TW202116353A - 使用酞菁染料靶向分子結合物之治療方法 - Google Patents

使用酞菁染料靶向分子結合物之治療方法 Download PDF

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Abstract

本文提供用於治療具有腫瘤或病灶之個體的組合物、組合及方法及用途，該腫瘤或病灶包括對先前治療性治療、例如先前免疫檢查點抑制劑治療無反應或有抗性之彼等。在一些態樣中，該等方法包括向該個體投與接合與酞菁染料(例如IR700)結合之CTLA-4的靶向分子。在一些情形下，該等方法包括投與免疫調節劑。用適於活化該結合物之該酞菁染料之波長的光照射該腫瘤或病灶，在一些情形下第一腫瘤。所提供方法及用途提供腫瘤及腫瘤細胞(包括原發性腫瘤、轉移性腫瘤細胞及/或侵襲性腫瘤細胞)之生長抑制、體積減小及消除。亦提供用於激發或增強全身及局部免疫反應及用於對抗腫瘤生長之協同反應的組合物、組合、方法及用途。

Description

使用酞菁染料靶向分子結合物之治療方法
本發明係關於用於治療具有腫瘤或病灶(包括對先前治療性治療(例如先前免疫檢查點抑制劑治療)無反應或有抗性之彼等)之個體的組合物、組合及方法及用途。在一些態樣中，該等方法包括向該個體投與靶向分子，該靶向分子接合與酞菁染料(例如IR700)結合之CTLA-4。在一些情形下，該等方法包括投與免疫調節劑。用適於活化該結合物之該酞菁染料之波長的光照射該腫瘤或病灶、在一些情形下第一腫瘤。本文所述方法及用途提供腫瘤及腫瘤細胞(包括原發性腫瘤、轉移性腫瘤細胞及/或侵襲性腫瘤細胞)之生長抑制、體積減小及消除。本揭示內容亦係關於在患有癌症(例如包含第一腫瘤、轉移性腫瘤細胞及/或侵襲性腫瘤細胞之癌症)之個體中用於激發或增強全身及局部免疫反應及用於針對腫瘤生長之協同反應的組合物、組合、方法及用途。
每年開發許多治療癌症之治療劑，包括免疫檢查點抑制劑、小分子靶向療法及其他抗癌治療劑。然而，一些患者對彼等治療劑無反應，且大多數癌症患者最終會對其在治療過程中接受之治療劑無反應或產生抗性，從而導致疾病進展及癌症相關死亡。迫切需要新穎組合物及方法來應對該等臨床挑戰。
本文提供治療腫瘤或病灶之方法。在任何實施例中之一些中，該等方法包括鑑別具有對先前治療性治療無反應之腫瘤或病灶的個體。在任何實施例中之一些中，該等方法包括向該個體投與包括連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至細胞毒性T-淋巴球相關蛋白4 (CTLA-4)。在任何實施例中之一些中，在投與該結合物後，該等方法包括以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射腫瘤或病灶。在任何實施例中之一些中，該等方法可另外包括向個體投與第一免疫調節性療法。在任何實施例中之一些中，個體中腫瘤或病灶之生長及/或體積增加受到抑制或減少。
本文提供治療腫瘤或病灶之方法，其包括：鑑別具有對先前治療性治療無反應之腫瘤或病灶的個體；向該個體投與包括連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4；及在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射腫瘤或病灶；其中個體中腫瘤或病灶之生長及/或體積增加受到抑制或減少。
本文提供治療腫瘤或病灶之方法，其包括：鑑別具有對先前治療性治療無反應之腫瘤或病灶的個體；向該個體投與包括連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4；在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射腫瘤或病灶；及向個體投與第一免疫調節性療法；其中個體中腫瘤或病灶之生長及/或體積增加受到抑制或減少。
在任何實施例中之一些中，先前治療性治療包括用免疫調節劑、免疫檢查點抑制劑、抗癌劑、針對阻抑細胞起作用之治療劑及其任何組合的治療。在任何實施例中之一些中，先前治療性治療包括用PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、CTLA-4抑制劑或其任一組合之治療。
在任何實施例中之一些中，先前治療性治療包括用抗體或抗體之抗原接合片段之治療。在任何實施例中之一些中，抗體或抗原接合片段接合至PD-1、CTLA-4或PD-L1。
在任何實施例中之一些中，第一免疫調節性療法係在投與結合物之前投與。在任何實施例中之一些中，第一免疫調節性療法係在投與結合物之前約1-3週投與。在任何實施例中之一些中，第一免疫調節性療法係在投與結合物之前投與1次、2次、3次、4次、5次或超過5次。
在任何實施例中之一些中，第一免疫調節性療法與投與結合物同時投與。
在任何實施例中之一些中，第一免疫調節性療法係在投與結合物之後投與。在任何實施例中之一些中，第一免疫調節性療法係在投與結合物之後投與1次、2次、3次、4次、5次或超過5次。在任何實施例中之一些中，第一免疫調節性療法係在投與結合物之後約1天與4週之間投與。
在任何實施例中之一些中，第一免疫調節性療法係在投與結合物之前投與且在投與結合物之後再投與至少一次。在任何實施例中之一些中，第一免疫調節性療法係在投與結合物之前投與1次、2次或3次。在任何實施例中之一些中，第一免疫調節性療法係在投與結合物之前約1-3週投與。
在任何實施例中之一些中，第一免疫調節性療法係用於增強先天活化之佐劑或用於增強適應性活化之佐劑。在任何實施例中之一些中，第一免疫調節性療法係T細胞激動劑。
本文亦提供治療對用先前免疫檢查點抑制劑之治療有抗性之腫瘤或病灶的方法。在任何實施例中之一些中，該等方法包括：鑑別對用先前免疫檢查點抑制劑之治療無反應或有抗性的腫瘤或病灶。在任何實施例中之一些中，該等方法包括：向該個體投與包括連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4。在任何實施例中之一些中，該等方法包括：在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射腫瘤或病灶。在任何實施例中之一些中，該等方法包括另外投與第一免疫檢查點抑制劑。在任何實施例中之一些中，腫瘤或病灶對該第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。
本文亦提供治療對用先前免疫檢查點抑制劑之治療有抗性之腫瘤或病灶的方法，其包括：鑑別對用先前免疫檢查點抑制劑之治療無反應或有抗性之個體中的腫瘤或病灶；向該個體投與包括連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4；及在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射腫瘤或病灶，其中腫瘤或病灶對該第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。
本文亦提供治療對用先前免疫檢查點抑制劑之治療有抗性之腫瘤或病灶的方法，其包括：鑑別對用先前免疫檢查點抑制劑之治療無反應或有抗性之個體中的腫瘤或病灶；向該個體投與包括連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4；在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射腫瘤或病灶；及投與第一免疫檢查點抑制劑，其中腫瘤或病灶對該第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。
在任何實施例中之一些中，先前免疫檢查點抑制劑選自由以下組成之群：PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或CTLA-4抑制劑。
在任何實施例中之一些中，個體之第二腫瘤或病灶未經照射，且其中第二腫瘤或病灶對投與第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。在任何實施例中之一些中，個體具有轉移性腫瘤細胞且其中轉移性腫瘤細胞對投與該第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。
在任何實施例中之一些中，敏感性包括腫瘤生長之減少或抑制、腫瘤細胞轉移之減少、腫瘤細胞殺死之增加、全身免疫反應之增加、新T細胞引發、CD8 T細胞之多樣性增加或其任何組合。
在任何實施例中之一些中，第一免疫檢查點抑制劑係PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或CTLA-4抑制劑。在任何實施例中之一些中，第一免疫檢查點抑制劑包括抗體或抗體之抗原接合片段。
本文亦提供激發全身免疫反應之方法。在任何實施例中之一些中，該等方法包括向個體投與包括連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4。在任何實施例中之一些中，該等方法包括在投與該結合物後，在第一腫瘤或第一病灶之位點以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射。在任何實施例中之一些中，該等方法包括投與第一免疫調節性療法。在任何實施例中之一些中，在方法之該等步驟之後，個體在經照射位點遠端之第二腫瘤或第二病灶中展現至少一種全身性反應。
本文亦提供激發全身免疫反應之方法，其包括向個體投與包括連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4；及在投與該結合物後，在第一腫瘤或第一病灶之位點以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射，其中在方法之該等步驟之後，個體在經照射位點遠端之第二腫瘤或第二病灶中展現至少一種全身性反應。
本文亦提供激發全身免疫反應之方法，其包括向個體投與包括連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4；在投與該結合物後，在第一腫瘤或第一病灶之位點以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射；及投與第一免疫調節性療法，其中在方法之該等步驟之後，個體在經照射位點遠端之第二腫瘤或第二病灶中展現至少一種全身性反應。
在任何實施例中之一些中，全身性反應包括全身免疫反應性特徵。在任何實施例中之一些中，全身免疫反應性特徵選自由以下組成之群：CD8 T細胞浸潤增加、CD8 T細胞活化增加、樹突細胞浸潤增加、樹突細胞活化增加、新T細胞引發增加、T細胞多樣性增加或其任一組合。在任何實施例中之一些中，全身免疫反應性特徵包括促炎性分子、促炎性細胞介素、免疫細胞活化標記物或T細胞多樣性中之一或多者之增加。在任何實施例中之一些中，自從個體獲得之血液樣品評價全身免疫反應性特徵。
本文亦提供激發局部免疫反應之方法。在任何實施例中之一些中，該等方法包括向個體投與包括連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4。在任何實施例中之一些中，該等方法包括在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射腫瘤或病灶。在任何實施例中之一些中，該等方法包括另外投與第一免疫調節性療法。在任何實施例中之一些中，在方法之該等步驟之後，個體展現至少一種局部反應，且其中與僅用第一免疫調節性療法之治療相比或與單獨用結合物投與及照射之治療相比，該反應係協同的。
本文提供激發局部免疫反應之方法，其包括：向個體投與包括連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4；及在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射腫瘤或病灶，其中，在方法之該等步驟之後，個體展現至少一種局部反應，且其中與僅用第一免疫調節性療法之治療相比或與單獨用結合物投與及照射之治療相比，該反應係協同的。
本文提供激發局部免疫反應之方法，其包括：向個體投與包括連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4；在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射腫瘤或病灶；及投與第一免疫調節劑，其中，在方法之該等步驟之後，個體展現至少一種局部反應，且其中與僅用第一免疫調節性療法之治療相比或與單獨用結合物投與及照射之治療相比，該反應係協同的。
在任何實施例中之一些中，局部反應包括局部免疫反應。在任何實施例中之一些中，局部免疫反應選自由以下組成之群：腫瘤內Treg耗盡、腫瘤內CD8 T細胞浸潤增加、腫瘤內CD8 T細胞活化增加、骨髓阻抑性細胞減少、I型干擾素反應及其任何組合。在任何實施例中之一些中，局部免疫反應包括在腫瘤或腫瘤微環境中抗免疫細胞類型或免疫活化標記物增加。
在任何實施例中之一些中，第一免疫調節性療法包括用PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑之治療。在任何實施例中之一些中，第一免疫調節性療法包括抗體或抗體之抗原接合片段之治療。在任何實施例中之一些中，第一免疫調節性療法選自由以下組成之群：用於增強先天活化之佐劑、用於增強適應性活化之佐劑及T細胞激動劑。
在任何實施例中之一些中，該等方法亦包括用第二結合物之治療，該第二結合物包括結合至酞菁染料之癌症靶向分子，且其中在投與第二結合物之後實施至少一個照射步驟。
本文亦提供治療腫瘤或病灶之方法。在任何實施例中之一些中，該等方法包括鑑別個體之冷腫瘤或病灶。在任何實施例中之一些中，該等方法包括向該個體投與包括連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4。在任何實施例中之一些中，該等方法包括在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射腫瘤或病灶。在任何實施例中之一些中，個體之冷腫瘤或病灶之生長及/或體積增加受到抑制或減少。
本文亦提供治療腫瘤或病灶之方法，其包括：鑑別個體之冷腫瘤或病灶；向該個體投與包括連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4；及在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射腫瘤或病灶，其中個體之冷腫瘤或病灶之生長及/或體積增加受到抑制或減少。
在任何實施例中之一些中，與用裸或未結合之CTLA-4抗體之治療相比，腫瘤生長之抑制增強。
在任何實施例中之一些中，藉由高突變負荷或腫瘤免疫評分鑑別冷腫瘤或病灶。在任何實施例中之一些中，藉由PD-1或PD-L1標記物之表現狀態鑑別冷腫瘤或病灶。在任何實施例中之一些中，基於腫瘤或病灶對PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑之反應失敗鑑別冷腫瘤或病灶。在任何實施例中之一些中，藉由液體生檢或組織生檢鑑別冷腫瘤或病灶。
在任何實施例中之一些中，在照射步驟之後，Treg細胞在腫瘤或腫瘤微環境中快速耗盡。在任何實施例中之一些中，在照射步驟之後，發生腫瘤細胞之壞死。
在任何實施例中之一些中，靶向分子包括抗CTLA-4抗體或其抗原接合片段。在任何實施例中之一些中，抗CTLA-4抗體選自由以下組成之群：伊匹單抗(ipilimumab) (益伏(YERVOY))、曲美目單抗(tremelimumab)、AGEN1181、AGEN1884、ADU-1064、BCD-145及BCD-217。
本文提供治療對先前免疫檢查點抑制劑療法無反應或有抗性之腫瘤或病灶的方法。在任何實施例中之一些中，該等方法包括(a) 鑑別個體中對用先前免疫檢查點抑制劑之治療無反應或有抗性之腫瘤或病灶；(b) 向該個體投與包含連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，該靶向分子接合至CTLA-4；(c) 在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射腫瘤或病灶；及(d) 投與第一免疫檢查點抑制劑，其中腫瘤或病灶對該第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。
在任何實施例中之一些中，對第一免疫檢查點抑制劑之敏感性包含腫瘤或病灶之體積、尺寸或質量減小、腫瘤或病灶之體積或尺寸之小於20%增加或腫瘤細胞之數量減少。
在任何實施例中之一些中，對第一免疫檢查點抑制劑之敏感性包含腫瘤細胞轉移減少、腫瘤細胞殺死增加、全身免疫反應增加、新T細胞引發增加、CD8+ T細胞之多樣性增加或其任何組合。
在任何實施例中之一些中，對第一免疫檢查點抑制劑之敏感性包含全身免疫反應增加，且全身免疫反應係藉由以下中之一或多者量測：細胞毒性T淋巴球(CTL)活性分析、腫瘤內T細胞耗竭分析、腫瘤內效應T細胞擴增分析、T細胞受體多樣性分析、活化CD8+ T細胞分析、循環調節性T細胞(Treg)分析、腫瘤內Treg分析或CD8+ T細胞:Treg分析。
在任何實施例中之一些中，藉由高突變負荷或腫瘤免疫評分鑑別無反應或有抗性之腫瘤或病灶。在任何實施例中之一些中，藉由PD-1或PD-L1生物標記物之表現狀態鑑別無反應或有抗性之腫瘤或病灶。在任何實施例中之一些中，藉由液體生檢或組織生檢鑑別無反應或有抗性之腫瘤或病灶。
在任何實施例中之一些中，用先前免疫檢查點抑制劑之治療包含用PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或CTLA-4抑制劑之治療。
在任何實施例中之一些中，用先前免疫檢查點抑制劑之治療包含用抗PD-1抗體或其抗原接合片段之治療。在任何實施例中之一些中，抗PD-1抗體選自由以下組成之群：派姆單抗(pembrolizumab) (MK-3475、KEYTRUDA；蘭布魯珠單抗(lambrolizumab))、尼沃魯單抗(nivolumab) (OPDIVO)、西米普利單抗(cemiplimab) (LIBTAYO)、特瑞普利單抗(toripalimab) (JS001)、HX008、SG001、GLS-010、多斯他利單抗(dostarlimab) (TSR-042)、替雷利珠單抗(tislelizumab) (BGB-A317)、賽曲利單抗(cetrelimab) (JNJ-63723283)、匹利珠單抗(pidilizumab) (CT-011)、傑諾珠單抗(genolimzumab) (APL-501、GB226)、BCD-100、西米普利單抗(REGN2810)、F520、信迪利單抗(sintilimab) (IBI308)、CS1003、LZM009、卡瑞利珠單抗(camrelizumab) (SHR-1210)、SCT-I10A、MGA012、AK105、PF-06801591、AMP-224、AB122、AMG 404、BI 754091、HLX10、JTX-4014、AMP-514 (MEDI0680)、Sym021、MGD019、MGD013、AK104、XmAb20717、RO7121661、CX-188、斯巴達珠單抗(spartalizumab)、BCD-217、HX009、IBI308、PDR001、REGN2810及TSR-042 (ANB011)。
本文提供激發全身免疫反應之方法。在任何實施例中之一些中，該等方法包括(a) 向個體投與包含連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，該靶向分子接合至CTLA-4；(b) 在投與該結合物後，在第一腫瘤或第一病灶之位點以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射；及(c) 投與第一免疫檢查點抑制劑，其中在步驟(a)、(b)及(c)之後，個體在經照射位點遠端之位置展現至少一種全身免疫反應性特徵。
在任何實施例中之一些中，至少一種全身免疫反應性特徵選自由以下組成之群：CD8+ T細胞浸潤增加、CD8+ T細胞活化增加、CD8+ :Treg比率增加、天然殺手細胞浸潤增加、天然殺手細胞活化增加、樹突細胞浸潤增加、樹突細胞活化增加、新T細胞引發增加、T細胞多樣性增加及其任何組合。
在任何實施例中之一些中，至少一種全身免疫反應性特徵包含促炎性分子、促炎性細胞介素或免疫細胞活化標記物中之一或多者增加。
在任何實施例中之一些中，自從個體獲得之血液樣品評價至少一種全身免疫反應性特徵。
在任何實施例中之一些中，經照射位點遠端之位置係未經照射之第二腫瘤或第二病灶。
本文提供激發局部免疫反應之方法，其包含：(a) 向個體投與包含連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，該靶向分子接合至CTLA-4；(b) 在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射腫瘤或病灶；及(c) 投與第一免疫檢查點抑制劑，其中在步驟(a)、(b)及(c)之後，個體展現至少一種局部免疫反應性特徵，且其中與僅投與第一免疫檢查點抑制劑相比或與僅用結合物之治療及照射步驟相比，至少一種局部免疫反應性特徵係協同的。
在任何實施例中之一些中，至少一種局部免疫反應性特徵選自由以下組成之群：腫瘤內Treg耗盡、腫瘤內CD8 T細胞浸潤增加、腫瘤內CD8 T細胞活化增加、腫瘤內CD8+ :Treg比率增加、腫瘤內天然殺手細胞浸潤增加、腫瘤內天然殺手細胞活化增加、骨髓阻抑性細胞減少、I型干擾素反應及其任何組合。在任何實施例中之一些中，至少一種局部免疫反應性特徵包含腫瘤或腫瘤微環境中抗免疫細胞類型或免疫活化標記物增加。
在任何實施例中之一些中，靶向分子包含抗CTLA-4抗體或其抗原接合片段。在任何實施例中之一些中，抗CTLA-4抗體選自由以下組成之群：伊匹單抗(益伏)、曲美目單抗、AGEN1181、AGEN1884、ADU-1064、BCD-145、CBT-509及BCD-217。
在任何實施例中之一些中，第一免疫檢查點抑制劑包含抗PD-1抗體或其抗原接合片段。在任何實施例中之一些中，第一免疫檢查點抑制劑選自由以下組成之群：派姆單抗(MK-3475、KEYTRUDA；蘭布魯珠單抗)、尼沃魯單抗(OPDIVO)、西米普利單抗(LIBTAYO)、特瑞普利單抗(JS001)、HX008、SG001、GLS-010、多斯他利單抗(TSR-042)、替雷利珠單抗(BGB-A317)、賽曲利單抗(JNJ-63723283)、匹利珠單抗(CT-011)、傑諾珠單抗(APL-501、GB226)、BCD-100、西米普利單抗(REGN2810)、F520、信迪利單抗(IBI308)、CS1003、LZM009、卡瑞利珠單抗(SHR-1210)、SCT-I10A、MGA012、AK105、PF-06801591、AMP-224、AB122、AMG 404、BI 754091、HLX10、JTX-4014、AMP-514 (MEDI0680)、Sym021、MGD019、MGD013、AK104、XmAb20717、RO7121661、CX-188、斯巴達珠單抗、BCD-217、HX009、IBI308、PDR001、REGN2810及TSR-042 (ANB011)、及其抗原接合片段。
在任何實施例中之一些中，第一免疫檢查點抑制劑與投與結合物同時投與。在任何實施例中之一些中，第一免疫檢查點抑制劑係在投與結合物之24小時內投與。
在任何實施例中之一些中，第一免疫檢查點抑制劑係在投與結合物之前投與。在任何實施例中之一些中，第一免疫檢查點抑制劑係在投與結合物之前約1-3週投與。在任何實施例中之一些中，第一免疫檢查點抑制劑係在投與結合物之前投與1次、2次、3次、4次、5次或超過5次。
在任何實施例中之一些中，該方法亦包括在投與結合物之後投與第一免疫檢查點抑制劑。在任何實施例中之一些中，第一免疫檢查點抑制劑係在投與結合物之後投與1次、2次、3次、4次、5次或超過5次。
在任何實施例中之一些中，第一免疫檢查點抑制劑係在投與該結合物後約1天與約4週之間投與。
在任何實施例中之一些中，個體在用先前免疫檢查點抑制劑治療後展現進行性疾病或穩定疾病。
在任何實施例中之一些中，對先前免疫檢查點抑制劑療法無反應或有抗性之腫瘤或病灶包含展現以下各項之腫瘤或病灶：腫瘤或病灶之體積、尺寸或質量沒有減小、腫瘤或病灶之體積或尺寸增加超過20%或腫瘤細胞之數量增加或轉移。
在任何實施例中之一些中，個體包含未經照射之第二腫瘤或病灶，且其中第二腫瘤或病灶對投與第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。在任何實施例中之一些中，個體包含轉移性腫瘤細胞且其中轉移性腫瘤細胞對投與該第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。
在任何實施例中之一些中，個體不經歷全身Treg細胞之實質減少。
在任何實施例中之一些中，個體在經照射腫瘤或病灶之位點處展現反應，其中該反應選自由以下組成之群：CD8+ T細胞浸潤增加、CD8+ T細胞活化增加、腫瘤內CD8+ :Treg比率增加、腫瘤內天然殺手細胞浸潤增加、腫瘤內天然殺手細胞活化增加、樹突細胞浸潤增加、樹突細胞活化增加、新T細胞引發增加、T細胞多樣性增加、促炎性分子、促炎性細胞介素、免疫細胞活化標記物中之一或多者增加及其任何組合。
在任何實施例中之一些中，該方法引起腫瘤內阻抑細胞之數量、頻率、活性及/或功能實質減少。在任何實施例中之一些中，腫瘤內阻抑細胞選自由以下組成之群：調節性T細胞、II型天然殺手T細胞、M2巨噬細胞、腫瘤相關之纖維母細胞、骨髓源阻抑細胞及其任何組合。在任何實施例中之一些中，該方法引起腫瘤內細胞毒性T效應細胞、天然殺手(NK)細胞、其他免疫效應細胞或其任一組合之數量或頻率之實質增加。在任何實施例中之一些中，該方法引起腫瘤內細胞毒性T效應細胞、天然殺手(NK)細胞、其他免疫效應細胞或其任一組合之活性或功能之實質增加。
在任何實施例中之一些中，在照射步驟之後，發生腫瘤或病灶之壞死。
在任何實施例中之一些中，酞菁染料係Si-酞菁染料。在任何實施例中之一些中，Si-酞菁染料係IR700。
在任何實施例中之一些中，第一免疫調節性療法或第一免疫檢查點抑制劑包括用選自由以下組成之群之抗PD-1抗體之治療：派姆單抗(MK-3475、KEYTRUDA；蘭布魯珠單抗)、尼沃魯單抗(OPDIVO)、西米普利單抗(LIBTAYO)、特瑞普利單抗(JS001)、HX008、SG001、GLS-010、多斯他利單抗(TSR-042)、替雷利珠單抗(BGB-A317)、賽曲利單抗(JNJ-63723283)、匹利珠單抗(CT-011)、傑諾珠單抗(APL-501、GB226)、BCD-100、西米普利單抗(REGN2810)、F520、信迪利單抗(IBI308)、CS1003、LZM009、卡瑞利珠單抗(SHR-1210)、SCT-I10A、MGA012、AK105、PF-06801591、AMP-224、AB122、AMG 404、BI 754091、HLX10、JTX-4014、AMP-514 (MEDI0680)、Sym021、MGD019、MGD013、AK104、XmAb20717、RO7121661、CX-188、斯巴達珠單抗、BCD-217、HX009、IBI308、PDR001、REGN2810及TSR-042 (ANB011)。
在任何實施例中之一些中，其中第一免疫調節性療法或第一免疫檢查點抑制劑包括用選自由以下組成之群之抗PD-L1抗體之治療：阿替珠單抗(MPDL3280A、TECENTRIQ、RG7446)、阿維魯單抗(BAVENCIO、MSB0010718C；M7824)、德瓦魯單抗(MEDI4736、IMFINZI)、LDP、NM-01、STI-3031 (IMC-001；STI-A1015)、KN035、LY3300054、M7824 (MSB0011359C)、BMS-936559、MSB2311、BCD-135、BGB-A333、CBT-502 (TQB-2450)、科西貝利單抗(cosibelimab) (CK-301)、CS1001 (WPB3155)、FAZ053、MDX-1105、SHR-1316 (HTI-1088)、TG-1501、ZKAB001 (STI-A1014)、INBRX-105、MCLA-145、KN046、LY3415244、REGN3504及HLX20。
在任何實施例中之一些中，照射步驟係在投與該結合物後介於30分鐘與96小時之間實施。在任何實施例中之一些中，照射步驟係在投與該結合物後24小時 ± 4小時實施。在任何實施例中之一些中，照射步驟係以690 ± 40 nm之波長實施。在任何實施例中之一些中，照射步驟係以為或約為50 J/cm2 或100 J/cm光纖長度之劑量實施。
在任何實施例中之一些中，結合物之投與重複一或多次。在任何該等實施例中之一些中，在結合物之每一重複投與之後，重複照射步驟。
