TW202115068A - Ｊａｋ激酶之吡唑并嘧啶碸抑制劑及其用途 - Google Patents

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諾米 Ｓ 拉賈帕克沙
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Abstract

本文描述可用作JAK激酶抑制劑之式(I)化合物及其鹽
Figure 109120272-A0101-11-0001-1
其中R1 、R2 、R3 、R4 、R5 及R6 如本文所定義。亦提供：醫藥組成物，其包括此一JAK抑制劑及醫藥學上可接受之載劑、佐劑、或媒劑；以及治療患者之對詹納斯激酶(Janus kinase)活性之抑制有反應的疾病或疾患或減小該疾病或疾患之嚴重性的方法。

Description

JAK激酶之吡唑并嘧啶碸抑制劑及其用途
本發明係關於作為詹納斯激酶(Janus kinase)諸如JAK1和JAK2之抑制劑的化合物以及含有此等化合物之組成物，及使用方法，包括但不限於診斷或治療罹患對JAK激酶之抑制有反應之疾患的患者。
細胞介素路徑介導廣泛範圍的生物學功能，包括炎症及免疫之許多態樣。詹納斯激酶(JAK)(包括JAK1、JAK2、JAK3及TYK2)為與I型及II型細胞介素受體締合且調控細胞介素訊息傳遞之細胞質蛋白激酶。細胞介素與同源受體之接合觸發受體締合之JAK之活化，且此舉引起訊息傳遞及轉錄活化子(signal transducer and activator of transcription；STAT)蛋白之JAK介導之酪胺酸磷酸化以及具體基因集之最後轉錄活化(Schindler等人, 2007, J. Biol. Chem. 282: 20059-63)。JAK1、JAK2及TYK2表現出寬廣的基因表現模式，而JAK3表現限於白血球。細胞介素受體通常作為異二聚體起作用，且因此，通常多於一種類型的JAK激酶與細胞介素受體複合物締合。與不同細胞介素受體複合物締合之具體JAK已在許多情況下透過基因研究得到確定且由其他實驗證據證實。JAK酶之抑制之示範性治療益處論述於例如國際申請案第WO 2013/014567號。
JAK1最初在新穎激酶之篩選中經鑑別(Wilks A.F., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:1603-1607)。基因及生化研究已顯示JAK1與I型干擾素(例如，IFNα)、II型干擾素(例如，IFNγ)及IL-2及IL-6細胞介素受體複合物在功能及物理上相關(Kisseleva等人, 2002, Gene 285:1-24；Levy等人, 2005, Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 3:651-662；O’Shea等人, 2002, Cell, 109 (增刊): S121-S131)。JAK1剔除小鼠由於LIF受體傳訊之缺陷而在圍產期死亡(Kisseleva等人, 2002, Gene 285:1-24；O’Shea等人, 2002, Cell, 109 (增刊): S121-S131)。來源於JAK1剔除小鼠之組織之特徵顯示此激酶在IFN、IL-10、IL-2/IL-4及IL-6路徑中之關鍵作用。靶向IL-6路徑之人源化單株抗體(塔西單抗(Tocilizumab))得到歐盟執行委員會批准用於治療中度至重度類風濕性關節炎(Scheinecker等人, 2009, Nat. Rev. Drug Discov. 8:273-274)。
CD4 T細胞透過在肺內產生TH2細胞介素(包括IL-4、IL-9及IL-13)來在氣喘發病機制中起重要作用(Cohn等人, 2004, Annu. Rev. Immunol. 22:789-815)。IL-4及IL-13誘導黏液產生增加、嗜酸性球募集至肺及IgE產生增加(Kasaian等人, 2008, Biochem. Pharmacol. 76(2): 147-155)。IL-9引起肥胖細胞活化，其加重氣喘症狀(Kearley等人, 2011, Am. J. Resp. Crit. Care Med., 183(7): 865-875)。IL-4Rα鏈活化JAK1且當分別與共同的γ鏈或IL-13Rα1鏈組合時結合於IL-4或IL-13 (Pernis等人, 2002, J. Clin. Invest. 109(10):1279-1283)。共同的γ鏈亦可與IL-9Rα組合以結合於IL-9，且IL-9Rα同樣活化JAK1 (Demoulin等人, 1996, Mol. Cell Biol. 16(9):4710-4716)。儘管共同的γ鏈活化JAK3，但是已顯示，JAK1比JAK3佔優勢，且除JAK3活性之外，JAK1之抑制足以透過共同的γ鏈使傳訊失活(Haan等人, 2011, Chem. Biol. 18(3):314-323)。藉由阻斷JAK/STAT傳訊路徑抑制IL-4、IL-13及IL-9傳訊可減輕臨床前肺部炎症模型中之氣喘症狀(Mathew等人, 2001, J. Exp. Med. 193(9): 1087-1096；Kudlacz等人, 2008, Eur. J. Pharmacol. 582(1-3): 154-161)。
生化及基因研究已顯示JAK2與訊息鏈(例如，EPO)、IL-3及干擾素γ細胞介素受體家族之間的關聯(Kisseleva等人, 2002, Gene 285:1-24；Levy等人, 2005, Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 3:651-662；O’Shea等人, 2002, Cell, 109 (增刊): S121-S131)。與此一致，JAK2剔除小鼠死於貧血(O’Shea等人, 2002, Cell, 109 (增刊): S121-S131)。JAK2之激酶活化突變(例如，JAK2 V617F)與人類骨髓增生病症有關。另外，JAK2與細胞介素諸如IL-5及胸腺基質淋巴細胞生成素(TSLP)之受體締合。IL-5為負責嗜酸性球分化、生長、活化、存活、及募集至氣道之關鍵性細胞介素(Pelaia等人, 2019, Front. Physiol., 10: 1514；Stirling等人, 2001, Am. J. Respir. Crit. Care Med., 164: 1403–9；Fulkerson及Rothenberg, 2013, Nat. Rev. Drug Discov., 12: 117–9.；Varricchi及Canonica, 2016, Expert. Rev. Clin. Immunol., 12: 903–5)。已批准三種靶向IL-5 (美泊珠單抗(Mepolizumab)、瑞利珠單抗(Reslizumab))或其受體之α鏈(Benralizumab)的單株抗體藥物作為用於具有嗜酸性表型之氣喘的治療。TSLP為在調控II型免疫力方面起重要作用且充當TH2細胞介素產生上游之警報素的上皮細胞源性細胞介素(Kitajima等人, 2011, Eur J Immunol., 41: 1862-71)。Tezepelumab為TSLP之拮抗劑抗體。2期試驗之結果指示其成功減少具有及不具有2型高標識之患者中的氣喘加重(Corren等人, 2017, 377: 936-46)。
JAK3僅僅與IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15及IL-21細胞介素受體複合物中存在之γ共同細胞介素受體鏈締合。JAK3對於淋巴樣細胞發展及增殖來說是關鍵的，且JAK3之突變導致嚴重合併性免疫缺失病(SCID)(O’Shea等人, 2002, Cell, 109 (增刊): S121-S131)。基於其在調節淋巴球中的作用，JAK3及JAK3街道之路徑已靶向免疫抑制適應症(例如，移植排斥及類風濕性關節炎) (Baslund等人, 2005, Arthritis & Rheumatism 52:2686-2692；Changelian等人, 2003, Science 302: 875-878)。
TYK2與I型干擾素(例如，IFNα)、IL-6、IL-10、IL-12及IL-23細胞介素受體複合物締合(Kisseleva等人, 2002, Gene 285:1-24；Watford, W.T.及O’Shea, J.J., 2006, Immunity 25:695-697)。與此一致，來源於TYK2缺陷的人類之初代細胞在I型干擾素、IL-6、IL-10、IL-12及IL-23傳訊方面存在缺陷。靶向IL-12及IL-23細胞介素之共有p40亞單元之全人類單株抗體(烏泰努單抗(Ustekinumab))最近得到歐盟執行委員會批准用於治療中度至重度斑塊牛皮癬(Krueger等人, 2007, N. Engl. J. Med. 356:580-92；Reich等人, 2009, Nat. Rev. Drug Discov. 8:355-356)。此外，對靶向IL-12及IL-23路徑之抗體進行了用於治療克羅恩氏病之臨床試驗(Mannon等人, 2004, N. Engl. J. Med. 351:2069-79)。
國際專利申請公開案第WO 2010/051549號、第WO 2011/003065號、第WO 2015/177326號及第WO 2017/089390號討論了某些吡唑并嘧啶化合物，該等化合物經報導可用作一或多種詹納斯激酶之抑制劑。該等案中呈現了顯示JAK1以及JAK2、JAK3、及/或TYK2激酶之抑制之某些具體化合物的資料。
目前仍需要作為詹納斯激酶之抑制劑之額外化合物。例如，需要擁有可用作一或多種詹納斯激酶(例如，JAK1及JAK2)之抑制劑之效能以及達成有用的治療益處所需的其他藥理性質的化合物。例如，需要顯示對一種詹納斯激酶之選擇性通常優於其他激酶(例如對JAK1及/或JAK2之選擇性優於其他激酶諸如富白胺酸重複激酶2 (LRRK2))的有效化合物。亦需要顯示對一種詹納斯激酶之選擇性優於其他詹納斯激酶(例如，對JAK1及/或JAK2之選擇性優於JAK3及/或TYK2)的有效化合物。證實對JAK1及JAK2之選擇性優於JAK3及TYK2之化合物可提供對JAK1之抑制有反應的病狀之治療益處。此外，目前需要擁有調配及藉由吸入投與所需之其他性質(例如，熔點、pK、溶解度等)的有效JAK1抑制劑。此類化合物將尤其可用於治療諸如例如氣喘之疾患。
因此，此項技術中存在對由JAK激酶(諸如上文所述者)介導之疾患的額外或替代治療的需要。特別需要可用於吸入遞送以治療氣道炎症適應症諸如氣喘的JAK1及JAK2激酶抑制劑。
本文提供抑制JAK激酶之吡唑并嘧啶，諸如選自式(I)化合物、其立體異構物或鹽，諸如其醫藥學上可接受之鹽。JAK激酶可為JAK1、JAK2或二者。
一個實施例提供一種式(I)化合物：
Figure 02_image001
(I) 或其醫藥學上可接受之鹽， 其中： R1 為：C1-6 烷基；氰基-C1-6 烷基；C1-6 烷氧基-(CO)-；-(CHRa )m -NRb Rc ；或-(CHRa )n -het1 ; R2 為：C1-6 烷基；羥基-C1-6 烷基；鹵基-C1-6 烷基；C1-6 烷氧基-C1-6 烷基；C3-6 環烷基；-(CHRa )p -NRb Rc ；het2 ；-(CHRa )q -het3 ；或苯基，其可未經取代或經Rd 取代一次或兩次； R3 為：氫；胺基；或C1-6 烷基； R4 為：氫；或C1-6 烷基； R5 為：氫；或C1-6 烷基； R6 為：氫；C1-6 烷基；或R2 及R6 連同其所連接之原子可形成六員環； m為2至3； n為0至2； p為0至2； 各Ra 獨立地為：氫；或C1-6 烷基； 各Rb 獨立地為：氫；或C1-6 烷基； 各Rc 獨立地為：氫；或C1-6 烷基； het1 為：四氫呋喃基；吖呾基；或吡咯啶基，其各自可未經取代或經Re 取代一次或兩次； het2 為：吡啶基；嘧啶基；吡唑基；咪唑基；或異喹啉基，其可為部分飽和的；其各自可未經取代或經Rf 取代一次或兩次； het3 為：吖呾基；吡咯啶基；氧呾基；或哌啶基；其各自可未經取代或經Rg 取代一次； 各Rd 獨立地為：C1-6 烷基；羥基；C1-6 烷氧基-C1-6 烷基；-(CHRa )q -NRb Rc ；或苯基； 各Re 獨立地為：C1-6 烷基；或側氧基； 各Rf 獨立地為：C1-6 烷基；羥基-C1-6 烷基；側氧基；-(CHRa )r -NRb Rc ；-(CHRa )s -het4 ； 各Rg 獨立地為：C1-6 烷基；或乙醯基； q為1至2； r為2至3； s為2至3；且 het4 為：吖呾-1-基；1-甲基-吖呾-3-基；口昆啶基；1-甲基-吡咯啶-2-基；或4-甲基哌嗪-1-基。
亦提供一種醫藥組成物，其包含如本文所述之JAK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
亦提供如本文所述之JAK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽在療法中諸如在炎性疾病(例如，氣喘)之治療中之用途。亦提供如本文所述之JAK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽用於製備用於治療炎性疾病之藥劑之用途。亦提供一種預防、治療患者之對詹納斯激酶活性之抑制有反應的疾病或疾患或減小該疾病或疾患之嚴重性的方法，其包含向該患者投與治療有效量之如本文所述之JAK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽。
氣喘中大部分經驗證細胞介素(IL-4、IL-5、IL-9、IL-13及TSLP)全部透過JAK1及/或JAK2傳訊。本發明之化合物對JAK1及JAK2具有活性。該等化合物中之某些化合物最佳地對於JAK1及JAK2二者具有良好平衡的共活性或對JAK1之親和力稍微高於JAK2，而非對該等激酶之一的活性遠大於對另一種激酶之活性。標的化合物亦針對已與肺部毒性相關聯之脫靶激酶諸如LRRK2具有良好選擇性。
雖然許多化合物可在簡單生化檢定中對JAK1及JAK2二者表現出高親和力，但並非所有此類化合物有效於介導與JAK1及JAK2締合之相關細胞介素。本發明之某些化合物除了對JAK1及JAK2二者具有活性之外，亦在基於細胞之檢定中顯示出有效於介導與JAK1及JAK2締合之氣喘相關細胞介素。
本發明之化合物亦在肺組織中表現出有利的藥物動力學(PK)特性且可用於吸入療法。當使用諸如乾粉吸入(DPI)或鼻內(IN)遞送之技術經由吸入路徑給藥時，某些化合物意外地在肺組織內顯示持續滯留，在全身循環中之濃度低許多。此類經改進PK特性可有利地使有效療法之劑量更小且給藥頻率要求更低。某些化合物表現出意外改進的溶解度，又在肺中提供改進的功效。本發明之某些化合物與其他JAK抑制劑相比表現出細胞毒性意外減小。
定義
「鹵素」或「鹵基」係指F、Cl、Br或I。此外，諸如「鹵烷基」之術語意謂包括單鹵烷基及多鹵烷基，其中一或多個鹵素置換烷基之一或多個氫。
術語「烷基」係指飽和直鏈或支鏈單價烴基，其中烷基可視情況經取代。在一個實例中，烷基為一至十八個碳原子(C1 -C18 )。在其他實例中，烷基為C0 -C6 、C0 -C5 、C0 -C3 、C1 -C12 、C1 -C10 、 C1 -C8 、C1 -C6 、C1 -C5 、C1 -C4 或C1 -C3 。C0 烷基係指鍵。烷基之實例包括甲基(Me，-CH3 )、乙基(Et，-CH2 CH3 )、1-丙基(n-Pr，正丙基，-CH2 CH2 CH3 )、2-丙基(i-Pr，異丙基，-CH(CH3 )2 )、1-丁基(n-Bu，正丁基，-CH2 CH2 CH2 CH3 )、2-甲基-1-丙基(i-Bu，異丁基，-CH2 CH(CH3 )2 )、2-丁基(s-Bu，二級丁基，-CH(CH3 )CH2 CH3 )、2-甲基-2-丙基(t-Bu，三級丁基，-C(CH3 )3 )、1-戊基(正戊基，-CH2 CH2 CH2 CH2 CH3 )、2-戊基(-CH(CH3 )CH2 CH2 CH3 )、3-戊基(-CH(CH2 CH3 )2 )、2-甲基-2-丁基(-C(CH3 )2 CH2 CH3 )、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3 )CH(CH3 )2 )、3-甲基-1-丁基(-CH2 CH2 CH(CH3 )2 )、2-甲基-1-丁基(-CH2 CH(CH3 )CH2 CH3 )、1-己基(-CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH3 )、2-己基(-CH(CH3 )CH2 CH2 CH2 CH3 )、3-己基(-CH(CH2 CH3 )(CH2 CH2 CH3 ))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3 )2 CH2 CH2 CH3 )、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3 )CH(CH3 )CH2 CH3 )、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3 )CH2 CH(CH3 )2 )、3-甲基-3-戊基(-C(CH3 )(CH2 CH3 )2 )、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2 CH3 )CH(CH3 )2 )、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3 )2 CH(CH3 )2 )、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3 )C(CH3 )3 、1-庚基及1-辛基。在一些實施例中，「視情況經取代之烷基」之取代基包括以下中之一至四個實例：F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、NH2 、NHCH3 、N(CH3 )2 、NO2 、N3 、 C(O)CH3 、COOH、CO2 CH3 、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、環丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、側氧基、三氟甲基、二氟甲基、磺醯基胺基、甲烷磺醯基胺基、SO、SO2 、苯基、哌啶基、哌嗪基及嘧啶基，其中烷基、苯基及其雜環部分可視情況經取代，諸如由選自此同一清單之取代基之一至四個實例取代。
術語「烯基」係指具有至少一個不飽和位點(亦即，碳-碳雙鍵)之直鏈或支鏈單價烴基，其中烯基可視情況經取代且包括具有「順式」及「反式」取向或替代地「E」及「Z」取向之基團。在一個實例中，烯基為二至十八個碳原子(C2 -C18 )。在其他實例中，烯基為C2 -C12 、C2 -C10 、 C2 -C8 、C2 -C6 或C2 -C3 。實例包括但不限於乙烯基(ethenyl或vinyl，-CH=CH2 )、丙-1-烯基(-CH=CHCH3 )、丙-2-烯基(-CH2 CH=CH2 )、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基及己-1,3-二烯基。在一些實施例中，「視情況經取代之烯基」之取代基包括以下中之一至四個實例：F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、NH2 、NHCH3 、N(CH3 )2 、NO2 、N3 、C(O)CH3 、COOH、CO2 CH3 、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、環丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、側氧基、三氟甲基、二氟甲基、磺醯基胺基、甲烷磺醯基胺基、SO、SO2 、苯基、哌啶基、哌嗪基及嘧啶基，其中烷基、苯基及其雜環部分可視情況經取代，諸如由選自此同一清單之取代基之一至四個實例取代。
術語「炔基」係指具有至少一個不飽和位點(亦即，碳-碳參鍵)之線性或分支單價烴基，其中炔基可視情況經取代。在一個實例中，炔基為二至十八個碳原子(C2 -C18 )。在其他實例中，炔基為C2 -C12 、C2 -C10 、 C2 -C8 、C2 -C6 或C2 -C3 。實例包括但不限於乙炔基(-C≡CH)、丙-1-炔基(-C≡CCH3 )、丙-2-炔基(炔丙基，-CH2 C≡CH)、丁-1-炔基、丁-2-炔基及丁-3-炔基。在一些實施例中，「視情況經取代之炔基」之取代基包括以下中之一至四個實例：F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、NH2 、NHCH3 、N(CH3 )2 、NO2 、N3 、C(O)CH3 、COOH、CO2 CH3 、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、環丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、側氧基、三氟甲基、二氟甲基、磺醯基胺基、甲烷磺醯基胺基、SO、SO2 、苯基、哌啶基、哌嗪基及嘧啶基，其中烷基、苯基及其雜環部分可視情況經取代，諸如由選自此同一清單之取代基之一至四個實例取代。
「伸烷基」係指具有兩個藉由自母體烷烴之同一碳原子或兩個不同碳原子移除兩個氫原子所獲得之單價基團中心的飽和支鏈或直鏈烴基。在一個實例中，二價伸烷基為一至十八個碳原子(C1 -C18 )。在其他實例中，二價伸烷基為C0 -C6 、C0 -C5 、C0 -C3 、C1 -C12 、C1 -C10 、 C1 -C8 、C1 -C6 、C1 -C5 、C1 -C4 或C1 -C3 。基團C0 伸烷基係指鍵。實例性伸烷基包括亞甲基(-CH2 -)、1,1-乙基(-CH(CH3 )-)、(1,2-乙基(-CH2 CH2 -)、1,1-丙基(-CH(CH2 CH3 )-)、2,2-丙基(-C(CH3 )2 -)、1,2-丙基(-CH(CH3 )CH2 -)、1,3-丙基(-CH2 CH2 CH2 -)、1,1-二甲基乙-1,2-基(-C(CH3 )2 CH2 -)、1,4-丁基(-CH2 CH2 CH2 CH2 -)及其類似基團。
術語「雜烷基」係指直鏈或支鏈單價烴基，其由規定數目之碳原子或(若未規定)至多18個碳原子及一至五個選自由O、N、Si及S組成之群之雜原子組成，且其中氮及硫原子可視情況經氧化且氮雜原子可視情況經四級銨化。在一些實施例中，雜原子選自O、N及S，且氮及硫原子可視情況經氧化且氮雜原子可視情況經四級銨化。一或多個雜原子可置於雜烷基之任何內部位置，包括烷基連接至分子之其餘部分的位置(例如，-O-CH2 -CH3 )。實例包括-CH2 -CH2 -O-CH3 、-CH2 -CH2 -NH-CH3 、-CH2 -CH2 -N(CH3 )-CH3 、-CH2 -S-CH2 -CH3 、-S(O)-CH3 、-CH2 -CH2 -S(O)2 -CH3 、-Si(CH3 )3 及-CH2 -CH=N-OCH3 。至多兩個雜原子可為連續的，諸如，例如-CH2 -NH-OCH3 及-CH2 -O-Si(CH3 )3 。雜烷基可視情況經取代。在一些實施例中，「視情況經取代之雜烷基」之取代基包括以下中之一至四個實例：F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、NH2 、NHCH3 、N(CH3 )2 、NO2 、N3 、C(O)CH3 、COOH、CO2 CH3 、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、環丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、側氧基、三氟甲基、二氟甲基、磺醯基胺基、甲烷磺醯基胺基、SO、SO2 、苯基、哌啶基、哌嗪基及嘧啶基，其中烷基、苯基及其雜環部分可視情況經取代，諸如由選自此同一清單之取代基之一至四個實例取代。
「胺基」意謂一級(亦即，–NH2 )、二級(亦即，-NRH)、三級(亦即，-NRR)及四級(亦即，-N(+)RRR)胺，其視情況經取代，其中各R相同或不同且選自烷基、環烷基、芳基及雜環基，其中烷基、環烷基、芳基及雜環基如本文所定義。特定二級及三級胺為烷基胺、二烷基胺、芳基胺、二芳基胺、芳烷基胺及二芳烷基胺，其中烷基及芳基部分可視情況經取代。特定二級及三級胺為甲胺、乙胺、丙胺、異丙胺、苯基胺、苄基胺、二甲胺、二乙胺、二丙胺及二異丙胺。在一些實施例中，四級胺之R基團各自獨立地為視情況經取代的烷基。
「芳基」係指碳環狀芳族基團，不管是否稠合至一或多個基團，碳原子數為指定的，或若未指定數目，則具有至多14個碳原子。一個實例包括具有6-14個碳原子之芳基。另一實例包括具有6-10個碳原子之芳基。芳基之實例包括苯基、萘基、聯苯基、菲基、稠四苯基、1,2,3,4-四氫萘基、1H-茚基、2,3-二氫-1H-茚基及其類似基團(參見，例如Lang’s Handbook of Chemistry (Dean, J. A.編) 第13版 表7-2 [1985])。特定芳基為苯基。經取代之苯基或經取代之芳基意謂經一個、兩個、三個、四個或五個取代基(例如，1-2、1-3或1-4個取代基)取代之苯基或芳基，該等取代基諸如選自本文指定之基團(參見「視情況經取代之」定義)，諸如F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、NH2 、NHCH3 、N(CH3 )2 、NO2 、N3 、C(O)CH3 、COOH、CO2 CH3 、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、環丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、側氧基、三氟甲基、二氟甲基、磺醯基胺基、甲烷磺醯基胺基、SO、SO2 、苯基、哌啶基、哌嗪基及嘧啶基，其中烷基、苯基及其雜環狀部分可視情況諸如由一至四個選自此同一清單之取代基之實例取代。術語「經取代苯基」之實例包括：單(鹵基)苯基或二(鹵基)苯基，諸如2-氯苯基、2-溴苯基、4-氯苯基、2,6-二氯苯基、2,5-二氯苯基、3,4-二氯苯基、3-氯苯基、3-溴苯基、4-溴苯基、3,4-二溴苯基、3-氯-4-苯基、2-氟苯基、2,4-二氟苯基及其類似基團；單(羥基)苯基或二(羥基)苯基，諸如4-羥基苯基、3-羥基苯基、2,4-二羥基苯基、其保護羥基衍生物及其類似基團；硝基苯基，諸如3-硝基苯基或4-硝基苯基；氰基苯基，例如，4-氰基苯基；單(烷基)苯基或二(烷基)苯基，諸如4-甲基苯基、2,4-二甲基苯基、2-甲基苯基、4-(異丙基)苯基、4-乙基苯基、3-(正丙基)苯基及其類似基團；單(烷氧基)苯基或二(烷氧基)苯基，例如，3,4-二甲氧基苯基、3-甲氧基-4-苄基氧基苯基、3-乙氧基苯基、4-(異丙氧基)苯基、4-(三級丁氧基)苯基、3-乙氧基-4-甲氧基苯基及其類似基團；3-三氟甲基苯基或4-三氟甲基苯基；單羧基苯基或二羧基苯基或(保護羧基)苯基諸如4-羧基苯基、單(羥基甲基)苯基或二(羥基甲基)苯基或(保護羥基甲基)苯基諸如3-(保護羥基甲基)苯基或3,4-二(羥基甲基)苯基；單(胺基甲基)苯基或二(胺基甲基)苯基或(保護胺基甲基)苯基，諸如2-(胺基甲基)苯基或2,4-(保護胺基甲基)苯基；或單(N-(甲基磺醯基胺基))苯基或二(N-(甲基磺醯基胺基))苯基，諸如3-(N-甲基磺醯基胺基))苯基。同樣，術語「經取代之苯基」表示：取代基不同的經二取代之苯基，例如，3-甲基-4-羥基苯基、3-氯-4-羥基苯基、2-甲氧基-4-溴苯基、4-乙基-2-羥基苯基、3-羥基-4-硝基苯基、2-羥基-4-氯苯基、2-氯-5-二氟甲氧基及其類似基團；以及取代基不同的經三取代之苯基，例如，3-甲氧基-4-苄基氧基-6-甲基磺醯基胺基、3-甲氧基-4-苄基氧基-6-苯基磺醯基胺基；及取代基不同的經四取代之苯基，諸如，3-甲氧基-4-苄基氧基-5-甲基-6-苯基磺醯基胺基。在一些實施例中，芳基(諸如苯基)之取代基包含醯胺。例如，芳基(例如，苯基)取代基可為-(CH2 )0-4 CONR’R”，其中R’及R”各自獨立地指代以下基團，包括例如氫；未經取代之C1- C6 烷基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之C1- C6 烷基；未經取代之C1- C6 雜烷基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之C1- C6 雜烷基；未經取代之C6- C10 芳基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基或NR’R”取代之C6- C10 芳基；未經取代之3-11員雜環基(例如，含有1至4個選自O、N及S之雜原子之5-6員雜芳基或含有1至4個選自O、N及S之雜原子之4-11員雜環烷基)；及由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之3-11員雜環基(例如，含有1至4個選自O、N及S之雜原子之5-6員雜芳基或含有1至4個選自O、N及S之雜原子之4-11員雜環烷基)；或R’及R”可與氮原子組合形成3、4、5、6或7員環，其中環原子視情況經N、O或S取代且其中環視情況經鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代。
「環烷基」係指非芳族、飽和或部分不飽和烴環基團，其中環烷基可視情況獨立地經一或多個本文所述之取代基取代。在一個實例中，環烷基為3至12個碳原子(C3 -C12 )。在其他實例中，環烷基為C3 -C8 、C3 -C10 或C5 -C10 。在其他實例中，呈單環之環烷基為C3 -C8 、C3 -C6 或C5 -C6 。在另一實例中，呈二環之環烷基為C7 -C12 。在另一實例中，呈螺環系之環烷基為C5 -C12 。單環狀烷基之實例包括環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊-1-烯基、1-環戊-2-烯基、1-環戊-3-烯基、環己基、全氘環己基、1-環己-1-烯基、1-環己-2-烯基、1-環己-3-烯基、環己二烯基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基、環十一基及環十二基。具有7至12個環原子之雙環狀環烷基之示範性排列包括但不限於[4,4]、[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]環系。示範性橋聯雙環狀環烷基包括但不限於雙環[2.2.1]庚烷、雙環[2.2.2]辛烷及雙環[3.2.2]壬烷。螺環烷基之實例包括螺[2.2]戊烷、螺[2.3]己烷、螺[2.4]庚烷、螺[2.5]辛烷及螺[4.5]癸烷。在一些實施例中，「視情況經取代之環烷基」之取代基包括以下中之一至四個實例：F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、NH2 、NHCH3 、N(CH3 )2 、NO2 、N3 、C(O)CH3 、COOH、CO2 CH3 、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、環丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、側氧基、三氟甲基、二氟甲基、磺醯基胺基、甲烷磺醯基胺基、SO、SO2 、苯基、哌啶基、哌嗪基及嘧啶基，其中烷基、芳基及其雜環部分可視情況經取代，諸如由選自此同一清單之取代基之一至四個實例取代。在一些實施例中，環烷基之取代基包含醯胺。例如，環烷基取代基可為-(CH2 )0-4 CONR’R”，其中R’及R”各自獨立地指代以下基團，包括例如氫；未經取代之C1- C6 烷基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之C1- C6 烷基；未經取代之C1- C6 雜烷基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之C1- C6 雜烷基；未經取代之C6- C10 芳基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基或NR’R”取代之C6- C10 芳基；未經取代之3-11員雜環基(例如，含有1至4個選自O、N及S之雜原子之5-6員雜芳基或含有1至4個選自O、N及S之雜原子之4-11員雜環烷基)；及由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之3-11員雜環基(例如，含有1至4個選自O、N及S之雜原子之5-6員雜芳基或含有1至4個選自O、N及S之雜原子之4-11員雜環烷基)；或R’及R”可與氮原子組合形成3、4、5、6或7員環，其中環原子視情況經N、O或S取代且其中環視情況經鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代。
「雜環狀基團」、「雜環狀」、「雜環」、「雜環基」或「雜環(heterocyclo)」可互換使用且指代具有3至20個環原子(例如，3-10個環原子)之單環狀、雙環狀、三環狀或螺飽和或不飽和芳族(雜芳基)或非芳族(例如，雜環烷基)，其中環原子為碳，且環或環系中至少一個原子為選自氮、硫或氧之雜原子。若環系之任一環原子為雜原子，則該系統為雜環，不管環系與分子之其餘部分之連接點。在一個實例中，雜環基包括3-11個環原子(「成員」)且包括單環、雙環、三環及螺環系，其中環原子為碳，其中環或環系中至少一個原子為選自氮、硫或氧之雜原子。在一個實例中，雜環基包括1至4個雜原子。在一個實例中，雜環基包括1至3個雜原子。在另一實例中，雜環基包括具有1-2、1-3或1-4個選自氮、硫或氧之雜原子的3至7員單環。在另一實例中，雜環基包括具有1-2、1-3或1-4個選自氮、硫或氧之雜原子的4至6員單環。在另一實例中，雜環基包括3員單環。在另一實例中，雜環基包括4員單環。在另一實例中，雜環基包括5-6員單環，例如5-6員雜芳基。在另一實例中，雜環基包括3-11員雜環烷基，諸如4-11員雜環烷基。在一些實施例中，雜環烷基包括至少一個氮。在一個實例中，雜環基包括0至3個雙鍵。任何氮或硫雜原子可視情況經氧化(例如，NO、SO、SO2 )，且任何氮雜原子可視情況經四級銨化(例如，[NR4 ]+ Cl- 、[NR4 ]+ OH- )。實例性雜環為環氧乙烷基、氮丙啶基、硫環丙烷基、吖呾基、氧呾基、硫呾基、1,2-二硫呾基、1,3-二硫呾基、吡咯啶基、二氫-1H-吡咯基、二氫呋喃基、四氫呋喃基、二氫噻吩基、四氫噻吩基、咪唑啶基、哌啶基、哌嗪基、異喹啉基、四氫異喹啉基、嗎啉基、硫代嗎啉基、1,1-二側氧基-硫代嗎啉基、二氫哌喃基、四氫哌喃基、六氫硫代哌喃基、六氫嘧啶基、噁嗪基、噻嗪基、噻噁烷基、高哌嗪基、高哌啶基、氮雜環庚烷基、氧雜環庚烷基、硫雜環庚烷基、氧雜吖庚因基、氧雜氮雜環庚烷基、二氮雜環庚烷基、1,4-二氮雜環庚烷基、二氮呯基、三氮呯基、硫雜氮雜環庚烷基、四氫硫代哌喃基、噁唑啶基、噻唑啶基、異噻唑啶基、1,1-二側氧基異噻唑啶酮基、噁唑啶酮基、咪唑啶酮基、4,5,6,7-四氫[2H]吲唑基、四氫苯并咪唑基、4,5,6,7-四氫苯并并[d]咪唑基、1,6-二氫咪唑并[4,5-d]吡咯并[2,3-b]吡啶基、噻嗪基、噁嗪基、噻二嗪基、噁二嗪基、二噻嗪基、二噁嗪基、噁噻嗪基、噻三嗪基、噁三嗪基、二噻二嗪基、咪唑啉基、二氫嘧啶基、四氫嘧啶基、1-吡咯啉基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、噻哌喃基、2H-哌喃基、4H-哌喃基、二噁烷基、1,3-二氧戊環基、吡唑啉基、吡唑啶基、二噻烷基、二硫戊環基、嘧啶酮基、嘧啶二酮基、嘧啶-2,4-二酮基、哌嗪酮基、哌嗪二酮基、吡唑啶基咪唑啉基、3-氮雜雙環[3.1.0]己基、3,6-二氮雜雙環[3.1.1]庚基、6-氮雜雙環[3.1.1]庚基、3-氮雜雙環[3.1.1]庚基、3-氮雜雙環[4.1.0]庚基、氮雜雙環[2.2.2]己基、2-氮雜雙環[3.2.1]辛基、8-氮雜雙環[3.2.1]辛基、2-氮雜雙環[2.2.2]辛基、8-氮雜雙環[2.2.2]辛基、7-氧雜雙環[2.2.1]庚烷、氮雜螺[3.5]壬基、氮雜螺[2.5]辛基、氮雜螺[4.5]癸基、1-氮雜螺[4.5]癸-2-酮基、氮雜螺[5.5]十一基、四氫吲哚基、八氫吲哚基、四氫異吲哚基、四氫吲唑基、1,1-二側氧基六氫硫代哌喃基。含有硫或氧原子及一至三個氮原子之5員雜環之實例為：噻唑基，包括噻唑-2-基及噻唑-2-基N-氧化物；噻二唑基，包括1,3,4-噻二唑-5-基及1,2,4-噻二唑-5-基；噁唑基，例如噁唑-2-基；及噁二唑基，諸如1,3,4-噁二唑-5-基及1,2,4-噁二唑-5-基。含有2至4個氮原子之實例性5員環雜環包括：咪唑基，諸如咪唑并-2-基；***基，諸如1,3,4-***-5-基、1,2,3-***-5-基、1,2,4-***-5-基；及四唑基，諸如1H-四唑-5-基。實例性苯并稠合5員雜環為苯并噁唑-2-基、苯并噻唑-2-基及苯并咪唑-2-基。實例性6員雜環含有一至三個氮原子及視情況一個硫或氧原子，例如吡啶基，諸如吡啶-2-基、吡啶-3-基及吡啶-4-基；嘧啶基，諸如嘧啶-2-基及嘧啶-4-基；三嗪基，諸如1,3,4-三嗪-2-基及1,3,5-三嗪-4-基；噠嗪基，尤其是噠嗪-3-基；及吡嗪基。吡啶N-氧化物及噠嗪N-氧化物以及吡啶基、嘧啶-2-基、嘧啶-4-基、噠嗪基及1,3,4-三嗪-2-基為其他實例性雜環基團。雜環可視情況經取代。舉例而言，「視情況經取代之雜環」之取代基包括以下中之一至四個實例：F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、NH2 、NHCH3 、N(CH3 )2 、NO2 、N3 、C(O)CH3 、COOH、CO2 CH3 、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、環丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、側氧基、三氟甲基、二氟甲基、磺醯基胺基、甲烷磺醯基胺基、SO、SO2 、苯基、哌啶基、哌嗪基及嘧啶基，其中烷基、芳基及其雜環部分可視情況經取代，諸如由選自此同一清單之取代基之一至四個實例取代。在一些實施例中，雜環狀基團諸如雜芳基或雜環烷基之取代基包含醯胺。例如，雜環(例如，雜芳基或雜環烷基)取代基可為-(CH2 )0-4 CONR’R”，其中R’及R”各自獨立地指代以下基團，包括例如氫；未經取代之C1- C6 烷基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之C1- C6 烷基；未經取代之C1- C6 雜烷基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之C1- C6 雜烷基；未經取代之C6- C10 芳基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基或NR’R”取代之C6- C10 芳基；未經取代之3-11員雜環基(例如，含有1至4個選自O、N及S之雜原子之5-6員雜芳基或含有1至4個選自O、N及S之雜原子之4-11員雜環烷基)；及由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之3-11員雜環基(例如，含有1至4個選自O、N及S之雜原子之5-6員雜芳基或含有1至4個選自O、N及S之雜原子之4-11員雜環烷基)；或R’及R”可與氮原子組合形成3、4、5、6或7員環，其中環原子視情況經N、O或S取代且其中環視情況經鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代。
「雜芳基」係指至少一個環為含有1至4個選自氮、氧及硫之雜原子之5或6員芳環的單環狀、雙環狀或三環狀環系，且在一實例性實施例中，至少一個雜原子為氮。參見，例如Lang’s Handbook of Chemistry (Dean, J. A.編) 第13版 表7-2 [1985]。定義中包括上文雜芳基環中任一者均稠合於芳基環的任何雙環基團，其中芳基環或雜芳基環接合於分子之其餘部分。在一個實施例中，雜芳基包括一或多個環原子為氮、硫或氧之5-6員單環芳族基團。實例性雜芳基包括噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、***基、噻二唑基、噁二唑基、四唑基、噻***基、噁***基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基、四嗪基、四唑并[1,5-b]噠嗪基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基及嘌呤基，以及苯并稠合衍生物例如苯并噁唑基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并***基、苯并咪唑基及吲哚基。雜芳基可視情況經取代。在一些實施例中，「視情況經取代之雜芳基」之取代基包括以下中之一至四個實例：F、Cl、Br、I、OH、SH、CN、NH2 、NHCH3 、N(CH3 )2 、NO2 、N3 、C(O)CH3 、COOH、CO2 CH3 、甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、環丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基、二氟甲基、磺醯基胺基、甲烷磺醯基胺基、SO、SO2 、苯基、哌啶基、哌嗪基及嘧啶基，其中烷基、苯基及其雜環部分可視情況經取代，諸如由選自此同一清單之取代基之一至四個實例取代。在一些實施例中，雜芳基之取代基包含醯胺。例如，雜芳基取代基可為-(CH2 )0-4 CONR’R”，其中R’及R”各自獨立地指代以下基團，包括例如氫；未經取代之C1- C6 烷基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之C1- C6 烷基；未經取代之C1- C6 雜烷基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之C1- C6 雜烷基；未經取代之C6- C10 芳基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基或NR’R”取代之C6- C10 芳基；未經取代之3-11員雜環基(例如，含有1至4個選自O、N及S之雜原子之5-6員雜芳基或含有1至4個選自O、N及S之雜原子之4-11員雜環烷基)；及由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之3-11員雜環基(例如，含有1至4個選自O、N及S之雜原子之5-6員雜芳基或含有1至4個選自O、N及S之雜原子之4-11員雜環烷基)；或R’及R”可與氮原子組合形成3、4、5、6或7員環，其中環原子視情況經N、O或S取代且其中環視情況經鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代。
在特定實施例中，雜環基連接於雜環基之碳原子。例如，碳鍵結之雜環基包括以下鍵結排列：在吡啶環之2、3、4、5或6位；嗒嗪環之3、4、5或6位；嘧啶環之2、4、5或6位；吡嗪環之2、3、5或6位；呋喃、四氫呋喃、硫代呋喃、噻吩、吡咯或四氫吡咯環之2、3、4或5位；噁唑、咪唑或噻唑環之2、4或5位；異噁唑、吡唑或異噻唑環之3、4或5位；氮丙啶環之2或3位；吖呾環之2、3或4位；喹啉環之2、3、4、5、6、7或8位；或異喹啉環之1、3、4、5、6、7或8位。
