TR201816335T4 - Alzheimer hastalığının tespitine yönelik optik yöntem. - Google Patents

Alzheimer hastalığının tespitine yönelik optik yöntem. Download PDF

Info

Publication number
TR201816335T4
TR201816335T4 TR2018/16335T TR201816335T TR201816335T4 TR 201816335 T4 TR201816335 T4 TR 201816335T4 TR 2018/16335 T TR2018/16335 T TR 2018/16335T TR 201816335 T TR201816335 T TR 201816335T TR 201816335 T4 TR201816335 T4 TR 201816335T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
curcumin
plaques
retina
mammal
peptides
Prior art date
Application number
TR2018/16335T
Other languages
English (en)
Inventor
Koronyo Maya
l black Keith
Schwartz Michal
l farkas Daniel
Koronyo Yosef
Original Assignee
Cedars Sinai Medical Center
Yeda Res & Dev
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Cedars Sinai Medical Center, Yeda Res & Dev filed Critical Cedars Sinai Medical Center
Publication of TR201816335T4 publication Critical patent/TR201816335T4/tr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/006—Biological staining of tissues in vivo, e.g. methylene blue or toluidine blue O administered in the buccal area to detect epithelial cancer cells, dyes used for delineating tissues during surgery
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/12—Ophthalmic agents for cataracts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B3/00—Apparatus for testing the eyes; Instruments for examining the eyes
    • A61B3/0016—Operational features thereof
    • A61B3/0025—Operational features thereof characterised by electronic signal processing, e.g. eye models
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B3/00—Apparatus for testing the eyes; Instruments for examining the eyes
    • A61B3/10—Objective types, i.e. instruments for examining the eyes independent of the patients' perceptions or reactions
    • A61B3/102—Objective types, i.e. instruments for examining the eyes independent of the patients' perceptions or reactions for optical coherence tomography [OCT]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B3/00—Apparatus for testing the eyes; Instruments for examining the eyes
    • A61B3/10—Objective types, i.e. instruments for examining the eyes independent of the patients' perceptions or reactions
    • A61B3/14—Arrangements specially adapted for eye photography
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
    • A61B5/40—Detecting, measuring or recording for evaluating the nervous system
    • A61B5/4076—Diagnosing or monitoring particular conditions of the nervous system
    • A61B5/4088—Diagnosing of monitoring cognitive diseases, e.g. Alzheimer, prion diseases or dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
    • A61B5/72—Signal processing specially adapted for physiological signals or for diagnostic purposes
    • A61B5/7235—Details of waveform analysis
    • A61B5/7264—Classification of physiological signals or data, e.g. using neural networks, statistical classifiers, expert systems or fuzzy systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B6/00—Apparatus or devices for radiation diagnosis; Apparatus or devices for radiation diagnosis combined with radiation therapy equipment
    • A61B6/02—Arrangements for diagnosis sequentially in different planes; Stereoscopic radiation diagnosis
    • A61B6/03—Computed tomography [CT]
    • A61B6/037—Emission tomography
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
    • A61B6/00—Apparatus or devices for radiation diagnosis; Apparatus or devices for radiation diagnosis combined with radiation therapy equipment
    • A61B6/50—Apparatus or devices for radiation diagnosis; Apparatus or devices for radiation diagnosis combined with radiation therapy equipment specially adapted for specific body parts; specially adapted for specific clinical applications
    • A61B6/506—Apparatus or devices for radiation diagnosis; Apparatus or devices for radiation diagnosis combined with radiation therapy equipment specially adapted for specific body parts; specially adapted for specific clinical applications for diagnosis of nerves
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/0019—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules
    • A61K49/0021—Fluorescence in vivo characterised by the fluorescent group, e.g. oligomeric, polymeric or dendritic molecules the fluorescent group being a small organic molecule
    • A61K49/0032—Methine dyes, e.g. cyanine dyes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0056—Peptides, proteins, polyamino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
    • G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
    • G01N2333/4701—Details
    • G01N2333/4709—Amyloid plaque core protein
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
    • G01N2800/2821—Alzheimer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5082—Supracellular entities, e.g. tissue, organisms
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5091—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)

Abstract

Mevcut konu, amiloid plaklarının gelişimi, miktarı ve lokasyonu gibi Alzheimer hastalığına (AD) özel olan erken patolojik olayların izlenmesine yönelik noninvazif bir optik görüntüleme yöntemi ile ilgilidir. Bu tür olayları izleme yeteneği, diğerlerinin yanı sıra AD teşhisi, prognozu ve potansiyel terapilerin değerlendirmesine yönelik bir temel sağlar. Ayrıca mevcut konu, AD'nin ve AD ile ilişkili retinal rahatsızlıkların tedavi edilmesine yönelik yeni yöntemler katar. Canlı beyinlerde Aß-plak tespiti, özellikle yüksek çözünürlükte oldukça sınırlıdır; bu nedenle mevcut buluş, doğrudan, tekrarlı olarak ve noninvazif bir şekilde görüntülenebilen beyin türevli dokuya bir alternatif olarak gözler üzerine odaklanan çalışmalara dayanır.

Description

TARIFNAME ALZHEIMER HASTALIGININ TESPITINE YÖNELIK OPTIK YÖNTEM KONUNUN SAHASI Mevcut konu, Alzheimer hastaligina özel erken patolojik olaylarin noninvazif izlenmesine yönelik yöntemlerde kullanima yönelik kürküinin ile ilgilidir ve bu nedenle AD,nin teshisine, prognozuna ve tedavisine yanitin degerlendirmesine yönelik yöntemler ve sistemleri içerir.
KONUNUN ALTYAPISI Alzheimer hastaligi (AD), yaygin ve yikici yasa bagli nörodejeneratif bir hastaliktir. AD beyin patolojisi, Aß plaklari olarak adlandirilan hücre disi agregalari olusturan amiloid prekursör protein (APP), amiloid-ß peptitlerin (Aß) proteolitik ürünlerinin tipik birikimi ile karakterize edilir. Bu plaklarin nörotoksik intlamasyon ve nöronal ölüme neden olan bozulmus hücreler aktivitelere ve beyindeki iletisime katki sagladigi düsünülür [2,3]. Canli öznelerde patolojik proseslerin noninvazif izlenmesini saglayan moleküler görüntüleme, hastaliginin tespitini ve anlasilmasini ve ilaç etkililigini gelistirme potansiyeline sahiptir. Buna göre canli AD hastalari ve hayvan modellerinin kafatasi araciligiyla amiloid plaklarinin noninvazif tespitini saglamak üzere araçlarin gelistirilmesi konusunda büyük çaba gösterilmistir [4-9]; ancak amiloid plaklarinin noninvazif izlenmesi klinik olarak zor olmaya devam eder ve yüksek çözünürlükte sinirli erisilebilirliktedir [10-12]. Optik görünürlük, son zamanlarda bir kraniyal pencere araciligiyla fare beyninde in vivo Aß plaklarini görüntülemek üzere çok fotonlu mikroskopi kullanilarak gösterildigi üzere in vivo görüntülemeye yönelik güçlü, yüksek çözünürlüklü ve spesifik bir araç olusturur [13]. Mevcut konu, Aß plaklarinin bu hastalarin retinalarinda gelismesi ve beyindekiler ile benzer özellikleri paylasmasi kosuluyla optik modaliteler ile AD hastalarinin retinasini görüntülemek üzere insanlarda alternatif ve noninvazif bir yaklasim ortaya çikarir. 02 1 67-P-0001 APP yaygin bir sekilde retinal gangliyon hücrelerinde (RGCIer), merkezi sinir sisteminin (CNS) fazla büyümesi olarak ifade edilir ve optik sinir araciligiyla aksonal plazma membrani ve sinir terininallerine tasinir [14]. Retinada plaklarin olusumu, özellikle iki ilgili nörodejeneratif bozuklukta olmak üzere son zamanlarda arastirilmaya baslanmistir: yasla ilgili maküler dejenerasyon (AMD) ve glokom [50 - 53]. AB plaklarinin AD hastalarinin erken veya geç evresinde retinada bulunup bulunmadigi belli degildir. Son kanitlar, glokom retinalarinda ve AMD hastalarinda ve bunlarin kemirgen modellerinde Aß plaklarinin varligini göstermistir. Örnegin RGC katmaninda Aß birikimi, glokom hastalarinda rapor edilmistir [50, 51]. Glokomun deneysel modellerinde RGC,lerin apoptozu, Aß peptitlerinin birikimi ile iliskilendirilmistir ve bunlarin olusumunu hedefleyen ajanlarin nöro koruyucu aktivite uyguladigi gösterilmistir [52]. AMD hastalarinda Aß birikintileri, dejenere fotoreseptörlerin lokasyonu ile iliskili drusende ve retinal pigment epitelyum hücrelerinde bulunmustur [53].
Mutasyona ugramis insan APPisi ve presenilin (PS) genlerinin hedeflenen ifadelerine bagli olarak AD°nin Drozofila transgenik modelinde Aß i:i immünreaktivitesi, bilesik gözde ve retinal fotoreseptör dejenerasyonu ile iliskili olarak bulunmustur [15]. Son bir çalisma, hastaligin gelismis bir evresinde (10 ayliktan sonraki yasta) AD transgenik farelerinde retinal sinir lifi katmaninda (NFL) ve gangliyon hücre katmaninda (GCL) Aß birikintilerini göstermistir. Aß birikintileri ayrica RGCslerin nörodejenerasyonu ve mikrogliyal aktivasyon ile iliskilendirilmistir [16].
