TW201806970A - 嵌合抗原受體、及其利用 - Google Patents
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Abstract
提供有效於癌等之疾病之治療的新穎CAR及CAR-T細胞等。
選自由嵌合抗原受體A~F所成之群的嵌合抗原受體及表現其之CAR-T細胞。
Description
揭示關於嵌合抗原受體、嵌合抗原受體T細胞及抗體之技術。
伴隨免疫學之發展，對癌之各種免疫療法的開發有所進展。其中尤以將具有識別癌細胞與正常細胞並殺傷癌細胞之能力的T細胞移入患者之過繼免疫療法(adoptive immunotherapy)，作為可對應於癌之轉移/復發的副作用小之治療戰略而受到期待。但是，由癌患者上得到足夠發揮治療效果之質及量的T細胞係有困難，此為阻礙本治療法之臨床應用的原因之一。作為克服該問題之方法，近年來，大量配製可藉由嵌合抗原受體(CAR)基因之導入來攻擊癌細胞的T細胞，且將該表現CAR之T(CAR-T)細胞利用作為細胞醫藥之過繼免疫療法受到注目。
目前研究有進展的CAR-T細胞療法之標的疾病多為造血系癌，特別是對B細胞淋巴瘤以CD19為標的之CAR-T細胞療法，於臨床試驗中被報告顯示出於以往之過繼免疫療法中無法得到之顯著效果。但是，顯示CAR-T細胞療法對固態腫瘤之有效性的臨床研究報告尚少。此可認
為係因為所移入之CAR-T細胞，於造血系腫瘤中容易與癌細胞接觸，相對於此，欲與固態腫瘤之癌細胞直接接觸，必須浸潤於血管外，進而通過間質組織之故。血液癌之罹患率為全部癌患者之未達5%，固態腫瘤佔其他之癌種類的多數。因而，對固態腫瘤之CAR-T細胞療法的開發受到需求。
[非專利文獻1]Kanagawa, N. et al., Cancer Gene Ther., 20(1): 57-64 (2013)
[非專利文獻2]N Engl J Med. 2014 Oct 16; 371(16): 1507-17.
於如上述之現狀下，提供對癌等疾病之治療有效的新穎CAR及CAR-T細胞等係為課題之1。
為了解決上述課題而重複努力研究的結果，發現了具有特定CDR序列之CAR及CAR-T細胞。於該見解上重複改良與探討，而提供以下述為代表之發明。
項1.
一種嵌合抗原受體，其係選自由下述任一者之嵌合抗原受體A~F所成之群：嵌合抗原受體A，其包含含有：包含具有序列編號1之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號2之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、及包含具有序列編號3之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3之重鏈可變區域、以及/或含有：包含具有序列編號5之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號6之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號7之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3之輕鏈可變區域；嵌合抗原受體B，其包含含有：包含具有序列編號21之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號22之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、及包含具有序列編號23之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3
之重鏈可變區域、以及/或含有：包含具有序列編號25之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號26之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號27之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3之輕鏈可變區域；嵌合抗原受體C，其包含含有：包含具有序列編號41之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號42之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、及包含具有序列編號43之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3之重鏈可變區域、以及/或含有：包含具有序列編號45之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號46之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號47之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3之輕鏈可變區域；嵌合抗原受體D，其包含
含有：包含具有序列編號61之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號62之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、及包含具有序列編號63之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3之重鏈可變區域、以及/或含有：包含具有序列編號65之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號66之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號67之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3之輕鏈可變區域；嵌合抗原受體E，其包含含有：包含具有序列編號81之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號82之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、及包含具有序列編號83之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3之重鏈可變區域、以及/或含有：包含具有序列編號85之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、
包含具有序列編號86之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號87之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3之輕鏈可變區域；或嵌合抗原受體F，其包含含有：包含具有序列編號101之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號102之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、及包含具有序列編號103之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3之重鏈可變區域、以及/或含有：包含具有序列編號105之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號106之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號107之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3之輕鏈可變區域。
項2.
一種如項1之嵌合抗原受體A。
項3.
一種嵌合抗原受體T細胞或嵌合抗原受體NK細胞，其
具有如項1或2之嵌合抗原受體。
項4.
一種多核苷酸，其編碼如項1或2之嵌合抗原受體。
項5.
一種醫藥組成物，其含有如項3之嵌合抗原受體T細胞或嵌合抗原受體NK細胞。
項6.