在任何實施例中之一些中，該等方法亦包括投與額外治療劑或抗癌治療。
在任何實施例中之一些中，腫瘤或病灶與選自由以下組成之群之癌症相關：結腸癌、結腸直腸癌、胰臟癌、乳癌、皮膚癌、肺癌、非小細胞肺癌、腎細胞癌、甲狀腺癌、***癌、頭頸癌、胃腸癌、胃癌、小腸癌、梭形細胞贅瘤、肝癌(hepatic carcinoma)、肝癌(liver cancer)、膽道癌、周圍神經癌、腦癌、骨骼肌癌、平滑肌癌、骨癌、脂肪組織癌、子宮頸癌、子宮癌、生殖器癌、淋巴瘤及多發性骨髓瘤。
在任何實施例中之一些中，結合物提供獨立於全身調節性T細胞之數量或活性之效應。
在任何實施例中之一些中，該方法引起腫瘤內細胞毒性T效應細胞、天然殺手(NK)細胞、其他免疫效應細胞或其任一組合之數量或頻率之實質增加。在任何實施例中之一些中，該方法引起腫瘤內細胞毒性T效應細胞、天然殺手(NK)細胞、其他免疫效應細胞或其任一組合之活性或功能之實質增加。在任何實施例中之一些中，該方法引起腫瘤內阻抑細胞之數量或頻率及/或活性或功能實質減少。在任何實施例中之一些中，腫瘤內阻抑細胞選自由以下組成之群：調節性T細胞、II型天然殺手T細胞、M2巨噬細胞、腫瘤相關之纖維母細胞、骨髓源阻抑細胞或其任一組合。
相關申請案
本申請案主張於2019年9月3日提出申請之標題為「METHODS FOR TREATMENT USING PHTHALOCYANINE DYE-TARGETING MOLECULE CONJUGATES」之美國臨時申請案第62/895,325號的優先權，該申請案之內容以全文引用之方式併入。
本文提供用於治療具有腫瘤或病灶(例如冷腫瘤及/或對先前治療性治療(例如先前免疫檢查點抑制劑治療及其他先前抗癌治療性治療)無反應或有抗性之腫瘤或病灶)之個體的組合物、組合及方法。在一些實施例中，所提供實施例包括向該個體投與接合與酞菁染料(例如IR700)結合之細胞毒性T-淋巴球相關蛋白4 (CTLA-4)的靶向分子。在一些態樣中，所提供實施例包括照射腫瘤或病灶之位點。在一些態樣中，照射導致表面上表現CTLA-4之細胞死亡。在一些態樣中，該方法亦包括投與免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑)與酞菁染料靶向分子結合物之組合。
在一些態樣中，酞菁染料靶向分子結合物(例如結合至IR700之抗CTLA-4抗體或其抗原接合片段)且在一些情形下免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑)用於所提供方法及用途中，例如用於供治療癌症之所提供方法及用途中。用途包括組合物及組合物(例如)於方法、治療或治療方案中之治療用途。用途包括組合物及組合在方法及治療中之用途，以及組合物及組合在製備藥劑以實施該等治療方法中之用途。在一些實施例中，方法及用途由此治療個體之癌症，例如包括原發性腫瘤、轉移性腫瘤細胞及/或侵襲性腫瘤細胞之癌症，例如侵襲性癌症、浸潤性癌症或轉移性癌症。亦提供用於在個體(例如患有癌症或腫瘤(例如侵襲性癌症、浸潤性癌症或轉移性癌症)之個體)中產生增強之反應(例如對治療或療法之增強之反應)的組合物、組合及方法。在一些態樣中，亦提供該等組合物及組合在增強、激發、增進、加強或支持個體之免疫功能(例如局部及全身免疫性)中之方法及用途。在一些態樣中，提供激發全身免疫反應之方法。在一些態樣中，提供激發局部免疫反應之方法。
所提供之組合物、組合、方法及用途可用於治療包括一或多種第一腫瘤或第一病灶及/或一或多種第二腫瘤或第二病灶之癌症，例如原發性腫瘤、轉移性腫瘤細胞及/或侵襲性腫瘤細胞。在一些實施例中，與接合CTLA-4之靶向分子結合之酞菁染料單獨使用或與免疫檢查點抑制劑組合使用。本文所述之方法及用途在治療癌症(例如轉移性癌症及/或侵襲性癌症)中提供各種優點，包括無需定位及/或直接照射轉移性腫瘤細胞及/或侵襲性腫瘤細胞。本揭示內容亦提供增強個體之全身性免疫之意外特徵，例如針對癌症復發。
在一些上下文中，所提供之實施例基於以下觀察結果：用酞菁染料靶向分子結合物(例如抗CTLA-4抗體-IR700結合物)治療癌症、之後照射第一(例如原發性)腫瘤，不僅導致治療第一腫瘤，而且導致有效治療照射部位遠端之腫瘤(例如轉移之腫瘤)，以及有效治療在個體在治療初始腫瘤後具有完全反應後引入之腫瘤，其指示腫瘤特異性免疫記憶反應。驚人地，此反應並不像利用其他療法所觀察依賴於全身調節性T細胞(Treg)之耗盡。所提供之實施例基於進一步之觀察結果：用抗CTLA4抗體-IR700結合物及免疫檢查點抑制劑(例如抗PD-1抗體)之組合治療在經照射之第一腫瘤及遠端腫瘤或稍後引入之腫瘤(例如包含次生相關腫瘤細胞群之腫瘤、轉移性腫瘤及/或侵襲性腫瘤)之治療中產生顯著協同效應。因此，展現所提供之組合物、組合、方法及用途提供對癌症之顯著改良及有效之治療，該癌症包括包含原發性腫瘤或多原發性腫瘤以及轉移性腫瘤細胞之癌症，例如轉移性癌症；及/或包括原發性腫瘤或多個多原發性腫瘤以及侵襲性腫瘤細胞之癌症，例如，不耗盡全身Treg之侵襲性癌症。所提供之組合物、組合、方法及用途可導致個體免疫反應(例如針對癌症之全身免疫反應，包括可有效針對治療後可發生之腫瘤之免疫記憶反應)之增強或改良。
治療癌症患者之巨大挑戰之一係癌症對治療劑無反應性。迫切需要用於治療該等癌症之組合物及方法。在一些上下文中，所提供之實施例基於以下觀察結果：對於歸類為「冷」腫瘤之腫瘤及對於對先前治療性治療(例如，免疫檢查點抑制劑、抗癌劑或針對免疫阻抑細胞之分子)無反應之腫瘤及腫瘤細胞，用酞菁染料靶向分子結合物(例如抗CTLA-4結合物)治療、之後在腫瘤位點照射(亦稱為「光免疫療法」及「PIT」)，導致腫瘤生長之實質抑制。此外，與免疫調節性療法(例如免疫檢查點抑制劑)組合，可觀察到對腫瘤生長之抑制效應比單獨任一藥劑大。
如本文所用之「抗CTLA-4結合物」可指具有連接至酞菁染料之CTLA-4靶向分子的結合物。CTLA-4靶向分子可包括CTLA-4接合分子(例如抗CTLA-4抗體或抗體片段(例如抗原接合片段))、或接合至CTLA-4之其他蛋白質、肽或小分子。抗CTLA-4結合物可包括Si-酞菁染料，例如IR700染料。
如本文所用之用抗CTLA-4結合物治療或投與抗CTLA-4結合物後通常用適宜波長之光照射，且應當假設該照射係抗CTLA-4結合物治療及投與之一部分，除非特別說明照射步驟並非用該方法實施。
本文之組合物、組合及方法可用於治療對先前治療性治療(例如免疫調節劑、免疫檢查點抑制劑、抗癌劑或針對免疫阻抑細胞起作用之治療劑)具有低反應性或實質上無反應性的癌症。亦提供用於治療癌症之組合物、組合及方法，該癌症對先前治療有抗性，例如對用免疫檢查點抑制劑之治療有抗性。進一步提供用於在所治療之個體中激發免疫反應(包括局部免疫反應及/或全身免疫反應)之組合物、組合及方法。本文之組合物、組合及方法可用於治療「冷」腫瘤及病灶。
本文所述之方法在治療癌症中提供各種優點，例如有效治療對先前治療性治療無反應之癌症。優點之一包括治療轉移性癌症及/或侵襲性癌症而不需要定位及/或直接照射轉移性腫瘤細胞及/或侵襲性腫瘤細胞。所提供之方法及組合物亦可在個體中激發局部及全身免疫性，例如針對腫瘤細胞及腫瘤微環境中之細胞。
本文提供用於治療腫瘤或癌性病灶(例如包括原發性腫瘤或多種原發性腫瘤以及轉移性腫瘤細胞)之癌症的組合物、組合及方法。在一些情形下，經治療之個體可具有一或多種第一腫瘤(例如，原發性腫瘤)、轉移性腫瘤細胞及侵襲性腫瘤細胞。
在一些情況下，腫瘤可為具有免疫阻抑表型之「冷腫瘤」。該等冷腫瘤可具有包括但不限於以下之特徵：腫瘤內CD8+ T效應細胞之數量及/或活性實質減少或缺乏及/或腫瘤內免疫阻抑細胞之數量及/或活性實質增加。在一些情形下，冷腫瘤或病灶具有高腫瘤突變負荷(TMB)、指示低免疫反應性之免疫評分、指示低免疫反應性之程式性細胞死亡蛋白1 (PD-1)或程式性死亡配體1 (PD-L1)標記狀態。在一些情況下，冷腫瘤或病灶對PD-1或PD-L1抑制劑單一療法無反應。
在一些實施例中，可用抗CTLA-4結合物治療冷腫瘤或病灶。在一些實施例中，用抗CTLA-4結合物及免疫檢查點抑制劑(例如抗PD-1抗體)之組合治療導致對經照射之第一(例如原發性)腫瘤及未經照射之遠端腫瘤兩者之生長的顯著抑制效應。
此外，對於對用免疫調節性療法之治療(例如用免疫檢查點抑制劑(例如，抗PD-1抗體)之治療)有抗性或無反應之腫瘤，用抗CTLA-4結合物及免疫檢查點抑制劑(例如抗PD-1抗體)之組合治療對經照射之第一腫瘤及遠端腫瘤兩者之生長產生意外抑制效應，指示抗CTLA-4結合物治療對免疫檢查點抑制劑在治療癌症及腫瘤細胞中之敏化效應。
所提供之組合物、組合及方法提供對癌症(包括第一腫瘤或病灶及/或第二腫瘤或病灶，例如原發性腫瘤及轉移性癌症)之有效治療。本文提供之方法包括用抗CTLA-4結合物治療對腫瘤或癌症之先前治療性治療無反應或有抗性之個體，及在投與結合物後，用適於與酞菁染料一起使用之光波長照射第一腫瘤。方法之一些實施例包括在投與抗CTLA-4結合物之前、同時或之後投與免疫調節劑，例如免疫檢查點抑制劑。所提供之組合物、組合及方法可使抗性或非反應性腫瘤及/或冷腫瘤(包括原發性冷腫瘤及轉移性冷腫瘤)對免疫調節劑敏感。
本申請案中提及之所有出版物(包括專利文獻、科學文章及資料庫)出於所有目的以引用整體之方式併入，其併入程度如同每一個別出版物以引用方式個別併入一般。若本文闡述之定義與以引用方式併入本文之專利、申請案、公開之申請案及其他出版物中闡述之定義相反或不一致，則本文闡述之定義優先於在以引用方式併入本文中之定義。
本文使用之章節標題僅用於組織目的，且不應解釋為對所述標的物之限制。 I. 用抗CTLA-4結合物之治療方法及抗CTLA-4結合物之用途
在一些實施例中，該等方法包括投與抗CTLA-4結合物及用適於與酞菁染料一起使用之光波長照射腫瘤或腫瘤之微環境(亦稱為腫瘤微環境；TME)或存在於TME中之細胞，使得光激發染料並導致細胞殺死。該等方法導致減少或消除病灶(例如腫瘤)；減少或抑制腫瘤生長；減少、抑制或消除腫瘤細胞侵襲；減少、抑制或消除腫瘤細胞轉移；減少、抑制或消除侵襲性腫瘤細胞；減少、抑制或消除轉移性腫瘤細胞或其任一組合。在一些實施例中，提供使用含有酞菁染料靶向分子結合物之組合物的方法及用途，其中靶向分子接合CTLA-4 (例如，抗CTLA-4抗體-IR700結合物)，其用於癌症(例如包括第一腫瘤或多種第一腫瘤(例如，一或多個原發腫瘤)之癌症)之療法或治療，及用照射處理該(等)第一腫瘤以在該(等)第一腫瘤以及次生癌細胞群(例如轉移性腫瘤細胞(例如，轉移性癌症)、侵襲性腫瘤細胞(例如，侵襲性癌症)、浸潤性腫瘤細胞(例如，浸潤性癌症)及/或一或多種第二腫瘤或病灶)中實現光免疫療法。在一些實施例中，次生癌細胞群與第一腫瘤相關，例如直接或間接源自第一腫瘤。在一些實施例中，次生細胞群不直接源自第一腫瘤或與第一腫瘤相關。
在方法之一些實施例中，第一腫瘤(例如原發性腫瘤)之生長受到抑制，第一腫瘤之體積減小或腫瘤生長及體積二者皆減少。在方法之一些實施例中，與單一療法(例如僅投與結合物、僅投與結合物之後照射、或僅投與免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑(例如，抗PD-1抗體)))相比，第一腫瘤之生長受到抑制，一或多種第一腫瘤之體積減小，或腫瘤生長及體積二者皆減少。
在一些態樣中，該等方法激發個體之免疫反應。在一些實施例中，激發之免疫反應係全身免疫反應。在一些實施例中，激發之免疫反應定位於治療(例如，局部免疫反應)之區域。在一些實施例中，所提供之方法激發局部及全身免疫反應。
在一些態樣中，該等方法亦包括投與免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑(例如，抗PD-1抗體或其抗原接合片段))與酞菁染料靶向分子結合物之組合。在一些態樣中，酞菁染料靶向分子結合物及免疫檢查點抑制劑(例如，抗PD-1抗體或其抗原接合片段)之組合用於所提供之方法及用途中，例如用於治療癌症之所提供之方法及用途中。在一些實施例中，投與抗CTLA-4抗體-IR700結合物、之後照射(例如，抗CTLA-4-IR700 PIT)使經治療(照射)之腫瘤對抗PD-1療法敏感。在一些實施例中，投與抗CTLA-4抗體-IR700結合物、之後照射(例如，抗CTLA-4-IR700 PIT)。在一些實施例中，投與抗CTLA-4抗體-IR700結合物、之後照射(例如，抗CTLA-4-IR700 PIT)使經治療(照射)之腫瘤及一或多個遠端(未經照射)腫瘤對抗PD-1療法敏感。在該等實施例中之任一者中，抗CTLA-4 PIT及抗PD-1療法係協同的。
用途包括組合物及組合在方法及治療中之用途，以及組合物及組合在製備藥劑以實施該等治療方法中之用途。在一些實施例中，該等方法及用途由此治療個體中之癌症，例如包括腫瘤之癌症及包括第一腫瘤(其為原發性或非原發性腫瘤)及腫瘤細胞(例如轉移性腫瘤細胞及/或侵襲性腫瘤細胞)之一或多個次生群之癌症，例如轉移性及/或侵襲性癌症。在一些實施例中，繼發性腫瘤細胞與第一腫瘤相關。在方法及用途之一些實施例中，治療一種以上腫瘤。在一些態樣中，亦提供該等組合物及組合在增強、加強、增強、強化、增加、加強或支持個體之免疫功能(例如全身性免疫性)中之方法及用途。
抗CTLA-4抗體已用於治療癌症，但成效有限。裸CTLA-4抗體被認為通常藉由檢查點抑制活化CD8 T細胞來誘導抗癌活性。該等抗體本身不會耗盡調節性T細胞(Treg)。其之效應主要係經由檢查點抑制(類似於PD-1及PD-L1抑制劑)。
本文之抗CTLA-4結合物之組合物(例如，包含與酞菁染料結合之抗CTLA-4抗體或其抗原接合片段)經由不同機制起作用。與裸抗體分子一樣，該等結合物可活化CD8+ T細胞。然而，結合照射，抗CTLA-4結合物可耗盡腫瘤內Treg細胞，此係用裸的未結合之CTLA-4抗體之治療中不存在之功能。
本文提供包括抗CTLA-4結合物之方法及組合物。該等組合物及方法可在Treg耗盡增加治療對腫瘤或腫瘤微環境(TME)之有效性之情況下提供有效治療。在一些情形下，腫瘤或TME中Treg細胞之耗盡會導致腫瘤細胞壞死。在一些實施例中，Treg耗盡發生在腫瘤中，但並非全身性的。
在一些實施例中，本文之方法及組合物可有效治療冷腫瘤，例如TME中具有免疫阻抑表型之腫瘤或細胞，其具有減少數量及/或活性之CD8+ T效應細胞或無CD8+ T效應細胞、及/或增加數量及/或活性之免疫阻抑細胞(例如調節性T細胞(Treg)、骨髓源阻抑細胞、M2巨噬細胞、腫瘤相關之纖維母細胞或其組合)。照射後之抗CTLA4結合物可消除免疫阻抑性Treg及骨髓源阻抑細胞(MDSC)，且因此減少或抑制腫瘤生長。
在一些實施例中，本文之方法及組合物可有效治療展現較少免疫反應性之腫瘤，例如，對免疫療法無反應(例如，對免疫檢查點阻斷之反應性降低)之腫瘤、含有高含量之免疫阻抑細胞類型(例如，調節性T細胞)之腫瘤、含有低含量之細胞毒性免疫細胞(例如，CD8+ T細胞及/或天然殺手細胞)之腫瘤或其任一組合。在一些實施例中，本文之方法及組合物可有效治療大小較大之腫瘤，且展現比較小腫瘤更大之免疫阻抑，例如，含有增加含量之調節性T細胞。該等腫瘤對其他治療(例如用免疫檢查點抑制劑(例如，裸CTLA-4抗體、裸PD-1抗體或裸PD-L1抗體)之治療或用其他抗體或抗體-結合物之治療)之反應性較低或無反應性。抗CTLA-4-IR700 PIT抑制或實質上減少較大腫瘤生長之有效性使其不同於單獨用裸抗CTLA4抗體或結合物之治療，用裸抗CTLA4抗體或結合物之治療不提供該等腫瘤之生長之抑制或減少。 A.    用於治療對先前治療性治療無反應之腫瘤或腫瘤細胞的方法及組合物
在一些實施例中，提供含有抗CTLA-4結合物(例如酞菁染料靶向分子結合物)之方法及組合物，其中靶向分子接合至CTLA-4 (例如抗CTLA-4抗體-IR700結合物)，用於對一或多種先前用免疫檢查點抑制劑、抗癌劑及/或針對免疫阻抑細胞之治療劑之治療失敗或無反應之癌症的療法或治療。癌症包括第一腫瘤或多種第一腫瘤以及轉移性腫瘤細胞，例如轉移性癌症；或包括第一腫瘤或多種第一腫瘤以及侵襲性或轉移性腫瘤細胞之癌症，例如侵襲性癌症或轉移性癌症。
該等方法及用途包括例如向具有腫瘤或腫瘤細胞之個體投與CTLA-4結合物(例如，與酞菁染料結合之抗CTLA-4抗體或其抗原接合片段)，之後在腫瘤(例如第一腫瘤或原發腫瘤)或腫瘤細胞或腫瘤微環境之位點使用適於酞菁染料之光波長及光劑量照射。在一些態樣中，照射導致表現靶分子(例如，CTLA-4)之細胞之照射依賴性裂解及死亡，導致癌症之治療效應或治療。在一些情形下，表現CTLA-4之TME內之細胞被殺死，且因此自TME (例如Treg細胞)迅速耗盡，且因此，可發生腫瘤細胞壞死。
在一些態樣中，該等方法亦包括投與免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑)與抗CTLA-4結合物之組合。在一些態樣中，該組合用於治療癌症、腫瘤或癌性病灶。在一些實施例中，該等方法包括在投與抗CTLA-4結合物(例如，與酞菁染料結合之抗CTLA-4抗體或其抗原接合片段)之前、同時或之後投與免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑)。在該等方法中，可使原發性腫瘤、侵襲性腫瘤細胞及轉移性腫瘤細胞對用免疫調節劑之治療敏感。在該等方法中，原發性腫瘤、侵襲性腫瘤細胞及轉移性腫瘤細胞之生長可受到抑制、減少或消除，及/或一或多種腫瘤之體積減小。
由該等組合治療導致之敏感性增加可包括(但不限於)腫瘤生長抑制之降低、腫瘤細胞侵襲及/或轉移之減少、腫瘤細胞殺死增加、全身免疫反應增加、新T細胞引發增加、腫瘤內CD8+ T細胞多樣性增加、腫瘤內CD8+ T效應細胞數量及/或活性增加，腫瘤內調節性T細胞之數量及/或活性降低、腫瘤內骨髓源阻抑細胞之數量及/或活性降低、腫瘤內腫瘤相關之纖維母細胞之數量及/或活性降低或其任一組合。
在一些態樣中，先前治療性治療或癌症、腫瘤或腫瘤細胞無反應之治療可為用免疫檢查點抑制劑之治療。先前免疫檢查點抑制劑可為PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或其組合。先前免疫檢查點抑制劑可為小分子抑制劑、抗體抑制劑或接合且抑制免疫檢查點蛋白之其他分子。在一些態樣中，先前免疫檢查點抑制劑可為抗PD-1抗體或其抗原接合片段。在一些態樣中，先前免疫檢查點抑制劑可為抗PD-L1抗體或其抗原接合片段。舉例而言，PD-1之抗體抑制劑可包括(但不限於)派姆單抗(MK-3475、KEYTRUDA；蘭布魯珠單抗)、尼沃魯單抗(OPDIVO)、西米普利單抗(LIBTAYO)、特瑞普利單抗(JS001)、HX008、SG001、GLS-010、多斯他利單抗(TSR-042)、替雷利珠單抗(BGB-A317)、賽曲利單抗(JNJ-63723283)、匹利珠單抗(CT-011)、傑諾珠單抗(APL-501、GB226)、BCD-100、西米普利單抗(REGN2810)、F520、信迪利單抗(IBI308)、CS1003、LZM009、卡瑞利珠單抗(SHR-1210)、SCT-I10A、MGA012、AK105、PF-06801591、AMP-224、AB122、AMG 404、BI 754091、HLX10、JTX-4014、AMP-514 (MEDI0680)、Sym021、MGD019、MGD013、AK104、XmAb20717、RO7121661、CX-188、斯巴達珠單抗、BCD-217、HX009、IBI308、PDR001、REGN2810、TSR-042 (ANB011)中之任一者。PD-L1之抗體抑制劑可包括(例如，但不限於)阿替珠單抗(MPDL3280A、TECENTRIQ、RG7446)、阿維魯單抗(BAVENCIO、MSB0010718C；M7824)、德瓦魯單抗(MEDI4736、IMFINZI)、LDP、NM-01、STI-3031 (IMC-001；STI-A1015)、KN035、LY3300054、M7824 (MSB0011359C)、BMS-936559、MSB2311、BCD-135、BGB-A333、CBT-502 (TQB-2450)、科西貝利單抗(CK-301)、CS1001 (WPB3155)、FAZ053、MDX-1105、SHR-1316 (HTI-1088)、TG-1501、ZKAB001 (STI-A1014)、INBRX-105、MCLA-145、KN046、LY3415244、REGN3504、HLX20中之任一者。
在一些態樣中，先前治療性治療或癌症、腫瘤或腫瘤細胞無反應之治療可為利用以下之治療：免疫調節劑，例如細胞介素，例如阿地介白素(Aldesleukin) (普留淨(PROLEUKIN))、干擾素α-2a、干擾素α-2b (Intron A)、聚乙二醇干擾素α-2b (SYLATRON/PEG-Intron)、或靶向IFNAR1/2路徑、IL-2/IL-2R路徑之細胞介素、或例如佐劑，例如聚ICLC (HILTONOL / 咪喹莫特(Imiquimod))、4-1BB (CD137；TNFRS9)、OX40 (CD134) OX40-配體(OX40L)、類鐸(Toll-Like)受體2激動劑SUP3、類鐸受體TLR3及TLR4激動劑及靶向類鐸受體7 (TLR7)路徑之佐劑、TNFR及TNF超家族之其他成員、其他TLR2激動劑、TLR3激動劑及TLR4激動劑。
在一些態樣中，癌症無反應之一或多種先前治療性治療包括使用抗癌劑。先前抗癌劑可為化學治療劑、抗體治療劑及/或放射性治療劑中之一或多者。
在一些態樣中，癌症無反應之一或多種先前治療性治療包括使用靶向免疫阻抑細胞之治療劑。試劑可為抗體，例如靶向調節性T細胞之抗CD25抗體；小分子抑制劑或其組合。免疫阻抑細胞包括調節性T細胞、M2巨噬細胞、腫瘤相關之纖維母細胞或其組合。 B.    腫瘤腫瘤細胞靶向抗CTLA-4結合物療法及抗CTLA-4結合物組合療法
本文所述之方法包括投與抗CTLA-4結合物(例如，與酞菁染料結合之抗CTLA-4抗體或其抗原接合片段)及用一定波長之光照射個體中之第一腫瘤或病灶或第一腫瘤或病灶之位點或第一腫瘤或病灶之腫瘤微環境(TME)，以活化結合物之酞菁染料部分，以實現細胞殺死，例如靶向殺死表現CTLA-4之細胞。在一些實施例中，本文提供之方法及用途包括治療患有一或多種第一腫瘤之個體。個體可能患有一種、兩種、三種或三種以上之第一(例如原發性)腫瘤。該等腫瘤可在一或多個組織或器官中，例如在一個組織或器官中、在兩個不同之組織或器官中、在三個不同之組織或器官中、或在多於三個不同之組織或器官中。
在一些態樣中，第一腫瘤可指個體中之第一、原發性或初始腫瘤；第一腫瘤亦可指選擇用於用本文提供之方法及用途照射之一或多個腫瘤。在一些實施例中，第一腫瘤與原發性腫瘤同義。在一些實施例中，一或多種第一腫瘤可為一或多個實體腫瘤，可為淋巴瘤，或可為白血病。腫瘤可為肺、胃、肝、胰臟、***、食管、頭及頸、腦、周圍神經、皮膚、小腸、結腸、直腸、肛門、卵巢、子宮、膀胱、***、脂肪組織、骨骼肌、平滑肌、血管、骨、骨髓、眼、舌、淋巴結、脾、腎、子宮頸、***、女性生殖器、睪丸或未知原發性初始腫瘤。
在一些實施例中，本文提供之方法及用途包括治療具有第一腫瘤亦及次生腫瘤細胞(例如侵襲性及/或轉移性腫瘤細胞或一或多種第二腫瘤)群之個體。該等方法包括向具有第一腫瘤及次生相關腫瘤細胞(例如侵襲性及/或轉移性腫瘤細胞)群之個體投與包含連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中靶向分子接合至CTLA-4，且在投與結合物後，用適於所選酞菁染料之波長照射第一腫瘤。在該等實施例中之一些中，不直接照射次生腫瘤細胞群。在利用抗CLTA-4結合物及照射(抗CTLA-4 PIT)治療(單獨或組合)之本文方法之一些實施例中，原發性/第一(經照射)腫瘤或額外(未經照射)腫瘤之生長受到抑制；減小第一(經照射)腫瘤或額外腫瘤之大小(例如，體積、尺寸或質量)；或者腫瘤生長及大小(例如體積、尺寸或質量)二者皆抑制或減少。
在一些實施例中，該等方法包括在投與結合物之前、同時或之後投與免疫檢查點抑制劑，例如抗PD-1抗體。在該等方法中，抑制、減少或消除第一腫瘤及/或次生腫瘤細胞群或一或多種第二腫瘤(例如轉移性腫瘤細胞)之生長(體積、尺寸或質量)，減少一或多種第一腫瘤及/或次生細胞群或一或多種第二腫瘤之體積、尺寸或質量，或其任一組合。在一些實施例中，對第一腫瘤及/或次生群或一或多種第二腫瘤之抑制之影響程度大於僅投與結合物、僅投與結合物之後照射或僅投與抗PD-1抗體所實現之抑制。在一些實施例中，若腫瘤在腫瘤體積、腫瘤尺寸或質量方面展現小於20%之增加；腫瘤體積、尺寸或質量無變化(即腫瘤生長或進展停止)；或者腫瘤之體積、尺寸或質量減小；或者腫瘤細胞數量減少，則實現抑制。
在本文之方法及用途中之任一者中，第一腫瘤可為原發性腫瘤或繼發性腫瘤。在一些實施例中，第一腫瘤及次生群係相關的。在一些實施例中，次生細胞群直接或間接源自第一腫瘤。在一些實施例中，次生細胞群包括一或多種第二腫瘤或第二病灶。在一些實施例中，次生群並不源自第一腫瘤。在一些實施例中，第一腫瘤係原發性腫瘤，且次生細胞群與原發性腫瘤相關；例如，次生細胞群直接或間接源自原發性腫瘤。在一些實施例中，第一腫瘤係原發性腫瘤，且次生腫瘤細胞群係第二原發性腫瘤。在一些實施例中，第一腫瘤係繼發性腫瘤，且次生細胞群與繼發性腫瘤相關。在一些態樣中，次生腫瘤群包括源自原發性腫瘤並侵入局部或遠端健康組織(即，侵入性腫瘤細胞)或擴散至具有原發性腫瘤(即，轉移性腫瘤細胞)之個體體內之一或多種遠端組織或器官、例如遠離定位或遠離原發性腫瘤之組織或器官的細胞。在一些態樣中，次生腫瘤細胞群係侵襲性及轉移性的。在一些態樣中，次生腫瘤細胞群係浸潤的。在一些態樣中，次生腫瘤細胞群係轉移性的，且與第一腫瘤直接或間接相關，例如直接或間接源自第一腫瘤。在其他態樣中，次生腫瘤細胞群係轉移性的且與第一腫瘤不直接相關。轉移性腫瘤細胞可位於肺、胃、肝、胰臟、***、食管、頭及頸、腦、周圍神經、皮膚、小腸、結腸、直腸、肛門、卵巢、子宮、膀胱、***、脂肪組織、骨骼肌、平滑肌、血管、骨、骨髓、眼、舌、淋巴結、脾、腎、子宮頸、***、女性生殖器、睪丸、血液、骨髓、腦脊髓液或任何其他組織或器官中之一或多個位置。在一些實施例中，轉移性腫瘤細胞包含在實體腫瘤中。在一些實施例中，轉移性腫瘤細胞係循環腫瘤細胞，係液體腫瘤或與腫瘤塊不相關。
在一些實施例中，本文提供之方法及用途包括治療具有一或多種第一腫瘤亦及侵襲性或轉移性腫瘤細胞之個體，例如當源自第一腫瘤之細胞已經侵襲至周圍組織中時。在一些實施例中，本文提供之方法及用途包括治療具有一或多種第一腫瘤亦及一或多種第二腫瘤或病灶之個體。在一些實施例中，第一腫瘤係原發性腫瘤，且侵襲性腫瘤細胞直接或間接源自第一腫瘤。在一些實施例中，侵襲性腫瘤細胞不直接源自第一腫瘤。該等方法包括向具有第一腫瘤及侵襲性腫瘤細胞之個體投與抗CTLA-4結合物，及在投與結合物後，用適於所選酞菁染料之波長照射第一腫瘤。在一些實施例中，該等方法包括在投與結合物之前、同時或之後投與免疫調節劑，例如免疫檢查點抑制劑。
在一些態樣中，侵襲性腫瘤細胞係指源自第一腫瘤之細胞且已經侵襲至具有第一腫瘤之個體體內之相同器官或鄰近器官之周圍組織或體腔。
在一些情況下，本文提供之方法包括照射一或多種第一腫瘤，且不照射一些或全部侵襲性或轉移性腫瘤細胞或第二腫瘤或第二病灶，且在該等方法中，抑制、減少或消除侵襲性或轉移性腫瘤細胞之生長；抑制、減少或消除第二腫瘤之生長；減少一或多種侵襲性或轉移性腫瘤之體積、尺寸或質量；減少一或多種第二腫瘤之體積、尺寸或質量；或其任一組合。在一些實施例中，亦抑制、減少或消除第一腫瘤之生長。舉例而言，一或多種第一腫瘤之生長或體積隨著對一或多種侵襲性或轉移性腫瘤細胞之效應及/或對一或多種第二腫瘤之效應而減少。
在一些實施例中，侵襲性腫瘤細胞包含在實體腫瘤中。在一些實施例中，侵襲性腫瘤細胞包含在體液(包括但不限於腹膜液、胸水,及腦脊髓液)中。在一些實施例中，侵襲性腫瘤細胞包含在一或多個體腔之滲出液中，包括(但不限於)腹膜滲出液(腹水)、胸膜滲出液及心包滲出液。
在一些實施例中，本文提供之方法及用途包括治療具有一或多種第一腫瘤亦及轉移性腫瘤細胞之個體。該等方法包括向具有第一腫瘤及轉移性腫瘤細胞之個體投與抗CTLA-4結合物，及在投與所述結合物之後，用適於所選酞菁染料之波長照射第一腫瘤。在一些實施例中，該等方法包括在投與結合物之前、同時或之後投與免疫調節劑，例如免疫檢查點抑制劑。在該等方法中，抑制、減少或消除轉移性腫瘤細胞之生長，減少一或多個轉移性腫瘤之體積，或其任一組合。
在本文提供之方法及用途之一些實施例中，轉移性腫瘤細胞位於第一腫瘤之遠端，且一些或全部轉移性腫瘤細胞未經照射，例如，未經直接照射。在方法及用途之一些實施例中，投與結合物後僅照射一或多種第一腫瘤，而不直接照射轉移性腫瘤細胞。在一些實施例中，照射多於一個第一腫瘤，但不照射腫瘤細胞(例如含有轉移性腫瘤細胞)之至少一個位點。
在一些態樣中，轉移性腫瘤細胞包括源自第一腫瘤並擴散至具有第一腫瘤之個體體內之一或多種遠端組織或器官的細胞。轉移性腫瘤細胞可位於肺、胃、肝、胰臟、***、食管、頭及頸、腦、周圍神經、皮膚、小腸、結腸、直腸、肛門、卵巢、子宮、膀胱、***、脂肪組織、骨骼肌、平滑肌、血管、骨、骨髓、眼、舌、淋巴結、脾、腎、子宮頸、***、女性生殖器、睪丸、血液、骨髓、腦脊髓液或任何其他組織或器官中之一或多個位置。在一些實施例中，轉移性腫瘤細胞包含在實體腫瘤中。在一些實施例中，轉移性腫瘤細胞係循環腫瘤細胞或與腫瘤塊不相關。II. 用於激發或增強局部及全身免疫反應之方法
