TW202221034A - 抗ｃｄ２２８抗體和抗體－藥物共軛體 - Google Patents

抗ｃｄ２２８抗體和抗體－藥物共軛體 Download PDF

Info

Publication number
TW202221034A
TW202221034A TW110128583A TW110128583A TW202221034A TW 202221034 A TW202221034 A TW 202221034A TW 110128583 A TW110128583 A TW 110128583A TW 110128583 A TW110128583 A TW 110128583A TW 202221034 A TW202221034 A TW 202221034A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
antibody
amino acid
seq
acid sequence
cdr
Prior art date
Application number
TW110128583A
Other languages
English (en)
Inventor
沙斯蒂 桑德爾
安德魯 偉特
Original Assignee
美商西根公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 美商西根公司 filed Critical 美商西根公司
Publication of TW202221034A publication Critical patent/TW202221034A/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6865—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from skin, nerves or brain cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3053—Skin, nerves, brain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Abstract

本發明提供新穎的抗CD228抗體和抗體-藥物共軛體及使用該抗CD228抗體和抗體-藥物共軛體以治療癌症之方法。

Description

抗ＣＤ２２８抗體和抗體－藥物共軛體
本發明關於新穎的抗CD228抗體和抗體-藥物共軛體及使用該抗CD228抗體和抗體-藥物共軛體以治療癌症之方法。 相關申請案之交互參照
本申請案主張美國臨時專利申請案第63/061,111號(2020年08月4日提出申請)之優先權，該案之內容全文以引用方式併入本文。 提交ASCII文字檔案序列表
下列提交之ASCII文字檔案的內容全文係以引用方式併入本文中：電腦可讀形式(CRF)之序列表(檔案名稱：761682004340SEQLIST.TXT，記錄日期：2021年7月30日，大小：25 KB)。
CD228(亦稱為黑色素轉鐵蛋白、MELTF、p97及MF12)係一種糖基磷脂醯肌醇錨定糖蛋白，其最先被識別為惡性黑色素瘤細胞的97-kDa細胞表面標記。CD228過度表現於大部分臨床黑色素瘤單離物上，且亦在許多人類癌症觀察到。CD228已顯示在多種癌症中表現。CD228屬於鐵結合蛋白之轉鐵蛋白家族。
黑色素瘤(亦稱為惡性黑色素瘤)係一種自黑色素細胞(含有色素之細胞)發展的癌症類型。黑色素瘤係最危險的皮膚癌類型。在2015年，310萬人患有活動性疾病且黑色素瘤導致59,800起死亡。手術對於早期黑色素瘤可為有效，但對於已轉移至遠端器官之疾病則非治療選項。黑色素瘤在擴散他處之前通常擴散至區域的淋巴結。藉由手術移除淋巴結來改善存活的企圖與許多併發症相關聯，但無整體存活效益。免疫治療、化學療法及放射療法皆被使用，但通常不具治癒性，特別是對於晚期黑色素瘤。當遠端轉移時，癌症通常被視為不可治癒。第IV期疾病之五年存活率係15至20%。因此，需要改善的黑色素瘤治療。
本文所引證之所有參考文獻包括專利申請案、專利公開案及科學文獻皆以引用方式完整併入本文中，猶如個別參考文獻係特別且個別指示以引用方式併入本文中。
本發明提供一種經單離之抗CD228抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列，其中輕鏈CDR的至少一個組胺酸殘基係經不同胺基酸取代。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO: 8之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:25之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:27之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:28之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列。在一些實施態樣中，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:29之胺基酸序列。在一些實施態樣中，抗體或抗原結合片段係抗原結合片段。在一些實施態樣中，抗原結合片段係選自由Fab、Fab'、F(ab') 2、Fab'-SH、Fv、雙體抗體、線性抗體及單鏈抗體片段所組成之群組。在一些實施態樣中，抗體或抗原結合片段係全長抗體。在一些實施態樣中，重鏈可變區係與重鏈恆定區融合且輕鏈可變區係與輕鏈恆定區融合。在一些實施態樣中，重鏈恆定區係IgG1同型。在一些實施態樣中，重鏈恆定區具有包含SEQ ID NO:30之胺基酸序列且輕鏈恆定區具有包含SEQ ID NO:32之胺基酸序列。在一些實施態樣中，重鏈恆定區係天然人恆定區之突變形式，其相較於天然人恆定區具有減少之與Fcγ受體之結合。在一些實施態樣中，重鏈恆定區具有包含SEQ ID NO:31 (S239C)之胺基酸序列且輕鏈恆定區具有包含SEQ ID NO:32之胺基酸序列。
本發明亦提供一種抗體-藥物共軛體，其包含本發明提供之抗體或抗原結合片段共軛至細胞毒性劑或細胞靜止劑。在一些實施態樣中，抗體或抗原結合片段係經由連接子與細胞毒性劑或細胞靜止劑共軛。在一些實施態樣中，連接子係MDpr-PEG(12)-gluc連接子。在一些實施態樣中，細胞毒性劑或細胞靜止劑係單甲基耳抑素。在一些實施態樣中，單甲基耳抑素係單甲基耳抑素E (MMAE)，該連接子係附接至單甲基耳抑素E以形成具有下式結構之抗體-藥物共軛體：
Figure 02_image001
其中Ab係該抗體或抗原結合片段，n係12，R PR係氫，R 21係CH 3且p表示1至16之數字。在一些實施態樣中，在該抗體-藥物共軛體族群中p的平均值係約8。
本發明亦提供一種包含與CD228結合之抗原結合蛋白或其片段之抗體-藥物共軛體，其中抗體-藥物共軛體係由下式結構代表：
Figure 02_image003
或其醫藥上可接受之鹽，其中：Ab係抗原結合蛋白或其片段且p表示1至12之數字；下標nn係1至5之數字；下標a'係0，且A'係不存在；P1、P2及P3各係胺基酸，其中：胺基酸P1、P2或P3之第一者係帶負電；胺基酸P1、P2或P3之第二者具有脂族側鏈，其疏水性不大於白胺酸；且胺基酸P1、P2或P3之第三者具有低於白胺酸之疏水性，其中胺基酸P1、P2或P3之第一者對應P1、P2或P3中任一者，胺基酸P1、P2或P3之第二者對應二個剩餘胺基酸P1、P2或P3之一者，且胺基酸P1、P2或P3之第三者對應最後一個剩餘胺基酸P1、P2或P3，惟-P3-P2-P1-不是-Glu-Val-Cit-或-Asp-Val-Cit-。在一些實施態樣中，下標nn係2。在一些實施態樣中，三肽之P3胺基酸係呈D-胺基酸組態；P2及P1胺基酸中一者具有疏水性低於白胺酸之脂族側鏈；且P2及P1胺基酸中另一者係帶負電。在一些實施態樣中，P3胺基酸係D-Leu或D-Ala。在一些實施態樣中，P3胺基酸係D-Leu或D-Ala，P2胺基酸係Ala、Glu或Asp，且P1胺基酸係Ala、Glu或Asp。在一些實施態樣中，-P3-P2-P1-係-D-Leu-Ala-Asp-、-D-Leu-Ala-Glu-、-D-Ala-Ala-Asp-或-D-Ala-Ala-Glu-。在一些實施態樣中，-P3-P2-P1-係-D-Leu-Ala-Glu-。
本發明亦提供一種抗體-藥物共軛體，其中抗體-藥物共軛體係由下式結構代表：
Figure 02_image005
或其醫藥上可接受之鹽，其中Ab係該抗原結合蛋白或其片段且p表示1至12之數字。
本發明亦提供一種核酸，其編碼本文所述之抗體之重鏈可變區及/或輕鏈可變區。本發明亦提供一種載體，其包含本文提供之核酸。在一些實施態樣中，載體係表現載體。本發明亦提供一種宿主細胞，其包含本文提供之核酸。在一些實施態樣中，宿主細胞係中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。
本發明亦提供一種生產本文提供之抗CD228抗體或抗原結合片段之方法，其包含在適用於生產該抗CD228抗體或其抗原結合片段之條件下培養本文提供之宿主細胞。
本發明亦提供一種生產本文提供之抗CD228抗體-藥物共軛體之方法，其包含在適用於生產抗CD228抗體之條件下培養本文提供之宿主細胞；單離該宿主細胞所生產之該抗CD228抗體；及將該抗CD228抗體與細胞毒性劑或細胞靜止劑共軛。
本發明亦提供一種治療個體的癌症之方法，該方法包含向該個體投予本文提供之抗體或抗原結合片段或本文提供之抗體-藥物共軛體。在一些實施態樣中，個體先前已經接受一或多種治療劑的治療且對該治療無反應，其中該一或多種治療劑不是抗體、抗原結合片段或抗體-藥物共軛體。在一些實施態樣中，個體先前已經接受一或多種治療劑的治療且在該治療之後復發，其中該一或多種治療劑不是抗體、抗原結合片段或抗體-藥物共軛體。在一些實施態樣中，個體先前已經接受一或多種治療劑的治療且在治療期間經歷疾病進展，其中該一或多種治療劑不是抗體、抗原結合片段或抗體-藥物共軛體。在一些實施態樣中，癌症係晚期癌症。在一些實施態樣中，晚期癌症係第3期或第4期癌症。在一些實施態樣中，晚期癌症係轉移性癌症。在一些實施態樣中，癌症係反覆性癌症。在一些實施態樣中，癌症係無法切除。在一些實施態樣中，個體曾接受癌症標準照護療法的先前治療且先前治療失敗。在一些實施態樣中，癌症係選自由黑色素瘤、胰臟癌、間皮瘤、結直腸癌、肺癌、甲狀腺癌、乳癌、膽管癌、食道癌及頭頸癌所組成之群組。在一些實施態樣中，癌症係黑色素瘤。在一些實施態樣中，黑色素瘤係皮膚黑色素瘤。在一些實施態樣中，皮膚黑色素瘤係選自由表淺擴散性黑色素瘤、結節性黑色素瘤、肢端小痣性黑色素瘤、小痣性惡性黑色素瘤及結締組織增生性黑色素瘤所組成之群組。在一些實施態樣中，肢端小痣性黑色素瘤係甲下黑色素瘤。在一些實施態樣中，個體曾接受PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑的先前療法。在一些實施態樣中，個體曾接受PD-1抑制劑的先前療法。在一些實施態樣中，黑色素瘤係皮膚下黑色素瘤。在一些實施態樣中，皮膚下黑色素瘤係眼黑色素瘤或黏膜黑色素瘤。在一些實施態樣中，黑色素瘤係非皮膚黑色素瘤。在一些實施態樣中，癌症係間皮瘤。在一些實施態樣中，間皮瘤係選自由胸膜間皮瘤、腹膜間皮瘤、心包膜間皮瘤及睪丸間皮瘤所組成之群組。在一些實施態樣中，間皮瘤係胸膜間皮瘤。在一些實施態樣中，個體已經接受基於鉑之療法的先前療法。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係順鉑(cisplatin)。在一些實施態樣中，個體曾接受培美曲塞(pemetrexed)的先前療法。在一些實施態樣中，肺癌係非小細胞肺癌。在一些實施態樣中，非小細胞肺癌具有突變形式之表皮生長因子受體(EGFR)。在一些實施態樣中，非小細胞肺癌具有野生型EGFR。在一些實施態樣中，個體已經接受基於鉑之療法的先前療法。在一些實施態樣中，個體曾接受PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑的先前療法。在一些實施態樣中，個體曾接受PD-1抑制劑的先前療法。在一些實施態樣中，乳癌係選自由HER2陽性、HER2陰性、***受體(ER)陽性、ER陰性、助孕素受體(PR)陽性、PR陰性及三陰性乳癌所組成之群組。在一些實施態樣中，乳癌係HER2陰性乳癌。在一些實施態樣中，個體曾接受HER2陰性乳癌的一或多種先前線上療法。在一些實施態樣中，一或多種先前線上療法包含紫杉烷(taxane)之治療。在一些實施態樣中，個體係荷爾蒙受體陽性。在一些實施態樣中，個體曾接受CDK4/6抑制劑的先前療法。在一些實施態樣中，個體曾接受荷爾蒙導向療法的先前療法。在一些實施態樣中，結直腸癌係選自由結直腸腺癌、胃腸道基質瘤、原發性結直腸淋巴瘤、胃腸道類癌腫瘤及平滑肌肉瘤所組成之群組。在一些實施態樣中，個體曾接受結直腸癌的二種或超過二種先前線上療法。在一些實施態樣中，胰臟癌係外分泌癌或神經內分泌癌。在一些實施態樣中，外分泌癌係選自由胰腺癌、腺泡細胞癌、囊腺癌、胰母細胞瘤、腺鱗癌、戒環細胞癌、肝樣癌、膠體癌、未分化癌及胰黏液性囊狀腫瘤所組成之群組。在一些實施態樣中，胰腺癌係胰管腺癌。在一些實施態樣中，個體曾接受胰臟癌的一或多種先前線上療法。在一些實施態樣中，抗體或抗原結合片段或抗體-藥物共軛體係於醫藥組成物中，該醫藥組成物包含該抗體或抗原結合片段或抗體-藥物共軛體及醫藥上可接受之載劑。在一些實施態樣中，個體係人類。
本發明亦提供一種套組，其包含：(a)本文提供之抗體或抗原結合片段或本文提供之抗體-藥物共軛體；及(b)根據本文提供之方法使用抗體或抗原結合片段或抗體-藥物共軛體的指示說明。
本發明亦提供一種醫藥組成物，其包含本文提供之抗體或抗原結合片段或本文提供之抗體-藥物共軛體及一或多種選自由生理上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑及助劑所組成之群組的藥劑。
I. 定義
為了可更清楚地瞭解本揭露，首先定義一些用語。如在本申請案中所使用，除了在本文中另外明示提供者，下列各用語應具有以下闡述之意義。額外定義闡述在整個申請案。
在本文中使用之用語「及/或」應被視為特定揭露二個指明特徵或組分之各者無論有或無另一者。因此，當使用於本文諸如「A及/或B」之用詞中，用語「及/或」係意圖包括「A及B」、「A或B」、「A」(單獨)及「B」(單獨)。同樣地，當使用於本文諸如「A、B及/或C」之用詞中，用語「及/或」係意圖包含下列態樣之各者：A、B及C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A(單獨)；B(單獨)；及C(單獨)。
應理解本文所述之本發明的態樣及實施態樣包括「包含(comprising)」、「組成(consisting)」及「基本上由組成(consisting essentially of)」態樣及實施態樣。
除非另行定義，此處所使用之所有技術及科學用語和本揭露相關技術領域中具有通常知識者所通常瞭解之意義相同。例如，Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press；The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press；及Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press提供所屬技術領域中具有通常知識者本揭露所使用之許多用語的一般字典。
單位、前綴及符號表示為彼等之國際單位制(SI)接受形式。數值範圍包含界定該範圍之數值。在本文中提供之標題不是本揭露之各種態樣的限制，其可參照說明書作為整體提供。因此，其下定義之用語參照說明書整體將更完整定義。
用語「CD228」、「p97」、「黑色素轉鐵蛋白」、「MELTF」及「MF12」在本文中可互換使用，且除非另外指明，包括通常由細胞表現或表現在經CD228基因轉染之細胞上的人CD228之任何變體、異構體及物種同源物。
用語「免疫球蛋白(immunoglobulin)」係指一類結構相關的糖蛋白，該等糖蛋白係由二對多肽鏈所組成，即一對低分子量輕(L)鏈及一對重(H)鏈，所有四個鏈藉由雙硫鍵互相連接。免疫球蛋白之結構已有詳細介紹。見例如Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N. Y. (1989))。簡言之，各重鏈一般包含重鏈可變區(在本文中縮寫為V H或VH)及重鏈恆定區(C H或CH)。重鏈恆定區一般包含三個結構域C H1、C H2及C H3。重鏈通常在所謂的「鉸鏈區」經由雙硫鍵互相連接。各輕鏈一般包含輕鏈可變區(在本文中縮寫為V L或VL)及輕鏈恆定區(C L或CL)。輕鏈恆定區一般包含一個結構域C L。CL可為κ(kappa)或λ(lamba)同型。用語「恆定結構域」及「恆定區」在本文中可互相交換使用。免疫球蛋白可衍生自任何公知同型，包括但不限於IgA、分泌性IgA、IgG及IgM。IgG亞型亦為所屬技術領域中具有通常知識者所廣為周知及包括但不限於人IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。「同型」係指由重鏈恆定區基因所編碼之抗體類型或亞型(例如，IgM或IgG1)。
用語「可變區(variable region)」或「可變結構域(variable domain)」係指涉及抗體與抗原結合之抗體重鏈或輕鏈的結構域。天然抗體之重鏈及輕鏈的可變區(分別為V H及V L)可進一步細分成穿插於較為保守的區域(稱為架構區(FR))之間的超變異性區域(或超變異區，其在結構定義圈環之序列及/或形式上可為超變異)，又稱為互補決定區(CDR)。用語「互補決定區(complementarity determining region)」及「CDR」與「超變異區(hypervariable region)」或「HVR」同義，係所屬技術領域中已知且係指抗體可變區內授予抗原特異性及/或結合親和性之非毗連胺基酸序列。一般來說，每個重鏈可變區中有三個CDR(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)及每個輕鏈可變區中有三個CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。「架構區(Framework region)」及「FR」係所屬技術領域中已知，係指重鏈及輕鏈可變區的非CDR部分。一般來說，每個全長重鏈可變區中有四個FR(FR-H1、FR-H2、FR-H3及FR-H4)及每個全長輕鏈可變區中有四個FR(FR-L1、FR-L2、FR-L3及FR-L4)。在各V H及V L中，三個CDR及四個FR通常以下列順序自胺基端至羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4(亦見Chothia and Lesk J. Mot. Biol., 195, 901-917 (1987))。
在本發明之情況中的用語「抗體(antibody)」(Ab)係指免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子之片段或彼等任一之衍生物，其具有在典型生理條件下以顯著期間之半衰期與抗原特異性結合之能力，該半衰期諸如至少約30 min、至少約45 min、至少約一小時(h)、至少約二小時、至少約四小時、至少約八小時、至少約12小時(h)、約24小時或多於24小時、約48小時或多於48小時、約三、四、五、六、七或多於七天等或任何其他相關的功能定義期間(諸如足以誘導、促進、增強及/或調節與抗體結合抗原相關之生理反應的時間及/或足以供抗體招募效應物活性的時間)。免疫球蛋白分子之重鏈及輕鏈之可變區包含與抗原交互作用之結合結構域。抗體(Ab)之恆定區可媒介免疫球蛋白與宿主組織或因子之結合，包括免疫系統之各種細胞(例如效應細胞)及補體系統之組分諸如C1q(補體活化典型途徑中之第一組分)。抗體亦可為雙特異性抗體、雙體抗體、多特異性抗體或類似分子。
本文中使用之用語「單株抗體(monoclonal antibody)」係指以單一一級胺基酸序列重組產生之抗體分子的製劑。單株抗體組成物展示對特定表位之單一結合特異性及親和性。因此，用語「人單株抗體」係指顯示單一結合特異性之抗體，其具有衍生自人種系免疫球蛋白序列之可變及恆定區。人單株抗體可藉由包括B細胞之融合瘤產製，該B細胞獲自具有包含人重鏈轉殖基因及輕鏈轉殖基因之基因體的基因轉殖或染色體轉殖非人動物(諸如基因轉殖小鼠)並融合至永生化細胞。
「經單離之抗體(isolated antibody)」係指實質上不含其他具有不同抗原特異性之抗體的抗體(例如與CD228特異性結合之經單離之抗體實質上不含與CD228以外之抗原特異性結合之抗體)。然而，與CD228特異性結合之經單離之抗體可具有對其他抗原(諸如不同物種之CD228分子)之交叉反應性。此外，經單離之抗體可實質上不含其他細胞材料及/或化學物。在一實施態樣中，經單離之抗體包括與另一藥劑(例如小分子藥物)附接之抗體共軛體。在一些實施態樣中，經單離之抗CD228抗體包括抗CD228抗體與小分子藥物(例如MMAE或MMAF)之共軛體。
「人抗體(human antibody)」(HuMAb)係指具有可變區且其中的FR及CDR皆源自人種系免疫球蛋白序列之抗體。另外，如果抗體含有恆定區，該恆定區亦衍生自人種系免疫球蛋白序列。本發明之人抗體可包括非由人種系免疫球蛋白序列所編碼之胺基酸殘基(例如藉由活體外隨機或定點突變形成或藉由活體內體突變導入之突變)。然而，如本文中所使用之用語「人抗體(human antibody)」無意包括其中衍生自另一哺乳動物物種(諸如小鼠)之種系的CDR序列被移植至人架構序列之抗體。用語「人抗體」及「全人抗體(fully human antibody)」係同義使用。
如本文中所使用之用語「人化抗體(humanized antibody)」係指經基因工程改造之非人抗體，其含有人抗體恆定結構域及經修飾以含有與人可變結構域具有高度序列同源性之非人可變結構域。此可藉由將六個一起形成抗原結合部位之非人抗體互補決定區(CDR)移植至同源人受體架構區(FR)上達成(見WO92/22653及EP0629240)。為了完全重構親代抗體的結合親和性及特異性，可能需要將來自親代抗體(即非人抗體)的架構殘基取代成人架構區(回復突變)。結構同源性模型構建可能有助於識別架構區中對於抗體的結合性質為重要的胺基酸殘基。因此，人化抗體可包含非人CDR序列、主要是人架構區(可選地包含一或多個胺基酸回復突變成非人胺基酸序列)及全人恆定區。可選地，可施用額外的胺基酸修飾(不一定是回復突變)以獲得具有較佳特徵(諸如親和性及生化性質)之人化抗體。
如本文中所使用之用語「嵌合抗體(chimeric antibody)」係指其中可變區衍生自非人物種(例如衍生自齧齒動物)且恆定區衍生自不同物種(諸如人)之抗體。嵌合抗體可藉由抗體工程改造來產製。「抗體工程改造(Antibody engineering)」係一通俗使用於不同種類的抗體修飾的用語，且其係技藝人士廣為周知之過程。具體而言，嵌合抗體可使用如Sambrook et al., 1989, Molecular Cloning: A laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, Ch. 15所述之標準DNA技術產製。因此，嵌合抗體可為經基因或經酶催化工程改造之重組抗體。產製嵌合抗體係技藝人士之知識範圍以內，因此產製根據本發明之嵌合抗體可藉由非本文所述之其他方法實施。開發用於治療應用之嵌合單株抗體是為了減少抗體免疫原性。彼等一般可含有非人(例如鼠)可變區(對受到關注之抗原具特異性)及人恆定抗體重鏈及輕鏈結構域。用於嵌合抗體之情況中的用語「可變區(variable region)」或「可變結構域(variable domain)」係指包含免疫球蛋白之重鏈及輕鏈兩者的CDR及架構區之區域。
「抗-抗原抗體(anti-antigen antibody)」係指與抗原結合之抗體。例如，抗CD228抗體係與抗原CD228結合之抗體。
抗體之「抗原結合部分(antigen-binding portion)」或「抗原結合片段(antigen-binding fragment)」係指抗體之一或多個片段，該一或多個片段保留完整抗體與抗原特異性結合的結合能力。抗體片段(例如抗原結合片段)的實例包括但不限於Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab') 2；雙價抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv)；及由抗體片段所形成的多特異性抗體。以木瓜酶消化抗體產生二個相同的各具有單一抗原結合部位的抗原結合片段(稱為「Fab」片段)及一個殘餘的「Fc」片段(其名稱反映其容易結晶之能力)。胃蛋白酶處理產生具有二個抗原結合部位且仍能夠與抗原交聯的F(ab') 2片段。
相對於參考多肽序列的「序列同一性百分比(Percent (%) sequence identity)」係定義為在排比序列及導入空位(若需要)以達成最大序列同一性百分比，且不考慮任何保守性取代作為序列同一性之一部分之後，候選序列中與參考多肽序列中之胺基酸殘基相同的胺基酸殘基之百分比。為達判定胺基酸序列同一性百分比目的之排比可以所屬技術領域中之各種方式達成，例如使用提供給大眾的電腦軟體諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟體。所屬技術領域中具有通常知識者可判定排比序列之適當參數，包括要達成比較序列全長的最大排比所需的任何演算法。例如，給定胺基酸序列A與、和或相對於給定胺基酸序列B之序列同一性%(可替代地措辭為與、和或相對於給定胺基酸序列B具有或包含特定序列同一性%之給定胺基酸序列A)計算如下： 100乘以分數X/Y 其中X係在A與B之程式排比中由序列評分為同一性匹配之胺基酸殘基數，且其中Y係B中胺基酸殘基之總數。將瞭解，若胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度，則A相對於B之序列同一性%將不等於B相對於A之序列同一性%。
如本文中所使用，用語「結合(binding、binds)」或「特異性結合(specifically binds)」在抗體與預定抗原結合之情況中通常係具有對應當藉由例如生物膜干涉術(BLI)技術於Octet HTX儀器中使用抗體作為配體及抗原作為分析物所判定約10 -6M或更小、例如10 -7M或更小、諸如約10 -8M或更小、諸如約10 -9M或更小、約10 -10M或更小或約10 -11M或甚至更小之K D之親和性的結合，且其中該抗體與預定抗原結合之親和性所對應之K D相較於其與除了預定抗原或密切相關抗原以外之非特異性抗原(例如BSA、酪蛋白)結合之K D至少十倍較低、諸如至少100倍較低、例如至少1,000倍較低、諸如至少10,000倍較低、例如至少100,000倍較低。結合之K D所降低的量取決於抗體的K D，因此當抗體的K D非常低時，與抗原結合之K D低於與非特異性抗原結合之K D的量可為至少10,000倍(也就是抗體具高度特異性)。
此處所使用之用語「K D」(M)係指特定抗體抗原交互作用之解離平衡常數。親和性(如本文中所使用)及K D係呈倒數相關，也就是說較高親和性意指較低K D而較低親和性意指較高K D。
用語「ADC」係指抗體-藥物共軛體，該用語在本發明之情況中係指與如本申請案所述之藥物部份(moiety)(例如MMAE或MMAF)偶合之抗CD228抗體。
縮寫「vc」及「val-cit」係指雙肽纈胺酸-瓜胺酸。
縮寫「PAB」係指自毀型間隔子：
Figure 02_image007
縮寫「MC」係指延伸子順丁烯二醯亞胺基己醯基：
Figure 02_image009
縮寫「MP」係指延伸子順丁烯二醯亞胺基丙醯基：
Figure 02_image011
「癌症(Cancer)」係指一群廣泛的各種疾病，其特徵在於身體中異常細胞的不受控制生長。「癌症(cancer)」或「癌症組織(cancer tissue)」可包括腫瘤。未經調節之細胞***及生長導致侵犯鄰近組織的惡性腫瘤形成且亦可經由淋巴系統或血流轉移至身體的遠距部分。在轉移之後，可稱遠端腫瘤為「衍生自(derived from)」轉移前腫瘤。
用語「抗體依賴性細胞性細胞毒性」或ADCC係一種用於誘導細胞死亡之機轉，該機轉取決於經抗體包覆之目標細胞與具有溶解活性之免疫細胞(亦稱為效應細胞)的交互作用。此類效應細胞包括自然殺手細胞、單核球/巨噬細胞及嗜中性球。效應細胞附接至Ig之Fc效應結構域，該Ig經由彼等之抗原組合部位與目標細胞結合。經抗體包覆之目標細胞的死亡因為效應細胞活性而發生。
用語「抗體依賴性細胞性吞噬作用」或ADCP係指經抗體包覆之細胞被與Ig之Fc效應結構域結合之吞噬細胞性免疫細胞(例如巨噬細胞、嗜中性球及樹突細胞)內化(不論整體或部分)之過程。
用語「補體依賴性細胞毒性」或「CDC」係指一種誘導細胞死亡之機轉，其中目標結合抗體之Fc效應結構域活化一系列酶反應，最終在目標細胞膜上形成孔。一般而言，抗原-抗體複合體(諸如該些在抗體包覆目標細胞上之抗原-抗體複合體)結合並活化補體組分Clq，其進而活化導致目標細胞死亡之補體級聯。補體之活化亦可導致補體組分沉積在目標細胞表面上，其藉由結合白血球上之補體受體(例如CR3)而促進ADCC。
「細胞靜止效應」係指抑制細胞增生。「細胞靜止劑」係指對細胞具有細胞靜止效應之劑，藉以抑制特定細胞亞群之生長及/或擴張。細胞靜止劑可與抗體共軛或與抗體組合投予。
個體的「治療(Treatment)」或「療法(therapy)」係指出於反轉、減輕、改善、抑制、延緩或預防與疾病相關之症狀、併發症、病況或生化徵象的開始、進展、發展、嚴重性或復發性之目的而在個體執行的任何類型的介入或過程或向個體投予活性劑。在一些實施態樣中，該疾病係癌症。
「個體(subject)」包括任何人類或非人動物。用語「非人動物(non-human animal)」包括但不限於脊椎動物諸如非人靈長動物、綿羊、犬及齧齒動物諸如小鼠、大鼠及天竺鼠。在一些實施態樣中，個體係人類。用語「個體(subject)」及「患者(patient)」及「個體(individual)」在本文中可以互換使用。
藥物或治療劑的「有效量(effective amount)」或「治療有效量(therapeutically effective amount)」或「治療有效劑量(therapeutically effective dosage)」係指當單獨使用或與另一治療劑組合使用時，如降低疾病症狀的嚴重性、增加疾病無症狀期的頻率及持續時間或預防因為罹患疾病造成之障礙或失能所示之保護個體防止疾病開始或促進疾病消退之任何量的藥物。治療劑促進疾病消退之能力可使用技藝人士已知之多種方法在諸如臨床試驗期間在人受試者中、在預測人療效之動物模型系統中或藉由測定藥劑在體外測定之活性來評估。
以腫瘤治療為例，治療有效量之抗癌劑在經治療的個體中(例如，一或多位經治療的個體)相對於未經治療的個體(例如，一或多位未治療的個體)抑制至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、或至少約80%、至少約90%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%或至少約99%的細胞生長或腫瘤生長。在一些實施態樣中，治療有效量之抗癌劑在經治療的個體中(例如，一或多位經治療的個體)相對於未經治療的個體(例如，一或多位未治療的個體)抑制100%的細胞生長或腫瘤生長。
