TW202139974A

TW202139974A - 一種抗ｉｌ－４ｒ抗體醫藥組成物及其用途

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Publication number: TW202139974A
Application number: TW110105766A
Authority: TW
Inventors: 吳婷婷; 顏貞; 劉洵
Original assignee: 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司; 大陸商上海恆瑞醫藥有限公司
Priority date: 2020-02-21
Filing date: 2021-02-19
Publication date: 2021-11-01
Also published as: WO2021164728A1; EP4104858A1; US20230088052A1; AU2021223128A1; JP2023515423A; CA3169959A1; KR20220143882A; MX2022010217A; CN114980926A; BR112022016345A2; EP4104858A4

Abstract

本披露涉及一種抗IL-4R抗體醫藥組成物及其用途。具體而言，本披露涉及一種醫藥組成物，其包含在緩衝液中的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段。除此之外，該醫藥組成物還包含糖、非離子型表面活性劑及黏度調節劑。本披露中的醫藥組成物具備良好的穩定性。

Description

一種抗IL-4R抗體醫藥組成物及其用途

本披露屬於藥物製劑領域，具體涉及一種包含抗IL-4R抗體或其抗原結合片段的醫藥組成物，以及其作為治療免疫性疾病藥物的用途。

這裡的陳述僅提供與本披露有關的背景信息，而不必然地構成現有技術

過敏性疾病是嚴重的醫學病症，包括非危及生命的過敏反應，以及可危及生命的過敏性疾病。目前治療過敏的方法包括避免過敏原、針對症狀的藥理學治療、以及用過敏原特異性的免疫治療進行預防。

白細胞介素-4(IL-4，又稱為B細胞刺激因子或BSF-1)，其響應低濃度的抗表面免疫球蛋白抗體，刺激B細胞增殖的能力得到表徵。IL-4己被證明具有廣泛的生物活性，包括對T細胞、肥大細胞、粒細胞、巨核細胞和紅細胞等進行生長刺激。IL-4誘導MHC-II在靜息B細胞中的表達，並藉由激活的B細胞增強免疫球蛋白IgE和IgG1的分泌。

IL-4的生物活性是由特定的細胞表面IL-4受體(IL-4R)介導的。IL-4受體(IL-4R)由802個胺基酸殘基組成，在T細胞、B細胞、胸腺細胞、骨髓細胞、巨噬細胞和肥大細胞表面都有IL-4R表達。IL-4R的α鏈同時也是IL-13受體(IL-13R)的組成部分，因此IL-4R也可介導IL-13的生物活性。在受試者接觸過敏原或過敏症狀出現之前、期間或之後，作為新的治療方法，可施用含有IL-4R拮抗劑的藥物及其組合物。

高蛋白質濃度的製劑對蛋白質的物理和化學穩定性提出了挑戰，並且造成蛋白質製劑在製備、儲存和遞送上的困難。一個問題是在操作和/或儲存過程中，蛋白質形成顆粒的傾向，使得在進一步的加工過程中的操作變得困難。

目前，已有的與抗IL-4R抗體及其製劑相關的專利申請包括：WO2010053751、WO2001092340、WO2008054606、WO2014031610、CN106604744A等。

考慮到蛋白製劑從製劑的製備，到將藥物遞送給患者，蛋白質製劑增加的黏度均產生負面效應，因此，存在開發具有適宜的低黏度的相對高濃度蛋白質製劑的需求，其中該低黏度適於蛋白質製劑製備、儲存和施用。

本披露提供一種醫藥組成物，其包含抗IL-4R抗體或其抗原結合片段和緩衝劑，該緩衝劑選自組胺酸-醋酸緩衝劑，該醫藥組成物的pH為4.5-6.0，較佳為約4.5-5.5，最佳為約5.0。

在一些實施方案中，前述的醫藥組成物，其中該緩衝劑的pH為4.8-5.5，較佳為約5.0。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該緩衝劑的pH值約為4.5至6.0，較佳4.5至5.5，較佳為大約4.6至5.5，較佳為大約4.7至5.5，較佳為大約4.8至5.5，4.9至5.5，較佳為大約5.0至5.5，較佳為大約5.2至5.5，或較佳為大約5.3至5.5，最佳5.0，非限制的實施例包括約4.5、約4.6、約4.7、約4.8、約4.0、約5.0、約5.1、約5.2、約5.3、約5.4、約5.5。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該組胺酸-醋酸緩衝劑的濃度為10mM至60mM，非限制實施例包括10mM至30mM、10mM至40mM、20mM至50mM。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該緩衝劑濃度為大約10mM至50mM，較佳為大約10mM至30mM，非限制性實施例包括10mM、12mM、14mM、16mM、18mM、20mM、30mM、32mM、34mM、36mM、38mM、40mM、42mM、44mM、46mM、48mM和50mM，最佳為大約20mM或50mM。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段濃度為100mg/mL至200mg/mL，非限制性的實施例包括：110mg/mL、120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL、170mg/mL、180mg/mL、190mg/mL、200mg/mL，以及這些點值之間的任意範圍。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段濃度為100mg/mL至180mg/mL。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段濃度為約150mg/mL。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段濃度為100mg/mL以上，較佳為100mg/mL至150mg/mL，最佳為120mg/mL。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段濃度為100mg/mL至140mg/mL。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段濃度為100mg/mL至120mg/mL，非限制性的實施例包括：102mg/mL、104mg/mL、106mg/mL、108mg/mL、110mg/mL、112mg/mL、114mg/mL、116mg/mL、118mg/mL、120mg/mL。

在一些實施方案中，醫藥組成物中還包括黏度調節劑，其中該黏度調節劑選自MgCl₂、CaCl₂、NaF、NaSCN、KCl、CH₃COONa、Na₂SO₄、NaI、Arg-HCl、精胺酸、組胺酸和賴胺酸，較佳選自MgCl₂、組胺酸和精胺酸鹽酸鹽(Arg-HCl)。

在一些實施例中，醫藥組成物包含黏度調節劑。在一些情況下，由於抗體的高濃度，抗體配製品具有高黏度。在一些實施例中，黏度調節劑是賴胺酸、精胺酸或組胺酸。在一些實施例中，黏度調節劑是精胺酸。在一些實施例中，黏度調節劑包含鹽形式，例如精胺酸、賴胺酸或組胺酸的鹽。在一些實施例中，黏度調節劑是胺基酸，例如L-型胺基酸、例如L-精胺酸、L-賴胺酸或L-組胺酸。在一些實施方案中，該黏度調節劑選自MgCl₂、CaCl₂、NaF、NaSCN、KCl、CH₃COONa、Na₂SO₄、NaI、Arg-HCl、組胺酸和賴胺酸。在一些實施方案中，該黏度調節劑選自MgCl₂、組胺酸和Arg-HCl。

在一些實施例中，黏度調節劑的濃度為約5mM至約220mM。非限制性實施例包括但不限於：5mM、10mM、20mM、30mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM、100mM、110mM、120mM、130mM、140mM、 150mM、160mM、170mM、180mM、190mM、200mM、210mM或220mM，以及以及這些點值之間的任何範圍。

在一些實施例中，黏度調節劑的濃度為約10mM至約220mM。在一些實施例中，黏度調節劑的濃度為約50mM至約180mM。

在一些實施例中，黏度調節劑的濃度為約5mM至約148mM。

在一些實施例中，黏度調節劑濃度為約50mM至約120mM。

在一些實施例中，黏度調節劑的濃度為約5mM至約50mM。在一些實施例中，黏度調節劑的濃度為約10mM至約40mM。

在一些實施方案中，醫藥組成物的黏度低於40mPa.s、低於30mPa.s。

在一些實施方案中，醫藥組成物的黏度低於20mPa.s。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該黏度調節劑的濃度為50mM至148mM，較佳為85mM至120mM。

在一些實施方案中，該黏度調節劑為：

i)5mM至220mM的精胺酸鹽酸鹽；

ii)5mM至100mM的組胺酸；或

iii)5mM至90mM的MgCl₂。

在一些實施方案中，該黏度調節劑為：

i)10mM至220mM的精胺酸鹽酸鹽；

ii)10mM至100mM的組胺酸；或

iii)10mM至90mM的MgCl₂。

在一些實施方案中，該黏度調節劑為5mM至220mM的精胺酸鹽酸鹽，非限制性實施例包括但不限於10mM、20mM、30mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM、100mM、110mM、120mM、130mM、140mM、150mM、160mM、170mM、180mM、190mM、200mM、210mM或220mM，以及這些點值之間的任何範圍。

在一些實施方案中，該黏度調節劑為5mM至100mM的組胺酸，非限制性實施例10mM、20mM、30mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM、90mM或100mM，以及這些點值之間的任何範圍。

在一些實施方案中，該黏度調節劑為10mM至90mM的MgCl₂，非限制性實施例10mM、20mM、30mM、40mM、50mM、60mM、70mM、80mM或90mM，以及這些點值之間的任何範圍。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段濃度為100mg/mL至200mg/mL，並且該黏度調節劑選自MgCl₂、組胺酸和精胺酸鹽酸鹽。

在一些實施方案中，當醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段濃度為100mg/mL至200mg/mL時，該黏度調節劑選自50mM至200mM的MgCl₂、組胺酸和精胺酸鹽酸鹽。

在一些實施方案中，當醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段濃度為100mg/mL至200mg/mL時；該黏度調節劑選自50mM至90mM的MgCl₂，50mM至100mM的組胺酸和10mM至200mM，較佳50mM至180mM的精胺酸鹽酸鹽。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段濃度為120mg/mL至150mg/mL；並且該黏度調節劑選自50mM至90mM的MgCl₂，50mM至100mM的組胺酸和50mM至120mM的精胺酸鹽酸鹽。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段濃度為100mg/mL至140mg/mL；並且該黏度調節劑選自5mM至50mM的組胺酸、精胺酸鹽酸鹽或MgCl₂，較佳為10mM至40mM的組胺酸、精胺酸鹽酸鹽或MgCl₂。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段濃度為100mg/mL至140mg/mL；並且該黏度調節劑為30mM的組胺酸、精胺酸鹽酸鹽或MgCl₂

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段濃度為100mg/mL至120mg/mL；並且該黏度調節劑選自5mM至50mM的組胺酸、精胺酸鹽酸鹽或MgCl₂，較佳為10mM至40mM的組胺酸、精胺酸鹽酸鹽或MgCl₂。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該黏度調節劑選自50mM至90mM的MgCl₂，85mM至100mM的組胺酸和90mM至120mM的精胺酸鹽酸鹽。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該黏度調節劑選自5mM至50mM的組胺酸、精胺酸鹽酸或MgCl₂，較佳為10mM至40mM的組胺酸、精胺酸鹽酸或MgCl₂。

在一些實施方案中，醫藥組成物中還包含表面活性劑，較佳為聚山梨酯80。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該表面活性劑的濃度為0.1mg/mL至1.2mg/mL，較佳為0.8mg/mL。

在一些實施方案中，醫藥組成物中表面活性劑的濃度為約0.1mg/mL至1.0mg/mL，較佳為0.2mg/mL至0.8mg/mL，更佳為0.4mg/mL至0.8mg/mL，非限制性實施例包括但不限於0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.45mg/mL、0.5mg/mL、0.55mg/mL、0.6mg/mL、0.7mg/mL、0.8mg/mL、0.9mg/mL、1.0mg/mL，以及這些點值之間的任何範圍，最佳為0.8mg/mL。

在一些實施方案中，前述的醫藥組成物，其包含：

(a)100mg/mL至200mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-6.0；(c)50mM至220mM黏度調節劑；和(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80；其中該黏度調節劑選自：MgCl₂、CaCl₂、NaF、NaSCN、KCl、CH₃COONa、Na₂SO₄、NaI、精胺酸、精胺酸鹽酸鹽、組胺酸和賴胺酸；較佳地，其中該黏度調節劑選自MgCl₂、組胺酸和精胺酸鹽酸鹽。

在一些實施方案中，醫藥組成物中還包含穩定劑，其中該穩定劑較佳選自海藻糖或蔗糖，較佳為蔗糖。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該穩定劑的濃度為20mg/mL至70mg/mL，較佳為40mg/mL至60mg/mL，最佳為58mg/mL。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該穩定劑的濃度為40mg/mL至70mg/mL。

在一些實施方案中，前述醫藥組成物中糖的濃度為約50mg/mL至約60mg/mL，較佳為55mg/mL至60mg/mL，非限制性實施例包括50mg/mL、 51mg/mL、52mg/mL、53mg/mL、54mg/mL、55mg/mL、56mg/mL、57mg/m、58/mL、59mg/mL和60mg/mL。

在一些實施方案中，該醫藥組成物包含：

(a)100mg/mL至150mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)80mM至148mM，或5mM至50mM的黏度調節劑；(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80和(e)40mg/mL至60mg/mL的蔗糖，其中該醫藥組成物黏度小於20mPa.s。

在一些實施方案中，該醫藥組成物包含：

(a)100mg/mL至150mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)80mM至148mM黏度調節劑；和(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80。

在一些實施方案中，該醫藥組成物包含：

(a)100mg/mL至120mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)10mM至40mM的組胺酸；(d)0.4mg/mL至1.0mg/mL的聚山梨酯80和(e)50mg/mL至60mg/mL的蔗糖。

在一些實施方案中，該醫藥組成物包含：

(a)100mg/mL至140mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)10mM至40mM黏度調節劑；(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80；和(e)40mg/mL至70mg/mL的蔗糖；

或

(a)100mg/mL至200mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)40mM至220mM黏度調節劑；和(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80；

其中該黏度調節劑選自：MgCl₂、CaCl₂、NaF、NaSCN、KCl、CH₃COONa、Na₂SO₄、NaI、精胺酸、精胺酸鹽酸鹽、組胺酸和賴胺酸。

在一些實施方案中，該醫藥組成物包含：

(a)100mg/mL至140mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)10mM至40mM黏度調節劑；(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80；和(e)40mg/mL至70mg/mL的蔗糖；其中該黏度調節劑為組胺酸、精胺酸鹽酸鹽或MgCl₂；或

(a)100mg/mL至180mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)40mM至90mM的MgCl₂；和(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80；或

(a)100mg/mL至180mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)50mM至100mM的組胺酸；和(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80；或

(a)100mg/mL至180mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)50mM至200mM的精胺酸鹽酸鹽；和(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80。

在一些實施方案中，該醫藥組成物包含：

(a)100mg/mL至140mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)10mM至40mM組胺酸；(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80；和(e)40mg/mL至70mg/mL的蔗糖。