在某些實施例中，雜環基經N連接。例如，氮鍵結之雜環基或雜芳基包括以下鍵結排列：在氮丙啶、吖呾、吡咯、吡咯啶、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑啶、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑之1位；異吲哚或異吲哚啉之2位；嗎啉之4位；及咔唑或β-咔啉之9位。
術語「烷氧基」係指由式-OR表示之線性或分支單價基團，其中R為烷基，如本文所定義。烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、單氟甲氧基、二氟甲氧基及三氟甲氧基及環丙氧基。
「醯基」意謂含有由式-C(O)-R表示之取代基之羰基，其中R為氫、烷基、環烷基、芳基或雜環基，其中烷基、環烷基、芳基及雜環基如本文所定義。醯基包括烷醯基(例如，乙醯基)、芳醯基(例如，苯甲醯基)及雜芳醯基(例如，吡啶醯基)。
除非另外指定，否則「視情況經取代之」意謂基團可未經取代或由一或多個(例如，0、1、2、3、4或5或更多個，或可自其中衍生之任何範圍)針對該基團所列舉之取代基取代，其中該等取代基可相同或不同。在一實施例中，視情況經取代之基團具有1個取代基。在另一實施例中，視情況經取代之基團具有2個取代基。在另一實施例中，視情況經取代之基團具有3個取代基。在另一實施例中，視情況經取代之基團具有4個取代基。在另一實施例中，視情況經取代之基團具有5個取代基。
烷基(單獨或作為另一取代基(例如，烷氧基)之一部分)以及伸烷基、烯基、炔基、雜烷基、雜環烷基及環烷基(亦各自單獨或作為另一取代基之一部分)之視情況選用之取代基可為多種基團，諸如本文所述者，以及選自由以下組成之群：鹵素；側氧基；CN；NO；N3 ；-OR’；全氟-C1- C4 烷氧基；未經取代之C3 -C7 環烷基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1 -C6 烷基、未經取代之C1 -C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之C3 -C7 環烷基；未經取代之C6 -C10 芳基(例如，苯基)；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1 -C6 烷基、未經取代之C1 -C6 烷氧基或NR’R”取代之C6 -C10 芳基；未經取代之3-11員雜環基(例如，含有1至4個選自O、N及S之雜原子之5-6員雜芳基或含有1至4個選自O、N及S之雜原子之4-11員雜環烷基)；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1 -C6 烷基、未經取代之C1 -C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之3-11員雜環基(例如，含有1至4個選自O、N及S之雜原子之5-6員雜芳基或含有1至4個選自O、N及S之雜原子之4-11員雜環烷基)；-NR’R”；-SR’；-SiR’R”R”’；-OC(O)R’；-C(O)R’；-CO2 R’；-CONR’R”；-OC(O)NR’R”；-NR”C(O)R’；-NR”’C(O)NR’R”；-NR”C(O)2 R’；-S(O)2 R’；-S(O)2 NR’R”；-NR’S(O)2 R”；-NR”’S(O)2 NR’R”；脒基；胍基；-(CH2 )1-4 -OR’；-(CH2 )1-4 -NR’R”；-(CH2 )1-4 -SR’；-(CH2 )1-4 -SiR’R”R”’；-(CH2 )1-4 -OC(O)R’；-(CH2 )1-4 -C(O)R’；-(CH2 )1-4 -CO2 R’；及-(CH2 )1-4 CONR’R”，或其組合，數目範圍為0至(2m’+1)，其中m’為此一基團中碳原子之總數。R’、R”及R”’各自獨立地指代以下基團，包括例如氫；未經取代之C1- C6 烷基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之C1- C6 烷基；未經取代之C1- C6 雜烷基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之C1- C6 雜烷基；未經取代之C6- C10 芳基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基或NR’R”取代之C6- C10 芳基；未經取代之3-11員雜環基(例如，含有1至4個選自O、N及S之雜原子之5-6員雜芳基或含有1至4個選自O、N及S之雜原子之4-11員雜環烷基)；及由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之3-11員雜環基(例如，含有1至4個選自O、N及S之雜原子之5-6員雜芳基或含有1至4個選自O、N及S之雜原子之4-11員雜環烷基)。當R’及R”連接於相同氮原子時，其可與氮原子組合形成3、4、5、6或7員環，其中環原子視情況經N、O及S取代且其中環視情況經鹵素、OH、CN、未經取代之C1 -C6 烷基、未經取代之C1 -C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代。例如，-NR’R”意謂包括1-吡咯啶基及4-嗎啉基。
類似地，芳基及雜芳基之視情況選用之取代基為不同的。在一些實施例中，芳基及雜芳基之取代基選自由以下組成之群：鹵素；側氧基；CN；NO；N3 ；-OR’；全氟-C1- C4 烷氧基；未經取代之C3 -C7 環烷基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1 -C6 烷基、未經取代之C1 -C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之C3 -C7 環烷基；未經取代之C6 -C10 芳基(例如，苯基)；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1 -C6 烷基、未經取代之C1 -C6 烷氧基或NR’R”取代之C6 -C10 芳基；未經取代之3-11員雜環基(例如，含有1至4個選自O、N及S之雜原子之5-6員雜芳基或含有1至4個選自O、N及S之雜原子之4-11員雜環烷基)；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1 -C6 烷基、未經取代之C1 -C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之3-11員雜環基(例如，含有1至4個選自O、N及S之雜原子之5-6員雜芳基或含有1至4個選自O、N及S之雜原子之4-11員雜環烷基)；-NR’R”；-SR’；-SiR’R”R”’；-OC(O)R’；-C(O)R’；-CO2 R’；-CONR’R”；-OC(O)NR’R”；-NR”C(O)R’；-NR”’C(O)NR’R”；-NR”C(O)2 R’；-S(O)2 R’；-S(O)2 NR’R”；-NR’S(O)2 R”；-NR”’S(O)2 NR’R”；脒基；胍基；-(CH2 )1-4 -OR’；-(CH2 )1-4 -NR’R”；-(CH2 )1-4 -SR’；-(CH2 )1-4 -SiR’R”R”’；-(CH2 )1-4 -OC(O)R’；-(CH2 )1-4 -C(O)R’；-(CH2 )1-4 -CO2 R’；and -(CH2 )1-4 CONR’R”，或其組合，數目範圍為0至(2m’+1)，其中m’為此一基團中碳原子之總數。R’、R”及R”’各自獨立地指代以下基團，包括例如氫；未經取代之C1- C6 烷基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之C1- C6 烷基；未經取代之C1- C6 雜烷基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之C1- C6 雜烷基；未經取代之C6- C10 芳基；由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基或NR’R”取代之C6- C10 芳基；未經取代之3-11員雜環基(例如，含有1至4個選自O、N及S之雜原子之5-6員雜芳基或含有1至4個選自O、N及S之雜原子之4-11員雜環烷基)；及由鹵素、OH、CN、未經取代之C1- C6 烷基、未經取代之C1- C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代之3-11員雜環基(例如，含有1至4個選自O、N及S之雜原子之5-6員雜芳基或含有1至4個選自O、N及S之雜原子之4-11員雜環烷基)。當R’及R”連接於相同氮原子時，其可與氮原子組合形成3、4、5、6或7員環，其中環原子視情況經N、O及S取代且其中環視情況經鹵素、OH、CN、未經取代之C1 -C6 烷基、未經取代之C1 -C6 烷氧基、側氧基或NR’R”取代。例如，-NR’R”意謂包括1-吡咯啶基及4-嗎啉基。
術語「側氧基」係指=O或(=O)2 。
如本文所用，在化學結構中與鍵交叉之波形線「」指示化學結構中波形鍵所連接之原子與分子之其餘部分或與分子片段之其餘部分之連接點。在一些實施例中，箭頭連同星號一起用於以波形線之形式指示連接點。
在某些實施例中，二價基團通常在沒有具體鍵結組態之情況下描述。除非另外指定，否則應理解一般描述意謂包括兩種鍵結組態。例如，除非另外指定，否則在基團R1 –R2 –R3 中，若基團R2 描述為-CH2 C(O)-，則應理解此基團可呈R1 –CH2 C(O)–R3 及呈R1 –C(O)CH2 –R3 經鍵結。
除非另外指示，否則術語「本發明之一或多種化合物」及其類似術語包括本文之式(I)化合物諸如化合物1-18，有時稱為JAK抑制劑，包括其立體異構物(包括構型異構物)、幾何異構物、互變異構物、溶劑合物、代謝物、同位素、鹽(例如，醫藥學上可接受之鹽)及前驅藥。在一些實施例中，排除溶劑合物、代謝物、同位素或前驅藥或其任何組合。
片語「醫藥學上可接受之」係指當向動物諸如例如人類(適當時)不產生不良、過敏性或其他事與願違的反應的分子實體及組成物。
本發明之化合物可呈鹽諸如醫藥學上可接受之鹽之形式。「醫藥學上可接受之鹽」包括酸及鹼加成鹽。「醫藥學上可接受之酸加成鹽」係指與無機酸諸如鹽酸、溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸及其類似者形成之保留自由鹼之生物有效性及性質且非為生物學或其他方面非所要的鹽，且有機酸可選自脂族、環脂族、芳族、芳脂族、雜環狀、羧酸及磺酸類的有機酸諸如甲酸、乙酸、丙酸、甘醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、順丁烯二酸、丙二酸、琥珀酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、天冬胺酸、抗壞血酸、麩胺酸、鄰胺苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、苦杏仁酸、撲酸、苯基乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸及其類似者。
「醫藥學上可接受之鹼加成鹽」包括衍生自無機鹼之鹼加成鹽諸如鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、錳鹽、鋁鹽及其類似者。特定鹼加成鹽為銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽及鎂鹽。衍生自醫藥學上可接受之有機非毒性鹼之鹽包括一級、二級及三級胺、經取代胺包括天然存在之經取代胺、環狀胺基鹼性離子交換樹脂，諸如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙胺基乙醇、緩血酸胺、二環己胺、離胺酸、精胺酸、組胺酸、咖啡鹼、普魯卡因、海卓胺、膽鹼、甜菜鹼、乙二胺、葡糖胺、甲基還原葡糖胺、可可鹼、嘌呤、哌嗪(piperizine)、哌啶、N-乙基哌啶、多胺樹脂及其類似者。特定有機非毒性鹼包括異丙胺、二乙胺、乙醇胺、緩血酸胺、二環己胺、膽鹼及咖啡鹼。
在一些實施例中，鹽選自鹽酸鹽、溴酸鹽、三氟乙酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、反丁烯二酸鹽、順丁烯二酸鹽、酒石酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、丙酮酸鹽、琥珀酸鹽、草酸鹽、甲烷磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、重硫酸鹽、苯磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、丙二酸鹽、昔奈酸鹽(xinafoate)、抗壞血酸鹽、油酸鹽、菸鹼酸鹽、糖酸鹽、己二酸鹽、甲酸鹽、甘醇酸鹽、棕櫚酸鹽、L-乳酸鹽、D-乳酸鹽、天冬胺酸鹽、蘋果酸鹽、L-酒石酸鹽、D-酒石酸鹽、硬脂酸鹽、糠酸鹽(例如2-糠酸鹽或3-糠酸鹽)、萘二磺酸鹽(napadisylate)(萘-1,5-二磺酸鹽或萘-1-(磺酸)-5-磺酸鹽)、乙二磺酸鹽(乙烷-1,2-二磺酸鹽或乙烷-1-(磺酸)-2-磺酸鹽)、羥基乙基磺酸鹽(isethionate)(2-羥基乙基磺酸鹽)、2-均三甲苯磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、2,5-二氯苯磺酸鹽、D-苦杏仁酸鹽、L-苦杏仁酸鹽、桂皮酸鹽、苯甲酸鹽、己二酸鹽、乙磺酸鹽(esylate)、丙二酸鹽、三甲苯磺酸鹽(mesitylate)(2-均三甲苯磺酸鹽)、萘磺酸鹽(napsylate)(2-萘磺酸鹽)、樟腦磺酸鹽(camsylate)(樟腦-10-磺酸鹽，例如(1S)-(+)-10-樟腦磺酸鹽)、麩胺酸鹽、戊二酸鹽、馬尿酸鹽(2-(苯甲醯基胺基)乙酸鹽)、乳清酸鹽(orotate)、二甲苯酸鹽(xylate)(對二甲苯-2-磺酸鹽)及撲酸鹽(2,2’-二羥基-1,1’-二萘基甲烷-3,3’二羧酸鹽)。
「無菌」調配物為無菌的或不含所有活微生物及其孢子。
「立體異構物」係指具有相同化學組成，但在原子或基團於空間中之排列方面不同之化合物。立體異構物包括非鏡像異構物、鏡像異構物、構形異構物及其類似者。
「掌性」係指分子具有與鏡像搭配物不可重疊之性質，而術語「非掌性」係指分子可重疊於其鏡像搭配物上。
「非鏡像異構物」係指具有二或更多個掌性中心且分子彼此不為鏡像之立體異構物。非鏡像異構物具有不同物理性質，例如熔點、沸點、光譜性質或生物活性。非鏡像異構物之混合物可在諸如電泳及層析法(諸如HPLC)之高解析度分析程序下分離。
「鏡像異構物」係指化合物之彼此爲不可重疊鏡像之兩個立體異構物。
本文所用之立體化學定義及慣例通常遵循S. P. Parker編, McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York；以及Eliel, E.及Wilen, S., 「Stereochemistry of Organic Compounds」, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994。多種有機化合物以光學活性形式存在，亦即，其具有使平面-偏振光之平面旋轉的能力。在描述光學活性化合物時，前綴D及L或R及S用於表示分子圍繞其一或多個掌性中心之絕對組態。前綴d及l或(+)及(-)係用於指定平面-偏振光圍繞化合物之旋轉標誌，其中(-)或1意謂化合物為左旋的。帶有前綴(+)或d之化合物爲右旋的。對於給定化學結構，此等立體異構物相同，除了其互爲鏡像。特定立體異構物亦可稱爲鏡像異構物，且此類異構物之混合物常常稱爲鏡像異構混合物。鏡像異構物之50:50混合物稱爲外消旋混合物或外消旋物，其可在化學反應或製程中不存在立體選擇或立體特異性時存在。術語「外消旋混合物」及「外消旋物」係指兩種鏡像異構物質之等莫耳濃度混合物，其缺乏光學活性。
術語「互變異構物」或「互變異構形式」係指可經由低能障壁互變之具有不同能量之結構異構物。例如，質子互變異構物(亦稱為質子異變的互變異構物)包括經由質子遷移發生之相互轉化，諸如酮基-烯醇及亞胺-烯胺異構化。價互變異構物包括藉由一些鍵結電子之重組實現之互變。
本發明之某些化合物可以非溶合形式以及溶合形式，包括水合形式存在。「溶劑合物」係指一或多種溶劑分子及本發明之化合物之締合或複合物。形成溶劑合物之溶劑之實例包括水、異丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸及乙醇胺。本發明之某些化合物可以多種結晶或非晶形式存在。一般而言，所有實體形式均意欲在本發明之範疇內。術語「水合物」係指溶劑分子為水之複合物。
「代謝物」係指由指定化合物或其鹽在體內代謝產生之產物。此類產物可例如由投與之化合物之氧化、還原、水解、胺化、脫醯胺、酯化、脫酯、酶裂解及其類似反應產生。
代謝物產物通常藉由以下鑑別：製備本發明化合物之放射性標記(例如，14 C或3 H)同位素；將其以可偵測劑量(例如，大於約0.5 mg/kg)向動物諸如大鼠、小鼠、天竺鼠、猴或人類投與；使代謝發生足夠時間(通常約30秒至30小時)；且將其轉化產物自尿、血或其他生物樣本單離。此等產物由於其經標記而易於單離(其他係藉由使用能夠結合在代謝物中留存之抗原決定區的抗體來單離)。代謝物結構係以習知方式例如藉由MS、LC/MS或NMR分析確定。一般而言，代謝物之分析係以與熟習此項技術者熟知之習知藥物代謝研究相同之方式進行。代謝物產物只要其不另外見於活體內，就適用於本發明化合物之治療性給藥之診斷檢定。
「受試者」、「個體」或「患者」為脊椎動物。在某些實施例中，脊椎動物為哺乳動物。哺乳動物包括但不限於農場動物(諸如母牛)、運動動物、寵物(諸如天竺鼠、貓、狗、兔及馬)、靈長類動物、小鼠及大鼠。在某些實施例中，哺乳動物為人類。在包含向患者投與如本文所述之JAK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽之實施例中，患者可為有需要之患者。
術語「詹納斯激酶」係指JAK1、JAK2、JAK3及TYK2蛋白激酶。在一些實施例中，詹納斯激酶可進一步定義為JAK1、JAK2、JAK3或TYK2之一。在任何實施例中，JAK1、JAK2、JAK3及TYK2中之任一者可特定言之被排除作為詹納斯激酶。在一些實施例中，詹納斯激酶為JAK1。在一些實施例中，詹納斯激酶為JAK1及JAK2之組合。
術語「抑制」及「減少」或這些術語之任何變型包括達成所要結果之任何可量測減小或完全抑制。例如，活性(例如JAK1活性)相較於正常活性之減少可為減小約、至多約或至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或更多或其中可導出之任何範圍。
「治療有效量」意謂本發明之化合物或其鹽(例如，其醫藥學上可接受之鹽)之量(i)治療或預防特定疾病、疾患或病症，或(ii)減弱、改善或消除特定疾病、疾患或病症之一或多個症狀，及視情況(iii)預防或延緩本文所述之特定疾病、疾患或病症之一或多個症狀之發作。在一些實施例中，治療有效量為足以減少或減輕自體免疫或炎性疾病(例如，氣喘)之症狀。在一些實施例中，治療有效量為本文所述之化學實體足以顯著減少B細胞之活性或數目的量。在癌症之情形下，治療有效量之藥物可減少癌細胞之數目；減小腫瘤大小；抑制(亦即在某種程度上減慢且較佳停止)癌細胞浸潤至外周器官中；抑制(亦即在某種程度上減慢且較佳停止)腫瘤轉移；在某種程度上抑制腫瘤生長；或在某種程度上減輕與癌症相關之一或多個症狀。在藥物可預防生長或殺傷現有癌細胞之情況下，其可為細胞抑制性或細胞毒性的。對於癌症療法，可例如藉由評定疾病進展時間(TTP)或確定反應率(RR)來量測功效。
「治療(Treatment)」(及變型諸如「治療(treat)」或「治療(treating)」)係指臨床介入以試圖改變治療之個體或細胞之自然病程，且可為實現預防或在臨床病理學過程中進行。所要治療效果包括預防疾病發生或復發、減輕症狀、減少疾病之任何直接或間接病理性後果、疾病狀態穩定(亦即不惡化)、減小疾病進展速率、改善或緩和疾病狀態、與未接受治療之預期存活相比延長存活及預後緩解或改良。在一些實施例中，本發明之化合物或其鹽(例如其醫藥學上可接受之鹽)用於延緩疾病或疾患之發展或減慢疾病或病症之進展。需要治療者包括已經具有疾患或病症者、以及傾向於患上疾患或病症(例如透過基因突變)者或欲預防疾患或病症者。
「炎性病症」係指其中過度或不受調控之炎性反應引起過度的炎性症狀、宿主組織損傷或組織功能損失的任何疾病、病症或症狀。「炎性病症」亦指藉由白血球之流入或嗜中性球趨化性介導之病理狀態。
「炎症」係指一種由組織損傷或破壞引發之局部保護反應，其用以破壞、稀釋或隔開(隔絕)有害藥劑與受損組織。炎症與白血球之流入或嗜中性球趨化性特別相關。炎症可由感染病原性生物體及病毒以及非感染性方式諸如創傷或者心肌梗塞或中風後再灌注、對外來抗原之免疫反應及自體免疫性疾病引起。據此，適於以本發明之化合物或其鹽(例如其醫藥學上可接受之鹽)治療之炎性病症涵蓋與特異性防禦系統之反應以及與非特異性防禦系統之反應相關的病症。
「特異性防禦系統」係指對具體抗原之存在有反應的免疫系統之組件。由特異性防禦系統之反應引起之炎症之實例包括對外來抗原之經典反應、自體免疫疾病及T細胞介導之遲發型過敏反應。慢性炎性疾病、固體移植組織及器官(例如腎及骨髓移植物)之排斥及移植物抗宿主疾病(GVHD)為特異性防禦系統之炎性反應之進一步實例。
術語「非特異性防禦系統」係指由沒有免疫記憶能力之白血球(例如，顆粒球及巨噬細胞)介導之炎性病症。至少部分地由非特異性防禦系統之反應引起之炎症之實例包括：與疾患諸如成人(急性)呼吸窘迫症候群(ARDS)或多個器官損傷症候群相關之炎症；再灌注損傷；急性腎小球腎炎；反應性關節炎；皮膚病伴急性炎性部分；急性腦膜炎或其他中樞神經系統炎性病症諸如中風；熱損傷；炎性腸病；顆粒球轉輸相關之症候群；及細胞介素誘導之毒性。
「自體免疫疾病」係指其中組織損傷係與對身體自身成分之體液或細胞介導之反應相關的病症之任何群。自體免疫疾病之非限制性實例包括類風濕性關節炎、狼瘡及多發性硬化。
如本文所用，「過敏性疾病」係指由過敏症引起之任何症狀、組織損傷或失去組織功能。如本文所用，「關節炎疾病」係指特徵在於可歸因於多種病因學之關節發炎病變之任何疾病。如本文所用，「皮炎」係指特徵在於可歸因於多種病因學之皮膚發炎之一大家族皮膚疾病中的任一者。如本文所用，「移植排斥」係指針對移植組織諸如器官或細胞(例如骨髓)之任何免疫反應，其特徵在於失去移植組織及周圍組織之功能、疼痛、腫脹、白細胞增多及血小板減少。本發明之治療方法包括用於治療與炎性細胞活化相關之病症之方法。
「炎性細胞活化」係指在炎性細胞(包括但不限於單核細胞、巨噬細胞、T淋巴球、B淋巴球、顆粒球(亦即多型核白血球諸如嗜中性球、嗜鹼性球及嗜酸性球)、肥胖細胞、樹突細胞、蘭格罕氏細胞(Langerhans cell)及內皮細胞)中，由增殖細胞反應之刺激物(包括但不限於細胞因子、抗原或自體抗體)誘導、產生可溶性介體(包括但不限於細胞因子、氧自由基、酶、***素類化合物或血管活性胺)，或細胞表面表現新的或增加數目之介體(包括但不限於主要組織相容性抗原或細胞黏附分子)。熟習此項技術者應瞭解，在此等細胞中此等表型之一者或組合之活化可有助於炎性病症之起始、延續或加重。
在一些實施例中，可根據本發明之方法治療之炎性病症包括但不限於氣喘、鼻炎(例如，過敏性鼻炎)、過敏性氣道症候群、異位性皮炎、支氣管炎、類風濕性關節炎、乾癬、接觸性皮炎、慢性阻塞性肺臟疾病(COPD)及遲發型過敏反應。
術語「癌症」及「癌性」、「贅瘤」及「腫瘤」及相關術語係指或描述哺乳動物中之生理疾患，其特徵通常在於不受調控之細胞生長。「腫瘤」包含一或多個癌細胞。癌症之實例包括上皮癌、胚細胞瘤、肉瘤、精細胞瘤、神經膠胚細胞瘤、黑色素瘤、白血病及髓樣或淋巴樣惡性腫瘤。此類癌症之更特定實例包括鱗狀細胞癌(例如，上皮鱗狀細胞癌)及肺癌，包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌(「NSCLC」)、肺腺癌及肺鱗狀細胞癌。其他癌症包括皮膚癌、角質棘皮瘤、濾泡癌、毛樣細胞白血病、頰腔癌、咽(口)癌、唇癌、舌癌、嘴癌、唾液腺癌、食道癌、喉癌、肝細胞癌、胃(gastric, stomach)癌、胃腸癌、小腸癌、大腸癌、胰臟癌、頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝腫瘤、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、生殖泌尿癌、膽道癌、甲狀腺癌、乳突癌、肝癌、子宮內膜癌、子宮癌、唾液腺癌、腎(kidney或renal)癌、***癌、睾丸癌、陰門癌、腹膜癌、肛門癌、陰莖癌、骨癌、多發性骨髓瘤、B細胞淋巴瘤、中樞神經系統癌、腦癌、頭頸癌、霍奇金氏癌及相關轉移。贅瘤性病症之實例包括骨髓增生病症諸如真性多血症(polycythemia vera)、自發性血小板增多症、骨髓纖維化諸如原發性骨髓纖維化及慢性骨髓性白血病(CML)。
「化學治療劑」為適用於治療給定病症例如癌症或炎性病症之藥劑。化學治療劑之實例為此項技術中熟知的且包括諸如美國公開申請案第2010/0048557號中所揭示之實例，該案以引用之方式併入本文。另外，化學治療劑包括任何化學治療劑之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物以及其二或多者之組合。
「藥品說明書」用於指慣常包括在治療性產品之商業包裝中之說明書，其含有關於與使用此類治療性產品相關之適應症、用法、劑量、投與、禁忌症或警告的資訊。
除非另外說明，否則本文所述之結構包括僅因存在一或多個同位素增濃原子而不同之化合物。可倂入至本發明化合物中之實例性同位素包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯及碘之同位素，分別諸如2 H、3 H、11 C、13 C、14 C、13 N、15 N、15 O、17 O、18 O、32 P、33 P、35 S、18 F、36 Cl、123 I及125 I。經同位素標記之化合物(例如，用3 H及14 C標記之彼等化合物)可適用於化合物或受質組織分佈檢定。氚化(亦即，3 H)及碳-14(亦即，14 C)同位素可由於其易於製備及可偵測性而適用。進一步，用諸如氘(亦即，2 H)之較重同位素進行的取代可提供由於較大代謝穩定性(例如，活體內半衰期增加或劑量需求減少)所致之某些治療性優勢。在一些實施例中，一或多個氫原子由2 H或3 H置換，或一或多個碳原子由13 C或14 C增濃碳置換。正電子發射同位素(諸如15 O、13 N、11 C及18 F)適用於正電子發射斷層攝影術(PET)研究以檢查受質受體佔有率。同位素標記之合物通常可藉由與本文中流程或實例中所揭示之程序類似的程序，藉由以同位素標記之藥劑取代非同位素標記之藥劑來製備。
特別涵蓋關於本發明之一個實施例討論之任何限制可應用於本發明之任何其他實施例。此外，本發明之任何化合物或其鹽(例如，其醫藥學上可接受之鹽)可用於本發明之任何方法，且本發明之任何方法可用於產生或利用本發明之化合物或其鹽(例如，其醫藥學上可接受之鹽)或組成物。
除非明確指示僅指替代物或替代物為相互排斥的，否則使用術語「或」用於意謂「及/或」，但是本揭露支持僅指替代物及「及/或」之定義。
在本申請通篇，術語「約」用於指示，值包括用於確定該值之裝置或方法之誤差之標準偏差。
除非另外明確指示，否則如本文所用，「一個/種(a/an)」意謂一或多個(種)。如本文所用，「另一」意謂至少第二或更多者。
本文所用之標題僅出於組織目的經指示。 詹納斯激酶之抑制劑
一個實施例提供一種式(I)化合物：
Figure 02_image001
(I) 或其醫藥學上可接受之鹽， 其中： R1 為：C1-6 烷基；氰基-C1-6 烷基；C1-6 烷氧基-(CO)-；-(CHRa )m -NRb Rc ；或-(CHRa )n -het1 ; R2 為：C1-6 烷基；羥基-C1-6 烷基；鹵基-C1-6 烷基；C1-6 烷氧基-C1-6 烷基；C3-6 環烷基；-(CHRa )p -NRb Rc ；het2 ；-(CHRa )q -het3 ；或苯基，其可未經取代或經Rd 取代一次或兩次； R3 為：氫；胺基；或C1-6 烷基； R4 為：氫；或C1-6 烷基； R5 為：氫；或C1-6 烷基； R6 為：氫；C1-6 烷基；或R2 及R6 連同其所連接之原子可形成六員環； m為2至3； n為0至2； p為0至2； 各Ra 獨立地為：氫；或C1-6 烷基； 各Rb 獨立地為：氫；或C1-6 烷基； 各Rc 獨立地為：氫；或C1-6 烷基； het1 為：四氫呋喃基；吖呾基；或吡咯啶基，其各自可未經取代或經Re 取代一次或兩次； het2 為：吡啶基；嘧啶基；吡唑基；咪唑基；或異喹啉基，其可為部分飽和的；其各自可未經取代或經Rf 取代一次或兩次； het3 為：吖呾基；吡咯啶基；氧呾基；或哌啶基；其各自可未經取代或經Rg 取代一次； 各Rd 獨立地為：C1-6 烷基；羥基；C1-6 烷氧基-C1-6 烷基；-(CHRa )q -NRb Rc ；或苯基； 各Re 獨立地為：C1-6 烷基；或側氧基； 各Rf 獨立地為：C1-6 烷基；羥基-C1-6 烷基；側氧基；-(CHRa )r -NRb Rc ；-(CHRa )s -het4 ； 各Rg 獨立地為：C1-6 烷基；或乙醯基； q為1至2； r為2至3； s為2至3；且 het4 為：吖呾-1-基；1-甲基-吖呾-3-基；口昆啶基；1-甲基-吡咯啶-2-基；或4-甲基哌嗪-1-基。
在某些實施例中，R3 為氫。
在某些實施例中，R4 為氫。
在某些實施例中，R5 為氫。
在某些實施例中，R6 為氫。
在某些實施例中，R1 為氰基甲基或甲基。
在某些實施例中，R1 為氰基甲基。
在某些實施例中，R1 為甲基。
在某些實施例中，R2 為：C1-6 烷基；羥基-C1-6 烷基；鹵基-C1-6 烷基；C1-6 烷氧基-C1-6 烷基；C3-6 環烷基；-(CHRa )p -NRb Rc ；het2 ；-(CHRa )q -het3 ；或苯基，其可未經取代或經Rd 取代一次。
在某些實施例中，R2 為C1-6 烷基。
在某些實施例中，R2 為羥基-C1-6 烷基。
在某些實施例中，R2 為鹵基-C1-6 烷基。
在某些實施例中，R2 為C1-6 烷氧基-C1-6 烷基。
在某些實施例中，R2 為C3-6 環烷基。
在某些實施例中，R2 為-(CHRa )p -NRb Rc 。
在某些實施例中，R2 為het2 。
在某些實施例中，R2 為-(CHRa )q -het3 。
在某些實施例中，R2 為苯基，其可未經取代或經Rd 取代一次。
在某些實施例中，R2 為C1-6 烷基、羥基-C1-6 烷基；C1-6 烷氧基-C1-6 烷基或鹵基-C1-6 烷基。
在某些實施例中，R2 為-(CH2 )2 -NRb Rc 。
在某些實施例中，R2 為C1-6 烷基。
在某些實施例中，R2 為羥基-C1-6 烷基或C1-6 烷氧基-C1-6 烷基。
在某些實施例中，R2 為羥基-C1-6 烷基。
在某些實施例中，R2 為C1-6 烷氧基-C1-6 烷基。
在某些實施例中，R2 為甲氧基-C1-6 烷基。
在某些實施例中，R2 為2-甲氧基乙基。
在某些實施例中，R2 為鹵基-C1-6 烷基。
在某些實施例中，R2 為2-羥基乙基、二氟甲氧基、3-羥基己基、-甲氧基苯基、2-羥基丙基、吡啶-4-基、甲基、吖呾--基、2-羥基-1-甲基-乙基、甲基胺基、二甲基胺基、1-甲基-吡唑-4-基、苯基、吡唑-4-基、1-甲基-2-側氧基-4-吡啶基或2-羥基-1-甲基-丙基。
在某些實施例中，R2 為2-羥基乙基、2-羥基丙基、2-羥基-1-甲基-乙基或2-羥基-1-甲基-丙基。
在某些實施例中，R2 為2-羥基乙基。
在某些實施例中，R2 為2-羥基丙基。
在某些實施例中，R2 為2-羥基-1-甲基-乙基。
在某些實施例中，R2 為2-羥基-1-甲基-丙基。
在某些實施例中，m為2。
在某些實施例中，m為3。
在某些實施例中，n為0。
在某些實施例中，n為1。
在某些實施例中，n為2。
在某些實施例中，p為0。
在某些實施例中，p為1。
在某些實施例中，p為2。
在某些實施例中，q為1。
在某些實施例中，q為2。
在某些實施例中，r為2。
在某些實施例中，r為3。
在某些實施例中，s為2。
在某些實施例中，s為3。
在某些實施例中，Ra 為氫。
在某些實施例中，Ra 為C1-6 烷基。
在某些實施例中，Rb 為氫。
在某些實施例中，Rb 為C1-6 烷基。
在某些實施例中，Rc 為氫。
在某些實施例中，Rc 為C1-6 烷基。
在某些實施例中，het1 為1-甲基吖呾-4-基、2-氧基-四氫呋喃-3-基或吡咯啶基。
在某些實施例中，het2 為吡啶-4-基、1-甲基-吡唑-4-基、1-(2-羥基丙基)-吡唑-4-基、吡唑-4-基、吡啶-3-基、6-側氧基-1H-吡啶-3-基、1-甲基-2-側氧基-吡啶-4-基、1-口昆啶-3-基吡唑-4-基、1-[2-[(1-甲基吡咯啶-2-基]乙基]吡唑-4-基、1-[2-(二甲基胺基)丙基]吡唑-4-基、1-甲基-吖呾-3-基)吡唑-4-基、2-甲基-1H-異喹啉-7-基、2-甲基-1H-異喹啉-6-基、1-甲基-咪唑-4-基或1H-咪唑-4-基、嘧啶-5-基。
在某些實施例中，het3 為1-甲基-吖呾-4-基、吖呾-4-基、吖呾-1-基、吡咯啶-3-基、氧呾-4-基、1-甲基-吡咯啶-3-基、1-乙醯基-吖呾-4-基、哌啶-3-基或4-甲基哌嗪-1-基。
在某些實施例中，標的化合物為式(II)化合物
Figure 02_image004
(II) 其中R1 及R2 為如本文所定義。
在某些實施例中，標的化合物為式(III)化合物
Figure 02_image006
(III) 其中R2 為如本文所定義。
在某些實施例中，式(I)化合物選自：
Figure 02_image008
；
Figure 02_image010
；
Figure 02_image012
；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
Figure 02_image066
；
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；
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；
Figure 02_image072
；
Figure 02_image074
；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
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；
Figure 02_image110
；
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；
Figure 02_image114
；
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；
Figure 02_image118
；
Figure 02_image120
；
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；
Figure 02_image124
；
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；
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；
Figure 02_image130
；
Figure 02_image132
；
Figure 02_image134
；
Figure 02_image136
；
Figure 02_image138
；
Figure 02_image140
；
Figure 02_image142
；
Figure 02_image144
；及
Figure 02_image146
；或其醫藥學上可接受之立體異構物或鹽。
在某些實施例中，標的化合物選自：
Figure 02_image008
；
Figure 02_image010
；
Figure 02_image012
；
Figure 02_image016
；
Figure 02_image018
；
Figure 02_image020
；
Figure 02_image024
；
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；
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；
Figure 02_image030
；
Figure 02_image032
；
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；
Figure 02_image036
；
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；
Figure 02_image040
；
Figure 02_image046
；
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；
Figure 02_image050
；
Figure 02_image052
；
Figure 02_image056
；
Figure 02_image058
；
Figure 02_image060
；
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；
Figure 02_image064
；
Figure 02_image066
；
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；
Figure 02_image074
；
Figure 02_image076
；
Figure 02_image078
；
Figure 02_image080
；
Figure 02_image082
；
Figure 02_image086
；
Figure 02_image088
；
Figure 02_image090
；
Figure 02_image094
；
Figure 02_image096
；
Figure 02_image098
；
Figure 02_image185
；
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；
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；
Figure 02_image116
；
Figure 02_image190
Figure 02_image192
；
Figure 02_image194
；
Figure 02_image196
；
Figure 02_image128
；
Figure 02_image199
；
Figure 02_image136
Figure 02_image140
；及
Figure 02_image203
；或其立體異構物或醫藥學上可接受之鹽。
在某些實施例中，化合物選自：
Figure 02_image008
；
Figure 02_image010
；
Figure 02_image016
；
Figure 02_image018
；
Figure 02_image024
；
Figure 02_image028
；
Figure 02_image030
；
Figure 02_image032
；
Figure 02_image034
；
Figure 02_image036
；
Figure 02_image038
；
Figure 02_image040
；
Figure 02_image048
；
Figure 02_image050
；
Figure 02_image054
；
Figure 02_image056
；
Figure 02_image058
；
Figure 02_image062
；
Figure 02_image066
；
Figure 02_image076
；
Figure 02_image086
；
Figure 02_image088
；
Figure 02_image090
；
Figure 02_image094
；
Figure 02_image098
；及
Figure 02_image228
；或其立體異構物或醫藥學上可接受之鹽。
在某些實施例中，標的化合物選自： 結構
Figure 02_image016
；
Figure 02_image034
；
Figure 02_image036
；
Figure 02_image052
;
Figure 02_image056
；
Figure 02_image235
；及
Figure 02_image237
；或其立體異構物或醫藥學上可接受之鹽。
亦提供一種醫藥組成物，其包含如本文所述之JAK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
亦提供如本文所述之JAK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽在療法中諸如在炎性疾病(例如，氣喘)之治療中之用途。亦提供如本文所述之JAK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽用於製備用於治療炎性疾病之藥劑之用途。亦提供一種預防、治療患者之對詹納斯激酶活性之抑制有反應的疾病或疾患或減小該疾病或疾患之嚴重性的方法，其包含向該患者投與治療有效量之如本文所述之JAK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，療法之疾病或疾患為癌症、真性多血症、自發性血小板增多症、骨髓纖維化、慢性骨髓性白血病(CML)、類風濕性關節炎、炎性腸症候群、克羅恩氏病、乾癬、接觸性皮炎或遲發型過敏反應。
在一個實施例中，提供如本文所述之JAK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽用於治療癌症、真性多血症、自發性血小板增多症、骨髓纖維化、慢性骨髓性白血病(CML)、類風濕性關節炎、炎性腸症候群、克羅恩氏病、乾癬、接觸性皮炎或遲發型過敏反應之用途。
在一個實施例中，提供一種經調配用於藉由吸入投與之組成物。
在一個實施例中，提供一種計量吸入器，其包含本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，如本文所述之JAK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽作為JAK1抑制劑比作為LRRK2抑制劑有效至少五倍。
在一個實施例中，如本文所述之JAK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽作為JAK1抑制劑比作為LRRK2抑制劑有效至少十倍。
在一個實施例中，提供一種用於治療哺乳動物之掉發之方法，其包含向該哺乳動物投與如本文所述之JAK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，提供如本文所述之JAK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽用於治療掉發之用途。
在一個實施例中，提供如本文所述之JAK抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽製備用於治療哺乳動物之掉發之藥劑之用途。
