一部分，例如Fc結構域或CH3結構域。在一些實施例中，第一和第二二聚化結構域包括孔內旋鈕突變(例如，T366Y旋鈕和Y407T孔)以促進異二聚化。 連接子

在去核類紅血球包括第一和第二外源性多肽的一些實施例中，第一外源性融合多肽(例如本文所述任何融合多肽)及/或第二外源性多肽(例如本文所述任何例示性多肽)可包括一或多個連接子。例如，連接子可設置在細胞激素多肽序列(例如，IL-15或其功能片段)與跨膜結構域序列之間，或IL-15或其功能片段與IL-15RA或其功能片段之間。在另一個實例中，連接子可設置在4-1BBL多肽、其功能片段與跨膜結構域序列之間。

在一些實施例中，連接子包括以下或由以下組成：長度為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或更多個胺基酸。在一些實施例中，連接子包括長度為約5至約25個胺基酸、約5至約20個胺基酸、約10至約25個胺基酸，或約10至約20個胺基酸或由其組成。在一些實施例中，可用於本發明的連接子包括長度為10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸或由其組成。在一個較佳實施例中，連接子是非免疫原性的。

在一些實施例中，連接子選自表2中所示的胺基酸序列。 表2. 連接子序列

SEQ ID NO.	序列說明	胺基酸序列
64	G4S連接子	GGGGS
37	(G4S) 3連接子	GGGGSGGGGSGGGGS
65	連接子-HA-連接子	GGSGGSGGYPYDVPDYAGGGSGGGS
43	連接子	GGSGGSGGGGGSGGGSGGGSGGGS
60	連接子	GGSGGSGGGPEDEPGSGSGGGSGGGS
66	連接子	GSGSGSGSGSEDEDEDEDGSGSGSGSGS
67	連接子	GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
68	連接子	GSGSGSGSEDGSGSGSGS
69	連接子	GSGSGSGSGSGSGSGSGS
70	連接子	GCGGSGGGGSGGGGS
71	連接子	SGRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSSPA
72	連接子	GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG
73	Snorkel連接子	SGRGASSGSSGSGSQKKPRYEIRWKVVVISAILALVVLTVISLIILIMLWGSGMQSPA

在一些實施例中，連接子包括胺基酸序列(GGGGS) _n(SEQ ID NO：30)，其中n是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，連接子由(GGGGS) _n連接子(SEQ ID NO：38)組成，其中n為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，連接子包括胺基酸序列GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO：37)。在一些實施例中，連接子由胺基酸序列SEQ ID NO：37組成。在一些實施例中，連接子包括胺基酸序列SEQ ID NO：65。在一些實施例中，連接子由胺基酸序列SEQ ID NO：65組成。在一些實施例中，連接子包括胺基酸序列SEQ ID NO：43。在一些實施例中，連接子由胺基酸序列SEQ ID NO：43組成。在一些實施例中，連接子包括胺基酸序列SEQ ID NO：60。在一些實施例中，連接子由胺基酸序列SEQ ID NO：60組成。可用於外源性融合多肽或外源性多肽(例如本文所述任何外源性多肽)的其他合適連接子是本領域中已知的。 前導 ( 訊號 ) 序列

在去核類紅血球包括第一和第二外源性多肽的一些實施例中，第一外源性融合多肽或外源性多肽(例如本文所述任何例示性外源性多肽)包括前導(訊號)序列。在一些實施例中，前導序列選自表3中列出的序列。 表3. 前導(訊號)序列

SEQ ID NO.	序列說明	胺基酸序列
35	GPA訊號肽	MYGKIIFVLLLSEIVSISA
74	Ig重鏈V區3訊號序列	MGWSCIILFLVATATGVHS
75	輕鏈前導	MRVPAQLLGLLLLWLPGARC

例示性去核類紅血球

在一些實施例中，去核類紅血球包括以下組合：包括IL-15或其片段的第一外源性融合多肽，該IL-15或其片段連接至IL-15受體α(IL-15Rα)的細胞外部分或其片段(例如IL-15Rα sushi結合結構域)，該IL-15受體α(IL-15Rα)的細胞外部分或其片段連接至跨膜多肽(例如，GPA或其跨膜片段)；以及包括4-1BBL或其片段的第二外源性多肽，4-1BBL或其片段連接至跨膜多肽(例如，GPA或其跨膜片段)；例如，如美國專利申請公開案第2019/0298769號中所述，以引用的方式併入本文)。

在一些實施例中，本文所述的去核類紅血球(例如人類去核類紅血球)對一或多種次要血型抗原為陰性(即不包括)，例如Le(a ^-b ^-)(路易斯抗原系統(Lewis antigen system))、Fy(a ^-b ^-)(達菲系統(Duffy system))、JK(a ^-b ^-)(基德系統(Kidd system))、M ^-N ^-(MNS系統)、K ^-k ^-(凱爾系統(Kell system))，Lu(a ^-b ^-)(路德系統(Lutheran system))和H抗原陰性(孟買表型(Bombay phenotype))或其任何組合。在一些實施例中，該等去核類紅血球也是O型及/或Rh ^-。次要血型描述於，例如Agarwal 等人「Blood group phenotype frequencies in blood donors from a tertiary care hospital in north India」, Blood Res.48(1):51-54, 2013，以及Mitra 等人「Blood groups systems」, Indian J. Anaesth.58(5):524-528, 2014中，其說明以引用的方式併入本文。在一些實施例中，本文所述的去核類紅血球(例如，人類去核類紅血球)展現出與不包括外源性多肽(例如本文所述或本領域中已知的任何外源性多肽)之經分離、未經培養的去核類紅血球基本上相同的滲透膜脆性(osmotic membrane fragility)。在一些實施例中，去核類紅血球群在0.3%、0.35%、0.4%，0.45%或0.5% NaCl下具有少於50%細胞溶解的滲透脆性。在一些實施例中，使用WO 2015/073587的實例59 (其說明以引用的方式併入本文)中所述方法來測定滲透脆性。

在一些實施例中，去核類紅血球(例如人類去核類紅血球)具有與野生型、未經處理的去核類紅血球大致相同的直徑或體積。在一些實施例中，去核類紅血球(例如人類去核類紅血球)群的平均直徑為約4、5、6、7、8、9、10，11或12微米，或約4.0至約12.0微米、約4.0至約11.5微米、約4.0至約11.0微米、約4.0至約10.5微米、約4.0至約10微米、約4.0至約9.5微米、約4.0至約9.0微米、約4.0至約8.5微米、約4.0至約8.0微米、約4.0至約7.5微米、約4.0至約7.0微米、約4.0至約6.5微米、約4.0至約6.0微米、約4.0至約5.5微米、約4.0至約5.0微米、約4.0至約4.5微米、約5.0至約12.0微米、約5.0至約11.5微米、約5.0至約11.0微米、約5.0至約10.5微米、約5.0至約10.0微米、約5.0至約9.5微米、約5.0至約9.0微米、約5.0至約8.5微米、約5.0至約8.0微米、約5.0至約7.5微米、約5.0至約7.0微米、約5.0至約6.5微米、約5.0至約6.0微米、約5.0至約5.5微米、約6.0至約12.0微米、約6.0至約11.5微米、約6.0至約11.0微米、約6.0至約10.5微米、約6.0至約10.0微米、約6.0至約9.5微米、約6.0至約9.0微米、約6.0至約8.5微米、約6.0至約8.0微米、約6.0至約7.5微米、約6.0至約7.0微米、約6.0至約6.5微米、約7.0至約12.0微米、約7.0至約11.5微米、約7.0至約11.0微米、約7.0至約10.5微米、約7.0至約10.0微米、約7.0至約9.5微米、約7.0至約9.0微米、約7.0至約8.5微米、約7.0至約8.0微米、約7.0至約7.5微米、約8.0至約12.0微米、約8.0至約11.5微米、約8.0至約11.0微米、約8.0至約10.5微米、約8.0至約10.0微米、約8.0至約9.5微米、約8.0至約9.0微米、約8.0至約8.5微米、約9.0至約12.0微米、約9.0至約11.5微米、約9.0至約11.0微米、約9.0至約10.5微米、約9.0至約10.0微米、約9.0至約9.5微米、約10.0至約12.0微米、約10.0至約11.5微米、約10.0至約11.0微米、約10.0至約10.5微米、約11.0至約12.0微米，或約11.0至約11.5微米，且細胞群的標準偏差視情況少於1、2或3微米。可以例如使用Advia 120血液學系統或Moxi Z細胞計數器(Orflo)測量去核類紅血球直徑。

在一些實施例中，去核類紅血球的平均紅血球容積的容積為約10 fL至約175 fL、約10 fL至約160 fL、約10 fL至約140 fL、約10 fL至約120 fL、約10 fL至約100 fL、約10 fL至約95 fL、約10 fL至約90 fL、約10 fL至約85 fL、約10 fL至約80 fL、約10 fL至約75 fL、約10 fL約70 fL、約10 fL至約65 fL、約10 fL至約60 fL、約10 fL至約55 fL、約10 fL至約50 fL、約10 fL至約45 fL、約10 fL至約40 fL、約10 fL至約35 fL、約10 fL至約30 fL、約10 fL至約25 fL、約10 fL至約20 fL、約10 fL至約15 fL、約20 fL至約175 fL、約20 fL至約160 fL、約20 fL至約140 fL、約20 fL至約120 fL、約20 fL至約100 fL、約20 fL至約95 fL、約20 fL至約90 fL、約20 fL至約85 fL、約20 fL至約80 fL、約20 fL至約75 fL、約20 fL至約70 fL、約20 fL至約65 fL、約20 fL至約60 fL、約20 fL至約55 fL、約20 fL至約50 fL、約20 fL至約45 fL、約20 fL至約40 fL、約20 fL至約35 fL、約20 fL至約30 FL、約20 fL至約25 fL、約30 fL至約175 fL、約30 fL至約160 fL、約30 fL至約140 fL、約30 fL至約120 fL、約30 fL至約100 fL、約30 fL至約95 fL、約30 fL至約90 fL、約30 fL至約85 fL、約30 fL至約80 fL、約30 fL至約75 fL、約30 fL至約70 fL、約30 fL至約65 fL、約30 fL至約60 fL、約30 fL至約55 fL、約30 fL至約50 fL、約30 fL至約45 fL、約30 fL至約40 fL、約30 fL至約35 fL、約40 fL至約175 fL、約40 fL至約160 fL、約40 fL至約140 fL、約40 fL至約120 fL、約40 fL至約100 fL、約40 fL至約95 fL、約40 fL至約90 fL、約40 fL至約85 fL、約40 fL至約80 fL、約40 fL至約75 fL、約40 fL至約70 fL、約40 fL至約65 fL、約40 fL至約60 fL、約40 fL至約55 fL、約40 fL至約50 fL、約40 fL至約45 fL、約50 fL至約175 fL、約50 fL至約160 fL、約50 fL至約140 fL、約50 fL至約120 fL、約50 fL至約100 fL、約50 fL至約95 fL、約50 fL至約90 fL、約50 fL至約85 fL、約50 fL至約80 fL、約50 fL至約75 fL、約50 fL至約70 fL、約50 fL至約65 fL、約50 fL至約60 fL、約50 fL至約55 fL、約60 fL至約175 fL、約60 fL至約160 fL、約60 fL至約140 fL、約60 fL至約120 fL、約60 fL至約100 fL、約60 fL至約95 fL、約60 fL至約90 fL、約60 fL至約85 fL、約60 fL至約80 fL、約60 fL至約75 fL、約60 fL至約70 fL、約60 fL至約65 fL、約70 fL至約175 fL、約70 fL至約160 fL、約70 fL至約140 fL、約70 fL至約120 fL、約70 fL至約100 fL、約70 fL至約95 fL、約70 fL至約90 fL、約70 fL至約85 fL、約70 fL至約80 fL、約70 fL至約75 fL、約80 fL至約175 fL、約80 fL至約160 fL、約80 fL至約140 fL、約80 fL至約120 fL、約80 fL至約100 fL、約80 fL至約95 fL、約80 fL至約90 fL、約80 fL至約85 fL、約100 fL約175 fL、約100 fL至約160 fL、約100 fL至約140 fL、約100 fL至約120 fL、約120 fL至約175 fL、約120 fL至約160 fL、約120 fL至約140 fL、約140 fL至約175 fL，約140 fL至約160 fL或約160 fL至約175 fL，且視情況群的標準偏差少於50、40、30、20、10、5或2 fL。可以例如使用血液分析儀(例如，Coulter計數器，Moxi Z細胞計數器(Orflo)或Sysmex血液分析儀)來測定平均紅血球容積。

在一些實施例中，本文所述的去核類紅血球具有本文所述的一或多種(例如，2、3、4種或更多種)物理特性，例如，滲透脆性、細胞大小、血紅素濃度或磷脂醯絲胺酸含量。儘管不希望受到理論所囿限，但在一些實施例中，表現外源性多肽的去核類紅血球具有類似於野生型、未經處理的去核類紅血球的物理特性。相反地，低滲裝載的去核類紅血球有時會表現出異常的物理特性，諸如滲透脆性增加、細胞大小改變、血紅素濃度降低或細胞膜外葉上的磷脂醯絲胺酸含量增加。

在一些實施例中，去核類紅血球包括由未被細胞保留、未被純化或未完全存在於去核類紅血球外的外源性核酸所編碼的外源性多肽。在一些實施例中，去核類紅血球在缺乏穩定劑的組成物中。

在一些實施例中，去核類紅血球具有與野生型、未經處理的去核類紅血球相似的血紅素含量。在一些實施例中，去核類紅血球包括大於1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或大於10%的胎兒血紅素。在一些實施例中，去核類紅血球包括至少約20、22、24、26、28或30 pg，並且視情況至多約30 pg的總血紅素。在一些實施例中，使用WO2015/073587的實例33的Drabkin氏試劑方法來測定血紅素含量。

在一些實施例中，去核類紅血球在其細胞膜的外葉上具有與野生型、未經處理的去核類紅血球大致相同的磷脂醯絲胺酸含量。磷脂醯絲胺酸主要存在於野生型、未經處理的去核類紅血球的細胞膜內葉上，而低滲裝載會導致磷脂醯絲胺酸分佈到外葉上，從而觸發免疫反應。在一些實施例中，去核類紅血球群包括小於約30、25、20、15、10、9、8、6、5、4、3、2或1%的對膜聯蛋白V染色呈陽性的細胞。在一些實施例中，藉由對偏好結合PS的膜聯蛋白-V-FITC染色並藉由流式細胞分析技術測量FITC螢光來評估磷脂醯絲胺酸暴露，例如，使用WO2015/073587的實例54的方法。

在一些實施例中，去核類紅血球群包括至少約50%、60%、70%、80%、90%或95%(和視情況至多90%或100%)的GPA陽性細胞。在一些實施例中，使用FACS偵測GPA的存在。

在一些實施例中，去核類紅血球在個體中具有至少30、45或90天的半衰期。

在一些實施例中，包括去核類紅血球的細胞群包括少於約10、5、4、3、2或1%的鋸齒狀紅血球(echinocyte)。

在一些實施例中，可以將包括複數個去核類紅血球的組成物投予給個體(例如本文所述任何個體)。在這樣的實施例中，組成物中大於50%、60%、70%、80%或90%的細胞可能是去核的。在一些實施例中，細胞(例如去核類紅血球)含有無功能的細胞核，例如已失活的。

在本文所述任何組成物的一些實施例中，去核類紅血球是人類(例如衍生自人類供體類紅血球前驅細胞)去核類紅血球。

在本文所述任何組成物的一些實施例中，去核類紅血球是經改造的人類去核類紅血球。在一些實例中，經改造的去核類紅血球包括單一外源性多肽。在其他實例中，經改造的去核類紅血球包括兩種或更多種外源性多肽(例如本文所述任何例示性外源性多肽)。在一些實施例中，存在於該經改造去核類紅血球膜上的外源性多肽可以是點擊化學反應的產物(例如，外源性多肽可以使用本文所述任何方法接合至存在於細胞膜上的多肽(例如，第二外源性多肽或內源性多肽))。在一些實施例中，存在於經改造去核類紅血球的膜上的外源性多肽可以是使用分選酶之接合反應的產物(例如，外源性多肽可以使用本文所述任何方法接合至存在於細胞膜上的多肽(例如，第二外源性多肽或內源性多肽))。使用分選酶之接合反應的非限制性實例可以在美國專利第10,260,038號和美國專利公開案第2016/0082046 A1中找到。在一些實施例中，存在於經改造去核類紅血球的膜上的外源性多肽可以是脂質錨定的多肽，例如GPI錨定、N-肉豆蔻醯化多肽或S-棕櫚醯化多肽。在一些實施例中，存在於經改造去核類紅血球的膜上的外源性多肽可以是跨膜多肽(例如，單穿越或多穿越跨膜多肽)或周邊膜多肽。在一些實施例中，存在於經改造去核類紅血球的膜上的外源性多肽可以是包括跨膜結構域的融合多肽(例如，包括小型整合膜蛋白1(SMIM1)或血型糖蛋白A(GPA)之跨膜結構域的融合多肽)。在一些實施例中，存在於經改造去核類紅血球的膜上的外源性多肽不具有伸入細胞外空間的任何胺基酸。在一些實施例中，存在於經改造去核類紅血球的膜上的外源性多肽不具有伸入經改造去核類紅血球之細胞質中的任何胺基酸。在一些實施例中，存在於經改造去核類紅血球的膜上的外源性多肽具有伸入細胞外空間的胺基酸以及伸入經改造去核類紅血球的細胞質中的胺基酸。在WO2014/183071或WO2014/183066中說明了使用分選(sortagging)產生去核類紅血球的例示性方法，其各自以全文引用的方式併入。

該等經改造去核類紅血球可以藉由將編碼一或多個外源性多肽(例如，本文所述或本領域中已知任何外源性多肽)之一或多個核酸(例如，DNA表現載體或mRNA)引入類紅血球前驅細胞(例如，本文所述或本領域中已知的任何類紅血球前驅細胞)而產生。用於將DNA表現載體引入類紅血球前驅細胞中的例示性方法包括，但不限於脂質體介導的轉移、轉形、基因槍，轉染和轉導，例如病毒介導的基因轉移(例如，使用包括腺病毒載體、腺相關病毒載體、慢病毒載體、皰疹病毒載體，以及反轉錄病毒為基礎的載體的病毒載體來進行)。用於將DNA表現載體引入類紅血球前驅細胞中的額外例示性方法包括使用，例如裸DNA、CaPO ₄沉澱、DEAE葡聚醣、電穿孔、原生質體融合，脂質轉染和細胞顯微注射。

可視情況例如在引入編碼一或多個外源性多肽的一或多個核酸之前及/或之後，於適當條件下培養類紅血球前驅細胞，從而允許分化成經改造去核類紅血球。在一些實施例中，所得的經改造去核類紅血球包括與成熟紅血球有關的多肽，例如血紅素(例如，成人血紅素及/或胎兒血紅素)，血型糖蛋白A以及外源性多肽，且可藉由標準方法予以驗證和定量(例如西方墨點法或FACS分析)。

在一些實施例中，兩種或更多種外源性多肽在單一核酸(例如單一載體)中編碼。在實施例中，單一載體對每個基因有不同的啟動子，具有最初被轉錄成在中間具有蛋白酶切割位點的單一多肽的兩種蛋白質，以便隨後的蛋白水解加工產生兩個外源性多肽，或任何其他合適的構型。在一些實施例中，兩條或更多條多肽在兩個或更多個核酸中編碼，例如，每個載體編碼一條外源性多肽。

核酸可能是例如DNA或RNA。許多病毒可用作基因轉移載體，包括反轉錄病毒、莫洛尼氏鼠類白血病病毒(Moloney murine leukemia virus，MMLV)、腺病毒、腺相關病毒(AAV)、單純皰疹病毒(HSV)、慢病毒(諸如人類免疫缺陷病毒1(HIV1))，和泡沫病毒(spumavirus) (諸如例如泡沫狀病毒(foamy virus))。

在一些實施例中，去核類紅血球擴增至少1000、2000、5000、10,000、20,000、50,000或100,000倍(並且視情況至多100,000、200,000或500,000倍)。在一些實施例中，使用自動細胞計數器測量細胞數量。

在一些實例中，可以用編碼外源性多肽之mRNA轉染去核類紅血球或類紅血球前驅細胞，以生成經改造的去核類紅血球。傳訊RNA可衍生自活體外轉錄含有編碼外源性多肽之序列的cDNA質體構建體。例如，可以將編碼外源性多肽之cDNA序列***含有與特定RNA聚合酶相容的啟動子序列的選殖載體中。例如，選殖載體ZAP Express® pBK-CMV (Stratagene, La Jolla, Calif., USA)含有分別與T3和T7 RNA聚合酶相容的T3和T7啟動子序列。就活體外轉錄正股mRNA來說，質體在對應於編碼外源性多肽之序列結束的終止密碼子下游的限制位點處被線性化。mRNA從線性DNA模板使用市售套組被轉錄，市售套組為諸如例如RNAMaxx® High Yield Transcription Kit (來自Stratagene, La Jolla, Calif., USA)。在一些情況下，可能需要產生5’-m7GpppG-加帽的mRNA。這樣，可以使用例如來自Ambion (Austin, Tex., USA)的mMESSAGE mMACHINE High Yield Capped RNA Transcription Kit進行線性化cDNA模板的轉錄。可以在20至100 μl的反應體積中於37℃下進行轉錄歷時30分鐘至4 h。所轉錄的mRNA藉由用DNaseI的簡短處理而從反應混合物被純化，以消除線性化DNA模板，然後在氯化鋰，醋酸鈉或醋酸銨存在下，沉澱於70%乙醇中。可以使用瓊脂糖甲醛凝膠或市售可用的Novex預鑄TBE凝膠(Novex, Invitrogen, Carlsbad, Calif., USA)進行電泳，評估所轉錄的mRNA完整性。

編碼外源性多肽的傳訊RNA可以使用不同方法被引入去核類紅血球或類紅血球前驅細胞，不同方法包括，例如脂質轉染和電穿孔(van Tandeloo et al., Blood98:49-56, 2001)。關於脂質轉染，例如5 μg活體外經轉錄mRNA於Opti-MEM (Invitrogen, Carlsbad, Calif., USA)中以1：4的比率與陽離子脂質DMRIE-C (Invitrogen)培育5至15分鐘。

或者，可以使用各種其他陽離子脂質或陽離子聚合物，以用mRNA轉染類紅血球前驅細胞，包括例如DOTAP、各種形式的聚乙烯亞胺和聚L-離胺酸(Sigma-Aldrich, Saint Louis, Mo., USA)與Superfect (Qiagen, Inc., Valencia, Calif., USA；參見，例如Bettinger et al., Nucleic Acids Res.29:3882-3891, 2001)。所得到的mRNA/脂質複合物與細胞(1至2×10 ⁶個細胞/mL)在37℃下培育2小時、洗滌，並回到培養。關於電穿孔，例如將500 μL Opti-MEM (Invitrogen, Carlsbad, Calif., USA)中約5至20 x 10 ⁶個細胞與約20 μg活體外經轉錄mRNA混合，並在0.4-cm比色管中進行電穿孔，例如使用Easyject Plus裝置(EquiBio, Kent, United Kingdom)。在一些情況下，可能需要測試各種電壓，電容和電穿孔體積，以確定用於將特定mRNA轉染至類紅血球前驅細胞中的條件。一般來說，用mRNA有效轉染細胞所需的電穿孔參數對細胞比那些用於DNA電穿孔所需者(van Tandeloo et al., Blood98:49-56, 2001)較不有害。

或者，mRNA可使用肽介導的RNA遞送策略被轉染至去核類紅血球或類紅血球前驅細胞(參見，例如Bettinger et al., Nucleic Acids Res.29:3882-3891, 2001)。例如，可以將陽離子脂質聚乙烯亞胺2 kDA (Sigma-Aldrich, Saint Louis, Mo., USA)與蜂毒肽(Alta Biosciences, Birmingham, UK)組合以增加mRNA轉染的效率，特別是在有絲***後的初代細胞中。可以使用二硫化物交聯劑(諸如，例如異雙功能交聯劑3-(2-吡啶基二硫基)丙酸琥珀醯亞胺酯)將蜂毒肽接合至PEI。經活體外轉錄的mRNA與蜂毒-PEI預培育5至15分鐘，以形成RNA/肽/脂質複合物。然後將這個複合物於37℃、5% CO ₂濕潤環境下添加至無血清培養基中的細胞，培養2至4小時，之後移除，並進一步培養經轉染的細胞。

在一些實施例中，藉由將編碼一或多個外源性多肽(例如，本文所述任何外源性多肽或外源性多肽的任何組合)的核酸(例如，本文所述任何例示性核酸)引入類紅血球前驅細胞來生成經改造的去核類紅血球。在一些實施例中，外源性多肽是由被引入類紅血球前驅細胞中的DNA所編碼。在一些實施例中，外源性多肽是由被引入類紅血球前驅細胞的RNA所編碼。

編碼一或多個外源性多肽的核酸可以在最終分化成去核類紅血球之前，使用各種DNA技術而被引入類紅血球前驅細胞，DNA技術包括，例如瞬時或穩定轉染和基因療法方法。

病毒基因轉移可用於以編碼一或多個外源性多肽的核酸來轉染細胞。許多病毒可用作基因轉移載體，包括莫洛尼氏鼠類白血病病毒(MMLV)、腺病毒、腺相關病毒(AAV)、單純皰疹病毒(HSV)、慢病毒(諸如人類免疫缺陷病毒1(HIV1))，和泡沫病毒(諸如泡沫狀病毒) (參見，例如Osten et al., HEP178:177-202, 2007)。舉例來說，反轉錄病毒有效地轉導包括人類細胞在內的哺乳動物細胞且併入染色體中，從而提供穩定的基因轉移。