在一些實施方案中，該醫藥組成物包含：

(a)120mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)30mM的組胺酸；(d)0.8mg/mL的聚山梨酯80和(e)58mg/mL的蔗糖。

在一些實施方案中，該醫藥組成物包含：

(a)120mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH約5.0；(c)30mM的組胺酸；(d)0.8mg/mL的聚山梨酯80和(e)58mg/mL的蔗糖。

在一些實施方案中，該醫藥組成物包含：

(a)120mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝液緩衝劑，pH約5.0；(c)0.8mg/mL的聚山梨酯80和(d)58mg/mL的蔗糖。

在一些實施方案中，該醫藥組成物包含：

(a)約100mg/mL至180mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)約10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH約4.5至5.5；(c)約0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80和(d)約90mM至200mM的精胺酸鹽酸鹽。

在一些實施方案中，該醫藥組成物包含：

(a)約150mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)約20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH約5.0；(c)約0.8mg/mL的聚山梨酯80和(d)約120mM的精胺酸鹽酸鹽。

在一些實施方案中，該醫藥組成物包含：

(a)100mg/mL至140mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)20mM至60mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH4.5-5.5；(c)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80和(d)40mg/mL至70mg/mL的蔗糖。

在一些實施方案中，該醫藥組成物包含：

(a)100mg/mL至140mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH4.5-5.5；(c)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80和(d)40mg/mL至70mg/mL的蔗糖。

在一些實施方案中，該醫藥組成物包含：

(a)100mg/mL至120mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)20mM至60mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0-5.5；(c)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80和(d)50mg/mL至60mg/mL的蔗糖；較佳地，包含：

(a)120mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0-5.5；(c)0.8mg/mL的聚山梨酯80和(d)58mg/mL的蔗糖。

在一些實施方案中，該醫藥組成物包含：

(a)120mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH約5.0；(c)0.8mg/mL的聚山梨酯80和(d)58mg/mL的蔗糖。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段包含如下所示的重鏈可變區和輕鏈可變區：

(i)重鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和

輕鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；

(ii)重鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和

輕鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；

(iii)重鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和

輕鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：40所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；或

(iv)重鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和

輕鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：39和SEQ ID NO：8所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段包含：

重鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和

輕鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：40所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3。

(v)重鏈可變區序列如SEQ ID NO：1所示或與SEQ ID NO：1具有至少90%的同一性，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：2所示或與SEQ ID NO：2具有至少90%的同一性；

(vi)重鏈可變區序列如SEQ ID NO：9所示或與SEQ ID NO：9具有至少90%的同一性，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：10所示或與SEQ ID NO：10具有至少90%的同一性；

(vii)重鏈可變區序列如SEQ ID NO：25、26、27、43或47所示，或與SEQ ID NO：25、26、27、43或47具有至少90%的同一性，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：28、29、30、37或41所示，或與SEQ ID NO：28、29、30、37或41具有至少90%的同一性；或

(viii)重鏈可變區序列如SEQ ID NO：31、32或33所示，或與SEQ ID NO：31、32或33具有至少90%的同一性，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：34、35或36所示，或與SEQ ID NO：34、35或36具有至少90%的同一性；

較佳地，該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段包含如下所示的重鏈可變區和輕鏈可變區：

(IX)重鏈可變區序列如SEQ ID NO：43所示或與SEQ ID NO：43具有至少90%的同一性，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：37所示或與SEQ ID NO：37具有至少90%的同一性；或

(X)重鏈可變區序列如SEQ ID NO：43所示或與SEQ ID NO：43具有至少90%的同一性，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：41所示或與SEQ ID NO：41具有至少90%的同一性；或

(XI)重鏈可變區序列如SEQ ID NO：47所示或與SEQ ID NO：47具有至少90%的同一性，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：41所示或與SEQ ID NO：41具有至少90%的同一性。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段的重鏈可變區序列如SEQ ID NO：43所示，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：37所示。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段包含恆定區。在一些實施方案中，該抗IL-4R的抗體或其抗原結合片段包含人源κ、λ鏈或其變體的恆定區；還包含人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其變體的重鏈恆定區，例如IgG4-S228P或IgG4-234A/235A突變體。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段包含如下所示的重鏈和輕鏈：

SEQ ID NO：17所示的重鏈，和SEQ ID NO：18所示的輕鏈；或

SEQ ID NO：19所示的重鏈，和SEQ ID NO：20所示的輕鏈；或

SEQ ID NO：44所示的重鏈，和SEQ ID NO：45所示的輕鏈；或

SEQ ID NO：44所示的重鏈，和SEQ ID NO：46所示的輕鏈；或

SEQ ID NO：48所示的重鏈，和SEQ ID NO：46所示的輕鏈。

在一些實施方案中，醫藥組成物中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO：44所示的重鏈，和SEQ ID NO：45所示的輕鏈。

本申請還涉及一種抗IL-4R抗體，其重鏈可變區序列如SEQ ID NO：47所示或與SEQ ID NO：47具有至少90%的同一性，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：41所示或與SEQ ID NO：41具有至少90%的同一性。

本申請還涉及一種抗IL-4R抗體，其包含如SEQ ID NO：48所示的重鏈，和如SEQ ID NO：46所示的輕鏈。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)100mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-6.0；和(c)0.1mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)100mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)100mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5；和(c)0.1mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)100mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)100mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 5.0；和(c)0.1mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)100mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 6.0；和(c)0.1mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)100mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.5。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)100mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.5；和(c)0.1mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)100-150mg/mL hu25G7-A抗體；和(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0-5.5。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)122mM NaCl。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)85mM MgCl₂。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)148mM CaCl₂。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)124mM KCl。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)86mM CH₃COONa。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)96mM Na₂SO₄。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)113mM NaI。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)74mM NaF。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)112mM NaSCN。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)120mM Arg-HCl。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)118mM賴胺酸。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)93mM組胺酸。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)207mM脯胺酸。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)85mM MgCl₂。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)148mM CaCl₂。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)93mM組胺酸。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)50mM的MgCl₂。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)90mM的MgCl₂。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)90mM CaCl₂。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)90mM組胺酸。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)120mM Arg-HCl。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；(c)90mM的MgCl₂；和(d)0.1mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；(c)90mM的MgCl₂；和(d)1mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；(c)122mM NaCl；和(d)0.1mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；(c)122mM NaCl；和(d)1mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；(c)90mM組胺酸；和(d)0.1mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；(c)90mM組胺酸；和(d)1mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；(c)120mM Arg-HCl；和(d)0.1mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；(c)120mM Arg-HCl；和(d)1mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)約165mg/mL hu25G7-A抗體；(b)約20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)約50mM至90mM MgCl₂。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)約165mg/mL hu25G7-A抗體；(b)約20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)約50mM至90mM組胺酸。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)約165mg/mL hu25G7-A抗體；(b)約20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；和(c)約90mM至200mM Arg-HCl。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；(c)120mM Arg-HCl；和(d)0.8mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH4.8；(c)87mM組胺酸；和(d)0.8mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；(c)100mM組胺酸；和(d)0.8mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 5.0；(c)30mM組胺酸；和(d)0.8mg/mL聚山梨酯80；(e)41.8mg/mL蔗糖。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；(c)30mM組胺酸；和(d)0.8mg/mL聚山梨酯80；(e)58mg/mL蔗糖。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.2；(c)30mM組胺酸；和(d)0.4mg/mL聚山梨酯80；(e)50mg/mL蔗糖。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH約5.0；(c)0.8mg/mL聚山梨酯80；和(d)58mg/mL蔗糖。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)120mg/mL-150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；(c)30mM-100mM組胺酸；(d)0.8mg/mL聚山梨酯80；和(e)41.8mg/mL-58m/mL蔗糖。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH5.0；(c)120mM精胺酸鹽酸鹽；和(d)0.8mg/mL聚山梨酯80。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)100mg/mL至140mg/mL hu25G7-A抗體；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH為4.5至5.5；(c)0.4mg/mL至1.2mg/mL聚山梨酯80；和(d)約58mg/mL蔗糖。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)100mg/mL至140mg/mL hu25G7-A抗體；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH為4.8至5.5；(c)0.4mg/mL至1.2mg/mL聚山梨酯80；和(d)約58mg/mL蔗糖。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)100mg/mL至120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH為4.5至5.5；(c)0.4mg/mL至0.8mg/mL聚山梨酯80；和(d)約58mg/mL蔗糖。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)約132mg/mL hu25G7-A抗體；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH約5.5；(c)約0.4mg/mL聚山梨酯80；和(d)約58mg/mL蔗糖。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)約100mg/mL hu25G7-A抗體；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH約5.0；(c)約0.8mg/mL聚山梨酯80；和(d)約58mg/mL蔗糖。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)約100mg/mL hu25G7-A抗體；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH約4.5；(c)約0.4mg/mL聚山梨酯80；和(d)約58mg/mL蔗糖。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)約140mg/mL hu25G7-A抗體；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH約4.5；(c)約0.8mg/mL聚山梨酯80；和(d)約58mg/mL蔗糖。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)約120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH約4.5；(c)約1.2mg/mL聚山梨酯80；和(d)約58mg/mL蔗糖。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)約100mg/mL hu25G7-A抗體；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH約5；(c)約1.2mg/mL聚山梨酯80；和(d)約58mg/mL蔗糖。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)約100mg/mL hu25G7-A抗體；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH約5.5；(c)約0.4mg/mL聚山梨酯80；和(d)約58mg/mL蔗糖。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)約120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH約5.5；(c)約1.2mg/mL聚山梨酯80；和(d)約58mg/mL蔗糖。

在一個實施方案中，該醫藥組成物包含：(a)約120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH約5；(c)約0.8mg/mL聚山梨酯80；和(d)約58mg/mL蔗糖。

本披露還提供一種製備該醫藥組成物的方法，包括將抗IL-4R抗體或其抗原結合片段原液經緩衝劑置換的步驟。

本披露還提供一種含抗IL-4R抗體或其抗原結合片段的凍乾製劑，其中該凍乾製劑藉由將前述的醫藥組成物經冷凍乾燥獲得。

本披露還提供一種含抗IL-4R抗體或其抗原結合片段的凍乾製劑，其中該凍乾製劑藉由將前述的醫藥組成物稀釋後，經冷凍乾燥獲得。

本披露還提供一種含抗IL-4R抗體或其抗原結合片段的凍乾製劑，其中該凍乾製劑藉由將前述的醫藥組成物稀釋1倍、2倍或3倍後，經冷凍乾燥獲得。

本披露還提供一種含有抗IL-4R抗體或其抗原結合片段的複溶溶液，其特徵在於該複溶溶液是藉由將前述的凍乾製劑經複溶製備獲得。

在一些實施方案中，該複溶溶液包含如下成分：

(a)120mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH約5.0；(c)0.4mg/mL的聚山梨酯80和(e)50mg/mL的蔗糖。

在一個實施方案中，該複溶溶液包含：(a)約120mg/mL hu25G7-A抗體；(b)約50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑；(c)約0.8mg/mL聚山梨酯80；和(d)約58mg/mL蔗糖，且醫藥組成物的pH為約5.3。

在一個實施方案中，該複溶溶液包含：(a)約150mg/mL hu25G7-A抗體；(b)約20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑；(c)約0.8mg/mL聚山梨酯80；和(d)約120mM精胺酸鹽酸鹽，且醫藥組成物的pH為約5.3。

本披露還提供一種製品，其包括容器，該容器中裝有前述的醫藥組成物或凍乾製劑或複溶溶液。

本披露還提供一種治療或預防免疫性疾病或病症的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的前述的醫藥組成物或凍乾製劑或複溶溶液，較佳地，其中該免疫性疾病為IL-4R介導的疾病或病症。

在一些實施方案中，該免疫性疾病或病症選自：哮喘、鼻息肉、慢性鼻竇炎、過敏性皮膚病、嗜酸細胞性食管炎、慢性阻塞性肺病、過敏性鼻炎、關節炎、炎症性疾病、變應性反應、自體免疫淋巴組織增生性綜合症、自體免疫性溶血性貧血、巴雷特食管、自體免疫葡萄膜炎、結核病和腎病；較佳地，該疾病或病症為哮喘或過敏性皮膚病。

在一些實施方案中，該免疫性疾病或病症是哮喘。

在另一些實施方案中，該免疫性疾病或病症是過敏性皮膚病。

本披露還提供前述的醫藥組成物，或凍乾製劑或凍乾製劑的複溶溶液，或製品在製備治療或預防免疫性疾病或病症的藥物中的用途，較佳地，其中該免疫性疾病或病症為IL-4R介導的疾病或病症。

本披露中的醫藥組成物，或凍乾製劑或凍乾製劑的複溶溶液，或製品可用作藥物，較佳地用作治療或預防免疫性疾病或病症的藥物，更佳地，用作治療IL-4R介導的疾病或病症的藥物。

本披露中的醫藥組成物，或凍乾製劑或凍乾製劑的複溶溶液，或製品可用作藥物，較佳地用作治療或預防免疫性疾病或病症的藥物，更佳地，其中該免疫性疾病或病症選自：哮喘、鼻息肉、慢性鼻竇炎、過敏性皮膚病、嗜酸細胞性食管炎、慢性阻塞性肺病、過敏性鼻炎、關節炎、炎症性疾病、變應性反應、自體免疫淋巴組織增生性綜合症、自體免疫性溶血性貧血、巴雷特食管、自體免疫葡萄膜炎、結核病和腎病；較佳地，該疾病或病症為哮喘或過敏性皮膚病。

在本申請中，組胺酸即可作為緩衝劑，也同時具有黏度調節劑的作用，因此，在醫藥組成物中，組胺酸的最終含量為緩衝劑中組胺酸的含量與為降低黏度而繼續添加的組胺酸含量之和。比如：在20mM組胺酸-醋酸緩衝劑pH 5.0中，繼續添加90mM的組胺酸以增加其降低黏度的作用，那麼，該醫藥組成物中組胺酸的終濃度為110mM，醫藥組成物的pH為約5.0。

圖1為抗IL-4R抗體對小鼠皮炎的作用實驗結果圖。小鼠皮炎模型中，經丙酮致敏後，人源化抗體hu25G7-A、hu25G7-B和陽性參照抗體度匹魯單抗以皮下給藥方式：一週給藥兩次，第27天檢測小鼠耳朵厚度。結果顯示，和對照組相比，hu25G7-A、hu25G7-B與度匹魯單抗均能有效降低小鼠的耳朵厚度，且hu25G7-B顯示出比度匹魯單抗更優的效果。