在本揭露之其他實施態樣中，腫瘤消退可觀察及持續一段至少約20天、至少約30天、至少約40天、至少約50天或至少約60天的期間。
治療有效量之藥物(例如抗CD228抗體或其抗原結合片段或抗CD228抗體-藥物共軛體)包括「預防有效量(prophylactically effective amount)」，預防有效量係指當單獨或與抗癌劑組合投予至具有發展癌症風險之個體(例如具有惡性前病況之個體)或具有癌症復發風險之個體時抑制癌症發展或復發之任何量的藥物。在一些實施態樣中，預防有效量完全預防癌症發展或復發。「抑制(Inhibiting)」癌症的發展或復發是指減少癌症發展或復發的可能性或完全預防癌症的發展或復發。
如本文中所使用，「亞治療劑量(subtherapeutic dose)」是指治療性化合物(例如抗CD228抗體或其抗原結合片段或抗CD228抗體-藥物共軛體)的劑量低於該治療性化合物單獨投予用於治療過度增生性疾病(例如癌症)時的平常或典型劑量。
「免疫相關反應模式(immune-related response pattern)」係指通常在經藉由誘導癌症特異性免疫反應或藉由調節天然免疫過程來產生抗腫瘤效應之免疫治療劑治療的癌症患者中觀察到的臨床反應模式。此反應模式的特徵為在初始腫瘤負荷增加或出現新病灶之後的有益治療效應，在傳統化學治療劑的評估中，此反應模式將被歸類為疾病進展且將與藥物失敗同義。因此，免疫治療劑的適當評估需要長期監測這些藥劑對於目標疾病的效應。
舉例來說，「抗癌劑(anti-cancer agent)」促進個體的癌症消退。在一些實施態樣中，治療有效量之藥物促進癌症消退至清除癌症的程度。「促進癌症消退(Promoting cancer regression)」是指單獨或與抗癌劑組合投予有效量的藥物導致腫瘤生長或大小減少、腫瘤壞死、至少一個疾病症狀的嚴重性降低、增加無疾病症狀期的頻率及持續時間或預防因為罹患疾病造成之障礙或失能。此外，有關治療之用語「有效(effective)」及「有效性(effectiveness)」包括藥理有效性及生理安全性。藥理有效性係指藥物促進患者癌症消退的能力。生理安全性係指投予藥物所導致之細胞性、器官及/或有機體層級上的毒性水準或其他不良生理效應(不良效應)。
「持續反應(Sustained response)」係指停止治療後減少腫瘤生長的持續效應。例如，腫瘤大小相較於投予期開始時的大小可維持相同或較小。在一些實施態樣中，持續反應具有與治療期間至少相同的期間或比治療期間長至少1.5、2.0、2.5或3倍。
如本文中所使用，「完全反應(complete response)」或「CR」係指所有目標病灶消失；「部分反應(partial response)」或「PR」係指目標病灶的最長直徑總和(SLD)參照基線SLD降低至少30%；及「穩定疾病」或「SD」係指參照自從治療開始的最小SLD，目標病灶的縮小不足以符合PR，增加也不足以符合PD。
如本文中所使用的「無進展存活期(progression free survival)」或「PFS」係指在治療期間及治療後所治療之疾病(例如癌症)沒有惡化的時間長度。無進展存活期可包括患者經歷完全反應或部分反應之時間的量以及患者經歷穩定疾病之時間的量。
如本文中所使用，「整體反應率(overall response rate)」或「ORR」係指完全反應(CR)率及部分反應(PR)率之總和。
如本文中所使用，「整體存活期(overall survival)」或「OS」係指一群個體中在特定時間期間之後可能活著的百分比。
用語「醫藥上可接受(pharmaceutically acceptable)」指示物質或組成物在化學及/或毒理學上必須與構成調配物之其他成分及/或其所治療之哺乳動物相容。
如本文中所使用之用語「醫藥上可接受之鹽(pharmaceutically acceptable salt)」係指本發明之化合物的醫藥上可接受之有機或無機鹽。例示性鹽包括但不限於硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乳酸鹽、柳酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、鞣酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、順丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽(gentisinate)、反丁烯二酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、蔗糖酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲烷磺酸鹽「甲磺酸鹽」、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、雙羥萘酸鹽(即，4,4'-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘酸鹽))、鹼金屬(例如，鈉及鉀)鹽、鹼土金屬(例如，鎂)鹽及銨鹽。醫藥上可接受之鹽可涉及包括另一分子，諸如乙酸根離子、琥珀酸根離子或其他相對離子。該相對離子可為使母體化合物上之電荷穩定的任何有機或無機部份。另外，醫藥上可接受之鹽的結構中可具有超過一個帶電原子。多個帶電原子係該醫藥上可接受之鹽的一部分的情況可具有多重相對離子。因此，醫藥上可接受之鹽可具有一或多個帶電原子及/或一或多個相對離子。
「投予(Administering或administration)」係指使用所屬技術領域中具有通常知識者已知之任何各種方法及遞送系統將治療劑物理導入至個體。抗CD228抗體-藥物共軛體之例示性投予途徑包括靜脈內、肌肉內、皮下、腹膜內、脊椎或其他例如藉由注射或輸注之腸胃外投予途徑(例如靜脈輸注)。如本文中所使用之用語「腸胃外投予(parenteral administration)」係指除經腸及局部投予以外之通常藉由注射之投予模式，包括但不限於靜脈內、肌肉內、動脈內、脊椎鞘內、淋巴內、病灶內、囊內、眼眶內、心內、皮內、腹膜內、經氣管、皮下、表皮下、關節內、囊下、蛛網膜下腔、脊椎內、硬膜外及胸骨內注射及輸注，以及活體內電穿孔。治療劑可經由非腸胃外途徑或口服投予。其他非腸胃外途徑包括局部、表皮或黏膜投予途徑，例如鼻內、經***、經直腸、舌下或局部。投予亦可執行例如一次、複數次及/或在一或多個延長的期間內執行。
在本文中可互換使用之用語「基線(baseline)」或「基線值(baseline value)」可指投予療法(例如，如本文所述之抗CD228抗體-藥物共軛體)之前或開始投予療法時症狀的測量值或表徵。基線值可與參考值比較以判定在本文中考慮之CD228相關疾病(例如癌症)的症狀之減少或改善。在本文中可互換使用之用語「參考(reference)」或「參考值(reference value)」可指投予療法(例如，如所述之抗CD228抗體-藥物共軛體)之後症狀的測量值或表徵。參考值可在給藥方案或治療週期期間或完成給藥方案或治療週期時測量一或多次。「參考值」可為絕對值；相對值；具有上限及/或下限之值；一範圍的值；平均值(average value)；中位數值；平均值(mean value)；或相較於基線值之值。
類似地，「基線值」可為絕對值；相對值；具有上限及/或下限之值；一範圍的值；平均值；中位數值；平均值；或相較於參考值之值。參考值及/或基線值可獲自一名個體、兩名不同個體或一群個體(例如，一群二、三、四、五或超過五名個體)。
如本文中所使用之用語「單一療法(monotherapy)」是指抗CD228抗體或其抗原結合片段或抗CD228抗體-藥物共軛體是在治療週期期間唯一向個體投予的抗癌劑。然而，可向個體投予其他治療劑。例如，向患有癌症之個體投予以治療與癌症相關但非實際癌症本身的症狀(包括例如發炎、疼痛、體重減輕及全身不適)的抗發炎劑或其他劑可在單一療法期間投予。
如本文中所使用之「不良事件(adverse event, AE)」係與醫學治療的使用相關之任何不利及通常非意圖或非所欲徵候(包括異常實驗室結果)、症狀或疾病。醫學治療可具有一或多個相關AE且各AE可具有相同或不同程度的嚴重性。提及能夠「改變不良事件(altering adverse events)」之方法是指一治療方案降低與使用不同治療方案相關之一或多個AE的發生率及/或嚴重性。
如本文中所使用之「嚴重不良事件(serious adverse event)」或「SAE」係符合下列標準之一的不良事件： • 致死或危及生命(在嚴重不良事件之定義中所使用的「危及生命(life-threatening)」係指患者在事件發生時有死亡風險的事件；不是指如果更為嚴重理論上可能造成死亡的事件。 • 導致持續或顯著失能/無能力 • 造成先天異常/先天缺陷 • 具醫學顯著性，即定義為危害患者或可能需要醫學或手術介入以防止上列結果之一的事件。必須進行醫學及科學判斷以決定AE是否具「醫學顯著性」 • 需要住院或延長目前的住院或，但排除下列：1)非與任何病況惡化相關的例行治療或監測實際疾病；2)與研究適應症不相關且在簽署知情同意書之後未惡化之既有病況的選擇性或預先計畫的治療；及3)在患者整體病況沒有任何惡化下的社會原因及喘息照顧。
使用替代物(例如，「或」)應理解為表示替代物之任一者、兩者或彼等之任何組合。如本文中所使用之不定冠詞「一(a或an)」應理解為指稱「一或多個」所引述或列舉之任何組分。
用語「約(about)」或「基本上包含(comprising essentially of)」係指在如所屬技術領域中具有通常知識者所判定之特定值或組成的可接受誤差範圍內，該可接受誤差範圍將部分取決於該值或組成是如何測量或判定的，即測量系統的限制。例如，「約」或「基本上包含」根據所屬技術領域之實務可指在1個標準差之內或超過1個標準差。替代地，「約」或「基本上包含」可指至多20%的範圍。另外，特別是關於生物系統或過程，該用語可指至多一個量級或至多5倍的值。當本申請案及請求項提供特定值或組成時，除非另行說明，否則「約」或「基本上包含」的意義應被假設為在該特定值或組成之可接受誤差範圍內。
在本文中指涉「約」某數值或參數時，其包括(且描述)與該數值或參數本身相關之實施態樣。舉例來說，提及「約X」之用語包括「X」之用語。
如本文所述，任何濃度範圍、百分比範圍、比例範圍或整數範圍應理解為包括所引述之範圍內的任何整數及(若適當)其分數(諸如整數的十分之一及百分之一)之值，除非另行指示。
本揭露之各種態樣係於下列子節進一步詳細描述。 II. 一般性
本發明提供與CD228特異性結合之抗體。已顯示CD228表現在多種癌症，包括黑色素瘤、甲狀腺癌、肺癌、肝癌、胰臟癌、頭頸癌、胃癌、結直腸癌、尿路癌、乳癌及子宮頸癌。 III. 目標分子
除非另外說明，否則CD228係指人CD228。例示性人蛋白序列指派為UniProt識別號P08582。 IV. 本發明之抗體
本發明提供衍生自人化抗體hL49之抗體(諸如人化抗體)。hL49係衍生自小鼠抗體L49。L49係針對CD228之鼠免疫球蛋白G1 (IgG1)單株抗體，其係衍生自經肺癌及黑色素瘤細胞系免疫之Balb/c小鼠(Siemers et al., 1997, Bioconjug. Chem. 8:510-9)。抗體hL49(亦稱為hL49 HALC)係描述於PCT/US2020/016381及美國專利申請案號16/780,711(彼等全文以引用方式併入本文中)。本發明提供其中hL49之輕鏈CDR的一或多個組胺酸殘基經不同胺基酸取代之抗體。在一些實施態樣中，hL49之輕鏈CDR的一個組胺酸殘基經不同胺基酸取代。在一些實施態樣中，hL49之輕鏈CDR的二個組胺酸殘基經不同胺基酸取代。在一些實施態樣中，hL49之輕鏈CDR的所有三個組胺酸殘基經不同胺基酸取代。在一些實施態樣中，本發明提供相較於hL49改善性質之抗體。在一些實施態樣中，本發明提供相較於hL49以較強親和力與CD228結合之抗體。在一些實施態樣中，本發明提供相較於hL49具有較高細胞毒性之抗體。在一些實施態樣中，本發明提供相較於hL49具有較快結合締合速率之抗體。在一些實施態樣中，本發明提供相較於hL49具有較快結合解離速率之抗體。在一些實施態樣中，本發明提供相較於hL49具有較慢結合締合速率之抗體。在一些實施態樣中，本發明提供相較於hL49具有較慢結合解離速率之抗體。在一些實施態樣中，本發明提供比起hL49更快被細胞內化之抗體。在一些實施態樣中，本發明提供比起hL49更高程度被細胞內化之抗體。
抗體hL49包含重鏈CDR序列，該重鏈CDR序列包含下列：
Figure 02_image013
Figure 02_image015
抗體hL49包含輕鏈CDR序列，該輕鏈CDR序列包含下列：
Figure 02_image017
抗體hL49包含
Figure 02_image019
Figure 02_image021
之重鏈可變區序列及
Figure 02_image023
Figure 02_image025
之輕鏈可變區序列。
本發明之較佳抗體抑制癌症(例如細胞生長、轉移及/或對有機體之致死性)，如在培養中增殖之癌性細胞、在動物模型或臨床試驗中所示。動物模型可藉由將CD228表現性人腫瘤細胞系植入適當之免疫缺陷鼠品系中形成，例如無胸腺裸鼠或SCID小鼠。這些腫瘤細胞系可藉由皮下注射為實質腫瘤或藉由靜脈注射為散播型腫瘤於免疫缺陷鼠宿主建立。
一旦在宿主體內建立後，這些腫瘤模型可被用於評估該抗CD228抗體或彼等之共軛形式之治療療效，如實施態樣中所述。
大致上，本揭露之抗CD228抗體及/或抗CD228抗體-藥物共軛體與CD228(例如人CD228)結合，且對惡性細胞(諸如癌細胞)發揮細胞靜止及細胞毒性效應。本揭露之抗CD228抗體較佳地係單株且可為多特異性、人、人化或嵌合抗體、單鏈抗體、Fab片段、F(ab')片段、由Fab表現庫產生之片段及上述任一者的CD228結合片段。在一些實施態樣中，本揭露之抗CD228抗體與CD228特異性結合。本揭露之免疫球蛋白分子可為任何種類(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、類型(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或亞型的免疫球蛋白分子。
在本揭露之某些實施態樣中，抗CD228抗體係如本文所述之抗原結合片段(例如，人抗原結合片段)且包括但不限於Fab、Fab'及F(ab') 2、Fd、單鏈Fv (scFv)、單鏈抗體、雙硫鍵連接之Fv (sdFv)及包含V L或V H結構域之片段。抗原結合片段(包括單鏈抗體)可包含單獨的或與下列全部或一部分組合的可變區：鉸鏈區、CH1、CH2、CH3及CL結構域。本揭露亦包括包含可變區與鉸鏈區、CH1、CH2、CH3及CL結構域之任何組合的抗原結合片段。在一些實施態樣中，抗CD228抗體或其抗原結合片段係人、鼠(例如小鼠及大鼠)、驢、綿羊、兔、山羊、天竺鼠、駱駝、馬或雞。
本揭露之抗CD228抗體可為單特異性、雙特異性、三特異性或高於三的多特異性。多特異性抗體可對CD228的不同表位具特異性或可對CD228以及異源性蛋白質具特異性。見例如PCT公開案WO 93/17715；WO 92/08802；WO 91/00360；WO 92/05793；Tutt, et al., 1991, J. Immunol. 147:60 69；美國專利號4,474,893；4,714,681；4,925,648；5,573,920；5,601,819；Kostelny et al., 1992, J. Immunol. 148:1547 1553。
本揭露之抗CD228抗體可就它們所包含的具體CDR方面描述或指明。給定CDR或FR之精確胺基酸序列邊界可使用一些廣為周知的任一方案輕易判定，包括該些如下所述者：Kabat et al.(1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD(「Kabat」編號方案)；Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 (「Chothia」編號方案)；MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996), “Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography,” J. Mol. Biol. 262, 732-745.”(「Contact」編號方案)；Lefranc MP et al., “IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,” Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77 (「IMGT」編號方案)；Honegger A and Plückthun A, “Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool,” J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70(「Aho」編號方案)；及Martin et al., “Modeling antibody hypervariable loops: a combined algorithm,” PNAS, 1989, 86(23):9268-9272 (「AbM」編號方案)。給定CDR之邊界可取決於用於識別之方案而變化。在一些實施態樣中，給定抗體或其區域(例如其可變區)的「CDR」或「互補決定區(complementarity determining region)」或個別指明之CDR (例如CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)應理解為涵蓋前述任一方案所定義的(特定)CDR。例如，當說明具體CDR(例如CDR-H3)含有給定V H或V L區胺基酸序列中對應CDR之胺基酸序列時，應理解該CDR具有可變區內如前述任一方案所定義之對應CDR(例如CDR-H3)之序列。可指明識別具體CDR或CDR之方案，諸如藉由Kabat、Chothia、AbM或IMGT方法所定義之CDR。
本文所述之抗CD228抗體及抗CD228抗體-藥物共軛體之CDR序列係根據描述於Kabat et al.(1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD中之Kabat編號方案。
本文所述之抗CD228抗體可包含任何合適架構可變結構域序列，前提是抗體保留與CD228(例如人CD228)結合的能力。如本文中所使用，重鏈架構區被定名為「HC-FR1-FR4」且輕鏈架構區被定名為「LC-FR1-FR4」。在一些實施態樣中，抗CD228抗體包含SEQ ID NO:33、34、35及36的重鏈可變結構域架構序列(分別為HC-FR1、HC-FR2、HC-FR3及HC-FR4)。在一些實施態樣中，抗CD228抗體包含SEQ ID NO:37、38、39及40的輕鏈可變結構域架構序列(分別為LC-FR1、LC-FR2、LC-FR3及LC-FR4)。
在一些實施態樣中，本文提供抗CD228抗體，其包含重鏈可變結構域，該重鏈可變結構域包含與SEQ ID NO:7之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列。在一些實施態樣中，重鏈可變結構域之N端麩醯胺酸係經環化以形成焦麩胺酸。在某些實施態樣中，包含與SEQ ID NO:7之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列的重鏈可變結構域相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、***或刪除且保留與CD228(例如人CD228)結合之能力。在某些實施態樣中，SEQ ID NO:7中總共1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。在某些實施態樣中，取代、***或刪除(例如1、2、3、4或5個胺基酸)發生在CDR以外的區域(即在FR中)。在一些實施態樣中，抗CD228抗體包含SEQ ID NO:7的重鏈可變結構域序列，包括該序列的轉譯後修飾。在一些實施態樣中，重鏈可變結構域之N端麩醯胺酸係經環化以形成焦麩胺酸。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗CD228抗體，其中該重鏈可變區包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列、(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列、及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且/或其中該輕鏈可變區包含：(i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列、(ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列、及(iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列，其中抗CD228抗體之CDR係由Kabat編號方案定義。
在一些實施態樣中，本文提供抗CD228抗體及/或抗CD228抗體-藥物共軛體，其包含輕鏈可變結構域，該結構域包含與SEQ ID NO:21之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列。在某些實施態樣中，包含與SEQ ID NO:21之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列的輕鏈可變結構域相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、***或刪除且保留與CD228 (例如人CD228)結合之能力。在某些實施態樣中，SEQ ID NO:21中總共1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。在某些實施態樣中，取代、***或刪除(例如1、2、3、4或5個胺基酸)發生在CDR以外的區域(即在FR中)。在一些實施態樣中，抗CD228抗體包含SEQ ID NO:21的輕鏈可變結構域序列，包括該序列的轉譯後修飾。在一具體實施態樣中，輕鏈可變結構域包含選自下列之一、二或三個CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列、(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變結構域及包含輕鏈可變結構域之抗CD228抗體，該重鏈可變結構域包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列，且該輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列。在一些實施態樣中，重鏈可變結構域之N端麩醯胺酸係經環化以形成焦麩胺酸。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗CD228抗體，其中該重鏈可變區包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列、(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列、及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且/或其中該輕鏈可變區包含：(i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列、(ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列、及(iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列，其中抗CD228抗體之CDR係由Kabat編號方案定義。
在一些實施態樣中，本文提供抗CD228抗體及/或抗CD228抗體-藥物共軛體，其包含輕鏈可變結構域，該結構域包含與SEQ ID NO:22之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列。在某些實施態樣中，包含與SEQ ID NO:22之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列的輕鏈可變結構域相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、***或刪除且保留與CD228 (例如人CD228)結合之能力。在某些實施態樣中，SEQ ID NO:22中總共1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。在某些實施態樣中，取代、***或刪除(例如1、2、3、4或5個胺基酸)發生在CDR以外的區域(即在FR中)。在一些實施態樣中，抗CD228抗體包含SEQ ID NO:22的輕鏈可變結構域序列，包括該序列的轉譯後修飾。在一具體實施態樣中，輕鏈可變結構域包含選自下列之一、二或三個CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列、(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變結構域及包含輕鏈可變結構域之抗CD228抗體，該重鏈可變結構域包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列，且該輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列。在一些實施態樣中，重鏈可變結構域之N端麩醯胺酸係經環化以形成焦麩胺酸。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗CD228抗體，其中該重鏈可變區包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列、(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列、及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且/或其中該輕鏈可變區包含：(i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列、(ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列、及(iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列，其中抗CD228抗體之CDR係由Kabat編號方案定義。
在一些實施態樣中，本文提供抗CD228抗體及/或抗CD228抗體-藥物共軛體，其包含輕鏈可變結構域，該結構域包含與SEQ ID NO:23之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列。在某些實施態樣中，包含與SEQ ID NO:23之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列的輕鏈可變結構域相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、***或刪除且保留與CD228 (例如人CD228)結合之能力。在某些實施態樣中，SEQ ID NO:23中總共1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。在某些實施態樣中，取代、***或刪除(例如1、2、3、4或5個胺基酸)發生在CDR以外的區域(即在FR中)。在一些實施態樣中，抗CD228抗體包含SEQ ID NO:23的輕鏈可變結構域序列，包括該序列的轉譯後修飾。在一具體實施態樣中，輕鏈可變結構域包含選自下列之一、二或三個CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列、(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變結構域及包含輕鏈可變結構域之抗CD228抗體，該重鏈可變結構域包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列，且該輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列。在一些實施態樣中，重鏈可變結構域之N端麩醯胺酸係經環化以形成焦麩胺酸。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗CD228抗體，其中該重鏈可變區包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列、(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列、及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且/或其中該輕鏈可變區包含：(i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列、(ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列、及(iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列，其中抗CD228抗體之CDR係由Kabat編號方案定義。
