TW201920157A - 作為泛素–特異性蛋白酶抑制劑之甲醯胺 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於至少一種選自USP28及USP25之路徑之調節劑(例如抑制劑)、包含該等抑制劑之醫藥組合物、及使用該等抑制劑之方法。該至少一種選自USP28及USP25之路徑之調節劑(例如抑制劑)可用於治療癌症以及其他病痛。

Description

作為泛素–特異性蛋白酶抑制劑之甲醯胺
本發明係關於至少一種選自泛素-特異性蛋白酶28 (USP28)及/或泛素-特異性蛋白酶25 (USP25)之路徑之調節劑，其可用於治療與至少一種選自USP28及USP25酶之路徑有關之疾病或病症。具體而言，本發明係關於抑制至少一種選自USP28及USP25之路徑之化學實體及組合物、治療與至少一種選自USP28及USP25之路徑有關之疾病或病症之方法及合成該等化合物之方法。
USP28及USP25係含有以下三個不同結構域之DUB之USP子家族之半胱胺酸異肽酶：N-末端UBA樣結構域；泛素相互作用基序(UIM)對；及USP結構域，其預計具有USP子家族之保守摺疊(Nijman等人，Cell 2005 , 123, 773-786；Komander等人，Mol. Cell Bio. 2009 , 10, 550-563)。USP28及USP25經由調控眾多細胞蛋白之穩定性來施加其功能。已將USP28描述為腫瘤促進因子且已發現其可穩定許多致癌蛋白。已將USP25描述為腫瘤促進因子及與自體免疫疾病、發炎及感染性疾病(例如病毒及細菌)相關之細胞反應之調控因子。
已在多個癌症類型(包含乳癌、AML、卵巢癌及結腸直腸癌)中鑑別到USP28之擴增、缺失及突變。(cbioportal；http://www.cbioportal.org；Diefenbacher等人，J. of Clin. Investi. 2014 ,124 , 3407-3418；Popov等人，Nat. Cell. Biol. 2007 ,9 , 729-731)。另外，USP28過度表現與患有神經膠母細胞瘤、非小細胞肺癌及膀胱癌之患者中之較差預後相關，從而表明USP28在該等腫瘤類型之腫瘤形成中發揮重要作用。(Wang等人，Exp. Biol. Med. 2016 , 255-264；Zhang等人，J. Cell. Mol. Med. 2015 ,19 , 799-805；Guo等人，Tumor Bio. 2014 ,35 , 4017-4022)。
大規模shRNA篩選亦已鑑別出，USP28可用於控制MYC蛋白之穩定性。(Popov,Nat. Cell. Biol. , 765-774)。MYC係涉及細胞生長、增殖及細胞凋亡之基因之轉錄之主要調控因子且對於許多腫瘤類型中之腫瘤啟動及維持至關重要。(Meyer等人，Nat. Rev. Cancer 2008 ,8 , 976-990；Conacci-Sorrell等人，Cold Spring Harb. Perspect. Med. 2014 ,4 , 1-24；Huang等人，Cold Spring Harb. Perspect. Med. 2013 ；Roussel等人，Cold Spring Harb. Perspect. Med. 2013 ；Gabay等人，Cold Spring Harb. Perspect. Med. 2014 ；Schmitz等人，Cold Spring Harb. Perspect. Med. 2014 )。另外，MYC係人類癌症中之最常擴增癌基因，且在許多腫瘤類型(包含乳癌、肺癌及***癌)中具有諸多變化。(Beroukhim等人，Nature 2010 ,463 , 899-905)。已展示，USP28基因敲低可減少MYC蛋白且同時抑制一組人類癌細胞系之活體外生長。(Popov,Nat. Cell Biol. , 765-774)。
亦已報導，需要USP28來賦予LSD1 (離胺酸-特異性去甲基酶1)蛋白穩定性。(Wu等人，Cell Rep. 2013 ,5 , 224-236)。LSD1係組織蛋白去甲基酶，其與許多配偶體蛋白複合以控制細胞多能性及分化。(Metzger等人，Nature 2005 ,437 , 436-439；Toffolo等人，J. Neurochem. 2014 128 , 603-616, 2014；Periz等人，PloS Biology 2015 )。已展示，腫瘤細胞中之USP28敲低可使LSD1蛋白去穩定，阻抑活體外癌症幹細胞(CSC)樣特性，且抑制活體內腫瘤生長。(Wu,Cell Rep., 224-236)。LSD1小分子抑制劑已在AML及尤恩氏肉瘤(Ewing sarcoma)之模型中展示抗腫瘤活性。(Sankar等人，「Reversible LSD1 inhibition interferes with global EWS/ETS transcriptional activity and impedes Ewing sarcoma tumor growth」Clin Cancer Res. 2014 4584-4597；Schenk等人，Nat. Med. 2012 ,18 , 605-611)。因此，USP28抑制代表靶向該等腫瘤類型中之LSD1之替代方式。
亦已展示，USP28抑制可減小NICD1含量且抑制NOTCH路徑活性。(Diefenbacher等人)。NOTCH信號傳導控制眾多細胞分化決定且驅動某些腫瘤類型中之腫瘤形成。NOTCH1係強力T細胞癌基因，且＞50%之T細胞急性淋巴母細胞性白血病(T-ALL)病例攜載NOTCH1之活化突變。(Weng等人，Science 2004 ,306 , 269-271)。增加之NOTCH1蛋白含量亦與結腸癌中之疾病進展有關。(Meng等人，Cancer Res. 2009 ,69 , 573-582)。NOTCH1重排可引起組成型路徑活化且驅動許多癌症類型(包含三陰性乳癌)中之腫瘤形成。(Stoeck等人，Cancer Discov. 2014 ,4 , 1154-1167)。
USP28之其他報告受質包含c-Jun、細胞週期蛋白E、HIF-1α、克拉普因(Claspin)、53BP1及Mdc1，其中之許多受質在人類腫瘤形成中發揮重要作用。(Diefenbacher等人；Flügel等人，Blood 2012 ,119 , 1292-1301；Zhang等人，「A role for the deubiquitinating enzyme USP28 in control of the DNA-damage response」Cell 2006 ,126 , 529-542)。有趣的是，許多USP28受質由FBW7識別，後者係SCF (FBW7) E3泛素連接酶之受質識別亞單元。(Diefenbacher等人)。FBW7以磷酸化依賴性方式識別USP28受質且靶向其以用於泛素化，從而最終引起其蛋白酶體降解。USP28及FBW7對其共用致癌蛋白受質之拮抗作用指示了蛋白質穩定性控制之複雜性質且可提供癌症治療之其他治療機會。
具有USP28種系剔除之小鼠已展示為可存活且可生育，從而證實USP28活性並非正常發育及生殖功能所需。(Knobel等人，Molecular and Cellular Biology 2014 ,34 , 2062-2074)。小鼠腸中之條件性USP28剔除可減少致癌蛋白(包含c-Myc、活性NOTCH (NICD1)及c-JUN)，此與腸細胞增殖降低及分化增強有關。更重要的是，可使用急性USP28消耗來有效地阻斷藉由APC突變誘導之腸腫瘤形成，從而表明 USP28可為減小腫瘤負荷及改良腸癌存活之有吸引力靶。(Diefenbacher等人)。
總而言之，USP28及USP25在促進細胞中之腫瘤形成及調節免疫反應中發揮重要作用。其主要作用在於使眾多致癌蛋白以及表觀遺傳驅動因子及免疫調節蛋白以及其他細胞因子的去泛素化及穩定化，此其係人類中之免疫反應以及腫瘤啟動及生長所需的。使用小分子抑制劑抑制USP28及/或USP25由此可經研發用於醫學應用，例如用於治療癌症(例如肺癌)。出於此原因，仍亟需USP28及/或USP25之新穎及強力小分子抑制劑。
本發明係關於選自式(I)化合物之化學實體：， 及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體， 其中： X係選自C(R)2 及O； Y係選自C及N； R係選自H、鹵素、C1 -C6 烷基、-OH及-CN，其中任一含氫R基團之一或多個氫可經氘置換； R1 係選自視情況經一或多個選自R5 及R6 之取代基取代之6-12員雜芳基，其中6員非稠合雜芳基經一或多個R6 取代，且另外其中任一含氫R1 基團之一或多個氫可經氘置換； R2 係選自N-連接及C-連接之4-12員雜環基及O連接之雜環基，其中該等雜環基視情況經一或多個R5 取代，雜環基之硫成員可為S(O)或S(O)2，且另外其中任一含氫R2 基團之一或多個氫可經氘置換； R3 獨立地選自H、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、( C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-CN、(C3 -C8 )環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基，其中烷基視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代，且其中環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基視情況經一或多個R7 取代； R4 係選自H、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-CN、(C3 -C8 )環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基，其中烷基視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代，且其中環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基視情況經一或多個R5 取代，且另外其中任一含氫R4 基團之一或多個氫可經氘置換； R5 獨立地選自-OH、-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中烷基視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代，且其中任一含氫R5 基團之一或多個氫可經氘置換； R6 係選自-N(C1 -C6 )烷基-芳基、-N(C1 -C6 )烷基-雜芳基及-N(C1 -C6 )烷基-雜環基，其中該等基團視情況經一或多個選自-OH、-NH、鹵素、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及(C1 -C6 )鹵代烷基之取代基取代，且另外其中任一含氫R6 基團之一或多個氫可經氘置換； R7 獨立地選自-OH、-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中烷基視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代； 且 n為0、1、2或3。
式(I)化合物可為其中符合以下條件之化合物或其醫藥上可接受之鹽： X係選自C(R)2 (例如C(R)(R)，其中每一R相同或不同)及O； Y係選自C (例如CH或C(R)，其中R與部分X中之R相同或不同)及N； R獨立地選自H、鹵素、C1 -C6 烷基、-OH及-CN； R1 係選自視情況經一或多個選自R5 及R6 之取代基取代之6-12員雜芳基，其中6員非稠合雜芳基經一或多個R6 取代； R2 係選自N-連接之4-12員雜環基、C-連接之4-12員雜環基及O-連接之雜環基，其中N-連接、C-連接或O-連接之雜環基視情況經一或多個R5 取代； R3 獨立地選自H、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、( C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-CN、(C3 -C8 )環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基，其中烷基視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代，且其中環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基視情況經一或多個R7 取代； R4 係選自H、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、( C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-CN、(C3 -C8 )環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基，其中烷基視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代，且其中環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基視情況經一或多個R5 取代； R5 獨立地選自-OH、-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中烷基視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代； R6 係選自-N-(C1 -C6 )烷基-芳基、-N-(C1 -C6 )烷基-雜芳基及-N-(C1 -C6 )烷基-雜環基，其中該等基團視情況經一或多個選自-OH、-NH、鹵素、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及(C1 -C6 )鹵代烷基之取代基取代； R7 獨立地選自-OH、-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中烷基視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代；且 n為0、1、2或3。
在其他實例中，式(I)化合物可為其中符合以下條件之化合物或其醫藥上可接受之鹽： X係選自C(R)2 (例如C(R)(R)，其中每一R相同或不同)及O； Y係選自C (例如CH或C(R)，其中R與部分X中之R相同或不同)及N； X及Y中之每一R獨立地選自H、鹵素、C1 -C6 烷基、-OH及-CN； R1 係選自視情況經一或多個選自R5 及R6 之取代基取代之雜芳基，其中該雜芳基視情況經一或多個R6 取代； R2 係選自N-連接之雜環基、C-連接之雜環基及O-連接之雜環基，其中N-連接、C-連接或O-連接之雜環基視情況經一或多個R5 取代； 每一R3 獨立地選自H、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、( C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-CN、(C3 -C8 )環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基，其中該等烷基各自視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代，且其中環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基視情況經一或多個R7 取代； 每一R4 獨立地選自H、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、( C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-CN、(C3 -C8 )環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基，其中烷基各自視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代，且其中環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基視情況經一或多個R5 取代； 每一R5 獨立地選自-OH、-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中該等烷基各自視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代； 每一R6 獨立地選自胺基-烷基-芳基(例如-N-(C1 -C6 )烷基-芳基)、胺基-烷基-雜芳基(例如-N-(C1 -C6 )烷基-雜芳基)、胺基-烷基-環基及胺基-烷基-雜環基(例如-N-(C1 -C6 )烷基-雜環基)，其中該等基團視情況經一或多個選自-OH、-NH、鹵素、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及(C1 -C6 )鹵代烷基之取代基取代； 每一R7 獨立地選自-OH、-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中該等烷基各自視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代； n為0、1、2或3。
本發明之另一態樣係關於治療與USP28抑制有關之疾病或病症之方法。該方法包括向需要治療與USP28抑制有關之疾病或病症之患者投與有效量之至少一種選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體的化學實體。
本發明之另一態樣係關於治療與USP25抑制有關之疾病或病症之方法。該方法包括向需要治療與USP25抑制有關之疾病或病症之患者投與有效量之至少一種選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體的化學實體。
本發明之另一態樣係關於治療與抑制至少一種選自USP28及USP25之路徑有關之疾病或病症之方法。該方法包括向需要治療與抑制至少一種選自USP28及USP25之路徑有關之疾病或病症之患者投與有效量之至少一種選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體的化學實體。
本發明之另一態樣係關於抑制USP28之方法。該方法涉及向有需要之患者投與有效量之至少一種選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體的化學實體。
本發明之另一態樣係關於抑制USP25之方法。該方法涉及向有需要之患者投與有效量之至少一種選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體的化學實體。
本發明之另一態樣係關於抑制至少一種選自USP28及USP25之路徑之方法。該方法涉及向有需要之患者投與有效量之至少一種選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體的化學實體。
本發明之另一態樣係關於治療癌症之方法。該方法包括向有需要之患者投與有效量之至少一種選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體的化學實體。
本發明之另一態樣係關於醫藥組合物，其包括至少一種選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體及醫藥上可接受之載劑。醫藥可接受之載劑可進一步包含賦形劑、稀釋劑或表面活性劑。
本發明之另一態樣係關於至少一種選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體，其用以製造用於治療與抑制USP28有關之疾病之藥劑。
本發明之另一態樣係關於至少一種選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體之用途，其用於治療與抑制USP28有關之疾病。
本發明之另一態樣係關於至少一種選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體之用途，其用於治療與抑制USP25有關之疾病。
本發明之另一態樣係關於至少一種選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體之用途，其用於治療與抑制至少一種選自USP28及USP25之路徑有關之疾病。
本文揭示可用於抑制USP 28及/或USP25之化合物，包含如本文所定義之USP25抑制劑化合物、USP28抑制劑化合物及USP28/25抑制劑化合物。USP28/25抑制劑、USP28抑制劑及/或USP25抑制劑化合物可為本文所揭示之化合物，包含式(I)化合物、式(II)化合物、式(III)化合物、式(IV)化合物、式(V)化合物、式(VI)化合物及/或式(VII)化合物。
本文所用之術語「USP28抑制劑」化合物係指在本文如實例A-1(a)中所闡述之USP28泛素-玫瑰紅110分析及/或如實例A-1(b)中所闡述之USP28泛素-玫瑰紅110分析中IC50 為2微莫耳濃度或更小的本文所揭示化合物(例如式(I)化合物、式(II)化合物、式(III)化合物、式(IV)化合物、式(V)化合物、式(VI)化合物及/或式(VII)化合物)。舉例而言，USP28抑制劑可為使用如實例A-1(a)中所闡述之USP28泛素-玫瑰紅110分析IC50 值最高為2微莫耳濃度(包含介於0.001 - 2微莫耳濃度、較佳地0.001-0.2微莫耳濃度及更佳地0.001-0.05微莫耳濃度之間之IC50 值)之本文所揭示式的化合物。USP28抑制劑可為使用如實例A-1(b)中所闡述之USP28泛素-玫瑰紅110分析IC50 值最高為2微莫耳濃度(包含介於0.001 - 2微莫耳濃度、較佳地0.001-0.2微莫耳濃度、更佳地0.001-0.05微莫耳濃度之間之IC50 值)之本文所揭示式的化合物。USP28抑制劑可為使用如實例A-1(a)中所闡述之USP28泛素-玫瑰紅110分析及如實例A-1(b)中所闡述之USP28泛素-玫瑰紅110分析IC50 值最高為2微莫耳濃度(包含在兩個分析中0.001 - 2微莫耳濃度、較佳地0.001-0.2微莫耳濃度、更佳地0.001-0.05微莫耳濃度之IC50 值)之本文所揭示式的化合物。
本文所用之術語「USP25抑制劑」係指在本文如實例A-2中所闡述之USP25泛素-玫瑰紅110分析中IC50 為2微莫耳濃度或更小的本文所揭示化合物(例如式(I)化合物、式(II)化合物、式(III)化合物、式(IV)化合物、式(V)化合物、式(VI)化合物及/或式(VII)化合物)。舉例而言，USP25抑制劑可為使用如實例A-2中所闡述之USP25泛素-玫瑰紅110分析IC50 值最高為2微莫耳濃度(包含介於0.001 - 2微莫耳濃度、較佳地0.001-0.2微莫耳濃度、更佳地0.001-0.05微莫耳濃度之間之IC50 值)之本文所揭示式的化合物。USP25抑制劑可為使用如實例A-2中所闡述之USP25泛素-玫瑰紅110分析IC50 值最高為2微莫耳濃度(包含介於0.001 - 2微莫耳濃度、較佳地0.001-0.2微莫耳濃度、更佳地0.001-0.05微莫耳濃度之間之IC50 值)之本文所揭示式的化合物。USP25抑制劑可為使用如實例A-2中所闡述之USP25泛素-玫瑰紅110分析及如實例A-2中針對USP25所闡述之泛素-玫瑰紅110分析IC50 值最高為2微莫耳濃度(包含在兩個分析中介於0.001 - 2微莫耳濃度、較佳地0.001-0.2微莫耳濃度、更佳地0.001-0.05微莫耳濃度之間之IC50 值)之本文所揭示式的化合物。
本文所用之術語「USP28/25抑制劑」係指係如本文所定義之USP28抑制劑或USP25抑制劑或USP28抑制劑及USP25抑制劑二者之本文所揭示之化合物(例如式(I)化合物、式(II)化合物、式(III)化合物、式(IV)化合物、式(V)化合物、式(VI)化合物及/或式(VII)化合物)。
視情況，式(I)化合物、式(II)化合物、式(III)化合物、式(IV)化合物、式(V)化合物、式(VI)化合物及/或式(VII)化合物中之任一或多個氫原子可獨立地經氘或其他氫同位素置換。
在本發明之第一態樣中，化學實體係選自式(I)化合物：， 及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體，其中X、Y、R1 、R2 、R3 、R4 及n係如上文所闡述。
本發明細節陳述於下文之隨附說明中。儘管在本發明之實踐或測試中可使用與彼等本文所闡述者類似或等效之方法及材料，但現將闡述闡釋性方法及材料。根據描述及申請專利範圍可明瞭本發明之其他特徵、目標及優點。在說明書及隨附申請專利範圍中，除非上下文明確指示其他含義，否則單數形式亦包含複數。除非另外定義，否則本文所使用之所有技術及科學術語皆具有與熟習本發明所屬技術領域者通常所理解相同之含義。本說明書中所引用之所有專利及公開案之全部內容皆以引用方式併入本文中。
本發明所用之冠詞「一個(a及an)」係指該冠詞之文法受詞之一個或一個以上(例如係指至少一個)。舉例而言，「一個元件」意指一個元件或一個以上元件。
除非另外指示，否則術語「及/或」在本發明中用於意指「及」或「或」。
術語「視情況經取代」應理解為意指，給定化學部分(例如烷基)可(但未必)鍵結其他取代基(例如雜原子)。舉例而言，視情況經取代之烷基可為完全飽和之烷基鏈(例如純烴)。或者，相同視情況經取代之烷基可具有非氫取代基。舉例而言，其可在沿鏈之任一點結合至鹵素原子、羥基或本文所闡述之任一其他取代基。因此，術語「視情況經取代」意指，給定化學部分可含有其他官能基，但未必具有任何其他官能基。用於視情況取代所闡述基團之適宜取代基包含(但不限於)、鹵素、側氧基、-OH、-CN、-COOH、-CH2 CN、-O-(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、-O-(C2 -C6 )烯基、-O-(C2 -C6 )炔基、(C2 -C6 )烯基、(C2 -C6 )炔基、-OH、-OP(O)(OH)2 、-OC(O)(C1 -C6 )烷基、-C(O)(C1 -C6 )烷基、-OC(O)O(C1 -C6 )烷基、-NH2 、-NH((C1 -C6 )烷基)、-N((C1 -C6 )烷基)2 、-NHC(O)(C1 -C6 )烷基、-C(O)NH(C1 -C6 )烷基、-S(O)2 (C1 -C6 )烷基、-S(O)NH(C1 -C6 )烷基及S(O)N((C1 -C6 )烷基)2 。取代基可自身視情況經取代。本文所用之「視情況經取代」亦係指經取代或未經取代，其含義闡述於下文中。
如本文中所使用，術語「經取代」意指，指定基團或部分具有一或多個適宜取代基，其中該等取代基可在一或多個位置連結至指定基團或部分。舉例而言，經環烷基取代之芳基可指示，環烷基使用鍵或藉由與芳基稠合且共用兩個或更多個公用原子來連結至一個芳基原子。
如本文中所使用，術語「未經取代」意指指定基團不具有取代基。
除非另外具體定義，否則術語「芳基」係指具有1至3個芳香族環之環狀、芳香族烴基團，包含單環或雙環基團，例如苯基、聯苯或萘基。在含有兩個芳香族環(雙環等)之情形下，芳基之芳香族環可接合於單一點(例如聯苯)或發生稠合(例如萘基)。芳基可視情況在任一連接點經一或多個取代基(例如1至5個取代基)取代。實例性取代基包含(但不限於)-H、-鹵素、-O-(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基、-O-(C2 -C6 )烯基、-O-(C2 -C6 )炔基、(C2 -C6 )烯基、(C2 -C6 )炔基、-OH、-OP(O)(OH)2 、-OC(O)(C1 -C6 )烷基、-C(O)(C1 -C6 )烷基、-OC(O)O(C1 -C6 )烷基、-NH2 、NH((C1 -C6 )烷基)、N((C1 -C6 )烷基)2 、-S(O)2 -(C1 -C6 )烷基、-S(O)NH(C1 -C6 )烷基及-S(O)N((C1 -C6 )烷基)2 。該等取代基可自身視情況經取代。另外，在含有兩個稠合環時，本文所定義之芳基可具有與完全飽和環稠合之不飽和或部分飽和環。該等芳基之實例性環系統包含(但不限於)苯基、聯苯、萘基、蒽基、萉基、菲基、二氫茚基、茚基、四氫萘基、四氫苯并輪烯基及諸如此類。
除非另外具體定義，否則「雜芳基」意指具有5至24個環原子之單價單環芳香族基團或含有一或多個選自N、O及S之環雜原子且剩餘環原子為C之多環芳香族基團。如本文所定義之雜芳基亦意指雙環雜芳香族基團，其中雜原子係選自N、O及S。芳香族基團視情況獨立地經一或多個本文所闡述之取代基取代。實例包含(但不限於)呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡啶基、吡唑基、嘧啶基、咪唑基、異噁唑基、噁唑基、噁二唑基、吡嗪基、吲哚基、噻吩-2-基、喹啉基、苯并吡喃基、異噻唑基、噻唑基、噻二唑、吲唑、苯并咪唑基、噻吩并[3,2-b]噻吩、***基、三嗪基、咪唑并[1,2-b]吡唑基、呋喃并[2,3-c]吡啶基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吲唑基、吡咯并[2,3-c]吡啶基、吡咯并[3,2-c]吡啶基、吡唑并[3,4-c]吡啶基、噻吩并[3,2-c]吡啶基、噻吩并[2,3-c]吡啶基、噻吩并[2,3-b]吡啶基、苯并噻唑基、吲哚基、二氫吲哚基、二氫吲哚酮基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并呋喃基、苯并呋喃、烷基、硫基烷基、四氫喹啉基、二氫苯并噻嗪、二氫苯并噁烷基、喹啉基、異喹啉基、1,6-萘啶基、苯并[de]異喹啉基、吡啶并[4,3-b][1,6]萘啶基、噻吩并[2,3-b]吡嗪基、喹唑啉基、四唑并[1,5-a]吡啶基、[1,2,4]***并[4,3-a]吡啶基、異吲哚基、吡咯并[2,3-b]吡啶基、吡咯并[3,4-b]吡啶基、吡咯并[3,2-b]吡啶基、咪唑并[5,4-b]吡啶基、吡咯并[1,2-a]嘧啶基、四氫吡咯并[1,2-a]嘧啶基、二苯并[b,d]噻吩、吡啶-2-酮、呋喃并[3,2-c]吡啶基、呋喃并[2,3-c]吡啶基、1H-吡啶并[3,4-b][1,4]噻嗪基、苯并噁唑基、苯并異噁唑基、呋喃并[2,3-b]吡啶基、苯并噻吩基、1,5-萘啶基、呋喃并[3,2-b]吡啶、[1,2,4]***并[1,5-a]吡啶基、苯并[1,2,3]***基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、[1,2,4]***并[4,3-b]噠嗪基、苯并[c][1,2,5]噻二唑基、苯并[c][1,2,5]噁二唑、1,3-二氫-2H-苯并[d]咪唑-2-酮、3,4-二氫-2H-吡唑并[1,5-b][1,2]噁嗪基、4,5,6,7-四氫吡唑并[1,5-a]吡啶基、噻唑并[5,4-d]噻唑基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑基、噻吩并[2,3-b]吡咯基、噻吩并[2,3-d]噻唑、1a,2,3,7b-四氫-1H -環丙并[c ][1,8]萘啶、3H-吲哚基及其衍生物。另外，本文所用之術語「雜芳基」及「雜芳-」亦包含其中雜芳香族環與一或多個芳基、環脂族或雜環基環稠合之基團，其中連接基團或連接點位於雜芳香族環上。非限制性實例包含二氫吲哚基、二氫吲哚酮基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并呋喃、烷基、硫基烷基、四氫喹啉基、二氫苯并噻嗪、3,4-二氫-1H-異喹啉基、2,3-二氫苯并呋喃、二氫吲哚基、吲哚基、異吲哚基及二氫苯并噁烷基。
鹵素或「鹵基」係指氟、氯、溴或碘。
烷基係指含有1-12個碳原子之直鏈或具支鏈飽和烴。(C1 -C6 )烷基之實例包含(但不限於)甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、異丙基、異丁基、第二丁基、第三丁基、異戊基、新戊基及異己基。
「烷氧基」係指在鏈中含有1-12個碳原子且含有末端「O」之直鏈或具支鏈飽和烴，例如-O(烷基)。烷氧基之實例包含(但不限於)甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、第三丁氧基或戊氧基。
術語「伸烷基」或「烷基烯基」係指二價烷基。任一上文提及單價烷基可藉由自烷基奪取第二氫原子而成為伸烷基。如本文中所定義，伸烷基亦可為C0 -C6 伸烷基。伸烷基可另外為C0 -C4 伸烷基。典型伸烷基包含(但不限於) -CH2 -、-CH(CH3 )-、-C(CH3 )2 -、-CH2 CH2 -、-CH2 CH(CH3 )-、-CH2 C(CH3 )2 -、-CH2 CH2 CH2 -、-CH2 CH2 CH2 CH2 -及諸如此類。
「環烷基」或「碳環基」意指含有3-18個碳原子之單環或多環飽和碳環。環烷基之實例包含(但不限於)環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚烷基、環辛烷基、降莰烷基、降莰烯基、雙環[2.2.2]辛烷基或雙環[2.2.2]辛烯基及其衍生物。C3 -C8 環烷基係含有3至8個碳原子之環烷基。環烷基可為稠合(例如十氫萘)或橋接(例如降莰烷)基團。
「雜環基」或「雜環烷基」係指含有碳及選自氧、氮或硫之雜原子之單環或多環環且其中所有環碳或雜原子並不共用離域π電子(芳香性)。雜環烷基環結構可經一或多個取代基取代。取代基可自身視情況經取代。雜環基環之實例包含(但不限於)環氧丙烷基、氮雜環丁烷基(azetadinyl)、四氫呋喃基、四氫吡喃基、吡咯啶基、噁唑啉基、噁唑啶基、噻唑啉基、噻唑啶基、吡喃基、噻喃基、四氫吡喃基、二氧戊環基(dioxalinyl)、六氫吡啶基、嗎啉基、硫嗎啉基、硫嗎啉基S-氧化物、硫嗎啉基S-二氧化物、六氫吡嗪基、氮呯基、氧呯基、二氮呯基、莨菪烷基、噁唑啶酮基及高托烷基(homotropanyl)。如本文中所使用，「雜環基」及「雜環烷基」亦包含橋接及螺環環系統，其中至少一個原子係雜原子。作為取代基之雜環可經由環雜原子(例如「N-連接」)或經由環碳(例如「C-連接」)連接。
術語「羥基烷基」意指烷基經一或多個OH基團取代之如上文所定義之烷基。羥基烷基之實例包含HO-CH2 -、HO-CH2 -CH2 -及CH3 -CH(OH)-。
本文所用之術語「鹵代烷基」係指經一或多個鹵素取代之如本文所定義之烷基。鹵代烷基之實例包含(但不限於)三氟甲基、二氟甲基、五氟乙基、三氯甲基等。
本文所用之術語「鹵代烷氧基」係指經一或多個鹵素取代之如本文所定義之烷氧基。鹵代烷氧基之實例包含(但不限於)三氟甲氧基、二氟甲氧基、五氟乙氧基、三氯甲氧基等。
本文所用之術語「氰基」意指具有藉由三鍵接合至氮原子之碳原子之取代基，例如C≡N。
術語「溶劑合物」係指藉由溶質及溶劑形成之具有可變化學計量學之複合物。用於本發明目的之該等溶劑可能並不干擾溶質之生物活性。適宜溶劑之實例包含(但不限於)水、MeOH、EtOH及AcOH。其中水係溶劑分子之溶劑合物通常稱為水合物。水合物包含含有化學計量量水之組合物以及含有可變量水之組合物。
術語「異構體」係指具有相同組成及分子量但具有不同物理及/或化學性質之化合物。結構差異可在於構造(幾何異構體)或旋轉偏振光平面之能力(立體異構體)。就立體異構體而言，式(I)化合物可具有一或多個不對稱碳原子且可以外消旋物、外消旋混合物及個別對映異構體或非對映異構體之形式存在。
本發明亦包含含有有效量之所揭示化合物及醫藥上可接受之載劑之醫藥組合物。
關於個體之術語「治療」係指改良個體病症之至少一種症狀。治療包含治癒、改良或至少部分地改善病症。
除非另外指示，否則術語「病症」在本發明中用於意指術語疾病、病狀或病況，且可互換使用。
本發明所用之術語「投與(administer、administering或administration)」係指向個體直接投與所揭示化合物或所揭示化合物之醫藥上可接受之鹽或組合物，或向個體投與該化合物或該化合物之醫藥上可接受之鹽或組合物之前藥衍生物或類似物(其可在個體身體內形成等效量之活性化合物)。
本發明所用之術語「前藥」意指可在活體內藉由代謝方式(例如藉由水解)轉化成所揭示化合物之化合物。
術語「癌症」包含(但不限於)下列癌症：膀胱癌、乳癌(例如導管癌)、子宮頸癌(例如鱗狀細胞癌)、結腸直腸癌(例如腺癌)、食管癌(例如鱗狀細胞癌)、胃癌(例如腺癌、髓母細胞瘤、結腸癌、絨毛膜癌、鱗狀細胞癌)、頭頸癌、血液學癌症(例如急性淋巴球性貧血、急性骨髓樣白血病、急性淋巴母細胞性B細胞白血病、間變性大細胞淋巴瘤、B細胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)、慢性淋巴球性白血病、慢性嗜酸性球性白血病/高嗜酸性球性症候群、慢性骨髓樣白血病、何傑金氏淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)、外套細胞淋巴瘤、多發性骨髓瘤、T細胞急性淋巴母細胞性白血病)、肺癌(例如支氣管肺泡腺癌、間皮瘤、黏液表皮樣癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、腺癌、鱗狀細胞癌)、肝癌(例如肝細胞癌)、淋巴瘤、神經學癌症(例如神經膠母細胞瘤、神經母細胞瘤、神經神經膠質瘤)、卵巢癌(例如腺癌)、胰臟癌(例如導管癌)、***癌(例如腺癌)、腎癌(例如腎細胞癌、透明細胞腎癌)、肉瘤(例如軟骨肉瘤、尤恩氏肉瘤、纖維肉瘤、多能性肉瘤、骨肉瘤、橫紋肌肉瘤、滑膜肉瘤)、皮膚癌(例如黑色素瘤、表皮樣癌、鱗狀細胞癌)、甲狀腺癌(例如髓質癌)及子宮癌。
本發明係關於選自能夠抑制至少一種選自USP28及USP25之路徑之化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體，其可用於治療與至少一種選自USP28及USP25之路徑的調節有關之疾病及病症。本發明另外係關於選自可用於抑制至少一種選自USP28及USP25之路徑之化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體。
在如本文所揭示之任一實施例中，癌症可為任一器官中之任一癌症，舉例而言，癌症係選自由以下組成之群：神經膠質瘤、甲狀腺癌、***癌、小細胞肺癌、非小細胞癌、胃癌、結腸癌、胃腸道基質癌、胰臟癌、膽管癌、CNS癌、卵巢癌、子宮內膜癌、***癌、腎癌、間變性大細胞淋巴瘤、白血病、多發性骨髓瘤、間皮瘤及黑色素瘤及其組合。
本發明係關於選自能夠抑制至少一種選自USP28及USP25之路徑之化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體，其可用於治療與至少一種選自USP28及/或USP25酶之路徑的調節有關之疾病及病症。本發明另外係關於選自可用於抑制至少一種選自USP28及USP25之路徑之化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體。
在一實施例中，化學實體係選自式(II)化合物：， 其中X、Y、R1 、R2 、R3 、R4 及n係如上文所闡述；及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體。
在另一實施例中，化學實體係選自式(III)化合物：， 其中X、Y、R1 、R2 、R3 、R4 及n係如上文所闡述；及其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體。
在另一實施例中，化學實體係選自式(IV)化合物：其中X、Y、R1 、R2 、R3 、R4 及n係如上文所闡述；及其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體。
在另一實施例中，化學實體係選自式(V)化合物：， 其中X、Y、R1 、R2 、R3 、R4 及n係如上文所闡述；及其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體。
在一些實施例中，化學實體係選自式(VI)化合物：， 或其醫藥上可接受之鹽， 其中： X係選自C(R)(R’’)及O； Y1 、Y2 及Y3 中之每一者獨立地選自C(R3 )及N； R’係選自H、氘及CH3 ； R及R’’中之每一者獨立地選自H、鹵素、-OH、-CN、視情況經一或多個Ri取代之C1 -C6 烷基， 或R及R’’與其所連接之碳一起形成視情況經一或多個Ri取代之螺環環丙基，其中任一係或含有氫之R、R’’或Ri基團之一或多個氫可獨立地經氘置換； 每一Ri獨立地選自鹵素、-OH及CH3 ； R1 係選自視情況經一或多個選自R5 及/或R6 之取代基取代之6-12員稠合及非稠合雜芳基，且另外其中任一含氫R1 基團之一或多個氫可經氘置換； R2 係選自N-連接之4-12員雜環基、C-連接之4-12員雜環基及連接至4-12員雜環基之O連接體，其中4-12員雜環基視情況經一或多個R5 (其可與R1 之一或多個R5 相同或不同)取代，且另外其中R2 基團中之任何氫可經氘置換一或多個氫； 每一R3 獨立地選自H、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、( C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-CN、(C3 -C8 )環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基，其中(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、( C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基中之每一者視情況經一或多個R7 取代； R4 係選自H、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-CN、(C3 -C8 )環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基，其中(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、(C3 -C8 )環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基中之每一者視情況經一或多個R5 取代，且另外其中任一含氫R4 基團之一或多個氫可經氘置換； 每一R5 獨立地選自-OH、-NH2 、醯胺基-(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、醯胺基-(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、-NH2 及-OH之取代基取代，且其中任一含氫R5 基團之一或多個氫可經氘置換； 每一R6 獨立地選自-胺基烷基-芳基、-胺基烷基-雜芳基、-胺基烷基-環基及-胺基烷基-雜環基，其中每一R6 基團視情況經一或多個選自-OH、-NH、鹵素、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及(C1 -C6 )鹵代烷基之取代基取代，且另外其中任一含氫R6 基團之一或多個氫可經氘置換； 每一R7 獨立地選自-OH、-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、-C(O)-環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、-C(O)-環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代； 且 n為0、1、2或3。
一種式(VI)化合物或其醫藥上可接受之鹽， 其中： X係選自C(R)(R’’)及O； Y1 、Y2 及Y3 中之每一者獨立地選自C(R3 )及N； R’係選自H及CH3 ； R及R’’中之每一者獨立地選自H、鹵素、-OH、-CN、視情況經一或多個Ri取代之C1 -C6 烷基， 或R及R’’與其所連接之碳一起形成視情況經一或多個Ri取代之螺環環烷基(例如螺環環丙基)，其中任一個為氫或含有氫之R、R’’或Ri基團中之一或多個氫可獨立地經氘置換； 每一Ri獨立地選自鹵素、-OH及CH3 ； R1 係選自視情況經一或多個選自R5 及/或R6 之取代基取代之稠合或非稠合雜芳基(例如6-12員稠合或非稠合雜芳基，例如視情況經一或多個R6 取代之6員非稠合雜芳基)； R2 係選自N-連接之雜環基(例如4-12員雜環基)、C-連接之雜環基(例如4-12員雜環基)及O-連接之雜環基(例如4-12員雜環基，例如)，其中-N-連接-、-C-連接或-O-連接(例如4-12員)之雜環基中之任一者視情況經一或多個R5 (其可與R1 之一或多個R5 相同或不同)取代； 每一R3 獨立地選自H、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、( C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-CN、(C3 -C8 )環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基，其中(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、( C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基中之每一者視情況經一或多個R7 取代； R4 係選自H、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-CN、(C3 -C8 )環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基，其中(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、(C3 -C8 )環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基中之每一者視情況經一或多個R5 取代； 每一R5 獨立地選自-OH、-NH2 、醯胺基-(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、醯胺基-(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、-NH2 及-OH之取代基取代； 每一R6 獨立地選自-胺基烷基-芳基、-胺基烷基-雜芳基、-胺基烷基-環基及-胺基烷基-雜環基，其中每一R6 基團視情況經一或多個選自-OH、-NH、鹵素、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及(C1 -C6 )鹵代烷基之取代基取代； 每一R7 獨立地選自-OH、-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、-C(O)-環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、-C(O)-環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代；且 n為0、1、2或3。
在一些實施例中，上文中式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)及/或式(VI)之化合物包含呈CH2 形式之X (若存在) (舉例而言，R及R’’在式(VI)中皆係氫)。在其他實施例中，上文中式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)及/或式(VI)之化合物包含呈O形式之X (若存在)。
在另一實施例中，化學實體係選自符合以下條件之式(VI)化合物及其醫藥上可接受之鹽： X係選自C(R)(R’’)及O； Y1 、Y2 及Y3 中之每一者獨立地選自C(R3 )及N； R’係選自H及CH3 ； R及R’’中之每一者獨立地選自H、鹵素、-OH、-CN、視情況經一或多個Ri取代之C1 -C6 烷基； 每一Ri獨立地選自鹵素、-OH及CH3 ； R1 係選自視情況經一或多個R5 取代之6-12員稠合及非稠合雜芳基，其中6員非稠合雜芳基經一或多個R6 取代； R2 係選自N-連接及C-連接之4-12員雜環基，其中4-12員雜環基視情況經一或多個R5 (其可與R1 之一或多個R5 相同或不同)取代； 每一R3 獨立地選自H、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、( C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、-OH及-CN，其中(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基及( C1 -C6 )鹵代烷氧基中之每一者視情況經一或多個R7 取代； R4 係選自H、(C1 -C6 )烷基、鹵素、-OH及-CN，其中(C1 -C6 )烷基視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代； 每一R5 獨立地選自-OH、-NH2 、-NHC(O)CH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中烷基視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基、-NH2 及-OH之取代基取代； 每一R6 獨立地選自-NH(C1 -C6 )烷基-芳基、-NH(C1 -C6 )烷基-雜芳基、-NH(C1 -C6 )烷基-環基及-NH(C1 -C6 )烷基-雜環基，其中每一R6基團視情況經一或多個選自-OH、-NH、鹵素、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及(C1 -C6 )鹵代烷基之取代基取代； 每一R7 獨立地選自-OH、-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、-C(O)-環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、-C(O)-環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代； 且 n為0、1、2或3。
在另一實施例中，化學實體係選自式(VII)化合物：， 或其醫藥上可接受之鹽，其中 Y係選自C(R3 )及N； R’係選自H、氘及CH3 ； R1 係選自6-11員雜芳基，其視情況經一或多個選自R5 及/或R6 之取代基取代； R2 係選自N-連接之4-12員雜環基及C-連接之4-12員雜環基，其中該等雜環基視情況經一或多個R5 取代，且另外其中任一含氫R2 基團之一或多個氫可經氘置換； 每一R3 (若存在)獨立地選自H、氘、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-CN，其中(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、( C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基中之每一者視情況經一或多個R7 取代； 每一R4 係選自H、氘、(C1-C6)烷基、鹵素、-OH、-CN，且另外其中任一含氫R4 基團之一或多個氫可經氘置換； 每一R5 (若存在)獨立地選自-OH、-NH2 、NHC(O)CH3 、-C(O)NHCH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、-NHC(O)CH3 、-C(O)NHCH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基、-NH2 及-OH之取代基取代，且其中任一含氫R5 基團之一或多個氫可經氘置換； 每一R6 (若存在)係選自-NH(C1-C6)烷基-芳基、-NH(C1-C6)烷基-雜芳基、-NH(C1-C6)烷基-雜環基及-NH(C1-C6)烷基-雜環基，其中每一R6 基團視情況經一或多個選自-OH、-NH、鹵素、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基及(C1-C6)鹵代烷基之取代基取代，且另外其中任一含氫R6 基團之一或多個氫可經氘置換； 每一R7 (若存在)獨立地選自-OH、-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、-C(O)-環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、-C(O)-環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代；且 n為0、1、2或3。
在上述各式之一些實施例中，X係CH2 。在另一實施例中，X係O。
在上述各式之一些實施例中，R1 係選自視情況經一或多個R5 取代之6-12員雜芳基。在上述各式之一些實施例中，R1 係選自經一或多個R6 取代之6員雜芳基。在上述各式之一些實施例中，任一含有氫之R1 基團或可選取代基之一或多個氫可經氘置換。
在上述各式之一些實施例中，R2 係選自視情況經一或多個R5 取代之N-連接之4-10員雜環基，且其中雜環基之硫成員可為S(O)或S(O)2 。在上述各式之一些實施例中，R2 係選自視情況經一或多個R5 取代之C-連接之4-10員雜環基，且其中雜環基之硫成員可為S(O)或S(O)2 。在上述各式之一些實施例中，R2 係選自視情況經一或多個R5 取代之O連接之雜環實體，且其中雜環基之硫成員可為S(O)或S(O)2 。在上述各式之一些實施例中，任一含有氫之R2 基團或可選取代基之一或多個氫可經氘置換。
在上述各式之一些實施例中，R3 獨立地選自H、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素及-CN。
在上述各式之一些實施例中，R4 係選自H及(C1 -C6 )烷基。在上述各式之一些實施例中，R4 之一或多個氫可經氘置換。
在上述各式之一些實施例中，n為0、1或2。在另一實施例中，n為0或1。在又一實施例中，n為1、2或3。在另一實施例中，n為1或2。在另一實施例中，n為2或3。在另一實施例中，n為0。在另一實施例中，n為1。在另一實施例中，n為2。在另一實施例中，n為3。
在上述各式之一些實施例中，視情況經R5 及/或R6 取代之R1 係選自表A之基團。較佳地，式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)及/或式(VII)之化合物包括選自下表A中之基團之R1 (單獨或經一或多個R5 及/或R6 取代)。表 A ：
在上述各式之一些實施例中，視情況經R5 取代之R2 係選自下表B之基團。較佳地，式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)及/或式(VII)之化合物可包括選自下表B之基團之R2 (單獨或經一或多個可相同或不同之R5 及/或R6 取代)。表 B
較佳地，式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)、式(V)、式(VI)及/或式(VII)之化合物可包括選自上表A中基團之R1 (單獨或經一或多個可相同或不同之R5 及/或R6 取代)及選自上表B中基團之R2 (單獨或經一或多個可相同或不同之R5 及/或R6 取代)。
在一些實施例中，化學實體係選自式(IIa)化合物：， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R7 及n係如式(I)中所定義；及/或式(IIaa)化合物：， 或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 、R2 、R3 、R5 、R6 、R7 及n係如式(I)中所定義。 在一些實施例中，化學實體係選自式(IIb)化合物：， 或其醫藥上可接受之鹽， 其中R’、R1 、R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R7 及n各自獨立地如式(VI)所定義。
在一些實施例中，化學實體係選自式(IIaa)化合物， 或其醫藥上可接受之鹽， 其中 R1 係選自8-9員雜芳基，其經一或多個選自R5 及R6 之取代基取代； R2 係選自N-連接之6-12員雜環基或C-連接之6-12員雜環基，其中6-12員雜環基視情況經一或多個R5 取代； R3 獨立地選自H、(C1 -C6 )烷基、鹵素及-CN；且 其中R5 、R6 、R7 及n各自獨立地如式(I)中所定義。
在式(IIaa)之較佳實施例中，視情況經R5 及/或R6 取代之R1 係選自及；且 視情況經R5 取代之R2 係選自 及。
在一些實施例中，化學實體係選自式(IIb’)化合物：， 或其醫藥上可接受之鹽， 其中R’係選自H及CH3 ； R1 係選自8-9員雜芳基，其經一或多個選自R5 及R6 之取代基取代； R2 係選自N-連接之6-12員雜環基或C-連接之6-12員雜環基，其中6-12員雜環基視情況經一或多個R5 取代； R3 獨立地選自H及鹵素；且 R5 、R6 、R7 及n各自獨立地如式(VI)中所定義。
在式(IIb’)之較佳實施例中，視情況經R5 及/或R6 取代之R1 係選自及；且 視情況經R5 取代之R2 係選自 及。
在一些實施例中，化學實體係選自式(IIIa)化合物：， 或其醫藥上可接受之鹽， 其中R1 、R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R7 及n各自獨立地如式(I)所定義；及/或式(IIIb)化合物：， 或其醫藥上可接受之鹽， 其中R1 、R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R7 及n各自獨立地如式(I)所定義。
在一些實施例中，化學實體係選自式(IIIaa)化合物：， 或其醫藥上可接受之鹽，其中 R1 係選自8-11員雜芳基，其視情況經一或多個R5 取代； R2 係選自N-連接之4-12員雜環基及C-連接之4-12員雜環基，其視情況經一或多個R5 取代； 每一R5 (若存在)獨立地選自-OH、-NH2 、NHC(O)CH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、-NHC(O)CH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基、-NH2 及-OH之取代基取代；且 n為0、1、2或3。
在式(IIIaa)之較佳實施例中，R1 係選自其中B係選自鍵或C； Z係選自N、S、C(Rii)； Rii係選自H、CH3 及R5 ； R2 係選自N-連接之5-8員雜環基，其經一至三個R5 取代； 每一R5 (若存在)獨立地選自-OH、-NH2 、NHC(O)CH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、-NHC(O)CH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基、-NH2 及-OH之取代基取代；且 n為0、1、2或3。
在式(IIIaa)之其他較佳實施例中，視情況經R5 取代之R1 係選自及；且 視情況經R5 取代之R2 係選自
在一些實施例中，化學實體係選自式(IVa)化合物：， 或其醫藥上可接受之鹽， 其中R1 、R2 、R4 、R5 、R6 、R7 及n各自獨立地如式(I)所定義。
在一些實施例中，化學實體係選自式(Va)化合物：， 或其醫藥上可接受之鹽， 其中R1 、R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R7 及n各自獨立地如式(I)所定義。
在一些實施例中，化學實體係選自式(Vaa)化合物：， 或其醫藥上可接受之鹽， 其中R1 係選自經一或多個選自R5 及R6 之取代基取代之8員雜芳基；R2 係選自N-連接之5員雜環基；且R5 、R6 、R7 及n各自獨立地如式(I)所定義。 在式(Vaa)之其他較佳實施例中，經R5 取代之R1 係選自，且R2 係選自。
在一些實施例中，化學實體係選自式(VIIa’)化合物：， 或其醫藥上可接受之鹽， 其中R’、R1 、R2 、R3 、R4 、R5 、R6 、R7 及n各自獨立地如式(VI)所定義。
在至少一個實施例中，化學實體係選自式(VIIaa)化合物：或其醫藥上可接受之鹽，其中 R1 係選自8-9員雜芳基，其視情況經一或多個R5 取代； R2 係選自N-連接之4-12員雜環基，其視情況經一或多個R5 取代； 每一R5 (若存在)獨立地選自-OH、-NH2 、NHC(O)CH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、-NHC(O)CH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基、-NH2 及-OH之取代基取代；且 n為0、1、2或3。
在式(VIIaa)之較佳實施例中，R1 係選自其中B係選自鍵或C； Z係選自N、S、C(Rii)； Rii係選自H、CH3 及R5 ； R2 係選自N-連接之5-8員雜環基，其經一至三個R5 取代； 每一R5 (若存在)獨立地選自-OH、-NH2 、NHC(O)CH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、-NHC(O)CH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情況經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基、-NH2 及-OH之取代基取代；且 n為0、1、2或3。
在式(VIIaa)之其他較佳實施例中，視情況經R5 取代之R1 係選自及；且 視情況經R5 取代之R2 係選自
較佳地，化合物係如本文所定義之式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(IIa)、(IIaa)、(IIb’)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIaa)、(IVa)、(Va)、(Vaa)、(VIIa’)或式(VIIaa)之化合物，其係USP28抑制劑、USP25抑制劑及/或USP 28/25抑制劑。
在本發明之另一實施例中，式(I)化合物係對映異構體。在一些實施例中，化合物係(S )-對映異構體。在其他實施例中，化合物係(R )-對映異構體。在其他實施例中，式(I)化合物可為(+)或(-)對映異構體。
應理解，所有異構體形式皆包含於本發明內(包含其混合物)。若化合物含有雙鍵，則取代基可呈E或Z構形。若化合物含有經二取代之環烷基，則環烷基取代基可具有順式或反式構形。本發明亦欲包含所有互變異構體形式。
本發明化合物及其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物、立體異構體及前藥可以其互變異構體形式(例如以醯胺或亞胺基醚形式)存在。所有該等互變異構體形式皆作為本發明之部分涵蓋於本文中。
本發明化合物可含有不對稱或對掌性中心，且由此以不同立體異構體形式存在。本發明化合物之所有立體異構體形式及其混合物(包含外消旋混合物)皆意欲形成本發明之一部分。另外，本發明涵蓋所有幾何異構體及位置異構體。舉例而言，若本發明化合物納入雙鍵或稠合環，則順式形式及反式形式以及混合物涵蓋於本發明範圍內。本文所揭示之每一化合物包含所有符合化合物之一般結構之對映異構體。該等化合物可呈外消旋或對映異構體純形式或關於立體化學之任一其他形式。分析結果可反映外消旋形式、對映異構體純形式或關於立體化學之任一其他形式所收集之數據。
非對映異構體混合物可基於其物理化學差異藉由熟習此項技術者熟知之方法(例如藉由層析及/或分段結晶)分離成其個別非對映異構體。對映異構體可藉由以下方式進行分離：藉由與適宜光學活性化合物(例如對掌性助劑，例如對掌性醇或Mosher醯氯)反應而將對映異構體混合物轉化成非對映異構體混合物，分離該等非對映異構體並將個別非對映異構體轉化(例如水解)成相應的純對映異構體。同樣，本發明之一些化合物可為阻轉異構體(例如經取代之二芳基)且視為本發明之一部分。亦可藉由使用對掌性HPLC管柱來分離對映異構體。
本發明化合物亦可以不同互變異構體形式存在，且所有該等形式皆涵蓋於本發明範圍內。同樣，舉例而言，本發明包含該等化合物之所有酮-烯醇及亞胺-烯胺形式。
本發明化合物之所有立體異構體(例如幾何異構體、光學異構體及諸如此類，包含該等化合物之鹽、溶劑合物、酯及前藥以及前藥之鹽、溶劑合物及酯之彼等立體異構體，例如可因各種取代基上之不對稱碳而存在者，包含對映異構體形式(其即使在不存在不對稱碳下亦可存在)、旋轉異構體形式、阻轉異構體及非對映異構體形式)以及位置異構體(例如4-吡啶基及3-吡啶基)皆涵蓋於本發明範圍內。(舉例而言，若式(I)化合物納入雙鍵或稠合環，則順式形式及反式形式以及混合物皆涵蓋於本發明範圍內。同樣，舉例而言，本發明包含該等化合物之所有酮-烯醇及亞胺-烯胺形式。)本發明化合物之個別立體異構體可(例如)實質上不含其他異構體，或者可(例如)作為外消旋物混合，或與所有其他或其他經選擇之立體異構體混合。本發明之對掌性中心可具有如藉由IUPAC 1974 Recommendations所定義之S或R構形。所用術語「鹽」、「溶劑合物」、「酯」、「前藥」及諸如此類意欲同樣適用於本文所揭示化合物之對映異構體、立體異構體、旋轉異構體、互變異構體、位置異構體、外消旋物或前藥之鹽、溶劑合物、酯及前藥。
本文所揭示之化合物可形成亦在本發明範圍內之鹽。
本發明係關於係至少一種選自USP28及USP25之路徑之調節劑之化合物。在一實施例中，本發明化合物係至少一種選自USP28及USP25之路徑之抑制劑。
本發明係關於選自如本文所闡述之化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體；及包括至少一種選自如本文所闡述之化合物及其醫藥上可接受之鹽、水合物、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體之醫藥組合物。
本發明之另一態樣係關於治療、預防、抑制或消除與USP28調節有關之疾病或病症之方法。該方法包括向需要治療與USP28調節有關之疾病或病症之患者投與有效量之組合物及式(I)之化學實體。在一實施例中，疾病或病症係癌症。
在另一態樣中，本發明係關於治療、預防、抑制或消除與USP28抑制有關之疾病或病症之方法。該方法包括向需要治療與USP28調節有關之疾病或病症之患者投與有效量之組合物及式(I)之化學實體。在一實施例中，疾病或病症係癌症。
在另一態樣中，本發明係關於抑制USP28之方法。該方法涉及向有需要之患者投與有效量之式(I)之化學實體。
本發明之另一態樣係關於治療、預防、抑制或消除與USP25調節有關之疾病或病症之方法。該方法包括向需要治療與USP25調節有關之疾病或病症之患者投與有效量之組合物及式(I)之化學實體。在一實施例中，疾病或病症係癌症。
在另一態樣中，本發明係關於治療、預防、抑制或消除與USP25抑制有關之疾病或病症之方法。該方法包括向需要治療與USP25調節有關之疾病或病症之患者投與有效量之組合物及式(I)之化學實體。在一實施例中，疾病或病症係癌症。
在另一態樣中，本發明係關於抑制USP25之方法。該方法涉及向有需要之患者投與有效量之式(I)之化學實體。
本發明之另一態樣係關於治療、預防、抑制或消除與USP28調節有關之疾病或病症之方法。該方法包括向需要治療與USP28調節有關之疾病或病症之患者投與有效量之組合物及式(I)之化學實體。在一實施例中，疾病或病症係癌症。在另一態樣中，本發明係關於治療、預防、抑制或消除與USP28抑制有關之疾病或病症之方法。該方法包括向需要治療與USP28調節有關之疾病或病症之患者投與有效量之組合物及式(I)之化學實體。在一實施例中，疾病或病症係癌症。該方法可包括向需要治療與USP28及/或USP25的調節有關之疾病或病症之患者投與有效量之如本文所揭示包括USP28抑制劑、USP25抑制劑及/或USP28/25抑制劑的醫藥組合物。在另一態樣中，本發明係關於抑制至少一種選自USP28及USP25之路徑之方法。該方法涉及向有需要之患者投與有效量之式(I)之化學實體。該方法可包括向需要治療與USP28及/或USP25的調節有關之疾病或病症之患者投與有效量之如本文所揭示包括USP28抑制劑、USP25抑制劑及/或USP28/25抑制劑的醫藥組合物。
本發明之另一態樣係關於治療、預防、抑制或消除患者中與USP28有關之疾病或病症之方法，該方法包括向有需要之患者投與有效量之式(I)之化學實體。在一實施例中，疾病或病症係癌症。該方法可包括向需要治療與USP28及/或USP25的調節有關之疾病或病症之患者投與有效量之如本文所揭示包括USP28抑制劑、USP25抑制劑及/或USP28/25抑制劑的醫藥組合物。
本發明之另一態樣係關於治療、預防、抑制或消除患者中與USP25有關之疾病或病症之方法，該方法包括向有需要之患者投與有效量之式(I)之化學實體。在一實施例中，疾病或病症係癌症。該方法可包括向需要治療與USP28及/或USP25的調節有關之疾病或病症之患者投與有效量之如本文所揭示包括USP28抑制劑、USP25抑制劑及/或USP28/25抑制劑的醫藥組合物。
本發明之另一態樣係關於治療、預防、抑制或消除患者中與至少一種選自USP28及USP25之路徑有關之疾病或病症之方法，該方法包括向有需要之患者投與有效量之式(I)之化學實體。在一實施例中，疾病或病症係癌症。該方法可包括向需要治療與USP28及/或USP25的調節有關之疾病或病症之患者投與有效量之如本文所揭示包括USP28抑制劑、USP25抑制劑及/或USP28/25抑制劑的醫藥組合物。
在另一態樣中，本發明係關於治療、預防、抑制或消除癌症之方法。該方法包括向需要治療癌症之患者投與有效量之選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體。該方法可包括向需要治療與USP28及/或USP25的調節有關之疾病或病症之患者投與有效量之如本文所揭示包括USP28抑制劑、USP25抑制劑及/或USP28/25抑制劑的醫藥組合物。
本發明之另一態樣係關於選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體，其用於治療、預防、抑制或消除與抑制USP28有關之疾病或病症之方法中。在一實施例中，疾病或病症係癌症。該方法可包括向需要治療與USP28及/或USP25的調節有關之疾病或病症之患者投與有效量之如本文所揭示包括USP28抑制劑、USP25抑制劑及/或USP28/25抑制劑的醫藥組合物。
在另一態樣中，本發明係關於選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體，其用於治療、預防、抑制或消除與抑制USP25有關之疾病或病症之方法中。在一實施例中，疾病或病症係癌症。
本發明之另一態樣係關於選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體，其用於治療、預防、抑制或消除與抑制至少一種選自USP28及USP25之路徑有關之疾病或病症之方法中。在一實施例中，疾病或病症係癌症。
在另一態樣中，本發明係關於選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體，其用於治療、預防、抑制或消除癌症之方法中。
本發明之另一態樣係關於選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體之用途，其用以製造用於治療、預防、抑制或消除與抑制USP28有關之疾病或病症之藥劑。在一實施例中，疾病或病症係癌症。
本發明之另一態樣係關於選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體之用途，其用以製造用於治療、預防、抑制或消除與抑制至少一種選自USP28及USP25之路徑有關之疾病或病症之藥劑。在一實施例中，疾病或病症係癌症。
在另一態樣中，本發明係關於選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體之用途，其用以製造用於治療、預防、抑制或消除癌症之藥劑。
在其他實施例中，本發明係關於USP28抑制劑之用途，其用以製備用於治療、預防、抑制或消除與癌症有關之疾病或病症之藥劑。
本發明亦係關於USP28抑制劑之用途，其用以製備用於治療、預防、抑制或消除藉由USP28介導之疾病或病狀之藥劑，其中該藥劑包括選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體。本發明亦係關於USP28抑制劑之用途，其用以製備用於治療、預防、抑制或消除藉由USP28介導之疾病或病狀之藥劑，其中該藥劑包括選自如本文所定義之式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(IIa)、(IIaa)、(IIb’)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIaa)、(IVa)、(Va)、(Vaa)、(VIIa’)或式(VIIaa)之化合物之化學實體且係USP28抑制劑、USP25抑制劑及/或USP 28/25抑制劑。
本發明亦係關於USP25抑制劑之用途，其用以製備用於治療、預防、抑制或消除藉由USP25介導之疾病或病狀之藥劑，其中該藥劑包括選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體。本發明亦係關於USP25抑制劑之用途，其用以製備用於治療、預防、抑制或消除藉由USP25介導之疾病或病狀之藥劑，其中該藥劑包括選自如本文所定義之式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(IIa)、(IIaa)、(IIb’)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIaa)、(IVa)、(Va)、(Vaa)、(VIIa’)或式(VIIaa)之化合物之化學實體且係USP28抑制劑、USP25抑制劑及/或USP 28/25抑制劑。
在另一態樣中，本發明係關於製造用於治療、預防、抑制或消除藉由至少一種選自USP28及USP25之路徑介導之疾病或病狀之藥劑的方法，其中該藥劑包括選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體。該等機制已展示可用於治療癌症(例如肺癌及腦癌)。
在一些實施例中，基於基因擴增及/或升高之USP28、MYC、LSD1、NICD1腫瘤表現及/或降低之FBXW7表現(相對於組織匹配之表現)來選擇患者進行治療。
在一些實施例中，基於基因擴增及/或升高之USP28、USP25、MYC、LSD1、NICD1腫瘤表現及/或降低之FBXW7表現(相對於組織匹配之表現)來選擇患者進行治療。
在一些實施例中，投與式(I)化合物或包括本發明化合物及醫藥上可接受之載劑之醫藥組合物可誘導細胞週期、細胞存活、細胞凋亡或分化之變化。
舉例而言，細胞週期或細胞存活或分化之變化可藉由降低之MYC、LSD1、NICD1、PIM1、CDK1、POLA2、HEY1及/或CCND1腫瘤含量及/或增加之CD86、p21、LGALS4及/或DLL1含量來指示。
本發明之另一態樣係關於醫藥組合物，其包括選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體及醫藥上可接受之載劑。醫藥可接受之載劑可進一步包含賦形劑、稀釋劑或表面活性劑。本發明之另一態樣係關於包括選自如本文所定義式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(IIa)、(IIaa)、(IIb’)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIaa)、(IVa)、(Va)、(Vaa)、(VIIa’)或式(VIIaa)之化合物之化學實體的醫藥組合物，該化學實體係USP28抑制劑、USP25抑制劑及/或USP 28/25抑制劑。
在一實施例中，提供治療與USP28調節有關之疾病或病症(包含癌症)之方法，其包括向患有該等疾病或病症中之至少一者之患者投與式(I)之化學實體。治療與USP28調節有關之疾病或病症(包含癌症)之方法可包括向患有該等疾病或病症中之至少一者之患者投與如本文所定義式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(IIa)、(IIaa)、(IIb’)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIaa)、(IVa)、(Va)、(Vaa)、(VIIa’)或式(VIIaa)的化學實體，該化學實體係USP28抑制劑、USP25抑制劑及/或USP 28/25抑制劑。
在另一實施例中，提供治療與USP25調節有關之疾病或病症(包含癌症)之方法，其包括向患有該等疾病或病症中之至少一者之患者投與式(I)之化學實體。治療與USP25調節有關之疾病或病症(包含癌症)之方法可包括向患有該等疾病或病症中之至少一者之患者投與如本文所定義式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(IIa)、(IIaa)、(IIb’)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIaa)、(IVa)、(Va)、(Vaa)、(VIIa’)或式(VIIaa)的化學實體，該化學實體係USP28抑制劑、USP25抑制劑及/或USP 28/25抑制劑。
在另一實施例中，提供治療與至少一種選自USP28及USP25之路徑的調節有關之疾病或病症(包含癌症)之方法，其包括向患有該等疾病或病症中之至少一者之患者投與式(I)之化學實體。治療與至少一種選自USP28及USP25之路徑的調節有關之疾病或病症(包含癌症)之方法亦可包括向患有該等疾病或病症中之至少一者之患者投與如本文所定義式(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)、(IIa)、(IIaa)、(IIb’)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIaa)、(IVa)、(Va)、(Vaa)、(VIIa’)或式(VIIaa)的化學實體，該化學實體係USP28抑制劑、USP25抑制劑及/或USP 28/25抑制劑。
抑制USP28之本發明化合物或組合物之一種治療用途係治療患有癌症之患者或個體。
抑制USP25之本發明化合物或組合物之另一治療用途係治療患有癌症之患者或個體。
抑制至少一種選自USP28及USP25之路徑之本發明化合物或組合物之另一治療用途係治療患有癌症之患者或個體。
可投與有效量之本發明化合物以治療或預防個體之病症及/或預防其發生。
可經由投與治療劑之任一模式來投與所揭示化合物。
本發明之另一態樣係關於醫藥組合物，其包括選自式(I)化合物及其醫藥上可接受之鹽、溶劑合物、前藥、立體異構體及互變異構體之化學實體及醫藥上可接受之載劑。醫藥可接受之載劑可進一步包含賦形劑、稀釋劑或表面活性劑。
根據包含以下之各種因素來選擇利用所揭示化合物之劑量方案：患者之類型、物種、年齡、體重、性別及醫學病狀；擬治療病狀之嚴重程度；投與途徑；患者之腎或肝功能；及所採用之特定揭示化合物。熟習此項技術之醫師或獸醫可易於確定預防、對抗或阻止病狀進展所需藥物之有效量並開出處方。
本發明之式(I)-(VII)化合物之非限制性實例包含下表9-25之彼等。合成化合物之方法
可以熟習有機合成技術者已知之諸多方式來製備本發明化合物。可藉由各種方法(包含標準化學)來製備本發明化合物。適宜合成途徑繪示於本文所提供之反應圖中。可藉由有機合成技術中已知之方法來製備本文所揭示之化合物，如部分地藉由下列合成反應圖所陳述。在本文所闡述之反應圖中，應充分理解，根據一般原理或化學視需要採用敏感或反應性基團之保護基團。根據標準有機合成方法來操縱保護基團(T. W. Greene及P. G. M. Wuts, 「Protective Groups in Organic Synthesis」，第3版，Wiley, New York 1999)。在化合物合成之適當階段使用熟習此項技術者易於瞭解之方法來去除該等基團。選擇製程以及反應條件及其執行順序應與本文所揭示化合物(例如包含式(I)化合物)之製備一致。
本文所闡述之化合物可自市售起始材料製得或使用已知有機、無機及/或酶促製程來合成。熟習此項技術者將認識到在本文所揭示之化合物中是否存在立體中心。因此，本發明包含兩種可能立體異構體(除非指定於合成中)且不僅包含外消旋化合物，且亦包含個別對映異構體及/或非對映異構體。在期望化合物作為單一對映異構體或非對映異構體時，可藉由立體特異性合成或藉由拆分最終產物或任一便利中間體來獲得。可藉由業內已知之任一適宜方法來拆分最終產物、中間體或起始材料。例如參見「Stereochemistry of Organic Compounds」，E. L. Eliel, S. H. Wilen及L. N. Mander (Wiley-lnterscience, 1994)。
舉例而言，可使用下述方法以及合成有機化學領域已知之合成方法或熟習此項技術者所瞭解的該等方法之變化形式來合成本發明化合物。較佳方法包含(但不限於)下文所闡述之彼等方法。製備本發明化合物之一般程序闡述於一般反應圖1中。可使經適當取代且保護之雙環中間體1 與經適當取代、保護之胺中間體2 在鈀催化之碳-氮偶合方案下使用適當鈀錯合物、配體及鹼(例如(但不限於)：RuPhos第3代鈀預觸媒及碳酸銫)在適當溫度(例如100℃)下於適宜溶劑(例如甲苯)中進行反應以提供中間體3 。可在適宜去保護條件(例如(但不限於)：氫(氣體)，使用碳載鈀，在適當溶劑(例如甲醇、乙醇或乙酸乙酯)中)下去除保護基團1 (PG1 ；通常係Cbz基團)以提供胺中間體4 。可使經適宜取代之胺中間體4 與經適宜取代之羧酸在醯胺偶合條件(例如(但不限於)：偶合試劑EDC及HOBt，使用適當鹼(例如Et3 N或DIEA)，在諸如DMF或DMA等溶劑中)下進行反應以提供倒數第二個醯胺中間體5 。可在適當條件下(例如TFA，在諸如DCM或HCl等溶劑中，在諸如MeOH或二噁烷等溶劑中)去除保護基團2 (PG2 ；通常係boc基團)以提供最終化合物6 。可通常藉由製備型HPLC來純化最終化合物並分離為游離鹼。倘若形成對映異構體及/或非對映異構體之混合物，則可在適當階段(在許多情形下藉由對掌性HPLC)純化個別立體異構體。一般反應圖 1 製備所選中間體之一般方法
製備本發明中間體之一般程序闡述於中間體一般反應圖1中。可使經適當取代之含有離去基團之起始材料1 (LG1 ；通常係溴化物)與鋰化對掌性輔助劑2 (藉由使2 與強鹼(例如nBuLi)進行反應所形成)在低溫(通常-78℃)下於適當溶劑(例如THF)中進行反應以提供中間體3 。在諸如HCl水溶液(於諸如乙腈等溶劑中)等條件下水解以去除輔助劑，隨後還原(通常使用於諸如MeOH等溶劑中之NaBH4 )可提供胺基醇4 。可使用強鹼(例如NaH)在低溫(通常-70℃)於諸如DMSO等溶劑中環化胺基醇4 以提供中間體4 。向相應中間體中添加適當保護基團(PG1 ；通常係CBz基團)可產生經適當取代之雙環中間體5 。中間體一般反應圖 1.