Bu tesvik edici arastirmaya ragmen AD`nin teshisi, prognozu ve tedavisine yönelik sistemler ve yöntemlere yönelik teknikte bir ihtiyaç vardir. Mevcut konu, AD hastalarinin postmortem gözlerinin retinalarinda Aß plaklarinin varligini bularak bu ihtiyaçlari karsilar. Insan APP°si ve PSl genlerinin (APPswe/PSldE9, burada AD-Tg fareleri olarak refere edilen) mutasyona ugramis formlarini ifade eden fareler kullanilarak mevcut konu ani zamanda bunlarin beyindeki manifestasyonu Öncesinde retinada AB plaklarinin erken olusumunu açiklayan 02 1 67-P-0001 kanit saglar. Ayrica mevcut açiklama, fare beyinlerinde ve AD-Tg farelerinin retinalarinda Aß plaklarinin azaltilmasinda etkili olan dendritic hücrelere [17, 18] yüklenen miyelin türevli peptitin zayif bir agonistini kullanan bir immün bazli terapiyi açiklar. Son olarak konu, canli hayvanlara AB plaklarini [19, 20] baglayan ve etiketleyen dogal bir bilesik olan kürküminin (diferuloilmetan) sistemik enjeksiyonunun retinada AB plaklarinin noninvazif yüksek çözünürlüklü ve spesifik görsellestirmesini sagladigini göstermistir. Mevcut konu, ilk kez Aß plaklarinin sayi ve lokasyona göre tespit edilmesini ve AD memelilerinin retinasinda gerçek zamanli olarak tekrarli bir sekilde sayilmasini ve izlenmesini saglayan yöntemlerde kullanima yönelik kürkümini açiklar.
HOSPITAL CORP), bir amiloid proteinini baglayan tespit edilebilir sekilde etiketlenen bir bilesik ile bir Oküler doku temas ettirilerek bir memelide Alzheimer hastaliginin durumunu teshis etme veya buna iliskin bir prognoz SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Örnek niteligindeki düzenlemeler, referans yapilan sekillerde gösterilir. Burada açiklanan düzenlemeler ve sekillerin kisitlayici olmaktan çok açiklayici olarak kabul edilmesi amaçlanir.
Sekil 1, altyapi ve bilgilendirme amaçlarina yönelik kürkümin ile görsellestirilen AD-Tg farelerinin retinasinda retinal Aß birikintisini gösterir. Sekiller la - lf, iki tespit yöntemi ile AB plak boyamasinin ko- lokalizasyonunu gösteren, insan karsiti Aß antikoru ve ex vivo kürküinin ile boyanan 9 aylik AD-Tg (Sekiller la - le) ve Tg olmayan (wt) (Sekil lt) farelerinden beyin donuk kesitlerinin görüntülerini gösterir. Sekiller 1d ve le, her bir kanala yönelik sunulan plak boyama deseninin daha yüksek oranda büyütülen görüntülerini gösterir. Sekil lf, Tg olmayan (wt) farede 02 1 67-P-0001 çift-pozitif insan karsiti Aß plaklari ve kürkümine yönelik herhangi bir kanit göstermez. Hücre çekirdekleri, DAPl (mavi) ile etiketlenir. Ölçek çubugu : 100 um. Sekiller lg - lj, anti-AB antikoru ve ex vi'vo kürkümin ile boyanan 10 aylik AD-Tg (n:27) ve Tg olmayan (wt) farelerinden retina tam numunelerinin temsili görüntüleridir. Aß plaklarinin (kirmizi ve yesil kanallari ile örtüsen sari noktalar) olusumu, birkaç farkli retinal katmanda gösterilir: Sekil lg, IPL-Iç Pleksiform Katmanini gösterir, Sekil lh, INL-Iç Nükleer/OPL-Dis Pleksiform Katinanlarini gösterir ve Sekil li, ON-Dis Nükleer Katmani gösterir. Sekil 1.1, esas olarak Tg olmayan (wt) farelerinde Aß plaklarini gösterir. (Sekil lg ve 1 j, alt sira). Ayri kanallara yönelik daha yüksek oranda büyütülen görüntüler, iki prosedür ile plak boyama desenlerini gösterir. Ölçek çubuklari = 5 um. Sekiller lk - ln, in vi'vo kürkümin akabinde insan karsiti Aß antikoru ve ex vivo DAPI ile boyanan tüm göz sagital donuk kesitlerini gösterir. Sekiller lk - lmlde Aß plaklari, çogu retinal katmanda ve 10 aylik AD-Tg farelerinde klorid içinde tespit edilmistir. Sekil 1n,de Aß plaklari, Tg olmayan (wt) farelerin retina ve kloridinde tespit edilememistir. Ölçek çubugu = 20 nm.
Sekil 2, altyapi ve bilgilendirme amaçlarina yönelik Alzheimer hastaligi hastalarinin insan retinasinda Aß plaklarini gösterir. Sekiller 2a ve 2b, spesifik olmayan otofloresans sinyallerini ortadan kaldirmak üzere Sudan Black B ile boyama ve akabinde kürküinin ex vi'vo boyamadan (kürkümin etiketli plaklar, beyaz oklar ile gösterilir) sonra 87 yasinda bir AD hastasinin insan retina tam numunesinin temsili görüntüleridir. Ölçek çubuklari = 10 nm. Hücre çekirdekleri, DAPI (mavi) ile etiketlenir.
Sekiller 2c ve 2d, Sudan Black B boyamasi (Sudan boyasina yönelik siyah noktalar) ve akabinde kürkümin boyamasindan (kürkümin etiketli plak, beyaz oklar ile gösterilir) sonra 65 yasinda bir AD hastasinin insan retina tam numunesinin daha yüksek oranda büyütülmüs görüntülerini gösterir. Ölçek çubuklari = 5 um. Sekiller 2e - 2g, 65 ila 90 yasindaki bir grup insan AD hastasinin retinalarindaki kürkümin pozitif plaklarin ilave örneklerini saglar. Sekiller 2h - 2j, insan karsiti AB antikorlari akabinde 02 1 67-P-0001 birkaç retinal ölümde (RGC ve IPL dahil olmak üzere) Sudan Black B tedavisi ile boyanan 65 ve 87 yasindaki insan AD hastalarinin insan retina tam numunelerinin temsili görüntüleridir. Sekil 2i, retinal plagin daha yüksek oranda büyütülen bir görüntüsünü temsil eder. Aß plak morfolojisi, fare retinalari ve beyinlerinde bulunan ile benzer olmustur. Ölçek çubuklari = 5 um. Sekiller 2k - 2m, plaklarin seçici bir sekilde insan AB antikorlari ve kürkümin (ayri kanallara yönelik alt sira görüntüleri) ile birlikte etiketlendigini ortaya çikaran, ayni insan retinalarinin kürkümin ile sonraki boyanmasini temsil eder. Sekil 2n, herhangi bir AB plagi isareti (ayri kanallara yönelik alt sira görüntüleri) göstermeyen postmortem AD- olmayan insan retina tam numunesindeki insan Aß antikorlari ve kürkümin ile çift boyamayi gösterir. Ölçek çubuklari = 5 um.
Sekil 3, altyapi ve bilgilendirme amaçlarina yönelik semptom öncesi erken evrede fare retinal Aß plak olusumlarini ve hastaligin ilerlemesi sirasinda birikimi gösterir. Kuyruk damarina i.v. Kürkümin enjeksiyonlarindan sonra Aß plaklar, AD-Tg farelerinin retinalari ve beyinlerinde görünür hale gelmistir. Sekiller 3a - 3n, çesitli yaslarda AD-Tg (n=l8) ve Tg olmayan (wt; n=lO) farelerden retina tam numunelerinin temsili Z-eksenli projeksiyon görüntüleridir; Sekiller 3a - 3d, 2.5 aylik Ad-Tg faresini gösterir, Sekil 3a ile retinada plaklarin varligi gösterilir ve Sekil 3b ile ayni lokasyonda (sari içinde kürkümin ve AB antikorunun ko-lokalizasyonu) spesifik insan karsiti ex vi'vo antikor kullanilarak Aß plak boyamasinin onaylanmasi gösterilir. Ölçek çubuklari = 10 um. Sekiller 30 ve 3d, beyin hipokampüs ve korteksinde herhangi bir plagin tespit edilmedigini gösterir. Ölçek çubuklari = 100 um. Sekiller 3e - 3h, 5 aylik AD-Tg faresini gösterir, Sekil 36 ile retinadaki plaklarin varligi gösterilir ve Sekil 3f ile ex vi'vo olarak boyanan spesifik Aß antikoru gösterilir. Ölçek çubuklari : 10 um. Sekil 3g ve 3h, beyinde plaklarin tespitini gösterir. Ölçek çubuklari = 50 um. Sekiller 3i - 3k, 9 aylik AD-Tg faresini gösterir, Sekil 3i ile retinadaki birçok plak gösterilir ve Sekiller 3j ve 3k ile beyindeki plaklar gösterilir. Ölçek çubuklari (i) = 10 nm ve (j,k) = 50 um. 02 1 67-P-0001 Sekiller 31 - 3n, 17 aylik AD-Tg faresini gösterir, Sekil 31 ile retinadaki birçok plak gösterilir ve Sekiller 3m ve 3n ile beyindeki plaklar gösterilir. Ölçek çubuklari (i) : 10 um ve (in,n) :100 um. Sekiller 30 - 3q, 9 aylik Tg olmayan (wt) fareyi gösterir, Sekil 30 ile retinada sifir plak gösterilir ve Sekiller 3p ve 3q ile beyinde sifir plak gösterilir. Ölçek çubuklari (0) = 10 um ve (p,q) =100 um.