在一些實施態樣中，本文提供抗CD228抗體及/或抗CD228抗體-藥物共軛體，其包含輕鏈可變結構域，該結構域包含與SEQ ID NO:24之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列。在某些實施態樣中，包含與SEQ ID NO:24之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列的輕鏈可變結構域相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、***或刪除且保留與CD228 (例如人CD228)結合之能力。在某些實施態樣中，SEQ ID NO:24中總共1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。在某些實施態樣中，取代、***或刪除(例如1、2、3、4或5個胺基酸)發生在CDR以外的區域(即在FR中)。在一些實施態樣中，抗CD228抗體包含SEQ ID NO:24的輕鏈可變結構域序列，包括該序列的轉譯後修飾。在一具體實施態樣中，輕鏈可變結構域包含選自下列之一、二或三個CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列、(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變結構域及包含輕鏈可變結構域之抗CD228抗體，該重鏈可變結構域包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列，且該輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列。在一些實施態樣中，重鏈可變結構域之N端麩醯胺酸係經環化以形成焦麩胺酸。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗CD228抗體，其中該重鏈可變區包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列、(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列、及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且/或其中該輕鏈可變區包含：(i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列、(ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列、及(iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列，其中抗CD228抗體之CDR係由Kabat編號方案定義。
在一些實施態樣中，本文提供抗CD228抗體及/或抗CD228抗體-藥物共軛體，其包含輕鏈可變結構域，該結構域包含與SEQ ID NO:25之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列。在某些實施態樣中，包含與SEQ ID NO:25之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列的輕鏈可變結構域相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、***或刪除且保留與CD228(例如人CD228)結合之能力。在某些實施態樣中，SEQ ID NO:25中總共1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。在某些實施態樣中，取代、***或刪除(例如1、2、3、4或5個胺基酸)發生在CDR以外的區域(即在FR中)。在一些實施態樣中，抗CD228抗體包含SEQ ID NO:25的輕鏈可變結構域序列，包括該序列的轉譯後修飾。在一具體實施態樣中，輕鏈可變結構域包含選自下列之一、二或三個CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列、(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變結構域及包含輕鏈可變結構域之抗CD228抗體，該重鏈可變結構域包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列，且該輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO:25之胺基酸序列。在一些實施態樣中，重鏈可變結構域之N端麩醯胺酸係經環化以形成焦麩胺酸。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗CD228抗體，其中該重鏈可變區包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列、(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列、及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且/或其中該輕鏈可變區包含：(i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列、(ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列、及(iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列，其中抗CD228抗體之CDR係由Kabat編號方案定義。
在一些實施態樣中，本文提供抗CD228抗體及/或抗CD228抗體-藥物共軛體，其包含輕鏈可變結構域，該結構域包含與SEQ ID NO:26之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列。在某些實施態樣中，包含與SEQ ID NO:26之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列的輕鏈可變結構域相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、***或刪除且保留與CD228(例如人CD228)結合之能力。在某些實施態樣中，SEQ ID NO:26中總共1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。在某些實施態樣中，取代、***或刪除(例如1、2、3、4或5個胺基酸)發生在CDR以外的區域(即在FR中)。在一些實施態樣中，抗CD228抗體包含SEQ ID NO:26的輕鏈可變結構域序列，包括該序列的轉譯後修飾。在一具體實施態樣中，輕鏈可變結構域包含選自下列之一、二或三個CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列、(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變結構域及包含輕鏈可變結構域之抗CD228抗體，該重鏈可變結構域包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列，且該輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列。在一些實施態樣中，重鏈可變結構域之N端麩醯胺酸係經環化以形成焦麩胺酸。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗CD228抗體，其中該重鏈可變區包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列、(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列、及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且/或其中該輕鏈可變區包含：(i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列、(ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列、及(iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列，其中抗CD228抗體之CDR係由Kabat編號方案定義。
在一些實施態樣中，本文提供抗CD228抗體及/或抗CD228抗體-藥物共軛體，其包含輕鏈可變結構域，該結構域包含與SEQ ID NO:27之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列。在某些實施態樣中，包含與SEQ ID NO:27之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列的輕鏈可變結構域相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、***或刪除且保留與CD228 (例如人CD228)結合之能力。在某些實施態樣中，SEQ ID NO:27中總共1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。在某些實施態樣中，取代、***或刪除(例如1、2、3、4或5個胺基酸)發生在CDR以外的區域(即在FR中)。在一些實施態樣中，抗CD228抗體包含SEQ ID NO:27的輕鏈可變結構域序列，包括該序列的轉譯後修飾。在一具體實施態樣中，輕鏈可變結構域包含選自下列之一、二或三個CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列、(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變結構域及包含輕鏈可變結構域之抗CD228抗體，該重鏈可變結構域包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列，且該輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO:27之胺基酸序列。在一些實施態樣中，重鏈可變結構域之N端麩醯胺酸係經環化以形成焦麩胺酸。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗CD228抗體，其中該重鏈可變區包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列、(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列、及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且/或其中該輕鏈可變區包含：(i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列、(ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列、及(iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列，其中抗CD228抗體之CDR係由Kabat編號方案定義。
在一些實施態樣中，本文提供抗CD228抗體及/或抗CD228抗體-藥物共軛體，其包含輕鏈可變結構域，該結構域包含與SEQ ID NO:28之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列。在某些實施態樣中，包含與SEQ ID NO:28之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列的輕鏈可變結構域相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、***或刪除且保留與CD228 (例如人CD228)結合之能力。在某些實施態樣中，SEQ ID NO:28中總共1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。在某些實施態樣中，取代、***或刪除(例如1、2、3、4或5個胺基酸)發生在CDR以外的區域(即在FR中)。在一些實施態樣中，抗CD228抗體包含SEQ ID NO:28的輕鏈可變結構域序列，包括該序列的轉譯後修飾。在一具體實施態樣中，輕鏈可變結構域包含選自下列之一、二或三個CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列、(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變結構域及包含輕鏈可變結構域之抗CD228抗體，該重鏈可變結構域包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列，且該輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO:28之胺基酸序列。在一些實施態樣中，重鏈可變結構域之N端麩醯胺酸係經環化以形成焦麩胺酸。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗CD228抗體，其中該重鏈可變區包含：(i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列、(ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列、及(iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且/或其中該輕鏈可變區包含：(i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列、(ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列、及(iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列，其中抗CD228抗體之CDR係由Kabat編號方案定義。
在一些實施態樣中，本文提供抗CD228抗體及/或抗CD228抗體-藥物共軛體，其包含輕鏈可變結構域，該結構域包含與SEQ ID NO:29之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列。在某些實施態樣中，包含與SEQ ID NO:29之胺基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列同一性之胺基酸序列的輕鏈可變結構域相對於參考序列含有取代(例如保守性取代)、***或刪除且保留與CD228 (例如人CD228)結合之能力。在某些實施態樣中，SEQ ID NO:29中總共1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。在某些實施態樣中，取代、***或刪除(例如1、2、3、4或5個胺基酸)發生在CDR以外的區域(即在FR中)。在一些實施態樣中，抗CD228抗體包含SEQ ID NO:29的輕鏈可變結構域序列，包括該序列的轉譯後修飾。在一具體實施態樣中，輕鏈可變結構域包含選自下列之一、二或三個CDR：(a) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列、(b) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列及(c) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列。
在一態樣中，本文提供包含重鏈可變結構域及包含輕鏈可變結構域之抗CD228抗體，該重鏈可變結構域包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列，且該輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO:29之胺基酸序列。在一些實施態樣中，重鏈可變結構域之N端麩醯胺酸係經環化以形成焦麩胺酸。
在一些實施態樣中，抗CD228抗體或抗體-藥物共軛體之抗CD228抗體係27D-Ala，亦稱為hL49_27D_Ala。在一些實施態樣中，抗CD228抗體或抗體-藥物共軛體之抗CD228抗體係27D-Gln，亦稱為hL49_27D_Gln。在一些實施態樣中，抗CD228抗體或抗體-藥物共軛體之抗CD228抗體係27D-Tyr，亦稱為hL49_27D_Tyr。在一些實施態樣中，抗CD228抗體或抗體-藥物共軛體之抗CD228抗體係34-Ala，亦稱為hL49_34_Ala。在一些實施態樣中，抗CD228抗體或抗體-藥物共軛體之抗CD228抗體係34-Gln，亦稱為hL49_34_Gln。在一些實施態樣中，抗CD228抗體或抗體-藥物共軛體之抗CD228抗體係34-Tyr，亦稱為hL49_34_Tyr。在一些實施態樣中，抗CD228抗體或抗體-藥物共軛體之抗CD228抗體係3X-Ala，亦稱為hL49_3X_Ala。在一些實施態樣中，抗CD228抗體或抗體-藥物共軛體之抗CD228抗體係3X-Gln，亦稱為hL49_3X_Gln。在一些實施態樣中，抗CD228抗體或抗體-藥物共軛體之抗CD228抗體係3X-Tyr，亦稱為hL49_3X_Tyr。
在一些實施態樣中，抗CD228抗體或抗CD228抗體-藥物共軛體之抗CD228抗體係單株抗體。
本發明之抗CD228抗體亦可就彼等與CD228(例如人CD228)之結合親和力方面描述或指明。較佳結合親和力包括該些解離常數或K D小於5x10 -2M、10 -2M、5x10 -3M、10 -3M、5x10 -4M、10 -4M、5x10 -5M、10 -5M、5x10 -6M、10 -6M、5x10 -7M、10 -7M、5x10 -8M、10 -8M、5x10 -9M、 10 -9M、5x10 -10M、10 -10M、5x10 -11M、10 -11M、5x10 -12M、10 -12M、5x10 -13M、10 -13M、5x10 -14M、10 -14M、5x 10 -15M或10 -15M者。
在一些實施態樣中，本發明之抗CD228抗體的結合具pH依賴性，以使抗體在pH梯度中展示差異性結合。在一些實施態樣中，抗CD228抗體在pH約5.6與pH約7.4之間展示最大結合。在一些實施態樣中，抗CD228抗體在pH約5.6下展示最大結合。在一些實施態樣中，抗CD228抗體在pH約6.3下展示最大結合。在一些實施態樣中，抗CD228抗體在pH約7.4下展示最小結合。
免疫球蛋白有五種類型：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，分別具有定名為α、β、ε、γ及μ之重鏈。γ及α類型進一步分成亞型，例如人類表現下列亞型：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。IgG1抗體可存在多種稱為同種異型之多形性變體(在Jefferis and Lefranc 2009. mAbsVol 1 Issue 4 1-7中回顧)，其任一者皆適用於本文中之一些實施態樣。人族群中常見的同種異型變體係該些以字母a、f、n、z或彼等之組合定名者。在本文中之任何實施態樣中，抗體可包含重鏈Fc區，該重鏈Fc區包含人IgG Fc區。在進一步實施態樣中，人IgG Fc區包含人IgG1。
在一些實施態樣中，抗CD228抗體及/或抗CD228抗體-藥物共軛體包含如以上提供之任一實施態樣中的重鏈可變結構域及如以上提供之任一實施態樣中的輕鏈可變結構域。在一實施態樣中，抗體包含重鏈恆定區及輕鏈恆定區，該重鏈恆定區包含
Figure 02_image027
Figure 02_image029
Figure 02_image031
之胺基酸序列，該輕鏈恆定區包含
Figure 02_image033
之胺基酸序列，包括該些序列的轉譯後修飾。在另一實施態樣中，抗體包含重鏈恆定區及輕鏈恆定區，該重鏈恆定區包含
Figure 02_image035
Figure 02_image037
之胺基酸序列，該輕鏈恆定區包含
Figure 02_image039
之胺基酸序列，包括該些序列的轉譯後修飾。SEQ ID NO:31包含人IgG1同型之胺基酸位置239的絲胺酸至半胱胺酸取代。額外半胱胺酸殘基之存在允許鏈間雙硫鍵形成。此類鏈間雙硫鍵形成可造成空間位阻，藉此減少Fc區-FcγR結合交互作用之親和力。經導入或靠近IgG恆定區之Fc區中的半胱胺酸殘基亦可作為與治療劑共軛之位點(即使用硫醇特異性試劑諸如藥物之順丁烯二醯亞胺衍生物共軛細胞毒性藥物)。治療劑之存在造成空間位阻，藉此進一步減少Fc區-FcγR結合交互作用之親和力。在位置234、235、236及/或237中任一者之其他取代減少對Fcγ受體之親和力，特別是FcγRI受體(見例如US 6,624,821、US 5,624,821)。
抗體亦包括經修飾之衍生物，即藉由共價附接任何類型之分子至抗體，以使共價附接不防止抗體與CD228結合或在HD細胞上發揮細胞靜止或細胞毒性效應。例如(但不限於此)，抗體衍生物包括經例如醣化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化(phosphylation)、醯胺化、藉由已知保護/阻斷基衍生化、蛋白分解切割、與細胞性配體或其他蛋白質鍵聯等修飾的抗體。許多化學修飾中任一者可藉由已知技術進行，包括但不限於特異性化學切割、乙醯化、甲醯化、代謝合成衣黴素等。此外，衍生物可含有一或多個非典型胺基酸。 恆定區之選擇
人化抗體之重鏈及輕鏈可變區可與至少一部份之人恆定區連接。恆定區之選擇部分取決於是否希望具備抗體依賴性細胞媒介性細胞毒性、抗體依賴性細胞性吞噬作用及/或補體依賴性細胞毒性。舉例來說，人同型IgGl及IgG3具有強烈之補體依賴性細胞毒性，人同型IgG2具有微弱之補體依賴性細胞毒性及人IgG4缺乏補體依賴性細胞毒性。人IgGl及IgG3相較於人IgG2及IgG4亦誘導更強之細胞媒介性效應功能。輕鏈恆定區可為λ或κ。抗體可被表現為含有二條輕鏈及二條重鏈之四聚體、分開之重鏈、分開之輕鏈、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、或其中重鏈及輕鏈可變區結構域係透過間隔子連接之單鏈抗體。
人恆定區顯示在不同個體間之同種異型(allotypic)變異及同型同種異型(isoallotypic)變異，也就是不同個體之恆定區的一或多個多形性位置可不同。同型同種異型與同種異型的不同之處在於，辨識一同型同種異型之血清與一或多種其他同型之非多形性區域結合。
在輕鏈及/或重鏈之胺基或羧基端的一或數個胺基酸(諸如重鏈之C端離胺酸)可在一部分或所有分子中遺失或衍生化。取代可發生在恆定區以減少或增加效應功能諸如補體媒介性細胞毒性或ADCC(見例如Winter et al., US Patent No. 5,624,821；Tso et al., US Patent No. 5,834,597；及Lazar et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:4005, 2006)或延長在人體中之半衰期(見例如Hinton et al., J. Biol. Chem. 279:6213, 2004)。
例示性取代包括將天然胺基酸取代成半胱胺酸殘基之胺基酸取代被導入胺基酸位置234、235、237、239、267、298、299、326、330或332，較佳地在人IgGl同型中之S239C突變(US 20100158909)。額外半胱胺酸殘基之存在允許鏈間雙硫鍵形成。此類鏈間雙硫鍵形成可造成空間位阻，藉此減少Fc區-FcγR結合交互作用之親和力。經導入或靠近IgG恆定區之Fc區中的半胱胺酸殘基亦可作為與治療劑共軛之位點(即使用硫醇特異性試劑諸如藥物之順丁烯二醯亞胺衍生物共軛細胞毒性藥物)。治療劑之存在造成空間位阻，藉此進一步減少Fc區-FcγR結合交互作用之親和力。在位置234、235、236及/或237中任一者之其他取代減少對Fcγ受體之親和力，特別是FcγRI受體(見例如US 6,624,821、US 5,624,821)。
抗體之活體內半衰期亦可影響彼之效應功能。可增加或降低抗體之半衰期以調整彼之治療活性。FcRn係結構類似MHC第一型抗原且與β2-微球蛋白非共價締合之之受體。FcRn調節IgG之分解代謝及彼等在組織間之胞移作用(Ghetie and Ward, 2000, Annu. Rev. Immunol. 18:739- 766; Ghetie and Ward, 2002, Immunol. Res. 25:97-113)。IgG-FcRn交互作用發生在pH 6.0(胞內囊泡之pH)但不發生在pH 7.4(血液之pH)；此交互作用使得IgG能被再循環回到循環中(Ghetie and Ward, 2000, Ann. Rev. Immunol. 18:739-766; Ghetie and Ward, 2002, Immunol. Res. 25:97-113)。已定位人IgGl中涉及FcRn結合之區域(Shields et al, 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604)。在人IgGl之位置Pro238、Thr256、Thr307、Gln311、Asp312、Glu380、Glu382或Asn434的丙胺酸取代增強FcRn結合(Shields et al, 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604)。獲得這些取代之IgGl分子具有較長之血清半衰期。因此，這些經修飾之IgG1分子可能可以執行彼等之效應功能，因而相較於未經修飾之IgG1在較長時期發揮彼等之治療療效。其他用於增加與FcRn結合之例示性取代包括位置250之Gln及/或位置428之Leu。EU編號係用於恆定區之所有位置。
共價附接至保守性Asn297之寡糖涉及IgG之Fc區與FcγR結合之能力(Lund et al, 1996, J. Immunol. 157:4963-69; Wright and Morrison, 1997, Trends Biotechnol. 15:26-32)。工程改造此糖化形式之IgG可顯著改善IgG媒介性ADCC。添加平分型N-乙醯葡萄糖胺修飾(Umana et al, 1999, Nat. Biotechnol. 17:176-180; Davies et al, 2001, Biotech. Bioeng. 74:288-94)至此糖化形式或自此糖化形式移除岩藻糖(Shields et al, 2002, J. Biol. Chem. 277:26733-40; Shinkawa et al, 2003, J. Biol. Chem. 278: 6591-604; Niwa et a/., 2004, Cancer Res. 64:2127-33)係二種改善IgG Fc與FcγR之間的結合之IgG Fc工程改造實例，藉此增強Ig媒介性ADCC活性。在一些實施態樣中，本文所述之抗CD228抗體或抗體-藥物共軛體之抗CD228抗體具有附接至恆定區之保守性Asn297殘基的聚醣，其中恆定區之胺基酸殘基的編號係根據描述於Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)中之EU索引。在一些實施態樣中，聚醣係雙觸角。在一些實施態樣中，聚醣係核心岩藻糖基化。在一些實施態樣中，聚醣具有零個末端半乳糖殘基。在一些實施態樣中，聚醣係雙觸角及核心岩藻糖基化。在一些實施態樣中，聚醣係雙觸角且具有零個末端半乳糖殘基。在一些實施態樣中，聚醣係核心岩藻糖基化且具有零個末端半乳糖殘基。在一些實施態樣中，聚醣係雙觸角、核心岩藻糖基化且具有零個半乳糖殘基。在一些實施態樣中，在本文所述之抗CD228抗體或抗體-藥物共軛體之抗CD228抗體族群中，恆定區之保守性Asn297殘基(其中恆定區之胺基酸殘基的編號係根據描述於Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)中之EU索引)主要被具有零個末端半乳糖殘基之雙觸角、核心岩藻糖基化聚醣佔據。
系統性取代人IgG1 Fc區之溶劑暴露胺基酸產生具有改變FcγR結合親和力之IgG變體(Shields et al, 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604)。當與親代IgG1比較時，這些涉及Thr256/Ser298、Ser298/Glu333、Ser298/ Lys334或Ser298/Glu333 Lys334至Ala之取代的變體亞群顯示對FcγR之結合親和力及ADCC活性增加(Shields et al, 2001, J. Biol. Chem. 276:6591-604; Okazaki et al, 2004, J. Mol. Biol. 336:1239-49)。
抗體之補體固定活性(Clq結合及CDC活性二者)可藉由Lys326及Glu333之取代來改善(Idusogie et al., 2001 , J. Immunol. 166:2571-2575)。在人IgG2主鏈上之相同取代可將與Clq結合不良且嚴重缺乏補體活化活性之抗體同型轉換成可與Clq結合且媒介CDC之抗體同型(Idusogie et al, 2001, J. Immunol. 166:2571-75)。一些其他方法亦可被用於改善抗體之補體固定活性。舉例來說，將IgM之18個胺基酸羧基端尾片段植入IgG之羧基端大幅增強彼等之CDC活性。此甚至可在IgG4中觀察到，其通常不具有可偵測之CDC活性(Smith et al, 1995, J. Immunol. 154:2226-36)。同樣地，以Cys取代位於靠近IgG 1重鏈之羧基端的Ser444誘導IgG 1之尾對尾二聚化，其CDC活性比起單體IgG1增加200倍(Shopes et al, 1992, J. Immunol. 148:2918-22)。此外，對Clq具特異性之雙特異性雙體抗體建構體亦授予CDC活性(Kontermann et a/., 1997, Nat. Biotech. 15:629-31)。
補體活性可藉由使重鏈之胺基酸殘基318、320及322中之至少一者突變成具有不同側鏈之殘基(諸如Ala)來減少。以其他經烷基取代之非離子性殘基(諸如Gly、He、Leu或Val)或芳香族非極性殘基(諸如Phe、Tyr、Trp及Pro)取代三個殘基中之任一者亦減少或阻斷Clq結合。Ser、Thr、Cys及Met可用於殘基320及322(但非318)以減少或阻斷Clq結合活性。
以極性殘基取代318 (Glu)殘基可修飾但不阻斷Clq結合活性。以Ala取代殘基297 (Asn)導致去除裂解活性，但僅輕微減少(約弱三倍)對Clq之親和力。此改變破壞糖基化位點及補體活化所需之碳水化合物之存在。任何在此位點之其他取代亦破壞糖基化位點。下列突變及彼等之任何組合亦減少Clq結合：D270A、K322A、P329A及P31 IS(見WO 06/036291)。
所謂的人恆定區包括具有任何天然同種異型或具有佔據天然同種異型之多形性位置的殘基之任何排列組合的恆定區。同樣地，多達1、2、5或10個突變可存在於天然人恆定區，諸如該些如上所述之可減少Fcγ受體結合或增加與FcRN結合者。
在一些實施態樣中，本文所述之抗CD228及/或抗CD228抗體-藥物共軛體抗體包含重鏈恆定區，其包含SEQ ID NO:30之胺基酸序列。在一些實施態樣中，本文所述之抗CD228及/或抗CD228抗體-藥物共軛體抗體包含輕鏈恆定區，其包含SEQ ID NO:32之胺基酸序列。在一些實施態樣中，本文所述之抗CD228及/或抗CD228抗體-藥物共軛體抗體包含重鏈恆定區及輕鏈恆定區，該重鏈恆定區包含SEQ ID NO:30之胺基酸序列，該輕鏈恆定區包含SEQ ID NO:32之胺基酸序列。在一些實施態樣中，本文所述之抗CD228及/或抗CD228抗體-藥物共軛體抗體包含重鏈恆定區，其包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列。在一些實施態樣中，本文所述之抗CD228及/或抗CD228抗體-藥物共軛體抗體包含重鏈恆定區及輕鏈恆定區，該重鏈恆定區包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列，該輕鏈恆定區包含SEQ ID NO:32之胺基酸序列。 V. 重組抗體之表現
