TW201618676A - 用於作爲動物之食物補充品之用途的組成物及組合 - Google Patents

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大衛 卡拉布塔
詹姆士D 恰波門
提恩 闊司地根
尼爾E 福斯堡
溫德尼爾 克納漢斯
德瑞克 麥可林
史提芬B 普恩提尼
安吉拉D 羅森
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歐姆尼金研究公司
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Abstract

本文中揭示可以與動物食物組合使用之組成物及組合的具體實例。在一些具體實例中,該等組合包含可以為諸如家養動物或伴侶動物及/或餵養動物之動物提供健康益處的各種組成物。該等組合可以用於幫助維持及/或促進動物健康及幸福,且在一些具體實例中,可以幫助促進增加動物壽命。

Description

用於作為動物之食物補充品之用途的組成物及組合 相關申請案之交叉引用
本申請案主張2014年10月1日申請之美國臨時申請案第62/058,461號之權益,其以全文引用之方式併入本文中。
本發明係關於用於單獨或與飼料原料或伴侶動物食物組合作為補充品之用途的組成物及該等組成物之組合。本文中亦揭示使用該等組合來幫助增加動物壽命且幫助支持健康的動物免疫系統之方法。
本文中揭示組合之具體實例,其包含:包含礦物黏土及二氧化矽、β-葡聚糖或其組合之主要組成物;以及絲蘭、皂皮樹屬(quillaja)、直接餵飼微生物、維生素D物質或植物萃取物中之任何一或多者。在一些具體實例中,該主要組成物可以進一步包含甘露聚糖。在其他具體實例中,該主要組成物可以進一步包含內葡聚糖水解酶。例示性主要組成物可以包含1-40wt%二氧化矽、1-25wt%葡聚糖及甘露聚糖以及30-92wt%礦物黏土。在一些具體實例中,該組合可以包含絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、 維生素D物質及植物萃取物中之每一者。在其他具體實例中,該組合可以包含皂皮樹(Quillaja saponaria)、西地格絲蘭(Yucca schidigera)、凝結桿菌(B.coagulans)、25-羥基維生素D3、多酚或其任何組合,且在其他具體實例中,該組合可以包含皂皮樹、西地格絲蘭、凝結桿菌及25-羥基維生素D3。本文中揭示之組合具體實例可以按重量計以1,000:1至1:1,000之比率包含主要組成物以及絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維生素D物質或植物萃取物中之任何一或多者。在例示性具體實例中,揭示一種用於促進增加動物壽命或促進健康的免疫系統之組合,且該組合可以包含:包含35-92%礦物黏土及1-40%二氧化矽、1-30% β-葡聚糖或其組合之主要組成物;及絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維生素D物質或植物萃取物中之任何一或多者,其量按組合之總乾重計介於5ppm至2,000ppm範圍內。此組合引起動物中之免疫系統生物標誌物或炎症生物標誌物之含量增加或減少。在一些具體實例中,該增加或減少介於至少5%至600%範圍內。
一些具體實例可以關於包含以下各者之組合:金屬碳酸鹽、巨藻(kelp)、菸鹼酸補充品、維生素B-12補充品、生物素、d-泛酸鈣、氯化膽鹼、單硝酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、二甲基嘧啶醇亞硫酸氫甲萘醌、核黃素-5-磷酸鹽、葉酸、大豆油、鋁矽酸鈣、稻殼、礦物油或其任何組合。在一些具體實例中,該主要組成物可以調配為粉末、顆粒、集結粒、溶液或懸浮液。在一些具體實例中,該組合調配為粉末、顆粒、集結粒、溶液或懸浮液。
該組合之特定揭示之具體實例可以進一步包含飼料原料或伴侶動物食物。例示性組合可以包含:包含β-葡聚糖、二氧化矽、礦物黏 土及β-葡聚糖之主要組成物;皂皮樹、西地格絲蘭、凝結桿菌、25-羥基維生素D3或其組合中之任何一或多者;以及飼料原料或伴侶動物食物。
本文中亦揭示向動物投予以下各者之方法:(a)包含礦物黏土及二氧化矽、β-葡聚糖或其組合之主要組成物;及(b)絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維生素D物質或植物萃取物中之任何一或多者。
其它方法具體實例係關於選擇幼齡或老齡動物;向該動物投予組合,該組合包含:包含礦物黏土及二氧化矽、β-葡聚糖或其組合之主要組成物,以及絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維生素D物質A植物萃取物中之任何一或多者;其中向該動物投予該組合有助於促進該動物之壽命相對於未投予該組成物之動物增加。該等具體實例可以包含使用進一步包含甘露聚糖、內葡聚糖水解酶或兩者之主要組成物。在一些具體實例中,該方法可以進一步包含向動物投予伴侶動物飼料或飼料原料。飼料原料可以為飼料日糧、礦物質補充品、蛋白質補充品、預混物、糖蜜、液體飼料、水或其任何組合。在一些具體實例中,可以在投予之前,將飼料原料或伴侶動物食物與該組合混合。在一些具體實例中,該動物可以為伴侶動物,諸如犬科動物或貓科動物。在其他具體實例中,該動物可以為餵養動物,諸如家禽或牛。在其他具體實例中,該動物可以為豬、魚、爬蟲、甲殼動物、兔、綿羊、山羊、鹿、野牛、水牛、羊駝、馬、驢或駱馬。
在一些具體實例中,向動物投予該組合改善在該動物中所觀察到或量測到之至少一種有害症狀或體征。在另一具體實例中,向動物投予該組合延遲在該動物中所觀察到或量測到之該至少一種有害症狀或體征之發作。例示性有害症狀或體征可以包括與以下各者相關之任何症狀或體 征:皮炎、特異反應、跳蚤過敏性皮炎、食物過敏性皮炎、接觸性皮炎、青少年皮炎、骨關節炎、結膜炎/眼色素層炎、子宮積膿、***炎、睪丸炎、膀胱炎、腎病、尋常性天疱瘡/落葉性天疱瘡、狼瘡、自體免疫性溶血性貧血、類風濕性關節炎、艾迪森氏病(Addison's Disease)、庫欣氏病(Cushing's disease)、甲狀腺高能症及甲狀腺低能症、糖尿病、尿崩症、炎症性腸病、出血性胃腸炎、耳炎、犬瘟熱病毒、小病毒、冠狀病毒、疱疹病毒、流感病毒、肝炎病毒、沙門氏桿菌病(salmonellosis)、支氣管敗血性博德氏桿菌(bordetella bronchiseptica)、萊姆病(Lyme's disease)、鉤端螺旋體病、布氏桿菌病(brucellosis)、芽生菌病、麴菌病、隱球菌、球黴菌病、小芽孢菌/髮癬菌、組織漿菌病、球蟲病、梨形鞭毛蟲病、鉤蟲、蛔蟲、鞭蟲、絛蟲、疥癬、腦膜炎-動脈炎/腦炎、後天性重症肌無力、淋巴肉瘤、骨肉瘤、血管肉瘤、肥胖細胞瘤、鱗狀細胞癌、黑素瘤、白血病、***腫瘤、肺癌、睪丸癌、移行細胞癌、腦腫瘤、蹄葉炎、跌跛、心臟病、癲癇、肝炎、胰炎、齒齦炎及其組合。在一些具體實例中,該至少一種有害症狀或體征包含異常免疫系統生物標誌物或異常炎症生物標誌物。
本發明之前述及其他目的及特徵將自以下參見附圖描述之實施方式變得更顯而易見。
【詳述】
I.術語
提供以下術語及縮寫之解釋以便較佳地描述本發明及指導一般技術者實踐本發明。除非上下文另外明確指明,否則如本文中所使用,「包含(comprising)」意謂「包括(including)」且單數形式「一(a)」或「一(an)」或「該(the)」包括複數個提及物。除非上下文另外明確指明,否則術語「或(or)」係指所述替代要素中之單個要素或兩個或兩個以上要素 之組合。
除非另有解釋,否則本文中所使用之所有技術及科學術語均具有與本發明所屬領域之一般技術者通常所理解相同之含義。儘管可以使用類似於或等效於其中所描述之方法及材料的方法及材料來實踐或測試本發明,但下文描述適合方法及材料。該等材料、方法及實施例僅為說明性的且不意欲為限制性的。本發明之其他特徵自以下實施方式及申請專利範圍顯而易知。
除非另外指明,否則本說明書或申請專利範圍中所使用之所有表示組分數量、分子量、百分比、溫度、時間等之數值均應理解為由術語「約(about)」修飾。因此,除非另外含蓄地或明確地指明,否則所述數值參數為可以視所尋求之所要特性及/或在標準測試條件/方法下之偵測極限而定的近似值。當直接且明確地區分具體實例與所述先前技術時,除非用詞語「約」敍述,否則具體實例數值為非近似值。此外,本文中所述之替代方案並非全為等效物。
抗微生物劑:殺死微生物及/或抑制其生長之藥劑。如本文中所使用,抗微生物劑包括抗生素、抗真菌劑、抗病毒劑及抗寄生蟲劑(包括抗球蟲劑)或其組合。
投藥:藉由任何途徑向動物提供本文中所揭示之組合、組成物或組分。在一些具體實例中,投藥可以指經口投藥。
動物:此術語可以包括(但不限於)伴侶動物、實用動物及餵養動物。在一些具體實例中,動物可以為作為寵物飼養之伴侶動物物種或為供人類食用而飼養之動物物種。在本文中提供例示性動物。
黏合劑或黏結劑:用於將其他材料連在一起或聚在一起以形成黏結單元之材料或物質。
伴侶動物:作為伴侶或寵物飼養之家養動物。
伴侶動物食物:伴侶動物或非餵養動物或實用動物之其他動物的食物來源。
黏合劑或黏結劑:用於將其他材料連在一起或聚在一起以形成黏結單元之材料或物質。
共同投藥:向個體同時、同期或按任何次序依序投予兩種或兩種以上組合、組成物或組分以得到其中個體體驗來自各組分之作用(例如,有利及/或有害作用)的重疊時間段。在一些具體實例中,該等組分中之一或多者可以為有利藥劑或治療劑。可以將各組分組合成單一組成物或劑型,或其可以按單獨組分形式同時或按任何次序依序投予。當依序投予時,在有效時間段內投予兩種或兩種以上組分以得到其中個體體驗來自各組分之作用的重疊時間段。
組合:組合包括兩種或兩種以上組成物或組分,其投予方式使得第一組成物或組分之有效時間段與第二及後續組成物或組分之有效時間段重疊。組合可以為包含該等組分之組成物、包含一或多種組分及另一種(或其他)單獨組分之組成物,或其可以為兩種或兩種以上實質上同時或按任何次序依序投予之個別組分。在包含四種組分之組合的例示性具體實例中,所投予之第一組分之有效時間段可以與第二、第三及第四組分之有效時間段重疊,但第二、第三及第四組分之各有效時間段可以或可以不彼此重疊。在包含四種組分之組合的另一例示性具體實例中,所投予之第 一組分之有效時間段與第二組分之有效時間段重疊,但不與第三或第四組分之有效時間段重疊;第二組分之有效時間段與第一及第三組分之有效時間段重疊;且第四組分之有效時間段僅與第三組分之有效時間段重疊。
直接餵飼微生物:可以含有諸如細菌及/或酵母之活(可存活的)微生物之產品,其可以藉由改善動物之腸道微生物平衡而有利地影響動物。
有效量:指定組合、組成物或組成性組分之足以在動物中達成所要作用之數量或濃度。治療有效量可以至少部分地視待治療動物之物種、該動物之大小及/或所要作用之性質而定。
賦形劑或載劑:可以用作如本文中所揭示之組合、組成物或組分中之(或與該組合、組成物或組分一起使用)添加劑的生理學上惰性物質。如本文中所使用,賦形劑或載劑可以併入組合、組成物或組分之粒子內或其可以按物理方式與組合、組成物或組分之粒子混合。賦形劑或載劑可以用於例如稀釋活性劑及/或修飾組合或組成物之特性。賦形劑及載劑之實例包括(但不限於)碳酸鈣、聚乙烯吡咯啶酮(polyvinylpyrrolidone;PVP)、生育酚聚乙二醇1000丁二酸酯(亦稱為維生素E TPGS或TPGS)、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(dipalmitoyl phosphatidyl choline;DPPC)、海藻糖、碳酸氫鈉、甘胺酸、檸檬酸鈉及乳糖。
餵養動物:為供人類食用而飼養之動物。
飼料原料:實用動物或餵養動物之食物來源。在一些具體實例中,術語「飼料原料(feedstuff)」包括(但不限於)固體及液體動物飼料(例如,飼料日糧)、補充品(例如,礦物質補充品)、水及飼料添加劑載 劑(例如,糖蜜)。
甘露聚糖:一類多醣,包括甘露糖。甘露聚糖家族包括純甘露聚糖(亦即,聚合物主鏈由甘露糖單體組成)、葡甘露聚糖(聚合物主鏈包含甘露糖及葡萄糖)及半乳甘露聚糖(其中單個半乳糖殘基鍵聯至聚合物主鏈之甘露聚糖或葡甘露聚糖)。甘露聚糖存在於一些植物物種及酵母之細胞壁中。
礦物黏土:在一些具體實例中,術語「礦物黏土(mineral clay)」可以指水合矽酸鋁。在一些具體實例中,礦物黏土可以包括少量雜質,諸如鉀、鈉、鈣、鎂及/或鐵。在其他具體實例中,礦物黏土可以具有雙層薄片結構,包括四面體矽酸鹽薄片及八面體氫氧化物薄片;或三層結構,在兩個矽酸鹽薄片之間包括氫氧化物薄片。
植物萃取物:經由萃取製程自植物材料回收之極性及非極性物質,該萃取製程可以包括大量極性不同的溶劑。出於該等目的使用之溶劑可以包括(但不限於)水、氯仿、己烷、乙酸乙酯及乙醇。在一些具體實例中,植物萃取物充當有益於動物健康及幸福之生物活性飼料/食物配料。
多酚:以存在複數個酚結構單元為特徵之結構類天然、合成或半合成有機化學試劑。
皂素:可以天然存在或以合成方式製備之一類化合物。在一些具體實例中,就結構而言,皂素可以依據其組成劃分為兩親媒性糖苷。在某些具體實例中,皂素可以包含一或多個親水性糖苷部分以及一親脂性三萜衍生物。
治療劑:能夠提供治療作用之藥劑,例如預防病症、抑制病 症,諸如藉由阻滯病症或其臨床症狀之發展,或藉由引起病症或其臨床症狀之消退而減輕病症。
實用動物:為製造供人類使用或食用之產品而飼養之動物。
II.組成物及組合
本文中揭示可以用於餵養動物之組成物及組合之具體實例,該等動物諸如伴侶動物、實用動物或餵養動物。在一些具體實例中,該等組成物及組合可以用於餵養水生動物,包括(但不限於)魚、甲殼動物及軟體動物。本文中所揭示之組合具體實例可以包含兩種或兩種以上本文中所揭示之組成物、基本上由其組成(例如,組成物或組合含有不超過5%、不超過4%、不超過3%、不超過2%、不超過1%或不超過0.5%之其他試劑,諸如0.01%至5%、0.1%至5%、1%至5%或0.1%至1%)或由其組成。在一些具體實例中,組合或組成物可以基本上由任何不實質上影響該組合之組分組成,諸如黴菌毒素、螯合劑、病原性細菌、致病性真菌或致病性病毒。在例示性具體實例中,該等組合可以添加至諸如貓科動物及犬科動物之伴侶動物所食用之食物中。在其他例示性具體實例中,該等組合可以添加至諸如家畜之餵養動物或實用動物所食用之飼料原料中。在其他具體實例中,該組合可以按在飼料原料或伴侶動物食物之前或之後直接喂給動物之補充品形式提供。然而,本發明亦涵蓋使用所揭示之組合作為飼料補充品或甚至作為直接食物來源提供給例如豬、家禽(例如,雞、火雞、鵝、鴨、考尼什雛雞(cornish game hen)、鵪鶉、野雞、珠雞、鴕鳥、鴯鶓、天鵝或鴿子)、魚(例如,鮭魚、鱒魚、吳郭魚及類似物)、爬行動物、甲殼動物、兔、綿羊、山羊、奶牛、鹿、野牛、水牛、羊駝、馬、驢或駱馬。
本文中揭示各種組成物具體實例。在一些具體實例中,本文中所揭示之組合具體實例中所用之組成物可以包含以下各者中之任何一或多者、基本上由其組成或由其組成:β-葡聚糖(例如,β-1,3(4)葡聚糖)、二氧化矽、礦物黏土、甘露聚糖或內葡聚糖水解酶(例如,β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶)。在其他具體實例中,組成物可以包含絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物或其組合、基本上由其組成或由其組成。在一些具體實例中,組成物可以包含一或多種維生素D物質、基本上由其組成或由其組成。在其他具體實例中,組成物可以包含植物萃取物、基本上由其組成或由其組成。在一些具體實例中,本文中所揭示之組合可以包含兩種或兩種以上本文中所揭示之組分及/或組成物、基本上由其組成或由其組成。在一些具體實例中,本文中所揭示之組合亦可以包含動物食物,諸如飼料原料或伴侶動物食物。在例示性具體實例中,該等組合可以包含以下各者、基本上由其組成或由其組成:β-葡聚糖、二氧化矽、礦物黏土、甘露聚糖、β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶、絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、植物萃取物、維他命D化合物或其任何組合。本文中所揭示之組成性組分可以自本文中所揭示之各種來源獲得或由其製成。例示性組成性組分較詳細地論述於下文中。
本文中所揭示之一些組成物可以包含自包括(但不限於)砂、石英、矽藻土及合成二氧化矽之來源獲得的二氧化矽。在一些具體實例中,二氧化矽可以為在結構上不同於天然存在之二氧化矽的合成二氧化矽。在某些具體實例中,甘露聚糖可以包含葡甘露聚醣、基本上由其組成或由其組成。在一些具體實例中,β-葡聚糖可以包括可溶性及/或不溶性β-葡聚糖,諸如(1,3/1,4)β-葡聚糖(β-1,3(4)葡聚糖)、(1,3/1,6)β-葡聚糖或其 組合。
可以獲得植物萃取物之適合植物材料包括(但不限於)蘋果、黑莓、黑果梨、黑醋栗、黑接骨木果、藍莓、櫻桃、蔓越橘、葡萄、綠茶、蛇麻子、洋蔥、皂皮樹屬、李子、石榴、覆盆子、草莓及絲蘭。
可以用於所揭示之組成物及組合中之絲蘭之實例包括(但不限於)金棒蘭(Yucca aloifolia)、細葉蘭(Yucca angustissima)、阿肯色州絲蘭(Yucca arkansana)、香蕉絲蘭(Yucca baccata)、納瓦霍絲蘭(Yucca baileyi)、布來利弗利雅絲蘭(Yucca brevifolia)、野生絲蘭(Yucca campestris)、好望角絲蘭(Yucca capensis)、稻草人絲蘭(Yucca carnerosana)、垂穗絲蘭(Yucca cernua)、科阿韋拉絲蘭(Yucca coahuilensis)、巴克爾絲蘭(Yucca constricta)、多毛葉絲蘭(Yucca decipiens)、垂枝絲蘭(Yucca declinata)、戴氏絲蘭(Yucca desmetiana)、皂皮樹絲蘭(Yucca elata)、安氏絲蘭(Yucca endlichiana)、法尼亞絲蘭(Yucca faxoniana)、線絲蘭(Yucca filamentosa)、樹絲蘭(Yucca filifera)、柔軟絲蘭(Yucca flaccida)、巨大絲蘭(Yucca gigantean)、小絲蘭(Yucca glauca)、鳳尾絲蘭(Yucca gloriosa)、大花絲蘭(Yucca grandiflora)、哈里曼尼亞絲蘭(Yucca harrimaniae)、中間絲蘭(Yucca intermedia)、加利森斯絲蘭(Yucca jaliscensis)、拉肯絲蘭(Yucca lacandonica)、條葉絲蘭(Yucca linearifolia)、發光絲蘭(Yucca luminosa)、馬德絲蘭(Yucca madrensis)、米斯泰克絲蘭(Yucca mixtecana)、內科皮亞絲蘭(Yucca necopina)、新墨西哥絲蘭(Yucca neomexicana)、淺色絲蘭(Yucca pallida)、培麗絲蘭(Yucca periculosa)、波托西絲蘭(Yucca potosina)、克雷塔羅絲蘭(Yucca queretaroensis)、勒韋絲蘭(Yucca reverchonii)、鳥喙絲蘭(Yucca rostrata)、 變葉絲蘭(Yucca rupicola)、西地格絲蘭(Yucca schidigera)、硬枝絲蘭(Yucca schottii)、貧育絲蘭(Yucca sterilis)、薄葉絲蘭(Yucca tenuistyla)、湯普森絲蘭(Yucca thompsoniana)、特萊氏絲蘭(Yucca treculeana)、猶他絲蘭(Yucca utahensis)或瓦力達絲蘭(Yucca valida)。在所揭示之某些具體實例中,絲蘭組分為西地格絲蘭。
