TW202122085A - 治療血管畸形之方法 - Google Patents
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Abstract
本發明係有關於抑制TIE2激酶之方法,其有益於靜脈畸形之生長的治療。具體而言,本發明係有關於使用式I化合物及其鹽的方法
Description
內膜內皮細胞激酶-2 (TIE2)主要限於在血管的內皮細胞中表現。TIE2為血管生成素1 (ANGPT1)、血管生成素2 (ANGPT2)及血管生成素4 (ANGPT4)的受體,且此信息傳遞系統在血管增生(新血管從現有血管芽生)及血管新生(新血管重新形成)兩者中扮演重要的角色。
血管畸形包含各種各樣的脈管系統疾病。這些疾病包括靜脈畸形、***畸形、微血管畸形、動脈畸形及動靜脈畸形。任何血管類型或組合皆可能涉及到畸形。血管畸形會隨時間增長且會迅速生長,並且會發生局部組織浸潤。靜脈畸形可限制於局部或多病灶性發生。靜脈畸形可與疼痛、腫脹、出血、外形病變、血栓形成及其他顯著的發病有關。靜脈畸形可影響諸如皮膚、關節、肌肉、腸道及骨骼的組織。許多靜脈畸形可通過手術、雷射療法或硬化療法來治療,然而並非所有靜脈畸形都適合這些治療。在大多數情況下,靜脈畸形會在常規治療之後復發。
已有大約50%的靜脈畸形病例與性腺有所關聯或與TIE2激酶的體細胞突變有關。這些突變活化了TIE2激酶,導致內皮細胞生長失調及靜脈畸形。因此,需要有新的用於這些與TIE2變動有關之疾病的治療。
例如,本文提供一種治療有需要之患者之TIE2激酶介導之血管異常或TIE2激酶突變體介導之血管異常的方法,其包含向該患者投與治療有效量之式I化合物,或其醫藥學上可接受之鹽。
此外,本文提供一種治有需要之患者之血管異常的方法,其包含向該患者投與治療有效量之式I化合物,或其醫藥學上可接受之鹽,其中所述血管異常係由TIE2激酶所介導或由TIE2激酶突變體介導的。
再者,本文提供一種用於治療有需要之患者之TIE2激酶介導之血管異常或TIE2激酶突變體介導之血管異常之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽,其包含向該患者投與治療有效量之式I化合物,或其醫藥學上可接受之鹽。
本文亦提供一種治療有需要之患者之靜脈畸形的方法,其包含向該患者每天一次或兩次投與約100 mg至約200 mg之式I化合物,或其醫藥學上可接受之鹽。
本文亦提供一種用於治療有需要之患者之靜脈畸形之式I化合物,或其醫藥學上可接受之鹽,其包含向該患者每天一次或兩次投與約100 mg至約200 mg之式I化合物,或其醫藥學上可接受之鹽。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2019年8月12日申請之U.S.S.N. 62/885,519的優先權,其內容係以全文引用的方式併入本文中。
本發明之特點及其他細節現將加以更明確之描述。本說明書、實施例及所附申請專利範圍中所採用之特定術語在此處收集。此等定義應依據本發明之剩餘部分且如熟悉本技藝者所理解來閱讀。除非另外定義,否則本文所使用之所有技術及科學術語具有如一般熟悉本技藝者通常所理解之含義相同之含義。定義
術語「個體(individual」、「患者」或「個體(subject)」、「可互換使用且包括任何動物,包括哺乳動物,較佳為小鼠、大鼠、其他嚙齒動物、兔、狗、貓、豬、牛、綿羊、馬或者靈長類動物,且最佳為人類。本文所描述之化合物不僅可投與至諸如人類之哺乳動物,且亦可投與至其他哺乳動物,諸如需要獸醫治療之動物,例如
家畜(例如
狗、貓及其類似動物)、農畜(例如
母牛、綿羊、豬、馬及其類似動物)及實驗室動物(例如
大鼠、小鼠、天竺鼠及其類似動物)。
「醫藥學上或藥理學上可接受」包括當適當時向動物或人類投與時不產生不利、過敏或其他不當反應之分子實體及組成物。對於人類投與,製劑應滿足如FDA生物製劑標準辦公室(FDA Office of Biologics standards)所要求之無菌性、發熱性及通用安全及純度標準。
如本文所使用之術語「醫藥學上可接受之載劑」或者「醫藥學上可接受之賦形劑」係指與醫藥投與相容之任何及所有溶劑、分散介質、包衣、等張劑及吸收延遲劑以及其類似物。該等介質及藥劑用於醫藥活性物質之用途在本技藝中眾所周知。組成物亦可含有提供補充、額外或者增強型治療功能之其他活性化合物。
如本文所使用之術語「醫藥組成物」係指包含與一或多種醫藥學上可接受之載劑一起調配之如本文所揭示之至少一種化合物的組成物。
如本文所使用之術語「醫藥上可接受之鹽」係指本文所揭露之化合物之醫藥上可接受的有機或無機鹽類。這些鹽類可為可存於該等組成物中所用之化合物中之酸性或鹼性基團的鹽。本質上為鹼性之本發明組成物中所包括之化合物能夠與各種無機酸及有機酸一起形成廣泛多種之鹽。可用於製備該等鹼性化合物之醫藥學上可接受之酸加成鹽的酸為形成無毒酸加成鹽的酸,即含有藥理學上可接受之陰離子的鹽,包括(但不限於)蘋果酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、柳酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、單寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、順丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、葡萄糖二酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽及雙羥萘酸鹽(即1,1'-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽))、鹼金屬(例如鈉及鉀)鹽、鹼土金屬(例如鎂)鹽及銨鹽。醫藥學上可接受之鹽可涉及包括另一分子,諸如乙酸根離子、琥珀酸根離子或其他相對離子。相對離子可為使母體化合物上之電荷穩定的任何有機或無機部分。此外,醫藥學上可接受之鹽可在其結構中具有超過一個帶電原子。在多個帶電原子為該醫藥學上可接受之鹽之一部分的情形下可具有多個相對離子。因此,醫藥學上可接受之鹽可具有一或多個帶電原子及/或一或多個相對離子。本發明化合物可含有酸性基團及鹼性基團;例如一個胺基及一個羧酸基。在此類情況下,化合物可以酸加成鹽、兩性離子或者鹼鹽之形式存在。若如本文所揭露之化合物為鹼,則所要醫藥學上可接受之鹽可藉由本領域中可利用之任何適合方法來製備,例如用以下各物處理游離鹼:無機酸,諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸及其類似酸;或有機酸,諸如乙酸、馬來酸、琥珀酸、杏仁酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、哌喃糖基酸(諸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α醇酸(諸如檸檬酸或酒石酸)、胺基酸(諸如天冬胺酸或麩胺酸)、芳族酸(諸如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(諸如對甲苯磺酸或乙磺酸)或其類似物。若如本文所揭露之化合物為酸,則所要醫藥學上可接受之鹽可藉由任 何適合方法來製備,例如用以下各物處理游離酸:無機或有機鹼,諸如胺(一級胺、二級胺或三級胺)、鹼金屬氫氧化物或鹼土金屬氫氧化物或其類似物。適合鹽之說明性實例包括但不限於來源於諸如甘胺酸及精胺酸之胺基酸、氨、一級胺、二級胺及三級胺以及諸如哌啶、嗎啉及哌嗪之環胺的有機鹽,及來源於鈉、鈣、鉀、鎂、錳、鐵、銅、鋅、鋁及鋰之無機鹽。
如本文所使用之術語「治療(treating或treatment)」包括以改良或穩定受試者之病狀的方式逆轉、減輕、或遏止病狀之症狀、臨床徵象、及潛在的病變。如本文所使用,且如此項技術中所理解,「治療」係一種用於獲得有益或所需結果包括臨床結果之方法。有益或所需臨床結果可包括(但不限於)可偵測或不可偵測地減輕、改善、或減緩與病狀(例如,癌症)相關之一或多個症狀或病狀,降低疾病程度,使疾病狀態穩定(亦即,不惡化),延遲或延緩疾病進展,改善或緩解疾病狀態,以及緩和(部分或完全)。「治療」亦可意指與在不接受治療情況下預期之存活相比使存活延長。例示性有益臨床結果係描述於本文中。
如本發明所使用之術語「投與(administer、administering或administration)」係指向個體直接投與組成物或是該化合物或組成物之醫藥學上可接受之鹽,或向該個體投與該組成物之前藥衍生物或類似物或是該化合物或組成物之醫藥學上可接受之鹽,其可在該個體的體內形成等效量的活性化合物。
在本說明書中,術語「治療有效量」意謂研究人員、獸醫、醫學醫生或者其他臨床醫師正尋求之引發組織、系統或者動物(例如哺乳動物或者人類)之生物學或者醫學反應的本發明化合物的量。本文所述之化合物係以治療有效量投與以治療所揭露之病症。
式I化合物在本文中亦稱為瑞把替尼(rebastinib)。
本發明部分係關於治療(阻斷)或預防靜脈畸形的生長。這類所揭露之方法可包括向有需要治療或降低這些病狀之預防效果之患者投與有效量之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽,例如,作為調控TIE2抑制之給藥方案的一部分。
例示性方法包括在患者中治療靜脈畸形,例如,其中這類患者在內皮細胞中具有可能致使或導致靜脈畸形生長之TIE2的表現、突變或變動。這類方法可包括向該罹患靜脈畸形之患者投與式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。例如,提供例如式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽之化合物可抑制包括有靜脈畸形之生長的過程。所預期的化合物包括式I之游離鹼。
有效量、毒性及治療功效可藉由標準醫藥程序、在細胞培養物或實驗動物中判定,例如,以用於判定LD50 (50%群體致死劑量)及ED50 (50%群體治療有效劑量)。劑量可視所用劑型及所用投藥途徑而變化。毒性與治療效果之間的劑量比率為治療指數且其可以LD50/ED50比率表示。在一些實施例中,該等組成物及方法展現出大的治療指數。所述組成物在血漿中之含量可(例如)藉由高效液相層析法量測,且任何特定劑量的效果尤其可藉由適宜生物分析法來監測。劑量可由醫師判定且根據需要調整以適合所觀測到的治療效果。