編碼一或多個外源性多肽的核酸可被轉染至類紅血球前驅細胞中。合適的載體是莫洛尼氏鼠類白血病病毒(MMLV)載體(Malik et al., Blood91:2664-2671, 1998)。基於MMLV的載體(一種致癌反轉錄病毒)目前用於基因療法臨床試驗中(Hassle et al., News Physiol. Sci.17:87-92, 2002)。例如，含有編碼外源性多肽之cDNA的DNA構建體可以使用標準分子生物學技術在MMLV載體骨架中生成。將構建體轉染到封裝細胞株(諸如例如PA317細胞)中，且病毒上清液用於轉染生產細胞(諸如例如PG13細胞)。PG13病毒上清液與類紅血球前驅細胞一起培育。外源性多肽的表現可以使用FACS分析(螢光-活化細胞分選)來監控，例如使用針對外源性多肽之螢光標記抗體(如果它是存在於經改造人類去核類紅血球的膜上)。類似方法可用於存在於經改造人類去核類紅血球之細胞質中的外源性多肽。

視情況，可以使用基於病毒的方法將編碼螢光追蹤分子(諸如，例如綠色螢光蛋白(GFP))的核酸轉染到類紅血球前驅細胞中(Tao et al., Stem Cells25:670-678, 2007)。使用封裝細胞(諸如，例如Phoenix-Eco細胞株(由Orbigen, San Diego, Calif.經銷))來封裝含有編碼增強綠色螢光蛋白(EGFP)或紅色螢光蛋白(例如，DsRed-Express)之DNA的異位反轉錄病毒載體。封裝細胞株穩定地表現適當病毒封裝所需的病毒多肽，包括例如gag，pol和env。來自已脫落病毒顆粒的Phoenix-Eco細胞上清液可用於轉導類紅血球前驅細胞。在一些情況下，轉導可以在特殊塗覆的表面(諸如例如重組纖維接合素的片段)上進行，以增進反轉錄病毒介導的基因轉移效率(例如，RetroNectin, Takara Bio USA, Madison, Wis.)。將細胞培育在具有反轉錄病毒Phoenix-Eco上清液與合適輔因子的經RetroNectin塗覆盤中。次日可重複進行轉導。在這種情況下，可以藉由FACS評估表現EGFP或DsRed-Express的類紅血球前驅細胞百分率。其它可用於評估轉導效率的報導基因包括，例如β-半乳糖苷酶、氯黴素乙醯轉移酶和螢光素酶，以及低親和力神經生長因子受體(LNGFR)，還有人類細胞表面CD24抗原(Bierhuizen 等人， Leukemia13:605-613, 1999)。

非病毒載體可被用於將編碼一或多個外源性多肽的核酸引入類紅血球前驅細胞，以生成經改造的去核類紅血球。多種遞送方法可用於將非病毒載體引入類紅血球前驅細胞中，包括化學和物理方法。可以使用合成大分子(諸如陽離子脂質和聚合物)，將編碼外源性多肽的非病毒載體引入類紅血球前驅細胞(Papapetrou等人， Gene Therapy12:S118-S130, 2005)。陽離子脂質體例如透過電荷交互作用與DNA形成複合物。帶正電荷的DNA/脂質複合物結合至負電荷細胞表面，並藉由胞吞作用被細胞攝入。這個方法可以用於例如轉染造血細胞(參見，例如Keller 等人， Gene Therapy6:931-938, 1999)。關於類紅血球前驅細胞，將質體DNA (在無血清培養基中，諸如例如OptiMEM (Invitrogen, Carlsbad, CA)中)與陽離子脂質體(在無血清培養基中) (諸如市售轉染試劑Lipofectamine™( Invitrogen, Carlsbad, Calif.))混合，並培育至少20分鐘以形成複合物。DNA/脂質體複合物被加入類紅血球前驅細胞，並使其培育5至24小時，之後分析外源性多肽的轉基因表現。或者，可以使用其他市售脂質體轉染試劑(例如，In vivo GeneSHUTTLE™, Qbiogene, Carlsbad, Calif.)。

視情況，陽離子聚合物(諸如，例如聚乙烯亞胺(PEI))可用於有效轉染類紅血球前驅細胞，例如造血和臍帶血衍生的CD34 ⁺細胞(參見，例如Shin 等人， Biochim. Biophys. Acta1725:377-384, 2005)。從人類臍帶血中分離出人類CD34 ⁺細胞，並培養在經Iscove氏改良的Dulbecco氏培養基中，該培養基補充有200 ng/ml幹細胞因子和20%熱失活血清。編碼外源性多肽的質體DNA與尺寸不同(從0.8 K至750 K) (Sigma Aldrich, Saint Louis, Mo., USA；Fermetas, Hanover, Md., USA)的分支或線性PEI一起培育。以蒸餾水製備4.2 mg/mL的PEI原液，並使用HCl將其略微酸化至pH 5.0。基於1 μg DNA含有3 nmol磷酸根而1 μL PEI原液含有10 nmol胺氮的算式，可以在室溫下以各種氮/磷酸根比率將DNA與PEI組合30分鐘。經分離的CD34 ⁺細胞與DNA/陽離子複合物一起接種，在280 xg下離心5分鐘並在培養基中培育4小時或更多個小時，直至評估到外源性多肽表現。

質體載體可以使用物理方法被引入到合適的類紅血球前驅細胞，物理方法為諸如粒子介導的轉染、「基因槍」、生物槍(biolistics)或粒子轟擊技術(Papapetrou, et al., Gene Therapy12:S118-S130, 2005)。在這種情況下，編碼外源性多肽的DNA被吸附到金粒子上，並藉由粒子槍被投予至細胞。例如，這個方法可用於轉染類紅血球前驅細胞，例如衍生自臍帶血的造血幹細胞(參見，例如Verma 等人， Gene Therapy5:692-699, 1998)。這樣一來，分離出臍帶血並在磷酸鹽緩衝鹽水中稀釋三倍。使用抗CD34單株抗體結合塗有二級抗體的磁性微珠和磁性分離系統(例如，Miltenyi MiniMac System, Auburn, Calif., USA)來純化CD34 ⁺細胞。可如本文所述培養富含CD34 ⁺細胞。關於轉染，藉由用氯化鈣和精三胺處理，使編碼外源性多肽的質體DNA沉澱到粒子(例如，金微珠)上。用乙醇洗滌塗覆有DNA的微珠之後，可以使用例如Biolistic PDS-1000/He系統(Bio-Rad, Hercules, Calif., USA)將微珠遞送到培養的細胞中。報導基因(諸如，例如β-半乳糖苷酶、氯黴素乙醯轉移酶，螢光素酶或綠色螢光蛋白)可用於評估轉染效率。

視情況，可以使用電穿孔方法將質體載體引入類紅血球前驅細胞中。電穿孔在細胞膜中產生瞬時孔，從而允許將各種分子(包括例如DNA和RNA)引入細胞中。這樣一來，如本文所述分離並培養CD34 ⁺細胞。就在電穿孔前，藉由以250xg於室溫下離心10分鐘將細胞分離，並以0.2至10×10 ⁶個活細胞/ml再懸浮在電穿孔緩衝液中，電穿孔緩衝液為諸如，例如X-VIVO 10，補充有1.0%人類血清白蛋白(HSA)。將質體DNA(1至50 μg)與500 μL細胞懸浮液一起添加到適當的電穿孔比色管中。

可以使用例如ECM 600電穿孔儀(Genetronics, San Diego, Calif., USA)以範圍200 V至280 V的電壓和範圍25至70毫秒的脈衝長度來進行電穿孔。許多的替代電穿孔儀器是可商購的並且可以用於此目的(例如，Gene Pulser Xcell™, BioRad, Hercules, Calif.；Cellject Duo, Thermo Science, Milford, Mass.)。或者，可以使用以下參數對經分離的CD34 ⁺細胞進行有效電穿孔：4 mm比色管，1600 μE，550 V/cm和每500 μL的1x10 ⁵個細胞/mL有10 μg DNA (Oldak等人， Acta Biochim.Polonica49：625-632，2002)。

核轉染(一種電穿孔的形式)也可用於轉染類紅血球前驅細胞。在這種情況下，轉染是在細胞類型特異性溶液中使用電參數進行，其使得DNA(或其他試劑)直接轉運至細胞核，從而降低了可能在細胞質中被降解的風險。例如，Human CD34 Cell Nucleofector™ Kit (來自Amaxa Inc.)可用於轉染類紅血球前驅細胞。在這種情況下，將Human CD34 Cell Nucleofector™ Solution中的1至5x10 ⁶個細胞與1至5 μg DNA混合，並使用經製造商決定的預程式化設定在Nucleofector™儀器中進行轉染。

可用習知表現載體對類紅血球前驅細胞進行非病毒轉染，除非將其整合入基因體中，否則習知表現載體將無法在哺乳動物細胞中自我複製。或者，類紅血球前驅細胞可以用游離基因體載體轉染，其在宿主細胞核中作為自體複製遺傳單元而不會整合入染色體中(Papapetrou等人， Gene Therapy12:S118-S130, 2005)。這些載體利用了在潛伏感染後通常會在細胞染色體外複製的病毒所衍生的遺傳要素，這些病毒為諸如例如EBV、人類多瘤病毒BK、牛乳頭瘤病毒-1(BPV-1)、單純皰疹病毒-1(HSV)，和猿猴病毒40(SV40)。哺乳動物人工染色體也可用於非病毒基因轉移(Vanderbyl等人， Exp. Hematol.33:1470-1476, 2005)。

編碼一或多個外源性多肽的外源性核酸可以藉由本領域中已知的標準分子生物學方法(例如限制消化、重疊延伸PCR和吉布森(Gibson)組裝)而被組裝成表現載體。

外源性核酸可包括編碼通常不存在於細胞表面(例如去核類紅血球的細胞表面)上的外源性多肽的基因，該基因融合至編碼內源性或天然膜多肽的基因，從而在細胞表面上表現外源性多肽。例如，可將編碼外源性多肽的外源性基因選殖在N端處(在第1型膜多肽前導序列之後)、第2型膜多肽的C端處，或GPI連接膜多肽之GPI附接位點的上游。

可以使用標準選殖方法在兩個融合基因之間引入彈性胺基酸連接子。舉例來說，彈性連接子是聚甘胺酸聚絲胺酸連接子，諸如[Gly ₄Ser] ₃(SEQ ID NO：37)，通常用於從全長抗體生成單鏈抗體片段(Antibody Engineering: Methods & Protocols, B. Lo, ed., Humana Press, 2004, 576 pp.)，或Ala-Gly-Ser-Thr多肽，諸如那些用於生成單鏈Arc抑制子者(Robinson & Sauer, Proc. Nat’l. Acad. Sci. U.S.A.95: 5929-34, 1998)。在一些實施例中，彈性連接子為外源性多肽提供了比沒有彈性連接子的等效構建體更大的彈性和空間自由度。這增加了靈活性，可用於需要結合至標靶的應用中(例如，抗體或多肽，或活性位點必須是受質(例如標靶)可接近的多肽的酵素反應)。

在一些實施例中，所提供的方法包括藉由使類紅血球前驅細胞與核酸接觸，並在有效向細胞遞送核酸(諸如彼等本文所述者)的條件下藉由電穿孔將核酸引入細胞，而將大型核酸分子(特別是RNA，諸如mRNA)遞送到類紅血球前驅細胞。合適的電穿孔儀包括但不限於Bio-Rad GENE PULSER與GENE PULSER II；Life Technologies NEON；BTX GEMINI系統；和MAXCYTE電穿孔儀。這些方法不需要病毒遞送或使用病毒載體。合適的核酸包括RNA，諸如mRNA。合適的核酸還包括DNA(包括轉位元、穩定的游離基因體，質體DNA或線性DNA)。

關於細胞株電穿孔的條件已由例如Van Tendeloo等人在 Blood98(l):49-56, 2001的文獻中描述過。針對Life Technologies Neon Transfection System，本文所述方法的合適電穿孔條件包括：脈衝電壓範圍約500至約2000 V、約800至約1800 V或約850至約1700 V；脈衝寬度範圍約5至約50 msec，或約10至約40 msec；而脈衝數範圍1至2個脈衝、1至3個脈衝，1至4個脈衝或1至5個脈衝。

關於類紅血球前驅細胞電穿孔，尤其合適的條件包括，例如持續4天：a)脈衝電壓1300至1400，脈衝寬度：10至20 msec，脈衝數：1至3；b)脈衝電壓1400，脈衝寬度：10 msec，脈衝數：3；c)脈衝電壓1400，脈衝寬度：20 msec，脈衝數：1；以及d)脈衝電壓1300，脈衝寬度：10 msec，脈衝數：3。

關於類紅血球前驅細胞電穿孔，尤其合適的條件包括，例如持續8至9天：a)脈衝電壓：1400至1600，脈衝寬度：20，脈衝數：1；b)脈衝電壓：1100至1300，脈衝寬度：30，脈衝數：1；c)脈衝電壓：1000至1200，脈衝寬度：40，脈衝數：1；d)脈衝電壓：1100至1400，脈衝寬度：20，脈衝數：2；e)脈衝電壓：950至1150，脈衝寬度：30，脈衝數：2；f)脈衝電壓：1300至1600，脈衝寬度：10，脈衝數：3。這些條件通常使得轉染效率為至少約60%或更多(例如，至少約為65%、70%、75%、80%、85%、90%，95%或至少約97%，或更多)，且細胞存活率為至少約70%或更多(例如，至少約75%、80%、85%、90%，95%或至少約97%，或更多)。

在分化條件下，關於培養中的類紅血球前驅細胞電穿孔，尤其合適的條件包括，例如持續12至13天：a)脈衝電壓：1500至1700，脈衝寬度：20，脈衝數：1；以及b)脈衝電壓：1500至1600，脈衝寬度：10，脈衝數：3。這些條件通常使得轉染效率為至少約50%或更多(例如，至少約55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%，95%或至少約97%，或更多)，且細胞存活率為至少約70%或更多(例如，至少約75%、80%、85%、90%，95%或至少約97%，或更多)。

本文揭示的條件可由本領域通常知識者參考Life Technologies Neon系統來簡單調整，以便僅僅利用常規實驗就可以配合不同的電穿孔儀及/或不同的電穿孔設定，且就所揭示的方法來說，本文所述的具體電穿孔儀並沒有限制。在一些實施例中，使用本文所述的電穿孔條件，將培養的類紅血球前驅細胞進行第一次電穿孔，然後培養一段預期時間(視情況在分化條件下)，並接著進行第二次再電穿孔。在一些實施例中，將培養的類紅血球前驅細胞進行第一次電穿孔，然後培養一段預期時間(視情況在分化條件下)，並接著進行第二、第三、第四，第五或第六次再電穿孔。視情況，可以變更第一次和第二次，第二次和第三次電穿孔等之間的培養期間。例如，電穿孔之間的期間可以根據需要進行調整，例如該期間可以是30分鐘、1小時、6小時、12小時、18小時、24小時、30小時、36小時、48小時、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天，14天或21天。例如，可在第1天和第2天、第1天和第3天、第1天和第4天、第1天和5天、第1天和第6天、第1天和第7天、第1天和第8天、第1天和第9天、第1天和第10天，第1天和第11天、第1天和第12天、第1天和第13天、第1天和第14天、第1天和第15天、或第1天和第16天對類紅血球前驅細胞進行電穿孔。在另一個實例中，可以在第2天和第3天、第2天和第4天、第2天和第5天、第2天和第6天、第2天和第7天、第2天和第8天、第2天和第9天、第2天和第10天、第2天和第11天、第2天和第12天、第2天和第13天、第2天和第14天、第2天和第15天、或2天和16天對細胞進行電穿孔。在又另一個實例中，可以在第3天和第4天、第3和第5天、第3和第6天、第3和第7天、第3和第8天、第3和第9天、第3和第10天、第3和第11天、第3和第12天、第3和第13天、第3和第14天、第3和第15天、或第3和第16天對類紅血球前驅細胞進行電穿孔。在又另一個實例中，可以在第4天和第5天、第4天和第6天、第4天和第7天、第4天和第8天、第4天和第9天、第4天和第10天、第4天和第11天、第4天和第12天、第4天和第13天、第4天和第14天、第4天和第15天、或第4天和第16天對細胞進行電穿孔。在又另一個實例中，可以在第5天和第6天、第5天和第7天、第5天和第8天、第5天和第9天、第5天和第10天、第5天和第11天、第5天和第12天、第5天和第13天、第5天和第14天、第5天和第15天、或第5天和第16天對細胞進行電穿孔。在又另一個實例中，可以在第6天和第7天、第6天和第8天、第6天和第9天、第6天和第10天、第6天和11天、第6天和12天、第6天和第13天、第6天和第14天、第6天和第15天、或第6天和第16天對類紅血球前驅細胞進行電穿孔。在又另一個實例中，可以在第7天和第8天、第7天和第9天、第7天和第10天、第7天和第11天、第7天和第12天、第7天和第13天、第7天和第14天、第7天和第15天、或第7天和第16天對類紅血球前驅細胞進行電穿孔。在又另一個實例中，可以在第8天和第9天、第8天和第10天、第8天和第11天、第8天和第12天、第8天和第13天、第8天和第14天、第8天和第15天、或第8天和第16天對類紅血球前驅細胞進行電穿孔。在又另一實例中，可以在第9天和第10天、第9天和第11天、第9天和第12天、第9天和第13天、第9天和第14天、第9天和第15天、或第9天和第16天對類紅血球前驅細胞進行電穿孔。在又另一個實例中，可以在第10天和第11天、第10天和第12天、第10天和第13天、第10天和第14天、第10天和第15天、或第10天和第16天對類紅血球前驅細胞進行電穿孔。在又另一個實例中，可以在第11天和第12天、第11天和第13天、第11天和第14天、第11天和第15天、或第11天和第16天對類紅血球前驅細胞進行電穿孔。在又另一個實例中，可以在第12天和第13天、第12天和第14天、第12天和第15天、或第12天和第16天對類紅血球前驅細胞進行電穿孔。在又另一個實例中，可以在第13天和第14天、第13天和第15天、或第13天和第16天對類紅血球前驅細胞進行電穿孔。在又另一個實例中，可以在第14和第15天、或第14天和第16天對類紅血球前驅細胞進行電穿孔。視情況，可以將類紅血球前驅細胞電穿孔超過兩次，例如三次、四次，五次或六次，並且可以根據需要在細胞分化過程的任一點選定間隔時間。

在一些實施例中，使用本文所述的電穿孔條件，在分化第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、或16天對培養的類紅血球前驅細胞進行電穿孔。

在一些實施例中，經改造去核類紅血球可以是點擊接合的經改造去核類紅血球。可以在例如類紅血球前驅細胞之上或之內表現一種存在於細胞質中或存在於膜上之形成催化鍵的多肽結構域。有許多形成催化鍵的多肽，包括轉肽酶、分選酶和異肽酶，包括那些衍生自Spy0128者，Spy0128是一種分離自釀膿鏈球菌( Streptococcus pyogenes)的多肽。已經證明，切開Spy0128的自催化異肽鍵形成次單位(CnaB2結構域)會導致兩個截然不同的多肽，其彼此保有特異性的催化活性。這個系統中的多肽稱為SpyTag和SpyCatcher。在混合後，SpyTag和SpyCatcher於SpyTag上的Asp1 17和SpyCatcher上的Lys31之間歷經異肽鍵形成(Zakeri and Howarth, JACS132:4526, 2010)。該反應與細胞環境相容且對於多肽/肽接合來說有高度特異性(Zakeri等人， Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.109:E690-E697, 2012)。SpyTag和SpyCatcher已顯示會指導彈性蛋白樣蛋白的轉譯後拓樸修飾。例如，SpyTag在N端處和SpyCatcher在C端處的鍵接(placement)引導形成環狀彈性蛋白樣蛋白(Zhang等人， J. Am. Chem. Soc.2013)。

組分SpyTag和SpyCatcher可以互換，以使得分子A融合至SpyTag而分子B融合至SpyCatcher的系統與分子A融合至SpyCatcher而分子B融合至SpyTag的系統在功能上相同。出於本發明之目的，當使用SpyTag和SpyCatcher時，應當理解，互補分子可以在其位置被取代。

形成催化鍵的多肽(諸如SpyTag/SpyCatcher系統)可以用於將外源性多肽附接至(例如類紅血球前驅細胞或去核類紅血球)表面。SpyTag多肽序列可以在類紅血球前驅細胞或去核類紅血球的細胞外表面上表現。舉例來說，SpyTag多肽可以被融合至第1型或第3型跨膜多肽(例如血型糖蛋白A)的N端、融合至第2型跨膜多肽(例如凱爾)的C端、以框內的方式***在多重穿膜多肽(例如帶3)的細胞外末端或細胞外環中、融合至GPI-受體多肽(例如CD55或CD59)、融合至脂質鏈錨定的多肽，或融合至周邊膜多肽。可以將外源性多肽融合至SpyCatcher。編碼SpyCatcher融合物的核酸可以由表現SpyTag融合物的同一類紅血球前驅細胞或去核類紅血球表現並分泌。或者，可以在例如細菌、真菌、昆蟲，哺乳動物或無細胞生產系統中外源性地產生編碼SpyCatcher融合物的核酸序列。在SpyTag和SpyCatcher多肽反應後，將形成共價鍵，該鍵將外源性多肽附接至類紅血球前驅細胞或去核類紅血球的表面。在一個實施例中，於類紅血球內，受到Gatal啟動子控制，SpyTag多肽可以表現為融合至血型糖蛋白A的N端。融合至SpyCatcher多肽序列的外源性多肽可受到Gatal啟動子控制而在同一個類紅血球中表現。在兩個融合多肽均表現後，在SpyTag和SpyCatcher多肽之間將形成異肽鍵，從而在類紅血球表面與外源性多肽之間形成共價鍵。

在另一個實施例中，於類紅血球前驅細胞或去核類紅血球內，受到Gata1啟動子控制，SpyTag多肽可以表現為融合至血型糖蛋白A的N端。融合至SpyCatcher多肽序列的外源性多肽可以在合適的哺乳動物細胞表現系統(例如HEK293細胞)中表現。在SpyTag融合多肽於類紅血球前驅細胞或去核類紅血球上表現後，可以使SpyCatcher融合多肽與細胞接觸。在合適的反應條件下，在SpyTag和SpyCatcher多肽之間將形成異肽鍵，從而在類紅血球前驅細胞表面或去核類紅血球表面與外源性多肽之間形成共價鍵。

形成催化鍵的多肽(諸如SpyTag/SpyCatcher系統)可用於將外源性多肽錨定在類紅血球前驅細胞或去核類紅血球的細胞內空間。SpyTag多肽序列可以藉由多種方法在類紅血球前驅細胞或去核類紅血球的細胞內空間中表現，包括直接表現轉基因、融合至內源性細胞內多肽(諸如例如血紅素)、融合至內源性細胞表面多肽(諸如，例如帶3、血型糖蛋白A、凱爾)的細胞內結構域，或融合至細胞骨架的結構組分。SpyTag序列不限於多肽末端，並且可以併入內源性多肽的內部序列中，使得多肽轉譯和定位不受干擾。可以將外源性蛋白融合至SpyCatcher。編碼SpyCatcher融合物的核酸序列可以在表現SpyTag融合物的同一類紅血球前驅細胞或去核類紅血球中表現。在SpyTag和SpyCatcher多肽反應後，將形成共價鍵，其作用是將外源性多肽錨定在類紅血球前驅細胞或去核類紅血球的細胞內空間中。

在一個實施例中，類紅血球前驅細胞或去核類紅血球可以在細胞內表現融合至血紅素β的SpyTag。類紅血球前驅細胞或去核類紅血球可以用包括血紅素啟動子、β球蛋白基因和SpyTag序列的基因序列進行遺傳修飾，使得在轉譯後，細胞內β球蛋白在C端處融合至SpyTag。另外，類紅血球前驅細胞或去核類紅血球表現一個受Gatal啟動子所引導的基因，該基因編碼SpyCatcher驅動多肽表現(例如，***酸羥化酶(PAH)表現)，從而在轉譯時使細胞內多肽(例如，PAH)在N端處融合至SpyCatcher。在兩個融合多肽均表現後，結合SpyTag的β球蛋白透過異肽鍵與細胞內空間中的SpyCatcher結合的多肽(例如PAH)鍵接，從而使該多肽(例如PAH)錨定至β球蛋白並在成熟期間得以保留下來。

在另一個實施例中，SpyTag多肽可以表現為融合至類紅血球前驅細胞或去核類紅血球內的外源性多肽。SpyCatcher多肽可以表現為在同一類紅血球前驅細胞或去核類紅血球內融合至血型糖蛋白A的C端(細胞內)。在兩個融合多肽均表現後，SpyTag和SpyCatcher多肽之間將會形成異肽鍵，從而在膜錨定的內源性類紅血球多肽和外源性多肽之間形成共價鍵。

可以在多肽之間形成其他分子融合物，並且包括直接或間接接合。多肽可以彼此直接接合或透過連接子間接接合。連接子可以是肽、聚合物，適配體或核酸。聚合物可以是例如天然的、合成的，線性的或分支的。外源性多肽可包括異源性融合多肽，其包括第一多肽和第二多肽，且該融合多肽包括彼此直接連接或在一端或兩端處具有***連接子序列及/或其他序列的多肽。可以透過共價鍵或離子鍵接合至連接子。

在一些實施例中，經改造去核類紅血球是經低張裝載的人類去核類紅血球。關於低張裝載/裂解，將類紅血球前驅細胞或去核類紅血球暴露於低離子強度緩衝液中，使其破裂。外源性多肽分佈在細胞內。可藉由向經分離的去核類紅血球沉澱物加入過量體積30至50倍的5 mM磷酸鹽緩衝液(pH 8)以低張的方式裂解去核類紅血球或類紅血球前驅細胞。藉由離心分離被裂解的細胞膜。將裂解的細胞膜沉澱物重新懸浮，並在低離子強度緩衝液中於外源性多肽存在下培育例如30分鐘。或者，可將裂解的細胞膜與外源性多肽一起培育少則一分鐘，或多至數天，這取決於為有效裝載去核類紅血球或類紅前驅細胞所確定的最佳條件。關於低張裝載編碼一或多個外源性多肽(例如，本文所述或本領域中已知的任何外源性多肽)的核酸，核酸可以被懸浮在低張Tris-HCl溶液(pH 7.0)並注射到類紅血球前驅細胞中。Tris-HCl濃度可為約20 mmol/l至約150 mmol/l，這取決於為有效裝載去核類紅血球所決定的最佳條件。

