TW201605885A - 尿嘧啶核苷酸類似物及其製備方法和應用 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及尿嘧啶核苷酸類似物及其製備方法和應用。具體而言，本發明提供了具有下式(I)化合物尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽及其製備方法和應用。這些化合物是RNA依賴性RNA病毒複製的抑制劑，並且可用作HCV NS5B聚合酶的抑制劑、HCV複製的抑制劑以及用於治療哺乳動物的丙型肝炎感染，具有廣闊的應用前景，有望開發成新一代抗病毒藥。 □

Description

尿嘧啶核苷酸類似物及其製備方法和應用
本發明屬於藥物合成領域，具體涉及一種尿嘧啶核苷酸類似物及其製備方法和應用。
黃病毒科家族的病毒包括至少三種不同的屬：瘟病毒屬(pestiviruses)，其在牛和豬中引起疾病；黃病毒屬(flavivruses)，其為諸如登革熱和黃熱病等疾病的主要原因；以及丙型肝炎病毒屬(hepaciviruses)，其唯一成員為HCV。黃病毒屬包括的成員超過68個，基於血清學親緣關係進行分組。臨床症狀各異並且包括發熱、腦炎和出血熱。全球所關注的與人類疾病有關的黃病毒屬包括登革出血熱病毒(DHF)、黃熱病病毒、休克綜合症病毒和日本腦炎病毒。由於HCV基因組在結構和表型特徵上與人黃病毒和瘟病毒相類似，將其歸為黃病毒科HCV。丙型肝炎病毒是正鏈RNA病毒，在核衣殼外包繞含脂質的囊膜，囊膜上有刺突。HCV僅有Huh7，Huh7.5，Huh7.5.1三種體外細胞培養系統。丙型肝炎病毒於1974年被首次發現，1989年美國科學家邁克爾．侯頓(Michael Houghton)和他的同事們利用 分子生物學方法找到了該病毒的基因序列，並克隆出了丙肝病毒，命名本病及其病毒為丙型肝炎(Hepatitis C)和丙型肝炎病毒(HCV)。
HCV病毒體是包膜的正鏈RNA病毒，HCV-RNA大約有9500-10000bp組成，5'和3'非編碼區(NCR)分別有319-341bp，和27-55bp，含有幾個順向和反向重複序列，可能與基因複製有關，基因組排列順序為5'-C-E1-E2-p7-NS2-NS3-NS4-NS5-3'，能編碼一長度大約為3014個胺基酸的多聚蛋白前體，後者可經宿主細胞和病毒自身蛋白酶作用後，裂解成10種病毒蛋白，包括三種結構蛋白，即分子量19KD的核衣殼蛋白(或稱核心蛋白，Core)和兩種糖蛋白(分子量為33KD的E1蛋白，分子量72Kd的E2蛋白)，p7編碼一種膜內在蛋白，其功能可能是一種離子通道。非結構蛋白部分則包括NS2，NS3，NS4A，NS5A和NS5B，非結構蛋白對比病毒的生活週期非常重要。NS2和NS3具有蛋白酶活性，參與病毒多聚蛋白前體的切割。 此外，NS3蛋白還具有螺旋酶活性，參與解旋HCV-RNA分子，以協助RNA複製，NS4的功能尚不清楚。NS5A是一種磷酸蛋白，可以與多種宿主細胞蛋白相互作用，對於病毒的複製起重要作用。而NS5B則具有RNA依賴的RNA聚合酶活性，參與HCV基因組複製，因此，NS5B聚合酶被認為是HCV複製複合體中的必要組成部分。HCV NS5B聚合酶的抑制阻止了雙鏈HCV RNA的形成，因此構成了開發HCV特異性抗病毒療法的具吸引力的途徑。
HCV具有顯著異源性和高度可變性，對已知全部基因組序列的HCV株進行分析比較其核苷酸和胺基酸序列存在較大差異。並表現HCV基因組各部位的變異程度不相一致，如5'-CR最保守，同源性在92-100%，而3'NCR區變異程度較高，在HCV的編碼基因中，C區最保守、非結構(NS)區次之，編碼囊膜蛋白E2/NS1可變性最高稱為高可變區。現知歐美國家多數HCV-I型感染，而亞洲國家以II型為主，III型次之。Okomoto報告日本慢性丙型肝炎患者和健康捐血員主要為II型感染，分別占59.3%和82.4%，而血友病人約50%為I型感染，原因是應用輸入美國進口凝血因子VIII。Wang氏報告我國北京慢性丙型肝炎患者86.2%為II型感染，III型感染為13.8%。而新疆病人III型感染卻占50%，說明不同型HCV具有一定的地區和人群分佈特徵。此外，不同基因型感染引起臨床過程和干擾素治療反應亦表現不同，如III型感染臨床症狀較重，有引起嚴重肝病傾向：II型(Simmonds 1b)感染對干擾素治療不敏感效果差，III型感染(Simononds 2a)用干擾素治療效果好。
丙型肝炎病毒(HCV)已經嚴重危及人類健康，其在大量的受感染個體(據估計為全世界人口的2-15%)中導致慢性肝臟疾病如肝硬化和肝細胞癌。根據美國疾病控制中心估計，僅在美國就有四百五十萬人受感染。根據世界衛生組織，全世界有超過2億的受感染個體，每年至少有3至4百萬人被感染。一旦被感染後，大約20%的人能清除該病毒，但是剩餘的人可能在他們的餘生中攜帶HCV。10 %至20%的慢性感染個體最終發展成肝臟破壞性的硬化或癌症。該病毒性疾病在胃腸外藉由被污染的血液和血液製品、被污染的針傳播；或者藉由性傳播；以及從被感染的母親或攜帶者母親垂直傳播給她們的後代。當前用於HCV感染的治療限於重組干擾素α單獨或與核苷類似物利巴韋林相結合免疫療法，其具有有限的臨床益處。
丙型肝炎發病機理仍未十分清楚，當HCV在肝細胞內複製引起肝細胞結構和功能改變或干擾肝細胞蛋白合成，可造成肝細胞變性壞死，表明HCV直接損害肝臟，導致發病起一定作用。但多數學者認為細胞免疫病理反應可能起重要作用，發現丙型肝炎與乙型肝炎一樣，其組織浸潤細胞以CD3+為主，細胞毒T細胞(TC)特異攻擊HCV感染的靶細胞，可引起肝細胞損傷。無論是急性丙型肝炎，還是慢性丙型肝炎，標準治療方案都是聚乙二醇干擾素(α-2a或α-2b)聯合利巴韋林。這也是唯一有效治療丙型肝炎的方案。聚乙二醇干擾素α由於一週一次給藥，給藥次數大大減少，方便了病人用藥，相對於普通干擾素的一週三次或隔日一次，聚乙二醇干擾素又稱為長效干擾素。兩種長效干擾素聯合利巴韋林的直接比較臨床試驗表明：12KD的聚乙二醇干擾素α-2b的復發率明顯低於4OKD聚乙二醇干擾素α-2a，原因可能與抗病毒活性及分子大小引起的藥物分佈有關。一般認為，聚乙二醇的分子量越大，抗病毒活性越低，12KD的聚乙二醇干擾素α-2b的活性明顯高於40KD的長效干擾素；而且，12KD的長效干擾素可以 全身分佈，不僅清除肝內的主要病毒，更可以清除淋巴結、腎臟、脾臟、腎上腺、唾液腺等肝外病毒，故停藥後的復發率較低。4OKD大分子聚乙二醇干擾素由於分子過大，限於血管和肝內分佈，對肝外的病毒清除不利。不僅加重肝臟負擔，***慢，而且由於不經過腎臟***，當發生不良反應時撤藥困難。一般認為，由於頭對頭比較的IDEAL試驗結果的公佈，12KD聚乙二醇干擾素α-2b應作為治療丙型肝炎的優先用藥。
目前，對於受丙型肝炎病毒感染的個體具有有限的治療選擇。現今已批准的治療選擇是重組干擾素α單獨或與核苷類似物利巴韋林相結合的免疫療法的使用。這種療法受其臨床效果的限制，並且僅有50%的受治療患者對該療法有響應。因此，需要發展更為有效和新型的療法，以解決由HCV感染造成的未被滿足的醫療需求。
目前已經能夠確認的可以作為抗HCV治療劑的藥物開發的一些潛在的分子靶點，包括但不限於NS2-NS3自體蛋白酶(autoprotease)、N3蛋白酶、N3解旋酶和NS5B聚合酶。RNA依賴性RNA聚合酶對單鏈RNA基因組複製絕對重要，該聚合酶已引起了藥物化學家的顯著興趣。NS5B聚合酶的核苷抑制劑可用作導致鏈終止的非天然基質，或者用作與核苷酸競爭結合於聚合酶的競爭性抑制劑。為了起鏈終止劑的作用，核苷類似物必須被細胞攝取並在體內轉化為三磷酸酯來競爭聚合酶核苷酸結合部位。三磷酸酯的這種轉化通常由細胞激酶介導，該細胞激酶對潛在的核 苷聚合酶抑制劑提出額外的結構要求。遺憾的是，這就將核苷作為HCV複製抑制劑的直接評價限制於能夠原位磷酸化的基於細胞的分析。
在一些情況中，核苷的生物活性受到相對於一種或多種激酶而言較差的基質特性阻礙，而該基質特性是將該核苷轉化為活性的三磷酸酯形式所需的。藉由核苷激酶的單磷酸酯的形成一般被認為是三磷酸化過程中的速率決定步驟。為了避免從核苷至活性三磷酸酯類似物的代謝中第一步的磷酸化，穩定的磷酸酯前藥製品已經被文獻報導。核苷胺基磷酸酯前藥是活性核苷三磷酸酯的前體，應當用於病毒感染的全細胞時抑制病毒複製。
限制核苷作為可行的治療劑應用的還有它們有時較差的物理化學和藥物代謝動力學性質。這些較差的性質可以限制藥劑的腸內吸收並且限制攝取進入靶組織或細胞。為了改善它們的性質，採用了該核苷的前藥。已經證實核苷胺基磷酸酯前藥改善了核苷的系統吸收，再者，這些“原核苷酸”的胺基磷酸酯部分被中性的親脂性基團掩蔽而獲得合適的分配係數來優化攝取和進入細胞的轉運，從而相對於單用母體核苷，顯著地提高了核苷單磷酸酯類似物的細胞內濃度。磷酸酯部分的酶介導水解會產生核苷單磷酸酯，就不需要起始的單磷酸化速率決定步驟。
近年來研究該類核苷單磷酸酯類似物的專利主要有PHARMASSET公司開發的WO2008121634A2、WO2010075517A2，CHIMERIX公司開發的WO2010135520A1， ALIOS BIOPHARMA公司開發的WO2012040127A1、WO2012088155A1，MERCK SHARP&DOHME CORP公司開發的WO2012142075A1、WO2012142085A1、WO2013009737A1。
發明人在研究過程中發現一類尿嘧啶核苷酸類似物，這些新型化合物是RNA依賴性RNA病毒複製的抑制劑，並且可用作HCV NS5B聚合酶的抑制劑、HCV複製的抑制劑以及用於治療哺乳動物的丙型肝炎感染，具有廣闊的應用前景，有望開發成新一代抗病毒藥。
本發明一方面提供一種具有如下式(I)化合物尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽：
其中，Z選自氧或硫；Y選自氫或乙醯基；R1選自氫、鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、鹵素取代C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5、-N(R5)-C(O)OR5、 -C0-8-S-R5、-SiR5R6R7、-GeR5R6R7，或者R1與苯環相鄰的碳原子形成5-7員碳環、5-7員雜環，其中該C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、C5-10芳基、5-10員雜芳基、5-7員碳環或5-7員雜環視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；R2選自氫、鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；其中該C1-8烷基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、C5-10芳基或5-10員雜芳基視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈 烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代； R3選自氫、C1-8烷基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、C5-10芳基或5-10員雜芳基，視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代； R4選自氫、鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、鹵素取代C1-8烷基、C3-8環烷基、C3-8環烷甲基、鹵素取代C1-8烷氧基、鹵素取代C1-8烷基硫基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5、-N(R5)-C(O)OR5； R5、R6、R7選自氫、C1-4烷基、C3-8環烷基； m為0、1、2、3、4。
r為0、1、2
本文所述的“5-7員碳環”是指含有5-7個碳原子的全碳環，包括環烷基或芳基，“5-7員雜環”是指含一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)r(其中r是整數0、1、2)的雜原子，其餘環原子為碳的包含5至7個環原子的環基。
作為較佳的方案，當Z選自氧時，其結構式如式(II)化合物，
其中：Y、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
作為進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，R1選自C1-8烷基、鹵素取代C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5、-N(R5)-C(O)OR5、-C0-8-S-R5、-SiR5R6R7、 -GeR5R6R7， 其中該C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、C5-10芳基或5-10員雜芳基視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；Y、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
作為進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，R1選自C1-8烷基、鹵素取代C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基，其中該C1-8烷基、鹵素取代C1-8烷基、C2-8鏈烯基或C2-8鏈炔基進一步被一個或多個選自C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基或5-10員雜芳基硫基的取代基所取代；Y、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
作為更進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽選自如下化合物：
最佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽選自如下化合物：
作為進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，R1選自C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基，其中該C3-8環烷基、3-8員雜環基、C5-10芳基或5-10 員雜芳基視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；Y、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
作為更進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽選自如下化合物：
最佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽選自如下化合物：
作為進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，R1選自-C0-8-S-R5、-SiR5R6R7、-GeR5R6R7，Y、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
作為進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽選自如下化合物：
作為最佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽選自如下化合物：
作為進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，R1與苯環相鄰的碳原子形成5-7員碳環、5-7員雜環，其中該5-7員碳環或5-7員雜環視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；Y、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
作為更進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，R1與苯環相鄰的碳原子形成5-7員碳環、5-7員雜環選自如下結構： 其中該5-7員碳環或5-7員雜環視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代； Y、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
最佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，R1與苯環相鄰的碳原子形成5-7員碳環、5-7員雜環選自如下結構：
作為較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，Z選自硫，結構式如式(III)化合物，
其中，Y、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
作為進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，R4選自鹵素、羥基、巰基、C1-8烷基、鹵素取代C1-8烷基、C3-8環烷基、C3-8環烷甲基、鹵素取代C1-8烷氧基、鹵素取代C1-8烷基硫基；Y、R1、R2、R3、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
作為更進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，R3選自氫、C1-8烷基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、C5-10芳基或5-10員雜芳基，視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、C1-8烷基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5或-C0-8-O-C(O)R5的取代基所取代；R4選自氟、甲基、三氟甲基、環丙基、環丙甲基；Y、R1、R2、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
作為更進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，R3選自氫、C1-4烷基、環丙基、環己基或苯基，視需要進一步被一個或多個選自 鹵素、羥基、巰基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5或-C0-8-O-C(O)R5的取代基所取代；R4選自甲基；Y、R1、R2、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
作為更進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，R1選自氫、C1-8烷基、鹵素取代C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基，其中該C1-8烷基、鹵素取代C1-8烷基、C2-8鏈烯基或C2-8鏈炔基進一步被一個或多個選自C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基或5-10員雜芳基硫基的取代基所取代；Y、R2、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
作為更進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽選自如下化合物：
作為更進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，R1選自C3-8環烷基、 3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基，其中該C3-8環烷基、3-8員雜環基、C5-10芳基或5-10員雜芳基視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；Y、R2、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
作為更進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽選自如下化合物：
作為更進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，R1選自-C0-8-S-R5、-SiR5R6R7、-GeR5R6R7；Y、R2、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
作為更進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽選自如下化合物：
作為更進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，R1與苯環相鄰的碳原子形成5-7員碳環、5-7員雜環，其中該5-7員碳環或5-7員雜環視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；Y、R2、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
作為更進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，R1與苯環相鄰的碳原子形成5-7員碳環、5-7員雜環選自如下結構：
其中該5-7員碳環或5-7員雜環視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8 烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；Y、R2、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
作為更進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，選自如下化合物：
作為最佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其立體異構體為S構型，結構如下：
作為更進一步較佳的方案，該尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，選自如下化合物：
本發明另一方面提供一種所述式(I)化合物尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽的製備方法，包括如下步驟： 當Y選自乙醯基時，視需要的進一步包括如下反應： 視需要進一步包括管柱層析分離得到其立體異構體，或者藉由以下步驟得到其立體異構體： 當Y選自乙醯基時，視需要的進一步包括如下反應：
其中：Y、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
本發明再一方面提供一種醫藥組成物，其包括治療有效劑量的該式(I)化合物尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽及可藥用的載體。
本發明又一方面提供使用該式(I)化合物的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽或前述醫藥組成物在製備用於治療丙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、西尼祿病毒、黃熱病病毒、登革病毒、鼻病毒、脊髓灰質炎病毒、牛病毒性腹瀉病毒或日本腦炎病毒感染所引起的疾病的藥物的應用。
詳細說明：除非有相反陳述，下列用在說明書和申請專利範圍中的術語具有下述含義。
“C1-8烷基”指包括1至8個碳原子的直鏈烷基和含支鏈烷基，烷基指飽和的脂族烴基團，C0-8是指不含碳原子或者C1-8烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第三丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基或其各種支鏈異構體等。
烷基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、 疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；“環烷基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，“C3-8環烷基”指包括3至8個碳原子的環烷基，“5-10員環烷基”指包括5至10個碳原子的環烷基，例如：單環環烷基的非限制性實施例包含環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基、環辛基等。
多環環烷基包括螺環、稠環和橋環的環烷基。“螺環烷基”指單環之間共用一個碳原子(稱螺原子)的多環基團，這些可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺環烷基分為單螺環烷基、雙螺環烷基基或多螺環烷基，螺環烷基的非限制性實施例包含：
“稠環烷基”指系統中的每個環與體系中的其他環共用毗鄰的一對碳原子的全碳多環基團，其中一個或多個 環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環稠環烷基，稠環烷基的非限制性實施例包含：
“橋環烷基”指任意兩個環共用兩個不直接連接的碳原子的全碳多環基團，這些可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環橋環烷基，橋環烷基的非限制性實施例包含：
該環烷基環可以稠合於芳基、雜芳基或雜環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為環烷基，非限制性實施例包括茚滿基、四氫萘基、苯並環庚烷基等。