本發明化合物可含有一或多個不對稱碳原子。據此，化合物可作為非鏡像異構物、鏡像異構物或其混合物存在。合成該等化合物可採用外消旋物、非鏡像異構物或鏡像異構物作為起始物質或作為中間物。特定非鏡像異構化合物之混合物可藉由層析法或結晶法來分離或以一或多種特定非鏡像異構物之形式增濃。類似地，鏡象異構化合物可使用相同技術或此項技術中已知之其他技術來分離或鏡像異構增濃。各不對稱碳或氮原子可呈R或S組態且此兩種組態均在本發明之範疇內。
在本文所示之結構中，在未指定任一特定掌性原子之立體化學的情況下，則所有立體異構物均作為本發明之化合物涵蓋且包括在內。在藉由表示特定組態之實心楔形或虛線來指定立體化學之情況下，則該立體異構物係以此方式來指定及定義。除非另外指定，否則使用實心楔形或虛線時意指相對立體化學。
另一態樣包括本文所述之化合物之前驅藥，其包括已知之胺基保護基及羧基保護基，該等基團在生理條件下經釋放(例如，經水解)以得到本發明之化合物。
術語「前驅藥」係指醫藥活性物質之前驅物或衍生物形式，其與母體藥物相比對患者之有效性較小，且能夠經酶或水解活化或轉化成更具活性之母體形式。參見例如Wilman, 「Prodrugs in Cancer Chemotherapy」 Biochemical Society Transactions, 14, 第375-382頁, 615th Meeting Belfast (1986)及Stella等人, 「Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery,」 Directed Drug Delivery, Borchardt等人(編), 第247-267頁, Humana Press (1985)。前驅藥包括但不限於含磷酸鹽前驅藥、含硫代磷酸鹽前驅藥、含硫酸鹽前驅藥、含肽前驅藥、D-胺基酸修飾之前驅藥、醣化前驅藥、含β-內醯胺前驅藥、含視情況經取代之苯氧基乙醯胺之前驅藥或含視情況經取代之苯基乙醯胺之前驅藥及5-氟胞嘧啶及5-氟尿苷前驅藥。
前驅藥之特定特別類別為以下化合物，在該等化合物中胺基、甲脒基、胺基烯烴胺基、亞胺基烯烴胺基或胍基中之氮原子經羥基、烷基羰基(-CO-R)、烷氧基羰基(-CO-OR)或醯氧基烷基-烷氧基羰基(-CO-O-R-O-CO-R)取代，其中R為單價或二價基團，例如烷基、伸烷基或芳基或具有式-C(O)-O-CP1P2-鹵烷基之基團，其中P1及P2相同或不同且為氫、烷基、烷氧基、氰基、鹵素、烷基或芳基。在一特定實施例中，氮原子為甲脒基之氮原子之一。前驅藥可藉由使化合物與活化基團諸如醯基反應以將例如化合物中之氮原子鍵合於活化醯基之示範性羰基來製備。活化羰基化合物之實例為含有鍵合於羰基之脫離基的化合物，且包括例如醯基鹵化物、醯基胺、醯基吡啶鹽、醯基烷氧化物、醯基苯氧化物諸如對硝基苯氧基醯基、二硝基苯氧基醯基、氟苯氧基醯基及二氟苯氧基醯基。反應通常在對比溫度諸如-78℃至約50℃下於惰性溶劑中進行。反應亦可在無機鹼(例如碳酸鉀或碳酸氫鈉)或有機鹼(諸如胺，包括吡啶、三甲胺、三乙胺、三乙醇胺或其類似者)存在下進行。
亦涵蓋額外類型的前驅藥。例如，如本文所述之JAK抑制劑之自由羧基可衍生化為醯胺或烷基酯。作為另一實例，包含自由羥基之本發明之化合物可藉由將羥基轉化成諸如但不限於磷酸酯、半琥珀酸酯、二甲胺基乙酸酯或磷醯氧基甲基氧基羰基之基團來衍生化為前驅藥，如Fleisher, D.等人, (1996) Improved oral drug delivery: solubility limitations overcome by the use of prodrugs Advanced Drug Delivery Reviews, 19:115中所概述。羥基及胺基之胺甲酸酯前驅藥亦包括在內，如同羥基之碳酸酯前驅藥、磺酸酯及硫酸酯。亦涵蓋呈(醯氧基)甲基及(醯氧基)乙基酯之羥基之衍生，其中醯基可為視情況經基團包括但不限於醚、胺及羧酸官能基取代之烷基酯，或其中醯基為如上文所述之胺基酸酯。此類型之前驅藥描述於J. Med. Chem., (1996), 39:10中。更具體實例包括將醇基之氫原子以基團諸如(C1- C6 )烷醯氧基甲基、1-((C1- C6 )烷醯氧基)乙基、1-甲基-1-((C1- C6 )烷醯氧基)乙基、(C1- C6 )烷氧基羰基氧基甲基、N-(C1- C6 )烷氧基羰基胺基甲基、琥珀醯基、(C1- C6 )烷醯基、α-胺基(C1- C4 烷醯基、芳基醯基及α-胺基醯基或α-胺基醯基-α-胺基醯基置換，其中各α-胺基醯基獨立地選自天然存在之L-胺基酸、P(O)(OH)2 、-P(O)(O(C1- C6 )烷基)2 或醣苷基(由醣之半縮醛形式的羥基之移除得到之基團)。
「脫離基」係指化學反應中第一反應之自該化學反應中該第一反應替換出的部分。脫離基之實例包括但不限於鹵素原子、烷氧基及磺醯氧基。實例性磺醯氧基包括但不限於烷基磺醯氧基(例如甲基磺醯氧基(甲磺酸酯基)及三氟甲基磺醯氧基(三氟甲磺酸酯基))及芳基磺醯氧基(例如對甲苯磺醯氧基(甲苯磺酸酯基)及對硝基磺醯氧基(硝基苯磺酸酯基))。 詹納斯激酶抑制劑化合物之合成
化合物可藉由本文所述之合成途徑合成。在某些實施例中，除了或根據本文所含有之描述，可使用化學領域中熟知之過程。起始物質通常可購自商業來源諸如Aldrich Chemicals (Milwaukee, Wis.)或是已經使用熟習此項技術者熟知之方法製備(例如，藉由通常於Louis F. Fieser及Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wiley, N.Y. (1967-1999版)；Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl編 Springer-Verlag, Berlin，包括增刊(亦可經由Beilstein線上資料庫購得)；或Comprehensive Heterocyclic Chemistry, Katrizky及Rees編, Pergamon Press, 1984中所述之方法製備。
化合物可單一地或呈包含至少2種例如5至1,000種化合物或10至100種化合物之化合物文庫來製備。化合物文庫可藉由組合的『***及混合』方法或藉由使用溶液相或固相化學之多重平行合成，藉由熟習此項技術者已知之程序製備。因此根據本發明之另一態樣，提供一種化合物文庫，其包含至少2種本發明之化合物。
出於說明性目的，以下所述之反應流程提供用於合成本發明之化合物之途徑以及關鍵中間物。關於個別反應步驟之更詳細說明，參見以下實例部分。熟習此項技術者應理解，可使用其他合成途徑。雖然一些特定的起始材料及試劑描繪於流程中且在下文中論述，但可替換其他起始材料及試劑以提供多種衍生物或反應條件。另外，藉由如下所述之方法製備的許多化合物可使用熟習此項技術者所熟知之習知化學反應根據本揭露經進一步修改。
在製備本發明之化合物時，保護中間物之遠端官能基(例如，一級或二級胺)可為必要的。對此保護之需要將取決於遠端官能基之性質及製備方法之條件。合適之胺基保護基包括乙醯基、三氟乙醯基、苄基、苯基磺醯基、三級丁氧基羰基(BOC)、苄基氧基羰基(CBz)及9-茀基亞甲基氧基羰基(Fmoc)。對此保護之需要易於由熟習此項技術者確定。有關保護基及其使用之一般描述，參見T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991。
合成本發明之化合物中所用且可使用多種試劑及條件進行之其他轉化包括以下： (1)  羧酸與胺形成醯胺之反應。此一轉變可使用熟習此項技術者已知之各種試劑達成，但全面的評述可見於Tetrahedron, 2005, 61, 10827-10852。 (2)  一級或二級胺與芳基鹵化物或擬鹵化物(例如三氟甲磺酸酯)之反應(通常稱為布赫瓦爾德-哈特維希交叉耦合)可使用多種催化劑、配體及鹼達成。這些方法之評述提供於Comprehensive Organic Name Reactions and Reagents, 2010, 575-581。 (3)  芳基鹵化物與乙烯基硼酸或硼酸酯之間的鈀交叉偶合反應。此轉變為「鈴木-宮浦交叉偶合(Suzuki-Miyaura cross-coupling)」之類型，其為已於Chemical Reviews, 1995, 95(7), 2457-2483中充分評述之一類反應。 (4)  酯水解得到對應羧酸為熟習此項技術者熟知的，且條件包括：對於甲基及乙基酯，使用強水性鹼諸如氫氧化鋰、氫氧化鈉或氫氧化鉀或強水性無機酸諸如HCl；對於三級丁基酯，水解可使用酸例如HCl之二噁烷溶液或三氟乙酸(TFA)之二氯甲烷(DCM)溶液進行。反應流程 1
Figure 02_image239
反應流程1示出式I化合物之合成。硝基吡唑化合物1可在鈀催化條件下用4-溴-1-(二氟甲氧基)-2-碘苯進行芳化，以生成化合物2。化合物2之硝基可使用諸如鐵及氯化銨之條件還原以生成胺基苯胺3。在偶合試劑(諸如但不限於PyAOP)之存在下伴以在有機溶劑(諸如但不限於DMF)中之有機鹼(諸如但不限於DIPEA及DMAP)，醯胺鍵與可商購獲得之吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸偶合提供化合物4。使用在溶劑(諸如但不限於1,4-二噁烷)中之酸(諸如但不限於HCl)去除化合物4之SEM保護基，得到化合物5。然後可使化合物5經歷使用基團R1 -X(其中X為鹵基，諸如溴基)進行之N烷化，以提供化合物6。可藉由在Pd催化偶合條件下用適當硫醇試劑R2 -SH處理化合物6來合成化合物7。使化合物7之硫基氧化，提供化合物8，其為根據本發明之式(II)化合物。或者，可使經SEM保護之化合物4經歷藉由用氟硼酸鹽試劑處理所進行之直接N烷化。反應流程 2
Figure 02_image241
反應流程2示出製備本發明之化合物的另一種路徑。使硝基吡唑基芳基溴化合物1在鈀催化劑存在下經歷硫醇化，以提供硫醇化化合物2，此後使硝基還原成相應胺，以得到化合物3。使醯胺鍵與可商購獲得之吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸在偶合試劑存在下偶合，得到化合物4。然後在酸性條件下去除化合物4之SEM保護基，以得到化合物5，然後使其經歷S氧化，以得到相應碸化合物6。然後使吡唑部分N烷化，提供根據本發明之化合物(II)。反應流程 3
Figure 02_image243
在反應流程3中，用三烷基矽烷硫醇諸如三異丙基矽烷硫醇處理芳基溴化合物1，以得到硫基矽基化合物2。使硫醇去保護且烷化，得到硫化物化合物3，然後可使其經歷S氧化，以得到根據本發明之化合物(II)。反應流程 4
Figure 02_image245
在反應流程4中，用三烷基矽烷硫醇處理芳基溴化合物1且使其在鹼性條件下經歷原位去矽基化，以得到硫醇化合物2。使化合物2經歷S烷化，以提供硫化物化合物3，進而使其氧化成根據本發明之化合物II。反應流程 5
Figure 02_image247
在某些實施例中，如反應流程5所示，可使三烷基矽基硫醇化合物1經歷氧化，以直接提供磺酸化合物2，然後可使其於胺反應，以提供磺醯胺化合物3。反應流程 6
Figure 02_image249
在某些實施例中，如反應流程6所示，使硫醇化合物1與溴吡唑反應，得到吡唑硫酯化合物2。使化合物2氧化，得到相應碸化合物，然後使其經歷N烷化，以得到化合物4。反應流程 7
Figure 02_image251
在反應流程7中，用氮雜二羧酸二異丙酯處理碸化合物1，以得到羧酸異丙酯化合物2。反應流程 8
Figure 02_image253
在反應流程8中，使芳基溴化合物1與N保護的硫代烷基胺反應，以得到胺基烷基硫化物化合物2。使化合物2氧化，得到相應碸，然後使其去保護，以提供胺基烷基碸化合物4。可使化合物4經歷還原性胺化，以得到化合物5，或者可替代地，可使其與醯基氯反應，以得到甲醯胺化合物6。反應流程 9
Figure 02_image255
在反應流程9中，使硫醇化合物1與取代的環氧化物反應，以得到羥基烷基硫化物化合物2。然後使化合物2進行S氧化，得到相應羥基烷基碸化合物3。
應理解，當存在適當官能基時，各種式之化合物或其製備中所用之任何中間物可藉由一或多種採用縮合、取代、氧化、還原或裂解反應之標準合成方法來進一步衍生。特定取代方法包括習知烷化、芳化、雜芳化、醯化、磺醯化、鹵化、硝化、甲醯化及偶合程序。
在另一實例中，可藉由醯化來將一級胺或二級胺基團轉化成醯胺基團(-NHCOR’或-NRCOR’)。可藉由與適當醯氯在鹼(諸如三乙胺)存在下於合適溶劑(諸如二氯甲烷)中反應，或藉由與適當羧酸在合適偶合劑(諸如HATU (O-(7-氮雜苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸鹽))存在下於合適溶劑(諸如二氯甲烷)中反應來達成醯化。類似地，可藉由與適當磺醯氯在合適鹼(諸如三乙胺)存在下於合適溶劑(諸如二氯甲烷)中反應來將胺基轉化成磺醯胺基(-NHSO2 R’或–NR”SO2 R’)。可藉由與適當異氰酸酯在合適鹼(諸如三乙胺)存在下於合適溶劑(諸如二氯甲烷)中反應來將一級或二級胺基團轉化成脲基(-NHCONR’R”或-NRCONR’R”)。
可藉由例如催化氫化使用例如氫在金屬催化劑(例如鈀/支撐物諸如碳)存在下於溶劑(諸如乙酸乙酯或醇(例如甲醇))中將硝(-NO2 )基還原來獲得胺(-NH2 )。替代地，可藉由使用例如金屬(例如錫或鐵)在酸(諸如鹽酸)存在下之化學還原來進行轉變。
在另一實例中，可藉由例如藉由催化氫化使用例如氫在金屬催化劑(例如鈀/支撐物諸如碳或雷氏鎳)存在下於溶劑諸如醚(例如環狀醚，諸如四氫呋喃)中在適當溫度(例如約-78℃至溶劑之回流溫度)下之催化氫化來獲得胺(-CH2 NH2 )基。
在另一實例中，可自羧酸基團(-CO2 H)藉由轉化成對應醯疊氮(-CON3 )、庫爾提斯(Curtius)重排及所得異氰酸酯(-N=C=O)之水解來獲得胺(-NH2 )基。
可藉由採用胺及硼氫化物(例如三乙氧基硼氫化鈉或氰基硼氫化鈉)於溶劑(諸如鹵化烴(例如二氯甲烷)或醇(諸如乙醇))中必要時在酸(諸如乙酸)存在下在大約環境溫度下之還原胺化來將醛基(-CHO)轉化成胺基(-CH2 NR’R”))。
在另一實例中，可藉由使用威悌或瓦茲沃斯-艾蒙士反應使用適當磷烷或膦酸酯在熟習此項技術者已知之標準條件下將醛基轉化成烯基(-CH=CHR’)。
可藉由使用二異丁基氫化鋁於合適溶劑(諸如甲苯)中還原酯基(諸如–CO2 Et)或腈(-CN)來獲得醛基。替代地，可藉由使用熟習此項技術者已知之任何合適氧化劑將醇基氧化來獲得醛基。
取決於R之性質，可藉由酸或鹼催化之水解來將酯基(-CO2 R’)轉化成對應酸基團(-CO2 H)。若R為三級丁基，則可例如藉由用有機酸(諸如三氟乙酸)在水性溶劑中處理，或藉由用無機酸(諸如鹽酸)在水性溶劑中處理來達成酸催化之水解。
可藉由與適當胺在合適偶合劑(諸如HATU)存在下於合適溶劑(諸如二氯甲烷)中反應來將羧酸基團(-CO2 H)轉化成醯胺(CONHR’或-CONR’R”)。
在另一實例中，可藉由轉化成對應醯氯(-COCl)接著進行阿恩特-艾斯特爾特合成來藉由一個碳將羧酸同系化(亦即-CO2 H至–CH2 CO2 H)。
在另一實例中，可自對應酯(例如-CO2 R’)或醛(-CHO)藉由使用例如複合金屬氫化物(諸如鋁氫化鋰)之二***或四氫呋喃溶液或硼氫化鈉於溶劑(諸如甲醇)中之還原來產生-OH基團。替代地，可藉由將對應酸(-CO2 H)還原，使用例如鋁氫化鋰於溶劑(諸如四氫呋喃)中，或藉由使用硼烷於溶劑(諸如四氫呋喃)中，來製備醇。
可使用熟習此項技術者已知之條件將醇基團轉化成脫離基諸如鹵素原子或磺醯氧基(諸如烷基磺醯氧基(例如三氟甲基磺醯氧基)或芳基磺醯氧基(例如對甲苯磺醯氧基))。例如，可將醇與亞硫醯氯於鹵化烴(例如二氯甲烷)中反應以產生對應氯化物。反應中亦可使用鹼(例如三乙胺)。
在另一實例中，可藉由將酚或醯胺與醇於溶劑(諸如四氫呋喃)中在膦(例如三苯基膦)及活化劑(諸如二乙基偶氮二羧酸鹽、二異丙基偶氮二羧酸鹽或二甲基偶氮二羧酸鹽)存在下偶合來將醇、酚或醯胺基團烷化。替代地，可藉由去質子化使用合適鹼(例如氫化鈉)之接著後續添加烷化劑(諸如烷基鹵化物)來達成烷化。
可藉由用鹼(例如鋰基鹼，諸如正丁基或三級丁基鋰)視情況在低溫(例如大約-78℃)下於溶劑(諸如四氫呋喃)中處理，然後以親電子劑淬滅以引入所要取代基來使化合物中之芳族鹵素取代基經歷鹵素-金屬交換。因此，舉例而言，可藉由使用N,N-二甲基甲醯胺作為親電子劑來引入甲醯基。可替代地使芳族鹵素取代基經歷金屬(例如鈀或銅)催化之反應以引入例如酸、酯、氰基、醯胺、芳基、雜芳基、烯基、炔基、硫代或胺基取代基。可採用之合適程序包括赫克(Heck)、鈴木(Suzuki)、施蒂勒(Stille)、布赫瓦爾德(Buchwald)或哈特維希(Hartwig)描述之程序。
芳族鹵素取代基亦可在與適當親核劑(諸如胺或醇)反應之後經歷親核置換。有利的是，此一反應可在高溫下在微波照射存在下進行。 分離方法
在各示範性流程中，使反應產物彼此分離或與起始物質分離為有利的。各步驟或一系列步驟之所要產物均藉由此項技術中常用之技術來分離或純化(下文稱為分離)至所要的均勻性程度。通常，此類分離涉及多相萃取、自溶劑或溶劑混合物結晶或研磨、蒸餾、昇華或層析。層析可涉及多種方法，包括例如：反相及正相；尺寸排阻；離子交換；超臨界流體；高壓、中壓及低壓液相層析法及設備；小規模分析；模擬移動床(SMB)及製備型薄層或厚層層析，以及小規模薄層及急驟層析技術。
另一類分離方法涉及以一試劑處理混合物，該試劑經選擇以結合於所要產物、未反應起始物質、反應副產物或其類似物或以其他方式使其可分離。此類試劑包括吸附劑或吸收劑諸如活性碳、分子篩、離子交換樹脂或其類似物。替代地，試劑可為酸(在鹼性物質之情況下)、鹼(在酸性物質之情況下)、結合試劑諸如抗體、結合蛋白、選擇性螯合劑諸如冠醚、液體/液體離子萃取試劑(LIX)或其類似物。
適當分離方法之選擇取決於所涉及之物質之性質。實例性分離方法包括沸點及分子量(在蒸餾及生化中)、存在或不存在極性官能基(在層析法中)、材料在酸性及鹼性媒介物中之穩定性(在多相萃取中)及其類似者。熟習此項技術者將採用最有可能達成所要分離的技術。
可藉由熟習此項技術者熟知之方法，諸如藉由層析法或分步結晶法，根據物理化學差異，將非鏡像異構混合物分離成其個別非鏡像異構物。鏡像異構物可藉由以下方法分離：藉由與適合的光學活性化合物(例如掌性助劑，諸如掌性醇或莫氏酸性氯化物(Mosher’s acid chloride))反應，將鏡像異構混合物轉變成非鏡像異構混合物，分離非鏡像異構物，且將個別非鏡像異構物轉化(例如水解)成相應之純鏡像異構物。同樣，一些本發明之化合物可為構型異構物(例如經取代聯芳)且被視為本發明之一部分。鏡像異構物亦可藉由使用掌性HPLC管柱或超臨界流體層析法來分離。
單一立體異構物(實質上不含其立體異構物)，例如鏡像異構物可藉由使用諸如形成非鏡像異構物之方法使用光學活性解析劑來解析外消旋混合物而獲得(Eliel, E.及Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994；Lochmuller, C. H., J. Chromatogr., 113(3):283-302 (1975))。本發明之掌性化合物之外消旋混合物可藉由任何合適方法分離及單離，該方法包括：(1)以掌性化合物形成離子性非鏡像異構鹽並藉由分段結晶或其他方法分離，(2)以掌性衍生試劑形成非鏡像異構化合物，分離非鏡像異構物，並轉化成純立體異構物，及(3)直接在掌性條件下分離實質上純或增濃之立體異構物。參見：Drug Stereochemistry, Analytical Methods and Pharmacology, Irving W. Wainer編, Marcel Dekker, Inc., New York (1993)。
可藉由使諸如馬錢子鹼(brucine)、奎寧(quinine)、麻黃鹼(ephedrine)、番木鼈鹼(strychnine)、α-甲基-β-苯基乙胺(***(amphetamine))及其類似物之鏡像異構純的掌性鹼與帶有諸如羧酸及磺酸之酸性官能基之不對稱化合物反應，來形成非鏡像異構鹽。該等非鏡像異構鹽可藉由分段結晶或離子層析來誘導分離。關於分離胺基化合物之光學異構物，添加掌性羧酸或磺酸(諸如樟腦磺酸、酒石酸、杏仁酸或乳酸)可引起形成非鏡像異構鹽。
替代地，使欲解析之受質與掌性化合物之一種鏡像異構物反應以形成非鏡像異構對(Eliel, E.及Wilen, S., Stereochemistry of Organic Compounds, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994, 第322頁)。可藉由使不對稱化合物與鏡像異構純之掌性衍生化試劑(諸如薄荷腦基衍生物)反應來形成非鏡像異構化合物，隨後分離非鏡像異構物並水解得到純或濃化之鏡像異構物。確定光學純度之方法涉及在鹼或莫舍酯(乙酸α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯酯)(Jacob, J. Org. Chem. 47:4165 (1982))存在下製備外消旋混合物之掌性酯(諸如薄荷酯，例如氯甲酸(-)薄荷酯)，及關於兩種構型異構鏡像異構物或非鏡像異構物之存在分析NMR光譜。構型異構化合物之穩定非鏡像異構物可遵循用於分離構型異構萘基-異喹啉之方法(WO 96/15111，其以引用之方式併入本文)，藉由正相及逆相層析分離並單離。藉由方法(3)，可藉由使用掌性固定相進行層析來分離兩種鏡像異構物之外消旋混合物(Chiral Liquid Chromatography W. J. Lough編, Chapman and Hall, New York, (1989)；Okamoto, J. of Chromatogr. 513:375-378 (1990))。可藉由用於辨識具有不對稱碳原子之其他掌性分子之方法(諸如旋光度及圓二色性)，來辨識濃化或純化之鏡像異構物。掌性中心及鏡像異構物之絕對立體化學可藉由x射線檢晶體來確定。
位置異構物及其合成之中間物可藉由層析法諸如NMR及分析HPLC來觀測。對於相互轉化之能量障壁足夠高的某些化合物，E及Z異構物可例如藉由製備型HPLC來分離。 醫藥組成物及投與
本發明所考慮之化合物為JAK激酶抑制劑，諸如JAK1抑制劑，且可用於治療若干疾病，例如炎性疾病，諸如氣喘。
據此，另一實施例提供含有本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑之醫藥組成物或藥劑，以及使用本發明之化合物製備此類組成物及藥劑之方法。
在一個實例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽可藉由在環境溫度下，在適當pH下，且在所要的純度下與生理上可接受之載劑(亦即在用於生藥投與形式之劑量及濃度下對接受者無毒的載劑)混合來調配。調配物之pH值主要視特定用途及化合物濃度而定，但通常在約3至約8範圍內之任一處。在一個實例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽係於pH 5之乙酸鹽緩衝液中調配。在另一實施例中，本發明之化合物為無菌的。該化合物可例如呈固體或非晶組成物、呈凍乾調配物或呈水溶液儲存。
組成物以與良好醫學規範一致之方式調配，給藥及投與。在此情況下考慮之因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床狀況、病症起因、藥劑遞送位點、投與方法、投與時程及醫學從業者已知之其他因素。
應理解，任何特定患者之具體劑量水準取決於多種因素，包括所採用之具體化合物之活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、膳食、投與時間、投與途徑、***速率、藥物組合及經歷治療之特定疾病之嚴重性。給藥之最佳劑量水準及頻率將藉由臨床試驗來確定，如醫藥技術中所需的。一般而言，以單一劑量或分劑量之形式，經口投與之每日劑量範圍應在每公斤人類體重約0.001 mg至約100 mg，經常每公斤0.01 mg至約50 mg，例如每公斤0.1至10 mg之範圍內。一般而言，以單一劑量或分劑量之形式，用於吸入投與之每日劑量範圍應在每公斤人類體重約0.1 µg至約1 mg，較佳每公斤0.1 µg至50 µg之範圍內。另一方面，在一些情況下使用在此等臨限之外的劑量可為必要的。
本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽可藉由任何合適方式投與，包括經口、局部(包括經頰及舌下)、經直腸、經***、經皮、腸胃外、皮下、腹膜內、肺內、皮內、鞘內、硬膜外、吸入及鼻內以及(必要時，針對局部治療)病灶內投與。非經口輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投與。在一些實施例中，採用吸入投與。
本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽可以任何便利的投與形式投與，例如錠劑、粉劑、膠囊、***錠、顆粒劑、溶液、分散劑、懸浮液、糖漿、噴霧劑、蒸氣、栓劑、凝膠、乳液、貼片等。此類組成物可含有醫藥製劑中習知的組分，例如稀釋劑(例如，葡萄糖、乳糖或甘露醇)、載劑、pH調節劑、緩衝液、甜味劑、增積劑、穩定劑、界面活性劑、潤濕劑、潤滑劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑、抗氧化劑、乳濁劑(opaquing agent)、助滑劑、加工助劑、著色劑、芳香劑、調味劑、其他已知添加劑、以及另外活性劑。
適合載劑及賦形劑係熟習此項技藝者已知的且詳細描述於Ansel, Howard C.等人, Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2004；Gennaro, Alfonso R等人. Remington: The Science and Practice of Pharmacy. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2000；及Rowe, Raymond C. Handbook of Pharmaceutical Excipients. Chicago, Pharmaceutical Press, 2005。例如，載劑包括溶劑、分散媒介物、包衣、界面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如，抗細菌劑、抗真菌劑)、等滲劑、吸收延遲劑、鹽、防腐劑、藥物、藥物穩定劑、凝膠、黏合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、染料、類似這樣的物質及其組合，如一般熟習此項技術者已知的(參見例如Remington’s Pharmaceutical Sciences, 第1289-1329頁, 1990)。除非任何習知載劑與活性成分不相容，否則亦涵蓋其在治療或醫藥組成物中之使用。示範性賦形劑包括磷酸二鈣、甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂或其組合。醫藥組成物可包含任何類型的載劑或賦形劑，其取決於欲以固體、液體、還是氣溶膠形式投與，以及此類投與途徑是否需要為無菌的。
例如，用於經口投與之錠劑及膠囊可為單位劑量呈現形式，且可含有習知賦形劑諸如黏合劑，例如糖漿、***膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠或聚乙烯吡咯啶酮；填充劑，例如乳糖、糖、玉米澱粉、磷酸鈣、山梨醇或甘胺酸；壓錠潤滑劑，例如硬脂酸鎂、滑石、聚乙二醇或二氧化矽；崩散劑，例如馬鈴薯澱粉；或可接受之潤濕劑，諸如月桂基硫酸鈉。錠劑可根據正規醫藥實踐熟知之方法來包衣。經口液體製劑可為例如水性或油性懸浮液、溶液、乳液、糖漿或酏劑之形式，或可呈現為用於在使用之前以水或其他合適媒劑復水之乾燥產物。此類液體製劑可含有習知添加劑諸如懸浮劑，例如，山梨醇、糖漿、甲基纖維素、葡萄糖糖漿、明膠、氫化食用脂肪；乳化劑，例如，卵磷脂、山梨糖醇酐單油酸酯或***膠；非水性媒劑(其可包括食用油)，例如，杏仁油、分餾椰子油、油性酯諸如甘油、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如，對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯或山梨酸；及需要時，習知調味劑或著色劑。
對於向皮膚局部塗敷，可將化合物製成霜劑、洗劑或軟膏。可用於藥物之霜劑或軟膏調配物為此項技術中熟知之習知調配物，例如諸如英國藥典之醫藥學標準教科書中所述。
本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽亦可調配用於例如呈鼻噴霧劑吸入或者乾燥粉劑或氣溶膠吸入器。對於藉由吸入遞送，該化合物通常為微粒子形式，其可藉由多種技術包括噴霧乾燥、冷凍乾燥及微粒化來製備。氣溶膠產生可使用例如壓力驅動噴射霧化器或超音波霧化器，諸如藉由使用推進劑驅動制量氣溶膠或無推進劑投與來自例如吸入膠囊或其他「乾燥粉劑」遞送系統之微粒化化合物來進行。
例如，本發明之組成物可製備成用於自噴霧器遞送之懸浮液或於液體推進劑中例如用於加壓計量吸入器(PMDI)之氣溶膠。合適用於PMDI之推進劑為技術人員已知的，且包括CFC-12、HFA-134a、HFA-227、HCFC-22 (CCl2 F2 )及HFA-152 (CH4 F2 及異丁烷)。
在一些實施例中，本發明之組成物為用於使用乾燥粉劑吸入器(DPI)遞送至乾燥粉劑形式。DPI之許多類型為已知的。
用於藉由投與遞送之微粒可與幫助遞送及釋放之賦形劑調配。例如，在乾燥粉劑調配物中，微粒可與幫助自DPI流動至肺中的大載劑粒子調配。合適之載劑粒子為已知的，且包括乳糖粒子；其可具有例如大於90 μm之質量平均氣動直徑。
在基於氣溶膠之調配物之情況下，實例為： 本發明之化合物*     24 mg/罐 卵磷脂，NF液體濃度    1.2 mg/罐 三氯氟甲烷，NF     4.025 g/罐 二氯二氟甲烷，NF  12.15 g/罐。 *或其醫藥學上可接受之鹽
本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽可取決於所使用之吸入器系統如所述進行給藥。除化合物之外，投與形式可另外含有如上文所述之賦形劑或例如推進劑(例如，在制量氣溶膠之情況下之Frigen)、表面活性物質、乳化劑、穩定劑、防腐劑、調味劑、填充劑(例如，在粉劑吸入器之情況下之乳糖)或(適當時)另外活性化合物。
出於吸入之目的，使用適於患者之吸入技術，大量可產生且投與最佳粒子大小之氣溶膠的系統可供使用。對於制量氣溶膠，除使用接頭(間隔物、擴張器)及梨形容器(例如Nebulator®、Volumatic®)及發射噴氣噴霧劑之自動裝置(Autohaler®)之外，尤其在粉劑吸入器之情況下，許多技術方案可供使用(例如，Diskhaler®、Rotadisk®、Turbohaler®或吸入器，例如，如美國專利第5,263,475號中所述，該專利以引用之方式併入本文)。此外，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽可於多腔室裝置中遞送，因此允許遞送組合藥劑。
該化合物或其醫藥學上可接受之鹽亦可於無菌媒介物中腸胃外投與。取決於所使用之媒劑及濃度，該化合物可懸浮於媒劑中或溶解於媒劑中。有利的是，可將佐劑諸如局部麻醉劑、防腐劑或緩衝劑溶解於媒劑中。 靶向吸入型藥物遞送
本發明之化合物可用於靶向吸入遞送。用於藉由局部(吸入)投與而向肺遞送之藥物之最佳化最近被評述(Cooper, A. E.等人, Curr. Drug Metab. 2012, 13, 457-473)。
由於遞送裝置之限制，吸入型藥物之劑量可能為有限人類劑量，其需要具有良好肺藥物動力學特性之高效分子。針對所關注之目標之高效能對於吸入型藥物來說特別重要，其歸因於諸如可自吸入器單次噴出所遞送之藥物之量有限，及與肺中高氣溶膠負擔相關之安全性考量(例如，咳嗽或刺激)之因素。例如，在一些實施例中，在諸如本文所述之JAK1生化檢定中約0.5 nM或更小之Ki及在諸如本文所述之JAK1依賴性基於細胞之檢定中約20 nM或更小之IC50可為吸入型JAK1抑制劑所要的。在其他實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之計劃人類劑量至少兩倍小於此項技術中已知之計劃人類劑量。據此，在一些實施例中，本文所述之化合物(或其醫藥學上可接受之鹽)顯示此類效能值。以下程序用於評價標的化合物用作吸入型藥物之潛能。
IL13傳訊。IL13傳訊在氣喘發病機制中強烈相關。IL13為需要活性JAK1來傳訊的細胞介素。因此，JAK1之抑制亦抑制IL13傳訊，其可為氣喘患者提供益處。動物模型(例如，小鼠模型)中IL13傳訊之抑制可為人類氣喘患者預測將來的益處。因此，對於吸入型JAK1抑制劑來說顯示在動物模型中IL13傳訊之抑制可為有益的。量測此類抑制之方法為此項技術中已知的。例如，如本文所討論且此項技術已知，已知JAK1依賴性STAT6磷酸化將為IL13刺激之下游結果。據此，在一些實施例中，本文所述之化合物(或其醫藥學上可接受之鹽)顯示肺pSTAT6誘導之抑制。為了檢查對pSTAT6水準之藥效動力學作用，將本發明之化合物與IL13向雌性Balb/c小鼠共同鼻內給藥。將化合物調配於0.2% (v:v) Tween 80之鹽水溶液中且就在投與之前與IL13 1:1 (v:v)混合。藉由將固定體積(50 µL)由移液管直接分配至鼻孔中以達成目標劑量水準(3 mg/kg、1 mg/kg、0.3 mg/kg、0.1 mg/kg)來向輕微麻醉(異氟醚)小鼠投與鼻內劑量。給藥後0.25 h，藉由心臟穿刺手機血液樣本(約0.5 mL)，且藉由離心得到血漿(1500 g，10 min，+4℃)。將肺以冷卻至磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)灌注，稱重且於液氮中速凍。將所有樣本在ca. -80℃下儲存直至用於分析。將解凍之肺樣本稱重且在為每公克組織添加2 mL HPLC級水之後使用Omni-Prep球磨機(Omni-Prep Bead Ruptor)在4℃下勻化。以三體積含有吐魯必他胺(Tolbutamide, 50 ng/mL)及拉貝他樂(Labetalol, 25 ng/mL)之乙腈作為分析內標準藉由蛋白沉澱提取血漿及肺樣本。在渦旋混合且在3200 g及4℃下離心30分鐘之後，以HPLC級水於96孔盤中將上清液適當稀釋(例如，1:1 v:v)。針對一系列基質匹配校準及品質控制標準物，藉由LC-MS/MS檢定血漿及肺樣本之代表性等分試樣之母體化合物。藉由以測試化合物摻加對照Balb/c小鼠血漿或肺均質物(2:1於HPLC級水中)且如針對實驗樣本所述進行提取來製備標準物。將肺:血漿比率確定為取樣時間(0.25h) 之平均肺濃度(µM)與平均血漿濃度(µM)之比。
為了量測pSTAT6水準，將小鼠肺在-80℃下冷凍儲存直至分析且於0.6 ml冰冷的細胞溶解緩衝液(Cell Signalling Technologies, 目錄號9803S)中勻化，該細胞溶解緩衝液補充有1 mM PMSF及蛋白酶(Sigma Aldrich, 目錄號P8340)與磷酸酶(Sigma Aldrich, 目錄號P5726及P0044)抑制劑之混合物。將樣本在4℃下以16060 x g離心4分鐘以移除組織碎屑且使用Pierce BCA蛋白檢定套組(目錄號23225)確定均質物之蛋白濃度。將樣本於冰冷的蒸餾水中稀釋至蛋白濃度為5 mg/ml，且藉由Meso Scale Discovery電化學發光免疫檢定來檢定pSTAT6水準。簡言之，將5 μl/孔150 μg/ml STAT6捕獲抗體(R&D Systems, 目錄號MAB 2169)塗佈至96孔Meso Scale Discovery高結合盤(目錄號L15XB-3)且在室溫下空氣乾燥5小時。將盤藉由添加150 μl/孔30 mg/ml Meso Scale Discovery阻斷劑A (目錄號R93BA-4)並在室溫下於微盤振盪器上孵育2小時來阻斷。將阻斷之盤以Meso Scale Discovery TRIS洗滌緩衝液(目錄號R61TX-1)洗滌4次，接著轉移50 μl/孔肺均質物以達成250 μg/孔之蛋白裝載。將檢定盤在4℃下孵育隔夜且以TRIS洗滌緩衝液洗滌4次，之後添加25 μl/孔2.5 μg/ml磺基標籤標記之pSTAT6偵測抗體(BD Pharmingen, 目錄號558241)在室溫下於微盤振盪器上達2小時。將盤以TRIS洗滌緩衝液洗滌4次且添加150 μl/孔1X Meso Scale Discovery讀取緩衝液T (目錄號R92TC-1)。藉由在Meso Scale Discovery SECTOR S 600儀器上偵測電化學發光來定量肺均質物pSTAT6水準。
JAK及JAK2抑制 抑制JAK1及JAK2二者之化合物潛在可用於治療不同類型之氣喘。JAK1與JAK2之間的選擇性可對於吸入型JAK1抑制劑來說亦是重要的。例如，GMCSF (顆粒球-巨噬細胞集落刺激因子)為排外地透過JAK2傳訊之細胞介素。GMCSF活性之中和與肺中肺泡蛋白質沉著症(pulmonary alveolar proteinosis, PAP)相關。然而，次最大JAK2抑制似乎與PAP無關。因此，即使適度JAK1對JAK2選擇性或對JAK1及JAK2之近似等效抑制也可在避免GMCSF路徑之完全抑制及避免PAP為有益的。例如，在某些實施例中，對JAK1及JAK 2之效果均等的化合物為期望的。在其他實施例中，具有對於JAK1優於JAK2之約2x-5x選擇性的化合物可對於吸入型JAK1抑制劑為有益的。據此，在一些實施例中，本文所述之化合物(或其醫藥學上可接受之鹽)顯示此類選擇性。量測JAK1及JAK2選擇性之方法為此項技術中已知的，且資訊亦可見於本文實例中。
激酶剖析。此外，對於吸入型JAK1或JAK1/JAK2抑制劑來說選擇性優於一或多種其他激酶可為所欲的以減少由於脫靶激酶路徑抑制所致之潛在毒性之可能性。因此，諸如在可得自使用Adapta™篩選方案檢定條件(2016年7月29日修訂)、LanthaScreen™ Eu激酶結合檢定篩選方案及檢定條件(2016年6月7日修訂)及/或Z’LYTE™篩選方案及檢定條件(2016年9月16日修訂)之ThermoFisher Scientific之SelectScreen™生化激酶剖析服務的方案中，對於吸入型JAK1抑制劑來說對一大組非JAK激酶具有選擇性亦可為有益的。例如，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽表現出對於JAK1對一組非JAK激酶至少50倍選擇性。據此，在一些實施例中，本文所述之化合物(或其醫藥學上可接受之鹽)顯示此類選擇性。
細胞毒性檢定。肝細胞毒性(一般毒性或未知機制之細胞毒性)為潛在藥物包括吸入型藥物之非所要特徵。對於吸入型JAK1或JAK1/JAK2抑制劑來說具有針對各種細胞類型之低固有細胞毒性可為有益的。用於評定細胞毒性之典型細胞類型包括初代細胞諸如人類幹細胞及增殖性已建立之細胞株諸如Jurkat及HEK-293。據此，在一些實施例中，本文所述之化合物(或其醫藥學上可接受之鹽)顯示此類值。量測細胞毒性之方法為此項技術中已知的。在一些實施例中，如下測試本文所述之化合物： (a) 將Jurkat及HEK293T細胞以次匯合密度維持於T175燒瓶中。將細胞以450個細胞/45 µl培養基鋪板於Greiner 384孔黑色/澄清組織培養物處理之盤中。(Greiner目錄號781091)。在分配細胞之後，將盤在室溫下平衡30分鐘。在室溫下30分鐘之後，將細胞在37℃下於CO2 及濕度控制孵育器中孵育隔夜。第二天，將細胞以在最高濃度為50 µM之10點劑量-反應曲線之情況下稀釋於100% DMSO (細胞上最終DMSO濃度= 0.5%)之化合物處理。然後將細胞及化合物在37℃下於CO2 及濕度控制孵育器中孵育72小時隔夜。孵育72小時之後，使用CellTiterGlo® (Promega登錄號G7572)對所有孔量測活力。在室溫下孵育20分鐘之後，於使用發光模式之EnVision™ (Perkin Elmer Life Sciences)上讀取盤； (b) 使用人類初代肝細胞：呈於DMSO中之10 mM溶液製備測試化合物。此外，呈於DMSO中之10 mM溶液製備陽性對照諸如氯普麻(Chlorpromazine)。通常使用7點劑量反應曲線以2倍稀釋評定測試化合物。通常，所測試之最大濃度為50-100 µM。通常藉由測試化合物之溶解度指示最大濃度。將低溫保存之初代人類肝細胞(BioreclamationIVT)(批號IZT)於InVitroGro™ HT解凍培養基(BioreclamationIVT)中在37℃下解凍，集結成粒且再懸浮。藉由台盼藍排除評定肝細胞活力，且將細胞以13,000個細胞/孔於InVitroGro™ CP鋪板培養基中鋪板於黑色壁BioCoat™膠原蛋白384孔盤(Corning BD)中，該鋪板培養基補充有1% Torpedo™抗生素混合物(BioreclamationIVT)及5%胎牛血清。將細胞之處理之前孵育隔夜達18小時(37℃、5% CO2 )。孵育18小時之後，將鋪板培養基移除且將肝細胞以稀釋於含有1% Torpedo™抗生素混合物及1% DMSO (無血清條件)之InVitroGro™ HI孵育培養基中之化合物處理。將肝細胞以測試化合物以諸如0.78、1.56、3.12、6.25、12.5、25及50 µM之濃度以最終體積50 µL處理。檢定中包括陽性對照(例如，氯普麻)，通常濃度與測試化合物相同。將另外的細胞以1% DMSO處理作為媒劑對照。將所有處理持續48小時時間段(在37℃、5% CO2 下)，且一式三份進行各處理條件。化合物處理48小時之後，將CellTiter-Glo®細胞活力檢定(Promega)作為終點檢定用於量測ATP含量作為細胞活力之確定。根據製造商說明書進行檢定。在EnVision™多盤讀取器(PerkinElmer, Waltham, MA, USA)上確定發光。將發光資料正規化至媒劑(1% DMSO)對照孔。藉由以可變希爾(Hill)斜率之對數轉型之抑制劑濃度(7點連續稀釋，包括媒劑)對正規化之反應之非線性迴歸產生抑制曲線及IC50 估計值，其中最大值及最小值分別限於恆定值100及0 (GraphPad Prism™, GraphPad Software, La Jolla, CA, USA)。
hERG抑制。hERG (人類ether-à-go-go相關基因)鉀通道之抑制可引起長QT症候群及心律不整。儘管預期吸入型JAK1或JAK1/JAK2抑制劑之血漿水準為低的，但是經由肺吸收離開肺至血流中之肺沉積化合物將直接循環至心臟。因此，吸入型JAK1抑制劑之局部心臟濃度可短暫地高於局部血漿水準，尤其是就在給藥之後。因此，使吸入型JAK1抑制劑之hERG抑制最小化可為有益的。例如，在一些實施例中，大於無藥物血漿Cmax 30x的hERG IC50為較佳的。據此，在一些實施例中，本發明之化合物(或其醫藥學上可接受之鹽)顯示在諸如以下條件下hERG抑制最小： (a) 使用hERG 2pt自動模片鉗條件以檢查化合物對哺乳動物細胞中表現之hERG之體外作用，在室溫下使用QPatch HT® (Sophion Bioscience A/S, Denmark)進行評估，其為自動平行模片鉗系統。在一些情況下，僅在一或兩個濃度諸如1或10 uM下測試化合物。在其他情況下，建立更廣泛的濃度反應關係以實現IC50之估計。例如，測試化合物濃度經選擇成以半對數增量跨越大約10-90%抑制之範圍。在二或更多個細胞(n ≥ 2)中測試各測試物品濃度。暴露於各測試物品濃度之持續時間為最少3分鐘；及/或 (b) WO 2014/074775中在以「對哺乳動物細胞中表現之選殖hERG鉀通道之作用」之實例中所述之條件，ChanTest™，Charles River Company，方案具有以下改變：將穩定表現hERG之細胞保持在-80 mV。使用以固定波幅之脈衝模式量測由化合物所致之hERG鉀電流之起效及穩定狀態抑制(調節前置脈衝：+20 mV達1 s；再極化測試ramepto -90 mV (-0.5 V/s)，以5 s間隔重複)。各記錄以最終應用超大濃度參考物質E-4021 (500 nM)(Charles River Company)結束。自資料中離線數位減去其餘非抑制電流以確定測試物質對於hERG抑制之效能。