Sekil 4, altyapi ve bilgilendirme amaçlarina yönelik dendritik hücre bazli asilamanin akabinde AD-Tg farelerinin retinasinda azalmis Aß plakalarini gösterir. Sekiller 4a - 4g, 10 aylik farelerden retina tam numunelerinin temsili z-eksenli projeksiyon görüntüleridir, Sekiller 4a - 40, PES ile tedavi edilen Ad-Tg faresi kontrolünü gösterir, Sekiller 4d - 4f, asilanmis AD-Tg faresini gösterir ve Sekil 4g, kürkümin ve insan karsiti Aß antikorlari ile ex vi'vo olarak boyana Tg olmayan (wt) fareyi gösterir.
Sekiller 4b ve 40 ve Sekiller 4e ve 4f, retinada kürkümin ve anti-Aß antikorlari etiketlemesine yönelik ayri kanal görüntülerini gösterir. Ölçek çubuklari = 10 um. Sekil 4h, retina tam numunelerinde (grup basina n=4 fare; fare basina iki retina) plaklarin nicel analizlerine yönelik kapsanan alani temsil eden optik disk (dikdörtgenler 1-12 ile gösterilen) çevresindeki 12 bölgenin bir gösterimidir. Ölçek çubugu = 200 mm. Sekil 4i, PBS ile tedavi edilen kontroller (Student t-testi; P=0.0028) ile karsilastirildiginda immün bazli asilama ile tedavi edilen AD-Tg farelerinin retinalarinda gözlemlenen plak sayisindaki azalmayi gösterir.
Sekil 4j, bunlarin kontrolleri (Student t-testi' P=0. 0002) ile karsilastirildiginda asilanmis AD-Tg farelerinin retinalarinda gözlemlenen ortalama plak alanindaki bir azalmayi gösterir. Sekil 4k, plaklar ile kaplanan toplam alandaki önemli azalmanin ayni zamanda immün bazli asilamadan sonra ayni farelerin beyin hipokampüs ve korteksinde tespit edildigini gösterir (Student t-testi P:0.0085). Her bir paneldeki hata Sekil 5, AD-Tg faresi retinalarinda kürkümin-etiketli plaklarin i'n vi'vo görüntülenmesini gösterir. Sekil Sa - 50, i.v. Kürkümin veya in vi'vo PBS 02 1 67-P-0001 uygulanmasinin akabinde (kan damarlari kirmizi oklar ile gösterilir) Tg olmayan (wt) farelerine (10 aylik) karsi perfüze edilineyen AD-Tg”nin retina tam numunelerinden alinan temsili z-eksenli projeksiyon görüntüleridir. Sekil Sa, kürküminin i.V. enjeksiyonunun akabinde AD-Tg faresi retinalarinda Aß plaklarmin görünür (beyaz ok ile gösterilen) hale geldigini gösterir (n=6). Sekil 5b, PBS'nin i.v. enj eksiyonundan sonra AD- Tg farelerinin retinalarinda Aß plaklarinin tespit edilemez oldugunu gösterir (n=5). Sekil 50, kürküininin i.v. enjeksiyonundan sonra Tg olmayan (wt) farelerin retinalarinda plaklarin tespit edilemez oldugunu gösterir (n=5). Sekil 5, AD-Tg faresi retina tam numunesinin parenkimasinda ve kan damarlarinin içinde insan karsiti AB antikorlari ile boyanan Aß Dplaklarini (beyaz oklar ile gösterilen damarlarin içindeki plaklar) gösteren, üç kanal ve sagital/koronal kesitleri kullanan, temsili bir esodakli z-eksenli projeksiyon görüntüsüdür. Sekiller 5e ve 5f, AOFT- bazli spektral görüntüleme sistemi ile bir floresans mikroskop kullanilarak yakalanan ve bölümlendirme ve siniflandirma yazilimi ile analiz edilen ve görsellestirilen görüntüleri gösterir. Sekil Se,de AB plaklari (beyaz içinde) ve kan damarlari (oklar ile gösterilen), kürkümin ile in vivo boyanan ve tek numunesinde görünür olmustur. Sekil 5f, ayni retina tam numunesi ve bölgesinde kürkümin ile etiketlenen Aß plaklarina özel olan optik imza (OS) kullanan spektral olarak siniflandirilan bir görüntüyü gösterir. Aß plaklari, sözde bir renktedir (beyaz oklar ile gösterilen) ve plak olmayan dokularin tamami yesil sözde renktedir. Ölçek çubuklari = 10 nm. Sekiller 5g - 5j, kürküininin tek bir enjeksiyonunun sonrasindaki görüntülerdir, burada plaklar (beyaz oklar ile gösterilen), spektral olarak kontrol edilen kaynak (546/ 15 nm dalga boyu) ile eksitasyondan sonra isigin emisyonu ile canli Ad-Tg faresi retinalarinda (n:4) görünür olmustur. Sekiller 5i ve 5j, daha yüksek oranda büyütülen görüntülerdir, burada plaklar çogunlukla optik diske yakin olan alanlarda tespit edilmistir ve ortalama plak boyutu, retina tam numunelerinde (ex vz'vo) gözlemlenen ile uyumlu olmustur. 02 1 67-P-0001 Sekil 5k, kürküinin ile i.v. enjekte edilen Tg olmayan (wt) farelerinde herhangi bir plak tespit edilmedigini gösterir. Ölçek çubuklari (g, k) = 100 pm ve (h-j) : 10 um. 23.
Sekil 6, mevcut bulusun bir düzenlemesine göre Aß plaklarinin teshis edilmesine, prognozuna ve analiz edilmesine yönelik bir spektral görüntüleme sisteminin bir akis diyagramini gösterir.
Sekil 7, mevcut bulusun bir düzenlemesine göre Aß plaklarinin teshis edilmesine ve/veya analiz edilmesine yönelik bir spektral görüntüleme sisteminin bir akis diyagramini gösterir.
Sekil 8, endojen fare APP geninden kaynaklandigi bulunan küçük retinal plaklarin (çogunluk olarak < çap olarak 1 um) yüksek çözünürlüklü görüntülerini gösterir. Görüntüler, 10 aylik Tg olmayan (wt) fare retinasina aittir.
Sekil 9, Ad-Tg retinasinda kürkümin ile boyanan plaklari ve Tg olmayan (wt) retinadaki kürkümin ile boyanan plaklarin eksikligini gösteren canli AD-Tg ve Tg olmayan (wt) fare retinalarinin görüntülerini gösterir.
BULUSUN DETAYLI AÇIKLAMASI Aksi belirtilmedikçe burada kullanilan teknik ve bilimsel ifadeler, bu bulusun ait oldugu teknikte uzman olan kisi tarafindan yaygin olarak anlasilan ile ayni anlama sahiptir. Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 3rd ed., J. Wiley & Sons (New York, NY 2001); March, Advanced Organic Chemistry Reactions, Mechanisms and Structure 5th ed., J. Wiley & Sons (New York, NY 2001); and Sambrook and Russel, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (Cold Spring Harbor, NY 2001), mevcut basvuruda kullanilan ifadelerin birçoguna genel bir kilavuz ile teknikte uzman bir kisi saglar.
Teknikte uzman kisi, mevcut bulusun uygulanmasinda kullanilabilecek, burada açiklananlar ile benzer veya esdeger olan birçok yöntem ve materyali kabul 02 1 67-P-0001 edecektir. Aslinda mevcut bulus, açiklanan yöntemler ve inateryaller ile herhangi bir sekilde sinirli degildir.
Burada kullanildigi üzere, “uygulama” ve/veya “uygulamak”, bir hastaya bir farrnasötik bilesimin dagitilmasina yönelik herhangi bir yola refere eder. Dagitim yollari, noninvazif peroral (agiz yoluyla), topikal (deri), transmukozal (nazal, bukkal/sublingual, vajinal, oküler ve rektal) ve inhalasyon yollari ayrica parenteral yollar ve teknikte bilinen diger yöntemleri içerebilir. Parenteral genel olarak intraorbital, inûizyon, intraarteriyel, intrakarotid, intrakapsüler, intrakardiyak, intradermal, intramasküler, intraperitoneal, intrapulmoner, intraspinal, intrasternal, intratekal, intrauterin, intravenöz, subaraknoid, subkapsüler, subkutanöz, transmukozal veya transtrakeal dahil olmak üzere enjeksiyon ile iliskilendirilen bir uygulama yoluna refere eder. Parenteral yol araciligiyla bilesimler, inûizyona yönelik veya enjeksiyona yönelik solüsyonlar veya süspansiyonlar formunda veya liyofilize edilmis tozlar olabilir.
