TW200946129A - Divalent hydrazide compound conjugates for inhibiting cystic fibrosis transmembrane conductance regulator - Google Patents

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Description

200946129 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 需要治療劑來治療與異常囊腫性纖維化跨膜傳導調節蛋 白（CFTR)有關之疾病及病症，諸如腸液分泌增加、分泌性 腹瀉及多囊性腎病。本文描述作為CFTR活性之有效抑制 劑且可用於治療此等疾病及病症之小分子共輛物。 政府關注之陳述 本發明係依據由美國國立衛生研究所（National Institutes of Health)授予之撥款許可DK72517、HL73854、EB00415、 EY13 574、DK35124及DK43 840下在政府支持下進行。政 府對本發明享有某些權利。 相關申請案的交叉參考 本申請案主張2008年4月4申請之美國臨時申請案第 61/042,651號之權益，該案係以其全文引用的方式併入本 文中。 【先前技術】 囊腫性纖維化跨膜傳導調節蛋白（CFTR)為於哺乳動物氣 管、腸、胰腺及睪丸之上皮細胞中表現的c AMP活化之氯 離子（Cl_)通道。CFTR為負責cAMP介導之Cl_分泌之氯離子 通道。諸如β-腎上腺素促效劑之激素，或諸如霍亂菌毒素 之毒素會引起cAMP增加、cAMP依賴性蛋白激酶活化，及 導致通道開放之CFTR Cl_通道磷酸化。細胞Ca2+增加亦可 活化不同頂端膜通道。由蛋白激酶C進行之磷酸化可打開 或關閉頂端膜中之Cl_通道。CFTR主要位於上皮細胞中， 139562.doc 200946129 其中其提供cr離子跨頂端膜以及調節跨上皮鹽及水輸送之 速率之關鍵點移動的途徑。 CFTR氣離子通道之功能與多種疾病相關，該等疾病包 括囊Μ性纖維化（CF)及一些形式之***、多囊性腎 病及分泌性腹瀉。囊腫性纖維化為由CFTR突變引起之遺 傳性致死疾病（例如參看Quint；on，79:S3-S22 (1999); Boucher，J. 23:146-58 (2004))。在罹患 CF之人類患者及CF小鼠模型中之觀察結果表明CFTR在腸 液及胰液輸送以及男性生育力中之功能重要性（Grubb等 人，79:S193-S214 (1999) ; Wong, Ρ·Υ.，从〇/， //wm. 4:107-110 (1997))。CFTR於腸中之腸上皮細 胞（enterocyte)中表現且在多囊性腎病中於囊腫上皮中表現 (例如參看 O’Sullivan等人，乂 幻如叮 Dzi 32:976-983 (1998) ; Sullivan等人，尸/2少5/〇/•心v. 78:1165-91 (1998); Strong 等人，J. /«ναί. 93:347-54 (1994) ; Mall 等 尺 ’ Gastroenterology 126:32-41 (2004) ; Hanaoka 等人， 义历· J. 270:C389-C399 (1996) ; Kunzelmann等人，
Physiol. Rev. 82:245-289 (2002) ; Davidow 等人，Kidney /«广 50:208-18 (1996) ; Li等人，幻办己少 /ni. 66:1926-38 (2004) ； Al-Awqati, J. Clin. Invest. 110:1599-1601 (2002)； Thiagarajah 等人，C“rr. Opin. Pharmacol. 3:594-99 (2003)) ° 高親和性CFTR抑制劑臨床應用於分泌性腹瀉之療法 中。細胞培養及動物模型表明在腸毒素介導之分泌性腹瀉 139562.doc 200946129 中腸氣離子之分泌主要經由CFTR來發生（例如參看Clarke 等人，257:1125-28 (1992) ; Gabriel等人， 266:107-109 (1994) ; Kunzelmann 及 Mall, Ρ/ζ>^ζ·ο/· _^ev. 82:245-89 (2002) ； Field, M. J. Clin. Invest. 111:931-43 (2003);及 Thiagarajah 等人，GasiroewieroZogy 126:511-519 (2003))。 兒童腹瀉病為全球性的健康問題：每年出現約四十億兒 童病例，導致至少兩百萬人死亡。旅行者腹瀉（Travelers' diarrhea)每年感染約六百萬人。通常將抗生素用於治療腹 瀉；然而，抗生素對於治療許多病原體為無效的，且此等 藥物之使用會引起其他病原體中抗生素抗性之發展。 亦通常將體液喪失之口服補充（Oral replacement of fluid loss)用於治療腹瀉，但此主要為緩解性的。針對減少腸液 分泌之療法（「抗分泌療法」）具有克服現存療法之侷限的 潛能。 已發現若干CFTR抑制劑，但有許多顯示弱效力且缺乏 CFTR特異性。口服降jk糖劑格列本脲（glibenclamide)在高 微莫耳濃度下藉由開放通道阻斷機制來抑制細胞内側之 CFTR Cl_傳導（Sheppard及 Robinson, «/· 503:333- 346 (1997) ; Zhou 等人，·/· Gen. 120:647-62 (2002))，其中其影響其他Cl·及陽離子通道（Edwards及 Weston，1993 ; Rabe等人，«/. P/iarmaco/. 110:1280-81 (1995) ; Schultz等人，79:S109-S144 (1999))。 包括二苯胺-2-甲酸鹽（DPC)、5-硝基-2(3-苯丙基-胺基）苯 139562.doc 200946129 曱酸鹽（NPPB)及氟芬那酸（flufenamic acid)之其他非選擇 性陰離子輸送抑制劑亦藉由關閉在細胞内位點處之孔來抑 帝J CFTR(Dawson等人，Rev.,Ί9:^ΑΊ-S15 (1999)； McCarty, 乂五xp. Biol·，203:1947-62 (2000))。 對CFTR抑制劑，尤其安全、不可吸收、高度有效、廉 價且化學上穩定之CFTR抑制劑存在需求。 【發明内容】 簡言之，本文提供適用於治療與囊腫性纖維化跨膜傳導 調節劑（CFTR)氣離子通道活性異常增大相關之疾病及病症 的二價醯肼化合物-聚乙二醇（PEG)共軛物。在某些實施例 中，使兩種丙二醯肼化合物與聚合物部分共輛。在其他實 施例中，使兩種甘胺酸醯肼化合物與聚合物部分共軛。本 文提供之實施例包括適用作囊腫性纖維化跨膜傳導調節劑 (CFTR)氯離子通道之抑制劑且具有以下結構I或II中之一者 之二價聚合物共軛化合物：
I或 139562.doc 200946129
或其醫藥學上可接受之鹽1藥或立體異構體，其中χ、 Ο
X， R J' R6、R(
Rl、R、R212·、R3 m
R7、R R!
Ru、R1 R8,、
Rs R1
R 10, Γ
R 12
R 12· 1 3 、R 、R13,、R14、R14.、Ri
R 15,
R及R16各係如本文中所定義 一在某_實施例中，聚合物為聚乙二醇（PEG)且使兩種丙 二酿耕化合物與觸部分（亦即，A為媽-〇偶_)共輛。 在，、他實鉍例中，使兩種甘胺酸醯肼化合物與PEG部分（亦 I3 A為CH^O-CH2·)共軛。本文提供之實施例包括適用 作囊腫性纖維化跨膜傳導調節劑（CFTR)氯離子通道之抑制 劑且具有以下結構I(a)或n(a)中之一者之二價pEG共軛化 合物：
139562.doc I⑻ 200946129
或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構體，其中X、 X,、j、j'、η、R1、R1’、R2、R2’、R3、R3’、R4、R4'、R5、 R5、R6、R6’、R7、R7'、R8、R8’、r9、r9’、R10、Rl〇|、 R11、R11’、RU、r12'、r13、f、RU、r14'、r!5、r15.、 R16及R16各係如本文中所定義。本文亦提供如在本文中較 詳細描述之式及子式 I(b)、I(c)、I(d)、I(e)、I(f)、I(g)、 1(h)、I(i)、i(j)、II(b)、II(C)、n(d)、11(句及11(幻及11(((：卜 (F))之子結構及二價醯肼PEG共軛化合物。 本文亦提供製備結構！及Π之二價聚合物共軛化合物以及 製備結構1(a)及II(a)(及其子結構）之二價pEG共軛化合物的 方法°亥等共輛化合物之醫藥製劑，及抑制囊腫性纖維化 5膜傳導調節劑（CFTR)氯離子通道以及治療與性 異常增大相關之疾病、病症及病狀的方法。 在另a細1例中，提供一種組合物，其中該組合物包含 醫藥學上可接受之職形劑及至少—種具有式！或式π之結構 的二價醯肼聚合物化合物。在另一實施例中，提供一種組 包含醫藥學上可接受之賦形劑及至少 -種具有如上所述且在本文中較詳細描述之式[⑷或式 139562.doc 200946129 Η⑷之結構或者式I(b)、I(cH⑴、_、π⑷、π⑷、 11(e)及刚、II((CHF))之子結構及結構的二價酿骄侧 共輛化合物。 在實⑯例巾’提供―種治療與由囊腫性纖維化跨膜傳 導5周卽劑（CFTR)進行之離；_、主思告^ μ • ⑷了之離子輸运異常增加相關之疾病或病 症的方法’該方法包含向個體投與如在上文及本文中所述 之組合物（其包含醫藥學上可接受之賦形劑及至少一種具 Φ 有式1或式11之結構的二價酿肼-聚合物共輕化合物）。在另、 -實施例巾’提供-種治療與由囊祕纖維化跨膜傳導調 節劑（CFTR)進行之離子輸送㈣增加相關之疾病或病症的 方法，該方法包含向個體投與如上文及本文中所述之組合 物(其包含醫藥學上可接受之賦形劑及至少一種具有式⑽ 或式11(a)之結構或者式I(b)、卟)〗⑴、π⑻、^⑷、
H⑷、H⑷及II(f)及II((C)_(F))之子結構，及其他如上所述 且在本文中詳細描述之特定子結構及結構的二價酿耕_pEG Φ 共1^化合物），其中藉*CFTR進行之離子輸送受抑制。在 -特定實施例中，該疾病或病症為腸液分泌之異常增加。 纟另-特定實施例中，該疾病或病症為分泌性腹瀉。在一 特定實施例中，分泌性腹瀉係由腸内病原體引起。在特定 - 實施例中’腸内病原體為霍亂弧菌難養 芽 m 後 n (c!〇stridium difficil、、大陽桿菌（Escherichia C〇/〇、志賀桿菌〇S/n·奸/⑷、沙門氏菌（心/w〇we//a)、輪狀 病毒（rotavirus)、梨形鞭毛蟲（Gz_ar£^ 、溶組織内 阿米巴（祝·〇咖；^咖㈣、空腸曲桿菌（c_加〇^c⑽ 139562.doc 200946129 及隱胞子蟲（〇冲…p〇rWMW)。在另一特定實施例 中，分泌性腹瀉係由腸毒素誘發。在特定實施例中，腸毒 素為隹菌毒素、大腸桿菌（£· c〇/〇毒素、沙門氏菌毒 素、曲桿菌毒素或志賀桿菌毒素。在特定實施例中，分泌 性腹瀉為潰瘍性結腸炎、大腸急躁症（IBS)、AIDS、化學 療法或腸内病原體感染之後遺症。在特定實施例中，個體 為人類或非人類動物。 在另一實施例中，本文提供一種抑制由囊腫性纖維化跨 膜傳導調節劑（CFTR)進行之離子輸送之方法，其包含使 ⑷包含CFTR之細胞與（b)至少一種具有si或式狀結構的 二價醯肼-聚合物共椀化合物接觸。在另一實施例中，本 文提供種抑制由囊腫性纖維化跨膜傳導調節劑（CFTR)進 行之離子輸送之方法，其包含使⑷包含以取細胞與⑻ 至少一種具有式I(a)或式11⑷之結構或者式10)、1((：)-(j) 11(b) II(c)、H⑷、π⑷及 π⑴及 H((c) (F))之子結 構、及如本文所述之特定結構的二價酿肼_pEG共輛化合物 在足以使CFTR與該化合物相互㈣之條件下接觸一段足 以使CFTR與該化合物相互作用之時間，藉此抑制藉由 CFTR進行之離子輪送。 在又一實施例中，接供—接、A、 杈供種療分泌性腹瀉之方法，其 包含向個體投與醫藥學上可接受之賦形劑及至少一種具有 式！或式Π之結構的二價酿骄·聚合物共耗化合物。在又一 實施例中，提供—德、Λ 、 杈供種冶療分泌性腹瀉之方法 體投與醫藥學上可接 又之賦形劑及至少一種具有式I(a)或 139562.doc 200946129 式Π⑷之結構或者式I(b)、％)_!⑴、„(b)、π⑷、π⑷、 n(e)及Π⑴及n((CHF))之子結構以及其他本文所述之特定 結構的二價醯肼-PEG共軛化合物。在一特定實施例中，個 體為人類或非人類動物。
中任一者用於 製備供治療與CFTR活性之異常增大相_之疾病或病症（包 括腸液分泌異常增加或分泌性腹瀉）的醫藥組合物之用
途該一彳貝酿肼-聚合物共概化合物包括至少一種具有式 I⑷或式II⑷之結構或者式I(b)、I(c) I⑴、n(b)、π⑷、 11(d)、II⑷及η⑴及II((CMF))之子結構以及其他本文所述 之特定結構的二價醯肼-PEG共軛化合物。 除非上下文另外明確規定，否則如在本文中及在隨附申 =專利範圍中所用，單數形式「一」及「該」包括複數個 才曰不物。因此，舉例而言，提及「一化合物」或「一共軛 物」刀別包括複數種此等化合物或共軛物。類似地，提及 、’-田胞」或「該細胞」包括提及熟習此項技術者已知之 或多個細胞及其等效物（例如，複數個細胞），等等。當 提及數子或數字範圍時，術語「約」意謂所提及之數字或 數字範圍為在實驗可變性内（或在統計學實驗誤差内）之近 似值’且因此該數字或數字範圍可在所述數字或數字範圍 之1%與15%之間變化。術語「包含」（及諸如「包含」或 具有」或「包括」之相關術語）並不意欲排除在其他特 疋實施例中（例如，本文所述之物質之任何組合物、組合 物、方法或製程或其類似物的實施例）可「由所述特徵組 139562.doc 200946129 成」或「大體上由所述特徵組成」。 【實施方式】 本文描述抑制CFTR活性之顯著改良的醯肼化合物共軛 物。將兩種醯肼化合物（例如兩種丙二醯肼化合物）與具有 兩個反應性官能基之聚合物（包括（但不限於）聚乙二醇 (PEG)))共價連接（亦即，以形成共價鍵之方式共軛、反應 或接合在一起）以提供二價醯拼-聚合物共輛化合物（例如， 二價醯肼PEG-共輊化合物）。本文所述之例示性二價丙二 醯肼-PEG共軛化合物與單價丙二醯肼-PEG共軛化合物相 比具有顯著改良之效能（改良約10-20倍）。二價丙二醯肼 PEG共軛化合物可極少經細胞吸收，且因此使潛在細胞毒 性及全身毒性最小化。 適用於改變腸液分泌之CFTR活性的特定抑制劑包括不 可吸收甘胺酸醯肼化合物及丙二醯肼化合物（例如參看 Muanprasat等人，J. Ρ/ζρίο/· 124:125-37 (2004);
Sonawane等人，J. 20:130-32 (2006);美國專利第 7,414,037號；美國專利申請公開案第2005/0239740號；例 如亦參看 Salinas 等人，FASEB J. 19:43 1-33 (2005)；
Thiagarajah等人，，18:875-77 (2004))。有效的甘 胺酸醯肼及丙二醯肼抑制劑具有約5 μΜ之IC5〇值。然而， 尤其藉由在感染分泌性腹瀉之個體中快速腸液運輸自腸中 洗除化合物，可逆轉具有微莫耳濃度IC5G之化合物與腸腔 中表現之CFTR的結合。 本文所述之二價醯肼-PEG共輛化合物（包括二價丙二醯 139562.doc •12- 200946129
肼-PEG共輛化合物）可因此用於治療與CFTR介導之跨上皮 體液分泌異常增加相關之疾病及病症。此等疾病及病症包 括分泌性腹瀉，其可由腸内病原生物體引起，該等腸内病 原生物體包括細菌、病毒及寄生物，諸如（但不限於）霍亂 弧菌、難養芽胞梭菌、大腸桿菌、志賀桿菌、沙門氏菌、 輪狀病毒、空腸曲桿菌、梨形鞭毛蟲、溶組織内阿米巴、 環孢子蟲及隱胞子蟲；或由諸如霍亂菌毒素 及志贺桿菌毒素之毒素引起^本文所述之共_物亦可適用 於治療分泌性腹瀉，其為包括（但不限於）以下之疾病、病 症或病狀的後遺症：AIDS、投與AIDS相關療法、化學療 法，及發炎性胃腸病症，諸如潰瘍性結腸炎'發炎性腸病 (IBD)及克羅恩氏病（Crohn，s disease)。 囊腫性纖維化跨膜傳導調節蛋白（CFTR)(其為cAMp活化 之氣離子（C1 )通道）之小分子抑制劑包括甘胺酸醯肼、草 醯胺醯肼及丙二醯肼化合物（例如參看美國專利第 7’414,037號’美國專利中請公開案第仙號；例 如亦參看Salinas等人，…猶j(2〇〇5广 Thiagarajahf Λ » FASEB J. 18:875-77 (2004)) 〇 it ^ ^ 物中之任一者可與聚乙二醇共軛(亦#，鍵聯、連接、接 ° ，、彳貝鍵結），聚乙二醇能夠與表現CFTR之細胞結合（亦 即藉由離子相互作用（庫命引力（c、疏水 相互作用、親水相互作用、親脂相互作用、氫鍵結或盆任 何組合而締合）。不希望受理論限制，部分因為此h極 v吸收之醯肼_PEG共輛化合物不會自腸腔洗除，所以 139562.doc -13- 200946129 該等共軛化合物與非共軛化合物相比可具有增大之效力。 丙二醯肼（MalH)類似物之單價聚乙二醇（PEG)共軛物當 添加至浸浴細胞外表面之溶液中時迅速且完全阻斷CFTR 氯離子電流（例如參看Sonawane等人，J. 20:130-132 (2006))。單價MalH-PEG共輛物當存在於小鼠之封閉腸袢 之内腔中時防止霍亂菌毒素誘導之腸液分泌。藉由單價 MalH-PEG共軛化合物進行之CFTR抑制的IC5〇值一般>5 μΜ，然而，在洗除之後將迅速逆轉抑制。因此，在患有 嚴重分泌性腹瀉之個體中，快速腸液運輸可藉由稀釋性洗 除化合物來顯著減小治療作用。出乎意料地，二價MalH-PEG共軛物與單價MalH-PEG共軛物相比具有顯著改良之 效力（10-20倍）。 二價醯肼聚合物共軛化合物 本文提供二價醯肼-聚合物共軛化合物，其為囊腫性纖 維化跨膜傳導調節劑（CFTR)氯離子通道之抑制劑。在一實 施例中，將聚合物之兩個反應性末端（在本文中亦稱為末 端）中之每一者與丙二醯肼或甘胺酸醯肼化合物部分接合 以提供二價醯肼結構：醯肼-聚合物-醯肼共輛化合物。一 般而言，如本文所述之聚合物係由重複單元組成，可將該 等重複單元描述為（A)„，其中A為重複單元且η為在0與 25 00之間的整數。可用於製造二價醯肼聚合物共軛化合物 之合適聚合物具有兩個親核末端基（例如，含有氧、氮或 硫之基團），可將該等親核末端基與連接基團（例如，在本 文中詳述之X及X')接合，該連接基團可與間隔基（例如， 139562.doc -14- 200946129 如在本文中詳述之j及j')接合。間隔基j係與一個醯肼化合 物邓为接合且j'係與第二醯肼化合物部分連接。例示性聚 合物包括（但不限於）諸如聚乙二醇（PEG)、聚丙二醇、聚 ik乙基甘油及其他聚氧炫基聚_之聚合物。另一合適的聚 合物為聚乙烯胺（一種PEG之胺類似物），其具有次單元 (-CH2NH-CH2-)。其他聚合物包括聚伸乙基亞胺（PEI)、樹 枝狀聚合物及碳水化合物（諸如葡聚糖），該等聚合物之反 應性基團可限於兩個，以使得兩個反應性基團中之每一者 可與兩種醯肼化合物中每一者接合從而提供二聚體醯肼_ 聚合物共輊物。 本文提供之一實施例為具有以下結構〗之二價丙二醯肼_ 聚合物共輛化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構體，其中： R1及R1’相同或不同且獨立地為視情況經取代之苯基、視 情況經取代之雜芳基、視情況經取代之喹啉基、視情況經 取代之葱基或視情況經取代之萘基； 139562.doc -15- 200946129 R、R 、R、R3、R4、R4’、r5、r5’、r6&r6’各相同或 不同且獨立地為氫、羥基、Cw烷基、Cw烷氧基、羧基、 鹵基、确基、氰基、-S03H、_s(=〇)2NH2、芳基及雜芳 基； R 、R13、R14及R14各相同或不同且獨立地為氫或Cw 烧基； X及X’各為相同或不同之連接部分，· J及J'各為相同或不同之間隔部分； A為聚合物之次單元；且 «為在0與2,500之間的整數。 在某些實施例中，《為在〇與1〇之間、在〇與1〇〇之間在 1與5之間、在mi0之間、在#1〇〇之間在❻别之 間、在1與looo之間、在10與25〇〇之間、在1〇與2〇〇〇之 間、在50與1000之間、在25〇與1〇〇〇之間或在45〇與1〇〇〇之 間的任何整數。在結構丨之較特定實施例中，μ為在5〇與 1000之間的任何整數。在另—特定實施例中1為在2⑼與 300之間的任何整數。在又一特定實施例中，”為在45〇與 550之間的任何整數。在又一特定實施例中，”為在9⑽與 1000之間的任何整數。在另一特定實施例中，„為0。 在某些實施例中’ Α為聚合物聚乙二醇(pEG)之次單元 (亦即-CH2-〇-CH2-)。在另-實施例中，八為選自聚伸乙基 亞胺㈣)、樹枝狀聚合物或碳水化合物(諸如葡聚糖)之聚 合物的次單元，其中該聚合物具有兩個末棒“〇(亦 即，末端（teminai end))，其中-個末端係與連接基乂接合 139562.doc •16· 200946129 且另一（或第二）末端係與連接基X，接合。在其他實施例 中，A為胺基酸且聚合物為肽或多肽。在某些特定實施例 中’當A為胺基酸時，n係在1與5、1與1〇、1與15、1與 20、1與40、1與50之間，在β1〇〇之間，或在1〇〇與5〇〇之 間。 在另一特定實施例中，入為_CH2_NH_CH2(聚乙烯胺之單 體）。在某些特定實施例中’ n為在W5、^1〇、W2〇、
1與30之間，在丨與丨⑽之間、在1〇〇與5〇〇之間或在5〇〇與 1000之間的整數。 在另一實施例中，Α為視情況經取代之烷二基、視情況 經取代之伸烯基（含有至少一個雙鍵之二價脂族烴）或視情 況經取代之伸炔基（含有至少一個參鍵之二價脂族烴卜在 某些特定實施例巾，當八為垸二基、伸烯基或伸块基時，” 為在2與5、2與1〇、2與2〇之間，或在2與3〇之間或在續 50之間的整數。 在其他實施例中’ A為視情況經取代之芳基或視情況經 取代之環烧基。在料實施例巾，A為視情況經取代之苯 基’且在其他特定實施例中，A為視情況經取代之環己 基。在某些特定實施例中，當A為芳基或環烧基時，”為在 1與3、1與5、1與10、w2〇或#3〇之間，或在味⑽之 間的整數。 在又一實施例中，n為0與人為不存在。 在某些實施例中 ’ Ri、R!'、r2、r2,、r3、r3,、r4 R4’、R5、R5·、RW、Rn、Ru，、r14、r14·、x、X、 139562.doc -17· 200946129 及j’各係如本文中所定義（參看下文關於二價醯肼-peg共輛 化合物）。 二價醢肼-PEG共軛化合物 在一實施例中，A為-C^-O-CH2-且聚合物為聚乙二醇 (PEG)。本文提供二價醯肼-PEG共軛化合物，其為囊腫性 纖維化跨膜傳導調節劑（CFTR)氣離子通道之抑制劑p本文 提供之一實施例為具有以下結構I(a)之二價丙二醯肼-pEG 共輛化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構體，其中： R與R相1¾或不同且獨立地為視情況經取代之苯基、視 f月況經取代之雜芳基、視情況經取代之喹啉基、視情況經 取代之蒽基或視情況經取代之萘基； R2、r2、R3 ' R3、R4、R4,、R5、R5’、R6及 R6 各相同或 不同且獨立地為氯、經基、Cu院基、Ci-8烧氧基、缓基、 函基石肖基氰基、-S〇3H、-S(=〇)2NH2、芳基及雜芳 基； 139562.doc 200946129 R13、R13’、R14及R14’各相同或不同且獨立地為氫或C】8 烷基； 1_8 X及X各為相同或不同之連接部分； J及J各為相同或不同之間隔部分；且 π為在0與2,500之間的整數。 在結構1(a)之某些實施例中，„為在〇與1〇之間、在〇與 • 100之間、在1與5之間、在1與ίο之間、在mi00之間、^ Φ 1與300之間、在1與550之間、在1與1000之間、在α25〇0 之間、在10與2500之間、在10與2000之間、在5〇與1〇〇〇之 間、在250與1〇〇〇之間或在45〇與1〇〇〇之間的任何整數。在 結構1(a)之更特定實施例中，„為在5〇與1〇〇〇之間的任何整 數。在另一特定實施例中，”為在2〇〇與3〇〇之間的任何整 數。在又一特定實施例中，„為在45〇與55〇之間的任何整 數。在又一特定實施例中，„為在9〇〇與1〇〇〇之間的任何整 數。在另一特定實施例中，„為〇。 # 在某些實施例中，Rl3、R13,、R14及R14,相同或不同且獨 立地為氫或甲基。在一更特定實施例中，R!3、R,3,、rM及 R14'各為氫。 在結構I及結構1(a)之更特定實施例中，…與尺丨，相同或不 同且獨立地為視情況經鹵基、經基、_SH、、Cl_8烧 基及C!-8烧氧基中之一或多者取代之丨·萘基或2_萘基；芳 氧基，單齒苯基；二齒苯基；單烷基苯基；2_蒽基；或6_ 喹啉基。在一特定實施例中，鹵基為氯。在結構j及結構 1(a)之其他特定實施例中，111與111’相同或不同且獨立地為 139562.doc •19- 200946129 未經取代之苯基’或經取代之苯基，纟中苯基係經經基、 Cw烧基、芳基、芳氧基、_s〇3H、Ci8烧氧基或_基中之 -或多者取代，其中函基為氟、a、溴或碘。在一特定實 施例中，函基為氣。在另-特定實施例中，Ci 8烧基為甲 基。在又一特定實施例中，…與….相同或不同且獨立地為 經甲基或氯取代之苯基。在其他特定實施例中，…與…，相 同或不同且獨立地為視情⑽_基、縣U基或Ci 8 烷氧基中之一或多者取代之喹啉基或蒽基。 在結構I及1(a)之其他特定實施例中，…與…，相同或不同 且獨立地為2-i苯基；4_齒苯基；_2_4_齒苯基、4甲基苯 基；單基）萘基、二（鹵基）萘基、三（画基）茶基、單（經 基）萘基、二（羥基）萘基、三（羥基）萘基、單（烷氧基）萘 基、二（烷氧基）萘基、三（烷氧基）萘基、單（芳氧基）萘基、 二（芳氧基）萘基、單（烷基）萘基、二（烷基）萘基、三（烷基） 萘基、單（羥基）-萘-磺酸、單（羥基）_萘_二磺酸、單（齒基）_ 單（羥基）萘基；二（_基）_單（羥基）萘基；單（函基）_二（羥 基）萘基；二（齒基）_二（羥基）萘基；單（烷基單（烷氧基）_ 萘基、單（烷基）-二（烷氧基）_萘基、單（鹵基）苯基、二（鹵 基）苯基、三（函基）苯基、單（羥基）苯基、二（羥基）苯基、 三（羥基）苯基、單（烷氧基）苯基、二（烷氧基）苯基、三（烷 氧基）苯基、單（芳氧基）苯基、二（芳氧基）苯基、單（烷基） 苯基、二（烧基）笨基、三（烷基）苯基、單（羥基）-苯基-磺 酸、單（羥基）·苯基-二磺酸、單（_基）_單（羥基）苯基、二 (鹵基）-單（羥基）苯基、單（函基）_二（羥基）苯基、二（鹵基）_ 139562.doc -20- 200946129 二（羥基）苯基、單（烷基）-單（烷氧基）_苯基或單（烷基）_二 (烧氧基）-本基’其中鹵基為鼠、氯、漠或块。在一特定實 施例中，鹵基為氯。 在結構I及結構1(a)之甚至更特定實施例中，Ri與r1 ·相同 或不同且獨立地為2-萘基、2-氯苯基、4-氣苯基、2-4-二 氣苯基、4-甲基苯基、2-蒽基或6_喹啉基。在結構〗及結構 ' J(a)之其他特定實施例中，R1與R1·各相同或不同且獨立地 血 為2-萘基或4-氣苯基。 〇 在上述結構I及結構1(a)之其他特定實施例中，R2、R2·、 R3、R3'、R4、R4'、R5、R5’、V及R6’各相同或不同且獨立 地為氫、羥基、鹵基、Cw烷基、Ci-8烷氧基或羧基。