在某些實施例中,預防效果將引起至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約50%、至少約70%、或至少約90%的可定量變化。在一些實施例中,所述效果將引起約10%、約20%、約30%、約50%、約70%、或甚至約90%或更多的可定量變化。治療益處還包括暫停或減緩所預期的潛在疾病或病症的進展,與是否實現改善無關。
本文所述之式I或其醫藥學上可接受之鹽(及/或額外試劑)可以包含有醫藥學上可接受的載劑或媒劑之組成物的組分形式投與個體。這類組成物可視情況包含適宜量之醫藥學上可接受之賦形劑以提供用於適合投與的形式。
醫藥學上可接受之賦形劑可為液體,諸如水及油,包括石油、動物、植物或合成來源的油,諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。醫藥賦形劑可為(例如)鹽水、***膠、明膠、澱粉糊、滑石、角蛋白、膠態二氧化矽、尿素等。另外,可使用輔助劑、穩定劑、增稠劑、潤滑劑及著色劑。在一些實施例中,醫藥學上可接受之賦形劑當投與個體時為無菌的。當本文所述的任何試劑靜脈內投與時,水為適用的賦形劑。亦可使用鹽水溶液及右旋糖水溶液以及甘油溶液作為液體賦形劑,特別是用於可注射溶液。合適的醫藥賦形劑亦包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻米、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、無水脫脂奶、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。如果需要,本文所述之任何試劑亦可包含少量潤濕劑或乳化劑,或pH緩衝劑。
在一些實施例中本文提供用以治療靜脈畸形或其他先天性靜脈畸形之方法,其包含向有需要之患者投與有效量之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。所預期的靜脈畸形包括球形細胞靜脈畸形、黏膜與皮膚的靜脈畸形(亦稱皮黏膜靜脈畸形,VMCM)、藍色橡皮泡痣綜合症、胃或腸胃道病變、及/或馬富西綜合症(Maffucci syndrome)。
例如,本文所預期的是一種阻斷靜脈畸形生長的方法,其包含在(例如)足以阻斷腫瘤微環境中的TIE2激酶的給藥方案中向有需要之患者投與有效量之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽的給藥方案為每天給藥投與或每天兩次給藥投與。
在其他實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽的給藥方案為間歇性給藥投與。該間歇非每天的給藥方案可包括(但不限於)隔天給藥、每隔兩天給藥、每週兩次給藥或每週一次給藥。在一些實施例中,該方法包含向該患者投與式I化合物每天一次、間歇非每天一次、每隔一天一次,每隔兩天一次、每隔一週一次、每天兩次、每週一次或每週兩次。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽的適宜給藥方案包括投與每週兩次、每週一次或隔週投與,例如每週兩次或每週一次,例如每週兩次。
本發明之另一態樣係關於一種阻斷靜脈畸形生長的方法,其包含以足以阻斷TIE2激酶或突變型TIE2激酶活性之劑量投與式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽,其中該式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽係以間歇非每天的給藥方案投與。在一些實施例中,該間歇非每天的給藥方案包括隔天給藥、每隔兩天給藥、每週兩次給藥、及每週一次給藥。
本發明之另一態樣係關於一種治療在手術切除腫瘤之前處於前導性治療中的靜脈畸形患者的方法,其包含向有需要之患者投與有效量之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽的給藥方案足以阻斷TIE2激酶或突變型TIE2激酶。
在一些實施例中,該治療在手術切除腫瘤之前處於前導性治療中的靜脈畸形患者的方法係包含以足以阻斷TIE2激酶或突變型TIE2激酶的給藥方案向有需要之患者投與有效量之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中,一種治療在手術切除之前處於前導性治療中的靜脈畸形患者的方法係包含以足以阻斷TIE2激酶或突變型TIE2激酶的劑量、以每天或每天兩次投與式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽的給藥方案來投與式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中,該治療在手術切除之前處於前導性治療中的靜脈畸形患者的方法係包含以足以阻斷TIE2激酶或突變型TIE2激酶的給藥方案、以間歇非每天之方式投與式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽的給藥方案來向有需要之患者投與有效量之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽,所述間歇非每天之方式包括隔天給藥、每隔兩天給藥、每週兩次給藥、及每週一次給藥。
在一些實施例中,該治療在手術切除之前處於前導性治療中的靜脈畸形患者的方法包含以每週兩次、每週一次或隔週投與的給藥方案來向有需要之患者投與有效量之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明之另一態樣係關於一種治療有需要之患者之TIE2激酶介導之血管異常或TIE2激酶突變體介導之血管異常(例如,血管畸形、血管腫瘤(例如血管瘤)及/或其他先天性血管缺陷)的方法,其包含向該患者投與治療有效量之式I化合物,或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中,該醫藥學上可接受之鹽為磺酸鹽。在一些實施例中,該醫藥學上可接受之鹽為甲磺酸鹽。在一些實施例中,該醫藥學上可接受之鹽為三氟甲磺酸鹽。在一些實施例中,該醫藥學上可接受之鹽為乙磺酸鹽。在一些實施例中,該醫藥學上可接受之鹽為苯磺酸鹽。在一些實施例中,該醫藥學上可接受之鹽為氯苯磺酸鹽。在一些實施例中,該醫藥學上可接受之鹽為樟腦磺酸鹽。在一些實施例中,該醫藥學上可接受之鹽為甲苯磺酸鹽。在一些實施例中,該醫藥學上可接受之鹽為單甲苯磺酸鹽。在一些實施例中,該醫藥學上可接受之鹽為二甲苯磺酸鹽。在一些實施例中,該醫藥學上可接受之鹽為三甲苯磺酸鹽。在一些實施例中,該醫藥學上可接受之鹽為四甲苯磺酸鹽。
治療有需要之患者之血管異常的方法係在本文預期中,包含向該患者投與治療有效量之式I化合物,或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中,血管異常是TIE2激酶介導的血管異常或TIE2激酶突變體介導的血管異常。TIE2激酶介導的血管異常或TIE2激酶突變體介導的血管異常可為慢血流型畸形。在一些實施例中,該慢血流型畸形係選自微血管畸形、***畸形、***-靜脈畸形、或靜脈畸形。在一些實施例中,該慢血流型畸形為靜脈畸形。 調配物、投與、給藥及治療方案
本發明亦描述在醫藥組成物中之式I化合物(及/或額外試劑)或其醫藥學上可接受之鹽。本文所述之組成物可呈以下形式:溶液、懸浮液、乳液、滴劑、片劑、丸劑、球粒、膠囊、含液體膠囊、散劑、持續釋放調配物、栓劑、乳液、氣霧劑、噴霧、懸浮液或任何其它適用的形式。在一些實施例中,該組成物係呈膠囊形式(參見例如美國專利第5,698,155號)。適合的醫藥賦形劑之其它實例係描述於Remington’s Pharmaceutical Sciences
1447-1676 (Alfonso R. Gennaro編,第19版,1995)中,其係以引用的方式併入本文中。
必要時,本文中所描述的鹽也可包括增溶劑。此外,試劑可用如所屬領域中已知的適宜媒劑或傳遞裝置傳遞。本文中概述的組合療法可在單一傳遞媒劑或傳遞裝置中共同傳遞。用於投與的組成物可視情況包括局部麻醉劑(諸如(例如)利諾卡因(lignocaine))以減輕注射部位的疼痛。
在一些實施例中,本文所述之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽(及/或額外試劑)係根據常規製程調配為適合於投與模式的組成物。
在某些實施例中,投與途徑包括例如:皮內、肌內、腹膜內、靜脈內、皮下、鼻內、硬膜外、口服、舌下、鼻內、腦內、***內、經皮、經直腸、通過吸入、或外用,尤其到耳、鼻、眼或皮膚。在一些實施例中,投與是經口或通過腸胃外注射實現。投與模式可留給醫師判斷,且部分取決於醫學病況的部位。在大多數情況下,投與會導致本文所述之任何試劑釋放到血流中。
在一些實施例中,向需要治療或阻斷的區域局部投與是可取的。
在一些實施例中,本文所述之鹽(及/或額外試劑)係根據常規製程調配為適合向人類經口投與之組成物。經口傳遞之組成物可呈(例如)片劑、***片、水性或油性懸浮液、顆粒、散劑、乳液、膠囊、糖漿劑或酏劑形式。經口投與之組成物可包含一或多種試劑,例如甜味劑,諸如果糖、阿斯巴甜或糖精;調味劑,諸如胡椒薄荷、冬青油或櫻桃油;著色劑;以及防腐劑,以提供醫藥學上適口的製劑。此外,當呈片劑或丸劑形式時,該組成物可經包覆以延遲在胃腸道中的崩解及吸收,藉以提供時間週期延長的持續作用。本文所述之包圍滲透活性驅動式I化合物或或其醫藥學上可接受之鹽(及/或額外試劑)的可選擇性滲透膜還適用於經口投與的組成物。在後面的這些平臺中,來自包圍膠囊的環境的流體係由該驅動組成物吸收,所述驅動組成物膨脹以使該試劑或試劑組成物移位穿過開口。這些傳遞平臺可提供與立即釋放調配物之尖峰狀曲線相對之基本上零級傳遞曲線。還可以使用延時材料,諸如單硬脂酸甘油酯或硬脂酸甘油酯。口服組成物可包括標準賦形劑,諸如甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素及碳酸鎂。在一些實施例中,所述賦形劑是醫藥級的。除活性組成物之外,懸浮液可含有諸如(例如)乙氧基化異硬脂醇、聚氧化乙烯山梨糖醇及去水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂-瓊脂及西黃蓍膠等及其混合物之懸浮劑。