在本文之一些實施例中，利用包括抗CTLA-4結合物之組合物的本文之方法可導致個體中全身及/或局部反應之增強，此進而可導致對癌症或腫瘤之療法或治療之增強或協同反應。在一些態樣中，欲治療之癌症或腫瘤展現降低之免疫反應性(例如，含有一或多個「冷」腫瘤)。在一些實施例中，展現較小免疫反應性之腫瘤係特徵在於對免疫療法無反應(例如對用免疫檢查點抑制劑之治療之反應性降低)、含有高含量之免疫阻抑細胞類型(例如，調節性T細胞)、含有低含量之細胞毒性效應免疫細胞(例如，CD8+ T細胞及/或天然殺手細胞)或其任一組合的腫瘤。在一些實施例中，本文之方法及組合物可有效治療大小較大之腫瘤，且展現比較小腫瘤更大之免疫阻抑，例如，含有增加含量之調節性T細胞，或減少之免疫細胞浸潤，例如減少之細胞毒性效應免疫細胞浸潤。該等腫瘤對其他治療(例如用免疫檢查點抑制劑(例如，裸(非結合之) CTLA-4抗體、裸PD-1抗體或裸PD-L1抗體)之治療、或用其他抗體或抗體-結合物之治療)之反應性較低或無反應性。抗CTLA-4-IR700 PIT抑制或實質上減少較大腫瘤或含有減少之細胞毒性免疫細胞浸潤之腫瘤生長之有效性使其不同於單獨用裸抗CTLA4抗體或結合物之治療，用裸抗CTLA4抗體或結合物之治療不能提供該等腫瘤之生長之抑制或減少。
在一些態樣中，本文之方法及用途包括投與個體抗CTLA-4結合物、投與免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑)，及在投與結合物後，照射腫瘤或癌性病灶或腫瘤微環境。免疫調節劑可在投與結合物之前、同時或之後投與。組合療法包括部分IV中進一步闡述之彼等。
在一些實施例中，本文之方法及組合物在患有癌症之個體中激發、刺激、加強、增進或支持免疫反應，例如全身性反應，例如全身免疫反應。在一些實施例中，本文之方法及用途包括增強患有癌症、腫瘤或癌性病灶之個體之全身免疫反應。「全身免疫反應」係指個體之免疫系統以全身性方式對一或多種免疫攻擊(包括與癌症、腫瘤或癌性病灶相關之攻擊)作出反應之能力。全身免疫反應可包括個體之適應性免疫系統及/或先天免疫系統之全身性反應。在一些態樣中，全身免疫反應包括跨不同組織(包括血流、淋巴結、骨髓、脾及/或腫瘤微環境)之免疫反應，且在一些情形下，包括組織及器官以及組織及器官之各種細胞及因子之間之協調反應。本文亦提供組合物及組合在個體中、例如在患有癌症或腫瘤之個體中增強、加強或增進個體對治療或療法之反應中的方法及用途。
在一些態樣中，本文提供之方法及組合物亦可展現遠端效應。在一些態樣中，「遠端效應」係指如下治療效應，其中未經直接照射或遠離局部照射位點之腫瘤(例如遠端或轉移性腫瘤)亦經治療，例如，導致腫瘤體積、尺寸及/或質量減小。
在一些態樣中，所提供之方法及用途包括向個體投與包含連接至靶向分子之酞菁染料之結合物，其中靶向分子接合至CTLA-4，及在投與結合物之後，照射腫瘤或癌性病灶或腫瘤微環境，以及投與免疫檢查點抑制劑。關於波長、照射劑量及照射定時之照射條件係例如本文所述之彼等。免疫檢查點抑制劑可在投與例如本文所述之結合物之前、同時或之後投與。在一些態樣中，本文提供之方法及用途導致個體之全身及/或局部免疫性之增強，此進而可導致對癌症之療法或治療的反應增強或協同。在一些實施例中，與僅投與結合物或僅投與免疫檢查點抑制劑相比，本文提供之方法及用途導致對癌症或腫瘤之治療或療法之增強之反應，例如協同反應。舉例而言，在一些實施例中，所提供之方法及用途與抗CTLA-4、PIT及免疫檢查點抑制劑(例如抗PD-1抗體)之組合導致協同反應，該組合在治療第一靶腫瘤及/或經照射第一腫瘤遠端之第二腫瘤細胞中比僅抗CTLA-4 PIT或僅抗PD-1抗體更有效。在一些態樣中，與投與抗CTLA-4結合物之後照射(抗CTLA-4 PIT)及免疫檢查點抑制劑(例如，抗PD-1抗體)之前之個體之全身及/或局部免疫性相比，增強之反應包括個體之全身及/或局部免疫性之增強。在一些態樣中，與僅投與抗CLTLA-4結合物、僅投與抗CTLA-4結合物之後照射、或僅投與免疫檢查點抑制劑(例如，抗PD-1抗體)相比，增強之反應包括對治療之增強之反應，例如額外、加成或協同之反應。
本文之方法及組合可激發、增加或增強針對第一腫瘤、侵襲性腫瘤、轉移性腫瘤及/或侵襲性或轉移性腫瘤細胞之全身性反應，例如全身免疫反應。在一些實施例中，第一腫瘤係展現降低之免疫反應性之「冷」腫瘤。在一些實施例中，侵襲性腫瘤或轉移性腫瘤係展現降低之免疫反應性之「冷」腫瘤。在一些實施例中，第一腫瘤及侵襲性腫瘤及/或轉移性腫瘤係「冷」腫瘤，各自展現降低之免疫反應性。
在一些態樣中，激發或增加之全身免疫反應包括個體中全身性CD8+ T效應細胞之數量及/或活性增加；如使用來自脾、外周血、骨髓或淋巴結之細胞之CTL分析量測之針對腫瘤細胞之全身性T細胞細胞毒性增加；侵襲性腫瘤及/或轉移性腫瘤中腫瘤內CD8+ T效應細胞之數量及/或活性增加；全身性CD8+ T細胞活化增加；侵襲性及/或轉移性腫瘤中CD8+ :Treg比率增加；侵襲性及/或轉移性腫瘤中天然殺手細胞浸潤增加；侵襲性及/或轉移性腫瘤中天然殺手細胞活化增加；全身性樹突細胞活化增加；侵襲性腫瘤及/或轉移性腫瘤中樹突細胞活化增加；侵襲性腫瘤及/或轉移性腫瘤中腫瘤內樹突細胞浸潤增加；侵襲性腫瘤及/或轉移性腫瘤中新T細胞引發增加；侵襲性腫瘤及/或轉移性腫瘤中T細胞多樣性增加；全身性調節性T細胞減少；侵襲性腫瘤及/或轉移性腫瘤中調節性T細胞減少；全身性骨髓源阻抑細胞減少；侵襲性腫瘤及/或轉移性腫瘤中腫瘤內骨髓源阻抑細胞減少；侵襲性腫瘤及/或轉移性腫瘤中腫瘤相關之纖維母細胞減少或其任一組合。在一些情況下，可藉由對個體之血液、組織、細胞或其他流體取樣並評價促炎性細胞介素之增加、免疫細胞活化標記物之增加或出現及/或T細胞多樣性來評價全身性反應。
在一些態樣中，全身免疫性之位準、強度或程度可基於腫瘤內CD8+ T淋巴球之數量、CD8+ T淋巴球對調節性T細胞(Treg)之比率、腫瘤內T淋巴球耗竭(例如，表現PD-1及/或CTLA4標記物之CD3+ CD8+ 細胞之百分比)、腫瘤內經活化CD8+ T淋巴球之數量或百分比(例如，Ki67+ 或CD69+ CD8細胞佔CD45+ 細胞之百分比)、細胞毒性腫瘤內T淋巴球之擴增(例如不表現PD-1及/或CTLA4標記物之CD3+ CD8+ 細胞之百分比)、基於脾細胞對腫瘤細胞之細胞毒性或其任一或全部組合來量測。在一些態樣中，腫瘤內CD8+ T淋巴球包括CD3+ CD8+ 細胞，腫瘤內耗竭之T淋巴球包括PD-1+ CTLA-4+ CD3+ CD8+ 細胞，活化腫瘤內CD8+ T淋巴球包括CD3+ CD8+ Ki67+ 及/或CD3+ CD8+ CD69+ 細胞，細胞毒性T淋巴球之擴增包括PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞。在某些態樣中，腫瘤內CD8+ T淋巴細胞、耗竭之腫瘤內T淋巴球、活化CD8+ T淋巴球或擴增之細胞毒性腫瘤內T淋巴球量測為白血球(CD45+ 細胞)及/或總CD8+ T細胞(例如CD3+ CD8+ CD45+ 細胞)之百分比。
在一些實施例中，全身免疫性之位準、強度或程度可基於腫瘤內天然殺手細胞之數量或百分比、腫瘤內活化天然殺手細胞之數量或百分比(例如CD49b+ CD3- Ki67+- 細胞作為CD45+ 細胞之百分比、或CD49b+ CD3- CD69+ 細胞佔CD45+ 細胞之百分比)來量測。可使用若干眾所周知之方法(包括本文所述之彼等)來實現該等數量或百分比之測定。舉例而言，可藉由例如藉由機械分離腫瘤及/或組織生檢或收集含有循環免疫細胞之血液樣品產生單細胞懸浮液、之後染色及流式細胞分析或質量細胞術，來測定該等數量或百分比。其他方法可包括組織及/或腫瘤生檢之多重免疫螢光成像。
在一些實施例中，藉由腫瘤內CD8+ T淋巴球(例如CD3+ CD8+ T淋巴球)之數量量測全身免疫性之強度或程度，且若與治療前相比，治療後CD45+ 細胞之總數中腫瘤內CD8+ T淋巴球(例如CD3+ CD8+ T淋巴球)之百分比增加，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在該等實例之一些中，若腫瘤內CD8+ T淋巴球(例如CD3+ CD8+ T淋巴球)之數量為CD45+ 細胞之總數之至少或約30%、例如CD45+ 細胞之總數之至少或約30%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%或更多，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在一些實施例中，腫瘤內CD8+ T淋巴球之百分比為腫瘤內CD45+ 細胞群體之至少40%。在一些實施例中，若與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞之百分比增加，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在該等實施例中之一些中，與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞之百分比增加至少或約5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、30%或更多。在一些實施例中，與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞之百分比增加至少10%。
在一些實施例中，藉由耗竭之腫瘤內CD8+ T淋巴球之數量(例如PD-1+ CTLA-4+ CD3+ CD8+ 細胞之數量佔腫瘤內CD8+ T淋巴球(例如CD3+ CD8+ T淋巴球)之百分比)來量測全身免疫性之強度或程度，且若與治療前相比，治療後腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞中PD-1+ CTLA-4+ CD3+ CD8+ 細胞之百分比降低，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在該等實施例中之一些中，若治療後腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞中PD-1+ CTLA-4+ CD3+ CD8+ 細胞之百分比小於20%或約20%，例如小於19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加。在一些實施例中，若與治療前相比，治療後腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞中PD-1+ CTLA-4+ CD3+ CD8+ 細胞之百分比降低，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在該等實施例中之一些中，與治療前相比，腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞中PD-1+ CTLA-4+ CD3+ CD8+ 細胞之百分比降低至少或約5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、30%或更多。在一些實施例中，與治療前相比，治療後腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞群體中耗竭之腫瘤內CD8+ T細胞(PD-1+ CTLA-4+ CD3+ CD8+ 細胞)之百分比降低至少10%。
在一些實施例中，藉由活化之腫瘤內CD8+ T淋巴球(例如CD3+ CD8+ Ki67+ 及/或CD3+ CD8+ CD69+ T淋巴球)之數量來量測全身免疫性之強度或程度，且若與治療前相比，治療後作為腫瘤內CD45+ 白血球之百分比之活化之腫瘤內CD8+ T淋巴球(例如CD3+ CD8+ Ki67+ 及/或CD3+ CD8+ CD69+ T淋巴球)的數量增加，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在該等實施例中之一些中，若治療後腫瘤內CD3+ CD8+ Ki67+ 細胞之數量為CD45+ 細胞之總數之至少0.15%或約0.15%(例如腫瘤內CD45+ 細胞之總數之至少或約0.2%、0.25%、0.3%、0.35%、0.4%、0.45%、0.5%或更多)，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在其他該等實施例中，若治療後腫瘤內CD3+ CD8+ CD69+ 細胞之數量係CD45+ 細胞之總數之至少或約0.5%，例如腫瘤內CD45+ 細胞之總數之至少或約0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1.0%、1.1%、1.2%、1.3%、1.4%、1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%、2.0%、2.1%、2.2%、2.3%、2.4%、2.5%、2.6%、2.7%、2.8%、2.9%、3.0%或更多，例如腫瘤內CD45+ 細胞之總數之至少約1.0%，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在一些實施例中，若與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞中腫瘤內CD3+ CD8+ Ki67+ 及/或CD3+ CD8+ CD69+ T淋巴球之百分比增加，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在該等實施例中之一些中，與治療前腫瘤內CD45+ 細胞中CD3+ CD8+ Ki67+ 及/或CD3+ CD8+ CD69+ T淋巴球細胞之百分比相比，腫瘤內CD45+ 細胞中CD3+ CD8+ Ki67+ 及/或CD3+ CD8+ CD69+ T淋巴球之百分比增加至少或約1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍-18倍、19倍、20倍、21倍、22倍、23倍、24倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍或更多。在一些實施例中，與治療前腫瘤內CD45+ 細胞中CD3+ CD8+ Ki67+ T淋巴球細胞之百分比相比，腫瘤內CD45+ 細胞中腫瘤內CD3+ CD8+ Ki67+ T淋巴球細胞之百分比增加至少15倍或20倍。在一些實施例中，與治療前腫瘤內CD45+ 細胞中CD3+ CD8+ CD69+ T淋巴球細胞之百分比相比，腫瘤內CD45+ 細胞中腫瘤內CD3+ CD8+ CD69+ T淋巴球細胞之百分比增加至少5倍。
在一些實施例中，藉由腫瘤內細胞毒性T淋巴球(例如PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞)之擴增量測全身免疫性之強度或程度，且若與治療前相比，治療後CD8+ T細胞(例如CD3+ CD8+ T細胞)中腫瘤內細胞毒性T淋巴球(例如PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞)之百分比增加，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在該等實例之一些中，若腫瘤內細胞毒性T淋巴球(例如PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞)之數量係CD3+ CD8+ T細胞之總數之至少或約20%，例如CD45+ 細胞之總數之至少或約25%、30%、35%、40%、41%、42% 43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%或更多，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在一些實施例中，腫瘤內PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞之百分比係腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞群體之至少或約40%、45%、50%或55%。在一些實施例中，若與治療前相比，治療後腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞群體中腫瘤內PD-1‑ CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞之百分比增加，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在該等實施例之一些中，與治療前腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞群體中腫瘤內PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞之百分比，治療後腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞群體中腫瘤內PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞之百分比增加至少或約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、50%、60%、70%、75%、80%或更多。在一些實施例中，與治療前腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞群體中腫瘤內PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞之百分比相比，治療後腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞群體中腫瘤內PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞之百分比增加至少30%。
在一些實施例中，根據本文提供之方法及用途之治療導致調節性T細胞(Treg) (例如腫瘤內CD4+ FoxP3+ Treg)之細胞死亡或數量減少。因此，在一些實施例中，可基於腫瘤內Treg之數量或百分比來量測全身免疫性之位準、強度或程度。在某些態樣中，抗CTLA-4結合物與表現CTLA-4之細胞(例如某些Treg)之表面之接合以及實現表現CTLA-4之腫瘤內細胞之照射依賴性裂解及死亡之照射，導致表現CTLA-4之細胞之數量減少。在一些態樣中，該等結果導致腫瘤內之免疫阻抑細胞(例如Treg)之數量減少，且因此可緩和或逆轉腫瘤中之免疫抑制。在一些態樣中，免疫阻抑細胞之該減少可導致腫瘤內T細胞(例如腫瘤內CD8+ 細胞毒性T細胞或CD4+ 輔助T細胞)之活化及增殖，此可消除腫瘤細胞，並導致腫瘤體積減小及/或腫瘤消除。在一些態樣中，根據所提供之實施例之治療可導致腫瘤內Treg之減少及/或腫瘤內CD8+ 對Treg比率或腫瘤內CD4+ 對Treg比率之增加。在所提供之方法及用途之一些實施例中，全身性Treg不會由於治療而減少。
在一些態樣中，根據本文提供之方法及用途之治療可導致腫瘤內Treg之持久或耐久降低。在一些態樣中，根據本文提供之方法及用途之治療可導致腫瘤內CD8+ 對Treg比率或腫瘤內CD4+ 對Treg比率之持久或耐久增加。在一些實施例中，可藉由測定腫瘤內CD8+ 對Treg之比率來量測全身免疫性之位準、強度或程度，且若與治療前相比，治療後腫瘤內CD8+ 對Treg之比率增加，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在該等實例中之一些中，若與治療前腫瘤內CD8+ 對Treg之比率相比，腫瘤內CD8+ 對Treg之比率增加至少或約1倍、1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2.0倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍、3.0倍、3.1倍、3.2倍、3.3倍、3.4倍、3.5倍、3.6倍、3.7倍、3.8倍、3.9倍、4.0倍或更多，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在一些實施例中，可藉由測定腫瘤內CD4+ 對Treg之比率來量測全身免疫性之位準、強度或程度，且若與治療前相比，治療後腫瘤內CD4+ 對Treg之比率增加，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在一些實施例中，可藉由測定腫瘤內Treg對CD45+ 之比率來量測全身免疫性之位準、強度或程度，且若與治療前相比，治療後腫瘤內Treg對CD45+ 之比率降低，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在一些態樣中，該增加或降低可持續至少或約3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天或3週、4週、5週、6週、7或8週或更長時間。
在一些態樣中，可藉由使用脾細胞或外周血細胞或骨髓細胞或淋巴結細胞之CTL活性分析來量測全身免疫性之位準、強度或程度。在一些實施例中，在照射個體之第一腫瘤後介於第4天與第28天之間自個體收集細胞。
在一些態樣中，可藉由腫瘤內T細胞耗竭分析使用自第一腫瘤或轉移性腫瘤細胞團或侵襲性腫瘤細胞團收集之T細胞來量測全身免疫性之位準、強度或程度。在一些實施例中，在照射個體之第一腫瘤後介於第4天與第28天之間自個體收集細胞。
在一些態樣中，可藉由腫瘤內效應T細胞擴增分析使用自第一腫瘤或轉移性腫瘤細胞團或侵襲性腫瘤細胞團收集之T細胞來量測全身免疫性之位準、強度或程度。在一些實施例中，在照射個體之第一腫瘤後介於第4天與第28天之間自個體收集細胞。
在一些態樣中，可藉由T細胞受體多樣性分析使用自第一腫瘤或轉移性腫瘤細胞團或侵襲性腫瘤細胞團或外周循環收集之T細胞來量測全身免疫性之位準、強度或程度。在一些實施例中，在照射個體之第一腫瘤後介於第4天與第28天之間自個體收集細胞。
在一些態樣中，可藉由測定腫瘤中調節性T細胞(Treg)之存在、數量或頻率及/或來自第一腫瘤或轉移性腫瘤細胞團或侵襲性腫瘤細胞團之腫瘤內Treg細胞對腫瘤內CD8+ T細胞或腫瘤內CD4+ T細胞之比率來測定全身免疫性之位準、強度或程度。在一些實施例中，在照射個體之第一腫瘤後介於第4天與第28天之間自個體收集細胞。
在一些實施例中，可基於腫瘤內活化之天然殺手(NK)細胞之數量或百分比(例如，CD49b+ CD3- Ki67+- 細胞佔CD45+ 細胞之百分比、或CD49b+ CD3- CD69+ 細胞佔CD45+ 細胞之百分比)來量測全身免疫性之位準、強度或程度。在一些實施例中，藉由腫瘤內Ki-67+ NK細胞及/或CD69+ NK細胞或例如CD49b+ CD3- Ki-67+ NK細胞及/或CD49b+ CD3- CD69+ NK細胞之數量來量測全身免疫性之強度或程度，且若與治療前相比，治療後CD45+ 細胞之總數中腫瘤內Ki-67+ NK細胞(例如CD49b+ CD3- Ki-67+ NK細胞)及/或CD69+ NK細胞(例如CD49b+ CD3- CD69+ NK細胞)之百分比增加，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在該等實施例中之一些中，若腫瘤內Ki-67+ NK細胞(例如CD49b+ CD3- Ki-67+ NK細胞)之數量為CD45+ 細胞之總數之至少或約0.03%，例如CD45+ 細胞之總數之至少或約0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.10%、0.11%、0.12%、0.13%、0.14%、0.15%、0.16%、0.17%、0.18%、0.19%、0.20%或更多，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在一些實施例中，腫瘤內Ki-67+ NK細胞之百分比為腫瘤內CD45+ 細胞群體之至少0.05%。在一些實施例中，若與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內Ki-67+ NK細胞之百分比增加，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在該等實施例中之一些中，與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內Ki-67+ NK細胞之百分比增加至少或約0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.10%、0.11%、0.12%、0.13%、0.14%、0.15%或更多。在一些實施例中，與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內Ki-67+ NK細胞之百分比增加至少5%。
在該等實施例中之一些中，若腫瘤內CD69+ NK細胞(例如CD49b+ CD3- CD69+ NK細胞)之數量為CD45+ 細胞之總數之至少或約0.2%，例如CD45+ 細胞之總數之至少或約0.2%、0.25%、0.3%、0.35%、0.4%、0.45%、0.5%、0.55%、0.6%、0.65%、0.7%、0.75%、0.8%、0.85%、0.9%、0.95%、10%或更多，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在一些實施例中，腫瘤內CD69+ NK細胞之百分比為腫瘤內CD45+ 細胞群體之至少0.25%或至少0.4%。在一些實施例中，若與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內CD69+ NK細胞之百分比增加，則針對復發腫瘤之全身免疫性增加或增進。在該等實施例中之一些中，與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內CD69+ NK細胞之百分比增加至少或約0.1%、0.15%、0.2%、0.25%、0.3%、0.35%、0.4%、0.45%、0.5%、0.55%、0.6%、0.65%、0.7%、0.75%、0.8%、0.85%、0.9%、0.95%、10%或更多。在一些實施例中，與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內CD69+ NK細胞之百分比增加至少0.25%。
在一些實施例中，可組合使用上述分析中之任一者。通常，藉由分析循環中或位於照射位點或區域遠端之細胞或組分(如細胞介素)來評價全身免疫性。然而，在一些實施例中，藉由分析經照射腫瘤及/或經照射腫瘤之TME內之細胞或組分(例如，細胞介素)來評價全身免疫性。在一些實施例中，在用本文提供之任何方法治療之前評價全身免疫性。在一些實施例中，在用任何提供之方法治療後評價全身免疫性。在一些實施例中，在用本文提供之任何方法治療之前及之後評價全身免疫性。
在一些態樣中，可藉由分析直接或間接受該等方法影響之細胞來評價全身性反應。舉例而言，可在治療後介於第4天與第28天之間或在照射個體之第一腫瘤之步驟後之任何時間自個體收集樣品。亦可在結合物投與前收集樣品，以在治療前確立基線用於比較。在一些實施例中，將全身免疫性之強度或程度與治療前同一個體之全身免疫性之強度或程度進行比較。在該等實施例中之一些中，將全身免疫性之強度或程度與個體群體進行比較。在該等實施例中之一些中，將全身免疫性之強度或程度與臨界值進行比較。在一些實施例中，將組合療法(例如抗CTLA-4 PIT與投與檢查點抑制劑(例如抗PD-1抗體)之組合)後之全身免疫性的強度或程度與用單一療法(例如投與單一藥劑，例如單獨免疫檢查點抑制劑(例如抗PD-1抗體)或抗CTLA-4結合物或抗CTLA-4 PIT)之治療後之全身免疫性的強度或程度進行比較。
在一些實施例中，本文之方法及組合物在患有癌症之個體中激發、刺激、加強、增進或支持免疫反應，例如局部反應，例如局部免疫反應。在一些實施例中，本文之方法及用途包括增強患有癌症、腫瘤或癌性病灶之個體之局部反應。在一些實施例中，第一腫瘤係展現降低之免疫反應性之「冷」腫瘤。「局部免疫反應」係指組織或器官中對一或多種免疫攻擊(包括與癌症、腫瘤或癌性病灶相關之彼等)的免疫反應。局部免疫反應可包括適應性免疫系統及/或先天免疫系統。在一些態樣中，局部免疫性包括在不同組織(例如血流、淋巴結、骨髓、脾及/或腫瘤微環境)同時發生之免疫反應。
