TW202237597A

TW202237597A - 新型egfr降解劑

Info

Publication number: TW202237597A
Application number: TW111110183A
Authority: TW
Inventors: 潘建峰; 大慶孫
Original assignee: 大陸商上海齊魯製藥研究中心有限公司
Priority date: 2021-03-19
Filing date: 2022-03-18
Publication date: 2022-10-01
Also published as: CN116888108A; CN116888108B; WO2022194269A1

Abstract

本發明提供了一種可降解EGFR的新型雙功能化合物（I），含有所述化合物的藥物組合物、製備方法及利用本發明化合物治療細胞增殖性疾病，例如癌症的方法。

Description

新型EGFR降解劑

本發明屬於藥物化學領域，具體涉及一種可降解EGFR的新型雙功能化合物，含有所述化合物的藥物組合物、其製備方法及利用本發明化合物治療EGFR介導的癌症的方法。

近些年，基於泛素-蛋白酶體系統(ubiquitin-proteasome system, UPS)的PROTAC技術（Proteolysis Targeting Chimeria）得到了快速的發展。PROTAC技術源於2004年諾貝爾化學獎——以色列科學家Aaron Ciechanover、Avram Hershko和美國科學家Irwin Rose共同發現的細胞降解有害蛋白質，即泛素調節的蛋白質降解過程。

PROTAC是一種雙功能的小分子三聯體化合物，可以分為靶蛋白配體、Linker（接頭）、E3連接酶配體（降解決定子）三部分。PROTAC分子進入細胞後，其結構中的目標蛋白（Protein of Interest，POI）配體可特異性地與相應的靶蛋白結合，而另一端可以募集E3連接酶從而形成POI-Linker-E3 ligase三元複合物，其中E3連接酶可介導泛素結合酶E2對POI泛素化。被泛素標記的POI被蛋白酶體識別並降解。

理論上PROTAC是事件驅動的藥理作用模式，此過程無需靶蛋白配體長時間佔據結合位點，只需三元複合物短暫的形成便可瞬時完成目標蛋白的泛素化，並且PROTAC分子在細胞內可多次循環利用，因此，與傳統的小分子抑制劑和大分子抗體相比，PROTAC具有明顯的優勢，有望將那些難以成藥的蛋白靶向成藥，並且可能具備用量小、毒性低、不依賴於親和力、可選擇性高、克服靶蛋白突變/過表達引起的耐藥等優點。

EGFR，即表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor），廣泛分佈於哺乳動物上皮細胞、成纖維細胞、膠質細胞等細胞表面。EGFR訊號通路對細胞的生長、增殖和分化等生理過程發揮重要的作用。EGFR突變也是NSCLC患者中最常見的一種突變類型，尤其是在亞洲人群中可以占到40%~50%，因此EGFR一直是製藥產業研究的最熱門靶點之一。

目前，上市的EGFR抑制劑有一、二、三代。第一代為可逆的靶向藥物，例如吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼。第二代為不可逆的靶向藥物，例如阿法替尼以及達克替尼。第一、二代靶向藥物雖然療效顯著，但多數患者都會在使用藥物1-2年出現耐藥性。EGFR抑制劑耐藥的患者中，有50%的耐藥與T790M突變有關。第三代EGFR靶向藥物奧希替尼能與EGFR敏感突變的T790M突變位點結合，抑制由於T790M突變引起的腫瘤耐藥，它的問世給更多的肺癌患者帶來了好的生存獲益。然而第三代EGFR抑制劑也由於C797S突變，不可避免地產生耐藥性。

對於目前奧希替尼的耐藥，尚無成熟的治療手段，基於臨床需求的迫在眉睫，同時基於PROTAC技術的獨特優勢，本發明旨在開發一種可特異性降解EGFR蛋白的雙功能的小分子三聯體化合物。

本發明提供了一種可以用於降解EGFR的新型雙功能化合物，含有所述化合物的藥物組合物、其製備方法及其用於治療EGFR介導的癌症的用途。

根據本發明所述的化合物為包含靶向配體、接頭與降解決定子的三聯體化合物，如式（X）所示，

其中，靶向配體可以特異性結合靶蛋白，如EGFR和/或突變的EGFR，在三聯體化合物中通過共價鍵與接頭相連接；接頭為靶向配體與降解決定子的連接基團，一端與靶向配體共價結合，另一端與降解決定子共價結合；降解決定子能夠結合泛素連接酶，如E3泛素連接酶，與接頭共價結合。

具體地，本發明提供了一種式（I）所示的雙功能化合物及其立體異構體、互變異構體或藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物，

，

，式（TL）為靶向配體，通過R ¹基團與接頭共價結合，其中， R ¹選自

或任選地被一個或多個R ⁹基團所取代的A； A選自3-7元雜環烷基、3-7元雜環烷基-O-、3-7元雜環烷基-NR ^a-、-(3-7元雜環烷基)-(3-7元雜環烷基)-、6-14元螺雜環基、6-14元橋雜環基、6-14元并雜環基； R ²選自C _6-10芳基、5-12元雜芳基，5-6元雜環烯基、其中所述C _6-10芳基、5-12元雜芳基，5-6元雜環烯基各自獨立任選地被一個或多個R ¹⁰基團所取代； R ³選自H、鹵素、C _1-4烷基、C _1-4烷氧基、C _1-4鹵代烷基、C _1-4鹵代烷氧基； M選自N或者CR ¹¹； R ⁴選自H、鹵素、-CN、C _1-4烷基、C _1-4鹵代烷基、C _3-6環烷基； R ⁵選自-C(=O)NR ^bR ^c、-S(=O) ₂R ^b、-P(=O)R ^bR ^c、-P(=O)R ^bNR ^cR ^d、-P(=O)R ^bOR ^c、-P(=O)OR ^bOR ^c、-P(=S)R ^bR ^c、-P(=S)R ^bNR ^cR ^d、-P(=S)R ^bOR ^c、-P(=S)OR ^bOR ^c、-S(=O) ₂NR ^bR ^c、-NR ^cS(=O) ₂R ^b、或-NR ^bC(O)R ^c； R ⁶、R ⁷、R ⁸各自獨立地選自H、C _1-4烷基、鹵素、C _3-6環烷基；或者，R ⁶、R ⁷和與其連接的原子一起環化成C _4-6環烷基、4-7元雜環烷基、5-7元雜芳基；或者R ⁷、R ⁸和與其連接的原子一起環化成C _4-6環烷基、4-7元雜環烷基、5-7元雜芳基；每個R ⁹獨立選自H、鹵素、-OH、-NH ₂、C _1-4烷基、C _1-4烷氧基、C _1-4鹵代烷基、-C _0-4烷基-NR ^aR ^b；每個R ¹⁰獨立選自H、鹵素、C _1-4烷基、C _1-4鹵代烷基、C _3-6環烷基磺醯基； R ¹¹選自H、鹵素、C _1-4烷基； R ^a選自H、C _1-4烷基； R ^b、R ^c、R ^d各自獨立地選自H、C _1-4烷基、C _3-6環烷基；接頭是與靶向配體中R ¹基團和降解決定子共價結合的基團；降解決定子是能夠與泛素連接酶結合的基團。

在本發明的一些方案中，上述式（I）所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物，其中， R ¹選自

或任選地被一個或多個R ⁹基團所取代的A； A選自3-7元雜環烷基、3-7元雜環烷基-O-、3-7元雜環烷基-NR ^a-、-(3-7元雜環烷基)-(3-7元雜環烷基)-、6-14元螺雜環基、6-14元橋雜環基、6-14元并雜環基； R ²選自C _6-10芳基、5-12元雜芳基，5-6元雜環烯基、其中所述C _6-10芳基、5-12元雜芳基，5-6元雜環烯基各自獨立任選地被一個或多個R ¹⁰基團所取代； R ³選自H、鹵素、C _1-4烷基、C _1-4烷氧基、C _1-4鹵代烷基、C _1-4鹵代烷氧基； M選自N或者CR ¹¹； R ⁴選自H、鹵素、-CN、C _1-4烷基、C _1-4鹵代烷基、C _3-6環烷基； R ⁵選自-C(=O)NR ^bR ^c、-S(=O) ₂R ^b、-P(=O)R ^bR ^c、-P(=O)R ^bNR ^cR ^d、-P(=O)R ^bOR ^c、-P(=O)OR ^bOR ^c、-P(=S)R ^bR ^c、-P(=S)R ^bNR ^cR ^d、-P(=S)R ^bOR ^c、-P(=S)OR ^bOR ^c、-S(=O) ₂NR ^bR ^c、-NR ^cS(=O) ₂R ^b、或-NR ^bC(O)R ^c； R ⁶、R ⁷、R ⁸各自獨立地選自H、C _1-4烷基；或者，R ⁶、R ⁷和與其連接的原子一起環化成C _4-6環烷基、5-7元雜芳基；或者R ⁷、R ⁸和與其連接的原子一起環化成C _4-6環烷基、5-7元雜芳基；每個R ⁹獨立選自H、鹵素、-OH、-NH ₂、C _1-4烷基、C _1-4烷氧基、C _1-4鹵代烷基、-C _0-4烷基-NR ^aR ^b；每個R ¹⁰獨立選自H、鹵素、C _1-4烷基、C _1-4鹵代烷基、C _3-6環烷基磺醯基； R ¹¹選自H、鹵素、C _1-4烷基； R ^a選自H、C _1-4烷基； R ^b、R ^c、R ^d各自獨立地選自H、C _1-4烷基、C _3-6環烷基；接頭是與靶向配體中R ¹基團和降解決定子共價結合的基團；降解決定子是能夠與泛素連接酶結合的基團。

或任選地被一個或多個R ⁹基團所取代的A； A選自3-7元雜環烷基、3-7元雜環烷基-O-、3-7元雜環烷基-NR ^a-、-(3-7元雜環烷基)-(3-7元雜環烷基)-、6-14元螺雜環基、6-14元并雜環基； R ²選自5-6元雜芳基，其中所述5-6元雜芳基任選地被一個或多個R ¹⁰基團所取代； R ³選自C _1-4烷氧基； M選自CR ¹¹； R ⁴選自H、鹵素、C _1-4烷基； R ⁵選自-P(=O)R ^bR ^c、-NR ^cS(=O) ₂R ^b； R ⁶、R ⁷、R ⁸各自獨立的選自H、C _1-4烷基；或者，R ⁶、R ⁷和與其連接的原子一起環化成5-7元雜芳基；每個R ⁹獨立選自H、鹵素、-OH、-NH ₂、C _1-4烷基；每個R ¹⁰獨立選自H、C _1-4烷基； R ¹¹選自H、鹵素； R ^a選自H、C _1-4烷基； R ^b、R ^c各自獨立的選自H、C _1-4烷基；接頭是與靶向配體中R ¹基團和降解決定子共價結合的基團；降解決定子是能夠與泛素連接酶結合的基團。

在本發明的一些方案中，A選自5-6元雜環烷基、5-6元雜環烷基-O-、5-6元雜環烷基-NR ^a-、-(5-6元雜環烷基)-(5-6元雜環烷基)-、7-11元螺雜環基、8-10元并雜環基。

在本發明的一些方案中，A選自5-6元氮雜環烷基、5-6元氮雜環烷基-O-、5-6元氮雜環烷基-NR ^a-、-(5-6元雜環烷基)-(5-6元雜環烷基)-、7-11元螺雜環基、8-10元氮雜并環基。

在本發明的一些方案中，A選自5-6元氮雜環烷基。

在本發明的一些方案中，A選自11元氮雜螺環基。

在本發明的一些方案中，A選自8元氮雜并環基。

在本發明的一些方案中，M選自CH。

在本發明的一些方案中，M選自CF。

在本發明的一些方案中，上述A選自

、

、

、

、

、

、

，R ^a如上文所定義。

在本發明的一些方案中，上述A選自

。

在本發明的一些方案中，上述A選自

。

在本發明的一些方案中，上述式R ¹選自

、

、

或

，R ^a如上文所定義。

在本發明的一些方案中，上述R ¹選自

。

在本發明的一些方案中，上述R ¹選自

。

在本發明的一些方案中，上述A選自

。

在本發明的一些方案中，上述R ¹選自

。

在本發明的一些方案中，上述R ¹⁰選自H、甲基、乙基或二氟甲基。

在本發明的一些方案中，上述R ²選自

。

在本發明的一些方案中，上述R ²選自

、

。

在本發明的一些方案中，上述R ³選自甲氧基。

在本發明的一些方案中，上述R ³選自H、甲基、F。

在本發明的一些方案中，上述R ⁴選自F、Cl、Br或甲基。

在本發明的一些方案中，上述R ⁴選自Br。

在本發明的一些方案中，上述R ⁴選自H。

在本發明的一些方案中，上述R ⁴選自三氟甲基。

在本發明的一些方案中，上述R ⁵選自

、

。

在本發明的一些方案中，上述R ⁵選自

。

在本發明的一些方案中，上述R ⁶、R ⁷、R ⁸選自H。

在本發明的一些方案中，上述R ⁶、R ⁷、R ⁸各自獨立的選自CH ₃、環丙基、氟。

在本發明的一些方案中，上述R ⁶、R ⁷選自CH ₃。

在本發明的一些方案中，上述R ⁶選自H，R ⁷選自CH ₃、環丙基、氟。

在本發明的一些方案中，上述R ⁶、R ⁷和與其連接的原子一起環化成吡𠯤環。

在本發明的一些方案中，上述R ⁶、R ⁷和與其連接的原子一起環化成吡啶環。

在本發明的一些方案中，所述靶向配體式（TL）選自：

、

、

、

、

、

、

、

、

、

；所述靶向配體通過

與所述接頭共價結合。

在本發明的一些方案中，所述靶向配體式（TL）選自：

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

、

。

在本發明的一些方案中，所述靶向配體式（TL）選自：

、

、

、

。

在本發明的一些方案中，所述靶向配體式（TL）選自：

、

、

。

在本發明的一些方案中，所述靶向配體式（TL）選自：

、

、

、

、

、

。

在本發明的一些方案中，上述接頭具有式LA：

或其立體異構體，其中，p ₁選自0-6的整數；p ₂選自0-6的整數；p ₃選自0-6的整數； U為鍵，或者選自C=O、O、NH或NR ¹²；每個Q獨立地選自鍵、CH ₂、O、S、NH或NR ¹²； W為鍵，或者選自C=O、O、NH、NR ¹²、C≡C；其中所述R ¹²選自C _1-4烷基；所述接頭通過U基團與靶向配體（式TL）中的R ¹共價結合，W基團與降解決定子共價結合。

在本發明的一些方案中，上述TL-LA選自：

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，其中，p ₁、p ₂、p ₃如上述所定義，TL代表靶向配體，不屬於接頭LA，僅代表接頭LA與靶向配體的連接關係；以及式TL具有如上所述的定義。

在本發明的一些方案中，上述TL-LA選自：

、

、

、

、

、

、

、

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、

、

、

、

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、

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、

、

、

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在本發明的一些方案中，上述TL-LA選自：

、

、

、

、

、

、

、

、

、

。

在本發明的一些方案中，上述接頭具有式LB：

或其立體異構體，其中，p ₁選自0-6的整數；p ₂選自0-6的整數；p ₃選自0-6的整數，p ₄選自0-6的整數；p ₅選自0-6的整數； U為鍵，或者選自C=O、O、NH或NR ¹³；每個Q獨立地選自鍵、CH ₂、O、S、NH或NR ¹³； W為鍵，或者選自C=O、O、NH、NR ¹³、C≡C；其中所述R ¹³選自C _1-4烷基；每個Z ₁各自獨立地選自不存在、苯基、C _3-6元環烷基、3-6元雜環烷基、5-6元雜芳基，其中所述苯基、C _3-6元環烷基、3-6元雜環烷基、5-6元雜芳基各自獨立任選地被一個或多個R ¹⁴基團所取代；每個R ¹⁴獨立選自鹵素、C _1-4烷基、羥基；或每個Z ₁各自獨立地選自7-11元氮雜螺環，其中所述7-11元氮雜螺環任選地被一個或多個R ¹⁴基團所取代；每個R ¹⁴獨立選自鹵素、C _1-4烷基、羥基；所述接頭通過U基團與靶向配體中的R ¹共價結合，W基團與降解決定子共價結合。

在本發明的一些方案中，上述接頭LB選自：

，

其中，p ₁、p ₂、p ₃、p ₄、U、W、Z ₁如上述所定義。

在本發明的一些方案中，上述TL-LB選自：

，

，

，

，

，

，

，其中，p ₁、p ₃、p ₄、Z ₁如上述所定義，TL代表靶向配體，不屬於接頭LB，僅代表接頭LB與靶向配體的連接關係；以及式TL具有如上所述的定義。

在本發明的一些方案中，上述TL-LB選自：

、

、

、

、

、

、

、

、

。

在本發明的一些方案中，上述TL-LB選自：

。

在本發明的一些方案中，上述TL-LB選自：

、

、

；其中，p ₁、p ₃、p ₄、Z ₁如上所述定義。

在本發明的一些方案中，上述TL-LB選自：

；其中，p ₁、p ₂、Z ₁如上所述的定義。

在本發明的一些方案中，上述TL-LB選自：

、

、

、

、

、

、

、

。

在本發明的一些方案中，上述TL-LB選自：

、

、

、

。

在本發明的一些方案中，上述TL-LB選自

。

在本發明的一些方案中，上述TL-LB選自

、

、

、

、

。

在本發明的一些方案中，上述TL-LB選自

、

、

、

、

、

、

。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子具有式D1，

或其立體異構體，其中，每個R ¹⁵獨立地選自C _1-4烷基； R ¹⁶選自H、氘；每個R ¹⁷獨立地選自鹵素、C _1-4烷基、C _1-4烷氧基、羥基； Z ₂選自CH ₂或者C=O； Y為鍵、O或者NH；其通過共價鍵與接頭相連； m選自0-3的整數； n選自0-4的整數。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D1中的Z ₂選自C=O。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D1中Y選自鍵或者NH。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D1中Y選自O。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D1選自：

，

，

，

。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D1選自：

。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D1選自：

。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D1選自：

、

。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子具有式D2，

或其立體異構體，其中，每個R ¹⁵ ^，任意獨立地選自C _1-4烷基； R ¹⁶ ^，選自H、氘；每個R ¹⁷ ^，任意獨立地選自鹵素、C _1-4烷基、C _1-4烷氧基； Y ^，為鍵、O或者NH，其通過共價鍵與接頭相連； m選自0-3的整數； n選自0-4的整數。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D2選自：

。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子具有式D3，

或其立體異構體，其中，R ¹⁸選自H、C _1-4烷基；每個R ¹⁹任意獨立地選自C _1-4烷基； R ²⁰選自H、C _1-4烷基； q選自0-4的整數；其中所述降解決定子通過

與所述接頭共價結合。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D3中的R ¹⁸選自甲基。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D3中的R ²⁰選自甲基。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D3選自：

，

，

。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子具有式D3 ^’，

或其立體異構體，其中，R ^18a選自H、C _1-4烷基；每個R ^19a任意獨立地選自C _1-4烷基、C _1-4烷氧基； R ^20a、R ^20b任意獨立地選自H、C _1-4烷基；或者R ^20a與R ^20b相連接，環化形成C _3-6環烷基；或者R ^19a與R ^20a或R ^19a與R ^20b相連接，環化形成3-6元雜環烷基； r選自0-4的整數；其中所述降解決定子通過

與所述接頭共價結合。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D3 ^’中的R ^18a選自甲基。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D3 ^’中的R ^20a、R ^20b和與其連接的原子一起環化形成環丙基。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D3 ^’中的R ^19a與R ^20a和與其連接的原子一起環化，或R ^19a與R ^20b和與其連接的原子一起環化形成四氫吡喃環。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子具有式D3 ^’，選自：

、

、

。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子具有式D4，

或其立體異構體， Y為鍵、或者NH，其通過共價鍵與接頭相連。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D4選自：

。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子具有式D5，

其中，M選自NH、O或者S； V為鍵、NH或者O，其通過共價鍵與接頭相連；每個R ²¹各自獨立地選自鹵素； S選自0、1、2或3。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D5為

。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D5為

。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D5為

、

、

。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D5為

。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子D5為

。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子選自

。

在本發明的一些方案中，所述的降解決定子選自

。

在本發明的一些方案中，上述式（I）所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物選自以下結構：

，

，

，

。其中，A、M、R ²、R ³、R ⁴、R ⁵、R ⁶、R ⁷、R ⁸、R ²⁰、Y、R ¹⁵、n、接頭、降解決定子如上述所定義。

在本發明的一些方案中，上述式（I）所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物，選自以下結構：

，

，

，

其中，M、R ²、R ³、R ⁴、R ⁵、R ⁶、R ⁷、R ⁸、R ²⁰、Y、R ¹⁵、n、接頭與降解決定子如上述所定義。

在本發明的一些方案中，上述式（I）所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物，選自式（Ic-A）或（Ic-B）：

、

；其中，R ₆、R ₇、R ¹⁵、Y、n、接頭與降解決定子如上述所定義。

在本發明的一些方案中，上述式（I）所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物，選自式（Ic）：

其中，接頭與降解決定子如上述所定義。

在本發明的一些方案中，上述式（I）所示的化合物或其立體異構體、互變異構體或藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物，選自式（Id）：

其中，接頭與降解決定子如上述所定義。

、

、

；其中，接頭、R ²⁰、Y、R ¹⁵、n如上述所定義。

本發明提供的雙功能化合物或其立體異構體、互變異構體或藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物，其選自：

本發明還提供一種藥物組合物，其含有治療有效量的上述雙功能化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物和藥學上可接受的載體。

根據本發明的藥物組合物可以配製用於各種常規給藥或特定給藥途徑，如口服給藥、胃腸外給藥和直腸給藥等。口服給藥的劑型，例如片劑、膠囊劑(包括持續釋放或定時釋放處方)、丸劑、散劑、顆粒劑、酏劑、酊劑、混懸液(包括奈米混懸液、微米混懸液、噴霧乾燥分散劑)、糖漿劑和乳劑；胃腸外給藥，例如通過皮下、靜脈內、肌內或胸骨內的注射，或輸注技術(例如作為無菌可注射水溶液或非水溶液或混懸液)；經鼻給藥，例如對鼻黏膜給藥，通過吸入噴霧；局部給藥，例如以乳膏或軟膏的形式；直腸給藥，例如以栓劑的形式。根據本發明的化合物可單獨給藥，但通常會與根據所選擇的給藥途徑和標準藥學操作選擇的藥學載體一起給藥。

“藥學上可接受的載體”指本領域通常可接受的用於將生物活性藥劑遞送給動物、特別是哺乳動物的介質，根據給藥方式和劑型的性質包括例如佐劑、賦形劑或賦形物，例如稀釋劑、防腐劑、填充劑、流動調節劑、崩解劑、潤濕劑、乳化劑、助懸劑、甜味劑、調味劑、芳香劑、抗菌劑、抗真菌劑、潤滑劑和分散劑。

藥學上可接受的載體在本發明所屬技術領域具有通常知識者的眼界範圍內可以綜合大量因素進行選擇和配製。其包括但不限於：配製的活性藥劑的類型和性質，要將含有該藥劑的組合物給藥的對象，組合物的預期給藥途徑和目標治療適應症等。藥學上可接受的載體包括含水介質和非水介質這兩者以及多種固體和半固體劑型。除了活性藥劑以外，這樣的載體可以包括許多不同的成分和添加劑，因多種原因(例如穩定活性藥劑、黏合劑等)在處方中包括另外的成分對於本發明所屬技術領域具有通常知識者也是眾所周知的。

用於本發明化合物的給藥方案當然可根據已知的因素改變，例如具體藥劑的藥效學特徵及其給藥的模式和途徑，接受者的物種、年齡、性別、健康、醫學狀況和體重，症狀的性質和程度，共存的治療的種類，治療的頻率，給藥的途徑，患者的腎臟和肝臟的功能，和需要的效果。治療有效劑量的化合物、藥物組合物或其組合取決於對象種類、體重、年齡和個體情況、所治療病症或疾病或其嚴重度。掌握普通技術的醫生、臨床醫生或獸醫能容易確定預防、治療或抑制病症或疾病進展所需的各活性成分有效量。

本發明還提供上述雙功能化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物或上述的藥物組合物在製備治療癌症藥物中的應用。

表皮生長因子受體EGFR（epidermal growth factor receptor），廣泛分佈於哺乳動物上皮細胞、成纖維細胞、膠質細胞等細胞表面。EGFR訊號通路對細胞的生長、增殖和分化等生理過程發揮重要的作用。EGFR突變也是NSCLC患者中最常見的一種突變類型，尤其是在亞洲人群中可以占到40%~50%。

因此，本發明還提供了治療癌症的方法，其包括向患者施用治療有效量的上述化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物或上述的藥物組合物。上述癌症包括淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、宮頸癌、***癌、結腸直腸癌、乳腺癌、胰腺癌、膠質瘤、膠質母細胞瘤，黑色素瘤、白血病、胃癌、子宮內膜癌、肺癌、肝細胞癌、胃腸道間質瘤(GIST)、急性髓細胞白血病(AML)、膽管癌、腎癌、甲狀腺癌、間變性大細胞淋巴瘤、間皮瘤、多發性骨髓瘤、黑色素瘤。

本發明還提供了上述化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物或上述的藥物組合物在製備治療EGFR相關癌症藥物中的應用。上述癌症包括淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、宮頸癌、***癌、結腸直腸癌、乳腺癌、胰腺癌、膠質瘤、膠質母細胞瘤，黑色素瘤、白血病、胃癌、子宮內膜癌、肺癌、肝細胞癌、胃腸道間質瘤(GIST)、急性髓細胞白血病(AML)、膽管癌、腎癌、甲狀腺癌、間變性大細胞淋巴瘤、間皮瘤、多發性骨髓瘤、黑色素瘤。

在本發明的一些方案中，上述癌症為肺癌。

本發明提供的上述雙功能化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物或上述的藥物組合物，用於治療癌症，上述癌症包括淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、宮頸癌、***癌、結腸直腸癌、乳腺癌、胰腺癌、膠質瘤、膠質母細胞瘤，黑色素瘤、白血病、胃癌、子宮內膜癌、肺癌、肝細胞癌、胃癌、胃腸道間質瘤(GIST)、急性髓細胞白血病(AML)、膽管癌、腎癌、甲狀腺癌、間變性大細胞淋巴瘤、間皮瘤、多發性骨髓瘤、黑色素瘤。

在本發明的一些方案中，上述癌症為肺癌。

本文所述的化合物可以通過本發明所屬技術領域具有通常知識者已知的方法製備，僅作為一般性舉例，可以使用以下方案製備：

通用方案一：

通用方案二：

如通用方案一中所示，接頭與靶向配體可以先通過化學反應相連接，隨後再加入降解決定子，製備得到本發明的三聯體化合物；或者如通用方案二中所示，接頭先與降解決定子通過化學反應相連接，隨後再加入靶向配體，製備得到本發明的三聯體化合物；需要說明的是，三聯體化合物中兩個部分相連接時，可以是兩部分分別製備完成後再連接，也可以是先連接，再完成每一部分的合成。例如通用方案一中靶向配體與接頭部分相連接，可以是製備完成的靶向配體與接頭相連接，也可以是靶向配體中的一部分先與接頭相連接，連接完成後，再完成靶向配體本身的製備。

三聯體化合物中兩個部分的連接，通過常規的化學反應製備得到，如通用方案一、二中的步驟1與步驟2，可以通過親核取代、縮合或者偶聯等反應實現。

具體的，本發明中的三聯體化合物可通過以下方式製備：

靶向配體與接頭連接後，再與降解決定子連接得到：

；或者接頭與降解決定子連接後，再與靶向配體連接得到：

其中，靶向配體，接頭，降解決定子如上述所定義。

代表性合成路線一：

步驟1接頭中的羧酸與降解決定子中的胺基在縮合試劑的作用下發生縮合反應形成醯胺鍵，常用的縮合劑包括但不限於4-（4,6-二甲氧基三𠯤）-4-甲基嗎福林鹽酸鹽（DMTMM）、二環己基碳二亞胺(DCC)、二異丙基碳二亞胺(DIC)和1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDCI)、2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)等。

步驟2靶向配體中的胺基進攻降解決定子的LG基團，LG離去發生親核取代反應製備得到三聯體化合物；其中，LG代表常用離去基團，例如三氟甲磺酸基、甲磺酸基、對甲基苯磺酸基以及氟、溴、碘、氯等鹵素原子。

以上兩步反應常在鹼的催化下進行，常用的鹼催化劑包括三乙胺、吡啶、N,N-二異丙基乙胺、醋酸鈉、碳酸鈉、碳酸鉀等。

代表性合成路線二：

步驟1，靶向配體中的胺基進攻接頭中的LG基團，LG離去發生親核取代反應；LG代表常用離去基團，例如三氟甲磺酸根、甲磺酸根、對甲基苯磺酸根以及氟、溴、碘、氯等鹵素原子；接頭中的PG代表常用的胺基保護基團，包括但不限於第三丁氧羰基、苄氧羰基、對甲苯磺醯基、笏甲氧羰基、對甲氧基苄基、苄基、三苯甲基等。

步驟2，一般情況下在酸性作用下脫除胺基保護基，常用的酸包括但不限於鹽酸、甲酸、三氟乙酸、氫溴酸等。

步驟3，靶向配體-接頭中胺基進攻降解決定子中的LG基團，LG離去發生親核取代反應，製備得到三聯體化合物。LG代表常用離去基團，例如三氟甲磺酸根、甲磺酸根、對甲基苯磺酸根以及氟、溴、碘、氯等鹵素原子。

步驟1與步驟3常在常在鹼的催化下進行，常用的鹼催化劑包括三乙胺、吡啶、N,N-二異丙基乙胺、醋酸鈉、碳酸鈉、碳酸鉀等。

代表性合成路線三：

步驟1中，在催化劑的作用下接頭與降解決定子發生偶聯反應，常用的催化劑為雙(三苯基膦)二氯化鈀(Ⅱ)、四(三苯基膦)鈀或[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀和碘化亞銅等。

隨後步驟2中羥基基團轉化為易離去的基團LG，與靶向配體中的胺基發生親核取代反應生成三聯體化合物。

本發明中使用的靶向配體，可以參考CN112538072A中相關化合物的製備方法中的靶向配體，相關內容以引用的方式併入本申請。

以上反應式中的各個基團變量如上文中所定義。

技術效果：

本發明化合物對Ba/F3 Del19/T790M/C797S EGFR三突變細胞系和Ba/F3 L858R/T790M/C797S EGFR三突變細胞系的細胞增殖有著很好的抑制作用。

本發明化合物能夠顯著地誘導EGFR蛋白的降解。

說明和定義：

除非另有說明，本文所用的下列術語和短語具有下列含義。一個特定的術語或短語在沒有特別定義的情況下不應該被認為是不確定的或不清楚的，而應該按照普通的含義去理解。

術語“藥學上可接受的”指在合理的醫學判斷範圍內適合與人類和動物的組織接觸使用而無過度的毒性、刺激、過敏反應或其它的問題或併發症，具有合理的收益/風險比的那些化合物、材料、組合物和/或劑型。

術語“藥學上可接受的鹽”是指本發明化合物與相對無毒的酸或鹼製備得到的衍生物。這些鹽可以在化合物合成、分離、純化期間就被製備，或者單獨使用經過純化的化合物的游離形式與適合的酸或鹼反應。當化合物中含有相對酸性的官能團時，與鹼金屬、鹼土金屬氫氧化物或有機胺反應得到鹼加成鹽，包括基於鹼金屬與鹼土金屬的陽離子以及無毒的銨、季銨和胺陽離子，還涵蓋胺基酸的鹽等。當化合物中含有相對鹼性的官能團時，與有機酸或無機酸反應得到酸加成鹽。

本發明所提供的化合物還包括前藥的形式，表示體內迅速轉化得到上式母體化合物的化合物，其可在體內或者體外的環境中通過化學或生化方法被轉換成本發明的化合物，例如借助血液中的水解作用。

本發明的化合物能夠以非溶劑化以及溶劑化形式存在，所述溶劑化物包括水合物形式。一般而言，溶劑化物形式的藥學效果等價於未溶劑化形式，也涵蓋在本發明的範圍內。

本發明的化合物存在“互變異構體”，術語“互變異構體”是指官能團異構體的一種，其通過一個或多個雙鍵位移而具有不同的連接點，例如，酮和它的烯醇形式是酮-烯醇互變異構體。

本發明的化合物存在幾何異構體以及立體異構體，例如順反異構體、對映異構體、非對映異構體、外消旋混合物和其他混合物，所有這些混合物都屬於本發明的範圍之內。

術語“對映異構體”是指互為鏡像關係的立體異構體。

術語“非對映異構體”是指分子具有兩個或多個手性中心，並且分子間為非鏡像的關係的立體異構體。

術語“順反異構體”是指分子中雙鍵或者成環碳原子單鍵不能自由旋轉而存在的構型。

除非另有說明，用楔形實線鍵

和楔形虛線鍵

表示一個立體中心的絕對構型，用直形實線鍵

和直形虛線鍵

表示立體中心的相對構型。

本發明化合物的立體異構體可以通過手性合成或手性試劑或者其他常規技術製備。例如本發明某化合物的一種對映體，可以通過不對稱催化技術或者手性助劑衍生技術製備得到。或者通過手性拆分技術，從混合物中得到單一立體構型的化合物。或者用手性起始原料，直接製備得到。本發明中的光學純化合物的分離通常是使用製備色譜完成的，採用手性色譜柱，達到分離手性化合物的目的。

一般情況下，光學純的化合物作為起始物料參與反應時，其結構中手性原子的立體構型也會發生傳遞，無特殊情況，其構型在反應中視為保持不變，即產物具有與起始物料相同的構型，當光學純混合物參與反應時，生成的化合物也是光學純相應的混合物。例如，( R)-3-甲基嗎福林作為起始物料參與反應，得到的化合物也是 R構型；反式-2, 6-二甲基嗎福林作為起始物料參與反應，得到的化合物為2 S, 6 S與2 R, 6 R構型的外消旋體。

術語“光學純”或“對映體富集”是指該異構體或對映體的含量大於等於60%，或者大於等於70%，或者大於等於80%，或者大於等於90%，或者大於等於95%，或者大於等於96%，或者大於等於97%，或者大於等於98%，或者大於等於99%，或者大於等於99.5%，或者大於等於99.6%，或者大於等於99.7%，或者大於等於99.8%，或者大於等於99.9%。

化合物的絕對立體構型通過可以通過本領域常規技術手段予以確證。例如單晶X射線衍射法，也可以通過原料的手性結構以及不對稱合成的反應機理來確證化合物的絕對構型。

本發明還包括同位素標記衍生物。包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分別例如 ²H、 ³H、 ¹³C、 ¹¹C、 ¹⁴C、 ¹⁵N、 ¹⁸O、 ¹⁷O、 ³¹P、 ³²P、 ³⁵S、 ¹⁸F和 ³⁶Cl。含有上述同位素和/或其它原子的其它同位素的本發明化合物都屬於發明的範圍。

術語“有效預防或治療量”是指本發明化合物或其立體異構體、互變異構體或藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物以適用於任何醫學治療和/或預防的合理效果/風險比治療障礙的足夠量的化合物。但應認識到，本發明式I所示化合物或其立體異構體、互變異構體或藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物和組合物的總日用量須由主診醫師在可靠的醫學判斷範圍內作出決定。對於任何具體的患者，具體的治療有效劑量水平鬚根據多種因素而定，所述因素包括所治療的障礙和該障礙的嚴重程度；所採用的具體化合物的活性；所採用的具體組合物；患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食；所採用的具體化合物的給藥時間、給藥途徑和***率；治療持續時間；與所採用的具體化合物組合使用或同時使用的藥物；及醫療領域公知的類似因素。例如，本領域的做法是，化合物的劑量從低於為得到所需治療效果而要求的水平開始，逐漸增加劑量，直到得到所需的效果。一般說來，本發明式I所示化合物或其藥學上可接受的鹽用於哺乳動物特別是人的劑量可以介於0.001～1000mg/kg體重/天，例如介於0.01～100mg/kg體重/天，例如介於 0.01～10mg/kg體重/天。

術語“任選被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有規定，取代基的種類和數目在化學上可以實現的基礎上可以是任意的，例如，術語“可任選地被一個或多個R ₀取代”是指可以被一個或多個R ₀取代，也可以不被R ₀取代。

當任何變量(例如R ₁₂)在化合物的組成或結構中出現一次以上時，其在每一種情況下的定義都是獨立的。例如，如果一個基團被0-2個R ₁₂所取代，則所述基團可以任選地至多被兩個R ₁₂所取代，並且每種情況下的R ₁₂都有獨立的選項。