適用於腸胃外投與(例如靜脈內、肌內、腹膜內、皮下及關節內注射及灌注)的劑型包括(例如)溶液、懸浮液、分散液、乳液等。其還可以無菌固體組成物(例如凍乾組成物)形式製造,其可在即將使用之前溶解或懸浮於無菌可注射介質中。其可含有(例如)所屬領域中已知的懸浮或分散劑。
本文所述之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽(及/或額外試劑)的劑量以及給藥時程可取決於各種參數,包括(但不限於)所治療的疾病、個體的一般健康狀況和投與醫師的判斷。本文所述之任何試劑可在投與另一治療劑之前(例如之前5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週)、與其同時、或在其之後(例如之後5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週)向有需要的個體投與。在各種實施例中,本文所述之任何試劑係相隔1分鐘、相隔10分鐘、相隔30分鐘、相隔不到1小時、相隔1小時、相隔1小時到2小時、相隔2小時到3小時、相隔3小時到4小時、相隔4小時到5小時、相隔5小時到6小時、相隔6小時到7小時、相隔7小時到8小時、相隔8小時到9小時、相隔9小時到10小時、相隔10小時到11小時、或相隔11小時到12小時投與。
本文所述之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽(及/或額外試劑)的劑量可取決於若干因素,包括病況的嚴重度、病況是被治療還是被預防的、以及待治療之個體的年齡、體重和健康狀況。此外,關於特定個體的藥物基因體學(基因型對治療的藥物動力學、藥效學或功效概況的作用)資訊可影響所使用的劑量。此外,確切的個別劑量可視多種因素而略加調整,所述因素包括所投與試劑的特定組合、投與時間、投與途徑、調配物性質、***的速率、所治療的特定疾病、病症的嚴重度以及病症的解剖學位置。可預期劑量有一些變化。
在一些實施例中,當哺乳動物向經口投與時,本文所述之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽(及/或額外試劑)的劑量可為0.001 mg/kg/天至150 mg/kg/天、0.001 mg/kg/天至100 mg/kg/天、0.01 mg/kg/天至50 mg/kg/天、或0.1 mg/kg/天至10 mg/kg/天。在一些實施例中,當向人類經口投與時,本文所述之任何試劑的劑量通常為每天0.001 mg至1500 mg、每天1 mg至600 mg、或每天5 mg至30 mg。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天50 mg至1200 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天50 mg至900 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天50 mg至600 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天50 mg至300 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天50 mg至150 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天50 mg至140 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天50 mg至130 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天50 mg至120 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天50 mg至110 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天50 mg至100 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天50 mg至90 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天57 mg至1200 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天57 mg至150 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天57 mg至140 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天57 mg至130 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天57 mg至120 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天57 mg至110 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天57 mg至100 mg範圍內。在一些實施例中,鹽(或試劑)的劑量在每天57 mg至90 mg範圍內。在其它實施例中,鹽(或試劑)或鹽的劑量在每天60 mg至200 mg範圍內。在其它實施例中,鹽(或試劑)或鹽的劑量在每天60 mg至150 mg範圍內。在其它實施例中,鹽(或試劑)或鹽的劑量在每天70 mg至150 mg範圍內。在其它實施例中,鹽(或試劑)或鹽的劑量在每天80 mg至150 mg範圍內。在其它實施例中,鹽(或試劑)或鹽的劑量在每天90 mg至150 mg範圍內。在其它實施例中,鹽(或試劑)或鹽的劑量在每天100 mg至150 mg範圍內。在其它實施例中,鹽(或試劑)或鹽的劑量在每天100 mg至200 mg範圍內。
在一些實施例中,對於本文所述之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽(及/或額外試劑)通過腸胃外注射之投與,劑量為每天0.1 mg至250 mg。在一些實施例中,該劑量為每天1 mg至200 mg。在一些實施例中,該劑量為每天1 mg至150 mg。在一些實施例中,該劑量為每天10 mg至150 mg。在一些實施例中,該劑量為每天20 mg至200 mg。在一些實施例中,該劑量為每天30 mg至200 mg。在一些實施例中,該劑量為每天40 mg至200 mg。在一些實施例中,該劑量為每天50 mg至200 mg。在一些實施例中,該劑量為每天50 mg至150 mg。在一些實施例中,該劑量為每天57 mg至150 mg。在一些實施例中,該劑量為每天57 mg至100 mg。在一些實施例中,該劑量為每天60 mg至150 mg。在一些實施例中,該劑量為每天70 mg至150 mg。在一些實施例中,該劑量為每天60 mg至140 mg。在一些實施例中,該劑量為每天60 mg至130 mg。在一些實施例中,該劑量為每天60 mg至120 mg。在一些實施例中,該劑量為每天60 mg至110 mg。在一些實施例中,該劑量為每天60 mg至100 mg。在一些實施例中,該劑量為每天60 mg至90 mg。在一些實施例中,該劑量為每天70 mg至130 mg。在一些實施例中,該劑量為每天70 mg至120 mg。在一些實施例中,該劑量為每天70 mg至110 mg。在一些實施例中,該劑量為每天70 mg至100 mg。在一些實施例中,該劑量為每天1 mg至20 mg,或每天3 mg至5 mg。注射可給予最多每天四次。在一些實施例中,當經口或腸胃外投與時,本文所述之任何試劑的劑量通常為每天0.1 mg至1500 mg、或每天0.5 mg至10 mg、或每天0.5 mg至5 mg。每天可投與最多3000 mg的劑量。
在一些實施例中,本文所述之鹽(及/或額外試劑)之投與可獨立地為每天一至四次。具體而言,所述鹽的投與可以鹽為約50 mg至1500 mg的給藥方案一天一次。適用於所尋求的預防性效果的日劑量為57-1200 mg/天。在一些實施例中,本文所述之方法包含每天向該患者投與約100 mg的式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中,本文所述之方法包含每天向該患者投與約200 mg的式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中,本文所述之方法包含每天向該患者投與約300 mg的式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。如果每天投與兩次,合適的劑量為100 mg至200 mg的鹽。在一些實施例中,本文所述之方法包含向該患者投與約150、200或300 mg的式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽每天一次或兩次。在一些其他實施例中,所述鹽亦可間歇地非每天投與。在一些實施例中,可每月一至四次或每年一至六次或每兩年、三年、四年或五年一次進行所述鹽的投與。在某些實施例中,每週或每兩週進行所述鹽的投與。在一些實施例中,當每週或每兩週投與時,在一些實施例中,合適的鹽給藥方案在50-200 mg/每投與範圍內。在一些實施例中,係每週或每兩週投與且劑量為200-400 mg/每次投與。在一些實施例中,係每週或每兩週投與且劑量為400-500 mg/每次投與。在一些實施例中,係每週或每兩週投與且劑量為500-600 mg/每次投與。在一些實施例中,係每週或每兩週投與且劑量為600-700 mg/每次投與。在一些實施例中,係每週或每兩週投與且劑量為700-800 mg/每次投與。在一些實施例中,係每週或每兩週投與且劑量為800-900 mg/每次投與。