環烷基可以是視需要取代的或未取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代； “雜環基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，其中一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)r(其中r是整數0、1、2)的雜原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的環部分，其餘環原子為碳。“5-10員雜環基”指包含5至10個環原子的環基，“3-8員雜環基”指包含3至8個環原子的環基。
單環雜環基的非限制性實施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、高哌嗪基等。
多環雜環基包括螺環、稠環和橋環的雜環-基。“螺雜環基”指單環之間共用一個原子(稱螺原子)的多環雜環基團，其中一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)r(其中r是整數0、1、2)的雜原子，其餘環原子為碳。這些可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺環烷基分為單螺雜環基、雙螺雜環基或多螺雜環基。螺環烷基的非限制性實施例包含：
“稠雜環基”指系統中的每個環與體系中的其他環共用毗鄰的一對原子的多環雜環基團，一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統，其中一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)r(其中r是整數0、1、2)的雜原子，其餘環原子為碳。根據組成 環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環稠雜環烷基，稠雜環基的非限制性實施例包含：
“橋雜環基”指任意兩個環共用兩個不直接連接的原子的多環雜環基團，這些可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統，其中一個或多個環原子選自氮、氧或S(O)r(其中r是整數0、1、2)的雜原子，其餘環原子為碳。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環橋環烷基，橋環烷基的非限制性實施例包含：
該雜環基環可以稠合於芳基、雜芳基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜環基，非限制性實施例包含：
雜環基可以是視需要被取代的或未取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、 3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代； “芳基”指全碳單環或稠合多環(也就是共用毗鄰碳原子對的環)基團，具有共軛的π電子體系的多環(即其帶有相鄰對碳原子的環)基團，“C5-10芳基”指含有5-10個碳的全碳芳基，“5-10員芳基”指含有5-10個碳的全碳芳基，例如苯基和萘基。該芳基環可以稠合於雜芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為芳基環，非限制性實施例包含：
芳基可以是被取代的或未取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5 或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代； “雜芳基”指包含1至4個雜原子的雜芳族體系，該雜原子包括氮、氧和S(O)r(其中r是整數0、1、2)的雜原子，5-7員雜芳基指含有5-7個環原子的雜芳族體系，5-10員雜芳基指含有5-10個環原子的雜芳族體系，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。該雜芳基環可以稠合於芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環，非限制性實施例包含：
雜芳基可以是視需要取代的或未取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；“烯基”指由至少兩個碳原子和至少一個碳-碳雙鍵組成的如上述定義的烷基，C2-8鏈烯基指含有2-8個碳的直鏈或含支鏈烯基。例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-， 2-或3-丁烯基等。
烯基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；“炔基”指至少兩個碳原子和至少一個碳-碳三鍵組成的如上所定義的烷基，C2-8鏈炔基指含有2-8個碳的直鏈或含支鏈炔基。例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-，2-或3-丁炔基等。
炔基可以是取代的或未取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定義如上所述。 C1-8烷氧基指含1-8個碳的烷基氧基，非限制性實施例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。
烷氧基可以是視需要取代的或未取代的，當被取代時，取代基，較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；“環烷氧基”指和-O-(未取代的環烷基)，其中環烷基的定義如上所述。C3-8環烷氧基指含3-8個碳的環烷基氧基，非限制性實施例包含環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基、環己氧基等。
烷氧基可以是視需要取代的或未取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，獨立地選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代； “鹵素取代的C1-8烷基”指烷基上的氫視需要的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-8個碳烷基基團，例如二氟甲基、二氯甲基、二溴甲基、三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基等。
“鹵素取代的C1-8烷氧基”烷基上的氫視需要的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-8個碳烷氧基基團。例如二氟甲氧基、二氯甲氧基、二溴甲氧基、三氟甲氧基、三氯甲氧基、三溴甲氧基等。
“鹵素”指氟、氯、溴或碘。
“視需要”或“視需要地”意味著隨後所描述地事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生地場合。例如，“視需要被烷基取代的雜環基團”意味著烷基可以但不必須存在，該說明包括雜環基團被烷基取代的情形和雜環基團不被烷基取代的情形。
“取代的”指基團中的一個或多個氫原子，較佳為最多5個，更佳為1至3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，本領域技術人員能夠在不付出過多努力的情況下確定(藉由實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。
“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上/可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，以及其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形 劑。醫藥組成物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。
下面結合實施例對本發明做進一步詳細、完整地說明，但決非限制本發明，本發明也並非僅局限於實施例的內容。
本發明的化合物結構是藉由核磁共振(NMR)或/和液質聯用色譜(LC-MS)來確定的。NMR化學位移(δ)以百萬分之一(ppm)的單位給出。NMR的測定是用Bruker AVANCE-400核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d 6 )，氘代甲醇(CD3OD)和氘代氯仿(CDCl3)內標為四甲基矽烷(TMS)。
液質聯用色譜LC-MS的測定用Agilent 1200 Infinity Series質譜儀。HPLC的測定使用安捷倫1200DAD高壓液相色譜儀(Sunfire C18 150×4.6mm色譜管柱)和Waters 2695-2996高壓液相色譜儀(Gimini C18 150×4.6mm色譜管柱)。
薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，TLC採用的規格是0.15mm至0.20mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm至0.5mm。管柱層析一般使用煙臺黃海矽膠200~300目矽膠為載體。
本發明實施例中的起始原料是已知的並且可以在市場上買到，或者可以採用或按照本領域已知的方法來合成。
在無特殊說明的情況下，本發明的所有反應均在連續的磁攪拌下，在乾燥氮氣或氬氣氛下進行，溶劑為乾燥溶 劑。
氬氣氛或氮氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氬氣或氮氣氣球。氫氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氫氣氣球。
在無特殊說明的情況下，實施例中的溶液是指水溶液。反應的溫度為室溫。室溫為最適宜的反應溫度，為20℃至30℃。
實施例中的反應進程的監測採用薄層色譜法(TLC)或液質連用色譜(LC-MS)反應所使用的展開劑體系有：二氯甲烷和甲醇體系，正己烷和乙酸乙酯體系，石油醚和乙酸乙酯體系，丙酮，溶劑的體積比可根據化合物的極性不同而進行調節。管柱層析的洗脫劑的體系包括：A：二氯甲烷和甲醇體系，B：正己烷和乙酸乙酯體系，C：二氯甲烷和乙酸乙酯體系，D：乙酸乙酯和甲醇，溶劑的體積比根據化合物的極性不同而進行調節，也可以加入少量的氨水和醋酸等進行調節。
實施例一
第一步 ((2-環丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(320mg,1.25mmol)溶於CH2Cl2(2.5mL)中，冷卻至-78℃，2-環丙基苯酚(185mg, 1.38mmol)和TEA(192μL,1.38mmol)的CH2Cl2(2.5mL)溶液逐滴滴入，在此溫度下反應30分鐘後逐漸升溫至0℃，此反應液逐滴滴入到0℃下冷卻的L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(210mg,1.25mmol)的CH2Cl2(2.5mL)溶液中，隨後TEA(366μL,2.63mmol)逐滴加入反應體系，在0℃下攪拌1小時，減壓下濃縮反應液，反應瓶中加入EtOAc(20mL)，過濾白色固體，濾液濃縮得到黃色油狀液體。管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=5：1)得到標題化合物((2-環丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(395mg,70%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.16-8.23(m,2H),7.33-7.42(m,3H),7.05-7.15(m,2H),6.86-6.93(m,1H),4.95-5.04(m,1H),3.95-4.18(m,2H),2.02-2.11(m,1H),1.34-1.43(m,3H),1.17-1.30(m,6H),0.83-0.98(m,2H),0.61-0.72(m,2H).
第二步 ((2-環丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
1-((2R,3R,4R,5S)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(58mg,0.22mmol)溶於THF(2mL)和NMP(0.6mL)的混合溶劑，水浴下， t BuMgCl 溶液(1M,0.45mL,0.45mmol)逐滴滴入到上述溶液中，室溫下，攪拌10分鐘，向反應中逐滴滴入((2-環丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(200mg,0.45mmol)的THF(1.5mL)溶液，55℃下攪拌過夜。然後冷卻至室溫，加入甲醇(1mL)淬滅反應，減壓濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=30：1)，得到標題化合物((2-環丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(15mg,12%，差向異構體比例為SP/RP=4.1：1)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.80(s,1H),7.44(d,J=8.0Hz,1H),7.35(d,J=8.0Hz,1H),7.06-7.18(m,2H),6.89-6.95(m,1H),6.17(d,J=19.6Hz,1H),5.67(d,J=8.0Hz,1H),4.95-5.07(m,1H),4.43-4.60(m,2H),3.81-4.16(m,4H),2.04-2.15(m,1H),1.18-1.41(m,12H),0.93-1.02(m,2H),0.64-0.77(m,2H)；31P NMR(162MHz,CDCl3)：δ 4.40,3.50；MS m/z(ESI)：570.1[M+H]+.
實施例二
第一步 ((3-環丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(1.950g,7.62mmol)溶於CH2Cl2(15mL)中，冷卻至-78℃，3-環丙基苯酚(1.124g,8.38mmol)和TEA(1.17mL,8.39mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液逐滴滴入，在此溫度下反應30分鐘後逐漸升溫至0℃，此反應液逐滴滴入到0℃下冷卻的L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(1.279g,7.63mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液中，隨後TEA(2.23mL,16.0mmol)逐滴加入反應體系，在0℃下攪拌1小時，減壓下濃縮反應液，反應瓶中加入EtOAc(30mL)，過濾白色固體，濾液濃縮得到黃色油狀液體。管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=4.5：1)得到標題化合物((3-環丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(2.905g,85%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.17-8.26(m,2H),7.33-7.44(m,2H),7.15-7.23(m,1H),6.96-7.04(m,1H),6.86-6.94(m,2H),4.93-5.05(m,1H),3.92-4.18(m,2H),1.80-1.91(m,1H),1.38(d,J=6.8Hz,3H),1.18-1.28(m,6H),0.93-0.99(m,2H),0.63-0.69(m,2H).
第二步((3-環丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
1-((2R,3R,4R,5S)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(272mg,1.05mmol)溶於THF(8mL)和NMP(2.7mL)的混合溶劑，水浴下， t BuMgCl溶液(1M,2.1mL,2.10mmol)逐滴滴入到上述溶液中，室溫下，攪拌10分鐘，向反應中逐滴滴入((3-環丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(938mg,2.09mmol)的THF(6mL)溶液，55℃下攪拌過夜。然後冷卻至室溫，加入甲醇(3mL)淬滅反應，減壓濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=30：1)，得到標題化合物((3-環丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(20mg,3%，差向異構體比例為SP/RP=3.8：1)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.74(s,1H),7.46(d,J=8.0Hz,1H),7.15-7.25(m,1H),6.82-7.07(m,3H),6.09-6.27(m,1H),5.51-5.75(m,1H),4.94-5.10(m,1H),4.37-4.59(m,2H),3.70-4.16(m,4H),1.79-1.95(m,1H),1.18-1.41(m,12H),0.93-1.10(m,2H),0.63-0.72(m,2H)；31P NMR(162MHz,CDCl3)：δ 4.08,3.40；MS m/z(ESI)：570.1[M+H]+.
實施例三
第一步 ((2-環丙基-6-甲基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(1.950g,7.62mmol)溶於CH2Cl2(15mL)中，冷卻至-78℃，2-環丙基-6-甲基苯酚(1.129g,7.62mmol)和TEA(1.17mL,8.39mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液逐滴滴入，在此溫度下反應30分鐘後逐漸升溫至0℃，此反應液逐滴滴入到0℃下冷卻的L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(1.279g,7.63mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液中，隨後TEA(2.23mL,16.0mmol)逐滴加入反應體系，在0℃下攪拌1小時，減壓下濃縮反應液，反應瓶中加入EtOAc(30mL)，過濾白色固體，濾液濃縮得到黃色油狀液體。管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=5：1至3：1)得到標題化合物((2-環丙基-6-甲基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(2.880g,82%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.18(d,J=9.2Hz,2H),7.32(dd,J=8.4,7.2Hz,2H),7.00(d,J=4.8Hz,2H),6.68-6.75(m,1H),4.91-5.05(m,1H),4.05-4.21(m,1H),3.89-4.05(m,1H),2.39(s,3H),2.17-2.31(m,1H),1.13-1.42(m,12H),0.90-1.06(m,2H),0.59-0.75(m,2H).
第二步((2-環丙基-6-甲基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
1-((2R,3R,4R,5S)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(272mg,1.05mmol)溶於THF(8mL)和NMP(2.7mL)的混合溶劑，水浴下， t BuMgCl溶液(1M,2.1mL,2.10mmol)逐滴滴入到上述溶液中，室溫下，攪拌10分鐘，向反應中逐滴滴入((2-環丙基-6-甲基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(967mg,2.09mmol)的THF(6mL)溶液，55℃下攪拌過夜。然後冷卻至室溫，加入甲醇(3mL)淬滅反應，減壓濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=30：1)，得到標題化合物((2-環丙基-6-甲基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(20mg，3%，差向異構體比例為SP/RP>10：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.53(d,J=8.0Hz,1H),6.98-7.06(m,2H),6.69-6.77(m,1H),6.01-6.08(m,1H),5.59(d,J=8.0Hz,1H),4.57(s,2H),4.41-4.50(m,1H),4.31-4.40(m,1H),4.03-4.11(m,1H),3.80-4.02(m,2H),2.38(s,3H),2.24-2.35(m,1H),1.26-1.40(m,6H),1.22(d,J=6.0Hz,6H),0.95-1.02(m,2H),0.59-0.71(m,2H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 3.81；MS m/z(ESI)：584.1[M+H]+.
實施例四
第一步 ((4-環丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(1.260g,4.92mmol)溶於CH2Cl2(10mL)中，冷卻至-78℃，4-環丙基苯酚(726mg,5.41mmol)和TEA(0.76mL,5.45mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液逐滴滴入，在此溫度下反應30分鐘後逐漸升溫至0℃，此反應液逐滴滴入到0℃下冷卻的L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(826mg,4.93mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中，隨後TEA(1.44mL,10.33mmol)逐滴加入反應體系，在0℃下攪拌1小時，減壓下濃縮反應液，反應瓶中加入EtOAc(30mL)，過濾白色固體，濾液濃縮得到黃色油狀液體。管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=5：1)得到標題化合物((4-環丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(1.48g,67%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.00-8.28(m,2H),7.32-7.45(m,2H),6.71-7.18(m,4H),4.91-5.02(m,1H),3.93-4.19(m,2H),1.77-1.92(m,1H),1.39(d,J=6.4Hz,3H),1.17-1.26(m,6H),0.90-0.98(m,2H),0.58-0.66(m,2H).
第二步 ((4-環丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃 -2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
1-((2R,3R,4R,5S)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(272mg,1.05mmol)溶於THF(8mL)和NMP(2.70mL)的混合溶劑，水浴下， t BuMgCl溶液(1M,2.1mL,2.10mmol)逐滴滴入到上述溶液中，室溫下，攪拌10分鐘，向反應中逐滴滴入((4-環丙基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(938mg,2.09mmol)的THF(6mL)溶液，55℃下攪拌過夜。然後冷卻至室溫，加入甲醇(3mL)淬滅反應，減壓濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=30：1)，得到標題化合物((4-環丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(62mg,10%，差向異構體比例為SP/RP=3.1：1)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 9.26-9.45(m,1H),7.25-7.52(m,1H),7.05-7.12(m,2H),6.97-7.04(m,2H),6.16(d,J=18.4Hz,1H),5.54-5.75(m,1H),4.94-5.05(m,1H),4.36-5.57(m,2H),3.70-4.24(m,4H),1.17-1.91(m,1H),1.15-1.39(m,12H),0.88-0.98(m,2H),0.55-0.65(m,2H)；31P NMR(162MHz,CDCl3)：δ 4.05,3.58； MS m/z(ESI)：570.1[M+H]+.
實施例五
第一步 (4-溴-2-甲基苯氧基)(第三-丁基)二甲基矽烷的製備
4-溴-2-甲基苯酚(2.1g,11mmol)和咪唑(2.2g,33mmol)溶於DMF(10mL)，冷卻至0℃，第三-丁基氯二甲基矽烷(2.0g，14mmol)在攪拌下加入上述溶液中。溶液攪拌下升至室溫並繼續攪3h，LC-MS檢測原料消失，溶液傾入水(40mL)中並用EtOAc(20mL×3)萃取。EtOAc層用水(20mL×3)和飽和食鹽水(30mL×2)洗滌並用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE)得到標題化合物(4-溴-2-甲基苯氧基)(第三-丁基)二甲基矽烷(2.4g,73%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 7.05(m,1H),6.94(m,1H),6.43(d，J=8.4Hz，1H),1.97(s,3H),0.81(s,9H),0.00(s,6H).