或者，可以使用針對低張溶液的控制透析對類紅血球前驅細胞或去核類紅血球裝載外源性多肽，以使細胞膨脹並在細胞膜上形成孔隙(參見，例如，美國專利第4,327,710號；第5,753,221號；第6,495,351號和第10,046,009號)。例如，細胞沉澱物再懸浮在10 mM HEPES、140 mM NaCl、5 mM葡萄糖，pH 7.4中，並對含有10 mM NaH ₂PO ₄、10 mM NaHCO ₃、20 mM葡萄糖，和4 mM MgCl ₂，pH 7.4的低離子強度緩衝液進行透析。30至60分鐘後，將細胞再用含有外源性多肽的16 mM NaH ₂PO ₄，pH 7.4溶液再透析30至60分鐘。所有這些程序都可以有利地在4℃的溫度下執行。在一些情況下，藉由透析方法裝載大量類紅血球前驅細胞或去核類紅血球可能是有益的，並且可以使用為此目的所設計的特定設備(參見，例如美國專利第4,327,710號，第6,139,836號和第6,495,351號)。

製造包括外源性多肽的去核類紅血球(例如，網狀細胞或紅血球)的例示性方法說明於例如WO2015/073587、WO2015/153102、WO2020/243006和WO2020/219909中，它們各自以全文引用的方式併入。

在一些實施例中，去核類紅血球群含有少於1%的活去核細胞，例如，不含可偵測到的活去核細胞。在一些實施例中，藉由FACS使用核染色來測量去核。在一些實施例中，在該群中至少30、35、40、45、50、55、60、65、70、75或80%(和視情況至多約70、80、90或100%)的去核類紅血球包括一或多個(例如，2、3、4個或更多個)外源性多肽。在一些實施例中，可以藉由FACS使用針對多肽的經標記抗體來測量外源性多肽的表現。在一些實施例中，在細胞群中至少30、35、40、45、50、55、60、65、70、75或80%(和視情況至多約70、80、90或100%)被去核，並且包括一或多個(例如，2、3、4個或更多個)外源性多肽。在一些實施例中，去核類紅血球群包括約1x10 ⁹至 2x10 ⁹、2x10 ⁹至 5x10 ⁹、5x10 ⁹至1x10 ¹⁰、1x10 ¹⁰至2x10 ¹⁰、2x10 ¹⁰至5x10 ¹⁰、5x10 ¹⁰至1x10 ¹¹、1x10 ¹¹至2x10 ¹¹、2x10 ¹¹至5x10 ¹¹、5x10 ¹¹至1x10 ¹²、1x10 ¹²至2x10 ¹²、2x10 ¹²至5x10 ¹²、或5x10 ¹²至1x10 ¹³個細胞。

本文所述任何去核類紅血球可以如例如WO 2020/219909(以引用的方式併入本文)中所述進行配製。 於先前被鑑定或診斷為患有 MICA 陽性、 MICB 陽性，或 MICA/MICB 陽性癌症之個體中增加 NKG2D 陽性淋巴球的數量的方法

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性、MICB陽性，或MICA/MICB陽性癌症的個體中增加NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性、MICB陽性，或MICA/MICB陽性癌症的個體中增加NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL多肽或其功能片段。

這些方法的一些實施例進一步包括：向個體投予NKG2A抑制劑(例如本文所述任何例示性NKG2A抑制劑)。

在這些方法的一些實施例中，投藥包括向個體靜脈內投藥。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括向個體投予一或多種額外治療劑。在一些實施例中，一或多種額外治療劑是癌症治療劑。在一些實施例中，癌症治療劑是選自由以下組成之群組：免疫檢查點分子的抑制劑(例如，本文所述免疫檢查點分子的任何例示性抑制劑)、化療劑、治療性抗體、嵌合抗原受體T細胞、激酶抑制劑或可溶性細胞激素。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以與本文提供的任何組成物基本上同時投予給個體。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以在向個體投予本文所述任何組成物之前或之後投予給個體。

這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症、MICB陽性癌症，或MICA/MICB陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性與HLA-E陰性癌症(MICA陽性/HLA-E陰性癌症)、MICB陽性與HLA-E陰性癌症(MICB陽性/HLA-E陰性癌症)，或MICA/MICB陽性與HLA-E陰性癌症(MICA/MICB陽性癌症/HLA-E陰性癌症)。

例如，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制PD-1和PD-L1或PD-L2，及/或阻斷、減少及/或抑制PD-1與PD-L1或PD-L2結合的藥劑(非限制性實例包括納武單抗(nivolumab) (ONO-4538/BMS-936558、MDX1106、OPDIVO、BRISTOL MYERS SQUIBB)、派姆單抗(pembrolizumab) (KEYTRUDA、MERCK)、匹地珠單抗(pidilizumab) (CT-011，CURE TECH)、MK-3475 (MERCK)、BMS 936559 (BRISTOL MYERS SQUIBB)，和MPDL328OA (ROCHE)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或抑制CTLA-4與一或多個其受體(例如CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合的藥劑。舉例來說，在一些實施例中，抑制CTLA-4活性的藥劑是抗體，諸如伊匹單抗(ipilimumab) (MDX-010、MDX-101、Yervoy、BRISTOL MYERS SQUIBB)及/或曲美木單抗(tremelimumab) (PFIZER)。此外，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括靶向免疫檢查點分子的阻斷抗體諸如，例如BTLA、HVEM、TIM3、GALS、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160(也稱為BY55)、CGEN-15049、CHK1和CHK2激酶、A2aR、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、GITR、GITRL、半乳糖凝集素-9、CD244、CD160、TIGIT、SIRPα、ICOS、CD172a、TMIGD2和各種B-7家族配體(包括但不限於B7-1、B7-2、B7-DC、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種阻斷、減少及/或抑制PD-1、PD-L1或PD-L2的活性的分子(例如，小分子) (非限制性實例包括BMS-1166 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-103 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-142 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-202 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-1001 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-242 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-200 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-986189 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、INCB086550 (INCYTE)、Aurigene-1 (AURIGENE)、AUNP12 (AURIGENE)、CA-170 (CURIS)、CCX4503 (CHEMOCENTRYX)、AMP-224 (ASTRAZENECA/MEDIMMUNE，GSK)和AMP-512 (ASTRAZENECA)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種分子(例如小分子)，其阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如，CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)的結合。

在所述方法的一些實施例中，該等方法導致個體中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量增加(例如增加至少5%、增加至少10%、增加至少15%、增加至少20%、增加至少25%、增加至少30%、增加至少35%、增加至少40%、增加至少45%、增加至少50%、增加至少55%、增加至少60%、增加至少65%、增加至少70%、增加至少75%、增加至少80%、增加至少85%、增加至少90%、增加至少95%、增加至少100%、增加至少120%、增加至少140%、增加至少160%、增加至少180%、增加至少200%、增加至少220%、增加至少240%、增加至少260%、增加至少280%、增加至少300%、增加至少350%、增加至少400%、增加至少450%、增加至少500%、增加至少550%、增加至少600%、增加至少650%、增加至少700%、增加至少750%、增加至少800%、增加至少850%、增加至少900%、增加至少950%，或增加至少1000%) (例如，與投予前個體中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量相比)。

在所述方法的一些實施例中，該等方法導致個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球(例如NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞)的數量增加(例如增加至少5%、增加至少10%、增加至少15%、增加至少20%、增加至少25%、增加至少30%、增加至少35%、增加至少40%、增加至少45%、增加至少50%、增加至少55%、增加至少60%、增加至少65%、增加至少70%、增加至少75%、增加至少80%、增加至少85%、增加至少90%、增加至少95%、增加至少100%、增加至少120%、增加至少140%、增加至少160%、增加至少180%、增加至少200%、增加至少220%、增加至少240%、增加至少260%、增加至少280%、增加至少300%、增加至少350%、增加至少400%、增加至少450%、增加至少500%、增加至少550%、增加至少600%、增加至少650%、增加至少700%、增加至少750%、增加至少800%、增加至少850%、增加至少900%、增加至少950%，或增加至少1000%) (例如，與投予前個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性細胞(例如，NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞)的數量相比)。

在這些方法的一些實施例中，該等方法導致個體中運輸NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量增加(例如增加至少5%、增加至少10%、增加至少15%、增加至少20%、增加至少25%、增加至少30%、增加至少35%、增加至少40%、增加至少45%、增加至少50%、增加至少55%、增加至少60%、增加至少65%、增加至少70%、增加至少75%、增加至少80%、增加至少85%、增加至少90%、增加至少95%、增加至少100%、增加至少120%、增加至少140%、增加至少160%、增加至少180%、增加至少200%、增加至少220%、增加至少240%、增加至少260%、增加至少280%，或增加至少300%) (例如，與投予前個體中運輸NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)的數量相比)。

在這些方法的一些實施例中，該等方法導致個體中運輸NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球(例如NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞)的數量增加(例如增加至少5%、至少10%、增加至少15%、增加至少20%、增加至少25%、增加至少30%、增加至少35%、增加至少40%、增加至少45%、增加至少50%、增加至少55%、增加至少60%、增加至少65%、增加至少70%、增加至少75%、增加至少80%、增加至少85%、增加至少90%、增加至少95%、增加至少100%、增加至少120%、增加至少140%、增加至少160%、增加至少180%、增加至少200%、增加至少220%、增加至少240%、增加至少260%、增加至少280%，或增加至少300%) (例如，與投予前個體中運輸NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球(例如NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞)的數量相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)與NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)的比率的最大倍數變化增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍、增加至少5.0倍、增加至少5.5倍、增加至少6.0倍、增加至少6.5倍、增加至少7.0倍、增加至少7.5倍、增加至少8.0倍、增加至少8.5倍、增加至少9.0倍、增加至少9.5倍，或增加至少10倍(例如，與投予前個體血液中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)與NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)的比率相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中NK細胞的絕對數量的最大倍數增加，增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍，或增加至少5.0倍(例如，與投予前個體血液中NK細胞的絕對數量的最大倍數增加相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中CD56 ^bright淋巴球(例如CD56 ^brightNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加，增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍，或增加至少5.0倍(例如，與投予前個體血液中CD56 ^bright淋巴球(例如CD56 ^brightNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中CD16 ⁺CD56 ^dim淋巴球(例如CD16 ⁺CD56 ^dimNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加，增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍，或增加至少5.0倍(例如，與投予前個體血液中CD16 ⁺CD56 ^dim淋巴球(例如CD16 ⁺CD56 ^dimNK細胞)的絕對數量的最大倍數增加相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中HLA-DR ⁺淋巴球(例如HLA-DR ⁺NK細胞)的絕對數量的最大倍數增加，增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍，或增加至少5.0倍(例如，與投予前個體中HLA-DR ⁺淋巴球(例如HLA-DR ⁺NK細胞)的絕對數量的最大倍數增加相比)。

在一些實施例中，個體先前被診斷或鑑定為患有MICA陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICA陽性癌症)。在一些實施例中，個體先前被診斷或鑑定為患有MICA陽性/HLA-E陰性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性/HLA-E陰性癌症。

MICA陽性癌症的非限制性實例包括：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。在一些實施例中，MICA陽性癌症包括，但不限於腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

在一些實施例中，個體先前被診斷或鑑定為患有MICB陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICB陽性癌症)。在一些實施例中，個體先前被診斷或鑑定為患有MICB陽性/HLA-E陰性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

MICB陽性癌症的非限制性實例包括：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。在一些實施例中，MICB陽性癌症包括但不限於：腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

在一些實施例中，個體先前被診斷或鑑定為患有MICA/MICB陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICA/MICB陽性癌症)。在一些實施例中，個體先前被診斷或鑑定為患有MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

MICA/MICB陽性癌症的非限制性實例包括：腎上腺皮質癌、急性骨髓性白血病、胰腺癌、膽管癌、腎癌、子宮頸鱗狀細胞癌、子宮頸內癌、結腸直腸癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤，和肺癌。在一些實施例中，MICA/MICB陽性癌症包括，但不限於腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

可以如本文所述使用任何劑量並按任何頻率將去核類紅血球投予給個體。 增加淋巴球細胞表面上 NKG2D 濃度與 NKG2A 濃度的比率的方法

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性、MICB陽性，或MICA/MICB陽性癌症的個體中增加淋巴球(例如NK細胞)細胞表面上NKG2D濃度與NKG2A濃度的比率的方法，包括向個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性多肽，該第一外源性多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性、MICB陽性，或MICA/MICB陽性癌症的個體中，增加淋巴球(例如NK細胞)細胞表面上NKG2D濃度與NKG2A濃度的比率的方法，包括向個體投予醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及在其細胞外表面上的第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL或其功能片段。

這些方法的一些實施例導致個體中淋巴球(例如NK細胞)細胞表面上NKG2D濃度與NKG2A濃度的比率增加至少1%、增加至少5%、增加至少10%、增加至少15%、增加至少20%、增加至少30%、增加至少40%、增加至少50%、增加至少60%、增加至少70%、增加至少80%、增加至少90%、增加至少100%、增加至少110%、增加至少120%、增加至少130%、增加至少140%、增加至少150%、增加至少160%、增加至少170%、增加至少180%、增加至少190%、增加至少200%、增加至少250%、增加至少300%、增加至少350%、增加至少400%、增加至少450%、增加至少500%、增加至少550%、增加至少600%、增加至少650%、增加至少700%、增加至少750%、增加至少800%、增加至少850%、增加至少900%、增加至少950%，或增加至少1000%(例如，與投予前個體中淋巴球(例如NK細胞)細胞表面上NKG2D濃度與NKG2A濃度的比率相比)。這些方法的一些實施例導致個體中淋巴球(例如NK細胞)細胞表面上NKG2D濃度與NKG2A濃度的比率增加約0.01倍至增加約10倍(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體中淋巴球(例如NK細胞)細胞表面上NKG2D濃度與NKG2A濃度的比率相比)。

本文所述方法的一些實施例導致個體血液中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)與NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)的比率的最大倍數變化增加至少0.1倍、增加至少0.2倍、增加至少0.3倍、增加至少0.4倍、增加至少0.5倍、增加至少0.6倍、增加至少0.7倍、增加至少0.8倍、增加至少0.9倍、增加至少1.0倍、增加至少1.5倍、增加至少2.0倍、增加至少2.5倍、增加至少3.0倍、增加至少3.5倍、增加至少4.0倍、增加至少4.5倍、增加至少5.0倍、增加至少5.5倍、增加至少6.0倍、增加至少6.5倍、增加至少7.0倍、增加至少7.5倍、增加至少8.0倍、增加至少8.5倍、增加至少9.0倍、增加至少9.5倍，或增加至少10倍(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍) (例如，與投予前個體血液中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)與NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)的比率相比)。本文所述方法的一些實施例導致個體血液中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)與NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)的比率的最大倍數變化增加約0.01倍至增加約10倍(例如，與投予前個體血液中NKG2D陽性淋巴球(例如NKG2D陽性NK細胞)與NKG2A陽性淋巴球(例如NKG2A陽性NK細胞)的比率相比)。

這些方法的一些實施例進一步包括：向個體投予NKG2A抑制劑(例如本文所述任何例示性NKG2A抑制劑)。

在這些方法的一些實施例中，投藥包括向個體靜脈內投藥。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括向個體投予一或多種額外治療劑。在一些實施例中，一或多種額外治療劑是癌症治療劑。在一些實施例中，癌症治療劑是選自由以下組成之群組：免疫檢查點分子的抑制劑(例如，本文所述免疫檢查點分子的任何例示性抑制劑)、化療劑、治療性抗體、嵌合抗原受體T細胞、激酶抑制劑或可溶性細胞激素。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以與本文提供的任何組成物基本上同時投予給個體。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以在向個體投予本文所述任何組成物之前或之後投予給個體。

這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症、MICB陽性癌症，或MICA/MICB陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性/HLA-E陰性癌症、MICB陽性/HLA-E陰性癌症，或MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

例如，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制PD-1和PD-L1或PD-L2，及/或阻斷、減少及/或抑制PD-1與PD-L1或PD-L2結合的藥劑(非限制性實例包括納武單抗(ONO-4538/BMS-936558、MDX1106、OPDIVO、BRISTOL MYERS SQUIBB)、派姆單抗(KEYTRUDA、MERCK)、匹地珠單抗(CT-011，CURE TECH)、MK-3475 (MERCK)、BMS 936559 (BRISTOL MYERS SQUIBB)，和MPDL328OA (ROCHE)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合的藥劑。例如，在一些實施例中，抑制CTLA-4活性的藥劑是抗體，諸如伊匹單抗(MDX-010、MDX-101、Yervoy、BRISTOL MYERS SQUIBB)及/或曲美木單抗(PFIZER)。此外，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括靶向免疫檢查點分子的阻斷抗體，免疫檢查點分子為諸如例如BTLA、HVEM、TIM3、GALS、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160(也稱為BY55)、CGEN-15049、CHK1和CHK2激酶、A2aR、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、GITR、GITRL、半乳糖凝集素-9、CD244、CD160、TIGIT、SIRPα、ICOS、CD172a、TMIGD2和各種B-7家族配體(包括但不限於B7-1、B7-2、B7-DC、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種阻斷、減少及/或抑制PD-1、PD-L1或PD-L2的活性的分子(例如，小分子) (非限制性實例包括BMS-1166 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-103 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-142 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-202 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-1001 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-242 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-200 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-986189 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、INCB086550 (INCYTE)、Aurigene-1 (AURIGENE)、AUNP12 (AURIGENE)、CA-170 (CURIS)、CCX4503 (CHEMOCENTRYX)、AMP-224 (ASTRAZENECA/MEDIMMUNE，GSK)和AMP-512 (ASTRAZENECA)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種分子(例如小分子)，其阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如，CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合。

在一些實施例中，個體先前被診斷或鑑定為患有MICA陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICA陽性癌症)。在一些實施例中，個體先前被診斷或鑑定為患有MICA陽性/HLA-E陰性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性/HLA-E陰性癌症。

MICA陽性癌症的非限制性實例包括：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。在一些實施例中，MICA陽性癌症包括但不限於：腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

在一些實施例中，個體先前被診斷或鑑定為患有MICB陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICB陽性癌症)。在一些實施例中，個體先前被診斷或鑑定為患有MICB陽性/HLA-E陰性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

MICB陽性癌症的非限制性實例包括：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。在一些實施例中，MICB陽性癌症包括但不限於：腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

在一些實施例中，個體先前被診斷或鑑定為患有MICA/MICB陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICA/MICB陽性癌症)。在一些實施例中，個體先前被診斷或鑑定為患有MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

MICA/MICB陽性癌症的非限制性實例包括：腎上腺皮質癌、急性骨髓性白血病、胰腺癌、膽管癌、腎癌、子宮頸鱗狀細胞癌、子宮頸內癌、結腸直腸癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤，和肺癌。在一些實施例中，MICA/MICB陽性癌症包括但不限於：腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。 治療患有 MICA 陽性癌症的個體的方法

本文也提供了治療先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICA陽性癌症)的個體的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球群(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文也提供了治療先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICA陽性癌症)的個體的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL多肽或其功能片段。

在這些方法的一些實施例中，投藥是向個體靜脈內投藥。

這些方法的一些實施例進一步包括向個體投予NKG2A抑制劑(例如本文所述任何例示性NKG2A抑制劑)。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括向個體投予一或多種額外治療劑。在一些實施例中，一或多種額外治療劑是癌症治療劑。在一些實施例中，癌症治療劑是選自由以下組成之群組：免疫檢查點分子的抑制劑(例如，本文所述免疫檢查點分子的任何例示性抑制劑)、化療劑、治療性抗體、嵌合抗原受體T細胞、激酶抑制劑或可溶性細胞激素。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以與本文提供的任何組成物基本上同時投予給個體。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以在向個體投予本文所述任何組成物之前或之後投予給個體。

例如，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制PD-1和PD-L1或PD-L2，及/或阻斷、減少及/或抑制PD-1與PD-L1或PD-L2結合的藥劑(非限制性實例包括納武單抗(ONO-4538/BMS-936558、MDX1106、OPDIVO、BRISTOL MYERS SQUIBB)、派姆單抗(KEYTRUDA、MERCK)、匹地珠單抗(CT-011，CURE TECH)、MK-3475 (MERCK)、BMS 936559 (BRISTOL MYERS SQUIBB)，和MPDL328OA (ROCHE)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合的藥劑。例如，在一些實施例中，抑制CTLA-4活性的藥劑是抗體，諸如伊匹單抗(MDX-010、MDX-101、Yervoy、BRISTOL MYERS SQUIBB)及/或曲美木單抗(PFIZER)。此外，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括靶向免疫檢查點分子的阻斷抗體，免疫檢查點分子為諸如例如BTLA、HVEM、TIM3、GALS、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160(也稱為BY55)、CGEN-15049、CHK1和CHK2激酶、A2aR、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、GITR、GITRL、半乳糖凝集素-9、CD244、CD160、TIGIT、SIRPα、ICOS、CD172a、TMIGD2和各種B-7家族配體(包括但不限於B7-1、B7-2、B7-DC、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種阻斷、減少及/或抑制PD-1、PD-L1或PD-L2的活性的分子(例如，小分子) (非限制性實例包括BMS-1166 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-103 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-142 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-202 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-1001 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-242 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-200 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-986189 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、INCB086550 (INCYTE)、Aurigene-1 (AURIGENE)、AUNP12 (AURIGENE)、CA-170 (CURIS)、CCX4503 (CHEMOCENTRYX)、AMP-224 (ASTRAZENECA/MEDIMMUNE，GSK)和AMP-512 (ASTRAZENECA)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種分子(例如小分子)，其阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如，CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合。

這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性/HLA-E陰性癌症。

MICA陽性癌症的非限制性實例包括：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。在一些實施例中，MICA陽性癌症包括但不限於：腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

可以如本文所述使用任何劑量並按任何頻率將去核類紅血球投予給個體。 治療患有 MICB 陽性癌症的個體的方法

本文也提供了治療先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICB陽性癌症)的個體的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文也提供了治療先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICB陽性癌症)的個體的方法，包括向先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL多肽或其功能片段。

在這些方法的一些實施例中，投藥是向個體靜脈內投藥。

這些方法的一些實施例進一步包括向個體投予NKG2A抑制劑(例如本文所述任何例示性NKG2A抑制劑)。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括向個體投予一或多種額外治療劑。在一些實施例中，一或多種額外治療劑是癌症治療劑。在一些實施例中，癌症治療劑是選自由以下組成之群組：免疫檢查點分子的抑制劑(例如，本文所述免疫檢查點分子的任何例示性抑制劑)、化療劑、治療性抗體、嵌合抗原受體T細胞、激酶抑制劑或可溶性細胞激素。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以與本文提供的任何組成物基本上同時投予給個體。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以在向個體投予本文所述任何組成物之前或之後投予給個體。

例如，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制PD-1和PD-L1或PD-L2，及/或阻斷、減少及/或抑制PD-1與PD-L1或PD-L2結合的藥劑(非限制性實例包括納武單抗(ONO-4538/BMS-936558、MDX1106、OPDIVO、BRISTOL MYERS SQUIBB)、派姆單抗(KEYTRUDA、MERCK)、匹地珠單抗(CT-011，CURE TECH)、MK-3475 (MERCK)、BMS 936559 (BRISTOL MYERS SQUIBB)，和MPDL328OA (ROCHE)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合的藥劑。例如，在一些實施例中，抑制CTLA-4活性的藥劑是抗體，諸如伊匹單抗(MDX-010、MDX-101、Yervoy、BRISTOL MYERS SQUIBB)及/或曲美木單抗(PFIZER)。此外，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括靶向免疫檢查點分子的阻斷抗體，免疫檢查點分子為諸如例如BTLA、HVEM、TIM3、GALS、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160(也稱為BY55)、CGEN-15049、CHK1和CHK2激酶、A2aR、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、GITR、GITRL、半乳糖凝集素-9、CD244、CD160、TIGIT、SIRPα、ICOS、CD172a、TMIGD2和各種B-7家族配體(包括但不限於B7-1、B7-2、B7-DC、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種阻斷、減少及/或抑制PD-1、PD-L1或PD-L2的活性的分子(例如，小分子) (非限制性實例包括BMS-1166 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-103 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-142 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-202 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-1001 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-242 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-200 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-986189 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、INCB086550 (INCYTE)、Aurigene-1 (AURIGENE)、AUNP12 (AURIGENE)、CA-170 (CURIS)、CCX4503 (CHEMOCENTRYX)、AMP-224 (ASTRAZENECA/MEDIMMUNE，GSK)和AMP-512 (ASTRAZENECA)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種分子(例如小分子)，其阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如，CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合。

這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

MICB陽性癌症的非限制性實例包括：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。在一些實施例中，MICB陽性癌症包括但不限於：腎上腺皮質癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

可以如本文所述使用任何劑量並按任何頻率將去核類紅血球投予給個體。 治療患有 MICA/MICB 陽性癌症的個體的方法

本文也提供了治療先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICA/MICB陽性癌症)的個體的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文也提供了治療先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICA/MICB陽性癌症)的個體的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL多肽或其功能片段。

在這些方法的一些實施例中，投藥是向個體靜脈內投藥。

這些方法的一些實施例進一步包括向個體投予NKG2A抑制劑(例如本文所述任何例示性NKG2A抑制劑)。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括向個體投予一或多種額外治療劑。在一些實施例中，一或多種額外治療劑是癌症治療劑。在一些實施例中，癌症治療劑是選自由以下組成之群組：免疫檢查點分子的抑制劑(例如本文所述免疫檢查點分子的任何例示性抑制劑)、化療劑、治療性抗體、嵌合抗原受體T細胞、激酶抑制劑或可溶性細胞激素。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以與本文提供的任何組成物基本上同時投予給個體。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以在向個體投予本文所述任何組成物之前或之後投予給個體。