圖2為製劑處方擬合結果。

圖3為製劑穩定性變化等高線圖，其中灰色區域表示超出限度，白色區域表示未超限度。

術語

為了更容易理解本披露，以下具體定義了某些技術和科學術語。除顯而易見在本文中的它處另有明確定義，否則本文使用的所有其它技術和科學術語都具有所屬領域的一般技術人員通常理解的含義。

本披露將申請PCT/CN2019/102169中的全部內容引入本申請。

“緩衝劑”指藉由其酸-鹼共軛組分的作用而耐受pH變化的緩衝劑。將pH控制在適當範圍中的緩衝劑的例子包括醋酸鹽、琥珀酸鹽、葡萄糖酸鹽、組胺酸鹽、草酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、枸櫞酸鹽、酒石酸鹽、延胡索酸鹽、甘胺醯甘胺酸和其它有機酸緩衝劑。

“組胺酸鹽緩衝劑”是包含組胺酸根離子的緩衝劑。組胺酸鹽緩衝劑的實例包括組胺酸-鹽酸鹽，組胺酸-醋酸鹽，組胺酸-磷酸鹽，組胺酸-硫酸鹽等緩衝劑，較佳組胺酸-醋酸鹽緩衝劑，組胺酸-醋酸鹽緩衝劑是組胺酸與醋酸配製而成，也稱為組胺酸-醋酸(His-AA)緩衝劑。

“枸櫞酸鹽緩衝劑”是包括枸櫞酸根離子的緩衝劑。枸櫞酸鹽緩衝劑的實例包括枸櫞酸-枸櫞酸鈉、枸櫞酸-枸櫞酸鉀、枸櫞酸-枸櫞酸鈣、枸櫞酸-枸櫞酸鎂緩衝劑等。較佳的枸櫞酸鹽緩衝劑是枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩衝劑。

“琥珀酸鹽緩衝劑”是包括琥珀酸根離子的緩衝劑。琥珀酸鹽緩衝劑的實例包括琥珀酸-琥珀酸鈉、琥珀酸-琥珀酸鉀、琥珀酸-琥珀酸鈣鹽緩衝劑等。較佳的琥珀酸鹽緩衝劑是琥珀酸-琥珀酸鈉緩衝劑。

“磷酸鹽緩衝劑”是包括磷酸根離子的緩衝劑。磷酸鹽緩衝劑的實例包括磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉-枸櫞酸緩衝劑等。較佳的磷酸鹽緩衝劑是磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩衝劑。

“醋酸鹽緩衝劑”是包括醋酸根離子的緩衝劑。醋酸鹽緩衝劑的實例包括醋酸-醋酸鈉、醋酸組胺酸鹽、醋酸-醋酸鉀、醋酸-醋酸鈣、醋酸-醋酸鎂緩衝劑等。較佳的醋酸鹽緩衝劑是醋酸-醋酸鈉緩衝劑。

“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述抗體或其抗原結合片段與其他化學組分的混合物，該其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。醫藥組成物的目的是保持抗體活性成分的穩定性，促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。

本文中，“醫藥組成物”和“製劑”並不互相排斥。

本披露中該醫藥組成物的溶液形式，若無特殊說明，其中的溶劑均為水性溶液。

“置換”是指溶解抗體蛋白的溶劑體系的置換，例如，使用穩定製劑的緩衝體系經物理操作方式將含抗體蛋白的高鹽或高滲溶劑體系置換，從而使抗體蛋白存在於穩定製劑中。所稱物理操作方式包括但不限於超濾、透析或離心後複溶。

“凍乾製劑”表示液體或溶液形式的醫藥組成物或液體或溶液製劑經真空冷凍乾燥步驟之後獲得的製劑或醫藥組成物。

本披露的“糖”包含常規組合物(CH₂O)_n及其衍生物，包括單糖、二糖、三糖、多糖、糖醇、還原性糖、非還原性糖等等。可選自葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、果糖、麥芽糖、右旋糖苷、甘油、赤藻糖醇、丙三醇、***糖醇、木糖醇、山梨糖醇、甘露醇、密裡二糖、松三糖、蜜三糖、甘露三糖、水蘇糖、麥芽糖、乳果糖、麥芽酮糖、山梨醇、麥芽糖醇、乳糖醇、異-麥芽酮糖等等。較佳的糖是非還原性二糖，更佳為海藻糖或蔗糖，最佳為蔗糖。

本披露的表面活性劑可選自聚山梨酯20、聚山梨酯80、聚羥亞烴、Triton、十二烷基磺酸鈉、月桂基磺酸鈉、辛基糖甙鈉、月桂基/肉豆蔻基/亞油基/硬脂基-磺基甜菜鹼、月桂基/肉豆蔻基/亞油基/硬脂基-肌胺酸、亞油基/肉豆蔻基/鯨蠟基-甜菜鹼、月桂醯胺基丙基/柯卡醯胺基丙基/亞油醯胺基丙基/肉豆蔻醯胺基丙基/棕櫚醯胺基丙基/異硬脂醯胺基丙基-甜菜鹼、肉豆蔻醯胺基丙基/棕櫚醯胺基丙基/異硬脂醯胺基丙基-二甲基胺、甲基可可醯基鈉、甲基油基牛磺酸鈉、聚乙二醇、聚丙二醇、乙烯與丙烯二醇的共聚物等等。較佳的表面活性劑是聚山梨酯80或聚山梨酯20，更佳為聚山梨酯80。

術語“黏度”可以是“運動黏度”或“絕對黏度”。“運動黏度”是在重力影響下流體的阻止流動的量度。當將兩個等體積的流體置於相同的毛細血管黏度計中並允許其借助重力流動時，黏的流體比更不黏的流體需要更長的時間流過該毛細管。例如，如果一種流體花200秒完成其流動，而另一流體花400秒，則第二種流體的運動黏度度量是第一種的兩倍。“絕對黏度”有時也稱為動力學或簡單黏度，是運動黏度和流體密度的結果(絕對黏度=運動黏度×密度)。運動黏度的單位是L²/T，其中L是長度，T為時間。通常，運動黏度表示為厘沱(cSt)。運動黏度的SI單位是mm²/s，其為1cSt。絕對黏度以厘泊(cP)為單位表示。絕對黏度的SI單位是毫帕斯卡-秒(mPa-s)，其中1cP=1mPa-s。

本文所用術語“約”、“大約”是指數值在由本領域一般技術人員所測定的具體值的可接受誤差範圍內，該數值部分取決於怎樣測量或測定(即測量體系的限度)。例如，在本領域每一次實行中“約”可意味著在1內或超過1的標準差。或者，“約”或“基本上包含”可意味著其後所示的具體數值±20%、±15%、±10%或±5%的範圍。此外，特別對於生物學系統或過程而言，該術語可意味著至多一個數量級或數值的至多5倍。除非另外說明，否則當具體值在本申請和權利要求中出現時，“約”或“基本上包含”的含義應該假定為在該具體值的可接受誤差範圍內。

本披露所述的醫藥組成物能夠達到一種穩定的效果：其中的抗體在貯藏後基本上保留其物理穩定性，和/或化學穩定性，和/或生物學活性。較佳地，醫藥組成物在貯藏後基本上保留其物理和化學穩定性以及其生物學活性。貯藏期一般基於醫藥組成物的預定保存期來選擇。目前有多種測量蛋白質穩定性的分析技術，可測量在選定溫度貯藏選定時間段後的穩定性。

穩定的藥物抗體製劑是在下述情況下沒有觀察到顯著變化的製劑：在冷藏溫度(2-8℃)保存至少3個月、較佳6個月、更佳1年，且甚至更佳地多達2年。另外，穩定的液體製劑包括這樣的液體製劑：其在包括25℃的溫度保存包括1個月、3個月、6個月在內的時段後表現出期望的特徵。穩定性的典型的可接受的標準如下：藉由SEC-HPLC測得，通常不超過約10%、較佳不超過約5%的抗體單體發生降解。藉由視覺分析，藥物抗體製劑是淡黃色近無色澄明液體或者無色，或澄清至稍微乳白色。該製劑的濃度、pH和重量克分子滲透壓濃度具有不超過±10%變化。通常觀察到不超過約10%、較佳不超過約5%的減少。通常形成不超過約10%、較佳不超過約5%的聚集。

如果在目檢顏色和/或澄清度後，或者藉由UV光散射、尺寸排阻色譜法(SEC)和動態光散射(DLS)測得，抗體沒有顯示出顯著的聚集增加、沉澱和/或變性，那麼該抗體在藥物製劑中“保留它的物理穩定性”。蛋白構象的變化可以藉由螢光光譜法(其確定蛋白三級結構)和藉由FTIR光譜法(其確定蛋白二級結構)來評價。

如果抗體沒有顯示出顯著的化學改變，那麼該抗體在藥物製劑中“保留它的化學穩定性”。藉由檢測和定量化學上改變的形式的蛋白，可以評估化學穩定性。經常改變蛋白化學結構的降解過程包括水解或截短(藉由諸如尺寸排阻色譜法和SDS-PAGE等方法來評價)、氧化(藉由諸如與質譜法或MALDI/TOF/MS結合的肽譜法等方法來評價)、脫醯胺作用(藉由諸如離子交換色譜法、毛細管等電聚焦、肽譜法、異天冬胺酸測量等方法來評價)和異構化(藉由測量異天冬胺酸含量、肽譜法等來評價)。

如果抗體在給定時間的生物活性是在製備藥物製劑時表現出的生物活性的預定範圍內，那麼該抗體在藥物製劑中“保留它的生物活性”。抗體的生物活性可以例如藉由抗原結合測定來確定。

“人IL-4R”(hIL-4R)意指與白細胞介素-4(IL-4)、IL-4Rα特異性結合的人細胞因子受體。

本文中所用的胺基酸三字母代碼和單字母代碼如J.Biol.Chem，243，p3558(1968)中所述。

術語“抗體(antibody，Ab)”包含任何包括至少一個與具體抗原(或其表位，例如IL-4R抗原或其表位)特異性結合或相互作用的互補決定區(CDR)的抗原結合分子或分子複合物。術語“抗體”包含：包括藉由雙硫鍵相互連接的四條多肽鏈，兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈的免疫球蛋白分子以及其多聚體(例如IgM)。各重鏈包含重鏈可變區(文中縮寫為HCVR或VH)和重鏈恆定區(CH)。這一重鏈恆定區包含三個區(結構域)，CH1、CH2和CH3。各輕鏈包含輕鏈可變區(文中縮寫為LCVR或VL)和輕鏈恆定區(CL)。輕鏈恆定區包含一個區(結構域，CL)。VH和VL區可進一步細分為高變區，稱為互補決定區(CDR)，其間散佈著較保守性區域，稱為框架區(framework region，FR，也稱骨架區、構架區)。各VH和VL是由三個CDR和四個FR所組成，以下列順序由胺基端排列到羧基端：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。

抗IL-4R抗體(或其抗原結合片段)的FR可與人種系序列相同，或可經自然或人工修飾。抗體可以是不同亞類(subclass)的抗體，例如，IgG(例如：IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4亞類)、IgA1、IgA2、IgD、IgE或IgM抗體。

抗原結合片段的非限定示例包含：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)單鏈Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；和(vii)由模擬抗體高變區的胺基酸殘基所組成的最小識別單位(例如分離的互補決定區(CDR)，例如CDR3肽)或限制性FR3-CDR3-FR4肽。其它工程改造分子，例如區域特異性抗體、單域抗體、區域刪除抗體、嵌合抗體、CDR-植入抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、微抗體、奈米抗體(例如單價奈米抗體、雙價奈米抗體等)、小模塊免疫醫藥(SMIP)和鯊可變IgNAR區，也涵蓋在文中所用的“抗原結合片段”的詞語內。

抗體的抗原結合片段典型地將包含至少一個可變區。可變區可以是任何大小或胺基酸組成的區域，且一般將包含與一個或多個框架序列相鄰或在其框架內的CDR。在具有VH區與VL區的抗原結合片段中，VH和VL區可以任何適合的排列位於彼此相對處。例如可變區可為二聚化並含有VH-VL或VL-VH二聚體。

在某些實施例中，抗原結合片段在任何可變區和恆定區的配置中，可變區和恆定區可直接彼此相連接或可藉由完整或部分的絞鏈或連接子區相連接。絞鏈區可由至少2個(例如5、10、15、20、40、60或更多個)胺基酸所組成，使得其在單一多肽分子中在相鄰的可變和/或恆定區之間產生柔性和半柔性連結。再者，在本披露抗原結合片段可包含以非共價彼此相互連結和/或與一個或多個單體VH或VL區相連結(例如以雙硫鍵)的具有可變區和恆定區的同源二聚體或異源二聚體(或其它多聚體)。

“鼠源抗體”在本披露中為根據本領域知識和技能製備的來源於小鼠或大鼠的單株抗體。製備時用抗原注射試驗對象，然後分離表達具有所需序列或功能特性的抗體的融合瘤，當所注射的試驗對象為小鼠時，所產生的抗體為小鼠來源抗體，當所注射的試驗對象為大鼠時，所產生的抗體為大鼠來源抗體。

“嵌合抗體(chimeric antibody)”，是將第一物種(如：鼠)抗體的可變區與第二物種(如：人)抗體的恆定區融合而成的抗體。建立嵌合抗體，要先建立分泌第一物種單抗的融合瘤，然後從融合瘤細胞中選殖可變區基因，再根據需要選殖第二物種抗體的恆定區基因，將第一物種可變區基因與第二物種恆定區基因連接成嵌合基因後***表達載體中，最後在真核系統或原核系統中表達嵌合抗體分子。在本披露一個較佳的實施方案中，該嵌合抗體的抗體輕鏈進一步包含人源κ、λ鏈或其變體的輕鏈恆定區。該嵌合抗體的抗體重鏈進一步包含人源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其變體的重鏈恆定區，較佳包含人源IgG1、IgG2或IgG4重鏈恆定區，或者使用胺基酸突變(如YTE突變、回復突變、L234A和/或L235A突變、或S228P突變)的IgG1、IgG2或IgG4重鏈恆定區變體。

術語“人源化抗體(humanized antibody)”，包括CDR移植抗體(CDR-grafted antibody)，是指將動物來源抗體，例如鼠源抗體的CDR序列移植到人的抗體可變區框架區(或構架區，framework region)中產生的抗體。人源化抗體可以克服嵌合抗體由於攜帶大量異源蛋白成分，從而誘導的異源性反應。此類構架序列可以從包括種系抗體基因序列的公共DNA數據庫或公開的參考文獻獲得。如人重鏈和輕鏈可變區基因的種系DNA序列可以在“VBase”人種系序列數據庫(在因特網http：//www.vbase2.org/獲得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版中找到。為避免免疫原性下降引起活性的下降，可對該人抗體可變區框架序列進行量少的回復突變，以保持活性。本披露的人源化抗體也包括進一步由噬菌體展示對CDR進行親和力成熟後的人源化抗體。