可以用於所揭示之組合中之皂皮樹屬之實例包括(但不限於)巴西皂皮樹(Quillaja brasiliensis)、披針葉皂皮樹(Quillaja lanceolata)、狹葉皂皮樹(Quillaja lancifolia)、莫氏皂皮樹(Quillaja molinae)、伏葉皂皮樹(Quillaja petiolaris)、帕皮皂皮樹(Quillaja poeppigii)、皂皮樹(Quillaja sapouaria)、塞勒萬皂皮樹(Quillaja sellowiana)或絲麥格皂皮樹(Quillaja smegmadermos)。在所揭示之特定具體實例中,皂皮樹屬為皂皮樹(Quillaja saponaria)。
直接餵飼微生物之實例可以包括桿菌屬物種(Bacillus species),諸如嗜鹼桿菌(B.alcalophilus)、蜂疫桿菌(B.alvei)、噬胺桿菌(B.aminovorans)、解澱粉桿菌(B.amyloliquefaciens)、解硫胺素桿菌(B.aneurinolyucus)、炭疽桿菌(B.anthracis)、海洋桿菌(B.aquaemaris)、萎縮桿菌(B.atrophaeus)、嗜硼桿菌(B.boroniphilus)、短桿菌(B.brevis)、熱容桿菌(B.caldolyucus)、中孢桿菌(B.centrosporus)、蠟狀桿菌(B.cereus)、環狀桿菌(B.circulans)、凝結桿菌(B.coagulans)、堅強桿菌(B.firmus)、黃熱桿菌(B.flavothermus)、紡錘桿菌(B.fusiformis)、加利桿菌(B.galliciensis)、球桿菌(B.globigii)、深層桿菌(B.infernus)、幼蟲桿菌(B.larvae)、側孢桿菌(B.laterosporus)、遲緩桿菌(B.lentus)、地衣桿菌(B. licheniformis)、巨大桿菌(B.megaterium)、馬鈴薯桿菌(B.mesentericus)、膠質桿菌(B.mucilaginosus)、蕈狀桿菌(B.mycoides)、納豆桿菌(B.natto)、泛酸桿菌(B.pantothenticus)、多黏桿菌(B.polymyxa)、假炭疽桿菌(B.pseudoanthracis)、短小桿菌(B.pumilus)、施氏桿菌(B.schlegelii)、球形桿菌(B.sphaericus)、耐熱桿菌(B.sporothermodurans)、嗜熱脂肪桿菌(B.stearothermophilus)、枯草桿菌(B.subtilis)、熱葡糖苷酶桿菌(B.thermoglucosidasius)、蘇力菌(B.thuringiensis)、普通變形桿菌(B.vulgatis)、韋氏桿菌(B.weihenstephanensis)或其組合。在特定揭示之有效具體實例中,桿菌為凝結桿菌(Bacillus coagulans/B.coagulans)。一般技術者應瞭解,如本文中所使用,細菌名稱可以指細菌或自該細菌獲得之化合物。自細菌獲得化合物之方法為此項技術中熟知。
可以用於本文中所揭示之組成物及組合中之維生素D化合物可以選自維生素D3、25-羥基維生素D3、25-二羥基維生素D3及其組合。在例示性具體實例中,可以使用25-羥基維生素D3(或其組成物)。
在一些具體實例中,本文中所揭示之組合可以包含組成物,諸如包含礦物黏土及二氧化矽、β-葡聚糖或其組合、基本上由其組成或由其組成之主要組成物。在一些具體實例中,主要組成物可以包含1-40wt%二氧化矽、1-30wt% β-葡聚糖及甘露聚糖、35-92wt%礦物黏土,且可以與絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維生素D3化合物或植物萃取物中之任何一或多者組合(或任何此等組分之組成物)。另一組合具體實例可以包括包含以下各者、基本上由其組成或由其組成之組成物:1-40wt%二氧化矽、1-25wt%葡聚糖及甘露聚糖及40-92wt%礦物黏土以及絲蘭、皂皮樹屬、直 接餵飼微生物、維生素D3化合物或植物萃取物中之任何一或多者(或任何此等組分之組成物)。其他組合具體實例可以包括包含以下各者、基本上由其組成或由其組成之組成物:5-40wt%二氧化矽、2-15wt% β-葡聚糖及甘露聚糖、40-80wt%礦物黏土以及絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維生素D3化合物或植物萃取物中之任何一或多者(或任何此等組分之組成物)。在一些具體實例中,組合具體實例可以包括包含以下各者、基本上由其組成或由其組成之組成物:20-40wt%二氧化矽、2-10wt% β-葡聚糖及甘露聚糖、50-70wt%礦物黏土以及絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維他命D化合物或植物萃取物中之任何一或多者(或任何此等組分之組成物)。其他組合具體實例可以包括包含以下各者、基本上由其組成或由其組成之組成物:15-40wt%二氧化矽、1-15wt% β-葡聚糖、0-10wt%甘露聚糖、50-81wt%礦物黏土以及絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維生素D3化合物或植物萃取物中之任何一或多者(或任何此等組分之組成物)。在其他具體實例中,組合具體實例可以包括包含以下各者、基本上由其組成或由其組成之組成物:20-30wt%二氧化矽、1.0-3.5wt% β-葡聚糖、1.0-6.0wt%甘露聚糖、60-75wt%礦物黏土以及絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維生素D3化合物或植物萃取物中之任何一或多者(或任何此等組分之組成物)。
在以上具體實例中之任一者中,組合或組成物可以進一步包含內葡聚糖水解酶,諸如β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶。某些組合具體實例可以調配成包含以上所揭示之組成物或以上所揭示組分中之任何一或多者、基本上由其組成或由其組成,且進一步包含至少0.05wt%內葡聚糖水解酶至5wt%內葡聚糖水解酶,諸如0.05-3wt% β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶。在一些 具體實例中,本文中所揭示之組合中所用之組成物可以包含0.2-3wt% β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶、20-40wt%二氧化矽、1-10wt% β-葡聚糖及甘露聚糖以及50-70wt%礦物黏土。在另一具體實例中,組成物基本上由0.1-3wt% β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶、20-40wt%矽藻土、2-20wt% β-葡聚糖及葡甘露聚糖以及50-70wt%礦物黏土組成。
在一個具體實例中,主要組成物可以包含0.1-1wt% β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶、20-40wt%矽藻土、5-20wt%酵母細胞壁萃取物及40-80wt%礦物黏土。在另一具體實例中,主要組成物可以包含0.1-0.5wt% β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶、20-30wt%矽藻土、5-15wt%酵母細胞壁萃取物及60-70wt%礦物黏土。在另一具體實例中,主要組成物可以包含0.1-0.3wt% β-1,3(4)-內葡聚糖水解醇、24-25wt%矽藻土、10-11wt%酵母細胞壁萃取物及63-64wt%礦物黏土。
在獨立具體實例中,β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶、矽藻土、酵母細胞壁萃取物及礦物黏土可以分別按0.05-3%、1-40%、1-20%及37-92%組合以形成適用於組合中之組成物。在另一獨立具體實例中,β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶、矽藻土、酵母細胞壁萃取物及礦物黏土可以分別按0.1-3%、5-40%、2-15%及40-80%組合以形成可以用於製造本文中所揭示之組合之組成物。在另一獨立具體實例中,β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶、矽藻土、酵母細胞壁萃取物及礦物黏土可以分別按0.2-3%、20-40%、4-15%及50-65%組合以製造可以用於製造所揭示組合之組成物。
某些組合具體實例(諸如以上所揭示之彼等組合)可以進一步包含絲蘭、皂皮樹屬或其組合或組成物、基本上由其組成或由其組成。 在例示性具體實例中,所揭示之組合可以包括包含85%皂皮樹及15%西地格絲蘭之組成物。
在所揭示之特定具體實例中,組合可以進一步包含直接餵飼微生物,諸如桿菌屬物種。在一些具體實例中,可以在包含絲蘭及皂皮樹、基本上由其組成或由其組成之組成物中提供桿菌屬物種。在例示性具體實例中,桿菌屬物種為凝結桿菌。
在其他具體實例中,該等組合可以包含以上所揭示之組成物中之任何一或多者、基本上由其組成或由其組成,且進一步包含25-羥基維生素D3、植物萃取物或兩者。
在一些具體實例中,本文中所揭示之組合可以包括一或多種除以上所揭示之組成性組分之外的組分。額外組分可用於任何所要目的,諸如作為例如填充劑添加之實質上生物惰性材料,或用於提供所要有益作用。舉例而言,該等組合可以進一步包含碳酸鹽(包括金屬碳酸鹽,諸如碳酸鈣)、巨藻、維生素(諸如菸鹼酸補充品或維生素B-12補充品)、生物素、d-泛酸鈣、氯化膽鹼、單硝酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、二甲基嘧啶醇亞硫酸氫甲萘醌、核黃素-5-磷酸鹽、葉酸、大豆油、鋁矽酸鈣、稻殼、礦物油或其任何組合。在一些具體實例中,該組合可以包含選自以下各者之黏結劑:***膠(acacia)、褐藻酸、羧甲基纖維素、鈉可壓縮糖、乙基纖維素明膠、液體葡萄糖、甲基纖維素、普維酮(povidone)、預膠凝化澱粉或其組合。在一些具體實例中,該組合可以包含選自以下各者之賦形劑:碳酸鈣、聚乙烯吡咯啶酮(PVP)、生育酚聚乙二醇1000丁二酸酯(亦稱為維生素E TPGS或TPGS)、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)、海藻糖、碳酸氫鈉、 甘胺酸、檸檬酸鈉、乳糖或其組合。
在一例示性實施例中,該組合可以包含:包含二氧化矽、礦物黏土、β-葡聚糖或其任何組合之主要組成物;以及皂皮樹、西地格絲蘭、凝結桿菌、25-羥基維生素D3或其組合中之任何一或多者。
在一些具體實例中,組成物及組合亦可以包含抗微生物劑、抗生素、抗球蟲劑、疫苗及/或該等組分之組合。
適合抗微生物劑及/或抗生素包括(但不限於)維吉黴素(Virginiamycin)、桿菌肽MD、桿菌肽鋅、泰黴素(Tylosin)、林可黴素(Lincomycin)、黃黴素(Flavomycin)、土黴素(Terramycin)、新土黴素(Neo-Terramycin)或其組合。在額外具體實例中,抗微生物劑或抗生素可以選自青黴素(penicillin)、四環素(tetracycline)、頭孢噻夫(ceftiofur)、氟苯尼考(florfenicol)、替米考星(tilmicosin)、恩氟沙星(enrofloxacin)及托拉黴素(托拉黴素)、普魯卡因青黴素(procaine penicillin)、苄星青黴素(benzathine penicillin)、胺苄青黴素(ampicillin)、阿莫西林(amoxicillin)、大觀黴素(spectinomycin)、二氫鏈黴素(dihydrostreptomycin)、氯四環素(chlortetracycline)、慶大黴素(gentamicin)、磺胺二甲嘧啶(sulphadimidine)、三甲氧苄二胺嘧啶(trimethoprim)、氧四環素(oxytetracycline)、紅黴素(erythromycin)、諾氟沙星(norfloxacin)以及其組合。
適合抗球蟲劑包括(但不限於)離子載體及化學抗球蟲產品。離子載體可以包括(但不限於)莫能黴素(Monensin)、鹽黴素(Salinomycin)、拉沙里菌素(Lasalocid)、那拉黴素(Narasin)、馬杜黴素(Maduramicin)、賽杜黴素(Semduramicin)、來洛黴素(Laidlomycin)或其 組合。
化學抗球蟲產品可以包括(但不限於)尼卡巴嗪(Nicarbazin)、馬希半(Maxiban)、地克珠利(Diclazuril)、托曲珠利(Toltrazuril)、氯苯胍(Robenidine)、速丹(Stenorol)、氯吡多(Clopidol)、地可喹酯(Decoquinate)、DOT(球痢靈(zoalene))、安普羅利(Amprolium)或其組合。
適合疫苗可以選自活球蟲病疫苗,諸如COCCIVAC(例如,包含堆形艾美球蟲(Eimeria acervulina)、變位艾美球蟲(Eimeria mivati)、巨型艾美球蟲(Eimeria maxima)、和緩艾美球蟲(Eimeria mitis)、柔嫩艾美球蟲(Eimeria tenella)、毒害艾美球蟲(Eimeria necatrix)、早熟艾美球蟲(Eimeria praecox)、布氏艾美球蟲(Eimeria brunetti)、哈氏艾美球蟲(Eimeria hagani)或其組合之活卵囊的組成物)、LivaCox(包含堆形艾美球蟲、巨型艾美球蟲及柔嫩艾美球蟲之各減毒株系之300-500個活孢子化卵囊於1% w/v氯胺B水溶液中之組成物)、ParaCox(包含來源於堆形艾美球蟲HP、布氏艾美球蟲HP、巨型艾美球蟲CP、巨型艾美球蟲MFP、緩艾美耳球蟲HP、毒害艾美球蟲HP、早熟艾美球蟲HP、柔嫩艾美球蟲HP及其組合之活孢子化卵囊的組成物)、Hatch Pack Cocci III(包含來源於堆形艾美球蟲、巨型艾美球蟲、柔嫩艾美球蟲或其組合之卵囊的組成物)、INOVOCOX(包含來源於堆形艾美球蟲、巨型艾美球蟲、柔嫩艾美球蟲之卵囊及氯化鈉溶液的組成物)、IMMUCOX(包含來源於堆形艾美球蟲、巨型艾美球蟲、毒害艾美球蟲、柔嫩艾美球蟲及其組合之活卵囊的組成物)、Advent或其組合。疫苗亦可以包含艾美球蟲屬之活卵囊,艾美球蟲屬例如奧拉艾美球蟲(Eimeria aurati)、巴 氏艾美球蟲(Eimeria baueri)、樂皮艾美球蟲(Eimeria lepidosirenis)、樂氏艾美球蟲(Eimeria leucisci)、羅蒂艾美球蟲(Eimeria rutile)、卡帕艾美球蟲(Eimeriia carpelli)、蘇貝艾美球蟲(Eimeria subepithelialis)、豐杜艾美球蟲(Eimeria funduli)及/或維納西艾美球蟲(Eimeria vanasi)。
如一般技術者將瞭解,所用抗微生物劑或抗生素之量在下文所述之量的範圍內,但可以視所用特定抗微生物劑或抗生素而定。在獨立具體實例中,所用抗生素或抗微生物劑之量可以為在特定抗生素之經批准或經授權劑量濃度下之治療有效量。在一些具體實例中,所用抗生素或抗微生物劑之量可以介於大於0ppm至100,000ppm範圍內,諸如0.25ppm至5,000ppm、或0.5ppm至2,500ppm、或0.75ppm至2,000ppm、或1ppm至1,500ppm、或5ppm至1,000ppm、或10ppm至500ppm、或25ppm至300ppm。在額外具體實例中,所用抗生素或抗微生物劑之量可以介於大於每公斤體重0mg至每公斤體重100,000mg範圍內,諸如0.5mg/kg至2,500mg/kg、或1mg/kg至1,500mg/kg、或5mg/kg至1,000mg/kg、或10mg/kg至500mg/kg、或25mg/kg至300mg/kg、或10-20mg/kg。
在一些具體實例中,組成物中所包括之抗微生物劑或抗生素之量可以介於每公噸飼料至少1g至每公噸飼料230g範圍內(或至少1.1ppm至256ppm),諸如每公噸飼料至少1g至每公噸飼料220g(或至少1.1ppm至243ppm)、每公噸飼料至少1g至每公噸飼料100g(或至少1.1ppm至110ppm)、每公噸飼料至少1g至每公噸飼料50g(或至少1.1ppm至55ppm)、或每公噸飼料至少1g至每公噸飼料10g(或至少1.1ppm至11ppm)。可以使用之特定抗微生物劑或抗生素及該等抗微生物劑及抗生素之劑量包 括(但不限於)以下各者:量介於每公噸飼料5g至每公噸飼料25g範圍內(或5ppm至27ppm,諸如22ppm)之維吉黴素;量介於每公噸飼料40g至每公噸飼料220g範圍內(在一些其他具體實例中,或44ppm至242ppm、或50ppm至250ppm)之桿菌肽MD;量介於每公噸飼料40g至每公噸飼料220g範圍內(或44ppm至242ppm)之桿菌肽鋅;量介於每公噸飼料1g至每公噸飼料1000g範圍內(或1ppm至1100ppm)之泰黴素;量介於每公噸飼料1g至每公噸飼料5g範圍內(或1ppm至6ppm)之林可黴素;量介於每公噸飼料1g至每公噸飼料5g範圍內(或1ppm至6ppm)之黃黴素;或其組合。
如一般技術者(例如,獸醫)將瞭解,抗球蟲劑之量可以視所用特定抗球蟲劑來選擇。在一些具體實例中,所用抗球蟲劑之量可以為針對特定動物物種之治療有效量。在一些具體實例中,所用抗球蟲劑之量可以介於大於0ppm至100,000ppm範圍內,諸如0.25ppm至5,000ppm、或0.5ppm至2,500ppm、或0.75ppm至2,000ppm、或1ppm至1,500ppm、或5ppm至1,000ppm、或10ppm至500ppm、或25ppm至300ppm。在額外具體實例中,所用抗生素或抗微生物劑之量可以介於大於每公斤體重0mg至每公斤體重100,000mg範圍內,諸如0.5mg/kg至2,500mg/kg、或1mg/kg至1,500mg/kg、或5mg/kg至1,000mg/kg、或10mg/kg至500mg/kg、或25mg/kg至300mg/kg、或10-20mg/kg。