Burada “Alzheimer Hastaligi”, dejeneratif ve terminal kognitif bozukluk olarak tanimlanan tüm demans formlarina refere eder. Hastalik, benzersiz bir küresel beyin hasarinin sonucu olarak statik veya normal yaslanmadan beklenebilecek olanin ötesinde vücuttaki zarar veya hastalik nedeniyle kognitif fonksiyonda uzun süreli bir zayiflamaya neden olan sekilde ilerleyici olabilir.
Burada kullanildigi üzere, “yasa bagli maküler dejenerasyon”, retinaya gelen zarar nedeniyle görüs alaninin (maküla) merkezinde bir görüs kaybina neden olan daha yasli yetiskinlerdeki tibbi bir duruma refere eder.
Burada kullanildigi üzere “kataraktlar”, az ila tam opaklik derecesinde degisen ve isigin geçisine engel olan, gözün kristalin lensinde veya bunun zarfinda gelisen bir bulanikliga refere eder. Yasa bagli kataraktin gelisiminde erken evrede lensin gücü, yakini görebilirlik (miyopluk) neden olan bir sekilde artabilir ve lenslerin yavas sararmasi ve opaklasmasi, mavi renklerin algilanmasini azaltabilir. 02 1 67-P-0001 Kataraktlar tipik olarak görüs kaybina neden olacak sekilde yavasça ilerler ve tedavi edilmemesi halinde potansiyel olarak körlestirir.
Burada kullanildigi üzere “Floresans Markör”, bilesigin bir protein veya nükleik asit gibi diger bir moleküle baglanmasina yönelik florofor içeren herhangi bir veya bütün bilesiklere refere eder. Bu genel olarak hedef molekülde yer alan bir fonksiyonel grubu seçici olayan baglayan floroforun bir reaktif türevi kullanilarak gerçeklestirilir.
Burada kullanildigi üzere “glokom”, optik siniri etkileyen bir grup hastaliga refere eder ve bir karakteristik desende retinal gangliyon hücrelerinin kaybini içerir.
Glokom, bir optik nöropati türü olarak kategorilestirilir.
Burada kullanildigi üzere “memeli”, sinirlama olmaksizin insan ve insan olmayan primatlar, örnegin sempanzeler ve diger büyük maymunlar ve maymun türleri; çiftlik hayvanlari örnegin büyükbas, koyun, domuzlar, keçiler ve atlar; evcil hayvanlar örnegin köpekler ve kediler; örnegin fareler, siçanlar ve gine domuzlari gibi kemirgenleri içeren laboratuvar hayvanlarini ve benzerini içeren Memeliler sinifinin herhangi bir üyesine refere eder. Ifade, belirli bir yas veya cinsiyeti temsil etmez. Bu nedenle erkek veya disi olmasi fark etmeksizin fetüslerin yani sira yetiskin ve yeni dogan öznelerin bu ifadenin kapsamina dahil edilmesi amaçlanir.
Burada kullanildigi üzere, “terapötik olarak etkili bir miktar”, tedavi edilen bir memelide faydali sonuçlar elde edebilen miktara refere eder. Terapötik olarak etkili bir miktar, bireysel olarak belirlenebilir ve en azindan kismi olarak memelinin fizyolojik özellikleri, kullanilan dagitim sistemi veya terapötik teknik türü ve tedavi edilen hastalik, bozukluk veya durumun ilerleyisine göre uygulama süresi hususlarina bagli olabilir.
Burada kullanildigi üzere “tedavi etmek”, “tedavi etme” ve “tedavi”, terapötik 02 1 67-P-0001 tedavi ve profilaktik veya önleyici önlemlere refere eder, burada amaç, tedavinin sonuç olarak basarisiz olmasi halinde dahi hedeflenen patolojik durum, hastalik veya bozuklugun önlenmesi veya yavaslatilmasidir (azaltilmasidir). Tedaviye ihtiyaci olanlar, bozukluga sahip olmaya egilimli olanlarin yani sira halihazirda bozuklugu olanlari veya hastaligin önlenecegi kisileri içerebilir. ß-Amiloid birikimi, AD nöropatolojinin merkezi ve Alzheimer hastaliginin temel ayirici özelligidir. Ancak canli Alzheimer hastalari ve hayvanlarin beyinlerindeki Aß plaklarinin izlenmesi, MRI ve PET'in mevcut çözünürlügü ve spesifikligi ile sinirlidir ve AB plaklarinin olusumu ile karakterize edilen Alzheimer veya diger rahatsizlik veya durumun kesin teshisi sadece plaklar ve yumaklarin sayisi ve dagilimi izlenerek beyin dokusu otopsisinden sonra mümkündür. Bu nedenle in vi'vo plaklari tanimlamak üzere araçlarin gelistirilmesi, terapilere yanit olarak hastaligin ilerleyisinin degerlendirilmesine ayrica teshisine yönelik esastir.
Mevcut bulusa göre, ekli istemlerde belirtildigi üzere yöntemlerde kullanima yönelik kürkümin saglanir.
Bulusun bir açisi, bir memelide Alzheimer hastaliginin teshisi veya prognozu yönteminde kullanima yönelik kürkümin saglar, söz konusu yöntem asagidaki adimlari içerir: kürküminin memeliye sistemik olarak uygulanmasi; memelinin retinasinin bir optik görüntüleme sistemi ile görüntülenmesi; boyanan Aß peptitlerine yönelik görüntülerin incelenmesi; ve (i) boyanan Aß peptitlerinin mevcut olmasi halinde memelinin Alzheimer hastaligina sahip olan olarak teshis edilmesi; veya (ii) bir önceki teshis ile karsilastirildiginda öznenin retinasindaki boyanan Aß peptitlerinin artisi/azalmasinin miktarinin belirlenmesi; ve 02 1 67-P-0001 öznenin retinasinda boyanan Aß peptitlerinin seviyesine bagli olarak bir prognozun ifade edilmesi.
Mevcut bulusun diger bir açisi, asagidaki adiinlari içeren, bir memelide Alzheimer hastaligi tedavisinin etkinliginin degerlendirilmesi yönteminde kullanima yönelik kürkümin saglar: kürküminin memeliye sistemik olarak uygulanmasi; memelinin retinasinin bir optik görüntüleme sistemi ile görüntülenmesi; boyanan Aß peptitlerine yönelik görüntülerin incelenmesi; ve memeli retinasinda boyanmis AB peptitlerinin seviyesine bagli olarak Alzheimer hastaligi tedavisinin etkinliginin degerlendirilmesi.
Mevcut bulusun diger bir açisi, bir memelide bir AB peptiti ile iliskili retinal rahatsizliga yönelik tedavinin etkinliginin degerlendirilmesi yönteminde kullanima yönelik kürkümin saglar, söz konusu yöntem asagidaki adimlari içerir: kürküminin memeliye sistemik olarak uygulanmasi; memelinin retinasinin bir optik görüntüleme sistemi ile görüntülenmesi; boyanan Aß peptitlerine yönelik görüntülerin incelenmesi; ve memeli retinasinda boyanmis AB peptitlerinin seviyesine bagli olarak Aß peptiti ile iliskili retina] rahatsizliga yönelik tedavinin etkinliginin degerlendirilmesi.
Mevcut bulusun diger bir açisi, bir memeli retinasinda AB peptitlerinin tanimlanmasi yönteminde kullanima yönelik kürkümin saglar, söz konusu yöntem asagidaki adimlari içerir: kürküminin memeliye sistemik olarak uygulanmasi; memelinin retinasinin bir optik görüntüleme sistemi ile görüntülenmesi; ve boyanan Aß peptitlerine yönelik görüntülerin incelenmesi. 02 1 67-P-0001 Mevcut açiklama, memelilerde retinal Aß plaklarinin olusumunu ve retinal Aß plaginin tanimlanmasina, niceliginin belirlenmesi ve görüntülenmesine yönelik yöntemlerde kullanima yönelik kürkümini saglar. Mevcut konu, Alzheimer hastaligi, deinans ve AB plaklarinin olusuinu ile karakterize edilen diger klinik durumlar ve rahatsizliklari olan hastalara yönelik dahil edilebilir. Ayrica mevcut konu, AD hastalarinin retinasinda Aß plaklarinin olusumunun beyindeki görünüslerinden önce oldugunu bulmustur. Buna göre mevcut konu, retinadaki Aß plaklarinin boyanmasina yönelik hastaya bir Iloresans marköiünün (diger bir ifadeyle, kürkümin) uygulanmasi ve boyanmis Aß peptitlerini tanimlamak üzere bir optik görüntüleme sistemi ile hastanin retinasinin görüntülenmesi adimlarini içeren, bir memelide AD,nin erken teshisine yönelik bir yöntemde kullanima yönelik kürkümini açiklar.
