TW202142264A

TW202142264A - 治療龐貝氏症的組成物及方法

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Publication number: TW202142264A
Application number: TW110104793A
Authority: TW
Inventors: 克里斯蒂娜安海克; 帕特里克芬恩
Original assignee: 美商健臻公司
Priority date: 2020-02-08
Filing date: 2021-02-08
Publication date: 2021-11-16
Also published as: IL295415A; MX2022009753A; US20210244803A1; CN115715218A; CA3167091A1; BR112022015505A2; AU2021216055A1; JP2023512783A; KR20220139936A; WO2021159092A1; EP4100120A1

Abstract

本文提供使用醫藥組成物治療龐貝氏症如嬰兒期發作的龐貝氏症（IOPD）的方法，所述醫藥組成物包含寡糖-酸性α-葡萄糖苷酶（GAA）接合物，如艾瓦葡萄糖苷酶α。本文還提供所述寡糖-GAA接合物的調配物。

Description

治療龐貝氏症的組成物及方法

本文涉及用於治療龐貝氏症（如嬰兒期發作的龐貝氏症（IOPD））的組成物和方法。

龐貝氏症（也稱為肝醣貯積症II型或GSD-II）是基因遺傳的溶酶體貯積症，其中肝醣降解酶之酸性α-葡萄糖苷酶（GAA）的缺乏引起肝醣在溶酶體中的積累，從而導致肌無力和心臟肥大（Chien, Y.和Hwu, W.Biologics 2007 1:3；Kishnani, P.S. 等人,Genetics in Medicine 2006 8）。龐貝氏症的最嚴重形式是嬰兒期發作的龐貝氏症（IOPD），其中症狀開始於生命早期，並且疾病進展極快：IOPD症狀開始的年齡中位數為兩個月，並且如果患者不進行治療，則發生死亡的年齡中位數為8.7個月（Chien, Y., 等人,The Journal of Pediatrics 2015 166:4；Chien, Y.和Hwu, W.Biologics 2007 1:3）。

已經開發出使用重組GAA的酶替代療法（ERT）來治療IOPD（例如，Kishnani, P.S. 等人Neurology 2007 68:2）。但是，IOPD是難以治療的疾病，並且仍然存在對在患有IOPD的患者中改善長期預後和緩解症狀的需要（Prater, S.N. 等人,Genet. Med. 2012 14:9；Chien, Y., 等人,The Journal of Pediatrics 2015 166:4）。因此，業內存在對用於治療龐貝氏症，並且特別是用於治療IOPD的方法和組成物的需要。

本文提供用於在有需要的個體中治療龐貝氏症如IOPD的方法和組成物。還提供用於治療龐貝氏症如IOPD的組成物和調配物以及組成物和調配物在製備用於治療龐貝氏症如IOPD的藥物中的用途。

本文的一方面提供一種治療嬰兒期發作的龐貝氏症（IOPD）的方法，所述方法包括向有需要的人類個體投予包含寡糖-蛋白質接合物和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述寡糖-蛋白質接合物具有式I的結構：

(I)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，L是連接所述寡糖與所述GAA的化學連接子，並且n是1至10，並且其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg的劑量投予。在一些實施例中，所述醫藥組成物是以約20 mg/kg的劑量投予。在一些實施例中，所述醫藥組成物是以約40 mg/kg的劑量投予。在一些實施例中，所述醫藥組成物是每兩周一次投予至個體。在一些實施例中，所述醫藥組成物是靜脈內投予。在一些實施例中，將所述醫藥組成物投予至所述個體持續至少約25周。

在根據上述任一種方法的一些實施例中，所述醫藥組成物是從包含所述寡糖-蛋白質接合物的凍乾調配物重構的。在一些實施例中，所述醫藥上可接受的載劑包含不被GAA降解的糖。在一些實施例中，所述不被GAA降解的糖是甘露醇。在一些實施例中，所述醫藥上可接受的載劑還包含甘胺酸。在一些實施例中，所述醫藥上可接受的載劑包含組胺酸。在一些實施例中，所述醫藥組成物的pH為約6.2。在一些實施例中，所述醫藥上可接受的載劑包含約10至50 mM組胺酸、約0.25%至2%甘胺酸、約1%至4%甘露醇和約0.005%至0.05%聚山梨醇酯80。在一些實施例中，所述醫藥上可接受的載劑包含約10 mM組胺酸、約2%甘胺酸、約2%甘露醇和約0.01%聚山梨醇酯80。

在根據上述任一種方法的一些實施例中，所述個體在生命第一年診斷時患有心肌病。在一些實施例中，所述個體患有心律不整。在一些實施例中，所述個體患有心臟肥大。在一些實施例中，所述個體是18歲或更年輕。在一些實施例中，所述個體是約6月齡或更年輕。

在根據上述任一種方法的一些實施例中，所述個體已經接受至少6個月的使用重組GAA的治療。在一些實施例中，所述個體在用所述重組GAA治療後顯示臨床衰退，其中所述臨床衰退是通過評估選自以下的一個或多個參數來確定：呼吸功能、運動技能和心臟參數。在一些實施例中，所述個體對使用所述重組GAA的治療具有次優臨床反應，其中所述臨床反應是通過評估選自以下的一個或多個參數來確定：呼吸功能、運動技能和心臟參數。在一些實施例中，所述個體尚未接受過使用重組GAA的治療。在一些實施例中，所述重組GAA是阿葡萄糖苷酶α。

在根據上述任一種方法的一些實施例中，所述個體是交叉反應性免疫物質（cross-reactive immunologic material，CRIM）陰性的。在一些實施例中，所述個體是CRIM陽性的。

在根據上述任一種方法的一些實施例中，所述方法還包括向所述個體投予有效量的甲胺蝶呤。在一些實施例中，所述有效量的甲胺蝶呤是在單個周期中或在三個周期中投予。在一些實施例中，所述甲胺蝶呤是在單個周期中投予。在一些實施例中，所述甲胺蝶呤是在兩個、三個、四個、五個或更多個周期中投予。在一些實施例中，甲胺蝶呤的周期由1天甲胺蝶呤投予或連續2、3、4、5、6、7、8、9、10或11天甲胺蝶呤投予組成。在一些實施例中，在選自以下的時間將甲胺蝶呤投予至所述個體：投予所述寡糖-蛋白質接合物之前、期間和之後中的一個或多個。在一些實施例中，在投予所述寡糖-蛋白質接合物之前48小時與之後48小時之間，投予所述甲胺蝶呤。在一些實施例中，與投予所述寡糖-蛋白質接合物同時以及在投予所述寡糖-蛋白質接合物後約24小時和約48小時，投予所述甲胺蝶呤。在一些實施例中，以約0.1 mg/kg至約5 mg/kg投予所述甲胺蝶呤。在一些實施例中，所述方法還包括向所述個體投予另外的免疫耐受誘導療法。在一些實施例中，所述另外的免疫耐受誘導療法包括利妥昔單抗(rituximab)和靜脈內免疫球蛋白（intravenous immunoglobulin，IVIG）。

在根據上述任一種方法的一些實施例中，所述個體的針對所述寡糖-蛋白質接合物的抗藥抗體（antidrug antibody，ADA）的位準隨時間而遞減。

在根據上述任一種方法的一些實施例中，當在治療至少約25周後測量時，所述個體的肌胺酸激酶（creatine kinase，CK）位準降低至少約100 IU/L。

在根據上述任一種方法的一些實施例中，當在治療至少約25周後測量時，所述個體的尿液六碳醣四聚糖（Hex4）位準降低至少約10 mmol/mol。

在根據上述任一種方法的一些實施例中，當在治療至少約25周後測量時，所述個體的粗動作功能量表（GMFM-88）分數增加至少5%。

在根據上述任一種方法的一些實施例中，所述個體顯示選自以下的一個或多個參數的改善或穩定：呼吸功能、運動技能、心臟參數和眼瞼位置。在一些實施例中，所述改善或穩定是基於選自以下的一個或多個參數來評估：阿爾伯塔嬰兒動作量表（Alberta Infant Motor Scale，AIMS）分數、龐貝-兒科殘疾評估量表（Pompe-Pediatric Evaluation of Disability Inventory，PEDI）功能技能量表、心臟超音波（echocardiographic，ECHO）-左心室質量（left ventricular mass，LVM）Z分數、ECHO LVMI分數、粗動作功能分類系統-擴展修訂版（Gross Motor Function Classification System-Expanded and Revised，GMFCS-E&R）分數、快速動作功能測試、6分鐘步行測試（6 Minute Walk test，6MWT）、瞼裂間距（interpalpebral fissure distance，IPFD）、邊緣反射距離-1（margin reflex distance-1，MRD-1）、邊緣瞳孔距離（margin pupil distance，MPD）、上瞼下垂發作和呼吸支援的使用。在一些實施例中，所述改善或穩定是基於龐貝-PEDI功能技能量表來評估。在一些實施例中，所述改善或穩定是基於ECHO-LVM Z分數來評估。

在根據上述任一種方法的一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物具有式II的結構：

(II)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，L'是化學連接子，並且n是1至10。

在根據上述任一種方法的一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物具有式III的結構：

(III)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，n是1至10，並且其中m和p獨立地選自範圍為1至10的整數。在一些實施例中，m是3並且p是1。在一些實施例中，n是5至7。

在根據上述任一種方法的一些實施例中，所述GAA是在中國倉鼠卵巢（CHO）細胞中產生的人類GAA。在一些實施例中，所述人類GAA具有糖型α。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α（avalglucosidase alfa）。

本文的另一方面提供一種調配物，所述調配物包含：(a) 寡糖-蛋白質接合物；以及 (b) 一種或多種冷凍保護劑，所述冷凍保護劑包含不被酸性α-葡萄糖苷酶降解的糖；其中所述寡糖-蛋白質接合物具有式I的結構：

(I)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，L'是化學連接子，並且n是1至10。在一些實施例中，所述糖是甘露醇。在一些實施例中，所述調配物包含約1%至4%（w/w）甘露醇，如約2%甘露醇。

在根據上述任一種調配物的一些實施例中，所述一種或多種冷凍保護劑還包含胺基酸。在一些實施例中，所述胺基酸是甘胺酸。在一些實施例中，所述調配物包含約0.25%至2%（w/w）甘胺酸，如約2%甘胺酸。

在根據上述任一種調配物的一些實施例中，所述一種或多種冷凍保護劑還包含界面活性劑。在一些實施例中，所述界面活性劑是聚山梨醇酯80。在一些實施例中，所述調配物包含約0.005%至0.05%（w/w）聚山梨醇酯80，如約0.01%聚山梨醇酯80。

在根據上述任一種調配物的一些實施例中，所述調配物還包含緩衝劑。在一些實施例中，所述緩衝劑是組胺酸。在一些實施例中，所述調配物包含約10至50 mM組胺酸，如約10 mM組胺酸。

在根據上述任一種調配物的一些實施例中，所述調配物包含約10 mM組胺酸、約2%甘胺酸、約2%甘露醇和約0.01%聚山梨醇酯80。

在根據上述任一種調配物的一些實施例中，所述調配物是凍乾調配物。在一些實施例中，所述調配物是凍乾前（即，可凍乾）調配物。在一些實施例中，所述調配物是重構的液體調配物。在一些實施例中，所述調配物的pH為約5.5至約6.5。在一些實施例中，所述調配物的pH為約6.2。

在根據上述任一種調配物的一些實施例中，所述調配物包含約5至10 mg/mL（例如，約5 mg/mL）的所述寡糖-蛋白質接合物。

在根據上述任一種調配物的一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物具有式II的結構：

在根據上述任一種調配物的一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物具有式III的結構：

在根據上述任一種調配物的一些實施例中，所述GAA是在中國倉鼠卵巢（CHO）細胞中產生的人類GAA。在一些實施例中，所述人類GAA具有糖型α。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。

本文的另一方面提供一種製品，所述製品包含容器，所述容器包含根據上述任一種調配物的調配物。在一些實施例中，所述容器是小瓶。在一些實施例中，所述調配物是凍乾調配物。

還提供一種治療龐貝氏症的方法，所述方法包括向有需要的人類個體投予有效量的醫藥組成物，所述醫藥組成物包含根據上述任一種調配物的調配物。在一些實施例中，所述龐貝氏症是IOPD。

還提供一種套組，所述套組包含根據上述任一種調配物的調配物。在一些實施例中，所述套組還包含用於治療龐貝氏症（例如，IOPD）的說明書。

本文提供使用寡糖-酸性α-葡萄糖苷酶（GAA）接合物治療龐貝氏症的組成物和方法，所述龐貝氏症包括嬰兒期發作的龐貝氏症（IOPD），它是龐貝氏症的最嚴重形式。在一些實施例中，本文所述組成物是寡糖-GAA接合物的凍乾調配物，其在儲存後和/或在重構後具有高穩定性。在一些實施例中，所述寡糖-GAA接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。艾瓦葡萄糖苷酶α在人患者中的臨床試驗顯示出本文所述組成物用於治療龐貝氏症如IOPD的功效，即使在用重組GAA治療後展現臨床衰退或次優臨床反應的患者中。I. 定義

本文所用的術語與業內通常所用的術語相同，除非下文另外定義。

術語「酸性α-葡萄糖苷酶」與「GAA」在本文中可互換使用，是指蛋白質酸性α-葡萄糖苷酶。在一些實施例中，所述GAA是重組GAA。在一些實施例中，所述GAA是人類GAA。

如本文所用，「治療（treatment）」或「治療（treating）」是用於獲得有益或所需結果（包括臨床結果）的方法。出於本文的目的，有益或所需臨床結果包括但不限於以下中的一種或多種：減少所述疾病所致的一種或多種症狀、減小所述疾病的範圍、穩定所述疾病（例如，預防或延遲所述疾病的惡化）、預防或延遲所述疾病的擴散、預防或延遲所述疾病的發生或復發、延遲或減慢所述疾病的進展、改善所述疾病狀態、提供所述疾病的緩解（部分或完全）、減小治療所述疾病所需的一種或多種其他藥物的劑量、延遲所述疾病的進展、提高生活品質和/或延長存活期。「治療」還涵蓋減少龐貝氏症（如IOPD）的病理後果。本文的方法考慮了這些治療方面的任何一個或多個。

術語「個體」、「受試者」與「患者」在本文中可互換使用以描述哺乳動物，包括人類。在一些實施例中，所述個體是人類。在一些實施例中，所述個體患有疾病，如IOPD。在一些實施例中，所述個體需要治療。

如業內所理解，「有效量」是指治療劑或組成物（例如包含艾瓦葡萄糖苷酶α（avalglucosidase alfa）的組成物）足以產生所需治療結果（例如，降低IOPD的一種或多種症狀的嚴重程度或持續時間、使其穩定或將其消除）或足以實現所需預防結果（例如，誘導對所述治療劑的免疫耐受）的量。本文中的有效量可以根據諸如以下的因素而變：疾病狀態、患者的年齡、性別和體重，以及所述抗體在所述個體中引發所需反應的能力。有效量也是治療有益效果超過治療的任何毒性或有害影響的量。對於預防性使用，有益或所需結果包括諸如以下的結果：消除或降低風險、減輕嚴重程度或延遲所述疾病的發作，所述疾病包括所述疾病的生化、組織學和/或行為症狀、其併發症和在所述疾病發展期間呈現出的中間病理表型。對於治療性使用，有益或所需結果包括例如減少所述疾病導致的一種或多種症狀（生化、組織學和/或行為的症狀，包括其併發症和在疾病發展期間呈現出的中間病理表型）、提高患有所述疾病的那些患者的生活品質、減少治療疾病所需的其他藥物的劑量、增強另一種藥物的效果、延遲所述疾病的進展和/或延長患者存活期。在一些實施例中，所述治療劑的有效量可以延長存活期（包括總存活期和無進展存活期）；引起客觀反應（包括完全反應或部分反應）；在一定程度上緩解所述疾病或病症的一種或多種體徵或症狀；和/或提高所述受試者的生活品質。出於本文的目的，藥物、化合物或醫藥組成物的有效量是足以直接或間接實現預防性或治療性治療的量。

如本文所用，「基線值」是指在治療開始之前或治療開始時個體的生物標記的值。

術語「醫藥組成物」是指如下製劑：其所呈形式使得其中所含活性成分的生物活性有效，並且其不含對將被投予所述調配物的受試者具有不可接受的毒性的另外的組分。

「醫藥上可接受的載劑」是指藥物調配物中除了活性成分以外的對受試者無毒的一種或多種成分。醫藥上可接受的載劑包括但不限於緩衝液、賦形劑、穩定劑、冷凍保護劑、張性劑(tonicity agent)、防腐劑及其組合。

術語「凍乾」、「凍乾的」和「冷凍乾燥的」是指如下過程，通過所述過程首先冷凍要乾燥的材料，然後通過在真空環境中昇華來去除冰或冷凍溶劑。凍乾前調配物中可以包括賦形劑以增強凍乾產物在儲存時的穩定性。

術語「凍乾前調配物」與「可凍乾調配物」在本文中可互換使用，是指要經歷凍乾以製備凍乾調配物的調配物。

術語「包裝說明書」用於指治療產品的商業包裝中通常包括的說明書，其含有關於涉及此類治療產品的使用的適應症、用法、劑量、投予、組合療法、禁忌和/或警告的資訊。

「製品」是任何製造物（例如，包裝或容器）或套組，其包含至少一種試劑（例如，用於治療疾病或病症（例如，IOPD）的藥物）或者用於特異性檢測本文所述生物標記的探針。在某些實施例中，所述製造物或套組是作為用於進行本文所述方法的單元來推銷、分發或銷售。

本文中對「約」某個值或參數的提及包括（並且描述）針對該值或參數本身的變化。例如，提及「約X」的描述包括對「X」的描述。

如本文所用，對「並非」某個值或參數的提及通常意指並描述「除了某個值或參數以外」。例如，方法並非用於治療X型疾病意指所述方法用於治療除了X以外的類型的疾病。

本文所用術語「約X至Y」具有與「約X至約Y」相同的含義。

如本文中以及在所附權利要求中所用，單數形式「一個/一種（a/an）」或「所述（the）」包括複數指示物，除非上下文明確指示其他情況。

應理解，為了清晰起見，在單獨實施例的背景中描述的本發明的某些特徵也可以在單個實施例中組合提供。相反，為了簡潔起見，在單個實施例的背景中描述的本發明的多種特徵也可以單獨提供或以任何合適的子組合來提供。關於本文所述組成物和方法的實施例的所有組合明確涵蓋於本發明中並且公開於本文中，就如同單獨且明確地公開每種和每個組合一樣。另外，在描述此類變數的實施例中，所述組成物和方法的特徵和特性的所有子組合也明確涵蓋於本發明中並且公開於本文中，就如同在本文中單獨且明確地公開每種和每個這種子組合一樣。II. 治療方法

本文提供在有需要的個體中使用本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）治療龐貝氏症（如嬰兒期發作的龐貝氏症（IOPD））的方法。