在一些具體實例中,該組成物及/或組合進一步包含維生素、微量礦物質、增積劑、載劑、著色劑、增味劑或其任何組合。在其他具體實例中,該組合及/或組成物進一步包含玉米、大豆粕、小麥、大麥、 黑麥、芥花、玉米油、石灰石、鹽、含可溶物之乾酒粕(distillers dried grains with solubles;DDGS)、磷酸二鈣、二碳酸氫鈉、甲硫胺酸來源、離胺酸來源、L-蘇胺酸、膽鹼或其任何組合。
在一些具體實例中,該組成物及/或組合包括塗佈劑。塗佈劑之量可以為零至10重量%或10重量%以上,諸如大於零至10重量%或2重量%至10重量%。塗佈劑為經選擇用於例如促進該組成物及/或組合之組分中之一些或所有黏附在一起、黏附至食物或兩者之材料。塗佈劑亦可以促進維持組成物及/或組合在用於便於向水生物種投藥之水生環境中黏附在一起或黏附至食物。該材料亦較佳地為可口的且可由水生動物食用。
在一些具體實例中,塗佈劑為油。舉例而言,該油可以選自玉米油、椰子油、亞麻籽油、棉籽油、橄欖油、花生油、棕櫚油、菜籽油、紅花油、大豆油、葵花籽油、納斯可樂油(Naskole oil)或其任何組合。在一些具體實例中,塗佈劑為糖漿。舉例而言,糖漿可以選自糖蜜、高粱、糖漿、蜂蜜或其任何組合。亦可以使用油及糖漿之組合。
在一些具體實例中,該組成物及/或組合可以用於替換或補充動物飼料原料。在一些具體實例中,飼料原料為市售飼料原料。在特定具體實例中,飼料原料由Raanan Fish Meal製造。該飼料可以調配成大小為2-4mm之下沉的擠製集結粒#4932S0。某些特定飼料具體實例包含45.0%蛋白質、12.0%脂肪、3.0%碳水化合物、9%灰分及9.8%水分。在其他特定具體實例中,飼料原料由Zemach Feed Mill製造。該飼料可以調配成大小為2-4mm之漂浮的擠製集結粒#4662。某些特定具體實例包含35.0%蛋白質、3.5%脂肪、14.0%碳水化合物、8.0%灰分及10.0%水分。在其他特定具體實例中, 所用飼料由Zemach Feed Mill製造,且基於大小為4mm之漂浮的擠製集結粒#4212。某些特定具體實例包含30.0%蛋白質、5.0%脂肪、4.5%碳水化合物、8.0%灰分及10.0%水分。在一些具體實例中,使用塗佈劑將該組成物或該組合之組分中之一或多者塗佈在飼料原料上。
在一些具體實例中,該組成物及/或組合包括額外組分。額外組分可用於任何所要目的,諸如作為例如填充劑添加之實質上生物惰性材料,或用於提供所要有益作用。或者或另外,亦可以在該組成物及/或組合中包括佐劑及/或治療劑。舉例而言,組成物及/或組合可以包括(但不限於)碳酸鹽(包括金屬碳酸鹽,諸如碳酸鈣)、巨藻、維生素(諸如菸鹼酸補充品或維生素B-12補充品)、生物素、d-泛酸鈣、氯化膽鹼、單硝酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、二甲基嘧啶醇亞硫酸氫甲萘醌、核黃素-5-磷酸鹽、葉酸、大豆油、鋁矽酸鈣、稻殼、藻類、礦物油或其任何組合。藻類可以為藍綠藻(藍細菌)、矽藻(矽藻門)、輪藻(輪藻門)、綠藻(綠藻門)、金藻(金藻門)、甲藻(甲藻門)、褐藻(褐藻門)或紅藻(紅藻門)。在一些具體實例中,藻類為綠藻門,且可以為小球藻屬(Chlorella)之藻類,包括(但不限於)普通小球藻(Chlorella vulgaris)、安格斯小球藻(Chlorella angustoellipsoidea)、葡萄樣小球藻(Chlorella botryoides)、莢膜小球藻(Chlorella capsulata)、橢圓小球藻(Chlorella ellipsoidea)、浮水小球藻(Chlorella emersonii)、福斯卡小球藻(Chlorella fusca)、同球小球藻(Chlorella homosphaera)、黃綠異小球藻(Chlorella luteo-v iriidis)、海洋小球藻(Chlorella marina)、紅藻小球藻(Chlorella miniata)、極微小球藻(Chlorella minutissima)、奇異小球藻(Chlorella mirabilis)、卵形小球藻(Chlorella ovalis)、寄生小球 藻(Chlorella parasitica)、秘魯小球藻(Chlorella peruviana)、玫瑰小球藻(Chlorella rugosa)、嗜糖小球藻(Chlorella saccharophila)、海水小球藻(Chlorella salina)、斯佩科小球藻(Chlorella spaerckii)、球抱小球藻(Chlorella sphaerica)、斯蒂格小球藻(Chlorella stigmatophora)、近球形小球藻(Chlorella subsphaerica)、他伯氏小球藻(Chlorella trebouxioides)或其組合。在其他具體實例中,藻類為藍細菌,諸如鈍頂節旋藻(Arthrospira platensis)或極大節旋藻(Arthrospira maxima)(螺旋藻)。其他藻類包括(但不限於)盤星藻屬(Pediastrum)之藻類,諸如二角盤星藻(Pediastrum dupl)、短棘盤星藻(Pediastrum boryanum)或其組合;葡萄藻屬(Botryococcus)之藻類,諸如布朗葡萄藻(Botryococcus braunii);紫菜屬(Porphyra)之藻類,諸如葡萄牙紫菜(Porphyra dioica)、線形紫菜(Porphyra linearis)、盧卡斯紫菜(Porphyra lucasii)、木福德紫菜屬(Porphyra mumfordii)、紫紅紫菜(Porphyra purpurea)、臍形紫菜(Porphyra umbilicalis)或其組合。
III.製造該等組成物及組合之方法
本文中亦揭示製造本文中所揭示之組成物及組合之方法。在所揭示之特定具體實例中,適用於所揭示之組合中之組成物可以藉由組合兩種或兩種以上在上文所揭示之組成性組分製成。在一些具體實例中,可以混合兩種或兩種以上組成物以形成如本文中所揭示之組合。該等組成物可以按適合向動物投予之比率或比例組合。在一些具體實例中,該等組成物可以藉由將一或多種組成性組分混合在一起來組合且該等組成物之組合可以藉由組合此等組成物製成。在一些具體實例中,組成性組分及組成物可以按固體、液體或其組合形式混合。
在一些具體實例中,所揭示之組成物及組合之某些組分可以藉由此項技術中通常已知之方法製備或可以自商業來源獲得。在一些具體實例中,所揭示之組成物及組合之一些組分可以存在於環境中或可以自天然存在之狀態修改或合成,從而形成非天然存在之化合物。
在以上揭示之組合具體實例中之任一者中,二氧化矽可以自矽藻土獲得。在一些具體實例中,矽藻土為可商購產品,主要包含二氧化矽(SiO2)且其剩餘組分未加以分析,但主要由灰分(礦物質)組成,如由分析化學家協會(Association of Analytical Chemists;AOAC,2002)所定義。在其他具體實例中,二氧化矽可以為自其天然存在狀態修改及/或以合成方式製備以得到合成二氧化矽。
在一些具體實例中,β-葡聚糖可以自酵母或諸如真菌、藻類或其類似者之其他材料獲得。在以上組合具體實例中之任一者中,甘露聚糖可以包含葡甘露聚糖。
可以用於製造本文中所揭示之組合具體實例之特定組成物具體實例中所用的礦物黏土(鋁矽酸鹽)可以藉由各種可商購黏土中之任一者實現,該等可商購黏土包括(但不限於)微晶高嶺土(montmorillonite clay)、膨潤土及沸石。
在一些具體實例中,β-葡聚糖及甘露聚糖可以自植物細胞壁、酵母(例如,釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、高蛋白假絲酵母(Candida utilis))、某些真菌(例如,蘑菇)、細菌或其組合獲得。β-葡聚糖及甘露聚糖(例如,β-1,3(4)葡聚糖及葡甘露聚糖)之一個例示性商業來源為來源於不活化酵母(釀酒酵母)之酵母細胞壁萃取物。酵母細胞壁萃 取物可以具有包括0-8%水分、92-100%乾物質、10-55%蛋白質、0-25%脂肪、0-2%磷、10-30% β-葡聚糖、0-25%甘露聚糖及0-5%灰分之組成物。在本文中所揭示之特定實施例中,酵母細胞壁萃取物可以包含以下組成:2-6%水分、94-98%乾物質、20-45%蛋白質、0.1-22%脂肪、0.5-3%磷、10-25%甘露聚糖、14-30% β-1,3(4)葡聚糖及3-5%灰分。在一些具體實例中,β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶可以自長柄木黴(Trichoderma longibrachiatum)菌株之沉沒醱酵(submerged fermentation)產生。在獨立具體實例中,可以使用具有以下化學組成的來源於初始不活化酵母(釀酒酵母)之β-1,3(4)葡聚糖及葡甘露聚糖的商業來源:水分3.5-6.5%;蛋白質30-42%;脂肪0.1-10.5%;磷0-1.5%;甘露聚糖11-25%;β-1,3-(4)葡聚糖15-29%;灰分3-5%;且在一些具體實例中,該組成物可以進一步包含乾物質94-98%。在另一獨立具體實例中,化學組成可以包含以下各者、基本上由其組成或由其組成:水分2-5%;乾物質94-98%;蛋白質14-36%;脂肪5-22%;磷0.5-2%;甘露聚糖15-24%;β-1,3-(4)葡聚糖18-26%;及灰分3-5%。
本文中所揭示之絲蘭及皂皮樹屬組分可以包括以整體形式或植物之任何部分形式獲得絲蘭或皂皮樹屬的植物物質中之任一者,諸如根、莖或軀幹、樹皮、葉、花、花莖或種子或其組合。可以使用新鮮的或經乾燥的此等植物部分且該等植物部分可以為整體、經粉碎、經搗碎、經切碎或經研磨。
所揭示植物萃取物之具體實例可以由含有多酚之植物材料製備。該植物材料亦可以包括非多酚化合物,包括多酚降解產物,諸如五倍子酸及反式咖啡酸。降解可以例如經由氧化及/或生物過程發生。多酚及 非多酚化合物均可以具有生物活性。植物萃取物可以由單一植物材料(例如,葡萄)或植物材料組合製備。在一些具體實例中,植物萃取物由經壓榨植物材料(諸如葡萄渣)、經乾燥植物材料(諸如茶)或其組合製備。果渣可以實質上在壓榨後立即獲得或作為青儲產品(亦即在壓榨後收集且儲存長達若干個月之果渣)獲得。適合植物具有複數種多酚及/或其他非多酚化合物,包含(但不限於)非多酚有機酸(諸如五倍子酸及/或反式咖啡酸)、黃烷醇、沒食子酸酯、黃烷二醇、間苯三酚、連苯三酚及兒茶酚。在一些具體實例中,植物萃取物由黑皮諾(Pinot noir)果渣、灰皮諾(Pinot gris)果渣或綠茶製備。
在一些具體實例中,在萃取之前或在萃取期間,將經壓榨或乾燥之植物材料研磨成細粉。經壓榨植物材料可以經冷凍以便於研磨。多酚及其他非多酚化合物可以經萃取以便投予。舉例而言,可以使用包含諸如水、醇、酯或其組合之極性溶劑的溶液自該粉末萃取多酚及其他非多酚化合物。在一些具體實例中,該溶液包含水可混溶性醇、酯或其組合,諸如低碳烷基醇、低碳烷基酯或其組合。在一些具體實例中,該溶液為水或包含25-99%溶劑、諸如25-95%溶劑、30-80%溶劑或50-75%溶劑及水之水溶液。在某些具體實例中,該溶液為包含甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯或其組合之水溶液。該溶液可以藉由添加酸進行酸化。酸可以防止萃取物中之生物活性多酚及其他非多酚化合物之氧化降解或使氧化降解降至最低。酸可以為任何適合酸,諸如無機酸(例如,鹽酸)或有機酸(諸如檸檬酸或乙酸)。在一些具體實例中,該溶液包含0.01%至1%酸,諸如0.02-0.5%、0.025-0.25%或0.05-0.15%。在一些實施例中,該溶液包括0.1%鹽酸。
萃取可以在0-100℃範圍內之溫度下進行。在一些具體實例中,在20-70℃範圍內之溫度下或在環境溫度下進行萃取。萃取可以持續數分鐘至數天範圍內之持續時間。為提高萃取效率,植物材料及溶液可以在萃取期間混合或攪拌,諸如藉由在萃取期間研磨植物材料、攪拌混合物、震盪混合物或使混合物均質化。在一些具體實例中,可以使用新製溶液重複萃取一或多次以提高多酚及其他非多酚化合物自植物材料的回收率。隨後合併各萃取循環之液相以便進一步處理。
可以回收液相,且丟棄殘餘固體或果肉。回收液相可以包含自剩餘固體傾析出液體及/或過濾液相以移除殘餘固體。可以藉由諸如蒸發(例如,旋轉蒸發)之任何適合方式自液體溶液移除溶劑(醇、酯或其組合),從而製造出含有生物活性組分於弱酸性溶液中之水性萃取物。
在植物材料包括大量油或脂質的某些具體實例中,可以進行非極性組分之初始萃取,隨後萃取多酚及其他極性非多酚化合物。非極性組分可以藉由使植物材料在例如己烷、庚烷或其組合之非極性溶劑中均質化來萃取。自植物材料分離出包括經萃取非極性組分之溶劑層且丟棄。
水性植物萃取物可以藉由適合方式(例如萃取、層析法、蒸餾等)進一步純化,以移除非多酚化合物及/或相對於萃取物中之其他化合物提高多酚濃度。
水性植物萃取物可以例如藉由冷凍乾燥或其他低溫乾燥方法乾燥,且研磨成粉末以得到經乾燥之植物萃取物。在一些具體實例中,經乾燥之植物萃取物包含0.01wt%至25wt%總多酚,諸如0.01wt%至10wt%、0.01wt%至5wt%、0.01wt%至2.5wt%、0.01wt%至1wt%、0.01wt% 至0.5wt%、0.02wt%至0.25wt%或0.03-0.1wt%總多酚。在某些具體實例中,經乾燥之植物萃取物進一步包含非多酚化合物。舉例而言,經乾燥之植物萃取物可以包含0.01-1mg/g五倍子酸,諸如0.05-0.5mg/g或0.09-0.25mg/g五倍子酸,及/或0.001-0.1mg/g反式咖啡酸,諸如0.005-0.05mg/g或0.01-0.025mg/g反式咖啡酸。
水性植物萃取物可以例如藉由蒸發濃縮至較小體積且用作水性植物萃取物。在其他具體實例中,在乾燥及研磨之前,將水性植物萃取物與載劑混合。適合載劑包括例如矽藻土、二氧化矽、麥芽糊精、磨碎穀物(例如,玉米)、粗粉(例如,大豆或棉籽粉)副產物(例如,乾酒糟、稻殼、小麥粗粉(wheat mill run))、黏土(例如,膨潤土)及其組合。植物萃取物可以與載劑按重量計以10:1至1:10、諸如5:1至1:5範圍內之比率組合。舉例而言,植物萃取物可以與矽藻土按重量計以3:1之比率混合。
在一些具體實例中,本文中所揭示之組成物及/或組合可以按任何適合形式調配,包括粉末、顆粒、集結粒、溶液或懸浮液。某些所揭示組成物及/或組合具體實例可以調配為自由流動的乾粉末,其可以用於直接包含至可商購飼料、食品中,或調配為總混合日糧或飲食之補充品。在一些具體實例中,該粉末可以與固體或液體飼料或與水混合。在另一具體實例中,本文中所揭示之組成物及/或組合可以形成為集結粒。
在一些具體實例中,本文中所揭示之組成物及/或組合之平均粒度可以經選擇以與飼料原料或伴侶動物食物或可以與該等組成物及/或組合混合之其他組分相容。如本文中所使用之術語「可相容(compatible)」意謂當組成物或組合與飼料原料或伴侶動物食物或其他組分混合時,粒度 足夠類似以減少或消除粒度偏析。舉例而言,若組合具體實例與平均粒度為50-200μm之飼料原料或伴侶動物食物或組分混合,則該組合(或其中所包括之組成物)可以具有類似平均粒度,例如為與該組合混合之食物或飼料原料/組分粒度之80-120%。
在一些具體實例中,以原料、伴侶動物食物或組合之總乾重計,絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維他命D化合物及植物萃取物中之每一者之量可以在5ppm至2,000ppm範圍內,諸如5ppm至1,000ppm、5ppm至500ppm、5ppm至250ppm或5ppm至100ppm。在一些具體實例中,以原料、伴侶動物食物或組合之總乾重計,絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維他命D化合物及植物萃取物中之每一者之量可以在5ppm至10ppm範圍內。
在一些具體實例中,主要組成物以及絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維他命D化合物或植物萃取物中之任何一或多者可以按重量計以1,000:1至1:1,000之比率投予。在一些具體實例中,該組合之組分可以單獨地或以單一組合形式一起與原料或伴侶動物食物組合。在一些具體實例中,該組合之組分可以恰好在向動物投予之前與原料或伴侶動物食物組合。舉例而言,該組合可以按介於每公噸飼料0.1至20kg範圍內之量或按介於0.01重量%至2.5重量%範圍內之量混合至飼料原料或伴侶動物食物中。
在一些具體實例中,組分可以按不同方式併入,包括以組成物形式及/或以組合形式。舉例而言,該組成物及/或組合可以包含選自以下各者之組分1:1A)葡聚糖(例如,β-葡聚糖);1B)二氧化矽;1C)礦物黏土;1D)甘露聚糖;1E)植物萃取物;1F)葡聚糖(例如,β-葡聚糖) 及二氧化矽;1G)葡聚糖(例如,β-葡聚糖)及礦物黏土;1H)葡聚糖(例如,β-葡聚糖)及甘露聚糖;1I)葡聚糖(例如,β-葡聚糖)及植物萃取物;1J)二氧化矽及礦物黏土;1K)二氧化矽及甘露聚糖;1L)二氧化矽及植物萃取物;1M)礦物黏土及甘露聚糖;1N)礦物黏土及植物萃取物;1O)甘露聚糖及植物萃取物;1P)葡聚糖(例如,β-葡聚糖)、二氧化矽及礦物黏土;1Q)葡聚糖(例如,β-葡聚糖)、二氧化矽及甘露聚糖;1R)葡聚糖(例如,β-葡聚糖)、二氧化矽及植物萃取物;1S)葡聚糖(例如,β-葡聚糖)、礦物黏土及甘露聚糖;1T)葡聚糖(例如,β-葡聚糖)、礦物黏土及植物萃取物;1U)葡聚糖(例如,β-葡聚糖)、甘露聚糖及植物萃取物;1V)二氧化矽、礦物黏土及甘露聚糖;1W)二氧化矽、礦物黏土及植物萃取物;1X)礦物黏土、甘露聚糖及植物萃取物;1Y)葡聚糖(例如,β-葡聚糖)、二氧化矽、礦物黏土及甘露聚糖;1Z)葡聚糖(例如,β-葡聚糖)、二氧化矽、礦物黏土及植物萃取物;1AA)二氧化矽、礦物黏土、甘露聚糖及植物萃取物;1AB)葡聚糖(例如,β-葡聚糖)、二氧化矽、礦物黏土、甘露聚糖及植物萃取物;1AC)皂皮樹屬;1AD)絲蘭;1AE)維生素D物質;1AF)皂皮樹屬及絲蘭;1AG)皂皮樹屬及益生菌;1AH)絲蘭及維生素D物質;1AI)皂皮樹屬、絲蘭及維生素D物質;1AJ)西地格絲蘭;1AK)皂皮樹;1AL)凝結桿菌;1AM)西地格絲蘭及凝結桿菌;IAN)皂皮樹及凝結桿菌;1AO)西地格絲蘭及皂皮樹;1AP)西地格絲蘭、皂皮樹及凝結桿菌;1AQ)直接餵飼微生物;1AQ1)內葡聚糖水解酶;1AQ2)抗微生物劑;1AR)抗生素;1AS)維吉黴素;1AT)抗球蟲劑,例如鹽黴素(Salinomycin);1AU)抗真菌劑;1AV)抗病毒劑;1AW)防寄生蟲劑; 1AX)疫苗;或1AY)塗佈劑。