例如，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制PD-1和PD-L1或PD-L2，及/或阻斷、減少及/或抑制PD-1與PD-L1或PD-L2結合的藥劑(非限制性實例包括納武單抗(ONO-4538/BMS-936558、MDX1106、OPDIVO、BRISTOL MYERS SQUIBB)、派姆單抗(KEYTRUDA、MERCK)、匹地珠單抗(CT-011，CURE TECH)、MK-3475 (MERCK)、BMS 936559 (BRISTOL MYERS SQUIBB)，和MPDL328OA (ROCHE)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合的藥劑。例如，在一些實施例中，抑制CTLA-4活性的藥劑是抗體，諸如伊匹單抗(MDX-010、MDX-101、Yervoy、BRISTOL MYERS SQUIBB)及/或曲美木單抗(PFIZER)。此外，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括靶向免疫檢查點分子的阻斷抗體，免疫檢查點分子為諸如例如BTLA、HVEM、TIM3、GALS、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160(也稱為BY55)、CGEN-15049、CHK1和CHK2激酶、A2aR、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、GITR、GITRL、半乳糖凝集素-9、CD244、CD160、TIGIT、SIRPα、ICOS、CD172a、TMIGD2和各種B-7家族配體(包括但不限於B7-1、B7-2、B7-DC、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種阻斷、減少及/或抑制PD-1、PD-L1或PD-L2的活性的分子(例如，小分子) (非限制性實例包括BMS-1166 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-103 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-142 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-202 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-1001 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-242 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-200 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-986189 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、INCB086550 (INCYTE)、Aurigene-1 (AURIGENE)、AUNP12 (AURIGENE)、CA-170 (CURIS)、CCX4503 (CHEMOCENTRYX)、AMP-224 (ASTRAZENECA/MEDIMMUNE，GSK)和AMP-512 (ASTRAZENECA)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種分子(例如小分子)，其阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如，CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合。

這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

MICA/MICB陽性癌症的非限制性實例包括：腎上腺皮質癌、急性骨髓性白血病、胰腺癌、膽管癌、腎癌、子宮頸鱗狀細胞癌、子宮頸內癌、結腸直腸癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤，和肺癌。在一些實施例中，MICA/MICB陽性癌症包括但不限於：腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

可以如本文所述使用任何劑量並按任何頻率將去核類紅血球投予給個體。 於先前被鑑定或診斷為患有 MICA 陽性癌症的個體中減少 MICA 陽性癌細胞的數量及 / 或增生的方法

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症(例如本文所述或本領域中已知的任何例示性MICA陽性癌症)的個體中減少MICA陽性癌細胞(例如本文所述或本領域中已知的任何例示性MICA陽性癌細胞)的數量及/或增生的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICA陽性癌症)的個體中減少MICA陽性癌細胞(例如本文所述或本領域中已知的任何例示性MICA陽性癌細胞)的數量及/或增生的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL多肽或其功能片段。

在這些方法的一些實施例中，投藥是向個體靜脈內投藥。

這些方法的一些實施例進一步包括向個體投予NKG2A抑制劑(例如本文所述任何例示性NKG2A抑制劑)。

在一些實施例中，MICA陽性癌細胞為MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括向個體投予一或多種額外治療劑。在一些實施例中，一或多種額外治療劑是癌症治療劑。在一些實施例中，癌症治療劑是選自由以下組成之群組：免疫檢查點分子的抑制劑(例如本文所述免疫檢查點分子的任何例示性抑制劑)、化療劑、治療性抗體、嵌合抗原受體T細胞、激酶抑制劑或可溶性細胞激素。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以與本文提供的任何組成物基本上同時投予給個體。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以在向個體投予本文所述任何組成物之前或之後投予給個體。

例如，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制PD-1和PD-L1或PD-L2，及/或阻斷、減少及/或抑制PD-1與PD-L1或PD-L2結合的藥劑(非限制性實例包括納武單抗(ONO-4538/BMS-936558、MDX1106、OPDIVO、BRISTOL MYERS SQUIBB)、派姆單抗(KEYTRUDA、MERCK)、匹地珠單抗(CT-011，CURE TECH)、MK-3475 (MERCK)、BMS 936559 (BRISTOL MYERS SQUIBB)，和MPDL328OA (ROCHE)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合的藥劑。例如，在一些實施例中，抑制CTLA-4活性的藥劑是抗體，諸如伊匹單抗(MDX-010、MDX-101、Yervoy、BRISTOL MYERS SQUIBB)及/或曲美木單抗(PFIZER)。此外，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括靶向免疫檢查點分子的阻斷抗體，免疫檢查點分子為諸如例如BTLA、HVEM、TIM3、GALS、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160(也稱為BY55)、CGEN-15049、CHK1和CHK2激酶、A2aR、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、GITR、GITRL、半乳糖凝集素-9、CD244、CD160、TIGIT、SIRPα、ICOS、CD172a、TMIGD2和各種B-7家族配體(包括但不限於B7-1、B7-2、B7-DC、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種阻斷、減少及/或抑制PD-1、PD-L1或PD-L2的活性的分子(例如，小分子) (非限制性實例包括BMS-1166 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-103 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-142 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-202 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-1001 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-242 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-200 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-986189 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、INCB086550 (INCYTE)、Aurigene-1 (AURIGENE)、AUNP12 (AURIGENE)、CA-170 (CURIS)、CCX4503 (CHEMOCENTRYX)、AMP-224 (ASTRAZENECA/MEDIMMUNE，GSK)和AMP-512 (ASTRAZENECA)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種分子(例如小分子)，其阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如，CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合。

這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性/HLA-E陰性癌症。

在這些方法的一些實施例中，該方法導致個體中MICA陽性癌細胞的數量減少(例如減少至少5%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、或減少至少95%，或減少約5%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍)) (例如，與投予前個體中MICA陽性癌細胞的數量相比)。

在這些方法的一些實施例中，該方法導致個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少(例如減少至少5%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、或減少至少95%，或減少約5%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍)) (例如，與投予前個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比)。

在這些方法的一些實施例中，該方法導致個體中MICA陽性癌細胞的增生減少(例如減少至少5%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、或減少至少95%，或減少約5%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍)) (例如，與投予前個體中MICA陽性癌細胞的增生相比)。

在這些方法的一些實施例中，該方法導致個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少(例如減少至少5%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、減少至少95%，或減少約5%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍)) (例如，與投予前個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比)。

這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性/HLA-E陰性癌症。

MICA陽性癌細胞的非限制性實例包括：腎上腺皮質癌細胞、膽管癌細胞、胰腺癌細胞、腎癌細胞、甲狀腺癌細胞、間皮瘤癌細胞、皮膚表皮黑色素瘤癌細胞、結腸直腸癌細胞、子宮頸鱗狀細胞癌細胞，和子宮頸內腺癌細胞。在一些實施例中，MICA陽性癌症包括但不限於：腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

可以如本文所述使用任何劑量並按任何頻率將去核類紅血球投予給個體。 於先前被鑑定或診斷為患有 MICB 陽性癌症的個體中減少 MICB 陽性癌細胞的數量及 / 或增生的方法

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症(例如本文所述或本領域中已知的任何例示性MICB陽性癌症)的個體中減少MICB陽性癌細胞(例如本文所述或本領域中已知的任何例示性MICB陽性癌細胞)的數量及/或增生的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICB陽性癌症)的個體中減少MICB陽性癌細胞(例如本文所述或本領域中已知的任何例示性MICB陽性癌細胞)的數量及/或增生的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL多肽或其功能片段。

在這些方法的一些實施例中，投藥是向個體靜脈內投藥。

這些方法的一些實施例進一步包括向個體投予NKG2A抑制劑(例如本文所述任何例示性NKG2A抑制劑)。

在一些實施例中，MICB陽性癌細胞為MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括向個體投予一或多種額外治療劑。在一些實施例中，一或多種額外治療劑是癌症治療劑。在一些實施例中，癌症治療劑是選自由以下組成之群組：免疫檢查點分子的抑制劑(例如本文所述免疫檢查點分子的任何例示性抑制劑)、化療劑、治療性抗體、嵌合抗原受體T細胞、激酶抑制劑或可溶性細胞激素。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以與本文提供的任何組成物基本上同時投予給個體。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以在向個體投予本文所述任何組成物之前或之後投予給個體。

例如，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制PD-1和PD-L1或PD-L2，及/或阻斷、減少及/或抑制PD-1與PD-L1或PD-L2結合的藥劑(非限制性實例包括納武單抗(ONO-4538/BMS-936558、MDX1106、OPDIVO、BRISTOL MYERS SQUIBB)、派姆單抗(KEYTRUDA、MERCK)、匹地珠單抗(CT-011，CURE TECH)、MK-3475 (MERCK)、BMS 936559 (BRISTOL MYERS SQUIBB)，和MPDL328OA (ROCHE)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合的藥劑。例如，在一些實施例中，抑制CTLA-4活性的藥劑是抗體，諸如伊匹單抗(MDX-010、MDX-101、Yervoy、BRISTOL MYERS SQUIBB)及/或曲美木單抗(PFIZER)。此外，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括靶向免疫檢查點分子的阻斷抗體，免疫檢查點分子為諸如例如BTLA、HVEM、TIM3、GALS、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160(也稱為BY55)、CGEN-15049、CHK1和CHK2激酶、A2aR、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、GITR、GITRL、半乳糖凝集素-9、CD244、CD160、TIGIT、SIRPα、ICOS、CD172a、TMIGD2和各種B-7家族配體(包括但不限於B7-1、B7-2、B7-DC、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種阻斷、減少及/或抑制PD-1、PD-L1或PD-L2的活性的分子(例如，小分子) (非限制性實例包括BMS-1166 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-103 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-142 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-202 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-1001 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-242 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-200 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-986189 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、INCB086550 (INCYTE)、Aurigene-1 (AURIGENE)、AUNP12 (AURIGENE)、CA-170 (CURIS)、CCX4503 (CHEMOCENTRYX)、AMP-224 (ASTRAZENECA/MEDIMMUNE，GSK)和AMP-512 (ASTRAZENECA)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種分子(例如小分子)，其阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如，CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合。

這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

在這些方法的一些實施例中，該方法導致個體中MICB陽性癌細胞的數量減少(例如減少至少5%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、或減少至少95%，或減少約5%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍)) (例如，與投予前個體中MICB陽性癌細胞的數量相比)。

在這些方法的一些實施例中，該方法導致個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少(例如減少至少5%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、或減少至少95%，或減少約5%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍)) (例如，與投予前個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比)。

在這些方法的一些實施例中，該方法導致個體中MICB陽性癌細胞的增生減少(例如減少至少5%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、或減少至少95%，或減少約5%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍)) (例如，與投予前個體中MICB陽性癌細胞的增生相比)。

在這些方法的一些實施例中，該方法導致個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少(例如減少至少5%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、或減少至少95%，或減少約5%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍)) (例如，與投予前個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比)。

這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

MICB陽性癌細胞的非限制性實例包括：急性骨髓性白血病癌細胞、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤癌細胞、睪丸生殖細胞腫瘤癌細胞、胃腺癌細胞、卵巢漿液性囊腺癌細胞、食道癌細胞，和肺癌細胞。在一些實施例中，MICB陽性癌症包括但不限於：腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

可以如本文所述使用任何劑量並按任何頻率將去核類紅血球投予給個體。 於先前被鑑定或診斷為患有 MICA/MICB 陽性癌症的個體中減少 MICA/MICB 陽性癌細胞的數量及 / 或增生的方法

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症(例如本文所述或本領域中已知的任何例示性MICA/MICB陽性癌症)的個體中減少MICA/MICB陽性癌細胞(例如本文所述或本領域中已知的任何例示性MICA/MICB陽性癌細胞)的數量及/或增生的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICA/MICB陽性癌症)的個體中減少MICA/MICB陽性癌細胞(例如本文所述或本領域中已知的任何例示性MICA/MICB陽性癌細胞)的數量及/或增生的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL多肽或其功能片段。

在這些方法的一些實施例中，投藥是向個體靜脈內投藥。

這些方法的一些實施例進一步包括向個體投予NKG2A抑制劑(例如本文所述任何例示性NKG2A抑制劑)。

在一些實施例中，MICA/MICB陽性癌細胞為MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括向個體投予一或多種額外治療劑。在一些實施例中，一或多種額外治療劑是癌症治療劑。在一些實施例中，癌症治療劑是選自由以下組成之群組：免疫檢查點分子的抑制劑(例如本文所述免疫檢查點分子的任何例示性抑制劑)、化療劑、治療性抗體、嵌合抗原受體T細胞、激酶抑制劑或可溶性細胞激素。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以與本文提供的任何組成物基本上同時投予給個體。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以在向個體投予本文所述任何組成物之前或之後投予給個體。

例如，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制PD-1和PD-L1或PD-L2，及/或阻斷、減少及/或抑制PD-1與PD-L1或PD-L2結合的藥劑(非限制性實例包括納武單抗(ONO-4538/BMS-936558、MDX1106、OPDIVO、BRISTOL MYERS SQUIBB)、派姆單抗(KEYTRUDA、MERCK)、匹地珠單抗(CT-011，CURE TECH)、MK-3475 (MERCK)、BMS 936559 (BRISTOL MYERS SQUIBB)，和MPDL328OA (ROCHE)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合的藥劑。例如，在一些實施例中，抑制CTLA-4活性的藥劑是抗體，諸如伊匹單抗(MDX-010、MDX-101、Yervoy、BRISTOL MYERS SQUIBB)及/或曲美木單抗(PFIZER)。此外，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括靶向免疫檢查點分子的阻斷抗體，免疫檢查點分子為諸如例如BTLA、HVEM、TIM3、GALS、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160(也稱為BY55)、CGEN-15049、CHK1和CHK2激酶、A2aR、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、GITR、GITRL、半乳糖凝集素-9、CD244、CD160、TIGIT、SIRPα、ICOS、CD172a、TMIGD2和各種B-7家族配體(包括但不限於B7-1、B7-2、B7-DC、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種阻斷、減少及/或抑制PD-1、PD-L1或PD-L2的活性的分子(例如，小分子) (非限制性實例包括BMS-1166 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-103 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-142 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-202 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-1001 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-242 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-200 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-986189 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、INCB086550 (INCYTE)、Aurigene-1 (AURIGENE)、AUNP12 (AURIGENE)、CA-170 (CURIS)、CCX4503 (CHEMOCENTRYX)、AMP-224 (ASTRAZENECA/MEDIMMUNE，GSK)和AMP-512 (ASTRAZENECA)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種分子(例如小分子)，其阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如，CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合。

這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

在這些方法的一些實施例中，該方法導致個體中MICA/MICB陽性癌細胞的數量減少(例如減少至少5%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、或減少至少95%，或減少約5%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍)) (例如，與投予前個體中MICA/MICB陽性癌細胞的數量相比)。

在這些方法的一些實施例中，該方法導致個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少(例如減少至少5%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、或減少至少95%，或減少約5%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍)) (例如，與投予前個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比)。

在這些方法的一些實施例中，該方法導致個體中MICA/MICB陽性癌細胞的增生減少(例如減少至少5%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、或減少至少95%，或減少約5%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍)) (例如，與投予前個體中MICA/MICB陽性癌細胞的增生相比)。

在這些方法的一些實施例中，該方法導致個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少(例如減少至少5%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、或減少至少95%，或減少約5%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍)) (例如，與投予前個體中MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比)。

這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

MICA/MICB陽性癌細胞的非限制性實例包括：腎上腺皮質癌細胞、急性骨髓性白血病癌細胞、胰腺癌細胞、膽管癌細胞、腎癌細胞、子宮頸鱗狀細胞癌細胞、子宮頸內癌細胞、結腸直腸癌細胞、間皮瘤癌細胞、皮膚表皮黑色素瘤癌細胞，和肺癌細胞。在一些實施例中，MICA/MICB陽性癌症包括但不限於：腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

可以如本文所述使用任何劑量並按任何頻率將去核類紅血球投予給個體。 於先前被鑑定或診斷為患有 MICA 陽性癌症的個體中誘導殺死 MICA 陽性癌細胞的方法

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICA陽性癌症)的個體中誘導殺死MICA陽性癌細胞(例如本文所述任何例示性MICA陽性癌細胞)的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICA陽性癌症)的個體中誘導殺死MICA陽性癌細胞(例如本文所述任何例示性MICA陽性癌細胞)的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL多肽或其功能片段。

在一些實施例中，誘導殺死MICA陽性癌細胞也導致於個體中誘導殺死非MICA陽性癌細胞(例如在也包括MICA陽性癌細胞的腫瘤中的非MICA陽性癌細胞)。

在一些實施例中，殺死MICA陽性癌細胞為壞死。在一些實施例中，殺死MICA陽性癌細胞為細胞凋亡。在一些實施例中，殺死是NK細胞介導的細胞溶解或NK細胞介導的細胞毒性。

這些方法的一些實施例進一步包括向個體投予NKG2A抑制劑(例如本文所述任何例示性NKG2A抑制劑)。

在這些方法的一些實施例中，投藥包括向個體靜脈內投藥。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括向個體投予一或多種額外治療劑。在一些實施例中，一或多種額外治療劑是癌症治療劑。在一些實施例中，癌症治療劑是選自由以下組成之群組：免疫檢查點分子的抑制劑(例如本文所述免疫檢查點分子的任何例示性抑制劑)、化療劑、治療性抗體、嵌合抗原受體T細胞、激酶抑制劑或可溶性細胞激素。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以與本文提供的任何組成物基本上同時投予給個體。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以在向個體投予本文所述任何組成物之前或之後投予給個體。

例如，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制PD-1和PD-L1或PD-L2，及/或阻斷、減少及/或抑制PD-1與PD-L1或PD-L2結合的藥劑(非限制性實例包括納武單抗(ONO-4538/BMS-936558、MDX1106、OPDIVO、BRISTOL MYERS SQUIBB)、派姆單抗(KEYTRUDA、MERCK)、匹地珠單抗(CT-011，CURE TECH)、MK-3475 (MERCK)、BMS 936559 (BRISTOL MYERS SQUIBB)，和MPDL328OA (ROCHE)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合的藥劑。例如，在一些實施例中，抑制CTLA-4活性的藥劑是抗體，諸如伊匹單抗(MDX-010、MDX-101、Yervoy、BRISTOL MYERS SQUIBB)及/或曲美木單抗(PFIZER)。此外，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括靶向免疫檢查點分子的阻斷抗體，免疫檢查點分子為諸如例如BTLA、HVEM、TIM3、GALS、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160(也稱為BY55)、CGEN-15049、CHK1和CHK2激酶、A2aR、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、GITR、GITRL、半乳糖凝集素-9、CD244、CD160、TIGIT、SIRPα、ICOS、CD172a、TMIGD2和各種B-7家族配體(包括但不限於B7-1、B7-2、B7-DC、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種阻斷、減少及/或抑制PD-1、PD-L1或PD-L2的活性的分子(例如，小分子) (非限制性實例包括BMS-1166 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-103 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-142 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-202 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-1001 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-242 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-200 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-986189 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、INCB086550 (INCYTE)、Aurigene-1 (AURIGENE)、AUNP12 (AURIGENE)、CA-170 (CURIS)、CCX4503 (CHEMOCENTRYX)、AMP-224 (ASTRAZENECA/MEDIMMUNE，GSK)和AMP-512 (ASTRAZENECA)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種分子(例如小分子)，其阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如，CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合。

這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性/HLA-E陰性癌症。

MICA陽性癌細胞的非限制性實例包括：腎上腺皮質癌細胞、膽管癌細胞、胰腺癌細胞、腎癌細胞、甲狀腺癌細胞、間皮瘤癌細胞、皮膚表皮黑色素瘤癌細胞、結腸直腸癌細胞、子宮頸鱗狀細胞癌細胞，和子宮頸內腺癌細胞。在一些實施例中，MICA陽性癌症包括但不限於：腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

可以如本文所述使用任何劑量並按任何頻率將去核類紅血球投予給個體。 於先前被鑑定或診斷為患有 MICB 陽性癌症的個體中誘導殺死 MICB 陽性癌細胞的方法

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICB陽性癌症)的個體中誘導殺死MICB陽性癌細胞(例如本文所述任何例示性MICB陽性癌細胞)的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICB陽性癌症)的個體中誘導殺死MICB陽性癌細胞(例如本文所述任何例示性MICB陽性癌細胞)的方法，包括向個體投予治療有效量去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL多肽或其功能片段。

在一些實施例中，誘導殺死MICB陽性癌細胞也導致在個體中誘導殺死非MICB陽性癌細胞(例如在也包括MICB陽性癌細胞的腫瘤中的非MICB陽性癌細胞)。

在一些實施例中，殺死MICB陽性癌細胞為壞死。在一些實施例中，殺死MICB陽性癌細胞為細胞凋亡。在一些實施例中，殺死是NK細胞介導的細胞溶解或NK細胞介導的細胞毒性。

這些方法的一些實施例進一步包括向個體投予NKG2A抑制劑(例如本文所述任何例示性NKG2A抑制劑)。

在這些方法的一些實施例中，投藥包括向個體靜脈內投藥。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括向個體投予一或多種額外治療劑。在一些實施例中，一或多種額外治療劑是癌症治療劑。在一些實施例中，癌症治療劑是選自由以下組成之群組：免疫檢查點分子的抑制劑(例如本文所述免疫檢查點分子的任何例示性抑制劑)、化療劑、治療性抗體、嵌合抗原受體T細胞、激酶抑制劑或可溶性細胞激素。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以與本文提供的任何組成物基本上同時投予給個體。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以在向個體投予本文所述任何組成物之前或之後投予給個體。

例如，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制PD-1和PD-L1或PD-L2，及/或阻斷、減少及/或抑制PD-1與PD-L1或PD-L2結合的藥劑(非限制性實例包括納武單抗(ONO-4538/BMS-936558、MDX1106、OPDIVO、BRISTOL MYERS SQUIBB)、派姆單抗(KEYTRUDA、MERCK)、匹地珠單抗(CT-011，CURE TECH)、MK-3475 (MERCK)、BMS 936559 (BRISTOL MYERS SQUIBB)，和MPDL328OA (ROCHE)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合的藥劑。例如，在一些實施例中，抑制CTLA-4活性的藥劑是抗體，諸如伊匹單抗(MDX-010、MDX-101、Yervoy、BRISTOL MYERS SQUIBB)及/或曲美木單抗(PFIZER)。此外，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括靶向免疫檢查點分子的阻斷抗體，免疫檢查點分子為諸如例如BTLA、HVEM、TIM3、GALS、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160(也稱為BY55)、CGEN-15049、CHK1和CHK2激酶、A2aR、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、GITR、GITRL、半乳糖凝集素-9、CD244、CD160、TIGIT、SIRPα、ICOS、CD172a、TMIGD2和各種B-7家族配體(包括但不限於B7-1、B7-2、B7-DC、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種阻斷、減少及/或抑制PD-1、PD-L1或PD-L2的活性的分子(例如，小分子) (非限制性實例包括BMS-1166 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-103 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-142 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-202 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-1001 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-242 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-200 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-986189 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、INCB086550 (INCYTE)、Aurigene-1 (AURIGENE)、AUNP12 (AURIGENE)、CA-170 (CURIS)、CCX4503 (CHEMOCENTRYX)、AMP-224 (ASTRAZENECA/MEDIMMUNE，GSK)和AMP-512 (ASTRAZENECA)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種分子(例如小分子)，其阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如，CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合。

這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

MICB陽性癌細胞的非限制性實例包括：急性骨髓性白血病癌細胞、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤癌細胞、睪丸生殖細胞腫瘤癌細胞、胃腺癌細胞、卵巢漿液性囊腺癌細胞、食道癌細胞，和肺癌細胞。在一些實施例中，MICB陽性癌症包括但不限於：腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

可以如本文所述使用任何劑量並按任何頻率將去核類紅血球投予給個體。 於先前被鑑定或診斷為患有 MICA/MICB 陽性癌症的個體中誘導殺死 MICA/MICB 陽性癌細胞的方法

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICA/MICB陽性癌症)的個體中誘導殺死MICA/MICB陽性癌細胞(例如本文所述任何例示性MICA/MICB陽性癌細胞)的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA/MICB陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICA/MICB陽性癌症)的個體中誘導殺死MICA/MICB陽性癌細胞(例如本文所述任何例示性MICA/MICB陽性癌細胞)的方法，包括向個體投予治療有效量去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL多肽或其功能片段。

在一些實施例中，誘導殺死MICA/MICB陽性癌細胞也導致在個體中誘導殺死非MICA/MICB陽性癌細胞(例如在也包括MICA/MICB陽性癌細胞的腫瘤中的非MICA/MICB陽性癌細胞)。

在一些實施例中，殺死MICA/MICB陽性癌細胞為壞死。在一些實施例中，殺死MICA/MICB陽性癌細胞為細胞凋亡。在一些實施例中，殺死是NK細胞介導的細胞溶解或NK細胞介導的細胞毒性。

這些方法的一些實施例進一步包括向個體投予NKG2A抑制劑(例如本文所述任何例示性NKG2A抑制劑)。

在這些方法的一些實施例中，投藥包括向個體靜脈內投藥。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括向個體投予一或多種額外治療劑。在一些實施例中，一或多種額外治療劑是癌症治療劑。在一些實施例中，癌症治療劑是選自由以下組成之群組：免疫檢查點分子的抑制劑(例如本文所述免疫檢查點分子的任何例示性抑制劑)、化療劑、治療性抗體、嵌合抗原受體T細胞、激酶抑制劑或可溶性細胞激素。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以與本文提供的任何組成物基本上同時投予給個體。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以在向個體投予本文所述任何組成物之前或之後投予給個體。

例如，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制PD-1和PD-L1或PD-L2，及/或阻斷、減少及/或抑制PD-1與PD-L1或PD-L2結合的藥劑(非限制性實例包括納武單抗(ONO-4538/BMS-936558、MDX1106、OPDIVO、BRISTOL MYERS SQUIBB)、派姆單抗(KEYTRUDA、MERCK)、匹地珠單抗(CT-011，CURE TECH)、MK-3475 (MERCK)、BMS 936559 (BRISTOL MYERS SQUIBB)，和MPDL328OA (ROCHE)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合的藥劑。例如，在一些實施例中，抑制CTLA-4活性的藥劑是抗體，諸如伊匹單抗(MDX-010、MDX-101、Yervoy、BRISTOL MYERS SQUIBB)及/或曲美木單抗(PFIZER)。此外，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括靶向免疫檢查點分子的阻斷抗體，免疫檢查點分子為諸如例如BTLA、HVEM、TIM3、GALS、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160(也稱為BY55)、CGEN-15049、CHK1和CHK2激酶、A2aR、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、GITR、GITRL、半乳糖凝集素-9、CD244、CD160、TIGIT、SIRPα、ICOS、CD172a、TMIGD2和各種B-7家族配體(包括但不限於B7-1、B7-2、B7-DC、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種阻斷、減少及/或抑制PD-1、PD-L1或PD-L2的活性的分子(例如，小分子) (非限制性實例包括BMS-1166 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-103 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-142 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-202 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-1001 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-242 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-200 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-986189 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、INCB086550 (INCYTE)、Aurigene-1 (AURIGENE)、AUNP12 (AURIGENE)、CA-170 (CURIS)、CCX4503 (CHEMOCENTRYX)、AMP-224 (ASTRAZENECA/MEDIMMUNE，GSK)和AMP-512 (ASTRAZENECA)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種分子(例如小分子)，其阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如，CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合。

