TW202015712A

TW202015712A - 用以抑制流感之重症化的抗流感病毒劑

Info

Publication number: TW202015712A
Application number: TW108123268A
Authority: TW
Inventors: 永井之; 清原寛章; 神野慎治; 小堤大介
Original assignee: 學校法人北里研究所; 一般財團法人糧食研究會; 日商明治股份有限公司
Priority date: 2018-07-03
Filing date: 2019-07-02
Publication date: 2020-05-01
Also published as: US20210268042A1; WO2020009135A1; CN112351693A; JPWO2020009135A1

Abstract

本發明係有關於一種含有雙叉雙歧桿菌作為有效成分的抗流感病毒劑。

Description

用以抑制流感之重症化的抗流感病毒劑

本發明係有關於一種用以抑制流感之重症化的抗流感病毒劑。

流感係一種憑藉流感病毒的感染而發病的傳染病。流感病毒的感染力極強，在日本每年約有1,000萬人被感染。而且，由於流感具流行性，一旦開始流行便會在短期間內令多人受到感染。高齡者或慢性疾病患者一旦罹患流感，則重症化之機率極高，且引起肺炎等併發症而致死的危險性亦極高。

流感的治療一般係使用例如oseltamivir(商品名Tamiflu克流感(註冊商標))等的抗流感藥。oseltamivir需在發病後48小時以內早期投予，而檢查時期過早的話，有時無法檢測出病毒而非診斷為流感，實不易在適當的時間點投予之。因此，便期望開發出可如食品般簡易地攝取，且可使用於透過事先攝取而能夠在流感病毒感染時抑制重症化的製品。

專利文獻1揭示，雷特氏B菌BL-04株對鼻炎、支氣管炎等呼吸器官疾病的治療或預防係屬有效。

專利文獻2揭示一種傳染病及包含傳染病之免疫系統相關異常的治療或預防用組成物，其包含長雙歧桿菌NCC2705。

屬雙叉乳酸桿菌之雙叉雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)OLB6378株經確認有提高腸內黏膜免疫之作用或過敏預防、治療效果(非專利文獻1及專利文獻3)。

然而，其中卻未揭示此等微生物是否可抑制流感之重症化。 [先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]日本特表2014-517003號公報 [專利文獻2]日本特表2012-526752號公報 [專利文獻3]日本特開2006-273852號公報 [非專利文獻]

[非專利文獻1]Tanaka K. et al., Nutrients, (2017) 9, 195; doi:10.3390/nu9030195

[發明所欲解決之課題]

本發明係以提供一種用以抑制流感之重症化的抗流感病毒劑為課題。 [解決課題之手段]

本案發明人等為解決上述課題而致力重複研究的結果發現一種可抑制流感之重症化的雙叉雙歧桿菌菌株，終至完成本發明。

亦即，本發明係包含以下者。 [1] 一種抗流感病毒劑，其係含有雙叉雙歧桿菌作為有效成分。 [2] 如上述[1]之抗流感病毒劑，其中雙叉雙歧桿菌係具有呼吸器官之流感病毒繁殖抑制作用。 [3] 如上述[1]或[2]之抗流感病毒劑，其中雙叉雙歧桿菌為雙叉雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)OLB6378株(寄存號碼NITE BP-31)。 [4] 如上述[1]～[3]中任一項之抗流感病毒劑，其係用以抑制流感之重症化。 [5] 如上述[1]～[4]中任一項之抗流感病毒劑，其中雙叉雙歧桿菌係選自由雙叉雙歧桿菌菌體之培養物、加熱處理物、乾燥物及濃縮物，以及彼等當中2種以上之組合所成群組。 [6] 一種用以抑制流感之重症化的食品，其係包含如上述[1]～[5]中任一項之抗流感病毒劑。 [7] 一種用以抑制流感之重症化的醫藥，其係包含如上述[1]～[5]中任一項之抗流感病毒劑。 [發明之效果]

