TW201838648A - 使用ｇｌｐ－１受體促效劑與抑胃肽受體（ｇｉｐｒ）結合蛋白之偶聯物治療或改善代謝病症之方法 - Google Patents

使用ｇｌｐ－１受體促效劑與抑胃肽受體（ｇｉｐｒ）結合蛋白之偶聯物治療或改善代謝病症之方法 Download PDF

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Abstract

本發明提供使用包含GIPR多肽特異性抗原結合蛋白與GLP-1受體促效劑之偶聯物的組成物治療代謝疾病及病症的方法。在各種實施例中，該代謝疾病或病症係2型糖尿病、肥胖症、血脂異常、葡萄糖含量升高、胰島素含量升高及糖尿病性腎病。在某些實施例中，該組成物包含在一或多個偶聯位點處包含半胱胺酸的抗體或其功能片段，其中該GLP-1受體促效劑經由該半胱胺酸殘基之側鏈偶聯至該抗體或其功能片段。

Description

使用GLP-1受體促效劑與抑胃肽受體(GIPR)結合蛋白之偶聯物治療或改善代謝病症之方法
本發明係關於使用GLP-1受體促效劑與抑胃肽受體(gastric inhibitory peptide receptor，GIPR)特異性抗原結合蛋白之偶聯物治療或改善代謝病症，諸如2型糖尿病、葡萄糖含量升高、胰島素含量升高、肥胖、非酒精性脂肪肝疾病、心血管疾病或糖尿病性腎病。
葡萄糖依賴性促胰島素多肽(Glucose-dependent insulinotropic polypeptide，GIP)係由小腸(十二指腸及空腸)中之K細胞分泌的具有42個胺基酸之單肽。人類GIP係藉由加工前體GIP得到，前體GIP係由位於染色體17q之基因編碼的具有153個胺基酸之前體(Inagaki等人, Mol Endocrinol 1989; 3:1014-1021；Fehmann等人, Endocr Rev. 1995;16:390-410)。GIP以前稱為抑胃肽。
食物攝取誘導GIP分泌。GIP在組織中具有多種生理作用，包括促進脂肪細胞中之脂肪儲存以及促進胰島β細胞功能及葡萄糖依賴性胰島素分泌。GIP及升糖素樣多肽-1 (GLP-1)係已知的促胰島素因子(「腸促胰島素」)。完整GIP經DPPIV迅速降解成無活性形式。在2型糖尿病患者中，GIP的促胰島素作用喪失，而GLP-1之腸促胰島素作用保持完整(Nauck等人, J. Clinc. Invest. 1993; 91:301-307)。
GIP受體(GIPR)係胰泌素-升糖素家族G蛋白偶合受體(GPCR)的成員，具有細胞外N末端、七個跨膜結構域及細胞內C末端。該家族受體之N末端細胞外結構域通常經糖基化且形成該受體之識別及結合結構域。GIPR在多個組織，包括胰臟、腸、脂肪組織、心臟、垂體、腎上腺皮質及腦中大量表現(Usdin等人, Endocrinology. 1993,133:2861-2870)。人類GIPR包含466個胺基酸且由位於染色體19q13.3上之基因編碼(Gremlich等人, Diabetes. 1995;44:1202-8；Volz等人, FEBS Lett. 1995, 373:23-29)。研究表明，在人類、大鼠及小鼠中的替代性mRNA剪接使得產生長度不同的GIP受體變異體。
GIPR基因敲除小鼠(Gipr-/- )對高脂肪飲食誘導的體重增加具有抗性且具有改善之胰島素敏感性及脂質分佈。(Yamada等人, Diabetes. 2006, 55:S86；Miyawaki等人, Nature Med. 2002, 8:738-742)。此外，新穎小分子GIPR拮抗劑SKL-14959預防肥胖及胰島素抵抗。(Diabetologia 2008, 51:S373, 44th EASD Annual meeting poster)。
總體而言，該等與肥胖及胰島素抵抗之關聯表明，抑制GIPR係一種有用的治療干預方法。
升糖素樣肽-1係由升糖素原基因得到的具有31個胺基酸之肽。它係由腸L細胞分泌且響應於食物攝取而釋放以誘導胰臟β細胞分泌胰島素(Diabetes 2004, 53:S3, 205-214)。除腸促胰島素作用外，GLP-1還減少升糖素分泌，延遲胃排空並降低熱量攝入(Diabetes Care, 2003, 26(10): 2929-2940)。GLP-1藉由活化GLP-1受體起作用，該受體屬於B類G蛋白偶合受體(Endocrinology. 1993, 133(4):1907-10)。GLP-1之功能因DPP-IV酶迅速降解而受到限制，使得其半衰期為約2分鐘。近來，已開發出長效GLP-1受體促效劑(GLP-1 RA)，如艾塞那肽(exenatide)、利拉魯肽(liraglutide)、度拉糖肽(dulaglutide)，且現正在臨床上使用以改善2型糖尿病患者之血糖控制。另外，GLP-1RA亦促進患者體重減輕以及血壓及血漿膽固醇含量降低(Bioorg. Med. Chem.Lett 2013, 23:4011-4018)。
在一個態樣中，本發明提供一種治療患有代謝病症之受試者的方法，該方法包括向該受試者投予治療有效量的包含抗原結合蛋白之組成物，該抗原結合蛋白特異性結合至包含與GIPR之胺基酸序列具有至少90%胺基酸序列一致性之胺基酸序列的蛋白質，其中該抗原結合蛋白與GLP-1受體促效劑偶聯。在一個實施例中，該代謝病症係葡萄糖代謝病症。在另一實施例中，葡萄糖代謝病症包含高血糖症且投予該抗原結合蛋白減少血漿葡萄糖。在另一實施例中，葡萄糖代謝病症包含高胰島素血症且投予該抗原結合蛋白減少血漿胰島素。在另一實施例中，葡萄糖代謝病症包含葡萄糖不耐受且投予該抗原結合蛋白增加葡萄糖耐受性。在另一實施例中，葡萄糖代謝病症包含胰島素抵抗且投予該抗原結合蛋白減小胰島素抵抗。在另一實施例中，葡萄糖代謝病症包含糖尿病。在另一實施例中，受試者肥胖。在另一實施例中，投予該組成物減輕肥胖受試者之體重。在另一實施例中，投予該組成物減小肥胖受試者之體重增加。在另一實施例中，投予該組成物使肥胖受試者之脂肪量減少。在另一實施例中，葡萄糖代謝病症包含胰島素抵抗且投予該組成物減小肥胖受試者之胰島素抵抗。在另一實施例中，投予該組成物使肝脂肪變性增加之肥胖受試者的肝臟脂肪變性減輕。在另一實施例中，投予該組成物使肝臟脂肪含量增加之肥胖受試者的肝臟脂肪含量減小。
在一個態樣中，該組成物包含特異性結合至具有與人類GIPR之胺基酸序列具有至少90%胺基酸序列一致性之胺基酸序列之蛋白質的抗體或其功能片段，其中該抗體或其功能片段在一或多個選自由以下組成之群之偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代：相對於參考序列SEQ ID NO: 455，該抗體輕鏈之D70；相對於參考序列SEQ ID NO: 612，該抗體重鏈之E276；及相對於參考序列SEQ ID NO: 612，該抗體重鏈之T363；以及GLP-1受體促效劑，其中該GLP-1受體促效劑經由在該一或多個偶聯位點處取代之半胱胺酸殘基或非經典胺基酸殘基的側鏈偶聯至該抗體或其功能片段。
在一個實施例中，該人類GIPR具有包含選自由SEQ ID NO: 3141、 SEQ ID NO: 3143及SEQ ID NO: 3145組成之群之序列的序列。在一個實施例中，該抗體或其功能片段係單株抗體、重組抗體、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、多特異性抗體或其抗體片段。在一個實施例中，該抗體片段係Fab片段、Fab'片段或F(ab')2片段。在一個實施例中，該抗體或其功能片段係屬於IgG1、IgG2、IgG3或IgG4類型。在一個實施例中，該抗體或其功能片段抑制GIP與人類GIPR細胞外部分之結合。
在一個實施例中，該GLP-1受體促效劑係GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)類似物。在一個實施例中，該GLP-1受體促效劑係選自由以下組成之群：艾塞那肽、利拉魯肽、利司那肽(lixisenatide)、阿必魯肽(albiglutide)、度拉糖肽、索馬魯肽(semaglutide)及他司魯肽(taspoglutide)。在一個實施例中，該GLP-1受體促效劑係選自由以下組成之群：GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3184)；GLP-1(7-36)-NH2 (SEQ ID NO: 3185)；利拉魯肽；阿必魯肽；他司魯肽；度拉糖肽；索馬魯肽；LY2428757；艾塞丁-4 (Exendin-4) (SEQ ID NO: 3163)；艾塞丁-3 (SEQ ID NO: 3164)；Leu14 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3165)；Leu14 ,Phe25 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3166)；Leu14 ,Ala19 ,Phe25 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3167)；艾塞丁-4(1-30) (SEQ ID NO: 3168)；Leu14 -艾塞丁-4(1-30) (SEQ ID NO: 3169)；Leu14 ,Phe25 -艾塞丁-4(1-30) (SEQ ID NO: 3170)；Leu14 ,Ala19 ,Phe25 -艾塞丁-4(1-30) (SEQ ID NO: 3171)；艾塞丁-4(1-28) (SEQ ID NO: 3172)；Leu14 -艾塞丁-4(1-28) (SEQ ID NO: 3173)；Leu14 ,Phe25 -艾塞丁-4(1-28) (SEQ ID NO: 3174)；Leu14 ,Ala19 ,Phe25 -艾塞丁-4 (1-28) (SEQ ID NO: 3175)；Leu14 ,Lys17,20 ,Ala19 ,Glu21 ,Phe25 ,Gln28 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3176)；Leu14 ,Lys17,20 ,Ala19 ,Glu21 ,Gln28 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3177)；辛基Gly14 ,Gln28 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3178)；Leu14 ,Gln28 ,辛基Gly34 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3179)；Phe4 ,Leu14 ,Gln28 ,Lys33 ,Glu34 , Ile35,36 ,Ser37 -艾塞丁-4(1-37) (SEQ ID NO: 3180)；Phe4 ,Leu14 ,Lys17,20 ,Ala19 ,Glu21 ,Gln28 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3181)；Val11 ,Ile13 ,Leu14 ,Ala16 ,Lys21 ,Phe25 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3182)；艾塞丁-4-Lys40 (SEQ ID NO: 3183)；GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3184)；GLP-1(7-36)-NH2 (SEQ ID NO: 3185)；Aib8,35 ,Arg26,34 ,Phe31 -GLP-1(7-36)) (SEQ ID NO: 3186)；HXaa8 EGTFTSDVSSYLEXaa22 Xaa23 AAKEFIXaa30 WLXaa33 Xaa34 GXaa36 Xaa37 ，其中Xaa8 係A、V或G；Xaa22 係G、K或E；Xaa23 係Q或K；Xaa30 係A或E；Xaa33 係V或K；Xaa34 係K、N或R；Xaa36 係R或G；且Xaa37 係G、H、P或不存在(SEQ ID NO: 3187)；Arg34 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3188)；Glu30 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3189)；Lys22 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3190)；Gly8,36 ,Glu22 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3191)；Val8 ,Glu22 ,Gly36 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3192)；Gly8,36 ,Glu22 ,Lys33 ,Asn34 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3193)；Val8 ,Glu22 ,Lys33 ,Asn34 ,Gly36 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3194)；Gly8,36 ,Glu22 ,Pro37 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3195)；Val8 ,Glu22 ,Gly36 ,Pro37 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3196)；Gly8,36 ,Glu22 ,Lys33 , Asn34 ,Pro37 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3197)；Val8 ,Glu22 ,Lys33 ,Asn34 ,Gly36 ,Pro37 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3198)；Gly8,36 ,Glu22 -GLP-1(7-36) (SEQ ID NO: 3199)；Val8 ,Glu22 ,Gly36 -GLP-1(7-36) (SEQ ID NO: 3200)；Val8 ,Glu22 ,Asn34 ,Gly36 -GLP-1(7-36) (SEQ ID NO: 3201)；Gly8,36 ,Glu22 ,Asn34 -GLP-1(7-36) (SEQ ID NO: 3202)；GLP-1類似物(SEQ ID NO: 3206)；GLP-1類似物(SEQ ID NO: 3207)；[Ne -(17-羧基十七烷酸)Lys20 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3208)；[Ne -(17-羧基十七烷醯基)Lys32 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3209)；[脫胺基-His1 ,Ne -(17-羧基十七烷醯基)Lys20 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3210)；[Arg12,27 ,NLe14 ,Ne -(17-羧基十七烷醯基)Lys32 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3211)；[Ne -(19-羧基十九烷醯基胺基)Lys20 ]-艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3212)；[Ne -(15-羧基十五烷醯基胺基)Lys20 ]-艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3213)；[Ne -(13-羧基十三烷醯基胺基)Lys20 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3214)；[Ne -(11-羧基十一烷醯基胺基)Lys20 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3215)；艾塞丁-4-Lys40 (e-MPA)-NH2 (SEQ ID NO: 3216)；艾塞丁-4-Lys40 (e-AEEA-AEEA-MPA)-NH2 (SEQ ID NO: 3217)；艾塞丁-4-Lys40 (e-AEEA-MPA)-NH2 (SEQ ID NO: 3218)；艾塞丁-4-Lys40 (e-MPA)-白蛋白(SEQ ID NO: 3219)；艾塞丁-4-Lys40 (e-AEEA-AEEA-MPA)-白蛋白 (SEQ ID NO: 3220)；艾塞丁-4-Lys40 (e-AEEA-MPA)-白蛋白(SEQ ID NO: 3221)；脫胺基-His7 ,Arg26 ,Lys34 (Nε -(γ-Glu(N-α-十六烷醯基)))-GLP-1(7-37) (以SEQ ID NO: 3222揭示之核心肽) (SEQ ID NO: 3222)；脫胺基-His7 ,Arg26 ,Lys34 (Nε -辛醯基)-GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3223)；Arg26,34 ,Lys38 (Nε -(ω-羧基十五烷醯基))-GLP-1(7-38) (SEQ ID NO: 3224)；Arg26,34 ,Lys36 (Nε -(γ-Glu(N-α-十六烷醯基)))-GLP-1(7-36) (以SEQ ID NO: 3225揭示之核心肽) (SEQ ID NO: 3225)；[Aib8 ;Lys37 ]GLP-1_(7-37) (SEQ ID NO: 3226)；[Aib8 , Lys26 ]GLP-1_(7-37) (SEQ ID NO: 3227)；[Aib8,22 ;Lys36 ]GLP-1(7-36)-醯胺(SEQ ID NO: 3228)；[Aib8,22 ;BLeu32 ;Lys36 ]GLP-1(7-36)-醯胺(SEQ ID NO: 3229)；[Aib8,22 ;Lys37 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3230)；[Aib8,22 ;BLeu32 ;Lys37 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3231)；[Aib8,22 ;aMeLeu32 ;Lys37 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3232)；[Aib8,22 ;AMEF12 ;Lys37 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3233)；[Aib8,22 ;BLeu16 ;Lys37 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3234)；[Aib8,22 ;Gly36 ;Lys37 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3235)；[Aib8,22 ;Lys33,37 ;Asn34 ;Gly36 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3236)；[Aib8,22 ;Lys33 ;Asn34 ;Gly36 ;Aeea37 ]GLP-1(7-37)-Aeea-Lys-醯胺(SEQ ID NO: 3237)；[Aib8,22 ;Gly36 ]GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3238)；環[E23 -K27 ][Aib8 ;Gly36 ]GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3239)；環[E22 -K26 ][Aib8 ;Gly36 ;Lys37 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3240)；[Aib8,22 ]-GLP-1(7-22)-Ex4(17-39) (SEQ ID NO: 3241)；[Gly8,36 ;Glu22 ]GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3242)；[Aib8 ;Glu22 ;Gly36 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3243)；[Aib8 ;Tyr16 ;Glu22 ;Gly36 ]GLP-1_(7-37) (SEQ ID NO: 3244)；[Aib8 ;Lys18,33 ;Glu22,23,30 ;Val25 ;Arg26 ;Leu27 ;Asn34 ;Gly36 ]GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3245)；[Aib8 ;Lys18,33 ;Glu22,23,30 ;Leu27 ;Asn34 ;Gly36 ]GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3246)；[Aib8 ;Lys18 ;Glu22,23,30 ;Leu27 ;Gly36 ]GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3247)；[Aib8,22 ;Ile9 ;Gly36 ]GLP-1_(7-36) (SEQ ID NO: 3248)；及[Aib8,22 ;Glu15 ;Gly36 ]GLP-1_(7-36) (SEQ ID NO: 3249)。
在一個實施例中，該GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)類似物在對應於該類似物之K26、K36、K37、K39或C末端胺基的殘基處與該抗體或其片段偶聯。
在一個實施例中，該GLP-1受體促效劑經由包含選自由以下組成之群之序列的肽連接子偶聯至該抗體或其片段：(Gly3 Ser)2 、(Gly4 Ser)2 、(Gly3 Ser)3 、(Gly4 Ser)3 、(Gly3 Ser)4 、(Gly4 Ser)4 、(Gly3 Ser)5 、(Gly4 Ser)5 、(Gly3 Ser)6 及(Gly4 Ser)6 。
本發明提供一種藉由阻斷或干擾GIP之生物活性來治療代謝病症，諸如葡萄糖代謝病症(例如2型糖尿病、葡萄糖含量升高、胰島素含量升高、血脂異常、代謝症候群(X症候群或胰島素抵抗症候群)、糖尿、代謝性酸中毒、糖尿病性神經病、糖尿病性腎病、糖尿病性視網膜病、糖尿病性心肌病、1型糖尿病、肥胖症及因肥胖而惡化之病況)的方法。在一個實施例中，向有需要之受試者投予治療有效量的經分離之人類GIPR結合蛋白。亦提供投藥及遞送方法。
本文中，包括實例中使用之重組多肽及核酸方法一般係Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)或Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel等人編, Green Publishers Inc.以及Wiley and Sons 1994)中陳述之方法，該等文獻以引用之方式併入本文中用於任何目的。
本文使用的任何章節標題皆僅出於組織目的，而不應解釋為限制所描述之主題內容。
除非本文另作定義，否則結合本申請案使用的科技術語應當具有與一般熟習此項技術者通常所瞭解之含義。另外，除非上下文另外需要，否則單數的術語應包括複數形式，而且複數的術語應包括單數形式。
一般而言，與本文所描述的細胞與組織培養、分子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學以及蛋白質與核酸化學及雜交學結合使用的命名法及其技術係此項技術中眾所周知並且常用的命名法及技術。除非另作指示，否則本申請案之方法及技術一般係根據此項技術中熟知之習知方法且如本說明書全篇所引用及論述之各種通用及更具體的參考文獻中所描述來進行。參見例如，Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第3版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001)；Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992)，以及Harlow及Lane Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990)，其以引用之方式併入本文中。酶反應及純化技術係根據製造商之說明，如此項技術中通常所實現或如本文中所描述進行的。與本文所描述的分析化學、合成有機化學以及醫學及藥物化學結合使用的術語及其實驗程序與技術係此項技術中熟知且常用的術語及其實驗程序與技術。可以使用標準技術來進行化學合成、化學分析、醫藥製備、配製及遞送以及患者之治療。
應瞭解，本發明不侷限於本文所描述之特定方法、方案及試劑等，且因此可以變化。本文所使用之術語僅出於描述特定實施例之目的，且不打算限制所揭示之範圍，該範圍僅受申請專利範圍界定。
除操作實例中外，或若另外指示，本文所使用的表示成分或反應條件之量的所有數字應當理解為在所有情況下經術語「約」修飾。當結合百分含量使用時，術語「約」可意謂±1%。
按照慣例，除非另外具體指示，否則如本文所使用，「一個(種)(a/an)」意謂「一或多個(種)」。
如本文所使用，術語「胺基酸」及「殘基」可互換，且當在肽或多肽之情形中使用時係指天然存在之胺基酸及合成胺基酸，以及胺基酸類似物、胺基酸模擬物及在化學上類似於天然存在之胺基酸的非天然存在之胺基酸。
「非天然存在之胺基酸」係由遺傳代碼編碼之胺基酸，以及由在合成後經修飾之遺傳代碼編碼之胺基酸，例如羥基脯胺酸、γ-羧基麩胺酸及O-磷酸絲胺酸。胺基酸類似物係具有與天然存在之胺基酸相同之基本化學結構，亦即α碳與氫、羧基、胺基及R基團結合的化合物，例如高絲胺酸、正白胺酸、甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸甲基鋶。該等類似物可具有經修飾之R基團(例如正白胺酸)或經修飾之肽主鏈，但保留與天然存在胺基酸相同之基本化學結構。
「胺基酸模擬物」係結構不同於胺基酸之一般化學結構，但以類似於天然存在胺基酸之方式作用的化合物。實例包括醯胺之甲基丙烯醯基或丙烯醯基衍生物、β-亞胺基酸、γ-亞胺基酸、δ-亞胺基酸(諸如哌啶-4-甲酸)及類似物。
「非天然存在之胺基酸」係具有與天然存在胺基酸相同之基本化學結構，但並非藉由轉譯複合物併入正在生長之多肽鏈中的化合物。「非天然存在之胺基酸」亦包括但不限於，藉由修飾(例如轉譯後修飾)天然編碼之胺基酸(包括但不限於，20種常見胺基酸)得到但自身並非藉由轉譯複合物天然併入正在生長之多肽鏈中的胺基酸。可以***多肽序列中或取代多肽序列中之野生型殘基的非天然存在之胺基酸之實例的非限制性清單包括β-胺基酸、高胺基酸、環狀胺基酸及具有衍生化側鏈之胺基酸。實例包括(呈L形式或D形式；括號中為縮寫)：瓜胺酸(Cit)、高瓜胺酸(hCit)、Nα-甲基瓜胺酸(NMeCit)、Nα-甲基高瓜胺酸(Nα-MeHoCit)、鳥胺酸(Orn)、Nα-甲基鳥胺酸(Nα-MeOrn或NMeOrn)、肌胺酸(Sar)、高離胺酸(hLys或hK)、高精胺酸(hArg或hR)、高麩醯胺酸(hQ)、Nα-甲基精胺酸(NMeR)、Nα-甲基白胺酸(Nα-MeL或NMeL)、N-甲基高離胺酸(NMeHoK)、Nα-甲基麩醯胺酸(NMeQ)、正白胺酸(Nle)、正纈胺酸(Nva)、1,2,3,4-四氫異喹啉(Tic)、八氫吲哚-2-甲酸(Oic)、3-(1-萘基)丙胺酸(1-Nal)、3-(2-萘基)丙胺酸(2-Nal)、1,2,3,4-四氫異喹啉(Tic)、2-茚滿基甘胺酸(IgI)、對碘代***酸(pI-Phe)、對胺基***酸(4AmP或4-Amino-Phe)、4-胍基***酸(Guf)、甘胺醯離胺酸(縮寫為「K(Nε-glycyl)」或「K(glycyl)」或「K(gly)」)、硝基***酸(nitrophe)、胺基***酸(aminophe或Amino-Phe)、苯甲基***酸(benzylphe)、γ-羧基麩胺酸(γ-carboxyglu)、羥基脯胺酸(hydroxypro)、對羧基***酸(Cpa)、α-胺基己二酸(Aad)、Nα-甲基纈胺酸(NMeVal)、N-α-甲基白胺酸(NMeLeu)、Nα-甲基正白胺酸(NMeNle)、環戊基甘胺酸(Cpg)、環己基甘胺酸(Chg)、乙醯基精胺酸(acetylarg)、α,β-二胺基丙酸(Dpr)、α,γ-二胺基丁酸(Dab)、二胺基丙酸(Dap)、環己基丙胺酸(Cha)、4-甲基-***酸(MePhe)、β,β-二苯基丙胺酸(BiPhA)、胺基丁酸(Abu)、4-苯基-***酸(或聯***酸；4Bip)、α-胺基異丁酸(Aib)、β-丙胺酸、β-胺基丙酸、哌啶酸、胺基己酸、胺基庚酸、胺基庚二酸、鎖鏈素、二胺基庚二酸、N-乙基甘胺酸、N-乙基天冬胺酸、羥基離胺酸、別羥基離胺酸、異鎖鏈素、別-異白胺酸、N-甲基甘胺酸、N-甲基異白胺酸、N-甲基纈胺酸、4-羥基脯胺酸(Hyp)、g-羧基麩胺酸、e-N,N,N-三甲基離胺酸、e-N-乙醯離胺酸、O-磷酸絲胺酸、N-乙醯絲胺酸、N-甲醯基甲硫胺酸、3-甲基組胺酸、5-羥基離胺酸、ω-甲基精胺酸、4-胺基-O-鄰苯二甲酸(4APA)及其他類似胺基酸，以及具體列出之該等胺基酸中任一種之衍生化形式。
術語「經分離之核酸分子」係指自5'至3’端讀取的脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸鹼基之單股或雙股聚合物(例如本文提供之GIPR核酸序列)，或其類似物，其已自至少約50%的當自源細胞分離總核酸時通常與核酸一起發現的多肽、肽、脂質、碳水化合物、聚核苷酸或其他物質分離。較佳地，經分離之核酸分子大體上不含在該核酸之天然環境中發現的會干擾其在多肽製造或其治療、診斷、預防或研究應用中之用途的任何其他污染核酸分子或其他分子。
術語「經分離之多肽」係指這樣一種多肽(例如本文所提供之GIPR多肽序列或本發明之抗原結合部分)，該多肽已自至少約50%的當自源細胞分離時通常與該多肽一起發現的多肽、肽、脂質、碳水化合物、聚核苷酸或其他物質分離。較佳地，經分離之多肽大體上不含在其然環境中發現的會干擾其治療、診斷、預防或研究用途的任何其他污染多肽分子或其他污染物。
本發明之組成物包括本發明之GLP-1受體直接或經由連接子部分間接地共價連接、附接或結合至本發明之另一抗GIPR抗原結合蛋白，或為「偶聯物」或「偶聯」分子，無論是否藉由化學方式偶聯(例如轉譯後或合成後)。
術語「編碼」係指聚核苷酸序列編碼一或多個胺基酸。該術語不需要起始或終止密碼子。
在兩個或兩個以上核酸或多肽序列之情況下，術語「一致」或「一致性」百分比係指相同的兩個或兩個以上序列或子序列。「一致性百分比」意味著在所比較之分子中胺基酸或核苷酸之間一致殘基之百分比，且以所比較之最小分子的大小為基準計算。對於該等計算，可以利用特定數學模型或計算機程式(亦即，「算法」)解決比對中之空位(若存在的話)。可以用於計算所比對之核酸或多肽的一致性的方法包括以下中所描述之方法：Computational Molecular Biology, (Lesk, A. M.編), (1988) New York: Oxford University Press；Biocomputing Informatics and Genome Projects, (Smith, D. W.編), 1993, New York: Academic Press；Computer Analysis of Sequence Data, 第I部分, (Griffin, A. M.及Griffin, H. G.編), 1994, New Jersey: Humana Press；von Heinje, G., (1987) Sequence Analysis in Molecular Biology, New York: Academic Press；Sequence Analysis Primer, (Gribskov, M.及Devereux, J.編), 1991, New York: M. Stockton Press；及Carillo等人(1988) SIAM J. Applied Math. 48:1073。
在計算一致性百分比時，以實現各序列間最大匹配之方式比對所比較之序列。用於測定一致性百分比之計算機程式係GCG程式包，其包括GAP (Devereux等人(1984) Nucl. Acid Res. 12:387；Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, WI)。計算機算法GAP係用於比對兩個多肽或聚核苷酸，以測定序列一致性百分比。序列經對準用於最佳匹配其各別胺基酸或核苷酸(如由算法所測定的「匹配範圍」)。空位開放罰分(以3x對角線平均值計算，其中「對角線平均值」係所用比較矩陣之對角線的平均值；「對角線」係由特定比較矩陣賦予每一完美胺基酸匹配之評分或數字)及空位擴展罰分(通常為空位開放罰分之1/10倍)以及比較矩陣，諸如PAM 250或BLOSUM 62，係與該算法結合使用。在某些實施例中，該算法亦使用標準比較矩陣(有關PAM 250比較矩陣，參見Dayhoff等人(1978) Atlas of Protein Sequence and Structure 5:345-352；有關BLOSUM 62比較矩陣，參見Henikoff等人(1992) Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 89:10915-10919)。
使用GAP程式測定多肽或核苷酸序列之一致性百分比的推薦參數如下： 算法：Needleman等人, 1970, J. Mol. Biol. 48:443-453； 比較矩陣：來自前述Henikoff等人, 1992之BLOSUM 62； 空位罰分：12 (但末端空位不罰分) 空位長度罰分：4 相似性臨限值：0
用於比對兩個胺基酸序列的某些比對方案可以使該兩個序列中僅較短區域匹配，且此較小比對區可以具有極高序列一致性，即使該兩個全場序列之間並無任何明顯關係。因此，必要時，可調整所選比對方法(例如GAP程式)以在靶多肽之至少50個連續胺基酸範圍內進行比對。
術語「GIPR多肽」及「GIPR蛋白質」可互換使用且意謂在哺乳動物，諸如人類或小鼠中表現的天然存在之野生型多肽，且包括天然存在之等位基因(例如人類GIPR蛋白質之天然存在之等位基因形式)。出於本發明之目的，術語「GIPR多肽」可互換地用於指任何全長GIPR多肽，例如SEQ ID NO: 3141，其由466個胺基酸殘基組成且由核苷酸序列SEQ ID NO: 3142編碼；或SEQ ID NO: 3143，其由430個胺基酸殘基組成且由核酸序列SEQ ID NO: 3144編碼；或SEQ ID NO: 3145，其由493個胺基酸殘基組成且由核酸序列SEQ ID NO: 3146編碼；或SEQ ID NO: 3147，其由460個胺基酸殘基組成且由核酸序列SEQ ID NO: 3148編碼；或SEQ ID NO: 3149，其由230個胺基酸殘基組成且由核酸序列SEQ ID NO: 3150編碼。
術語「GIPR多肽」亦涵蓋天然存在之GIPR多肽序列(例如SEQ ID NO: 3141、3143或3145)經修飾之GIPR多肽。此類修飾包括但不限於，一或多個胺基酸取代，包括經非天然存在之胺基酸、非天然存在之胺基酸類似物及胺基酸模擬物取代。
在各種實施例中，GIPR多肽包含與天然存在之GIPR多肽(例如SEQ ID NO: 3141、3143或3145)至少約85%一致的胺基酸序列。在其他實施例中，GIPR多肽包含與天然存在之GIPR多肽胺基酸序列(例如SEQ ID NO: 3141、3143或3145)至少約90%，或約95%、96%、97%、98或99%一致的胺基酸序列。該等GIPR多肽優選但未必具有野生型GIPR多肽之至少一種活性，諸如結合GIP之能力。本發明亦涵蓋編碼此類GIPR多肽序列之核酸分子。
術語「GIPR活性檢定」(又稱為「GIPR功能檢定」)意謂可以用於在細胞環境中量測GIP或GIP結合蛋白活性的檢定。在一個實施例中，「活性」(或「功能」)檢定可以為在GIPR表現細胞中進行之cAMP檢定，在該等細胞中GIP可以誘導cAMP信號，且可以在存在/不存在GIP配體情況下量測GIP/GIPR結合蛋白之活性，在此情況下，可以獲得IC50/EC50及抑制/活化程度(Biochemical and Biophysical Research Communications (2002) 290:1420–1426)。在另一實施例中，活性摂(或功能摂)檢定可以為在胰臟β細胞中進行之胰島素分泌檢定，在該等細胞中GIP可以誘導葡萄糖依賴性胰島素分泌，且可以在存在/不存在GIP配體情況下量測GIP/GIPR結合蛋白之活性，在此情況下，可以獲得IC50/EC50及抑制/活化程度(Biochemical and Biophysical Research Communications (2002) 290:1420–1426)。
術語「GIPR結合檢定」意謂可以用於量測GIP與GIPR之結合的檢定。在一個實施例中，「GIPR結合檢定」可以為使用FMAT或FACS進行之檢定，該檢定量測螢光標記之GIP與GIPR表現細胞之結合，且可以量測GIP/GIPR結合蛋白之活性代替螢光標記之GIP與GIPR表現細胞之結合。在另一實施例中，「GIPR結合檢定」可以為量測放射性標記之GIP與GIPR表現細胞之結合的檢定，且可以量測GIP/GIPR結合蛋白之活性代替放射性標記之GIP與GIPR表現細胞之結合(Biochimica et Biophysica Acta (2001) 1547:143-155)。
術語「GIP」、「抑胃多肽」、「葡萄糖依賴性促胰島素肽」及「GIP配體」可互換使用且意謂在哺乳動物，諸如人類或小鼠中表現的天然存在之野生型多肽，且包括天然存在之等位基因(例如人類GIP蛋白質之天然存在之等位基因形式)。出於本發明之目的，術語「GIP」可互換使用以指任何成熟GIP多肽。