這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

MICA/MICB陽性癌細胞的非限制性實例包括：腎上腺皮質癌細胞、急性骨髓性白血病癌細胞、胰腺癌細胞、膽管癌細胞、腎癌細胞、子宮頸鱗狀細胞癌細胞、子宮頸內癌細胞、結腸直腸癌細胞、間皮瘤癌細胞、皮膚表皮黑色素瘤癌細胞，和肺癌細胞。在一些實施例中，MICA/MICB陽性癌症包括但不限於：腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

可以如本文所述使用任何劑量並按任何頻率將去核類紅血球投予給個體。 於先前被鑑定或診斷為患有 MICA 陽性癌症、 MICB 陽性癌症或 MICA/MICB 陽性癌症的個體中減少實體腫瘤體積的方法

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症(例如本文所述或本領域中已知的任何例示性MICA癌症)、MICB陽性癌症(例如本文所述或本領域中已知的任何例示性MICB癌症)或MICA/MICB陽性癌症(例如本文所述或本領域中已知的任何例示性MICA/MICB癌症)的個體中減少實體腫瘤體積的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。

本文也提供了於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症(例如本文所述任何例示性MICA陽性癌症)、MICB陽性癌症(例如本文所述或本領域中已知的任何例示性MICB癌症)或MICA/MICB陽性癌症(例如本文所述或本領域中已知的任何例示性MICA/MICB癌症)的個體中減少實體腫瘤體積的方法，包括向個體投予治療有效量的去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及第二外源性多肽，該第二外源性多肽包括4-1BBL多肽或其功能片段。

這些方法的一些實施例進一步包括向個體投予NKG2A抑制劑(例如本文所述任何例示性NKG2A抑制劑)。

在這些方法的一些實施例中，投藥包括向個體靜脈內投藥。

本文所述任何方法的一些實施例進一步包括向個體投予一或多種額外治療劑。在一些實施例中，一或多種額外治療劑是癌症治療劑。在一些實施例中，癌症治療劑是選自由以下組成之群組：免疫檢查點分子的抑制劑(例如本文所述免疫檢查點分子的任何例示性抑制劑)、化療劑、治療性抗體、嵌合抗原受體T細胞、激酶抑制劑或可溶性細胞激素。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以與本文提供的任何組成物基本上同時投予給個體。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可以在向個體投予本文所述任何組成物之前或之後投予給個體。

例如，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制PD-1和PD-L1或PD-L2，及/或阻斷、減少及/或抑制PD-1與PD-L1或PD-L2結合的藥劑(非限制性實例包括納武單抗(ONO-4538/BMS-936558、MDX1106、OPDIVO、BRISTOL MYERS SQUIBB)、派姆單抗(KEYTRUDA、MERCK)、匹地珠單抗(CT-011，CURE TECH)、MK-3475 (MERCK)、BMS 936559 (BRISTOL MYERS SQUIBB)，和MPDL328OA (ROCHE)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合的藥劑。例如，在一些實施例中，抑制CTLA-4活性的藥劑是抗體，諸如伊匹單抗(MDX-010、MDX-101、Yervoy、BRISTOL MYERS SQUIBB)及/或曲美木單抗(PFIZER)。此外，在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括靶向免疫檢查點分子的阻斷抗體，免疫檢查點分子為諸如例如BTLA、HVEM、TIM3、GALS、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160(也稱為BY55)、CGEN-15049、CHK1和CHK2激酶、A2aR、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3及/或CEACAM-5)、GITR、GITRL、半乳糖凝集素-9、CD244、CD160、TIGIT、SIRPα、ICOS、CD172a、TMIGD2和各種B-7家族配體(包括但不限於B7-1、B7-2、B7-DC、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種阻斷、減少及/或抑制PD-1、PD-L1或PD-L2的活性的分子(例如，小分子) (非限制性實例包括BMS-1166 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-103 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-142 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-202 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-1001 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-242 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-200 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、BMS-986189 (BRISTOL MYERS SQUIBB)、INCB086550 (INCYTE)、Aurigene-1 (AURIGENE)、AUNP12 (AURIGENE)、CA-170 (CURIS)、CCX4503 (CHEMOCENTRYX)、AMP-224 (ASTRAZENECA/MEDIMMUNE，GSK)和AMP-512 (ASTRAZENECA)中的一或多者)。在一些實施例中，一或多種額外治療劑包括一或多種分子(例如小分子)，其阻斷、減少及/或抑制CTLA-4的活性及/或CTLA-4與一或多個其受體(例如，CD80、CD86、AP2M1、SHP-2和PPP2R5A)結合。

這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性、MICB陰性，或MICA/MICB陽性癌症。這些方法的一些實施例可進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性/HLA-E陰性癌症、MICB陰性/HLA-E陰性癌症，或MICA/MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

MICA陽性癌症的非限制性實例包括：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。在一些實施例中，MICA陽性癌症包括但不限於：腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

MICB陽性癌症的非限制性實例包括：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。在一些實施例中，MICB陽性癌症包括但不限於：腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

MICA/MICB陽性癌症的非限制性實例包括：腎上腺皮質癌、急性骨髓性白血病、胰腺癌、膽管癌、腎癌、子宮頸鱗狀細胞癌、子宮頸內癌、結腸直腸癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤，和肺癌。在一些實施例中，MICA/MICB陽性癌症包括但不限於：腎上腺皮質癌、肛門癌、膽管癌、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、食道癌、眼癌、頭頸癌、急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大b細胞淋巴瘤、腎癌、腎臟腎透明細胞癌、腎臟腎乳頭狀細胞癌、腎臟嫌色細胞、肝癌、肺癌、肺腺癌、肺臟鱗狀細胞癌、間皮瘤、卵巢癌、胰臟癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、子宮癌、子宮體子宮內膜癌、子宮癌肉瘤，和葡萄膜黑色素瘤。

在這些方法的一些實施例中，該方法導致個體中實體腫瘤體積減少(例如減少至少5%、減少至少10%、減少至少15%、減少至少20%、減少至少25%、減少至少30%、減少至少35%、減少至少40%、減少至少45%、減少至少50%、減少至少55%、減少至少60%、減少至少65%、減少至少70%、減少至少75%、減少至少80%、減少至少85%、減少至少90%、或減少至少95%、或減少約5%至減少約99%(或本文所述此範圍的任何例示性子範圍)) (例如，與投予前實體腫瘤體積相比)。

可以如本文所述使用任何劑量並按任何頻率將去核類紅血球投予給個體。 劑量和投藥

投予包括(例如，表現)外源性藥劑(例如，多肽)的去核類紅血球(例如，網狀細胞)的方法說明於例如WO2015/073587、WO2015/153102和WO 2019/173798中，它們各自以全文引用的方式併入。

在實施例中，本文所述去核類紅血球可以被投予給個體，例如哺乳動物(例如人類)。可受到治療的例示性哺乳動物包括但不限於人類、家畜(例如狗、貓與類似動物)、農場動物(例如牛、綿羊、豬、馬與類似動物)，以及實驗室動物(例如猴、大鼠、小鼠、兔、天竺鼠與類似動物)。本文所述方法可適用於人類療法以及獸醫應用。

在一些實施例中，一個劑量的去核類紅血球包括約1x10 ⁹至2x10 ⁹、2x10 ⁹至5x10 ⁹、5x10 ⁹至1x10 ¹⁰、1x10 ¹⁰至2x10 ¹⁰、2x10 ¹⁰至5x10 ¹⁰、5x10 ¹⁰至1x10 ¹¹、1x10 ¹¹至2x10 ¹¹、2x10 ¹¹至5x10 ¹¹、5 x10 ¹¹至1x10 ¹²、1x10 ¹²至2x10 ¹²、2x10 ¹²至5x10 ¹²，或5x10 ¹²至1x10 ¹³個細胞。

經改造類紅血球可呈適於非經腸、病灶內、靜脈內、器官內或其他投藥路徑的調配物被投予給個體。

經改造類紅血球可以按每天數次的頻率被投予給個體，或者可以不那麼頻繁地投予，諸如一天一次、一週一次、每兩週一次、每三週一次、一個月一次或甚至更不頻繁地投予，諸如每幾個月甚至一年或更少一次。劑量的頻率對於通常知識者來說將是顯而易見的並且將取決於許多因素，諸如但不限於所治療疾病的類型和嚴重程度、個體的類型和年齡等。

在一些實施例中，MICA陽性癌症是選自由以下組成之群組的癌症：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。

在一些實施例中，MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組的癌症：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。

在一些實施例中，MICA/MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組的癌症：腎上腺皮質癌、急性骨髓性白血病、胰腺癌、膽管癌、腎癌、子宮頸鱗狀細胞癌、子宮頸內癌、結腸直腸癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤，和肺癌。 套組

本文還提供了包括本文提供的任何組成物的套組。例如，本文提供一種套組，其包括包括去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)的醫藥組成物，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，和(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及用於執行本文所述任何方法的說明書。在一些實施例中，去核類紅血球包括至少1,000個複本、至少10,000個複本或至少15,000個複本的第一外源性融合多肽。在一些實施例中，去核類紅血球包括至少1,000個複本、至少10,000個複本、至少15,000個複本、至少20,000個複本、至少25,000個複本、至少30,000個複本、至少40,000個複本、至少50,000個複本，至少60,000個複本、至少80,000個複本、至少100,000個複本、至少200,000個複本、至少300,000個複本、至少400,000個複本、至少500,000個複本，或至少600,000個複本的第一外源性融合多肽。

在另一個實例中，本文提供了一種套組，其包括包括去核類紅血球(例如本文所述任何例示性去核類紅血球)的醫藥組成物，該去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，和(ii)IL-15受體α或功能片段；及包括4-1BBL多肽或其功能片段的第二外源性多肽，其中外源性多肽存在於去核類紅血球的表面上；以及用於執行本文所述任何方法的說明書。

在一些實施例中，組成物如在例如WO 2020/219909(以引用的方式併入本文)中所述那樣配製，本文所述任何去核類紅血球可配製用於投予給個體。

本文進一步提供套組，其包括一或多個含有本文所述任何組成物的無菌容器(例如無菌錐形管、無菌培養皿、無菌小瓶(例如，硼矽玻璃小瓶)，以及無菌塑膠袋(二-2-乙基己基鄰苯二甲酸酯(DEHP)-塑化聚氯乙烯(PVC)袋，或正丁醯基三(正-己基)檸檬酸酯(BTHC)-塑化PVC袋)。在一些實施例中，本文所提供之任何套組可進一步包括用以將任一種組成物投予有需要之個體的說明書。

本文所述套組的一些實施例包括本文所述任何組成物的合適單一劑型。例如，本文所述任何組成物的單一劑型可具有例如以下體積：約0.5 mL至約2 L、約0.5 mL至約1500 mL、約0.5 mL至約1000 mL、約0.5 mL至約800 mL、約0.5 mL至約600 mL、約0.5 mL至約400 mL、約0.5 mL至約200 mL、約0.5 mL至約150 mL、約0.5 mL至約100 mL、約0.5 mL至約50 mL、約1.0 mL至約2 L、約1.0 mL至約1500 mL、約1.0 mL至約1000 mL、約1.0 mL至約800 mL、約1.0 mL至約600 mL、約1.0 mL至約400 mL、約1.0 mL至約200 mL、約1.0 mL至約150 mL、約1.0 mL至約100 mL、約1.0 mL至約50 mL、約5 mL至約2 L、約5 mL至約1500 mL、約5 mL至約1000 mL、約5 mL至約800 mL、約5 mL至約600 mL、約5 mL至約400 mL、約5 mL至約200 mL、約5 mL至約150 mL、約5 mL至約100 mL、約5 mL至約50 mL、約10 mL至約2 L、約10 mL至約1500 mL、約10 mL至約1000 mL、約10 mL至約800 mL、約10 mL至約600 mL、約10 mL至約400 mL、約10 mL至約200 mL、約10 mL至約150 mL、約10 mL至約100 mL、約10 mL至約50 mL、約20 mL至約2 L、約20 mL至約1500 mL、約20 mL至約1000 mL、約20 mL至約800 mL、約20 mL至約600 mL、約20 mL至約400 mL、約20 mL至約200 mL、約20 mL至約150 mL、約20 mL至約100 mL、約20 mL至約50 mL、約50 mL至約2 L、約50 mL至約1500 mL、約50 mL至約1000 mL、約50 mL至約800 mL、約50 mL至約600 mL、約50 mL至約400 mL、約50 mL至約200 mL、約50 mL至約150 mL、約50 mL至約100 mL、約100 mL至約2 L、約100 mL至約1500 mL、約100 mL至約1000 mL、約100 mL至約800 mL、約100 mL至約600 mL、約100 mL至約400 mL、約100 mL至約200 mL、約100 mL至約150 mL、約150 mL至約2 L、約150 mL至約1500 mL、約150 mL至約1000 mL、約150 mL至約800 mL、約150 mL至約600 mL、約150 mL至約400 mL、約150 mL至約200 mL、約200 mL至約2 L、約200 mL至約1500 mL、約200 mL至約1000 mL、約200 mL至約800 mL、約200 mL至約600 mL、約200 mL至約400 mL、約400 mL至約2 L、約400 mL至約1500 mL、約400 mL至約1000 mL、約400 mL至約800 mL、約400 mL至約600 mL、約600 mL至約2 L、約600 mL至約1500 mL、約600 mL至約1000 mL、約600 mL至約800 mL、約800 mL至約2 L、約800 mL至約1500 mL、約800 mL至約1000 mL、約1000 mL至約2 L、約1000 mL至約1500 mL，或約1500 mL至約2 L。 實例 實例 1. 生成經基因工程改造以表現第一融合多肽的類紅血球 IL-15 及 IL-15/IL-15RA 融合 構建體

製備編碼融合多肽的各種DNA構建體以供在類紅血球中表現，如下表5中所示。 表 5.IL-15及IL-15/IL-15RA融合構建體及多肽。SEQ ID NO是指胺基酸序列。

構建體 / 多肽	說明	SEQ ID NO ：
V3IL-15	GPA訊號肽(SEQ ID NO：35) -成熟人類IL-15 (SEQ ID NO：24) - 連接子-HA-連接子 (SEQ ID NO：65) - GPA (SEQ ID NO：44)	46
V4IL-15 + IL-15RA (細胞外)	GPA訊號肽(SEQ ID NO：35) -成熟人類IL-15 (SEQ ID NO：24) -彈性連接子 (SEQ ID NO：37) -成熟人類細胞外IL-15RA (SEQ ID NO：30) - 連接子-HA- 連接子 (SEQ ID NO：65) - GPA (SEQ ID NO：44)	48
V5IL-15 + IL-15RA (sushi結構域+ 13個aa)	GPA訊號肽(SEQ ID NO：35) -成熟人類 IL-15 (SEQ ID NO：24) -彈性連接子 (SEQ ID NO：37) -成熟人類IL-15RA (sushi結構域+13個aa) (SEQ ID NO：33) - 連接子-HA-連接子(SEQ ID NO：65) - GPA (SEQ ID NO：44)	50
V3.1	GPA訊號肽(SEQ ID NO：35) -成熟人類IL-15 (SEQ ID NO：24) - 連接子(SEQ ID NO：43) - GPA (SEQ ID NO：44)	52
V4.1	GPA訊號肽(SEQ ID NO：35) -成熟人類IL-15 (SEQ ID NO：24) -彈性連接子 (SEQ ID NO：37) -成熟人類細胞外IL-15RA (SEQ ID NO：30) - 連接子(SEQ ID NO：43) - GPA (SEQ ID NO：44)	54
IL-15/IL-15RA融合多肽	成熟人類IL-15 (SEQ ID NO：24) -彈性連接子(SEQ ID NO：37) -成熟人類細胞外IL-15RA (SEQ ID NO：30)	39
IL-15/IL-15RA (sushi結構域 + 13個aa)融合多肽	成熟人類IL-15 (SEQ ID NO：24) -彈性連接子(SEQ ID NO：37) -成熟人類IL-15RA (sushi結構域+13個aa) (SEQ ID NO：33)	41

如下所述，將DNA構建體選殖到受MSCV啟動子序列控制的慢病毒載體的多選殖位點中以供在類紅血球中表現。 產生慢病毒載體

將構建體選殖到受MSCV啟動子序列(System Biosciences)控制之慢病毒載體pCDH的多選殖位點中。藉由用pPACKH1 (System Biosciences)和含有構建體的pCDH慢病毒載體轉染細胞，在293T細胞中產生慢病毒。將細胞置於新鮮培養基中。在培養基更換後48小時藉由在1,500 rpm下離心5分鐘收集病毒上清液。收集上清液、過濾，並以等分試樣冷凍在-80℃下。 類紅血球的擴增和分化

使用衍生自正常人類捐贈者的經動員周邊血球的人類CD34 ⁺細胞。擴展/分化程序包括3個階段。在第一階段中，解凍的CD34 ⁺類紅血球前驅細胞培養於包括重組人類胰島素、人類運鐵蛋白、重組人類幹細胞因子和重組人類介白素3的Iscove氏MDM (IMDM)培養基中。在第二階段中，類紅血球培養於補充有重組人類胰島素、人類運鐵蛋白、人類重組幹細胞因子、人類重組紅血球生成素和L-麩醯胺酸的IMDM培養基。在第三階段中，類紅血球培養於補充有人類運鐵蛋白、重組人類胰島素、人類重組紅血球生成素和肝素的IMDM培養基中。將培養物在5% CO ₂培養箱中保持在37℃。 類紅血球前驅細胞的轉導

在上述培養過程的第1階段期間轉導類紅血球前驅細胞。將培養基中的類紅血球前驅細胞與慢病毒上清液和聚凝胺結合。藉由旋轉接種實現感染，將盤在室溫下以2,000 rpm旋轉90分鐘。旋轉接種後，在37℃下培育細胞過夜。 抗體結合

經PE標記的抗IL-15-RA抗體(例如抗IL-15RA抗體(JM7A4) (ab91270)，AbCam)的結合用於驗證第一外源性多肽在經改造類紅血球中的表現。抗體的結合是藉由流式細胞分析技術來測量APC螢光或PE螢光。基於經染色的未轉導細胞設置圈選。 實例 2. 生成經基因工程改造以表現 4-1BBL 的類紅血球 4-1BBL 構建體

製備DNA構建體以供在類紅血球中表現，如下表6中所示： 表 6. 4-1BBL 構建體。 SEQ ID NO 是指胺基酸序列。

構建體	說明	SEQ ID NO:
4-1BBL	GPA訊號肽(SEQ ID NO：35) -人類細胞外4-1BBL (SEQ ID NO：56) – 4-1BBL連接子(SEQ ID NO：60) - GPA (SEQ ID NO：44)	58

產生慢病毒載體

如表6中所示構建4-1BBL基因構建體。將基因選殖到具有MSCV啟動子序列之慢病毒載體pCDH (來自System Biosciences)的多選殖位點中。藉由用pPACKH1 (System Biosciences)和含有4-1BBL基因的pCDH慢病毒載體轉染細胞，在293T細胞中產生慢病毒。將細胞置於新鮮培養基中。在培養基更換後48小時藉由在1,500 rpm下離心5分鐘收集病毒上清液。收集上清液、過濾，並以等分試樣冷凍在-80℃下。 類紅血球的擴增和分化

衍生自正常人類捐贈者的經動員周邊血球的人類CD34 ⁺細胞是以冷凍方式購自AllCells Inc.。擴展/分化程序包括3個階段。在第一階段中，解凍的CD34 ⁺類紅血球前驅細胞培養於包括重組人類胰島素、人類運鐵蛋白、重組人類重組人類幹細胞因子和重組人類介白素3的Iscove氏MDM培養基。在第二階段中，類紅血球培養於補充有重組人類胰島素、人類運鐵蛋白、人類重組幹細胞因子、人類重組紅血球生成素和L-麩醯胺酸的Iscove氏MDM培養基。在第三階段中，類紅血球培養於補充有人類運鐵蛋白、重組人類胰島素、人類重組紅血球生成素和肝素的Iscove氏MDM培養基。將培養物在5% CO ₂培養箱中保持在37℃。 類紅血球前驅細胞的轉導

在上述培養過程的第1步驟期間轉導類紅血球前驅細胞。將培養基中的類紅血球與慢病毒上清液和聚凝胺結合。藉由旋轉接種實現感染，將盤在室溫下以2,000 rpm旋轉90分鐘。旋轉接種後，在37℃下培育細胞過夜。 抗體結合

經PE標記的抗4-1BBL抗體(例如經純化抗人類4-1BB配體(CD137L)抗體，BioLegend)的結合用於驗證4-1BBL在經改造類紅血球中的表現。抗體的結合是藉由流式細胞分析技術來測量PE螢光。基於經染色的未轉導細胞設置圈選。 實例 3. 生成經基因工程改造以表現第一和第二外源性多肽的類紅血球 產生慢病毒載體

構建編碼IL-15/IL-15-RA融合多肽和4-1BBL的基因。將每個基因選殖到受MSCV啟動子序列控制之慢病毒載體pCDH(System Biosciences)的多選殖位點，使得一個載體包括IL-15/IL-15RA基因，而另一個載體包括4-1BBL基因。藉由用pPACKH1 (System Biosciences)和含有IL-15/IL-15-RA基因的pCDH慢病毒載體與含有4-1BBL基因的pCDH慢病毒載體共轉染細胞，在293T細胞中產生慢病毒。將細胞置於新鮮培養基中。在培養基更換後48小時藉由在1,500 rpm下離心5分鐘收集病毒上清液。收集上清液、過濾，並以等分試樣冷凍在-80℃下。

或者，構建編碼IL-15/IL-15-RA融合多肽和4-1BBL的基因，並選殖到受MSCV啟動子序列控制之慢病毒載體pCDH(System Biosciences)的多選殖位點，使得單個載體包括IL-15/IL-15RA基因和4-1BBL基因。藉由用pPACKH1 (System Biosciences)和含有IL-15/IL-15-RA基因與4-1BBL基因的pCDH慢病毒載體共轉染細胞，在293T細胞中產生慢病毒。將細胞置於新鮮培養基中。在培養基更換後48小時藉由在1,500 rpm下離心5分鐘收集病毒上清液。收集上清液、過濾，並以等分試樣冷凍在-80℃下。 類紅血球的擴增和分化

衍生自正常人類捐贈者的經動員周邊血球的人類CD34 ⁺細胞是以冷凍方式購自AllCells Inc.。擴展/分化程序包括3個階段。在第一階段中，解凍的CD34 ⁺類紅血球前驅細胞培養於包括重組人類胰島素、人類運鐵蛋白、重組人類重組人類幹細胞因子和重組人類介白素3的Iscove氏MDM培養基。在第二階段中，類紅血球培養於補充有重組人類胰島素、人類運鐵蛋白、人類重組幹細胞因子、人類重組紅血球生成素和L-麩醯胺酸的Iscove氏MDM培養基。在第三階段中，類紅血球培養於補充有人類運鐵蛋白、重組人類胰島素、人類重組紅血球生成素和肝素的Iscove氏MDM培養基。將培養物在5% CO ₂培養箱中保持在37℃。 類紅血球前驅細胞的轉導

在上述培養過程的第1步驟期間轉導類紅血球前驅細胞。將培養基中的類紅血球與慢病毒上清液和聚凝胺結合。藉由旋轉接種實現感染，將盤在室溫下以2000 rpm旋轉90分鐘。旋轉接種後，在37℃下培育細胞過夜。 抗體結合

經PE標記的抗IL-15-RA抗體(例如抗IL-15RA抗體(JM7A4) (ab91270)，AbCam)的結合用於驗證IL-15/IL-15-RA在經改造類紅血球中的表現。經PE標記的抗4-1BBL抗體(例如經純化抗人類4-1BB配體(CD137L)抗體，BioLegend)的結合用於驗證4-1BBL在經改造類紅血球中的表現。抗體的結合是藉由流式細胞分析技術來測量PE螢光。基於經染色的未轉導細胞設置圈選。 實例 4. 投予經基因工程改造成表現 IL-15/IL-15RA 與 4-1BBL 的去核類紅血球，使得在活體內 NKG2D 陽性淋巴球與 NKG2A 陽性淋巴球的比率增加

為了評估投予經基因工程改造成表現IL-15/IL-15RA與4-1BBL的人類去核類紅血球對人類個體NKG2D陽性淋巴球和NKG2A陽性淋巴球的影響，使用流式細胞分析技術在投予前以及投予後不同時間點從個體取得的全血樣品中測量NKG2D陽性淋巴球和NKG2A陽性淋巴球的含量。

使用以下抗體對全血樣本進行流式細胞分析技術：APC-H7小鼠抗人類CD45殖株2D1 (BD Pharmingen)、PE-Cy7小鼠抗人類CD16殖株B73.1 (BD Biosciences)、PE小鼠抗人類CD56殖株NCAM16.2 (BD Biosciences)、APC小鼠抗人類NKG2D殖株1D11 (BD Biosciences)、BV421小鼠抗人類NKG2A殖株131411 (BD Biosciences)，並用7-胺基放線菌素D (7-AAD) (BD Biosciences)分析存活率。淋巴球是依據散射/單重態/CD45 ⁺(淋巴球)/存活率/CD16 ⁺或CD56 ⁺來定義。NKG2D陽性淋巴球和NKG2A陽性淋巴球是基於透過螢光減一個對照樣品、螢光補償以及量化經驗所確立的圈選而被鑑定為陽性。NKG2D陽性/NKG2A陽性的比率定義為NKG2D陽性淋巴球的百分率除以NKG2A陽性淋巴球的百分率。最大倍數變化是在投予包括IL-15/IL-15RA和4-1BBL的人類去核類紅血球後所有可用時間點的NKG2D陽性/NKG2D陽性比率除以基線(投予前)值的最大結果。