製備本發明中間體之一般程序闡述於中間體一般反應圖2中。可使經適當取代之酮1 在還原胺化條件(通常使用乙酸銨作為胺源，使用NaBH3 CN作為還原劑，且使用諸如MeOH等溶劑)下進行反應以提供胺中間體2 。然後對胺2 進行保護(PG1 ；通常係CBz基團)以提供經適當取代之中間體3 。中間體一般反應圖 2.
製備本發明中間體之一般程序闡述於中間體一般反應圖3中。可使醯氯1 在路易斯酸(lewis acid)促進之乙烯加成(通常使用AlCl3 及乙烯氣體，在諸如DCM等溶劑中)下進行反應以提供酮2 。然後可將酮2 轉化成肟，然後還原(使用O -甲基羥基胺鹽酸鹽、吡啶及EtOH來形成肟；使用氫氣、拉尼鎳(Raney Ni)在EtOH溶劑中進行還原)或在還原胺化條件(通常使用乙酸銨作為胺源，使用NaBH3 CN作為還原劑，且使用諸如MeOH等溶劑)下進行反應以提供胺3 。然後可對胺3 進行保護(PG1 ；通常係CBz基團)以提供經適當取代之中間體4 。中間體一般反應圖 3.
製備本發明中間體之一般程序闡述於中間體一般反應圖4中。可藉由烯胺基酮(通常藉由使用氨在甲醇中處理經單保護之環己烷-1,4-二酮(例如1 )原位生成)與丙炔酸酯之邁克爾加成(Michael addition)來獲得2-吡啶酮2 。可轉化吡啶酮2 以納入離去基團(LG；通常係三氟甲磺酸根基，其可藉由在諸如三乙胺等鹼存在下處理使用三氟甲磺酸酐進行處理來獲得)。在去除酮保護基團後，然後可使酮4 在還原胺化條件(通常使用乙酸銨作為胺源，使用NaBH3 CN作為還原劑，且使用諸如MeOH等溶劑)下進行反應以提供胺5 。然後可對胺5 進行保護(PG1 ；通常係Cbz基團)以提供經適當取代之中間體6 。中間體一般反應圖 4.
製備本發明中間體之一般程序闡述於中間體一般反應圖5中。可使酮1 與二甲基-甲醯胺二甲基縮醛在溶劑(例如甲苯)中縮合以提供烯胺基酮2 。可使用奎寧定(quinidine)及鹼(例如乙醇鈉)處理酮2 以提供嘧啶-2-胺3 。可轉化嘧啶-2-胺3 以納入離去基團(LG；通常係可藉由使用CuCl2 及亞硝酸第三丁基酯進行處理所獲得之氯化物基團)以提供經適當取代之中間體4 。中間體一般反應圖 5.
製備本發明中間體之一般程序闡述於中間體一般反應圖中6。可使經適當取代之中間體1 與經適當取代之酸酯2 (或酸)在鈀催化之碳-碳鍵形成條件(使用適當鈀觸媒(例如Pd(dppf)Cl2 二氯甲烷複合物)，在諸如1,4-二噁烷/水混合物等溶劑中，且使用諸如碳酸鉀等鹼，在諸如100℃等溫度下)下進行反應以提供經偶合中間體3 。然後可使用標準方法(例如(但不限於)：烯烴還原且環氧化，隨後還原所得環氧化物)將存在於中間體3 中之烯烴雙鍵官能化以提供經適當取代之中間體4 。中間體一般反應圖 6.
製備本發明中間體之一般程序闡述於中間體一般反應圖7中。可使經適當取代之中間體1 在鈀催化之□酸酯形成條件(使用鈀觸媒(例如Pd(dppf)Cl2 -CH2 Cl2 複合物)及□酸酯來源(例如雙(頻哪醇)二硼)，在諸如二噁烷等溶劑中，在諸如80℃等溫度下)下進行反應以提供□酸酯2 。可使□酸酯2 在適宜氧化劑(例如脲-過氧化氫複合物，於諸如MeOH等溶劑中)存在下進行反應以提供酚中間體3 。然後可使用適宜親電試劑(例如藉由使用光延(Mitsonobu)型條件：例如DIAD與PPh3 )對酚中間體實施烷基化以提供經適當取代之中間體4 。中間體一般反應圖 7. 實例
藉由下列實例及合成反應圖來進一步闡釋本發明，該等實例及合成反應圖並不解釋為將本發明之範圍或精神限制於本文所闡述之具體程序。應理解，提供實例以闡釋某些實施例且由此並不意欲限制本發明範圍。另外應理解，可採取熟習此項技術者可明瞭之各種其他實施例、修改及其等效內容，此並不背離本發明精神及/或隨附申請專利範圍之範圍。分析方法、材料及儀器
除非另外陳述，否則試劑及溶劑按自商業供應商接收時之狀態使用。除非另有所述，否則在惰性氮氣氛下實施反應。在Bruker或Varian光譜儀上於於300或400 MHz下獲得質子核磁共振(NMR)光譜。光譜係以ppm (δ)給出且偶合常數J係以赫茲報告。使用四甲基矽烷(TMS)作為內部標準物。使用兩種下列方法中之一者來量測純度及質譜數據。方法1：Waters Acquity i類超高效液相層析(UPLC)系統，其具有Acquity光二極體陣列檢測器、Acquity蒸發光散射檢測器(ELSD)及Waters ZQ質譜儀。使用Waters MassLynx 4.1軟體獲取數據且藉由220 nm UV波長、蒸發光散射檢測(ELSD)及電噴霧陽離子(ESI)表徵純度。(管柱：Acquity UPLC BEH C18 1.7 µm 2.1 × 50 mm；流速：0.6 mL/min；溶劑A (95/5/0.1%：10 mM甲酸銨/乙腈/甲酸)，溶劑B (95/5/0.09%：乙腈/水/甲酸)；梯度：自0至2 min 5-100% B，保持100% B至2.2 min且在2.21 min下5%B)。方法2：SHIMADZU LCMS，其由UFLC 20-AD及LCMS 2020 MS檢測器組成。(管柱：Shim-pack XR-ODS, 2.2 µm, 3.0 × 50 mm；溶劑：(乙腈/水，含有0.05% NH4 HCO3 ))。除非另有所述，否則如下文所指定來實施製備型HPLC純化，其中流速為20 mL/min且藉由220 nm及254 nm UV波長進行檢測。偶爾測定本文所闡述實例中之化合物之所分離對映異構體之絕對構形。在所有其他情形下，並不測定所分離對映異構體之絕對構形且在彼等情況下將所拆分材料之構形在每一情形下任意分配為R或S。下列實例及本文其他處中所使用之縮寫如下 ： 中間體之製備 中間體 1 、 2 及 3. (7- 溴 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯、 (R)-(7- 溴 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯及 (S)-(7- 溴 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 步驟 1. 7- 溴 -3- 硝基 -2H- 烯
將4-溴-2-羥基苯甲醛(21.6 g, 108 mmol)、1,3-二氫-2-苯并呋喃-1,3-二酮(32 g, 216 mmol)及二丁胺(7.0 g, 54 mmol)於甲苯(800 mL)中之混合物在N2 氣氛下加熱至回流。經2 h逐份添加2-硝基乙烷-1-胺(50 g, 550 mmol)。使用迪安-斯脫克裝置(Dean-Stark apparatus)將混合物在回流下攪拌過夜。在冷卻至室溫之後，過濾出固體。由此平行運行8個批次且合併來自8個批次之濾液並在真空下濃縮。使用EtOAc (2 L)稀釋殘餘物並使用1N NaOH (2 L)洗滌。藉由無水Na2 SO4 乾燥有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:6 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色固體形式之7-溴-3-硝基-2H-烯。MS: (ESI, m/z): 256, 258 [M+H]+ 。 步驟 2. 7- 溴 烷 -3- 胺
向7-溴-3-硝基-2H-烯(27 g, 106 mmol)於THF (300 mL)中之溶液中添加BH3 (1M於THF中，600 mL, 600 mmol)及NaBH4 (201 mg, 5.3 mmol)。將混合物在65℃下攪拌過夜。在冷卻至室溫之後，然後藉由添加600 mL MeOH來終止反應並在80℃下攪拌8 h。在冷卻至室溫之後，在真空下濃縮混合物。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )，B：ACN；梯度：0%至50% B，40 min)純化殘餘物以提供白色固體形式之7-溴烷-3-胺。MS: (ESI, m/z): 228, 230 [M+H]+ 。 步驟 3. (7- 溴 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 ( 中間體 1)
將K2 CO3 (19.3 g, 140 mmol)於水(150 mL)中之溶液添加至7-溴烷-3-胺(16.0 g, 70.1 mmol)於EtOAc (300 mL)中之溶液中。在-10℃下添加氯甲酸苄基酯(17.8 g, 104 mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌30 min。使用EtOAc (200 mL)稀釋混合物。收集有機層，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾，並在真空下濃縮。使用1:1 EtOAc/石油醚(200 mL)洗滌殘餘物以得到白色固體形式之(7-溴烷-3-基)胺基甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 362, 364 [M+H]+ 。 步驟 4. (R)-(7- 溴 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 ( 中間體 2) 及 (S)-(7- 溴 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 ( 中間體 3)
藉由SFC (管柱：ChiralArt Amylose-SA, 2×25 cm, 5 μm；移動相A：CO2 , 80%，B：EtOH, 20%；流速：40 mL/min)分離外消旋 (7-溴烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(12.5 g, 34.6 mmol)以提供下列標題化合物：白色固體形式之(R)-(7-溴烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(第一洗脫異構體，RT = 7.98 min)及白色固體形式之(S)-(7-溴烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(第二洗脫異構體，RT = 9.21 min)。 第一洗脫異構體：1 H NMR (CDCl3 , 400 MHz) δ(ppm): 7.35-7.32 (m, 5H), 7.03-7.01 (m, 2H), 6.90 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 5.22-5.10 (m, 3H), 4.25 (s, 1 H), 4.17-4.09 (m, 2H), 3.04 (dd,J = 16.8 Hz, 4.8 Hz, 1H), 2.73 (d,J = 16.8 Hz, 1H)。MS: (ESI, m/z): 362, 364 [M+H]+ 。 第二洗脫異構體：1 H NMR (CDCl3 , 400 MHz) δ(ppm): 7.35-7.32 (m, 5H), 7.03-7.01 (m, 2H), 6.90 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 5.22-5.07 (m, 3H), 4.25 (s, 1 H), 4.18-4.09 (m, 2H), 3.04 (dd,J = 16.8 Hz, 4.8 Hz, 1H), 2.73 (d,J = 16.80 Hz, 1H)。MS: (ESI, m/z): 362, 364 [M+H]+ 。中間體 4-1. 4-(3- 胺基 -8- 氟 烷 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯 步驟 1. 3,4- 二氟 -2- 羥基苯甲醛
向使用惰性氮氣氛吹掃並維持該氣氛之500-mL圓底燒瓶中添加2,3-二氟苯酚(10.0 g, 75.33 mmol)、ACN (200 mL)、HCHO (23.06 g, 738 mmol)、Et3 N (21.0 mL, 146 mmol)及MgCl2 (14.6 g, 150.28 mmol)。將所得溶液在60℃下攪拌16 h。將反應混合物冷卻至26℃，然後使用200 mL水稀釋。使用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取所得溶液。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮以提供殘餘物，藉由矽膠層析使用乙酸乙酯/石油醚(1:4)純化殘餘物以提供淺黃色油狀物形式之3,4-二氟-2-羥基苯甲醛。 步驟 2 . 4-(2- 氟 -4- 甲醯基 -3- 羥基苯基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
向250-mL圓底燒瓶中添加3,4-二氟-2-羥基苯甲醛(5 g, 31.63 mmol)、六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(5.9 g, 31.68 mmol)、DMSO (100 mL)及DIEA (6.1 g, 47.20 mmol)。將所得溶液在120℃下攪拌6 h。在冷卻至室溫之後，然後藉由添加100 mL水來終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取所得溶液。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮以提供殘餘物，藉由矽膠層析使用乙酸乙酯/石油醚(0-30%)純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之4-(2-氟-4-甲醯基-3-羥基苯基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。 步驟 3. 4-(8- 氟 -3- 硝基 -2H- 烯 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
向100-mL圓底燒瓶中添加4-(2-氟-4-甲醯基-3-羥基苯基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(185 mg, 0.48 mmol)、1,3-二氫-2-苯并呋喃-1,3-二酮(166 mg, 1.06 mmol, 95%)、2-硝基乙烷-1-醇(104 mg, 1.08 mmol)、二丁胺(37 mg, 0.27 mmol)及甲苯(10 mL)。將所得溶液在100℃下於油浴中攪拌8 h。將反應混合物冷卻至室溫，然後藉由添加5 mL水來驟冷，並使用DCM (3×10 mL)萃取。合併有機層，使用鹽水(3×10 mL)洗滌，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮以提供殘餘物，藉由矽膠層析使用乙酸乙酯/石油醚(1:3)純化殘餘物以提供紅色固體形式之4-(8-氟-3-硝基-2H-烯-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。 步驟 4. 4-(3- 胺基 -8- 氟 烷 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
向使用惰性氮氣氛吹掃並維持該氣氛之100-mL 3頸圓底燒瓶中添加4-(8-氟-3-硝基-2H-烯-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(150 mg, 0.39 mmol)及THF (20 mL)。在0℃及攪拌下逐滴添加硼烷-THF複合物(4 mL, 4 mmol)。向此反應混合物中添加NaBH4 (73 mg, 1.93 mmol)。將所得溶液在65℃下攪拌12 h，然後藉由添加甲醇(20 mL)來驟冷，並在真空下濃縮以提供殘餘物，藉由矽膠層析使用乙酸乙酯/石油醚(0-100%)純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之4-(3-胺基-8-氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。
使用標準化學操作及類似於用於製備中間體4-1之程序的程序來製備表1中之下列中間體。 表1： 1 程序注意事項： 無需步驟1。中間體 5-1. (R)-(7- 溴 -5- 氟 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 方法 1. 步驟 1 . 5- 溴 -2-( 溴甲基 )-1,3- 二氟苯
將48% HBr (130 mL, 1149 mmol)及(4-溴-2,6-二氟苯基)甲醇(40 g, 179 mmol)之混合物加熱至回流過夜。在冷卻至室溫之後，將反應混合物傾倒至80 mL水中並使用己烷(2 × 300 mL)萃取。使用碳酸氫鈉溶液洗滌合併之有機層，藉由MgSO4 乾燥，過濾，並濃縮以提供5-溴-2-(溴甲基)-1,3-二氟苯。1 H NMR (CDCl3 , 300 MHz) δ(ppm): 6.94-7.22 (m, 2H), 4.46 (s, 2H)。 步驟 2 . (2R,5S)-2-(4- 溴 -2,6- 二氟苄基 )-5- 異丙基 -3,6- 二甲氧基 -2,5- 二氫吡嗪
在-78℃下，將nBuLi (6.78 mL, 10.86 mmol, 1.6 M)於己烷中之溶液逐滴添加至(S)-2-異丙基-3,6-二甲氧基-2,5-二氫吡嗪(2.0 g, 10.86 mmol)於20 mL THF中之溶液中。在-78℃下攪拌30 min之後，添加5-溴-2-(溴甲基)-1,3-二氟苯(3.10 g, 10.86 mmol)於10 mL THF中之溶液且將反應混合物在-78℃下攪拌3 h。然後添加20 mL飽和NH4 Cl溶液。在將反應混合物升溫至室溫之後，添加150 mL水且使用EtOAc將混合物萃取三次。藉由MgSO4 乾燥合併之有機層，過濾，並濃縮。藉由矽膠層析(使用0至15% EtOAc/己烷洗脫)純化以提供(2R,5S)-2-(4-溴-2,6-二氟苄基)-5-異丙基-3,6-二甲氧基-2,5-二氫吡嗪。1 H NMR (CDCl3 , 300 MHz) δ(ppm): 7.03 (d,J = 7.04 Hz, 2H), 4.14-4.32 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.58 (s, 3H), 3.13-3.33 (m, 1H), 2.79-2.93 (m, 1H), 2.13-2.33 (m, 1H), 1.00 (d,J = 7.04 Hz, 3H), 0.64 (d,J = 7.04 Hz, 3H)。MS: (ESI, m/z): 389, 391 [M+H]+ 。 步驟 3 . (R)-2- 胺基 -3-(4- 溴 -2,6- 二氟苯基 ) 丙酸甲酯
使用HCl (53.5 ml, 16.04 mmol, 0.3 N)處理(2R,5S)-2-(4-溴-2,6-二氟苄基)-5-異丙基-3,6-二甲氧基-2,5-二氫吡嗪(3.1 g, 8.02 mmol)於乙腈(60 mL)中之溶液。將反應混合物在室溫下攪拌60 min。使用NaHCO3 飽和水溶液使反應液變為鹼性且使用CH2 Cl2 將混合物萃取三次。藉由MgSO4 乾燥合併之有機層，過濾，並濃縮。藉由矽膠層析(使用0至100% EtOAc/己烷洗脫)純化以提供(R)-2-胺基-3-(4-溴-2,6-二氟苯基)丙酸甲酯。1 H NMR (CDCl3 , 300 MHz) δ(ppm): 7.07 (d,J = 6.74 Hz, 2H), 3.54-3.80 (m, 4H), 3.01-3.24 (m, 1H), 2.93 (s, 1H), 1.62 (br s, 2H)。MS: (ESI, m/z): 294, 296 [M+H]+ 。 步驟 4. (R)-2- 胺基 -3-(4- 溴 -2,6- 二氟苯基 ) 丙烷 -1- 醇
在室溫下，向(R)-2-胺基-3-(4-溴-2,6-二氟苯基)丙酸甲酯(2.3 g, 7.85 mmol)於MeOH (70 mL)中之溶液中逐份添加NaBH4 (1.043 g, 27.57 mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜。添加水且在減壓下去除MeOH。使用氯仿將水性混合物萃取三次。藉由Na2 SO4 乾燥合併之有機層，過濾，並濃縮以提供(R)-2-胺基-3-(4-溴-2,6-二氟苯基)丙烷-1-醇。1 H NMR (CDCl3 , 300 MHz) δ(ppm): 7.08 (d,J = 6.74 Hz, 2H), 3.54-3.72 (m, 1H), 3.36 (dd,J = 10.55, 7.62 Hz, 1H), 3.09 (br s, 1H), 2.51-2.86 (m, 2H), 1.74 (br s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 266, 268 [M+H]+ 。 步驟 5 . (R)-7- 溴 -5- 氟 烷 -3- 胺
在室溫下，向(R)-2-胺基-3-(4-溴-2,6-二氟苯基)丙烷-1-醇(500 mg, 1.88 mmol)於DMSO (3 mL)中之溶液中添加NaH (113 mg, 2.82 mmol)。將混合物在室溫下攪拌30 min，然後在70℃下攪拌30 min，且在50℃下保持攪拌過夜。在冷卻至室溫之後，添加30 mL水，且使用EtOAc將混合物萃取三次。使用水洗滌合併之有機層，藉由Na2 SO4 乾燥，過濾，並濃縮以提供粗製(R)-7-溴-5-氟烷-3-胺。1 H NMR (CDCl3 , 300 MHz) δ(ppm): 6.61-6.92 (m, 2H), 4.01-4.32 (m, 1H), 3.67-3.88 (m, 1H), 3.35 (ddt,J = 7.00, 3.19, 1.80, 1.80 Hz, 1H), 2.79-3.03 (m, 1H), 2.46 (br d,J = 6.74 Hz, 1H), 1.40-1.89 (m,2H)。MS: (ESI, m/z): 246, 248 [M+H]+ 。 步驟 6. (R)-(7- 溴 -5- 氟 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
在0℃下，向(R)-7-溴-5-氟烷-3-胺(467 mg, 1.90 mmol)及碳酸氫鈉飽和溶液(10 mL)於MeOH (20 mL)中之溶液中逐滴添加氯甲酸苄基酯(0.405 mL, 2.85 mmol)。將混合物攪拌過夜，從而使溫度升溫至室溫。添加20 mL水且使用EtOAc將混合物萃取三次。使用水洗滌合併之有機層，藉由Na2 SO4 乾燥，過濾，並濃縮。藉由矽膠層析(使用7%至 60% EtOAc/己烷洗脫)純化以提供(R)-(7-溴-5-氟烷-3-基)胺基甲酸苄基酯。1 H NMR (CDCl3 , 300 MHz) δ(ppm): 7.34 (s, 5 H), 6.65-6.97 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.90-5.08 (m, 1H), 4.26 (br s, 1H), 3.97-4.21 (m, 3H), 2.89 (m, 1H), 2.78 (m, 1H)。MS: (ESI, m/z): 380, 382 [M+H]+ 。中間體 5-1. (R)-(7- 溴 -5- 氟 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 方法 2. 步驟 1 . 2- 乙醯胺基 -2-(4- 溴 -2,6- 二氟苄基 ) 丙二酸二乙基酯
在室溫下，向2-乙醯胺基丙二酸二乙基酯(59.2 g, 0.273 mol)於DMF (500 mL)中之經攪拌溶液中逐份添加t-BuOK (33.1 g, 0.295 mol)。將混合物在室溫下攪拌1 h且添加5-溴-2-(溴甲基)-1,3-二氟苯(65.0 g, 0.227 mol)。將反應混合物在室溫下攪拌3 h。緩慢添加水(2000 mL)且將混合物攪拌1 h。藉由過濾收集所得沈澱物，使用水(3 × 250 mL)洗滌並在真空下乾燥以得到灰白色固體形式之2-乙醯胺基-2-(4-溴-2,6-二氟苄基)丙二酸二乙基酯。 步驟 2. 2- 乙醯胺基 -3-(4- 溴 -2,6- 二氟苯基 ) 丙酸
向2-乙醯胺基-2-(4-溴-2,6-二氟苄基)丙二酸二乙基酯(80 g, 0.189 mol)於乙醇(500 mL)中之經攪拌溶液中添加NaOH (30 g, 0.758 mol)於水(500 mL)中之溶液。將反應混合物在回流下加熱5 h且然後冷卻至室溫。使用2N HCl水溶液將混合物調整至pH=5-6並在回流下加熱過夜。將混合物冷卻至室溫並使用10% NaOH水溶液調整至pH=8-9。使用MTBE (300 mL)洗滌所得混合物並使用2N HCl水溶液將水相調整至pH 2-3且然後使用EtOAc (500 mL×2)萃取。使用鹽水(300 mL)洗滌合併之萃取物，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾，並濃縮至乾燥。使用EtOAc (100 mL)及石油醚(150 mL)之混合物將殘餘物在攪拌下處理1 h。藉由過濾收集所得沈澱物，使用石油醚洗滌並在真空下乾燥以得到白色固體形式之2-乙醯胺基-3-(4-溴-2,6-二氟苯基)丙酸。1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz) δ(ppm): 12.86 (br s, 1H), 8.31 (br s, 1H), 7.43 (d,J = 6.8 Hz, 2H), 4.43 (m, 1H), 3.08-2.87 (m, 2H), 1.77 (s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 322, 324 [M+H]+ 。 步驟 3 . (R)-2- 乙醯胺基 -3-(4- 溴 -2,6- 二氟苯基 ) 丙酸
向2-乙醯胺基-3-(4-溴-2,6-二氟苯基)丙酸(55 g, 0.171 mol)於蒸餾水(1.1 L)中之懸浮液中逐滴添加10% NaOH水溶液以將pH調整至8.5。將混合物加熱至35-38℃且添加L -醯基酶(11.0 g)。將反應混合物在此溫度下攪拌48 h，同時使用10% NaOH水溶液將pH保持於8.5。使用2N HCl水溶液將混合物調整至pH 4-5且添加活性碳(2 g)。將混合物在60℃下加熱2 h且然後冷卻至室溫。使用10% NaOH水溶液將混合物調整至pH 9.5-10並過濾。使用2N HCl水溶液將濾液調整至pH 2-3且然後使用EtOAc (400 mL × 2)萃取。使用0.5N HCl水溶液(200 mL × 2)及鹽水(200 mL)洗滌合併之萃取物，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾，並濃縮至乾燥。使用EtOAc (60 mL)及石油醚(80 mL)之混合物將殘餘物在攪拌下處理1 h。藉由過濾收集所得沈澱物，使用石油醚洗滌並在真空下乾燥以得到白色固體形式之(R)-2-乙醯胺基-3-(4-溴-2,6-二氟苯基)丙酸。 步驟 4 . (R)-2- 胺基 -3-(4- 溴 -2,6- 二氟苯基 ) 丙酸鹽酸鹽
將(R)-2-乙醯胺基-3-(4-溴-2,6-二氟苯基)丙酸(26 g, 80.7 mmol)於6N HCl水溶液(260 mL)中之混合物在回流下加熱5 h。濃縮混合物且將殘餘物在真空及50℃下乾燥以提供白色固體形式之粗製(R)-2-胺基-3-(4-溴-2,6-二氟苯基)丙酸鹽酸鹽。 步驟 5. (R)-2- 胺基 -3-(4- 溴 -2,6- 二氟苯基 ) 丙酸甲酯
向(R)-2-胺基-3-(4-溴-2,6-二氟苯基)丙酸鹽酸鹽(25.4 g, 80.7 mmol)於MeOH (125 mL)中之溶液中添加MeOH/HCl (8M, 125 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜並濃縮至乾燥。將殘餘物懸浮於5% Na2 CO3 水溶液(250 mL)中且然後使用EtOAc (250 mL × 2)萃取。使用鹽水洗滌合併之萃取物，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾，並濃縮以得到油狀物形式之(R)-2-胺基-3-(4-溴-2,6-二氟苯基)丙酸甲酯。1 H NMR (CDCl3 , 400 MHz) δ(ppm): 7.08 (m, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.70 (m, 1H), 3.09-2.87 (m, 2H), 1.55 (br s, 2H)。MS: (ESI, m/z): 294, 296 [M+H]+ 。 步驟 6. (R)-2- 胺基 -3-(4- 溴 -2,6- 二氟苯基 ) 丙烷 -1- 醇
向(R)-2-胺基-3-(4-溴-2,6-二氟苯基)丙酸甲酯(23.5 g, 79.9 mmol)於MeOH (500 mL)中之經攪拌溶液中逐份添加NaBH4 (6.08 g, 159.9 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌3 h且添加NaBH4 (1.52 g, 39.9 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。添加水(500 mL)且藉由在真空下蒸發來去除MeOH。使用CH2 Cl2 (250 mL × 3)萃取所得混合物且藉由無水Na2 SO4 乾燥合併之萃取物，過濾，並濃縮以提供白色固體形式之粗製(R)-2-胺基-3-(4-溴-2,6-二氟苯基)丙烷-1-醇。MS: (ESI, m/z): 266, 268 [M+H]+ 。 步驟 7 . (R)-7- 溴 -5- 氟 烷 -3- 胺
在室溫下，向(R)-2-胺基-3-(4-溴-2,6-二氟苯基)丙烷-1-醇(18.5 g, 69.5 mmol)於DMSO (100 mL)中之經攪拌溶液中添加NaH (60%於礦物油中，4.17 g)。將反應混合物在35℃下攪拌3 h且小心添加冰-水(500 mL)以終止反應。使用EtOAc (300 mL × 3)萃取所得混合物且使用鹽水(200 mL)洗滌合併之萃取物，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾，並濃縮以得到粗製(R)-7-溴-5-氟烷-3-胺。MS: (ESI, m/z): 246, 248 [M+H]+ 。 步驟 8. (R)-(7- 溴 -5- 氟 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
向粗製(R)-7-溴-5-氟烷-3-胺(17 g, 69.5 mmol)及NaHCO3 飽和水溶液(200 mL)於MeOH (400 mL)中之經攪拌混合物中逐滴添加氯甲酸苄基酯(17.7 g, 104.2 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜且然後使用水(500 mL)稀釋。使用EtOAc (300 mL × 2)萃取所得混合物且使用水(200 mL)洗滌合併之萃取物，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾，並濃縮。藉由矽膠層析純化殘餘物以得到(R)-(7-溴-5-氟烷-3-基)胺基甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 380, 382 [M+H]+ 。
可使用標準化學操作及類似於中間體5-1之方法2之程序來製備表2中之下列中間體。表 2 ： 1 程序注意事項 ： 並不實施步驟3及步驟8。在步驟1中，以兩個步驟自4-溴-2,6-二氟苯甲酸甲酯來製備5-溴-2-(溴甲基-d2)-1,3-二氟苯：將甲醇(0.806 ml, 19.92 mmol)小心逐滴添加至4-溴-2,6-二氟苯甲酸甲酯(5 g, 19.92 mmol)、四氫硼酸鈉-d4 (0.834 g, 19.92 mmol)於THF (15 mL)中之攪拌溶液中。然後將反應液在70℃下攪拌2 h。將反應液冷卻至室溫且添加10 mL NH4 Cl飽和水溶液。將反應液在室溫下攪拌2 h。分離有機層。使用2 × 15 mL DCM萃取水層。合併有機層，藉由Na2 SO4 乾燥，過濾，並在真空下濃縮以提供(4-溴-2,6-二氟苯基)甲烷-d2-醇。 將(4-溴-2,6-二氟苯基)甲烷-d2-醇(3.00 g, 13.33 mmol)及PBr3 (14.21 mL, 14.21 mmol)於DCM (30 mL)中之溶液在40℃下攪拌30 min。在冷卻至室溫之後，藉由添加水(7.5 mL)來終止反應。使用DCM (3 × 10 mL)萃取所得混合物且合併有機層，藉由Na2 SO4 乾燥，過濾，並濃縮以提供淺黃色油狀物形式之粗製物。藉由正相層析使用Biotage (KP-SIL 50g, 2% EtOAc/己烷至最高25% EtOAc/己烷)純化油狀物。合併期望部分並濃縮以提供5-溴-2-(溴甲基-d2)-1,3-二氟苯。1 H NMR (CDCl3 , 300 MHz) δ(ppm): 1.54 (s, 1H) 4.46 (br d,J = 3.8 Hz, 1H) 7.05-7.21 (m, 2H)。中間體 6. (R)-4-(3- 胺基 -8- 溴 -5- 氟 烷 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯及 中間體 7-1. (R)-4-(3- 胺基 -6- 氰基 -5- 氟 烷 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯 步驟 1 ： (R)-4-(3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-8- 溴 -5- 氟 烷 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯及 (R)-4-(3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-6- 溴 -5- 氟 烷 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
向20-mL小瓶中添加4-[(3R)-3-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-5-氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基]六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(570 mg, 1.17 mmol)、THF (10 mL)及NBS (314 mg, 1.76 mmol)。將所得溶液在25℃下攪拌2 h，然後藉由添加水(30 mL)來驟冷。使用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：XSelect CSH Prep C18 OBD, 5 µm, 19×150 mm；移動相A：水(0.05% TFA), B：ACN；梯度：在15 min內45% B增加至70% B)純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分以提供灰白色固體形式之4-[(3R)-3-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-8-溴-5-氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基]六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(峰1) (中間體 6 )及灰白色固體形式之4-[(3R)-3-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-6-溴-5-氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基]六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(峰2)。MS (ESI, m/z): 564, 566 [M+H]+ 。使該兩種化合物獨立地進行至後續合成步驟中。 步驟 2 ： 4-[(3R)-3-[[( 苄基氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-6- 氰基 -5- 氟 -3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -7- 基 ] 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
向使用惰性氮氣氛吹掃並維持該氣氛之10-mL密封管中添加4-[(3R)-3-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-6-溴-5-氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基]六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(80 mg, 0.14 mmol)、Zn(CN)2 (13 mg, 0.11 mmol)、Pd(PPh3 )4 (8 mg, 0.01 mmol)、PPh3 (7 mg, 0.03 mmol)及NMP (5 mL)。將所得溶液在120℃下攪拌1 h。在冷卻至25℃之後，藉由添加10 mL水來終止反應。使用3 × 20 mL乙酸乙酯萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮以提供殘餘物，經由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：於H2 O中之0.1% TFA，B：ACN；流速：50 mL/min；梯度：在30 min內0% B增加至80% B)純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分以提供灰白色固體形式之4-[(3R)-3-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-6-氰基-5-氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基]六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS (ESI, m/z): 511 [M+H]+ 。 步驟 3 ： 4-[(3R)-3- 胺基 -6- 氰基 -5- 氟 -3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -7- 基 ] 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
向使用氮吹掃並維持該氣氛之25-mL圓底燒瓶中放置4-[(3R)-3-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-6-氰基-5-氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基]六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(40 mg, 0.08 mmol)、乙酸乙酯(4 mL)及10%碳載鈀(40 mg)。將所得混合物在25℃及氫氣氛下攪拌2 h。藉由經由矽藻土過濾來去除固體且在真空下濃縮濾液以提供黃色油狀物形式之4-[(3R)-3-胺基-6-氰基-5-氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基]六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(中間體 7-1 )。MS (ESI, m/z): 377 [M+H]+ 。 可使用標準化學操作及類似於用於製備中間體7-1之程序的程序來製備表3中之下列中間體。表 3 ： 中間體 8. (6- 溴 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 ) 胺基甲酸苄基酯； 中間體 9. (S)-(6- 溴 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 ) 胺基甲酸苄基酯及 中間體 10. (R)-(6- 溴 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 步驟 1. 6- 溴 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 胺
將6-溴-3,4-二氫萘-2(1H)-酮(5 g, 22.21 mmol)、NH4 OAc (13.8 g, 179 mmol)及NaBH3 CN (1.68 g, 26.67 mmol)於MeOH (250 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。使用2N HCl溶液將反應混合物酸化至pH 4-5且在真空下濃縮。使用CH2 Cl2 (200 mL × 2)洗滌殘餘溶液。使用1N NaOH溶液將水層鹼化至pH 10，然後使用CH2 Cl2 (200 mL × 2)萃取。藉由Na2 SO4 乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮以提供黃色油狀物形式之6-溴-1,2,3,4-四氫萘-2-胺。MS: (ESI, m/z): 226, 228 [M+H]+ 。 步驟 2. (6- 溴 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 ( 中間體 8)
將6-溴-1,2,3,4-四氫萘-2-胺(1.8 g, 7.96 mmol)、氯甲酸苄基酯(1.6 g, 9.55 mmol)及Cs2 CO3 (3 g, 21.71 mmol)於THF (20 mL)及水(20 mL)中之溶液在60℃下攪拌過夜。在冷卻至室溫之後，使用EtOAc (30 mL × 3)萃取反應混合物。藉由Na2 SO4 乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:100至1:3 EtOAc/石油醚之梯度洗脫)純化以提供固體形式之(6-溴-1,2,3,4-四氫萘-2-基)胺基甲酸苄基酯(中間體 8 )。MS: (ESI, m/z): 360, 362 [M+H]+ 。 步驟 3. (S)-(6- 溴 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 ( 中間體 9) 及 (R)-(6- 溴 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 ( 中間體 10)
藉由SFC (管柱：Chiralpak IA-SFC-03, 5x25 cm, 5 μm；移動相A：CO2 , B: MeOH；流速：170 mL/min)分離外消旋 (6-溴-1,2,3,4-四氫萘-2-基)胺基甲酸苄基酯以提供如下標題化合物：白色固體形式之(S)-(6-溴-1,2,3,4-四氫萘-2-基)胺基甲酸苄基酯(第一洗脫異構體，RT = 6.54 min)及白色固體形式之(R)-(6-溴-1,2,3,4-四氫萘-2-基)胺基甲酸苄基酯(第二洗脫異構體，RT = 9.06 min)。 第一洗脫異構體：1 H NMR (CDCl3 , 400 MHz) δ(ppm): 7.30-7.21 (m, 5H), 7.17-7.13 (m, 2H), 6.85-6.83 (d,J = 8.00 Hz, 1H), 5.02 (s, 2H), 4.70 (br, 1H), 3.95 (m,1H), 3.01-2.96 (dd,J = 4.00 Hz, 16.00 Hz, 2H), 2.79-2.75 (m, 2H), 2.53-2.47 (m, 1H), 2.00-1.97 (m, 1H), 1.68-1.66 (m,1H)。MS: (ESI, m/z): 360, 362 [M+H]+ 。 第二洗脫異構體：1 H NMR (CDCl3 , 400 MHz) δ(ppm): 7.30-7.23 (m, 5H), 7.17-7.13 (m, 2H), 6.84-6.82 (d,J = 8.00 Hz, 1H), 5.02 (s, 2H), 4.70 (br, 1H), 4.06-3.95 (m,1H), 3.01-2.96 (dd,J = 4.00 Hz, 16.0 Hz, 2H), 2.79-2.75 (m, 2H), 2.51-2.47 (m, 1H), 2.00-1.96 (m, 1H), 1.68-1.66 (m,1H)。MS: (ESI, m/z): 360, 362 [M+H]+ 。中間體 11-1. (6- 溴 -8- 氟 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 步驟 1. 2-(4- 溴 -2- 氟苯基 ) 乙醯氯 向250-mL圓底燒瓶中裝填2-(4-溴-2-氟苯基)乙酸(10 g, 42.05 mmol)、DCM (50 mL)及亞硫醯氯(6.3 mL, 85.11 mmol)。將所得溶液在40℃下攪拌16 h。在冷卻至25℃之後，在真空下濃縮反應混合物以提供褐色油狀物形式之2-(4-溴-2-氟苯基)乙醯氯。 步驟 2 . 6- 溴 -8- 氟 -3,4- 二氫萘 -2(1H)- 酮 向500-mL圓底燒瓶中裝填2-(4-溴-2-氟苯基)乙醯氯(5.0 g, 18.49 mmol)及DCM (100 mL)。然後在0℃下逐份添加AlCl3 (7.15 g, 53.09 mmol)。將所得混合物在0℃下攪拌10 min，然後在0℃下將輕微乙烯氣體流鼓泡至反應混合物中5 h。將反應混合物傾倒至冰中並添加濃鹽酸(5 mL)。使用DCM (3 × 50 mL)萃取所得溶液，合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥並在真空下濃縮以提供粗製殘餘物，藉由使用乙酸乙酯/石油醚(1:2)洗脫之管柱層析純化以提供褐色固體形式之6-溴-8-氟-3,4-二氫萘-2(1H)-酮。1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ(ppm): 2.49 (t,J =8.0Hz, 2H), 3.08 (t,J =8.0Hz, 2H), 3.49 (s, 2H), 7.40-7.42 (m, 2H)。 步驟 3 . (2E)-6- 溴 -8- 氟 -N- 甲氧基 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 亞胺 向250-mL圓底燒瓶中裝填6-溴-8-氟-3,4-二氫萘-2(1H)-酮(4.2 g, 16.07 mmol)、O-甲基羥基胺HCl鹽(2.16 g, 25.60 mmol)、乙醇(50 mL)及吡啶(5 mL, 61.50 mmol)。將所得混合物在80℃下於油浴中攪拌16 h，然後冷卻至25℃。在冷卻之後，將所得混合物在真空下濃縮以提供殘餘物，藉由使用乙酸乙酯/石油醚(1:2)洗脫之管柱層析純化殘餘物以提供褐色固體形式之(2E)-6-溴-8-氟-N-甲氧基-1,2,3,4-四氫萘-2-亞胺。MS: (ESI, m/z) 272, 274 [M+H]+ 。 步驟 4. 6- 溴 -8- 氟 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 胺 向使用氮吹掃之250-mL圓底燒瓶中裝填(2E)-6-溴-8-氟-N-甲氧基-1,2,3,4-四氫萘-2-亞胺(3.5 g, 11.58 mmol, 90%)、乙醇(50 mL)及拉尼鎳(2.0 g, 23.11 mmol)。向此燒瓶中引入氫(g)。將所得混合物在25℃下攪拌48 h。藉由使用矽藻土過濾來去除固體。在真空下濃縮濾液以提供殘餘物，藉由使用DCM/甲醇(10:1)洗脫之管柱層析純化殘餘物以提供褐色固體形式之6-溴-8-氟-1,2,3,4-四氫萘-2-胺。MS: (ESI, m/z): 244, 246 [M+H]+ 。 步驟 5. (6- 溴 -8- 氟 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 向100-mL圓底燒瓶中裝填6-溴-8-氟-1,2,3,4-四氫萘-2-胺(930 mg, 3.43 mmol)、乙酸乙酯(15 mL)、水(15 mL)、碳酸鉀(1.58 g, 11.32 mmol)及氯甲酸苄基酯(780 mg, 4.53 mmol)。將所得混合物在60℃下於油浴中攪拌16 h。在冷卻至25℃之後，使用水(30 mL)稀釋反應液。使用乙酸乙酯(3 × 40 mL)萃取所得溶液，合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮以提供殘餘物，藉由使用乙酸乙酯/石油醚(1:5)洗脫之管柱層析純化殘餘物以提供灰白色固體形式之(6-溴-8-氟-1,2,3,4-四氫萘-2-基)胺基甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 378, 380 [M+H]+ 。
使用標準化學操作及類似於用於製備中間體11-1之程序的程序來製備表4中之下列中間體。表 4 ： 1 程序注意事項 ： 在步驟2中，生成區域異構體6-溴-7-甲基-3,4-二氫萘-2(1H)-酮及6-溴-5-甲基-3,4-二氫萘-2(1H)-酮(3:1，分別)之混合物。將混合物用於步驟5中。藉由SFC使用對掌性管柱Phenomenex Lux 5μm Cellulose-3及移動相50% CO2 /IPA (2 mM NH3 -MeOH)來分離區域異構體及對映異構體以提供中間體 11-4 (作為第一洗脫異構體)、中間體 11-2 (作為第二洗脫異構體)、中間體 11-5 (作為第三洗脫異構體)及中間體 11-3 (作為第四洗脫異構體)。任意分配所分離對映異構體之立體化學。中間體 12. 4-(3- 胺基 烷 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯 步驟 1 . 7- 溴 -2H- 烯 -3- 甲腈
將4-溴-2-羥基苯甲醛(10 g, 47.26 mmol)及三乙二胺(1.12 g, 9.49 mmol)於丙烯腈(16 mL)中之溶液在80℃下攪拌24 h。在冷卻至室溫之後，1N NaOH (400 mL)終止反應。使用EtOAc (300 mL × 3)萃取所得溶液。合併有機層，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用20:1-9:1石油醚/EtOAc洗脫)純化殘餘物以得到黃色固體形式之7-溴-2H-烯-3-甲腈。MS: (ESI, m/z): 236, 238 [M+H]+ 。 步驟 2. 4-(3- 氰基 -2H- 烯 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將7-溴-2H-烯-3-甲腈(1 g, 3.81 mmol)、六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(950 mg, 4.85 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (327 mg, 0.42 mmol)、XPhos (191 mg, 0.38 mmol)及Cs2 CO3 (3.9 g, 11.37 mmol)於甲苯(20 mL)中之混合物在100℃下攪拌18 h。在冷卻至室溫之後，藉由添加30 mL水來終止反應。使用EtOAc (30 mL × 3)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用9:1-4:1石油醚/EtOAc洗脫)純化殘餘物以得到0.7 g黃色固體形式之4-(3-氰基-2H-烯-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 342 [M+H]+ 。 步驟 3 . 4-(3- 胺甲醯基 -2H- 烯 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將4-(3-氰基-2H-烯-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(500 mg, 1.32 mmol)、30%過氧化氫(0.2 mL, 2.58 mmol)及碳酸鉀(304 mg, 2.09 mmol)於DMSO (2 mL)及乙醇(10 mL)之混合物中之溶液在室溫下攪拌3 h。藉由添加50 mL水來終止反應。使用EtOAc (50 mL × 3)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用10:1-3:1石油醚/EtOAc洗脫)純化殘餘物以得到黃色固體形式之4-(3-胺甲醯基-2H-烯-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 360 [M+H]+ 。 步驟 4 . 4-(3- 胺甲醯基 烷 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將4-(3-胺甲醯基-2H-烯-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(700 mg, 1.95 mmol)及Pd/C (100 mg, 10%)於THF (50 mL)中之混合物在室溫及氫氣氛下攪拌18 h。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用EtOAc洗脫)純化殘餘物以得到淺黃色固體形式之4-(3-胺甲醯基烷-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 362 [M+H]+ 。 步驟 5 . 4-(3- 胺基 烷 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
向(二乙醯氧基碘)苯(468 mg, 1.45 mmol)於DMF (3.88 mL)及水(3.88 mL)之混合物中之攪拌溶液中添加4-(3-胺甲醯基烷-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(350 mg, 0.97 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌18 h。經24 h分兩份添加額外(二乙醯氧基碘)苯(936 mg, 2.90 mmol)。使用20 mL水稀釋所得溶液且使用EtOAc (50 mL)萃取。在真空下濃縮水層。藉由製備型HPLC (管柱：SunFire Prep C18, 19×150 mm；移動相A：水(0.05% NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在15 min內15% B至70% B)純化殘餘物以提供淺黃色固體形式之4-(3-胺基烷-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 334 [M+H]+ 。中間體 13. 3-(3- 胺基 烷 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯 步驟 1 . 7- 氯 烷 -3- 胺
將7-氯烷-3-酮(700 mg, 3.83 mmol)及NH4 OAc (2.37 g, 30.75 mmol)於MeOH (35 mL)中之溶液在室溫下攪拌4 h。向此溶液中添加NaBH3 CN (364 mg, 5.79 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌14 h且然後在真空下濃縮。使用50 mL水稀釋殘餘物。使用1N HCl將混合物之pH值調整至5。使用CH2 Cl2 (20 mL × 2)萃取所得混合物。使用1M NaOH溶液將水層之pH值調整至10。使用CH2 Cl2 (30 mL × 3)萃取所得溶液。合併有機層，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾，並在真空下濃縮以提供淺黃色油狀物形式之7-氯烷-3-胺。MS: (ESI, m/z): 184 [M+H]+ 。 步驟 2 . (7- 氯 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
將7-氯烷-3-胺(350 mg, 1.91 mmol)、碳酸鉀(786.6 mg, 5.69 mmol)及氯甲酸苄基酯(390 mg, 2.29 mmol)於EtOAc (15 mL)及水(15 mL)之混合物中之混合物在60℃下攪拌3 h。在冷卻至室溫之後，將反應混合物傾倒至10 mL水中且使用EtOAc (10 mL × 3)萃取。合併有機層，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用7:1石油醚/EtOAc洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之(7-氯烷-3-基)胺基甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 318 [M+H]+ 。 步驟 3 . 3-(3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 烷 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
向使用惰性氮氣氛吹掃並維持該氣氛之20-mL密封管中放置(7-氯烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(95 mg, 0.26 mmol)、3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(70 mg, 0.33 mmol)、Cs2 CO3 (294 mg, 0.90 mmol)、甲苯(5 mL)及RuPhos Pd G3 (25.1 mg, 0.03 mmol)。使用微波輻射將反應混合物在120℃下處理5 h。在冷卻至室溫之後，然後將反應混合物傾倒至10 mL水中。使用CH2 Cl2 (10 mL × 3)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用2:1石油醚/EtOAc洗脫)純化殘餘物以提供淺黃色油狀物形式之3-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)烷-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 494 [M+H]+ 。 步驟 4. 3-(3- 胺基 烷 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將3-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)烷-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(300 mg, 0.60 mmol)及Pd/C (60 mg, 10%)於MeOH (25 mL)中之混合物在室溫及氫氣氛下攪拌2 h。過濾掉固體且濃縮濾液以得到黃色油狀物形式之3-(3-胺基烷-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 360 [M+H]+ 。中間體 14-1. 3-(3- 胺基 烷 -7- 基 )-3,9- 二氮雜雙環 [3.3.1] 壬烷 -9- 甲酸第三丁基酯 步驟 1. 3-(3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 烷 -7- 基 )-3,9- 二氮雜雙環 [3.3.1] 壬烷 -9- 甲酸第三丁基酯
將(7-溴烷-3-基)胺基甲酸苄基酯、中間體 1 、(400 mg, 1.07 mmol)、3,9-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-9-甲酸第三丁基酯(300 mg, 1.31 mmol)、Pd(dppf)Cl2 -CH2 Cl2 (90 mg, 0.11 mmol)、Xphos (52 mg, 0.11 mmol)及Cs2 CO3 (722 mg, 2.22 mmol)於甲苯(6 mL)中之混合物在100℃下攪拌14 h。在冷卻至室溫之後，添加水且使用EtOAc (70 mL × 2)萃取反應混合物。藉由硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並濃縮。藉由製備型TLC (使用1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供淺黃色固體形式之3-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)烷-7-基)-3,9-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-9-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 508 [M+H]+ 。 步驟 2. 3-(3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 烷 -7- 基 )-3,9- 二氮雜雙環 [3.3.1] 壬烷 -9- 甲酸第三丁基酯
將3-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)烷-7-基)-3,9-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-9-甲酸第三丁基酯(120 mg, 0.22 mmol)及Pd/C (60 mg, 10%)於MeOH (5 mL)中之混合物在室溫及氫氣氛下攪拌1 h。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液以提供無色油狀物形式之3-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)烷-7-基)-3,9-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-9-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 374 [M+H]+ 。
使用標準化學操作及類似於用於製備中間體14-1之程序的程序來製備表5中之下列中間體。表 5 ： 1 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用RuPhos Pd G3/RuPhos作為觸媒/配體系統。中間體 15-1. 3-(3- 胺基 -5- 氟 烷 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯 步驟 1. 2,4- 二氟 -6- 羥基苯甲醛
將3,5-二氟苯酚(10 g, 73 mmol)、低聚甲醛(23 g, 728 mmol)、Et3 N (21 mL)及MgCl2 (14.6 g, 153.34 mmol)於ACN (200 mL)中之溶液在60℃下攪拌14 h。在冷卻至室溫之後，藉由添加水(100 mL)來終止反應。使用DCM (2 × 200 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:10至1:1 EtOAc/石油醚之梯度洗脫)純化以提供淺黃色固體形式之2,4-二氟-6-羥基苯甲醛。MS: (ESI, m/z): 159 [M+H]+ 。 步驟 2. 3-(3- 氟 -4- 甲醯基 -5- 羥基苯基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將2,4-二氟-6-羥基苯甲醛(600 mg, 3.80 mmol)、3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(800 mg, 3.75 mmol)及DIEA (700 mg, 5.42 mmol)於DMSO (10 mL)中之溶液在100℃下攪拌2 h。在冷卻至室溫之後，藉由添加水(10 mL)來終止反應。使用DCM (2 × 20 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:4 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色固體形式之3-(3-氟-4-甲醯基-5-羥基苯基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 351 [M+H]+ 。 步驟 3. 3-(3-( 烯丙基氧基 )-5- 氟 -4- 甲醯基苯基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將3-(3-氟-4-甲醯基-5-羥基苯基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(1.4 g, 3.60 mmol)、碳酸鉀(3 g, 21.71 mmol)及烯丙基溴(500 mg, 4.13 mmol)在DMF (20 mL)中之溶液在100℃下攪拌2 h。在冷卻至室溫之後，藉由添加水(20 mL)來終止反應。使用DCM (2 × 50 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:5 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色固體形式之3-(3-(烯丙基氧基)-5-氟-4-甲醯基苯基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 392 [M+H]+ 。 步驟 4. 3-(3-( 烯丙基氧基 )-5- 氟 -4- 乙烯基苯基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
在0℃下，向甲基三苯基溴化鏻(3.3 g, 8.86 mmol)於THF (25 mL)中之溶液中逐份添加氫化鈉(178 mg, 4.45 mmol，於油中之60%分散液)。將反應混合物在室溫下攪拌4 h。隨後逐滴添加3-(3-(烯丙基氧基)-5-氟-4-甲醯基苯基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(1.2 g, 2.77 mmol)於THF (20 mL)中之溶液並在30℃下繼續攪拌3 h。藉由添加水(60 mL)來終止反應。使用EtOAc (3 × 50 mL)萃取所得混合物。使用鹽水(50 mL)洗滌合併之有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:6至1:1之EtOAc/石油醚之梯度洗脫)純化以提供無色油狀物形式之3-(3-(烯丙基氧基)-5-氟-4-乙烯基苯基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 389 [M+H]+ 。 步驟 5. 3-(5- 氟 -2H- 烯 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將3-(3-(烯丙基氧基)-5-氟-4-乙烯基苯基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(800 mg, 2.06 mmol)及Grubbs Catalyst™ 2nd Gen (48 mg, 0.05 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。在真空下濃縮混合物。藉由矽膠層析(使用1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供無色油狀物形式之3-(5-氟-2H-烯-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 361 [M+H]+ 。 步驟 6. 3-(5- 氟 -3- 硝基 -2H- 烯 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將KNO2 (945 mg, 11.10 mmol)及18-冠-6 (2.2 g, 8.32 mmol)於THF (20 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。然後添加I2 (2.3 g, 9.06 mmol)且繼續攪拌1 h。最後，將3-(5-氟-2H-烯-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(1 g, 2.77 mmol)及吡啶(110 mg, 1.39 mmol)於THF (10 mL)中之溶液添加至溶液中且繼續攪拌14 h。藉由添加水(20 mL)來終止反應。使用DCM (2 × 50 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:6 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色固體形式之3-(5-氟-3-硝基-2H-烯-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 406 [M+H]+ 。 步驟 7. 3-(3- 胺基 -5- 氟 烷 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將3-(5-氟-3-硝基-2H-烯-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(120 mg, 0.30 mmol)、BH3 -THF (1 M, 20 mL, 20.0 mmol)及NaBH4 (116 mg, 3.07 mmol)於THF (20 mL)中之溶液在65℃下攪拌14 h。然後添加甲醇(20 mL)且在85℃下繼續攪拌4 h。在真空下濃縮混合物。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：含有10 mM NH4 HCO3 之水，B: ACN；流速：50 mL/min；梯度：在40 min內0%至50% B)純化以得到無色油狀物形式之3-(3-胺基-5-氟烷-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 378 [M+H]+ 。
使用標準化學操作及類似於用於製備中間體15-1之程序的程序來製備表6中之下列中間體。表 6 ： 1 程序注意事項 ： 步驟6：藉由在50℃下將4-[6-(三氟甲氧基)-2H-烯-7-基]六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(800 mg, 2.00 mmol)、ACN (2.2 g, 4.00 mmol)、NaNO2 (1.4 g, 20.29 mmol)及乙酸(1.44 g, 23.98 mmol)於氯仿(40 mL)中之溶液超音波處理6 h來實施硝化。使用NaHCO3 飽和水溶液(40 mL)終止反應且使用EtOAc實施萃取後處理。中間體 16. 3- 胺基 -5- 氟 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸 步驟 1 . 2- 氯 -5- 氟 -6- 甲基菸鹼甲腈
將2,6-二氯-5-氟吡啶-3-甲腈(5 g, 26.18 mmol)、甲基□酸(1.58 g, 26.36 mmol)、Na2 CO3 (8.33 g, 78.54 mmol)及Pd(dppf)Cl2 -CH2 Cl2 (958mg, 1.31 mmol)於DMF (40 mL)及水(20 mL)中之混合物在80℃下攪拌3 h。在冷卻至室溫之後，使用50 mL水稀釋反應混合物。使用EtOAc (3 × 100 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:5 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供粉紅色固體形式之2-氯-5-氟-6-甲基菸鹼甲腈。MS: (ESI, m/z): 171 [M+H]+ 。 步驟 2. 3- 胺基 -5- 氟 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
將2-氯-5-氟-6-甲基菸鹼甲腈(1.40 g, 8.21 mmol)/KOH (1.38 g, 24.63 mmol)及2-巰基乙酸甲酯(1.74 g, 16.42 mmol)於DMF (20 mL)及水(20 mL)中之溶液在室溫下攪拌3 h。使用1N HCl溶液將溶液之pH值調整至5。藉由過濾收集固體以提供黃色固體形式之3-胺基-5-氟-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯。MS: (ESI, m/z): 241 [M+H]+ 。 步驟 3. 3- 胺基 -5- 氟 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸
將3-胺基-5- 氟-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯(200 mg, 0.83 mmol)及NaOH (66 mg, 1.66 mmol)於MeOH (2 mL)及水(1 mL)中之溶液在60℃下攪拌1 h。在冷卻至室溫之後，在真空下濃縮所得混合物。使用20 mL水稀釋殘餘物。使用1N HCl溶液將混合物之pH值調整至5。藉由過濾收集固體以得到黃色固體形式之3-胺基-5-氟-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸。MS: (ESI, m/z): 227 [M+H]+ 。中間體 17. 3- 胺基 -5- 氟噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸 步驟 1. 3- 胺基 -5- 氟噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
將鈉(230 mg, 10.00 mmol)在0℃下添加至MeOH (20 mL)中且將所得混合物在0℃下攪拌30 min直至鈉耗盡為止。向反應混合物中添加2-氯-5-氟菸鹼甲腈(900 mg, 5.75 mmol)及2-巰基乙酸甲酯(1.8 mL, 14.98 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌16 h。藉由添加50 mL水來終止反應且使用DCM (3 × 50 mL)萃取。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:1 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色固體形式之3-胺基-5-氟噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯。MS: (ESI, m/z): 227 [M+H]+ 。 步驟 2 . 3- 胺基 -5- 氟噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸
將3-胺基-5-氟噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯(1 g, 3.76 mmol)及LiOH (100 mg, 3.97 mmol)於水(10 mL)及二噁烷(10 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。使用20 mL水稀釋反應液且使用EtOAc (3 × 30 mL)萃取。使用6N HCl溶液將水層之pH值調整至6。藉由過濾收集固體以提供黃色固體形式之3-胺基-5-氟噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸。MS: (ESI, m/z): 213 [M+H]+ 。中間體 18. 3- 胺基 -6- 氟噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸 步驟 1 . 2,6- 二氟菸鹼甲腈
將2,6-二氯菸鹼甲腈(6.92 g, 40.00 mmol)及KF (6.98 g, 120.14 mmol)於DMF (30 mL)中之混合物在90℃下攪拌過夜。在冷卻至室溫之後，藉由添加100 mL水來終止反應。使用EtOAc (3 × 100 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供白色固體形式之2,6-二氟菸鹼甲腈。MS: (ESI, m/z): 141 [M+H]+ 。 步驟 2 . 2-((3- 氰基 -6- 氟吡啶 -2- 基 ) 硫基 ) 乙酸苄基酯
在-70℃下，向2,6-二氟菸鹼甲腈(1 g, 6.42 mmol)及NaOAc (878 mg, 10.70 mmol)於THF (20 mL)中之混合物中添加2-巰基乙酸苄基酯(1.17 g, 6.42 mmol)。將所得溶液緩慢升溫至室溫且然後攪拌30 min。藉由添加20 mL水來終止反應。使用DCM (3 × 30 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用2:25 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供白色固體形式之2-((3-氰基-6-氟吡啶-2-基)硫基)乙酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 303[M+H]+ 。 步驟 3 . 3- 胺基 -6- 氟噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸苄基酯