Mevcut konunun diger bir düzenlemesi, tedaviden önce ve sonra hastalarin retinasindaki Aß plaklarinin artisi veya azalmasi ölçülerek meinelilerde AD”nin prognozuna yönelik bir yöntemde kullanima yönelik kürkümini açiklar. Prognoz yöntemi, retinada Aß plaklarinin boyanmasina yönelik hastaya bir Iloresans markörününün uygulanmasi ve boyanan Aß peptitlerini tanimlamak üzere bir optik görüntüleme sistemi ile hastanin retinasinin görüntülenmesi akabinde hastaya bir AD tedavisinin uygulanmasi ve zamani gelince AD tedavisinin etkisini göstermesinin saglanmasi adimlarini içerir. Ve AD tedavisinden sonra retinada AB plaklarinin boyanmasina yönelik hastaya bir floresans markörünün yeniden uygulanmasi ve boyanmis Aß peptitlerinde bir artis veya azalma tanimlamak üzere optik görüntüleme sistemi ile hastanin retinasmin görüntülenmesi.
Bilgilendirme amaciyla burada AB plaklarinin olusumunun azaltilmasinda ve varliginin çözülmesinde hastaya miyelin türevli peptitlerin ve/veya iniyelin türevli peptitlerin agonistinin terapötik olarak etkili bir miktarinin uygulanmasini içeren, memeli hastalarda AD°nin tedavi edilmesine yönelik bir yöntem açiklanir.
Bilgilendirme amaciyla burada hastaya miyelin türevli peptitlerin ve/veya miyelin 02 1 67-P-0001 türevli peptitlerin agonistinin terapötik olarak etkili bir iniktarinin uygulanmasi adimlarini içeren, retinal Aß plaklarini içeren memeli hastalarda görme yeteneginin gelistirilmesine yönelik yöntemler açiklanir. Görme yeteneginin gelistirilmesi yöntemi, AD°si, demansi veya Aß plaklarinin olusumu ile karakterize edilen diger klinik durumlar ve rahatsizliklari, örnegin Yasla Ilgili Maküler Dejenerasyon (AMD) ve glokomu olan hastalara yönelik uygulanabilir.
Konu, Aß plaklarinin memelilerin retinasinda mevcut oldugunu ve retina] Aß plaklari ile karakterize edilen diger birçok klinik durum ve rahatsizligi analiz etmek, prognozunu yapmak ve teshis etmek üzere kullanilabilecegini açiklar.
Temsili klinik durum ve rahatsizliklar, AMD ve glokomu içerebilir.
Bulusun baglaminda faydali olan diger buluslar, insan olmayan memeli ve insan hastalarin retinasindan in vivo Aß plaklarinin görsellestirilmesine yönelik bir optik görüntüleme sistemini içerir. Optik görüntüleme sistemi, bir Iloresans mikroskopu, civa ve ksenon ark lambalari, bir CCD kamera, bir AOTF (sesli isiksal ayarlanabilir filtreler)-temelli spektral görüntü edinme aparati ve ve analiz sonrasi görüntüleme yaziliminin kullanimini içerir. Optik görüntüleme sistemi, ham görüntülerden çikarilan spektral imzanin bir görsel sözde renkli temsilini saglayan, Aß plaklari nesnelerinin boyutunu ve lokasyoriunu temsil eden, boyanmis Aß plaklarinin retina] görüntülerini saglamak üzere yukaridaki araçlari Alternatif bir düzenlemede optik görüntüleme sistemi, floresansi görsellestirrnek ve daha yüksek çözünürlüklerde sinyalleri yaymak üzere ayarlanan bir stereomikroskop kullanimini içerir. Stereomikroskop, bir Polychrome V degisken dalga boyu isik kaynagi ile donatilabilir. Ilave düzenlemelerde optik görüntüleme sistemi, büyütmeyi ve görüntü ayrintisini gelistirmek üzere bir MicroFire renkli dijital kamera ve bir veya daha fazla büyütme lensi içerebilir. Görüntüleme elde edilmesi, görüntüleme yazilimi kullanilarak analiz sonrasi görüntü bölümlendirme ve siniflandirmasi ile edinilir ve mükemmel hale getirilir. 02 1 67-P-0001 Optik görüntüleme sisteini, burada açiklanan yöntemlere dahil olabilir. Ayrica optik görüntüleme sistemi, hizli bir sekilde degisen optik distorsiyonun etkileri azaltilarak optik görüntülemenin performansini gelistirmek üzere kullanilan uyarlanabilir optikler ile arttirilabilir.
Diger bir düzenlemede konu, ilaç gelistirme ve test etmeye yönelik kullanilabilir.
Noninvazif, hizli bir sekilde tekrarli görüntüleme yöntemleri, çesitli ilaçlar ve ilaçlarin çesitli dozlarinin arka arkaya karsilastirmasini saglayacaktir, mevcut konu ilaç gelistirme ve test etme konusunda faydali bir kullanima sahip olacaktir. Önceki bir rapor, AD hastalarinin lenslerinde Aß birikiminin bulgularina bagli olarak beyinde Aß patolojisini tanimlainistir [31]. Mevcut çalisma, spesifik olarak kürkümin ile görsellestirilebilen AD hastalarinin retinalarinda AB plaklarinin varligina yönelik kanit saglar. Aß plaklari, incelenen tüm AD hastalarinin retinasinda bulunmustur ancak bunlar, AD olmayan kontrollerde tespit edilememistir. Genç ve yasli AD farelerinde retinal ve beyin Aß plak patolojisi arasinda iyi bir iliski gözlemleninistir; plaklar, hastaligin ilerlemesi sirasinda yasa bagli bir sekilde birikmistir ve retina ve beyin, ayni terapötik modaliteye bir yanit olarak Aß plak azalmasi göstermistir. Genel olarak beyin ile birçok benzerligi paylasan retinal doku, AD7nin teshis edilmesi ve izlenmesine yönelik potansiyel olarak kullanilabilir.
Mevcut çalismada AD hastalarinin retinalarinda Aß plaklari, çogunlukla RGC katmaninda tespit edilmistir. AD fare gözlerinde plaklar, retinal katmanlarin çogunda ve koroid içinde görülmüstür. Plaklar, NFLaden ONUye fark edilebilmistir ve Aß plaklarinin kümeleri, canli öznelerin gözleri üzerinde plak görüntüleinenin olasiligini gösteren bir sekilde retinainn iç katmanlarinda daha sik görülmüstür. AD farelerinin retinalari, beyinde gözlemlenen plaklarin yasa bagimli birikimi ile benzer bir sekilde sayi ve boyut açisindan Aß plak yükünde yasa bagimli bir artisa maruz kalir. Retinal plak patolojisini gösteren sonuçlarimiz, yetiskin ve yasli AD-Tg farelerinde retinal inflamasyon ve 02 1 67-P-0001 dejenarsyon ile iliskili retinal AB birikintisini ortaya çikaran son bir rapor ile uyumludur [16]. Mevcut konu, retinal ve beyin plak patolojisi arasindaki bir bagi destekleyen kanit saglar ayni zamanda AB plaklarinin genç AD-Tg farelerinde beyinde tespit edilmelerinden önce retinada tespit edilebilir olduklarini gösterir.
Ayni zamanda miyelin türevli peptit ile asilamadan sonra AD-Tg farelerinin retinalarinda AB plaklarinin önemli bir azalmasi tarafimizca gösterilebilmistir; ilgili olanlarin yani sira bu tedavinin beyinde AB plak yükünün azaltilmasinda etkili oldugu bulunmustur [l7,24,25]. Bu bulgular, retinal plaklarin degerlendirmesinin plak azaltici terapiye yanitlari degerlendirmek üzere kullanilabilecegini ve retinal plaklarin beyinde AB plak azalmasinda etkili olan ayni tedaviye yanit verebilecegini saglar. Önemli bir sekilde plaklarin 5 um”den fazla bir boyuta ulasan insan gözlerindeki GCL°de görülmesi, bir adaptif optik oftalmoskop gibi insan gözü görüntülemeye yönelik mevcut olarak bulunan araçlar dahil olmak üzere bazi modifikasyonlarla Alzheimer hastalarinin retina üzerinden görüntülenmesine yönelik uygulanabilir bir yaklasim olusturur [32]. Canli farelerde ticari olarak temin edilebilen bir midriyatik retinal kameranin retinal gangliyon hücrelerinin boylamsal degisikliklerinin degerlendirilmesini saglayan fundus fotograflarinin kaydedilmesinde etkili oldugu bulunmustur [33]. Siyan Iloresans proteinini görsellestirmek üzere modifiye edilen bir mavi isik esodakli taramali lazer oftalmoskop (bCSLO) sistemi ayni zamanda canli fare retinasinda RGCileri görsellestirmek üzere noninvazif bir yaklasik saglar [34]. Burada kavram kanitlamaya yönelik Polychrome V spektral isik kaynagi ve çift konveks lensi ile donatilan bir stereomikroskop (Leica S6E) kullanarak canli farelerde kürkümin etiketli plaklari tespit edebildik. Ayrica bir AOTF sistemi kullanarak güçlü altyapili otofloresans sinyallerini (kirmizi kan hücrelerinden) ortadan kaldirirken kürkümin ile retinal AB plaklarini tespit edebildik.