在一些實施例中,係每週或每兩週投與且劑量為900-1000 mg/每次投與。在一些實施例中,係每週或每兩週投與且劑量為1000-1100 mg/每次投與。在一些實施例中,係每週或每兩週投與且劑量為1100-1200 mg/每次投與。投與的持續時間可為一天或一個月、兩個月、三個月、六個月、一年、兩年、三年,且可能甚至持續於該個體的終生中。將在許多情況下指示慢性長期投與。劑量可以單一劑量形式或分成多個劑量投與。一般來說,所需劑量應以設定的時間間隔持續長期的投與,通常至少經數週或數月,不過可能需要數月或數年的投與較長時間。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可以單一試劑形式或與其他治療劑組合投與。這類其他治療劑包括放射線療法、抗微管蛋白劑、DNA烷基化劑、DNA合成抑制劑、DNA嵌入劑、抗***劑、抗雄激素、類固醇、抗EGFR劑、激酶抑制劑、拓樸異構酶抑制劑、組蛋白去乙醯酶(HDAC)抑制劑、DNA甲基化抑制劑、抗HER2劑、抗血管生成劑、蛋白酶體抑制劑、沙利多胺(thalidomide)、來那度胺(lenalidomide)、抗體-藥物共軛物(ADC)、免疫調節劑或癌症疫苗。在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與VEGF抑制劑一起向患者投與。在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與Akt抑制劑一起向患者投與。在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與mTOR抑制劑一起向患者投與。在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與PI3K抑制劑一起向患者投與。
當式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽與其它試劑組合使用時,所述其它試劑可與式I化合物的給藥時程獨立給藥。所述其它試劑可以其先前確立的治療劑量及給藥時程給藥,或其劑量及給藥時程可在與式I化合物組合使用時修改以優化功效、安全性或耐受性。
式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與包括(但不限於)化學治療劑、標靶治療劑、生物製劑或放射線療法之其它試劑組合使用。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與化學治療劑組合使用,所述化學治療劑包括(但不限於)抗微管蛋白劑(例如,太平洋紫杉醇(paclitaxel)、用於可注射懸浮液之太平洋紫杉醇蛋白結合粒子、艾日布林(eribulin)、多西他賽(docetaxel)、伊沙匹隆(ixabepilone)、長春新鹼(vincristine)、長春瑞濱(vinorelbine)、埃博黴素(epothilones)、軟海綿素(halichondrins)、美登醇(maytansinoids))、DNA烷基化劑(例如,順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、異環磷醯胺(ifosfamide)、替莫唑胺(temozolomide))、DNA嵌入劑(例如,多柔比星(doxorubicin)、聚乙二醇化脂質體多柔比星、道諾黴素(daunorubicin)、艾達黴素(idarubicin)和表柔比星(epirubicin))、5-氟尿嘧啶、卡培他濱(capecitabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、地西他濱(decitabine)、5-氮雜胞苷、吉西他濱(gemcitabine)及甲胺蝶呤(methotrexate)。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與激酶抑制劑組合使用,所述激酶抑制劑包括(但不限於)埃羅替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、拉帕替尼(lapatanib)、依維莫司(everolimus)、西羅莫司(sirolimus)、坦羅莫司(temsirolimus)、LY2835219、LEEOl l、PD 0332991、克卓替尼(crizotinib)、卡博替尼(cabozantinib)、舒尼替尼(sunitinib、帕唑帕尼(pazopanib)、索拉非尼(sorafenib)、瑞格非尼(regorafenib)、阿西替尼(axitinib)、達沙替尼(dasatinib)、伊馬替尼(imatinib)、尼祿替尼(nilotinib)、維羅非尼(vemurafenib)、達拉菲尼(dabrafenib)、曲美替尼(trametinib)、艾德昔布(idelalisib)、度維昔布(duvelisib)、阿培昔布(alpelisib)、科帕昔布(copanlisib)及喹雜替尼(quizartinib)。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與抗***劑組合使用,所述抗***劑包括(但不限於)他莫昔芬(tamoxifen)、氟維司群(fulvestrant)、阿那曲唑(anastrozole)、來曲唑(letrozole)及依西美坦(exemestane)。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與抗雄激素劑組合使用,所述抗雄激素劑包括(但不限於)乙酸阿比特龍酯(abiraterone acetate)、恩雜魯胺(enzalutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、氟他胺(flutamide)、乙酸環丙孕酮(cyproterone acetate)。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與類固醇劑組合使用,所述類固醇劑包括(但不限於)強的松(prednisone)及***(dexamethazone)。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與拓撲異構酶I抑制劑組合使用,所述拓撲異構酶I抑制劑包括(但不限於)伊立替康(irinotecan)、喜樹鹼(camptothecin)及拓撲替康(topotecan)。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與拓撲異構酶II抑制劑組合使用,所述拓撲異構酶II抑制劑包括(但不限於)依託泊苷(etoposide)、磷酸依託泊苷(etoposide phosphate)及米托蒽醌(mitoxantrone)。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與組蛋白去乙醯基酶(HDAC)抑制劑組合使用,所述組蛋白去乙醯基酶(HDAC)抑制劑包括(但不限於)伏立諾他(vorinostat)、羅米地辛(romidepsin)、帕比司他(panobinostat)、丙戊酸(valproic acid)和貝林諾他(belinostat)。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與DNA甲基化抑制劑組合使用,所述DNA甲基化抑制劑包括(但不限於) DZNep及5-氮雜-2'-去氧胞苷。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與蛋白酶體抑制劑組合使用,所述蛋白酶體抑制劑包括(但不限於)硼替佐米(bortezomib)及卡非唑米(carfilzomib)。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與沙立度胺(thalidomide)、來那度胺及泊馬度胺(pomalidomide)組合使用。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與生物製劑組合使用,所述生物製劑包括(但不限於)曲妥珠單抗(trastuzumab)、阿多-曲妥珠單抗(ado-trastuzumab)、帕妥珠單抗(pertuzumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗(panitumumab)、伊派利單抗(ipilimumab)、抗PD-1劑(包括(但不限於)拉立珠單抗(labrolizumab)及尼沃單抗(nivolumab))、抗PD-L1劑(包括(但不限於) MPDL3280A)、抗血管生成劑(包括(但不限於)貝伐單抗(bevacizumab)及阿柏西普(aflibercept))、以及抗體-藥物共軛物(ADC)(包括貝倫妥單抗維多汀(brentuximab vedotin)、曲妥珠單抗德魯特坎(trastuzumab deruxtecan) (DS-8201)、及曲妥珠單抗恩他新(trastuzumab emtansine))。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與放射線療法組合使用。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與治療性疫苗組合使用,所述治療性疫苗包括(但不限於)西普魯塞-T (sipuleucel-T)。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與VEGF抑制劑組合使用,所述VEGF抑制劑包括(但不限於)帕唑帕尼(pazopanib)、貝伐單抗(bevacizumab)、卡博替尼(cabozantinib)、舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、阿西替尼(axitinib)、瑞格菲尼(regorafenib)、帕納替尼(ponatinib)、卡博替尼(cabozantinib)、凡德他尼(vandetanib)、雷莫蘆單抗(ramucirumab)、樂伐替尼(lenvatinib)、貝伐單抗(bevacizumab)及ziv-阿柏西普(ziv-aflibercept)。