如項5之醫藥組成物，其係癌之治療或預防用。
提供有效於癌(較佳為固態癌)之治療的手段。
[圖1]表示嵌合抗原受體A所具有的scFV之胺基酸序列。實線之下線表示之區域為輕鏈可變區域。虛線之下線表示之區域為重鏈可變區域。無下線之區域為連結子(linker)。粗體字之大字型表示之區域，如其下所示，為輕鏈及重鏈之CDR1~3。
[圖2]表示嵌合抗原受體B所具有的scFV之胺基酸序列。實線之下線表示之區域為輕鏈可變區域。虛線之下線表示之區域為重鏈可變區域。無下線之區域為連結子。粗體字之大字型表示之區域，如其下所示，為輕鏈及重鏈之CDR1~3。
[圖3]表示嵌合抗原受體C所具有的scFV之胺基酸序列。實線之下線表示之區域為輕鏈可變區域。虛線之下線表示之區域為重鏈可變區域。無下線之區域為連結子。粗體字之大字型表示之區域，如其下所示，為輕鏈及重鏈之CDR1~3。
[圖4]表示嵌合抗原受體D所具有的scFV之胺基酸序列。實線之下線表示之區域為輕鏈可變區域。虛線之下線表示之區域為重鏈可變區域。無下線之區域為連結子。粗體字之大字型表示之區域，如其下所示，為輕鏈及重鏈之CDR1~3。
[圖5]表示嵌合抗原受體E所具有的scFV之胺基酸序列。實線之下線表示之區域為輕鏈可變區域。虛線之下線表示之區域為重鏈可變區域。無下線之區域為連結子。粗體字之大字型表示之區域，如其下所示，為輕鏈及重鏈之CDR1~3。
[圖6]表示嵌合抗原受體F所具有的scFV之胺基酸序列。實線之下線表示之區域為輕鏈可變區域。虛線之下線表示之區域為重鏈可變區域。無下線之區域為連結子。粗體字之大字型表示之區域，如其下所示，為輕鏈及重鏈之CDR1~3。
[圖7]表示編碼嵌合抗原受體A所具有的scFV之胺基酸序列的鹼基序列。實線之下線表示之區域為輕鏈可變區域。虛線之下線表示之區域為重鏈可變區域。無下線之區域為連結子。粗體字之大字型表示之區域，如其下所示，
為輕鏈及重鏈之CDR1~3。
[圖8]表示編碼嵌合抗原受體B所具有的scFV之胺基酸序列的鹼基序列。實線之下線表示之區域為輕鏈可變區域。虛線之下線表示之區域為重鏈可變區域。無下線之區域為連結子。粗體字之大字型表示之區域，如其下所示，為輕鏈及重鏈之CDR1~3。
[圖9]表示編碼嵌合抗原受體C所具有的scFV之胺基酸序列的鹼基序列。實線之下線表示之區域為輕鏈可變區域。虛線之下線表示之區域為重鏈可變區域。無下線之區域為連結子。粗體字之大字型表示之區域，如其下所示，為輕鏈及重鏈之CDR1~3。
[圖10]表示編碼嵌合抗原受體D所具有的scFV之胺基酸序列的鹼基序列。實線之下線表示之區域為輕鏈可變區域。虛線之下線表示之區域為重鏈可變區域。無下線之區域為連結子。粗體字之大字型表示之區域，如其下所示，為輕鏈及重鏈之CDR1~3。
[圖11]表示編碼嵌合抗原受體E所具有的scFV之胺基酸序列的鹼基序列。實線之下線表示之區域為輕鏈可變區域。虛線之下線表示之區域為重鏈可變區域。無下線之區域為連結子。粗體字之大字型表示之區域，如其下所示，為輕鏈及重鏈之CDR1~3。
[圖12]表示編碼嵌合抗原受體F所具有的scFV之胺基酸序列的鹼基序列。實線之下線表示之區域為輕鏈可變區域。虛線之下線表示之區域為重鏈可變區域。無下線之區
域為連結子。粗體字之大字型表示之區域，如其下所示，為輕鏈及重鏈之CDR1~3。
[圖13]表示pMXs-IG/CAR[mV-(h28)-h28-h3Z]之構築步驟。
[圖14]表示pMXs-IG/CAR[hV-(h28)-h28-h3Z]之構築步驟。
[圖15]表示pMXs-IG/CAR[mV-(h8α)-h137-h3Z]之構築步驟。
[圖16]表示pMXs-IG/CAR[hV-(h8α)-h137-h3Z]之構築步驟。
[圖17]表示編碼各CAR之pMXs-IG載體的構造。
[圖18]表示測定CAR-T細胞所致之in-vivo抗腫瘤效果的結果。
1.嵌合抗原受體
嵌合抗原受體(CAR)，係指N末端側具有直列結合單株抗體可變區域之輕鏈(VL)與重鏈(VH)而得的單鏈抗體(scFv)、C末端側具有T細胞受體(TCR)ζ鏈之嵌合蛋白。表現CAR之T細胞，係稱為CAR-T細胞。
對嵌合抗原受體A~F所具有之scFV區域之胺基酸序列及編碼其之鹼基序列所賦予的序列編號係如下述表1所示。表內之數字意指序列編號。AA意指胺基酸序列。
V意指可變區域。scFV意指scFV區域全體。
嵌合抗原受體A，較佳具有選自由包含具有序列編號1之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號2之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、包含具有序列編號3之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3、包含具有序列編號5之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號6之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號7之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3所成之群的至少一種CDR，更佳為具有2種以上、更佳為具有3種以上、更佳為具有4種以上、更佳為具有5種以上、更佳為具有全部的CDR。適宜之一實施形態中，嵌合抗原受體A較佳具有：具有序列編號4之胺基酸序列的輕鏈可變區域及/或具有序列編號8之胺基酸序列的重鏈可變區域。適宜之一實施形態中，嵌合抗原受體A較佳具有：具有序列編號10表示之胺基酸序列的scFV構造。
一實施形態中，嵌合抗原受體A之輕鏈可變區
域之胺基酸序列，與序列編號4之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體A之重鏈可變區域之胺基酸序列，與序列編號8之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體A，與序列編號10之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體A所具有之連結子之胺基酸序列，只要維持作為嵌合抗原受體之功能，則為任意。