Mevcut çalismada kürkümin, 7.5 mg/kgdik tek bir dozda sistemik olarak uygulandiginda veya oral olarak verildiginde retinal AB plaklarinin tespit 02 1 67-P-0001 edilmesinde etkili olmustur. Kürkümin, faydali bir plak görüntüleme ajanina yönelik gerekli olan kan-beyin ve kan-retina bariyerlerini çaprazlama yetenegi göstermistir. Güvenlik açisindan kanserli olan hastalarda Faz I ve II denemeleri, yüksek dozlarda (12 g/gün) dahi ve uzun zaman periyotlari boyunca verildiginde insanlarda düsük toksisitesini kanitlamistir [35]. Retinal plak görsellestirmesine yönelik farelerden insanlara (l g”nin altinda) intravenöz olarak veya oral olarak verilen kürkümin dozlarinin translasyonunun rapor edilen güvenlik seviyelerinde kalmasi beklenir. Ayrica son çalismalari, insanlarda kürkümin stabilitesi ve biyoyararlanimi önemli derecede arttirmak üzere çesitli yaklasimlar rapor etmistir AD hastalarinin retinasinda Aß plaklarinin tanimlanmasi, bunlarin in vivo tespit edilmesini saglayacak olan yüksek çözünürlüklü ve hassas görüntüleme yönteminin gelistirilmesine yönelik yeni bir firsat saglar. Bu sonuçlar, AD hastalarinda bulunan erken görsel islev bozuklugu ile [37, 38] ve AD hastalarinda rapor edilen GCL ve NFL7nin atrofisinde hücre kaybi gibi retinal anormalliklere yönelik kanit ile [39-44] uyumlu olabilir. Aß plaklarinin AD,n1n erken veya geç evrelerinde bulunup bulunmadigmm kesin olmamasina ragmen farkli yaslardaki bu hastalarin retinasinda Aß plaklarinin mevcut bulusu ve bu plaklarin AD-Tg farelerinde hastaligin çok erken semptom öncesi fazda tespit edilebilir olmasi, gözler üzerinde görünen kürkümin etiketli plaklarin AD,nin erken teshisine yönelik kullanilabilecegi olasiligini güçlendirir. Önemli bir sekilde bunlarin retinalardaki benzersiz boyut ve dagitimina bagli olarak AD hastalarinda gözlemlenen plaklar sonunda farkli teshislere yönelik kullanilabilir: yasla ilgili maküler dejenerasyonda tespit edilen plaklar drusen içinde retinal pigment epitelyum ile lokal olarak sinirlidir ve boyut olarak daha küçük görünür [45-47].
AD hastalarinda görünen retinal anormallikler açisindan mevcut DC asisi gibi bir plak azaltici terapinin ayni zamanda gelismis görme yetenegine neden olarak görsel islev bozukluklarinin bazilarini azaltma konusunda yardimci olmasi mümkündür. 02 1 67-P-0001 Dünya nüfusunun yaslanmasi ve AD'nin epidemisinin büyümesi ile birlikte AD”nin erken tespiti, riskin degerlendirilmesine, yeni terapilerin incelenmesine ve gelistiginde erken müdahale ile ADanin tedavi edilmesine yönelik daha kritik hale gelir. Amiloid plaklar ve nörofibriler yuinaklar dahil olmak üzere AD patolojisinin semptomlarin kendini göstermesinden ve herhangi bir önemli nörodejenerasyonun meydana gelmesinden yillar önce göründügü düsünülür.
Bilissel olarak normal olan öznelerde beyin patolojisi ve kognitif zayiflamanin gelisimini tahmin edebilen, retinadaki Aß plaklari gibi AD”ye özel olan erken ölçülebilir markörlerin kesfedilmesi özellikle gereklidir. ADsnin fare modellerinde bulusçularin bulgulari, AD patolojisinin erken belirtisine ve bir terapötik müdahaleye yönelik noninvazif bir araç olarak kürkümin ile in vi'vo etiketlenen retina] plaklarin görüntülenmesinin kullanimini destekler.
Ayrica burada genel olarak AD hastalarinin gözleri ve görme yeteneginin dejenerasyonu ile iliskilendirilen, retinadaki Aß plaklarini azaltmak ve/veya ortadan kaldirmak üzere asi terapileri açiklanir. Miyelin türevli peptitler veya miyelin türevli peptitlerin zayif agonistleri, nörolojik korunmayi etkili bir sekilde indüklemek ve retinadaki plak olusumunu azaltmak üzere kullanilmistir.
Kisaca insan retinalarindaki AB plaklarini tanimladik ve insanlarda güvenli oldugu kanitlanan sistematik bir sekilde uygulanan bir bilesik kullanilarak retinada Aß plaklarini görüntüleyerek beyinde Alzheimer plak patolojisini daha erken ve daha kolay bir sekilde tespit etmek ve izlemek üzere yeni bir yaklasimi açikliyoruz. Bu, önemli bir fonksiyonel eksikligin görülmesinden önce bilissel olarak normal ve iyi olan öznelerde beyin patolojisi ve kognitif zayifligin gelisimini tahmin edebilir. Bu bulgular, retinanin optik görüntülemesinin AD ilerleyisinin ve terapötik müdahalelere yanitin izlenmesine yönelik noninvazif bir yaklasim olarak kullanilabilecegini gösterir [48]. 02 1 67-P-0001 ÖRNEKLER Asagidaki örnekler, tanimlanan bulusu daha iyi açiklamak üzere saglanir ve bulusun kapsamini sinirlandirici olarak yorumlanmayacaktir. Spesifik materyallerden bahsedilmesine iliskin olarak bu sadece açiklama amacina yöneliktir ve bulusu sinirlamasi amaçlanmaz. Teknikte uzman kisi, bulusa ait kapasite gerçeklestirilmeden ve bulusun kapsami disina çikilmadan esdeger araçlar veya reaktantlar gelistirebilir.
Ornek 1 !Altyapi ve bilgilendirme amaçlarina yönelik! Sonuçlar: AD fare retinasinda Aß birikintileri' kürkümin kullanilarak görsellestirilebilir Insan APPswe ve PSldE9 transgenlerini tasiyan AD-Tg fareleri, gözde Aß plaklarinin tespit edilmesine yönelik noninvazif bir araç gelistirme potansiyelini degerlendirmek üzere kullanilmistir. Birinci olarak kürküminin AD-Tg farelerinin hipokampüsünde insan Aßssina özel olan antikorlar ile tespit edilen ayni plaklara bir afiniteye sahip oldugunu onayladik (Sekil la: ayni kanallar Sekiller lb ve lc).
Daha yüksek oranda büyütmede görüntüler, her bir prosedür takip edilerek elde edilen spesifik boyama desenini gösterir (Sekiller 1d ve le). Insan AB plaklari, Tg olmayan yavru dogal sus (wt) farelerinin beyinlerinde tespit edilememistir (Sekil lt). Akabinde AD-Tg farelerinin gözlerinde Aß plaklarinin ayni zamanda kürkümini baglayip baglayamadigini test ettik. Yüksek çözünürlükte inceleme, Tg olmayan (wt) farelerin retinalarinda (Sekiller 1 j ve ln) degil ancak AD-Tg farelerinin (Sekil lg - li, retina tam numunesi; Sekil lk - lm) retinalarinda kürkümin ve insan karsiti Aß antikorlari ile etiketlenen AB plaklarinin varligini ortaya çikarmistir. Temsili görüntüler, iç pleksiform katmani (lPL; Sekil lg), iç nükleer katman (INL) / dis pleksiforrn katmani (OPL; Sekil lh) ve dis nükleer katmani (ONL; Sekil li) içermek üzere çesitli derinliklerde (80 um derinliginde fokal düzlemlerde sirali edinim) retina tam numunelerinde Aß plaklarinin 02 1 67-P-0001 lokasyonunu gösterir. Enine kesitlerin analizi ayrica OPL katmanlari üzerinde gangliyon hücre katmani (GCL) ve lPL”de belirgin bir üstünlük ile derin retinal katmanlari ve koroid içinde Aß plaklari birikintisini onaylamistir (Sekiller lk - lm). Ancak insan Aß plaklari, Tg olinayan (Wt) yavrularda mevcut olmamistir (Sekil lj ve ln), rastgele küçük kürkümin pozitif plaklar tespit edilmistir. Wt farelerde kürkümin boyamasi ile tespit edilen bu küçük ve aralikli plaklarin yapisini belirlemek üzere 10 aylik wt farelerin retina tam numunesinde fare-Aß”ya özel kürkümin ve antikorlar kullanilarak çift boyama deneyi gerçeklestirdik.