當一個連接基團的數量為0時，比如-O(CH ₂) _nCH ₃，n=0表示該連接基團為單鍵，即-OCH ₃。

當一個取代基的鍵可以交叉連接到一個環上的兩個原子時，這種取代基可以與這個環上的任意原子相鍵合。例如，結構單元

表示取代基R ₁₂可以在苯環上的任意一個位置發生取代。

當所列舉的取代基中沒有指明其通過哪一個原子連接到化學結構通式中時，這種取代基可以通過其任何原子相鍵合。例如，吡唑作為取代基，是指吡唑環上任意一個碳原子連接到被取代的基團上；當結構中出現

或者

時，表示該原子為鍵合原子，例如

與

均表示嗎福林環上的N原子為鍵合原子。

除非另有規定，“環”是指飽和的、部分飽和的或不飽和的單環以及多環，“多環”包括螺環、并環或橋環。代表性的“環”包括被取代或未被取代的環烷基、雜環烷基、環烯基、雜環烯基、環炔基、雜環炔基、芳基或雜芳基。

術語“雜”表示取代或未被取代的雜原子以及雜原子的氧化形式，所述雜原子一般選自N、O、S，氧化形式一般包括NO、SO、S(O) ₂，氮原子可以是取代的，即NR（R為H或者文中定義的其他取代基）；環上原子的數目通常被定義為環的元數，例如，“3-6元雜環烷基”是指3-6個原子環繞排列而成的環，每個環任選地包含1～3個雜原子，即N、O、S、NO、SO、S(O) ₂或NR，每個環任選的被R基團所取代，R為本發明中所定義的任意取代基。

除非另有規定，“環烷基”是指飽和的單環烴基。環烷基優選3-8元單環烷基，更優選3-6元單環烷基，這些單環烷基的實例包括但不限於：環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基。

除非另有規定，“雜環烷基”是指環中包含一定數目雜原子或雜原子團的單雜環烷基，所述雜原子或雜原子團一般選自N、O、S、NO、SO、S(O) ₂以及NR。雜環烷基優選3-8元單雜環烷基，更優選3-6元單雜環烷基，這些單雜環烷基的實例包括，但不限於環氧乙烷基、四氫吡咯基、哌啶基、哌𠯤基、嗎福林基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫吡喃基、1,3-二氧戊環、1,4-二氧六環等。

除非另有規定，“螺環基”是指單環之間共用一個碳原子(稱螺原子)的多環體系，每個單環中均可包含一定數目的雙鍵，螺環基優選5-13元螺環基、6-12元螺環基、或者7-11元螺環基。螺環基的實施例包括但不限於螺[2.2]戊基、螺[2.3]己基、螺[2.4]庚基、螺[2.5]辛基、螺[2.6]壬基、螺[3.3]庚基、螺[3.4]辛基、螺[3.5]壬基、螺[3.6]癸基、螺[4.4]壬基、螺[4.5]癸基、螺[4.6]十一烷基、螺[5.5]十一烷基、螺[5.6]十二烷基、螺[6.6]十三烷基、螺[6.7]十四烷基。

“螺雜環基”是指螺環骨架結構中的一個或多個碳原子被雜原子或雜原子團取代的螺環基，所述雜原子或雜原子團選自N、O、S、NO、SO、S(O) ₂等。螺雜環基優選5-13元螺雜環基、6-12元螺雜環基、7-11元螺雜環基以及7-11元氮雜螺環基。螺雜環基的實施例包括但不限於2-氧雜-7-氮雜螺[5.3]壬烷-7-基、2-氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-7-基、2-氧雜-6-氮雜螺[3.3]庚烷-6-基、2-氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基、1,4,9-三氮雜螺[5.5]十一烷-9-基、3-氧雜-9-氮雜螺[5.5]十一烷-9-基、2,6-二氮雜螺[3.3]庚烷-2-基、2,7-二氮雜螺[5.3]壬烷 -7- 基、2,7-二氧雜螺[5.3]壬基、3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基、1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-基、1-氧雜-4,8-二氮雜螺[5.4]癸烷-8-基、3-氮雜螺[5.5]十一烷-3-基、7-氮雜螺[3.5]癸烷-7-基、1-氧雜-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-4-基、6-氧雜-2,9-二氮雜螺[4.5]癸烷-9-基、9-氧雜-2,6-二氮雜螺[4.5]癸烷-6-基、3-氮雜螺[5.5]十一烷-3-基、4-氧雜-1,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-基。

除非另有規定，“橋環基”是指共用兩個不直接連接的碳原子的多環體系，體系中可包含一定數目的雙鍵。橋環基優選4-13元橋環基、5-12元橋環基、6-12元橋環基、6-11元橋環基、7-11元橋環基。橋環基的實施例包括但不限於

、

、

、

、

、

、

等。

“橋雜環基”是指構成橋環骨架的一個或多個碳原子被雜原子或雜原子團取代的橋環基，所述雜原子或雜原子團選自N、O、S、NO、SO、S(O) ₂等。橋雜環基優選4-13元橋雜環基、5-12元橋雜環基、6-12元橋雜環基、6-11元橋雜環基、7-11元橋雜環基。橋雜環基的實施例包括但不限於

、

、

、

、

、

、

等。

除非另有規定，“并環”是指系統中的每個環與體系中的其他環共享毗鄰的一對碳原子的多環基團，其中每個環中可包含一定數目的雙鍵。所述并環優選5-14元并環基，更優選7-12元并環基、更優選8-10元并環基，并環基的實例包括但不限於

、

、

、

、

、

、

、

、

等。

“并雜環”是指構成并環骨架的一個或多個碳原子被雜原子或雜原子團取代的并環基，所述雜原子或雜原子團選自N、O、S、NO、SO、S(O) ₂等。優選5-14元并雜環基，更優選7-12元并雜環基，更優選8-10元并雜環基，更優選8-10元氮雜并環基，并雜環基的實例包括但不限於

、

、

、

、

、

、

、

等。

環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基均可以與苯環稠合，形成相應的多環結構。例如結構

中，“R ₇與R ₈可以環化成C _4-6環烷基”即代表了該結構可以是

、

或

；“R ₇與R ₈可以環化成4-6元雜環烷基”的實施例包括但不僅限於

、

、

、

； “R ₇與R ₈可以環化成5-7元雜芳基”的實施例包括但不僅限於

、

、

、

、

、

、

。

除非另有規定，術語“芳基”是指多不飽和的、芳族的烴基，其可為單環或稠合在一起的多個環。芳基的實例包括但不限於苯基。萘基。

除非另有規定，術語“雜芳基”意指包含至少一個雜原子或雜原子團（N、O、S、NO、SO、S(O) ₂或NR）的穩定的單環或者多環的芳族基團。優選5-12元雜芳基，更優選5、6、7元單環或6、7、8、9或10元雙環雜芳基；優選包含碳原子和1、2、3或4個獨立地選自N、O和S的環雜原子。雜芳基的實例包括但不限於吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡𠯤基、㗁唑基、苯并㗁唑基、異㗁唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、苯并噻唑基、嘌呤基、苯并咪唑基、吲哚基、異喹啉基、喹㗁啉基、喹啉基。

除非另有規定，術語“烷基”表示直鏈或支鏈的飽和烴基。優選C _1-6的烷基，更優選C _1-3的烷基，烷基的實例包括但不限於甲基，乙基，正丙基、異丙基、丁基、異丁基、戊基、異戊基、新戊基、正己基等。

除非另有規定，術語“鹵素”表示氟、氯、溴或碘原子。

除非另有規定，術語“鹵代烷基”是指一個或多個氫原子被鹵素原子取代的烷基。優選C _1-6鹵代烷基，鹵代烷基的實例包括但不僅限於一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基、2, 2, 2-三氟乙基，2, 2, 2三氯乙基等。

除非另有規定，術語“烷氧基”是指通過氧橋連接的烷基，也即是烷基將羥基中的氫原子取代所得到的基團。優選C _1-6烷氧基，更優選C _1-3烷氧基。烷氧基的實例包括但不限於甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、第二丁氧基、第三丁氧基、正戊氧基、新戊氧基、正己基氧基等。

除非另有規定，術語“環烷基氧基”是指通過氧橋連接的環烷基，也即是環烷基取代羥基中的氫原子所得到的基團。環烷基氧基優選3-7元、4-7元、或5-7元環烷氧基。環烷基氧基的實例包括但不限於環丙基氧基、環丁基氧基、環戊烷基氧基、環己基氧基等。

除非另有規定，術語“鹵代烷氧基”是指一個或多個氫原子被鹵素原子取代的烷氧基。鹵代烷氧基的實例包括但不限於三氟甲氧基、三氯甲氧基、2, 2, 2-三氟乙氧基、2, 2, 2-三氯乙氧基等。

除非另有規定，術語“環烯基”是指環中包含一個或多個不飽和碳-碳雙鍵的穩定的單環烴基或多環烴基。這些環烯基的實例包括但不限於環丙烯、環丁烯、環戊烯基、環己烯基、1, 3-環己二烯基、1, 4-環己二烯基等。

除非另有規定，術語“雜環烯基”是指環中包含1-3個雜原子或雜原子團的環烯基。

特別說明，本文中所有的取代基和/或其變體的組合只有在這樣的組合會產生穩定的化合物的情況下才是被允許的。

在本發明實施例中，標題化合物的命名是借助Chemdraw通過化合物結構轉化過來的。若化合物名稱與化合物結構存在不一致的情況，可通過綜合相關訊息和反應路線輔助確定；無法通過其他來確認的，以給出的化合物結構式為準。

本發明中部分化合物的製備方法引用了前述類似化合物的製備方法。本發明所屬技術領域具有通常知識者應當知曉，在使用或參照使用其引用的製備方法時，反應物的投料比、反應溶劑、反應溫度等可根據反應物的不同，進行適當的調整。

本發明的化合物可以通過本發明所屬技術領域具有通常知識者所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本領域技術上人員所熟知的等同替換方式，優選的實施方式包括但不限於本發明的實施例。

本發明實施例中使用的縮寫及其對應的化學名稱如下：

縮寫	化學名稱
HATU	2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯
DMAP	4-二甲胺基吡啶
DIEA	N,N-二異丙基乙胺
DMSO	二甲基亞碸
DMF	N,N-二甲基甲醯胺
NMP	N-甲基吡咯烷酮

下面通過實施例對本發明進行詳細描述，但並不意味著對本發明任何不利限制。

本發明的化合物結構是通過核磁共振（NMR）或/和液質聯用色譜（LC-MS）來確定的。NMR化學位移（δ）以百萬分之一（ppm）的單位給出。NMR的測定是用Bruker Avance III 400M核磁儀器，測定溶劑為氘代二甲基亞碸（DMSO- d ₆），氘代甲醇（CD ₃OD）和氘代氯仿（CDCl ₃），內標為四甲基矽烷（TMS）。

液質聯用色譜LC-MS的測定用Shimadzu LCMS-2020質譜儀（離子源為電噴霧離子化）。HPLC的測定使用Shimadzu LCMS-20高效液相色譜。

製備高效液相色譜使用Waters 2767-2489 (Xbridge，C18，10 µm，OBD 250cm ×19cm）或Waters 2767-2489 (Sunfire Prep，C18，10 µm，OBD 250cm ×19cm）。

薄層層析矽膠板使用煙臺江友矽膠開發有限公司GF254矽膠板或乳山市上邦新材料有限公司GF254矽膠板，TLC採用的規格是0.15 mm~0.20 mm，製備型20 x 20 cm，柱層析一般使用於成化工200~300目矽膠為載體。

本發明實施例中的起始原料是已知的並且可以在市場上買到，或者可以採用或按照本領域已知的方法來合成。

在無特殊說明的情況下，本發明的所有反應均在連續的磁力攪拌下，在乾燥氮氣或氬氣氣氛下進行，溶劑為乾燥溶劑，反應溫度單位為攝氏度。

實施例1: (2S,4R)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)己醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將喹㗁啉-6-胺（5.0 g, 34.5 mmol）溶於乙酸（150 mL）中，緩慢滴加氯化碘（6.1 g, 37.6 mmol）的乙酸（55 mL）溶液，氬氣氛圍下20℃攪拌2小時至反應完全。反應液直接減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 20/1 ~ 3/1）得到5-碘喹㗁啉-6-胺（6.0 g，收率64%）。 MS (ESI) M/Z: 272.1 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將5-碘喹㗁啉-6-胺（6.0 g, 22.1 mmol）、二甲基膦氧（2.6 g, 33.2 mmol）和磷酸鉀（7.0 g, 33.2 mmol）溶於N’N-二甲基甲醯胺（100 mL）和水（20 mL）中，加入4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽（1.2 g, 2.2 mmol）和醋酸鈀（494 mg, 2.2 mmol）。反應液在氬氣氛下加熱至120℃攪拌24小時至反應完全。冷卻至室溫，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 10/1 ~ 1/1）得到(6-胺基喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（4.0 g，收率82%）。 MS (ESI) M/Z: 221.9 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將(6-胺基喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（1.0 g, 4.5 mmol）溶於乙醇（20 mL）中，加入5-溴-2,4-二氯吡啶（2.0 g, 9.0 mmol）和N,N-二異丙基乙胺（3.5 g, 27.1 mmol）。反應液在氬氣保護下加熱至120℃攪拌72小時至反應完全。將反應液冷卻至室溫並減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 10/1 ~ 1/1）得到(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（0.5 g，收率27%）。 MS (ESI) M/Z: 411.9 [M+H] ⁺. 步驟4：將1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯（5.0 g, 20.1 mmol）和哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（4.1 g, 22.0 mmol）溶於N’N-二甲基甲醯胺（60 mL）中，加入碳酸鉀（8.3 g, 60.0 mmol），升溫至60℃攪拌過夜。反應液用水（300 mL）稀釋後用乙酸乙酯（200 mL×3次）萃取。合併有機相，先用飽和食鹽水（300 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 8/1）得到4-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（6.9 g，收率83%）。 MS (ESI) M/Z: 416.0 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 8.22 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.64 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 3.12 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 1.49 (s, 9H). 步驟5：室溫下將4-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（3.0 g, 7.2 mmol）和1-甲基-4-1H-吡唑硼酸頻那醇酯（2.25 g, 10.8 mmol）溶於二氧六環（60 mL）和水（6 mL）中, 加入碳酸鈉 (2.3 g, 21.6 mmol)和二茂鐵二氯化鈀(587.5 mg, 0.72 mmol)。反應液在氬氣氛圍下加熱至105℃攪拌過夜。將反應液冷卻至室溫，用水（300 mL）稀釋後用乙酸乙酯（200 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 2/1）得到4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯（2.4 g，收率80%）。 MS (ESI) M/Z: 418.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 7.93 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 6.60 (s, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.96 (s, 3H), 3.50 (br, 4H), 2.95 (br, 4H), 1.47 (s, 9H). 步驟6：室溫下向4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯（1.9 g, 4.6 mmol）的甲醇（2 mL）溶液中加入鹽酸二氧六環溶液(12 mL, 4M)。室溫下攪拌18小時後減壓濃縮得到1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌𠯤鹽酸鹽（1.4 g，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 318.1 [M+H] ⁺. 步驟7：室溫下向1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌𠯤鹽酸鹽（1.0 g, 粗品，約2.8 mmol）和6-溴代己酸甲酯（0.6 mL, 3.8 mmol）的N’N-二甲基甲醯胺（41 mL）溶液中加入碳酸銫（3.5 g, 10.8 mmol）。反應液在室溫下攪拌18小時。將反應液用水（200 mL）稀釋後用乙酸乙酯（150 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 19/1）得到6-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌𠯤-1-基)己酸甲酯（927 mg，收率64%）。 MS (ESI) M/Z: 446.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 7.92 (s, 1H), 7.86 (s, 1H),7.69 (s, 1H), 6.61 (s, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 3.03 (brs, 4H), 2.52 (brs, 4H), 2.38 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 2.32 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 1.67-1.60 (m, 4H), 1.54-1.49 (m, 2H). 步驟8：室溫下向6-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌𠯤-1-基)己酸甲酯（927 mg, 2.1 mmol）的甲醇（20 mL）溶液中加入10%鈀碳催化劑Pd/C （223 mg）。氫氣置換三次後反應體系在15psi氫氣氛圍下攪拌過夜。反應液過濾，濾餅用甲醇（20 mL）洗滌，濾液減壓濃縮得到6-(4-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)己酸甲酯（592 mg，收率68%）。 MS (ESI) M/Z: 416.2 [M+H ⁺]. 步驟9：室溫下向6-(4-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)己酸甲酯（204 mg, 0.49 mmol）和(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（203 mg, 0.49 mmol）的異丙醇（8 mL）溶液中加入三氟乙酸（0.36 mL, 4.9 mmol）。反應液升溫至100℃攪拌36小時。將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 40/1）得到6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)己酸甲酯（277 mg，收率71%）。 MS (ESI) M/Z: 791.2 [M+H] ⁺. 步驟10：室溫下向6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)己酸甲酯（200 mg, 0.25 mmol）的四氫呋喃（2 mL）和水（1 mL）混合溶液中加入氫氧化鋰（32 mg, 0.75 mmol）。反應液在室溫下攪拌2小時，用稀鹽酸將反應液pH值調節至5，得到的混合物直接用反相柱色譜層析純化得到6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)己酸（111 mg，收率57%）。 MS (ESI) M/Z: 777.5 [M+H] ⁺. 步驟11：室溫下將6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)己酸（60 mg, 0.077 mmol）, HATU（44 mg, 0.10 mmol）和三乙胺（23 mg ,0.11 mmol）溶於N’N-二甲基甲醯胺（4 mL）中，室溫下攪拌0.1小時後加入 (2S,4R)-1-((S)-2-胺基-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷基-2-甲醯胺鹽酸鹽 (34 mg, 0.077 mmol)。反應液在室溫下繼續攪拌3小時，加入水（8 mL），有黃色固體析出，過濾，濾餅用高效液相製備色譜純化得到目標化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)己醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷基-2-甲醯胺（35 mg，收率38%）。 MS (ESI) M/Z: 1189.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.60 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.84-8.80 (m, 3H), 8.57 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.87 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.57 (br, 2H), 7.42 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.38 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 6.84 (s, 1H), 5.14 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 4.56 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 4.45-4.40 (m, 2H), 4.35 (brs, 1H), 4.21 (d, J= 16.0 Hz, 5.6 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.71-3.63 (m, 2H), 2.87 (br, 4H), 2.51-2.49 (m, 4H), 2.44 (s, 3H), 2.35-2.27 (m, 3H), 2.18-2.13 (m, 1H), 2.10 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 2.10-2.02 (m, 1H), 1.99-1.90 (m, 1H), 1.60-1.40 (m, 4H), 1.35-1.25 (m, 2H), 0.94 (s, 9H).

實施例2: (2S,4R)-1-((S)-2-(5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)戊醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將1-（5-甲氧基-2-（1-甲基-1H-吡唑-4-基）-4-硝基苯基）哌𠯤（2.0 g，6.3 mmol）和DMAP（766 mg，6.3 mmol）加入到二氯甲烷（20 mL）中，攪拌5分鐘，再加入三氟乙酸酐（2.64 g，12.6 mmol），室溫攪拌反應2小時。將反應液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 20/1 ~ 5/1）得到2,2,2-三氟-1-（4-（5-甲氧基-2-（1-甲基-1H-吡唑-4-基）-4-硝基苯基）哌𠯤-1-基）乙烷-1-酮（2.0克，收率77%）。 MS (ESI) M/Z: 414.1[M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將2,2,2-三氟-1-（4-（5-甲氧基-2-（1-甲基-1H-吡唑-4-基）-4-硝基苯基）哌𠯤-1-基）乙烷-1-酮（2.0 g，4.8 mmol）和10%鈀碳（500 mg）加入到乙醇（30 mL）中，在氫氣球氛圍下，升溫到55℃攪拌反應2小時。將反應液冷至室溫，過濾，濾液減壓濃縮得到1-（4-（4-胺基-5-甲氧基-2-（1-甲基-1H-吡唑-4-基）苯基）哌𠯤-1-基）-2,2,2-三氟乙烷-1-酮直接用於下一步反應（1.7克，收率92%）。 MS (ESI) M/Z: 384.1 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將1-（4-（4-胺基-5-甲氧基-2-（1-甲基-1H-吡唑-4-基）苯基）哌𠯤-1-基）-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（1.0 g，2.6 mmol），（6-（（5-溴-2-氯嘧啶-4-基）胺基）喹㗁啉-5-基）二甲基氧膦（859 mg，2.1 mmol）和三氟乙酸（2.96 g，26.0 mmol）依次加入到異丙醇（30 mL）中，氬氣保護下升溫至95℃攪拌反應16小時。將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 20/1）得到1-（4-（4-（（5-溴-4-（（5-（二甲基磷醯基）喹㗁啉-6-基）胺基）嘧啶-2-基）胺基）-5-甲氧基-2-（1-甲基-1H-吡唑-4-基）苯基）哌𠯤-1-基）-2,2,2-三氟乙基-1-酮（1.5克，收率76%）。 MS (ESI) M/Z: 759.1 [M+H] ⁺. 步驟4：室溫下將1-（4-（4-（（5-溴-4-（（5-（二甲基磷醯基）喹㗁啉-6-基）胺基）嘧啶-2-基）胺基）-5-甲氧基-2-（1-甲基-1H-吡唑-4-基）苯基）哌𠯤-1-基）-2,2,2-三氟乙基-1-酮（2.5 g，3.3 mmol）和氫氧化鉀（1.85 g，33.0 mmol）加入到甲醇（100 mL）和水（10 mL）中，升溫至60℃攪拌反應5小時。將反應液冷卻至室溫，用二氯甲烷（100 mL）稀釋，分液。有機相先用飽和食鹽水（100 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到((6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（1.5克，收率69%）。 MS (ESI) M/Z: 663.0 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD ₃OD): δ 8.84-8.65 (m, 3H), 8.25-8.11 (m, 1H), 7.93 (d, J= 14.4 Hz, 1H), 7.78 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 7.41 (s, 2H), 6.81-6.56 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.63 (s, 3H), 2.95-2.87 (m, 4H), 2.85-2.77 (m, 4H), 2.13 (d, J= 4.8 Hz, 3H), 2.08 (s, 3H). 步驟5：室溫下將5-氯戊酸（62 mg, 0.45 mmol）溶於N,N-二甲基甲醯胺（3 mL）中，依次加入HATU（172 mg, 0.45 mmol）和DIEA（135 mg, 1.05 mmol），攪拌30分鐘後，滴加(2S,4R)-1-((S)-2-胺基-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷基-2-甲醯胺（150 mg, 0.35 mmol）的N,N-二甲基甲醯胺（2 mL）溶液，繼續室溫攪拌3小時。LCMS監控顯示原料消失，往反應液中加入水（10 mL）淬滅反應。混合液用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20 mL×3次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 10/1）得到(2S,4R)-1-((S)-2-(5-氯戊醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺（125 mg，收率65%）。 MS (ESI) M/Z: 549.5 [M+H] ⁺. 步驟6：室溫下將(2S,4R)-1-((S)-2-(5-氯戊醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺（125 mg, 0.23 mmol）溶於N,N-二甲基甲醯胺（5 mL）中，依次加入碘化鈉（51 mg, 0.34 mmol），DIEA（88 mg, 0.76 mmol）和((6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（151 mg, 0.23 mmol），將反應體系加熱至90℃並攪拌4小時。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（10 mL）淬滅反應。混合液用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20 mL×3次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用反相柱層析純化（洗脫劑：乙腈/10%碳酸氫銨= 11/9）得到終產物(2S,4R)-1-((S)-2-(5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)戊醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺（15.4 mg，收率6%）。 MS (ESI) M/Z: 1175.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.59 (s, 1H), 8.98 (dd, J= 9.6, 4.4 Hz, 1H), 8.78-8.63 (m, 3H), 8.29 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.75-7.51 (m, 3H), 7.43-7.30 (m, 6H), 6.72 (s, 1H), 6.21 (brs, 1H), 4.75 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 4.57-4.53 (m, 3H), 4.35 (dd, J= 14.8, 5.2 Hz, 1H), 4.10 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.60 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 3.02 (brs, 4H), 2.67 (s, 3H), 2.54-2. 51 (m, 6H), 2.37-2.15 (m, 4H), 2.14 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.62-1.55 (m, 2H), 1.34-1.21 (m, 2H), 0.94 (s, 9H).

實施例3: (2R,4S)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)己醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷基-2-甲醯胺

反應流程:

反應步驟：以(2R,4S)-1-((S)-2-胺基-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷基-2-甲醯胺和6-溴己酸為原料，參照實施例2的步驟製備得到終產物(2R,4S)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)己醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷基-2-甲醯胺（22 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1189.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.56 (s, 1H), 9.01-8.97 (m, 1H), 8.72 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.70 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.64-7.57 (m, 2H), 7.42-7.37 (m, 3H), 7.32-7.29 (m, 3H), 6.73 (s, 1H), 6.04-6.01 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 4.75-4.72 (m, 1H), 4.64-4.62 (m, 1H), 4.58-4.53 (m, 1H), 4.36-4.29 (m, 2H), 4.16-4.12 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.66-3.62 (m, 1H), 2.92-2.90 (m, 4H), 2.52 (s, 3H), 2.52-2.47 (m, 4H), 2.33-2.28 (m, 2H), 2.24-2.11 (m, 1H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.07-1.94 (m, 2H), 1.47-1.42 (m, 4H), 1.32-1.21 (m, 4H), 1.08 (s, 9H).

實施例4: (2S,4R)-1-((S)-2-(7-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺

反應流程:

反應步驟：以(2S,4R)-1-((S)-2-胺基-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷基-2-甲醯胺和7-溴庚酸為原料，參照實施例2的步驟製備得到終產物(2S,4R)-1-((S)-2-(7-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺（37.9 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1203.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.59 (s, 1H), 8.99 (dd, J= 9.6, 4.4 Hz, 1H), 8.75-8.64 (m, 3H), 8.29 (s, 1H),8.22 (s, 1H), 7.65-7.61 (m, 3H), 7.38-7.33 (m, 6H), 6.73 (s, 1H), 6.12-5.98 (m, 1H), 4.74 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 4.63-4.47 (m, 3H), 4.33 (dd, J= 14.8, 5.2 Hz, 1H), 4.12 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.60 (dd, J= 11.2, 3.6 Hz, 1H), 2.94 (br s, 4H), 2.65-2.25 (m, 9H), 2.21-2.20 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.76-1.40 (m, 6H), 1.32 (brs, 4H), 0.93 (s, 9H).

實施例5: (2S,4R)-1-((S)-2-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)丁醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺

反應流程:

反應步驟：以(2S,4R)-1-((S)-2-胺基-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷基-2-甲醯胺和4-氯丁酸為原料，參照實施例2的步驟製備得到終產物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)丁醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺（22.4 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1161.2 [M+H ⁺]. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.59 (s, 1H), 8.98 (dd, J= 9.6, 4.0 Hz, 1H), 8.71 (dd, J= 10.0, 2.0 Hz, 2H), 8.66 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.75-7.59 (m, 2H), 7.55-7.44 (m, 2H), 7.38-7.29 (m, 5H), 6.95-6.71 (m, 2H), 4.79 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 4.63-4.45 (m, 3H), 4.37 (dd, J= 14.8, 5.2 Hz, 1H), 4.17 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.75 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.59 (dd, J= 11.2, 3.2 Hz, 1H), 3.26-2.75 (m, 10H), 2.67-2.47 (m, 5H), 2.36 (d, J= 13.2 Hz, 1H), 2.26-2.17 (m, 1H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.99 (brs, 2H), 0.97 (s, 9H).

實施例6: 4-((2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將((6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（50 mg, 0.076 mmol）和 (2-(2-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)胺基甲酸第三丁酯（50 mg, 0.14 mmol）溶於N,N-二甲基甲醯胺（5 mL）中，加入DIEA（39 mg, 0.30 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至85℃攪拌5小時。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（10 mL）淬滅反應。混合液用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20 mL×3次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到(2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)胺基甲酸第三丁酯（70 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 938.3 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下向(2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)胺基甲酸第三丁酯（90 mg, 約0.096 mmol）的二氯甲烷（2 mL）溶液中加入鹽酸二氧六環溶液(12 mL, 4M)。室溫下攪拌2小時後減壓濃縮得到(6-((2-((4-(4-(2-(2-(2-(2-胺基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（60 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 838.3 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將(6-((2-((4-(4-(2-(2-(2-(2-胺基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（60 mg, 約0.072 mmol）和 2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-4-氟異吲哚-1,3-二酮（20 mg, 0.72 mmol）溶於DMSO（5 mL）中，加入DIEA（47 mg, 0.36 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至110℃攪拌12小時。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（10 mL）淬滅反應。混合液用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用高效製備液相色譜純化得到終產物4-((2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（1 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1093.7 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.57 (s, 1H), 8.98-8.95 (m, 1H), 8.75 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 8.70 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.20 (s,1H), 7.66 (brs, 2H), 7.52-7.46 (m, 2H), 7.35-7.26 (m, 2H), 7.10 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 6.91 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.53 (t, J= 5.2 Hz, 1H), 4.94-4.89 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.73-3.62 (m, 13H), 3.48-3.43 (m, 2H), 3.0-2.7 (m, 12H), 2.26-2.18 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.07-1.95 (m, 2H).

實施例7: (2S,4R)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)己醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將1-(4-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（400 mg，1.04 mmol），(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)苯基)二甲基氧膦（331 mg，0.92 mmol）和三氟乙酸（296 mg，2.6 mmol）依次加入到異丙醇（20 mL）中，氬氣保護下升溫至95℃攪拌反應16小時。將反應液冷卻至室溫並減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 20/1）得到1-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑基-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟噻吩-1-酮（510 mg，收率78%）。 MS (ESI) M/Z: 707.4 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將1-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑基-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟噻吩-1-酮（510 mg，0.72 mmol）和氫氧化鉀（403 mg，7.2 mmol）加入到甲醇（15 mL）和水（6 mL）中，升溫至60℃攪拌反應4小時。將反應液冷卻至室溫，用二氯甲烷（100 mL）稀釋，分液。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)二甲基氧化膦（370 mg，收率84%）。 MS (ESI) M/Z: 611.2 [M+H] ⁺. 以(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)二甲基氧化膦和(2S,4R)-1-((S)-2-(6-氯己醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺為原料，參照實施例2製備得到終產物(2S,4R)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)己醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲醯胺（45.5 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1137.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 10.67 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.49-8.45 (m, 1H), 8.22 (d, J= 3.6 Hz, 2H), 7.79 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.39-7.29 (m, 7H), 7.03-6.95 (m, 2H), 6.71 (s, 1H), 6.10 (brs, 1H), 4.75 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 4.61-4.51 (m, 3H), 4.36-4.31 (m, 1H), 4.10 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 3.60-3.57 (m, 1H), 2.98 (br s, 4H), 2.60-2.52 (m, 9H), 2.26-2.13 (m, 4H), 1.86 (s, 3H), 1.83 (s, 3H), 1.75-1.50 (m, 4H), 1.37-1.32 (m, 2H), 0.93 (s, 9H).

實施例8: 4-((2-(2-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基-3-氧丙氧基)乙氧基)乙基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（50 mg，0.076 mmol）溶於DMF（5 mL）中，依次加入3-(2-(2-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚-4-基)胺基)乙氧基)丙酸（43 mg，0.10 mmol）、HATU（57 mg，0.15 mmol）和DIEA（20 mg，0.15 mmol），反應體系加熱至25℃攪拌3小時。LCMS監控顯示原料消失，向反應液中加入水（20 mL）淬滅。混合液用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取。合併有機相，先用飽和食鹽水（20 mL×3次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物經高效製備液相色譜純化得到終產物4-((2-(2-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基-3-氧丙氧基)乙氧基)乙基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（26.8 mg，收率33%）。 MS (ESI) M/Z: 1077.9 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD ₃OD): δ 8.86-8.85 (m, 2H), 8.75-8.61 (m, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.65 (brs, 2H), 7.58-7.54 (m, 1H), 7.48-7.44 (m, 1H), 7.01-6.95 (m, 2H), 6.82 (s, 1H), 5.02-4.98 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.79-3.76 (m, 4H), 3.72-3.69 (m, 2H), 3.68-3.57 (m, 8H), 3.44-3.42 (m, 2H), 2.91-2.84 (m, 4H), 2.80-2.75 (m, 1H), 2.70-2.61 (m, 4H), 2.17-2.13 (m, 6H), 2.04-1.98 (m, 1H), 1.32-1.28 (m, 1H).

實施例9: 4-((15-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-15-氧-3,6,9,12-四氧戊癸基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：室溫下將1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)胺基)-3,6,9,12-四氧代十五烷基-15-油酸（120 mg，0.23 mmol），2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（105 mg，0.28 mmol）和N,N-二異丙基乙胺（59 mg，0.46 mmol）溶於DMF（5 mL），攪拌一小時後加入((6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（152 mg，0.23 mmol），繼續攪拌3小時。LCMS監測反應基本結束，反應液過濾，濾液經高效製備液相色譜純化得到終產物4-((15-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基) 哌𠯤-1-基)-15-氧-3,6,9,12-四氧戊癸基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（42 mg，收率16%）。 MS (ESI) M/Z: 1166.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.58 (s, 1H), 8.98-8.94 (m, 1H), 8.88-8.83 (m, 1H), 8.74 (d, J= 1.6 Hz, 1H)，8.70 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.66-7.56 (m, 2H), 7.51-7.45 (m, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.10 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 6.91 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.65 (s, 1H), 6.50-6.48 (m, 1H), 4.96-4.85 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.83-3.80 (t, J= 4.8 Hz, 2H), 3.73-3.64 (m, 18H), 3.55-3.53 (m, 2H), 3.53-3.48 (m, 2H), 2.89 (brs, 4H), 2.67-2.64 (m, 2H), 2.58 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 2.24-2.20 (m, 1H), 2.14 (s, 3H), 2.11(s, 3H), 2.02-1.98 (m, 1H), 1.31-1.26 (m, 1H).

實施例10: 4-((2-(2-(2-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-3-氧丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（50 mg，0.076 mmol）溶於DMF（5 mL）中，依次加入3-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚-4-基)胺基)乙氧基)乙氧基)丙酸（35 mg，0.073 mmol）、HATU（57 mg，0.15 mmol）和DIEA（20 mg，0.15 mmol），反應體系加熱至25℃攪拌3小時。LCMS監控顯示原料消失，向反應液中加入水（20 mL）淬滅。混合液用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取。合併有機相，先用飽和食鹽水（20 mL×3次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物經高效製備液相色譜純化得到終產物4-((2-(2-(2-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-3-氧丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（23.6 mg，收率29%）。 MS (ESI) M/Z: 1121.9 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD ₃OD): δ 8.86-8.84 (m, 2H), 8.77-8.57 (m, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.64 (s, 2H), 7.55-7.52 (m, 1H) , 7.47-7.43 (m, 1H), 6.99-6.95 (m, 2H), 6.82 (s, 1H), 5.03-4.98 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.78-3.69 (m, 7H), 3.68-3.58 (m, 11H), 3.40 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 2.95-2.87 (m, 4H), 2.83-2.78 (m, 1H), 2.73-2.59 (m, 4H), 2.16 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.08-1.99 (m, 1H), 1.33-1.28 (m, 1H).

實施例11: 4-((9-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-9-氧化壬基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（50 mg，0.076 mmol）溶於DMF（5 mL）中，依次加入9-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚-4-基)胺基)壬酸（32 mg，0.075 mmol）、HATU（57 mg，0.15 mmol）和DIEA（20 mg，0.15 mmol），反應體系加熱至25℃攪拌3小時。LCMS監控顯示原料消失，向反應液中加入水（20 mL）淬滅。混合液用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取。合併有機相，先用飽和食鹽水（20 mL×3次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物經高效製備液相色譜純化得到終產物4-((9-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-9-氧化壬基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（21.5 mg，收率27%）。 MS (ESI) M/Z: 1074.0 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD ₃OD): δ 8.88-8.85 (m, 2H), 8.74-8.59 (m, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.75-7.57 (m, 3H), 7.53-7.49 (m, 1H), 7.02-6.99 (m, 2H), 6.85 (s, 1H), 5.05-5.00 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.80-3.62 (m, 7H), 2.97-2.86 (m, 4H), 2.84-2.60 (m, 3H), 2.43 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.10-1.99 (m, 2H), 1.67-1.58 (m, 4H), 1.47-1.28 (m, 9H).