嵌合抗原受體B，較佳具有選自由包含具有序列編號21之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號22之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、包含具有序列編號23之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3、包含具有序列編號25之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號26之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號27之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3所成之群的至少一種CDR，更佳為具有2種以上、更佳為具有3種以上、更佳為具有4種以上、更佳為具有5種以上、更佳為具有全部的CDR。適宜之一實施形態中，嵌合抗原受體B較佳具有：具有序列編號24之胺基酸序列的輕鏈可變區域及/或具有序列編號28之胺基酸序列的重鏈可變區域。適宜之一實施形態中，嵌合抗原受體B較佳具有：具有序列編號30表示
之胺基酸序列的scFV構造。
一實施形態中，嵌合抗原受體B之輕鏈可變區域之胺基酸序列，與序列編號24之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體B之重鏈可變區域之胺基酸序列，與序列編號28之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體B，與序列編號30之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體B所具有之連結子之胺基酸序列，只要維持作為嵌合抗原受體之功能，則為任意。
嵌合抗原受體C，較佳具有選自由包含具有序列編號41之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號42之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、包含具有序列編號43之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3、包含具有序列編號45之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號46之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號47之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3所成之群的至少一種CDR，更佳為具有2種以上、更佳為具有3種以上、更佳為具有4種以上、更佳為具有5種以上、更佳為具有全部的CDR。適宜之一實施形態中，嵌合抗原受體C較佳具有：具有序列編號44之胺基酸序列的輕鏈可變區域及/或具有
序列編號48之胺基酸序列的重鏈可變區域。適宜之一實施形態中，嵌合抗原受體C較佳具有：具有序列編號50表示之胺基酸序列的scFV構造。
一實施形態中，嵌合抗原受體C之輕鏈可變區域之胺基酸序列，與序列編號44之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體C之重鏈可變區域之胺基酸序列，與序列編號48之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體C，與序列編號50之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體C所具有之連結子之胺基酸序列，只要維持作為嵌合抗原受體之功能，則為任意。
嵌合抗原受體D，較佳具有選自由包含具有序列編號61之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號62之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、包含具有序列編號63之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3、包含具有序列編號65之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號66之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號67之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3所成之群的至少一種CDR，更佳為具有2種以上、更佳為具有3種以上、更佳為具有4種以上、更佳為具有5種以上、更佳為具有全部的
CDR。適宜之一實施形態中，嵌合抗原受體D較佳具有：具有序列編號64之胺基酸序列的輕鏈可變區域及/或具有序列編號68之胺基酸序列的重鏈可變區域。適宜之一實施形態中，嵌合抗原受體D較佳具有：具有序列編號70表示之胺基酸序列的scFV構造。
一實施形態中，嵌合抗原受體D之輕鏈可變區域之胺基酸序列，與序列編號64之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體D之重鏈可變區域之胺基酸序列，與序列編號68之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體D，與序列編號70之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體D所具有之連結子之胺基酸序列，只要維持作為嵌合抗原受體之功能，則為任意。
嵌合抗原受體E，較佳具有選自由包含具有序列編號81之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號82之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、包含具有序列編號83之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3、包含具有序列編號85之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號86之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號87之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3所成之群的至少一種