成熟人類GIP之42個胺基酸之序列係： YAEGTFISDY SIAMDKIHQQ DFVNWLLAQK GKKNDWKHNI TQ (SEQ ID NO: 3151) 且由以下DNA序列編碼： tatgcggaag gcacctttat tagcgattat agcattgcga tggataaaat tcatcagcag gattttgtga actggctgct ggcgcagaaa ggcaaaaaaa acgattggaa acataacatt acccag (SEQ ID NO: 3152)。
成熟鼠類GIP之42個胺基酸之序列係： YAEGTFISDY SIAMDKIRQQ DFVNWLLAQR GKKSDWKHNI TQ (SEQ ID NO: 3153) 且由以下DNA序列編碼： tatgcggaag gcacctttat tagcgattat agcattgcga tggataaaat tcgccagcag gattttgtga actggctgct ggcgcagcgc ggcaaaaaaa gcgattggaa acataacatt acccag (SEQ ID NO: 3154)。
成熟大鼠GIP之42個胺基酸之序列係： YAEGTFISDY SIAMDKIRQQ DFVNWLLAQK GKKNDWKHNL TQ (SEQ ID NO: 3155) 且由以下DNA序列編碼： tatgcggaag gcacctttat tagcgattat agcattgcga tggataaaat tcgccagcag gattttgtga actggctgctg gcgcagaaag gcaaaaaaaa cgattggaaa cataacctga cccag (SEQ ID NO: 3156)。
如本文所使用，「抗原結合蛋白」意謂特異性結合指定靶抗原，諸如GIPR多肽(例如人類GIPR多肽，諸如SEQ ID NO:3141、3143或3145中所提供)的任何蛋白質。該術語涵蓋包含至少兩條全長重鏈及兩條全長輕鏈之完整抗體，以及其衍生物、變異體、片段及突變。抗體片段之實例包括Fab、Fab'、F(ab')2 及Fv片段。抗原結合蛋白亦包括結構域抗體，諸如奈米抗體及scFv，如下文進一步描述。
一般而言，當GIPR抗原結合蛋白與非GIPR分子展現基本上背景結合時，認為該抗原結合蛋白「特異性結合」其靶抗原GIPR。不過，特異性結合GIPR之抗原結合蛋白可以與來自不同物種之GIPR多肽交叉反應。典型地，如經由表面電漿共振技術(例如BIACore, GE-Healthcare Uppsala, Sweden)或動力學排阻檢定(KinExA, Sapidyne, Boise, Idaho)所量測，當解離常數(KD)≤10-7 M時，GIPR抗原結合蛋白特異性結合人類GIPR。如使用所述方法所量測，當KD ≤5× 10-9 M時，GIPR抗原結合蛋白以「高親和力」特異性結合人類GIPR，且當KD ≤5×10-10 M時，以「極高親和力」特異性結合人類GIPR。
「抗原結合蛋白」意謂特異性結合指定抗原之蛋白質，或蛋白質之一部分。舉例而言，抗原結合蛋白中含有與抗原相互作用且賦予該抗原結合蛋白對抗原之特異性及親和力之胺基酸殘基的部分稱為「抗原結合區」。抗原結合區典型地包括免疫球蛋白、單鏈免疫球蛋白或駱駝抗體之一或多個「互補結合區」(「CDR」)。某些抗原結合區亦包括一或多個「構架」區。「CDR」係引起抗原結合特異性及親和力之胺基酸序列。「構架」區可以幫助維持CDR之適當構象以促進抗原結合區與抗原之間的結合。
「重組蛋白」，包括重組GIPR抗原結合蛋白，係使用重組技術，亦即，經由表現如本文所述之重組核酸製備的蛋白質。用於製備重組蛋白之方法及技術係此項技術中熟知的。
術語「抗體」係指任何同種型之完整免疫球蛋白，或其可以與完整抗體競爭特異性結合至靶抗原的片段，且包括例如嵌合抗體、人類化抗體、完全人類抗體及雙特異性抗體。因此，「抗體」係抗原結合蛋白之一個物種。完整抗體一般將包含至少兩條全長重鏈及兩條全長輕鏈。抗體可以僅源自於單一來源，或者可以為「嵌合」的，亦即，抗體之不同部分可以源自於兩種不同的抗體，如以下進一步描述。抗原結合蛋白、抗體或結合片段可以在融合瘤中產生，藉由重組DNA技術產生，或藉由酶裂解或化學裂解完整抗體產生。
如關於抗體或其片段使用之術語「輕鏈」包括全長輕鏈及其具有足以賦予結合特異性之可變區序列的片段。全長輕鏈包括可變區結構域VL及恆定區結構域CL。輕鏈之可變區結構域係在多肽之胺基末端。輕鏈包括κ鏈及λ鏈。
如關於抗體或其片段使用之術語「重鏈」包括全長重鏈及其具有足以賦予結合特異性之可變區序列的片段。全長重鏈包括可變區結構域VH，及三個恆定區結構域CH1、CH2及CH3。VH結構域係在多肽之胺基末端，且CH結構域係在羧基末端，其中CH3最接近多肽之羧基末端。重鏈可以屬於任何同型，包括IgG(包括IgG1、IgG2、IgG3及IgG4亞型)、IgA(包括IgA1及IgA2亞型)、IgM及IgE。
如本文所使用，術語抗體或免疫球蛋白鏈(重鏈或輕鏈)的「免疫功能性片段」(或簡稱為「片段」)係包含抗體中缺乏全長鏈中存在之至少一些胺基酸的部分(不管該部分係如何獲得或合成的)但能夠特異性結合至抗原的一種抗原結合蛋白。此類片段具有生物活性，因為其特異性結合至靶抗原且可以與其他抗原結合蛋白(包括完整抗體)競爭特異性結合至給定抗原決定基。
該等生物活性片段可以藉由重組DNA技術產生，或者可以藉由酶裂解或化學裂解抗原結合蛋白(包括完整抗體)產生。免疫功能性免疫球蛋白片段包括但不限於，Fab、Fab'及F(ab')2 片段。
在另一實施例中，Fv、結構域抗體及scFv可源自於本發明之抗體。
另外，預期本文所揭示的抗原結合蛋白之功能性部分，例如一或多個CDR，可以與另一種蛋白質或與小分子共價結合以產生針對體內特定靶之治療劑，具有雙功能治療特性，或具有較長之血清半衰期。
「Fab片段」由一條輕鏈以及一條重鏈之CH1及可變區構成。Fab分子之重鏈無法與另一重鏈分子形成二硫鍵。
「Fc」區含有兩個重鏈片段，包含抗體之CH2及CH3結構域。該兩個重鏈片段藉由兩個或更多個二硫鍵及與CH3結構域之疏水相互作用保持在一起。
「Fab'片段」含有一條輕鏈以及一條重鏈之一部分，該重鏈之一部分含有VH結構域及CH1結構域以及在CH1與CH2結構域之間的區域，由此可以在兩個Fab'片段之兩條重鏈之間形成鏈間二硫鍵，從而形成F(ab')2分子。
「F(ab')2片段」含有兩條輕鏈以及兩條重鏈，該兩條重鏈在CH1與CH2結構域之間含有恆定區之一部分，由此在該兩條重鏈之間形成鏈間二硫鍵。因此，F(ab')2片段係由藉由兩條重鏈之間之二硫鍵保持在一起的兩個Fab'片段構成。
「Fv區」包含來自重鏈及輕鏈的可變區，但缺乏恆定區。
「單鏈抗體」或「scFv」係重鏈與輕鏈可變區藉由可撓性連接子連接形成單一多肽鏈，由此形成抗原結合區的Fv分子。scFv詳細論述於國際專利申請公開案第WO 88/01649號以及美國專利第4,946,778號及第5,260,203號中，其揭示內容以引用之方式併入。
「結構域抗體」或「單鏈免疫球蛋白」係僅含重鏈可變區或輕鏈可變區的具有免疫功能之免疫球蛋白片段。結構域抗體之實例包括Nanobodies®。在一些情況下，兩個或更多個VH區與肽連接子共價接合以產生二價結構域抗體。二價結構域抗體之兩個VH區可以靶向相同或不同的抗原。
「二價抗原結合蛋白」或「二價抗體」包含兩個抗原結合區。在一些情況下，該兩個結合區具有相同抗原特異性。二價抗原結合蛋白及二價抗體可以為雙特異性的，參見下文。
「多特異性抗原結合蛋白」或「多特異性抗體」係靶向超過一種抗原或抗原決定基之抗原結合蛋白或抗體。
「雙特異性」、「雙重特異性」或「雙功能」抗原結合蛋白或抗體分別係具有兩個不同抗原結合位點之混合抗原結合蛋白或抗體。雙特異性抗原結合蛋白及抗體係多特異性抗原結合蛋白或多特異性抗體之一個物種，且可以由多種方法，包括但不限於融合瘤融合或連接Fab'片段產生。參見例如Songsivilai及Lachmann, 1990, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321；Kostelny等人, 1992, J. Immunol. 148:1547-1553。雙特異性抗原結合蛋白或抗體之兩個結合位點將結合至兩個不同抗原決定基，該等抗原決定基可以存在於相同或不同蛋白質靶上。
當在抗原結合蛋白(例如抗體)情況下使用時，術語「競爭」意謂抗原結合蛋白之間之競爭係由檢定測定，在該檢定中，測試抗原結合蛋白(例如抗體或其免疫功能片段)阻止或抑制參考抗原結合蛋白與共同抗原(例如GIPR或其片段)之特異性結合。可以使用多種類型之競爭性結合檢定，例如：直接或間接固相放射免疫檢定(RIA)、直接或間接固相酶免疫檢定(EIA)、夾心競爭檢定(參見例如Stahli等人, 1983, Methods in Enzymology 9:242-253)；直接固相生物素-抗生物蛋白EIA(參見例如Kirkland等人, 1986, J. Immunol. 137:3614-3619)；直接固相標記檢定、直接固相標記夾心檢定(參見例如Harlow及Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press)；使用I-125標記的直接固相標記RIA(參見例如Morel等人, 1988, Molec. Immunol. 25:7-15)；直接固相生物素-抗生物素蛋白EIA(參見例如Cheung等人, 1990, Virology 176:546-552)；及直接標記之RIA(Moldenhauer等人, 1990, Scand. J. Immunol. 32:77-82)。典型地，此類檢定涉及使用結合至帶有未標記之測試抗原結合蛋白及經標記之參考抗原結合蛋白中之任一種之固體表面或細胞的純化抗原。競爭性抑制係藉由在測試抗原結合蛋白存在下，測定結合至固體表面或細胞之標記的量來量測。通常，測試抗原結合蛋白係過量存在。有關用於測定競爭性結合之方法的其他細節提供於本文之實例中。通常，當競爭性抗原結合蛋白過量存在時，其將使參考抗原結合蛋白與共同抗原之特異性結合抑制至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%或75%。在一些情況下，結合經抑制至少80%、85%、90%、95%或97%，或更多。
術語「抗原」係指能夠經選擇性結合劑，諸如抗原結合蛋白(包括例如抗體)結合且亦能夠用於動物以產生能夠結合至該抗原之抗體的分子或分子之一部分。抗原可以具有一或多個抗原決定基，該一或多個抗原決定基能夠與不同抗原結合蛋白，例如抗體相互作用。
術語「抗原決定基」係經抗原結合蛋白(例如抗體)結合之分子之一部分。該術語包括能夠特異性結合至抗原結合蛋白，諸如抗體之任何決定子。抗原決定基可以為鄰接或非鄰接(不連續)的(例如就多肽而言，在該多肽序列中彼此不鄰接但在分子內經抗原結合蛋白結合的胺基酸殘基)。構象抗原決定基係存在於活性蛋白質構象內但不存在於變性蛋白質中的抗原決定基。在某些實施例中，抗原決定基可以為模擬物，因為其構成之三維結構類似於用於產生抗原結合蛋白之抗原決定基，亦不包含或僅包含一部分在用於產生抗原結合蛋白之抗原決定基中發現的胺基酸殘基。最常見的是，抗原決定基存在於蛋白質中，但在一些情況下可能存在於其他種類分子中，諸如核酸中。抗原決定基決定子可以包括具化學活性之表面分子群，諸如胺基酸、糖側鏈、磷醯基或磺醯基，且可以具有特定三維結構特徵及/或特定電荷特徵。一般而言，對特定靶抗原具有特異性之抗原結合蛋白將優先識別在蛋白質及/或大分子之複雜混合物中的靶抗原上之抗原決定基。
如本文中所使用，「基本上純」意思指，所描述之分子物種係所存在的佔主導之物質，亦即，以莫耳量計，其豐度比同一混合物中之任何其他個別物種高。在某些實施例中，基本上純的分子係目標物種佔存在之所有大分子物種至少50%(以莫耳量計)的組成物。在其他實施例中，基本上純的組成物將佔該組成物中存在的所有大分子物種至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%。在其他實施例中，目標物種經純化至基本上均質，其中藉由習知偵測方法在該組成物中無法偵測到污染物種並因此該組成物由單一可偵測之大分子物種組成。
術語「治療」係指成功治療或改善損傷、病變或病況之任何標準，包括任何客觀或主觀參數，諸如症狀之消除、緩解、減輕，或使患者更能忍受損傷、病變或病況；減慢退化或惡化之速率；使退化終點不會造成虛弱；改善患者之身體或心理健康。症狀之治療或改善可以基於客觀或主觀參數；包括體檢結果、神經精神檢查及/或精神評價。舉例而言，本文呈現之某些方法藉由降低心血管疾病之發生率，使心血管疾病緩解及/或改善與心血管疾病相關之症狀，成功地治療心血管疾病，諸如動脈粥樣硬化。
「有效量」一般係足以降低症狀之嚴重程度及/或頻率，消除症狀及/或潛在病因，預防症狀及/或其潛在病因之發生，及/或改善或治癒由疾病狀態(例如糖尿病、肥胖、血脂異常、葡萄糖含量升高、胰島素含量升高或糖尿病性腎病)引起或與之相關之損傷的量。在一些實施例中，有效量係治療有效量或預防有效量。「治療有效量」係足以治療疾病狀態(例如動脈粥樣硬化)或症狀，特別是與疾病狀態有關之狀態或症狀，或以其他方式預防、阻滯、延遲或逆轉疾病狀態或以任何方式與該疾病相關的任何其他不希望之症狀之進展的量。「預防有效量」係當投予受試者時將具有長期預防作用，例如預防或延遲疾病狀態之發作(或再發生)，或降低疾病狀態或相關症狀發作(或再發生)之可能性的醫藥組成物之量。完全治療或預防作用未必藉由投予一次劑量發生，且可能僅在投予一系列劑量之後發生。因此，治療或預防有效量可以分一次或多次投藥投予。
如本文所使用，術語「治療有效劑量」及「治療有效量」意謂在組織系統、動物或人類中引起研究人員、醫師或其他臨床醫生所希望之生物或醫學反應的GIPR結合蛋白之量，該反應包括減輕或改善所治療之疾病或病症之症狀，亦即，支持可觀察水準的一或多種所需生物或醫學反應，例如降低血糖、胰島素、甘油三酯或膽固醇含量；減輕體重；或改善葡萄糖耐量、能量消耗或胰島素敏感性的GIPR結合蛋白之量。
術語「聚核苷酸」或「核酸」包括單股及雙股核苷酸聚合物。構成聚核苷酸之核苷酸可以為核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸，或任一類型核苷酸之修飾形式。修飾包括鹼基修飾，諸如溴代尿苷及肌苷衍生物；核糖修飾，諸如2',3'-雙脫氧核糖；及核苷酸間鍵聯修飾，諸如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯胺磷酸硫醇酯、縮苯胺磷酸酯(phoshoraniladate)及胺基磷酸酯。
術語「寡核苷酸」意謂包含200個或更少核苷酸之聚核苷酸。在一些實施例中，寡核苷酸係10至60個鹼基長度。在其他實施例中，寡核苷酸係12、13、14、15、16、17、18、19或20至40個核苷酸長度。寡核苷酸可以為單股或雙股的，例如用於構築突變基因。寡核苷酸可以為有義或反義寡核苷酸。寡核苷酸可以包括標記，包括放射性標記、螢光標記、半抗原或抗原標記，以用於偵測檢定。寡核苷酸可以例如用作PCR引子、選殖引子或雜交探針。
「經分離之核酸分子」意謂基因組DNA或RNA、mRNA、cDNA或合成來源或其一些組合，其與聚核苷酸之全部或一部分相關聯，其中經分離之聚核苷酸在自然界中發現，或連接至其在自然界中未連接之聚核苷酸。出於本發明之目的，應瞭解，「包含特定核苷酸序列之核酸分子」不包含完整染色體。「包含」指定核酸序列的經分離之核酸分子除該指定序列外，亦可包括多達十種或甚至多達二十種其他蛋白質或其部分的編碼序列，或者可以包括可操作地連接之調控序列，該等序列控制所述核酸序列之編碼區的表現，及/或可以包括載體序列。
除非另外說明，否則本文所論述的任何單股聚核苷酸序列之左手端係5'端；雙股聚核苷酸序列之左手方向稱為5'方向。新生RNA轉錄物之5'至3'添加方向稱為轉錄方向；在具有與RNA轉錄物相同之序列之DNA股上作為RNA轉錄物5'端之5'端的序列區稱為「上游序列」；在具有與RNA轉錄物相同之序列之DNA股上作為RNA轉錄物3'端之3'端的序列區稱為「下游序列」。
術語「控制序列」係指可以影響其所連接之編碼序列的表現及加工之聚核苷酸序列。此類控制序列之性質可以取決於宿主生物體。在特定實施例中，原核生物之控制序列可以包括啟動子、核糖體結合位點及轉錄終止序列。舉例而言，真核生物之控制序列包括含一個或複數個轉錄因子識別位點的啟動子、轉錄強化子序列以及轉錄終止序列。「控制序列」可以包括前導序列及/或融合搭配物序列。
術語「載體」意謂用於將蛋白質編碼信息轉移至宿主細胞中的任何分子或實體(例如核酸、質體、噬菌體或病毒)。
術語「表現載體」或「表現構築體」係指適於轉型宿主細胞的載體且其含有引導及/或控制(與宿主細胞結合)一或多個可操作地連接之異源編碼區之表現的核酸序列。表現構築體可以包括但不限於，影響或控制轉錄、轉譯且在存在內含子時，影響與其可操作地連接之編碼區之RNA剪接的序列。
如本文所使用，「可操作地連接」意謂，該術語所適用之組分係處於允許其在適合條件下發揮其固有功能的關係。舉例而言，載體中「可操作地連接」至蛋白質編碼序列的控制序列係與該編碼序列連接以使得在與控制序列之轉錄活性相適應的條件下實現該蛋白質編碼序列之表現。
術語「宿主細胞」意謂經核酸序列轉型且由此表現所關注基因的細胞。該術語包括親本細胞之子代，無論該子代是否在形態或遺傳組成上與原始親本細胞一致，只要存在該所關注基因即可。
術語「多肽」與「蛋白質」在本文中可互換使用，指胺基酸殘基之聚合物。該等術語亦適用於一或多個胺基酸殘基係相應天然存在胺基酸之類似物或模擬物的胺基酸聚合物，且適用於天然存在之胺基酸聚合物。該等術語亦可以涵蓋例如藉由添加碳水化合物殘基形成糖蛋白進行修飾或經磷酸化之胺基酸聚合物。多肽及蛋白質可以由天然存在及非重組細胞產生；或其係由經遺傳工程改造或重組之細胞產生，且包含具有天然蛋白質之胺基酸序列的分子，或在天然序列中具有一或多個胺基酸缺失、添加及/或取代之分子。術語「多肽」及「蛋白質特定地涵蓋GIPR抗原結合蛋白、抗體或在抗原結合蛋白中具有一或多個胺基酸殘基缺失、添加及/或取代之序列。術語「多肽片段」係指相較於全長蛋白質，具有胺基末端缺失、羧基末端缺失及/或內部缺失的多肽。此類片段亦可含有相較於全長蛋白質存在修飾之胺基酸。在某些實施例中，片段之長度係約五至500個胺基酸。舉例而言，片段之長度可以為至少5、6、8、10、14、20、50、70、100、110、150、200、250、300、350、400或450個胺基酸。有用的多肽片段包括抗體之免疫功能片段，包括結合結構域。
術語「經分離之蛋白質」意謂，主題蛋白質(1)不含至少一些通常與其一起發現之其他蛋白質；(2)基本上不含來自相同來源，例如來自相同物種之其他蛋白質；(3)由來自不同物種之細胞表現；(4)已自至少約50%在自然界與其相關聯之聚核苷酸、脂質、碳水化合物或其他材料分離；(5)與在自然界未與其締合之多肽可操作地締合(藉由共價或非共價相互作用)；或(6)在自然界中不存在。典型地，「經分離之蛋白質」構成給定樣品之至少約5%、至少約10%、至少約25%或至少約50%。合成來源之基因組DNA、cDNA、mRNA或其他RNA，或其任何組合可以編碼此類經分離之蛋白質。較佳地，經分離之蛋白質基本上不含在其然環境中發現的會干擾其治療、診斷、預防、研究或其他用途的蛋白質或多肽或其他污染物。
多肽(例如抗原結合蛋白，諸如抗體)之「變體」包含這樣一種胺基酸序列，其中相對於另一多肽序列，一或多個胺基酸殘基經***、缺失及/或取代入該胺基酸序列中。變體包括融合蛋白。
多肽之「衍生物」係以不同於***、缺失或取代變異體之某種方式，例如經由與另一化學部分偶聯進行化學修飾的多肽(例如抗原結合蛋白，諸如抗體)。
如本說明書通篇結合諸如多肽、核酸、宿主細胞及類似物之生物材料使用的術語「天然存在」係指在自然界中發現之材料。
如本文所使用，「受試者」或「患者」可以為任何哺乳動物。在一個典型實施例中，受試者或患者係人類。
如本文所揭示，本發明所描述之GIPR多肽可以使用標準分子生物學方法工程改造及/或製備。在各種實例中，可以使用適當寡核苷酸引子，自基因組DNA或cDNA分離及/或擴增編碼GIPR之核酸序列，其可以包含SEQ ID NO: 1、3或5之全部或一部分。引子可以根據標準(RT)-PCR擴增技術，基於本文所提供之核酸及胺基酸序列設計。接著，可以將所擴增之GIPR核酸分子選殖至適合載體中，並藉由DNA序列分析進行表徵。
在分離或擴增本文所提供之GIPR序列之全部或一部分時用作探針的寡核苷酸可以使用標準合成技術，例如自動DNA合成裝置設計及產生，或者可以自較長的DNA序列分離。
人類GIPR之466個胺基酸之序列係(Volz等人, FEBS Lett. 373:23-29 (1995)；NCBI參考序列：NP_0001555)： MTTSPILQLL LRLSLCGLLL QRAETGSKGQ TAGELYQRWE RYRRECQETL AAAEPPSGLA CNGSFDMYVC WDYAAPNATA RASCPWYLPW HHHVAAGFVL RQCGSDGQWG LWRDHTQCEN PEKNEAFLDQ RLILERLQVM YTVGYSLSLA TLLLALLILS LFRRLHCTRN YIHINLFTSF MLRAAAILSR DRLLPRPGPY LGDQALALWN QALAACRTAQ IVTQYCVGAN YTWLLVEGVY LHSLLVLVGG SEEGHFRYYL LLGWGAPALF VIPWVIVRYL YENTQCWERN EVKAIWWIIR TPILMTILIN FLIFIRILGI LLSKLRTRQM RCRDYRLRLA RSTLTLVPLL GVHEVVFAPV TEEQARGALR FAKLGFEIFL SSFQGFLVSV LYCFINKEVQ SEIRRGWHHC RLRRSLGEEQ RQLPERAFRA LPSGSGPGEV PTSRGLSSGT LPGPGNEASR ELESYC (SEQ ID NO: 3141) 且由以下DNA序列(NCBI參考序列NM_000164)編碼： ggcagcggtg gcaggggctg caggagcaag tgaccaggag caggactggg gacaggcctg atcgcccctg cacgaaccag acccttcgcc gccctcacga tgactacctc tccgatcctg cagctgctgc tgcggctctc actgtgcggg ctgctgctcc agagggcgga gacaggctct aaggggcaga cggcggggga gctgtaccag cgctgggaac ggtaccgcag ggagtgccag gagaccttgg cagccgcgga accgccttca ggcctcgcct gtaacgggtc cttcgatatg tacgtctgct gggactatgc tgcacccaat gccactgccc gtgcgtcctg cccctggtac ctgccctggc accaccatgt ggctgcaggt ttcgtcctcc gccagtgtgg cagtgatggc caatggggac tttggagaga ccatacacaa tgtgagaacc cagagaagaa tgaggccttt ctggaccaaa ggctcatctt ggagcggttg caggtcatgt acactgtcgg ctactccctg tctctcgcca cactgctgct agccctgctc atcttgagtt tgttcaggcg gctacattgc actagaaact atatccacat caacctgttc acgtctttca tgctgcgagc tgcggccatt ctcagccgag accgtctgct acctcgacct ggcccctacc ttggggacca ggcccttgcg ctgtggaacc aggccctcgc tgcctgccgc acggcccaga tcgtgaccca gtactgcgtg ggtgccaact acacgtggct gctggtggag ggcgtctacc tgcacagtct cctggtgctc gtgggaggct ccgaggaggg ccacttccgc tactacctgc tcctcggctg gggggccccc gcgcttttcg tcattccctg ggtgatcgtc aggtacctgt acgagaacac gcagtgctgg gagcgcaacg aagtcaaggc catttggtgg attatacgga cccccatcct catgaccatc ttgattaatt tcctcatttt tatccgcatt cttggcattc tcctgtccaa gctgaggaca cggcaaatgc gctgccggga ttaccggctg aggctggctc gctccacgct gacgctggtg cccctgctgg gtgtccacga ggtggtgttt gctcccgtga cagaggaaca ggcccggggc gccctgcgct tcgccaagct cggctttgag atcttcctca gctccttcca gggcttcctg gtcagcgtcc tctactgctt catcaacaag gaggtgcagt cggagatccg ccgtggctgg caccactgcc gcctgcgccg cagcctgggc gaggagcaac gccagctccc ggagcgcgcc ttccgggccc tgccctccgg ctccggcccg ggcgaggtcc ccaccagccg cggcttgtcc tcggggaccc tcccagggcc tgggaatgag gccagccggg agttggaaag ttactgctag ggggcgggat ccccgtgtct gttcagttag catggattta ttgagtgcca actgcgtgcc aggcccagta cggaggacgc tggggaaatg gtgaaggaaa cagaaaaaag gtccctgccc ttctggagat gacaactgag tggggaaaac agaccgtgaa cacaaaacat caagttccac acacgctatg gaatggttat gaagggaagc gagaaggggg cctagggtgg tctgggaggc gtctccaagg aggtgacact taagccatcc ccgaaagagg tgaaagagat cactttgggg agagctggag aacaggattc taggcggaag cgatagcata ggcaaaggcc cttgggcagg aaggcgctca gccttggctg gagtagaatt aagtcagagc caacaggtgg ggagagacag agaagtgggc aggggcaccc aagttgggat ttcatttcag gtgcattgga gattcttagg agtgtctctt gggggtaata ttttattttt taaaaaatga ggat (SEQ ID NO: 3142)。
由自動計算分析預測的人類GIPR之430個胺基酸之同功型(同功型X1)具有序列(NCBI參考序列XP_005258790)： MTTSPILQLL LRLSLCGLLL QRAETGSKGQ TAGELYQRWE RYRRECQETL AAAEPPSVAA GFVLRQCGSD GQWGLWRDHT QCENPEKNEA FLDQRLILER LQVMYTVGYS LSLATLLLAL LILSLFRRLH CTRNYIHINL FTSFMLRAAA ILSRDRLLPR PGPYLGDQAL ALWNQALAAC RTAQIVTQYC VGANYTWLLV EGVYLHSLLV LVGGSEEGHF RYYLLLGWGA PALFVIPWVI VRYLYENTQC WERNEVKAIW WIIRTPILMT ILINFLIFIR ILGILLSKLR TRQMRCRDYR LRLARSTLTL VPLLGVHEVV FAPVTEEQAR GALRFAKLGF EIFLSSFQGF LVSVLYCFIN KEVQSEIRRG WHHCRLRRSL GEEQRQLPER AFRALPSGSG PGEVPTSRGL SSGTLPGPGN EASRELESYC (SEQ ID NO: 3143) 且由以下DNA序列編碼： atgaccacca gcccgattct gcagctgctg ctgcgcctga gcctgtgcgg cctgctgctg cagcgcgcgg aaaccggcag caaaggccag accgcgggcg aactgtatca gcgctgggaa cgctatcgcc gcgaatgcca ggaaaccctg gcggcggcgg aaccgccgag cgtggcggcg ggctttgtgc tgcgccagtg cggcagcgat ggccagtggg gcctgtggcg cgatcatacc cagtgcgaaa acccggaaaa aaacgaagcg tttctggatc agcgcctgat tctggaacgc ctgcaggtga tgtataccgt gggctatagc ctgagcctgg cgaccctgct gctggcgctg ctgattctga gcctgtttcg ccgcctgcat tgcacccgca actatattca tattaacctg tttaccagct ttatgctgcg cgcggcggcg attctgagcc gcgatcgcct gctgccgcgc ccgggcccgt atctgggcga tcaggcgctg gcgctgtgga accaggcgct ggcggcgtgc cgcaccgcgc agattgtgac ccagtattgc gtgggcgcga actatacctg gctgctggtg gaaggcgtgt atctgcatag cctgctggtg ctggtgggcg gcagcgaaga aggccatttt cgctattatc tgctgctggg ctggggcgcg ccggcgctgt ttgtgattcc gtgggtgatt gtgcgctatc tgtatgaaaa cacccagtgc tgggaacgca acgaagtgaa agcgatttgg tggattattc gcaccccgat tctgatgacc attctgatta actttctgat ttttattcgc attctgggca ttctgctgag caaactgcgc acccgccaga tgcgctgccg cgattatcgc ctgcgcctgg cgcgcagcac cctgaccctg gtgccgctgc tgggcgtgca tgaagtggtg tttgcgccgg tgaccgaaga acaggcgcgc ggcgcgctgc gctttgcgaa actgggcttt gaaatttttc tgagcagctt tcagggcttt ctggtgagcg tgctgtattg ctttattaac aaagaagtgc agagcgaaat tcgccgcggc tggcatcatt gccgcctgcg ccgcagcctg ggcgaagaac agcgccagct gccggaacgc gcgtttcgcg cgctgccgag cggcagcggc ccgggcgaag tgccgaccag ccgcggcctg agcagcggca ccctgccggg cccgggcaac gaagcgagcc gcgaactgga aagctattgc (SEQ ID NO: 3144)。
藉由替代性剪接產生的人類GIPR之493個胺基酸之同功型具有序列(Gremlich等人, Diabetes 44:1202-8 (1995)；UniProtKB序列標識符：P48546-2)： MTTSPILQLL LRLSLCGLLL QRAETGSKGQ TAGELYQRWE RYRRECQETL AAAEPPSGLA CNGSFDMYVC WDYAAPNATA RASCPWYLPW HHHVAAGFVL RQCGSDGQWG LWRDHTQCEN PEKNEAFLDQ RLILERLQVM YTVGYSLSLA TLLLALLILS LFRRLHCTRN YIHINLFTSF MLRAAAILSR DRLLPRPGPY LGDQALALWN QALAACRTAQ IVTQYCVGAN YTWLLVEGVY LHSLLVLVGG SEEGHFRYYL LLGWGAPALF VIPWVIVRYL YENTQCWERN EVKAIWWIIR TPILMTILIN FLIFIRILGI LLSKLRTRQM RCRDYRLRLA RSTLTLVPLL GVHEVVFAPV TEEQARGALR FAKLGFEIFL SSFQGFLVSV LYCFINKEVG RDPAAAPALW RRRGTAPPLS AIVSQVQSEI RRGWHHCRLR RSLGEEQRQL PERAFRALPS GSGPGEVPTS RGLSSGTLPG PGNEASRELE SYC (SEQ ID NO: 3145) 且由以下DNA序列編碼： atgaccacca gcccgattct gcagctgctg ctgcgcctga gcctgtgcgg cctgctgctg cagcgcgcgg aaaccggcag caaaggccag accgcgggcg aactgtatca gcgctgggaa cgctatcgcc gcgaatgcca ggaaaccctg gcggcggcgg aaccgccgag cggcctggcg tgcaacggca gctttgatat gtatgtgtgc tgggattatg cggcgccgaa cgcgaccgcg cgcgcgagct gcccgtggta tctgccgtgg catcatcatg tggcggcggg ctttgtgctg cgccagtgcg gcagcgatgg ccagtggggc ctgtggcgcg atcataccca gtgcgaaaac ccggaaaaaa acgaagcgtt tctggatcag cgcctgattc tggaacgcct gcaggtgatg tataccgtgg gctatagcct gagcctggcg accctgctgc tggcgctgct gattctgagc ctgtttcgcc gcctgcattg cacccgcaac tatattcata ttaacctgtt taccagcttt atgctgcgcg cggcggcgat tctgagccgc gatcgcctgc tgccgcgccc gggcccgtat ctgggcgatc aggcgctggc gctgtggaac caggcgctgg cggcgtgccg caccgcgcag attgtgaccc agtattgcgt gggcgcgaac tatacctggc tgctggtgga aggcgtgtat ctgcatagcc tgctggtgct ggtgggcggc agcgaagaag gccattttcg ctattatctg ctgctgggct ggggcgcgcc ggcgctgttt gtgattccgt gggtgattgt gcgctatctg tatgaaaaca cccagtgctg ggaacgcaac gaagtgaaag cgatttggtg gattattcgc accccgattc tgatgaccat tctgattaac tttctgattt ttattcgcat tctgggcatt ctgctgagca aactgcgcac ccgccagatg cgctgccgcg attatcgcct gcgcctggcg cgcagcaccc tgaccctggt gccgctgctg ggcgtgcatg aagtggtgtt tgcgccggtg accgaagaac aggcgcgcgg cgcgctgcgc tttgcgaaac tgggctttga aatttttctg agcagctttc agggctttct ggtgagcgtg ctgtattgct ttattaacaa agaagtgggc cgcgatccgg cggcggcgcc ggcgctgtgg cgccgccgcg gcaccgcgcc gccgctgagc gcgattgtga gccaggtgca gagcgaaatt cgccgcggct ggcatcattg ccgcctgcgc cgcagcctgg gcgaagaaca gcgccagctg ccggaacgcg cgtttcgcgc gctgccgagc ggcagcggcc cgggcgaagt gccgaccagc cgcggcctga gcagcggcac cctgccgggc ccgggcaacg aagcgagccg cgaactggaa agctattgct aa (SEQ ID NO: 3146)