在結構I及結構1(a)之其他某些實施例中，r2、R3、R4、 R5及R6各相同或不同且獨立地選自氫、經基、鹵基、C 1-8 烷基、Cw烷氧基或羧基，使得R2、R3、R4、R5&R6所連 接之苯基經一、二或三個齒基；一或兩個羧基；一、二或 ❹三個經基；一或兩個鹵基及一、二或三個經基；—或兩個 鹵基、一或兩個經基及一個^-^炫·氧基；一或兩個齒基、 一個羥基及一或兩個C,_8烷氧基；或一個鹵基、—或兩個 羥基及一或兩個C!-8烷氧基取代，其中鹵基為溴、氯、_ 或氟；在一更特定實施例中，鹵基為溴。在其他特定實施 例中，烷氧基為曱氧基。 在結構I及結構1(a)之其他某些實施例中，R2_、R3,、 R4'、R5'及R6'各相同或不同且獨立地選自氫、羥基、齒 基、Cw烷基、（：卜8烷氧基或羧基’使得R2'、R3·、R4·、r5, 139562.doc -21- 200946129 及R所連接之苯基經一、二或三個鹵基；一或兩個羧基； 、一或二個羥基；一或兩個鹵基及一、二或三個羥基； 一或兩個鹵基、一或兩個羥基及一個ci8烷氧基；一或兩 個鹵基、一個羥基及一或兩個ci 8烷氧基；或一個鹵基、 一或兩個羥基及一或兩個Cy烷氧基取代，其中鹵基為 溴、氯、碘或氟。在一更特定實施例中，鹵基為溴。在其 他特定實施例中，烷氧基為甲氧基。 在結構I及結構1(a)之某些特定實施例中，r2、r3、r4、 R5及R6相同或不同且獨立地選自氫、羥基、鹵基、Cw烷 基、Cw烷氧基或羧基，使得R2、R3、R4、R5及R6所連接 之苯基經以下基團取代：二（羥基）；單（鹵基）單（羥基）； 單（函基）-一（經基），單（_基）_三（經基）；二（鹵基）_單（經 基）；二（鹵基）-二（經基）；二（函基）_三（經基）；單（鹵基）_單 (經基）-單（炫氧基）；單（鹵基）_二（經基）_單（烧氧基”單⑽ 基）-單（經基）-一（院氧基）；單（鹵基）_二（經基）_二（烧氧 基）；二（鹵基單（經基）-單（烧氧基）；二（画基）_二（經基）_ 單（烷氧基）；或二（鹵基）-單（羥基）_二（烷氧基）。在一特定 實施例中，鹵基為溴。 在結構I及結構1(a)之某些特定實施例中，r2,、R3.、 R4、R5及R6相同或不同且獨立地選自氫、羥基、鹵基、 Cu烷基、Cw烷氧基或羧基，使得r2,、r3,、r4.、r5，及r6· 所連接之苯基經以下基團取代：二(經基)；單(叫單(經 基广單（齒基）-二（經基）；單（齒基）_三（經基）；二（齒基）·單 (經基）；二（齒基）-二（經基）；二（南基）三（經基）；單（南 139562.doc -22- 200946129 基）_單（羥基）-單（烷氧基）；單（鹵基）-二（羥基）_單（烷氧 基），單（齒基）_單（經基）_二（燒氧基）；單（鹵基）_二（經基）_ 一（烧氧基）；二（齒基）-單（羥基）-單（烷氧基）；二（豳基）-二 (羥基>單（烷氧基），·或二（齒基）-單（羥基）-二（烷氧基）。在 一特定實施例中，鹵基為溴。 在結構I及結構1(a)之其他某些特定實施例中，r2、R3、 • R4、尺5及尺6相同或不同且獨立地選自氫、羥基、鹵基、Cl_8 參 烧基、Cl·8烧氧基或叛基’使得R2、R3、R4、R5及R6所連 接之苯基為2-鹵苯基、3-i苯基或4-齒苯基；3,5-二鹵笨 基，2-羥苯基、3_羥苯基或4_羥苯基；2,4•二羥苯基， 3,5_ 一鹵基-2,4,6-三羥苯基、3,5-二_基-2,4-二羥苯基；3,5-; 鹵基-4·羥苯基；3-_基-4·羥苯基；3,5-二_基-2-羥基-4-甲氧基苯基；或4-羧基苯基，其中鹵基為溴、氯、氟或 填。在另一特定實施例中，鹵基為溴。 在結構I及結構1(a)之其他某些特定實施例中，Rr、 參 R 、R 、r5及R6相同或不同且獨立地選自氫、經基、鹵 基、C!-8烷基、Ci_8烷氧基或羧基，使得R2,、r3_、r4_、r5’ 及R0’所連接之苯基為2-鹵苯基、苯基或苯基； 3’5-二齒苯基；2-羥苯基、3-羥苯基或4-經苯基；2 4_二择 ‘ 苯基；3,5_二_基-2,4,6-三羥苯基、3,5-二_基_2,4_二羥笨 基，3,5-二_基-4-經苯基；基-4-經笨基；3,5_二鹵纂-2-羥基-4-曱氧基苯基；或4-羧基苯基，其中齒基為溴、 氣、氟或碘。在另一特定實施例中，鹵基為漠。 在結構I及結構1(a)之其他某些特定實施例中，汉3及尺5各 139562.doc -23- 200946129 為南基且R4及R6各為羥基。在另一特定實施例中，尺3及尺: 各為鹵基且R4為羥基。在又一特定實施例中，尺3及尺5各為 溴且R4及R6各為羥基。在又一特定實施例中，尺3及尺5各為 溪’ R4為經基且R6為1。在結構z及結構I(a)之某些特定實 施例中’ R3及R5·各為南基且r4^r6’各為經基。在另一特 定實施例中，R3,及R5,各為鹵基且r4,為羥基。在又一特定 實施例中，R3·及R、為漠且r4.及R，各為羥基。在又一特 定實施例中，RW各為漠，r4•為羥基且r6，為氫。在特 定實施例中，R2及R2'各為氫。 在結構I及結構1(a)之某些特定實施例中，R3、R3,、r5及 R5各為i基且R4、R4'、RjR6'各為經基。在其他某些特 定實施例中，R2及R2·各為氫。 在結構I及結構1(a)之其他特定實施例中，R3、R3,、R5及 R各為鹵基且R4及R4各為羥基。在特定實施例中，尺2及 R2各為氫。 在結構I及結構1(a)之更特定實施例中，r3、R3，、R5及 R5’各為溴且R4、R4·、R6及R6’各為羥基。在特定實施例 中，R2及R2’各為氫。 在結構I及結構1(a)之更特定實施例中，R3、R3,、R5及 R各為溴’R及R各為經基且R6及r6’各為氫。在特定實 施例中，R2及R2'各為氫。 在結構I及結構1(a)之其他更特定實施例中，r1 3、r1 3’、 R14及Ru_相同或不同且獨立地為氫或曱基。在此等實施例 中，R1與R]各相同或不同且獨立地為經至少一個氣或曱基 139562.doc • 24- 200946129 取代之苯基萘基；2_萘基；6-喹啉基或2·蒽基。在特 定6 實施例中 ’ R2、R\ R4、r5、r6、r2,、r3,、r4,、y，及 β各相同或不同且獨立地為氫、函基、甲氧基、經基或羧 基；在特定實施例中’ _基為漠。在某些特定實施例中， ^、R4、R5、R6、R3.、R4,、Rm^mR2 及R2'各為氫。 ❹ ❹ 連接部分X及X，各為可用於使間隔基J及間隔基J,分別與 聚乙二酵（亦即，（偶_〇偶_)；1)(對於具有結構I(a)之化合 物而言）或聚合物（A)„(對於具有結構J之化合物而言）共軛之 官能基。在具有如上所述之結構w⑷之化合物的某些實 施例中，連接基X與連接基X，相同或不同且獨立地為屮H_ 、-〇_或_S_。在一特定實施例+ ’ χ與χ,相同且各為他_。 如在式1(a)之結構中所闡述，間隔基j及間隔 獨立地為-料，其為在|乙二醇部分與兩種醢勝化合物 部分之每一者之間的間隔基（該等間隔基分別經由連接基X 及X，與PEG共軛）。類似地，如在式〗之結構中所闡述，間 隔基J及間隔基Γ各分別獨立地為一部分，其為在聚人物 (A)„與兩種醯肼化合物部分之每一者之間的間隔基（該等間 隔基分別經由連接基X及X，與該聚合物共軛）。具有如上所 述之結構I或1(a)之化合物的例示性間隔邹分（亦即，了 及-J'-)包括以下結構J1至J29。 139562.doc •25- 200946129
139562.doc 26- 200946129
139562.doc
27- 200946129 139562.doc
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Ο J16
〇 J17
J19
139562.doc -29- 200946129 139562.doc
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各間隔基j與j，可相同或不同且選自n_J29。在某些實施例 中，J及r各相同且各為J1(4,4，_二異硫氰基芪_2,2,_二磺酸 (DIDS))。 上文所示之例示性結構提供可用作間隔基了或間隔基】之 化學部分：如熟習化學技術者將顯而易見，當間隔基與醯 接。卩分接合時，諸如上文及本文中所示之η_ J29中任一者夕ΒΒ _ 曰 1 基的結構將不相同，亦即，上述社構 139562.doc -31 · 200946129 J1-J29表示間隔部分之前驅體結構或在某些情況下表示反 應物之化學部分。上述例示性間隔部分n_J29及在此項技 術中可用之其他間隔部分具有至少兩個反應性基團（亦即 B月b基）其中一個基團係與二聚體共輕物之兩種醯肼化 合物中之一者接合，且該間隔基之另一（或第二）反應性基 團係與連接基χ(或與連接基X，）接合。如本文中所用，間 隔基J及間隔基J，之「端」表示各反應性基團（亦即官能 基）。 各間隔基J及間隔基J，具有第一端及第二端，其中間隔基 J之第一端係經由第一 J間隔基官能基與如在式I或I(a)中描 繪之一種醯肼化合物部分之醯肼氮原子連接或接合。間隔 基J在間隔基J之第二端經由第二J間隔基官能基與連接基x 連接或接合。類似地，間隔基J’經由第一 J’間隔基官能基 與如在式I及1(a)中描緣之第二醯肼化合物部分之末端醯肼 氮連接或接合。間隔基J’在間隔基Γ之第二端經由第二Γ間 隔基官能基與連接基X·連接或接合。 在結構1(a)之一特定實施例中，R2、R2'、R3、r3·、r4、 R4’、R5、R5’、R6、R6’、R13、R13’、R14及 R14'、又及乂，及 „ 各係如上文及本文中關於結構1(a)所述’且J及j，各為結構 Jl(4,4’-二異硫氰基芪_2,2’-二磺酸（DIDS))之部分且該化合 物具有以下結構1(b): 139562.doc -32- 200946129
❿ 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構體。 因此，在某些實施例中，R1與R1’相同或不同且獨立地為 視情況經取代之笨基、視情況經取代之雜芳基、視情況經 取代之啥琳基、視情況經取代之蒽基或視情況經取代之蔡 基； τ R2、R2’、R3、R3’、r4、r4·、R5、RV、RyR6，各相同或 不同且獨立地為氫、羥基、CW烷基' CM烷氧基、羧基、 鹵基、硝基、氰基、_s〇3H、_s(=〇)2NH2、芳基及雜芳 ❹ 基； p 1 3 ^ 1> τ> 1 4 Ώ , Δ, 及R 各相同或不同且獨立地為氫或c18 烧基； X及X各為相同或不同之連接部分；且 «為在0與2,500之間的整數。 在結構1(b)之某些實施例中，w為在〇與1〇之間、在〇與 100之間在1與5之間、在1與10之間、在1與1〇〇之間、在 1與300之間、在1與55〇之閭、在^1〇〇〇之間在丨與乃⑻ I39562.doc -33· 200946129 之間、在10與2500之間、在10與2000之間、在50與1〇〇〇之 間、在250與1000之間或在450與1〇〇〇之間的任何整數。在 結構1(b)之更特定實施例中，„為在5〇與1〇〇〇之間的任何整 數。在另一特定實施例中’ „為在2〇〇與3〇〇之間的任何整 數。在又一特定實施例中，《為在450與550之間的任何整 數。在又一特定實施例中，《為在900與1〇〇〇之間的任何整 數。在另一特定實施例中，《為0。 在某些實施例中，R13、R〗3·、及R〗4.相同或不同且獨 立地為氫或甲基。在一更特定實施例中，r,3、Rl3.、及 R14'各為氫。 在結構1(b)之更特定實施例中，R1與Rr相同或不同且獨 立地為視情況經鹵基、羥基、_SH、_s〇3H、Ci 8烷基及Ci 8 烧氧基中之一或多者取代之丨_萘基或2_萘基；芳氧基；單 幽苯基，二齒苯基；單烷基苯基；2-蒽基；或6-喹啉基。 在一特定實施例中’鹵基為氣。在另一特定實施例中， Cl·8烧基為曱基。在其他特定實施例中，R1與R〗_相同或不 同且獨立地為視情況經鹵基、羥基、Ci 8烷基或Cl_8烷氧基 中之一或多者取代之喹啉基或蒽基。 在結構I(b)之更特定實施例中，R1與R1'相同或不同且獨 立地為未經取代之苯基，或經取代之苯基，其中苯基係經 經基、Cl-8烧基、芳基、芳氧基、-S03H、Cm烷氧基或鹵 基中之一或多者取代，其中鹵基為氟、氣、溴或碘。在一 特定實施例中，鹵基為氣。在另一特定實施例中，C】_8烷 基為甲基。在又—特定實施例中，R1與R1，相同或不同且獨 139562.doc 200946129 立地為經曱基或氯取代之苯基。 在結構1(b)之其他特定實施例中，R1與R1'相同或不同且 獨立地為2-鹵苯基；4-鹵苯基；-2-4-鹵苯基、4-甲基苯 基；單（鹵基）萘基、二（i基）萘基、三（鹵基）萘基、單（羥 基）萘基、二（羥基）萘基、三（羥基）萘基、單（烷氧基）萘 基、二（烷氧基）萘基、三（烷氧基）萘基、單（芳氧基）萘基、 二（芳氧基）萘基、單（烷基）萘基、二（烷基）萘基、三（烷基） 萘基、單（羥基）-萘-磺酸、單（羥基）-萘-二磺酸、單（i基）-單（羥基）萘基；二（_基）-單（羥基）萘基；單（i基）-二（羥 基）萘基；二（鹵基）-二（羥基）萘基；單（烷基）-單（烷氧基）-萘基、單（烷基）-二（烷氧基）-萘基、單（鹵基）苯基、二（鹵 基）苯基、三基）苯基、單（羥基）苯基、二（羥基）苯基、 三（羥基）苯基、單（烷氧基）苯基、二（烷氧基）苯基、三（烷 氧基）苯基、單（芳氧基）苯基、二（芳氧基）苯基、單（烷基） 苯基、二（烷基）苯基、三（烷基）苯基、單（羥基）-苯基-磺 p 酸、單（羥基）-苯基-二磺酸、單（鹵基）-單（羥基）苯基、二 (鹵基）-單（羥基）苯基、單（i基）-二（羥基）苯基、二基）-二（羥基）苯基、單（烷基）-單（烷氧基）-苯基或單（烷基）-二 (烷氧基）-苯基，其中鹵基為氟、氯、溴或碘。在一特定實 施例中，鹵基為氯。 在結構1(b)之甚至更特定實施例中，R1與R1’相同或不同 且獨立地為2-萘基、2-氯苯基、4-氯苯基、2-4-二氯苯 基、4-曱基苯基、2-慧基或6-喹啉基。在結構1(b)之其他特 定實施例中，R1與R1’各相同或不同且獨立地為2-萘基或4- 139562.doc -35- 200946129 氯苯基。 在如上所述之結構1(b)之其他特定實施例中，r2、r2_、 R3、R3’、R4、R4、R5、R5、R6及R6’各相同或不同且獨立 地為氫、羥基、鹵基、C!.s烷基、Cw烷氧基或羧基。 在結構1(b)之其他某些實施例中，R2、R3、r4、r5&r6 各相同或不同且獨立地選自氫、經基、鹵基、C〗-8烧基、 .
Cl_8院氧基或羧基’使得R2、R3、R4、R5及R6所連接之苯 基經一、二或三個鹵基；一或兩個羧基；一、二或三個經 基；一或兩個鹵基及一、二或三個羥基；一或兩個豳基、 © 或兩個經基及一個Ci.8烧氧基，一或兩個鹵基、一個經 基及一或兩個Ch烧氧基；或一個鹵基、一或兩個經基及 一或兩個C〗_8烧氧基取代，其中鹵基為溴、氣、硤或氟； 在一更特定實施例中，鹵基為溴。 在結構1(b)之其他某些實施例中，r2’、r3’、r4，、r5，及 R6各相同或不同且獨立地選自氯、羥基、鹵基、Ci8烷 基、Cu烷氧基或羧基’使得R2’、R3,、r4.、尺5，及r6，所速 ❽ 接之苯基經一、二或三個函基；一或兩個羧基；一、二戒 二個羥基；一或兩個鹵基及一、二或三個羥基；一或兩個 鹵基 或兩個經基及一個Cl_8烧氧基；一或兩個鹵基、 個ϋ基及一或兩個C!_8院氧基；或一個鹵基、一或兩個 沒基及一或兩個(：1_8烷氧基取代，其中鹵基為溴、氣、碘 或氟。在一更特定實施例中，鹵基為溴。 在結構1(b)之某些特定實施例中，R2、R3、R4、R5及R6 相同或不同且獨立地選自氫、羥基、鹵基、C18烷基、Ci_8 139562.doc -36- 200946129 烷氧基或羧基，使得R2、R3、R4、R5及r6所連接之苯基經 以下各基團取代：二（羥基）；單（幽基）_單（羥基）；單（豳 基）_ 一（經基），單（鹵基）_三（經基）；二（函基）_單（經基）；二 (齒基）-一（赵基）；二（鹵基）_三（經基單（函基）_單（經基）_ 單（烷氧基）；單（鹵基）_二（羥基）_單（烷氧基）；單（鹵基單 (經基）_二（院氧基）；單（南基）_二（經基）-二（烧氧基）；二（齒 基）-單（經基）-單（燒氧基）；二（齒基）_二（經基單（院氧 ❹ 基）；或二（齒基）-單（羥基）_二（烷氧基）。在一特定實施例 中，鹵基為溴。在其他特定實施例中，烷氧基為甲氧基。 在結構1(b)之某些特定實施例中，y、r3.、r4，、r5.及 R6'相同或不同且獨立地選自氫、羥基、齒基、Ci8烷基、 CV8烷氧基或羧基，使得r2,、r3’、r4,、r5，及r6.所連接之 苯基經以下各基團取代：二（羥基）；單（齒基單（羥基）； 早（鹵基）二（經基）；單（函基）_三（經基）；二（幽基）單（經 基）；二（函基）-二（經基）；二（齒基）_三（經基）；單⑽基）_單 ❹（經基）_單（烧氧基）；單（齒基）_二（經基）-單（院氧基）；單（_ 基）-單（經基）-二（院氧基）；單（齒基）_二（經基）_二（院氧 基）；二（鹵基）-單（經基）-單（烧氧基）；二（鹵基）_二（經基 單（烷氧基）’或二（鹵基）-單（羥基）_二（烷氧基）。在一特定 實施例中，_基為溴。在其他特定實施例中，烷氧基為甲 氧基。 ’ 在結構1(b)之其他某些特定實施例中，R2、R3、r4、y 及R6相同或不同且獨立地選自氫、羥基、鹵基、Cw烷 基、Cm烷氧基或羧基，使得R2、R3、R4、R5&R6所連接 139562.doc •37- 200946129 之本基為2-齒苯基、3 -鹵苯基或4 + 土飞笨基；3,5-二鹵苯 基，2-經苯基、3-經苯基或4-經笨其.q 暴，2,4-二羥笨基；3,5- 二鹵基-2,4,6-三經苯基、3,5-二_美ο 田卷-2,4-二羥苯基；3,5_二 鹵基-4-經苯基；3-齒基-4-經苯基，。 +丞，3,5-二函基_2_羥基_4_ 曱氧基笨基，或4 -幾基苯基，其中南| 國基為 碘。在另一特定實施例中，鹵基為填。 氣、氟或 在結構1(b)之其他某些特定實施例中，Rr、R3,、R4 R5’及R6’相同或不同 獨立地選自氫、羥基、鹵基、Gw烷 基、C丨·8烷氧基或羧基，R2,、r3,、r4,、r5.及r6.所連接之 笨基為2-鹵苯基、3-齒苯基或4-_苯基；3,5-二鹵苯基；2-羥苯基、3-羥苯基或4-經苯基；2,4-二羥苯基；3,5_二鹵 基-2,4’6-三羥苯基、3,5-二鹵基_2,4_二羥苯基；3,5-二鹵 基-4-羥苯基；3-齒基-4-羥苯基；3,5-二函基_2-羥基_4_甲 氧基苯基；或4-羧基苯基，其中鹵基為溴、氯、氟或碘。 在另一特定實施例中，鹵基為濞。 在結構1(b)之其他某些特定實施例中，R3及R5各為鹵基 且R4及R6各為羥基。在另一特定實施例中，R3及R5各為鹵 基且R為羥基。在又一特定實施例中，尺3及R5為溴且R4及 R6各為羥基。在又一特定實施例中，“及汉5為溴，R4為羥 基且R為氫。在結構Rb)之某些特定實施例中，R3,及r5,各 為鹵基且R4及R6各為羥基。在另一特定實施例中，r3,及 R各為齒基且R4'為羥基。在又一特定實施例中，“，及汉5. 各為溴且R及R6各為羥基。在又一特定實施例中，r3,及 R5各為溴，R4’為羥基，且R6,為氫。在特定實施例中，R2 139562.doc -38- 200946129 及R2·各為氫。 尺3、汉3’、尺5及尺5各為 在特定實施例中，R2 在結構1(b)之某些特定實施例中 鹵基且R4、R4’、…及r6，各為羥基 及R2'各為氫。 R5及R5’各為 R2及R2'各為 、R5及R5’各為 在特定實施例 隹裢構Ub)之其他特定只❿ 函基且RW各為經基。在特定實：例： 氫。 R3、R3·、R5 及 R5’各為 ’在特定實施例中，R2
在結構1(b)之更特定實施例中 /臭，且R、R 、R6及r6各為經基 及R2'各為氫。 在結構1(b)之更特定實施例中，R3、r 溴’ R4及R4各為羥基，且尺6及尺6·各為氯 中，R2及R2'各為氫。 在如上所述之結構I(b)之其他更特定實施例中，Rn、 以、心"，相同或不同且獨立地為氫或甲*。在此等 實施例中，R1與R1各相同或不同，獨立 或甲基取代之苯一基；2_蔡基一基或J 基。在特定實施例中，R2、R3、r4、r5、r6、r2,、r3,、 R4、R5及R6各相同或不同，獨立地為氫、鹵基、甲氧 基、經基或叛基，在特定實施例中，鹵基為溴。在某些特 定實施例中，當R3、R4、R5、R6、R3,、R4,、r5，及r6,各不 為氮時，R2及R2各為氮。 關於結構1(b)之實施例，連接部分X及X，各為可用於使間 隔基J及間隔基Γ分別與聚乙二醇（亦即（-CH2-0-CH2_)„)共 -39- 139562.doc 200946129 輛之官能基。在具有如 上所述之結構1(b)之化合物的某些 特定實施例中，連接基X與連接基X，相同或不同且獨立地 為-NH-、-〇-或-S-。在一特定實施例中，又與又，相同且各 為-NH-。 在結構I、1(a)及1(b)之某些特定實施例中’該等化合物 為鈉鹽。 在結構I、1(a)及1(b)之更特定實施例中’該等化合物係 由以下結構I(c)-I(j)來說明：
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1(h) 139562.doc • 41 · 200946129
在某些特定實施例中，結構⑴為鈉鹽。 在式 1(b)、I(c)、I(d)、I(e)、I(f)、I(g)、I(h)、j⑴及 I(j)
中任者之結構的某些實施例中，《為在〇與1 〇之間、在〇 與100之間、在1與5之間、在mi〇之間、在mi〇〇之間、 在1與300之間、在1與550之間、在1與1000之間、在m 2500之間、在1〇與25〇〇之間、在1〇與2〇〇〇之間在”與 1000之間、在250與1〇〇〇之間或在450與1000之間的任何整 數。在結構1(b)及結構^勾“⑴之更特定實施例中”為在 5〇與1000之間的任何整數。在另一特定實施例中，”為在 200與300之間的任何整數。在又一特定實施例中”為在 450與550之間的任何整數。在又一特定實施例中，”為在 900與1〇〇〇之間的任何整數。在另一特定實施例中”為〇。 139562.doc -42 - 200946129 在本文中亦將具有式j、I(a)、I(b)中任一者之結構及結 構I(c)-I(j)或其任何子結構之共軛化合物稱作二價丙二醯 肼-PEG共軛化合物（或二價丙二醯肼_pEG共軛物）。 二償甘胺酸醢肼聚合物共軛物 本文亦提供為二價甘胺酸醯肼聚合物共軛物之化合物。 此專化合物亦適用作囊腫性纖維化跨膜傳導調節劑（CFTR) 氯離子通道之抑制劑且具有以下結構H :
或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構體 其中： _ 尺7與尺7'相同或不同且獨立地為視情況經取代之苯基、視 情況經取代之雜芳基、視情況經取代之嗤淋基、視情況經 取代之蒽基或視情況經取代之萘基； …、^’、^、^、^。、^’、…、….、心及尺^目同 或不同且獨立地為氫、羥基、Cw烷基、Cl·8说氡基、緩 基、鹵基、硝基、氰基、_S〇3H、-S(=〇)2NH2、芳基及雜 芳基； ^ R15、R15’、R16及R16·相同或不同且獨立地為氫、側氧基 或Ci.g烧基， 139562.doc •43- 200946129 x及x'各為相同或不同之連接部分； J及Γ各為相同或不同之間隔部分； A為聚合物次單元；且 «為在0與2,500之間的整數。 在某些實施例中，《為在0與10之間、在〇與1〇〇之間、在 1與5之間、在1與1〇之間、在mi〇〇之間在#3〇〇之 間、在1與550之間、在m1〇〇〇之間、在^25〇〇之間、在 10與2500之間、在1〇與2000之間、在5〇與1〇〇〇之間在 250與1000之間或在450與1〇〇〇之間的任何整數。在結構工〇 之更特定實施例中，《為在50與1〇〇〇之間的任何整數。在 另一特定實施例中，《為在2〇〇與3〇〇之間的任何整數。在 又一特定實施例中，《為在45〇與55〇之間的任何整數。在 又一特定實施例中，《為在9〇〇與1〇〇〇之間的任何整數。在 另一特定實施例中，„為〇。 在某些實施例中，Α為聚合物聚乙二醇(pEG)之次單元 (亦即，-ch2-〇-CH2_)。在另一實施例中，a為選自聚乙烯 胺（PE〗）、碳水化合物（諸如葡聚糖）之聚合物的次單元，其 © 中該聚合物具有兩個末端（亦即，末端），其中—個係與連 接基X接合且另-(或第二）個係與連接基X，接合。在其他 實施例中’ A為胺基酸且該聚合物為肽或多肽。在某些特 疋實鉍例中，虽A為胺基酸時，《係在1與5、1與1 〇、丄與 15、1與20、1與40、1與50之間，在1與100之間，或在10() 與500之間。 在另一特疋實施例中，人為_CH2_NH_CH2·。在某些特定 139562.doc -44- 200946129 實施例中’福在1與5、^1〇、W2〇、^3〇之間，在i 與100之間、在100與500之間或在5〇〇與1〇〇〇之間的整數。 在另一實施例中，A為視情況經取代之烷二基、視情況 經取代之伸烯基（含有至少一個雙鍵之二價脂族烴）或視情 況經取代之伸炔基（含有至少一個參鍵之二價脂族烴）。在 ’ 某些特定實施例中，當A為烷二基、伸豨基或伸炔基時，„ 為在2與5、2與1〇、2與20之間，或在2與30之間，或在2與 50之間的整數。 e 一 在其他實施例中，A為視情況經取代之芳基或視情況經 取代之環烷基。在特定實施例中’ A為視情況經取代之笨 基，且在其他特定實施例中，A為視情況經取代之環己 基。在某些特定實施例中，當A為芳基或環烷基時，”為在 1與3、1與5、mi0、m2〇siu與3〇之間，或在mi〇〇之 間的整數。 在某些實施例中，R7、R7,、、r8·、r9、r9.、r1〇、 ❿ R1°’、Rn、R11，、R12及 R12,、R15、Rl5.、Rl6、Rl6,、χ、 X’、J及J'各係如本文中所定義（參看下文關於二價甘胺酸 醯肼-PEG共軛化合物）。 二價甘胺酸醢肼PEG共輛物 在又一實施例中，”為0且A為不存在。在一實施例中， A為-CI^-O-CH2-且聚合物為聚乙二醇（pEG)。本文提供為 二價甘胺酸醯肼PEG共軛物之化合物。此等化合物亦適用 作囊腫性纖維化跨膜傳導調節劑（CFTR)氣離子通道之抑制 劑且具有以下結構II(a): 139562.doc •45· 200946129