CDR，更佳為具有2種以上、更佳為具有3種以上、更佳為具有4種以上、更佳為具有5種以上、更佳為具有全部的CDR。適宜之一實施形態中，嵌合抗原受體E較佳具有：具有序列編號84之胺基酸序列的輕鏈可變區域及/或具有序列編號88之胺基酸序列的重鏈可變區域。適宜之一實施形態中，嵌合抗原受體E較佳具有：具有序列編號90表示之胺基酸序列的scFV構造。
一實施形態中，嵌合抗原受體E之輕鏈可變區域之胺基酸序列，與序列編號84之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體E之重鏈可變區域之胺基酸序列，與序列編號88之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體E，與序列編號90之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體E所具有之連結子之胺基酸序列，只要維持作為嵌合抗原受體之功能，則為任意。
嵌合抗原受體F，較佳具有選自由包含具有序列編號101之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號102之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、包含具有序列編號103之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3、包含具有序列編號105之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號106之胺基酸序列
的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號107之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3所成之群的至少一種CDR，更佳為具有2種以上、更佳為具有3種以上、更佳為具有4種以上、更佳為具有5種以上、更佳為具有全部的CDR。適宜之一實施形態中，嵌合抗原受體F較佳具有：具有序列編號104之胺基酸序列的輕鏈可變區域及/或具有序列編號108之胺基酸序列的重鏈可變區域。適宜之一實施形態中，嵌合抗原受體F較佳具有：具有序列編號110表示之胺基酸序列的scFV構造。
一實施形態中，嵌合抗原受體F之輕鏈可變區域之胺基酸序列，與序列編號104之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體F之重鏈可變區域之胺基酸序列，與序列編號108之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體F，與序列編號110之胺基酸序列具有90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性。一實施形態中，嵌合抗原受體F所具有之連結子之胺基酸序列，只要維持作為嵌合抗原受體之功能，則為任意。
胺基酸之同一性，可使用市售或可透過網際網路利用的解析工具(例如FASTA、BLAST、PSI-BLAST、SSEARCH等之軟體)來計算。例如，於BLAST檢索一般所使用的主要初期條件，係如以下所示。亦即，於
Advanced BLAST 2.1中，程式使用blastp，Expect值設為10、Filter全部設為OFF，Matrix使用BLOSUM62，將Gap existence cost、Per residue gap cost及Lambda ratio分別設為11、1、0.85(預設值)，其他各種參數亦設定為預設值來進行檢索，藉此可算出胺基酸序列之同一性之值(%)。
嵌合抗原受體A~C所具有的scFV(序列編號10、30及50之胺基酸序列)，係各來自於會特異性辨識血管內皮增殖因子受體(VEGFR2)之單株抗體。VEGFR2於腫瘤新生血管有高表現。嵌合抗原受體D~F所具有的scFV(序列編號70、90及110之胺基酸序列)，係各來自會特異性辨識血管內皮細胞特異性受體(Robo4)之單株抗體。Robo4亦作為腫瘤血管特異性標記而為人所知。因而，嵌合抗原受體A~F可特異性辨識癌組織(腫瘤組織)。
嵌合抗原受體A~F，較佳為具有自其N末端起依序配置有scFv區域、間隔序列(spacer sequence)、膜貫通結構域、共刺激因子之細胞內結構域，以及TCR之細胞內結構域的構造。scFv區域與膜貫通結構域之間所設置的間隔序列之長度及構成其之胺基酸殘基的種類，只要不阻礙嵌合抗原受體之功能，則無限制。例如，間隔序列可設計為10個~25個左右之胺基酸殘基。
膜貫通結構域之種類，只要不阻礙嵌合抗原受體之功能，則無限制。例如，可使用於T細胞等表現之CD28、CD3ζ、CD4、CD8α等。此等之膜貫通結構域，只要不阻礙嵌合抗原受體之功能，則亦可適當導入變異。
共刺激因子之細胞內結構域，只要係來自T細胞等所具有的共刺激因子的細胞內結構域即可，並無特殊限定。例如可適當選擇選自由OX40、4-1BB、CD27、CD278及CD28等所成之群的1種以上來使用。此等之共刺激因子之細胞內結構域，只要不阻礙嵌合抗原受體之功能，則亦可適當導入變異。
TCR之細胞內結構域，例如可為來自亦稱為TCRζ鏈之CD3等的細胞內結構域。CD3，只要不阻礙嵌合抗原受體之功能，則亦可適當導入變異。對CD3導入變異時，較佳為以包含ITAM(immunoreceptor tyrosine-based activation motif)的方式進行。
利用特定scFV之嵌合抗原受體及製造表現其之CAR-T細胞的技術係為公知。例如，可利用非專利文獻1及2所揭示之方法來製造嵌合抗原受體A~F。
2.編碼嵌合抗原受體之多核苷酸
編碼嵌合抗原受體A之多核苷酸，只要係編碼上述之嵌合抗原受體A，則無特殊限制。一實施形態中，編碼嵌合抗原受體A之多核苷酸，較佳具有選自由編碼具有序列編號11之鹼基序列的輕鏈CDR1之區域、編碼具有序列編號12之鹼基序列的輕鏈CDR2之區域、編碼具有序列編號13之鹼基序列的輕鏈CDR3之區域、編碼具有序列編號15之鹼基序列的重鏈CDR1之區域、編碼具有序列編號16之鹼基序列的重鏈CDR2之區域、及編碼具有序列編號17之