如圖1中所示，投予經基因工程改造以表現IL-15/IL-15RA和4-1BBL的人類去核類紅血球導致人類個體血液中NKG2D陽性淋巴球與NKG2A陽性淋巴球的比率增加。 實例 5. 投予經基因工程改造成表現 IL-15/IL-15RA 與 4-1BBL 的去核類紅血球，使得在 NKG2D 陽性淋巴球， NK 細胞和 CD8+ 記憶 T 細胞增加

新鮮全血中的細胞表面標記是藉由流式細胞分析技術，在用大於或等於1 x 10 ¹⁰個經基因工程改造成表現IL-15/IL-15RA和4-1BBL的人類去核類紅血球治療患者之前和治療期間的多個時間點進行評估。

在治療前基線和第一個給藥週期治療後的4小時、1天、2天、7天和14天以及隨後給藥週期後的治療後2天、7天和14天從患者收集全血。藉由流式細胞分析技術使用標準技術用接合螢光團的抗體對全血進行染色以供分析。使用了多個抗體組，每組都有單獨的試管和流式細胞分析。所有組包括用於識別淋巴球、NK細胞和T細胞群的標記以及活化狀態的標記。所述數據是利用以下組獲得：組1-CD3、CD8、CD16/CD56、CD45、CD45RA、CCR7、HLA-DR和活/死染色；組2-CD3、CD4、Foxp3、CD25、CD127、Ki67、活/死染色；組3-CD45、CD16、CD56、NKG2D、NKp30，和活/死染色。然後分析數據作為已建立母體圈選(parent gate)的百分率的群體頻率(例如，CD45 ⁺CD56 ⁺活淋巴球的%NKG2D ⁺)。在組1的情況下，還根據包括的定量計數對照分析了每個體積血液的定量細胞群數量數據。數據記述為每個感興趣的參數相對於基線觀察到的最大倍數變化(每μL全血的細胞或母群體%)。

圖2A中的數據顯示，投予經基因工程改造以表現IL-15/IL-15RA和4-1BBL的人類去核類紅血球導致表現NKG2D的CD56 ⁺淋巴球百分率增加。

圖2B中的數據顯示，投予經基因工程改造以表現IL-15/IL-15RA和4-1BBL的人類去核類紅血球導致表現NKG2D的CD56 ^dimCD16 ⁺淋巴球的百分率增加。