根據本發明，可抑制被流感病毒感染時的重症化。本說明書係包含屬本案之優先權的基礎之日本專利申請編號2018-127101號的揭示內容。

以下就本發明詳細加以說明。本發明係有關於一種雙叉雙歧桿菌，較佳為具有呼吸器官之流感病毒繁殖抑制作用的雙叉雙歧桿菌作為抗流感病毒劑的用途。

本發明中所使用之「雙叉雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)」為雙歧桿菌屬之1菌種。本發明中，雙叉雙歧桿菌在細菌中的分類可依循一般分類學上的基準來進行。本發明中所使用之雙叉雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)的菌株不特別限定，較佳具有呼吸器官之流感病毒繁殖抑制作用。

本發明中，所稱雙叉雙歧桿菌「具有呼吸器官之流感病毒繁殖抑制作用」，係指具有在呼吸器官，亦即上呼吸道及/或下呼吸道可抑制流感病毒的繁殖之能力。所稱「上呼吸道」，典型上係指鼻腔、咽頭及喉頭。所稱「下呼吸道」，典型上係指氣管、支氣管及肺。本發明中所使用之雙叉雙歧桿菌，在呼吸器官、例如鼻腔、咽頭、喉頭、氣管、支氣管及肺當中的至少1處(例如2處以上)，可抑制流感病毒的繁殖。

本發明中，所稱呼吸器官之流感病毒的繁殖的「抑制」，係指在投予被測物質(於此為雙叉雙歧桿菌)時，與替代被測物質而投予水之情形相比，顯示由呼吸器官回收之流感病毒的感染性病毒力價降低之意。此種感染性病毒力價的降低，較佳為統計學上顯著的降低，亦可為例如根據Dunnett檢定而顯示統計學上的顯著差異之降低。投予被測物質時的此種感染性病毒力價之降低，與替代被測物質而投予水之情形相比，以平均值計亦可為30%以上或40%以上，例如50%以上的降低。

本發明中可使用之雙叉雙歧桿菌的實例可舉出雙叉雙歧桿菌OLB6378株。雙叉雙歧桿菌OLB6378株係於2004年10月26日(原寄存日)，以寄存號碼 NITE P-31寄存於獨立行政法人製品評估技術基礎機構專利微生物寄存中心(NPMD)(日本千葉縣木更津市Kazusa鎌足2-5-8 122號室郵遞區號292-0818)後，於2006年1月18日自原寄存移交至基於布達佩斯條約之寄存，且寄存號碼變更為NITE BP-31。雙叉雙歧桿菌OLB6378株係具有呼吸器官之流感病毒繁殖抑制作用。此外，雙叉雙歧桿菌OLB6378株目前的寄存者為明治股份有限公司。

本發明係有關於一種含有雙叉雙歧桿菌，較佳為具有呼吸器官之流感病毒繁殖抑制作用的雙叉雙歧桿菌作為有效成分的抗流感病毒劑。本發明之抗流感病毒劑亦可為以有效量包含此種雙叉雙歧桿菌者。

本發明之抗流感病毒劑可使用於流感病毒的繁殖抑制，典型上為呼吸器官之流感病毒的繁殖抑制。屬適用對象的流感病毒非限定於以下者，可為A型(蘇聯型、pdm09型、香港型等)、B型、C型或新型。A型流感病毒可為H1N1、H1N2、H2N2、H2N3、H3N2、H5N1、H5N6、H7N7、H7N9或H10N8等次型，但不限定於此等。