CYP (細胞色素P450)抑制檢定。CYP抑制不可為吸入型JAK1或JAK1/JAK2抑制劑之所要特徵。例如，可逆的或時間依賴性CYP抑制劑可引起其自身血漿水準或者其他共同投與之藥物(藥物-藥物相互作用)之血漿水準之非所要的增加。此外，時間依賴性CYP抑制有時由母體藥物至反應性代謝物之生物轉變引起。此類反應性代謝物可共價修飾蛋白，可能引起毒性。因此，使可逆的及時間依賴性CYP抑制最小可對於吸入型JAK1抑制劑而言為有益的。據此，在一些實施例中，本發明之化合物(或其醫藥學上可接受之鹽)顯示最小或沒有可逆及/或時間依賴性CYP抑制。量測CYP抑制之方法為此項技術中已知的。使用先前報導之方法(Halladay等人, Drug Metab. Lett. 2011, 5, 220-230)，使用彙集(n=150)人類肝微粒體(Corning, Tewksbury, MA)，在0.16-10 uM化合物之濃度範圍內評定本文所述之化合物之CYP抑制。孵育持續時間及蛋白濃度取決於CYP同功型及所評定之探針受質/代謝物。使用以下受質/代謝物以及針對各CYP之孵育時間及蛋白濃度：CYP1A2，非那西汀/乙醯胺酚，30 min，0.03 mg/ml蛋白；CYP2C9，華法林/7-羥基華法林，30 min，0.2 mg/ml蛋白；CYP2C19，美芬妥英(mephenytoin)/4-羥基美芬妥英，40 min，0.2 mg/ml蛋白；CYP2D6，右美沙芬(dextromethorphan)/右啡烷(dextrorphan)，10 min，0.03 mg/ml蛋白；CYP3A4，咪達唑侖(midazolam)/1-羥基咪達唑侖，10 min，0.03 mg/ml蛋白；及CYP3A4，睪固酮/6-羥基睪固酮，10 min，0.06 mg/ml蛋白。這些條件先前被確定為以CYP特異性代謝物之線性形成速率之形式。所有反應均以1 mM NADPH起始，且藉由添加含有適當穩定標記之內標準的0.1%甲酸之乙腈溶液來終止。藉由LC-MS/MS分析樣本
小鼠肺組織結合。肺組織之JAK1/JAK2抑制劑之高結合流份或百分比可為期望的，因為這可減少可用於抑制JAK1或JAK2之游離藥物的量。 (a) 使用一次性RED板藉由以下標準方案重複三次(n=3)執行組織結合實驗。最初，將個別藥物添加至組織均質物(pH 7.4)以實現1 µM最終濃度，且然後將300 µL藥物-組織均質物轉移至RED板之供體孔，該板預先裝載有受體孔中之500 µL磷酸鹽緩衝鹽水(133 mM)。用透氣膜密封RED板且將其置於振盪孵育器(450 rpm, VWR SymphonyTM )中在37ºC、5% CO2 下6 h。在孵育結束後，自RED裝置取出30 µL樣本等分試樣且使其與等體積組織均質物或緩衝液進行基質平衡，且然後立即用含有普萘洛爾或拉貝他樂之冰冷乙腈(樣本:乙腈1:4)作為內標準淬滅所得樣本。在Thermo Scientific Compact Digital MicroPlate振盪器上在500 rpm下震盪15 min後，然後使所有樣本均在3700 rpm下離心15 min (Beckman Coulter Allegra X 12R)，以去除血漿蛋白。隨後，收集上清液且然後用等體積水稀釋，之後進行LC-MS/MS分析。 (b) 在交替程序中，測試樣品與小鼠肺均質物之肺組織結合程度亦可藉由使用Pierce RED (快速平衡透析)裝置(Fisher Scientific 89811 & 89809)進行平衡透析來確定。製備化合物於DMSO中之10mM溶液且用DMSO稀釋至1 mM。將此1 mM之等分試樣(4 µL)添加至肺均質物(稀釋係數為1:9，肺組織:磷酸鉀緩衝液(0.05 M, pH 7.4))，以得到5 µM最終化合物孵育濃度，其中溶劑佔最終孵育體積之0.5% (v/v)。
對於各檢定，重複三次確定經結合肺組織之百分比。重複三次將肺均質物(200 µL)裝載到RED裝置插件之一側，且將350 µL磷酸鉀緩衝液裝載到另一側。密封RED裝置且將其在約37℃下在定軌振盪器(約150 rpm)上孵育4小時。
在孵育後，在分析之前，將肺均質物等分試樣(8 µL)及透析液等分試樣(72 µL)基質匹配(具有72 µL磷酸鹽緩衝液之肺均質物、具有8 µL肺均質物之透析液)。藉由添加160 µL含有內部標準之乙腈使蛋白自樣本沉澱。對在實驗開始時取樣之肺均質物等分試樣(t=0 min樣本)執行相同基質匹配及蛋白沉澱程序，以用於評估質量平衡。將經淬滅樣本離心(4000 rpm，30 min，4℃)且用水稀釋所得上清液(3:1 (v/v)，上清液:水)且藉由液相層析質譜檢定法分析樣本之親本化合物。
由透析液與均質物峰面積比率確定肺均質物中之未結合流份(fu)，考慮肺均質物稀釋(D)來校正，使得能夠使用以下等式評估全肺組織結合： 未經稀釋fu = (1/D) / [((1/表觀fu) - 1) + (1/D)] 經校正結合流份(%) = (1-未經稀釋fu)*100
動力學溶解度。為了減少肺中不溶性微粒物質之量，用於吸入型遞送之JAK1/JAK2抑制劑的良好水溶解度為期望的。在量測動力學溶解度之一程序中，將4 µL測試化合物之10 mM DMSO儲備溶液添加至Millipore Multiscreen® 96孔過濾板中之196 µL pH 7.4磷酸鹽緩衝鹽水溶液，以得到200 µM測試濃度及2%殘餘DMSO。用鋁密封膜密封過濾板且在室溫下震盪24小時，然後使該等混合物真空過濾到乾淨96孔板中。使用pH 7.4磷酸鹽緩衝鹽水溶液以2之係數稀釋濾液樣本，然後藉由超高效液相層析(UHPLC)使用化學發光氮偵測(CLND)及254 nm波長下之紫外光(UV)偵測來分析5 µL所得溶液。通常藉由CLND強度定量樣本濃度，該強度與化合物中氮之數目相關。主要使用UV偵測來證實樣本純度，除了測試樣本不含氮之少數情況。在彼等情況下，基於UV吸光度來收集化合物特異性校準曲線。然後使用此曲線確定樣本濃度。
親油性。親油性通常與潛在藥物之溶解度、吸收度、組織滲透性、蛋白結合、分佈、及ADME及PK特性相關。經計算logP (cLogP)為化合物在正辛醇與水之間的分配係數的對數(亦即log(正辛醇中化合物之濃度/水中化合物之濃度)，因此可為用於吸入型遞送之JAK1/JAK抑制劑的重要考慮因素。
肝粒線體穩定性。為了使吸入型JAK1/JAK2抑制劑之全身暴露最小化，對肝中之快速代謝進行最佳化可為有利的。在BioCel 1200液體處理工作台(Agilent Technologies, Santa Clara, CA)上執行肝粒線體穩定性檢定。將化合物(1.0 µM)在37℃下在100 µL含有100 mM磷酸鹽緩衝液(pH 7.4)及0.5 mg/mL肝粒線體及1 mM NADPH之反應混合物中孵育5 min。在不同時間間隔(0、20、40及60 min)下，取出20 µL反應混合物之等分試樣且將其與4個體積之含有0.1 μM普萘洛爾作為內部標準之乙腈(ACN)混合以終止代謝反應。然後將樣本在3250xg下離心40 min以去除沉澱蛋白。隨後將上清液轉移至新96孔板且用去離子水稀釋2倍，且然後使用與Agilent 1260 HPLC (Agilent Technologies, Santa Clara, CA)耦接之ABI Sciex 5500 QTRAP®質譜儀(Applied Biosystems, Foster City, CA)對齊進行LC-MS/MS分析。在不同時間點相對於對照(T=0 min)使用測試化合物與內部標準之峰面積比率計算其餘部分之百分比。參見B. Williamson, C. Wilson, G. Dagnell, RJ Riley. Harmonised high throughput microsomal stability assay.J. Pharmacol. Toxicol. Methods . 2017; 84 :31-36。
固相特性。對於預定經由乾燥粉劑吸入來遞送之化合物，亦需要能夠產生可微粒化至大小為1-5 µm的化合物之結晶形式。粒子大小為吸入式化合物之肺沉積之重要決定因素。通常將直徑小於5微米(µm)之粒子定義為可呼吸的。直徑大於5 µm之粒子更可能沉積於口咽且對應地不太可能沉積於肺中。此外，直徑小於1 µm之精細粒與較大粒子相比更可能保持懸浮於空氣中，且對應地更可能自肺呼出。因此，1-5 µm之粒徑可對於作用部位在肺中的吸入型藥物來說為有益的。用於量測粒子大小之典型方法包括雷射繞射及級聯衝擊。用於定義粒子大小之典型值包括： ●    D10、D50及D90。這些為指示分別10%、50%或90%樣本低於該值的粒徑量測值。例如，D50為3 µm指示50%樣本低於3。 ●    質量平均氣動直徑(MMAD)。MMAD為按質量計50%粒子較大且50%粒子較小時的直徑。MMAD為集中趨勢之量度。 ●    幾何標準偏差(GSD)。GSD為自MMAD之分散性之量值或氣動粒子大小分佈之分散之量度。
吸入型藥物之常見調配物為乾燥粉劑製劑，包括摻合有載劑諸如乳糖、具有或不具有額外添加劑諸如硬脂酸鎂之活性醫藥成分(API)。對於此調配物及其他調配物，對於API本身來說具有使其碾磨至1-5 µm之可呼吸粒子大小的性質可為有益的。應避免粒子之黏聚，其可藉由此項技術中已知之方法量測，諸如在不同壓力條件下檢查D90值。據此，在一些實施例中，本發明之化合物(或其醫藥學上可接受之鹽)可製備成在極少或沒有黏聚之情況下具有此一可呼吸粒子大小。
至於結晶度，對於吸入型藥物之一些調配物(包括乳糖摻合物)而言，使用具體晶體形式之API為重要的。結晶度及晶體形式可影響許多與吸入型藥物有關的參數，包括但不限於：隨時間推移之化學及氣動穩定性、與吸入型調配物組分諸如乳糖之相容性、吸濕性、肺滯留及肺刺激。因此，對於吸入型藥物而言，穩定的可再生晶體形式可為有益的。此外，用於將化合物碾磨至所要粒子大小之技術經常為高能的且可使低熔點結晶形式轉化成其他結晶形式或變得完全或部分非晶。熔點小於150℃之結晶形式可能不適合碾磨，而熔點小於100℃之結晶形式很可能不適合碾磨。因此，對於吸入型藥物來說熔點至少大於100℃，且理想地大於150℃可為有益的。據此，在一些實施例中，本文所述之化合物(或其醫藥學上可接受之鹽)顯示此類性質。
此外，使分子量最小可有助於減少吸入型JAK1抑制劑之有效劑量。較小的分子量使得每單位質量活性醫藥成分(API)之分子數較高。因此，尋找保留吸入型藥物之所有其他所要性質的最小分子量吸入型JAK1抑制劑可為有益的。
最後，該化合物需要在給定時間段內於肺中維持足夠濃度，以便能夠發揮出所要持續時間之藥理作用，且對於藥理靶標(其中該靶標之全身性抑制為非所要的)而言，具有低全身性暴露。肺對大分子(蛋白、肽)以及伴隨有短肺半衰期之小分子具有固有的高滲透性，因此可能需要透過修改化合物之一或多個特徵來減小肺吸收速率：使膜滲透性、最佳化pKa、cLogP、溶解度、溶解速率最小化。量測此類性質之方法為此項技術中已知的。
據此，在一些實施例中，本發明之化合物(或其醫藥學上可接受之鹽)有利地表現出上文特徵之一或多者。此外，在一些實施例中，本發明之化合物相對於此項技術中已知之化合物有利地表現出這些特徵之一或多者，這對於意欲作為經口藥物對吸入型之此項技術之化合物而言可尤其如此。例如，在吸入時具有快速經口吸收之化合物通常在肺中保留不良。 以詹納斯激酶抑制劑治療之方法及其用途
本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽抑制詹納斯激酶諸如 JAK1及/或JAK2激酶之活性。例如，化合物或其醫藥學上可接受之鹽抑制訊息傳遞及轉錄活化子(STAT)由JAK1激酶磷酸化以及STAT介導之細胞介素產生。本發明之化合物可用於透過細胞介素路徑諸如IL-6、IL-15、IL-7、IL-2、IL-4、IL-9、IL-10、IL-13、IL-21、G-CSF、IFNα、IFNβ或IFNγ路徑抑制細胞中JAK1激酶活性。據此，在一個實施例中提供一種將細胞與本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽接觸以抑制細胞中詹納斯激酶活性(例如，JAK1活性)之方法。
該等化合物可用於治療由異常的IL-6、IL-15、IL-7、IL-2、IL-4、IL9、IL-10、IL-13、IL-21、G-CSF、IFNα、IFNβ或IFNγ細胞介素傳訊引起之免疫病症。
據此，一個實施例包括用於療法中之本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，提供本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用於治療炎性疾病。進一步提供本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用於製備用於治療炎性疾病諸如氣喘之藥劑。亦提供本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療炎性疾病諸如氣喘。
另一實施例包括一種預防、治療患者之對詹納斯激酶活性諸如JAK1激酶活性之抑制有反應的疾病或疾患諸如氣喘或減小該疾病或疾患之嚴重性的方法。該方法可包括向患者投與治療有效量本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的步驟。在一個實施例中，對詹納斯激酶諸如JAK1激酶之抑制有反應的疾病或疾患為氣喘。
在一個實施例中，該疾病或疾患為癌症、中風、糖尿病、肝腫大、心血管疾病、多發性硬化、阿茲海默氏病、囊性纖維化、病毒性疾病、自體免疫疾病、動脈粥樣硬化、再狹窄、乾癬、類風濕性關節炎、炎性腸病、氣喘、過敏性病症、炎症、神經病症、激素相關疾病、與器官移植相關之疾患(例如，移植排斥)、免疫缺乏病症、破壞性骨病症、增殖性病症、傳染病、與細胞死亡相關之疾患、凝血酶誘發之血小板聚集、肝病、涉及T細胞活化之病理性免疫疾患、CNS病症或骨髓增生病症。
在一個實施例中，炎性疾病為類風濕性關節炎、乾癬、氣喘、炎性腸病、接觸性皮炎或遲發型過敏反應。在一個實施例中，自體免疫疾病為類風濕性關節炎、狼瘡或多發性硬化。
在另一實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽可用於治療肺病諸如纖維化肺病或間質性肺病(例如，間質性肺炎)。在一些實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽可用於治療特發性肺纖維化(IPF)、全身性硬化間質性肺病(SSc-ILD)、非特異性間質性肺炎(NSIP)、類風濕性關節炎相關之間質性肺病(RA-ILD)、類肉瘤病、過敏性肺炎或硬皮症後繼發於結締組織病之ILD (例如，多發性肌炎、皮肌炎、類風濕性關節炎、全身性紅斑性狼瘡(SLE)或混合結締組織疾病)。
在一個實施例中，癌症為乳癌、卵巢癌、子宮頸癌、***癌、睾丸癌、陰莖癌、生殖泌尿道癌、精細胞瘤、食道癌、喉癌、胃癌、胃癌、胃腸癌、皮膚癌、角質棘皮瘤、濾泡癌、黑色素瘤、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌、鱗狀肺癌、結腸癌、胰腺癌、甲狀腺癌、乳突癌、膀胱癌、肝癌、膽道癌、腎癌、骨癌、髓樣病症、淋巴樣病症、毛樣細胞癌、頰腔咽(口)癌、唇癌、舌癌、嘴癌、唾液腺癌、咽癌、小腸癌、結腸癌、直腸癌、肛門癌、腎癌、***癌、陰門癌、甲狀腺癌、大腸癌、子宮內膜癌、子宮癌、腦癌、中樞神經系統癌、腹膜癌、肝細胞癌、頭癌、頸癌、霍奇金氏病或白血病。
在一個實施例中，疾病為骨髓增生病症。在一個實施例中，骨髓增生病症為真性多血症、自發性血小板增多症、骨髓纖維化或慢性骨髓性白血病(CML)。
另一實施例包括本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽用於製造用於治療本文所述之疾病(例如，炎性病症、免疫病症或癌症)之藥劑之用途。在一個實施例中，本發明提供一種藉由靶向抑制JAK激酶諸如JAK1來治療如本文所述之疾病或疾患(例如，炎性病症、免疫病症或癌症)之方法。 組合療法
該等化合物可單獨或與其他用於治療之藥劑組合採用。醫藥組成物或給藥方案之第二或另外(例如，第三)化合物通常具有對本發明之化合物之互補活性，使得其不會不利地彼此影響。此類藥劑合適地以對預期之目的有效之量組合之形式存在。化合物可以一體式醫藥組成物形式一起投與或分開投與，且當分開投與時，此可同時或依序進行。此依序投與可在時間上接近或遠離。
例如，其他化合物可與本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽組合用於預防或治療炎性疾病諸如氣喘。組合療法之合適治療劑包括但不限於：腺苷A2A受體拮抗劑；抗感染劑；非類固醇糖皮質素受體(GR受體)促效劑；抗氧化劑；α2腎上腺素受體促效劑；CCR1拮抗劑；趨化介素拮抗劑(非CCR1)；皮質類固醇；CRTh2拮抗劑；DP1拮抗劑；甲醯基肽受體拮抗劑；組蛋白去乙醯酶活化劑；氯離子通道hCLCA1阻斷劑；上皮鈉通道阻斷劑(ENAC阻斷劑；細胞間黏附分子1阻斷劑(ICAM阻斷劑)；IKK2抑制劑；JNK抑制劑；暫態受體電位錨蛋白1 (TRPA1)抑制劑；布魯頓氏酪胺酸激酶(BTK)抑制劑(例如，芬魯替尼(fenebrutinib))；脾酪胺酸激酶(SYK)抑制劑；類胰蛋白酶-β抗體；ST2受體抗體(例如，AMG 282)；環氧化酶抑制劑(COX抑制劑)；脂肪加氧酶抑制劑；白三烯受體拮抗劑；雙α2腎上腺素受體促效劑/M3受體拮抗劑(MABA化合物)；MEK-1抑制劑；髓過氧化物酶抑制劑(MPO抑制劑)；蕈毒拮抗劑；p38 MAPK抑制劑；磷酸二酯酶PDE4抑制劑；磷脂酸肌醇3-激酶δ抑制劑(PI3-激酶δ抑制劑)；磷脂酸肌醇3-激酶γ抑制劑(PI3-激酶γ抑制劑)；過氧化體增殖物活化之受體促效劑(PPARγ促效劑)；蛋白酶抑制劑；視網酸受體調節劑(RARγ調節劑)；斯他汀；凝血脂素拮抗劑；TLR7受體促效劑；或血管舒張劑。
另外，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與以下組合：(1)皮質類固醇，諸如二丙酸阿氯米鬆(alclometasone dipropionate)、阿洛米松(amelometasone)、二丙酸倍氯米松(beclomethasone dipropionate)、布***(budesonide)、丙酸布替可特(butixocort propionate)、環索奈德(biclesonide)、丙酸可洛貝他索(clobetasol propionate)、去異丁醯基環索奈德(desisobutyrylciclesonide)、***(dexamethasone)、艾潑諾酯(etiprednol dicloacetate)、乙酸氟輕鬆(fluocinolone acetonide)、糠酸氟替卡松(fluticasone furoate)、丙酸氟替卡松(fluticasone propionate)、氯替潑諾(loteprednol etabonate)(局部)或糠酸莫美他松(mometasone furoate)；(2) β2-腎上腺素受體促效劑，諸如沙丁胺醇(salbutamol)、阿丁胺醇(albuterol)、特布他林(terbutaline)、非諾特羅(fenoterol)、比托特羅(bitolterol)、卡布特羅(carbuterol)、克倫特羅(clenbuterol)、匹布特羅(pirbuterol)、萊莫特羅(rimoterol)、特布他林、曲托喹酚(tretoquinol)、妥布特羅(tulobuterol)，及長效β2-腎上腺素受體促效劑，諸如奧西普那林(metaproterenol)、異丙特醇(isoproterenol)、異丙腎上腺素(isoprenaline)、沙美特羅(salmeterol)、茚達特羅(indacaterol)、福莫特羅(formoterol)(包括反丁烯二酸莫特羅)、阿福特羅(arformoterol)、卡莫特羅(carmoterol)、阿迪特羅(abediterol)、三苯乙酸維蘭特羅(vilanterol trifenate)或奧達特羅(olodaterol)；(3)皮質類固醇/長效β2促效劑組合產品，諸如沙美特羅/丙酸氟替卡松(Advair®，亦呈Seretide®銷售)、福莫特羅/布***(Symbicort®)、福莫特羅/丙酸氟替卡松(Flutiform®)、福莫特羅/環索奈德、福莫特羅/糠酸莫美他松、茚達特羅/糠酸莫美他松、三苯乙酸維蘭特羅/糠酸氟替卡松(BREO ELLIPTA)或阿福特羅/環索奈德；(4)抗副交感神經劑，例如，蕈毒-3 (M3)受體拮抗劑，諸如異丙托溴銨(ipratropium bromide)、噻托溴銨(tiotropium bromide)、阿地溴銨(aclidinium bromide)(LAS-34273)、格隆溴銨(glycopyrronium bromide)或蕪地溴銨(umeclidinium bromide)；(5) M3-抗副交感神經/β2-腎上腺素受體促效劑組合產品，諸如維蘭特羅/蕪地銨(Anoro® Ellipta®)、奧達特羅/噻托溴銨、格隆溴銨/茚達特羅(Ultibro®，亦呈Xoterna®銷售)、非諾特羅氫溴化物(fenoterol hydrobromide)/異丙托溴銨(Berodual®)、硫酸沙丁胺醇(albuterol sulfate)/異丙托溴銨(Combivent®)、反丁烯二酸福莫特羅/格隆溴銨(glycopyrrolate)或阿地溴銨/福莫特羅；(6)雙藥理學M3-抗副交感神經/β2-腎上腺素受體促效劑，諸如琥珀酸備芬特羅(batefenterol succinate)、AZD-2115或LAS-190792；(7)白三烯調節劑，例如，白三烯拮抗劑(諸如孟魯司特(montelukast)、紮魯司特(zafirulast)或普侖司特(pranlukast))、白三烯生物合成抑制劑(諸如齊留通(zileuton))或LTB4拮抗劑(諸如啊美盧班(amelubant))或FLAP抑制劑(諸如飛博拉泊(fiboflapon))，GSK- 2190915；(8)磷酸二酯酶-IV (PDE-IV)抑制劑(經口或吸入)，諸如羅氟司特(roflumilast)、西洛司特(cilomilast)、奧米司特(oglemilast)、洛利普蘭(rolipram)、替托司特(tetomilast)、AVE-8112、萊米司特(revamilast)、CHF 6001；(9)抗組織胺，例如，選擇性組織胺-1 (H1)受體拮抗劑諸如非索非那定(fexofenadine)、西替利嗪(citirizine)、氯雷他定(loratidine)或阿斯特米唑(astemizole)或雙H1/H3受體拮抗劑諸如GSK 835726或GSK 1004723；(10)鎮咳劑，諸如可待因(codeine)或右美沙芬(dextramorphan)；(11)稀痰劑，例如，N-乙醯基半胱胺酸或福多司坦(fudostein)；(12)去痰劑/黏液調節劑，例如，安嗽錠(ambroxol)、高滲溶液(例如，鹽水或甘露醇)或界面活性劑；(13)黏液溶解肽，例如，重組人類去氧核酸酶I (去氧核醣酶-α及rhDNase)或螺殺菌素(helicidin)；(14)抗生素，例如阿奇黴素(azithromycin)、妥布黴素(tobramycin)或氨曲南(aztreonam)；(15)非選擇性COX-1/COX-2抑制劑，諸如布洛芬(ibuprofen)或酮洛芬(ketoprofen)；(16) COX-2抑制劑，諸如塞來昔布(celecoxib)及羅非昔布(rofecoxib)；(17) VLA-4拮抗劑，諸如WO 97/03094及WO 97/02289中所述者，其各自以引用之方式併入本文；(18) TACE抑制劑及TNF-α抑制劑，例如抗TNF單株抗體諸如Remicade®及CDP-870及TNF受體免疫球蛋白分子，諸如Enbrel®；(19)基質金屬蛋白酶抑制劑，例如MMP-12；(20)人類嗜中性球彈性蛋白酶抑制劑，諸如BAY-85-8501或WO 2005/026124、WO 2003/053930及WO 2006/082412中所述之彼等者，其各自以引用之方式併入本文；(21) A2b拮抗劑，諸如WO 2002/42298中所述者，其以引用之方式併入本文；(22)趨化介素受體功能之調節劑，例如CCR3及CCR8之拮抗劑；(23)調節其他***類似物受體之作用之化合物，例如凝血脂素A2拮抗劑；DP1拮抗劑諸如拉羅匹侖(laropiprant)或阿莎匹侖(asapiprant)；CRTH2拮抗劑諸如OC000459、費維匹侖(fevipiprant)、ADC 3680或ARRY 502；(24) PPAR促效劑包括PPAR α促效劑(諸如非諾貝特(fenofibrate))、PPAR δ促效劑、PPAR γ促效劑諸如吡格列酮(pioglitazone)、羅格列酮(rosiglitazone)及巴格列酮(balaglitazone)；(25)甲基黃嘌呤諸如茶鹼或胺茶鹼及甲基黃嘌呤/皮質類固醇組合諸如茶鹼/布***(budesonide)、茶鹼/丙酸氟替卡松(fluticasone propionate)、茶鹼/環索奈德、茶鹼/糠酸莫美他松及茶鹼/丙酸倍氯米松(beclometasone dipropionate)；(26) A2a促效劑諸如EP1052264及EP1241176中所述者；(27) CXCR2或IL-8拮抗劑諸如AZD-5069、AZD-4721或達尼日新(danirixin)；(28) IL-R傳訊調節劑諸如kineret及ACZ 885；(29) MCP-1拮抗劑諸如ABN-912；(30) p38 MAPK抑制劑諸如BCT197、JNJ49095397、洛批莫德(losmapimod)或PH-797804；(31) TLR7受體促效劑諸如AZD 8848；(32) PI3-激酶抑制劑諸如RV1729或GSK2269557；(尼米拉利昔(nemiralisib))；(33)三組合產品諸如TRELEGY ELLIPTA (糠酸氟替卡松、蕪地溴銨及維蘭特羅)；或(34) TRPA1、BTK或SYK之小分子抑制劑。
在一些實施例中，本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與一或多種額外藥物組合使用，例如抗過渡增殖藥、抗癌藥、細胞生長抑制劑、細胞毒性劑、消炎劑或化學治療劑，諸如美國公開申請案第2010/0048557號中所揭示者，其以引用之方式併入本文。本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽亦可與輻射治療或外科組合使用，如此項技術中已知的。
明確考慮到任何前述者與本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之組合。 製造物品
另一實施例包括一種製造物品(例如，套組)，其用於治療對詹納斯激酶(諸如JAK1激酶)之抑制有反應之疾病或病症。該套組可包含： (a) 第一醫藥組成物，其包含本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；及 (b) 使用說明書。
在另一實施例中，該套組進一步包含： (c) 第二醫藥組成物，諸如包含用於如上文所述之治療之藥劑的醫藥組成物，諸如用於治療炎性病症之藥劑，或化學治療劑。
在一個實施例中，說明書描述向有需要之患者同時、依序或分開投與該第一及第二醫藥組成物。
在一個實施例中，該第一及第二組成物含於單獨的容器中。在另一實施例中，該第一及第二組成物含於同一容器中。
供使用之容器包括例如瓶、小瓶、注射器、泡鼓包裝等。該等容器可由多種材料，諸如玻璃或塑膠形成。容器包括本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其有效治療該疾患且可具有無菌出入孔(例如，容器可為靜脈內溶液袋或具有可由皮下注射針刺穿之塞子的小瓶)。標籤或藥品說明書指示化合物用於治療所選疾患，諸如氣喘或癌症。在一個實施例中，標籤或藥品說明書指示該化合物可用於治療一病症。此外，標籤或藥品說明書可指示欲治療之患者為患有特徵在於過度活化或無規律詹納斯激酶活性諸如過渡活化或無規律JAK1活性之病症之患者。標籤或藥品說明書亦可指示該化合物可用於治療其他病症。
替代地或另外，套組可進一步包含第二(或第三)容器，其包含醫藥學上可接受之緩衝液，諸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液或右旋糖溶液。其還可包括出於商業及使用者觀點適宜之其他物質，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針及注射器。
為了說明本發明，包括以下實例。然而，應瞭解此等實例不限制本發明且僅欲表明實施本發明之方法。熟習此項技術者將認識到所述化學反應可易於調適以製備其他本發明之化合物，且製備化合物之替代性方法在本發明之範疇內。例如，可藉由對於熟習此項技術者而言顯而易知之修改來成功進行根據本發明之非示範性化合物之合成，例如藉由適當保護干擾基團、藉由利用此項技術中已知之不同於所述試劑之其他適合試劑或藉由對反應條件進行常規修改。替代地，本文所揭示或此項技術中已知之其他反應將被視為適用於製備本發明之其他化合物。 實例
使用類似於本文流程及實例中所述之程序製備表1之以下代表性化合物。可能尚未描繪以下各化合物之絕對立體化學：因此，結構可出現多於一次，各自表示單一立體異構物。 表1：本發明之示範性JAK抑制劑
   結構 名稱
1
Figure 02_image008
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-異丙基碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
2
Figure 02_image010
 N-[3-[5-環丁基碸基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
3
Figure 02_image012
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1-甲基吖呾-3-基)碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
4
Figure 02_image014
 N-[3-[5-(吖呾-3-基碸基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
5
Figure 02_image016
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-羥基乙基碸基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
6
Figure 02_image018
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-乙基碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
7
Figure 02_image020
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[2-(二甲基胺基)乙基碸基]苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
8
Figure 02_image022
 N-[3-[5-(2-胺基乙基碸基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
9
Figure 02_image024
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(二氟甲基碸基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
10
Figure 02_image026
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-吡咯啶-3-基碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
11
Figure 02_image028
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(3-羥基苯基)碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
12
Figure 02_image030
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(3-甲氧基苯基)碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
13
Figure 02_image032
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(氧呾-3-基碸基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
14
Figure 02_image034
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-甲氧基乙基碸基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
15
Figure 02_image036
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[外消旋-(2S)-2-羥基丙基]碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
16
Figure 02_image038
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(4-吡啶基碸基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
17
Figure 02_image040
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-甲基碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
18
Figure 02_image042
 N-[3-[5-[3-(2-胺基乙基)苯基]碸基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
19
Figure 02_image044
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1-甲基吡咯啶-3-基)碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
20
Figure 02_image046
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1-甲基吡咯啶-3-基)碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
21
Figure 02_image048
 N-[3-[5-(吖呾-1-基碸基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
22
Figure 02_image050
 N-[3-[5-環丙基碸基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
23
Figure 02_image052
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-羥基-1-甲基-乙基)碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
24
Figure 02_image054
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-羥基-1-甲基-乙基)碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
25
Figure 02_image056
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[外消旋-(2R)-2-羥基丙基]碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
26
Figure 02_image058
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(甲基胺磺醯基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
27
Figure 02_image060
 N-[3-[5-(1-乙醯基吖呾-3-基)碸基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
28
Figure 02_image062
 N-[1-(氰基甲基)-3-[2-(二氟甲氧基)-5-甲基碸基-苯基]吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
29
Figure 02_image064
 N-[1-(氰基甲基)-3-[2-(二氟甲氧基)-5-(二氟甲基碸基)苯基]吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
30
Figure 02_image066
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(二甲基胺磺醯基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
31
Figure 02_image068
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-胺磺醯基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
32
Figure 02_image070
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-甲基碸基-苯基]-1-(2-側氧基四氫呋喃-3-基)吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
33
Figure 02_image072
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-甲基碸基-苯基]-1-(2-側氧基四氫呋喃-3-基)吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
34
Figure 02_image074
 3-[2-(二氟甲氧基)-5-甲基碸基-苯基]-4-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羰基胺基)吡唑-1-羧酸異丙酯
35
Figure 02_image076
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1-甲基吡唑-4-基)碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
36
Figure 02_image078
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(3-哌啶基碸基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
37
Figure 02_image080
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(3-哌啶基碸基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
38
Figure 02_image082
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[1-[(2S)-2-羥基丙基]吡唑-4-基]碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
39
Figure 02_image084
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[2-氟-1-(氟甲基)乙基]碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
40
Figure 02_image086
 N-[3-[5-(苯碸基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
41
Figure 02_image088
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1H-吡唑-4-基碸基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
42
Figure 02_image090
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(3-吡啶基碸基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
43
Figure 02_image092
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(6-側氧基-1H-吡啶-3-基)碸基]苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
44
Figure 02_image094
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(1-甲基-2-側氧基-4-吡啶基)碸基]苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
45
Figure 02_image096
 N-[1-(氰基甲基)-3-[5-環丙基碸基-2-(二氟甲氧基)苯基]吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
46
Figure 02_image098
 N-[3-[6-(二氟甲氧基)-1,1-二側氧基-3,4-二氫-2H-1λ6,4-苯并噻嗪-7-基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
47
Figure 02_image299
 N-[3-[5-[1-(2-胺基乙基)吡唑-4-基]碸基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
48
Figure 02_image301
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[1-[2-(甲基胺基)乙基]吡唑-4-基]碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
49
Figure 02_image303
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[1-[2-(二甲基胺基)乙基]吡唑-4-基]碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