實施例12: 4-((2-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)乙基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-(3-羥基丙氧基)乙基)胺基)異吲哚啉-1,3-二酮（100 mg, 0.27 mmol）溶於二氯甲烷（5 mL）中，加入三乙胺（40 mg, 0.40 mmol）。降溫至0℃，緩慢滴加甲磺醯氯（46 mg, 0.40 mmol），0℃下攪拌1小時。TLC監測顯示反應結束，加入飽和碳酸氫鈉水溶液（20 mL）淬滅反應。混合液用二氯甲烷（20 mL×3次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱色譜層析法純化得到3-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-4-基)胺基)乙氧基)丙基甲磺酸酯。 MS (ESI) M/Z: 454.3 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（48 mg, 0.073 mmol）和3-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-4-基)胺基)乙氧基)丙基甲磺酸酯（50 mg, 0.11 mmol）溶於N,N-二甲基甲醯胺（5 mL）中，加入DIEA（28.7 mg, 0.22 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至80℃並攪拌過夜。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（10 mL）淬滅反應。混合液用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用高效製備液相色譜純化得到終產物4-((2-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)乙基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（26.7 mg，收率35%）。 MS (ESI) M/Z: 1020.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 13.34 (brs, 1H), 10.97 (brs, 1H), 10.39 (brs, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.78 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 8.71-8.68 (m, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.92 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.58-7.54(m, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.16 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.95 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 6.54 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 5.01-4.96 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.74-3.69 (m, 9H), 3.62-3.58 (m, 2H), 3.51-3.49 (m, 2H), 3.40-3.38(m, 1H), 3.28-3.21 (m, 3H), 3.13-3.08 (m, 2H), 3.00-2.92 (m, 2H), 2.81-2.76 (m, 1H), 2.35-2.18 (m, 3H),2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H).

實施例13: 5-(4-((1-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-羰基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌𠯤-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：將4-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)苯甲酸（73 mg，0.13 mmol）溶於DMF（5 mL）中，依次加入(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（87 mg，0.13 mmol）、HATU（99 mg，0.26 mmol）和DIEA（67 mg，0.52 mmol），反應體系室溫下攪拌1小時。LCMS監控顯示原料消失，向反應液中加入水（20 mL）淬滅。混合液用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取。合併有機相，先用飽和食鹽水（20 mL×3次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物經高效製備液相色譜純化得到終產物5-(4-((1-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-羰基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌𠯤-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（7.2 mg，收率4.6%）。 MS (ESI) M/Z: 1204.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.66 (s, 1H), 11.07 (s, 1H), 8.84-8.80 (m, 3H), 8.40 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.12(s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.69-7.64 (m, 2H), 7.36-7.32 (m, 3H), 7.27-7.23 (m, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.54 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.09-5.05 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.70-3.68 (m, 4H), 3.51-3.44 (m, 6H), 3.39-3.36 (m, 2H), 2.90-2.83 (m, 6H), 2.67-2.51 (m, 6H), 2.44-2.40 (m, 2H), 2.33-2.27 (m, 1H), 2.19-2.13 (m, 1H), 2.03 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.69-1.64 (m, 3H).

實施例14: 5-(3-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將2-(哌啶-4-基)乙酸乙酯鹽酸鹽（500 mg, 2.4 mmol）、1-Boc-3-碘氮雜環丁烷（1.05 g, 3.6 mmol）和碘化鈉（36 mg, 0.24 mmol）溶於乙腈（100 mL）中，加入碳酸鉀（1.0 g, 7.2 mmol），反應體系升溫至80℃攪拌16小時。LCMS監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，倒入到冰水（200 mL）中。混合液用乙酸乙酯（200 mL×3次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱色譜層析法（石油醚：乙酸乙酯= 5:1）純化得到3-(4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（304 mg，收率39%）。 MS (ESI) M/Z: 327.2 [M+H] ⁺. 步驟2：將3-(4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（240 mg, 0.74 mmol）溶於氯化氫二氧六環溶液（3M, 5 mL）中，室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示反應結束，反應液減壓濃縮得到190 mg 2-(1-(氮雜環丁烷-3-基)哌啶-4-基)乙酸乙酯鹽酸鹽。 MS (ESI) M/Z: 227.2 [M+H] ⁺. 步驟3：將2-(1-(氮雜環丁烷-3-基)哌啶-4-基)乙酸乙酯鹽酸鹽（250 mg, 0.95 mmol）和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-異吲哚啉-1,3-二酮（263 mg, 0.95 mmol）溶於乙腈（100 mL）中，加入N,N-二異丙基乙胺（245 mg，1.90 mmol），反應體系升溫至85℃攪拌16小時。LCMS監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，倒入到冰水（200 mL）中。混合液用乙酸乙酯（200 mL×3次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱色譜層析法（石油醚：乙酸乙酯= 1:1）純化得到2-(1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)氮雜環丁烷-3-基)哌啶-4-基)乙酸乙酯（143 mg，收率31%）。 MS (ESI) M/Z: 483.2 [M+H] ⁺. 步驟4：將2-(1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)氮雜環丁烷-3-基)哌啶-4-基)乙酸乙酯（140 mg, 0.29 mmol）溶於水（5 mL）中，降溫至0℃，緩慢滴加濃硫酸（1 mL）。反應體系升溫至100℃下攪拌16小時，LCMS監測顯示反應結束。加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH值至中性，減壓濃縮，所得殘餘物用高效製備液相色譜純化得到2-(1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)氮雜環丁烷-3-基)哌啶-4-基)乙酸（103 mg，收率78%）。 MS (ESI) M/Z: 455.2 [M+H] ⁺. 步驟5：將2-(1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)氮雜環丁烷-3-基)哌啶-4-基)乙酸（27.7 mg，0.06 mmol）溶於DMF（3 mL）中，依次加入(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（33 mg，0.05 mmol）、HATU（57 mg，0.15 mmol）和DIEA（20 mg，0.15 mmol），反應體系室溫下攪拌2小時。LCMS監控顯示原料消失，向反應液中加入水（20 mL）淬滅。混合液用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取。合併有機相，先用飽和食鹽水（20 mL×3次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物經高效製備液相色譜純化得到終產物5-(3-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（3.6 mg，收率6.6%）。 MS (ESI) M/Z: 1099.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.56 (s, 1H), 8.99-8.96 (m, 1H), 8.74-8.70 (m, 2H), 8.30-8.24 (m, 2H), 8.03 (s,1H), 7.65-7.62 (m, 3H), 7.36 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.52 (d, J= 9.4 Hz, 1H), 5.36-5.30 (m, 1H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.11 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 3.90 (brs, 4H), 3.73 (brs, 4H), 3.53 (s, 2H), 2.90-2.84 (m, 6H), 2.80-2.72 (m, 2H), 2.29 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 2.24-2.20 (m, 1H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.02-1.98 (m, 4H), 1.90-1.84 (m, 2H), 1.28-1.25 (m, 3H).

實施例15: 4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)丁醯胺

反應流程:

反應步驟：將4-氯-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)丁醯胺（100 mg, 0.26 mmol）、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（176 mg, 0.26 mmol）和碘化鈉（5 mg, 0.03 mmol）溶於N,N-二甲基甲醯胺（5 mL）中，加入DIEA（68 mg, 0.52 mmol），反應體系升溫至90℃攪拌16小時。LCMS監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物經高效製備液相色譜純化得到終產物4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)丁醯胺（10.5 mg，收率4%）。 MS (ESI) M/Z: 1004.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.69 (s, 1H), 11.16 (s, 1H), 9.85 (s, 1H), 9.69-9.58 (m, 1H), 8.85 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.81-8.78 (m, 2H), 8.45-8.43 (m, 2H), 8.29 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.89-7.82 (m, 2H), 7.68-7.66 (m, 2H), 6.77 (s, 1H), 5.18-5.13 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.60-3.56 (m, 2H), 3.27-3.22 (m, 6H), 3.00-2.95 (m, 3H), 2.67-2.55 (m, 5H), 2.09-2.06 (m, 2H), 2.04 (s, 3H), 2.00 (s, 3H).

實施例16: 7-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)庚醯胺

反應流程:

反應步驟：以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦和7-溴-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)庚醯胺為原料，參照實施例15製備得到終產物7-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)庚醯胺（34.1 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1046.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.78 (s, 1H), 11.16 (s, 1H), 9.71 (s, 1H), 9.29 (brs, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.82-8.77 (m, 2H), 8.59 (brs, 1H), 8.48 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.84-7.81 (m, 2H), 7.65-7.62 (m, 2H), 6.77 (s, 1H), 5.16-5.12 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.25-3.22 (m, 8H), 2.97-2.91 (m, 4H), 2.67-2.55 (m, 4H), 2.04 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.69 (brs, 4H), 1.40 (brs, 4H).

實施例17: 3-(4-(5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)戊-1-炔-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦和5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代異吲哚啉-4-基)戊-4-炔-1-基甲磺酸酯為原料（其製備，參見WO2017176958A1），參照實施例15製備得到終產物3-(4-(5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)戊-1-炔-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮（15.1 mg）。 MS (ESI) M/Z: 971.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 13.17 (s, 1H), 10.61 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.69-8.65 (m, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.89-7.85 (m, 2H), 7.59 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.52-7.41 (m, 2H), 7.30 (s, 1H), 6.75 (s, 1H), 5.34-5.29 (m, 1H), 4.67-4.49 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.74-3.67 (m, 1H), 3.63-3.56 (m, 1H), 3.41-3.36 (m, 2H), 3.26-3.24 (m, 3H), 3.18-3.13 (m, 1H), 2.98-2.91 (m, 2H), 2.87-2.85 (m, 2H), 2.67-2.65 (m, 2H), 2.58-2.10 (m, 8H), 1.27-1.24 (m, 2H).

實施例18: 3-(4-(5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)戊基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦和5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代異吲哚啉-4-基)戊基甲磺酸酯為原料（其製備，參見WO2017176958A1），參照實施例15製備得到終產物3-(4-(5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)戊基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮（17 mg）。 MS (ESI) M/Z: 975.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 13.17 (s, 1H), 9.62 (s, 1H), 8.73 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.69 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.62-8.57 (m, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.75-7.70 (m, 1H), 7.64-7.61 (m, 1H), 7.45-7.40 ( m, 2H), 7.34-7.29 (m, 2H), 6.67 (s, 1H), 5.23-5.18 (m, 1H), 4.47-4.28 (m, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.57-3.54 (m, 2H), 3.32-3.26 (m, 1H), 3.20-3.13 (m, 3H), 2.95-2.88 (m, 4H), 2.84-2.78 (m, 1H), 2.66-2.61 (m, 2H), 2.49-2.36 (m, 1H), 2.18-2.15 (m, 2H), 2.07 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.24-1.19 (m, 2H), 0.80-0.74 (m, 4H).

實施例19: 3-(4-(5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)戊基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((5-羥基戊基)胺基)異吲哚啉-1,3-二酮（65 mg, 0.18 mmol，製備，參見Journal of Medicinal Chemistry，2020, 192, 112186）溶於二氯甲烷（10 mL）中，加入三乙胺（27 mg, 0.27 mmol）。降溫至0℃，緩慢滴加甲磺醯氯（31 mg, 0.27 mmol），0℃下攪拌1小時。TLC監測顯示反應結束，加入飽和碳酸氫鈉水溶液（20 mL）淬滅反應。混合液用二氯甲烷（20 mL×3次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱色譜層析法純化得到5-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-4-基)胺基)戊基甲磺酸酯（65 mg，收率82%）。 MS (ESI) M/Z: 438.0 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（98 mg, 0.15 mmol）和5-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-4-基)胺基)戊基甲磺酸酯（65 mg, 0.15 mmol）溶於乙腈（5 mL）中，加入DIEA（48 mg, 0.37 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至80℃並攪拌12小時。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，用高效製備液相色譜純化得到終產物3-(4-(5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)戊基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮（20.5 mg，收率35%）。 MS (ESI) M/Z: 1004.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.58 (s, 1H), 8.99 (dd, J= 4.4, 9.6 Hz, 1H), 8.73 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.70 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.43 (brs, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.65-7.61 (m, 3H), 7.53-7.47 (m, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.10 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.89 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.24 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 4.94-4.89 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.32-3.26 (m, 2H), 2.96 (brs, 4H), 2.91-2.59 (m, 8H), 2.45 (brs, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.75-1.67 (m, 4H), 1.51-1.43 (m, 2H).

實施例20: 4-((3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)丙基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((3-羥基丙基)胺基)異吲哚啉-1,3-二酮為原料，參照實施例19製備得到終產物4-((3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)丙基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（6.7 mg）。 MS (ESI) M/Z: 976.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.58 (s, 1H), 9.00-8.96 (m, 1H), 8.74 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.70 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.66 (brs, 2H), 7.52 (t, J= 6.4 Hz, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.14-7.11 (m, 1H), 7.00-6.96 (m, 1H), 6.75 (s, 1H), 6.47 (brs, 1H), 4.94-4.89 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.42 (brs, 2H), 3.39-2.58 (m, 12H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.00-1.78 (m, 2H), 1.31-1.25 (m, 2H).

實施例21: 3-(4-(3-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)丙基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦和3-(4-(3-(3-羥基丙氧基)丙基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮（製備參見WO2020113233A1）為原料，參照實施例19製備得到終產物3-(4-(3-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)丙氧基)丙基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氫-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮（12.3 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1020.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.59 (s, 1H), 8.99-8.95 (m, 1H), 8.75 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 8.71 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.90 (brs, 1H), 7.69 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.37 (brs, 2H), 7.02-6.89 (m, 2H), 6.74 (s, 1H), 6.67 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.26-5.21 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.66-3.64 (m, 3H), 3.53-3.47 (m, 2H), 3.42-3.37 (m, 2H), 3.13-2.71 (m, 12H), 2.66-2.59 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.98-1.86 (m, 6H).

實施例22: (2S,4R)-1-((S)-2-(7-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺

反應流程:

反應步驟：步驟1：將7-溴庚酸（210 mg，1.0 mmol）溶於DMF（3 mL）中，加入HATU（1.1 g，3.0 mmol）和DIEA（387 mg，3.0 mmol），室溫下攪拌30分鐘後，再滴加(2S,4R)-1-((S)-2-胺基-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺（444 mg，1.0 mmol）的DMF（2 mL）溶液，反應體系室溫下繼續攪拌1小時。LCMS監控顯示原料消失，向反應液中加入水（20 mL）淬滅。混合液用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取。合併有機相，先用飽和食鹽水（20 mL×3次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到(2S,4R)-1-((S)-2-(7-溴庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺（200 mg，收率32%）。 MS (ESI) M/Z: 635.3 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（105 mg, 0.16 mmol）和(2S,4R)-1-((S)-2-(7-溴庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺（100 mg, 0.16 mmol）溶於DMF（5 mL）中，加入DIEA（62 mg, 0.48 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至80℃並攪拌過夜。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，用高效製備液相色譜純化得到終產物(2S,4R)-1-((S)-2-(7-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)庚醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺（22.5 mg，收率12%）。 MS (ESI) M/Z: 1217.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.59 (s, 1H), 8.99-8.95 (m, 1H), 8.74 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.71 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.72-7.68 (m, 1H), 7.51 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.39-7.36 (m, 6H), 6.71 (s, 1H), 6.28 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.12-5.05 (m, 1H), 4.77 (t, J= 8.2 Hz, 1H), 4.62 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 4.49 (s, 1H), 4.11 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 3.58-5.54 (m, 1H), 3.35-3.15 (m, 5H), 2.91-2.85 (m, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.50-2.39 (m, 1H), 2.35-2.27 (m, 2H), 2.24-2.18 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.81-1.72 (m, 4H), 1.63-1.55 (m, 2H), 1.48 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.39-1.30 (m, 4H), 1.05 (s, 9H).

實施例23: (2S,4R)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)己醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺

反應流程:

反應步驟：以(2S,4R)-1-((S)-2-胺基-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺、6-溴己酸和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例22的步驟製備得到終產物(2S,4R)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)己醯胺基)-3,3-二甲基丁醯基)-4-羥基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲醯胺（54.3 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1203.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.59 (s, 1H), 9.00-8.96 (m, 1H), 8.74 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.70 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.68 (brs, 2H), 7.49-7.32 (m, 7H), 6.72 (s, 1H), 6.36-6.18 (m, 1H), 5.12-5.04 (m, 1H), 4.78-4.74 (m, 1H), 4.59 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.49 (s, 1H), 4.12 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.59-3.54 (m, 2H), 3.24-2.90 (m, 5H), 2.90-2.59 (m, 4H), 2.53 (s, 3H), 2.30-2.23 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.85-1.66 (m, 6H), 1.48 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.40-1.35 (m, 2H), 1.05 (s, 9H).

實施例24: 4-((9-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)壬基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將9-胺基壬-1-醇（95 mg, 0.60 mmol）和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟-異吲哚啉-1,3-二酮（110 mg, 0.40 mmol）溶於NMP（3 mL）中，加入N,N-二異丙基乙胺（0.1 mL），反應體系升溫至140℃攪拌20分鐘。TLC監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，倒入到水（10 mL）中。混合液用乙酸乙酯（10 mL×4次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱色譜層析法（石油醚：乙酸乙酯= 0:1）純化得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((9-羥基壬基)胺基)異吲哚啉-1,3-二酮（80 mg，收率48%）。 MS (ESI) M/Z: 416.2 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((9-羥基壬基)胺基)異吲哚啉-1,3-二酮（80 mg, 0.19 mmol）溶於二氯甲烷（5 mL）中，加入三乙胺（0.04 mL）。降溫至0℃，緩慢滴加甲磺醯氯（31 mg, 0.27 mmol），0℃下攪拌1小時。TLC監測顯示反應結束，將反應液倒入水（10 mL）中。混合液用乙酸乙酯（10 mL×2次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱色譜層析法（石油醚：乙酸乙酯= 5:1）純化得到9-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-4-基)胺基)壬基甲磺酸酯（55 mg，收率58%）。 MS (ESI) M/Z: 494.2 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（52 mg, 0.08 mmol）和9-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-4-基)胺基)壬基甲磺酸酯（55 mg, 0.11 mmol）溶於乙腈（5 mL）中，加入DIEA（0.04 mL）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至80℃並攪拌16小時。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，倒入水（5 mL）中。混合液用二氯甲烷（10 mL×2次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用製備型薄層層析矽膠板（二氯甲烷：甲醇=20：1）純化得到終產物4-((9-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)壬基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（31 mg，收率37%）。 MS (ESI) M/Z: 1060.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.58 (s, 1H), 8.99-8.95 (m, 1H), 8.75 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 8.70 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.76 -7.68 (m, 2H), 7.52-7.48 (m, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.09 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.89 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.25 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 4.93-4.89 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 3.29-3.28 (m, 2H), 3.14 (brs, 4H), 2.95-2.66 (m, 8H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.96-1.80 (m, 10H), 1.70-1.64 (m, 4H), 1.47-1.39 (m, 2H).

實施例25: 4-((7-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)庚基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟異吲哚啉-1,3-二酮、7-胺基庚-1-醇和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例24的步驟製備得到終產物4-((7-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)庚基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（23 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1032.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.74 (s, 1H), 11.11 (s, 1H), 9.50 (brs, 1H), 8.87 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.82 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.63-7.59 (m, 1H), 7.50 (brs, 1H), 7.12 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.05 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.55 (brs, 1H), 5.09-5.04 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.57-3.54 (m, 2H), 3.37-3.16 (m, 8H), 3.00-2.96 (m, 3H), 2.64-2.56 (m, 1H), 2.05 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.70-1.62 (m, 4H), 1.39 (brs, 6H), 1.24 (brs, 2H).

實施例26: 4-((8-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)辛基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟異吲哚啉-1,3-二酮、8-胺基辛-1-醇和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例24的步驟製備得到終產物4-((8-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)辛基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（23 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1046.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 13.26 (s, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.83-8.77 (m, 2H), 8.73 8.64 (m, 1H), 8.05-8.02 (m, 2H), 7.69-7.67 (m, 1H), 7.54-7.50 (m, 1H), 7.45-7.42 (m, 2H), 7.10 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 6.91 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 4.97-4.92 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.67-3.60 (m, 2H), 3.32-3.24 (m, 6H), 3.07-2.98 (m, 4H), 2.81-2.70 (m, 4H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.74-1.69 (m, 4H), 1.47-1.26 (m, 8H).

實施例27: 4-((6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)己基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟異吲哚啉-1,3-二酮、6-胺基己-1-醇和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例24的步驟製備得到終產物4-((6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)己基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（22 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1018.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.59 (s, 1H), 8.99-8.95 (m, 1H), 8.75 ( d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.71 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.69 (brs, 1H), 7.54-7.48 (m, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.11 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.91 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 6.25-6.23 (m, 1H), 4.94-4.89 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.34-3.31 (m, 2H), 3.11-2.60 (m, 12H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.72-1.68 (m, 4H), 1.52-1.36 (m, 6H).

實施例28: 4-((9-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)壬基)氧代)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將9-溴-1-壬醇（222 mg, 1.0 mmol）和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羥基-異吲哚啉-1,3-二酮（274 mg, 1.0 mmol）溶於DMF（10 mL）中，加入碳酸氫鈉（168 mg, 2.0 mmol），反應體系升溫至70℃攪拌12小時。TLC監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，倒入到水（100 mL）中。混合液用乙酸乙酯（50 mL×2次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((9-羥基壬基)氧代)異吲哚啉-1,3-二酮（390 mg，收率93%）。 MS (ESI) M/Z: 417.3 [M+H] ⁺. 後續步驟以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((9-羥基壬基)氧代)異吲哚啉-1,3-二酮為原料，參照實施例24的製備方法得到終產物4-((9-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)壬基)氧代)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（21.3 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1061.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.90 (s, 1H), 12.76 (s, 1H), 11.24 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.87-8.82 (m, 1H), 8.79 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.89 (s, 2H), 7.75-7.68 (m, 2H), 7.45 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 6.70 (s, 1H), 5.02-4.95 (m, 1H), 4.20 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.58-3.56 (m, 2H), 3.27-3.18 (m, 2H), 3.10-3.01 (m, 2H), 3.00-2.97 (m, 2H), 2.88-2.86 (m, 2H), 2.83-2.76 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.91-1.87 (m, 2H), 1.57-1.52 (m, 2H), 1.48-1.46 (m, 2H), 1.46-1.34 (m, 10H).

實施例29: 3-(4-(10-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)癸-1-炔-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將3-(4-溴-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮（50 mg, 0.16 mmol），雙(三苯基膦)二氯化鈀(Ⅱ) （43 mg, 0.06 mmol）和碘化亞銅（17 mg, 0.09 mmol）溶於DMF（5 mL）中，氮氣置換3次，再加入DIEA（216 mg, 1.7 mmol）和癸-9-炔-1-醇（213 mg, 1.4 mmol），反應體系升溫至65℃攪拌16小時。TLC監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，倒入到水（100 mL）中。混合液用乙酸乙酯（50 mL×2次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱色譜層析法（石油醚：乙酸乙酯= 0:1）純化得到3-(4-(10-羥基癸-1-炔-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮（34 mg，收率56%）。 MS (ESI) M/Z: 397.2 [M+H] ⁺. 後續步驟以3-(4-(10-羥基癸-1-炔-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮為原料，參照實施例24的製備方法得到終產物3-(4-(10-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)癸-1-炔-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮（3.9 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1041.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.58 (s, 1H), 9.00-8.96 (m, 1H), 8.74-8.70 (m, 2H), 8.30-8.28 (m, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.81-7.32 (m, 8H), 6.72 (s, 1H), 5.29-5.24 (m, 1H), 4.51-4.31 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 2.97-2.82 (m, 6H), 2.71-2.45 (m, 6H), 2.35-2.21 (m, 4H), 2.14 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.53-1.46 (m, 4H), 1.37-1.25 (m, 8H).

實施例30: 5-((2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將2-胺基乙-1-醇（166 mg, 2.7 mmol）和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-異吲哚啉-1,3-二酮（500 mg, 1.8 mmol）溶於NMP（10 mL）中，加入N,N-二異丙基乙胺（351 mg, 2.7 mmol），反應體系升溫至140℃攪拌20分鐘。TLC監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，倒入到水（50 mL）中。混合液用乙酸乙酯（40 mL×4次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱色譜層析法（石油醚：乙酸乙酯= 0:1）純化得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((2-羥基乙基)胺基)異吲哚啉-1,3-二酮（200 mg，收率35%）。 MS (ESI) M/Z: 318.1 [M+H] ⁺. 後續步驟以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((2-羥基乙基)胺基)異吲哚啉-1,3-二酮為原料，參照實施例24的製備方法得到終產物5-((2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（5 mg）。 MS (ESI) M/Z: 962.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 13.19 (s, 1H), 9.58 (brs, 1H), 8.79 (d , J= 1.6 Hz, 1H), 8.75 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.73-8.69 (m, 1H), 8.09 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.68-7.61 (m, 3H), 7.35 (s, 1H), 6.99-6.95 (m, 2H), 6.70 (s, 1H), 4.98-4.93 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.58-3.50 (m 4H), 3.38-3.32 (m, 4H), 3.30-3.10 (m, 4H), 2.95-2.76 (m, 4H), 2.14 (s, 3H), 2.10 (s, 3H).

實施例31: 5-((5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-異吲哚啉-1,3-二酮、5-胺基戊-1-醇和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例24的步驟製備得到終產物5-((5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（3.2 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1004.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.58 (s, 1H), 9.00-8.96 (m, 1H), 8.74 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.70 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.67-7.52 (m, 4H), 7.35 (s, 1H), 6.97 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 6.79-6.76 (m, 1H), 6.74 (s, 1H), 4.95-4.90 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.28-3.23 (m, 2H), 3.05 (brs, 4H), 2.92-2.70 (m, 6H), 2.59 (brs, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.54-1.47 (m, 4H), 1.34-1.22 (m, 4H).

實施例32: 4-((5-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（500 mg, 0.76 mmol）和4-碘哌啶-1-羧酸第三丁酯（705 mg, 2.3 mmol）溶於乙腈（10 mL）中，加入碳酸鉀（312 mg, 2.3 mmol），反應體系升溫至100℃攪拌36小時。TLC監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱色譜層析法（石油醚：乙酸乙酯= 1:1）純化得到4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（460 mg，收率72%）。 MS (ESI) M/Z: 846.3 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下向4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（460 mg, 0.54 mmol）的二氯甲烷（5 mL）溶液中加入鹽酸二氧六環溶液（10 mL, 4M）。室溫下攪拌30分鐘後減壓濃縮得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲磷氧化物鹽酸鹽（500 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 746.2 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲磷氧化物鹽酸鹽（68 mg, 約0.08 mmol）和5-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)胺基)戊基甲磺酸酯（60 mg, 0.14 mmol）溶於乙腈（5 mL）中，加入DIEA（35 mg, 0.27 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至85℃並攪拌12小時。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，用高效製備液相色譜純化得到終產物4-((5-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（8.2 mg，收率37%）。 MS (ESI) M/Z: 1087.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.57 (s, 1H), 8.99-8.96 (m, 1H), 8.73 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.70 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.64 (brs, 3H), 7.53-7.47 (m, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.09 (d, J=7.2 Hz, 1H), 6.89 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.25 (t, J= 5.4 Hz, 1H), 4.93-4.88 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.31-3.26 (m 2H), 3.11-3.03 (m, 2H), 2.95 (brs, 4H), 2.91-2.74 (m, 4H), 2.72-2.69 (m, 4H), 2.51-2.15 (m, 5H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.95-1.88 (m, 2H), 1.53-1.43 (m, 4H), 1.34-1.25 (m, 4H).

實施例33: 4-((3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)丙基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-4-基)胺基)丙基甲磺酸酯和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲磷氧化物鹽酸鹽為原料，參照實施例32的步驟製備得到終產物4-((3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)丙基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（6 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1059.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.54 (s, 1H), 8.97-8.93 (m, 1H), 8.73 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.70 (d, J= 2.0Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.68-7.46 (m, 5H), 7.31 (s, 1H), 7.08 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 6.92 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.86-6.83 (m, 1H), 6.76 (s, 1H), 4.90-4.86 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.38-3.33 (m, 2H), 3.04-3.01 (m, 6H), 2.87-2.63 (m, 9H), 2.47-2.44 (m, 2H), 2.29-2.23 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.11(s, 3H), 1.77-1.64 (m, 4H), 1.33-1.23 (m, 2H).

實施例34: 3-(4-(5-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)戊-1-炔-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：以5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代異吲哚啉-4-基)戊-4-炔-1-基甲磺酸酯和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲磷氧化物鹽酸鹽為原料，參照實施例32的步驟製備得到終產物3-(4-(5-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)戊-1-炔-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮（10.8 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1054.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 13.04 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.79-8.72 (m, 2H), 8.14 (s, 1H), 7.86-7.84 (m, 2H), 7.75 (s, 1H), 7.66-7.64 (m, 1H), 7.58 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.47 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 6.69 (s, 1H), 5.36-5.33 (m, 2H), 4.58-4.41 (m, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.26 (brs, 4H), 2.95-2.76 (m, 5H), 2.67-2.60 (m, 2H), 2.54-2.34 (m, 6H), 2.24-2.20 (m, 4H), 2.14 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.31-1.25 (m, 6H).

實施例35: 5-(3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲磷氧化物鹽酸鹽（110 mg, 0.13 mmol）和3-碘氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（209 mg, 0.74 mmol）溶於乙腈（10 mL）中，加入碳酸鉀（102 mg, 0.74 mmol），反應體系升溫至100℃攪拌5天。TLC監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用製備型薄層層析矽膠板純化得到3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（90 mg，收率77%）。 MS (ESI) M/Z: 901.3 [M+H] ⁺. 步驟2：將3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（90 mg, 0.10 mmol）溶於二氯甲烷（5 mL）中，加入三氟乙酸（10 mL），室溫下攪拌30分鐘。LCMS監測顯示反應結束，反應液減壓濃縮得到(6-((2-((4-(4-(1-(氮雜環丁烷-3-基)哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基磷氧化物的三氟乙酸鹽（50 mg，收率55%）。 MS (ESI) M/Z: 801.3 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將(6-((2-((4-(4-(1-(氮雜環丁烷-3-基)哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基磷氧化物三氟乙酸鹽（25 mg, 0.03 mmol）和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮（25 mg, 0.09 mmol）溶於DMSO（5 mL）中，加入DIEA（12 mg, 0.09 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至60℃並攪拌過夜。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，用高效製備液相色譜純化得到終產物5-(3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（11.4 mg，收率35%）。 MS (ESI) M/Z: 1057.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 13.23 (s, 1H), 8.80 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 8.75 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.86-8.72 (m, 1H), 8.58 (brs, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.69-7.60 (m, 2H), 7.52-7.50 (m, 1H), 7.43 (s, 1H), 6.82 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.60-6.57 (m, 1H), 4.97-4.92 (m, 1H), 4.19-4.08 (m, 4H), 3.84 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.69-3.65 (m, 1H), 3.57-3.51 (m, 2H), 3.35-3.27 (m, 6H), 2.93-2.68 (m, 5H), 2.49 (m, 4H), 2.30-2.27 (m, 4H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H).

實施例36: 5-(4-((4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(羥甲基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮（100 mg, 0.27 mmol，製備參見WO2018140809A1）溶於二氯甲烷（5 mL）中，加入三乙胺（81.5 mg, 0.81 mmol）。降溫至0℃，緩慢滴加甲磺醯氯（34 mg, 0.30 mmol），0℃下攪拌1小時。TLC監測顯示反應結束。反應液用二氯甲烷（20 mL）稀釋後，用飽和碳酸氫鈉水溶液（10 mL×2次）洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱色譜層析法（石油醚：乙酸乙酯= 5:1）純化得到(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基甲磺酸酯（52 mg，收率42%）。 MS (ESI) M/Z: 450.1 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲磷氧化物鹽酸鹽（86 mg, 約0.10 mmol）和(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基甲磺酸酯（52 mg, 0.12 mmol）溶於乙腈（5 mL）中，加入DIEA（45 mg, 0.35 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至85℃並攪拌12小時。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，用高效製備液相色譜純化得到終產物5-(4-((4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（2.2 mg，收率2%）。 MS (ESI) M/Z: 1099.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CD ₃OD): δ 8.88-8.77 (m, 3H), 8.29 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.66 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.55 (brs, 2H), 7.00 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 6.89-6.80 (m, 2H), 5.08-5.06 (m, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.89-3.81 (m, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.68-3.53 (m, 4H), 3.52-3.46 (m, 4H), 3.26-3.24 (m, 2H), 3.17-3.13 (m, 4H), 2.89-2.48 (m, 1H), 2.76-2.69 (m, 2H), 2.61-2.49 (m, 2H), 2.50-2.22 (m, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.12-2.04 (m, 5H), 1.99-1.97 (m, 2H), 1.88-1.78 (m, 1H).

實施例37: 5-(4-((9-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下向9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-羧酸第三丁酯（346 mg, 0.71 mmol，製備參見CN112538072A）的二氯甲烷（2 mL）溶液中加入鹽酸二氧六環溶液（12 mL, 4M）。室溫下攪拌2小時後減壓濃縮得到3-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷鹽酸鹽（458 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 386.2 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將3-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷鹽酸鹽（458 mg，粗品）和DMAP（342 mg，2.8 mmol）加入到二氯甲烷（10 mL）中，攪拌5分鐘，再加入三氟乙酸酐（588 mg，2.8 mmol），室溫攪拌反應2小時。將反應液減壓濃縮得到2,2,2-三氟-1-(9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)乙烷-1-酮（382 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 482.3 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將2,2,2-三氟-1-(9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)乙烷-1-酮（382 mg，粗品）和10%鈀碳（50 mg）加入到甲醇（15 mL）中，氫氣置換三次後，室溫下攪拌反應2小時。過濾，濾液減壓濃縮得到1-(9-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（371 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 452.2 [M+H] ⁺. 步驟4：室溫下將1-(9-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（371 mg，粗品），(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧膦（310 mg，0.75 mmol）和三氟乙酸（857 mg，7.5 mmol）依次加入到異丙醇（10 mL）中，氬氣保護下升溫至100℃攪拌反應16小時。將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得殘餘物用製備TLC板純化得到1-(9-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2,2,2-三氟乙基-1-酮（277 mg，四步收率47%）。 MS (ESI) M/Z: 827.0 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.59 (s, 1H), 9.02-8.98 (m, 1H), 8.73 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.70 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.68-7.61 (m, 3H), 7.34 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.68-3.64 (m, 2H), 3.57 (brs, 2H), 2.90-2.83 (m, 4H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.64 (brs, 8H). 步驟5：室溫下將1-(9-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2,2,2-三氟乙基-1-酮（237 mg，0.29 mmol）和氫氧化鉀（160 mg，2.9 mmol）加入到甲醇（10 mL）和水（4 mL）中，升溫至60℃攪拌反應4小時。將反應液冷卻至室溫，用二氯甲烷（20 mL）稀釋，分液。有機相先用飽和食鹽水（20 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（174 mg，收率83%）。 MS (ESI) M/Z: 731.2 [M+H] ⁺. 步驟6：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（54 mg, 0.074 mmol）和(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基甲磺酸酯（50 mg, 0.11 mmol）溶於乙腈（5 mL）中，加入DIEA（29 mg, 0.22 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至85℃並攪拌過夜。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，用高效製備液相色譜純化得到終產物5-(4-((9-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（18.2 mg，收率23%）。 MS (ESI) M/Z: 1084.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 13.35 (s, 1H), 12.55 (brs, 1H), 8.80 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 8.76-8.72 (m, 2H), 8.05 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.69-7.64 (m, 2H), 7.58 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 6.92 (d, J= 0.8 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.67 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.96-4.91 (m, 1H), 3.85 (s, 6H), 3.63-3.38 (m, 6H), 3.10-3.05 (m, 2H), 2.96-2.75 (m, 8H), 2.39 (brs, 2H), 2.29 (brs, 2H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.98 (brs, 6H), 1.79-1.69 (m, 5H).