在一些實施例中，本文提供一種治療龐貝氏症的方法，所述方法包括向有需要的人類個體投予有效量的醫藥組成物，所述醫藥組成物包含寡糖-蛋白質接合物，其中所述寡糖蛋白質和醫藥上可接受的載劑，其中所述寡糖-蛋白質接合物具有式I的結構：

(I)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，L是連接所述寡糖與所述GAA的化學連接子，並且n是1至10。在一些實施例中，所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述醫藥上可接受的載劑包含組胺酸、甘胺酸、甘露醇和/或聚山梨醇酯80。在一些實施例中，所述醫藥上可接受的載劑包含約10至50 mM（例如，約10 mM）組胺酸、約0.25%至2%（例如，約2%）甘胺酸、約1%至4%（例如，約2%）甘露醇和約0.005%至0.05%（例如，約0.01%）聚山梨醇酯80。在一些實施例中，所述醫藥組成物的pH為約5.5至約6.5，如約6.2。在一些實施例中，所述龐貝氏症是IOPD。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物具有式 (II) 的結構：

(II)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，L'是化學連接子，並且n是1至10。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物具有式 (III) 的結構：

(III)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，n是1至10，並且m和p獨立地選自範圍為1至10的整數。在一些實施例中，m是3並且p是1。在一些實施例中，n是5至7。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。

在一些實施例中，提供治療IOPD的方法，所述方法包括向有需要的人類個體投予包含寡糖-蛋白質接合物和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述寡糖-蛋白質接合物具有式I的結構：

(I)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，L是連接所述寡糖與所述GAA的化學連接子，並且n是1至10，並且其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物具有式II的結構：

(II)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，L'是化學連接子，並且n是1至10。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物具有式III的結構：

在一些實施例中，提供治療IOPD的方法，所述方法包括向有需要的人類個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述個體是6個月大或更年輕。在一些實施例中，提供治療IOPD的方法，所述方法包括向有需要的人類個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述個體在6個月或更年輕時開始接受治療。在一些實施例中，所述個體在接所述受寡糖-GAA接合物之前尚未接受過使用重組GAA的治療。在一些實施例中，所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。

肌胺酸激酶（CK，也稱為肌胺酸磷酸激酶）是龐貝氏症的血清酶生物標記，其指示肌肉損傷；CK位準在患有經典型IOPD的患者體內升高（Burton, B.K. 等人Pediatrics 2017 140:s1）。可以進行CK血液測試以測量個體血液中CK酶的量。

因此，在本文的一些實施例中，提供治療IOPD的方法，所述方法包括向有需要的人類個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予，並且其中當在治療至少約25周後測量時，所述個體的肌胺酸激酶（CK）位準降低至少約100 IU/L。在一些實施例中，提供降低患有IOPD的人類個體中的肌胺酸激酶位準的方法，所述方法包括向所述個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，並且其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。

在實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，CK位準降低至少約以下值中的任一個：50 IU/L、60 IU/L、70 IU/L、80、IU/L、90 IU/L、100 IU/L、110 IU/L、120 IU/L、130 IU/L、140 IU/L、150 IU/L、160 IU/L、170 IU/L、180 IU/L、190 IU/L、200 IU/L、250 IU/L、300 IU/L、400 IU/L、500 IU/L、600 IU/L、700 IU/L、800 IU/L或更多。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，所述CK位準降低約以下值中的任一個：50 IU/L、60 IU/L、70 IU/L、80、IU/L、90 IU/L、100 IU/L、110 IU/L、120 IU/L、130 IU/L、140 IU/L、150 IU/L、160 IU/L、170 IU/L、180 IU/L、190 IU/L、200 IU/L、250 IU/L、300 IU/L、400 IU/L、500 IU/L、600 IU/L、700 IU/L、800 IU/L或更多，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述CK位準降低至少約以下值中的任一個：10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述CK位準降低不超過約以下值中的任一個：90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%或10%。在一些實施例中，所述CK位準降低約以下值中的任一種：10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，在治療約以下值中的任一時間後測量所述CK位準：1個月、3個月、6個月、25周、7個月、8個月、9個月、12個月、2年、5年、10年或更長時間，包括這些值之間的任何值或範圍。

IOPD的另一生物標記是葡萄糖四聚糖（glucose tetrasaccharide），其在患有龐貝氏症的患者的尿液和血漿中升高（Burton, B.K. 等人Pediatrics 2017 140:s1）。葡萄糖四聚糖可以作為尿液中的六碳醣四聚糖（Hex4）位準來測量，因為Hex4是肝醣的分解產物。因此，尿液Hex4用作肝醣貯積的生物標記（Burton, B.K. 等人Pediatrics 2017 140:s1）。

因此，在本文方法的一些實施例中，提供治療IOPD的方法，所述方法包括向有需要的人類個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予，並且其中當在治療至少約25周後測量時，所述個體的尿液六碳醣四聚糖（Hex4）位準降低至少約10 mmol/mol。在一些實施例中，提供降低患有IOPD的人類個體中的尿液Hex4位準的方法，所述方法包括向所述個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，並且其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。

在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，所述個體的尿液Hex4位準降低至少約以下值中的任一個：5 mmol/mol、6 mmol/mol、7 mmol/mol、8 mmol/mol、9 mmol/mol、10 mmol/mol、11 mmol/mol、12 mmol/mol、13 mmol/mol、14 mmol/mol、15 mmol/mol、20 mmol/mol、25 mmol/mol、30 mmol/mol、35 mmol/mol、40 mmol/mol或50 mmol/mol。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，所述個體的尿液Hex4位準降低約以下值中的任一個：5 mmol/mol、6 mmol/mol、7 mmol/mol、8 mmol/mol、9 mmol/mol、10 mmol/mol、11 mmol/mol、12 mmol/mol、13 mmol/mol、14 mmol/mol、15 mmol/mol、20 mmol/mol、25 mmol/mol、30 mmol/mol、35 mmol/mol、40 mmol/mol或50 mmol/mol，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述尿液Hex4位準降低至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述尿液Hex4位準降低不超過約90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%或10%。在一些實施例中，所述Hex4位準降低約以下值中的任一個：10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，在治療約以下值中的任一時間後測量所述Hex4位準：1個月、3個月、6個月、25周、7個月、8個月、9個月、12個月、2年、5年、10年或更長時間，包括這些值之間的任何值或範圍。

可以使用粗動作功能量表-88（GMFM-88）分數來評估與IOPD相關的肌無力。GMFM-88是88項測量，其考慮到以下五個維度的個體的粗動作活動：(1) 躺臥和翻滾，(2) 坐，(3) 爬行和跪，(4) 站立，以及 (5) 步行、奔跑和跳躍。選擇GMFM-88中的項目來表示截至5歲沒有運動障礙的兒童通常進行的運動功能。每一項按4分制李克特量表（即，0 = 無法做到；1 = 啟動[＜任務的 10%]；2 = 部分完成[10%至＜ 100%的任務]；3 = 任務完成）進行評分。每個維度的分數表示為該維度的最大分數的百分比。通過以下方式獲得總分數：將每個維度的百分比分數相加，並將和除以維度總數。因此，每個維度對總分數的貢獻相等。

GMFM-88測試旨在用於兒童，並且可以用於一歲以下的幼兒。對於GMFM-88不存在截止年齡。在業內根據已出版手冊（Russell, D.J., 等人Gross Motor Function Measure (GMFM-66 & GMFM-88) User’s Manual, 第 2 版 2013）使用GMFM-88。儘管最初對於具有除了大腦性癱瘓以外的診斷的兒童沒有進行驗證，但是GMFM-88已經用於具有運動困難的其他兒童，包括患有成骨不全（Russell, D.J., 等人Gross Motor Function Measure (GMFM-66 & GMFM-88) User’s Manual, 第 2 版 2013）和急性成淋巴細胞性白血病（Wright, M.J., 等人Med Pediatr Oncol. 1998 31:2）的兒童。GMFM-88已經用於評價患有龐貝氏症的兒童和成人（Winkel, L.P. 等人,Ann Neurol. 2004 55:4），並且可以用於測量繼發於肌肉強度的改善或衰退的運動表現隨時間的變化。

因此，在本文方法的一些實施例中，提供治療IOPD的方法，所述方法包括向有需要的人類個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予，並且其中當在治療至少約25周後測量時，所述個體的粗動作功能量表-88（GMFM-88）分數增加至少5%。在一些實施例中，提供在患有IOPD的人類個體中改善和/或增加GMFM-88分數的方法，所述方法包括向個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，並且其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。

在一些實施例中，所述GMFM-88分數增加至少約以下值中的任一個：3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%或更多，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述GMFM-88分數增加至少約以下值中的任一個：5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述GMFM-88分數增加不超過約以下值中的任一個：90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%或10%。在一些實施例中，所述GMFM-88分數增加約以下值中的任一個：5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，在治療約以下值中的任一時間後測定所述GMFM-88分數：1個月、3個月、6個月、25周、7個月、8個月、9個月、12個月、2年、5年、10年或更長時間，包括這些值之間的任何值或範圍。

在一些實施例中，所述個體顯示改善或穩定，如通過粗動作功能分類系統-擴展修訂版（GMFCS-E&R）參數所評估。GMFCS-E&R強調世界衛生組織的功能、殘疾和健康的國際分類（World Health Organization's International Classification of Functioning, Disability and Health）中的概念。重點是在家庭、工作和社區環境中的日常表現，而不對運動品質或預後的改善進行評判。GMFCS-E&R是標準化的系統，最初開發用於對患有大腦性癱瘓的兒童的粗動作功能進行分類（Palisano, R., 等人Dev. Med. Child Neurol. 1997 39:4）。還可以應用GMFCS-E&R來評估龐貝氏症（例如，Spiridigliozzi, G.A. 等人Mol. Genet. Metab. 2017 121:2）。GMFCS-E&R是用於特定年齡範圍的5級分類系統，由基於自發運動的I至V級組成，重點在於坐、轉移和運動性。級別之間的區別是基於功能限制、對輔助運動裝置的需要以及（在非常低的程度上）動作品質，並且被設計為在日常生活中有意義（Palisano R.J., 等人Dev Med Child Neurol. 2008 50:10）。

5個級別的總標題是： • I級：不受限制的步行 • II級：受限制的步行 • III級：使用手持運動裝置步行 • IV級：受限制的自身運動性；可能使用動力運動裝置 • V級：用手動輪椅移動。

因此，在本文方法的一些實施例中，提供治療IOPD的方法，所述方法包括向有需要的人類個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予，並且其中當在治療至少約25周後測量時，所述個體的GMFCS-E&R分數增加。在一些實施例中，提供在患有IOPD的人類個體中改善GMFCS-E&R分數的方法，所述方法包括向所述個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。

在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述GMFCS-E&R分數增加至少約以下值中的任一個：10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述GMFCS-E&R分數增加不超過約以下值中的任一個：90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%或10%。在一些實施例中，所述GMFCS-E&R分數增加約以下值中的任一個：10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述GMFCS-E&R分數增加1級、2級、3級或4級。在一些實施例中，在治療約以下值中的任一時間後測定GMFCS-E&R分數：1個月、3個月、6個月、25周、7個月、8個月、9個月、12個月、2年、5年、10年或更長時間，包括這些值之間的任何值或範圍。

在一些實施例中，所述個體顯示選自以下的一個或多個參數的改善或穩定：呼吸功能、運動技能、心臟參數和眼瞼位置。示例性參數包括但不限於龐貝-兒科殘疾評估量表（PEDI）功能技能量表、心臟超音波（ECHO）-左心室質量（LVM）Z分數、ECHO LVMI分數、粗動作功能分類系統-擴展修訂版（GMFCS-E&R）分數、快速動作功能測試、6分鐘步行測試（6MWT）、瞼裂間距（IPFD）、邊緣反射距離-1（MRD-1）、邊緣瞳孔距離（MPD）、上瞼下垂發作和呼吸支援的使用。在一些實施例中，在治療特定持續時間後，相對於基線，所述個體顯示一個或多個參數的改善或穩定。治療的持續時間可以是在以下時間之後：至少約10周、13周、20周、25周、30周、40周、49周、61周、73周、97周、或100周、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1年、2年、3年、4年、5年或更長時間。

在一些實施例中，所述個體顯示一種或多種運動技能的改善或穩定，如通過龐貝兒科殘疾評估量表（龐貝-PEDI）功能技能量表：運動性領域所評估（Haley, S.M., 等人Pediatr Rehabil 2003 6:2；Haley, S.M., 等人Pediatr. Neurol. 2004 31）。龐貝-PEDI是專用於龐貝氏症的兒科殘疾評估量表的修改版，並且包括自理和運動性兩個項目（例如，頭部控制、地面活動、坐、站立等（Haley, S.M., 等人Pediatr. Neurol. 2004 31））。原始龐貝-PEDI分數是兒童能夠從所述評估得到的專案分數之和。標準分數和量表分數以及相關的標準差是從統計學程式生成的，所述統計學程式是作為S.M., 等人Pediatr. Neurol. 2004 31中描述的調查研究的一部分產生的；所述程式要求輸入所述受試者的年齡和分數並產生相應的標準分數和量表分數資料。

在一些實施例中，提供在患有IOPD的人類個體中改善或穩定龐貝-PEDI分數的方法，所述方法包括向所述個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。

在一些實施例中，龐貝-PEDI功能技能量表：運動性領域量表分數增加至少約以下值中的任一個：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、25、30、40或50分。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述龐貝-PEDI功能技能量表：運動性領域量表分數增加至少約以下值中的任一個：5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述龐貝-PEDI功能技能量表：運動性領域量表分數增加不超過約以下值中的任一個：90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%或10%。在一些實施例中，龐貝-PEDI功能技能量表：運動性領域量表分數增加約以下值中的任一個：10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，在治療約以下值中的任一時間後確定龐貝-PEDI功能技能量表：運動性領域量表分數：1個月、3個月、6個月、25周、7個月、8個月、9個月、12個月、2年、5年、10年或更長時間，包括這些值之間的任何值或範圍。

在一些實施例中，提供在患有IOPD的人類個體中改善或穩定阿爾伯塔嬰兒動作量表（AIMS）分數的方法，所述方法包括向所述個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。

阿爾伯塔嬰兒動作量表（AIMS）評估0-18月齡的嬰兒粗大運動技能。其評價嬰兒的負重、姿勢和反重力（antigravity）運動。參見例如，Piper MC 等人 Construction and validation of the Alberta Infant Motor Scale (AIMS). Can J Public Health. 1992年7月-8月;83 增刊2:S46-50。PMID：1468050。

在一些實施例中，所述個體顯示一種或多種運動技能的改善或穩定，如通過快速動作功能測試（QMFT）所評估（van Capelle, C.I., 等人J Inherit Metab Dis. 2012 35:2）。所述QMFT是專用於龐貝氏症的功能運動量表，其中評價者觀察患者的表現並按16個項目（例如，抬高軀幹、屈頸、拾取物體等）對其進行評分，每個項目使用5分制量表。

在一些實施例中，提供在患有IOPD的人類個體中改善或穩定QMFT分數的方法，所述方法包括向所述個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。

在一些實施例中，所述個體顯示QMFT量表上的改善。例如，在治療特定持續時間後，相對於基線，個體可以顯示QMFT量表上的改善，所述改善為約以下值中的任一個：2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%或20%變化。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述QMFT分數增加至少約以下值中的任一個：5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述QMFT分數增加不超過約以下值中的任一個：90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%或10%。在一些實施例中，所述QMFT分數增加約以下值中的任一個：10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，在治療約以下值中的任一時間後測定所述QMFT分數：1個月、3個月、6個月、25周、7個月、8個月、9個月、12個月、2年、5年、10年或更長時間，包括這些值之間的任何值或範圍。

在一些實施例中，所述個體顯示一個或多個心臟參數的改善或穩定，如通過心臟超音波（ECHO）終點（如左心室質量指數（LVMI）和/或左心室質量（LVM）Z分數）所評估（Barker, P.A.C., 等人Mol. Genet. Metab. 2010 101:4）。心臟衰竭是龐貝氏症患者的主要死因，並且因此在業內使用心臟超音波（也稱為echo）來評價對ERT的心臟反應（van Capelle, C.I., 等人Int. Journal of Cardiology 2018 269）。echo Z分數描述給定測量值高於或低於特定體型或年齡的群體平均值的標準差（Chubb, H.和J.M. Simpson,Ann. Pediatr. Cardiol. 2012 5:2）。

在一些實施例中，提供減少患有IOPD的人類個體的LVMI的方法，所述方法包括向所述個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。

在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述LVMI減少至少約以下值中的任一個：10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述LVMI減少不超過約以下值中的任一個：90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%或10%。在一些實施例中，所述LVMI減少約以下值中的任一個：10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，在治療約以下值中的任一時間後測定所述LVMI：1個月、3個月、6個月、25周、7個月、8個月、9個月、12個月、2年、5年、10年或更長時間，包括這些值之間的任何值或範圍。

在一些實施例中，提供減少患有IOPD的人類個體的LVM Z分數的方法，所述方法包括向所述個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。

在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述LVM Z分數減少至少約以下值中的任一個：10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述LVM Z分數減少不超過約以下值中的任一個：90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%或10%。在一些實施例中，所述LVM Z分數減少約以下值中的任一個：10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，在治療約以下值中的任一時間後測定LVM Z分數：1個月、3個月、6個月、25周、7個月、8個月、9個月、12個月、2年、5年、10年或更長時間，包括這些值之間的任何值或範圍。

在一些實施例中，所述個體顯示呼吸功能、運動技能和/或心臟參數中的一個或多個的改善或穩定，如通過6分鐘步行測試（6MWT）所評估。如本文所用，6MWT評估能夠在不停止或不使用輔助裝置的情況下行走至少40米的患者在6分鐘內步行的距離。例如，如果在治療特定持續時間後，相對於基線，所述個體能夠在6分鐘內步行更大距離，則6MWT有所改善。在一些實施例中，提供在患有IOPD的人類個體中改善所述6MWT分數（例如，增加行走距離）的方法，所述方法包括向所述個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。

在一些實施例中，所述個體顯示一種或多種運動功能的改善或穩定，如通過上瞼下垂發作所評估。上瞼下垂是上眼瞼下垂覆蓋在眼睛上。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於未治療IOPD患者中的平均上瞼下垂發作，上瞼下垂被延遲。在一些實施例中，提供延遲患有IOPD的人類個體的上瞼下垂發作的方法，所述方法包括向所述個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。