圖3A中的數據顯示，投予經基因工程改造以表現IL-15/IL-15RA和4-1BBL的人類去核類紅血球導致循環NK細胞的絕對數量增加。

圖3B中的數據顯示，投予經基因工程改造以表現IL-15/IL-15RA和4-1BBL的人類去核類紅血球導致表現顆粒酶B的CD8 ⁺記憶T細胞的百分率增加。

圖4A中的數據顯示，CD4 ⁺T細胞佔總CD3 ⁺T細胞的百分率沒有顯著變化。

圖4B中的數據顯示，CD8 ⁺T細胞佔總CD3 ⁺T細胞的百分率沒有顯著變化。 序列附錄

SEQ ID NO ：	識別符	序列
1	NKG2D (NP_031386.2)	MGWIRGRRSRHSWEMSEFHNYNLDLKKSDFSTRWQKQRCPVVKSKCRENASPFFFCCFIAVAMGIRFIIMVTIWSAVFLNSLFNQEVQIPLTESYCGPCPKNWICYKNNCYQFFDESKNWYESQASCMSQNASLLKVYSKEDQDLLKLVKSYHWMGLVHIPTNGSWQWEDGSILSPNLLTIIEMQKGDCALYASSFKGYIENCSTPNTYICMQRTV
2	NKG2D (編碼NP_031386.2的核酸序列)	ATGGGGTGGATTCGTGGTCGGAGGTCTCGACACAGCTGGGAGATGAGTGAATTTCATAATTATAACTTGGATCTGAAGAAGAGTGATTTTTCAACACGATGGCAAAAGCAAAGATGTCCAGTAGTCAAAAGCAAATGTAGAGAAAATGCATCTCCATTTTTTTTCTGCTGCTTCATCGCTGTAGCCATGGGAATCCGTTTCATTATTATGGTAACAATATGGAGTGCTGTATTCCTAAACTCATTATTCAACCAAGAAGTTCAAATTCCCTTGACCGAAAGTTACTGTGGCCCATGTCCTAAAAACTGGATATGTTACAAAAATAACTGCTACCAATTTTTTGATGAGAGTAAAAACTGGTATGAGAGCCAGGCTTCTTGTATGTCTCAAAATGCCAGCCTTCTGAAAGTATACAGCAAAGAGGACCAGGATTTACTTAAACTGGTGAAGTCATATCATTGGATGGGACTAGTACACATTCCAACAAATGGATCTTGGCAGTGGGAAGATGGCTCCATTCTCTCACCCAACCTACTAACAATAATTGAAATGCAGAAGGGAGACTGTGCACTCTATGCCTCGAGCTTTAAAGGCTATATAGAAAACTGTTCAACTCCAAATACGTACATCTGCATGCAAAGGACTGTGTAA
3	MICA (NP_000238.1)	MGLGPVFLLLAGIFPFAPPGAAA EPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLTEVHLDGQPFLRCDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETKEWTMPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLKSGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICQGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAAAIFVIIIFYVRCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTSDHRDATQLGFQPLMSDLGSTGSTEGA
4	MICA	ATGGGGCTGGGCCCGGTCTTCCTGCTTCTGGCTGGCATCTTCCCTTTTGCACCTCCGGGAGCTGCTGCTGAGCCCCACAGTCTTCGTTATAACCTCACGGTGCTGTCCTGGGATGGATCTGTGCAGTCAGGGTTTCTCACTGAGGTACATCTGGATGGTCAGCCCTTCCTGCGCTGTGACAGGCAGAAATGCAGGGCAAAGCCCCAGGGACAGTGGGCAGAAGATGTCCTGGGAAATAAGACATGGGACAGAGAGACCAGAGACTTGACAGGGAACGGAAAGGACCTCAGGATGACCCTGGCTCATATCAAGGACCAGAAAGAAGGCTTGCATTCCCTCCAGGAGATTAGGGTCTGTGAGATCCATGAAGACAACAGCACCAGGAGCTCCCAGCATTTCTACTACGATGGGGAGCTCTTCCTCTCCCAAAACCTGGAGACTAAGGAATGGACAATGCCCCAGTCCTCCAGAGCTCAGACCTTGGCCATGAACGTCAGGAATTTCTTGAAGGAAGATGCCATGAAGACCAAGACACACTATCACGCTATGCATGCAGACTGCCTGCAGGAACTACGGCGATATCTAAAATCCGGCGTAGTCCTGAGGAGAACAGTGCCCCCCATGGTGAATGTCACCCGCAGCGAGGCCTCAGAGGGCAACATTACCGTGACATGCAGGGCTTCTGGCTTCTATCCCTGGAATATCACACTGAGCTGGCGTCAGGATGGGGTATCTTTGAGCCACGACACCCAGCAGTGGGGGGATGTCCTGCCTGATGGGAATGGAACCTACCAGACCTGGGTGGCCACCAGGATTTGCCAAGGAGAGGAGCAGAGGTTCACCTGCTACATGGAACACAGCGGGAATCACAGCACTCACCCTGTGCCCTCTGGGAAAGTGCTGGTGCTTCAGAGTCATTGGCAGACATTCCATGTTTCTGCTGTTGCTGCTGCTGCTATTTTTGTTATTATTATTTTCTATGTCCGTTGTTGTAAGAAGAAAACATCAGCTGCAGAGGGTCCAGAGCTCGTGAGCCTGCAGGTCCTGGATCAACACCCAGTTGGGACGAGTGACCACAGGGATGCCACACAGCTCGGATTTCAGCCTCTGATGTCAGATCTTGGGTCCACTGGCTCCACTGAGGGCGCCTAG
5	MICA (NP_001170990.1)	MGLGPVFLLLAGIFPFAPPGAAA EPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLAEVHLDGQPFLRYDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRMTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETEEWTVPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLESGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASSFYPRNIILTWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICRGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAGCCYFCYYYFLCPLL
6	MICA (CCDS 56412.1)	ATGGGGCTGGGCCCGGTCTTTCTGCTTCTGGCTGGCATCTTCCCTTTTGCACCTCCGGGAGCTGCTGCTGAGCCCCACAGTCTTCGTTATAACCTCACGGTGCTGTCCTGGGATGGATCTGTGCAGTCAGGGTTTCTTGCTGAGGTACATCTGGATGGTCAGCCCTTCCTGCGCTATGACAGGCAGAAATGCAGGGCAAAGCCCCAGGGACAGTGGGCAGAAGATGTCCTGGGAAATAAGACATGGGACAGAGAGACCAGGGACTTGACAGGGAACGGAAAGGACCTCAGGATGACCCTGGCTCATATCAAGGACCAGAAAGAAGGCTTGCATTCCCTCCAGGAGATTAGGGTCTGTGAGATCCATGAAGACAACAGCACCAGGAGCTCCCAGCATTTCTACTACGATGGGGAGCTCTTCCTCTCCCAAAACCTGGAGACTGAGGAATGGACAGTGCCCCAGTCCTCCAGAGCTCAGACCTTGGCCATGAACGTCAGGAATTTCTTGAAGGAAGATGCCATGAAGACCAAGACACACTATCACGCTATGCATGCAGACTGCCTGCAGGAACTACGGCGATATCTAGAATCCGGCGTAGTCCTGAGGAGAACAGTGCCCCCCATGGTGAATGTCACCCGCAGCGAGGCCTCAGAGGGCAACATCACCGTGACATGCAGGGCTTCCAGCTTCTATCCCCGGAATATCATACTGACCTGGCGTCAGGATGGGGTATCTTTGAGCCACGACACCCAGCAGTGGGGGGATGTCCTGCCTGATGGGAATGGAACCTACCAGACCTGGGTGGCCACCAGGATTTGCCGAGGAGAGGAGCAGAGGTTCACCTGCTACATGGAACACAGCGGGAATCACAGCACTCACCCTGTGCCCTCTGGGAAAGTGCTGGTGCTTCAGAGTCATTGGCAGACATTCCATGTTTCTGCTGTTGCTGCTGGCTGCTGCTATTTTTGTTATTATTATTTTCTATGTCCGTTGTTGTAA
7	MICA (NP_001276081.1)	MTLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETEEWTVPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLESGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASSFYPRNIILTWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICRGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAGCCYFCYYYFLCPLL
8	MICA (CCDS75421.1)	ATGACCCTGGCTCATATCAAGGACCAGAAAGAAGGCTTGCATTCCCTCCAGGAGATTAGGGTCTGTGAGATCCATGAAGACAACAGCACCAGGAGCTCCCAGCATTTCTACTACGATGGGGAGCTCTTCCTCTCCCAAAACCTGGAGACTGAGGAATGGACAGTGCCCCAGTCCTCCAGAGCTCAGACCTTGGCCATGAACGTCAGGAATTTCTTGAAGGAAGATGCCATGAAGACCAAGACACACTATCACGCTATGCATGCAGACTGCCTGCAGGAACTACGGCGATATCTAGAATCCGGCGTAGTCCTGAGGAGAACAGTGCCCCCCATGGTGAATGTCACCCGCAGCGAGGCCTCAGAGGGCAACATCACCGTGACATGCAGGGCTTCCAGCTTCTATCCCCGGAATATCATACTGACCTGGCGTCAGGATGGGGTATCTTTGAGCCACGACACCCAGCAGTGGGGGGATGTCCTGCCTGATGGGAATGGAACCTACCAGACCTGGGTGGCCACCAGGATTTGCCGAGGAGAGGAGCAGAGGTTCACCTGCTACATGGAACACAGCGGGAATCACAGCACTCACCCTGTGCCCTCTGGGAAAGTGCTGGTGCTTCAGAGTCATTGGCAGACATTCCATGTTTCTGCTGTTGCTGCTGGCTGCTGCTATTTTTGTTATTATTATTTTCTATGTCCGTTGTTGTAA
9	MICA (NP_001276083.1)	MGQRDQGLDRERKGPQDDPGSYQGPERRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLESGVVLRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASSFYPRNIILTWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICRGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVLQSHWQTFHVSAVAAGCCYFCYYYFLCPLL
10	MICA	ATGGGACAGAGAGACCAGGGACTTGACAGGGAACGGAAAGGACCTCAGGATGACCCTGGCTCATATCAAGGACCAGAAAGAAGGAATTTCTTGAAGGAAGATGCCATGAAGACCAAGACACACTATCACGCTATGCATGCAGACTGCCTGCAGGAACTACGGCGATATCTAGAATCCGGCGTAGTCCTGAGGAGAACAGTGCCCCCCATGGTGAATGTCACCCGCAGCGAGGCCTCAGAGGGCAACATCACCGTGACATGCAGGGCTTCCAGCTTCTATCCCCGGAATATCATACTGACCTGGCGTCAGGATGGGGTATCTTTGAGCCACGACACCCAGCAGTGGGGGGATGTCCTGCCTGATGGGAATGGAACCTACCAGACCTGGGTGGCCACCAGGATTTGCCGAGGAGAGGAGCAGAGGTTCACCTGCTACATGGAACACAGCGGGAATCACAGCACTCACCCTGTGCCCTCTGGGAAAGTGCTGGTGCTTCAGAGTCATTGGCAGACATTCCATGTTTCTGCTGTTGCTGCTGGCTGCTGCTATTTTTGTTATTATTATTTTCTATGTCCGTTGTTGTAA
11	MICB (NP_001276089.1)	MVLSQDGSVQSGFLAEGHLDGQPFLRYDRQKRRAKPQGQWAENVLGAKTWDTETEDLTENGQDLRRTLTHIKDQKGGLHSLQEIRVCEIHEDSSTRGSRHFYYDGELFLSQNLETQESTVPQSSRAQTLAMNVTNFWKEDAMKTKTHYRAMQADCLQKLQRYLKSGVAIRRTVPPMVNVTCSEVSEGNITVTCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHNTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRIRQGEEQRFTCYMEHSGNHGTHPVPSGKALVLQSQRTDFPYVSAAMPCFVIIIILCVPCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTGDHRDAAQLGFQPLMSATGSTGSTEGT
12	MICB (CCDS75423.1)	ATGGTGCTGTCCCAGGATGGATCTGTGCAGTCAGGGTTTCTCGCTGAGGGACATCTGGATGGTCAGCCCTTCCTGCGCTATGACAGGCAGAAACGCAGGGCAAAGCCCCAGGGACAGTGGGCAGAAAATGTCCTGGGAGCTAAGACCTGGGACACAGAGACCGAGGACTTGACAGAGAATGGGCAAGACCTCAGGAGGACCCTGACTCATATCAAGGACCAGAAAGGAGGCTTGCATTCCCTCCAGGAGATTAGGGTCTGTGAGATCCATGAAGACAGCAGCACCAGGGGCTCCCGGCATTTCTACTACGATGGGGAGCTCTTCCTCTCCCAAAACCTGGAGACTCAAGAATCGACAGTGCCCCAGTCCTCCAGAGCTCAGACCTTGGCTATGAACGTCACAAATTTCTGGAAGGAAGATGCCATGAAGACCAAGACACACTATCGCGCTATGCAGGCAGACTGCCTGCAGAAACTACAGCGATATCTGAAATCCGGGGTGGCCATCAGGAGAACAGTGCCCCCCATGGTGAATGTCACCTGCAGCGAGGTCTCAGAGGGCAACATCACCGTGACATGCAGGGCTTCCAGCTTCTATCCCCGGAATATCACACTGACCTGGCGTCAGGATGGGGTATCTTTGAGCCACAACACCCAGCAGTGGGGGGATGTCCTGCCTGATGGGAATGGAACCTACCAGACCTGGGTGGCCACCAGGATTCGCCAAGGAGAGGAGCAGAGGTTCACCTGCTACATGGAACACAGCGGGAATCACGGCACTCACCCTGTGCCCTCTGGGAAGGCGCTGGTGCTTCAGAGTCAACGGACAGACTTTCCATATGTTTCTGCTGCTATGCCATGTTTTGTTATTATTATTATTCTCTGTGTCCCTTGTTGCAAGAAGAAAACATCAGCGGCAGAGGGTCCAGAGCTTGTGAGCCTGCAGGTCCTGGATCAACACCCAGTTGGGACAGGAGACCACAGGGATGCAGCACAGCTGGGATTTCAGCCTCTGATGTCAGCTACTGGGTCCACTGGTTCCACTGAGGGCACCTAG
13	MICB (NP_001276090.1)	MGLGRVLLFLAVAFPFAPPAAAAEPHSLRYNLMVLSQDGSVQSGFLAEGHLDGQPFLRYDRQKRRAKPQGQWAENVLGAKTWDTETEDLTENGQDLRRTLTHIKDQKGVPQSSRAQTLAMNVTNFWKEDAMKTKTHYRAMQADCLQKLQRYLKSGVAIRRTVPPMVNVTCSEVSEGNITVTCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHNTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRIRQGEEQRFTCYMEHSGNHGTHPVPSGKALVLQSQRTDFPYVSAAMPCFVIIIILCVPCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTGDHRDAAQLGFQPLMSATGSTGSTEGT
14	MICB (CCDS75422.1)	ATGGGGCTGGGCCGGGTCCTGCTGTTTCTGGCCGTCGCCTTCCCTTTTGCACCCCCGGCAGCCGCCGCTGAGCCCCACAGTCTTCGTTACAACCTCATGGTGCTGTCCCAGGATGGATCTGTGCAGTCAGGGTTTCTCGCTGAGGGACATCTGGATGGTCAGCCCTTCCTGCGCTATGACAGGCAGAAACGCAGGGCAAAGCCCCAGGGACAGTGGGCAGAAAATGTCCTGGGAGCTAAGACCTGGGACACAGAGACCGAGGACTTGACAGAGAATGGGCAAGACCTCAGGAGGACCCTGACTCATATCAAGGACCAGAAAGGAGTGCCCCAGTCCTCCAGAGCTCAGACCTTGGCTATGAACGTCACAAATTTCTGGAAGGAAGATGCCATGAAGACCAAGACACACTATCGCGCTATGCAGGCAGACTGCCTGCAGAAACTACAGCGATATCTGAAATCCGGGGTGGCCATCAGGAGAACAGTGCCCCCCATGGTGAATGTCACCTGCAGCGAGGTCTCAGAGGGCAACATCACCGTGACATGCAGGGCTTCCAGCTTCTATCCCCGGAATATCACACTGACCTGGCGTCAGGATGGGGTATCTTTGAGCCACAACACCCAGCAGTGGGGGGATGTCCTGCCTGATGGGAATGGAACCTACCAGACCTGGGTGGCCACCAGGATTCGCCAAGGAGAGGAGCAGAGGTTCACCTGCTACATGGAACACAGCGGGAATCACGGCACTCACCCTGTGCCCTCTGGGAAGGCGCTGGTGCTTCAGAGTCAACGGACAGACTTTCCATATGTTTCTGCTGCTATGCCATGTTTTGTTATTATTATTATTCTCTGTGTCCCTTGTTGCAAGAAGAAAACATCAGCGGCAGAGGGTCCAGAGCTTGTGAGCCTGCAGGTCCTGGATCAACACCCAGTTGGGACAGGAGACCACAGGGATGCAGCACAGCTGGGATTTCAGCCTCTGATGTCAGCTACTGGGTCCACTGGTTCCACTGAGGGCACCTAG
15	MICB (NP_005922.2)	MGLGRVLLFLAVAFPFAPPAAA AEPHSLRYNLMVLSQDGSVQSGFLAEGHLDGQPFLRYDRQKRRAKPQGQWAENVLGAKTWDTETEDLTENGQDLRRTLTHIKDQKGGLHSLQEIRVCEIHEDSSTRGSRHFYYDGELFLSQNLETQESTVPQSSRAQTLAMNVTNFWKEDAMKTKTHYRAMQADCLQKLQRYLKSGVAIRRTVPPMVNVTCSEVSEGNITVTCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHNTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRIRQGEEQRFTCYMEHSGNHGTHPVPSGKALVLQSQRTDFPYVSAAMPCFVIIIILCVPCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTGDHRDAAQLGFQPLMSATGSTGSTEGT
16	MICB (CCDS43449.1)	ATGGGGCTGGGCCGGGTCCTGCTGTTTCTGGCCGTCGCCTTCCCTTTTGCACCCCCGGCAGCCGCCGCTGAGCCCCACAGTCTTCGTTACAACCTCATGGTGCTGTCCCAGGATGGATCTGTGCAGTCAGGGTTTCTCGCTGAGGGACATCTGGATGGTCAGCCCTTCCTGCGCTATGACAGGCAGAAACGCAGGGCAAAGCCCCAGGGACAGTGGGCAGAAAATGTCCTGGGAGCTAAGACCTGGGACACAGAGACCGAGGACTTGACAGAGAATGGGCAAGACCTCAGGAGGACCCTGACTCATATCAAGGACCAGAAAGGAGGCTTGCATTCCCTCCAGGAGATTAGGGTCTGTGAGATCCATGAAGACAGCAGCACCAGGGGCTCCCGGCATTTCTACTACGATGGGGAGCTCTTCCTCTCCCAAAACCTGGAGACTCAAGAATCGACAGTGCCCCAGTCCTCCAGAGCTCAGACCTTGGCTATGAACGTCACAAATTTCTGGAAGGAAGATGCCATGAAGACCAAGACACACTATCGCGCTATGCAGGCAGACTGCCTGCAGAAACTACAGCGATATCTGAAATCCGGGGTGGCCATCAGGAGAACAGTGCCCCCCATGGTGAATGTCACCTGCAGCGAGGTCTCAGAGGGCAACATCACCGTGACATGCAGGGCTTCCAGCTTCTATCCCCGGAATATCACACTGACCTGGCGTCAGGATGGGGTATCTTTGAGCCACAACACCCAGCAGTGGGGGGATGTCCTGCCTGATGGGAATGGAACCTACCAGACCTGGGTGGCCACCAGGATTCGCCAAGGAGAGGAGCAGAGGTTCACCTGCTACATGGAACACAGCGGGAATCACGGCACTCACCCTGTGCCCTCTGGGAAGGCGCTGGTGCTTCAGAGTCAACGGACAGACTTTCCATATGTTTCTGCTGCTATGCCATGTTTTGTTATTATTATTATTCTCTGTGTCCCTTGTTGCAAGAAGAAAACATCAGCGGCAGAGGGTCCAGAGCTTGTGAGCCTGCAGGTCCTGGATCAACACCCAGTTGGGACAGGAGACCACAGGGATGCAGCACAGCTGGGATTTCAGCCTCTGATGTCAGCTACTGGGTCCACTGGTTCCACTGAGGGCACCTAG
17	NKG2A (NP 002250.2)多肽	MDNQGVIYSDLNLPPNPKRQQRKPKGNKNSILATEQEITYAELNLQKASQDFQGNDKTYHCKDLPSAPEKLIVGILGIICLILMASVVTIVVIPSTLIQRHNNSSLNTRTQKARHCGHCPEEWITYSNSCYYIGKERRTWEESLLACTSKNSSLLSIDNEEEMKFLSIISPSSWIGVFRNSSHHPWVTMNGLAFKHEIKDSDNAELNCAVLQVNRLKSAQCGSSIIYHCKHKL
18	編碼SEQ ID NO：17的核酸序列	ATGGATAACCAAGGAGTAATCTACTCAGACCTGAATCTGCCCCCAAACCCAAAGAGGCAGCAACGAAAACCTAAAGGCAATAAAAACTCCATTTTAGCAACTGAACAGGAAATAACCTATGCGGAATTAAACCTTCAAAAAGCTTCTCAGGATTTTCAAGGGAATGACAAAACCTATCACTGCAAAGATTTACCATCAGCTCCAGAGAAGCTCATTGTTGGGATCCTGGGAATTATCTGTCTTATCTTAATGGCCTCTGTGGTAACGATAGTTGTTATTCCCTCTACATTAATACAGAGGCACAACAATTCTTCCCTGAATACAAGAACTCAGAAAGCACGTCATTGTGGCCATTGTCCTGAGGAGTGGATTACATATTCCAACAGTTGTTACTACATTGGTAAGGAAAGAAGAACTTGGGAAGAGAGTTTGCTGGCCTGTACTTCGAAGAACTCCAGTCTGCTTTCTATAGATAATGAAGAAGAAATGAAATTTCTGTCCATCATTTCACCATCCTCATGGATTGGTGTGTTTCGTAACAGCAGTCATCATCCATGGGTGACAATGAATGGTTTGGCTTTCAAACATGAGATAAAAGACTCAGATAATGCTGAACTTAACTGTGCAGTGCTACAAGTAAATCGACTTAAATCAGCCCAGTGTGGATCTTCAATAATATATCATTGTAAGCATAAGCTTTAG
19	NKG2A (NP_998823.1)多肽	MDNQGVIYSDLNLPPNPKRQQRKPKGNKSSILATEQEITYAELNLQKASQDFQGNDKTYHCKDLPSAPEKLIVGILGIICLILMASVVTIVVIPSTLIQRHNNSSLNTRTQKARHCGHCPEEWITYSNSCYYIGKERRTWEESLLACTSKNSSLLSIDNEEEMKFLSIISPSSWIGVFRNSSHHPWVTMNGLAFKHEIKDSDNAELNCAVLQVNRLKSAQCGSSIIYHCKHKL
20	編碼SEQ ID NO：19的核酸序列	ATGGATAACCAAGGAGTAATCTACTCAGACCTGAATCTGCCCCCAAACCCAAAGAGGCAGCAACGAAAACCTAAAGGCAATAAAAACTCCATTTTAGCAACTGAACAGGAAATAACCTATGCGGAATTAAACCTTCAAAAAGCTTCTCAGGATTTTCAAGGGAATGACAAAACCTATCACTGCAAAGATTTACCATCAGCTCCAGAGAAGCTCATTGTTGGGATCCTGGGAATTATCTGTCTTATCTTAATGGCCTCTGTGGTAACGATAGTTGTTATTCCCTCTACATTAATACAGAGGCACAACAATTCTTCCCTGAATACAAGAACTCAGAAAGCACGTCATTGTGGCCATTGTCCTGAGGAGTGGATTACATATTCCAACAGTTGTTACTACATTGGTAAGGAAAGAAGAACTTGGGAAGAGAGTTTGCTGGCCTGTACTTCGAAGAACTCCAGTCTGCTTTCTATAGATAATGAAGAAGAAATGAAATTTCTGTCCATCATTTCACCATCCTCATGGATTGGTGTGTTTCGTAACAGCAGTCATCATCCATGGGTGACAATGAATGGTTTGGCTTTCAAACATGAGATAAAAGACTCAGATAATGCTGAACTTAACTGTGCAGTGCTACAAGTAAATCGACTTAAATCAGCCCAGTGTGGATCTTCAATAATATATCATTGTAAGCATAAGCTTTAG
21	HLA-E (NP 005507.3)多肽	MVDGTLLLLLSEALALTQTWAGSHSLKYFHTSVSRPGRGEPRFISVGYVDDTQFVRFDNDAASPRMVPRAPWMEQEGSEYWDRETRSARDTAQIFRVNLRTLRGYYNQSEAGSHTLQWMHGCELGPDGRFLRGYEQFAYDGKDYLTLNEDLRSWTAVDTAAQISEQKSNDASEAEHQRAYLEDTCVEWLHKYLEKGKETLLHLEPPKTHVTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQQDGEGHTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPEPVTLRWKPASQPTIPIVGIIAGLVLLGSVVSGAVVAAVIWRKKSSGGKGGSYSKAEWSDSAQGSESHSL
22	編碼SEQ ID NO：21的核酸序列	ATGGTAGATGGAACCCTCCTTTTACTCCTCTCGGAGGCCCTGGCCCTTACCCAGACCTGGGCGGGCTCCCACTCCTTGAAGTATTTCCACACTTCCGTGTCCCGGCCCGGCCGCGGGGAGCCCCGCTTCATCTCTGTGGGCTACGTGGACGACACCCAGTTCGTGCGCTTCGACAACGACGCCGCGAGTCCGAGGATGGTGCCGCGGGCGCCGTGGATGGAGCAGGAGGGGTCAGAGTATTGGGACCGGGAGACACGGAGCGCCAGGGACACCGCACAGATTTTCCGAGTGAATCTGCGGACGCTGCGCGGCTACTACAATCAGAGCGAGGCCGGGTCTCACACCCTGCAGTGGATGCATGGCTGCGAGCTGGGGCCCGACGGGCGCTTCCTCCGCGGGTATGAACAGTTCGCCTACGACGGCAAGGATTATCTCACCCTGAATGAGGACCTGCGCTCCTGGACCGCGGTGGACACGGCGGCTCAGATCTCCGAGCAAAAGTCAAATGATGCCTCTGAGGCGGAGCACCAGAGAGCCTACCTGGAAGACACATGCGTGGAGTGGCTCCACAAATACCTGGAGAAGGGGAAGGAGACGCTGCTTCACCTGGAGCCCCCAAAGACACACGTGACTCACCACCCCATCTCTGACCATGAGGCCACCCTGAGGTGCTGGGCCCTGGGCTTCTACCCTGCGGAGATCACACTGACCTGGCAGCAGGATGGGGAGGGCCATACCCAGGACACGGAGCTCGTGGAGACCAGGCCTGCAGGGGATGGAACCTTCCAGAAGTGGGCAGCTGTGGTGGTGCCTTCTGGAGAGGAGCAGAGATACACGTGCCATGTGCAGCATGAGGGGCTACCCGAGCCCGTCACCCTGAGATGGAAGCCGGCTTCCCAGCCCACCATCCCCATCGTGGGCATCATTGCTGGCCTGGTTCTCCTTGGATCTGTGGTCTCTGGAGCTGTGGTTGCTGCTGTGATATGGAGGAAGAAGAGCTCAGGTGGAAAAGGAGGGAGCTACTCTAAGGCTGAGTGGAGCGACAGTGCCCAGGGGTCTGAGTCTCACAGCTTGTAA
23	未成熟人類IL-15	MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
24	成熟人類IL-15	NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
25	編碼成熟人類IL-15 (編碼SEQ ID NO：24) 的核酸序列	AACTGGGTGAACGTTATTAGTGACCTTAAAAAGATCGAAGATTTGATACAGTCAATGCACATAGACGCGACGCTTTATACAGAATCTGATGTACATCCTTCATGCAAGGTTACTGCTATGAAGTGTTTTCTTCTCGAACTCCAAGTAATAAGTCTTGAGAGCGGAGATGCGAGCATTCATGACACCGTTGAGAATCTTATTATATTGGCTAACAACTCTCTGTCCAGCAATGGTAATGTGACAGAAAGCGGGTGTAAGGAGTGCGAGGAACTCGAGGAGAAGAACATCAAAGAGTTCTTGCAGTCTTTCGTCCATATTGTCCAGATGTTCATAAATACTAGC
26	編碼成熟人類IL-15 (編碼SEQ ID NO：24)的核酸序列	AACTGGGTAAACGTCATAAGCGACCTCAAAAAGATCGAGGACCTTATACAGTCTATGCACATAGATGCGACACTTTACACGGAATCAGACGTGCACCCGTCCTGCAAAGTCACAGCCATGAAGTGCTTTCTTCTCGAACTGCAGGTAATTTCTCTCGAATCAGGTGACGCATCTATCCACGACACAGTTGAAAATCTTATTATCCTGGCTAATAACTCCCTTAGCTCAAACGGCAATGTCACCGAGAGTGGATGTAAAGAATGTGAGGAACTTGAAGAGAAAAACATAAAGGAATTCTTGCAGAGTTTCGTTCATATTGTGCAAATGTTCATCAATACTAGT
27	未成熟全長人類IL-15受體α	MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVE MEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL
28	成熟全長人類IL-15受體α	ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL
29	未成熟細胞外人類IL-15受體α	MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTT
30	成熟細胞外人類IL-15受體α	ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTT
31	編碼SEQ ID NO：30 (成熟細胞外人類IL-15受體α)的核酸序列	ATCACATGCCCACCGCCCATGTCTGTTGAACACGCAGACATTTGGGTTAAAAGTTACTCACTTTACTCACGCGAGAGATATATATGCAACAGCGGCTTCAAGCGCAAAGCAGGCACTAGTAGTCTTACAGAGTGCGTGCTCAATAAAGCTACAAATGTAGCTCATTGGACTACTCCTAGTCTCAAATGCATTCGGGACCCCGCGCTTGTGCACCAGAGACCTGCGCCGCCGTCCACAGTGACGACAGCTGGTGTAACCCCCCAACCTGAATCCCTTAGTCCGTCTGGTAAAGAACCGGCGGCGTCTTCACCTTCCAGCAATAATACTGCGGCGACAACAGCCGCGATAGTTCCTGGATCCCAACTCATGCCGTCAAAGTCTCCTTCAACGGGAACGACAGAGATCTCTTCACATGAAAGTTCTCATGGAACACCGAGCCAAACTACGGCAAAGAACTGGGAACTGACTGCCTCAGCAAGCCACCAGCCGCCAGGGGTGTACCCGCAAGGGCACTCAGATACTACT
32	人類IL-15受體sushi結構域	ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR
33	人類IL-15受體sushi結構域 + IL-15受體α的13個aa	ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPS
34	編碼SEQ ID NO：33的核酸序列	ATCACCTGCCCGCCTCCCATGAGCGTGGAACACGCGGACATTTGGGTTAAGAGCTACAGTCTTTACAGCCGGGAGCGCTATATCTGCAACTCAGGGTTTAAGCGGAAAGCAGGGACATCAAGTTTGACAGAATGTGTGTTGAACAAGGCTACAAATGTTGCTCACTGGACCACGCCATCTTTGAAGTGTATCCGAGATCCCGCGCTTGTCCATCAGCGCCCAGCGCCTCCCTCC
35	GPA訊號肽	MYGKIIFVLLLSEIVSISA
36	編碼SEQ ID NO: 35的核酸序列	ATGTATGGAAAAATAATCTTTGTATTACTATTGTCAGAAATTGTGAGCATATCAGCA
37	連接子	GGGGSGGGGSGGGGS
38	(GGGGS)n	(GGGGS)n，其中n為1、2、3、4、5、6、7、8、9，或10
39	成熟人類IL-15 + (G4S)3連接子 + 成熟細胞外可溶性人類IL-15受體α	NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTT
40	編碼SEQ ID NO：39的核酸序列	AACTGGGTGAACGTTATTAGTGACCTTAAAAAGATCGAAGATTTGATACAGTCAATGCACATAGACGCGACGCTTTATACAGAATCTGATGTACATCCTTCATGCAAGGTTACTGCTATGAAGTGTTTTCTTCTCGAACTCCAAGTAATAAGTCTTGAGAGCGGAGATGCGAGCATTCATGACACCGTTGAGAATCTTATTATATTGGCTAACAACTCTCTGTCCAGCAATGGTAATGTGACAGAAAGCGGGTGTAAGGAGTGCGAGGAACTCGAGGAGAAGAACATCAAAGAGTTCTTGCAGTCTTTCGTCCATATTGTCCAGATGTTCATAAATACTAGCGGGGGAGGTGGCTCTGGTGGAGGCGGGAGTGGCGGGGGCGGCTCAATCACATGCCCACCGCCCATGTCTGTTGAACACGCAGACATTTGGGTTAAAAGTTACTCACTTTACTCACGCGAGAGATATATATGCAACAGCGGCTTCAAGCGCAAAGCAGGCACTAGTAGTCTTACAGAGTGCGTGCTCAATAAAGCTACAAATGTAGCTCATTGGACTACTCCTAGTCTCAAATGCATTCGGGACCCCGCGCTTGTGCACCAGAGACCTGCGCCGCCGTCCACAGTGACGACAGCTGGTGTAACCCCCCAACCTGAATCCCTTAGTCCGTCTGGTAAAGAACCGGCGGCGTCTTCACCTTCCAGCAATAATACTGCGGCGACAACAGCCGCGATAGTTCCTGGATCCCAACTCATGCCGTCAAAGTCTCCTTCAACGGGAACGACAGAGATCTCTTCACATGAAAGTTCTCATGGAACACCGAGCCAAACTACGGCAAAGAACTGGGAACTGACTGCCTCAGCAAGCCACCAGCCGCCAGGGGTGTACCCGCAAGGGCACTCAGATACTACT
41	成熟人類IL-15 + (G4S)3連接子 + IL-15受體α sushi結構域 + IL-15受體α的13個aa	NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPS
42	編碼SEQ ID NO：41的核酸序列	AACTGGGTAAACGTCATAAGCGACCTCAAAAAGATCGAGGACCTTATACAGTCTATGCACATAGATGCGACACTTTACACGGAATCAGACGTGCACCCGTCCTGCAAAGTCACAGCCATGAAGTGCTTTCTTCTCGAACTGCAGGTAATTTCTCTCGAATCAGGTGACGCATCTATCCACGACACAGTTGAAAATCTTATTATCCTGGCTAATAACTCCCTTAGCTCAAACGGCAATGTCACCGAGAGTGGATGTAAAGAATGTGAGGAACTTGAAGAGAAAAACATAAAGGAATTCTTGCAGAGTTTCGTTCATATTGTGCAAATGTTCATCAATACTAGTGGCGGGGGGGGAAGCGGTGGTGGAGGGAGCGGGGGTGGTGGATCCATCACCTGCCCGCCTCCCATGAGCGTGGAACACGCGGACATTTGGGTTAAGAGCTACAGTCTTTACAGCCGGGAGCGCTATATCTGCAACTCAGGGTTTAAGCGGAAAGCAGGGACATCAAGTTTGACAGAATGTGTGTTGAACAAGGCTACAAATGTTGCTCACTGGACCACGCCATCTTTGAAGTGTATCCGAGATCCCGCGCTTGTCCATCAGCGCCCAGCGCCTCCCTCC
43	連接子	GGSGGSGGGGGSGGGSGGGSGGGS
44	GPA多肽	LSTTEVAMHTSTSSSVTKSYISSQTNDTHKRDTYAATPRAHEVSEISVRTVYPPEEETGERVQLAHHFSEPEITLIIFGVMAGVIGTILLISYGIRRLIKKSPSDVKPLPSPDTDVPLSSVEIENPETSDQ
45	編碼SEQ ID NO：44的核酸序列	TTAAGTACCACTGAGGTGGCAATGCACACTTCAACCTCTTCTTCAGTCACAAAGAGTTACATCTCATCACAGACAAATGATACGCACAAACGGGACACATATGCAGCCACTCCTAGAGCTCATGAAGTTTCAGAAATTTCTGTTAGAACTGTTTACCCTCCAGAAGAGGAAACCGGAGAAAGGGTACAACTTGCCCATCATTTCTCTGAACCAGAGATAACACTCATTATTTTTGGGGTGATGGCTGGTGTTATTGGAACGATCCTCTTAATTTCTTACGGTATTCGCCGACTGATAAAGAAAAGCCCATCTGATGTAAAACCTCTCCCCTCACCTGACACAGACGTGCCTTTAAGTTCTGTTGAAATAGAAAATCCAGAGACAAGTGATCAA
46	IL-15 V3構建體	MYGKIIFVLLLSEIVSISANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGSGGSGGYPYDVPDYAGGGSGGGSLSTTEVAMHTSTSSSVTKSYISSQTNDTHKRDTYAATPRAHEVSEISVRTVYPPEEETGERVQLAHHFSEPEITLIIFGVMAGVIGTILLISYGIRRLIKKSPSDVKPLPSPDTDVPLSSVEIENPETSDQ
47	編碼SEQ ID NO：46 (IL-15 V3)的核酸序列	ATGTATGGAAAAATAATCTTTGTATTACTATTGTCAGAAATTGTGAGCATATCAGCAAACTGGGTAAATGTGATTTCAGACCTGAAAAAAATCGAAGACCTTATTCAATCCATGCACATCGACGCGACACTTTATACTGAATCAGACGTACACCCGTCCTGTAAGGTTACTGCGATGAAGTGCTTTCTGTTGGAATTGCAAGTGATCTCCCTCGAATCAGGGGATGCATCCATTCATGATACCGTCGAGAATTTGATCATTCTGGCAAATAACTCCCTCAGTAGTAACGGGAATGTGACCGAGTCTGGGTGTAAGGAGTGCGAAGAGTTGGAGGAAAAGAATATCAAAGAATTCCTTCAGTCCTTTGTTCACATCGTGCAAATGTTTATTAATACATCTGGAGGATCTGGCGGGTCTGGAGGCTACCCCTATGACGTGCCCGACTATGCCGGCGGAGGGTCTGGAGGCGGTTCCTTAAGTACCACTGAGGTGGCAATGCACACTTCAACCTCTTCTTCAGTCACAAAGAGTTACATCTCATCACAGACAAATGATACGCACAAACGGGACACATATGCAGCCACTCCTAGAGCTCATGAAGTTTCAGAAATTTCTGTTAGAACTGTTTACCCTCCAGAAGAGGAAACCGGAGAAAGGGTACAACTTGCCCATCATTTCTCTGAACCAGAGATAACACTCATTATTTTTGGGGTGATGGCTGGTGTTATTGGAACGATCCTCTTAATTTCTTACGGTATTCGCCGACTGATAAAGAAAAGCCCATCTGATGTAAAACCTCTCCCCTCACCTGACACAGACGTGCCTTTAAGTTCTGTTGAAATAGAAAATCCAGAGACAAGTGATCAA
48	IL-15/IL-15Ra V4構建體	MYGKIIFVLLLSEIVSISANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTGGSGGSGGYPYDVPDYAGGGSGGGSLSTTEVAMHTSTSSSVTKSYISSQTNDTHKRDTYAATPRAHEVSEISVRTVYPPEEETGERVQLAHHFSEPEITLIIFGVMAGVIGTILLISYGIRRLIKKSPSDVKPLPSPDTDVPLSSVEIENPETSDQ
49	編碼SEQ ID NO：48 (IL-15-V4)的核酸序列	ATGTATGGAAAAATAATCTTTGTATTACTATTGTCAGAAATTGTGAGCATATCAGCAAACTGGGTGAACGTTATTAGTGACCTTAAAAAGATCGAAGATTTGATACAGTCAATGCACATAGACGCGACGCTTTATACAGAATCTGATGTACATCCTTCATGCAAGGTTACTGCTATGAAGTGTTTTCTTCTCGAACTCCAAGTAATAAGTCTTGAGAGCGGAGATGCGAGCATTCATGACACCGTTGAGAATCTTATTATATTGGCTAACAACTCTCTGTCCAGCAATGGTAATGTGACAGAAAGCGGGTGTAAGGAGTGCGAGGAACTCGAGGAGAAGAACATCAAAGAGTTCTTGCAGTCTTTCGTCCATATTGTCCAGATGTTCATAAATACTAGCGGGGGAGGTGGCTCTGGTGGAGGCGGGAGTGGCGGGGGCGGCTCAATCACATGCCCACCGCCCATGTCTGTTGAACACGCAGACATTTGGGTTAAAAGTTACTCACTTTACTCACGCGAGAGATATATATGCAACAGCGGCTTCAAGCGCAAAGCAGGCACTAGTAGTCTTACAGAGTGCGTGCTCAATAAAGCTACAAATGTAGCTCATTGGACTACTCCTAGTCTCAAATGCATTCGGGACCCCGCGCTTGTGCACCAGAGACCTGCGCCGCCGTCCACAGTGACGACAGCTGGTGTAACCCCCCAACCTGAATCCCTTAGTCCGTCTGGTAAAGAACCGGCGGCGTCTTCACCTTCCAGCAATAATACTGCGGCGACAACAGCCGCGATAGTTCCTGGATCCCAACTCATGCCGTCAAAGTCTCCTTCAACGGGAACGACAGAGATCTCTTCACATGAAAGTTCTCATGGAACACCGAGCCAAACTACGGCAAAGAACTGGGAACTGACTGCCTCAGCAAGCCACCAGCCGCCAGGGGTGTACCCGCAAGGGCACTCAGATACTACTGGAGGATCTGGCGGGTCTGGAGGCTACCCCTATGACGTGCCCGACTATGCCGGCGGAGGGTCTGGAGGCGGTTCCTTAAGTACCACTGAGGTGGCAATGCACACTTCAACCTCTTCTTCAGTCACAAAGAGTTACATCTCATCACAGACAAATGATACGCACAAACGGGACACATATGCAGCCACTCCTAGAGCTCATGAAGTTTCAGAAATTTCTGTTAGAACTGTTTACCCTCCAGAAGAGGAAACCGGAGAAAGGGTACAACTTGCCCATCATTTCTCTGAACCAGAGATAACACTCATTATTTTTGGGGTGATGGCTGGTGTTATTGGAACGATCCTCTTAATTTCTTACGGTATTCGCCGACTGATAAAGAAAAGCCCATCTGATGTAAAACCTCTCCCCTCACCTGACACAGACGTGCCTTTAAGTTCTGTTGAAATAGAAAATCCAGAGACAAGTGATCAA
50	IL-15/IL-15Ra V5	MYGKIIFVLLLSEIVSISANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSGGSGGSGGYPYDVPDYAGGGSGGGSLSTTEVAMHTSTSSSVTKSYISSQTNDTHKRDTYAATPRAHEVSEISVRTVYPPEEETGERVQLAHHFSEPEITLIIFGVMAGVIGTILLISYGIRRLIKKSPSDVKPLPSPDTDVPLSSVEIENPETSDQ
51	編碼SEQ ID NO：50 (IL-15 V5)的核酸序列	ATGTATGGAAAAATAATCTTTGTATTACTATTGTCAGAAATTGTGAGCATATCAGCAAACTGGGTAAACGTCATAAGCGACCTCAAAAAGATCGAGGACCTTATACAGTCTATGCACATAGATGCGACACTTTACACGGAATCAGACGTGCACCCGTCCTGCAAAGTCACAGCCATGAAGTGCTTTCTTCTCGAACTGCAGGTAATTTCTCTCGAATCAGGTGACGCATCTATCCACGACACAGTTGAAAATCTTATTATCCTGGCTAATAACTCCCTTAGCTCAAACGGCAATGTCACCGAGAGTGGATGTAAAGAATGTGAGGAACTTGAAGAGAAAAACATAAAGGAATTCTTGCAGAGTTTCGTTCATATTGTGCAAATGTTCATCAATACTAGTGGCGGGGGGGGAAGCGGTGGTGGAGGGAGCGGGGGTGGTGGATCCATCACCTGCCCGCCTCCCATGAGCGTGGAACACGCGGACATTTGGGTTAAGAGCTACAGTCTTTACAGCCGGGAGCGCTATATCTGCAACTCAGGGTTTAAGCGGAAAGCAGGGACATCAAGTTTGACAGAATGTGTGTTGAACAAGGCTACAAATGTTGCTCACTGGACCACGCCATCTTTGAAGTGTATCCGAGATCCCGCGCTTGTCCATCAGCGCCCAGCGCCTCCCTCCGGAGGATCTGGCGGGTCTGGAGGCTACCCCTATGACGTGCCCGACTATGCCGGCGGAGGGTCTGGAGGCGGTTCCTTAAGTACCACTGAGGTGGCAATGCACACTTCAACCTCTTCTTCAGTCACAAAGAGTTACATCTCATCACAGACAAATGATACGCACAAACGGGACACATATGCAGCCACTCCTAGAGCTCATGAAGTTTCAGAAATTTCTGTTAGAACTGTTTACCCTCCAGAAGAGGAAACCGGAGAAAGGGTACAACTTGCCCATCATTTCTCTGAACCAGAGATAACACTCATTATTTTTGGGGTGATGGCTGGTGTTATTGGAACGATCCTCTTAATTTCTTACGGTATTCGCCGACTGATAAAGAAAAGCCCATCTGATGTAAAACCTCTCCCCTCACCTGACACAGACGTGCCTTTAAGTTCTGTTGAAATAGAAAATCCAGAGACAAGTGATCAA
52	IL-15 V3.1構建體	MYGKIIFVLLLSEIVSISANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGSGGSGGGGGSGGGSGGGSGGGSLSTTEVAMHTSTSSSVTKSYISSQTNDTHKRDTYAATPRAHEVSEISVRTVYPPEEETGERVQLAHHFSEPEITLIIFGVMAGVIGTILLISYGIRRLIKKSPSDVKPLPSPDTDVPLSSVEIENPETSDQ
53	編碼SEQ ID NO：52 (IL-15 V3.1)的核酸序列	ATGTATGGAAAAATAATCTTTGTATTACTATTGTCAGAAATTGTGAGCATATCAGCAAACTGGGTAAATGTGATTTCAGACCTGAAAAAAATCGAAGACCTTATTCAATCCATGCACATCGACGCGACACTTTATACTGAATCAGACGTACACCCGTCCTGTAAGGTTACTGCGATGAAGTGCTTTCTGTTGGAATTGCAAGTGATCTCCCTCGAATCAGGGGATGCATCCATTCATGATACCGTCGAGAATTTGATCATTCTGGCAAATAACTCCCTCAGTAGTAACGGGAATGTGACCGAGTCTGGGTGTAAGGAGTGCGAAGAGTTGGAGGAAAAGAATATCAAAGAATTCCTTCAGTCCTTTGTTCACATCGTGCAAATGTTTATTAATACATCTGGAGGATCTGGCGGGTCTGGAGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGGTCTGGAGGCGGTTCCTTAAGTACCACTGAGGTGGCAATGCACACTTCAACCTCTTCTTCAGTCACAAAGAGTTACATCTCATCACAGACAAATGATACGCACAAACGGGACACATATGCAGCCACTCCTAGAGCTCATGAAGTTTCAGAAATTTCTGTTAGAACTGTTTACCCTCCAGAAGAGGAAACCGGAGAAAGGGTACAACTTGCCCATCATTTCTCTGAACCAGAGATAACACTCATTATTTTTGGGGTGATGGCTGGTGTTATTGGAACGATCCTCTTAATTTCTTACGGTATTCGCCGACTGATAAAGAAAAGCCCATCTGATGTAAAACCTCTCCCCTCACCTGACACAGACGTGCCTTTAAGTTCTGTTGAAATAGAAAATCCAGAGACAAGTGATCAA
54	IL-15/IL-15Ra V4.1構建體	MYGKIIFVLLLSEIVSISANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTGGSGGSGGGGGSGGGSGGGSGGGSLSTTEVAMHTSTSSSVTKSYISSQTNDTHKRDTYAATPRAHEVSEISVRTVYPPEEETGERVQLAHHFSEPEITLIIFGVMAGVIGTILLISYGIRRLIKKSPSDVKPLPSPDTDVPLSSVEIENPETSDQ
55	編碼SEQ ID NO：54 (IL-15-V4.1)的核酸序列	ATGTATGGAAAAATAATCTTTGTATTACTATTGTCAGAAATTGTGAGCATATCAGCAAACTGGGTGAACGTTATTAGTGACCTTAAAAAGATCGAAGATTTGATACAGTCAATGCACATAGACGCGACGCTTTATACAGAATCTGATGTACATCCTTCATGCAAGGTTACTGCTATGAAGTGTTTTCTTCTCGAACTCCAAGTAATAAGTCTTGAGAGCGGAGATGCGAGCATTCATGACACCGTTGAGAATCTTATTATATTGGCTAACAACTCTCTGTCCAGCAATGGTAATGTGACAGAAAGCGGGTGTAAGGAGTGCGAGGAACTCGAGGAGAAGAACATCAAAGAGTTCTTGCAGTCTTTCGTCCATATTGTCCAGATGTTCATAAATACTAGCGGGGGAGGTGGCTCTGGTGGAGGCGGGAGTGGCGGGGGCGGCTCAATCACATGCCCACCGCCCATGTCTGTTGAACACGCAGACATTTGGGTTAAAAGTTACTCACTTTACTCACGCGAGAGATATATATGCAACAGCGGCTTCAAGCGCAAAGCAGGCACTAGTAGTCTTACAGAGTGCGTGCTCAATAAAGCTACAAATGTAGCTCATTGGACTACTCCTAGTCTCAAATGCATTCGGGACCCCGCGCTTGTGCACCAGAGACCTGCGCCGCCGTCCACAGTGACGACAGCTGGTGTAACCCCCCAACCTGAATCCCTTAGTCCGTCTGGTAAAGAACCGGCGGCGTCTTCACCTTCCAGCAATAATACTGCGGCGACAACAGCCGCGATAGTTCCTGGATCCCAACTCATGCCGTCAAAGTCTCCTTCAACGGGAACGACAGAGATCTCTTCACATGAAAGTTCTCATGGAACACCGAGCCAAACTACGGCAAAGAACTGGGAACTGACTGCCTCAGCAAGCCACCAGCCGCCAGGGGTGTACCCGCAAGGGCACTCAGATACTACTGGAGGATCTGGCGGGTCTGGAGGCGGCGGCGGCAGCGGCGGCGGCAGCGGCGGAGGGTCTGGAGGCGGTTCCTTAAGTACCACTGAGGTGGCAATGCACACTTCAACCTCTTCTTCAGTCACAAAGAGTTACATCTCATCACAGACAAATGATACGCACAAACGGGACACATATGCAGCCACTCCTAGAGCTCATGAAGTTTCAGAAATTTCTGTTAGAACTGTTTACCCTCCAGAAGAGGAAACCGGAGAAAGGGTACAACTTGCCCATCATTTCTCTGAACCAGAGATAACACTCATTATTTTTGGGGTGATGGCTGGTGTTATTGGAACGATCCTCTTAATTTCTTACGGTATTCGCCGACTGATAAAGAAAAGCCCATCTGATGTAAAACCTCTCCCCTCACCTGACACAGACGTGCCTTTAAGTTCTGTTGAAATAGAAAATCCAGAGACAAGTGATCAA
56	細胞外4-1BBL多肽	ACPWAVSGARASPGSAASPRLREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSE
57	編碼SEQ ID NO：56 (細胞外4-1BBL)的核酸序列	GCCTGCCCCTGGGCCGTGTCCGGGGCTCGCGCCTCGCCCGGCTCCGCGGCCAGCCCGAGACTCCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAA
58	4-1BBL構建體	MYGKIIFVLLLSEIVSISAACPWAVSGARASPGSAASPRLREGPELSPDDPAGLLDLRQGMFAQLVAQNVLLIDGPLSWYSDPGLAGVSLTGGLSYKEDTKELVVAKAGVYYVFFQLELRRVVAGEGSGSVSLALHLQPLRSAAGAAALALTVDLPPASSEARNSAFGFQGRLLHLSAGQRLGVHLHTEARARHAWQLTQGATVLGLFRVTPEIPAGLPSPRSEGGSGGSGGGPEDEPGSGSGGGSGGGSLSTTEVAMHTSTSSSVTKSYISSQTNDTHKRDTYAATPRAHEVSEISVRTVYPPEEETGERVQLAHHFSEPEITLIIFGVMAGVIGTILLISYGIRRLIKKSPSDVKPLPSPDTDVPLSSVEIENPETSDQ
59	編碼SEQ ID NO：58 (4-1BBL構建體)的核酸序列	ATGTATGGAAAAATAATCTTTGTATTACTATTGTCAGAAATTGTGAGCATATCAGCAGCCTGCCCCTGGGCCGTGTCCGGGGCTCGCGCCTCGCCCGGCTCCGCGGCCAGCCCGAGACTCCGCGAGGGTCCCGAGCTTTCGCCCGACGATCCCGCCGGCCTCTTGGACCTGCGGCAGGGCATGTTTGCGCAGCTGGTGGCCCAAAATGTTCTGCTGATCGATGGGCCCCTGAGCTGGTACAGTGACCCAGGCCTGGCAGGCGTGTCCCTGACGGGGGGCCTGAGCTACAAAGAGGACACGAAGGAGCTGGTGGTGGCCAAGGCTGGAGTCTACTATGTCTTCTTTCAACTAGAGCTGCGGCGCGTGGTGGCCGGCGAGGGCTCAGGCTCCGTTTCACTTGCGCTGCACCTGCAGCCACTGCGCTCTGCTGCTGGGGCCGCCGCCCTGGCTTTGACCGTGGACCTGCCACCCGCCTCCTCCGAGGCTCGGAACTCGGCCTTCGGTTTCCAGGGCCGCTTGCTGCACCTGAGTGCCGGCCAGCGCCTGGGCGTCCATCTTCACACTGAGGCCAGGGCACGCCATGCCTGGCAGCTTACCCAGGGCGCCACAGTCTTGGGACTCTTCCGGGTGACCCCCGAAATCCCAGCCGGACTCCCTTCACCGAGGTCGGAAGGAGGATCTGGCGGGTCTGGAGGCGGCCCCGAGGACGAGCCCGGCAGCGGCAGCGGCGGAGGGTCTGGAGGCGGTTCCTTAAGTACCACTGAGGTGGCAATGCACACTTCAACCTCTTCTTCAGTCACAAAGAGTTACATCTCATCACAGACAAATGATACGCACAAACGGGACACATATGCAGCCACTCCTAGAGCTCATGAAGTTTCAGAAATTTCTGTTAGAACTGTTTACCCTCCAGAAGAGGAAACCGGAGAAAGGGTACAACTTGCCCATCATTTCTCTGAACCAGAGATAACACTCATTATTTTTGGGGTGATGGCTGGTGTTATTGGAACGATCCTCTTAATTTCTTACGGTATTCGCCGACTGATAAAGAAAAGCCCATCTGATGTAAAACCTCTCCCCTCACCTGACACAGACGTGCCTTTAAGTTCTGTTGAAATAGAAAATCCAGAGACAAGTGATCAA
60	4-1BBL連接子	GGSGGSGGGPEDEPGSGSGGGSGGGS
61	編碼SEQ ID NO：60的核酸序列	GGAGGATCTGGCGGGTCTGGAGGCGGCCCCGAGGACGAGCCCGGCAGCGGCAGCGGCGGAGGGTCTGGAGGCGGTTCC
62	全長GPA胺基酸	MYGKIIFVLLLSAIVSISALSTTEVAMHTSTSSSVTKSYISSQTNDTHKRDTYAATPRAHEVSEISVRTVYPPEEETGERVQLAHHFSEPEITLIIFGVMAGVIGTILLISYGIRRLIKKSPSDVKPLPSPDTDVPLSSVEIENPETSDQ
63	SMIM1多肽	MQPQESHVHYSRWEDGSRDGVSLGAVSSTEEASRCRRISQRLCTGKLGIAMKVLGGVALFWIIFILGYLTGYYVHKCK
64	G4S連接子	GGGGS
65	連接子-HA-連接子	GGSGGSGGYPYDVPDYAGGGSGGGS
66	連接子	GSGSGSGSGSEDEDEDEDGSGSGSGSGS
67	連接子	GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
68	連接子	GSGSGSGSEDGSGSGSGS
69	連接子	GSGSGSGSGSGSGSGSGS
70	連接子	GCGGSGGGGSGGGGS
71	連接子	SGRGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSSPA
72	連接子	GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGG
73	Snorkel連接子	SGRGASSGSSGSGSQKKPRYEIRWKVVVISAILALVVLTVISLIILIMLWGSGMQSPA
74	Ig重鏈V區3訊號序列	MGWSCIILFLVATATGVHS
75	輕鏈前導	MRVPAQLLGLLLLWLPGARC