鼠類GIPR之460個胺基酸之序列係(NCBI參考序列：NP_001074284；uniprotKB/Swiss-Prot Q0P543-1)；參見Vassilatis等人, PNAS USA 2003, 100:4903-4908。 MPLRLLLLLL WLWGLQWAET DSEGQTTTGE LYQRWEHYGQ ECQKMLETTE PPSGLACNGS FDMYACWNYT AANTTARVSC PWYLPWFRQV SAGFVFRQCG SDGQWGSWRD HTQCENPEKN GAFQDQTLIL ERLQIMYTVG YSLSLTTLLL ALLILSLFRR LHCTRNYIHM NLFTSFMLRA AAILTRDQLL PPLGPYTGDQ APTPWNQALA ACRTAQIMTQ YCVGANYTWL LVEGVYLHHL LVIVGRSEKG HFRCYLLLGW GAPALFVIPW VIVRYLRENT QCWERNEVKA IWWIIRTPIL ITILINFLIF IRILGILVSK LRTRQMRCPD YRLRLARSTL TLVPLLGVHE VVFAPVTEEQ VEGSLRFAKL AFEIFLSSFQ GFLVSVLYCFINKEVQSEIRQ GWRHRRLRLS LQEQRPRPHQ ELAPRAVPLS SACREAAVGN ALPSGMLHVP GDEVLESYC (SEQ ID NO: 3147) 且由以下DNA序列(NCBI參考序列：NM_001080815)編碼： atgccgctgc gcctgctgct gctgctgctg tggctgtggg gcctgcagtg ggcggaaacc gatagcgaag gccagaccac caccggcgaa ctgtatcagc gctgggaaca ttatggccag gaatgccaga aaatgctgga aaccaccgaa ccgccgagcg gcctggcgtg caacggcagc tttgatatgt atgcgtgctg gaactatacc gcggcgaaca ccaccgcgcg cgtgagctgc ccgtggtatc tgccgtggtt tcgccaggtg agcgcgggct ttgtgtttcg ccagtgcggc agcgatggcc agtggggcag ctggcgcgat catacccagt gcgaaaaccc ggaaaaaaac ggcgcgtttc aggatcagac cctgattctg gaacgcctgc agattatgta taccgtgggc tatagcctga gcctgaccac cctgctgctg gcgctgctga ttctgagcct gtttcgccgc ctgcattgca cccgcaacta tattcatatg aacctgttta ccagctttat gctgcgcgcg gcggcgattc tgacccgcga tcagctgctg ccgccgctgg gcccgtatac cggcgatcag gcgccgaccc cgtggaacca ggcgctggcg gcgtgccgca ccgcgcagat tatgacccag tattgcgtgg gcgcgaacta tacctggctg ctggtggaag gcgtgtatct gcatcatctg ctggtgattg tgggccgcag cgaaaaaggc cattttcgct gctatctgct gctgggctgg ggcgcgccgg cgctgtttgt gattccgtgg gtgattgtgc gctatctgcg cgaaaacacc cagtgctggg aacgcaacga agtgaaagcg atttggtgga ttattcgcac cccgattctg attaccattc tgattaactt tctgattttt attcgcattc tgggcattct ggtgagcaaa ctgcgcaccc gccagatgcg ctgcccggat tatcgcctgc gcctggcgcg cagcaccctg accctggtgc cgctgctggg cgtgcatgaa gtggtgtttg cgccggtgac cgaagaacag gtggaaggca gcctgcgctt tgcgaaactg gcgtttgaaa tttttctgag cagctttcag ggctttctgg tgagcgtgct gtattgcttt attaacaaag aagtgcagag cgaaattcgc cagggctggc gccatcgccg cctgcgcctg agcctgcagg aacagcgccc gcgcccgcat caggaactgg cgccgcgcgc ggtgccgctg agcagcgcgt gccgcgaagc ggcggtgggc aacgcgctgc cgagcggcat gctgcatgtg ccgggcgatg aagtgctgga aagctattgc taa (SEQ ID NO: 3148)
由替代性剪接產生的鼠類GIPR之230個胺基酸之同功型具有序列(Gerhard等人, Genome Res, 14:2121-2127 (2004)；NCBI參考序列：AAI20674)： MPLRLLLLLL WLWGLQWAET DSEGQTTTGE LYQRWEHYGQ ECQKMLETTE PPSGLACNGS FDMYACWNYT AANTTARVSC PWYLPWFRQV SAGFVFRQCG SDGQWGSWRD HTQCENPEKN GAFQDQTLIL ERLQIMYTVG YSLSLTTLLL ALLILSLFRR LHCTRNYIHM NLFTSFMLRA AAILTRDQLL PPLGPYTGDQ APTPWNQVLH RLLPGGTKTF PIYFRTFPHH(SEQ ID NO: 3149) 且由以下DNA序列編碼： atgccgctgc gcctgctgct gctgctgctg tggctgtggg gcctgcagtg ggcggaaacc gatagcgaag gccagaccac caccggcgaa ctgtatcagc gctgggaaca ttatggccag gaatgccaga aaatgctgga aaccaccgaa ccgccgagcg gcctggcgtg caacggcagc tttgatatgt atgcgtgctg gaactatacc gcggcgaaca ccaccgcgcg cgtgagctgc ccgtggtatc tgccgtggtt tcgccaggtg agcgcgggct ttgtgtttcg ccagtgcggc agcgatggcc agtggggcag ctggcgcgat catacccagt gcgaaaaccc ggaaaaaaac ggcgcgtttc aggatcagac cctgattctg gaacgcctgc agattatgta taccgtgggc tatagcctga gcctgaccac cctgctgctg gcgctgctga ttctgagcct gtttcgccgc ctgcattgca cccgcaacta tattcatatg aacctgttta ccagctttat gctgcgcgcg gcggcgattc tgacccgcga tcagctgctg ccgccgctgg gcccgtatac cggcgatcag gcgccgaccc cgtggaacca ggtgctgcat cgcctgctgc cgggcggcac caaaaccttt ccgatttatt ttcgcacctt tccgcatcat taa (SEQ ID NO: 3150)。
如本文所述，術語「GIPR多肽」涵蓋天然存在之GIPR多肽序列，例如人類胺基酸序列SEQ ID NO: 3141、3143或3145。然而，術語「GIPR多肽」亦涵蓋包含與天然存在之GIPR多肽序列之胺基酸序列，例如SEQ ID NO: 3141、3143或3145有一或多個胺基酸不同的胺基酸序列之多肽，因此該序列與SEQ ID NO: 3141、3143或3145至少85%一致。GIPR多肽可以藉由引入一或多個保守或非保守胺基酸取代，並在GIPR多肽之特定位置使用天然或非天然存在之胺基酸來產生。
「保守胺基酸取代」可以涉及天然胺基酸殘基(亦即，野生型GIPR多肽序列之給定位置中所見的殘基)經非天然殘基(亦即，在野生型GIPR多肽序列之給定位置未發現之殘基)取代，由此對在該位置之胺基酸殘基之極性或電荷具有極小或無影響。保守胺基酸取代亦涵蓋典型地藉由化學肽合成而非藉由生物系統中之合成併入的非天然存在之胺基酸殘基。該等殘基包括肽模擬物，以及胺基酸部分之其他顛倒或倒轉形式。
天然存在之殘基可以基於常見側鏈特性分成以下各類： (1) 疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile； (2) 中性親水性：Cys、Ser、Thr； (3) 酸性：Asp、Glu； (4) 鹼性：Asn、Gln、His、Lys、Arg； (5) 影響鏈取向之殘基：Gly、Pro；及 (6) 芳族：Trp、Tyr、Phe。
亦可使用例如Creighton (1984) PROTEINS: STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES (第2版, 1993), W.H. Freeman and Company中所描述之原理制定胺基酸之其他組群。在一些情況下，基於此類特徵中之兩種或多於兩種進一步表徵取代可為有用的(例如用「較小極性」殘基，諸如Thr殘基取代，在適當情況下可以表示高度保守性取代)。
保守取代可以涉及該等種類之一的成員經同一種類之另一成員替換。非保守取代可以涉及該等種類之一的成員經另一種類之成員替換。
已知與上述分組之胺基酸殘基具有類似物理化學特性之合成、稀少或經修飾胺基酸殘基可以在一個序列中用作特定胺基酸殘基之「保守」取代。舉例而言，D-Arg殘基可以充當典型L-Arg殘基之取代物。可以關於上述種類中之兩種或多於兩種描述特定取代也正是此情形(例如，用較小疏水性殘基取代意謂一個胺基酸經在上述種類中之兩類或此項技術中已知與滿足該兩個定義之殘基具有類似物理化學特性之其他合成、稀少或經修飾殘基中所見的殘基取代)。
編碼本文所提供之GIPR多肽，包括與SEQ ID NO: 3141、3143或3145具有簡併性之該等多肽的核酸序列，以及編碼SEQ ID NO: 3141、3143或3145之多肽變異體之核酸序列形成本發明之其他態樣。
為了表現本文所提供之GIPR核酸，根據此項技術中已知之標準選殖及表現技術(例如，如Sambrook, J., Fritsh, E. F.及Maniatis, T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual第2版, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989中所描述)，可以將適當編碼序列，例如SEQ ID NO: 3141、3143或3145選殖至適合載體中且在引入適合宿主中後，可以表現該序列以產生編碼多肽。本發明亦關於該等包含根據本發明之核酸序列的載體。
「載體」係指一種遞送媒介，其(a)促進編碼多肽之核酸序列之表現；(b)促進由其產生多肽；(c)促進靶細胞經其之轉染/轉型；(d)促進核酸序列之複製；(e)促進核酸之穩定性；(f)促進核酸及/或經轉型/轉染之細胞的偵測；及/或(g)以其他方式賦予編碼多肽之核酸序列有利的生物及/或物理化學功能。載體可以為任何適合的載體，包括染色體、非染色體及合成核酸載體(包含一組適合表現控制元件的核酸序列)。此類載體之實例包括SV40衍生物、細菌質體、噬菌體DNA、桿狀病毒、酵母質體、來源於質體與噬菌體DNA之組合的載體，及病毒核酸(RNA或DNA)載體。
重組表現載體可以設計成用於在原核細胞(例如大腸桿菌)或真核細胞(例如昆蟲細胞，使用桿狀病毒表現載體，酵母細胞或哺乳動物細胞)中表現GIPR蛋白。在一個實施例中，宿主細胞係哺乳動物、非人類宿主細胞。代表性宿主細胞包括典型地用於選殖及表現的宿主，包括大腸桿菌株TOP10F'、TOP10、DH10B、DH5a、HB101、W3110、BL21(DE3)及BL21 (DE3)pLysS、BLUESCRIPT (Stratagene)、哺乳動物細胞株CHO、CHO-K1、HEK293、293-EBNA pIN載體(Van Heeke & Schuster, J. Biol. Chem. 264: 5503-5509 (1989)；pET載體(Novagen, Madison Wis.)。或者，可以在體外，例如使用T7啟動子調控序列及T7聚合酶轉錄及轉譯重組表現載體。較佳地，該載體在含有編碼該多肽之核酸序列的選殖位點上游包含啟動子。可以打開及關閉之啟動子的實例包括lac啟動子、T7啟動子、trc啟動子、tac啟動子及trp啟動子。
因此，本文提供包含編碼GIPR之核酸序列的載體，該等載體有利於重組GIPR之表現。在各種實施例中，載體包含可操作地連接的核苷酸序列，該序列調控GIPR之表現。載體可以包含或締合任何適合啟動子、強化子及其他有助於表現之元件。此類元件之實例包括強表現啟動子(例如人類CMV IE啟動子/強化子、RSV啟動子、SV40啟動子、SL3-3啟動子、MMTV啟動子或HIV LTR啟動子、EF1α啟動子、CAG啟動子)、有效聚(A)終止序列、大腸桿菌中質體產物之複製起點、作為可選擇標記物之抗生素抗性基因及/或適宜選殖位點(例如聚連接子)。載體亦可包含誘導性啟動子，與組成性啟動子，諸如CMV IE相對。在一個態樣中，提供包含編碼GIPR多肽之序列的核酸，該核酸可操作地連接至組織特異性啟動子，該啟動子促進代謝相關組織，諸如肝或胰臟組織中該序列之表現。
在本發明之另一態樣中，提供包含本文所揭示之GIPR核酸及載體的宿主細胞。在各種實施例中，將載體或核酸整合至宿主細胞基因組中，在其他實施例中，該載體或核酸係在染色體外。
提供包含此類核酸、載體或其中任一種或兩種之組合等等重組細胞，諸如酵母、細菌(例如大腸桿菌)及哺乳動物細胞(例如永生化哺乳動物細胞)。在各種實施例中，提供包含非整合性核酸，諸如質體、黏接質體、噬菌粒或線性表現元件的細胞，該核酸包含用於表現GIPR多肽之編碼序列。
可以藉由轉型或藉由轉染將包含編碼本文所提供之GIPR多肽之核酸序列的載體引入宿主細胞中。用表現載體轉型細胞之方法係熟知的。
GIPR編碼核酸可以經由病毒載體安置於及/或遞送至宿主細胞或宿主動物中。任何適合病毒載體均可用於此情形。病毒載體可以包含單獨或組合一或多種病毒蛋白質之多個病毒聚核苷酸，該等聚核苷酸有助於本發明之核酸在所需宿主細胞中之遞送、複製及/或表現。病毒載體可以為構成病毒基因組之全部或一部分的聚核苷酸、病毒蛋白/核酸偶聯物、病毒樣粒子(VLP)或包含病毒核酸及GIPR多肽編碼核酸之完整病毒粒子。病毒粒子病毒載體可以包含野生型病毒粒子或經修飾之病毒粒子。病毒載體可以為需要存在另一載體或野生型病毒以進行複製及/或表現的載體(例如病毒載體可以為輔助病毒依賴性病毒)，諸如腺病毒載體擴增子。典型地，此類病毒載體由野生型病毒粒子，或蛋白質及/或核酸內含物經修飾成增加轉殖基因容量或幫助核酸轉染及/或表現的病毒粒子組成(此類載體之實例包括疱疹病毒/AAV擴增子)。典型地，病毒載體類似於及/或來源於通常感染人類之病毒。就這一點而言，適合病毒載體粒子包括例如腺病毒載體粒子(包括屬於腺病毒科病毒或來源於腺病毒科病毒之任何病毒)、腺相關病毒載體粒子(AAV載體粒子)或其他細小病毒屬及細小病毒載體粒子、乳頭瘤病毒載體粒子、黃病毒載體、α病毒載體、疱疹病毒載體、痘病毒載體、逆轉錄病毒載體，包括慢病毒載體。
如本文所描述表現的GIPR多肽可以使用標準蛋白質純化方法分離。GIPR多肽可以自天然表現其之細胞分離，或者其可以自經工程改造成表現GIPR之細胞，例如不天然表現GIPR的細胞分離。
可以用於分離GIPR多肽之蛋白質純化方法，以及相關材料及試劑係此項技術中所知的。可以用於分離GIPR多肽之其他純化方法可以見於參考文獻，諸如Bootcov MR, 1997, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:11514-9, Fairlie WD, 2000, Gene 254: 67-76中。
本文提供結合GIPR，包括人類GIPR (hGIPR)之拮抗劑抗原結合蛋白。在一個實施例中，人類GIPR具有如SEQ ID NO: 3141中所陳述之序列。在另一實施例中，人類GIPR具有如SEQ ID NO: 3143中所陳述之序列。在另一實施例中，人類GIPR具有如SEQ ID NO: 3145中所陳述之序列。
所提供的抗原結合蛋白係嵌入及/或接合有一或多個如本文所描述之互補決定區(CDR)的多肽。在一些抗原結合蛋白中，CDR係嵌入「構架」區中，使CDR取向成使得實現CDR之適當抗原結合特性。本文所描述的某些抗原結合蛋白係抗體或來源於抗體。在其他抗原結合蛋白中，CDR序列係嵌入不同類型蛋白質骨架中。以下進一步描述各種結構。
本文所揭示之抗原結合蛋白具有多種效用。該等抗原結合蛋白例如可用於特異性結合檢定、GIPR之親和純化以及用於鑑別其他GIPR活性拮抗劑之篩選檢定中。抗原結合蛋白之其他用途包括例如診斷GIPR相關疾病或病況以及確定GIPR存在或不存在之篩選檢定。鑒於所提供之抗原結合蛋白係拮抗劑，故GIPR抗原結合蛋白亦可用於治療方法中，在該等方法中，其可用於減小體重增加，甚至同時還維持或增加食物攝入，增加脂肪量百分比及增加瘦肉量百分比，提高葡萄糖耐量，降低胰島素含量，降低膽固醇和甘油三酯含量。因此，抗原結合蛋白可用於治療及預防糖尿病，例如2型糖尿病、肥胖、血脂異常、葡萄糖含量升高或胰島素含量升高。
提供可用於調節GIPR活性之多種選擇性結合劑。該等結合劑包括例如含有抗原結合結構域(例如scFv、結構域抗體及具有抗原結合區之多肽)且特異性結合至GIPR多肽，特別是人類GIPR的抗原結合蛋白。該等結合劑中有一些例如可用於增強GIPR之活性，且可以活化一或多種與GIPR有關之活性。
一般而言，提供的抗原結合蛋白典型地包含一或多個如本文所描述之CDR(例如1、2、3、4、5或6個CDR)。在一些情況下，抗原結合蛋白包含(a)多肽結構，以及(b)***及/或接合至該多肽結構的一或多個CDR。多肽結構可以呈多種不同的形式。舉例而言，其可以為或包含天然存在之抗體，或者其片段或變異體的構架，或者可以實際上為完全合成的。各種多肽結構之實例於下文進一步描述。
在某些實施例中，抗原結合蛋白質多肽結構係抗體或來源於抗體。因此，所提供的某些抗原結合蛋白之實例包括但不限於，單株抗體、雙特異性抗體、微型抗體、結構域抗體(諸如Nanobodies®)、合成抗體(在本文中有時稱為「抗體模擬物」)、嵌合抗體、人類化抗體、人類抗體、抗體融合物，以及其各自之部分或片段。在一些情況下，抗原結合蛋白係完整抗體之免疫片段(例如Fab、Fab'、F(ab')2)。在其他情況下，抗原結合蛋白係使用來自本發明抗體之CDR的scFv。
本文所提供之抗原結合蛋白特異性結合至人類GIPR。在一具體實施例中，抗原結合蛋白特異性結合至包含SEQ ID NO: 3141之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之人類GIPR。在一具體實施例中，抗原結合蛋白特異性結合至包含SEQ ID NO: 3143之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之人類GIPR。在一具體實施例中，抗原結合蛋白特異性結合至包含SEQ ID NO: 3145之胺基酸序列或由該胺基酸序列組成之人類GIPR。
所提供的抗原結合蛋白係拮抗劑且典型地具有以下特徵中之一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個或全部八個： (a) 能夠預防或減少GIP與GIPR之結合，其中該等預防或減少程度可以例如藉由諸如放射性標記或螢光標記之配體結合研究，或藉由本文所描述之方法(例如cAMP檢定或其他功能檢定)量測。在相同條件下，該減少可以為SEQ ID NO: 3141、3143或3145之預處理程度之至少10%、25%、50%、100%或更高。 (b) 能夠降低血糖； (c) 能夠增加葡萄糖耐量； (d) 能夠增加胰島素敏感性； (e) 能夠減輕體重或減少體重增加； (f) 能夠減少脂肪量或減少脂肪組織之炎症； (g) 能夠降低空腹胰島素含量； (h) 能夠降低循環膽固醇含量； (i) 能夠降低循環甘油三酯含量； (j) 能夠減少肝脂肪變性或降低肝中甘油三酯含量； (k) 降低AST、ALT及/或ALP含量。
在一個實施例中，GIPR抗原結合蛋白具有以下活性中之一或多種： (a) 結合人類GIPR使得例如經由表面電漿共振或動力學排除檢定技術所量測，KD ≤200 nM、≤150 nM、≤100nM、≤50 nM、≤10 nM、≤5 nM、≤2 nM或≤1 nM。 (b) 在人類血清中之半衰期係至少3天。
如例如根據以下所述量測，所提供的一些抗原結合蛋白對於GIPR之締合速率(ka)係至少104 / M×秒、至少105 /M×秒或至少106 /M×秒。所提供的某些抗原結合蛋白具有較慢解離速率(dissociation rate/off-rate)。一些抗原結合蛋白之kd (解離速率)例如係1×10-2 s-1 ，或1×10-3 s-1 ，或1×10-4 s-1 ，或1×10-5 s-1 。在某些實施例中，抗原結合蛋白之KD(平衡結合親和力)小於25 pM、50 pM、100 pM、500 pM、1 nM、5 nM、10 nM、25 nM或50 nM。
在另一態樣中，提供的抗原結合蛋白在活體外或活體內(例如當投予人類受試者時)之半衰期係至少一天。在一個實施例中，抗原結合蛋白之半衰期係至少三天。在各種其他實施例中，抗原結合蛋白之半衰期係4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50或60天或更長。在另一實施例中，抗原結合蛋白經衍生化或修飾以使得其半衰期長於未衍生化或未修飾抗體。在另一實施例中，抗原結合蛋白含有增加血清半衰期之點突變。有關此類突變體及衍生化形式之其他詳情提供於下。
所提供的抗原結合蛋白中有一些的結構典型地與天然存在之抗體相關。該等抗體之結構單元典型地包含一或多個四聚體，其各自由兩對相同的多肽鏈構成，不過一些哺乳動物物種亦產生僅具有單一重鏈之抗體。在典型抗體中，每對包括一條全長「輕」鏈(在某些實施例中約25 kDa)及一條全長「重」鏈(在某些實施例中約50-70 kDa)。每一個別免疫球蛋白鏈係由若干「免疫球蛋白結構域」構成，各結構域由約90至110個胺基酸組成且表現特有摺疊模式。該等結構域係所構成之抗體多肽之基本單位。每條鏈之胺基末端部分典型地包括負責抗原識別之可變結構域。羧基末端部分在進化上比該鏈另一端保守且稱為「恆定區」或「C區」。人類輕鏈一般分類為κ及λ輕鏈，且其各自含有一個可變結構域及一個恆定結構域。重鏈典型地分類為μ、δ、γ、α或ε鏈，且其分別將抗體同型定義為IgM、IgD、IgG、IgA及IgE。IgG具有若干亞型，包括但不限於IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。IgM亞型包括IgM及IgM2。IgA亞型包括IgA1及IgA2。在人體中，IgA及IgD同型含有四條重鏈及四條輕鏈；IgG及IgE同型含有兩條重鏈及兩條輕鏈；且IgM同型含有五條重鏈及五條輕鏈。重鏈C區典型地包含負責效應功能之一或多個結構域。重鏈恆定區結構域之數量將取決於同型。IgG重鏈例如各自含有三個C區結構域，稱為CH1、CH2及CH3。所提供的抗體可以具有該等同型及亞型中之任一種。在某些實施例中，GIPR抗體屬於IgG1、IgG2或IgG4亞型。術語「GIPR抗體」及「抗GIPR抗體」在本申請案及圖式中可互換使用。兩個術語均指結合至GIPR之抗體。
在全長輕鏈及重鏈中，可變區及恆定區藉由約十二個或更多胺基酸之「J」區接合，且重鏈還包括約十個或更多個胺基酸之「D」區。參見例如Fundamental Immunology, 第2版, 第7章 (Paul, W.編) 1989, New York: Raven Press(以全文引用之方式併入本文中用於所有目的)。每個輕鏈/重鏈對的可變區典型地形成抗原結合位點。
對於本文所提供之抗體，免疫球蛋白鏈之可變區一般展現相同的整體結構，包含由三個高變區，更通常稱為「互補決定區」或CDR接合的相對保守之構架區(FR)。來自以上提及的各重鏈/輕鏈對之兩條鏈的CDR經構架區對準而形成特異性結合GIPR上之特定抗原決定基的結構。自N末端至C末端，天然存在之輕鏈及重鏈可變區典型地遵循以下元件次序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。已設計出編號系統用於指定在該等結構域之每一個中佔據位置的胺基酸的編號。該編號系統定義於Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987及1991, NIH, Bethesda, Md.)，或Chothia及Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917；Chothia等人, 1989, Nature 342:878-883中。
有關如以下實例中所述製備及鑑別的特定抗體之序列信息概述於表1中。因此，在一個實施例中，抗原結合蛋白係具有如表1各列之一中所說明的CDR、可變結構域以及輕鏈及重鏈序列的抗體。
已指定本發明抗體及其片段之可變輕鏈、可變重鏈、輕鏈、重鏈、CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2及CDRH3序列的SEQ ID NO並顯示於表1中。亦已指定編碼本發明抗體及其片段之可變輕鏈、可變重鏈、輕鏈、重鏈、CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2及CDRH3序列之聚核苷酸的SEQ ID NO並顯示於表2中。本發明之抗原結合蛋白可以用SEQ ID NO以及構築體名稱(例如2C2.005)或標識符編號(例如iPS:336175)標識。下表1-5中標識之抗原結合蛋白可以基於構築體名稱分為數個家族。舉例而言，「4B1家族」包括構築體4B1、4B1.010、4B1.011、4B1.012、4B1.013、4B1.014、4B1.015及4B1.016。
本文提供的各種輕鏈及重鏈可變區描述於表3中。該等可變區各自可以連接至重鏈或輕鏈恆定區以分別形成完整抗體重鏈及輕鏈。此外，由此產生之重鏈及輕鏈序列各自可以組合形成完整抗體結構。 表1. 胺基酸SEQ ID NO. 表2. 核酸SEQ ID NO. 表3. 例示性可變輕鏈區及可變重鏈區：核酸(「NA」)及胺基酸(「AA」)序列 表4. 例示性CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2及CDRH3核酸(「NA」)及胺基酸(「AA」)序列 表4A. 例示性CDRL1、CDRL2及CDRL3核酸(「NA」)及胺基酸(「AA」)序列 表4B. 例示性CDRH1、CDRH2及CDRH3核苷酸及胺基酸序列 表5. 例示性輕鏈及重鏈核酸(「NA」)及胺基酸(「AA」)序列
在一個實施例中，該抗體或其片段包括包含選自由SEQ ID NO: 1-157組成之群之序列的輕鏈可變區及包含選自由SEQ ID NO: 158-314組成之群之序列的重鏈可變區，其中該抗體或其功能片段在一或多個選自由以下組成之群之偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代：相對於參考序列SEQ ID NO: 455，抗體輕鏈之D70；相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之E276；及相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之T363。
在一個實施例中，該抗體或其片段包含選自由以下組成之群之輕鏈可變區與重鏈可變區的組合：包含SEQ ID NO: 1之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 158之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 2之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 159之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 3之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 160之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 4之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 161之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 5之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 162之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 6之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 163之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 7之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 164之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 8之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 165之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 9之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 166之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 10之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 167之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 11之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 168之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 12之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 169之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 13之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 170之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 14之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 171之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 15之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 172之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 16之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 173之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 17之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 174之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 18之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 175之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 19之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 176之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 20之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 177之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 21之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 178之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 22之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 179之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 23之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 180之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 24之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 181之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 25之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 182之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 26之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 183之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 27之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 184之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 28之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 185之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 29之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 186之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 30之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 187之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 31之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 188之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 32之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 189之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 33之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 190之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 34之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 191之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 35之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 192之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 36之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 193之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 37之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 194之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 38之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 195之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 39之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 196之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 40之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 197之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 41之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 198之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 42之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 199之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 43之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 200之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 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153之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 310之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 154之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 311之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 155之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 312之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 156之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 313之重鏈可變區；以及包含SEQ ID NO: 157之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 314之重鏈可變區，其中該抗體或其功能片段在一或多個選自由以下組成之群的偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代：相對於參考序列SEQ ID NO: 455，抗體輕鏈之D70；相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之E276；及相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之T363。