第二步 第三-丁基(4-環丙基-2-甲基苯氧基)二甲基矽烷的製備
磷酸鉀(6.6g,32mmol)溶於水(10mL)中，環丙基硼酸(2.1g,24mmol)和Pd(OAc)2(290mg,1.28mmol)在攪 拌條件加入上述溶液中，然後繼續加入(4-溴-2-甲基苯氧基)(第三-丁基)二甲基矽烷的甲苯(50mL)溶液。懸濁液用氮氣鼓泡除氧45分鐘，三環己基磷(0.9g,3.2mmol)加入上述溶液中，懸濁液在攪拌及氮氣保護下在95℃下反應過夜。LC-MS檢測原料消失，溶液用EtOAc(50mL)和水(20mL)稀釋，有機層用水(40mL)和飽和食鹽水(40mL)洗滌並用無水硫酸鈉乾燥，濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE)得到粗品標題化合物第三-丁基(4-環丙基-2-甲基苯氧基)二甲基矽烷(1.1g，粗產率50%,85%純度)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 6.65(d,J=2.0Hz,1H),6.57(m,1H),6.46(d，J=8.0Hz，1H),1.98(s,3H),1.61(m,1H),0.81(s,9H),0.68(m,2H),0.41(m,2H),0.00(s,6H).
第三步 4-環丙基-2-甲基苯酚的製備
向第三-丁基(4-環丙基-2-甲基苯氧基)二甲基矽烷(1.1g,85%純度，4mmol)的燒瓶中加入四丁基氟化銨(1M in THF,12mL,12mmol)。溶液在室溫下攪拌2小時，TLC顯示原料消失。溶液用10%氯化銨水溶液(30mL)稀釋並用EtOAc(60mL)萃取。EtOAc層用飽和食鹽水洗滌並用無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮管柱層析(洗脫劑：PE~PE：EtOAc=5：1)得到粗品標題化合物4-環丙基-2-甲基苯酚(0.64g，粗產率80%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ 8.98(s,1H),6.79(d,J= 1.6Hz,1H),6.75(m,1H),6.67(d,J=8.0Hz,1H),2.10(s,3H),1.77(m,1H),0.84(m,2H),0.55(m,2H).
第四步 ((4-環丙基-2-甲基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(900mg,3.6mmol)溶於CH2Cl2(7.5mL)中，溶液冷至-78℃，4-環丙基-2-甲基苯酚(600mg,4.0mmol)和TEA(0.39g,3.9mmol)的CH2Cl2(7.5mL)溶液在十分鐘內滴入上述溶液中，反應攪拌下升至室溫。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷卻的L-丙胺酸異丙基酯鹽酸(600mg，3.6mmol)的CH2Cl2(7.5mL)溶液中，然後TEA(0.75g,7.5mmol)在5分鐘內滴入反應體系。反應在0℃下攪拌1小時，溶液濃縮後加入EtOAc(50mL)，抽濾白色沉澱並用EtOAc(20mL)洗滌，濾液濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=9：1~7：3)得到標題化合物((4-環丙基-2-甲基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(550mg,33%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.22(m,2H),7.37(m,2H),7.20(m,1H),6.90(s,1H),6.84(m,1H),5.02(m,1H),4.09(m,1H),3.89(m,1H),2.21(m,3H),1.82(m,1H),1.40(m,3H),1.23(m,6H),0.93(m,2H),0.62(m,2H).
第五步 ((4-環丙基-2-甲基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5- (2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
室溫下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(145mg，0.56mmol)溶於THF(5mL)和NMP(1.45mL)的混合溶液中。攪拌下於五分鐘內滴加 t BuMgCl(1.0M in THF,1.1mL,1.1mmol)到上述溶液中，反應在室溫下攪拌10分鐘後，((4-環丙基-2-甲基苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(550mg,1.15mmol)的THF(3mL)溶液在五分鐘內滴入。反應在55℃下攪拌過夜，冷至室溫，加入MeOH(3mL)淬滅反應。反應液取一半濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=50：1~10：1)得到標題化合物((4-環丙基-2-甲基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(29mg,9%，差向異構體比例為SP/RP=9.3：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.57(d,J=8.0Hz,1H),7.21(m,1H),6.97(s,1H),6.88(m,1H),6.13(d,J=19.6Hz,1H),5.59-5.64(m,1H),4.93-5.01(m,1H),4.49-4.54(m,1H),4.36-4.41(m,1H),4.09-4.13(m,1H),3.89-3.97(m,2H),2.30 (s,3H),1.83-1.89(m,1H),1.31-1.40(m,7H),1.23-1.26(m,6H),0.92-0.96(m,2H),0.62-0.66(m,2H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 4.09,3.99；MS m/z(ESI)：584.2[M+H]+.
實施例六
第一步 3-(4-(苄氧基)苯基)噁丁環的製備
(4-(苄氧基)苯基)硼酸(684mg,3.00mmol)，NiI2(28.0mg,90mmol)，反式-2-胺基環己醇鹽酸鹽(11.0mg,90.0mmol)溶於 i PrOH(10mL)，滴加入NaHMDS(1M,3.0mL,3.0mmol)，氮氣鼓泡10分鐘，再加入3-碘噁丁環(276mg,1.50mmol)，再氮氣鼓泡5分鐘。微波下於80℃反應30分鐘。反應平行.做三批，三個反應的反應液冷卻後，合併，加入EtOH稀釋，用矽藻土過濾，濾液濃縮，管柱層析(洗脫劑：PE：EA=50：1)得到標題化合物3-(4-(苄氧基)苯基)噁丁環(400mg,56%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 7.32(m,7H),6.91(d,J=8.8Hz,2H),4.97(m,4H),4.68(t,J=6.4Hz,2H),4.08(m,1H).
第二步 4-(噁丁環-3-基)苯酚的製備
3-(4-(苄氧基)苯基)噁丁環(400mg,1.67mmol),Pd/C(10wt%,50mg)混合於EtOH(20mL)中，在氫氣氛圍下反應3個小時，用短的矽膠管柱過濾，濾液濃縮，得標題化合物4-(噁丁環-3-基)苯酚(250mg,100%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 7.29(d,J=8.4Hz,2H),6.83(d,J=8.4Hz,2H),5.05(m,2H),4.74(m,2H),4.19(m,1H).
第三步 異丙基((4-硝基苯氧基)(4-(噁丁環-3-基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(427mg,1.67mmol)溶於CH2Cl2(6mL)中，冷卻至-78℃，4-(噁丁環-3-基)苯酚(250mg,1.67mmol)和TEA(233μL,1.67mmol)的CH2Cl2(3mL)溶液逐滴滴入，室溫下反應40分鐘。然後再冷卻至-78℃，依次緩慢滴入L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(280mg,1.67mmol)的CH2Cl2(2.5mL)溶液和TEA(466μL,3.34mmol)的CH2Cl2(2mL)溶液，緩慢升至室溫，並攪拌過夜。減壓下濃縮溶液，反應瓶中加入EtOAc(15mL)，過濾除去白色固體，濾液濃縮得到黃色油狀液體。管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=2：1)得到標題化合物((4-硝基苯氧基)(4-(噁丁環-3-基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(540mg,70%)。 1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.11(d,J=8.4Hz,2H),7.30(m,4H),7.16(m,2H),4.92(m,3H),4.62(t,J=6.4Hz,2H),4.47(m,1H),4.11(m,1H),1.30(m,3H),1.30(m,6H)；MS m/z(ESI)：465.1[M+H]+.
第四步 ((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-(噁丁環-3-基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
1-((2R,3R,4R,5S)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(152mg,0.584mmol)溶於THF(4mL)和NMP(1mL)的混合溶劑，水浴下， t BuMgCl溶液(1M,1.17mL,1.17mmol)逐滴滴入到上述溶液中。室溫下攪拌20分鐘，向反應中逐滴滴入((4-硝基苯氧基)(4-(噁丁環-3-基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(542mg,1.17mmol)的THF(2mL)溶液，55℃下攪拌過夜。然後冷卻至室溫，加入甲醇(2mL)淬滅反應，減壓濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=20：1)，得到標題化合物((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-(噁丁環-3-基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯 (35mg,10%，一對差向異構體比例為SP/RP=2.5：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.51(m,1H),7.33(m,2H),7.16(m,2H),6.03(m,1H),5.46-5.56(m,1H),4.97(m,2H),4.88(m,1H),4.61(m,2H),4.45(m,1H),4.30(m,1H),4.18(m,1H),4.01(m,1H),3.83(m,2H),1.25(m,6H),1.11(m,6H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 3.93,3.89；MS m/z(ESI)：586.2[M+H]+.
實施例七
第一步 4-(環丙基甲基)苯酚的製備
冰水浴下，向4-羥基-苯基環丙基酮(4.2g,26mmol)的THF(15mL)溶液中滴加硼烷四氫呋喃溶液(1M,31mL,31mmol)，加畢，室溫下攪拌1小時，然後加入三氟化硼***(0.32mL,2.6mmol)，繼續攪拌1小時。TLC檢測反應完畢，反應液倒入到冰水中，分出有機相，有機相用無水硫酸鎂乾燥，濃縮，管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=20：1)得到標題化合物4-(環丙基甲基)苯酚(3.7g,96%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 7.13(d,J=8.4Hz,2H),6.80(d,J=8.4Hz,2H),5.35(brs,1H),2.48(d,J=6.8Hz,2H),0.94(m,1H),0.51(m,2H),0.18(m,2H).
第二步 ((4-(環丙基甲基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
乾冰丙酮浴下(-78℃)，向二氯磷酸4-硝基苯基酯(1.50g，5.86mmol)的CH2Cl2溶液(30mL)中，滴加L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(982mg,5.86mmol)和TEA(1.63mL,11.7mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液，加畢，緩慢升至室溫，並繼續攪拌1小時。再用乾冰丙酮浴冷卻到-78℃，依次緩慢滴加4-(環丙基甲基)苯酚(868mg，5.86mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液和TEA(0.82mL,5.86mmol)，緩慢升至室溫，並攪拌過夜。反應液依次用水、飽和食鹽水洗滌，再用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=6：1)得淡黃色油狀標題化合物((4-(環丙基甲基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(180mg,6.7%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.17(m,2H),7.32(m,2H),7.l7(m,2H),7.07(m,2H),4.96(m,1H),4.00(m,1H),2.44(m,2H),1.36(m,3H),1.17(m,6H),0.85(m,1H),0.47(m,2H),0.12(m,2H)；MS m/z(ESI)：463.0[M+H]+.
第三步 ((4-(環丙基甲基)苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)丙胺酸異丙基酯的製備
1-((2R,3R,4R,5S)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(51mg,0.20mmol)溶於THF(2mL)和NMP(0.5mL)的混合溶劑，水浴下， t BuMgCl溶液(1M,0.39mL,0.39mmol)逐滴滴入到上述溶液中，室溫下攪拌20分鐘，向反應中滴加((4-(環丙基甲基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(180mg,0.39mmol)的THF溶液(1mL)，55℃下攪拌過夜。然後冷卻至室溫，加入甲醇(1mL)淬滅反應，濃縮除去大部分有機溶劑，殘餘物用CHCl3和 i PrOH的混合溶劑溶液(v：v=3：1,20mL)稀釋，用飽和食鹽水洗滌多次，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=40：1)，得無色泡沫狀標題化合物((4-(環丙基甲基)苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)丙胺酸異丙基酯(54mg,47%，差向異構體比例為SP/RP=3.9：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.42(d,J=8.0Hz,1H),7.07(d,J=8.4Hz,2H),6.97(m,2H),5.94(d,J=19.2Hz,1H),5.41(m,1H),4.78(m,1H),3.92(m,1H),3.74(m,2H),2.33(d,J=6.8Hz,2H),1.18(m,3H),1.03(m,3H),0.75(m,1H), 0.32(m,2H),0.01(m,2H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 3.99,3.90；MS m/z(ESI)：584.2[M+H]+.
實施例八
第一步 ((4-硝基苯氧基)(4-(苯基乙炔基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
乾冰-丙酮浴下(-78℃)，向二氯磷酸4-硝基苯基酯(924mg,3.61mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中，緩慢滴加入4-(苯基乙炔基)苯酚(700mg,3.61mmol)三乙胺(0.833mL,3.61mmol)的CH2Cl2(7mL)溶液，加畢，升至室溫並繼續攪拌40分鐘，重新冷卻至-78℃下，依次緩慢滴加L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(605mg,3.61mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液和TEA(1.67mL,7.22mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液，滴加完畢，緩慢升至室溫，並攪拌過夜。反應液濃縮，殘餘物中加入EtOAc稀釋，過濾不溶物，濾餅用EtOAc洗滌，濾液用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=5：1)得到標題化合物((4-硝基苯氧基)(4-(苯基乙炔基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(1.0g,55%)。
1H NMR(400Hz,CDCl3)：δ 8.17(dd,J=8.8,2.0Hz,2H), 7.45(m,4H),7.31(m,5H),7.16(t,J=7.6Hz,2H),4.95(m,1H),4.01(m,1H),3.86(m,1H),1.33(d,J=7.2Hz,3H),1.17(m,6H)；MS m/z(ESI)：509.0[M+H]+.
第二步 ((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-(苯基乙炔基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
1-((2R,3R,4R,5S)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(26.0mg,0.100mmol)溶於THF(2mL)和NMP(0.5mL)的混合溶劑，水浴下， t BuMgCl溶液(1.0M in THF,0.2mL,0.2mmol)緩慢滴加到上述溶液中，室溫下攪拌20分鐘，再向反應中緩慢滴加入((4-硝基苯氧基)(4-(苯基乙炔基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(102mg,0.200mmol)的THF(1mL)溶液，55℃下攪拌過夜。次日冷卻至室溫，加入MeOH(1mL)淬滅反應，然後濃縮除去大部分有機溶劑，殘餘物用水洗滌，過濾，濾餅用CH2Cl2溶解，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後製備薄層純化(洗脫劑：CH2Cl2： i PrOH=17：1)，得無色泡沫狀標題化合物((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫 嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-(苯基乙炔基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(14mg,22%，差向異構體比例為SP/RP=3.8：1)。
1H NMR(400Hz,CD3OD)：δ 7.53(d,J=8.0Hz,1H),7.41(m,4H),7.27(m,3H),7.20(d,J=7.2Hz,2H),6.01(m,1H),5.56-5.80(m,1H),4.88(m,1H),4.42(m,1H),4.30(m,1H),4.03(m,1H),3.83(m,2H),1.26(m,6H),1.06(m,6H)；MS m/z(ESI)：630.1[M+H]+.
實施例九
第一步 4-(環丙基乙炔基)苯酚的製備
4-碘苯酚(5.00g,22.7mmol),DIPEA(18.0mL,109mmol)溶於DMF(80mL)中，氮氣置換瓶內空氣三次，然後在冰水浴下，依次加入乙炔基環丙烷(2.50mL,29.5mmol)，四(三苯基膦)鈀(1.00g,0.866mmol)和CuI(900mg,109mmol)。反應緩慢升至室溫，並在氮氣保護下，攪拌過夜。反應液經矽藻土過濾，除去不溶性物質，然後用EtOAc稀釋，並用0.5M稀鹽酸洗滌一次，用飽和食鹽水洗滌8次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=8：1)得標題化合物4-(環丙基乙炔基)苯酚(3.50g,97%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 7.28(dd,J=7.2,2.0Hz,2H), 6.75(dd,J=7.2,2.0Hz,2H),5.21(s,1H),1.45(m,1H),0.78-0.89(m,4H).
第二步 ((4-(環丙基乙炔基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(2.50g,9.77mmol)溶於CH2Cl2(20mL)中，冷卻至-78℃，4-(環丙基乙炔基)苯酚(1.55g,9.77mmol)和TEA(1.36mL,9.77mmol)的CH2Cl2(8mL)溶液逐滴滴入，室溫下反應40分鐘。然後再冷卻至-78℃，依次緩慢滴入L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(1.64g,9.77mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液和TEA(2.72mL,19.5mmol)的CH2Cl2(7mL)溶液，緩慢升至室溫，並攪拌過夜。減壓下濃縮溶液，反應瓶中加入EtOAc(50mL)，過濾除去白色固體，濾液濃縮得到黃色油狀液體。管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=5：1)得到標題化合物((4-(環丙基乙炔基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(3.30g,72%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.24(dd,J=8.8,2.0Hz,2H),7.36(m,4H),7.14(m,2H),5.00(m,1H),4.12(m,1H),1.42(m,1H),1.38(m,3H),1.24(m,6H),0.78-0.89(m,4H)；MS m/z(ESI)：473.1[M+H]+.
第三步 ((4-(環丙基乙炔基)苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
1-((2R,3R,4R,5S)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(52mg,0.20mmol)溶於THF(2mL)和NMP(0.5mL)的混合溶劑，水浴下， t BuMgCl溶液(1M,0.40mL,0.40mmol)逐滴滴入滴入到上述溶液中，室溫下，攪拌20分鐘，向反應中逐滴滴入((4-(環丙基乙炔基)苯氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(189mg,0.40mmol)的THF(1mL)溶液，55℃下攪拌過夜。然後冷卻至室溫，加入甲醇(1mL)淬滅反應，減壓濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=30：1)，得到標題化合物((4-(環丙基乙炔基)苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(45mg,38%，差向異構體比例為SP/RP=3.4：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.50(m,1H),7.24(d,J=8.8Hz,2H),7.08(m,2H),6.02(m,1H),5.57(m,1H),4.86(m,1H),4.42(m,1H),4.30(m,1H),4.01(m,1H),3.80(m,2H),1.34(m,1H),1.28(m,6H),1.11(m,6H),0.77(m,2H),0.62 (m,2H)；MS m/z(ESI)：594.3[M+H]+.
實施例十
第一步 4-(丙基硫基)苯酚的製備
在室溫下向DMF(40mL)中加入碳酸鉀(28g,200mmol)，對羥基苯硫酚(2.5g,20mmol)和1-溴丙烷(3.1g,25mmol)，懸濁液室溫下攪拌三天，LC-MS檢測原料消失。反應液傾入水(200mL)中，並用EtOAc(50mL×3)萃取，有機相用水(50mL×3)，飽和食鹽水(50mL×2)洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE~PE：EtOAc=4：1)得到標題化合物4-(丙基硫基)苯酚(0.9g,27%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 9.52(s,1H),7.21(d,J=8.8Hz,2H),6.73(d,J=8.8Hz,2H),2.76(t,J=7.2Hz,2H),1.49(m,2H),0.93(t,J=7.2Hz,1H).