上瞼下垂可以通過使用業內已知方法測量一個或多個眼瞼位置來評估，例如，通過使用如圖6A中所示的測量工具來評估。示例性眼瞼位置測量包括但不限於瞼裂間距（IPFD）、邊緣反射距離-1（MRD-1）和邊緣瞳孔距離（MPD），它們顯示於圖6B至圖6D中。上瞼下垂（下垂的眼瞼）已經顯示發生在接受阿葡萄糖苷酶α（alglucosidase alfa）的患有嬰兒期發作的龐貝氏症（IOPD）的長期存活者中，並且可能是由於提瞼肌中的肝醣貯積所致。上瞼下垂可能導致弱視，並且如果嚴重，可能需要手術干預。參見例如，De Wilde F. 等人 Surgical treatment of myogenic blepharoptosis. Bull Soc Belge Ophtalmol. 1995;255:139-46；Slingerland NW, 等人 Ptosis, extraocular motility disorder, and myopia as features of Pompe disease. Orbit. 2011;30(2):111-3；以及Prakalapakorn SG, 等人 Ocular and histologic findings in a series of children with infantile Pompe disease treated with enzyme replacement therapy. J Pediatr Ophthalmol Strabismus. 2014;51(6):355-9，將所述文獻通過引用併入本文。眼瞼位置可以使用閃光攝影術或非閃光攝影術來測量。在一些實施例中，眼瞼位置（例如，IPDF和MPD）是用非閃光攝影術來測量的。在一些實施例中，所述方法減小個體的IPFD、MRD-1和MPD中的一種或多種。在一些實施例中，所述方法減小個體的IPFD、MRD-1和MPD。在一些實施例中，所述減小是在兩隻眼睛中。在一些實施例中，所述減小是在一隻眼睛中。

在一些實施例中，提供減小患有IOPD的人類個體的瞼裂間距（IPFD）的方法，所述方法包括向所述個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述醫藥組成物是以每隔一周或每周的頻率投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。在一些實施例中，所述減小是在兩隻眼睛中。在一些實施例中，所述減小是在一隻眼睛中。

在一些實施例中，提供減小患有IOPD的人類個體的邊緣反射距離-1（MRD-1）的方法，所述方法包括向所述個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述醫藥組成物是以每隔一周或每周的頻率投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。在一些實施例中，所述減小是在兩隻眼睛中。在一些實施例中，所述減小是在一隻眼睛中。

在一些實施例中，提供減小患有IOPD的人類個體的邊緣瞳孔距離（MPD）的方法，所述方法包括向所述個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述醫藥組成物是以每隔一周或每周的頻率投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。在一些實施例中，所述減小是在兩隻眼睛中。在一些實施例中，所述減小是在一隻眼睛中。

在一些實施例中，所述個體顯示一種或多種呼吸功能的改善或穩定，如通過呼吸機使用所評估。IOPD患者可能需要使用呼吸機。呼吸機可以是侵入式（invasive）或非侵入式（non-invasive）的，僅在日間或夜間使用，或者既在日間也在夜間使用。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述個體在日、周或月期間使用呼吸機的頻率更低。在一些實施例中，當在治療特定持續時間後測量時，相對於基線，所述個體使用微創呼吸機，所述持續時間如約以下值中的任一個：1個月、3個月、6個月、25周、7個月、8個月、9個月、12個月、2年、5年、10年或更長時間，包括這些值之間的任何值或範圍。

在一些實施例中，提供延遲患有IOPD的人類個體的呼吸機使用的方法，所述方法包括向所述個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。

在一些實施例中，提供延長患有IOPD的個體的無有創呼吸機存活期和/或總存活期的方法，所述方法包括向所述個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。在一些實施例中，無有創呼吸機存活期增加約以下值中的任一個：1年、2年、3年、4年、5年、10年、15年、20年、25年、30年、40年或更長時間，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，總存活期增加約以下值中的任一個：1年、2年、3年、4年、5年、10年、15年、20年、25年、30年、40年或更長時間，包括這些值之間的任何值或範圍。

本文所述方法與不良影響的低發生率也相關。在一些實施例中，提供治療IOPD的方法，所述方法包括向有需要的人類個體投予包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg（例如，約20 mg/kg或約40 mg/kg）的劑量投予，並且其中所述個體針對所述寡糖-蛋白質接合物的抗藥抗體（ADA）的位準隨時間而降低。ADA可以針對藥物如寡糖-蛋白質接合物而形成。ADA具有中和藥物作用的潛力，並且因此可以在ERT中呈遞激發。

在一些實施例中，本文所述方法還包括製備所述醫藥組成物。在一些實施例中，所述醫藥組成物是從凍乾調配物重構的。在一些實施例中，所述醫藥組成物是從包含所述寡糖-蛋白質接合物的凍乾調配物重構的。

在一些實施例中，提供本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）在製造用於在有需要的人類個體中治療IOPD的藥物中的用途。在一些實施例中，提供包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）的醫藥組成物，其用於在有需要的人類個體中治療IOPD。

可以將本文所述醫藥組成物靜脈內或用另一種合適的投予途徑投予至個體。所述醫藥組成物的合適的劑量為約20 mg/kg至約40 mg/kg，包括約以下值中的任一個：20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40 mg/kg，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，所述醫藥組成物是以約20 mg/kg的劑量投予。在一些實施例中，所述醫藥組成物是以約40 mg/kg的劑量投予。

本文所述醫藥組成物可以以合適的頻率來投予，所述頻率包括例如每周兩次、每周一次、每兩周一次、每三周一次或每個月一次。在一些實施例中，所述醫藥組成物是每兩周一次投予至個體。

將本文的醫藥組成物投予至個體可以以單一劑量或者以重複投予來進行。例如，本文所述醫藥組成物可以每兩周在大約例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10小時內以約20 mg/kg至約40 mg/kg體重的劑量通過靜脈內輸注來投予。在一些實施例中，投予速率可以以例如1 mg/kg/hr開始，然後在建立患者對所述輸注速率的耐受性之後，每30分鐘增加例如2 mg/kg/hr，直至例如7 mg/kg/hr的最大值。

可以將本文所述醫藥組成物在延長時間段中投予至個體，所述延長時間段包括例如至少約以下值中的任一個：25周、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、12個月、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、12年、15年、20年、25年、30年或更長時間，包括這些值之間的任何值或範圍。A. 患者群體

龐貝氏症（也稱為酸性麥芽糖酶缺乏或肝醣貯積症（GSD）II型）是由溶酶體酸性α-葡萄糖苷酶（GAA）（一種降解肝醣的酶）的缺乏引起的罕見常染色體隱性遺傳病（參見OMIM 232300）。已將其分類為嬰兒期發作的形式和遲髮型形式。經典型嬰兒期發作的龐貝氏症（infantile onset Pompe disease，IOPD）的特徵是在不治療的情況下在一歲前致死。遲發型龐貝氏症（Late onset Pompe disease，LOPD）具有更易變的病程。

特別地，IOPD的特徵在於快速進行性肥厚型心肌病、左側室性流出道阻塞、肌張力低下和肌無力、呼吸窘迫以及獨立呼吸器的進行性喪失（Kohler, L. 等人,Neurotherapeutics 2018 15:4）。呼吸困難、餵食問題和巨舌症是IOPD的常見表現，並且運動發育通常顯著延遲（Kohler, L. 等人,Neurotherapeutics 2018 15:4）。IOPD可以通過新生兒篩查來診斷，如Burton, B.K. 等人Pediatrics 2017 140:s1中所述。

阿葡萄糖苷酶α含有重組人酸性α-葡萄糖苷酶（rhGAA）之活性成分，可以作為長期酶替代療法（ERT）用於治療已證實診斷患有龐貝氏症的患者的龐貝氏症。基於阿葡萄糖苷酶α延長嬰兒的無侵入式呼吸機存活期和總存活期的功效，以及其在患有所述疾病的兒童和成人中改善運動性和穩定呼吸功能的能力，阿葡萄糖苷酶α治療已在全球被核准（商品名MYOZYME®和LUMIZYME®）用於治療龐貝氏症。儘管可使用rhGAA，但在龐貝氏症中，特別是對於雖然進行了早期治療但仍頻繁經歷長期運動衰退的IOPD患者，仍然存在未滿足的需求。不希望受限於理論，這被認為至少部分是由於阿葡萄糖苷酶α上雙-甘露糖-6-磷酸（bis-mannose-6-phosphate，bis-M6P）的相對低位準所致。增加阿葡萄糖苷酶α上的bis-M6P的位準可以提供一個機制，以驅動攝取至骨骼肌中且由此改善在IOPD和LOPD方面的結果。

本文所述方法適合於治療患有IOPD的人類個體。在一些實施例中，所述個體在生命第一年診斷時患有心肌病。在一些實施例中，所述個體在生命第一年診斷時患有肥厚型心肌病。在一些實施例中，所述個體在生命第一年診斷時患有心律不整。在一些實施例中，所述個體在生命第一年診斷時患有心臟肥大。在一些實施例中，所述個體在生命第一年診斷時患有重度肌張力低下。在一些實施例中，所述個體在生命第一年診斷時患有重度肌病。

在一些實施例中，所述個體是18歲或更年輕。在特定實施例中，所述個體是17歲或更年輕、16歲或更年輕、15歲或更年輕、14歲或更年輕、13歲或更年輕、12歲或更年輕、11歲或更年輕、10歲或更年輕、9歲或更年輕、8歲或更年輕、7歲或更年輕、6歲或更年輕、5歲或更年輕、4歲或更年輕、3歲或更年輕、2歲或更年輕或者1歲或更年輕。在一些實施例中，所述個體大於18歲。在一些實施例中，所述個體是11月齡或更年輕、10月齡或更年輕、9月齡或更年輕、8月齡或更年輕、7月齡或更年輕、6月齡或更年輕、5月齡或更年輕、4月齡或更年輕、3月齡或更年輕、2月齡或更年輕或者小於1月齡。在一些實施例中，所述個體是新生兒。在一些實施例中，所述個體是約以下值中的任一個：0至1月齡、0至2月齡、0至3月齡、0至4月齡、0至5月齡、0至6月齡、1至6月齡、2至6月齡、3至6月齡、4至6月齡、5至6月齡、2至4月齡、3至6月齡或4至6月齡。在一些實施例中，所述個體在生命的第一個月內首次被投予寡糖-GAA接合物。在一些實施例中，所述個體在生命的第一個月內被投予免疫誘導療法（例如，甲胺蝶呤、利妥昔單抗和IVIG）。

在一些實施例中，所述個體已經接受至少6個月的使用重組GAA的治療。在一些實施例中，所述個體已經接受至少約以下值中的任一時間的使用重組GAA的治療：8個月、10個月、1年、2年、3年、4年、5年、10年或更長時間，包括這些值之間的任何值或範圍。在其他實施例中，所述個體尚未接受過使用重組GAA的治療。示例性重組GAA包括但不限於阿葡萄糖苷酶α、拉維阿葡萄糖苷酶α（reveglucosidase alfa，BioMarin）和ATB200（Amicus）。

在一些實施例中，所述個體在用所述重組GAA治療後顯示臨床衰退，其中所述臨床衰退是通過評估選自以下的一個或多個參數來確定：呼吸功能、運動技能和心臟參數。在一些實施例中，所述個體對使用重組GAA的治療具有次優臨床反應。次優臨床反應可以通過評估呼吸功能、運動技能或心臟參數來確定。呼吸功能、運動技能和/或心臟參數可以通過以下來評估：CK位準、尿液Hex4位準、GMFM-88、阿爾伯塔嬰兒動作量表（AIMS）分數、龐貝-兒科殘疾評估量表（PEDI）功能技能量表、心臟超音波（ECHO）-左心室質量（LVM）Z分數、ECHO LVMI分數、粗動作功能分類系統-擴展修訂版（GMFCS-E&R）分數、快速動作功能測試、6分鐘步行測試（6MWT）、上瞼下垂發作、瞼裂間距（IPFD）、邊緣反射距離-1（MRD-1）和邊緣瞳孔距離（MPD）和/或呼吸支援的使用。

在一些實施例中，所述個體是交叉反應性免疫物質（CRIM）陰性的。CRIM陰性患者不產生任何GAA酶，並且因此可以產生高位準的針對GAA ERT的中和抗體（Dasouki, M. 等人Neurol Clin. 2014 32:3）。在其他實施例中，所述個體是CRIM陽性的。CRIM陽性患者具有一定殘留的GAA活性。CRIM狀態可以通過西方墨點法分析(Western blot analysis)從培養的皮膚成纖維細胞來確定，從GAA基因突變來預測，或者從血液測試來確定（Burton, B.K. 等人Pediatrics 2017 140:s1；Bali, D.S. 等人,Am J Med Genet C Semin Med Genet. 2012 15:160C；Wang, Z. 等人Mol Genet Metab. 2014 111:2）。B. 寡糖 - 蛋白質接合物

本文所述方法使用寡糖-蛋白質接合物（本文中也稱為「寡糖GAA接合物」），其包含寡糖、GAA（也稱為酸性α-葡萄糖苷酶）以及連接所述寡糖與所述GAA（例如經由肟(oxime)基團）的化學連接子。在一些實施例中，所述寡糖是多聚己糖。在一些實施例中，所述寡糖具有兩個甘露糖-6-磷酸（mannose-6-phosphate，M6P）。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物具有約以下值中的任一個：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20或更多個M6P，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。

在一些實施例中，本文描述的是寡糖-蛋白質接合物，其包含 (1) GAA蛋白、(2) 寡糖和 (3) 連接所述GAA蛋白與所述寡糖的肟基團。

在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物具有式 (I) 的結構：

(I)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，L是連接所述寡糖與所述GAA的化學連接子，並且n是1至10。在一些實施例中，n是1。在一些實施例中，n是2。在一些實施例中，n是3。在一些實施例中，n是4。在一些實施例中，n是5。在一些實施例中，n是6。在一些實施例中，n是7。在一些實施例中，n是8。在一些實施例中，n是9。在一些實施例中，n是10。在一些實施例中，n是至少1、2、3、4、5、6、7、8或9。在一些實施例中，n不大於2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，n選自以下範圍：1至2、2至3、3至4、4至5、5至6、6至7、7至8、8至9、9至10、1至3、3至5、5至7、7至9、1至4、4至7、7至10、1至5、5至10、2至10、3至9、4至8、2至9、3至8、4至7、5至8、5至9、5至10、4至7、3至7、2至7和1至7。在一些實施例中，n是5至9。

在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物具有式 (II) 的結構：

(II)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，L'是化學連接子，並且n是1至10。在一些實施例中，n是1。在一些實施例中，n是2。在一些實施例中，n是3。在一些實施例中，n是4。在一些實施例中，n是5。在一些實施例中，n是6。在一些實施例中，n是7。在一些實施例中，n是8。在一些實施例中，n是9。在一些實施例中，n是10。在一些實施例中，n是至少1、2、3、4、5、6、7、8或9。在一些實施例中，n不大於2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，n選自以下範圍：1至2、2至3、3至4、4至5、5至6、6至7、7至8、8至9、9至10、1至3、3至5、5至7、7至9、1至4、4至7、7至10、1至5、5至10、2至10、3至9、4至8、2至9、3至8、4至7、5至8、5至9、5至10、4至7、3至7、2至7和1至7。在一些實施例中，n是5至9。

在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物具有式 (III) 的結構：

(III)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，n是1至10，並且m和p獨立地選自範圍為1至10的整數。在一些實施例中，n是1。在一些實施例中，n是2。在一些實施例中，n是3。在一些實施例中，n是4。在一些實施例中，n是5。在一些實施例中，n是6。在一些實施例中，n是7。在一些實施例中，n是8。在一些實施例中，n是9。在一些實施例中，n是10。在一些實施例中，n是至少1、2、3、4、5、6、7、8或9。在一些實施例中，n不大於2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，n選自以下範圍：1至2、2至3、3至4、4至5、5至6、6至7、7至8、8至9、9至10、1至3、3至5、5至7、7至9、1至4、4至7、7至10、1至5、5至10、2至10、3至9、4至8、2至9、3至8、4至7、5至8、5至9、5至10、4至7、3至7、2至7和1至7。在一些實施例中，n是5至9。在一些實施例中，m是1、2、3、4、5、6、7、8或9或10。在一些實施例中，p是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，m和p獨立地從選自以下範圍的整數選擇：1至4、4至8、8至10、2至4、2至6、2至8、2至10、1至3、3至6、6至9和4至10。在一些實施例中，m和p獨立地選自範圍為1至5的整數。在一些實施例中，m是1、2、3、4或5，並且p是1、2、3、4或5。在一些實施例中，m是1、2或3，並且p是1、2或3。在一些實施例中，m是5，並且p是1。在一些實施例中，m是4，並且p是1。在一些實施例中，m是3並且p是1。在一些實施例中，m是2，並且p是1。在一些實施例中，m是1，並且p是1。在一些實施例中，m不大於5，並且p不大於3。在一些實施例中，m不大於4，並且p不大於2。在一些實施例中，m不大於3，並且p不大於1。在一些實施例中，m是至少1，並且p是至少1。在一些實施例中，m是至少2，並且p是至少1。在一些實施例中，m是至少3，並且p是至少1。

在一些實施例中，每個寡糖-蛋白質接合物（例如，式 (I)、(II) 或 (III) 的接合物）中磷酸基團的數量為約2至20。在一些實施例中，每個寡糖-蛋白質接合物中磷酸基團的數量為2、4、6、8、10、12、14、16、18或20。在一些實施例中，每個寡糖-蛋白質接合物中磷酸基團的數量為至少2、4、6、8、10、12、14、16、18或20。在一些實施例中，每個寡糖-蛋白質接合物中磷酸基團的數量不大於2、4、6、8、10、12、14、16、18或20。在一些實施例中，每個寡糖-蛋白質接合物中磷酸基團的數量是選自以下範圍的偶數：2至4、4至6、6至8、8至10、10至12、12至14、14至16、16至18、18至20、2至6、6至10、10至14、14至18、2至8、8至14、14至20、2至10、10至20、4至20、6至18、8至16、4至18、6至16、8至14、10至16、10至18、10至20、8至14、6至14、4至14和2至14。

在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α（avalglucosidase alfa）。艾瓦葡萄糖苷酶α也稱為neoGAA或GZ402666。艾瓦葡萄糖苷酶α是人類GAA的寡糖修飾的形式，其包含多個六甘露糖結構，所述六甘露糖結構含有與所述GAA綴合的兩個末端甘露糖-6-磷酸（M6P）部分。

製備本文所述的寡糖-蛋白質接合物的方法是業內已知的。參見例如，US 7723296、WO 2008/089403和WO 2010/075010，將所述申請通過引用以其整體併入本文。

所述寡糖可以從天然來源分離，或者可以通過化學或酶合成來製備。從天然來源分離的寡糖可以是同質的或者可以是相關寡糖的異質性混合物。在一些實施例中，可以通過對從天然來源分離的寡糖進行化學或酶修飾來製備寡糖（「半合成」）。在一些實施例中，所述寡糖可以是具有天然存在的寡糖的化學結構的合成寡糖。

GAA的序列是習知的（參見例如，Martiniuk 等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:9641-9644 (1986)；Hoefsloot 等人,Biochem. J. 272:493-497 (1990)；Moreland 等人,J. Biol. Chem. 280:6780-6791 (2005)）。還參見GenBank登錄號NM_000152。所述GAA可以是野生型GAA或其序列變異體。