在一些實施態樣中，本文所述之抗CD228抗體藉由重組表現生產。重組多核苷酸建構體通常包括與抗體鏈之編碼序列可操作地連接之表現控制序列，包括天然締合或異源性啟動子區。較佳地，表現控制序列係能夠轉形或轉染真核宿主細胞之載體中的真核啟動子系統。一旦載體併入適當宿主中之後，將宿主維持在適合高度表現核苷酸序列之條件下並收集及純化交叉反應抗體。
哺乳動物細胞係用於表現編碼免疫球蛋白或其片段之核苷酸區段的較佳宿主。見Winnacker, From Genes to Clones, (VCH Publishers, NY, 1987)。一些能夠分泌完整異源性蛋白之合適宿主細胞系已在該領域中發展，包括CHO細胞系(例如DG44)、各種COS細胞系、HeLa細胞、HEK293細胞、L細胞及非抗體生產骨髓瘤(包括Sp2/0及NS0)。較佳地，細胞係非人細胞。用於這些細胞之表現載體可包括表現控制序列，諸如複製起點、啟動子、增強子(Queen et al., Immunol. Rev. 89:49 (1986))及必要處理資訊位點，諸如核糖體結合位點、RNA剪接位點、聚腺苷酸化位點及轉錄終止子序列。較佳之表現控制序列係衍生自內源性基因、巨細胞病毒、SV40、腺病毒、牛乳頭狀瘤病毒及類似物之啟動子。見Co et al., J. Immunol. 148:1149 (1992)。
在經表現之後，抗體可根據該領域之標準程序純化，包括HPLC純化、管柱層析、膠體電泳及類似者(一般見Scopes, Protein Purification (Springer- Verlag, NY, 1982))。 VI. 核酸
本發明進一步提供編碼上述重鏈及輕鏈中任一者之核酸。通常，核酸亦編碼與成熟重鏈及輕鏈融合之信號肽。核酸上之編碼序列可與調節序列可操作地連接以確保該編碼序列之表現，諸如啟動子、增強子、核糖體結合位點、轉錄終止信號及該類似序列。編碼重鏈及輕鏈之核酸可發生於經分離之形式或可被選殖至一或多個載體。該等核酸可藉由例如固相合成或重疊寡核苷酸之PCR加以合成。編碼重鏈及輕鏈之核酸可在例如表現載體內被接合成一個連續核酸，或可被各自分開選殖至自己的表現載體。
在一些態樣中，本文亦提供編碼如本文所述之抗CD228抗體或其抗原結合片段的核酸。本文進一步提供包含編碼如本文所述之抗CD228抗體或其抗原結合片段的核酸之載體。本文進一步提供表現編碼如本文所述之抗CD228抗體或其抗原結合片段的核酸之宿主細胞。本文進一步提供包含載體之宿主細胞，該載體包含編碼如本文所述之抗CD228抗體或其抗原結合片段的核酸。
本文所述之抗CD228抗體可藉由廣為周知之重組技術使用廣為周知之表現載體系統及宿主細胞製備。在一實施態樣中，抗體係使用如De la Cruz Edmunds et al., 2006, Molecular Biotechnology34; 179-190、EP216846、美國專利第5,981,216號、WO 87/04462、EP323997、美國專利第5,591,639號、美國專利第5,658,759號、EP338841、美國專利第5,879,936號及美國專利第5,891,693號所揭示之GS表現載體系統於CHO細胞中製備。
本文所述之單株抗CD228抗體可例如藉由最先由Kohler et al., Nature, 256, 495 (1975)描述之融合瘤方法產生或可藉由重組DNA方法產生。單株抗體亦可使用例如Clackson et al., Nature, 352, 624-628 (1991)及Marks et al., J. Mol. Biol., 222(3):581-597 (1991)所描述之技術自噬菌體抗體庫單離。單株抗體可獲自任何合適來源。因此，舉例來說，單株抗體可獲自由鼠脾B細胞製備之雜交瘤，該鼠脾B細胞獲自經受到關注之抗原以例如在表面表現抗原之細胞或編碼受到關注之抗原的核酸之形式免疫之小鼠。單株抗體亦可獲自衍生自經免疫的人或非人哺乳動物諸如大鼠、犬、靈長動物等的抗體表現細胞之雜交瘤。 VII. 抗體-藥物共軛體
抗CD228抗體可與細胞毒性劑或細胞靜止劑(包括其醫藥上可相容之鹽)共軛以形成抗體-藥物共軛體(ADC)。特別適合用於與抗體共軛之部份係細胞毒性劑(例如化學治療劑)、前藥轉換酶、放射性同位素、放射性化合物、或毒素(這些部份統稱為治療劑)。舉例來說，抗CD228抗體可與細胞毒性劑諸如化學治療劑或毒素共軛(例如細胞靜止劑或殺細胞劑諸如相思豆毒素(abrin)、蓖麻毒蛋白(ricin) A、假單胞菌外毒素、或白喉毒素)。
抗CD228抗體可與前藥轉換酶共軛。前藥轉換酶可使用已知方法與抗體重組融合或與其化學共軛。例示性前藥轉換酶係羧基肽酶G2、β-葡萄醣醛酸酶、青黴素-V-醯胺酶、青黴素-G-醯胺酶、β-內醯胺酶、β-葡萄糖苷酶、硝基還原酶及羧基肽酶A。
用於將治療劑與蛋白(特別是抗體)共軛之技術係廣為周知。(見例如Arnon et al, “Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy,” in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy (Reisfeld et al. eds., Alan R. Liss, Inc., 1985)；Hellstrom et al, “Antibodies For Drug Delivery,” in Controlled Drug Delivery (Robinson et al. eds., Marcel Dekker, Inc., 2nd ed. 1987)；Thorpe, “Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review,” in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications (Pinchera et al. eds., 1985)；“Analysis, Results, and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy,” in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy (Baldwin et al. eds., Academic Press, 1985)；及Thorpe et al, 1982, Immunol. Rev. 62:119-58。亦見例如PCT公開案WO 89/12624。)
治療劑可以除非自抗體切割(例如藉由水解、抗體降解或切割劑)否則減少其活性之方式共軛。此類治療劑係以可切割連接子附接至抗體，該可切割連接子在表現CD228之癌細胞之胞內環境中對切割敏感，但在胞外環境則實質上不敏感，以使當共軛體被表現CD228之癌細胞內化後(例如在胞內體中或例如藉由pH敏感性或蛋白酶敏感性在溶酶體環境中或在微坑洞環境中)自抗體切割。
通常，ADC包含介於治療劑與抗CD228抗體之間的連接子區域。如上所述，一般來說，連接子在胞內條件下係可切割，以使在胞內環境中切割連接子自抗體釋放治療劑(例如在溶酶體或胞內體或微坑洞之內)。連接子可為例如藉由胞內肽酶或蛋白酶(包括溶酶體或胞內體蛋白酶)切割之肽基連接子。通常，肽基連接子係至少二個胺基酸長或至少三個胺基酸長。切割劑可包括組織蛋白酶B、組織蛋白酶D及纖維蛋白溶酶(見例如Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123)。最典型的是可經酶切割且存在於表現CD228之細胞中之肽基連接子。舉例來說，可使用可經硫醇依賴性蛋白酶組織蛋白酶B(其高度表現於癌性組織中)切割之肽基連接子(例如包含Phe-Leu或Gly-Phe-Leu-Gly肽之連接子(SEQ ID NO: 30))。其他此類連接子係描述於例如美國專利第6,214,345號。在特定實施態樣中，可由胞內蛋白酶切割之肽基連接子包含Val-Cit連接子或Phe-Lys二肽(見例如美國專利第6,214,345號，其描述合成多柔比星(doxorubicin)與Val-Cit連接子)。利用胞內蛋白水解釋放治療劑之一項優點在於該劑在共軛時通常被減弱，且共軛體之血清穩定性通常很高。
可切割連接子可具pH敏感性，即在特定pH值下對水解敏感。一般而言，pH敏感性連接子可在酸性條件下水解。舉例來說，可使用可在溶酶體中水解之酸不穩定連接子(例如，腙、半卡巴腙、硫半卡巴腙、順烏頭醯胺、原酯、縮醛、縮酮或類似物)。(見例如美國專利第5,122,368號、第5,824,805號、第5,622,929號；Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123; Neville et al, 1989, Biol. Chem. 264: 14653-14661。)此類連接子在中性pH條件下(諸如在血液中)相對穩定，但在低於pH 5.5或5.0下(溶酶體之大約pH)不穩定。在某些實施態樣中，可水解之連接子係硫醚連接子(諸如例如經由醯腙鍵與治療劑連接之硫醚(見例如美國專利第5,622,929號))。
其他連接子在還原條件下係可切割(例如二硫化物連接子)。二硫化物連接子包括該些可使用SATA(N-琥珀醯亞胺基-S-乙醯基硫乙酸酯)、SPDP(N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯)、SPDB(N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫)丁酸酯)及SMPT(N-琥珀醯亞胺基-氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫)甲苯)、SPDB及SMPT形成者。(見例如Thorpe et al, 1987, Cancer Res. 47:5924-5931；Wawrzynczak et al, In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987。亦見美國專利第4,880,935號。)
連接子亦可為丙二酸酯連接子(Johnson et al, 1995, Anticancer Res. 15:1387-93)、順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基連接子(Lau et al, 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10): 1299-1304)或3'-N-醯胺類似物(Lau et al, 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1305-12)。連接子亦可為丙二酸酯連接子(Johnson et al, 1995, Anticancer Res. 15:1387-93)、順丁烯二醯亞胺基苯甲醯基連接子(Lau et al, 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1299-1304)或3'-N-醯胺類似物(Lau et al, 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1305-12)。
連接子亦可為不可切割之連接子，諸如與治療劑(例如藥物)直接連接之順丁烯二醯亞胺基-伸烷基-或順丁烯二醯亞胺-芳基連接子。活性藥物-連接子藉由降解抗體時釋放。
一般而言，連接子對胞外環境實質上不敏感，表示當ADC存在於胞外環境(例如血漿)中時，ADC樣本中不超過約20%、通常不超過約15%、更常不超過約10%、甚至更常不超過約5%、不超過約3%或不超過約1%之連接子係經切割。
連接子是否對胞外環境實質上不敏感可藉由例如以下判定：使血漿與(a) ADC(「ADC樣本」)及(b)等莫耳量之未共軛抗體或治療劑(「對照樣本」)獨立培育一段預定時間(例如，2、4、8、16或24小時)，接著比較藉由例如高效液相層析測量之存在於ADC樣本及存在於對照樣本中之未經共軛之抗體或治療劑之量。
連接子亦可促進細胞性內化作用。當與治療劑共軛時，連接子可促進細胞性內化作用(即，在如本文所述之ADC或ADC衍生物之連接子-治療劑部份環境中)。或者，當與治療劑及抗CD228抗體二者共軛時，連接子可促進細胞性內化作用(即，在如本文所述之ADC環境中)。
抗CD228抗體可經由抗體之雜原子與連接子共軛。這些雜原子可以其天然狀態存在於抗體上或可導入抗體中。在一些態樣中，抗CD228抗體將經由離胺酸殘基之氮原子共軛至連接子。在其他態樣中，抗CD228抗體將經由半胱胺酸殘基之硫原子共軛至連接子。半胱胺酸殘基可為天然存在或為經工程改造至抗體中者。將連接子及藥物-連接子經由離胺酸及半胱胺酸殘基共軛至抗體之方法係所屬技術領域中已知。
例示性抗體-藥物共軛體包括基於耳抑素之抗體-藥物共軛體(即該藥物組分係耳抑素藥物)。耳抑素與微管蛋白結合，已經顯示干擾微管動力學、核***及細胞***，且具有抗癌活性。一般而言，基於耳抑素之抗體-藥物共軛體包含在耳抑素藥物與抗CD228抗體之間的連接子。連接子可為例如可切割連接子(例如肽基連接子、碳水化合物連接子)或不可切割連接子(例如藉由降解抗體釋放之連接子)。耳抑素包括耳抑素T、MMAF及MMAE。示範性耳抑素之合成及結構係描述於美國專利公開號7,659,241、7,498,298、2009-0111756、2009-0018086及7,968,687號，各以參照方式整體納入此處以符合所有目的。
其他例示性抗體-藥物共軛體包括類美坦素(maytansinoid)抗體-藥物共軛體(即藥物組分係類美坦素藥物)及苯并二氮呯抗體-藥物共軛體(即藥物組分係苯并二氮呯(例如吡咯并[l,4]苯并二氮呯二聚體(PBD二聚體)、吲哚啉并苯并二氮呯二聚體及
Figure 110128583-A0304-12-0059-1
唑啶基苯并二氮呯二聚體))。
在一些實施態樣中，用於本發明之PBD二聚體係由下式I代表。PBD二聚體之較佳立體化學係如下式Ia所示：
Figure 02_image041
或醫藥上之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物；其中下標n係1或3。
式(I)及(Ia)之溶劑合物一般係自添加水或醇系溶劑穿過一或兩個PBD單體之亞胺官能基形成，以形成甲醇胺及/或甲醇胺醚。例如，在N10-C11位置，可有亞胺(N=C)、甲醇胺(NH-CH(OH))或甲醇胺醚(NH-CH(OMe))，如下式I'及Ia'代表：
Figure 02_image043
其中： (a) R 10係H，且R 11係OH或OR A，其中R A係飽和C 1-4烷基(較佳地甲基)；或 (b) R 10及R 11在它們所結合之氮與碳原子之間形成氮-碳雙鍵；或 (c) R 10之一係H，且R 11係OH或OR A，其中R A係飽和C 1-4烷基(較佳地甲基)；且另一R 10及R 11在它們所結合之氮與碳原子之間形成氮-碳雙鍵。
式I或la之PBD二聚體(或醫藥上之鹽、溶劑合物或其鹽之溶劑合物)一般係經由連接子單元LU連接至抗體。連接子單元在目標位置(例如在癌細胞內)作用以釋放式I或la之PBD二聚體(或醫藥上之鹽、溶劑合物或其鹽之溶劑合物)。用於本發明之PBD藥物-連接子化合物係藉由下式II(較佳立體化學如Ila所示)代表，其中LU係連接子單元。連接子單元可為例如可切割肽連接子單元(例如包含纈胺酸-丙胺酸肽之連接子)或可切割二硫化物連接子單元：
Figure 02_image045
或醫藥上之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物；其中下標n係1或3。
用於本發明之較佳PBD藥物-連接子化合物係由下式III代表：
Figure 02_image047
或醫藥上之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物；其中下標n係1或3且下標m係2至5之整數。
PBD藥物-連接子係與抗CD228抗體共軛以生產靶向CD228之抗體-藥物共軛體。例如，抗體可與式II或式III之藥物-連接子共軛。例示性靶向C228之抗體-藥物共軛體顯示於下式IV、IVa及IVb：
Figure 02_image049
或醫藥上之鹽、溶劑合物或鹽之溶劑合物；其中下標n係1或3；下標m係2至5之整數；且下標p係1至4。
例示性藥物-連接子包括MMAE藥物-連接子。本發明人發現，將聚乙二醇聚合物作為側鏈併入至可切割β-葡萄糖醛酸苷MMAE藥物-連接子中提供相較於非聚乙二醇化對照在異種移植模型中具有降低血漿廓清及增加抗腫瘤活性之抗體藥物-共軛體。因此，用於附接至本發明之抗體之特別有利藥物-連接子係如下式V：
Figure 02_image051
或其醫藥上可接受之鹽。
此類藥物-連接子之較佳立體化學顯示於下式Va：
Figure 02_image053
或其醫藥上可接受之鹽，其中以式V及Va而言，Z代表具有能夠與抗體之官能基反應以形成與其共價附接之反應性位點的有機部份，n從8至36不等且最佳的是從8至14不等(最佳的是12)，R 21係聚乙二醇部份之加蓋單元，較佳為-CH 3或-CH 2CH 2CO 2H。
較佳Z部份係含順丁烯二醯亞胺基部份。特別較佳之Z部份顯示於以下之藥物-連接子：
Figure 02_image055
或其醫藥上可接受之鹽。
此類藥物-連接子之較佳立體化學顯示於下：
Figure 02_image057
或其醫藥上可接受之鹽，其中以式VI、VIa、VII及VIIa而言，n從8至36不等且最佳的是從8至14不等(最佳的是12)，R PR係氫或保護基，例如酸不穩定保護基，例如BOC，R 21係聚乙二醇部份之加蓋單元，較佳為-CH 3或 -CH 2CH 2CO 2H。
如上所述，R PR可為氫或保護基。如本文中所使用之保護基係指選擇性地暫時或永久阻斷多官能性化合物之反應性部位的基團。當保護基在致效分子他處所欲化學轉變所需之反應條件下及在當需要時純化新形成分子期間能夠預防或避免非所要副反應或過早喪失保護基，且在不會不良影響該新形成分子結構或立體化學完整性的條件下可經移除時，該保護基係合適保護基。合適胺保護基包括酸不穩定氮保護基，包括該些由Isidro-Llobel et al. “Amino acid-protecting groups” Chem. Rev. (2009) 109: 2455-2504所提供者。一般而言，酸不穩定氮保護基將一級或二級胺基轉變成其對應胺甲酸酯且包括三級丁基、烯丙基及苄基胺甲酸酯。
如上所述，R 21係聚乙二醇部份之加蓋單元。如所屬技術領域中具有通常知識者所將會理解的，聚乙二醇單元可經廣泛多樣之有機部份末端加蓋，一般為該些相對不具反應性者。烷基及經取代之烷基係較佳。
通常，各抗體附接1至16個藥物-連接子。
例示性基於耳抑素之抗體-藥物共軛體包括如下所示之mp-dLAE-PABC-MMAE(在本文中亦稱為dLAE-MMAE或mp-dLAE-MMAE或7092)抗體-藥物共軛體，其中Ab係ABP(例如本文所述之抗CD228抗體)且val-cit (vc)代表纈胺酸-瓜胺酸雙肽，且dLAE代表D-白胺酸-丙胺酸-麩胺酸三肽：
Figure 02_image059
或其醫藥上可接受之鹽。藥物裝載係由p代表，即每抗體之藥物-連接子分子的數量。根據上下文，p可代表抗體組成物中每抗體之藥物-連接子分子的平均數量，亦稱為平均藥物裝載。P係介於1至20，且較佳係1至8。在一些較佳實施態樣中，當p代表平均藥物裝載時，p係介於約2至約5。在一些實施態樣中，p係約2、約3、約4、或約5。在製劑中每抗體之藥物的平均數量可由習知手段諸如質譜分析、HIC、ELISA測定及HPLC表徵。在一些態樣中，ABP(例如抗CD228抗體)係經由抗體之半胱胺酸殘基附接至藥物-連接子。在一些實施態樣中，半胱胺酸殘基係經工程改造至抗體中之殘基。在其他態樣中，半胱胺酸殘基係鏈間雙硫半胱胺酸殘基。
參照靶向CD228之抗體-藥物共軛體，下標p代表藥物裝載，且取決於上下文可代表附接至個別抗體分子之藥物-連接子分子的分子數量且因此係整數值，或可代表平均藥物裝載且因此可為整數或非整數值，但一般係非整數值。平均藥物裝載代表族群中每抗體之藥物-連接子分子的平均數量。通常(但非總是)，當我們提及抗體例如單株抗體時，我們指的是抗體分子族群。在包含抗體-藥物共軛體分子族群之組成物中，平均藥物裝載係重要品質屬性，因為其決定可遞送至目標細胞之藥物的量。組成物中未共軛抗體分子之百分比係包括於平均藥物裝載值中。
在本發明之較佳態樣中，當提及包含抗體-藥物共軛體化合物族群之組成物時，平均藥物裝載係1至約16、較佳地約2至約14、更佳的是約2至約10。以PBD抗體-藥物共軛體諸如該些本文例示者而言，特別較佳之平均藥物裝載係約2。在一些態樣中，在抗體-藥物共軛體化合物族群中個別抗體分子之實際藥物裝載係1至4、1至3或1至2，其中優勢藥物裝載為2。在較佳態樣中，平均藥物裝載2係經由定點共軛技術達成(例如將經工程改造之半胱胺酸導入至抗體包括根據EU索引編號系統之位置239)。
以MMAE聚乙二醇化ADC諸如該些本文例示者而言，特別較佳之平均藥物裝載係約8。在例示性實施態樣中，藥物-連接子係共軛至經還原之鏈間二硫化物的半胱胺酸殘基。在一些態樣中，在抗體-藥物共軛體化合物族群中個別抗體分子之實際藥物裝載係1至10(或6至10或6至8)，其中優勢藥物裝載為8。可達成較高藥物裝載，例如除了鏈間二硫化物之外，藥物-連接子係共軛至經導入之半胱胺酸殘基(諸如半胱胺酸殘基導入根據EU索引之位置239)。
例示性ADC包括下列：
Figure 02_image061
Figure 02_image063
Figure 02_image065
或其醫藥上可接受之鹽，其中n從8至36不等且最佳的是從8至14不等(最佳的是12)，R PR係氫或保護基，例如酸不穩定保護基例如BOC，R 21係聚乙二醇部份之加蓋單元，較佳為-CH 3或-CH 2CH 2CO 2H，Ab代表抗CD228抗體，且當提及個別抗體分子時p代表從1至16不等之整數(較佳為1至14、6至12、6至10或8至10)，或當提及抗體分子族群時代表約4或約6至約14(較佳約8)之平均藥物裝載。
如上所述，藥物連接子之PEG(聚乙二醇)部分可從8至36不等，然而已發現具有12個環氧乙烷單元之PEG特別較佳。已發現較長PEG鏈可導致較慢廓清，然而較短PEG鏈可導致活性減損。因此，在所有上述實施態樣中，下標n較佳地係8至14、8至12、10至12或10至14且最佳的是12。
多分散PEG、單分散PEG及離散PEG可用於製造本發明之聚乙二醇化抗體-藥物共軛體。多分散PEG係大小及分子量之異質性混合物，然而單分散PEG一般係自異質性混合物純化且因此提供單鏈長度及分子量。較佳PEG單元係離散PEG，其係以逐步方式而非經由聚合過程合成之化合物。離散PEG提供具有經定義及指明鏈長度之單一分子。如同下標「p」，當提及抗體-藥物共軛體族群時，下標「n」的值可為平均數量且可為整數或非整數。
在較佳實施態樣中，將抗體共價附接至藥物-連接子係透過抗體之巰基官能基與藥物連接子之順丁烯二醯亞胺官能基交互作用以形成經硫基取代之琥珀醯亞胺來完成。巰基官能基可存在於配體天然狀態之配體單元上，例如在天然存在殘基(鏈間二硫化物殘基)中，或可經由化學修飾或藉由生物工程改造或兩者之組合導入至配體中。將理解的是抗體-經取代之琥珀醯亞胺可以經水解之形式存在。例如在較佳實施態樣中，ADC包含當與抗體結合時係由下式結構代表之琥珀醯亞胺部份：
Figure 02_image067
或包含當與抗體結合時係由下式結構代表之其對應酸-醯胺部份：
Figure 02_image069
波浪線指示鍵聯至藥物-連接子之其餘部分。
可用於與抗CD228抗體共軛之細胞毒性劑類型包括例如抗微管蛋白劑、DNA次要凹槽結合劑、DNA複製抑制劑、化學治療致敏劑或該類似物。其他例示性細胞毒性劑類型包括蒽環類、耳抑素、喜樹鹼、雙聯黴素(duocarmycin)、依扥泊苷(etoposide)、類美坦素(maytansinoid)及長春花生物鹼。一些例示性細胞毒性劑包括耳抑素(例如，耳抑素T、耳抑素E、AFP、單甲基耳抑素F (MMAF)、親脂性單甲基耳抑素F、單甲基耳抑素E (MMAE))、DNA次要凹槽結合劑(例如，烯二炔及萊克西托素(lexitropsin))、雙聯黴素、紫杉烷(例如，太平洋紫杉醇(paclitaxel)及多西紫杉醇(docetaxel))、長春花生物鹼、菸鹼醯胺磷酸核糖轉移酶抑制劑(NAMPTi)、微管溶素M (tubulysin M)、多柔比星(doxorubicin)、嗎啉基-多柔比星及氰基嗎啉基-多柔比星。
細胞毒性劑可為化學治療劑諸如舉例來說多柔比星、太平洋紫杉醇、黴法蘭(melphalan)、長春花生物鹼、甲胺喋呤(methotrexate)、絲裂黴素C或依扥泊苷。該劑亦可為CC-1065類似物、卡利奇黴素(calicheamicin)、美坦素(maytansine)、海兔毒素10 (dolastatin 10)之類似物、利索新(rhizoxin)或沙海葵毒素(palytoxin)。
細胞毒性劑亦可為耳抑素。耳抑素可為耳抑素E衍生物，例如耳抑素E與酮酸之間形成的酯。舉例來說，耳抑素E可分別與對乙醯基苯甲酸或苯甲醯戊酸反應以產生AEB及AEVB。其他典型耳抑素包括耳抑素T、AFP、MMAF及MMAE。各種耳抑素之合成及結構係描述於例如US 2005-0238649及US2006-0074008。
細胞毒性劑可為DNA次要凹槽結合劑。(見例如美國專利第6,130,237號。)舉例來說，次要凹槽結合劑可為CBI化合物或烯二炔(例如，卡利奇黴素)。
細胞毒性或細胞靜止劑可為抗微管蛋白劑。抗微管蛋白劑之實例包括紫杉烷類(例如，Taxol®(太平洋紫杉醇(paclitaxel))、Taxotere®(多西紫杉醇(docetaxel))、T67 (Tularik)、長春花生物鹼(例如，長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、長春地辛(vindesine)及長春瑞濱(vinorelbine))及耳抑素(例如，耳抑素E、AFP、MMAF、MMAE、AEB、AEVB)。其他適當之抗微管蛋白劑包括例如，漿果赤黴素(baccatin)衍生物、紫杉烷類似物(例如埃博黴素(epothilone) A及B)、噻氨酯噠唑(nocodazole)、秋水仙鹼(colchicine)及秋水仙醯胺(colcimid)、***氮芥(estramustine)、念珠藻素(cryptophysin)、西馬多丁(cemadotin)、類美坦素、考布他丁(combretastatin)、圓皮海綿內酯(discodermoide)、及艾榴塞洛素(eleuthrobin)。
細胞毒性劑可為另一群抗微管蛋白劑類美坦素(例如DM1、DM2、DM3、DM4)。舉例來說，類美坦素可為美坦素或含美坦素之藥物連接子諸如DM-1或DM-4(ImmunoGen, Inc.；亦見Chari et al., 1992, Cancer Res.)。
在一些實施態樣中，本發明之抗CD228抗體係經由MDpr-PEG(12)-gluc連接子共軛至單甲基耳抑素E以形成具有下式結構之抗體-藥物共軛體：
Figure 02_image071
或其醫藥上可接受之鹽，其中n從8至36不等且最佳的是從8至14不等(最佳的是12)，R PR係氫或保護基，例如酸不穩定保護基例如BOC，R 21係聚乙二醇部份之加蓋單元，較佳為-CH 3或-CH 2CH 2CO 2H，Ab代表抗CD228抗體，且當提及個別抗體分子時p代表從1至16不等之整數(較佳為1至14、6至12、6至10或8至10)，或當提及抗體分子族群時代表約4或約6至約14(較佳約8)之平均藥物裝載。在一些實施態樣中，抗CD228抗體係hL49_27D-Ala且所得抗體-藥物共軛體係hL49_27D-Ala-Mdpr-PEG(12)-gluc-MMAE。在一些實施態樣中，抗CD228抗體係hL49_27D-Gln且所得抗體-藥物共軛體係hL49_27D-Gln-Mdpr-PEG(12)-gluc-MMAE。在一些實施態樣中，抗CD228抗體係hL49_27D-Tyr且所得抗體-藥物共軛體係hL49_27D-Tyr-Mdpr-PEG(12)-gluc-MMAE。在一些實施態樣中，抗CD228抗體係hL49_34-Ala且所得抗體-藥物共軛體係hL49_34-Ala-Mdpr-PEG(12)-gluc-MMAE。在一些實施態樣中，抗CD228抗體係hL49_34-Gln且所得抗體-藥物共軛體係hL49_34-Gln-Mdpr-PEG(12)-gluc-MMAE。在一些實施態樣中，抗CD228抗體係hL49_34-Tyr且所得抗體-藥物共軛體係hL49_34-Tyr-Mdpr-PEG(12)-gluc-MMAE。在一些實施態樣中，抗CD228抗體係hL49_3X-Ala且所得抗體-藥物共軛體係hL49_3X-Ala-Mdpr-PEG(12)-gluc-MMAE。在一些實施態樣中，抗CD228抗體係hL49_3X-Gln且所得抗體-藥物共軛體係hL49_3X-Gln-Mdpr-PEG(12)-gluc-MMAE。在一些實施態樣中，抗CD228抗體係hL49_3X-Tyr且所得抗體-藥物共軛體係hL49_3X-Tyr-Mdpr-PEG(12)-gluc-MMAE。 VIII. 治療性應用
本發明之抗體(單獨或作為其抗CD228抗體-藥物共軛體)可用於治療個體的癌症。一些此類癌症顯示以蛋白(例如藉由使用例示性抗體之一者的免疫測定)或mRNA水準測量之可偵測量的CD228。一些此類癌症顯示相對於相同類型之非癌性組織(較佳地來自相同病患)上升量的CD228。應接受治療之癌細胞的CD228例示量係每細胞5000至500000個CD228分子，雖然可治療更高或更低的量。可任意選擇地，癌症之CD228的量係於實施治療前測量。在一些實施態樣中，個體先前已經接受一或多種治療劑的治療且對該治療無反應，其中該一或多種治療劑不是抗體、抗原結合片段或抗體-藥物共軛體。在一些實施態樣中，個體先前已經接受一或多種治療劑的治療且在該治療之後復發，其中該一或多種治療劑不是抗體、抗原結合片段或抗體-藥物共軛體。在一些實施態樣中，個體先前已經接受一或多種治療劑的治療且在治療期間經歷疾病進展，其中該一或多種治療劑不是抗體、抗原結合片段或抗體-藥物共軛體。在一些實施態樣中，癌症係晚期癌症。在一些實施態樣中，晚期癌症係第3期或第4期癌症。在一些實施態樣中，晚期癌症係轉移性癌症。在一些實施態樣中，癌症係反覆性癌症。在一些實施態樣中，個體曾接受癌症標準照護療法的先前治療且先前治療失敗。在一些實施態樣中，個體係人類。