本發明中，雙叉雙歧桿菌只要可保持抗流感病毒作用，較佳為呼吸器官之流感病毒繁殖抑制作用或抑制後述流感之重症化之作用，則能以任意形態使用於抗流感病毒劑以及後述之食品及醫藥。於一實施形態中，抗流感病毒劑、食品及醫藥中所使用的雙叉雙歧桿菌可為以任意方法調製而成的菌體，及/或亦可為選自由任意之菌體處理物，例如雙叉雙歧桿菌菌體之培養物、加熱處理物、乾燥物(例如冷凍乾燥粉末等冷凍乾燥物)及濃縮物，以及彼等當中2種以上之組合所成群組者。雙叉雙歧桿菌可為死菌體或活菌體。於一實施形態中，雙叉雙歧桿菌亦可為經加熱處理之濃縮菌液或其冷凍乾燥物。於一實施形態中，雙叉雙歧桿菌的加熱處理能以70～90℃(例如75～85℃)來進行，亦可例如加熱5～30分鐘，但不限定於此等條件。

本發明之上述雙叉雙歧桿菌及包含其之抗流感病毒劑係具有抑制流感之重症化之作用。本發明中所稱「流感之重症化」，係指被流感病毒感染時，可能引起生存率降低的嚴重症狀，此種嚴重症狀可舉出例如支氣管炎、肺炎、流感腦病、腦炎、中耳炎、熱痙攣等併發症、高熱、重度全身倦怠感等。本發明中所稱「流感之重症化的抑制」，係指被流感病毒感染時，使成為此種嚴重症狀的機率降低、防止成為嚴重症狀或減輕其重症度及促進早日由嚴重症狀恢復者。從而，本發明之抗流感病毒劑可為用以抑制流感之重症化者。流感之重症化的抑制能以例如流感病毒感染後之生存率的改善為指標來判斷。投予被測物質(於此為雙叉雙歧桿菌)時，流感病毒感染後之生存率，與替代被測物質而投予水的情形相比為增加時，則可判斷為該被測物質可抑制流感之重症化。此種生存率的增加較佳為統計學上顯著的增加，亦可為例如根據採Kaplan-Meier法之Log-rank檢定而顯示統計學上的顯著差異之增加。本發明之抗流感病毒劑(及上述之雙叉雙歧桿菌)可抑制流感之重症化，由此可降低流感之重症化的風險。

本發明亦提供一種包含本發明之抗流感病毒劑(或上述之雙叉雙歧桿菌)的食品或醫藥。包含本發明之抗流感病毒劑(或上述之雙叉雙歧桿菌)的食品及醫藥，對於攝取或投予其之對象，可抑制流感之重症化。本發明之食品及醫藥可抑制呼吸器官之流感病毒的繁殖。本發明之食品及醫藥可為用以抑制流感之重症化者。本發明之食品及醫藥又可為用以降低流感之重症化的風險者。

本發明之抗流感劑、食品及醫藥亦可包含可容許口服攝取用或製藥上可容許之添加劑。可容許口服攝取用或製藥上可容許之添加劑可舉出例如載體(固體或液體載體等)、賦形劑、界面活性劑、黏合劑、崩解劑、潤滑劑、助溶劑、懸浮劑、塗覆劑、著色劑、矯味矯臭劑、保存劑、緩衝劑、pH調整劑、稀釋劑、安定劑、噴射劑、抗氧化劑、增黏劑、甜味料等，但非限定於此等。此等添加劑可單獨或組合2種以上使用，可依據製劑的劑形或食品的種類或形狀適宜使用。載體可舉出例如水、可容許口服投予之有機溶劑、膠原蛋白、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、羧基乙烯聚合物、海藻酸鈉、水溶性葡聚糖、水溶性糊精、羧甲基澱粉鈉、果膠、黃原膠、***膠、酪蛋白、明膠、洋菜、甘油、丙二醇、聚乙二醇、凡士林、石蠟、硬脂醇、硬脂酸、人類血清白蛋白、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、可容許口服投予之界面活性劑等。