由於抗原的接觸殘基，CDR的移植可由於與抗原接觸的構架殘基而導致產生的抗體或其抗原結合片段對抗原的親和力減弱。此類相互作用可以可能是體細胞高度突變的結果。因此，可能仍然需要將此類供體構架胺基酸移植至人源化抗體的構架。來自非人抗體或其抗原結合片段的參與抗原結合的胺基酸殘基可藉由檢查動物單株抗體可變區序列和結構來鑒定。CDR供體構架中與種系不同的各殘基可被認為是相關的。如果不能確定最接近的種系，那麼可將序列與亞類共有序列或具有高相似性百分數的動物抗體序列的共有序列相比較。稀有構架殘基被認為可能是體細胞高度突變的結果，從而在結合中起著重要作用。

在本披露一個的實施方案中，該抗體或其抗原結合片段，可進一步包含人源或鼠源κ、λ鏈或其變體的輕鏈恆定區，或進一步包含人源或鼠源IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其變體的重鏈恆定區。

人抗體重鏈恆定區和人抗體輕鏈恆定區的“常規變體”是指現有技術已公開的來源於人的不改變抗體可變區結構和功能的重鏈恆定區或輕鏈恆定區的變體，示例性變體包括對重鏈恆定區進行定點改造和胺基酸替換的IgG1、IgG2、IgG3或IgG4重鏈恆定區變體，具體替換如現有技術已知的YTE突變，L234A和/或L235A突變，或S228P突變，或獲得knob-into-hole結構的突變(使得抗體重鏈具有knob-Fc和hole-Fc組合)，這些突變已被證實使得抗體具有新的性能，但不改變抗體可變區的功能。

“人抗體”與“人源抗體”可以互換使用，可以是源於人的抗體或者是從一種轉基因生物體中獲得的抗體，該轉基因生物體經“改造”以響應於抗原刺激而產生特異性人抗體並且可以藉由本領域已知的任何方法產生。在某些技術中，將人重鏈和輕鏈基因座的元件引入到細胞株中，這些細胞株中的內源性重鏈和輕鏈基因座被靶向破壞。轉基因生物可以合成對抗原特異的人抗體，並且該生物可以用於產生人抗體-分泌融合瘤。人抗體還可以是一種抗體，其中重鏈和輕鏈是由源於一個或多個人DNA來源的核苷酸序列編碼的。完全人抗體還可以藉由基因或染色體轉染方法以及噬菌體展示技術來構建，或者由體外活化的B細胞構建，所有的這些都是本領域已知的。

“單株抗體”是指從基本上均質抗體的群體獲得的抗體，即除可能的變體抗體(例如含有天然存在的突變或在製造單株抗體製劑的期間產生的突變，這些變體通常以少量存在)之外，構成該群體的個別抗體識別相同和/或結合相同表位。單株抗體製備物(製劑)的每個單株抗體針對抗原上的單一決定簇。因此，修飾語“單株”指示如從基本上均質抗體群體獲得的抗體的特性，且不應解釋為需要藉由任何特定方法來製造抗體。例如，根據本披露使用的單株抗體可藉由各種技術製備，該技術包括但不限於融合瘤方法、重組DNA方法、噬菌體展示方法以及利用含有全部或部分人免疫球蛋白基因座的轉基因動物的方法，此類方法以及用於製備單株抗體的其他示例性方法在本文中進行描述。

此外，雖然Fv片段的兩個結構域VL和VH由分開的基因編碼，但可使用重組方法，藉由合成的接頭連接它們，從而使得其能夠產生為其中VL和VH區配對形成單價分子的單個蛋白質鏈(稱為單鏈Fv(scFv)；參見，例如，Bird等人(1988)Science242：423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci USA85：5879-5883)。此類單鏈抗體也意欲包括在術語抗體的“抗原結合片段”中。使用本領域技術人員已知的常規技術獲得此類抗體片段，並且以與對於完整抗體的方式相同的方式就功用性篩選的片段。可藉由重組DNA技術或藉由酶促或化學斷裂完整免疫球蛋白來產生抗原結合部分。

抗原結合片段還可併入至包含一對串聯Fv片段(VH-CH1-VH-CH1)的單鏈分子中，該對串聯Fv片段連同互補輕鏈多肽一起形成一對抗原結合區(Zapata等人，1995 Protein Eng.8(10)：1057-1062；及美國專利US5641870)。

Fab是藉由用蛋白酶木瓜蛋白酶(切割H鏈的224位的胺基酸殘基)處理IgG抗體所獲得的具有約50,000Da的分子量並具有抗原結合活性的抗體片段，其中H鏈N端側的約一半和整個L鏈藉由二硫鍵結合在一起。

F(ab')2是藉由用胃蛋白酶消化IgG鉸鏈區中兩個二硫鍵的下方部分而獲得的分子量為約100,000Da並具有抗原結合活性，並包含在鉸鏈位置相連的兩個Fab區的抗體片段。

Fab'是藉由切割上述F(ab')2的鉸鏈區的二硫鍵而獲得的分子量為約50,000Da並具有抗原結合活性的抗體片段。Fab'可以藉由用還原劑例如二硫蘇糖醇處理特異性識別並結合抗原的F(ab')2來生產。

此外，可以藉由將編碼抗體的Fab'片段的DNA***到原核生物表達載體或真核生物表達載體中，並將載體導入到原核生物或真核生物中以表達Fab'。

術語“單鏈抗體”、“單鏈Fv”或“scFv”意指包含藉由接頭連接的抗體重鏈可變結構域(或區域；VH)和抗體輕鏈可變結構域(或區域；VL)的分子。此類scFv分子可具有一般通式：NH₂-VL-接頭-VH-COOH或NH₂-VH-接頭-VL-COOH。合適的現有技術接頭由重複的GGGGS胺基酸序列或其變體組成，例如使用1-4個(包括1個、2個、3個或4個)重複的變體(Holliger等人(1993)，Proc Natl Acad Sci USA.90：6444-6448)。可用於本披露的其他接頭由Alfthan等人(1995)，Protein Eng.8：725-731，Choi等人(2001)，Eur J Immuno.31：94-106，Hu等人(1996)，Cancer Res.56：3055-3061，Kipriyanov等人(1999)，J Mol Biol.293：41-56和Roovers等人(2001)，Cancer Immunol Immunother.50：51-59.描述。

雙抗體(diabody)是指scFv被二聚體化的抗體片段，是具有二價抗原結合活性的抗體片段。在二價抗原結合活性中，兩個抗原可以是相同或不同的。

dsFv是藉由將其中每個VH和VL中的一個胺基酸殘基被半胱胺酸殘基取代的多肽經由半胱胺酸殘基之間的二硫鍵相連而獲得的。可以按照已知方法(Protein Engineering.7：697(1994))基於抗體的三維結構預測來選擇被半胱胺酸殘基取代的胺基酸殘基。

本披露一些實施例中抗原結合片段可以藉由以下步驟來生產：獲得本披露的特異性識別並結合抗原的單株抗體的VH和/或VL及所需的其他結構域的編碼cDNA，構建編碼抗原結合片段的DNA，將該DNA***到原核生物表達載體或真核生物表達載體中，然後將該表達載體導入到原核生物或真核生物中以表達抗原結合片段。

"Fc區"可以是天然序列Fc區或變體Fc區。雖然免疫球蛋白重鏈的Fc區的邊界可能變化，但人IgG重鏈Fc區通常被定義成從位置Cys226上的胺基酸殘基或從Pro230延伸至其羧基端。Fc區中的殘基的編號為如Kabat中的EU索引的編號。Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1991。免疫球蛋白的Fc區通常具有兩個恆定區結構域CH2和CH3。

術語“胺基酸差異”或“胺基酸突變”是指相較于原蛋白質或多肽，變體蛋白質或多肽存在胺基酸的改變或突變，包括在原蛋白質或多肽的基礎上發生1個或更多個胺基酸的***、缺失或替代。

抗體的“可變區”是指單獨的或組合的抗體輕鏈的可變區(VL)或抗體重鏈的可變區(VH)。如在本領域中已知的，重鏈和輕鏈的可變區各自由藉由3個互補決定區(CDR)(也稱為高變區)連接的4個框架區(FR)組成。每一條鏈中的CDR藉由FR緊密地保持在一起並且與來自另一條鏈的CDR一起促成抗體的抗原結合部位的形成。存在至少2個用於確定CDR的技術：(1)基於跨種序列變異性的方法(即，Kabat等Sequences of Proteins of Immunological Interest,(第5版，1991,National Institutes of Health,Bethesda MD))；和(2)基於抗原-抗體複合物的晶體學研究的方法(Al-Lazikani等，J.Molec.Biol.273：927-948(1997))。如本文中所用，CDR可指由任一方法或由兩種方法的組合確定的CDR。

術語“抗體框架”或“FR區”，是指可變結構域VL或VH的一部分，其用作該可變結構域的抗原結合環(CDR)的支架。從本質上講，其是不具有CDR的可變結構域。

術語“互補決定區”和“CDR”是指抗體的可變結構域內主要促成抗原結合的6個高變區之一。通常，每個重鏈可變區中存在三個CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3)和每個輕鏈可變區中存在三個CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。可以使用各種公知方案中的任何一種來確定CDR的胺基酸序列邊界，包括“Kabat”編號規則(參見Kabat等(1991)，“Sequences of Proteins of Immunological Interest”，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD)、“Chothia”編號規則Martin,ACR.Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains[J].2001和ImMunoGenTics(IMGT)編號規則(Lefranc,M.P.等，Dev.Comp.Immunol.,27,55-77(2003))等。例如，對於經典格式，遵循Kabat規則，該重鏈可變域(VH)中的CDR胺基酸殘基編號為31-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)：輕鏈可變域(VL)中的CDR胺基酸殘基編號為24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。遵循Chothia規則，VH中的CDR胺基酸編號為26-32(HCDR1)、52-56(HCDR2)和95-102(HCDR3)；並且VL中的胺基酸殘基編號為24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)。藉由組合Kabat和Chothia兩者的CDR定義，CDR由人VH中的胺基酸殘基26-35(HCDR1)、50-65(HCDR2)和95-102(HCDR3)和人VL中的胺基酸殘基24-34(LCDR1)、50-56(LCDR2)和89-97(LCDR3)構成。遵循IMGT規則，VH中的CDR胺基酸殘基編號大致為27-38(CDR1)、56-65(CDR2)和105-117(CDR3)，VL中的CDR胺基酸殘基編號大致為27-38(CDR1)、56-65(CDR2)和105-117(CDR3)。遵循IMGT規則，抗體的CDR區可以使用程序IMGT/DomainGap Align確定。

“抗體恆定區結構域”指來源於抗體的輕鏈和重鏈的恆定區的結構域，包括CL和來源於不同類抗體的CH1、CH2、CH3和CH4結構域。

“表位”或“抗原決定簇”是指抗原上免疫球蛋白或抗體特異性結合的部位。表位通常以獨特的空間構象包括至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個連續或非連續的胺基酸。參見，例如，Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology，第66卷，G.E.Morris，Ed.(1996)。

術語“特異性結合”、“選擇性結合”、“選擇性地結合”和“特異性地結合”是指抗體對預先確定的抗原上的表位的結合。

術語“親和力”是指在單一表位處，抗體與抗原之間相互作用的強度。在各抗原位點內，抗體“臂”的可變區藉由弱非共價力與抗原在多個胺基酸位點處相互作用；相互作用愈大，親和力愈強。如本文所用，抗體或其抗原結合片段(例如Fab片段)的術語“高親和力”通常是指具有1E^-9M或更小的K_D(例如1E^-10M或更小的K_D、1E^-11M或更小的K_D、1E^-12M或更小的K_D、1E^-13M或更小的K_D、1E^-14M或更小的K_D等)的抗體或抗原結合片段。

術語"KD"或“K_D”是指特定抗體-抗原相互作用的解離平衡常數。通常，抗體以小於大約1E^-8M，例如小於大約1E^-9M、1E^-10M或1E^-11M或更小的解離平衡常數(KD)結合抗原，例如，如使用表面等離子體共振(SPR)技術在BIACORE儀中測定的。KD值越小，親和力越大。

術語“核酸分子”是指DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是單鏈或雙鏈的DNA分子或RNA分子，例如是雙鏈DNA或mRNA。當將核酸與另一個核酸序列置於功能關係中時，核酸是“有效連接的”。例如，如果啟動子或增強子影響編碼序列的轉錄，那麼啟動子或增強子有效地連接至該編碼序列。

術語"載體"意指能夠遞送一個或多個目標基因或序列並且較佳地在宿主細胞中表達其的構建體。載體的示例包括，但不限於，病毒載體、裸露DNA或RNA表達載體、質粒、黏粒或噬菌體載體、與陽離子凝聚劑締合的DNA或RNA表達載體、包封在脂質體中的DNA或RNA表達載體和某些真核生物細胞諸如生產細胞。

現有技術中熟知生產和純化抗體和抗原結合片段的方法，如冷泉港的抗體實驗技術指南，5-8章和15章。例如，鼠可以用抗原或其片段免疫，所得到的抗體能被覆性、純化，並且可以用常規的方法進行胺基酸測序。抗原結合片段同樣可以用常規方法製備。本披露所述的抗體或抗原結合片段用基因工程方法在非人源的CDR區加上一個或多個人源FR區。人FR種系序列可以藉由比對IMGT人類抗體可變區種系基因數據庫和MOE軟體得到，或者從免疫球蛋白雜誌，2001ISBN012441351上獲得。

術語“宿主細胞”是指已向其中引入了表達載體的細胞。宿主細胞可包括細菌、微生物、植物或動物細胞。易於轉化的細菌包括腸桿菌科(enterobacteriaceae)的成員，例如大腸桿菌(Escherichia coli)或沙門氏菌(Salmonella)的菌株；芽孢桿菌科(Bacillaceae)例如枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)；肺炎球菌(Pneumococcus)；鏈球菌(Streptococcus)和流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)。適當的微生物包括釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和畢赤酵母(Pichia pastoris)。適當的動物宿主細胞系包括CHO(中國倉鼠卵巢細胞系)、HEK293細胞(非限制性實施例如HEK293E細胞)和NS0細胞。