在一些態樣中，激發或增加之局部免疫反應包括個體中腫瘤內CD8+ T效應細胞之數量及/或活性增加、CD8+ T效應細胞活化增加、腫瘤內CD8+ :Treg比率增加、腫瘤內天然殺手細胞浸潤增加、腫瘤內天然殺手細胞活化增加、腫瘤內樹突細胞活化增加、腫瘤內樹突細胞浸潤增加、腫瘤內新T細胞引發增加、腫瘤內T細胞多樣性增加、腫瘤內調節性T細胞減少、腫瘤內骨髓源阻抑細胞減少、腫瘤內腫瘤相關之纖維母細胞減少、腫瘤內耗竭之PD-1+ CTLA-4+ CD3+ CD8+ T細胞之數量及/或活性減少或其任一組合。
在一些態樣中，局部免疫性之位準、強度或程度可基於腫瘤內CD8+ T淋巴球之數量、CD8+ T淋巴球對調節性T細胞(Treg)之比率、腫瘤內T淋巴球耗竭(例如，表現PD-1及/或CTLA4標記物之CD3+ CD8+ 細胞之百分比)、腫瘤內活化CD8+ T淋巴球之數量或百分比(例如，Ki67+ 或CD69+ CD8細胞佔CD45+ 細胞之百分比)、細胞毒性腫瘤內T淋巴球之擴增(例如不表現PD-1及/或CTLA4標記物之CD3+ CD8+ 細胞之百分比)、基於脾細胞對腫瘤細胞之細胞毒性或其任一或全部組合來量測。在一些態樣中，腫瘤內CD8+ T淋巴球包括CD3+ CD8+ 細胞，腫瘤內耗竭之T淋巴球包括PD-1+ CTLA-4+ CD3+ CD8+ 細胞，活化腫瘤內CD8+ T淋巴球包括CD3+ CD8+ Ki67+ 及/或CD3+ CD8+ CD69+ 細胞，細胞毒性T淋巴球之擴增包括PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞。在某些態樣中，腫瘤內CD8+ T淋巴細胞、耗竭之腫瘤內T淋巴球、活化CD8+ T淋巴球或擴增之細胞毒性腫瘤內T淋巴球量測為白血球(CD45+ 細胞)及/或總CD8+ T細胞(例如CD3+ CD8+ CD45+ 細胞)之百分比。可使用若干眾所周知之方法(包括本文所述之彼等)來實現該等數量或百分比之測定。舉例而言，可藉由例如藉由機械分離腫瘤及/或組織生檢或收集含有循環免疫細胞之血液樣品產生單細胞懸浮液、之後染色及流式細胞分析或質量細胞術，來測定該等數量或百分比。其他方法可包括組織及/或腫瘤生檢之多重免疫螢光成像。
在一些實施例中，藉由腫瘤內CD8+ T淋巴球(例如CD3+ CD8+ T淋巴球)之數量量測局部免疫性之強度或程度，且若與治療前相比，治療後CD45+ 細胞之總數中腫瘤內CD8+ T淋巴球(例如CD3+ CD8+ T淋巴球)之百分比增加，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在該等實例之一些中，若腫瘤內CD8+ T淋巴球(例如CD3+ CD8+ T淋巴球)之數量為CD45+ 細胞之總數之至少或約30%、例如CD45+ 細胞之總數之至少或約30%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%或更多，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在一些實施例中，腫瘤內CD8+ T淋巴球之百分比為腫瘤內CD45+ 細胞群體之至少40%。在一些實施例中，若與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞之百分比增加，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在該等實施例中之一些中，與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞之百分比增加至少或約5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、30%或更多。在一些實施例中，與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞之百分比增加至少10%。
在一些實施例中，藉由耗竭之腫瘤內CD8+ T淋巴球之數量(例如PD-1+ CTLA-4+ CD3+ CD8+ 細胞之數量佔腫瘤內CD8+ T淋巴球(例如CD3+ CD8+ T淋巴球)之百分比)來量測全身免疫性之強度或程度，且若與治療前相比，治療後腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞中PD-1+ CTLA-4+ CD3+ CD8+ 細胞之百分比降低，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在該等實施例中之一些中，若治療後腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞中PD-1+ CTLA-4+ CD3+ CD8+ 細胞之百分比小於20%或約20%，例如小於19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或更少，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加。在一些實施例中，若與治療前相比，治療後腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞中PD-1+ CTLA-4+ CD3+ CD8+ 細胞之百分比降低，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在該等實施例中之一些中，與治療前相比，腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞中PD-1+ CTLA-4+ CD3+ CD8+ 細胞之百分比降低至少或約5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、30%或更多。在一些實施例中，與治療前相比，治療後腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞群體中耗竭之腫瘤內CD8+ T細胞(PD-1+ CTLA-4+ CD3+ CD8+ 細胞)之百分比降低至少10%。
在一些實施例中，藉由活化之腫瘤內CD8+ T淋巴球(例如CD3+ CD8+ Ki67+ 及/或CD3+ CD8+ CD69+ T淋巴球)之數量來量測全身免疫性之強度或程度，且若與治療前相比，治療後作為腫瘤內CD45+ 白血球之百分比之活化之腫瘤內CD8+ T淋巴球(例如CD3+ CD8+ Ki67+ 及/或CD3+ CD8+ CD69+ T淋巴球)的數量增加，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在該等實施例中之一些中，若治療後腫瘤內CD3+ CD8+ Ki67+ 細胞之數量為CD45+ 細胞之總數之至少0.15%或約0.15%(例如腫瘤內CD45+ 細胞之總數之至少或約0.2%、0.25%、0.3%、0.35%、0.4%、0.45%、0.5%或更多)，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在其他該等實施例中，若治療後腫瘤內CD3+ CD8+ CD69+ 細胞之數量係CD45+ 細胞之總數之至少或約0.5%，例如腫瘤內CD45+ 細胞之總數之至少或約0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1.0%、1.1%、1.2%、1.3%、1.4%、1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%、2.0%、2.1%、2.2%、2.3%、2.4%、2.5%、2.6%、2.7%、2.8%、2.9%、3.0%或更多，例如腫瘤內CD45+ 細胞之總數之至少約1.0%，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在一些實施例中，若與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞中腫瘤內CD3+ CD8+ Ki67+ 及/或CD3+ CD8+ CD69+ T淋巴球之百分比增加，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在該等實施例中之一些中，與治療前腫瘤內CD45+ 細胞中CD3+ CD8+ Ki67+ 及/或CD3+ CD8+ CD69+ T淋巴球細胞之百分比相比，腫瘤內CD45+ 細胞中CD3+ CD8+ Ki67+ 及/或CD3+ CD8+ CD69+ T淋巴球之百分比增加至少或約1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍-18倍、19倍、20倍、21倍、22倍、23倍、24倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍、50倍、55倍、60倍或更多。在一些實施例中，與治療前腫瘤內CD45+ 細胞中CD3+ CD8+ Ki67+ T淋巴球細胞之百分比相比，腫瘤內CD45+ 細胞中腫瘤內CD3+ CD8+ Ki67+ T淋巴球細胞之百分比增加至少15倍或20倍。在一些實施例中，與治療前腫瘤內CD45+ 細胞中CD3+ CD8+ CD69+ T淋巴球細胞之百分比相比，腫瘤內CD45+ 細胞中腫瘤內CD3+ CD8+ CD69+ T淋巴球細胞之百分比增加至少5倍。
在一些實施例中，藉由腫瘤內細胞毒性T淋巴球(例如PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞)之擴增量測局部免疫性之強度或程度，且若與治療前相比，治療後CD8+ T細胞(例如CD3+ CD8+ T細胞)中腫瘤內細胞毒性T淋巴球(例如PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞)之百分比增加，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在該等實例之一些中，若腫瘤內細胞毒性T淋巴球(例如PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞)之數量係CD3+ CD8+ T細胞之總數之至少或約20%，例如CD45+ 細胞之總數之至少或約25%、30%、35%、40%、41%、42% 43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%或更多，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在一些實施例中，腫瘤內PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞之百分比係腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞群體之至少或約40%、45%、50%或55%。在一些實施例中，若與治療前相比，治療後腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞群體中腫瘤內PD-1‑ CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞之百分比增加，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在該等實施例之一些中，與治療前腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞群體中腫瘤內PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞之百分比，治療後腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞群體中腫瘤內PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞之百分比增加至少或約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、50%、60%、70%、75%、80%或更多。在一些實施例中，與治療前腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞群體中腫瘤內PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞之百分比相比，治療後腫瘤內CD3+ CD8+ T細胞群體中腫瘤內PD-1- CTLA-4- CD3+ CD8+ 細胞之百分比增加至少30%。
在一些實施例中，根據本文提供之方法及用途之治療導致調節性T細胞(Treg) (例如腫瘤內CD4+ FoxP3+ Treg)之細胞死亡或數量減少，此可促使局部免疫性。因此，在一些實施例中，可基於腫瘤內Treg之數量或百分比來量測局部免疫性之位準、強度或程度。在某些態樣中，抗CTLA-4結合物與表現CTLA-4之細胞(例如某些Treg)之表面之接合以及實現表現CTLA-4之腫瘤內細胞之照射依賴性裂解及死亡之照射，導致表現CTLA-4之細胞之數量減少。在一些態樣中，該等結果導致腫瘤內之免疫阻抑細胞(例如Treg)之數量減少，且因此可緩和或逆轉腫瘤中之免疫抑制。在一些態樣中，免疫阻抑細胞之該減少可導致腫瘤內T細胞(例如腫瘤內CD8+ 細胞毒性T細胞或CD4+ 輔助T細胞)之活化及增殖，此可消除腫瘤細胞，並導致腫瘤體積減小及/或腫瘤消除。在一些態樣中，根據所提供之實施例之治療可導致腫瘤內Treg之減少及/或腫瘤內CD8+ 對Treg比率或腫瘤內CD4+ 對Treg比率之增加。在所提供之方法及用途之一些實施例中，全身性Treg不會由於治療而減少。
在一些態樣中，根據本文提供之方法及用途之治療可導致腫瘤內Treg之持久或耐久降低。在一些態樣中，根據本文提供之方法及用途之治療可導致腫瘤內CD8+ 對Treg比率或腫瘤內CD4+ 對Treg比率之持久或耐久增加。在一些實施例中，可藉由測定腫瘤內CD8+ 對Treg之比率來量測局部免疫性之位準、強度或程度，且若與治療前相比，治療後腫瘤內CD8+ 對Treg之比率增加，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在該等實例中之一些中，若與治療前腫瘤內CD8+ 對Treg之比率相比，腫瘤內CD8+ 對Treg之比增加至少或約1倍、1.1倍、1.2倍、1.3倍、1.4倍、1.5倍、1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2.0倍、2.1倍、2.2倍、2.3倍、2.4倍、2.5倍、2.6倍、2.7倍、2.8倍、2.9倍、3.0倍、3.1倍、3.2倍、3.3倍、3.4倍、3.5倍、3.6倍、3.7倍、3.8倍、3.9倍、4.0倍或更多，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在一些實施例中，可藉由測定腫瘤內CD4+ 對Treg之比率來量測局部免疫性之位準、強度或程度，且若與治療前相比，治療後腫瘤內CD4+ 對Treg之比率增加，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在一些實施例中，可藉由測定腫瘤內Treg對CD45+ 之比率來量測局部免疫性之位準、強度或程度，且若與治療前相比，治療後腫瘤內Treg對CD45+ 之比率降低，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在一些態樣中，該增加或降低可持續至少或約3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天或3週、4週、5週、6週、7或8週或更長時間。
在一些態樣中，可藉由使用脾細胞或外周血細胞或骨髓細胞或淋巴結細胞之CTL活性分析來量測局部免疫性之位準、強度或程度。在一些實施例中，在照射個體之第一腫瘤後介於第4天與第28天之間自個體收集細胞。
在一些態樣中，可藉由腫瘤內T細胞耗竭分析使用自第一腫瘤或轉移性腫瘤細胞團或侵襲性腫瘤細胞團收集之T細胞來量測局部免疫性之位準、強度或程度。在一些實施例中，在照射個體之第一腫瘤後介於第4天與第28天之間自個體收集細胞。
在一些態樣中，可藉由腫瘤內效應T細胞擴增分析使用自第一腫瘤或轉移性腫瘤細胞團或侵襲性腫瘤細胞團收集之T細胞來量測局部免疫性之位準、強度或程度。在一些實施例中，在照射個體之第一腫瘤後介於第4天與第28天之間自個體收集細胞。
在一些態樣中，可藉由T細胞受體多樣性分析使用自第一腫瘤或轉移性腫瘤細胞團或侵襲性腫瘤細胞團或外周循環收集之T細胞來量測局部免疫性之位準、強度或程度。在一些實施例中，在照射個體之第一腫瘤後介於第4天與第28天之間自個體收集細胞。
在一些態樣中，可藉由測定腫瘤中調節性T細胞(Treg)之存在、數量或頻率及/或來自第一腫瘤或轉移性腫瘤細胞團或侵襲性腫瘤細胞團之腫瘤內Treg細胞對腫瘤內CD8+ T細胞或腫瘤內CD4+ T細胞之比率來測定局部免疫性之位準、強度或程度。在一些實施例中，在照射個體之第一腫瘤後介於第4天與第28天之間自個體收集細胞。
在一些實施例中，可組合使用上述分析中之任一者。通常，藉由分析經照射腫瘤及/或經照射腫瘤之TME內之細胞或組分(例如，細胞介素)來評價局部免疫性。然而，在一些實施例中，藉由分析循環中或位於照射位點或區域遠端之細胞或組分(如細胞介素)來評價局部免疫性。
在一些實施例中，可基於腫瘤內活化之天然殺手(NK)細胞之數量或百分比(例如，CD49b+ CD3- Ki67+- 細胞佔CD45+ 細胞之百分比、或CD49b+ CD3- CD69+ 細胞佔CD45+ 細胞之百分比)來量測局部免疫性之位準、強度或程度。在一些實施例中，藉由腫瘤內Ki-67+ NK細胞及/或CD69+ NK細胞或例如CD49b+ CD3- Ki-67+ NK細胞及/或CD49b+ CD3- CD69+ NK細胞之數量來量測局部免疫性之強度或程度，且若與治療前相比，治療後CD45+ 細胞之總數中腫瘤內Ki-67+ NK細胞(例如CD49b+ CD3- Ki-67+ NK細胞)及/或CD69+ NK細胞(例如CD49b+ CD3- CD69+ NK細胞)之百分比增加，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在該等實施例中之一些中，若腫瘤內Ki-67+ NK細胞(例如CD49b+ CD3- Ki-67+ NK細胞)之數量為CD45+ 細胞之總數之至少或約0.03%，例如CD45+ 細胞之總數之至少或約0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08% 0.09%、0.10%、0.11%、0.12%、0.13%、0.14%、0.15%、0.16%、0.17%、0.18%、0.19%、0.20%或更多，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在一些實施例中，腫瘤內Ki-67+ NK細胞之百分比為腫瘤內CD45+ 細胞群體之至少0.05%。在一些實施例中，若與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內Ki-67+ NK細胞之百分比增加，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在該等實施例中之一些中，與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內Ki-67+ NK細胞之百分比增加至少或約0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.10%、0.11%、0.12%、0.13%、0.14%、0.15%或更多。在一些實施例中，與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內Ki-67+ NK細胞之百分比增加至少5%。
在該等實施例中之一些中，若腫瘤內CD69+ NK細胞(例如CD49b+ CD3- CD69+ NK細胞)之數量為CD45+ 細胞之總數之至少或約0.2%，例如CD45+ 細胞之總數之至少或約0.2%、0.25%、0.3%、0.35%、0.4%、0.45%、0.5%、0.55%、0.6%、0.65%、0.7%、0.75%、0.8%、0.85%、0.9%、0.95%、10%或更多，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在一些實施例中，腫瘤內CD69+ NK細胞之百分比為腫瘤內CD45+ 細胞群體之至少0.25%或至少0.4%。在一些實施例中，若與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內CD69+ NK細胞之百分比增加，則針對復發腫瘤之局部免疫性增加或增進。在該等實施例中之一些中，與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內CD69+ NK細胞之百分比增加至少或約0.1%、0.15%、0.2%、0.25%、0.3%、0.35%、0.4%、0.45%、0.5%、0.55%、0.6%、0.65%、0.7%、0.75%、0.8%、0.85%、0.9%、0.95%、10%或更多。在一些實施例中，與治療前相比，治療後腫瘤內CD45+ 細胞群體中腫瘤內CD69+ NK細胞之百分比增加至少0.25%。在一些情形下，可藉由自個體獲取血液、組織或其他樣品並評價腫瘤或TME中抗免疫細胞類型之增加及/或評價局部免疫活化標記物之增加或出現來評價局部反應，例如局部免疫反應。
在一些實施例中，在用本文提供之任何方法治療之前評價全身免疫性。在一些實施例中，在用任何提供之方法治療後評價全身免疫性。在一些實施例中，在用本文提供之任何方法治療之前及之後評價全身免疫性。
在一些態樣中，可藉由分析直接或間接受該等方法影響之細胞來評價局部反應，例如局部免疫反應。舉例而言，可在治療後介於第4天與第28天之間或在照射個體之第一腫瘤之步驟後之任何時間自個體收集細胞。III. 利用包括單一療法及組合療法方法之方法的組合物
本文提供之方法及用途採用抗CTLA-4結合物，其包括接合至與酞菁染料連接之CTLA-4之靶向分子。細胞毒性T淋巴球相關蛋白4 (CTLA-4或CTLA4)，亦稱為分化簇152 (CD152))，係起免疫檢查點之作用並下調免疫反應的蛋白受體。CTLA-4在CD4+ FoxP3+ 調節性T細胞(Treg)、活化T細胞及某些腫瘤細胞中組成型表現。其當與抗原呈遞細胞表面之CD80或CD86接合時充當「關閉」開關。
在一些實施例中，靶向分子可為抗CTLA-4抗體或其抗原接合片段。實例性抗CTLA-4抗體包括(但不限於)伊匹單抗(益伏)、曲美目單抗(替西木單抗，CP-675,206)、AGEN1181、AGEN1884、ADU-1064、BCD-145、BCD-217、ADG116、AK104、ATOR-1015、BMS-986218、KN046、MGD019、MK-1308、REGN4659、XmAb20717及XmAb22841。
在一些實施例中，靶向分子可為抗體或抗體片段，其包括抗CTLA-4抗體(例如任何所述抗體或其抗原接合片段)之「互補決定區」或「CDR」。CDR通常負責與抗原之表位之接合。每一鏈之CDR通常稱為CDR1、CDR2及CDR3 (自N-末端開始依序編號)，且通常亦藉由特定CDR所位於之鏈來鑑別。因此，重鏈可變區(VH ) CDR3位於發現其之抗體之重鏈之可變結構域中，而輕鏈可變區(VL ) CDR1係來自發現其之抗體之輕鏈可變結構域之CDR1。特異性不同(例如不同抗原之組合位點不同)之抗體具有不同CDR。儘管CDR因抗體而異，但CDR內僅有限數量之胺基酸位置直接參與抗原接合。CDR內之該等位置稱為特異性決定殘基(SDR)。在一些實施例中，靶向分子包括伊匹單抗(益伏)、曲美目單抗(替西木單抗)、AGEN1181、AGEN1884、ADU-1064、BCD-145或BCD-217之CDR。
在一些實施例中，抗CTLA-4結合物之靶向分子係伊匹單抗(益伏)或曲美目單抗(替西木單抗)。在一些實施例中，抗CTLA-4結合物之靶向分子係任何本文所述抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗(益伏)或曲美目單抗(替西木單抗))或其抗原接合片段之生物類似物、互換或生物改良物。該等抗體亦包括任何本文所述抗CTLA-4抗體(例如伊匹單抗(益伏)、曲美目單抗(替西木單抗))或其抗原接合片段之拷貝生物製劑及生物非專利藥(biogenerics)。
在一些實施例中，抗CTLA-4抗體之靶向分子包含功能Fc區。在一些實施例中，抗CTLA-4抗體之靶向分子係人類化抗體。
本文之方法及組合物中使用之抗CTLA-4結合物包括酞菁染料。在一些實施例中，酞菁染料係具有矽配位金屬之酞菁染料(Si-酞菁染料)。在一些實施例中，酞菁染料包含下式：
Figure 02_image001
，其中： L係連接體； Q係用於染料與靶向分子連接之反應性基團； R2 、R3 、R7 及R8 各自獨立地選自視情況經取代烷基及視情況經取代芳基； R4 、R5 、R6 、R9 、R10 及R11 各自獨立地選自氫、視情況經取代烷基、視情況經取代烷醯基、視情況經取代烷氧基羰基、視情況經取代烷基胺甲醯基及螯合配體，其中R4 、R5 、R6 、R9 、R10 及R11 中之至少一者包含水溶性基團； R12 、R13 、R14 、R15 、R16 、R17 、R18 、R19 、R20 、R21 、R22 及R23 各自獨立地選自氫、鹵素、視情況經取代烷硫基、視情況經取代烷基胺基及視情況經取代烷氧基；且 X2 及X3 各自獨立地係視情況雜有雜原子之C1 -C10 伸烷基。
在一些實施例中，酞菁染料包含下式：
Figure 02_image003
，其中： X1 及X4 各自獨立地係視情況雜有雜原子之C1 -C10 伸烷基； R2 、R3 、R7 及R8 各自獨立地選自視情況經取代烷基及視情況經取代芳基； R4 、R5 、R6 、R9 、R10 及R11 各自獨立地選自氫、視情況經取代烷基、視情況經取代烷醯基、視情況經取代烷氧基羰基、視情況經取代烷基胺甲醯基及螯合配體，其中R4 、R5 、R6 、R9 、R10 及R11 中之至少一者包含水溶性基團；且 R16 、R17 、R18 及R19 各自獨立地選自氫、鹵素、視情況經取代烷硫基、視情況經取代烷基胺基及視情況經取代烷氧基。
在本文提供之方法及用途之一些實施例中，Si-酞菁染料係IRDye 700DX (IR700)。在一些實施例中，含有反應性基團之酞菁染料係IR700NHS酯，例如IRDye 700DX NHS酯(LiCor 929-70010、929-70011)。在一些實施例中，染料係具有下式之化合物：
Figure 02_image005
出於本文之目的，術語「IR700」、「IRDye 700」或「IRDye 700DX」包括當染料例如經由反應性基團與抗體結合時之上式。
在一些實施例中，用於本文方法之組合物包括抗CTLA-4結合物，其包含與接合至CTLA-4之靶向分子連接之Si-酞菁染料。在一些實施例中，組合物係抗CTLA-4-Si-酞菁染料結合物。在一些實施例中，組合物係抗CTLA-4-IR700結合物。在一些實施例中，組合物係抗CTLA-4-IR700結合物，其中靶向分子係伊匹單抗或曲美目單抗  在一些實施例中，組合物係抗CTLA-4-IR700結合物，其中靶向分子係含有功能Fc區之伊匹單抗，或係含有功能Fc區之曲美目單抗。Ⅳ . 組合療法
在一些實施例中，本文之方法包括組合治療，其包括抗CTLA-4結合物與免疫調節劑之組合。在一些實施例中，該等組合治療中使用之靶向分子係抗CTLA-4抗體或接合至CTLA-4之抗體片段。在一些實施例中，結合物係抗CTLA-4抗體或接合至與Si-酞菁染料(例如IR700染料)連接之CTLA-4的抗體片段。
本文之該等組合治療中使用之免疫調節劑可包括佐劑、免疫檢查點抑制劑、細胞介素或其任一組合。組合中使用之細胞介素可為(例如)阿地介白素(普留淨)、干擾素α-2a、干擾素α-2b (Intron A)、聚乙二醇干擾素α-2b (SYLATRON/PEG-Intron)或靶向IFNAR1/2路徑、IL-2/IL-2R路徑之細胞介素。組合中使用之佐劑可為(例如)聚ICLC (HILTONOL / 咪喹莫特)、4-1BB (CD137；TNFRS9)、OX40 (CD134) OX40-配體(OX40L)、類鐸受體2激動劑SUP3、類鐸受體TLR3及TLR4激動劑及靶向類鐸受體7 (TLR7)路徑之佐劑、TNFR及TNF超家族之其他成員、其他TLR2激動劑、TLR3激動劑及TLR4激動劑。