本發明中的「食品」不特別限定，係包含飲料、飲料以外的食品及機能性食品。本發明中的「食品」可為食品組成物。本發明之食品的種類不特別限定，飲料可舉出例如發酵乳(優格飲料等)、乳酸菌飲料、乳飲料(咖啡牛乳、水果牛乳等)、茶系飲料(綠茶、紅茶、烏龍茶等)、水果/蔬菜系飲料(包含柳橙、蘋果、葡萄等的果汁，蕃茄、紅蘿蔔等的蔬菜汁之飲料)、酒精性飲料(啤酒、發泡酒、紅酒等)、口服脫水補充液、碳酸飲料、清涼飲料、水等。就各種飲料的製造法等，能以既有之參考書，例如「最新軟性飲料」(2003)(光琳股份有限公司)等為參考。又，食品可舉出例如發酵乳(成組包裝優格、軟優格、乳酪等)、乳製品、調製奶粉、零食甜點(巧克力、果凍軟糖、口香糖、小圓餅、餅乾、果凍、錠型糖果、冰品等)、即席食品等。就各種食品的製造法等，能以既有之參考書為參考。

本發明之食品亦可為機能性食品。就本發明之「機能性食品」，係指對生物體具有一定的機能性之食品，例如日本之特定保健用食品(包含附條件特保[特定保健用食品])及包含營養機能食品之保健機能食品、機能性標示食品及特別用途食品，且包含營養輔助食品、健康輔助食品、營養補充品(例如錠劑、被覆錠、糖衣錠、膠囊及液劑等各種劑形者)及美容食品(例如減肥食品)等所謂的健康食品全體。此外，本發明之機能性食品係包含應用基於CODEX(FAO/WHO國際食品法典委員會)之食品規格的健康宣稱(Health claim)之健康食品。

本發明之機能性食品可為錠劑、顆粒劑、散劑、丸劑、膠囊劑等固態製劑、液劑、懸浮劑、糖漿等液體製劑，或者凝膠劑或糊劑等，亦可為一般飲食品的形狀(例如飲料、優格、甜點等)。

本發明之食品可供容易罹患流感或罹患時流感易成重症化之對象使用。本發明之食品可供新生兒(尤其包含剛出生後之新生兒、健康新生兒、未成熟兒、早產兒、低體重兒等)、乳兒、幼兒、小兒、病患、虛弱體質之健康者、身體狀況不良之健康者、產婦、高齡者(典型上為60歲以上)、慢性疾病患者(例如具有心臟疾病、呼吸器官疾病、腎功能異常、免疫功能異常或糖尿病等代謝性疾病之患者)等，以及其家人及其他與之密切接觸者(醫療從事者、保育/教育從事者、生活支援從事者等)攝取。本發明之食品亦可為例如病患用食品、產婦・哺乳婦用奶粉、乳兒用調製奶粉、乳兒用調製乳、高齡者用食品、照護用食品等特別用途食品。本發明之食品也可為奶粉、流質食物、半流質食物、粉末流質食物、照護用食品、幼兒食品、黏稠度調整食品、能量補給糊漿、營養粉、營養強化食品、液態乳等。

本發明之雙叉雙歧桿菌或抗流感病毒劑只要由本業者藉由可利用的任意適當方法而含於食品中即可。例如，可將本發明之雙叉雙歧桿菌調製成液體狀、凝膠狀、固體狀、粉末狀或顆粒狀後，將其摻混於食品中。或者亦可將本發明之雙叉雙歧桿菌或抗流感病毒劑直接混合或溶解於飲食品的原料中。本發明之雙叉雙歧桿菌或抗流感病毒劑亦可塗佈、被覆、滲透或噴灑於飲食品。本發明之雙叉雙歧桿菌或抗流感病毒劑可使其均勻地分散於飲食品中，亦可使其不均勻地分佈於飲食品中。亦可調製摻有本發明之雙叉雙歧桿菌或抗流感病毒劑的膠囊等。也可將本發明之雙叉雙歧桿菌或抗流感病毒劑以可食用薄膜或食用塗覆劑等包覆。此外，還可對本發明之雙叉雙歧桿菌或抗流感病毒劑添加適當的賦形劑等後，成形為錠劑等形狀。含有本發明之雙叉雙歧桿菌或抗流感病毒劑的飲食品可進一步經過加工，且此種加工品亦包含於本發明之範圍。於一實施形態中，亦可將本發明之雙叉雙歧桿菌菌體濃縮物進行加熱處理後添加於食品原料(例如奶粉調合液、流質食物原料等)中，再經過加熱殺菌、濃縮乾燥。