工程化的抗體或抗原結合片段可用常規方法製備和純化。比如，編碼重鏈和輕鏈的cDNA序列，可以選殖並重組至GS表達載體。重組的免疫球蛋白表達載體可以穩定地轉染CHO細胞。作為一種可選的現有技術，哺乳動物類表達系統會導致抗體的糖基化，特別是在Fc區的高度保守N端位點。藉由表達與抗原特異性結合的抗體得到穩定的純株。陽性的純株在生物反應器的無血清培養基中擴大培養以生產抗體。分泌了抗體的培養液可以用常規技術純化。比如，用含調整過的緩衝劑的蛋白A或蛋白G Sepharose FF管柱進行純化。洗去非特異性結合的組分。再用pH梯度法沖提結合的抗體，用SDS-PAGE檢測抗體片段，收集。抗體可用常規方法進行過濾濃縮。可溶的混合物和多聚體，也可以用常規方法去除，比如分子篩、離子交換。得到的產物需立即冷凍，如-70℃，或者凍乾。

“施用”、“給藥”、“給予”和“處理”當應用於動物、人、實驗受試者、細胞、組織、器官或生物流體時，是指將外源性藥物、治療劑、診斷劑、組成物或者人為操作(比如實施例中的“安樂死”)提供給動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體的接觸。“給予”和“處理”可以指例如治療、藥物代謝動力學、診斷、研究和實驗方法。細胞的處理包括試劑與細胞的接觸，以及試劑與流體的接觸，其中該流體與細胞接觸。“給予”和“處理”還意指藉由試劑、診斷、結合組合物或藉由另一種細胞體外和離體處理例如細胞。“處理”當應用於人、獸醫學或研究受試者時，是指治療處理、預防或預防性措施，研究和診斷應用。

“治療”意指給予患者(或受試者)內用或外用治療劑，例如包含本披露實施例的任一種化合物的組合物，該患者(或受試者)具有(或疑似患有、或易感於)一種或多種疾病症狀，而已知該治療劑對這些症狀具有治療作用。通常，在受治療患者(或受試者)或群體中以有效緩解一種或多種疾病症狀的量給予治療劑，以誘導這類症狀退化或抑制這類症狀發展到任何臨床有測量的程度。有效緩解任何具體疾病症狀的治療劑的量(也稱作“治療有效量”)可根據多種因素變化，例如患者(或受試者)的疾病狀態、年齡和體重，以及藥物在患者(或受試者)產生需要療效的能力。藉由醫生或其它專業衛生保健人士通常用於評價該症狀的嚴重性或進展狀況的任何臨床檢測方法，可評價疾病症狀是否已被減輕。儘管本披露的實施方案(例如治療方法或製品)可能無法在緩解每個目標疾病症狀方面都有效，但是根據本領域已知的任何統計學檢驗方法如Student t檢驗、卡方檢驗、依據Mann和Whitney的U檢驗、Kruskal-Wallis檢驗(H檢驗)、Jonckheere- Terpstra檢驗和Wilcoxon檢驗確定，其在統計學顯著數目的患者(或受試者)中應當減輕目標疾病症狀。

“胺基酸保守修飾”或“胺基酸保守取代”指蛋白質或多肽中的胺基酸被具有相似特徵(例如電荷、側鏈大小、疏水性/親水性、主鏈構象和剛性等)的其他胺基酸取代，從而使得在不改變蛋白質或多肽的生物活性或其他所需特性(例如抗原親和力和/或特異性)的情況下，可以經常進行改變。本領域技術人員認識到，通常，多肽的非必需區域中的單個胺基酸取代基本上不改變生物活性(參見，例如，Watson等人，(1987)Molecular Biology of the Gene,The Benjamin/Cummings Pub.Co.，第224頁(第4版))。此外，結構上或功能上相似的胺基酸的取代不太可能破壞生物活性。

“與IL-4R結合”，指能與人IL-4R相互作用。本文的術語“抗原結合位點”指由本文抗體或抗原結合片段識別的三維空間位點。

“交叉反應”是指本文的抗體與來自不同物種的IL-4R結合的能力。例如，結合人IL-4R的本文的抗體也可以結合另一物種的IL-4R。交叉反應性是藉由在結合測定(例如SPR和ELISA)中檢測與純化抗原的特異性反應性，或與生理表達IL-4R的細胞的結合或功能性相互作用來測量。確定交叉反應性的方法包括如本文所述的標準結合測定，例如表面等離子體共振(SPR)分析，或流式細胞術。

“中和”或“阻斷”抗體意指其與hIL-4R的結合造成對hIL-4和/或hIL-13生物活性抑制的抗體。這種hIL-4和/或IL-13生物活性的抑制可藉由測量本領域眾所周知的一個或多個hIL-4/或hIL-13生物活性指標，如hlL-4/或hIL-13誘導的細胞活化和hIL-4與hIL-4R的結合等指標來評估，例如參見 CN103739711A中的。“抑制生長”(例如涉及細胞)旨在包括細胞生長任何可測量的降低。

“誘導免疫應答”和“增強免疫應答”可互換使用，並指免疫應答對特定抗原的刺激(即，被動或適應性的)。針對誘導CDC或ADCC的術語，“誘導”是指刺激特定的直接細胞殺傷機制。

“ADCC(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity)”，抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用，是指表達Fc受體的細胞藉由識別抗體的Fc段直接殺傷被抗體包被的靶細胞。可藉由對IgG上Fc段的修飾，降低或消除抗體的ADCC效應功能。該修飾指在抗體的重鏈恆定區進行突變，如選自IgG1的N297A、L234A、L235A；IgG2/4嵌合體、IgG4的F235E、或L234A/E235A突變。

工程化的抗體或抗原結合片段可用常規方法製備和純化。比如，編碼重鏈和輕鏈的cDNA序列，可以選殖並重組至GS表達載體。重組的免疫球蛋白表達載體可以穩定地轉染CHO細胞。利用分子選殖技術將本文的人源化抗體的序列***到相應的表達載體中，利用HEK293細胞表達系統表達生產，即可獲得相應的人源化抗體。作為一種更推薦的現有技術，哺乳動物類表達系統會導致抗體的糖基化，特別是在FC區的高度保守N端。藉由表達與人源抗原特異性結合的抗體得到穩定的純株。陽性的純株在生物反應器的無血清培養基中擴大培養以生產抗體。分泌了抗體的培養液可以用常規技術純化、收集。抗體可用常規方法進行過濾濃縮。可溶的混合物和多聚體，也可以用常規方法去除，比如分子篩，離子交換。得到的產物需立即冷凍，如-70℃，或者凍乾。

“有效量”、“有效劑量”是指獲得任一種或多種有益的或所需的治療結果所必需的藥物、化合物或醫藥組成物的量。對於預防用途，有益的或所需的結果包括消除或降低風險、減輕嚴重性或延遲病症的發作，包括病症、其併發症和在病症的發展過程中呈現的中間病理表型的生物化學、組織學和/或行為症狀。對於治療應用，有益的或所需的結果包括臨床結果，諸如減少各種本披露靶抗原相關病症的發病率或改善該病症的一個或多個症狀，減少治療病症所需的其它藥劑的劑量，增強另一種藥劑的療效，和/或延緩患者(或受試者)的本披露靶抗原相關病症的進展。

“外源性”指根據情況在生物、細胞或人體外產生的物質。

“內源性”指根據情況在細胞、生物或人體內產生的物質。

“分離的”指純化狀態，並且在這種情況下意味著在指定的分子基本上不含其他生物分子，例如核酸、蛋白質、脂質、碳水化合物或其他材料，例如細胞碎片和生長培養基。通常，術語“分離的”並不意圖指完全不存在這些材料或不存在水、緩衝劑或鹽，除非它們以顯著干擾如本文所述的化合物的實驗或治療用途的量存在。

“同源性”或“同一性”是指兩個多核苷酸序列之間或兩個多肽之間的序列相似性。當兩個比較序列中的位置均被相同鹼基或胺基酸單體亞基佔據時，例如如果兩個DNA分子的每一個位置都被腺嘌呤佔據時，那麼該分子在該位置是同源的。兩個序列之間的同源性百分率是兩個序列共有的匹配或同源位置數除以比較的位置數×100%的函數。例如，在序列最佳比對時，如果兩個序列中的10個位置有6個匹配或同源，那麼兩個序列為60%同源。一般而言，當比對兩個序列而得到最大的同源性百分率時進行比較。本文所述“至少85%序列同一性”是指變體與親本序列相比，兩序列具有至少85%同源，在一些方案中，其具有至少86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%序列同源；在一些具體的方案中，其具有90%、95%或99%以上；在另一些具體的方案中，其具有至少95%序列同源。該具有至少85%序列同一性的胺基酸序列包括藉由對親本序列進行一個或者多個胺基酸缺失、***或替換突變獲得。

本文使用的表述“細胞”、“細胞系”和“細胞培養物”可互換使用，並且所有這類名稱都包括其後代。因此，術語“轉化體”和“轉化細胞”包括原代受試細胞和由其衍生的培養物，而不考慮轉移數目。還應當理解的是，由於故意或非有意的突變，所有後代在DNA含量方面不可能精確相同。包括具有與最初轉化細胞中篩選的相同的功能或生物學活性的突變後代。

“任選”或“任選地”意味著隨後所描述地事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生地場合。例如，“任選包含1-3個抗體重鏈可變區”意味著特定序列的抗體重鏈可變區可以但不必須存在。

示例性抗體醫藥組成物(製劑)製備工藝：

第一步：取一定量的純化的抗IL-4R抗體溶液，用不含抗體的緩衝劑進行溶劑置換(較佳超濾)，經超濾膜至少6倍體積置換，抗體濃縮到一濃度。加入一定體積的其他輔料母液，並用緩衝劑稀釋，使抗體及各輔料達到需要的濃度，混勻。原液經過濾後中控取樣檢測無菌。將原液過0.22μm PVDF濾芯，收集濾液。

第二步：調節裝量至2.15mL，將濾液灌裝於2mL西林瓶中，加塞，分別於灌裝開始、灌裝中間、灌裝結束時取樣中控檢測裝量差異。

第三步：開啟軋蓋機，加鋁蓋，進行軋蓋。

第四步：目檢，確認產品無裝量不准等缺陷。打印、黏貼西林瓶標簽；打印紙盒標簽，折疊紙盒，裝盒，貼紙盒標簽。

[實施例]

以下結合實施例用於進一步描述本披露，但這些實施例並非限制著本披露的範圍。實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，如冷泉港的抗體技術實驗手冊，分子選殖手冊；或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。未註明具體來源的試劑，為市場購買的常規試劑。

抗體製備實施例

實施例1：小鼠免疫接種及檢測

帶his標簽的人IL-4R(h-IL-4R-his)重組蛋白、帶his標簽的小鼠IL-4R(m-IL-4R-his)重組蛋白和帶his標簽的恆河猴IL-4R(rhesus-IL-4R-his)重組蛋白由Acrobiosystems公司合成，經HEK293表達後純化。

帶人源Fc標簽的人IL-4R(h-IL-4R-Fc)重組蛋白經自行設計、表達以及純化。純化的蛋白可用於下述各實施例實驗中。

本實施例中抗體或抗原結合片段的VL區和VH區的CDR胺基酸殘基在數量和位置符合已知的Kabat編號規則(LCDR1-3，HCDR2-3)，和AbM規則(HCDR1)。

抗人IL-4R單株抗體藉由免疫小鼠產生。實驗用C57BL/6小鼠，雌性，6~8週齡(蘇州昭衍新藥研究中心有限公司，動物生產許可證號：201503052)。

飼養環境：SPF級。小鼠購進後，實驗室環境飼養1週，12/12小時的光/暗週期調節，溫度20-25℃；濕度40-60%。將已適應環境的小鼠分成3籠，每籠5隻。免疫抗原為帶Fc標簽的人IL-4R重組蛋白(h-IL4R-Fc，濃度為0.73mg/mL)。用弗氏佐劑(sigma，Cat#：F5881)乳化：首次用弗氏完全佐劑(CFA，Pierce，Cat#77140)，其餘加強免疫用核酸類佐劑(CpG，上海生工)和鋁佐劑(Alum，Thermo Cat#77161)。

第0天腹膜內(IP)注射70μg/隻的乳化後抗原。第14、28、42、56、77天，根據背部結塊和腹部腫脹情況，選擇背部和腹膜內注射抗原(各注射0.1mL)。於第21、35、49、63、84天採血進行血檢，用實施例2的ELISA方法檢測小鼠血清，確定小鼠血清中的抗體滴度。在第4次免疫以後，選擇血清中抗體滴度高並且滴度趨於平臺的小鼠進行脾細胞融合，融合前3天加強免疫，腹膜內(IP)注射10μg/隻的磷酸鹽緩衝劑配製的抗原溶液。採用優化的PEG介導的融合步驟將脾淋巴細胞與骨髓瘤細胞Sp2/0細胞(ATCC® CRL-8287^TM)進行融合得到融合瘤細胞。

實施例2：抗體的ELISA測試及篩選

1、ELISA結合實驗：

ELISA實驗被用來檢測抗IL-4R抗體的結合特性。用帶his標簽的IL-4R重組蛋白的包被酶標板，抗體加入各孔後，藉由加入二抗(HRP偶聯的抗一抗Fc的抗體)和HRP受質TMB檢測抗體與抗原結合的活性。

人或恆河猴IL-4R-his蛋白包被96孔酶標板，按0.5μg/mL濃度每孔100μL，4℃孵育過夜。洗液洗三遍，每孔250μL。加入200μL/孔封閉液室溫孵育2小時。洗液洗三遍，每孔250μL。每孔加100μL用稀釋液稀釋好的抗IL-4R待測抗體。室溫孵育1小時。洗液洗三遍，每孔250μL。每孔加入100μL用稀釋液按1：20000倍稀釋的HRP標記的山羊抗人IgG二抗。室溫孵育1小時。洗液洗三遍，每孔250μL。每孔加入100μL TMB，避光反應15分鐘。加入50μL每孔的0.16M/L硫酸。Thermo MultiSkanFc酶標儀讀取450nm OD值，計算抗IL-4R抗體對IL-4R的結合EC₅₀值。

2、ELISA阻斷實驗：

本實驗藉由體外阻斷實驗，檢測所篩選出來的抗人IL-4R抗體阻斷人IL-4R和人IL-4結合。具體方法是，將帶Fc標簽的IL-4R重組蛋白包被到96孔酶標板上，加入結合人IL-4R的抗體充分結合佔據表位後，再加入IL-4(Biolegend，Cat#574004)，藉由生物素偶聯的抗IL-4抗體以及Neutravidin-HRP(Pierce，Cat#31001)，檢測IL-4是否還能夠結合到IL-4R上，計算IL-4R抗體對IL-4/IL-4R結合的阻斷的IC₅₀值。