對於本文之組合療法，免疫檢查點抑制劑可為PD-1抑制劑，例如小分子、抗體或抗原接合片段。在一些態樣中，免疫檢查點抑制劑係抗PD-1抗體或其抗原接合片段。實例性抗PD-1抗體包括(但不限於)派姆單抗(MK-3475、KEYTRUDA；蘭布魯珠單抗)、尼沃魯單抗(OPDIVO)、西米普利單抗(LIBTAYO)、特瑞普利單抗(JS001)、HX008、SG001、GLS-010、多斯他利單抗(TSR-042)、替雷利珠單抗(BGB-A317)、賽曲利單抗(JNJ-63723283)、匹利珠單抗(CT-011)、傑諾珠單抗(APL-501、GB226)、BCD-100、西米普利單抗(REGN2810)、F520、信迪利單抗(IBI308)、CS1003、LZM009、卡瑞利珠單抗(SHR-1210)、SCT-I10A、MGA012、AK105、PF-06801591、AMP-224、AB122、AMG 404、BI 754091、HLX10、JTX-4014、AMP-514 (MEDI0680)、Sym021、MGD019、MGD013、AK104、XmAb20717、RO7121661、CX-188、斯巴達珠單抗、BCD-217、HX009、IBI308、PDR001、REGN2810、TSR-042 (ANB011)及其任何組合。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係派姆單抗(MK-3475、KEYTRUDA；蘭布魯珠單抗)、尼沃魯單抗(OPDIVO)或西米普利單抗(LIBTAYO)或其抗原接合片段。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係任何本文所述抗PD-1抗體(例如派姆單抗(MK-3475、KEYTRUDA；蘭布魯珠單抗)、尼沃魯單抗(OPDIVO)或西米普利單抗(LIBTAYO))或其抗原接合片段之生物類似物、互變、生物改良物、拷貝生物製劑或生物非專利藥。
對於本文之組合療法，免疫檢查點抑制劑可為PD-L1抑制劑，例如小分子、抗體或抗原接合片段。在一些態樣中，免疫檢查點抑制劑係抗PD-L1抗體或其抗原接合片段。實例性抗PD-L1抗體包括(但不限於)阿替珠單抗(MPDL3280A、TECENTRIQ、RG7446)、阿維魯單抗(BAVENCIO、MSB0010718C；M7824)、德瓦魯單抗(MEDI4736、IMFINZI)、LDP、NM-01、STI-3031 (IMC-001；STI-A1015)、KN035、LY3300054、M7824 (MSB0011359C)、BMS-936559、MSB2311、BCD-135、BGB-A333、CBT-502 (TQB-2450)、科西貝利單抗(CK-301)、CS1001 (WPB3155)、FAZ053、MDX-1105、SHR-1316 (HTI-1088)、TG-1501、ZKAB001 (STI-A1014)、INBRX-105、MCLA-145、KN046、LY3415244、REGN3504、HLX20及其任何組合。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係阿替珠單抗(MPDL3280A、TECENTRIQ、RG7446)、阿維魯單抗(BAVENCIO、MSB0010718C；M7824)、德瓦魯單抗(MEDI4736、IMFINZI)或其抗原接合片段。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係任何本文所述抗PD-L1抗體(例如阿替珠單抗(MPDL3280A、TECENTRIQ、RG7446)、阿維魯單抗(BAVENCIO、MSB0010718C；M7824)、德瓦魯單抗(MEDI4736、IMFINZI))或其抗原接合片段之生物類似物、互變、生物改良物、拷貝生物製劑或生物非專利藥。
免疫調節劑(例如檢查點抑制劑、佐劑或細胞介素)之投與可在投與抗CTLA-4結合物之前、同時或之後投與。舉例而言，該等方法包括投與一或多個劑量之免疫檢查點抑制劑、投與抗CTLA-4結合物，及在投與結合物之後，用適宜波長之光照射一或多個第一腫瘤。該等方法可包括首先投與結合物，及在投與結合物之後，照射一或多個第一腫瘤，及然後在投與結合物之後或在照射步驟之後投與免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑)。該等方法亦可包括在投與結合物之同時投與免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑)，之後照射一或多個第一腫瘤。在一些實施例中，免疫調節劑(例如免疫檢查點抑制劑、佐劑或細胞介素)係在投與抗CTLA-4結合物之前投與一或多次，之後照射一或多個第一腫瘤，且然後一或多次額外投與免疫調節劑(相同或不同之免疫調節劑)。
在一些實施例中，免疫調節劑係免疫檢查點抑制劑，例如PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或任何其他抑制劑或其組合。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑選自接合並抑制PD-1或PD-L1之抗體或抗原接合片段。在一些實施例中，免疫檢查點抑制劑係抑制PD-1或PD-L1之小分子、或阻斷PD-L1與PD-1接合之肽。
在一些實施例中，本文之組合療法包括在投與抗CTLA-4結合物及照射之前投與免疫檢查點抑制劑。在一些態樣中，免疫檢查點抑制劑可在投與結合物之前一週、兩週、三週、四週或四週以上投與個體。在一些態樣中，免疫檢查點抑制劑可在投與結合物之前投與個體一次、兩次、三次、四次、五次或五次以上。
在一些實施例中，該等方法包括投與抗CTLA-4結合物之同時投與免疫檢查點抑制劑，且隨後照射第一腫瘤。在一些態樣中，在照射腫瘤之後，免疫檢查點抑制劑可進一步投與個體一次、兩次、三次、四次、五次或五次以上。
在一些實施例中，該等方法包括在投與抗CTLA-4結合物之後投與免疫檢查點抑制劑。在一些態樣中，免疫檢查點抑制劑係在投與結合物後一天、投與結合物後一週內、投與結合物後兩週內、投與結合物後三週內或投與結合物後四週內投與患有癌症之個體。在一些態樣中，免疫檢查點抑制劑可投與個體一次、兩次、三次或三次以上。
在一些實施例中，該等方法包括進一步投與額外治療劑或抗癌治療。V. 投與及調配方法
在一些實施例中，抗CTLA-4結合物可全身或局部投與例如患有疾病或病症(例如癌症或腫瘤或病灶)之個體之欲治療之器官或組織。實例性投與途徑包括(但不限於)局部、注射(例如皮下、肌內、真皮內、腹膜內、腫瘤內及靜脈內)、經口、舌下、直腸、經皮、鼻內、***及吸入途徑。在一些實施例中，抗CTLA-4結合物係靜脈內投與。在一些實施例中，抗CTLA-4結合物係非經腸投與。在一些實施例中，抗CTLA-4結合物係經腸投與。在一些實施例中，結合物係藉由局部注射投與。在一些實施例中，結合物作為局部應用投與。
包含抗CTLA-4結合物之組合物可使用業內已知之任何方法局部或全身投與給(例如)患有腫瘤(例如癌症)或先前已例如經由手術去除腫瘤之個體。儘管提供具體實例，但熟習此項技術者將理解，可使用所揭示藥劑之替代投與方法。該等方法可包括(例如)使用導管或可植入幫浦在若干小時至若干天之時段內向需要治療之個體提供連續輸注。
在一些實施例中，抗CTLA-4結合物係藉由非經腸方式(包括直接注射或輸注至腫瘤中，例如腫瘤內)來投與。在一些實施例中，藉由將藥劑應用於腫瘤、例如藉由將腫瘤浸泡在含有抗CTLA-4結合物之溶液中、或藉由將藥劑傾倒至腫瘤上，向腫瘤投與抗CTLA-4結合物。
此外或者可選擇地，抗CTLA-4結合物可全身性(例如靜脈內、肌內、皮下、真皮內、腹膜內、皮下或經口)投與給患有腫瘤(例如癌症)之個體。
欲投與給個體之抗CTLA-4結合物之劑量不受絕對限值限制，但將取決於組合物之性質及其活性成分及其不需要之副作用，例如針對藥劑之免疫反應、所治療之個體及所治療病況之類型以及投與方式。通常，劑量將為治療有效量，例如足以實現期望生物效應之量，例如有效減小腫瘤之大小(例如體積及/或重量)或減弱腫瘤之進一步生長或減少腫瘤之不期望症狀之量。
在一些實施例中，用於投與抗CTLA-4結合物之組合物含有有效量之藥劑以及適於所考慮之投與類型之習用醫藥載劑及賦形劑。舉例而言，在一些實施例中，非經腸調配物可含有結合物之無菌水溶液或懸浮液。在一些實施例中，用於經腸投與之組合物可在水溶液或懸浮液中含有有效量之抗CTLA-4結合物，該水溶液或懸浮液可視情況包括緩衝液、表面活性劑、觸變劑及矯味劑。
在一些實施例中，抗CTLA-4結合物或結合物與另一治療劑之組合可調配於醫藥上可接受之緩衝液(例如含有醫藥上可接受之載劑或或媒劑之緩衝液)中。通常，醫藥上可接受之載劑或媒劑(例如存在於藥學上可接受之緩衝液中之彼等)可為業內已知之任一者。Remington’s Pharmaceutical Sciences (E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 第19版(1995))闡述適於一或多種治療化合物之醫藥遞送之組合物及調配物。醫藥上可接受之組合物通常係鑒於管理機構或其他機構之批准製備、或根據公認之用於動物及人類之藥典製備。
醫藥組合物可包括與化合物一起投與之載劑，例如稀釋劑、佐劑、賦形劑或媒劑。適宜醫藥載劑之實例闡述於E. W. Martin之「Remington’s Pharmaceutical Sciences」中。該等組合物將含有治療有效量之通常呈純化形式之化合物以及適宜量之載劑，以便提供適當投與給患者之形式。該等醫藥載劑可為無菌液體，例如水及油，包括石油、動物、植物或合成來源之彼等，例如花生油、大豆油、礦物油及芝麻油。當靜脈內投與醫藥組合物時，水係典型載劑。亦可採用鹽水溶液及水性右旋糖及甘油溶液作為液體載劑、特定而言用於可注射溶液。除活性成分外，組合物亦可含有：稀釋劑，例如乳糖、蔗糖、磷酸二鈣或羧甲基纖維素；潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣及滑石；及黏合劑，例如澱粉、天然樹膠(例如***樹膠)、明膠、葡萄糖、糖蜜、聚乙烯基吡咯啶酮、纖維素及其衍生物、聚維酮(povidone)、交聚維酮及熟習此項技術者已知之其他該等黏合劑。適宜醫藥賦形劑包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻穀、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、甘油單硬脂酸酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙二醇、水及乙醇。若期望，組合物亦可含有微量潤濕或乳化劑、或pH緩衝劑，例如乙酸鹽、檸檬酸鈉、環糊精衍生物、去水山梨醇單月桂酸酯、三乙醇胺乙酸鈉、三乙醇胺油酸酯及其他該等試劑。
在一些實施例中，醫藥製劑可呈液體(例如溶液、糖漿或懸浮液)形式。該等液體製劑可藉由習用方式利用醫藥上可接受之添加劑來製備，例如懸浮劑(例如，山梨醇糖漿、纖維素衍生物或氫化食用脂肪)；乳化劑(例如，卵磷脂或***樹膠)；非水性媒劑(例如，杏仁油、油性酯或經分餾植物油)；及防腐劑(例如，對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯或山梨酸)。在一些情形下，醫藥製劑可以凍乾形式提供以在使用前用水或其他適宜媒劑重構。
在一些實施例中，醫藥上可接受之緩衝劑或載劑之性質取決於所採用之特定投與方式。例如，在一些實施例中，非經腸調配物可包含作為媒劑之可注射流體，其包括醫藥及生理上可接受之流體，例如水、生理鹽水、平衡鹽溶液、水性右旋糖或甘油。在一些實施例中，對於固體組合物(例如粉劑、丸劑、錠劑或膠囊形式)，無毒性固體載劑可包括(例如)醫藥級甘露醇、乳糖、澱粉或硬脂酸鎂。除了生物學上中性之載劑外，在一些實施例中，欲投與之醫藥組合物亦可含有微量無毒性輔助物質，例如潤濕或乳化劑、防腐劑及pH緩衝劑，例如乙酸鈉或去水山梨醇單月桂酸酯。
可將化合物調配成適宜醫藥製劑，例如對於經口投與為溶液、懸浮液、錠劑、可分散錠劑、丸劑、膠囊、粉末、持續釋放調配物或酏劑，以及經皮貼劑製劑及乾粉吸入劑。通常，使用業內熟知之技術及程序將化合物調配成醫藥組合物(例如，參見Ansel Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 第四版, 1985, 126)。通常，調配物模式隨投與途徑變化。
可調配組合物用於藉由熟習此項技術者已知之任何途徑(包括肌內、靜脈內、真皮內、病灶內、腹膜內注射、皮下、腫瘤內、硬膜外、經鼻、經口、***、直腸、外敷、局部、經耳、吸入、經頰(例如舌下)及經皮投與或任何途徑)投與。亦考慮其他投與模式。端視治療之部位而定，投與可為局部、外敷或全身性的。局部投與給需要治療之區域可藉由(例如但不限於)在手術期間局部輸注、外敷施加(例如在手術後連同傷口敷料)、藉由注射、藉助導管、藉助栓劑或藉助植入體來達成。
本文考慮非經腸投與，特徵通常在於皮下、肌內、瘤內、靜脈內或皮內注射。可注射劑可以習用形式、以液體溶液或懸浮液形式、在注射之前適於液體中之溶液或懸浮液之固體形式或以乳液形式製備。適宜賦形劑係(例如)水、鹽水、右旋糖、甘油或乙醇。另外，若期望，欲投與之醫藥組合物亦可含有呈溶劑形式之活化劑，例如pH緩衝劑、金屬離子鹽或其他緩衝劑。醫藥組合物可含有其他微量無毒輔助物質，例如潤濕或乳化劑、pH緩衝劑、穩定劑、溶解增強劑及其他該等試劑(例如，乙酸鈉、山梨糖醇酐單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯及環糊精)。本文亦考慮緩釋或持續釋放系統之植入，使得維持恆定量之劑量(參見(例如)美國專利第3,710,795號)。包含於該等非經腸組合物中之活性化合物之百分比高度取決於其具體性質以及化合物之活性及個體之需要。
可注射劑經設計用於局部及全身投與。非經腸投與之製劑包括準備用於注射之無菌溶液、在即將使用之前準備與溶劑組合之無菌乾燥可溶性產品(例如凍乾粉劑，包括皮下錠劑)、準備用於注射之無菌懸浮液、在即將使用之前準備與媒劑組合之無菌乾燥不溶性產品及無菌乳液。溶液可為水性或非水性溶液。若靜脈內投與，則適宜載劑包括生理鹽水或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)及含有增稠及增溶劑(例如葡萄糖、聚乙二醇及聚丙烯二醇及其混合物)之溶液。
非經腸製劑中所用之醫藥上可接受之載劑包括水性媒劑、非水性媒劑、抗微生物劑、等滲劑、緩衝劑、抗氧化劑、局部麻醉劑、懸浮及分散劑、乳化劑、鉗合或螯合劑及其他醫藥上可接受之物質。水性媒劑之實例包括氯化鈉注射液、林格氏(Ringers)注射液、等滲右旋糖注射液、無菌水注射液、右旋糖及乳酸化林格氏注射液。非水性非經腸媒劑包括植物來源之固定油、棉籽油、玉米油、芝麻油及花生油。可向包裝於多劑量容器中之非經腸製劑中添加抑制細菌或抑制真菌濃度之抗微生物劑，其包括酚或甲酚、汞製劑、苄醇、氯丁醇、甲基及丙基對羥基苯甲酸酯、硫柳汞(thimerosal)、氯化苄烷銨(benzalkonium chloride)及氯化本索寧(benzethonium chloride)。等滲劑包括氯化鈉及右旋糖。緩衝劑包括磷酸鹽及檸檬酸鹽。
若靜脈內投與，則適宜載劑包括生理鹽水或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)及含有增稠及增溶劑(例如葡萄糖、聚乙二醇及聚丙烯二醇及其混合物)之溶液。
組合物可經調配用於單一劑量投與或用於多個劑量投與。該等試劑可調配用於直接投與。組合物可提供為液體或凍乾調配物。若組合物以凍乾形式提供，則其可在即將使用前藉由適當緩衝劑(例如無菌鹽水溶液)重構。
組合物亦可與其他生物活性劑依序、間歇地或在同一組合物中投與。投與亦可包括控制釋放系統，該等控制釋放系統包括控制釋放調配物及控制釋放、例如藉助幫浦之裝置。
在任何給定情形下，最適宜途徑取決於多個因素，例如疾病之性質、疾病之進展、疾病之嚴重程度及所用之特定組合物。舉例而言，組合物係(例如)經由靜脈內投與來全身投與。亦可採用皮下方法，但與靜脈內方法相比，可需要延長之吸收時間來確保相當之生物利用度。
醫藥組合物可以適於每一投與途徑之劑型調配。醫藥及治療活性化合物及其衍生物通常以單位劑型或多個劑型調配並投與。每一單位劑量含有足以產生期望治療效應之預定量之治療活性化合物以及所需醫藥載劑、媒劑或稀釋劑。單位劑型包括(但不限於)含有適宜量之化合物或其醫藥上可接受之衍生物的錠劑、膠囊、丸劑、粉劑、顆粒、無菌非經腸溶液或懸浮液、及經口溶液或懸浮液、及油水乳液。單位劑型可包含於安瓿及注射器中或個別包裝之錠劑或膠囊中。單位劑型可分數份投與或多次投與。多次劑型係複數份相同單位劑型，其包裝於單一容器中以供以分開7的單位劑型投與。多個劑型之實例包括小瓶、成瓶錠劑或膠囊，或品脫瓶或加侖瓶。因此，多個劑型係於包裝中不分開之多個劑量。通常，可製備含有0.005%至100%範圍內之活性成分且其餘部分由無毒載劑構成之劑型或組合物。醫藥組合物可以適於每一投與途徑之劑型調配。
醫藥活性化合物之濃度經調節以使注射提供有效量以產生期望藥理學效應。精確劑量取決於患者或動物之年齡、體重及狀況，如業內已知。單位劑量非經腸製劑包裝於安瓿、小瓶或具有針之注射器中。含有醫藥活性化合物之液體溶液或重構粉末製劑的體積隨欲治療之疾病及選擇用於包裝之特定製品變化。如業內所已知及實踐，所有非經腸投與之製劑應皆無菌。在一些實施例中，組合物可以凍乾粉之形式提供，其可以溶液、乳液及其他混合物之形式重構用於投與。其亦可重構並調配成固體或凝膠。凍乾之粉末可自上述溶液中之任一者製備。
無菌、凍乾之粉劑可藉由將酞菁染料靶向分子結合物溶解於緩衝劑溶液中來製備。緩衝劑溶液可含有改良粉劑或自粉劑製得之重構溶液之穩定性或其他藥理學組分的賦形劑。
在一些實施例中，隨後無菌過濾溶液、之後在熟習此項技術者已知之標準條件下凍乾，從而提供期望調配物。簡言之，凍乾之粉劑係藉由將賦形劑(例如右旋糖、山梨醇、果糖、玉米糖漿、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其他適宜試劑)溶解於適宜緩衝劑(例如檸檬酸鹽、磷酸鈉或磷酸鉀或熟習此項技術者已知之其他該緩衝劑)來製備。然後，向所得混合物中添加所選酶且攪拌直至其溶解。將所得混合物無菌過濾或處理以去除顆粒且確保無菌，且分配至小瓶中用於凍乾。每一小瓶可含有單一劑量(1 mg - 1 g，通常1-100 mg，例如1-5 mg)或多個劑量之化合物。凍乾之粉劑可在適當條件下(例如於約4℃至室溫下)儲存。用緩衝劑溶液重構此凍乾之粉劑可提供調配物用於非經腸投與。精確量取決於所治療適應症及所選化合物。該量可憑經驗確定。
在一些實施例中，組合物之pH介於為或約6與10之間，例如介於為或約6與8之間，介於為或約6.9與7.3之間，例如約pH 7.1。在一些實施例中，醫藥上可接受之緩衝液之pH為至少或約5、至少或約6、至少或約7、至少或約8、至少或約9或至少或約10，或為7.1。
組合物可經調配用於單一劑量投與或用於多個劑量投與。該等試劑可調配用於直接投與。
在一些實施例中，本文提供之組合物以如下範圍內之量調配用於抗CTLA-4結合物之直接投與：為或約0.01 mg至約3000 mg、約0.01 mg至約1000 mg、約0.01 mg至約500 mg、約0.01 mg至約100 mg、約0.01 mg至約50 mg、約0.01 mg至約10 mg、約0.01 mg至約1 mg、約0.01 mg至約0.1 mg、約0.1 mg至約2000 mg、約0.1 mg至約1000 mg、約0.1 mg至約500 mg、約0.1 mg至約100 mg、約0.1 mg至約50 mg、約0.1 mg至約10 mg、約0.1 mg至約1 mg、約1 mg至約2000 mg、約1 mg至約1000 mg、約1 mg至約500 mg、約1 mg至約100 mg、約1 mg至約10 mg、約10 mg至約2000 mg、約10 mg至約1000 mg、約10 mg至約500 mg、約10 mg至約100 mg、約100 mg至約2000 mg、約100 mg至約1000 mg、約100 mg至約500 mg、約500 mg至約2000 mg、約500 mg至約1000 mg及約1000 mg至約3000 mg。在一些實施例中，組合物之體積可為0.5 mL至1000 mL、例如0.5 mL至100 mL、0.5 mL至10 mL、1 mL至500 mL、1 mL至10 mL，例如至少或約至少或約或0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、7 mL、8 mL、9 mL、10 mL、15 mL、20 mL、30 mL、40 mL、50 mL或更多。舉例而言，組合物經調配用於介於或介於約100 mg與500 mg之間、或介於或介於約200 mg與400 mg之間之量的單一劑量投與。在一些實施例中，組合物經調配用於介於或介於約500 mg與1500 mg之間、800 mg與1200 mg之間或1000 mg與1500 mg之間之量的單一劑量投與。在一些實施例中，組合物之體積介於或介於約10 mL與1000 mL之間或50 mL與500 mL之間；或組合物之體積係至少10 mL、20 mL、30 mL、40 mL、50 mL、75 mL、100 mL、150 mL、200 mL、250 mL、300 mL、400 mL、500 mL或1000 mL。
在一些實施例中，可抽出調配物之整個小瓶內容物用於投與，或可將其分成複數個劑量用於多次投與。在抽出一定量之藥物用於投與時，若期望，調配物可進一步經稀釋，例如稀釋於水、鹽水(例如0.9%)或其他生理溶液中。
在一些實施例中，亦提供含有免疫調節劑或抗癌劑之組合物，其可根據已知或標準調配指南製備，例如上文所述。在一些實施例中，免疫調節劑、抗癌劑及/或抗CTLA-4結合物經調配為單獨組合物。在一些實施例中，免疫調節劑提供為抗CTLA-4結合物之單獨組合物，且兩種組合物分開投與。在一些實施例中，抗癌劑提供為抗CTLA-4結合物之單獨組合物，且兩種組合物分開投與。組合物可經調配用於非經腸遞送(即用於全身遞送)。舉例而言，組合物或組合物之組合經調配用於皮下遞送或用於靜脈內遞送。該等試劑(例如抗CTLA-4結合物)及免疫調節劑及/或抗癌劑可藉由不同投與途徑來投與。
以下係免疫調節劑之實例性投與，且該等試劑可原樣投與或以其他投與時間表及劑量投與。舉例而言，黑色素瘤患者之PD-1抑制劑派姆單抗(KEYTRUDA)之推薦劑量係2 mg/kg，其係每3週經30分鐘靜脈內輸注來投與，直至疾病進展或不可接受之毒性為止。對於非小細胞肺癌，KEYTRUDA之推薦劑量為200 mg，其係每3週經30分鐘靜脈內輸注來投與，直至疾病進展、不可接受之毒性為止，或在無疾病進展之患者中持續長達24個月。對於頭頸部鱗狀細胞癌患者，KEYTRUDA之推薦劑量為每3週200 mg，靜脈輸注30分鐘來投與，直至疾病進展、不可接受之毒性或在無疾病進展之患者中持續高達24個月。對於另一實例，PD-1抑制劑尼沃魯單抗(OPTIVO)作為單一藥劑對於不可切除或轉移黑色素瘤之推薦劑量為每2週240 mg或每4週480 mg，其係經30分鐘靜脈內輸注來投與，直至疾病進展或不可接受之毒性為止。對於非小細胞肺癌患者，OPDIVO之推薦劑量為每2週240 mg或每4週480 mg，其係經30分鐘靜脈內輸注來投與，直至疾病進展或不可接受之毒性為止。對於腎細胞癌患者，OPDIVO作為單一藥劑之推薦劑量為每2週240 mg或每4週480 mg，其係經30分鐘靜脈內輸注來投與，直至疾病進展或不可接受之毒性為止。對於典型霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)患者，OPDIVO之推薦劑量為每2週240 mg或每4週480 mg，其係經30分鐘靜脈內輸注來投與，直至疾病進展或不可接受之毒性為止。對於復發性或轉移性頭頸部鱗狀細胞癌患者，OPDIVO之推薦劑量為每2週240 mg或每4週480 mg，其係經30分鐘靜脈內輸注來投與，直至疾病進展或不可接受之毒性為止。對於尿路上皮癌患者，OPDIVO之推薦劑量為每2週240 mg或每4週480 mg，其係經30分鐘靜脈內輸注來投與，直至疾病進展或不可接受之毒性為止。對於結腸直腸癌患者，OPDIVO之推薦劑量為每2週240 mg，其係經30分鐘靜脈內輸注來投與，直至疾病進展或不可接受之毒性為止。對於肝細胞癌患者，OPDIVO之推薦劑量為每2週240 mg或每4週480 mg，其係經30分鐘靜脈內輸注來投與，直至疾病進展或不可接受之毒性為止。
舉例而言，對於並非治癒性手術或治癒性放射之候選者的轉移性皮膚鱗狀細胞癌(CSCC)或局部晚期CSCC患者，PD-1抑制劑西米普利單抗-rwlc (LIBTAYO)之推薦劑量為350 mg，其係每3週經30分鐘靜脈內輸注。
對於PD-L1抑制劑阿維魯單抗(BAVENCIO)，對於轉移默克爾細胞癌(Merkel cell carcinoma)或局部晚期或轉移性尿路上皮癌患者之推薦劑量為800 mg，其係每2週經60分鐘靜脈內輸注來投與，直至疾病進展或不可接受之毒性為止。
對於PD-L1抑制劑阿替珠單抗(TECENTRIQ)，對於晚期或轉移性尿路上皮癌或轉移性非小細胞肺癌患者之推薦劑量為1200 mg，其係每3週經60分鐘靜脈內輸注。若耐受第一次輸注，則所有後續輸注皆可在30分鐘內遞送。
對於PD-L1抑制劑德瓦魯單抗(IMFINZI)，局部晚期或轉移性尿路上皮癌患者之推薦劑量為10 mg/kg，其係每2週經60分鐘靜脈內輸注。
在利用抗CTLA-4結合物及免疫調節劑之方法之一些實施例中，免疫調節劑係以推薦投與劑量及/或時間表投與。在一些實施例中，免疫調節劑可在本文之方法中以低於推薦量之劑量或以交替時間表投與，例如當抗CTLA-4結合物使腫瘤或病灶或TME對免疫調節劑敏感時及/或當抗CTLA-4結合物及免疫調節劑之組合導致協同反應時。Ⅵ . 與抗 CTLA-4 結合物方法及組合物一起使用之裝置及照射方法
在一些態樣中，可與本文之方法及組合物一起使用之裝置包括光漫射裝置，其在適於與染料結合物組合物(例如酞菁染料結合物(例如，抗CTLA-4結合物，例如本文所述之彼等)一起使用之光波長之一個波長(或多個波長)下提供照射。照射設備可包括光源(例如，雷射)及將光傳送至感興趣之區域或位點之構件(例如，一或多個光纖以照射個體之分離區域或分離病灶或腫瘤)。
在一些實施例中，用治療劑量之以下範圍內之波長之輻射輻照細胞(例如腫瘤)：為或約400 nm至約900 nm、例如為或約500 nm至約900 nm、例如為或約600 nm至約850 nm、例如為或約600 nm至約740 nm、例如約660 nm至約740 nm、約660 nm至約710 nm、約660 nm至約700 nm、約670 nm至約690 nm、約680 nm至約740 nm、或約690 nm至約710 nm。在一些實施例中，以治療劑量之波長為600 nm至850 nm、例如660 nm至740 nm之輻射輻照細胞(例如腫瘤)。在一些實施例中，以至少或約至少600 nm、620 nm、640 nm、660 nm、680、nm、700 nm、720 nm或740 nm、例如690 ± 50 nm、例如約680 nm之波長輻照細胞(例如腫瘤)。
在本文提供之方法及用途之一些實施例中，使用圓柱形漫射光纖實施照射，該等圓柱形漫射光纖包括0.5 cm至10 cm之漫射體長度且間隔1.8 ± 0.2 cm。在一些實施例中，光照射劑量為或約20 J/cm光纖長度至約500 J/cm光纖長度。在一些實施例中，腫瘤大於10 mm深或係皮下腫瘤。
在一些實施例中，所提供之方法包括用圓柱形漫射光纖照射個體之間質腫瘤，該等圓柱形漫射光纖包括0.5 cm至10 cm之漫射體長度且間隔1.8±0.2 cm，光劑量為100 J/cm或約100 J/cm光纖長度或注量率為400 mW/cm或約400 mW/cm。在一些實施例中，腫瘤大於10 mm深或係皮下腫瘤。在一些實施例中，圓柱形漫射光纖放置在位於腫瘤中之導管中，間隔1.8±0.2 cm。在一些實施例中，導管係光學透明的。
在一些實施例中，以至少1 J/cm2 、例如至少10 J/cm2 、至少30 J/cm2 、至少50 J/cm2 、至少100 J/cm2 或至少500 J/cm2 之劑量照射細胞(例如腫瘤)。在一些實施例中，照射之劑量為或約1至約J/cm2 、約1至約500 J/cm2 、約5至約200 J/cm2 、約10至約100 J/cm2 或約10至約50 J/cm2 。在一些實施例中，以至少或至少約2 J/cm2 、5 J/cm2 、10 J/cm2 、25 J/cm2 、50 J/cm2 、75 J/cm2 、100 J/cm2 、150 J/cm2 、200 J/cm2 、300 J/cm2 、400 J/cm2 或500 J/cm2 之劑量輻照細胞(例如腫瘤)。
在一些實施例中，病灶係作為表淺性腫瘤之腫瘤。在一些實施例中，腫瘤小於10 mm厚。在一些實施例中，使用用於表面照射之微透鏡尖端光纖來實施照射。在一些實施例中，光照射劑量為或約5 J/cm2 至約200 J/cm2 。