第二步 ((4-硝基苯氧基)(4-(丙基硫基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(1.3g,5mmol)溶於CH2Cl2(10mL)的室溫溶液中，溶液冷至-78℃，4-(丙基硫基)苯酚(900mg,5.6mmol)和TEA(0.56g,5.6mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液在十分鐘內滴入上述溶液中，然後反應攪拌下升至室溫。上述溶液逐滴滴入到0℃下冷卻的異丙基L-丙胺酸酯鹽酸(840mg,5mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中，然後TEA(1.05g,10.5mmol)在5分鐘內滴入反應體系。反應在0℃下攪拌1小時，溶液濃縮後加入EtOAc(50mL)，抽濾白色沉澱並用EtOAc(20mL)洗滌，溶液濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=9：1~7：3)得到標題化合物((4-硝基苯氧基)(4-(丙基硫基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(1.5g,60%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.16(m,2H),7.33(m,2H),7.24(m,2H),7.08(m,2H),4.94(m,1H),4.02(m,1H),3.86(m,1H),2.78(m,2H),1.58(m,2H),1.33(m,3H),1.16(m,6H),0.94(t,J=7.2Hz,3H).
第三步 ((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-(丙基硫基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
室溫下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶於THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。 攪拌下於五分鐘內滴加 t BuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反應在室溫下攪拌10分鐘後，((4-硝基苯氧基)(4-(丙基硫基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(484mg,1mmol)的THF(3mL)溶液在五分鐘內滴入。反應在55℃下攪拌過夜，冷至室溫，加入MeOH(3mL)淬滅反應。反應液取一半濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=50：1~10：1)得到標題化合物((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-(丙基硫基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(66mg,22%，差向異構體比例為SP/RP=3.5：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.63(d,J=8.0Hz,1H),7.36(m,2H),7.22(m,2H),6.12(m,1H),5.65-5.72(m,1H),4.54(m,1H),4.40-4.42(m,1H),4.12-4.14(m,1H),3.91-3.95(m,2H),2.87-2.92(m,2H),1.61-1.66(m,2H),1.31-1.40(m,7H),1.23-1.26(m,6H),1.02(m,3H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 3.97,3.91；MS m/z(ESI)：604.2[M+H]+.
實施例十一
第一步 4-(第三丁基硫基)苯酚的製備
在室溫下向第三丁基氯(25g)中加入對羥基苯硫酚(3.1g,25mmol)。三氯化鋁(4g,30mmol)分批加入，反應在室溫下攪拌一小時，LC-MS檢測原料消失。反應液傾入水(200mL)中，並用EtOAc(200mL)萃取，EtOAc層用飽和食鹽水(100mL)洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE~PE：EtOAc=4：1)得到標題化合物4-(第三丁基硫基)苯酚(3.0g,65%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 9.76(s,1H),7.28(d,J=8.8Hz,2H),6.77(d,J=8.8Hz,2H),1.19(s,9H).
第二步 ((4-硝基苯氧基)(4-(第三丁基硫代)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(3.8g,15mmol)溶於CH2Cl2(30mL)的室溫溶液中，溶液冷至-78℃，4-(第三丁基硫基)苯酚(3.0g,16mmol)和TEA(1.6g,16mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液在十分鐘內逐滴滴入上述溶液中，反應攪拌下升至室溫。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷卻的L-丙胺酸異丙基酯鹽酸(2.5g,15mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液中，然後TEA(3.2g,32mmol)在5分鐘內滴入反應體系。反應在0℃下攪拌1小時，溶液濃縮後加入EtOAc (100mL)，抽濾白色沉澱並用EtOAc(20mL)洗滌，濾液濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=9：1~6：4)得到標題化合物((4-硝基苯氧基)(4-(第三丁基硫基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(3.0g,40%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.23(m,2H),7.50(m,2H),7.40(m,2H),7.19(m,2H),5.01(m,1H),4.07(m,1H),3.96(m,1H),1.40(m,3H),1.22-1.28(m,15H).
第三步 ((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-(第三丁基硫基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
室溫下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶於THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。攪拌下於五分鐘內滴加 t BuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反應在室溫下攪拌10分鐘後，((4-硝基苯氧基)(4-(第三丁基硫基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(500mg,1mmol)的THF(3mL)溶液在五分鐘內滴入。反應在55℃下攪拌過夜，冷至室溫，加入MeOH(3mL)淬滅反應。反應液濃縮後管柱層析(洗脫劑： CH2Cl2：MeOH=50：1~10：1)得到標題化合物((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-(第三丁基硫基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(126mg,41%，差向異構體比例為SP/RP=2.2：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.66(m,1H),7.53(m,2H),7.28(m,2H),6.14(m,1H),5.67-5.73(m,1H),4.96(m,1H),4.57(m,1H),4.39-4.44(m,1H),4.13-4.15(m,1H),3.90-4.00(m,2H),1.30-1.43(m,7H),1.20-1.27(m,14H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 3.79,3.74；MS m/z(ESI)：618.2[M+H]+.
實施例十二
第一步 乙基(4-甲氧苄基)硫烷的製備
4-甲氧基苄硫醇(5.0g,32.5mmol)溶於DMF(100mL)中，依次加入DIPEA(5.2g,39mmol)和碘乙烷(6.0g,39mmol)，反應在室溫下攪拌過夜。反應液用EtOAc(200mL)稀釋，依次用水(600mL)，HCl(1N,400mL)，飽和食鹽水(200mL)洗滌。分出有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE~PE：EtOAc=20：1)得到標題化合物乙基(4-甲氧苄基)硫烷(3.9g,67%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 7.26(d,J=8.8Hz,2H),6.87 (d,J=8.8Hz,2H),3.82(s,3H),3.71(s,2H),2.45(q,J=7.2Hz,2H),1.25(t,J=7.2Hz,3H).
第二步 4-((乙硫基)甲基)苯酚的製備
乙基(4-甲氧苄基)硫烷(3.9g，22mmol)置於250mL燒瓶中，BBr3(1M,55mL,55mmol)的CH2Cl2(55mL)溶液逐滴滴入反應中，反應於室溫下攪拌一小時，LC-MS檢測原料消失。飽和碳酸氫鈉溶液加入反應中並用CH2Cl2(50mL)稀釋，有機相用飽和食鹽水(100mL)洗滌並用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=9：1~6：4)得到標題化合物乙基(4-甲氧苄基)硫烷(2.5g,67%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 9.31(s,1H),7.09(d,J=8.4Hz,2H),6.88(d,J=8.4Hz,2H),3.82(s,2H),2.37(q,J=7.2Hz,2H),1.15(t,J=7.2Hz,3H).
第三步 ((4-硝基苯氧基)(4-((乙硫基)甲基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(3.5g,13.5mmol)溶於CH2Cl2(27mL)的室溫溶液中，溶液冷至-78℃，4-((乙硫 基)甲基)苯酚(2.5g,15mmol)和TEA(1.5g,15mmol)的CH2Cl2(27mL)的溶液在十分鐘內滴入上述溶液中，反應攪拌下升至室溫。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷卻的L-丙胺酸異丙基酯鹽酸(2.3g,13.5mmol)的CH2Cl2(27mL)溶液中，然後TEA(3.0g,30mmol)在5分鐘內滴入反應體系，反應緩慢升溫至室溫攪拌過夜。溶液濃縮後加入EtOAc(50mL)，抽濾白色沉澱並用EtOAc(20mL)洗滌，濾液濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=9：1~6：4)得到標題化合物((4-硝基苯氧基)(4-((乙硫基)甲基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(1.7g,25%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.23(m,2H),7.41(m,2H),7.29(m,2H),7.16(m,2H),5.01(m,1H),4.11(m,1H),3.97(m,1H),3.68(m,2H),2.41(m,2H),1.40(m,3H),1.22(m,9H).
第四步 ((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-((乙硫基)甲基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
室溫下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5 mmol)溶於THF(4mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。攪拌下於五分鐘內滴加 t BuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反應在室溫下攪拌10分鐘後，((4-硝基苯氧基)(4-((乙硫基)甲基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(480mg,1mmol)的THF(3mL)溶液在五分鐘內滴入。反應在55℃下攪拌過夜，冷至室溫，加入MeOH(3mL)淬滅反應。反應液濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=50：1~10：1)得到標題化合物((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-((乙硫基)甲基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(150mg,50%，差向異構體比例為SP/RP=2.2：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.63(d,J=8.4Hz,1H),7.35(d,J=8.4Hz,1H),7.22(m,2H),6.16(m,1H),5.64-5.71(m,1H),4.95-5.02(m,1H),4.52-4.57(m,1H),4.37-4.42(m,1H),4.12(m,1H),3.89-3.98(m,2H),3.73(m,2H),2.39-2.46(m,2H),1.31-1.40(m,7H),1.20-1.27(m,9H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 3.93,3.83；MS m/z(ESI)：604.2[M+H]+.
實施例十三
第一步 ((4-硝基苯氧基)(4-(三甲基矽基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(1.02g,4mmol)溶於CH2Cl2(8mL)的室溫溶液中，溶液冷至-78℃，4-(三甲基矽基)苯酚(750mg,4.5mmol)和TEA(0.45g,4.5mmol)的CH2Cl2(8mL)溶液在十分鐘內滴入上述溶液中，然後反應攪拌下升至室溫。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷卻的L-丙胺酸異丙基酯鹽酸(690mg，4mmol)的CH2Cl2(8mL)溶液中，然後TEA(800mg,8mmol)在5分鐘內滴入反應體系。反應在0℃下攪拌1小時，溶液濃縮後加入EtOAc(50mL)，抽濾白色沉澱並用EtOAc(20mL)洗滌，濾液濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE~PE：EtOAc=3：2)得到標題化合物((4-硝基苯氧基)(4-(三甲基甲矽烷基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(1.2g,60%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.13(m,2H),7.39(m,2H),7.31(m,2H),7.11(m,2H),4.90(m,1H),4.01(m,1H),3.79(m,1H),1.30(m,3H),1.13(m,6H),0.15(m,9H).
第二步 ((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-(三甲基矽基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
室溫下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶於THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。攪拌下於五分鐘內滴加 t BuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反應在室溫下攪拌10分鐘後，((4-硝基苯氧基)(4-(三甲基矽基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(480mg,1.0mmol)的THF(3mL)溶液在五分鐘內滴入。反應在55℃下攪拌過夜，冷至室溫，加入MeOH(3mL)淬滅反應。反應液取一半濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=50：1~10：1)得到標題化合物((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-(三甲基矽基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(38mg,13%，差向異構體比例為SP/RP>10：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.49(d,J=8.0Hz,1H),7.43(m,2H),7.15(m,2H),6.03(d,J=20.0Hz,1H),5.48(m,1H),4.83-4.89(m,1H),4.41-4.46(m,1H),4.25-4.31(m,1H),4.00-4.03(m,1H),3.78-3.86(m,2H),1.19-1.28(m,7H),1.10-1.14(m,6H),0.14(s,9H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 3.77； MS m/z(ESI)：602.2[M+H]+.
實施例十四
第一步 (((2,3-二氫-1H-茚-5-基)氧代)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(2.0g,8.0mmol)溶於CH2Cl2(16mL)，冷至-78℃，2,3-二氫-1H-茚-5-醇(1.2g,9.0mmol)和TEA(0.9g,9mmol)的CH2Cl2(16mL)溶液在十分鐘內滴入上述溶液中，反應攪拌下升至室溫。上述溶液逐滴下滴加到0℃下冷卻的L-丙胺酸異丙基酯鹽酸(1.35g,8mmol)的CH2Cl2(16mL)溶液中，然後TEA(1.7g,17mmol)在5分鐘內滴入反應體系。反應在0℃下攪拌1小時，溶液濃縮後加入EtOAc(50mL)，抽濾白色沉澱並用EtOAc(20mL)洗滌，濾液濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE~PE：EtOAc=3：2)得到標題化合物(((2,3-二氫-1H-茚-5-基)氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(1.9g,50%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.15(m,2H),7.33(m,2H),7.07(m,1H),7.01(m,1H),6.89(m,1H),4.94(m,1H),4.02(m,1H),3.87(m,1H),2.80(m,4H),2.00(m,2H),1.33(m,3H),1.16(m,6H).
第二步 (((2,3-二氫-1H-茚-5-基)氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基 四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
室溫下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(260mg,1.0mmol)溶於THF(8mL)和無水NMP(2.6mL)的混合溶液中。攪拌下於五分鐘內滴加 t BuMgCl(1.0M in THF,2.0mL,2.0mmol)到上述溶液中，反應在室溫下攪拌10分鐘後，(((2,3-二氫-1H-茚-5-基)氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(900mg,2mmol)的無水THF(6mL)溶液在五分鐘內滴入。反應在55℃下攪拌過夜，冷至室溫，加入MeOH(3mL)淬滅反應。反應液取一半濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=50：1~10：1)得到標題化合物(((2,3-二氫-1H-茚-5-基)氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(40mg,7%，差向異構體比例為SP/RP=3.3：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.61(d,J=8.0Hz,1H),7.18(d,J=8.0Hz,1H),7.12(s,1H),7.01(d,J=8.0Hz,1H),6.14(d,J=18.8Hz,1H),5.57-5.67(m,1H),4.95-5.02(m,1H),4.52-4.56(m,1H),4.35-4.40(m,1H),4.12(d,J=3.0Hz,1H),3.89-3.98(m,2H),2.86-2.92(m,4H),2.06-2.14(m,2H), 1.31-1.39(m,7H),1.23-1.27(m,6H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 3.96,3.90；MS m/z(ESI)：570.2[M+H]+.
實施例十五
第一步 ((4-硝基苯氧基)((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(600mg,2.4mmol)溶於CH2Cl2(5mL)的室溫溶液中，溶液冷至-78℃，5,6,7,8-四氫萘-2-酚(400mg,2.6mmol)和TEA(0.26g,2.6mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液在十分鐘內滴入上述溶液中，然後反應攪拌下升至室溫。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷卻的L-丙胺酸異丙基酯鹽酸(400mg,2.4mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液中，然後TEA(500mg,5mmol)在5分鐘內滴入反應體系。反應在0℃下攪拌1小時，溶液濃縮後加入EtOAc(50mL)，抽濾白色沉澱並用EtOAc(20mL)洗滌，濾液濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE~PE：EtOAc=1：1)得到標題化合物((4-硝基苯氧基)((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(480mg,44%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.16(m,2H),7.33(m,2H),6.94(m,1H),6.87(m,2H),4.94(m,1H),4.02(m,1H),3.79(m,1H),2.65(m,4H),1.69(m,4H),1.33(m,3H),1.16(m, 6H).
第二步 ((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
室溫下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶於THF(4mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。攪拌下於五分鐘內滴加 t BuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反應在室溫下攪拌10分鐘後，((4-硝基苯氧基)((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(480mg,1mmol)的無水THF(3mL)溶液在五分鐘內滴入。反應在55℃下攪拌過夜，冷至室溫，加入MeOH(3mL)淬滅反應。反應液取一半濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=50：1~10：1)得到標題化合物(((2,3-二氫-1H-茚-5-基)氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(25mg,9%，差向異構體比例為SP/RP=4.0：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.59(d,J=8.4Hz,1H),7.04 (m,1H),6.96(m,2H),6.14(d,J=18.8Hz,1H),5.55-5.65(m,1H),4.95-5.02(m,1H),4.52-4.60(m,1H),4.35-4.40(m,1H),4.11-4.13(m,1H),3.89-3.98(m,2H),2.74(m,4H),1.77-1.81(m,4H),1.31-1.39(m,7H),1.23-1.28(m,6H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 3.91,3.86；MS m/z(ESI)：584.2[M+H]+.
實施例十六
第一步 (((2,3-二氫苯並[b][1,4]二噁英-6-基)氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(600mg,2.4mmol)溶於CH2Cl2(5mL)的室溫溶液中，溶液冷至-78℃，2,3-二氫苯並[b][1,4]二噁英-6-醇(400mg,2.6mmol)和TEA(0.26g,2.6mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液在十分鐘內滴入上述溶液中，然後反應攪拌下升至室溫。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷卻的異丙基L-丙胺酸酯鹽酸(400mg，2.4mmol)的CH2Cl2(5mL)溶液中，然後TEA(500mg,5mmol)在5分鐘內滴入反應體系。反應在0℃下攪拌1小時，溶液濃縮後加入EtOAc(50mL)，抽濾白色沉澱並用EtOAc(20mL)洗滌，濾液濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE~PE：EtOAc=1：1)得到標題化合物(((2,3-二氫苯並[b][1,4]二噁英-6-基)氧代)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(580mg, 53%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.25(m,2H),7.41(m,2H),6.80(m,2H),6.74(m,1H),5.03(m,1H),4.24(m,4H),4.11(m,1H),3.89(m,1H),1.42(m,3H),1.25(m,6H).
第二步 (((2,3-二氫苯並[b][1,4]二噁英-6-基)氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
室溫下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(150mg,0.6mmol)溶於THF(5mL)和NMP(1.5mL)的混合溶液中。攪拌下於五分鐘內滴加 t BuMgCl(1.0M in THF,1.2mL,1.2mmol)到上述溶液中，反應在室溫下攪拌10分鐘後，(((2,3-二氫苯並[b][1,4]二噁英-6-基)氧基)(4-硝基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(580mg,1.2mmol)的THF(3mL)溶液在五分鐘內滴入。反應在55℃下攪拌過夜，冷至室溫，加入MeOH(3mL)淬滅反應。反應液取一半濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=50：1~10：1)得到40mg含少量NMP的產物。製備薄層析(EtOAc)繼續純化得到標題化合物(((2,3-二氫苯並[b][1,4]二噁英-6-基)氧 代)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(20mg,6%，差向異構體比例為SP/RP=1.9：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.58-7.61(m,1H),6.75-6.81(m,2H),6.69-6.72(m,2H),6.12-6.17(m,1H),5.61-5.69(m,1H),4.94-5.00(m,1H),4.48-4.53(m,1H),4.32-4.37(m,1H),4.19-4.24(m,4H),4.08-4.11(m,1H),3.86-3.94(m,2H),1.29-1.38(m,7H),1.22-1.26(m,6H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 4.16,4.08；MS m/z(ESI)：588.1[M+H]+.