組成物及/或組合亦可以包含組分2。關於組分1具體實例,以下組分2可以與1A至1AY組合:2A)皂皮樹屬;2B)絲蘭;2C)維生素D物質;2D)皂皮樹屬及絲蘭;2E)皂皮樹屬及維生素D物質;2F)絲蘭及維生素D物質;2G)皂皮樹屬、絲蘭及維生素D物質;2H)西地格絲蘭;2I)皂皮樹;2J)凝結桿菌;2K)西地格絲蘭及凝結桿菌;2L)皂皮樹及凝結桿菌;2M)西地格絲蘭及皂皮樹;2N)西地格絲蘭、皂皮樹及凝結桿菌;2O)直接餵飼微生物;2OA)內葡聚糖水解酶;2OB)抗微生物劑;2P)抗生素;2Q)維吉黴素;2R)抗球蟲劑,例如鹽黴素;2S)抗真菌劑;2T)抗病毒劑;2U)抗寄生蟲劑;2V)疫苗;或2W)塗佈劑。
一般技術者應瞭解,2A至2W中之任一者可以與1A至1AY中之任一者組合,以形成介於該等取代者之間的任何及所有組成物及/或組合。
組成物及/或組合可以包含組分3。關於組分1具體實例1A至1AY及組分2具體實例2A至2W,以下組分3可以與1A至1AY及2A至2W組合:3A)抗微生物劑;3B)抗生素;3C)維吉黴素;3D)抗球蟲劑,例如鹽黴素;3E)抗真菌劑;3F)抗病毒劑;3G)抗寄生蟲劑;3H)疫苗;3I)塗佈劑;3J)直接餵飼微生物;或3K)內葡聚糖水解酶。
一般技術者應瞭解,3A至3I中之任一者可以與1A至1AY中之任一者及2A至2W中之任一者組合,以形成介於該等取代者之間的任何及所有組成物及/或組合。
組成物及/或組合可以進一步包含組分4。關於組分1具體實 例1A至1AY、組分2具體實例2A至2W及組分3具體實例3A至3K,以下組分4可以與1A至1AY、2A至2W及3A至3K組合:4A)抗微生物劑;4B)抗生素;4C)維吉黴素;4D)抗球蟲劑,例如鹽黴素;4E)抗真菌劑;4F)抗病毒劑;4G)抗寄生蟲劑;4H)塗佈劑;4I)直接餵飼微生物;或4J)內葡聚糖水解酶。
一般技術者應瞭解,4A至4H中之任一者可以與1A至1AY中之任一者、2A至2W中之任一者及3A至3K中之任一者組合,以形成介於該等取代者之間的任何及所有組成物及/或組合。
組成物及/或組合可以進一步包含組分5。關於組分1具體實例1A至1AY、組分2具體實例2A至2W、組分3具體實例3A至3K及組分4具體實例4A至4J,以下組分5可以與1A至1AY、2A至2W、3A至3K及4A至4J組合:5A)抗微生物劑;5B)抗生素;5C)維吉黴素;5D)抗球蟲劑,例如鹽黴素;5E)抗真菌劑;5F)抗病毒劑;5G)抗寄生蟲劑;或5H)直接餵飼微生物;或5I)內葡聚糖水解酶。
一般技術者應瞭解,5A至5G中之任一者可以與1A至1AY中之任一者、2A至2W中之任一者、3A至3K中之任一者及4A至4J中之任一者組合,以形成介於該等取代者之間的任何及所有組成物及/或組合。
組成物及/或組合之組分可以按任何適合形式調配,包括粉末、顆粒、集結粒、溶液或懸浮液。在一個具體實例中,組成物及/或組合之組分為適合直接包含至可商購飼料、食品中或作為總混合日糧或飲食之補充品的自由流動乾粉末。該粉末可以與固體或液體飼料或與水混合。在另一具體實例中,組成物及/或組合之組分可以形成為集結粒。
在一些具體實例中,組成物及/或組合可以為使用塗佈劑頂塗至飼料原料上之粉末。在一些具體實例中,在混合器中混合飼料與塗佈劑。將組成物添加至飼料原料中且混合直至所有組分適當地摻合為止。
在一些具體實例中,將組合及/或組成物與飼料原料混合。在某些具體實例中,組合及/或組成物調配成適合與飼料原料形成均勻混合物,諸如藉由壓碎、粉碎、研磨該組合或以其他方式調整該組合之大小。或者,該組合及/或組成物可以調配成溶液、懸浮液或漿料。在組合包含兩種或兩種以上組分之具體實例中,該等組分可以單獨地或實質上一起調配。該等組分亦可以與飼料原料按任何次序依序混合或實質上同時混合。
IV.使用方法
本文中所揭示之組成物之具體實例可以用於餵養動物且可以為動物提供額外營養益處以幫助支持及/或維持動物之整體健康及幸福,從而幫助增加動物之壽命,幫助增強對疾病之免疫力及其他健康益處。在一些具體實例中,該等方法可以包含以下內容、基本上由其組成或由其組成:將包含β-葡聚糖(例如,β-1,3(4)葡聚糖)、二氧化矽、礦物黏土、甘露聚糖、β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶及其任何組合、基本上由其組成或由其組成之主要組成物與絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維生素D物質或植物萃取物中之任何一或多者組合。該方法可以進一步包含向動物單獨或與飼料原料或伴侶動物食物組合投予該組合。在一些具體實例中,該等方法係關於與伴侶寵物食物組合投予本文中所揭示之組成物或組成性組分之組合。在例示性具體實例中,伴侶寵物食物可以為濕的或乾的犬科動物食物或濕的或乾的貓科動物食物。在一些具體實例中,犬科動物食物及/或貓 科動物食物可以為普通的或專門的飲食食物。
在一些具體實例中,該等組合可以用於幫助提昇由於年齡大或免疫缺陷而具有患病風險之動物的健康。在該等具體實例中,可以基於一或多種可以造成動物對特定疾病之易感性的因素肯定地選擇動物。該等因素可以包括動物之年齡、降低之免疫力、對應激源(例如,熱應激、擁擠、工作量、化學療法、消炎療法)之暴露、胃腸道紊亂(例如,腹瀉疾病)或其組合。在例示性具體實例中,該動物可以為伴侶動物,特定言之犬科動物或貓科動物,其由於年齡(例如,幼齡或老齡動物)或降低之免疫功能而易受疾病影響。在其他具體實例中,該方法可以用於改善遭受或罹患疾病之動物之疾病的體症或症狀。例示性具體實例可以包含向動物投予該組合以幫助改善以下各者中之任何一或多者的體症或症狀:僵硬、皮炎(例如,特異反應、跳蚤過敏性皮炎、食物過敏性皮炎、接觸性皮炎及青少年皮炎)、骨關節炎、結膜炎/眼色素層炎、子宮積膿、***炎、睪丸炎、膀胱炎、腎病、自體免疫病症(例如,尋常性天疱瘡/落葉性天疱瘡、狼瘡、自體免疫性溶血性貧血及類風濕性關節炎)、內分泌病症(例如,艾迪森氏病、庫欣氏病、甲狀腺高能症及甲狀腺低能症、糖尿病及尿崩症)、炎症性腸病、出血性胃腸炎、耳炎、病毒性疾病(犬瘟熱病毒、小病毒、冠狀病毒、疱疹病毒、流感病毒、肝炎病毒)、細菌疾病(沙門氏桿菌病、支氣管敗血性博德氏桿菌、萊姆病、鉤端螺旋體病、布氏桿菌病)、真菌疾病(芽生菌病、麴菌病、隱球菌、球黴菌病、小芽孢菌/髮癬菌、組織漿菌病)、寄生蟲病(球蟲病、梨形鞭毛蟲病、鉤蟲、蛔蟲、鞭蟲、絛蟲、疥癬)、腦膜炎-動脈炎/腦炎、後天性重症肌無力、瘤形成(淋巴肉瘤、骨肉瘤、血 管肉瘤、肥胖細胞瘤、鱗狀細胞癌、黑素瘤、白血病、***腫瘤、肺癌、睪丸癌、移行細胞癌、腦腫瘤)、蹄葉炎、跌跛、心臟病、癲癇、肝炎、胰炎、齒齦炎及其組合。
本文中所揭示之動物可以展現對本文中所揭示之組合(或其組分)之反應或反應組合。在一些具體實例中,可以偵測且量測此等反應以判定向動物投予該組合是否支持該動物之健康。在所揭示之特定具體實例中,可以使用一或多種因素(或終點)來判定動物對該組合之反應。在一些具體實例中,可以檢查之因素為該組合(或其組分)之以下能力:充當界面活性劑以例如降低動物生物腔中之物質與上皮細胞層之間的表面張力,塗佈上皮細胞,傳遞可以修飾營養物轉運之消化酶及結合病原性細菌。在另一具體實例中,可以檢查之因素為該組合(或其組分)之以下能力:藉由分散分子充當乳化劑,從而促進營養物轉運及/或增加動物腸道中抗原對M細胞及其他抗原感測細胞之暴露。在其他具體實例中,該組合(或其組分)之抗氧化、消炎、抗微生物及/或抗高血壓特性可以為檢查因素。在一些具體實例中,可以測定該組合有利地影響免疫調變、代謝調控、營養物利用及/或轉運、內分泌及神經內分泌調控及壽命(longevity/lifespan)之能力。
在一些具體實例中,該等組合可以用於幫助增加動物之壽命且因此幫助延長其壽命長於未投予該組合之動物的時間段(例如,數天、數週、數年)。在該等具體實例中,該組合可以在動物一生中任何時間點向該動物投予。在一些具體實例中,該組合可以向已達到小於平均壽命之50%的年齡至平均壽命之90%(或90%以上)的年齡範圍內的年齡的動物投予。 應瞭解,如本文中所使用之「平均壽命(Average lifespan)」為獸醫學領域中之一般技術者所瞭解的動物物種或品種(品種混合物)之平均壽命。舉例而言,一些動物可以在其已達到其平均壽命之10%至其平均壽命之80%範圍內的年齡時或在其已達到其平均壽命之25%至其平均壽命之75%範圍內的年齡時投予該組合。
待投予該組合之動物之年齡可以隨動物之物種或品種(或混合品種)變化。舉例而言,一些動物物種、品種或混合品種可以具有比其他動物物種長或短之平均壽命;因此,該組合之投予時間點可以根據待投予該組合之動物的類型。僅僅舉例而言,可以向作為幼齡伴侶動物之伴侶動物(如犬科動物及貓科動物)投予該組合,此處幼齡伴侶動物(就犬科動物及貓科動物而言)應理解為年齡介於出生至兩歲範圍內。然而,本文中所揭示之其他動物物種仍然可以視為幼齡伴侶動物,但會具有超過兩歲之年齡上限(例如,10%至200%或200%以上)或小於兩歲之年齡下限(例如,10%至90%或90%以下)。在另一實施例中,可以向老齡犬科動物或貓科動物投予該組合,此處老齡動物(就犬科動物及貓科動物而言)應理解為年齡介於六歲至動物死亡時之年齡範圍內。然而,本文中所揭示之其他動物物種仍然可以視為老齡伴侶動物,但會具有超過六歲之年齡下限(例如,10%至200%或200%以上)或小於六歲之年齡下限(例如,10%至50%或50%以上)。在所揭示之特定具體實例中,該組合可以在動物出生之後(例如,在出生之後數天、數週或數月)向其投予,且以數天、數週及甚至數年之時間間隔每天投予一次或一次以上。在所揭示之其他具體實例中,該組合可以在動物已達到例如三歲至十歲、諸如六歲至十歲或六歲至八歲之 年齡時向其投予。
在一些具體實例中,該組合可以按咸信或經確定對於達成有利結果有效之時間間隔每天向動物投予。該等組合可以按單一劑量每天投予或一天之內分次給藥。在一些情況下,可以第一次向動物投予本文中所揭示之一或多種個別組成物(或其任何組成性組分),且在同一天內在一或多個後續時間,可以單獨地或以組合形式投予剩餘組成物(或其組成性組分)。
本文中所揭示之組合具體實例當向動物投予時,可以產生伴隨性改變,例如動物體內之免疫系統生物標誌物或炎症生物標誌物之含量相比於尚未接受該組合之動物體內之生物標誌物的平均含量改變至少5%、至少10%、至少20%、至少30%、至少50%、至少75%、至少100%、至少200%或至少500%,諸如5-600%、10-500%、10-200%或10-100%。視特定生物標誌物而定,該改變可以為增加或減少。
在一些具體實例中,藉由量測編碼該生物標誌物之信使RNA(mRNA)之濃度評定生物標誌物含量。在一些具體實例中,當向動物投予時,該等組合可以產生伴隨性改變,該動物體內編碼免疫系統生物標誌物或炎症生物標誌物之mRNA的濃度相比於尚未接受該組合之動物體內的mRNA之平均濃度改變至少5%、至少10%、至少20%、至少30%、至少50%、至少75%、至少100%或至少200%或至少500%,諸如5-600%、10-500%、10-200%或10-100%。視特定mRNA而定,該改變可以為增加或減少。
在一些具體實例中,該組成物及/或組合之投予可以使魚之先天防禦機制之水準在暴露於病原體之前產生伴隨性改變,或改善暴露於 特定病原體之後的存活情況。先天免疫反應改善之標誌可以包括:總白血球計數;呼吸爆發(超氧陰離子之釋放);吞噬指數及活性;以及溶菌酶活性。
魚中總血細胞計數及差示血細胞計數之異常改變可能由諸如貧血、白血球減少症、白血球增多症及血小板減少症之疾病造成,但亦可以指示應激、毒物暴露、缺氧及生殖狀態改變。
由於魚體內之紅血細胞(紅血球)之具核性質,所以無法使用自動化細胞計數程序區分充當健康指示物之白血細胞(白細胞)而不裂解紅血球且白血細胞(白細胞)通常使用血球計手動計數。在魚類及甲殼動物中,一般針對染色抹片或用血球計分別執行亦充當健康指示物之差示白血球及血球枚舉。手動枚舉之缺點為與計數100至200個細胞相關的統計限制性,其中100至200個細胞為差示白血球程序中之典型範圍。
流動式細胞測量術(Flow cytometry)為藉由一或多個雷射詢問懸浮粒子流之儀器技術。基於粒子之光散射特性、自體螢光或標記螢光或兩者之組合來分析且區分粒子。
流動式細胞測量術技術之主要優勢為每秒區分且枚舉數千個粒子且同時將多個群體以物理方式分類至收集容器中之能力。因此,在血液學應用中,在少許時間內針對比手動方法實際可達成多之細胞獲得準確且精確的總血液計數及5份差示血液計數之能力僅取決於準確區分細胞類型之能力。
魚類在呼吸爆發期間藉由吞噬細胞產生若干活性氧物質(reactive oxygen species;ROS)。一旦白血球吞沒細菌或真菌,宿主之NADPH 氧化酶即得到活化,其又會增加耗氧量且隨後產生ROS,諸如超氧陰離子(O2 -)、過氧化氫(H2O2)、羥基(OH)及單態氧(1O2)。超氧陰離子之釋放已知為呼吸爆發且所釋放及/或形成之ROS可以為殺細菌劑。
吞噬為硬骨魚體內針對傳染媒劑物之非特異性免疫反應的基本組分。此過程涉及包括病原體之外來粒子之識別及黏附、由吞噬細胞吞噬及消化。一直使用試管內分析來研究魚巨噬細胞吞噬活性,從而提供評估魚之免疫能力之途徑。試管內分析亦已提供關於有鰭魚水產養殖中非特異性增強疾病抗性之見解,且已充當免疫生物標誌物測試來評定水生環境衛生。
皮膚黏液、末梢血液及某些富含白血球之組織中所存在之溶菌酶為催化細菌細胞壁中之肽聚糖的N-乙醯基胞壁酸及N-乙醯基葡糖胺之水解的酶。此蛋白質在防禦系統中起關鍵作用。
在其他具體實例中,該組成物及/或組合之投予可以使甲殼動物之先天防禦機制之水準在暴露於病原體之前產生伴隨性改變,或改善暴露於特定病原體之後的存活情況。甲殼動物之先天性免疫反應改善之標誌可以包括:總血球計數;吞噬活性;酚氧化酶(phenoloxidase;PO)及酚氧化酶原(prophenoloxidase;ProPO)活性;抗細菌活性;血漿蛋白質濃度。
血球在甲殼動物免疫防禦中起主要作用。首先,其藉由吞噬、囊封及結節性凝集移除血腔中之外來粒子。其次,血球藉由細胞凝結及經由釋放血漿膠凝所需之因子起始凝血過程而參與傷口癒合。
血像由總血球計數(total haemocyte count;THC)及差示血球計數(differential haemocyte count;DHC)組成。關於DHC,大多數研究 人員同意鑑別對蝦(penaeid shrimp)中之三種細胞類型:大顆粒血球(large granule haemocytes;LGH)、小顆粒血球(small granule haemocytes;SGH)及無顆粒血球或透明細胞(hyaline cell;HC)。
THC可以使用血細胞計數器容易地測定,然而DHC之測定需要較複雜的血球鑑別。DHC可以藉由使用諸如細胞之大小及形狀之形態準則及使用相差顯微鏡獲得之血球折射率差異來確定。雖然此技術快速,但應該指出,當使用此技術時,可能由於判讀誤差(interpretation error)而容易得到大的結果偏差。
不同血球類型可以使用酶活性偵測或特異性染色之細胞化學研究來確定。自對蝦之細胞化學染色獲得之結果表明,此等特異性染色可以區分血球類型且提供關於其功能之額外資訊。細胞鑑別之替代方法為使用單株抗體(monoclonal antibody;mAb)以便找出不同細胞類型之抗原標誌物。使用針對藉由基於珀可梯度(Percoll gradient)之等密度離心分離之血球的不同亞群的mAb,已經發現,在日本對蝦(P.japonicus)中,HC與SGH共享抗原決定基,且關於LGH,抗原特異性表現。單株抗體可以視為用於研發血球譜系及血球增殖研究以及用於分離且研究血漿組分之強大工具。
吞噬為最常見之細胞防禦反應。在吞噬期間,粒子或微生物內化至細胞中,其隨後形成稱作吞噬體之消化液泡。經吞噬粒子之消除涉及將降解酶釋放至吞噬體中且產生活性氧中間物(reactive oxygen intermediate;ROI)。此最後過程已知為呼吸爆發。在此過程期間產生之第一ROI為超氧陰離子。後續反應將產生其他ROI,諸如過氧化氫、羥基及單態 氧。過氧化氫可以經由髓過氧化酶系統轉化成次氯酸,形成強效抗細菌系統。儘管針對對蝦中之呼吸爆發之研究數目有限,但實際結果鑒於其值作為環境失調之生物標誌物而極其引人關注。此外,以下事實強烈暗示呼吸爆發作為對蝦中之殺微生物機制之重要性:蝦之病原性細菌已發展出避開此機制之方式。在南美白對蝦(P.tannamei)中,與藉由溶藻弧菌(V.Iginolyticus)及諸如大腸桿菌(Escherichia coli)之其他細菌產生之強烈刺激相反,當使用毒性創傷弧菌(Vibrio vulniflcus)作為誘導子時,不產生O2
PO負責節肢動物中之黑化過程。PO酶由ProPO酶之活化產生。ProPO活化系統已在甲殼動物中進行非常充分的研究。使用此等不同方法,可以關於蝦之健康狀況較佳地瞭解ProPO系統之功能。一些研究已顯示,ProPO可以用作健康及環境標誌物,因為改變與感染狀態及環境變化有關,此問題最近亦已在基因表現量上得到證實。已在廣泛範圍之無脊椎動物體內偵測到之酚氧化酶藉由若干微生物多醣活化,該等微生物多醣包括來自真菌細胞壁之β-1,3-葡聚糖及來自細菌細胞壁之肽聚糖或脂多醣。
抗細菌肽及蛋白質已在節肢動物中、主要在昆蟲及螯肢動物亞門(chelicerata)中進行充分研究,其中抗微生物分子家族已得到分離及表徵。在甲殼動物中,一些研究已顯示出甲殼動物血淋巴抑制細菌生長之能力。在普通濱蟹(C.maenas)中發現若干抗細菌蛋白質,其具有針對革蘭氏陽性(Gram-positive)及革蘭氏陰性(Gram-negative)細菌之試管內活性。
在文獻中存在報導顯示,甲殼動物體內之抗細菌活性可以視為環境標誌物。因此,諸多研究人員已開發出基於抑制瓊脂培養盤上(區 域抑制分析及菌落形成單位(colony-forming unit;CFU)抑制分析)或微量滴定盤上之液體培養基中(濁度分析)之細菌生長的定量抗細菌分析,用於偵測甲殼動物血淋巴中之抗細菌能力。使用CFU抑制技術,已在食草蟹普通濱蟹之顆粒血球中及在其他甲殼動物物種中發現抗細菌活性。使用區域抑制分析及濁度測試,已報導藍蟹(C.sapidus)血清中之強效抗細菌活性。使用CFU抑制分析,已描述斑節對蝦(P.monodon)之血淋巴中針對革蘭氏陰性細菌之殺細菌活性。在凡納濱對蝦(P.Iannamei)中,已使用濁度分析觀察到針對不同海洋細菌之強烈的血漿抗細菌活性。
近年來,一直在研究血液代謝物作為用於監控暴露於不同環境條件之野生型或經培養甲殼動物之生理狀況的工具。血氰蛋白為主要血淋巴組分(>60%);其餘蛋白質(按濃度次序)包括凝固蛋白原、去輔基血氰蛋白(apohemocyanin)、激素及脂蛋白。血液蛋白質含量隨環境及生理條件的改變而波動,且在甲殼動物之自O2轉運至繁殖直至應激反應之生理學中起重要作用。實際上,蛻皮、繁殖、營養狀態、感染、缺氧及鹽度變化為影響血淋巴蛋白質之相對比例及總數量的主要因素。