與CD228表現相關聯且適於治療之癌症實例包括黑色素瘤及其他癌，包括胰臟癌、肺癌諸如非小肺癌、甲狀腺癌、食道癌、頭頸癌、乳癌諸如三陰性乳癌、結直腸癌、間皮瘤及膽管癌。在一些實施態樣中，本發明之抗體或抗體-藥物共軛體係用於治療個體的黑色素瘤之方法。在一些實施態樣中，黑色素瘤係皮膚黑色素瘤。在一些實施態樣中，皮膚黑色素瘤係選自由表淺擴散性黑色素瘤、結節性黑色素瘤、肢端小痣性黑色素瘤、小痣性惡性黑色素瘤及結締組織增生性黑色素瘤所組成之群組。在一些實施態樣中，皮膚黑色素瘤係表淺擴散性黑色素瘤。在一些實施態樣中，皮膚黑色素瘤係結節性黑色素瘤。在一些實施態樣中，皮膚黑色素瘤係肢端小痣性黑色素瘤。在一些實施態樣中，肢端小痣性黑色素瘤係甲下黑色素瘤。在一些實施態樣中，皮膚黑色素瘤係小痣性惡性黑色素瘤。在一些實施態樣中，皮膚黑色素瘤係結締組織增生性黑色素瘤。在一些實施態樣中，個體曾接受皮膚黑色素瘤的PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑先前療法。在一些實施態樣中，個體曾接受PD-1抑制劑的先前療法。在一些實施態樣中，PD-1之抑制劑係選自由尼沃魯單抗(OPDIVO®、BMS-936558或MDX-1106)、派姆單抗(KEYTRUDA®, MK-3475)、匹利珠單抗(CT-011)及西米匹單抗(cemiplimab) (REGN2810)所組成之群組。在一些實施態樣中，個體曾接受PD-L1抑制劑的先前療法。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑係選自由阿特珠單抗(atezolizumab) (TECENTRIQ®, MPDL3280A)、艾維路單抗(avelumab) (BAVENCIO®)、德瓦魯單抗(durvalumab)及BMS-936559所組成之群組。在一些實施態樣中，黑色素瘤係皮膚下黑色素瘤。在一些實施態樣中，皮膚下黑色素瘤係眼黑色素瘤或黏膜黑色素瘤。在一些實施態樣中，黑色素瘤係非皮膚黑色素瘤。在一些實施態樣中，本發明之抗體或抗體-藥物共軛體係用於治療個體的胰臟癌之方法。在一些實施態樣中，胰臟癌係外分泌癌或神經內分泌癌。在一些實施態樣中，胰臟癌係外分泌癌症。在一些實施態樣中，外分泌胰臟癌係選自由胰腺癌、腺泡細胞癌、囊腺癌、胰母細胞瘤、腺鱗癌、戒環細胞癌、肝樣癌、膠體癌、未分化癌及胰黏液性囊狀腫瘤所組成之群組。在一些實施態樣中，個體曾接受外分泌胰臟癌的一或多種先前線上療法。在一些實施態樣中，個體曾接受外分泌胰臟癌的一種先前線上療法。在一些實施態樣中，個體曾接受外分泌胰臟癌的超過一種先前線上療法。在一些實施態樣中，胰臟癌係胰腺癌。在一些實施態樣中，胰腺癌係胰管腺癌。在一些實施態樣中，胰臟癌係腺泡細胞癌。在一些實施態樣中，胰臟癌係囊腺癌。在一些實施態樣中，胰臟癌係胰母細胞瘤。在一些實施態樣中，胰臟癌係腺鱗癌。在一些實施態樣中，胰臟癌係戒環細胞癌。在一些實施態樣中，胰臟癌係肝樣癌。在一些實施態樣中，胰臟癌係膠體癌。在一些實施態樣中，胰臟癌係未分化癌。在一些實施態樣中，胰臟癌係胰黏液性囊狀腫瘤。在一些實施態樣中，胰臟癌係神經內分泌癌。在一些實施態樣中，本發明之抗體或抗體-藥物共軛體係用於治療個體的肺癌之方法。在一些實施態樣中，本發明之抗體或抗體-藥物共軛體係用於治療個體的非小細胞肺癌之方法。在一些實施態樣中，非小細胞肺癌具有突變形式之表皮生長因子受體(EGFR)。在一些實施態樣中，非小細胞肺癌具有野生型EGFR。在一些實施態樣中，個體已經接受非小細胞肺癌的基於鉑之療法的先前療法。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係選自由下列所組成之群組：卡鉑(carboplatin)、順鉑(cisplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、奈達鉑(nedaplatin)、四硝酸三鉑、菲鉑(phenanthriplatin)、吡鉑(picoplatin)及沙鉑(satraplatin)。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係卡鉑。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係順鉑(cisplatin)。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係奧沙利鉑。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係奈達鉑。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係四硝酸三鉑。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係菲鉑。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係吡鉑。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係沙鉑。在一些實施態樣中，個體曾接受非小細胞肺癌的PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑先前療法。在一些實施態樣中，個體曾接受PD-1抑制劑的先前療法。在一些實施態樣中，PD-1抑制劑係選自由尼沃魯單抗(OPDIVO®、BMS-936558或MDX-1106)、派姆單抗(KEYTRUDA®, MK-3475)、匹利珠單抗(CT-011)及西米匹單抗(cemiplimab) (REGN2810)所組成之群組。在一些實施態樣中，個體曾接受PD-L1抑制劑的先前療法。在一些實施態樣中，PD-L1抑制劑係選自由阿特珠單抗(atezolizumab) (TECENTRIQ®, MPDL3280A)、艾維路單抗(avelumab) (BAVENCIO®)、德瓦魯單抗(durvalumab)及BMS-936559所組成之群組。在一些實施態樣中，個體已經接受非小細胞肺癌的基於鉑之療法及PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑先前療法。在一些實施態樣中，本發明之抗體或抗體-藥物共軛體係用於治療個體的甲狀腺癌之方法。在一些實施態樣中，本發明之抗體或抗體-藥物共軛體係用於治療個體的食道癌之方法。在一些實施態樣中，本發明之抗體或抗體-藥物共軛體係用於治療個體的頭頸癌之方法。在一些實施態樣中，本發明之抗體或抗體-藥物共軛體係用於治療個體的乳癌之方法。在一些實施態樣中，乳癌係選自由HER2陽性、HER2陰性、***受體(ER)陽性、ER陰性、助孕素受體(PR)陽性、PR陰性及三陰性乳癌所組成之群組。在一些實施態樣中，乳癌係HER2陽性乳癌。在一些實施態樣中，乳癌係HER2陰性乳癌。在一些實施態樣中，個體曾接受HER2陰性乳癌的一或多種先前線上療法。在一些實施態樣中，一或多種先前線上療法包含紫杉烷(taxane)之治療。在一些實施態樣中，紫杉烷係選自由太平洋紫杉醇、多西紫杉醇及卡巴西紫杉醇(cabazitaxel)所組成之群組。在一些實施態樣中，紫杉烷係太平洋紫杉醇。在一些實施態樣中，紫杉烷係多西紫杉醇。在一些實施態樣中，紫杉烷係卡巴西紫杉醇。在一些實施態樣中，HER2陰性乳癌個體係荷爾蒙受體陽性。在一些實施態樣中，HER2陰性、荷爾蒙受體陽性乳癌個體曾接受CDK4/6抑制劑的先前療法。在一些實施態樣中，HER2陰性、荷爾蒙受體陽性乳癌個體曾接受荷爾蒙導向療法的先前療法。在一些實施態樣中，乳癌係ER陽性乳癌。在一些實施態樣中，乳癌係ER陰性乳癌。在一些實施態樣中，乳癌係PR陽性乳癌。在一些實施態樣中，乳癌係PR陰性乳癌。在一些實施態樣中，本發明之抗體或抗體-藥物共軛體係用於治療個體的三陰性乳癌之方法。三陰性乳癌係一種癌之術語，其係指缺乏可偵測之***受體及助孕素受體，並缺乏HER2/neu過度表現之乳癌。在一些實施態樣中，本發明之抗體或抗體-藥物共軛體係用於治療個體的結直腸癌之方法。在一些實施態樣中，結直腸癌係選自由結直腸腺癌、胃腸道基質瘤、原發性結直腸淋巴瘤、胃腸道類癌腫瘤及平滑肌肉瘤所組成之群組。在一些實施態樣中，結直腸癌係結直腸腺癌。在一些實施態樣中，結直腸癌係胃腸道基質瘤。在一些實施態樣中，結直腸癌係原發性結直腸淋巴瘤。在一些實施態樣中，結直腸癌係胃腸道類癌腫瘤。在一些實施態樣中，結直腸癌係平滑肌肉瘤。在一些實施態樣中，個體曾接受結直腸癌的二種或超過二種先前線上療法。在一些實施態樣中，個體曾接受結直腸癌的二種先前線上療法。在一些實施態樣中，個體曾接受結直腸癌的超過二種先前線上療法。在一些實施態樣中，本發明之抗體或抗體-藥物共軛體係用於治療個體的間皮瘤之方法。在一些實施態樣中，間皮瘤係選自由胸膜間皮瘤、腹膜間皮瘤、心包膜間皮瘤及睪丸間皮瘤所組成之群組。在一些實施態樣中，間皮瘤係胸膜間皮瘤。在一些實施態樣中，個體已經接受胸膜間皮瘤的基於鉑之療法的先前療法。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係選自由下列所組成之群組：卡鉑(carboplatin)、順鉑(cisplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、奈達鉑(nedaplatin)、四硝酸三鉑、菲鉑(phenanthriplatin)、吡鉑(picoplatin)及沙鉑(satraplatin)。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係卡鉑。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係順鉑(cisplatin)。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係奧沙利鉑。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係奈達鉑。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係四硝酸三鉑。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係菲鉑。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係吡鉑。在一些實施態樣中，基於鉑之療法係沙鉑。在一些實施態樣中，個體曾接受胸膜間皮瘤的培美曲塞的先前療法。在一些實施態樣中，間皮瘤係腹膜間皮瘤。在一些實施態樣中，間皮瘤係心包膜間皮瘤。在一些實施態樣中，間皮瘤係睪丸間皮瘤。在一些實施態樣中，本發明之抗體或抗體-藥物共軛體係用於治療膽管癌之方法。該治療可應用至具有這些種類之原發性或轉移性腫瘤之病患。治療亦可施用至對習知治療呈現難治性之病患，或對此類治療出現反應後又復發之病患。在一些實施態樣中，個體係人類。
單獨或呈共軛體形式之本發明知抗體(諸如人化抗體)係以有效配方投予，表示延緩癌症發生、減少癌症嚴重性、抑制癌症進一步惡化及/或改善症之至少一種徵候或症狀之劑量、投予途徑及投予頻率。若病患已經罹癌，配方可指治療性有效配方。若該病患相較於一般大眾具有較高之罹癌風險但尚未出現症狀，則該配方可指預防性有效配方。在一些實例中，治療性或預防性療效可於個體病患中相對於歷史對照或相同病患之過去經驗比較觀察。在其他實例中，治療性或預防性療效可於治療病患族群相對於未經治療之對照病患族群的臨床前或臨床試驗中顯示。
單株抗體之例示性劑量係0.1 mg/kg至50 mg/kg病患體重、更典型為1 mg/kg至30 mg/kg、1 mg/kg至20 mg/kg、1 mg/kg至15 mg/kg、1 mg/kg至12 mg/kg或1 mg/kg至10 mg/kg 1、或2 mg/kg至30 mg/kg、2 mg/kg至20 mg/kg、2 mg/kg至15 mg/kg、2 mg/kg至12 mg/kg或2 mg/kg至10 mg/kg、或3 mg/kg至30 mg/kg、3 mg/kg至20 mg/kg、3 mg/kg至15 mg/kg、3 mg/kg至12 mg/kg或3 mg/kg至10 mg/kg。單株抗體或其抗體藥物共軛物之例示性劑量係1 mg/kg至7.5 mg/kg或2 mg/kg至7.5 mg/kg或3 mg/kg至7.5 mg/kg病患體重、或0.1至20或0.5至5 mg/kg體重(例如0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10 mg/kg)或10至1500或200至1500 mg之固定劑量。在一些方法中，病患係經投予至少1.5 mg/kg、至少2 mg/kg或至少3 mg/kg之劑量，每三週投予一次或更高之劑量。劑量取決於投予頻率、病患狀態、對先前治療之反應(若有的話)、預防性或治療性之治療或急性或慢性病症等其他因素。
投予可為腸胃外、靜脈內、經口、皮下、動脈內、顱內、脊椎鞘內、腹膜內、局部、鼻內或肌肉內。投予亦可直接集中至腫瘤內。藉由靜脈內或皮下投予至系統性循環內係為較佳。靜脈內投予可藉由例如在諸如30至90分鐘之期間輸注，或藉由單一推注注射。
投予頻率取決於抗體或共軛體於循環中之半衰期、病患病況及投予途徑等其他因素。頻率可為每天、每週、每月、每季或因應病患病況之改變或所治療之癌症的進展而在不規則之間隔投予。示範性靜脈投予之頻率係在一連續治療療程中介於每週二次至每季一次，雖然更高或更低頻率之投藥亦為可能。其他例示性靜脈投予之頻率係在一連續治療療程中介於每週一次至每四週三次，雖然更高或更低頻率之投藥亦為可能。以皮下投予而言，例示性投藥頻率係每天至每月一次，雖然更高或更低頻率之投藥亦為可能。
投予之劑量次數取決於癌症之特性(例如是否出現急性或慢性症狀)及病症對治療之反應。以急性病症或慢性病症之急性惡化而言，投予1至10次通常足夠。有時單次推注劑量(可任意選擇地呈分開形式)即足以用於急性病症或慢性病症之急性惡化。治療可重複用於反覆性急性病症或急性惡化。以慢性病症而言，抗體可以規律之間隔投予，例如每週、隔週、每月、每季、每六個月一次至少1、5或10年或病患終生。
用於腸胃外投予之醫藥組成物係較佳地無菌、實質上等滲性且在GMP條件下製造。醫藥組成物可以單位劑量形式提供(即用於單次投予之劑量)。醫藥組成物可利用一或多種生理上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或助劑調配。調配物取決於所選擇之投予途徑。以注射而言，抗體可被調配於水性溶液，較佳地生理上可相容之緩衝液，諸如Hank氏溶液、Ringer氏液或生理鹽水或醋酸緩衝液(以減少注射部位之不適)。溶液可包含調配劑諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。選擇性地，抗體可呈凍乾形式以供使用前與適當載具例如無致熱原之無菌水構成。抗體於液體調配物中之濃度可為例如1至100 mg/ml，諸如10 mg/ml。
本發明之抗體治療可與化學療法、放射療法、幹細胞治療、手術及其他能有效對抗所治療之病症的治療組合。其他可與本文所述之針對CD228之抗體及抗體-藥物共軛體一起投予之劑的有用類別包括例如針對癌性細胞上表現之其他受體之抗體、抗微管蛋白劑(例如耳抑素)、DNA次要凹槽結合劑、DNA複製抑制劑、烷化劑(例如鉑複合物諸如順鉑、單(鉑)、二(鉑)及三核鉑複合物及卡鉑)、蒽環類、抗生素、抗葉酸劑、抗代謝物、化學療法致敏劑、雙聯黴素、依扥泊苷、氟化嘧啶、離子載體、萊克西托素(lexitropsin)、亞硝基尿素、普拉汀諾(platinol)、預先形成化合物、嘌呤抗代謝物、嘌呤黴素(puromycin)、放射線致敏劑、類固醇、紫杉烷、拓撲異構酶抑制劑、長春花生物鹼及類似物。
抗CD228抗體或抗體-藥物共軛體之治療(可選地單獨與上述其他劑或配方之任一者組合或作為抗體藥物共軛體)相較於相同治療(例如化學治療)但不含單獨或作為共軛體之抗CD228抗體可增加腫瘤(例如黑色素瘤、胰臟癌、非小細胞肺癌、甲狀腺癌、頭頸癌、三陰性乳癌乳癌、結直腸癌、間皮瘤、膽管癌)病患特別是復發或頑固性病患之中位無進展存活期或整體存活期至少30%或40%，但較佳地50%、60%至70%或甚至100%或更久。此外或替代地，包括單獨或作為共軛體之抗CD228抗體之治療(例如標準化學治療)相較於相同治療(例如化學治療)但不含單獨或作為共軛體之抗CD228抗體可增加腫瘤病患的完全反應率、部分反應率或客觀反應率(完全+部分)至少30%或40%，但較佳地50%、60%至70%或甚至100%。
一般而言，在臨床試驗中(例如II期、II/III期或III期)，經標準治療加上單獨或作為共軛體之抗CD228抗體治療之病患的前述中位無進展存活期及/或反應率之增加相對於單獨接受標準治療(或加上安慰劑)之對照組病患具有統計顯著性，例如p = 0.05或0.01或甚至0.001的水準。完全及部分反應率係由經常用於癌症臨床試驗中的客觀標準決定，例如由美國國家癌症研究所及/或食品藥物管理局列示或接受之標準。 IX. 製造物品及套組
在另一態樣中，所提供之製造物品或套組包含本文所述之抗CD228抗體或抗CD228抗體-藥物共軛體。製造物品或套組可進一步包含在本發明之方法中使用本文所述之抗CD228抗體或抗CD228抗體-藥物共軛體的指示說明。因此，在某些實施態樣中，製造物品或套組包含在治療個體的癌症(例如黑色素瘤及其他癌，包括胰臟癌、非小肺癌、甲狀腺癌、頭頸癌、乳癌諸如三陰性乳癌、結直腸癌、間皮瘤或膽管癌)之方法中使用本文所述之抗CD228抗體或抗CD228抗體-藥物共軛體的指示說明，包含向個體投予有效量的本文所述之抗CD228抗體或抗CD228抗體-藥物共軛體。在一些實施態樣中，癌症係黑色素瘤。在一些實施態樣中，癌症係胰臟癌。在一些實施態樣中，癌症係非小肺癌。在一些實施態樣中，癌症係甲狀腺癌。在一些實施態樣中，癌症係頭頸癌。在一些實施態樣中，癌症係乳癌。在一些實施態樣中，乳癌係三陰性乳癌。在一些實施態樣中，該癌係結直腸癌。在一些實施態樣中，癌症係間皮瘤。在一些實施態樣中，癌症係膽管癌。在一些實施態樣中，個體係人類。
製造物品或套組可進一步包含容器。合適容器包括例如瓶、小瓶(例如，雙室小瓶)、注射器(諸如單室或雙室注射器)及試管。在一些實施態樣中，容器係小瓶。容器可自多種材料諸如玻璃或塑膠形成。容器容納調配物。
製造物品或套組可進一步包含在容器上或與容器相關之標籤或包裝仿單，其可標示重構及/或使用調配物的指示。標籤或包裝仿單可進一步指示調配物可用於或欲用於皮下、靜脈內(例如靜脈輸注)或其他用於治療個體的癌症(例如黑色素瘤及其他癌，包括胰臟癌、非小肺癌、甲狀腺癌、頭頸癌、乳癌諸如三陰性乳癌、結直腸癌、間皮瘤或膽管癌)的投予模式。容納調配物之容器可為單次使用小瓶或允許重複投予經重構的調配物之多次使用小瓶。製造物品或套組可進一步包含第二容器，該第二容器包含合適稀釋劑。製造物品或套組可進一步包括其他從商業性、治療性及使用者觀點來說所欲之材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭、注射器及載有使用說明的包裝仿單。
本文中之製造物品或套組可選地進一步包含容器，該容器包含第二藥物，其中抗CD228抗體或抗CD228抗體-藥物共軛體係第一藥物，且該物品或套組在標籤或包裝仿單上進一步包含使用有效量的第二藥物治療個體之指示說明。在一些實施態樣中，第二藥物係用於消除或減少一或多起不良事件的嚴重性。
在一些實施態樣中，抗CD228抗體或抗CD228抗體-藥物共軛體係以冷凍乾燥粉末存在於容器中。在一些實施態樣中，冷凍乾燥粉末係於標示活性劑的數量之密封容器諸如小瓶、安瓿或小袋中。當該藥品係藉由注射投予時，可提供例如無菌注射用水或鹽水之安瓿(可選地作為套組之一部分)以使成分可在投予前混合。該套組可進一步包括若有需要之一或多種不同的習知醫藥組分，諸如例如所屬技術領域中具有通常知識者將顯而易知之具有一或多種醫藥上可接受之載劑的容器、額外容器等。印製為仿單或標籤形式之指示說明亦可包括於套組中，其標示應投予之組分數量、投予準則及/或混合組分之準則。 X. 其他應用
本文所述之抗CD228抗體(諸如人化抗CD228)可在臨床診斷、臨床治療或研究之情況中用於偵測CD228。癌症之CD228的表現提供癌症可由本發明之抗體治療的指示。抗體亦可作為實驗室研究之研究試劑販售，以偵測帶有CD228之細胞及彼等對各種刺激之反應。在此類用途中，單株抗體可以螢光分子、自旋標示分子、酶或放射性同位素標示，且可以含有實施CD228測定所需之所有試劑的套組形式提供。本文所述之抗體可用於偵測CD228蛋白表現及決定癌症是否可使用CD228 ADC治療。作為實例，本文所述之抗體可用於偵測黑色素瘤細胞、胰臟癌細胞、非小細胞肺癌細胞、甲狀腺癌細胞及頭頸癌細胞的CD228表現。抗體亦可用於例如藉由親和力層析純化CD228。
所有以上或以下所引述之專利申請案、網站、其他公開資料、編號及類似物係以引用方式整體併入本文以符合所有目的，如同每個個別項目係經具體及個別明示而以引用方式併入之相同範圍。若不同版本之序列在不同時間與一編號相關，此處係指在本申請案之有效申請日與該編號相關之版本。有效申請日係指較早之提及該編號之優先權之實際申請日或申請日(若有的話)。同樣地，若不同版本之公開資料、網站或該類似物係於不同時間出版，此處係指在最近本申請案之有效申請日以前所發表之版本，除非另外說明。本發明之任何特徵、步驟、元件、實施態樣或態樣可與任何其他者組合使用除非特別說明不可如此。雖然本發明已由說明和示例之方式詳加描述以求清晰認識，但顯而易見的是某些改變及修飾可在該隨附之權利要求的範圍內實施。 XI. 抗體序列
CDR序列：
Figure 02_image073
以下列可變區序列之各者而言，根據Kabat編號方案之CDR係畫底線且根據IMGT編號方案之CDR係呈粗體及斜體。
hL49、27D-Ala、27D-Gln、27D-Tyr、34-Ala、34-Gln、34-Tyr、3X-Ala、3X-Gln、3X-Tyr-重鏈可變區：
Figure 02_image075
hL49輕鏈可變區：
Figure 02_image077
27D-Ala-輕鏈可變區：
Figure 02_image079
27D-Gln-輕鏈可變區：
Figure 02_image081
27D-Tyr-輕鏈可變區：
Figure 02_image083
輕鏈可變區：
34-Ala-輕鏈可變區：
Figure 02_image085
34-Gln-輕鏈可變區：
Figure 02_image087
34-Tyr-輕鏈可變區：
Figure 02_image089
3X-Ala-輕鏈可變區：
Figure 02_image091
3X-Gln-輕鏈可變區：
Figure 02_image093
3X-Tyr-輕鏈可變區：
Figure 02_image095
hL49、27D-Ala、27D-Gln、27D-Tyr、34-Ala、34-Gln、34-Tyr、3X-Ala、3X-Gln、3X-Tyr-架構區：
Figure 02_image097
參照下列實例將能更完整了解本發明。然而，它們不應被解讀為限制本發明之範圍。應了解此處所描述之實例及實施態樣僅供示範之目的，各種對於彼等之修飾或改變將由該領域之技藝人士建議且將被納入本申請案之精神與範圍及該隨附之權利要求之範圍內。 實例 實例 1 ：癌細胞系之 CD228 表現
在各種癌細胞系之細胞表面上的CD228拷貝數定量係使用鼠CD228 mAb作為一級抗體及如製造商(DAKO A/S, Glostrup, Denmark)所述之DAKO QiFiKit流式細胞間接測定來測定並使用Attune NxT流式細胞儀評估。所得每細胞CD228分子表現數顯示於表1。 表1：各種細胞系之每細胞的CD228分子
Figure 02_image099
Figure 02_image101
實例2：抗CD228抗體之pH依賴性結合
各種抗CD228抗體結合CD228之能力在pH值範圍4.55至7.4下使用標準ELISA規程評估。簡言之，將100 ng之人CD228(R&D Systems Custom02；批號DCWR021505A)或BSA(Sigma；目錄編號A7030-100G)用PBS稀釋且添加至各孔在4°C下隔夜。接著將板以PBS-T(EMD Millipore；目錄編號5246531EA)洗滌三次。在洗滌之後，將板在室溫下以3% (w/v) BSA於PBS-T中阻斷1小時。接著移除過量阻斷緩衝液，且一級抗體以3倍稀釋於稀釋緩衝液(0.15M檸檬酸鹽-磷酸鹽緩衝劑pH 4.0至7.5)始於抗體濃度60 nM添加。在室溫下培育1小時之後，將板洗滌3次，接著以二級抗體(山羊抗人IgG Fc特異性HRP共軛，Jackson ImmunoResearch編號109-035-098)於含1% BSA之PBS-T中培育。在室溫下培育30分鐘之後，將板洗滌3次。接著將100 µl TMB受質(Life Technologies；目錄編號002023)添加至各孔。在室溫下培育10分鐘之後，將100 µl H 2SO 4添加至各孔以停止反應，將板覆蓋透明板封且在Envision上以450 nM讀取。hL49及輕鏈CDR之組胺酸經取代成丙胺酸、麩醯胺酸或酪胺酸之九種變體的pH依賴性結合係如圖1A至1I所示。各抗體之所得EC 50顯示於表2。在此測定中，hL49_27D突變體(27D_Ala、27D_Tyr及27D_Gln)比起hL49具有較強親和力。hL49_34突變體(34_Ala及34_Gln)在pH 7.4下具有與hL49類似之親和力，但在pH 6.3下具有較強親和力。三突變體整體而言相較於hL49具有較低親和力。 表2：各抗體之EC 50(nM)
Figure 02_image103
實例3：抗CD228抗體在中性pH下之細胞結合
使用飽和結合測定在中性pH下評估各種抗CD228抗體結合A375細胞、A2058細胞上之CD228及CD228蛋白的能力。簡言之，將分別具有40,000或18,000拷貝數之CD228的1x10 5個A2058或A375細胞等分至96孔v底板之每孔。添加濃度範圍0.66 pM至690 nM之各CD228抗體並在冰上培育60分鐘。使細胞成團塊且以PBS/BSA洗滌3X，隨後添加10 µg/ml之經PE標示之抗人IgG山羊二級抗體，並在冰上培育額外60分鐘。使細胞成團塊且以PBS/BSA洗滌3X，並重懸於125 μL之PBS/BSA中。以流式細胞儀分析螢光，使用飽和螢光信號之百分比測定結合百分比且後續計算表觀K D。各抗體之所得EC 50顯示於表3。組胺酸34變體(34_Ala、34_Gln及34_Tyr)比起組胺酸27D變體或3X組胺酸變體顯示較低之對細胞之親和力。組胺酸34變體顯示以丙胺酸、麩醯胺酸及酪胺酸取代之巨大差異。令人意外的是，3X突變體之細胞結合與ELISA測定之間的親和力具有巨大差異。 表3：各抗體之EC 50(nM)
Figure 02_image105
實例4：抗CD228抗體-藥物共軛體之活體外細胞毒性
使腫瘤細胞與包含所示抗CD228抗體、連接子及MMAE之CD228抗體-藥物共軛體在37 °C下培育96至144小時。根據製造商說明使用Cell Titer Glo測量細胞存活性。螢光信號係於Fusion HT螢光板讀取儀(Perkin Elmer, Waltham, MA)上測量。將資料標準化至未經處理之細胞，且使用Graph Pad軟體計算x50值。每細胞CD228分子數量及在最高劑量下剩餘之存活細胞百分比顯示於表4。經各種濃度之抗CD228抗體-藥物共軛體處理之A2058細胞的所得存活細胞百分比顯示於圖2。hL49_34Ala的最大殺滅百分比特別不同。其他突變體不具有較高IC 50值，但顯示較多整體殺滅(表4括號中的數字)。 表4：各抗體之IC 50(nM)及各抗體-藥物共軛體之整體殺滅百分比
Figure 02_image107
實例5：抗CD228抗體之內化
評估抗CD228抗體內化及分解代謝螢光部份AF647之能力。Colo853細胞係經抗CD228抗體處理，該抗CD228抗體與QF01以每抗體2個分子之近似比例共軛，該QF01包含經由葡萄糖醛酸苷連接子(gluc)連接至Cy5螢光團之淬熄劑Tide Quencher 5WS琥珀醯亞胺基酯(TQ5WS)。當Cy5完整在抗體上時維持淬熄，只有在經切割脫離TQ5WS淬熄劑時才發出螢光。在30分鐘後洗滌2 µg/ml之經標示之抗CD228抗體以移除未經結合之經標示之抗CD228抗體。將腫瘤細胞與抗CD228抗體培育且進行成像測定以測定隨時間之每細胞螢光強度。以三重複(in triplicate)實施實驗且結果顯示於圖3A至3C。
以連續暴露條件而言，Colo853細胞係經抗CD228抗體處理，該抗CD228抗體與QF01以每抗體2個分子之近似比例共軛，該QF01包含經由葡萄糖醛酸苷連接子(gluc)連接至Cy5螢光團之淬熄劑Tide Quencher 5WS琥珀醯亞胺基酯(TQ5WS)。如前段所述，當Cy5完整在抗體上時維持淬熄，只有在經切割脫離TQ5WS淬熄劑時才發出螢光。接著添加2 µg/ml之抗體-QF01且允許與細胞結合。不洗滌未與細胞結合之經標示之hL49抗體。將腫瘤細胞與抗CD228抗體培育且進行成像測定以測定隨時間之每細胞螢光強度。以三重複(in triplicate)實施實驗且結果顯示於圖3D至3F。
這些實驗顯示hL49_34Ala比起hL49具有較佳整體內化作用。HL49_34Tyr在結合及洗滌條件下展現較差內化作用，但在連續暴露條件下展現較佳內化作用。 實例6：抗CD228抗體之結合動力學
使用生物膜干涉術(BLI)技術，於Octet Red 384儀器中使用抗體作為配體及抗原作為分析物測定hL49、hL49_34Ala及hL49_Tyr之結合動力學。hL49、hL49_34Ala及hL49_34Tyr之Octet結果顯示於圖4A至C。如表5所示，使用Octet測定之結合動力學表明二個組胺酸34突變體具有減少整體親和力。hL49_34Ala相較於野生型hL49具有較快締合速率但較慢解離速率。相對地，hL49_34Tyr相較於野生型hL49具有較慢締合速率但類似之解離速率，此可解釋其對細胞減少之親和力。 表5：抗CD228抗體之結合動力學
Figure 02_image109
實例 7 ：抗 CD228 ADC 之活體內活性
在裸(nu/nu)小鼠(6隻動物/組)植入於25%基質膠中之1xl0 6個經培養之A375、1x10 5個或2.5x10 5個A2058腫瘤細胞。當腫瘤達到100 mm 3時，開始1mg/kg測試ADC之投藥(單一劑量腹膜內注射)。使用卡尺監測腫瘤體積，當腫瘤體積達到約1000 mm3時安樂死動物。各組之平均腫瘤體積作圖持續，直到一或多隻動物安樂死(圖5A至5D)。所有動物程序係根據獲得實驗動物管理評鑑及認證協會認可之機構中的實驗動物照顧及使用委員會所核准之規程實施。
在具有中等量的CD228表現之A2058異種移植模型中，hL49與二個突變體ADC(hL49_H34A及hL49_H34Y)之間的抗腫瘤活性類似。此活性在當ADC以二種不同ADC連接子及載荷物共軛時維持(圖5A及5C)。在較低CD228表現性細胞系衍生性腫瘤異種移植(CDX)模型A375中，當與MDpr-PEG(12)-gluc-MMAE (8)連接子/載荷物共軛時，hL49突變體ADC比起hL49具有稍微較劣活性(圖5D)。在相同模型中，當與不可通透載荷物(耳抑素T)共軛時，hL49_H34A突變體抗體具有與hL49類似之抗腫瘤活性，然而hL49_H34Y突變體抗體具有此載荷物時失去所有抗腫瘤活性(圖5B)。這些結果表明抗體結合特徵對於取決於CD228表現水準以及連接子和載荷物選擇兩者之ADC活性具有獨特影響。
[圖1A至1I]顯示在pH值範圍4.55至7.4下各種抗CD228抗體與CD228之結合。
[圖2]顯示經不同濃度之各種抗CD228抗體-藥物共軛體處理之A2058細胞系的存活細胞百分比。
[圖3A至3F]顯示hL49、hL49_34Ala及hL49_34Tyr在結合及洗滌條件(圖3A至3C)及連續暴露條件(圖3D至3F)下隨時間之內化作用。
[圖4A至4C]顯示藉由Octet所測定之hL49(圖4A)、hL49_34Ala(圖4B)及hL49_34Tyr(圖4C)的結合動力學。
[圖5A至5D]顯示抗CD228抗體ADC於A2058 (圖5A及5C)及A375(圖5B及5D)異種移植模型中之活體內活性。hL49-mDpr-AT(8)、hL49-H34A-mDpr-AT(8)及hL49-H34Y-mDpr-AT(8)顯示於圖5A及5B。hL49-mDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(8)、hL49-H34A-mDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(8)及hL49-H34Y-mDpr-PEG(12)-gluc-MMAE(8)顯示於圖5C及5D。
 