本發明之雙叉雙歧桿菌或抗流感病毒劑對食品的摻混量不特別限定，可視情況任意取用。本發明之雙叉雙歧桿菌或抗流感病毒劑的具體摻混量可考量食品的種類或所要求的味道或口感，由本業者適宜決定。一般而言，雙叉雙歧桿菌的摻混量，以相對於食品的總重量所摻混之雙叉雙歧桿菌之相當於菌體乾燥重量的量(菌體固含量)之比率計可取0.0001～100重量(質量)%，例如0.0005～100重量(質量)%或0.001～99重量(質量)%。於一實施形態中，以相對於食品的總重量所摻混之雙叉雙歧桿菌之相當於菌體乾燥重量的量(菌體固含量)之比率計，可將0.0001～100重量(質量)%、例如0.001～99重量(質量)%、0.01～10重量(質量)%或0.01～0.1重量(質量)%的雙叉雙歧桿菌摻混於固態食品，例如粉末狀食品(調製奶粉、粉末調味料等)、顆粒狀食品、片狀食品、易崩解性固態食品等。此種固態食品亦可為溶解於水或飲料等可飲用之液狀介質，調製成飲料(液態乳(液狀乳)、口服脫水補充液等)、液體食品(湯、咖哩等)、液體調味料、流質食物、半流質食物、黏稠度調整食品等後供攝取者。於另一實施形態中，以相對於食品的總重量所摻混之雙叉雙歧桿菌之相當於菌體乾燥重量的量(菌體固含量)之比率計，可將0.0001～100重量(質量)%，例如0.0005～10重量(質量)%或0.001～5重量(質量)%的雙叉雙歧桿菌摻混於液狀或半液狀食品，例如湯、咖哩、發酵乳、飲料(液態乳(液狀乳)、口服脫水補充液等)、液體調味料、流質食物、半流質食物、黏稠度調整食品等。此外，以相當於菌體乾燥重量的量表示之雙叉雙歧桿菌的上述摻混量，非限定性地意指將雙叉雙歧桿菌以乾燥菌體之形態摻混於食品等，本發明之雙叉雙歧桿菌只要可保持抗流感病毒作用，尤為呼吸器官之流感病毒繁殖抑制作用及/或抑制流感之重症化之作用，則能以任意形態摻混於食品等。

本發明之食品亦可進一步包含任意的食品成分。本發明之食品可含有水、蛋白質、糖質、脂質、維生素類、礦物質類、胺基酸、有機酸、有機鹼、果汁、香料類等。蛋白質可舉出例如全脂奶粉、脫脂奶粉、部分脫脂奶粉、酪蛋白、乳清粉、乳清蛋白質、乳清蛋白質濃縮物、乳清蛋白質分離物、α-酪蛋白、β-酪蛋白、κ-酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白、乳鐵蛋白、大豆蛋白質、雞卵蛋白質、肉蛋白質等動植物性蛋白質、此等之水解物、黃油、乳清礦物質、乳脂、乳清、非蛋白態氮、唾液酸、磷脂質、乳糖等各種源自乳之成分等。糖質可舉出一般的糖類、加工澱粉(糊精、可溶性澱粉、英式澱粉、氧化澱粉、澱粉酯、澱粉醚等)、食物纖維等。脂質可舉出例如豬油、魚油等、此等之分離油、氫化油、酯交換油等動物性油脂；棕櫚油、紅花油、玉米油、菜籽油、椰子油、此等之分離油、氫化油、酯交換油等植物性油脂等。維生素類可舉出例如維生素A、胡蘿蔔素類、維生素B群、維生素C、維生素D群、維生素E、維生素K群、維生素P、維生素Q、菸鹼酸、菸酸、泛酸、生物素、肌醇、膽鹼、葉酸等；礦物質類可舉出例如鈣、鉀、鎂、鈉、銅、鐵、錳、鋅、硒、乳清礦物質等。有機酸可舉出例如蘋果酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸等。此等成分可單獨或組合2種以上使用。