在一些實施例中，以至少1 J/cm光纖長度、例如至少10 J/cm光纖長度、至少50 J/cm光纖長度、至少100 J/cm光纖長度、至少250 J/cm光纖長度或至少500 J/cm光纖長度之劑量照射細胞(例如腫瘤)。在一些實施例中，輻照劑量為或約1至約1000 J/cm光纖長度、約1至約500 J/cm光纖長度、約2至約500 J/cm光纖長度、約50至約300 J/cm光纖長度、約10至約100 J/cm光纖長度或約10至約50 J/cm光纖長度。在一些實施例中，以至少或至少約2 J/cm光纖長度、5 J/cm光纖長度、10 J/cm光纖長度、25 J/cm光纖長度、50 J/cm光纖長度、75 J/cm光纖長度、100 J/cm光纖長度、150 J/cm光纖長度、200 J/cm光纖長度、250 J/cm光纖長度、300 J/cm光纖長度、400 J/cm光纖長度或500 J/cm光纖長度之劑量輻照細胞(例如腫瘤)。
在一些實施例中，所提供之方法包括以為或約5 J/cm2 至約200 J/cm2 之光劑量用微透鏡尖端之光纖照射個體中之表淺性腫瘤用於表面照射。在一些實施例中，光照射劑量為或為約50 J/cm2 。
在一些實施例中，人類個體中輻照或照射之劑量為或為約1至約400 J/cm2 、約2至約400 J/cm2 、約1至約300 J/cm2 、約10至約100 J/cm2 或約10至約50 J/cm2 、例如為至少或至少約為10 J/cm2 、至少30 J/cm2 、至少50 J/cm2 、至少100 J/cm2 ，或為或在或在約10 J/cm2 、至少30 J/cm2 、至少50 J/cm2 、至少100 J/cm2 內，或為或約為10 J/cm2 、至少30 J/cm2 、至少50 J/cm2 、至少100 J/cm2 。在一些實施例中，人類個體中之照射劑量為或約為1至300 J/cm光纖長度、10至100 J/cm光纖長度或10至50 J/cm光纖長度，例如為至少或至少約為10 J/cm光纖長度、至少30 J/cm光纖長度、至少50 J/cm光纖長度、至少100 J/cm光纖長度，或為或在或在約10 J/cm光纖長度、至少30 J/cm光纖長度、至少50 J/cm光纖長度、至少100 J/cm光纖長度內，或為或為約10 J/cm光纖長度、至少30 J/cm光纖長度、至少50 J/cm光纖長度、至少100 J/cm光纖長度。在某些情況下，發現人類個體達到PIT之照射劑量可低於小鼠中PIT所需。舉例而言，在一些情形下，活體內腫瘤小鼠模型中之50 J/cm2 (50 J/cm2 )光劑量測定對PIT無效，此與吾人在臨床上對人類患者觀察到之情況相反。
在一些實施例中，投與包含酞菁染料靶向分子結合物之組合物後之照射劑量為於660-740 nm之波長下至少1 J/cm2 或1 J/cm光纖長度，例如於660-740 nm之波長下至少10 J/cm2 或10 J/cm光纖長度、於660-740 nm之波長下至少50 J/cm2 或50 J/cm光纖長度、或於660-740 nm之波長下至少100 J/cm2 或100 J/cm光纖長度，例如於660-740 nm之波長下1.0至500 J/cm2 或1.0至500 J/cm光纖長度。在一些實施例中，波長係660-710 nm。在一些實施例中，投與包含酞菁染料靶向分子結合物之組合物後之照射劑量為於680 nm之波長下至少1.0 J/cm2 或1 J/cm光纖長度，例如於680 nm之波長下至少10 J/cm2 或10 J/cm光纖長度、於680 nm之波長下至少50 J/cm2 或50 J/cm光纖長度、或於680 nm之波長下至少100 J/cm2 或100 J/cm光纖長度，例如於680 nm之波長下1.0至500 J/cm2 或1.0至500 J/cm光纖長度。在一些實施例中，實施多次輻照，例如至少2次、至少3次或至少4次照射，例如2、3、4、5、6、7、8、9或10次分開投與。投與本文提供之結合物或組合物後之實例性照射包括於660 nm至740 nm之波長下以至少1 J/cm2 或1 J/cm光纖長度之劑量照射腫瘤。
在一些實施例中，可將光或雷射施加至染料分子(例如含有結合物之細胞)達約5秒至約5分鐘。舉例而言，在一些實施例中，施加光或雷射約5、10、15、20、25、30、35、40、45、50或55秒或在任何兩個該等值之間之範圍內，以活化染料分子。在一些實施例中，施加光或雷射達或達約1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5或5分鐘或更長時間或在介於任何兩個該等值之間之範圍內。在一些實施例中，施加光或雷射之時間長度可根據(例如)光或雷射之能量(例如瓦數)而變。舉例而言，可施加較低瓦數之光或雷射較長時間，以活化染料分子。
在一些實施例中，可在投與結合物後約30分鐘至約48小時施加光或雷射。舉例而言，在一些實施例中，在投與結合物後30、35、40、45、50或55分鐘或約30、35、40、45、50或55分鐘、或介於任兩個該等值之間之範圍內施加光或雷射。在一些實施例中，在投與結合物後1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30小時或約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30小時施加光或雷射，或在介於或介於約任何兩個該等值之間(例如介於約20小時至約28小時之間、或約24小時 ± 4小時)之範圍內投與。在一些實施例中，施加光或雷射介於或介於約1與24小時之間，例如介於或介於約1與12小時之間、介於12與24小時之間、介於6與12小時之間，或可在投與結合物後超過24小時投與。在一些實施例中，在投與結合物後36或48小時施加光或雷射。在一些實施例中，在投與結合物後24小時 ± 4小時或約24小時 ± 4小時施加光或雷射。
在一些實施例中，可照射細胞或個體一或多次。因此，照射可在單一天內完成，或可利用相同或不同劑量在多天內重複進行，例如照射至少2個不同時間、3個不同時間、4個不同時間、5個不同時間或10個不同時間。在一些實施例中，重複照射可在同一天、在連續天、或每1-3天、每3-7天、每1-2週、每2-4週、每1-2個月或以甚至更長間隔進行。
在一些實施例中，照射之劑量或方法根據腫瘤之類型或形態而不同。
在一些實施例中，病灶係作為表淺性腫瘤之腫瘤。在一些實施例中，腫瘤小於10 mm厚。在一些實施例中，使用用於表面照射之微透鏡尖端光纖來實施照射。在一些實施例中，光照射劑量為或約5 J/cm2 至約200 J/cm2 。
在一些實施例中，所提供之方法包括以為或約5 J/cm2 至約200 J/cm2 之光劑量用微透鏡尖端之光纖照射個體中之表淺性腫瘤用於表面照射，其中腫瘤與包括接合至腫瘤之細胞表面分子之靶向分子的光毒性劑相關。在一些實施例中，光輻照劑量為或為約50 J/cm2 。
在一些實施例中，病灶係作為間質腫瘤之腫瘤。在一些實施例中，腫瘤大於10 mm深或係皮下腫瘤。在一些實施例中，使用圓柱形漫射光纖實施照射，該等圓柱形漫射光纖包括0.5 cm至10 cm之漫射體長度且間隔1.8+-0.2 cm。在一些實施例中，光照射劑量為或約20 J/cm光纖長度至約500 J/cm光纖長度。
在一些實施例中，所提供之方法包括用圓柱形漫射光纖照射個體之間質腫瘤，該等圓柱形漫射光纖包括0.5 cm至10 cm之漫射體長度且間隔1.8 ± 0.2 cm，光劑量為100 J/cm或約100 J/cm光纖長度或注量率為400 mW/cm或約400 mW/cm，其中腫瘤與包括接合至腫瘤之細胞表面分子之靶向分子的光毒性劑相關。在一些實施例中，腫瘤大於10 mm深或係皮下腫瘤。在一些實施例中，圓柱形漫射光纖放置在位於腫瘤中之導管中，間隔1.8±0.2 cm。在一些實施例中，導管係光學透明的。
在一些實施例中，照射採用具有「頂帽」輻照度分佈輪廓之裝置，例如在WO2018/080952及US20180239074中闡述之彼等。VII. 定義
除非另外定義，否則本文所用之所有技術、註釋及其他技術及科學術語或用辭具有與熟習所主張標的物所屬技術者通常所理解含義相同之含義。在一些情形下，為清楚及/或供及時參考起見，具有通常所瞭解含義之術語定義於本文中，且本文中此等定義之納入不應解釋為表示與如業內通常所瞭解之術語之定義有實質差異。
除非上下文另外明確指出，否則本文所用單數形式「一(a、an)」及「該」包括複數個指示物。舉例而言，「一(a、an)」意指「至少一個」或「一或多個」。應理解，本文所述之態樣及變化包括「由態樣及變化組成」及/或「基本上由態樣及變化組成」。
貫穿本揭示內容，所主張標的物之各個態樣係以範圍格式提供。應理解，呈範圍格式之說明僅出於方便及簡潔之目的，且不應理解為對所主張標的物之範疇的硬性限制。因此，範圍之說明應視為具有特定揭示之所有可能的子範圍以及該範圍內之個別數值。舉例而言，在提供值之範圍的情況下，應理解，所主張標的物內涵蓋該範圍之上限與下限之間每一***值及該所述範圍內之任何其他所述或***值。該等較小範圍之上限及下限可獨立地包括於較小範圍中，且亦涵蓋於所主張標的物中，受所述範圍內任何特定排除之限制。在所述範圍包括限值中之一者或二者的情況下，所主張標的物中亦包括排除彼等所包括限值中之任一者或二者的範圍。無論範圍之寬度如何，此皆適用。
如本文所用術語「約」係指熟習本技術領域者容易瞭解之各別值之一般誤差範圍。對「約」一值或參數之提及在本文中包括(且闡述)針對該值或參數本身之若干實施例。舉例而言，提及「約」之說明包括對「X」之說明。
如本文所用「結合物」係指直接或間接連接至光可活化染料之靶向分子，例如藉由化學結合物產生之彼等及藉由任何其他方法產生之彼等。舉例而言，結合物可指直接或間接連接至一或多個靶向分子(例如接合至或靶向細胞表面蛋白之多肽)之酞菁染料，例如矽-酞菁染料(Si-酞菁染料)，例如IR700分子。靶向分子可為多肽、一種以上多肽、抗體或化學部分。
如本文所用之「抗CTLA-4結合物」係指具有接合至CTLA-4之靶向分子的結合物。抗CTLA-4結合物可具有為接合至CTLA-4之抗體、抗原接合片段、小分子或其他部分的靶向分子。
如本文所用之「抗體」係指包含至少一個特異性識別及接合抗原之表位(例如腫瘤特異性蛋白)的輕鏈或重鏈免疫球蛋白可變區之多肽。抗體由重鏈及輕鏈構成，其各自具有可變區，稱為可變重(VH)區及可變輕(VL)區。VH區及VL區一起負責接合由抗體識別之抗原。
「單株抗體」係由B淋巴球之單個純系或由單一抗體之輕鏈及重鏈基因轉染至之細胞產生的抗體。單株抗體係藉由熟術此術技術者所知之方法產生，例如藉由自骨髓瘤細胞與免疫脾細胞之融合製備雜交抗體形成細胞。單株抗體包括人類化單株抗體。
「特異性結合」係指相對於與不相關蛋白(例如非腫瘤蛋白，例如β-肌動蛋白)之接合，個別抗體與抗原(例如腫瘤特異性抗原)特異性免疫反應之能力。舉例而言，CTLA-4特異性接合劑在活體外或活體內實質上僅接合CTLA-4蛋白。如本文所用術語「腫瘤特異性接合劑」包括腫瘤特異性抗體及在該製劑中實質上僅接合腫瘤特異性蛋白之其他試劑。
「抗體-IR700分子」或「抗體-IR700結合物」係指包括結合至IR700之抗體(例如腫瘤特異性抗體)的分子。在一些實例中，抗體係特異性接合至癌細胞上之表面蛋白之人類化抗體(例如人類化單株抗體)。
「抗原」係指可刺激動物中產生抗體或T細胞反應之化合物、組合物或物質，包括注射或吸收至動物中之組合物(例如包括腫瘤特異性蛋白之組合物)。抗原與特異性體液或細胞免疫性之產物(包括由異源抗原(例如揭示之抗原)誘導之彼等)反應。「表位」或「抗原決定子」係指B細胞及/或T細胞對其有反應之抗原區域。在一個實施例中，當表位與MHC分子結合存在時，T細胞對表位有反應。表位可自連續胺基酸或由蛋白質之三級摺疊並置之非連續胺基酸形成。自連續胺基酸形成之表位在暴露於變性溶劑時通常保留，而在用變性溶劑處理時通常損失由三級摺疊形成之表位。表位通常包括至少3個、且更通常至少5個、約9個或約8-10個呈獨特空間構象之胺基酸。確定表位之空間構象之方法包括(例如) x-射線晶體測量術及核磁共振。
抗原之實例包括(但不限於)含有抗原決定子之肽、脂質、多醣及核酸，例如由免疫細胞識別之彼等。在一些實例中，抗原包括腫瘤特異性肽(例如在癌細胞表面上發現之肽)或其免疫原性片段。
「免疫調節劑」及「免疫調節性療法」分別指調節免疫系統之治療劑(例如細胞介素、佐劑及免疫檢查點抑制劑)及用該試劑之治療。
「免疫檢查點抑制劑」係指阻斷由一些類型之免疫系統細胞(例如T細胞)及一些癌細胞產生之某些蛋白質的一類藥物。該等蛋白質有助於製止免疫反應，並可防止T細胞殺死癌細胞。當該等蛋白質被阻斷時，免疫系統之「制動器」被釋放，且T細胞能夠更好地殺死癌細胞。在T細胞或癌細胞上發現之檢查點蛋白之實例包括PD-1/PD-L1及CTLA-4/B7-1/B7-2。一些免疫檢查點抑制劑用於治療癌症。
如本文所用之組合係指兩個或更多個條目之間或之中之任何相關聯。組合可為兩個更多個單獨條目，例如兩種組合物或兩個集合，可為其混合物，例如兩個或更多個條目之單一混合物，或其任何形式。組合之要素通常在功能上相關聯或相關。
如本文所用之「組合療法」係指其中給予個體兩種或更多種治療劑(例如至少兩種或至少三種治療劑)以治療單一疾病之治療。在一些實施例中，每一療法可產生獨立之醫藥效應，且一起可產生相加或協同之醫藥效應。
如本文所用之「治療」患有疾病或病況之個體意指在治療後，個體之症狀部分或完全緩和，或保持靜止。因此，治療涵蓋預防、療法及/或治癒。預防係指防止潛在疾病及/或防止疾病之症狀惡化或疾病進展。
如本文所用之「治療」意指改善或以其他方式有益地改變病況、病症或疾病或其他適應症之症狀的任何方式。
如本文所用之「治療效應」意指由個體之治療產生之效應，其改變、通常改良或改善疾病或病況之症狀或治癒疾病或病況。
如本文所用之藉由治療(例如藉由投與醫藥組合物或其他治療劑)改善特定疾病或病症之症狀係指症狀之任何減輕(無論係永久的或暫時的、持久的或短暫的)，其可歸因於組合物或治療劑之投與或與組合物或治療劑之投與相關。
如本文所用術語「個體」係指動物，包括哺乳動物，例如人類。
如本文所用術語「可選」或「視情況」意指隨後闡述之事件或情形發生或不發生，且該說明包括該事件或情形發生之情況以及該事件或情形不發生之情況。舉例而言，視情況經取代之基團意指該基團未經取代或經取代。
如本文所用之「腫瘤」係指當細胞***超過其應***之程度時產生之異常組織塊或當其應該***時不死亡之異常組織塊。腫瘤可為良性的(非癌症)或惡性的(癌症)。
如本文所用之「病灶」係指異常組織區域。病灶可為良性的(非癌症)或惡性的(癌症)。
如本文所用之「抗癌劑」係指任何用於治療以停止或預防癌症之分子，  實例可包括(但不限於)小化學分子、抗體、抗體結合物、免疫調節劑或其任一組合。
如本文所用之「阻抑細胞」或「免疫阻抑細胞」係指能降低或抑制免疫效應細胞(例如CD8+ T效應細胞)之功能之細胞。阻抑細胞之實例可包括(但不限於)調節性T細胞、M2巨噬細胞、骨髓源阻抑細胞、腫瘤相關之纖維母細胞或癌症相關之纖維母細胞。
如本文所用之「免疫阻抑劑」係指降低身體之免疫反應之試劑。其會降低身體抵抗感染及其他疾病(例如癌症)之能力。
如本文所用之「對治療有抗性」係指對治療無反應之疾病或病理狀況，使得此治療在治療此疾病或病理狀況中無效或不顯示效能。
如本文所用之「全身免疫反應」係指個體之免疫系統以全身性方式對一或多種免疫攻擊(包括與癌症、腫瘤或癌性病灶相關之攻擊)作出反應之能力。全身免疫反應可包括個體之適應性免疫系統及/或先天免疫系統之全身性反應。全身免疫反應包括跨不同組織(包括血流、淋巴結、骨髓、脾及/或腫瘤微環境)之免疫反應，且在一些情形下，包括組織及器官以及組織及器官之各種細胞及因子之間之協調反應。
如本文所用之「局部免疫反應」係指組織或器官中對一或多種免疫攻擊(包括與癌症、腫瘤或癌性病灶相關之彼等)的免疫反應。局部免疫反應可包括適應性免疫系統及/或先天免疫系統。局部免疫性包括在不同組織(包括血流、淋巴結、骨髓、脾及/或腫瘤微環境)同時發生之免疫反應。VIII. 實例性實施例
在提供之實施例中： 1. 一種治療腫瘤或病灶之方法，其包含： (a)    鑑別具有對先前治療性治療無反應之腫瘤或病灶的個體； (b)    向該個體投與包含連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4； (c)    在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射該腫瘤或病灶；及 (d)    向該個體投與第一免疫調節性療法； 其中該個體中該腫瘤或病灶之生長及/或體積增加受到抑制或減少。 2. 如實施例1之方法，其中該先前治療性治療包含用免疫調節劑、免疫檢查點抑制劑、抗癌劑、針對阻抑細胞起作用之治療劑及其任何組合的治療。 3. 如實施例1或實施例2之方法，其中該先前治療性治療包含用PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、CTLA-4抑制劑或其任一組合之治療。 4. 如實施例1至3中任一實施例之方法，其中該先前治療性治療包含用抗體或該抗體之抗原接合片段的治療。 5. 如實施例4之方法，其中該抗體或抗原接合片段接合至PD-1、CTLA-4或PD-L1。 6. 如實施例1至5中任一實施例之方法，其中該第一免疫調節性療法係在投與該結合物之前投與。 7. 如實施例6之方法，其中該第一免疫調節性療法係在投與該結合物之間約1-3週之間投與。 8. 如實施例6或實施例7之方法，其中該第一免疫調節性療法係在投與該結合物之前投與1次、2次、3次、4次、5次或超過5次。 9. 如實施例1至5中任一實施例之方法，其中該第一免疫調節性療法與投與該結合物同時投與。 10.   如實施例1至5中任一實施例之方法，其中該第一免疫調節性療法係在投與該結合物之後投與。 11.   如實施例10之方法，其中該第一免疫調節性療法係在投與該結合物之後投與1次、2次、3次、4次、5次或超過5次。 12.   如實施例10或實施例11之方法，其中該第一免疫調節性療法係在投與該結合物後約1天與4週之間投與。 13.   如實施例1至5中任一實施例之方法，其中該第一免疫調節性療法係在投與該結合物之前投與且在投與該結合物之後再投與至少一次。 14.   如實施例13之方法，其中該第一免疫調節性療法係在投與該結合物之前投與1次、2次或3次。 15.   如實施例13或實施例14之方法，其中該第一免疫調節性療法係在投與該結合物之前約1-3週之間投與。 16.   如實施例1至15中任一實施例之方法，其中該第一免疫調節性療法係用於增強先天活化之佐劑或用於增強適應性活化之佐劑。 17.   如實施例1至15中任一實施例之方法，其中該第一免疫調節性療法係T細胞激動劑。 18.   一種對用先前免疫檢查點抑制劑之治療有抗性之腫瘤或病灶的方法，其包含： (e)    鑑別個體中對用先前免疫檢查點抑制劑之治療無反應或有抗性之腫瘤或病灶； (f)    向該個體投與包含連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4； (g)    在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射該腫瘤或病灶；及 (h)    投與第一免疫檢查點抑制劑， 其中該腫瘤或病灶對該第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。 19.   如實施例18之方法，其中該先前免疫檢查點抑制劑選自由以下組成之群：PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或CTLA-4抑制劑。 20.   如實施例18或實施例19之方法，其中該個體包含未經照射之第二腫瘤或病灶，且其中該第二腫瘤或病灶對投與該第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。 21.   如實施例18或實施例19之方法，其中該個體包含轉移性腫瘤細胞且其中該等轉移性腫瘤細胞對投與該第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。 22.   如實施例18至21中任一實施例之方法，其中敏感性包含腫瘤生長減少或抑制、腫瘤細胞轉移減少、腫瘤細胞殺死增加、全身免疫反應增加、新T細胞引發增加、CD8 T細胞之多樣性增加或其任何組合。 23.   如實施例18至22中任一實施例之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑係PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或CTLA-4抑制劑。 24.   如實施例18至23中任一實施例之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑包含抗體或抗體之抗原接合片段。 25.   一種激發全身免疫反應之方法，其包含： (i)    向個體投與包含連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4； (j)    在投與該結合物後，在第一腫瘤或第一病灶之位點以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射；及 (k)    投與第一免疫調節性療法， 其中在步驟(i)、(j)及(k)之後，該個體在該經照射位點遠端之第二腫瘤或第二病灶中展現至少一種全身性反應。 26.   如實施例25之方法，其中該全身性反應包含全身免疫反應性特徵。 27.   如實施例26之方法，其中該全身免疫反應性特徵選自由以下組成之群：CD8 T細胞浸潤增加、CD8 T細胞活化增加、樹突細胞浸潤增加、樹突細胞活化增加、新T細胞引發增加、T細胞多樣性增加或其任一組合。 28.   如實施例26之方法，其中該全身免疫反應性特徵包含促炎性分子、促炎性細胞介素、免疫細胞活化標記物或T細胞多樣性中之一或多者增加。 29.   如實施例26至28中任一實施例之方法，其中自從該個體獲得之血液樣品評價該全身免疫反應性特徵。 30.   一種激發局部免疫反應之方法，其包含： (l)    向個體投與包含連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4； (m)   在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射該腫瘤或病灶；及 (n)    投與第一免疫調節性療法， 其中在步驟(l)、(m)及(n)之後，該個體展現至少一種局部反應，且其中與僅用該第一免疫調節性療法之治療相比或與單獨用該結合物投與及照射之治療相比，該反應係協同的。 31.   如實施例30之方法，其中該局部反應包含局部免疫反應。 32.   如實施例31之方法，其中該局部免疫反應選自由以下組成之群：腫瘤內Treg耗盡、腫瘤內CD8 T細胞浸潤增加、腫瘤內CD8 T細胞活化增加、骨髓阻抑性細胞減少、I型干擾素反應及其任何組合。 33.   如實施例31之方法，其中該局部免疫反應包含在腫瘤或腫瘤微環境中抗免疫細胞類型或免疫活化標記物增加。 34.   如實施例25至33中任一實施例之方法，其中該第一免疫調節性療法包含用PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑之治療。 35.   如實施例25至34中任一實施例之方法，其中該第一免疫調節性療法包含用抗體或抗體之抗原接合片段之治療。 36.   如實施例25至33中任一實施例之方法，其中該第一免疫調節性療法選自由以下組成之群：用於增強先天活化之佐劑、用於增強適應性活化之佐劑及T細胞激動劑。 37.   如實施例1至35中任一實施例之方法，其進一步包含用第二結合物之治療，該第二結合物包含結合至酞菁染料之癌症靶向分子，且其中在投與該第二結合物後實施至少一個照射步驟。 38.   一種治療腫瘤或病灶之方法，其包含： (o)    鑑別個體之冷腫瘤或病灶； (p)    向該個體投與包含連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，其中該靶向分子接合至CTLA-4；及 (q)    在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射該腫瘤或病灶， 其中該個體之該冷腫瘤或病灶之生長及/或體積增加受到抑制或減少。 39.   如實施例38之方法，其中與用裸或未結合之CTLA-4抗體之治療相比，腫瘤生長之抑制增強。 40.   如實施例38或實施例39之方法，其中藉由高突變負荷或腫瘤免疫評分鑑別該冷腫瘤或病灶。 41.   如實施例38或實施例39之方法，其中藉由PD-1或PD-L1標記物之表現狀態鑑別該冷腫瘤或病灶。 42.   如實施例38或實施例39之方法，其中基於該腫瘤或病灶對PD-1抑制劑或PD-L1抑制劑之反應失敗鑑別該冷腫瘤或病灶。 43.   如實施例38至42中任一實施例之方法，其中藉由液體生檢或組織生檢鑑別該冷腫瘤或病灶。 44.   如實施例38至43中任一實施例之方法，其中在該照射步驟之後，Treg細胞在該腫瘤或腫瘤微環境中快速耗盡。 45.   如實施例38至44中任一實施例之方法，其中在該照射步驟之後，發生該等腫瘤細胞之壞死。 46.   如實施例1至45中任一實施例之方法，其中該靶向分子包含抗CTLA-4抗體或其抗原接合片段。 47.   如實施例46之方法，其中該抗CTLA-4抗體選自由以下組成之群：伊匹單抗(益伏)、曲美目單抗、AGEN1181、AGEN1884、ADU-1064、BCD-145及BCD-217。 48.   如實施例1至47中任一實施例之方法，其中該酞菁染料係Si-酞菁染料。 49.   如實施例48之方法，其中該Si-酞菁染料係IR700。 50.   如實施例1至49中任一實施例之方法，其中該第一免疫調節性療法或該第一免疫檢查點抑制劑包含用選自由以下組成之群之抗PD-1抗體之治療：派姆單抗(MK-3475、KEYTRUDA；蘭布魯珠單抗)、尼沃魯單抗(OPDIVO)、西米普利單抗(LIBTAYO)、特瑞普利單抗(JS001)、HX008、SG001、GLS-010、多斯他利單抗(TSR-042)、替雷利珠單抗(BGB-A317)、賽曲利單抗(JNJ-63723283)、匹利珠單抗(CT-011)、傑諾珠單抗(APL-501、GB226)、BCD-100、西米普利單抗(REGN2810)、F520、信迪利單抗(IBI308)、CS1003、LZM009、卡瑞利珠單抗(SHR-1210)、SCT-I10A、MGA012、AK105、PF-06801591、AMP-224、AB122、AMG 404、BI 754091、HLX10、JTX-4014、AMP-514 (MEDI0680)、Sym021、MGD019、MGD013、AK104、XmAb20717、RO7121661、CX-188、斯巴達珠單抗、BCD-217、HX009、IBI308、PDR001、REGN2810及TSR-042 (ANB011)。 51.   如實施例1至49中任一實施例之方法，其中該第一免疫調節性療法或該第一免疫檢查點抑制劑包含用選自由以下組成之群之抗PD-L1抗體之治療：阿替珠單抗(MPDL3280A、TECENTRIQ、RG7446)、阿維魯單抗(BAVENCIO、MSB0010718C；M7824)、德瓦魯單抗(MEDI4736、IMFINZI)、LDP、NM-01、STI-3031 (IMC-001；STI-A1015)、KN035、LY3300054、M7824 (MSB0011359C)、BMS-936559、MSB2311、BCD-135、BGB-A333、CBT-502 (TQB-2450)、科西貝利單抗(CK-301)、CS1001 (WPB3155)、FAZ053、MDX-1105、SHR-1316 (HTI-1088)、TG-1501、ZKAB001 (STI-A1014)、INBRX-105、MCLA-145、KN046、LY3415244、REGN3504及HLX20。 52.   如實施例1至51中任一實施例之方法，其中該照射步驟係在投與該結合物後介於30分鐘與96小時之間實施。 53.   如實施例1至52中任一實施例之方法，其中該照射步驟係在投與該結合物後24小時 ± 4小時實施。 54.   如實施例1至53中任一實施例之方法，其中該照射步驟係以690 ± 40 nm之波長實施。 55.   如實施例1至54中任一實施例之方法，其中該照射步驟係以為或約為50 J/cm2 或100 J/cm光纖長度之劑量實施。 56.   如實施例1至55中任一實施例之方法，其中該結合物之該投與重複一或多次，視情況其中在該結合物之每次重複投與之後，重複該照射步驟。 57.   如實施例1至56中任一實施例之方法，其進一步包含投與額外治療劑或抗癌治療。 58.   如實施例1至57中任一實施例之方法，其中該腫瘤或病灶與選自由以下組成之群之癌症相關：結腸癌、結腸直腸癌、胰臟癌、乳癌、皮膚癌、肺癌、非小細胞肺癌、腎細胞癌、甲狀腺癌、***癌、頭頸癌、胃腸癌、胃癌、小腸癌、梭形細胞贅瘤、肝癌(hepatic carcinoma)、肝癌(liver cancer)、膽道癌、周圍神經癌、腦癌、骨骼肌癌、平滑肌癌、骨癌、脂肪組織癌、子宮頸癌、子宮癌、生殖器癌、淋巴瘤及多發性骨髓瘤。 