<![CDATA[<110> 美商西根公司(Seagen Inc.)]]>
          <![CDATA[<120> 抗CD228抗體和抗體-藥物共軛體]]>
          <![CDATA[<140> TW 110128583]]>
          <![CDATA[<141> 2021-08-03]]>
          <![CDATA[<150> US 63/061,111]]>
          <![CDATA[<151> 2020-08-04]]>
          <![CDATA[<160> 41]]>
          <![CDATA[<170> FastSEQ Windows 4.0版]]>
          <![CDATA[<210> 1]]>
          <![CDATA[<211> 5]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 1]]>
          Ser Gly Tyr Trp Asn
           1               5  
          <![CDATA[<210> 2]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 2]]>
          Tyr Ile Ser Asp Ser Gly Ile Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
           1               5                  10                  15      
          <![CDATA[<210> 3]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 3]]>
          Arg Thr Leu Ala Thr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr
           1               5                  10      
          <![CDATA[<210> 4]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 4]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His
           1               5                  10                  15      
          <![CDATA[<210> 5]]>
          <![CDATA[<211> 7]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 5]]>
          Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser
           1               5          
          <![CDATA[<210> 6]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 6]]>
          Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr
           1               5                  
          <![CDATA[<210> 7]]>
          <![CDATA[<211> 119]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 7]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
           1               5                  10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
                      20                  25                  30          
          Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Ile Ser Asp Ser Gly Ile Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Ser Leu
          65                  70                  75                  80  
          Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                          85                  90                  95      
          Arg Arg Thr Leu Ala Thr Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                  115                 
          <![CDATA[<210> 8]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 8]]>
          Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val His Ser
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
                  35                  40                  45              
          Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 9]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 9]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val Ala Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His
           1               5                  10                  15      
          <![CDATA[<210> 10]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 10]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val Gln Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His
           1               5                  10                  15      
          <![CDATA[<210> 11]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 11]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His
           1               5                  10                  15      
          <![CDATA[<210> 12]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 12]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ala
           1               5                  10                  15      
          <![CDATA[<210> 13]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 13]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Gln
           1               5                  10                  15      
          <![CDATA[<210> 14]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 14]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr
           1               5                  10                  15      
          <![CDATA[<210> 15]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 15]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val Ala Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ala
           1               5                  10                  15      
          <![CDATA[<210> 16]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 16]]>
          Ser Gln Ser Thr Ala Val Pro Pro Thr
           1               5                  
          <![CDATA[<210> 17]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 17]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val Gln Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Gln
           1               5                  10                  15      
          <![CDATA[<210> 18]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 18]]>
          Ser Gln Ser Thr Gln Val Pro Pro Thr
           1               5                  
          <![CDATA[<210> 19]]>
          <![CDATA[<211> 16]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 19]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr
           1               5                  10                  15      
          <![CDATA[<210> 20]]>
          <![CDATA[<211> 9]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 20]]>
          Ser Gln Ser Thr Tyr Val Pro Pro Thr
           1               5                  
          <![CDATA[<210> 21]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 21]]>
          Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val Ala Ser
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
                  35                  40                  45              
          Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 22]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 22]]>
          Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val Gln Ser
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
                  35                  40                  45              
          Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 23]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 23]]>
          Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
                  35                  40                  45              
          Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 24]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 24]]>
          Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val His Ser
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
                  35                  40                  45              
          Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 25]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 25]]>
          Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val His Ser
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
                  35                  40                  45              
          Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 26]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 26]]>
          Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val His Ser
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
                  35                  40                  45              
          Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
                          85                  90                  95      
          Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 27]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 27]]>
          Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val Ala Ser
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
                  35                  40                  45              
          Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
                          85                  90                  95      
          Thr Ala Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 28]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 28]]>
          Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val Gln Ser
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Gln Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
                  35                  40                  45              
          Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
                          85                  90                  95      
          Thr Gln Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 29]]>
          <![CDATA[<211> 112]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 29]]>
          Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser
                      20                  25                  30          
          Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
                  35                  40                  45              
          Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
              50                  55                  60                  
          Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
          65                  70                  75                  80  
          Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
                          85                  90                  95      
          Thr Tyr Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210> 30]]>
          <![CDATA[<211> 329]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 30]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
           1               5                  10                  15      
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                          85                  90                  95      
          Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
                      100                 105                 110         
          Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
                  115                 120                 125             
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
              130                 135                 140                 
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
          145                 150                 155                 160 
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
                          165                 170                 175     
          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
                      180                 185                 190         
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
                  195                 200                 205             
          Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
              210                 215                 220                 
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
          225                 230                 235                 240 
          Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
                          245                 250                 255     
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
                      260                 265                 270         
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                  275                 280                 285             
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
              290                 295                 300                 
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
          305                 310                 315                 320 
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                          325                 
          <![CDATA[<210> 31]]>
          <![CDATA[<211> 329]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 31]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
           1               5                  10                  15      
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                          85                  90                  95      
          Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
                      100                 105                 110         
          Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Cys Val Phe Leu Phe Pro Pro
                  115                 120                 125             
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
              130                 135                 140                 
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
          145                 150                 155                 160 
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
                          165                 170                 175     
          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
                      180                 185                 190         
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
                  195                 200                 205             
          Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
              210                 215                 220                 
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
          225                 230                 235                 240 
          Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
                          245                 250                 255     
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
                      260                 265                 270         
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
                  275                 280                 285             
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
              290                 295                 300                 
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
          305                 310                 315                 320 
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
                          325                 
          <![CDATA[<210> 32]]>
          <![CDATA[<211> 106]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 32]]>
          Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
           1               5                  10                  15      
          Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
                      20                  25                  30          
          Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
                  35                  40                  45              
          Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
              50                  55                  60                  
          Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
          65                  70                  75                  80  
          His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
                          85                  90                  95      
          Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
                      100                 105     
          <![CDATA[<210> 33]]>
          <![CDATA[<211> 30]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 33]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
           1               5                  10                  15      
          Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Asp Ser Ile Thr
                      20                  25                  30  
          <![CDATA[<210> 34]]>
          <![CDATA[<211> 14]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 34]]>
          Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
           1               5                  10                  
          <![CDATA[<210> 35]]>
          <![CDATA[<211> 32]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 35]]>
          Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Tyr Ser Leu Lys
           1               5                  10                  15      
          Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210> 36]]>
          <![CDATA[<211> 11]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 36]]>
          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
           1               5                  10      
          <![CDATA[<210> 37]]>
          <![CDATA[<211> 23]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 37]]>
          Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
           1               5                  10                  15      
          Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys
                      20              
          <![CDATA[<210> 38]]>
          <![CDATA[<211> 15]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 38]]>
          Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
           1               5                  10                  15  
          <![CDATA[<210> 39]]>
          <![CDATA[<211> 32]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 39]]>
          Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
           1               5                  10                  15      
          Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys
                      20                  25                  30          
          <![CDATA[<210> 40]]>
          <![CDATA[<211> 10]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 40]]>
          Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
           1               5                  10  
          <![CDATA[<210> 41]]>
          <![CDATA[<211> 4]]>
          <![CDATA[<212> PRT]]>
          <![CDATA[<213> 人工序列]]>
          <![CDATA[<220> ]]>
          <![CDATA[<223> 合成性建構體]]>
          <![CDATA[<400> 41]]>
          Gly Phe Leu Gly
           1
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016