50
Figure 02_image106
 N-[3-[5-環丙基碸基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[2-(二甲基胺基)乙基]吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
51
Figure 02_image187
 N-[1-(氰基甲基)-3-[2-(二氟甲氧基)-5-(氧呾-3-基碸基)苯基]吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
52
Figure 02_image110
 N-[3-[5-環丙基碸基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-(1-甲基吖呾-3-基)吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
53
Figure 02_image307
 N-[3-[5-[1-[2-(吖呾-1-基)乙基]吡唑-4-基]碸基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
54
Figure 02_image309
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]吡唑-4-基]碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
55
Figure 02_image116
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1-口昆啶-3-基吡唑-4-基)碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
56
Figure 02_image312
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[1-[2-[(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]乙基]吡唑-4-基]碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
57
Figure 02_image314
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[1-[2-[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]乙基]吡唑-4-基]碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
58
Figure 02_image316
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[1-[(2S)-2-(二甲基胺基)丙基]吡唑-4-基]碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
59
Figure 02_image318
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[1-[(2R)-2-(二甲基胺基)丙基]吡唑-4-基]碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
60
Figure 02_image320
 N-[3-[5-環丙基碸基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[[外消旋-(2R)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲基]吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
61
Figure 02_image128
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[1-(1-甲基吖呾-3-基)吡唑-4-基]碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
62
Figure 02_image130
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(2-甲基-1H-異喹啉-7-基)碸基]苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
63
Figure 02_image235
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(3-羥基丙基碸基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
64
Figure 02_image134
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(2-甲基-1H-異喹啉-6-基)碸基]苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
65
Figure 02_image136
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1-甲基咪唑-4-基)碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
66
Figure 02_image138
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1H-咪唑-4-基碸基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
67
Figure 02_image140
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-嘧啶-5-基碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
68
Figure 02_image329
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-羥基-1-甲基-丙基)碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
69
Figure 02_image331
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-羥基-1-甲基-丙基)碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
70
Figure 02_image331
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-羥基-1-甲基-丙基)碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
71
Figure 02_image331
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-羥基-1-甲基-丙基)碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
72
Figure 02_image333
 N-[3-[2-(二氟甲氧基)-5-甲基碸基-苯基]-1-[[(2S)-1-甲基吡咯啶-2-基]甲基]吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
73
Figure 02_image146
 N-(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(N-(2-羥基乙基)-N-甲基胺磺醯基)苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺
LCMS 條件 方法A
在具有C18反相管柱(50 x 3 mm Shim-Pack XR-ODS, 2.2 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.05%三氟乙酸；溶劑B：乙腈 + 0.05%三氟乙酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.00 1.2 95 5
2.00 1.2 5 95
2.70 1.2 5 95
2.75 1.2 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法B
在具有C18反相管柱(50 x 3 mm Shim-Pack XR-ODS, 2.2 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.05%三氟乙酸；溶劑B：乙腈 + 0.05%三氟乙酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.00 1.2 80 20
3.60 1.2 40 60
4.00 1.2 0 100
4.70 1.2 0 100
4.75 1.2 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法C
在具有C18反相管柱(50 x 3 mm Shim-Pack XR-ODS, 2.2 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.05%三氟乙酸；溶劑B：乙腈 + 0.05%三氟乙酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.00 1.2 95 5
3.00 1.2 5 95
3.70 1.2 5 95
3.75 1.2 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法D
在具有C18反相管柱(50 x 3 mm Shim-Pack XR-ODS, 2.2 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.05%三氟乙酸；溶劑B：乙腈 + 0.05%三氟乙酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.00 1.2 95 5
3.50 1.2 30 70
3.70 1.2 0 100
4.50 1.2 0 100
4.75 1.2 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法E
在具有C18反相管柱(50 x 3 mm Shim-Pack XR-ODS, 2.2 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.05%三氟乙酸；溶劑B：乙腈 + 0.05%三氟乙酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.00 1.2 95 5
3.50 1.2 40 60
3.70 1.2 0 100
4.70 1.2 0 100
4.75 1.2 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法F
在具有C18反相管柱(50 x 3 mm Shim-Pack XR-ODS, 2.2 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.05%三氟乙酸；溶劑B：乙腈 + 0.05%三氟乙酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.00 1.2 70 30
3.50 1.2 30 70
3.70 1.2 0 100
4.50 1.2 0 100
4.75 1.2 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法G
在具有C18反相管柱(50 x 2.1 mm Ascentis Express C18, 2.7 µm粒子大小)之SHIMADZU 20A HPLC上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.05%三氟乙酸；溶劑B：乙腈 + 0.05%三氟乙酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.00 1.0 95 5
1.10 1.0 0 100
1.60 1.0 0 100
1.70 1.0 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法H
在具有C18反相管柱(50 x 3 mm Shim-Pack XR-ODS, 2.2 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.05%三氟乙酸；溶劑B：乙腈 + 0.05%三氟乙酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.00 1.2 95 5
1.10 1.2 0 100
1.70 1.2 0 100
1.75 1.2 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法I
在具有Poroshell HPH-C18 管柱(50 x 3 mm, 2.7 µm粒子大小)之SHIMADZU 20A HPLC上進行實驗，以溶劑A：水/5 mM NH4 HCO3 ；溶劑B：乙腈進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.00 1.2 90 10
1.10 1.2 5 95
1.60 1.2 5 95
1.70 1.2 90 10
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法J
在具有C18反相管柱(50 x 3 mm Kinetex XB-C18 , 2.6 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.05%三氟乙酸；溶劑B：乙腈 + 0.05%三氟乙酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.00 1.5 95 5
1.20 1.5 0 100
1.70 1.5 0 100
1.80 1.5 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法K
在具有C18反相管柱(50 x 3 mm Shim-Pack XR-ODS, 2.2 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.05%三氟乙酸；溶劑B：乙腈 + 0.05%三氟乙酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.00 1.0 95 5
2.20 1.0 0 100
3.20 1.0 0 100
3.30 1.0 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法L
在具有C18反相管柱(50 x 2.1 mm Kinetex XB-C18 100A, 2.6 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.05%三氟乙酸；溶劑B：乙腈 + 0.05%三氟乙酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.00 1.0 95 5
1.10 1.0 0 100
1.60 1.0 0 100
1.70 1.0 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法M
在具有C18反相管柱(30 x 2.1 mm Kinetex C18-100A, 1.7 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.05%三氟乙酸；溶劑B：乙腈 + 0.05%三氟乙酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.01 1.0 95 5
0.60 1.0 0 100
1.00 1.0 0 100
1.05 1.0 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法N
在具有C18反相管柱(50 x 3.0 mm Poroshell HPH-C18, 2.7 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 5 mM碳酸氫銨；溶劑B：乙腈進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.01 1.0 90 10
2.00 1.0 5 95
2.70 1.0 5 95
2.80 1.0 90 10
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法O
在具有C18反相管柱(50 x 3.0 mm Titank C18, 3.0 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 5 mM碳酸氫銨；溶劑B：乙腈進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.01 1.0 90 10
2.00 1.0 5 95
2.70 1.0 5 95
2.80 1.0 90 10
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法P
在具有C18反相管柱(30 x 2.1 mm Halo C18, 2.0 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.05%三氟乙酸；溶劑B：乙腈 + 0.05%三氟乙酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.00 1.0 95 5
1.30 1.0 0 100
1.80 1.0 0 100
1.90 1.0 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法Q
在具有C18反相管柱(50 x 3.0 mm YMC-Triart C18, 2.5 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.1%甲酸；溶劑B：乙腈 + 0.1%甲酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.01 1.0 95 5
3.00 1.0 5 95
3.70 1.0 5 95
3.75 1.0 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法R
在具有C18反相管柱(50 x 3 mm Shim-Pack XR-ODS, 2.2 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.05%三氟乙酸；溶劑B：乙腈 + 0.05%三氟乙酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.00 1.2 70 30
3.10 1.2 0 100
3.70 1.2 0 100
3.75 1.2 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法S
在具有HPH-C18反相管柱(50 x 3.0 mm Poroshell HPH-C18, 2.7 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 5 mM碳酸氫銨；溶劑B：乙腈進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.01 1.0 90 10
3.50 1.0 40 60
4.00 1.0 5 95
4.70 1.0 5 95
4.80 1.0 90 10
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法T
在具有C18反相管柱(50 x 2.1 mm Ascentis Express C18, 2.7 µm粒子大小)之SHIMADZU 20A HPLC上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.05%三氟乙酸；溶劑B：乙腈 + 0.05%三氟乙酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.00 1.0 95 5
2.00 1.0 0 100
2.70 1.0 0 100
2.80 1.0 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法U
在具有C18反相管柱(50 x 3 mm Shim-Pack XR-ODS, 2.2 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.05%三氟乙酸；溶劑B：乙腈 + 0.05%三氟乙酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.01 1.2 95 5
3.50 1.2 50 50
3.70 1.2 0 100
4.70 1.2 0 100
4.75 1.2 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法V
在具有HPH-C18反相管柱(50 x 3.0 mm Poroshell HPH-C18, 2.7 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 5 mM碳酸氫銨；溶劑B：乙腈進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.01 1.0 90 10
3.50 1.0 60 40
4.00 1.0 5 95
4.70 1.0 5 95
4.80 1.0 90 10
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法W
在具有C18反相管柱(50 x 2.1 mm Waters Acquity BEH, 1.7 µm粒子大小)之SHIMADZU LCMS-2020上進行實驗，以溶劑A：水 + 0.1%甲酸；溶劑B：乙腈 + 0.1%甲酸進行溶離。梯度：
梯度–時間 流速ml/min %A %B
0.00 0.8 95 5
1.60 0.8 0 100
1.80 0.8 0 100
2.00 0.8 95 5
偵測 - UV (220及254 nm)及ELSD 方法X
在與Agilent MSD (6140)質譜儀耦接之Agilent 1290 UHPLC上使用ESI作為電離源來執行實驗。使用Phenomenex XB-C18, 1.7 um, 50 × 2.1 mm管柱在0.4 ml/min流速下進行LC分離。流動相A為具有0.1%甲酸之水且流動相B為具有0.1%甲酸之乙腈。梯度以2% B開始且經7 min以98% B結束，且在平衡1.5 min後在98% B下保持1.5 min。LC管柱溫度為40℃。在220 nm及254 nm下收集UV吸光度且將質譜全掃描應用於所有實驗。 常見縮寫之清單 ACN                                       乙腈 鹽水                                       飽和氯化鈉水溶液 CH-3 OD                                 氘化甲醇 CDCl3 氘化氯仿 DCM                                      二氯甲烷 DIEA或DIPEA                     二異丙基乙胺 DMA                                      二甲基乙醯胺 DMAP                                    4-二甲基胺基吡啶 DMF                                      二甲基甲醯胺 DMSO                                    二甲亞碸 DMSO-d6 氘化二甲亞碸 DTAD                                    氮雜二羧酸二三級丁酯 EDC或EDCI                         1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺 ESI                                         電噴霧電離 EtOAc                                    乙酸乙酯 EtOH                                      乙醇 FA                                          甲酸 HOAc                                     乙酸 G                                            公克 H                                            小時 HATU                                    (O-(7-氮雜苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽) Hcl                                         鹽酸 HOBt                                      羥基苯并*** HPLC                                     高效液相層析 IMS                                        工業甲基化酒精 L                                            公升 LCMS                                    液相層析-質譜法 LiHMDS或LHMDS             六甲基二基疊氮化理 MDAP                                    質量定向自動化純化 MeCN                                    乙腈 MeOH                                    甲醇 Μm                                        微米 Min                                        分鐘 mg                                          毫克 mL                                         毫升 Mm                                        毫米 M                                           莫耳 Nm                                         奈米 NMR                                      核磁共振光譜 Pd2 (dba)3 .CHCl3 參(二亞苄基丙酮)二鈀(0)-氯仿加合物 PE                                          石油醚 製備型-HPLC                        製備型高效液相層析 PyAOP                                   (7-氮雜苯并***-1-基氧基)三吡咯啶鏻六氟磷酸鹽 SCX-2                                    強陽離子交換 TBAF                                     四正丁基氟化銨 THF                                       四氫呋喃 TFA                                        三氟乙酸 Xantphos                                4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基黃嘌呤 ZnCl2 氯化鋅中間物 1
Figure 02_image336
N -(5-(5- 溴 -2-( 二氟甲氧基 ) 苯基 )-1-((2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -3- 甲醯胺 步驟1：4-溴-1-(二氟甲氧基)-2-碘苯之合成
Figure 02_image338
向4-溴-2-碘苯酚(282 g，943 mmol)於N ,N -二甲基甲醯胺(2000 mL)及水(500 mL)中之溶液中添加2-氯-2,2-二氟乙酸鈉(216 g，1.42 mol)及Cs2 CO3 (617 g，1.89 mol)。反應容器裝備有用於CO2 釋放之氣體出口。將所得混合物在120℃下攪拌隔夜，使其冷卻至室溫且倒入冰水(3000 mL)中。用乙酸乙酯(3x1500 mL)萃取所得溶液且合併有機層。將乙酸乙酯萃取物用鹽水(1000 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。藉由用乙酸乙酯/石油醚(1/10)溶離之矽膠急驟層析純化殘餘物，以得到300 g (91%)呈黃色油狀物之4-溴-1-(二氟甲氧基)-2-碘苯。1 H NMR (300 MHz, CDCl3 ) δ 7.96 (dd,J = 5.7 Hz, 2.4 Hz, 1H), 7.45 (dd,J = 8.7 Hz, 2.4 Hz, 1H), 7.03 (d,J = 8.7 Hz, 1H), 6.39 (t,J = 72.9 Hz, 1H)。 步驟2：5-[5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基]-4-硝基-1-[[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基]-1H -吡唑之合成
Figure 02_image340
在攪拌、-70℃、氮氣下向4-硝基-1-[[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基]-1H -吡唑(100 g，411 mmol)於無水THF (1000 mL)中之溶液中逐滴添加LiHMDS (490 mL，THF中之1.0 mol/L)溶液。將所得溶液在-50℃下攪拌1 h且然後使其冷卻至-70℃。在-70℃下逐滴添加ZnCl2 (500 mL，THF中之0.7 mol/L)。使所得溶液升溫至室溫且將其在室溫下攪拌1 h。向該混合物中添加4-溴-1-(二氟甲氧基)-2-碘苯(150 g，860 mmol)、Pd(PPh3 )4 (24.0 g，20.8 mmol)。將所得溶液在回流溫度下加熱隔夜，使其冷卻至室溫，且在減壓下濃縮。重複此規模之反應多於一次，且將來自兩個輪次之粗產物合併以用於純化。藉由用乙酸乙酯/石油醚(1/20)溶離之矽膠急驟層析法純化殘餘物。將適當流份合併且在減壓下濃縮。這產生總計300 g (79%)呈淡黃色固體之5-[5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基]-4-硝基-1-[[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑。1 H NMR (300 MHz, CDCl3 ) δ 8.27 (s, 1H), 7.68 (dd,J = 8.7, 2.4 Hz, 1H), 7.62 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 7.19 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.39 (t,J = 72.5 Hz, 1H), 5.44 – 5.19 (m, 2H), 3.72 – 3.54 (m, 2H), 0.94 – 0.89 (m, 2H), 0.02 (s, 9H)。 步驟3：5-(5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-胺之合成
Figure 02_image342
向5-(5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基)-4-硝基-1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H -吡唑(50.1 g，108 mmol)於乙醇(2000 mL)及水(200 mL)中之溶液中添加鐵粉(60.1 g，1.07 mol)及NH4 Cl (28.0 g，0.523 mol)。將反應混合物在回流溫度下在氮氣下攪拌3 h。濾出固體，且用乙醇(100 mL)洗滌。使濾液在減壓下濃縮。將殘餘物溶解於3000 mL乙酸乙酯中。將乙酸乙酯溶液用1x500 mL鹽水洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，且在減壓下濃縮，以得到50.1 g呈黃色油狀物之粗5-(5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H -吡唑-4-胺。將粗產物用於下一步驟而無需進一步純化。LC/MS (方法G, ESI)：[M+H]+ = 434.2, RT = 0.93 min。 步驟4：N -(5-(5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image344
向5-(5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H -吡唑-4-胺(50.1 g，115 mmol)於DMA (1500 mL)中之溶液中添加吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸(32.1 g，196.0 mmol)、PyAOP (102 g，196 mmol)、DMAP (1.41 g，11.0 mmol)及DIPEA (44.1 g，0.341 mol)。將所得溶液在60℃下在油浴中攪拌3 h，然後使其冷卻至室溫。將反應混合物在水/冰(2000 mL)與乙酸乙酯(2000 mL)之間進行分配。將水相用乙酸乙酯(2x)萃取。將有機層合併，用鹽水(1000 mL)洗滌，經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。藉由用乙酸乙酯/石油醚(4:1)溶離之矽膠急驟層析法來純化殘餘物。將適當流份合併且在減壓下濃縮。將水(150 mL)添加至殘餘物中且將混合物在水中在室溫下攪拌1 h。藉由過濾收集固體且風乾，以得到60.1 g (91%)呈淡黃色固體之N-(5-(5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺。LC/MS (方法G, ESI)：[M+H]+ = 579.1 & 581.1, RT = 1.10 min.1 H NMR (300 MHz, CDCl3 ) δ 9.62 (s, 1H), 8.80 (dd,J = 6.9, 1.7 Hz, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.53 (dd,J = 4.2, 1.7 Hz, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.79 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 7.67 (dd,J = 8.8, 2.5 Hz, 1H), 7.29 (d,J = 1.4 Hz, 1H), 7.00 (dd,J = 6.9, 4.2 Hz, 1H), 6.43 (t,J = 72.6 Hz, 1H), 5.53 – 5.27 (m, 2H), 3.73 – 3.50 (m, 2H), 0.88 (ddd,J = 9.5, 6.4, 4.4 Hz, 2H), 0.00 (s, 9H)。中間物 2
Figure 02_image345
N-[3-[5- 溴 -2-( 二氟甲氧基 ) 苯基 ]-1H - 吡唑 -4- 基 ] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -3- 甲醯胺
在室溫下將N-[5-[5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基]-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺(中間物1，5.00 g，8.63 mmol)用HCl/二噁烷(150 mL，4 M)處理隔夜。將所得混合物在減壓下濃縮。這產生3.80 g呈黃色固體之N-[3-[5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺。中間物之純度足以用於下一步驟而無需進一步純化。LC/MS (方法I, ESI)：[M+H]+ = 449.0, RT = 1.02 min。1 H NMR (400 MHz, CD3 OD) δ 9.11 (dd,J = 6.8, 1.6 Hz, 1H), 8.67 – 8.64 (m, 2H), 8.32 (s, 1H), 7.80 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 7.72 (dd,J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.37 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.23 (dd,J = 7.0, 4.2 Hz, 1H), 6.81 (t,J = 73.2 Hz, 1H)。中間物 3
Figure 02_image347
N - [3-[5- 溴 -2-( 二氟甲氧基 ) 苯基 ]-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- yl] 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺
在室溫下向N -[5-[5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基]-l-[[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基]-lH -吡唑-4-基]吡唑并[l,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(中間物1，10.1 g，17.3 mmol)於二氯甲烷(200 mL)中之溶液中添加Me3 OBF4 (2.81 g，18.9 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌2 h。然後將EtOH添加10 mL至反應混合物中，且將反應混合物攪拌1 h，向此溶液中添加5.0 mL HC1 (濃)，且將其攪拌1 h。在真空下濃縮所得混合物。將溶液之pH值用碳酸氫鈉(20%)調節至8。用3x300 mL乙酸乙酯萃取所得溶液且將有機層合併，且經無水硫酸鈉乾燥並在真空下濃縮。將殘餘物施用至以乙酸乙酯/石油醚(80%)溶離之矽膠管柱上，以得到5.5 g (69%)呈淡黃色固體之N -[3-[5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基 1H -吡唑-4- yl]吡唑并[l,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。1 H NMR (400 MHz, CDC13 ): δ (ppm) 9.86 (s, 1H), 8.80 (dd,J = 7.0, 1.6 Hz, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.60 (dd,J = 4.2, 1.6 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 7.85 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 7.58 (dd,J = 8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.24 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.02 (dd,J = 7.0, 4.2 Hz, 1H), 6.49 (t,J = 74.0 Hz, 1H), 4.01 (s, 3H)。中間物 4
Figure 02_image349
N -(3-(2-( 二氟甲氧基 )-5-( 甲基硫基 ) 苯基 )-1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺 步驟1：5-[2-(二氟甲氧基)-5-(甲基硫烷基)苯基]-4-硝基-1-[[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基]-1H -吡唑之合成。
Figure 02_image351
向用惰性氮氣氣氛吹掃且保持之1000-mL圓底燒瓶裝入甲苯(500 mL)、5-[5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基]-4-硝基-1-[[2-(三甲基矽基)乙氧基] 甲基]-1H -吡唑(60 g，129 mmol)、NaSMe (26 g，371 mmol)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (6.7 g，6.47 mmol)、XantPhos (7.5 g，12.96 mmol)。將所得混合物在85℃下攪拌隔夜。將所得混合物在真空下濃縮。使此反應重複三次。將殘餘物施用至用乙酸乙酯/石油醚(1:20)溶離之矽膠管柱上。將適當流份合併且在真空下濃縮。這產生總計171 g呈黃色固體之 of 5-[2-(二氟甲氧基)-5-(甲基硫烷基)苯基]-4-硝基-1-[[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基]-1H -吡唑。LC/MS (方法F, ESI)：[M+H]+ = 432.1, RT = 1.23 min；1 H NMR (300 MHz, CDC13) δ: (ppm) 8.25 (s, 1H), 7.42 (dd,J = 8.7, 2.4 Hz, 1H), 7.34 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 7.23 (d,J = 8.7 Hz, 1H), 6.39 (t,J = 72.9 Hz, 1H), 5.36 – 5.22 (m, 2H), 3.74 – 3.55 (m, 2H), 2.51 (s, 3H), 0.94 – 0.90 (m, 2H), 0.02 (s, 9H)。 步驟2：N -[5-[2-(二氟甲氧基)-5-(甲基硫烷基)苯基]-1-[[2-(三甲基矽基)乙氧基] 甲基] -1H -吡唑-4-基]吡唑并[l,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image353