ma) 或其醫藥子上可接党之鹽、前藥或立體異構體，其中： R與R各相同或不同且獨立地為視情況經取代之苯基、 視情況經取代之雜芳基、視情I經取代之㈣基、視情況 經取代之蒽基或視情況經取代之萘美· R8、R8、R9、R9’、Ri。、Rl。，、Rll、r11.、r12 及 r12，各相 同或不同且獨立地為氫、經基、基、q•戌氧基、叛 基、i基、確基' 氰基、_s〇3H、_s(=〇)2NH2、芳基及雜 芳基； R 、R 、R及尺16各相同或不同且獨立地為氫、側氧 基或C 1 -8烧基； X及X·各為相同或不同之連接部分； J及J'各為相同或不同之間隔部分〆且 «為在0與2,500之間的整數。 在結構11(a)之化合物的某些實施例中，”為在〇與丨〇之 間、在〇與100之間、在1與5之間、在m 1〇之間、在❻ 100之間、在1與300之間、在1與55〇之間、在1與1〇〇〇之 間、在1與2500之間、在1〇與25〇〇之間、在1〇與2〇〇〇之 間、在50與1〇〇〇之間、在25〇與1000之間或在45〇與1〇〇〇之 139562.doc -46 * 200946129 間的任何整數。在結構11及結構H(a)之更特定實施例中，《 為在5〇與_之間的任何整數。在另-特定實施例中，„ 為在200與300之間的任何整數。在又—特定實施例中” 為在450與550之間的任何整數。在又—特定實施例中，" 為在_與胸之間的任何整數。在另_特定實施例中，” 為0 〇 在結構II及結構H⑷之一特定實施例中，R^R7,相同或 φ $同且獨立地為未經取代之苯基，或經取代之苯基，其中 苯基係經幾基、Cl-8烧基、芳基、芳氧基、-so3h、Cl-8烧 氧基或_基中之-或多者取代，其中齒基為氣、氣、漠或 碘。在一特定實施例中，鹵基為氣。 在結構11及結構U(a)之另一特定實施例中，R7與R7,相同 或不同且獨立地為視情況經鹵基、羥基、_SH、_s〇3H、 Ci·8烷基及c〗_8烷氧基中之一或多者取代之丨萘基或2萘 基，芳氧基，單_苯基；二鹵苯基；單烷基苯基；2_蒽 ® 基；或6_喹啉基。在一特定實施例中’ Cw烷基為甲基。 在其他特定實施例中，_基為氯。 在結構II及結構11(a)之另一特定實施例中，…與尺7,相同 或不同且獨立地相同或不同，且獨立地為2_ _苯基；4_鹵 苯基；-2-4-鹵苯基、4_甲基苯基；單（_基）萘基、二（鹵 基）萘基、三（齒基）萘基、單（經基）萘基、二（經基）萘基、 三（羥基）萘基、單（烷氧基）萘基、二（烷氧基）萘基、三（烷 氧基）萘基、單（芳氧基）萘基、二（芳氧基）萘基、單（烷基） 萘基、二（烷基）萘基、三（烷基）萘基、單（羥基）_萘_磺酸、 139562.doc •47- 200946129 單（羥基）-萘-二磺酸、單（i基）_單（羥基）萘基；二基）_ 單（經基）萘基；單（齒基）-二（經基）萘基；二（_基）_二（經 基）萘基；單（烷基）_單（烷氧基）_萘基、單（烷基）_二（烷氧 基）-萘基、單（齒基）苯基、二（_基）苯基、三（_基）苯基、 單（羥基）笨基、二（羥基）苯基、三（羥基）苯基、單（烷氧基） 苯基、二（烷氧基）苯基、三（烷氧基）苯基、單（芳氧基）苯 基、二（芳氧基）苯基、單（烷基）苯基、二（烷基）苯基、三 (烷基）苯基、單（羥基）_苯基-磺酸、單（羥基）_苯基二磺 酸、單（_基）-單（羥基）苯基、二（齒基）_單（羥基）苯基、單 (鹵基）-二（羥基）苯基、二（函基）_二（羥基）苯基、單（烷基）_ 單（院氧基）-苯基或單（烷基）-二（烷氧基）_苯基，其中鹵基 為氟、氯、溴或峨。在一特定實施例中，鹵基為氣。 在結構II及結構11(a)之又一實施例中’尺7與！^，相同或不 同且獨立地為視情況經鹵基、羥基、Ci 8烷基或Ci 8烷氧基 中之一或多者取代之啥嚇基或葱基。在一特定實施例中， Ci_8烷基為曱基。在其他特定實施例中，鹵基為氯。在結 構II及結構11(a)之另一特定實施例中，R7與R7’相同或不同 且獨立地為經取代苯基，其中苯基係經曱基或氯取代。 在結構II及結構11(a)之又一實施例中，R7與R7’相同或不 同且獨立地為視情況經鹵基、羥基、_SH、-S03H、Cu烧 基、芳基、芳氧基或Ci-8烧氧基中之一或多者取代之2-萘 基或1-萘基。 在結構II及結構11(a)之某些實施例中，R7與R7'相同或不 同且獨立地為單（鹵基）萘基；二（鹵基）萘基；三（鹵基）萘 139562.doc -48- 200946129 基’單（輕基）萘基；二（經基）萘基；三（經基）蔡基；單（烧 氧基）萘基；二（烷氧基）萘基；三（烷氧基）萘基；單（芳氧 基）萘基；二（芳氧基）萘基；單（烷基）萘基；二（烷基）萘 基，三（烧基）萘基；單（經基）_萘_項酸；單（經基）_蔡_二磺 酸；單（i基）-單（經基）萘基；二（_基）_單（經基）萘基；單 (鹵基）-二（經基）萘基；二（齒基）_二（經基）萘基；單（烧基卜 • 單（烷氧基）_萘基；或單（烷基）-二（烷氧基）-萘基，其中鹵 ❹ 基為氟、氣、溴或碘。在一特定實施例中，鹵基為氯。 在結構II及結構11(a)之其他特定實施例中，^與尺7，相同 或不同且獨立地為2-萘基、2-氯苯基、4_氯苯基、2,4_氣 苯基、4-曱基苯基、2-蒽基或6-喹琳基。 在結構II及結構11(a)之其他特定實施例中，尺7與尺7,相同 或不同且獨立地為視情況經鹵基、羥基、Gw烷基或Ci 8烷 氧基中之一或多者取代之喹啉基或蒽基。 在上述結構II及結構n(a)之其他特定實施例中，R8、 9 R8’、R9、R9·、Rl°、Rl°'、Rl1、R11’、R12及R丨2’相同或不同 且獨立地為氫、羥基、鹵基、羧基、Ci_8烷基或Cw烷氧 基0 在結構II及結構11(a)之另一特定實施例中，R8、R9、 R 、R10、R〗1及R12各相同或不同且獨立地選自氫、羚 基、鹵基、羧基、C^·8烷基或Cm烷氧基，使得R8、R9、 R 、R及R〗2所連接之苯基經一、二或三個函基；一或兩 個羧基，一、一或二個經基；一或兩個齒基及一、二或三 個羥基；一或兩個鹵基、一或兩個羥基及一個Cw烷氧 139562.doc •49· 200946129 基；一或兩個鹵基、—個羥基及一或兩個Ci8烷氧基；或 一個鹵基、一或兩個羥基及—或兩個ci 8烷氧基取代。 在結構II及結構11(勾之另一特定實施例中，R8,、R9.、 R 、r11及尺12·各相同或不同且獨立地選自氫、羥基、鹵 基、缓基、Cw烷基或Cl 8烷氧基，使得R8.、r9,、Rl0·、 R及R所連接之苯基經一、二或三個齒基；一或兩個綾 基，、一或二個羥基；一或兩個齒基及一、二或三個羥 基，一或兩個鹵基、一或兩個羥基及一個ci 8烷氧基；— 或兩個鹵基、一個羥基及一或兩個Ci 8烷氧基；或一個_ 基、一或兩個羥基及一或兩個烷氧基取代。 在結構II及結構11(a)之其他特定實施例中，R8、R9、 R 、R11及R12各相同或不同且獨立地選自氫、羥基、鹵 基、羧基、Ci-8烷基或烷氧基，使得r8、r9、r1()、Rll 及所連接之苯基經以下各基團取代：二（羥基）；單（_ 基）-單（經基單（鹵基）_二（經基）；單（齒基）_三（經基）；二 (齒基）-單（經基广二（函基）_二（經基）；二（函基）三（經 基）；單（齒基）-單（經基）·單（炫氧基）；單（_基）_二（輕基 早（烷氧基）；單（鹵基）_單（羥基）·二（烷氧基）；單（鹵基二 (經基）-二（烧氧基）；二（鹵基）_單（經基）_單（燒氧基二（齒 基）-二（經基）_單（烧氧基）；或二（齒基 >單（經基）-二成氧 基）。在特定實施例中，鹵基為漢。在其他特定實施例 中，烷氧基為甲氧基。 在結構II及結構n(a)之其他特定實施例中，R8，、R9,、 各相同或不同且獨立地選自氯、經基、函 139562.doc -50- 200946129 基、羧基、Cw烷基或Cu烧氧基，使得R8·、R9·、Rl〇, Rir&R12'所連接之苯基經以下各基團取代：二（羥基）；單 (鹵基）-單（羥基）；單（鹵基）-二（羥基）；單（_基）三（羥 基）；二（鹵基）-單（經基）；二（鹵基）_二（經基）；二（南基 (經基）；單（鹵基）-單（羥基）-單（烧氧基）；單（_基二（辦 基）-單（烷氧基）；單（鹵基）-單（羥基）_二（烷氧基）；單（鹵 基）-一（經基）-一（燒氧基）；二（鹵基）_單（經基）_單（貌氧 眷 基）；二（鹵基）·二（經基）-單（炫氧基）；或二（鹵基）_單（經 基）-二（烧氧基）。在特定實施例中，齒基為溴。在其他特 定實施例中，烷氧基為甲氧基。 在結構II及結構11(a)之某些特定實施例中，r8、r9、 R 、RU及R12各相同或不同且獨立地選自氫、經基、自 基、羧基、CN8烷基或CN8烷氧基，使得R8、R9、rig、Rll 及R所連接之苯基為2-鹵苯基、3-¾苯基或4-鹵苯基； 3,5-一 ΐ苯基；2-經苯基、3-經苯基或4-經苯基；2,4-二叛 φ 苯基；3,5-二鹵基-2,4,6-三羥苯基；3,5-二函基-2,4-二經笨 基，3,5- 一 ΐ基-4-經笨基；3 - 1¾基-4-經苯基；3,5-二齒基_ 2-經基-4-甲乳基笨基；或4-叛基苯基。在一更特定實施例 中，鹵基為溴。 在結構II及結構11(a)之其他某些特定實施例中，r8’、 Rw、Rio’、Rll'及各相同或不同且獨立地選自氫、羥 基、鹵基、羧基、（：卜8烷基或C卜8烷氧基，使得R8'、R9·、 R1Q’、R11’及R12'所連接之苯基為2-鹵苯基、3-_苯基或4-鹵 苯基；3,5-二齒苯基；2-羥苯基、3-羥苯基或4-羥苯基； 139562.doc -51- 200946129 2,4-二經苯基；3,5m經苯基、3,5-二齒基· 2’4-二經苯基；3,5-二齒基I經苯基4函基-4-經笨基； 仏二*基-2-經基-4_甲氧基笨基；或4基苯基，其中齒 基為氟m碘。在—更特定實施例中，ώ基為演。 在結構II及結構Π⑷之—更特定實施例中，R^R11 鹵基且R10及R12各為經基。為s ''' 馮羥基在另一特定實施例中，R9及Rn 各為齒基且R1。為經基。在又—特定實施例中，r^rU各 為漠且R1。及R12各為㈣。在又—特定實施例中，尺9及汉" 各為溴，Rl°為羥基’且Rl2為氫。在其他實施例中，犷及 R"各為齒基且R-W各為經基。在其他特定實施例 中，V及R"各為函基且R1。.為經基。在另一特定實施例 中’ f及W各為漠’且f及Rl2.各為經基。在又—特定 實施例中，R9·及1^'各為漠，經基，且r12•為氣。在 其他特定實施例中，R8及R8'各為氫。 在結構II及結構11(a)之某些特定實施例中，R9、Μ,、 及R11各為函基且R10、Ri〇_、Rn&Ru.各為羥基。在其他 特定實施例中，R8及R8'各為氫。 在結構II及結構11(a)之其他特定實施例中，r9、r9，、w! 及R11各為函基且R1Q及R1G’各為羥基。在其他特定實施例 中，R8及R8’各為氫。 在結構II及結構11(a)之更特定實施例中，r9、R9,、Rll及 R11'各為溴，且R1G、R1Q’、Ri2&Ri2,各為羥基。在其他特 定實施例中，R8及R8'各為氫。 在結構II及結構11(a)之更特定實施例中，R9、R9’、Rll及 139562.doc •52- 200946129 R11'各為溴，r1q&r1q|各為羥基，且Ru&Rl2,各為氫。在 其他特定實施例中，R8及R8·各為氫。 在結構II及結構11(a)之其他特定實施例中，r1S、r1s,、 R16及R16'各相同或不同且獨立地為氫或甲基。在另一特定 實施例中Rl6.各為氫。在又一特定實施 例中，R16及R16’各相同或不同且獨立地為氫或側氧基。 在上文及本文中所述之結構„及„⑷之其他更特定實施 基。在特定實施例中，R* 例中，Rl5、Rl5、Rl6及Rl6，相同或不同且獨立地為氯或甲 基。在又一特定實施例巾，R】6及Rl6.各為側氧基。在此等 實施例中，R7與R7,各相同或不同且獨立地為經至少一個氯 或甲基取代之苯基；i•萘基；2_萘基；6_0基或2_葱
R 12 R9、R10、R1 R、R、R及R12各相同或不同且獨立地為氯、齒基、 甲氧基、㉖基或叛基；在特定實施例中，ώ基為溴。在某
R9、R
R
些特定實施例中，當y、Ri〇、Ru、R ❹ 及汉12各均不為氫時，R8及R8·各為氫。 連接部分X及X'各為可用於使間隔基了及間隔基J，分別與 聚乙二醇（亦即’（-CH2-〇-CH2-)„)(對於具有結構II(a)之化 合物而έ)或聚合物（A)”（對於具有結構11之化合物而言）共 輊之官能基。在具有如上所述之結構Ilsilll⑷之化合物的 某二實％例中，連接基又與連接基X，相同或不同且獨立地 為-NH-、-〇_或_S_。在—更特定實施例中，連接基X及連 接基X’各為-NH-。 如在式n(a)之結構中所闡述，間隔基】及間隔基了，各分別 139562.doc •53· 200946129 蜀地為邛刀其為在聚乙二醇部分與兩種醯肼化合物 部分之每一者之間的間隔基（該等間隔基分別經由埤接基X 及X，與PEG共輛）。類似地，如在式π之結構中所闡述，間 隔基J及間隔基J，各分別獨立地為—部分，其為在聚合物 ⑷”與兩種醯肼化合物部分之每―者之間的間隔基⑽等間 隔基分別經由連接基Χ&χ,與該聚合物共輛）。例示性間隔 Ρ刀〇括如在上表中描緣之結構η至J29。各間隔基J與間 隔基J’為相同或不同的且可選自；1_129(參看上文）。在結構 ij或π⑷之化合物的特定實施财，；及了，各為（4,4，_二異硫 氰基芪-2,2·-二績酸（DIDS))。 上文所示之例示性結構提供可用作間隔基】或間隔基^之 化學部分。如熟習化學技術者將顯而易見，當將諸如上文 及本文中所示之叫29中任-者之間隔基與醯肼部分及連 接部分接合時，該間隔基之結構將不相同；亦即，上述結 構J1-J29表示間隔部分之前驅體結構或在某些情況下表示 反應物之化學部分。上述例示性間隔部分JW29及此項技 術中可用之其他間隔部分具有至少兩個反應性基團（亦即 官能基），其中一個係與二聚體共軛物之兩種醯肼化合物 中之-者接合’且間隔基之另一（或第二）反應性基團係與 連接基X(或與連接基X，）接合。如本文中所用，間隔基了及 間隔基Γ之「端」表示各反應性基團（亦即官能基卜 *各間隔基J及間隔基J，具有第一端A第二端。㈣基J之 第一端係經由第一 J間隔基官能基與R7氮連接或接合，且 間隔基J，之第一端係經由第_ J，間隔基官能基與R7.氮連 139562.doc -54- 200946129 接。間隔基j係在間隔基j之第二端經由第二j間隔基官能基 與連接基X連接或接合，且間隔基r係在間隔基γ之第二端 經由第二J'間隔基官能基與連接基X，連接。 在結構11(a)之某些特定實施例中，R7·、R7、R8、R8'、 R9、R9’、R10、Ri〇’、rH、Rn'、Ri2、Rir、r15、r15,、 ❹ R16、R16'、《、X及X’各係如上文關於結構II(a)所述，且j 且J’各為Jl(4,4，-二異硫氰基芪-2,2，-二磺酸（DIDS))且該化 合物具有以下結構11(b):
或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構體，其中： R7與R7各相同或不同且獨立地為視情況經取代之苯基、 視情況經取代之雜芳基、視情況絲代之㈣基、視情況 經取代之蒽基或視情況經取代之萘基； R】 R1 R"'、R12 及 R12'各相 同或不同且獨立地為氫、麥美 美内其m 基丨·8燒氧基、羧 暴、鹵基、石为基、梟 氰基、媽H、,=〇)2·2、芳基及雜 方基； I39562.doc •55- 200946129 R13、R】5、rJ6 16 各相同或不同且獨立地為氫、側氧 基或Ch烧基； X及X’各為相同或不同之連接部分；且 «為在0與2,5 00之間的整數。 在、·、。構11(b)之化合物的某些實施例巾，”為在〇與⑺之 間、在0與1〇0之間、在1與5之間、在@10之間、在工與 100之間、在1與300之間、在1與550之間、在…麵之 間、在1與2500之間、在1〇與25〇〇之間在1〇與2〇〇〇之 間、在50與1_之間、在25(^嶋之間或在彻與^刪之 間的任何整數。在結構_之更特定實施例中，福㈣ 與1000之間的任何整數。在另—特定實施例中福在· 與〇之間的任何整數。在又一特定實施例中，”為在 與550之間的任何整數。在又_特定實施例中，”為在9〇〇 與1000之間的任何整數4另-特定實施例中，《為〇。 在結構II(b)之一特定實施例中，R7與R7,相同或不同且獨 立地為未經取代之苯基，或經取代之苯基，其中苯基係經 羥基、Cm烷基、芳基、芳氧基、_§〇3；9及(：：1_8烷氧基或画 基中之一或多者取代，其中鹵基為氟 '氣、溴或碘。在一 特定實施例中，_基為氯。 在結構11(b)之另一特定實施例中，R7與Rr相同或不同且 獨立地為視情況經鹵基、羥基、-SH、-S〇3H、Cm烷基及 Cl·8燒氧基中之一或多者取代之1-萘基或2-萘基；芳氧 基，單i笨基；二鹵苯基；單烷基苯基；2_蒽基；或6喹 琳基。在一特定實施例中’ C1-8烷基為甲基。在其他特定 139562.doc 200946129 實施例中。i基為氯。 在結構11(b)之另一特定實施例中，R7與R7'相同或不同且 獨立地相同或不同，且獨立地為2- i苯基；4- i苯基；-2-4-鹵苯基、4-甲基苯基；單（_基）萘基、二（鹵基）萘基、三 (鹵基）秦基、早（輕基）蔡基、二（經基）蔡基、三（經基）蔡 基、單（烷氧基）萘基、二（烷氧基）萘基、三（烷氧基）萘基、 單（芳氧基）萘基、二（芳氧基）萘基、單（烷基）萘基、二（烷 基）萘基、三（烷基）萘基、單（羥基）-萘-磺酸、單（羥基）-萘-二磺酸、單（鹵基）-單（羥基）萘基；二（i基）-單（羥基）萘 基；單（鹵基）-二（羥基）萘基；二（i基）-二（羥基）萘基；單 (烷基）-單（烷氧基）-萘基、單（烷基）-二（烷氧基）-萘基、單 (鹵基）苯基、二（鹵基）苯基、三（ii基）苯基、單（羥基）苯 基、二（羥基）苯基、三（羥基）苯基、單（烷氧基）苯基、二 (烷氧基）苯基、三（烷氧基）苯基、單（芳氧基）苯基、二（芳 氧基）苯基、單（烷基）苯基、二（烷基）苯基、三（烷基）苯 基、單（羥基）-苯基-磺酸、單（羥基）-苯基-二磺酸、單（鹵 基）-單（羥基）苯基、二（鹵基）-單（羥基）苯基、單（鹵基）-二 (羥基）苯基、二（鹵基）-二（羥基）苯基、單（烷基）-單（烷氧 基）-苯基或單（烷基）-二（烷氧基）-苯基，其中鹵基為氟、 氯、溴或碘。在一特定實施例中，鹵基為氣。 在結構11(b)之另一特定實施例中，R7與R7'相同或不同且 獨立地為經取代苯基，其中苯基係經曱基或氣取代。 在結構11(b)又一實施例中，R7與R7'相同或不同且獨立地 為視情況經鹵基、羥基、Cu烷基或烷氧基中之一或多 139562.doc -57- 200946129 者取代之喹啉基或蒽基。在一特定實施例中，Ci 8烷基為 曱基。在其他特定實施例中，鹵基為氯。 在結構n(b)之又一實施例中，R7與R7’相同或不同且獨立 地為視情況經函基、羥基、_SH、_s〇3H、Ci 8烷基、芳 基、芳氧基或Cl_8烷氧基中之一或多者取代之2_萘基或 萘基。 在結構11(b)之某些實施例中，尺7與R7’相同或不同且獨立 地為單（鹵基）萘基；二（鹵基）萘基；三（齒基）萘基；單（羥 基）萘基；二（羥基）萘基；三（羥基）萘基；單（烷氧基）萘 基；二（烷氧基）萘基；三（烷氧基）萘基；單（芳氧基）萘基； 單（烧基）萘基；二（烧基）萘基；三（烧基） 萘基；單（羥基萘-磺酸；單（羥基）_萘_二磺酸；單（齒基）_ 單（經基）萘基；二（_基）·單（經基）萘基；單（鹵基）_二（經 基）萘基；二（鹵基）_二（羥基）萘基；單（烷基單（烷氧基）_ 萘基；或單（烷基）-二（烷氧基）_萘基’其中鹵基為氟、氣、 演或峨。在一特定實施例中，鹵基為氣。 在結構11(b)之其他特定實施例中，R7與R7·相同或不同且 獨立地為2-萘基、2-氣苯基、4-氣苯基、2,4-氣苯基、4·曱 基苯基、2-¾•基或6 -喧嘛基。 在結構11(b)之其他特定實施例中，。與尺7'相同或不同且 獨立地為視情況經i!基、羥基、Cw烷基或Cw烷氧基中之 一或多者取代之喹啉基或蒽基。 在如上所述之結構11(b)之另一特定實施例中，R8、R8,、 、R12及R12'相同或不同且獨
、R
Rj R1 R1
R 139562.doc -58- 200946129 立地為氫、羥基、鹵基、羧基、Cl.8烷基或Cw烷氧基。 在結構11(b)之另一特定實施例中，r8、R9、R10、R11及 R12各相同或不同且獨立地選自氫、經基、鹵基、叛基、 Ci-8烷基或Cw烷氧基，使得與尺8、、Rio、Rll及R12連接 之苯基經一、二或三個函基；一或兩個羧基；一、二或三 個經基；一或兩個鹵基及一、二或三個經基；一或兩個鹵 . 基、一或兩個羥基及一個Cw烷氧基；一或兩個鹵基、一 ❹ 個經基及一或兩個Cw烷氧基；或一個鹵基、一或兩個羥 基及一或兩個Cw烷氧基取代。 在結構11(b)之另一特定實施例中，R8’、R9’、Rio’、Rll’ 及R各相同或不同且獨立地選自氫、經基、鹵基、羧 基、Cb8烷基或C!-8烷氧基，使得與、r9_、Rio·、Rll·及 R連接之笨基經一、二或三個鹵基；一或兩個羧基； 一、二或三個羥基；一或兩個鹵基及一、二或三個羥基； 一或兩個鹵基、一或兩個羥基及一個C18烷氧基；一或兩 Ο 個齒基、一個羥基及一或兩個cv8烷氧基；或一個鹵基、 一或兩個經基及一或兩個C1_8烷氧基取代。 在結構11(b)之其他特定實施例中，R8、R9、Rio、R"及 12 R各相同或不同且獨立地選自氫、羥基、鹵基、羧基、 cN8烷基或Cl 8烷氧基，使得r8、r9、r1G、Rll及r12所連接 之苯基經以下各基團取代：二（羥基）；單（鹵基）_單（羥 基）’單（齒基）-二（經基）；單（鹵基）_三（經基）；二（齒基）_單 (羥基）；二（_基>二（羥基）；二（鹵基）·三（羥基）；單（鹵 基）-單（羥基）-單（烷氧基）；單（齒基）·二（羥基）_單（烷氧 139562.doc -59· 200946129 基）’單（齒基）-單（經基）_二（烧氧基）；單（鹵基）_二（經基）_ 一（烷氧基）·’二（齒基）_單（羥基）_單（烷氧基）；二（鹵基）_二 (羥基）-單（烷氡基）；或二（鹵基）_單（羥基）二（烷氧基）。在 特定實施例中’鹵基為溴。在其他特定實施例中，烷氧基 為甲氧基。 在結構11(b)之其他特定實施例中，r8,、r9,、R10,、Rll. 及R12·各相同或不同且獨立地選自氫、羥基、鹵基、羧 基、Cu烷基或C1-8烷氧基，使得R8,、r9,、rHV、及r12, 所連接之苯基經以下各基團取代：二（羥基）；單（鹵基y單 (說基）；單（鹵基）_二（經基）；單（_基）_三（經基）；二（齒 基）-單（备基）’二（_基）-二（經基）；二（函基三⑽基”單 (_基）-單（％基）_單（炫氧基）；單（_基）_二（經基）_單（燒氧 基）；單（鹵基）_單（經基）_二（烧氧基）；單（齒基）_二（經基）_ 二（烷氧基）；二（鹵基）_單（羥基）_單（烷氧基）；二（鹵基）_二 (沒基）-單（烧氧基），或二（齒基）_單（經基）_二（烧氧基）。在
特定實施财’ i基㈣。在其他特定實施例中，燒氧基 為甲氧基。 A 在結構11(b)之某些特定實施例中，R8、R9、R丨0、及 R12各相同或不同且獨立地選自氫、羥基、由基、羧基、 烧基或Cw烧氧基，使得R8、R9、r1G、Rll及Rl2所連接 之苯基為2-鹵苯基、3-_苯基或4_ώ苯基；3,5_二鹵笨 基；2-羥苯基、3-羥苯基或4_羥苯基；2,4_二羥苯基；3,5_ —鹵基-2,4,6-二羥苯基；3,5-二鹵基_2,4_二羥苯基；3 5__ 3,5-二齒基-2-經基_4_ 鹵基·4-經苯基；3-¾基-4-經笨基； 139562.doc • 60 - 200946129 甲氧基笨基；或4-缓基苯基。在一更特定實施例中，鹵基 為漠。 、 在結構11(b)之其他某些特定實施例中，R8,、R9.、r1〇’、 R11及R12各相同或不同且獨立地選自氫、羥基、函基、羧 基、C!.8 烷基或 C!_8 烷氧基，使得 R8.、r9,、r1G,、r11.及 r12. ❿ ❿ 所連接之苯基為2-鹵苯基、3_南苯基或心函苯基；3,5_二 齒苯基；2_經苯基、3_經苯基或4-經笨基；2,4-二經苯 基；3,5-二鹵基_2,4,6_三經笨基、3,5_二幽基_2,4二經苯 基；3,5-二齒基-4_經苯基；3_齒基_4_經苯基；3,5_二齒基_ 2,基_4_甲氧基苯基；或4,基苯基，其中函基為氟、 氣、溴或碘。在一更特定實施例中，鹵基為溴。 :結構_之一更特定實施例中，r、r11各為齒基且 R及R各為髮基。在另一特定實施例中，汉9及 基且R10為羥基。在又一转宗杳故,丨士 9 馬圉 隹又特疋實施例中，R9及Rii各為溴， 且為經基。在又一特定實施例 各 漠，為羥基，且為氫。在1各為 々轧在其他實施例中，；Rll.