無

圖 1是顯示全血樣品中NKG2D陽性淋巴球與NKG2A陽性淋巴球的比率相對於基線的最大倍數變化的圖，全血樣品是得自投予經基因工程改造成表現IL-15/IL-15RA和4-1BBL的人類去核類紅血球之前(基線)和之後(治療後)的人類個體。 圖 2A是顯示全血樣品中表現NKG2D的CD45 ⁺CD56 ⁺淋巴球的百分比相對於基線的最大倍數變化的圖，全血樣品是得自投予經基因工程改造成表現IL-15/IL-15RA和4-1BBL的大於或等於1x10 ¹⁰個人類去核類紅血球之前(基線)和之後(治療後)的人類個體。在多個給藥週期內進行治療後測量。 圖 2B是顯示全血樣品中表現NKG2D的CD45 ⁺CD16 ⁺CD56 ^dim淋巴球的百分比相對於基線的最大倍數變化的圖，全血樣品是得自投予經基因工程改造成表現IL-15/IL-15RA和4-1BBL的大於或等於1x10 ¹⁰個人類去核類紅血球之前(基線)和之後(治療後)的人類個體。在多個給藥週期內進行治療後測量。 圖 3A是顯示全血樣品中循環NK細胞(CD3 ^-CD16 ⁺CD56 ⁺)的絕對數量相對於基線的最大倍數變化的圖，全血樣品是得自投予經基因工程改造成表現IL-15/IL-15RA和4-1BBL的大於或等於1x10 ¹⁰個人類去核類紅血球之前(基線)和之後(治療後)的人類個體。在多個給藥週期內進行治療後測量。 圖 3B是顯示全血樣品中表現顆粒酶B的CD8 ⁺記憶T細胞的百分比(CD8 ⁺CD45RA ^-的GrB ⁺%)相對於基線的最大倍數變化的圖，全血樣品是得自投予經基因工程改造成表現IL-15/IL-15RA和4-1BBL的大於或等於1x10 ¹⁰個人類去核類紅血球之前(基線)和之後(治療後)的人類個體。在多個給藥週期內進行治療後測量。 圖 4A是顯示全血樣品中CD4 ⁺T細胞佔總T細胞(CD3 ⁺)的百分比相對於基線的最大倍數變化的圖，全血樣品是得自投予經基因工程改造成表現IL-15/IL-15RA和4-1BBL的大於或等於1x10 ¹⁰個人類去核類紅血球之前(基線)和之後(治療後)的人類個體。在多個給藥週期內進行治療後測量。 圖 4B是顯示全血樣品中CD8 ⁺T細胞佔總T細胞(CD3 ⁺)的百分比相對於基線的最大倍數變化的圖，全血樣品是得自投予經基因工程改造成表現IL-15/IL-15RA和4-1BBL的大於或等於1x10 ¹⁰個人類去核類紅血球之前(基線)和之後(治療後)的人類個體。在多個給藥週期內進行治療後測量。

無

Claims (121)

1. 一種於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體中增加NKG2D陽性淋巴球數量的方法，包括向該個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。
2. 如請求項1所述之方法，其中該方法進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症。
3. 如請求項1或2所述之方法，其中該MICA陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。
4. 如請求項1至3中任一項所述之方法，其中該MICA陽性癌症是MICA陽性/HLA-E陰性癌症。
5. 一種於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體中增加NKG2D陽性淋巴球數量的方法，包括向該個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。
6. 如請求項5所述之方法，其中該方法進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性癌症。
7. 如請求項5或6所述之方法，其中該MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。
8. 如請求項5至7中任一項所述之方法，其中該MICB陽性癌症是MICB陽性/HLA-E陰性癌症。
9. 如請求項1至8中任一項所述之方法，其中與投予前該個體中NKG2D陽性淋巴球的數量相比，該投予導致該個體中NKG2D陽性淋巴球的數量增加至少5%。
10. 如請求項9所述之方法，其中與投予前該個體中NKG2D陽性淋巴球的數量相比，該投予導致該個體中NKG2D陽性淋巴球的數量增加至少10%。
11. 如請求項1至10中任一項所述之方法，其中該NKG2D陽性淋巴球是NKG2D陽性NK細胞。
12. 如請求項1至11中任一項所述之方法，其中該方法進一步導致該個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球的數量增加。
13. 如請求項12所述之方法，其中投予步驟導致該個體中該NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球的數量增加至少5%。
14. 如請求項13所述之方法，其中投予步驟導致該個體中該NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球的數量增加至少10%。
15. 如請求項14所述之方法，其中投予步驟導致個體中該NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球的數量增加至少15%。
16. 如請求項12至15中任一項所述之方法，其中該NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球是NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞。
17. 如請求項1至16中任一項所述之方法，其中該方法進一步包括向該個體投予NKG2A抑制劑。
18. 如請求項17所述之方法，其中該NKG2A抑制劑是特異地結合至NKG2A的拮抗性抗體。
19. 一種治療先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體的方法，該方法包括向先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性多肽，該第一外源性多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。
20. 如請求項19所述之方法，其中該方法進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症。
21. 如請求項19或20所述之方法，其中該MICA陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。
22. 如請求項19至21中任一項所述之方法，其中該MICA陽性癌症是MICA陽性/HLA-E陰性癌症。
23. 一種治療先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體的方法，該方法包括向先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性多肽，該第一外源性多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。
24. 如請求項23所述之方法，其中該方法進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性癌症。
25. 如請求項23或24所述之方法，其中該MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。
26. 如請求項23至25中任一項所述之方法，其中該MICB陽性癌症是MICB陽性/HLA-E陰性癌症。
27. 如請求項19至26中任一項所述之方法，其中該投予導致該個體中NKG2D陽性淋巴球的數量增加及/或該個體中NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球的數量增加。
28. 如請求項27所述之方法，其中該NKG2D陽性淋巴球是NKG2D陽性NK細胞。
29. 如請求項27或28所述之方法，其中該NKG2D陽性/NKG2A陰性淋巴球是NKG2D陽性/NKG2A陰性NK細胞。
30. 如請求項19至29中任一項所述之方法，其中該方法進一步包括向該個體投予NKG2A抑制劑。
31. 如請求項30所述之方法，其中該NKG2A抑制劑是特異地結合至NKG2A的拮抗性抗體。
32. 一種於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體中減少MICA陽性癌細胞的數量及/或增生的方法，該方法包括投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性多肽，該第一外源性多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。
33. 如請求項32所述之方法，其中該投予導致該個體中MICA陽性癌細胞的數量減少。
34. 如請求項33所述之方法，其中與投予前該個體中MICA陽性癌細胞的數量相比，該投予導致該個體中MICA陽性癌細胞的數量減少至少5%。
35. 如請求項34所述之方法，其中與投予前該個體中MICA陽性癌細胞的數量相比，該投予導致該個體中MICA陽性癌細胞的數量減少至少10%。
36. 如請求項32所述之方法，其中該投予導致該個體中MICA陽性癌細胞的增生減少。
37. 如請求項36所述之方法，其中與投予前該個體中MICA陽性癌細胞的增生相比，該投予導致該個體中MICA陽性癌細胞的增生減少至少5%。
38. 如請求項37所述之方法，其中與投予前該個體中MICA陽性癌細胞的增生相比，該投予導致該個體中MICA陽性癌細胞的增生減少至少10%。
39. 如請求項32至38中任一項所述之方法，其中該方法進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症。
40. 如請求項32至39中任一項所述之方法，其中該MICA陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。
41. 如請求項32至40中任一項所述之方法，其中該MICA陽性癌症是MICA陽性/HLA-E陰性癌症。
42. 如請求項41所述之方法，其中該投予導致該個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少。
43. 如請求項42所述之方法，其中與投予前該個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比，該投予導致該個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少至少5%。
44. 如請求項43所述之方法，其中與投予前該個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比，該投予導致該個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少至少10%。
45. 如請求項41所述之方法，其中該投予導致該個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少。
46. 如請求項45所述之方法，其中與投予前該個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比，該投予導致該個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少至少5%。
47. 如請求項46所述之方法，其中與投予前該個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比，該投予導致該個體中MICA陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少至少10%。
48. 一種於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體中減少MICB陽性癌細胞的數量及/或增生的方法，該方法包括投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性多肽，該第一外源性多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。
49. 如請求項48所述之方法，其中該投予導致該個體中MICB陽性癌細胞的數量減少。
50. 如請求項49所述之方法，其中與投予前該個體中MICB陽性癌細胞的數量相比，該投予導致該個體中MICB陽性癌細胞的數量減少至少5%。
51. 如請求項50所述之方法，其中與投予前該個體中MICB陽性癌細胞的數量相比，該投予導致該個體中MICB陽性癌細胞的數量減少至少10%。
52. 如請求項48所述之方法，其中該投予導致該個體中MICB陽性癌細胞的增生減少。
53. 如請求項52所述之方法，其中與投予前該個體中MICB陽性癌細胞的增生相比，該投予導致該個體中MICB陽性癌細胞的增生減少至少5%。
54. 如請求項53所述之方法，其中與投予前該個體中MICB陽性癌細胞的增生相比，該投予導致該個體中MICB陽性癌細胞的增生減少至少10%。
55. 如請求項48至54中任一項所述之方法，其中該方法進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性癌症。
56. 如請求項48至55中任一項所述之方法，其中該MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。
57. 如請求項48至56中任一項所述之方法，其中該MICB陽性癌症是MICB陽性/HLA-E陰性癌症。
58. 如請求項57所述之方法，其中該投予導致該個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少。
59. 如請求項58所述之方法，其中與投予前該個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比，該投予導致該個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少至少5%。
60. 如請求項59所述之方法，其中與投予前該個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量相比，該投予導致該個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的數量減少至少10%。
61. 如請求項57所述之方法，其中該投予導致該個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少。
62. 如請求項61所述之方法，其中與投予前該個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比，該投予導致該個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少至少5%。
63. 如請求項62所述之方法，其中與投予前該個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生相比，該投予導致該個體中MICB陽性/HLA-E陰性癌細胞的增生減少至少10%。
64. 如請求項32至63中任一項所述之方法，其中該方法進一步包括向該個體投予NKG2A抑制劑。
65. 如請求項64所述之方法，其中該NKG2A抑制劑是特異地結合至NKG2A的拮抗性抗體。
66. 一種於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體中誘導殺死MICA陽性癌細胞的方法，該方法包括投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。
67. 如請求項66所述之方法，其中該MICA陽性癌細胞是選自由以下組成之群組的癌細胞：腎上腺皮質癌細胞、膽管癌細胞、胰腺癌細胞、腎癌細胞、甲狀腺癌細胞、間皮瘤癌細胞、皮膚表皮黑色素瘤癌細胞、結腸直腸癌細胞、子宮頸鱗狀細胞癌細胞，和子宮頸內腺癌細胞。
68. 如請求項66或67所述之方法，其中該方法進一步包括鑑定或診斷該個體患有MICA陽性癌症。
69. 如請求項68所述之方法，其中該MICA陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。
70. 如請求項68或69所述之方法，其中該MICA陽性癌症是MICA陽性/HLA-E陰性癌症。
71. 如請求項70所述之方法，其中該MICA陽性癌細胞是MICA陽性和HLA-E陰性癌細胞。
72. 一種於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體中誘導殺死MICB陽性癌細胞的方法，該方法包括投予治療有效量的醫藥組成物，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。
73. 如請求項72所述之方法，其中該MICB陽性癌細胞是選自由以下組成之群組的癌細胞：急性骨髓性白血病癌細胞、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤癌細胞、睪丸生殖細胞腫瘤癌細胞、胃腺癌細胞、卵巢漿液性囊腺癌細胞、食道癌細胞，和肺癌細胞。
74. 如請求項72或73所述之方法，其中該方法進一步包括鑑定或診斷該個體患有MICB陽性癌症。
75. 如請求項74所述之方法，其中該MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。
76. 如請求項74或75所述之方法，其中該MICB陽性癌症是MICB陽性/HLA-E陰性癌症。
77. 如請求項76所述之方法，其中該MICB陽性癌細胞是MICB陽性和HLA-E陰性癌細胞。
78. 如請求項66至77中任一項所述之方法，其中該殺死包括壞死。
79. 如請求項66至77中任一項所述之方法，其中該殺死包括細胞凋亡。
80. 如請求項66至77中任一項所述之方法，其中該殺死是經由NK細胞介導的細胞溶解所介導的。
81. 如請求項66至80中任一項所述之方法，其中該投予亦導致殺死該個體體內的非MICA陽性和非MICB陽性癌細胞。
82. 如請求項66至81中任一項所述之方法，其中該方法進一步包括向該個體投予NKG2A抑制劑。
83. 如請求項82所述之方法，其中該NKG2A抑制劑是特異地結合至NKG2A的拮抗性抗體。
84. 一種於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體中減少實體腫瘤體積的方法，該方法包括投予治療有效量的去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。
85. 如請求項84所述之方法，其中該方法進一步包括鑑定或診斷個體患有MICA陽性癌症。
86. 如請求項84或85所述之方法，其中該MICA陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。
87. 請求項84至86中任一項所述之方法，其中該MICA陽性癌症是MICA陽性/HLA-E陰性癌症。
88. 一種於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體中減少實體腫瘤體積的方法，該方法包括投予治療有效量的去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段。
89. 如請求項88所述之方法，其中該方法進一步包括鑑定或診斷個體患有MICB陽性癌症。
90. 如請求項88或89所述之方法，其中該MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。
91. 如請求項88至90中任一項所述之方法，其中該MICB陽性癌症是MICB陽性/HLA-E陰性癌症。
92. 如請求項84至91中任一項所述之方法，其中與投予前該個體中實體腫瘤體積相比，該投予導致該實體腫瘤體積減少至少5%。
93. 如請求項92所述之方法，其中與投予前該個體中實體腫瘤體積相比，該投予導致該實體腫瘤體積減少至少10%。
94. 如請求項93所述之方法，其中與投予前該個體中實體腫瘤體積相比，該投予導致該實體腫瘤體積減少至少15%。
95. 如請求項84至94中任一項所述之方法，其中該方法進一步包括向該個體投予NKG2A抑制劑。
96. 如請求項95所述之方法，其中該NKG2A抑制劑是特異地結合至NKG2A的拮抗性抗體。
97. 如請求項1至96中任一項所述之方法，其中該去核類紅血球包括至少1,000個複本的該第一外源性融合多肽。
98. 如請求項1至97中任一項所述之方法，其中該去核類紅血球是藉由包括以下的方法製造： 將編碼該第一外源性融合多肽的核酸引入有核類紅血球前驅細胞中；以及 在足以表現該第一外源性融合多肽並使該有核類紅血球前驅細胞去核的條件下培養該有核類紅血球前驅細胞。
99. 如請求項1至98中任一項所述之方法，其中該去核類紅血球進一步包括包括4-1BBL或其功能片段的第二外源性多肽，其中該第二外源性多肽存在於該去核類紅血球的細胞外表面上。
100. 如請求項99所述之方法，其中該去核類紅血球包括至少1,000個複本的該第二外源性多肽。
101. 如請求項99或100所述之方法，其中該去核類紅血球是藉由包括以下的方法製造： 將編碼該第一外源性融合多肽或其功能片段的核酸和編碼該第二外源性多肽的核酸引入有核類紅血球前驅細胞中；以及 在足以表現該第一外源性融合多肽和該第二外源性多肽並使該有核類紅血球前驅細胞去核的條件下培養該有核類紅血球前驅細胞。
102. 如請求項1至101中任一項所述之方法，其中該去核類紅血球不是低滲透析細胞。
103. 如請求項1至102中任一項所述之方法，其中該去核類紅血球不包括經分選酶轉移的特徵(sortase-transfer signature)。
104. 如請求項103所述之方法，其中該個體是人類且該去核類紅血球是人類細胞。
105. 一種套組，其包括： 醫藥組成物，該醫藥組物包括去核類紅血球，該去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段；以及 用於實施如請求項1至135中任一項所述之方法的說明書。
106. 如請求項105所述之套組，其中該去核類紅血球包括至少1,000個複本的該第一外源性融合多肽。
107. 如請求項105或106所述之套組，其中該去核類紅血球是藉由包括以下的方法製造： 將編碼該第一外源性融合多肽的核酸引入有核類紅血球前驅細胞中；以及 在足以表現該第一外源性融合多肽並使該有核類紅血球前驅細胞去核的條件下培養該有核類紅血球前驅細胞。
108. 如請求項105至107中任一項所述之套組，其中該去核類紅血球進一步包括包括4-1BBL或其功能片段的第二外源性多肽，其中該第二外源性多肽存在於該去核類紅血球的細胞外表面上。
109. 如請求項108所述之套組，其中該去核類紅血球包括至少1,000個複本的該第二外源性多肽。
110. 如請求項108或109所述之套組，其中該去核類紅血球是藉由包括以下的方法製造： 將編碼該第一外源性融合多肽的核酸和編碼該第二外源性多肽的核酸引入有核類紅血球前驅細胞中；以及 在足以表現該第一外源性融合多肽和該第二外源性多肽以及使該有核類紅血球前驅細胞去核的條件下培養該有核類紅血球前驅細胞。
111. 如請求項105至110中任一項所述之套組，其中該去核類紅血球不是低滲透析細胞。
112. 如請求項105至111中任一項所述之套組，其中該去核類紅血球不包括經分選酶轉移的特徵。
113. 如請求項105至112中任一項所述之套組，其中該去核類紅血球是人類細胞。
114. 一種選擇醫藥組成物的方法，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段，以供用於先前被鑑定或診斷為患有MICA陽性癌症的個體。
115. 如請求項114所述之方法，其中該方法進一步包括鑑定或診斷該個體患有MICA陽性癌症。
116. 如請求項114或115所述之方法，其中該MICA陽性癌症是選自由以下組成之群組：腎上腺皮質癌、膽管癌、胰腺癌、腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、皮膚表皮黑色素瘤、結腸直腸癌、子宮頸鱗狀細胞癌，和子宮頸內腺癌。
117. 如請求項114至116中任一項所述之方法，其中該MICA陽性癌症是MICA陽性/HLA-E陰性癌症。
118. 一種選擇醫藥組成物的方法，該醫藥組成物包括去核類紅血球群，該等去核類紅血球在其細胞外表面上包括第一外源性融合多肽，該第一外源性融合多肽包括(i)IL-15或其功能片段，及(ii)IL-15受體α或其功能片段，以供用於先前被鑑定或診斷為患有MICB陽性癌症的個體。
119. 如請求項118所述之方法，其中該方法進一步包括鑑定或診斷該個體患有MICB陽性癌症。
120. 如請求項118或119所述之方法，其中該MICB陽性癌症是選自由以下組成之群組：急性骨髓性白血病、淋巴腫瘤瀰漫性大B細胞淋巴瘤、睪丸生殖細胞腫瘤、胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌、食道癌，和肺癌。
121. 如請求項118至120中任一項所述之方法，其中該MICB陽性癌症是MICB陽性/HLA-E陰性癌症。

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