在一個實施例中，該抗體或其片段包含由選自由SEQ ID NO: 1571-1727組成之群之聚核苷酸序列編碼的輕鏈可變區及由選自由SEQ ID NO: 1728-1884組成之群之聚核苷酸序列編碼的重鏈可變區，其中該抗體或其功能片段在一或多個選自由以下組成之群之偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代：相對於參考序列SEQ ID NO: 455，抗體輕鏈之D70；相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之E276；及相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之T363。
在一個實施例中，該抗體或其片段包含選自由以下組成之群之輕鏈可變區與重鏈可變區的組合：由包含SEQ ID NO: 1571之聚核苷酸序列編碼的輕鏈可變區及由包含SEQ ID NO:1728之聚核苷酸序列編碼的重鏈可變區；由包含SEQ ID NO: 1572之聚核苷酸序列編碼的輕鏈可變區及由包含SEQ ID NO:1729之聚核苷酸序列編碼的重鏈可變區；由包含SEQ ID NO: 1573之聚核苷酸序列編碼的輕鏈可變區及由包含SEQ ID NO:1730之聚核苷酸序列編碼的重鏈可變區；由包含SEQ ID NO: 1574之聚核苷酸序列編碼的輕鏈可變區及由包含SEQ ID NO:1731之聚核苷酸序列編碼的重鏈可變區；由包含SEQ ID NO: 1575之聚核苷酸序列編碼的輕鏈可變區及由包含SEQ ID NO:1732之聚核苷酸序列編碼的重鏈可變區；由包含SEQ ID NO: 1576之聚核苷酸序列編碼的輕鏈可變區及由包含SEQ ID NO:1733之聚核苷酸序列編碼的重鏈可變區；由包含SEQ ID NO: 1577之聚核苷酸序列編碼的輕鏈可變區及由包含SEQ ID NO:1734之聚核苷酸序列編碼的重鏈可變區；由包含SEQ ID NO: 1578之聚核苷酸序列編碼的輕鏈可變區及由包含SEQ ID NO:1735之聚核苷酸序列編碼的重鏈可變區；由包含SEQ ID NO: 1579之聚核苷酸序列編碼的輕鏈可變區及由包含SEQ ID NO:1736之聚核苷酸序列編碼的重鏈可變區；由包含SEQ ID NO: 1580之聚核苷酸序列編碼的輕鏈可變區及由包含SEQ ID NO:1737之聚核苷酸序列編碼的重鏈可變區；由包含SEQ ID NO: 1581之聚核苷酸序列編碼的輕鏈可變區及由包含SEQ ID NO:1738之聚核苷酸序列編碼的重鏈可變區；由包含SEQ ID NO: 1582之聚核苷酸序列編碼的輕鏈可變區及由包含SEQ ID NO:1739之聚核苷酸序列編碼的重鏈可變區；由包含SEQ ID NO: 1583之聚核苷酸序列編碼的輕鏈可變區及由包含SEQ ID NO:1740之聚核苷酸序列編碼的重鏈可變區；由包含SEQ ID NO: 1584之聚核苷酸序列編碼的輕鏈可變區及由包含SEQ ID NO:1741之聚核苷酸序列編碼的重鏈可變區；由包含SEQ ID NO: 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本發明係關於一種組成物，其包含具有至少一個內部偶聯位點之抗GIPR抗原結合蛋白。該偶聯位點必須適於藉由確定之偶聯化學，經該偶聯位點處之胺基酸殘基的側鏈偶聯另外的官能部分(例如GLP-1受體促效劑)。實現與根據本發明之抗GIPR抗原結合蛋白之高選擇性、位點特異性偶聯需要考慮多種不同的設計標準。首先，須確定或預先確定較佳之偶聯或偶合化學。官能部分，諸如GLP-1受體促效劑可以經由此項技術中已知之不同偶聯化學分類偶聯或偶合至選定的抗GIPR抗原結合蛋白之偶聯位點。舉例而言，靶向抗GIPR抗原結合蛋白上可接近之半胱胺酸硫醇的順丁烯二醯亞胺活化之偶聯搭配物係一個實施例，而且根據本發明，可以採用靶向抗GIPR抗原結合蛋白序列中之經典或非經典，例如非天然胺基酸之側鏈的多種偶聯或偶合化學。
化學選擇性偶聯之化學包括：銅(I)催化的疊氮化物–炔[3+2]偶極環加成；道丁格連接反應(Staudinger ligation)；其他醯基轉移酶方法(SàN；XàN)；肟化反應；腙鍵形成；以及其他適合的有機化學反應，諸如使用水溶性鉑催化劑之交叉偶合反應。(例如Bong等人, Chemoselective Pd(0)-catalyzed peptide coupling in water, Organic Letters 3(16):2509-11 (2001)；Dibowski等人, Bioconjugation of peptides by palladium-catalyzed C-C cross-coupling in water, Angew. Chem. Int. Ed. 37(4):476-78 (1998)；DeVasher等人, Aqueous-phase, palladium-catalyzed cross-coupling of aryl bromides under mild conditions, using water-soluble, sterically demanding alkylphosphines, J. Org. Chem. 69:7919-27 (2004)；Shaugnessy等人, J. Org. Chem, 2003, 68, 6767-6774；Prescher, JA及Bertozzi CR, Chemistry in living system, Nature Chemical Biology 1(1); 13-21 (2005))。
如以上所提及，與抗GIPR抗原結合蛋白的偶聯(或共價結合)係經由在偶聯位點處之胺基酸殘基，例如但不限於半胱胺醯基殘基的側鏈實現。選擇的在內部偶聯位點處之胺基酸殘基，例如半胱胺醯基殘基可以為在天然Fc結構域序列中佔據相同胺基酸殘基位置之殘基，或該胺基酸殘基可以藉由取代或***而工程改造至Fc結構域序列中。
在本發明方法及物質組成物之一些實施例中，特別適用作偶聯位點的非天然胺基酸殘基之其他實例包括：包含疊氮基之胺基酸殘基，例如疊氮高丙胺酸、對疊氮基***酸；包含酮基胺基酸殘基，例如對乙醯基***酸；包含炔烴胺基酸殘基，例如對乙炔基***酸、高炔丙基甘胺酸、對-(丙-2-炔基)-酪胺酸；包含烯烴胺基酸殘基，例如高烯丙基甘胺酸；包含芳基鹵化物之胺基酸殘基，例如對碘***酸、對溴***酸；及包含1,2-胺基硫醇之胺基酸殘基。
非經典胺基酸殘基可以藉由胺基酸取代或***來併入。非經典胺基酸殘基可以藉由化學肽合成而非藉由生物系統中之合成，諸如重組表現細胞而併入肽中，或者熟練技術人員可以採用蛋白質工程之已知技術，該等技術使用重組表現細胞。(參見例如，Link等人, Non-canonical amino acids in protein engineering, Current Opinion in Biotechnology, 14(6):603-609 (2003)；Schultz等人, In vivo incorporation of unnatural amino acids；美國專利第7,045,337號)。
在整個抗GIPR抗原結合蛋白中偶聯位點放置之選擇係選擇根據本發明之內部偶聯位點的另一重要方面。抗GIPR抗原結合蛋白上的任何暴露之胺基酸殘基均可潛在地作為有用偶聯位點並且若在抗GIPR抗原結合蛋白序列中選定之偶聯位點處不存在時，可以突變成半胱胺酸或一些其他的反應性胺基酸進行位點選擇性偶合。不過，該方法未考慮可能干擾偶聯搭配物之活性或限制工程改造之突變之反應性的潛在空間限制。
在一個實施例中，抗GIPR抗原結合蛋白係抗體或其功能片段。在一個實施例中，抗GIPR抗體或其功能片段在一或多個偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代。偶聯位點可以基本上在抗原結合蛋白之任何殘基上。在某些實施例中，偶聯位點係位於抗體或其功能片段之CL、CH1、CH2或CH3區內。在某些實施例中，偶聯位點係選自由以下組成之群：相對於參考序列SEQ ID NO: 455，抗體輕鏈之D70；相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之E276；及相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之T363。為簡潔起見，「相對於參考序列SEQ ID NO: 455，抗體輕鏈之D70」係與抗體5G12.006之輕鏈AHo位置D88以及抗體5G12.006之輕鏈Kabat位置D70相同之取代位點；「相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之E276」係與抗體5G12.006之重鏈AHo位置E384和抗體5G12.006之重鏈Kabat位置E285相同之取代位點；及「相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之T363」係與與抗體5G12.006之重鏈AHo位置T487和抗體5G12.006之重鏈Kabat位置T382相同之取代位點。
一些抗原結合蛋白包含如有關表3中所列有關抗體之一的一列中所列的可變輕鏈結構域及可變重鏈結構域。在一些情況下，抗原結合蛋白包含來自表3中所列抗體之一的兩個相同可變輕鏈結構域及兩個相同可變重鏈結構域。所提供的一些抗原結合蛋白包含如表3中所列有關抗體之一的一列中所列的可變輕鏈結構域及可變重鏈結構域，不過該等結構域中之一個或兩個與表中說明之序列有僅1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個胺基酸殘基不同，其中此類序列差異各自獨立地為單一胺基酸缺失、***或取代，其中該等缺失、***及/或取代引起相對於表3中所說明之可變結構域序列有僅1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個胺基酸變化。在一個實施例中，抗原結合蛋白包含來自表3之可變區序列，但其中N末端甲硫胺酸缺失。其他抗原結合蛋白亦包含如表3中所列有關抗體之一的一列中所列的可變輕鏈結構域及可變重鏈結構域，不過該等結構域中之一個或兩個與表中說明之序列的差異在於，該重鏈可變結構域及/或輕鏈可變結構域包含與表3中所說明之重鏈可變結構域或輕鏈可變結構域序列之胺基酸序列具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列，或由該胺基酸序列組成。
在另一態樣中，抗原結合蛋白僅由來自表3中所列抗體之可變輕鏈結構域或可變重鏈結構域組成。在另一態樣中，抗原結合蛋白包含來自表3中所列該等結構域的兩個或多於兩個相同可變重鏈結構域或者兩個或多於兩個相同可變輕鏈結構域。該等結構域抗體可以經由連接子融合在一起或接合，如下文更詳細地描述。結構域抗體亦可與一或多個分子融合或連接以延長半衰期(例如PEG或白蛋白)。
所提供的其他抗原結合蛋白係藉由組合表3中所顯示之重鏈與輕鏈而形成的抗體變異體，並且包含的輕鏈及/或重鏈各自與該等鏈之胺基酸序列具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性。在一些情況下，此類抗體包括至少一條重鏈及一條輕鏈，而在其他情況下，變異體形式 含有兩條相同輕鏈及兩條相同重鏈。
重鏈可變區之各種組合可以與輕鏈可變區各種組合中之任一種組合。
在另一實施例中，本文提供的經分離之抗原結合蛋白係包含如表3中所述之序列的人類抗體且屬於IgG1 、IgG2 、IgG3 或IgG4 類型。
本文所揭示之抗原結合蛋白係移植、***及/或接合有一或多個CDR之多肽。抗原結合蛋白可以具有1、2、3、4、5或6個CDR。因此，抗原結合蛋白可以具有例如一個重鏈CDR1(「CDRH1」)，及/或一個重鏈CDR2(「CDRH2」)，及/或一個重鏈CDR3(「CDRH3」)，及/或一個輕鏈CDR1 (「CDRL1」)，及/或一個輕鏈CDR2 (「CDRL2」)，及/或一個輕鏈CDR3 (「CDRL3」)。一些抗原結合蛋白包括CDRH3及CDRL3兩者。特定輕鏈及重鏈CDR分別標識於表4A及4B中。
給定抗體之互補決定區(CDR)及構架區(FR)可以使用Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH出版號91-3242, 1991中所描述之系統進行鑑別。本文所揭示之某些抗體包含一或多個與表4A及4B中所呈現之一或多個CDR之胺基酸序列一致或具有較大序列一致性的胺基酸序列。該等CDR使用上述Kabat所描述之系統。
在天然存在之抗體內的CDR之結構及特性描述於前述文獻中。簡言之，在傳統抗體中，CDR係嵌入重鏈及輕鏈可變區之構架內，在此情況下，其構成負責抗原結合及識別之區域。可變區在構架區(Kabat等人, 1991, 前述稱為構架區1-4、FR1、FR2、FR3及FR4；亦參見Chothia及Lesk, 1987, 前述)內包含至少三個重鏈或輕鏈CDR，參見前述(Kabat等人, 1991,Sequences of Proteins of Immunological Interest , Public Health Service N. I. H., Bethesda, MD；亦參見Chothia及Lesk, 1987,J. Mol. Biol. 196 :901-917；Chothia等人, 1989,Nature 342 : 877-883)。然而，本文所提供之CDR不僅可以用於確定傳統抗體結構之抗原結合結構域，而且可以嵌入多種其他多肽結構中，如本文所描述。
在一個實施例中，抗體或其片段包含CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2及CDRH3，其中該抗體或其功能片段在一或多個選自由以下組成之群之偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代：相對於參考序列SEQ ID NO: 455，抗體輕鏈之D70；相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之E276；及相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之T363。在一個實施例中，抗體或其片段包含CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2及CDRH3，其中CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2及CDRH3各自分別包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 629、SEQ ID NO: 786、SEQ ID NO: 943、SEQ ID NO: 1100、SEQ ID NO: 1257及SEQ ID NO: 1414；SEQ ID NO: 630、SEQ ID NO: 787、SEQ ID NO: 944、SEQ ID NO: 1101、SEQ ID NO: 1258及SEQ ID NO: 1415；SEQ ID NO: 631、SEQ ID NO: 788、SEQ ID NO: 945、SEQ ID NO: 1102、SEQ ID NO: 1259及SEQ ID NO: 1416；SEQ ID NO: 632、SEQ ID NO: 789、SEQ ID NO: 946、SEQ ID NO: 1103、SEQ ID NO: 1260及SEQ ID NO: 1417；SEQ ID NO: 633、SEQ ID NO: 790、SEQ ID NO: 947、SEQ ID NO: 1104、SEQ ID NO: 1261及SEQ ID NO: 1418；SEQ ID NO: 634、SEQ ID NO: 791、SEQ ID NO: 948、SEQ ID NO: 1105、SEQ ID NO: 1262及SEQ ID NO: 1419；SEQ ID NO: 635、SEQ ID NO: 792、SEQ ID NO: 949、SEQ ID NO: 1106、SEQ ID NO: 1263及SEQ ID NO: 1420；SEQ ID NO: 636、SEQ ID NO: 793、SEQ ID NO: 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1256、SEQ ID NO: 1413及SEQ ID NO: 1570，其中該抗體或其功能片段在一或多個選自由以下組成之群的偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代：相對於參考序列SEQ ID NO: 455，抗體輕鏈之D70；相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之E276；及相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之T363。
在一個實施例中，抗體或其片段包含CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2及CDRH3，其中該抗體或其功能片段在一或多個由聚核苷酸編碼的選自由以下組成之群之偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代：相對於參考序列SEQ ID NO: 455，抗體輕鏈之D70；相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之E276；及相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之T363。在一個實施例中，抗體或其片段包含CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2及CDRH3，其中該抗體或其功能片段在一或多個選自由以下組成之群之偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代：相對於參考序列SEQ ID NO: 455，抗體輕鏈之D70；相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之E276；及相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之T363，其中CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2及CDRH3各自分別由選自由以下組成之群之序列編碼：SEQ ID NO: 2199、SEQ ID NO: 2356、SEQ ID NO: 2513、SEQ ID NO: 2670、SEQ ID NO: 2827及SEQ ID NO: 2984；SEQ ID NO: 2200、SEQ ID NO: 2357、SEQ ID NO: 2514、SEQ ID NO: 2671、SEQ ID NO: 2828及SEQ ID NO: 2985；SEQ ID NO: 2201、SEQ ID NO: 2358、SEQ ID NO: 2515、SEQ ID NO: 2672、SEQ ID NO: 2829及SEQ ID NO: 2986；SEQ ID NO: 2202、SEQ ID NO: 2359、SEQ ID NO: 2516、SEQ ID NO: 2673、SEQ ID NO: 2830及SEQ ID NO: 2987；SEQ ID NO: 2203、SEQ ID NO: 2360、SEQ ID NO: 2517、SEQ ID NO: 2674、SEQ ID NO: 2831及SEQ ID NO: 2988；SEQ ID NO: 2204、SEQ ID NO: 2361、SEQ ID NO: 2518、SEQ ID 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在另一態樣中，抗原結合蛋白包括表4A及4B中所列CDR之1、2、3、4、5或6種變異體形式，其各自與表4A及4B中所列CDR序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性。一些抗原結合蛋白包括表4A及4B中所列CDR中之1、2、3、4、5或6種，其各自或全體與該表中所列CDR有不超過1、2、3、4或5個胺基酸之差異。
在各種其他實施例中，抗原結合蛋白係來源於此類抗體。舉例而言，在一個態樣中，抗原結合蛋白包含表4A及4B中所列有關任何特定抗體各列之一中所列CDR中的1、2、3、4、5或全部6個。在另一態樣中，抗原結合蛋白包括表4A及4B中所列有關抗體各列之一中所列CDR之1、2、3、4、5或6種變異體形式，各CDR與表4A及4B中所列CDR序列具有至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性。一些抗原結合蛋白包括表4A及4B之一列中所列CDR中之1、2、3、4、5或6個，其各自與該等表中所列CDR有不超過1、2、3、4或5個胺基酸之差異。在另一態樣中，抗原結合蛋白包含表4A及4B之一列中所列的全部6個CDR且該等CDR中胺基酸變化之總數總計不超過1、2、3、4或5個胺基酸。
在一個實施例中，該抗體或其片段包括包含選自由SEQ ID NO: 472-628組成之群之序列的輕鏈及包含選自由SEQ ID NO: 472-628組成之群之序列的重鏈，其中該抗體或其功能片段在一或多個選自由以下組成之群之偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代：相對於參考序列SEQ ID NO: 455，抗體輕鏈之D70；相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之E276；及相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之T363。在一個實施例中，該抗體或其片段包含選自由以下組成之群之輕鏈與重鏈的組合：包含SEQ ID NO: 315之輕鏈及包含SEQ ID NO: 472之重鏈；包含SEQ ID NO: 316之輕鏈及包含SEQ ID NO: 473之重鏈；包含SEQ ID NO: 317之輕鏈及包含SEQ ID NO: 474之重鏈；包含SEQ ID NO: 318之輕鏈及包含SEQ ID NO: 475之重鏈；包含SEQ ID NO: 319之輕鏈及包含SEQ ID NO: 476之重鏈；包含SEQ ID NO: 320之輕鏈及包含SEQ ID NO: 477之重鏈；包含SEQ ID NO: 321之輕鏈及包含SEQ ID NO: 478之重鏈；包含SEQ ID NO: 322之輕鏈及包含SEQ ID NO: 479之重鏈；包含SEQ ID NO: 323之輕鏈及包含SEQ ID NO: 480之重鏈；包含SEQ ID NO: 324之輕鏈及包含SEQ ID NO: 481之重鏈；包含SEQ ID NO: 325之輕鏈及包含SEQ ID NO: 482之重鏈；包含SEQ ID NO: 326之輕鏈及包含SEQ ID NO: 483之重鏈；包含SEQ ID NO: 327之輕鏈及包含SEQ ID NO: 484之重鏈；包含SEQ ID NO: 328之輕鏈及包含SEQ ID NO: 485之重鏈；包含SEQ ID NO: 329之輕鏈及包含SEQ ID NO: 486之重鏈；包含SEQ ID NO: 330之輕鏈及包含SEQ ID NO: 487之重鏈；包含SEQ ID NO: 331之輕鏈及包含SEQ ID NO: 488之重鏈；包含SEQ ID NO: 332之輕鏈及包含SEQ ID NO: 489之重鏈；包含SEQ ID NO: 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458之輕鏈及包含SEQ ID NO: 615之重鏈；包含SEQ ID NO: 459之輕鏈及包含SEQ ID NO: 616之重鏈；包含SEQ ID NO: 460之輕鏈及包含SEQ ID NO: 617之重鏈；包含SEQ ID NO: 461之輕鏈及包含SEQ ID NO: 618之重鏈；包含SEQ ID NO: 462之輕鏈及包含SEQ ID NO: 619之重鏈；包含SEQ ID NO: 463之輕鏈及包含SEQ ID NO: 620之重鏈；包含SEQ ID NO: 464之輕鏈及包含SEQ ID NO: 621之重鏈；包含SEQ ID NO: 465之輕鏈及包含SEQ ID NO: 622之重鏈；包含SEQ ID NO: 466之輕鏈及包含SEQ ID NO: 623之重鏈；包含SEQ ID NO: 467之輕鏈及包含SEQ ID NO: 624之重鏈；包含SEQ ID NO: 468之輕鏈及包含SEQ ID NO: 625之重鏈；包含SEQ ID NO: 469之輕鏈及包含SEQ ID NO: 626之重鏈；包含SEQ ID NO: 470之輕鏈及包含SEQ ID NO: 627之重鏈；以及包含SEQ ID NO: 471之輕鏈及包含SEQ ID NO: 628之重鏈，其中該抗體或其功能片段在一或多個選自由以下組成之群的偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代：相對於參考序列SEQ ID NO: 455，抗體輕鏈之D70；相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之E276；及相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之T363。
在一個實施例中，該抗體或其片段包括由選自由SEQ ID NO: 1885-2014組成之群之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及包含選自由SEQ ID NO: 2042-2198組成之群之序列的重鏈，其中該抗體或其功能片段在一或多個選自由以下組成之群之偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代：相對於參考序列SEQ ID NO: 455，抗體輕鏈之D70；相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之E276；及相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之T363。在一個實施例中，該抗體或其片段包含輕鏈與重鏈之組合，其中該抗體或其功能片段在一或多個選自由以下組成之群之偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代：相對於參考序列SEQ ID NO: 455，抗體輕鏈之D70；相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之E276；及相對於參考序列SEQ ID NO: 612，抗體重鏈之T363，該輕鏈與重鏈之組合係選自由以下組成之群：由包含SEQ ID NO: 1885之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2042之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1886之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2043之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1887之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2044之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1888之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2045之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1889之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2046之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1890之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2047之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1891之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2048之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1892之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2049之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1893之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2050之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1894之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2051之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1895之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2052之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1896之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2053之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1897之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2054之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1898之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2055之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1899之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2056之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1900之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2057之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1901之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2058之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1902之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2059之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1903之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2060之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1904之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2061之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1905之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2062之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1906之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2063之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1907之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2064之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1908之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2065之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1909之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ ID NO:2066之聚核苷酸序列編碼的重鏈；由包含SEQ ID NO: 1910之聚核苷酸序列編碼的輕鏈及由包含SEQ 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在另一態樣中，抗原結合蛋白包含如表5中所列有關抗體之一之一列中所列的全長輕鏈及全長重鏈。所提供的一些抗原結合蛋白包含如表5中所列有關抗體之一的一列中所列的全長輕鏈及全長重鏈，不過該等鏈中之一個或兩個與表中說明之序列有僅1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個胺基酸殘基不同，其中此類序列差異各自獨立地為單一胺基酸缺失、***或取代，其中該等缺失、***及/或取代引起相對於表5中所說明之全長序列有僅1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個胺基酸變化。在一個實施例中，抗原結合蛋白包含N末端甲硫胺酸缺失的來自表5之全長輕鏈及/或全長重鏈。在一個實施例中，抗原結合蛋白包含C末端離胺酸缺失的來自表5之全長輕鏈及/或全長重鏈。其他抗原結合蛋白亦包含如表5中所列有關抗體之一的一列中所列的全長輕鏈及全長重鏈，不過該等鏈中之一個或兩個與表中說明之序列的差異在於，該輕鏈及/或重鏈包含與表5中所說明之輕鏈或重鏈序列之胺基酸序列具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的胺基酸序列，或由該胺基酸序列組成。
在另一實施例中，抗原結合蛋白僅由表5中所述之輕鏈或重鏈多肽組成。
在又另一態樣中，含有表3、4A、4B及5中所列CDR、可變結構域及/或全長序列的抗原結合蛋白係單株抗體、嵌合抗體、人類化抗體、人類抗體、多特異性抗體或前述之抗體片段。在另一實施例中，本文提供的經分離之抗原結合蛋白的抗體片段係基於具有表5中所列序列之抗體的Fab片段、Fab'片段、F(ab')2 片段、Fv片段、雙功能抗體或scFv。
在又一態樣中，表5中所提供的經分離之抗原結合蛋白可以與標記基團偶合且可與本文所提供之經分離之抗原結合蛋白之一種抗原結合蛋白競爭結合至GIPR。
在另一實施例中，提供的抗原結合蛋白與上述例示性抗體或功能片段之一競爭特異性結合至人類GIPR(例如SEQ ID NO: 3141)。此類抗原結合蛋白可以結合至與本文所述之抗原結合蛋白之一相同之抗原決定基，或重疊抗原決定基。預期與例示性抗原結合蛋白競爭的抗原結合蛋白及片段顯示類似的功能特性。例示性抗原結合蛋白及片段包括上述抗原結合蛋白及片段，包括具有表3、4A、4B及5中包括之重鏈及輕鏈、可變區結構域及CDR的抗原結合蛋白及片段。因此，作為一個具體實例，所提供的抗原結合蛋白包括與以下抗體競爭之抗原結合蛋白： 具有關於表4A及4B中所列任何抗體所列之全部6個CDR的抗體； 具有關於表3中所列任何抗體所列之VH及VL的抗體；或 具有如關於表5中所列任何抗體所說明之兩條輕鏈及兩條重鏈的抗體。