鹼基序列的重鏈CDR3之區域所成之群的至少一種區域，更佳為具有2種以上、更佳為具有3種以上、更佳為具有4種以上、更佳為具有5種以上、更佳為具有全部之區域。適宜之一實施形態中，編碼嵌合抗原受體A之多核苷酸，較佳具有編碼具有序列編號14之鹼基序列的輕鏈可變區域之區域及/或編碼具有序列編號18之鹼基序列的重鏈可變區域之區域。適宜之一實施形態中，編碼嵌合抗原受體A之多核苷酸，較佳具有序列編號20之鹼基序列。
一實施形態中，編碼嵌合抗原受體A之多核苷酸，具有與序列編號11~20之鹼基序列具有80%以上、較佳為85%以上、較佳為90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性的鹼基序列。
編碼嵌合抗原受體B之多核苷酸，只要係編碼上述之嵌合抗原受體B，則無特殊限制。一實施形態中，編碼嵌合抗原受體B之多核苷酸，較佳具有選自由編碼具有序列編號31之鹼基序列的輕鏈CDR1之區域、編碼具有序列編號32之鹼基序列的輕鏈CDR2之區域、編碼具有序列編號33之鹼基序列的輕鏈CDR3之區域、編碼具有序列編號35之鹼基序列的重鏈CDR1之區域、編碼具有序列編號36之鹼基序列的重鏈CDR2之區域、及編碼具有序列編號37之鹼基序列的重鏈CDR3之區域所成之群的至少一種區域，更佳為具有2種以上、更佳為具有3種以上、更佳為具有4種以上、更佳為具有5種以上、更佳為具有全部之區域。適宜之一實施形態中，編碼嵌合抗原受體B之多核苷
酸，較佳具有編碼具有序列編號34之鹼基序列的輕鏈可變區域之區域及/或編碼具有序列編號38之鹼基序列的重鏈可變區域之區域。適宜之一實施形態中，編碼嵌合抗原受體B之多核苷酸，較佳具有序列編號40之鹼基序列。
一實施形態中，編碼嵌合抗原受體B之多核苷酸，具有與序列編號31~40之鹼基序列具有80%以上、較佳為85%以上、較佳為90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性的鹼基序列。
編碼嵌合抗原受體C之多核苷酸，只要係編碼上述之嵌合抗原受體C，則無特殊限制。一實施形態中，編碼嵌合抗原受體C之多核苷酸，較佳具有選自由編碼具有序列編號51之鹼基序列的輕鏈CDR1之區域、編碼具有序列編號52之鹼基序列的輕鏈CDR2之區域、編碼具有序列編號53之鹼基序列的輕鏈CDR3之區域、編碼具有序列編號55之鹼基序列的重鏈CDR1之區域、編碼具有序列編號56之鹼基序列的重鏈CDR2之區域、及編碼具有序列編號57之鹼基序列的重鏈CDR3之區域所成之群的至少一種區域，更佳為具有2種以上、更佳為具有3種以上、更佳為具有4種以上、更佳為具有5種以上、更佳為具有全部之區域。適宜之一實施形態中，編碼嵌合抗原受體C之多核苷酸，較佳具有編碼具有序列編號54之鹼基序列的輕鏈可變區域之區域及/或編碼具有序列編號58之鹼基序列的重鏈可變區域之區域。適宜之一實施形態中，編碼嵌合抗原受體C之多核苷酸，較佳具有序列編號60之鹼基序列。
一實施形態中，編碼嵌合抗原受體C之多核苷酸，具有與序列編號51~60之鹼基序列具有80%以上、較佳為85%以上、較佳為90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性的鹼基序列。
編碼嵌合抗原受體D之多核苷酸，只要係編碼上述之嵌合抗原受體D，則無特殊限制。一實施形態中，編碼嵌合抗原受體D之多核苷酸，較佳具有選自由編碼具有序列編號71之鹼基序列的輕鏈CDR1之區域、編碼具有序列編號72之鹼基序列的輕鏈CDR2之區域、編碼具有序列編號73之鹼基序列的輕鏈CDR3之區域、編碼具有序列編號75之鹼基序列的重鏈CDR1之區域、編碼具有序列編號76之鹼基序列的重鏈CDR2之區域、及編碼具有序列編號77之鹼基序列的重鏈CDR3之區域所成之群的至少一種區域，更佳為具有2種以上、更佳為具有3種以上、更佳為具有4種以上、更佳為具有5種以上、更佳為具有全部之區域。適宜之一實施形態中，編碼嵌合抗原受體D之多核苷酸，較佳具有編碼具有序列編號74之鹼基序列的輕鏈可變區域之區域及/或編碼具有序列編號78之鹼基序列的重鏈可變區域之區域。適宜之一實施形態中，編碼嵌合抗原受體D之多核苷酸，較佳具有序列編號80之鹼基序列。
一實施形態中，編碼嵌合抗原受體D之多核苷酸，具有與序列編號71~80之鹼基序列具有80%以上、較佳為85%以上、較佳為90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性的鹼基序列。
編碼嵌合抗原受體E之多核苷酸，只要係編碼上述之嵌合抗原受體E，則無特殊限制。一實施形態中，編碼嵌合抗原受體E之多核苷酸，較佳具有選自由編碼具有序列編號91之鹼基序列的輕鏈CDR1之區域、編碼具有序列編號92之鹼基序列的輕鏈CDR2之區域、編碼具有序列編號93之鹼基序列的輕鏈CDR3之區域、編碼具有序列編號95之鹼基序列的重鏈CDR1之區域、編碼具有序列編號96之鹼基序列的重鏈CDR2之區域、及編碼具有序列編號97之鹼基序列的重鏈CDR3之區域所成之群的至少一種區域，更佳為具有2種以上、更佳為具有3種以上、更佳為具有4種以上、更佳為具有5種以上、更佳為具有全部之區域。適宜之一實施形態中，編碼嵌合抗原受體E之多核苷酸，較佳具有編碼具有序列編號94之鹼基序列的輕鏈可變區域之區域及/或編碼具有序列編號98之鹼基序列的重鏈可變區域之區域。適宜之一實施形態中，編碼嵌合抗原受體E之多核苷酸，較佳具有序列編號100之鹼基序列。
一實施形態中，編碼嵌合抗原受體E之多核苷酸，具有與序列編號91~100之鹼基序列具有80%以上、較佳為85%以上、較佳為90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性的鹼基序列。
編碼嵌合抗原受體F之多核苷酸，只要係編碼上述之嵌合抗原受體F，則無特殊限制。一實施形態中，編碼嵌合抗原受體F之多核苷酸，較佳具有選自由編碼具有序列編號111之鹼基序列的輕鏈CDR1之區域、編碼具有
序列編號112之鹼基序列的輕鏈CDR2之區域、編碼具有序列編號113之鹼基序列的輕鏈CDR3之區域、編碼具有序列編號115之鹼基序列的重鏈CDR1之區域、編碼具有序列編號116之鹼基序列的重鏈CDR2之區域、及編碼具有序列編號117之鹼基序列的重鏈CDR3之區域所成之群的至少一種區域，更佳為具有2種以上、更佳為具有3種以上、更佳為具有4種以上、更佳為具有5種以上、更佳為具有全部之區域。適宜之一實施形態中，編碼嵌合抗原受體F之多核苷酸，較佳具有編碼具有序列編號114之鹼基序列的輕鏈可變區域之區域及/或編碼具有序列編號118之鹼基序列的重鏈可變區域之區域。適宜之一實施形態中，編碼嵌合抗原受體F之多核苷酸，較佳具有序列編號120之鹼基序列。