各為函基且f及f各為經基。在其他特 及R R9.及R"·各…且Ri。、經 知例中， d9- n, 丞在又特疋實..施例ψ 及R各為溴，且r、ri2,各為羥基。在 例中臭，Rl〇.為經基，且r12寺疋實施 特定實施例中，R8·及R9'各為氫。 1。在其他 及R】】，各 實施 在結構n(b)之某些特定實施例中，r9、r9.、以 為齒基且R1。、R-、R】2及Rl2.各為羥基 … 例中，各為氫。 在、他特定 I39562.doc -61- 200946129 在結構n(b)之其他特定實 為齒基且RlG及R1Q，各為羥基 R8'各為氫。 施例中’ r9、r9.、r"及Rll.各 。在其他特定實施例中，R8及 R9’、R11 及 R11’各為 在其他特定實施例 在結構n(b)之更特定實施例中，r9 溴，且R10、R1。’、Ri2^ 12. K及R各為羥基 中，R8及R8’各為氫。 、R9’、Ru及 R11·各為 各為氫。在其他特定 在結構11(b)之更特定實施例中，R9 溴，R及R1Q各為經基，且尺12及尺12, 實施例中，R8及R8’各為氫。 在結構11(b)之其他特定實施例中，R15、Ri5.、Ri6及w 各相同或不同且獨立地為氫或甲基 中，以、R15.、R16及Rl6，各:在另一特定實施例 16 , 及尺各為虱。在又一特定實施例中’ R及R16各相同或不同且獨立地為氫或側氧基。 在結構n(b)之其他更特定實施例中，r1S、Ris,、及 R16’相同或不同且獨立地為氫或甲基。在又一特定實施： 中，R16及R16各為側氧基。在此等實施例中，R^R7，各相 同或不同且獨立地為經至少一個氣或曱基取代之笨基；】_ 萘基；2-萘基；6_喹啉基或2_蒽基。在特定實施例中， R8、R9、R丨0、R"、、r8,、r9 10. R及汉12各相同 或不同且獨立地為氫、鹵基、甲氧基、羥基或羧基；在特 定實施例中，鹵基為溴。在某些特定實施例中，^ r9 r1。、Rh、π m W及W各均不為氫時^及 R8各為氫。 關於結構n(b)之實施例，連接部分又及乂，夂 分吟可用於使 139562.doc -62 - 200946129 間隔基及間隔基Γ(例如，DIDS(參看具有結構叫!^)之化合 物））分別與聚乙二醇（亦即（-CH^O-c^丄）共軛之官能基。 在某些特定實施例中，連接基X與連接基X，相同或不同且 獨立地為-NH-、-0-或-S-。在一更特定實施例中，連接基 X及連接基X'各為_NH-。 在結構11(a)及11(b)之某些特定實施例中，該等化合物為 鈉鹽。 在結構II⑷及（b)之更特定實施例中，該等化合物具有以 下結構11(c)、11(d)、iI(e)4II(f) ·
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在某些特定實施例中，結構11(C)、11(d)、11(e)及11(f)為 納鹽。 在其他特定實施例中，X及X'各為-NH-、-Ο-或-S-。 在特定實施例中，當X及X'各為-NH-時，結構11(C)、 11(D)、11(E)及11(F)具有特定式： 139562.doc -64· 200946129
11(C)
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為鈉鹽。 在式 11(b)、11(c)、11(d)、II(e)及 n(f)、n(c)、11(D)、 11(E)及11(F)中任一者之結構的某些實施例中，„為在〇與1〇 之間、在0與100之間、在1與5之間、在1與1〇之間、在！與 100之間、在1與300之間、在1與55〇之間、在1與1〇〇〇之 間、在1與2500之間、在1〇與2500之間、在1〇與2000之 間、在50與1〇〇〇之間、在25〇與1〇〇〇之間或在45〇與1〇〇〇之 間的任何整數。在結構叫…、π⑷、n(d)、n(e)及n(f)以 及n((C)_(F))之更特定實施例中，《為在50與1000之間的任 何整數。在另一特定實施例中，”為在2〇〇與3〇〇之間的任 何整數。在又一特定實施例中，《為在450與550之間的任 何正數。在又一特定實施例中，《為在900與1000之間的任 何整數。在另一特定實施例中，《為0 ^ 具有式11(a)、11(b)、π⑷、π⑷、π⑷及π⑴中任一者 之、、構或其任何子結構（例如，之共軛化合物在 本文中亦稱為二價甘胺冑醯肼_咖共軛化合物(或二價甘 139562.doc 200946129 胺酸醯肼-PEG共軛物）。 在某些特定實施例中，二價甘胺酸醯肼PEG共軛化合物 具有以下結構中之一者： 參
〇
Λ
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H>C
冲。个x /χο
CH,
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CH, 冲°个》
冲。个,.
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139562.doc ·69· 200946129
或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構體， 其中J及J各獨立地為如本文所述之間隔基η·】”中之任 一者，且其中X及X,各獨立地為-NH-、-〇-或-S-。在某些 實施例中’ J及J’各為】1(4,4,_二異硫氰基笑_2,21_二磺酸 (DIDS))。在其他特定實施例中，又及乂，各為_νη·。 化學定義 本文中所命名之某些化學基團之前有一個表示指定化學 基團中所見之總碳原子數的簡寫符號。舉例而言，Ci_c8 烷基描述如下定義之總共具有丨至8個碳原子之烷基，且8 Cs-Cn環烷基描述如下定義之總共具有3至12個碳原子之環 烷基。簡寫符號中之碳總數並不包括可以所述基團之取代 基形式存在之碳。除非作相反規定，否則除前述之外，如 本文中所用之以下術語具有指定含義。 「烷基」意謂含有〗至18個碳原子之直鏈或支鏈、非環 狀或環狀、不飽和或飽和脂族烴，而術語「CM烷基」具 有與烷基相同之含義但含有丨至8個碳原子。代表性飽和直 鏈烷基包括曱基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己 139562.doc -70- 200946129
基及其類似基團，而飽和支鍵炫基包括異丙基、第二丁 基、異丁基、第三丁基、庚基、正辛基、異戊基、2-乙基 己基及及其類似基團。代表性飽和環狀烷基包括環丙基、 環丁基、環戊基、環己基、-CH2環丙基、-CH2環丁 基、-CH2環戊基、-CH2環己基及其類似基團；不飽和環狀 烧基包括環戊烯基及環己烯基及其類似基團。亦稱為「同 素環（homocyclic ring)」之環狀烷基包括二同素環及多同 素環，諸如十氫萘及金剛烷基。不飽和烷基在相鄰碳原子 之間含有至少一個雙鍵或參鍵（分別稱為「烯基」或「炔 基」）。代表性直鏈及支鏈烯基包括乙烯基、丙烯基、卜丁 烯基、2-丁烯基、異丁稀基、丨_戊烯基、2_戊烯基、3_甲 基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁稀基、2,3_二甲基_2_丁稀基及其 類似基團；代表性直鏈及支鏈炔基包括乙炔基、丙炔基Y 1-丁炔基、2-丁炔基、1_戊炔基、2_戊炔基、3_甲基_丨_ 丁 炔基及其類似基團。 在本文所述之化合物之情形中，除非另有規定，否則如 本文中所定義’將術語烷基、芳基、芳基烷基、雜環、同 素環及雜我基分職為包含未經取代^基及經取代烧 基、未經取代之芳基及經取代芳基、未經取代之芳基烧基 及經取代緑㈣、未經取代之雜環及㈣代雜環、未經 取代之同素環及經取代同素環、未經取代之雜環烧基及經 取代雜環烷基。 ' 如本文中所用，在烷基、关 — 土、方基烷基、雜環及雜環 烷基之情形中，術語「經取 ^ 」思明烷基、^•基、芳基烷 139562.doc •71· 200946129 基、雜環或雜環烷基部分之至少一個氫原子經取代基置 換。在側氧基取代基（「=〇」）之情況下，兩個氫原子經置 換。如在本揭示案之上下文中所用之「取代基」包括側氧 基、鹵素、經基、氰基、确基、胺基、烧基胺基、二院基 胺基、烧基、烧氧基、硫烧基、鹵炫•基、經取代烧基、雜 烷基、芳基、經取代芳基、芳基烷基、經取代芳基烷基、 雜芳基、經取代雜芳基、雜芳基烷基、經取代雜芳基烷基、 雜環、經取代雜環、雜環烷基、經取代雜環烷基、-NRaRb 、-NRaC(=0)Rb、-NRaC(=0)NRaRb、-NRaC(=0)0Rb-NRaS(=0)2Rb、-ORa、-C(=0)Ra、-C(=0)0Ra、-C(=0)NRaRb 、-0CH2C(=0)NRaRb、-0C(=0)NRaRb、-SH、-SRa、-SORa 、-S(=0)2NRaRb、-S(=0)2Ra、-SRaC(=0)NRaRb、-0S(=0)2Ra 及-S(=0)20Ra(亦寫作-S03Ra)，其中Ra與Rb相同或不同且 獨立地為氫、烧基、函烧基、經取代烧基、烧氧基、芳 基、經取代芳基、芳基烧基、經取代芳基烧基、芳基烧氧 基、雜芳基、經取代雜芳基、雜芳基烷基、經取代雜芳基 烷基、雜環、經取代雜環、雜環烷基或經取代雜環烷基。 上述113及Rb之定義適用於在整個說明書中此等取代基之所 有使用。 代表性取代基包括（但不限於）烷氧基（亦即，烷基-Ο-， 包括Ci_8烷氧基，例如曱氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧 基、戊氧基）、芳氧基（例如，苯氧基、氯苯氧基、甲苯氧 基、甲氧基苯氧基、苯甲氧基、烷氧基羰基苯氧基、烷氧 基羰氧基、醯氧基苯氧基）、醯氧基（例如，丙醯氧基、苯 139562.doc -72- 200946129 曱醯氧基、乙醯氧基）、胺甲醯基氧基、羧基、巯基、烷 硫基、醯基硫基、芳硫基（例如，苯硫基、氯苯硫基、烧 基苯硫基、烷氧基苯硫基、苯甲硫基、烷氧基羰基-苯硫 基）、胺基（例如，胺基、單-及二烷基胺基、甲基苯 基胺基、曱基苯甲基胺基、Ci-Cs烷基醯胺基、醢胺基、 胺甲酸胺基（carbamamido)、脲基、胍基、石肖基及氰基）。 此外，任何取代基可具有1-5個與其連接之其他取代基。 「芳基」意謂芳族碳環部分，諸如苯基或萘基 (naphthyl)(亦即，萘基（naphthalenyl))(l-萘基或2-萘基）或 蒽基（例如2-蒽基）。 「芳基烷基」（例如苯烷基）意謂至少一個烷基氫原子經 芳基部分置換之烷基，諸如-CH2-苯基、-CH=CH-苯 基、-C(CH3) = CH-苯基及其類似基團。 「雜芳基」意謂具有5至1 0個成員且具有至少一個選自 氮、氧及硫之雜原子且含有至少1個礙原子的芳族雜環， 其包括單環及雙環系統。代表性雜芳基為呋喃基、苯并呋 喃基、嗔吩基、苯并嗟吩基、吼σ各基、吲哚基、異吲哚 基、氮雜吲D朵基、。比咬基、喧琳基（包括6-喧琳基）、異喧 琳基、°惡。坐基、異°惡唾基、苯并。惡。坐基、°比。坐基、咪唾 基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、異噻唑基、噠嗪 基、°密°定基、°比°秦基、三嗓基、_ °若琳基、醜°秦基及喧。坐 琳基。 「雜芳基烷基」意謂至少一個烷基氫原子經雜芳基部分 置換之烷基，諸如-CH2吡啶基、-CH2嘧啶基及其類似基 139562.doc -73- 200946129 團。 「雜環（Heterocycle)」（在本文中亦稱為「雜環 (mheter〇CyCliC ring)」）意謂4至7員單環或7至10員雙環雜 裒了為飽和、不飽和或芳族的，且其含有工至4個獨立地 選自氮、氧及硫之雜原子，且其中氣及硫雜原子可視情況 經氧化’且氮雜原子可視情況經季錢化，該雙環雜環包括 上述雜環中之任-者與苯環稠合之雙環。可經*任何雜原 子或碳原子來連接雜環。雜環包括如本文中所定義之雜芳 基因此，除上文所列之雜芳基之外，雜環亦包括嗎啉 基、吡咯啶酮基、吡咯啶基、哌啶基、乙内醯基 (ydantoinyl)、戊内醯胺基（vaier〇iactamyi)、氧 p元基氧 雜環丁烷基、四氫呋喃基、四氫哌喃基、四氫吡啶基、四 氫嘧啶基、四氫噻吩基、四氫噻喃基、四氫嘧啶基、四氫 售吩基、四氫噻喃基及其類似基團。 如在視情況經取代之雜環（以及雜芳基）之情形中所使 用術”。視情況經取代」意謂至少一個氫原子經取代基 置換。在酮基取代基（「_C( = 0)_」）之情況下，兩個氫原子 經置換。當經取代時，上述基團中之一或多者經取代。在 本說明書上下文中之「取代基」亦在上文中描述且包括鹵 素、羥基、氰基、硝基、胺基、烷基胺基、二烷基胺基、 烷基、烷氧基、烷硫基、鹵烷基、芳基、芳基烷基、雜芳 基、雜蒡基烷基、雜環及雜環烷基，以及_NRaRb、 -NRaC( = 〇)Rb , -NRaC( = 0)NRaRb > -N RaC ( = 〇 ) 〇 Rb . NRaS( = 〇)2Rb . _〇Ra . -C( = 〇)Ra-C(=0)〇Ra . -C( = 〇)NRaRb 139562.doc • 74· 200946129 、-OCH2C(=0)NRaRb、_〇c(=〇)NRaRb、SH、_SRa、s〇Ra ' -S(=0)2NRaRb ^ -S(=〇)2Ra , -〇S(=0)2Ra^-S(=0)2〇Ra 〇 另外，上述取代基可進一步經上述取代基中之一或多者取 代，因此該取代基為經取代烷基、經取代芳基、經取代芳 基烷基、經取代雜環或經取代雜環烷基。在此情形中1與 Rb可相同或不同且獨立地為氫、烷基、鹵烷基、經取代烷 . 基、烷氧基、芳基、經取代芳基、芳基烷基、經取代芳基 _ 烷基、雜環（包括雜芳基）、經取代雜環（包括經取代雜芳 基）、雜環烷基或經取代雜環烷基。 「雜環烷基」意謂至少一個烷基氫原子經雜環置換之烷 基，諸如-CH2嗎啉基、_CH2Ch2娘啶基、_〇出氮呼基、π% 吡嗪基、-CH2哌喃基、_CH2呋喃基、_CH2吡咯啶基及其類 似基團。 「同素環（Hom〇cycle)」（在本文中亦稱為「同素環 (homocyclic ring)」意謂含有3_7碳原子之飽和或不飽和（但 φ 非芳族）碳環’諸如環丙烷、環丁烷、環戊烷、環己烧、 環庚烧、環己烯及其類似物。 「鹵素」或「鹵基」意謂氟、氣、溴及碘。 「鹵烧基」（其為經取代烷基之實例）意謂至少一個氫原 ' 子經1^素置換之烷基，諸如三氟甲基及其類似基團。 「iS芳基」（其為經取代芳基之實例）意謂至少一個氫原 子經齒素置換之芳基，諸如4-氟苯基及其類似基團。 「烷氧基」意謂經由氧橋連接之烷基部分（亦即，_〇_烧 基），諸如甲氧基、乙氧基及其類似基團。 139562.doc •75- 200946129 函烷氧基」（其為經取代烷氧基之實例）意謂至少一個 氫原子經i素置換找氧基部分，諸如氣甲氧基及其類似 基團。 烷氧二基」意謂經由兩個獨立氧橋連接之烷基部分 (亦即，-〇-烷基-〇-)，諸如-〇-ch2-cu、_〇_CH2CH2_〇_、 -o-ch2ch2ch2-o- > -0-CH(CH3)CH2CH2-0- > -0-CH2C(CH3)2CH2-0- 及其類似基團。 烷二基」意謂兩個氫原子係自同一碳原子或自不同碳原 子移去之二價烷基，諸如_CH2_、_ch2CH2_、_CH2CH2CH2 、-CH(CH3)CH2CH2-、-chach+cH2·及其類似基團。 如本文中所用，「伸稀基」係指直鏈、支鏈或環狀二價 脂族烴基，在一實施例中為直鏈或支鏈二價脂族烴基，在 某些實施例中具有2至約20個碳原子及至少一個雙鍵，在 其他實施例中具有1至12個碳。在其他實施例中伸烯基 包括低碳伸烯基。可視情況沿伸烯基***一或多個氧、硫 或者經取代或未經取代之氮原子，其中氮取代基為烷基7 伸烯基包括（但不限於）_CH=CH_CH=CHJ _CH=CHCH广。 術語「低碳伸稀基」係指具有2至6個碳之伸烯基。在某些 實施例中，伸烯基為低碳伸烯基，包括具有3至4個碳原子 之伸烯基。 Μ 如本文中所用，「伸炔基」係指直鍵、分支鏈或環狀二 價脂族烴基，在某些實施例中為直鏈或分支鏈二價脂族烴 基，在一個實施例中具有2至約20個碳原子及至少一個參 鍵，在另一實施例中具有丨至12個碳。在另一實施例中， 139562.doc -76· 200946129 伸块基包括低碳伸炔基。可視情況沿伸炔基***一或多個 氧、硫或者經取代或未經取代之氮原子，其中氮取代基為 烷基。伸炔基包括（但不限於）_Csc«-、-C三C-及-OC-CH2_。術語「低碳伸炔基」係指具有2至6個碳之伸炔基。 在某些貫施例中，伸炔基為低碳伸炔基，包括具有3至4個 碳原子之伸炔基。 硫烷基」意謂經由硫橋連接之烷基部分（亦即_s_烷
基），諸如曱硫基、乙氧基及其類似基團。 「烷基胺基」及「二烷基胺基」意謂經由氮橋連接之 或兩個烷基部分（亦即-N_烷基），諸如甲胺基、乙胺基、 甲胺基、二乙胺基及其類似基團。 「胺基甲酸酯」為_Ra〇C(；=c^NRaRb。 的佐何胺基曱 「環狀胺基曱酸酯」意謂作為環之一部分 酸酯部分。 「醯胺基（Amidyl)」為-NRaRb。 「羥基」係指·〇Η基團。 「硫氫基」或「硫基（thi〇)」為—SH。 「胺基」係指-NH2基團。 「硝基」係指-N〇2基團。 「亞胺基」係指=NH基團。 「硫酮基（thi〇xo)」係指=s基團。 「氰基」係指_CsN基團。 「磺醯胺」係指基團_s(=〇)2NH2。 「異氰酸酯基」係指-N=C=〇基團。 139562.doc -77- 200946129 「異硫氰酸酯基」係指-N=C=S基團。 「疊氮基」係指-Ν=Ν+=Ν·基團。 「羧基」係指-C02H基團（亦描述為_c(=〇)〇h或COOH)。 「醯肼」係指-C(=0)NRa-NRaRb基團。 「侧氧基（oxo)」係指=〇基團。 聚乙烯亞胺（PEI)單體為三員環。該分子之兩個「拐角」 係由-CH2·鍵聯組成，且第三r拐角」為第二胺*=NH。 本文所述之式 1(a)、1(b)、i(c)_i(j)、n(a)、η⑻、 11(c) ' 11(d)、11(e)及 11(f)以及 之結構中之任一者 中的各-ch^o-chh表示聚乙二醇（PEG)之單體單元）具有 44道爾頓（dalton)之經計算分子量。當此等式中任一者之沒 係在1與2500之間時，所貢獻之估計分子量 因此係在約0.044 kDa與約110kDa之間；當„係在1〇與25〇〇 之間時’（-CH2-o-cH2_)„所貢獻之估計分子量係在約〇 44 kDa與約11〇 kDa之間；當„係在1〇與2〇〇〇之間時，（_CH2_ o-CH2_)„所貝獻之估計分子量係在約〇 44 kDa與約88 kDa 之間；當π係在50與looo之間時，（_CH2-〇_Ch2丄所貢獻之 估计刀子量係在2.2 kDa與44 kDa之間；當《係在250與1000 之間時，（·ί：Η2-0-(：Η2-)„所貢獻之估計分子量係在約u kDa與約44 kDa之間；當„係在45〇與1〇〇〇之間時，卜CH2_ O CH2丄所貝獻之估計分子量係在約2〇 kDa與約44 kDa之 間’田此等式中任一者之„係在2〇〇與3〇〇之間時，（_CIi2_ O CH2_)„所貝獻之估計分子量因此係在約$ 8 與約13 kDa之間，虽此等式中任一者之”係在與之間時， 139562.doc 200946129 (-CHi-O-CH2·)”所貢獻之估計分子量因此係在約2〇 kDa與 約24 kDa之間；且當此等式中任一者之„係在9〇〇與1000之 間時’（-CH^O-CH2丄所貢獻之估計分子量因此係在約40 kDa與約44 kDa之間。在某些特定實施例中，（_CH2_OCh2-)„ 所貢獻之估計分子量為0.2 kDa、3 kDa、6 kDa、10 kDa、 20 kDa、40 kDa或100 kDa。在更特定實施例中，（-CH2-0(：112-)„所貢獻之估計分子量為i〇 kDa、20 kDa或40 kDa。 ❿ 本文所述之化合物一般可以游離酸或游離鹼之形式使 用。或者’化合物可以酸或鹼加成鹽之形式使用。游離鹼 胺基化合物之酸加成鹽可根據在此項技術中熟知之方法來 製備’且可由有機酸及無機酸形成。合適的有機酸包括 (但不限於）順丁烯二酸、反丁烯二酸、苯甲酸、抗壞血 酸、丁二酸、甲烧石黃酸、乙酸、草酸、丙酸、酒石酸、水 楊酸、檸檬酸、葡萄糖酸、乳酸、扁桃酸、肉桂酸、天冬 胺酸、硬脂酸、棕櫚酸、乙醇酸、麩胺酸及苯績酸。合適 φ 的無機酸包括（但不限於）鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸及硝 酸。本文所述之化合物的游離酸化合物之驗加成鹽亦可藉 由在此項技術中熟知之方法製備且可由有機鹼及無機鹼形 成。合適的無機驗包括（但不限於）納、卸、链、敍、每、 ’ 鎂 '鐵、鋅、銅、錳、鋁及其類似物之氫氧化物或其他 鹽，及諸如經取代錢鹽之有機鹼。因此，術語結構I、I(a) 及結構II及11(a)以及任何及所有子結構及本文所述之特定 化合物及共軛物之「醫藥學上可接受之鹽」意欲涵蓋任何 及所有醫藥學上合適之鹽形式。 139562.doc -79- 200946129 有時可將結構卜！⑷、„及11(〇及其子結構以及】及j，描 為陰離子物質。舉例而言’可將化合物描述為磺酸 。-般熟習此項技術者將認識到化合物係與陽離子 併寻莫耳比存在。舉例而言’本文所述之化合物可以完全 貝子化之形式，或以諸如鈉、鉀、銨之鹽的形式或與如上 :述之任何無機驗組合存在。當描繪—種以上陰離子物質 :’各陰離子物質可獨立地以質子化物質或鹽物質之形式 =存^些特定實施例中’本文所述之化合物係以納鹽 亦涵蓋本文所述之任何化合物共輛物之料。前藥為任 何共價鍵結之載劑’當向個體投與此前藥時，其在活體内 釋放結構I、1(a)、π或„(a)以及本文中之任何子結構之共 軛化合物。-般藉由以一定方式修飾官能基來製備前藥:、 該方式使得能藉由常規操作或藉由活體内方法將該修飾裂 解從而產生母體化合物。當(例如)羥基或胺基與當向個體 投與時裂解形成㈣或胺基之任何基團鍵結時，前藥包括 (例如）本文所述之共軛化合物。因此，前藥之代表性實例 包括（但不限於）結構ί、I(a)、n4II(a)以及本文中之任何 子結構之化合物的醇及胺官能基之乙酸鹽、甲酸鹽及苯甲 酸鹽衍生物。此外，在羧酸«〇〇Η)之情況下可採用 酯，諸如曱酯、乙酯及其類似物。前藥化學為一般熟習此 項技術者所習知及通常實踐。 月’J藥通常例如藉由在血液中水解而在活體内迅速轉化以 產生母體化合物（亦即，式utI(a)或子式I(b)_I(j)，或式卩 139562.doc 200946129 或 11(a)或子式 11(b)、11(c)、11(d)、11(e)及 11(f)，及 II((C)-(F))之化合物共軛物）。前藥化合物經常在哺乳動物生物體 中提供溶解度、組織相容性或延遲釋放之優勢（例如參看 Bundgard，H·，Design of Prodrugs (1985)，第 7-9、21-24 頁 (Elsevier, Amsterdam))。前藥之論述在 Higuchi，T 等人， 「Pro-drugs as Novel Delivery Systems」A.C.S. Symposium Series，第 14卷中且在 Bioreversible Carriers in Drug Design， Edward B. Roche 編 > American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987中提供，兩篇文獻均以引用的方 式完全併入本文中。 關於立體異構體，結構I、1(a)、II或11(a)以及本文所述 之任何子結構的共軛化合物可具有一或多個對掌性中心且 可以任何異構形式（包括外消旋體、外消旋混合物）及以個 別對映異構體或非對映異構體之形式存在。另外，結構 I、1(a)、II或11(a)以及其任何子結構的共輥化合物可含有 烯系雙鍵或其他幾何不對稱中心，且除非另外特別指出， 否則包括E及Z幾何異構體（例如，順式或反式）。同樣地， 亦意欲包括所有可能之異構體，以及其外消旋及光學純形 式，及所有互變異構形式。互變異構體係指質子自分子之 一個原子移至同一分子之另一原子。包括且涵蓋該等化合 物之所有此等異構形式，以及其混合物。此外，本文所述 之任何化合物的一些結晶形式可作為多晶型物存在，其亦 包括且涵蓋於本揭示案中。另外，一些化合物可與水或其 他有機溶劑形成溶劑合物。在本文所述之化合物及組合物 139562.doc -81 - 200946129 之範疇内類似地包括此等溶劑合物。 化合物合成