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與Akt抑制劑組合使用,所述Akt抑制劑包括(但不限於)AZD5363、米替福新(miltefosine)、哌立福新(perifosine)、VQD-002、MK-2206、GSK690693、GDC-0068、曲西立濱(triciribine)、CCT128930、PHT-427及厚朴酚(honokiol)。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與mTOR抑制劑組合使用,所述mTOR抑制劑包括(但不限於)西羅莫司(sirolimus)、坦西羅莫司(temsirolimus)、依維莫司(everolimus)、AP23841、AZD8055、BEZ235、BGT226、迪福莫司(deferolimus) (AP23573/MK-8669)、EM101/LY303511、EX2044、EX3855、EX7518、GDC0980、INK-128、KU-0063794、NV-128、OSI-027、PF-4691502、雷帕黴素類似物(rapalogs)、雷帕黴素(rapamycin)、瑞達莫司(ridaforolimus)、SAR543、SF1126、WYE-125132、XL765、佐他莫司(zotarolimus) (ABT578)、托林1 (torin 1)、GSK2126458、AZD2014、GDC-0349及XL388。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與PI3K抑制劑組合使用,所述PI3K抑制劑包括(但不限於)艾德昔布(idelalisib)、科帕昔布(copanlisib)、度維昔布(duvelisib)、阿培昔布(alpelisib)、NVP-BEZ235、BKM-120、GDC-0941、GDC-0980、SF1126、PX-866、PF-04691502、XL-765、XL-147、GSK2126458及ZSTK474。
在一些實施例中,式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與本文所述之一或多種其他試劑組合使用。實例
本發明之範疇不受意欲作為本發明幾個態樣之說明的實例中所揭示的特定實施例限制,且功能上等效的任何實施例均落入本發明之範疇內。實際上,除本文所示及所述之外,本發明之各種修改將為所屬領域技術人員顯而易見且欲落入所附申請專利範圍之範疇內。實例 1. 式 I 化合物對 R849W TIE2 突變體之生物化學抑制 R849W TIE2 之生化分析法 (Seq. ID No. 1)
R849W TIE2激酶之活性係藉由追蹤從經由與丙酮酸激酶/乳酸脫氫酶系統偶合之激酶反應產生的ADP來測定(例如Schindler等人,Science (2000) 289: 1938-1942)。在此測定法中,以分光光度測定法連續監測NADH的氧化(由此在A340nm
下會減少)。反應混合物(100 µL)含有R849W TIE2 (SignalChem) (7.5 nM)、BSA (0.004% (w/v))、polyEY (1 mg/ml)、MgCl2
(15 mM)、DTT (0.5 mM)、丙酮酸激酶(4個單位)、乳酸脫氫酶(7個單位)、磷酸烯醇丙酮酸(1 mM)及NADH (0.28 mM)及ATP (4 mM)於含有0.2%辛基-葡萄糖苷及1% DMSO的100 mM Tris緩衝液(pH 7.5)中。抑制反應係藉由將連續稀釋的測試化合物與以上反應混合物混合一起而啟動。在孔盤讀取器(BioTek)上於30 ºC下連續監測在340 nm下的吸收持續8小時。使用3至4小時時間範圍來計算反應速率。抑制百分比係藉由比較反應速率與對照(即無測試化合物)的反應速率來獲得。使用如GraphPad Prism套裝軟體中所執行的軟體常式,利用在一系列抑制劑濃度下所測定的一系列抑制百分比值計算IC50
值。本文所揭露之式I化合物展現0.9 nM的IC50
值。用於篩選之 R849W TIE2 蛋白序列 (Seq. ID No. 1)
QLKRANVQRRMAQAFQNVREEPAVQFNSGTLALNRKVKNNPDPTIYPVLDWNDIKFQDVIGEGNFGQVLKARIKKDGLWMDAAIKRMKEYASKDDHRDFAGELEVLCKLGHHPNIINLLGACEHRGYLYLAIEYAPHGNLLDFLRKSRVLETDPAFAIANSTASTLSSQQLLHFAADVARGMDYLSQKQFIHRDLAARNILVGENYVAKIADFGLSRGQEVYVKKTMGRLPVRWMAIESLNYSVYTTNSDVWSYGVLLWEIVSLGGTPYCGMTCAELYEKLPQGYRLEKPLNCDDEVYDLMRQCWREKPYERPSFAQILVSLNRMLEERKTYVNTTLYEKFTYAGIDCSAEEAA實例 2. 式 I 化合物對一組 TIE2 突變體之生物化學抑制 一組 TIE2 突變體及 WT TIE2 之生化分析法
將TIE2 WT或TIE2突變體(R849W、P883A、Y897C、Y897S、Y1108F或A1124V)及polyEY受質添加至反應緩衝液(20 mM Hepes pH 7.5,10 mM MgCl2
、2 mM MnCl2
、1 mM EGTA、0.02% Brij35、0.02 mg/ml BSA、0.1 mM Na3
VO4
、2 mM DTT、1% DMSO)。將化合物1添加至反應物中,隨後20分鐘之後添加ATP及33
P ATP之混合物至最終濃度為10 μM。反應係於25 °C下進行2小時。將反應物點至P81離子交換濾紙上且在0.75%磷酸中將未結合的磷洗出濾器。在減去源自含有非活性酶之對照反應的背景值後,激酶活性數據係呈現為該等測試樣本中剩餘之激酶活性與DMSO對照反應物相比下之百分比。使用如GraphPad Prism套裝軟體中所執行的軟體常式,利用在一系列抑制劑濃度下所測定的一系列抑制百分比值計算IC50
值。本文所揭露之式I化合物對於WT TIE2展現0.97 nM的IC50
值,對於R849W TIE2為1.3 nM,對於P883A TIE2為8.1 nM,對於Y897C TIE2為1.2 nM,對於Y897S TIE2為1.5 nM,對於Y1108F TIE2為8.4 nM,且對於A1124V TIE2為2.7 nM。實例 3. 式 I 化合物在 CHO 細胞中對 TIE2 突變體之細胞抑制 CHO-K1 細胞培養
CHO-K1細胞(目錄號CCL-61)係獲自美國典型培養物保存中心(ATCC, Manassas, VA)。簡言之,使細胞在RPMI 1640培養基(補充有10%特徵化胎牛血清(Invitrogen, Carlsbad, CA)、100 單位/mL盤尼西林G、100 µg/ml 鏈黴素、及0.29 mg/mL L-麩醯胺酸(Invitrogen, Carlsbad, CA))中、於37℃、5% CO2
及95%濕度下生長。允許細胞擴增直至達到70-95%群集,此時對其進行繼代培養或收集以供分析使用。突變型 TIE2 轉染的 CHO K1 磷酸化 -TIE2 西方墨點法
將CHO K1細胞(1 x 105
個細胞/孔)添加到24孔組織培養處理盤中之補充有10%經特性分析胎牛血清及1X非必需胺基酸的1 mL RPMI1640培養基(Invitrogen公司, Carlsbad, CA)內。接著將細胞在37℃、5% CO2
及95%濕度下培育過夜。抽吸培養基,且將0.5 mL培養基添加到各孔中。將編碼TIE2突變體R849W、L914F、R1099*、Y897C/R915C或Y897F/R915L之轉染級質體DNA(轉殖到pcDNA3.2™/V5-DEST表現載體之TIE2
基因Gateway,Invitrogen公司, Carlsbad, CA)在無血清的室溫Opti-MEM® I培養基(Invitrogen公司, Carlsbad, CA)中稀釋到5 µg/mL。每0.5 µg的質體DNA添加2 µL的Lipofectamine LTX試劑(Invitrogen公司, Carlsbad, CA)。輕輕地混合試管,且在室溫下培育25分鐘以使DNA-Lipofectamine LTX複合物形成。將100 µL的DNA-Lipofectamine LTX複合物直接添加到含有細胞的各孔中且輕輕地混合。轉染後二十四小時,抽吸含有DNA-Lipofectamine LTX複合物的培養基,用無血清的RPMI 1640洗滌細胞,且添加無血清的RPMI 1640。將測試化合物或DMSO添加到各孔中(0.5%最終DMSO濃度)。接著將孔盤在37℃、5% CO2
及95%濕度下培育4小時。在培育之後,抽吸培養基,且用PBS洗滌細胞。於4℃在搖晃之情況下使用含有Halt磷酸酶及蛋白酶抑制劑(Pierce, Rockford, IL)及磷酸酶抑制劑混合液2 (Sigma, St. Louis, MO)之MPER溶解緩衝液(Pierce, Rockford, IL)溶解細胞10分鐘。澄清的溶胞產物係通過SDS-PAGE在4-12% Novex NuPage Bis-Tris凝膠(Invitrogen公司, Carlsbad, CA)上分離,且接著轉移到Immobilon-FL PVDF。在轉移之後,將PVDF膜用Odyssey阻斷緩衝液(Li-cor公司, Lincoln, NE)阻斷,且接著用磷酸化-TIE2的兔抗體(EMD Millipore公司, Burlington, MA)及小鼠抗TIE2抗體(BD Pharmingen公司, San Jose, CA)探測。使用與近紅外光染劑(發射波長為800 nm)共軛的二級山羊抗兔抗體(Li-cor公司, Lincoln, NE)來檢測磷酸化-TIE2。使用與近紅外光染劑(發射波長為680 nm)共軛的二級山羊抗小鼠抗體(Li-cor公司, Lincoln, NE)來檢測總TIE2。使用Odyssey CL成像儀(Li-cor公司, Lincoln, NE)來檢測螢光。使用Image Studio軟體(Li-cor公司, Lincoln, NE)來定量160 kDa磷酸化-TIE2及總TIE2之條帶。資料係使用Prism軟體(GraphPad Software公司, San Diego, CA)分析以計算IC50