本發明之醫藥可為錠劑、顆粒劑、散劑、丸劑、膠囊劑等固態製劑、凝膠劑或液劑、懸浮劑、糖漿等液體製劑等任意劑形。本發明中的「醫藥」亦可為醫藥組成物。

本發明之抗流感劑、食品及醫藥亦可進一步包含具有抗流感作用的其他物質。

本發明之抗流感劑、食品及醫藥可為口服投予用或非口服投予用，較佳為口服投予用。

本發明亦提供一種治療或預防流感的方法，其包含對對象投予本發明之抗流感劑、食品或醫藥。本發明又提供一種抑制流感之重症化的方法，其包含對對象投予本發明之抗流感劑、食品或醫藥。本發明中所稱「投予」，係包含對食品所使用之「攝取」及對醫藥所使用之「投予」、細胞或組織之in vivo「處理」任一者。本發明中「口服投予」(亦稱口服/經腸投予)，除了從口中的投予或攝取外，亦包含採用經由鼻管、胃造口管或腸造口管等之經管營養法的投予。本發明又提供一種降低流感之重症化的風險的方法，其包含對對象投予本發明之抗流感劑、食品或醫藥。本發明又提供一種本發明之上述雙叉雙歧桿菌，例如雙叉雙歧桿菌OLB6378株的用途，其係在本發明之抗流感劑、食品或醫藥的製造中使用。

本發明之抗流感劑、食品及醫藥的投予量可考量待投予對象的年齡及體重、投予路徑、投予次數等，同時由本業者斟酌衡量而於廣範圍變更。就本發明之雙叉雙歧桿菌的投予量，不特別限定，可為例如每次用量達1×10⁵ ～1×10¹¹ 細胞、1×10⁶ ～1×10¹⁰ 細胞或1×10⁷ ～1×10¹⁰ 細胞的量。

於一實施形態中，本發明之抗流感劑、食品及醫藥能以1日1次以上，例如1日2次或更多而對對象投予。本發明之抗流感劑、食品及醫藥可持續地對對象投予，例如可為每日投予。本發明之抗流感劑、食品及醫藥可持續1週、2週、3週或者4週或更久(例如1年以上)而對對象投予。

本發明之抗流感劑、食品及醫藥可不分被流感病毒感染前或後地對對象投予，惟較佳為在流感病毒感染前投予。

待投予本發明之抗流感劑、食品及醫藥的對象可為任意的動物，較佳為以人類、大猩猩、黑猩猩等靈長類，犬、貓、小鼠、大鼠、兔子、馬、牛、綿羊、山羊等為主的哺乳動物或其細胞等。待投予本發明之抗流感劑、食品及醫藥的對象可為容易罹患流感或罹患時流感易成重症化之對象。於較佳實施形態中，人類對象可為如上述之新生兒、乳兒、幼兒、小兒、病患、虛弱體質之健康者、身體狀況不良之健康者、產婦、高齡者、慢性疾病患者等，以及其家人及其他與之密切接觸者，但對象非限定於此等，本發明之抗流感劑、食品及醫藥可針對具罹患流感之風險的廣泛對象來使用。 [實施例]