59.   如實施例1至58中任一實施例之方法，其中該結合物提供獨立於全身調節性T細胞之數量或活性之效應。 60.   如實施例1至58中任一實施例之方法，其中該方法引起腫瘤內細胞毒性T效應細胞、天然殺手(NK)細胞、其他免疫效應細胞或其任一組合之數量或頻率之實質增加。 61.   如實施例1至58中任一實施例之方法，其中該方法引起腫瘤內細胞毒性T效應細胞、天然殺手(NK)細胞、其他免疫效應細胞或其任一組合之活性或功能之實質增加。 62.   如實施例1至58中任一實施例之方法，其中該方法引起腫瘤內阻抑細胞之數量或頻率及/或活性或功能之實質減少。 63.   如實施例62之方法，其中該腫瘤內阻抑細胞選自由以下組成之群：調節性T細胞、II型天然殺手T細胞、M2巨噬細胞、腫瘤相關之纖維母細胞、骨髓源阻抑細胞或其任一組合。 64.   一種治療對先前免疫檢查點抑制劑療法無反應或有抗性之腫瘤或病灶的方法，該方法包含： (a)    鑑別個體中對用先前免疫檢查點抑制劑之治療無反應或有抗性的腫瘤或病灶； (b)    向該個體投與包含連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，該靶向分子接合至CTLA-4； (c)    在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射該腫瘤或該病灶；及 (d)    投與第一免疫檢查點抑制劑， 其中該腫瘤或該病灶對該第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。 65.   如實施例64之方法，其中對該第一免疫檢查點抑制劑之敏感性包含該腫瘤或該病灶之體積、尺寸或質量減小、該腫瘤或該病灶之體積或尺寸之小於20%增加或腫瘤細胞之數量減少。 66.   如實施例64之方法，其中對該第一免疫檢查點抑制劑之敏感性包含腫瘤細胞轉移減少、腫瘤細胞殺死增加、全身免疫反應增加、新T細胞引發增加、CD8+ T細胞之多樣性增加或其任何組合。 67.   如實施例66之方法，其中對該第一免疫檢查點抑制劑之敏感性包含全身免疫反應增加，且該全身免疫反應係藉由以下中之一或多者量測：細胞毒性T淋巴球(CTL)活性分析、腫瘤內T細胞耗竭分析、腫瘤內效應T細胞擴增分析、T細胞受體多樣性分析、活化CD8+ T細胞分析、循環調節性T細胞(Treg)分析、腫瘤內Treg分析或CD8+ T細胞:Treg分析。 68.   如實施例64至67中任一實施例之方法，其中藉由高突變負荷或腫瘤免疫評分鑑別無反應或有抗性之該腫瘤或該病灶。 69.   如實施例64至67中任一實施例之方法，其中藉由PD-1或PD-L1生物標記物之表現狀態鑑別無反應或有抗性之該腫瘤或該病灶。 70.   如實施例64至69中任一實施例之方法，其中藉由液體生檢或組織生檢鑑別無反應或有抗性之該腫瘤或該病灶。 71.   如實施例64至70中任一實施例之方法，其中用該先前免疫檢查點抑制劑之該治療包含用PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或CTLA-4抑制劑之治療。 72.   如實施例64至71中任一實施例之方法，其中用該先前免疫檢查點抑制劑之該治療包含用抗PD-1抗體或其抗原接合片段之治療。 73.   如實施例72之方法，其中該抗PD-1抗體選自由以下組成之群：派姆單抗(MK-3475、KEYTRUDA；蘭布魯珠單抗)、尼沃魯單抗(OPDIVO)、西米普利單抗(LIBTAYO)、特瑞普利單抗(JS001)、HX008、SG001、GLS-010、多斯他利單抗(TSR-042)、替雷利珠單抗(BGB-A317)、賽曲利單抗(JNJ-63723283)、匹利珠單抗(CT-011)、傑諾珠單抗(APL-501、GB226)、BCD-100、西米普利單抗(REGN2810)、F520、信迪利單抗(IBI308)、CS1003、LZM009、卡瑞利珠單抗(SHR-1210)、SCT-I10A、MGA012、AK105、PF-06801591、AMP-224、AB122、AMG 404、BI 754091、HLX10、JTX-4014、AMP-514 (MEDI0680)、Sym021、MGD019、MGD013、AK104、XmAb20717、RO7121661、CX-188、斯巴達珠單抗、BCD-217、HX009、IBI308、PDR001、REGN2810及TSR-042 (ANB011)。 74.   一種激發全身免疫反應之方法，該方法包含： (a)    向個體投與包含連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，該靶向分子接合至CTLA-4； (b)    在投與該結合物後，在第一腫瘤或第一病灶之位點以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射；及 (c)    投與第一免疫檢查點抑制劑， 其中在步驟(a)、(b)及(c)之後，該個體在該經照射位點遠端之位置中展現至少一種全身免疫反應性特徵。 75.   如實施例74之方法，其中該至少一種全身免疫反應性特徵選自由以下組成之群：CD8+ T細胞浸潤增加、CD8+ T細胞活化增加、CD8+ :Treg比率增加、天然殺手細胞浸潤增加、天然殺手細胞活化增加、樹突細胞浸潤增加、樹突細胞活化增加、新T細胞引發增加、T細胞多樣性增加及其任何組合。 76.   如實施例74之方法，其中該至少一種全身免疫反應性特徵包含促炎性分子、促炎性細胞介素或免疫細胞活化標記物中之一或多者之增加。 77.   如實施例74至76中任一實施例之方法，其中自從該個體獲得之血液樣品評價該至少一種全身免疫反應性特徵。 78.   如實施例74至77中任一實施例之方法，其中該經照射位點遠端之該位置係未經照射之第二腫瘤或第二病灶。 79.   一種激發局部免疫反應之方法，其包含： (a)    向個體投與包含連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，該靶向分子接合至CTLA-4； (b)    在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射該腫瘤或該病灶；及 (c)    投與第一免疫檢查點抑制劑， 其中在步驟(a)、(b)及(c)之後，該個體展現至少一種局部免疫反應性特徵，且其中與僅投與該第一免疫檢查點抑制劑相比或與僅用該結合物及該照射步驟之治療相比，該至少一種局部免疫反應性特徵係協同的。 80.   如實施例79之方法，其中該至少一種局部免疫反應性特徵選自由以下組成之群：腫瘤內Treg耗盡、腫瘤內CD8 T細胞浸潤增加、腫瘤內CD8 T細胞活化增加、腫瘤內CD8+ :Treg比率增加、腫瘤內天然殺手細胞浸潤增加、腫瘤內天然殺手細胞活化增加、骨髓阻抑性細胞減少、I型干擾素反應及其任何組合。 81.   如實施例79之方法，其中該至少一種局部免疫反應性特徵包含腫瘤或腫瘤微環境中抗免疫細胞類型或免疫活化標記物增加。 82.   如實施例64至81中任一實施例之方法，其中該靶向分子包含抗CTLA-4抗體或其抗原接合片段。 83.   如實施例82之方法，其中該抗CTLA-4抗體選自由以下組成之群：伊匹單抗(益伏)、曲美目單抗、AGEN1181、AGEN1884、ADU-1064、BCD-145、CBT-509及BCD-217。 84.   如實施例64至83中任一實施例之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑包含抗PD-1抗體或其抗原接合片段。 85.   如實施例84之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑選自由以下組成之群：派姆單抗(MK-3475、KEYTRUDA；蘭布魯珠單抗)、尼沃魯單抗(OPDIVO)、西米普利單抗(LIBTAYO)、特瑞普利單抗(JS001)、HX008、SG001、GLS-010、多斯他利單抗(TSR-042)、替雷利珠單抗(BGB-A317)、賽曲利單抗(JNJ-63723283)、匹利珠單抗(CT-011)、傑諾珠單抗(APL-501、GB226)、BCD-100、西米普利單抗(REGN2810)、F520、信迪利單抗(IBI308)、CS1003、LZM009、卡瑞利珠單抗(SHR-1210)、SCT-I10A、MGA012、AK105、PF-06801591、AMP-224、AB122、AMG 404、BI 754091、HLX10、JTX-4014、AMP-514 (MEDI0680)、Sym021、MGD019、MGD013、AK104、XmAb20717、RO7121661、CX-188、斯巴達珠單抗、BCD-217、HX009、IBI308、PDR001、REGN2810及TSR-042 (ANB011)及其抗原接合片段。 86.   如實施例64至85中任一實施例之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑與投與該結合物同時投與。 87.   如實施例64至85中任一實施例之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑係在投與該結合物之24小時內投與。 88.   如實施例64至85中任一實施例之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑係在投與該結合物之前投與。 89.   如實施例88之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑係在投與該結合物之前約1-3週之間投與。 90.   如實施例88或實施例89之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑係在投與該結合物之前投與1次、2次、3次、4次、5次或超過5次。 91.   如實施例64至90中任一實施例之方法，其進一步包含在投與該結合物之後投與該第一免疫檢查點抑制劑。 92.   如實施例91之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑係在投與該結合物之後投與1次、2次、3次、4次、5次或超過5次。 93.   如實施例91或實施例92之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑係在投與該結合物後約1天與約4週之間投與。 94.   如實施例64至73及82至93中任一實施例之方法，其中在用先前免疫檢查點抑制劑治療後，該個體展現進行性疾病或穩定疾病。 95.   如實施例64至73及82至93中任一實施例之方法，其中對先前免疫檢查點抑制劑療法無反應或有抗性之該腫瘤或該病灶包含展現以下各項之腫瘤或病灶：該腫瘤或該病灶之體積、尺寸或質量沒有減小、該腫瘤或該病灶之體積或尺寸增加超過20%或腫瘤細胞之數量增加或轉移。 96.   如實施例64至95中任一實施例之方法，其中該個體包含未經照射之第二腫瘤或病灶，且其中該第二腫瘤或病灶對投與該第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。 97.   如實施例64至95中任一實施例之方法，其中該個體包含轉移性腫瘤細胞且其中該等轉移性腫瘤細胞對投與該第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。 98.   如實施例64至97中任一實施例之方法，其中該個體不經歷全身Treg細胞之實質減少。 99.   如實施例64至98中任一實施例之方法，其中該個體在該經照射腫瘤或病灶遠端之位點展現反應，其中該反應選自由以下組成之群：CD8+ T細胞浸潤增加、CD8+ T細胞活化增加、腫瘤內CD8+ :Treg比率增加、腫瘤內天然殺手細胞浸潤增加、腫瘤內天然殺手細胞活化增加、樹突細胞浸潤增加、樹突細胞活化增加、新T細胞引發增加、T細胞多樣性增加、促炎性分子、促炎性細胞介素、免疫細胞活化標記物中之一或多者增加及其任何組合。 100.  如實施例64至99中任一實施例之方法，其中該方法引起腫瘤內阻抑細胞之數量、頻率、活性及/或功能之實質減少。 101.  如實施例100之方法，其中該腫瘤內阻抑細胞選自由以下組成之群：調節性T細胞、II型天然殺手T細胞、M2巨噬細胞、腫瘤相關之纖維母細胞、骨髓源阻抑細胞及其任何組合。 102.  如實施例64至101中任一實施例之方法，其中該方法引起腫瘤內細胞毒性T效應細胞、天然殺手(NK)細胞、其他免疫效應細胞或其任一組合之數量或頻率之實質增加。 103.  如實施例64至102中任一實施例之方法，其中該方法引起腫瘤內細胞毒性T效應細胞、天然殺手(NK)細胞、其他免疫效應細胞或其任一組合之活性或功能之實質增加。 104.  如實施例64至103中任一實施例之方法，其中在該照射步驟之後，發生該腫瘤或該病灶之壞死。 105.  如實施例64至104中任一實施例之方法，其中該酞菁染料係Si-酞菁染料。 106.  如實施例105之方法，其中該Si-酞菁染料係IR700。 107.  如實施例64至106中任一實施例之方法，其中該照射步驟係在投與該結合物後介於30分鐘與96小時之間實施。 108.  如實施例64至107中任一實施例之方法，其中該照射步驟係在投與該結合物後24小時 ± 4小時實施。 109.  如實施例64至108中任一實施例之方法，其中該照射步驟係以690 ± 40 nm之波長實施。 110.  如實施例64至109中任一實施例之方法，其中該照射步驟係以為或約為50 J/cm2 或100 J/cm光纖長度之劑量實施。 111.  如實施例64至110中任一實施例之方法，其中該結合物之該投與重複一或多次，視情況其中在該結合物之每次重複投與之後，重複該照射步驟。 112.  如實施例64至111中任一實施例之方法，其進一步包含投與額外治療劑或抗癌治療。 113.  如實施例64至112中任一實施例之方法，其中該腫瘤或該病灶與選自由以下組成之群之癌症相關：結腸癌、結腸直腸癌、胰臟癌、乳癌、皮膚癌、肺癌、非小細胞肺癌、腎細胞癌、甲狀腺癌、***癌、頭頸癌、胃腸癌、胃癌、小腸癌、梭形細胞贅瘤、肝癌(hepatic carcinoma)、肝癌(liver cancer)、膽道癌、周圍神經癌、腦癌、骨骼肌癌、平滑肌癌、骨癌、脂肪組織癌、子宮頸癌、子宮癌、生殖器癌、淋巴瘤及多發性骨髓瘤。IX. 實例
包括以下實例僅用於闡釋性目的且並不意欲限制本發明之範疇。實例 1 ： IRDye 700 結合之抗 CTLA-4 抗體之生成
此實例闡述製備含有與抗CTLA-4抗體9H10連接之IRDye 700DX (IR700)之結合物的方法，從而產生9H10-IRDye 700DX (9H10-IR700)。
將抗體9H10 (一種針對小鼠CTLA-4之Syrian倉鼠IgG單株抗體(mAb)) (1 mg, 6.8 nmol)與IRDye 700DX NHS酯(IR700；LI-COR Bioscience, Lincoln, NE) (66.8 µg, 34.2 nmol, 5 mmol/L，於DMSO中)在0.1 mol/L Na2 HPO4 (pH 8.5)中於室溫下培育30至120 min。使用Sephadex G50管柱(PD-10；GE Healthcare, Piscataway, NJ)純化混合物。利用Coomassie Plus蛋白分析套組(Pierce Biotechnology, Rockford, IL)藉由利用UV-Vis系統(8453 Value System；Agilent Technologies, Palo Alto, CA)量測595 nm下之吸收來測定蛋白濃度。藉由利用UV-Vis系統之吸收來量測IR700之濃度，以確認與每一9H10分子結合之螢光團分子之數量。每9H10之IR700數量為約3。
藉由分析型尺寸排除HPLC (SE-HPLC)及十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)確認9H10-IR700結合物之純度。使用配備有126型溶劑遞送模組、168型UV檢測器及由32 Karat軟體控制之JASCO螢光檢測器(激發689 nm及在700 nm下發射)之Beckman System Gold (Fullerton, CA)實施SE-HPLC分析。在TSK凝膠G2000SWx1 (Tosoh Bioscience LLC, Montgomeryville, PA)上實施SE層析，該TSK凝膠G2000SWx1使用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)以0.5 mL/min溶析45分鐘。利用4%至20%梯度聚丙烯醯胺凝膠(Invitrogen, Carlsbad, CA)實施SDS-PAGE。分離蛋白質後，利用Fujifilm FLA-5100螢光掃描儀(Valhalla, NY)分析螢光強度，內部雷射為670 nm用於激發及705 nm長通濾波器用於發射。用Multigage軟體(Fujifilm)分析每一帶之螢光強度。然後用膠體藍染色套組(Invitrogen)對凝膠進行染色，並進行數位掃描。利用ImageJ軟體分析每一帶之蛋白濃度。如藉由HPLC及SDS-PAGE所測定，9H10-IR700製劑展現強締合性，且不含可檢測之mAb聚集物。
為了測定IR700結合物之活體外接合特徵，使用Indo-Gen程式實施結合物之125 I標記。確認與IR700結合之mAb之最小損失。如先前所述實施免疫反應性分析。簡言之，胰蛋白酶化後，將2 × 106 個腫瘤細胞重懸於含1%牛血清白蛋白(BSA)之PBS中。添加125 I-9H10-IR700 (1 mCi, 0.2 µg)且在冰上培育1 h。洗滌細胞，沈澱，傾析上清液，並在2470 Wizard γ-計數器(Perkin Elmer, Shelton, CT)中計數。在抗體過量(200 µg未標記之9H10)之條件下檢查與細胞之非特異性接合。 實例2： 抗CTLA-4-IR700光免疫療法(PIT)抑制免疫反應性降低之腫瘤生長
此實例闡述抗CTLA-4-IR700光免疫療法(PIT)對免疫反應性降低之腫瘤生長的抑制效應。
6-8週齡之BALB/c小鼠在右後肋部皮下接種1×106 個CT26-EphA2純系c4D10鼠類結腸癌細胞/小鼠。當同種異體移植物腫瘤生長至約250-350 mm3 之大小時(腫瘤細胞接種後11天)，向小鼠投與鹽水(100 µL)、「裸」未結合之抗CTLA-4抗體9H10 (100 µg)或實質上如上文實例1中所述生成之9H10-IR700 (抗CTLA-4-IR700)結合物(100 µg)。在腫瘤細胞接種後15及19天，向接受「裸」未結合之抗CTLA-4之動物投與額外劑量(100 µg)之抗體。在投與抗CTLA-4-IR700後24小時，在690 nm下及以150 J/cm2 之劑量下照射PIT組中之腫瘤。在21天內觀察腫瘤生長，並使用下式計算腫瘤體積：腫瘤體積=(寬度×長度)×高度/2。
當腫瘤生長至約250-350 mm3 之大小時，其形成免疫阻抑表型：例如，腫瘤內細胞毒性CD8+ T細胞之數量減少，且腫瘤內調節性T細胞(免疫阻抑細胞)之數量增加(數據未顯示)。如圖 1 中所示，當用多次投與抗CTLA-4抗體(抗CTLA4)治療小鼠時，與鹽水對照組相比，腫瘤之生長實質上被抑制(封閉圈對開放圈)。在經單週期抗CTLA-4-IR700 PIT (CTLA4-IR700 PIT)治療之小鼠中，腫瘤生長進一步受到抑制(圖 1 ；封閉菱形)。實例 3 ： 抗 CTLA-4 PIT 誘導遠端腫瘤中之抗癌反應
此實例闡述抗CTLA-4 PIT對未直接照射之遠端腫瘤生長之抑制效應。
BALB/c小鼠在右及左後肋部二者上皮下接種1×106 個CT26-EphA2純系c4D10鼠類結腸癌細胞或1×106 個MCA205鼠類纖維肉瘤細胞/小鼠。當兩側上之同種異體移植物腫瘤生長至約250-350 mm3 (對於CT26-EphA2細胞)或約150 mm3 (對於MCA205細胞)時，向小鼠投與鹽水(100 µL)或抗CTLA-4 (9H10)-IR700結合物(100 µg)。投與結合物後24小時，在690 nm下以150 J/cm2 (對於CT26-EphA2腫瘤)或150 J/cm2 (對於MCA205腫瘤)之劑量照射抗CTLA-4 PIT組中右肋部中之腫瘤，而左肋部中之腫瘤被遮擋而不照射。觀察經照射腫瘤(靶腫瘤)及未經照射腫瘤(遠端腫瘤)之生長一段時間(19-20天)，並使用下式計算腫瘤體積：腫瘤體積=(寬×長)×高度/2。
如圖 2A 及2B 中所示，對於兩種腫瘤細胞類型，與鹽水處理或抗CTLA-4-IR700結合物處理(無PIT)之腫瘤相比，用抗CTLA-4 PIT處理之靶腫瘤(左圖)及遠端腫瘤(右圖)展現腫瘤生長抑制。投與單獨抗CTLA-4-IR700結合物(無照射)之小鼠亦展現，與鹽水對照相比，靶腫瘤(圖 2A 及2B ；左圖)及遠端腫瘤(圖 2A 及2B ；右圖)生長減少，但在兩種腫瘤細胞類型中，與抗CTLA-4-PIT相比，單獨結合物在抑制靶腫瘤(圖 2A 及2B ；左圖)及遠端腫瘤(圖 2A 及2B ；右圖)生長中較不有效。該等數據支持以下發現：與單獨用抗CTLA-4-IR700結合物治療相比，抗CTLA-4 PIT能夠誘導局部及全身免疫反應，且展現遠端效應，例如抑制遠端(未經照射之)腫瘤生長。 實例4： 「冷」腫瘤對抗CTLA-4及抗PD-1療法之抗性
此實例闡述「冷」腫瘤(即免疫反應性降低之腫瘤)對抗CTLA-4抗體9H10單一療法或9H10與抗PD-1抗體RMP1-14療法之組合的抗性。
為了產生免疫反應性降低之小鼠腫瘤模型，吾人使用4T1鼠類乳癌細胞同種異體移植物腫瘤。顯示在4T1腫瘤中，腫瘤內細胞毒性細胞(如CD8+ T效應細胞)之數量及/或活性實質上減少或缺失，從而使此類腫瘤變得「冷」(Mosely等人，(2017) Cancer Immunol Res. 5(1):29-41)。
6-8週齡之BALB/c小鼠在右後肋部皮下接種1×106 個4T1細胞/小鼠。當同種異體移植物腫瘤達到150 mm3 之近似平均體積時(腫瘤細胞接種後7天)，向小鼠投與鹽水(100 µL)、鹽水加抗PD-1抗體純系RMP1-14 (100 µg)、實質上如上文實例1中所述生成之9H10-IR700 (抗CTLA-4-IR700)結合物(100 µg)、或9H10-IR700 (抗CTLA-4-IR700)結合物與RMP1-14 (各自100 µg)之組合。抗CTLA-4-IR700結合物在第7天投與且RMP1-14在第7、9、11及14天投與。在26天內觀察腫瘤生長，並使用下式計算腫瘤體積：腫瘤體積=(寬度×長度)×高度/2。
結果顯示，「冷」4T1腫瘤對投與給小鼠之任何治療皆有抗性。與對照組(鹽水)相比，投與單獨抗CTLA-4-IR700結合物或與抗PD-1抗體之組合僅部分減少腫瘤之生長(圖 3 )。 實例5： 冷腫瘤對抗CTLA-4 PIT之抗性
此實例展現「冷」腫瘤(即免疫反應性降低之腫瘤)對抗CTLA-4 PIT之抗性。
6-8週齡之BALB/c小鼠在右後肋部皮下接種1×106 個4T1細胞/小鼠。當同種異體移植物腫瘤生長至約約150 mm3 之體積時(腫瘤細胞接種後6天)，向小鼠投與鹽水(100 µL)或抗CTLA-4抗體9H10-IR700結合物(100 µg)。在投與結合物後24小時，在690 nm下以150 J/cm2 之劑量照射抗CTLA-4 PIT組中之腫瘤。在26天內觀察存活及腫瘤生長，並使用下式計算腫瘤體積：腫瘤體積=(寬度×長度)×高度/2。
與對照組(鹽水)相比，抗CTLA-4-IR700結合物(無PIT)及抗CTLA-4 PIT皆未實質上減少腫瘤生長(圖 4A )。然而，與單獨之結合物或對照(鹽水)相比，用抗CTLA-4 PIT治療之動物之存活率稍微增加(圖 4B )。 實例6： 抗CTLA-4 PIT使冷腫瘤對抗PD-1抗體治療敏感
此實例闡述抗CTLA-4 PIT可使「冷」腫瘤(即免疫反應性降低之腫瘤)對免疫檢查點抑制劑抗PD-1治療敏感。
6-8週齡之BALB/c小鼠在右後肋部皮下接種1×106 個4T1細胞/小鼠。當同種異體移植物腫瘤生長至約150 mm3 之體積時(腫瘤細胞接種後6天)，向小鼠投與鹽水(100 µL)、抗CTLA-4 (9H10)-IR700結合物(100 µg)或抗CTLA-4 (9H10)-IR700結合物與抗PD-1抗體RMP1-14 (各自100 µg)之組合。抗CTLA-4-IR700結合物在第6天投與且RMP1-14在第6、8、10及13天投與。結合物投與後24小時，在690 nm下以100 J/cm2 之劑量照射抗CTLA-4 PIT組中之腫瘤。在20天內觀察腫瘤生長，並使用下式計算腫瘤體積：腫瘤體積=(寬度×長度)×高度/2。
抗CTLA-4 PIT與抗PD-1之組合實質上抑制「冷」腫瘤之生長，但單獨抗CTLA-4 PIT對「冷」腫瘤之生長不顯示實質抑制效應(圖 5 )。該等數據支持以下發現：抗CTLA-4 PIT使冷腫瘤對抗PD-1治療敏感。 實例7： 抗CTLA-4 PIT使遠端冷腫瘤對抗PD-1抗體治療敏感
此實例闡述抗CTLA-4 PIT與抗PD-1抗體之組合對未直接照射之遠端腫瘤生長之抑制效應。
6-8週齡之BALB/c小鼠在右及左後肋部皮下接種1×106 個4T1細胞/小鼠。當兩側上之同種異體移植物腫瘤生長至約150 mm3 之體積時(腫瘤細胞接種後6天)，向小鼠投與鹽水(100 µL)、抗CTLA-4 (9H10)-IR700結合物(100 µg)或抗CTLA-4-IR700結合物與抗PD-1抗體RMP1-14 (各自100 µg)之組合。抗CTLA-4-IR700結合物在第6天投與且RMP1-14在第6、8、10及13天投與。在投與結合物後24小時，於690 nm下以100 J/cm2 之劑量照射抗CTLA-4 PIT組中右肋部中之腫瘤，而左肋部中之腫瘤被遮擋而不照射。在20天內觀察未照射之遠端腫瘤之腫瘤生長，並使用下式計算腫瘤體積：腫瘤體積=(寬度×長度)×高度/2。
抗CTLA-4 PIT與抗PD-1之組合實質上抑制未照射之遠端4T1腫瘤之生長，而單獨抗CTLA-4 PIT不抑制遠端腫瘤生長(圖 6 )。該等數據支持以下發現：抗CTLA-4 PIT與抗PD-1免疫檢查點抑制劑之組合能夠誘導全身免疫反應且展現遠端效應，例如未直接照射之遠端腫瘤之生長抑制。 實例8： 抗CTLA-4對全身調節性T細胞之效應
此實例闡述投與抗CTLA-4-IR700結合物(無PIT)不會影響調節性T細胞(Treg)之群體。
自經抗CTLA-4純系9H10或抗CD25純系PC61 (用作全身性Treg減少之陽性對照)治療之動物之脾測定CD3+ CD4+ 細胞中FoxP3+ 調節性T細胞(FoxP3 Treg)之百分比。如圖 7 中所示，投與抗CTLA-4純系9H10不減少全身調節性T細胞，此指示靶腫瘤及遠端腫瘤中抗CTLA-4 PIT之抗癌活性不需要減少全身調節性T細胞。 實例9： 抗CTLA-4 PIT對腫瘤內調節性T細胞之效應
此實例闡述因應抗CTLA-4-IR700 PIT之活體內調節性T細胞(Treg )之耗盡。
BALB/c小鼠在右後肋部皮下接種1×106 個4T1-EpCAM腫瘤細胞。一旦腫瘤達到約150 mm3 之平均體積，用鹽水、單獨之抗CTLA-4-IR700結合物(CTLA-4-IR700)或抗CTLA-4-IR700結合物與照射(抗CTLA-4-IR 700 PIT；CTLA-4 PIT)治療小鼠。在投與結合物後24小時，將經照射(PIT)組之小鼠中之腫瘤以100 J/cm2 暴露於690 nm光。照射後2小時及7天，自所有組切除腫瘤且加工成單細胞懸浮液。然後用Treg 標記物CD3、CD4、CD45及FoxP3對懸浮細胞進行染色。使用流式細胞術分析染色細胞，且測定CD45+ 細胞中CD3+ CD4+ FoxP3+ 細胞之百分比。
治療後2小時，與單獨用鹽水或抗CTLA-4-IR700結合物處理之小鼠相比，用抗CTLA-4-IR700 PIT處理之帶有腫瘤之小鼠展現腫瘤內CD3+ CD4+ FoxP3+ T細胞之百分比顯著降低(分別為P ≤0.01及P ≤ 0.0001)，指示在抗CTLA-4 PIT後腫瘤中立即Treg減少(圖 8A )。7天後，與對照(鹽水處理之)動物之腫瘤相比，用抗CTLA-4-IR700 PIT處理之腫瘤繼續含有降低百分比之腫瘤內CD3+ CD4+ FoxP3+ T細胞(圖 8B ；P ＜0.01)。與對照(鹽水處理之)動物之腫瘤相比，單獨用結合物處理之動物之腫瘤在7天後亦含有降低百分比之腫瘤內CD3+ CD4+ FoxP3+ T細胞(P ≤0.01)及與CTLA-4 PIT處理之腫瘤相似之百分比(圖 8B )。該等結果展現，抗CTLA-4 PIT導致腫瘤內調節性T細胞(Treg )之快速及持續耗盡。 實例10： CTLA4 PIT對腫瘤內CD8:Treg比率之效應