實施例38: 5-(4-((5-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)六氫吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯（250 mg, 1.0 mmol）和六氫吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸第三丁酯（233 mg, 1.1 mmol）溶於N’N-二甲基甲醯胺（10 mL）中，加入碳酸鉀（414 mg, 3.0 mmol），升溫至60℃攪拌過夜。反應液用水（50 mL）稀釋後用乙酸乙酯（50 mL×3次）萃取。合併有機相，先用飽和食鹽水（50 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用乙酸乙酯打漿純化得到5-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)六氫吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸第三丁酯（280 mg，收率63%）。 MS (ESI) M/Z: 442.1 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將5-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)六氫吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸第三丁酯（280 mg, 0.63 mmol）和1-甲基-4-1H-吡唑硼酸頻那醇酯（197 mg, 0.95 mmol）溶於二氧六環（10 mL）和水（2 mL）中, 加入磷酸鉀（267 mg, 1.26mmol）和二茂鐵二氯化鈀（46 mg, 0.06 mmol）。反應液在氬氣氛圍下加熱至110℃攪拌12小時。將反應液冷卻至室溫，用水（50 mL）稀釋後用乙酸乙酯（50 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用乙酸乙酯打漿純化得到5-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)六氫吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸第三丁酯（170 mg，收率60%）。 MS (ESI) M/Z: 444.2 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下向5-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)六氫吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸第三丁酯（170 mg, 0.38 mmol）的二氯甲烷（2 mL）溶液中加入鹽酸二氧六環溶液(8 mL, 4M)。室溫下攪拌2小時後減壓濃縮得到2-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)八氫吡咯[3,4-c]吡咯鹽酸鹽（164 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 344.2 [M+H] ⁺. 步驟4：室溫下將2-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)八氫吡咯[3,4-c]吡咯鹽酸鹽（20 mg, 約0.046 mmol）和(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基甲磺酸酯（36 mg, 0.08 mmol）溶於乙腈（10 mL）中，加入DIEA（16 mg, 0.12 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至85℃並攪拌過夜。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，用水（50 mL）稀釋後用乙酸乙酯（50 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用製備級TLC板純化得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((5-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)六氫吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮（21 mg，收率65%）。 MS (ESI) M/Z: 697.3 [M+H] ⁺. 步驟5：室溫下將2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((5-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)六氫吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮（21 mg, 0.03 mmol）和10%鈀碳（10 mg）加入到四氫呋喃（6 mL）中，氫氣置換三次後，室溫下攪拌反應2小時。過濾，濾液減壓濃縮得到5-(4-((5-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)六氫吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（18 mg，收率90%）。 MS (ESI) M/Z: 667.3 [M+H] ⁺. 步驟6：室溫下將5-(4-((5-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)六氫吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（18 mg，0.027 mmol），(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧膦（12 mg，0.029 mmol）和三氟乙酸（34 mg，0.3 mmol）依次加入到異丙醇（4 mL）中，氬氣保護下升溫至95℃攪拌反應16小時。將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得殘餘物用高效製備液相色譜純化得到終產物5-(4-((5-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)六氫吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（6.6 mg，收率23%）。 MS (ESI) M/Z: 1042.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 13.37 (s, 1H), 13.04 (s, 1H), 8.9 (dd, J= 8.8, 1.2 Hz, 2H), 8.13 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.71-7.66 (m, 3H), 7.39 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.70 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 4.96-4.91 (m, 1H), 4.02 (brs, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.67-3.61 (m, 2H), 3.60-3.50 (m, 2H), 3.49-3.38 (m, 2H), 3.19 (brs, 4H), 3.11(d, J= 9.6 Hz, 4H), 2.70-2.56 (m, 4H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.06-1.96 (m, 4H), 1.70-1.50 (m, 1H).

實施例39: 4-((5-(4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將4-(哌啶-4-基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（2.0 g, 7.4 mmol）、1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯（1.9 g, 7.4 mmol）溶於DMF（50 mL）中，加入碳酸鉀（2.1 g, 15.0 mmol）。將反應體系加熱至60℃並攪拌過夜。LCMS監控顯示原料消失。將反應液冷卻至室溫，倒入水（250 mL）中，用乙酸乙酯萃取（200 mL × 2）。合併有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化（石油醚/乙酸乙酯=1/1）得到4-(1-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（1.9 g，收率51%）。 MS (ESI) M/Z: 499.2 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將4-(1-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（1.9 g, 3.8 mmol）和1-甲基-4-1H-吡唑硼酸頻那醇酯（0.95 g, 4.6 mmol）溶於二氧六環（50 mL）和水（10 mL）中, 加入磷酸鉀 (1.6 g, 7.6 mmol)和二茂鐵二氯化鈀(0.28g, 0.38 mmol)，反應液在氮氣氛圍下加熱至110℃攪拌過夜。LCMS監測反應結束，將反應液冷卻至室溫，用水（300 mL）稀釋後用乙酸乙酯（200 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 2/1）得到4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（1.3 g，收率68%）。 MS (ESI) M/Z: 501.3 [M+H] ⁺. 後續步驟以4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯為原料，參照實施例37的製備方法得到終產物4-((5-(4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（8.0 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1087.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 13.32 (s, 1H), 10.74 (brs, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.70-8.64 (m, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.58-7.48 (m, 4H), 7.15 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.92 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.68 (s, 1H), 4.99-4.93 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.83-3.79 (m, 2H), 3.37-3.06 (m, 9H), 2.96-2.86 (m, 2H), 2.82-2.64 (m, 8H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.91-1.88 (m, 4H), 1.78-1.56 (m, 6H).

實施例40: 4-((5-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)戊基)氧代)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((5-羥戊基)氧代)異吲哚啉-1,3-二酮（16 mg, 0.044 mmol，製備參見CN112552293A）溶於二氯甲烷（10 mL）中，加入DIEA（17 mg, 0.13 mmol）。降溫至0℃，緩慢滴加甲磺醯氯（6 mg, 0.05 mmol），0℃下攪拌19小時。TLC監測顯示反應結束。反應液用二氯甲烷（10 mL）稀釋後，用飽和碳酸氫鈉水溶液（10 mL×2次）洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用製備TLC板（二氯甲烷：甲醇= 30:1）純化得到5-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-4-基)氧代)戊基甲磺酸酯（10 mg，收率52%）。 MS (ESI) M/Z: 439.1 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲磷氧化物鹽酸鹽（17 mg, 約0.02 mmol）和5-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-4-基)氧代)戊基甲磺酸酯（10 mg, 0.023 mmol）溶於乙腈（5 mL）中，加入碳酸鉀（10 mg, 0.072 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至90℃並攪拌16小時。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，用高效製備液相色譜純化得到終產物4-((5-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)戊基)氧代)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（5.1 mg，收率21%）。 MS (ESI) M/Z: 1088.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 8.85-8.76 (m, 4H), 8.22 (s, 1H), 7.86-7.83 (m, 1H), 7.76-7.72 (m, 1H), 7.67-7.62 (m, 2H), 7.51 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.29-7.25 (m, 1H), 6.75 (s, 1H), 5.03-4.99 (m, 1H), 4.25-4.22 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.80-3.64 (m, 6H), 3.55- 3.47 (m, 2H), 3.44-3.39 (m, 2H), 3.33-3.22 (s, 8H), 3.17-2.99 (m, 4H), 2.86-2.70 (m, 4H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.02-1.94 (m, 4H), 1.77-1.70 (m, 2H).

實施例41: 3-(4-(6-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)己-1-炔-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：以3-(4-(6-羥己基-1-炔-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮（製備參見WO202191575A1）和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲磷氧化物鹽酸鹽為原料，參照實施例40的步驟製備得到30.4 mg終產物3-(4-(6-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)己-1-炔-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 MS (ESI) M/Z: 1068.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 13.29 (s, 1H), 10.57 (brs, 1H), 10.24 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.62 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.89 (brs, 1H), 7.82 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.58 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 7.48-7.44 (m, 3H), 6.66 (s, 1H), 5.28-5.23 (m, 1H), 4.58-4.42 (m, 2H), 3.80 (brs, 6H), 3.65-3.45 (m, 3H), 3.30-3.25 (m, 8H), 3.10-3.02 (m, 4H), 2.91-2.84 (m, 4H), 2.60-2.54 (m, 6H), 2.14 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.10-2.03 (m, 2H), 1.71-1.65 (m, 2H).

實施例42: 3-(4-(6-(4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)己基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：以3-(4-(6-羥己基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮（製備參見WO202191575A1）和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲磷氧化物為原料，參照實施例40的步驟製備得到3.3 mg終產物3-(4-(6-(4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)己基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。 MS (ESI) M/Z: 1072.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 13.26 (s, 1H), 10.80 (brs, 1H), 9.13 (brs, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.76 (d, J= 0.8 Hz, 1H), 8.69-8.65 (m, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.77 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.52 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 7.46 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.68 (s, 1H), 5.29-5.24 (m, 1H), 4.48-4.31 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.34-3.21 (m, 4H), 3.03-2.89 (m, 6H), 2.7-2.69 (m, 7H), 2.28-2.22 (m, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.09-2.04 (m, 2H), 1.78-1.62 (m, 6H), 1.44-1.28 (m, 6H).

實施例43: 4-((8-(2-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-2,6-二氫吡咯[3,4-c]并吡唑-5(4H)-基)辛基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯（1.5 g, 6.0 mmol）、2,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-羧酸第三丁酯（1.3 g, 6.0 mmol）溶於DMF（50 mL）中，加入碳酸鉀（1.7 g, 12.0 mmol）。將反應體系加熱至85℃並攪拌18小時。LCMS監控顯示原料消失。將反應液冷卻至室溫，倒入水（100 mL）中，用乙酸乙酯萃取（100 mL × 2）。合併有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化（石油醚/乙酸乙酯=1/1）得到2-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)-2,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-羧酸第三丁酯（1.6 g，收率61%）。 MS (ESI) M/Z: 439.1 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將2-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)-2,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-羧酸第三丁酯（1.6 g, 3.6 mmol）和1-甲基-4-1H-吡唑硼酸頻那醇酯（0.76 g, 3.7 mmol）溶於1,4-二氧六環（100 mL）和水（20 mL）中, 加入碳酸銫 (3.6 g, 10.9 mmol)和二茂鐵二氯化鈀(0.27 g, 0.36 mmol)，反應液在氮氣氛圍下加熱至110℃攪拌18小時。LCMS監測反應結束，將反應液冷卻至室溫，旋蒸除去大部分1,4-二氧六環，加水（100 mL）稀釋後用乙酸乙酯（100 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 2/1）得到2-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-羧酸第三丁酯（1.4 g，收率84%）。 MS (ESI) M/Z: 441.2 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下向2-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-羧酸第三丁酯（1.4 g, 3.1 mmol）的二氯甲烷（100 mL）溶液中滴加三氟乙酸（25 mL）。室溫下攪拌2小時後減壓濃縮得到2-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑三氟乙酸鹽（1.1 g，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 341.2 [M+H] ⁺. 步驟4：室溫下將2-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,4,5,6-四氫吡咯并[3,4-c]吡唑三氟乙酸鹽（1.1 g，粗品）和DMAP（789 mg，6.5 mmol）加入到二氯甲烷（50 mL）中，攪拌5分鐘，再加入三氟乙酸酐（1.4 g，6.5 mmol），室溫攪拌反應2小時。加水（100 mL）淬滅後用二氯甲烷（100 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 2/1）得到2,2,2-三氟-1-(2-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-基)乙烷-1-酮（1.1 g，二步收率79%）。 MS (ESI) M/Z: 437.3 [M+H] ⁺. 步驟5：室溫下將2,2,2-三氟-1-(2-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-基)乙烷-1-酮（1.1 g，2.5 mmol）和10%濕鈀碳（110 mg）加入到二氯甲烷（25 mL）和甲醇（25 mL）的混合溶液中，氫氣球置換三次，室溫下攪拌2小時。LCMS檢測反應完全，過濾，濾液減壓濃縮得到1-(2-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-2,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（960 mg，收率94%）。 MS (ESI) M/Z: 407.2 [M+H] ⁺. 步驟6：室溫下將1-(2-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-2,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（960 mg，2.4 mmol），(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧膦（975 mg，2.4 mmol）和三氟乙酸（2.7 g，23.6 mmol）依次加入到正丁醇（25 mL）中，氬氣保護下升溫至110℃攪拌反應16小時。LCMS檢測反應完全，將反應液冷卻至室溫，加水（100 mL）稀釋後用乙酸乙酯（100 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 2/1）得到1-(2-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-2,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（540 mg，收率29%）。 MS (ESI) M/Z: 782.1 [M+H] ⁺. 步驟7：室溫下將1-(2-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-2,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（540 mg，0.69 mmol）和氫氧化鉀（77 mg，1.4 mmol）加入到甲醇（10 mL）和水（5 mL）中，升溫至60℃攪拌反應2小時。將反應液冷卻至室溫，旋蒸除去大部分甲醇，用乙酸乙酯（50 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到(6-((5-溴-2-((4-(5,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-2(4H)-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（480 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 686.2 [M+H] ⁺. 步驟8：室溫下將(6-((5-溴-2-((4-(5,6-二氫吡咯并[3,4-c]吡唑-2(4H)-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（140 mg, 約0.20 mmol）和8-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-4-基)胺基)辛基甲磺酸酯（98 mg, 0.20 mmol，製備參見專利WO201889736A1）溶於乙腈（25 mL）中，加入DIEA（77 mg, 0.60 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至80℃並攪拌16小時。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，用高效製備液相色譜純化得到終產物4-((8-(2-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-2,6-二氫吡咯[3,4-c]并吡唑-5(4H)-基)辛基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（34 mg，收率16%）。 MS (ESI) M/Z: 1069.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 13.02 (s, 1H), 9.44 (s, 1H), 8.78-8.73 (m, 3H), 8.59 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.62 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.53-7.49 (m, 1H),7.19 (s, 1H), 7.10 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.91-6.86 (m, 2H), 6.68 (s, 1H), 6.25 (brs, 1H), 5.00-4.89 (m, 3H), 4.20-4.06 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.37-3.27 (m, 4H), 3.11-2.99 (m, 8H), 2.90-2.73 (m, 4H), 2.16 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 1.89-1.85 (m, 2H), 1.70-1.65 (m, 2H).

實施例44: 4-((5-(4-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲磷醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將1-(4-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（0.5 g，1.3 mmol），(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)胺基)苯基)二甲基氧膦（375 mg，1.2 mmol）和三氟乙酸（1.35 g，11.8 mmol）依次加入到異丙醇（20 mL）中，氬氣保護下升溫至100℃攪拌反應16小時。將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得殘餘物用乙酸乙酯打漿純化得到1-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙基-1-酮（480 mg，收率60%）。 MS (ESI) M/Z: 663.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 11.03 (s, 1H), 8.56-8.52 (m, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.00-6.99 (m, 2H), 6.64 (s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.79 (brs, 2H), 3.71-3.67 (m, 2H), 2.99-2.94 (m, 4H), 1.86 (s, 3H), 1.83 (s, 3H). 步驟2：室溫下將1-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙基-1-酮（430 mg，0.65 mmol）和氫氧化鉀（363 mg，6.5 mmol）加入到甲醇（10 mL）和水（4 mL）中，升溫至60℃攪拌反應4小時。將反應液冷卻至室溫，用二氯甲烷（20 mL）稀釋，分液。有機相先用飽和食鹽水（20 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到(2-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)二甲基氧化膦（304 mg，收率69%）。 MS (ESI) M/Z: 567.3 [M+H] ⁺. 後續步驟以(2-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例32的製備方法得到終產物4-((5-(4-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲磷醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（20.2 mg）。 MS (ESI) M/Z: 989.4 [M-H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.01 (s, 1H), 10.59 (brs, 1H), 10.15 (s, 1H), 8.35-8.31 (m, 1H), 7.87 (d, J= 5.6 Hz, 2H), 7.58-7.50 (m, 2H), 7.42 (s, 1H), 7.17-7.12 (m, 2H), 6.99-6.92 (m, 2H), 6.68 (s, 1H), 6.25 (brs, 1H), 4.94-4.89 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 3.57 (d, J= 10.4 Hz, 2H), 3.39-3.36 (m, 2H), 3.28 (brs, 5H), 2.97-2.86 (m, 4H), 2.80-2.74 (m, 4H), 2.58-2.53 (m, 4H), 2.36-2.27 (m, 6H), 1.86 (s, 3H), 1.83 (s, 3H), 1.78-1.73 (m, 2H), 1.63-1.59 (m, 2H).

實施例45: 4-((5-(4-(4-((4-((2-(二甲磷醯基)苯基)胺基)-5-甲基嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將1-(4-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（714 mg，1.9 mmol），(2-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)胺基)苯基)二甲基氧膦（500 mg，1.7 mmol）和三氟乙酸（1.94 g，17.0 mmol）依次加入到異丙醇（50 mL）中，氬氣保護下升溫至95℃攪拌反應16小時。將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得殘餘物用製備級TLC板純化得到1-(4-(4-((4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)胺基)-5-甲基嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙基-1-酮（690 mg，收率63%）。 MS (ESI) M/Z: 643.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 11.83 (s, 1H), 9.51 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.86 (s, 2H), 7.63-7.57 (m, 2H), 7.20-7.03 (m, 2H), 6.92 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.79 (brs, 4H), 3.01-2.94(m, 4H), 2.13 (s, 3H), 1.83 (s, 3H), 1.80 (s, 3H). 步驟2：室溫下將1-(4-(4-((4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)胺基)-5-甲基嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙基-1-酮（500 mg，0.78 mmol）和氫氧化鉀（437 mg，7.8 mmol）加入到甲醇（50 mL）和水（20 mL）中，升溫至60℃攪拌反應4小時。將反應液冷卻至室溫，用二氯甲烷（50 mL）稀釋，分液。有機相先用飽和食鹽水（20 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到(2-((2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)-5-甲基嘧啶-4-基)胺基)苯基)二甲基氧化膦（315 mg，收率74%）。 MS (ESI) M/Z: 547.3 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將(2-((2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)-5-甲基嘧啶-4-基)胺基)苯基)二甲基氧化膦（50 mg, 0.092 mmol）和5-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧異吲哚啉-4-基)胺基)戊基甲磺酸酯（60 mg, 0.14 mmol）溶於乙腈（5 mL）中，加入DIEA（35 mg, 0.27 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至110℃並攪拌過夜。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，用高效製備液相色譜純化得到終產物4-((5-(4-(4-((4-((2-(二甲磷醯基)苯基)胺基)-5-甲基嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（10 mg，收率12%）。 MS (ESI) M/Z: 888.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 11.09 (s, 1H), 10.84 (s, 1H), 8.60-8.56 (m, 1H), 7.90 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 7.83 (d, J= 4.8 Hz, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.61-7.57 (m, 1H), 7.52-7.45 (m, 1H), 7.11 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.03 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.95- 6.94 (m, 2H), 6.79 (s, 1H), 6.56-6.52 (m, 1H), 5.07-5.02 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 2.92 -2.83 (m, 6H), 2.67-2.56 (m, 4H), 2.42-2.33 (m, 2H), 2.06 (s, 3H), 2.02-1.98 (m, 2H), 1.79 (s, 3H), 1.76 (s, 3H), 1.64-1.58 (m, 2H), 1.55-1.51 (m, 2H), 1.42-1.37 (m, 2H), 1.28-1.24 (m, 2H).

實施例46: 4-((5-(4-(4-(4-((4-((2-(二甲磷醯基)苯基)胺基)-5-甲基嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(2-((2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)-5-甲基嘧啶-4-基)胺基)苯基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例32的步驟製備得到終產物4-((5-(4-(4-(4-((4-((2-(二甲磷醯基)苯基)胺基)-5-甲基嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（9.3 mg）。 MS (ESI) M/Z: 971.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 11.11 (brs, 1H), 10.83 (s, 1H), 8.60-8.57 (m, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.84 (d, J= 2.4 Hz, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.61-7.58 (m, 1H), 7.53-7.46 (m, 1H), 7.11 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.03 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 6.97-6.95 (m, 2H), 6.82 (s, 1H), 6.56-6.53 (m, 1H), 5.08-5.04 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 2.94-2.85 (m, 8H), 2.62-2.55 (m, 6H), 2.27-2.24 (m, 2H), 2.20-2.15 (m, 1H), 2.07 (s, 3H), 2.04-1.98 (m, 2H), 1.90-1.83 (m, 2H), 1.80 (s, 3H), 1.77 (s, 3H), 1.64-1.58 (m, 2H), 1.49-1.33 (m, 6H), 1.24 (d, J= 1.2 Hz, 2H).

實施例47: 4-((5-(4-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲磷醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將2-溴-1-氟-4-硝基苯（5.0 g, 22.8 mmol）、哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（4.3 g, 23.0 mmol）溶於DMF（50 mL）中，加入碳酸鉀（9.5 g, 68.8 mmol）。將反應體系加熱至60℃並攪拌過夜。LCMS監控顯示原料消失。將反應液冷卻至室溫，倒入水（300 mL）中，用乙酸乙酯萃取（300 mL × 2）。合併有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮，殘留物用矽膠柱層析純化（石油醚/乙酸乙酯=10/1）得到4-(2-溴-4-硝基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（6.1 g，收率69%）。 MS (ESI) M/Z: 386.1 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將4-(2-溴-4-硝基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（6.0 g, 15.6 mmol）和1-甲基-4-1H-吡唑硼酸頻那醇酯（3.23 g, 15.6 mmol）溶於DMF（50 mL）中, 加入碳酸鈉 (4.9 g, 46.6 mmol)和二茂鐵二氯化鈀(0.6 g, 0.8 mmol)，反應液在氬氣氛圍下加熱至110℃攪拌12小時。LCMS監測反應結束，將反應液冷卻至室溫，加水（500 mL）稀釋後用乙酸乙酯（250 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 40/1）得到4-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（5.3 g，收率88%）。 MS (ESI) M/Z: 388.2 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下向4-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（5.3 g, 13.7 mmol）的二氯甲烷（30 mL）溶液加入5M鹽酸/二氧六環（30 mL，150 mmol），室溫攪拌2小時。LCMS監測原料消失，直接濃縮得到1-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌𠯤鹽酸鹽（2.8 g，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 288.2 [M+H] ⁺. 步驟4：室溫下將1-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌𠯤鹽酸鹽（2.1 g，粗品）和DMAP（1.8 g，14.6 mmol）加入到DMF（50 mL）中，攪拌5分鐘，再加入三氟乙酸酐（3.1 g，14.6 mmol），室溫攪拌過夜。將反應液倒入冰水（300 mL）中，用乙酸乙酯（200 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到2,2,2-三氟-1-(4-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌𠯤-1-基)乙烷-1-酮（2.2 g，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 384.3 [M+H] ⁺. 步驟5：室溫下將2,2,2-三氟-1-(4-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌𠯤-1-基)乙烷-1-酮（2.2 g，粗品）和10%濕鈀碳（200 mg）加入到甲醇（30 mL）中，氫氣球置換三次，室溫下攪拌過夜。LCMS檢測反應完全，過濾，濾液減壓濃縮得到1-(4-(4-胺基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（1.55 g，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 354.2 [M+H] ⁺. 步驟6：室溫下將1-(4-(4-胺基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（0.35 g，粗品），(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)胺基)苯基)二甲基氧膦（0.32 g，1.0 mmol）和三氟乙酸（0.35 g，3.0 mmol）依次加入到異丙醇（10 mL）中，氬氣保護下升溫至110℃攪拌反應16小時。LCMS檢測反應完全，將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 30/1）得到1-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（420 mg，四步收率29%）。 MS (ESI) M/Z: 633.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 11.19 (s, 1H), 9.28 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.18 (s, 2H), 7.84 (s, 1H), 7.66 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.59-7.57 (m, 1H), 7.46 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.25 (s, 1H), 7.09-7.05 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.74-3.70 (m, 4H), 2.87-2.83 (m, 4H), 1.80 (s, 3H), 1.77 (s, 3H). 步驟7：室溫下將1-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（1.3 g，2.1 mmol）和氫氧化鉀（1.2 g，21.0 mmol）加入到甲醇（15 mL）和水（6 mL）中，升溫至60℃攪拌反應4小時。將反應液冷卻至室溫，加入二氯甲烷（30 mL）稀釋，用飽和食鹽水（20 mL×3次）洗滌。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到(2-((5-氯-2-((3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)二甲基氧化膦（1.0 g，收率91%）。 MS (ESI) M/Z: 537.2 [M+H] ⁺. 後續步驟以(2-((5-氯-2-((3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)苯基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例32的製備方法得到終產物4-((5-(4-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲磷醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（16.9 mg）。 MS (ESI) M/Z: 961.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.15 (s, 1H), 11.58 (brs, 1H), 10.10 (s, 1H), 8.48-8.45 (m, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.57-7.50 (m, 3H), 7.39 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.35-7.29 (m, 2H), 7.20-7.14 (m, 2H), 7.03 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.93 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.24 (brs, 1H), 4.94-4.89 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.62-3.45 (m, 2H), 3.38 (brs, 4H), 3.24 (brs, 5H), 2.98-2.87 (m, 4H), 2.81-2.73 (m, 4H), 2.71-2.62 (m, 2H), 2.58-2.44 (m, 4H), 2.35-2.24 (m, 2H), 1.89 (s, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.78-1.59 (m, 4H).

實施例48: 5-(3-(4-(2-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將4-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（1.7 g，4.5 mmol），(6-((2,5-二氯嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧膦（1.5 g，4.1 mmol）和三氟乙酸（4.68 g，41.0 mmol）依次加入到正丁醇（30 mL）中，氬氣保護下升溫至98℃攪拌過夜。將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，加入四氫呋喃（30 mL），然後向溶液中加入三乙胺（1.24 g，12.3 mmol），攪拌10分鐘，加入二碳酸二第三丁酯（900 mg，4.1 mmol），室溫攪拌2小時。向反應液中加入水（30 mL）淬滅，乙酸乙酯（40 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（30 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物矽膠柱層析提純（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 30/ 1）得到4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（2.0 g，收率75%）。 MS (ESI) M/Z: 719.4 [M+H] ⁺. 步驟2：將4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（2.0 g，2.8 mmol）溶於乙酸乙酯（25 mL）中，加入5M鹽酸/二氧六環（18.5 mL，92.5 mmol），室溫攪拌30分鐘。TLC監測原料消失，直接濃縮得到(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（2.0 g，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 619.0 [M+H] ⁺. 步驟3：將(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（500 mg，約0.70 mmol）溶於1,2二氯乙烷（20 mL）和N ,N-二甲基甲醯胺（4 mL）中，加入三乙胺（232 mg，2.3 mmol），攪拌5分鐘，然後加入4-(2-氧乙基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（347 mg，1.5 mmol），攪拌15分鐘，加入醋酸（0.75 mL），最後加入三乙醯氧基硼氫化鈉（486 mg，2.3 mmol），室溫攪拌2小時。TLC監測原料消失，向反應液加入飽和碳酸氫鈉（20 mL）淬滅，乙酸乙酯（30 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物矽膠柱層析提純（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 20/ 1）得到4-(2-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（380 mg，收率65%）。 MS (ESI) M/Z: 830.3 [M+H] ⁺. 步驟4：將4-(2-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（380 mg，0.46 mmol）溶於乙酸乙酯（6 mL）中，加入5M鹽酸/二氧六環溶液（3.5 mL），室溫攪拌30分鐘。TLC監測原料消失，直接減壓濃縮得到(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（350 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 730.4 [M+H] ⁺. 後續步驟以(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽為原料，參照實施例35的製備方法得到終產物5-(3-(4-(2-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（25.1 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1041.0 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.78 (s, 1H), 9.14 (dd, J= 9.6, 4.0 Hz, 1H), 8.73 (dd, J= 14.8, 1.8 Hz, 2H), 8.23-8.19 (m, 3H), 7.83 (s, 1H), 7.73-7.60 (m, 2H), 7.55-7.33 (m, 2H), 6.79 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.53 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.11 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.91-3.83 (m, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.35 (brs, 2H), 3.30-2.67 (m, 15H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.95-1.91 (m, 2H), 1.85 -1.29 (m, 7H).

實施例49: 5-(3-(4-((4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（500 mg，約0.70 mmol）溶於1,2二氯乙烷（20 mL）和N ,N-二甲基甲醯胺（4 mL）中，加入三乙胺（232 mg，2.3 mmol），攪拌5分鐘，然後加入4-甲醯基哌啶-1-羧酸第三丁酯（325 mg，1.5 mmol），攪拌15分鐘，加入醋酸（0.75 mL），最後加入三乙醯氧基硼氫化鈉（486 mg，2.3 mmol），室溫攪拌2小時。TLC監測原料消失，向反應液加入飽和碳酸氫鈉（20 mL）淬滅，乙酸乙酯（30 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物矽膠柱層析提純（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 20/ 1）得到4-((4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（420 mg，收率74%）。 MS (ESI) M/Z: 816.4 [M+H] ⁺. 步驟2：將4-((4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（420 mg，0.52 mmol）溶於乙酸乙酯（7 mL）中，加入5M鹽酸/二氧六環溶液（3.9 mL），室溫攪拌30分鐘。TLC監測原料消失，直接減壓濃縮得到(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基甲基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（400 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 716.5 [M+H] ⁺. 後續步驟以(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基甲基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽為原料，參照實施例35的製備方法得到終產物5-(3-(4-((4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（5.8 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1027.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.78 (s, 1H), 9.15 (dd, J= 9.2, 3.6 Hz, 1H), 8.73 (d, J= 14.0 Hz, 2H), 8.26-8.07 (m, 3H), 7.80-7.65 (m, 3H), 7.38 (brs, 2H), 6.79 (s, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.53 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 4.95-4.91 (m, 1H), 4.11 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.70-3.49 (m, 4H), 3.36 (brs, 1H), 3.22-2.66 (m, 14H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.00-1.25 (m, 7H).

實施例50: 4-((5-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將1-溴-2-氟-4-甲基-5-硝基苯（2.0 g, 8.6 mmol）和哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（1.9 g, 10.2 mmol）溶於N’N-二甲基甲醯胺（12 mL）中，加入碳酸鉀（2.4 g, 17.1 mmol），升溫至60℃攪拌過夜。反應液用水（100 mL）稀釋後用乙酸乙酯（50 mL×3次）萃取。合併有機相，先用飽和食鹽水（50 mL）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 8/1）得到4-(2-溴-5-甲基-4-硝基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（3.2 g，收率93%）。 MS (ESI) M/Z: 400.1 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將4-(2-溴-5-甲基-4-硝基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（3.2 g, 8.0 mmol）和1-甲基-4-1H-吡唑硼酸頻那醇酯（2.16 g, 10.4 mmol）溶於二氧六環（70 mL）和水（14 mL）中, 加入碳酸鈉 (1.7 g, 16.0 mmol)和二茂鐵二氯化鈀(586 mg, 0.7 mmol)。反應液在氮氣氛圍下加熱至80℃攪拌過夜。將反應液冷卻至室溫，用水（200 mL）稀釋後用乙酸乙酯（100 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇＝20/1）得到4-(5-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌𠯤-1-甲酸第三丁酯（2.1 g，收率66%）。 MS (ESI) M/Z: 402.3 [M+H] ⁺. 步驟3：將鐵粉（1.5 g，27.0 mmol）、二氧化矽（100-200目，3.1 g）和氯化銨（0.9 g，17.0 mmol）加入乙醇（20 mL）和水（20 mL）中，升溫至65℃，加入4-(5-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（1.7 g，4.2 mmol）的四氫呋喃（15 mL）溶液，反應液在65℃攪拌1.5小時。TLC監測原料消失，將反應液倒入飽和食鹽水（100 mL）和乙酸乙酯（200 mL）中。過濾，分液，有機相用飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到4-(4-胺基-5-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（1.7 g，收率92%）。 MS (ESI) M/Z: 372.2 [M+H] ⁺. 步驟4：室溫下將4-(4-胺基-5-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（1.0 g，2.7 mmol），(6-((2,5-二氯嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧膦（830 mg，2.3 mmol）和三氟乙酸（2.5 g，22.4 mmol）依次加入到正丁醇（20 mL）中，氮氣保護下升溫至98℃攪拌過夜。將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，加入四氫呋喃（16 mL），然後向溶液中加入三乙胺（0.68 g，6.7 mmol），攪拌10分鐘，加入二碳酸二第三丁酯（488 mg，2.2 mmol），室溫攪拌2小時。向反應液中加入水（30 mL）淬滅，乙酸乙酯（40 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（30 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物矽膠柱層析提純（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 30/ 1）得到4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（1.0 g，收率66%）。 MS (ESI) M/Z: 703.2 [M+H] ⁺. 步驟5：將4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（1.0 g，1.4 mmol）溶於乙酸乙酯（20 mL）中，加入5M鹽酸/二氧六環（11 mL，55.0 mmol），室溫攪拌30分鐘。TLC監測原料消失，直接濃縮得到(6-((5-氯-2-((2-甲基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（1.0 g，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 603.6 [M+H] ⁺. 步驟6：將(6- ((5-氯-2- ((2-甲基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（110 mg，約0.14 mmol）溶於N,N二甲基甲醯胺（20 mL）中，依次加入N,N-二異丙基乙胺（407 mg，3.1 mmol）、5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代吲哚啉-4-基)胺基)戊基甲磺酸酯（411 mg，0.94 mmol）和碘化鈉（30 mg），反應液60℃攪拌過夜。TLC監測原料消失，向反應液加入飽和碳酸氫鈉溶液（50 mL）淬滅，二氯甲烷（25 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（30 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘留物經高效製備液相色譜純化得到終產物4-((5-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（15.8 mg，收率12%）。 MS (ESI) M/Z: 944.9 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.81 (s, 1H), 9.08 (dd, J= 9.6, 4.0 Hz, 1H), 8.74 -8.63 (m, 2H), 8.14 (s, 1H), 7.90 (brs, 1H), 7.77-7.65 (m, 2H), 7.59 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 7.54-7.50 (m, 1H), 7.11 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.91 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 6.25 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 4.94-4.90 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.32-3.30 (m, 2H), 3.06 (brs, 4H), 2.95-2.52 (m, 8H), 2.28 (s, 3H), 2.12-2.09 (m, 8H), 1.76-1.63 (m, 6H).

實施例51: 4-((5-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽為原料，參照實施例50的操作製備得到終產物4-((5-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)戊基)胺基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（13.6 mg）。 MS (ESI) M/Z: 960.8 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.77 (s, 1H), 9.14 (dd, J= 9.6, 4.0 Hz, 1H), 8.73 (dd, J= 14.6, 1.8 Hz, 2H), 8.22-8.19 (m, 2H), 7.76 (brs, 1H), 7.68-7.56 (m, 2H), 7.54-7.47 (m, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.11 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 6.90 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.25 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 4.95-4.91 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.31-3.25 (m, 2H), 3.03 (brs, 4H), 2.94-2.37 (m, 8H), 2.15-2.10 (m, 8H), 1.77-1.66 (m, 6H).

實施例52: 5-(3-(4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例35的操作步驟製備得到終產物5-(3-(4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（17.8 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1075.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.71 (s, 1H), 11.09 (s, 1H), 9.41 (brs, 1H), 8.86 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.81 (d, J= 1.6 Hz, 2H), 8.45 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.66-7.60 (m, 2H), 6.96 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 5.10-5.05 (m, 1H), 4.31-4.26 (m, 2H), 4.07-4.01 (m, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.35-3.28 (m, 2H), 3.23-3.07(m, 8H), 2.90-2.82 (m, 1H), 2.72-2.59 (m, 4H), 2.35-2.28 (m, 3H), 2.19-2.11 (m, 2H), 2.04 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.87-1.77 (m, 2H).

實施例53: 5-(3-(4-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（1.0 g，約1.5 mmol）溶於1,2二氯乙烷（50 mL）和N,N-二甲基甲醯胺中（10 mL）中，加入三乙胺（500 mg， 5.0 mmol），攪拌5分鐘，再加入4-氧代哌啶-1-羧酸第三丁酯（1.3 g，6.5 mmol），攪拌15分鐘，最後加入醋酸（1.5 mL）和三乙醯氧基硼氫化鈉（1.6 g，7.5 mmol），室溫攪拌過夜。TLC監測原料消失，向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液（20 mL）淬滅，乙酸乙酯（30 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 20/ 1）得到4-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（840 mg，收率69%）。 MS (ESI) M/Z: 702.7 [M-Boc+H] ⁺. 步驟2：將4-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（840 mg，1.0 mmol）溶於乙酸乙酯（16 mL）中，加入5M鹽酸/二氧六環溶液（8 mL），室溫攪拌30分鐘。TLC監測原料消失，直接減壓濃縮得到(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（800 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 702.3 [M+H] ⁺. 後續步驟以(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽為原料，參照實施例35的製備方法得到終產物5-(3-(4-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（29.4 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1013.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.78 (s, 1H), 9.14 (dd, J= 9.6, 4.0 Hz, 1H), 8.73 (dd, J= 15.6, 2.0 Hz, 2H), 8.23 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.12 (brs, 1H), 7.82 (brs, 1H), 7.75-7.63 (m, 3H), 7.59-7.49 (m, 1H), 7.39 (brs, 1H), 6.80 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.55 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 4.96-4.92 (m, 1H), 4.25-4.23 (m, 1H), 4.22-4.08 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.91-3.87 (m, 2H), 3.70 (brs, 4H), 3.39 (brs, 2H), 3.28-2.67 (m, 12H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.08-1.96 (m, 2H), 1.77-1.65 (m, 4H).