實施例十七
第一步 (2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯的製備
二氯磷酸苯酯(1.0g,4.7mmol)溶於CH2Cl2(10mL)的室溫溶液中，溶液冷至-78℃，4-硝基苯酚(750mg,5.4mmol)和TEA(0.54g,5.4mmol)溶於CH2Cl2(10mL)溶液在十分鐘內滴入上述溶液中，然後反應攪拌下升至室溫。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷卻的(S)-2-胺基丙基硫代羧酸S-異丙基酯鹽酸(1.2g,4.7mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中，然後TEA(1.0g,10mmol)在5分鐘內滴入反應體 系。反應在0℃下攪拌1小時，溶液濃縮後加入EtOAc(50mL)，抽濾白色沉澱並用EtOAc(20mL)洗滌，濾液濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=9：1~3：1)得到標題化合物2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基(酯(1.03g,50%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.16(m,2H),7.33(m,2H),7.28(m,2H),7.16(m,3H),4.09(m,1H),3.86(m,1H),3.53(m,1H),1.33(m,3H),1.21(m,6H).
第二步 (2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯的製備
室溫下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶於THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。攪拌下於五分鐘內滴加 t BuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反應在室溫下攪拌10分鐘後，(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(424mg,1.0mmol)的THF(3mL)溶液在五分鐘內滴入。反應在55℃下攪拌過夜，冷至室溫，加入MeOH(3mL)淬滅反應。反應液取一半濃縮後管柱層析 (洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=50：1~10：1)得到標題化合物(2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(66mg,24%,差向異構體比例為SP/RP=2.2：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.62-7.66(m,1H),7.38-7.42(m,2H),7.21-7.31(m,3H),6.15(d,J=18.8Hz,1H),5.64-5.71(m,1H),4.55-4.59(m,1H),4.40-4.45(m,1H),4.12-4.15(m,1H),3.94-4.02(m,2H),3.49-3.58(m,1H),1.26-1.40(m,12H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 3.66,3.55；MS m/z(ESI)：546.1[M+H]+.
實施例十八
第一步 (S)-2-((第三-丁氧基羰基)胺基)丙基硫代羧酸S-甲基酯
封管中，N-第三丁氧羰基-L-丙胺酸(5.7g,30mmol)和TEA(3.0g,30mmol)溶於THF(100mL)中，冷至-20℃，氯甲酸異丁酯(4.0g,30mmol)注入上述溶液中。溶液在-20℃下攪拌1小時，甲硫醇鈉(1.7g,24mmol)加入上述溶液中，反應在封管下升至室溫攪拌過夜。反應液濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE~PE：EtOAc=9：1)得到標題化合物(S)-2-((第三-丁氧基羰基)胺基)丙基硫代羧酸S-甲基 酯(3.4g,67%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 4.97(s,1H),4.40(q,J=7.2Hz,1H),2.29(s,3H),1.46(s,9H),1.37(d,3H).
第二步 (S)-2-胺基丙基硫代羧酸S-甲基酯鹽酸鹽的製備
在含有(S)-2-((第三-丁氧基羰基)胺基)丙基硫代羧酸S-甲基酯(3.4g,16mmol)的燒瓶中加入HCl(4N in dioxane,20mL)溶液室溫下攪拌三小時，LC-MS檢測原料消失。溶劑濃縮後得到粗品標題化合物(S)-2-胺基丙基硫代羧酸S-甲基酯鹽酸鹽(2.5g，粗產率100%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.59(s,3H),4.29(q,J=7.2Hz,1H),2.37(s,3H),1.45(d,J=7.2Hz,3H).
第三步 (2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-甲基酯的製備
二氯磷酸苯酯(3.15g,15mmol)溶於CH2Cl2(30mL)的室溫溶液中，溶液冷至-78℃，4-硝基苯酚(2.3g,16.5mmol)和TEA(1.6g,16mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液在十分鐘內滴入上述溶液中，然後反應攪拌下升至室溫。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷卻的(S)-2-胺基丙基硫代羧酸 S-甲基酯鹽酸鹽(2.3g,15mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液中，然後TEA(3.3g,33mmol)在5分鐘內滴入反應體系。 反應在0℃下攪拌1小時，溶液濃縮後加入EtOAc(100mL)，抽濾白色沉澱並用EtOAc(20mL)洗滌，濾液濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=6：1~1：1)得到標題化合物(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-甲基酯(2.7g,45%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.23(m,2H),7.50(m,2H),7.40(m,2H),7.19(m,2H),5.01(m,1H),4.07(m,1H),3.96(m,1H),1.40(m,3H),1.22-1.28(m,15H).
第四步 (2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-甲基酯的製備
室溫下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶於THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。攪拌下於五分鐘內滴加 t BuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反應在室溫下攪拌10分鐘後，(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-甲基酯(400mg,1mmol)的THF(3mL)溶液在五分鐘內滴入。反應在55℃下攪拌過夜，冷至室溫，加入MeOH (3mL)淬滅反應。反應液濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=50：1~10：1)得到標題化合物(2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-甲基酯(130mg,50%，差向異構體比例為SP/RP=2.2：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.60-7.65(m,1H),7.38-7.42(m,2H),7.21-7.31(m,3H),6.15(m,1H),5.62-5.69(m,1H),4.55-4.59(m,1H),4.40-4.45(m,1H),4.12-4.15(m,1H),3.94-4.06(m,2H),2.25-2.29(m,3H),1.30-1.40(m,6H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 3.83,3.54；MS m/z(ESI)：518.0[M+H]+.
實施例十九
第一步 (S)-2-((第三-丁氧基羰基)胺基)丙基硫代羧酸S-(第三-丁基)酯的製備
N-第三丁氧羰基-L-丙胺酸(9.0g,48mmol)和DCC(10.0g,48mmol)溶於CH2Cl2(60mL)中，在35℃下攪拌15分鐘後，第三丁基硫醇(3.6g,40mmol)和HOBt(650mg,5mmol)加入反應液中，反應在35℃下攪拌過夜。懸濁液過濾，濾餅用CH2Cl2(60mL)洗滌。減壓濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=20：1~6：1)得到標題化合物(S)-2-((第三-丁氧基羰基)胺基)丙基硫代羧酸S-(第三-丁基)酯(2.2g, 17%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 5.05(d,J=6.8Hz,1H),4.31(m,1H),1.49(s,9H),1.45(s,9H),1.35(d,J=7.2Hz,3H).
第二步 (S)-2-胺基丙基硫代羧酸S-第三丁基酯鹽酸鹽的製備
(S)-2-((第三-丁氧基羰基)胺基)丙基硫代羧酸S-(第三-丁基)酯(2.2g,8.5mmol)溶於4N鹽酸二噁烷溶液(20mL)中，反應在30℃下攪拌兩小時。LC-MS檢測原料消失，溶液減壓濃縮後得到標題化合物(S)-2-胺基丙基硫代羧酸S-第三丁基酯鹽酸鹽(1.7g，粗產率100%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.59(s,3H),4.14(m,1H),1.48(s,9H),1.43(d,J=7.2Hz,3H).
第三步 (2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-第三丁基酯的製備
二氯磷酸苯酯(1.7g,8.0mmol)溶於CH2Cl2(15mL)的室溫溶液中，溶液冷至-78℃，4-硝基苯酚(1.25g,9.0mmol)和TEA(0.9g,9.0mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液在十分鐘內滴入上述溶液中，然後反應攪拌下升至室溫。上述溶液逐滴滴加到0℃下冷卻的(S)-2-胺基丙基硫代羧酸 S-第三丁基酯鹽酸(1.7g,8.5mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液中，然後TEA(1.8g,18mmol)在5分鐘內滴入反應體系。反應在0℃下攪拌1小時，溶液濃縮後加入EtOAc(50mL)，抽濾白色沉澱並用EtOAc(20mL)洗滌，濾液濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=9：1~6：4)得到標題化合物(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-第三丁基酯(1.9g,53%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.22(m,2H),7.40(m,4H),7.22(m,3H),4.11(m,1H),3.93(m,1H),1.42(m,9H),1.37(m,3H).
第四步 (2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-第三丁基酯的製備
室溫下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶於THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。 攪拌下於五分鐘內滴加 t BuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反應在室溫下攪拌10分鐘後，(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧 酸S-第三丁基酯(440mg,1.0mmol)的THF(3mL)溶液在五分鐘內滴入。反應在55℃下攪拌過夜，冷至室溫，加入MeOH(3mL)淬滅反應。反應液濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=50：1~10：1)得到標題化合物(2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-第三丁基酯(134mg,49%，差向異構體比例為SP/RP=2.2：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.64-7.66(d,J=8.4Hz,1H),7.38-7.42(m,2H),7.21-7.30(m,3H),6.17(m,1H),5.64-5.71(m,1H),4.54-4.59(m,1H),4.38-4.45(m,1H),4.12-4.15(m,1H),3.88-3.96(m,2H),1.28-1.50(m,15H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 3.49；MS m/z(ESI)：560.0[M+H]+.
實施例二十
第一步 (2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-環己基酯的製備
二氯磷酸苯酯(1.7g,8.0mmol)溶於CH2Cl2(15mL)的室溫溶液中，溶液冷至-78℃，4-硝基苯酚(1.25g,9.0mmol)和TEA(0.9g,9.0mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液在十分鐘內滴入上述溶液中，然後反應攪拌下升至室溫。上 述溶液逐滴滴加到0℃下冷卻的(S)-2-胺基丙基硫代羧酸S-環己基酯鹽酸(1.8g,8.0mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液中，然後TEA(1.8g,18mmol)在5分鐘內滴入反應體系。 反應在0℃下攪拌1小時，溶液濃縮後加入EtOAc(50mL)，抽濾白色沉澱並用EtOAc(20mL)洗滌，濾液濃縮後管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=9：1~6：4)得到標題化合物(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-環己基酯(2.5g,70%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.22(m,2H),7.40(m,4H),7.22(m,3H),4.18(m,1H),3.88(m,1H),3.47(m,1H),1.84(m,2H),1.67(m,2H),1.57(m,1H),1.24-1.45(m,8H).
第二步 (2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-環己基酯的製備
室溫下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶於THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。 攪拌下於五分鐘內滴加 t BuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反應在室溫下攪拌10分鐘後，(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-環己基酯(424mg,1.0mmol)的THF(3mL)溶液在五 分鐘內滴入。反應在55℃下攪拌過夜，冷至室溫，加入MeOH(3mL)淬滅反應。反應液濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=50：1~10：1)得到標題化合物(2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-環己基酯(122mg,42%，差向異構體比例為SP/RP=2.2：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.62-7.66(m,1H),7.38-7.42(m,2H),7.21-7.31(m,3H),6.15(d,J=18.8Hz,1H),5.65-5.71(m,1H),4.55-4.59(m,1H),4.40-4.45(m,1H),4.12-4.15(m,1H),3.94-4.02(m,2H),3.40-3.43(m,1H),1.87(m,2H),1.71(m,2H),1.48(m,1H),1.29-1.48(m,11H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 3.64,3.51；MS m/z(ESI)：586.2[M+H]+.
實施例二十一
第一步 (2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(4-環丙基苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(1.75g,6.75mmol)溶於CH2Cl2(15mL)中，冷卻至-78℃，4-環丙基苯酚(1.0g,7.5mmol)和TEA(0.75g,7.5mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液逐滴滴入，在此溫度下反應30分鐘後逐漸升溫至0℃，此反 應液逐滴滴入到0℃下冷卻的(S)-2-胺基丙基硫代羧酸S-異丙基酯鹽酸(1.3g,6.75mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液中，隨後TEA(1.5g,15mmol)逐滴加入反應體系，在0℃下攪拌1小時，減壓下濃縮反應液，反應瓶中加入EtOAc(100mL)，過濾白色固體，濾液濃縮得到黃色油狀液體。 管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=9：1~1.5：1)得到標題化合物(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(4-環丙基苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(2.1g,70%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.20-8.23(m,2H),7.36-7.41(m,2H),7.09-7.13(m,2H),7.01-7.04(m,2H),4.13-4.17(m,1H),3.89-3.93(m,1H),3.57-3.61(m,1H),1.86-1.88(m,1H),1.28-1.40(m,3H),1.24-1.28(m,6H),0.92-0.98(m,2H),0.62-0.66(m,2H).
第二步 (2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-環丙基苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯的製備
室溫下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶於THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。攪拌下五分鐘內滴加 t BuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0 mmol)到上述溶液中，反應在室溫下攪拌10分鐘後，(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(4-環丙基苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(464mg,1.0mmol)的THF(3mL)溶液在五分鐘內滴入。反應在55℃下攪拌過夜，冷至室溫，加入MeOH(3mL)淬滅反應。反應液濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=50：1~10：1)得到標題化合物(2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-環丙基苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(60mg,20%，差向異構體比例為SP/RP=4.7：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.59-7.62(m,1H),7.16-7.18(m,2H),7.07-7.10(m,2H),6.15(d,J=19.2Hz,1H),5.62-5.69(m,1H),4.54-4.58(m,1H),4.38-4.43(m,1H),4.12-4.14(m,1H),3.93-3.99(m,2H),3.48-3.55(m,1H),1.89-1.93(m,1H),1.26-1.40(m,12H),0.93-0.99(m,2H),0.63-0.67(m,2H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 3.80,3.71；MS m/z(ESI)：586.2[M+H]+.
實施例二十二
第一步 (2S)-2-(((4-硝基苯氧基)((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(1.75g,7.0mmol)溶於CH2Cl2(15mL)中，冷卻至-78℃，5,6,7,8-四氫-2-萘酚(1.4g,8.0mmol)和TEA(0.8g,8.0mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液逐滴滴入，在此溫度下反應30分鐘後逐漸升溫至0℃，此反應液逐滴滴入到0℃下冷卻的(S)-2-胺基丙基硫代羧酸S-異丙基酯鹽酸(1.4g,8.0mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液中，隨後TEA(1.5g,15mmol)逐滴加入反應體系，在0℃下攪拌1小時，減壓下濃縮反應液，反應瓶中加入EtOAc(100mL)，過濾白色固體，濾液濃縮得到黃色油狀液體。管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=9：1~1.5：1)得到標題化合物(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(2.2g,65%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.20-8.24(m,2H),7.38-7.42(m,2H),6.99-7.03(m,1H),6.92-7.00(m,2H),4.10-4.17(m,1H),3.79-3.82(m,2H),3.58-3.62(m,1H),2.72(m,4H),1.76-1.78(m,4H),1.39(m,3H),1.24-1.28(m,6H).
第二步 (2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯的製備
室溫下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶於THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。 攪拌下五分鐘內滴加 t BuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反應在室溫下攪拌10分鐘後，(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(480mg,1.0mmol)的THF(3mL)溶液在五分鐘內滴入。反應在55℃下攪拌過夜，冷至室溫，加入MeOH(3mL)淬滅反應。反應液濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=50：1~10：1)得到標題化合物(2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(148mg,50%，差向異構體比例為SP/RP=2.7：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.57-7.60(m,1H),7.03-7.06(m,1H),6.95-7.00(m,2H),6.15(d,J=20.4Hz,1H),5.57-5.64(m,1H),4.55-4.59(m,1H),4.38-4.45(m,1H),4.12-4.14(m,1H),3.93-3.99(m,2H),3.51-3.56(m,1H),2.74(m,4H),1.80(m,4H),1.27-1.39(m,12H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 3.69；MS m/z(ESI)：600.1[M+H]+.
實施例二十三
第一步 (2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(4-(丙基硫代)苯氧基) 磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯的製備
二氯磷酸4-硝基苯基酯(1.75g,7.0mmol)溶於CH2Cl2(15mL)中，冷卻至-78℃，4-(丙基硫基)苯酚(1.4g,8.0mmol)和TEA(0.8g,8.0mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液逐滴滴入，在此溫度下反應30分鐘後逐漸升溫至0℃，此反應液逐滴滴入到0℃下冷卻的(S)-2-胺基丙基硫代羧酸S-異丙基酯鹽酸鹽(1.4g,8.0mmol)的CH2Cl2(15mL)溶液中，隨後TEA(1.5g,15mmol)逐滴加入反應體系，在0℃下攪拌1小時，減壓下濃縮反應液，反應瓶中加入EtOAc(100mL)，過濾白色固體，濾液濃縮得到黃色油狀液體。管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=9：1~1.5：1)得到標題化合物(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(4-(丙基硫基)苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(2.5g,70%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)：δ 8.21-8.24(m,2H),7.37-7.41(m,2H),7.291-7.32(m,2H),7.14-7.18(m,2H),4.10-4.15(m,1H),3.89-3.92(m,1H),3.58-3.62(m,1H),2.84-2.88(m,2H),1.61-1.67(m,2H),1.39(m,3H),1.24-1.28(m,6H),0.99-1.02(m,3H).