蝦免疫系統反應在很大程度上基於蛋白質。此等蛋白質參與例如識別外來粒子及捕獲外來侵襲生物體且防止在受傷時失血。近來已顯示,蝦經充分適應以使用蛋白質作為能量及分子之來源。已發現,在多種甲殼動物中,血液蛋白質濃度與營養條件有關。血液中之蛋白質濃度為營養條件之可能指數,其在饑餓的明蝦及龍蝦中下降。蛻皮週期對蛋白質含量施加約束,血液蛋白質典型地恰好在蛻皮之前下降,因為吸收水且蛋白質用於合成新的外骨骼。蛋白質含量隨後在蛻皮之後又逐漸累積,因為水 經組織替換。因此,量測甲殼動物樣品組之血液蛋白質濃度可以提供用於鑑別其狀況之有價值的資訊。血液中之蛋白質濃度與血液之折射率成正比。因此,血液折射率之量測結果提供用於評定明蝦之營養狀況之野外方法的可能性。
比色程序通常為用於量測血清蛋白質濃度之較佳選擇;然而,其為昂貴的、費時的,且不容易在野外執行。歸因於簡易性、快速操作模式及所需材料之量少,使用折射計量測血清蛋白質濃度提供用於在不需要任何實驗室設施之情況下評定甲殼動物之生理狀態(應激、免疫反應、營養狀態、蛻皮等)的非破壞性野外方法;折射計為可以在野外或在甲殼動物農場上使用之簡單小型攜帶型儀器。
當向動物投予時,所揭示組合之具體實例展現出對至少一些與炎症相關之生物標誌物的可量測影響。例示性生物標誌物包括(但不限於)腫瘤壞死因子α(TNF-α)、核因子κ B(NF-κ B)、干擾素γ(IFN-γ)、介白素-6(IL6)、介白素-8(IL8)、介白素-1 β(IL-1 β)、細胞COX-2基因表現、L-選擇素、介白素-8受體(IL8R)、細胞脂肪加氧酶(LOX)、C反應蛋白(CRP)、巨噬細胞炎症蛋白1-α(MIP)基因表現、類廿烷酸(由COX及LOX產生之局部細胞產物)、α-1-抗胰蛋白酶(AAT)、結合球蛋白、血纖維蛋白原、尿酸/尿酸鹽、高半胱胺酸、脂聯素及/或toll樣受體(TLR)。向動物投予所揭示組合之具體實例可以促進降低至少一種生物標誌物之活體內含量,從而藉由幫助降低與以此等生物標誌物中之一或多者升高為特徵的炎性病症相關的症狀或體症之流行率及/或嚴重程度來幫助維持動物之整體健康,該炎性病症包括(但不限於)關節炎、蹄病、皮炎、濕疹、動 脈粥樣硬化、膀胱炎、炎症性腸病、出血性胃腸炎、腦膜炎-動脈炎、腦炎、後天性重症肌無力、肝炎、胰炎、齒齦炎、退化性神經病況、糖尿病及肥胖。
不希望受任何特定操作理論限制,本文中所揭示之組成物及組合可以增強動物之免疫系統(例如,先天性及/或適應性免疫系統)。舉例而言,本文中所揭示之組成物及/或組合之一些具體實例可以影響或改變(例如,增加或減少10%至90%,諸如10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%)免疫生物標誌物之含量,該等免疫標誌物包括(但不限於)嗜中性白血球L-選擇素、IL-1 β及/或C反應蛋白(基因名稱「CRP」)之基因表現、甘露糖結合凝集素2(基因名稱「Mbl2」)、血清澱粉樣蛋白P組分(基因名稱「Apcs」)、介白素5(基因名稱「I15」)、干擾素α 1(基因名稱「Ifna1」)、趨化因子配體12(基因名稱「Ccl12」)、顆粒球巨噬細胞群落刺激因子(基因名稱「Csf2」)、介白素13(基因名稱「Il13」)、介白素10(基因名稱「Il10」)、反式作用T細胞特異性轉錄因子3(基因名稱「Gata3」)、信號轉導與轉錄活化因子3(基因名稱「Stat3」)、C3轉化酶(基因名稱「C3」)、toll樣受體3(基因名稱「Tlr3」)、趨化因子配體5(基因名稱「Ccl5」)、干擾素引導GTP結合蛋白(基因名稱「Mx2」)、NF κ B-1(基因名稱「Nfkb1」)、NF κ B1-α(基因名稱「NFKBIA」)、toll樣受體9(基因名稱「Tlr9」)、C-X-C基元趨化因子10(基因名稱「Cxcl10」)、分化簇4(基因名稱「Cd4」)、介白素16(基因名稱「I16」)、趨化因子配體3(基因名稱「Ccl3」)、C-C趨化因子受體類型6(基因名稱「Ccr6」)、分化簇40(基因名稱「Cd40」)、RIG-1樣受體雙股RNA解螺旋酶(基因名稱「Ddx58」)、介白素18(基因名稱「Il18」)、 c-Jun蛋白(基因名稱「Jun」)、腫瘤壞死因子(基因名稱「Tnf」)、腫瘤壞死因子受體相關因子6(基因名稱「Traf6」)、信號轉導與轉錄活化因子1(基因名稱「Stat1」)、干擾素β-1(基因名稱「Ifhb1」)、分化簇80(基因名稱「Cd80」)、toll樣受體1(基因名稱「Tlr1」)、toll樣受體6(基因名稱「Tlr6」)、MAP激酶8(基因名稱「Mapk8」)、含核苷酸結合寡聚化域蛋白2(基因名稱「Nod2」)、C-C趨化因子受體類型8(基因名稱「Ccr8」)、介白素-1受體相關激酶1(基因名稱「Irak1」)、糖脂抗原呈現MHC樣分子之CD1家族(基因名稱「Cd1d1」)、信號轉導與轉錄活化因子4(基因名稱「Stat4」)、1AA胺基酸水解酶(基因名稱「llr1」)、Fas配體(TNF超家族成員6)(基因名稱「Faslg」)、干擾素調控因子3(基因名稱「Irf3」)、磷酸化干擾素-α受體1次單位(基因名稱「Ifnar1」)、Nrampl(基因名稱「Slc11a1」)、toll樣受體4(基因名稱「Tlr4」)、分化簇86(基因名稱「Cd86」)、卡斯蛋白酶(caspase)1(基因名稱「Casp1」)、C-C趨化因子受體類型5(基因名稱「Ccr5」)、細胞間黏附分子1(基因名稱「Icam1」)、卡斯汀(cathelcidin)抗微生物蛋白(基因名稱「Camp」)、toll樣受體7(基因名稱「Tlr7」)、干擾素調控因子7(基因名稱「Irf7」)、RAR相關孤兒受體C(基因名稱「Rorc」)、分化簇40lg(基因名稱「Cd40lg」)、T-box轉錄因子21(基因名稱「Tbx21」)、卡斯蛋白酶8(基因名稱「Casp8」)、介白素23a(基因名稱「Il23a」)、分化簇14(基因名稱「Cd14」)、分化簇8a(基因名稱「Cd8a」)、趨化因子受體3(基因名稱「Cxcr3」)、叉頭框P3(基因名稱「Foxp3」)、脂多醣結合蛋白(基因名稱「Lbp」)、MAP激酶1(基因名稱「Mapk1」)、髓樣分化初次應答基因88(基因名稱「Myd88」)、信號轉導與轉錄活化因子6(基因名稱「Stat6」)、 聚集蛋白及/或介白素33(基因名稱「IL33」)。如以引用的方式併入本文中之美國專利第8,142,798號中所揭示,該組合之一些具體實例亦可以強化動物之適應性免疫系統,例如藉由增加對疫苗之反應。在一些具體實例中,相對於已接受疫苗但尚未投予本文中所揭示之組合之動物而言,諸如IgG含量之抗體含量可以增加。該組合之一些具體實例可以影響炎症生物標誌物之含量,該等炎症生物標誌物例如COX-2、IL-1 β、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、介白素-8受體(IL8R)及/或L-選擇素。在一些具體實例中,動物免疫細胞可以增加10%至90%,諸如10%至80%、20%至70%或30%至60%。
在一個具體實例中,當直接併入至飼料原料中時,該組合可以按每公噸(2000磅)飼料0.1至20kg範圍內之量添加。在一些具體實例中,組合具體實例可以按每公噸飼料0.5kg至10kg之量添加至動物飼料原料中。在某些具體實例中,組合具體實例可以按每公噸飼料1至5kg範圍內之量添加至飼料原料中。
對於一些具體實例,諸如在家畜牛之情況下,該組合可以按10公克/頭/天至70公克/頭/天、諸如45公克/頭/天至70公克/頭/天或50公克/頭/天至60公克/頭/天之範圍提供。一般技術者應瞭解,所餵飼之組合之量可以視多種因素而改變,該等因素包括動物物種、動物之大小及待添加該組合之飼料原料之類型。在一些具體實例中,該組合之個別組分(諸如絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維生素D物質或植物萃取物)可以按上文所論述之量存在;因此,包含所有5種組分之組合部分之量按飼料原料、伴侶動物食物或該組合之總乾重計可以在25ppm至10,000ppm範圍內: 諸如25ppm至5,000ppm、或25ppm至2,500ppm、或25ppm至1,250ppm、或25ppm至500ppm。類似地,在包含四種該等組分之具體實例中,包含此四種組分之組合部分之量可以在20ppm至8,000ppm範圍內,諸如20ppm至4,000ppm、或25ppm至2,000ppm、或25ppm至1,000ppm、或25ppm至400ppm。包含三種該等組分之組合具體實例可以包括一定量的包含該三種組分之組合部分,該量可以在20ppm至6,000ppm範圍內,諸如20ppm至3,000ppm、或25ppm至1,500ppm、或25ppm至750ppm、或25ppm至300ppm。包含兩種該等組分之組合具體實例可以包括一定量的包含該兩種組分之組合部分,該量可以在20ppm至4,000ppm範圍內,諸如20ppm至2,000ppm、或25ppm至1,000ppm、或25ppm至500ppm、或25ppm至200ppm。或者,該組合可以作為補充品按以每公斤活體重每天0.01公克至20公克之量直接餵飼給動物,諸如每公斤0.01公克至10公克、0.01公克至5公克、0.01公克至1公克或0.015公克至1公克。
在一些具體實例中,所揭示之組成物及/或組合可以投予給水生動物以獲得一或多個有利結果。舉例而言,該組成物及/或組合之具體實例可以用於預防及/或治療某些水生疾病。另外,該組成物及/或組合可以改善水生動物之飼料轉化率。飼料轉化率亦稱為飼料轉化比率,為動物將飼料質量轉化成增加之身體質量之效率的量度。認為飼料轉化率低之動物為有效的,因為其達至所要體重所需之飼料較少。飼料轉化率在物種之間變化。舉例而言,吳郭魚典型地具有1.6至1.8之飼料轉化比率,且養殖鮭魚典型地具有約1.2之比率。在一些具體實例中,飼料轉化率可以藉由投予該組成物及/或組合增強0.5%至20%或20%以上,諸如1%至20%,較佳2% 至10%,且在某些具體實例中,3%至5%。
對於一些具體實例,諸如在水生動物之情況下,該組成物及/或組合可以基於體重投予,諸如每磅或公斤魚體重每天數公克該組成物及/或組合,或每磅或公斤體重數毫克該組成物及/或組合。在一特定實施例中,當向魚投予時,該組成物及/或組合可以按每公斤體重每天大於零至500mg之範圍提供,諸如每公斤體重每天10mg至350mg或每公斤體重每天50mg至250mg。
或者,該組成物及/或組合基於提供給水生動物之飼料之量投予。在一些具體實例中,提供給水生動物之組成物及/或組合之量為每公斤飼料大於零至10,000mg或10,000mg以上,諸如每公斤飼料500mg至7,500mg或每公斤飼料1,000mg至5,000mg。
一般技術者應瞭解,所投予之組成物及/或組合之量可以視多種因素而改變,該等因素包括動物物種、動物之大小、動物之年齡或生長階段及待添加該組合之飼料原料之類型。在一些具體實例中,每公斤體重每天投予100mg,且在其他具體實例中,每公斤體重每天投予200mg。在某些具體實例中,向動物投予每公斤飼料1,000mg、2,000mg或4,000mg。
圖20提供基於每公斤體重每天100mg組成物及/或組合之投予量,孵化、養殖及養成階段之例示性範圍。圖20展示孵化階段的魚每天以體重之10%之餵飼率餵飼且每公斤體重每天投予100mg組成物及/或組合,該組成物及/或組合之劑量為每公斤飼料1,000mg。在養殖階段,魚之劑量增加至每公斤飼料2,000mg,且在養成階段,魚之劑量多達每公斤飼料4,000mg。圖20亦提供例示性飼料大小,孵化階段之飼料大小為大於零至1 mm及1mm至2mm,養殖階段為2mm至3mm,且養成階段為3mm或3mm以上。飼料大小可以視水生動物之物種以及該動物之生長階段而改變。特定水生動物在不同生長階段之適合飼料大小為一般熟習此項技術者所已知。
在所揭示之特定具體實例中,該組成物及/或組合可以使用載劑及/或塗佈劑向水生動物投予。該載劑及/或塗佈劑可以為一般技術者已知適合與飼料組成物及/或組合相組合之任何載劑及/或塗佈劑。在所揭示之其他特定具體實例中,該組成物及/或組合可以使用分散劑或塗佈劑向水生動物投予,使得該組成物及或組合在水生環境中耦接至動物飼料原料。在一些具體實例中,載劑或塗佈劑並非必需的及/或該組成物及/或組合可以作為主要飼料原料投予。
動物可以為水生動物,包括(但不限於)魚類、甲殼動物及軟體動物。在一些具體實例中,水生動物為魚類或軟體動物。在其他具體實例中,水生動物並非甲殼動物。水生動物可以出於食用、觀賞用途或出於其他原因而飼養。
魚可以為任何魚,其中例示性特定物種包括吳郭魚,諸如尼羅吳郭魚(Nile tilapia)、藍吳郭魚(blue tilapia)、莫三鼻克吳郭魚(Mozambique tilapia)、慈鯛科吳郭魚(tilapiine cichlid)或其雜種;鯛,諸如羊首魚(sheepshead)、門齒鯛(scup)、黃鰭鯛(yellowfin bream)、金頭鯛(gilt-head bream)、蘆鯛(Saucereye porgies)、真鯛(red sea bream)或其雜種;鯉魚,諸如普通鯉魚、亞洲鯉魚(Asiancarp)、印度鯉魚(Indian carp)、青魚(black carp)、草魚(grass carp)、白鰱(silver carp)、大頭鰱(bighead carp)或其雜 種;鮭魚,諸如粉鮭(pink salmon)、***哈魚(chum salmon)、紅鮭(sockeye salmon)、銀鮭(coho salmon)、大西洋鮭(Atlantic salmon)、契努克鮭(chinook salmon)、櫻花鉤吻鮭(masu salmon)或其雜種;鱒魚,諸如虹鱒魚(rainbow trout)、亞得里亞海鱒魚(Adriatic trout)、邦納維爾割喉鱒(Bonneville cutthroat trout)、河鱒(brook trout)、硬頭鱒(steelhead trout)或其雜種;鱈魚,諸如東北大西洋鱈魚(Atlantic northeast cod)、西北大西洋鱈魚(Atlantic northwest cod)、太平洋鱈魚(Pacific cod)或其雜種;大比目魚,諸如太平洋大比目魚(Pacific halibut)、大西洋大比目魚(Atlantic halibut)或其雜種;笛鯛,諸如紅笛鯛(red snapper)、蘭勃舵魚(bluefish)或其雜種;鯡魚,諸如大西洋鯡魚(Atlantic herring)或太平洋鯡魚(Pacific herring);鯰魚,諸如河鯰(channel catfish)、蟾鬍子鯰(walking catfish)、巨鯰(shark catfish)、兵鯰(Corydoras)、波沙(basa)、蝌蚪鯰(banjo catfish)、棘甲鯰(talking catfish)、長鬚鯰(long-whiskered catfish)、吸口鯰(armoured suckermouth catfish)、藍鯰(blue catfish)或其雜種;牙鮃,諸如白斑牙鮃(gulf flounder)、南方牙鮃(southern flounder)、齒牙鮃(summer flounder)、美洲擬鰈(winter flounder)、歐洲川鰈(European flounder)、牙鮃(olive flounder)或其雜種;無鬚鱈,諸如歐洲無鬚鱈(European hake)、阿根廷無鬚鱈(Argentine hake)、佛羅里達長鰭鱈(Southern hake)、大鱗無鬚鱈(offshore hake)、本格拉無鬚鱈(benguela hake)、淺水無鬚鱈(shallow-water hake)、深水無鬚鱈(deep-water hake)、智利無鬚鱈(gayi hake)、銀無鬚鱈(silver hake)、北太平洋無鬚鱈(North Pacific hake)、巴拿馬無鬚鱈(Panama hake)、塞內加爾無鬚鱈(Senegalese hake)或其雜種;香魚(smelt);鯷魚,諸如歐洲鯷魚(European anchovy)、阿根 廷鯷魚(Argentine anchoita)、加利福尼亞鯷魚(Californian anchovy)、日本鯷魚(Japanese anchovy)、秘魯鯷魚(Peruvian anchovy)、南非鯷魚(Southern African anchovy)或其雜種;小鱈魚(lingcod);莫伊魚(moi);河鱸,諸如黃鱸(yellow perch)、巴爾喀什鱸魚(balkhash perch)、歐洲鱸魚(European perch)或其雜種;橘棘鯛(orange roughy);鱸魚,諸如歐洲海鱸(European sea bass)、條紋鱸(striped bass)、鱸滑石斑魚(black sea bass)、智利海鱸(Chilean sea bass)、斑點鱸(spotted bass)、大嘴海鱸(largemouth sea bass)、亞洲海鱸(Asian sea bass)、尖吻鱸(barramundi)或其雜種;鮪魚,諸如黃鰭鮪魚(yellowfln tuna)、大西洋藍鰭鮪魚(Atlantic bluefin tuna)、太平洋藍鰭鮪魚(pacific bluefin tuna)、長鰭鮪魚(albacore tuna)或其雜種;鯕鰍(mahi mahi);鯖魚,諸如大西洋鯖(Atlantic mackerel)、短鯖(Short rmackerel)、藍鯖(Blue mackerel)、白腹鯖(chub mackerel)、大耳馬鮫(king mackerel)、大西洋西班牙鯖(Atlantic Spanish mackerel)、韓國鯖(Korean mackerel)或其雜種;鰻魚,諸如美國鰻魚(American eel)、歐洲鰻魚(European eel)、日本鰻魚(Japanese eel)、短鰭鰻魚(short-fin eel)、康吉鰻魚(conga eel)或其雜種;金梭魚,諸如大金梭魚(great barracuda)、太平洋金梭魚(Pacific barracuda)、黃紋金梭魚(Yellowstripe barracuda)、澳大利亞金梭魚(Australian barracuda)、歐洲金梭魚(European barracuda)或其雜種;槍魚,諸如大西洋藍槍魚(Atlantic blue marlin)、黑槍魚(black marlin)或其雜種;鯔魚,諸如紅鯔魚(red mullet)、灰鯔魚(grey mullet)或其雜種;大西洋鱸魚(Atlantic ocean perch);尼羅河鱸魚(Nile perch);北極鮭(Arctic char);黑線鱈(haddock);長尾鱈(hoki);阿拉斯加綠青鱈(Alaskan pollock);大菱鮃(turbot);淡水石首魚(freshwater drum);白眼魚(walleye);鰩魚(skate);鱘魚(sturgeon),諸如白鯨(beluga)、卡盧加(Kaluga)、斯塔樂(starlet)或其雜種;多佛鰨魚(Dover sole)或太平洋油鰈(Microstomus pacificus);普通鰨魚;狼魚(wolfish);裸蓋魚(sablefish);美洲西鯡(American shad);海魴(John Dory);石斑魚(grouper);安康魚(monkfish);鮐魚(pompano);湖白鮭(lake whitefish);方頭魚(tilefish);棘鰆(wahoo);單鰭鱈(cusk);弓鰭魚(bowfin);岬羽鼬(kingklip);月魚(opah);灰鯖鯊(mako shark);劍魚(swordfish);軍曹魚(cobia);石首魚(croaker)。在某些具體實例中,術語『魚(fish)』不包括鮭魚或鱒魚。在其他具體實例中,魚選自吳郭魚、鯛、鯉魚、鱈魚、大比目魚、笛鯛、鯡魚、鯰魚、牙鮃、無鬚鱈、香魚、鯷魚、小鱈魚、莫伊魚、河鱸、橘棘鯛、鱸魚、鮪魚、鯕鰍、鯖魚、鰻、金梭魚、槍魚、大西洋鱸魚、尼羅河鱸魚、北極鮭、黑線鱈、長尾鱈、阿拉斯加綠青鱈、大菱鮃、淡水石首魚、白眼魚、鰩魚、鱘魚、多佛鰨魚、普通鰨魚、狼魚、裸蓋魚、美洲西鯡、海魴、石斑魚、安康魚、鮐魚、湖白鮭、方頭魚、棘鰆、單鰭鱈、弓鰭魚、岬羽鼬、月魚、灰鯖鯊、劍魚、軍曹魚、石首魚或其雜種。