向5-[2-(二氟甲氧基)-5-(甲基硫烷基)苯基]-4-硝基-1-[[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基]-1H -吡唑(171 g，408 mmol)、乙醇(2000 mL)、水(200 mL)之混合物中添加鐵粉(228 g，4.08 mol)、NH4 Cl (120 g，2.24 mol)。將反應混合物在氮氣下攪拌回流3 h，且使其冷卻至室溫。濾出固體。將濾液在真空下濃縮。將殘餘物溶解於3000 mL乙酸乙酯中且用1x500 mL鹽水洗滌。將有機相經無水硫酸鈉乾燥，且在真空下濃縮。這產生148 g呈黃色油狀物之5-[2- (二氟甲氧基)-5-(甲基硫烷基)苯基]-1-[[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基]-1H -吡唑-5-胺。LC/MS (方法F, ESI)：[M+H]+ = 402.1, RT = 0.93 min。向3000-mL 3-頸圓底燒瓶中裝入DMA (1500 mL)、5-[2-(二氟甲氧基)-5-(甲基硫烷基)苯基]-l-[[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基]-lH -吡唑-4-胺(148 g)、吡唑并[l,5-a ]嘧啶-3-羧酸(102 g)、HATU (325 g), 4-二甲基胺基吡啶(4.5 g)、DIPEA (142 g)。將所得溶液在60℃下攪拌3 h，將其傾入冰水(2000 mL)中，用3x2000 mL乙酸乙酯萃取且將有機層合併。將所得混合物用1x1000 mL鹽水洗滌。將混合物經無水硫酸鈉乾燥並在真空下濃縮。將殘餘物施用至以乙酸乙酯/石油醚(4:1)溶離之矽膠管柱上，以得到200 g呈淡黃色固體之N -[5-[2-(二氟甲氧基)-5-(甲基硫烷基)苯基]-1-[[2-(三甲基矽基)乙氧基] 甲基] -1H -吡唑-4-基]吡唑并[l,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。LC/MS (方法A, ESI)：[M+H]+ = 547.2, RT = 1.10 min；1 H NMR (300 MHz, CDC13) δ: (ppm) 9.63 (s, 1H), 8.77 (dd,J = 7.0, 1.7 Hz, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.51 (dd,J = 4.2, 1.8 Hz, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.50 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 7.39 (dd,J = 8.7, 2.4 Hz, 1H), 7.30 (d,J = 8.7 Hz, 1H), 6.98 (dd,J = 6.9, 4.2 Hz, 1H), 6.39 (t,J = 73.2 Hz, 1H), 5.46 – 5.38 (m, 2H), 3.70 – 3.59 (m, 2H), 2.52 (s, 3H), 0.92-0.85 (m, 2H), 0.03 (s, 9H)。 步驟3：N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(甲基硫基)苯基)-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image355
向N -[5-[2-(二氟甲氧基)-5-(甲基硫烷基)苯基]-l-[[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基]-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(60 g)於甲醇(600 mL)中之溶液中添加濃HCl溶液(300 mL)。將所得溶液在35℃下攪拌隔夜。將所得混合物在真空下濃縮。藉由過濾收集固體。將固體懸浮於200 mL水中。將該溶液之pH值用飽和碳酸氫鈉調節至8。藉由過濾收集產物，將其乾燥，得到30 g (66%)呈淡黃色固體之N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(甲基硫基)苯基)-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。LC/MS (方法G, ESI)：[M+H]+ = 417.0, RT = 0.80 min；1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ: (ppm) 13.02 (s, 1H), 9.71 (s, 1H), 9.33 (dd,J = 6.9, 1.5 Hz, 1H), 8.68 (dd,J = 4.1, 1.4 Hz, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.24 (s, 1H), 7.47 – 7.36 (m, 3H), 7.27 (dd,J = 6.9, 4.2 Hz, 1H), 7.17 (t,J = 73.8 Hz, 1H), 2.51 (s, 3H)。中間物 5
Figure 02_image356
N -(5-(2-( 二氟甲氧基 )-5-(( 三異丙基矽基 ) 硫基 ) 苯基 )-1-((2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ) 甲基 )-1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺
在氮氣下向N -(5-(5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(中間物 1 ，4.00 g，6.90 mmol)於甲苯(20 mL)中之溶液中添加氰化鈉(415 mg，10.4 mmol，礦物油中之60%)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (735 mg，0.710 mmol)及XantPhos (800 mg，1.38 mmol)及參(丙烷-2-基)矽烷硫醇(1.97 g，10.4 mmol)。將所得溶液在90℃下攪拌20 min。將所得混合物在真空下濃縮。藉由用乙酸乙酯/石油醚(80/20)溶離之矽膠急驟層析法純化殘餘物。將適當流份合併且在真空下濃縮。這產生3.30 g (69%)呈灰白色固體之N -(5-(2-(二氟甲氧基)-5-((三異丙基矽基)硫基)苯基)-1-((2-(三甲基矽基)乙氧基)甲基)-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。LC/MS (方法B, ESI): [M+H]+ = 689.4, RT = 1.51 min。中間物 6
Figure 02_image358
N -[3-[2-( 二氟甲氧基 )-5-[[ 參 ( 丙烷 -2- 基 ) 矽基 ] 硫烷基 ] 苯基 ]-1- 甲基 -lH - 吡唑 -4- 基 ] 吡唑并 [l,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺
在室溫下且在氮氣下向氰化鈉(260 mg，10.8 mmol)於甲苯(40 mL)中之懸浮液中逐滴添加參(丙烷-2-基)矽烷硫醇(1.23 g，6.47 mmol)。將混合物在此溫度攪拌1 h，直至混合物變澄清，然後在室溫下在氮氣氣氛下添加N -[3-[5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并 [1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(中間物 3 ，2.50 g，5.40 mmol)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (184 mg，0.178 mmol)及XantPhos (250 mg，0.432 mmol)。將所得溶液在90℃下在N2 下攪拌30 min。然後藉由添加50 mL NH4 C1水溶液來淬滅反應物。將所得溶液用100 mL EA稀釋。分離有機層且用3x50 mL水及2x50 mL鹽水洗滌。將混合物經無水硫酸鈉乾燥並在真空下濃縮。將殘餘物施用至以乙酸乙酯/石油醚(1/1)溶離之矽膠管柱上，以得到2.35 g (76%)呈灰白色固體之N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[[參(丙烷-2-基)矽基] 硫烷基]苯基]-1-甲基-lH -吡唑-4-基]吡唑并[l,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。TLC：PE/EA = 1/1, Rf = 0.4。中間物 7
Figure 02_image360
4-( 二氟甲氧基 )-3-(1- 甲基 -4-[ 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 醯胺基 ]-1H - 吡唑 -3- 基 ) 苯 -1- 磺酸
向100-mL圓底燒瓶中裝入N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[[參(丙烷-2-基)矽基]硫烷基]苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(中間物 6 ，360 mg，0.63 mmol，1.00當量)、二氯甲烷(30 mL)、m-CPBA (217 mg，1.26 mmol，2.0當量)。將所得溶液在室溫下攪拌5 h。在真空下濃縮所得混合物。將殘餘物施用至以二氯甲烷/甲醇(6:4)溶離之矽膠管柱上。這產生210 mg (72%)呈黃色固體之4-(二氟甲氧基)-3-(1-甲基-4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-醯胺基]-1H -吡唑-3-基)苯-1-磺酸。LC/MS (方法I, ESI)：[M+H]+ = 465.1, RT = 0.684 min。中間物 8
Figure 02_image362
N -(3-(2-( 二氟甲氧基 )-5- 巰基苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺
向冷卻至0℃之N -[3-[5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(中間物 3 ，3000 mg，6.48 mmol)、參(丙烷-2-基)矽烷硫醇(1.48 g，1.67 mL，7.77 mmol)、XantPhos Pd G2 (575 mg，0.648 mmol)及XantPhos (375 mg，0.648 mmol)於甲苯(100 mL)中之溶液中添加NaH (518 mg，13.0 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌30 min，在室溫下攪拌1 h，且然後在90℃下攪拌1 h。將反應混合物用二氯甲烷稀釋，透過以二氯甲烷溶離之矽藻土過濾，且在真空中濃縮濾液。使殘餘物吸附到二氧化矽上且藉由使用庚烷中之10%-80% 3:1 MeOH : iPrOAc進行急劇管柱層析來純化，以得到呈棕色固體之N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-巰基苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(2.32 g，86%)。該產物被一些二聚物污染且未經進一步純化即使用。LC/MS (方法W, ESI)：[M+H]+ = 417.1, RT = 1.09 min。中間物 9
Figure 02_image364
N -(3-(2-( 二氟甲氧基 )-5-( 甲基碸基 ) 苯基 )-lH - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [l,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺
向N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(甲基硫基)苯基)-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(中間物 4 , 500 mg，1.20 mmol)於二氯甲烷(5.0 mL)中之溶液中添加m-CPBA (623 mg，3.61 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌5 min並在真空下濃縮。將殘餘物藉由以二氯甲烷/甲醇(25/1)溶離之矽膠急驟層析法純化。收集適當流份且在真空下濃縮，以得到523 mg (97%)呈黃色固體之N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-甲烷碸基苯基]-lH -吡唑-4-基]吡唑并[l,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。LC/MS (方法G, ESI)：[M+H]+= 449.2, RT = 0.99 min；1 H NMR (300MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 13.18 (s, 1H), 9.68 (s, 1H), 9.33 (dd,J= 6.9, 1.5 Hz, 1H), 8.70 (dd,J= 4.2, 1.5 Hz, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.12 - 8.09 (m, 2H), 7.68 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.47 (t,J = 72.6 Hz, 1H), 7.30 (dd, 7= 6.9, 4.2 Hz, 1H), 3.28 (s, 3H)。實例
以下實例根據以上表1中之實例編號。實例 28
Figure 02_image366
N -(1-( 氰基甲基 )-3-(2-( 二氟甲氧基 )-5-( 甲基碸基 ) 苯基 )-1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺
向10-mL小瓶中裝入N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-甲烷碸基苯基]-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺 (中間物 9 , 100 mg，0.223 mmol)、碳酸銫(146 mg，0.447 mmol，2.00當量)、N ,N -二甲基甲醯胺(2 mL)及2-溴乙腈(39.8 mg，0.332 mmol，1.49當量)。將所得溶液在室溫下攪拌3 h。然後藉由添加3 mL水來淬滅反應物。將所得溶液用3x3 mL乙酸乙酯萃取，且將有機層合併且在真空下濃縮。藉由製備型-HPLC使用以下條件(2#-分析型HPLC-SHIMADZU(HPLC-10))純化粗產物(3 mL)：管柱，Kinetex EVO C18管柱，30*150, 5μm；流動相，水(10 mmol/L NH4 HCO3 )及ACN (在7 min內19.0% ACN多至27.0%)；偵測器，UV 254/220 nm，以得到40.7 mg (37%)呈黃色固體之N -[1-(氰基甲基)-3-[2-(二氟甲氧基)-5-甲烷碸基苯基]-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 9.76 (s, 1H), 9.36 (dd,J =6.9, 1.5 Hz, 1H), 8.69 – 8.67 (m, 2H), 8.54 (s, 1H), 8.16 (dd,J =8.7, 2.4 Hz, 1H), 8.08 (d,J =1.6 Hz, 1H), 7.74 – 7.26 (m, 3H), 5.64 (s, 2H), 3.32 (s, 3H)。LC/MS (方法A, ESI)：[M+H]+= 488.2, RT = 1.42 min。實例 22
Figure 02_image368
N -(3-(5-( 環丙基碸基 )-2-( 二氟甲氧基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺 步驟1：N -[5-[5-(環丙基硫烷基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基]-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image370
向以惰性氮氣氣氛吹掃且保持之250-mL圓底燒瓶中裝入N -[5-[5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基]-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(中間物3, 4 g，6.90 mmol)、Pd2 (dba)3 ·CHCl3 (1.4 g，1.35 mmol，0.20當量)、XantPhos (1.6 g，2.77 mmol，0.401當量)、碳酸鉀(1.9 g，13.7 mmol，2.0當量)、甲苯(100 mL)及環丙烷硫醇(2 g，27 mmol，3.9當量)。將所得溶液在100℃下攪拌20 h。將反應混合物冷卻至室溫且在真空下濃縮。將殘餘物施用至使用乙酸乙酯/己烷(1/1、4/1)之矽膠管柱上。將所收集流份合併且在真空下濃縮。這產生3.5 g (89%)呈黃色油狀物之N-[5-[5-(環丙基硫烷基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺。LC/MS (方法J, ESI): [M+H]+= 573.3, RT = 1.34 min。 步驟2：N -[3-[5-(環丙基硫烷基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image372
向100-mL圓底燒瓶中裝入N -[5-[5-(環丙基硫烷基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-[[2-(三甲基矽基)乙氧基]甲基]-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(3.87 g，6.76 mmol)、二氯甲烷(20 mL)及CF3 COOH (10 mL)。將所得溶液在室溫下攪拌4 h。在真空下濃縮所得混合物。將所得溶液用乙酸乙酯稀釋。藉由過濾收集固體。這產生3.01 g (粗物質)呈棕色固體之N -[3-[5-(環丙基硫烷基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。LC/MS (方法H, ESI)：[M+H]+= 443.15, RT = 1.24 min。 步驟3：N -[3-[5-(環丙基硫烷基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image374
向25-mL圓底燒瓶中裝入N -[3-[5-(環丙基硫烷基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(250 mg，0.565 mmol)、N ,N -二甲基甲醯胺(4 mL)、碳酸銫(294 mg，0.902 mmol，2.00當量)、碘甲烷(77 mg，0.542 mmol，1.20當量)。將所得溶液在30℃下攪拌2 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物施用至使用乙酸乙酯/石油醚(2:1)之矽膠管柱上。這產生150 mg (58%)呈黃色固體之N -[3-[5-(環丙基硫烷基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。LC/MS (方法H, ESI)：[M+H]+= 457.2, RT = 1.24 min。 步驟4：N -[3-[5-(環丙烷碸基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image376
向50-mL圓底燒瓶中裝入N -[3-[5-(環丙基硫烷基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(280 mg，0.613 mmol)、二氯甲烷(20 mL)、m-CPBA (212 mg，1.23 mmol，2.00當量)。將所得溶液在室溫下攪拌5 h。在真空下濃縮所得混合物。將殘餘物施用至以二氯甲烷/甲醇(95:5)溶離之矽膠管柱上。藉由製備型-HPLC使用以下條件(2#-分析型HPLC-SHIMADZU(HPLC-10))純化粗產物：管柱，Kinetex EVO C18管柱，30*150, 5μm；流動相，水(10 mmol/L NH4 HCO3 )及ACN (在8 min內25.0% ACN多至33.0%)；偵測器，UV 254/220 nm。這產生42.9 mg (14%)呈白色固體之N -[3-[5-(環丙烷碸基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 9.68 (s, 1H), 9.34 (dd,J =6.8, 1.4 Hz, 1H), 8.70 – 8.67 (m, 2H), 8.33 (s, 1H), 8.07 (dd,J =8.8, 2.4 Hz, 1H), 8.02 (d,J =2.4 Hz, 1H), 7.69 – 7.28 (m, 3H), 3.96 (s, 3H), 3.01 – 2.95 (m, 1H), 1.16 – 1.12 (m, 2H), 1.08 – 1.06 (m, 2H)。LC/MS (方法A, ESI)：[M+H]+= 489.2, RT = 1.47 min。實例 52
Figure 02_image377
N -(3-(5-( 環丙基碸基 )-2-( 二氟甲氧基 ) 苯基 )-1-(1- 甲基吖呾 -3- 基 )-1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺 步驟1：3-(3-(5-(環丙基碸基)-2-(二氟甲氧基)苯基)-4-(吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺基)-1H -吡唑-1-基)吖呾-1-羧酸三級丁酯
Figure 02_image379
向小瓶中添加N -[3-[5-環丙基碸基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(51 mg，0.11 mmol)及碳酸銫(105 mg，0.32 mmol)，隨後添加N ,N -二甲基甲醯胺(1.1 mL)及3-碘吖呾-1-羧酸三級 丁酯(107 mg，0.065 mL，0.38 mmol)且將反應混合物加熱至60℃達16 h。藉由添加飽和氯化銨水溶液來淬滅反應器且用EtOAc (3x)萃取。將合併之有機層以鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。使殘餘物吸附到二氧化矽上且藉由急劇管柱層析使用庚烷中之10%-80% 3:1 MeOH:iPrOAc進行純化，以得到呈黃色油狀物之索所要化合物(35.6 mg，53%)。 步驟2：N -(1-(吖呾-3-基)-3-(5-(環丙基碸基)-2-(二氟甲氧基)苯基)-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺
Figure 02_image381
向3-[3-[5-環丙基碸基-2-(二氟甲氧基)苯基]-4-(吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-羰基胺基)吡唑-1-基]吖呾-1-羧酸三級丁酯(35.6 mg，0.057 mmol)於二氯甲烷(1 mL)中之溶液中添加三氟乙酸(0.25 mL)且將反應物在室溫下攪拌2 h。在真空中濃縮反應混合物，然後將其溶解於2 mL二氯甲烷中。添加MP-碳酸鹽(180 mg，0.57 mmol)且將反應混合物攪拌2 h。過濾反應混合物且在真空中濃縮濾液，以得到呈白色固體之所要化合物。確保完全轉化且以粗物質形式用於下一步驟中。LC/MS (方法W, ESI)：[M+H]+= 530.2, RT = 0.83 min。 步驟3：N -(3-(5-(環丙基碸基)-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-(1-甲基吖呾-3-基)-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺
Figure 02_image383
向N -[1-(吖呾-3-基)-3-[5-環丙基碸基-2-(二氟甲氧基)苯基]吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(29.9 mg，0.057 mmol)於1,2-二氯乙烷(1.88 mL)中之溶液中添加甲醛(水中之1.28 mol/L) (6.87 mg，0.0063 mL，0.085 mmol)及硼氫化鈉(3.62 mg，0.0031 mL，0.058 mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌1 h。添加另一部分甲醛(水中之1.28 mol/L) (6.87 mg，0.0063 mL，0.085 mmol及硼氫化鈉(3.62 mg，0.0031 mL，0.058 mmol)，且將反應混合物攪拌隔夜。將混合物用二氯甲烷稀釋且傾入含有飽和碳酸氫鈉水溶液之分液漏斗中。分離各層且將水層用二氯甲烷萃取(3×)。將合併之有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由RP-HPLC純化殘餘物以得到呈白色固體狀之標題化合物(2.1 mg，7%)。LC/MS (方法X, ESI)：[M+H]+= 544.2, RT = 3.06 min。實例 9
Figure 02_image384
N -(3-(2-( 二氟甲氧基 )-5-(( 二氟甲基 ) 碸基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺 步驟1：N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((二氟甲基)硫基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺
Figure 02_image386
向50-mL圓底燒瓶中裝入2-氯-2,2-二氟乙酸鈉(617 mg，4.05 mmol，1.00當量)、N ,N -二甲基甲醯胺(10 mL，129 mmol，1.00當量)、碳酸銫(704 mg，2.16 mmol，2.00當量)、N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[[參(丙烷-2-基)矽基] 硫烷基]苯基]-1-甲基-lH -吡唑-4-基]吡唑并[l,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(中間物 6 ，328 mg，0.59 mmol，2.00當量)。將所得溶液在100℃下攪拌。在真空下濃縮所得混合物。將殘餘物施用至使用乙酸乙酯/石油醚(1:1)之矽膠管柱上。這產生100 mg (5%)呈黃色固體之N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(二氟甲基)硫烷基]苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。LC/MS (方法H, ESI)：[M+H]+= 467.2, RT = 1.20 min。 步驟2：N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((二氟甲基)碸基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺
Figure 02_image388
向25-mL圓底燒瓶中裝入N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(二氟甲基)硫烷基]苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺 (100 mg，0.22 mmol，1.00當量)、二氯甲烷(4 mL，62.9 mmol，1.00當量)、m-CPBA (74.4 mg，0.43 mmol，2.00當量)。將所得溶液在室溫下攪拌4 h。在真空下濃縮所得混合物。將殘餘物施用至以二氯甲烷/甲醇(20:1)溶離之矽膠管柱上。這產生6.2 mg (6%)呈黃色固體之N -[3-[5-(二氟甲烷)碸基-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 9.66 (s, 1H), 9.35 (dd,J =6.9, 1.5 Hz, 1H), 8.70 – 8.67 (m, 2H), 8.35 (s, 1H), 8.18 (dd,J =8.7, 2.4 Hz, 1H), 8.07 (d,J =2.4 Hz, 1H), 7.81 – 7.22 (m, 4H), 3.97 (s, 1H)。LC/MS (方法A, ESI)：[M+H]+= 499.2, RT = 1.56 min。實例 4
Figure 02_image389
N -(3-(5-( 吖呾 -3- 基碸基 )-2-( 二氟甲氧基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺 步驟1：3-((4-(二氟甲氧基)-3-(1-甲基-4-(吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺基)-1H -吡唑-3-基)苯基)碸基)吖呾-1-羧酸三級丁酯之合成
Figure 02_image391
向以惰性氮氣氣氛吹掃且保持之30-mL密封管中裝入N -[3-[5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(中間物 3 ，1.00 g，2.16 mmol)、Pd2 (dba)3 (104 mg，0.114 mmol，0.053當量)、3-硫烷基吖呾-1-羧酸三級丁酯(500 mg，2.64 mmol，1.22當量)、XantPhos (116 mg，0.20 mmol，0.093當量)、碳酸鉀(552 mg，3.99 mmol，1.85當量)及甲苯(15 mL)。將所得溶液在100℃下攪拌隔夜且在真空下濃縮。將殘餘物施用至使用二氯甲烷/甲醇(94/6)之矽膠管柱上。將所收集流份合併且在真空下濃縮。這產生1.5 g (122%)呈紅色固體之3-[[4-(二氟甲氧基)-3-(1-甲基-4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-醯胺基]-1H-吡唑-3-基)苯基]硫烷基]吖呾-1-羧酸三級丁酯。LC/MS (方法A, ESI)：[M+H]+= 572.3, RT = 1.28 min。 步驟2：3-[[4-(二氟甲氧基)-3-(1-甲基-4-[吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-醯胺基]-1H -吡唑-3-基)苯]碸基]吖呾-1-羧酸三級丁酯之合成
Figure 02_image393
向50-mL圓底燒瓶中裝入3-[[4-(二氟甲氧基)-3-(1-甲基-4-[吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-醯胺基]-1H -吡唑-3-基)苯基]硫烷基]吖呾-1-羧酸三級丁酯(100 mg，0.175 mmol)、二氯甲烷(10 mL)及3-氯苯-1-碳過氧酸(60 mg，0.35 mmol，2.0當量)。將所得溶液在室溫下攪拌2 h。在真空下濃縮所得混合物。將殘餘物施用至使用二氯甲烷/甲醇(92/8)之矽膠管柱上。將所收集流份合併且在真空下濃縮。這產生100 mg (95%)呈棕色固體之3-[[4-(二氟甲氧基)-3-(1-甲基-4-[吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-醯胺基]-1H -吡唑-3-基)苯]碸基]吖呾-1-羧酸三級丁酯。LC/MS (方法I, ESI)：[M+H]+= 604.3, RT = 1.05 min。 步驟3：N -(3-(5-(吖呾-3-基碸基)-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image395
向50-mL圓底燒瓶中裝入3-[[4-(二氟甲氧基)-3-(1-甲基-4-[吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-醯胺基]-1H -吡唑-3-基)苯]碸基]吖呾-1-羧酸三級丁酯(100 mg，0.166 mmol，1.00當量)、三氟乙酸(1 mL，13.5 mmol，82當量)及二氯甲烷(10 mL)。將所得溶液在室溫下攪拌6 h。在真空下濃縮所得混合物。藉由急劇製備型-HPLC使用以下條件(IntelFlash-1)純化粗產物(5 mL)：管柱，矽膠；流動相，在10 min內H2 O(NH4 HCO3 )/CH3 CN=90/10增加至H2 O(NH4 HCO3 )/CH3 CN=50/50；偵測器，UV 254 nm。這產生11.6 mg (14%)呈灰白色固體之N -[3-[5-(吖呾-3-碸基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 9.67 (s, 1H), 9.35 (dd,J =6.8, 1.6 Hz, 1H), 8.70 – 8.66 (m, 2H), 8.34 (s, 1H), 8.07 (dd,J =4.4, 1.6 Hz, 1H), 8.00 (s,J =2.4 Hz, 1H), 7.70 – 7.29 (m, 3H), 4.67 – 4.59 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.80 – 3.77 (m, 2H), 3.60 – 3.56 (m, 2H)。LC/MS (方法A, ESI)：[M+H]+= 504.2, RT = 1.12 min。實例 3
Figure 02_image397
N -(3-(2-( 二氟甲氧基 )-5-((1- 甲基吖呾 -3- 基 ) 碸基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺
向50-mL圓底燒瓶中裝入N -[3-[5-(吖呾-3-碸基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺 (50 mg，0.099 mmol，1.00當量)、甲醇(1 mL)、NaBH(AcO)3 (200 mg，0.94 mmol，9.5當量)及二氯甲烷(10 mL)。將所得溶液在室溫下攪拌隔夜。在真空下濃縮所得混合物。藉由急劇製備型-HPLC使用以下條件(IntelFlash-1)純化粗產物(5 mL)：管柱，矽膠；流動相，在10 min內H2 O(NH4 HCO3 )/CH3 CN=90/10增加至H2 O(NH4 HCO3 )/CH3 CN =50/50；偵測器，UV 254 nm。這產生18.1 mg (35%)呈灰白色固體之N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1-甲基吖呾-3-碸基)苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 9.67 (s, 1H), 9.35 (dd,J =6.8, 1.6 Hz, 1H), 8.70 – 8.66 (m, 2H), 8.34 (s, 1H), 8.07 (dd,J = 4.4, 1.6 Hz, 1H), 8.00 (s,J = 2.4 Hz, 1H), 7.70 – 7.29 (m, 3H), 4.67 – 4.59 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.80 – 3.77 (m, 2H), 3.60 – 3.56 (m, 2H)。LC/MS (方法A, ESI)：[M+H]+= 518.3, RT = 1.14 min。
Figure 02_image399
N -(3-(5-((1- 乙醯基吖呾 -3- 基 ) 碸基 )-2-( 二氟甲氧基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺
向50-mL圓底燒瓶中裝入N -[3-[5-(吖呾-3-碸基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(80 mg，0.159 mmol)、二氯甲烷(15 mL)、吡啶(60 mg，0.76 mmol，4.8當量)。在0℃下將乙醯氯(15 mg，0.19 mmol，1.20當量)添加到該溶液中。將所得溶液在室溫下攪拌30 min。然後藉由添加10 mL水來淬滅反應物。將所得溶液用2x20 mL二氯甲烷萃取，且將有機層合併，乾燥且在真空下濃縮。將殘餘物施用至以二氯甲烷/甲醇(93:7)溶離之矽膠管柱上。藉由製備型-HPLC使用以下條件(2#-分析型HPLC-SHIMADZU(HPLC-10))純化粗產物：管柱，Kinetex EVO C18管柱，30*150, 5μm；流動相，水(10mmol/L NH4 HCO3 )及ACN (在8 min內21.0% ACN多至25.0%)；偵測器，UV 254/220 nm。這產生5.8 mg (7%)呈白色固體之N-[3-[5-(1-乙醯基吖呾-3-碸基)-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-1H-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 9.68 (s, 1H), 9.36 (dd,J =6.8, 1.6 Hz, 1H), 8.70 – 8.68 (m, 2H), 8.34 (s, 1H), 8.16 (dd,J =6.8, 2.4 Hz, 1H), 8.07 (d,J =2.4 Hz, 1H), 7.72 – 7.30 (m, 3H), 4.62 – 4.55 (m, 1H), 4.38 – 4.34 (m, 2H), 4.07 – 3.98 (m, 2H), 3.97 (s, 3H), 2.08 (s, 3H)。LC/MS (方法A, ESI)：[M+H]+= 546.2, RT = 1.32 min。實例 26
Figure 02_image401
N -[3-[2-( 二氟甲氧基 )-5-( 甲基胺磺醯基 ) 苯基 ]-1- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ] 吡唑并 [1,5-a] 嘧啶 -3- 甲醯胺
向以惰性氮氣氣氛吹掃且保持之25-mL 2頸圓底燒瓶中裝入4-(二氟甲氧基)-3-(1-甲基-4-[吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-醯胺基]-1H -吡唑-3-基)苯-1-磺酸(中間物 7 ，150 mg，0.323 mmol)、二氯甲烷(10 mL)、N ,N -二甲基甲醯胺(0.05 mL，0.646 mmol，2.00當量)、草醯氯(0.50 mL，5.87 mmol，18.2當量)、吡啶(100 mg，1.26 mmol，3.91當量)及甲基胺(0.50 mL，14.4 mmol，44.7當量)。將所得溶液在室溫下攪拌1 h。然後藉由添加10 mL水來淬滅反應物。用2x20 mL二氯甲烷萃取所得溶液且將有機層合併，且經無水硫酸鈉乾燥並在真空下濃縮。將殘餘物施用至以二氯甲烷/甲醇(93:7)溶離之矽膠管柱上。藉由製備型-HPLC使用以下條件(2#-分析型HPLC-SHIMADZU(HPLC-10))純化粗產物(20 mg)：管柱，Kinetex EVO C18管柱，30*150, 5μm；流動相，水(10MMOL/L NH4HCO3)及ACN (在7 min內20% ACN多至35%)；偵測器，UV 254/220 nm。這產生8.6 mg (6%)呈白色固體之N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(甲基胺磺醯基)苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 9.70 (s, 1H), 9.35 (dd,J =7.2, 1.6 Hz, 1H), 8.70 – 8.68 (m, 2H), 8.34 (s, 1H), 7.96 – 7.93 (m, 2H), 7.66 – 7.26 (m, 4H), 3.96 (s, 3H), 2.44 (s, 3H)。LC/MS (方法A, ESI)：[M+H]+= 478.2, RT = 1.39 min。實例 5
Figure 02_image403
N -(3-(2-( 二氟甲氧基 )-5-((2- 羥基乙基 ) 碸基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺 步驟1：N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((2-羥基乙基)硫基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image405