所提供的抗原結合蛋白包括結合至GIPR之單株抗體。單株抗體可以使用此項技術中已知之任何技術，例如藉由在完成免疫時程之後，使自轉殖基因動物收集之脾細胞永生化來製備。可以使用此項技術中已知之任何技術，例如藉由使脾細胞與骨髓瘤細胞融合以產生融合瘤來使脾細胞永生化。用於產生融合瘤之融合程序中的骨髓瘤細胞較佳不產生抗體，具有高融合效率且具有使其無法在僅支持所需融合細胞(融合瘤)生長的某些選擇性培養基中生長之酶缺陷。適用於小鼠融合中之細胞株的實例包括Sp-20、P3-X63/Ag8、P3-X63-Ag8.653、NS1/1. Ag 4 1、Sp210-Ag14、FO、NSO/U、MPC-11、MPC11-X45-GTG 1.7及S194/5XXO Bul；用於大鼠融合中之細胞株的實例包括R210.RCY3、Y3-Ag 1.2.3、IR983F及4B210。可用於細胞融合之其他細胞株係U-266、GM1500-GRG2、LICR-LON-HMy2及UC729-6。
在一些情況下，融合瘤細胞株係藉由以下方式製備：用GIPR免疫原使動物(例如具有人類免疫球蛋白序列之轉殖基因動物)免疫；自經免疫動物收集脾細胞；使收集的脾細胞與骨髓瘤細胞株融合，由此產生融合瘤細胞；由該等融合瘤細胞產生融合瘤細胞株；及鑑別產生結合GIPR多肽之抗體的融合瘤細胞株。此類融合瘤細胞株及由此產生的抗GIPR單株抗體係本申請案之態樣。
由融合瘤細胞株分泌的單株抗體可以使用此項技術中已知之任何技術純化。可以對融合瘤或mAb進一步篩選以鑑別具有特定特性，諸如增加GIPR活性之能力的mAb。
亦提供基於前述序列的嵌合抗體及人類化抗體。用作治療劑的單株抗體可以在使用前藉由各種方式修飾。一個實例係嵌合抗體，嵌合抗體係由來自不同抗體之蛋白質區段共價接合以產生功能性免疫球蛋白輕鏈或重鏈或者其免疫功能部分而構成之抗體。一般而言，重鏈及/或輕鏈之一部分與來源於特定物種或屬於特定抗體類別或亞類之抗體中的相應序列一致或同源，而該(等)鏈之其餘部分與來源於另一物種或屬於另一抗體類別或亞類之抗體中的相應序列一致或同源。有關涉及嵌合抗體之方法，參見例如美國專利第4,816,567號；及Morrison等人, 1985,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 :6851-6855，其以引用之方式併入本文中。CDR移植描述於例如美國專利第6,180,370號、第5,693,762號、第5,693,761號、第5,585,089號及第5,530,101號中。
一般而言，製備嵌合抗體之目的係產生嵌合體，其中使來自預定患者物種之胺基酸數量最大。一個實例係「CDR移植」的抗體，其中該抗體包含一或多個來自特定物種或屬於特定抗體類別或亞類的互補決定區(CDR)，而該(等)抗體鏈之其餘部分與來源於另一物種或屬於另一抗體類別或亞類之抗體中的相應序列一致或同源。對用於人類，通常將來自囓齒動物抗體之可變區或選擇之CDR移植至人類抗體中，替代人類抗體之天然存在之可變區或CDR。
嵌合抗體之一種有用的類型係「人類化」抗體。一般而言，人類化抗體係由最初在非人類動物中產生之單株抗體製備。該單株抗體中之某些胺基酸殘基，典型地來自抗體非抗原識別部分之胺基酸殘基經修飾成與相應同型之人類抗體中的相應殘基同源。人類化可以例如使用各種方法，藉由用至少一部分囓齒動物可變區取代人類抗體之相應區域來進行(參見例如，美國專利第5,585,089號及第5,693,762號；Jones等人, 1986,Nature 321 :522-525；Riechmann等人, 1988,Nature 332 :323-27；Verhoeyen等人, 1988,Science 239 :1534-1536)。
在一個態樣中，將本文所提供之抗體之輕鏈及重鏈可變區的CDR移植至來自相同或不同系統發生物種之抗體的構架區(FR)。舉例而言，可以將重鏈及輕鏈可變區VH 1、VH 2、VH 3、VH 4、VH 5、VH 6、VH 7、VH 8、VH 9、VH 10、VH 11、VH 12及/或VL 1及VL 2之CDR移植至共同人類FR上。為了確定共同人類FR，可以比對來自若干人類重鏈或輕鏈胺基酸序列的FR以鑑別共同胺基酸序列。在其他實施例中，用來自不同重鏈或輕鏈之FR置換本文所揭示之重鏈或輕鏈之FR。在一個態樣中，GIPR抗體之重鏈及輕鏈FR中的稀有胺基酸未經置換，而其餘FR胺基酸經置換。「稀有胺基酸」係一種特殊的胺基酸，該胺基酸係在FR中通常未發現該特定胺基酸之位置中。或者，可以將來自一條重鏈或輕鏈之經移植可變區與不同於該本文所揭示之特定重鏈或輕鏈之恆定區的恆定區一起使用。在其他實施例中，經移植之可變區係單鏈Fv抗體之一部分。
在某些實施例中，來自非人類物種之恆定區可以與人類可變區一起使用以產生混合抗體。
亦提供完全人類GIPR抗體。諸多方法可用於製備對給定抗原具有特異性之完全人類抗體，無需使人類暴露於該抗原(「完全人類抗體」)。提供的用於產生完全人類抗體之一種特定方式係小鼠體液免疫系統之「人類化」。將人類免疫球蛋白(Ig)基因座引入內源Ig基因失活之小鼠中係在小鼠中產生完全人類單株抗體(mAb)之一種方式，小鼠係可以用任何所需抗原免疫之動物。使用完全人類抗體可以最大限度地減小免疫原性及過敏性反應，該等反應有時會因向人類投予小鼠或小鼠源性mAb作為治療劑而引起。
可以藉由使在不產生內源免疫球蛋白情況下，能夠產生人類抗體譜系之轉殖基因動物(通常為小鼠)免疫來產生完全人類抗體。用於此目的之抗原典型地具有六個或更多個連續胺基酸，且視情況與載體，諸如半抗原偶聯。參見例如，Jakobovits等人, 1993,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 :2551-2555；Jakobovits等人, 1993,Nature 362 :255-258；及Bruggermann等人, 1993,Year in Immunol. 7 :33。在此類方法之一個實例中，藉由使編碼小鼠重鏈及輕鏈免疫球蛋白鏈之內源小鼠免疫球蛋白基因座失去能力，並將含有編碼人類重鏈及輕鏈蛋白質的含人類基因組DNA之基因座之較大片段***小鼠基因組中來產生轉殖基因動物。接著對具有少於人類免疫球蛋白基因座完全補體的部分修飾之動物進行雜交繁育，以獲得具有全部所需免疫系統修飾之動物。當投予免疫原時，該等轉殖基因動物產生對該免疫原具有免疫特異性，同時具有人類而非鼠類胺基酸序列，包括可變區的抗體。有關此類方法之進一步詳情，參見例如WO96/33735及WO94/02602。有關用於製備人類抗體之轉殖基因小鼠的其他方法描述於美國專利第5,545,807號、第6,713,610號、第6,673,986號、第6,162,963號、第5,545,807號、第6,300,129號、第6,255,458號、第5,877,397號、第5,874,299號及第5,545,806號；PCT公開案WO91/10741、WO90/04036；以及EP 546073B1及EP 546073A1中。
上述轉殖基因小鼠在本文中稱為「HuMab」小鼠，含有編碼未重排人類重鏈([μ]及[γ])及[κ]輕鏈免疫球蛋白序列以及使內源[μ]及[κ]鏈基因座失活之靶突變的人類免疫球蛋白基因微型基因座(Lonberg等人, 1994,Nature 368 :856-859)。因此，小鼠展現較低的小鼠IgM或[κ]表現量且對免疫起反應，且引入的人類重鏈及輕鏈轉殖基因經歷類別轉換及體細胞突變以產生高親和力人類IgG[κ]單株抗體(Lonberg等人, 前述；Lonberg及Huszar, 1995,Intern. Rev. Immunol. 13 : 65-93；Harding及Lonberg, 1995,Ann. N.Y Acad. Sci .764 :536-546)。HuMab小鼠之製備詳細描述於以下中：Taylor等人, 1992,Nucleic Acids Research 20 :6287-6295；Chen等人, 1993,International Immunology 5 :647-656；Tuaillon等人, 1994,J. Immunol. 152 :2912-2920；Lonberg等人, 1994,Nature 368 :856-859；Lonberg, 1994,Handbook of Exp. Pharmacology 113 :49-101；Taylor等人, 1994,International Immunology 6:579-591；Lonberg及Huszar, 1995,Intern. Rev. Immunol. 13 :65-93；Harding及Lonberg, 1995,Ann. N.Y Acad. Sci. 764 :536-546；Fishwild等人, 1996,Nature Biotechnology 14 :845-851；前述參考文獻以全文引用之方式併入本文中用於所有目的。另參見美國專利第5,545,806號、第5,569,825號、第5,625,126號、第5,633,425號、第5,789,650號、第5,877,397號、第5,661,016號、第5,814,318號、第5,874,299號及第5,770,429；以及美國專利第5,545,807號；國際公開案第WO 93/1227號、第WO 92/22646號及第WO 92/03918號，所有各案之揭示內容以全文引用之方式併入本文中用於所有目的。用於在這些轉殖基因小鼠中產生人類抗體之技術亦揭示於WO 98/24893及Mendez等人, 1997,Nature Genetics 15 :146-156中，其以引用之方式併入本文中。舉例而言，可以使用HCo7及HCo12轉殖基因小鼠品系產生針對GIPR之人類單株抗體。有關使用轉殖基因小鼠產生人類抗體的其他詳情提供於下。
使用融合瘤技術，可以自轉殖基因小鼠，諸如上述轉殖基因小鼠產生及選擇具有所需特異性之抗原特異性人類mAb。此類抗體可以使用適合載體及宿主細胞選殖及表現，或該等抗體可以自培養之融合瘤細胞收集。
完全人類抗體亦可來源於噬菌體展示文庫(如Hoogenboom等人, 1991,J. Mol. Biol. 227 :381；及Marks等人, 1991,J. Mol. Biol. 222 :581中所揭示)。噬菌體展示技術經由將抗體譜系展示於絲狀噬菌體之表面上且隨後藉由該等抗體與所選抗原之結合選擇噬菌體來模擬免疫選擇。一種此類技術描述於PCT公開案第WO 99/10494號(以引用之方式併入)中。
基於GIPR抗原結合蛋白之結構具有如上文所述之CDR、可變區及/或全長鏈，GIPR結合蛋白亦可為變異體、模擬物、衍生物或寡聚物。
在一個實施例中，例如，抗原結合蛋白係上文所揭示之抗原結合蛋白的變異體形式。舉例而言，一些抗原結合蛋白在重鏈或輕鏈、可變區或CDR中之一或多個中具有一或多個保守胺基酸取代。
天然存在之胺基酸可以基於常見側鏈特性分成以下各類： 1) 疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile； 2) 中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； 3) 酸性：Asp、Glu； 4) 鹼性：His、Lys、Arg； 5) 影響鏈取向之殘基：Gly、Pro；及 6) 芳族：Trp、Tyr、Phe。
保守胺基酸取代可以涉及該等類別之一的成員與同一類別之另一成員之交換。保守胺基酸取代可以涵蓋典型地藉由化學肽合成而非藉由生物系統中之合成併入的非天然存在之胺基酸殘基。該等殘基包括肽模擬物，以及胺基酸部分之其他顛倒或倒轉形式。
非保守取代可以涉及以上類別之一之成員經來自另一類別之成員替換。辭了經取代殘基可以引入與人類抗體同源之抗體區域中，或引入該分子之非同源區中。
在進行此類變化時，根據某些實施例中，可以考慮胺基酸之疏水性指數。一種蛋白質之疏水性特徵係藉由對各胺基酸指定數字值(「疏水性指數」)且隨後沿多肽鏈對該等值重複求平均值來計算。各胺基酸之疏水性指數係基於其疏水性及電荷特徵指定。胺基酸之疏水性指數為：異白胺酸(+4.5)；纈胺酸(+4.2)；白胺酸(+3.8)；***酸(+2.8)；半胱胺酸/胱胺酸(+2.5)；甲硫胺酸(+1.9)；丙胺酸(+1.8)；甘胺酸(-0.4)；蘇胺酸(-0.7)；絲胺酸(-0.8)；色胺酸(-0.9)；酪胺酸(-1.3)；脯胺酸(-1.6)；組胺酸(-3.2)；麩胺酸(-3.5)；麩醯胺酸(-3.5)；天冬胺酸(-3.5)；天冬醯胺(-3.5)；離胺酸(-3.9)；及精胺酸(-4.5)。
疏水性特徵在賦予蛋白質相互作用生物功能方面之重要性係此項技術中所知的(參見例如Kyte等人, 1982,J. Mol. Biol. 157 :105-131)。已知某些胺基酸可以取代具有類似疏水性指數或評分之其他胺基酸且仍保持類似生物活性。在基於疏水性指數進行變化時，在某些實施例中，包括疏水性指數差異在±2內之胺基酸取代。在一些態樣中，包括差異在±1內之取代，且在其他態樣中，包括差異在±0.5內之取代。
此項技術亦應瞭解，可以基於親水性有效進行類似胺基酸之取代，特別是在由此產生之生物功能性蛋白質或肽擬用於免疫實施例中，如在本發明之情形中時。在某些實施例中，由相鄰胺基酸之親水性所控制的蛋白質之最大局部平均親水性與其免疫原性及抗原結合或免疫原性，亦即，與該蛋白質之生物特性相關。
已對該等胺基酸殘基指定以下親水性值：精胺酸(+3.0)；離胺酸(+3.0)；天冬胺酸(+3.0±1)；麩胺酸(+3.0±1)；絲胺酸(+0.3)；天冬醯胺(+0.2)；麩醯胺酸(+0.2)；甘胺酸(0)；蘇胺酸(-0.4)；脯胺酸(-0.5±1)；丙胺酸(-0.5)；組胺酸(-0.5)；半胱胺酸(-1.0)；甲硫胺酸(-1.3)；纈胺酸(-1.5)；白胺酸(-1.8)；異白胺酸(-1.8)；酪胺酸(-2.3)；***酸(-2.5)；及色胺酸(-3.4)。在基於類似親水性值進行變化時，在某些實施例中，包括親水性值差異在±2內之胺基酸取代，在其他實施例中，包括差異在±1內之胺基酸取代，且在又其他實施例中，包括差異在±0.5內之胺基酸取代。在一些情況下，亦可基於親水性鑑別一級胺基序列中之抗原決定基。該等區域又稱為「抗原決定基核心區」。
例示性保守胺基酸取代示於表6中。 表8：保守胺基酸取代
熟練技術人員將能夠使用熟知技術確定如本文所述之多肽之適合變異體。熟習此項技術者可以藉由靶向認為對活性不重要之區域來鑑別可經改變而不破壞活性的適合分子區域。熟練技術人員亦能夠鑑別該等分子中在類似多肽間保守之殘基及部分。在其他實施例中，即使可能對於生物活性或結構很重要之區域亦可經歷保守胺基酸取代，而不破壞生物活性或不會對多肽結構域有不利影響。
另外，熟習此項技術者可以評述結構-功能研究以鑑別類似多肽中對於活性或結構很重要之殘基。基於此類比較，可以預測一種蛋白質中對應於類似蛋白質中對活性或結構很重要之胺基酸殘基的胺基酸殘基之重要性。熟習此項技術者可以選擇用化學上類似之胺基酸取代此類預測之重要胺基酸殘基。
熟習此項技術者亦可分析3維結構及類似多肽中與該結構有關之胺基酸序列。基於此類資訊，熟習此項技術者可以針對三維結構預測抗體胺基酸殘基之比對。熟習此項技術者可以選擇不對預測處於蛋白質表面上之胺基酸殘基進行基本變化，因為該等殘基可能涉及與其他分子之重要相互作用。此外，熟習此項技術者可以產生在每一所需胺基酸殘基處含有單一胺基酸取代之測試變異體。該等變異體接著可以使用針對GIPR活性之檢定進行篩選，由此得到有關可以經改變且不得改變之胺基酸的資訊。換言之，基於由該等常規實驗收集之資訊，熟習此項技術者可以容易地確定應僅避免進一步取代或應避免進一步取代及其他突變之胺基酸位置。
多種科技出版物致力於預測二級結構。參見Moult, 1996,Curr. Op. in Biotech. 7 :422-427；Chou等人, 1974,Biochem. 13 :222-245；Chou等人, 1974,Biochemistry 113 :211-222；Chou等人, 1978,Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol. 47 :45-148；Chou等人, 1979,Ann. Rev. Biochem. 47 :251-276；及Chou等人, 1979,Biophys. J. 26 :367-384。此外，計算機程式當前可用於幫助預測二級結構。一種預測二級結構之方法係基於同源性建模。舉例而言，序列一致性大於30%或相似性大於40%的兩個序列或蛋白質可以具有類似結構拓撲學。近期蛋白質資料庫(PDB)之發展增進對二級結構，包括多肽或蛋白質結構內潛在摺疊之數量之預測。參見Holm等人, 1999,Nucl. Acid. Res. 27 :244-247。已提出(Brenner等人, 1997,Curr. Op. Struct. Biol. 7 :369-376)，在給定多肽或蛋白質中存在有限數量之摺疊，且一旦解析出多個關鍵結構，就能更準確地預測結構。
預測二級結構之其他方法包括「串線法(threading)」(Jones, 1997,Curr. Opin. Struct. Biol. 7 :377-387；Sippl等人, 1996,Structure 4 :15-19)、「輪廓分析(profile analysis)」(Bowie等人, 1991,Science 253 :164-170；Gribskov等人, 1990,Meth. Enzym. 183 :146-159；Gribskov等人, 1987,Proc. Nat. Acad. Sci. 84 :4355-4358)及「進化連接(evolutionary linkage)」(參見Holm, 1999, 前述；及Brenner, 1997, 前述)。
在一些實施例中，進行胺基酸取代以：(1)降低對蛋白質水解之敏感性；(2)降低對氧化之敏感性；(3)改變結合親和力以形成蛋白質複合物；(4)改變配體或抗原結合親和力；及/或(4)賦予或改變此類多肽之其他物理化學或功能特性。舉例而言，可以在天然存在之序列中進行單一或多個胺基酸取代(在某些實施例中，保守胺基酸取代)。可以在抗體中處於形成分子間接觸之結構域外的部分中進行取代。在此類實施例中，可以使用的保守胺基酸取代不會顯著改變親本序列之結構特徵(例如，不會破壞表徵親本或天然抗原結合蛋白之二級結構的一或多個置換胺基酸)。技術認可之多肽二級結構和三級結構的實例描述於Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton編), 1984, W. H. New York: Freeman and Company；Introduction to Protein Structure (Branden及Tooze編), 1991, New York: Garland Publishing；及Thornton等人, 1991,Nature 354 :105中，該等文獻各自以引用之方式併入本文中。
其他較佳的抗體變異體包括半胱胺酸變異體，其中親本或天然胺基酸序列中之一或多個半胱胺酸殘基缺失或經另一胺基酸(例如絲胺酸)取代。當抗體須重新摺疊成生物活性構象時，半胱胺酸變異體特別有用。半胱胺酸變異體具有的半胱胺酸殘基可以少於天然抗體，且該等變異體典型地具有偶數個殘基以最大限度地減少由未配對半胱胺酸引起之相互作用。
可以使用所揭示的重鏈及輕鏈、可變區結構域及CDR製備含有能特異性結合至GIPR之抗原結合區的多肽。舉例而言，可以將一或多個CDR共價或非共價併入分子(例如多肽)中以製備免疫黏附素。免疫黏附素可以作為較大多肽鏈之一部分併入CDR中，可以將CDR共價連接至另一多肽鏈，或者可以非共價併入CDR中。CDR使免疫黏附素能夠特異性結合至特定相關抗原(例如GIPR多肽或其抗原決定基)。
亦提供基於本文所述之可變區結構域及CDR的模擬物(例如「肽模擬物」或「模擬肽」)。該等類似物可以為肽、非肽或肽與非肽區之組合。Fauchere, 1986,Adv. Drug Res. 15 :29；Veber及Freidinger, 1985,TINS 第392頁；及Evans等人, 1987,J. Med. Chem. 30 :1229，其以引用之方式併入本文中用於任何目的。可以使用結構類似於治療上有用之肽的肽模擬物產生類似治療或預防作用。此類化合物通常係借助於計算機分子建模開發。一般而言，模擬肽係結構類似於展示所需生物活性，諸如此處特異性結合GIPR之能力，但具有一或多個視情況藉由此項技術中熟知之方法經選自以下之鍵聯置換之肽鍵的蛋白質：-CH2 NH-、-CH2 S-、-CH2 -CH2 -、-CH-CH-(順式及反式)、-COCH2 -、-CH(OH)CH2 -及-CH2 SO-。在某些實施例中，共同序列之一或多個胺基酸經同一類型之D-胺基酸系統性取代(例如D-離胺酸替代L-離胺酸)可以用於產生更穩定之蛋白質。此外，亦可藉由此項技術中已知之方法(Rizo及Gierasch, 1992,Ann. Rev. Biochem .61 :387)，其以引用之方式併入本文中)，例如藉由添加能夠形成分子內二硫橋以使肽環化的內部半胱胺酸殘基，產生構成共同序列或大體上一致之共同序列變化的受限肽。
亦提供本文所述之抗原結合蛋白的衍生物。衍生化抗原結合蛋白可以包含賦予抗體或片段所需特性，諸如增加在特定應用中之半衰期之任何分子或物質。衍生化抗原結合蛋白可以包含例如可偵測(或標記)部分(例如放射性、發色、抗原或酶分子、可偵測珠粒(諸如磁性或電子緻密(例如金)珠粒)或結合至另一分子(例如生物素或抗生蛋白鏈菌素)之分子)、治療或診斷部分(例如放射性、細胞毒性、醫藥活性部分)或增加用於特定用途(例如投予受試者，諸如人類受試者，或其他活體內或活體外用途)之抗原結合蛋白之適合性的分子。可以用於使抗原結合蛋白衍生化之分子的實例包括白蛋白(例如人血清白蛋白)及聚乙二醇(PEG)。可以使用此項技術中熟知之技術製備抗原結合蛋白的白蛋白連接衍生物及聚乙二醇化衍生物。某些抗原結合蛋白包括聚乙二醇化的本文所述之單鏈多肽。在一個實施例中，抗原結合蛋白偶聯至或以其他方式連接至甲狀腺素轉運蛋白(TTR)或TTR變異體。TTR或TTR變異體可以用例如選自由以下組成之群之化學試劑化學修飾：葡聚糖、聚(n-乙烯吡咯啶酮)、聚乙二醇、丙二醇均聚物、環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇及聚乙烯醇。
其他衍生物包括GIPR抗原結合蛋白與其他蛋白質或多肽之共價或聚集性偶聯物，諸如藉由表現包含異源多肽與GIPR抗原結合蛋白N末端或C末端之融合物的重組融合蛋白。舉例而言，偶聯肽可以為異源信號(或前導)多肽，例如酵母α-因子前導肽或諸如抗原決定基標籤之肽。含GIPR抗原結合蛋白之融合蛋白可以包含添加用於促進GIPR抗原結合蛋白純化或鑑別之肽(例如聚His)。如Hopp等人, 1988,Bio/Technology 6 :1204及美國專利第5,011,912號中所述，GIPR抗原結合蛋白亦可連接至FLAG肽。FLAG肽具有高抗原性且提供經特定單株抗體(mAb)可逆結合之抗原決定基，由此能夠快速檢定及便於純化所表現之重組蛋白。可用於製備FLAG肽與給定多肽融合之融合蛋白的試劑係可商購的(Sigma, St. Louis, MO)。
在一些實施例中，抗原結合蛋白包含一或多個標記。術語「標記基團」或「標記」意謂任何可偵測之標記。適合標記基團之實例包括但不限於以下：放射性同位素或放射性核種(例如3 H、14 C、15 N、35 S、90 Y、99 Tc、111 In、125 I、131 I)、螢光基團(例如FITC、若丹明(rhodamine)、鑭系元素磷光體)、酶基團(例如辣根過氧化酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶)、化學發光基團、生物素基團，或由第二報告子識別之預定多肽抗原決定基(例如白胺酸拉鏈對序列、二次抗體之結合位點、金屬結合結構域、抗原決定基標籤)。在一些實施例中，標記基團經由各種長度之間隔子臂偶合至抗原結合蛋白以減小潛在空間位阻。此項技術中已知各種用於標記蛋白質之方法且在適合時可以使用。
術語「效應子基團」意謂偶合至抗原結合蛋白以充當細胞毒性劑的任何基團。適合效應子基團之實例有放射性同位素或放射性核種(例如3 H、14 C、15 N、35 S、90 Y、99 Tc、111 In、125 I、131 I)。其他適合基團包括毒素、治療性基團或化學治療性基團。適合基團之實例包括加利車黴素(calicheamicin)、奧瑞他汀(auristatin)、格爾德黴素(geldanamycin)及美登素(maytansine)。在一些實施例中，效應子基團經由各種長度之間隔子臂偶合至抗原結合蛋白以減小潛在空間位阻。
一般而言，標記取決於偵測其之檢定而氛圍多個類別：a)同位素標記，其可以為放射性或較重同位素；b)磁性標記(例如磁性粒子)；c)氧化還原活性部分；d)光學染料；酶基團(例如辣根過氧化酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶)；e)生物素化基團；及f)由第二報告子識別之預定多肽抗原決定基(例如白胺酸拉鏈對序列、二次抗體之結合位點、金屬結合結構域、抗原決定基標籤等)。在一些實施例中，標記基團經由各種長度之間隔子臂偶合至抗原結合蛋白以減小潛在空間位阻。此項技術中已知用於標記蛋白質之各種方法。
特定標記包括光學染料，包括但不限於，發色團、磷光體及螢光團，其中螢光團在許多情況下具有特異性。螢光團可以為「小分子」螢光或蛋白質螢光。
「螢光標記」意謂可以經由固有螢光特性偵測之任何分子。適合螢光標記包括但不限於，螢光素、若丹明、四甲基若丹明、伊紅、紅螢素、香豆素、甲基香豆素、芘、孔雀石綠、二苯乙烯、Lucifer Yellow、Cascade BlueJ、Texas Red、IAEDANS、EDANS、BODIPY FL、LC Red 640、Cy 5、Cy 5.5、LC Red 705、Oregon green、Alexa-Fluor染料(Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 430、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 568、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 660、Alexa Fluor 680)、Cascade Blue、Cascade Yellow及R-藻紅素(PE) (Molecular Probes, Eugene, OR)、FITC、若丹明及Texas Red (Pierce, Rockford, IL)、Cy5、Cy5.5、Cy7 (Amersham Life Science, Pittsburgh, PA)。適合光學染料，包括螢光團，描述於以引用之方式明確併入本文中的Richard P. Haugland之Molecular Probes Handbook中。
適合蛋白質螢光標記亦包括但不限於，綠色螢光蛋白，包括海腎、海筆(Ptilosarcus)或水母物種之GFP (Chalfie等人, 1994,Science 263:802-805)、EGFP (Clontech Labs., Inc., Genbank寄存編號U55762)、藍色螢光蛋白(BFP，Quantum Biotechnologies, Inc., Quebec, Canada；Stauber, 1998,Biotechniques 24:462-471；Heim等人, 1996,Curr. Biol. 6:178-182)、增強黃色螢光蛋白(EYFP，Clontech Labs., Inc.)、螢光素酶(Ichiki等人, 1993,J. Immunol. 150:5408-5417)、β半乳糖苷酶(Nolan等人, 1988,Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 85:2603-2607)及海腎(WO92/15673, WO95/07463、WO98/14605、WO98/26277、WO99/49019、美國專利第5292658號、第5418155號、第5683888號、第5741668號、第5777079號、第5804387號、第5874304號、第5876995號、第5925558號)。
亦提供編碼本文所述之抗原結合蛋白的核酸或其部分，包括編碼抗體或其片段、衍生物、突變蛋白或變異體之一條或兩條鏈的核酸；編碼重鏈可變區或僅CDR之聚核苷酸；足以用作雜交探針之聚核苷酸；用於鑑別、分析、突變或擴增編碼多肽之聚核苷酸的PCR引子或測序引子；用於抑制聚核苷酸表現之反義核酸；及前述之互補序列。該等核酸可以為任何長度。其可以為例如5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、175、200、250、300、350、400、450、500、750、1,000、1,500、3,000、5,000個或更多個核苷酸長度，及/或可以包含一或多個另外的序列，例如調控序列，及/或作為一個更大核酸之一部分，例如載體。核酸可以為單股或雙股且可以包含RNA及/或DNA核苷酸，及其人造變異體(例如肽核酸)。本文提供之任何可變區均可以連接至該等恆定區以形成完整重鏈及輕鏈序列。不過，應瞭解，該等恆定區序列僅作為具體實例提供。在一些實施例中，可變區序列接合至此項技術中已知之其他恆定區序列。
可以自經GIPR或其免疫原性片段免疫之小鼠的B細胞分離出編碼某些抗原結合蛋白或其部分(例如全長抗體、重鏈或輕鏈、可變區結構域或CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2或CDRL3)的核酸。該核酸可以藉由習知程序，諸如聚合酶鏈反應(PCR)分離。噬菌體展示係已知可用於製備抗體及其他抗原結合蛋白之衍生物之技術的另一實例。在一種方法中，使作為所關注抗原結合蛋白之組分的多肽在任何適合的重組表現系統中表現，且使表現之多肽組裝形成抗原結合蛋白。
另一態樣進一步提供在特定雜交條件下與其他核酸雜交之核酸。核酸雜交方法係此項技術中熟知的。參見例如Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6。如本文所定義，中等嚴格度雜交條件使用一種含5×氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)、0.5% SDS、1.0 mM EDTA(pH 8.0)之預洗滌溶液；具有約50%甲醯胺、6× SSC之雜交緩衝液；及55℃雜交溫度(或其他類似的雜交溶液，諸如含有約50%甲醯胺之雜交溶液，以及42℃雜交溫度)，以及60℃下在0.5× SSC、0.1% SDS中之洗滌條件。嚴格雜交條件在45℃下於6× SSC中雜交，隨後在68℃下於0.1× SSC、0.2% SDS中洗滌一或多次。另外，熟習此項技術者可以操作該等雜交及/或洗滌條件以增加或降低雜交的嚴格度，由此使包含彼此至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%一致之核苷酸序列的核酸典型地保持彼此雜交。
影響雜交條件之選擇的基本參數以及有關設計適合條件之指導係由以下中所陳述：例如Sambrook, Fritsch及Maniatis (2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 前述；及Current Protocols in Molecular Biology, 1995, Ausubel等人編, John Wiley & Sons, Inc., 第2.10及6.3-6.4部分)，且可以由熟習此項技術者基於例如該核酸之長度及/或鹼基組成容易地確定。
可以藉由突變向核酸中引入變化，由此使其編碼之多肽(例如抗體或抗體衍生物)之胺基酸序列變化。突變可以使用此項技術中已知之任何技術引入。在一個實施例中，使用例如定點突變誘發方案來改變一或多個特定的胺基酸殘基。在另一實施例中，使用例如隨機突變誘發方案使一或多個隨機選擇之殘基變化。不管利用何種方式，均可以使突變多肽表現且針對所需特性進行篩選。
可以將突變引入核酸中，而不顯著改變其編碼之多肽的生物活性。舉例而言，可以進行核苷酸取代，在非必需胺基酸殘基處引起胺基酸取代。或者，可以將一或多個突變引入核酸中以選擇性改變其編碼之多肽的生物活性。舉例而言，突變可以定量或定性地改變生物活性。定量變化之實例包括增加、降低或消除該活性。定性變化之實例包括改變抗體之抗原特異性。在一個實施例中，可以使用此項技術充分確定之分子生物學技術使編碼本文所述任何抗原結合蛋白的核酸突變以改變胺基酸序列。
另一態樣提供適合用作引子或雜交探針以偵測核酸序列之核酸分子。核酸分子可以僅包含編碼全長多肽之核酸序列的一部分，例如可以用作探針或引子之片段或編碼多肽活性部分之片段。
可以使用基於核酸序列之探針偵測核酸或類似核酸，例如編碼多肽之轉錄物。該探針可以包含標記基團，例如放射性同位素、螢光化合物、酶或輔因子。此類探針可以用於鑑別表現多肽之細胞。
另一態樣提供包含編碼多肽或其部分(例如含有一或多個CDR或者一或多個可變區結構域之片段)之核酸的載體。載體之實例包括但不限於，質體、病毒載體、非游離型哺乳動物載體及表現載體，例如重組表現載體。重組表現載體可以包含呈適於在宿主細胞中表現核酸之形式的核酸。重組表現載體包括一或多個基於欲用於表現之宿主細胞選擇的調控序列，其可操作地連接至待表現之核酸序列。調控序列包括引導核苷酸序列在許多類型宿主細胞中表現的序列(例如SV40早期基因強化子、勞斯氏肉瘤病毒(Rous sarcoma virus)啟動子及巨細胞病毒啟動子)、引導核苷酸序列僅在某些宿主細胞中表現的序列(例如組織特異性調控序列，參見Voss等人, 1986,Trends Biochem. Sci. 11:287；Maniatis等人, 1987,Science 236:1237，以全文引用之方式併入本文中)，以及引導核苷酸序列響應特定處理或條件進行誘導性表現的序列(例如哺乳動物細胞中之金屬硫蛋白以及在原核及真核系統中之tet反應性及/或鏈黴素反應性啟動子(參見以上))。熟習此項技術者應理解，表現載體之設計可以取決於諸如待轉型之宿主細胞之選擇、所需蛋白質表現量等因素。可以將表現載體引入宿主細胞中，由此產生由本文所述之核酸編碼的蛋白質或肽，包括融合蛋白或肽。
另一態樣提供引入有重組表現載體之宿主細胞。宿主細胞可以為任何原核細胞(例如大腸桿菌)或真核細胞(例如酵母、昆蟲或哺乳動物細胞(例如CHO細胞))。可以經由習知轉型或轉染技術將載體DNA引入原核或真核細胞中。對於穩定轉染哺乳動物細胞，已知取決於所用表現載體及轉染技術，僅一小部分細胞可將外來DNA整合至其基因組中。為了鑑別及選擇該等整合體，一般會將編碼可選擇標記物之基因(例如抗生素抗性基因)與所關注基因一起引入宿主細胞中。較佳地可選擇標記物包括賦予藥物(例如G418、潮黴素(hygromycin)及甲胺喋呤(methotrexate))抗性者。經引入之核酸穩定轉染的細胞可以藉由藥物選擇來鑑別(例如，併入可選擇標記物基因之細胞將存活，而其他細胞死亡)。
本文亦提供包含至少一種如上文所述之聚核苷酸的呈質體、表現載體、轉錄或表現卡匣形式之表現系統及構築體，以及包含該等表現系統或構築體之宿主細胞。
本文提供之抗原結合蛋白可以藉由多種習知技術中之任一種製備。舉例而言，可以使用此項技術中已知之任何技術，由重組表現系統產生GIPR抗原結合蛋白。參見例如，Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Kennet等人(編) Plenum Press, New York (1980)；及Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow及Lane (編), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1988)。
抗原結合蛋白可以在融合瘤細胞株中表現(例如特定言之，抗體可以在融合瘤中表現)或在除融合瘤外之細胞株中表現。可以使用編碼抗體之表現構築體轉型哺乳動物、昆蟲或微生物宿主細胞。轉型可以使用已知用於將聚核苷酸引入宿主細胞中之任何方法來進行，包括例如將聚核苷酸包裝於病毒或噬菌體中並藉由此項技術中已知之轉染程序用構築體轉導宿主細胞，如美國專利第4,399,216號、第4,912,040號、第4,740,461號、第4,959,455號中所例示。所用最佳轉型程序將取決於所轉型之宿主細胞的類型。用於將異源聚核苷酸引入哺乳動物細胞中的方法係此項技術中眾所周知的且包括但不限於，葡聚糖介導之轉染、磷酸鈣沈澱、聚凝胺介導之轉染、原生質體融合、電穿孔、聚核苷酸封裝於脂質體中、將核酸與帶正電荷之脂質混合及DNA直接顯微注射至核中。
重組表現構築體典型地包含編碼包含以下一或多種之多肽之核酸分子：一或多個本文所提供之CDR；輕鏈恆定區；輕鏈可變區；重鏈恆定區(例如CH 1、CH 2及/或CH 3)；及/或GIPR抗原結合蛋白之另一骨架部分。該等核酸序列係使用標準連接技術***適當表現載體中。在一個實施例中，將重鏈或輕鏈恆定區附接至抗GIPR特異性重鏈或輕鏈可變區之C末端且連接至表現載體中。所選載體典型地在所用特定宿主細胞中具有功能(亦即，該載體與宿主細胞機器相容，由此能夠進行基因之擴增及/或表現)。在一些實施例中，使用的載體採用了使用蛋白質報告子之蛋白質-片段互補檢定，諸如二氫葉酸還原酶(參見例如，美國專利第6,270,964號，其以引用之方式併入本文中)。適合表現載體可以購自例如Invitrogen Life Technologies或BD Biosciences (先前為「Clontech」)。其他可用於選殖及表現抗體及片段的載體包括以引用之方式併入本文中的Bianchi及McGrew, 2003,Biotech. Biotechnol. Bioeng . 84:439-44中所述之載體。其他適合的表現載體論述於例如Methods Enzymol ., 第185卷 (D. V. Goeddel編), 1990, New York: Academic Press中。
典型地，任一宿主細胞中所使用的表現載體將含有用於維持質體及用於外源核苷酸序列選殖及表現的序列。在某些實施例中，該等序列，統稱為「側接序列」典型地將包括以下核苷酸序列中之一或多個：啟動子、一或多個強化子序列、複製起點、轉錄終止序列、含有供體及受體剪接位點之完整內含子序列、編碼用於多肽分泌之前導序列的序列、核糖體結合位點、聚腺苷酸化序列、用於***編碼待表現之多肽之核酸的多連接子區及可選擇標記物元件。該等序列分別於下文論述。