該組成物及/或組合可以提供給任何甲殼動物,包括(但不限於)蝦,諸如中國白蝦(Chinese white shrimp)、粉紅蝦(pink shrimp)、黑虎蝦(black tiger shrimp)、淡水蝦(freshwater shrimp)、海灣蝦(gulf shrimp)、太平洋白蝦(Pacific white shrimp)、白肢蝦(whiteleg shrimp)、大虎蝦(giant tiger shrimp)、石頭蝦(rock shrimp)、秋醬蝦(Akiama paste shrimp)、南部厚殼蝦(Southern rough shrimp)、對蝦(fleshy prawn)、香蕉蝦(banana prawn)、北部蝦(Northern prawn)或其雜種;蟹,諸如藍蟹(blue crab)、比基托蟹 (peekytoe crab)、扳手蟹(spanner crab)、約拿蟹(Jonah crab)、雪蟹(snow crab)、帝王蟹(king crab)、石蟹(stone crab)、鄧傑內斯蟹(Dungeness crab)、軟殼蟹(soft-shell crab)、克羅默蟹(Cromer crab)或其雜種;龍蝦,諸如美國龍蝦(American lobster)、棘龍蝦(spiny lobster)、鎧甲蝦(squat lobster)或其雜種;小龍蝦(crayfish);磷蝦(krill);橈足動物(copepod);藤壺,諸如鵝頸藤壺(goose barnacle)、皮克洛藤壺(picoroco barnacle)或其雜種。在其他具體實例中,甲殼動物不為蝦及/或選自蟹、龍蝦、小龍蝦、磷蝦、橈足動物、藤壺或其雜種。
軟體動物可以選自魷魚,諸如普通魷魚、巴塔哥尼亞魷魚(Patagonian squid)、長鰭近岸魷魚(longfin inshore squid)、紅色飛魷(neon flying squid)、阿根廷短鰭魷魚(Argentine shortfin squid)、洪堡特魷魚(Humboldt squid)、日本飛魷(Japanese flying squid)、惠靈頓魷魚(Wellington squid)或其雜種;章魚,諸如普通章魚;蚌蛤,諸如硬殼蛤(hard clam)、軟殼蛤(soft-shell clam)、海蛤(ocean quahog)、浪蛤(surf clam)、亞沙里蛤(Asari)、哈馬蛤(Hamaguri)、彭格列蛤(Vongola)、蛤蜊(Cozza)、櫻蛤(Tellina)或其雜種;牡蠣,諸如太平洋牡蠣(Pacific oyster)、石牡蠣(rock oyster)、歐洲平牡蠣(European flat oyster)、葡萄牙牡蠣(Portuguese oyster)或其雜種;蚌,諸如藍蚌(blue mussel)、淡水蚌(freshwater mussel)、綠唇蚌(green-lipped mussel)、亞洲綠蚌(Asian green mussel)、地中海蚌(Mediterranean mussel)、波羅的海蚌(Baltic mussel)或其雜種;鮑魚(abalone);海螺(conch);岩石蝸牛(rock snail);蛾螺(whelk);鳥蛤(cockle);或其組合。
在一些具體實例中,動物可以為易受環境弊病影響之水生動物,該環境弊病諸如由於周圍環境所致之氨之急性毒性或由例如水溫升高或降低造成之熱應激。氨中毒可以在水生動物暴露於氨濃度大於約2.0mg/L之環境中時發生。在一些具體實例中,在動物發生氨中毒之前及/或在動物發生氨中毒之同時投予該組成物及/或組合。在其他具體實例中,該方法可以用於改善遭受或罹患疾病之動物之疾病的體症或症狀。例示性具體實例可以包含向動物投予該組合以幫助改善傳染性及非傳染性疾病或病況之體症或症狀。
實例可以包括以下:- 傳染性疾病,諸如細菌、病毒、真菌媒介物或有毒藻類;- 環境疾病,諸如氨毒、亞硝酸鹽毒、硝酸鹽毒、缺氧、懸浮固體含量增加、鹽度水準改變、低體溫症、高體溫症或pH水準改變;- 營養病,諸如維生素缺乏症、黴菌毒素或腐臭飼料;以及- 遺傳病,諸如解剖學病症、脊柱腹凸或鰭發育不全。
應激為水生物種由於有害地影響其幸福之各種因素而不能維持正常生理狀態之病況。在水產養殖中誘發之較常見應激因素中之一些包括:化學應激源,例如不良水品質,諸如低溶解氧或不當pH;污染,諸如故意污染、化學處理、意外污染、殺蟲劑或洩漏;飲食組成,諸如蛋白質或胺基酸之類型;以及含氮廢棄物及其他代謝廢棄物,諸如氨、硝酸鹽或亞硝酸鹽之累積;生物應激源,例如群體密度,諸如過度擁擠;引起攻擊、領域性及/或 側向游泳空間要求問題之其他魚類物種;微生物,諸如致病性及非致病性生物體;以及微生物,諸如體內及體外寄生蟲;物理應激源,例如溫度,諸如低體溫症及高體溫症,溫度為魚類免疫系統之最重要影響因素之一;光;聲音;以及溶解氣體;以及程序應激源,例如處置;裝運;以及疾病治療。
V.實施例
實施例1
在此實施例中,測定組合具體實例對動物健康之影響。將雌性大鼠(約200g)分配至14種處理中,其中每種處理六隻動物,且餵飼以下飲食持續28天時間。在此時間期間,大鼠每天接受飼料及水,且維持在20℃下之12小時:12小時光照:黑暗循環。評估以下組成物、組分及/或其組合:
A-對照組飲食(Harlan Teklad 8604,Harlan Laboratories)
B-含有具有礦物黏土、二氧化矽、β-葡聚糖及/或甘露聚糖之組成物的飲食
C-含有絲蘭之飲食
D-含有皂皮樹屬之飲食
E-含有直接餵飼微生物之飲食
F-含有β-葡聚糖之飲食
G-含有維生素D物質之飲食
H-含有植物萃取物之飲食
I-為B+C之混合物之飲食
J-為B+D之混合物之飲食
K-為B+E之混合物之飲食
L-為B+F之混合物之飲食
M-為B+G之混合物之飲食
N-為B+H之混合物之飲食
在第28天,用***(ketamine)及甲苯噻嗪(xylazine)之混合物麻醉動物且經由心臟穿刺獲得全血樣品(用酸性枸櫞酸鹽葡萄糖[acid citrate dextrose;ACD]保存)。隨後經由頸椎脫位術使大鼠安樂死。將全血分成兩個部分:保存在「壇普斯管(Tempus tube)」中用於後續RNA純化之部分;及在4℃下儲存若干小時,隨後離心且回收血漿部分之第二部分。將經純化RNA儲存在-80℃下,直至其用於定量PCR為止且血漿將儲存在相同溫度下,直至適合生物標誌物之定量可能為止。
針對13種添加劑組合(以上項目B至N)影響生物標誌物之能力測定其作用,該等生物標誌物諸如本文中所揭示之與以下生物功能相關的生物標誌物中之任何一或多者:a.界面活性劑;b.乳化;c.抗氧化劑;d.消炎劑;e.抗微生物;f.抗高血壓;g.免疫調變; h.代謝調控;i.營養物利用及轉運;j.內分泌及神經內分泌調控;及/或k.壽命
藉由變異數分析(analysis of variance;ANOVA)分析資料且用恰當的多範圍測試評定個別處理對結果「a」至「k」之影響。測定統計顯著相互作用,其中個別成分(例如,以上項目B至H)對結果幾乎無影響或無影響,但當彼此組合餵飼時(例如,處理「I」至「N」)具有大(可能協同)影響。可以修改本發明實施例以測定其他組合(例如,B-H之組合及/或B與C-H中之任兩者或兩者以上之組合)之作用。
實施例2
在此實施例中,使用本文中所揭示之組合之具體實例(例如,單獨或與包含β-葡聚糖(例如,β-1,3(4)葡聚糖)、二氧化矽、礦物黏土、甘露聚糖及β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶之組成物(稱為「組成物A」)組合之經萃取葡萄渣)來評定該組合對免疫功能生物標誌物之影響。本發明實施例之一個具體實例為持續6天之短期研究,且另一具體實例為持續28天之較長期研究。
在兩個具體實例中,將四組雄性CD大鼠(每處理組8隻大鼠,175-200g)分配至以下四種處理中:
1.餵飼對照組
2.餵飼組成物A
3.餵飼葡萄渣萃取物
4.「2」與「3」之組合
以0.5% w/w飲食(Harlan Teklad 8604,Harlan Laboratories)向第2組及第4組提供組成物A。向第3組及第4組提供葡萄渣萃取物以提供每大鼠每天6.25mg總多酚之每日量。以此等處理維持動物6或28天,隨後將其麻醉,且經心臟穿刺獲得血液樣品。
經由珀可梯度離心自血液樣品純化嗜中性白血球,隨後在活細胞分析中評定酵母聚糖刺激之活性氧物質(ROS)產生情況。亦自嗜中性白血球中提取RNA,且使用定量逆轉錄酶聚合酶鏈式反應(qRT-PCR)評定三種mRNA之濃度。定量包括L-選擇素、介白素-8受體(IL8R)及β-肌動蛋白mRNA。根據Livak及Schmittgen(Methods 25,402-408(2001))之方法,L-選擇素及IL8R mRNA表示為與管家基因(β-肌動蛋白)之比例。
大鼠對此四種處理之短期(6天)暴露對嗜中性白血球L-選擇素及IL8R mRNA之影響示出在圖1及圖2中。單獨餵飼組成物A(CTP-5)引起L-選擇素及IL8R mRNA兩者之濃度小幅增加。然而,出人意料地,單獨餵飼葡萄渣萃取物(GPE)引起此兩種生物標誌物之表現大幅增加(圖1及圖2)。萃取物之此等影響非常出人意料且鑒於其量值而判斷為不當的。然而,向葡萄渣萃取物產品中添加組成物A減輕葡萄渣萃取物對嗜中性白血球生物標誌物基因表現之刺激作用。此等作用為出人意料之相互作用。
在長期(28天)研究中亦注意到類似出人意料之相互作用。在此實施例中,組成物A及葡萄渣萃取物均單獨地強化L-選擇素及IL8R mRNA於經分離大鼠嗜中性白血球中之表現。然而,葡萄渣萃取物與組成 物A之組合導致發生相互作用,伴隨著降低L-選擇素及IL8R mRNA於經分離嗜中性白血球中之表現(圖3及圖4)。
如圖1至圖4中所示,組成物A(CTP-5)當單獨餵飼時,增加兩種炎症標誌物L-選擇素及IL8R之表現。出人意料地,儘管葡萄萃取物產品被視為消炎產品,但在嗜中性白血球中亦發揮炎症特性。此等資料完全出人意料,因為認為抗氧化劑多酚起消炎劑作用。實際上,諸多研究已為此提供證據。然而,圖1至圖4中所示之結果明確表明葡萄多酚萃取物在單獨餵飼時,在大鼠模型中發揮促炎性特性。然而,當組成物A與葡萄多酚產品組合時,發生出人意料的相互作用。特定言之,組合產品對嗜中性白血球炎症生物標誌物發揮與個別組分單獨提供時所發揮的作用完全相反的作用。組合產品減少兩種關鍵炎症生物標誌物在嗜中性白血球中之表現。
在動物暴露於四種處理6天及28天之後,測定該等處理對嗜中性白血球響應於酵母聚糖(病原體模擬劑)之添加產生活性氧物質(ROS)之能力的影響。如圖5中所示,動物暴露於組成物A(CTP-5)6天引起嗜中性白血球之ROS產生能力小幅(5%)增加。類似地,動物暴露於葡萄渣萃取物(GPE)引起酵母聚糖刺激之ROS活性增加11%。然而,自餵飼組成物A與葡萄渣萃取物之組合之動物回收的嗜中性白血球表明,其嗜中性白血球對酵母聚糖攻擊之協同反應。自此等大鼠分離之嗜中性白血球表明,酵母聚糖刺激之ROS產生增加23%;一種完全未預料到的協同相互作用。
在自餵飼實驗處理28天之動物回收之嗜中性白血球中注意 到酵母聚糖刺激之ROS活性之類似反應(圖6)。在長期餵飼動物中,組成物A及葡萄渣萃取物(GPE)均增強嗜中性白血球響應於酵母聚糖攻擊產生ROS之能力。然而,飲食中之組成物A與葡萄渣萃取物之組合在嗜中性白血球產生ROS之能力方面產生大得多的反應。
除組合產品對嗜中性白血球基因表現及ROS產生之反常且未預料到的作用之外,在其他分析中亦注意到此兩種飼料添加劑之間的相互作用。舉例而言,當給動物餵飼該等處理6天時,血清C反應蛋白(CRP)表現以未預料到的方式反應。雖然組成物A(CTP-5)及葡萄萃取物(GPE)均使血清CRP濃度小幅升高,但組成物A與葡萄萃取物之組合對血清CRP濃度發揮協同作用(圖7)。出人意料地,在較長期研究中,單獨或組合形式之添加劑對血清CRP濃度不具有任何影響(資料圖中未示)。
C反應蛋白為急性期蛋白,其在肝臟中合成且在起始補體級聯中起重要作用。組成物A(CTP-5)與葡萄萃取物之組合對CRP表現之影響暗示該組合產品將協同增強補體功能。此等協同反應模擬在該組合產品影響酵母聚糖介導之ROS產生之情況下所偵測到的反應。因此,組合產品似乎出人意料地減弱炎症反應之一些態樣(例如嗜中性白血球募集潛能),而同時協同增強免疫反應之其他要素(例如ROS產生及CRP之肝形成/補體活化)。
實施例3
在此實施例中,測定組成物A(上文所論述)在狗、特定言之米格魯犬中對免疫生物標誌物之影響。所分析之具體標誌物包括嗜中性白血球L-選擇素及IL-8R mRNA及血漿介白素6(IL-6)、介白素4(IL-4)、 C反應蛋白(CRP)及干擾素-γ(INF-γ)。
動物:將二十八隻18-24個月齡完好雌性米格魯犬隨機分成兩組:A組(n=14;處理組)及B組(n=14;對照組)。對照組飲食為用於成年狗之Nutro® Natural Choice®羊肉粉及米天然乾狗糧。處理組飲食為以0.5%(w/w)所餵飼飲食/天之比率補充有組成物A之用於成年狗之Nutro® Natural Choice®羊肉粉及米天然乾狗糧。將狗圈養在兩個分開的房間中,其中各房間飼養各組七隻動物。所有狗單獨圈養且在凸起平台上餵飼。給各狗記錄日誌,詳述所食用食物之量、大便稠度(糞便稠度評分1-7)及在整個研究中所展示之其他健康相關症狀之發生情況。在第0天及第28天給狗稱重且給體況評分(body condition score;BCS)賦值。
在此實施例中所述之試驗起始之前,給狗餵飼Teklad犬科動物飲食#8653。因此,針對對照組飲食,給狗六天馴化期。在此時間期間,將狗之初始飲食與對照組飲食組合,一天天逐漸減小狗之初始飲食之量且增加對照組飲食之量,使得六天馴化期結束時,所有狗食用完所有對照組飲食。
樣品收集以及L-選擇素及IL-8R mRNA及血漿IL-6、IL-4、CRP發IFN-γ濃度之評定:在餵飼第0天(在CTP-5補充之前)、第14天及第28天,自所有動物之頸靜脈收集血液樣品。
在三個時間點中之每一者,自各動物收集一管10ml肝素鈉。立即使用珀可梯度離心自肝素鈉管中分離出嗜中性白血球。使用Trizol方法自嗜中性白血球中分離出RNA且將其儲存在-80℃下直至進一步分析為止。使用定量RT-PCR及對犬科動物序列具有特異性之引物評定L-選擇 素、IL-8R及RPL-19 mRNA之濃度。在-80℃下冷凍一毫升血漿用於未來細胞因子分析。在此樣品中,藉由ELISA評定IL-6、IL-4、C反應蛋白(CRP)及干擾素-γ(IFN-γ)之濃度。通常使用學生t檢驗(Student's t-test)評定各處理之間的差異。關於IL-6及CRP之評定,亦使用血漿細胞因子之零時刻值作為ANOVA中之共變數來解釋在兩個實驗組中記錄的IL-6及CRP之濃度的初始差異。
在第0天、第14天及第28天,兩種飲食對L-選擇素及IL-8R mRNA之影響分別示出在圖8及圖9中。餵飼組成物A14天對嗜中性白血球L-選擇素或IL-8R mRNA無影響(P>0.05);然而,在第28天,餵飼組成物A之動物展現嗜中性白血球L-選擇素mRNA增加2.2倍(P=0.004)且IL-8R mRNA增加1.7倍(P=0.029)。
該等處理對血漿IL-6之影響示出在圖10中。在第14天及第28天,在各處理之間未偵測到差異(P>0.05)。在研究開始時IL-6之濃度出於未知原因為高度可變的。
圖11展示組成物A對血漿IL-4濃度之影響。在三個時間點中之任一者,在各處理之間,IL-4濃度無差異(P>0.05)。
該等處理對血漿CRP濃度之影響示出在圖12中。在第0天、第14天及第28天,餵飼組成物A之狗展現數值較高之CRP濃度;然而,此等結果不顯著(P>0.05)。
該等處理對血漿IFN-γ濃度之影響示出在圖13中。在研究開始時(第0天),餵飼對照組及餵飼組成物A之動物中之IFN-γ相等。然而,在第14天及第28天,組成物A使血漿IFN-γ顯著增加(P<0.05)。
在第0天或第28天,各組之間體重及體況評分無不同。不存在關於組成物A之適口性的問題,且在經處理動物中之任一者中,未觀察到諸如嘔吐、下痢或嗜睡之飲食誘發之不良臨床體征。
餵飼組成物A提高先天性免疫力之以下三種生物標誌物之表現:嗜中性白血球L-選擇素及IL-8R mRNA及血清IFN-γ。組成物A對另外三種生物標誌物無影響:IL-6、IL-4及C反應蛋白。組成物A對嗜中性白血球L-選擇素及IL-8R之影響需要超過兩週來發展。這兩種生物標誌物增加意味著,嗜中性白血球對感染部位較敏感且較「可恢復(recruitable)」。特定言之,IL-8由感染部位附近之巨噬細胞分泌且用以補充白血球(包括嗜中性白血球)。白血球經由IL-8受體提供之偵測經由IL-8之濃度梯度移動。IL-8R之表現增加意味著嗜中性白血球內之監視功能加強。L-選擇素以黏附分子形式在白血球(包括嗜中性白血球)中表現。L-選擇素使得嗜中性白血球能夠黏附於毛細血管之內皮內襯且最終經由外溢逃離血管結構。免疫抑制使嗜中性白血球中之L-選擇素表現明顯下調且代表著應激藉以增加感染可能性之方式。在此實施例中,類似地,L-選擇素表現增加意味著嗜中性白血球監視功能增強。
IFN-γ為由Th1細胞、細胞毒性T細胞及自然殺手細胞(NK細胞)分泌之細胞因子。其具有抗病毒、免疫調控及抗腫瘤特性。更特定言之,IFN-γ促進NK細胞活性,增加巨噬細胞之抗原呈現及溶酶體活性,促進Th1分化且支持針對白血球遷移之黏附及結合。在此實施例中,IFN-γ濃度在餵飼該產品2週之內升高。如同L-選擇素及IL-8R一樣,升高之IFN-γ暗示免疫監視增強。