此實例闡述活體內抗CTLA-4-IR700 PIT對腫瘤內CD8+ T細胞對調節性T細胞(Treg )比率之效應，該比率係對治療之臨床反應之預測標記。
BALB/c小鼠在右後肋部皮下接種1 × 106 個4T1-EpCAM腫瘤細胞。一旦腫瘤達到150 mm3 之近似平均體積，用鹽水、單獨之抗CTLA-4 (9H10)-IR700結合物(100 µg) (CTLA-4-IR700)或抗CTLA-4-IR700結合物(100 µg)與照射(抗CTLA-4-IR700 PIT；CTLA-4 PIT)處理小鼠。在投與結合物後24小時，將照射(PIT)組之小鼠中之腫瘤以100 J/cm2 於690 nm下照射。照射後2小時及7天，自所有組切除腫瘤且加工成單細胞懸浮液。然後對懸浮細胞進行細胞標記物染色，包括CD3、CD45、CD8、CD4及FoxP3。同型對照亦用於染色。使用流式細胞術分析染色細胞，且測定腫瘤內CD8+ T細胞對Treg 之比率。
如圖 9A 中所示，照射後2小時，與接受鹽水(P ≤0.01)或單獨抗CTLA-4-IR700結合物(無照射)(P ≤0.01)之小鼠相比，經抗CTLA-4-IR700 PIT治療之小鼠之腫瘤具有增加之腫瘤內CD8+ :Treg 比率。接受PIT之動物之腫瘤中增加之CD8+ :Treg 比率在照射後7天內得以維持(圖 9B ；P ≤0.01)。與照射後7天接受鹽水之小鼠相比，投與單獨抗CTLA-4結合物導致增加之CD8+ :Treg 比率(圖 9B ；P ≤0.05)。該等結果指示，單次抗CTLA-4 PIT治療導致經治療腫瘤內CD8+ :Treg 比率快速而持久地增加。 實例11： 抗CTLA-4-IR700 PIT導致活化CD8+ T細胞快速增加
此實例闡述活體內抗CTLA-4-IR700 PIT對腫瘤內CD8+ T細胞活化之效應。
向BALB/c小鼠接種4T1-EpCAM腫瘤細胞。一旦腫瘤達到150 mm3 之近似平均體積，用鹽水、單獨之抗CTLA-4 (9H10)-IR700結合物(CTLA-4-IR700) (100 µg)或抗CTLA-4-IR700結合物(100 µg)與照射(抗CTLA-4-IR700 PIT；CTLA-4 PIT)處理小鼠。在投與結合物後24小時，將照射(PIT)組之小鼠中之腫瘤以100 J/cm2 於690 nm下照射。照射後2小時，自所有組切除腫瘤且加工成單細胞懸浮液。然後對懸浮細胞進行細胞標記染色，用於細胞類型鑑別，並藉由流式細胞術進行分析。測定每一情況下CD8 T細胞中CD25+ 細胞之百分比。
如圖 10 中所示，在用抗CTLA-4-IR700 PIT(三角形)處理之小鼠中，與接受鹽水(圓圈)或單獨抗CTLA-4-IR700結合物(正方形)之小鼠相比，活化CD8+ T細胞(CD3+ CD8+ CD25+ )之數量顯著增加(P ≤0.01)。該等結果指示，抗CTLA-4 PIT導致經照腫瘤中活化CD8+ T細胞快速增加。 實例12： 抗CTLA-4-IR700 PIT導致活化CD8+ T細胞持續增加
此實例闡述活體內抗CTLA-4-IR700 PIT對持續腫瘤內CD8+ T細胞活化之效應。
向BALB/c小鼠接種4T1-EpCAM腫瘤細胞。一旦腫瘤達到150 mm3 之近似平均體積，用鹽水、單獨之抗CTLA-4 (9H10)-IR700結合物(CTLA-4-IR700) (100 µg)或抗CTLA-4-IR700結合物(100 µg)與照射(抗CTLA-4-IR700 PIT；CTLA-4 PIT)處理小鼠。在投與結合物後24小時，將照射(PIT)組之小鼠中之腫瘤以100 J/cm2 於690 nm下照射。照射後7天，自所有組切除腫瘤且加工成單細胞懸浮液。然後對懸浮細胞進行細胞標記物染色，包括CD3、CD69、CD45、CD8及Ki67。同型對照亦用於染色。使用流式細胞術分析染色細胞。
如圖11A 及11B 中所示，與接受鹽水(正方形)或單獨抗CTLA-4-IR700結合物(三角形)之小鼠相比，在用抗CTLA-4-IR700 PIT (倒三角形)處理之小鼠中，活化CD8+ T細胞(CD3+ CD8+ Ki67+ ，圖 11A ；及CD3+ CD8+ CD69+ ，圖 11B )之百分比顯著增加(P ＜0.001)。該等結果指示，抗CTLA-4 PIT導致經照腫瘤中活化CD8+ T細胞持續增加。 實例13： 抗CTLA-4-IR700 PIT導致活化天然殺手細胞增加
此實例闡述活體內抗CTLA-4-IR700 PIT對持續腫瘤內天然殺手(NK)細胞活化之效應。
向BALB/c小鼠接種4T1-EpCAM腫瘤細胞。一旦腫瘤達到150 mm3 之近似平均體積，用鹽水、單獨之抗CTLA-4 (9H10)-IR700結合物(100 µg)或抗CTLA-4-IR700結合物(100 µg)與照射(抗CTLA-4-IR700 PIT)處理小鼠。在投與結合物後24小時，將照射(PIT)組之小鼠中之腫瘤以100 J/cm2 於690 nm下照射。照射後7天，自所有組切除腫瘤且加工成單細胞懸浮液。然後對懸浮細胞進行細胞標記物染色，包括CD3、CD69、CD45、CD49b及Ki67。同型對照亦用於染色。使用流式細胞術分析染色細胞。
如圖 12A 及12B 中所示，與接受鹽水(分別P ≤0.01及P ≤0.0001)或單獨抗CTLA-4-IR700結合物(分別P ≤0.05及P ≤0.01)之小鼠相比，在用抗CTLA-4-IR700 PIT處理之小鼠中，顯示為CD45+ 細胞之百分比的活化NK細胞(CD49b+ CD3- Ki67+ ，圖 12A ；及CD49b+ CD3- CD69+ ，圖 12B )之比例顯著增加。該等結果展現，抗CTLA-4 PIT導致經照腫瘤中活化NK細胞增加。 實例14： 抗CTLA-4-IR700 PIT增強外週中腫瘤抗原特異性細胞毒性淋巴球之擴增
此實例闡述抗CTLA-4-IR700 PIT對活體內全身免疫性之刺激效應。 A.     細胞毒性T淋巴球(CTL)分析
CTL分析經設計以評估接種CT26-EphA2純系c4D10腫瘤之小鼠之脾細胞的腫瘤特異性細胞毒性活性。使用CytoTox™ 96非放射性細胞毒性分析(Promega；目錄號G1780)評估細胞毒性。套組量測孔中乳酸去氫酶(LDH)之含量，細胞死亡時，乳酸去氫酶自細胞中釋放。自用單獨抗CTLA-4 (9H10)-IR700結合物(100 µg)或抗CTLA-4-IR700 (CTLA-4 IR700)結合物(100 µg)與照射(抗CTLA-4-IR700 PIT；CTLA-4 PIT)處理之帶有腫瘤之小鼠或自投與鹽水之對照帶有腫瘤之小鼠收穫脾。藉由在70-µm孔徑細胞濾器上機械解離收穫之脾來製備單細胞懸浮液。收集所得流通液，並裂解紅血球。在活體外用CT26抗原AH1肽引發懸浮脾細胞達四天。其後，藉由將脾細胞(效應細胞)及CT26-ephA2純系c4D10靶細胞以若干效應細胞對靶細胞比率(E:T比率)共培育4小時，實施細胞毒性分析。隨後，取出脾細胞，且量測自靶細胞釋放之LDH含量。人類胰臟癌細胞系BxPC3細胞作為不相關之對照靶細胞。 B.     結果
在用單獨結合物或抗CTLA-4-IR700 PIT處理之小鼠中，脾細胞離體展現針對靶腫瘤細胞之腫瘤特異性免疫反應(圖 13 )。對於源自用抗CTLA-4-IR700 PIT處理之小鼠之脾細胞，結果顯示對靶腫瘤細胞具有明確E:T比率依賴性細胞毒性效應，能夠在100:1之E:T比率下殺死75%以上之靶細胞，且在33:1之比率下殺死約60% (圖 13 )。對於源自用單獨抗CTLA-4-IR700結合物(CTLA-4-IR 700；無PIT)處理之小鼠之脾細胞，結果顯示對靶腫瘤細胞具有明確E:T比率依賴性細胞毒性效應，能夠在100:1之比率下殺死約40%靶細胞，且在33:1之比率下殺死約30%。對於源自對照、鹽水處理之小鼠之脾細胞，結果顯示在任何E:T比率下對靶腫瘤細胞之細胞毒性效應最小(圖 13 )。此外，針對BxPC3細胞(一種不相關類型之腫瘤細胞，在100:1之E:T比率下用作靶腫瘤細胞之對照)基本上無細胞毒性效應。該等結果清楚地顯示，用抗CTLA-4-IR700 PIT之治療導致脾中腫瘤特異性細胞毒性T細胞活性增加，且在用抗CTLA-4-IR700結合物治療但未進行光治療之小鼠中，全身免疫活性之增加實質上大於腫瘤特異性細胞毒性T細胞活性之增加。該等結果指示，腫瘤內結合物之光活化有助於額外全身免疫活性，超過了僅由抗CTLA4抗體組分提供之功能。 實例15： 在抗CTLA-4-IR700 PIT後具有完全反應之小鼠中排斥再攻擊腫瘤之生長
此實例闡述排斥新近接種至小鼠中之腫瘤之生長，該等小鼠在用實例性抗CTLA-4-IR700 PIT初始治療後實現完全反應。
6-8週齡之BALB/c小鼠同時在右及左後肋部皮下接種1×106 個CT26-EphA2純系c4D10細胞/小鼠。當同種異體移植物腫瘤生長至約250 mm3 之大小時，向小鼠投與抗CTLA-4-IR700結合物(100 µg)。投與抗CTLA-4-IR700後24小時，於690 nm下以100 J/cm2 照射腫瘤。再攻擊實現完全反應(腫瘤自右及左後肋部消失)之小鼠(CR小鼠；n=7)，且在初始腫瘤細胞接種後72天(即，抗CTLA-4 PIT處理後63天)，未經處置小鼠(n=10)在左後肋部上接種CT26-EphA2細胞。觀察來自新近接種之細胞之腫瘤生長達44天，並使用下式計算腫瘤體積：腫瘤體積=(寬度×長度)×高度/2。
所有先前未暴露於任何治療之未經處置小鼠(10/10)皆形成展現連續生長之腫瘤(圖 14A )。相反，所有抗CTLA-4 PIT處理之動物(7/7)皆完全排斥腫瘤細胞之第二次接種，且在接種後超過10天未觀察到腫瘤生長，且觀察到之任何初始生長截至約13天返回基線(圖 14B )。該等結果指示，抗CTLA-4 PIT治療增強動物之全身抗腫瘤免疫性。
本發明之範圍並不意欲限於所揭示之特定實施例，該等實例提供以例如闡釋本發明之各個態樣。根據本文之說明及教示可明瞭所述組合物及方法之各種修改形式。可在不脫離本揭示內容之真實範圍及精神之情況下實踐該等變化，且該等變化意欲落入本揭示內容之範圍內。
圖 1 顯示抗CTLA-4抗體(抗CTLA4)或抗CTLA-4 IR700 PIT (CTLA4-IR700 PIT)抑制免疫反應性降低之腫瘤之生長。
圖 2A 顯示抗CTLA-4-IR700 PIT (CTLA4-IR700 PIT)實質上抑制經照射(左圖)及未經照射遠端(右圖) CT26鼠類結腸癌源腫瘤活體內生長，且抑制效應大於單獨抗CTLA-4-IR700結合物(CTLA-4-IR700)所觀察到之效應。
圖 2B 顯示抗CTLA-4-IR700 PIT (CTLA4-IR700 PIT)實質上抑制經照射(左圖)及未經照射遠端(右圖) MCA205鼠類纖維肉瘤源腫瘤活體內生長，且抑制效應大於單獨抗CTLA-4-IR700結合物(CTLA-4-IR700)所觀察到之效應。
圖 3 顯示冷腫瘤對抗CTLA-4及抗PD-1療法之抗性。源自4T1鼠類乳癌細胞之腫瘤顯示免疫反應性降低，且因此命名為「冷腫瘤」。冷腫瘤對單獨抗CTLA-4 IR700結合物(CTLA4-IR700)或與抗PD-1免疫檢查點抑制劑之組合(CTLA4-IR700 +抗PD1)之治療具有抗性。
圖 4A 顯示「冷」腫瘤對單獨抗CTLA-4 IR700結合物及抗CTLA-4 PIT之抗性，展現免疫反應性降低。與對照組(鹽水)相比，單獨抗CTLA-4-IR700結合物(CTLA4-IR700) (無照射)及抗CTLA-4 PIT (CTLA4-IR700 PIT)皆未減少腫瘤之生長(圖 4A )。
圖 4B 顯示與鹽水(點線)或無照射之抗CTLA-4-IR700結合物(CTLA4-IR700；虛線)相比，抗CTLA-IR700 PIT (CTLA4-IR700 PIT；實線)改良帶有「冷」 4T1腫瘤之小鼠之存活。
圖 5 顯示抗CTLA-4 PIT (CTLA-4-PIT)使4T1源「冷」腫瘤對抗PD-1抗體治療敏感。
圖 6 顯示抗CTLA-4-IR700 PIT (CTLA-4 PIT)使未經照射之遠端冷腫瘤對用抗PD-1抗體之治療敏感。單獨抗CTLA-4 PIT (CTLA-4 PIT)對冷腫瘤生長不顯示實質抑制效應，但其使腫瘤對抗PD-1治療(CTLA-4 PIT + 抗PD1)敏感。
圖 7 顯示，抗CTLA-4 PIT與抗PD-1 (抗CTLA-4)之組合對未經照射遠端冷腫瘤之遠端效應(abscopal effect)不需要減少全身調節性T細胞(*：p＜0.001)。
圖 8A-8B 顯示與投與鹽水或單獨抗CTLA4-IR700結合物(CTLA-4-IR700)相比，在治療後2小時(圖 8A )及7天(圖 8B )因應抗CTLA-4-PIT (CTLA-4 PIT)之活體內腫瘤內調節性T細胞(Treg)之耗盡。與鹽水對照相比，投與單獨抗CTLA4-IR700結合物(CTLA-4-IR700)在治療後2小時未顯著降低腫瘤內Treg之百分比(圖 8A )，但在治療後7天觀察到腫瘤內Treg之耗盡(圖 8B )。
圖 9A-9B 顯示與鹽水治療相比，在治療後2小時(圖 9A )及治療後7天(圖 9B )，因應抗CTLA-4-PIT (CTLA-4 PIT)之活體內腫瘤內CD8+ T細胞: 調節性T細胞(CD8+ :Treg)比率增加。投與單獨抗CTLA4-IR700結合物(CTLA-4-IR700)在治療後2小時不增加CD8+ :Treg比率(圖 9A )，但在治療後7天觀察到CD8+ :Treg比率增加(圖 9B )。
圖 10 顯示與投與鹽水或單獨抗CTLA-4-IR700結合物(CTLA-4-IR700)相比，抗CTLA-4-PIT (CTLA-4-PIT)後2小時之活體內腫瘤內活化CD8+ T細胞(CD3+ CD8+ CD25+ )增加。
圖 11A-11B 顯示與投與鹽水或單獨抗CTLA-4-IR700結合物(CTLA-4-IR700)相比，抗CTLA-4-IR700 PIT (CTLA-4 PIT)後7天之活體內腫瘤內CD8+ T細胞活化(CD45+ 細胞之CD3+ CD8+ Ki-67+ %；圖 11A ， 及CD45+ 細胞之CD3+ CD8+ CD69+ ；圖 11B )持續增加。
圖 12A-12B 顯示與投與鹽水或單獨抗CTLA-4-IR700結合物(CTLA-4-IR700)相比，抗CTLA-4-IR700 PIT (CTLA-4 PIT)後7天之活體內腫瘤內活化天然殺手(NK)細胞(CD45+ 細胞之CD49b+ CD3- Ki-67+ %；圖 12A ，及CD45+ 細胞之CD49b+ CD3- CD69+ ；圖 12B )增加。
圖 13 顯示在與自完全反應(CR)小鼠獲得之脾細胞一起培育後，在用腫瘤特異性抗原引發後，針對CT26腫瘤細胞或不相關腫瘤細胞之細胞毒性，該等小鼠用抗CTLA-4-IR700及照射(CTLA-4 PIT)或單獨抗CTLA-4-IR700結合物(CTLA-4-IR700)治療，效應物: 靶標比率為100:1、33:1、11:1、3.7:1、1.23:1及0.41:1 (或對於不相關腫瘤細胞為100:1)。
圖14A-14B 顯示在抗CTLA-4-IR700 PIT之後之小鼠中確立抗腫瘤全身免疫性。結果顯示，在未經處置動物(圖 14A )中及在用抗CTLA-4-IR700 PIT治療先前確立之腫瘤後用腫瘤細胞再次攻擊之完全反應者(CR)小鼠(圖 14B )中之腫瘤生長。

Claims (50)

  1. 一種治療對先前免疫檢查點抑制劑療法無反應或有抗性之腫瘤或病灶的方法，該方法包含： (a)    鑑別個體中對用先前免疫檢查點抑制劑之治療無反應或有抗性的腫瘤或病灶； (b)    向該個體投與包含連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，該靶向分子接合至CTLA-4； (c)    在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射該腫瘤或該病灶；及 (d)    投與第一免疫檢查點抑制劑， 其中該腫瘤或該病灶對該第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。
  2. 如請求項1之方法，其中對該第一免疫檢查點抑制劑之敏感性包含該腫瘤或該病灶之體積、尺寸或質量減小、該腫瘤或該病灶之體積或尺寸之小於20%增加或腫瘤細胞之數量減少。
  3. 如請求項1之方法，其中對該第一免疫檢查點抑制劑之敏感性包含腫瘤細胞轉移減少、腫瘤細胞殺死增加、全身免疫反應增加、新T細胞引發增加、CD8+ T細胞之多樣性增加或其任何組合。
  4. 如請求項3之方法，其中對該第一免疫檢查點抑制劑之敏感性包含全身免疫反應增加，且該全身免疫反應係藉由以下中之一或多者量測：細胞毒性T淋巴球(CTL)活性分析、腫瘤內T細胞耗竭分析、腫瘤內效應T細胞擴增分析、T細胞受體多樣性分析、活化CD8+ T細胞分析、循環調節性T細胞(Treg)分析、腫瘤內Treg分析或CD8+ T細胞:Treg分析。
  5. 如請求項1至4中任一項之方法，其中藉由高突變負荷或腫瘤免疫評分鑑別無反應或有抗性之該腫瘤或該病灶。
  6. 如請求項1至4中任一項之方法，其中藉由PD-1或PD-L1生物標記物之表現狀態鑑別無反應或有抗性之該腫瘤或該病灶。
  7. 如請求項1至6中任一項之方法，其中藉由液體生檢或組織生檢鑑別無反應或有抗性之該腫瘤或該病灶。
  8. 如請求項1至7中任一項之方法，其中用該先前免疫檢查點抑制劑之該治療包含用PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或CTLA-4抑制劑之治療。
  9. 如請求項1至8中任一項之方法，其中用該先前免疫檢查點抑制劑之該治療包含用抗PD-1抗體或其抗原接合片段之治療。
  10. 如請求項9之方法，其中該抗PD-1抗體選自由以下組成之群：派姆單抗(pembrolizumab) (MK-3475、KEYTRUDA；蘭布魯珠單抗(lambrolizumab))、尼沃魯單抗(nivolumab) (OPDIVO)、西米普利單抗(cemiplimab) (LIBTAYO)、特瑞普利單抗(toripalimab) (JS001)、HX008、SG001、GLS-010、多斯他利單抗(dostarlimab) (TSR-042)、替雷利珠單抗(tislelizumab) (BGB-A317)、賽曲利單抗(cetrelimab) (JNJ-63723283)、匹利珠單抗(pidilizumab) (CT-011)、傑諾珠單抗(genolimzumab) (APL-501、GB226)、BCD-100、西米普利單抗(REGN2810)、F520、信迪利單抗(sintilimab) (IBI308)、CS1003、LZM009、卡瑞利珠單抗(camrelizumab) (SHR-1210)、SCT-I10A、MGA012、AK105、PF-06801591、AMP-224、AB122、AMG 404、BI 754091、HLX10、JTX-4014、AMP-514 (MEDI0680)、Sym021、MGD019、MGD013、AK104、XmAb20717、RO7121661、CX-188、斯巴達珠單抗(spartalizumab)、BCD-217、HX009、IBI308、PDR001、REGN2810及TSR-042 (ANB011)。
  11. 一種激發全身免疫反應之方法，該方法包含： (a)    向個體投與包含連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，該靶向分子接合至CTLA-4； (b)    在投與該結合物後，在第一腫瘤或第一病灶之位點以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射；及 (c)    投與第一免疫檢查點抑制劑， 其中在步驟(a)、(b)及(c)之後，該個體在該經照射位點遠端之位置中展現至少一種全身免疫反應性特徵。
  12. 如請求項11之方法，其中該至少一種全身免疫反應性特徵選自由以下組成之群：CD8+ T細胞浸潤增加、CD8+ T細胞活化增加、CD8+ :Treg比率增加、天然殺手細胞浸潤增加、天然殺手細胞活化增加、樹突細胞浸潤增加、樹突細胞活化增加、新T細胞引發增加、T細胞多樣性增加及其任何組合。
  13. 如請求項11之方法，其中該至少一種全身免疫反應性特徵包含促炎性分子、促炎性細胞介素或免疫細胞活化標記物中之一或多者之增加。
  14. 如請求項11至13中任一項之方法，其中自從該個體獲得之血液樣品評價該至少一種全身免疫反應性特徵。
  15. 如請求項11至14中任一項之方法，其中該經照射位點遠端之該位置係未經照射之第二腫瘤或第二病灶。
  16. 一種激發局部免疫反應之方法，其包含： (a)    向個體投與包含連接至靶向分子之酞菁染料的結合物，該靶向分子接合至CTLA-4； (b)    在投與該結合物後，以為或約為600 nm至為或約為850 nm之波長及以為或約為25 J/cm2 至為或約為400 J/cm2 或為或約為2 J/cm光纖長度至為或約為500 J/cm光纖長度之劑量照射該腫瘤或該病灶；及 (c)    投與第一免疫檢查點抑制劑， 其中在步驟(a)、(b)及(c)之後，該個體展現至少一種局部免疫反應性特徵，且其中與僅投與該第一免疫檢查點抑制劑相比或與僅用該結合物及該照射步驟之治療相比，該至少一種局部免疫反應性特徵係協同的。
  17. 如請求項16之方法，其中該至少一種局部免疫反應性特徵選自由以下組成之群：腫瘤內Treg耗盡、腫瘤內CD8 T細胞浸潤增加、腫瘤內CD8 T細胞活化增加、腫瘤內CD8+ :Treg比率增加、腫瘤內天然殺手細胞浸潤增加、腫瘤內天然殺手細胞活化增加、骨髓阻抑性細胞減少、I型干擾素反應及其任何組合。
  18. 如請求項16之方法，其中該至少一種局部免疫反應性特徵包含該腫瘤或腫瘤微環境中抗免疫細胞類型或免疫活化標記物增加。
  19. 如請求項1至18中任一項之方法，其中該靶向分子包含抗CTLA-4抗體或其抗原接合片段。
  20. 如請求項19之方法，其中該抗CTLA-4抗體選自由以下組成之群：伊匹單抗(ipilimumab) (益伏(YERVOY))、曲美目單抗(tremelimumab)、AGEN1181、AGEN1884、ADU-1064、BCD-145、CBT-509及BCD-217。
  21. 如請求項1至20中任一項之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑包含抗PD-1抗體或其抗原接合片段。
  22. 如請求項21之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑選自由以下組成之群：派姆單抗(MK-3475、KEYTRUDA；蘭布魯珠單抗)、尼沃魯單抗(OPDIVO)、西米普利單抗(LIBTAYO)、特瑞普利單抗(JS001)、HX008、SG001、GLS-010、多斯他利單抗(TSR-042)、替雷利珠單抗(BGB-A317)、賽曲利單抗(JNJ-63723283)、匹利珠單抗(CT-011)、傑諾珠單抗(APL-501、GB226)、BCD-100、西米普利單抗(REGN2810)、F520、信迪利單抗(IBI308)、CS1003、LZM009、卡瑞利珠單抗(SHR-1210)、SCT-I10A、MGA012、AK105、PF-06801591、AMP-224、AB122、AMG 404、BI 754091、HLX10、JTX-4014、AMP-514 (MEDI0680)、Sym021、MGD019、MGD013、AK104、XmAb20717、RO7121661、CX-188、斯巴達珠單抗、BCD-217、HX009、IBI308、PDR001、REGN2810及TSR-042 (ANB011)及其抗原接合片段。
  23. 如請求項1至22中任一項之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑與投與該結合物同時投與。
  24. 如請求項1至22中任一項之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑係在投與該結合物之24小時內投與。
  25. 如請求項1至22中任一項之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑係在投與該結合物之前投與。
  26. 如請求項25之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑係在投與該結合物之前約1-3週之間投與。
  27. 如請求項25或26之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑係在投與該結合物之前投與1次、2次、3次、4次、5次或超過5次。
  28. 如請求項1至27中任一項之方法，其進一步包含在投與該結合物之後投與該第一免疫檢查點抑制劑。
  29. 如請求項28之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑係在投與該結合物之後投與1次、2次、3次、4次、5次或超過5次。
  30. 如請求項28或29之方法，其中該第一免疫檢查點抑制劑係在投與該結合物後約1天與約4週之間投與。
  31. 如請求項1至10及19至30中任一項之方法，其中在用先前免疫檢查點抑制劑治療後，該個體展現進行性疾病或穩定疾病。
  32. 如請求項1至10及19至30中任一項之方法，其中對先前免疫檢查點抑制劑療法無反應或有抗性之該腫瘤或該病灶包含展現以下各項之腫瘤或病灶：該腫瘤或該病灶之體積、尺寸或質量沒有減小、該腫瘤或該病灶之體積或尺寸增加超過20%或腫瘤細胞之數量增加或轉移。
  33. 如請求項1至32中任一項之方法，其中該個體包含未經照射之第二腫瘤或病灶，且其中該第二腫瘤或病灶對投與該第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。
  34. 如請求項1至32中任一項之方法，其中該個體包含轉移性腫瘤細胞且其中該等轉移性腫瘤細胞對投與該第一免疫檢查點抑制劑展現敏感性。
  35. 如請求項1至34中任一項之方法，其中該個體不經歷全身Treg細胞之實質減少。
  36. 如請求項1至35中任一項之方法，其中該個體在該經照射腫瘤或病灶遠端之位點展現反應，其中該反應選自由以下組成之群：CD8+ T細胞浸潤增加、CD8+ T細胞活化增加、腫瘤內CD8+ :Treg比率增加、腫瘤內天然殺手細胞浸潤增加、腫瘤內天然殺手細胞活化增加、樹突細胞浸潤增加、樹突細胞活化增加、新T細胞引發增加、T細胞多樣性增加、促炎性分子、促炎性細胞介素、免疫細胞活化標記物中之一或多者增加及其任何組合。
  37. 如請求項1至36中任一項之方法，其中該方法引起腫瘤內阻抑細胞之數量、頻率、活性及/或功能之實質減少。
  38. 如請求項37之方法，其中該腫瘤內阻抑細胞選自由以下組成之群：調節性T細胞、II型天然殺手T細胞、M2巨噬細胞、腫瘤相關之纖維母細胞、骨髓源阻抑細胞及其任何組合。
  39. 如請求項1至38中任一項之方法，其中該方法引起腫瘤內細胞毒性T效應細胞、天然殺手(NK)細胞、其他免疫效應細胞或其任一組合之數量或頻率之實質增加。
  40. 如請求項1至39中任一項之方法，其中該方法引起腫瘤內細胞毒性T效應細胞、天然殺手(NK)細胞、其他免疫效應細胞或其任一組合之活性或功能之實質增加。
  41. 如請求項1至40中任一項之方法，其中在該照射步驟之後，發生該腫瘤或該病灶之壞死。
  42. 如請求項1至41中任一項之方法，其中該酞菁染料係Si-酞菁染料。
  43. 如請求項42之方法，其中該Si-酞菁染料係IR700。
  44. 如請求項1至43中任一項之方法，其中該照射步驟係在投與該結合物後30分鐘與96小時之間實施。
  45. 如請求項1至44中任一項之方法，其中該照射步驟係在投與該結合物後24小時 ± 4小時實施。
  46. 如請求項1至45中任一項之方法，其中該照射步驟係以690 ± 40 nm之波長實施。
  47. 如請求項1至46中任一項之方法，其中該照射步驟係以為或約為50 J/cm2 或100 J/cm光纖長度之劑量實施。
  48. 如請求項1至47中任一項之方法，其中該結合物之該投與重複一或多次，視情況其中在該結合物之每次重複投與之後，重複該照射步驟。
  49. 如請求項1至48中任一項之方法，其進一步包含投與額外治療劑或抗癌治療。
  50. 如請求項1至49中任一項之方法，其中該腫瘤或該病灶與選自由以下組成之群之癌症相關：結腸癌、結腸直腸癌、胰臟癌、乳癌、皮膚癌、肺癌、非小細胞肺癌、腎細胞癌、甲狀腺癌、***癌、頭頸癌、胃腸癌、胃癌、小腸癌、梭形細胞贅瘤、肝癌(hepatic carcinoma)、肝癌(liver cancer)、膽道癌、周圍神經癌、腦癌、骨骼肌癌、平滑肌癌、骨癌、脂肪組織癌、子宮頸癌、子宮癌、生殖器癌、淋巴瘤及多發性骨髓瘤。
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