一般而言，可根據熟習此項技術者已知之有機合成技 術，由市售化學物質及/或化學文獻中所述之化合物起始 來製造用於本文所述之反應中的化合物。「市售化學物 質」可自標準商業來源獲得，該等來源包括Acros Organics (Pittsburgh PA) ' Aldrich Chemical (Milwaukee WI，包括 Sigma Chemical及 Fluka)、Apin Chemicals Ltd. (Milton Park UK)、Avocado Research (Lancashire U.K·)、 BDH Inc. (Toronto, Canada) ' Bionet (Cornwall, U.K.) ' Chemservice Inc. (West Chester PA)、Crescent Chemical Co. (Hauppauge NY) 、Eastman Organic Chemicals 、 Eastman Kodak Company (Rochester NY) ' Fisher Scientific Co.(Pittsburgh PA) 、 Fisons Chemicals (Leicestershire UK)、Frontier Scientific(Logan UT)、ICN Biomedicals,
Inc. (Costa Mesa CA)、Key Organics (Cornwall U.K·)、 Lancaster Synthesis (Windham NH) ' Maybridge Chemical Co. Ltd. (Cornwall U.K.)、Parish Chemical Co. (Orem UT) ' Pfaltz & Bauer, Inc. (Waterbury CN) ' Polyorganix (Houston TX)、Pierce Chemical Co. (Rockford IL)、Riedel de Haen AG (Hanover, Germany) 、 Spectrum Quality Product, Inc. (New Brunswick, NJ)、TCI America (Portland OR)、Trans World Chemicals, Inc. (Rockville MD)及 Wako Chemicals USA, Inc. (Richmond VA) o 139562.doc -82- 200946129 可經由各種參考書及資料庫鑑別一般熟習此項技術者已 知之方法。詳述適用於製備本文所述之化合物及化合物共 軛物之反應物的合成或提供描述該製備之文章之參考文獻 的合適參考書及論文包括（例如）「Synthetic Organic Chemistry」，John Wiley & Sons，Inc., New York; S. R. Sandler等人，「Organic Functional Group Preparations」第 2版，Academic Press, New York, 1983 ； H. O. House, 「Modern Synthetic Reactions」第 2版，W. A. Benjamin, Inc. Menlo Park, Calif. 1972 ; T. L. Gilchrist, 「Heterocyclic Chemistry」第 2 版，John Wiley & Sons， New York, 1992 ; J. March，「Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structure」，第 4版，\^16丫-Interscience，New York, 1992。詳述適用於製備本文所述 之共軛化合物之反應物的合成或提供描述該製備之文章的 參考文獻的其他合適之參考書及論文包括（例如）Fuhrhop， J.及 Penzlin G.，「Organic Synthesis: Concepts, Methods, Starting Materials」，第二次修訂及增補版（1994) John Wiley & Sons ISBN: 3-527-29074-5 ； Hoffman, R.V., 「Organic Chemistry，An Intermediate Text」（1996) Oxford University Press, ISBN 0-19-509618-5 ; Larock，R. C.， 「Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations」第 2版（1999) Wiley-VCH, ISBN: 0-471-19031-4 ; March, J.， 「Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure」第 4版 139562.doc -83 - 200946129 (1992) John Wiley & Sons, ISBN: 0-471-60180-2 ； Otera, J. (編輯）「Modern Carbonyl Chemistry」（2000) Wiley-VCH， ISBN: 3-527-29871-1 ； Patai, S.，「Patai's 1992 Guide to the Chemistry of Functional Groups」（1992) Interscience ISBN: 0-471-93022-9 ; Quin, L.D.等人，「A Guide to Organophosphorus Chemistry」（2000) Wiley-Interscience， ISBN: 0-471-31824-8 ； Solomons, T. W. G., 「Organic Chemistry」第 7版（2000) John Wiley & Sons，ISBN: 0-471-19095-0 ; Stowell, J.C., 「 Intermediate Organic
Chemistry」第 2^ΐ5·(1993)\νΉ6γ-Ιηί6Γ8ίΰ6η〇6，Ι8ΒΝ:0-471-57456-2 ;「Industrial Organic Chemicals: Starting Materials and Intermediates: An Ullmann's Encyclopedia」（1999) John Wiley & Sons, ISBN: 3-527-29645-X, 8卷；「Organic Reactions」（1942-2000) John Wiley & Sons，在所有 55卷 中；及「Chemistry of Functional Groups」John Wiley & Sons，73卷。 亦可經由美國化學學會之化學文摘社（Chemical Abstract Service of the American Chemical Society)(其在大多數公 共及大學圖書館中可得）制定之已知化學物質之索引以及 經由線上資料庫（關於更多細節，可聯繫美國化學學會， Washington，D.C.)來鑑別特定且類似之反應物。已知但並 不在廠家目錄中可得之化學物質可藉由委託化學合成機構 (custom chemical synthesis house)來製備，其中許多標準 化學品供應機構（例如，上文所列之機構）提供委託合成服 139562.doc -84- 200946129 務。關於製備及選擇本文所述之醯肼化合物及共軛化合物 之醫藥鹽的參考文獻為P. H. Stahl及C. G_ Wermuth, 「Handbook of Pharmaceutical Salts」，Verlag Helvetica Chimica Acta, Zurich，2002。 關於合成丙二醯肼化合物及甘胺酸醯肼化合物之方法， 亦參看美國專利第7,414,037號；]^1^叩^331等人，</.6^· P/z_y<sio/· 124:125-37 (2004);及 Sonawane 等人，FJ/S1 20:130-132 (2006)。在實例1中將提供描述二價丙二醯肼化 合物之合成的其他細節。 反應流程1
1(a) 一般而言，式I及1(a)之共輛化合物可根據反應流程1來 製備。參看反應流程1，將1 0 mmol反應物1與10 mmol漠化 丙二酸二乙酯（2)組合。接著將所得反應混合物在高温下攪 139562.doc -85- 200946129 ^約8小時。冷卻後，即過濾固體物質且使其自己烧再結 晶以產生式3化合物。接著將3於乙醇中之溶液與12出以〇1 ^合肼一起回流約1〇小時。接著在真空下蒸館溶劑及過量 試劑。接著使產物自乙醇再結晶以產生式4化合物。接著 將式4化合物與酸5在乙醇中組合且接著使其回流約3小時 以產生所需產物6。接著將式6化合物與中任一者） 在DMF中組合以產生間隔基連接之化合物7。接著使化合 物7與式8之聚乙二醇部分共軛以產生式I(a)化合物。 · 热習此項技術者將認識到，當Rl、r2、r3、r4、&5及r6 ❿ 中任一者分別與R1’、R2.、r3.、r4·、R5j r6，不同時可藉 由首先使式7化合物與8以！ ： ！比率反應，接著使所得產物 與過1之不同式7化合物反應，來製備式1(a)化合物。 或者，可將間隔基j之第二端首先與聚乙二醇部分8連 接。可接著使所得化合物與式6化合物反應以獲得式丨（約化 合物。 熟S此項技術者將易於瞭解，調節本文所述之間隔基J 的原子價以保持化合物之穩定性。舉例而言，當1⑷經自 〇 異硫氛酸醋基（例如在11中）與1連接時，該異硫氰酸酯基之 氮原子將增加氫以保持穩定性。 . 139562.doc -86· 200946129 反應流程2
一般而言’根據反應流程2來製備Sn&II(a)化合物。參 看反應流程2，組合化合物9與1〇以形成11。將式11化合物 溶解於乙醇中且使其與12 mm〇l水合肼一起回流約10小 時。接著在真空下蒸館溶劑及過量試劑。使產物自乙醇再 φ 結晶以產生式12化合物。接著將式12化合物與醛13在乙醇 中組合且接著回流約3小時以產生所需式14化合物。在 DMF中用J處理14產生化合物15。接著藉由使聚乙二醇部 分與15反應來獲得式n(a)化合物。 如在反應流程1中，熟習此項技術者亦將認識到，當 R ' R ' R ' R 及 R12 中任一者分別與 r7_、r8·、 R9、R1G、Rn及尺12不同時，可藉由首先使式“化合物與 8以1:1比率反應’接者使所得產物與過量之不同式1 $化合 物反應，來製備式11(a)化合物。 139562.doc •87· 200946129 或者，可將間隔基J之第二端首先與聚乙二醇部分8連 接。可接著使所得化合物與式14化合物反應以獲得式1(a) 化合物。 可根據此項技術中實踐且在本文中描述之方法來進行醢 肼-聚乙二醇（PEG)共軛物之製備。可藉由使相應雙胺基及 單胺基PEG與5倍莫耳過量之與間隔基J連接之丙二醯肼或 甘胺酸醯肼化合物（諸如MalH-DIDS)在無水DMSO中，在 作為鹼催化劑之三乙胺存在下反應來合成單價及二價PEG 共輛物。藉由胺基官能化淨化劑移除未反應之化合物，且 PEG共軛物可藉由此項技術中常用之方法（例如受控沈澱， 及凝膠過濾、透析、離子交換層析及製備型HPLC之組合） 來純化。 表徵及使用二償醯肼-PEG共輛化合物之方法 具有式I或式II之結構的二價醯肼-聚合物共軛化合物及 具有本文所述之式1(a)或子式1(b)、I(c)-I(j)或者式11(a)或 子式11(b)、11(c)、11(d)、11(e)及 11(f)及 II((C)-(F))之結構的 二價醯肼-PEG共輛化合物能夠阻斷或阻礙CFTR孔或通道 且抑制由位於細胞之細胞外膜中的CFTR進行之離子輸 送。本文亦提供抑制由CFTR進行之離子輸送之方法，其 包含使在外膜中具有CFTR之細胞與本文所述之任一共軛 化合物在足以使CFTR與該化合物相互作用之條件下接觸 一段足以使CFTR與該化合物相互作用之時間。 二價醯肼共輛化合物可藉由在活體外用經分離細胞進行 的此抑制由CFTR進行之離子輸送之方法來鑑別及/或表 139562.doc -88 - 200946129
某些實施例中，此等方法可使用如本文所述之生物 =來進行’該生物試樣包含(例如)自組織、禮液或培養 ㈣之細胞株（euWadapted _ Hne)或如在下文詳細描 述之其他生物來源獲得之細胞。使在外膜中具有cftr之 細胞與至少一種化合物接觸之步驟係指組合、混合，或以 熟習此項技術者熟悉之-些其他接觸方式，其允許該化合 物與該細胞相互作用’以致該化合物對CFTR活性之任何 影響均可根據本文料且在此項技術_通f實踐之方法來 量測。應瞭解，本文所述之用於抑制由cftr進行之離子 輸送之方法係在足以允許CFTR與化合物相互作用之條件 I進行一段足以允許CFTR與化合物相互作用之時間。特 定檢定之條件包括溫度、緩衝液（包括鹽、陽離子、培養 基）及其他保持細胞及化合物之完整性之組份，其為熟習 此項技術者所熟悉且/或可易於測定。熟習此項技術者亦 易於瞭解當進行本文所述之活體外方法時可設計且包括適 當對照物。 表徵化合物共軛物（諸如測定達成治療益處之有效濃度） 之方法可使用本文所述且熟習此項技術者通常實踐之技術 及知序來進行。例示性方法包括（但不限於）CFTR抑制之基 於榮光細胞之檢定（例如參看Galietta等人， 281:C1734~C1742 (2001))、頂端氣離子短路電流量測及膜 片甜刀析（例如參看Muanprasat等人，·/· Gew. P/zjho/· 124:125-37 (2004) ; Ma等人，J. C7in. Jnve以· 110··1651-58 (2002) ’ 例如亦參看 Carmeliet，Fer/z.尺· Jcad. GeweeAi/· 139562.doc •89- 200946129
Belg. 55:5-26(1993) ； Hamill^ A 5 Pflugers Arch. 391:85-100 (1981))。亦可在動物模型（例如霍亂之封閉腸袢模 型、霍亂之乳小鼠模型及胃腸運輸之活體内成像）中分析 二價醯肼-聚合物共輛化合物，包括二價醯肼-PEG共輛化 合物（例如參看 Takeda 等人，19:752-54 (1978);例如亦參看 Spira等人，/«/eci. 32:739-747 (1981)) 〇 如本文所述，具有式I或式II之結構的二價醯肼-聚合物 共軛化合物及具有本文所述之式1(a)或子式1(b)、I(c)-I(j) 或者式 11(a)或子式 11(b)、11(c)、11(d)、11(e)及 11(f)及 II((C)-(F))之結構的二價醯肼-PEG共輛化合物能夠抑制細 胞中之CFTR活性（亦即，以統計學顯著或生物學顯著之方 式抑制、減小、降低、阻斷CFTR通道或孔中氣離子之輸 送），且可用於治療由CFTR活性異常增大引起或與CFTR活 性異常增大有關之疾病、病症及病狀。因此，本文提供抑 制由CFTR進行之離子輸送之方法，其包含使在細胞外膜 中包含CFTR之細胞（例如胃腸細胞）（亦即，表現CFTR且在 細胞膜中具有由CFTR形成之通道或孔的細胞）與本文所述 之任一種或多種共輛化合物在足以使CFTR與該共軛化合 物相互作用之條件下接觸一段足以使CFTR與該共耗化合 物相互作用之時間。 在某些實施例中，在活體外檢定中接觸細胞，且該細胞 可自個體或自生物試樣獲得。生物試樣可為血液試樣（可 由其製備血清或血漿且分離細胞）、活組織檢查樣品、體 139562.doc -90- 200946129 液（例如，肺灌洗液（hmg lavage)、腹水、黏膜洗滌液、滑 液)、骨髓、，淋巴結、組織外植體、器官培養物或來自個 體或生物來源之任何其他組織或細胞製劑。試樣可進—+ 指形態完整性或物理狀態已例如經解剖、解離、溶解、分 離、均質化、生物化學或化學提取、粉碎、凍乾、超音1 處理或任何用於處理源自個體或生物來源之試樣的其他方 式破壞的組織或細胞製劑。個體或生物來源可為人類或非 φ 人類動物、原代細胞培養物（例如，免疫細胞、感染病毒 之細胞）’或培養適應之細胞株，包括（但不限於）可含有染 色體整合或游離型重組核酸序列之經遺傳工程改造之細胞 株、永生化或可永生化細胞株、體細胞雜交細胞株、分化 或可分化細胞株、經轉型細胞株及其類似物。 如本文所述’包括二價醯肼_PEG化合物之二價醯肼_聚 合物共軛化合物為CFTR抑制劑且適用於治療CFTR介導或 CFTR相關病狀，亦即由CFTR活性（諸如離子輸送中之 ❿ CFTR活性）引起之任何病狀、病症或疾病。此等病狀、病 症及疾病可適於藉由抑制CFTR活性（例如抑制CFTR離子輸 送）治療。 在一實施例中，將具有式I或式II之結構的二價醯肼_聚 ’ 合物共輛化合物及具有式1(a)或子式1(b)、I(c)-I(j)或者式 Π(α)或子式 n(b)、II(C)、11(d)、11(e)及 11(f)及 II((C)-(F))之 結構及本文所述之特定結構的二價醯肼-PEG共軛化合物用 於治療與腸分泌異常增加、尤其急性腸分泌異常增加相關 之病狀’包括分泌性腹瀉。可適於使用二價醯肼共軛化合 139562.doc 91 · 200946129 物治療的腹瀉可由曝露於各種病原體或藥劑引起，該等病 原體或藥劑包括（不限於）霍亂菌毒素（霍亂弧菌）、大腸桿 菌（尤其產腸毒素者（ETEC))、志贺桿菌、沙門氏菌、曲桿 菌、難養芽胞梭菌、寄生物（例如，梨形鞭毛蟲 、溶組織内阿米巴、隱胞子蟲病、環孢子蟲）或 腹瀉病毒（例如，輪狀病毒）。由CFTR介導之腸分泌增加引 起的分泌性腹瀉亦可為與食物中毒或曝露於包括腸毒素 (諸如霍亂毒素、大腸桿菌毒素、沙門氏菌毒素、曲桿菌 毒素或志贺桿菌毒素）之毒素相關的病症或後遺症。 其他可藉由投與本文所述之任一種或多種二價醯肼PEG 共軛物來治療之分泌性腹瀉包括與AIDS相關或作為Ams 之後遺症之腹瀉；作為與抗八108藥物（諸如蛋白酶抑制劑） 之作用有關之病狀的腹瀉；作為病狀或與投與化學治療化 合物有關之腹瀉；發炎性胃腸病症’諸如潰瘍性結腸炎、 發炎性腸病（IBD)、克羅恩氏病、憩室病，及其類似疾 病。腸發炎調節腸内鹽輸送之三個主要介體的表現且可藉 由增大跨上皮cr分泌且藉由抑制上皮NaC1吸收來引起潰 癌性結腸炎之腹腐（例如參看Lohi等人，
Lz.verP/z少283:G567-75 (2002)) ° 因此，具有式I或式II之結構的二價醯肼-聚合物共軛化 合物及具有式1(a)或子式1(b)、I(c)-I(j)或者式n(a)或子式 11(b)、II(c)、11(d)、II⑷及 11(f)及 II((C)_(F))之結構及本文 所述之特定結構的二價醯肼-PEG共軛化合物中之一或多者 可以有效抑制CFTR離子輸送且因此降低腸液分泌之量投 139562.doc -92· 200946129 與。在此等實施例中，一般對胃腸道之黏膜表面（例如藉 由腸内途徑，例如經口、腸内、經直腸及其類似途徑）或 對口腔或鼻腔之黏膜表面（例如經鼻内、頰内、舌下及其 類似方式）投與該專共扼化合物中之至少一者或多者。 本文提供治療與由囊腫性纖維化跨膜傳導調節劑（cftr) 進行之離子輸送異常增大相關之疾病或病症的方法，其中 ， 該等方法包含向個體投與具有式I或式II之結構的二價醯 ❹ 肼·聚合物共軛化合物或具有式1(a)或子式1(b)、I(c)-I⑴或 者式 11(a)或子式 11(b)、n(c)、n(d)、π⑷及叫^及 n((c)_ (F))之結構及本文所述之特定結構的二價醯肼_pEG共軛化 合物中之任一者（或多者）’其中由（：1?丁11進行之離子輸送 (尤其氣離子輸送）受到抑制。需要此治療之個體包括人類 及非人類動物。可治療之非人類動物包括哺乳動物，例如 非人類靈長類動物（例如，猴、黑猩猩、大猩猩及其類似 動物）、齧齒動物（例如，大鼠、小鼠、沙鼠、倉鼠、雪 Φ 貂、兔）、兔類動物、豬（例如，豬、小型豬）、馬、犬科、 貓科動物、牛及其他家畜、農畜及動物園動物。 醫藥组合物 本文亦提供醫藥組合物，其包含二價醯肼_聚合物共軛 化口物’包括具有式〗或办）或子式吵）、Μ)%)或者式Η 或式n(a)或子式II(b)、π⑷、π⑷、π⑷及π⑴及ιι((〇_ (F))中之任一者之結構或本文所述之特定結構的二價醯肼_ PEG共軛化合物。可將化合物共軛物調配於用於治療（包括 預防性治療）表現為腸液分泌增加之疾病或病症（諸如分泌 139562.doc -93· 200946129 性腹瀉）之醫藥組合物中。 在醫藥劑型中，本文所述之二價醯肼_聚合物共軛化合 物（例如，二價醯肼-PEG共軛化合物，其包括二價丙二醯 肼PEG共軛化合物及二價甘胺酸醯肼pEG共軛化合物）中 之任一者或多者可以諸如鹽之醫藥學上可接受之衍生物的 形式投與，或其亦可單獨使用或與其他醫藥學活性化合物 適當締合以及組合使用。纟文所述之方法及賦形劑僅為例 示性的且決不作為限制。 在特別關注之一實施例中，可將二價醯肼_聚合物共軛 化合物（例如，二價醯肼-PEG共軛化合物，其包括二價丙 二醯肼-PEG共軛化合物及二價甘胺酸醯肼ρΕ(}共軛化合 物）中之任者或多者傳遞至個體之胃腸道中以提供減少 之體液分泌。用於此實施例之合適調配物包括提供向胃腸 表面、尤其腸道表面之化合物傳遞之任何調配物。 一般可使用實驗模型及/或臨床試驗來確定最佳劑量。 最佳劑量可視個體之身體質量、體量或血容量而定。一般 而&，本文所述之共軛化合物（諸如本文所述之二價醯肼_ PEG共軛化合物）之量係包括在約〇〇1叫至約1〇〇〇叫宿 主體重之劑量範圍内。使用足以提供有效療法之最小劑量 通常較佳。一般可使用適於所治療或預防之病狀的檢定監 測個體之療效，該等檢定將為一般熟習此項技術者所熟悉 且在本文中經描述。 可根據熟習醫學技術者瞭解之參數來確定用於治療與異 常CFTR功能相關之疾病或病症的組合物之劑量，該疾病 139562.doc • 94· 200946129 或病症包括（但不限於）腸液分泌、分泌性腹瀉（諸如毒素誘 發之腹i寫，或與腸内病原、體感染相關或為腸内病原體感染 之後遺症的分泌性腹瀉）、旅行者腹瀉、潰瘍性結腸炎、 大腸急躁症（IBS)、AIDS、化學療法及本文所述之其他疾 病或病狀。因此，適當劑量可視個體之病狀（亦即疾病階 羧）、一般健康狀態以及年齡、性別及體重以及熟習醫學 技術者所考慮之其他因素而定。