IL-6由T細胞、巨噬細胞及內皮細胞響應於感染、瘤形成、創傷及燒傷而釋放。其為發熱及急性期反應之重要介體。IL-6主要對血細胞生成及血小板生成有影響且似乎為惡性細胞之生長因子。IL-6之過度表現會導致自體免疫疾病及多種淋巴惡性腫瘤。餵飼組成物A之狗(僅)在第0天展現較高之IL-6血漿含量這一觀察結果表明,此等動物可能正遭受暫時性亞臨床感染或創傷,因為在此日期,所有動物均以健康方式呈現及表現。截至第14天及第28天,餵飼組成物A之狗血漿IL-6含量與餵飼對照組之狗中所發現之含量無不同。在此實施例中,在第0天、第14天或第28天,餵飼組成物A之狗與餵飼對照組之狗的血漿IL-4含量亦無差異。IL-4為誘導天然輔助T細胞分化成Th2細胞之細胞因子。其參與B細胞發展、IgE合成及過敏反應之調控。IL-4之過度產生與過敏相關。在此研究中,組成物A不增加IL-6或IL-4之血漿含量這一事實鼓勵且支持以下結論:此產品不過度刺激臨床正常動物之免疫系統。
CRP為由肝臟產生之急性期蛋白。CRP之生理作用為結合在已死細胞或將死細胞之表面上表現之磷酸膽鹼,企圖活化補體級聯。CRP含量響應於廣泛範圍的急性或慢性炎症病況顯著上升,該等炎症病況諸如細菌、病毒及真菌感染、惡性腫瘤及組織損傷。IL-6可以誘導由肝臟合成CRP。在此實施例中,量測餵飼組成物A之狗與餵飼對照組之狗之間的CRP血漿含量。
實施例4
在此實施例中,量測在餵飼組成物A之馬中,馬鏈球菌之嗜中性白血球介導之殺死、嗜中性白血球IL-8R mRNA及薰煙色麴菌DNA 之血漿含量。
將十八匹馬分配至以下兩組中之一者中:1)餵飼對照組(n=9)及2)餵飼組成物A(n=9)。第1組由年齡介於1歲至16歲之6匹閹馬及3匹母馬組成。第2組由年齡介於2歲至17歲之6匹閹馬及3匹母馬組成。給第1組中之馬餵飼4 lb/h/d完全飼料集結粒(以所餵飼之飼料(as-fed)計,18%粗蛋白、2%粗脂肪及6%粗纖維)及提摩西草(timothy hay)。第2組中之馬接受相同飲食,但在集結粒中包括49 g/h/d組成物A。餵飼飲食總共28天。將馬圈養在畜欄中且每天騎馬。該研究中所包括之馬之品種為誇特馬(Quarter horse)、純種馬(Thoroughbred)及阿帕盧薩馬(Appaloosa),且其重量介於800磅至1400磅範圍內。在組別分配之前(第0天)及在該研究之第14天及第28天,自所有馬收集血液樣品。使用珀可梯度離心分離嗜中性白血球且使用Trizol試劑分離RNA。藉由定量RT-PCR且基於參考基因RPL-19之表現量測IL-8R mRNA之量。在第14天及第28天評定嗜中性白血球吞噬馬鏈球菌之能力且以基因組單位(genomic unit;GU)量度。以嗜中性白血球:馬鏈球菌之兩個比率(1:30及1:60)評定嗜中性白血球殺死能力。使用定量RT-PCR分析血漿中之薰煙色麴菌DNA。使用PROC GLM(SAS,統計分析系統)分析資料,且顯著性經評估在P<0.05機率水準下。
馬血漿中所存在之薰煙色麴菌DNA之濃度示出在圖14中。在研究開始時(第0天),偵測到極少量薰煙色麴菌DNA;然而,在第14天及第28天,濃度升高。在第14天,餵飼對照組之馬及餵飼組成物A之馬中之薰煙色麴菌DNA之濃度分別為2.86及2.05 GU×104。一匹來自第1組之馬在第14天展現極高薰煙色麴菌DNA濃度(5.38 GU×104/ml)且在收 集下一血液樣品之前死亡。在餵飼對照組之動物及餵飼組成物A之動物中,其餘馬在第28天之薰煙色麴菌DNA分別為1.34及0.77GU×104/ml。在一段時間內,對照組馬與組成物A馬之間的薰煙色麴菌DNA GU平均值不同(P=0.03)。
餵飼對照組之馬及餵飼組成物A之馬的嗜中性白血球IL-8R mRNA示出在圖15中。在第14天,在餵飼對照組之馬及餵飼組成物A之馬之間,嗜中性白血球IL-8R mRNA表現無不同,但當相比於第0天的值時,兩組均有所降低。在第28天,在餵飼對照組之動物中,嗜中性白血球IL-8R mRNA進一步下降;然而,餵飼組成物A之馬之嗜中性白血球IL-8R mRNA顯著升高(P=0.01)。
餵飼對照組之馬及餵飼組成物A之馬中,馬鏈球菌之嗜中性白血球介導之殺死示出在圖16[菌落形成單位(CFU)]及表1[吸光度(550-665nm)]中。自餵飼組成物A之馬獲得之嗜中性白血球當相比於餵飼對照組之馬時,殺死較多馬鏈球菌。此作用在30:1及60:1細菌:嗜中性白血球之稀釋率下均為顯著的[P分別=0.003及=0.01(CFU),且P分別=0.04及=0.015(吸光度)]。
在此實施例中,持續28天評定補充或不補充組成物A之18匹馬中的薰煙色麴菌DNA、嗜中性白血球IL-8R mRNA之血漿含量及馬鏈 球菌之嗜中性白血球介導之殺死。餵飼組成物A之馬在補充之第28天,相比於對照組而言,薰煙色麴菌濃度下降、嗜中性白血球IL-8R mRNA增加且嗜中性白血球吞噬能力增加。
當相比於研究第0天時,在第14天兩組之嗜中性白血球IL-8R mRNA之表現均下降。此下降可以歸因於冷應激,因為大概在第14天,氣候異常地冷。另外,在第14天,在馬血漿中存在薰煙色麴菌DNA之累積。薰煙色麴菌之來源可能為飼料且此黴菌之存在會造成由此真菌產生之黴菌毒素所致之免疫抑制。在第14天具有最高濃度之薰煙色麴菌DNA之餵飼對照組之馬由於絞痛體症而在第28天之前安樂死。在俄勒岡州立大學獸醫診斷實驗室(Oregon State University Veterinary Diagnostic Lab)執行屍體剖檢且未確定腹痛之明確病因。這一點突出暴露於薰煙色麴菌會使馬具有顯著健康風險這一可能性。
馬在其一生中通常經受多次應激事件且此等應激源可能與免疫功能降低及對疾病之易感性增加相關。在此研究中,自餵飼組成物A之馬獲得之嗜中性白血球展現免疫標誌物IL-8R mRNA之表現增加且殺死常見的馬病原體馬鏈球菌之能力增加。不受特定理論限制,目前咸信,用組成物A補充馬有助於支持正常免疫功能且可以產生能夠較佳地耐受應激之負面影響的較健康動物。
實施例5
藉由雄性奶犢牛執行研究,該等雄性奶犢牛始於1-3日齡,約30kg,其中將45隻動物分配至以下四種處理中之一者中:a)對照組(CON)處理;b)其中以0.5%(w/w)向飲食中添加礦物黏土及二氧化矽及β-葡聚 糖補充品之處理(TRT1);c)直接餵飼微生物(DFM;TRT2)及d)「b」及「c」中所列成分之組合(TRT3)。動物維持飲食持續七天時間。在此時間段期間,評定該等動物之生長速率及免疫功能之量測結果。在第0天及第7天,自該等動物收集血液且完成若干免疫功能評估,包括嗜中性白血球數目、嗜中性白血球百分比及末梢血液嗜中性白血球與淋巴細胞之比率。在此時間段未偵測到生長速率差異。如圖17至圖19中可見,結果表明,處理「b」未使嗜中性白血球數目、嗜中性白血球百分比及末梢血液嗜中性白血球與淋巴細胞之比率嗜中性白血球ROS增加;且處理「c」對此等參數無影響。然而,觀察到組合產品(處理「d」)對嗜中性白血球數目、嗜中性白血球百分比及末梢血液嗜中性白血球與淋巴細胞之比率產生強烈的、協同的且出人意料的影響,其中此等動物展現此等參數增加20-40%(參見圖17至圖19)。
實施例6
在此實施例中,藉由重達約200g之雌性大鼠執行研究。將32隻動物分配至以下四種處理中之一者中:a)對照組(CON)處理;b)以0.5%(w/w)向飲食中添加礦物黏土及二氧化矽及β-葡聚糖補充品之處理(TRT1);c)絲蘭及皂皮樹屬萃取物0.0125%(w/w;TRT2)及d)b」及「c」中所列成分之組合(TRT3)。大鼠維持飲食持續28天時間。在此時間段期間,評定該等動物之生長速率及炎症量測結果。舉例而言,在第0天及第28天,可以自大鼠收集血液且可以測定介白素6(IL-6)之含量。在一些具體實例中,可以觀察到血清IL-6減少。
實施例7
在此實施例中,將藉由重達約200g之雌性大鼠執行研究。將32隻動物分配至以下四種處理中之一者中:a)對照組(CON)處理;b)以0.5%(w/w)向飲食中添加礦物黏土及二氧化矽及β-葡聚糖補充品之處理(TRT1);c)絲蘭及皂皮樹屬萃取物0.0125%(w/w;TRT2)及d)b」及「c」中所列成分之組合(TRT3)。大鼠維持飲食持續28天時間。在此時間段期間,評定該等動物之生長速率及炎症量測結果。舉例而言,在第0天及第28天,可以自大鼠收集血液且可以測定介白素-10(IL-10)之含量。在一些具體實例中,可以觀察到血清IL-10減少。
實施例8
在此實施例中,藉由重達約200g之雌性大鼠執行研究。將32隻動物分配至以下四種處理中之一者中:a)對照組(CON)處理;b)以0.5%(w/w)向飲食中添加礦物黏土及二氧化矽及β-葡聚糖補充品之處理(TRT1);c)直接餵飼微生物(DFM)及d)b」及「c」中所列成分之組合(TRT3)。大鼠維持飲食持續28天時間。在此時間段期間,評定該等動物之生長速率及空腸絨毛中刷狀緣表面積之量測結果。舉例而言,在第0天及第28天,可以自大鼠收集組織且可以完成該組織之組織學檢查以判定是否在空腸中觀察到刷狀緣表面積之任何增加。
實施例9
在此實施例中,以包含15%與40%之間之二氧化矽、50%與81%之間之礦物黏土、1.0%與5.0%之間之β-葡聚糖、0.05%與3.0%之間之β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶及1%與8.0%之間之甘露聚糖的組成物形式投予該組成物及/或組合。該組成物之具體實例用作鯛之飼料添加劑。在實驗站儲 備12罐金頭鯛(Gilthead sea bream)(金頭鯛(Sparus aurata))之幼體。各罐1.0立方公尺,儲備55條平均重量為26公克之幼體鯛。水源來自井,在21℃之穩定溫度下,且恆定總鹽度為18.0ppt(parts per thousand)。該實驗之持續時間為158天。
實驗方案包括連續評定造成疾病之生物體的存在情況。有規律地記錄魚之生長效能參數。水品質參數之每天/每週評定包括氨、亞硝酸鹽、pH、溫度及氧。
餵飼率係基於Phibro Aqua之推薦商業餵飼表且根據魚大小及水溫調整。人工餵飼,一天兩次。在每兩週評估各罐中之魚之平均重量之後,調整各罐之餵飼數量。
使用2wt%大豆油作為塗佈劑,將組成物頂塗在集結粒上。對照組給予經2wt%大豆油塗佈之相同飼料。該試驗之飼料製備包括在混合器中混合已稱重飼料與2wt%大豆油5分鐘,且隨後再用該組成物塗佈5分鐘。每處理以4罐複製執行該實驗。在該試驗中,比較組成物在飼料中之2種不同劑量:每公斤體重每天100毫克及每公斤體重每天200毫克。
此試驗中所用飼料由Raanan Fish Meal製造且基於大小為2-4毫米之下沉擠製集結粒#4932S0;含有45.0%蛋白質、12.0%脂肪、3.0%碳水化合物、9%灰分及9.8%水分。
一般健康參數:
1.在所有罐中,所有處理組之存活率為高的(99.1-99.5%)。
2.在該試驗中未偵測到體外或體內寄生蟲。
3.對於整個試驗中所有處理組而言,如由活力及對餵飼之反應指示之 一般健康狀況非常良好。
在此試驗中得到,餵飼劑量(A)、每公斤體重每天使用100毫克組成物之魚之生長速率顯著較高。截至第17天,在處理組(A)中觀察到較佳生長速率。此差異在截至第59天時變成統計顯著。不受特定理論限制,較佳生長速率可以歸因於魚營養改善及/或飼料中之免疫刺激成分改善。
如此試驗中所示,魚類對該組成物及/或組合之反應顯著優於不含該組成物及/或組合之對照組。此結論突出該組成物及/或組合作為諸如魚之水生動物之有效飼料添加劑的功效及優勢。
處理組(A)具有3個處理組中顯著性最低之飼料轉化比率(FCR)值。此證明該組成物及/或組合作為高級執行者,改善魚之飼料攝取能力的優勢。此降低FCR值之能力為水產養殖管理中之主要因素,因為其降低餵飼成本,對魚民及蝦民而言,餵飼成本常為最高成本。
此實施例中就水溫、溶解氧含量及水品質而言之環境條件對於飼養鯛而言為最佳的。3組之生長速率均遵照鯛之預期生長速率。在此研究中,在3組中均較高之存活百分比(99.1-99.5%)突出該試驗期間之最佳條件。在試驗結束時之較低溫度影響魚之最佳生長速率,但該組成物之優勢仍然明顯。
實施例10
在此實施例中,以包含15%與40%之間之二氧化矽、50%與81%之間之礦物黏土、1.0%與5.0%之間之β-葡聚糖、0.05%與3.0%之間之β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶及1%與8.0%之間之甘露聚糖的組成物形式投予該 組成物及/或組合。該組成物用作吳郭魚之飼料添加劑。在實驗站中,儲備18籠雜交吳郭魚(尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)×奧里斯羅非魚(O.aureus))之幼體。實驗系統之總體積為600立方公尺。各籠之體積為1立方公尺且具有25毫米網眼的網,儲備有35條平均重量為95公克之魚。水源來自井,在24℃之穩定溫度下。該實驗之持續時間為149天。
實驗方案包括連續評定造成疾病之生物體的存在情況。有規律地記錄魚之生長效能參數。水品質參數之每天/每週評定包括氨、亞硝酸鹽、pH、溫度及溶解氧。
餵飼率係基於Phibro Aqua之推薦商業餵飼表且根據魚大小及水溫調整。人工餵飼,一天兩次。在每兩週評估各籠中之魚之平均重量之後,調整各籠之餵飼數量。
使用2wt%大豆油作為塗佈劑,將組成物頂塗在集結粒上。對照組給予經2wt%大豆油塗佈之相同飼料。該試驗之飼料藉由在混合器中混合已稱重飼料與2wt%大豆油5分鐘,且隨後再用該組成物塗佈5分鐘來製備。在此試驗中,比較組成物在飼料中之2種不同劑量:每公斤體重每天100毫克AI及每公斤體重每天200毫克AI。
每處理使用6籠複製,其在飼養系統中平分。此試驗之飼料由Zemach Feed Mill製造。該飼料係基於大小為2-4毫米之漂浮的擠製集結粒#4662;含有35.0%蛋白質、3.5%脂肪、14.0%碳水化合物、8.0%灰分及10.0%水分。
一般健康參數:
1.對於所有處理而言,所有籠具中之存活率均極佳,無死亡。
2.以低發生率偵測到體外寄生蟲(車輪蟲(Trichodina)及指環蟲(Dactylogyrus))。該等魚用福爾馬林(formalin)37%及Bromex溶液(50% Naled)處理。
3.偵測到存在少量複殖亞綱寄生蟲棘帶吸蟲(Centrocestus)。不需要處理。
4.對於整個試驗中所有處理組而言,如由活力及對餵飼之反應指示之一般健康狀況非常良好。
在此試驗中得到,餵飼劑量(A)、每公斤體重每天使用100mg組成物之魚之生長速率顯著較高。截至第16天,在處理組(A)中觀察到較佳生長速率。此差異在截至第86天時變成統計顯著。不受特定理論限制,較佳生長速率可以歸因於魚營養改善及/或飼料中之免疫刺激成分改善。
投予該組成物促成較佳生長速率及較佳飼料攝取。投予劑量為每公斤體重每天100毫克及每公斤體重每天200毫克。如此試驗中所示,魚對該組成物之反應顯著優於不含該組成物及/或組合之對照組。此結論突出該組成物及/或組合作為諸如魚之水生動物之有效飼料添加劑的功效及優勢。
處理組(A)具有3個處理組中顯著性最低之FCR值。此證明該組成物及/或組合作為高級執行者,改善魚之飼料攝取能力的優勢。此降低FCR值之能力為水產養殖管理中之主要因素。對於魚民及蝦民而言,餵飼成本常為最高成本。
此實驗中就水溫、溶解氧含量及水品質而言之環境條件對於飼養吳郭魚而言為最佳的。當相比於吳郭魚之預期生長速率時,3組之生長 速率均較佳,突出該試驗之最佳條件。在此研究中,在3組中均較高之存活百分比(100%)亦突出該試驗期間之最佳條件。在該試驗結束時之較低溫度影響魚之最佳生長速率,但該組成物及/或組合之優勢仍然明顯。
實施例11
在此實施例中,以包含15%與40%之間之二氧化矽、50%與81%之間之礦物黏土、1.0%與5.0%之間之β-葡聚糖、0.05%與3.0%之間之β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶及1%與8.0%之間之甘露聚糖的組成物形式投予該組成物及/或組合。該組成物用作鯉魚之飼料添加劑。在實驗站中,儲備18籠普通鯉魚(鯉魚(Cyprinus carpio))之幼體。實驗系統之總體積為600立方公尺。各籠之體積為1立方公尺且具有25毫米網眼的網,儲備有35條平均重量為160公克之魚。水源來自井,在24℃之穩定溫度下。該實驗之持續時間為83天。
實驗方案包括連續評定造成疾病之生物體的存在情況。有規律地記錄魚之生長效能參數。水品質參數之每天/每週評定包括氨、亞硝酸鹽、pH、溫度及溶解氧。
餵飼率係基於Phibro Aqua之推薦商業餵飼表且根據魚大小及水溫調整。人工餵飼,一天兩次。在每兩週評估各籠中之魚之平均重量之後,調整各籠之餵飼數量。
使用2wt%大豆油作為塗佈劑,將組成物頂塗在集結粒上。對照組給予經2wt%大豆油塗佈之相同飼料。該試驗之飼料藉由在混合器中混合已稱重飼料與2wt%大豆油5分鐘,且隨後再用該組成物塗佈5分鐘來製備。在此試驗中,比較該組成物及/或組合在飼料中之2種不同劑量:每 公斤體重每天100mg及每公斤體重每天200mg。
每處理使用6籠複製,其在飼養系統中平分。此試驗之飼料由Zemach Feed Mill製造。該飼料係基於大小為4毫米之漂浮的擠製集結粒#4212;含有30.0%蛋白質、5.0%脂肪、4.5%碳水化合物、8.0%灰分及10.0%水分。
一般健康參數:
1.對於所有處理而言,所有籠具中之存活率均極佳,無死亡。
2.以低發生率偵測到體外寄生蟲(三代蟲(Gyrodectylus)及指環蟲)。該等魚用福爾馬林37%及Bromex溶液(50% Naled)處理。
3.對於整個試驗中所有處理組而言,如由活力及對餵飼之反應指示之一般健康狀況非常良好。
在此試驗中得到,餵飼劑量(A)、每公斤體重每天使用100毫克組成物之魚之生長速率顯著較高。截至第41天,在處理組(A)中觀察到較佳生長速率。此差異在截至第83天時變成統計顯著。不受特定理論限制,較佳生長速率可以歸因於魚營養改善及/或飼料中之免疫刺激成分改善。
投予該組成物促成較佳生長速率及較佳飼料攝取。投予劑量為每公斤體重每天100毫克及每公斤體重每天200毫克。如此試驗中所示,魚對該組成物之反應顯著優於不含該組成物及/或組合之對照組。此結論突出該組成物及/或組合作為如魚之動物之有效飼料添加劑的功效及優勢。
處理組(A)具有3個處理組中最低(不顯著)之FCR值。此證明該組成物及/或組合作為高級執行者,改善魚之飼料攝取能力的優 勢。此降低FCR值之能力為水產養殖管理中之主要因素。對於魚民及蝦民而言,餵飼成本常為最高成本。
實驗溫度表明冷水環境(16-21℃)。此溫度範圍為全世界鯉魚培養中常見的。此等低溫影響魚之最佳生長速率,但該組成物及/或組合之優勢仍然明顯。就溶解氧含量、氨、亞硝酸鹽及pH而言,該等水條件對於飼養鯉魚而言為最佳的。在此研究中,在3組中均較高之存活百分比(100%)突出該試驗期間之最佳條件。