實施例54: 3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將1-溴-4-硝基苯（4.8 g，23.8 mmol）、N-Boc-1,2,5,6-四氫吡啶-4-硼酸頻哪醇酯（7.3 g，23.8 mmol）、Pd(dppf)Cl ₂（1.7 g，2.4 mmol）和磷酸鉀（9.85 g，71.3 mmol）依次加入二氧六環/水（40 mL/10 mL）中，氮氣置換三次，升溫至100℃攪拌過夜。LCMS監測原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（50 mL）稀釋，乙酸乙酯（30 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 5/ 1）得到4-(4-硝基苯基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸第三丁酯（4.5 g，收率62%）。 MS (ESI) M/Z: 305.1 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將4-(4-硝基苯基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸第三丁酯（2.0 g，6.6 mmol）和10%濕鈀碳（350 mg）加入到甲醇/DMF（10 mL/10 mL）中，氫氣置換三次，室溫攪拌過夜。LCMS檢測反應完全，反應液過濾，減壓濃縮得到4-(4-胺基苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（1.68 g，收率92%）。 MS (ESI) M/Z: 277.2 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將4-(4-胺基苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（252 mg, 0.9 mmol）、3-溴哌啶-2,6-二酮（175 mg，0.9 mmol）和碳酸氫鈉（230 mg，2.7 mmol）依次加入DMF（10 mL）中，升溫至50℃攪拌過夜。LCMS監測原料消失，加入水（50 mL）稀釋，乙酸乙酯（30 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 3/ 1）得到4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（112 mg，收率32%）。 MS (ESI) M/Z: 388.2 [M+H] ⁺. 步驟4：將4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（60 mg， 0.16 mmol）和5M HCl/dioxane（10 mL）加入到DCM（5 mL）中，室溫下攪拌30分鐘。LCMS監測反應完成。反應液減壓濃縮得到3-((4-(哌啶-4-基)苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽（47 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 288.2 [M+H] ⁺. 步驟5：室溫下將3-((4-(哌啶-4-基)苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽（27 mg，粗品）、碳酸氫鈉（44 mg，0.5 mmol）和溴乙酸第三丁酯（21 mg，0.1 mmol）依從加入到乙腈（6 mL）中，升溫至50℃攪拌過夜。LCMS監測原料消失，加入水（30 mL）稀釋，乙酸乙酯（20 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（30 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用製備級TLC板純化得到2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸第三丁酯（30 mg，二步收率84%）。 MS (ESI) M/Z: 402.3 [M+H] ⁺. 步驟6：將2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸第三丁酯（30 mg，0.075 mmol）和5M HCl/dioxane（5 mL）加入到DCM（5 mL）中，室溫下攪拌1小時。LCMS監測反應完成。反應液減壓濃縮得到2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸鹽酸鹽（25 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 346.2 [M+H] ⁺. 步驟7：室溫下將2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)胺基)苯基)哌啶-1-基)乙酸鹽酸鹽（25 mg，粗品）、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（60 mg，0.09 mmol）、HATU（55 mg，0.14 mmol）和DIEA（28 mg，0.22 mmol）依次加入到DMF（5 mL）中，室溫下攪拌10分鐘。LCMS監測原料消失，加入水（30 mL）稀釋，乙酸乙酯（20 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（30 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘留物經高效製備液相色譜純化得到終產物3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮（7.8 mg，二步收率11%）。 MS (ESI) M/Z: 990.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.57 (s, 1H), 8.99-8.96 (m, 1H), 8.73 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.71 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.11(brs, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.64-7.61 (m, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.05 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 6.66-6.62 (m, 3H), 4.09-4.05 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.71-3.68 (m, 2H), 3.34 (brs, 2H), 3.10-3.06 (m, 2H), 2.91-2.88 (m, 6H), 2.79-2.70 (m, 2H), 2.56-2.52 (m, 2H), 2.46-2.41 (m, 2H), 2.34-2.28 (m, 2H), 2.24-2.20 (m, 1H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.03-2.00 (m, 2H).

實施例55: 5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇（219.5 mg，1.7 mmol）溶於NMP（5 mL）中，加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮（500 mg，1.7 mmol，製備參見US202016143A1），微波下升溫至140℃反應5 分鐘。LCMS監測反應結束，將反應液倒入水中，有固體析出，過濾，石油醚淋洗得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-(2-羥乙基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮（560 mg，收率82%）。 MS (ESI) M/Z: 385.1 [M-H ₂O] ⁺. 步驟2：室溫下將2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-(2-羥乙基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮（100 mg，0.25 mmol）溶於二氯甲烷（3 mL）中，加入三乙胺（38 mg，0.37 mmol），降溫至0℃，緩慢滴加甲磺醯氯（42.6 mg，0.37 mmol），0℃下攪拌30分鐘。LCMS監測反應結束，反應液用二氯甲烷（15 mL）稀釋，飽和碳酸氫鈉水溶液（20 mL×2）洗滌。合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 2/ 1）得到2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙基甲磺酸酯（100 mg，收率84%）。 MS (ESI) M/Z: 482.1 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙基甲磺酸酯（37 mg，0.077 mmol）、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（51 mg, 0.077 mmol）溶於乙腈（3 mL）中，加入DIEA（30 mg，0.23 mmol）和催化量的碘化鈉，85℃攪拌反應15小時。LCMS監測原料消失，反應液冷卻至室溫，減壓濃縮。所得殘留物經高效製備液相色譜純化得到終產物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（18.7 mg，收率23%）。 MS (ESI) M/Z: 1048.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.73 (s, 1H), 11.11 (s, 1H), 9.53 (brs, 1H), 8.86 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.82 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.80 (brs, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.73 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.48 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.78 (s, 1H), 5.13-5.08 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.69-3.55 (m, 4H), 3.32-3.21 (m, 4H), 3.03-2.85 (m, 4H), 2.62-2.51 (m, 2H), 2.04 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.88-1.79 (m, 2H), 1.75-1.67 (m, 2H), 1.62-1.55 (m, 1H), 1.44-1.35 (m, 2H), 1.29-1.21 (m, 4H).

實施例56: 5-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮和哌啶-4-基甲醇為原料，參照實施例55的操作步驟製備得到終產物5-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（30.7 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1034.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.78 (s, 1H), 11.11 (s, 1H), 9.77 (brs, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.70-7.60 (m, 2H), 7.50 (brs, 1H), 7.09 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 5.11-5.06 (m, 1H), 3.84-3.60 (m, 11H), 3.28 (brs, 8H), 3.03-2.86 (m, 3H), 2.63-2.52 (m, 2H), 2.33 (brs, 1H), 2.18 (brs, 1H), 2.06 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.90 (brs, 2H), 1.71 (brs, 1H).

實施例57: 5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦和4-甲醯基哌啶-1-羧酸第三丁酯為原料，參照實施例49的操作步驟製備得到終產物5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（16.1 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1070.9 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.58 (s, 1H), 8.99 (dd, J= 9.6, 4.0 Hz, 1H), 8.72 (dd, J= 12.0, 1.6 Hz, 2H), 8.29 (s, 1H), 8.21 (brs, 2H), 7.80-7.52 (m, 4H), 7.36 (s, 1H), 6.81-6.71 (m, 2H), 6.52 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 4.94-4.92 (m, 1H), 4.11 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 3.90 (brs, 5H), 3.72 (s, 3H), 3.37-3.33 (m, 1H), 3.22-2.66 (m, 14H), 2.15-2.11 (m, 8H), 1.96-1.89 (m, 5H), 1.45-1.27 (m, 2H).

實施例58: 5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮和2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇為原料，參照實施例55的操作步驟製備得到終產物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（12.8 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1030.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.59 (s, 1H), 8.99 (dd, J= 9.6, 4.0 Hz, 1H), 8.73 (dd, J= 13.6, 1.6 Hz, 2H), 8.30 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.14 (brs, 1H), 7.77-7.55 (m, 4H), 7.36 (s, 1H), 7.28 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.05 (dd, J= 8.4, 2.4 Hz, 1H), 6.72 (s, 1H), 4.96-4.93 (m, 1H), 3.98-3.87 (m, 5H), 3.71 (s, 3H), 3.05-2.38 (m, 14H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.86-1.82 (m, 2H), 1.68-1.57 (m, 5H), 1.40-1.23 (m, 2H).

實施例59: 5-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（1.7 g，約2.6 mmol）溶於甲醇（20 mL）和二氯甲烷（5 mL）中，加入2-氧代-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯（740 mg，3.1 mmol），室溫攪拌1小時後，冰浴下慢慢加入氰基硼氫化鈉（650 mg，10.3 mmol），再室溫攪拌16小時。TLC監測原料消失，向反應液加入飽和碳酸氫鈉（20 mL）淬滅，乙酸乙酯（40 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物矽膠柱層析提純（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=40/ 1~ 20/ 1）得到2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯（810 mg，收率36%）。 MS (ESI) M/Z: 886.5 [M+H] ⁺. 步驟2：將2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯（810 mg，0.92 mmol）溶於二氯甲烷（3 mL）中，冰浴下加入三氟乙酸（6 mL），室溫攪拌3小時。TLC監測原料消失，直接減壓濃縮得到(6-((2-((4-(4-(7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦三氟乙酸（800 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 786.7 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將(6-((2-((4-(4-(7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦三氟乙酸（200 mg，粗品）、2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮（200 mg, 0.68 mmol）溶於N,N-二甲基甲醯胺（6 mL）中，加入碳酸鉀（152 mg，1.1 mmol）和催化量的碘化鈉，75℃攪拌反應16小時。LCMS監測原料消失，反應液冷卻至室溫，減壓濃縮。所得殘留物經高效製備液相色譜純化得到終產物5-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（28.6 mg，收率12%）。 MS (ESI) M/Z: 1060.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.68 (s, 1H), 11.12 (s, 1H), 8.85-8.81 (m, 3H), 8.44 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.73-7.44 (m, 4H), 6.87 (m, 1H), 5.13-5.08 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.23-3.15 (m, 4H), 2.89-2.85 (m, 8H), 2.66-2.50 (m, 3H), 2.05-2.01 (m, 8H), 1.74-1.64 (m, 6H), 1.25-1.15 (m, 2H).

實施例60: 5-(3-(1'-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-二哌啶]-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將[4,4'-二哌啶]-1-羧酸第三丁酯（1.6 g, 6.0 mmol）、1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯（1.4 g, 5.6 mmol）溶於DMF（20 mL）中，加入碳酸鉀（0.8 g, 6.0 mmol），室溫攪拌16小時。LCMS監控顯示原料消失。將反應液冷卻至室溫，倒入冰水（100 mL）中，用乙酸乙酯萃取（120 mL × 2）。合併有機相，飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮，石油醚結晶純化得到1'-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-羧酸第三丁酯（1.6 g，收率57%）。 MS (ESI) M/Z: 498.2 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將1'-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-羧酸第三丁酯（1.6 g, 3.2 mmol）和1-甲基-4-1H-吡唑硼酸頻那醇酯（0.8 g, 3.8 mmol）溶於二氧六環（10 mL）和水（1 mL）中, 加入磷酸鉀（1.3 g, 6.4 mmol）和二茂鐵二氯化鈀（0.12 g, 0.16 mmol)，反應液在氮氣氛圍下加熱至80℃攪拌16小時。LCMS監測反應結束，將反應液冷卻至室溫，用水（200 mL）稀釋後用乙酸乙酯（100 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-羧酸第三丁酯（1.3 g，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 500.4 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-羧酸第三丁酯（1.1 g，粗品）和10%鈀碳（110 mg）加入到甲醇（15 mL）中，在氫氣球氛圍下室溫攪拌4小時。TLC監測顯示原料消失，過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/乙酸乙酯= 1/1）得到1'-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-羧酸第三丁酯（0.75 g，二步收率59%）。 MS (ESI) M/Z: 470.4 [M+H] ⁺. 後續步驟以1'-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-聯哌啶]-1-羧酸第三丁酯為原料，參照實施例35和實施例48的製備方法得到終產物5-(3-(1'-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-二哌啶]-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（33.6 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1056.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.68 (s, 1H), 11.09 (s, 1H), 8.84-8.81 (m, 3H), 8.45 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.67-7.65 (m, 1H), 7.56 (s, 2H), 6.81 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 6.69-6.67 (m, 1H), 5.10-5.06 (m, 1H), 4.14-4.10 (m, 2H), 3.84-3.79 (m, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.37-3.31 (m, 2H), 3.15-3.12 (m, 2H), 2.91-2.85 (m, 3H), 2.66-2.52 (m, 6H), 2.03 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.93-1.70 (m, 6H), 1.35-1.10 (m, 4H).

實施例61: 5-(3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將(6-胺基-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦（1.1 g, 5.6 mmol）溶於丙酮（50 mL）中，加入5-溴-2,4-二氯吡啶（1.3 g, 5.6 mmol）和N,N-二異丙基乙胺（1.4 g, 11.2 mmol）。反應液在氮氣保護下加熱至60℃攪拌3小時至反應完全。將反應液冷卻至室溫並減壓濃縮，加入水（50 mL），用乙酸乙酯（50 mL×3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦（1.7 g，收率78%）。 MS (ESI) M/Z: 388.0 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦（1.7 g，4.4 mmol）溶於正丁醇（50 mL），加入1-(4-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（1.7 g，4.4 mmol）和三氟乙酸（5.0 g， 43.7 mmol），氮氣置換2次，升溫至110℃攪拌過夜，LCMS監測反應完畢。將反應液冷卻至室溫並減壓濃縮，加入水（50 mL），用乙酸乙酯（50 mL×3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到1-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（3.2 g，收率99%）。 MS (ESI) M/Z: 735.2 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將1-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（3.2 g，4.4 mmol）溶於甲醇（50 mL）和水（10 mL）中，加入氫氧化鉀（487 mg，8.7 mmol），氮氣保護下升溫至60℃攪拌1小時，LCMS監測反應結束。將反應液冷卻至室溫並減壓濃縮，加入水（50 mL），用乙酸乙酯/甲醇=10:1（50 mL×3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 10/1）得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基磷氧化物（2.2 g，收率79%）。 MS (ESI) M/Z: 639.2 [M+H] ⁺. 步驟4：將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基磷氧化物（2.2 g, 3.4 mmol）和4-碘哌啶-1-羧酸第三丁酯（2.1 g, 6.9 mmol）溶於乙腈（10 mL）中，加入碳酸鉀（1.4 g, 10.3 mmol），氮氣置換3次後，反應體系升溫至100℃攪拌4天。LCMS監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮。加入水（50 mL），用二氯甲烷（50 mL×3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 10/1~5/1）得到4-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（1.5 g，收率53%）。 MS (ESI) M/Z: 822.3 [M+H] ⁺. 步驟5：將4-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（1.5 g, 1.8 mmol）溶於二氯甲烷（50 mL）中，加入三氟乙酸（10 mL），室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示反應結束，加入水（50 mL），用二氯甲烷（50 mL×3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基磷氧化物的三氟乙酸鹽（1.2 g，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 722.3 [M+H] ⁺. 步驟6：將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基磷氧化物的三氟乙酸鹽（0.5 g, 粗品）和3-碘氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（588 mg, 2.1 mmol）溶於乙腈（50 mL）中，加入碳酸鉀（477 mg, 3.5 mmol），氮氣置換3次後，反應體系升溫至100℃攪拌4天。LCMS監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮。加入水（50 mL），用二氯甲烷（50 mL×3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 10/1~5/1）得到3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（280 mg，二步收率42%）。 MS (ESI) M/Z: 877.3 [M+H] ⁺. 步驟7：將3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（280 mg, 0.32 mmol）溶於二氯甲烷（50 mL）中，加入三氟乙酸（10 mL），室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示反應結束，加入水（30 mL），用二氯甲烷（30 mL×3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到(6-((2-((4-(4-(1-(氮雜環丁烷-3-基)哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基磷氧化物的三氟乙酸鹽（220 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 777.3 [M+H] ⁺. 步驟8：室溫下將(6-((2-((4-(4-(1-(氮雜環丁烷-3-基)哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基磷氧化物的三氟乙酸鹽（120 mg, 粗品）和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮（43 mg, 0.15 mmol）溶於DMSO（5 mL）和乙腈（5 mL）中，加入DIEA（40 mg, 0.31 mmol），將反應體系加熱至80℃並攪拌16小時。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，用高效製備液相色譜純化得到終產物5-(3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（23.1 mg，收率15%）。 MS (ESI) M/Z: 1033.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃/CD ₃OD): δ 8.08 (s, 1H), 7.98-7.95 (m, 1H), 7.71-7.64 (m, 4H), 7.50 (s, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.77-6.71 (m, 2H), 6.65-6.62 (m, 1H), 4.98-4.95 (m, 1H), 4.26 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 3.93 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 3.88-3.81 (m, 1H), 3.75-3.50 (m, 4H), 3.28 (brs, 6H), 2.88-2.75 (m, 3H), 2.71-2.59 (m, 2H), 2.40-2.29 (m, 6H), 2.20-2.11 (m, 8H), 2.02 (s, 3H), 1.99 (s, 3H).

實施例62： 5-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-1,4’-雙哌啶-1’-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸第三丁酯（770 mg，1.9 mmol，製備可參考專利WO2021/104441A1）溶於甲醇（20 mL）中，加入10% Pd/C（80 mg）。室溫10公斤氫氣壓下攪拌反應16小時。過濾，濾液減壓濃縮得到4-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（600 mg，收率84%），直接用於下步反應。 MS (ESI) M/Z: 387.2 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將4-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（370 mg，0.96 mmol），(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧膦（357 mg，0.87 mmol）和三氟乙酸（992 mg，8.7 mmol）依次加入到正丁醇（10 mL）中，氮氣保護下升溫至98℃攪拌過夜。將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，加入四氫呋喃（10 mL），然後向溶液中加入三乙胺（90 mg，0.89 mmol），攪拌10分鐘，加入二碳酸二第三丁酯（285 mg，1.3 mmol），室溫攪拌2小時。向反應液中加入水（50 mL）淬滅，乙酸乙酯（50 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物矽膠柱層析提純（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 50/ 1）得到4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（370 mg，收率56%）。 MS (ESI) M/Z: 761.7 [M+H] ⁺. 步驟3：將4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（370 mg，0.49 mmol）溶於乙酸乙酯（8 mL）中，加入5M氯化氫/乙酸乙酯溶液（5 mL），室溫攪拌30分鐘。TLC監測原料消失，過濾，濾餅用飽和碳酸鉀溶液調節pH值到9，乙酸乙酯（50 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌啶-4-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（300 mg，收率93%）。 MS (ESI) M/Z: 661.9 [M+H] ⁺. 後續步驟以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌啶-4-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例35和實施例53的製備方法得到終產物5-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-1,4’-雙哌啶-1’-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（4 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1056.6 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.77 (s, 1H), 8.90-8.80 (m, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.00 (brs, 1H),7.67-7.64 (m, 2H), 7.34-7.26 (m, 2H), 7.10 (s, 1H), 6.83-6.80 (m, 1H), 6.56-6.54 (m, 1H), 4.95-4.93 (m, 1H), 4.20-4.05 (m, 2H), 3.95-3.80 (m, 8H), 3.60-3.40 (m, 4H), 2.85-2.65 (m, 6H), 2.20-2.00 (m, 9H), 2.00-1.60 (m, 6H), 1.30-1.20 (m, 4H).

實施例63: 5-(4-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基) 苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基磷氧化物的鹽酸鹽（0.5 g, 0.72 mmol）和3-碘氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（1.1 g, 3.9 mmol）溶於乙腈（20 mL）中，加入碳酸鉀（521 mg, 3.8 mmol），氮氣置換3次後，反應體系升溫至98℃攪拌3天。TLC監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，加入飽和碳酸氫鈉溶液（100 mL）淬滅，用二氯甲烷（50 mL×2次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 8/1）得到3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-( 1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（230 mg，收率39%）。 MS (ESI) M/Z: 818.6 [M+H] ⁺. 步驟2：將3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-( 1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（230 mg，0.28 mmol）溶於乙酸乙酯（5 mL）中，加入5M氯化氫/1,4-二氧六環溶液（5 mL），室溫攪拌30分鐘。TLC監測原料消失，直接減壓濃縮得到(6-((2-((4-(4-(氮雜環丁烷-3-基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦的鹽酸鹽（200 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 718.2 [M+H] ⁺. 步驟3：將(6-((2-((4-(4-(氮雜環丁烷-3-基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（200 mg，粗品）溶於1,2二氯乙烷（10 mL）和N,N-二甲基甲醯胺（2 mL）中，加入三乙胺（118 mg， 1.2 mmol），攪拌5分鐘，再加入4-氧代哌啶-1-羧酸第三丁酯（155 mg，0.78 mmol），攪拌15分鐘，最後加入醋酸（0.4 mL）和三乙醯氧基硼氫化鈉（248 mg，1.2 mmol），室溫攪拌2小時。TLC監測原料消失，向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液（20 mL）淬滅，乙酸乙酯（30 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 20/ 1）得到4-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基- 2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（190 mg，二步收率75%）。 MS (ESI) M/Z: 901.5 [M+H] ⁺. 步驟4：將4-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基- 2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（190 mg，0.21 mmol）溶於二氯甲烷（10 mL）中，加入三氟乙酸（10 mL），室溫攪拌30分鐘。TLC監測原料消失，直接減壓濃縮得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(1-(哌啶-4-基)氮雜環丁烷)- 3-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦的三氟乙酸鹽（200 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 801.5 [M+H] ⁺. 步驟5：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(1-(哌啶-4-基)氮雜環丁烷)- 3-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦三氟乙酸鹽（200 mg, 粗品）和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮（207 mg, 0.75 mmol）溶於DMSO（10 mL）中，加入DIEA（163 mg, 1.3 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至60℃並攪拌過夜。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入飽和碳酸氫鈉溶液（20 mL）淬滅，乙酸乙酯（15 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（10 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用高效製備液相色譜純化得到終產物5-(4-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（8.5 mg，二步收率3.8%）。 MS (ESI) M/Z: 1057.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.59 (s, 1H), 8.97 (dd, J= 9.6, 4.2 Hz, 1H), 8.73 (dd, J= 12.0 1.8 Hz, 2H), 8.37 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.65-7.40 (m, 3H), 7.38 (s, 1H), 7.06 (dd, J= 8.6, 1.8 Hz, 1H), 6.70 (s, 1H), 4.95 (dd, J= 12.0, 5.2 Hz, 1H), 4.03-3.93 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.55 (brs, 2H), 3.13-2.65 (m, 12H), 2.49 (brs, 4H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.07-1.95 (m, 6H).

實施例64: 5-(4-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(1-(哌啶-4-基)氮雜環丁烷)- 3-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦三氟乙酸鹽和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮為原料，參照實施例63的操作步驟製備得到終產物5-(4-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（25.6 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1075.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.68 (s, 1H), 11.12 (s, 1H), 8.85-8.80 (m, 3H), 8.45 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.73-7.70 (m, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.46-7.44 (m, 1H), 6.86 (s, 1H), 5.13-5.08 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.55-3.40 (m, 2H), 3.00-2.80 (m, 14H), 2.60-2.20 (m, 4H), 2.10-1.95 (m, 10H), 1.80-1.70 (m, 2H).

實施例65: 5-(3-(4-(2-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（830 mg，1.2 mmol）溶於1,2二氯乙烷（35 mL）和N ,N-二甲基甲醯胺（7 mL）中，加入三乙胺（380 mg，3.8 mmol），攪拌5分鐘，然後加入4-(2-氧乙基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（570 mg，2.5 mmol），攪拌15分鐘，加入醋酸（1.2 g），最後加入三乙醯氧基硼氫化鈉（790 mg，3.8 mmol），室溫攪拌16小時。TLC監測原料消失，向反應液加入飽和碳酸氫鈉溶液（20 mL）淬滅，乙酸乙酯（50 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物矽膠柱層析提純（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 50/ 1~20/ 1）得到4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基) 苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（600 mg，收率58%）。 MS (ESI) M/Z: 873.9 [M+H] ⁺. 步驟2：將4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基) 苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（600 mg，0.69 mmol）溶於乙酸乙酯（3 mL）中，冰浴下加入3.7M氯化氫/二氧六環溶液（3 mL），室溫攪拌16小時。TLC監測原料消失，過濾，濾餅用乙酸乙酯（3 mL）洗滌一次，乾燥得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（560 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 773.9 [M+H] ⁺. 後續步驟以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽為原料，參照實施例35的製備方法得到終產物5-(3-(4-(2-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（36 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1085.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.60 (s, 1H), 8.98 (dd, J= 9.2, 4.0 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.23-8.15 (m, 2H), 8.10 (s, 1H), 7.80-7.70 (m, 2H), 7.63-7.60 (m, 1H), 7.38 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 6.51 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 4.95-4.92 (m, 1H), 4.15-4.05 (m, 2H), 3.91-3.80 (m, 5H), 3.68 (s, 3H), 3.60-2.90 (m, 9H), 2.90-2.65 (m, 8H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.95-1.90 (m, 2H), 1.79-1.70 (m, 2H), 1.60-1.20 (m, 5H).

實施例66: 5-(3-(4-(2-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：室溫下將(6-((2-((4-(4-(2-(1-(氮雜環丁烷-3-基)哌啶-4-基)乙基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦三氟乙酸鹽（134 mg, 約0.14 mmol）和2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮（143 mg, 0.48 mmol）溶於DMSO（6 mL）中，加入DIEA（105 mg, 0.81 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至60℃並攪拌16小時。TLC監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（20 mL）淬滅，二氯甲烷（60 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用高效製備液相色譜純化得到終產物5-(3-(4-(2-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（49.7 mg，收率32%）。 MS (ESI) M/Z: 1103.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.68 (s, 1H), 11.11 (s, 1H), 8.84-8.81 (m, 3H), 8.45 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.63-7.56 (m, 3H), 6.92 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.84 (s, 1H), 5.10-5.05 (m, 1H), 4.23 (brs, 2H), 3.96 (brs, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.20 (brs, 1H), 2.87-2.71 (m, 8H), 2.60-2.30 (m, 8H), 2.03 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.83-1.78 (m, 4H), 1.40-1.15 (m, 5H).

實施例67: 5-(3-(4-((4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：室溫下將(6-((2-((4-(4-((1-(氮雜環丁烷-3-基)哌啶-4-基)甲基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦三氟乙酸鹽（200 mg, 約0.22 mmol）和2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮（217 mg, 0.74 mmol）溶於DMSO（5 mL）中，加入DIEA（142 mg, 1.1 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至60℃並攪拌16小時。TLC監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（20 mL）淬滅，二氯甲烷（60 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用高效製備液相色譜純化得到終產物5-(3-(4-((4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（43.5 mg，收率18%）。 MS (ESI) M/Z: 1089.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.68 (s, 1H), 11.11 (s, 1H), 8.90-8.80 (m, 3H), 8.43 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.63-7.57 (m, 3H), 6.94-6.86 (m, 2H), 5.08-5.05 (m, 1H), 4.23 (brs, 2H), 4.14-4.10 (m, 2H), 3.97 (brs, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 3.30-3.20 (m, 2H), 2.90-2.75 (m, 7H), 2.58-2.50 (m, 4H), 2.22 (brs, 2H), 2.03 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.83-1.55 (m, 5H), 1.20-1.10 (m, 2H).

實施例68: 5-(3-(4-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將4-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（1.3 g, 3.1 mmol）和1-乙基-1H-吡唑-4-基硼酸（0.57 g, 4.1 mmol）溶於二氧六環（20 mL）和水（4 mL）中, 加入碳酸鈉（0.66 g, 6.2 mmol）和二茂鐵二氯化鈀（0.23 g, 0.31 mmol)，反應液在氮氣氛圍下加熱至80℃攪拌16小時。LCMS監測反應結束，將反應液冷卻至室溫，用水（100 mL）稀釋後用乙酸乙酯（50 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 5/1~1/1）得到4-(2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（0.7 g，收率52%）。 MS (ESI) M/Z: 432.1 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將還原鐵粉（1.1 g，19.6 mmol），矽膠（2.2 g，100-200目）和氯化銨（0.65 g，36 mmol）加入到乙醇（8 mL）和水（8 mL）中，升溫至65℃攪拌0.5小時。再加入4-(2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（1.3 g，3.0 mmol）的四氫呋喃（10 mL）溶液，反應體系在65℃繼續攪拌1.5小時。TLC監測反應結束，矽藻土過濾，濾液中加入水（10 mL）稀釋，乙酸乙酯（50 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 10/1~1/1）得到4-(4-胺基-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（1.2 g，收率99%）。 MS (ESI) M/Z: 402.4 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將4-(4-胺基-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（1.1 g，2.7 mmol），(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧膦（1.2 g，2.9 mmol）和三氟乙酸（3.1 g，27.2 mmol）依次加入到正丁醇（10 mL）中，氮氣保護下升溫至98℃攪拌過夜。將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，加入四氫呋喃（10 mL），然後向溶液中加入三乙胺（270 mg，2.7 mmol），攪拌10分鐘，加入二碳酸二第三丁酯（0.89 g，4.0 mmol），室溫攪拌2小時。向反應液中加入水（50 mL）淬滅，乙酸乙酯（50 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物矽膠柱層析提純（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 50/ 1）得到4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（0.9 g，收率43%）。 MS (ESI) M/Z: 777.4 [M+H] ⁺. 步驟4：將4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（900 mg，1.2 mmol）溶於二氯甲烷（10 mL）中，加入5M氯化氫/乙酸乙酯溶液（2 mL），室溫攪拌30分鐘。TLC監測原料消失，過濾，濾餅用飽和碳酸鉀溶液調節pH值到9，乙酸乙酯（50 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到(6-((5-溴-2-((5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-甲氧基-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（550 mg，收率70%）。 MS (ESI) M/Z: 677.4 [M+H] ⁺. 步驟5：將(6-((5-溴-2-((5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-甲氧基-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（900 mg，1.3 mmol）溶於DCM（7.5 mL）和MeOH（7.5 mL）中，加入4-氧代哌啶-1-羧酸第三丁酯（1.1 g，5.3 mmol），攪拌1小時，再加入氰基硼氫化鈉（500 mg，8.0 mmol），室溫攪拌16小時。TLC監測顯示原料消失，向反應液中加入水（20 mL）和乙酸乙酯（50 mL），水相再用乙酸乙酯（30 mL）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物矽膠柱層析提純（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 50/1~25/1）得到4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（570 mg，收率50%）。 MS (ESI) M/Z: 860.4 [M+H] ⁺. 步驟6：將4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（570 mg，0.66 mmol）溶於DCM（10 mL），冰浴下加入三氟乙酸（4 mL），室溫下攪拌0.5小時，TLC監測顯示原料消失，用飽和碳酸鉀溶液調節pH值到9，乙酸乙酯（50 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到(6-((5-溴-2-((5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-甲氧基-4-(4-(哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（350 mg，收率70%）。 MS (ESI) M/Z: 760.0 [M+H] ⁺. 步驟7：將(6-((5-溴-2-((5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-甲氧基-4-(4-(哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦（350 mg, 0.46 mmol）和3-碘氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（651 mg, 2.3 mmol）溶於乙腈（30 mL）中，加入碳酸鉀（318 mg, 2.3 mmol），反應體系升溫至98℃攪拌2天。TLC監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物矽膠柱層析提純（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 50/1~25/1）得到3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（250 mg，收率59%）。 MS (ESI) M/Z: 915.5 [M+H] ⁺. 步驟8：將3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（250 mg, 0.27 mmol）溶於二氯甲烷（10 mL）中，加入三氟乙酸（3 mL），室溫下攪拌30分鐘。TLC監測顯示反應結束，反應液減壓濃縮得到(6-((2-((4-(4-(1-(氮雜環丁烷-3-基)哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)-5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基磷氧化物的三氟乙酸鹽（200 mg，收率79%）。 MS (ESI) M/Z: 814.9 [M+H] ⁺. 步驟9：室溫下將(6-((2-((4-(4-(1-(氮雜環丁烷-3-基)哌啶-4-基)哌𠯤-1-基)-5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-甲氧基苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基磷氧化物三氟乙酸鹽（200 mg, 0.22 mmol）和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮（204 mg, 0.73 mmol）溶於DMSO（10 mL）中，加入DIEA（160 mg, 1.2 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至60℃並攪拌16小時。TLC監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（20 mL），再用二氯甲烷（60 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用高效製備液相色譜純化得到終產物5-(3-(4-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（58.7 mg，收率25%）。 MS (ESI) M/Z: 1071.8 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.68 (s, 1H), 11.10 (s, 1H), 8.84-8.80 (m, 3H), 8.46 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.67-7.45 (m, 3H), 6.85-6.75 (m, 2H), 6.70-6.60 (m, 1H), 5.09-5.04 (m, 1H), 4.11-4.05 (m, 4H), 3.85-3.75 (m, 5H), 2.90-2.80 (m, 8H), 2.70-2.50 (m, 8H), 2.03 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.91-1.80 (m, 4H), 1.45 (brs, 2H), 1.31-1.20 (m, 3H).

實施例69: 5-(3-(4-(4-(4-(5-溴-4-(5-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)-2-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3- 基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以1-(二氟甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-1H-吡唑為原料，參照實施例68的製備方法得到終產物5-(3-(4-(4-(4-(5-溴 -4-(5-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)-2-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3- 基)異吲哚啉-1,3-二酮（33.6 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1093.6 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.68 (s, 1H), 11.10 (s, 1H), 8.84-8.79 (m, 3H), 8.55 (brs, 2H), 8.31 (s, 1H), 8.20 (brs, 1H), 7.74-7.55 (m, 4H), 6.95-6.91 (m, 1H), 6.81 (s, 1H), 6.68-6.65 (m, 1H), 5.09-5.04 (m, 1H), 4.15-4.10 (m, 2H), 3.85-3.80 (m, 5H), 2.95-2.80 (m, 8H), 2.70-2.50 (m, 8H), 2.03 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.90-1.80 (m, 4H), 1.45 (brs, 2H).

實施例70: 5-(3-(4-(4-(4-(4-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基磷氧化物（製備參見WO2021/190417A1）為原料，參照實施例68的製備方法得到終產物5-(3-(4-(4-(4-(4-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（14.1 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1047.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.64 (s, 1H), 11.09 (s, 1H), 9.00 (brs, 1H), 8.84-8.81 (m, 2H), 8.51 (brs, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.65 (d, J= 8.0, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.43 (brs, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.66 (dd, J= 8.4, 1.6Hz, 1H), 5.10-5.00 (m, 1H), 4.11 (t, J= 7.6, 2H), 3.90-3.70 (m, 8H), 2 85 (brs, 8H), 2.70-2.50 (m, 8H), 2.01 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.90-1.80 (m, 4H), 1.55-1.40 (m, 2H).

實施例71: 3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：以4-溴-3-氟苯胺為原料，參照實施例54的製備方法得到終產物3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮（29.2 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1008.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.80 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 9.60 (brs, 1H), 8.87-8.78 (m, 3H), 8.63 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.10 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.53 (brs, 1H), 7.02-6.96 (m, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.52-6.46 (m, 2H), 4.48 (brs, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.73 (brs, 2H), 3.63-3.55 (m, 4H), 3.19-3.10 (m, 2H), 3.05-2.83 (m, 6H), 2.79-2.70 (m, 1H), 2.62-2.54 (m, 1H), 2.13-2.06 (m, 2H), 2.05 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.96-1.74 (m, 4H).

實施例72: 3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-2-氟苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：以4-溴-2-氟苯胺為原料，參照實施例54的製備方法得到終產物3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-2-氟苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮（26.4 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1008.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.71 (s, 1H), 10.82 (s, 1H), 9.54 (brs, 1H), 8.86-8.81 (m, 3H), 8.46 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.09 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.53 (brs, 1H), 6.97-6.93 (m, 1H), 6.88-6.78 (m, 3H), 4.39-4.35 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.75-3.68 (m, 2H), 3.63-3.55 (m, 4H), 3.09 (brs, 2H), 2.94-2.87 (m, 4H), 2.85-2.64 (m, 3H), 2.61-2.55 (m, 1H), 2.13-1.97 (m, 12H).

實施例73: 3-(4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)苯氧基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：以4-(4-((2,6-二氧哌啶-3-基)氧代)苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（製備參見WO2021/83949A1）為原料，參照實施例54的製備方法得到終產物3-(4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)苯氧基)哌啶-2,6-二酮（30.8 mg）。 MS (ESI) M/Z: 991.9 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.67 (s, 1H), 10.88 (s, 1H), 8.81 (d, J= 1.6 Hz, 2H), 8.76 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.54 (brs, 1H), 6.91-6.81 (m, 5H), 5.02-4.99 (m, 1H), 3.79 (s, 6H), 3.74 (brs, 2H), 3.66 (brs, 2H), 3.25 (s, 2H), 3.04 (brs, 4H), 2.85 (brs, 4H), 2.68-2.64 (m, 1H), 2.60-2.56 (m, 6H), 2.19-2.13 (m, 1H), 2.11-2.05 (m, 1H), 2.03 (s, 3H), 1.99 (s, 3H).