Aslinda wt retinalarda kürkümin ile tespit edilen küçük plaklarin fare karsiti Aß antikorlari ile birlikte etiketlendigi böylece bunlarin kimligini endojen olarak olusturulan fare-AB birikintileri olarak onayladigi bulunmustur (Sekiller Sa - 8d). Örnek 2 (Altyapi ve bilgilendirme amaçlarina yönelik) Sonuçlar: Aß plaklari, AD hastalarinin retinalarmda olusur ve kürkümin ile görsellestirilebilir Akabinde ADinin kesin teshisi ile hastalarin postmortem gözlerinde (n=9 48 ila 94 yas araligi; farkli hastalik siddetleri, bunlarin nöropatoloji raporlarina bagli olarak karakterize edilen) ve yas eslesmeli normal kontrollerin postmortem gözlerinde (n=4, 66 ila 92 yas; bakiniz insan donör göz kayitlari (bakiniz Tablo 1)) AB plaklarinin varlgini inceledik. 360-710 nm araliginda eksitasyon altinda gözlemlenen ve Iipofuskin/lipid birikintileri ve/veya formalin ile uzun süreli baglama ile iliskilendirilen baglanmis insan gözlerinin otofloresansi ve Spesifik olmayan sinyalleri [21, 22], Sudan Black B boyasi ile ortadan kaldirilmistir (Sekil 2). Kürkümin boyamasina yönelik birinci olarak insan retina tam numunesini Sudan Black B boyasina batirdik (Sekil 2a ve 2c; herhangi bir plak gözlemlenmeinistir) akabinde kürkümine maruz biraktik (Sekil 2b ve 2d; temsili görüntüler, ayni doku lokasyonunda plaklari gösterir). Boyut olarak 1 ila 10 am (tipik olarak yaklasik 5 um) araliginda degisen kürkümin ile tespit edilen plaklar, GCL, IPL ve INL retinal katmanlarina (Sekil 2a ve 2g) karsilik gelen çesitli fokal 02 1 67-P-0001 derinliklerde ve beyinde rapor edilen plak patolojisine belirgin bir iliski ile incelenen tüm AD hastasi gözlerinde bulunmustur. Ayni zamanda insan Aß,sina karsi yönlendirilen antikorlar ile insan retinalarini analiz ettik. AD hastalarinda AB plaklari tanimladik ve bunlarin yapisinin fare retinasi ve beyninde bulunan ile benzer oldugunu bulduk [Sekiller 2h ve Zi, en içteki retinal katmanlari (diger bir ifadeyle, GCL) temsil eder burada plaklar kolay bir sekilde tespit edilir; Sekil 2i, retinal Aß plak yapisinin daha yüksek oranda büyütülmüs bir görüntüsüdür; Sekil 2j, daha derin sirali fokal düzlemleri (diger bir ifadeyle, IPL) temsil eder. Plaklar, sadece sekonder antikorlar kullanildiginda tespit edilememistir (veriler gösterilmez). Bunlarin Aßaya yönelik immün etiketlenmelerinden sonra insan retinalarinin kürkümine maruziyeti, bunlarin ko-lokalizasyonunu onaylamistir (Sekiller 2k -2m). AD olmayan insan gözlerinde herhangi bir AB plak tespit edilmemistir (Sekil 2n).
TABLO 1 Hasta Cinsiyet'& Pre- Post Mortem Nihai Ölüm Nedeni Teshisi (Hastalik Süresi) Neokorteks ve Demans, . Hidrosefalus hipokampüste orta AD 412 F, 48 AD, (10 _ i _ i . ile serebral siddetli ile sik NP,ler belirgin yasinda) atrofi ve NFTsler Entorinal korteks ve Demans, _ hipokampüste AD 404 F, 65 AD, (5 N/A yüksek sayida difüze belirgin yasinda) plak, NP ve NFT 435 M, 70 Demans, Olta yükseklikte AD Arka 02 1 67-P-0001 Hasta Cinsiyet'& 539 M. 78 484 M, 86 664 M, 87 486 F, 88 513 F, 90 525 F, 94 Mortem Teshisi (Hastalik Süresi) yasinda) Demans, (3 yasinda) Demans, yasinda) Demans, yasinda) Demans, yasinda) Demans, AD2 ( 1 4 yasinda) Demans, yasinda) Post Mortem Nöropatoloji sayida NP ve NFT Çogu çekirdekli yüksek sayida NP ve fazla sayida NFT ve difüze plaklar Neokorteks ve hipokampüste fazla NFT' ve NP Neokorteks ve hipokampüs CA- lide orta siddetli ila sik NPsler ile NFT,ler Siddetli NPller ve NFT”ler Hafif NP”ler5 ve fazla NFTiler4 Olgun çekirdekler ile fazla NPiler ve çok sayida NFT Teshis belirgin belirgin belirgin belirgin belirgin belirgin6 belirgin Ölüm Nedeni akcigerlerin pnömonisi Subdural hematom Serebrum & Serebellum infarktüsü Serebrum infarktüsü Pnömoni Serebral hemoraji infarktüs fokal Serebrum infarktüsü 02 1 67-P-0001 Hasta Cinsiyet'& Yas (yil) 93-78 Mortem Teshisi (Hastalik Süresi) Demans Yoklugu Normal Demans Yoklugu Normal Demans Yoklugu Oksipital Demans Yoklugu Normal 1 Cinsiyet: F=Disi, M=Erkek 2 AD - Alzheimer hastaligi 3 Nevritik Plaklar (NPiler) ve 4Nöroiibriler Yumaklar (NFTaler), birkaç Post Mortem Nöropatoloji Aralikli neokortikal NP91er ve NFTsler Orta yükseklikte sayida difîize plakalar ve sadece hipokampüste az yükseklikte sayida N Psler Teshis Normal Normal Normal Normal Ölüm Nedeni Karaciger yetmezligi Serebrum infarktüsleri Uzak ve çoklu serebrum infarktüsü CNS alaninda Gümüs :(Gallyas veya Bielschowsky) boyasi ve TiyoIlavin boyasi ile belirlenmistir: Hipokampüs CA-l, Entorinal Korteks, Mid Frontal, Sup./Mid. Temporal, Inferiyor parietal, Primer Görsel, Görsel iliski CVA - Serebral vasküler kaza veya felç. 02 1 67-P-0001 Hasta Cinsiyet'& Pre- Post Mortem Nihai Ölüm Nedeni Teshisi (Hastalik Süresi) 6 AD belirgin - CERAD kriterine göre. Örnek 3 (Altyapi ve bilgilendirme amaçlarina yönelik) Sonuçlar: Kürkümin ile in vivo boyunun AD farelerinde Aß plaklari, beyinde oldugundan daha erken bir sekilde retinada tespit edilir ve hastaligin ilerleyisi sirasinda biriki'r Retinada plaklarin görüntülenmesine yönelik kürkümin kullanimi olusturmak üzere sistematik olarak enjekte edildiginde bunun göze biyoyararlanimini test ettik. Bu amaçla farelere intravenöz olarak kürkümin enjekte edilmistir.
Uygulanan kürküminin akabinde etiketlenen plaklar, Tg olmayan (wt) kontrollerde degil ancak AD-Tg farelerinin retinalari ve beyinlerinde tespit edilebilmistir (Sekil 3). Bu bulgular, kürküminin kan-beyin bariyerini geçtigini dogrulamistir ve bunun ayni zamanda kan-retina bariyerini geçtigini ve in vi'vo Aß plaklarina yönelik yüksek bir atiniteye sahip oldugunu önerir. Önemli olarak kürkümin etiketli plaklar, tek bir kürkümin enjeksiyonunun akabinde veya çoklu enjeksiyonlarin akabinde tespit edilebilir. 2.5, 5, 9 ve 17 aylik AD-Tg farelerinin retinal ve beyin hipokampüs ve kortikal görüntülerinin temsili z-eksenli projeksiyonlari, retina ve beyindeki plak birikintisi ile hastaligin ilerlemesi üzerine artan birikme arasinda yasa bagimli bir iliski göstermistir (Sekiller 3a - n). Önemli olarak plaklar, retinalardaki Aß plaklarinin beyin patolojisinden önce geldigini öneren bir sekilde in vivo kürkümin uygulanmasinin akabinde AD-Tg farelerinde 2.5 aylik kadar erken olarak beyinde degil (Sekil 3c ve 3d) ancak retinada (Sekil 3a ve 3b) tespit edilmistir. Ayrica bu kürkümin etiketli plaklarin, 02 1 67-P-0001 insan karsiti Aß antikoru boyainasi ile ex vivo olarak birlikte lokalize edildigini dogruladik (Sekil 3b ve 3D. Aß plaklari, AD-Tg farelerinin bu susunda hastaligin baslangici ve ilerleyisinin önceki açiklamalari dogrultusunda birinci olarak 5 aylik oldugunda beyinde (Sekil 3g ve 3h) tespit edilebilinistir [23]. Wt farelerinde Aß plaklari, 9 aylik kadar geç olmak üzere retinada (Sekil 30) ve beyinde (Sekil 3p ve 3q) tespit edilememistir. Örnek 4 (Altyapi ve bilgilendirme amaçlarina yönelik) Sonuçlar: Aß plak yükü, asi terapisin in akabinde retinada azalir Ayrica AD-Tg farelerinde gözlemlenen retinal plaklarin geleceginin ayni tedaviye yanit olarak beyin Aß plaklarininki ile benzer olup olmadigini arastirdik. Miyelin türevli peptitler veya miyelin türevli peptitlerin zayif agonistlerinin nörolojik korunmayi etkili bir sekilde indükledigi ve plak olusumunu azalttigi gösterilmistir etkisini saglamak üzere AD-Tg farelerini bir tasiyici ve adjuvan olarak dendritik hücreleri (DC'ler) kullanarak degistirilen bir miyelin türevli peptit (MOG45D, PBS ile enjekte edilen 10 aylik AD-Tg farelerinin tam numunesi alinan retinalari ve wt yavrularinkiler (grup basina 4 fare/8 retina), kürküinin ve anti-Aß antikou kullanilarak Aß plaklarina yönelik ex vivo etiketlenmistir (Sekil 4). Temsili eksenel (z-yigini) projeksiyon görüntüleri, PBS ile muamele edilen kontroller ile karsilastirildiginda asilanan AD-Tg farelerinde Aß plaklarinin sayisinda büyük oranda bir azalma göstermistir (Sekil 4d ve 4f”ye karsi Sekil 4a - 4c, sirasiyla; Sekiller 4b ve 4c ve Sekiller 4e ve 4f”de ayri kanallar). Wt farelerinde herhangi bir AB plagi (kürkümin ve insan karsiti AB antikoru ile çift boyanan) tespit edilmemistir (Sekil 4g). Yüksek çözünürlüklü görüntülerde nadiren endojen fare APP geninden kaynaklandigi bulunan küçük retinal plaklari (çogunluk olarak çap olarak hepsinde insan karsiti AB antikorlari ile degil ancak kürkümin ile boyanmistir 02 1 67-P-0001 (Sekiller 4a, 4d ve 4g). Ayrica optik diskin çevresindeki 12 alani (toplamda yaklasik olarak 0.45 mm2) yakalayarak plak sayisi ve boyutunun niceligini belirledik ve her bir alanda 60-um tarama derinligi boyunca plaklarin niceligini belirledik (Sekil 4h; her bir alan dikdörtgen 1-12 ile gösterilir). Kürkümin boyamasi ile tespit edilen plak sayisinda önemli bir azalma, PBS ile muamele edilen kontroller ile karsilastirildiginda asilanan AD-Tg farelerinin retinalarinda bulunmustur (Sekil 4i; P=0.(){)28). Büyük oranda azalma ayni zamanda PBS ile muamele edilen AD-Tg farelerine karsi asilananlarda retina] plaklar ile kapsanan ortalama alanda gözlemlenmistir (Sekil 3j; P=0.0002). Açik bir sekilde toplam plan alaninda PBS ile muamele edilen farelere göre önemli azalma ayni zamanda ayni asilanan farelerin beyinlerinden hipokampüs ve kortekte gözlemlenmistir (Sekil 4k; P=0.0085).