在-50℃下，將2-((3-氰基-6-氟吡啶-2-基)硫基)乙酸苄基酯(120 mg, 0.40 mmol)於THF (2 mL)中之溶液逐滴添加至DBU (120 mg, 0.79 mmol)於THF (3 mL)中之溶液中。然後將混合物升溫至室溫並攪拌過夜。在真空下濃縮所得溶液。藉由矽膠層析(使用1:1 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供灰白色固體形式之3-胺基-6-氟噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 303 [M+H]+ 。 步驟 4 . 3- 胺基 -6- 氟噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸
將3-胺基-6-氟噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸苄基酯(89 mg, 0.29 mmol)及Pd/C (20 mg, 10%)於EtOAc (15 mL)中之混合物在室溫下攪拌1 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以得到淺黃色固體形式之3-胺基-6-氟噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸。MS: (ESI, m/z): 213 [M+H]+ 。中間體 19. 3- 胺基 -6- 甲氧基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸 步驟 1 . 2- 氯 -6- 甲氧基菸鹼甲腈
將鈉(1.5 g, 65.22 mmol)在室溫下添加至MeOH (25 mL)中且將所得混合物在0℃下攪拌30 min直至鈉耗盡為止。經5 min向反應混合物中添加2,6-二氯菸鹼甲腈(5 g, 28.90 mmol)且維持反應溫度低於10℃。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用1:3 EtOAc/己烷洗脫)純化以提供白色固體形式之2-氯-6-甲氧基菸鹼甲腈。MS: (ESI, m/z): 169 [M+H]+ 。 步驟 2. 3- 胺基 -6- 甲氧基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
在0℃下經5 min，向2-氯-6-甲氧基菸鹼甲腈(3.9 g, 23.13 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液中添加KOH (5.2 g)，隨後添加2-巰基乙酸甲酯(2.46 g, 23.18 mmol)。將所得溶液在0℃下攪拌1 h。藉由添加20 mL水來終止反應。使用EtOAc (3×30 mL)萃取所得混合物。使用水(50 mL)及鹽水(50 mL)洗滌合併之有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:10至1:1 EtOAc/己烷洗脫)純化以提供淺黃色固體形式之3-胺基-6-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯。1 H NMR (DMSO-d6 , 300 MHz) δ(ppm): 8.40 (d,J = 8.7 Hz, 1H), 7.24 (br, 2H), 6.89 (d,J = 9.0 Hz, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.77 (s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 239 [M+H]+ 。 步驟 3 . 3- 胺基 -6- 甲氧基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸
將3-胺基-6-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯(110 mg, 0.46 mmol)及LiOH (100 mg, 4.18 mmol)於THF (4 mL)及水(1.5 mL)中之溶液在60℃下攪拌2 h。在冷卻至室溫之後，在真空下濃縮所得混合物。使用2 mL水稀釋殘餘物。使用1N HCl將溶液之pH值調整至7。藉由過濾收集固體以提供黃色固體形式之3-胺基-6-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸。MS: (ESI, m/z): 225 [M+H]+ 。中間體 20. 3- 胺基 -5- 氟 -6- 甲氧基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸 步驟 1 . 2- 氯 -5- 氟 -6- 甲氧基菸鹼甲腈
將2,6-二氯-5-氟吡啶-3-甲腈(3.0 g, 15.71 mmol)及MeONa (1.28 g, 23.70 mmol)於MeOH (30 mL)中之混合物在室溫下攪拌5 h。在真空下濃縮所得混合物。藉由矽膠層析(使用1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色固體形式之2-氯-5-氟-6-甲氧基菸鹼甲腈。MS: (ESI,m/z ): 187, 189 [M+H]+ 。 步驟 2 . 3- 胺基 -5- 氟 -6- 甲氧基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
將2-氯-5-氟-6-甲氧基菸鹼甲腈(1.90 g, 10.22 mmol)、2-巰基乙酸甲酯(1.3 g, 12.26 mmol)及DBU (7.2 g, 47.29 mmol)於THF (30 mL)中之溶液在室溫下攪拌過夜。藉由添加50 mL水來終止反應且使用EtOAc (3 × 50 mL)萃取。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色固體形式之3-胺基-5-氟-6-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯。MS: (ESI,m/z ): 257 [M+H]+ 。 步驟 3 . 3- 胺基 -5- 氟 -6- 甲氧基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸
將3-胺基-5-氟-6-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯(500 mg, 1.95 mmol)及LiOH (236 mg, 9.85 mmol)於THF (8 mL)及水(8 mL)中之混合物在60℃下攪拌過夜。在冷卻至室溫之後，在真空下去除溶劑。使用3N HCl將殘餘物之pH值調整至7。藉由過濾收集固體以提供黃色固體形式之3-胺基-5-氟-6-甲氧基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸。MS: (ESI,m/z ): 243 [M+H]+ 。中間體 21. 3- 胺基 -4,6- 二甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸 步驟 1 . 3- 胺基 -4,6- 二甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
在攪拌及-50℃下，向2-氯-4,6-二甲基菸鹼甲腈(2.000 g, 12.00 mmol)及DBU (5.00 g, 32.84 mmol)於DMF (20 mL)中之溶液中逐滴添加2-氫硫基乙酸甲酯(1.019 g, 9.60 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。將混合物傾倒至水(50 mL)中且藉由過濾收集固體以得到淺黃色固體形式之3-胺基-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯。MS: (ESI, m/z): 237 [M+H]+ 。 步驟 2. 3- 胺基 -4,6- 二甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸
向3-胺基-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯(300 mg, 1.27 mmol)於MeOH (5 mL)中之溶液中添加NaOH (254 mg, 6.35 mmol)於水(5 mL)中之溶液。將所得溶液在70℃下攪拌3 h。在冷卻至室溫之後，在真空下去除溶劑。使用3N HCl將殘餘物之pH值調整至6。藉由過濾收集固體以提供黃色固體形式之3-胺基-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸。MS: (ESI, m/z): 223 [M+H]+ 。中間體 22. 3- 胺基 -6- 甲基 -4-( 三氟甲基 ) 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸 步驟 1 . 6- 甲基 -2- 側硫基 -4-( 三氟甲基 )-1,2- 二氫吡啶 -3- 甲腈
將2-氰基乙硫醯胺(2 g, 19.97 mmo)、1,1,1-三氟戊烷-2,4-二酮(3 g, 19.47 mmol)及三乙胺(0.1 mL)於乙醇(20 mL)中之溶液在90℃下攪拌1 h。在冷卻至室溫之後，藉由過濾收集固體並在減壓下於烘箱中乾燥以提供黃色固體形式之6-甲基-2-側硫基-4-(三氟甲基)-1,2-二氫吡啶-3-甲腈。MS: (ESI,m/z ): 219 [M+H]+ 。 步驟 2 . 3- 胺基 -6- 甲基 -4-( 三氟甲基 ) 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸乙酯
將6-甲基-2-側硫基-4-(三氟甲基)-1,2-二氫吡啶-3-甲腈(800 mg, 3.67 mmol)、2-溴乙酸乙酯(609 mg, 3.65 mmol)及NaOEt (297 mg, 4.37 mmol)於乙醇(20 mL)中之溶液在80℃下攪拌過夜。在真空下去除溶劑。使用30 mL水稀釋殘餘物且使用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:10至1:1 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色固體形式之3-胺基-6-甲基-4-(三氟甲基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯。MS: (ESI,m/z ): 305 [M+H]+ 。 步驟 3 . 3- 胺基 -6- 甲基 -4-( 三氟甲基 ) 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸
將3-胺基-6-甲基-4-(三氟甲基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(1.0 g, 3.29 mmol)及氫氧化鈉(470 mg, 11.75 mmol)於水(2 mL)及甲醇(10 mL)中之溶液在60℃下攪拌2 h。在真空下濃縮所得混合物。使用10 mL水稀釋殘餘物。使用3N HCl將溶液之pH值調整至3。藉由過濾收集固體以得到黃色固體形式之3-胺基-6-甲基-4-(三氟甲基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸。MS: (ESI,m/z ): 277 [M+H]+ 。中間體 23. 6- 胺基 -2- 甲基噻吩并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲酸甲酯及 中間體 24. 6- 胺基 -2- 甲基噻吩并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲酸 步驟 1. 4- 氯 -2- 甲基噻唑 -5- 甲腈
將2,4-二氯噻唑-5-甲腈(1.00 g, 5.59 mmol)、二甲基鋅(1M於Et2 O中) (8.8 mL, 8.80 mmol)及Pd(dppf)Cl2 - CH2 Cl2 (911 mg, 1.12 mmol)於甲苯(30 mL)中之混合物在40℃下攪拌4 h。藉由添加20 mL水來終止反應。使用EtOAc (3 × 20 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:5 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供淺黃色固體形式之4-氯-2-甲基噻唑-5-甲腈。MS: (ESI, m/z): 159 [M+H]+ 。 步驟 2 . 6- 胺基 -2- 甲基噻吩并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲酸甲酯
在攪拌及-40℃下，向4-氯-2-甲基噻唑-5-甲腈(550 mg, 3.47 mmol)及DBU (1.06 g, 6.94 mmol)於THF (20 mL)中之溶液中逐滴添加2-巰基乙酸甲酯(443 mg, 4.17 mmol)於THF (2 mL)中之溶液。使所得溶液容許升溫至室溫，同時攪拌過夜。使用20 mL水終止反應。使用EtOAc (3 × 20 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:7 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供淺黃色固體形式之6-胺基-2-甲基噻吩并[2,3-d]噻唑-5-甲酸甲酯。MS: (ESI, m/z): 229 [M+H]+ 。 步驟 3. 6- 胺基 -2- 甲基噻吩并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲酸
向6-胺基-2-甲基噻吩并[2,3-d]噻唑-5-甲酸甲酯(174 mg, 0.76 mmol)於ACN (11 mL)中之溶液中添加LiOH (100 mg, 4.18 mmol)於水(5 mL)中之溶液。將所得溶液在30℃下攪拌過夜，然後在真空下濃縮。使用1 mL水稀釋殘餘物。使用1N HCl溶液將殘餘物之pH值調整至7。藉由過濾收集固體以得到灰白色固體形式之6-胺基-2-甲基噻吩并[2,3-d]噻唑-5-甲酸。MS: (ESI, m/z): 214 [M+H]+ 。中間體 25. 1- 乙基 -1H- 吡咯并 [2,3-b] 吡啶 -5- 甲酸
在0℃下，向1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酸甲酯(3 g, 17.03 mmol)於DMF (80 mL)中之溶液中逐份添加氫化鈉(2.04 g, 51.09 mmol，於油中之60%分散液)。將反應混合物在0℃下攪拌1 h。然後在0℃下添加碘乙烷(5.32 g, 34.06 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌10 h。使用10 mL水終止反應。在攪拌30 min之後，使用3N HCl將溶液之pH值調整至7~8。使用EtOAc (6 × 50 mL)萃取所得混合物。使用鹽水(50 mL)洗滌合併之有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮以得到黃色固體形式之1-乙基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-甲酸(粗製物，90%純度)。MS: (ESI, m/z): 191 [M+H]+ 。中間體 26. 7- 乙基 -7H- 吡咯并 [2,3-c] 噠嗪 -3- 甲酸 步驟 1. 3- 氯 -7- 乙基 -7H- 吡咯并 [2,3-c] 噠嗪
在0℃下，向3-氯-7H-吡咯并[2,3-c]噠嗪(700 mg, 4.56 mmol)於DMF (17 mL)中之溶液中逐份添加NaH (365 mg, 9.12 mmol，於油中之60%分散液)。將反應混合物在0℃下攪拌30 min。然後在0℃下添加碘乙烷(856 mg, 5.49 mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌2 h。藉由添加40 mL水來終止反應。使用EtOAc (3 × 20 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由製備型TLC (使用1:1 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色油狀物形式之3-氯-7-乙基-7H-吡咯并[2,3-c]噠嗪。MS: (ESI, m/z): 182, 183 [M+H]+ 。 步驟 2 . 7- 乙基 -7H- 吡咯并 [2,3-c ] 噠嗪 -3- 甲酸甲酯
在30-mL壓力罐反應器中，將3-氯-7-乙基-7H-吡咯并[2,3-c]噠嗪(300 mg, 1.65 mmol)、Pd(dppf)Cl2 .CH2 Cl2 (121 mg, 0.15 mmol)及Et3 N (0.69 mL, 4.96 mmol)於MeOH (15 mL)中之溶液在120℃及50 atm CO (g)下攪拌48 h。在冷卻至室溫之後，在真空下濃縮所得混合物。使用20 mL水稀釋殘餘物。使用EtOAc (3 × 20 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由製備型TLC (使用1:1 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色固體形式之7-乙基-7H-吡咯并[2,3-c]噠嗪-3-甲酸甲酯。MS: (ESI, m/z): 206 [M+H]+ 。 步驟 3 . 7- 乙基 -7H- 吡咯并 [2,3-c] 噠嗪 -3- 甲酸
將7-乙基-7H-吡咯并[2,3-c]噠嗪-3-甲酸甲酯(238 mg, 1.04 mmol)及氫氧化鈉(206 mg, 5.20 mmol)於THF (10 mL)及水(10 mL)中之混合物在室溫下攪拌18 h。在真空下濃縮所得混合物。使用10 mL水稀釋殘餘物。使用2N HCl將混合物之pH值調整至5。使用EtOAc (3 × 30 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮以得到淺黃色固體形式之7-乙基-7H-吡咯并[2,3-c]噠嗪-3-甲酸(粗製物)。MS: (ESI, m/z): 192 [M+H]+ 。中間體 27. 3- 胺基 -6- 甲基呋喃并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸 步驟 1. 3- 胺基 -6- 甲基呋喃并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸乙酯
將2-氯-6-甲基菸鹼甲腈(5 g, 32.77 mmol)、2-羥基乙酸乙酯(3.36 g, 32.28 mmol)及Cs2 CO3 (32.2 g, 98.83 mmol)於NMP (80 mL)中之溶液在75℃下攪拌過夜。在冷卻至室溫之後，將混合物傾倒至100 mL水中。使用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取所得混合物。使用鹽水(100 mL)洗滌合併之有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化以提供粉紅色固體形式之3-胺基-6-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯。MS: (ESI, m/z): 221 [M+H]+ 。 步驟 2. 3- 胺基 -6- 甲基呋喃并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲酸
在攪拌下，向3-胺基-6-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-2-甲酸乙酯(110 mg, 0.53 mmol)於甲醇(1 mL)及THF (1 mL)中之溶液中逐滴添加LiOH (24 mg, 1.00 mmol)於水(0.5 mL)中之溶液。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。使用1N HCl將溶液之pH值調整至8。使用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(0.1%甲酸), B: ACN；流速：50 mL/min；梯度：在30 min內0% B至100% B)純化以提供淺黃色固體形式之3-胺基-6-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-2-甲酸。MS: (ESI, m/z): 193 [M+H]+ 。中間體 28. 8-( 第三丁氧基羰基 )-5,6,7,8- 四氫 -1,8- 萘啶 -3- 甲酸 步驟 1 . 5,6,7,8- 四氫 -1,8- 萘啶 -3- 甲酸甲酯
在30-mL壓力罐反應器中，將6-溴-3,4-二氫-1,8-萘啶-1(2H)-甲酸第三丁基酯(300 mg, 0.86 mmol)、Pd(dppf)Cl2- CH2 Cl2 (90 mg, 0.11 mmol)及Et3 N (1 mL)於MeOH (5 mL)中之混合物在120℃及5 atm CO (g)下攪拌48 h。在冷卻至室溫之後，在真空下去除溶劑。使用水(10 mL)稀釋殘餘物且使用EtOAc (3 × 10 mL)萃取。藉由Na2 SO4 乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:5 EtOAc/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供0.15 g白色固體形式之5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-3-甲酸甲酯。MS: (ESI, m/z): 193 [M+H]+ 。 步驟 2. 3,4- 二氫 -1,8- 萘啶 -1,6(2H)- 二甲酸 1-( 第三丁基 ) 酯 6- 甲基酯
將5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-3-甲酸甲酯(110 mg, 0.52 mmol)、DMAP (126 mg, 1.03 mmol)及(Boc)2 O (227 mg, 1.04 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。藉由添加5 mL水來終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取所得混合物。藉由Na2 SO4 乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:8 EtOAc/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之3,4-二氫-1,8-萘啶-1,6(2H)-二甲酸1-(第三丁基)酯6-甲基酯。MS: (ESI, m/z): 293 [M+H]+ 。 步驟 3. 8-( 第三丁氧基羰基 )-5,6,7,8- 四氫 -1,8- 萘啶 -3- 甲酸
將3,4-二氫-1,8-萘啶-1,6(2H)-二甲酸1-(第三丁基)酯6-甲基酯(280 mg, 0.86 mmol)及LiOH (81 mg, 3.38 mmol)於THF (5 mL)及水(5 mL)中之溶液在室溫下攪拌3 h。在真空下濃縮所得混合物。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(0.05%甲酸), B: ACN；梯度：在40 min內0% B至60% B)純化殘餘物以提供白色固體形式之8-(第三丁氧基羰基)-5,6,7,8-四氫-1,8-萘啶-3-甲酸。MS: (ESI, m/z): 279 [M+H]+ 。中間體 29. 2',3'- 二氫 -1'H- 螺 [ 環丙烷 -1,4'-[1,8] 萘啶 ]-6'- 甲酸 步驟 1 . 6- 溴 -1,2,3,4- 四氫 -1,8- 萘啶
在0℃下，向6-溴-3,4-二氫-1,8-萘啶-2(1H)-酮(5.0 g, 21.80 mmol)及NaBH4 (4.18 g, 110.49 mmol)於THF (140 mL)中之溶液中逐滴添加BF3 -Et2 O (20 mL, 157.83 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌16 h。添加1N HCl溶液(100 mL)且將反應混合物在室溫下再攪拌16 h。然後使用NaHCO3 飽和水溶液將混合物之pH值調整至8。使用乙酸乙酯(3 × 150 mL)萃取所得混合物且藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮以得到白色固體形式之6-溴-1,2,3,4-四氫-1,8-萘啶。MS: (ESI, m/z): 213, 215 [M+H]+ 。 步驟 2 . 6- 溴 -3,4- 二氫 -1,8- 萘啶 -1(2H)- 甲酸第三丁基酯
在0℃下，向氫化鈉(1.41 g, 58.76 mmol，於油中之60%分散液)於THF (100 mL)中之混合物中添加6-溴-1,2,3,4-四氫-1,8-萘啶(5.0 g, 22.53 mmol)於THF (100 mL)中之溶液。將反應混合物在0℃下攪拌30 min。然後向混合物中添加(Boc)2 O (10.15 g, 46.51 mmol)於THF (50 mL)中之溶液。將所得混合物在回流下加熱16 h。在冷卻至室溫之後，藉由添加水(150 mL)來終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 150 mL)萃取所得混合物且藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供淺黃色固體形式之6-溴-3,4-二氫-1,8-萘啶-1(2H)-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 313, 315 [M+H]+ 。 步驟 3 . 6- 溴 -4- 側氧基 -3,4- 二氫 -1,8- 萘啶 -1(2H)- 甲酸第三丁基酯
在50℃下，向6-溴-3,4-二氫-1,8-萘啶-1(2H)-甲酸第三丁基酯(2.0 g, 6.13 mmol)及NaH2 PO4 (1.92 g, 16.00 mmol)於第三丁醇(20 mL)及水(15 mL)中之溶液中逐滴添加NaMnO4 -H2 O (6.13 g, 38.31 mmol)於水(5mL)中之溶液。將反應混合物在50℃下攪拌3 h。在冷卻至室溫之後，添加Na2 SO3 且將混合物在室溫下攪拌30 min。過濾掉固體且使用50 mL水稀釋濾液。使用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取所得混合物且藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供白色固體形式之6-溴-4-側氧基-3,4-二氫-1,8-萘啶-1(2H)-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 327, 329 [M+H]+ 。 步驟 4 . 6- 溴 -4- 亞甲基 -3,4- 二氫 -1,8- 萘啶 -1(2H)- 甲酸第三丁基酯
將甲基三苯基溴化鏻(3.29 g, 9.21 mmol)及t-BuOK (1M於THF中) (9.2 mL, 9.02 mmol)於甲苯(30 mL)中之溶液在100℃下攪拌1 h。向反應混合物中添加6-溴-4-側氧基-3,4-二氫-1,8-萘啶-1(2H)-甲酸第三丁基酯(1.5 g, 4.40 mmol)於甲苯(5 mL)中之溶液。將所得溶液在100℃下保持1 h。在冷卻至室溫之後，藉由添加水(50 mL)來終止反應。使用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取所得混合物且藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:100至1:3之EtOAc/石油醚之梯度洗脫)純化以提供白色固體形式之6-溴-4-亞甲基-3,4-二氫-1,8-萘啶-1(2H)-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 325, 327 [M+H]+ 。 步驟 5 . 6'- 溴 -2',3'- 二氫 -1'H- 螺 [ 環丙烷 -1,4'-[1,8] 萘啶 ]-1'- 甲酸第三丁基酯
向氫氧化鉀(4.8 g, 85.55 mmol)於水(7.2 mL)中之溶液中添加2-亞硝基丙烷醯胺(3.76 g, 36.83 mmol)於Et2 O (30 mL)中之溶液。將所得溶液在0℃下攪拌1 h。分離有機相以獲得重氮甲烷於Et2 O中之溶液。在0℃下，向6-溴-4-亞甲基-3,4-二氫-1,8-萘啶-1(2H)-甲酸第三丁基酯(400 mg, 1.18 mmol)於THF (30 mL)中之溶液中添加重氮甲烷溶液，隨後添加Pd(OAc)2 (28 mg, 0.12 mmol)於THF (3 mL)中之混合物。將反應混合物在室溫下再攪拌3 h。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液。藉由矽膠層析 (使用1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供淺黃色固體形式之6'-溴-2',3'-二氫-1'H-螺[環丙烷-1,4'-[1,8]萘啶]-1'-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 339, 341 [M+H]+ 。 步驟 6 . 2',3'- 二氫 -1'H- 螺 [ 環丙烷 -1,4'-[1,8] 萘啶 ]-6'- 甲酸
向配備有磁攪拌棒之30-mL壓力罐反應器中放置6'-溴-2',3'-二氫-1'H-螺[環丙烷-1,4'-[1,8]萘啶]-1'-甲酸第三丁基酯(140 mg, 0.40 mmol)、三水合乙酸鈉(167 mg, 1.23 mmol)及Pd(dppf)Cl2 -CH2 Cl2 (65 mg, 0.08 mmol)於DMF (6 mL)及水(2 mL)中之混合物。將反應混合物在120℃、一氧化碳氣氛及50 atm下攪拌16 h。在冷卻至室溫之後，藉由添加20 mL水來終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取所得溶液。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水, B: ACN；梯度：在10 min內0% B至10% B)純化以提供灰白色固體形式之2',3'-二氫-1'H-螺[環丙烷-1,4'-[1,8]萘啶]-6'-甲酸。MS: (ESI, m/z): 205 [M+H]+ 。中間體 30. 3-( 第三丁氧基羰基 )-1a,2,3,7b- 四氫 -1H- 環丙并 [c][1,8] 萘啶 -6- 甲酸 步驟 1. 2-( 烯丙基胺基 )-5- 溴菸鹼醛
向兩個平行30 ml密封管中分別放置5-溴-2-氟菸鹼醛(1.83 g, 9.0 mmol)、烯丙基胺(1.03 g, 18.0 mmol)及乙醇(15 mL)。將所得溶液在80℃下攪拌3 h。在冷卻至室溫之後，將所得溶液傾倒至30 mL鹽酸(1N)中並將所得混合物攪拌10 min且然後使用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:10 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供淺黃色固體形式之2-(烯丙基胺基)-5-溴菸鹼醛。MS: (ESI, m/z): 241, 243 [M+H]+ 。 步驟 2. N- 烯丙基 -5- 溴 -3- 乙烯基吡啶 -2- 胺
將甲基三苯基溴化鏻(6.22 g, 17.42 mmol)及第三丁醇鉀(1.96 g, 17.42 mmol)於THF (30 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。然後在室溫下逐滴添加2-(烯丙基胺基)-5-溴菸鹼醛(2.10 g, 87.1 mmol)於THF (5 mL)中之溶液且將反應混合物在室溫下攪拌過夜。藉由添加20 mL水來終止反應且使用DCM (3 × 40)萃取。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:20 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供淺黃色液體形式之N-烯丙基-5-溴-3-乙烯基吡啶-2-胺。MS: (ESI, m/z): 239, 241 [M+H]+ 。 步驟 3. 烯丙基 (5- 溴 -3- 乙烯基吡啶 -2- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
將N-烯丙基-5-溴-3-乙烯基吡啶-2-胺(590 mg, 2.47 mmol)、二碳酸二-第三丁基酯(1.62 g, 7.40 mmol)、三乙胺(749 mg, 7.40 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(90 mg, 0.74 mmol)於THF (15 mL)中之溶液在70℃下攪拌過夜。在冷卻至室溫之後，藉由添加50 mL水來終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 40 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:30 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供灰白色固體形式之烯丙基(5-溴-3-乙烯基吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 339, 341 [M+H]+ 。 步驟 4 . 6- 溴 -1,8- 萘啶 -1(2H)- 甲酸第三丁基酯
將烯丙基(5-溴-3-乙烯基吡啶-2-基)胺基甲酸第三丁基酯(600 mg, 1.77 mmol)及二氯[1,3-雙(2,4,6-三甲基苯基)-2-咪唑啶亞基](亞苄基)(三環己基膦)釕(II) (Grubbs Catalyst™ 2nd Gen) (75 mg, 0.09 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液在50℃下攪拌過夜。在冷卻至室溫之後，在真空下濃縮所得混合物。藉由矽膠層析(使用1:20 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供灰白色固體形式之6-溴-1,8-萘啶-1(2H)-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 311, 313 [M+H]+ 。 步驟 5. 6- 溴 -1,1a,2,7b- 四氫 -3H- 環丙并 [c][1,8] 萘啶 -3- 甲酸第三丁基酯
在0℃下，向氫氧化鉀(5.68 g, 101.24 mmol)於水(8 mL)中之溶液中逐滴添加1-甲基-1-亞硝基脲(2.98 g, 28.92 mmol)於Et2 O (40 mL)中之溶液。將反應混合物在0℃下攪拌1 h。然後分離有機相以獲得重氮甲烷於Et2 O中之溶液。向6-溴-1,8-萘啶-1(2H)-甲酸第三丁基酯(450 mg, 1.45 mmol)於THF (15 mL)中之溶液中添加重氮甲烷於Et2 O (40 mL)中之溶液，隨後添加Pd(OAc)2 (32 mg, 0.14 mmol)於THF (7 mL)中之溶液。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用1:50至1:20 EtOAc/石油醚之梯度洗脫)純化以提供灰白色固體形式之6-溴-1,1a,2,7b-四氫-3H-環丙并[c][1,8]萘啶-3-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 325, 327 [M+H]+ 。 步驟 6. 3-( 第三丁氧基羰基 )-1a,2,3,7b- 四氫 -1H- 環丙并 [c][1,8] 萘啶 -6- 甲酸
向30-mL壓力罐反應器中放置6-溴-1,1a,2,7b-四氫-3H-環丙并[c][1,8]萘啶-3-甲酸第三丁基酯(200 mg, 0.62 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (90 mg, 0.12 mmol)、NaOAc (151 mg, 1.85 mmol)、DMF (4.5 mL)及水(1.5 mL)。將反應混合物在120℃及50 atm CO (g)下攪拌18 h。在冷卻至室溫之後，使用10 mL水稀釋反應混合物。使用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(0.1%甲酸), B: ACN；流速：50 mL/min；梯度：在30 min內0% B至100% B)純化以提供淺黃色固體形式之3-(第三丁氧基羰基)-1a,2,3,7b-四氫-1H-環丙并[c][1,8]萘啶-6-甲酸。MS: (ESI, m/z): 291 [M+H]+ 。中間體 31. 6-( 苄基胺基 ) 菸鹼酸 步驟 1 . 6-( 苄基胺基 ) 菸鹼酸甲酯
將6-氟吡啶-3-甲酸甲酯(1 g, 6.12 mmol)、苯基甲烷胺(1.38 g, 12.88 mmol)及碳酸鉀(2.67 g, 19.32 mmol)於DMF (10 mL)中之混合物在80℃下攪拌2 h。在冷卻至室溫之後，藉由添加20 mL水來終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用3:10 EtOAc:石油醚洗脫)純化以提供白色固體形式之6-(苄基胺基)菸鹼酸甲酯。MS: (ESI, m/z): 243 [M+H]+ 。 步驟 2 . 6-( 苄基胺基 ) 菸鹼酸
將6-(苄基胺基)菸鹼酸甲酯(500 mg, 1.86 mmol)、甲醇(20 mL)、水(2 mL)及NaOH (165 mg, 4.13 mmol)之混合物在80℃下攪拌3 h。在冷卻至室溫之後，在真空下濃縮所得混合物。將殘餘物溶於10 mL水中。使用鹽酸(6 N)將溶液之pH值調整至6。藉由過濾收集固體以提供白色固體形式之6-(苄基胺基)菸鹼酸。MS: (ESI, m/z): 229 [M+H]+ 。中間體 32. 9,9- 二氟 -3,7- 二氮雜雙環 [3.3.1] 壬烷 -3- 甲酸第三丁基酯 步驟 1 ： 7- 苄基 -9,9- 二氟 -3,7- 二氮雜雙環 [3.3.1] 壬烷 -3- 甲酸第三丁基酯
將7-苄基-9-側氧基-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁基酯(5 g, 14.94 mmol)及DAST (12.2 g, 75.69 mmol)於CH2 Cl2 (80 mL)中之溶液在室溫下攪拌16 h。然後藉由添加50 mL NaHCO3 飽和水溶液來終止反應。使用CH2 Cl2 (100 mL × 3)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用5:1石油醚/EtOAc洗脫)純化以提供700 mg黃色固體形式之7-苄基-9,9-二氟-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 353 [M+H]+ 。 步驟 2 ： 9,9- 二氟 -3,7- 二氮雜雙環 [3.3.1] 壬烷 -3- 甲酸第三丁基酯
將7-苄基-9,9-二氟-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁基酯(460 mg, 1.24 mmol)及Pd/C (50 mg, 10%)於EtOAc (20 mL)中之混合物在50℃及氫氣氛下攪拌2 h。在冷卻至室溫之後，過濾掉固體且在真空下濃縮濾液。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19×250 mm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在7 min內20% B至45% B)純化殘餘物以提供淺黃色固體形式之9,9-二氟-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 263 [M+H]+ 。中間體 33. 5- 苄基 -2- 氧雜 -5,8- 二氮雜螺 [3.5] 壬烷 步驟 1. 2-(3-( 硝基甲基 ) 環氧丙烷 -3- 基胺基 ) 乙酸甲酯
在-80℃下，向環氧丙烷-3-酮(5 g, 69.38 mmol)、硝基甲烷(5.93 g, 97.15 mmol)及Et3 N (2.1 g, 13.28 mmol)於DCM (70 mL)中之溶液中添加MsCl (10 g, 87.30 mmol)於DCM (70 mL)中之溶液。在-80℃下再繼續攪拌90 min。單獨地，使甘胺酸乙酯鹽酸鹽(19.4 g, 139 mmol)及Et3 N (21 g, 139 mmol)於DCM (300 mL)中之溶液在攪拌及室溫下反應10 min。將所得溶液在-80℃下逐份添加至第一反應混合物中。在添加之後，將反應混合物在室溫下攪拌16 h。藉由添加100 mL水來終止反應且使用2 × 300 mL DCM萃取。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19×150 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在30 min內10% B至50% B)純化以提供黃色油狀物形式之2-(3-(硝基甲基)環氧丙烷-3-基胺基)乙酸甲酯。MS: (ESI, m/z): 205 [M+H]+ 。 步驟 2. 2- 氧雜 -5,8- 二氮雜螺 [3.5] 壬烷 -7- 酮
將2-(3-(硝基甲基)環氧丙烷-3-基胺基)乙酸甲酯(8.5 g, 41.63 mmol)及拉尼鎳(2 g)在MeOH (50 mL)中之懸浮液在室溫及氫氣氛下攪拌16 h。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19×150 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在30 min內10% B至80% B)純化以提供紅色固體形式之2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-酮。MS: (ESI, m/z): 143 [M+H]+ 。 步驟 3. 5- 苄基 -2- 氧雜 -5,8- 二氮雜螺 [3.5] 壬烷 -7- 酮
將2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-酮(4 g, 28.14 mmol)、(溴甲基)苯(12 g, 70.16 mmol)、Na2 CO3 (20.9 g, 197.18mmol)及NaI (10.5 g, 70.05 mmol)於乙腈(200 mL)中之混合物在80℃下攪拌3 h。在冷卻至室溫之後，在真空下去除溶劑。使用水(200 mL)稀釋殘餘物。使用DCM (2 × 300 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:10 MeOH/CH2 Cl2 洗脫)純化以提供黃色固體形式之5-苄基-2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-酮。MS: (ESI, m/z): 233 [M+H]+ 。 步驟 4. 5- 苄基 -2- 氧雜 -5,8- 二氮雜螺 [3.5] 壬烷 -7- 硫酮
將5-苄基-2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-酮(2.9 g, 11.86 mmol)及2,4-雙(4-甲氧基苯基)-2,4-二側硫基-1,3,2,4-二硫雜二磷雜環丁烷(勞森試劑(Lawesson reagent)) (2.44 g, 6.03 mmol)於THF (150 mL)中之溶液在室溫下攪拌16 h且然後在65℃下再攪拌3 h。然後將反應混合物傾倒至水(100 mL)中且使用DCM (2 × 150 mL)萃取。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供白色固體形式之5-苄基-2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-硫酮。MS: (ESI, m/z): 249 [M+H]+ 。 步驟 5. 5- 苄基 -2- 氧雜 -5,8- 二氮雜螺 [3.5] 壬烷
將5-苄基-2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-硫酮(300 mg, 1.15 mmol)及硼氫化鈉(412 mg, 11.19 mmol)於THF (15 mL)及MeOH (30 mL)中之溶液在室溫下攪拌2 h。使用水(15 mL)終止反應並在室溫下再攪拌14 h。使用DCM (2 × 50 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19×150 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在30 min內10% B至75% B)純化以提供白色固體形式之5-苄基-2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷。MS: (ESI, m/z): 219 [M+H]+ 。中間體 34. 2- 氧雜 -5,8- 二氮雜螺 [3.5] 壬烷 -8- 甲酸第三丁基酯 步驟 1. 5- 苄基 -2- 氧雜 -5,8- 二氮雜螺 [3.5] 壬烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將5-苄基-2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷(中間體31，200 mg, 0.82 mmol)、(Boc)2 O (200 mg, 0.92 mmol)、Et3 N (185 mg, 1.83 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(11 mg, 0.09 mmol)於DCM (4 mL)中之溶液在室溫下攪拌2.5 h。藉由添加水(20 mL)來終止反應且使用EtOAc (3 × 20 mL)萃取。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:4 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色油狀物形式之5-苄基-2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 319 [M+H]+ 。 步驟 2. 2- 氧雜 -5,8- 二氮雜螺 [3.5] 壬烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將5-苄基-2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-8-甲酸第三丁基酯(190 mg, 0.60 mmol)及Pd/C (20 mg, 10%)於EtOAc (10 mL)中之混合物在室溫下攪拌1 h。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液以提供黃色油狀物形式之2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 229 [M+H]+ 。中間體 35. N-(4- 甲氧基吡咯啶 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯 步驟 1. 3- 疊氮基 -4- 羥基吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
將6-氧雜-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸苄基酯(5 g, 22.81 mmol)、NaN3 (3 g, 46.15 mmol)、NH4 Cl (1.23 g, 22.99 mmol)於MeOH (60 mL)及水(10 mL)中之溶液在65℃下攪拌16 h。在冷卻至室溫之後，使用0.5N NaOH水溶液將pH值調整至7-8。使用DCM (2 × 150 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮以得到淺黃色固體形式之3-疊氮基-4-羥基吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 263 [M+H]+ 。 步驟 2. 3- 疊氮基 -4- 甲氧基吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
在＜ 10℃下，向3-疊氮基-4-羥基吡咯啶-1-甲酸苄基酯(4 g, 15.25 mmol)於DMF (40 mL)中之溶液中添加NaH (1.2 g，於油中之60%分散液)。將所得溶液在室溫下攪拌1 h。添加碘甲烷(2.8 mL, 44.98 mmol)且再繼續攪拌1 h。藉由添加水(50 mL)來終止反應。使用Et2 O (2 × 50 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:1 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供無色油狀物形式之3-疊氮基-4-甲氧基吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 277 [M+H]+ 。 步驟 3. 3- 胺基 -4- 甲氧基吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
將3-疊氮基-4-甲氧基吡咯啶-1-甲酸苄基酯(2 g, 7.24 mmol)及PPh3 (2.1 g, 8.01 mmol)於THF (50 mL)及水(5 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h，然後在50℃下再攪拌5 h。在冷卻至室溫之後，在真空下濃縮反應液。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19×50 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在30 min內10% B至80% B)純化以提供無色油狀物形式之3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 251 [M+H]+ 。 步驟 4. 3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 甲氧基吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
將3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-甲酸苄基酯(600 mg, 2.40 mmol)、Et3 N (457 mg, 4.52 mmol)及(Boc)2 O (786 mg, 3.60 mmol)於THF (12 mL)及水(12 mL)中之溶液在室溫下攪拌30 min。使用DCM (2 × 30 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:1 EtOAc/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到白色固體形式之3-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲氧基吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 351 [M+H]+ 。 步驟 5. N-(4- 甲氧基吡咯啶 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
將3-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲氧基吡咯啶-1-甲酸苄基酯(200 mg, 0.57 mmol)及Pd/C (200 mg, 10%)於EtOAc (10 mL)中之混合物在室溫及氫氣氛下攪拌3 h。過濾出固體並使用EtOAc (3×10mL)洗滌。在真空下濃縮濾液以得到白色固體形式之N-(4-甲氧基吡咯啶-3-基)胺基甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 217 [M+H]+ 。中間體 36. ((3S,4S)-4- 甲氧基吡咯啶 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯 步驟 1. (3S,4S)-3- 疊氮基 -4- 羥基吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
在30℃下，向6-氧雜-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸苄基酯(10 g, 44.70 mmol)及(1R,2R)-(-)-[1,2-環己烷二胺基-N N’-雙(3,5-二-第三丁基亞水楊基)]氯化鉻(III) (雅克布森鉻觸媒(Jacobsen’s Chromium catalyst)) (682 mg, 1.08 mmol)之混合物中添加疊氮基三甲基矽烷(6.52 g, 56.59 mmol)。將反應混合物在30℃下攪拌16 h。添加甲醇(30 mL)及三氟乙酸(0.5 mL)。將所得溶液在30℃下攪拌3 h，然後在真空下濃縮。使用100 mL水稀釋殘餘物且使用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:2 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供淺黃色油狀物形式之 (3S,4S)-3-疊氮基-4-羥基吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 263 [M+H]+ 。 步驟 2. (3S,4S)-3- 疊氮基 -4- 甲氧基吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
根據中間體35步驟2之程序自(3S,4S)-3-疊氮基-4-羥基吡咯啶-1-甲酸苄基酯開始來製備標題化合物。MS: (ESI, m/z): 277 [M+H]+ 。 步驟 3. (3S,4S)-3- 胺基 -4- 甲氧基吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
根據中間體35步驟3之程序自(3S,4S)-3-疊氮基-4-甲氧基吡咯啶-1-甲酸苄基酯開始來製備標題化合物。MS: (ESI, m/z): 251 [M+H]+ 。 步驟 4. (3S,4S)-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 甲氧基吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
根據中間體35步驟4之程序自(3S,4S)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-甲酸苄基酯開始來製備標題化合物。MS: (ESI, m/z): 351 [M+H]+ 。 步驟 5. ((3S,4S)-4- 甲氧基吡咯啶 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
根據中間體35步驟5之程序自(3S,4S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲氧基吡咯啶-1-甲酸苄基酯開始來製備標題化合物。MS: (ESI, m/z): 217 [M+H]+ 。中間體 37. 3-( 三氟甲基 ) 六氫吡啶 -3- 基胺基甲酸第三丁基酯 步驟 1 . 3-( 三氟甲基 ) 六氫吡啶 -1,3- 二甲酸 1- 苄基酯 3- 甲基酯
在-78℃下，向六氫吡啶-1,3-二甲酸1-苄基酯3-甲基酯(2.0 g, 7.14 mmol)於THF (60 mL)中之溶液中逐滴添加LDA (2.0 M於THF中) (10.8 mL, 21.66 mmol)。在將溶液在-78℃下攪拌30 min之後，添加S-(三氟甲基)二苯并噻吩鎓三氟甲烷磺酸鹽(4.35 g, 10.81 mmol)。在添加之後，使所得溶液在攪拌及-40℃下再反應2 h。然後藉由添加30 mL NH4 Cl飽和水溶液來終止反應。使用EtOAc (3 × 70 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:4 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色油狀物形式之3-(三氟甲基)六氫吡啶-1,3-二甲酸1-苄基酯3-甲基酯。MS: (ESI,m/z ): 346 [M+H]+ 。 步驟 2 . 1-(( 苄基氧基 ) 羰基 )-3-( 三氟甲基 ) 六氫吡啶 -3- 甲酸
將3-(三氟甲基)六氫吡啶-1,3-二甲酸1-苄基酯3-甲基酯(310 mg, 0.83 mmol)於MeOH (10 mL)及1N NaOH水溶液(2.7 mL, 2.70 mmol)中之溶液在50℃下攪拌2 h且然後在真空下濃縮。使用5 mL水稀釋殘餘物。使用6N HCl將溶液之pH值調整至3-4。藉由過濾收集固體以得到黃色固體形式之1-((苄基氧基)羰基)-3-(三氟甲基)六氫吡啶-3-甲酸。MS: (ESI,m/z ): 332 [M+H]+ 。 步驟 3. 3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3-( 三氟甲基 ) 六氫吡啶 -1- 甲酸苄基酯
將1-((苄基氧基)羰基)-3-(三氟甲基)六氫吡啶-3-甲酸(250 mg, 0.76 mmol)、Et3 N (229 mg, 2.26 mmol)及DPPA (415 mg, 1.51 mmol)於甲苯(8 mL)中之溶液在90℃下攪拌2 h。添加第三丁醇(279 mg, 3.76 mmol)且將反應混合物在90℃下再攪拌16 h。在冷卻至室溫之後，藉由添加水(20 mL)來終止反應且使用EtOAc (20 mL × 3)萃取。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:10至1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色固體形式之3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(三氟甲基)六氫吡啶-1-甲酸苄基酯。MS: (ESI,m/z ): 403 [M+H]+ 。 步驟 4 . (3-( 三氟甲基 ) 六氫吡啶 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
將3-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(三氟甲基)六氫吡啶-1-甲酸苄基酯(90 mg, 0.21 mmol)及Pd/C (10 mg, 10%)於EtOAc (5 mL)中之混合物在室溫及氫氣氛下攪拌1 h。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液以得到黃色油狀物形式之(3-(三氟甲基)六氫吡啶-3-基)胺基甲酸第三丁基酯。MS: (ESI,m/z ): 269 [M+H]+ 。中間體 38. (4-( 三氟甲氧基 ) 吡咯啶 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯 步驟 1. 3- 疊氮基 -4- 羥基吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
將6-氧雜-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸苄基酯(5 g, 22.81 mmol)、NaN3 (3 g, 46.15 mmol)、NH4 Cl (1.23 g, 22.99 mmol)於MeOH (60 mL)及水(10 mL)中之溶液在65℃下攪拌16 h。在冷卻至室溫之後，使用0.5N NaOH水溶液將pH值調整至7-8。使用DCM (2 × 150 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮以得到淺黃色固體形式之3-疊氮基-4-羥基吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 263 [M+H]+ 。 步驟 2. 3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 羥基吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
將3-疊氮基-4-羥基吡咯啶-1-甲酸苄基酯(6 g, 22.88 mmol)、1 N NaOH水溶液(46 mL, 46 mmol)、PMe3 (1M於THF中) (70 mL, 70 mmol)及(Boc)2 O (15.0 g, 68.73 mmol)於THF (228 mL)中之溶液在室溫下攪拌3 h。使用50 mL水稀釋反應混合物且使用CH2 Cl2 (3 × 200 mL)萃取。藉由無水Na2 SO4 乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；流速：50 mL/min；梯度：在40 min內0% B至70% B)純化以提供白色固體形式之3-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-羥基吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 337 [M+H]+ 。 步驟 3. 3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-4-( 三氟甲氧基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
將3-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-羥基吡咯啶-1-甲酸苄基酯(1 g, 2.97 mmol)、Selectfluor® (5.26 g, 14.85 mmol)、AgOTf (7.6 g, 29.7 mmol)、KF (1.72 g, 29.61 mmol)、2-氟吡啶(2.88 g, 29.66 mmol)及TMS-CF3 (4.22 g, 29.68 mmol)於EtOAc (14 mL)中之溶液在室溫下攪拌過夜。過濾出固體並使用CH2 Cl2 (3 × 50 mL)洗滌。在真空下濃縮合併之濾液並藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；流速：50 mL/min；梯度：在40 min內0% B至80% B)純化以得到黃色油狀物形式之3-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-(三氟甲氧基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 405 [M+H]+ 。 步驟 4. (4-( 三氟甲氧基 ) 吡咯啶 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
將3-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-(三氟甲氧基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(190 mg, 0.47 mmol)及Pd/C (20 mg, 10%)於EtOAc (10 mL)中之混合物在室溫及氫氣氛下攪拌2 h。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液以得到黃色油狀物形式之(4-(三氟甲氧基)吡咯啶-3-基)胺基甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 271 [M+H]+ 。中間體 39. 4-( 第三丁基二甲基矽基氧基 ) 六氫吡啶 步驟 1. 1- 苄基 -4-( 第三丁基二甲基矽基氧基 ) 六氫吡啶
將1-苄基六氫吡啶-4-醇(1 g, 5.23 mmol)、咪唑(712 mg, 10.46 mmol)及第三丁基二甲基矽基氯(867 mg, 5.75 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液在室溫下攪拌3 h且然後使用20 mL水稀釋。使用DCM (3 × 20 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供無色油狀物形式之1-苄基-4-(第三丁基二甲基矽基氧基)六氫吡啶。MS: (ESI, m/z): 306 [M+H]+ 。 步驟 2 . 4-( 第三丁基二甲基矽基氧基 ) 六氫吡啶
將1-苄基-4-(第三丁基二甲基矽基氧基)六氫吡啶(500 mg, 1.64 mmol)及Pd/C (50 mg, 10% )於EtOAc (20 mL)中之混合物在室溫及氫氣氛下攪拌2 h。過濾出固體且在真空下濃縮濾液以得到無水油狀物形式之4-(第三丁基二甲基矽基氧基)六氫吡啶。MS: (ESI, m/z): 216 [M+H]+ 。中間體 40 ： 3-(( 第三丁基二甲基矽基 ) 氧基 )-3- 甲基六氫吡啶
將3-甲基六氫吡啶-3-醇(500 mg, 3.91 mmol)、第三丁基二甲基矽基氯(497 mg, 3.30 mmol)及Et3 N (837 mg, 8.27 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液在室溫下攪拌24 h。藉由添加50 mL水來終止反應。使用DCM (3 × 40 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:20至1:5 EtOAc/石油醚之梯度洗脫)純化以提供無色油狀物形式之3-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-3-甲基六氫吡啶。MS: (ESI, m/z): 230 [M+H]+ 。中間體 41. 7- 羥基 -5- 氧雜 -2- 氮雜螺 [3.4] 辛烷 -2- 甲酸第三丁基酯 步驟 1 ： 3-(2- 乙氧基 -2- 側氧基亞乙基 ) 氮雜環丁烷 -1- 甲酸第三丁基酯
在0℃下，向2-(二乙氧基磷醯基)乙酸乙酯(26.2 g, 116.86 mmol)於THF (60 mL)中之溶液中逐份添加NaH (4.68 g, 117.01 mmol，於油中之60%分散液)。將所得溶液在室溫下攪拌30 min。在攪拌及0℃下，向反應混合物中添加3-側氧基氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯(10 g, 58.41 mmol)。將所得溶液在室溫下再攪拌30 min。然後藉由添加30 mL水/冰混合物來終止反應。使用DCM (3 × 40 mL)萃取所得溶液。藉由無水Na2 SO4 乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:5 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色油狀物形式之3-(2-乙氧基-2-側氧基亞乙基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 242 [M+H]+ 。 步驟 2 ： 7- 側氧基 -5- 氧雜 -2- 氮雜螺 [3.4] 辛烷 -2,8- 二甲酸 2-( 第三丁基 ) 酯 8- 乙基酯
在0℃下，向NaH (1.2 g, 30.00 mmol，於油中之60%分散液)於Et2 O (20 mL)中之溶液中添加2-羥基乙酸甲酯(2.69 g, 29.86 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌30 min且然後在真空下濃縮。使用20 mL DMSO稀釋殘餘物且添加3-(2-乙氧基-2-側氧基亞乙基)氮雜環丁烷-1-甲酸第三丁基酯(6 g, 24.87 mmol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。使用鹽酸(1N)將溶液之pH值調整至4-5。使用Et2 O (4 × 20 mL)萃取所得混合物。藉由無水Na2 SO4 乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:10至1:5 EtOAc/石油醚之梯度洗脫)純化以提供淺黃色固體形式之7-側氧基-5-氧雜-2-氮雜螺[3.4]辛烷-2,8-二甲酸2-(第三丁基)酯8-乙基酯。MS: (ESI, m/z): 300 [M+H]+ 。 步驟 3. 7- 側氧基 -5- 氧雜 -2- 氮雜螺 [3.4] 辛烷 -2- 甲酸第三丁基酯
將7-側氧基-5-氧雜-2-氮雜螺[3.4]辛烷-2,8-二甲酸2-(第三丁基)酯8-乙基酯(4 g, 13.4 mmol)及NaCl (1.33 g, 22.76 mmol)於DMSO/水(10:1, 20 mL)中之溶液在120℃下攪拌2 h。在冷卻至室溫之後，使用20 mL水終止反應。使用Et2 O (4 × 20 mL)萃取所得混合物。藉由無水Na2 SO4 乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供白色固體形式之7-側氧基-5-氧雜-2-氮雜螺[3.4]辛烷-2-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 228 [M+H]+ 。 步驟 4. 7- 羥基 -5- 氧雜 -2- 氮雜螺 [3.4] 辛烷 -2- 甲酸第三丁基酯
在0℃下，向7-側氧基-5-氧雜-2-氮雜螺[3.4]辛烷-2-甲酸第三丁基酯(1.1 g, 4.84 mmol)於THF (8 mL)中之溶液中逐份添加NaH (276 mg, 7.49 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌30 min。使用50 mL水/冰混合物終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取所得混合物。藉由無水Na2 SO4 乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(0.5% TFA), B: ACN；梯度：在35 min內0%至50% B)純化以提供黃色油狀物形式之7-羥基-5-氧雜-2-氮雜螺[3.4]辛烷-2-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 230 [M+H]+ 。中間體 42. (R)-(7- 氯 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 步驟 1. (4,6- 二氯吡啶 -3- 基 ) 甲醇
向使用惰性氮氣氛吹掃並維持該氣氛之500-mL 3頸圓底燒瓶中放置4,6-二氯菸鹼醛(8 g, 43.18 mmol)及乙醇(200 mL)。在0℃下逐份添加NaBH4 (5.2 g, 141.21 mmol)。然後，將所得溶液在25℃下攪拌2 h。然後藉由添加水(200 mL)來終止反應。使用DCM (3 × 300 mL)萃取所得混合物且合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:10乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之((4,6-二氯吡啶-3-基)甲醇。MS: (ESI, m/z): 178,180 [M+H]+ 。 步驟 2. 5-( 溴甲基 )-2,4- 二氯吡啶
向使用惰性氮氣氛吹掃並維持該氣氛之250-mL 3頸圓底燒瓶中放置(4,6-二氯吡啶-3-基)甲醇(5 g, 26.68 mmol)、DCM (100 mL)及PBr3 (7.7 g, 28.45 mmol)。將所得溶液在40℃下於油浴中攪拌30 min。在冷卻至25℃之後，然後藉由添加水(120 mL)來終止反應。使用DCM (2 × 150 mL)萃取所得混合物且合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:30乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之5-(溴甲基)-2,4-二氯吡啶。MS: (ESI, m/z): 240, 242, 244 [M+H]+ 。 步驟 3. (2R,5S)-2-((4,6- 二氯吡啶 -3- 基 ) 甲基 )-5- 異丙基 -3,6- 二甲氧基 -2,5- 二氫吡嗪
向使用惰性氮氣氛吹掃並維持該氣氛之500-mL 3頸圓底燒瓶中放置(2S)-3,6-二甲氧基-2-(丙烷-2-基)-2,5-二氫吡嗪(3 g, 15.47 mmol)及THF (200 mL)。將n-BuLi於正己烷(2.5 M) (9.8 mL, 24.5 mmol)中之溶液在-80℃下添加至液氮浴中。將所得溶液於-80℃下在液氮浴中攪拌30 min。然後，添加5-(溴甲基)-2,4-二氯吡啶(4.7 g, 18.53 mmol)於THF (10mL)中之溶液。使所得溶液在攪拌下再反應1 h，同時將液氮浴中之溫度維持於-80℃。然後藉由添加120 mL氯化銨(飽和水溶液)來終止反應。使用DCM (2 × 150 mL)萃取所得混合物且合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:10乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之(2R,5S)-2-[(4,6-二氯吡啶-3-基)甲基]-3,6-二甲氧基-5-(丙烷-2-基)-2,5-二氫吡嗪。MS: (ESI, m/z): 344, 346 [M+H]+ 。 步驟 4 . (2R)-2- 胺基 -3-(4,6- 二氯吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
向250-mL圓底燒瓶中放置(2R,5S)-2-[(4,6-二氯吡啶-3-基)甲基]-3,6-二甲氧基-5-(丙烷-2-基)-2,5-二氫吡嗪(3.5 g, 9.66 mmol)、鹽酸(0.3M) (70 mL)及ACN (80 mL)。將所得溶液在25℃下攪拌2 h。然後藉由添加100 mL碳酸氫鈉(飽和水溶液)來終止反應。使用2 × 150 mL DCM萃取所得混合物且合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮以得到無色油狀物形式之(2R)-2-胺基-3-(4,6-二氯吡啶-3-基)丙酸甲酯。MS: (ESI, m/z): 249, 251 [M+H]+ 。 步驟 5. (2R)-2- 胺基 -3-(4,6- 二氯吡啶 -3- 基 ) 丙烷 -1- 醇
向250-mL圓底燒瓶中放置(2R)-2-胺基-3-(4,6-二氯吡啶-3-基)丙酸甲酯(1.5 g, 5.72 mmol)及甲醇(50 mL)。在0℃下逐份添加NaBH4 (690 mg, 18.24 mmol)。將所得溶液在25℃下攪拌3 h。然後藉由添加水(20 mL)來終止反應。使用DCM (2 × 50 mL)萃取所得混合物且合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:10甲醇/DCM洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之(2R)-2-胺基-3-(4,6-二氯吡啶-3-基)丙烷-1-醇。MS: (ESI, m/z): 221, 223 [M+H]+ 。 步驟 6. (R)-7- 氯 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -3- 胺
向使用惰性氮氣氛吹掃並維持該氣氛之50-mL圓底燒瓶中放置(2R)-2-胺基-3-(4,6-二氯吡啶-3-基)丙烷-1-醇(1 g, 4.30 mmo)、氫化鈉(271 mg, 6.78 mmol, 60%)及DMSO (10 mL)。將所得溶液在50℃下於油浴中攪拌16 h。在冷卻至25℃之後，然後藉由添加水(20 mL)來終止反應。使用DCM (2 × 30 mL)萃取所得混合物且合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(0.1%甲酸), B: ACN；流速：50 mL/min；梯度：在30 min內0% B至30% B)純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分以得到白色固體形式之(R)-7-氯-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-3-胺。MS: (ESI, m/z): 185, 187 [M+H]+ 。 步驟 7. (R)-(7- 氯 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