實施例74: 3-(4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)苯)硫代)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將4-溴苯硫酚（2.0 g, 10.6 mmol）、3-溴哌啶-2,6-二酮（2.0 g，10.6 mmol）和無水碳酸鉀（4.4 g，31.8 mmol）依次加入乙腈（20 mL）中，升溫至50℃攪拌過夜。TLC監測原料消失，加入水（50 mL）稀釋，乙酸乙酯（50 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到3-((4-溴苯基)硫代)哌啶-2,6-二酮（3.17 g，粗品），直接用於下步反應。 MS (ESI) M/Z: 300.0 [M+H] ⁺. 步驟2：將3-((4-溴苯基)硫代)哌啶-2,6-二酮（3.17 g，粗品）、N-Boc-1,2,5,6-四氫吡啶-4-硼酸頻哪醇酯（3.3 g，10.6 mmol）、Pd(dppf)Cl ₂（775 mg，1.06 mmol）和無水碳酸鉀（4.4 g，31.8 mmol）依次加入DMF（30 mL）中，氮氣置換三次，升溫至100℃攪拌過夜。TLC監測反應完畢，將反應液冷卻至室溫，加入水（50 mL）稀釋，乙酸乙酯（50 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 60/ 1）得到4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)硫代)苯基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸第三丁酯（1.72 g，二步收率40%）。 MS (ESI) M/Z: 403.2 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)硫代)苯基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸第三丁酯（1.12 g，2.8 mmol）和10%濕鈀碳（300 mg）加入到甲醇（10 mL）中，氫氣置換三次，升溫至50℃攪拌過夜。LCMS檢測反應完全，反應液過濾，減壓濃縮，所得殘餘物用高效製備液相色譜純化得到4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)硫代)苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（100 mg，收率9%）。 MS (ESI) M/Z: 405.2 [M+H] ⁺. 後續步驟以4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)硫代)苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯為原料，參照實施例54的製備方法得到終產物3-(4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)苯)硫代)哌啶-2,6-二酮（4.2 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1007.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.62 (s, 1H), 8.96 (dd, J= 9.6, 4.0 Hz, 1H), 8.75 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 8.71 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.68-7.59 (m, 2H), 7.57 (s, 1H), 7.53-7.35 (m, 3H), 6.64 (s, 1H), 5.36-5.34 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.56-3.50 (m, 2H), 3.41-3.44 (m, 2H), 2.93-2.78 (m, 6H), 2.65-2.58 (m, 1H), 2.50-2.40 (brs, 1H), 2.38-2.29 (m, 1H), 2.24-2.16 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.03-1.99 (m, 4H), 1.66-1.61 (m, 4H).

實施例75: 3-(4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-2,3-二氫苯并呋喃-7-基)胺基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：以4-溴-2,3-二氫苯并呋喃-7-胺（製備參見CN106220644 A）為原料，參照實施例54的製備方法得到終產物3-(4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-2,3-二氫苯并呋喃-7-基)胺基)哌啶-2,6-二酮（22 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1030.3 [M-H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.58 (s, 1H), 8.99-8.96 (m, 1H), 8.72 (d, J= 11.2 Hz, 2H), 8.30 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.11 (brs, 1H), 7.67-7.62 (m, 3H), 7.38 (s, 1H), 6.66 (s, 1H), 6.61 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.46 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 4.62-4.57 (m, 2H), 4.13-4.09 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.67 (brs, 2H), 3.39 (brs, 2H), 3.20-3.11 (m, 4H), 2.90 (brs, 5H), 2.82-2.69 (m, 2H), 2.52-2.43 (m, 5H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.00-1.89 (m, 5H).

實施例76: 4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯甲醯胺

反應流程:

反應步驟：步驟1：將4-溴-2-氟苯甲酸（2.0 g，9.1 mmol）、N-Boc-1,2,5,6-四氫吡啶-4-硼酸頻哪醇酯（2.8 g，9.1 mmol）、Pd(PPh ₃) ₄（1.1 g，0.9 mmol）和碳酸鉀（3.8 g，27.4 mmol）依次加入二氧六環/水（20 mL/5 mL）中，氮氣置換三次，升溫至100℃攪拌反應2小時。TLC監測反應完畢，將反應液冷卻至室溫，加入水（30 mL）稀釋，乙酸乙酯（30 mL×3）洗滌後，稀鹽酸調節pH值至弱酸性。有固體析出，過濾，收集濾餅，乾燥得到4-(1-(第三丁氧羰基)-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基)-2-氟苯甲酸（2.1 g，收率72%）。 MS (ESI) M/Z: 322.1 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將4-(1-(第三丁氧羰基)-1,2,3,6-四氫吡啶-4-基)-2-氟苯甲酸（1.0 g，3.1 mmol）和10%濕鈀碳（100 mg）加入到甲醇（20 mL）中，氫氣置換三次，室溫攪拌反應2小時。TLC檢測反應完全，反應液用矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得到4-(1-(第三丁氧羰基)哌啶-4-基)-2-氟苯甲酸（0.7 g，收率70%）。 MS (ESI) M/Z: 324.2 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將4-(1-(第三丁氧羰基)哌啶-4-基)-2-氟苯甲酸（650 mg, 2.0 mmol）溶於二氯甲烷（10 mL），N ₂保護下冷卻至0℃，滴加草醯氯（0.35 mL，4.0 mmol）和DMF（0.2 mL）中，攪拌10分鐘後，升至室溫，在室溫下繼續反應1個小時。TLC監測反應結束，反應液減壓濃縮得到4-(4-(氯羰基)-3-氟苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（670 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 342.2 [M+H] ⁺. 步驟4：室溫下將3-胺基哌啶-2,6-二酮（1.0 g，8.0 mmol）和DIEA（3.5 mL，20.1 mmol）溶於二氯甲烷（20 mL），N ₂保護下冷卻至0℃，滴加4-(4-(氯羰基)-3-氟苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（670 mg，粗品）的四氫呋喃溶液，反應體系在0℃攪拌2個小時。TLC監測反應結束，加入水（40 mL），用二氯甲烷（30 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（50 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 50/ 1）得到4-(4-((2,6-二氧哌啶-3-基)氨甲醯基)-3-氟苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（502 mg，二步收率58%）。 MS (ESI) M/Z: 434.2 [M+H] ⁺. 以4-(4-((2,6-二氧哌啶-3-基)氨甲醯基)-3-氟苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯為原料，後續步驟參照實施例54的製備方法得到終產物4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯甲醯胺（22.9 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1036.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.58 (s, 1H), 9.02-8.95 (m, 1H), 8.78-8.68 (m, 2H), 8.32-8.22 (m, 3H), 8.04-8.00 (m, 1H), 7.66 (brs, 3H), 7.54-7.50 (m, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.15 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.02 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 4.83-4.74 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.66-3.62 (m, 2H), 3.44-3.34 (m, 2H), 3.17-3.09 (m, 2H), 2.92-2.90 (m, 4H), 2.85-2.69 (m, 3H), 2.67-2.45 (m, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.08-1.94 (m, 7H).

實施例77: 5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將(6-((2-((4-(4-(7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基磷氧化物的三氟乙酸鹽（1.5 g, 1.7 mmol）和3-碘氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（2.6 g, 9.0 mmol）溶於DMF（25 mL）中，加入碳酸鉀（1.3 g, 9.0 mmol），氮氣置換3次後，反應體系升溫至75℃攪拌16小時。TLC監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮。加入水（50 mL），用乙酸乙酯（50 mL×3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 100/1~50/1）得到3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（450 mg，收率28%）。 MS (ESI) M/Z: 941.2 [M+H] ⁺. 步驟2：將3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（450 mg, 0.48 mmol）溶於乙酸乙酯（5 mL）中，冰浴下加入氯化氫的乙酸乙酯溶液（4M, 5 mL），室溫下攪拌3小時。LCMS監測顯示反應結束，減壓濃縮得到(6-((2-((4-(4-(7-(氮雜環丁烷-3-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基磷氧化物的鹽酸鹽（450 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 841.3 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將(6-((2-((4-(4-(7-(氮雜環丁烷-3-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基磷氧化物的鹽酸鹽（210 mg, 粗品）和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮（210 mg, 0.76 mmol）溶於DMF（6 mL）中，加入碳酸鉀（160 mg, 1.16 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至75℃並攪拌16小時。TLC監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（30 mL），用乙酸乙酯（60 mL×2次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，所得殘餘物用高效製備液相色譜純化得到終產物5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（20.3 mg，二步收率8.3%）。 MS (ESI) M/Z: 1096.9 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.60 (s, 1H), 9.02-8.92 (m, 1H), 8.76 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.72 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.81-7.63 (m, 3H), 7.39 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.72 (s, 1H), 6.53 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.10 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.87-3.80 (m, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.58-3.45 (m, 5H), 3.40-3.25 (m, 2H), 3.20-3.12 (m, 2H), 2.88-2.66 (m, 7H), 2.30-2.20 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.00-1.80 (m, 8H).

實施例78: 5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基) -6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：室溫下將(6-((2-((4-(4-(7-(氮雜環丁烷-3-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基磷氧化物的鹽酸鹽（210 mg, 約0.24 mmol）和2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮（210 mg, 0.71 mmol）溶於DMF（6 mL）中，加入碳酸鉀（160 mg, 1.2 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至75℃並攪拌16小時。TLC監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（20 mL）淬滅，二氯甲烷（60 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用高效製備液相色譜純化得到終產物5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基) -6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（2.1 mg，收率0.8%）。 MS (ESI) M/Z: 1116.0 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.60 (s, 1H), 9.00-8.97 (m, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.06 (brs, 1H), 7.81-7.73 (m, 2H), 7.40-7.30 (m, 2H), 6.84-6.82 (m, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.92-4.89 (m, 1H), 4.25 (brs, 2H), 4.10-4.00 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.67 (s, 3H), 3.55-3.45 (m, 5H), 3.40-3.25 (m, 2H), 3.25-3.10 (m, 2H), 2.89-2.66 (m, 7H), 2.35-1.80 (m, 16H).

實施例79: 5-(4-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將3-(哌啶-4-基)丙基-1-醇（250 mg, 1.75 mmol）和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-異吲哚啉-1,3-二酮（482 mg, 1.75 mmol）溶於NMP（30 mL）和N,N-二異丙基乙胺（15 mL）中，反應體系升溫至110℃攪拌6小時。TLC監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，倒入水（100 mL）中。用乙酸乙酯（100 mL×3次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（100 mL）洗滌兩次，然後無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱色譜層析法（石油醚：乙酸乙酯= 3:1）純化得到2-(2,6-氧代哌啶-3-基)-5-(4-(3-羥基丙基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮（310 mg，收率44%）。 MS (ESI) M/Z: 400.2 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將2-(2,6-氧代哌啶-3-基)-5-(4-(3-羥基丙基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮（300 mg, 0.75 mmol）溶於二氯甲烷（10 mL）中，加入三乙胺（114 mg, 1.1 mmol）。降溫至0℃，緩慢滴加甲磺醯氯（129 mg, 1.1 mmol），室溫下攪拌過夜。TLC監測顯示反應結束，加入飽和碳酸氫鈉水溶液（20 mL）淬滅反應。混合液用二氯甲烷（20 mL×3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，然後無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱色譜層析法（石油醚：乙酸乙酯= 5:1）純化得到3-(1-(2-(2,6-氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基) 哌啶-4-基)丙基甲磺酸酯（270 mg，收率75%）。 MS (ESI) M/Z: 478.2 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（200 mg, 0.29 mmol）和3-(1-(2-(2,6-氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基) 哌啶-4-基)丙基甲磺酸酯（164 mg, 0.34 mmol）溶於N,N-二甲基甲醯胺（5 mL）中，加入DIEA（184 mg, 1.4 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至80℃並攪拌過夜。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（20 mL）淬滅反應。混合液用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用高效製備液相色譜純化得到終產物5-(4-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（21.3 mg，收率7%）。 MS (ESI) M/Z: 1044.7 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.59 (s, 1H), 8.98 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 8.74 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.71 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.53 (brs, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.76-7.54 (m, 4H), 7.38 (s, 1H), 7.05-7.03 (m, 1H), 6.74 (s, 1H), 4.95-4.85 (m, 1H), 3.97-3.90 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.08 (brs, 4H), 3.00-2.54 (m, 10H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.85-1.51 (m, 6H), 1.33-1.25 (m, 5H).

實施例80: 5-(4-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟-異吲哚啉-1,3-二酮為原料，參照實施例79的製備方法得到終產物5-(4-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（26.4 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1063.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.50 (s, 1H), 8.92 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 8.67-8.64 (m, 3H), 8.22 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.60-7.55 (m, 3H), 7.39-7.30 (m, 3H), 6.67 (s, 1H), 4.87-4.85 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 3.59-3.56 (m, 2H), 2.96 (brs, 4H), 2.86-2.37 (m, 10H), 2.07 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.78-1.28 (m, 11H).

實施例81: 4-(4-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(3-羥丙基)哌啶-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮（製備可參考WO2020/113233 A1）為原料，參照實施例79的製備方法得到終產物4-(4-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（27.2 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1045.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.58 (s, 1H), 8.98 (dd, J= 9.6 Hz, 4.4 Hz, 1H), 8.74 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.71 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.37 (brs, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.65 (brs, 3H), 7.65-7.55 (m, 1H), 7.36 (d, J= 6.8 Hz, 2H), 7.18 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.75 (s, 1H), 4.98-4.90 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.74-3.72 (m, 5H), 3.02 (brs, 4H), 2.91-2.65 (m, 6H), 2.47 (brs, 4H), 2.13 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 1.88-1.57 (m, 6H), 1.48- 1.35 (m, 5H).

實施例82: 5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將2-(哌啶-4-基)乙酸（500 mg, 3.5 mmol）和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮（368 mg, 1.25 mmol）溶於NMP（30 mL）和N,N-二異丙基乙胺（15 mL）中，反應體系升溫至110℃攪拌6小時。TLC監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，倒入水（100 mL）中，用稀鹽酸調節pH值至4-5，乙酸乙酯（100 mL×3次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（100 mL）洗滌兩次，然後無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到2-(1-(2-(2,6-氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)哌啶-1-基)乙酸（310 mg，粗品），直接用於下一步反應。 MS (ESI) M/Z: 418.1 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將2-(1-(2-(2,6-氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)哌啶-1-基)乙酸（119 mg，粗品）、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（200 mg，0.29 mmol）、HATU（163 mg，0.43 mmol）和DIEA（147 mg，1.1 mmol）依次加入到二氯甲烷（5 mL）中，室溫下攪拌過夜。LCMS監測原料消失，加入水（20 mL）稀釋，乙酸乙酯（20 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（10 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘留物經高效製備液相色譜純化得到終產物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（40 mg，二步收率13%）。 MS (ESI) M/Z: 1062.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.77 (brs, 1H), 8.95-8.90 (m, 1H), 8.76 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.72 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.67-7.61 (m, 3H), 7.45 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 4.95-4.85 (m, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.75 (brs, 5H), 3.66-3.63 (m, 2H), 3.56 (brs, 2H), 2.89-2.65 (m, 9H), 2.35-2.30 (m, 2H), 2.15-2.11 (m, 8H), 1.95-1.92 (m, 2H), 1.47-1.44 (m, 2H).

實施例83: 5-(4-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（500 mg，0.72 mmol）和三乙胺（454 mg，4.5 mmol）溶於二氯乙烷（10 mL）和DMF（2 mL）中，攪拌15分鐘後加入4-(4-甲醯基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（311 mg，1.1 mmol），攪拌15分鐘，再加入三乙醯氧基硼氫化鈉（216 mg，2.1 mmol），室溫攪拌過夜。TLC監測顯示原料消失，向反應液中加入水（20 mL）和乙酸乙酯（50 mL），水相再用乙酸乙酯（30 mL）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物矽膠柱層析提純（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 50/1）得到4-(4-((4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（110 mg，收率16%）。 MS (ESI) M/Z: 936.8 [M+H] ⁺. 步驟2：將4-(4-((4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（110 mg，0.12 mmol）溶於DCM（3 mL），冰浴下加入6 N 氯化氫/二氧六環溶液（10 mL），室溫下攪拌1小時，TLC監測顯示原料消失，減壓濃縮得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(4-(哌𠯤-1-基)苄基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦的鹽酸鹽（110 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 836.8 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(4-(哌𠯤-1-基)苄基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（110 mg, 粗品）和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮（99 mg, 0.36 mmol）溶於N,N-二甲基甲醯胺（5 mL）中，加入碳酸鉀（83 mg, 0.60 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至80℃並攪拌過夜。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（20 mL）淬滅反應。混合液用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用高效製備液相色譜純化得到終產物5-(4-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（17.9 mg，二步收率14%）。 MS (ESI) M/Z: 1092.9 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.59 (s, 1H), 8.99-8.96 (m, 1H), 8.75-8.71 (m, 2H), 8.29 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.84 (brs, 1H), 7.71-7.69 (m, 2H), 7.45 (brs, 2H), 7.37 (s, 1H), 7.26-7.24 (m, 2H), 7.07-7.05 (m, 1H), 6.92-6.90 (m, 2H), 6.72 (s, 1H), 4.99-4.96 (m, 1H), 3.96-3.85 (m, 5H), 3.70-3.55 (m, 9H), 3.40 (brs, 6H), 3.10-2.63 (m, 8H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H).

實施例84: 5-(3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將(6-胺基-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-5-基)二甲基氧化膦（487 mg, 2.1 mmol）溶於正丁醇（10 mL）中，加入5-溴-2,4-二氯吡啶（977 mg, 4.3 mmol）和N,N-二異丙基乙胺（555 mg, 4.3 mmol）。反應液在氮氣保護下加熱至100℃攪拌1小時至反應完全。將反應液冷卻至室溫並減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 10/1）得到(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-5-基)二甲基氧化膦（874 mg，收率98%）。 MS (ESI) M/Z: 418.0 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-5-基)二甲基氧化膦（824 mg，2.0 mmol）溶於正丁醇（20 mL），加入1-(4-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（755 mg，2.0 mmol）和三氟乙酸（2.3 g， 20.0 mmol），氮氣置換2次，升溫至110℃攪拌16小時，LCMS監測反應完畢。將反應液冷卻至室溫並減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 10/1）得到1-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（1.05 g，收率69%）。 MS (ESI) M/Z: 765.1 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將1-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（950 mg，1.24 mmol）溶於甲醇（5 mL）和水（1 mL）中，加入氫氧化鉀（700 mg，12.4 mmol），氮氣保護下升溫至60℃攪拌1小時，LCMS監測反應結束。將反應液冷卻至室溫並減壓濃縮，加入水（30 mL），用二氯甲烷（30 mL×3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 8/1）得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-5-基)二甲基磷氧化物（808 mg，收率97%）。 MS (ESI) M/Z: 669.2 [M+H] ⁺. 後續步驟以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-5-基)二甲基磷氧化物為原料，參照實施例53和61的製備方法得到終產物5-(3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（2.0 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1063.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.60 (s, 1H), 7.98-7.95 (m, 1H), 7.85-7.77 (m, 2H), 7.71-7.66 (m, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.61-6.56 (m, 1H), 6.39-6.34 (m, 1H), 4.96-4.92 (m, 1H), 4.30-4.18 (m, 7H), 4.10-4.07 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.78-3.75 (m, 1H), 3.57-3.41 (m, 4H), 3.33-3.28 (m, 6H), 2.90-2.74 (m, 4H), 2.64-2.52 (m, 4H), 2.35-2.20 (m, 2H), 1.90 (s, 3H), 1.86 (s, 3H).

實施例85: 5-(3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲膦醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將(2-胺基-5-環丙基苯基)二甲基氧化膦（1.0 g, 4.8 mmol）溶於正丁醇（25 mL）中，加入5-溴-2,4-二氯吡啶（2.2 g, 9.6 mmol）和N,N-二異丙基乙胺（1.85 g, 14.3 mmol）。反應液在氮氣保護下加熱至100℃攪拌16小時至反應完全。將反應液冷卻至室溫並減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 20/1）得到(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)-5-環丙基苯基)二甲基氧化膦（510 mg，收率27%）。 MS (ESI) M/Z: 400.0 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)-5-環丙基苯基)二甲基氧化膦（510 mg，2.0 mmol）溶於正丁醇（50 mL），加入1-(4-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（489 mg，1.3 mmol）和三氟乙酸（1.45 g，12.7 mmol），氮氣置換2次，升溫至100℃攪拌16小時，LCMS監測反應完畢。將反應液冷卻至室溫，倒入石油醚中（50 mL），有固體析出，過濾，所得濾餅用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 10/1）得到1-(4-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲膦醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（450 mg，收率46%）。 MS (ESI) M/Z: 746.9 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將1-(4-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲膦醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（450 mg，0.60 mmol）溶於甲醇（5 mL）和水（1 mL）中，加入氫氧化鉀（338 mg，6.0 mmol），氮氣保護下升溫至60℃攪拌2小時，LCMS監測反應結束。將反應液冷卻至室溫並減壓濃縮，加入水（30 mL），用二氯甲烷（30 mL×3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-5-環丙基苯基)二甲基磷氧化物（260 mg，收率66%）。 MS (ESI) M/Z: 651.2 [M+H] ⁺. 後續步驟以(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-5-環丙基苯基)二甲基磷氧化物為原料，參照實施例61的製備方法得到終產物5-(3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲膦醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（10.0 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1045.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.60 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.66 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.52-7.49 (m, 2H), 7.43 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 7.36 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 7.02- 6.98 (m, 1H), 6.79-6.75 (m, 2H), 6.55-6.53 (m 1H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.12 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 4.03-3.95 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 3.65-3.35 (m, 4H), 3.20-3.00 (m, 6H), 2.93-2.74 (m, 3H), 2.50-2.46 (m, 2H), 2.28-2.00 (m, 8H), 1.85 (s, 3H), 1.82 (s, 3H), 1.25-1.20 (m, 1H), 0.98-0.93 (m, 2H), 0.58-0.53 (m, 2H).

實施例86: 3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氯苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：以4-溴-3-氯苯胺為原料，參照實施例54的製備方法得到終產物3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氯苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮（14.4 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1024.0 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.56 (s, 1H), 8.97 (dd, J= 9.2, 4.0 Hz, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.29-8.19 (m, 3H), 7.67 (s, 1H), 7.63-7.60 (m, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.06 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.67 (d, J= 5.6 Hz, 2H), 6.56 (dd, J= 8.0, 1.2 Hz, 1H), 4.68 (brs, 1H), 4.08-4.04 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.64 (s, 2H), 3.49 (brs, 2H), 3.21 (brs, 2H), 2.98-2.85 (m, 6H), 2.80-2.71 (m, 1H), 2.58-2.49 (m, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.01-1.81 (m, 6H).

實施例87: 5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦（200 mg，0.31 mmol）溶於DMSO（5 mL）中，加入2-氧代-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯（116 mg，0.48 mmol），滴加15滴醋酸，室溫攪拌1小時後，冰浴下慢慢加入三乙醯氧基硼氫化鈉（204 mg，0.96 mmol），再升溫至70℃攪拌12小時。TLC監測原料消失，向反應液加入飽和碳酸氫鈉（20 mL）淬滅，乙酸乙酯（40 mL×2）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物矽膠柱層析提純（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 20/ 1）得到2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯（60 mg，收率36%）。 MS (ESI) M/Z: 862.4 [M+H] ⁺. 步驟2：將2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-羧酸第三丁酯（60 mg，0.07 mmol）溶於二氯甲烷（5 mL）中，冰浴下加入三氟乙酸（2 mL），室溫攪拌1小時。TLC監測原料消失，直接減壓濃縮得到 (6-((2-((4-(4-(7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦三氟乙酸鹽（48 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 762.3 [M+H] ⁺. 步驟3：將(6-((2-((4-(4-(7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦三氟乙酸鹽（48 mg, 0.06 mmol）和3-碘氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（43 mg, 0.16 mmol）溶於乙腈（10 mL）中，加入碳酸鉀（32 mg, 0.23 mmol），氮氣置換3次後，反應體系升溫至100℃攪拌5天。TLC監測顯示反應結束，反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮。加入水（20 mL），用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 10/1）得到3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（41 mg，收率81%）。 MS (ESI) M/Z: 917.4 [M+H] ⁺. 步驟4：將3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)氮雜環丁烷-1-羧酸第三丁酯（35 mg, 0.04 mmol）溶於二氯甲烷（5 mL）中，冰浴下加入三氟乙酸（2 mL），室溫下攪拌1小時。LCMS監測顯示反應結束，減壓濃縮得到(6-((2-((4-(4-(7-(氮雜環丁烷-3-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基膦氧化物的三氟乙酸鹽（27 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 817.3 [M+H] ⁺. 步驟5：室溫下將(6-((2-((4-(4-(7-(氮雜環丁烷-3-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-2-基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基膦氧化物的三氟乙酸鹽（27 mg, 粗品）和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮（22 mg, 0.08 mmol）溶於DMSO（3 mL）中，加入DIEA（42 mg, 0.33 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至60℃並攪拌過夜。TLC監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，用高效製備液相色譜純化得到終產物5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（3.2 mg，二步收率7.8%）。 MS (ESI) M/Z: 1073.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.08 (s, 1H), 11.10 (s, 1H), 10.26 (s, 1H), 8.27 (brs, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.90-7.83 (m, 2H), 7.75 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.78-6.75 (m, 2H), 6.66 (s, 1H), 5.11-5.06 (m, 1H), 4.36-4.25 (m, 5H), 3.90-3.80 (m, 8H), 3.25-3.20 (m, 4H), 3.15-3.00 (m, 3H), 2.99-2.85 (m, 6H), 2.60-2.50 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.05-2.00 (m, 4H), 1.91 (s, 3H), 1.87 (s, 3H), 1.83-1.75 (m, 4H).

實施例88: 5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲基膦醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-5-環丙基苯基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例87的製備方法得到終產物5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲基膦醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（7.2 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1085.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 10.58 (s, 1H), 8.40-8.36 (m, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.64 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.32-7.30 (m, 2H), 7.02-6.98 (m, 1H), 6.78 (brs, 2H), 6.70 (s, 1H), 6.54-6.51 (m, 1H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.10-4.08 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.60-3.41 (m, 5H), 3.31 (brs, 2H), 3.17-3.14 (m, 2H), 2.91-2.80 (m, 2H), 2.76-269 (m, 4H), 2.37-2.11 (m, 8H), 2.12-1.89 (m, 2H), 1.85 (s, 3H), 1.81 (s, 3H), 1.68 (brs, 4H), 0.98-0.96 (m, 2H), 0.60-0.58 (m, 2H).

實施例89: 5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-5-基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例87的製備方法得到終產物5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（2.2 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1103.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 7.99-7.95 (m, 1H), 7.89-7.80 (m, 2H), 7.70-7.65 (m, 1H), 7.62-7.55 (m, 1H), 7.52-7.48 (m, 1H), 6.87-6.79 (m, 1H), 6.73-6.68 (m, 1H), 6.63-6.57 (m, 1H), 6.42-6.34 (m, 1H), 4.98- 4.91 (m, 1H), 4.42-4.20 (m, 9H), 3.91 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.64-3.42 (m, 5H), 3.30- 3.18 (m, 5H), 3.05-2.73 (m, 7H), 2.58-2.47 (m, 4H), 2.25-1.99 (m, 4H), 1.90 (s, 3H), 1.86 (s, 3H).

實施例90: 5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-4-甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將(2-胺基-5-甲基苯基)二甲基氧化膦（8.1 g, 粗品，約37.6 mmol）溶於N-甲基吡咯烷酮（80 mL）中，加入5-溴-2,4-二氯吡啶（15.1 g, 66.3 mmol）和N,N-二異丙基乙胺（11.4 g, 88.4 mmol）。反應液在氮氣保護下加熱至80℃攪拌4小時至反應完全。將反應液冷卻至室溫，加入水（500 mL），用乙酸乙酯（150 mL×3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 90/1）得到(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)-5-甲基苯基)二甲基氧化膦（10.0 g，收率71%）。 MS (ESI) M/Z: 373.9 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)-5-甲基苯基)二甲基氧化膦（508 mg，1.4 mmol）溶於正丁醇（15 mL），加入1-(4-(4-胺基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（400 mg，1.0 mmol）和三氟乙酸（1.2 g， 10.4 mmol），氮氣置換2次，升溫至100℃攪拌過夜，LCMS監測反應完畢。將反應液冷卻至室溫，加入水（200 mL），用乙酸乙酯（100 mL×3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 20/1）得到1-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-4-甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（519 mg，收率69%）。 MS (ESI) M/Z: 721.1 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將1-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-4-甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（519 mg，0.72 mmol）溶於甲醇（10 mL）和水（2 mL）中，加入氫氧化鈉（287 mg，7.2 mmol），氮氣保護下升溫至60℃攪拌1小時，LCMS監測反應結束。將反應液冷卻至室溫，加入水（50 mL），用二氯甲烷（50 mL×3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水洗滌三次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-5-甲基苯基)二甲基磷氧化物（442 mg，收率98%）。 MS (ESI) M/Z: 625.2 [M+H] ⁺. 步驟4：室溫下將(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-5-甲基苯基)二甲基磷氧化物（50 mg, 0.08 mmol）和2-(1-(2-(2,6-氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙基甲磺酸酯（48 mg, 0.10 mmol）溶於乙腈（5 mL）中，加入DIEA（103 mg, 0.80 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至100℃並攪拌過夜。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（20 mL）淬滅反應。混合液用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物經製備級薄層色譜（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 10/ 1）純化得到終產物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-4-甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（16.6 mg，收率20%）。 MS (ESI) M/Z: 1010.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 10.53 (s, 1H), 8.34 (dd, J= 8.6, 4.6 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.45 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 7.38 (s, J= 7.2 Hz, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.05-7.01 (m, 1H), 6.85-6.79 (m, 1H), 6.73 (s, 1H), 4.95-4.91 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.66-3.63 (m, 2H), 3.02-2.68 (m, 10H), 2.65-2.44 (m, 5H), 2.25 (s, 3H), 2.19-2.11 (m, 1H), 1.85-1.81 (m, 2H), 1.84 (s, 3H), 1.81 (s, 3H), 1.58-1.35 (m, 5H).

實施例91: 5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-胺基喹啉-5-基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例90的製備方法得到終產物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（45.8 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1047.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.38 (brs, 1H), 11.12 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.55-8.50 (m, 1H), 8.44-8.42 (m, 1H), 8.28 (brs, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.73-7.70 (m, 1H), 7.56-7.44 (m, 4H), 6.81 (s, 1H), 5.13-5.08 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.63-3.60 (m, 2H), 3.35-3.20 (m, 2H), 2.89-2.85 (m, 8H), 2.65-2.40 (m, 5H), 2.05-2.02 (m, 7H), 1.84-1.81 (m, 2H), 1.60-1.45 (m, 3H), 1.40-1.30 (m, 2H).

實施例92: 5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-胺基-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例90的製備方法得到終產物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（32.8 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1024.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.19 (s, 1H), 11.12 (s, 1H), 9.57 (brs, 1H), 8.45 (brs, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.88-7.85 (m, 2H), 7.75-7.72 (m, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.48 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.76 (s, 1H), 6.64 (brs, 1H), 5.14-5.10 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.65-3.23 (m, 4H), 3.01-2.83 (m, 8H), 2.66-2.40 (m, 5H), 2.25 (s, 3H), 2.10-1.95 (m, 4H), 1.91 (s, 3H), 1.88 (s, 3H), 1.83 (brs, 2H), 1.71 (brs, 2H), 1.60 (brs, 1H), 1.44-1.34 (m, 2H).

實施例93: 5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲膦醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(2-胺基-5-環丙基苯基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例90的製備方法得到終產物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲膦醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（37.5 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1036.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 11.11 (s, 1H), 11.04 (s, 1H), 9.54 (brs, 1H), 8.46 (brs, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.14 (brs, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.76-7.67 (m, 2H), 7.47 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.24-7.20 (m, 1H), 6.76 (s, 1H), 6.45 (brs, 1H), 5.13-5.08 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.66-3.56 (m, 4H), 3.31-3.21 (m, 6H), 3.03-2.86 (m, 5H), 2.69-2.53 (m, 3H), 2.08-2.00 (m, 1H), 1.84-1.72 (m, 2H), 1.77 (s, 3H), 1.74 (s, 3H), 1.73-1.67 (m, 2H), 1.59 (brs, 1H), 1.42-1.34 (m, 2 H), 0.94-0.88 (m, 2H), 0.56-0.51 (m, 2H).

實施例94: 5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-胺基-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-5-基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例90的製備方法得到終產物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（7.8 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1054.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 11.63 (s, 1H), 11.10 (s, 1H), 8.12-8.08 (m, 2H), 8.02 (s, 1H), 7.94-7.87 (m, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.72-7.68 (m, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.45 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.81 (s, 1H), 6.44-6.34 (m, 1H), 5.12-5.08 (m, 1H), 4.31-4.20 (m, 4H), 3.84 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.60-3.30 (m, 4H), 2.93-2.88 (m, 8H), 2.50-2.40 (m, 5H), 2.08-1.80 (m, 1H), 1.90-1.80 (m, 8H), 1.60-1.40 (m, 3H), 1.35-1.20 (m, 2H).

實施例95: 5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-4-氟苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(2-胺基-5-氟苯基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例90的製備方法得到終產物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-4-氟苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（32.4 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1014.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 10.39 (s, 1H), 8.39-8.33 (m, 1H), 8.19 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 8.04 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.46 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 7.38 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 6.97-6.90 (m, 1H), 6.73 (s, 1H), 6.59 (brs, 1H), 4.95-4.91 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 3.66-3.63 (m, 2H), 2.98-2.63 (m, 10H), 2.56-2.42 (m, 5H), 2.16-2.11 (m, 1H), 1.86-1.82 (m, 8H), 1.58-1.40 (m, 5H).

實施例96: 3-(5-(4-(2-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-6-氟-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將4,5-二氟-2-甲基苯甲酸甲酯（500 mg, 2.7 mmol）溶於1,2-二氯乙烷（10 mL）中，加入偶氮二異丁腈（22 mg, 0.13 mmol）。反應液在氮氣保護下加熱至80℃攪拌20小時至反應完全。將反應液冷卻至室溫，加入飽和硫代硫酸鈉水溶液（10毫升）淬滅。混合液用二氯甲烷（20 mL×3次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物經矽膠柱層析（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 20/ 1）純化得到2-(溴甲基)-4,5-二氟苯甲酸甲酯（741 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 265.0 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將2-(溴甲基)-4,5-二氟苯甲酸甲酯（741 mg，粗品）溶於乙腈（10 mL）中，加入3-胺基哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽（506 mg, 3.1 mmol）和DIEA（542 mg, 4.2 mmol）。反應液在氮氣保護下加熱至80℃攪拌20小時至反應完全。將反應液冷卻至室溫，加入水（50 mL）和乙酸乙酯（50 mL）, 分液，有機相用飽和食鹽水洗滌（50 mL）一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮得到3-(5,6-二氟-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮（750 mg，二步收率99%）。 MS (ESI) M/Z: 281.1 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將3-(5,6-二氟-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮（2.0 g，7.1 mmol）溶於DMSO（20 mL）中，加入2-(哌啶-4-基)乙醇（2.8 g，21.4 mmol）和三乙胺（2.2 g，21.4 mmol），氮氣保護下升溫至80℃攪拌20小時。TLC監測原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（50 mL）稀釋，用乙酸乙酯（50 mL）萃取四次。合併有機相，用飽和食鹽水（50 mL）洗滌一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，所得殘餘物經矽膠柱層析（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 50/ 1）純化得到3-(6-氟-5-(4-(2-羥乙基)哌啶-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮（0.9 g，收率33%）。 MS (ESI) M/Z: 389.6 [M+H] ⁺. 步驟4：將3-(6-氟-5-(4-(2-羥乙基)哌啶-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮（500 mg，1.3 mmol）和三乙胺（261 mg，2.6 mmol）溶於二氯甲烷（20 mL）中，冰浴下滴加甲磺醯氯（220 mg，1.9 mmol），室溫攪拌2小時。TLC監測原料消失，加入水（50 mL）淬滅，用二氯甲烷（50 mL）萃取三次。合併有機相，用飽和食鹽水（50 mL）洗滌一次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，所得殘餘物經矽膠柱層析（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 50/ 1）純化得到2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1-氧代異吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙基甲磺酸酯（89 mg，收率15%）。 MS (ESI) M/Z: 468.2 [M+H] ⁺. 步驟5：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（126 mg, 0.18 mmol）和2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1-氧代異吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙基甲磺酸酯（89 mg, 0.19 mmol）溶於乙腈（10 mL）中，加入DIEA（74 mg, 0.57 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至80℃並攪拌過夜。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（50 mL）淬滅反應。混合液用二氯甲烷（50 mL×3次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物經高效製備液相色譜純化得到終產物3-(5-(4-(2-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-6-氟-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮（23.2 mg，收率12%）。 MS (ESI) M/Z: 1034.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 13.73 (s, 1H), 12.72 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.65-8.64 (m, 1H), 8.05-8.02 (m, 2H), 7.75 (s, 1H), 7.65-7.62 (m, 1H), 7.52-7.50 (m, 2H), 6.75 (s,1H), 5.18-5.14 (m, 1H), 4.48-4.35 (m, 2H), 3.85 (s, 6H), 3.66-3.60 (m, 6H), 3.35-2.80 (m, 9H), 2.40-2.20 (m, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.10-1.50 (m, 7H).