所述GAA可以從天然來源或以重組方式獲得。在一些實施例中，所述GAA是糖蛋白。在一些實施例中，所述GAA是在中國倉鼠卵巢（CHO）細胞中產生的人類GAA。在一些實施例中，所述人類GAA具有糖型α。在一些實施例中，所述GAA具有至少一個羰基基團。例如，具有至少一個羰基基團的GAA可以通過用熟習此項技術者已知的任何手段氧化GAA來獲得。在一些實施例中，例如，具有至少一個羰基基團的GAA可以通過用高碘酸鹽（例如，高碘酸鈉）或半乳糖氧化酶氧化GAA來獲得。在一些實施例中，具有至少一個羰基基團的GAA可以與在還原端用羰基反應性基團（如例如，肼、醯肼、胺基氧基、胺基硫脲、胺基脲或胺基團）官能化的寡糖化學綴合，以產生寡糖-GAA接合物。在一些實施例中，將所述GAA用約1、2、3、4、5、7.5、10或22.5 mM高碘酸鹽氧化。在一些實施例中，將所述GAA在足以氧化所述GAA的聚糖上的唾液酸殘基並且使岩藻糖和甘露糖氧化降至最低的條件下進行氧化。在一些實施例中，所用高碘酸鹽濃度小於約2、3、4或5 mM。在一些實施例中，所述高碘酸鹽是高碘酸鈉。

可以使用將所述寡糖與所述GAA蛋白綴合的其他方法。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是通過使包含第一反應性基團的寡糖與具有第二反應性基團的GAA蛋白反應來製備的。在一些實施例中，所述寡糖-蛋白質接合物是通過使包含胺基氧基的寡糖與具有至少一個羰基的GAA反應來製備的。

在一些實施例中，可以使所述寡糖與所述GAA蛋白的胺基酸（如半胱胺酸或離胺酸）綴合。

在一些實施例中，可以使所述寡糖與所述GAA上的聚糖綴合。在一些實施例中，可以使所述寡糖與聚糖上的唾液酸殘基綴合。在其他實施例中，可以使所述寡糖與聚糖上的甘露糖、岩藻糖、半乳糖和/或唾液酸殘基綴合。對於經由半乳糖綴合，可以首先用唾液酸酶處理糖蛋白以去除唾液酸殘基，然後用半乳糖氧化酶處理，之後與所述寡糖反應。

例如，所述寡糖-蛋白質接合物可以通過可能存在於（包括例如，胺、硫醇、羧酸、羥基）和/或引入蛋白質中的任何官能團與寡糖上合適的第二官能團的反應來製備。用於引入官能團的方法是業內熟知的。例如，具有至少一個羰基的糖蛋白可以通過用例如高碘酸鹽（例如，高碘酸鈉）或用半乳糖氧化酶氧化該糖蛋白來獲得。在另一個例子中，羰基基團可以通過使用具有擴展的遺傳密碼的表達系統來引入，如例如Wang 等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100:56-61 (2003)中所述。還參見例如，美國專利申請公開號2006/0228348，其描述將反應性基團引入糖蛋白中。

在某些實施例中，所述方法還包括將還原劑添加至所述寡糖-蛋白質接合物。所述還原劑可以是熟習此項技術者已知的任何還原劑，如例如氰基硼氫化鈉或三乙醯氧基硼氫化鈉（sodium triacetoxyborohydride，STAB）。

在某些實施例中，在綴合期間形成的蛋白質聚集物可以使用各種層析來去除。在一個實施例中，可以採用疏水相互作用層析（hydrophobic interaction chromatography，HIC）。HIC管柱的例子包括丁基650C和650M、己基650C、苯基6FF、Capto辛基和Capto苯基。在其他實施例中，聚集物可以通過金屬螯合層析（如銅、鎳、鈷或汞）來去除。在一個實施例中，可以以結合與洗脫模式或以流通模式使用銅管柱。

在一些實施例中，包含第一反應性基團的寡糖是包含胺基氧基的寡糖並且具有式 (IV) 的結構：

(IV)，其中L'是化學連接子。

在一些實施例中，式 (III) 的寡糖是式 (V) 的寡糖：

(V)，其中m和p獨立地選自範圍為1至10的整數。在一些實施例中，m是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，p是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，p是至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實施例中，m和p獨立地從選自以下範圍的整數選擇：1至4、4至8、8至10、2至4、2至6、2至8、2至10、1至3、3至6、6至9和4至10。在一些實施例中，m和p獨立地選自範圍為1至5的整數。在一些實施例中，m是1、2、3、4或5，並且p是1、2、3、4或5。在一些實施例中，m是1、2或3，並且p是1、2或3。在一些實施例中，m是5，並且p是1。在一些實施例中，m是4，並且p是1。在一些實施例中，m是3並且p是1。在一些實施例中，m是2，並且p是1。在一些實施例中，m是1，並且p是1。在一些實施例中，m不大於5，並且p不大於3。在一些實施例中，m不大於4，並且p不大於2。在一些實施例中，m不大於3，並且p不大於1。在一些實施例中，m是至少1，並且p是至少1。在一些實施例中，m是至少2，並且p是至少1。在一些實施例中，m是至少3，並且p是至少1。C. 免疫耐受誘導療法

本文所述的任一種方法還可以包括投予免疫耐受誘導療法。在一些實施例中，所述免疫耐受誘導療法包括甲胺蝶呤。在一些實施例中，所述免疫耐受誘導療法包括甲胺蝶呤和另外的免疫耐受誘導療法。在一些實施例中，所述免疫耐受誘導療法包括甲胺蝶呤、利妥昔單抗和IVIG。在一些實施例中，所述免疫耐受誘導療法用於預防性用途。

在一些實施例中，所述方法還包括向個體投予有效量的甲胺蝶呤。在一些實施例中，使用甲胺蝶呤在個體中誘導針對本文所述寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）的免疫耐受。可以使用任何可用給藥方案來誘導免疫耐受，包括連續的每周重複的劑量方案（Garman等人 Clin Exp Immunol, 137(3):496-502 (2004)；Joseph等人, Clin Exp Immunol, 152(1): 138-46 (2008)；Mendelsohn等人, N Engl J Med, 360(2): 194-5 (2009)），以及短暫的低劑量方案（參見美國專利公開號20140135337）。在一些實施例中，有效量的甲胺蝶呤是在三個周期中投予。在一些實施例中，所述甲胺蝶呤是在單個周期中投予。在一些實施例中，所述甲胺蝶呤是在一個、兩個、三個、四個、五個或更多個周期中投予。

如本文所用，單個周期是指連續或不連續的數天的治療方案或治療單元，並且較佳在給予所述寡糖-GAA接合物後不超過五天（例如，不超過三天）開始。甲胺蝶呤的單個周期可以由單劑量的甲胺蝶呤，或約2、3、4、5、6、7、8、9、10或11個連續每日劑量的甲胺蝶呤中的任一個組成。如果所述寡糖-GAA接合物是在多個時間段中給藥，則使用甲胺蝶呤治療的單個周期較佳不延長超過所述寡糖-GAA接合物給藥的第一時間段。舉例來說，在每周、每月或每年寡糖-GAA接合物投予中，甲胺蝶呤的單個周期由連續三天的甲胺蝶呤攝入（例如，口服）組成，所述周期在第0天（即將所述寡糖-GAA接合物首次給予患者的當天）開始。然後患者在第1天（約24小時後）和在第2天（約48小時後）接受單個劑量的甲胺蝶呤。在一些實施例中，甲胺蝶呤的單個周期不會持續長於約8天。

甲胺蝶呤和所述寡糖-GAA接合物可以以被認為適當的任何順序來投予。例如，可以在投予所述寡糖-GAA接合物之前、期間和/或之後將所述甲胺蝶呤投予至受試者。在一些實施例中，在投予所述寡糖-GAA接合物之前約48小時與之後約48小時之間投予所述甲胺蝶呤。例如，可以在約以下值中的任一時間投予所述甲胺蝶呤：在投予所述寡糖-GAA接合物治療之前48小時、之前36小時、之前24小時、之前12小時、同時、之後12小時、之後24小時、之後36小時或之後48小時。在一些實施例中，所述甲胺蝶呤與所述寡糖-GAA接合物同時投予。在一些實施例中，所述甲胺蝶呤是與寡糖-GAA接合物的投予同時投予，以及在投予寡糖-GAA接合物之後約24小時和約48小時投予。在一些實施例中，所述寡糖-GAA接合物是阿葡萄糖苷酶α，並且所述甲胺蝶呤是與所述寡糖-GAA接合物的投予同時投予，以及在投予所述寡糖-GAA接合物之後約24小時和約48小時投予。

甲胺蝶呤可以以有效減少不需要的免疫反應（如抗體或細胞反應）的任何劑量來投予。甲胺蝶呤在人患者中的有效量可以在以下範圍內：約0.05 mg/kg至約10 mg/kg，如不超過約以下值中的任一個：0.1 mg/kg、0.2 mg/kg、0.3 mg/kg、0.4 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg、1.5 mg/kg、2 mg/kg、2.5 mg/kg、3 mg/kg、3.5 mg/kg、4 mg/kg、4.5 mg/kg、5 mg/kg、6 mg/kg、7.5 mg/kg或10 mg/kg。在一些實施例中，所述有效量是以下值中的任一個：約0.1 mg/kg至約1.5 mg/kg、約0.12 mg/kg至約1.28 mg/kg、約1 mg/kg至約2.5 mg/kg、或約2.5 mg/kg至約5 mg/kg、或約0.1 mg/kg至約5 mg/kg。在一些實施例中，甲胺蝶呤的劑量可以造成最小安全風險，因為所述給藥方案僅涉及如下劑量位準的甲胺蝶呤的短暫過程，所述劑量位準更類似於用於類風濕性關節炎的劑量而不是低腫瘤劑量。類風濕性關節炎患者可以每周接受高達25 mg的甲胺蝶呤而沒有嚴重毒性。甲胺蝶呤的低腫瘤劑量被認為是30 mg/m² 。

在一些實施例中，甲胺蝶呤是在多於一個周期中投予，但總劑量低。例如，所述甲胺蝶呤可以在兩個或更多個（例如，3個、4個、5個、6個等）周期中投予，但是在患者中的總組合劑量不超過5 mg/kg。

在一些實施例中，除了甲胺蝶呤外，在本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）投予的同時向受試者投予另外的免疫耐受誘導療法。在一些實施例中，在開始所述寡糖-GAA接合物後將所述甲胺蝶呤和/或所述另外的免疫耐受誘導療法投予至個體，與在使用所述寡糖-GAA接合物的治療的其他周期中投予的免疫耐受誘導療法相反。在一些實施例中，在開始所述寡糖-GAA接合物後以及在使用所述寡糖-GAA接合物的治療的一個或多個其他周期中，將所述甲胺蝶呤和/或所述另外的免疫耐受誘導療法投予至個體。在一些實施例中，所述另外的免疫耐受誘導療法是與甲胺蝶呤同時投予。在一些實施例中，在投予甲胺蝶呤之後，如在投予甲胺蝶呤後1、2、3、4、5、6、7天或更長時間中的任一時間之後，投予所述另外的免疫耐受誘導療法。在一些實施例中，在投予甲胺蝶呤之前，如在投予甲胺蝶呤之前1、2、3、4、5、6、7天或更長時間中的任一時間，投予所述另外的免疫耐受誘導療法。在一些實施例中，所述受試者患有CRIM陰性IOPD。在一些實施例中，所述受試者患有CRIM陽性IOPD。在一些實施例中，甲胺蝶呤是腸內投予。在一些實施例中，甲胺蝶呤是以約0.5 mg/kg的劑量投予。在一些實施例中，甲胺蝶呤是每周投予。在一些實施例中，甲胺蝶呤是皮下投予。在一些實施例中，甲胺蝶呤是以約0.4 mg/kg的劑量投予。在一些實施例中，甲胺蝶呤是以每周三個劑量投予，持續三周。

在一些實施例中，所述另外的免疫耐受誘導療法包括利妥昔單抗、靜脈內免疫球蛋白（IVIG）或其組合。在一些實施例中，所述另外的免疫耐受誘導療法包括投予利妥昔單抗。在一些實施例中，利妥昔單抗是以約375 mg/m² 的劑量投予。在一些實施例中，如在受試者的體表面積（BSA）小於0.5 m² 時，利妥昔單抗是以約12.5 mg/kg的劑量投予。在一些實施例中，利妥昔單抗是靜脈內投予。在一些實施例中，利妥昔單抗是每周投予。在一些實施例中，所述另外的免疫耐受誘導療法包括投予IVIG。在一些實施例中，IVIG是以約0.5 g/kg的劑量投予。在一些實施例中，IVIG是以約400-500 mg/kg的劑量投予。在一些實施例中，IVIG是約每四周投予。在一些實施例中，IVIG是每月投予。在一些實施例中，所述另外的免疫耐受誘導療法包括投予利妥昔單抗和IVIG二者。

在一些實施例中，所述方法包括：(a) 向個體投予有效量的本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；以及 (b) 向個體投予有效量的甲胺蝶呤、有效量的利妥昔單抗和有效量的IVIG。在一些實施例中，所述寡糖-GAA接合物是每隔一周以約20 mg/kg投予。在一些實施例中，所述甲胺蝶呤是皮下投予。在一些實施例中，所述甲胺蝶呤是以約0.4 mg/kg投予。在一些實施例中，所述甲胺蝶呤是以每周三次劑量投予，持續三周。在一些實施例中，所述利妥昔單抗是以約375 mg/m² 投予。在一些實施例中，如在受試者的體表面積（BSA）小於0.5 m² 時，利妥昔單抗是以約12.5 mg/kg的劑量投予。在一些實施例中，利妥昔單抗是靜脈內投予。在一些實施例中，利妥昔單抗是每周投予。在一些實施例中，IVIG是以約400-500 mg/kg的劑量投予。在一些實施例中，IVIG是約每四周投予。在一些實施例中，所述寡糖-GAA接合物、甲胺蝶呤、利妥昔單抗和IVIG的劑量方案如圖12中所示。

甲胺蝶呤和所述另外的免疫耐受誘導療法對管理患者中的不需要的抗體反應的作用，可以通過習知的方法來監測，所述方法包括對患者的臨床檢查、症狀、測定抗藥抗體滴度的血液測試以及免疫組織化學測定（例如，C4沉積測定和其他固相抗體檢測方法，如酶聯免疫吸附測定（ELISA）和基於珠的螢光測定）。所述作用還可以通過測量以下項來監測：生物標記（如MCP-1、IL-13、IL-6和IL-12）的位準，已顯示其位準通過甲胺蝶呤治療而降低；以及移行2 B細胞、移行3 B細胞、濾泡B細胞、邊緣區B細胞、B10 B細胞和B1 B細胞，已顯示其數量通過甲胺蝶呤治療而增加。另外，可以根據需要使用TGF-β、FoxP3、IL-5、IL-10、IL-15和GM-CSF作為生物標記來監測甲胺蝶呤對不需要的免疫反應的作用。還可以使用生物標記的位準來監測甲胺蝶呤對T細胞針對所述寡糖-GAA接合物的反應性的影響。還可以監測用於T細胞啟動的生物標記（如IL-2、干擾素-γ和TNF-α）作為甲胺蝶呤對T細胞反應的影響的讀出。在一些實施例中，還檢測CD19的位準以監測不需要的免疫反應。在一些實施例中，在整個治療中監測個體的抗藥抗體位準（如抗rhGAA IgG抗體位準）、CD19位準和疾病進展中的一項或多項。III. 調配物和醫藥組成物

還提供調配物和醫藥組成物，其包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）。在一些實施例中，所述調配物是凍乾調配物。在一些實施例中，所述調配物是可凍乾調配物。在一些實施例中，所述醫藥組成物是從所述凍乾調配物重構的。還提供本文所述調配物和醫藥組成物用於治療龐貝氏症如IOPD的方法和用途。

當在延長時間段中儲存時，本文所述寡糖-GAA接合物在液體調配物中不穩定。不受任何理論或假設的束縛，所述寡糖部分與所述GAA蛋白之間的化學連接可能在液體調配物中發生降解。開發凍乾調配物以允許儲存呈乾粉形式的所述寡糖-GAA接合物，並且在投予至患者之前將其重構為液體調配物。先前將重組GAA配製為凍乾調配物的嘗試是不成功的，並且在重構後導致聚集，因為GAA是可以分解常用作凍乾或可凍乾調配物中的冷凍保護劑的糖部分的酶。本文所述凍乾調配物包含不經歷GAA的降解的一種或多種冷凍保護劑，如甘露醇。

在一些實施例中，提供一種調配物，所述調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；以及 (b) 不被GAA降解的糖。在一些實施例中，提供一種調配物，所述調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；(b) 不被GAA降解的糖；以及 (c) 緩衝劑。在一些實施例中，所述糖是甘露醇。在一些實施例中，所述緩衝劑是組胺酸。在一些實施例中，所述調配物還包含一種或多種穩定劑，如甘胺酸或精胺酸。在一些實施例中，所述調配物還包含界面活性劑，如聚山梨醇酯，例如，聚山梨醇酯80。在一些實施例中，所述調配物是凍乾調配物。在一些實施例中，所述調配物是可凍乾調配物。在一些實施例中，提供一種從所述凍乾調配物重構的醫藥組成物。

在一些實施例中，提供一種凍乾或可凍乾調配物，所述凍乾或可凍乾調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；以及 (b) 包含不被GAA降解的糖的一種或多種冷凍保護劑。在一些實施例中，提供一種凍乾或可凍乾調配物，所述凍乾或可凍乾調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；(b) (b) 包含不被GAA降解的糖的一種或多種冷凍保護劑；以及 (c) 緩衝劑。在一些實施例中，所述一種或多種冷凍保護劑包含甘露醇。在一些實施例中，所述一種或多種冷凍保護劑包含甘胺酸和甘露醇。在一些實施例中，所述一種或多種冷凍保護劑包含精胺酸和甘露醇。在一些實施例中，所述一種或多種冷凍保護劑還包含界面活性劑，如聚山梨醇酯，例如，聚山梨醇酯80。在一些實施例中，所述緩衝劑是組胺酸。在一些實施例中，所述調配物是凍乾調配物。在一些實施例中，所述調配物是可凍乾調配物。在一些實施例中，提供一種從所述凍乾調配物重構的醫藥組成物。

在一些實施例中，提供一種調配物，所述調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；(b) 甘露醇；以及 (c) 緩衝劑，如組胺酸。在一些實施例中，所述調配物還包含界面活性劑，如聚山梨醇酯，例如，聚山梨醇酯80。在一些實施例中，所述調配物是凍乾調配物。在一些實施例中，所述調配物是可凍乾調配物。在一些實施例中，提供一種從所述凍乾調配物重構的醫藥組成物。

在一些實施例中，提供一種調配物，所述調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；(b) 甘露醇；(c) 甘胺酸；以及 (d) 緩衝劑，如組胺酸。在一些實施例中，所述調配物還包含界面活性劑，如聚山梨醇酯，例如，聚山梨醇酯80。在一些實施例中，所述調配物是凍乾調配物。在一些實施例中，所述調配物是可凍乾調配物。在一些實施例中，提供一種從所述凍乾調配物重構的醫藥組成物。