一實施形態中，編碼嵌合抗原受體F之多核苷酸，具有與序列編號111~120之鹼基序列具有80%以上、較佳為85%以上、較佳為90%以上、較佳為95%以上、較佳為98%以上、較佳為99%以上之同一性的鹼基序列。
鹼基序列之同一性，可使用市售或可透過電信電路(網際網路)利用之解析工具來算出。例如，具體而言，於Advanced BLAST 2.1中，程式使用blastn，且將各種參數設定為預設值來進行檢索，藉此可算出核苷酸序列之相同性的值(%)。多核苷酸，可依表現其之載體或細胞的種類來最佳化密碼子使用頻度。
多核苷酸之狀態並無特殊限定，例如可為經單離者、亦可為接入載體內者。載體之種類及用途並無特
殊限定。例如，載體可為質體載體或病毒載體(例如腺病毒或反轉錄病毒)。又，載體例如可為選殖用載體或表現用載體。表現用載體可列舉大腸菌或放線菌等之原核細胞用之載體，或酵母細胞、昆蟲細胞或哺乳類細胞等之真核細胞用之載體。多核苷酸亦可施以任意之修飾，例如，可於5’末端側適當附加編碼訊息胜肽之鹼基序列。
多核苷酸亦可為被攝入宿主細胞之狀態。宿主細胞含有多核苷酸之態樣並無特殊限定。例如，宿主細胞能夠以載體之形態具有多核苷酸，亦能夠以整合於宿主細胞內之基因體DNA的形態具有多核苷酸。宿主細胞之種類為任意，無特殊限制。例如，宿主細胞可為酵母細胞、昆蟲細胞及哺乳類細胞等之真核細胞，以及大腸菌及放線菌等之原核細胞。一實施形態中，宿主細胞較佳為真核細胞(例如哺乳類、人類)，例如較佳為T細胞或NK細胞等。含有多核苷酸之宿主細胞，例如可於任意之宿主細胞中導入該多核苷酸(例如以載體之形態)而得到。
宿主細胞可表現編碼嵌合抗原受體之多核苷酸、亦可為不表現的狀態。於宿主細胞內表現編碼嵌合抗原受體之多核苷酸時，較佳為構成嵌合抗原受體之scFv區域露出於細胞外側，且膜貫通結構域、共刺激因子，及TCR之細胞內結構域係存在於細胞膜或細胞內。
3.CAR-T細胞
提供表現上述嵌合抗原受體A~F之任一者的T細胞
(CAR-T細胞)。表現嵌合抗原受體之T細胞等係以scFv區域辨識抗原後，將其辨識訊息通過ζ鏈傳達至T細胞等之內部。scFv區域辨識其抗原決定位時，透過膜貫通結構域及共刺激因子於細胞內使誘發細胞傷害活性之訊息作動，且與其連動地，該細胞係對表現同樣抗原決定位之其他細胞或組織發揮攻擊或細胞傷害活性。
發揮如此功能之細胞為CTL的情況時，係稱為嵌合抗原受體T細胞(CAR-T細胞)。NK細胞等之具有發揮細胞傷害活性之可能性的細胞亦與嵌合抗原受體T細胞同樣地，藉由scFv區域與其抗原決定位結合，可發揮細胞傷害活性。因此，含有編碼嵌合抗原受體之多核苷酸的宿主細胞(特別是具有細胞傷害活性之宿主細胞)，係有用於作為醫藥組成物之有效成分。含有編碼嵌合抗原受體之多核苷酸的宿主細胞(例如CAR-T細胞)，可參考非專利文獻1及2等所記載之公知方法來製造。
如此之CAR-T細胞等，係特異性地辨識癌組織(腫瘤組織)，因此有用於腫瘤等之治療或預防。腫瘤之種類並無特殊限制，包含固態癌及血液癌。固態癌可列舉例如肺癌、大腸癌、卵巢癌、乳癌、腦腫瘤、胃癌、肝癌、舌癌、甲狀腺癌、腎臟癌、攝護腺癌、子宮癌、骨肉瘤、軟骨肉瘤、及橫紋肌肉瘤。
4.醫藥組成物
提供含有上述CAR-T細胞等之醫藥組成物及利用其之
疾病之治療或預防方法。醫藥組成物中之上述CAR-T細胞的含量，可考慮作為對象之疾病(例如固態癌)之種類、作為目的之治療效果、投與方法、治療期間、患者之年齡，及患者之體重等來適當設定。例如，以醫藥組成物全體為100重量份時，醫藥組成物中之抗體的含量，可為0.001重量份~10重量份左右。醫藥組成物中之細胞的含量，例如可為1細胞/mL~104細胞/mL左右。
醫藥組成物之投與形態，只要可得到所期望之效果，則無特殊限制，能夠以經口投與及非經口投與(例如靜脈注射、肌肉注射、皮下投與、直腸投與、經皮投與、局部投與)的任一投與路徑對包含人類之哺乳類投與。由於有效成分為細胞，故較佳之投與形態為非經口投與、更佳為靜脈注射。用於經口投與及非經口投與之劑型及其製造方法係為所屬技術領域中具有通常知識者眾所周知，可藉由與藥學上容許之醫藥載體等混合等，遵照一般方法來製造本發明之抗體或細胞。
用於非經口投與之劑型，可列舉注射用製劑(例如點滴注射劑、靜脈注射劑、肌肉注射劑、皮下注射劑、皮內注射劑)、外用劑(例如軟膏劑、泥罨劑、洗劑)、栓劑吸入劑、眼劑、眼軟膏劑、點鼻劑、點耳劑、脂質體劑等。例如，注射用製劑，可將抗體或細胞溶解或懸浮於注射用蒸餾水而調製，並依需要添加溶解輔助劑、緩衝劑、pH調整劑、等張化劑、無痛化劑、保存劑及安定化劑等。醫藥組成物亦可作為用時調製用之冷凍乾燥製劑。
醫藥組成物，亦可進一步含有對疾病之治療或預防有效之其他藥劑。又，醫藥組成物，亦可依需要摻合殺菌劑、消炎劑、細胞賦活劑、維生素類及胺基酸等之成分。
醫藥組成物之製劑化所用的醫藥載體，可使用該技術領域中通常使用之賦形劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑、著色劑、調味調臭劑，或依需要之安定化劑、乳化劑、吸收促進劑、界面活性劑、pH調整劑、防腐劑、抗氧化劑、增量劑、濕潤化劑、表面活性化劑、分散劑、緩衝劑、保存劑、溶解輔助劑、無痛化劑等。
使用醫藥組成物來治療或預防的疾病之種類，只要可達成其治療或預防，則無特殊限定。具體的對象疾病，例如可列舉腫瘤。腫瘤之種類並無特殊限制，包含固態癌及血液癌。固態癌可列舉例如肺癌、大腸癌、卵巢癌、乳癌、腦腫瘤、胃癌、肝癌、舌癌、甲狀腺癌、腎臟癌、攝護腺癌、子宮癌、骨肉瘤、軟骨肉瘤及橫紋肌肉瘤。
醫藥組成物之投與對象(被試驗體)，例如為罹患了上述疾病之動物或有罹患的可能性之動物。「有罹患的可能性」，例如可藉由後述診斷方法決定。動物係指例如哺乳類動物，較佳為人類。
醫藥組成物之投與量，例如可基於投與路徑、疾病之種類、症狀之程度、患者之年齡、性別、體重、疾病之嚴重度、藥物動態及毒物學的特徵等之藥理學
的見解、藥物傳輸系統利用之有無、以及是否作為與其他藥物之組合的一部分投與等各種因子，而由臨床醫師來決定。醫藥組成物之投與量，例如有效成分為抗體時，每一日可為1μg/kg(體重)~10g/kg(體重)左右。又，有效成分為細胞(VI)時，可為104細胞/kg(體重)~109細胞/kg(體重)左右。醫藥組成物之投與時程，亦可考量與其投與量相同之要因來決定。例如，能夠以上述之每1日投與量，於1日~1個月投與1次。