實施例97: 3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：室溫下將2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸鹽酸鹽（50 mg，約0.13 mmol）、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦（78 mg，0.12 mmol）、HATU（91 mg，0.24 mmol）和DIEA（78 mg，0.60 mmol）依次加入到DMF（3 mL）中，升溫至35℃攪拌30分鐘。LCMS監測原料消失，加入水（30 mL）稀釋，乙酸乙酯（30 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（30 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘留物經高效製備液相色譜純化得到終產物3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮（21.6 mg，收率18%）。 MS (ESI) M/Z: 982.2 [M-H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃/CD ₃OD): δ 8.18 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 8.10-8.06 (m, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 6.92 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 6.80 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.68 (s, 1H), 6.44-6.39 (m, 2H), 4.13-4.09 (m, 1H), 3.88 (s, 6H), 3.84-3.66 (m, 4H), 3.57 (brs, 2H), 3.45-3.39 (m, 3H), 2.93-2.80 (m, 7H), 2.48-2.38 (m, 1H), 2.31 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.94-1.76 (m, 6H).

實施例98: 3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-4-甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：室溫下將2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸鹽酸鹽（35 mg，0.09 mmol）、(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-5-甲基苯基)二甲基氧化膦（63 mg，0.10 mmol）、HATU（54 mg，0.14 mmol）和DIEA（37 mg，0.29 mmol）依次加入到DMF（2 mL）中，室溫攪拌2小時。LCMS監測原料消失，加入水（20 mL）稀釋，有固體析出，過濾，濾餅經製備級薄層色譜（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 10/ 1）純化得到終產物3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-4-甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮（18.7 mg，收率21%）。 MS (ESI) M/Z: 970.0 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 10.55 (s, 1H), 8.34 (dd, J= 8.4, 4.4 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.07-7.02 (m, 2H), 6.84-6.81 (m, 1H), 6.65 (s, 1H), 6.41 (dd, J= 8.2, 2.2 Hz, 1H), 6.33 (dd, J= 12.4, 2.4 Hz, 1H), 4.71-4.70 (m, 1H), 4.06-4.01 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 3.74-3.70 (m, 4H), 3.27-3.22 (brs, 2H), 3.03-2.99 (m, 2H), 2.91-2.86 (m, 5H), 2.80-2.71 (m, 2H), 2.56-2.51 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.30-2.10 (m, 1H), 1.85 (s, 3H), 1.81 (s, 3H), 1.95-1.75 (m, 5H).

實施例99: 3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-4-氟苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：室溫下將2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸鹽酸鹽（56 mg，0.14 mmol）、(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-5-氟苯基)二甲基氧化膦（75 mg，0.12 mmol）、HATU（68 mg，0.18 mmol）和DIEA（31 mg，0.24 mmol）依次加入到DMF（3 mL）中，室溫攪拌1小時。LCMS監測原料消失，加入水（20 mL）稀釋，乙酸乙酯（20 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（30 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘留物經高效製備液相色譜純化得到終產物3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-4-氟苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮（22.3 mg，收率19%）。 MS (ESI) M/Z: 974.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 10.78 (d, J= 3.2 Hz, 2H), 8.30 (brs, 1H), 8.21 (d, J= 3.2 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.43-7.35 (m, 1H), 6.96 (t, J= 8.6 Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.68 (brs, 1H), 6.44 (s, 1H), 6.40 (s, 1H), 5.99 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 4.33-4.26 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.74-3.71 (m, 2H), 3.63 (brs, 2H), 3.19 (s, 2H), 2.95-2.87 (m, 4H), 2.81-2.50 (m, 5H), 2.14-2.05 (m, 3H), 1.93-1.82 (m, 1H), 1.79 (s, 3H), 1.76 (s, 3H), 1.65 (brs, 4H).

實施例100: 5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹啉-5-基)二甲基氧化膦和4-甲醯基哌啶-1-羧酸第三丁酯為原料，參照實施例49和35的操作步驟製備得到終產物5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（14.9 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1069.9 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.37 (s, 1H), 11.08 (s, 1H), 8.78 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 8.58-8.52 (m, 1H), 8.44 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.66 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.60-7.49 (m, 3H), 6.81 (brs, 2H), 6.67-6.65 (m, 1H), 5.10-5.04 (m, 1H), 4.66 (brs, 8H), 4.12 (brs, 2H), 3.85-3.75 (m, 8H), 2.87 (brs, 7H), 2.20 (brs, 3H), 2.10-1.96 (m, 8H), 1.90-1.70 (m, 4H).

實施例101: 5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲膦醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-5-環丙基苯基)二甲基氧化膦和4-甲醯基哌啶-1-羧酸第三丁酯為原料，參照實施例49和35的操作步驟製備得到終產物5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((4-環丙基-2-(二甲膦醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（17.2 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1059.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 10.51 (s, 1H), 8.32-8.29 (m, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.88 (brs, 1H), 7.58 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.26 (s, 1H), 6.95-6.90 (m, 1H), 6.72-6.64 (m, 3H), 6.47 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.8-4.84 (m, 1H), 4.08-4.01 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.67-3.26 (m, 5H), 3.10-3.03 (m, 2H), 2.92-2.64 (m, 10H), 2.09-2.03 (m, 2H), 2.01-1.92 (m, 5H), 1.78 (s, 3H), 1.75 (s, 3H), 1.50-1.25 (m, 3H), 0.90-0.88 (m, 2H), 0.53-0.49 (m, 2H).

實施例102: 5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-4-氟苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將哌啶-4-羧酸乙酯（8.9 g, 56.6 mmol）和N-第三丁氧羰基-3-氮雜環丁酮（9.7 g, 56.6 mmol）溶於四氫呋喃（180 mL）中，冰浴下緩慢加入三乙醯氧基硼氫化鈉（36.0 g, 169.8 mmol)。反應體系在室溫下攪拌16小時，LC-MS顯示反應結束。向反應液中緩慢加入飽和碳酸氫鈉水溶液（300 mL）淬滅，混合液用乙酸乙酯（100 mL × 3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水（200 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥並過濾。濾液減壓濃縮，所得殘餘物經矽膠柱層析（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇 = 30/1）純化得到1-(1-(第三丁氧羰基)氮雜環丁-3-基)哌啶-4-羧酸乙酯（16.0 g，收率90%）。 MS (ESI) M/Z: 313.2 [M+H] ⁺. 步驟2：氮氣保護下將四氫呋喃（170 mL）冷卻至0℃，慢慢加入氫化鋁鋰（2.9 g, 76.8 mmol），攪拌10分鐘後，緩慢滴加1-(1-(第三丁氧羰基)氮雜環丁-3-基)哌啶-4-羧酸乙酯（16.0 g, 51.3 mmol）的四氫呋喃（30 mL）溶液，反應體系在0℃下攪拌1小時。TLC顯示反應結束，反應液在0℃下經十水合硫酸鈉淬滅並過濾。濾液減壓濃縮得到3-(4-(羥甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-羧酸第三丁酯（10.5 g，收率76%）。 MS (ESI) M/Z: 271.2 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將3-(4-(羥甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-羧酸第三丁酯（10.5 g, 38.9 mmol）和咪唑（5.5 g, 81.2 mmol）溶於二氯甲烷（200 mL）中，冰浴並下緩慢加入第三丁基二苯基氯矽烷（15.2 g, 55.4 mmol），反應體系在室溫下攪拌16小時。LC-MS顯示反應結束，向反應液中加入水（300 mL），用乙酸乙酯（100 mL × 3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水（100 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物經矽膠柱層析（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯 = 3/1）純化得到3-(4-((第三丁基二苯基矽氧基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-羧酸第三丁酯（17.2 g，收率87%）。 MS (ESI) M/Z: 509.3 [M+H] ⁺. 步驟4：室溫下將3-(4-((第三丁基二苯基矽氧基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-羧酸第三丁酯（17.2 g, 33.8 mmol）溶於二氯甲烷（200 mL）中，冰浴下慢慢加入三氟乙酸（25.9 mL, 338 mmol）。反應體系在室溫下攪拌5小時，LC-MS顯示反應結束。反應液減壓濃縮後加入飽和碳酸氫鈉水溶液（400 mL）中和，再用二氯甲烷（150 mL × 3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水（200 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物經矽膠柱層析（洗脫劑：二氯甲烷/四氫呋喃 = 10/1）純化得到1-(氮雜環丁-3-基)-4-((第三丁基二苯基矽氧基)甲基)哌啶（13.2 g，收率96%）。 MS (ESI) M/Z: 409.3 [M+H] ⁺. 步驟5：室溫下將1-(氮雜環丁-3-基)-4-((第三丁基二苯基矽氧基)甲基)哌啶（2.0 g, 4.9 mmol）和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟異吲哚啉-1,3-二酮（1.35 g, 4.9 mmol）溶於二甲基亞碸（20 mL）中，加入N,N-二異丙基乙胺（6.3 g, 49.0 mmol）。反應體系升溫至140℃攪拌30分鐘。LC-MS顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加水（50 mL）稀釋，用乙酸乙酯（50 mL × 3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水（50 mL × 3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物經矽膠柱層析（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 1/1）純化得到5-(3-(4-((第三丁基二苯基矽氧基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（1.5 g，收率46%）。 MS (ESI) M/Z: 665.3 [M+H] ⁺. 步驟6：將5-(3-(4-((第三丁基二苯基矽氧基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（1.3 g, 1.95 mmol）溶於四氫呋喃（15 mL）中，冰浴下加入四丁基氟化銨的四氫呋喃溶液（1 M, 3.9 mL, 3.9 mmol）。反應體系室溫下攪拌2小時。LC-MS顯示原料消失，往反應液中加水（20 mL）稀釋，用乙酸乙酯（20 mL × 3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水（20 mL × 3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物經矽膠柱層析（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 30/1）純化得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(3-(4-(羥甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮（630 mg，收率76%）。 MS (ESI) M/Z: 427.1 [M+H] ⁺. 步驟7：氮氣保護下將草醯氯（66 mg, 0.52 mmol）溶於乾燥二氯甲烷（3 mL）中，冷卻至-78℃，滴加二甲基亞碸（81 mg, 1.04 mmol），攪拌10分鐘後，再滴加2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(3-(4-(羥甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮（200 mg, 0.47 mmol）的乾燥二氯甲烷（2 mL）溶液。反應體系在-78℃繼續攪拌1小時，然後滴加三乙胺（238 mg, 2.35 mmol）並攪拌10分鐘。LC-MS顯示原料消失，反應液自然升溫至室溫，加水（10 mL）稀釋，用二氯甲烷（10 mL × 3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水（10 mL × 3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物經矽膠柱層析（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 40/1）純化得到1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)氮雜環丁-3-基)哌啶-4-甲醛（80 mg，收率40%）。 MS (ESI) M/Z: 425.0 [M+H] ⁺. 步驟8：將1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)氮雜環丁-3-基)哌啶-4-甲醛（40 mg, 0.094 mmol）和(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-5-氟苯基)二甲基氧化膦（59 mg, 0.094 mmol）溶於四氫呋喃/N,N-二甲基甲醯胺（2.7 mL/0.3 mL）中，冰浴下加入三乙醯氧基硼氫化鈉（60 mg, 0.28 mmol）。反應體系在室溫下攪拌2小時。LC-MS顯示原料消失，反應液加水（10 mL）淬滅，用二氯甲烷（10 mL × 3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水（10 mL × 3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物經高效製備液相色譜純化得到終產物5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-4-氟苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（36.5 mg，收率37%）。 MS (ESI) M/Z: 1037.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 10.37 (s, 1H), 8.37-8.30 (m, 1H), 8.23-8.17 (m, 2H), 8.10 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.63 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.98-6.90 (m, 1H), 6.78 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.58 (brs, 1H), 6.53 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.10 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 3.91-3.88 (m, 8H), 3.39-3.31 (m, 1H), 2.94-2.70 (m, 9H), 2.57 (brs, 4H), 2.32-2.30 (m, 2H), 2.15-2.10 (m, 1H), 1.94-1.82 (m, 10H), 1.64-1.60 (brs, 1H), 1.34-1.24 (m, 2H).

實施例103: 5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：將1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)氮雜環丁-3-基)哌啶-4-甲醛（47 mg, 0.11 mmol）和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦（60 mg, 0.094 mmol）溶於四氫呋喃/N,N-二甲基甲醯胺（2.5 mL/0.5 mL）中，冰浴下加入三乙醯氧基硼氫化鈉（60 mg, 0.28 mmol）。反應體系在室溫下攪拌2小時。LC-MS顯示原料消失，反應液加水（10 mL）淬滅，用二氯甲烷（10 mL × 3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水（10 mL × 3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物經高效製備液相色譜純化得到終產物5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（37.1 mg，收率31%）。 MS (ESI) M/Z: 1047.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 11.77 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.17-8.13 (m, 2H), 8.04 (brs, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.63 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.83 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.52 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.10 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 3.91-3.86 (m, 8H), 3.37-3.31 (m, 1H), 2.92-2.68 (m, 9H), 2.55 (brs, 4H), 2.30-2.28 (m, 5H), 2.13 (s, 4H), 2.00 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.93-1.83 (m, 4H), 1.60 (brs, 1H), 1.33-1.23 (m, 2H).

實施例104: 5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-4-甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：將1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)氮雜環丁-3-基)哌啶-4-甲醛（40 mg, 0.094 mmol）和(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-5-甲基苯基)二甲基氧化膦（59 mg, 0.094 mmol）溶於四氫呋喃/N,N-二甲基甲醯胺（2.7 mL/0.3 mL）中，冰浴下加入三乙醯氧基硼氫化鈉（60 mg, 0.28 mmol）。反應體系在室溫下攪拌2小時。LC-MS顯示原料消失，反應液加水（10 mL）淬滅，用二氯甲烷（10 mL × 3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水（10 mL × 3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物經高效製備液相色譜純化得到終產物5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（34.5 mg，收率36%）。 MS (ESI) M/Z: 1033.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 10.51 (s, 1H), 8.34 (dd, J= 8.6, 4.6 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.63 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.03 (d, J= 14.4 Hz, 1H), 6.82-6.77 (m, 2H), 6.72 (s, 1H), 6.52 (dd, J= 8.2, 2.2 Hz, 1H), 4.95-4.90 (m, 1H), 4.10 (t, J= 7.4 Hz, 2H), 3.91-3.86 (m, 8H), 3.37-3.31 (m, 1H), 2.93-2.70 (m, 9H), 2.56 (brs, 4H), 2.29 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.15-2.10 (m, 1H), 1.94-1.81 (m, 10H), 1.60 (brs, 1H), 1.33-1.24 (m, 2H).

實施例105: 5-((R)-3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)吡咯啉-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1: 室溫下將 (S)-3-(2-羥乙基)吡咯啉-1-羧酸第三丁酯（200 mg, 0.93 mmol）溶於二氯甲烷（2 mL）中，冰浴下加入氯化氫/1,4-二氧六環溶液（4 M, 1 mL, 4 mmol）。反應體系在室溫下攪拌1小時，LC-MS顯示反應結束。反應液減壓濃縮，加入飽和碳酸氫鈉水溶液（5 mL），用二氯甲烷（5 mL × 3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水（5 mL × 3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到(S)-2-(吡咯啉-3-基)乙-1-醇（110 mg, 粗品），直接用於下一步反應。 MS (ESI) M/Z: 116.2 [M+H ⁺]. 步驟2：室溫下將(S)-2-(吡咯啉-3-基)乙-1-醇（110 mg, 粗品）和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮（281 mg, 0.96 mmol）溶於二甲基亞碸（2 mL）中，加入N,N-二異丙基乙胺（1.3 g, 10.0 mmol）。反應體系升溫至140℃攪拌30分鐘。LC-MS顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加水（10 mL）稀釋，用乙酸乙酯（10 mL × 3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水（10 mL × 3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物經矽膠柱層析（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 20/1）純化得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-((S)-3-(2-羥乙基)吡咯啉-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮（307 mg，收率85%）。 MS (ESI) M/Z: 390.1 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-((S)-3-(2-羥乙基)吡咯啉-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮（100 mg, 0.26 mmol）溶於二氯甲烷（4 mL）中，冰浴下加入三乙胺（78 mg, 0.77 mmol）和甲基磺醯氯（44 mg, 0.39 mmol）。反應體系在冰浴下攪拌1小時。LC-MS顯示原料消失，加入飽和碳酸氫鈉水溶液（8 mL）和水（5 mL）稀釋，用二氯甲烷（20 mL × 3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水（10 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物經矽膠柱層析（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 1/2）純化得到2-((3S)-1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)吡咯啉-3-基)乙基甲磺酸酯（78 mg，收率65%）。 MS (ESI) M/Z: 468.1 [M+H] ⁺. 步驟4：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦（107 mg, 0.17 mmol）和2-((3S)-1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)吡咯啉-3-基)乙基甲磺酸酯（78 mg, 0.17 mmol）溶於乙腈（5 mL）中，加入DIEA（216 mg, 1.7 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至85℃攪拌過夜。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入飽和碳酸氫鈉水溶液（10 mL）淬滅反應。混合液用二氯甲烷/無水甲醇=10/1（33 mL×3次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物經製備級薄層色譜（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 10/1）純化得到終產物5-((R)-3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)吡咯啉-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（52.2 mg，收率31%）。 MS (ESI) M/Z: 1010.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 11.79 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.17-8.14 (m, 2H), 7.99 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.38 (d, J= 12.4 Hz, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.01 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.87-6.83 (m, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.94-4.89 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.76-3.72 (m, 1H), 3.65-3.58 (m, 2H), 3.28-3.22 (m, 1H), 2.99-2.65 (m, 8H), 2.61-2.45 (m, 5H), 2.37-2.29 (m, 4H), 2.23-2.11 (m, 5H), 2.00 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.72-1.56 (m, 3H).

實施例106: 5-((S)-3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)吡咯啉-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(R)-3-(2-羥乙基)吡咯啉-1-羧酸第三丁酯為原料，參照實施例105的操作步驟製備得到終產物5-((S)-3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)吡咯啉-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（23.6 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1010.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 11.92 (s, 1H), 11.08 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.99 (s, 2H), 7.90-7.88 (m, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.61-7.57 (m, 2H), 7.06 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.69 (brs, 1H), 5.08-5.04 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.76-3.71 (m, 1H), 3.66-3.56 (m, 2H), 3.27-3.21 (m, 1H), 2.92-2.84 (m, 5H), 2.68-2.56 (m, 5H), 2.50-2.43 (m, 3H), 2.34-2.21 (m, 4H), 2.17-1.99 (m, 5H), 1.88 (s, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.66-1.61 (m, 3H).

實施例107: 5-(3-((R)-3-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)吡咯啉-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將 (S)-3-(羥甲基)吡咯啉-1-羧酸第三丁酯（500 mg, 2.5 mmol）溶於二氯甲烷（8 mL）中，冰浴下加入DIEA（641 mg, 5.0 mmol）和甲基磺醯氯（427 mg, 3.7 mmol）。反應體系在室溫下攪拌1小時。LC-MS顯示原料消失，加入水（20 mL）稀釋，用二氯甲烷（20 mL × 3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水（20 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物經矽膠柱層析（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 5/1）純化得到 (S)-3-((甲磺醯氧基)甲基)吡咯啉-1-羧酸第三丁酯（540 mg，收率78%）。 MS (ESI) M/Z: 280.1 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦（200 mg, 0.31 mmol）和(S)-3-((甲磺醯氧基)甲基)吡咯啉-1-羧酸第三丁酯（131 mg, 0.47 mmol）溶於DMSO（8 mL）中，加入DIEA（121 mg, 0.94 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至100℃攪拌過夜。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，加入水（40 mL）淬滅反應。混合液用乙酸乙酯（40 mL×3次）萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物經矽膠柱層析（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 30/1）純化得到 (R)-3-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)吡咯啉-1-羧酸第三丁酯（140 mg，收率55%）。 MS (ESI) M/Z: 822.3 [M+H] ⁺. 步驟3: 室溫下將(R)-3-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)吡咯啉-1-羧酸第三丁酯（140 mg, 0.17 mmol）溶於二氯甲烷（6 mL）中，冰浴下加入氯化氫/1,4-二氧六環溶液（4 M, 3 mL, 12 mmol）。反應體系在室溫下攪拌1小時，LC-MS顯示反應結束。反應液減壓濃縮得到(S)-(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(吡咯啉-3-基甲基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦鹽酸鹽（140 mg, 粗品），直接用於下一步反應。 MS (ESI) M/Z: 722.3 [M+H ⁺]. 後續步驟以(S)-(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(吡咯啉-3-基甲基)哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦鹽酸鹽為原料，參照實施例35的製備方法得到終產物5-(3-((R)-3-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)吡咯啉-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（6.6 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1033.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃/CD ₃OD): δ 8.08-7.88 (m, 4H), 7.64 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 7.53-7.58 (m, 3H), 6.74-6.66 (m, 3H), 6.54-6.45 (m, 1H), 4.90-4.80 (m, 1H), 4.09-4.07 (m, 2H), 3.88-3.92 (m, 4H), 3.82 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.25-2.88 (m, 5H), 2.75-2.63 (m, 6H), 2.60-2.40 (m, 4H), 2.26 (s, 3H), 2.13-2.10 (m, 2H), 2.04 (s, 3H), 1.93 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.60-1.46 (m, 3H).

實施例108: 5-(3-((S)-3-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)吡咯啉-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(R)-3-(羥甲基)吡咯啉-1-羧酸第三丁酯為原料，參照實施例107的製備方法得到終產物5-(3-((S)-3-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)吡咯啉-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（12.9 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1033.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 11.74 (s, 1H), 8.19-8.07 (m, 4H), 7.76 (s, 1H), 7.57 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.63 (s, 1H), 6.46 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.87-4.83 (m, 1H), 4.04 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 3.94-3.88 (m, 2H), 3.80 (s, 6H), 3.50 (brs, 2H), 3.22- 3.06 (m, 3H), 2.85-2.53 (m, 12H), 2.23 (s, 3H), 2.18-2.13 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.93 (s, 3H), 1.90 (s, 3H), 1.60-1.46 (m, 3H).

實施例109: 5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮和2-(4-甲基哌啶-4-基)乙烷-1-醇（製備可參考文獻Collection of Czechoslovak Chemical Communications, 1953, vol. 18, p. 818,821）為原料，參照實施例55的操作步驟製備得到終產物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（7 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1038.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 11.78 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.17-8.14 (m, 2H), 8.00 (brs, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.46 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 7.40 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.89-6.82 (m, 1H), 6.70 (s, 1H), 4.95-4.91 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.37-3.30 (m, 2H), 3.22-3.15 (m, 2H), 3.00 (brs, 4H), 2.93-2.68 (m, 6H), 2.63-2.53 (m, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.18-2.11 (m, 4H), 2.00 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.60-1.45 (m, 6H), 1.05 (s, 3H).

實施例110: 5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)-4-氟哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：氮氣保護下將四氫呋喃（10 mL）冷卻至0℃，慢慢加入氫化鋁鋰（176 mg, 4.6 mmol），攪拌10分鐘後，緩慢滴加4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-4-氟哌啶-1-羧酸苄酯（1.0 g, 3.1 mmol）的四氫呋喃（2 mL）溶液，反應體系在0℃下攪拌0.5小時。LCMS顯示反應結束，冰浴下向反應液中加入乙酸乙酯（20 mL）稀釋，再依次加水（0.5 mL）、10%氫氧化鈉水溶液（0.4 mL）和水（0.5 mL）。混合物過濾，濾液經無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮得到4-氟-4-(2-羥乙基)哌啶-1-羧酸苄酯（800 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 282.0 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將4-氟-4-(2-羥乙基)哌啶-1-羧酸苄酯（800 mg，粗品）溶於甲醇（10 mL）中，加入10%濕鈀碳(240 mg)。反應體系在氫氣球氛圍下攪拌過夜。LCMS顯示反應結束，反應液減壓濃縮得到2-(4-氟哌啶-4-基)乙烷-1-醇（520 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 148.1 [M+H] ⁺. 後續步驟以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮和2-(4-氟哌啶-4-基)乙烷-1-醇為原料，參照實施例55的操作步驟製備得到終產物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)-4-氟哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（41.1 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1042.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 11.92 (s, 1H), 11.10 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.99 (s, 2H), 7.89 (dd, J= 7.8, 3.4 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.74 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.51 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.71 (brs, 1H), 5.13-5.08 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.51-3.47 (m, 2H), 3.33-3.29 (m, 1H), 3.19-3.12 (m, 2H), 2.93-2.80 (m, 5H), 2.68-2.53 (m, 7H), 2.22 (s, 3H), 2.07-2.00 (m, 4H), 1.96-1.81 (m, 12H).

實施例111: 3-(4-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)-4-羥基哌啶-1-基)-3-氟苯基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：室溫下將2-(1-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙酸鹽酸鹽（50 mg，0.14 mmol，製備參照專利WO2021/127561A1）、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦（88 mg，0.14 mmol）、HATU（80 mg，0.21 mmol）和DIEA（35 mg，0.27 mmol）依次加入到DMF（3 mL）中，室溫攪拌1小時。LCMS監測原料消失，加入水（10 mL）稀釋，乙酸乙酯（10 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（10 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘留物經高效製備液相色譜純化得到終產物3-(4-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)-4-羥基哌啶-1-基)-3-氟苯基)哌啶-2,6-二酮（68.8 mg，收率50%）。 MS (ESI) M/Z: 985.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 11.91 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 8.11 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 7.99 (s, 1H), 7.89 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.02-6.93 (m, 3H), 6.78 (s, 1H), 6.70 (brs, 1H), 4.94 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.79 (brs, 4H), 3.70 (brs, 4H), 3.10-2.98 (m, 4H), 2.83 (brs, 4H), 2.69-2.57 (m, 4H), 2.23-2.15 (m, 4H), 2.08 (s, 3H), 2.03-1.97 (m, 1H), 1.89 (s, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.83-1.68 (m, 4H).

實施例112: 5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2,5-二氯苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：將1,4-二氯-2-氟-5-硝基苯（11.5 g, 55.0 mmol）和哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（12.2 g, 65.6 mmol）溶於乙腈（300 mL）中，加入碳酸鉀（15.1 g, 109 mmol），升溫至70℃攪拌過夜。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮除去大部分溶劑，加入乙酸乙酯（300 mL）稀釋，再用飽和食鹽水（200 mL×3）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 20/1）得到4-(2,5-二氯-4-硝基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（18.6 g，收率90%）。 MS (ESI) M/Z: 376.0 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下向4-(2,5-二氯-4-硝基苯基)哌𠯤-1-羧酸第三丁酯（15.6 g, 41.6 mmol）的二氯甲烷（50 mL）溶液中加入氯化氫二氧六環溶液（50 mL, 4M）。室溫下攪拌3小時後減壓濃縮得到1-(2,5-二氯-4-硝基苯基)哌𠯤鹽酸鹽（10.1 g，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 276.1 [M+H] ⁺. 步驟3：室溫下將1-(2,5-二氯-4-硝基苯基)哌𠯤鹽酸鹽（10.1 g，粗品）和DMAP（8.9 g，73.2 mmol）加入到二氯甲烷（150 mL）中，攪拌5分鐘，再加入三氟乙酸酐（11.5 g，54.9 mmol），室溫攪拌反應1小時。將反應液倒入冰水（150 mL）中，用二氯甲烷（100 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 20/1）得到1-(4-(2,5-二氯-4-硝基苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（9.1 g，二步收率59%）。 MS (ESI) M/Z: 372.0 [M+H] ⁺. 步驟4：室溫下將1-(4-(2,5-二氯-4-硝基苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（9.1 g，24.5 mmol）溶於甲醇（100 mL）和水（20 mL）中，依次加入和原料等重的氯化銨和鐵粉，升溫至70℃攪拌2小時。LCMS檢測反應完全，反應液冷卻至室溫，過濾，濾液減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 5/1）得到1-(4-(4-胺基-2,5-二氯苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（4.2 g，收率50%）。 MS (ESI) M/Z: 342.1 [M+H] ⁺. 步驟5：室溫下將1-(4-(4-胺基-2,5-二氯苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（176 mg，0.52 mmol），(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧膦（200 mg，0.52 mmol）和三氟乙酸（582 mg，5.1 mmol）依次加入到正丁醇（10 mL）中，氮氣保護下升溫至110℃攪拌過夜。LCMS檢測反應完全，將反應液冷卻至室溫，加水（50 mL）稀釋後用乙酸乙酯（50 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 25/1）得到1-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2,5-二氯苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（84 mg，收率24%）。 MS (ESI) M/Z: 693.1 [M+H] ⁺. 步驟6：室溫下將1-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2,5-二氯苯基)哌𠯤-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮（84 mg，0.12 mmol）和氫氧化鉀（34 mg，0.60 mmol）加入到甲醇（8 mL）和水（2 mL）中，升溫至60℃攪拌反應1小時。LCMS監測反應完畢，將反應液冷卻至室溫，加入冰水（20 mL）稀釋，再用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物經製備級薄層色譜純化（洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 15/1）得到(6-((5-溴-2-((2,5-二氯-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯)二甲基氧化膦（23 mg，收率32%）。 MS (ESI) M/Z: 597.1 [M+H] ⁺. 步驟7：室溫下將(6-((5-溴-2-((2,5-二氯-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯)二甲基氧化膦（23 mg, 0.039 mmol）和2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙基甲磺酸酯（19 mg, 0.040 mmol）溶於乙腈（3 mL）中，加入DIEA（15 mg, 0.12 mmol）和催化量的碘化鈉，將反應體系加熱至85℃並攪拌15小時。LCMS監控顯示原料消失，將反應液冷卻至室溫，用高效製備液相色譜純化得到終產物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2,5-二氯苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（6.5 mg，收率17%）。 MS (ESI) M/Z: 982.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.61 (s, 1H), 8.01 (d, J= 5.6 Hz, 2H), 7.88-7.85 (m, 2H), 7.47 (d, J= 10.8 Hz, 1H), 7.38 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.14-7.11 (m, 2H), 4.96-4.91 (m, 1H), 3.76-3.64 (m, 4H), 3.44-3.31 (m, 4H), 3.19-3.15 (m, 2H), 3.09-3.04 (m, 2H), 2.88-2.81 (m, 4H), 2.78-2.69 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.16-2.12 (m, 1H), 2.00 (s, 3H), 1.97(s, 3H), 1.86-1.81 (m, 3H), 167-1.59 (m, 1H), 1.54-1.45 (m, 2H).

實施例113: 5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2,5-二氯苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例112的操作步驟製備得到終產物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2,5-二氯苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（20 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1006.0 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.66 (s, 1H), 8.93 (dd, J= 9.6, 4.0 Hz, 1H), 8.78 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.73 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.21 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 8.08 (brs, 1H), 7.45 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 4.95-4.91 (m, 1H), 3.65 (d, J= 12.4 Hz, 2H), 3.10 (brs, 4H), 2.93-2.69 (m, 8H), 2.60-2.56 (m, 2H), 2.16 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 1.84 (brs, 4H), 1.62-1.45 (m, 5H).

實施例114: 1-(6-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)-3,3-二氟哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

反應流程:

反應步驟：以2-(4-(3-(2,4-二氧代四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酸三氟乙酸鹽（製備參見專利WO2021/127561A1）和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例111的操作步驟製備得到終產物1-(6-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)-3,3-二氟哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮（46 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1042.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 11.94 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.15-8.12 (m, 2H), 7.77 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.63 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.11 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.83 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 4.09 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 3.76-3.67 (m, 3H), 3.47-3.34 (m, 2H), 3.27-3.22 (m, 1H), 3.13-3.03 (m, 2H), 2.95-2.87 (m, 7H), 2.73-2.63 (m, 1H), 2.55-2.50 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.72 (brs, 2H).

實施例115: 1-(6-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

反應流程:

反應步驟：以2-(4-(3-(2,4-二氧代四氫嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)乙酸三氟乙酸鹽（製備參見專利WO2021/127561A1）和 (6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例111的操作步驟製備得到終產物1-(6-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮（14.8 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1029.9 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.59 (s, 1H), 9.03-8.93 (m, 1H), 8.72 (d, J= 12.6 Hz, 2H), 8.30 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.74-7.57 (m, 5H), 7.40 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 7.05 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 6.67 (s, 1H), 4.10-4.07 (m, 2H), 3.98 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 3.75-3.71 (m, 6H), 3.35-3.25 (m, 2H), 3.09-3.05 (m, 2H), 2.91-2.84 (m, 4H), 2.72-2.62 (m, 1H), 2.40-2.27 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.93-1.84 (m, 7H).

實施例116: 3-(5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：以3-(5-(4-(2-羥乙基)哌啶-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮（製備參見專利US2020/339572A1）和 (6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例55的操作步驟製備得到終產物3-(5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-1-氧代異吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮（7.1 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1016.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 12.68 (s, 1H), 10.96 (s, 1H), 8.85-8.81 (m, 3H), 8.43 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.52-7.45 (m, 3H), 7.10-7.00 (m, 2H), 6.83 (s, 1H), 5.07-5.04 (m, 1H), 4.34-4.22 (m, 2H), 3.90-3.87 (m, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 2.90-2.75 (m, 8H), 2.70-2.40 (m, 6H), 2.03-1.90 (m, 8H), 1.80-1.70 (m, 2H), 1.55-1.40 (m, 5H).

實施例117: 3-((4-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)-4-羥基哌啶-1-基)-3-氟苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：室溫下將2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)胺基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙酸鹽酸鹽（80 mg，0.19 mmol，製備參照專利WO2021/127561A1）、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦（183 mg，0.22 mmol）、HATU（123 mg，0.32 mmol）和DIEA（105 mg，0.81 mmol）依次加入到DMF（5 mL）中，室溫攪拌3小時。LCMS監測原料消失，反應液倒入水（20 mL）中，乙酸乙酯（20 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（10 mL）洗滌二次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘留物經高效製備液相色譜純化得到終產物3-((4-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)-4-羥基哌啶-1-基)-3-氟苯基)胺基)哌啶-2,6-二酮（95 mg，收率49%）。 MS (ESI) M/Z: 1000.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 11.98 (s, 1H), 10.86 (s, 1H), 8.18 (d, J= 2.0 Hz, 2H), 8.09 (s, 1H), 7.95 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.69 (brs, 1H), 6.92-6.90 (m, 1H), 6.85 (s, 1H), 6.80-6.70 (m, 1H), 6.58-6.54 (m, 1H), 6.49-6.46 (m, 1H), 5.87-5.83 (m, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.40-4.28 (m, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.77-3.70 (m, 4H), 2.90-2.75 (m, 9H), 2.63-2.56 (m, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.14-2.05 (m, 5H), 1.95 (s, 3H), 1.92 (s, 3H), 1.85-1.65 (m, 4H).

實施例118: 1-(4-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)-4-羥基哌啶-1-基)-3-氟苯基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

反應流程:

反應步驟：室溫下將2-(1-(4-(2,4-二氧代四氫嘧啶-1(2H)-基)-2-氟苯基)-4-羥基哌啶-4-基)乙酸（150 mg，0.41 mmol，製備參照專利WO2021/127561A1）、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦（277 mg，0.43 mmol）、HATU（187 mg，0.49 mmol）和DIEA（159 mg，1.23 mmol）依次加入到DMF（5 mL）中，室溫攪拌3小時。LCMS監測原料消失，反應液倒入水（20 mL）中，乙酸乙酯（20 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（10 mL）洗滌二次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘留物經高效製備液相色譜純化得到終產物1-(4-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)-4-羥基哌啶-1-基)-3-氟苯基)二氫嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮（55.8 mg，收率14%）。 MS (ESI) M/Z: 986.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 11.92 (s, 1H), 10.38 (s, 1H), 8.12 (d, J= 2.0 Hz, 2H), 8.03 (s, 1H), 7.88 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.18-7.14 (m, 1H), 7.07-7.05 (m, 2H), 6.78 (s, 1H), 6.76 (brs, 1H), 4.96 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.75-3.65 (m, 6H), 3.10-2.95 (m, 4H), 2.83-2.80 (m, 4H), 2.68 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 2.58 (brs, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.80-1.69 (m, 4H).