在一些實施例中，提供一種調配物，所述調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；(b) 甘露醇；(c) 精胺酸；以及 (d) 緩衝劑，如組胺酸。在一些實施例中，所述調配物還包含界面活性劑，如聚山梨醇酯，例如，聚山梨醇酯80。在一些實施例中，所述調配物是凍乾調配物。在一些實施例中，所述調配物是可凍乾調配物。在一些實施例中，提供一種從所述凍乾調配物重構的醫藥組成物。

在一些實施例中，提供一種調配物，所述調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；(b) 甘露醇；(c) 甘胺酸；以及 (d) 組胺酸。在一些實施例中，提供一種調配物，所述調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；(b) 甘露醇；(c) 甘胺酸；(d) 組胺酸；以及 (e) 聚山梨醇酯（例如，聚山梨醇酯80）。在一些實施例中，所述調配物是凍乾調配物。在一些實施例中，所述調配物是可凍乾調配物。在一些實施例中，提供一種從所述凍乾調配物重構的醫藥組成物。

除非另有指示，否則本文所述的百分比濃度是重量百分比。在提及寡糖-GAA接合物或各種賦形劑在凍乾調配物中的濃度時，所述濃度是在凍乾之前（即，在可凍乾調配物中）或在重構所述凍乾調配物之後在組成物中確定。凍乾調配物的pH也是指在凍乾之前（即，在可凍乾調配物中）或在重構凍乾調配物之後組成物的pH。

在一些實施例中，所述調配物包含約1%至約5%的不被GAA降解的糖，包括例如約以下值中的任一個：1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4%、4.5%或5%的糖，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，所述調配物包含約以下值中的任一個：1%至2%、2%至3%、3%至4%、4%至5%、1%至3%、2%至4%、1%至4%或1%至5%的糖。在一些實施例中，所述配製品包含約2%的糖。

在一些實施例中，所述調配物包含約1%至約5%的甘露醇，包括例如約以下值中的任一個：1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4%、4.5%或5%的甘露醇，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，所述調配物包含約以下值中的任一個：1%至2%、2%至3%、3%至4%、4%至5%、1%至3%、2%至4%、1%至4%或1%至5%的甘露醇。在一些實施例中，所述配製品包含約1%至4%甘露醇。在一些實施例中，所述調配物包含約2%甘露醇。

在一些實施例中，所述調配物包含約0.5%至約4%的胺基酸（例如，精胺酸），包括例如約以下值中的任一個：0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%或4%的胺基酸，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，所述調配物包含約以下值中的任一個：0.5%至1%、1%至2%、2%至3%、3%至4%、1%至3%、2%至4%或1%至4%的胺基酸。

在一些實施例中，所述調配物包含約0.25%至約4%的甘胺酸，包括例如約以下值中的任一個：0.25%、0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%或4%的糖，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，所述調配物包含約以下值中的任一個：0.25%至0.5%、0.5%至1%、1%至2%、2%至3%、3%至4%、1%至3%、2%至4%、0.25%至1%、0.25%至1.5%或0.25%至2%的甘胺酸。在一些實施例中，所述調配物包含約0.25%至2%甘胺酸。在一些實施例中，所述調配物包含約2%甘胺酸。

在一些實施例中，所述調配物以約以下值中的任一個的重量比包含甘露醇和胺基酸（例如，精胺酸或甘胺酸）：16 : 1、8 : 1、4 : 1、2 : 1、1 : 1、1 : 2、1 : 3、1 : 4或1 : 5，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，所述調配物以約1 : 1的重量比包含甘露醇和甘胺酸。

在一些實施例中，所述調配物包含約5 mM至約50 mM緩衝劑，包括例如約以下值中的任一個：5 mM、10 mM、15 mM、20 mM、25 mM、30 mM、35 mM、40 mM、45 mM或50 mM，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，所述調配物包含約以下值中的任一個：5至10 mM、10至20 mM、20至30 mM、30至40 mM、40至50 mM、5至20 mM、10至40 mM、10至50 mM、5至25 mM或25至50 mM的所述緩衝劑。

在一些實施例中，所述調配物包含約5 mM至約50 mM組胺酸，包括例如約以下值中的任一個：5 mM、10 mM、15 mM、20 mM、25 mM、30 mM、35 mM、40 mM、45 mM或50 mM，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，所述調配物包含約以下值中的任一個：5至10 mM、10至20 mM、20至30 mM、30至40 mM、40至50 mM、5至20 mM、10至40 mM、10至50 mM、5至25 mM或25至50 mM的組胺酸。在一些實施例中，所述調配物包含約10至50 mM組胺酸。在一些實施例中，所述調配物包含約10 mM組胺酸。

在一些實施例中，所述調配物的pH為約5.5至約6.5，包括例如約以下值中的任一個：5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4或6.5，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，所述調配物的pH為約以下值中的任一個：5.5至6、6至6.5、5.5至5.75、5.75至6、6至6.25、5.75至6.25或6.25至6.5。在一些實施例中，所述調配物的pH為約6.2。

在一些實施例中，所述調配物包含約0.005%至0.05%的界面活性劑（例如，聚山梨醇酯），包括例如約以下值中的任一個：0.005%、0.0075%、0.01%、0.015%、0.02%、0.025%、0.03%、0.035%、0.04%、0.045%或0.05%，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，所述調配物包含約以下值中的任一個：0.005%至0.01%、0.01%至0.02%、0.02%至0.03%、0.03%至0.04%、0.04%至0.05%、0.005%至0.02%、0.01%至0.04%或0.005%至0.05%的界面活性劑（例如，聚山梨醇酯）。

在一些實施例中，所述調配物包含約0.005%至0.05%的聚山梨醇酯80，包括例如約以下值中的任一個：0.005%、0.0075%、0.01%、0.015%、0.02%、0.025%、0.03%、0.035%、0.04%、0.045%或0.05%，包括這些值之間的任何值或範圍。在一些實施例中，所述調配物包含約以下值中的任一個：0.005%至0.01%、0.01%至0.02%、0.02%至0.03%、0.03%至0.04%、0.04%至0.05%、0.005%至0.02%、0.01%至0.04%或0.005%至0.05%的聚山梨醇酯80。在一些實施例中，所述調配物包含約0.01%聚山梨醇酯80。

在一些實施例中，所述調配物包含約1至10 mg/mL的寡糖-GAA接合物，包括例如約以下值中的任一個：1、2、3、4、5、6、7、8、9或10 mg/mL的所述寡糖-GAA接合物。在一些實施例中，所述調配物包含約以下值中的任一個：1至5、2至8、3至7、4至6、1至2.5、2.5至5、5至7.5、7.5至10或5至10 mg/mL的所述寡糖-GAA接合物。在一些實施例中，所述調配物包含約5至10 mg/mL的所述寡糖-GAA接合物。在一些實施例中，所述調配物包含約5 mg/mL的所述寡糖-GAA接合物。

在一些實施例中，提供一種調配物，所述調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；以及 (b) 約1%至4%甘露醇。在一些實施例中，提供一種調配物，所述調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；(b) 約1%至4%甘露醇；以及 (c) 約0.25%至2%甘胺酸。在一些實施例中，提供一種調配物，所述調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；(b) 約1%至4%甘露醇；(c) 約0.25%至2%甘胺酸；以及 (d) 約10至50 mM組胺酸。在一些實施例中，提供一種調配物，所述調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；(b) 約1%至4%甘露醇；(c) 約0.25%至2%甘胺酸；(d) 約10至50 mM組胺酸；以及 (e) 約0.005%至0.05%聚山梨醇酯（例如，聚山梨醇酯80）。在一些實施例中，所述調配物是凍乾調配物。在一些實施例中，所述調配物是可凍乾調配物。在一些實施例中，提供一種從所述凍乾調配物重構的醫藥組成物。在一些實施例中，所述調配物包含約5 mg/mL至約10 mg/mL的所述寡糖-GAA接合物。在一些實施例中，所述調配物的pH為約5.5至約6.5。

在一些實施例中，提供一種調配物，所述調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；以及 (b) 約2%甘露醇。在一些實施例中，提供一種調配物，所述調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；(b) 約2%甘露醇；以及 (c) 約2%甘胺酸。在一些實施例中，提供一種調配物，所述調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；(b) 約2%甘露醇；(c) 約2%甘胺酸；以及 (d) 約10 mM組胺酸。在一些實施例中，提供一種調配物，所述調配物包含：(a) 本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）；(b) 約2%甘露醇；(c) 約2%甘胺酸；(d) 約10 mM組胺酸；以及 (e) 約0.01%聚山梨醇酯80。在一些實施例中，所述調配物是凍乾調配物。在一些實施例中，所述調配物是可凍乾調配物。在一些實施例中，提供一種從所述凍乾調配物重構的醫藥組成物。在一些實施例中，所述調配物包含約5 mg/mL的所述寡糖-GAA接合物。在一些實施例中，所述調配物的pH為約6.2。

在一些實施例中，提供一種凍乾或可凍乾調配物，所述凍乾或可凍乾調配物包含：(a) 艾瓦葡萄糖苷酶α；(b) 約1%至4%甘露醇；(c) 約0.25%至2%甘胺酸；(d) 約10至50 mM組胺酸；以及 (e) 約0.005%至0.05%聚山梨醇酯80。在一些實施例中，所述調配物是凍乾調配物。在一些實施例中，所述調配物是可凍乾調配物。在一些實施例中，提供一種從所述凍乾調配物重構的醫藥組成物。在一些實施例中，所述調配物包含約5 mg/mL的艾瓦葡萄糖苷酶α。在一些實施例中，所述調配物的pH為約6.2。

在一些實施例中，提供一種凍乾或可凍乾調配物，所述凍乾或可凍乾調配物包含：(a) 艾瓦葡萄糖苷酶α；(b) 約2%甘露醇；(c) 約2%甘胺酸；(d) 約10 mM組胺酸；以及 (e) 約0.01%聚山梨醇酯80。在一些實施例中，所述調配物是凍乾調配物。在一些實施例中，所述調配物是可凍乾調配物。在一些實施例中，提供一種從所述凍乾調配物重構的醫藥組成物。在一些實施例中，所述調配物包含約5 mg/mL的艾瓦葡萄糖苷酶α。在一些實施例中，所述調配物的pH為約6.2。

術語「緩衝液」涵蓋在凍乾前將溶液pH維持在可接受範圍內的那些藥劑，並且可以包括琥珀酸鹽（琥珀酸鈉或琥珀酸鉀）、組胺酸、磷酸鹽（磷酸鈉或磷酸鉀）、Tris（三(羥甲基)胺基甲烷）、二乙醇胺、檸檬酸鹽（檸檬酸鈉）等。將pH控制在該範圍內的緩衝液的例子包括琥珀酸鹽（如琥珀酸鈉）、葡糖酸鹽、組胺酸、檸檬酸鹽和其他有機酸緩衝液。

術語「冷凍保護劑」通常包括如下藥劑：其可能通過優先從蛋白質表面被排除來向蛋白質提供抵抗冷凍誘發的應力的穩定性。它們還可以在初級和次級乾燥期間以及在長期產物儲存期間提供保護。例子是聚合物，如葡聚糖和聚乙二醇；糖，如甘露醇；界面活性劑，如聚山梨醇酯；以及胺基酸，如甘胺酸、精胺酸和絲胺酸。

本文所述調配物還可以包含一種或多種醫藥上可接受的賦形劑，如膨脹劑、張性調節劑（tonicity modifiers）、抗氧化劑和防腐劑。本文所述冷凍保護劑（如甘露醇和甘胺酸）可以起多種作用，包括作為膨脹劑和/或張力調節劑。術語「膨脹劑」包含提供冷凍乾燥的產物的結構的藥劑。除了提供醫藥上精緻的餅狀物（pharmaceutically elegant cake）以外，膨脹劑還可以賦予關於修改塌陷溫度、提供冷凍-解凍保護和增強長期儲存中的蛋白質穩定性的有用性質。術語「張性調節劑」包括用作張性調節劑以控制滲透壓的鹽（NaCl、KCl、MgC1₂ 、CaC₁₂ 等）。

在一些實施例中，本文所述調配物包含抗氧化劑，如甲硫胺酸。在一些實施例中，本文所述調配物不含抗氧化劑。在一些實施例中，所述調配物包含約1至20 mM的抗氧化劑（例如，甲硫胺酸），包括例如約以下值中的任一個：1、2、5、10、15或20 mM的所述抗氧化劑，包括這些值之間的任何值或範圍。

本文所述調配物是穩定的。「穩定的」調配物是如下調配物：其中的蛋白質在儲存時基本上保持其物理穩定性和/或化學穩定性和/或生物學穩定性。用於測量蛋白質穩定性的各種分析技術是業內可用的並且綜述於以下文獻中：Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee編輯, Marcel Dekker, Inc., 紐約, 紐約州, Pubs. (1991)；和Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10:29-90 (1993)。可以在所選溫度下在所選時間段中測量穩定性。

「穩定的」凍乾調配物是如下凍乾調配物：在冷凍溫度（2ºC至8ºC）下至少12個月、較佳2年、且更佳3年；或者在室溫（23-27ºC）下至少3個月、較佳6個月、且更佳1年，未觀察到其有顯著變化。穩定性的標準如下：不超過10%，較佳5%、3%、2%、1%或更少的所述寡糖-GAA接合物單體被降解，如通過尺寸排阻層析（SEC）所測量。通過視覺分析，復水的(rehydrated)溶液是無色的，或者是透明至微乳白色的。所述調配物的濃度、pH和同滲重摩的變化不超過+/-10%。效力（potency）在對照的70%-130%內，較佳在80%-120%內。觀察到不超過10%，較佳5%、3%、2%、1%或更少的裁剪（clipping）。形成不超過10%，較佳5%、3%、2%、1%或更少的聚集。

在開發穩定的凍乾調配物時考慮以下標準。在凍乾期間的蛋白質解折疊應最小化。各種降解途徑應最小化，包括GAA與寡糖之間的化學連接的降解和GAA蛋白的降解。玻璃化轉變溫度（Tg）應高於產物儲存溫度。殘留水分應低（以質量計＜ 1%）。應獲得堅固且精緻的餅狀物結構。在室溫（22ºC至28ºC）下，較佳的保質期應為至少3個月，較佳6個月，更佳1年。重構時間應短，例如，小於5分鐘，較佳小於2分鐘，並且更佳小於1分鐘。在重構凍乾產物時，重構的樣品應在2ºC至8ºC下穩定至少48小時。

本文所述調配物使包含所述寡糖-GAA接合物的醫藥組成物中聚集物和微粒的形成最小化，並且確保在從凍乾調配物重構之後所述寡糖-GAA接合物維持其活性。本文所述醫藥組成物可以包含從水性凍乾前（即，可凍乾）調配物製備的無菌的醫藥上可接受的凍乾調配物。

凍乾是冷凍乾燥過程，其通常用於製備藥物產品以保留其生物學活性。製備液體組成物，然後將其凍乾以形成乾燥餅狀產物。所述過程通常涉及在真空中乾燥先前冷凍的樣品以去除冰，使無水組分以粉狀或餅狀物質的形式保持完整。所述凍乾產物可以儲存延長的時間段，並且在升高的溫度下儲存，而不損失生物學活性，並且可以通過添加適當的稀釋劑將其容易地重構為無顆粒溶液。適當的稀釋劑可以是如下任何液體：其是生物上可接受的並且凍乾粉末可以完全溶於其中。水、特別是無菌的無熱原水是較佳的稀釋劑，因為它不包括可能影響所述寡糖-GAA接合物的穩定性的鹽或其他化合物。凍乾的優點在於含水量降低至一定位準，所述位準顯著減少導致產物在長期儲存時不穩定的各種分子事件。所述凍乾產物還能夠更容易地耐受運輸的物理應力。所述重構的產物不含顆粒，因此它可以在不進行預先過濾的情況下投予。

液體凍乾前（即，可凍乾）調配物可以使用適當的乾燥參數來凍乾。例如，可以使用以下乾燥參數：約-20ºC至-50ºC的初級乾燥期溫度和在約80 mTorr至約120 mTorr之間的壓力；以及在環境溫度和在約80 mTorr至120 mTorr之間的壓力下的次級乾燥期。

在稀釋劑（例如，無菌水或鹽水）中使用時將凍乾調配物復水，以產生無顆粒醫藥組成物。即使在凍乾餅狀物在環境溫度下的延長儲存後，重構的醫藥組成物是無顆粒的。將重構的醫藥組成物腸胃外（較佳靜脈內或皮下）投予至受試者。

所述凍乾調配物的重要特徵是重構時間或將乾粉復水所耗時間。為了使得能夠極快且完全地復水，重要的是使餅狀物具有多孔結構。餅狀物結構隨多個參數而變，所述參數包括所述寡糖-GAA接合物的濃度、賦形劑類型和濃度以及凍乾周期的過程參數。通常，重構時間隨濃度增加而增加，並且因此在開發寡糖-GAA接合物的高濃度凍乾調配物時，短重構時間是重要目標。

本文還提供本文所述任一種調配物或醫藥組成物用於製備治療龐貝氏症（如IOPD）的藥物中的用途。本文還提供用於治療龐貝氏症（如IOPD）的本文所述任一種調配物或醫藥組成物。IV. 套組和製品

本文還提供用於本文所述治療方法的任何實施例中的套組和製品。所述套組和製品可以包含本文所述的任一種調配物和醫藥組成物。例如，本文提供包含艾瓦葡萄糖苷酶α的凍乾調配物的套組。

在一些實施例中，本文提供一種包含調配物的套組，所述調配物包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）、一種或多種冷凍保護劑、一種或多種緩衝劑（例如，組胺酸）和包含不被所述GAA降解的糖（例如，甘露醇）的一種或多種冷凍保護劑。在一些實施例中，所述一種或多種冷凍保護劑包含甘露醇和甘胺酸。在一些實施例中，所述一種或多種冷凍保護劑還包含界面活性劑（例如，聚山梨醇酯80）。在一些實施例中，所述套組包含調配物，所述調配物包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）、組胺酸、甘胺酸、甘露醇和聚山梨醇酯80。在一些實施例中，所述調配物包含約10至50 mM（例如，約10 mM）組胺酸、約0.25%至2%（例如，約2%）甘胺酸、約1%至4%（例如，約2%）甘露醇和約0.005%至0.05%（例如，約0.01%）聚山梨醇酯80。在一些實施例中，所述調配物是凍乾調配物、可凍乾調配物或重構的液體調配物。在一些實施例中，所述調配物的pH為約5.5至約6.5（例如，約6.2）。在一些實施例中，所述調配物包含約5 mg/mL至約10 mg/mL的所述寡糖-GAA接合物。在一些實施例中，所述調配物包含艾瓦葡萄糖苷酶α。