在室溫下在氮氣下向N -[3-[5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(中間物 3 ，20.0 g，43.2 mmol), DIEA (11.2 g，86.5 mmol)、Pd2 (dba)3 ·CH3 Cl (2.24 g，2.16 mmol)及XantPhos (2.5 g，4.32 mmol)於1,4-二噁烷(200 mL)中之溶液中添加2-巰基乙醇(3.19 mL，45.3 mmol)。將所得溶液在95℃下攪拌4 h。將所得混合物冷卻至室溫且過濾。將濾液在真空下濃縮。藉由以MeOH/DCM (3%)溶離之矽膠急劇層析純化粗殘餘物，以得到呈灰白色固體之N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((2-羥基乙基)硫基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(16.8 g，36.5 mmol，84.5%產率)。LC/MS (方法A, ESI)：[M+H]+= 461.1, RT = 1.02 min。 步驟2：N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-羥基乙基碸基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image407
在25℃下將過氧單磺酸鉀(125 g，204 mmol)溶解於水(450 mL)中同時攪拌，且然後將其添加到N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((2-羥基乙基)硫基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(45 g，97 mmol)於甲醇(900 mL)中之懸浮液中。將所得懸浮液在室溫下攪拌6 h。添加水(1 L)，且在真空下濃縮所得懸浮液，以去除甲醇。在過濾後，收集固體且用水(100 mL)洗滌。在50℃下乾燥固體且用水(500 mL)漿化。在過濾後，收集固體且用水(50 mL)洗滌。將固體在50℃下乾燥隔夜，以得到44 g。在80℃下將固體用EtOH (400 mL)漿化3 h且然後在油浴中使其冷卻至室溫。在過濾後，收集固體且藉由EtOH (20 mL)洗滌。在80℃下將固體用EtOH (300 mL)漿化3 h且然後在油浴中使其冷卻至室溫並攪拌隔夜。在過濾後，收集固體且藉由EtOH (50 mL)洗滌。將固體在50℃下乾燥隔夜，以得到呈灰白色固體之N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-羥基乙基碸基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(43.3 g，87.9 mmol，90.4%產率)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) 9.68 (s, 1H), 9.34 (dd,J = 7.0, 1.6 Hz, 1H), 8.68 (dd,J = 4.2, 1.6 Hz, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.11 8.01 (m, 2H), 7.67 – 7.29 (m, 3H), 4.89 (t,J = 5.3 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.71 (m, 2H), 3.53 (t,J = 6.2 Hz, 2H)。LC/MS (方法A, ESI)：[M+H]+= 493.2, RT = 1.27 min。實例 34
Figure 02_image408
3-(2-( 二氟甲氧基 )-5-( 甲基碸基 ) 苯基 )-4-( 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺基 )-1H - 吡唑 -1- 羧酸異丙酯
向100-mL 3頸圓底燒瓶中裝入N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-甲烷碸基苯基]-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺 (100 mg，0.223 mmol)、三苯基膦(76 mg，0.29 mmol，1.3當量), DIAD (58.6 mg，0.290 mmol，1.30當量)及甲苯(6 mL)。將所得溶液在95℃下攪拌隔夜。在真空下濃縮所得混合物。將殘餘物施用至使用乙酸乙酯/石油醚(4:1)之矽膠管柱上。這產生20 mg (17%)呈白色固體之3-(2-(二氟甲氧基)-5-(甲基碸基)苯基)-4-(吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺基)-1H -吡唑-1-羧酸異丙酯。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) 9.87 (s, 1H), 9.37 (dd,J = 7.2, 1.5 Hz, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.64 (dd,J = 4.2, 1.8 Hz, 1H), 8.25 (dd,J = 8.9, 2.7 Hz, 1H), 8.16 (d,J = 2.4 Hz, 1H), 7.80 – 7.26 (m, 3H), 5.26 – 5.18 (m, 1H), 3.33 (s, 1H), 1.42 (d,J = 6.3 Hz, 1H)。LC/MS (方法A, ESI)：[M+H]+= 535.2, RT = 1.68 min。實例 12
Figure 02_image410
N -(3-(2-( 二氟甲氧基 )-5-((3- 甲氧基苯基 ) 碸基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺 步驟1：N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(3-甲氧基苯基)硫烷基]苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image412
向以惰性氮氣氣氛吹掃且保持之30-mL密封管中裝入N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[[參(丙烷-2-基)矽基]硫烷基]苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺 (中間物 6 , 1.10 g，1.92 mmol，1.00當量)、氟化銫(658 mg，4.33 mmol，2.26當量)、異丙醇(20 mL)、1-溴-3-甲氧基苯(809 mg，4.33 mmol，2.25當量)、Pd2 (dba)3 .CHCl3 (117 mg，0.113 mmol，0.059當量)、碳酸銫(1.40 g，4.30 mmol，2.24當量)。將所得溶液在90 ℃下攪拌6 h。將所得混合物在真空下濃縮。將殘餘物施用至使用二氯甲烷/甲醇(95/5)之矽膠管柱上。將所收集流份合併且在真空下濃縮。這產生1.2 g (120%)呈紅色固體之N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(3-甲氧基苯基)硫烷基]苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。 步驟2：N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((3-甲氧基苯基)碸基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成。
Figure 02_image414
向50-mL圓底燒瓶中裝入N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(3-甲氧基苯基)硫烷基]苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(800 mg，1.53 mmol)、二氯甲烷(10 mL)、3-氯苯-1-碳過氧酸(753 mg，4.36 mmol，1.00當量)。將所得溶液在室溫下攪拌2 h。濃縮混合物且藉由管柱層析純化粗產物，以提供N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((3-甲氧基苯基)碸基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 9.67 (s, 1H), 9.32 (dd,J =7.2, 1.5 Hz, 1H), 8.65 – 8.60 (m, 2H), 8.31 (s, 1H), 8.20 (dd,J =8.7, 2.4 Hz, 1H), 8.08 – 7.20 (m, 7H), 3.95 (s, 3H), 3.81 (s, 3H)。LC/MS (方法A, ESI)：[M+H]+= 555.3, RT = 1.65 min。實例 11
Figure 02_image415
N -(3-(2-( 二氟甲氧基 )-5-((3- 羥基苯基 ) 碸基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺
向以惰性氮氣氣氛吹掃且保持之50-mL圓底燒瓶中裝入N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(3-甲氧基苯)碸基]苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(410 mg，0.739 mmol)、二氯甲烷(10 mL)及三溴硼烷(1.5 mL，12.0 mmol，16.2當量)。將所得溶液在室溫下攪拌3 h。在真空下濃縮所得混合物且藉由管柱層析來純化。這產生76.5 mg (19%)呈灰白色固體之N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(3-羥基苯)碸基]苯基]-1-甲基-1H -吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ): δ (ppm) 10.26 (s, 1H), 9.67 (s, 1H), 9.32 (dd,J =7.2, 1.5 Hz, 1H), 8.66 – 8.63 (m, 2H), 8.33 (s, 1H), 8.12 (dd,J =8.8, 2.4 Hz, 1H), 8.02 (d,J =2.4 Hz, 1H), 7.66 – 7.26 (m, 6H), 7.06 – 7.01 (m, 1H), 3.96 (s, 3H)。LC/MS (方法A, ESI)：[M+H]+= 541.3, RT = 1.51 min。實例 35
Figure 02_image417
N -(3-(2-( 二氟甲氧基 )-5-((1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 碸基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺 步驟1：N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1-甲基吡唑-4-基)硫烷基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image419
向小瓶中添加N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-硫烷基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(中間物 8 ，1.05 g，2.52 mmol)及XantPhos Pd G3 (201 mg，0.202 mmol)。添加N ,N -二甲基甲醯胺(16.8 mL)，隨後添加4-溴-1-甲基-1H-吡唑(837 mg，0.537 mL，5.04 mmol)及N ,N -二異丙基乙胺(978 mg，1.32 mL，7.56 mmol)，且使氮氣鼓泡透過反應混合物3 min。將反應混合物在微波反應器中加熱至180℃達30 min。藉由添加飽和氯化銨水溶液來淬滅反應混合器且將其用乙酸乙酯萃取(3x)。將合併之有機層以鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。使殘餘物吸附至二氧化矽上且藉由急劇管柱層析使用庚烷中之10%-80% 3:1 MeOH : iPrOAc純化，以得到呈黃色泡沫之N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1-甲基吡唑-4-基)硫烷基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(555 mg，44%)。LC/MS (方法W, ESI)：[M+H]+= 497.2 RT = 1.09 min。 步驟2：N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((1-甲基-1H -吡唑-4-基)碸基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image421
向N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1-甲基吡唑-4-基)硫烷基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺(651 mg，1.31 mmol)於二氯甲烷(16.4 mL)中之溶液中添加3-氯-過苯甲酸(1.18 g，5.25 mmol)且將反應物在室溫下攪拌30 min。在真空中濃縮反應混合物且將殘餘物溶解於乙酸乙酯中且用飽和氯化銨水溶液洗滌。將水層用EtOAc萃取(2x)，且將合併之有機層用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。按比例重複此反應，以得到N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1-甲基吡唑-4-基)硫烷基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺(555 mg)，且將兩個部分合併以重結晶。將合併批次完全溶解於410 mL煮沸的EtOH中。停止加熱且使該溶液緩慢冷卻至室溫，同時攪拌，然後在冰浴中冷卻。過濾沉澱，收集且在真空下乾燥，以得到N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((1-甲基-1H -吡唑-4-基)碸基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(372 mg，29%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.64 (s, 1H), 9.33 (dd,J = 7.0, 1.7 Hz, 1H), 8.67 – 8.61 (m, 2H), 8.51 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.10 (dd,J = 8.8, 2.5 Hz, 1H), 8.03 (d,J = 2.5 Hz, 1H), 7.97 (d,J = 0.9 Hz, 1H), 7.64 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.42 (t,J = 72.5 Hz, 1H), 7.28 (dd,J = 7.0, 4.3 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.83 (s, 3H)。LC/MS (方法X, ESI)：[M+H]+= 529.1 RT = 3.96 min。實例 41
Figure 02_image422
N -(3-(5-((1H - 吡唑 -4- 基 ) 碸基 )-2-( 二氟甲氧基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺 步驟1：N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1H -吡唑-4-基硫烷基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image424
向小瓶中添加N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-硫烷基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(中間物 8 , 1000 mg，2.40 mmol)、4-溴-1H-吡唑(706 mg，4.80 mmol)及XantPhos Pd G3 (240 mg，0.240 mmol)。添加N ,N -二甲基甲醯胺(16.0 mL)，隨後添加N ,N -二異丙基乙胺(931 mg，1.26 mL，7.20 mmol)，且使氮氣鼓泡透過反應混合物3 min。將反應混合物在微波反應器中加熱至180℃達45 min。藉由添加飽和氯化銨水溶液來淬滅反應混合物且用EtOAc萃取(3x)。將合併之有機層以鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮。使殘餘物吸附至二氧化矽上且藉由急劇管柱層析使用庚烷中之10%-80% 3:1 MeOH : iPrOAc純化，以得到呈橘色固體之N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1H -吡唑-4-基硫烷基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(517 mg，45%)。 步驟2：N -(3-(5-((1H -吡唑-4-基)碸基)-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image426
向N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1H -吡唑-4-基硫烷基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺 (517 mg，1.07 mmol)於二氯甲烷(10 mL)中之溶液中添加3-氯過苯甲酸(961 mg，4.29 mmol)且將反應物在室溫下攪拌30 min。將反應混合物用二氯甲烷稀釋且將其傾入含有飽和碳酸氫鈉水溶液之分液漏斗中。分離各層且將水層用二氯甲烷萃取(3×)。將合併之有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。使殘餘物吸附至二氧化矽上且藉由急劇管柱層析使用庚烷中之10%-80% 3:1 MeOH : iPrOAc純化，以得到呈棕色固體之N -(3-(5-((1H -吡唑-4-基)碸基)-2-(二氟甲氧基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(383 mg，69%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 13.78 (s, 1H), 9.64 (s, 1H), 9.32 (dd,J = 7.0, 1.7 Hz, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.63 (dd,J = 4.3, 1.7 Hz, 1H), 8.40 – 8.18 (m, 3H), 8.11 (dd,J = 8.8, 2.5 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.63 (d,J = 8.7 Hz, 1H), 7.41 (t,J = 72.5 Hz, 1H), 7.27 (dd,J = 7.0, 4.2 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H)。LC/MS (方法X, ESI)：[M+H]+=515.1 RT = 3.71 min。實例 53
Figure 02_image427
N -(3-(5-((1-(2-( 吖呾 -1- 基 ) 乙基 )-1H - 吡唑 -4- 基 ) 碸基 )-2-( 二氟甲氧基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺
向N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(1H -吡唑-4-基碸基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(50 mg，0.097 mmol)、PS-三苯基膦(85.0 mg，0.20 mmol)、氮雜二羧酸二三級丁酯(49.2 mg，0.21 mmol)於四氫呋喃(1.5 mL)中之溶液中添加2-(吖呾-1-基)乙醇(20.3 mg，0.019 mL，0.19 mmol)，且將反應混合物加熱至60℃達90 min。過濾反應混合物且在真空中濃縮濾液。將粗混合物溶解於二氯甲烷(3 mL)及HCl (於***中之2.0 mol/L，0.73 mL，1.46 mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌1 h。在真空中濃縮反應混合物且將其溶解於二氯甲烷中。添加MP-碳酸鹽(464 mg，1.458 mmol)且將反應混合物攪拌隔夜。過濾混合物且在真空中濃縮，且藉由反相HPLC純化，以得到呈白色固體之標題化合物(25.4 mg，44%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.64 (s, 1H), 9.33 (dd, J = 7.0, 1.6 Hz, 1H), 8.66 – 8.63 (m, 2H), 8.52 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.24 (s, 2H), 8.11 (dd, J = 8.7, 2.5 Hz, 1H), 8.03 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.99 – 7.94 (m, 1H), 7.64 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.42 (t, J = 72.5 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 7.0, 4.3 Hz, 1H), 4.02 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.95 (s, 3H), 2.97 (t, J = 7.0 Hz, 4H), 1.87 – 1.76 (m, 2H)。LC/MS (方法X, ESI)：[M+H]+=598.2 RT = 3.07 min。實例 40
Figure 02_image429
N -(3-(2-( 二氟甲氧基 )-5-( 苯基碸基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺 步驟1：N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(苯基硫基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image431
向冷卻至0℃之N -[3-[5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(中間物 3 ，200 mg，0.43 mmol)、硫酚(57 mg，0.053 mL，0.52 mmol)、XantPhos Pd G2 (38.3 mg，0.0432 mmol)及XantPhos (25 mg，0.0432 mmol)於甲苯(11 mL)中之溶液中添加NaH (34.5 mg，0.86 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌30 min，在室溫下攪拌1 h，且然後加熱至90℃達2 h。將反應混合物用二氯甲烷稀釋，透過以二氯甲烷溶離之矽藻土過濾，且在真空中濃縮濾液。粗N-(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(苯基硫基)苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲醯胺未經進一步純化即使用。LC/MS (方法W, ESI)：[M+H]+=593.1 RT = 1.34 min。 步驟2：N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-(苯基碸基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image433
向N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-苯基硫烷基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺 (213 mg，0.432 mmol)於二氯甲烷(4.0 mL)中之溶液中添加3-氯過苯甲酸(203 mg，0.91 mmol)且將反應物在室溫下攪拌2 d。添加3-氯過苯甲酸(68 mg，0.302 mmol)，且在1 h後添加第二部分(25 mg)。在1 h後，將混合物用二氯甲烷稀釋且傾入含有飽和碳酸氫鈉水溶液之分液漏斗中。分離各層且將水層用二氯甲烷萃取(3×)。將合併之有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由反相HPLC純化殘餘物以得到呈白色固體之標題化合物(107.2 mg，47%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.61 (s, 1H), 9.32 (dd, J = 7.0, 1.5 Hz, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.62 (dd, J = 4.3, 1.7 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.15 (dd, J = 8.8, 2.5 Hz, 1H), 8.06 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.03 – 7.93 (m, 2H), 7.71 – 7.22 (m, 6H), 3.95 (s, 3H)。LC/MS (方法X, ESI)：[M+H]+=525.1 RT = 4.58 min。實例 44
Figure 02_image434
N -(3-(2-( 二氟甲氧基 )-5-((1- 甲基 -2- 側氧基 -1,2- 二氫吡啶 -4- 基 ) 碸基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺 步驟1：N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(1-甲基-2-側氧基-4-吡啶基)硫烷基]苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image436
向小瓶中添加N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-硫烷基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(中間物 3 ，50 mg，0.12 mmol)及XantPhos Pd G3 (9.60 mg，0.0096 mmol)。添加N ,N -二甲基甲醯胺(1.5 mL)，隨後添加4-溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(47.5 mg，0.240 mmol)及N ,N -二異丙基乙胺(46.6 mg，0.0628 mL，0.360 mmol)，且使氮氣鼓泡透過反應混合物3 min。將反應混合物在微波反應器中加熱至180℃達30 min。藉由添加飽和氯化銨水溶液來淬滅反應混合物且用EtOAc萃取(3x)。將合併之有機層以鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且真空濃縮，以得到N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(1-甲基-2-側氧基-4-吡啶基)硫烷基]苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺。 步驟2：N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-4-基)碸基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image438
向N -[3-[2-(二氟甲氧基 )-5-[(1-甲基-2-側氧基-4-吡啶基)硫烷基]苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺 (63 mg，0.120 mmol)於二氯甲烷(2.0 mL)中之溶液中添加3-氯過苯甲酸(108 mg，0.48 mmol)且將反應物在室溫下攪拌15 min。將反應混合物用二氯甲烷稀釋且將其傾入含有飽和碳酸氫鈉水溶液之分液漏斗中。分離各層且將水層用二氯甲烷萃取(3×)。將合併之有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮。藉由RP-HPLC進一步純化殘餘物，以得到呈白色固體之標題化合物(29.2 mg，44%)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.63 (s, 1H), 9.33 (dd, J = 6.9, 1.6 Hz, 1H), 8.66 – 8.63 (m, 2H), 8.32 (s, 1H), 8.22 (dd, J = 8.8, 2.5 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.48 (t, J = 72.3 Hz, 1H), 7.28 (dd, J = 7.0, 4.3 Hz, 1H), 6.94 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 6.60 (dd, J = 7.1, 2.1 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.40 (s, 3H)。LC/MS (方法X, ESI)：[M+H]+=556.1 RT = 3.18 min。實例 15
Figure 02_image439
(S )-N -(3-(2-( 二氟甲氧基 )-5-((2- 羥基丙基 ) 碸基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺 步驟1：(S )-N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((2-羥基丙基)硫基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image441
向N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-硫烷基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺 (中間物 8 , 950 mg，2.28 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液中添加(S )-(-)-環氧丙烷(250 mg，4.3 mmol)及DIEA (900 mg，6.98 mmol)且將混合物在80℃下攪拌3 h。在冷卻至室溫後，在真空下濃縮反應混合物。藉由反相HPLC [流動相A：水(0.1% NH4 HCO3 )，流動相B：乙腈；梯度：在50 min內10% B至40% B]純化殘餘物，以得到呈淡黃色固體之N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(2S )-2-羥基丙基]硫烷基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(730 mg,1.54 mmol，67%產率)。LC/MS (方法O, ESI)：[M+H]+=475.2 RT = 1.43 min。 步驟2：(S )-N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((2-羥基丙基)碸基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image443
向N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(2S )-2-羥基丙基]硫烷基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺 (730 mg，1.54 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液中添加過硫酸氫鉀(2.0 g，3.25 mmol)於水(5.0 mL)中之溶液且將混合物在室溫下攪拌3 h。在真空下去除有機溶劑且添加10 mL水。藉由過濾收集固體。用水(5.0 mL x5)洗滌濾餅且在真空下乾燥。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150mm 5um；流動相A：水(10 mmol/L NH4 HCO3 )，流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：在8 min內16% B至37% B；254 nm；RT 1:7.45 min)純化殘餘物。將產物在室溫下在3.0 mL乙醇中攪拌隔夜，以得到呈灰白色固體之N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(2S )-2-羥基丙基]碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(783 mg，1.52 mmol)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.69 (s, 1H), 9.35 (dd,J = 6.8, 1.6 Hz, 1H), 8.70 – 8.68 (m, 2H), 8.34 (s, 1H), 8.09 – 8.04 (m, 2H), 7.68 – 7.29 (m, 3H), 4.90 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 4.10 – 4.04 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.50 – 3.40 (m, 2H), 1.12 (d,J = 6.0 Hz, 3H)。LC/MS (方法O, ESI)：[M+H]+=507.2 RT = 1.26 min。實例 25
Figure 02_image444
(R )-N -(3-(2-( 二氟甲氧基 )-5-((2- 羥基丙基 ) 碸基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺 步驟1：(R )-N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((2-羥基丙基)硫基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image446
向N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-硫烷基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺 (1.10 g，2.64 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液中添加(R )-(+)-環氧丙烷(300 mg，5.17 mmol)及 DIEA (1.00 g，7.75 mmol)且將反應混合物在80℃下攪拌3 h。在冷卻至室溫後，在真空下去除溶劑。藉由反相HPLC [流動相A：水(0.1% NH4 HCO3 )，流動相B：乙腈；梯度：在50 min內10% B至40% B]純化殘餘物，以的呈灰白色固體之N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(2R )-2-羥基丙基]硫烷基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(780 mg，1.64 mmol，62%產率)。LC/MS (方法O, ESI)：[M+H]+=475.2 RT = 1.43 min。 步驟2：(R )-N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((2-羥基丙基)碸基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image448
向N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(2R )-2-羥基丙基]硫烷基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(780 mg，1.64 mmol)於甲醇(10 mL)中之溶液中添加過硫酸氫鉀(2.0 g，3.26 mmol)於水(5.0 mL)中之溶液且將混合物在室溫下攪拌3 h。在真空下去除有機溶劑。添加水(10 mL)且藉由過濾收集固體。將濾餅用水(5.0 mL x5)洗滌且然後在真空下乾燥。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150 mm 5 um；流動相A：水(10 mmol/L NH4 HCO3 )，流動相B：ACN；流速：60 mL/min；梯度：在8 min內16% B至37% B；254 nm；RT 1:7.45 min)純化殘餘物。將產物在室溫下在3.0 mL乙醇中攪拌隔夜，以得到呈灰白色固體之N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-[(2S )-2-羥基丙基]碸基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(771 mg，1.51 mmol，92%產率)。LC/MS (方法O, ESI)：[M+H]+=507.2 RT = 1.26 min.1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.69 (s, 1H), 9.35 (dd,J = 6.8, 1.6 Hz, 1H), 8.70 – 8.68 (m, 2H), 8.34 (s, 1H), 8.10 – 8.04 (m, 2H), 7.68 – 7.29 (m, 3H), 4.90 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 4.10 – 4.04 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.50 – 3.40 (m, 2H), 1.12 (d,J = 6.0 Hz, 3H)。實例 23 及 24
Figure 02_image449
(R )-N -(3-(2-( 二氟甲氧基 )-5-((1- 羥基丙烷 -2- 基 ) 碸基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺及 (S )-N -(3-(2-( 二氟甲氧基 )-5-((1- 羥基丙烷 -2- 基 ) 碸基 ) 苯基 )-1- 甲基 -1H - 吡唑 -4- 基 ) 吡唑并 [1,5-a ] 嘧啶 -3- 甲醯胺 步驟1：N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((1-羥基丙烷-2-基)硫基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image451
在室溫下在氮氣下向N -[3-[5-溴-2-(二氟甲氧基)苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺 (2.00 g，4.32 mmol)於1,4-二噁烷(100 mL)中之溶液中添加Pd2 (dba)3 (396 mg，0.431 mmol)、Xantphos (500 mg，0.864 mmol)及DIPEA (1.67 g，13.0 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌15分鐘且加熱至90℃。將2-硫烷基丙烷-1-醇(580 mg，6.29 mmol)添加至反應混合物中且將所得混合物在90℃下攪拌10 h。將反應物冷卻至室溫且透過矽藻土過濾懸浮液。將濾液在真空下濃縮。藉由以DCM/EA (0%~100%)溶離之矽膠急劇層析來純化殘餘物，以得到呈灰白色固體之N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-羥基-1-甲基-乙基)硫烷基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(1.74 g，3.67 mmol，85%產率)。LC/MS (方法I, ESI)：[M+H]+=507.2 RT = 0.97 min。 步驟2：N -(3-(2-(二氟甲氧基)-5-((1-羥基丙烷-2-基)碸基)苯基)-1-甲基-1H -吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺之合成
Figure 02_image449
將N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-羥基-1-甲基-乙基)硫烷基-苯基]-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺(850 mg，1.79 mmol)於甲醇(8.0 mL)中之溶液在0℃下攪拌5 min。然後在0℃下添加過硫酸氫鉀(2.20 g，3.58 mmol)於水(8.0 mL)中之溶液。將反應溶液在室溫下攪拌1 h。將反應混合物濃縮且過濾。將濾餅與DCM (10 mL)混合且過濾。在真空下濃縮濾液，以得到該產物(779 mg，1.54 mmol，86%產率)。以相同規模重複該反應且將其合併，以得到1.10 g (61%產率的外消旋物)。藉由掌性-SFC使用以下條件純化合併之產物：管柱：Lux 5um Cellulose-4, 5*25cm, 5μm；流動相A：CO2 ，流動相B：EtOH:ACN = 2:1 (2 mM NH3 -MeOH)；流速：150 mL/min；梯度：40% B；220 nm；RT 1：9.03 min；RT 2：10.79 min。將含有兩種鏡像異構物之流份合併且濃縮，藉由在室溫下在2 mL異丙醇中攪拌2日來使二者重結晶。藉由過濾分離產物，以得到標題化合物，其立體化學分配任意進行。