值。本文所揭露之式I化合物展現以下IC50
值:對於R849W TIE2為3.6 nM、對於L914F TIE2為0.58 nM、對於R1099* TIE2為0.41 nM、對於Y897C/R915C TIE2為1.2 nM、及對於Y897F/R915L TIE2為0.35 nM (圖 1A-E
)。實例 4. 式 I 化合物在人類臍靜脈內皮細胞中對 TIE2 突變體之細胞抑制 人類臍靜脈內皮細胞 (HUVEC) 培養
用於活體內作業之HUVEC係由Lauri Eklund博士(Oulu, Finland)惠予提供。簡言之,細胞係於含有10%胎牛血清(Sigma-Aldrich公司, Diegem, Belgium)之內皮細胞生長培養基(Tebu-Bio公司, Boechout, Belgium)中在37℃、5% CO2
及95%濕度下培育。允許細胞擴增直至達到90-95%群集,此時對其進行繼代培養或收集以供分析使用。突變型 TIE2 轉染的 HUVEC 西方墨點法
將穩定表現WT或TIE2突變體R849W、L914F、R1099*、Y897C/R915C、Y897F/F915L或T1105N/T1106P之HUVEC細胞(2.5 x 105
個細胞/孔)添加至覆有貼附因子溶液(Tebu-Bio公司, Boechout, Belgium)之6孔孔盤中之含有10%胎牛血清(Sigma-Aldrich公司, Diegem, Belgium)的2 mL內皮細胞生長培養基(Tebu-Bio公司, Boechout, Belgium)中。隨後將細胞在37℃、5% CO2
及95%濕度下培育過夜。第二天將測試化合物或DMSO添加到各孔(0.068%最終DMSO濃度)中。接著將孔盤在37℃、5% CO2
及95%濕度下培育4小時。接著,用1 µg/mL ANGPT1刺激細胞15分鐘。將細胞溶解且以西方墨點法檢測pTIE2、TIE2、β-肌動蛋白、pAKT (S473)、pAKT (T308)、AKT、pSTAT1及STAT1。本文所揭露之式I化合物濃度為100 nM時係於具有WT TIE2及TIE2突變體之HUVEC中在有或沒有ANGPT1的刺激下皆展現出完全抑制TIE2磷酸化(圖 2
)。本文所揭露之式I化合物濃度為100 nM時係於具有WT TIE2及TIE2突變體之HUVEC中在有或沒有ANGPT1的刺激下皆展現出完全抑制TIE2下游的AKT Ser473及Thr308磷酸化(圖 3
)。本文所揭露之式I化合物濃度為100 nM時係於具有WT TIE2及TIE2突變體之HUVEC中在有或沒有ANGPT1的刺激下皆展現出完全抑制TIE2下游的STAT1磷酸化(圖 4
)。實例 5. 式 I 化合物在 TIE2 突變型人類臍靜脈內皮細胞中對於細胞形態的恢復 突變型 TIE2 轉染的 HUVEC 細胞形態測定法
將穩定表現WT或TIE2突變體R849W、L914F、R1099*、Y897C/R915C、Y897F/F915L或T1105N/T1106P之HUVEC細胞(5 x 105
個細胞/孔)添加至覆有貼附因子溶液(Tebu-Bio公司, Boechout, Belgium)之10公分培養盤中之含有10%胎牛血清(Sigma-Aldrich公司, Diegem, Belgium)的6 mL內皮細胞生長培養基(Tebu-Bio公司, Boechout, Belgium)中。接著將細胞在37℃、5% CO2
及95%濕度下培育2天。接著,將測試化合物或DMSO添加到各孔(0.068%最終DMSO濃度)中。接著將培養盤在37℃、5% CO2
及95%濕度下另外培育48小時。在添加化合物後的24及48小時通過顯微鏡對細胞進行成像。本文所揭露之式I化合物濃度為100 nM時係於TIE2突變型HUVEC細胞中將細胞形態恢復到與表現WT TIE2的HUVEC細胞相當。圖 5A
顯示表現WT TIE2或L914F TIE2之HUVEC細胞在未經處理、以DMSO對照處理、或以100 nM化合物處理48小時後的細胞形態。圖 5B
顯示表現R849W TIE2之HUVEC細胞在未經處理、以DMSO對照處理、或以100 nM化合物處理48小時後的細胞形態。圖 5C
顯示表現R1099* TIE2之HUVEC細胞在未經處理、以DMSO對照處理、或以100 nM化合物處理48小時後的細胞形態。圖 5D
顯示表現Y897C/R915C TIE2之HUVEC細胞在未經處理、以DMSO對照處理、或以100 nM化合物處理48小時後的細胞形態。圖 5E
顯示表現Y897C/R915L TIE2之HUVEC細胞在未經處理、以DMSO對照處理、或以100 nM化合物處理48小時後的細胞形態。圖 5F
顯示表現T1105N/T1106P TIE2之HUVEC細胞在未經處理、以DMSO對照處理、或以100 nM化合物處理48小時後的細胞形態。實例 6. 式 I 化合物在 TIE2 突變型人類臍靜脈內皮細胞中對於 RNA 表現的效果 突變型 TIE2 轉染的基因表現測定法
將穩定表現WT或TIE2突變體R849W、L914F、R1099*、Y897C/R915C、Y897F/F915L或T1105N/T1106P之HUVEC細胞(5 x 105
個細胞/孔)添加至覆有貼附因子溶液(Tebu-Bio公司, Boechout, Belgium)之10公分培養盤中之含有10%胎牛血清(Sigma-Aldrich公司, Diegem, Belgium)的內皮細胞生長培養基(Tebu-Bio公司, Boechout, Belgium)中。接著將細胞在37℃、5% CO2
及95%濕度下培育2天。接著,將測試化合物或DMSO添加到各孔(0.068%最終DMSO濃度)中。接著將培養盤在37℃、5% CO2
及95%濕度下另外培育48小時。藉由將細胞收集到TriPure分離試劑(Sigma-Aldrich公司, Diegem, Belgium)內來萃取RNA。隨後,使用RevertAid H Minus第一鏈cDNA合成套組(Thermo Fischer Scientific公司, Merelbeke, Belgium)從萃取的RNA合成cDNA。使用LightCycler480 SYBRGreen預混液及LightCycler 480 II儀器(Roche公司, Switzerland)進行定量PCR。對ANGPT2、PDGFB、ADAMTS1、ADAMTS9、PLAT及PLAU之cDNA定量且以持家基因GAPDH的表現進行歸一化。本文所揭露之式I化合物濃度為100 nM時引起了編碼TIE2配位體之ANGPT2 RNA的表現增加,且在TIE2突變細胞中異常地下調。本文所揭露之式I化合物濃度為100 nM時係亦引起了編碼PDGFRB配位體之PDGFB RNA的表現增加,且在TIE2突變細胞中異常地下調。本文所揭露之式I化合物濃度為100 nM時係亦引起了編碼胞外金屬蛋白分解酶之ADAMTS1及ADAMTS9 RNA的表現減少,而其表現於突變型TIE2轉染細胞中係異常地上調。本文所揭露之式I化合物濃度為100 nM時係亦引起了編碼血纖維蛋白溶酶原活化子之PLAT及PLAU RNA的表現減少,而其表現於突變型TIE2轉染細胞中係異常地上調。圖 6A
顯示表現WT TIE2、L914F TIE2、R849W TIE2及R1099* TIE2之HUVEC細胞的ANGPT2及PDGFB RNA表現。圖 6B
顯示表現WT TIE2、L914F TIE2、Y897C/R915C TIE2、Y897C/R915L TIE2及T1105N/T1106P TIE2之HUVEC細胞的ANGPT2及PDGFB RNA表現。圖 6C
顯示表現WT TIE2、L914F TIE2、R849W TIE2及R1099* TIE2之HUVEC細胞的ADAMSTS1及ADAMSTS9 RNA表現。圖 6D
顯示表現WT TIE2、L914F TIE2、Y897C/R915C TIE2、Y897C/R915L TIE2及T1105N/T1106P TIE2之HUVEC細胞的ADAMSTS1及ADAMSTS9 RNA表現。圖 6E
顯示表現WT TIE2、L914F TIE2、R849W TIE2及R1099* TIE2之HUVEC細胞的PLAT及PLAU RNA表現。圖 6F
顯示表現WT TIE2、L914F TIE2、Y897C/R915C TIE2、Y897C/R915L TIE2及T1105N/T1106P TIE2之HUVEC細胞的PLAT及PLAU RNA表現。實例 6. 式 I 化合物在 TIE2 突變型人類臍靜脈內皮細胞中對於胞外纖維接合素之恢復 突變型 TIE2 轉染的纖維接合素測定法
將穩定表現WT或TIE2突變體R849W、L914F、R1099*、Y897C/R915C、Y897F/F915L或T1105N/T1106P之HUVEC細胞(3 x 105
個細胞/孔)添加至覆有貼附因子溶液(Tebu-Bio公司, Boechout, Belgium)之6孔孔盤中之含有10%胎牛血清(Sigma-Aldrich公司, Diegem, Belgium)的內皮細胞生長培養基(Tebu-Bio公司, Boechout, Belgium)中。接著將細胞在37℃、5% CO2
及95%濕度下培育24小時。接著,將測試化合物或DMSO添加到各孔(0.068%最終DMSO濃度)中。接著將孔盤在37℃、5% CO2
及95%濕度下另外培育48小時。將細胞轉換到2% FBS中過夜。在轉染體中的胞內纖維接合素含量較低,因此收集細胞溶胞產物作為對照組。至於細胞殘留物,將孔盤用含有0.05% Triton-X及50 nM NH4
OH之1X PBS洗滌,隨後用50 mM之1X PBS洗滌,接著用1X PBS洗滌三次;接著用具有6.5M尿素之溶解緩衝液(9.1 mM Na2
HPO4
、1.7 mM NaH2
PO4