第二步 (2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧 基)(4-(丙基硫基)苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯的製備
室溫下，1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(130mg,0.5mmol)溶於THF(5mL)和NMP(1.3mL)的混合溶液中。攪拌下五分鐘內滴加 t BuMgCl(1.0M in THF,1.0mL,1.0mmol)到上述溶液中，反應在室溫下攪拌10分鐘後，(2S)-2-(((4-硝基苯氧基)(4-(丙基硫基)苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(500mg,1.0mmol)的THF(3mL)溶液在五分鐘內滴入。反應在55℃下攪拌過夜，冷至室溫，加入MeOH(3mL)淬滅反應。反應液濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2：MeOH=50：1~10：1)得到標題化合物(2S)-2-(((((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶.-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-(丙基硫基)苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(141mg,46%，差向異構體比例為SP/RP=1.5：1)。
1H NMR(400MHz,CD3OD)：δ 7.61-7.63(m,1H),7.36-7.38(m,2H),7.20-7.25(m,2H),6.17(d,J=17.2Hz,1H),5.66-5.71(m,1H),4.55-4.59(m,1H),4.40-4.45(m,1H),4.12-4.15(m,1H),3.94-4.00(m,2H),3.48-3.58(m,1H), 2.88-2.92(m,2H),1.60-1.67(m,2H),1.26-1.40(m,12H),1.00-1.05(m,3H)；31P NMR(162MHz,CD3OD)：δ 3.70；MS m/z(ESI)：620.2[M+H]+.
實施例二十四
第一步 二氯磷酸4-環丙基苯基酯的製備
稱取4-環丙基苯酚(2.6g,19.39mmol)溶解於Et2O(15mL)中，室溫下緩慢滴加TEA(2.7mL,19.39mmol)並攪拌15分鐘。
取三氯氧磷(3.0g,19.39mmol)溶解於Et2O(100mL)中，冷至-55℃後緩慢滴加上述溶液，有白色固體析出。滴加完畢後在該溫度下繼續攪拌2小時，隨後緩慢升至室溫並攪拌過夜。在N2保護下濾去白色固體，濾液濃縮得標題化合物二氯磷酸4-環丙基苯基酯(4.4g,91%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 7.18-7.14(m,2H),7.12-7.08(m,2H),1.94-1.86(m,1H),1.03-0.96(m,2H),0.71-0.65(m,2H)；31P NMR(162MHz,CDCl3)δ 3.99.
第二步 ((4-環丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
取L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(2.5g,14.97mmol)溶解於 CH2Cl2(30mL)中，冷至-78℃，在N2保護下緩慢滴加TEA(4.3mL,31.44mmol)，攪拌15分鐘後，緩慢滴加溶解於CH2Cl2(5mL)中的二氯磷酸4-環丙基苯基酯(3.7g,14.82mmol)溶液，攪拌30分鐘後緩慢升至0℃，在該溫度下繼續攪拌1小時。
取全氟苯酚(2.72g,14.82mmol)溶解於CH2Cl2(10mL)中，0℃下緩慢滴加TEA(2.3mL,16.46mmol)，攪拌5分鐘後將該溶液緩慢滴加至上述反應體系中，保持0℃並攪拌過夜。濾去固體，濾液濃縮後以MTBE(30mL)稀釋，室溫下攪拌30分鐘，然後濾去固體，濾液濃縮得到標題化合物((4-環丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(6.03g,82%，差向異構體比例為SP/RP=1：1)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 7.16-7.08(m,4H),6.80-6.73(m,1H),4.91-4.84(m,1H),3.97-3.87(m,1H),1.95-1.89(m,1H),1.33-1.23(m,3H),1.18-1.14(m,6H),0.96-0.90(m,2H),0.65-0.59(m,2H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d 6)δ 0.52.
第三步 ((S)-(4-環丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
將上述第二步所得((4-環丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(差向異構體比例為SP/RP=1：1) 以PE：EtOAc=5：1打漿，濾出固體，以石油醚淋洗，油泵抽乾，得到標題化合物((S)-(4-環丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(2.99g,40%,HPLC純度：97%)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 7.09(s,4H),6.80(dd,J=14.0,10.0Hz,1H),4.89-4.83(m,1H),3.96-3.87(m,1H),1.95-1.89(m,1H),1.26(d,J=6.8Hz,3H),1.16-1.14(m,6H),0.96-0.90(m,2H),0.65-0.60(m,2H)；31P NMR(162MHz,DMSO-d 6)δ 0.52.
第四步 (S)-(4-環丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
取1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(440mg,1.69mmol)溶解於THF(10mL)中，冷至-5℃，在N2保護下緩慢滴加 t BuMgCl(1M in THF,3.6mL,3.6mmol)，滴加完畢後在該溫度下攪拌30分鐘，隨後升至室溫並繼續攪拌30分鐘。 將反應體系置於冰水浴中，緩慢滴加溶解於THF(3.6mL)中的((S)-(4-環丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(1.0g,2.03mmol)溶液，保持該溫度並連續攪拌 過夜。用1N HCl溶液(2mL)淬滅反應體系，濃縮後殘餘加入CH2Cl2(50mL)和1N HCl溶液(20mL)稀釋，分離有機相，水相用CH2Cl2(50mL×2)萃取，合併有機相，分別以飽和碳酸氫鈉溶液(30mL)和飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮濾液得粗產物。將所得固體在CH2Cl2中再結晶，得標題化合物(S)-(4-環丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(680mg,70%,HPLC純度：98%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.25(brs,1H),7.48(d,J=7.6,1H),7.11-7.08(m,2H),7.03-7.01(m,2H),6.18(d,J=18.4Hz,1H),5.70(d,J=8.0,1H),5.03-4.99(m,1H),4.55-4.43(m,2H),4.13-4.08(m,2H),3.96-3.91(m,2H),1.90-1.81(m,1H),1.45-1.32(m,6H),1.31-1.19(m,6H),0.98-0.91(m,2H),0.66-0.61(m,2H)；31P NMR(162MHz,CDCl3)δ 3.65；19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-161.79；MS m/z(ESI)：570.1[M+H]+.
((R)-(4-環丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
取1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(220mg,0.845mmol)溶於THF(5mL)中，冷至-5℃，在N2保護下緩慢滴加 t BuMgCl(1M in THF,1.8mL,1.8mmol)，滴加完畢後在該溫度下攪拌30分鐘，隨後升至室溫並繼續攪拌30分鐘。將反應體系置於冰水浴中，緩慢滴加溶解於THF(3mL)中的((4-環丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(實施例二十一中第二步)(500mg,1.02mmol)溶液，保持該溫度並連續攪拌過夜。用1N HCl溶液(1mL)淬滅反應體系，水泵減壓濃縮溶劑，殘餘加入CH2Cl2(30mL)和1N HCl溶液(15mL)稀釋，分離有機相，水相用CH2Cl2萃取(30mL×2)，合併有機相，分別以飽和碳酸氫鈉溶液(20mL)和飽和食鹽水(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮濾液得粗產物。所得粗產物管柱層析(CH2Cl2： i PrOH=20：1)得標題化合物((R)-(4-環丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(118mg,24%,HPLC純度：98%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.95(s,1H),7.26-7.24(m,1H),7.11-7.09(m,2H),7.03-7.00(m,2H),6.17(d,J=18.8Hz, 1H),5.59(d,J=8.0,1H),5.05-4.99(m,1H),4.51-4.45(m,2H),4.10(d,J=9.6Hz,1H),4.06-3.88(m,2H),3.76(dd,J=24.0,9.2,1H),1.87-1.82(m,1H),1.39-1.28(m,6H),1.27-1.21(m,6H),0.98-0.91(m,2H),0.66-0.55(m,2H)；31P NMR(162MHz,CDCl3)δ 4.31；19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-162.04；MS m/z(ESI)：570.1[M+H]+.
實施例二十五
((S)-(((2R,3R,4R,5R)-3-乙醯氧基-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-環丙基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯
取(S)-(4-環丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(57mg,0.10mmol)溶於THF(7mL)，往該溶液中依次加入乙醯氯(0.035mL,0.50mmol)，DMAP(61mg,0.50mmol)，室溫下攪拌3小時。 用EtOAc稀釋，有機相依次用水、飽和食鹽水洗滌，再用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，Prep-TLC純化(展開劑CH2Cl2： i PrOH=20：1)，得到標題化合物((S)-(((2R,3R,4R,5R)-3-乙醯氧基-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟 -4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-環丙基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(45mg,74%,HPLC純度：98%)1H NMR(400MHz,MeOD)δ 7.55(d,J=8.0Hz,1H),7.06(m,4H),6.03(d,J=18.4Hz,1H),5.55(d,J=8.0Hz,1H),5.22(m,1H),4.91(m,1H),4.38(m,1H),4.27(m,2H),3.85(m,1H),3.26(m,1H),2.10(s,3H),1.83(m,1H),1.30(m,6H),1.17(m,6H),0.89(m,2H),0.58(m,2H)；31P NMR(162MHz,MeOD)δ 3.83；19F NMR(376MHz,MeOD)δ-157.42；MS m/z(ESI)：612.2[M+H]+.
實施例二十六
第一步 ((S)-((2,3-二氫-1H-茚-5-基)氧代)(全氟苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
稱取2,3-二氫-1H-茚-5-醇(20.0g,150mmol)溶解於Et2O(150mL)中，室溫下緩慢滴加DIPEA(19.4g,150mmol)並攪拌15分鐘。
取三氯氧磷(23.0g,150mmol)溶解於Et2O(300mL)中，冷至-78℃後緩慢滴加上述溶液，1.5小時滴完，有白色固體析出。滴加完畢後緩慢升至室溫並攪拌過夜。LCMS顯示反應生成二氯磷酸(2,3-二氫-1H-茚-5-基)酯。
取L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(24.0g,143mmol)溶解於 CH2Cl2(400mL)中，加入DIPEA(39.0g,300mmol)，攪拌均勻。緩慢滴入-78℃下冷卻的(2,3-二氫-1H-茚-5-基)磷二氯化酸酯溶液中，滴加時間約2小時。溶液緩慢升至0℃。
稱取全氟苯酚(30.3g,165mmol)溶於CH2Cl2(100mL)中，溶液置於冰浴中，攪拌下緩慢滴加DIPEA(21.5g,165mmol)。上述溶液緩慢滴入已加入L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽的零度的溶液中，半小時滴完，溶液室溫下攪拌過夜。
上述溶液用水(2L)，0.2N HCl(2L×2)，飽和食鹽水(300mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，旋乾，真空泵除去溶劑，得到67.5g粗產物。
在上述產物中加入石油醚(1.25L)，EtOAc(40mL)，懸濁液室溫下攪拌過夜。溶液過濾，用石油醚(50mL)洗滌，固體在真空泵上抽去溶劑，得到標題化合物((S)-((2,3-二氫-1H-茚-5-基)氧代)(全氟苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(14.5g,20%)。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ 7.20(d,J=8.4Hz,1H),7.12(s,1H),7.01(d,J=8.4Hz,1H),4.97(m,1H),4.02(m,1H),2.90(m,4H),2.12(m,2H),1.38(dd,J=7.2,1.0Hz,3H),1.23(m,6H)；19F NMR(376MHz,MeOD)δ-155.35(d,J=22.4Hz,2F),-163.11(t,J=23.2Hz,1F),-165.78(t,J=23.2Hz,3F).
第二步 (S)-((2,3-二氫-1H-茚-5-基)氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4- 氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
取1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(2.95g,11.36mmol)溶解於THF(100mL)中，冷至0℃，在N2保護下緩慢滴加 t BuMgCl(1M in THF,22.72mL,22.72mmol)，滴加完畢後在該溫度下攪拌30分鐘，隨後升至室溫並繼續攪拌30分鐘。將反應體系置於冰水浴中，緩慢滴加溶解於THF(50mL)中的((S)-((2,3-二氫-1H-茚-5-基)氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(5.6g,11.36mmol)溶液，保持該溫度並連續攪拌過夜。LCMS顯示產物主峰。溶液用1N HCl溶液(20mL)淬滅反應體系，濃縮後殘餘加入CH2Cl2(300mL)和1N HCl溶液(100mL)稀釋，分離有機相，水相用CH2Cl2(50mL×2)萃取，合併有機相，分別以飽和碳酸氫鈉溶液(100mL)和飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，與矽膠一起濃縮濾液。管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2： i PrOH=60：1~12：1)得標題化合物(S)-((2,3-二氫-1H-茚-5-基)氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(3.9g,67%)。
1H NMR(400MHz,MeOD)7.61(d,J=8.0Hz,1H),7.18(d,J =8.0Hz,1H),7.12(s,1H),7.01(dd,J=8.4Hz,0.8Hz,1H),6.14(d,J=19.6Hz,1H),5.57(d,J=8.4Hz,1H),4.98(m,1H),4.54(m,1H),4.38(m,1H),4.12(m,1H),3.95(m,2H),2.88(m,4H),2.10(m,2H),1.39-1.33(m,6H),1.24(m,6H)；31P NMR(162MHz,MeOD)δ 3.89；19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-161.97；MS m/z(ESI)：570.1[M+H]+.
實施例二十七
((S)-(((2R,3R,4R,5R)-3-乙醯氧基-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-環丙基苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯
取(S)-((2,3-二氫-1H-茚-5-基)氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(57mg,0.10mmol)溶於THF(7mL)，往該溶液中依次加入乙醯氯(0.035mL,0.50mmol),DMAP(61mg,0.50mmol)，室溫下攪拌3小時。用EtOAc稀釋，有機相依次用水、飽和食鹽水洗滌，再用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，Prep-TLC純化(展開劑CH2Cl2： i PrOH=20：1)，得到標題化合物((S)-(((2R,3R,4R,5R)-3-乙醯氧基-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-環丙基 苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(40mg,65%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.37(s,1H),7.48(d,J=8.0Hz,1H),7.06(d,J=8.0Hz,1H),7.01(s,1H),6.88(d,J=8.0Hz,1H),6.13(d,J=18.4Hz,1H),5,46(d,J=8.0Hz,1H),5.12(dd,J=20.4,8.0Hz,1H),4.94(m,1H),4.47(m,1H),4.17(m,1H),3.90(m,2H),2.78(m,4H),2.11(s,3H),2.01(m,2H),1.29(m,6H),1.16(m,6H)；31P NMR(162MHz,CDCl3)δ 2.97；19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-157.52；MS m/z(ESI)：612.3[M+H]+.
實施例二十八
第一步 ((S)-((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
稱取5,6,7,8-四氫萘-2-酚(23.0g,150mmol)溶解於Et2O(150mL)中，室溫下緩慢滴加DIPEA(19.4g,150mmol)並攪拌15分鐘。
取三氯氧磷(23.0g,150mmol)溶解於Et2O(300mL)中，冷至-78℃後緩慢滴加上述溶液，1.5小時滴完，有白色固體析出。滴加完畢後緩慢升至室溫並攪拌過夜，LCMS顯示生成二氯磷酸(5,6,7,8-四氫萘-2-基)酯。
取L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(24.0g,143mmol)溶解於 CH2Cl2(400mL)中，加入DIPEA(39.0g,300mmol)，攪拌均勻。緩慢滴入-78℃下冷卻的二氯磷酸(5,6,7,8-四氫萘-2-基)酯溶液中，滴加時間約2小時。溶液緩慢升至零度。
稱取全氟苯酚(30.3g,165mmol)溶於CH2Cl2(100mL)中，溶液置於冰浴中，攪拌下緩慢滴加DIPEA(21.5g,165mmol)。上述溶液緩慢滴入已加入L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽的零度的溶液中，半小時滴完，溶液室溫下攪拌過夜。
上述溶液用水(2L)，0.2N HCl(2L×2)，飽和食鹽水(300mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到72.4g粗產物。
在上述產物中加入石油醚(500mL)，乙酸乙酯(15mL)，懸濁液室溫下攪拌3小時並冷至0℃，並在0℃下攪拌1小時。溶液過濾，用0℃的石油醚(50mL)洗滌，固體在真空泵上抽去溶劑，得到32.4g產物。MeOD中19FNMR顯示4：1差向異構體。固體再在石油醚(250mL)中攪拌過夜，過濾，除去溶劑，得到23.4g產物，差向異構體比例15：1。固體再在0℃的石油醚(300mL)中攪一小時，過濾，除去溶劑，得到標題化合物((S)-((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(22.0g,28%)。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ 7.06(d,J=9.2Hz,1H),6.97(m,2H),4.95(m,1H),4.02(m,1H),2.76(m,4H),1.81(m,4H),1.39(dd,J=7.2,1.2Hz,3H),1.23(m,6H)；19F NMR(376MHz,MeOD)δ-155.33(d,J=18.8Hz,2F),-163.14(t,J=23.2Hz,1F),-165.80(t,J=20.2Hz,3F).
第二步 (S)-((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
取1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(2.95g,11.36mmol)溶解於THF(100mL)中，冷至0℃，在N2保護下緩慢滴加 t BuMgCl(1M in THF,22.72mL,22.72mmol)，滴加完畢後在該溫度下攪拌30分鐘，隨後升至室溫並繼續攪拌30分鐘。將反應體系置於冰水浴中，緩慢滴加溶解於THF(50mL)中的((S)-((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(5.8g,11.36mmol)溶液，保持該溫度並連續攪拌過夜。反應用1N HCl溶液(20mL)淬滅，濃縮後殘餘加入CH2Cl2(300mL)和1N HCl溶液(100mL)稀釋，分離有機相，水相用CH2Cl2(50mL×2)萃取，合併有機相，分別以飽和碳酸氫鈉溶液(100mL)和飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2： i PrOH=60：1~12：1)得標題化合物(S)-((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(2.2g,34%)。
1H NMR(400MHz,MeOD)7.59(d,J=7.2Hz,1H),7.04(m,1H),6.97(m,1H),6.14(d,J=18.8Hz,1H),5.55(d,J=8.0Hz,1H),4.96(m,1H),4.55(m,1H),4.38(m,1H),4.12(m,1H),3.94(m,2H),2.74(m,4H),1.79(m,4H),1.39-1.33(m,6H),1.24(m,6H)；31P NMR(162MHz,MeOD)δ 3.87；19F NMR(376MHz,MeOD)δ-162.11；MS m/z(ES1)：584.0[M+H]+.