視情況，載體可以含有「標籤」編碼序列，亦即，位於GIPR抗原結合蛋白編碼序列之5'或3'端的寡核苷酸分子；該寡核苷酸序列編碼聚His(諸如六組胺酸)或另一「標籤」，諸如FLAG® 、HA(血凝素流感病毒)或myc，存在針對該標籤的可商購之抗體。該標籤典型地在多肽表現時與該抗體融合，且可以用作一種自宿主細胞親和純化或偵測GIPR抗原結合蛋白之方式。親和純化可以藉由例如管柱層析法，使用針對標籤之抗體作為親和基質來實現。視情況，隨後可以藉由各種方式，諸如使用某些肽酶裂解，自純化之GIPR抗原結合蛋白移除標籤。
側接序列可以為同源的(亦即，來自與宿主細胞相同之物種及/或品系)、異源的(亦即，來自與宿主細胞物種或品系不同之物種)、混合的(亦即，來自超過一種來源之側接序列的組合)、合成的或天然的。因此，側接序列之來源可以為任何原核或真核生物體、任何脊椎動物或非脊椎動物生物體，或任何植物，只要該側接序列在宿主細胞機器中起作用且可以經宿主細胞機器活化。
可用於載體中之側接序列可以藉由此項技術中熟知之若干方法中的任一種獲得。典型地，可用於本文中的側接序列應預先藉由定位及/或藉由限制性核酸內切酶消化鑑別且因此可以使用適當限制性核酸內切酶自適當組織來源分離。在一些情況下，側接序列之完全核苷酸序列可能為已知的。此處，側接序列可以使用本文所述的核酸合成或選殖方法合成。
無論已知側接序列之全部抑或僅一部分，其均可使用聚合酶鏈反應(PCR)及/或藉由用適合探針，諸如來自相同或另一物種之寡核苷酸及/或側接序列片段篩選基因組文庫來獲得。若側接序列未知，則可以自可能含有例如編碼序列或甚至另外一或多個基因的較大DNA片段分離含有側接序列之DNA片段。可以藉由限制性核酸內切酶消化產生適當DNA片段，隨後使用瓊脂糖凝膠純化、Qiagen® 管柱層析法(Chatsworth, CA)或熟練技術人員已知之其他方法分離來實現分離。一般熟習此項技術者將易於瞭解實現此目的的適合酶之選擇。
複製起點典型地係可商購之原核表現載體的一部分，且該起點有助於在宿主細胞中擴增載體。若所選載體不含複製起點，則可以基於已知序列以化學方式合成，並將其連接至載體中。舉例而言，來自質體pBR322 (New England Biolabs, Beverly, MA)之複製起點適合大多數革蘭氏陰性細菌，且各種病毒起點(例如SV40、多瘤病毒、腺病毒、水皰性口炎病毒(VSV)，或乳頭瘤病毒，諸如HPV或BPV)可用於在哺乳動物細胞中選殖載體。一般而言，哺乳動物表現載體不需要複製起點組分(例如，通常僅使用SV40，因為其亦含有病毒早期啟動子)。
轉錄終止序列典型地位於多肽編碼區之3'端且用於終止轉錄。通常，原核細胞中之轉錄終止序列係富含G-C之片段，隨後為聚T序列。儘管該序列易於自文庫選殖或甚至作為載體之一部分商購得到，但其亦可使用核酸合成方法，諸如本文所述之方法容易地合成。
可選擇標記物基因編碼使選擇性培養基中生長之宿主細胞存活及生長所需的蛋白質。典型的選擇標記物基因編碼的蛋白質(a)賦予原核宿主細胞對抗生素或其他毒素，例如胺比西林(ampicillin)、四環素或卡那黴素(kanamycin)之抗性；(b)補充細胞之營養缺陷；或(c)供應無法自複合物培養基或成分確定之培養基獲得之必要養分。特定可選擇標記物係卡那黴素抗性基因、胺比西林抗性基因及四環素抗性基因。有利的是，亦可使用新黴素抗性基因在原核及真核宿主細胞中進行選擇。
可以使用其他可選擇基因擴增有待表現之基因。擴增係使生長或細胞存活必要之蛋白質產生所需的基因在連續數代重組細胞之染色體內串聯性複製的過程。適用於哺乳動物細胞之可選擇標記物的實例包括二氫葉酸還原酶(DHFR)或無啟動子胸苷激酶基因。使哺乳動物細胞轉型株處於選擇壓力下，其中由於載體中存在可選擇基因，故僅轉型株唯一適於存活。選擇壓力係藉由在連續地增加培養基中選擇劑之濃度的條件下培養經轉型細胞，由此使可選擇基因及編碼另一基因，諸如結合GIPR多肽之抗原結合蛋白之DNA擴增來施加。因此，由擴增之DNA合成較多量的多肽，諸如抗原結合蛋白。
核糖體結合位點通常係mRNA轉譯起始所必需的，且以Shine-Dalgarno序列(原核生物)或Kozak序列(真核生物)為特徵。該元件典型地位與啟動子之3'端且在待表現之多肽編碼序列的5'端。
在一些情況下，諸如在真核宿主細胞表現系統中需要糖基化之情況下，可以操作各種前序列或原序列以改善糖基化或產率。舉例而言，可以改變特定信號肽之肽酶裂解位點，或添加原序列，該等序列亦可影響糖基化。最終蛋白質產物可以在-1位(相對於成熟蛋白質之第一個胺基酸)具有一或多個易於表現之另外的胺基酸，該等胺基酸可能未完全移除。舉例而言，最終蛋白質產物可能具有一個或兩個在肽酶裂解位點中發現之胺基酸殘基，附接至胺基末端。或者，使用一些酶裂解位點可能產生所需多肽之略微截短之形式，當該酶在成熟多肽內之此類區域切割時。
表現及選殖典型地將含有宿主生物體識別且可操作地連接至編碼GIPR抗原結合蛋白之分子的啟動子。啟動子係位於結構基因之起始密碼子上游(亦即，5')(一般在約100至1000bp內)的非轉錄序列，其控制結構基因之轉錄。啟動子按照慣例歸為以下兩類之一：誘導性啟動子及組成性啟動子。誘導性啟動子起始處於其控制下之DNA響應於培養條件之某種變化，諸如養分之存在或不存在，或者溫度變化以較高水準轉錄。另一方面，組成性啟動子一致地轉錄其可操作地連接之基因，亦即，對基因表現具有極小或無控制。由多種潛在宿主細胞識別之多種啟動子係熟知的。藉由限制性酶消化自源DNA去除適合啟動子，並將所需啟動子序列***載體中，將該啟動子可操作地連接至編碼構成GIPR抗原結合蛋白之重鏈或輕鏈之DNA。
適用於酵母宿主之適合啟動子亦係此項技術中熟知的。酵母強化子宜與酵母啟動子一起使用。適用於哺乳動物宿主細胞之啟動子係熟知的且包括但不限於，自病毒，諸如多瘤病毒、禽痘病毒、腺病毒(諸如腺病毒2)、牛乳頭瘤病毒、禽肉瘤病毒、巨細胞病毒、逆轉錄病毒、B型肝炎病毒及猿猴病毒40 (SV40)之基因組獲得的啟動子。其他適合的哺乳動物啟動子包括異源哺乳動物啟動子，例如熱休克啟動子及肌動蛋白啟動子。
強化子序列可以***載體中以增加高等真核生物中編碼構成GIPR抗原結合蛋白之輕鏈或重鏈之DNA的轉錄。強化子係順式作用DNA元件，通常為約10-300 bp長度，作用於啟動子以增加轉錄。強化子相對獨立於取向及位置，見於在轉錄單元之5'及3'端之位置處。已知可得自哺乳動物基因(例如球蛋白、彈性蛋白酶、白蛋白、α-胎蛋白及胰島素)之若干強化子序列。然而，典型地使用來自病毒之強化子。此項技術中已知的SV40強化子、巨細胞病毒早期啟動子強化子、多瘤病毒強化子及腺病毒強化子係用於活化真核啟動子之例示性強化元件。儘管強化子可以定位於載體中編碼序列之5'或3'端，但其典型地位於啟動子5'端之位點處。編碼適當天然或異源信號序列(前導序列或信號肽)之序列可以併入表現載體中，以促進抗體之細胞外分泌。信號肽或前導序列之選擇取決於待產生抗體之宿主細胞的類型，且異源信號序列可以替代天然信號序列。在哺乳動物細胞中起作用之信號肽的實例包括以下：美國專利第4,965,195號中所述之介白素-7(IL-7)之信號序列；Cosman等人, 1984,Nature 312:768中所述之介白素-2受體之信號序列；EP專利第0367 566號中所述之介白素-4受體信號肽；美國專利第4,968,607號中所述之I型介白素-1受體信號肽；EP專利第0 460 846號中所述之II型介白素-1受體信號肽。
在一個實施例中，前導序列包含SEQ ID NO: 3157 (MDMRVPAQLL GLLLLWLRGA RC)，其係由SEQ ID NO: 3158 (atggacatga gagtgcctgc acagctgctg ggcctgctgc tgctgtggct gagaggcgcc agatgc)編碼。在另一實施例中，前導序列包含SEQ ID NO: 3159 (MAWALLLLTL LTQGTGSWA)，其係由SEQ ID NO: 3160 (atggcctggg ctctgctgct cctcaccctc ctcactcagg gcacagggtc ctgggcc)編碼。
所提供的表現載體可以由起始載體，諸如可商購之載體構築。該等載體可含有或可不含所有所需側接序列。在載體中不存在一或多個本文所述之側接序列的情況下，該一或多個側接序列可以獨立地獲得且連接至載體中。用於獲得各側接序列之方法係熟習此項技術者熟知的。
在構築載體且將編碼構成GIPR抗原結合序列之輕鏈、重鏈或輕鏈及重鏈的核酸分子***載體之適當位點中後，可以將完整載體***適合宿主細胞中進行擴增及/或多肽表現。可以藉由熟知方法，包括轉染、感染、磷酸鈣共沈澱、電穿孔、顯微注射、脂質體轉染、DEAE-葡聚糖介導之轉染或其他已知技術將抗原結合蛋白之表現載體轉型至所選宿主細胞中。所選方法將部分隨所用宿主細胞之類型而變化。該等方法及其他適合方法係熟練技術人員熟知的，且陳述於例如Sambrook等人, 2001, 前述。
宿主細胞當在適當條件下培養時合成抗原結合蛋白，該抗原結合蛋白隨後可以自培養基收集(若宿主細胞將其分泌至培養基中)或直接由產生該抗原結合蛋白之宿主細胞收集(若其並非分泌的)。適當宿主細胞之選擇將取決於各種因素，諸如所需表現量、活性所需或必需之多肽修飾(諸如糖基化或磷酸化)及摺疊成生物活性分子之容易性。
可用作表現宿主之哺乳動物細胞株係此項技術中熟知的且包括但不限於，可得自美國典型培養物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)之永生化細胞株，包括但不限於中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、HeLa細胞、幼倉鼠腎(BHK)細胞、猴腎細胞(COS)、人肝細胞癌細胞(例如Hep G2)及多種其他細胞株。在某些實施例中，可以經由確定具有高表現量且組成性產生具有GIPR結合特性之抗原結合蛋白的細胞株來選擇細胞株。在另一實施例中，可以自B細胞譜系選擇不產生自身抗體但能夠製備並分泌異源抗體的細胞株。
在一個實施例中，本發明係針對由表現表2、3、4及5中所標識之聚核苷酸中之一或多種的細胞產生的抗原結合蛋白。
在一個態樣中，投予GIPR結合蛋白進行長期治療。在另一態樣中，投予該等結合蛋白進行急性治療。
亦提供包含GIPR抗原結合蛋白之醫藥組成物且其可用於本文所揭示之預防及治療方法中之任一種中。在一個實施例中，亦提供治療有效量的一種或複數種抗原結合蛋白以及醫藥學上可接受之稀釋劑、載劑、增溶劑、乳化劑、防腐劑及/或佐劑。可接受之調配材料在所採用之劑量及濃度下對接受者無毒。
在某些實施例中，醫藥組成物可以含有用於改變、維持或保持例如該組成物之pH、莫耳滲透壓濃度、黏度、澄清度、顏色、等滲性、氣味、無菌性、穩定性、解離或釋放速率、吸收或滲透性之調配材料。在此類實施例中，適合調配材料包括但不限於，胺基酸(諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、精胺酸或離胺酸)；抗微生物劑；抗氧化劑(諸如抗壞血酸、亞硫酸鈉或亞硫酸氫鈉)；緩衝劑(諸如硼酸鹽、碳酸氫鹽、Tris-HCl、檸檬酸鹽、磷酸鹽或其他有機酸)；增積劑(諸如甘露糖醇或甘胺酸)；螯合劑(諸如乙二胺四乙酸(EDTA))；錯合劑(諸如咖啡因、聚乙烯吡咯啶酮、β-環糊精或羥丙基-β-環糊精)；填充劑；單醣；二醣；及其他碳水化合物(諸如葡萄糖、甘露糖或糊精)；蛋白質(諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白)；著色劑、調味劑及稀釋劑；乳化劑；親水性聚合物(諸如聚乙烯吡咯啶酮)；低分子量多肽；成鹽平衡離子(諸如鈉)；防腐劑(諸如苯紮氯胺、苯甲酸、水楊酸、硫柳汞、苯乙醇、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸或過氧化氫)；溶劑(諸如甘油、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(諸如甘露糖醇或山梨糖醇)；懸浮劑；界面活性劑或潤濕劑(諸如普流尼克(pluronics)；PEG；脫水山梨糖醇酯；聚山梨醇酯，諸如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯；曲通(triton)；胺丁三醇；卵磷脂；膽固醇；泰洛沙伯(tyloxapal))；穩定性增強劑(諸如蔗糖或山梨糖醇)；張力增強劑(諸如鹼金屬鹵化物，較佳為氯化鈉或氯化鉀；甘露糖醇、山梨糖醇)；遞送媒劑；稀釋劑；賦形劑及/或醫藥佐劑。REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 第18版, (A.R. Genrmo編), 1990, Mack Publishing Company提供可併入醫藥組成物中的適合試劑之其他詳情及選擇。
在某些實施例中，最佳醫藥組成物將由熟習此項技術者根據例如預定投藥途徑、遞送形式及所需劑量決定。參見例如，REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 前述。在某些實施例中，此類組成物可能會影響所揭示之抗原結合蛋白的物理狀態、穩定性、活體內釋放速率及活體內清除速率。在某些實施例中，醫藥組成物中之主要媒劑或載劑可以為水性或非水性的。舉例而言，適合媒劑或載劑可以為注射用水或生理食鹽水溶液。在某些實施例中，可以藉由將選擇的具有所需純度之組成物與可選調配劑(REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 前述)混合，以凍乾餅狀物或水溶液形式製備GIPR抗原結合蛋白組成物以供儲存。另外，在某些實施例中，可以使用適當賦形劑，諸如蔗糖調配呈凍乾產物之GIPR抗原結合蛋白。
所選醫藥組成物可以用於非經腸遞送。或者，所選組成物可以用於吸入或經消化道遞送，諸如口服。此類醫藥學上可接受之組成物的製備在此項技術之技能範圍內。
調配物組分較佳係以投藥部位可接受之濃度存在。在某些實施例中，使用緩衝劑將組成物維持在生理pH或略微較低之pH，典型地在約5至約8的pH值範圍內。
當意欲非經腸投予時，提供的治療組成物可以呈在醫藥學上可接受之媒劑中包含所需人類GIPR抗原結合蛋白的無熱源質、非經腸可接受之水溶液形式。特別適合非經腸注射之媒劑係無菌蒸餾水，在其中GIPR抗原結合蛋白經調配為具有適當防腐劑的無菌等滲溶液。在某些實施例中，該製備可以涉及將所需分子與諸如可注射微球體、生物溶蝕性粒子、聚合化合物(諸如聚乳酸或聚羥基乙酸)、珠粒或脂質體之試劑一起調配，該試劑實現產物之控制或持續釋放，該產物可以經由儲集式注射遞送。在某些實施例中，亦可使用玻尿酸，其有促進在循環中維持持續時間之作用。在某些實施例中，可以使用植入式藥物遞送裝置引入所需抗原結合蛋白。
某些醫藥組成物係調配用於吸入。在一些實施例中，GIPR抗原結合蛋白係調配為可吸入之乾粉形式。在特定實施例中，亦可用推進劑調配GIPR抗原結合蛋白吸入溶液以遞送氣霧劑。在某些實施例中，可以使溶液霧化。肺投藥及用於肺投藥之調配方法進一步描述於國際專利申請案第PCT/US94/001875號中，其以引用之方式併入且描述化學修飾之蛋白質的肺遞送。一些調配物可以經口投予。以此方式投予之GIPR抗原結合蛋白可以在存在或不存在常用於混配固體劑型，諸如錠劑及膠囊之載劑的情況下調配。在某些實施例中，膠囊可以設計成在胃腸道某一點處釋放調配物之活性部分，此時生物利用率達到最大且使體循環前降解減至最少。可以包括其他試劑以促進GIPR抗原結合蛋白之吸收。亦可採用稀釋劑、調味劑、低熔點蠟、植物油、潤滑劑、懸浮劑、錠劑崩解劑及黏合劑。
一些醫藥組成物包含有效量的一種或複數種GIPR抗原結合蛋白與適於製造錠劑之無毒賦形劑之混合物。藉由將錠劑溶解於無菌水或另一適當媒劑中，可以製備呈單位劑型之溶液。適合賦形劑包括但不限於，惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣、碳酸鈉或碳酸氫鈉、乳糖或磷酸鈣；或黏合劑，諸如澱粉、明膠或***膠；或潤滑劑，諸如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。
熟習此項技術者將顯而易見其他醫藥組成物，包括呈持續遞送或控制遞送調配物形式的含GIPR結合蛋白之調配物。用於調配多種其他持續或控制遞送構件，諸如脂質體載體、生物溶蝕性微粒或多孔珠粒及儲集式注射液之技術，亦為熟習此項技術者所知。參見例如，國際專利申請案第PCT/US93/00829號，其引用之方式併入且描述用於遞送醫藥組成物之多孔聚合微粒之控制釋放。持續釋放製劑可以包括呈成型物品形式的半滲透性聚合物基質，例如膜或微膠囊。持續釋放基質可以包括聚酯、水凝膠、聚丙交酯(如美國專利第3,773,919號及歐洲專利申請公開案第EP 058481號中所揭示，各自以引用之方式併入)、L-麩胺酸與γ-乙基-L-麩醯胺酸之共聚物(Sidman等人, 1983,Biopolymers 2:547-556)、聚(甲基丙烯酸2-羥乙酯)(Langer等人, 1981,J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277及Langer, 1982,Chem. Tech. 12:98-105)、乙烯乙酸乙烯酯(Langer等人, 1981, 前述)或聚-D(-)-3-羥基丁酸(歐洲專利申請公開案第EP 133,988號)。持續釋放組成物亦可包括脂質體，該等脂質體可以藉由此項技術中已知之若干方法中的任一種製備。參見例如，Eppstein等人, 1985,Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 82:3688-3692；歐洲專利申請公開案第EP 036,676號、第EP 088,046號及第EP 143,949號，以引用之方式併入。
用於活體外投予之醫藥組成物典型地以無菌製劑形式提供。滅菌可以藉由濾過無菌過濾膜來實現。當凍乾組成物時，使用該方法進行滅菌可以在凍乾及復原之前或之後進行。非經腸投予之組成物可以凍乾形式或溶液形式儲存。非經腸組成物一般係放置在具有無菌接取口之容器中，例如具有皮下注射針可刺穿之塞子的靜脈內溶液袋或小瓶。
在某些調配物中，抗原結合蛋白之濃度係至少10 mg/mL、20 mg/mL、30 mg/mL、40 mg/mL、50 mg/mL、60 mg/mL、70 mg/mL、80 mg/mL、90 mg/mL、100 mg/mL或150 mg/mL。在一個實施例中，醫藥組成物包含抗原結合蛋白、緩衝液及聚山梨醇酯。在其他實施例中，醫藥組成物包含抗原結合蛋白、緩衝液、蔗糖及聚山梨醇酯。醫藥組成物之實例係含有50-100 mg/mL抗原結合蛋白、5-20 mM乙酸鈉、5-10% w/v蔗糖及0.002-0.008% w/v聚山梨醇酯之醫藥組成物。舉例而言，某些組成物含有在9-11 mM乙酸鈉緩衝液、8-10% w/v蔗糖及0.005-0.006% w/v聚山梨醇酯中的65-75 mg/mL抗原結合蛋白。某些此類調配物之pH值在4.5-6範圍內。其他調配物之pH值為5.0-5.5 (例如pH 5.0、5.2或5.4)。
一旦調配好醫藥組成物，即可將其以溶液、懸浮液、凝膠、乳液、固體、晶體或者脫水或凍乾粉末形式儲存於無菌小瓶中。此類調配物可以呈備用形式或需要在投予前復原之形式(例如凍乾形式)儲存。亦提供用於製造單劑量投藥單元之套組。某些套組含有具有乾燥蛋白質之第一容器及具有水性調配物之第二容器。在某些實施例中，提供含有單室及多室預填充注射器(例如液體注射器及lyosyringe)的套組。所用含治療有效量之GIPR抗原結合蛋白的醫藥組成物將例如取決於治療情況及對象。熟習此項技術者應理解，用於治療之適當劑量將部分取決於所遞送之分子、使用GIPR抗原結合蛋白之適應症、投藥途徑以及患者之體格(體重、體表面積或器官尺寸)及/或狀況(年齡及一般健康狀況)而變化。在某些實施例中，臨床醫生可以滴定劑量且改變投藥途徑以獲得最佳治療效果。
給藥頻率將取決於所用調配物中特定GIPR抗原結合蛋白之藥物動力學參數。典型地，臨床醫生投予該組成物，直至達到獲得所需效果之劑量。因此，該組成物可以單次劑量，或隨時間以兩次或更多次劑量(可以含有或可以不含相同量的所需分子)，或經由植入裝置或導管連續輸注來投予。經由使用適當劑量-反應資料可以確定適當劑量。在某些實施例中，可以在整個較長時間段內向患者投予抗原結合蛋白。在某些實施例中，抗原結合蛋白係每兩週、每個月、每兩個月、每三個月、每四個月、每五個月或每六個月給予。
醫藥組成物之投藥途徑係根據已知方法進行，例如口服；經由靜脈內、腹膜內、腦內(實質內)、腦室內、肌肉內、眼內、動脈內、門內或病灶內途徑注射；藉由持續釋放系統；或藉由植入裝置投予。在某些實施例中，組成物可以藉由推注或連續輸注，或藉由植入裝置投予。
該組成物亦可經由植入膜、紗布或上面吸收或封裝有所需分子之另一適當材料局部投予。在使用植入裝置之某些實施例中，該裝置可以植入任何適合組織或器官中，且可以經由擴散、定時釋放大丸劑或連續投藥來遞送所需分子。
離體使用所揭示之GIPR抗原結合蛋白醫藥組成物亦可為適合的。在此類情況下，使自患者取出之組織或器官暴露於GIPR抗原結合蛋白醫藥組成物，之後，將細胞、組織及/或器官植入回患者體內。
醫師將能夠根據特定患者之個別特徵選擇適當治療適應症及靶脂質含量。有關指導高脂質血症治療的一個普遍接受之標準係Third Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of the High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III) Final Report, National Institutes of Health, NIH出版號02-5215 (2002)，其印刷之出版物以全文引用之方式併入本文中。
特定劑量之功效可以藉由參照生物標記物或某些生理參數之改善來評估。適合生物標記物之實例包括游離膽固醇比血漿脂質之比率、游離膽固醇比膜蛋白之比率、磷脂醯膽鹼比鞘磷脂之比率或HDL-C含量。
本文亦提供包含GIPR抗原結合蛋白及一或多種其他治療劑之組成物，以及將此類藥劑與GIPR抗原結合蛋白同時或依序投予以用於本文所揭示之預防及治療方法中之方法。該一或多種其他藥劑可以與GIPR抗原結合蛋白共調配或可以與GIPR抗原結合蛋白共投予。一般而言，亦可將治療方法、組成物及化合物與其他自化療劑組合使用以治療各種疾病狀態，其中該等其他藥劑係同時投予。
在一個態樣中，本發明係針對一種治療患有代謝病症之受試者的方法，該方法包括向受試者投予治療有效量的GLP-1受體促效劑及治療有效量的特異性結合至含與GIPR胺基酸序列具有至少90%胺基酸序列一致性之胺基酸序列之蛋白質的GIPR拮抗劑。
「GLP-1受體促效劑」係指具有GLP-1受體活性之化合物。此類例示性化合物包括艾塞丁、艾塞丁類似物、艾塞丁促效劑、GLP-1(7-37)、GLP-1(7-37)類似物、GLP-1(7-37)促效劑，及類似物。GLP-1受體促效劑化合物可以視情況經醯胺化。術語「GLP-1受體促效劑」及「GLP-1受體促效劑化合物」具有相同含義。
術語「艾塞丁」包括在大毒蜥(Gila monster)之唾液分泌中發現的天然存在之艾塞丁肽(或天然存在之艾塞丁肽的合成形式)。特別值得關注的艾塞丁包括艾塞丁-3及艾塞丁-4。用於本文所述之方法中的艾塞丁、艾塞丁類似物及艾塞丁促效劑可以視情況醯胺化，且亦可呈該分子之酸形式、醫藥學上可接受之鹽形式或任何其他生理活性形式。
在一個實施例中，該GLP-1受體促效劑係GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)類似物。
在一個實施例中，該GLP-1受體促效劑係選自由以下組成之群：艾塞那肽、利拉魯肽、利司那肽、阿必魯肽、度拉糖肽、索馬魯肽及他司魯肽。
在一個態樣中，本發明係針對一種治療方法，其包括向受試者投予治療有效量的至少一種GLP-1受體促效劑與投予至少一種GIPR拮抗劑之組合，其在投予具有代謝病症之症狀的受試者時提供持續有益作用。
在一個實施例中，投予至少一種GLP-1受體促效劑與投予至少一種GIPR拮抗劑之組合提供對代謝病症之至少一種症狀的持續有益作用。
在一個實施例中，治療有效量的GLP-1受體促效劑及GIPR拮抗劑係在投予受試者之前組合。
在一個實施例中，治療有效量的GLP-1受體促效劑及GIPR拮抗劑係依序投予受試者。
在一個實施例中，GLP-1受體促效劑及GIPR拮抗劑之治療有效量係協同有效量。
艾塞丁-4 (HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 (SEQ ID NO: 3163))係在大毒蜥鈍尾毒蜥(Heloderma suspectum )之唾液中發現的肽；且艾塞丁-3 (HSDGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 (SEQ ID NO: 3164))係在死亡的蜥蜴珠毒蜥(Heloderma horridum )之唾液中發現的肽。艾塞丁與升糖素樣肽(GLP)家族之一些成員具有某種胺基酸序列相似性。舉例而言，艾塞丁-4與升糖素樣肽-1(GLP-1)(7-37) (HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG (SEQ ID NO: 3184))具有約53%序列一致性。不過，艾塞丁-4係由不同基因轉錄，並非表現GLP-1之哺乳動物原升糖素基因的大毒蜥同源物。此外，艾塞丁-4並非GLP-1(7-37)之類似物，因為合成艾塞丁-4肽之結構並非由連續修飾GLP-1之結構產生。Nielsen等人,Current Opinion in Investigational Drugs , 4(4):401-405 (2003)。
合成艾塞丁-4，又稱為艾塞那肽，係以BYETTA® (Amylin Pharmaceuticals, Inc.及Eli Lilly and Company)可商購的。WO 2005/102293中描述一週一次艾塞那肽調配物，該案之揭示內容以引用之方式併入本文中。
「艾塞丁類似物」係指當藉由此項技術已知之措施，諸如受體結合及/或競爭研究(如例如Hargrove等人,Regulatory Peptides , 141:113-119 (2007)，其揭示內容以引用之方式併入本文中)評價時引起艾塞丁參考肽之生物活性，較佳具有等於或優於艾塞丁參考肽(例如艾塞丁-4)之效力，或效力相較於艾塞丁參考肽在五個數量級(±)內的肽。較佳地，艾塞丁類似物將在此類檢定中以小於1 μM之親和力，且更佳小於3 nM、小於1 nM或小於0.1 nM之親和力結合。術語「艾塞丁類似物」亦可稱為「艾塞丁促效劑」。在一個較佳實施例中，艾塞丁類似物係艾塞丁-4類似物。
艾塞丁類似物亦包括本文所述的已經化學衍生化或改變之肽，例如具有非天然胺基酸殘基(例如牛磺酸、β-胺基酸殘基、γ-胺基酸殘基及D-胺基酸殘基)；C末端官能基修飾，諸如醯胺、酯及C末端酮修飾；及N末端官能基修飾，諸如醯基化胺、希夫鹼(Schiff base)或如例如在胺基酸焦麩胺酸中所見之環化的肽。艾塞丁類似物亦可含有其他化學部分，諸如肽模擬物。
例示性艾塞丁及艾塞丁類似物艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3163)；艾塞丁-3 (SEQ ID NO: 3164)；Leu14 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3165)；Leu14 ,Phe25 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3166)；Leu14 ,Ala19 ,Phe25 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3167)；艾塞丁-4(1-30) (SEQ ID NO: 3168)；Leu14 -艾塞丁-4(1-30) (SEQ ID NO: 3169)；Leu14 ,Phe25 -艾塞丁-4(1-30) (SEQ ID NO: 3170)；Leu14 ,Ala19 ,Phe25 -艾塞丁-4(1-30) (SEQ ID NO: 3171)；艾塞丁-4(1-28) (SEQ ID NO: 3172)；Leu14 -艾塞丁-4(1-28) (SEQ ID NO: 3173)；Leu14 ,Phe25 -艾塞丁-4(1-28) (SEQ ID NO: 3174)；Leu14 ,Ala19 ,Phe25 -艾塞丁-4 (1-28) (SEQ ID NO: 3175)；Leu14 ,Lys17,20 ,Ala19 ,Glu21 ,Phe25 ,Gln28 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3176)；Leu14 ,Lys17,20 ,Ala19 ,Glu21 ,Gln28 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3177)；辛基Gly14 ,Gln28 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3178)；Leu14 ,Gln28 ,辛基Gly34 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3179)；Phe4 ,Leu14 ,Gln28 ,Lys33 ,Glu34 , Ile35,36 ,Ser37 -艾塞丁-4(1-37) (SEQ ID NO: 3180)；Phe4 ,Leu14 ,Lys17,20 ,Ala19 ,Glu21 ,Gln28 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3181)；Val11 ,Ile13 ,Leu14 ,Ala16 ,Lys21 ,Phe25 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3182)；艾塞丁-4-Lys40 (SEQ ID NO: 3183)；利司那肽(Sanofi-Aventis/Zealand Pharma)；CJC-1134 (ConjuChem, Inc.)；[Ne -(17-羧基十七烷酸)Lys20 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3208)；[Ne -(17-羧基十七烷醯基)Lys32 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3209)；[脫胺基-His1 ,Ne -(17-羧基十七烷醯基)Lys20 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3210)；[Arg12,27 ,NLe14 ,Ne -(17-羧基十七烷醯基)Lys32 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3211)；[Ne -(19-羧基十九烷醯基胺基)Lys20 ]-艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3212)；[Ne -(15-羧基十五烷醯基胺基)Lys20 ]-艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3213)；[Ne -(13-羧基十三烷醯基胺基)Lys20 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3214)；[Ne -(11-羧基十一烷醯基胺基)Lys20 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3215)；艾塞丁-4-Lys40 (e-MPA)-NH2 (SEQ ID NO: 3216)；艾塞丁-4-Lys40 (e-AEEA-AEEA-MPA)-NH2 (SEQ ID NO: 3217)；艾塞丁-4-Lys40 (e-AEEA-MPA)-NH2 (SEQ ID NO: 3218)；艾塞丁-4-Lys40 (e-MPA)-白蛋白(SEQ ID NO: 3219)；艾塞丁-4-Lys40 (e-AEEA-AEEA-MPA)-白蛋白(SEQ ID NO: 3220)；艾塞丁-4-Lys40 (e-AEEA-MPA)-白蛋白(SEQ ID NO: 3221)；及類似物。AEEA係指[2-(2-胺基)乙氧基)]乙酸。EDA係指乙二胺。MPA係指順丁烯二醯亞胺基丙酸。艾塞丁及艾塞丁類似物可視情況醯胺化。
在一個實施例中，GLP-1受體促效劑化合物係與艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3163)具有至少80%序列一致性；與艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3163)具有至少85%序列一致性；與艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3163)具有至少90%序列一致性；或與艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3163)具有至少95%序列一致性的艾塞丁-4類似物。
可用於本文所述之方法中的其他艾塞丁及艾塞丁類似物包括以下中描述者：WO 98/05351；WO 99/07404；WO 99/25727；WO 99/25728；WO 99/40788；WO 00/41546；WO 00/41548；WO 00/73331；WO 01/51078；WO 03/099314；美國專利第6,956,026號；美國專利第6,506,724號；美國專利第6,703,359號；美國專利第6,858,576號；美國專利第6,872,700號；美國專利第6,902,744號；美國專利第7,157,555號；美國專利第7,223,725號；美國專利第7,220,721號；美國公開案第2003/0036504號；及美國公開案第2006/0094652號，各案揭示內容以全文引用之方式併入本文中。
「GLP-1(7-37)類似物」係指當藉由此項技術已知之措施，諸如受體結合或活體內血糖檢定(如例如Hargrove等人,Regulatory Peptides , 141:113-119 (2007)，其揭示內容以引用之方式併入本文中)評價時引起與GLP-1(7-37)類似之生物活性的肽。在一個實施例中，術語「GLP-1(7-37)類似物」係指當與GLP-1(7-37)之胺基酸序列相比較時具有含1、2、3、4、5、6、7或8個胺基酸取代、***、缺失或其中兩個或多於兩個之組合之胺基酸序列的肽。在一個實施例中，GLP-1(7-37)類似物係GLP-1(7-36)-NH2 。GLP-1(7-37)類似物包括該分子之醯胺化形式、酸形式、醫藥學上可接受之鹽形式及任何其他生理活性形式。在一些實施例中，使用簡單命名法描述GLP-1受體促效劑，例如[Aib8] GLP-1(7-37)表示在8位中的天然存在之Ala經Aib取代的GLP-1(7-37)類似物。
例示性GLP-1(7-37)及GLP-1(7-37)類似物包括GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3184)；GLP-1(7-36)-NH2 (SEQ ID NO: 3185)；利拉魯肽(來自Novo Nordisk之VICTOZA®)；阿必魯肽(來自GlaxoSmithKline之SYNCRIA®)；他司魯肽(Hoffman La-Roche)；度拉糖肽(又稱LY2189265；Eli Lilly and Company)；LY2428757 (Eli Lilly and Company)；脫胺基-His7 ,Arg26 ,Lys34 (Nε -(γ-Glu(N-α-十六烷醯基)))-GLP-1(7-37) (如SEQ ID NO: 3222所揭示之核心肽)；脫胺基-His7 ,Arg26 ,Lys34 (Nε -辛醯基)-GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3223)；Arg26,34 ,Lys38 (Nε -(ω-羧基十五烷醯基))-GLP-1(7-38) (SEQ ID NO: 3224)；Arg26,34 ,Lys36 (Nε -(γ-Glu(N-α-十六烷醯基)))-GLP-1(7-36) (如SEQ ID NO: 3225所揭示之核心肽)；Aib8,35 ,Arg26,34 ,Phe31 -GLP-1(7-36)) (SEQ ID NO: 3186)；HXaa8 EGTFTSDVSSYLEXaa22 Xaa23 AAKEFIXaa30 WLXaa33 Xaa34 G Xaa36 Xaa37 ，其中Xaa3 係A、V或G；Xaa22 係G、K或E；Xaa23 係Q或K；Xaa30 係A或E；Xaa33 係V或K；Xaa34 係K、N或R；Xaa36 係R或G；且Xaa37 係G、H、P或不存在(SEQ ID NO: 3187)；Arg34 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3188)；Glu30 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3189)；Lys22 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3190)；Gly8,36 ,Glu22 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3191)；Val8 ,Glu22 ,Gly36 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3192)；Gly8,36 ,Glu22 ,Lys33 ,Asn34 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3193)；Val8 ,Glu22 ,Lys33 ,Asn34 ,Gly36 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3194)；Gly8,36 ,Glu22 ,Pro37 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3195)；Val8 ,Glu22 ,Gly36 Pro37 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3196)；Gly8,36 ,Glu22 ,Lys33 , Asn34 ,Pro37 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3197)；Val8 ,Glu22 ,Lys33 ,Asn34 ,Gly36 ,Pro37 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3198)；Gly8,36 ,Glu22 -GLP-1(7-36) (SEQ ID NO: 3199)；Val8 ,Glu22 ,Gly36 -GLP-1(7-36) (SEQ ID NO: 3200)；Val8 ,Glu22 ,Asn34 ,Gly36 -GLP-1(7-36) (SEQ ID NO: 3201)；Gly8,36 ,Glu22 ,Asn34 -GLP-1(7-36) (SEQ ID NO: 3202)。GLP-1(7-37)及GLP-1(7-37)類似物各自可視情況經醯胺化。