人IL-4R-Fc蛋白包被96孔酶標板，0.5μg/mL濃度每孔100μL，4℃孵育過夜。洗液洗三遍，每孔250μL。加入200μL/孔封閉液室溫孵育2小時。洗液洗三遍，每孔250μL。每孔加100μL用稀釋液稀釋好的抗IL-4R待測抗體，室溫孵育1小時。洗液洗三遍，每孔250μL。每孔加入100μL稀釋好的IL-4，室溫孵育1小時，洗液洗三遍。每孔加入100μL稀釋好的生物素偶聯的抗IL-4抗體，室溫孵育1小時，洗液洗三遍。用稀釋液按1：5000倍稀釋的HRP標記的Neutravidin，室溫孵育1小時。洗液洗三遍，每孔250μL。每孔加入100μL TMB，避光反應15分鐘。加入50μL每孔的0.16M/L硫酸。Thermo MultiSkanFc酶標儀讀取450nm OD值，計算IL-4R抗體對IL-4R與IL-4結合阻斷的IC₅₀值。

實施例3：結合人IL-4R的抗體的報告基因細胞活性實驗

HEK-Blue IL-4細胞購自Invivogen(Cat#hkb-stat6)，該細胞穩定轉染了人IL-4R基因和STAT6介導的SEAP基因組，可以藉由SEAP受質QUANTI-Blue檢測上清中分泌的SEAP來表徵IL-4R信號通路的活化水平。

本實驗藉由檢測細胞HEK-Blue IL-4的活化，根據IC₅₀大小評價IL-4R抗體的體外細胞活性。

在含10%FBS、100μg/mL Zeocin(Invivogen，Cat#ant-zn-05)和10μg/mL Blasticidin(Invivogen，Cat#ant-bl-05)的DMEM培養基中培養HEK-Blue IL-4細胞。一週傳代2~3次，傳代比例1：5或1：10。傳代時，吸掉培養基，用5mL 0.25%的胰酶沖洗細胞層，然後吸掉胰酶，將細胞放在培養箱中消化3~5分鐘，加入新鮮培養基重新懸浮細胞。在96孔細胞培養板中加入100μL的細胞懸液，密度為5×10⁵細胞/mL，培養基為10%FBS，100μg/mL Zeocin和30μg/mL Blasticidin的DMEM，96孔板外圍只加入100μlL無菌水。將培養板在培養箱培養24小時(37℃，5% CO₂)。細胞貼壁後，每孔加入100μL梯度稀釋的待測抗體。將培養板在培養箱孵育20-24小時(37℃，5% CO₂)。每孔取20μL細胞上清到一個新的96孔平底板中，加入180μL QUANTI-Blue受質溶液，將培養板在培養箱內避光孵育1-3小時。用酶標儀(Thermo MultiSkanFc)測定在620nm處的吸光度。

實施例4：結合人IL-4R的抗體抑制TF-1細胞增殖實驗

TF-1細胞(ATCC CRL-2003)是表達IL-4R，對IL-4/IL-13等細胞因子敏感的淋巴癌細胞。IL-4可以刺激TF-1細胞在無GM-CSF的情況下增殖。本實驗藉由加入中和性抗體，阻斷IL-4的作用通路，抑制TF-1細胞增殖，來比較不同抗IL-4R抗體的中和活性。

細胞TF-1培養在含10%FBS，2ng/mL GM-CSF(R&D，Cat#215-GM-010)的RPMI1640培養基中；一週傳代2~3次，傳代比例1：10。在96孔細胞培養板中加入100μL的細胞懸液，密度為2×10⁵細胞/mL，培養基為10%FBS RPMI1640培養基，96孔板外圍只加入100μL無菌水。每孔加入50μL梯度稀釋的待測抗體和50μL終濃度0.7ng/mL的IL-4(R&D，Cat#204-IL-050)，將培養板在培養箱孵育72小時(37℃，5% CO₂)。培養結束後，用CTG試劑盒(Promega，Cat#G7572)檢測細胞增殖。

實施例5：體外結合親和力和動力學實驗

用Biacore，GE儀器測定待測人源化IL-4R的抗體與人IL-4R親和力。

按照人抗捕獲試劑盒(Cat.# BR-1008-39，GE)說明書中的方法將人抗捕獲抗體共價偶聯於Biacore儀器(Biacore X100，GE)的生物傳感芯片CM5上，從而親和捕獲一定量的待測抗體；然後於芯片表面流經一系列濃度梯度的IL-4R抗原(IL-4R抗原均購自Acrobiosystems，Cat#ILR-H5221)，利用Biacore儀器(Biacore X100，GE)實時檢測反應信號從而獲得結合和解離曲線。在每個循環解離完成後，用人抗捕獲試劑盒裡配置的再生溶液將生物芯片洗淨再生。實驗中用到的胺基偶聯試劑盒購自GE公司(Cat.# BR-1000-50，GE)，緩衝劑為HBS-EP+ 10×緩衝溶液(Cat.# BR-1006-69，GE)用D.I.Water稀釋至1×(pH 7.4)。

實驗得到的數據用BiacoreX100評價軟體2.0 GE軟體以(1：1)結合模型進行擬合，得出親和力數值。

實施例6：抗體的序列與製備

藉由如上實施例2的ELISA結合實驗(人IL-4R-his的ELISA結合)和ELISA阻斷實驗(人IL-4/IL-4R的ELISA阻斷)、實施例3中抑制HEK293-Blue IL-4細胞在IL-4刺激下活化的實驗，以及實施例4中抑制TF-1細胞在IL-4刺激下增殖的實驗，選出體外活性最好的兩株單株融合瘤細胞株。其活性檢測結果見表2。

挑選出單株融合瘤細胞株25G7和7B10，選殖其中抗體序列。從融合瘤中選殖序列過程如下：

收集對數生長期融合瘤細胞，用Trizol(Invitrogen，15596-018)提取RNA(按照試劑盒說明書步驟)，反轉錄(PrimeScript^TM Reverse Transcriptase，Takara，cat # 2680A)。將反轉錄得到的cDNA採用鼠Ig-Primer Set(Novagen，TB326 Rev.B 0503)進行PCR擴增後送測序公司測序，並分析所得抗體序列。

鼠單抗25G7的重鏈和輕鏈可變區序列如下：

25G7 HCVR

(SEQ ID NO：1)

25G7 LCVR

(SEQ ID NO：2)

其含有的CDR序列如表3所示，其中。

鼠單抗7B10的重鏈和輕鏈可變區序列如下：

7B10 HCVR

(SEQID NO：9)

7B10 LCVR

(SEQID NO：10)

其含有的CDR序列如表4所示。

將獲得的可變區序列接上人的恆定區序列，得到人-鼠嵌合的抗體序列。利用分子選殖技術，把嵌合抗體的序列***到相應的表達載體中。利用HEK293細胞表達系統，即可獲得人-鼠嵌合抗體25G7-C和7B10-C。

經前述實施例2-5的方法，對純化的嵌合抗體進行相應的體外活性檢測，數據見表5。結果顯示，25G7-C抗體對IL-4結合的阻斷效果，以及對細胞增殖的抑制效果均顯著優於參照抗體度匹魯單抗(參考WHO Drug Information，Vol.26，No.4，2012合成)。

實施例7：小鼠抗體人源化實驗

對所得鼠源抗體25G7和7B10進行人源化。在所獲得的鼠源抗體VH/VLCDR典型結構的基礎上，將重、輕鏈可變區序列與人抗體Germline數據庫比較，獲得同源性高的人種系模板。其中，人類種系輕鏈框架區來自人κ輕鏈基因，較佳人種系輕鏈模版IGKV3-11*01(SEQ ID NO：22，用於抗體25G7)和IGKV2D-29*01(SEQ ID NO：24，用於抗體7B10)。人類種系重鏈框架區來自人重鏈，較佳人種系重鏈模版IGHV3-48*01(SEQ ID NO：21，用於抗體25G7)和IGHV1-2*02(SEQ ID NO：23，用於抗體7B10)。

人種系模板序列如下所示。

人種系重鏈模版IGHV3-48*01：

(SEQ ID NO：21)

人種系輕鏈模板IGKV3-11*01：EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWP(SEQ ID NO：22)

人種系重鏈模版IGHV1-2*02：

(SEQ ID NO：23)

人種系輕鏈模板IGKV2D-29*01：

(SEQ ID NO：24)

將鼠源抗體的CDR區移植到選擇的人源化模板上，再與IgG恆定區重組，並進行回復突變，得到一系列人源化分子。

其中，對hu7B10-VH-a、hu7B10-VH-b、hu7B10-VH-c做成藥性修飾，將重鏈人種系模板的第一位由Q變為E。兩株抗體的人源化後的重鏈可變區序列分別如SEQ ID NO：25-27，SEQ ID NO：31-33所示；輕鏈可變區序列分別如SEQ ID NO：28-30，SEQ ID NO：34-36所示。

hu25G7-VH-a：

(SEQ ID NO：25)

hu25G7-VH-b：

(SEQ ID NO：26)

hu25G7-VH-c：

(SEQ ID NO：27)

hu25G7-VL-a：

( SEQ ID NO：28)

hu25G7-VL-b：

( SEQ ID NO：29)

hu25G7-VL-c：

(SEQ ID NO：30)

hu7B10-VH-a：

(SEQ ID NO：31)

hu7B10-VH-b：

(SEQ ID NO：32)

hu7B10-VH-c：

(SEQ ID NO：33)

hu7B10-VL-a：

(SEQ ID NO：34)

hu7B10-VL-b：

(SEQ ID NO：35)

hu7B10-VL-c：

(SEQ ID NO：36)

融合瘤純株25G7的回復突變設計見表6。

融合瘤純株7B10回復突變設計，見下表7：

示例性的人源化抗體hu25G7(使用VH-c重鏈和VL-a輕鏈)和hu7B10抗體分子(使用VH-b重鏈和VL-b輕鏈)，其各自的完整輕重鏈序列如SEQ ID NO：17-20所示。

hu25G7 HC

(SEQ ID NO：17)

hu25G7 LC

(SEQ ID NO：18)

hu7B10 HC

(SEQ ID NO：19)

hu7B10 LC

(SEQ ID NO：20)

利用分子選殖技術，將人源化抗體的序列***到相應的表達載體中，利用HEK293細胞表達系統表達生產，即可獲得相應的人源化抗體。

實施例8：人源化抗體活性數據

對人源化抗體hu25G7和hu7B10進行實施例2-5該體外活性檢測，試驗結果見表8。

結果顯示，hu25G7和hu7B10均隻與人IL-4R結合，而不與恆河猴IL-4R結合，說明兩個抗體均結合在人與恆河猴不同源的表位上，能特異性地結合人IL-4R。兩個抗體均能阻斷IL-4/IL-4R結合以及細胞內信號通路，導致IL-4的激活作用被中和，TF-1細胞的增殖被抑制，其中hu25G7的阻斷及抑制活性仍顯著優於參照抗體度匹魯單抗。

實施例9：人源化抗體hu25G7的親和力成熟實驗

藉由酵母展示平臺技術對hu25G7抗體進行親和力成熟，在hu25G7抗體的基礎上設計並製備針對6個CDR的親和力成熟的酵母文庫，設計簡併引子，藉由PCR和同源重組的方法將設計的突變胺基酸引入hu25G7-scFv抗體文庫中，每個文庫的大小在10⁹左右，構建好的酵母文庫藉由二代測序(GENEWIZ)的方法驗證文庫的多樣性。

用生物素標記人的IL-4R從hu25G7-scFv酵母文庫中篩選高親和力的抗體，經過兩輪MACS篩選(鏈黴素磁珠，Invitrogen)和兩輪FACS篩選(BD FACSAriaTM FUSION)，再挑選酵母單株培養和誘導表達，藉由FACS(BD FACSCanto II)檢測酵母單株對人IL-4R的結合，選出比野生型25G7抗體親和力高的酵母單株測序驗證，經過對測序純株進行比對分析，去除冗餘序列之後，將非冗餘序列轉換成全長人的抗體分子，進行哺乳動物細胞表達。親和純化之後的全長抗體採用BIAcoreTM X-100(GE生命科學)進行親和力測定，挑選出對人IL- 4R較高親和力的候選抗體分子。這些抗體分子對人IL-4R的親和力高於野生型hu25G7抗體，其中hu25G7-A抗體分子的親和力和度匹魯單抗相當，而hu25G7-B分子的親和力明顯更優於度匹魯單抗。

親和力成熟最終得到抗體hu25G7-A的輕鏈可變區序列如下：

hu25G7-A LCVR

(SEQ ID NO：37)

其含有的CDR序列如表9所示。

抗體hu25G7-B的輕鏈可變區序列如下：

hu25G7-B LCVR

(SEQ ID NO：41)

其含有的CDR序列如表10所示。

上述輕鏈可變區hu25G7-ALCVR與hu25G7輕鏈恆定區重組，得到hu25G7-A抗體輕鏈；上述輕鏈可變區hu25G7-B LCVR與hu25G7輕鏈恆定區重組，得到hu25G7-B抗體輕鏈。

對hu25G7-VH-c胺基酸殘基優化，得到重鏈可變區hu25G7-A/B VH和hu25G7-C VH

hu25G7-A/B VH：

(SEQ ID NO：43)

hu25G7-C VH：

(SEQ ID NO：47)

上述重鏈可變區可與hu25G7重鏈恆定區重組，得到hu25G7-A/hu25G7-B和hu25G7-C抗體重鏈。

hu25G7-A和hu25G7-B完整的重鏈序列如SEQ ID NO：44所示。

hu25G7 HC(即：hu25G7-A/hu25G7-B抗體重鏈)

(SEQ ID NO：44)

hu25G7-C抗體重鏈：

(SEQ ID NO：48)

各自完整的輕鏈序列如SEQ ID NO：45-46所示。

hu25G7-A LC

(SEQ ID NO：45)

hu25G7-B/hu25G7-C LC

(SEQ ID NO：46)

實施例10：人源化抗體親和力成熟活性數據

按照實施例3和實施例4對hu25G7-A及hu25G7-B兩個抗體進行檢測；hu25G7-A及hu25G7-B兩個抗體均能阻斷IL-4/IL-4R結合，以及細胞內信號通路導致IL-4及IL-13的激活作用被中和，TF-1細胞的增殖被抑制，各項活性數據見表11。

在抑制IL-13刺激引起的TF-1細胞增殖實驗中，hu25G7-A和hu25G7-B均表現出有益效果。hu25G7-A與hu25G7-B比度匹魯單抗在阻斷IL-4、IL-13與IL-4R的結合方面，及該結合引起的細胞增殖方面具有顯著提高的效果。