實施例二十九
((S)-(((2R,3R,4R,5R)-3-乙醯氧基-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯
取(S)-((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(60mg,0.10mmol)溶於THF(7mL)，往該溶液中依次加入乙醯氯(0.07mL,0.10mmol),DMAP(122mg,1.0mmol)，DIPEA(260mg,2.0mmol)，室溫下攪拌3小時。用EtOAc稀釋，有機相依次用水、飽和食鹽水洗滌，再用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2： i PrOH=60：1~12：1)得標題 化合物((S)-(((2R,3R,4R,5R)-3-乙醯氧基-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)((5,6,7,8-四氫萘-2-基)氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(29mg,40%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 9.14(s,1H),7.54(d,J=8.4Hz,1H),6.99(m,1H),6.92(m,2H),6.20(d,J=18.4Hz,1H),5.51(d,J=8.0Hz,1H),5.17(dd,J=20.4,9.2Hz,2H),5.00(m,1H),4.55(m,1H),4.31(m,1H),4.22(m,1H),3.92(m,2H),2.70(m,4H),2.17(s,3H),1.76(m,4H),1.34(m,6H),1.24(m,6H)；31P NMR(162MHz,CDCl3)δ 2.87；19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-157.54；MS m/z(ESI)：626.3[M+H]+.
實施例三十
第一步 ((S)-(4-(丙基硫基)苯氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
稱取4-(丙基硫基)苯酚(14.7g,87.5mmol)溶解於Et2O(100mL)中，室溫下緩慢滴加DIPEA(11.3g,87.5mmol)並攪拌15分鐘。
取三氯氧磷(14.0g,91.9mmol)溶解於Et2O(200mL)中，冷至-78℃後緩慢滴加上述溶液，1.5小時滴完，有白 色固體析出。滴加完畢後緩慢升至室溫並攪拌過夜，LCMS顯示生成二氯磷酸(4-(丙基硫基)苯氧基)酯。
取L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽(14.0g,83.8mmol)溶解於CH2Cl2(180mL)中，加入DIPEA(22.8g,177mmol)，攪拌均勻。緩慢滴入-78℃下冷卻的二氯磷酸(4-(丙基硫基)苯氧基)酯溶液中，滴加時間約2小時，滴完後溶液緩慢升至0℃。
稱取全氟苯酚(17.7g,96mmol)溶於CH2Cl2(120mL)中，溶液置於冰浴中，攪拌下緩慢滴加DIPEA(12.4g，96mmol)。上述溶液緩慢滴入已加入L-丙胺酸異丙酯鹽酸鹽的0℃的溶液中，半小時滴完，溶液室溫下攪拌過夜。
上述溶液用水(1L)，0.2N HCl(1L×2)，飽和食鹽水(200mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到40.0g粗產物。
在上述產物中加入石油醚(650mL)，乙酸乙酯(130mL)，懸濁液室溫下攪拌過夜。溶液過濾，用石油醚(50mL)洗滌，過濾得到標題化合物((S)-(4-(丙基硫基)苯氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(10.9g,27%)。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ 7.39(m,2H),7.22(m,2H),4.97(m,1H),4.03(m,1H),2.92(t,J=7.2Hz,2H),1.84(m,2H),1.39(dd,J=7.2,1.2Hz,3H),1.23(m,6H),1.03(t,J=7.2Hz,3H)；19F NMR(376MHz,MeOD)δ-155.40(d,J=22.0Hz,2F),-162.95(t,J=22.0Hz,1F),-165.78(t,J=20.2Hz,3F).
第二步 (S)-(4-(丙基硫基)苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯的製備
取1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(1.56g,6.0mmol)溶解於THF(50mL)中，冷至0℃，在N2保護下緩慢滴加 t BuMgCl(1M in THF,12.0mL,12.0mmol)，滴加完畢後在該溫度下攪拌30分鐘，隨後升至室溫並繼續攪拌30分鐘。 將反應體系置於冰水浴中，緩慢滴加溶解於THF(25mL)中的((S)-(4-(丙基硫基)苯氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(3.32g,6.3mmol)溶液，保持該溫度並連續攪拌過夜。LCMS顯示產物主峰。溶液用1N HCl溶液(12mL)淬滅反應體系，濃縮後殘餘加入CH2Cl2(150mL)和1N HCl溶液(50mL)稀釋，分離有機相，水相用CH2Cl2(25mL×2)萃取，合併有機相，分別以飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)和飽和食鹽水(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2： i PrOH=60：1~12：1)得標題化合物(S)-(4-(丙基硫基)苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2- 基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(1.9g,53%)。
1H NMR(400MHz,MeOD)7.63(d,J=8.4Hz,1H),7.36(d,J=8.4Hz,1H),7.22(dd,J=8.8,0.8Hz,2H),6.16(d,J=20.0Hz,1H),5.66(d,J=8.0Hz,1H),4.96(m,1H),4.55(m,1H),4.40(m,1H),4.14(m,1H),3.95(m,2H),2.90(t,J=6.8Hz,2H),1.64(m,2H),1.39-1.33(m,6H),1.24(m,6H),1.03(t,J=8.0Hz,3H)；31P NMR(162MHz,MeOD)δ 3.89；19F NMR(376MHz,MeOD)δ-161.87；MS m/z(ESI)：604.0[M+H]+.
實施例三十一
((S)-(((2R,3R,4R,5R)-3-乙醯氧基-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-(丙基硫基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯
取(S)-(4-(丙基硫基)苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(60mg,0.10mmol)溶於THF(7mL)，往該溶液中依次加入乙醯氯(0.035mL,0.50mmol),DMAP(61mg,0.50mmol)，室溫下攪拌3小時。用EtOAc稀釋，有機相依次用水、飽和食鹽 水洗滌，再用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，Prep-TLC純化(展開劑CH2Cl2： i PrOH=20：1)，得到標題化合物((S)-(((2R,3R,4R,5R)-3-乙醯氧基-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)(4-(丙基硫基)苯氧基)磷醯基)-L-丙胺酸異丙基酯(50mg,77%)。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ 7.53(d,J=8.0Hz,1H),7.25(dd,J=11.6,2.8Hz,2H),7.10(dd,J=8.8,1.2Hz,2H),6.01(d,J=20.4Hz,1H),5.54(d,J=8.8Hz,1H),5.17(dd,J=20.4,8.0Hz,2H),4.85(m,1H),4.38(m,1H),4.22(m,2H),3.83(m,1H),2.78(t,J=7.2Hz,2H),1.50(m,2H),1.26(m,6H),1.17(m,6H),0.96(t,J=7.2Hz,3H)；31P NMR(162MHz,MeOD)δ 3.85；19F NMR(376MHz,MeOD)δ-157.38；MS m/z(ESI)：646.2[M+H]+.
實施例三十二
第一步 (S)-2-(((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯
稱取苯酚(9.4g,100mmol)溶解於Et2O(100mL)中，室溫下緩慢滴加DIPEA(12.9g,100mmol)並攪拌15分鐘。
取三氯氧磷(16.0g,105mmol)溶解於Et2O(200mL) 中，冷至-78℃後緩慢滴加上述溶液，1.5小時滴完，有白色固體析出，滴加完畢後緩慢升至室溫並攪拌過夜，LCMS顯示生成二氯磷酸酯。
取(S)-2-胺基丙基硫代羧酸S-異丙基酯鹽酸鹽(16.5g,90mmol)溶解於CH2Cl2(200mL)中，加入DIPEA(23.2g，180mmol)，攪拌均勻。緩慢滴入到-78℃冷卻的二氯磷酸苯基酯溶液中，滴加時間約2小時。溶液緩慢升至0℃。
稱取全氟苯酚(20.2g,110mmol)溶於CH2Cl2(100mL)中，溶液置於冰浴中，攪拌下緩慢滴加DIPEA(14.2g,110mmol)。上述溶液緩慢滴入已加入(S)-2-胺基丙基硫代羧酸S-異丙基酯鹽酸鹽的零度的溶液中，30分鐘滴完，溶液室溫下攪拌過夜。
上述溶液用水(1L)，0.2N HCl(1L×2)，飽和食鹽水(200mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到46g粗產物。
在上述產物中加入石油醚(300mL)，EtOAc(30mL)，懸濁液室溫下攪拌過夜。溶液過濾，用石油醚(50mL)洗滌，固體在真空泵上抽去溶劑，得到13.5g含一對差向異構體的粗產物，產物用混合溶劑(PE：EtOAc=20：1)打漿五次，得到標題化合物(S)-2-(((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(7.1g,15%)。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ 7.42(m,2H),7.28(m,3H),4.08(m,1H),3.52(m,1H),1.38(dd,J=7.2,0.8Hz,3H),1.26(m,6H)；19F NMR(376MHz,MeOD)δ-154.86(d,J=20.0Hz,2F), -162.92(t,J=21.2Hz,1F),-165.65(t,J=18.4Hz,3F)；31P NMR(162MHz,MeOD)δ 0.07.
第二步 (S)-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯的製備
取1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(1.56g,6.0mmol)溶解於THF(50mL)中，冷至0℃，在N2保護下緩慢滴加 t BuMgCl(1M in THF,12.0mL,12.0mmol)，滴加完畢後在該溫度下攪拌30分鐘，隨後升至室溫並繼續攪拌30分鐘。將反應體系置於冰水浴中，緩慢滴加(S)-2-(((S)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(2.96g,6.3mmol)的THF(50mL)溶液溶液，反應攪拌過夜。反應用1N HCl溶液(12mL)淬滅反應，濃縮後殘餘加入CH2Cl2(150mL)和1N HCl溶液(30mL)稀釋，分離有機相，水相用CH2Cl2(25mL×2)萃取，合併有機相，分別以飽和碳酸氫鈉溶液(30mL)和飽和食鹽水(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2： i PrOH=60：1~12：1)得到0.93g粗產物，石油醚/乙酸乙酯再結晶得到標題化合物(S)-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4- 氟-3-羥基-4-甲基氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙硫酸S-異丙基酯(0.5g,15%)。
1H NMR(400MHz,MeOD)7.63(d,J=8.0Hz,1H),7.40(m,2H),7.28(m,2H),7.21(m,1H),6.15(d,J=20.0Hz,1H),5.65(d,J=8.0Hz,1H),4.57(m,1H),4.42(m,1H),4.13(m,1H),3.98(m,2H),3.52(m,1H),1.39-1.33(m,6H),1.27(m,6H)；31P NMR(162MHz,MeOD)δ 3.53；19F NMR(376MHz,MeOD)δ-161.97；MS m/z(ESI)：546.0[M+H]+.
實施例三十三
乙酸(2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-2-((((S)-(((S)-1-(異丙基硫基)-1-羰基丙烷-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-甲基四氫呋喃-3-基酯
取(S)-2-(((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基氫呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(54mg,0.10mmol)溶於THF(7mL)，往該溶液中依次加入乙醯氯(0.035mL,0.50mmol),DMAP(61mg,0.50mmol)，室溫下攪拌3小時。用EtOAc稀釋，有機相依次用水、飽和食鹽 水洗滌，再用無水硫酸鈉乾燥，濃縮，管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2： i PrOH=60：1~12：1)得標題化合物乙酸(2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-2-((((S)-(((S)-1-(異丙基硫基)-1-羰基丙烷-2-基)胺基)(苯氧基)磷醯基)氧基)甲基)-4-甲基四氫呋喃-3-基酯(52mg,90%)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.92(s,1H),7.49(d,J=8.0Hz,1H),7.34(m,2H),7.19(m,3H),6.18(d,J=18.8Hz,1H),5.50(m,1H),5.18(dd,J=20.8,9.2Hz,1H),4.56(m,1H),4.31(m,1H),4.24(m,1H),4.06(m,1H),3.96(m,1H),3.61(m,1H),2.19(s,3H),1.39-1.33(m,6H),1.28(m,6H)；31P NMR(162MHz,CDCl3)δ 2.36；19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-157.20；MS m/z(ESI)：588.0[M+H]+.
實施例三十四
第一步(2S)-2-(((4-環丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯的製備
稱取4-環丙基苯酚(4.4g,32.8mmol)溶解於Et2O(30mL)中，室溫下向反應體系中緩慢滴加DIPEA(4.23g,32.8mmol)並攪拌15分鐘。
取三氯氧磷(5.0g,32.8mmol)溶解於Et2O(60mL) 中，冷至-78℃後，緩慢滴加上述溶液，1.5小時滴完，反應有白色固體析出。滴加完畢後緩慢升至室溫並攪拌過夜。LCMS顯示生成二氯磷酸4-環丙基苯基酯。
取S-異丙基(S)-2-胺基丙硫酸酯鹽酸鹽(5.67g,31mmol)溶解於CH2Cl2(80mL)中，加入DIPEA(8.5g，66mmol)，攪拌均勻。緩慢滴入到-78℃冷卻的二氯磷酸苯基酯溶液中，滴加時間約2小時，滴完後溶液緩慢升至0℃。
稱取全氟苯酚(6.62g,36mmol)溶於CH2Cl2(40mL)中，溶液置於冰浴中，攪拌下緩慢滴加DIPEA(4.6g,36mmol)。該混合溶液緩慢滴入已加入(S)-2-胺基丙基硫代羧酸S-異丙基酯鹽酸鹽的零度的溶液中，半小時滴完，溶液室溫下攪拌過夜。
上述溶液依次用水(300mL)，0.2N HCl(300mL×2)，飽和食鹽水(100mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，管柱層析(洗脫劑：PE：EtOAc=6：1)給出7.0g粗產物。
向上述粗產物中加入石油醚(100mL)，EtOAc(10mL)，懸濁液室溫下攪拌過夜。溶液過濾，用石油醚(20mL)洗滌，抽濾得到標題化合物(2S)-2-(((4-環丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(1.07g,6%，差向異構體比例為SP/RP=2.5：1)。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ 7.2-6.4(m,4H),4.2-3.8(m,1H),3.5-3.3(m,1H),1.9-1.6(m,1H),1.4-1.2(m,6H),0.9-0.4(m,4H).
第二步 (S)-2-(((S)-(4-環丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R) -5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯的製備
取1-((2R,3R,4R,5R)-3-氟-4-羥基-5-(羥甲基)-3-甲基四氫呋喃-2-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.60g,2.4mmol)溶於THF(20mL)中，冷至0℃，在N2保護下緩慢滴加 t BuMgCl(1M in THF,4.8mL,4.8mmol)，滴加完畢後在該溫度下攪拌30分鐘，隨後升至室溫並繼續攪拌30分鐘。將反應體系置於冰水浴中，緩慢滴加(2S)-2-(((4-環丙基苯氧基)(全氟苯氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(1.0g,1.9mmol)的THF(10mL)溶液，反應在該溫度攪拌過夜，用1N HCl溶液(4mL)淬滅反應，濃縮後殘餘加入CH2Cl2(50mL)和1N HCl溶液(10mL)稀釋，分離有機相，水相用CH2Cl2(10mL×2)萃取，合併有機相，分別以飽和碳酸氫鈉溶液(10mL)和飽和食鹽水(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，管柱層析(洗脫劑：CH2Cl2： i PrOH=50：1~12：1)得到標題化合物(S)-2-(((S)-(4-環丙基苯氧基)(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-二羰基-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羥基-4-甲基四氫呋喃-2-基)甲氧基)磷醯基)胺基)丙基硫代羧酸S-異丙基酯(0.28g,25%)。 1H NMR(400MHz,MeOD)δ 7.60(d,J=8.4Hz,1H),7.16(m,2H),7.08(d,J=8.4Hz,2H),6.14(d,J=19.6Hz,1H),5.62(d,J=8.4Hz,1H),4.55(m,1H),4.42(m,1H),4.13(m,1H),3.98(m,2H),3.52(m,1H),1.93(m,1H),1.39-1.33(m,6H),1.27(m,6H),0.96(m,2H),0.65(m,2H)；31P NMR(162MHz,MeOD)δ 3.68；19F NMR(376MHz,MeOD)δ-161.62；MS m/z(ESI)：586.2[M+H]+.