本發明之物質組成物中的GLP-1受體促效劑亦可在一或多個胺基酸殘基處經已知有機化學技術化學衍生化。「化學衍生物」或「化學衍生化」係指一或多個殘基藉由官能側基反應進行化學衍生化的主題肽。此類衍生化分子包括例如游離胺基經衍生化以形成胺鹽酸鹽、對甲苯磺醯基、苯甲氧羰基、第三丁氧羰基、氯乙醯基或甲醯基之分子。游離羧基可以經衍生化以形成鹽、甲酯及乙酯或其他類型之酯或醯肼。游離羥基可以經衍生化以形成O-醯基或O-烷基衍生物。組胺酸之咪唑氮可以經衍生化以形成N-im-苯甲基組胺酸。亦包括含有二十個經典胺基酸(無論是L-形式抑或D-形式)之一或多個天然存在之胺基酸衍生物的肽作為化學衍生物。舉例而言，4-羥基脯胺酸可以取代脯胺酸；5-羥基離胺酸可以取代離胺酸；3-甲基組胺酸可以取代組胺酸；高絲胺酸可以取代絲胺酸；且鳥胺酸可以取代離胺酸。
在一些實施例中，有用之衍生化包括肽之胺基末端經化學阻斷以防止在N末端游離胺基處發生與媒劑之偶聯的衍生化。此類修飾亦可存在其他有益作用，例如降低毒素肽類似物對酶蛋白水解之敏感性。N末端可以經醯基化或修飾成為經取代胺，或經另一官能基，諸如芳族部分(例如吲哚酸、苯甲基(Bzl或Bn)、二苯甲基(DiBzl或Bn2 )或苯甲氧羰基(Cbz或Z))、N,N -二甲基甘胺酸或肌胺酸衍生化。舉例而言，在一些實施例中，醯基部分，諸如但不限於甲醯基、乙醯基(Ac)、丙醯基、丁基、庚基、己醯基、辛醯基或壬醯基，可以共價連接至肽之N末端，由此可以防止在媒劑與肽偶聯期間發生不想要之副反應。其他例示性N-末端衍生物基團包括-NRR1 (不為-NH2 )、-NRC(O)R1 、-NRC(O)OR1 、-NRS(O)2 R1 、-NHC(O)NHR1 、琥珀醯亞胺或苯甲氧羰基-NH- (Cbz-NH-)，其中R及R1 各自獨立地為氫或低碳數烷基，且其中苯環可以經1至3個選自C1 -C4 烷基、C1 -C4 烷氧基、氯及溴之取代基取代。
在一些實施例中，胺基酸殘基之間的一或多個肽基[-C(O)NR-]鍵聯(肽鍵)可以經非肽基鍵聯置換。例示性非肽基鍵聯為-CH2 -胺基甲酸酯[-CH2 -OC(O)NR-]、膦酸酯、-CH2 -磺醯胺[-CH2 -S(O)2 NR-]、脲[-NHC(O)NH-]、-CH2 -第二胺及烷基化肽[-C(O)NR6 -，其中R6 係低碳數烷基]。
在一些實施例中，一或多個個別胺基酸殘基可經衍生化。已知各種衍生化試劑與所選側鏈或末端殘基特異性反應，如以下舉例詳述。
離胺醯基殘基及胺基末端殘基可以與琥珀酸酐或其他羧酸酐反應，由此逆轉離胺醯基殘基之電荷。用於使含α-胺基之殘基衍生化的其他適合試劑包括醯亞胺酯，諸如甲基吡啶亞胺甲酯；磷酸吡哆醛；吡哆醛；氯代硼氫化物；三硝基苯磺酸；O-甲基異脲；2,4-戊二酮；及轉胺酶催化的與乙醛酸之反應。
精胺醯基殘基可以藉由與若干習知試劑中之任一種或組合反應進行修飾，該等試劑包括苯甲醯甲醛、2,3-丁二酮、1,2-環己二酮及茚三酮。使精胺醯基殘基衍生化需要反應在鹼性條件下進行，因為胍官能基之pKa較高。此外，該等試劑可以與離胺酸之基團以及精胺酸ε-胺基反應。
已對酪胺醯基殘基之特定修飾進行深入研究，其中特別值得關注的是，藉由與芳族重氮鎓化合物或四硝基甲烷反應將光譜標記引入酪胺醯基殘基中。最常見的是，使用N-乙醯咪唑及四硝基甲烷分別形成O-乙醯基酪胺醯基物種及3-硝基衍生物。
羧基側鏈基團(天冬胺醯基或麩胺醯基)可以藉由與碳化二亞胺(R'-N=C=N-R')，諸如1-環己基-3-(2-嗎啉基-(4-乙基)碳化二亞胺或1-乙基-3-(4-氮雜鎓-4,4-二甲基戊基)碳化二亞胺反應進行選擇性修飾。此外，天冬胺醯基及麩胺醯基可以藉由與銨離子反應而轉化成天冬醯胺醯基及麩醯胺醯基殘基。
麩醯胺醯及天冬醯胺醯基殘基可以脫醯胺基，得到相應的麩胺醯基及天冬胺醯基殘基。作為替代，該等殘基在微酸性條件下脫醯胺基。該等殘基的任一形式均在本發明之範圍內。
半胱胺醯基殘基可以經胺基酸殘基或其他部分置換以消除二硫鍵或相反，使交聯穩定。(參見例如Bhatnagar等人, J. Med. Chem., 39:3814-3819 (1996))。
其他可能之修飾包括脯胺酸及離胺酸之羥基化；絲胺醯基或蘇胺醯基殘基之羥基的磷酸化；Cys中硫原子之氧化；離胺酸、精胺酸及組胺酸側鏈之α-胺基的甲基化。Creighton, Proteins: Structure and Molecule Properties (W. H. Freeman & Co., San Francisco), 79-86 (1983)。
預期以上衍生化實例並非詳盡處理，而僅為說明性的。
在一個實施例中，GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)類似物共價連接(直接或藉由連接基團)至免疫球蛋白(例如IgG、IgE、IgG及類似物)之Fc部分。舉例而言，SEQ ID NO:25-40中之任一個可以共價連接至包含以下序列的免疫球蛋白之Fc部分：AESKYGPPCPPCPAPXaa16 Xaa17 Xaa18 GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFXaa80 STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGXaa230 ；其中Xaa16 係P或E；Xaa17 係F、V或A；Xaa18 係L、E或A；Xaa80 係N或A；且Xaa230 係K或不存在(SEQ ID NO: 3203)。該連接基團可以為任何化學部分(例如胺基酸及/或化學基團)。在一個實施例中，連接基團係(-GGGGS-)x (SEQ ID NO: 3204)，其中x係1、2、3、4、5或6；較佳為2、3或4；更佳為3。在一個實施例中，共價連接至免疫球蛋白Fc部分之GLP-1(7-37)類似物包含胺基酸序列：HGEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGGGGGGGSGGGGSGGGGSAESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (SEQ ID NO: 3205)。
在另一實施例中，GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)類似物可以共價連接(直接或經由連接基團)至一個或兩個聚乙二醇分子。舉例而言，GLP-1(7-37)類似物可以包含胺基酸序列：HXaa8 EGTFTSDVS SYLEXaa22 QAAKEFIAWLXaa33 KGGPSSGAPPPC45 C46 -Z，其中Xaa8 係D-Ala、G、V、L、I、S或T；Xaa22 係G、E、D或K；Xaa33 係V或I；且Z係O或NH2 (SEQ ID NO: 3206)，且視情況，其中(i)一個聚乙二醇部分共價連接至C45 ，(ii)一個聚乙二醇部分共價連接至C46 ，或(iii)一個聚乙二醇部分連接至C45 且一個聚乙二醇部分連接至C46 。在一個實施例中，GLP-1(7-37)類似物係HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFI AWLIKGGPSSGAPPPC45 C46 -NH2 (SEQ ID NO: 3207)且視情況，其中(i)一個聚乙二醇部分共價連接至C4 ，(ii)一個聚乙二醇部分共價連接至C46 ，或(iii)一個聚乙二醇部分連接至C45 且一個聚乙二醇部分連接至C46 。
可以提供一級胺部分進行偶聯的GLP-1受體促效劑胺基酸殘基包括離胺酸、高離胺酸、鳥胺酸、α,β-二胺基丙酸(Dap)、α,β-二胺基丙酮酸(α, β-diaminopropionoic acid，Dpr)及α, γ-二胺基丁酸(Dab)、胺基丁酸(Abu)及α-胺基-異丁酸(Aib)殘基。多肽N末端亦提供與醯胺化多肽C末端同樣適用於偶聯之α-胺基。在某些實施例中，該GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)類似物在對應於該類似物以下位置之殘基處偶聯至抗體或其片段：K26 (SEQ ID NO: 3184之20位)、K34 (SEQ ID NO: 3184之28位)、K36(SEQ ID NO: 3184之30位；例如經由R36K突變)、K37 (SEQ ID NO: 3184之31位；例如經由G37K突變)、K39(例如，經由添加兩個胺基酸至在39位具有離胺酸之GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)類似物)或C末端胺基。可以提供二級胺部分之胺基酸殘基包括ε-N-烷基離胺酸、α-N-烷基離胺酸、δ-N-烷基鳥胺酸、α-N-烷基鳥胺酸或N末端脯胺酸，其中烷基係C1 至C6 。
如本文所使用，「連接子部分」係指共價結合至本發明組成物中所含毒素肽類似物或其他多肽鏈(例如免疫球蛋白HC或LC或者免疫球蛋白Fc結構域)之胺基酸殘基的生物學上可接受之肽基或非肽基有機基團，該連接子部分將該毒素肽類似物或其他多肽鏈共價接合或偶聯至該組成物中之另一肽或多肽鏈，或半衰期延長部分。在該組成物之一些實施例中，如本文所描述之半衰期延長部分係偶聯，亦即直接共價結合至毒素肽類似物本身，或視情況直接共價結合至與該毒素肽類似物之胺基酸殘基共價結合的肽基或非肽基連接子部分(包括但不限於，芳族或芳基連接子)。任何連接子部分之存在均為可選的。當存在時，其化學結構並不重要，因為其主要用作間隔子以定位、接合、校正或優化一個官能部分相對於本發明組成物中之分子之一或多個其他官能部分的表示或位置。連接子部分之存在可用於優化本發明組成物之一些實施例的藥理學活性。該連接子當存在時，可以由經肽鍵連接在一起之胺基酸構成。連接子部分當存在時，可以獨立地與本發明組成物中可能存在之任何其他連接子相同或不同。在一些實施例中，該連接子可以為有助於多價展示本發明之毒素肽類似物的多價連接子；此類生物活性化合物之多價展示可以增加接合親和力及/或經由親合力實現之效力。治療劑之活體內特性可以經由偶聯至聚合物或蛋白質而變化(亦即，特異性靶向、半衰期延長、分配型態等)。
肽基連接子. 如上文所述，連接子部分當存在時(無論是在毒素肽類似物之一級胺基酸序列內，抑或作為連接子用於將半衰期延長部分連接至毒素肽類似物)，實質上均可為「肽基」(亦即，由經肽鍵連接在一起之胺基酸構成)且由較佳1至約40個胺基酸殘基，更佳1至約20個胺基酸殘基且最佳1至約10個胺基酸殘基長度構成。較佳地但非必需地，該連接子中之胺基酸殘基係來自該二十個經典胺基酸，更佳來自半胱胺酸、甘胺酸、丙胺酸、脯胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸及/或絲胺酸。甚至更佳地，肽基連接子係主要由經肽鍵連接的無空間位阻之胺基酸，諸如甘胺酸、絲胺酸及丙胺酸構成。亦希望，若存在，所選肽基連接子避免在活體內循環中快速蛋白水解轉換。熟習此項技術者應充分瞭解，該等胺基酸中有一些可以經糖基化。舉例而言，構成唾液酸化位點之有用連接子序列係X1 X2 NX4 X5 G (SEQ ID NO: 3250)，其中X1 、X2 、X4 及X5 各自獨立地為任何胺基酸殘基。
在其他實施例中，肽基連接子部分之1至40個胺基酸係選自甘胺酸、丙胺酸、脯胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸及離胺酸。較佳地，連接子係主要由無空間位阻之胺基酸，諸如甘胺酸及丙胺酸構成。因此，較佳之連接子包括聚甘胺酸、聚絲胺酸及聚丙胺酸，或其中任一種之組合。一些例示性肽基連接子係聚(Gly)1-8 ，尤其是(Gly)3 、(Gly)4 (SEQ ID NO:480)、(Gly)5 (SEQ ID NO:3252)及(Gly)7 (SEQ ID NO:3252)，以及GlySer及聚(Gly)4 Ser，諸如「L15」 (GGGGSGGGGSGGGGS；SEQ ID NO:3253)、聚(Gly-Ala)2-4 及聚(Ala)1-8 。肽基連接子之其他具體實例包括(Gly)5 Lys (SEQ ID NO:3254)及(Gly)5 LysArg (SEQ ID NO:3255)。有用肽基連接子之其他實例為： (Gly)3 Lys(Gly)4 (SEQ ID NO:3256)； (Gly)3 AsnGlySer(Gly)2 (SEQ ID NO:3257)； (Gly)3 Cys(Gly)4 (SEQ ID NO:3258)；及 GlyProAsnGlyGly (SEQ ID NO:3259)。
為了解釋以上命名法，例如，(Gly)3 Lys(Gly)4 意謂Gly-Gly-Gly-Lys-Gly-Gly-Gly-Gly (SEQ ID NO:3260)。Gly及Ala之其他組合亦為有用的。
其他較佳連接子係在本文中標識為「L5」 (GGGGS；或「G4 S」；SEQ ID NO:3261)、「L10」 (GGGGSGGGGS；SEQ ID NO:3262)；「L20」 (GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS；SEQ ID NO:3263)；「L25」 (GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS；SEQ ID NO:3264)之連接子及下文在操作實例中使用的任何連接子。
在包含肽連接子部分之本發明組成物的一些實施例中，酸性殘基，例如麩胺酸或天冬胺酸殘基，係放在該連接子部分之胺基酸序列中。實例包括以下肽連接子序列： GGEGGG (SEQ ID NO:3265)； GGEEEGGG (SEQ ID NO:3266)； GEEEG (SEQ ID NO:3267)； GEEE (SEQ ID NO:3258)； GGDGGG (SEQ ID NO:3269)； GGDDDGG (SEQ ID NO:3270)； GDDDG (SEQ ID NO:3271)； GDDD (SEQ ID NO:3272)； GGGGSDDSDEGSDGEDGGGGS (SEQ ID NO:3273)； WEWEW (SEQ ID NO:3274)； FEFEF (SEQ ID NO:3275)； EEEWWW (SEQ ID NO:3276)； EEEFFF (SEQ ID NO:3277)； WWEEEWW (SEQ ID NO:3278)；或 FFEEEFF (SEQ ID NO:3279)。
在其他實施例中，連接子構成磷酸化位點，例如X1 X2 YX4 X5 G (SEQ ID NO:3280)，其中X1 、X2 、X4 及X5 各自獨立地為任何胺基酸殘基；X1 X2 SX4 X5 G (SEQ ID NO:3281)，其中X1 、X2 、X4 及X5 各自獨立地為任何胺基酸殘基；或X1 X2 TX4 X5 G (SEQ ID NO:3282)，其中X1 、X2 、X4 及X5 各自獨立地為任何胺基酸殘基。
此處顯示之連接子係例示性的；在本發明之範圍內的肽基連接子可能更長且可能包括其他殘基。肽基連接子可以含有例如半胱胺酸、另一硫醇或親核試劑以與半衰期延長部分偶聯。在另一實施例中，連接子含有半胱胺酸或高半胱胺酸殘基，或其他2-胺基-乙硫醇或3-胺基-丙硫醇部分以偶聯至順丁烯二醯亞胺、碘代乙醯胺或硫酯，即官能化半衰期延長部分。
另一有用的肽基連接子係包含隨機Gly/Ser/Thr序列，例如：GSGSATGGSGSTASSGSGSATH (SEQ ID NO:3283)或HGSGSATGGSGSTASSGSGSAT (SEQ ID NO:3284)的較大可撓性連接子，估計該連接子為約1 kDa PEG分子之大小。或者，有用肽基連接子可以包含此項技術中已知的形成剛性螺旋結構之胺基酸序列(例如剛性連接子：-AEAAAKEAAAKEAAAKAGG-// SEQ ID NO:3285)。另外，肽基連接子亦可包含非肽基區段，諸如具有式-CH2 -CH2 -CH2 -CH2 -CH2 -CH2 -之6碳脂族分子。該等肽基連接子可以經改變以形成如本文所描述之衍生物。
非肽基連接子. 視情況，非肽基連接子部分亦可用於將半衰期延長部分偶聯至半衰期延長部分偶聯之毒素肽類似物之肽部分。舉例而言，可以使用烷基連接子，諸如-NH-(CH2 )s -C(O)-，其中s = 2-20。該等烷基連接子可以進一步經任何無空間位阻之基團，諸如低碳數烷基(例如C1 -C6 )低碳數醯基、鹵素(例如Cl、Br)、CN、NH2 、苯基等取代。例示性非肽基連接子為PEG連接子(例如，顯示於下)：其中n係使得該連接子之分子量為約100至約5000道爾頓(Da)，較佳為約100至約500 Da。
在一個實施例中，非肽基連接子係芳基。該等連接子可以經改變而以與本文所描述相同之方式形成衍生物。「芳基」係苯基或與飽和、部分飽和或不飽和3員、4員或5員碳橋鄰位稠合之苯基，該苯基或橋經0、1、2或3個選自C1-8 烷基、C1-4 鹵烷基或鹵基之取代基取代。「雜芳基」係不飽和5、6或7員單環，或者部分飽和或不飽和6員、7員、8員、9員、10員或11員雙環，其中至少一個環係不飽和的，該等單環及雙環含有1、2、3或4個選自N、O及S之原子，其中該環經0、1、2或3個選自C1-8 烷基、C1-4 鹵烷基及鹵基之取代基取代。
本發明物質組成物之非肽部分，諸如非肽基連接子或非肽半衰期延長部分可以藉由習知有機化學反應合成。
多價連接子之其他實施例包含長度受控之剛性聚雜環核心。該等連接子在任一端上經化學分化以適應鄰位偶合化學(亦即，疊氮化物「點擊(Click)」、醯胺偶合、藉由經順丁烯二醯亞胺或鹵代乙醯胺烷基化來形成硫醚、肟形成、還原胺化等)。
以上僅為說明性的且並非對可以視情況根據本發明使用的連接子類別之詳盡處理。
在一個實施例中，GLP-1受體促效劑化合物係與GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3184)具有至少80%序列一致性；與GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3184)具有至少85%序列一致性；與GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3184)具有至少90%序列一致性；或與GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3184)具有至少95%序列一致性的肽。
GLP-1受體促效劑化合物可以藉由此項技術中熟知之技術製備，例如，如Eng等人,J. Biol. Chem ., 265:20259-62 (1990)中所描述之肽純化法；如Raufman等人,J. Biol. Chem ., 267:21432-37 (1992)中所描述之標準固相肽合成技術；如Sambrook等人,Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第 2 版 , Cold Spring Harbor (1989)中所描述之重組DNA技術；及類似方法。 表7. GLP-1受體促效劑序列之實例
AEEA係指[2-(2-胺基)乙氧基)]乙酸。
EDA係指乙二胺。
MPA係指順丁烯二醯胺基丙酸。
本發明亦提供包含本文所描述之GLP-1受體促效劑化合物及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組成物。GLP-1受體促效劑化合物可以治療有效量存在於醫藥組成物中且其存在量可以提供實現治療功效所需之最低GLP-1受體促效劑化合物血漿含量。該等醫藥組成物係此項技術中所知的且描述於例如美國專利第7,521,423號、美國專利第7,456,254號、WO 2000/037098、WO 2005/021022、WO 2005/102293、WO 2006/068910、WO 2006/125763、WO 2009/068910、美國公開案第2004/0106547號及類似案中，其揭示內容以引用之方式併入本文中。
含有本文所描述之GLP-1受體促效劑化合物的醫藥組成物可以提供用於周圍投予，諸如非經腸(例如皮下、靜脈內、肌肉內)、連續輸注(例如靜脈內滴注、靜脈內推注、靜脈內輸注)、表面、經鼻或經口投予。適合醫藥學上可接受之載劑及其調配物描述於標準調配論著，諸如Martin之Remington's Pharmaceutical Sciences；及Wang等人,Journal of Parenteral Science and Technology , Technical Report No. 10, 42:2S增補版(1988)中。本文所描述之GLP-1受體促效劑化合物可以提供於供注射或輸注用的非經腸組成物中。其可以例如懸浮於水；惰性油，諸如植物油(例如芝麻油、花生油、橄欖油及類似油)；或其他醫藥學上可接受之載劑中。在一個實施例中，該等化合物係懸浮於水性載劑，例如pH值為約3.0至8.0，或為約3.0至5.0的等滲緩衝溶液中。該等組成物可以藉由習知滅菌技術滅菌或可以經無菌過濾。必要時，該等組成物可以含有醫藥學上可接受之輔助物質以接近生理條件，諸如pH緩衝劑。
有用的緩衝劑包括例如乙酸緩衝劑。可以使用儲存式或「儲集式」緩慢釋放製劑以在皮下注射、經皮注射或其他遞送方法之後，經數小時或數天將治療有效量之製劑遞送至血流中。所需等滲性可以使用氯化鈉或其他醫藥學上可接受之試劑，諸如右旋糖、硼酸、酒石酸鈉、丙二醇、多元醇(諸如甘露糖醇及山梨糖醇)或其他無機或有機溶質實現。在有關靜脈內輸注之一個實施例中，該調配物可以包含(i) GLP-1受體促效劑化合物、(2)無菌水，及視情況(3)氯化鈉、右旋糖或其組合。
亦可使用載劑或賦形劑促進GLP-1受體促效劑化合物之投予。載劑或賦形劑之實例包括碳酸鈣；磷酸鈣；各種糖，諸如乳糖、葡萄糖或蔗糖；或各類澱粉；纖維素衍生物；明膠；植物油；聚乙二醇；及生理上相容之溶劑。
GLP-1受體促效劑化合物亦可調配為醫藥學上可接受之鹽(例如酸加成鹽)及/或其複合物之形式。醫藥學上可接受之鹽係在其投予濃度下無毒之鹽。醫藥學上可接受之鹽包括酸加成鹽，諸如含有硫酸鹽、鹽酸鹽、磷酸鹽、胺基磺酸鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、環己基胺基磺酸鹽及奎寧酸鹽之鹽。醫藥學上可接受之鹽可以由諸如以下酸獲得：鹽酸、硫酸、磷酸、胺基磺酸、乙酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸、丙二酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、環己基胺基磺酸及奎寧酸。該等鹽可以藉由例如以下方式製備：使該產物之游離酸或鹼形式與一或多個當量之適當鹼或酸在不可溶解該鹽之溶劑或介質中反應，或在諸如水之溶劑中反應，隨後在真空中或藉由冷凍乾燥或藉由在適合離子交換樹脂上將現有鹽之離子交換成另一離子以移除溶劑。
GLP-1受體促效劑化合物之例示性醫藥調配物描述於美國專利第7,521,423號、美國專利第7,456,254號、美國公開案第2004/0106547號WO 2006/068910、WO 2006/125763及類似案，其揭示內容以引用之方式併入本文中。
用於本文所描述之方法中的本文所描述之GLP-1受體促效劑化合物之治療有效量典型地將為約0.01 μg至約5 mg；約0.1 μg至約2.5 mg；約1 μg至約1 mg；約1 μg至約50 μg；或約1 μg至約25 μg。或者，GLP-1受體促效劑化合物之治療有效量基於70 kg患者之體重可以為約0.001 μg至約100 μg；或基於70 kg患者之體重為約0.01 μg至約50 μg。取決於調配物，該等治療有效劑量可以一天一次、一天兩次、一天三次、一週一次、兩週一次或一個月一次投予。擬投予之確切劑量係例如由調配物決定，諸如速釋調配物或緩釋調配物。對於經皮、經鼻或經口劑型，劑量可以增加約5倍至約10倍。
在某些實施例中，GLP-1受體促效劑將與GIPR抗原結合蛋白同時投予。在一個實施例中，GLP-1受體促效劑將在GIPR抗原結合蛋白之後投予。在一個實施例中，GLP-1受體促效劑將在GIPR抗原結合蛋白之前投予。在某些實施例中，受試者或患者在用GIPR抗原結合蛋白進一步治療之前已用GLP-1受體促效劑治療。
本文所提供之GIPR抗原結合蛋白可用於偵測生物樣品中之GIPR。舉例而言，GIPR抗原結合蛋白可用於診斷檢定，例如結合檢定中，以偵測及/或定量血清中表現之GIPR。
所描述之抗原結合蛋白可以用於診斷目的以偵測、診斷或監測與GIPR相關之疾病及/或病況。所揭示之抗原結合蛋白提供一種使用熟習此項技術者已知之經典免疫組織方法偵測樣品中GIPR之存在的方式(例如Tijssen, 1993,Practice and Theory of Enzyme Immunoassays , 第15卷 (R.H. Burdon及P.H. van Knippenberg編, Elsevier, Amsterdam)；Zola, 1987,Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques , 第147-158頁(CRC Press, Inc.)；Jalkanen等人, 1985,J. Cell. Biol. 101:976-985；Jalkanen等人, 1987,J. Cell Biol. 105:3087-3096)。可以在活體內或活體外偵測GIPR。
本文所提供之診斷應用包括使用該等抗原結合蛋白偵測GIPR之表現。可用於偵測GIPR之存在之方法的實例包括免疫檢定，諸如酶連免疫吸附劑檢定(ELISA)及放射免疫檢定(RIA)。
對於診斷應用，該抗原結合蛋白典型地將用可偵測標記基團標記。適合標記基團包括但不限於以下：放射性同位素或放射性核種(例如3 H、14 C、15 N、35 S、90 Y、99 Tc、111 In、125 I、131 I)、螢光基團(例如FITC、若丹明、鑭系元素磷光體)、酶基團(例如辣根過氧化酶、β-半乳糖苷酶、螢光素酶、鹼性磷酸酶)、化學發光基團、生物素基團，或由第二報告子識別之預定多肽抗原決定基(例如白胺酸拉鏈對序列、二次抗體之結合位點、金屬結合結構域、抗原決定基標籤)。在一些實施例中，該標記基團經由各種長度之間隔子臂偶合至抗原結合蛋白以減小潛在空間位阻。此項技術中已知各種用於標記蛋白質之方法且均可使用。
在一些實施例中，GIPR抗原結合蛋白係使用此項技術中已知之技術分離及量測。參見例如，Harlow 及 Lane , 1988,Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor (1991版及定期增補版)；John E. Coligan 編 , 1993,Current Protocols In Immunology New York: John Wiley & Sons。
本發明之另一態樣提供偵測與所提供之抗原結合蛋白競爭結合至GIPR之測試分子的存在。一種此類檢定之實例涉及在存在或不存在測試分子下，偵測含有一定量GIPR之溶液中游離抗原結合蛋白之量。游離抗原結合蛋白(亦即，未結合至GIPR之抗原結合蛋白)之量增加將指示該測試分子能夠與該抗原結合蛋白競爭結合GIPR。在一個實施例中，該抗原結合蛋白經標記基團標記。或者，該測試分子經標記且在存在或不存在抗原結合蛋白下，監測游離測試分子之量。
GIPR結合蛋白可以用於治療、診斷或改善代謝病況或病症。在一個實施例中，待治療之代謝病症係糖尿病，例如2型糖尿病。在另一實施例中，代謝病況或病症係肥胖。在其他實施例中，代謝病況或病症係血脂異常、葡萄糖含量升高、胰島素含量升高或糖尿病性腎病。舉例而言，可以使用GIPR結合肽治療或改善之代謝病況或病症包括人類受試者之空腹血糖含量為125 mg/dL或更高，例如130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200或超過200 mg/dL之狀況。血糖含量可以在飽腹或空腹狀態下測定，或隨機測定。代謝病況或病症亦可包含受試者發展代謝病況之風險較高的病況。對於人類受試者，此類病況包括空腹血糖含量為100 mg/dL。可以使用包含GIPR結合蛋白之醫藥組成物治療的病況亦可見於以引用之方式併入本文中的American Diabetes Association Standards of Medical Care in Diabetes Care-2011, American Diabetes Association, Diabetes Care第34卷, 第1期增刊, S11-S61, 2010。
在應用中，代謝病症或病況，諸如2型糖尿病、葡萄糖含量升高、胰島素含量升高、血脂異常、肥胖或糖尿病性腎病，可以藉由向有需要之患者投予治療有效劑量的GIPR結合蛋白進行治療。該投藥可以如本文所描述進行，諸如藉由靜脈內注射、腹膜內(IP)注射、皮下注射、肌肉內注射或口服錠劑或液體調配物。在一些情況下，GIPR結合蛋白之治療有效劑量或較佳劑量可以由臨床醫生決定。GIPR結合蛋白之治療有效劑量將特別取決於投藥時程、投予之藥劑之單位劑量、GIPR結合蛋白是否與其他治療劑組合、免疫狀態及接受者之健康狀況。如本文所使用，術語「治療有效劑量」意謂在組織系統、動物或人類中引起研究人員、醫師或其他臨床醫生所希望之生物或醫學反應的GIPR結合蛋白之量，該反應包括減輕或改善所治療之疾病或病症之症狀，亦即，支持可觀察水準的一或多種所需生物或醫學反應，例如降低血糖、胰島素、甘油三酯或膽固醇含量；減輕體重；或改善葡萄糖耐量、能量消耗或胰島素敏感性的GIPR結合蛋白之量。
應注意，GIPR結合蛋白之治療有效劑量亦可隨所需結果而變化。因此，例如，在指示血糖含量較低之情況下，GIPR結合蛋白之劑量將相應地高於需要相對較低血糖含量之劑量。相反，在指示血糖含量較高之情況下，GIPR結合蛋白之劑量將相應地低於需要相對較高血糖含量之劑量。
在各種實施例中，受試者係血糖含量為100 mg/dL或更高的可以用GIPR結合蛋白治療之人類。
在一個實施例中，本發明之方法包括先量測受試者體內諸如葡萄糖、胰島素、膽固醇、脂質之一或多種代謝相關化合物的基線含量。接著向該受試者投予包含GIPR結合蛋白之醫藥組成物。在所需時間段後，再次量測受試者體內該一或多種代謝相關化合物(例如血糖、胰島素、膽固醇、脂質)之含量。接著，可以比較這兩種含量以便確定受試者體內代謝相關化合物之相對變化。取決於該比較之結果，可以投予另一次劑量的包含GIPR結合蛋白之醫藥組成物以達到一或多種代謝相關化合物之所需含量。
應注意，包含GIPR結合蛋白之醫藥組成物可以與另一化合物共投予。與GIPR結合蛋白共投予之化合物的屬性及特性將取決於待治療或改善之病況的性質。可以與包含GIPR結合蛋白之醫藥組成物組合投予的化合物之實例的非限制性清單包括羅格列酮(rosiglitizone)、匹格列酮(pioglitizone)、瑞格列奈(repaglinide)、那格列奈(nateglitinide)、二甲雙胍(metformin)、艾塞那肽、西格列汀(stiagliptin)、普蘭林肽(pramlintide)、格列吡嗪(glipizide)、格列美脲阿卡波糖(glimeprirideacarbose)及米格列醇(miglitol)。
亦提供用於實行所揭示之方法的套組。該等套組可以包括含編碼本文所提供之肽或蛋白質之核酸、含該等核酸之載體及細胞的醫藥組成物，諸如本文所描述之醫藥組成物；以及包含該等含核酸化合物之醫藥組成物，該等醫藥組成物可以提供於無菌容器中。視情況，亦可包括有關如何使用所提供之醫藥組成物治療代謝病症之說明書，或供患者或醫療服務提供者使用。
在一個態樣中，該套組包括(a)含治療有效量之GIPR結合蛋白的醫藥組成物；及(b)用於該醫藥組成物之一或多個容器。此類套組亦可包含有關其使用之說明書；該等說明書可以針對所治療之精確代謝病症定製。該等說明書可以描述套組中所提供之材料的使用及性質。在某些實施例中，套組包括有關患者進行投藥以治療代謝病症，諸如葡萄糖含量升高、胰島素含量升高、肥胖、2型糖尿病、血脂異常或糖尿病性腎病之說明書。
說明書可以印刷於基底，諸如紙或塑料等上，且可以作為包裝插頁、該套組之容器之標籤中或其組分(例如與包裝相聯)等存在於套組中。在其他實施例中，說明書係以呈現於例如CD-ROM、磁碟等適合電腦可讀存儲媒體上之電子存儲資料文件形式存在。在又其他實施例中，實際說明書不存在於套組中，而是提供自遠程源，諸如經網際網路獲得說明書之方式。該實施例之實例係包括網址之套組，在該網址，可以觀看該說明書及/或可以下載說明書。
一個套組之一些或全部組分包裝在適合包裝中以維持無菌性通常係合乎需要的。套組各組分可以包裝在套組封閉元件中以形成單一、易於處理之單元，其中該套組封閉元件，例如盒或類似結構，可以為或可以不為氣密性容器，例如以進一步保持該套組之一些或全部組分之無菌性。 實例1產生雙半胱胺封端之抗 GIPR cys mAb(2 g 規模 )
用於產生抗GIPR/GLP1肽偶聯物之反應流程顯示於圖1中。將具有特定半胱胺酸突變之抗GIPR單株抗體(抗GIPR cys mAb，2 g)與2.5 mM胱胺及2.5 mM半胱胺於40 mM HEPES緩衝液pH 7.5-8.5中之800 mL溶液一起溫育15-20小時。使用0.22 μm過濾器過濾反應混合物，並在1200 mL的100 mM乙酸鈉緩衝液pH 5中稀釋。使用陽離子交換層析法自反應混合物中純化出雙半胱胺封端之抗GIPR cys mAb。首先，將在100 mM乙酸鈉緩衝液pH 5中稀釋之2 L反應混合物以20 mL/min裝載至240 mL SP HP管柱上。用2管柱體積之100 mM乙酸鈉pH 5，隨後0-20%梯度的含1.2 M NaCl之100 mM乙酸鈉pH 5洗滌管柱。收集含有雙半胱胺封端之抗GIPR cys mAb的主要峰且使用切向流過濾法將緩衝液交換成含9%蔗糖之10 mM乙酸鈉pH 5.2。 實例2產生抗 GIPR/GLP1 肽偶聯物
在室溫下，使用3-4當量之叁(2-羧基乙基)膦(TCEP)部分還原雙半胱胺封端之抗GIPR cys mAb (6 mg/mL於含9%蔗糖之10 mM乙酸鈉中)，保持60-90分鐘。移除TCEP，且將部分還原之cys mAb緩衝液交換成含2 mM乙二胺四乙酸(EDTA)之50 mM磷酸鈉緩衝液pH 7.5。向部分還原之cys mAb中添加6-10當量的脫氫抗壞血酸(DHAA)，且在室溫下進行氧化直至僅觀察到痕量的部分還原之mAb物種(30-120分鐘)。不移除dhAA，將3-8當量之溴代乙醯基-GLP1肽添加至反應混合物中並在室溫下溫育15-20小時。移除所有試劑，且使用旋轉濃縮或切向流過濾將抗GIPR/GLP1肽偶聯物產物緩衝液交換成最終調配物。 表9. 抗GIPR拮抗劑/GLP-1受體促效劑雙特異性偶聯物構築體。 實例3活體外及活體內檢定方法 GLP-1 受體促效劑活性
在均相時間解析螢光(HTRF)檢定(CISBIO，目錄號62AM4PEJ)中使用穩定表現單獨人類GLP-1R或GLP-1R與GIPR (M1)之CHOK1細胞量測肽/偶聯物誘導之cAMP產生。在37℃下，將連續稀釋之肽/偶聯物(3×10-7 M – 3×10-14 M)與40,000個細胞一起在檢定緩衝液(0.1% BSA、500 μM IBMX於F12培養基中)中培養15分鐘。接著，用含有cAMP-d2及cAMP穴狀物(CISBIO)之溶解緩衝液溶解細胞，並在室溫下培養1小時，隨後在Evision板讀取器(PerkinElmer)中量測。cAMP含量表示為665/620 nm之螢光度比率且顯示於圖2A-2E及圖3中。 實例4GIPR 拮抗劑活性
在HTRF檢定(Cisbio，目錄號62AM4PEJ)中，使用穩定表現人類GIPR之HEK 293T細胞量測肽/偶聯物誘導之cAMP產生。在37℃下，將連續稀釋之偶聯物或GIPR抗體(3×10-6 M – 1×10-11 M)與30,000個細胞一起在檢定緩衝液(0.1% BSA、500 μM IBMX於F12培養基中)中培養30分鐘，隨後用最終濃度為0.05 nM之GIP處理。在37℃下將細胞培養30分鐘，且接著，在室溫下，在含有cAMP-d2及cAMP穴狀物(CISBIO)之溶解緩衝液溶解1小時。在Evision板讀取器(PerkinElmer)中量測螢光度且cAMP含量表示為665/620 nm之比率且顯示於圖2A-2E及圖中。 實例5用於活體內雙特異性小鼠之材料及方法
主要選擇糖尿病小鼠，針對雙特異性分子之GLP-1活性進行篩選。分子係基於其在注射後不同時間點降低血漿葡萄糖含量之潛力進行選擇。此外，如圖4A-4I中所示，亦自各自共投予或自該雙特異性分子量測體重減輕或體重增加抑制來指示GLP-1活性、GIPR抑制或二者之組合。自Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME)獲得雄性db/db小鼠(#642)且在8-9週齡時移交。在到達後，將小鼠以每籠四隻分組圈養且維持於具有12小時亮(6:30 AM – 6:30 PM)及暗循環(6:30 PM – 6:30 AM)之控制環境條件中。給小鼠飼喂標準囓齒動物飼料(2020x Harlan Teklad)，並使其自由取用飲用水。
在其他研究中，使用葡萄糖耐量測試對GLP-1類似物之效力分級(圖5A-5C)。使C57Bl6小鼠適應環境條件一至兩週。在給藥前，處理小鼠並獲得體重量測值。在給藥前一天，使用設計用於囓齒動物血漿之手持式血糖儀自有意識小鼠之眶後竇抽血以量測血漿葡萄糖。給藥當天，獲得基線血漿葡萄糖及體重量測值。使用血漿葡萄糖及體重之籠平均值將各籠分入治療組。將小鼠維持在其飼養籠中。在投予測試物後，在各種時間點，在(1、3及6小時)或(4小時)量測血漿葡萄糖且之後每24小時取得血漿葡萄糖及體重量測值。量測血漿葡萄糖直至含量返回至接近基線含量且取得體重量測值直至體重增加速率類似於媒劑治療之對照組。