、1% NP-40、0.25%去氧膽酸鈉、150 mM NaCl、0.1% SDS、1mM EDTA)萃取胞外基質蛋白。如圖7所示,在DMSO處理的情況下,於TIE2突變體之胞外基質中看到比WT萃取物(上面的斑點)較低的纖維接合素含量。細胞溶胞產物中的纖維接合素含量係與對照組中的相當。本文所揭露之式I化合物濃度為100 nM時恢復了表現TIE2突變體之HUVEC細胞之胞外基質中的纖維接合素含量,導致了與表現WT TIE2之細胞相似的含量(圖 7
)。實例 7. 式 I 化合物在靜脈畸形模型中對活體內之突變型 TIE2 人類臍靜脈內皮細胞之生長的抑制 靜脈畸形小鼠模型評估
對於活體內模型,使用慢病毒感染來製作新的轉染體。簡言之,將2 x 106
個HEK293細胞塗在10公分的培養皿上24小時,進行胰蛋白酶化,接著以含有pGAG-Pol、pRSV-Rev、pMD2.VSVG、慢病毒載體pTM945、2.5 µg的pTIE2-L914F、CaCl2
(Merck公司, UK)、及2x HBS (Thermo Fischer Scientific公司, Merelbeke, Belgium)之混合物培育20分鐘。將1.5 ml的細胞塗在24孔孔盤中且培育48小時。隨後,以每孔25,000個HUVEC (LGC Standards sarl公司, France)在24孔孔盤上生長24小時,以500 µl的慢病毒-TIE2-L914F進行感染,接著另外培育48小時,收集,接著冷凍。
為了評估該化合物在活體內對於血管畸形(VM)病變的發展,將表現TIE2-L914F之HUVEC細胞(2.5 x 106
)培育、脫附、且接著再懸浮於200 µL 基質膠(Corning公司)中。將該混合物皮下注射到5-7週齡之雄性無胸腺裸鼠(Charles River公司)的背側背部中。在注射當天(第0天),給予小鼠對照飲食或注入10 mg/kg相等濃度化合物I的飲食;一旦引入,小鼠可以自由飲食,直到植入日後第7或16天採集基質膠塞的時點為止(圖 8A
)。在植入日後第7或16天,將小鼠安樂死並切開各個基質膠塞周圍的皮膚,接著平放在聚苯乙烯發泡板上並在10%中性福馬林緩衝溶液(Sigma-Aldrich, Diegem, Belgium)中固定過夜。將基質膠塞從鼠皮移除,在一系列級配乙醇中脫水,並包埋在石蠟中。接著將包埋在石蠟中的基質膠塞切成5 µm切片進行組織學分析。在二甲苯中脫蠟並在一系列遞降的乙醇中再水合之後,將切片在含有或不含0.05% Tween-20的0.1 M檸檬酸鹽緩衝液(pH 6.0)中進行熱誘導的抗原修復。對於免疫組織化學染色,切片係以3% H2
O2
(Sigma-Aldrich公司, Diegem, Belgium)進行阻斷,與抗人類內皮細胞標誌物荆豆凝集素(Ulex Europaeus Agglutinin) 1 (UEA1) (Vector labs, Brussels, Belgium)之經生物素化抗體一起培育,隨後與辣根過氧化物酶共軛的卵白素二級抗體(GE Healthcare公司, Diegem, Belgium)一起培育,接著在DAB溶液(Vector labs公司, Brussels, Belgium)中培育。將切片用蘇木素進行複染,並以VectaMount永久封埋介質(Vector labs公司, Brussels, Belgium)進行封固。對於免疫螢光染色(IF),將切片與會辨識UEA1、平滑肌層標誌物SMA (殖株1A4, Sigma-Aldrich公司, Diegem, Belgium)、經磷酸化-TIE2(Y772) (Bioke公司, Leiden, Netherlands)、或總TIE2 (Santa Cruz公司, Heidelberg, Germany)之一級抗體一起培育。所使用的二級抗體係與Alexa488-、Alexa649-或CY5-螢光團共軛。將載玻片用VectaShield Hardset封埋介質與DAPI (Vector labs公司, Brussels, Belgium)進行封固。經由Panoramic 250 Flash III數位玻片掃描器(3D Histech公司, Hungary)獲得影像,並用Caseviewer 2.2版軟體(3D Histech公司, Hungary)進行視覺化。平均血管面積係藉由各個基質膠塞的至少5個區域在20x接物鏡下製作快照,並使用ImageJ軟體分別測量至少6個UEA+血管的面積而進行量化。
在圖 8B
中,所採集的病變之肉眼可見視圖顯示,在餵養正常或對照飲食的小鼠中於植入後第7天(D7)確立有充血的靜脈通道且在第16天發展得更嚴重。一些餵養含有式I化合物之飲食的小鼠在基質膠塞內並未發展出任何病變;與未經治療的突變體相比下,已確實形成之充血血管通道似乎受到更多控制且不那麼嚴重。圖 9
係顯示來自在植入後7天之給予對照飲食的小鼠的基質膠塞之UEA1染色代表影像中之擴大的靜脈通道及紊亂的內皮細胞(EC)斑塊。然而,在來自經式I化合物治療小鼠之基質膠塞內,擴張的血管形成則不那麼嚴重。有證據表明,UEA1+ EC團簇的遷移性係比對照組中的更高。也有若干未血管化的UEA1+細胞。另外,採自經以式I化合物治療之小鼠之基質膠塞內的血管平均面積係大大低於餵養對照飲食之小鼠的。
VM病變的其中一種標誌為不良且不一致之擴張靜脈通道的平滑肌細胞/外被細胞覆蓋率。於圖 10
中,在餵食對照飲食的小鼠中之病變的IF染色顯示出血管周圍沒有陽性SMA細胞或很少。在餵食式I化合物的小鼠中則顯示出有一些SMA陽性細胞但並非在EC層周圍的所有細胞中。來自餵食對照及式I化合物飲食之小鼠之所有血管的EC皆強烈表現出總TIE2;同樣地,在餵食對照飲食之小鼠中之所有EC似乎表現經磷酸化的TIE2 (pTIE2),如圖 11
中所顯現。在給予式I化合物飲食之小鼠之EC中的pTIE2表現似乎較弱。
到植入後第16天,基質膠內的病變已嚴重擴大,儘管看到了一些變異性,可能更多是由於技術/操作的問題(例如細胞與基質膠的非均質混合物)引起的(圖 12
)。餵食對照飲食之小鼠發展出與未經治療之小鼠相當的病變,但餵食式I化合物飲食之小鼠顯示出小得多的血管。在未經治療及餵食對照飲食之小鼠內,第16天的培植體發展出擴大的血管通道,且所述血管稀疏地被平滑肌層及少量SMA+細胞包圍。相反地,在餵食式I化合物之化合物中,血管似乎正常化且更一致地被SMA+細胞所包圍(圖 13
)。圖 14
顯示出未經治療之小鼠中的EC強烈表現pTIE2。然而,在餵食式I化合物之小鼠中,pTIE2係大大降低。
為評估培植體內之整體形態,進行基質膠塞內之血管全形包埋IF。在切開附著有基質膠塞的皮膚之後,將其在10%中性福馬林緩衝溶液中平置固定隔夜,將大約100-200 μm的基質膠塞片切成薄片,且在1X PBS中洗滌。切片係以1% BSA (v/v) (Gibco公司)與0.3% Triton-X100 (Sigma-Aldrich公司, Diegem, Belgium)之1X PBS溶液進行阻斷,接著在UEA1中培育至少72小時,隨後在CY5-卵白素二級抗體中(Vector labs公司, Brussels, Belgium)培育。接著將切片在10% NBF中進行後固定10分鐘,接著以螢光封固劑G (Fluormount G) (Thermo Fischer Scientific, Merelbeke, Belgium)封埋。以Zeiss細胞觀測轉盤式共軛焦顯微鏡(Zeiss公司, Germany)獲得Z軸堆疊影像;通過AriVis4D軟體產生Z軸堆疊影像的3D投影。圖 15
顯示出餵食對照飲食的小鼠中,形成在基質膠塞內之血管在植入後第7天及第16天係皆異常伸長且絮亂。在第7天。採自餵食式I化合物之小鼠之培植體中看到擴張的且群聚的血管;然而,看到更正常且呈管狀的血管。也看到許多未經血管化之UEA+細胞;要注意的是,這與TIE2-WT細胞在注入時展現的模式相同。在第16天,血管似乎在很大程度上正常化,具有均勻的管狀結構。也存在有未經血管化之UEA+細胞但其表現降低。也對第16天之具有野生型與L914F TIE2突變體之經治療與未經治療VM病變進行了比較,其中治療係於第0天(圖 18A-D
)或第7天(圖 19A-C
)開始。此數據支持了用注入有式I化合物之食物餵養患有VM之小鼠會導致VM的發展性降低,且支持了向確立有VM之小鼠餵養式I化合物減輕了VM之嚴重性。
為評估式I化合物對於先前確立的VM病變具有效果,依循了相同方法產生VM小鼠。然而,改為在在植入後第7天對小鼠引入對照或式I化合物飲食;接著,將小鼠安樂死且在第16天採集培植體(圖 16A
)。全部的實驗族群中皆發展出充血的血管通道,儘管嚴重程度差異很大(圖 16B
)。來自餵食對照飲食之小鼠之第16天的培植體內之血管平均脈管面積係與對照小鼠的相當,如圖 17A-B
中所顯示。來自餵食式I化合物飲食之小鼠的血管平均脈管面積係適度降低。來自餵食式I化合物飲食之小鼠的病變展現出平滑肌細胞層覆蓋率改善,與餵食對照飲食之小鼠的相當,這表明有增強的外被細胞穩定度及血管成熟度。圖 19A-D
亦繪示第16天之具有野生型與L914F TIE2突變體之經治療與未經治療之VM病變的部分比較,其中治療係於植入後第7天開始。此數據支持了向確立有VM之小鼠餵養式I化合物減輕了VM之嚴重性。等效物
所屬領域技術人員將頂多使用常規實驗即可認識到或能夠確定尤其在本文中所述之特定實施例的許多等效物。這類等效物意欲涵蓋在隨附申請專利範圍的範疇中。
圖1A-E顯示在使用經轉染之CHO細胞的測定法中使用式I化合物抑制各種TIE2突變型(分別為R849W、L914F、R1099*、Y897C/R915C及Y897F/R915L)的磷酸化。
圖 2
顯示在使用經轉染之人類臍靜脈內皮細胞的測定法中使用式I化合物抑制各種TIE2突變型的磷酸化。
圖 3
顯示在使用經轉染之人類臍靜脈內皮細胞及各種TIE2突變型的測定法中使用式I化合物抑制下游信息傳遞蛋白AKT的磷酸化。
圖 4
顯示在使用經轉染之人類臍靜脈內皮細胞及各種TIE2突變型的測定法中使用式I化合物抑制下游信息傳遞蛋白STAT1的磷酸化。
圖 5A-F
顯示在使用經轉染之人類臍靜脈內皮細胞及各種TIE2突變型(分別為WT或L914F、R849W、R1099*、Y897C/R915C、Y897C/R915L及T1105N/T1106P)的測定法中使用式I化合物恢復細胞的形態。
圖 6A-F
顯示在使用經轉染之人類臍靜脈內皮細胞及各種TIE2突變型的測定法中使用式I化合物表現ANGPT2、PDGFB、ADAMTS1、ADAMTS9、PLAT及PLAU的效果。