生物學評價 1、丙肝病毒HCV抑制活性測定
本發明化合物對HCV複製的抑制活性是用HCV螢光素酶報告基因分析方法(HCV Replicon Reporter Luciferase Assay)測定的。實驗用的細胞模型為HCV螢光素酶報告基因穩轉的Huh-7細胞系；待測化合物貯備溶液用二甲基亞碸配製為10mM，實驗時用培養基稀釋成一系列梯度濃度，一般稀釋成8到10個濃度。測試的內參化合物為Cyclosporine。
試驗的程式為：將細胞生長在96孔培養板上，24小時後將不同濃度的待測化合物和內參化合物加到培養的細胞。48小時後，用酶標儀檢測螢光素酶活性。化合物的半數抑制濃度IC50值可藉由一系列不同濃度下，受試化合物對螢光素酶活性的抑制數值進行計算。
2、化合物對細胞的毒性測試
本發明化合物對細胞的毒性是用MTT cytotoxicity assay測定的。實驗用的細胞模型為HCV螢光素酶報告基因穩轉的Huh-7細胞系；待測化合物貯備溶液用二甲基亞碸配製為10mM，實驗時用培養基稀釋成一系列梯度濃度，一般稀釋成8到10個濃度。測試的內參化合物為Cyclosporine。
試驗的程式為：將細胞生長在96孔培養板上，24小時後將不同濃度的待測化合物和內參化合物加到培養的細胞。48小時後，將MTT加入到培養的細胞裏培養4小時，然後用酶標儀檢測吸光度。化合物的半數抑制濃度CC50值可藉由一系列不同濃度下，受試化合物對細胞活性的抑制數值進行計算。
3、本發明實施例化合物生物活性檢測資料列表如下：
由實施例二十四中製備的一對差向異構體的測試結果表2可得知，光學純的Sp構型的異構體細胞活性優於Rp構型的異構體。
4、本發明較佳實施例化合物PK試驗資料
HCV NS5B是一種RNA聚合酶，負責HCV病毒複製，複製所用基質為三磷酸核苷。本發明的實施例化合物為磷醯胺酯核苷酸類似物前藥，在肝細胞內代謝生成活性藥三磷酸核苷類似物，從而抑制NS5B的活性和HCV病毒的複製。作為一個前藥，體內生成三磷酸尿苷類似物的能力與對NS5B的抑制活性直接相關聯，因此發明人分別做了體外PK試驗和體內PK試驗以檢測本發明較佳實施例化合物生成活性藥三磷酸尿苷類似物的能力，其中： 1)體外PK試驗模型為：Huh-7細胞和人原代肝細胞PK分析，具體試驗方法如下： 前藥在人肝細胞內代謝生成活性藥三磷酸氟代尿苷的藥物代謝動力學試驗是用人肝癌Huh-7細胞和人原代肝細胞進行的。細胞種殖後24小時將藥物加到培養液中，終濃度為50μM。藥物處理24小時後用胰酶收取細胞，計數，離心，用D-PBS洗一次，離心，細胞沉澱團塊在液氮中速凍，保存於液氮或-80℃。
細胞內活性藥三磷酸氟代尿苷的濃度是用液相色譜-串聯質譜(LC/MS/MS)方法測量得到。將1毫升冰冷的60%甲醇加入凍存的細胞沉澱團塊將細胞吹散，然後置於-20℃過夜處理。第二天離心(11000轉，10分鐘)得到上清液，每一個樣品取100μL上清液，再加入100μL水，渦旋2分鐘，離心(3500轉，5分鐘)後取10μL上清液進行LC/MS/MS測量分析三磷酸尿苷的濃度。
LC/MS/MS分析三磷酸尿苷所用儀器為AB Sciex API 400。液相色譜的條件為Shimadzu LC-20AD泵，Ultimate X8-C8 column 4.6*250mm,5μm管柱，移動相所用的(A)液是10mM醋酸銨(pH=7.8)，(B)液是乙腈，流速為0.56mL/min，洗脫時間0-12.1分鐘，0.01分鐘為95%(A)和5%(B),4.2分鐘為100%(A),4.5分鐘為20%(A)和80%(B),6分鐘為20%(A)和80%(B),6.1分鐘為95%(A)和5%(B),12分鐘為95%(A)和5%(B),12.1分鐘終止。質譜分析儀的設置條件為：負離子電噴霧電離(ESI)模式，分析物三 磷酸氟代尿苷的多反應監測為499.2/158.7。藥物代謝動力學的參數用WinNonlin 6.1計算得到。
本發明較佳實施例化合物為實施例二十四、二十八、三十二化合物，體外PK主要參數及與Sofosbuvir的比較見表3：
從表3中資料可以看出，本發明較佳實施例化合物實施例二十四、二十八、三十二化合物與Sofosbuvir一樣，兩種體外PK試驗模型均可有效代謝生成活性藥三磷酸尿苷類似物。
為了進一步論證本發明較佳實施例化合物具有代謝生成活性藥三磷酸尿苷類似物的能力，發明人還做了體內 PK試驗以檢測本發明較佳實施例化合物生成活性藥三磷酸尿苷類似物的能力，體內PK試驗模型為：1)大鼠體內肝臟PK分析；2)犬體內肝臟PK分析。具體試驗方法如下：
1)大鼠肝臟的PK分析
前藥在大鼠肝臟內代謝生成活性藥三磷酸氟代尿苷的藥物代謝動力學試驗是用SD大鼠(上海史萊克)進行的。給藥為單次灌胃給藥，給藥劑量為50毫克/10毫升/千克。Sofosbuvir的製劑處方為20% PEG200和0.5%羧甲基纖維素鈉；實施例二十四、二十八、三十二化合物的製劑處方為30% PEG200和0.5%羧甲基纖維素鈉。肝臟樣品的取樣點為給藥後0.5、1、2、4、6、12小時。取樣時，大鼠先用CO2處死，藉由肝門靜脈用冰冷的生理鹽水沖洗肝臟，肝臟下腔靜脈剪開以便於沖洗。肝臟左側葉中遠端的2/3用刀片切成大約0.2克的小塊，在液氮中速凍，保存於液氮或-80℃。
肝臟內活性藥三磷酸氟代尿苷是先用固相萃取法將三磷酸尿苷分離出來，然後用鹼性磷酸酶處理去掉三磷酸得到尿苷，尿苷濃度是用液相色譜-串聯質譜(LC/MS/MS)方法測量得到。肝臟樣品加入5倍體積的60%甲醇，勻漿；標樣和質控用空白肝臟製備。三磷酸疊氮胸苷(AZT-TP)加入肝臟勻漿液中作為內參。固相萃取使用被啟動的Waters公司的弱陰離子交換管柱，啟動方法為1毫升的甲醇，1毫升水，1毫升含1%甲酸的氯化鉀，1毫升1%甲酸。肝臟勻漿後，渦旋2分鐘，然後4000轉離心10分鐘。將離心 後的上清液加樣到已啟動的管柱，用1毫升含有1%甲酸的KCl洗管柱，三磷酸核苷用0.3毫升含有5%氨水的甲醇洗脫2次，洗脫物在37℃用氮氣乾燥後用160μL 5mM醋酸銨重新溶解，然後加入40μL鹼性磷酸酶在37℃處理30分鐘得到核苷，處理後取樣20μL進行LC/MS/MS分析核苷的濃度。
LC/MS/MS分析核苷所用儀器為AB Sciex API 5500 Qtrap。液相色譜的條件為Shimadzu LC-20AD泵，Luna 5μm C18 30 x 2.0mm管柱，移動相所用的(A)液是5mM醋酸銨，(B)液是5mM醋酸銨/95%乙腈/5%水，流速為0.5mL/min，洗脫時間0-4.5分鐘，0.01分鐘為100%(A)，0.5分鐘為100%(A)，1.2分鐘為5%(A)和95%(B)，2.4分鐘為5%(A)和95%(B)，2.5分鐘為100%(A)，4.5分鐘為100%(A)。質譜分析儀的設置條件為：負離子電噴霧電離(ESI)模式，分析物氟代尿苷的多反應監測為259.20/239.20，內參AZT的多反應監測為266.10/223.10。藥物代謝動力學的主要參數用WinNonlin 6.1計算得到，分析物氟代尿苷的測量資料根據內參AZT的測量資料標準化。
2)犬肝臟的PK分析
前藥在全肝臟內代謝生成活性藥三磷酸氟代尿苷的藥物代謝動力學試驗是用比格犬(北京馬斯)進行的。給藥為每天單次灌胃給藥，給藥劑量為50毫克/10毫升/千克，連續給藥4天。Sofosbuvir和實施例二十四、二十八、三十二化合物的製劑處方均為20%羥丙基-β-環糊精。肝臟 樣品的取樣點為最後一次給藥後4小時。取樣時，犬先用***麻醉處死，肝臟各葉取下後用冰冷的生理鹽水簡單沖洗後，用刀片切成大約0.2克的小塊，在液氮中速凍，保存於液氮或-80℃。
肝臟內活性藥三磷酸氟代尿苷是先用固相萃取法將三磷酸尿苷分離出來，然後用鹼性磷酸酶處理去掉三磷酸得到尿苷，尿苷濃度是用液相色譜-串聯質譜(LC/MS/MS)方法測量得到。肝臟樣品加入5倍體積的60%甲醇，勻漿；標樣和質控用空白肝臟製備。三磷酸疊氮胸苷(AZT-TP)加入肝臟勻漿液中作為內參。固相萃取使用被啟動的Waters公司的弱陰離子交換管柱，啟動方法為1毫升的甲醇，1毫升水，1毫升含1%甲酸的氯化鉀，1毫升1%甲酸。肝臟勻漿後，渦旋2分鐘，然後4000轉離心10分鐘。將離心後的上清液加樣到已啟動的管柱，用1毫升含有1%甲酸的KCl洗管柱，三磷酸核苷用0.3毫升含有5%氨水的甲醇洗脫2次，洗脫物在37℃用氮氣乾燥後用160μL 5mM醋酸銨重新溶解，然後加入40μL鹼性磷酸酶在37℃處理30分鐘得到核苷，處理後取樣20μL進行LC/MS/MS分析核苷的濃度。
LC/MS/MS分析核苷所用儀器為AB Sciex API 5500 Qtrap。液相色譜的條件為Shimadzu LC-20AD泵，Luna 5μm C18 30 x 2.0mm柱子，移動相所用的(A)液是5mM醋酸銨，(B)液是5mM醋酸銨/95%乙腈/5%水，流速為0.5mL/min，洗脫時間0-4.5分鐘，0.01分鐘為100%(A)，0.5分鐘為100% (A)，1.2分鐘為5%(A)和95%(B)，2.4分鐘為5%(A)和95%(B)，2.5分鐘為100%(A)，4.5分鐘為100%(A)。質譜分析儀的設置條件為：負離子電噴霧電離(ESI)模式，分析物氟代尿苷的多反應監測為259.20/239.20，內參AZT的多反應監測為266.10/223.10。藥物代謝動力學的主要參數用WinNonlin 6.1計算得到，分析物氟代尿苷的測量資料根據內參AZT的測量資料標準化。
本發明較佳實施例化合物為實施例二十四、二十八、三十二化合物，體內PK主要參數及與Sofosbuvir的比較見表4：
從表4中資料可以看出，本發明較佳實施例化合物實施例二十四、二十八、三十二化合物與Sofosbuvir一樣，在體內也可有效代謝生成活性藥三磷酸尿苷類似物，尤其是實施例三十二化合物在大鼠肝臟、犬肝臟中生成三磷酸尿苷類似物的能力與陽性藥Sofosbuvir相比，各項資料都提高了20%以上，實施例二十四化合物在犬肝臟中生成三磷酸尿苷類似物的能力與陽性藥Sofosbuvir相比提高了近35%。與體外肝細胞PK實驗相比，體內實驗綜合了藥物吸收、蛋白質結合、組織器官分佈及代謝等過程，更能反映化合物的真實情況，因此，更具有臨床意義。
最後應當說明的是，以上實施例僅用以說明本發明的技術方案而非限制本發明，儘管參照較佳實施例對本發明進行了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對發明的技術方案進行修改或者等同替換，例如實施例一至實施例二十三可以管柱層析分離得到(S)-異構體或者根據實施例二十四的方法合成(S)-異構體，該技術方案也不會脫離本發明技術方案的精神和範圍，其均應涵蓋在本發明的申請專利範圍的範圍內。

Claims (33)

  1. 一種具有下式(I)化合物尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽： 其中，Z選自氧或硫；Y選自氫或乙醯基；R1選自氫、鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、鹵素取代C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5、-N(R5)-C(O)OR5、-C0-8-S-R5、-SiR5R6R7、-GeR5R6R7，或者R1與苯環相鄰的碳原子形成5-7員碳環、5-7員雜環，其中該C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、C5-10芳基、5-10員雜芳基、5-7員碳環或5-7員雜環視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、 C2-8烯基、C2-8炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；R2選自氫、鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；其中該C1-8烷基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、C5-10芳基或5-10員雜芳基視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取 代基所取代；R3選自氫、C1-8烷基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、C5-10芳基或5-10員雜芳基，視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；R4選自氫、鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、鹵素取代C1-8烷基、C3-8環烷基、C3-8環烷甲基、鹵素取代C1-8烷氧基、鹵素取代C1-8烷基硫基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5、-N(R5)-C(O)OR5；R5、R6、R7選自氫、C1-4烷基、C3-8環烷基；m為0、1、2、3、4；r為0、1、2。
  2. 如申請專利範圍第1項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其 立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，Z選自氧，結構式如式(II)化合物， 其中：Y、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
  3. 如申請專利範圍第2項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R1選自C1-8烷基、鹵素取代C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5、-N(R5)-C(O)OR5、-C0-8-S-R5、-SiR5R6R7、-GeR5R6R7，其中該C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、C5-10芳基或5-10員雜芳基視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8 環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；Y、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
  4. 如申請專利範圍第3項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R1選自C1-8烷基、鹵取代C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基，其中該C1-8烷基、鹵素取代C1-8烷基、C2-8鏈烯基或C2-8鏈炔基進一步被一個或多個選自C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基或5-10員雜芳基硫基的取代基所取代；Y、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
  5. 如申請專利範圍第4項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其為選自如下化合物：
  6. 如申請專利範圍第5項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其為選自如下化合物：
  7. 如申請專利範圍第3項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R1選自C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10 員雜芳基硫基，其中該C3-8環烷基、3-8員雜環基、C5-10芳基或5-10員雜芳基視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；Y、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
  8. 如申請專利範圍第7項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其為選自如下化合物：
  9. 如申請專利範圍第8項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其為選自如下化合物：
  10. 如申請專利範圍第3項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R1選自-C0-8-S-R5、-SiR5R6R7、-GeR5R6R7，Y、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
  11. 如申請專利範圍第10項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其為選自如下化合物：
  12. 如申請專利範圍第11項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其為選自如下化合物：
  13. 如申請專利範圍第2項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R1與苯環相鄰的碳原子形成5-7員碳環、5-7員雜環，其中該5-7員碳環或5-7員雜環視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、 5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；Y、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
  14. 如申請專利範圍第13項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R1與苯環相鄰的碳原子形成5-7員碳環、5-7員雜環選自如下結構： 其中該5-7員碳環或5-7員雜環視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；Y、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
  15. 如申請專利範圍第14項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R1與苯環相鄰的碳原子形成5-7員碳環、5-7員雜環選自如下結構：
  16. 如申請專利範圍第1項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，Z選自硫，結構式如式(III)化合物， 其中，Y、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
  17. 如申請專利範圍第16項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R4選自鹵素、羥基、巰基、C1-8烷基、鹵素取代C1-8烷基、C3-8環烷基、C3-8環烷甲基、鹵素取代C1-8烷氧基、鹵素取代C1-8烷基硫基；Y、R1、R2、R3、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
  18. 如申請專利範圍第17項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、 其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R3選自氫、C1-8烷基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、C5-10芳基或5-10員雜芳基，視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、C1-8烷基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5或-C0-8-O-C(O)R5的取代基所取代；R4選自氟、甲基、三氟甲基、環丙基、環丙甲基；Y、R1、R2、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
  19. 如申請專利範圍第18項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R3選自氫、C1-4烷基、環丙基、環己基或苯基，視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5或-C0-8-O-C(O)R5的取代基所取代；R4選自甲基；Y、R1、R2、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
  20. 如申請專利範圍第19項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R1選自氫、C1-8烷基、鹵素取代C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基，其中該C1-8烷基、鹵素取代C1-8烷基、C2-8鏈烯基或C2-8鏈炔基進一步被一個或多個選自C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、 C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基或5-10員雜芳基硫基的取代基所取代；Y、R2、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
  21. 如申請專利範圍第20項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其為選自如下化合物：
  22. 如申請專利範圍第19項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R1選自C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基，其中該C3-8環烷基、3-8員雜環基、C5-10芳基或5-10員雜芳基視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、 3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；Y、R2、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
  23. 如申請專利範圍第22項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其為選自如下化合物：
  24. 如申請專利範圍第19項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R1選自-C0-8-S-R5、-SiR5R6R7、-GeR5R6R7；Y、R2、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
  25. 如申請專利範圍第24項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其為選自如下化合物：
  26. 如申請專利範圍第19項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R1與苯環相鄰的碳原子形成5-7員碳環、5-7員雜環，其中所述的5-7員碳環或5-7員雜環視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；Y、R2、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
  27. 如申請專利範圍第26項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，R1與苯環相鄰的碳原子形成5-7員碳環、5-7員雜環選自如下結構： 其中該5-7員碳環或5-7員雜環視需要進一步被一個或多個選自鹵素、羥基、巰基、氰基、硝基、疊氮基、C1-8烷基、C2-8鏈烯基、C2-8鏈炔基、C3-8環烷基、3-8員雜環基、3-8員雜環基氧基、3-8員雜環基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10員雜芳基、5-10員雜芳基氧基、5-10員雜芳基硫基、-C0-8-S(O)rR5、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R5、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R5、-C0-8-NR6R7、-C0-8-C(O)NR6R7、-N(R5)-C(O)R5或-N(R5)-C(O)OR5的取代基所取代；Y、R2、R5、R6、R7、m、r如式(I)化合物所定義。
  28. 如申請專利範圍第27項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其為選自如下化合物：
  29. 如申請專利範圍第16至28項中任一項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其中，其立體異構體為S構型，結構如下：
  30. 如申請專利範圍第29項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽，其為選自如下化合物：
  31. 一種如申請專利範圍第1項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽的製備方法，其中，包括如下步驟： 當Y選自乙醯基時，視需要的進一步包括如下反應： 視需要進一步包括管柱層析分離得到其立體異構體，或者藉由以下步驟得到其立體異構體： 當Y選自乙醯基時，視需要的進一步包括如下反應： 其中：Y、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、r如申請專利範圍第1項所定義。
  32. 一種醫藥組成物，其包括治療有效劑量的如申請專利範圍第1項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽及可藥用的載體。
  33. 一種使用如申請專利範圍第1項所述的尿嘧啶核苷酸類似物、其立體異構體或其藥學上可接受鹽或使用如申請專利範圍第32項所述的醫藥組成物在製備用於治療丙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、西尼祿病毒、黃熱病病毒、登革病毒、鼻病毒、脊髓灰質炎病毒、牛病毒性腹瀉病毒或日本腦炎病毒感染所引起的疾病的藥物的應用。
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