在一個實施例中，本文提供包含含有調配物的容器的製品，所述調配物包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）、一種或多種冷凍保護劑一種或多種緩衝劑（例如，組胺酸）和包含不被GAA降解的糖（例如，甘露醇）的一種或多種冷凍保護劑。在一些實施例中，所述一種或多種冷凍保護劑包含甘露醇和甘胺酸。在一些實施例中，所述一種或多種冷凍保護劑還包含界面活性劑（例如，聚山梨醇酯80）。在一些實施例中，所述製品包含含有調配物的容器，所述調配物包含本文所述的任一種寡糖-GAA接合物（例如，式I至式III，或艾瓦葡萄糖苷酶α）、約10至50 mM（例如，約10 mM）組胺酸、約0.25%至2%（例如，約2%）甘胺酸、約1%至4%（例如，約2%）甘露醇和約0.005%至0.05%（例如，約0.01%）聚山梨醇酯80。在一些實施例中，所述調配物是凍乾調配物、可凍乾調配物或重構的液體調配物。在一些實施例中，所述調配物的pH為約5.5至約6.5（例如，約6.2）。在一些實施例中，所述調配物包含約5 mg/mL至約10 mg/mL的所述寡糖-GAA接合物。在一些實施例中，所述調配物包含艾瓦葡萄糖苷酶α。在一些實施例中，所述容器是小瓶。在一些實施例中，所述容器是20 cc小瓶。

本文的套組和製品在合適的包裝中。合適的包裝包括但不限於小瓶、瓶子、廣口瓶、軟包裝（例如，麥拉（Mylar）袋或塑膠袋）等。套組可以視情況提供另外的組分，如緩衝液和解釋性資訊。本文因此還提供製品，所述製品包括小瓶（如密封小瓶）、瓶子、廣口瓶、軟包裝等。

套組還包含使用所述寡糖-GAA接合物治療龐貝氏症（如IOPD）的說明書。在一些實施例中，所述套組還包含指導手冊，如描述本文所述治療方法的任何實施例的方案的手冊。所述說明書可以包括關於以下的資訊：寡糖-GAA接合物（例如，艾瓦葡萄糖苷酶α）的劑量、給藥時間表和投予途徑。在一些實施例中，所述套組還包含針對治療方法選擇個體的說明書。在一些實施例中，所述套組還包含在接受治療後監測個體的說明書。

所述容器可以是單位劑量、散裝包裝（例如，多劑量包裝）或亞單位劑量。例如，可以提供如下套組：其含有足夠的如本文所公開的寡糖-GAA接合物（例如，艾瓦葡萄糖苷酶α），以在諸如以下的延長時間段內提供對個體的有效治療：3周、6周、9周、3個月、4個月、5個月、6個月、8個月、9個月、1年或更長時間中的任一時間。

本說明書中公開的所有特徵可以以任何組合進行組合。本說明書中公開的每個特徵可以由用於相同、等同或類似目的的替代性特徵來替代。因此，除非另外明確陳述，否則所公開的每個特徵只是等同或類似特徵的一般系列的例子。實例

下文的實例僅意圖做為本發明的例示，並且因此不應視為以任何方式限制本發明。以下實例和詳細描述是以說明方式而不是限制方式來提供的。實例1.於嬰兒期發作的龐貝氏症中之艾瓦葡萄糖苷酶α的臨床試驗

以下實例描述開放標籤的遞增劑量群組研究，其評估艾瓦葡萄糖苷酶α在用阿葡萄糖苷酶α治療且顯示臨床衰退或次優臨床反應的患有嬰兒期發作的龐貝氏症的患者中的安全性、藥動學和初步功效。 A. 研究設計 目標

該研究的主要目標是評價艾瓦葡萄糖苷酶α在先前以阿葡萄糖苷酶α治療的患有嬰兒期發作的龐貝氏症（IOPD）的患者中的安全性概況。次要目標是表徵艾瓦葡萄糖苷酶α的藥動學概況和評價艾瓦葡萄糖苷酶α相較於阿葡萄糖苷酶α之初步功效。方法學

進行多階段2期開放標籤、多中心、多國遞增劑量群組研究，其包括艾瓦葡萄糖苷酶α在患有IOPD的兒科患者中的重複靜脈內輸注研究，所述兒科患者先前已經用阿葡萄糖苷酶α治療，並顯示在指定的呼吸功能、運動技能、心臟參數和/或新發作之上瞼下垂（包括眼瞼位置測量，如瞼裂間距（IPFD）、邊緣反射距離-1（MRD-1）和邊緣瞳孔距離（MPD））方面的臨床衰退（階段1）或次優臨床反應（階段2）。研究設計的示意性總結提供於圖 1 中。

群組1和2中的患者具有已記錄的與龐貝氏症相關的至少一個以下參數方面的臨床衰退的證據：呼吸功能、運動技能和/或心臟參數。群組3中的患者具有已記錄的接受阿葡萄糖苷酶α時至少一個與龐貝氏症相關的以下參數方面的次優臨床反應的證據：呼吸功能、運動技能和/或上瞼下垂新發作（通過至少2次連續評估來證實）。

在階段1中，群組1中的患者在整個研究中接受20 mg/kg艾瓦葡萄糖苷酶α，並且群組2中的患者在整個研究中接受40 mg/kg艾瓦葡萄糖苷酶α（圖 1 ）。在階段2中，將加入群組3的患者隨機化為接受來自群組1和2的最大耐受劑量的艾瓦葡萄糖苷酶α（即，40 mg/kg），或在研究的前6個月內接受阿葡萄糖苷酶α（在加入研究之前至少6個月內以穩定劑量、以標記劑量或高於標記劑量），之後轉換為40 mg/kg艾瓦葡萄糖苷酶α。所有患者在研究的剩餘時間中接受艾瓦葡萄糖苷酶α。診斷以及納入和排除的標準

納入的患者具有已記錄的GAA缺乏，年齡＜ 18歲，在龐貝氏症診斷時患有心臟侵犯(cardiac involvement)，在即將進入研究之前最少6個月內一直定期接受穩定劑量的阿葡萄糖苷酶α，並且具有已記錄的臨床衰退（階段1患者）或次優臨床反應（階段2患者）的證據。

研究的納入標準如下： ˙ 患者患有已證實的任何組織來源（例如，血液、皮膚或肌肉組織）的酸性α-葡萄糖苷酶（GAA）酶缺乏。 ˙ 在進行任何研究相關程式之前根據當地法規所定義已達到法定成年年齡的患者或患者的一名或多名法定監護人提供已簽署的知情同意書。如果根據當地法規患者在法律上未成年，在適用的情況下取得患者的同意。 ˙ 患者（和患者的法定監護人，如果根據當地法規的定義患者在法律上未成年的話）必須有能力依從臨床方案。 ˙ 患者＜ 18歲。 ˙ 患者（如果是女性並且有生育能力）的血清妊娠測試（β-人絨毛膜***）必須呈陰性，並且在篩查/基線時不得正在進行母乳餵養。 ˙ 患者在生命第一年診斷時患有心肌病：即，左心室質量指數（LVMI）等同於平均年齡特定的LVMI加2個標準差。 ˙ 患者在即將進入研究之前最少6個月內一直定期接受穩定劑量的阿葡萄糖苷酶α。 ˙ 對於階段1中的參與者：患者具有已記錄的至少一個與龐貝氏症相關且與併發疾病無關的以下參數方面的臨床衰退的證據：呼吸功能、運動技能和/或心臟參數。 ˙ 對於階段2中的參與者：患者具有已記錄的至少一個與龐貝氏症相關且與併發疾病無關的以下參數方面的次優臨床反應的證據：呼吸功能、運動技能和/或新發作之上瞼下垂。

排除的患者具有高抗體滴度（即，在相隔＞ 1個月的2個連續時間點，抗阿葡萄糖苷酶α抗體滴度 ≥ 1 : 25,600）；臨床上顯著的器質性疾病（除了龐貝氏症），其可能已經導致異常實驗室參數或潛在降低的存活期；或者對艾瓦葡萄糖苷酶α的嚴重過敏反應的高風險（即，先前中度/嚴重過敏性反應、IgE抗體或針對阿葡萄糖苷酶α的高IgG抗體史）。

研究的排除標準如下： ˙ 患者具有針對阿葡萄糖苷酶α的高抗體滴度。 ˙ 患者具有對艾瓦葡萄糖苷酶α的嚴重過敏反應的高風險。 ˙ 患者在研究的持續時間中需要任何禁止的合併用藥（例如，免疫調節治療）。 ˙ 患者先前已經參與過任何ACT14132研究群組。 ˙ 有生育能力的女性患者未通過高效的節育避孕方法進行保護和/或其不願或不能進行妊娠測試。主要關鍵終點和主要的次要關鍵終點

主要安全性終點包括：(1) 不良事件/治療期間出現的不良事件（TEAE），包括輸注相關反應（IAR）（表 5 ）；(2) 作為描述性總結的臨床實驗室分析，包括標準生物化學、血液學和尿分析；以及 (3) 作為描述性總結的免疫原性評估。

次要藥動學終點包括血漿參數，包括C_max 、t_max 、曲線下面積（AUC_0- _最後）、終末半衰期（t_1/2z ）、廓清率（CL）和分佈容積（Vd）。

次要功效終點包括在6個月時以下參數的變化：粗動作功能量表-88（GMFM-88，參見圖 2A 至圖 2B ）和粗動作功能分類系統-擴展修訂版（GMFCS-E&R）；龐貝兒科殘疾評估量表（龐貝-PEDI）功能技能量表：運動性領域（圖 3 ）；快速動作功能測試（QMFT）；心臟超音波（ECHO）終點（表 6 ）：左心室質量指數（LVMI）和左心室質量（LVM）Z分數；以及肌胺酸激酶位準（圖 4A 至圖 4B ）。

其他次要終點包括6分鐘步行測試（6MWT），其測量能夠在不停止和不使用輔助裝置的情況下行走至少40米（大約130英尺）的患者步行的距離；呼吸機使用和尿液HEX-4位準（圖 5A 至圖 5B ）。

另一次要終點是眼瞼位置測量。所述評估是在篩查/基線時、第1天以及從第3周至第25周（包含端值）每2周進行。如作為次優改善的納入標準所定義的對上瞼下垂的診斷是基於治療主要研究者的評估；另外，中心讀取器基於在基線時和在每次訪視（包括第25周）時拍攝的照片來檢查所評價的上瞼下垂的存在。在參與者佩戴新型測量裝置時拍攝所述參與者眼睛的圖像，所述新型測量裝置由一對空眼鏡框和作為標準化測量工具連接的尺子組成（圖 6A ）。通過遮蔽治療組和劑量的獨立中心讀取器進行以下眼瞼位置測量：(1) 瞼裂間距（IPFD）：上瞼緣與下瞼緣之間的垂直距離（圖 6B ）；(2) 邊緣反射距離-1（MRD-1）：角膜光反射與上瞼緣之間的距離（圖 6C ）；(3) 邊緣瞳孔距離（MPD）：瞳孔中心與上瞼緣之間的距離（圖 6D ）。統計學方法

基於安全性群體提供安全性結果的描述性總結，所述安全性群體被定義為在研究中接受至少一次輸注（部分或完全）的所有患者。總結關於不良事件、實驗室安全性變數和免疫原性的資料。

提供所有群組的功效終點、藥動學和藥力學終點的描述性總結和/或圖表。艾瓦葡萄糖苷酶 α 調配物

將艾瓦葡萄糖苷酶α配製於小瓶中，每個小瓶在10 mM組胺酸、2%甘胺酸、2%甘露醇、0.01%聚山梨醇酯80（pH 6.2）中含有大約105 mg艾瓦葡萄糖苷酶α。在投予前將其用注射用無菌水來重構。 B. 結果 群體特徵

六名患者加入群組1，5名加入群組2，並且11名加入群組3（表 1 ）。患者在法國的兩個地點、日本的兩個地點、英國的兩個地點、美國的3個地點和臺灣的一個地點加入。在群組3患者中，六名隨機指派給予阿葡萄糖苷酶α且五名隨機指派給予艾瓦葡萄糖苷酶α。患者年齡在1歲與12歲之間。

患者在基線時的人口統計學和特徵在三個群組和治療組之間相當，但年齡除外：隨機化為阿葡萄糖苷酶α的群組3患者更年輕（表 1 ）。表 2 提供加入研究之前，從診斷時起的患者病史的總結。基線功能位準在所有患者之間是異質性的，且群組3中運動功能障礙不太嚴重（表 3 ）。有兩名交叉反應性免疫物質（CRIM）陰性患者和20名CRIM陽性患者（表 3 ）。

群組3阿葡萄糖苷酶α治療組參與者在基線時比其他群組更年輕，並且接受範圍為20 mg/kg qow至高達每周40 mg/kg的劑量方案。群組1參與者主要是男性。總之，參與者的生長參數基本上在正常範圍內。表 1. 在基線時患者人口統計學的總結

參數	群組 1 （ N = 6 ）	群組 2 （ N = 5 ）	群組 3
艾瓦葡萄糖苷酶 α （ N = 5 ）	阿葡萄糖苷酶 α （ N = 6 ）
國家，n（%）法國日本臺灣英國美國	2 (33) 1 (17) 2 (33) 0 1 (17)	1 (20) 1 (20) 2 (40) 0 1 (20)	0 0 1 (20) 1 (20) 3 (60)	1 (17) 0 0 1 (17) 4 (67)
進入研究時的年齡，平均值（標準差），歲	7.6 (3.4)	8.1 (4.1)	6.9 (2.7)	4.7 (3.2)
進入研究時的年齡，中位數（min，max），歲	8.2 (2, 11)	9.8 (1, 12)	8.0 (4, 10)	3.6 (1, 10)
性別，n（%）男性女性	5 (83) 1 (17)	3 (60) 2 (40)	2 (40) 3 (60)	2 (33) 4 (67)
人種，n（%）白種人黑種人或非裔美國人亞洲人	3 (50) 0 3 (50)	2 (40) 0 3 (60)	3 (60) 0 2 (40)	4 (67) 2 (33) 0
身高，Z分數，平均值（標準差）	–0.2 (0.7)	0.0 (1.4)	–0.8 (0.8)	–0.1 (1.2)
身高，Z分數，中位數（min，max）	–0.3 (–1, 1)	–0.3 (–1, 2)	–1.2 (–2, 0)	0.3 (–2, 1)
體重，Z分數，平均值（標準差）	-0.1 (1.4)	–0.2 (2.1)	0.4 (0.9)	0.1 (0.9)
體重，Z分數，中位數（min，max）	0.0 (–2, 2)	–0.1 (–3, 3)	0.5 (–1, 1)	0.4 (–1, 1)
身體質量指數，Z分數，平均值（標準差）	-0.16 (1.91)	-0.06 (2.57)	1.07 (1.25)	0.48 (0.36)
身體質量指數，Z分數，中位數（min，max）	0.41 (–2.7, 1.6)	0.64 (–3.7, 2.2)	0.98 (–0.7, 2.4)	0.50 (0.1, 1.0)
頭圍，平均值（標準差）	53.4 (3.4)	51.7 (2.7)	53.2 (1.5)	50.6 (2.5)
頭圍，中位數（min，max），cm*	54.0 (48, 58)	52.0 (49, 56)	53.2 (52, 56)	50.9 (46, 54)

*僅可獲得年齡在0與35個月（包含端值）之間的患者（n = 4）的頭圍Z分數，WHO頭圍Z分數表。表 2. 從診斷時起 / 加入研究之前的患者病史的總結

參數	群組 1 （ N = 6 ）	群組 2 （ N = 5 ）	群組 3
艾瓦葡萄糖苷酶 α （ N = 5 ）	阿葡萄糖苷酶 α （ N = 6 ）
充血性心臟衰竭，是，n（%）	0	1 (20.0)	0	0
心臟侵犯，是，n（%）心律不整心臟肥大其他	6 (100) 0 6 (100) 0	5 (100) 0 5 (100) 0	5 (100) 1 (20) 2 (40) 2 (40)	6 (100) 0 4 (67) 2 (33)
舌腫大，是，n（%）	4 (67)	3 (60)	4 (80)	2 (33)
聽力損失，是，n（%）	6 (100)	3 (60)	5 (100)	4 (67)
肝腫大，是，n（%）	1 (17)	2 (40)	1 (20)	2 (33)
胃食道逆流，是，n（%）	1 (17)	1 (20)	0	4 (67)
氣管切開術，是，n（%）	1 (17)	0	0	1 (17)
肺炎*，是，n（%）	4 (67)	2 (40)	3 (60)	3 (50)
睡眠障礙，是，n（%）	2 (33)	0	3 (60)	0
睡眠呼吸中止，是，n（%）	2 (33)	2 (40)	2 (40)	2 (33)
上肢肌無力，是，n（%）	5 (83)	4 (80)	3 (60)	5 (83)
下肢肌無力，是，n（%）	6 (100)	4 (80)	5 (100)	6 (100)
脊椎側彎，是，n（%）	3 (50)	2 (40)	2 (40)	0
關節攣縮，是，n（%）	3 (50)	0	2 (40)	2 (33)
移動裝置使用，是，n（%）	4 (67)	1 (20)	3 (60)	4 (67)

*在其病史中患有肺炎的所有患者中，除了一名患者以外都在加入之前一年期間具有＜ 5次發病；群組3阿葡萄糖苷酶α組中的一名患者在加入之前一年中具有5次與10次之間的發病。表 3. 在基線時龐貝氏症史、 CRIM 和功能狀態的總結

參數	群組1 （N = 6）	群組2 （N = 5）	群組3
艾瓦葡萄糖苷酶α（N = 5）	阿葡萄糖苷酶α（N = 6）
首次症狀時的年齡，中位數（min，max），月	0.34 (0.0, 4.4)	4.40 (0.1, 6.5)	0.00 (0.0, 0.9)	1.79 (0.0, 3.7)
診斷時的年齡，中位數（min，max），月	1.10 (0.3, 5.5)	4.47 (0.3, 8.7)	1.84 (0.0, 3.5)	3.45 (0.3, 15.9)
首次用阿葡萄糖苷酶α治療時的年齡，中位數（min，max），月	2.41 (0.4, 5.7)	4.63 (0.5, 10.4)	1.94 (0.2, 5.7)	4.44 (0.3, 19.4)
龐貝氏症的家族史，n（%）	1 (17)	1 (20)	1 (20)	1 (17)
歷史CRIM陰性狀態，n（%）*	0	1 (20)	0	1 (17)
GMFCS-E&R I級（不受限制的步行） II級（受限制的步行） III級（使用手持運動裝置步行） IV級（受限制的自身運動性；可能使用動力運動裝置） V級（用手動輪椅移動）	1 1 1 2 1	1 2 0 2 0	2 1 1 0 1	3 0 1 1 1

*2名CRIM（歷史的）陰性患者加入（一名患者在群組2中，並且一名患者在群組3阿葡萄糖苷酶α中[在診斷時用免疫耐受誘導預治療]）

在初步分析期（25周治療期）中，或者在初步分析期的最後一名患者的最後一次訪視（LPLV）之後，直至2019年9月30日的資料截止日，沒有患者中斷。所有患者都具有至少6個月的可用資料。初步分析期期間的研究藥物暴露