向50-mL圓底燒瓶中放置(R)-7-氯-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-3-胺(500 mg, 2.57 mmol)、乙酸乙酯(15 mL, 153.23 mmol)、水(15 mL)、氯甲酸苄基酯(558 mg, 3.27 mmol)及碳酸鉀(751 mg, 5.43 mmol)。將所得混合物在25℃下攪拌30 min。使用3 × 20 mL乙酸乙酯萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:1乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之(R)-(7-氯-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-3-基)胺基甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 319, 321 [M+H]+ 。中間體 43. (R)-(7- 氯 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [2,3-b] 吡啶 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 步驟 1. 3-( 溴甲基 )-2,6- 二氯吡啶
向使用惰性氮氣氛吹掃並維持該氣氛之500-mL 3頸圓底燒瓶中放置(2,6-二氯吡啶-3-基)甲醇(10 g, 56.17 mmol)、DCM (200 mL)及PBr3 (15.3 g, 56.52 mmol)。將所得溶液在40℃下於油浴中攪拌30 min。使用NH4 HCO3 (飽和水溶液)將溶液之pH值調整至7。使用3 × 200 mL DCM萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:10至1:5乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到灰白色固體形式之3-(溴甲基)-2,6-二氯吡啶。MS: (ESI, m/z): 240, 242, 244 [M+H]+ 。 步驟 2. (2R,5S)-2-((2,6- 二氯吡啶 -3- 基 ) 甲基 )-5- 異丙基 -3,6- 二甲氧基 -2,5- 二氫吡嗪
向使用惰性氮氣氛吹掃並維持該氣氛之兩個250-mL 3頸圓底燒瓶中放置(2S)-3,6-二甲氧基-2-(丙烷-2-基)-2,5-二氫吡嗪(2 g, 10.86 mmol)及THF (15 mL)。隨後在-78℃下添加丁基鋰(2.5 M) (6.5 mL, 16.25 mmol)。將所得溶液攪拌30 min。向此溶液中添加3-(溴甲基)-2,6-二氯吡啶(2.62 g, 10.88 mmol)。將所得溶液在-78℃下再攪拌1 h。然後藉由添加5 mL NH4 HCO3 (飽和)來終止反應且使用10 mL H2 O稀釋混合物。合併兩個批次之所得混合物並使用3 × 50 mL乙酸乙酯萃取。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1/5乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供無色油狀物形式之(2R,5S)-2-((2,6-二氯吡啶-3-基)甲基)-5-異丙基-3,6-二甲氧基-2,5-二氫吡嗪。MS: (ESI, m/z): 344, 346 [M+H]+ 。 步驟 3 . (R)-2- 胺基 -3-(2,6- 二氯吡啶 -3- 基 ) 丙酸甲酯
向500-mL圓底燒瓶中放置(2R,5S)-2-((2,6-二氯吡啶-3-基)甲基)-5-異丙基-3,6-二甲氧基-2,5-二氫吡嗪(5.4 g, 16.35 mmol)、乙腈(100 mL)及鹽酸(0.3 N) (157 mL)。將所得溶液在24℃下攪拌1小時。在真空下去除溶劑且使用3×100 mL DCM萃取殘餘物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:5至1:1乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供/得到灰白色固體形式之(R)-2-胺基-3-(2,6-二氯吡啶-3-基)丙酸甲酯。MS: (ESI, m/z): 249, 251 [M+H]+ 。 步驟 4. (R)-2- 胺基 -3-(2,6- 二氯吡啶 -3- 基 ) 丙烷 -1- 醇
向250-mL圓底燒瓶中放置(R)-2-胺基-3-(2,6-二氯吡啶-3-基)丙酸甲酯(3.2 g, 12.85 mmol)、甲醇(15 mL)、THF (60 mL)及NaBH4 (1.46 g, 39.65 mmol)。將所得溶液在24℃下攪拌2 h。然後藉由添加5 mL水來終止反應。在真空下去除溶劑。使用50 mL水稀釋殘餘物。使用3 × 50 mL乙酸乙酯萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:20甲醇/DCM洗脫)純化殘餘物以提供灰白色固體形式之(R)-2-胺基-3-(2,6-二氯吡啶-3-基)丙烷-1-醇。MS: (ESI, m/z): 221, 223 [M+H]+ 。 步驟 5. (R)-7- 氯 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [2,3-b] 吡啶 -3- 胺
向帶有氫氣囊之250-mL圓底燒瓶中放置(R)-2-胺基-3-(2,6-二氯吡啶-3-基)丙烷-1-醇(2.6 g, 11.76 mmol)及DMSO (30 mL)。隨後在0℃下添加氫化鈉(706 mg, 29.42 mmol, 60%)。將所得溶液在24℃攪拌30 min且然後在50℃下攪拌過夜。在冷卻至25℃之後，然後藉由添加60 mL水來終止反應。使用3 × 60 mL乙酸乙酯萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；流速：50 mL/min；梯度：在30 min內0% B至30% B)純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分以得到灰白色固體形式之(R)-7-氯-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-3-胺。MS: (ESI, m/z): 185, 187 [M+H]+ 。 步驟 6. (R)-(7- 氯 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [2,3-b] 吡啶 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
向100-mL圓底燒瓶中放置(R)-7-氯-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-3-胺(1.3 g, 6.34 mmol)、乙酸乙酯(15 mL)、水(10 mL)、碳酸鉀(1.95 g, 14.11 mmol)及氯甲酸苄基酯(1.44 g, 8.44 mmol)。將所得溶液在25℃下攪拌2 h。然後藉由添加30 mL水來終止反應。使用3×30 mL乙酸乙酯萃取所得混合物併合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由在石油醚中進行再結晶來純化殘餘物。藉由過濾收集固體以得到白色固體形式之(R)-(7-氯-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-3-基)胺基甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 319, 321 [M+H]+ 。中間體 44. 4-[(3R)-3-[[( 苄基氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -7- 基 ]-4- 氟六氫吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯 步驟 1. 7- 溴 -4- 甲基 -3- 硝基 -3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 在-78℃下，向7-溴-3-硝基-2H-烯(2.2 g, 8.59 mmol)於THF (30 mL)中之溶液中添加CH3 MgBr (1 M於THF中) (13 mL, 13.00 mmol)。將所得溶液在-78℃下攪拌20 min。然後藉由添加20 mL NH4 Cl飽和水溶液來終止反應。使用3 × 50 mL乙酸乙酯萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用3:1石油醚/乙酸乙酯洗脫)純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之7-溴-4-甲基-3-硝基-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃。GCMS: (ESI, m/z): 271, 273 [M+H]+ 。 步驟 2 . 7- 溴 -4- 甲基 -3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -3- 胺 向BH3 -THF (1M) (40 mL, 40.00 mmol)及NaBH4 (1.26 g, 33.30 mmol)於THF (40 mL)中之溶液中添加7-溴-4-甲基-3-硝基-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃(900 mg, 3.31 mmol)。將所得混合物在75℃下於密封管中攪拌16 h。然後添加甲醇(40 mL)且將反應混合物在80℃下攪拌6 h。在冷卻至25℃之後，在真空下去除溶劑。使用50 mL冰/水稀釋殘餘物。使用3 × 50 mL乙酸乙酯萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(0.05% TFA), B: ACN；梯度：在45 min內0% B至40%)純化殘餘物以提供白色固體形式之7-溴-4-甲基-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-胺。MS: (ESI, m/z): 242, 244 [M+H]+ 。 步驟 3 . N-(7- 溴 -4- 甲基 -3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 將7-溴-4-甲基-3,4-二氫- 2H-1-苯并吡喃-3-胺(500 mg, 2.07 mmol)及CbzCl (423 mg, 2.48 mmol)於乙酸乙酯(8 mL)中之溶液及碳酸鉀(567 mg, 4.10 mmol)於水(8 mL)中之溶液在25℃下攪拌1 h。使用20 mL水稀釋所得溶液。使用3 × 20 mL乙酸乙酯萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用3:1石油醚/乙酸乙酯洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之N-(7-溴-4-甲基-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-基)胺基甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 376, 378 [M+H]+ 。中間體 45. 6-(( 第三丁基二甲基矽基 ) 氧基 )-1,4- 二氮雜環庚烷 -1- 甲酸第三丁基酯 步驟 1 . 1,4- 二苄基 -1,4- 二氮雜環庚烷 -6- 醇 將1,3-二溴丙烷-2-醇(12.37 g, 56.77 mmol)、苄基(2-(苄基胺基)乙基)胺(13.56 g, 56.42 mmol)及Et3 N (17.17 g, 169.68 mmol)於甲苯(50 mL)中之溶液在120℃下攪拌48 h。在冷卻至25℃之後，然後藉由添加100 mL水來終止反應。使用2 × 100 mL乙酸乙酯萃取所得混合物且合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:2乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之1,4-二苄基-1,4-二氮雜環庚烷-6-醇。MS: (ESI, m/z): 297 [M+H]+ 。 步驟 2. 1,4- 二苄基 -6-(( 第三丁基二甲基矽基 ) 氧基 )-1,4- 二氮雜環庚烷 將1,4-二苄基-1,4-二氮雜環庚烷-6-醇(2.0 g, 6.61 mmol)、咪唑(900 mg, 13.22 mmol)及TBS-Cl (1.2 g, 7.96 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液在25℃下攪拌16 h。然後藉由添加50 mL水來終止反應。使用2 × 50 mL乙酸乙酯萃取所得混合物且合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:5乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之1,4-二苄基-6-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-1,4-二氮雜環庚烷。MS: (ESI, m/z): 411 [M+H]+ 。 步驟 3. 6-(( 第三丁基二甲基矽基 ) 氧基 )-1,4- 二氮雜環庚烷 將1,4-二苄基-6-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-1,4-二氮雜環庚烷(1.5 g, 3.47 mmol)及碳載Pd(OH)2 (20 mg, 10%)於乙酸乙酯(10 mL)中之混合物在氫氣氛及20℃下攪拌28 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以提供無色油狀物形式之6-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-1,4-二氮雜環庚烷。MS: (ESI, m/z): 231 [M+H]+ 。 步驟 4. 6-(( 第三丁基二甲基矽基 ) 氧基 )-1,4- 二氮雜環庚烷 -1- 甲酸第三丁基酯 將6-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-1,4-二氮雜環庚烷(1.2 g, 4.95 mmol)、Boc2 O (700 mg, 3.21 mmol)及三乙胺(500 mg, 4.94 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液在-40℃下於乾冰/乙醇浴中攪拌2 h並在20℃下再攪拌1 h。然後藉由添加40 mL水來終止反應。使用2 × 40 mL乙酸乙酯萃取所得混合物且合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:10甲醇/DCM洗脫)純化殘餘物以提供無色油狀物形式之6-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 331 [M+H]+ 。中間體 46. 6-(( 第三丁基二甲基矽基 ) 氧基 )-1,4- 二氮雜環庚烷 -1- 甲酸第三丁基酯 向2-(羥甲基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(1 g, 4.39 mmol)及三乙胺(1.53 mL, 10,98 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中添加第三丁基(氯)二甲基矽烷(693 mg, 4.60 mmol)。將所得溶液在20℃下攪拌過夜。然後藉由添加20 mL水來終止反應。使用3 × 20 mL DCM萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用20:1乙基DCM/甲醇洗脫)純化殘餘物以提供淺色至無色油狀物形式之6-((第三丁基二甲基矽基)氧基)-1,4-二氮雜環庚烷-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 331 [M+H]+ 。中間體 47-1. N-[2-[( 三氟甲烷 ) 磺醯基氧基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯 中間體 47-2. N-[(6S)-2-( 三氟甲烷磺醯基氧基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯 中間體 47-3. N-[(6R)-2-( 三氟甲烷磺醯基氧基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯 方法 1. 對掌性分離 步驟 1 . 7',8'- 二氫 -5'H- 螺 [1,3- 二氧雜環戊烷 -2,6'- 喹啉 ]-2'- 醇 將1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-酮(50.0 g, 320 mmol)、丙-2-炔酸乙酯(68 mL, 672 mmol)及NH3 於MeOH中之溶液(230 mL, 7M)於異丙醇(1.3 L)中之溶液在130℃下攪拌14 h。將反應混合物冷卻至20℃。在真空下去除溶劑。藉由過濾收集固體。使用2 × 30 mL石油醚洗滌濾餅並在真空下乾燥以得到灰白色固體形式之7',8'-二氫-5'H-螺[1,3-二氧雜環戊烷-2,6'-喹啉]-2'-醇。MS (ESI, m/z): 208 [M+H]+ 。 步驟 2 . 三氟甲烷磺酸 7',8'- 二氫 -5'H- 螺 [1,3- 二氧雜環戊烷 -2,6'- 喹啉 ]-2'- 基酯 在10℃下，向7',8'-二氫-5'H-螺[1,3-二氧雜環戊烷-2,6'-喹啉]-2'-醇(24.0 g, 116 mmol)及三乙胺(64.4 mL, 464 mmol)於DCM (500 mL)中之溶液中添加三氟甲烷磺酸酐(58.4 mL, 347 mmol)於DCM (100 mL)中之溶液。將所得溶液在20℃下攪拌1 h。在真空下濃縮混合物。藉由矽膠層析(使用3:1乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之三氟甲烷磺酸7',8'-二氫-5'H-螺[1,3-二氧雜環戊烷-2,6'-喹啉]-2'-基酯。MS (ESI, m/z): 340 [M+H]+ 。 步驟 3 . 三氟甲烷磺酸 6- 側氧基 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基酯 將三氟甲烷磺酸7',8'-二氫-5'H-螺[1,3-二氧雜環戊烷-2,6'-喹啉]-2'-基酯(35.0 g, 103 mmol)及鹽酸(206 mL, 1N)於丙酮(300 mL)中之溶液在75℃下攪拌1 h。將混合物冷卻至20℃。在真空下濃縮丙酮。使用NaHCO3 (飽和水溶液)將殘餘物之pH值調整至7-8。使用3 × 100 mL DCM萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由使用乙酸乙酯及石油醚(10:1)之100 mL混合溶劑進行再結晶來純化殘餘物，以得到灰白色固體形式之三氟甲烷磺酸6-側氧基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基酯。MS (ESI, m/z): 296 [M+H]+ 。 步驟 4 . 三氟甲烷磺酸 6- 胺基 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基酯 將三氟甲烷磺酸6-側氧基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基酯(16.0 g, 54.2 mmol)及NH4 OAc (50.1 g, 650 mmol)於甲醇(250 mL)中之混合物在20℃下攪拌1 h。在10℃下逐份添加NaBH3 CN (4.10 g, 65.2 mmol)。使所得混合物在20℃下反應13 h。然後藉由添加50 mL水/冰來終止反應。在真空下濃縮溶劑。使用100 mL鹽酸(1N)稀釋殘餘物。使用2 × 100 mL DCM萃取所得混合物。使用Na2 CO3 (飽和水溶液)將水相之pH值調整至10。使用4 × 100 mL DCM萃取水相。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮，以得到黃色油狀物形式之三氟甲烷磺酸6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基酯。MS (ESI, m/z): 297 [M+H]+ 。 步驟 5 . N-[2-[( 三氟甲烷 ) 磺醯基氧基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯 將三氟甲烷磺酸6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基酯(12.0 g, 40.5mmol)、碳酸鉀(14.0 g, 101 mmol)及CbzCl (7.4 mL, 52.8 mmol)於乙酸乙酯(100 mL)中之混合物在20℃下攪拌2 h。然後藉由添加100 mL水/冰來終止反應。使用3 × 100 mL乙酸乙酯萃取混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由使用乙酸乙酯及石油醚(10:1)之80 mL混合溶劑進行再結晶來純化殘餘物，以得到灰白色固體形式之N-[2-[(三氟甲烷)磺醯基氧基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯。MS (ESI, m/z): 431 [M+H]+ 。 步驟 6 . N-[(6S)-2-( 三氟甲烷磺醯基氧基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯及 N-[(6R)-2-( 三氟甲烷磺醯基氧基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯 藉由SFC (管柱：Chiralpak AD-H SFC, 5 × 25 cm, 5 µm；移動相A：CO2 : 55%及B: MeOH: 45%；流速：150 mL/min)分離外消旋N-[2-(三氟甲烷磺醯基氧基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(中間體 47-1 ) (7.00 g, 16.3 mmol)。收集第一洗脫異構體(RT = 4.23 min)並在真空下濃縮以得到灰白色固體形式之N-[(6S)-2-(三氟甲烷磺醯基氧基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(中間體 47-2 )。且收集第二洗脫異構體(RT= 5.16 min)並在真空下濃縮以得到灰白色固體形式之N-[(6R)-2-(三氟甲烷磺醯基氧基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(中間體 47-3 )。兩種異構體之MS (ESI, m/z)：431 [M+H]+ 。中間體 47-2. N-[(6S)-2-( 三氟甲烷磺醯基氧基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯 方法 2. 對掌性拆分 步驟 1 . (S)- 三氟甲烷磺酸 6- 胺基 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基酯 將三氟甲烷磺酸6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基酯(183 g, 525.65 mmol)及L-(-)-苦杏仁酸(39.99 g, 262.83 mmol)於EtOH (1830 mL)中之溶液在70℃下攪拌2 h。將混合物緩慢冷卻至25℃並攪拌過夜。藉由過濾收集所形成沈澱物並在真空下乾燥以提供白色固體形式之對掌性鹽。將鹽溶於H2 O (350 mL)中且使用NaOH (1 N水溶液)將水相之pH值調整至12 - 14。使用EtOAc (500 mL)萃取水相。藉由Na2 SO4 乾燥有機層，過濾並在真空下濃縮以提供黃色油狀物形式之對掌性胺(S)-三氟甲烷磺酸6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基酯之游離鹼。MS (ESI, m/z): 297 [M+H]+ 。1 H NMR (DMSO-d6 , 400 mHz) δ(ppm): 7.79 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.25 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 3.14-3.11 (m, 1H), 2.97-2.81 (m, 3H), 2.54-2.52 (m, 1H), 2.61-2.58 (m, 2H), 1.64-1.59 (m, 1H)。 步驟 2 . N-[(6S)-2-( 三氟甲烷磺醯基氧基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯 在0℃下，向(S)-三氟甲烷磺酸6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基酯(48.0 g, 162.02 mmol)及K2 CO3 (55.98 g, 405.04 mmol)於EtOAc (480 mL)中之溶液中逐滴添加CbzCl (35.93 g, 210.62 mmol, 29.94 mL)。將混合物在20℃下攪拌30 min。然後藉由水/冰(150 mL)來終止反應。使用乙酸乙酯(350 mL)萃取混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥有機層，過濾並在真空下濃縮。使用石油醚(200 mL)在20℃下研磨粗製物。藉由過濾收集所得沈澱物並在真空下乾燥以提供淺粉紅色固體形式之N-[(6S)-2-(三氟甲烷磺醯基氧基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯。MS (ESI, m/z): 431 [M+H]+ 。1 H NMR (DMSO-d6 , 400 mHz) δ(ppm): 7.82 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.49 (m, 1H), 7.37-7.28 (m, 6H), 5.04 (s, 2H), 3.82 (m, 1H), 3.08 (dd,J = 16.8 Hz, 4.8 Hz, 1H), 2.91-2.88 (m, 2H), 2.76-2.72 (m, 1H), 2.02-2.00 (m, 1H), 1.83-1.75 (m, 1H)。 使用標準化學操作及類似於用於製備中間體47-1之程序的程序來製備表7中之下列中間體。表 7 ： 1 程序注意事項 ： 在步驟1中，所用酮係6,9-二氧雜二螺[2.1.45.33 ]十二烷-12-酮，其係藉由下列方法製得：將(2-氯乙基)二甲基碘化鋶(88.0 g, 347 mmol)經4 h緩慢添加至1,4-二氧雜螺[4.5]癸烷-8-酮(60.0 g, 384 mmol)及t-BuOK (88.0 g, 784 mmol)於t-BuOH (1.50 L)中之溶液中。將所得溶液在25℃下攪拌1 h。過濾固體。在真空下濃縮濾液。使用水(400 mL)稀釋殘餘物。使用DCM (3 × 400 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。經由反相層析純化殘餘物以提供淺黃色油狀物形式之6,9-二氧雜二螺[2.1.45.33 ]十二烷-12-酮。MS (ESI, m/z): 183 [M+H]+ 。中間體 48-1. 順式 -N-[4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯； 中間體 48-2. N-[(3R,4R)-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯及 中間體 48-3. (3R,4R)-3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯 步驟 1 . 順式 -3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4-( 羥甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯 將順式-3-胺基-4-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(2.00 g, 7.99 mmol)、Et3 N (2.13 mL, 23.7 mmol)及(Boc)2 O (2.20 g, 10.1 mmol)於THF (40 mL)及水(20 mL)中之溶液在20℃下攪拌2 h。在真空下去除溶劑。使用水(20 mL)稀釋殘餘物。使用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取所得混合物，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到灰白色固體形式之順式-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS (ESI, m/z): 351 [M+H]+ 。 步驟 2 . 順式 -3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯 將四氟硼酸三甲基側氧基氧鎓(1.50 g, 10.4 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液添加至1,8-雙(二甲基胺基)萘(2.20 g, 10.3 mmol)及順式-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(2.20 g, 6.09 mmol)於DCM (100 mL)中之攪拌溶液中。將所得混合物在40℃下攪拌3 h。使用HCl (3N，水溶液)將混合物之pH調整至4-6。使用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取所得混合物，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:1乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之順式-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS (ESI, m/z): 365 [M+H]+ 。 步驟 3 . 順式 -N-[4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 將順式-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(1.00 g, 2.74 mmol)及碳載鈀(1.00 g, 10%)於乙酸乙酯(50 mL)中之混合物在20℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌1 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以得到黃色油狀物形式之順式-N-[4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(中間體 48-1 ) (粗製物)。MS (ESI, m/z): 231 [M+H]+ 。 步驟 4 . N-[(3R,4R)-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 藉由SFC (管柱：Chiralpak IA-SFC, 5 × 25 cm, 5 µm；移動相A：CO2 : 70%及B: MeOH (含有於MeOH中之2 mM NH3 ): 30%；流速：150 mL/min)將外消旋順式-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯分離成其對映異構體。收集第一洗脫異構體(RT = 3.91 min)並在真空下濃縮以得到黃色固體形式之(3S,4S)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。收集第二洗脫異構體(RT = 5.04 min)並在真空下濃縮以得到黃色固體形式之(3R,4R)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(中間體 48-3 )。MS (ESI, m/z): 365 [M+H]+ 。 將(3R,4R)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(中間體 48-3 ) (0.800 g, 2.20 mmol)及碳載鈀(0.800 g, 10%)於乙酸乙酯(30 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌1 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以得到黃色油狀物形式之N-[(3R,4R)-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(中間體 48-2 ) (粗製物)。MS (ESI, m/z): 231 [M+H]+ 。中間體 48-3. (3R,4R)-3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯 方法 2. 步驟 1 . N-(2,2- 二甲氧基乙基 ) 胺基甲酸苄基酯 向2,2-二甲氧基乙烷-1-胺(1600 g, 15.22 mol)於甲苯(8 L)中之溶液中添加NaOH (858 g, 21.45 mol)於水(4.42 L)中之溶液。隨後在攪拌及＜20℃下逐滴添加CbzCl (2598 g, 15.23 mol)。將所得溶液在室溫下攪拌4 h。分離有機層並使用3×5 L鹽水洗滌。藉由無水硫酸鈉乾燥有機層並在真空下濃縮以提供白色固體形式之N-(2,2-二甲氧基乙基)胺基甲酸苄基酯。 步驟 2 . N-(2,2- 二甲氧基乙基 )-N-( 丙 -2- 烯 -1- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 在攪拌及室溫下，向N-(2,2-二甲氧基乙基)胺基甲酸苄基酯(1700 g, 7.10 mol)、KOH (1755 g, 31.28 mol)及苄基三乙基氯化銨(32.37g, 142.1 mmol)於甲苯(7.82 L)中之溶液中逐滴添加3-溴丙-1-烯(1117.4 g, 9.24 mol)。將所得溶液在室溫下攪拌24 h。由此平行運行兩個批次。然後藉由添加10 L水來終止反應。使用2×7 L甲苯萃取所得溶液併合併有機層。使用2×10 L鹽水洗滌有機相。藉由無水硫酸鈉乾燥混合物並在真空下濃縮以提供淺黃色油狀物形式之N-(2,2-二甲氧基乙基)-N-(丙-2-烯-1-基)胺基甲酸苄基酯。 步驟 3 . N-(2- 側氧基乙基 )-N-( 丙 -2- 烯 -1- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 將N-(2,2-二甲氧基乙基)-N-(丙-2-烯-1-基)胺基甲酸苄基酯(3900 g, 13.96 mol)於88%甲酸(5460 mL)中之溶液在室溫下攪拌過夜。在真空下濃縮所得混合物。使用20 L乙酸乙酯稀釋殘餘物，使用4×10 L鹽水洗滌。藉由無水硫酸鈉乾燥有機相並在真空下濃縮以提供褐色油狀物形式之N-(2-側氧基乙基)-N-(丙-2-烯-1-基)胺基甲酸苄基酯。 步驟 4 . N-[2-( 羥基亞胺基 ) 乙基 ]-N-( 丙 -2- 烯 -1- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 向N-(2-側氧基乙基)-N-(丙-2-烯-1-基)胺基甲酸苄基酯(1700 g, 7.29 mol)及NH2 OH-HCl (638 g, 9.18 mol)於ACN (9.52 L)中之溶液中添加NaOAc (669 g, 8.16 mol)於H2 O (4.96 L)中之溶液。將所得溶液在室溫下攪拌20 h。由此平行運行兩個批次。在真空下濃縮所得混合物並使用3×10 L乙酸乙酯萃取，且合併有機層。使用3×5 L鹽水洗滌有機相，藉由無水硫酸鈉乾燥並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:9 EtOAc/石油醚洗脫)純化粗產物以提供無色油狀物形式之N-[2-(羥基亞胺基)乙基]-N-(丙-2-烯-1-基)胺基甲酸苄基酯。 步驟 5 . 順式 -3- 胺基 -4-( 羥甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯 將N-[2-(羥基亞胺基)乙基]-N-(丙-2-烯-1-基)胺基甲酸苄基酯(1200 g, 4.83 mol)及二甲苯(6 L)之溶液在130℃下攪拌過夜。將混合物冷卻至室溫。將HOAc (6 L)添加至混合物中。然後在15℃下將Zn (1200 g, 18.35 mol)添加至混合物中。將所得溶液在室溫下於水浴中攪拌過夜。由此平行運行兩個批次。合併各批次並過濾。使用二甲苯洗滌濾餅。使用20 L水稀釋合併之濾液。使用二甲苯(4×5 L)萃取混合物。在真空下濃縮水相。使用飽和碳酸鈉將殘餘物之pH值調整至9-10。過濾出固體。在真空下濃縮濾液。使用5 L THF萃取殘餘物並在真空下濃縮以提供褐色油狀物形式之順式-3-胺基-4-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。 步驟 6 . 順式 -3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4-( 羥甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯 在攪拌及室溫下，向順式-3-胺基-4-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(900 g, 3.60 mol)及三乙胺(728 g, 7.19 mol)於甲醇(9 L)中之溶液中逐滴添加二碳酸二-第三丁基酯(863 g, 3.95 mol)。將所得溶液在室溫下攪拌過夜。在真空下濃縮所得混合物。藉由矽膠層析(使用2:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化粗產物以提供白色固體形式之順式-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。 步驟 7 . 順式 -3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯 向順式-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(羥甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(600 g, 1.71 mol)及2,6-二-第三丁基-4-甲基吡啶(1406 g, 6.85 mol)於DCM (12 L)中之混合物中添加四氟硼酸三甲基氧鎓(506.5 g, 3.42 mol)。將反應液在室溫下攪拌過夜。在真空下濃縮所得溶液。藉由矽膠層析(使用3:7 EtOAc/石油醚洗脫)純化粗產物以提供白色固體形式之順式-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。 步驟 8 . (3R,4R)-3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯 藉由SFC (管柱：Lux 5µm Amylose-1, 5×25 cm, 5 µm；移動相A：CO2 : 50%，及B: MeOH: 50%；流速：160 mL/min)將外消旋順式-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯分離成其對映異構體。收集第一洗脫異構體(RT = 4.2 min)並在真空下濃縮以得到白色固體形式之(3S,4S)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS (ESI, m/z): 387 [M+Na]+ 。1 H NMR (CDCl3 , 300 MHz) δ(ppm): 7.31-7.44 (m, 5H), 5.14-5.36 (m, 3H), 4.28 (s, 1H), 3.46-3.70 (m, 4H), 3.32-3.46 (m, 5H), 2.54 (s, 1H), 1.47 (s, 9H)。 收集第二洗脫異構體(RT = 5.7 min)並在真空下濃縮以得到白色固體形式之(3R,4R)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(中間體 48-3 )。MS (ESI, m/z): 387 [M+Na]+ 。1 H NMR (CDCl3 , 300 MHz) δ(ppm): 7.33-7.40 (m, 5H), 5.09-5.40 (m, 3H), 4.28 (s, 1H), 3.46-3.73 (m, 4H), 3.32-3.46 (m, 5H), 2.53-5.55 (m, 1H), 1.46 (s, 9H)。中間體 49. ((3S,4S)-4-( 甲氧基 -d3) 吡咯啶 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯 步驟 1 . (3S,4S)-3- 疊氮基 -4-( 甲氧基 -d3) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯 向(3S,4S)-3-疊氮基-4-羥基吡咯啶-1-甲酸苄基酯(202.7 mg, 0.773 mmol)於無水DMF (5 mL)中之溶液中添加NaH (於礦物油中之60%分散液，37.1 mg, 0.927 mmol)。將反應液在室溫下攪拌1 h。然後，添加碘甲烷-d3 (0.058 ml, 0.927 mmol)且將反應液在22℃下攪拌6 h。使用5 mL EtOAc稀釋反應液並使用2 × 3mL H2 O洗滌。分離有機層，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾，並濃縮以提供黃色油狀物形式之粗製(3S,4S)-3-疊氮基-4-(甲氧基-d3)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 280 [M+H]+ 。 步驟 2 . (3S,4S)-3- 胺基 -4-( 甲氧基 -d3) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯 將(3S,4S)-3-疊氮基-4-(甲氧基-d3)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(215.8 mg, 0.773 mmol)及三苯基膦(223 mg, 0.850 mmol)於THF (1.405 mL)及水(0.14 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。然後將反應液在50℃下加熱5 h。在冷卻至室溫之後，在真空下濃縮反應液。藉由製備型HPLC (管柱：Waters XBridge Prep C18 OBD 5µm, 19×50 mm；移動相梯度：在8 min內0%至35% ACN (0.1%甲酸)；流速：23 mL/min)純化殘餘物以提供無色油狀物形式之(3S,4S)-3-胺基-4-(甲氧基-d3)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 254 [M+H]+ 。 步驟 3 . (3S,4S)-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-4-( 甲氧基 -d3) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯 將(3S,4S)-3-胺基-4-(甲氧基-d3)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(217 mg, 0.858 mmol)、Et3 N (225 µl, 1.61 mmol)及Boc2 O (0.299 mL, 1.29 mmol)於THF (1.43 mL)及水(1.43 mL)中之溶液在室溫下攪拌30 min。使用2 × 30 mL DCM萃取所得混合物。藉由無水Na2 SO4 乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮以提供無色油狀物形式之(3S,4S)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-(甲氧基-d3)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 354 [M+H]+ 。 步驟 4 . ((3S,4S)-4-( 甲氧基 -d3) 吡咯啶 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯 將3-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲氧基吡咯啶-1-甲酸苄基酯(200 mg, 0.57 mmol)及Pd/C (200 mg, 10%)於EtOAc (10 mL)中之混合物在室溫及氫氣氛下攪拌3 h。過濾出固體並使用3 × 10 mL EtOAc洗滌。在真空下濃縮濾液以提供無色油狀物形式之N-(4-甲氧基吡咯啶-3-基)胺基甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 220 [M+H]+ 。1 H NMR (CDCl3 , 300 MHz) δ(ppm): 8.04-8.26 (m, 1H), 4.41-4.86 (m, 1H), 3.93-4.22 (m, 1H), 3.09-3.92 (m, 3H), 1.46 (s, 9H)。中間體 50. N-(7- 氯 -6,8- 二氟 -3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 步驟 1 . 4- 氯 -3,5- 二氟 -2- 羥基苯甲醛 將3-氯-2,4-二氟苯酚(4.00 g, 23.6 mmol)及HMTA (6.60 g, 47.2 mmol)於TFA (60 mL)中之溶液在100℃下攪拌3h。在冷卻至0℃之後，將濃H2 SO4 (10 mL)及H2 O (50 mL)在0℃下添加至混合物中。將混合物在20℃下攪拌2h且然後使用H2 O (40 mL)稀釋。使用二丁胺將混合物之pH值調整至7-8。使用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1: 5乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供灰白色固體形式之4-氯-3,5-二氟-2-羥基苯甲醛。GCMS (ESI, m/z): 192,194 [M+H]+ 。 步驟 2 . 7- 氯 -6,8- 二氟 -3- 硝基 -2H- 烯 在125℃下，經由注射幫浦使用0.5 mL/h之流速將2-硝基乙烷-1-醇(3.72 mL, 51.9 mmol)添加至4-氯-3,5-二氟-2-羥基苯甲醛(1.50 g, 7.77 mmol)、二丁胺(0.659 mL, 3.89 mmol)及鄰苯二甲酸酐(2.20 g, 14.8 mmol)於甲苯(80 mL)中之攪拌溶液中。將所得溶液在125℃下回流16h。在冷卻至20℃之後，在真空下濃縮所得混合物。藉由矽膠層析(使用1:10乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到黃色固體形式之7-氯-6,8-二氟-3-硝基-2H-烯。MS (ESI, m/z): 248, 250 [M+H]+ 。 步驟 3 . 7- 氯 -8- 氟 -3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -3- 胺 將7-氯-6,8-二氟-3-硝基-2H-烯(1.30 g, 5.25 mmol)、BH3 (40 mL, 1M於THF中)及NaBH4 (399 mg, 10.5 mmol)之混合物在65℃下攪拌16h。將MeOH (80 mL)在＜10℃下緩慢添加至混合物中。將所得溶液在80℃下攪拌8h。在冷卻至20℃之後，在真空下濃縮所得混合物。經由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )及B: ACN (在20 min內5 %至75%))純化殘餘物以提供灰白色固體形式之7-氯-8-氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-胺。MS (ESI, m/z): 220, 222 [M+H]+ 。 步驟 4 . N-(7- 氯 -6,8- 二氟 -3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 在＜10℃下，將CbzCl (0.500 mL, 3.55 mmol)添加至7-氯-6,8-二氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-胺(650 mg, 2.96 mmol)及碳酸鉀(822 mg, 5.92 mmol)於乙酸乙酯(20 mL)及水(20 mL)中之混合物中。然後將所得溶液在25℃下攪拌1h並使用水(30 mL)稀釋。使用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:5乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供灰白色固體形式之N-(7-氯-6,8-二氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-基)胺基甲酸苄基酯。MS (ESI, m/z): 354, 356 [M+H]+ 。中間體 51-1. N-[(3R,4S)-4-( 二氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 中間體 51-2. N-[(3S,4R)-4-( 二氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 步驟 1. 4,4- 二氟 -3- 羥基丁酸乙酯 在0℃下，將NaBH4 (34.2 g, 902 mmol)添加至4,4-二氟-3-側氧基丁酸乙酯(100 g, 602 mmol)於甲苯(1 L)中之攪拌溶液中。將所得混合物在0℃下攪拌2h，且然後升溫至最高25℃並攪拌16h。使用水(400 mL)終止反應。使用乙酸乙酯(2 × 1 L)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮以提供淺黃色油狀物形式之4,4-二氟-3-羥基丁酸乙酯。GCMS (ESI, m/z): 168 [M+H]+ 。 步驟 2. (2E)-4,4- 二氟丁 -2- 烯酸乙酯 在0℃下，向4,4-二氟-3-羥基丁酸乙酯(40.0 g, 238 mmol)及Et3 N (99.0 mL, 712 mmol)於DCM (300 mL)中之溶液中逐滴添加MsCl (28.0 mL, 244 mmol)。將所得混合物升溫至25℃並攪拌16h。使用水(500 mL)終止反應。使用DCM (2 × 500 mL)萃取所得混合物。合併有機層，使用鹽水(500 mL)洗滌，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:10乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供黃綠色油狀物形式之(2E)-4,4-二氟丁-2-烯酸乙酯。GCMS (ESI, m/z): 150 [M+H]+ 。 步驟 3 . 反式 -1- 苄基 -4-( 二氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 甲酸乙酯 在0℃下經2 min，向(2E)-4,4-二氟丁-2-烯酸乙酯(12.0 g, 79.9 mmol)及苄基(甲氧基甲基)[(三甲基矽基)甲基]胺(30.7 mL, 120 mmol)於DCM (250 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加TFA (0.59 mL, 5.21 mmol)於DCM(20 mL)中之溶液。將所得混合物升溫至25℃並攪拌14h。藉由添加水(500 mL)來終止反應。使用DCM (2 × 300 mL)萃取所得混合物。合併有機層，使用碳酸氫鈉溶液(飽和，300 mL)洗滌，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:10至1:5乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分以提供黃色油狀物形式之反式-1-苄基-4-(二氟甲基)吡咯啶-3-甲酸乙酯。MS (ESI, m/z): 284 [M+H]+ 。 步驟 4. 反式 -4-( 二氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 甲酸乙酯 將反式-1-苄基-4-(二氟甲基)吡咯啶-3-甲酸乙酯(5.50 g, 19.4 mmol)及Pd(OH)2 /C (2.00 g, 10%)於MeOH (30 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌2h。過濾出固體且使用MeOH (3 × 10 mL)洗滌濾餅。在減壓下濃縮濾液以提供白色固體形式之反式-4-(二氟甲基)吡咯啶-3-甲酸乙酯。MS (ESI, m/z): 194 [M+H]+ 。 步驟 5. 反式 -3-( 二氟甲基 )-4-[ 乙氧基 ( 羥基 ) 甲基 ] 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯 在0℃下，將CbzCl (4.05 g, 23.741 mmol)添加至反式-4-(二氟甲基)吡咯啶-3-甲酸乙酯(3.90 g, 19.8 mmol)及K2 CO3 (8.20 g, 59.3 mmol)於H2 O (20 mL)及乙酸乙酯(40 mL)中之攪拌溶液中。將所得混合物在25℃下攪拌1 h。藉由添加水(100 mL)來終止反應。使用DCM (2 × 200 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.1% TFA)及B: ACN (在30 min內0%至60%))純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之反式-3-(二氟甲基)-4-[乙氧基(羥基)甲基]吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS (ESI, m/z): 328 [M+H]+ 。 步驟 6 . 反式 -1-[( 苄基氧基 ) 羰基 ]-4-( 二氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 甲酸 向反式-3-(二氟甲基)-4-[乙氧基(羥基)甲基]吡咯啶-1-甲酸苄基酯(6.00 g, 18.0 mmol)於THF (80 mL)及MeOH (20 mL)中之攪拌溶液中添加LiOH (4.30 g, 180 mmol)於水(10 mL)中之溶液。將所得混合物在25℃下攪拌1 h。在真空下去除溶劑。使用NH4 Cl (飽和水溶液)將殘餘物之pH值調整至5-6。使用DCM (3 × 50 mL)萃取所得混合物。合併有機層，使用碳酸氫鈉溶液(飽和，50 mL)洗滌，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.1% TFA)及B: ACN (在30 min內0%至60%))純化殘餘物以提供無色油狀物形式之反式-1-[(苄基氧基)羰基]-4-(二氟甲基)吡咯啶-3-甲酸。MS (ESI, m/z): 300 [M+H]+ 。 步驟 7. 反式 -3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4-( 二氟甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯 在0℃下，向反式-1-[(苄基氧基)羰基]-4-(二氟甲基)吡咯啶-3-甲酸(4.00 g, 13.1 mmol)於t-BuOH (100 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加Et3 N (2.73 mL, 19.6 mmol)及DPPA (4.33 g, 15.7 mmol)。在添加之後，將所得混合物在80℃下攪拌2 h。將混合物冷卻至25℃且然後在真空下濃縮。藉由反相急速層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.1% TFA)及B: ACN (在40 min內0%至100%))純化殘餘物以提供期望產物。藉由矽膠層析(使用2:5 THF/石油醚洗脫)進一步純化以提供無色油狀物形式之反式-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(二氟甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS (ESI, m/z): 371 [M+H]+ 。 步驟 8. N-[(3S,4R)-4-( 二氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯及 N-[(3R,4S)-4-( 二氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 藉由SFC (管柱：Chiralpak AD-H SFC, 5×25 cm, 5 µm；移動相A： CO2 :70%及B: MeOH (含有2 mM NH3 -MeOH): 30%；流速：180 mL/min)分離反式-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(二氟甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(1.70 g, 4.58 mmol)以提供白色固體形式之第一洗脫異構體(RT = 4.23 min)，其立體化學任意分配為N-[(3R,4S)-4-(二氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯；及白色固體形式之第二洗脫異構體(RT = 6.14 min)，其立體化學任意分配為N-[(3S,4R)-4-(二氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI, m/z): 371 [M+H]+ 。 步驟 9. N-[(3S,4R)-4-( 二氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯及 N-[(3R,4S)-4-( 二氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 將(3S,4R)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(二氟甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(650 mg, 1.76 mmol)及Pd/C (450 mg, 10%)於乙酸乙酯(14 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌3 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以得到無色油狀物形式之N-[(3S,4R)-4-(二氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI, m/z): 237 [M+H]+ 。 類似地，自 (3R,4S)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(二氟甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯獲得N-[(3R,4S)-4-(二氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI, m/z): 237 [M+H]+ 。中間體 52-1. 4-[(6S)-6- 胺基 -4- 氟 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ] 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯 步驟 1. N- 苄基 -N-[(6S)-2-( 三氟甲烷磺醯基氧基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯 在0℃下，將NaH (260 mg, 6.50 mmol, 60%)逐份添加至N-[(6S)-2-(三氟甲烷磺醯基氧基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(中間體 47-2 ) (1.00 g, 2.23 mmol)於DMF (5 mL)中之攪拌溶液中。將所得混合物在0℃下攪拌30 min。在0℃下經30 min，向上述混合物中逐滴添加苄基溴(795 mg, 4.56 mmol)。將所得混合物在26℃下攪拌1 h。藉由在0℃下添加水(30 mL)來終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在30 min內5%至80%))純化殘餘物。濃縮所收集部分以得到褐色固體形式之N-苄基-N-[(6S)-2-(三氟甲烷磺醯基氧基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯。MS (ESI, m/z): 521 [M+H]+ 。 步驟 2. N- 苄基 -N-[(6S)-2- 氯 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯 將N-苄基-N-[(6S)-2-(三氟甲烷磺醯基氧基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(925 mg, 1.69 mmol)及HCl溶液(1 mL, 4M於二噁烷中)於二噁烷(3 mL)中之溶液在100℃下攪拌15 min。將混合物冷卻至25℃並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在30 min內5%至80%))純化殘餘物。濃縮所收集部分以得到褐色油狀物形式之N-苄基-N-[(6S)-2-氯-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯。MS (ESI, m/z): 407, 409 [M+H]+ 。 步驟 3. (6S)-6-[ 苄基 [( 苄基氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-2- 氯 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -1- 鎓 -1- 醇鹽 將N-苄基-N-[(6S)-2-氯-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(632 mg, 1.49 mmol)及m-CPBA (1.31 g, 7.46 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液在25℃下攪拌16 h。藉由添加Na2 SO3 (飽和水溶液，30 mL)及NaHCO3 (飽和水溶液，30 mL)來終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之(6S)-6-[苄基[(苄基氧基)羰基]胺基]-2-氯-5,6,7,8-四氫喹啉-1-鎓-1-醇鹽。MS (ESI, m/z): 423, 425 [M+H]+ 。 步驟 4. (6S)-6-[ 苄基 [( 苄基氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-2-[4-[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 六氫吡嗪 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -1- 鎓 -1- 醇鹽 將(6S)-6-[苄基[(苄基氧基)羰基]胺基]-2-氯-5,6,7,8-四氫喹啉-1-鎓-1-醇鹽(470 mg, 1.06 mmol)、六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(1.04 g, 5.58 mmol)及DIEA (0.990 mL, 5.57 mmol)於t-BuOH (5 mL)中之溶液在90℃下攪拌10 h。在真空下濃縮所得混合物。藉由反相層析(C18矽膠；移動相A：水(含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在30 min內5%至80%))純化殘餘物。濃縮所收集部分以得到黃色固體形式之(6S)-6-[苄基[(苄基氧基)羰基]胺基]-2-[4-[(第三丁氧基)羰基]六氫吡嗪-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-1-鎓-1-醇鹽。MS (ESI, m/z): 573 [M+H]+ 。 步驟 5. (6S)-6-[ 苄基 [( 苄基氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-2-[4-[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 六氫吡嗪 -1- 基 ]-N,N,N- 三甲基 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -4- 銨之 TFA 鹽 在0℃下，使用三甲基胺溶液(3.63 mL, 1M於THF中)處理(6S)-6-[苄基[(苄基氧基)羰基]胺基]-2-[4-[(第三丁氧基)羰基]六氫吡嗪-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-1-鎓-1-醇鹽(460 mg, 0.760 mmol)於DCM (9 mL)中之溶液，隨後在0℃下逐滴添加Tf2 O (0.365 mL, 2.13 mmol)。將所得混合物在25℃下攪拌1 h且然後在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在30 min內5%至80%))純化殘餘物。濃縮所收集部分以提供淺褐色固體形式之(6S)-6-[苄基[(苄基氧基)羰基]胺基]-2-[4-[(第三丁氧基)羰基]六氫吡嗪-1-基]-N,N,N-三甲基-5,6,7,8-四氫喹啉-4-銨之TFA鹽。MS (ESI, m/z): 615 [M+H]+ 。 步驟 6. 4-[(6S)-6-[ 苄基 [( 苄基氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4- 氟 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ] 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯 將(6S)-6-[苄基[(苄基氧基)羰基]胺基]-2-[4-[(第三丁氧基)羰基]六氫吡嗪-1-基]-N,N,N-三甲基-5,6,7,8-四氫喹啉-4-銨之TFA鹽(230 mg, 0.300 mmol)及TBAF溶液(3.30 mL, 1M於THF中)於DMF (5 mL)中之溶液在90℃下攪拌2 h。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在30 min內5%至80%))純化混合物。濃縮所收集部分以得到白色固體形式之4-[(6S)-6-[苄基[(苄基氧基)羰基]胺基]-4-氟-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS (ESI, m/z): 575 [M+H]+ 。 步驟 7. 4-[(6S)-6- 胺基 -4- 氟 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ] 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯 將4-[(6S)-6-[苄基[(苄基氧基)羰基]胺基]-4-氟-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(100 mg, 0.170 mmol)及碳載鈀(100 mg, 10%)於乙酸乙酯(5 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛下攪拌3 h。過濾出固體且使用乙酸乙酯(3 × 10 mL)洗滌濾餅。在減壓下濃縮濾液以提供淺褐色固體形式之4-[(6S)-6-胺基-4-氟-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS (ESI, m/z): 351 [M+H]+ 。
使用標準化學操作及類似於用於製備中間體52-1之程序的程序來製備表8中之下列中間體。表 8 中間體 53. 反式 -N-[4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ]-N- 甲基胺基甲酸第三丁基酯 步驟 1. (2E)-4- 甲氧基丁 -2- 烯酸乙酯
將 (2E)-4-溴丁-2-烯酸乙酯(33.0 g, 171 mmol)、Ag2 O (39.6 g, 171 mmol)及MeOH (100 mL)之混合物在25℃及無光下攪拌12 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液。經由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.05% TFA)及B: ACN (在20 min內5%至75%))純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分以得到黃色油狀物形式之(2E)-4-甲氧基丁-2-烯酸乙酯。MS (ESI,m/z ): 145 [M+H]+ 。 步驟 2. 反式 -1- 苄基 -4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -3- 甲酸乙酯
在＜10℃下，將TFA (0.480 mL, 4.20 mmol)於DCM (2 mL)中之溶液添加至(2E)-4-甲氧基丁-2-烯酸乙酯(9.30 g, 64.5 mmol)及苄基(甲氧基甲基)[(三甲基矽基)甲基]胺(22.9 g, 96.7 mmol)於DCM (400 mL)中之攪拌溶液中。將所得混合物在25℃下攪拌2 h。藉由添加NH4 HCO3 (飽和水溶液，150 mL)來終止反應。使用DCM (3 × 100 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:5乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之反式-1-苄基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-甲酸乙酯。MS (ESI,m/z ): 278 [M+H]+ 。 步驟 3. 反式 -4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -3- 甲酸乙酯
將反式-1-苄基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-甲酸乙酯(14.0 g, 50.4 mmol)、Pd(OH)2 /C (8.43 g, 10%)及MeOH (200 mL)之混合物在25℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌1 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以得到黃色油狀物形式之反式-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-甲酸乙酯。MS (ESI,m/z ): 188 [M+H]+ 。 步驟 4. 反式 -4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -1,3- 二甲酸 1- 苄基酯 3- 乙基酯
在0℃下，將CbzCl (9.01 mL, 64.0 mmol)添加至反式-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-甲酸乙酯(8.00 g, 42.7 mmol)及K2 CO3 (14.7 g, 106 mmol)於乙酸乙酯(100 mL)及H2 O (100 mL)中之混合物中。將混合物在25℃下攪拌1 h。使用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之反式-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1,3-二甲酸1-苄基酯3-乙基酯。MS (ESI,m/z ): 322 [M+H]+ 。 步驟 5 . 反式 -1-[( 苄基氧基 ) 羰基 ]-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -3- 甲酸
將反式-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1,3-二甲酸1-苄基酯3-乙基酯(5.00 g, 15.6 mmol)及NaOH (3.11 g, 77.7 mmol)於H2 O (40 mL)、THF (40 mL)及MeOH (40 mL)中之溶液在25℃下攪拌2 h。在真空下去除溶劑。使用鹽酸(3N)將殘餘物之pH值調整至6。使用乙酸乙酯(3 × 25 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮以得到黃色油狀物形式之反式-1-[(苄基氧基)羰基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-甲酸。MS (ESI,m/z ): 294 [M+H]+ 。 步驟 6. 反式 -3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
將反式-1-[(苄基氧基)羰基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-甲酸(3.00 g, 10.2 mmol)、DPPA (3.38 g, 12.3 mmol)及Et3 N (4.25 mL, 30.6 mmol)於t-BuOH (60 mL)中之溶液在80℃下攪拌3h。將混合物冷卻至25℃並在真空下濃縮。經由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.05% TFA)及B: ACN (在20 min內5%至75%))純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分以得到粗產物。藉由矽膠層析(使用1:3 THF/石油醚洗脫)純化粗產物以提供無色油狀物形式之反式-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 365 [M+H]+ 。 步驟 7. 反式 -N-[1- 苄基 -4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ]-N- 甲基胺基甲酸第三丁基酯
在0℃下，將NaH (59.0 mg, 1.48 mmol, 60%)添加至反式-N-[1-苄基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(350 mg, 0.983 mmol)於DMF (4 mL)中之溶液中。將所得溶液在0℃下攪拌30 min。然後在0℃下添加CH3 I (0.018 mL, 0.281 mmol)。將所得混合物在25℃下再攪拌2 h。使用水(50 mL)終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之反式-N-[1-苄基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]-N-甲基胺基甲第三丁基酸酯。MS (ESI,m/z ): 379 [M+H]+ 。 步驟 8. 反式 -N-[4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ]-N- 甲基胺基甲酸第三丁基酯
將反式-N-[1-苄基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯(330 mg, 0.828 mmol)及碳載鈀(300 mg, 10%)於乙酸乙酯(10 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌3 h。過濾所得混合物。在減壓下濃縮濾液以提供無色油狀物形式之反式-N-[4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 245 [M+H]+ 。中間體 54. 順式 -N-[4-( 氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 步驟 1 . 1- 苄基 -4-( 羥甲基 ) 吡咯啶 -2- 酮