以下，藉由實施例以更詳細說明本發明，但本發明不限制於此等。
1.pMXs-IG/CAR[hV-(h28)-h28-h3Z]之構築
由Open Biosystems公司購入Human CD3zeta chain cDNA及Human CD28 cDNA，hCD3zeta STD及hCD28 HD-hCD28 TMD-hCD28 STD之基因，係使用表2所示之Primer組及KOD Plus(TOYOBO,Inc)，以hCD3zeta STD之5’末端與hCD28 HD-hCD28 TMD-hCD28 STD之3’末端具備相同鹼基序列的方式，製作各編碼該等之基因片段。接著，使用此等之基因片段與KOD Plus進行assembly PCR，製作使上游具有Sac II、下游具有Not I之限制酵素位點的hCD28 HD-hCD28 TMD-hCD28 STD與CD3zeta STD基因連結而得的基因片段(Insert 1)(圖13)。將具備anti-mVEGFR2
scFv且以platelet-derived growth factor receptor(PDGFR)為膜貫通結構域之pMXs-IG/anti-mVEGFR2 scFv，以限制酵素Sac II與Not I切斷，藉由使用了DNA Ligation kit Ver.2.1(TAKARA BIO,Inc)之接合反應接入Insert 1，以構築pMXs-IG/CAR[mV-(h28)-h28-h3Z]。
對於具有anti-hVEGFR2 scFv之基因序列(序列編號20)的pET15b-mouse anti-hVEGFR2-scFv(aV2-95h)，使用表2所示之Primer組及KOD Plus進行PCR，得到上游具備Sfi I及下游具備Sac II之限制酵素位點的基因片段(Insert 2)(圖14)。將pMXs-IG/CAR[mV-(h28)-h28-h3Z]以限制酵素Sfi I與Sac II切斷，藉由使用了DNA Ligation kit Ver.2.1之接合反應接入Insert 2，以構築pMXs-IG/CAR[hV-(h28)-h28-h3Z]。
2.pMXs-IG/CAR[hV-(h8α)-h137-h3Z]之構築
使用具有使hCD8αHD及TMD之基因與CD137 STD之基因連結而得的序列之質體pCR4-TOPO/hCD8αHD-TMD-hCD137-hCD3zeta與表2所示之Primer組及KOD Plus，進行PCR，製作上游具備Sac II及下游具備Not I之限制酵素位點，且編碼hCD8αHD及TMD與CD137 STD之基因片段(Insert 3)(圖15)。將pMXs-IG/CAR[mV-(h28)-h28-h3Z]以限制酵素Sac II與Not I切斷，藉由使用了DNA Ligation kit Ver.2.1之接合反應接入Insert 3，以構築pMXs-IG/CAR[mV-(h8α)-h137-h3Z]。
將pMXs-IG/CAR[hV-(h28)-h28-h3Z]以限制酵素EcoR I與Sac II切斷，得到具有anti-hVEGFR2 scFv之基因序列(序列編號20)的基因片段(Insert 4)(圖16)。將pMXs-IG/CAR[mV-(h8α)-h137-h3Z]以限制酵素EcoR I與Sac II切斷，藉由使用了DNA Ligation kit Ver.2.1之接合
反應接入Insert 4，以構築pMXs-IG/CAR[hV-(h8α)-h137-h3Z]。
由圖17所示之編碼CAR[mV-(m28)-m28-m3Z]、CAR[mV-(h28)-h28-h3Z]、CAR[hV-(h28)-h28-h3Z]、CAR[mV-(h8α)-h137-h3Z]、CAR[hV-(h8α)-h137-h3Z]之基因的質體，使用表2所示之引子及DNA聚合酶KOD plus(Toyobo,Inc)進行PCR，製作包含T7 promoter sequence及CAR基因之DNA模板，使用mMESSAGE mMACHINE(R)T7 ULTRA Transcription Kit(Ambion,Inc)，遵照一般方法純化mRNA，以Nuclease Free Water(Ambion,Inc)懸浮後，於-20℃保管。如此方式地得到CAR-mRNA。
3.CAR-mRNA之導入
將CD8+ T細胞以Opti-MEM(Life Technology,Inc)進行3次懸浮、離心、去除上清的操作，完全去除血清中所含有的蛋白等，使用Opti-MEM懸浮為5.7×106-5.7×107cells/mL。又，將含80pg-4μg/μL之CAR-mRNA的Nuclease Free Water 25μL與細胞懸浮液175μL混合，於正要進行電穿孔之前對4mm比色管(BEX,Inc)以氣泡不會進入的方式填充200μL。對比色管電極用腔室(CU500；Nepagene,Inc)***比色管，使用電穿孔器(CUY21Pro-Vitro；Nepagene,Inc)測定電阻，確認無異常後，進行EP，於3小時後、6小時後、12小時後、24小時後、36小時後、48小時後、72小
時後藉由FCM測定CAR表現強度，以台盼藍色素排除法測定細胞生存率。
4.in vivo抗腫瘤效果
將黑色素瘤B16BL6細胞3×105個移植於C57BL/6小鼠之腹部皮內，自腫瘤接種起7日後於腫瘤之長徑達到5.0~6.0mm左右之時間點，將表現CAR[mV-(m28)-m28-m3Z]之小鼠CAR-T細胞以5×106 cells/500μL/mouse進行單次投與、或隔2日進行計2次之追加投與，之後經時測定腫瘤之長徑及短徑，遵照以下所示之式算出腫瘤體積。又，製作無處置群與投與未導入CAR-mRNA之CD8+ T細胞之群，作為控制組。小鼠CAR-T細胞係懸浮於RPMI1640進行投與。腫瘤體積(mm3)=(腫瘤長徑；mm)×(腫瘤短徑；mm)2×0.5236
試驗結果示於圖18。於單次投與CAR-T細胞之荷癌小鼠中，相較於控制組群而言，顯著地抑制腫瘤之增殖，進一步進行2次之追加投與時，可得更強之抗腫瘤效果。因此，我們所製作之CAR-T細胞，暗示了以下可能性：雖CAR之表現為暫時性(transient)，但僅以單次投與即發揮有效性，若進而複數次投與時，可成為充分顯示效果的細胞醫藥。