以下，利用實施例對本發明更具體地加以說明。惟，本發明技術範圍非限定於此等實施例。

[實施例1] OLB6378濃縮粉末的調製將雙叉雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)OLB6378株(寄存號碼NITE BP-31)在乳清蛋白質分解培養基(以經酵素分解之乳清蛋白質為主氮源的培養基)中，於厭氧環境下進行中和培養，而得到濃縮菌液。將濃縮菌液在80℃下培養10分鐘以上後，進行冷凍乾燥。所得冷凍乾燥物係顯示超過2.5×10¹¹ 細胞/g的菌體濃度。將如此調製之加熱處理OLB6378菌株的冷凍乾燥物稱為OLB6378濃縮粉末，如後述對其抗流感病毒作用進行試驗。

[實施例2] OLB6378濃縮粉末之抗流感病毒作用的評估實施例1中所調製之OLB6378濃縮粉末的抗流感病毒作用係由流感病毒感染後的「生存率」與「呼吸器官中的感染性病毒力價(病毒繁殖程度)」此兩方面來評估。

a) 生存率對BALB/c小鼠(母，8週大)(日本CLEA)以0.2ml/個體/日的用量連日口服投予水(水投予群)或OLB6378濃縮粉末的20%懸浮液(OLB6378/雙叉乳酸桿菌投予群)達4週。在開始口服投予後3週的時間點藉由***Somnopentyl^(R) (以有效成分戊巴比妥鈉量計為5mg/kg體重)的腹腔內投予將小鼠麻醉，並將小鼠馴養流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)懸浮液20μl(2×LD₅₀ [相當於半數致死量的2倍量]，0.1% BSA-PBS)經鼻接種於右側鼻腔，而引起流感病毒的下呼吸道感染。又作為陽性對照，係替代投予水或OLB6378濃縮粉末的20%懸浮液，而由與上述相同之接種流感病毒的1小時前至6日後口服投予抗流感藥之「oseltamivir」(1mg/kg體重/日)。自開始病毒接種紀錄21日之小鼠的生存率。生存檢定係藉由Kaplan-Meier法的log-rank檢定來進行。

將結果示於圖1。就口服投予水之小鼠(水投予群)，自接種病毒(感染)的8日後起開始觀察到小鼠死亡，於感染10日後生存率急遽降低至約11%，於感染20日後小鼠全數死亡(生存率0%)。相對於此，就口服投予OLB6378濃縮粉末的20%懸浮液之小鼠(OLB6378投予群)，自接種病毒(感染)的9日後雖開始觀察到小鼠死亡，但感染10日後的生存率仍為約56%，且感染21日後仍顯示約22%的生存率。投予OLB6378濃縮粉末所產生之生存率的改善，與水投予群相比屬統計學上顯著者(p=0.05，圖1)。

此外，就使口服投予抗流感藥「oseltamivir」之小鼠下呼吸道感染流感病毒的陽性對照群，未觀察到小鼠死亡(圖1)。

b) 感染性病毒力價(病毒繁殖程度) 對BALB/c小鼠(母，8週大)(日本CLEA)以0.2ml/個體/日的用量連日口服投予水(水投予群)或OLB6378濃縮粉末的20%懸浮液(OLB6378投予群；試驗群)達25日(由病毒接種21日前至3日後為止)。在開始口服投予後3週的時間點藉由***Somnopentyl^(R) (以有效成分戊巴比妥鈉量計為5mg/kg體重)的腹腔內投予將小鼠麻醉，並將小鼠馴養流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)懸浮液20μl(2×LD₅₀ [相當於半數致死量的2倍量]，0.1% BSA-PBS)經鼻接種於右側鼻腔，而引起流感病毒的感染。又作為陽性對照，係替代投予水或OLB6378濃縮粉末的20%懸浮液，而由與上述相同之接種流感病毒的1小時前至3日後口服投予抗流感藥之「oseltamivir」(1mg/kg體重/日)。自接種病毒4日後，調製小鼠的支氣管肺胞洗淨液(BALF)。藉由噬菌區法測定支氣管肺胞洗淨液的感染性病毒力價。具體而言，係使MDCK細胞(源自狗腎臟尿細管上皮細胞之細胞株)暴露於支氣管肺胞洗淨液後，計數由病毒感染所致之細胞變性所形成的噬菌區數，評估支氣管肺胞洗淨液每1mL的噬菌區形成數作為感染性病毒力價。統計學處理係根據分散分析法(ANOVA)與Dunnett檢定來進行。