實施例119: 5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2,5-二氯苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)胺基)苯基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例112的操作步驟製備得到終產物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2,5-二氯苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（三氟乙酸鹽，26.2 mg）。 MS (ESI) M/Z: 953.9 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 13.00 (s, 1H), 11.64 (s, 1H), 11.32 (brs, 1H), 8.14-8.10 (m, 1H), 8.06 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.47 (d, J= 10.8 Hz, 1H), 7.38 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.30-7.21 (m, 3H), 7.16 (s, 1H), 4.96-4.91 (m, 1H), 3.78 (d, J= 11.6 Hz, 2H), 3.65 (d, J= 12.8 Hz, 2H), 3.47 (d, J= 11.6 Hz, 2H), 3.45 (t, J= 11.8 Hz, 2H), 3.22-3.17 (m, 2H), 3.13-3.07 (m, 2H), 2.94-2.72 (m, 5H), 2.18-2.11 (m, 1H), 1.89-1.83 (m, 10H), 1.65-1.61 (m, 1H), 1.55-1.43 (m, 2H).

實施例120: 5-(4-(2-(4-(2,5-二氯-4-((5-氯-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-((2,5-二氯嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例116的操作步驟製備得到終產物5-(4-(2-(4-(2,5-二氯-4-((5-氯-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（35 mg）。 MS (ESI) M/Z: 938.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.03 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.17-8.14 (m, 2H), 8.07 (s, 1H), 7.46 (d, J= 10.8 Hz, 1H), 7.38 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 4.95-4.91 (m, 1H), 3.65 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 3.10 (brs, 4H), 2.89-2.80 (m, 8H), 2.64-2.61 (m, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.16-2.12 (m, 2H), 2.01 (s, 3H), 1.97 (s, 3H), 1.86 (d, J= 11.6 Hz, 2H), 1.63-1.55 (m, 3H), 1.50-1.42 (m, 2H).

實施例121: 3-(4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)哌啶-2,6-二酮

反應流程:

反應步驟：步驟1：室溫下將6-苄基-2-(苄氧基)-3-溴吡啶（826 mg, 2.3 mmol）和 4-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧代環戊硼烷-2-基)苯基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸第三丁酯（900 mg, 2.2 mmol，製備參考專利WO2014/6554A1）溶於二氧六環（20 mL）和水（4 mL）中, 加入磷酸鉀（946 mg, 4.4 mmol）和二茂鐵二氯化鈀（162 mg, 0.21 mmol)，反應體系在氮氣氛圍下加熱至100℃攪拌3小時。LCMS監測反應結束，將反應液冷卻至室溫，用水（30 mL）稀釋後用乙酸乙酯（20 mL×3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水（20 mL）洗滌二次，然後用無水硫酸鈉乾燥，過濾，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化（洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯= 50/1~5/1）得到4-(4-(2,6-二(苄氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸第三丁酯（527 mg，收率42%）。 MS (ESI) M/Z: 567.3 [M+H] ⁺. 步驟2：室溫下將4-(4-(2,6-二(苄氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸第三丁酯（400 mg, 0.71 mmol）溶於甲醇/乙酸乙酯（5 mL/5 mL）中，加入10%濕鈀碳(40 mg)。反應體系在氫氣球氛圍下攪拌15小時。LCMS顯示反應結束，反應液用矽藻土過濾，濾液減壓濃縮得到4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（258 mg，收率94%）。 MS (ESI) M/Z: 391.2 [M+H] ⁺. 步驟3：將4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基)哌啶-1-羧酸第三丁酯（110 mg， 0.28 mmol）和5M HCl/dioxane（3 mL）加入到DCM（5 mL）中，室溫下攪拌2小時。LCMS監測反應完成。反應液減壓濃縮得到3-(3-氟-4-(哌啶-4-基)苯基)哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽（87 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 291.1 [M+H] ⁺. 步驟4：室溫下將3-(3-氟-4-(哌啶-4-基)苯基)哌啶-2,6-二酮鹽酸鹽（87 mg，粗品）、DIEA（194 mg，1.5 mmol）和2-溴乙酸第三丁酯（59 mg，0.3 mmol）依次加入到DMSO（2 mL）中，升溫至50℃攪拌3小時。LCMS監測原料消失，加入水（20 mL）稀釋，乙酸乙酯（20 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（30 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用製備級TLC板純化（洗脫劑：乙酸乙酯）得到2-(4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸第三丁酯（78 mg，二步收率69%）。 MS (ESI) M/Z: 405.2 [M+H] ⁺. 步驟5：將2-(4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸第三丁酯（47 mg，0.12 mmol）和三氟乙酸（1 mL）加入到DCM（2 mL）中，室溫下攪拌1小時。LCMS監測反應完成。反應液減壓濃縮得到2-(4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸三氟乙酸鹽（47 mg，粗品）。 MS (ESI) M/Z: 349.2 [M+H] ⁺. 步驟6：室溫下將2-(4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸三氟乙酸鹽（47 mg，粗品）、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦（72 mg，0.11 mmol）、HATU（86 mg，0.23 mmol）和DIEA（72 mg，0.56 mmol）依次加入到DMF（2 mL）中，室溫攪拌1小時。LCMS監測原料消失，加入水（10 mL）稀釋，乙酸乙酯（10 mL×3）萃取。合併有機相，飽和食鹽水（10 mL）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘留物經高效製備液相色譜純化得到終產物3-(4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)哌啶-2,6-二酮（13.5 mg，二步收率13%）。 MS (ESI) M/Z: 969.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃): δ 12.90 (s, 1H), 10.43 (brs, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.92 (s, 2H), 7.82-7.61 (m, 2H), 7.51 (d, J= 12.4 Hz, 1H), 7.11-6.79 (m, 2H), 6.63 (brs, 2H), 4.31-4.19 (m, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.78-3.69 (m, 4H), 3.60-3.46 (m, 4H), 3.23-3.13 (m, 2H), 3.02-2.84 (m, 3H), 2.69-2.77 (m, 2H), 2.40-2.24 (m, 6H), 2.11 (s, 3H), 2.04-1.80 (m, 10H).

實施例122: 5-((R)-3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2,5-二氯苯基)哌𠯤-1-基)乙基)吡咯啉-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-((S)-3-(2-羥乙基)吡咯啉-1-基)異吲哚啉-1,3-二酮和(6-((5-溴-2-((2,5-二氯-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)喹㗁啉-5-基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例105的操作步驟製備得到終產物5-((R)-3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)喹㗁啉-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-2,5-二氯苯基)哌𠯤-1-基)乙基)吡咯啉-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（10.2 mg）。 MS (ESI) M/Z: 992.1 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, CDCl ₃/D ₂O): δ 8.93 (dd, J= 9.4 Hz, 3.8 HZ, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.21 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 12.4 Hz, 1H), 7.08 (s, 1H), 7.02 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 4.94-4.89 (m, 1H), 3.78-3.60 (m, 3H), 3.29-3.23 (m, 1H), 3.14-3.01 (m, 4H), 2.93-2.67 (m, 7H), 2.63 (brs, 2H), 2.40-2.25 (m, 1H), 2.50-2.12 (m, 8H), 1.75-1.62 (m, 3H).

實施例123: 5-(3-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例65的製備方法得到終產物5-(3-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（78 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1061.5 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 11.93 (s, 1H), 11.10 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.04-8.00 (m, 2H), 7.90-7.85 (m, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.64 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.50 (s, 1H), 6.79-6.76 (m, 2H), 6.66-6.63 (m, 2H), 5.09-5.04 (m, 1H), 4.18-4.12 (m, 2H), 3.84-3.80 (m, 8H), 3.40-3.20 (m, 5H), 2.90-2.84 (m, 8H), 2.70-2.50 (m, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.10-2.00 (m, 1H), 1.90-1.80 (m, 8H), 1.73-1.60 (m, 2H), 1.50-1.10 (m, 5H).

實施例124: 5-(3-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以(6-((2-((4-(4-(2-(1-(氮雜環丁烷-3-基)哌啶-4-基)乙基)哌𠯤-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)胺基)-5-溴嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦為原料，參照實施例66的製備方法得到終產物5-(3-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦醯基)-3,4-二甲基苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮雜環丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（47 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1079.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 11.93 (s, 1H), 11.12 (s, 1H), 8.12 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.05-8.02 (m, 2H), 7.79-7.88 (m, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.64-7.61 (m, 2H), 6.94-6.92 (m, 1H), 6.77-6.60 (m, 2H), 5.10-5.05 (m, 1H), 4.24 (brs, 2H), 3.97 (brs, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.55-3.45 (m, 1H), 3.40-3.10 (m, 2H), 3.00-2.80 (m, 6H), 2.60-2.30 (m, 7H), 2.20 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.10-2.04 (m, 1H), 1.89-1.85 (m, 8H), 1.75-1.60 (m, 2H) , 1.40-1.10 (m, 5H).

實施例125: 5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：將1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代異吲哚啉-5-基)氮雜環丁-3-基)哌啶-4-甲醛（30 mg, 0.07 mmol）和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌𠯤-1-基)苯基)胺基)嘧啶-4-基)胺基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-5-基)二甲基氧化膦（40 mg, 0.06 mmol）溶於四氫呋喃/N,N-二甲基甲醯胺（2.5 mL/0.5 mL）中，冰浴下加入三乙醯氧基硼氫化鈉（32 mg, 0.18 mmol）。反應體系在室溫下攪拌2小時。LC-MS顯示原料消失，反應液加水（10 mL）淬滅，用二氯甲烷（10 mL × 3次）萃取。合併有機相，用飽和食鹽水（10 mL × 3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物經高效製備液相色譜純化得到終產物5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦醯基)-2,3-二氫苯并[b][1,4]二㗁英-6-基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮雜環丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)異吲哚啉-1,3-二酮（三氟乙酸鹽，28.7 mg，收率40%）。 MS (ESI) M/Z: 1077.4 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 11.93 (brs, 1H), 11.10 (s, 1H), 10.52 (brs, 1H), 9.68 (brs, 1H), 8.60 (brs, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.87 (brs, 2H), 7.75 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 6.80-6.72 (m, 2H), 5.11-5.06 (m, 1H), 4.50-4.15 (m, 12H), 3.87 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.66-3.50 (m, 4H), 3.33-3.21 (m, 3H), 3.07-3.01 (m, 2H), 2.94-2.81 (m, 3H), 2.68-2.54 (m, 2H), 2.18-1.93 (m, 4H), 1.82 (s, 3H), 1.78 (s, 3H), 1.54-1.37 (m, 2H).

實施例126: 5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-4-氟苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮和2-(4-甲基哌啶-4-基)乙烷-1-醇（製備可參考文獻Collection of Czechoslovak Chemical Communications, 1953, vol. 18, p. 818,821）為原料，參照實施例55的操作步驟製備得到終產物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-4-氟苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（三氟乙酸鹽, 30.8 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1028.3 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 11.11 (s, 1H), 10.94 (s, 1H), 9.55 (brs, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.27 (brs, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.73 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.50-7.39 (m, 2H), 6.76 (s, 1H), 6.65 (brs, 1H), 5.13-5.09 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.61 (d, J= 10.4 Hz, 2H), 3.40-3.10 (m, 6H), 2.98-2.84 (m, 3H), 2.62-2.50 (m, 6H), 2.09-1.98 (m, 1H), 1.84-1.68 (m, 8H), 1.64-1.51 (m, 4H), 1.04 (s, 3H).

實施例127: 5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-4-氟苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)-4-氟哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮

反應流程:

反應步驟：以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟異吲哚啉-1,3-二酮和2-(4-氟哌啶-4-基)乙烷-1-醇為原料，參照實施例55的操作步驟製備得到終產物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦醯基)-4-氟苯基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌𠯤-1-基)乙基)-4-氟哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟異吲哚啉-1,3-二酮（28.9 mg）。 MS (ESI) M/Z: 1032.2 [M+H] ⁺. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d ₆): δ 11.11 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 8.34 (brs, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.75 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.52 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.44-7.37 (m, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.69 (brs, 1H), 5.13-5.09 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.53-3.49 (m, 3H), 3.19-3.10 (m, 3H), 3.01-2.79 (m, 6H), 2.72-2.50 (m, 4H), 2.09-1.84 (m, 7H), 1.80-1.76 (m, 7H).

二、生物活性實驗

測試例1：評價本發明化合物對穩定表達三突變表皮生長因子受體的Ba/F3細胞株的抑制增殖作用本實驗採用熒光法測定細胞內ATP含量來檢測化合物對穩定表達三突變表皮生長因子受體（EGFR triple mutants）細胞株的抑制增殖作用，並得出化合物對三突變表皮生長因子受體（EGFR triple mutants）細胞株抑制增殖的半數抑制濃度 IC50。實驗材料 RPMI-1640培養基，胎牛血清（FBS），100X Pen/Strep，GlutaMAX-I Supplement購自GIBCO公司。Cell Titer-Glo發光法細胞活力檢測試劑購自Promega 公司。 1. 實驗方法 1)將穩定轉染的Ba/F3（DEL19/T790M/C797S和L858R/T790M/C797S）細胞用細胞計數儀計數，按照每孔 3000個細胞的密度將細胞接種於 96 孔培養板，每孔 100 μL。置於培養箱（37 ℃，5%CO ₂）中孵育過夜。 2)Day 0：使用 D300e (TECAN) 向培養板細胞中加入 500 nL梯度稀釋的待測化合物 (起始濃度為30 μM，10個濃度，1:3比例稀釋)， DMSO終濃度為 0.5%，將培養板置於細胞培養箱中孵育72小時（37 ℃，5%CO ₂）。空白對照加入每孔 500 nL的 DMSO。 3)Day 3：每孔加入 100 μL Cell Titer-Glo 試劑，500 rpm震盪2分鐘，1000 rpm離心1分鐘，室溫避光靜置孵育10 分鐘穩定發光訊號。 4)Envision 酶標儀（PerkinElmer）檢測發光訊號。 5)使用GraphPad Prism 6 軟件進行數據分析，計算化合物的IC50。經測定，本發明化合物對Ba/F3 Del19/T790M/C797S EGFR 三突變細胞系和 Ba/F3 L858R/T790M/C797S EGFR 三突變細胞系的細胞增殖有著很好的抑制作用，其IC ₅₀值一般低於1 μM；部分本發明化合物的IC ₅₀值低於0.5 μM，更為優異的本發明化合物的IC ₅₀值低於0.1 μM，甚至低於0.015 μM。本發明部分化合物對三突變表皮生長因子受體的Ba/F3細胞株的抑制結果見表1。表1

實施例	Del19/T790M/C797S IC ₅₀(nM)	L858R/T790M/C797S IC ₅₀(nM)	實施例	Del19/T790M/C797S IC ₅₀(nM)	L858R/T790M/C797S IC ₅₀(nM)
1	AB	AC	63	AA	AA
2	B	B	64	AA	AA
4	AA	AB	65	AA	AA
5	AC	B	66	AA	AB
6	A	B	67	AA	AA
7	B	B	68	AA	AA
8	AC	B	69	AA	AA
9	B	B	70	AA	AA
10	B	B	71	AA	AA
11	AB	AB	72	AA	AA
12	AA	AA	73	AB	AA
13	AB	N.D.	74	AC	AC
14	AA	AA	75	AA	AA
15	AC	N.D.	76	AA	AA
16	AA	N.D.	77	AA	AA
17	AA	AA	78	AA	AA
18	AA	AA	79	AA	AB
19	AA	AA	80	AA	AA
20	AA	AA	81	AA	AA
21	AA	AA	82	AB	AB
22	AB	AB	83	AA	AA
23	B	B	84	AA	AA
24	AB	AB	85	AA	AB
25	AA	AA	86	AA	AA
26	AA	AB	87	AA	AB
27	AA	AA	88	AA	AB
28	AB	AB	89	AA	AA
29	AB	AC	90	AB	AB
30	AA	AA	91	AA	AB
31	AA	AA	92	AB	AB
32	AA	AA	93	AB	AB
33	AA	AA	94	AB	AB
34	AA	AB	95	AA	AB
35	AA	AA	96	AA	AA
36	AA	AB	97	AA	AA
37	AA	AA	98	AA	AA
38	AA	AB	99	AA	AB
39	AA	AA	100	AA	AA
40	AA	AC	101	AA	AA
41	AA	AA	102	AA	AA
42	AA	AA	103	AA	AA
43	AA	AB	104	AA	AA
44	AA	AA	105	AA	AA
45	AA	AA	106	AB	AC
46	AA	AB	107	AA	AA
47	AA	AA	108	AA	AA
48	AA	AA	109	AB	AB
49	AA	AA	110	AA	AB
50	AA	AA	111	AA	AA
51	AA	AA	114	AA	AA
52	AA	AA	115	AA	AA
53	AA	AA	116	AA	AA
54	AA	AA	117	AA	AA
55	AA	AA	118	AA	AB
56	AA	AA	121	AB	AA
57	AA	AA	123	AA	AB
58	AA	AA	124	AB	AB
59	AA	AA	125	AA	AA
60	AA	AB	126	AB	AB
61	AA	AA	127	AB	AB
62	AC	AA

各個數值代表以下範圍： A: ＜100 nM； 100 nM≤B＜500 nM； 500 nM≤C＜1000 nM；1000 nM≤C＜2500 nM；E≥2500 nM；其中，＜100 nM 的化合物又可以細分為AA: ＜15 nM；15 nM≤AB＜50 nM； 50 nM≤AC＜100 nM； N.D.代表未測定。測試例2：EGFR PROTAC ELISA實驗 1. 實驗材料 HCC827細胞培養基（RPMI-1640培養基，10%胎牛血清（FBS），100X Pen/Strep，GlutaMAX-I Supplement）均購自GIBCO公司。10×RIPA 購自CST公司，蛋白酶抑制劑購自Roche公司。EGFR抗體及羊抗兔二抗來自Abcam公司，EGFR蛋白購自SignalChem公司。牛血清白蛋白（BSA），TMB溶液及Tween-20來自Sigma公司。20×PBS及ELISA終止液購自生工生物。ELISA包被板購自Thermo公司。 2. 實驗方法 1)將HCC827細胞用細胞計數儀計數（85%以上活細胞才可用於後續實驗），按照每孔 40000個細胞的密度將細胞接種於 96 孔培養板，每孔 100 μL。置於培養箱（37 ℃，5%CO2）中孵育過夜。 2)Day 1：使用 D300e (TECAN) 向培養板細胞中加入梯度稀釋的待測化合物(起始濃度為1μM，9個濃度，1:3比例稀釋，3複孔)， DMSO終濃度為 0.5%，空白對照加入每孔 500 nL的 DMSO。將培養板置於細胞培養箱中孵育8小時（37 ℃，5%CO ₂），加入PBS洗細胞一次，每孔加入100μL含蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液，放-80℃保存。 3)Day 2：每孔取10μL細胞裂解液，用PBS補齊到100μL，轉移到ELISA包被板中，EGFR蛋白作為標準品，稀釋後以最高濃度10ng/mL，7個濃度，1：2比例稀釋，加入ELISA包被板中。將包被板放入4℃孵育過夜。 4)Day 3：每孔加入300μL洗滌緩衝液（含0.05% tween-20的PBS）洗滌 4 次。後加入200μL封閉緩衝液(1%BSA)，在室溫下孵育1小時。加入300μL洗滌緩衝液洗滌4次後，加入100μL一抗（1:2000 稀釋在封閉緩衝液中），並在室溫下孵育2小時。繼續300μL洗滌緩衝液洗滌4次後，加入100μL二抗（1:1000 稀釋在封閉緩衝液），室溫下孵育1小時。300μL洗滌緩衝液洗滌4次後，每孔加入 100μL TMB溶液，避光在室溫下孵育 5-10 分鐘，每孔加入50μL終止液，震盪混勻後用酶標儀讀取450nm處吸光值。 5)計算：以EGFR已知蛋白濃度做標準曲線，線性擬合，計算出對應樣品孔的EGFR蛋白含量，以空白對照為參考，計算加藥後的EGFR降解率。 EGFR%=(處理組細胞EGFR蛋白水平/對照組細胞EGFR蛋白水平) ×100% 用Prism軟件，4參數法擬合曲線 Y=Bottom + (Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope)) 計算出藥物降解EGFR蛋白的DC ₅₀。從表2實驗結果可以看出，本發明化合物能夠顯著的誘導EGFR蛋白的降解，優選地，本發明部分化合物的DC ₅₀小於50 nM，更優選地，部分化合物的DC ₅₀小於10 nM。表2

實施例	DC ₅₀(nM)
1	B ^，
4	A ^，
19	A ^，
22	A ^，
24	B ^，
32	A ^，
28	A ^，
35	A ^，
36	A ^，
49	A ^，
54	A ^，
55	B ^，
57	A ^，
66	A ^，
75	A ^，
92	B ^，
94	B ^，
98	A ^，
99	A ^，
100	A ^，
114	A ^，
115	A ^，

各個數值代表以下範圍：A ^，: ＜10 nM；B ^，: 10-50 nM；本文已經詳細地描述了本發明，其中也公開了其具體實施例方式，對本發明所屬技術領域具有通常知識者而言，在不脫離本發明精神和範圍的情況下針對本發明具體實施方式進行各種變化和改進將是顯而易見的。

無

Claims

一種雙功能化合物，具有下式：
或其立體異構體、互變異構體或藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物，其中， R ¹選自
或任選地被一個或多個R ⁹基團所取代的A； A選自3-7元雜環烷基、3-7元雜環烷基-O-、3-7元雜環烷基-NR ^a-、-(3-7元雜環烷基)-(3-7元雜環烷基)-、6-14元螺雜環基、6-14元橋雜環基、6-14元并雜環基； R ²選自C _6-10芳基、5-12元雜芳基、5-6元雜環烯基，其中所述C _6-10芳基、5-12元雜芳基，5-6元雜環烯基各自獨立任選地被一個或多個R ¹⁰基團所取代； R ³選自H、鹵素、C _1-4烷基、C _1-4烷氧基、C _1-4鹵代烷基、C _1-4鹵代烷氧基； M選自N或者CR ¹¹； R ⁴選自H、鹵素、-CN、C _1-4烷基、C _1-4鹵代烷基、C _3-6環烷基； R ⁵選自-C(=O)NR ^bR ^c、-S(=O) ₂R ^b、-P(=O)R ^bR ^c、-P(=O)R ^bNR ^cR ^d、-P(=O)R ^bOR ^c、-P(=O)OR ^bOR ^c、-P(=S)R ^bR ^c、-P(=S)R ^bNR ^cR ^d、-P(=S)R ^bOR ^c、-P(=S)OR ^bOR ^c、-S(=O) ₂NR ^bR ^c、-NR ^cS(=O) ₂R ^b、或-NR ^bC(O)R ^c； R ⁶、R ⁷、R ⁸各自獨立地選自H、C _1-4烷基、鹵素、C _3-6環烷基；或者，R ⁶、R ⁷和與其連接的原子一起環化成C _4-6環烷基、4-7元雜環烷基、5-7元雜芳基；或者R ⁷、R ⁸和與其連接的原子一起環化成C _4-6環烷基、4-7元雜環烷基、5-7元雜芳基； R ⁹任意地選自H、鹵素、-OH、-NH ₂、C _1-4烷基、C _1-4烷氧基、C _1-4鹵代烷基、-C _0-4烷基-NR ^aR ^b； R ¹⁰選自H、鹵素、C _1-4烷基、C _1-4鹵代烷基、C _3-6環烷基磺醯基； R ¹¹選自H、鹵素、C _1-4烷基； R ^a選自H、C _1-4烷基； R ^b、R ^c、R ^d各自獨立地選自H、C _1-4烷基、C _3-6環烷基；接頭是與靶向配體中R ¹基團和降解決定子共價結合的基團；降解決定子是能夠與泛素連接酶結合的基團。
如請求項1所述的雙功能化合物，其中，式（I）化合物中， R ¹選自
或任選地被一個或多個R ⁹基團所取代的A； A選自3-7元雜環烷基、3-7元雜環烷基-O-、3-7元雜環烷基-NR ^a-、-(3-7元雜環烷基)- (3-7元雜環烷基)-、6-14元螺雜環基、6-14元橋雜環基、6-14元并雜環基； R ²選自C _6-10芳基、5-12元雜芳基、5-6元雜環烯基，其中所述C _6-10芳基、5-12元雜芳基，5-6元雜環烯基各自獨立任選地被一個或多個R ¹⁰基團所取代； R ³選自H、C _1-4烷基、C _1-4烷氧基、C _1-4鹵代烷基、C _1-4鹵代烷氧基； M選自N或者CR ¹¹； R ⁴選自H、鹵素、-CN、C _1-4烷基、C _1-4鹵代烷基、C _3-6環烷基； R ⁵選自-C(=O)NR ^bR ^c、-S(=O) ₂R ^b、-P(=O)R ^bR ^c、-P(=O)R ^bNR ^cR ^d、-P(=O)R ^bOR ^c、-P(=O)OR ^bOR ^c、-P(=S)R ^bR ^c、-P(=S)R ^bNR ^cR ^d、-P(=S)R ^bOR ^c、-P(=S)OR ^bOR ^c、-S(=O) ₂NR ^bR ^c、-NR ^cS(=O) ₂R ^b、或-NR ^bC(O)R ^c； R ⁶、R ⁷、R ⁸各自獨立地選自H、C _1-4烷基；或者，R ⁶與R ⁷和與其連接的原子一起環化成C _4-6環烷基、5-7元雜芳基；或者R ⁷與R ⁸和與其連接的原子一起環化成C _4-6環烷基、5-7元雜芳基； R ⁹任意地選自H、鹵素、-OH、-NH ₂、C _1-4烷基、C _1-4烷氧基、C _1-4鹵代烷基、-C _0-4烷基-NR ^aR ^b； R ¹⁰選自H、鹵素、C _1-4烷基、C _1-4鹵代烷基、C _3-6環烷基磺醯基； R ¹¹選自H、鹵素、C _1-4烷基； R ^a選自H、C _1-4烷基； R ^b、R ^c、R ^d各自獨立地選自H、C _1-4烷基、C _3-6環烷基；接頭是與靶向配體中R ¹基團和降解決定子共價結合的基團；降解決定子是能夠與泛素連接酶結合的基團。
如請求項1所述的雙功能化合物，其中，式（I）化合物中， R ¹選自
或任選地被一個或多個R ⁹基團所取代的A； A選自3-7元雜環烷基、3-7元雜環烷基-O-、3-7元雜環烷基-NR ^a-、-(3-7元雜環烷基)-(3-7元雜環烷基)-、6-14元螺雜環基、6-14元并雜環基； R ²選自5-6元雜芳基，其中所述5-6元雜芳基任選地被一個或多個R ¹⁰基團所取代； R ³選自C _1-4烷氧基； M選自CR ¹¹； R ⁴選自H、鹵素、C _1-4烷基； R ⁵選自-P(=O)R ^bR ^c、-NR ^cS(=O) ₂R ^b； R ⁶、R ⁷、R ⁸各自獨立的選自H、C _1-4烷基；或者，R ⁶、R ⁷和與其連接的原子一起環化成5-7元雜芳基； R ⁹任意地選自H、鹵素、-OH、-NH ₂、C _1-4烷基； R ¹⁰選自H、C _1-4烷基； R ¹¹選自H、鹵素； R ^a選自H、C _1-4烷基； R ^b、R ^c各自獨立的選自H、C _1-4烷基；接頭是與靶向配體中R ¹基團和降解決定子共價結合的基團；降解決定子是能夠與泛素連接酶結合的基團。
如請求項1-3任一項所述的雙功能化合物，M選自CH。
如請求項1-4任一項所述的雙功能化合物，其中R ¹選自
。
如請求項1-4任一項所述的雙功能化合物，其中A選自
、
、
、
、
、

、
、
、
；R ^a如請求項1-4任一項所定義。
如請求項6所述的雙功能化合物，其中A選自
。
如請求項1-7任一項所述的雙功能化合物，其中R ²選自
。
如請求項1-7任一項所述的雙功能化合物，其中環R ²選自
、
。
如請求項1-9任一項所述的雙功能化合物，其中R ³選自甲氧基。
如請求項1-9任一項所述的雙功能化合物，其中R ³選自H、甲基。
如請求項1-11任一項所述的雙功能化合物，其中R ⁴選自F、Cl、Br、甲基或三氟甲基。
如請求項12所述的雙功能化合物，其中R ⁴選自Br。
如請求項1-13任一項所述的雙功能化合物，其中R ⁵選自
、
。
如請求項14所述的雙功能化合物，其中R ⁵選自
。
如請求項1-15任一項所述的雙功能化合物，其中R ⁶、R ⁷、R ⁸選自H。
如請求項1-15任一項所述的雙功能化合物，其中R ⁶、R ⁷、R ⁸各自獨立地選自CH ₃、環丙基、氟。
如請求項1-15任一項所述的雙功能化合物，其中R ⁶、R ⁷和與其連接的原子一起環化成吡𠯤環、吡啶環。
如請求項1-18任一項所述的雙功能化合物，其中所述接頭具有式LA：
或其立體異構體，其中，p ₁選自0-6的整數；p ₂選自0-6的整數；p ₃選自0-6的整數； U為鍵，或者選自C=O、O、NH或NR ¹²；每個Q獨立地選自鍵、CH ₂、O、S、NH或NR ¹²； W為鍵，或者選自C=O、O、NH、NR ¹²、C≡C；其中所述R ¹²選自C _1-4烷基；所述接頭通過U基團與靶向配體TL中的R ¹共價結合，W基團與降解決定子共價結合。
如請求項19所述的雙功能化合物，其中，所述TL-LA選自：
，
，
，
，
，
，
，
，
，

；其中，p ₁選自0-6的整數；p ₂選自0-6的整數；p ₃選自0-6的整數。
如請求項20所述的雙功能化合物，其中，所述TL-LA選自：
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如請求項20所述的雙功能化合物，其中，所述TL-LA選自：
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、
、
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如請求項1-18任一項所述的雙功能化合物，其中，所述接頭具有式LB：
或其立體異構體，其中，p ₁選自0-6的整數；p ₂選自0-6的整數；p ₃選自0-6的整數，p ₄選自0-6的整數；p ₅選自0-6的整數； U為鍵，或者選自C=O、O、NH或NR ¹³；每個Q獨立地選自鍵、CH ₂、O、S、NH或NR ¹³；； W為鍵，或者選自C=O、O、NH、NR ¹³、C≡C；其中所述R ¹³選自C _1-4烷基；每個Z ₁獨立地選自不存在、苯基、C _3-6元環烷基、3-6元雜環烷基、5-6元雜芳基，其中所述苯基、C _3-6元環烷基、3-6元雜環烷基、5-6元雜芳基各自獨立任選地被一個或多個R ¹⁴基團所取代，R ¹⁴選自鹵素、C _1-4烷基、羥基；或每個Z ₁各自獨立地選自7-11元氮雜螺環，其中所述7-11元氮雜螺環任選地被一個或多個R ¹⁴基團所取代；R ¹⁴選自鹵素、C _1-4烷基、羥基；所述接頭通過U基團與靶向配體中的R ¹共價結合，W基團與降解決定子共價結合。
如請求項23所述的雙功能化合物，其中所述接頭LB選自：
，
其中，p ₁、p ₂、p ₃、p ₄、U、W、Z ₁如請求項23所定義。
如請求項24所述的雙功能化合物，其中，TL-LB選自：
、
、
、
、
、
、
；其中，p ₁、p ₂、p ₃、p ₄、Z ₁如請求項24所定義。
如請求項25所述的雙功能化合物，其中，所述TL-LB選自：
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、
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如請求項24所述的雙功能化合物，其中，所述TL-LB選自：
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、
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如請求項24所述的雙功能化合物，其中，所述TL-LB選自：
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如請求項1-28任一項所述的雙功能化合物，其中所述的降解決定子具有式D1：
或其立體異構體，其中，每個R ¹⁵任意獨立地選自C _1-4烷基； R ¹⁶選自H、氘；每個R ¹⁷任意獨立地選自鹵素、C _1-4烷基、C _1-4烷氧基、羥基； Z ₂選自CH ₂或者C=O； Y為鍵、O或者NH，其通過共價鍵與接頭相連； m選自0-3的整數； n選自0-4的整數。
如請求項29所述的雙功能化合物，所述的降解決定子D1中的Z ₂選自C=O。
如請求項29所述的雙功能化合物，所述的降解決定子D1中Y選自鍵或者NH。
如請求項29所述的雙功能化合物，所述的降解決定子D1選自：
、
、
、
、
、
、
、
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如請求項1-28任一項所述的雙功能化合物，其中，所述的降解決定子具有式D2：
或其立體異構體，其中，每個R ¹⁵ ^，任意獨立地選自C _1-4烷基； R ¹⁶ ^，選自H、氘；每個R ¹⁷ ^，任意獨立地選自鹵素、C _1-4烷基、C _1-4烷氧基； Y ^，為鍵、O或者NH，其通過共價鍵與接頭相連； m選自0-3的整數； n選自0-4的整數。
如請求項33所述的雙功能化合物，其中，所述的降解決定子D2選自：
。
如請求項1-28任一項所述的雙功能化合物，其中所述的降解決定子具有式D3：
或其立體異構體，其中，R ¹⁸選自H、C _1-4烷基；每個R ¹⁹任意獨立地選自C _1-4烷基； R ²⁰選自H、C _1-4烷基； q選自0-4的整數。
如請求項35所述的雙功能化合物，其中，所述的降解決定子D3中的R ¹⁸是甲基。
如請求項35所述的雙功能化合物，其中，所述的降解決定子D3中的R ²⁰是甲基。
如請求項35所述的雙功能化合物，所述的降解決定子D3選自：
，
，
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如請求項1-28任一項所述的雙功能化合物，其中，所述的降解決定子具有式D4：
或其立體異構體， Y為鍵、或者NH，其通過共價鍵與接頭相連。
如請求項39所述的雙功能化合物，其中，所述的降解決定子D4選自：
。
如請求項1-28任一項所述的雙功能化合物，其中，所述的降解決定子具有式D5，
其中，M選自NH、O或者S； V為鍵、NH或者O，其通過共價鍵與接頭相連； R ²¹選自鹵素； S選自0、1、2或3。
如請求項41所述的雙功能化合物，其中，所述的降解決定子D5選自：
、
、
、
、
、
、
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如請求項1-28任一項所述的雙功能化合物，其中，所述的降解決定子選自：
、
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如請求項1-43任一項所述的雙功能化合物，其中，所述的靶向配體（TL）選自：
、
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、
、
、
、
、
、
、

；所述靶向配體通過
與所述接頭共價結合。
如請求項1-43任一項所述的雙功能化合物，其中，所述的靶向配體（TL）選自：
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、
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、
、
和
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如請求項1-45任一項所述的雙功能化合物，其選自：
，
，
，
；其中，A、M、R ²、R ³、R ⁴、R ⁵、R ⁶、R ⁷、R ⁸、Y、R ²⁰、R ¹⁵、n、接頭、降解決定子如請求項1-45任一項所定義。
如請求項46所述的雙功能化合物，其選自：
，
，
，
； R ²、R ³、R ⁴、R ⁵、R ⁶、R ⁷、R ⁸、Y、R ²⁰、R ¹⁵、n、M、接頭與降解決定子如請求項46所定義。
如請求項47所述的雙功能化合物，其選自：
，
，
、
；其中，R ₆、R ₇、R ¹⁵、Y、n、接頭與降解決定子如請求項47所定義。
如請求項48所述的雙功能化合物，其選自：
，
，
；其中，接頭、Y、R ²⁰、R ¹⁵、n、如請求項48所定義。
一種雙功能化合物或其立體異構體、互變異構體或藥學上可接受的鹽、前藥、水合物、溶劑合物、同位素標記衍生物，其選自：

‘

、

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一種藥物組合物，其包含請求項1-50任一項所述的雙功能化合物，以及藥學上可接受的載體。
如請求項1-50任一項所述的雙功能化合物或請求項51所述的藥物組合物在製備治療EGFR介導的癌症藥物中的應用。
如請求項52所述的應用，其中，所述癌症選自淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、宮頸癌、***癌、結腸直腸癌、乳腺癌、胰腺癌、膠質瘤、膠質母細胞瘤，黑色素瘤、白血病、胃癌、子宮內膜癌、肺癌、肝細胞癌、胃腸道間質瘤(GIST)、急性髓細胞白血病(AML)、膽管癌、腎癌、甲狀腺癌、間變性大細胞淋巴瘤、間皮瘤、多發性骨髓瘤、黑色素瘤。
如請求項1-50任一項所述的雙功能化合物，其製備方法包括以下步驟：靶向配體與接頭連接後，再與降解決定子連接得到：
；或者，接頭與降解決定子連接後，再與靶向配體連接得到：
；其中，靶向配體，接頭，降解決定子如請求項1-50任一項所述。