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Claims (6)
- 一種選自由下述任一者之嵌合抗原受體A~F所成之群嵌合抗原受體：嵌合抗原受體A，其包含含有：包含具有序列編號1之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號2之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、及包含具有序列編號3之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3之重鏈可變區域、以及/或含有：包含具有序列編號5之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號6之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號7之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3之輕鏈可變區域；嵌合抗原受體B，其包含含有：包含具有序列編號21之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號22之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、及 包含具有序列編號23之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3之重鏈可變區域、以及/或含有：包含具有序列編號25之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號26之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號27之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3之輕鏈可變區域；嵌合抗原受體C，其包含含有：包含具有序列編號41之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號42之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、及包含具有序列編號43之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3之重鏈可變區域、以及/或含有：包含具有序列編號45之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號46之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號47之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3 之輕鏈可變區域；嵌合抗原受體D，其包含含有：包含具有序列編號61之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號62之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、及包含具有序列編號63之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3之重鏈可變區域、以及/或含有：包含具有序列編號65之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號66之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號67之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3之輕鏈可變區域；嵌合抗原受體E，其包含含有：包含具有序列編號81之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號82之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、及包含具有序列編號83之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3之重鏈可變區域、以及/或 含有：包含具有序列編號85之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號86之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號87之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3之輕鏈可變區域；或嵌合抗原受體F，其包含含有：包含具有序列編號101之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR1、包含具有序列編號102之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR2、及包含具有序列編號103之胺基酸序列的胺基酸序列之輕鏈CDR3之重鏈可變區域、以及/或含有：包含具有序列編號105之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR1、包含具有序列編號106之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR2、及包含具有序列編號107之胺基酸序列的胺基酸序列之重鏈CDR3之輕鏈可變區域。
- 一種如請求項1中記載之嵌合抗原受體A。
- 一種嵌合抗原受體T細胞或嵌合抗原受體NK細胞，其具有如請求項1或2之嵌合抗原受體。
- 一種多核苷酸，其編碼如請求項1或2之嵌合抗原受體。
- 一種醫藥組成物，其含有如請求項3之嵌合抗原受體T細胞或嵌合抗原受體NK細胞。
- 如請求項5之醫藥組成物，其係癌之治療或預防用。
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