將結果示於圖2。流感病毒感染4日後，口服投予水之小鼠(水投予群)在支氣管肺胞洗淨液中可看出高感染性病毒力價，顯示確立下呼吸道感染。另一方面，就口服投予OLB6378濃縮粉末的20%懸浮液之小鼠(OLB6378投予群)，比起水投予群支氣管肺胞洗淨液中的感染性病毒力價可看出統計學上顯著的降低(與水投予群相比降低超過53%)(p＜0.01，圖2)。

此外，就使口服投予抗流感藥「oseltamivir」之小鼠下呼吸道感染流感病毒的陽性對照群，起比水投予群液可看出支氣管肺胞洗淨液中的感染性病毒力價的顯著降低(p＜0.001，圖2)。

由上述生存率與感染性病毒力價(病毒繁殖程度)的試驗結果顯示，OLB6378菌株可抑制流感病毒感染後病毒在支氣管及肺中的繁殖，而且可改善生存率。此顯示OLB6378菌株係具有抗流感病毒作用，尤其可產生抑制流感之重症化的效果。 [產業上可利用性]

本發明可用以提供具有抑制流感之重症化之效果的抗流感製品。本發明之抗流感病毒劑，透過以食品等形態日常攝取，可抑制感染流感病毒時症狀變嚴重的情形。本發明尤其可提供一種有用於抑制新生兒(尤為剛出生後之新生兒)、嬰幼兒、兒童、病患、高齡者、慢性疾病患者等流感易成重症化之對象的流感症狀之重症化的抗流感製品。

本說明書中所引用的所有發行物、專利及專利申請案係直接載入本說明書中以供引用。

圖1為表示流感病毒下呼吸道感染小鼠之生存率對OLB6378菌株之效果的圖。*p=0.05(與水投予群比較)。n=9。圖中，四邊形表示oseltamivir投予群(陽性對照群)、黑點表示OLB6378投予群、圓圈表示水投予群之生存率。圖2為表示流感病毒下呼吸道感染小鼠之支氣管肺胞洗淨液的感染性病毒力價對OLB6378菌株之效果的圖。**p＜0.01、***p＜0.001(與水投予群比較)。

國外生物材料 1.日本 ; NPMD ; 2004/10/26 ; NITE BP-31

Claims

一種抗流感病毒劑，其係含有雙叉雙歧桿菌作為有效成分。
如請求項1之抗流感病毒劑，其中雙叉雙歧桿菌係具有呼吸器官之流感病毒繁殖抑制作用。
如請求項1或2之抗流感病毒劑，其中雙叉雙歧桿菌為雙叉雙歧桿菌(Bifidobacterium bifidum)OLB6378株(寄存號碼NITE BP-31)。
如請求項1～3中任一項之抗流感病毒劑，其係用以抑制流感之重症化。
如請求項1～4中任一項之抗流感病毒劑，其中雙叉雙歧桿菌係選自由雙叉雙歧桿菌菌體之培養物、加熱處理物、乾燥物及濃縮物，以及彼等當中2種以上之組合所成群組。
一種用以抑制流感之重症化的食品，其係包含如請求項1～5中任一項之抗流感病毒劑。
一種用以抑制流感之重症化的醫藥，其係包含如請求項1～5中任一項之抗流感病毒劑。