沒有遺漏輸注或劑量降低，並且加入的所有22名患者都完成了初步分析期（直至第25周；表 4 ）。總體治療依從性良好；沒有參與者遺漏輸注或降低其劑量。

在群組3阿葡萄糖苷酶α治療組中，每名患者各自具有其給藥方案，所述方案係基於範圍為每2周20 mg/kg直至每周40 mg/kg的先前穩定劑量。群組1中的兩名患者在初步分析期後根據方案增加劑量。表 4. 初步分析期期間的研究藥物暴露

參數	群組 1 （ N = 6 ）	群組 2 （ N = 5 ）	群組 3
艾瓦葡萄糖苷酶 α （ N = 5 ）	阿葡萄糖苷酶 α （ N = 6 ）
對治療的累積暴露，患者-年	3.0	2.5	2.5	3.0
研究藥物暴露的持續時間，中位數（min，max），周	26.1 (26, 26)	26.1 (26, 27)	26.0 (26, 26)	26.0 (26, 27)
總輸注次數，n	78	65	65	115
每名患者接受的輸注次數，中位數（min，max），n	13 (13, 13)	13 (13, 13)	13 (13, 13)	19 (13, 26)

安全性結果

治療期間出現的不良事件（TEAE）的發生率在所有群組之間以及在群組3的兩個治療組之間是類似的（表 5 ）。在嚴重影響且先前接受過治療之IOPD患者中所測試的兩種劑量位準（20 mg/kg qow和40 mg/kg qow），其安全性與產品的已知安全性概況和潛在疾病二者均為一致。最常見的TEAE是嘔吐和發燒（各6名患者）、上呼吸道感染（5名患者）、咳嗽和皮疹（各4名患者）。表 5. 安全性結果的總結

參數	群組 1 （ N = 6 ）	群組 2 （ N = 5 ）	群組 3
艾瓦葡萄糖苷酶 α （ N = 5 ）	阿葡萄糖苷酶 α （ N = 6 ）
TEAE，n（%）	5 (83)	5 (100)	5 (100)	5 (83)
可能與治療相關的TEAE，n（%）	0	2 (40)	1 (20)	1 (17)
嚴重TEAE，n（%）	1 (17)	3 (60)	0	2 (33)
輸注相關反應，n（%）	0	2 (40)	1 (20)	1 (17)

沒有治療相關的嚴重不良事件。在任何群組中沒有由於不良事件引起的死亡或退出。

四名患者在初步分析期內經歷至少一次輸注相關反應（IAR），並且四名患者在延長治療期（ETP）內經歷至少一次IAR（表 5 ）。

沒有實驗室或心臟超音波的潛在臨床上顯著異常的相關不良事件。

在投予研究藥物後（在首次藥物投予之後的任何時間），6名患者產生針對艾瓦葡萄糖苷酶α的抗藥抗體（ADA）且中位數峰值滴度為6400，包括具有加強的ADA的1名患者，即，預先存在的ADA從基線被加強至少2個滴度臺階（step）（即，滴度增加4倍）。除了一名患者以外所有患者的ADA都隨時間而下降；該患者在最後一個可用時間點的峰值滴度為6400。

值得注意的是，CRIM陰性患者極少。經歷阿葡萄糖苷酶α治療的患者被包括在內，並且先前具有高抗體滴度（抗阿葡萄糖苷酶α抗體滴度 ≥ 1 : 25600）的患者被排除。功效結果

大多數患者（14/16名用艾瓦葡萄糖苷酶α治療的患者、6/6名用阿葡萄糖苷酶α治療的患者）經歷合格症狀（即，臨床衰退/次優反應的進入標準）的穩定或改善。在初步分析期之後，兩名惡化的患者根據方案將艾瓦葡萄糖苷酶α劑量從20 mg/ kg增加至40 mg/ kg。

使用艾瓦葡萄糖苷酶α治療時，運動量表GMFM-88（圖 2A 至圖 2B ）、龐貝-PEDI（圖 3 ）和心臟超音波評估（例如，心臟超音波左心室質量（LVM）Z分數）（表 6 ）存在正趨勢（穩定或改善）。在所有群組之間，關於龐貝-PEDI功能技能量表，單獨患者顯示改善或穩定（圖 3 ）。在初步分析期期間，沒有觀察到ECHO-LVM Z分數從基線衰退，並且在基線時具有異常LVM Z分數的唯一患者在第25周改善為正常範圍（CRIM陰性群組2患者）（表 6 ）。表 6. 心臟超音波（ ECHO ） -LVM Z 分數 M 模式 * 結果

	群組 1 （ N = 6 ）	群組 2 （ N = 5 ）	群組 3
艾瓦葡萄糖苷酶 α （ N = 5 ）	阿葡萄糖苷酶 α （ N = 6 ）
觀察值	自基線的變化	觀察值	自基線的變化	觀察值	自基線的變化	觀察值	自基線的變化
基線數量中位數（min，max）	6 -1.30 (-2.0, 0.9)	NA	3 -0.60 (-1.8, 2.8)	NA	5 -0.70 (-1.8, -0.1)	NA	4 0.0 (-1.8, 0.1)	NA
第 25 周數量中位數（min，max）	5 -1.00 (-5.2, -0.1)	5 0.20 (-3.2, 1.9)	4 -0.65 (-4.6, 1.7)	2 -0.60 (-1.1, -0.1)	5 -1.50 (-2.5, 0.0)	5 -0.70 (-1.3, 0.3)	4 0.50 (-1.4, 1.0)	3 0.70 (-1.4, 2.1)

在組的位準上，在第25周時在群組3中的艾瓦葡萄糖苷酶α（每隔一周40 mg/kg）與阿葡萄糖苷酶α（在先前穩定劑量下；範圍為每隔一周/每周20-40 mg/kg）之間沒有觀察到明顯差異，但在治療組之間關於患者年齡存在不平衡（即，阿葡萄糖苷酶α組中的患者更年輕）。藥效動力學 (Pharmacodynamics) 結果

在所有劑量位準下，肌胺酸激酶（圖 4A 至圖 4B ）和尿液HEX4（圖 5A 至圖 5B ）參數存在高個體間變異性，且在40 mg/kg艾瓦葡萄糖苷酶α組中存在更顯著下降的趨勢。與使用阿葡萄糖苷酶α的穩定性相比，使用艾瓦葡萄糖苷酶α時，肌肉損傷（肌胺酸激酶[CK]）和肝醣負荷（六碳醣四聚糖[Hex4]）的藥力學疾病生物標記的位準也有所下降。上瞼下垂

眼瞼位置測量的結果顯示於下表7中。在基線時，加入Mini-COMET的22名參與者中有7名具有上瞼下垂的臨床診斷，包括3名雙側和4名單側。在第25周，7名參與者患有上瞼下垂，包括3名雙側和4名單側。在群組1（艾瓦葡萄糖苷酶α，20 mg/kg qow）中，1名參與者患有消退的左眼上瞼下垂，並且另外2名參與者截至第25周發生雙側上瞼下垂。在群組2（艾瓦葡萄糖苷酶α，40 mg/kg qow）中，1名參與者在基線時患有右眼上瞼下垂，並且截至第25周沒有參與者患有任一隻眼睛的上瞼下垂。在群組3（艾瓦葡萄糖苷酶α，40 mg/kg qow）中，另外1名參與者截至第25周發生右眼上瞼下垂，而在基線時患有雙側上瞼下垂的1名參與者截至第25周沒有上瞼下垂。在群組3（阿葡萄糖苷酶α，20 mg/kg qow至每周40 mg/kg）中，2名參與者在基線時患有右眼上瞼下垂，截至第25周，所述上瞼下垂在1名參與者中仍然存在並且在1名參與者中消退，而在基線時患有左眼上瞼下垂的1名參與者中，所述上瞼下垂在第25周仍然存在。表 7. 對上瞼下垂在參與者中的存在進行臨床評估（數據是參與者的數量）

		右眼上瞼下垂	左眼上瞼下垂
群組1：艾瓦葡萄糖苷酶α 20 mg/kg qow（N = 6）		基線時不存在（n = 4）	基線時存在（n = 2）	基線時不存在（n = 4）	基線時存在（n = 2）
第25周不存在	2	0	2	1
第25周存在	2（上瞼下垂發生）	2	2（上瞼下垂發生）	1（上瞼下垂消退）
群組2：艾瓦葡萄糖苷酶α 40 mg/kg qow（N = 5）		基線時不存在（n = 4）	基線時存在（n = 1）	基線時不存在（n = 5）	基線時存在（n = 0）
第25周不存在	4	1	5	0
第25周存在	0	0（上瞼下垂消退）	0	0
群組3：艾瓦葡萄糖苷酶α 40 mg/kg qow（N = 5）		基線時不存在（n = 4）	基線時存在（n = 1）	基線時不存在（n = 4）	基線時存在（n = 1）
第25周不存在	3	1	4	1
第25周存在	1（上瞼下垂發生）	0（上瞼下垂消退）	0	0（上瞼下垂消退）
群組3：阿葡萄糖苷酶α 20 mg/kg qow至每周40 mg/kg（N = 6*）		基線時不存在（n = 4）	基線時存在（n = 2）	基線時不存在（n = 5）	基線時存在（n = 1）
第25周不存在	4	1	5	1
第25周存在	0	1（上瞼下垂消退）	0	0

圖 7A 至圖 7F 比較不同群組之間各個眼瞼位置測量的結果。在40 mg/kg qow艾瓦葡萄糖苷酶α組（群組2和群組3艾瓦葡萄糖苷酶α組）中，存在從基線至第25周對於眼瞼位置測量的改善趨勢。相比之下，20 mg/kg qow艾瓦葡萄糖苷酶α組（群組1）和阿葡萄糖苷酶α組（群組3阿葡萄糖苷酶α組）在這些測量中顯示穩定或惡化。瞼裂間距（兩隻眼睛，使用和不使用閃光）在治療組之間的差異比邊緣反射距離-1（兩隻眼睛）或邊緣瞳孔距離（兩隻眼睛）的差異更顯著。值得注意的是，非閃光圖像、特別是測量瞼裂間距和邊緣瞳孔距離的那些可以允許更精確的測量，因為不存在由於閃光攝影術所致的眼斜視。個別參與者反應

已經通過在細面圖中標繪基線和第25周資料來分析Mini-COMET研究中的個別參與者反應。

圖 8A 至圖 8D 顯示不同群組中的個體反應，如通過以下龐貝氏症負荷生物標記所測量：(1) 六碳醣四聚糖（Hex4）位準和 (2) 肌胺酸激酶（CK）位準。Hex4從基線至第25周的下降在用艾瓦葡萄糖苷酶α 40 mg/kg qow治療的參與者中最大，其基線值＞ 40 mmol/mol，而對於用阿葡萄糖苷酶α和艾瓦葡萄糖苷酶α 20 mg/kg qow治療的那些參與者，變化是更多變的（圖 8A 至圖 8B ）。CK從基線至第25周的下降顯現出主要在基線位準＞ 900 IU/L的參與者中被觀察到，並且在用艾瓦葡萄糖苷酶α治療的參與者中傾向於下降，且在用阿葡萄糖苷酶α治療的那些參與者中保持穩定（圖 8C 至圖 8D ）。

圖 9A 至圖 9D 顯示不同群組中的個體反應，如通過運動功能參數（包括GMFM-88和QMFT）所測量。GMFM-88和快速動作功能測試（QMFT）顯現出分別對於基線分數在20%至70%之間（按0至100%範圍）和在10至45之間（按0至64範圍）的情況下具有最大改善。功能更低或更高的參與者保持穩定或傾向於下降（圖 9A 至圖 9D ）。

在開始艾瓦葡萄糖苷酶α治療之前可獲得GMFM-88分數的那些參與者中，在從每周高阿葡萄糖苷酶α治療轉換為艾瓦葡萄糖苷酶α 40 mg/kg qow之後，顯示運動功能的一致性改善。三項個體病例研究顯示於圖 10A 至圖 10C 和下表8中。表 8. 病例研究

參與者	在加入時的特徵	生物標記	基線	第25周	自基線至第25周的變化
1號	• 3.6歲 • 男性 • GMFM-88：平穩 • GMFCS E&R III級 • 在Mini-COMET之前的治療：阿葡萄糖苷酶α 每周42.6 mg/kg	Hex4，mmol/mol	50.83	32.34	-18.49
CK，IU/L	1704	779	-925
2號	• 9.7歲 • 女性 • GMFM-88：衰退 • GMFCS E&R II級 • 在Mini-COMET之前的治療：阿葡萄糖苷酶α每周35 mg/kg	Hex4，mmol/mol	27.73	23.53	-4.2
CK，IU/L	829	748	-81
3號	• 4.5歲 • 女性 • GMFM-88：平穩 • GMFCS E&R I級 • 在Mini-COMET之前的治療：阿葡萄糖苷酶α每周25 mg/kg	Hex4，mmol/mol	11.94	8.29	-3.65
CK，IU/L	347	213	-134

對於群組2和3中接受艾瓦葡萄糖苷酶α 40 mg/kg qow的所有那些參與者，在基線時年齡＞ 6歲的可行走參與者的6分鐘步行測試（6MWT）距離有所改善（圖 11A ），而接受較低劑量的艾瓦葡萄糖苷酶α（20 mg/kg qow）的群組1中和群組3阿葡萄糖苷酶α組（劑量範圍，20 mg/kg qow至每周40 mg/kg）中的參與者在治療的前25周期間穩定或衰退（圖 11B ）。

基於可靠地進行測試的能力的與年齡相關的限制，可獲得關於肺功能測試的有限資料。5名參與者在基線時正在接受呼吸器，並且觀察到極少變化，沒有呼吸衰退。結論

患者在基線時的人口統計學和特徵在三個群組和治療組之間是相當的，年齡除外（隨機化為阿葡萄糖苷酶α的群組3患者的平均年齡更年輕）。在所有患者之間，在基線時的功能位準具有異質性，且群組3中的運動功能障礙不太嚴重。

在初步分析期內或直至截止日，沒有患者中斷。此外，沒有死亡，且沒有治療相關的嚴重不良事件。

存在有利的安全性和免疫原性概況。在先前以範圍為每2周20 mg/kg至每周40 mg/kg的劑量方案治療的對阿葡萄糖苷酶α具有不完全治療反應的嚴重受影響的IOPD患者中，艾瓦葡萄糖苷酶α在每2周20 mg/kg和40 mg/kg下總體上是安全的且耐受良好。疾病生物標記和探索性功效評估顯示大多數研究參與者的改善的趨勢。

在接受40 mg/kg艾瓦葡萄糖苷酶α的患者中，肌胺酸激酶（和HEX4）下降的趨勢更顯著。個體間存在高變異性。

與接受艾瓦葡萄糖苷酶α 20 mg/kg qow或劑量範圍為20 mg/kg qow至每周40 mg/kg的阿葡萄糖苷酶α的參與者中的穩定或衰退相比，在接受艾瓦葡萄糖苷酶α 40 mg/kg qow的參與者中還觀察到眼瞼位置的改善的趨勢。該作用對於瞼裂間距比對於邊緣反射距離-1或邊緣瞳孔距離更顯著。這些資料進一步支援，在患有IOPD的長期存活者中，艾瓦葡萄糖苷酶α 40 mg/kg qow對臨床上有意義的結果量度（即，預防上瞼下垂惡化，最終轉化為降低弱視的風險或對手術干預的需求）的作用更強。

大多數患者（14/16名用艾瓦葡萄糖苷酶α治療的患者、6/6名用阿葡萄糖苷酶α治療的患者）經歷臨床衰退/次優反應的進入標準的穩定或改善。

由於患者群組的異質性基線功能位準，患者位準分析闡明艾瓦葡萄糖苷酶α的作用。進行分析以解釋在三個群組和治療組中的患者之間基線時的異質性功能位準，以及在診斷和進入研究時的年齡、先前阿葡萄糖苷酶α治療和性別平衡方面的差異。

參與者位準分析證實，關於藥力學疾病生物標記、運動結果、呼吸參數和眼瞼量度，與阿葡萄糖苷酶α（20 mg/kg qow至每周40 mg/kg）相比，20 mg/kg和40 mg/kg qow的艾瓦葡萄糖苷酶α顯現出改善或更好地穩定龐貝氏症的症狀。所測試艾瓦葡萄糖苷酶α的最高劑量40 mg/kg qow顯現出在有意義的結果量度方面提供另外的益處，同時維持有利的安全性概況和可接受的免疫原性。

這些數據支持使用艾瓦葡萄糖苷酶α在患有IOPD的患者（受影響最嚴重的龐貝氏症患者群體）中的積極臨床影響。實例 2. 於未經治療的嬰兒期發作的龐貝氏症中之艾瓦葡萄糖苷酶 α 的臨床試驗

以下實例描述對艾瓦葡萄糖苷酶α在年齡小於或等於6個月的未經治療的嬰兒期發作的龐貝氏症兒科患者中的功效、安全性、藥動學和藥力學的3期、開放標籤、多國、多中心、靜脈內輸注研究。 A. 研究設計目標

研究的主要目標是確定在治療的52周後，艾瓦葡萄糖苷酶α治療對年齡小於或等於6個月的嬰兒期發作的龐貝氏症（IOPD）患者的存活期和無有創呼吸機存活期的影響。研究的次要目標是確定艾瓦葡萄糖苷酶α治療對以下的影響：12月齡和18月齡時的存活期和無有創呼吸機存活期，以及在研究的第52周時左心室質量Z分數（LVM Z分數）、阿爾伯塔嬰兒動作量表（AIMS）分數、身長、體重和頭圍百分位數以及尿液Hex4位準的變化。研究的其他次要目標是確定艾瓦葡萄糖苷酶α的安全性、耐受性和免疫原性，以及確定在第12周和第52周時藥代動力學（pharmacokinetic，PK）概況。方法學

患者包括在單一實驗組中，其每兩周接受艾瓦葡萄糖苷酶α靜脈內（IV）輸注。在研究完成之前，在52周收集主要終點資料。診斷以及納入和排除的標準

納入的患者必須具有證實的嬰兒期發作的龐貝氏症的診斷，並且年齡小於或等於6個月。

研究的納入標準如下： ˙ 患者具有證實的嬰兒期發作的龐貝氏症的診斷，所述嬰兒期發作的龐貝氏症定義為：(1) 兩種溶酶體酸性α-葡萄糖苷酶（GAA）致病變異體的存在和已記錄的血液、皮膚或肌肉組織的GAA缺乏，或者 (2) 兩種單獨樣品（來自兩種不同組織或來自相同組織但在兩個不同的取樣日期）中一種GAA致病變異體的存在和已記錄的血液、皮膚和肌肉組織的GAA缺乏。 ˙ 患者具有在加入之前可獲得的已確立的交叉反應性免疫物質（CRIM）狀態。這可以由以下來提供：歷史CRIM測試結果、基於基因型分析的CRIM的預測或者通過臨床實驗室改進修正案（Clinical Laboratory Improvement Amendments，CLIA）或其他適當認證的實驗室在篩查時進行的測試。 ˙ 患者在診斷時患有心肌病；即，左心室質量指數（LVMI）等同於平均年齡特定的LVMI加1個標準差（對於通過新生兒篩查或手足篩查（sibling screening）診斷的參與者）或加2個標準差（對於通過臨床評價診斷的參與者）。 ˙ 患者的父母或一名或多名法定授權代表能夠提供已簽署的知情同意書。