在0℃下，將NaBH4 (24.0 g, 634 mmol)添加至1-苄基-5-側氧基吡咯啶-3-甲酸甲酯(50.0 g, 214 mmol)於乙醇(800 mL)中之溶液中。將所得溶液在25℃下攪拌4 h。使用水(50 mL)終止反應。在真空下濃縮混合物。使用水(200 mL)稀釋殘餘物。使用DCM (3 × 500 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用10:1二氯甲烷/甲醇洗脫)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之1-苄基-4-(羥甲基)吡咯啶-2-酮。MS (ESI,m/z ): 206 [M+H]+ 。 步驟 2. 1- 苄基 -4-( 氟甲基 ) 吡咯啶 -2- 酮
在-78℃下，將DAST (32.2 mL, 244 mmol)添加至1-苄基-4-(羥甲基)吡咯啶-2-酮(20.0 g, 97.5 mmol)於DCM (300 mL)中之溶液中。將所得溶液在25℃下攪拌16 h。將反應液傾倒至冰-水(200 mL)中。使用DCM (3 × 200 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。經由反相層析(管柱：C18管柱；移動相A：水(含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在45 min內0%至50%))純化殘餘物以得到黃色油狀物形式之1-苄基-4-(氟甲基)吡咯啶-2-酮。MS (ESI,m/z ): 208 [M+H]+ 。 步驟 3. 反式 -1- 苄基 -4-( 氟甲基 )-3- 羥基吡咯啶 -2- 酮
在-78℃下，將LDA溶液(24.0 mL, 2M於THF中)添加至1-苄基-4-(氟甲基)吡咯啶-2-酮(5.00 g, 23.6 mmol)於THF (100 mL)中之溶液中。將所得溶液在-78℃下攪拌1 h。然後引入O2 。將所得溶液在-78℃下攪拌3 h。藉由添加水(50 mL)來終止反應。在真空下去除溶劑。使用DCM (3 × 100 mL)萃取殘餘物。合併有機層，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.1% TFA)及B: ACN (在30 min內0%至60%))純化殘餘物以提供褐色油狀物形式之反式-1-苄基-4-(氟甲基)-3-羥基吡咯啶-2-酮。MS (ESI,m/z ): 224 [M+H]+ 。 步驟 4. 反式 - 甲烷磺酸 1- 苄基 -4-( 氟甲基 )-2- 側氧基吡咯啶 -3- 基酯
在0℃下，將MsCl (2.75 mL, 35.5 mmol)添加至反式-1-苄基-4-(氟甲基)-3-羥基吡咯啶-2-酮(5.40 g, 23.7 mmol)及Et3 N (6.59 mL, 47.4 mmol)於DCM (70 mL)中之攪拌溶液中。將所得混合物在25℃下攪拌2 h。藉由在0℃下添加水(50 mL)來終止反應。使用DCM(3 × 50 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾，在減壓下濃縮以提供褐色油狀物形式之反式-甲烷磺酸1-苄基-4-(氟甲基)-2-側氧基吡咯啶-3-基酯。MS (ESI,m/z ): 302 [M+H]+ 。 步驟 5. 順式 -3- 疊氮基 -1- 苄基 -4-( 氟甲基 ) 吡咯啶 -2- 酮
將反式-甲烷磺酸1-苄基-4-(氟甲基)-2-側氧基吡咯啶-3-基酯(6.00 g, 19.5 mmol)及NaN3 (3.81 g, 58.6 mmol)於DMF (150 mL)中之混合物在100℃下攪拌1 h。將混合物冷卻至25℃。藉由在25℃下添加水(500 mL)來終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 200 mL)萃取所得混合物。使用鹽水(300 mL)洗滌合併之有機層，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾並在減壓下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:1乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之順式-3-疊氮基-1-苄基-4-(氟甲基)吡咯啶-2-酮。MS (ESI,m/z ): 249 [M+H]+ 。 步驟 6. 順式 -N-[1- 苄基 -4-( 氟甲基 )-2- 側氧基吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將3-疊氮基-1-苄基-4-(氟甲基)吡咯啶-2-酮(4.00 g, 15.8 mmol)、碳載鈀(4.00 g, 10%)及二碳酸二-第三丁基酯(6.89 g, 31.6 mmol)於EtOH (100 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌3 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用1:1乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之順式-N-[1-苄基-4-(氟甲基)-2-側氧基吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 323 [M+H]+ 。 步驟 7. 順式 -N-[1- 苄基 -4-( 氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
在0℃下，將BH3 溶液(30 mL, 1M於THF中)添加至順式-N-[1-苄基-4-(氟甲基)-2-側氧基吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(2.40 g, 7.30 mmol)於THF (60 mL)中之攪拌溶液中。將所得混合物在25℃下攪拌16 h。在真空下濃縮所得混合物。然後添加EtOH (60 mL)、H2 O (15 mL)及Et3 N (15 mL)。將所得混合物在80℃下攪拌2 h。將所得混合物冷卻至25℃並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18管柱；移動相A：水(含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在30 min)內0%至100%)純化殘餘物以提供白色固體形式之順式-N-[1-苄基-4-(氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 309 [M+H]+ 。 步驟 8. 順式 -N-[4-( 氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將N-[1-苄基-4-(氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(450 mg, 1.43 mmol)及Pd(OH)2 /C (450 mg, 10%)於乙酸乙酯(10 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌2 h。過濾所得混合物。在減壓下濃縮濾液以提供褐色油狀物形式之順式-N-[4-(氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 219 [M+H]+ 。中間體 55. 反式 -N-[4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 步驟 1. 反式 -3- 疊氮基 -4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
在＜10℃下，將NaH (1.91 g, 47.7 mmol, 60%)添至反式-3-疊氮基-4-羥基吡咯啶-1-甲酸苄基酯(5.00 g, 19.1 mmol)於DMF (70 mL)中之攪拌溶液中。將所得溶液在＜ 10℃下攪拌30 min。然後將1-溴-2-甲氧基乙烷(7.95 g, 57.2 mmol)在＜ 10℃下添加至混合物中。將所得混合物在26℃下攪拌3 h。然後藉由添加水/冰(70 mL)來終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮濾液。經由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.05% TFA)及B: ACN (在25 min內10 %至75%))純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分以得到黃色油狀物形式之反式-3-疊氮基-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 321 [M+H]+ 。 步驟 2. 反式 -3- 胺基 -4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
將反式-3-疊氮基-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(5.60 g, 17.4 mmol)及PtO2 (2.00 g, 8.80 mmol)於乙酸乙酯(100 mL)中之混合物攪在26℃及氫氣氛(氣囊)下拌1 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以得到黑色油狀物形式之反式-3-胺基-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 295 [M+H]+ 。 步驟 3. 反式 -3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
將(Boc)2 O (5.45 g, 25.0 mmol)添加至反式-3-胺基-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(5.00 g, 17.0 mmol)及Et3 N (7.08 mL, 70.0 mmol)於THF (70 mL)及H2 O (70 mL)中之溶液中。將所得溶液在26℃下攪拌3 h。在真空下去除THF。使用乙酸乙酯(3 × 100 mL)萃取殘餘物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用1:3乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之反式-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 395 [M+H]+ 。 步驟 4. 反式 -N-[4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將反式-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(1.60 g, 4.06 mmol)及碳載鈀(1.60 g, 10%)於乙酸乙酯(30 mL)中之混合物在26℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌2h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以得到淺黃色油狀物形式之反式-N-[4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 261 [M+H]+ 。中間體 56. N-[(3S,4S)-4-( 丙烷 -2- 基氧基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 步驟 1. (3S,4S)-3- 疊氮基 -4-( 丙烷 -2- 基氧基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
在0℃下，將氫化鈉(688 mg, 17.2 mmol, 60%)添加至(3S,4S)-3-疊氮基-4-羥基吡咯啶-1-甲酸苄基酯(3.00 g, 11.44 mmol)、2-溴丙烷(10.7 mL, 113 mmol)及KI (3.80 g, 2.89 mmol)於DMF (100 mL)中之攪拌溶液中。將所得溶液在50℃下攪拌3 h。在冷卻至25℃之後，藉由添加H2 O/冰(100 mL)來終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 200 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾且然後在真空下濃縮。藉由反相層析(Column, C18矽膠；移動相A：水(含有0.05%甲酸)及B: ACN (在40 min內0%至80%))純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分以得到無色油狀物形式之(3S,4S)-3-疊氮基-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 305 [M+H]+ 。 步驟 2. (3S,4S)-3- 胺基 -4-( 丙烷 -2- 基氧基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
將(3S,4S)-3-疊氮基-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(220 mg, 0.72 mmol)及PtO2 (33.0 mg, 0.150 mmol)於乙酸乙酯(10 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌2 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以得到褐色油狀物形式之(3S,4S)-3-胺基-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 279 [M+H]+ 。 步驟 3. (3S,4S)-3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4-( 丙烷 -2- 基氧基 ) 吡咯啶 -1- 甲酸苄基酯
將(3S,4S)-3-胺基-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(200 mg , 0.720 mmol)、Et3 N (0.190 mL, 1.35 mmol)及(Boc)2 O (236 mg, 1.08 mmol)於THF (5 mL)及水(5 mL)中之溶液在25℃下攪拌30 min。在真空下去除溶劑。使用水(10 mL)稀釋殘餘物。使用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取所得混合物，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:5乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之(3S, 4S)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 379 [M+H]+ 。 步驟 4. N-[(3S,4S)-4-( 丙烷 -2- 基氧基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將(3S,4S)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-1-甲酸苄基酯(250 mg, 0.660 mmol)及碳載鈀(250 mg, 10%)於乙酸乙酯(5 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌2 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以得到褐色固體形式之N-[(3S,4S)-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI, m/z): 245 [M+H]+ 。中間體 57. N-(2- 氯 -5,6,7,8- 四氫喹唑啉 -6- 基 ) 胺基甲酸苄基酯 步驟 1. N-[(3Z)-3-[( 二甲基胺基 ) 亞甲基 ]-4- 側氧基環己基 ] 胺基甲酸苄基酯
將N-(4-側氧基環己基)胺基甲酸苄基酯(10.0 g, 40.4 mmol)及(二甲氧基甲基)二甲基胺(4.80 g, 40.4 mmol)於甲苯(20 mL)中之溶液在100℃下攪拌16 h。在真空下濃縮所得混合物以得到黃色油狀物形式之N-[(3Z)-3-[(二甲基胺基)亞甲基]-4-側氧基環己基]胺基甲酸苄基酯。MS (ESI, m/z): 303 [M+H]+ 。 步驟 2. N-(2- 胺基 -5,6,7,8- 四氫喹唑啉 -6- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
將胍鹽酸鹽(3.45 g, 36.1 mmol)及乙醇鈉(2.47 g, 36.3 mmol)於乙醇(150 mL)中之溶液在23℃下攪拌30 min。然後添加N-[(3Z)-3-[(二甲基胺基)亞甲基]-4-側氧基環己基]胺基甲酸苄基酯(11 g, 21.8 mmol，純度：60%)。將所得溶液在80℃下攪拌過夜。在真空下濃縮所得混合物。藉由矽膠層析(使用1:10 MeOH/DCM洗脫)純化殘餘物以得到白色固體形式之N-(2-胺基-5,6,7,8-四氫喹唑啉-6-基)胺基甲酸苄基酯。S (ESI, m/z): 299 [M+H]+ 。 步驟 3. N-(2- 氯 -5,6,7,8- 四氫喹唑啉 -6- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
將N-(2-胺基-5,6,7,8-四氫喹唑啉-6-基)胺基甲酸苄基酯(1.85 g, 6.20 mmol)、t-BuNO2 (3.72 mL, 31.0 mmol)及CuCl2 (4.14 g, 30.8 mmol)於ACN (40 mL)中之混合物在60℃下攪拌20 min。將反應混合物冷卻至25℃且添加二***(20 mL)。過濾出固體。在真空下濃縮濾液。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.05% NH4 HCO3 )及B: ACN (在30 min內5%至80%))純化殘餘物以提供白色固體形式之N-(2-氯-5,6,7,8-四氫喹唑啉-6-基)胺基甲酸苄基酯。MS (ESI, m/z): 318, 320 [M+H]+ 。中間體 58. 4-(7- 胺基 -5,6,7,8- 四氫異喹啉 -3- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯 步驟 1. RuCl-(S,S)-Ts-DPEN( 六甲基苯 )
將N-[(1S,2S)-2-胺基-1,2-二苯基乙基]-4-甲基苯-1-磺醯胺(S,S-Ts-DPEN) (1.09 g, 3.00 mmol)、Et3 N (0.90 mL, 6.47 mmol)及[RuCl2 (六甲基苯)]2 (1.00 g, 1.50 mmol)於DCM (40 mL)中之溶液在25℃下攪拌5 h。在真空下濃縮所得混合物。藉由矽膠層析(使用1:10 MeOH/DCM洗脫)純化殘餘物以提供紅色固體形式之RuCl-(S,S)-Ts-DPEN(六甲基苯)。 步驟 2. RuCl-(S,S)-Ts-DPEN-OTf( 六甲基苯 )
將RuCl-(S,S)-Ts-DPEN(六甲基苯) (1.95 g, 2.99 mmol)及三氟甲烷磺酸銀(0.800 g, 3.17 mmol)於DCM (50 mL)中之溶液在25℃下攪拌6 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以提供褐色固體形式之RuCl-(S,S)-Ts-DPEN-OTf(六甲基苯)。 步驟 3 . 6- 氯 -4- 甲基吡啶 -3- 甲酸乙酯
將硫酸(15.6 mL, 306 mmol)添加至6-氯-4-甲基吡啶-3-甲酸(10.0 g, 58.3 mmol)於EtOH (250 mL)中之溶液中。將所得溶液在25℃下攪拌48 h。向反應液中添加NaHCO3 於水(500 mL)中之飽和溶液。然後蒸發出EtOH。使用DCM (2 × 500 mL)萃取殘餘物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:15乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到白色固體形式之6-氯-4-甲基吡啶-3-甲酸乙酯。MS (ESI, m/z): 200, 202 [M+H]+ 。 步驟 4 . 3- 氯 -8- 羥基 -5,6- 二氫異喹啉 -7- 甲酸甲酯
在-78℃下，將LDA溶液(12.5 mL, 2M於THF中)添加至6-氯-4-甲基吡啶-3-甲酸乙酯(2.00 g, 10.0 mmol)於THF (100 mL)中之溶液中。將所得溶液在-78℃下攪拌1 h。然後添加丙-2-烯酸甲酯(2.25 mL, 24.9 mmol)且將反應液在-78℃下攪拌1 h。然後使用水(50 mL)終止反應。在真空中去除THF。使用DCM (3 × 50 mL)萃取水層。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:10乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到白色固體形式之3-氯-8-羥基-5,6-二氫異喹啉-7-甲酸甲酯。MS (ESI, m/z): 240, 242 [M+H]+ 。 步驟 5 . 3- 氯 -8- 羥基 -5,6,7,8- 四氫異喹啉 -7- 甲酸甲酯
在0℃下，將Et3 N (7.62 mL, 54.8 mmol)添加至甲酸(1.89 mL, 50.1 mmol)於MeOH (90 mL)中之溶液中。然後添加3-氯-8-羥基-5,6-二氫異喹啉-7-甲酸甲酯(3.00 g, 12.5 mmol)及RuCl-(S,S)-Ts-DPEN-OTf(六甲基苯) (82 mg, 0.099 mmol)。將所得溶液在25℃下攪拌16 h。然後將反應液傾倒至水(200 mL)中。在真空中去除溶劑。使用DCM (3 × 150 mL)萃取水層。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:5乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到白色固體形式之3-氯-8-羥基-5,6,7,8-四氫異喹啉-7-甲酸甲酯。MS (ESI, m/z): 242, 244 [M+H]+ 。 步驟 6 . 3-[4-[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 六氫吡嗪 -1- 基 ]-5,6- 二氫異喹啉 -7- 甲酸甲酯
將3-氯-8-羥基-5,6,7,8-四氫異喹啉-7-甲酸甲酯(0.500 g, 2.07 mmol)、六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(0.750 g, 4.03 mmol)、RuPhos Pd G3 (100 mg, 0.120 mmol)、RuPhos (62.0 mg, 0.140 mmol)及Cs2 CO3 (2.00 g, 6.16 mmol)於甲苯(10 mL)中之混合物在95℃下攪拌16 h。平行實施4個批次之此反應。在冷卻至室溫之後，將4批反應混合物傾倒至水(100 mL)中。使用乙酸醯基酯(3 × 100 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:4乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到白色固體形式之3-[4-[(第三丁氧基)羰基]六氫吡嗪-1-基]-5,6-二氫異喹啉-7-甲酸甲酯)。MS (ESI, m/z): 374 [M+H]+ 。 步驟 7 . 3-[4-[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 六氫吡嗪 -1- 基 ]-5,6- 二氫異喹啉 -7- 甲酸甲酯
將3-[4-[(第三丁氧基)羰基]六氫吡嗪-1-基]-5,6-二氫異喹啉-7-甲酸甲酯(550 mg, 1.47 mmol)及碳載鈀(500 mg, 10%)於乙酸乙酯(20 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌3 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以得到白色固體形式之3-[4-[(第三丁氧基)羰基]六氫吡嗪-1-基]-5,6,7,8-四氫異喹啉-7-甲酸甲酯。MS (ESI, m/z): 376 [M+H]+ 。 步驟 8 . 3-[4-[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 六氫吡嗪 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫異喹啉 -7- 甲酸
將LiOH (200 mg, 8.35 mmol)於水(20 mL)中之溶液添加至3-[4-[(第三丁氧基)羰基]六氫吡嗪-1-基]-5,6,7,8-四氫異喹啉-7-甲酸甲酯(500 mg, 1.33 mmol)於THF (20 mL)中之溶液中。將所得溶液在25℃下攪拌2 h。在真空下濃縮所得溶液。經由反相層析(管柱：X Bridge C18, 19 × 150 mm, 5 um；移動相A：水(含有0.05% TFA)及B: ACN (在25 min內0%至30%))純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分以得到白色固體形式之3-[4-[(第三丁氧基)羰基]六氫吡嗪-1-基]-5,6,7,8-四氫異喹啉-7-甲酸。MS (ESI, m/z): 362 [M+H]+ 。 步驟 9 . 4-(7-[[( 苄基氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-5,6,7,8- 四氫異喹啉 -3- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將3-[4-[(第三丁氧基)羰基]六氫吡嗪-1-基]-5,6,7,8-四氫異喹啉-7-甲酸(400 mg, 1.11 mmol)、DPPA (476 mL, 2.20 mmol)及Et3 N (0.460 mL, 3.72 mmol)於甲苯(6 mL)中之溶液在25℃下攪拌2 h且然後在70℃下攪拌2 h。然後添加苄基醇(1.14 mL, 11.0 mmol)。將所得溶液在70℃下攪拌2 h。在冷卻至室溫之後，然後將反應液傾倒至水(30 mL)中。使用乙酸醯基酯(3 × 20 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:1乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到無色油狀物形式之4-(7-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-5,6,7,8-四氫異喹啉-3-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS (ESI, m/z): 467 [M+H]+ 。 步驟 10 . 4-(7- 胺基 -5,6,7,8- 四氫異喹啉 -3- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將4-(7-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-5,6,7,8-四氫異喹啉-3-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(200 mg, 0.430 mmol)及K3 PO4 (228 mg, 1.07 mmol)於DMA (5 mL)中之混合物在90℃下攪拌1 h。在冷卻至室溫之後，經由反相層析(管柱：X Bridge C18, 19 × 150 mm, 5 um；移動相A：水(含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在30 min內10%至50%))純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分以得到白色固體形式之4-(7-胺基-5,6,7,8-四氫異喹啉-3-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS (ESI, m/z): 333 [M+H]+ 。中間體 59. N-[1,4- 二氧雜 -7- 氮雜螺 [4.4] 壬烷 -9- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯 步驟 1. 1,4- 二氧雜 -7- 氮雜螺 [4.4] 壬烷 -7,9- 二甲酸 7- 苄基酯 9-(2- 羥乙基 ) 酯
使用迪安-斯脫克管(Dean-Stark tube)，將4-側氧基吡咯啶-1,3-二甲酸1-苄基酯3-乙基酯(5.00 g, 17.2 mmol)、乙烷-1,2-二醇(3.20 g, 51.5 mmol)及PTSA (296 mg, 1.72 mmol)於甲苯(100 mL)中之混合物在110℃下攪拌3 h。將混合物冷卻至27℃並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.05% TFA)及B: ACN (在20 min內5%至55%))純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-7,9-二甲酸7-苄基酯9-(2-羥乙基)酯。MS (ESI,m/z ): 352 [M+H]+ 。 步驟 2. 7-[( 苄基氧基 ) 羰基 ]-1,4- 二氧雜 -7- 氮雜螺 [4.4] 壬烷 -9- 甲酸
將1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-7,9-二甲酸7-苄基酯9-(2-羥乙基)酯(2.80 g, 7.96 mmol)及氫氧化鈉(199 mg, 4.98 mmol)於MeOH (40 mL)、THF (40 mL)及H2 O (40 mL)中之混合物在28℃下攪拌2 h。在真空下去除THF及MeOH。使用HCl (1M)將所得混合物酸化至pH 7-8，且然後在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.05% TFA)及B: ACN (在20 min內5%至30%))純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之7-[(苄基氧基)羰基]-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-9-甲酸。MS (ESI,m/z ): 308 [M+H]+ 。 步驟 3. 9-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-1,4- 二氧雜 -7- 氮雜螺 [4.4] 壬烷 -7- 甲酸苄基酯
在0℃下，將DPPA (632 mg, 2.30 mmol)添加至7-[(苄基氧基)羰基]-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-9-甲酸(600 mg, 1.91 mmol)及Et3 N (0.398 mL, 2.87 mmol)於t-BuOH (10 mL)中之攪拌溶液中。將所得混合物在90℃下攪拌2 h。冷卻混合物。在真空下濃縮所得混合物。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A： H2 O (含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在30 min內0%至60%))純化混合物以提供黃色油狀物形式之9-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-7-甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 379 [M+H]+ 。 步驟 4. N-[1,4- 二氧雜 -7- 氮雜螺 [4.4] 壬烷 -9- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將9-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-7-甲酸苄基酯(200 mg, 0.518 mmol)及Pd/C (200 mg, 10%)於EtOAc (5 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛下攪拌2 h。過濾所得混合物，且使用乙酸乙酯(3 × 5 mL)洗滌濾餅。在減壓下濃縮濾液以提供褐色N-[1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-9-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 245 [M+H]+ 。式 (I) 化合物之合成實例： 實例 1-1. (R)-3- 胺基 -6- 甲基 -N-(7-( 六氫吡嗪 -1- 基 ) 烷 -3- 基 ) 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 實例 1-2. (S)-3- 胺基 -6- 甲基 -N-(7-( 六氫吡嗪 -1- 基 ) 烷 -3- 基 ) 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. 4-(3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 ) 烷 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將4-(3-胺基烷-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(中間體12，130 mg, 0.27 mmol)、EDCI (81 mg, 0.42 mmol)、HOBt (57 mg, 0.42 mmol)、DIEA (108 mg, 0.84 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(58 mg, 0.28 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液在室溫下攪拌18 h。使用20 mL水終止反應且使用EtOAc (50 mL × 3)萃取。使用鹽水(30 mL × 2)洗滌合併之有機層，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19×50 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在13 min內40% B至60% B)純化以提供4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。 步驟 2. (R)-4-(3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 ) 烷 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯及 (S)-4-(3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 ) 烷 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
藉由對掌性HPLC (管柱：Lux cellulose-4, 0.46×5 cm, 3 μm；移動相：己烷(0.1% Et2 NH):EtOH = 60:40，6 min)分離4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯之外消旋混合物以提供如下標題化合物：黃色固體形式之(R)-4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(第一洗脫異構體，RT = 3.87 min，假設立體化學)及黃色固體形式之(S)-4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(第二洗脫異構體，RT = 4.74 min，假設立體化學)。 步驟 3. (R)-3- 胺基 -6- 甲基 -N-(7-( 六氫吡嗪 -1- 基 ) 烷 -3- 基 ) 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將(R)-4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸酯(6 mg, 0.01 mmol)及TFA (0.5 mL)於CH2 Cl2 (2 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。在真空下濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19×50 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在13 min內5% B至30% B)純化殘餘物以得到黃色固體形式之(R)-3-胺基-6-甲基-N-(7-(六氫吡嗪-1-基)烷-3-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (CD3 OD, 400 MHz) δ(ppm): 8.18 (d,J = 8.0Hz, 1H), 7.28 (d,J = 8.4Hz, 1H), 6.95 (d,J = 8.4Hz, 1H), 6.54-6.56 (m, 1H), 6.41(d,J = 2.4Hz, 1H), 4.40-4.47 (m, 1H), 4.21-4.24( m, 1H), 3.88-3.93 (m, 1H), 3.07-3.12 (m, 4H), 2.95-3.02 (m, 5H), 2.82-2.88 (m, 1H), 2.62 (s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 424 [M+H]+ 。 步驟 4. (S)-3- 胺基 -6- 甲基 -N-(7-( 六氫吡嗪 -1- 基 ) 烷 -3- 基 ) 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將類似於步驟3之程序應用於(S)-4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸酯(8 mg, 0.02 mmol)以提供白色固體形式之(S)-3-胺基-6-甲基-N-(7-(六氫吡嗪-1-基)烷-3-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (CD3 OD, 300 MHz) δ(ppm): 8.18 (d,J = 8.4Hz, 1H), 7.28 (d,J = 8.7Hz, 1H), 6.96 (d,J = 8.7Hz, 1H), 6.54-6.58 (m, 1H), 6.41(d,J = 2.1Hz, 1H), 4.39-4.86 (m, 1H), 4.22-4.25( m, 1H), 3.88-3.96 (m, 1H), 3.04-3.10 (m, 5H), 2.89-3.02 (m, 4H), 2.81-2.87 (m, 1H), 2.63 (s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 424 [M+H]+ 。
使用標準化學操作及類似於用於製備實例1-1及1-2之程序的程序來製備表9中之下列實例。表 9 ： 1 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用胺中間體 13 ，且藉由矽膠層析(使用2:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化。步驟2對掌性HPLC (管柱：Chiralpak ID-2, 2×25 cm, 5 μm；移動相：40% EtOH/己烷，41 min)提供實例1-4前體作為第一洗脫異構體(RT=3.32 min)且提供實例1-3前體作為第二洗脫異構體(RT=4.42 min)。2 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用胺中間體 14-1 ，且藉由矽膠層析(使用1:1 EtOAc/石油醚洗脫)純化。步驟2對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IB, 4.6×250 mm, 5 μm；移動相A：己烷(0.1% Et2 NH), B: EtOH；梯度：在30 min內50% B至50% B)提供實例1-5前體作為第一洗脫異構體(RT=3.7 min)且提供實例1-6前體作為第二洗脫異構體(RT=7.1 min)。步驟3之製備型HPLC純化(管柱：XBridge Prep Phenyl OBD, 19×150 mm, 5 µm；移動相A：水(0.05% NH4 OH), B: ACN；梯度：在7 min內25% B至60% B)。3 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用胺中間體 14-2 。並不實施步驟2對掌性分離。步驟3製備型HPLC分離非對映異構體混合物1 (含有實例1-7至1-10，假設立體化學)及非對映異構體混合物2 (含有實例1-11至1-14，假設立體化學)。藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak ID-2, 2×25 cm, 5 μm；移動相：20% IPA/MTBE (0.1% Et2 NH)，23 min)進一步純化混合物1可提供混合物1a (RT=8.9 min，含有實例1-7及1-8，假設立體化學)及混合物1b (RT=9.5 min，含有實例1-9及1-10，假設立體化學)。分離混合物1a (管柱：Chiralpak IE, 2×25 cm, 5 μm；移動相：50% EtOH/己烷，25 min；流速：15 mL/min)可提供實例1-7 (RT=19.1 min，假設立體化學)及實例1-8 (RT=23.0 min，假設立體化學)。分離混合物1b (管柱：Chiralpak ID-2, 2×25 cm, 5 μm；移動相：20% IPA/MTBE (0.1% Et2 NH)，23 min)可提供實例1-9 (RT=14.6 min，假設立體化學)及實例1-10 (RT=20.1 min，假設立體化學)。藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak ID-2, 2×25 cm, 5 μm；移動相：30% EtOH/MTBE，26 min；流速：16 mL/min)進一步純化混合物2可提供混合物2a (RT=8.4 min，含有實例1-11及1-12，假設立體化學)、實例1-13 (RT=9.5 min，假設立體化學)及實例1-14 (RT=10.4 min，假設立體化學)。分離混合物2a (管柱：Phenomenex Lux cellulose-4, AXIA Packed, 2.12×25 cm, 5μm；移動相：50% EtOH/Hex (0.1% Et2 NH)，22 min)可提供實例1-11 (RT=16.0 min，假設立體化學)及實例1-12 (RT=19.9 min，假設立體化學)。4 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用羧酸中間體 16 。步驟2對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IA, 2×25 cm, 5 μm；移動相A：己烷，B: EtOH；流速：17 mL/min；梯度：在23 min內40% B至60% B)提供實例1-15前體作為第一洗脫異構體(RT=15.9 min)且提供實例1-16前體作為第二洗脫異構體(RT=19.7 min)。5 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用羧酸中間體 17 及胺中間體 13 。步驟2對掌性HPLC (管柱：Phenomenex Lux cellulose-4, AXIA Packed, 2.12×25 cm, 5μm；移動相：50% EtOH/己烷，15 min)提供實例1-17前體作為第一洗脫異構體(RT=9.3 min)且提供實例1-18前體作為第二洗脫異構體(RT=11.8 min)。6 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用胺中間體 13 。步驟2對掌性HPLC (管柱：Chiralpak ID-2, 2×25 cm, 5 μm；移動相：80% MeOH/CH2 Cl2 ，15 min；流速：17 mL/min)提供實例1-19前體作為第一洗脫異構體(RT=10.5 min)且提供實例1-20前體作為第二洗脫異構體(RT=12.2 min)。7 程序注意事項 ： 步驟2對掌性HPLC (管柱：Chiral Art Cellulose-SB, 2×25 cm, 5 μm；移動相：30% EtOH/己烷，30 min)提供實例1-21前體作為第一洗脫異構體(RT=22.2 min)且提供實例1-22前體作為第二洗脫異構體(RT=26.5 min)。8 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用羧酸中間體 24 及胺中間體 13 。步驟2對掌性HPLC (管柱：Chiralpak ID-2, 2×25 cm, 5 μm；移動相：50% EtOH/己烷，35 min；流速：14 mL/min)提供實例1-23前體作為第一洗脫異構體(RT=21.6 min)且提供實例1-24前體作為第二洗脫異構體(RT=29.0 min)。9 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用羧酸中間體 24 。步驟2對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IC, 2×25 cm, 5 μm；移動相：50% EtOH/己烷，25 min)提供實例1-25前體作為第一洗脫異構體(RT=15.8 min)且提供實例1-26前體作為第二洗脫異構體(RT=20.4 min)。10 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用羧酸中間體 25 及胺中間體 13 。步驟2對掌性HPLC (管柱：Chiralpak ID-3, 2×25 cm, 5 μm；移動相：50% iPrOH/己烷，10 min)提供實例1-27前體作為第一洗脫異構體(RT=4.5 min)且提供實例1-28前體作為第二洗脫異構體(RT=7.2 min)。11 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用胺中間體 15-1 。步驟2對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IA-2, 2×25 cm, 5 μm；移動相：50% EtOH/己烷，25 min；流速：16 mL/min)提供實例1-29前體作為第一洗脫異構體(RT=16.6 min)且提供實例1-30前體作為第二洗脫異構體(RT=21.1 min)。12 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用胺中間體 15-2 ；使用於DMA中之HBTU及Et3 N之醯胺偶合條件。步驟2對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IC, 2×25 cm, 5 μm；移動相：20% EtOH/MTBE)提供實例1-31前體作為第一洗脫異構體(RT=6.9 min)且提供實例1-32前體作為第二洗脫異構體(RT=20.0 min)。在步驟3及4中，使用於MeOH中之NH3 處理粗產物以提供游離鹼，然後藉由製備型HPLC純化。13 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用胺中間體 4-1 。步驟2對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IC, 2×25 cm, 5 µm；移動相：50% EtOH/己烷，22 min；流速：15 mL/min)。步驟3製備型HPLC (管柱：XBridge Shield RP18 OBD, 5µm,19×150mm；移動相：水(含有10 mM NH4 HCO3 )及ACN，梯度(在7 min內25% ACN至最高65%))。14 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用胺中間體 4-2 。步驟2對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IA, 2.12 × 15cm, 5µm；移動相A：己烷，B: EtOH；梯度：在17 min內0%至50% B)。步驟3製備型HPLC (管柱：XBridge C18, 19 × 150 mm, 5 µm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：(在10 min內10% B至80% B))。15 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用胺中間體 15-3 及羧酸中間體 24 。藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiral Art Cellulose-SB及移動相10% IPA/MTBE來分離對映異構體以提供實例1-37前體作為第一洗脫異構體且提供實例1-38前體作為第二洗脫異構體。16 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用羧酸中間體 24 。藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak ID-2及移動相40% EtOH/己烷來分離對映異構體以提供實例1-39前體作為第一洗脫異構體且提供實例1-40前體作為第二洗脫異構體。17 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用胺中間體 15-3 。藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak IG及移動相50% EtOH/己烷來分離對映異構體以提供實例1-41前體作為第一洗脫異構體且提供實例1-42前體作為第二洗脫異構體。實例 2-1. 3- 胺基 -N-((3R)-7-(9,9- 二氟 -3,7- 二氮雜雙環 [3.3.1] 壬烷 -3- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. 7-((R)-3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 烷 -7- 基 )-9,9- 二氟 -3,7- 二氮雜雙環 [3.3.1] 壬烷 -3- 甲酸第三丁基酯
將(R)-(7-溴烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(中間體2 ，400 mg, 1.08 mmol)、9,9-二氟-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁基酯(中間體32 ，288 mg, 1.06 mmol)、Pd(dppf)Cl2 -CH2 Cl2 (90 mg, 0.11 mmol)、Xphos (105 mg, 0.22 mmol)及Cs2 CO3 (1.076 g, 3.30 mmol)於甲苯(40 mL)中之混合物在100℃下攪拌16 h。在冷卻至室溫之後，使用水(40 mL)終止反應並使用EtOAc (40 mL × 3)萃取。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:4 EtOAc/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到黃色油狀物形式之7-((R)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)烷-7-基)-9,9-二氟-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 544 [M+H]+ 。 步驟 2. 7-((R)-3- 胺基 烷 -7- 基 )-9,9- 二氟 -3,7- 二氮雜雙環 [3.3.1] 壬烷 -3- 甲酸第三丁基酯
將7-((R)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)烷-7-基)-9,9-二氟-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁基酯(110 mg, 0.19 mmol)及Pd/C (20 mg, 10%)於EtOAc (10 mL)中之混合物在30℃及氫氣氛下攪拌2 h。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液以提供黃色固體形式之7-((R)-3-胺基烷-7-基)-9,9-二氟-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 410 [M+H]+ 。 步驟 3. 7-((R)-3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 ) 烷 -7- 基 )-9,9- 二氟 -3,7- 二氮雜雙環 [3.3.1] 壬烷 -3- 甲酸第三丁基酯
將7-((R)-3-胺基烷-7-基)-9,9-二氟-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁基酯(70 mg, 0.16 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(43 mg, 0.20 mmol)、HOBt (45 mg, 0.33 mmol)、EDCI (65 mg, 0.34 mmol)及DIEA (66 mg, 0.51 mmol)於DMF (15 mL)中之溶液在室溫下攪拌16 h。藉由添加25 mL水來終止反應。使用EtOAc (30 mL × 3)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:1 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色固體形式之7-((R)-3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)-9,9-二氟-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 600 [M+H]+ 。 步驟 4. 3- 胺基 -N-((3R)-7-(9,9- 二氟 -3,7- 二氮雜雙環 [3.3.1] 壬烷 -3- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將7-((R)-3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)-9,9-二氟-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-甲酸第三丁基酯(50 mg, 0.08 mmol)及TFA (1 mL)於CH2 Cl2 (3 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。在真空下濃縮所得混合物。將殘餘物溶於NH3 (7M於MeOH中) (5 mL)中並攪拌1 h。濃縮混合物且藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19×250 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在7 min內30% B至50% B)純化粗產物以提供黃色固體形式之3-胺基-N-((3R)-7-(9,9-二氟-3,7-二氮雜雙環[3.3.1]壬烷-3-基)烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (CD3 OD, 300 MHz) δ(ppm): 8.19 (d,J = 8.1Hz, 1H), 7.29 (d,J = 8.4Hz, 1H), 6.99 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.64 (dd,J = 2.4, 8.4 Hz, 1H), 6.48 (s, 1H), 4.41-4.48 (m, 1H), 4.21-4.25 (m, 1H), 3.82-3.96 (m, 3H), 3.35-3.37 (m, 2H), 3.13-3.19 (m, 4H), 2.80-2.98 (m, 2H), 2.63 (s, 3H), 2.15-2.18 (m, 2H)。MS: (ESI, m/z): 500 [M+H]+ 。
使用標準化學操作及類似於用於製備實例2-1之程序的程序來製備表10中之下列實例。表 10 ： 1 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用RuPhos Pd G3/RuPhos作為觸媒/配體系統；在實例2-3中使用溴化物中間體 3 。在步驟4中，並不實施NH3 處理；使用製備型HPLC條件(管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19×150 mm, 5 μm；移動相A：水(0.05% NH4 OH), B: ACN；梯度：在7 min內25% B至55% B)。2 程序注意事項 ： 在步驟4中，並不實施NH3 處理；使用製備型HPLC條件(管柱：XBridge Prep C18 OBD, 30×150 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 + 0.1% NH4 OH), B: ACN；梯度：在7 min內15% B至50% B)。3 程序注意事項 ： 在步驟1中，藉由微波輻照將反應液在140℃下加熱1 h。在步驟4中，使用製備型HPLC條件(管柱：XBridge Shield RP18 OBD, 19×150 mm, 5μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在7 min內18% B至58% B)。4 程序注意事項 ： 在步驟4中，並不實施NH3 處理；使用製備型HPLC條件(管柱：XBridge Prep Phenyl OBD, 19×150 mm, 5 μm；移動相A：水(0.05% NH4 OH), B: MeOH；梯度：在12 min內45% B至75% B)。5 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用RuPhos Pd G3/RuPhos作為觸媒/配體系統。6 程序注意事項 ： 在步驟3中，藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在35 min內0% B至100% B)純化。在步驟4中，並不實施NH3 處理；使用製備型HPLC條件(管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19×150 mm, 5 μm；移動相A：水(0.05% NH4 OH), B: ACN；梯度：在7 min內15% B至65% B)。7 程序注意事項 ： 在步驟4中，使用製備型HPLC條件(管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19×250 mm, 10 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在7 min內30% B至50% B)。8 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用RuPhos Pd G3/RuPhos作為觸媒/配體系統。在步驟3中，使用於DMA中之HBTU及Et3 N之醯胺偶合條件。9 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用RuPhos Pd G3/RuPhos作為觸媒/配體系統。在步驟3中，使用於DMA中之HBTU及Et3 N之醯胺偶合條件。10 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用RuPhos Pd G3/RuPhos作為觸媒/配體系統。在步驟3中，使用羧酸中間體 18 及於DMA中之HBTU及Et3 N之醯胺偶合條件。在步驟4中，並不實施NH3 處理。11 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用RuPhos Pd G3/RuPhos作為觸媒/配體系統。在步驟3中，使用羧酸中間體 16 及於DMA中之HBTU及Et3 N之醯胺偶合條件。12 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用羧酸中間體 20 及於DMA中之HBTU及Et3 N之醯胺偶合條件。13 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用羧酸中間體 21 。14 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用RuPhos Pd G3/RuPhos作為觸媒/配體系統。在步驟3中，使用羧酸中間體 21 及於DMA中之HBTU及Et3 N之醯胺偶合條件。15 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用RuPhos Pd G3/RuPhos作為觸媒/配體系統。在步驟3中，使用羧酸中間體 21 及於DMA中之HBTU及Et3 N之醯胺偶合條件。16 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用RuPhos Pd G3/RuPhos作為觸媒/配體系統。在步驟3中，使用羧酸中間體 22 及於DMA中之HBTU及Et3 N之醯胺偶合條件。17 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用羧酸中間體 22 及於DMA中之HBTU及Et3 N之醯胺偶合條件。18 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用羧酸中間體 29 及於DMA中之HBTU及Et3 N之醯胺偶合條件。在步驟4中，並不實施NH3 處理。19 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用羧酸中間體 31 。在步驟4中，使用製備型HPLC條件(管柱：XBridge Shield RP18 OBD, 19×150 mm, 5μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在7 min內32% B至62% B)。20 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用RuPhos Pd G3/RuPhos作為觸媒/配體系統。在步驟3中，使用羧酸中間體 24 。在步驟4中，並不實施NH3 處理；使用製備型HPLC條件(管柱：XBridge Shield RP18 OBD, 19×150 mm, 5μm；移動相A：水(0.05% NH4 OH), B: ACN；梯度：在7 min內25% B至50% B)。21 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用羧酸中間體 24 及於DMA中之HBTU及Et3 N之醯胺偶合條件；藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(0.1%甲酸)，B: ACN；梯度：在40 min內0% B至100% B)純化。22 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用RuPhos Pd G3/RuPhos作為觸媒/配體系統。在步驟3中，使用羧酸中間體 26 ；藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(0.05% TFA)，B: ACN；梯度：在40 min內0% B至70% B)純化。在步驟4中，並不實施NH3 處理；使用製備型HPLC條件(管柱：XBridge Shield RP18 OBD, 19×150 mm, 5μm；移動相A：水(0.05% NH4 OH), B: ACN；梯度：在8 min內35% B至50% B)。23 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用羧酸中間體 25 及於DMA中之HBTU及Et3 N之醯胺偶合條件；藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(0.1%甲酸)，B: ACN；梯度：在40 min內0% B至100% B)純化。24 程序注意事項 ： 使用胺中間體 7-2 及羧酸中間體 21 。在醯胺偶合步驟中，在DMA溶劑中使用HBTU作為偶合試劑且使用Et3 N作為鹼。藉由製備型HPLC (管柱：C18矽膠；移動相A：於H2 O中之10 mM NH4 HCO3 ，B: ACN (在30 min內0%至60% B))純化所得醯胺。在boc-去保護步驟之後，藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD管柱, 19 ×150 mm，5µm；移動相：水(0.05% NH4 OH)及ACN；梯度：在8 min內25%至55% ACN)純化所得胺。25 程序注意事項 ： 使用胺中間體 7-1 及羧酸中間體 21 。在醯胺偶合步驟中，在DMA溶劑中使用HBTU作為偶合試劑且使用Et3 N作為鹼。藉由製備型HPLC (管柱：C18矽膠；移動相A：於H2 O中之10 mM NH4 HCO3 ，B: ACN；梯度：在30 min內0至60% B)純化所得醯胺。在boc-去保護步驟之後，藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Shield RP18 OBD, 5µm, 19 × 150 mm；移動相：水(0.05% NH4 OH)及ACN；梯度：在11 min內20%至50% ACN)純化所得胺。26 程序注意事項 ： 在醯胺偶合步驟中，在DMA溶劑中使用HBTU作為偶合試劑且使用Et3 N作為鹼。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/石油醚，1:1)純化所得醯胺。在boc-去保護之後，使用於甲醇中之7M NH3 處理粗製TFA鹽，濃縮並藉由製備型HPLC (管柱：X Bridge C18, 19 ×150 mm, 5 µm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在10 min內10%B至80%B)純化。27 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用溴化物中間體 11-2 至11-5 。使用Pd2 (dba)3 /Xphos作為觸媒/配體系統。28 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用胺中間體 49 。在偶合反應中，使用Xphos Pd G3作為觸媒系統，使用Cs2 CO3 作為鹼，且使用1,4-二噁烷作為溶劑。在步驟3中，使用於DMA中之HATU及Et3 N在50℃下達成醯胺偶合。在步驟4中，使用於二噁烷/EtOAc中之HCl達成boc-去保護。實例 3-1. 3- 胺基 -N-((R)-7-((3S,4S)-3- 胺基 -4- 甲氧基吡咯啶 -1- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 實例 3-2. 3- 胺基 -N-((R)-7-((3R,4R)-3- 胺基 -4- 甲氧基吡咯啶 -1- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 方法 1. 步驟 1. ((3R)-7-(3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-4- 甲氧基吡咯啶 -1- 基 ) 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
將 (R)-(7-溴烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(中間體2 ，170 mg, 0.47 mmol)、N-(4-甲氧基吡咯啶-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(中間體35 ，100 mg, 0.46 mmol)、RuPhos Pd G3 (38 mg, 0.05 mmol)、RuPhos (23 mg, 0.05 mmol)及Cs2 CO3 (300 mg, 0.92 mmol)於甲苯(10 mL)中之混合物在95℃下攪拌2 h。在冷卻至室溫之後，將反應液傾倒至水(20 mL)中。使用DCM (2 × 50 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠管柱(使用1:1 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供白色固體形式之((3R)-7-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲氧基吡咯啶-1-基)烷-3-基)胺基甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 498 [M+H]+ 。 步驟 2. (1-((R)-3- 胺基 烷 -7- 基 )-4- 甲氧基吡咯啶 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
將((3R)-7-(3-((第三丁氧基羰基)胺基)-4-甲氧基吡咯啶-1-基)烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(80 mg, 0.16 mmol)及Pd/C (80 mg, 10%)於EtOAc (5 mL)中之混合物在室溫及氫氣氛下攪拌3 h。過濾掉固體並使用EtOAc (10 mL × 3)洗滌。在真空下濃縮濾液以提供無色油狀物形式之(1-((R)-3-胺基烷-7-基)-4-甲氧基吡咯啶-3-基)胺基甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 364 [M+H]+ 。 步驟 3. (1-((R)-3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 ) 烷 -7- 基 )-4- 甲氧基吡咯啶 -3- 基 ) 胺基甲酸第三丁基酯
將(1-((R)-3-胺基烷-7-基)-4-甲氧基吡咯啶-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(40 mg, 0.11 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(23 mg, 0.11 mmol)、Et3 N (39 mg, 0.39 mmol)及HBTU (50 mg, 0.13 mmol)於DMA (2 mL)中之溶液在室溫下攪拌30 min。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在10 min內10%至80% B)純化以提供白色固體形式之(1-((R)-3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)-4-甲氧基吡咯啶-3-基)胺基甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 554 [M+H]+ 。 步驟 4. 3- 胺基 -N-((3R)-7-(3- 胺基 -4- 甲氧基吡咯啶 -1- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將(1-((R)-3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)-4-甲氧基吡咯啶-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(45 mg, 0.08 mmol)及TFA (1 mL)於CH2 Cl2 (3 mL)中之溶液在室溫下攪拌30 min。在真空下濃縮所得混合物。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在10 min內10%至80% B)純化粗產物以提供無色油狀物形式之3-胺基-N-((3R)-7-(3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基)烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS: (ESI, m/z): 454 [M+H]+ 。 步驟 5. 胺基 -N-((R)-7-((3S,4S)-3- 胺基 -4- 甲氧基吡咯啶 -1- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 3- 胺基 -N-((R)-7-((3R,4R)-3- 胺基 -4- 甲氧基吡咯啶 -1- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IE, 2×25 cm, 5 μm；移動相：50% EtOH/MTBE (0.1% Et2 NH)，28 min；流速：16 mL/min)分離3-胺基-N-((3R)-7-(3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基)烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺(35 mg, 0.077 mmol)之外消旋混合物以提供如下標題化合物： 黃色固體形式之胺基-N-((R)-7-((3S,4S)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基)烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺(第一洗脫異構體，RT = 13.5 min)。1 H NMR (DMSO-d6 , 300 MHz) δ(ppm): 8.32 (d,J = 8.4 Hz, 1H). 7.49 (br s, 1H), 7.31 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.21 (br s, 2H), 6.87 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.12-6.08 (br s, 1H), 5.91 (s, 1H), 4.31-4.21 (m, 1H), 4.16-4.11 (m, 1H), 3.79 (t,J = 9.9Hz, 1H), 3.63-3.62 (m, 1H), 3.51-3.46 (m,1H), 3.42-3.32 (m, 2H), 2.93 (s, 3H), 3.13-3.09 (m, 1H), 2.91-2.82 (m, 3H), 2.58 (s, 3H), 2.12-1.96 (m, 2H)。MS: (ESI, m/z): 454 [M+H]+ ； 及黃色固體形式之胺基-N-((R)-7-((3R,4R)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基)烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺(第二洗脫異構體，RT = 20.2 min)。1 H NMR (DMSO-d6 , 300 MHz) δ(ppm): 8.32 (d,J = 8.1 Hz, 1H). 7.49 (br s, 1H), 7.31 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.21 (br s, 2H), 6.86 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.11-6.08 (br s, 1H), 5.91 (s, 1H), 4.31-4.21 (m, 1H), 4.16-4.11 (m, 1H), 3.79 (t,J = 9.9Hz, 1H), 3.63-3.62 (m, 1H), 3.51-3.46 (m,1H), 3.42-3.32 (m, 2H), 2.93 (s, 3H), 3.13-3.09 (m, 1H), 2.91-2.81 (m, 3H), 2.58 (s, 3H), 2.12-1.96 (m, 2H).MS: (ESI, m/z): 454 [M+H]+ 。實例 3-1. 3- 胺基 -N-((R)-7-((3S,4S)-3- 胺基 -4- 甲氧基吡咯啶 -1- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 方法 2.