亦使用飲食誘導之肥胖小鼠(DIO)作為模型量測用不同分子治療之體重減輕作用，如圖6中所示。
自Harlan Laboratories獲得雄性c57bl6小鼠且在26天大時移交。將小鼠以每籠二至四隻同窩小鼠分組圈養。適應環境一週後，小鼠開始高脂肪飲食飼喂方案(HFD：D12492, Research Diets, New Brunswick, NJ)或繼續標準囓齒動物飼料(2020x, Harlan Laboratories)。飼喂後12週，使單一圈養之小鼠適應常規處理、食物攝入量測及每日生理食鹽水注射(IP)。自有意識DIO小鼠之眶後竇收集血液。將少量血液立即放在設計用於囓齒動物血漿之手持式血糖儀上且其餘血液放在填有EDTA且含蛋白酶抑制劑混合液(Roche Diagnostics, Indianapolis, IN)之收集管中。離心後，將血漿儲存於-80℃。基於體重及血漿葡萄糖量測值將小鼠分入治療組中。小鼠用媒劑(Q3D)、GIPR Ab (2.5或10 mg/kg，Q3D)、GLP-1肽(0.06 mg/kg，QD)、度拉糖肽(1 mg/kg，Q3D)或雙特異性偶聯物(2.5或10 mg/kg，Q3D)治療。另2組小鼠接受上述劑量及劑量頻率的GLP-1與GIPR Ab之組合治療(GIPR 2.5 mg/kg + GLP-1肽及GIPR 2.5 mg/kg + 度拉糖肽)。除給與GLP-1肽之組外，所有其他小鼠在不給與其對應測試物時均注射生理食鹽水。每天量測體重且對三天內之累積食物攝入量求平均值得到每天食物攝入量值。在研究第0天至第3天及第6天至第9天之間量測食物攝入量。在研究第9天，注射後1小時收集血液，且在研究第12天，前一測試物注射後1或3天，收集末梢血液。
用小鼠ELISA套組，遵循製造商之說明書(ALPCO, Salem, NH)量測血漿胰島素。使用Olympus AU400e化學分析儀(Olympus America, Center Valley, PA)量測血漿葡萄糖、膽固醇、甘油三酯、非酯化脂肪酸、AST及ALT。 實例6用於活體內雙特異性食蟹獼猴之材料及方法
在研究開始前，使原生雄性自發肥胖食蟹獼猴(9-14歲)適應實驗程序/針對實驗程序進行訓練，且將其分選至7個治療組中，其中每組n=10隻猴，且各組中所有分選參數(體重及血液化學)均具有相同分佈。接著，一週一次向猴注射媒劑或GLP1R-GIPR偶聯物(1264、1273、1248或1257)，持續6週。在6週治療期後，猴經歷4週洗脫期。在研究之訓練/治療/洗脫期間，每天監測總能量攝入；每週或隔週監測體重、血液化學及藥物暴露情況，如圖7-21中所示。 實例7GIP 及 GLP-1 放射性配體競爭結合檢定之材料及方法
由過度表現hu GIPR及hu GLP1R之哺乳動物細胞株製備膜且典型地儲存於-80℃之檢定緩衝液中：50 mM HEPES (7.4)、5 mM MgCl2 、1mM CaCl2 、0.2% BSA及蛋白酶抑制劑錠劑「無EDTA」。未標記之GIP及GLP-1肽係自Phoenix Pharmaceuticals獲得且放射性標記之125 I-GIP及125 I-GLP-1係自Perkin Elmer訂購。在96孔圓底細胞培養盤(Costar)中，在振盪下，在室溫下進行主要反應2小時。細胞膜濃度固定在0.6 mg/mL且所用放射性配體之濃度為0.1 nM。一式兩份，滴定六種濃度之測試物。兩小時後，使用Filtermate收集器(Perkin Elmer)，用冰冷的50 mM TRIS (pH 7.4)收集主要盤且將細胞膜捕捉於PEI處理之GF/C UniFilter濾板(Perkin Elmer)上。使用真空烘箱乾燥盤15分鐘，且向各孔中添加Microscint 20，隨後在Perkin Elmer TopCount NXT HTS儀器中計數。藉由獲取總計數與非特異性計數之差值來確定特異性結合。非特異性孔含有1 µM冷配體。使用GraphPad Prism 7分析資料並作圖，如圖22中所示。
圖1. 用於產生抗GIPR/GLP1肽偶聯物之反應流程
圖2A-E. GLP-1受體促效劑在CHOK1-GLP-1R H20重組細胞中之活性及GIPR拮抗劑在293 HEK-GIPR #10重組細胞中之活性
圖3. 相較於僅表現GLP-1R之細胞(CHOK1 hGLP1R H20)，在表現GLP-1R及GIPR兩種之細胞(CHOK1 hGLP1R/hGIPR M1)中2G10偶聯物之GLP-1促效劑活性更有效
圖4. 活體內活性—在db/db小鼠中之葡萄糖及體重影響
圖5. 在C57Bl6小鼠中5G12及2G10化學偶聯物之GLP-1受體促效劑及GIPR拮抗劑的活體內活性(葡萄糖耐量測試)
圖6. 在DIO小鼠中5G12及2G10化學偶聯物之GLP-1受體促效劑及GIPR拮抗劑的活體內活性(血漿葡萄糖及體重變化)
圖7. GLP1R-GIPR雙特異性偶聯物1273減輕雄性自發肥胖之食蟹獼猴之體重(%自基線之變化)
圖8. GLP1R-GIPR雙特異性偶聯物1273減少雄性自發肥胖之食蟹獼猴之總能量攝入(%自基線之變化)
圖9. GLP1R-GIPR雙特異性偶聯物1273減少雄性自發肥胖之食蟹獼猴之空腹胰島素(%自基線之變化)
圖10. GLP1R-GIPR雙特異性偶聯物1273減少雄性自發肥胖之食蟹獼猴之空腹甘油三酯(%自基線之變化)
圖11. GLP1R-GIPR雙特異性偶聯物1273減少雄性自發肥胖之食蟹獼猴之空腹總膽固醇(%自基線之變化)
圖12. GLP1R-GIPR雙特異性偶聯物1264減輕雄性自發性肥胖食蟹獼猴之體重(%自基線之變化)
圖13. GLP1R-GIPR雙特異性偶聯物1264減少雄性自發肥胖之食蟹獼猴之總能量攝入(%自基線之變化)
圖14. GLP1R-GIPR雙特異性偶聯物1264減少雄性自發肥胖之食蟹獼猴之空腹胰島素(%自基線之變化)
圖15. GLP1R-GIPR雙特異性偶聯物1264減少雄性自發肥胖之食蟹獼猴之空腹甘油三酯(%自基線之變化)
圖16. GLP1R-GIPR雙特異性偶聯物1264減少雄性自發肥胖之食蟹獼猴之空腹總膽固醇(%自基線之變化)
圖17. GLP1R-GIPR雙特異性偶聯物1248和1257減輕雄性自發性肥胖食蟹獼猴之體重(%自基線之變化)
圖18. GLP1R-GIPR雙特異性偶聯物1248和1257減少雄性自發肥胖之食蟹獼猴之總能量攝入(%自基線之變化)
圖19. GLP1R-GIPR雙特異性偶聯物1248和1257減少雄性自發肥胖之食蟹獼猴之空腹胰島素(%自基線之變化)
圖20. GLP1R-GIPR雙特異性偶聯物1248和1257減少雄性自發肥胖之食蟹獼猴之空腹甘油三酯(%自基線之變化)
圖21. GLP1R-GIPR雙特異性偶聯物1248和1257減少雄性自發肥胖之食蟹獼猴之空腹膽固醇(%自基線之變化)
圖22. GIPR/GLP-1R雙特異性偶聯物之結合親和力

Claims (20)

  1. 一種組成物，其包含： a) 特異性結合至具有與人類GIPR之胺基酸序列具有至少90%胺基酸序列一致性之胺基酸序列之蛋白質的抗體或其功能片段，其中 該抗體或其功能片段在一或多個選自由以下組成之群的偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代： 相對於參考序列SEQ ID NO: 455，該抗體輕鏈之D70， 相對於參考序列SEQ ID NO: 612，該抗體重鏈之E276，及 相對於參考序列SEQ ID NO: 612，該抗體重鏈之T363；及 b) GLP-1受體促效劑，其中該GLP-1受體促效劑經由在該一或多個偶聯位點處取代之半胱胺酸殘基或非經典胺基酸殘基的側鏈偶聯至該抗體或其功能片段。
  2. 如請求項1之組成物，其中該人類GIPR具有包含選自由SEQ ID NO: 3141、SEQ ID NO: 3143及SEQ ID NO: 3145組成之群之序列的序列。
  3. 如請求項1或2之組成物，其中該抗體或其功能片段係單株抗體、重組抗體、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、多特異性抗體或其抗體片段。
  4. 如請求項3之組成物，其中該抗體片段係Fab片段、Fab'片段或F(ab')2片段。
  5. 如請求項3之組成物，其中該抗體或其功能片段係人類抗體。
  6. 如請求項3之組成物，其中該抗體或其功能片段係單株抗體。
  7. 如請求項3之組成物，其中該抗體或其功能片段係屬於IgG1、IgG2、IgG3或IgG4類型。
  8. 如請求項7之組成物，其中該抗體或其功能片段係屬於IgG1或IgG2類型。
  9. 如請求項3之組成物，其中該抗體或其功能片段抑制GIP與人類GIPR之細胞外部分的結合。
  10. 如請求項3之組成物，其中該抗體包含CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2及CDRH3，其中該CDRL1包含選自由SEQ ID NO: 629-785組成之群的序列；該CDRL2包含選自由SEQ ID NO: 786-942組成之群的序列；該CDRL3包含選自由SEQ ID NO: 943-1099組成之群的序列；該CDRH1包含選自由SEQ ID NO: 1100-1256組成之群的序列；該CDRH2包含選自由SEQ ID NO: 1257-1413組成之群的序列；且該CDRH3包含選自由SEQ ID NO: 1414-1570組成之群的序列，其中 該抗體或其功能片段在一或多個選自由以下組成之群的偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代： 相對於參考序列SEQ ID NO: 455，該抗體輕鏈之D70， 相對於參考序列SEQ ID NO: 612，該抗體重鏈之E276，及 相對於參考序列SEQ ID NO: 612，該抗體重鏈之T363。
  11. 如請求項3之組成物，其中該抗體包含CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2及CDRH3，其中CDRL1、CDRL2、CDRL3、CDRH1、CDRH2及CDRH3各自分別包含選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 629、SEQ ID NO: 786、SEQ ID NO: 943、SEQ ID NO: 1100、SEQ ID NO: 1257及SEQ ID NO: 1414；SEQ ID NO: 630、SEQ ID NO: 787、SEQ ID NO: 944、SEQ ID NO: 1101、SEQ ID NO: 1258及SEQ ID NO: 1415；SEQ ID NO: 631、SEQ ID NO: 788、SEQ ID NO: 945、SEQ ID NO: 1102、SEQ ID NO: 1259及SEQ ID NO: 1416；SEQ ID NO: 632、SEQ ID NO: 789、SEQ ID NO: 946、SEQ ID NO: 1103、SEQ ID NO: 1260及SEQ ID NO: 1417；SEQ ID NO: 633、SEQ ID NO: 790、SEQ ID NO: 947、SEQ ID NO: 1104、SEQ ID NO: 1261及SEQ ID NO: 1418；SEQ ID NO: 634、SEQ ID NO: 791、SEQ ID NO: 948、SEQ ID NO: 1105、SEQ ID NO: 1262及SEQ ID NO: 1419；SEQ ID NO: 635、SEQ ID NO: 792、SEQ ID NO: 949、SEQ ID NO: 1106、SEQ ID NO: 1263及SEQ ID NO: 1420；SEQ ID NO: 636、SEQ ID NO: 793、SEQ ID NO: 950、SEQ ID NO: 1107、SEQ ID NO: 1264及SEQ ID NO: 1421；SEQ ID NO: 637、SEQ ID NO: 794、SEQ ID NO: 951、SEQ ID NO: 1108、SEQ ID NO: 1265及SEQ ID NO: 1422；SEQ ID NO: 638、SEQ ID NO: 795、SEQ ID NO: 952、SEQ 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  12. 如請求項3之組成物，其中該抗體或其功能片段係抗體或其片段，且其中該抗體或其片段包括包含選自由SEQ ID NO: 1-157組成之群之序列的輕鏈可變區，及包含選自由SEQ ID NO: 158-314組成之群之序列的重鏈可變區，其中 該抗體或其功能片段在一或多個選自由以下組成之群的偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代： 相對於參考序列SEQ ID NO: 455，該抗體輕鏈之D70， 相對於參考序列SEQ ID NO: 612，該抗體重鏈之E276，及 相對於參考序列SEQ ID NO: 612，該抗體重鏈之T363。
  13. 如請求項3之組成物，其中該抗體或其功能片段係抗體或其片段，且其中該抗體或其片段包含選自由以下組成之群的輕鏈可變區與重鏈可變區之組合：包含SEQ ID NO: 1之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 158之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 2之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 159之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 3之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 160之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 4之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 161之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 5之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 162之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 6之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 163之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 7之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 164之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 8之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 165之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 9之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 166之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 10之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 167之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 11之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 168之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 12之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 169之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 13之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 170之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 14之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 171之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 15之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 172之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 16之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 173之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 17之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 174之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 18之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 175之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 19之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 176之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 20之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 177之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 21之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 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309之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 153之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 310之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 154之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 311之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 155之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 312之重鏈可變區；包含SEQ ID NO: 156之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 313之重鏈可變區；以及包含SEQ ID NO: 157之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 314之重鏈可變區，其中 該抗體或其功能片段在一或多個選自由以下組成之群的偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代： 相對於參考序列SEQ ID NO: 455，該抗體輕鏈之D70， 相對於參考序列SEQ ID NO: 612，該抗體重鏈之E276，及 相對於參考序列SEQ ID NO: 612，該抗體重鏈之T363。
  14. 如請求項3之組成物，其中該抗體或其功能片段係抗體，且其中該抗體包括包含選自由SEQ ID NO: 315-471組成之群之序列的輕鏈，及包含選自由SEQ ID NO: 472-628組成之群之序列的重鏈，其中 該抗體或其功能片段在一或多個選自由以下組成之群的偶聯位點處包含半胱胺酸或非經典胺基酸之胺基酸取代： 相對於參考序列SEQ ID NO: 455，該抗體輕鏈之D70， 相對於參考序列SEQ ID NO: 612，該抗體重鏈之E276，及 相對於參考序列SEQ ID NO: 612，該抗體重鏈之T363。
  15. 如請求項3之組成物，其中該抗體或其功能片段係抗體，且其中該抗體包含選自由以下組成之群的輕鏈與重鏈之組合：包含SEQ ID NO: 315之輕鏈及包含SEQ ID NO: 472之重鏈；包含SEQ ID NO: 316之輕鏈及包含SEQ ID NO: 473之重鏈；包含SEQ ID NO: 317之輕鏈及包含SEQ ID NO: 474之重鏈；包含SEQ ID NO: 318之輕鏈及包含SEQ ID NO: 475之重鏈；包含SEQ ID NO: 319之輕鏈及包含SEQ ID NO: 476之重鏈；包含SEQ ID NO: 320之輕鏈及包含SEQ ID NO: 477之重鏈；包含SEQ ID NO: 321之輕鏈及包含SEQ ID NO: 478之重鏈；包含SEQ ID NO: 322之輕鏈及包含SEQ ID NO: 479之重鏈；包含SEQ ID NO: 323之輕鏈及包含SEQ ID NO: 480之重鏈；包含SEQ ID NO: 324之輕鏈及包含SEQ ID NO: 481之重鏈；包含SEQ ID NO: 325之輕鏈及包含SEQ ID NO: 482之重鏈；包含SEQ ID NO: 326之輕鏈及包含SEQ ID NO: 483之重鏈；包含SEQ ID NO: 327之輕鏈及包含SEQ ID NO: 484之重鏈；包含SEQ ID NO: 328之輕鏈及包含SEQ ID NO: 485之重鏈；包含SEQ ID NO: 329之輕鏈及包含SEQ ID NO: 486之重鏈；包含SEQ ID NO: 330之輕鏈及包含SEQ ID NO: 487之重鏈；包含SEQ ID NO: 331之輕鏈及包含SEQ ID NO: 488之重鏈；包含SEQ ID NO: 332之輕鏈及包含SEQ ID NO: 489之重鏈；包含SEQ ID NO: 333之輕鏈及包含SEQ ID NO: 490之重鏈；包含SEQ ID NO: 334之輕鏈及包含SEQ ID NO: 491之重鏈；包含SEQ ID NO: 335之輕鏈及包含SEQ ID NO: 492之重鏈；包含SEQ ID NO: 336之輕鏈及包含SEQ ID NO: 493之重鏈；包含SEQ ID NO: 337之輕鏈及包含SEQ ID NO: 494之重鏈；包含SEQ ID NO: 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  16. 如請求1項或2之組成物，其中該GLP-1受體促效劑係GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)類似物。
  17. 如請求項1或2之組成物，其中該GLP-1受體促效劑係選自由以下組成之群：艾塞那肽(exenatide)、利拉魯肽(liraglutide)、利司那肽(lixisenatide)、阿必魯肽(albiglutide)、度拉糖肽(dulaglutide)、索馬魯肽(semaglutide)及他司魯肽(taspoglutide)。
  18. 如請求項16之組成物，其中該GLP-1受體促效劑係選自由以下組成之群：GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3184)；GLP-1(7-36)-NH2 (SEQ ID NO: 3185)；利拉魯肽；阿必魯肽；他司魯肽；度拉糖肽；索馬魯肽；LY2428757；艾塞丁-4 (Exendin-4 )(SEQ ID NO: 3163)；艾塞丁-3 (SEQ ID NO: 3164)；Leu14 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3165)；Leu14 ,Phe25 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3166)；Leu14 ,Ala19 ,Phe25 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3167)；艾塞丁-4(1-30) (SEQ ID NO: 3168)；Leu14 -艾塞丁-4(1-30) (SEQ ID NO: 3169)；Leu14 ,Phe25 -艾塞丁-4(1-30) (SEQ ID NO: 3170)；Leu14 ,Ala19 ,Phe25 -艾塞丁-4(1-30) (SEQ ID NO: 3171)；艾塞丁-4(1-28) (SEQ ID NO: 3172)；Leu14 -艾塞丁-4(1-28) (SEQ ID NO: 3173)；Leu14 ,Phe25 -艾塞丁-4(1-28) (SEQ ID NO: 3174)；Leu14 ,Ala19 ,Phe25 -艾塞丁-4 (1-28) (SEQ ID NO: 3175)；Leu14 ,Lys17,20 ,Ala19 ,Glu21 ,Phe25 ,Gln28 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3176)；Leu14 ,Lys17,20 ,Ala19 ,Glu21 ,Gln28 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3177)；辛基Gly14 ,Gln28 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3178)；Leu14 ,Gln28 ,辛基Gly34 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3179)；Phe4 ,Leu14 ,Gln28 ,Lys33 ,Glu34 , Ile35,36 ,Ser37 -艾塞丁-4(1-37)(SEQ ID NO: 3180)；Phe4 ,Leu14 ,Lys17,20 ,Ala19 ,Glu21 ,Gln28 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3181)；Val11 ,Ile13 ,Leu14 ,Ala16 ,Lys21 ,Phe25 -艾塞丁-4 (SEQ ID NO: 3182)；艾塞丁-4-Lys40 (SEQ ID NO: 3183)；GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3184)；GLP-1(7-36)-NH2 (SEQ ID NO: 3185)；Aib8,35 ,Arg26,34 ,Phe31 -GLP-1(7-36)) (SEQ ID NO: 3186)；HXaa8 EGTFTSDVSSYLEXaa22 Xaa23 AAKEFIXaa30 WLXaa33 Xaa34 GXaa36 Xaa37 ，其中Xaa8 係A、V或G；Xaa22 係G、K或E；Xaa23 係Q或K；Xaa30 係A或E；Xaa33 係V或K；Xaa34 係K、N或R；Xaa36 係R或G；且Xaa37 係G、H、P或不存在(SEQ ID NO: 3187)；Arg34 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3188)；Glu30 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3189)；Lys22 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3190)；Gly8,36 ,Glu22 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3191)；Val8 ,Glu22 ,Gly36 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3192)；Gly8,36 ,Glu22 ,Lys33 ,Asn34 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3193)；Val8 ,Glu22 ,Lys33 ,Asn34 ,Gly36 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3194)；Gly8,36 ,Glu22 ,Pro37 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3195)；Val8 ,Glu22 ,Gly36 ,Pro37 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3196)；Gly8,36 ,Glu22 ,Lys33 , Asn34 ,Pro37 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3197)；Val8 ,Glu22 ,Lys33 ,Asn34 ,Gly36 ,Pro37 -GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3198)；Gly8,36 ,Glu22 -GLP-1(7-36) (SEQ ID NO: 3199)；Val8 ,Glu22 ,Gly36 -GLP-1(7-36) (SEQ ID NO: 3200)；Val8 ,Glu22 ,Asn34 ,Gly36 -GLP-1(7-36) (SEQ ID NO: 3201)；Gly8,36 ,Glu22 ,Asn34 -GLP-1(7-36) (SEQ ID NO: 3202)；GLP-1類似物(SEQ ID NO: 3206)；GLP-1類似物(SEQ ID NO: 3207)；[Ne -(17-羧基十七烷酸)Lys20 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3208)；[Ne -(17-羧基十七烷醯基)Lys32 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3209)；[脫胺基-His1 ,Ne -(17-羧基十七烷醯基)Lys20 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3210)；[Arg12,27 ,NLe14 ,Ne -(17-羧基十七烷醯基)Lys32 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3211)；[Ne -(19-羧基十九烷醯基胺基)Lys20 ]-艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3212)；[Ne -(15-羧基十五烷醯基胺基)Lys20 ]-艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3213)；[Ne -(13-羧基十三烷醯基胺基)Lys20 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3214)；[Ne -(11-羧基十一烷醯基胺基)Lys20 ]艾塞丁-4-NH2 (SEQ ID NO: 3215)；艾塞丁-4-Lys40 (e-MPA)-NH2 (SEQ ID NO: 3216)；艾塞丁-4-Lys40 (e-AEEA-AEEA-MPA)-NH2 (SEQ ID NO: 3217)；艾塞丁-4-Lys40 (e-AEEA-MPA)-NH2 (SEQ ID NO: 3218)；艾塞丁-4-Lys40 (e-MPA)-白蛋白(SEQ ID NO: 3219)；艾塞丁-4-Lys40 (e-AEEA-AEEA-MPA)-白蛋白(SEQ ID NO: 3220)；艾塞丁-4-Lys40 (e-AEEA-MPA)-白蛋白(SEQ ID NO: 3221)；脫胺基-His7 ,Arg26 ,Lys34 (Nε -(γ-Glu(N-α-十六烷醯基)))-GLP-1(7-37) (以SEQ ID NO: 3222揭示之核心肽) (SEQ ID NO: 3222)；脫胺基-His7 ,Arg26 ,Lys34 (Nε -辛醯基)-GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3223)；Arg26,34 ,Lys38 (Nε -(ω-羧基十五烷醯基))-GLP-1(7-38) (SEQ ID NO: 3224)；Arg26,34 ,Lys36 (Nε -(γ-Glu(N-α-十六烷醯基)))-GLP-1(7-36) (以SEQ ID NO: 3225揭示之核心肽) (SEQ ID NO: 3225)；[Aib8 ;Lys37 ]GLP-1_(7-37) (SEQ ID NO: 3226)；[Aib8 , Lys26 ]GLP-1_(7-37) (SEQ ID NO: 3227)；[Aib8,22 ;Lys36 ]GLP-1(7-36)-醯胺(SEQ ID NO: 3228)；[Aib8,22 ;BLeu32 ;Lys36 ]GLP-1(7-36)-醯胺(SEQ ID NO: 3229)；[Aib8,22 ;Lys37 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3230)；[Aib8,22 ;BLeu32 ;Lys37 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3231)；[Aib8,22 ;aMeLeu32 ;Lys37 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3232)；[Aib8,22 ;AMEF12 ;Lys37 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3233)；[Aib8,22 ;BLeu16 ;Lys37 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3234)；[Aib8,22 ;Gly36 ;Lys37 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3235)；[Aib8,22 ;Lys33,37 ;Asn34 ;Gly36 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3236)；[Aib8,22 ;Lys33 ;Asn34 ;Gly36 ;Aeea37 ]GLP-1(7-37)-Aeea-Lys-醯胺(SEQ ID NO: 3237)；[Aib8,22 ;Gly36 ]GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3238)；環[E23 -K27 ][Aib8 ;Gly36 ]GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3239)；環[E22 -K26 ][Aib8 ;Gly36 ;Lys37 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3240)；[Aib8,22 ]-GLP-1(7-22)-Ex4(17-39) (SEQ ID NO: 3241)；[Gly8,36 ;Glu22 ]GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3242)；[Aib8 ;Glu22 ;Gly36 ]GLP-1(7-37)-醯胺(SEQ ID NO: 3243)；[Aib8 ;Tyr16 ;Glu22 ;Gly36 ]GLP-1_(7-37) (SEQ ID NO: 3244)；[Aib8 ;Lys18,33 ;Glu22,23,30 ;Val25 ;Arg26 ;Leu27 ;Asn34 ;Gly36 ]GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3245)；[Aib8 ;Lys18,33 ;Glu22,23,30 ;Leu27 ;Asn34 ;Gly36 ]GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3246)；[Aib8 ;Lys18 ;Glu22,23,30 ;Leu27 ;Gly36 ]GLP-1(7-37) (SEQ ID NO: 3247)；[Aib8,22 ;Ile9 ;Gly36 ]GLP-1_(7-36) (SEQ ID NO: 3248)；及[Aib8,22 ;Glu15 ;Gly36 ]GLP-1_(7-36) (SEQ ID NO: 3249)。
  19. 如請求項16之組成物，其中該GLP-1(7-37)或GLP-1(7-37)類似物在對應於該類似物之K26、K36、K37、K39或C末端胺基的殘基處與該抗體或其片段偶聯。
  20. 如請求項1之組成物，其中該GLP-1受體促效劑經由包含選自由以下組成之群之序列的肽連接子偶聯至該抗體或其片段：(Gly3 Ser)2 、(Gly4 Ser)2 、(Gly3 Ser)3 、(Gly4 Ser)3 、(Gly3 Ser)4 、(Gly4 Ser)4 、(Gly3 Ser)5 、(Gly4 Ser)5 、(Gly3 Ser)6 及(Gly4 Ser)6 。
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