Claims (116)

  1. 一種經單離之抗CD228抗體或其抗原結合片段，其包含重鏈可變區及輕鏈可變區，其中該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列，其中輕鏈CDR的至少一個組胺酸殘基係經不同胺基酸取代。
  2. 如請求項1之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含與SEQ ID NO: 7之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含與SEQ ID NO: 8之胺基酸序列具有至少95%序列同一性之胺基酸序列。
  3. 如請求項1或2之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。
  4. 如請求項3之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列。
  5. 如請求項1或2之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。
  6. 如請求項5之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列。
  7. 如請求項1或2之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。
  8. 如請求項7之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列。
  9. 如請求項1或2之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。
  10. 如請求項9之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列。
  11. 如請求項1或2之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。
  12. 如請求項11之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:25之胺基酸序列。
  13. 如請求項1或2之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列。
  14. 如請求項13之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列。
  15. 如請求項1或2之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列。
  16. 如請求項15之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:27之胺基酸序列。
  17. 如請求項1或2之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列。
  18. 如請求項17之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:28之胺基酸序列。
  19. 如請求項1或2之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含： (i) CDR-H1，其包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列； (ii) CDR-H2，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列；及 (iii) CDR-H3，其包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列；且 其中該輕鏈可變區包含： (i) CDR-L1，其包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列； (ii) CDR-L2，其包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列；及 (iii) CDR-L3，其包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列。
  20. 如請求項19之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:29之胺基酸序列。
  21. 如請求項1至20中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段係抗原結合片段。
  22. 如請求項21之抗體或抗原結合片段，其中該抗原結合片段係選自由Fab、Fab'、F(ab') 2、Fab'-SH、Fv、雙體抗體、線性抗體及單鏈抗體片段所組成之群組。
  23. 如請求項1至20中任一項之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段係全長抗體。
  24. 如請求項23之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈可變區係與重鏈恆定區融合且該輕鏈可變區係與輕鏈恆定區融合。
  25. 如請求項24之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈恆定區係IgG1同型。
  26. 如請求項24或25之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈恆定區具有包含SEQ ID NO:30之胺基酸序列且該輕鏈恆定區具有包含SEQ ID NO:32之胺基酸序列。
  27. 如請求項24或25項之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈恆定區係天然人恆定區之突變形式，該突變形式相較於該天然人恆定區具有減少之與Fcγ受體之結合。
  28. 如請求項24或25之抗體或抗原結合片段，其中該重鏈恆定區具有包含SEQ ID NO:31 (S239C)之胺基酸序列且該輕鏈恆定區具有包含SEQ ID NO:32之胺基酸序列。
  29. 一種抗體-藥物共軛體，其包含與細胞毒性劑或細胞靜止劑共軛之如請求項1至28中任一項之抗體或抗原結合片段。
  30. 如請求項29之抗體-藥物共軛體，其中該抗體或抗原結合片段係經由連接子與該細胞毒性劑或細胞靜止劑共軛。
  31. 如請求項30之抗體-藥物共軛體，其中該連接子係MDpr-PEG(12)-gluc連接子。
  32. 如請求項29至31中任一項之抗體-藥物共軛體，其中該細胞毒性劑或細胞靜止劑係單甲基耳抑素。
  33. 如請求項32之抗體-藥物共軛體，其中該單甲基耳抑素係單甲基耳抑素E (MMAE)。
  34. 如請求項33之抗體-藥物共軛體，其中該連接子係附接至單甲基耳抑素E以形成具有下式結構之抗體-藥物共軛體：
    Figure 03_image001
    其中Ab係該抗體或抗原結合片段，n係12，R PR係氫，R 21係CH 3且p表示1至16之數字。
  35. 如請求項34之抗體-藥物共軛體，其中在該抗體-藥物共軛體族群中p的平均值係約8。
  36. 如請求項1至22中任一項之抗體-藥物共軛體，其中該抗體-藥物共軛體係由下式結構代表：
    Figure 03_image003
    或其醫藥上可接受之鹽，其中： Ab係該抗原結合蛋白或其片段且p表示1至12之數字； 下標nn係1至5之數字； 下標a'係0且A'係不存在； P1、P2及P3各係胺基酸，其中： 該胺基酸P1、P2或P3之第一者係帶負電； 該胺基酸P1、P2或P3之第二者具有疏水性不大於白胺酸之脂族側鏈；且 該胺基酸P1、P2或P3之第三者具有低於白胺酸之疏水性， 其中該胺基酸P1、P2或P3之第一者對應P1、P2或P3中任一者，該胺基酸P1、P2或P3之第二者對應剩餘二個胺基酸P1、P2或P3中一者，且該胺基酸P1、P2或P3之第三者對應剩餘最後一個胺基酸P1、P2或P3， 惟-P3-P2-P1-不是-Glu-Val-Cit-或-Asp-Val-Cit-。
  37. 如請求項36之抗體-藥物共軛體，其中下標nn係2。
  38. 如請求項36或37之抗體-藥物共軛體，其中： 該三肽之該P3胺基酸係呈D-胺基酸組態； 該P2及P1胺基酸中一者具有疏水性低於白胺酸之脂族側鏈；且 該P2及P1胺基酸中另一者係帶負電。
  39. 如請求項36至38中任一項之抗體-藥物共軛體，其中該P3胺基酸係D-Leu或D-Ala。
  40. 如請求項36至39中任一項之抗體-藥物共軛體，其中該P3胺基酸係D-Leu或D-Ala，該P2胺基酸係Ala、Glu或Asp且該P1胺基酸係Ala、Glu或Asp。
  41. 如請求項36至40中任一項之抗體-藥物共軛體，其中-P3-P2-P1-係-D-Leu-Ala-Asp-、-D-Leu-Ala-Glu-、-D-Ala-Ala-Asp-或-D-Ala-Ala-Glu-。
  42. 如請求項36至41中任一項之抗體-藥物共軛體，其中-P3-P2-P1-係-D-Leu-Ala-Glu-。
  43. 如請求項36至42中任一項之抗體-藥物共軛體，其中該抗體-藥物共軛體係由下式結構代表：
    Figure 03_image005
    或其醫藥上可接受之鹽， 其中Ab係該抗原結合蛋白或其片段且p表示1至12之數字。
  44. 一種核酸，其編碼如請求項1至28中任一項所定義之重鏈可變區及/或輕鏈可變區。
  45. 一種載體，其包含如請求項44之核酸。
  46. 如請求項45之載體，其中該載體係表現載體。
  47. 一種宿主細胞，其包含如請求項44之核酸。
  48. 如請求項47之宿主細胞，其中該宿主細胞係中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。
  49. 一種生產抗CD228抗體或其抗原結合片段之方法，其包含在適用於生產該抗CD228抗體或其抗原結合片段之條件下培養如請求項47或48之宿主細胞。
  50. 如請求項49之方法，其進一步包含單離由該宿主細胞生產之該抗CD228抗體或其抗原結合片段。
  51. 一種生產抗CD228抗體-藥物共軛體之方法，其包含在適用於生產抗CD228抗體之條件下培養如請求項47或48之宿主細胞；單離該宿主細胞所生產之該抗CD228抗體；及將該抗CD228抗體與細胞毒性劑或細胞靜止劑共軛。
  52. 如請求項51之方法，其中該抗CD228抗體係經由連接子與該細胞毒性劑或細胞靜止劑共軛。
  53. 如請求項52之方法，其中該連接子係MDpr-PEG(12)-gluc連接子。
  54. 如請求項51至53中任一項之方法，其中該細胞毒性劑或細胞靜止劑係單甲基耳抑素。
  55. 如請求項54之方法，其中該單甲基耳抑素係單甲基耳抑素E (MMAE)。
  56. 如請求項55之方法，其中該連接子係附接至單甲基耳抑素E以形成具有下式結構之抗體-藥物共軛體：
    Figure 03_image007
    其中Ab係該抗體或抗原結合片段，n係12，R PR係氫，R 21係CH 3且p表示1至16之數字。
  57. 如請求項56之方法，其中在該抗體-藥物共軛體族群中p的平均值係約8。
  58. 如請求項55之方法，其中該連接子係附接至單甲基耳抑素E以形成由下式結構代表之抗體-藥物共軛體：
    Figure 03_image009
    或其醫藥上可接受之鹽，其中： Ab係該抗原結合蛋白或其片段且p表示1至12之數字； 下標nn係1至5之數字； 下標a'係0且A'係不存在； P1、P2及P3各係胺基酸，其中： 該胺基酸P1、P2或P3之第一者係帶負電； 該胺基酸P1、P2或P3之第二者具有疏水性不大於白胺酸之脂族側鏈；且 該胺基酸P1、P2或P3之第三者具有低於白胺酸之疏水性， 其中該胺基酸P1、P2或P3之第一者對應P1、P2或P3中任一者，該胺基酸P1、P2或P3之第二者對應剩餘二個胺基酸P1、P2或P3中一者，且該胺基酸P1、P2或P3之第三者對應剩餘最後一個胺基酸P1、P2或P3， 惟-P3-P2-P1-不是-Glu-Val-Cit-或-Asp-Val-Cit-。
  59. 如請求項58之方法，其中下標nn係2。
  60. 如請求項58或59之方法，其中： 該三肽之該P3胺基酸係呈D-胺基酸組態； 該P2及P1胺基酸中一者具有疏水性低於白胺酸之脂族側鏈；且 該P2及P1胺基酸中另一者係帶負電。
  61. 如請求項58至60中任一項之方法，其中該P3胺基酸係D-Leu或D-Ala。
  62. 如請求項58至61中任一項之方法，其中該P3胺基酸係D-Leu或D-Ala，該P2胺基酸係Ala、Glu或Asp且該P1胺基酸係Ala、Glu或Asp。
  63. 如請求項58至62中任一項之方法，其中-P3-P2-P1-係-D-Leu-Ala-Asp-、-D-Leu-Ala-Glu-、-D-Ala-Ala-Asp-或-D-Ala-Ala-Glu-。
  64. 如請求項58至63中任一項之方法，其中-P3-P2-P1-係-D-Leu-Ala-Glu-。
  65. 如請求項58至64中任一項之方法，其中該抗體-藥物共軛體係由下式結構代表：
    Figure 03_image011
    或其醫藥上可接受之鹽， 其中Ab係該抗原結合蛋白或其片段且p表示1至12之數字。
  66. 一種治療個體的癌症之方法，該方法包含向該個體投予如請求項1至28中任一項之抗體或抗原結合片段或如請求項29至43中任一項之抗體-藥物共軛體。
  67. 如請求項66之方法，其中該個體先前已經接受一或多種治療劑的治療且對該治療無反應，其中該一或多種治療劑不是該抗體、抗原結合片段或抗體-藥物共軛體。
  68. 如請求項66之方法，其中該個體先前已經接受一或多種治療劑的治療且在該治療之後復發，其中該一或多種治療劑不是該抗體、抗原結合片段或抗體-藥物共軛體。
  69. 如請求項66之方法，其中該個體先前已經接受一或多種治療劑的治療且在治療期間經歷疾病進展，其中該一或多種治療劑不是該抗體、抗原結合片段或抗體-藥物共軛體。
  70. 如請求項66至69中任一項之方法，其中該癌症係晚期癌症。
  71. 如請求項70之方法，其中該晚期癌症係第3期或第4期癌症。
  72. 如請求項70或71之方法，其中該晚期癌症係轉移性癌症。
  73. 如請求項66至72中任一項之方法，其中該癌症係反覆性癌症。
  74. 如請求項66至73中任一項之方法，其中該癌症係無法切除。
  75. 如請求項66至74中任一項之方法，其中該個體曾接受該癌症標準照護療法的先前治療且該先前治療失敗。
  76. 如請求項66至75中任一項之方法，其中該癌症係選自由黑色素瘤、胰臟癌、間皮瘤、結直腸癌、肺癌、甲狀腺癌、乳癌、膽管癌、食道癌及頭頸癌所組成之群組。
  77. 如請求項76之方法，其中該癌症係黑色素瘤。
  78. 如請求項77之方法，其中該黑色素瘤係皮膚黑色素瘤。
  79. 如請求項78之方法，其中該皮膚黑色素瘤係選自由表淺擴散性黑色素瘤、結節性黑色素瘤、肢端小痣性黑色素瘤、小痣性惡性黑色素瘤及結締組織增生性黑色素瘤所組成之群組。
  80. 如請求項79之方法，其中該肢端小痣性黑色素瘤係甲下黑色素瘤。
  81. 如請求項78至80中任一項之方法，其中該個體曾接受PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑的先前療法。
  82. 如請求項81之方法，其中該個體曾接受PD-1抑制劑的先前療法。
  83. 如請求項77之方法，其中該黑色素瘤係皮膚下黑色素瘤。
  84. 如請求項83之方法，其中該皮膚下黑色素瘤係眼黑色素瘤或黏膜黑色素瘤。
  85. 如請求項77之方法，其中該黑色素瘤係非皮膚黑色素瘤。
  86. 如請求項76之方法，其中該癌症係間皮瘤。
  87. 如請求項86之方法，其中該間皮瘤係選自由胸膜間皮瘤、腹膜間皮瘤、心包膜間皮瘤及睪丸間皮瘤所組成之群組。
  88. 如請求項87之方法，其中該間皮瘤係胸膜間皮瘤。
  89. 如請求項88之方法，其中該個體已經接受基於鉑之療法的先前療法。
  90. 如請求項89之方法，其中該基於鉑之療法係順鉑。
  91. 如請求項88至90中任一項之方法，其中該個體曾接受培美曲塞(pemetrexed)的先前療法。
  92. 如請求項76之方法，其中該肺癌係非小細胞肺癌。
  93. 如請求項92之方法，其中該非小細胞肺癌具有突變形式之表皮生長因子受體(EGFR)。
  94. 如請求項92之方法，其中該非小細胞肺癌具有野生型EGFR。
  95. 如請求項94之方法，其中該個體已經接受基於鉑之療法的先前療法。
  96. 如請求項92或94之方法，其中該個體曾接受PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑的先前療法。
  97. 如請求項96之方法，其中該個體曾接受PD-1抑制劑的先前療法。
  98. 如請求項76之方法，其中該乳癌係選自由HER2陽性、HER2陰性、***受體(ER)陽性、ER陰性、助孕素受體(PR)陽性、PR陰性及三陰性乳癌所組成之群組。
  99. 如請求項98之方法，其中該乳癌係HER2陰性乳癌。
  100. 如請求項99之方法，其中該個體曾接受HER2陰性乳癌的一或多種先前線上療法。
  101. 如請求項100之方法，其中該一或多種先前線上療法包含紫杉烷(taxane)之治療。
  102. 如請求項99或100之方法，其中該個體係荷爾蒙受體陽性。
  103. 如請求項102之方法，其中該個體曾接受CDK4/6抑制劑的先前療法。
  104. 如請求項102或103之方法，其中該個體曾接受荷爾蒙導向療法的先前療法。
  105. 如請求項76之方法，其中該結直腸癌係選自由結直腸腺癌、胃腸道基質瘤、原發性結直腸淋巴瘤、胃腸道類癌腫瘤及平滑肌肉瘤所組成之群組。
  106. 如請求項105之方法，其中該個體曾接受結直腸癌的二種或超過二種先前線上療法。
  107. 如請求項76之方法，其中該胰臟癌係外分泌癌或神經內分泌癌。
  108. 如請求項107之方法，其中該外分泌癌係選自由胰腺癌、腺泡細胞癌、囊腺癌、胰母細胞瘤、腺鱗癌、戒環細胞癌、肝樣癌、膠體癌、未分化癌及胰黏液性囊狀腫瘤所組成之群組。
  109. 如請求項108之方法，其中該胰腺癌係胰管腺癌。
  110. 如請求項108或109之方法，其中該個體曾接受胰臟癌的一或多種先前線上療法。
  111. 如請求項66至110中任一項之方法，其中該抗體或抗原結合片段或抗體-藥物共軛體係於醫藥組成物中，該醫藥組成物包含該抗體或抗原結合片段或抗體-藥物共軛體及醫藥上可接受之載劑。
  112. 如請求項66至111中任一項之方法，其中該個體係人。
  113. 一種套組，其包含： (a) 如請求項1至28中任一項之抗體或抗原結合片段或如請求項29至43中任一項之抗體-藥物共軛體；及 (b) 根據如請求項66至112中任一項之方法使用該抗體或抗原結合片段或抗體-藥物共軛體的指示說明。
  114. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至28中任一項之抗體或抗原結合片段或如請求項29至43中任一項之抗體-藥物共軛體及一或多種選自由生理上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑及助劑所組成之群組的藥劑。
  115. 一種與CD228結合之抗體或其抗原結合片段或抗體-藥物共軛體，其係用於如請求項66至112中任一項之方法。
  116. 一種與CD228結合之抗體或其抗原結合片段或抗體-藥物共軛體於製造用於如請求項66至112中任一項之方法的藥物之用途。
TW110128583A 2020-08-04 2021-08-03 抗ｃｄ２２８抗體和抗體－藥物共軛體 TW202221034A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063061111P 2020-08-04 2020-08-04
US63/061,111 2020-08-04