亦可使用類似於方法1之程序自((3S,4S)-4-甲氧基吡咯啶-3-基)胺基甲酸第三丁基酯(中間體36 )來製備胺基-N-((R)-7-((3S,4S)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基)烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺，其中無需步驟5之對掌性分離。
使用標準化學操作及類似於用於製備實例3-1及3-2之方法1的程序來製備表11中之下列實例。表 11 ： 1 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用胺中間體 37 ；使用Pd(dppf)Cl2 -CH2 Cl2 /Xphos作為觸媒/配體系統。在步驟3中，藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19×150 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在8 min內20% B至50% B)純化。在步驟5中，對掌性HPLC (管柱：Chiral Art Cellulose-SB, 2×25 cm, 5 μm；移動相：20% EtOH/MTBE，10 min)提供實例3-3 (RT=6.2 min，假設立體化學)及實例3-4 (RT=7.9 min，假設立體化學)。2 程序注意事項 ： 在步驟4中，使用NH3 (7M於MeOH中)處理粗產物以提供游離鹼。在步驟5中，對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IA, 2×25 cm, 5 μm；移動相A：己烷/CH2 Cl2 =3:1, B: EtOH (0.1% Et2 NH)；流速：14 mL/min；梯度：在25 min內保持50% B)提供實例3-5 (RT=16.5 min，假設立體化學)及實例3-6 (RT=21.5 min，假設立體化學)。3 程序注意事項 ： 在步驟4中，使用NH3 (7M於MeOH中)處理粗產物以提供游離鹼。在步驟5中，對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IG, 2×25 cm, 5 μm；移動相：80% MeOH (0.1% IPA)/CH2 Cl2 ，13.5 min；流速：18 mL/min)提供實例3-7 (RT=8.6 min，假設立體化學)及實例3-8 (RT=10.6 min，假設立體化學)。4 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用胺中間體 38 。在步驟4中，藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 30×150 mm, 5 μm；移動相A：水(0.05% NH4 OH), B: ACN；梯度：在7 min內15% B至60% B)純化。在步驟5中，使用對掌性管柱Chiralpak IC (2×25 cm, 5 μm)來提供實例3-9 (RT=7.1 min，假設立體化學)及實例3-10 (RT=8.9 min，假設立體化學)。5 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用於DMF中之HOBt、EDCI及DIEA之醯胺偶合條件。在步驟5中，藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IA, 2×25 cm, 5 μm；移動相：50% EtOH/己烷(0.1% Et2 NH)，23 min；流速：15 mL/min)純化以提供實例13-11 (RT=14.6 min，假設立體化學)及實例13-12 (RT=17.4 min，假設立體化學)。6 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用於DMA中之HOBt、EDCI及DIEA之醯胺偶合條件。並不實施步驟5之對掌性分離。而是，針對步驟3產物實施對掌性分離(對掌性HPLC，管柱：Chiralpak IG, 20×250 mm, 5 μm；移動相：30% EtOH/MTBE，12 min)以提供實例3-13前體(RT=6.8 min，假設立體化學)及實例3-14前體(RT=9.2 min，假設立體化學)。7 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用Pd(dppf)Cl2 -CH2 Cl2 /Xphos作為觸媒/配體系統。在步驟3中，使用羧酸中間體 30 ；使用0%至100%水(0.1%甲酸)/ACN經30 min實施反相層析。在步驟4中，使用HCl (4M於二噁烷中)。在步驟5中，藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IG, 2×25 cm, 5 μm；移動相：30% MeOH (0.1% Et2 NH)/CH2 Cl2 ，15 min)純化以提供實例13-15 (RT=9.5 min，假設立體化學)及實例13-16 (RT=11.0 min，假設立體化學)。8 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用溴化物中間體 50 。使用預觸媒tBuXphos Pd G3且使用於DMSO中之膦氮烯鹼P2 -Et在25℃下達成偶合反應。在步驟5中，使用對掌性管柱Chiralpak IC及移動相50% EtOH/己烷(0.1% Et2 NH)實施對掌性分離。實例 4-1. (R)-N-(7-(2- 氧雜 -5,8- 二氮雜螺 [3.5] 壬烷 -8- 基 ) 烷 -3- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. (R)-(7-(5- 苄基 -2- 氧雜 -5,8- 二氮雜螺 [3.5] 壬烷 -8- 基 ) 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
將 (R)-(7-溴烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(中間體2 ，166 mg, 0.44 mmol)、5-苄基-2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷(中間體33 ，100 mg, 0.44 mmol)、RuPhos Pd G3 (38 mg, 0.05 mmol)、RuPhos (21 mg, 0.05 mmol)及Cs2 CO3 (300 mg, 0.92 mmol)於甲苯(5 mL)中之混合物在95℃下攪拌16 h。在冷卻至室溫之後，將反應液傾倒至10 mL水中且使用DCM (2 × 20 mL)萃取。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用2:1 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供白色固體形式之(R)-(7-(5-苄基-2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-8-基)烷-3-基)胺基甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 500 [M+H]+ 。 步驟 2. (R)-7-(2- 氧雜 -5,8- 二氮雜螺 [3.5] 壬烷 -8- 基 ) 烷 -3- 胺
將(R)-(7-(5-苄基-2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-8-基)烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(80 mg, 0.15 mmol)及Pd/C (100 mg, 10%)於EtOAc (5 mL)中之混合物在室溫及氫氣氛下攪拌2 h。過濾出固體並使用MeOH (3×10 mL)洗滌。在真空下濃縮合併之濾液以得到淺黃色油狀物形式之(R)-7-(2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-8-基)烷-3-胺。MS (ESI,m/z ): 276 [M+H]+ 。 步驟 3. (R)-N-(7-(2- 氧雜 -5,8- 二氮雜螺 [3.5] 壬烷 -8- 基 ) 烷 -3- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將(R)-7-(2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-8-基)烷-3-胺(20 mg, 0.07 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(18 mg, 0.08 mmol)、Et3 N (33 mg, 0.33 mmol)及HBTU (42 mg, 0.11 mmol)於DMA (1 mL)中之溶液在室溫下攪拌30 min。藉由製備型HPLC (管柱：X Bridge C18, 19×150 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在30 min內10%B至80%B)純化以提供白色固體形式之(R)-N-(7-(2-氧雜-5,8-二氮雜螺[3.5]壬烷-8-基)烷-3-基)-3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H-NMR (CD3 OD, 300 MHz) δ(ppm ): 8.20 (d,J = 8.4Hz, 1H), 7.30 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.98 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.62-6.59 (m, 1H), 6.46 (s, 1H), 4.53-4.44 (m, 5H), 4.26-4.21 (m, 1H), 3.95-3.91 (m, 1H), 3.31-3.29 (m, 2H), 3.03-2.91 (m,3H), 2.89-2.88 (m, 3H), 2.63 (s, 3H)。MS (ESI,m/z ): 466 [M+H]+ 。實例 5-1. (R)-3- 胺基 -N-(7-(4,4- 二氟六氫吡啶 -1- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. (R)-(7-(4,4- 二氟六氫吡啶 -1- 基 ) 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
將(R)-(7-溴烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(中間體2 ，100 mg, 0.28 mmol)、4,4-二氟六氫吡啶(42 mg, 0.35 mmol)、RuPhos Pd G3 (23 mg, 0.03 mmol)、RuPhos (15 mg, 0.03 mmol)及Cs2 CO3 (225 mg, 0.69 mmol)於甲苯(30 mL)中之混合物在100℃下攪拌1 h。在冷卻至室溫之後，將反應液傾倒至水(10 mL)中。使用EtOAc (3 × 20 mL)萃取所得混合物。使用鹽水(2 × 20 mL)洗滌合併之有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠管柱(使用1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供灰白色固體形式之(R)-(7-(4,4-二氟六氫吡啶-1-基)烷-3-基)胺基甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 403 [M+H]+ 。 步驟 2 . (R)-7-(4,4- 二氟六氫吡啶 -1- 基 ) 烷 -3- 胺
將(R)-(7-(4,4-二氟六氫吡啶-1-基)烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(98 mg, 0.24 mmol)及Pd/C (50 mg, 10%)於EtOAc (10 mL)中之混合物在30℃及氫氣氛下攪拌2 h。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液以提供60 mg淺黃色油狀物形式之(R)-7-(4,4-二氟六氫吡啶-1-基)烷-3-胺。MS: (ESI, m/z): 269 [M+H]+ 。 步驟 3. (R)-3- 胺基 -N-(7-(4,4- 二氟六氫吡啶 -1- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將(R)-7-(4,4-二氟六氫吡啶-1-基)烷-3-胺(60 mg, 0.22 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(58 mg, 0.28 mmol)、Et3 N (90 mg, 0.89 mmol)及HBTU (106 mg, 0.28 mmol)於DMA (2 mL)中之溶液在室溫下攪拌30 min。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 30×150 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在7 min內40% B至60% B)純化以提供黃色固體形式之(R)-3-胺基-N-(7-(4,4-二氟六氫吡啶-1-基)烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz) δ(ppm): 8.32 (d,J = 8.0Hz, 1H), 7.52 (br s, 1H), 7.31 (d,J = 8.0Hz, 1H), 7.21 (br s, 2H), 6.95 (d,J = 8.4Hz, 1H), 6.57 (d,J = 8.4Hz, 1H), 6.41 (s, 1H), 4.31-4.27 (m, 1H), 4.18-4.14 (m, 1H), 3.82 (t,J = 10.0Hz, 1H), 3.28-3.25 (m, 4H), 2.92-2.83 (m, 2H), 2.58 (s, 3H), 2.09-1.97 (m, 4H)。MS: (ESI, m/z): 459 [M+H]+ 。
使用標準化學操作及類似於用於製備實例5-1之程序的程序來製備表12中之下列實例。表 12 ： 1 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用Xbridge Shield RP18 OBD管柱來進行製備型HPLC純化。實例 6-1. (R)-1-(3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 ) 烷 -7- 基 ) 六氫吡啶 -4- 甲酸 步驟 1. (R)-1-(3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 烷 -7- 基 ) 六氫吡啶 -4- 甲酸乙酯
將(R)-(7-溴烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(中間體2 ，200 mg, 0.52 mmol)、六氫吡啶-4-甲酸乙酯(130 mg, 0.79 mmol)、RuPhos Pd G3 (44 mg, 0.05 mmol)、RuPhos (24 mg, 0.05 mmol)及Cs2 CO3 (513 mg, 1.57 mmol)於甲苯(30 mL)中之混合物在90℃下攪拌2 h。在冷卻至室溫之後，過濾出固體且在真空下濃縮濾液。藉由矽膠管柱(使用1:1 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色固體形式之(R)-1-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)烷-7-基)六氫吡啶-4-甲酸乙酯。MS: (ESI, m/z): 439 [M+H]+ 。 步驟 2. (R)-1-(3- 胺基 烷 -7- 基 ) 六氫吡啶 -4- 甲酸乙酯
將(R)-1-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)烷-7-基)六氫吡啶-4-甲酸乙酯(180 mg, 0.32 mmol)及Pd/C (50 mg, 10%)於EtOAc (5 mL)中之混合物在室溫及氫氣氛下攪拌2 h。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液以提供黃色油狀物形式之(R)-1-(3-胺基烷-7-基)六氫吡啶-4-甲酸乙酯。MS: (ESI, m/z): 305 [M+H]+ 。 步驟 3. (R)-1-(3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 ) 烷 -7- 基 ) 六氫吡啶 -4- 甲酸乙酯
將(R)-1-(3-胺基烷-7-基)六氫吡啶-4-甲酸乙酯(110 mg, 0.33 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(107 mg, 0.49 mmol)、Et3 N (99 mg, 0.98 mmol)及HBTU (185 mg, 0.49 mmol)於DMA (5 mL)中之溶液在室溫下攪拌2 h。然後藉由添加5 mL水來終止反應。使用EtOAc (3 × 10 mL)萃取所得混合物。使用鹽水(2 × 30 mL)洗滌合併之有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠管柱(使用1:1 EtOAc/石油醚洗脫)純化提供黃色固體形式之(R)-1-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)六氫吡啶-4-甲酸乙酯。MS: (ESI, m/z): 495 [M+H]+ 。 步驟 4. (R)-1-(3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 ) 烷 -7- 基 ) 六氫吡啶 -4- 甲酸
將(R)-1-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)六氫吡啶-4-甲酸乙酯(40 mg, 0.07 mmol)及LiOH (1.6 mg, 0.07 mmol)於THF (2 mL)及水(0.5 mL)中之混合物在室溫下攪拌16 h。在真空下濃縮所得混合物。使用水(5 mL)稀釋殘餘物且使用3N HCl水溶液將pH調整至4。使用DCM (3 × 10 mL)洗滌所得混合物。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Shield RP18 OBD, 19×150 mm, 5μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在7 min內5% B至65% B)純化以提供黃色固體形式之(R)-1-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)六氫吡啶-4-甲酸。1 H NMR (DMSO-d 6 , 300 MHz) δ(ppm): 8.33 (d,J = 8.4Hz, 1H). 7.53 (br s, 1H), 7.31 (d,J = 8.4Hz, 1H), 7.22 (br s, 2H), 6.91 (d,J = 8.7Hz, 1H), 6.52 (dd,J = 2.4, 8.4Hz, 1H), 6.32 (s, 1H), 4.32-4.24 (m, 1H), 4.16-4.12 (m, 1H), 3.80 (t,J = 9.9Hz, 1H), 3.57-3.52 (m, 2H), 2.86-2.82 (m,2H), 2.73-2.65 (m, 2H), 2.58 (s, 3H), 2.50-2.28 (m, 1H), 1.91-1.84 (m, 2H), 1.69-1.57 (m, 2H)。MS: (ESI, m/z): 467 [M+H]+ 。
使用標準化學操作及類似於用於製備實例6-1之程序的程序來製備表13中之下列實例。表 13 ： 1 程序注意事項 ： 在步驟1中，在實例6-2中使用(3R)-吡咯啶-3-甲酸甲酯且在實例6-3中使用(3S)-吡咯啶-3-甲酸甲酯。2 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用溴化物中間體 9 。實例 7-1. (R)-3- 胺基 -N-(7-(4- 羥基六氫吡啶 -1- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. (R)-(7-(4-( 第三丁基二甲基矽基氧基 ) 六氫吡啶 -1- 基 ) 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
將(R)-(7-溴烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(中間體2 ，200 mg, 0.55 mmol)、4-(第三丁基二甲基矽基氧基)六氫吡啶(中間體39 ，142 mg, 0.66 mmol)、RuPhos Pd G3 (46 mg, 0.05 mmol)、RuPhos (26 mg, 0.06 mmol)及Cs2 CO3 (539 mg, 1.65 mmol)於甲苯(10 mL)中之混合物在100℃下攪拌3 h。在冷卻至室溫之後，過濾出固體且在真空下濃縮濾液。藉由矽膠管柱(使用1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色固體形式之(R)-(7-(4-(第三丁基二甲基矽基氧基)六氫吡啶-1-基)烷-3-基)胺基甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 497 [M+H]+ 。 步驟 2. (R)-7-(4-( 第三丁基二甲基矽基氧基 ) 六氫吡啶 -1- 基 ) 烷 -3- 胺
將(R)-(7-(4-(第三丁基二甲基矽基氧基)六氫吡啶-1-基)烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(170 mg, 0.34 mmol)及Pd/C (170 mg, 10%)於EtOAc (6 mL)中之混合物在室溫及氫氣氛下攪拌2 h。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液以提供黃色固體形式之(R)-7-(4-(第三丁基二甲基矽基氧基)六氫吡啶-1-基)烷-3-胺。MS: (ESI, m/z): 363 [M+H]+ 。 步驟 3. (R)-3- 胺基 -N-(7-(4-( 第三丁基二甲基矽基氧基 ) 六氫吡啶 -1- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將(R)-7-(4-(第三丁基二甲基矽基氧基)六氫吡啶-1-基)烷-3-胺(100 mg, 0.28 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(63 mg, 0.30 mmol)、Et3 N (84 mg, 0.83 mmol)及HBTU (157 mg, 0.41 mmol)於DMA (5 mL)中之溶液在室溫下攪拌30 min。然後藉由添加10 mL水來終止反應。使用CH2 Cl2 (3 × 15 mL)萃取所得混合物。使用鹽水(3 × 15 mL)洗滌合併之有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠管柱(使用1:1 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色固體形式之(R)-3-胺基-N-(7-(4-(第三丁基二甲基矽基氧基)六氫吡啶-1-基)烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS: (ESI, m/z): 553 [M+H]+ 。 步驟 4. (R)-3- 胺基 -N-(7-(4- 羥基六氫吡啶 -1- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將(R)-3-胺基-N-(7-(4-(第三丁基二甲基矽基氧基)六氫吡啶-1-基)烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺(30 mg, 0.05 mmol)及HCl (4N於二噁烷中) (1 mL)於CH2 Cl2 (3 mL)中之溶液在室溫下攪拌10 min。使用NaHCO3 飽和水溶液將pH調整至8。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 30×150 mm, 5μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；流速：60 mL/min；梯度：在7 min內15% B至50% B)純化以提供白色固體形式之(R)-3-胺基-N-(7-(4-羥基六氫吡啶-1-基)烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (DMSO-d 6 , 300 MHz) δ(ppm): 8.32 (d,J = 8.1Hz, 1H), 7.52 (br s, 1H), 7.32 (d,J = 8.1Hz, 1H), 7.22 (br s, 2H), 6.91 (d,J = 8.4Hz, 1H), 6.51 (dd,J = 2.4, 8.4Hz, 1H), 6.31(s, 1H), 4.65 (br s, 1H), 4.29-4.26 (m, 1H), 4.17-4.13 (m, 1H), 3.80 (t,J = 9.9Hz, 1H), 3.64-3.58 (m, 1H), 3.48-3.44 (m, 2H), 2.87-2.73 (m, 4H), 2.59 (s, 3H), 1.80-1.76 (m, 2H), 1.48-1.43 (m, 2H)。MS: (ESI, m/z): 439 [M+H]+ 。
使用標準化學操作及類似於用於製備實例7-1之程序的程序來製備表14中之下列實例。表 14 ： 1 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用胺中間體 40 。藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IC, 2×25 cm, 5 μm；移動相A：己烷/CH2 Cl2 =3:1, B: EtOH；流速：17 mL/min；梯度：在13 min內保持於50% B)分離步驟4產物以提供實例7-2 (RT=9.5 min，假設立體化學)及實例7-3 (RT=11.3 min，假設立體化學)。2 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用外消旋溴化物中間體 8 、胺中間體 45 且使用Pd(dppf)Cl2 -CH2 Cl2 /Xphos作為觸媒/配體系統。使用於DMF中之EDCI、HOBt及DIEA實施醯胺化。在步驟4後，藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak IA及移動相90% MeOH/DCM (0.1% Et2 NH)分離外消旋物以提供第一洗脫試樣(其係2種異構體之混合物)；實例7-5，作為第二洗脫試樣(假設立體化學)；及實例7-7，作為第三洗脫試樣(假設立體化學)。藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak IC及移動相30% EtOH/MTBE (0.1% Et2 NH)進一步分離2種異構體之混合物以提供實例7-4作為第一洗脫異構體且提供實例7-6作為第二洗脫異構體(假設立體化學)。 3 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用外消旋溴化物中間體 8 、胺中間體 46 且使用Pd(dppf)Cl2 -CH2 Cl2 /Xphos作為觸媒/配體系統。使用於DMF中之EDCI、HOBt及DIEA實施醯胺化。在步驟4後，藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱EnantioCel-C1and移動相25% EtOH/己烷(0.1% Et2 NH) 分離外消旋物以提供第一洗脫試樣1 (其係兩種異構體之混合物)及第二洗脫試樣2 (其係兩種異構體之混合物)。藉由SFC使用對掌性管柱EnantioPak A1-5及移動相50% CO2 /MeOH (0.1% iPrNH2 )進一步分離兩種試樣中之每一者以自試樣1提供實例7-8作為第一洗脫異構體且提供實例7-9作為第二洗脫異構體；且自試樣2提供實例7-10作為第一洗脫異構體且提供實例7-11作為第二洗脫異構體(假設立體化學)。實例 8. (R)-3- 胺基 -N-(7-(4- 氟六氫吡啶 -4- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1 . (R)-4-(3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 烷 -7- 基 )-4- 羥基六氫吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯
在-78℃下，向(R)-(7-溴烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(中間體2 ，500 mg, 1.35 mmol)於THF (13 mL)中之溶液添加n-BuLi (2.5 M於己烷中) (2.7 mL, 6.74 mmol)且在-78℃下繼續攪拌1 h。在-78℃下，向反應混合物中添加4-側氧基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(1.37 g, 6.88 mmol)於THF (2 mL)中之溶液。將所得溶液在室溫下再攪拌2 h。使用NH4 Cl飽和水溶液(10 mL)終止反應。使用EtOAc (3 × 30 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色固體形式之(R)-4-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)烷-7-基)-4-羥基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 483 [M+H]+ 。 步驟 2 . (R)-4-(3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 烷 -7- 基 )-4- 氟六氫吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯
在-78℃下，向(R)-4-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)烷-7-基)-4-羥基六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(180 mg, 0.36 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中添加DAST (179 mg, 1.11 mmol)且在-78℃下繼續攪拌1 h。使用Na HCO3 飽和水溶液(15 mL)終止反應。使用DCM (3 × 20 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:4 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供黃色固體形式之(R)-4-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)烷-7-基)-4-氟六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 485 [M+H]+ 。 步驟 3 . (R)-4-(3- 胺基 烷 -7- 基 )-4- 氟六氫吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯
將(R)-4-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)烷-7-基)-4-氟六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(90 mg, 0.18 mmol)及Pd/C (15 mg, 5%)於EtOAc (10 mL)中之混合物在30℃及氫氣氛下攪拌1 h。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液以提供黃色油狀物形式之(R)-4-(3-胺基烷-7-基)-4-氟六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 351 [M+H]+ 。 步驟 4 . (R)-4-(3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 ) 烷 -7- 基 )-4- 氟六氫吡啶 -1- 甲酸第三丁基酯
將(R)-4-(3-胺基烷-7-基)-4-氟六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(65 mg, 0.15 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(54 mg, 0.26 mmol)、EDCI (54 mg, 0.28 mmol)、HOBt (38 mg, 0.28 mmol)及DIEA (72 mg, 0.56 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液在室溫下攪拌16 h。使用水(15 mL)終止反應且使用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:20 MeOH/CH2 Cl2 洗脫)純化以提供黃色固體形式之(R)-4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)-4-氟六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 541 [M+H]+ 。 步驟 5 . (R)-3- 胺基 -N-(7-(4- 氟六氫吡啶 -4- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將(R)-4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)-4-氟六氫吡啶-1-甲酸第三丁基酯(35 mg, 0.06 mmol)及HCl (4 M於二噁烷中) (0.2 mL)於DCM (3 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。在真空下濃縮所得混合物。藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IG, 20×250 mm, 5 μm；移動相：30% EtOH (8 mM NH3 -MeOH)/MTBE，15 min)純化殘餘物以提供淺黃色固體形式之(R)-3-胺基-N-(7-(4-氟六氫吡啶-4-基)烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (DMSO-d 6 , 300 MHz) δ(ppm): 8.33 (d,J = 8.1Hz, 1H). 7.60 (br s, 1H), 7.32 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.23 (br s, 2H), 7.12 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 6.90 (dd,J = 1.5, 8.1Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 4.35-4.29 (m, 1H), 4.22-4.18 (m, 1H), 3.87 (t,J = 9.9Hz, 1H), 2.97-2.95 (m, 2H), 2.89-2.76 (m, 4H), 2.58 (s, 3H), 2.54-2.51 (m, 1H),1.97-1.71 (m, 4H)。MS: (ESI, m/z): 441 [M+H]+ 。實例 9-1. N-((R)-7-(((S)-5- 氧雜 -2- 氮雜螺 [3.4] 辛烷 -7- 基 ) 氧基 ) 烷 -3- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 實例 9-2. N-((R)-7-(((R)-5- 氧雜 -2- 氮雜螺 [3.4] 辛烷 -7- 基 ) 氧基 ) 烷 -3- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1 . (R)-(7-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧硼㖦 -2- 基 ) 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
將(R)-(7-溴烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(中間體2 ，200 mg, 0.55 mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)-1,3,2-二氧硼㖦(169 mg, 0.67 mmol)、Pd(dppf)Cl2 -CH2 Cl2 (45 mg, 0.06 mmol)及KOAc (163 mg, 1.66 mmol)於二噁烷(5 mL)中之混合物在80℃下攪拌3 h。在冷卻至室溫之後，將所得混合物傾倒至15 mL水中。使用乙酸乙酯(3 × 15 mL)萃取所得混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾，並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:50至1:5 EtOAc/石油醚之梯度洗脫)純化以得到白色固體形式之(R)-(7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)烷-3-基)胺基甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 410 [M+H]+ 。 步驟 2. (R)-(7- 羥基 烷 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
將(R)-(7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼㖦-2-基)烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(75 mg, 0.18 mmol)及過氧化氫-脲加合物(43 mg, 0.46 mmol)於甲醇(6 mL)中之溶液在室溫下攪拌30 min。在真空下去除溶劑。使用5 mL水稀釋殘餘物。藉由過濾收集固體以得到白色固體形式之(R)-(7-羥基烷-3-基)胺基甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 300 [M+H]+ 。 步驟 3. 6-(((R)-3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 烷 -7- 基 ) 氧基 )-2- 氮雜螺 [3.4] 辛烷 -2- 甲酸第三丁基酯
將(R)-(7-羥基烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(250 mg, 0.84 mmol)、7-羥基-5-氧雜-2-氮雜螺[3.4]辛烷-2-甲酸第三丁基酯(287 mg, 1.25 mmol)、PPh3 (328 mg, 1.25 mmol)及DIAD (253 mg, 1.25 mmol)於THF (8 mL)中之溶液在室溫下攪拌過夜。在真空下濃縮所得混合物。藉由矽膠層析(使用1:20至1:2 EtOAc/石油醚之梯度洗脫)純化以提供白色固體形式之6-(((R)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)烷-7-基)氧基)-2-氮雜螺[3.4]辛烷-2-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 511 [M+H]+ 。 步驟 4. 6-(((R)-3- 胺基 烷 -7- 基 ) 氧基 )-2- 氮雜螺 [3.4] 辛烷 -2- 甲酸第三丁基酯
將6-(((R)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)烷-7-基)氧基)-2-氮雜螺[3.4]辛烷-2-甲酸第三丁基酯(170 mg, 0.33 mmol)及Pd/C (80 mg, 10%)於乙酸乙酯(5 mL)中之混合物在室溫及氫氣氛下攪拌3 h，過濾掉固體且在真空下濃縮濾液以得到淺黃色油狀物形式之6-(((R)-3-胺基烷-7-基)氧基)-2-氮雜螺[3.4]辛烷-2-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 377 [M+H]+ 。 步驟 5. 6-(((R)-3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 ) 烷 -7- 基 ) 氧基 )-2- 氮雜螺 [3.4] 辛烷 -2- 甲酸第三丁基酯
將6-(((R)-3-胺基烷-7-基)氧基)-2-氮雜螺[3.4]辛烷-2-甲酸第三丁基酯(110 mg, 0.29 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(73 mg, 0.35 mmol)、Et3 N (89 mg, 0.88 mmol)及HBTU (133 mg, 0.35 mmol)於DMA (3 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(0.1%甲酸)，B: ACN；梯度：在20 min內0%至70% B)純化以提供黃色固體形式之6-(((R)-3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)氧基)-2-氮雜螺[3.4]辛烷-2-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 567 [M+H]+ 。 步驟 6. N-((3R)-7-((2- 氮雜螺 [3.4] 辛烷 -6- 基 ) 氧基 ) 烷 -3- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將6-(((R)-3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)烷-7-基)氧基)-2-氮雜螺[3.4]辛烷-2-甲酸第三丁基酯(75 mg, 0.13 mmol)及TFA (2 mL)於DCM (4 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。在真空下濃縮所得混合物以得到白色固體形式之N-((3R)-7-((2-氮雜螺[3.4]辛烷-6-基)氧基)烷-3-基)-3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺之三氟乙酸鹽。MS: (ESI, m/z): 467 [M+H]+ 。 步驟 7. N-((R)-7-(((S)-2- 氮雜螺 [3.4] 辛烷 -6- 基 ) 氧基 ) 烷 -3- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 N-((R)-7-(((R)-2- 氮雜螺 [3.4] 辛烷 -6- 基 ) 氧基 ) 烷 -3- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IG, 20×250 mm, 5 μm；移動相：20% EtOH/MTBE (0.2% IPA)，21 min)分離N-((3R)-7-((2-氮雜螺[3.4]辛烷-6-基)氧基)烷-3-基)-3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺TFA鹽(60 mg)之外消旋混合物以提供如下標題化合物： 第一洗脫異構體：灰白色固體形式之N-((R)-7-(((S)-2-氮雜螺[3.4]辛烷-6-基)氧基)烷-3-基)-3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺(RT = 14.5 min，假設立體化學)1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz) δ(ppm): 8.32 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.31 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.21 (s, 2H), 7.00 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.46-6.43 (m, 1H), 6.35 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 4.99 (s, 1H), 4.31-4.16 (m, 2H), 3.98-3.95 (m, 1H), 3.86-3.81 (m, 2H), 3.74-3.42 (m, 4H), 2.94-2.84 (m, 2H), 2.58 (s, 3H), 2.42-2.17 (m, 2H)。MS: (ESI, m/z): 467 [M+H]+ 。 第二洗脫異構體：灰白色固體形式之N-((R)-7-(((R)-2-氮雜螺[3.4]辛烷-6-基)氧基)烷-3-基)-3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺(第二洗脫異構體，RT = 17.4 min)。1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz) δ(ppm): 8.32 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.54 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.31 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.21 (s, 2H), 7.00 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 6.46-6.43 (m, 1H), 6.34 (s, 1H), 4.99 (s, 1H), 4.29-4.16 (m, 2H), 3.99-3.95 (s, 1H), 3.88-3.81 (m, 2H), 3.68-3.42 (m, 4H), 2.94-2.88 (m, 2H), 2.67 (s, 3H), 2.43-2.31 (m, 2H)。MS: (ESI, m/z): 467 [M+H]+ 。實例 10-1. (R)-3- 胺基 -N-(5- 氟 -7-( 六氫吡嗪 -1- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. (R)-4-(3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-5- 氟 烷 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將(R)-(7-溴-5-氟烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(中間體5-1 ，500 mg, 1.32 mmol)、六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(294 mg, 1.58 mmol)、Pd(dppf)Cl2 -CH2 Cl2 (106 mg, 0.13 mmol)、Xphos (63 mg, 0.13 mmol)及Cs2 CO3 (1.3 g, 3.99 mmol)於甲苯(15 mL)中之混合物在95℃下於密封管中攪拌過夜。在冷卻至室溫之後，過濾出固體且在真空下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到灰白色固體形式之(R)-4-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-5-氟烷-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 486 [M+H]+ 。 步驟 2. (R)-4-(3- 胺基 -5- 氟 烷 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將(R)-4-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-5-氟烷-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(4.9 g, 10.10 mmol)及Pd/C (0.5 g, 10%)於EtOAc (100 mL)中之混合物在室溫及氫氣氛下攪拌1 h。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液以提供黃色油狀物形式之(R)-4-(3-胺基-5-氟烷-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 352 [M+H]+ 。 步驟 3. (R)-4-(3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-5- 氟 烷 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將(R)-4-(3-胺基-5-氟烷-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(3.5 g, 9.96 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(2.5 g, 12.01 mmol)、Et3 N (3.0 g, 29.65 mmol)及HBTU (4.5 g, 11.87 mmol)於DMA (30 mL)中之溶液在室溫下攪拌30 min。藉由添加60 mL水來終止反應。使用CH2 Cl2 (50 mL × 3)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )，B: ACN；梯度：在30 min內0%至100% B；流速：90 mL/min)純化以提供灰白色固體形式之(R)-4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-5-氟烷-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 542 [M+H]+ 。 步驟 4. (R)-3- 胺基 -N-(5- 氟 -7-( 六氫吡嗪 -1- 基 ) 烷 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將(R)-4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-5-氟烷-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(30 mg, 0.05 mmol)及TFA (1 mL)於CH2 Cl2 (2 mL)中之溶液在室溫下攪拌30 min。在真空下濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19×50 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )，B: ACN；梯度：在7 min內25% B至75% B)純化粗產物以提供黃色固體形式之(R)-3-胺基-N-(5-氟-7-(六氫吡嗪-1-基)烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz) δ(ppm): 8.33 (d,J = 9 MHz, 1H), 7.58 (d,J = 9 MHz, 1H), 7.31 (d,J = 6 MHz, 1H), 7.22 (s, 2H), 6.43-6.40 (m, 1H), 6.17 (s, 1H), 4.40-4.20 (m, 1H), 4.19-4.12 (m, 1H), 3.89-3.82 (m, 1H), 3.32 (s, 1H), 3.01-2.97 (m, 4H), 2.80-2.74 (m, 6H), 2.58 (s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 442 [M+H]+ 。
使用標準化學操作及類似於用於製備實例10-1之程序的程序來製備表15中之下列實例。表 15 ： 1 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用胺中間體 35 ；使用RuPhos Pd G3/RuPhos作為觸媒/配體系統。在步驟4之後，藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IC, 2×25 cm, 5 μm；移動相A：MTBE (0.1% Et2 NH), B: EtOH；梯度：在18 min內保持於20% B)分離3-胺基-N-((3R)-7-(3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基)-5-氟烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺之外消旋混合物以提供實例10-2 (RT=8.2 min，假設立體化學)及實例10-3 (RT=10.3 min，假設立體化學)。2 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用RuPhos Pd G3/RuPhos作為觸媒/配體系統。3 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用(S)-(7-溴-5-氟烷-3-基)胺基甲酸苄基酯。4 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用羧酸中間體 21 。5 程序注意事項 ： 在步驟4中，使用於MeOH中之NH3 處理粗產物以提供游離鹼，然後藉由製備型HPLC純化。6 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用羧酸中間體 19 。7 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用羧酸中間體 22 。8 程序注意事項 ： 在Cbz-去保護(步驟2)之前，藉由使用NaH (2當量)及MeI (1.5當量)在25℃下於DMF中處理來對胺基甲酸酯實施甲基化。使用水終止反應且使用EtOAc實施萃取後處理，隨後藉由矽膠層析純化以提供相應4-(3-[[(苄基氧基)羰基](甲基)胺基]-5-氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 500 [M+H]+ 。實例 11-1. N-((2S)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 實例 11-2. N-((2R)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 方法 1. 步驟 1. 3-(6-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將(6-溴-1,2,3,4-四氫萘-2-基)胺基甲酸苄基酯(中間體8 ，2 g, 5.55 mmol)、3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(1.171 g, 5.52 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (404.96 mg, 0.55 mmol)、Xphos (527 mg, 1.11 mmol)、Cs2 CO3 (5.3 g, 16.28 mmol)於甲苯(40 mL)中之混合物在100℃下攪拌過夜。在冷卻至室溫之後，在真空下濃縮反應混合物。藉由矽膠層析(使用1:100至2:5 EtOAc/石油醚之梯度洗脫)純化以提供黃色固體形式之3-(6-(((苄基氧基)羰基)胺基)-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 492 [M+H]+ 。 步驟 2. 3-(6- 胺基 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將3-(6-(((苄基氧基)羰基)胺基)-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(1.4 g, 2.85 mmol)及Pd/C (1.4 g, 13.16 mmol)於乙醇(30 mL)中之混合物在室溫及氫氣氛下攪拌1 h。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用1:10 MeOH/CH2 Cl2 洗脫)純化以提供黃色固體形式之3-(6-胺基-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 358 [M+H]+ 。 步驟 3. 3-(6-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(175 mg, 0.84 mmol)、3-(6-胺基-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(300 mg, 0.84 mmol)、EDCI (193 mg, 1.01 mmol)、HOBt (136 mg, 1.01 mmol)、DIEA (325 mg, 2.52 mmol)於DMF (20 mL)中之混合物在20℃下攪拌18 h。使用水(50 mL)稀釋反應混合物且使用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3 EtOAc/石油醚洗脫)純化以提供3-(6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 548 [M+H]+ 。 步驟 4. 3-((S)-6-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯及 3-((R)-6-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
藉由對掌性HPLC (管柱：(R,R)-WHELK-O1-Kromasil, 0.5×25 cm, 5 μm；移動相：MeOH；檢測器：UV 190 nm至500 nm)分離3-(6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯之外消旋混合物以提供如下標題化合物：白色固體形式之3-((S)-6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(第一洗脫異構體，RT = 15.5 min)及白色固體形式之3-((R)-6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(第二洗脫異構體，RT = 20.4 min)。 步驟 5. N-((2S)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將3-((S)-6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(70 mg, 0.13 mmol)及TFA (7 mL)於DCM (28 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。在真空下濃縮反應混合物。使用5 mL DCM稀釋所得溶液。使用NH3 (於MeOH中之溶液)將溶液之pH值調整至8。在真空下濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge BEH C18 OBD, 130 Å, 19×150 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )，B: ACN；梯度：在8 min內5% B至52% B)純化以提供灰白色固體形式之N-((2S)-6-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-1,2,3,4-四氫萘-2-基)-3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (CD3 OD, 400 MHz) δ(ppm): 8.19 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.93 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.58 (s, 1H), 4.24-4.23 (m, 1H), 3.63-3.60 (m, 2H), 3.45-3.41 (m, 2H), 3.02-2.68 (m, 6H), 2.64 (s, 3H), 2.14-2.08 (m, 1H), 1.92-1.75 (m, 5H)。MS: (ESI, m/z): 449 [M+H]+ 。 步驟 6. N-((2R)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將3-((R)-6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(70 mg, 0.13 mmol)及TFA (7 mL)於DCM (28 mL)中之溶液在室溫下攪拌1 h。在真空下濃縮反應混合物。使用5 mL DCM稀釋所得溶液。使用NH3 (7M於MeOH中)將溶液之pH值調整至8。在真空下濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge BEH C18 OBD, 130 Å, 19×150 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )，B: ACN；梯度：在8 min內5% B至52% B)純化以提供灰白色固體形式之N-((2R)-6-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-1,2,3,4-四氫萘-2-基)-3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (CD3 OD, 400 MHz) δ(ppm): 8.20 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.30 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.59 (s, 1H), 4.26-4.17 (m, 1H), 3.65-3.61 (m, 2H), 3.45-3.39 (m, 3H), 3.00-2.71 (m, 6H), 2.64 (s, 3H), 2.12-2.09 (m, 1H), 1.91-1.75 (m, 5H)。MS: (ESI, m/z): 449 [M+H]+ 。實例 11-1. N-((2S)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 方法 2.
亦可根據方法1自(S)-(6-溴-1,2,3,4-四氫萘-2-基)胺基甲酸苄基酯(中間體9 )開始且跳過步驟4對掌性分離來製備N-((2S)-6-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-1,2,3,4-四氫萘-2-基)-3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。實例 11-2. N-((2R)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 方法 2.
亦可根據方法1自(R)-(6-溴-1,2,3,4-四氫萘-2-基)胺基甲酸苄基酯(中間體10 )開始且跳過步驟4對掌性分離來製備N-((2R)-6-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-1,2,3,4-四氫萘-2-基)-3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。 使用標準化學操作及類似於製備實例11-1及11-2之方法1 (或根據指示之方法2)之程序來製備表16中之下列實例。表 16 ： 1 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用羧酸中間體 16 。在步驟4中，藉由SFC (管柱：Chiralpak IA-SFC-02, 5×25 mm, 5 μm；移動相：CO2 (60%)/IPA(40%)；流速：40 mL/min；檢測器：UV 190-500 nm)達成對掌性分離以提供實例11-3前體(RT=9.8 min，假設立體化學)及實例11-4前體(RT=12.0 min，假設立體化學)。2 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用羧酸中間體 19 ；藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19×150 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )，B: ACN；梯度：在7 min內25% B至55% B)純化。在步驟4中，對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IC, 2×25 cm, 5 μm；移動相：50% EtOH/己烷，20 min；流速：16 mL/min)提供實例11-5前體(RT=11.4 min，假設立體化學)及實例11-6前體(RT=17.5 min，假設立體化學)。3 程序注意事項 ： 在步驟4中，對掌性HPLC (管柱：Chiralpak ID, 5×25 mm, 5 μm；移動相：50% EtOH/己烷；檢測器：UV 190-500 nm)提供實例11-7前體(RT=11.6 min，假設立體化學)及實例11-8前體(RT=13.6 min，假設立體化學)。4 程序注意事項 ： 在醯胺化後，對掌性HPLC條件：管柱：Chiralpak AD-H-SL002, 20×250 mm, 5 µm；30% IPA/己烷；檢測器：190 nm至500 nm。任意分配所分離對映異構體之立體化學。在boc-去保護步驟後，製備型HPLC條件：管柱：XBridge Shield RP18 OBD, 130 Å, 5 μm, 19 ( 150 mm；移動相：水(10 mM NH4 HCO3 )、ACN (在7 min內25% ACN至55%)。5 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用溴化物中間體 11-1 。在步驟3中，藉由反相層析純化粗製外消旋物：管柱：C18矽膠；移動相A：於H2 O中之10 mM NH4 HCO3 ，B：ACN，在30 min內0%至90% B。藉由以下對掌性HPLC分離對映異構體：管柱：Phenomenex Lux 5µm Cellulose-4 AXIA Packed, 2.12 × 25cm, 5µm；50% EtOH/己烷，24 min。任意分配所分離對映異構體之立體化學。在boc-去保護後，藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep OBD C18, 30 ×150 mm 5 µm；移動相：水(10 mM NH4 HCO3 + 0.1% NH3 -H2 O)及ACN (在7 min內18% ACN至52%))純化每一對映異構體。6 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用溴化物中間體 11-1 。在步驟3中，醯胺化利用HOBt、EDCI作為偶合劑，利用Et3 N作為鹼且利用DMF作為溶劑。藉由製備型HPLC純化粗製外消旋物：管柱：SunFire Prep C18, 19×150 mm；移動相A：水(0.05% NH4 HCO3 )，B: ACN (在7 min內55% ACN至90%)。藉由對掌性HPLC使用以下條件來分離對映異構體：管柱：Phenomenex Lux 5u Cellulose-4，AXIA Packed, 250×21.2 mm, 5µm；移動相：50% EtOH/己烷，19 min。任意分配所分離對映異構體之立體化學。在boc-去保護步驟之後，藉由以下製備型HPLC純化每一對映異構體：管柱：XBridge Prep C18 OBD, 5 µm,19×150 mm；移動相：水(10 mM NH4 HCO3 )及ACN (在5 min內35% ACN至最高60%)。7 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用溴化物中間體 44 且使用Ruphos Pd G3作為觸媒。在步驟4中，藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Cellulose SB及0%至5% EtOH/MTBE (0.1% Et2 NH)之洗脫劑梯度分離4種對映異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。8 程序注意事項 ： 在步驟4中，藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak ID及移動相MeOH來分離對映異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。9 程序注意事項 ： 在Boc去保護之後而非在步驟4中藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Phenomenex Lux 5µm Cellulose-4及移動相50% EtOH/己烷來分離對映異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。10 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用羧酸中間體 26 。在步驟4中，藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Phenomenex Lux 5µm Cellulose-4及移動相50% EtOH/己烷來分離對映異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。11 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用N-甲基-N-[(3S)-吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。在步驟4中，藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak IA及移動相35% EtOH/己烷來分離對映異構體。任意分配四氫萘醯胺處之立體化學。12 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用N-甲基-N-[(3R)-吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。在步驟4中，藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱(R,R)-Whelk-O1-Kromasil及移動相30% DCM/EtOH來分離對映異構體。任意分配四氫萘醯胺處之立體化學。13 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用(1S,4S)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-甲酸第三丁基酯且使用Ruphos Pd G3作為觸媒。在步驟4中，藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak ID及60%至65% MeOH/DCM之洗脫劑梯度來分離對映異構體。任意分配四氫萘醯胺處之立體化學。14 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用(1R,4R)-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷-2-甲酸第三丁基酯且使用Ruphos Pd G3作為觸媒。在步驟4中，藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak AD-H-SL001及移動相40% IPA/己烷(0.1% Et2 NH)來分離對映異構體。任意分配四氫萘醯胺處之立體化學。15 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用羧酸中間體 24 。在步驟4中，藉由SFC使用對掌性管柱Phenomenex Lux 5µm Cellulose-4及移動相60% EtOH/己烷來分離對映異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。16 程序注意事項 ： 使用實例11之方法2。在步驟1中，使用Ruphos Pd G3作為觸媒。17 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用溴化物中間體 11-1 。在步驟4中，藉由SFC使用對掌性管柱Phenomenex Lux 5µm Cellulose-4及移動相50% CO2 /EtOH:ACN (1:1)來分離對映異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。18 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用溴化物中間體 11-1 且使用Ruphos Pd G3作為觸媒。在步驟4中，藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Phenomenex Lux 5µm Cellulose-4及移動相50% EtOH/己烷來分離對映異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。實例 12-1. N-((2S)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-6- 胺基 -2- 甲基噻吩并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲醯胺及 實例 12-2. N-((2R)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-6- 胺基 -2- 甲基噻吩并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲醯胺 步驟 1. 3-(6-(6- 胺基 -2- 甲基噻吩并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲醯胺基 )-5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將3-(6-胺基-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(150 mg, 0.42 mmol)、中間體 23 6-胺基-2-甲基噻吩并[2,3-d]噻唑-5-甲酸甲酯(98 mg, 0.43 mmol)及AlMe3 (1M於甲苯中，1.7 mL, 1.7 mmol)於甲苯(6 mL)中之溶液在100℃下攪拌過夜。在冷卻至室溫之後，藉由添加10 mL甲醇來終止反應。過濾掉固體且在真空下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用1:3-1:1 EtOAc/石油醚之梯度洗脫)純化以提供白色固體形式之3-(6-(6-胺基-2-甲基噻吩并[2,3-d]噻唑-5-甲醯胺基)-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 554 [M+H]+ 。 步驟 2. 3-((S)-6-(6- 胺基 -2- 甲基噻吩并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲醯胺基 )-5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯及 3-((R)-6-(6- 胺基 -2- 甲基噻吩并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲醯胺基 )-5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
藉由對掌性HPLC (管柱：Phenomenex Lux cellulose-4, AXIA Packed, 250 × 21.2 mm, 5 μm；移動相：50%己烷:EtOH，21 min)分離3-(6-(6-胺基-2-甲基噻吩并[2,3-d]噻唑-5-甲醯胺基)-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯之外消旋混合物以提供如下標題化合物：白色固體形式之3-((S)-6-(6-胺基-2-甲基噻吩并[2,3-d]噻唑-5-甲醯胺基)-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(第一洗脫異構體，RT = 12.4 min，假設立體化學)及白色固體形式之3-((R)-6-(6-胺基-2-甲基噻吩并[2,3-d]噻唑-5-甲醯胺基)-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(第二洗脫異構體，RT = 16.3 min，假設立體化學)。MS: (ESI, m/z): 554 [M+H]+ 。 步驟 3. N-((2S)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-6- 胺基 -2- 甲基噻吩并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲醯胺
將3-((S)-6-(6-胺基-2-甲基噻吩并[2,3-d]噻唑-5-甲醯胺基)-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(40 mg, 0.07 mmol)及TFA (1 mL)於DCM (5 mL)中之溶液在室溫下攪拌30 min。在真空下濃縮所得溶液。使用2 mL DCM稀釋殘餘物。使用氨於甲醇中之溶液(7 M)將溶液之pH值調整至10。在真空下濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge BEH C18 OBD, 130 Å, 19×150 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )，B: ACN；梯度：在8 min內25% B至45% B)純化以提供白色固體形式之N-((2S)-6-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-1,2,3,4-四氫萘-2-基)-6-胺基-2-甲基噻吩并[2,3-d]噻唑-5-甲醯胺。1 H NMR (CD3 OD, 400 MHz) δ(ppm): 6.96 (d,J = 8.5 Hz, 1H), 6.72-6.65 (m, 1H), 6.62 (s, 1H), 4.38-4.19 (m, 1H), 3.72 (s, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.04 - 2.81 (m, 8H), 2.85-2.67 (m, 1H), 2.11 (d,J = 12.0 Hz, 1H), 2.03-1.91 (m, 4H), 1.82-1.65 (m, 1H)。MS: (ESI, m/z): 454 [M+H]+ 。 步驟 4. N-((2R)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-6- 胺基 -2- 甲基噻吩并 [2,3-d] 噻唑 -5- 甲醯胺
將3-((R)-6-(6-胺基-2-甲基噻吩并[2,3-d]噻唑-5-甲醯胺基)-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(50 mg, 0.09 mmol)及TFA (1 mL)於DCM (5 mL)中之溶液在室溫下攪拌30 min。在真空下濃縮所得溶液。使用2 mL DCM稀釋殘餘物。使用氨於甲醇中之溶液(7 M)將溶液之pH值調整至10。在真空下濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge BEH C18 OBD, 130 Å, 19×150 mm, 5 μm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )，B: ACN；梯度：在7 min內30% B至55% B)純化以提供白色固體形式之N-((2R)-6-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-1,2,3,4-四氫萘-2-基)-6-胺基-2-甲基噻吩并[2,3-d]噻唑-5-甲醯胺。1 H NMR (CD3 OD, 400 MHz) δ(ppm): 6.95 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.72 - 6.65 (m, 1H), 6.61 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 4.38-4.21 (m, 1H), 3.70 (s, 2H), 3.53-3.31 (m, 2H), 3.04 - 2.81 (m, 8H), 2.81-2.71 (m, 1H), 2.15 - 2.03 (m, 1H), 2.02-1.85 (m, 4H), 1.84-1.67 (m, 1H)。MS: (ESI, m/z): 454 [M+H]+ 。實例 13-1. N-((3R)-7-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-5,8- 二氟 烷 -3- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 實例 13-2. N-((3S)-7-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-5,8- 二氟 烷 -3- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺。 步驟 1 . 3-(3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-5- 氟 烷 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將中間體 15-1 3-(3-胺基-5-氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(210 mg, 0.53 mmol)、氯甲酸苄基酯(143 mg, 0.120 mL, 0.80 mmol)、碳酸鉀(200 mg, 1.45 mmol)於乙酸乙酯(2 mL)及水(2 mL)中之混合物在20℃下攪拌30 min。將混合物在真空下濃縮成粗產物，藉由矽膠層析(石油醚/EtOAc = 5:1)純化以提供白色固體形式之3-(3-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-5-氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。 MS: (ESI, m/z): 512 [M+H]+ 。 步驟 2. 3-(3-[[( 苄基氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-5,8- 二氟 -3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯及 3-(3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-5,6- 二氟 烷 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
向使用惰性氮氣氛吹掃並維持該氣氛之50-mL 3頸圓底燒瓶中放置3-(3-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-5-氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(350 mg, 0.65 mmol)、Selectfluor (267 mg, 0.75 mmol)、DCM (5 mL)及甲醇(5 mL)。將所得溶液在25℃下攪拌24 h，然後在真空下濃縮所得混合物以提供粗製殘餘物，藉由使用乙酸乙酯/石油醚(4:1)洗脫之管柱層析純化以提供3-(3-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-5,8-二氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯及3-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-5,6-二氟烷-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(其單獨轉化成期望最終實例)。兩種中間體皆具有MS: (ESI, m/z): 530 [M+H]+ 。 步驟 3. 3-(3- 胺基 -5,8- 二氟 -3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
向使用氮吹掃並維持該氣氛之燒瓶中添加3-(3-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-5,8-二氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(80 mg, 0.15 mmol)及甲醇(6 mL)。添加碳載鈀(80 mg)，然後將所得懸浮液在18℃下攪拌1 h。藉由矽藻土過濾去除固體，且在真空下濃縮所得濾液以提供黃色油狀物形式之3-(3-胺基-5,8-二氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 396 [M+H]+ 。 步驟 4 . 3-(3-[3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,8- 二氟 -3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸酯
向50-mL圓底燒瓶中添加3-(3-胺基-5,8-二氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(55 mg, 0.14 mmol)、DMA (2 mL)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(29 mg, 0.14 mmol)、DIEA (54 mg, 0.074 mL, 0.42 mmol)、EDCI (53 mg, 0.28 mmol)及HOBt (38 mg, 0.28 mmol)。將所得溶液在18℃下攪拌過夜。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相：於H2 O/ACN (在30 min內自100/0增加至30/70)中之10 mM NH4 HCO3 純化所得混合物。在真空下濃縮合併之部分以提供黃色固體形式之3-(3-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,8-二氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 586 [M+H]+ 。 步驟 5. N-((3R)-7-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-5,8- 二氟 烷 -3- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 N-((3S)-7-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-5,8- 二氟 烷 -3- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
向25-mL圓底燒瓶中添加3-(3-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,8-二氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(30 mg, 0.05 mmol)、DCM (1.5 mL)及三氟乙酸(0.5 mL)。將所得溶液在18℃下攪拌1 h。在真空下濃縮所得混合物以提供黃色固體形式之外消旋3-胺基-N-(7-[3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基]-5,8-二氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺之三氟乙酸鹽。MS: (ESI, m/z): 486 [M+H]+ 。對掌性分離 ：
藉由對掌性HPLC (管柱：ChiralArt Cellulose-SB, 2 × 25 cm, 5 µm；移動相A：己烷(0.1% Et2 NH), B: EtOH；梯度：40% B，19 min)分離三氟乙酸3-胺基-N-(7-[3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基]-5,8-二氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺 (28 mg, 0.05 mmol)。濃縮第一洗脫異構體(RT = 14.40 min)，然後凍乾以提供黃色固體形式之3-胺基-N-[(3R)-7-[3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基]-5,8-二氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺(任意分配立體化學)。MS: (ESI, m/z): 486 [M+H]+ 。1 H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ(ppm): 8.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.24 (s, 2H), 6.37-6.33 (m, 1H), 4.35-4.24 (m, 2H), 3.96-3.91 (m, 1H), 3.44 (s, 2H), 3.09-2.80 (m, 6H), 2.58 (s, 3H), 1.82-1.66 (m, 4H)。 濃縮第二洗脫異構體(RT = 16.71 min)，然後凍乾以提供黃色固體形式之3-胺基-N-[(3S)-7-[3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基]-5,8-二氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺(任意分配立體化學)。MS: (ESI, m/z): 486 [M+H]+ 。1 H NMR (DMSO-d6 , 400 MHz) δ(ppm): 8.33 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.24 (s, 2H), 6.39-6.35 (m, 1H), 4.33-4.24 (m, 2H), 3.96-3.92 (m, 1H), 3.58 (s, 2H), 3.11-2.73 (m, 6H), 2.58 (s, 3H), 1.90-1.69 (m, 4H), 1.23 (s, 1H)。
使用標準化學操作及類似於用於製備實例13-1及13-2之程序的程序來製備表17中之下列實例。表 17 ： 1 程序注意事項 ： 對掌性分離條件：管柱：ChiralArt Cellulose-SB, 2 × 25 cm, 5 µm；移動相：30% EtOH (於MeOH中之8 mM NH3 )/MTBE，15 min。2 程序注意事項 ： 使用N-氯琥珀醯亞胺在DCM溶劑中實施鹵化反應(步驟2)。使用KOH/MeOH在80℃下實施Cbz去除(步驟3) 3 h。在步驟4之後使用以下對掌性HPLC分離氯區域異構體及對映異構體之混合物(4種化合物)：管柱：XBridge BEH C18 OBD Prep管柱，130 Å, 5 μm, 19 ( 150 mm；移動相：水(10 mmol NH4 HCO3 )及ACN (在7 min內31% ACN至最高53%)。實例 14-1. N-((2R)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-5- 氰基 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 ； 實例 14-2. N-((2S)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-5- 氰基 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 ； 實例 14-3. N-((2R)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-7- 氰基 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 實例 14-4. N-((2S)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-7- 氰基 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. 外消旋 3-(6-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-1- 溴 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯及外消旋 3-(6-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3- 溴 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯之混合物
向250-mL圓底燒瓶中添加3-(6-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(1.2 g, 2.44 mmol)及DCM (96 mL)。隨後在攪拌及0℃下逐滴添加NBS (478 mg, 2.69 mmol)於DCM (24 mL)中之溶液。將所得溶液在20℃下攪拌2 h，然後藉由添加水(20 mL)驟冷。使用DCM (3 × 30 mL)萃取所得溶液。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮以提供殘餘物，藉由使用乙酸乙酯/石油醚(PE/EA=100:1至5:1)洗脫之矽膠層析純化殘餘物以提供黃色固體形式之3-(6-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-3-溴-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯及3-(6-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-1-溴-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯之混合物。MS: (ESI, m/z): 572 [M+H]+ 。 步驟 2. 外消旋 3-(6-[[( 苄基氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-3- 氰基 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯及 3-(6-[[( 苄基氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-1- 氰基 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯之混合物
向使用惰性氮氣氛吹掃並維持該氣氛之20-mL密封管中添加3-(6-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-3-溴-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯及3-(6-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-1-溴-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(460 mg, 0.81 mmol)、Zn(CN)2 (93 mg, 0.80 mmol)、Pd(PPh3 )4 (93 mg, 0.08 mmol)及N,N-二甲基甲醯胺(9 mL)之混合物。使用微波將所得混合物在120℃下輻照1 h。將反應液冷卻至室溫並藉由添加20 mL水驟冷。使用乙酸乙酯(3 × 15 mL)萃取所得溶液。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮以提供殘餘物，藉由矽膠層析純化殘餘物並使用100:1至2:1乙酸乙酯/石油醚洗脫以提供黃色油狀物形式之3-(6-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-3-氰基-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯及3-(6-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-1-氰基-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯之混合物。MS: (ESI, m/z): 517 [M+H]+ 。 步驟 3. 外消旋 3-(6- 胺基 -3- 氰基 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯及外消旋 3-(6- 胺基 -1- 氰基 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯之混合物
向使用氮吹掃並維持該氣氛之50-mL圓底燒瓶中添加3-(6-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-3-氰基-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯及3-(6-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-1-氰基-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(300 mg, 0.58 mmol)、乙醇(20 mL)及鈀碳(300 mg)之混合物。將所得懸浮液在20℃及氫氣氛下攪拌1 h。藉由矽藻土過濾去除固體且在真空下濃縮濾液以提供粗製殘餘物，藉由矽膠層析純化並使用DCM/甲醇(DCM/MeOH=10:1)洗脫以提供黃色油狀物形式之3-(6-胺基-3-氰基-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯及3-(6-胺基-1-氰基-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯之混合物。MS: (ESI, m/z): 383 [M+H]+ 。 步驟 4. 3-((R)-6-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-1- 氰基 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯 ( 峰 A ， 對映異構體 1) ； 3-((S)-6-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-1- 氰基 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯 ( 峰 A ， 對映異構體 2) ； 3-((R)-6-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-3- 氰基 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯 ( 峰 B ， 對映異構體 1) ； 3-((S)-6-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-3- 氰基 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯 ( 峰 B ， 對映異構體 2) 。
向100-mL圓底燒瓶中放置3-(6-胺基-1-氰基-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯及3-(6-胺基-3-氰基-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(150 mg, 0.39 mmol)、EDCI (90 mg, 0.47 mmol)、HOBt (63 mg, 0.47 mmol)、DIEA (152 mg, 1.18 mmol)、N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)及3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(98 mg, 0.47 mmol)之混合物。將所得溶液在20℃下攪拌2 h，然後藉由添加20 mL水驟冷。藉由過濾收集固體，且藉由製備型HPLC (管柱：XBridge BEH C18 OBD, 5 μm, 19 ( 150 mm；移動相：水(10 mM NH4 HCO3 ), ACN (在7 min內55% ACN至最高70%))純化固體。
然後藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak OD-H, 5 μm, 20 ( 250 mm；移動相A：己烷，B: EtOH, 50% B)進一步純化此混合物。此產生單一區域異構體峰A：(RT=8.45 min)及單一區域異構體峰B：(RT=12.91 min)。
藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IC, 5 μm, 20 ( 250 mm；移動相A：己烷，B: EtOH, 50% B)進一步純化峰A。此產生黃色固體形式之峰A/對映異構體1: (RT=15.55 min)及黃色固體形式之峰A/對映異構體2：(RT=21.10 min)。 任意分配所分離峰A對映異構體之立體化學。MS (對於兩種對映異構體)：(ESI, m/z): 573 [M+H]+ 。
藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IB, 5 μm, 20 ( 250 mm；移動相A：己烷，B: EtOH, 50% B)進一步純化峰B。此產生黃色固體形式之峰B/對映異構體1：(RT=7.65 min)及黃色固體形式之峰B/對映異構體2：(RT=9.22 min)。任意分配所分離峰B對映異構體之立體化學。MS (對於兩種對映異構體)：(ESI, m/z): 573 [M+H]+ 。 步驟 5. N-((2R)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-5- 氰基 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺； N-((2S)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-5- 氰基 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 ； N-((2R)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-7- 氰基 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 N-((2S)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-7- 氰基 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 第一異構體之代表性程序及光譜 ：
向50-mL圓底燒瓶中添加3-[(6R)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-1-氰基-5,6,7,8-四氫萘-2-基]-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(30 mg, 0.05 mmol)、DCM (5 mL)及TFA (1 mL)。將所得溶液在20℃下攪拌1 h，然後在真空下濃縮以提供粗製殘餘物，使用5 mL DCM稀釋該殘餘物。使用於MeOH中之NH3 (7 M)將溶液之pH調整至8，然後在真空下將所得混合物濃縮成殘餘物，藉由製備型HPLC (管柱：XBridge BEH C18 OBD Prep管柱, 130 Å, 5 μm, 19 ( 150 mm；移動相：水(10 mmol NH4 HCO3 ), ACN (在7 min內35% ACN至最高56%))純化以提供淺黃色固體形式之N-((2R)-6-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-5-氰基-1,2,3,4-四氫萘-2-基)-3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (400 MHz, MeOH-d4 ) δ(ppm): 8.20 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 7.29-7.30 (m, 2H), 6.94 (d,J = 8.5 Hz, 1H), 4.21-4.24 (m, 1H), 3.55 (s, 2H), 3.20-3.27 (m, 2H), 2.91-3.19 (m, 5H), 2.79-2.80 (m, 1H), 2.64 (s, 3H), 2.18-2.20 (m, 3H), 1.79-1.94 (m, 3H)。MS: (ESI, m/z): 473 [M+H]+ 。
使用標準化學操作及類似於用於製備實例14-1之程序的程序來製備表18中之下列實例。表 18 1 程序注意事項 ： 在步驟1中，僅觀察到一種溴化區域異構體，亦即4-(6-(((苄基氧基)羰基)胺基)-1-溴-4-氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。2 程序注意事項 ： 在步驟5之後而非在步驟4中使用對掌性管柱Chiralpak IA及移動相50% EtOH/己烷(0.1% Et2 NH)來對掌性分離對映異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。3 程序注意事項 ： 在步驟4中，使用HBTU及Et3 N在DMA中實施醯胺偶合反應。在步驟5之後而非在步驟4中使用對掌性管柱Chiralpak IE及移動相20% IPA/MTBE (0.1% Et2 NH)來對掌性分離對映異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。4 程序注意事項 ： 在步驟4中，使用羧酸中間體 24 。使用HBTU及Et3 N在DMA中實施醯胺偶合反應。在步驟5之後而非在步驟4中使用對掌性管柱Chiralpak IA及移動相40% EtOH/己烷-DCM (5:1) (0.1% Et2 NH)來對掌性分離對映異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。5 程序注意事項 ： 在步驟4中，使用HBTU及Et3 N在DMA中實施醯胺偶合反應。在步驟5之後而非在步驟4中使用對掌性管柱Chiralpak IG及移動相30% EtOH/MTBE (含有於MeOH中之8 mM NH3 )來對掌性分離對映異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。6 程序注意事項 ： 在步驟4中，使用HBTU及Et3 N在DMA中實施醯胺偶合反應。藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak IC及移動相15% EtOH/MTBE來分離對映異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。7 程序注意事項 ： 在步驟4中，使用HBTU及Et3 N在DMA中實施醯胺偶合反應。藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak IG及移動相30% EtOH/MTBE來分離對映異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。8 程序注意事項 ： 在步驟4中，使用羧酸中間體 24 。使用HBTU及Et3 N在DMA中實施醯胺偶合反應。藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak IG及移動相30% EtOH/MTBE來分離對映異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。9 程序注意事項 ： 在步驟2中，在Zn (2當量)、Zn(CN)2 (10當量)、Pd(P(t-Bu)3 )2 (0.5當量)及4,4'-二-第三丁基-2,2'-聯吡啶(1當量)存在下於DMA中達成氰化，其中在97℃下加熱2 h。10 程序注意事項 ： 在步驟4中，使用HBTU及Et3 N在DMA中實施醯胺偶合反應。藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak ID-2及移動相15% EtOH/MTBE (0.1% Et2 NH)來分離對映異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。實例 15-1. (R)-3- 胺基 -6- 甲基 -N-(3-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -7- 基 ) 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 實例 15-2. (S)-3- 胺基 -6- 甲基 -N-(3-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -7- 基 ) 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 ( 假設立體構形 ) 步驟 1 . (3- 硝基 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -7- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
將(3-側氧基環己基)胺基甲酸苄基酯(247 mg, 0.999 mmol)及1-甲基-3,5-二硝基吡啶-2(1H)-酮(300 mg, 1.507 mmol)於氨/MeOH (1M, 6 mL)中之混合物在90℃下微波處理30 min以提供微黑色-紅色溶液。在相同條件下運行相同組合物之額外11份試樣。合併12份試樣並在減壓下蒸發。將殘餘物分配於DCM (300 mL)與NaHCO3 飽和水溶液(100 mL)之間。使用鹽水(100 mL)洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾，使用矽膠處理，並在減壓下蒸發。藉由矽膠層析(於己烷中之0至50% EtOAc)純化以提供淺黃色膠形式之(3-硝基-5,6,7,8-四氫喹啉-7-基)胺基甲酸苄基酯及不期望區域異構體(3-硝基-5,6,7,8-四氫喹啉-5-基)胺基甲酸苄基酯之混合物。混合物未經進一步純化即使用。MS (ESI,m/z ): 213 [M+H]+ 。 步驟 2 . (3- 胺基 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -7- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
使用二水合氯化錫(II) (9.10 g, 40.3 mmol)及濃HCl (1 mL)處理(3-硝基-5,6,7,8-四氫喹啉-7-基)胺基甲酸苄基酯及區域異構體(2.64 g, 8.07 mmol)於乙醇(110 mL)中之溶液，然後在80℃下攪拌75 min。冷卻溶液，然後在減壓下濃縮至約15 mL。藉由添加NaHCO3 飽和水溶液來使試樣變為鹼性(pH ~9)；大約在中途，使用DCM (100 mL)稀釋試樣。研磨混合物，然後過濾，且使用DCM (50 mL)洗滌濾餅。研磨濾餅並在MeOH (200 mL)中超音波處理，然後過濾混合物。經由矽藻土545過濾輕微渾濁之濾液，然後濃縮以提供黃色固體。藉由矽膠層析(於DCM中之0至15% MeOH)純化以提供黃色固體形式之(3-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-7-基)胺基甲酸苄基酯及區域異構體之混合物。混合物未經進一步純化即使用。MS (ESI,m/z ): 298 [M+H]+ 。 步驟 3 . (3- 碘 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -7- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
使用ACN (17 mL)處理(3-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-7-基)胺基甲酸苄基酯及區域異構體之試樣(1.25 g, 4.22 mmol)。在乾冰/乙二醇浴(大約-10℃至-15℃)中冷卻材料且添加PTSA單水合物(1.61 g, 8.45 mmol)。在攪拌10 min之後，經20 min逐滴添加碘化鉀(1.05 g, 6.33 mmol)及亞硝酸鈉(0.436 g, 6.32 mmol)於水(3.4 mL)中之溶液。使用冰浴代替乾冰浴，且將微紅色-褐色混合物在0℃下攪拌3 h 40 min。使用EtOAc (50 mL)稀釋溶液，在冰浴中冷卻並使用NaHCO3 飽和水溶液處理直至鹼性(pH ~8-9)。去除有機層且使用EtOAc (50 mL)再次萃取水層。使用水及鹽水(各50 mL)依序洗滌合併之有機物，乾燥(Na2 SO4 )，過濾，使用矽膠處理，並在減壓下蒸發。藉由矽膠層析(於己烷中之0至23% EtOAc)純化以提供黃色固體形式之(3-碘-5,6,7,8-四氫喹啉-7-基)胺基甲酸苄基酯及區域異構體之混合物。混合物未經進一步純化即使用。MS (ESI,m/z ): 409 [M+H]+ 。 步驟 4 . 4-(7-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -3- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將t-BuXPhos Pd G4 (76.3 mg, 94.4 µmole)、(3-碘-5,6,7,8-四氫喹啉-7-基)胺基甲酸苄基酯及區域異構體(605.0 mg, 1.482 mmol)、六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(553.5 mg, 2.97 mmol)及第三丁醇鈉(257.1 mg, 2.68 mmol)之混合物密封於40-mL小瓶中。將氣氛抽真空並使用氮代替三次。添加二噁烷(15 mL)且將溶液在環境溫度下攪拌三天。添加來自先前試驗之相同階段材料(自40.7 mg/0.100 mmol碘起始材料)。使用EtOAc (約100 mL)稀釋混合物，使用矽膠處理，並在減壓下蒸發。藉由矽膠層析(於己烷中之0至87% EtOAc)純化以提供黃色發泡體形式之4-(7-(((苄基氧基)羰基)胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉-3-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯及區域異構體之混合物。混合物未經進一步純化即使用。MS (ESI,m/z ): 467 [M+H]+ 。 步驟 5 . 4-(7- 胺基 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -3- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將Pd/C (10%) (57.1 mg, 0.054 mmol)及4-(7-(((苄基氧基)羰基)胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉-3-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯及區域異構體之混合物(485 mg, 1.039 mmol)於MeOH (5 mL)中之懸浮液在環境溫度及氫氣氛下攪拌過夜。經由矽藻土545在真空下過濾試樣，且使用MeOH沖洗矽藻土。蒸發濾液以提供橙色膠形式之4-(7-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-3-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯及區域異構體之混合物。混合物未經進一步純化即使用。MS (ESI,m/z ): 333 [M+H]+ 。 步驟 6 . 4-(7-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -3- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