可以如由熟習醫學技術者確定之適於待治療之疾病或病 症的方式投與醫藥組合物。投與之適當劑量以及合適持續 時間及頻率將由諸如以下因素決定：患者之病狀、患者疾 病之類型及嚴重性、活性成份之特定形式及投藥方法。一 般而言，適當劑量（或有效劑量）及治療方案係以足以提供 治療及/或預防益處(例如’改良之臨床結果，諸如較頻繁 之完全或部分緩解，或較長的無疾病及/或總存活期，或 症狀嚴重ft之減輕）之！提供组合物。可進行脫水及/或電 解質不平衡程度之臨戍 ^床汗估以測定共軛化合物之有效程度 且無論劑量抑或其他投藥參數（諸如投與頻率或投與途徑） 均應作調節.。 術語「治療」係指治疼 摩〖生 療及預防性（prophylactic或 preventative)措施，兑中 一 /、T目的在於預防或者減緩或延緩（減 輕）病症之非所需生理聲辦儿丄 竿逆化或此病症之擴展或嚴重性。 如在本文中所討論，古 有矛j或所需臨床結果包括（但不限於） 可偵測或不可偵測的症肤 狀减輕、疾病程度減小、疾病狀態 穩定（亦即不惡化）、疾 '柄進展延遲或減緩、疾病狀態改善 139562.doc -95- 200946129 «輕，及緩解（部分或總體）。「治療」亦可意謂使存 2與個體不接收治療時之預期存活期相比時有所延長。需 :叙：體包括已患有病況或病症之個體，以及傾向於 ^該=況或病症或者處於發展該錢或魅之風險中的個 及欲預防該病況或病症之個體。 液醫==無菌水性或非水性溶液、懸浮液或乳 匕3 "里學上可接受之賦形劑(醫藥學上可接 受或合適之賦形劑或載劑）（亦即，不干擾活性成份活性之 ❹ ❹ 开無ΐ物此等組合物可呈固體、液體或氣體（氣霧劑）之 可將本文所述之組合物調配為凌乾產物，或 可使'在此項技術中已知之技術將化合物囊封於脂質體 内。醫藥組合物亦可含有可在生物學上具活性或無活性之 其他組份。此等組份包括（但不限於）緩衝液（例如，中性緩 衝生理鹽水或磷酸鹽緩衝之生理鹽水）、碳水化合物（例 如葡萄糖、甘露糖、薦糖或葡聚糖）、甘露糖醇、蛋白 質、多肽或胺基酸（諸如甘胺酸）、抗氧化劑、螯合劑（諸如 EDTA)或麵胱甘肽、穩定劑、染料、調味劑及懸浮劑及/或 防腐劑。 -般熟習此項技術者已知之用於醫藥組合物中之任何合 適的賦形劑或載劑均可用於本文所述之組合物中。用於治 療性用途之賦形劑為熟知的且描述於（例如）細咖霞Z Science and Practice of Pharmacy (Gennaro ^ ^21^Mack pub· Co，’ East〇n，PA(2〇〇5)^。一般而言基於投藥模式 來選擇賦形劑類型。可針對任何適當之投藥方式調配醫藥 139562.doc •96- 200946129 ，、·“物，該技樂方式包括(例如)經局部、經 内、經直腸、經***、丄鼻勒 與，包括皮下、靜脈内/下，或非經腸投 肌肉内、胸骨内、海綿體内 (mtracavernous)、耳洁由 、内（intrameatal)或尿道内
❷ 注。對於隸腸投“言，載龍佳包含水、生理鹽t 醇、脂肪、钱緩衝劑。對於經口投與而t，可採用上述 賦形劑或固體賦形劑或載劑中之任一者，諸如甘露糖醇、 乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精納、滑石、纖維素、高嶺 土、甘油'殿粉糊精、褐藻酸納、叛甲基纖維素、乙基纖 維素、葡萄糖、蔗糖及/或碳酸鎂。 醫藥組合物（例如，用於經口投與或注射傳遞）可呈液體 之形式。液體醫藥組合物可包括(例如)以下各物中之一或 多者：無菌稀釋劑，諸如注射用水、生理鹽水溶液(較佳 為生理^水）林葛爾氏溶液（Ringer's solution)、等張氣化 鈉、可充當溶劑或懸浮介質之不揮發性油，聚乙二醇、甘 油、丙二醇或其他溶劑；抗菌劑；抗氧化劑；螯合劑；緩 衝劑，及用於調節張力之試劑，諸如氣化鈉或右旋糖。可 將非經腸製劑密封於由玻璃或塑膠製成之安瓿、拋棄式注 射器或多劑量小瓶中。較佳使用生理鹽水，且可注射醫藥 組合物較佳為無菌的。 可調配包含具有式I或式II之結構的二價醯肼-聚合物共 軛化合物及具有式1(a)或子式1(b)、I(c)-I(j)或者式11(3)或 子式 11(b)、11(c)、11(d)、11(e)及 11(f)及 n((c)-(F))之結構及 如本文所述之特定結構的二價醯肼-PEG共軛化合物中之任 139562.doc -97- 200946129 -者的組合物以用於持續或緩慢釋放。此等組合物一般可 使用熟知技術來製備且藉由（例如）經口、經直腸或皮下植 入或藉由在所需目標部位植入來投與。持續釋放調配物可 含有分散於載劑基質中且/或含於由速率控制膜包圍之儲 -^内的八概化合物。用於此等調配物中之賦形劑為生物 的且亦可為可生物降解的；調配物較佳提供相對恆 定之活性組份釋放量。持續釋放型調配物中所含之活性丘 輕化合物之量視植人部位、釋放之速率及預期持續時間， 及待治療或預防之病狀的性質而定。 鳴 對於口服調配物而言，本文所述之共耗化合物可單獨使 n與製得_'散劑'顆粒劑或膠囊之適當添加劑組合 使用，例如與習知添加劑組合，諸如乳糖、甘露糖醇、玉 米澱粉或馬鈴薯澱粉；與黏合劑組合，諸如澱粉、明膠、 天然糖（諸如葡萄糖或β_乳糖）、玉米甜味劑、天然及合成 膠（諸如***膠、黃f或褐藻酸納）、竣甲基纖維素、聚 ^二醇、壤、結晶纖維素、纖維素衍生物及***膠；與 崩解劑、、且〇，諸如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉或羧甲基纖維素 0 ^、甲基纖維素' 4脂、膨潤土或三仙膠；與潤滑劑组 合’諸如滑石、油酸鈉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉' 笨甲酸 鈉、乙酸鈉或氣化納：且必要時與稀釋劑、緩衝劑、濕潤 劑、防腐劑、著色劑及調味劑組合。可將共輛化合物與緩 衝劑及/或腸溶衣一起調配以提供對化合物之保護使其不 受胃環境之低pH值的料。可將共祕合物與調味劑一起 調配於（例如）液體、固體或半固體調配物中且/或與腸溶衣 139562.doc •98· 200946129 一起調配以用於經口傳遞β
口服調配物可以明膠膠囊之形式提供，其可含有活性化 合物共軛物，連同粉末狀載劑，諸如乳糖、澱粉、纖維素 衍生物硬月曰酸鎮、硬脂酸及其類似物。類似載劑及稀釋 劑可用以製造Μ製㈣卜可將鍵劑及膠囊製造為持續釋放 產物以提供在-段時間内活性成份之連續釋放。壓製旋劑 :經糖衣包覆或薄膜包覆以掩蓋任何令人不快之味道且保 邊錠劑免受大氣影響，或經腸溶衣包覆以使其在胃腸道中 選擇性崩解。用於經口投與之液體劑型可含有著色劑及/ 或調味劑以增加個體對化合物之接受性。 可藉由與各種基質（諸如乳化基質或水溶性基質）混合來 將本文所述之二價醯肼聚合物共輕化合物製成检劑。本文 所述之共減合物可經由栓劑經直腸投與。栓劑可包括諸 :可可脂、卡波蠟(carbowax)及聚乙二醇之媒劑，其在體 溫下熔融’但在室溫下固化。 本文所述之共軛化合物可用於待經由吸入投與之氣霧劑 調配物中。可將該等化合物調配至加壓可接受之推進劑 (諸如一氯一氟甲烧、丙⑥、氮及其類似物)中。 本文所述之：㈣肼共減合物巾之任—者或多者 部投與(例如藉由經皮投與)。局部調配物可呈經皮貼片、 軟膏、糊劑、洗劑、乳膏、凝夥劑及其類似物之形 部調配物可包括穿透劑、增稠劑、稀釋劑、乳化劑、分散 值诚姓 田調配共軛化合物用於經皮 傳柄，耗合物可與穿透增強劑—起調配或經調配以與 I39562.doc •99- 200946129 穿透增強劑一起使用。包括化學穿透增強劑及物理穿透增 強劑之穿透增強劑有助於透過皮膚傳遞化合物，且其亦可 互換地稱為「滲透增強劑」。物理穿透增強劑包括（例如）電 泳技術（諸如離子電滲法（iontophoresis))、使用超音（或 「聲音電滲法（phonophoresis)」）及其類似技術。化學穿透 增強劑為在投與化合物之前、之時或之後立即投與的藥 劑，其增大皮膚（尤其角質層）之滲透性以提供增強之透過 皮膚之藥物滲透性。其他化學及物理穿透增強劑係描述於 (例如）Transdermal Delivery of Drugs, A. F. Kydonieus (編） 1987 CRL Press ； Percutaneous Penetration Enhancers, Smith 等人編（CRC Press, 1995) ; Lenneruas 等人，《/· P/zarw. P/zarwaco/· 2002; 54(4):499-508 ; Karande等人， 户/zflrm· 2002; 19(5):655-60 ; Vaddi等人，*/· P/zarm. 5W· 2002 年 7 月；91(7):1639-51 ; Ventura 等人，J. Drwg· rargei 2001; 9(5):379-93 ; Shokri 等人，乂 2001; 228(1-2):99-107 ; Suzuki等人，仏〇/. 5W//. 2001; 24(6):698-700，Alberti 專人，乂 （Jo”化〇/ 及 2001; 71(3):319-27 ; Goldstein 等人，〜0/0尽少 2001; 57(2):301-5 ; Kiijavainen等人，五wr 丄 2000; 10(2):97-102 ;及 Tenjarla 等人，Int. J. Pharm. 1999; 192(2):147-58。 當將二價共耗化合物與化學穿透增強劑一起調配時，針 對與該化合物之相容性來選擇穿透增強劑，且其係以足以 便利透過個體之皮膚傳遞化合物（例如以將化合物傳遞至 139562.doc -100- 200946129 全身循環）之量存在。可將共軛化合物提供於藥物傳遞貼 片（例如經黏膜或經皮貼片）中且其可與穿透增強劑一起調 配。貼片一般包括不可滲透化合物及其他調配物組份之墊 層，與該墊層之一側接觸之基質，該基質提供化合物之持 續釋放（可為受控釋放）；及在該墊層之與基質同一侧上的 黏著層。可選擇如適於投藥途徑的基質且可為（例如）聚合 • 或水凝膠基質。 Α σ 〇 為用於本文所述之方法中，可將本文所述之：價酿肼化 合物中之一或多者與其他醫藥學活性劑或化合物一起調 配，該等醫藥學活性劑或化合物包括其他cftr抑制劑及 化合物或阻斷腸氣離子通道之藥劑及化合物。 提供具有單位劑量之本文所述之共軛化合物（通常為口 服或可注射劑量)的套組。在此等套組中，除含有該等單 位劑量之容器外’亦將存在描述該等藥物在治療所關注之 病理學病狀中的用途及伴隨錢之資訊包裝插頁。 參 纟另「實施例中，提供一種用於製備具有式ι或式π之結 構的上述二價醯肼·聚合物共耗化合物及具有式叫或子式 • 吵）、1⑷灿或者式H(a)或子式H(b)、II(c)、II⑷、„(e) 及11(f)及II((C)-(F))之結構及本文所述之特定結構的二價 - 酸肼-PEG共輛化合物中之任—者的製造方法。在_實施例 中，該製造方法包含該化合物之合成。可根據本文所述且 在此項技術中實踐之方法來進行一或多種本文所述之化合 物之口纟在另-製造方法中，該方法包含將至少一種本 文所揭示之化合物與醫藥學上合適之賦形劑-起調配(亦 139562.doc 200946129 即，組合、混合）。此等方法係在允許調配且/或保持化合 物及賦形劑各之所需狀態（亦即，例如液體或固體）的條件 下進行。製造方法可包含以下步驟中之一或多者··合成至 少一種化合物；將化合物與至少一種醫藥學上合適之賦形 劑一起調配以形成醫藥組合物；及在適當容器（亦即，適 於儲存及/或分布醫藥組合物之容器）中分配所調配之醫藥 組合物。 鑒於本揭示案，其他實施例及用途將為熟習此項技術者 顯而易見。以下實例僅作為說明各種實施例之目的提供且 不應視為以任何方式限制本發明。 實例 實例1 MALH-PEG共輛物之合成 化合物袼(1111-1>11^(2-萘基胺基-1(3,5-二溴-2,4_二羥苯 基）亞甲基〗醢肼Ιί〖4-12-(4-異硫氰基-2-磺酸笨基）乙烯基]-2-磺酸笨基]胺基]硫酮基γ基]醢肼丙二酸，二鈉鹽）之合 政··使二醯肼中間物4(參看上文反應流程l)(Sonawane等 人，（2006)，同上文）（5 mmol)與水合4,4’-二異硫氰基芪-2,2'-二績酸二納鹽（15 mmol)於DMF(5 ml)中之混合物回流 4 h。在冷卻之後，將反應混合物逐滴添加至EtOAc:EtOH (1:1)之經攪拌溶液中，過濾，以乙醇洗蘇，且藉由管柱層 析進一步純化，得到呈淺黃色固體狀之MalH-DIDS (43%) ° 在 CDC13 或 DMSO-d6中，使用 400 MHz Varian 光譜儀， 139562.doc -102- 200946129 參考CDC13或DMSO來獲得iH及13C NMR光譜。使用 WATERS LC/MS 系統（ALLIANCE HT 2790+ZQ, HPLC, WATERS 2690型，Milford，MA)來進行質譜分析。使用EM 矽膠（230-400目）來進行急驟層析，且薄層層析係在MERK 石夕膠 60 F254板（MERK，Darmstadt, Germany)上進行。
MalH-DIDS化合物具有以下特性：mp>300°C ; 4 NMR (DMSO-d6): δ 4.98，5.63 (d，1H，/=9.88, 8.51 Hz，COCH)， 6.33-6.51 (m, 1H, Ar-H), 6.71, 6.84 (m, 1H, Ar-H), 7.03-7.37 (m，4H, Ar-H及人卜>111)，7.42-7.65 〇,411，八卜11)，7.77- 7.92 (m, 3H, Ar-H), 7.98-8.11 (m, 1H), 8.93 (s, 1H), 9.13, 9.15，9.21(三個單峰，1H), 11.62, 11.70(兩個單峰，1H)， 11.98，12_00, 12.21 (s，1H)。在 8.93-12.21 之間之所有信號 及 4.98 、5.63 均為 D20 可交換的；MS(ES+)(w/z): (：36112561：2：^70984之[]\4-1]-計算值987.71，實驗值986.44。 藉由使相應雙胺基及單胺基PEG與5倍莫耳過量之MalH-DIDS在無水DMSO中在作為鹼催化劑之三乙胺存在下反應 來合成二價MalH-PEG-MalH及單價MalH-PEG共軛物。藉 由胺基官能化淨化劑移除未反應之MalH-DIDS，且藉由受 控沈澱以及凝膠過濾、透析、離子交換層析與製備型 HPLC之組合來純化PEG共軛物。至多20 kDa之雙胺基PEG 為市售的，得到至多10 nm之溶解長度（solution length)(例 如參看 Baird等人，价oc/zewzWr;;· 42:12739-12748 (2003))， 其略小於在潛在CFTR二聚體中CFTR孔之間距離的估計 值。為產生具有潛在地跨越CFTR二聚體中之抑制劑結合 139562.doc -103· 200946129 位點之較大溶解長度的較大共輕物，如圖1 (c)中所示，將 具有末端羥基之40 kDa及108 kDa之可用PEG轉化為甲磺酸 酯，接著使與疊氮化鈉反應且進行施陶丁格還原 (Staudinger reduction)(例如參看 Staudinger 及 Meyer, J. i/e/v. C/n.w. Jcia. 2:635-646 (1919);及 Pal 等人， Commwi 34:1317-1323 (2004))。 更詳言之，在室溫下將雙胺基或單胺基PEG(0.25 kDa、 1 kDa、2 kDa、3 kDa、6 kDa、10 kDa ' 20 kDa，購自 IGMA-ALDRICH, St· Louis, MO ; 40 kDa及 100 kDa係如下 所述合成）（各 20 mg於 0.5 ml DMSO中）、MalH-DIDS(5 莫耳 過量，Sonawane等人，2007)及三乙胺（5倍莫耳過量）緩慢 攪拌1小時。添加胺基官能化矽膠（10倍莫耳過量）且再攪拌 2小時。將反應混合物過濾，以1 ml DMSO洗滌淨化劑， 且在攪拌下將經合併之濾液逐滴添加至50 ml甲醇中。將 沈澱產物過濾且以甲醇洗滌兩次。藉由以NaCl梯度（0.5-1 M)溶離之陰離子交換層析（瓊脂糖（Sepharose)，GE)進一步 純化大小為6 kDa及6 kDa以下之PEG共輛物。將大小為10 kDa、20 kDa、40 kDa及 100 kDa之 PEG共軛物針對 PBS透 析隔夜。藉由凝膠過濾（SEPHADEX G25)純化此等較大 PEG共輛物。 雙胺基-PEG(40 kDa 及 100 kDa):在 0°C 下向 PEG(25 μηιοί，40 kDa 及 108 kDa，Sigma)及三乙胺（14 μΐ，100 μιηοΐ)於2-5 ml CH2C12中之混合物中逐滴添加甲烧石黃醯氣 (52 mmol)且在室溫下攪拌6小時。以碳酸氫鈉（50 mM，2 139562.doc -104- 200946129 ml)洗滌反應混合物且乾燥（Mgs〇4)有機相。蒸發有機相得 到40 kDa及100 kDa之l,w-二曱烷磺醯基聚氧化乙烯，將其 溶解於2 ml DMSO中且添加NaN3(13 mg，0.2 mmol)且在 5 0 C下擴:拌6小時。在冷卻之後，添加水（2〇 ml)且在二氯 甲烷中萃取PEG-疊氮化物且蒸發。使peg·疊氮化物（1〇 μιηοΐ)及二苯膦（8 mg ’ 30 μηιοί)於無水甲醇（3mL)中之混合 物回流1小時且在減壓下移除溶劑。將殘餘物溶解於二氯 曱烷（10 ml)中’過濾，且接著曝露於無水氣化氫氣體。過 濾沈澱之雙胺基PEG鹽酸鹽。將溶液在4°C下冷卻隔夜且 藉由利用羧甲基CM-葡聚糖凝膠C25，以10 mM Tris (pH 9.0)及2 L之0_1-2 M NaCl梯度溶離之陽離子交換層析進一 步純化沈澱之鹽酸鹽。 藉由HPLC/MS確定化合物純度以及不存在未反應之 MalH-DIDS ’且藉由4 NMR、質譜分析及UV/可見光譜測 定法來表徵PEG共軛物。在CDC13或DMSO-d6中，使用400 MHz Varian光譜儀，參考CDC13或DMSO來獲得4及13C NMR 光譜。在 WATERS LC/MS 系統（ALLIANCE HT 2790+ZQ，HPLC: Waters 2690型，Milford，ΜΑ)上進行質譜 分析。使用EM矽膠（230-400目）來進行急驟層析，且薄層 層析係在MERK矽膠60 F254板上進行。 圖 2(A)展示 MalH-PEG20kDa-MalH 之代表性1H NMR 光 譜，其展示PEG質子之主峰及在y刻度擴展後所見之相對 較小之芳族區域中之峰。對於其他MalH-PEG共輛物而 言，獲得類似NMR光譜。在圖2(B)及2(C)中提供單價共輛 139562.doc -105- 200946129 物 MalH-PEG750-OMe(亦稱為 MalH-PEG，0.75 kDa)及 MalH-PEG2kDa-OMe 以及二價共輊物 MalH_PEG3kDa-MalH 之質譜。單價共軛物在本文中亦稱為MalH-PEG，接著提 及特定共輛物之PEG的分子量（例如，MalH-PEG，0.75 kDa ;及MalH-PEG，2 kDa)。二價共軛物在本文中亦稱為 MalH-PEG-MalH，接著提及特定共軛物之PEG的分子量。 質譜確定預計分子量。較高分子量PEG共軛物具有相當大 之多分散性，具有CH2-CH2-0=44道爾頓/電荷之預期特徵 峰間距。藉由4 NMR確定雙胺基PEG，得到在2.90-3.10 ppm範圍中之CH2-NH2的多個峰，且13C NMR展示在約40 ppm下之C-NH2(而非對於C-OH之約60 ppm)。 Μα/丑-户五··產率 49% ; mp>30(TC ; 4 NMR (D20): δ 3.19-4.44 (s, 8H，PEG-CH2)，4.72, 5.22 (d，m，約 1H， COCH)，7.60-7.88 (m，Ar-H) ; MS(ES.)(w/z): C40H38Br2N8O11S4 之[M-2H]2·及[M-l]-計算值：546.43 及 1094.86，實驗值 545, 546, 547 [M-2H]2.，1091，1093, 1095 [M-Η]-。 ..產率 18% ; 1H NMR (D20): δ 2.85 (s, OCH3), 3.52 (s, PEG-CH2), 7.60-7.82 (m, Ar-H)； MS(ES+)(tw/z): C69H96Br2N8025S4 之[[M]2-+Na+]/2 計算值 896.3 1，實驗值 896 +/- 22, 44, 88, 176(圖 2B)。 五.* 產率 31% ; iH NMR (D20): δ 2.69 (s，0-CH3), 3.21 (s, PEG-CH2), 7.57-7.90 (m, Ar-H)； MS(ES + )(m/2): C121H200Br2N8O51S4 之[M-2H]2·計算值 1433.0，實驗值 143 2.8 +/- 22, 44, 88, 176(圖 2B)。 139562.doc •106· 200946129 Μβ/β-Ρ五.·產率 53% ; 4 NMR (D20): δ 2.64 (s，0-CH3), 3.50 (s，PEG-CH2)，7.38-7.91 (m, Ar-H);共軛 比 MalH:PEG 1:1.04 (UV/可見光）。
MalH-PEGlOkDa-OMe : A 隼62% .，!H NMR (D2〇)： δ 2.58 (s, 0-CH3), 3.49 (s, PEG-CH2), 7.55-8.07 (m, Ar-H)； • 共軛比MalH:PEG 1:1.08 (UV/可見光）。 - MalH-PEG20kDa-OMe : 1 率 39% .，NMR (D20)： δ 2.59 (s, 0-CH3), 3.48 (s, PEG-CH2), 7.40-7.96 (m, Ar-H)； 共軛比MalH:PEG 1:0.96 (UV/可見光）。 Μα/开-P五·.產率 29% ; !H NMR (D20): δ 3.21-3.60 (m, PEG-CH2), 3.62-3.71 (m, PEG-CH2), 7.27-7.82 (m, Ar-H) ; MS(ES+)〇/z): C78H70Br2N16O20S8 之[M-2H]2·及[[M-2H]2-3Na+]計算值：1062.82及1131.82，實驗 值 1062.94及 1130.88 ° Μα//ί-尸五..產率 44% ; 4 NMR (D20): δ φ 3.48 (s, PEG-CH2), 7.13-780 (m, Ar-H) ； MS(ES+)(m/z；: C224H362Br4N16093S8i[[M-4H]4-+Na+]/4計算值 1339.25，實 驗值1339 (圖2B)。 ' Μα/Ζί-尸.·產率 26% ; NMR (D20): δ * 3.51 (s，PEG-CH2)，7.22-8.14 (m, Ar-H);共軛比 MalH:PEG 2:1.11 (UV/可見光）。 Μα//ί-尸放Da-Ma/开 / 產率 23% ; NMR (D20): δ 3.46 (s，PEG-CH2), 7.05-8.21 (m, Ar-H);共軛比 MalH:PEG 2:0.92 (UV/可見光）。 139562.doc 107- 200946129
MaW-尸五/ 產率 55% ; !H NMR (D20): δ