實施例11：人源化抗體對小鼠皮炎的作用研究

建立小鼠皮炎模型：選用IL-4/IL-4Rα轉基因小鼠(購自賽業模式生物研究中心(太倉)有限公司)，每隻小鼠腹部範圍約為3cm×3cm，均勻塗抹1.5% OXZ丙酮橄欖油溶液(丙酮：橄欖油=4：1)100μL致敏，致敏當日計為D0(Day 0)。第七天(Day 7)開始將1% OXZ丙酮橄欖油溶液20μL均勻塗抹於小鼠雙耳(兩面)進行攻擊，每隔72小時攻擊一次。

本實驗設正常對照組(致敏和激發時僅塗抹丙酮橄欖油溶液)、模型對照組、hu25G7-A、hu25G7-B和度匹魯單抗組，共5組，每組3~5隻小鼠，給藥組給藥劑量為50mg/kg，給藥方式為皮下給藥，一週給藥兩次(具體信息見表12)。第27天用遊標卡尺檢測耳朵厚度，結果如圖1所示。

結果顯示，模型對照組小鼠耳朵出現明顯病理性損傷，耳朵厚度顯著高於正常對照組。hu25G7-A、hu25G7-B及度匹魯單抗組小鼠第27天耳朵厚度顯著低於模型對照組。即hu25G7-A、hu25G7-B與度匹魯單抗均可以用於治療皮炎，且hu25G7-B的效果較之度匹魯單抗更優異。

製劑製備實施例

製備過程中使用的設備及結果計算方法如下：

SEC分子排阻色譜法：

根據凝膠孔隙的孔徑大小與高分子樣品分子的線團尺寸間的相對關係而對溶質進行分離的分析的方法。

SEC單體含量百分比=A單體/A總*100%(A單體為樣品中主峰單體的峰面積，A總為所有峰面積之和)。

SEC測定用儀器：安捷倫1260；管柱：waters，XBrige BEH200Å SEC(300×7.8mm 3.5μm)。

CE毛細管凝膠電泳：

將凝膠移到毛細管中作為支持介質進行的一種電泳，並在一定的電壓下根據樣品分子量的大小進行分離的方法。

非還原CE純度百分比=A主峰/A總*100%(A主峰為樣品中主峰的峰面積，A總為所有峰面積之和)。

CE測定用儀器：Beckman型號plus800

iCIEF成像毛細管等點聚焦電泳：

根據蛋白質等電點pI不同進行分離的技術。

iCIEF中性峰含量百分比=中性峰面積/總面積*100%(總面積為酸性峰、中性峰和鹼性峰面積之和)。

iCIEF測定所用儀器廠家simple protein，型號muarice。

黏度測定：採用流變儀(廠家Anton Paar，型號MCR xx2)測定黏度，測定溫度25度，樣品直接放置於測定平板上測試。

滲透壓：冰點法測定滲透壓，以冰點下降值與溶液的摩爾濃度成正比例關係為基礎，採用高靈敏度感溫元件，測定溶液結冰點，藉由電量轉化為滲透壓。儀器廠家羅澤Loser，型號OM815。

實施例1. 緩衝體系的篩選

在pH4.5-6.5不同緩衝體系中，製備包含100mg/mL hu25G7-A抗體，0.1mg/mL聚山梨酯80(PS80)製劑，考察在不同緩衝體系中抗體的穩定性。具體處方設計及見下表。

將樣品無菌過濾灌裝，分別考察40℃高溫條件下樣品的外觀、SEC，數據見下表。

結果顯示，SA/CA/AA緩衝液的外觀較差，因此緩衝體系選擇His-AA。His-AA體系中，pH4.5-5.5外觀較好；除His-AA pH6.5外，各緩衝體系間SEC無顯著差異，pH5.0、6.0略優。因此，該抗體的緩衝體系選擇His-AA，pH4.5-6.0。

實施例2. 抗體濃度篩選

在20mM His-AA pH5.0、5.5緩衝體系中，製備不同濃度的hu25G7-A製劑，製劑成分如下：

1)20mM His-AA pH5.0，100mg/mL hu25G7-A

2)20mM His-AA pH5.5，100mg/mL hu25G7-A

3)20mM His-AA pH5.0，150mg/mL hu25G7-A

4)20mM His-AA pH5.5，150mg/mL hu25G7-A

5)20mM His-AA pH5.0，139mg/mL hu25G7-A

6)20mM His-AA pH5.0，127mg/mL hu25G7-A

7)20mM His-AA pH5.0，120mg/mL hu25G7-A

8)20mM His-AA pH5.5，138mg/mL hu25G7-A

9)20mM His-AA pH5.5，122mg/mL hu25G7-A

製劑配製完畢後，首先取部分製劑樣品檢測製劑的黏度。然後將樣品無菌過濾灌裝，考察40℃高溫條件下樣品的外觀、SEC、非還原CE-SDS、iCIEF，考察不同抗體濃度對hu25G7-A製劑黏度及穩定性的影響。結果見下表：

結果顯示：不同抗體濃度間的外觀、SEC、CE、iCIEF無顯著差異，即在His-AA緩衝液中，pH 5.0或pH5.5，抗體濃度對製劑的穩定性影響不大；但抗體濃度越高，製劑的黏度越大，在pH5.0的緩衝液中，當抗體濃度為100mg/mL時，黏度在14mPa.s左右；當抗體濃度為120mg/mL時，黏度為22mPa.s左右。

實施例3. 黏度調節劑的篩選

在20mM His-AA(pH5.0)緩衝液中，製備抗體濃度為120mg/mL，含不同黏度調節劑的hu25G7-A製劑。以黏度為評價指標，考察不同黏度調節劑對製劑黏度的影響。為滿足皮下製劑的等滲的需要，各黏度調節劑按空白黏度調節劑滲透壓270mosm/kg加入製劑，以考察其效果。具體結果見下表。

結果顯示，除脯胺酸之外，NaCl、MgCl₂、CaCl₂、KCl、CH₃COONa、Na₂SO₄、NaI、NaF、NaSCN、Arg-Hcl、Lys(賴胺酸)和His(組胺酸)在相應的最大濃度下，均有明顯降低製劑黏度的作用。其中Arg-HCl、MgCl₂、CaCl₂、NaF、NaSCN和組胺酸的效果較優，較佳Arg-HCl、MgCl₂、CaCl₂和組胺酸作為黏度調節劑。

實施例4. 黏度調節劑對高濃度製劑黏度的影響

為測試黏度調節劑的效果，在20mM His-AA，pH5.0緩衝液中，製備hu25G7-A抗體濃度為150mg/mL Hu25G7-A製劑，具體如下成分如下：

1)不含黏度調節劑(N/A)

2)85mM MgCl₂

3)148mM CaCl₂

4)93mM組胺酸

以黏度為評價指標，考察不同輔料對高濃度製劑黏度的影響，結果見下表。

結果顯示，當抗體濃度為150mg/mL時，MgCl₂、CaCl₂和組胺酸均可以將製劑黏度降到20mPa.s以下，降黏度作用較好。

實施例5. 黏度調節劑對製劑穩定性的影響

在20mM His-AA pH5.0緩衝體系中，製備Hu25G7-A抗體濃度為150mg/mL，含不同濃度的輔料的製劑，考察不同濃度輔料對製劑熱穩定性(在40℃放置17天)的影響。實驗設計及結果見下表。

結果顯示：MgCl₂、Arg-HCl、NaCl和組胺酸對製劑穩定性影響較小，其中包含MgCl₂、Arg-HCl、NaCl和組胺酸的製劑穩定性優於包含CaCl₂的製劑，CaCl₂組高溫條件下CE降幅大於其他製劑樣品，包含MgCl₂、Arg-HCl和組胺酸製劑的穩定性均較好，因此較佳MgCl₂、Arg-HCl和組胺酸。

實施例6. 黏度調節劑對製劑穩定性影響全面評價

在20mM His-AA pH5.0緩衝液中，製備含0.1mg/mL PS80，150mg/mL Hu25G7-A和黏度調節劑的製劑，其中振搖15天的樣品中PS80的濃度為1mg/mL，考察不同輔料對Hu25G7-A製劑黏度及穩定性的影響。實驗設計及如下。

1)N/A(不含黏度調節劑)

2)90mM MgCl₂

3)120mM Arg-HCl

4)90mM組胺酸

製劑配製完畢後，首先取部分製劑樣品檢測製劑的黏度。然後將樣品無菌過濾灌裝，分別考察40℃高溫、重複凍融(-35℃至4℃)、振搖(25℃ 300rpm)條件下樣品的外觀、SEC和非還原CE，評價不同輔料對製劑黏度及穩定性的影響。結果見下表。

結果顯示：

加入輔料黏度調節劑後，外觀出現乳光，但各輔料間無差異；當製劑中含有0.1mg/mL PS80時，含黏度調節劑組振搖一天，外觀出現顆粒。但當PS80為1mg/mL，振搖15天後，外觀仍然澄明。

40℃ SEC結果顯示，加入黏度調節劑後，SEC單體含量略有下降，但各組樣品間無明顯差異，其中，Arg-HCl樣品組和組胺酸樣品組較好，組胺酸樣品穩定性最好。40℃ CE結果顯示，加入黏度調節劑後CE略有下降，但各輔料間差異不大。

實施例7. 黏度調節劑的濃度篩選

在20mM His-AA pH5.0緩衝體系中，製備包含不同Hu25G7-A抗體濃度和黏度調節劑的製劑，考察製劑黏度。實驗設計及結果見下表。

結果顯示，提高黏度調節劑His、MgCl₂和Arg-HCl濃度，可明顯降低製劑的黏度。

實施例8. 製劑穩定性測試

為提高製劑的外觀，考慮降低製劑中鹼性胺基酸(黏度調節劑)加入量，製備製劑樣品如下：

1. 20mM His-AA pH 5.0，30mM組胺酸，0.8mg/mL PS80，41.8mg/mL蔗糖，抗體Hu25G7-A 120mg/mL，該樣品中的組胺酸最終含量為50mM；

2. 20mM His-AA pH 4.8，87mM組胺酸，0.8mg/mL PS80，150mg/mL抗體Hu25G7-A；

3. 20mM His-AA pH 5.0，100mM組胺酸，0.8mg/mL PS80，150mg/mL抗體Hu25G7-A；

4. 20mM His-AA pH5.0，120mM精胺酸鹽酸鹽，0.8mg/mL PS80，150mg/mL抗體Hu25G7-A；

製劑配製完畢後，首先取部分製劑樣品檢測製劑的黏度。然後將樣品無菌過濾後灌裝，分別考察4℃、25℃穩定性。檢測樣品的外觀、滲透壓、pH、SEC、非還原CE、iCIEF，評價不同製劑樣品的黏度及穩定性，結果見表。

結果顯示：1至4號製劑樣品的pH漂移均在0.1以內，緩衝能力較好；滲透壓處於等滲範圍，且黏度均在20mPa.s以內；1號樣品在25度放置3個月後，CE/iCIEF略有下降；4度放置3個月後，外觀依然澄明，化學穩定性無顯著變化。1至4號樣品在4℃放置11個月後，外觀澄清，並且SEC、iCIEF及CE-SDS的檢測結果均比較穩定，因此上述1至4號製劑均比較穩定。

實施例9.糖濃度篩選

為開發皮下製劑，減少注射刺激性，滲透壓控制為等滲最佳，因此對糖濃度進行篩選，確定等滲糖濃度。製備含50mM His-AA pH5.0，58mg/mL蔗糖，0.8mg/mL PS80和120mg/mL hu25G7-A抗體製劑，使用冰點法測定滲透壓，測試3次。

結果顯示，當糖濃度為58mg/mL時滲透壓為約297mosm/kg，等滲。

實施例10. 凍乾工藝篩選

製備25mM His-AA pH4.9，60mg/mL hu25G7-A，25mg/mL蔗糖，0.2mg/mL PS80的製劑，無菌過濾，罐裝3.4mL瓶，按下表程序進行凍乾。

凍乾後出箱，樣品外觀：白色粉餅，外觀飽滿，無塌陷。採用約1.5mL的注射用水進行複溶，複溶後樣品的成分如下：50mM His-AA，120mg/mL hu25G7-A，50mg/mL蔗糖，0.4mg/mL PS80，pH5.3，對複溶樣品進行各項檢測。結果顯示稀凍濃溶後複溶溶液的各項指標良好。

實施例11. 製劑處方的優化

以50mM His-AA緩衝液pH、Hu25G7-A抗體濃度和PS80濃度為變量進行DOE實驗設計，變量為：pH4.5~5.5、PS80 0.4~1.2mg/mL、Hu25G7-A抗體蛋白濃度100~140mg/mL，應用JMP軟體得到一系列hu25G7-A製劑處方，處方中均含有58mg/mL蔗糖，具體見表29。藉由強制降解，包括40度高溫、振搖(300rpm)、凍融實驗(-35℃至4℃)，檢測製劑的穩定性。以外觀、黏度、SEC、非還原CE、iCIEF為評價指標，結果見表30，採用最小二乘法對結果進行統計分析。

結果顯示，凍融5次後，各製劑外觀依然澄清。

將各強制降解數據進行擬合，其中黏度及40度CE、iCIEF降解差值擬合較好，模型有效，結果見圖2。當PS濃度為0.8mg/mL時，以抗體濃度及pH為橫縱坐標，黏度、40度CE/iCIEF降解差值為指標繪製等高線圖，以黏度<30cP、CE降幅<3%，iCIEF降幅<30%為限度，繪製製劑穩定性變化等高線圖，結果見圖3。

結果顯示：蛋白濃度越底，pH越低，製劑的黏度越低；當pH5.0，CE結果最優，當pH為5.1時，iCIEF中性峰最優。結合等高線圖和黏度結果，穩定製劑如下：抗體濃度100-140mg/mL，0.4-1.2mg/mL PS80，pH4.5-5.5。進一步的，抗體濃度為110-130mg/mL，pH 4.85-5.45時，製劑更穩定。

實施例12. 製劑穩定性檢測

製備50mM His-AA pH5.0，hu25G7-A抗體120mg/mL，58mg/ml蔗糖，0.8mg/mLPS80的製劑，無菌過濾，罐裝。然後進行4℃穩定性實驗，結果見表31。

結果顯示：上述製劑在4度放置4個月後，依然穩定。

<110> 江蘇恆瑞醫藥股份有限公司(JIANGSU HENGRUI MEDICINE CO.,LTD.) 上海恆瑞醫藥有限公司(SHANGHAI HENGRUI PHARMACEUTICAL CO.,LTD.)