峰1：獲得呈灰白色固體之(R )-(N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-羥基-1-甲基-乙基)碸基-苯基)-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺，341 mg)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.67 (s, 1H), 9.34 (dd,J = 7.0, 1.6 Hz, 1H), 8.79 – 8.55 (m, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.17 – 7.85 (m, 2H), 7.79 – 7.16 (m, 3H), 4.96 (t,J = 5.6 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.70 (m, 1H), 3.60 – 3.27 (m, 2H), 1.22 (d, J = 6.7 Hz, 3H)。LC/MS (方法X, ESI)：[M+H]+=507.1 RT = 3.59 min。
峰2：獲得呈灰白色之(S )-(N -[3-[2-(二氟甲氧基)-5-(2-羥基-1-甲基-乙基)碸基-苯基)-1-甲基-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a ]嘧啶-3-甲醯胺，411 mg)。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 9.67 (s, 1H), 9.34 (dd,J = 7.0, 1.6 Hz, 1H), 8.79 – 8.45 (m, 2H), 8.32 (s, 1H), 8.17 – 7.86 (m, 2H), 7.86 – 7.16 (m, 3H), 4.96 (t,J = 5.5 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.70 (m, 1H), 3.60 – 3.28 (m, 2H), 1.22 (d, J = 6.7 Hz, 3H)。LC/MS (方法X, ESI)：[M+H]+=507.1 RT = 3.56 min。檢定 測試藥劑
測試藥劑樣本作為於二甲亞碸(DMSO)中之濃度為10 mM的溶液提供且在使用前儲存於黑暗、室溫下。 JAK1 及 JAK2 生化檢定
活體外生化檢定定量合成肽之經JAK催化之磷酸化，如使用LabChip® EZ Reader II微流體流動性轉移儀器(PerkinElmer; Waltham, MA)所偵測. 受質肽Y-1B具有序列5-FAM-VALVDGYFRLTT-NH2 。Y-1B在N端被5-FAM (5-羧基螢光素)螢光標記且含有可藉由JAK活性磷酸化之單酪胺酸殘基(Y)。將受質肽儲備液以DMSO製備為5 mM。使經純化重組人類JAK1激酶域蛋白(殘基854-1154)在昆蟲細胞中表現且獲自Proteros Biostructures GmbH (Martinsried, Germany)。使重組人類JAK2激酶域蛋白(殘基812-1132)在昆蟲細胞中表現且在Genentech, Inc. (South San Francisco, CA)處純化。
激酶反應混合物含有100 mM 4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸(HEPES)緩衝液(pH 7.2)、10 mM氯化鎂、0.015% Brij® 35、4 mM二硫蘇糖醇、1.5 μM Y-1B肽受質、25 μM三磷酸腺苷(ATP)、1 nM總JAK1或0.2 nM總JAK2及於最終濃度為2%之(體積比體積[v/v]) DMSO中之多至1000 nM測試化合物。在各滴定實驗中，在十二個濃度之各濃度下對測試化合物重複測試兩次。空白反應物含有ATP、肽及DMSO，但不含JAK或測試化合物，而未受抑制對照反應物含有ATP、肽、JAK及DMSO，但不含測試化合物。
將肽加上ATP混合物(24 μL)添加至1 μL DMSO中之測試化合物(或單獨DMSO)中。藉由將25 μL JAK酶添加至抑制劑/肽/ATP混合物之後徹底混合所得溶液來開始反應。將反應物在室溫下(22℃-23℃)在384孔板之每孔50 μL的最終體積中孵育。在孵育30分鐘後，藉由將25 μL於含有0.015% Brij 35之100 mM HEPES緩衝液(pH 7.2)中之150 mM乙二胺四乙酸添加至各孔中來終止反應。
在各反應中，使用EZ Reader II儀器分離殘餘Y-1B受質及所生成之磷酸-肽產物。分別使用-500及-2600 V之下游及上游電壓在-1.3 psi操作壓力下達成產物分子與受質分子之電泳分離。在488 nm下激發存在於受質及產物肽上之5-FAM基團，且在530 nm下偵測螢光，且報告峰高度。資料分析
受質轉化為產物之程度(或百分比)由使用HTS Well Analyzer軟體5.2版(PerkinElmer)得到之電泳圖中的相應峰高度及以下等式(等式1)計算：等式 1
Figure 02_image454
其中S及P分別表示受質及產物之峰高度。在自所有測試孔之訊息減去不含JAK之空白孔之任何基線訊息後，將%轉化資料轉換為如等式2所示之分數活性，其中v i 及v o 分別為測試化合物存在及不存在時之%轉化。含有JAK及DMSO媒劑但不含測試化合物之未受抑制對照反應物中觀測到的%轉化被定義為具有分數活性= 1 (其中不存在抑制劑，v i =v o )，而不具有JAK之空白孔被定義為具有分數活性= 0。將分數活性針對測試化合物濃度作圖且使用XLfit軟體(IDBS; Guildford, United Kingdom)將該資料擬合至緊密結合表觀抑制常數(K i 表觀 )二次方程式(參見等式2) (Williams JW, Morrison JF. The kinetics of reversible tight-binding inhibition.Methods Enzymol 1979;63 :437-67.)，該二次方程式用於計算分數活性及K i 表觀 等式 2
Figure 02_image455
其中[E ]T 及[I]T 分別為活性酶(初始估值對於JAK1為0.15 nM且對於JAK2為0.048 nM)及抑制劑(可變參數)之總濃度。最後，K i 藉由應用競爭性抑制關係(等式3)由K i 表觀 計算等式 3 K i =K i 表觀 /(1 + [ATP]/K m 表觀 ) 其中[ATP]為ATP = 25 μM之濃度，K m 表觀 為表觀ATP Michaelis常數，對於JAK1，該常數= 32.1 μM，且對於JAK2，K m 表觀 = 11.7 μM。藉由應用考慮抑制劑之任何消耗的緊密結合等式2以及競爭性抑制關係等式3，檢定之敏感性可至少延長至對JAK1計算之K i 0.008 nM及對JAK2之0.0015 nM。激酶選擇性
在一組重組人類激酶活性及結合檢定中評定測試藥劑在1 μM濃度下之活體外激酶選擇性，包括細胞質及受體酪胺酸激酶、絲胺酸/蘇胺酸激酶及脂質激酶(SelectScreen® Kinase Profiling Services, ThermoFisher Scientific, Madison, WI)。激酶活性檢定量測肽磷酸化(Z’-LYTE® )或ADP產生(Adapta® )，而結合檢定監測ATP位點結合探針之置換(LanthaScreen® )。活性檢定中所用之ATP濃度通常為憑實驗確定之各激酶的表觀Michaelis常數(K m 表觀 )值之2倍內，而結合檢定中所用之競爭性結合痕量濃度通常為憑實驗確定之解離常數(K d )值之3倍。針對各激酶重複兩次測試抑制劑且報告%抑制值平均值。對於在初始1-μM測試濃度下受到抑制接近或大於50%之激酶，使用相同檢定進行10點抑制劑滴定，以便確定引起50%抑制(IC50 )之抑制劑濃度。此檢定組中所用之總JAK1濃度為75 nM。若100% 75 nM JAK1蛋白具有催化活性，則來自供應商JAK1檢定之JAK1抑制劑靈敏度限度在理論上將為37.5 nM之IC50 值(總酶濃度之一半)。然而，SelectScreen® JAK1檢定生成若干抑制劑之JAK1 IC50 值，該等值遠低於37.5 nM且與內部確定值一致。因此，SelectScreen® 檢定中之活性JAK1酶濃度必須遠低於該檢定中所用之總標稱JAK1蛋白濃度75 nM，且此檢定所觀測到之靈敏度遠好於理論靈敏度IC50 限度37.5 nM。資料分析
對於使濃度-激酶抑制曲線圖中之資料擬合，SelectScreen® 激酶剖析服務使用XLfit軟體(IDBS)模型編號205 (S形濃度-反應模型)，其為由等式4描述之四參數邏輯擬合模型 等式4
Figure 02_image457
其中x為抑制劑濃度，y為所觀測到之%抑制，A為最小y-值，B為最大y-值，C為IC50 值，且D為Hill斜率。在某些情況下，使用三參數邏輯擬合。例如，若在無限低抑制劑濃度下曲線之平台期未在-20%與20%抑制之間擬合，則該平台期下限被設置為0%抑制，而若在無限抑制劑濃度下曲線之平台期未在70%與130%抑制之間擬合，則平台期上限被設置為100%抑制。TF-1 細胞株磷酸 -STAT JAK1 及 JAK2 路徑選擇性檢定
使TF-1人紅白血病細胞(ATCC® ；Manassas, VA；目錄號CRL-2003TM )在Roswell Park Memorial Institute (RPMI)培養基中生長，該培養基補充有10%熱滅活胎牛血清(FBS)、2 ng/mL顆粒球-巨噬細胞集落刺激因子、1
Figure 02_image458
非必需胺基酸(NEAA)及1 mM丙酮酸鈉。檢定前一日，將培養物轉移至Opti-MEMTM 、1
Figure 02_image458
NEAA、1 mM丙酮酸鈉及0.5%經木炭剝離之FBS (饑餓培養基)。將抑制劑儲備溶液(DMSO中之5 mM)以DMSO連續1:2稀釋，以生成10點濃度滴定(在500
Figure 02_image458
測試濃度下)，其藉由50倍稀釋以檢定培養基(含有1
Figure 02_image458
NEAA及1 mM丙酮酸鈉之RPMI)進一步稀釋，以生成10
Figure 02_image458
濃度滴定(在2% DMSO中)。將細胞(300,000個細胞/孔，在35 μL檢定培養基中)接種在384孔Greiner板。將以10
Figure 02_image458
濃度稀釋之抑制劑(5 μL)添加至細胞且將板在37℃下在濕潤孵育器中孵育30分鐘。將細胞用對應EC90 濃度的人類重組細胞介素刺激，如先前針對各個別批所確定。對於磷酸化訊息傳遞及轉錄活化子6 (P-STAT6) TF-1 +介白素-13 (IL-13)檢定，將10 μL 250 ng/mL IL-13 (R&D Systems；Minneapolis, MN)添加至細胞中，然後將其在37℃下孵育10分鐘。對於P-STAT5 TF-1 +促紅血球形成素(EPO)檢定，將10 μL 110 IU/mL EPO (Gibco Life Technologies，目錄號PHC2054)添加至細胞中，然後將其在37℃下孵育30 min。對於兩種檢定，在孵育之後，將其添加至5 μL含有1 mM 苯基甲基氟化磺醯(PMSF)之冰冷10
Figure 02_image458
細胞溶解緩衝液(Cell Signaling Technologies; Danvers, MA；目錄號9803S)的細胞中。將檢定板在-80℃下冷凍至少1小時。在IL-13檢定中，藉由用兔抗人總STAT6抗體(Cell Signaling Technologies；目錄號9362S)塗覆山羊抗兔(GAR)板(Meso Scale Discovery [MSD]; Rockville, MD；目錄號MSD L21RA-1)、將塗覆板中之細胞溶解物在4℃下孵育隔夜、且然後使用標準MSD板處理、洗滌及偵測方案偵測小鼠抗-P-STAT6 (Tyr641)純系16E12抗體(MilliporeSigma; Burlington, MA；目錄號05-590，由具有SULFO-標籤之MSD標記之慣例)來量測P-STAT6。在EPO檢定中，使用磷酸-STAT5a,b全細胞溶解物套組(MSD；目錄號K150IGD-1)來偵測P-STAT5。在MESO SECTOR S600 (MSD)讀取器上讀取孔之電化學發光(ECL)訊息。資料分析
藉由自所有孔之ECL值減去陰性對照(細胞介素刺激及20 μM對照抑制劑處理細胞)平均ECL值、確定測試化合物孔ECL值相對於陽性對照(細胞介素刺激且DMSO處理之細胞)平均ECL值之對照百分比、且使用如等式4所示之四參數邏輯擬合模型確定測試化合物之IC50 來執行資料分析。P-STAT6 BEAS-2B + IL-13 細胞檢定
為了研究細胞株中與人類氣喘細胞生物學相關之JAK1抑制劑的作用，開發人類肺支氣管上皮BEAS-2B細胞株之IL-13-刺激之STAT6磷酸化檢定。
使BEAS-2B細胞(ATCC® CRL-9609™)在支氣管上皮生長培養基(BEGM) (Lonza目錄號CC-3170；Walkersville, MD；或PromoCell目錄號C-21060；Heidelberg, Germany)上生長。將測試化合物儲備溶液(DMSO中之0.5 mM)以DMSO連續1:2稀釋，以生成10點濃度曲線(在500
Figure 02_image458
測試濃度下)，其藉由50倍稀釋步驟以BEGM進一步稀釋，以生成10
Figure 02_image458
濃度曲線(在2% DMSO中)。將細胞以100,000個細胞/孔鋪板於96孔板中之200 μL BEGM中且將其再37℃下在濕潤孵育器中孵育48小時。自細胞抽出培養基且用70 μL新鮮BEGM置換。將經稀釋測試化合物(10 μL；或檢定培養基中之2% DMSO)添加至細胞，且將板在37℃下在濕潤孵育器中孵育1小時。然後將二十μL 250 ng/mL人類重組IL-13 (Bio Techne目錄號213-ILB)添加至細胞且將其在37℃下孵育15分鐘。自細胞抽出培養基且將60 μL含有1 mM PMSF之冰冷1
Figure 02_image458
細胞溶解緩衝液(Cell Signaling Technologies；目錄號9803S)添加至細胞。將檢定板在-80℃下孵育至少1小時。藉由用兔抗人總STAT6抗體(Cell Signaling Technologies；目錄號9362S)塗覆GAR板(MSD；目錄號L45RA-1)、將塗覆板中之細胞溶解物在4℃下孵育隔夜、且然後使用標準MSD板處理、洗滌及偵測方案偵測小鼠抗-磷酸-STAT6 (Tyr641)純系16E12抗體(Millipore；目錄號05-590，由具有SULFO-標籤之MSD標記之慣例)來量測P-STAT6。在MESO SECTOR S600上讀取板。資料分析
藉由自所有孔減去陰性對照值且使用陽性對照值確定對照百分比來執行資料分析；使用如等式4所示之四參數邏輯擬合模型來確定IC50 。細胞毒性測定
使用T175燒瓶中以次匯合密度維持之A549 (ATCC® CCL-185™)、Jurkat純系E6-1 (ATCC® TIB-152™)及HEK-293T (ATCC® CRL-1573™)細胞。將指數生長期之細胞鋪板(45 μL培養基中之450個細胞) 於Greiner 384孔黑色/透明組織培養物處理板(Greiner目錄號781091)中。在分配細胞後，使板在室溫下平衡30分鐘，在此之後將板置於37℃ CO2 及濕度控制孵育器中隔夜。次日，在10點滴定及最高濃度50 μM下，用以100% DMSO稀釋(在細胞上為0.5%最終DMSO濃度)之測試藥劑處理細胞。然後將細胞及化合物在37℃ CO2 及濕度控制孵育器中孵育72小時，在此之後藉由將CellTiter-Glo® (Promega G7572)試劑添加至所有孔來量測細胞活力。將板在室溫下孵育20分鐘且然後在EnVision板讀取器(Perkin Elmer Life Sciences)上讀取孔發光。
以下表2中示出表1之化合物的來自以上JAK1及JAK2檢定之資料。 表2
   酶JAK1 Ki (nM) 酶JAK2 Ki (nM) 細胞JAK1 PSTAT6 BEAS2B+IL13 IC50 (nM) 細胞JAK1 PSTAT6 TF-1+IL13 IC50 (nM) 細胞JAK2 PSTAT5 TF-1+EPO IC50 (nM) LC/MS 方法 滯留 時間(min) m/z
1 0.56 0.25 31 6.3 12 D 2.44 491.2
2 0.5 0.2 15 14 12 A 1.53 503.2
3 2 0.66 58       A 1.15 518.3
4 1.4 0.6 180       A 1.13 504.2
5 0.43 0.19 35 16 29 A 1.27 493.2
6 0.48 0.22 18       A 1.42 477.2
7 0.88 0.49 32 21 22 A 1.13 520.3
8 0.82 0.48 92       A 1.12 492.2
9 0.27 0.18 15       A 1.56 499.2
10 0.95 0.6 52       A 1.15 518.3
11 0.21 0.12 17       A 1.52 541.3
12 0.24 0.14 18 8.7 9.1 A 1.65 555.3
13 0.4 0.19 33 34 28 D 2.1 505.2
14 0.49 0.22 23       A 1.4 507.2
15 0.43 0.16 20       T 0.94 507.2
16 0.32 0.19 15       A 1.47 526.3
17 0.22 0.1 14       A 1.36 463.1
18 0.43 0.4 290       B 2.14 568.2
19 4 1.7 120       A 1.15 532.3
20 1.5 0.65 65       A 1.16 532.3
21 0.22 0.16 14       A 1.49 504.3
22 0.46 0.19 23 4.6 14 A 1.47 489.2
23 0.26 0.13 14 20 22 A 1.33 507.2
24 0.46 0.19 30       A 1.33 507.2
25 0.48 0.2 20 20 39 A 1.33 507.2
26 0.16 0.097 11       A 1.39 478.2
27 0.59 0.26 99       A 1.13 546.2
28 0.24 0.14 9.5 3.1 26 A 1.43 488.2
29 0.58 0.37 25       A 1.61 524.1
30 0.22 0.14 11       D 2.47 492.1
31 0.84 0.38 51       B 2.2 464.1
32 1.1 0.62 120       B 2.41 533.2
33 0.4 0.23 99       B 2.41 533.2
34 0.31 0.29 21       A 1.68 535.2
35 0.3 0.19 24 5.8 14 X 3.96 529.2
36 1.8 1.1    71 120 U 2.22 532.1
37 0.69 0.54 46 51 38 U 2.22 532.1
38 0.34 0.25 89       X 3.98 573.2
39 1.5 0.53 230       X 4.33 533.1
40 0.21 0.11 24 3.1 6.4 X 4.67 525.1
41 0.18 0.1 37 15 34 X 3.71 515.1
42 0.42 0.24 30 2.6 21 X 4.15 526.1
43 0.5 0.27 1000       X 3.75 542.1
44 0.52 0.34 29 14 15 X 3.18 556.1
45 0.71 0.35 35 10 38 D 2.49 514.1
46 0.26 0.087 49 27 61 B 2.19 490.1
47 0.31 0.33 210       X 2.98 558.2
48 0.52 0.39 130       X 3.11 572.2
49 0.5 0.37 28 20 34 X 3.02 586.2
50 1.7 1.9 50 27 160 X 2.97 546.2
51 0.39 0.21 100       X 3.82 530.1
52 2.2 1 96       X 3 544.2
53 0.94 0.19 50       X 3.07 598.2
54 1.2 0.21 140       X 3.1 641.2
55 0.93 0.98 71       X 3.19 624.2
56 0.71 0.76 56       X 3.16 626.2
57 0.57 0.54 54       X 3.15 626.2
58 0.89 0.86 40 24 32 X 3.12 600.2
59 0.53 0.54 32 13 28 X 3.09 600.2
60 1.1 2.5 44 24 170 X 3.06 572.2
61 0.81 0.77 34 190 200 X 3.06 584.2
62 2 0.93 150       X 3.83 592.1
63 0.58 0.28 71       X 3.53 507.1
64 1.9 0.84 210       X 3.8 592.2
65 0.72 0.24 72       X 3.66 529.1
66 0.55 0.18 380       X 3.5 515.1
67 0.48 0.24 25       X 2.97 527.1
68 0.6 0.25 62       X 3.78 521.2
69       77       X 3.72 521.2
70 1 0.33 75       X 3.79 521.2
71 1.4 0.46 110       X 3.78 521.2
72 0.94 1.5 31       X 2.89 546.2
73 0.63 0.21 53       A 1.32 522.2
如由表2可看出，本發明之化合物在生化JAK1及JAK2檢定中以及在大部分情況下在一種或多種JAK1及JAK2之基於細胞的檢定中具有高活性。若干種化合物對JAK1及JAK2之活性為基本上均等。
以下表3提供小鼠肺組織結合(LTB)資料(%結合)及表1之所選化合物之細胞毒性資料。 表3
   小鼠LTB % 細胞毒性K-293 EC50 (μM) 細胞毒性Jurkat EC50 (μM) 細胞毒性A549 EC50 (μM)
2 88.1 27.5 38.5 25.5
5 80.1 10.2 23 45.5
6    6.05 21.5 6.75
7 78.8 6.9 2.1 4.1
9   2.2 3.5 1.66
11   3.7 5.5 6.4
12 97.1 36 50 50
13 85 31 50 44
14 80.1 32 50 50
15 85.7 25 35 25
16 87.3 7.6 6.2 7.4
17 85.8 7.3 11 8.7
21 83 4.8 11 7.5
22 88.7 43 50 50
23 82.1 11 24 28
24 81.7 22 37 50
25 85 48 50 50
26 86.9 5.8 12 11
28 70.8 24 39 50
30 83.1 2.4 9.2 6.1
35 86.2 17 21 22
37 90.1 31 50 50
40 95.6 50 50 50
41 91.2 28 35 50
44 86.5 7 11 24
45 87.9 50 50 50
46 89.9 50 50 50
48 91.3         
49 84.4 14 24 33
68   19 32 50
56 91.4 10 24 50
59   14 30 43
63 80.5 20 35 50
69 78.4         
72   20 49 50
73 81.8 2.9 8.4 50
表3
由表3中資料，發現1-甲基-吡唑化合物(亦即，在式(I) - (III)中之R1 為甲基)當與相應去甲基(R1 為氫)類似物相比較時穿過K-293、Jurkat及A549細胞株檢定具有出乎意料地更低的細胞毒性。以下表4提供表1及2之實例6、9及17之甲基-去甲基類似物對(R1 = 甲基對比R1 =氫)的比較。
      細胞毒性K-293 EC50 (μM) 細胞毒性Jurkat EC50 (μM) 細胞毒性A549 EC50 (μM)
表1中之實例6。
Figure 02_image460
  		 6.05 21.5 6.75
WO2017089390中之實例192
Figure 02_image462
 0.436667 0.79 2.366667
              
表1中之實例9。
Figure 02_image024
 2.2 3.5 1.66
  
Figure 02_image465
 0.038 0.16 0.26
              
表1中之實例17
Figure 02_image040
 7.3 11 8.7
WO2017089390中之實例4
Figure 02_image468
 2.1 6.2 22
表4
由表3中之資料，亦發現本發明之碸化合物當與相應硫化物類似物相比較時表現出出乎意料地改進的肺組織結合。以下表5提供表1及2之實例13、28及35之碸-硫化物類似物對(R1 = 甲基對比R1 =氫)的比較 表5
      肺組織結合，%
表1中之實例13
Figure 02_image032
 85.8
  
Figure 02_image471
 97.4
        
表1中之實例28
Figure 02_image062
 70.8
  
Figure 02_image474
 96.9
        
表1中之實例35
Figure 02_image076
 86.2
  
Figure 02_image477
 97
表5
本發明之碸化合物與相應硫化物類似物相比表現出更低LogD及增加的動力學溶解度。
由表2及3中之資料，亦發現本發明之化合物(其中R1 為甲基且R2 為羥基烷基或烷氧基烷基)對JAK1及JAK2二者表現出良好平衡的親和力，且亦具有相對低的肺組織結合及細胞毒性。動物模型 小鼠屋塵蟎 (HDM) 模型
七至八週齡雌性C57BL/6J小鼠購自Jackson West。在第0及14日藉由腹膜內投與屋塵蟎(HDM, D. Pteronyssinus，購自Greer Laboratories，正規化至每只小鼠0.918ug DerP1含量)與以無菌PBS稀釋之2 mg明礬(Thermo Scientific)之混合物來免疫接種小鼠。在第21及24日，用PBS中之HDM (再對0.918 ug DerP1含量正規化)攻擊小鼠，藉由氣管內吸入來給藥。在每次吸入型HDM攻擊前(且在組之子集中，亦在第22及23日)，動物經由僅鼻吸入接受測試化合物(使用來自電子醫療量測系統(Electro-Medical Measurement Systems，EMMS)之乾粉吸入裝置，包括Wright粉劑進給裝置及4-層/24-口或2-層/12-口，定向流，僅鼻吸入塔)，在攻擊前1小時結束。對照動物接受僅空氣僅鼻吸入。在最終治療後24小時，自小鼠眼眶後抽血以進行血漿PK，且然後藉由CO2吸入來安樂死。在安樂死後，收集BAL流體以進行總(藉由FACS，使用已知量的所添加參考珠粒)及分化(藉由Wright Giemsa−染色細胞離心塗片器)細胞計數。收集肺及脾，稱重，且冷凍以進行PK。每組存在5或6只動物。
另外，為了驗證經肺遞送劑量，經由僅鼻吸入向各自3只純真動物之PK衛星組給予測試化合物，達單一日或連續四日。就在最終吸入給藥後，自PK衛星動物眼眶後抽血以進行血漿PK，且然後藉由CO2 吸入來安樂死。收集肺及脾且稱重以進行PK分析。大鼠 OVA 模型
六週齡雄性Brown Norway大鼠來自Charles River-Kingston。在第0日藉由腹膜內投與150 ug OVA (Sigma)與以無菌PBS稀釋之40 mg明礬(Thermo Scientific)之混合物來免疫接種大鼠。在敏化後28日，用經由噴霧器氣霧化之PBS中的2% OVA攻擊大鼠30分鐘，達連續三日。在每次OVA攻擊前，動物經由僅鼻吸入接受JAK1/JAK2測試化合物(使用來自電子醫療量測系統(EMMS)之乾粉吸入裝置，包括Wright粉劑進給裝置及4-層、24-口，定向流，僅鼻吸入塔)，在攻擊前1小時結束。對照動物接受口服MCT緩衝液或僅空氣僅鼻吸入。在最終治療後24小時，使動物藉由CO2 吸入來安樂死。自動物腹主動脈抽血以進行血漿PK及全血FACS分析。在安樂死後，收集BAL流體以進行總(藉由FACS，使用已知量的所添加參考珠粒)及分化(藉由Wright Giemsa−染色細胞離心塗片器)細胞計數。收集肺，稱重，且冷凍以進行PK。稱量脾且切下一半以進行PK且進行FACS分析。藉由FACS分析血液及脾分析以進行總細胞計數及% NK細胞(CD161a陽性)。每組存在6只動物，除了純真對照組，其含有5只動物。
另外，為了驗證經肺遞送劑量，各自3只純真動物之PK衛星組經由僅鼻吸入接受JAK1/JAK2測試化合物，達單一日或三日。就在最終吸入給藥後，PK衛星動物藉由CO2 吸入來安樂死。自動物腹主動脈抽血以進行血漿PK。收集肺及脾且稱重以進行PK分析。
以以下方式確定測試化合物之血漿及肺水準及其比率。在該檢定中使用來自Charles River Laboratories之BALB/c小鼠。將測試化合物以鹽水中之0.2% Tween 80單獨調配且將給藥溶液藉由經口吸入來引入到小鼠氣管中。在給藥後之不同時間點(通常為0.167、2、6、24 h)，經由心臟穿刺去除血液樣本且自小鼠切下完整肺。將血液樣本在大約12,000 rpm、4℃下離心(Eppendorf centrifuge，5804R) 4分鐘，以收集血漿。將肺墊乾，稱重且以無菌水以1:3稀釋來均化。藉由針對構造成測試基質之標準曲線的分析標準進行LC-MS分析來確定測試化合物之血漿及肺水準。肺與血漿比率被確定以μg h/g計之肺AUC與以μg h/mL計之血漿AUC的比率，其中AUC通常被定義為測試化合物濃度對比時間之曲線下面積。小鼠血漿及肺中之藥物動力學
在藉由單次鼻內(IN)推注溶液/懸浮液投藥來投與以鹽水中之0.2% Tween 80調配之0.3 mg/kg目標劑量之後，確定雌性Balb/c小鼠中化合物之藥物動力學。7-8週齡雌性Balb/c小鼠可購自Charles River。在特別無病原體條件下飼養小鼠，直至在研究中使用為止。
在給藥前動物不禁食。在給藥後0.083、2、7及24小時之每個時間點在麻醉(腹膜內注射戊巴比妥)下經由心臟穿刺自3只動物獲得血液樣本到經EDTA塗覆之微容器中。將血液樣本離心(1500 g，在4℃下10 min)，以分離血漿。將血漿樣本冷凍在大約-80℃下。在鼻內給藥後，在肺灌注前，移出脾，稱重，且速凍。在確認死亡後，用冷凍PBS灌注經給藥動物之肺，以自肺血管移出殘餘血液。然後切下肺且稱重(記錄全部重量)。藉由浸漬在液氮中來冷凍所有組織樣本。將組織樣本冷凍儲存(約-80℃)直至用於分析。
在PK分析前，將解凍之組織樣本(脾及肺)稱重且在為每公克組織添加4 mL HPLC級水後使用Omni-Prep球磨機(Omni Inc., Kennesaw, GA)在4℃下勻化。以四體積含有吐魯必他胺(200 ng/mL)及拉貝他樂(100 ng/mL)之乙腈作為內標準使用蛋白沉澱提取血漿及組織均質物樣本。將樣本在3200 g及4℃下混合且離心30分鐘以去除沉澱蛋白，且於96孔盤中將上清液以HPLC級水適當稀釋(例如，1:1，v:v)。藉由陽離子模式之LC-MS/MS使用Waters Xevo TQ-S (Waters, Elstree, UK)針對基質匹配之校準曲線及品質對照標準檢定血漿、脾及肺之代表性等分試樣之化合物濃度。藉由以化合物摻加對照血漿、脾及肺組織均質物來製備標準物且如針對實驗樣本所述進行提取。在所有基質中檢定偵測限為0.168 mg/mL - 4000 ng/mL。
低於定量下限(LLOQ)之濃度作為零處理以用於計算平均值及SD。使用樣本中所量測之平均濃度來構築半對數濃度-時間曲線特徵。使用Biobook (E-WorkbookIDBS)中之非房室方法進行藥物動力學(PK)分析。肺之經互生鏈隔孢菌誘導之嗜酸性球炎症的鼠類模型
氣道嗜酸性球增多症為人類氣喘之標誌。互生鏈隔孢菌為可加重人類氣喘且誘導小鼠肺中之嗜酸性球炎症的真菌氣源性致敏原(Havaux等人 Clin Exp Immunol. 2005, 139(2):179-88)。在小鼠中，已證實鏈隔孢菌間接活化肺中之2型組織駐留型先天性淋巴細胞，其對(例如IL-2及IL-7)有反應且釋放JAK依賴性細胞介素(例如IL-5及IL-13)且調節嗜酸性球炎症(Bartemes等人 J Immunol. 2012, 188(3):1503-13)。
該研究使用來自Taconic之七至九週齡雄性C57小鼠。在研究當日，用異氟烷輕微麻醉動物且經由口咽抽吸投與媒劑或測試化合物。在給藥後將動物斜靠放置，且監測自麻醉之完全恢復，之後使其返回至其居住籠。一小時後，再次簡單麻醉動物且經由口咽抽吸用媒劑或互生鏈隔孢菌攻擊，之後監測其自麻醉之恢復，且使動物返回至其居住籠。在投與鏈隔孢菌後四十八小時，收集支氣管肺泡灌洗液(BALF)且使用Advia 120 Hematology System (Siemens)計數BALF中之嗜酸性球。
藉由與經媒劑處理、經鏈隔孢菌攻擊之對照動物相比在四十八小時後存在於經處理動物之BALF中的嗜酸性球水準降低來證明模型中之化合物活性。資料被表示為經媒劑處理、經鏈隔孢菌攻擊之BALF嗜酸性球反應的抑制百分比。為了計算抑制百分比，將各條件之BALF嗜酸性球數目轉換為平均經媒劑處理、經鏈隔孢菌攻擊之BALF嗜酸性球的百分比且將其自一百百分比減去。
Figure 109120272-A0101-11-0002-3

Claims (19)

  1. 一種式(I)化合物 一個實施例提供一種式(I)化合物：
    Figure 03_image001
    (I) 或其立體異構物或醫藥學上可接受之鹽， 其中： R1 為：C1-6 烷基；氰基-C1-6 烷基；C1-6 烷氧基-(CO)-；-(CHRa )m -NRb Rc ；或-(CHRa )n -het1 ; R2 為：C1-6 烷基；羥基-C1-6 烷基；鹵基-C1-6 烷基；C1-6 烷氧基-C1-6 烷基；C3-6 環烷基；-(CHRa )p -NRb Rc ；het2 ；-(CHRa )q -het3 ；或苯基，其可未經取代或經Rd 取代一次或兩次； R3 為：氫；或C1-6 烷基； R4 為：氫；或C1-6 烷基； R5 為：氫；或C1-6 烷基； R6 為：氫；C1-6 烷基；或R2 及R6 連同其所連接之原子可形成六員環； m為2至3； n為0至2； p為0至2； 各Ra 獨立地為：氫；或C1-6 烷基； 各Rb 獨立地為：氫；或C1-6 烷基； 各Rc 獨立地為：氫；或C1-6 烷基； het1 為：四氫呋喃基；吖呾基；或吡咯啶基，其各自可未經取代或經Re 取代一次或兩次； het2 為：吡啶基；嘧啶基；吡唑基；咪唑基；或異喹啉基，其可為部分飽和的；其各自可未經取代或經Rf 取代一次或兩次； het3 為：吖呾基；吡咯啶基；氧呾基；或哌啶基；其各自可未經取代或經Rg 取代一次； 各Rd 獨立地為：C1-6 烷基；羥基；C1-6 烷氧基-C1-6 烷基；-(CHRa )q -NRb Rc ；或苯基； 各Re 獨立地為：C1-6 烷基；或側氧基； 各Rf 獨立地為：C1-6 烷基；羥基-C1-6 烷基；側氧基；-(CHRa )r -NRb Rc ；-(CHRa )s -het4 ； 各Rg 獨立地為：C1-6 烷基；或乙醯基； q為1至2； r為2至3； s為2至3；且 het4 為：吖呾-1-基；1-甲基-吖呾-3-基；口昆啶基；1-甲基-吡咯啶-2-基；或4-甲基哌嗪-1-基。
  2. 如請求項1之化合物，其中R3 、R4 、R5 及R6 為氫。
  3. 如請求項1之化合物，其中R1 為氰基甲基或甲基。
  4. 如請求項1之化合物，其中R1 為氰基甲基。
  5. 如請求項1之化合物，其中R1 為甲基。
  6. 如請求項1之化合物，其中R2 為：C1-6 烷基；羥基-C1-6 烷基；鹵基-C1-6 烷基；C1-6 烷氧基-C1-6 烷基；C3-6 環烷基；-(CHRa )p -NRb Rc ；het2 ；-(CHRa )q -het3 ；或苯基，其可未經取代或經Rd 取代一次。
  7. 如請求項1之化合物，其中R2 為C1-6 烷基、羥基-C1-6 烷基；C1-6 烷氧基-C1-6 烷基或鹵基-C1-6 烷基。
  8. 如請求項1之化合物，其中R2 為羥基-C1-6 烷基或C1-6 烷氧基-C1-6 烷基。
  9. 如請求項1之化合物，其中R2 為2-羥基乙基、二氟甲氧基、3-羥基己基、-甲氧基苯基、2-羥基丙基、吡啶-4-基、甲基、吖呾--基、2-羥基-1-甲基-乙基、甲基胺基、二甲基胺基、1-甲基-吡唑-4-基、苯基、吡唑-4-基、1-甲基-2-側氧基-4-吡啶基或2-羥基-1-甲基-丙基。
  10. 如請求項1之化合物，其中R2 為2-羥基乙基、2-羥基丙基、2-羥基-1-甲基-乙基或2-羥基-1-甲基-丙基。
  11. 如請求項1之化合物，其中該化合物為式(II)化合物
    Figure 03_image004
    (II) 或其立體異構物或醫藥學上可接受之鹽。
  12. 如請求項1之化合物，其中該化合物為式(III)化合物
    Figure 03_image006
    (III) 或其立體異構物或醫藥學上可接受之鹽。
  13. 如請求項1之化合物，其選自：
    Figure 03_image008
    ；
    Figure 03_image010
    ；
    Figure 03_image012
    ；
    Figure 03_image014
    ；
    Figure 03_image016
    ；
    Figure 03_image018
    ；
    Figure 03_image020
    ；
    Figure 03_image022
    ；
    Figure 03_image024
    ；
    Figure 03_image026
    ；
    Figure 03_image028
    ；
    Figure 03_image030
    ；
    Figure 03_image032
    ；
    Figure 03_image034
    ；
    Figure 03_image036
    ；
    Figure 03_image038
    ；
    Figure 03_image040
    ；
    Figure 03_image042
    ；
    Figure 03_image044
    ；
    Figure 03_image046
    ；
    Figure 03_image048
    ；
    Figure 03_image050
    ；
    Figure 03_image052
    ；
    Figure 03_image054
    ；
    Figure 03_image056
    ；
    Figure 03_image058
    ；
    Figure 03_image060
    ；
    Figure 03_image062
    ；
    Figure 03_image064
    ；
    Figure 03_image066
    ；
    Figure 03_image068
    ；
    Figure 03_image070
    ；
    Figure 03_image072
    ；
    Figure 03_image074
    ；
    Figure 03_image076
    ；
    Figure 03_image078
    ；
    Figure 03_image080
    ；
    Figure 03_image082
    ；
    Figure 03_image084
    ；
    Figure 03_image086
    ；
    Figure 03_image088
    ；
    Figure 03_image090
    ；
    Figure 03_image092
    ；
    Figure 03_image094
    ；
    Figure 03_image096
    ；
    Figure 03_image098
    ；
    Figure 03_image100
    ；
    Figure 03_image102
    ；
    Figure 03_image104
    ；
    Figure 03_image106
    ；
    Figure 03_image108
    ；
    Figure 03_image110
    ；
    Figure 03_image112
    ；
    Figure 03_image114
    ；
    Figure 03_image116
    ；
    Figure 03_image118
    ；
    Figure 03_image120
    ；
    Figure 03_image122
    ；
    Figure 03_image124
    ；
    Figure 03_image126
    ；
    Figure 03_image128
    ；
    Figure 03_image130
    ；
    Figure 03_image132
    ；
    Figure 03_image134
    ；
    Figure 03_image136
    ；
    Figure 03_image138
    ；
    Figure 03_image140
    ；
    Figure 03_image142
    ；
    Figure 03_image144
    ；及
    Figure 03_image146
    ；或其立體異構物或醫藥學上可接受之鹽。
  14. 治療患者之對詹納斯激酶(Janus kinase)活性之抑制有反應的疾病或疾患或減小該疾病或疾患之嚴重性的方法，其包含向該患者投與治療有效量之如請求項1之化合物或其立體異構物或醫藥學上可接受之鹽。
  15. 如請求項2之方法，其中該疾病或疾患為癌症、中風、糖尿病、肝腫大、心血管疾病、多發性硬化、阿茲海默氏病(Alzheimer’s disease)、囊性纖維化、病毒性疾病、自體免疫疾病、動脈粥樣硬化、再狹窄、乾癬、類風濕性關節炎、炎性腸病、氣喘、過敏性病症、炎症、神經病症、激素相關疾病、與器官移植相關之疾患(例如，移植排斥)、免疫缺乏病症、破壞性骨病症、增殖性病症、傳染病、與細胞死亡相關之疾患、凝血酶誘發之血小板聚集、肝病、涉及T細胞活化之病理性免疫疾患、CNS病症或骨髓增生病症。
  16. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1之化合物或其立體異構物或醫藥學上可接受之鹽，其中該醫藥組成物包含該化合物之適於吸入遞送之微粒。
  17. 如請求項1之醫藥組成物，其中該等微粒係藉由噴霧乾燥、冷凍乾燥或微粒化來製備。
  18. 一種套組，其包含： (a) 第一醫藥組成物，其包含如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽；及 (b) 使用說明書。
  19. 如請求項14之套組，其進一步包含第二醫藥組成物，該第二醫藥組成物包含用於治療炎性病症之劑或化學治療劑。
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