3.53 (s，PEG-CH2)，7.14-7.91 (m，Ar-H);共軛比 MalH:PEG 2:1.07 (UV/可見光）。 ⑽Ζ)α-Μβ/// ··產率 27% ; 4 NMR (D20): δ 3.53 (s，PEG-CH2)，7.13-8.12 (m，Ar-H);共軛比 MalH:PEG 2:0.95 (UV/可見光）。 偷:產率 58% ; 4 NMR (D20): δ 3.60 (s，PEG-CH2)，7.07-7.89 (m，Ar-H);共軛比 MalH.PEG 2:1.08 (UV/可見光）。 //2TV-P五G扣ΑτΖ)α-Λ^/2 .. 26%產率；4 NMR (D20): δ 2.91 (m，-CH2-N)，3.27 (t，0-CH2-C-N)，3.52 (s，PEG-CH2)。 38%產率；1H NMR (D20): δ 2.90 (m, -CH2-N)，3.31 (t，0-CH2-C-N)，3.51 (s，PEG-CH2)。 實例2 藉由二價MALH-PEG共軛物改良CFTR抑制 CFJ7? #你之差於砻笼知龙之被定。如所述（例如參看 Galietta等人，《/· 281:C1734-C1742 (2001))’ 藉由 利用表現人類野生型CFTR及黃色螢光蛋白（YFP)職離子感 應器之經雙重轉染細胞的基於螢光細胞之檢定來測定 MalH-PEG共軛物對CFTR之抑制。如所述（例如參看1^&等 人，·/. C//«. /«veW. 110:1651-1658 (2002))，在 96孔黑壁板 上培養穩定表現野生型人類CFTR及YFP-H148Q之費雪大 鼠甲狀腺（Fisher rat thyroid，FRT)細胞。將96孔板中之細 胞洗滌三次，且接著藉由與含有ίο μΜ弗斯<林、20 μΜ 139562.doc -108- 200946129 芹菜素及100 μΜ IBMX之活性混合物一起培育15分鐘來活 化CFTR。在檢定碘離子流入之前5分鐘添加測試化合物， 其中使細胞曝露於100 mM之向内導向之硪離子梯度。記 錄在產生碘離子梯度之前2秒及在產生碘離子梯度之後12 秒時的YFP螢光。由碘離子梯度之後降低螢光之時程計算 蛾離子流入之初始速率。 在細胞外碘離子添加之後CFTR促進之碘離子流入引起 細胞質YFP螢光淬滅。圖3(A)展示分子大小為20 kDa之共 軛物的代表性原始螢光資料，其展示二價（左圖）比單價（右 圖）共輛物實質上更大之抑制效力。圖3(B)展示如由初始曲 線斜率測定之單價及二價MalH-PEG共軛物中每一者之 CFTR抑制百分比。圖3(C)概括由向單一位點抑制模型之 非線性回歸測定之IC5〇值及希爾係數。已發現，與單價 MalH-PEG相比，二價MalH-PEG-MalH具有顯著較低之IC50 值，具有較大希爾係數，從而為二價共軛物抑制CFTR的 協同機制提供證據，其中在不希望受理論限制的情況下， 二價共軛物中之兩個MalH部分與CFTR相互作用。 癍路C诸之#漱。進行短路電流量測以檢驗MalH-PEG 共軛物之頂端膜表面作用位點及相對效力，且測定CFTR 抑制之動力學。如所述（Sonowane等人，Gaiiroeniero/og少， ej：文），在具有1 cm2表面積之Snapwell過滤器（Corning-Costar)上培養FRT細胞（穩定表現人類野生型CFTR)直至電 阻 >1，000 Hem2。將過渡器安裝於 Easymount Chamber System (Physiologic Instruments，San Diego)中。對於頂端 139562.doc -109- 200946129 ΟΓ電流量測，基側半室（basolateral hemichamber)含有130 mM NaCl、2.7 mM KC1、1.5 mM KH2P〇4、1 mM CaCl2、 0.5 mM MgCl2、10 mM Na-HEPES、10 mM 葡萄糖（pH 7.3)。使基側膜經兩性黴素B(amphotericin B)(250 pg/ml) 滲透歷時30 min。在頂端溶液中，用葡糖酸鈉置換65 mM NaC卜且將CaCl2增至2 mM。以95% 02/5% C02使溶液鼓 泡且在37°C下保持。使用利用Ag/AgCl電極及1 M KC1壤脂 橋之 DVC-1000電壓甜（World Precision Instruments)來記錄 電流。 圖4(A)及圖4(B)分別展示二價及單價MalH-PEG抑制 CFTR介導之頂端膜氣離子電流之代表性短路電流資料。 將該等共軛物僅添加至浸浴孭端細胞表面之溶液中。抑制 為快速的且在較高共軛物濃度下為幾乎完全的。如圖4(C) 中所示，對於許多二價共軛物而言，CFTR氯離子電流係 在小於1 μΜ之ICso值下得到抑制，而單價共軛物之1(：5〇值 一般>10 μΜ’這表明在單價與二價共軛物之間IC5()值之差 異大於10倍。歸因於檢定條件之差異，諸如在螢光檢定中 頂端膜電位及稀釋效果之差異，使得自螢光檢定及短路電 流實驗中每一者獲得之碟切Ic50值不同。 實例3 藉由MALH-PEG共軛物抑制CFTR之機制 廣〆念分#。完成全細胞膜片钳分析以研究MalH-PEG 共軛物抑制CFTR之機制。進行實驗以比較分子大小為20 kDa之單價與二價共軛物，其中IC5Q值相差>2〇倍。在不存 139562.doc •110、 200946129 在抑制劑之情況下，且在分別接近0.6 μΜ及15 μΜ之IC50 值之二價及單價共軛物的濃度下量測全細胞CFTR氯離子 電流。 在室溫下，在穩定表現野生型CFTR之FRT細胞上進行膜 片鉗實驗。使用全細胞及外側向外組態。對於全細胞實 驗，移液管溶液含有（以mM為單位）：120 mM CsC卜10 mM TEA-CM、0.5 mM EGTA、1 mM MgCl2、440 mM 甘露 糖酵、10 mM Cs-HEPES及3 mM MgATP(pH 7.3)。對於外 側向外膜片，移液管溶液含有（以mM為單位）150 mM氣化 N-甲基-D-葡萄胺（NMDG-C1)、2 mM MgCl2、10 mM EGTA、10 mM Hepes、1 mM ATP(pH 7.3)。此移液管溶液 中補充有125 nM之蛋白激酶A之催化次單元。所有實驗中 之浸浴液均為（以mM為單位）：150 NaCl、1 CaCl2、1 MgCl2、10葡萄糖、10甘露糖醇、10 Na-Hepes(pH 7.4)。 在指定電壓下使用EPC-7膜片鉗放大器（List Medical)箝制 細胞膜。資料係在500 Hz(全細胞）或200 Hz(外側向外）下 過濾且在1000 Hz下使用INSTRUTECH ITC-16 AD/DA界面 及PULSE(HEKA)軟體來數位化。藉由細胞外灌注來施用 抑制劑。
圖5(A)及5(B)展示代表性迹線，且平均電流-電壓關係展 示於圖5(C)及圖5(D)中。兩種化合物均產生對CFTR電流之 電壓依賴性抑制’其中正電流受到較強烈地影響’從而在 抑制劑存在下產生内向整流行為（此與通道孔之閉塞一 致）。二價共軛物展示較為顯著之電壓依賴性。MalH-PEG 139562.doc •111- 200946129 共軛物對CFTR之抑制在抑制劑洗除之後為可逆的，且在 2-4分鐘内回復至基線電流。 在不同膜電位下之CFTR電流迹線揭示由MalH-PEG共軛 物進行之阻斷及接通之慢動力學。如圖5(E)中所示，當膜 電壓自0 mV之保持電位箝制至正或負電位時，CFTR電流 分別展示時間依賴性減小及增大。該動力學與單指數函數 擬合良好，其中時間常數係在100-200 ms範圍内，實質上 大於GlyH-101之時間常數（8-10 ms ;例如參看Muanprasat 等人，·/· 124:125-137 (2004))，但與 MalH-凝 集素共輥物之時間常數相當（例如參看Sonawane等人， Gastroenterology 132:1234-1244 (2007))。如圖 5(F)中所 示，時間常數展示極小之電壓依賴性，且在大多數電位 下，單價共軛物之時間常數明顯大於二價共軛物之時間常 數。作為MalH-PEG共軛物藉由孔閉塞機制來起作用之另 一證據，將細胞外C1-降至20 mM使MalH-PEG-MalH之阻斷 明顯減小（參看圖5(G))。 以伍德哈等式（Woodhull equation)(參看界〇〇(!111111，·/· Ρ/ζγίο/. 61:687-708 (1973))估計沿電場之 MalH 結合 位點之距離。假定單價及二價化合物之原子價（z)值均為-1，則相對於細胞外表面，在結合位點感應之膜電位（δ)的 計算分數分別為0.21及0.33。若二價化合物之ζ為-2 ’則δ 變為0.17。 進行外側向外膜片鉗量測以進一步研究MalH_PEG共輛· 物抑制CFTR之機制。為活化CFTR ’移液管（細胞内）溶液 139562.doc -112· 200946129 含有1 mM ATP及5 pg/ml蛋白激酶A催化次單兀。圖6(A)及 圖6(B)展示在60 mV下在不存在及存在二價及單價MalH_ PEG共軛物時獲得之單通道CFTR通道活性的代表性§己錄。 向細胞外側添加MalH-PEG共軛物使通道開放之持續時間 極大減少。來自多次實驗之資料概枯於圖6(C)及圖6(D) 中。MalH-PEG共軛物顯著減少平均開放時間及表觀開放 通道概率。單價MalH-PEG顯著減少卒均封閉時間’在不 希望受理論限制之情況下，此可能係因為短暫放電期關閉 (brief intraburst closure)次數增加，但更詳細之分析需要 不同實驗參數。亦觀察到單通道幅值⑴之顯著減小（約 10%)。此等結果支持MalH-PEG共軛物藉由外部孔閉塞機 制來抑制CFTR之結論。 實例4 二價MALH-PEG共軛物抑制霍亂毒素誘導之腸液分泌 邀液分泌之活鎪分知虑旗赉。在丁84結腸上皮細胞中在 未經滲透條件下且在不存在Cl_梯度之情況下研究二價共軛 物之抑制功效。在用胺氯吡脒抑制上皮鈉通道（EnaC)之 後，藉由弗斯可林活化CFTR，且接著將MalH-PEG-MalH 添加至浸浴頂端細胞表面之腔室中。圖7(A)展示在T84細 胞中 20 kDa MalH-PEG20kDa-MalH(左）及 40 kDa MalH-PEG20kDa-MalH(右）抑制弗斯可林刺激之短路電流，其中 IC5〇值為約1 μΜ。 黨鹿之者勞麇斧旗#。在霍亂之腸袢封閉小鼠模型中測 試二價MalH-PEG共軛物之抗分泌功效。閉袢模型使中段 139562.doc -113- 200946129 空腸袢中響應於霍亂毒素之體液累積量化。此為公認的且 技術簡單之量化模型，其中儘管不存在腸運輸，但體液分 泌及吸收機制係完整的（例如參看Oi等人，/Voc. Natl. Jcai Π 99:3042-3046 (2002))。 向中段空腸袢中注射鹽水或含有不同濃度測試化合物之 霍亂毒素，且在6小時時量測腸液分泌。在麻醉（2.5%阿佛 丁（avertin)，經腹膜内）之前，給與小鼠（CD1品系，28-34 g)5%蔗糖達24 h。使用加熱墊將體溫保持在36-3 8°C。在 腹部產生小切口之後，藉由缝合線分隔出三或四個封閉的 中段空腸袢（長度15-20 mm)。向空腸袢中注射100 μΐ PBS 或含有霍亂毒素（1 μ§)之PBS(不具有或具有測試化合物）。 以縫合線封閉腹部切口且使小鼠自麻醉中恢復。在6小時 時，將小鼠再次麻醉，移出腸袢，且量測腸袢長度及重量 以量化淨體液累積。藉由過度劑量之阿佛丁來處死小鼠。 所有方案均由動物研究之UCSF委員會（UCSF Committee on Animal Research)批准 ° 圖7(B)展示在注射PBS之腸袢中0.06 g/cm之腸袢重_量與 長度比（對應於100%抑制）及約0.22 g/cm之注射霍亂毒素之 腸袢的腸袢重量與長度比（對應於0%抑制）。分子大小為2 kDa、10 kDa、20 kDa及 40 kDa之二價 MalH-CFTR共軛物 以濃度依賴性方式抑制霍亂毒素誘導之體液分泌，其中 IC5Q值分別為每腸袢約100、10、10及100 pmol。單獨 PEG(右邊之條形）並不抑制腸液累積。 贫鹿之旄</、腐旗麥。亦在技術認可之霍亂之乳小鼠模型 139562.doc -114- 200946129 中，測試二價MalH-PEG共軛物之抗分泌功效，其中存活 率為腸液損失之端點（例如參看Sonawane等人，J. 20:130-132 (2006);及 Takeda等人，19:752-754 (1978))。使用 PE-10 管以 50 pL 體積（含有 50 mM Tris、 200 mM NaCl及 0.08%伊文思藍（Evans blue)(pH 7.5)，有或 無 MalH-PEG20kDa-MalH(5〇〇 pmol)或 MalH-PEG40kDa-MalH(500 pmol))中之10 pg霍亂毒素管飼相等數目之來自 同一母親之新生Balb-C小鼠，其各重2-3 g(3-4天大）。以單 獨缓衝液管飼「對照」小鼠。藉由胃/腸中伊文思藍之定 位來確定成功的管飼。如所述（例如參看Sonawane等人， CJaWroewiero/og少 132:1234-1244 (2007))，每小時評估小鼠 存活率。 圖7(C)概括乳小鼠存活率研究。接收單一 口服劑量之霍 亂毒素的3-4天大之Balb-C乳小鼠一般死於20小時時，且 「媒劑對照」（鹽水管飼）小鼠歷經超過24 h無死亡。當將 二價20 kDa或40 kDa MalH-PEG-MalH共軛物連同霍亂毒素 一起管飼時，接收霍亂毒素之小鼠的存活率顯著改良。 實例5 單價醯肼化合物之CFTR抑制活性 如所述（參看美國專利申請公開案第2005/023974號）測定 例示性單體醯肼化合物之CFTR抑制活性。在下表中呈現 如由針對表現CFTR之FRT細胞之短路電流分析所測定’顯 示在1 μΜ Ki與20 μΜ Ki(引起CFTR C1·傳導之50%抑制之 濃度）之間的CFTR抑制活性之例示性甘胺酸醯肼化合物。 139562.doc •115· 200946129 例示性丙二醯肼化合物之CFTR抑制活性係在1 μΜ Ki與1 0 μΜ Ki之間且由針對表現CFTR之FRT細胞之短路電流分析 測定（參看美國專利第7,414,037號；美國專利申請公開案 第 2005/023974號）。
N /經取代苯基
R 15
化合物 R7 R16 經取代苯基 R15 GlyH-101 2_萘基 Η 3,5-二-Br-2,4-二-OH-Ph H GlyH-102 2-萘基 Η 3,5-:-Br-4-OH-Ph H GlyH-103 2-蔡基 Η 3,5-二-Br-2-OH-4-OMe-Ph H GlyH-104 1-秦基 Η 3,5c-Br-2,4-:-OH-Ph H GlyH-105 1-萘基 Η 3,5-二-Br-4-OH-Ph H GlyH-106 2-蔡基 ch3 3,5-:-Br-2,4-:-OH-Ph H GlyH-107 2-蔡基 ch3 3,5-二-Br-4-OH-Ph H GlyH-108 2-萘基 Η 3,5-:-Br-2,4-:-OH-Ph ch3 GlyH-109 2_萘基 Η 3,5-二-Br-4-OH-Ph ch3 OxaH-llO 2-萘基 =0 3,5-二-Br-2,4-二-OH-Ph H OxaH-111 2-秦基 -0 3,5-二-Br-4-OH-Ph H OxaH-112 2-萘基 =0 3,5-:-Br-2,4-:-OHPh ch3 OxaH-113 2-萘基 -0 3,5-二-Br-4-OH-Ph ch3 GlyH-114 4-Cl-Ph Η 3,5-:-Br-4-OH-Ph H GlyH-115 4-Cl-Ph Η 3,5-二-Br-2,4-二-OH Ph H GlyH-116 4-Me-Ph Η 3,5-:-Br-2,4-:-OHPh H 本說明書中所參考且/或列於申請案資料表中之所有上 述美國專利、美國專利申請公開案、美國專利申請案、國 外專利、國外專利申請案及非專利公開案均以其全文引用 的方式併入本文中。 自前述内容，熟習此項技術者將瞭解，儘管已在本文中 出於達成說明之目的而描述特定實施例，但可作出各種修 139562.doc -116- 200946129 改。熟習此項技術者僅僅使用常規實驗即可認識到或能夠 確定本文所述之特定實施例的許多等效物。以下申請專利 範圍意欲涵蓋此等等效物。一般而言，在以下申請專利範 圍中’不應將所用術語視為將申請專利範圍限於本說明書 及申請專利範圍中所揭示之特定實施例，而應視為包括所 ' 有可能之實施例連同此等申請專利範圍所授權之等效物的 • 完整範疇。因此，申請專利範圍並不受揭示内容限制。 【圖式簡單說明】 圖1描繪分子量為40 kD之雙胺PEG及分子量為108 kDa 之雙胺PEG的例示性合成。自左向右：TsCl、TEA、 DCM ; NaN3、DMF、40°C ; PPh3、H20 ; 圖2A至圖2C描繪單價MalH-PEG及二價MalH-PEG-MalH 共軛物之NMR及質譜。圖2(A)描繪MalH_PEG20kDa-MalH(MalH-PEG_MalH，20 kDa)之1H-NMR譜，其展示分 別對應於PEG及MalH部分之脂族及芳族質子的峰。圖2(B) 參展示單價共軛物 MalH-PEG750Da-OMe(MalH-PEG，0.75 kDa)及 MalH-PEG2kDa-OMe(MalH-PEG，2 kDa)之負離子 電喷霧電離（ESI)質譜。圖2(C)描繪二價共軛物MalH-PEG3kDa-MalH(MalH-PEG-MalH，3 kDa)之負離子 ESI 質 譜，其展示具有多分散性之[Μ]3·及[Μ]4·離子的峰； 圖3Α至圖3C描繪藉由MalH-PEG及MalH-PEG-MalH共軛 物進行之CFTR抑制。圖3(A)展示藉由MalH-PEG20kDa-MalH(MalH-PEG-MalH’ 20 kDa)(左）及 MalH-PEG20kDa· OMe(MalH-PEG，20 kDa)(右）進行之CFTR抑制的初始螢光 139562.doc -117- 200946129 檢定資料。在共表現人類CFTR與黃色螢光蛋白YFP-H148Q/I152L之經穩定轉染之FRT細胞中，利用多種促效 劑（弗斯可林（forskolin)、IBMX及芹菜素（apigenin))最大程 度上刺激CFTR。在添加碘離子之後的螢光降低表示CFTR 鹵離子傳導。圖3(B)展示由螢光檢定測定之指定單價及二 價共輛物之濃度-抑制資料（誤差棒表示標準誤差（S.E.)， n=3-5)。將數據擬合至單一位點抑制模型。圖3(C)說明隨 分子大小變化之單價及二價共軛物之經擬合IC5〇值，其中 展示經計算之迴轉半徑（左）。圖3(C)(右）展示經擬合希爾 係數（Hill coefficient)。在各分子大小下，IC5〇值及希爾係 數顯著不同（ρ<〇·〇 1 ;學生t測試（Student's t test))。誤差棒 表示土S.E_ ; 圖4A至圖4C展示CFTR抑制之短路電流量測的結果。在 表現人類野生型CFTR之FRT細胞中，在氯離子梯度存在下 於滲透基底側膜之後量測CFTR介導之頂端膜氯離子電流 (參看實例2)。如圖4(A)中所示，藉由20 μΜ弗斯可林及指 定濃度之二價 MalH-PEG-MalH共軛物（3 kDa、10 kDa、20 kDa及40 kDa之PEG)將CFTR活化，且如圖4(B)中所示，將 單價 MalH-PEG 共軛物（2 kDa、10 kDa及 20 kDa之 PEG)添 加至頂端浸浴液（apical bathing solution)中。圖4(C)展示與 如所示之不同分子量PEG共軛之單價及二價MalH的經推導 IC50值（S.E.，n=5); 圖5A至圖5G說明藉由20 kDa MalH-PEG共軛物進行之 CFTR抑制的電生理學分析。圖5(A)及圖5(B)展示表現 139562.doc -118- 200946129 CFTR之FRT細胞之代表性全細胞膜電流。各圖展示在6〇〇 ms持續時間内在以20 mV階躍之不同膜電位（_1〇〇 mV至 + 1000 mV)下誘導之疊加膜電流。各脈衝之後為6〇〇 ms2_ 100 mV階躍。脈衝間隔為4 s。量測在應用MalH_PEG共軛 物（0.6 μΜ之 MalH-PEG-MalH ; 15 μΜ之 MalH-PEG)之前（上 圖）、期間（中圖）及之後（下圖）的電流。在所有量測中均存 在弗斯可林（5 μΜ)。圖5(C)及圖5(D)展示由全細胞實驗得 到之電流-電壓關係，其係如5(A)及圖5(B)中量測。將電流 幅值報導為在脈衝結束時（5 5 0-600 ms)的平均值，歸一化 成細胞電容。各點為平均值。誤差棒表示土S.E.(4-5個實 驗）。圖5(E)描繪在指定膜電壓下引發之電流弛豫的動力 學。展示單指數回歸。圖5(F)展示藉由電流弛豫之單指數 回歸在指定膜電壓（Vm)下量測之阻斷（bi〇ck)及接通 (unblock)的時間常數。實心圓圈表示單價MalH-PEG ;空 心圓圈表示二價MalH-PEG-MalH。誤差棒表示:tS.E.(4-5個 實驗；*p<0.05)。MalH-PEG-MalH 之濃度為 0·6 μΜ 且 MalH-PEG之濃度為15 μΜ »圖5G說明細胞外C1·濃度對 MalH-PEG-MalH阻斷之影響。在60 mV下，在154 mM或20 mM細胞外Cl_存在下量測CFTR電流之抑制。符號為三至五 個不同實驗之平均值。誤差棒表示土S.E.(*p<0.05); 圖6 A至圖6D描繪MalH-PEG共輛物抑制CFTR之外侧向外 膜片钳（outside-out patch-clamp)記錄。圖 6(A)及圖 6(B)說 明在60 mV下之代表性迹線，其分別展示在不存在及存在2 μΜ二價 20 kDa MalH-PEG-MalH及 1 5 μΜ單價 20 kDa MalH- 139562.doc -119- 200946129 PEG共軛物時之CFTR單通道活性。移液管（細胞内）溶液含 有1 mM ATP及5 pg/ml蛋白激酶A催化次單元。通道開放係 展示為自封閉通道水準（最低電流）（由在迹線右側之短線指 示）向上偏轉。圖6(C)及圖6(D)分別概括二價及單價丙二醯 肼-PEG 20 kDa共軛物之單通道分析的結果。誤差棒表示 一個 S.E.(4個實驗，*，p<0.05 ; **，p<0.01);及 圖7A至圖7C展示在活體外及活體内模型中二價MalH-PEG共軛物之止瀉功效。圖7(A)說明在人類腸T84細胞（未 經滲透）中 MalH-PEG20kDa-MalH(MalH-PEG-MalH，20 kDa)及 MalH-PEG40kDa-MalH(MalH-PEG-MalH，40 kDa) 對CFTR刺激之短路電流之抑制。在弗斯可林之前添加胺 氣°比脒（amiloride)。資料代表三組實驗。當指示時，添加 弗斯可林（forsk)(20 μΜ)以活化CFTR。基線電流為3-7 μΑ。圖7(B)展示小鼠之封閉中段空腸袢中在6 h時之腸液 累積，其係藉由腸袢之重量與長度比來量化（誤差棒表示 一個S.E.，每個條件研究6-8個腸袢，*P<0.05，ANOVA)。 圖7(C)說明在管飼霍亂菌毒素之後，在不利用與利用 MalH-PEG20kDa-MalH(500 pmol，左）及 MalH-PEG40kDa-MalH(500 pmol，右）的情況下乳小鼠（每組32隻小鼠）存活 率之改良。「媒劑對照」小鼠係經同樣處理但並不接收霍 亂菌毒素或抑制劑。 139562.doc -120-

Claims (1)

  1. 200946129 七、申請專利範圍： 1. ' —種具有以下結構I之化合物：
    ❹ ❹ 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構體， 其中： R1與R1’相同或不同，獨立地為視情況經取代之苯基、 視情況經取代之雜芳基、視情況經取代之嗜啉基、視情 況經取代之蒽基或視情況經取代之英其； R2、R2.、〜、r、r4，、r5:rV、rir 或不同，獨立地為氫、經° 氬基烷基、Cw烷氧基、羧 基、函基、硝基、氰基、_S〇3H、评〇)师2、 雜芳基； R、R、R14及R"各相同或不同，獨立地為 烷基； X及X'各為相同或不同之連接部分； I及J各為相同或不同之間隔部分； A為聚合物次單元；及 «為在0與2,500之間的整數。 其中A為-Civo-CH2·且該化合物 2·如请求項1之化合物， 具有以下結構1(a): 139562.doc 200946129 3. 4.