實施例12
在此實施例中,以包含15%與40%之間之二氧化矽、50%與81%之間之礦物黏土、1.0%與5.0%之間之β-葡聚糖、0.05%與3.0%之間之β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶及1%與8.0%之間之甘露聚糖的組成物形式投予該組成物及/或組合。該組成物用作雜交吳郭魚之免疫調節劑。氨為可以有害地影響魚健康之毒性化合物。毒性之性質及程度視諸多因素而定,該等因素包括氨之化學形式、水之pH及溫度、暴露時長及所暴露魚之生活期。在天然地表水中,氨以兩種形式出現:離子化氨NH4 +及未離子化氨NH3。在魚中,氨為蛋白質代謝之副產物且主要跨越鰓膜***,且少量以尿液形式***。氨之毒性主要歸因於未離子化形式NH3。隨著pH增加,氨之毒性上升,因為未離子化氨之相對比例增加。氨毒可以造成抽搐、昏迷及死亡。不受特定理論限制,魚體內升高之NH4 +會取代K+且使神經元去極化,造成麩胺酸受體之活化,該活化導致流入過量Ca2 +及後續中樞神經系統細胞死亡。在常見鯉魚之幼體之情況下,1.76ppm NH3之急性毒性造成24小時後組內50%之死亡率。在恆定氯化銨溶液中暴露4-6週之三批大菱鮃(大菱鮃 (Scophthalmus maximus))幼體(14、23及104公克)中研究氨之慢性影響。在所用環境條件(16.5-17.5℃,pH 7.92-8.03,鹽度34.5ppt,氧飽和度超過80%)下,未發生死亡直至0.4ppm(parts per million)未離子化氨。在經適應之幼小大菱鮃中,未觀察到主要生理紊亂直至0.4-0.5ppm,而大齡大菱鮃對氨較敏感。
已研究改善水生物種對氨毒之抗性的能力。給虎蝦(斑節對蝦(Penaeus monodon))之5日後幼體餵飼補充有0及71.5ppm蝦青素之飲食,持續8週。隨後使蝦在0.02、0.2、2及20ppm之氨中暴露72小時。在除20ppm以外之所有氨含量下,餵飼蝦青素之蝦的存活率均高於對照組蝦之彼等存活率,說明飲食蝦青素已改善蝦對氨應激之抗性。其他研究已研究飲食甘露聚糖寡醣(MOS)對太平洋白蝦凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)之生長效能、腸道形態及NH3應激耐受性之影響。在NH3應激24小時之後,餵飼2.0、4.0、6.0及8.0公克/公斤補充有MOS之飲食之蝦的存活率顯著高於(P<0.05)餵飼對照組飲食之蝦的存活率。
此研究之目的為評估該組成物及/或組合對魚對水中之毒性氨含量之應激條件之抗性的影響。
在實驗站中,儲備12罐雜交吳郭魚(尼羅羅非魚×奧里斯羅非魚)。各罐之體積為230公升,儲備有10條平均重量為350公克/魚之魚。水源來自井,其中恆定水溫為22℃且恆定鹽度為1,300毫克氯化物。該實驗之持續時間為74天。在第一階段期間,6罐每公斤體重每天餵飼100毫克該組成物及/或組合,而另6罐餵飼不含補充品之商購飼料。在水之最佳條件下餵飼30天之後,水入口減小,允許水品質劣化,再持續30天。在為期 14天之第三階段中,水入口完全封閉且每天向各罐中添加氯化銨(NH4Cl)。此階段之特徵為魚連續死亡,說明氨毒性及細菌感染之臨床症狀與不良水品質相關。
實驗方案包括連續評定造成疾病之生物體的存在情況。水品質參數之每天評定包括氨、亞硝酸鹽、pH、水溫及溶解氧。
餵飼率為體重之1%,基於Phibro Aqua之推薦商業餵飼表,且根據水溫及魚之反應調整。人工餵飼,一天兩次。使用2wt%大豆油作為塗佈劑,將組成物頂塗在集結粒上。對照組給予經2wt%大豆油塗佈、但不含該組成物之相同商業飼料。該試驗之飼料藉由在混合器中混合已稱重飼料與2wt%大豆油5分鐘,且隨後再用該組成物塗佈5分鐘來製備。此試驗之飼料由Zemach Feed Mill製造。該飼料係基於漂浮的擠製4mm集結粒#4662;含有35.0%蛋白質、3.5%脂肪、14.0%碳水化合物、8.0%灰分及10.0%水分。
一般健康參數:
1.在第三階段(14天),魚對飼料不起反應。
2.在該試驗期間收集的瀕死的及已死的魚具有典型的氨中毒臨床症狀。
此試驗之結果顯示,以每公斤體重每天100mg之劑量餵飼含該組成物及/或組合之飲食的魚的抗性顯著高於不含該組成物及/或組合之對照組。在此試驗中,在該試驗期間收集的瀕死的及已死的魚具有典型的氨中毒臨床症狀,包括抽搐、鰓壞死、昏迷及死亡。
不良水品質遏制魚之免疫系統,使得寄生蟲及細菌進入魚體 內,造成疾病爆發且因此造成死亡。在該實驗中,乾淨的水入口流量減小,造成水品質劣化,水品質劣化最後導致此試驗中受到應激最大且最虛弱的魚死亡。
持續30天時間,以每公斤體重每天100毫克之劑量,給吳郭魚餵飼該組成物及/或組合顯著改善其在諸如高含量氨及亞硝酸鹽之不良水條件下之抗性及存活率。
實施例13
在此實施例中,測定該組成物及/或組合充當太平洋白蝦(凡納濱對蝦)之存活率及整體健康狀況之免疫調節劑的能力。
在實驗站,儲備12罐2,400隻凡納濱對蝦之20天後期幼體。各罐之體積為500公升,儲備有200隻估計重量為0.15公克/後期幼體之PL-20。實驗單元包括中央收集罐及中央生物過濾器。水源來自井。為達成10ppt(parts per thousand)之總鹽度,向水中添加剩餘部分海鹽。該實驗之持續時間為71天。在該試驗結束時,蝦之平均大小為約10公克。
在此試驗中,以包含15%與40%之間之二氧化矽、50%與81%之間之礦物黏土、1.0%與5.0%之間之β-葡聚糖、0.05%與3.0%之間之β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶及1%與8.0%之間之甘露聚糖的組成物形式投予該組成物及/或組合。將2種不同劑量之組成物與對照組進行比較。4罐每公斤體重每天餵飼100mg組成物,4罐每公斤體重每天餵飼200mg組成物,而另4罐餵飼不含補充品之商購飼料。
餵飼率基於Phibro Aqua關於蝦之推薦餵飼表。飼料數量根據水溫、蝦之反應及其平均重量之估計結果加以調整。人工餵飼,一天兩 次。使用2%大豆油作為塗佈劑,將組成物頂塗在集結粒上。對照組給予經2%大豆油塗佈之不含補充品的相同飼料。該試驗之飼料藉由在水泥混合器(最大負載為50公斤)中混合已稱重飼料與2%大豆油5分鐘,且隨後再用補充品塗佈5分鐘來製備。
實驗方案包括連續評定造成疾病之生物體的存在情況。水品質參數之每天評定包括總鹽度、氨、亞硝酸鹽、pH、水溫及溶解氧。
結果表明,餵飼補充品之蝦之存活百分比顯著大於對照組。該等試驗條件對於蝦生長而言為極佳的。蝦具有良好體況及良好著色。未偵測到體外寄生蟲。蝦之最終平均重量為約10公克,對於室內培養(in-door culture)而言為正常的。在此階段(養殖階段),對照組之存活率(60%)正常。
在一不同試驗中,給池塘中之2500隻蝦投予包含15%與40%之間之二氧化矽、50%與81%之間之礦物黏土、1.0%與5.0%之間之β-葡聚糖、0.05%與3.0%之間之β-1,3(4)-內葡聚糖水解酶及1%與8.0%之間之甘露聚糖的組成物。6個月後,比較該等蝦與2500隻對照組蝦,該等對照組蝦在另一個未投予該組成物之池塘中。相比於對照組蝦22%之存活率,餵飼該組成物之蝦具有86%存活率,且亦具有大於對照組蝦之產率(公斤/池塘)。
鑒於所揭示技術之原理可以應用之諸多可能的具體實例,應認識到,所說明之具體實例僅具有該技術且不應視為限制本發明之範圍。實際上,本發明之範圍由以下申請專利範圍界定。因此吾人主張所有在此等申請專利範圍之範圍及精神內者。
圖1為展示在6天研究之後在大鼠嗜中性白血球中,組成物具體實例組成物A(CTP-5)、植物萃取物葡萄渣萃取物(grape pomace extract;GPE)及兩者之組合(CTP-5+GPE)對L-選擇素mRNA濃度之影響的條形圖。L- 選擇素mRNA表示為與管家基因(β-肌動蛋白mRNA)之比例。
圖2為展示在6天研究之後在大鼠嗜中性白血球中,組成物具體實例組成物A(CTP-5)、植物萃取物葡萄渣萃取物(GPE)及兩者之組合(CTP-5+GPE)對IL8R mRNA濃度之影響的條形圖。IL-8R mRNA表示為與管家基因(β-肌動蛋白mRNA)之比例。
圖3為展示在28天研究之後在大鼠嗜中性白血球中,組成物具體實例組成物A(CTP-5)、植物萃取物葡萄渣萃取物(GPE)及兩者之組合(CTP-5+GPE)對L-選擇素mRNA濃度之影響的條形圖。y軸表示L-選擇素mRNA/β肌動蛋白mRNA(其中對照組設定成1.0)。L-選擇素mRNA表示為與管家基因(β-肌動蛋白mRNA)之比例。
圖4為展示在28天研究之後在大鼠嗜中性白血球中,組成物具體實例組成物A(CTP-5)、植物萃取物葡萄渣萃取物(GPE)及兩者之組合(CTP-5+GPE)對IL8R mRNA濃度之影響的條形圖。y軸表示IL8R mRNA/β肌動蛋白mRNA(其中對照組設定成1.0)。IL-8R mRNA表示為與管家基因(β-肌動蛋白mRNA)之比例。
圖5為展示在暴露於飲食治療6天之後在大鼠嗜中性白血球中,組成物具體實例組成物A(CTP-5)、植物萃取物葡萄渣萃取物(GPE)及兩者之組合(CTP-5+GPE)對活性氧物質(reactive oxygen species)之酵母聚糖介導之表現的影響的條形圖。y軸表示自由基(奈莫耳)。DCF=二氯螢光黃。
圖6為展示在暴露於飲食治療28天之後在大鼠嗜中性白血球中,組成物具體實例組成物A(CTP-5)、植物萃取物葡萄渣萃取物(GPE)及兩者之組合(CTP-5+GPE)對活性氧物質之酵母聚糖介導之表現的影響的條形圖。 y軸表示自由基(皮莫耳)。DCF=二氯螢光黃。
圖7為展示在餵養6天之後在大鼠中,組成物具體實例組成物A(CTP-5)、植物萃取物葡萄渣萃取物(GPE)及兩者之組合(CTP-5+GPE)對C反應蛋白(C-reactive protein;CRP)之血清濃度之影響的條形圖。y軸為CRP(pg/mL)。
圖8為展示自獲自餵飼CTP-5及餵飼對照組之米格魯犬(Beagle dog)之嗜中性白血球分離的L-選擇素之量的條形圖(P=0.004;第28天),其中L-選擇素mRNA表示為與RPL-19 mRNA之比例。
圖9為展示自獲自餵飼CTP-5及餵飼對照組之米格魯犬之嗜中性白血球分離的IL-8R之量的條形圖(P=0.029;第28天),其中IL-8R mRNA表示為與RPL-19 mRNA之比例。
圖10為展示餵飼CTP-5及餵飼對照組之米格魯犬之血漿IL-6含量的條形圖(P>0.05;第14天及第28天)。
圖11為展示餵飼CTP-5及餵飼對照組之米格魯犬之血漿IL-4濃度的條形圖(P>0.05)。
圖12為展示餵飼CTP-5及餵飼對照組之米格魯犬之血漿C反應蛋白(CRP)濃度的條形圖(P>0.05)。
圖13為展示餵飼CTP-5及餵飼對照組之米格魯犬之血漿干擾素-γ(IFN-γ)濃度的條形圖(P<0.05;第14天及第28天)。
圖14為展示馬血漿中之薰煙色麴菌(Aspergillus fumigatus)DNA之濃度的條形圖。
圖15為展示嗜中性白血球介白素-8受體mRNA表現之條形圖,其中 IL-8R mRNA表示為與RPL-19 mRNA之比例。
圖16為展示餵飼對照組及餵飼組成物A之動物中馬鏈球菌(Streptococcus equi)之嗜中性白血球吞噬的條形圖;評定嗜中性白血球:馬鏈球菌之兩個比率:30:1及60:1。
圖17為展示用以下四種不同處理方式處理的公奶牛的嗜中性白血球計數(百萬個細胞/毫升)結果的條形圖:對照組(「CON」);包含礦物黏土、二氧化矽及β-葡聚糖補充品之組成物(「TRT1」);直接餵飼微生物(「TRT2」);以及包含礦物黏土、二氧化矽、β-葡聚糖補充品及直接餵飼微生物之組合的組成物(「TRT3」)。
圖18為展示關於圖17所述之用四種處理方式處理之公奶牛所觀察到的嗜中性白血球百分比的條形圖。
圖19為展示關於圖17中所述之用四種處理方式處理之公奶牛所觀察到的嗜中性白血球:淋巴細胞比率的條形圖。
圖20為展示該組成物及/或組合之所揭示例示性具體實例針對各個生長階段之例示性劑量範圍的表格。

Claims (30)

  1. 一種組合,其包含:包含礦物黏土及二氧化矽、β-葡聚糖或其組合之主要組成物;以及絲蘭、皂皮樹屬(quillaja)、直接餵飼微生物、維生素D物質或植物萃取物中之任何一或多者。
  2. 如申請專利範圍第1項之組合,其中該主要組成物進一步包含甘露聚糖。
  3. 如申請專利範圍第1項或第2項之組合,其中該主要組成物進一步包含內葡聚糖水解酶。
  4. 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項之組合,其中該主要組成物包含1-40wt%二氧化矽、1-25wt%葡聚糖及甘露聚糖及30-92wt%礦物黏土。
  5. 如申請專利範圍第1項至第4項中任一項之組合,其中該組合包含絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維生素D物質及植物萃取物中之每一者。
  6. 如申請專利範圍第1項至第5項中任一項之組合,其中該組合包含皂皮樹(Quillaja saponaria)、西地格絲蘭(Yucca schidigera)、凝結桿菌(B.coagulans)、25-羥基維生素D3、多酚或其任何組合。
  7. 如申請專利範圍第1項至第5項中任一項之組合,其中該組合包含皂皮樹、西地格絲蘭、凝結桿菌及25-羥基維生素D3。
  8. 如申請專利範圍第1項至第7項中任一項之組合,其中該組合包含按重量計以1,000:1至1:1,000之比率存在的該組成物及該絲蘭、皂皮樹 屬、直接餵飼微生物、維生素D物質或植物萃取物中之任何一或多者。
  9. 如申請專利範圍第1項至第8項中任一項之組合,其進一步包含金屬碳酸鹽、巨藻(kelp)、菸鹼酸補充品、維生素B-12補充品、生物素、d-泛酸鈣、氯化膽鹼、單硝酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、二甲基嘧啶醇亞硫酸氫甲萘醌、核黃素-5-磷酸鹽、葉酸、大豆油、鋁矽酸鈣、稻殼、礦物油或其任何組合。
  10. 如申請專利範圍第1項至第9項中任一項之組合,其中該主要組成物經調配為粉末、顆粒、集結粒、溶液或懸浮液。
  11. 如申請專利範圍第1項至第10項中任一項之組合,其中該組合經調配為粉末、顆粒、集結粒、溶液或懸浮液。
  12. 如申請專利範圍第1項至第11項中任一項之組合,其進一步包含飼料原料或伴侶動物食物。
  13. 一種組合,其包含:包含礦物黏土及二氧化矽、β-葡聚糖或其組合之主要組成物;皂皮樹、西地格絲蘭、凝結桿菌、25-羥基維生素D3或其組合中之任何一或多者;以及飼料原料或伴侶動物食物。
  14. 一種方法,其包含向動物投予:(a)包含礦物黏土及二氧化矽、β-葡聚糖或其組合之主要組成物;以及(b)絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維生素D物質或植物萃取物中之任何一或多者。
  15. 一種方法,其包含:選擇幼齡或老齡動物;向該動物投予組合,該組合包含:包含礦物黏土及二氧化矽、β-葡聚糖或其組合之主要組成物;及絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維生素D物質或植物萃取物中之任何一或多者;以及其中向該動物投予該組合有助於促進該動物之壽命相對於未投予該組成物之動物增加。
  16. 如申請專利範圍第14項或第15項之方法,其中該主要組成物進一步包含甘露聚糖、內葡聚糖水解酶或兩者。
  17. 如申請專利範圍第14項至第16項中任一項之方法,其進一步包含向該動物投予伴侶動物飼料或飼料原料。
  18. 如申請專利範圍第17項之方法,其中該飼料原料為飼料日糧、礦物質補充品、蛋白質補充品、預混物、糖蜜、液體飼料、水或其任何組合。
  19. 如申請專利範圍第17項或第18項之方法,其中在投予之前,將該飼料原料或伴侶動物食物與該組合混合。
  20. 如申請專利範圍第14項至第19項中任一項之方法,其中該動物為伴侶動物。
  21. 如申請專利範圍第20項之方法,其中該伴侶動物為犬科動物或貓科動物。
  22. 如申請專利範圍第14項至第19項中任一項之方法,其中該動物為餵養動物。
  23. 如申請專利範圍第22項之方法,其中該餵養動物為家禽或牛。
  24. 如申請專利範圍第14項至第19項中任一項之方法,其中該動物為豬、魚、爬蟲、甲殼動物、兔、綿羊、山羊、鹿、野牛、水牛、羊駝、馬、驢或駱馬。
  25. 如申請專利範圍第14項至第24項中任一項之方法,其中向該動物投予該組合改善在該動物中所觀察到或量測到之至少一種有害症狀或體征。
  26. 如申請專利範圍第25項至第27項中任一項之方法,其中向該動物投予該組合延遲在該動物中所觀察到或量測到之該至少一種有害症狀或體征的發作。
  27. 如申請專利範圍第25項至第27項中任一項之方法,其中該至少一種有害症狀或體征與以下各者相關:僵硬、皮炎、特異反應、跳蚤過敏性皮炎、食物過敏性皮炎、接觸性皮炎、青少年皮炎、骨關節炎、結膜炎/眼色素層炎、子宮積膿、***炎、睪丸炎、膀胱炎、腎病、尋常性天疱瘡/落葉性天疱瘡、狼瘡、自體免疫性溶血性貧血、類風濕性關節炎、艾迪森氏病(Addison's Disease)、庫欣氏病(Cushing's disease)、甲狀腺高能症及甲狀腺低能症、糖尿病、尿崩症、炎症性腸病、出血性胃腸炎、耳炎、犬瘟熱病毒、小病毒、冠狀病毒、疱疹病毒、流感病毒、肝炎病毒、沙門氏桿菌病(salmonellosis)、支氣管敗血性博德氏桿菌(bordetella bronchiseptica)、萊姆病(Lyme's disease)、鉤端螺旋體病、布氏桿菌病(brucellosis)、芽生菌病、麴菌病、隱球菌、球黴菌病、小芽孢菌/髮癬菌、組織漿菌病、球蟲病、梨形鞭毛蟲病、鉤蟲、蛔蟲、鞭蟲、絛蟲、疥癬、腦膜炎-動脈炎/腦炎、後天性重症肌無力、淋巴肉 瘤、骨肉瘤、血管肉瘤、肥胖細胞瘤、鱗狀細胞癌、黑素瘤、白血病、***腫瘤、肺癌、睪丸癌、移行細胞癌、腦腫瘤、蹄葉炎、跌跛、心臟病、癲癇、肝炎、胰炎、齒齦炎及其組合。
  28. 如申請專利範圍第25項至第27項中任一項之方法,其中該至少一種有害症狀或體征包含異常免疫系統生物標誌物或異常炎症生物標誌物。
  29. 一種用於促進增加動物壽命或促進健康的免疫系統之組合,其包含:包含35-92%礦物黏土及1-40%二氧化矽、1-30% β-葡聚糖或其組合之主要組成物;以及絲蘭、皂皮樹屬、直接餵飼微生物、維生素D物質或植物萃取物中之任何一或多者,其量按該組合之總乾重計介於5ppm至2,000ppm範圍內;其中該組合引起該動物中之免疫系統生物標誌物或炎症生物標誌物之含量增加或減少。
  30. 如申請專利範圍第30項之組合,其中該增加或減少介於至少5%至600%範圍內。
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