使用3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(74 mg, 0.355 mmol)、BOP (188.4 mg, 0.426 mmol)及DIEA (186.4 µL, 1.067 mmol)處理4-(7-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-3-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯及區域異構體(130 mg, 0.391 mmol)於DCM (6 ml)中之溶液。將溶液在環境溫度下攪拌4.5 h。使用EtOAc (40 mL)稀釋混合物並依序使用2M Na2 CO3 水溶液(20 mL)及鹽水(2×40 mL)洗滌。添加庚烷(約15 mL)，然後將混合物在減壓下蒸發至乾燥。藉由矽膠層析(於己烷中之0至100% EtOAc)純化以提供黃色固體形式之4-(7-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉-3-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯及區域異構體之混合物。MS (ESI,m/z ): 523 [M+H]+ 。 步驟 7 . (R)-3- 胺基 -6- 甲基 -N-(3-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -7- 基 ) 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 (S)-3- 胺基 -6- 甲基 -N-(3-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -7- 基 ) 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 區域異構體純化 ：
使用HCl (4 M於二噁烷中；1.5 mL, 6.00 mmol)處理4-(7-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉-3-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯及區域異構體(97.3 mg, 0.186 mmol)之混合物於DCM (5 mL)及MeOH (1 mL)中之溶液，並在環境溫度下靜置30 min；在5 min內，黃色沈澱物開始形成。在減壓下濃縮混合物。在Et2 O (10 mL)中研磨殘餘物，然後收集固體並使用Et2 O (20 mL)洗滌以提供黃色固體形式之3-胺基-6-甲基-N-(3-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-7-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺及區域異構體之混合物。藉由製備型HPLC (管柱：Chiralpak IB, 250 × 4.6 mm, 5 μm；移動相A：己烷，B：乙醇/Et2 NH；梯度60% B；總流速：5 mL/min；檢測器：190 nm至500 nm)純化材料以提供3-胺基-6-甲基-N-(3-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-7-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺(作為主要區域異構體峰)，其然後用於對掌性分離。對掌性純化 ： 藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IC, 2 × 25cm, 5um；移動相：己烷、0.1% Et2 NH及乙醇(保持50%乙醇30 min))將3-胺基-6-甲基-N-[3-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-7-基]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺(20 mg, 0.04 mmol, 90%)之粗產物分離成其對映異構體。分離淺黃色固體形式之第一洗脫異構體(RT = 23.0 min)，立體化學任意分配為(R)-3-胺基-6-甲基-N-(3-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-7-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) δ(ppm): 8.30 (d, J = 8.1Hz, 1H), 8.06-8.05 (br s, 1H), 7.61 (d, J = 7.5Hz, 1H), 7.31 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.16-7.15 (br s, 2H), 7.02 (d, J = 2.4Hz,1H), 4.25-4.10 (m,1H), 3.05-3.02 (m, 5H), 2.93-2.71 (m, 8H), 2.58 (s, 3H), 2.05-1.96 (m, 1H), 1.79-1.65 (m, 1H)。MS: (ESI, m/z): 423 [M+H]+ 。 分離淺黃色固體形式之第二洗脫異構體(RT = 27.5 min)，立體化學任意分配為(S)-3-胺基-6-甲基-N-(3-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-7-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6 ) δ(ppm): 8.30 (d, J = 8.1Hz, 1H), 8.06-8.05 (br s, 1H), 7.61 (d, J = 7.5Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.16-7.15 (br s, 2H), 7.02 (d, J = 2.4Hz,1H), 4.25-4.10 (m,1H), 3.05-3.02 (m, 5H), 2.93-2.71 (m, 8H), 2.58 (s, 3H), 2.05-1.96 (m, 1H), 1.79-1.65 (m, 1H)。MS: (ESI, m/z): 423 [M+H]+ 。實例 16. (R)-3- 胺基 -6- 甲基 -N-(7-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -3- 基 ) 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. (R)-4-(3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將(R)-(7-氯-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-3-基)胺基甲酸苄基酯(中間體42 ) (200 mg, 0.60 mmol)、RuPhos (28 mg, 0.06 mmol)、六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(175 mg, 0.94 mmol)、RuPhos Pd G3 (50 mg, 0.06 mmol)及Cs2 CO3 (410 mg, 1.26 mmol)於甲苯(5 mL)中之溶液在95℃下攪拌16 h。在冷卻至25℃之後，然後藉由添加水(10 mL)來終止反應。使用DCM (3 × 10 mL)萃取所得混合物且合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:2乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之(R)-4-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 469 [M+H]+ 。 步驟 2. (R)-4-(3- 胺基 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將(R)-4-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(100 mg, 0.20 mmol)及碳載鈀(20 mg, 10%)於乙酸乙酯(10 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛下攪拌2 h。過濾出固體且使用甲醇(3×10 mL)洗滌濾餅。在真空下濃縮濾液以得到白色固體形式之(R)-4-(3-胺基-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 335 [M+H]+ 。 步驟 3. (R)-4-(3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將4-[(3R)-3-胺基-2H,3H,4H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基]六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(65 mg, 0.18 mmol)、HBTU (108 mg, 0.28 mmol)、Et3 N (85 mg, 0.84 mmol)及3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(49 mg, 0.22 mmol)於DMA (3 mL)中之溶液在25℃下攪拌30 min。然後藉由添加水(10 mL)來終止反應。使用DCM (2 × 10 mL)萃取所得混合物且合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:1乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供無色油狀物形式之(R)-4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 525 [M+H]+ 。 步驟 4. (R)-3- 胺基 -6- 甲基 -N-(7-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -3- 基 ) 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將(R)-4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(45 mg, 0.08 mmol)及TFA (1 mL)於DCM (3 mL)中之溶液在25℃下攪拌30 min並在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：X Bridge C18, 19×150 mm, 5 µm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 ), B: ACN；梯度：在10 min內10% B至80% B)純化殘餘物以提供白色固體形式之(R)-3-胺基-6-甲基-N-(7-(六氫吡嗪-1-基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-3-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (DMSO-d6 , 300 MHz) δ(ppm): 8.33 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.59 (br s, 1H), 7.31 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.23 (br s, 2H), 6.14 (s, 1H), 4.27- 4.20 (m, 2H), 3.92-3.86 (m, 1H), 3.48-3.35 (m, 1H), 3.33-3.22 (m, 4H), 2.84-2.81 (m, 2H), 2.76-2.72 (m, 4H), 2.58 (s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 425 [M+H]+ 。實例 17. N-((3R)-7-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-5- 氟 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -3- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. (R)- 苄基 (7- 氯 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -3- 基 ) 胺基甲酸苄基酯
將(R)-(7-氯-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-3-基)胺基甲酸苄基酯(中間體42 ) (250 mg, 0.75 mmol)、氫化鈉(63 mg, 1.58 mmol, 60%)及苄基溴(268 mg, 1.57 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液在25℃下攪拌2 h。然後藉由添加15 mL水來終止反應。使用3 × 15 mL乙酸乙酯萃取所得混合物且合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到淺黃色固體形式之(R)-苄基(7-氯-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-3-基)胺基甲酸苄基酯。MS: (ESI, m/z): 409, 411 [M+H]+ 。 步驟 2. (R)-3-( 苄基 (( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-7- 氯 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 6- 氧化物
將(R)-苄基(7-氯-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-3-基)胺基甲酸苄基酯(300 mg, 0.70 mmol)及m-CPBA (633 mg, 3.67 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液在25℃下攪拌16 h。然後藉由添加10 mL Na2 S2 O3 (飽和)及10 mL NaHCO3 (飽和)來終止反應。使用3 × 20 mL DCM萃取所得混合物且合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用10:1 DCM/甲醇洗脫)純化殘餘物以得到淺黃色固體形式之(R)-3-(苄基((苄基氧基)羰基)胺基)-7-氯-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶6-氧化物。MS: (ESI, m/z): 425, 427 [M+H]+ 。 步驟 3. (3R)-3-( 苄基 (( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-7-(8-( 第三丁氧基羰基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 6- 氧化物
將(R)-3-(苄基((苄基氧基)羰基)胺基)-7-氯-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶6-氧化物(498 mg, 2.35 mmol)及二異丙基乙基胺(303 mg, 2.34 mmol)於第三丁醇(8 mL)中之溶液在90℃下攪拌16 h。在冷卻至25℃之後，在真空下濃縮所得混合物。藉由矽膠層析(使用10:1 DCM/甲醇洗脫)純化殘餘物以得到黃色固體形式之(3R)-3-(苄基((苄基氧基)羰基)胺基)-7-(8-(第三丁氧基羰基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶6-氧化物。MS: (ESI, m/z): 601 [M+H]+ 。 步驟 4. (3R)-3-( 苄基 (( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-7-(8-( 第三丁氧基羰基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-5- 氟 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 6- 氧化物
在0℃下，向(3R)-3-(苄基((苄基氧基)羰基)胺基)-7-(8-(第三丁氧基羰基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶6-氧化物(100 mg, 0.16 mmol)於DCM (10 mL)及三甲胺於THF中之溶液(1M, 0.83 mL, 0.83 mmol)中之溶液中添加TFAA (105 mg, 0.50 mmol)。將所得溶液在25℃下攪拌1 h並在真空下濃縮。藉由矽膠管柱(使用5:1 DCM/甲醇洗脫)純化殘餘物以得到中間體(粗製物)：((3R)-3-(苄基((苄基氧基)羰基)胺基)-7-(8-(第三丁氧基羰基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-N,N,N-三甲基-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-5-銨)。將中間體溶於DMF (4 mL)中。添加TBAF (83 mg, 0.32 mmol)。將所得溶液在90℃下攪拌30 min。在冷卻至25℃之後，然後藉由添加10 mL水來終止反應。使用3 × 10 mL乙酸乙酯萃取所得混合物且合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:2乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到黃色固體形式之(3R)-3-(苄基((苄基氧基)羰基)胺基)-7-(8-(第三丁氧基羰基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-5-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶6-氧化物。MS: (ESI, m/z): 619 [M+H]+ 。 步驟 5. 3-((R)-3- 胺基 -5- 氟 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將(3R)-3-(苄基((苄基氧基)羰基)胺基)-7-(8-(第三丁氧基羰基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-5-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶6-氧化物(58 mg, 0.09 mmol)及碳載鈀(50 mg, 5%)於乙酸乙酯(5 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛下攪拌2 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以得到淺黃色固體形式之3-((R)-3-胺基-5-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 379 [M+H]+ 。 步驟 6. 3-((R)-3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-5- 氟 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將3-((R)-3-胺基-5-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(35 mg, 0.09 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(21 mg, 0.10 mmol)、HBTU (57 mg, 0.15 mmol)及Et3 N (30 mg, 0.30 mmol)於DMA (3 mL)中之溶液在25℃下攪拌1 h。然後藉由添加10 mL水來終止反應。使用3 × 15 mL乙酸乙酯萃取所得混合物且合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:2乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到黃色固體形式之3-((R)-3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-5-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 569 [M+H]+ 。 步驟 7. N-((3R)-7-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-5- 氟 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -3- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 將3-((R)-3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-5-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(25 mg, 0.04 mmol)及TFA (1 mL)於DCM (3 mL)中之溶液在25℃下攪拌1 h。在真空下濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Shield RP18 OBD, 30 × 150 mm, 5 µm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )，B: ACN；梯度：在7 min內20% B至47% B)純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分以得到灰白色固體形式之N-((3R)-7-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-5-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-3-基)-3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (DMSO-d6 , 300 MHz) δ(ppm): 8.33 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (br s, 1H), 7.31 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.23 (s, 2H), 5.92 (s, 1H), 4.28-4.19 (m, 2H), 3.99-3.93 (m, 1H), 3.63-3.59 (m, 2H), 3.47-3.45 (m, 2H), 2.79-2.65 (m, 5H), 2.58 (s, 3H), 1.65-1.53 (m, 4H)。MS: (ESI, m/z): 469 [M+H]+ 。實例 18. N-((3R)-7-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-8- 氟 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -3- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. 3-((R)-3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將(R)-(7-氯-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-3-基)胺基甲酸苄基酯(中間體42 ) (500 mg, 1.57 mmol)、3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(401 mg, 1.89 mol)、RuPhos (88 mg, 0.19 mmol)、RuPhos Pd G3 (129 mg, 0.15 mmol)及Cs2 CO3 (1.03 g, 3.16 mmol)於甲苯(20 mL)中之溶液在95℃下攪拌過夜。在冷卻至24℃之後，過濾出固體且在真空下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用1:1乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到白色固體形式之3-((R)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 495 [M+H]+ 。 步驟 2. 3-((R)-3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-8- 氟 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
在-10℃下，向3-((R)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(500 mg, 1.01 mmol)於DCM (25 mL)及甲醇(25 mL)中之溶液中添加Selectfluor (358 mg, 1.01 mmol)於ACN (25 mL)中之溶液。將所得溶液在-10℃下攪拌2 h。在真空下濃縮所得混合物。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(0.1% TFA)，B: ACN；流速：50 mL/min；梯度：在30 min內0% B至80% B)純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分以得到黃色油狀物形式之3-((R)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-8-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 513 [M+H]+ 。 步驟 3. 3-((R)-3- 胺基 -8- 氟 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
將3-((R)-3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-8-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(100 mg, 0.20 mmol)及碳載鈀(20 mg, 10%)於乙酸乙酯(5 mL)中之懸浮液在24℃及氫氣氛下攪拌1.5 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以提供黃色油狀物形式之3-((R)-3-胺基-8-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 379 [M+H]+ 。 步驟 4. 3-((R)-3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-8- 氟 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -7- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯
在24℃下，將3-((R)-3-胺基-8-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(80 mg, 0.13 mmol，純度為60%)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(47 mg, 0.23 mmol)、Et3 N (64 mg, 0.63 mmol)及HBTU (96 mg, 0.25 mmol)於DMA (3 mL)中之溶液攪拌30 min。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )，B: ACN；流速：50 mL/min；梯度：在30 min內0% B增加至75% B)純化所得溶液。在真空下濃縮所收集部分並得到黃色固體形式之3-((R)-3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-8-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 569 [M+H]+ 。 步驟 5. N-((3R)-7-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-8- 氟 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [3,2-c] 吡啶 -3- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 在24℃下，將3-((R)-3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-8-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(40 mg, 0.07 mmol)及TFA (1 mL)於DCM (3 mL)中之溶液攪拌1 h。在真空下濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Shield RP18 OBD, 5 µm, 19×150 mm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )，B: ACN；梯度：在2 min內10% B至40% B，在7 min內增加至60%))純化混合物。凍乾所收集部分以得到淺黃色固體形式之N-((3R)-7-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-8-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-3-基)-3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (DMSO-d6 , 300 MHz) δ(ppm): 8.33 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.65 (br s, 1H), 7.31 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.23 (br s, 2H), 4.32-7.29 (m, 2H), 4.05-3.95 (m, 1H), 3.60-3.48 (m, 2H), 3.48-3.40 (m, 2H), 2.97-2.91 (m, 4H), 2.58 (s, 3H), 1.72-1.68 (m, 4H)。MS: (ESI, m/z): 469 [M+H]+ 。實例 19. (R)-3- 胺基 -6- 甲基 -N-(7-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [2,3-b] 吡啶 -3- 基 ) 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. (R)-4-(3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [2,3-b] 吡啶 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將(R)-(7-氯-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-3-基)胺基甲酸苄基酯(中間體43 ) (200 mg, 0.56 mmol)、六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(140 mg, 0.75 mmol)、RuPhos Pd G3 (52 mg, 0.06 mmol)、RuPhos (59 mg, 0.13 mmol)及Cs2 CO3 (618 mg, 1.90 mmol)於甲苯(5 mL)中之溶液在100℃下攪拌3 h。在冷卻至25℃之後，然後藉由添加10 mL水來終止反應。使用3 × 10 mL乙酸乙酯萃取所得混合物併合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到灰白色固體形式之(R)-4-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 469 [M+H]+ 。 步驟 2. ( R)-4-(3- 胺基 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [2,3-b] 吡啶 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將(R)-4-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(270 mg, 0.52 mmol)及碳載鈀(30 mg, 10%)於乙酸乙酯(20 mL)中之懸浮液在25℃下攪拌4 h。過濾出固體。將濾液在真空下濃縮成褐色油狀物形式之(R)-4-(3-胺基-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 335 [M+H]+ 。 步驟 3. (R)-4-(3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [2,3-b] 吡啶 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將(R)-4-(3-胺基-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(50 mg, 0.13 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(34 mg, 0.16 mmol)、HBTU (62 mg, 0.16 mmol)及Et3 N (45 mg, 0.44 mmol)於DMA (3 mL)中之溶液在25℃下攪拌30 min。然後藉由添加10 mL水來終止反應。使用3 × 10 mL乙酸乙酯萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(0.1%甲酸)，B: ACN；流速：50 mL/min；梯度：在40 min內0% B增加至100% B)純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分。在真空下濃縮所收集部分以得到黃色固體形式之(R)-4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 525 [M+H]+ 。 步驟 4. (R)-3- 胺基 -6- 甲基 -N-(7-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [2,3-b] 吡啶 -3- 基 ) 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將(R)-4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(30 mg, 0.05 mmol)及TFA (1 mL)於DCM (3 mL)中之溶液在25℃下攪拌30 min。在真空下濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Shield RP18 OBD, 19 × 250 mm, 10 µm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )，B: ACN；梯度：在8 min內20% B至38% B)純化殘餘物。凍乾所收集部分以得到灰白色固體形式之(R)-3-胺基-6-甲基-N-(7-(六氫吡嗪-1-基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-3-基)噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (DMSO-d6 , 400 MHz) δ(ppm): 8.33 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.55 (br s, 1H), 7.32-7.27 (m, 2H), 7.22 (br s, 2H), 6.37 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.33-4.20 (m, 2H), 3.99-3.94 (m, 1H), 3.49-3.31 (m, 5H), 2.89-2.74 (m, 6H), 2.59 (s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 425 [M+H]+ 。實例 20. (R)-3- 胺基 -N-(6- 氟 -7-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [2,3-b] 吡啶 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. (R)-4-(3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [2,3-b] 吡啶 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將(R)-(7-氯-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-3-基)胺基甲苄基酸酯(中間體43) (500 mg, 1.57 mmol)、六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(352 mg, 1.19 mol)、RuPhos Pd G3 (131 mg, 0.16 mmol)、Ruphos (146 mg, 0.31 mmol)及Cs2 CO3 (1.54 g, 4.72 mmol)於甲苯(10 mL)中之溶液在100℃下攪拌3 h。在冷卻至25℃之後，藉由添加50 mL水來終止反應。由此平行運行三個批次併合併以使用乙酸乙酯(3 × 50 mL)進行萃取後處理。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供黃色固體形式之(R)-4-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 469 [M+H]+ 。 步驟 2. (R)-4-(3-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-6- 氟 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [2,3-b] 吡啶 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
在-20℃下，向(R)-4-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(580 mg, 1.24 mmol)於DCM (25 mL)及MeOH (25 mL)中之溶液中添加Selectfluor (441 mg, 1.24 mmol)。將所得混合物在25℃下攪拌2 h。在真空下去除溶劑。使用水(30 mL)稀釋殘餘物。使用DCM (3 × 30 mL)萃取所得混合物。藉由無水Na2 SO4 乾燥合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:10-1:3乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供灰白色固體形式之(R)-4-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-6-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 487 [M+H]+ 。 步驟 3. (R)-4-(3- 胺基 -6- 氟 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [2,3-b] 吡啶 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將(R)-4-(3-(((苄基氧基)羰基)胺基)-6-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(150 mg, 0.31 mmol)及碳載鈀(20 mg, 10%)於乙酸乙酯(5 mL)中之懸浮液在25℃及氫氣氛下攪拌2 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以得到黃色油狀物形式之(R)-4-(3-胺基-6-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 353 [M+H]+ 。 步驟 4. (R)-4-(3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-6- 氟 -3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [2,3-b] 吡啶 -7- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將(R)-4-(3-胺基-6-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(90 mg, 190 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(56.0 mg, 270 mmol)、HBTU (107 mg, 0.28 mmol)及Et3 N (77 mg, 0.76 mmol)於DMA (4 mL)中之溶液在25℃下攪拌1 h。使用水(10 mL)終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(0.1% TFA)，B: ACN；流速：50 mL/min；梯度：在40 min內0% B至70% B)純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分以提供黃色固體形式之(R)-4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-6-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 543 [M+H]+ 。 步驟 5. (R)-3- 胺基 -N-(6- 氟 -7-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-3,4- 二氫 -2H- 吡喃并 [2,3-b] 吡啶 -3- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將(R)-4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-6-氟-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(100 mg, 0.18 mmol)及TFA (1 mL)於DCM (3 mL)中之溶液在25℃下攪拌30 min。在真空下濃縮所得混合物。添加NH3 於甲醇中之溶液(7M) (5 mL)。將所得混合物在25℃下攪拌30 min。在真空下濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep OBD C18, 30 × 150 mm 5 µm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )，B: ACN；流速：60 mL/min；梯度：在7 min內20% B至45% B)純化殘餘物以提供灰白色固體形式之(R)-3-胺基-N-(6-氟-7-(六氫吡嗪-1-基)-3,4-二氫-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (DMSO-d6 , 300 MHz) δ(ppm): 8.32 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.59 (br s, 1H), 7.36-7.30 (m, 2H), 7.21 (br s, 2H), 4.33-4.19 (m, 2H), 4.01-3.95 (m, 1H), 3.23-3.20 (m, 4H), 2.89-2.73 (m, 6H), 2.58 (s, 3H)。MS: (ESI, m/z): 443 [M+H]+ 。實例 21-1. N-((2R)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-5- 氟 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. 3-(6-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3- 氟 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯及 3-(6-((( 苄基氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-1- 氟 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯之混合物
將3-(6-(((苄基氧基)羰基)胺基)-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(800 mg, 1.63 mmol)及Selectfluor (634 mg, 1.79 mmol)於ACN (16 mL)中之溶液在20℃下攪拌18 h。藉由添加30 mL水來終止反應。使用3 × 10 mL乙酸乙酯萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1%-50% EtOAC/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之區域異構體3-(6-(((苄基氧基)羰基)胺基)-3-氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯及3-(6-(((苄基氧基)羰基)胺基)-1-氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯之混合物。MS: (ESI, m/z): 510 [M+H]+ 。 步驟 2. 3-(6- 胺基 -3- 氟 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯及 3-(6- 胺基 -1- 氟 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯之混合物
將3-(6-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-3-氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)- 3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯及3-(6-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-1-氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯之混合物(508 mg, 1.00 mmol)及碳載鈀(100 mg, 10%)於乙酸乙酯(100 mL)中之漿液在20℃及氫氣氛下攪拌1 h。過濾出固體。在真空下濃縮所得混合物。藉由矽膠層析(使用1%-50% MeOH/DCM洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之區域異構體3-(6-胺基-3-氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯及3-(6-胺基-1-氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯之混合物。MS: (ESI, m/z): 376 [M+H]+ 。 步驟 3. 3-(6-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-1- 氟 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯及 3-(6-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-3- 氟 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 )-3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -8- 甲酸第三丁基酯之混合物
將3-(6-胺基-1-氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯及3-(6-胺基-3-氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯之混合物(150 mg, 0.40 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(99 mg, 479.45 mmol)、EDCI (92 mg, 0.48 mmol)、HOBt (65 mg, 0.48 mmol)及DIEA (155 mg, 1.20 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液在20℃下攪拌2 h。藉由添加20 mL水來終止反應。藉由過濾收集固體且藉由製備型HPLC (管柱：XBridge BEH C18 OBD, 130 Å, 5 μm, 19 × 150 mm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )，B: ACN (在7 min內60% ACN至80%))純化粗產物以提供標題化合物之混合物。
對掌性分離. 藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IA, 250 × 20 mm, 5 um；流速：15 mL/min；移動相10% MeOH/MTBE；波長：190 nm至500 nm)來部分地分離區域異構體及對映異構體之混合物以提供3-((R)-6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基) -1-氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯及3-((R)-6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-3-氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯之混合物(峰1 ：RT = 7.37 min；任意分配立體化學)；白色固體形式之3-((S)-6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-1-氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(峰2 ：RT = 7.69 min；任意分配立體化學)；及白色固體形式之3-((S)-6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-3-氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(峰3 ：RT = 13.70 min；任意分配立體化學)。
藉由對掌性HPLC (管柱：Phenomenex Lux 5u Cellulose-4, AXIA Packed, 250 × 21.5 mm, 5 um；流速：18 mL/min，移動相：MeOH；波長：190 nm至500 nm)進一步純化峰 1 以提供白色固體形式之3-((R)-6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基) -1-氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(RT = 13.56 min；任意分配立體化學)及白色固體形式之3-((R)-6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-3-氟-5,6,7,8 -四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(RT = 17.31 min；任意分配立體化學)。所有4種異構體之MS：(ESI, m/z): 566 [M+H]+ 。 步驟 4. N-((2R)-6-(3,8- 二氮雜雙環 [3.2.1] 辛烷 -3- 基 )-5- 氟 -1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將3-((R)-6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-3-氟-5,6,7,8 -四氫萘-2-基)-3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁基酯(25 mg, 0.04 mmol)及TFA (1 mL)於DCM (5 mL)中之溶液在20℃下攪拌1 h。在真空下濃縮所得混合物。使用5 mL DCM稀釋殘餘物。使用於MeOH中之NH3 (7 M)將溶液之pH調整至8。在真空下濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 130 Å, 5 μm, 19 ( 150 mm；移動相：水(10 mM NH4 HCO3 )、ACN (在7 min內25% ACN至最高55%))純化殘餘物以提供灰白色固體形式之N-((2R)-6-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-5-氟-1,2,3,4-四氫萘-2-基)-3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (甲醇-d4 ，400 MHz) δ(ppm): 8.20 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.30 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.80-6.76 (m, 2H), 4.25-4.17 (m, 1H), 3.53-3.51 (m, 2H), 3.16-3.14 (m, 2H), 3.10-2.99 (m, 2H), 2.92-2.90 (m, 2H), 2.82-2.74 (m, 2H), 2.64 (s, 3H), 2.18-2.12 (m, 1H), 2.04-2.02 (m, 2H), 1.87-1.82 (m, 3H)。MS: (ESI, m/z): 466 [M+H]+ 。
使用標準化學操作及類似於彼等用於製備實例21-1之程序的程序自步驟3中所分離之剩餘三種異構體來製備表19中之前三個實例。使用標準化學操作及類似於彼等用於製備實例21-1至21-4之程序的程序來製備表19中之其餘實例。表 19 ： 1 程序注意事項 ： 藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak-AD-H-SL002及移動相50% EtOH/己烷來部分地分離區域異構體及對映異構體之混合物以提供實例21-7前體(作為第一洗脫試樣)、實例21-8前體(作為第二洗脫試樣)及兩個峰之混合物(作為第三洗脫試樣)。藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak-IC及移動相30% IPA/MTBE來進一步分離混合物以提供實例21-5前體作為第一洗脫試樣且提供實例21-6前體作為第二洗脫試樣。任意分配所分離對映異構體之立體化學。2 程序注意事項 ： 藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak-IA及移動相EtOH來部分地分離區域異構體及對映異構體之混合物以提供實例21-9前體(作為第一洗脫試樣)、兩個峰之混合物(作為第二洗脫試樣)及實例21-12前體(作為第三洗脫試樣)。藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱(R,R)-Whelk-O1-Kromasil及移動相10% EtOH/MTBE來進一步分離混合物以提供實例21-10前體作為第一洗脫試樣且提供實例21-11前體作為第二洗脫試樣。任意分配所分離對映異構體之立體化學。實例 22-1. (S)-3- 胺基 -N-(5,8- 二氟 -6-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 實例 22-2. (R)-3- 胺基 -N-(5,8- 二氟 -6-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. 4-(6-( 苄基氧基羰基胺基 )-1,4- 二氟 - 5,6,7, 8- 四氫萘 -2- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
在0℃下，向4-(6-(苄基氧基羰基胺基)-4-氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(3.00 g, 6.20 mmol)於1:1 DCM/MeOH (100 mL)中之溶液中添加Selectfluor (2.20 g, 6.20 mmol)。將所得溶液在20℃下攪拌過夜。在0℃下添加兩個額外部分之Selectfluor (1.1 g, 3.1mmol)並在20℃下攪拌4 h。然後將反應混合物傾倒至80 mL水中。使用3 × 100 mL DCM萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用3:1石油醚/乙酸乙酯洗脫)純化殘餘物以提供淺黃色固體形式之4-(6-(苄基氧基羰基胺基)-1,4-二氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 502 [M+H]+ 。 步驟 2 . 4-(6- 胺基 -1,4- 二氟 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將4-(6-(苄基氧基羰基胺基)-1,4-二氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(530 mg, 1.06 mmol)及碳載鈀(100 mg, 10%)於乙酸乙酯(10 mL)中之溶液在20℃及氫氣氛下攪拌2 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以提供黃色固體形式之4-(6-胺基-1,4-二氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 368 [M+H]+ 。 步驟 3 . 4-(6-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-1,4- 二氟 -5,6,7,8- 四氫萘 -2- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將4-(6-胺基-1,4-二氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(360 mg, 0.74 mmol，75%純度)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(188 mg, 0.90 mmol)、HBTU (343 mg, 0.90 mmol)及Et3 N (0.31 mL, 2.26 mmol)於DMA (5 mL)中之溶液在20℃下攪拌30 min。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(0.05%甲酸)，B: ACN (在30 min內0% ACN至最高80%))純化粗產物。在真空下濃縮所收集部分以提供黃色固體形式之4-(6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-1,4-二氟-5,6,7,8 -四氫萘-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 558 [M+H]+ 。 步驟 4 . 對掌性分離 .
藉由對掌性HPLC (管柱：ChiralArt Cellulose-SB, 2×25 cm, 5 µm；移動相：30% EtOH/己烷，13 min)分離外消旋4-(6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-1,4- 二氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(250 mg)。在真空下濃縮第一洗脫異構體(RT=9.05 min)以提供黃色固體形式之(S)-4-(6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-1,4-二氟 -5,6,7,8-四氫萘-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(任意分配立體化學)。在真空下濃縮第二洗脫異構體(RT=10.15 min)以提供黃色固體形式之(R)-4-(6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-1,4-二氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(任意分配立體化學)。兩種異構體之MS：(ESI, m/z): 558 [M+H]+ 。 步驟 5. (S)-3- 胺基 -N-(5,8- 二氟 -6-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將(S)-4-(6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-1,4-二氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(60 mg, 0.11 mmol)及三氟乙酸(1 mL)於DCM (3 mL)中之溶液在20℃下攪拌1 h。在真空下濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep OBD C18, 30 × 150 mm, 5 µm；移動相A：水(0.05% NH4 OH)，B: ACN (在7 min內15% ACN至最高50%))純化殘餘物。凍乾所收集部分以提供灰白色固體形式之(S)-3-胺基-N-(5,8-二氟-6-(六氫吡嗪-1-基)-1,2,3,4-四氫萘-2-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (CD3 OD, 300 MHz) δ(ppm): 8.17 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.30 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.67-6.65 (m, 1H), 4.25-4.17 (m, 1H), 3.14-2.97 (m, 10H), 2.82-2.70 (m, 1H), 2.64-2.54 (m, 4H), 1.89-1.74 (m, 1H)。MS: (ESI, m/z): 458 [M+H]+ 。 步驟 6. (R)-3- 胺基 -N-(5,8- 二氟 -6-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-1,2,3,4- 四氫萘 -2- 基 )-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將(R)-4-(6-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-1,4-二氟-5,6,7,8-四氫萘-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(90 mg, 0.16 mmol)及三氟乙酸(1.5 mL)於DCM (4 mL)中之溶液在20℃下拌1 h。在真空下濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC (Column, XBridge Prep OBD C18, 30×150 mm, 5 µm；移動相A：水(0.05% NH4 OH)，B: ACN (在7 min內15% ACN至最高50%))純化殘餘物。凍乾所收集部分以提供灰白色固體形式之(R)-3-胺基-N-(5,8-二氟-6-(六氫吡嗪-1-基)-1,2,3,4-四氫萘-2-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (DMSO-d6 , 300 MHz) δ(ppm): 8.31 (d,J = 8.4Hz, 1H), 7.64 (d,J = 7.5Hz, 1H), 7.31 (d,J = 8.1Hz, 1H), 7.17 (s, 2H), 6.70-6.68 (m, 1H), 4.13-4.04 (m, 1H), 2.92-2.81 (m, 10H), 2.73-2.55 (m, 5H), 2.06-1.97 (m, 1H), 1.78-1.68 (m, 1H)。MS: (ESI, m/z): 458 [M+H]+ 。
使用標準化學操作及類似於用於製備實例22-1及22-2之程序的程序來製備表20中之下列實例。表 20 ： 1 程序注意事項 ： 在步驟4中，藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak IG及移動相15% EtOH/MTBE來分離立體異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。2 程序注意事項 ： 在步驟4中，藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiral Art Cellulose-SB及移動相10% EtOH/MTBE來分離立體異構體。任意分配所分離對映異構體之立體化學。實例 23-1. 7- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3- 胺基 -4- 甲氧基吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-3- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡嗪 -6- 甲醯胺 方法 1. 步驟 1. N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4- 甲氧基吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯
將N-[(6S)-2-(三氟甲烷磺醯基氧基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(中間體47-2 ) (500 mg, 1.16 mmol)、N-[(3S,4S)-4-甲氧基吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(300 mg, 1.39 mmol)、RuPhos Pd G3 (195 mg, 0.230 mmol)、RuPhos (108 mg, 0.230 mmol)及Cs2 CO3 (1.14 g, 3.49 mmol)於甲苯(10 mL)中之混合物在95℃下攪拌3 h。在冷卻至20℃之後，過濾出固體且在真空下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用5:2石油醚/乙酸乙酯洗脫)純化殘餘物以得到褐色固體形式之N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-甲氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 497 [M+H]+ 。 步驟 2. N-[(3S,4S)-1-[(6S)-6- 胺基 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-4- 甲氧基吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-甲氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(450 mg, 0.910 mmol)及碳載鈀(450 mg, 10%)於乙酸乙酯(10 mL)中之混合物在20℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌3 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以得到白色固體形式之N-[(3S,4S)-1-[(6S)-6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-甲氧基吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 362 [M+H]+ 。 步驟 3. N-[(3S,4S)-1-(6-[7- 胺基 -3- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡嗪 -6- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 )-4- 甲氧基吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將三乙胺(0.400 mL, 2.92 mmol)及HBTU (377 mg, 0.990 mmol)添加至第三丁基 N-[(3S,4S)-1-(6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基)-4-甲氧基吡咯啶-3-基]胺基甲酸酯(300 mg, 0.830 mmol)及7-胺基-3-甲基噻吩并[2,3-b]吡嗪-6-甲酸(174 mg, 0.830 mmol)於DMA (5 mL)中之攪拌溶液中。將所得溶液在20℃下攪拌2 h。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )及B: ACN (在30 min內0%至70% B))純化混合物。在真空下濃縮所收集部分以得到綠色固體形式之N-[(3S,4S)-1-(6-[7-胺基-3-甲基噻吩并[2,3-b]吡嗪-6-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基)-4-甲氧基吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 554 [M+H]+ 。 步驟 4. 7- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3- 胺基 -4- 甲氧基吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-3- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡嗪 -6- 甲醯胺
將N-[(3S,4S)-1-[(6S)-6-[7-胺基-3-甲基噻吩并[2,3-b]吡嗪-6-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-甲氧基吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(300 mg, 0.470 mmol)及TFA (3 mL)於DCM (10 mL)中之溶液在20℃下攪拌30 min且然後在真空下濃縮。使用NH3 於MeOH中之溶液(15 mL, 7M)將殘餘物在20℃下處理1 h。在真空下濃縮所得溶液。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19 × 150 mm 5 µm；移動相A：水(含有10 mM NH4 HCO3 )及B: ACN (在7 min內20%至42% B))純化殘餘物以提供黃色固體形式之7-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-3-甲基噻吩并[2,3-b]吡嗪-6-甲醯胺。MS (ESI,m/z ): 454 [M+H]+ 。1 H NMR (DMSO-d6 , 400 MHz) δ(ppm): 8.65 (s, 1H), 7.81 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.20 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 6.92 (br s, 2H), 6.23 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.28-4.12 (m, 1H), 3.62-3.59 (m, 2H), 3.48-3.41 (m, 2 H), 3.36-3.33 (m, 4H), 3.14-3.12 (m, 1H), 2.84-2.73 (m, 4 H), 2.66 (s, 3 H), 2.05-2.00 (m, 1 H), 1.90-1.83 (m, 1H), 1.79 (br s, 2H)。實例 23-1. 7- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3- 胺基 -4- 甲氧基吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-3- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡嗪 -6- 甲醯胺及 實例 23-2. 7- 胺基 -N-[(6R)-2-[(3S,4S)-3- 胺基 -4- 甲氧基吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-3- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡嗪 -6- 甲醯胺 方法 2.
亦自外消旋N-[2-(三氟甲烷磺醯基氧基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(中間體47-1 )開始且遵循類似於方法1之程序來獲得7-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-3-甲基噻吩并[2,3-b]吡嗪-6-甲醯胺。藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak IE及洗脫劑系統50% EtOH/MTBE (含有於MeOH中之2 mM NH3 )分離外消旋7-胺基-N-[2-[(3S,4S)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-3-甲基噻吩并[2,3-b]吡嗪-6-甲醯胺之對映異構體以提供黃色固體形式之7-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-3-甲基噻吩并[2,3-b]吡嗪-6-甲醯胺作為第一洗脫異構體且提供黃色固體形式之7-胺基-N-[(6R)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-3-甲基噻吩并[2,3-b]吡嗪-6-甲醯胺作為第二洗脫異構體。1 H NMR (DMSO-d6 , 400 MHz) δ(ppm): 8.65 (s, 1H), 7.83 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.20 (d,J = 8.4Hz, 1H), 6.93 (br, 2H), 6.24 (d,J = 8.8Hz, 1H), 4.20-4.11(m, 1H), 3.63-3.56 (m, 2H), 3.47-3.44 (m, 2H), 3.33 (s, 3H), 3.15-3.13 (m, 1H), 2.84-2.73 (m, 4H), 2.65 (s, 3H), 2.05-1.98 (m, 1H), 1.91-1.83 (m, 2H)。MS (ESI,m/z ): 454 [M+H]+ 。
使用標準化學操作及類似於製備實例23-1之方法1 (或根據指示之方法2)之程序來製備表21中之下列實例。表 21 ： 1 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用羧酸中間體 21 。2 程序注意事項 ： 遵循方法2，藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak IE及洗脫劑梯度30%至35% EtOH/MTBE (含有於MeOH中之2 mM NH3 )來分離立體異構體。3 程序注意事項 ： 遵循方法2，藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak ID-3及移動相30% EtOH/(己烷:DCM=3:1，含有0.1%DIEA)來分離立體異構體。4 程序注意事項 ： 在步驟3中，使用羧酸中間體 24 。5 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用(2S)-2-甲基六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。6 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用(2R)-2-甲基六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。7 程序注意事項 ： 跳過步驟1及步驟2，在步驟3中使用胺中間體 52-1 。8 程序注意事項 ： 跳過步驟1及步驟2，在步驟3中使用胺中間體 52-2 。實例 24-1. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3- 胺基 -4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 方法 1. 步驟 1 . N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯
將N-[(6S)-2-(三氟甲烷磺醯基氧基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(中間體47-2 ) (800 mg, 1.85 mmol)、N-[(3R,4R)-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(中間體48-2 ) (513 mg, 2.23 mmol)、RuPhos Pd G3 (155 mg, 0.186 mmol)、RuPhos (86.7 mg, 0.186 mmol)及Cs2 CO3 (1.21 g, 3.71 mmol)於甲苯(10 mL)中之混合物在90℃下攪拌3 h。在冷卻至25℃之後，過濾出固體。在真空下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用1:2乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 511 [M+H]+ 。 步驟 2 . N-[1-[(6S)-6- 胺基 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(550 mg, 1.07 mmol)及碳載鈀(80 mg, 10%)於乙酸乙酯(5 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌1 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以得到白色固體形式之N-[1-[(6S)-6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(粗製物)。MS (ESI,m/z ): 377 [M+H]+ 。 步驟 3 . N-[(3R,4R)-1-[(6S)-6-[3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將Et3 N (0.50 mL, 3.58 mmol)及HBTU (453 mg, 1.19 mmol)添加至N-[(3R,4R)-1-[(6S)-6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(450 mg, 1.19 mmol)及3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(248 mg, 1.19 mmol)於DMA (4 mL)中之攪拌溶液中。將所得溶液在25℃下攪拌2 h。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.05% TFA)及B: ACN (在25 min內15%至90%))純化混合物。在真空下濃縮所收集部分以得到黃色固體形式之N-[(3R,4R)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 567 [M+H]+ 。 步驟 4 . 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3- 胺基 -4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將N-[(3R,4R)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(450 mg, 0.794 mmol)及TFA (3 mL)於DCM (12 mL)中之溶液在25℃下攪拌1 h。在真空下濃縮混合物。使用NH3 於MeOH中之溶液(2 mL, 7M)處理殘餘物。將所得混合物攪拌10 min並在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Shield RP18 OBD, 30 ×150 mm, 5 µm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )及B: ACN (在7 min內27%至37%)；流速：60 mL/min)純化殘餘物。凍乾所收集部分以得到白色固體形式之3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-胺基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI,m/z ): 467 [M+H]+ 。1 H NMR (DMSO-d6 , 400 MHz) δ(ppm): 8.31 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.59 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.31 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.19-7.17 (m, 3H), 6.20 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.15-4.08 (m, 1H), 3.61-3.51 (m, 2H), 3.52-3.35 (m, 3H), 3.29 (s, 3H), 3.25-3.15 (m, 2H), 2.81-2.64 (m, 4H), 2.60 (s, 3H), 2.49-2.38 (m, 1H), 2.09-1.98 (m, 1H), 1.91-1.80 (m, 1H), 1.61 (br s, 2H)。實例 24-1. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3- 胺基 -4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 實例 24-2. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3- 胺基 -4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 方法 2.
亦自順式外消旋物N-[4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(中間體48-1 )且遵循類似於方法1之程序來獲得3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-胺基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak IA及移動相50% A：己烷:DCM=3:1及50% B: EtOH (含有0.1% Et2 NH)來分離順式外消旋物N-[1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(步驟3產物)之對映異構體以提供白色固體形式之N-[(3R,4R)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯作為第一洗脫異構體(RT=9.3 min)且提供白色固體形式之N-[(3S,4S)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯作為第二洗脫異構體(RT=11.3 min)。
藉由遵循類似於方法1步驟4之程序轉化N-[(3S,4S)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯來獲得3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。1 H NMR (DMSO-d6 , 400 MHz) δ(ppm): 8.30 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 (br s, 1H), 7.31 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.18-7.16 (m, 3H), 6.20 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.18-4.09 (m, 1H), 3.61-3.51 (m, 2H), 3.50-3.39 (m, 3H), 3.28 (s, 3H), 3.21-3.17 (m, 2H), 2.81-2.64 (m, 4H), 2.67 (s, 3H), 2.46-2.40 (m, 1H), 2.09-1.91 (m, 1H), 1.91-1.80 (m, 1H), 1.55 (br s, 2H)。MS (ESI,m/z ): 467 [M+H]+ 。實例 25. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3- 胺基 -4-( 二氟甲基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4-( 二氟甲基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯
將N-[(6S)-2-(三氟甲烷磺醯基氧基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(中間體47-2 ) (480 mg, 1.09 mmol)、N-[(3S,4R)-4-(二氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(中間體51-2 ) (284 mg, 1.20 mmol)、RuPhos (51.0 mg, 0.109 mmol)、RuPhos Pd G3 (91.0 mg, 0.109 mmol)及Cs2 CO3 (890 mg, 2.73 mmol)於甲苯(10 mL)中之混合物在95℃下攪拌4 h。在冷卻至25℃之後，過濾出固體。在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用1:1乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(二氟甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 517 [M+H]+ 。 步驟 2. N-[(3S,4R)-1-[(6S)-6- 胺基 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-4-( 二氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(二氟甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(350 mg, 0.664 mmol)及Pd/C (350 mg, 10%)於乙酸乙酯(10 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛下攪拌2 h。過濾出固體且使用乙酸乙酯(3 × 10 mL)洗滌濾餅。在減壓下濃縮濾液以提供褐色固體形式之N-[(3S,4R)-1-[(6S)-6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(二氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 383 [M+H]+ 。 步驟 3. N-[(3S,4R)-1-[(6S)-6-[3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-4-( 二氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將N-[(3S,4R)-1-[(6S)-6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(二氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(240 mg, 0.615 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(141 mg, 0.677 mmol)、Et3 N (0.260 mL, 1.85 mmol)及HBTU (280 mg, 0.738 mmol)於DMA (5 mL)中之溶液在25℃下攪拌6 h。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.1% TFA)及B: ACN (在30 min內0%至60%))純化混合物以提供黃色固體形式之N-[(3S,4R)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(二氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 573 [M+H]+ 。 步驟 4. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3- 胺基 -4-( 二氟甲基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
在0℃下，向N-[(3S,4R)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(二氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(300 mg, 0.513 mmol)於DCM (15 mL)中之攪拌溶液中逐滴添加TFA (5 mL)。將所得混合物在25℃下攪拌40 min。在真空下濃縮所得混合物。在真空下濃縮所得混合物。使用NH3 (15 mL，於MeOH中之7 M)處理殘餘物。將溶液在25℃下攪拌30 min並在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep Phenyl OBD, 19 × 150 mm, 5 µm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )及B: ACN (在8 min內20%至37%)；流速：60 mL/min)純化殘餘物。凍乾產物部分以提供白色固體形式之3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-胺基-4-(二氟甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI,m/z ): 473 [M+H]+ 。1 H NMR (DMSO-d6 , 400 MHz) δ(ppm): 8.31 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.59 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.31 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.21 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.17 (br s, 2H), 6.34-6.05 (m, 2H), 3.68-3.57 (m, 2H), 3.51-3.48 (m, 1H), 3.39-3.77 (m, 1H), 3.04-3.00 (m, 1H), 2.81-2.75 (m, 4H), 2.72 (s, 3H), 2.48-2.42 (m, 1H), 2.08-1.91 (m, 1H), 1.90-1.78 (m, 3H)。實例 26-1. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-( 甲氧基甲基 )-4-( 甲基胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 實例 26-2. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3R,4S)-3-( 甲氧基甲基 )-4-( 甲基胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. 反式 -N-[(6S)-2-(3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ]( 甲基 ) 胺基 ]-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯
將N-[(6S)-2-(三氟甲烷磺醯基氧基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(中間體47-2 ) (200 mg, 0.446 mmol)、反式-N-[4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯(中間體53 ) (121 mg, 0.446 mmol)、RuPhos (42.0 mg, 0.090 mmol)、RuPhos Pd G3 (38.0 mg, 0.045 mmol)及Cs2 CO3 (291 mg, 0.893 mmol)於甲苯(4 mL)中之混合物在90℃下攪拌3 h。過濾出固體。在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用1:1乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供黃色固體形式之反式-N-[(6S)-2-(3-[[(第三丁氧基)羰基](甲基)胺基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 525 [M+H]+ 。 步驟 2. 反式 -N-[1-[(6S)-6- 胺基 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ]-N- 甲基胺基甲酸第三丁基酯
將反式-N-[(6S)-2-(3-[[(第三丁氧基)羰基](甲基)胺基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(180 mg, 0.326 mmol)及碳載鈀(180 mg, 10%)於乙酸乙酯(10 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌3 h。過濾出固體。在減壓下濃縮濾液以提供白色固體形式之反式-N-[1-[(6S)-6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 391 [M+H]+ 。 步驟 3. 反式 -N-[1-[(6S)-6-[3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ]-N- 甲基胺基甲酸第三丁基酯
將HBTU (122 mg, 0.322 mmol)添加至反式-N-[1-[(6S)-6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯(70.0 mg, 0.179 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(39.0 mg, 0.189 mmol)及Et3 N (0.075 mL, 0.537 mmol)於DMA (2 mL)中之攪拌溶液中。將所得溶液在25℃下攪拌1 h。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在30 min內5%至80%))純化所得混合物。在真空下濃縮所收集部分以得到黃色固體形式之反式-N-[1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 581 [M+H]+ 。 步驟 4. N-[(3R,4S)-1-[(6S)-6-[3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ]-N- 甲基胺基甲酸第三丁基酯及 N-[(3S,4R)-1-[(6S)-6-[3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-4-( 甲氧基甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ]-N- 甲基胺基甲酸第三丁基酯
藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IA, 2 × 25 cm, 5 µm；移動相A：己烷:DCM=3:1 (含有0.1% Et2 NH)及B: EtOH (在30 min內保持30%)；流速：12 mL/min)分離反式-N-[1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯(40.0 mg, 0.0690 mmol)。收集第一洗脫異構體(RT=11.8 min)並在真空下濃縮以得到黃色固體，針對吡咯啶之立體化學任意分配為N-[(3S,4R)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯。收集第二洗脫異構體(RT=21.4 min)並在真空下濃縮以得到黃色固體，針對吡咯啶之立體化學任意分配為N-[(3R,4S)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 581 [M+H]+ 。 步驟 5. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-( 甲氧基甲基 )-4-( 甲基胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將N-[(3S,4R)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯(11.0 mg, 0.0190 mmol)及TFA (0.500 mL)於DCM (1.50 mL)中之溶液在25℃下攪拌30 min。在真空下濃縮所得混合物。使用NH3 溶液(2.00 mL，7M於MeOH中)處理殘餘物。將所得溶液在25℃下攪拌30 min並在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Shield RP18 OBD, 5 µm, 19 × 150 mm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )及B: ACN (在7 min內0%至55%)；流速：25 mL/min)純化殘餘物。凍乾所收集部分以得到白色固體形式之3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-(甲氧基甲基)-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI,m/z ): 481 [M+H]+ 。1 H-NMR (DMSO-d6 , 400 MHz)δ( ppm): 8.31 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.59 (br s, 1H), 7.31 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.20-7.17(m, 3H), 6.24 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 4.14-4.10 (m, 1H), 3.64-3.59 (m, 1H), 3.54-3.50 (m, 1H), 3.46-3.27 (m, 8H), 3.17-3.10 (m, 5H), 2.55 (s, 3H), 2.35-2.30 (m, 4H), 2.02-1.97 (m, 1H), 1.88-1.82 (m, 1H)。 步驟 6. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3R,4S)-3-( 甲氧基甲基 )-4-( 甲基胺基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將 N-[(3R,4S)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-3-基]-N-甲基胺基甲酸第三丁基酯(13.0 mg, 0.022 mmol)及TFA (0.500 mL)於DCM (1.50 mL)中之溶液在25℃下攪拌30 min。在真空下濃縮所得混合物。使用NH3 溶液(2.00 mL，7M於MeOH中)處理殘餘物。將所得溶液在25℃下攪拌30 min並在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Shield RP18 OBD, 5 µm, 19 × 150 mm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )及B: ACN (在7 min內20%至45%)；流速：25 mL/min)純化殘餘物。凍乾所收集部分以得到白色固體形式之3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4S)-3-(甲氧基甲基)-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI,m/z ): 481 [M+H]+ 。1 H-NMR (DMSO-d6 , 400 MHz)δ( ppm): 8.31 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.59 (br s, 1H), 7.31 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.20-7.17 (m, 3H), 6.24 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.14-4.10 (m, 1H), 3.65-3.60 (m, 1H), 3.55-3.51 (m, 1H), 3.46-3.27 (m, 5H), 3.16-3.10 (m, 2H), 3.02-3.00 (m, 1H), 2.76-2.72 (m, 4H), 2.59 (s, 3H), 2.34-2.32 (m, 4H), 2.02-1.97 (m, 1H), 1.88-1.82 (m, 1H)。實例 27-1. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3- 胺基 -4-( 氟甲基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 實例 27-2. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3- 胺基 -4-( 氟甲基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. 順式 -N-[(6S)-2-(3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4-( 氟甲基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯
將順式-N-[4-(氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(中間體54 ) (150 mg, 0.687 mmol)、 N-[(6S)-2-(三氟甲烷磺醯基氧基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(中間體 47-2 ) (150 mg, 0.342 mmol)、RuPhos (16.0 mg, 0.034 mmol)、RuPhos Pd G3 (29.0mg, 0.035 mmol)及Cs2 CO3 (278 mg, 0.853 mmol)於甲苯(5 mL)中之混合物在95℃下攪拌2 h。在冷卻至25℃之後，過濾出固體。在真空下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用1:1乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之順式-N-[(6S)-2-(3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(氟甲基)吡咯啶-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 499 [M+H]+ 。 步驟 2 . 順式 -N-[1-[(6S)-6- 胺基 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-4-( 氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將順式-N-[(6S)-2-(3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(氟甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(130 mg, 0.256 mmol)及碳載鈀(130 mg, 10%)於乙酸乙酯(5 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌2 h。過濾所得混合物。在減壓下濃縮濾液以提供褐色固體形式之順式-N-[1-[(6S)-6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 365 [M+H]+ 。 步驟 3. 順式 -N-[1-[(6S)-6-[3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-4-( 氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將HBTU (92.0 mg, 0.243 mmol)添加至順式-N-[(3R,4R)-1-[(6S)-6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(75.0 mg, 0.202 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(45.0 mg, 0.216 mmol)及Et3 N (0.084 mL, 0.603 mmol)於DMA (3 mL)中之溶液中。將所得溶液在25℃下攪拌1 h。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在30 min內0%至100%))純化混合物以提供黃色固體形式之順式-N-[1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 555 [M+H]+ 。 步驟 4. N-[(3R,4R)-1-[(6S)-6-[3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-4-( 氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯及 N-[(3S,4S)-1-[(6S)-6-[3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-4-( 氟甲基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IG, 20 × 250 mm, 5 µm；移動相A：己烷:DCM=3:1 (含有0.1% Et2 NH)及B: IPA (在16 min內保持30%))分離順式-N-[1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(70.0 mg, 0.124 mmol)。收集第一洗脫異構體(RT=10.09 min)並在真空下濃縮以提供白色固體，針對吡咯啶之立體化學任意分配為N-[(3R,4R)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。收集第二洗脫異構體(RT=13.22 min)並在真空下濃縮以提供白色固體，針對吡咯啶之立體化學任意分配為N-[(3S,4S)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 555 [M+H]+ 。 步驟 5. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3- 胺基 -4-( 氟甲基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將N-[(3R,4R)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(15.0 mg, 0.027 mmol)及TFA (0.5 mL)於DCM (1.5 mL)中之溶液在25℃下攪拌25 min。在真空下濃縮所得混合物。使用NH3 溶液(1.0 mL，7M於MeOH中)處理殘餘物。將所得溶液攪拌30 min且然後在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30 × 150 mm，5 um；移動相A：水(含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在7 min內20%至45%))純化殘餘物。凍乾所收集部分以提供白色固體形式之3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-胺基-4-(氟甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI,m/z ): 455 [M+H]+ 。1 H NMR (DMSO-d6 , 400 MHz)δ ( ppm): 8.31 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.31 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.20 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.16 (br s, 2H), 6.23 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.81-4.47 (m, 2H), 4.11-4.09 (m, 1H), 3.61-3.60 (m, 1H), 3.54-3.46 (m, 2H), 3.33-3.28 (m, 1H), 3.20-3.18 (m, 1H), 2.81-2.68 (m, 4H), 2.59 (s, 3H), 2.02-1.96 (m, 1H), 1.90-1.66 (m, 2H)。 步驟 6. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3- 胺基 -4-( 氟甲基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將N-[(3S,4S)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(氟甲基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(15.0 mg, 0.027 mmol)及TFA (0.5 mL)於DCM (1.5 mL)中之溶液在25℃下攪拌25 min。在真空下濃縮所得混合物。向殘餘物中添加NH3 (1.0 mL，7M於MeOH中)。將所得溶液攪拌30 min並在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep OBD C18管柱，30×150mm，5um；移動相A：水(含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在7 min內20%至45%))純化殘餘物。凍乾所收集部分以提供白色固體形式之3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-(氟甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI,m/z ): 455 [M+H]+ 。1 H NMR (DMSO-d6 , 400 MHz)δ( ppm): 8.31 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 (d,J = 7.6 Hz, 1H), 7.31 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.20 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.16 (br s, 2H), 6.23 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.81-4.47 (m, 2H), 4.12-4.09 (m, 1H), 3.61-3.60 (m, 1H), 3.53-3.47 (m, 2H), 3.33-3.27 (m, 1H), 3.21-3.18 (m, 1H), 2.81-2.68 (m, 4H), 2.59 (s, 3H), 2.02-1.96 (m, 1H), 1.90-1.66 (m, 2H)。實例 28-1. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3- 胺基 -4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 實例 28-2. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3- 胺基 -4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. 反式 -N-[(6S)-2-(3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 吡咯啶 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯
將 N-[(6S)-2-(三氟甲烷磺醯基氧基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(中間體47-2 ) (200 mg, 0.465 mmol)、反式-N-[4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(中間體55 ) (157 mg, 0.603 mmol)、RuPhos Pd G3 (38.9 mg, 0.046 mmol)、RuPhos (22.0 mg, 0.047 mmol)及Cs2 CO3 (454 mg, 1.39 mmol)於甲苯(4 mL)中之混合物在100℃下攪拌3 h。在冷卻至26℃之後，過濾出固體。在真空下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用1:1乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到黃色固體形式之反式-N-[(6S)-2-(3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 541 [M+H]+ 。 步驟 2. 反式 -N-[1-[(6S)-6- 胺基 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將反式-N-[(6S)-2-(3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(140 mg, 0.259 mmol)及碳載鈀(70.0 mg, 10%)於乙酸乙酯(10 mL)中之混合物在26℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌3 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以得到黑色固體形式之反式-N-[1-[(6S)-6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 407 [M+H]+ 。 步驟 3. 反式 -N-[1-[(6S)-6-[3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將HBTU (112 mg, 0.295 mmol)添加至反式-N-[1-[(6S)-6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(100 mg, 0.246 mmol)、Et3 N (0.103 mL, 0.741 mmol)及3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(61.0 mg, 0.293 mmol)於DMA (2 mL)中之溶液中。將所得溶液在26℃下攪拌1 h。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.05% TFA)及B: ACN (在25 min內20%至85%))純化混合物。在真空下濃縮所收集部分以得到黃色固體形式之反式-N-[1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 597 [M+H]+ 。 步驟 4. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3S,S-3- 胺基 -4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3- 胺基 -4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IG, 2 × 25 cm, 5 µm；移動相A：己烷：DCM=3:1 (0.1% Et2 NH)及B: EtOH (在20 min內保持40%))分離反式-N-[1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(120 mg, 0.201 mmol)。收集第一洗脫異構體(RT=12.26 min)並在真空下濃縮以得到黃色固體，針對吡咯啶之立體化學任意分配為3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。收集第二洗脫異構體(RT=17.55 min)並在真空下濃縮以得到黃色固體，針對吡咯啶之立體化學任意分配為3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-胺基-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI,m/z ): 597 [M+H]+ 。 步驟 5. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3- 胺基 -4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將N-[(3S,4S)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(27.0 mg, 0.047 mmol)及TFA (1.00 mL)於DCM (3 mL)中之溶液在26℃下攪拌30 min。在真空下濃縮所得混合物。使用NH3 溶液(2.00 mL，7M於MeOH中)處理殘餘物。將所得溶液攪拌30 min，且然後在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep OBD C18, 19 × 150 mm, 5 µm, 13 nm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )及B: ACN (在8 min內18%至40%)，流速：60 mL/min)純化殘餘物。凍乾所收集部分以得到白色固體形式之3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI,m/z ): 497 [M+H]+ 。1 H NMR (DMSO-d6 , 400 MHz)δ( ppm): 8.31 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.59 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.31 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.19 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.17 (br s, 2H), 6.22 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.14-4.10 (m, 1H), 3.75-3.74 (m 1H), 3.64-3.55 (m, 3H), 3.49-3.31 (m, 5H), 3.24 (s, 3H), 3.14-3.12 (m, 1H), 2.82-2.72 (m, 4H), 2.59 (s, 3H), 2.03-1.82 (m, 4H)。 步驟 6 . 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3- 胺基 -4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將N-[(3R,4R)-1-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(26.0 mg, 0.045 mmol)及TFA (1.00 mL)於DCM (3 mL)中之溶液在25℃下攪拌30 min。在真空下濃縮所得混合物。向殘餘物中添加NH3 (2.00 mL，7M於MeOH中)。將所得溶液攪拌30 min，且然後在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：X Bridge Prep OBD C18, 30 × 150 mm, 5 µm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )及B: ACN (在8 min內18%至40%)，流速：60 mL/min)純化殘餘物。凍乾所收集部分以得到白色固體形式之3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-胺基-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI,m/z ): 497 [M+H]+ 。1 H NMR (DMSO-d6 , 400 MHz)δ( ppm): 8.31 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.59 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.31 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.19 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.17 (br s, 2H), 6.22 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 4.15-4.11 (m, 1H), 3.75-3.74 (m 1H), 3.63-3.59 (m, 3H), 3.48-3.33 (m, 5H), 3.24 (s, 3H), 3.14-3.11 (m, 1H), 2.80-2.72 (m, 4H), 2.59 (s, 3H), 2.01-1.82 (m, 4H)。實例 29-1. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(9S)-9- 胺基 -1,4- 二氧雜 -7- 氮雜螺 [4.4] 壬烷 -7- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 實例 29-2. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(9R)-9- 胺基 -1,4- 二氧雜 -7- 氮雜螺 [4.4] 壬烷 -7- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. N-[(6S)-2-(9-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-1,4- 二氧雜 -7- 氮雜螺 [4.4] 壬烷 -7- 基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯
將N-[(6S)-2-(三氟甲烷磺醯基氧基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(中間體47-2 ) (180 mg, 0.410 mmol)、 N-[1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-9-基]胺基甲酸第三丁基酯(中間體59 ) (150 mg, 0.614 mmol)、RuPhos (19.0 mg, 0.041 mmol)、RuPhos Pd G3 (34.0 mg, 0.041 mmol)及Cs2 CO3 (334 mg, 1.025 mmol)於甲苯(10 mL)中之混合物在95℃下攪拌3 h。將混合物冷卻至25℃，過濾，且在真空下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用1:1乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之N-[(6S)-2-(9-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-7-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 525 [M+H]+ 。 步驟 2. N-[7-[(6S)-6- 胺基 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-1,4- 二氧雜 -7- 氮雜螺 [4.4] 壬烷 -9- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將 N-[(6S)-2-(9-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-7-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(180 mg, 0.336 mmol)及Pd/C (180 mg, 10%)於乙酸乙酯(5 mL)中之混合物在25℃下攪拌2 h。過濾所得混合物，且使用乙酸乙酯(3 × 5 mL)洗滌濾餅。在減壓下濃縮濾液以提供褐色固體形式之N-[7-[(6S)-6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-9-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 391 [M+H]+ 。 步驟 3. N-[7-[(6S)-6-[3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-1,4- 二氧雜 -7- 氮雜螺 [4.4] 壬烷 -9- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將HBTU (114 mg, 0.301 mmol)添加至N-[7-[(6S)-6-胺基-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-9-基]胺基甲酸第三丁基酯(100 mg, 0.251 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(57.0 mg, 0.274 mmol)及Et3 N (0.104 mL, 0.751 mmol)於DMA (3 mL)中之溶液中。將反應液在25℃下攪拌3 h。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.1% TFA)及B: ACN (在30 min內0%至60%))純化殘餘物以提供黃色固體形式之N-[7-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-9-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 581 [M+H]+ 。 步驟 4. N-[(9S)-7-[(6S)-6-[3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-1,4- 二氧雜 -7- 氮雜螺 [4.4] 壬烷 -9- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯及 N-[(9R)-7-[(6S)-6-[3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ]-1,4- 二氧雜 -7- 氮雜螺 [4.4] 壬烷 -9- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IF, 2 × 25 cm, 5 µm；移動相A： MTBE (0.1% Et2 NH)及B: EtOH (在24 min內保持30%)；流速：12 mL/min)分離N-[7-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-9-基]胺基甲酸第三丁基酯(100 mg, 0.169 mmol)。收集第一洗脫異構體(RT=15.97 min)並在真空下濃縮以提供黃色固體，針對吡咯啶之立體化學任意分配為N-[(9S)-7-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-9-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 581 [M+H]+ 。
收集第二洗脫異構體(RT=20.62 min)並在真空下濃縮以提供黃色固體，針對吡咯啶之立體化學任意分配為N-[(9R)-7-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-9-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 581 [M+H]+ 。 步驟 5. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(9S)-9- 胺基 -1,4- 二氧雜 -7- 氮雜螺 [4.4] 壬烷 -7- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將N-[(9S)-7-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-9-基]胺基甲酸第三丁基酯(40 mg, 0.068 mmol)及TFA (0.50 mL)於DCM (1.5 mL)中之溶液在25℃下攪拌30 min。在真空下濃縮所得溶液。向殘餘物中添加NH3 (2.0 mL，7M於MeOH中)。將所得溶液在25℃下攪拌30 min，且然後在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：X Bridge Prep C18 OBD, 19 × 150 mm, 5 µm；移動相A：水(0.05% NH4 HCO3 )及B: ACN (在7 min內20%至35%))純化殘餘物。凍乾所收集部分以提供白色固體形式之3-胺基-N-[(6S)-2-[(9S)-9-胺基-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-7-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI,m/z ): 481 [M+H]+ 。1 H-NMR (CDCl3 , 400 MHz) δ(ppm): 7.82 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.22-7.20 (m, 1H), 6.20 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.06-6.02 (m, 2H), 5.52 (d,J = 7.2 Hz, 1H), 4.48-4.42 (m, 1H), 4.14-4.09 (m, 4H), 3.82-3.69 (m, 2H), 3.53-3.50 (m, 2H), 3.24-3.20 (m, 1H), 3.09-3.08 (m, 1H), 2.94-2.86 (m, 2H), 2.70-2.64 (m, 4H), 2.26-2.23 (m, 1H), 1.98-1.91 (m, 1H)。 步驟 6. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(9R)-9- 胺基 -1,4- 二氧雜 -7- 氮雜螺 [4.4] 壬烷 -7- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將N-[(9R)-7-[(6S)-6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-9-基]胺基甲酸第三丁基酯(40.0 mg, 0.068 mmol)及TFA (0.50 mL)於DCM (1.5 mL)中之溶液在25℃下攪拌30 min。在真空下濃縮所得溶液。向殘餘物中添加NH3 (2.0 mL，7M於MeOH中)。將所得溶液在25℃下攪拌30 min，且然後在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19 × 150 mm, 5 µm；移動相A：水(0.05% NH4 HCO3 )及B: ACN (在7 min內20%至35%))純化殘餘物。凍乾所收集部分以提供白色固體形式之3-胺基-N-[(6S)-2-[(9R)-9-胺基-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-7-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI,m/z ): 481 [M+H]+ 。1 H-NMR (CDCl3 , 400 MHz) δ(ppm): 7.82 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.22-7.20 (m, 1H), 6.20 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 6.06-6.00 (m, 2H), 5.53 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 4.48-4.42 (m, 1H), 4.14-4.09 (m, 4H), 3.82-3.67 (m, 2H), 3.53-3.501 (m, 2H), 3.27-3.22 (m, 1H), 3.10-3.08 (m, 1H), 2.95-2.90 (m, 2H), 2.70-2.65 (m, 4H), 2.24-2.20 (m, 1H), 1.93-1.87 (m, 1H)。實例 30-1. 3- 胺基 -N-[(6S)-3- 氟 -2-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 實例 30-2. 3- 胺基 -N-[(6R)-3- 氟 -2-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1 . 4-(6-[[( 苄基氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將 N-[2-[(三氟甲烷)磺醯基氧基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(中間體47-1 ) (400 mg, 0.930 mmol)、六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(208 mg, 1.12 mol)、RuPhos (87.0 mg, 0.190 mmol)、RuPhos Pd G3 (76.0 mg, 0.090 mmol)及Cs2 CO3 (758 mg, 2.33 mmol)於甲苯(15 mL)中之混合物在95℃下攪拌3 h。在冷卻至25℃之後，過濾出固體。在真空下濃縮濾液。藉由矽膠層析(使用1:3乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以提供白色固體形式之4-(6-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 467 [M+H]+ 。 步驟 2 . 4-(6-[[( 苄基氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-3- 氟 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將Selectfluor (683 mg, 1.93 mmol)於ACN (10 mL)中之溶液添加至4-(6-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(600 mg, 1.29 mmol)於DCM (30 mL)及MeOH (30 mL)中之攪拌溶液中。將所得溶液在-20℃下攪拌1 h。在真空下濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 5 µm, 19 × 150 mm；移動相A：水(0.05% TFA)及B: ACN (在7 min內55%至85%))純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分以得到灰白色固體形式之4-(6-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-3-氟-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 485 [M+H]+ 。 步驟 3 . 4-(6- 胺基 -3- 氟 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將 4-(6-[[(苄基氧基)羰基]胺基]-3-氟-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(70.0 mg, 0.140 mmol)及碳載鈀(70.0 mg, 10%)於乙酸乙酯(5 mL)中之混合物在25℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌1 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以得到灰白色固體形式之4-(6-胺基-3-氟-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 351 [M+H]+ 。 步驟 4 . 4-(6-[3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-3- 氟 -5,6,7,8- 四氫喹啉 -2- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將HBTU (58.0 mg, 0.150 mmol)添加至4-(6-胺基-3-氟-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸酯(45.0 mg, 0.130 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(32.0 mg, 0.150 mmol)及Et3 N (54.0 μL, 0.390 mmol)於DMA (2 mL)中之溶液中。將所得溶液在25℃下攪拌30 min。經由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有10 mmoL/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在25 min內0%至85%))純化混合物。在真空下濃縮所收集部分以得到灰白色固體形式之4-(6-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-3-氟-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS (ESI,m/z ): 541 [M+H]+ 。 步驟 5 . 3- 胺基 -N-[(6S)-3- 氟 -2-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 3- 胺基 -N-[(6R)-3- 氟 -2-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫喹啉 -6- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將4-[3-胺基-6-(3-胺基-6-甲基-1-苯并噻吩-2-醯胺基)-5,6,7,8-四氫喹啉-2-基]六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(40.0 mg, 0.070 mmol)及TFA (1.00 mL)於DCM (3 mL)中之溶液在25℃下攪拌1 h。在真空下濃縮所得混合物以得到黃色固體形式之3-胺基-N-[3-氟-2-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺之TFA鹽。藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IC, 2 × 25 cm, 5 µm；移動相A： Hex (0.2% Et2 NH)及B: EtOH (在20 min內保持50%)；流速：15 mL/min)分離對映異構體。在真空下濃縮第一洗脫異構體(RT= 11.3 min)且然後凍乾以提供灰白色固體，立體化學任意分配為3-胺基-N-[(6S)-3-氟-2-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI, m/z): 441 [M+H]+ 。1 H-NMR (DMSO-d6 , 300 MHz) δ(ppm): 8.30 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.60 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 7.32-7.22 (m, 2H), 7.16 (br s, 2H), 4.14 (br s, 1H), 3.25-3.21 (m, 4H), 2.83-2.72 (m, 8H), 2.58 (s, 3H), 1.98-1.86 (m, 2H)。
在真空下濃縮第二洗脫異構體(RT=16.9 min)且然後使用ACN及水凍乾以提供灰白色固體，立體化學任意分配為3-胺基-N-[(6R)-3-氟-2-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI, m/z): 441 [M+H]+ 。1 H-NMR (DMSO-d6 , 300 MHz) δ(ppm): 8.30 (d,J = 8.1 Hz, 1H), 7.60 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 7.32-7.21 (m, 2H), 7.16 (br s, 2H), 4.15 (br s, 1H), 3.22-3.20 (m, 4H), 2.83-2.72 (m, 8H), 2.58 (s, 3H), 2.07-1.83 (m, 2H)。實例 31-1. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3- 胺基 -4-( 丙烷 -2- 基氧基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹唑啉 -6- 基 ]-4,6- 二甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 實例 31-2. 3- 胺基 -N-[(6R)-2-[(3S,4S)-3- 胺基 -4-( 丙烷 -2- 基氧基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹唑啉 -6- 基 ]-4,6- 二甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. N-[2-[(3S,4S)-3-[[( 第三丁氧基 ) 羰基 ] 胺基 ]-4-( 丙烷 -2- 基氧基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹唑啉 -6- 基 ] 胺基甲酸苄基酯
將N-(2-氯-5,6,7,8-四氫喹唑啉-6-基)胺基甲酸苄基酯(中間體57 ) (300 mg, 0.944 mmol)、N-[(3S,4S)-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(中間體56 ) (276 mg, 1.133 mmol)及DIEA (0.312 mL, 1.89 mmol)於DMA (10 mL)中之溶液在150℃下微波處理1 h。在冷卻至25℃之後，藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在20 min內0%至70%))純化殘餘物。在真空下濃縮所收集部分以提供褐色固體形式之N-[2-[(3S,4S)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹唑啉-6-基]胺基甲酸苄基酯。MS (ESI, m/z): 526 [M+H]+ 。 步驟 2. N-[(3S,4S)-1-(6- 胺基 -5,6,7,8- 四氫喹唑啉 -2- 基 )-4-( 丙烷 -2- 基氧基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將N-[2-[(3S,4S)-3-[[(第三丁氧基)羰基]胺基]-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹唑啉-6-基]胺基甲酸苄基酯(300 mg, 0.542 mmol)及碳載鈀(300 mg, 10%)於乙酸乙酯(20 mL)中之混合物在20℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌2 h。過濾所得混合物且使用乙酸乙酯(3×10 mL)洗滌濾餅。在真空下濃縮濾液以提供褐色固體形式之N-[(3S,4S)-1-(6-胺基-5,6,7,8-四氫喹唑啉-2-基)-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI, m/z): 392 [M+H]+ 。 步驟 3. N-[(3S,4S)-1-[6-[3- 胺基 -4,6- 二甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹唑啉 -2- 基 ]-4-( 丙烷 -2- 基氧基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
將HBTU (140 mg, 0.370 mmol)添加至N-[(3S,4S)-1-(6-胺基-5,6,7,8-四氫喹唑啉-2-基)-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(100 mg, 0.230 mmol)、Et3 N (0.096 mL, 0.690 mmol)及3-胺基-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(中間體21 ) (70.0 mg, 0.300 mmol)於DMA (3 mL)中之溶液中。將所得溶液在25℃下攪拌3 h。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在30 min內10%至60%))純化殘餘物。濃縮所收集部分以得到白色固體形式之N-[(3S,4S)-1-[6-[3-胺基-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹唑啉-2-基]-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI, m/z): 596 [M+H]+ 。 步驟 4. N-[(3S,4S)-1-[(6S)-6-[3- 胺基 -4,6- 二甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹唑啉 -2- 基 ]-4-( 丙烷 -2- 基氧基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯及 N-[(3S,4S)-1-[(6R)-6-[3- 胺基 -4,6- 二甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫喹唑啉 -2- 基 ]-4-( 丙烷 -2- 基氧基 ) 吡咯啶 -3- 基 ] 胺基甲酸第三丁基酯
藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IA, 2 × 25 cm, 5 µm；移動相A：己烷:DCM=3:1及B: EtOH (在19 min內保持50%)；流速：16 mL/min)分離N-[(3S,4S)-1-[6-[3-胺基-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹唑啉-2-基]-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(65.0 mg, 0.109 mmol)。收集第一洗脫異構體(RT=11.42 min)並濃縮以得到白色固體，針對醯胺之立體化學任意分配為N-[(3S,4S)-1-[(6S)-6-[3-胺基-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹唑啉-2-基]-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。收集第二洗脫異構體(RT=15.96 min)並在真空下濃縮以得到白色固體，針對醯胺之立體化學任意分配為N-[(3S,4S)-1-[(6R)-6-[3-胺基-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹唑啉-2-基]-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯。MS (ESI, m/z): 596 [M+H]+ 。 步驟 5. 3- 胺基 -N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3- 胺基 -4-( 丙烷 -2- 基氧基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹唑啉 -6- 基 ]-4,6- 二甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將N-[(3S,4S)-1-[(6S)-6-[3-胺基-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹唑啉-2-基]-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(28.0 mg, 0.05 mmol)及TFA (0.5 mL)於DCM (1.5 mL)中之溶液在25℃下攪拌30 min。在真空下濃縮所得混合物。使用NH3 溶液(1.0 mL，7M於MeOH中)處理殘餘物。將所得溶液攪拌30 min並在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Shield RP18 OBD, 30 ×150 mm, 5 µm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )及B: ACN (在7 min內25%至45%)；流速：60 mL/min)純化殘餘物。凍乾所收集部分以得到白色固體形式之3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹唑啉-6-基]-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI, m/z): 496 [M+H]+ 。1 H NMR (DMSO-d6 , 400 MHz) δ (ppm): 8.06 (s, 1H),7.64 (br s, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.82 (br s, 2H), 4.14-4.11 (m, 1H), 3.78-3.73 (m, 1H), 3.71-3.70 (m, 2 H), 3.57-3.53 (m, 1H), 3.37-3.32 (m, 5H), 3.25-3.22 (m, 1H), 2.82-2.62 (m, 7H), 2.01-1.98 (m, 1 H), 1.91-1.83 (m, 1H), 1.74 (br s, 2H), 1.12-1.08 (m, 6H)。 步驟 6. 3- 胺基 -N-[(6R)-2-[(3S,4S)-3- 胺基 -4-( 丙烷 -2- 基氧基 ) 吡咯啶 -1- 基 ]-5,6,7,8- 四氫喹唑啉 -6- 基 ]-4,6- 二甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將N-[(3S,4S)-1-[(6R)-6-[3-胺基-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫喹唑啉-2-基]-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-3-基]胺基甲酸第三丁基酯(27.0 mg, 0.05 mmol)及TFA (0.5 mL)於DCM (1.5 mL)中之溶液在25℃下攪拌30 min。在真空下濃縮所得混合物。向殘餘物中添加NH3 (1.0 mL，7M於MeOH中)。將所得溶液攪拌30 min並在真空下濃縮。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Shield RP18 OBD, 30 ×150 mm, 5 µm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )及B: ACN (在7 min內25%至50%)；流速：60 mL/min)純化殘餘物。凍乾所收集部分以得到白色固體形式之3-胺基-N-[(6R)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹唑啉-6-基]-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI, m/z): 496 [M+H]+ 。1 H NMR (DMSO-d6 , 400 MHz) δ (ppm): 8.07 (s, 1H),7.65 (br s, 1H), 7.05 (s, 1H), 6.83 (br s, 2H), 4.16-4.13 (m, 1H), 3.79-3.74 (m, 1H), 3.72-3.71 (m, 2 H), 3.57-3.53 (m, 1H), 3.38-3.33 (m, 5H), 3.26-3.23 (m, 1H), 2.83-2.62 (m, 7H), 2.01-1.99 (m, 1 H), 1.92-1.83 (m, 1H), 1.74 (br s, 2H), 1.12-1.08 (m, 6H)。
使用標準化學操作及類似於用於製備實例31-1及31-2之程序的程序來製備表22中之下列實例。表 22 ： 1 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用三氟甲磺酸鹽中間體 47-4 。在步驟4中，藉由對掌性HPLC使用管柱Chiralpak IC及移動相10% EtOH/MTBE (含有於MeOH中之10 mmol/L NH3 )分離對映異構體以提供實例31-3前體作為第一洗脫異構體(任意分配立體化學)；且提供實例31-4前體作為第二洗脫異構體(任意分配立體化學)。實例 32-1. 3- 胺基 -6- 甲基 -N-[(7S)-3-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫異喹啉 -7- 基 ] 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 實例 32-2. 3- 胺基 -6- 甲基 -N-[(7R)-3-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫異喹啉 -7- 基 ] 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1 . 4-(7-[3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,7,8- 四氫異喹啉 -3- 基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將HBTU (70.0 mg, 0.180 mmol)添加至4-(7-胺基-5,6,7,8-四氫異喹啉-3-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(中間體58 ) (30 mg, 0.090 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(20.0 mg, 0.100 mmol)及Et3 N (0.038 mL, 0.270 mmol)於DMA (2 mL)中之溶液中。將所得溶液在25℃下攪拌30 min。經由反相層析(管柱：X Bridge C18, 19 × 150 mm, 5 um；移動相A：水(含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在30 min內10%至80%))純化混合物。在真空下濃縮所收集部分以得到白色固體形式之4-(7-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫異喹啉-3-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS (ESI, m/z): 523 [M+H]+ 。 步驟 2 . 3- 胺基 -6- 甲基 -N-[3-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫異喹啉 -7- 基 ] 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將4-(7-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,7,8-四氫異喹啉-3-基)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(35.0 mg, 0.070 mmol)及TFA (0.50 mL)於DCM (1.50 mL)中之溶液在25℃下攪拌30 min。在真空下濃縮反應混合物。然後添加NH3 溶液(2 mL，7M於甲醇中)。將所得溶液在25℃下攪拌30 min。在真空下濃縮所得溶液以得到白色固體形式之3-胺基-6-甲基-N-[3-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫異喹啉-7-基]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI, m/z): 423 [M+H]+ 。 步驟 3 . 3- 胺基 -6- 甲基 -N-[(7S)-3-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫異喹啉 -7- 基 ] 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺及 3- 胺基 -6- 甲基 -N-[(7R)-3-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-5,6,7,8- 四氫異喹啉 -7- 基 ] 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
藉由對掌性HPLC (管柱：Chiralpak IG, 2 × 25 cm, 5 um；移動相A： MTBE (含有0.1% Et2 NH)及B:乙醇(在20 min內保持50%))將外消旋3-胺基-6-甲基-N-[3-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫異喹啉-7-基]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺(25.0 mg, 0.059 mmol)分離成其對映異構體。在真空下濃縮第一洗脫異構體(RT= 12.37 min)且然後凍乾以得到白色固體，立體化學任意分配為3-胺基-6-甲基-N-[(7S)-3-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫異喹啉-7-基]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI, m/z): 423 [M+H]+ 。1 H NMR (CD3 OD, 400 MHz) δ(ppm): 8.22 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.33 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 4.25-4.23 (m, 1 H), 3.49-3.43 (m, 4 H), 3.06-2.98 (m, 1 H), 2.97-2.92 (m, 6 H), 2.82-2.69 (m, 1 H), 2.66 (s, 3 H), 2.15-2.13 (m, 1 H), 1.89-1.81 (m, 1H)。在真空下濃縮第二洗脫異構體(RT= 17.03 min)且然後凍乾以得到白色固體，立體化學任意分配為3-胺基-6-甲基-N-[(7R)-3-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫異喹啉-7-基]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI, m/z): 423 [M+H]+ 。1 H NMR (CD3 OD, 400 MHz) δ(ppm): 8.22 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.33 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 6.63 (s, 1H), 4.25-4.23 (m, 1 H), 3.49-3.43 (m, 4 H), 3.15-2.98 (m, 1 H), 2.97-2.93 (m, 6 H), 2.82-2.72 (m, 1 H), 2.76 (s, 3 H), 2.15-2.13 (m, 1 H), 1.89-1.81 (m, 1H)。實例 33-1. (R)-3- 胺基 -N-(5- 氟 -7-( 六氫吡嗪 -1- 基 ) 烷 -3- 基 -4,4-d2)-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 實例 33-2. (S)-3- 胺基 -N-(5- 氟 -7-( 六氫吡嗪 -1- 基 ) 烷 -3- 基 -4,4-d2)-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1 . 3- 胺基 -N-(7- 溴 -5- 氟 烷 -3- 基 -4,4-d2)-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將7-溴-5-氟烷-4,4-d2-3-胺(中間體5-2 ) (340 mg, 1.370 mmol)、3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(342 mg, 1.645 mmol)、Et3 N (0.287 ml, 2.056 mmol)及HBTU (624 mg, 1.645 mmol)於DMA (5 mL)中之溶液在室溫下攪拌4 h。將反應液之體積在減壓下減半。添加EtOAc (5 mL)及H2 O (3 mL)。分離有機層，藉由Na2 SO4 乾燥，過濾，並濃縮。藉由矽膠層析(使用2%至100% EtOAc/己烷洗脫)純化殘餘物。合併期望部分並濃縮以提供黃色固體形式之3-胺基-N-(7-溴-5-氟烷-3-基-4,4-d2)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS: (ESI, m/z): 438 [M+H]+ 。1 H NMR (CDCl3 , 300 MHz) δ(ppm): 7.61-7.83 (m, 1H), 7.03-7.13 (m, 1H), 6.69-6.90 (m, 2H), 6.00 (br s, 2H), 5.59 (br d,J = 6.7 Hz, 1H), 4.47-4.82 (m, 1H), 3.95-4.29 (m, 3H), 2.85-2.86 (m, 1H), 2.67-2.79 (m, 3H), 2.59 (d,J = 3.2 Hz, 3H)。 步驟 2 . 4-(3-(3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺基 )-5- 氟 烷 -7- 基 -4,4-d2) 六氫吡嗪 -1- 甲酸第三丁基酯
將3-胺基-N-(7-溴-5-氟烷-3-基-4,4-d2)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺(150 mg, 0.342 mmol)之溶液與六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯(127 mg, 0.684 mmol)合併於無水DMA (3.42 mL)中。添加LiHMDS之1M THF溶液(3.42 mL, 3.42 mmol)且使用N2 將反應液吹掃20 min。添加Pd-PEPPSI-IPent (34.2 mg, 0.034 mmol)且將反應液在60℃下攪拌16 h。使用10 mL EtOAc稀釋反應液並使用3 mL H2 O洗滌。分離有機層，藉由無水Na2 SO4 乾燥，過濾，並濃縮。藉由矽膠層析(使用5%至80% EtOAc/己烷洗脫)純化殘餘物。合併期望部分並濃縮以提供灰白色固體形式之4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-5-氟烷-7-基-4,4-d2)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯。MS: (ESI, m/z): 544 [M+H]+ 。 步驟 3 . 3- 胺基 -N-(5- 氟 -7-( 六氫吡嗪 -1- 基 ) 烷 -3- 基 -4,4-d2)-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將HCl (4M於1,4-二噁烷中，0.276 mL, 1.104 mmol)添加至4-(3-(3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺基)-5-氟烷-7-基-4,4-d2)六氫吡嗪-1-甲酸第三丁基酯於EtOAc (1 mL)中之懸浮液中。將反應液在22℃下攪拌16 h。將反應液在真空下濃縮至乾燥。藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak IA (移動相A：己烷(0.1% Et2 NH)，及B: EtOH (0.1% Et2 NH)；50% B)來純化殘餘物以提供峰1 (其立體化學任意分配為(R)-3-胺基-N-(5-氟-7-(六氫吡嗪-1-基)烷-3-基-4,4-d2)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺)及峰2 (其立體化學任意分配為(S)-3-胺基-N-(5-氟-7-(六氫吡嗪-1-基)烷-3-基-4,4-d2)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺)。MS: (ESI, m/z): 444 [M+H]+ 。
使用標準化學操作及類似於用於製備實例33-1及33-2之程序的程序來製備表23中之下列實例。表 23 ： 1 程序注意事項 ： 在步驟1中，使用7-溴烷-3-胺作為胺偶合配偶體以提供外消旋3-胺基-N-(7-溴烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。藉由SFC使用對掌性管柱ChiralArt Amylose-SA及移動相A：65% CO2 及B: EtOH:DCM=1:1來分離對映異構體以提供(R)-3-胺基-N-(7-溴烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺作為第一洗脫異構體且提供(S)-3-胺基-N-(7-溴烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺作為第二洗脫異構體。在步驟2中，使用順式-3,8-二氮雜雙環[4.2.0]辛烷-3-甲酸第三丁基酯作為胺偶合配偶體以提供順式-8-[(3R)-3-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基]-3,8-二氮雜雙環[4.2.0]辛烷-3-甲酸第三丁基酯。藉由對掌性HPLC使用對掌性管柱Chiralpak IE及移動相10% EtOH/MTBE (0.1% Et2 NH)來分離順式異構體以提供實例33-3前體作為第一洗脫異構體(任意分配立體化學)且提供實例33-4前體作為第二洗脫異構體(任意分配立體化學)。在步驟3中，藉由使用TFA在DCM中處理來達成boc-去保護。實例 34. 3- 胺基 -N-[(3R)-7-(4- 氰基 -1,1- 二側氧基 -1λ6- 噻烷 -4- 基 )-3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -3- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. N-[(3R)-7-(4- 羥基噻烷 -4- 基 )-3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -3- 基 ] 胺基甲酸苄基酯
在-78℃下，將n-BuLi (4.40 mL，2.5 M於正己烷中)添加至(R)-(7-溴烷-3-基)胺基甲酸苄基酯(中間體2 ) (800 mg, 2.16 mmol)於THF (20 mL)中之溶液中。將所得溶液在-78℃下攪拌30 min。然後在-78℃下添加噻烷-4-酮(1.28 g, 11.0 mmol)於THF (3 mL)中之溶液。將所得溶液在-78℃下攪拌1 h。然後使用水(30 mL)終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:2乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到淺黃色固體形式之N-[(3R)-7-(4-羥基噻烷-4-基)-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-基]胺基甲酸苄基酯。MS: (ESI,m/z ): 400 [M+H]+ 。 步驟 2. N-[(3R)-7-(4- 氰基噻烷 -4- 基 )-3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -3- 基 ] 胺基甲酸苄基酯
將TMSCN (120 mg, 1.21 mmol)於DCM (1 mL)中之溶液添加至InBr3 (11.0 mg, 0.030 mmol)及DCM (1 mL)之混合物中。然後經30 min添加N-[(3R)-7-(4-羥基噻烷-4-基)-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-基]胺基甲酸苄基酯(120 mg, 0.300 mmol)於DCM (1 mL)中之溶液。將所得混合物在29℃下攪拌30 min。由此平行運行三個批次併合併以用於使用水(10 mL)驟冷。使用DCM (3 × 15 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:3乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到灰白色固體形式之N-[(3R)-7-(4-氰基噻烷-4-基)-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-基]胺基甲酸苄基酯。MS: (ESI,m/z ): 409 [M+H]+ 。 步驟 3. N-[(3R)-7-(4- 氰基 -1,1- 二側氧基 -1 λ 6- 噻烷 -4- 基 )-3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -3- 基 ] 胺基甲酸苄基酯
將N-[(3R)-7-(4-氰基噻烷-4-基)-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-基]胺基甲酸苄基酯(160 mg, 0.390 mmol)及過硫酸氫鉀複合鹽(650 mg, 3.87 mmol)於2-丁酮(10 mL)中之混合物在40℃下攪拌12 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液。經由矽膠層析(使用1:1乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到白色固體形式之N-[(3R)-7-(4-氰基-1,1-二側氧基-1λ6-噻烷-4-基)-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-基]胺基甲酸苄基酯。MS: (ESI,m/z ): 441 [M+H]+ 。 步驟 4. 4-[(3R)-3- 胺基 -3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -7- 基 ]-1,1- 二側氧基 -1 λ 6- 噻烷 -4- 甲腈
將N-[(3R)-7-(4-氰基-1,1-二側氧基-1λ6-噻烷-4-基)-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-基]胺基甲酸苄基酯(80.0 mg, 0.180 mmol)及碳載鈀(80.0 mg, 10%)於乙酸乙酯(10 mL)中之混合物在29℃及氫氣氛(氣囊)下攪拌1 h。過濾出固體。在真空下濃縮濾液以提供灰白色固體形式之4-[(3R)-3-胺基-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基]-1,1-二側氧基-1λ6-噻烷-4-甲腈。MS: (ESI,m/z ): 307 [M+H]+ 。 步驟 5. 3- 胺基 -N-[(3R)-7-(4- 氰基 -1,1- 二側氧基 -1 λ 6- 噻烷 -4- 基 )-3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -3- 基 ]-6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
將HBTU (68.0 mg, 0.180 mmol)添加至4-[(3R)-3-胺基-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基]-1,1-二側氧基-1λ6-噻烷-4-甲腈(50.0 mg, 0.160 mmol)、Et3 N (0.067 mL, 0.480 mmol)及3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(34.0 mg, 0.160 mmol)於DMA (2 mL)中之溶液中。將所得溶液在29℃下攪拌30 min。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Prep C18 OBD, 19 × 150 mm 5 µm；移動相A：水(10 mM NH4 HCO3 )及B: ACN (在7 min內30%至60%))純化混合物。凍乾所收集部分以得到淺黃色固體形式之3-胺基-N-[(3R)-7-(4-氰基-1,1-二側氧基-1λ6-噻烷-4-基)-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI, m/z): 497 [M+H]+ 。1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz) δ(ppm): 8.33 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.63 (d,J = 7.6 Hz,1H), 7.32 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 7.24-7.22 (m, 3H), 7.10-7.08 (m, 1H), 6.99 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 4.37-4.32 (m, 1H), 4.26-4.22 (m, 1H), 3.93-3.88 (m, 1H), 3.42-3.27(m, 4H), 3.01-2.99 (m, 2H), 2.59-2.50 (m, 7H)。實例 35. 3- 胺基 -6- 甲基 -N-[(3R)-5,6,8- 三氟 -7-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -3- 基 ] 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺 步驟 1. 4-(2,3,5,6- 四氟 -4- 甲醯基苯基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸苄基酯
將2,3,4,5,6-五氟苯甲醛(10.0 g, 51.0 mmol)、六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯(11.2 g, 50.8 mmol)及DIEA (15.9 mL, 95.9 mmol)於DMF (50 mL)中之溶液在60℃下攪拌12 h。藉由添加水(50 mL)來終止反應，並使用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取。合併有機層，使用水(6 × 100 mL)洗滌，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由矽膠層析(使用1:5乙酸乙酯/石油醚洗脫)純化殘餘物以得到白色固體形式之4-(2,3,5,6-四氟-4-甲醯基苯基)六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 397 [M+H]+ 。 步驟 2. 4-[2,3,5,6- 四氟 -4-( 羥甲基 ) 苯基 ] 六氫吡嗪 -1- 甲酸苄基酯
在＜ 10℃下，向4-(2,3,5,6-四氟-4-甲醯基苯基)六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯(4.00 g, 10.1 mmol)於甲醇(40 mL)中之溶液添加NaBH4 (950 mg, 25.1 mmol)。將所得溶液在25℃下攪拌2h。在真空下去除溶劑。使用水(100 mL)稀釋殘餘物。使用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取所得混合物。合併有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮以得到白色固體形式之4-[2,3,5,6-四氟-4-(羥甲基)苯基]六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯。MS: (ESI,m/z ): 399 [M+H]+ 。 步驟 3. 4-[4-( 溴甲基 )-2,3,5,6- 四氟苯基 ] 六氫吡嗪 -1- 甲酸苄基酯
將4-[2,3,5,6-四氟-4-(羥甲基)苯基]六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯(5.70 g, 14.3 mmol)及PBr3 (3.85 g, 14.2 mmol)於DCM (40 mL)中之溶液在25℃下攪拌2 h。然後藉由添加水(40 mL)來終止反應。使用DCM (3 × 30 mL)萃取所得混合物。合併有機層，使用鹽水(30 mL)洗滌，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮以得到白色固體形式之4-[4-(溴甲基)-2,3,5,6-四氟苯基]六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 461, 463 [M+H]+ 。 步驟 4. 4-(4-[[(2R,5S)-3,6- 二甲氧基 -5-( 丙烷 -2- 基 )-2,5- 二氫吡嗪 -2- 基 ] 甲基 ]-2,3,5,6- 四氟苯基 ) 六氫吡嗪 -1- 甲酸苄基酯
在-78℃下，向(2S)-3,6-二甲氧基-2-(丙烷-2-基)-2,5-二氫吡嗪(1.84 g, 9.99 mmol)於THF (50 mL)中之溶液中添加n-BuLi (6.0 mL，2.5M於正己烷中)。將所得溶液在-78℃下攪拌30 min。在-78℃下，向此溶液中添加4-[4-(溴甲基)-2,3,5,6-四氟苯基]六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯(4.60 g, 9.97 mmol)。將所得溶液在-78℃下攪拌2h。然後藉由添加NH4Cl (飽和水溶液) (40 mL)來終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取所得混合物。合併有機層，使用鹽水(3 × 30 mL)洗滌，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.05% TFA)及B: ACN (在30 min內5%至75%)純化殘餘物以得到黃色油狀物形式之4-(4-[[(2R,5S)-3,6-二甲氧基-5-(丙烷-2-基)-2,5-二氫吡嗪-2-基]甲基]-2,3,5,6-四氟苯基)六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 565 [M+H]+ 。 步驟 5. 4-[4-[(2R)-2- 胺基 -3- 甲氧基 -3- 側氧基丙基 ]-2,3,5,6- 四氟苯基 ] 六氫吡嗪 -1- 甲酸苄基酯
在＜10℃下，將鹽酸(100 mL, 0.3N)添加至4-(4-[[(2R,5S)-3,6-二甲氧基-5-(丙烷-2-基)-2,5-二氫吡嗪-2-基]甲基]-2,3,5,6-四氟苯基)六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯(5.86 g, 10.3 mmol)於ACN (100 mL)中之攪拌溶液中。將所得溶液在25℃下攪拌1h。在真空下去除溶劑。使用NaHCO3 (飽和水溶液)將殘餘物之pH值調整至9-10。使用乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取所得混合物。合併有機層，使用鹽水(50 mL)洗滌，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮以得到黃色固體形式之4-[4-[(2R)-2-胺基-3-甲氧基-3-側氧基丙基]-2,3,5,6-四氟苯基]六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 470 [M+H]+ 。 步驟 6. 4-[4-[(2R)-2- 胺基 -3- 羥丙基 ]-2,3,5,6- 四氟苯基 ] 六氫吡嗪 -1- 甲酸苄基酯
在＜10℃下，向4-[4-[(2R)-2-胺基-3-甲氧基-3-側氧基丙基]-2,3,5,6-四氟苯基]六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯(3.83 g, 8.16 mmol)於甲醇(10 mL)及THF (40 mL)中之溶液中添加NaBH4 (900 mg, 23.7 mmol)。將所得溶液在25℃下攪拌3h。在真空下濃縮溶劑。使用水(50 mL)稀釋殘餘物。使用乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取所得混合物。合併有機層，使用鹽水(3 × 30 mL)洗滌，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.05% TFA)及B: ACN (在30 min內5%至80%))純化殘餘物以提供黃色油狀物形式之4-[4-[(2R)-2-胺基-3-羥丙基]-2,3,5,6-四氟苯基]六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 442 [M+H]+ 。 步驟 7. 4-[(3R)-3- 胺基 -5,6,8- 三氟 -3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -7- 基 ] 六氫吡嗪 -1- 甲酸苄基酯
將氫化鈉(34.0 mg, 1.42 mmol, 60%)添加至4-[4-[(2R)-2-胺基-3-羥丙基]-2,3,5,6-四氟苯基]六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯(400 mg, 0.910 mmol)於DMSO (10 mL)中之攪拌溶液中。將所得溶液在25℃下攪拌30 min且然後在70℃下攪拌2h。在冷卻至25℃之後，藉由添加水(40 mL)來終止反應。使用乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取所得混合物。合併有機層，使用鹽水(20 mL)洗滌，藉由無水硫酸鈉乾燥，過濾並在真空下濃縮。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.05% TFA)及B: ACN (在30 min內20%至70%))純化殘餘物以得到黃色油狀物形式之4-[(3R)-3-胺基-5,6,8-三氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基]六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 422 [M+H]+ 。 步驟 8. 4-[(3R)-3-[3- 胺基 -6- 甲基噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 醯胺基 ]-5,6,8- 三氟 -3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -7- 基 ] 六氫吡嗪 -1- 甲酸苄基酯
向4-[(3R)-3-胺基-5,6,8-三氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基]六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯(70.0 mg, 0.170 mmol)及3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(41.5 mg, 0.200 mmol)於DMA (2 mL)中之溶液中添加Et3 N (0.068 mL, 0.49 mmol)及HBTU (75.0 mg, 0.200 mmol)。將所得溶液在25℃下攪拌1 h。藉由反相層析(管柱：C18矽膠；移動相A：水(含有0.05% TFA)及B: ACN (在30 min內5%至80%))純化混合物，以提供黃色油狀物形式之4-[(3R)-3-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,8-三氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基]六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯。MS (ESI,m/z ): 612 [M+H]+ 。 步驟 9. 3- 胺基 -6- 甲基 -N-[(3R)-5,6,8- 三氟 -7-( 六氫吡嗪 -1- 基 )-3,4- 二氫 -2H-1- 苯并吡喃 -3- 基 ] 噻吩并 [2,3-b] 吡啶 -2- 甲醯胺
向4-[(3R)-3-[3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-醯胺基]-5,6,8-三氟-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-7-基]六氫吡嗪-1-甲酸苄基酯(50.0 mg, 0.080 mmol)於CH3 COOH (1.5 mL)中之溶液中添加氫溴酸(1.5 mL, 48%)。將所得溶液在50℃下攪拌1 h。在真空下濃縮所得混合物。藉由製備型HPLC (管柱：XBridge Shield RP18 OBD管柱；移動相A：水(含有10 mmol/L NH4 HCO3 )及B: ACN (在8 min內25%至65% B))純化殘餘物。凍乾所收集部分以得到白色固體形式之3-胺基-6-甲基-N-[(3R)-5,6,8-三氟-7-(六氫吡嗪-1-基)-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-基]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。MS (ESI,m/z ): 478 [M+H]+ 。1 H NMR (DMSO-d 6 , 400 MHz) δ(ppm): 8.33 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.70 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 7.31 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 7.25 (br s, 2H), 4.36-4.30 (m, 1H), 4.26-4.23 (m, 1H), 3.99-3.95 (m, 1H), 3.04-2.94 (m, 5H), 2.90-2.84 (m, 1H), 2.79-2.77 (m, 4H), 2.58 (s, 3H)。實例 A-1(a) ： 生物化學分析 ： USP28 活性之泛素 - 玫瑰紅 ( Rhodamine ) 110 分析。
在含有20 mM Tris-HCl (pH 8.0, (1M Tris-HCl, pH 8.0溶液；Corning 46-031-CM))、3 mM BME (2-巰基乙醇；Sigma 63689-25ML-F)、0.03% BGG (0.22 µM過濾，Sigma, G7516-25G)及0.01% Triton X-100 (Sigma, T9284-10L)之分析緩衝液中，以9 µL最終體積進行分析。取於DMSO中經過3倍連續稀釋之10個毫微升量溶液預先分配至1536分析板(Corning, 3724BC號)中，且最終測試濃度為25 µM至1.3 nM (分別為最高劑量及最低劑量)。將酶USP28 (即，構築體加His標籤之USP28-FL-哺乳動物(蛋白質表現及純化程序闡述於下文中)) 濃度及培育時間最佳化以達成最大信號/背景，同時在固定受質濃度下維持初始速度條件。分析中之最終酶濃度為75 pM。最終受質(Ub-Rh110；泛素-玫瑰紅110，UbiQ-126)濃度為25 nM且[Ub-Rh110]＜＜Km。向與USP25一起預培育30分鐘之分析板(使用化合物預壓印)中添加3 µL 2×酶且然後向分析板中添加3 µL 2 × Ub-Rh110。將板在室溫下培育45分鐘，然後添加3 µL終止溶液(最終濃度為10 mM檸檬酸(Sigma, 251275-500G))。在Envision (在485 nm下激發且在535 nm下發射；Perkin Elmer)上或在PheraSTAR (在485 nm下激發且在535 nm下發射；BMG Labtech)上讀取螢光。構築體加 His 標籤之 USP28-FL- 哺乳動物之蛋白質表現及純化之程序
在Expi293f細胞(序列源自uniprot ID: Q96RU2-1)中表現USP28 (1-1077)-TEV-6*His (pTT5載體)。將細胞再懸浮於裂解緩衝液B (50mM pH 8.0二羥乙甘胺酸(Bicine)、20mM NaCl、5%甘油、0.1% CHAPS、5mM β-ME、1mM PMSF、1ug/ml亮抑蛋白酶肽(Leupeptin)、1ug/ml胃蛋白酶抑制素(Pepstatin))中且藉由超音波處理來裂解。藉由離心去除不溶性材料且將上清液加載於經Ni緩衝液A (50mM pH 8.0二羥乙甘胺酸、20mM NaCl、5%甘油、0.1% CHAPS、5mM β-ME.)平衡之Ni-NTA管柱(GE Healthcare)上，並使用Ni緩衝液A + 20 mM咪唑洗滌直至A280 達到基線為止。使用Ni緩衝液B (50mM pH 8.0二羥乙甘胺酸、20mM NaCl、5%甘油、0.1% CHAPS、5mM β-ME、300mM咪唑)洗脫蛋白質。使用經50mM pH 8.0二羥乙甘胺酸、20mM NaCl、5%甘油、0.1% CHAPS、5mM β-ME平衡之SuperdexTM 200 10/300 GL管柱(GE Healthcare)進一步純化蛋白質。將蛋白質濃縮至2.5 mg ml-1 ，急速冷凍於液體N2 中並儲存於-80℃下。實例 A-1(b) ： 生物化學分析 ： USP28 活性之泛素 - 玫瑰紅 110 分析。
以20 µL最終體積在含有20 mM Tris-HCl (pH 8.0, (1M Tris-HCl, pH 8.0溶液；Corning 46-031-CM))、2 mM CaCl2 (1M氯化鈣溶液；Sigma 21114號)、2 mM BME (2-巰基乙醇；Sigma 63689-25ML-F)、0.01% Prionex (0.22 µM過濾，Sigma G-0411號)及0.01% Triton X-100之分析緩衝液中實施每一分析。將儲備化合物於DMSO中之10 mM溶液儲存於-20℃下。在分析之前最長1個月時，將2 mM測試化合物預分配至分析板(黑色，低體積；Corning 3820號)中並在-20℃下冷凍。使預壓印分析板在分析當天達到室溫。對於篩選而言，預分配100 nL 2 mM溶液直至最終篩選濃度為10 µM (DMSO(fc) = 0.5%)。將酶(USP28，構築體USP28 (USP28-5(1-1077)-TEV-6*His；LifeSensors)濃度及培育時間最佳化以達成最大信號/背景，同時在固定受質濃度下維持初始速度條件。分析中之最終酶濃度為400 pM。最終受質(Ub-Rh110；泛素-玫瑰紅110, R&D Systems U-555號)濃度為25 nM且[Ub-Rh110]＜＜Km。向分析板(經化合物預壓印)中添加10 µL 2×酶(與2 × Ub-Rh110同時或與USP28一起預培育40分鐘)，然後向化合物板中添加10 µL 2 × Ub-Rh110。將板在室溫下堆疊培育90分鐘，然後在Envision (在485 nm下激發且在535 nm下發射；Perkin Elmer)上或在PheraSTAR (在485 nm下激發且在535 nm下發射；BMG Labtech)上讀取螢光。
在隨訪研究中，以15 µL最終體積在含有20 mM Tris-HCl (pH 8.0, (1M Tris-HCl, pH 8.0溶液；Corning 46-031-CM))、3mM BME (2-巰基乙醇；Sigma 63689-25ML-F)、0.03% BGG (0.22 µM過濾，Sigma, G7516-25G)及0.01% Triton X-100 (Sigma, T9284-10L)之分析緩衝液中實施每一分析。將毫微升量之於DMSO中之8點或10點、3倍連續稀釋液預分配至分析板(Perkin Elmer, ProxiPlate-384 F Plus, #)中，且最終測試濃度分別為25 μM至11nM或25 µM至1.3 nM。將酶USP28 (即構築體USP28 (USP28-5(1-1077)-TEV-6*His；LifeSensors))濃度及培育時間最佳化以達成最大信號/背景，同時在固定受質濃度下維持初始速度條件。分析中之最終酶濃度為75 pM。最終受質(Ub-Rh110；泛素-玫瑰紅110, R&D Systems U-555號)濃度為25nM且[Ub-Rh110]＜＜Km。向與USP28一起預培育30分鐘之分析板(經化合物預壓印)中添加5 µL 2×酶且然後向分析板中添加5 µL 2 × Ub-Rh110。將板在室溫下堆疊培育20分鐘，然後添加5 µL終止溶液(最終濃度為10mM檸檬酸(Sigma, 251275-500G))。在Envision (在485 nm下激發且在535 nm下發射；Perkin Elmer)上或在PheraSTAR (在485 nm下激發且在535 nm下發射；BMG Labtech)上讀取螢光。實例 A-2 ： 生物化學分析 ： USP25 活性之泛素 - 玫瑰紅 110 分析。
以9 µL最終體積在含有20 mM Tris-HCl (pH 8.0, (1M Tris-HCl, pH 8.0溶液；Corning 46-031-CM))、3 mM BME (2-巰基乙醇；Sigma 63689-25ML-F)、0.03% BGG (0.22 µM過濾，Sigma, G7516-25G)及0.01% Triton X-100 (Sigma, T9284-10L)之分析緩衝液中實施分析。將毫微升量之於DMSO中之10點、3倍連續稀釋液預分配至1536分析板(Corning, 3724BC號)中，且最終測試濃度為25 µM至1.3 nM (分別為最高劑量及最低劑量)。將酶USP25 (即，構築體USP25-His6 (Boston Biochem E-546)) 濃度及培育時間最佳化以達成最大信號/背景，同時在固定受質濃度下維持初始速度條件。分析中之最終酶濃度為75 pM。最終受質(Ub-Rh110；泛素-玫瑰紅110，R&D Systems U-555號)濃度為25 nM且[Ub-Rh110]＜＜Km。向與USP25一起預培育30分鐘之分析板(使用化合物預壓印)中添加3 µL 2×酶且然後向分析板中添加3 µL 2 × Ub-Rh110。將板在室溫下培育45分鐘，然後添加3 µL終止溶液(最終濃度為10 mM檸檬酸(Sigma, 251275-500G))。在Envision (在485 nm下激發且在535 nm下發射；Perkin Elmer)上或在PheraSTAR (在485 nm下激發且在535 nm下發射；BMG Labtech)上讀取螢光。
對於分析形式實例A-1(a)、A-1(b)及A-2而言，基於下列方程式將數據報告為與對照孔相比之抑制百分比：inh% = 1-((FLU - Ave低 ) / (Ave高 - Ave低 ))，其中FLU =所量測螢光，Ave低 =無酶對照之平均螢光(n=16)，且Ave高 = DMSO對照之平均螢光(n=16)。藉由Activity Base軟體包：IDBS XE Designer模型205中所包含標準4參數邏輯擬合算法之曲線擬合來測定IC50 值。使用Levenburg Marquardt算法來擬合數據。
本發明生物化學IC50 分析中之化合物活性(IC50 範圍)根據下列形式報告於下表24中： 「+」: ＞ 2 µM；「++」: 0.2-2 µM；「+++」: 0.05-0.2 µM；「++++」: 0.001-0.05 µM。表 24 ： 表 25 ： 等效内容
熟習此項技術者僅使用常規實驗即可認識或能夠確定本文所具體闡述具體實施例之許多等效內容。該等效內容意欲涵蓋於下列申請專利範圍之範圍內。

Claims (16)

  1. 一種式(VI)化合物，， 或其醫藥上可接受之鹽， 其中： X係選自C(R)(R’’)及O； Y1 、Y2 及Y3 中之每一者獨立地選自C(R3 )及N； R’係選自H、氘及CH3 ； R及R’’中之每一者獨立地選自H、鹵素、-OH、-CN、視情况經一或多個Ri取代之C1 -C6 烷基，R及R’’與其所連接之碳一起形成視情况經一或多個Ri取代之螺環環丙基，其中任一個為氫或含有氫之R、R’’或Ri基團中之一或多個氫可獨立地經氘置換； 每一Ri獨立地選自鹵素、-OH及CH3 ； R1 係選自視情况經一或多個選自R5 及/或R6 之取代基取代之6至12員稠合及非稠合雜芳基，且另外其中任一個含氫之R1 基團中之一或多個氫可經氘置換； R2 係選自N-連接之4至12員雜環基、C-連接之4至12員雜環基及-O-連接之4至12員雜環基，其中該等4至12員雜環基視情况經一或多個R5 (其可與R1 之一或多個R5 相同或不同)取代，且另外其中R2 基團中之任何氫可經氘置換一或多個氫； 每一R3 獨立地選自H、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、( C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-CN、(C3 -C8 )環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基，其中(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、( C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基中之每一者視情况經一或多個R7 取代； R4 係選自H、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-CN、(C3 -C8 )環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基，其中(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、(C3 -C8 )環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基中之每一者視情况經一或多個R5 取代，且另外其中任一含氫之R4 基團之一或多個氫可經氘置換； 每一R5 獨立地選自-OH、-NH2 、醯胺基-(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、醯胺基-(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情况經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、-NH2 及-OH之取代基取代，且其中任一含氫 之R5 基團之一或多個氫可經氘置換； 每一R6 獨立地選自-胺基烷基-芳基、-胺基烷基-雜芳基、-胺基烷基-環基及-胺基烷基-雜環基，其中每一R6 基團視情况經一或多個選自-OH、-NH、鹵素、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及(C1 -C6 )鹵代烷基之取代基取代，且另外其中任一含氫之R6 基團之一或多個氫可經氘置換； 每一R7 獨立地選自-OH、-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、-C(O)-環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、-C(O)-環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情况經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代； 且 n為0、1、2或3。
  2. 如請求項1之化合物，其具有式(II)：， 或其醫藥上可接受之鹽，其中 X、R1 、R2 、R3 、R7 及n中之每一者係如式(VI)中所定義； R4 係選自H、(C1 -C6 )烷基、鹵素及-OH； 每一R5 獨立地選自-OH、-NH2 、-NHC(O)CH3 、-C(O)NHCH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、-NHC(O)CH3 、-C(O)NHCH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情况經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、-NH2 及-OH之取代基取代；且 每一R6 獨立地選自-NH(C1 -C6 )烷基-芳基、-NH(C1 -C6 )烷基-雜芳基、-NH(C1 -C6 )烷基-環基及-NH(C1 -C6 )烷基-雜環基，其中每一R6 基團視情况經一或多個選自-OH、-NH、鹵素、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及(C1 -C6 )鹵代烷基之取代基取代。
  3. 如請求項1之化合物，其具有式(IIaa)：或其醫藥上可接受之鹽，其中 R1 係選自經一或多個選自R5 及R6 之取代基取代之8至9員雜芳基，其中R5 及R6 中之每一者獨立地如式(II)中所定義； R2 係選自視情况經一或多個R5 取代之N-連接之6至12員雜環基或C-連接之6至12員雜環基，其中R5 係如式(II)中所定義；且 R3 獨立地選自H、(C1 -C6 )烷基、鹵素及-CN，其中該等(C1 -C6 )烷基視情况經R7 取代，其中每一R7 獨立地如式(VI)中所定義。
  4. 如請求項1之化合物，其具有式(IIb’)：或其醫藥上可接受之鹽，其中 R’係選自H及CH3 ； R1 係選自經一或多個選自R5 及R6 之取代基取代之8至9員雜芳基，其中每一R5 及/或R6 (若存在)獨立地如式(VI)中所定義； R2 係選自視情况經一或多個R5 取代之N-連接之6至12員雜環基或C-連接之6至12員雜環基，其中每一R5 獨立地如式(VI)中所定義；且 R3 獨立地選自H、(C1 -C6 )烷基、鹵素及-CN，其中該等(C1 -C6 )烷基視情况經R7 取代，其中每一R7 獨立地如式(VI)中所定義。
  5. 如請求項1至4中任一項之化合物，其中視情况經R5 及/或R6 取代之R1 係選自表A。
  6. 如請求項1至5中任一項之化合物，其中視情况經R5 取代之R2 係選自表B。
  7. 如請求項1至4中任一項之化合物，其中視情况經R5 及/或R6 取代之R1 係選自及；且 視情况經R5 取代之R2 係選自
  8. 如請求項1至4中任一項之化合物，其中視情况經R5 及/或R6 取代之R1 係選自及；且 視情况經R5 取代之R2 係選自
  9. 如請求項1之化合物，其具有式(VII)：， 或其醫藥上可接受之鹽，其中 Y係選自C(R3 )及N； R’係選自H、氘及CH3 ； R1 係選自6至11員雜芳基，其視情况經一或多個選自R5 及/或R6 之取代基取代； R2 係選自N-連接之4至12員雜環基及C-連接之4至12員雜環基，其中該等雜環基視情况經一或多個R5 取代，且另外其中任一含氫之R2 基團之一或多個氫可經氘置換； 每一R3 獨立地選自H、氘、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、-OH、-CN，其中(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、( C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基、芳基及雜芳基中之每一者視情况經一或多個R7 取代； R4 係選自H、氘、(C1 -C6 )烷基、鹵素、-OH、-CN，且另外其中任一含氫之R4 基團之一或多個氫可經氘置換； 每一R5 (若存在)獨立地選自-OH、-NH2 、NHC(O)CH3 、-C(O)NHCH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、-NHC(O)CH3 、-C(O)NHCH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情况經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基、-NH2 及-OH之取代基取代，且其中任一含氫之R5 基團之一或多個氫可經氘置換； 每一R6 (若存在)係選自-NH(C1 -C6 )烷基-芳基、-NH(C1 -C6 )烷基-雜芳基、-NH(C1 -C6 )烷基-雜環基及-NH(C1 -C6 )烷基-雜環基，其中每一R6 基團視情况經一或多個選自-OH、-NH、鹵素、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及(C1 -C6 )鹵代烷基之取代基取代，且另外其中任一含氫之R6 基團之一或多個氫可經氘置換； 每一R7 獨立地選自-OH、-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、-C(O)-環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、-C(O)-環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情况經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基及-OH之取代基取代； 且 n為0、1、2或3。
  10. 如請求項9之化合物，其具有式(IIIaa)：， 或其醫藥上可接受之鹽，其中 R1 係選自8至11員雜芳基，其視情况經一或多個R5 取代； R2 係選自N-連接之4至12員雜環基及C-連接之4至12員雜環基，其視情况經一或多個R5 取代； 每一R5 (若存在)獨立地選自-OH、-NH2 、NHC(O)CH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、-NHC(O)CH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情况經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基、-NH2 及-OH之取代基取代；且 n為0、1、2或3。
  11. 如請求項9之化合物，其具有式(VIIaa)：或其醫藥上可接受之鹽，其中 R1 係選自8至9員雜芳基，其視情况經一或多個R5 取代； R2 係選自N-連接之4至12員雜環基，其視情况經一或多個R5 取代； 每一R5 (若存在)獨立地選自-OH、-NH2 、NHC(O)CH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、-NHC(O)CH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情况經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基、-NH2 及-OH之取代基取代；且 n為0、1、2或3。
  12. 如請求項10或11中任一項之化合物，其中R1 係選自其中B係選自鍵或C； Z係選自N、S、C(Rii)； Rii係選自H、CH3 及R5 ； R2 係選自N-連接之5至8員雜環基，其經一至三個R5 取代； 每一R5 (若存在)獨立地選自-OH、-NH2 、NHC(O)CH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、鹵素、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基，其中-NH2 、-NHC(O)CH3 、(C1 -C6 )烷基、(C1 -C6 )烷氧基、(C1 -C6 )鹵代烷基、(C1 -C6 )鹵代烷氧基、環烷基、雜環烷基及-C(O)-雜環烷基中之每一者視情况經一或多個獨立地選自(C1 -C6 )烷氧基、-NH2 及-OH之取代基取代；且 n為0、1、2或3。
  13. 如請求項9至12中任一項之化合物，其中視情况經R5 取代之R1 係選自及； 且視情况經R5 取代之R2 係選自
  14. 如請求項1至13中任一項之化合物，其中該化合物係 a. USP28抑制劑化合物，其在如本文實例A-1(a)中所闡述之USP28泛素-玫瑰紅110分析中具有0.001微莫耳濃度至2微莫耳濃度之IC50 ；及/或 b. USP28抑制劑化合物，其在如本文實例A-1(b)中所闡述之USP28泛素-玫瑰紅110分析中具有0.001微莫耳濃度至2微莫耳濃度之IC50 ；及/或 c. USP25抑制劑化合物，其在如本文實例A-2中所闡述之USP25泛素-玫瑰紅110分析中具有0.001微莫耳濃度至2微莫耳濃度之IC50 。
  15. 如請求項1之化合物，其選自表9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25中之任一者之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
  16. 如請求項1之化合物，其選自下列化合物：10-1 : (R)-3-胺基-N-(5-氟-7-(六氫吡嗪-1-基)烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺10-5 : (S)-3-胺基-N-(5-氟-7-(六氫吡嗪-1-基)烷-3-基)-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺10-15 : 3-胺基-N-[(3R)-5-氟-7-(六氫吡嗪-1-基)-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-基]-N,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺10-16 : 3-胺基-N-[(3S)-5-氟-7-(六氫吡嗪-1-基)-3,4-二氫-2H-1-苯并吡喃-3-基]-N,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺11-1 : N-((2S)-6-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-1,2,3,4-四氫萘-2-基)-3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺11-2 : N-((2R)-6-(3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基)-1,2,3,4-四氫萘-2-基)-3-胺基-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺23-1 : 7-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-3-甲基噻吩并[2,3-b]吡嗪-6-甲醯胺23-2 : 7-胺基-N-[(6R)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-3-甲基噻吩并[2,3-b]吡嗪-6-甲醯胺23-3 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺23-4 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺23-5 : 3-胺基-N-[(6R)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺23-6 : 7-胺基-3-甲基-N-[(6S)-2-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]噻吩并[2,3-b]吡嗪-6-甲醯胺23-7 : 3-胺基-6-甲基-N-[(6S)-2-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺23-8 : 3-胺基-6-甲基-N-[(6R)-2-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺23-9 : 6-胺基-2-甲基-N-[(6S)-2-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]噻吩并[2,3-d][1,3噻唑-5-甲醯胺23-12 : 3-胺基-N-[(6S)-2-{3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基}-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺23-13 : 7-胺基-N-[(6S)-2-{3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基}-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-3-甲基噻吩并[2,3-b]吡嗪-6-甲醯胺23-14 : 3-胺基-4,6-二甲基-N-[(6S)-2-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺23-17 : 3-胺基-N-[(6S)-4-氟-2-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺23-18 : 3-胺基-N-[(6S)-2-{3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基}-4-氟-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺24-1 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-胺基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺24-2 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺25 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-胺基-4-(二氟甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺26-1 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-(甲氧基甲基)-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺26-2 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4S)-3-(甲氧基甲基)-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺27-1 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-胺基-4-(氟甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺27-2 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-(氟甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺28-1 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺28-2 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-胺基-4-(2-甲氧基乙氧基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺29-1 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(9S)-9-胺基-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-7-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺29-2 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(9R)-9-胺基-1,4-二氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-7-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺30-1 : 3-胺基-N-[(6S)-3-氟-2-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺30-2 : 3-胺基-N-[(6R)-3-氟-2-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺31-3 : 3-胺基-6-甲基-N-[(6'S)-2'-(六氫吡嗪-1-基)-6',7'-二氫-5'H-螺[環丙烷-1,8'-喹啉]-6'-基]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺31-4 : 3-胺基-6-甲基-N-[(6'R)-2'-(六氫吡嗪-1-基)-6',7'-二氫-5'H-螺[環丙烷-1,8'-喹啉]-6'-基]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺142 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-乙氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺203 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-5-氟-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺204 : 3-胺基-5-氟-6-甲基-N-[(6S)-2-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺205 : 3-胺基-6-甲基-N-[(6S,8S)-8-甲基-2-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺206 : 3-胺基-6-甲基-N-[(6R,8S)-8-甲基-2-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺207 : 3-胺基-6-甲基-N-[(6S,8R)-8-甲基-2-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺208 : 3-胺基-6-甲基-N-[(6R,8R)-8-甲基-2-(六氫吡嗪-1-基)-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺210 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-4-胺基-3-甲氧基-3-甲基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺211 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-4-胺基-3-甲氧基-3-甲基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺239 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-甲氧基-3-甲基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺240 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-胺基-4-甲氧基-3-甲基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺254 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-胺基-4-乙氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺255 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4S)-3-胺基-4-乙氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺269 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺270 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4S)-3-胺基-4-甲氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺279 : 7-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-4-胺基-3-甲氧基-3-甲基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-3-甲基噻吩并[2,3-b]吡嗪-6-甲醯胺280 : 7-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-4-胺基-3-甲氧基-3-甲基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-3-甲基噻吩并[2,3-b]吡嗪-6-甲醯胺285 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-環丁氧基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺296 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-胺基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺297 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺298 : 7-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-胺基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-3-甲基噻吩并[2,3-b]吡嗪-6-甲醯胺299 : 7-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-3-甲基噻吩并[2,3-b]吡嗪-6-甲醯胺300 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-胺基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-3-氟-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺301 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-3-氟-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺302 : 3-胺基-N-[(6R)-2-[(3R,4R)-3-胺基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-3-氟-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺303 : 3-胺基-N-[(6R)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-3-氟-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺311 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-甲氧基-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺312 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-甲氧基-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺320 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺321 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-胺基-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺322 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4S)-3-胺基-4-(丙烷-2-基氧基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺327 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4S)-3-胺基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺328 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-胺基-4-(甲氧基甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺331 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4S)-3-羥基-3-甲基-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺332 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-羥基-3-甲基-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺341 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4R)-4-胺基-3-(甲氧基甲基)-3-甲基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺342 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-4-胺基-3-(甲氧基甲基)-3-甲基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺343 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-4-胺基-3-(甲氧基甲基)-3-甲基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺344 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4S)-4-胺基-3-(甲氧基甲基)-3-甲基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺345 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-胺基-4-(二氟甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺346 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-胺基-4-(二氟甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺347 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4S)-3-胺基-4-(二氟甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺354 : 3-胺基-N-[(6S)-2-{3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-3-基}-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-4,6-二甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺363 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4S)-3-胺基-4-(三氟甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺364 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-胺基-4-(三氟甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺376 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-(二氟甲基)-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺377 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4S)-3-(二氟甲基)-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩並[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺384 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4S)-3-胺基-4-(氟甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺385 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4R)-3-胺基-4-(氟甲基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺427 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4S)-4-胺基-3-甲氧基-3-甲基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺428 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4R)-4-胺基-3-甲氧基-3-甲基吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺430 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(5S,9R)-9-胺基-2-氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-7-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺431 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(5R,9S)-9-胺基-2-氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-7-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺437 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(5R,9R)-9-胺基-2-氧雜-7-氮雜螺[4.4]壬烷-7-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺441 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3R,4R)-3-(氟甲基)-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺442 : 3-胺基-N-[(6S)-2-[(3S,4S)-3-(氟甲基)-4-(甲基胺基)吡咯啶-1-基]-5,6,7,8-四氫喹啉-6-基]-6-甲基噻吩并[2,3-b]吡啶-2-甲醯胺。
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