    Ka) 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異 其中： 構體， R,與R,_相同或不同’獨立地為視情況經取代之苯某、 視情況經取代之料m驗取狀料基、ς情 況經取代之蒽基或視情況經取代之萘基； R2、R2’、R3、R3、及4 ϋ4 、R 、R、r 、R6&r6’相同或 不同，獨立地為氫、羥篡、Γ 叛基、C^8烷基、（V8烷氧基、羧 基、鹵基、硝基、氮甚、Qn 亂基 s〇3H、_s(=〇)2nh2、芳基及
    雜芳基； R13、R13 基； 、H14及或不同，獨立地為氯 X及X'各為相同或不同之連接部分； J及J'各為相同或不同之間隔部分；及 «為在0與2,500之間的整數。 如請求項1或2之化合物，其中Rl3、Rl3,、r14arM，相同 或不同，獨立地為氫或甲基。 如請求項1或2之化合物， 地為經經基、C1 _8烧基、 其中R1與R1'相同或不同，獨立
    139562.doc -2- 200946129 5. 基、芳氧基及ή基之一或多者取代之苯基。 如請求項1或2之化合物，其中R1與R1’相同或不同，獨立 地為1-萘基或2-萘基，視情況經鹵基、羥基、-SH、-S03H 、Cw烷基及Cm烷氧基之一或多者取代；芳氧基；單鹵 苯基；二鹵苯基；單烷基苯基；2-蒽基；或6-喹啉基。 6. 如請求項5之化合物，其中R1與R1'相同或不同，獨立地 為早（¾基）秦基；二（鹵基）蔡基；三（鹵基）蔡基；单（經 ❹ 7. 基）萘基；二（羥基）萘基；三（羥基）萘基；單（烷氧基）萘 基；二（烷氧基）萘基；三（烷氧基）萘基；單（芳氧基）萘 基；二（芳氧基）萘基；單（烷基）萘基；二（烷基）萘基；三 (烷基）萘基；單（羥基）-萘-磺酸；單（羥基）-萘-二磺酸； 單（鹵基）-單（羥基）萘基；二（處基）-單（羥基）萘基；單（鹵 基）-二（羥基）萘基；二（i基）-二（羥基）萘基；單（烷基）-單 (烷氧基）-萘基；或單（烷基）-二（烷氧基）-萘基。 如請求項4之化合物，其中R1與R1'相同或不同，獨立地 φ • 為單（鹵基）苯基；二（鹵基）苯基；三（鹵基）苯基；2-鹵苯 基；4-i苯基；2-4-_苯基；單（羥基）苯基；二（羥基）苯 基；三（羥基）苯基；單（烷氧基）苯基；二（烷氧基）苯基； 三（烷氧基）苯基；單（芳氧基）苯基；二（芳氧基）苯基；單 (烷基）苯基；二（烷基）苯基；三（烷基）苯基；單（經基）-苯 基-磺酸；單（羥基）-苯基-二磺酸；單（鹵基）-單（羥基）苯 基；二（鹵基）-單（羥基）苯基；單（鹵基）-二（羥基）苯基； 二（鹵基）-二（羥基）苯基；單（烷基）-單（烷氧基）-苯基；或 單（烷基）-二（烷氧基）-苯基。 139562.doc 200946129 8. 9. 10. 11. 12. 13. 如”fl求項5之化合物，其中Ri與Ri相同或不同，獨立地 為2_蔡基；2-氯苯基；4_氯苯基；2-4-二氣苯基；4_曱基 本基，2-¾、基或6 -啥琳基。 如請求項1或2之化合物，其中R2、R2.、R3、R3,、R4、 A 1 R ' R5、R5'、R6及R6'相同或不同，獨立地為氫、經 基、_基、Cm烷基、Cm烷氧基或羧基。 如請求項9之化合物，其中R2、R3、R4、R5&R6各相同 或不同且經獨立選擇，與R2、R3、R4、…及尺6連接之苯 基、、Ί 、二或三個鹵基；一或兩個缓基；一、二或三個 經基；一或兩個鹵基及一、二或三個羥基；一或兩個齒 基 或兩個經基及一個Cl ·8炫氧基；一或兩個鹵基、 一個經基及一或兩個cN8烷氧基；或一個鹵基、一或兩 個經基及一或兩個C1_8烷氧基取代。 如請求項9之化合物，其中R2’、R3'、R4'、R5’及R6,各相同 或不同且經獨立選擇，與R2’、R3,、R4’、R6·連接之 苯基經―、二或三個鹵基；一或兩個羧基；一、二或三 個經基；一或兩個鹵基及一、二或三個經基；一或兩個 齒基、一或兩個羥基及一個Cw烷氧基；一或兩個鹵 基、—個羥基及一或兩個cN8烷氧基；或一個鹵基、一 戈兩個每基及一或兩個Ci-8烧氧基取代。 如請求項10之化合物，其中鹵基為溴。 如請求項10之化合物，其中R2、R3、R4、R5及R6相同或 不同且經獨立選擇，與R2、R3、R4、R5及R6連接之苯基 經以下取代：二（羥基）；單（鹵基）-單（羥基）；單（鹵基）- 139562.doc -4- 200946129 二（經基）；單（_基）_三（經基），·二（_基）_單（經基）；二 (齒基）-二（羥基）；二（鹵基）_三（羥基單（_基）_單（經 基）-單（烧氧基）；單（鹵基）-二（羥基）_單（烧氧基）；單（函 基）-單（羥基）-二（烷氧基）；單（函基）_二（羥基）_二（烷氧 基）；二（函基）-單（羥基）-單（烷氧基）；二（函基）_二（經 基）-單（燒氧基）；或二（鹵基）-單（羥基）_二（烧氧基）。 14.如請求項^之化合物，其中R2’、r3’、r4.、R5jR6.相同 或不同且經獨立選擇，與R2,、R3,、R4'、R5^R6,連接之 苯基經以下取代：二（羥基）；單（函基）_單（羥基）；單（鹵 基）_二（經基）；單（鹵基）-三（經基）；二（鹵基）-單（經基）； 二（豳基）-二（羥基）；二（_基）·三（羥基）；單（鹵基）·單（羥 基）·單（烷氧基）；單（鹵基）-二（羥基）-單（烷氧基）；單（鹵 基）-單（羥基）-二（烷氧基）；單（函基）-二（羥基）-二（烷氧 基）；二基）_單（羥基）-單（烷氧基）；二（i基）-二（羥 基）_單（烷氧基）；或二（鹵基）-單（羥基）-二（烷氧基）。 15·如请求項1〇之化合物，其中R2、R3、R4、R5及R6相同或 不同且經獨立選擇，與R2、R3、R4、R5及R6連接之苯基 為2-_笨基、3_鹵苯基或4_鹵笨基；3,5_二鹵苯基；2_羥 苯基、3-羥苯基或4-羥苯基；2,4-二羥苯基；3,5-二鹵基-2’4’二窥本基，3,5-二齒基- 2,4 -二經苯基；3，5-二鹵基_ 4-經苯基；3_鹵基_4_羥苯基；3,5_二函基_2_羥基_4_曱氧 基苯基；或4-羧基苯基。 16.如請求項^之化合物，其中r2,、r3·、r4,、^及以，相同 或不同且經獨立選擇，與R2·、R3’、R4’、R5·及R6,連接之 139562.doc 200946129 苯基為2-鹵苯基、3-齒苯基或4-函苯基；3，5_二_笨基 2-羥苯基、3-羥苯基或4-羥苯基；2,4-二羥苯基；3 5 鹵基-2,4,6-三羥苯基 3,5-二鹵基-2,4-二羥苯基；3,5 函基-4-羥苯基；3-齒基-4-羥苯基；3,5_二齒基_2_羥基 4-曱氧基苯基；或4_羧基苯基。 Α 17. 如请求項11之化合物，其中鹵基為溴。 18. 如請求項9之化合物，其中 (a) R3及R5各為_基且R4及R6各為經基； (b) R3及R5各為_基且R4為羥基； (c) R3及R5各為溴且…及尺6各為羥基；或 (d) R3及R5各為溴，R4為羥基，且R6為氫。 19_如請求項9之化合物，其中 (a) R及R各為_基且R4及r6’各為經基； (b) R3’及R5’各為鹵基且R4,為羥基； (c) R3'及R5'各為溴且“’及“’各為羥基；或 (d) R3’及R5’各為溴，R4,為羥基， 20·如請求項9之化合物，其中R3、R3, R4、R4、R6及R6’各為羥基。 且R6’為氳。 、R5及R5各為鹵基 且 21·如請求項20之化合物，其中…及尺2.各為氫。 22.如請求項9之化合物其中 ⑷"^及^各為函基且以及^各為經基； (b) R、R3、R5及R5各為溴，且r4、r4,、尺6及汉 為羥基；或 R及R各為經基，且 ⑷R3、R3'、尺5及尺5·各為溴 139562.doc 200946129 R6及R6·各為氫。 23·如請求項22之化合物，其中R2&R2.各為氫。 24. 如請求項1或2之化合物，其中X與X，各相同或不同且獨 立地為-NH-、-Ο-或-S-。 25. 如請求項2之化合物，其中該間隔基j及該間隔基j，各為 4,4'-二異硫氰基芪（stilbene)_2,2l_二磺酸（didS)且該化合 物具有以下結構1(b):
    其中： R與R1相同或不同，獨立地為視情況經取代之苯基、 視if况經取代之雜芳基 '視情況經取代之喹琳基、視情 况經取代之蒽基或視情況經取代之萘基； R、R2、r3、r3、R4、R4’、R5、R5’、R6 及 R6’相同或 不同，獨立地為氫、羥基、Ci 8烷基、CM烷氧基、羧 基、鹵基、硝基、氰基' -S〇3H、-S(=〇)2N h2、芳基及 雜芳基； R13、卩13'、卩 14βΐ>ΐ4， 及尺相同或不同，獨立地為氫或匚“烷基； 139562.doc 200946129 x及x，各為相同或不同之連接部分；及 «為在0與2,500之間的整數。 26. 如請求項25之化合物，其中該化合物為鈉鹽。 27. 如請求項25之化合物，其中Rl3、Rl3,、二 R及R 相同或 不同’獨立地為氩或甲基。 28. 如請求項25之化合物，其中R>Rl.相同或不同，獨立地 為1-萘基或2-萘基，視情況經齒基、羥基、_sh、jo# 、Cm烷基及Cl_8烷氧基之一或多者取代；芳氧基；經羥 基、Cm烷基、Cl_8烷氧基、羧基、_s〇3H、芳基、芳氧 基或鹵基之一或多者取代之苯基；單_苯基；二函苯 基；單院基苯基；2-蒽基；或6-喹琳基。 29. 如請求項28之化合物，其中Ri與相同或不同，獨立地 為2-萘基；2-氣笨基；4-氣苯基；_2_4_二氣笨基；或4_ 甲基苯基。 30. 如請求項28之化合物，其中Ri與W，相同或不同，獨立地 為单（_基）萘基’ 一（鹵基）秦基；三（_基）萘基；單（經 基）萘基’二（經基）萘基；三（經基）萘基；單（烧氧基）萘 基’一（烧氧基）萘基；三（烧氧基）萘基；單（芳氧基）萘 基；二（芳氧基）萘基；單（烧基）萘基；二（烷基）萘基；三 (烷基）萘基；單（羥基）·萘-磺酸；單（羥基）_萘-二項酸； 單（齒基）-單（經基）萘基；二（齒基）-單（經基）萘基；單（南 基）-一（經基）蔡基，二（鹵基）-二（經基）萘基；單（烧基）_單 (烷氧基）-萘基；或單（烷基）-二（烷氧基）_萘基。 31·如請求項28之化合物，其中R1與R1·相同或不同，獨立地 139562.doc 200946129 ❹
    為單（鹵基）苯基；二（鹵基）苯基；三（鹵基）笨基；單（羥 基）笨基；二（羥基）苯基；三（羥基）苯基；單（烷氧基）苯 基；二（烷氧基）苯基·’三（烷氧基）苯基；單（芳氧基）苯 基；二（芳氧基）苯基；單（烷基）苯基；二（烷基）苯基；三 (烷基）苯基；單（羥基）_苯基-磺酸；單（羥基）_苯基_二磺 酸，單（鹵基）-單（經基）苯基；二（鹵基）_單（經基）笨基； 單（齒基）_二（經基）苯基；二（_基）_二（經基）苯基；單（烧 基）-單（烷氧基）-苯基；或單（烷基）_二（烷氧基）_苯基。 32. 如請求項25之化合物，其中r2、y、r3、r3,、r4、 R4、R5、R5' R6及R6'相同或不同，獨立地為氫、羥 基、_基、（：】_8烷基、Cw烷氧基或羧基。 33. 如請求項32之化合物，其中R2、R3、R4、r5及R6各相同 或不同且經獨立選擇，與R2、R3、R4、R5及R6連接之笨 基、、'呈、一或二個由基；一或兩個缓基；一、二或三個 經基’一或兩個鹵基及一、二或三個羥基；一或兩個_ 基、—或兩個羥基及一個Cl-8烷氧基；一或兩個鹵基、 一個經基及一或兩個Cl_8烷氧基；或一個鹵基、一或兩 個經基及—或兩個Cl 8烷氧基取代，其中鹵基為溴、 氯、峨或氟。 34.如請求項32之化合物，其中R2'、R3,、R4'、R5'及R6,各相 同或不同且經獨立選擇，與R2'、R3'、R4'、R5'及R6'連接 之苯基經―、二或三個函基；一或兩個羧基；一、二或 二個說基；一或兩個_基及一、二或三個羥基；一或兩 個函基、—或兩個經基及一個Ci-8院氧基；一或兩個鹵 139562.doc 200946129 土 個备基及一或兩個Cw烧氧基；或一個鹵基、一 或兩個羥基及一或兩個Cl 8烷氧基取代，其中鹵基為 >臭鼠、峨或氣。 35·如请求項33之化合物，其中R2、R3、R4、R5及R6相同或 不同且經獨立選擇，與R2、R3、R4、R5及R6連接之苯基 經以下取代：二（羥基）；單（鹵基）_單（羥基）；單（画基）— 二（經基）；單（齒基）_三（羥基）；二（_基）_單（羥基）；二 (齒基）-二（羥基）；二（|fi基）_三（羥基）；單（鹵基）_單（羥 基）_單（烷氧基單（鹵基）-二（羥基）-單（烷氧基）；單（鹵 基）-單（羥基）-二（烷氧基）；單（鹵基）-二（羥基）_二（烷氧 基）；二（画基）-單（羥基）-單（烷氧基）；二基二（羥 基）·單（烷氧基）；或二（鹵基）-單（羥基）-二（烷氧基）。 36. 如請求項34之化合物，其中R2,、r3,、r4,、r5，ar6，相同 或不同且經獨立選擇，與R2,、R3,、r4,、尺5.及r6.連接之 苯基經以下取代：二（羥基）；單（鹵基）_單（羥基）；單（鹵 基）·二（羥基）；單（鹵基）-三（羥基）；二（_基）_單（羥基）； 二（_基）-二（羥基）；二（鹵基）_三（羥基）；單（齒基）_單（羥 基）-單（烧氧基）；單（鹵基）-二（經基）_單（烧氧基）；單（鹵 基）-單（羥基）-二（烷氧基）；單（齒基）_二（羥基）_二（烷氧 基）；二（_基）-單（羥基）-單（烷氧基）；二（鹵基）_二（超 基）-單（烧氧基）；或二（_基）-單（羥基）_二（烧氧基）。 37. 如請求項33之化合物，其中R2、R3、R4、r5及r6相同或 不同且經獨立選擇，與R2、R3、R4、尺5及R6連接之苯基 經以下取代：2-¾苯基、3-齒苯基或4-_苯基；3,5-二!| 139562.doc •10· 200946129 苯基；2-羥苯基、3-羥苯基或4-羥苯基；2,4-二 3.5- 二齒基-2,4,6-三羥苯基、3,5-二 i 基 _2,4_二 3.5- 二鹵基-4-經苯基；3-_基-4-幾苯基；35 羥基-4-曱氧基苯基；或4-羧基苯基。 經笨基； 羥笨基； 二鹵基-2. 3 8.如請求項3 4之化合物，其中R: R R4,、 汉’及〜同 或不同且經獨立選擇，與R2·、R3’、R4'、 及R連接之 苯基為2-i苯基、3-_苯基或4-函苯基；3 s _上 _笨基； 2-羥苯基、3-羥笨基或4-羥笨基；2,4-二羥笨旯.3 鹵基-2,4,6-三羥苯基、3,5-二鹵基-2,4·二羥笨基.3’ 一 鹵基-4-羥苯基；3-自基-4-羥苯基；3,5-二志| ，一 囫丞-2 -經其 4-曱氧基苯基；或4-羧基苯基。 土- 39·如請求項32至38中任一項之化合物 40_如請求項32之化合物，其中
    (a) H3及R5各為_基且R4&R6各為羥基； (b) R及R5各為鹵基且r4為經基； (0 R3及R5各為溴且尺4及尺6各為羥基；或 (句R3及R5各為溴，R4為羥基，且R6為氫。 41 ·如請求項32之化合物，其中 (a) R3’及R5’各為自基且r4，及r6•各為羥基； (b) R3及R5各為鹵基且R4,為羥基； (c) R3’及R5’各為漠WAR6.各為超基；或 (d) R及R5各為溴，R4,為經基，且r6,為氣。 42.如請求項32之化合物，其中 (a) R3 R 、R及R5各為鹵基且R4、r4. r6及R6'各 I39562.doc -11. 200946129 為經基； ⑻R3 m r5’各為_基且尺4及r4.各為經基； (C) R3、R3、R5及R5’各為溴且尺4、R4.、尺6及汉6•各為 羥基；或 (d) R3、R3’、R5及R5’各為漠，R4&R4’各為羥基且 R6及R6’各為氫。 43. 如請求項4〇至42中任一項之化合物，其中R2及R2’各為氫。 44. 如請求項25之化合物，其中X與X，各相同或不同且獨立 地為-NH-、-〇 -或-S-。 45. 如請求項44之化合物，其中X及X，各為-NH-。 46. 如請求項25之化合物，其中該化合物具有以下結構 1(c)、1(d)、1(e)或 1(f)之一：
    1(d) 139562.doc -12. 200946129
    1(f) ο 47. 如請求項46之化合物’其中該化合物為鈉鹽。 48. 如請求項1、2、25及46中任一項之化合物，其中”為在〇 ❹ 與10之間、在〇與100之間、在1與5之間、在1與10之 間、在1與100之間或在}與1000之間的整數。 r 49.如请求項1、2、25及46中任一項之化合物，其中π為在 50與10〇〇之間、在2〇〇與3〇〇之間、在450與550之間或在 9〇〇與1〇〇〇之間的整數。 5〇· 一種具有以下結構II之化合物： 139562.doc 200946129
    其中： R、R7相同或不同，獨立地為視情況經取代之苯基、 視It况”.呈取代之雜芳基、視情況經取代之喹啉基、視情 況經取代之恩基或視情況經取代之萘基； R8u、R9，、R'Rl〇，、R"、Rll’、Rm 同或不同’獨立地為氫、羥基、Ci8烷基、Ci8烷氧基、 緩基、-基、石肖基、氰基、·s〇3H、_s( = 〇)2NH2、芳基 及雜芳基； R 、R 、Rl6及Rl6相同或不同，獨立地為氫或Cw烷 基； X及X’各為相同或不同之連接部分； J及J’各為相同或不同之間隔部分； A為聚合物次單元；及 ”為在〇與2,500之間的整數。 51. 如明求項50之化合物’其中A為-CH2-O-CH2-且該化合物 具有以下結構11(a): 139562.doc 200946129
    R10 R10· R11 Rtr 今。个
    體 11(a)
    ❿ 或其醫藥學上可接受之鹽、前藥或立體異構 其中： R與R7·相同或不同’獨立地為視情況經取代之苯美 視情況經取代之雜芳基、視情況經取代之啥琳基、：情 況經取代之蒽基或視情況經取代之萘基； R R、R、R9、Rl°、Rl0、Rl1、R"，、R12及RU，相 同或不同’獨立地為氫、經基、Ci 8絲、（^烧氧基、 瘦基、_基、硝基、氰基、·s〇3H、_s( = 〇)細2 及雜芳基； R 、R15、R16及r16’相同或不同，獨立地為氫或^ 8烷 基； X及X’各為相同或不同之連接部分； J及J’各為相同或不同之間隔部分；及 π為在〇舆2,500之間的整數。 52_如喷求項51之化合物，其中該間隔基J及該間隔基J，各為 4,4 異硫氰基芪_2,2，-二磺酸（DIDS)且該化合物具有以 下結構11(b): 139562.doc -15· 200946129
    及R16相同或不同且獨立地為氫或曱基。 53. 54. 55. 56. 57. 如请求項50至52之化合物，其中R7與R7’相同或不同，獨 立地為未經取代之苯基，或經取代之苯基，其中苯基係 經羥基、（:烷基、cN8烷氧基、羧基、_s〇3H、芳基、 ^乳基或齒基之一或多者取代。 如請求項54之化合物，其中R7與R7'相同或不同，獨立地 為單（自基）苯基；二（画基）苯基；三（函基）苯基；單（羥 基）苯基·，二（羥基）苯基；三（羥基）苯基；單（烷氧基）苯 基，二（烷氧基）苯基；三（烷氧基）苯基；單（芳氧基）苯 基；二（芳氧基）苯基；單（烷基）苯基；二（烷基）苯基；三 (烷基）笨基；單（羥基）_苯基_磺酸；單（羥基苯基-二磺 酸’單（鹵基）-單（羥基）苯基；二（鹵基）_單（羥基）苯基； 單（_基）-二（經基）苯基；二（_基）_二（經基）苯基；單（烧 基）-單（烷氧基）-苯基；或單（烷基）_二（烷氧基）_笨基。 如請求項55之化合物’其中鹵基為氣。 如請求項54之化合物，其中R7與R7·相同或不同且獨立地 139562.doc -16- 200946129 為屯取代之苯基’其中苯基係經曱基或氣取代。 月求項50至52中任一項之化合物，其中R7與R7’相同或 不同’獨立地為喹啉基或蒽基’視情況經鹵基' 羥基、 Ci-s烷基或c丨j烷氧基之一或多者取代。 59_如°月求項50至52中任一項之化合物，其中R7與R7'相同或 不同’獨立地為2_萘基或丨_萘基，視情況經齒基、經 • 基、-SH、-S〇3H、Ci8烧基、芳基、芳氧基或q禮氧 ❺ 基之一或多者取代。 60. 如叫求項59之化合物其中r7與r7·相同或不同，獨立地 為單（齒基）萘基；二（鹵基）萘基；三（齒基）萘基；單（羥 基）奈基；二（羥基）萘基；三（羥基）萘基；單（烷氧基）萘 基；二（烷氧基）萘基；三（烷氧基）萘基；單（芳氧基）萘 基；二（芳氧基）萘基；單（烷基）萘基；二（烷基）萘基；三 (烷基）萘基；單（羥基）-萘-磺酸；單（羥基）-萘-二磺酸； 單（齒基）_單（經基）萘基；二（由基）-單（經基）萘基；單（幽 ❹ 基—(說基）萘基；二（i基）-二（經基）萘基；單（烧基）_單 (烷氧基）-萘基；或單（烷基）-二（烷氧基）_萘基。 61. 如請求項50至52中任一項之化合物，其中“與尺7’相同或 不同’獨立地為2-氯苯基、4-氣苯基、2,4-氣笨基、4-甲 ' 基苯基、2-蒽基或6-喹啉基。 62. 如請求項5〇至52中任一項之化合物，其中“與尺7,相同或 不同’獨立地為2-萘基或1-萘基。 63. 如請求項5〇至52中任一項之化合物，其中R8、r9、Rio、 R 、R 、R8、R9、R10'、R"jR12'各相同或不同，獨 139562.doc 17· 200946129 立地為氫、羥基、鹵基、Cl 8烷基、Cl-8烷氧基或羧基。 64·如请求項63中任一項之化合物，其中R8、R9、R10、R11 及R各相同或不同且經獨立選擇，與R8、R9、R10、R11 及R連接之苯基經一、二或三個鹵基；一或兩個叛基； 一、二或三個羥基；一或兩個鹵基及一、二或三個羥 基’—或兩個鹵基、一或兩個羥基及一個Cl_8烷氧基； 或兩個鹵基、一個羥基及一或兩個Cl_8烷氧基；或一 個齒基、—或兩個羥基及一或兩個Ci 8烷氧基取代。
    65.如請求項63中任一項之化合物，其中Rs'、R9·、Rl0,、Rll. 及Rl2各相同或不同且經獨立選擇，與R8,、R9’、Rl0’、 連接之本基經一、二或三個ή基；一或兩個幾 美；一、-、- , 土 一或二個經基；一或兩個基及一、二或三個 |i«< 工土，一或兩個鹵基、一或兩個羥基及一個烷氧 基，—或兩個鹵基、一個羥基及一或兩個ci8烷氧基； 或個鹵基、一或兩個羥基及一或兩個Cw烷氧基取 代。 66.如請求項64中任 及各相同或不 R丨0 R10
    R11 R11 一項之化合物，其中R8、R9、 同且經獨立選擇，與R8、R9、 及連接之苯基經以下取代：二（羥基广單（鹵基）_單 (經基）；單（卣基）-二（經基）；單（齒基）_三（經基）；二（_ ，）·單（經基）；二（鹵基）_二（經基）；二（鹵基）·三（經基）； 單（_基）-單（經基）_單（院氧基）；單（函基）_二（經基）_單 (烷氧基）；單（鹵基）-單（羥基）_二（烷氧基）；單（鹵基二 (土）一（烷氧基）；二（鹵基）單（羥基）_單（烷氧基）；二 I39562.doc •18- 200946129 (_基）-二（羥基）-單（烷氧基）；或二（鹵基）_單（羥基二 (烷氧基）。 67.如請求項65中任一項之化合物，其中r8i、r9.、Rl0.、rU. 及R 各相同或不同且經獨立選擇，與R8’、R9_、Rl〇，、 R及R12’連接之苯基經以下取代：二（羥基）；單（幽基）_ 單（經基）；單（鹵基）-二（經基）；單（函基）_三（經基）；二 (齒基）-單（羥基）；二基）_二（羥基）；二（_基）_三（羥
    基）；單（鹵基）-單（羥基）-單（烷氧基）；單（鹵基）_二（羥 基）單（燒氧基）；單（鹵基）_單（羥基）_二（烷氧基）；單（鹵 基）_ 一（羥基）-二（烷氧基）；二（鹵基）_單（羥基）_單（烷氧 基）；二（齒基）-二（羥基）_單（烷氧基）；或二（函基）_單（羥 基）_—(燒氧基）。 68.如請求項64中任一項之化合物，其中r8、尺9、r丨〇、Rn 及R各相同或不同且經獨立選擇，與r8、r9、r10、r11 連接之笨基為2-_笨基、3_鹵苯基或苯基； 3,5_二_笨基；2-羥苯基、3_羥苯基或4•羥苯基；2,4_二 羥苯基；3,5-二鹵基-2,4,6-三羥苯基；3,5_二鹵基_2,4_二 羥苯基，3,5-二齒基_4_羥苯基；3__基_4_羥苯基；3,5_ 二函基羥基_4_甲氧基苯基；或4_羧基笨基。 69. 如1求項65中任一項之化合物，其中Ri R R1 月R 121女 | 相同或不同且經獨立選擇，與R8’ ' R9’、R10’、 R及R連接之苯基為2__苯基、3__苯基或4_鹵苯 土 3’5 —齒苯基；2-羥笨基、3_羥苯基或4_羥苯基； 2,4- 羥笨基 3,5·二鹵基-2,4,6-三羥苯基、3,5-二齒基- 139562.doc -19· 200946129 70. 71. 72 73. 74. 75. 2广二趣苯基…-二齒基_4_經苯基；3·齒基_4_經苯 二3:氕二函基_2_羥基·"氧基苯基；或4傭苯基。 05月求項63之化合物，其中鹵基為溴。 如請求項63之化合物，其中 玟及R11各為_基且rh^ri2各為羥基； (b) R9及r11各為鹵基且Rl0為羥基； (c) R9及R11各為溴且尺^及尺!2各為羥基；或 (d) R9及R"各為漠，Rl〇為經基，且Ri2為氫。 如請求項63之化合物，其中 (a) R9及R丨Γ各為鹵基且Rl〇^R〗2,各為羥基； ()R及R各為_基且r 1 〇’為經基； (c) R9·及Rn’各為溴且各為羥基；或 ()R及R各為溴，Rio為羥基，且r12,為氫。 如請求項63之化合物，其中 ⑷ R9、R9’、R"及R"1各為鹵基且Ri。、Rl。，、r Rl2各為羥基； (b) R9、r9_、r"及R"’各為_基且R〗。及Rl。.各為羥基； ⑷ r9、r9'、R"及rh’各為溴且…。、Rl。，、r12及Ri2. 各為經基；或 ⑷R9、R9’、R11及R".各為溴，Ri。及R10.各為羥基， 且R12及R12,各為氫。 如°月求項73之化合物，其中R8及R8·各為氫。 月求項50至52中任一項之化合物，其中χ與X，各相同 或不同且獨立地為-ΝΗ-、-〇-或-S_。 139562.doc 200946129 76. 如請求項75中任一項之化合物，其中X及X'各為-NH-。 77. 如請求項52之化合物，其中該化合物為鈉鹽。 78. 如請求項52之化合物，其中該化合物具有以下結構 11(c)、11(d)、11(e)或 11(f)之一：
    11(e)或 139562.doc •21 · 200946129 α
    79. 80. 81. 82. 83. 84. 85. 如請求項78之化合物，其中X及Χ·各為_Νη_。 如請求項78之化合物，其中該化合物為鈉鹽。 如請求項50至52及财任-項之化合物，其^為在〇與 1〇之間、在〇與100之間、在之間、在mi〇之間、 在1與loo之間、在⑻麵之間或在5G與讓之間的整 數0 如請求項81之化合物，其中„為在2〇〇與3〇〇之間在45〇 與550之間或在900與1〇〇〇之間的整數。 種組合物’其包含如請求項1 78中任—項之化合物及醫藥學上 、2、25、46、50至 52及 可接受之賦形劑。 一種治療與囊腫性纖維化跨膜傳導調節劑（cftr)之離 輸送異常增大相關之疾錢病症的方法，該方法包含 個體投與如請求柳之組合物，其巾抑制cftr之離子 送。 如請求項84之方法 增加。 其中该疾病或病症為腸液分泌異常
    139562.doc •22· 200946129 86.如請求項84之方法，其中該疾病或病症為分泌性腹瀉。 87_如請求項86之方法，其中分泌性腹瀉係由腸内病原體引 起。 88. 如請求項87之方法，其中該腸内病原體為霍亂弧菌 {Vibrio cholerae)、赛秦等紙後窗{Clostridium difficile)、 大腸桿菌（五co/z·)、志賀桿菌（67zige//a)、沙門 氏菌（》Sa/w2C^e//a)、輪狀病毒（rotavirus)、梨形鞭毛蟲 (Giardia lamblia)、溶組戴内 Η 米巴（Entamoeba histolytica)、 空腸曲桿菌/e/wm·)及隱胞子蟲 {Cryptosporidium)。 89. 如請求項86之方法，其中分泌性腹瀉係由腸毒素誘導。 90. 如請求項89之方法，其中該腸毒素為霍亂毒素、大腸桿 菌毒素、沙門氏菌毒素、曲桿菌毒素或志賀桿菌毒素。 9 1 ·如請求項86之方法，其中分泌性腹瀉為潰瘍性結腸炎、 大腸急躁症（irritable bowel syndrome)(IBS)、AIDS、化 學療法或腸内病原體感染之後遺症（sequelae)。 92. 如請求項84方法，其中該個體為人類或非人類動物。 93. —種抑制囊腫性纖維化跨膜傳導調節劑（CFTR)之離子輸 送之方法，其包含使（a)包含CFTR之細胞與（b)如請求項 1、2、25、46、50至5 2及78中任一項之化合物在足以使 該CFTR與該化合物相互作用之條件下接觸一段足以使該 CFTR與該化合物相互作用之時間，藉此抑制CFTR之離 子輸送。 94. 一種治療分泌性腹瀉之方法，其包含向個體投與醫藥學 139562.doc •23- 200946129 2、25、46、50至 52及 上可接受之賦形劑及如請求項} 78中任一項之化合物。 95. 96. 97. ^請求項94之方法，其中該個體為人類或非人類動物。 一種如請求項1、2、25、46、50至52及78中任一項之化 «物的用途，其係用於製備用於治療腸液分泌異常增加 或分泌性腹瀉之醫藥組合物。 如請求項31之化合物，其中函基為氯。 139562.doc
    〇 -24-
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