研究的排除標準如下： ˙ 患者在加入時具有呼吸功能不全的症狀，或任何呼吸器使用（侵入式或非侵入式）。 ˙ 患者患有嚴重先天性異常。 ˙ 患者患有臨床上顯著的器質性疾病（與龐貝氏症相關的症狀除外）。 ˙ 患者已經接受過使用來自任何來源的重組人酸性α葡萄糖苷酶（rhGAA）的酶替代療法（ERT）。 ˙ 患者先前在艾瓦葡萄糖苷酶α的任何臨床試驗中進行過治療。 ˙ 研究者不論出於任何原因（包括醫療或臨床狀況）判斷患者不適合參與，或者患者可能具有不依從研究程式的風險。主要關鍵終點和主要的次要關鍵終點

研究的主要終點是在第52周時存活並且不使用侵入式呼吸器的患者的比例。

研究的次要終點包括在第52周的以下評價：在12月齡和18月年齡時存活並且不使用侵入式呼吸器的患者的比例；在第52周時存活的參與者的比例；在12月齡和18月齡時存活的患者的比例；以及在第52周時沒有使用呼吸機且沒有使用補充供氧的患者的比例。

次要終點還包括在第52周的以下評價：治療期間出現的不良事件（TEAE，包括輸注相關反應）的評估；身體檢查；臨床實驗室評價；生命體徵測量；12導程心電圖（ECG）；以及免疫原性評估。

其他次要終點包括以下參數從基線至第52周的變化：左心室質量（LMV）Z分數、阿爾伯塔嬰兒動作量表（AIMS）分數、身體生長Z分數、尿液Hex4、以及身長、體重和頭圍百分位數。

另外，在第1天、第12周和第52周時評估酸性α葡萄糖苷酶（GAA）的血漿濃度。研究期的持續時間

患者在初步分析期內被治療52周，並且在隨後的52周研究延長治療期內繼續接受治療。在此之後進行長達104周的延長的長期治療期加上4周隨訪期，研究總持續時間長達4.08年。該持續時間可隨國家而變，但持續直至艾瓦葡萄糖苷酶α在患者所在國家被批准為止或長達4.08年，以先發生者為准。艾瓦葡萄糖苷酶α調配物

將艾瓦葡萄糖苷酶α配製為無菌凍乾粉末。在IV輸注投予之前將其重構。

無

圖 1 提供研究設計的示意性總結。群組1以藍色顯示，群組2以橙色顯示，並且群組3的兩個組以粉色和綠色顯示。自基線起的時間從左到右顯示。

圖 2A- 圖 2B 顯示粗動作功能量表-88（GMFM-88）總百分比分數相對於基線的變化。圖 2A 顯示在初步分析期期間，群組1（藍色）和群組2（橙色）的GMFM-88分數。圖 2B 顯示在初步分析期期間，接受阿葡萄糖苷酶α且之後在第25周後接受艾瓦葡萄糖苷酶α（粉色）或接受阿葡萄糖苷酶α（綠色）的群組3的GMFM-88分數。在圖 2B 中，*表示對於一名GMFCS V級患者，沒有測量GMFM-88。在圖 2A 至圖 2B 中，x軸顯示以周計的自基線起的時間的量，並且y軸顯示自基線的變化（平均值 ± 標準差）。

圖 3 顯示按患者年齡隨時間變化的龐貝兒科殘疾評估量表（龐貝-PEDI）功能技能量表：運動性領域量表分數（scaled score）。訪視時的患者年齡顯示於x軸上，並且量表分數顯示於y軸上。群組1個體以藍色顯示，群組2個體以橙色顯示，接受阿葡萄糖苷酶α且之後在第25周後接受艾瓦葡萄糖苷酶α的群組3個體以粉色顯示，並且接受阿葡萄糖苷酶α的群組3個體以綠色顯示。

圖 4A 至圖 4B 顯示肌胺酸激酶（CK）位準相對於基線的隨時間的變化。圖 4A 顯示在初步分析期期間，群組1（藍色）和群組2（橙色）的CK位準的變化。圖 4B 顯示在初步分析期期間，接受阿葡萄糖苷酶α且之後在第25周後接受艾瓦葡萄糖苷酶α（粉色）或接受阿葡萄糖苷酶α（綠色）的群組3的CK位準的變化。在圖 4A 至圖 4B 中，x軸顯示以周計的自基線起的時間的量，並且y軸顯示自基線的變化（中位數）。不同群組在基線時以IU/L計的CK位準如下：群組1平均值：1102.17，標準差：932.43，中位數：750，最小值：318.0，以及最大值：2607.0；群組2平均值：1444.80，標準差：164.17，中位數：1472，最小值：1188.0，最大值：1645.0；接受艾瓦葡萄糖苷酶α的群組3平均值：1211.40，標準差：597.45，中位數：1528，最小值：347.0，以及最大值：1704.0；以及接受阿葡萄糖苷酶α且之後在第25周後接受艾瓦葡萄糖苷酶α的群組3平均值：1136.17，標準差：672.61，中位數：1179，最小值：273.0，以及最大值：1830.0。

圖 5A 至圖 5B 顯示HEX4位準相對於基線的隨時間的變化。圖 5A 顯示在初步分析期期間，群組1（藍色）和群組2（橙色）的HEX4位準的變化。圖 5B 顯示在初步分析期期間，接受阿葡萄糖苷酶α且之後在第25周後接受艾瓦葡萄糖苷酶α（粉色）或接受阿葡萄糖苷酶α（綠色）的群組3的HEX4位準的變化。在圖 5A- 圖 5B 中，x軸顯示以周計的自基線起的時間的量，並且y軸顯示自基線的變化（中位數）。不同群組在基線時以mmol/mol計的HEX4位準如下：群組1平均值：80.25，標準差：48.38，中位數：73.12，最小值：16.1，以及最大值：143.3；群組2平均值：63.43，標準差：30.71，中位數：71.31，最小值：20.0，最大值：97.3；接受艾瓦葡萄糖苷酶α的群組3平均值：54.81，標準差：50.41，中位數：42.54，最小值：11.9，以及最大值：141.0；以及接受阿葡萄糖苷酶α且之後在第25周後接受艾瓦葡萄糖苷酶α的群組3平均值：52.16，標準差：33.93，中位數：69.17，最小值：4.2，以及最大值：80.6。

圖 6A 至圖 6D 顯示眼瞼位置測量結果。

圖 7A 至圖 7F 顯示以下參數在第13周和第25周自基線的平均值 ± 標準差（SD）：瞼裂間距（IPFD；圖 7A ：右眼；圖 7B ：左眼）、邊緣反射距離-1（MRD-1；圖 7C ：右眼；圖 7D ：左眼）、邊緣瞳孔距離（MPD；圖 7E ：右眼；圖 7F ：左眼）。

圖 8A 至圖 8D 顯示按群組（圖 8A ）和基線值（圖 8B ）排序的六碳醣四聚糖（Hex4）自基線至第25周的變化，以及按群組（圖 8C ）和基線值（圖 8D ）排序的肌胺酸激酶（CK）自基線至第25周的變化。1：群組1（艾瓦葡萄糖苷酶α，20 mg/kg qow）；2：群組2（艾瓦葡萄糖苷酶α，40 mg/kg qow）；3：群組3（艾瓦葡萄糖苷酶α，40 mg/kg qow）；以及4：群組3（阿葡萄糖苷酶α，20 mg/kg qow至每周40 mg/kg）。

圖 9A 至圖 9D 顯示按群組（圖 9A ）和基線值（圖 9B ）排序的生長運動功能測量-88項（GMFM-88）自基線至第25周的變化，以及按群組（圖 9C ）和基線值（圖 9D ）排序的快速動作功能測試（QMFT）自基線至第25周的變化。1：群組1（艾瓦葡萄糖苷酶α，20 mg/kg qow）；2：群組2（艾瓦葡萄糖苷酶α，40 mg/kg qow）；3：群組3（艾瓦葡萄糖苷酶α，40 mg/kg qow）；以及4：群組3（阿葡萄糖苷酶α，20 mg/kg qow至每周40 mg/kg）。

圖 10A 至圖 10C 顯示對於三病例研究的單獨參與者，如回顧性圖表資料中所記錄的以及在艾瓦葡萄糖苷酶α治療開始後的粗動作功能量表-88項（GMFM-88）表現。

圖 11A 至圖 11B 顯示在基線時年齡＞ 6歲的可行走參與者中，在基線以及第13周和第25周時的6分鐘步行測試（6MWT）距離。圖 11A 顯示群組2（艾瓦葡萄糖苷酶α，40 mg/kg qow）和群組3（艾瓦葡萄糖苷酶α，40 mg/kg qow）中的結果。圖 11B 顯示群組1（艾瓦葡萄糖苷酶α，20 mg/kg qow）和群組3（阿葡萄糖苷酶α，20 mg/kg qow和每周40 mg/kg）中的結果。

圖 12 顯示用於CRIM陰性患者的示例性劑量方案。在此劑量方案中，ERT：酶替代療法；ITI：免疫耐受誘導療法，即，甲胺蝶呤、利妥昔單抗和IVIG。

Claims

一種治療嬰兒期發作的龐貝氏症（IOPD）的方法，所述方法包括向有需要的人類個體投予包含寡糖-蛋白質接合物和醫藥上可接受的載劑的醫藥組成物，其中所述寡糖-蛋白質接合物具有式I的結構：
(I)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，L是連接所述寡糖與所述GAA的化學連接子，並且n是1至10，並且其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg至約40 mg/kg的劑量投予。
如請求項1所述的方法，其中所述醫藥組成物是以約20 mg/kg的劑量投予。
如請求項1所述的方法，其中所述醫藥組成物是以約40 mg/kg的劑量投予。
如請求項1至3中任一項所述的方法，其中所述醫藥組成物是每兩周一次投予至所述個體。
如請求項1至4中任一項所述的方法，其中所述醫藥組成物是靜脈內投予。
如請求項1至5中任一項所述的方法，其中將所述醫藥組成物投予至所述個體持續至少約25周。
如請求項1至6中任一項所述的方法，其中所述醫藥組成物是從包含所述寡糖-蛋白質接合物的凍乾調配物重構的。
如請求項7所述的方法，其中所述醫藥上可接受的載劑包含不被GAA降解的糖。
如請求項8所述的方法，其中所述不被GAA降解的糖是甘露醇。
如請求項7至9中任一項所述的方法，其中所述醫藥上可接受的載劑還包含甘胺酸。
如請求項7至10中任一項所述的方法，其中所述醫藥上可接受的載劑包含組胺酸。
如請求項7至11中任一項所述的方法，其中所述醫藥組成物的pH為約6.2。
如請求項7至12中任一項所述的方法，其中所述醫藥上可接受的載劑包含約10至50 mM組胺酸、約0.25%至2%甘胺酸、約1%至4%甘露醇和約0.005%至0.05%聚山梨醇酯80。
如請求項13所述的方法，其中所述醫藥上可接受的載劑包含約10 mM組胺酸、約2%甘胺酸、約2%甘露醇和約0.01%聚山梨醇酯80。
如請求項1至14中任一項所述的方法，其中所述個體在生命第一年診斷時患有心肌病。
如請求項15所述的方法，其中所述個體患有心律不整。
如請求項15所述的方法，其中所述個體患有心臟肥大。
如請求項1至17中任一項所述的方法，其中所述個體是18歲或更年輕。
如請求項18所述的方法，其中所述個體是6月齡或更年輕。
如請求項1至18中任一項所述的方法，其中所述個體已經接受至少6個月的使用重組GAA的治療。
如請求項20所述的方法，其中所述個體在用所述重組GAA治療後顯示臨床衰退，其中所述臨床衰退是通過評估選自以下的一個或多個參數來確定：呼吸功能、運動技能和心臟參數。
如請求項20所述的方法，其中所述個體對使用所述重組GAA的治療具有次優臨床反應，其中所述臨床反應是通過評估選自以下的一個或多個參數來確定：呼吸功能、運動技能和心臟參數。
如請求項1至19中任一項所述的方法，其中所述個體尚未接受過使用重組GAA的治療。
如請求項20至23中任一項所述的方法，其中所述重組GAA是阿葡萄糖苷酶α。
如請求項1至24中任一項所述的方法，其中所述個體是交叉反應性免疫物質（CRIM）陰性的。
如請求項1至24中任一項所述的方法，其中所述個體是CRIM陽性的。
如請求項1至26中任一項所述的方法，其還包括向所述個體投予有效量的甲胺蝶呤。
如請求項27所述的方法，其中所述有效量的甲胺蝶呤是在單個周期中或在三個周期中投予。
如請求項27或28所述的方法，其還包括向所述個體投予有效量的另外的免疫耐受誘導療法。
如請求項29所述的方法，其中所述另外的免疫耐受誘導療法包括利妥昔單抗和靜脈內免疫球蛋白（IVIG）。
如請求項1至30中任一項所述的方法，其中所述個體的針對所述寡糖-蛋白質接合物的抗藥抗體（ADA）的位準隨時間而遞減。
如請求項1至31中任一項所述的方法，其中當在治療至少約25周後測量時，所述個體的肌胺酸激酶（CK）位準降低至少約100 IU/L。
如請求項1至32中任一項所述的方法，其中當在治療至少約25周後測量時，所述個體的尿液六碳醣四聚糖（Hex4）位準減少至少約10 mmol/mol。
如請求項1至33中任一項所述的方法，其中當在治療至少約25周後測量時，所述個體的粗動作功能量表（GMFM-88）分數增加至少5%。
如請求項1至34中任一項所述的方法，其中所述個體顯示選自以下的一個或多個參數的改善或穩定：呼吸功能、運動技能、心臟參數和眼瞼位置。
如請求項35所述的方法，其中所述改善或穩定是基於選自以下的一個或多個參數來評估：阿爾伯塔嬰兒動作量表（AIMS）分數、龐貝-兒科殘疾評估量表（PEDI）功能技能量表、心臟超音波（ECHO）-左心室質量（LVM）Z分數、ECHO LVMI分數、粗動作功能分類系統-擴展修訂版（GMFCS-E&R）分數、快速動作功能測試、6分鐘步行測試（6MWT）、瞼裂間距（IPFD）、邊緣反射距離-1（MRD-1）、邊緣瞳孔距離（MPD）、上瞼下垂發作和呼吸支援的使用。
如請求項36所述的方法，其中所述改善或穩定是基於龐貝-PEDI功能技能量表來評估。
如請求項36所述的方法，其中所述改善或穩定是基於ECHO-LVM Z分數來評估。
如請求項1至38中任一項所述的方法，其中所述寡糖-蛋白質接合物具有式II的結構：
(II)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，L'是化學連接子，並且n是1至10。
如請求項39所述的方法，其中所述寡糖-蛋白質接合物具有式III的結構：
(III)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，n是1至10，並且其中m和p獨立地選自範圍為1至10的整數。
如請求項40所述的方法，其中m是3並且p是1。
如請求項40或41所述的方法，其中n是5至7。
如請求項1至42中任一項所述的方法，其中所述GAA是在中國倉鼠卵巢（CHO）細胞中產生的人類GAA。
如請求項43所述的方法，其中所述人類GAA具有糖型α。
如請求項44所述的方法，其中所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。
一種調配物，所述調配物包含：(a) 寡糖-蛋白質接合物；以及 (b) 一種或多種冷凍保護劑，所述冷凍保護劑包含不被酸性α-葡萄糖苷酶降解的糖；其中所述寡糖-蛋白質接合物具有式I的結構：
(I)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，L'是化學連接子，並且n是1至10。
如請求項46所述的調配物，其中所述糖是甘露醇。
如請求項47所述的調配物，其包含約1%至4%（w/w）甘露醇。
如請求項46-48中任一項所述的調配物，其中所述一種或多種冷凍保護劑還包含胺基酸。
如請求項49所述的調配物，其中所述胺基酸是甘胺酸。
如請求項50所述的調配物，其包含約0.25%至2%（w/w）甘胺酸。
如請求項46至51中任一項所述的調配物，其中所述一種或多種冷凍保護劑還包含界面活性劑。
如請求項52所述的調配物，其中所述界面活性劑是聚山梨醇酯80。
如請求項53所述的調配物，其包含約0.005%至0.05%（w/w）聚山梨醇酯80。
如請求項46至54中任一項所述的調配物，其還包含緩衝劑。
如請求項55所述的調配物，其中所述緩衝劑是組胺酸。
如請求項56所述的調配物，其包含約10至50 mM組胺酸。
如請求項57所述的調配物，其包含約包含10 mM組胺酸、約2%甘胺酸、約2%甘露醇和約0.01%聚山梨醇酯80。
如請求項46至58中任一項所述的調配物，其中所述調配物是凍乾調配物。
如請求項46至58中任一項所述的調配物，其中所述調配物是凍乾前或重構的液體調配物。
如請求項60所述的調配物，其中所述調配物的pH為約5.5至約6.5。
如請求項61所述的調配物，其中所述調配物的pH為約6.2。
如請求項46至62中任一項所述的調配物，其中所述調配物包含約5至10 mg/mL的所述寡糖-蛋白質接合物。
如請求項46至63中任一項所述的調配物，其中所述寡糖-蛋白質接合物具有式II的結構：
(II)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，L'是化學連接子，並且n是1至10。
如請求項64所述的調配物，其中所述寡糖-蛋白質接合物具有式III的結構：
(III)，其中GAA是酸性α-葡萄糖苷酶，n是1至10，並且其中m和p獨立地選自範圍為1至10的整數。
如請求項65所述的調配物，其中m是3並且p是1。
如請求項65或66所述的調配物，其中n是5至7。
如請求項46-67中任一項所述的調配物，其中所述GAA是在中國倉鼠卵巢（CHO）細胞中產生的人類GAA。
如請求項68所述的調配物，其中所述人類GAA具有糖型α。
如請求項69所述的調配物，其中所述寡糖-蛋白質接合物是艾瓦葡萄糖苷酶α。
一種製品，所述製品包含含有如請求項46至70中任一項所述的調配物的容器。
如請求項71所述的製品，其中所述容器是小瓶。
如請求項72所述的製品，其中所述調配物是凍乾調配物。
一種治療龐貝氏症的方法，所述方法包括向有需要的人類個體投予有效量的醫藥組成物，所述醫藥組成物包含如請求項46至70中任一項所述的調配物。
如請求項74所述的方法，其中所述龐貝氏症是IOPD。
一種套組，所述套組包含如請求項46至70中任一項所述的調配物。
如請求項76所述的套組，其還包含用於治療龐貝氏症的說明書。