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202221034A true TW202221034A (zh) 2022-06-01

Family

ID=77519784

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW110128583A TW202221034A (zh) 2020-08-04 2021-08-03 抗ｃｄ２２８抗體和抗體－藥物共軛體

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20230295330A1 (zh)
EP (1) EP4192871A1 (zh)
JP (1) JP2023537714A (zh)
KR (1) KR20230042518A (zh)
CN (1) CN116568337A (zh)
AR (1) AR124558A1 (zh)
AU (1) AU2021320739A1 (zh)
CA (1) CA3189225A1 (zh)
IL (1) IL300176A (zh)
MX (1) MX2023001143A (zh)
TW (1) TW202221034A (zh)
WO (1) WO2022031652A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023231877A1 (zh) * 2022-05-31 2023-12-07 山东博安生物技术股份有限公司 抗cd228抗体及其药物偶联物
WO2024064714A2 (en) * 2022-09-21 2024-03-28 Seagen Inc. Antibodies that bind cd228

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4714681A (en) 1981-07-01 1987-12-22 The Board Of Reagents, The University Of Texas System Cancer Center Quadroma cells and trioma cells and methods for the production of same
US4474893A (en) 1981-07-01 1984-10-02 The University of Texas System Cancer Center Recombinant monoclonal antibodies
CA1319120C (en) 1985-04-01 1993-06-15 John Henry Kenten Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
US5981216A (en) 1985-04-01 1999-11-09 Alusuisse Holdings A.G. Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4880935A (en) 1986-07-11 1989-11-14 Icrf (Patents) Limited Heterobifunctional linking agents derived from N-succinimido-dithio-alpha methyl-methylene-benzoates
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
FI102355B1 (fi) 1988-02-11 1998-11-30 Bristol Myers Squibb Co Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjugaattien valmistamiseksi
GB8809129D0 (en) 1988-04-18 1988-05-18 Celltech Ltd Recombinant dna methods vectors and host cells
US5879936A (en) 1988-04-18 1999-03-09 Aluguisse Holding A.G. Recombinant DNA methods, vectors and host cells
AU631802B2 (en) 1988-06-14 1992-12-10 Cetus Oncology Corporation Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom
US4925648A (en) 1988-07-29 1990-05-15 Immunomedics, Inc. Detection and treatment of infectious and inflammatory lesions
US5601819A (en) 1988-08-11 1997-02-11 The General Hospital Corporation Bispecific antibodies for selective immune regulation and for selective immune cell binding
WO1991000360A1 (en) 1989-06-29 1991-01-10 Medarex, Inc. Bispecific reagents for aids therapy
US5891693A (en) 1990-01-25 1999-04-06 Alusuisse Holdings A.G. Recombinant DNA methods vectors and host cells
WO1992005793A1 (en) 1990-10-05 1992-04-16 Medarex, Inc. Targeted immunostimulation with bispecific reagents
ATE160379T1 (de) 1990-10-29 1997-12-15 Chiron Corp Bispezifische antikörper, verfahren zu ihrer herstellung und deren verwendungen
AP257A (en) 1991-04-26 1993-06-03 Surface Active Ltd A method of releasing an antigen from an antibody and methods for their use in diagnosis and therapy.
JP4124480B2 (ja) 1991-06-14 2008-07-23 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫グロブリン変異体
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
GB9203459D0 (en) 1992-02-19 1992-04-08 Scotgen Ltd Antibodies with germ-line variable regions
ATE239506T1 (de) 1992-03-05 2003-05-15 Univ Texas Verwendung von immunokonjugate zur diagnose und/oder therapie der vaskularisierten tumoren
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
WO1997023243A1 (en) 1995-12-22 1997-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Branched hydrazone linkers
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
US6130237A (en) 1996-09-12 2000-10-10 Cancer Research Campaign Technology Limited Condensed N-aclyindoles as antitumor agents
ATE490518T1 (de) 1999-02-05 2010-12-15 Samsung Electronics Co Ltd Verfahren und vorrichtung zum wiederauffinden von texturbildern
EP2357006B1 (en) 2002-07-31 2015-09-16 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
WO2004050867A1 (en) * 2002-12-02 2004-06-17 Seattle Genetics, Inc. MODIFIED L49-sFv EXHIBITING INCREASED STABILITY AND METHODS OF USE THEREOF
BR122018071968B8 (pt) 2003-11-06 2021-07-27 Seattle Genetics Inc conjugado de anticorpo-droga, composição farmacêutica, artigo de manufatura e uso de um conjugado de anticorpo-droga
MX2007000998A (es) 2004-07-30 2007-07-11 Rinat Neuroscience Corp Anticuerpos dirigidos peptido beta-amiloide y procedimientos que usan los mismos.
EP2722051B1 (en) 2005-07-07 2018-11-07 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain modifications at the C-terminus
WO2007008848A2 (en) 2005-07-07 2007-01-18 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the c-terminus
PL2099823T5 (pl) 2006-12-01 2023-02-20 Seagen Inc. Wariant środków wiążących cel i jego zastosowania
EP2211904B1 (en) 2007-10-19 2016-08-17 Seattle Genetics, Inc. Cd19 binding agents and uses thereof
LT2825036T (lt) * 2012-03-16 2018-07-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Histidino pakeitimus lengvoje grandinėje turintys antikūnai ir genetiškai modifikuoti graužikai, išvesti ju gamybai
TW201617368A (zh) * 2014-09-05 2016-05-16 史坦森特瑞斯公司 新穎抗ｍｆｉ２抗體及使用方法

Also Published As

Publication number Publication date
AU2021320739A1 (en) 2023-02-23
JP2023537714A (ja) 2023-09-05
AR124558A1 (es) 2023-04-12
WO2022031652A1 (en) 2022-02-10
MX2023001143A (es) 2023-02-22
CN116568337A (zh) 2023-08-08
EP4192871A1 (en) 2023-06-14
US20230295330A1 (en) 2023-09-21
CA3189225A1 (en) 2022-02-10
KR20230042518A (ko) 2023-03-28
IL300176A (en) 2023-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7166384B2 (ja) Ｌｉｖ－１に対するヒト化抗体および癌治療のためのその使用
US11617798B2 (en) Anti-CD228 antibodies and antibody-drug conjugates
US20210101982A1 (en) Anti-pd-l1 antibodies and antibody-drug conjugates
US20240076383A1 (en) Anti-avb6 antibodies and antibody-drug conjugates
TW202221034A (zh) 抗ｃｄ２２８抗體和抗體－藥物共軛體