圖 7
顯示在使用經轉染之人類臍靜脈內皮細胞及各種TIE2突變型的測定法中使用式I化合物恢復胞外纖維接合素。
圖 8A
顯示實例10中所述之實驗設計之示意圖,其係用以在靜脈畸形模型中通過式I化合物評估活體內之突變型TIE2人類臍靜脈內皮細胞之生長的抑制,其中在第0天係給予小鼠對照飲食或注入式I化合物的飲食。
圖 8B
顯示式I化合物在第7天於靜脈畸形的活體內模型中對於突變型TIE2血管病變之眼觀外型的效果。
圖 9
顯示式I化合物在第7天於靜脈畸形的活體內模型中對於突變型TIE2血管病變之尺寸的效果。
圖 10
顯示式I化合物在第7天於靜脈畸形的活體內模型中對於突變型TIE2血管病變之平滑肌細胞及外被細胞覆蓋率的效果。
圖 11
顯示式I化合物在第7天於靜脈畸形的活體內模型中對於突變型TIE2血管病變中之TIE2之磷酸化的效果。
圖 12
顯示式I化合物在第16天於靜脈畸形的活體內模型中對於突變型TIE2血管病變之尺寸的效果。
圖 13
顯示式I化合物在第16天於靜脈畸形的活體內模型中對於突變型TIE2血管病變之平滑肌細胞及外被細胞覆蓋率的效果。
圖 14
顯示式I化合物在第16天於靜脈畸形的活體內模型中對於突變型TIE2血管病變中之TIE2之磷酸化的效果。
圖 15
顯示式I化合物在第7及16天於靜脈畸形的活體內模型中對於突變型TIE2血管病變之血管形態的效果。
圖 16A
顯示實例10中所述之實驗設計之示意圖,其係用以在靜脈畸形模型中通過式I化合物評估活體內之突變型TIE2人類臍靜脈內皮細胞之生長的抑制,其中在第7天係給予小鼠對照飲食或注入式I化合物的飲食。
圖 16B
顯示式I化合物於靜脈畸形的活體內模型中對於先前確立之突變型TIE2血管病變之眼觀外型的效果。
圖 17A-B
顯示式I化合物於靜脈畸形的活體內模型中對於先前確立之突變型TIE2血管病變之尺寸以及對於突變型TIE2血管病變之平滑肌細胞及外被細胞覆蓋率的效果。
圖 18A-D
係比較式I化合物從注射日(第0天)至第7天之對於表現野生型及L914F TIE2突變型之血管畸形(VM)病變的效果。通過肉眼可見的(圖 18A
)及顯微鏡的(圖 18B
)影像以及血管脈管面積的量化(圖 18C
及圖 18D
),將使用式I化合物飲食的治療與使用對照飲食的治療以及未經治療的VM病變進行比較。
圖 19A-C
係提供從注射日(第0天)至第16天,或從第7天至第16天之表現野生型及L914F TIE2突變型之血管畸形(VM)病變的治療比較。包括了未經治療的VM病變以及使用式I化合物飲食與對照飲食治療之表現TIE2 L914F的VM病變之顯微鏡視圖比較(圖 19A
),以及在表現TIE2野生型或L914F的病變中之血管脈管面積的量化(圖 19B
及圖 19C
)。
Claims (39)
- 如請求項1之方法,其中該醫藥學上可接受之鹽為甲苯磺酸鹽。
- 如請求項1之方法,其中該TIE2激酶介導之血管異常或TIE2激酶突變體介導之血管異常為慢血流型畸形。
- 如請求項3之方法,其中該慢血流型畸形係選自微血管畸形、***畸形或靜脈畸形。
- 如請求項4之方法,其中該慢血流型畸形為靜脈畸形。
- 如請求項1之方法,其包含向該患者投與式I化合物每天一次、間歇非每天一次、每隔一天一次,每隔兩天一次、每隔一週一次、每天兩次、每週一次或每週兩次。
- 如請求項1之方法,其包含每天向該患者投與約57 mg至約1200 mg之式I化合物。
- 如請求項1之方法,其包含每天向該患者投與約100 mg之式I化合物。
- 如請求項1之方法,其包含向該患者投與約150、200或300 mg之式I化合物每天一次或兩次。
- 如請求項1或10之方法,其進一步包含向該患者投與一第二治療劑。
- 如請求項11之方法,其中該第二治療劑為VEGF抑制劑。
- 如請求項12之方法,其中該VEGF抑制劑係選自帕唑帕尼(pazopanib)、貝伐單抗(bevacizumab)、卡博替尼(cabozantinib)、舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、阿西替尼(axitinib)、瑞格菲尼(regorafenib)、帕納替尼(ponatinib)、卡博替尼(cabozantinib)、凡德他尼(vandetanib)、雷莫蘆單抗(ramucirumab)、樂伐替尼(lenvatinib)、貝伐單抗(bevacizumab)及ziv-阿柏西普(ziv-aflibercept)。
- 如請求項11之方法,其中該第二治療劑為Akt抑制劑。
- 如請求項14之方法,其中該Akt抑制劑係選自AZD5363、米替福新(miltefosine)、哌立福新(perifosine)、VQD-002、MK-2206、GSK690693、GDC-0068、曲西立濱(triciribine)、CCT128930、PHT-427及厚朴酚(honokiol)。
- 如請求項11之方法,其中該第二治療劑為mTOR抑制劑。
- 如請求項16之方法,其中該mTOR抑制劑係選自西羅莫司(sirolimus)、坦西羅莫司(temsirolimus)、依維莫司(everolimus)、AP23841、AZD8055、BEZ235、BGT226、迪福莫司(deferolimus) (AP23573/MK-8669)、EM101/LY303511、EX2044、EX3855、EX7518、GDC0980、INK-128、KU-0063794、NV-128、OSI-027、PF-4691502、雷帕黴素類似物(rapalogs)、雷帕黴素(rapamycin)、瑞達莫司(ridaforolimus)、SAR543、SF1126、WYE-125132、XL765、佐他莫司(zotarolimus) (ABT578)、托林1 (torin 1)、GSK2126458、AZD2014、GDC-0349及XL388。
- 如請求項11之方法,其中該第二治療劑為PI3K抑制劑。
- 如請求項18之方法,其中該PI3K抑制劑係選自艾德昔布(idelalisib)、科帕昔布(copanlisib)、度維昔布(duvelisib)、阿培昔布(alpelisib)、NVP-BEZ235、BKM-120、GDC-0941、GDC-0980、SF1126、PX-866、PF-04691502、XL-765、XL-147、GSK2126458及ZSTK474。
- 如請求項20之化合物之用途,其中該醫藥學上可接受之鹽為甲苯磺酸鹽。
- 如請求項20之化合物之用途,其中該TIE2激酶介導之血管異常或TIE2激酶突變體介導之血管異常為慢血流型畸形。
- 如請求項22之化合物之用途,其中該慢血流型畸形係選自微血管畸形、***畸形或靜脈畸形。
- 如請求項23之化合物之用途,其中該慢血流型畸形為靜脈畸形。
- 如請求項20之化合物之用途,其中該化合物係該患者投與每天一次、間歇非每天一次、每隔一天一次,每隔兩天一次、每隔一週一次、每天兩次、每週一次或每週兩次。
- 如請求項20之化合物之用途,其中該患者係經每天投與約57 mg至約1200 mg之式I化合物。
- 如請求項20之化合物之用途,其中該患者係經每天投與約100 mg之式I化合物。
- 如請求項20之化合物之用途,其中該患者係經投與約150、200或300 mg之式I化合物每天一次或兩次。
- 如請求項20之化合物之用途,其進一步包含向該患者投與一第二治療劑。
- 如請求項29之化合物之用途,其中該第二治療劑為VEGF抑制劑。
- 如請求項30之化合物之用途,其中該VEGF抑制劑係選自帕唑帕尼(pazopanib)、貝伐單抗(bevacizumab)、卡博替尼(cabozantinib)、舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、阿西替尼(axitinib)、瑞格菲尼(regorafenib)、帕納替尼(ponatinib)、卡博替尼(cabozantinib)、凡德他尼(vandetanib)、雷莫蘆單抗(ramucirumab)、樂伐替尼(lenvatinib)、貝伐單抗(bevacizumab)及ziv-阿柏西普(ziv-aflibercept)。
- 如請求項29之化合物之用途,其中該第二治療劑為Akt抑制劑。
- 如請求項32之方法,其中該Akt抑制劑係選自AZD5363、米替福新(miltefosine)、哌立福新(perifosine)、VQD-002、MK-2206、GSK690693、GDC-0068、曲西立濱(triciribine)、CCT128930、PHT-427及厚朴酚(honokiol)。
- 如請求項29之化合物之用途,其中該第二治療劑為mTOR抑制劑。
- 如請求項34之化合物之用途,其中該mTOR抑制劑係選自西羅莫司(sirolimus)、坦西羅莫司(temsirolimus)、依維莫司(everolimus)、AP23841、AZD8055、BEZ235、BGT226、迪福莫司(deferolimus) (AP23573/MK-8669)、EM101/LY303511、EX2044、EX3855、EX7518、GDC0980、INK-128、KU-0063794、NV-128、OSI-027、PF-4691502、雷帕黴素類似物(rapalogs)、雷帕黴素(rapamycin)、瑞達莫司(ridaforolimus)、SAR543、SF1126、WYE-125132、XL765、佐他莫司(zotarolimus) (ABT578)、托林1 (torin 1)、GSK2126458、AZD2014、GDC-0349及XL388。
- 如請求項32之化合物之用途,其中該第二治療劑為PI3K抑制劑。
- 如請求項36之化合物之用途,其中該PI3K抑制劑係選自艾德昔布(idelalisib)、科帕昔布(copanlisib)、度維昔布(duvelisib)、阿培昔布(alpelisib)、NVP-BEZ235、BKM-120、GDC-0941、GDC-0980、SF1126、PX-866、PF-04691502、XL-765、XL-147、GSK2126458及ZSTK474。
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