<120> 一種抗IL-4R抗體藥物組合物及其用途

<130> 721013CPCT

<150> CN202010107765.0

<151> 2020-02-21

<160> 48

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(118)

<223> 鼠單抗25G7的重鏈可變區

<400> 1

<210> 2

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(108)

<223> 鼠單抗25G7的輕鏈可變區

<400> 2

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(10)

<223> 鼠單抗25G7的HCDR1

<400> 3

<210> 4

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(17)

<223> 鼠單抗25G7的HCDR2

<400> 4

<210> 5

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(9)

<223> 鼠單抗25G7的HCDR3

<400> 5

<210> 6

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(10)

<223> 鼠單抗25G7的LCDR1

<400> 6

<210> 7

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(7)

<223> 鼠單抗25G7的LCDR2

<400> 7

<210> 8

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(11)

<223> 鼠單抗25G7的LCDR3

<400> 8

<210> 9

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(125)

<223> 鼠單抗7B10的重鏈可變區

<400> 9

<210> 10

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(111)

<223> 鼠單抗7B10的輕鏈可變區

<400> 10

<210> 11

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(10)

<223> 鼠單抗7B10的HCDR1

<400> 11

<210> 12

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(17)

<223> 鼠單抗7B10的HCDR2

<400> 12

<210> 13

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(16)

<223> 鼠單抗7B10的HCDR3

<400> 13

<210> 14

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(14)

<223> 鼠單抗7B10的LCDR1

<400> 14

<210> 15

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(7)

<223> 鼠單抗7B10的LCDR2

<400> 15

<210> 16

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(9)

<223> 鼠單抗7B10的LCDR3

<400> 16

<210> 17

<211> 445

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 鏈

<222> (1)..(445)

<223> 人源化抗體hu25G7的重鏈

<400> 17

<210> 18

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 鏈

<222> (1)..(215)

<223> 人源化抗體hu25G7的輕鏈

<400> 18

<210> 19

<211> 455

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 鏈

<222> (1)..(455)

<223> 人源化抗體hu7B10的重鏈

<400> 19

<210> 20

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 鏈

<222> (1)..(218)

<223> 人源化抗體hu7B10的輕鏈

<400> 20

<210> 21

<211> 98

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(98)

<223> 人種系重鏈模版IGHV3-48＊01

<400> 21

<210> 22

<211> 95

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(95)

<223> 人種系輕鏈模板IGKV3-11＊01

<400> 22

<210> 23

<211> 98

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(98)

<223> 人種系重鏈模版IGHV1-2＊02

<400> 23

<210> 24

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(100)

<223> 人種系輕鏈模板IGKV2D-29＊01

<400> 24

<210> 25

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(118)

<223> hu25G7-VH-a

<400> 25

<210> 26

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(118)

<223> hu25G7-VH-b

<400> 26

<210> 27

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(118)

<223> hu25G7-VH-c

<400> 27

<210> 28

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(108)

<223> hu25G7-VL-a

<400> 28

<210> 29

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(108)

<223> hu25G7-VL-b

<400> 29

<210> 30

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(108)

<223> hu25G7-VL-c

<400> 30

<210> 31

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(125)

<223> hu7B10-VH-a

<400> 31

<210> 32

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(125)

<223> hu7B10-VH-b

<400> 32

<210> 33

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(125)

<223> hu7B10-VH-c

<400> 33

<210> 34

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(111)

<223> hu7B10-VL-a

<400> 34

<210> 35

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(111)

<223> hu7B10-VL-b

<400> 35

<210> 36

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(111)

<223> hu7B10-VL-c

<400> 36

<210> 37

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(108)

<223> hu25G7-A的輕鏈可變區

<400> 37

<210> 38

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(10)

<223> hu25G7-A的LCDR1

<400> 38

<210> 39

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(7)

<223> hu25G7-B的LCDR2

<400> 39

<210> 40

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(11)

<223> hu25G7-A的LCDR3

<400> 40

<210> 41

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(108)

<223> hu25G7-B的輕鏈可變區

<400> 41

<210> 42

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(10)

<223> hu25G7-B的LCDR1

<400> 42

<210> 43

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<222> (1)..(118)

<223> hu25G7-A/B VH优化后的重鏈可變區

<400> 43

<210> 44

<211> 445

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 鏈

<222> (1)..(445)

<223> hu25G7-A和hu25G7-B的重鏈

<400> 44

<210> 45

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 鏈

<222> (1)..(215)

<223> hu25G7-A的輕鏈

<400> 45

<210> 46

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 鏈

<222> (1)..(215)

<223> hu25G7-B的輕鏈

<400> 46

<210> 47

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 結構域

<223> hu25G7-C VH

<400> 47

<210> 48

<211> 445

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 鏈

<223> hu25G7-C抗體重鏈

<400> 48

Claims

一種醫藥組成物，其包含抗IL-4R抗體或其抗原結合片段和緩衝劑，該緩衝劑為組胺酸-醋酸緩衝劑，該緩衝劑的pH為4.5至6.0，較佳為4.5至5.5。
如請求項1所述的醫藥組成物，其中該組胺酸-醋酸緩衝劑的濃度為10mM至60mM，較佳為10mM至30mM。
如請求項1或2所述的醫藥組成物，其中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段的濃度為100mg/mL以上，較佳為100mg/mL至200mg/mL；較佳為100mg/mL至180mg/mL；更佳為100mg/mL至150mg/mL。
如請求項1至3中任一項所述的醫藥組成物，其還包括黏度調節劑，其中該黏度調節劑選自MgCl₂、CaCl₂、NaF、NaSCN、KCl、CH₃COONa、Na₂SO₄、NaI、精胺酸、精胺酸鹽酸鹽、組胺酸和賴胺酸，較佳選自MgCl₂、組胺酸和精胺酸鹽酸鹽。
如請求項4所述的醫藥組成物，其中該黏度調節劑的濃度為5mM至220mM，較佳為5mM至148mM；更佳地，其中該黏度調節劑為：

i)5mM至220mM的精胺酸鹽酸鹽；

ii)5mM至100mM的組胺酸；或

iii)5mM至90mM的MgCl₂。
如請求項5所述的醫藥組成物，其中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段的濃度為100mg/mL至200mg/mL，較佳為120mg/mL至150mg/mL；且該黏度調節劑選自50mM至90mM的MgCl₂；50mM至100mM的組胺酸和10mM至200mM，較佳50mM至180mM的精胺酸鹽酸鹽。
如請求項5所述的醫藥組成物，其中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段濃度為100mg/mL至140mg/mL，較佳100mg/mL至120mg/mL；且該黏度調節劑選自5mM至50mM的組胺酸、精胺酸鹽酸鹽或MgCl₂，較佳為10mM至40mM的組胺酸、精胺酸鹽酸鹽或MgCl₂；最佳為30mM的組胺酸、精胺酸鹽酸鹽或MgCl₂。
如請求項1至7中任一項所述的醫藥組成物，其還包含表面活性劑，較佳為聚山梨酯，最佳為聚山梨酯80或聚山梨酯20。
如請求項8所述的醫藥組成物，其中該表面活性劑的濃度為0.1mg/mL至1.2mg/mL，較佳為0.4mg/mL至1.0mg/mL，最佳為0.8mg/mL。
如請求項1至5和7至9中任一項所述的醫藥組成物，其還包含穩定劑，其中該穩定劑較佳為海藻糖或蔗糖，更佳為蔗糖。
如請求項10所述的醫藥組成物，其中該穩定劑的濃度為20mg/mL至70mg/mL，較佳為40mg/mL至60mg/mL，最佳為58mg/mL。
一種醫藥組成物，其包含：

(a)100mg/mL至150mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝液緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)80mM至148mM黏度調節劑；和(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80；或包含：

(a)100mg/mL至120mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)5mM至50mM的組胺酸；(d)0.4mg/mL至1.0mg/mL的聚山梨酯80和(e)50mg/mL至60mg/mL的蔗糖。
一種醫藥組成物，其包含：

(a)100mg/mL至140mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)10mM至40mM黏度調節劑；(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80；和(e)40mg/mL至70mg/mL的蔗糖；

或

(a)100mg/mL至200mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)40mM至220mM黏度調節劑；和(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80；

其中該黏度調節劑選自：MgCl₂、CaCl₂、NaF、NaSCN、KCl、CH3COONa、Na₂SO₄、NaI、精胺酸、精胺酸鹽酸鹽、組胺酸和賴胺酸；

較佳地，其中該醫藥組成物包含：

(a)100mg/mL至140mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)10mM至40mM黏度調節劑；(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80；和(e)40mg/mL至70mg/mL的蔗糖；其中所述的黏度調節劑為組胺酸、精胺酸鹽酸鹽或MgCl₂；或

(a)100mg/mL至180mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)40mM至90mM的MgCl₂；和(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80；或

(a)100mg/mL至180mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)50mM至100mM的組胺酸；和(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80；或

(a)100mg/mL至180mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)10mM至30mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)50mM至200mM的精胺酸鹽酸鹽；和(d)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80。
一種醫藥組成物，其包含：

(a)100mg/mL至120mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)20mM至60mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 4.5-5.5；(c)0.4mg/mL至1.2mg/mL的聚山梨酯80和(d)40mg/mL至70mg/mL的蔗糖；較佳地，包含：

(a)120mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH 5.0；(c)0.8mg/mL的聚山梨酯80和(d)58mg/mL的蔗糖。
一種醫藥組成物，其包含：

(a)約150mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)約20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑，pH約5.0；(c)約0.8mg/mL的聚山梨酯80和(d)約120mM的精胺酸鹽酸鹽。
如請求項1至15中任一項所述的醫藥組成物，其中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段包含：

(i)重鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和

輕鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：40所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；

(ii)重鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和

輕鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；

(iii)重鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和

輕鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；

或

(iv)重鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和

輕鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：39和SEQ ID NO：8所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；較佳地，包含：

重鏈可變區：分別如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示的HCDR1、HCDR2和HCDR3；和

輕鏈可變區，其包含分別如SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：40所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3；

更佳地，其中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段包含如下任一項所示的重鏈可變區和輕鏈可變區：

(v)重鏈可變區序列如SEQ ID NO：1所示或與SEQ ID NO：1具有至少90%的同一性，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：2所示或與SEQ ID NO：2具有至少90%的同一性；

(vi)重鏈可變區序列如SEQ ID NO：9所示或與SEQ ID NO：9具有至少90%的同一性，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：10所示或與SEQ ID NO：10具有至少90%的同一性；

(vii)重鏈可變區序列如SEQ ID NO：25、26、27、43或47所示，或與SEQ ID NO：25、26、27、43或47具有至少90%的同一性，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：28、29、30、37或41所示，或與SEQ ID NO：28、29、30、37或41具有至少90%的同一性；或

(viii)重鏈可變區序列如SEQ ID NO：31、32或33所示，或與SEQ ID NO：31、32或33具有至少90%的同一性，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：34、35或36所示，或與SEQ ID NO：34、35或36具有至少90%的同一性；

最佳地，該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段包含如下任一項所示的重鏈可變區和輕鏈可變區：

(IX)重鏈可變區序列如SEQ ID NO：43所示或與SEQ ID NO：43具有至少90%的同一性，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：37所示或與SEQ ID NO：37具有至少90%的同一性；

(X)重鏈可變區序列如SEQ ID NO：43所示或與SEQ ID NO：43具有至少90%的同一性，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：41所示或與SEQ ID NO：41具有至少90%的同一性；或

(XI)重鏈可變區序列如SEQ ID NO：47所示或與SEQ ID NO：47具有至少90%的同一性，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO：41所示或與SEQ ID NO：41具有至少90%的同一性。
如請求項16所述的醫藥組成物，其中該抗IL-4R抗體或其抗原結合片段包含恆定區；較佳地，其中該抗IL-4R抗體包含如下所示的重鏈和輕鏈：

SEQ ID NO：17所示的重鏈，和SEQ ID NO：18所示的輕鏈；或

SEQ ID NO：19所示的重鏈，和SEQ ID NO：20所示的輕鏈；或

SEQ ID NO：44所示的重鏈，和SEQ ID NO：45所示的輕鏈；或

SEQ ID NO：44所示的重鏈，和SEQ ID NO：46所示的輕鏈；或

SEQ ID NO：48所示的重鏈，和SEQ ID NO：46所示的輕鏈；

更佳地，

該抗IL-4R抗體包含SEQ ID NO：44所示的重鏈，和SEQ ID NO：45所示的輕鏈。
一種製備如請求項1至17中任一項所述的醫藥組成物的方法，包括將抗IL-4R抗體或其抗原結合片段原液經緩衝劑置換的步驟。
一種包含抗IL-4R抗體或其抗原結合片段的凍乾製劑，其中該凍乾製劑藉由將如請求項1至17中任一項所述的醫藥組成物經冷凍乾燥獲得。
一種含有抗IL-4R抗體或其抗原結合片段的複溶溶液，其特徵在於該複溶溶液是藉由將如請求項19所述的凍乾製劑經複溶獲得；較佳地，該複溶溶液包含如下成分：

(a)120mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑；(c)0.4mg/mL的聚山梨酯80和(d)50mg/mL的蔗糖，且醫藥組成物的pH為約5.3；或

(a)120mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)50mM的組胺酸-醋酸緩衝劑；(c)0.8mg/mL的聚山梨酯80和(d)50mg/mL的蔗糖，且醫藥組成物的pH為約5.3；或

(a)120mg/mL的抗IL-4R抗體或其抗原結合片段；(b)20mM的組胺酸-醋酸緩衝劑；(c)0.8mg/mL的聚山梨酯80和(d)120mM的精胺酸鹽酸鹽，且醫藥組成物的pH為約5.3。
一種製品，其包括容器，該容器中裝有如請求項1至17中任一項所述的醫藥組成物，或如請求項19所述的凍乾製劑，或如請求項20所述的複溶溶液。
一種治療或預防免疫性疾病或病症的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的如請求項1至17中任一項所述的醫藥組成物，或如請求項19所述的凍乾製劑，或如請求項20所述的複溶溶液；較佳地，其中該免疫性疾病或病症為IL-4R介導的疾病或病症；更佳地，其中該免疫性疾病或病症選自：哮喘、鼻息肉、慢性鼻竇炎、過敏性皮膚病、嗜酸細胞性食管炎、慢性阻塞性肺病、過敏性鼻炎、關節炎、炎症性疾病、變應性反應、自體免疫淋巴組織增生性綜合症、自體免疫性溶血性貧血、巴雷特食管、自體免疫葡萄膜炎、結核病和腎病；最佳地，該免疫性疾病或病症為哮喘或過敏性皮膚病。