Sonuçlar: Sistemik olarak enjekte edilen kürkümin kullanilarak gözlerde Aß plaklarinm in vivo görüntülenmesi Canli öznelerin gözlerinde kürkümin ile AB plaklarinin görsellestirilmesi potansiyelini arastirmak üzere birinci olarak bunlarin göz enükleasyonunun öncesinde perfuze edilmeyen farelerin retina tam numunelerinde Aß plaklarini tanimlama yetenegimizi, daha fizyolojik bir ayar ile test ettik. Temsili eksenel projeksiyon görüntüleri, kapilerlerde kirmizi kan hücrelerinde arkaplan sinyallerini içeren, bu kosullar altinda dahi plaklarin daha önceden kürkümin ile i.V. enjekte edilen AD-Tg farelerinin retinalarinda tanimlanabilecegini göstermistir (Sekil 5a). Önemli olarak kürkümin yoklugunda plaklar, PBS ile i.V. enjekte edilen AD-Tg farelerinde tespit edilemeinistir (Sekil 5b), bu görüntüleme modaliteleri kullanildginda plaklarin, bunlarin otofloresans sinyalleri ile yalnizca retinada nadiren tespit edildigini önerir. Beklendigi üzere kürkümin ile enjekte edilen Tg olmayan (Wt) farelerde plaklar tespit edilmemistir (Sekil 5c). Plaklarin ex vivo insan karsiti Aß antikorlari ile ilave etiketlenmesi, kürkümin boyamasinin 02 1 67-P-0001 Aß spesifikligini dogrulainistir (veriler gösterilmez). Anti-AB antikorlari ile etiketlenen ADTg farelerinin retina tam numunelerindeki Aß plaklari, kan damarlarinda ayrica bunlarin parankimal yakinlarinda bulunmustur (Sekil 5d; konfokal gerçek enine kesit). Ayni zamanda kan damarlarindan ortaya çikan arkaplan sinyalini azaltirken AB plaklarinin tespit edilmesinin mümkün olup olmayacagini inceledik. Bu amaçla geçitli kamera kullanarak sesli isiksal ayarlanabilir filtreler (AOTF) [29] ve floresans ömürlü görüntüleme ile spektral görüntüleineden olusan bir çoklu spektral görüntüleme teknolojisini içeren bir floresans mikroskop (Nikon TEZOOO) kullanilarak spesifik optik imzayi izledik; görüntü ediniminden sonra daha önceden tarafimizca gelistirilen yazilim kullanilarak analiz sonrasi görüntü bölümlendirme ve siniflandirina yapilmistir görüntülenen kürkümin etiketli plaklar, AD-Tg fare retinasinda gözlemlenmistir (Sekil 5e). AOTF bazli görüntüleme uygulanarak, kürkümin etiketli plaklarin spektral imzasi yakalanarak ve rengine göre siniflandirilan dijital görüntülere post-translasyon ile, kan damarlari tarafindan olusturulan otofloresans ortadan kaldirilirken “dogru” sinyaller olarak Aß plaklarinin spesifik optik imzasini tanimlayabildik (Sekil 5f). Noninvazif plak tespitine yönelik yaklasimimizin fizibilitesini arastirmak üzere dalga boyu ile kontrol edilen isik kaynagi ve dijital bir kamera ile modifiye edilmis bir stereomikroskop (Leica S6E) kullanilarak canli farelerde retinanin in vi'vo görüntülenmesini gerçeklestirdik. Görüntülemenin iki saat öncesinde kürküminin tek bir enjeksiyonunun (7.5 mg/kg) akabinde kürkümin etiketli plaklar, 546/ 15 nm`1ik bir eksitasyon dalga boyunda spesifik olarak AD-Tg fareleri retinasinda görünür olmustur (Sekil 5g - 5j). Plaklar çogunlukla optik diske yakin olan alanlarda tespit edilmistir. Ortalama plak boyutu, retina tam numunelerinde (ex vivo) gözlemlenen ile uyumlu olmustur.
Kürkümin ile i.v. enjekte edilen Tg olmayan (Wt) farelerde (Sekil 5k) veya kürkümin enjeksiyhonu almayan AD-Tg farelerinde (veriler gösterilmez) herhangi bir plak tespit edilmemistir. Modifiye edilmis stereoinikroskop ile yakalanan sinyallerin plaklardan kaynaklandigini dogrulamak amaciyla farelere ötenazi 02 1 67-P-0001 yapilmistir ve kürkümin etiketli plaklarin varligi retina tam numunesinde onaylanmistir (veriler gösterilmez). Örnek 6 (Altyapi ve bilgilendirme amaçlarina yönelik) Kimerik fare/insan APP (APPswe) ve mutant insan presenilin l (ekson 9,da delesyon - PSENlAE9) genlerini barindiran çift transgenik fareler (esit sayida disiler ve erkekler) ve bunlarin yas eslesmeli Tg olmayan yavrulari, Jackson Laboratoriesiden (Bar Harbour, ME, sus #4462) alinmistir ve Cedars-Sinai Medical Center (Los Angeles, CA) karsilastirmali tip hayvan merkezinde çiftlestirilmistir ve muhafaza edilmistir. Bütün deneyler, Cedars-Sinai Institutional Animal Care and Use Committee tarafindan planlanan düzenlemelere göre onaylanmis ve gerçeklestirilmistir. Örnek 7 (Altyapi ve bilgilendirme amaçlarina yönelik) Genoti'pleme Genomik DNA, üreticinin protokolü takip edilerek bir DNA ekstraksiyon kiti (Qiagen, Valencia, CA) kullanilarak 0.5 cm kuyruk ucundan ekstrakte edilmistir.
Bu çalismada kullanilan fareler, önceden açiklandigi üzere (Jankowsky, 2004, Referans #120) PCR ile transgenlerin varligina yönelik genotiplenmistir. Örnek 8 (Altyapi ve bilgilendirme amaçlarina yönelik) Asilama Hazirliklari Modifiye edilmis miyelin türevli peptit, ensefalitogenik peptitten (MOG45D), 02 1 67-P-0001 olmayan yavrularin donör farelerinden kemik iligi türevli dendritik hücrelerine eklenmistir. Asilamaya yönelik dendritik hücrelerin hazirlanisi daha önceden açiklandigi gibidir (Hauben, 2003, Referans #34).
Ornek 9 !Algapi ve bilgilendirme amaçlarina yönelik) Asilamalara yönelik Deneysel Rejim 7 aylik AD-Tg farelerine üç ay boyunca ayda bir kere DC-MOG45 (hayvan basina kontrol gruplarina karsilik gelen rejimlere göre 1 x PBS enjekte edilmistir. Çalisinanin sonunda bütün fareler, % akabinde 1 x PBS ile anestezi altinda perfuze edilmistir ve beyinleri ve gözleri diger bir analize yönelik toplanmistir. Örnek 10 (Altyapi ve bilgilendirme amaçlarina yönelik) Hayvan Dokusu Farelere anestezi yapilmistir ve bunlar %4 buzlu-soguk tamponlanmis PFA ile perfîjze edilmistir ve farelerin bir grubu perfuze edilmemistir. Gözleri enükle edilmistir ve bir gece boyunca %4 yeni PFA içine hemen sabitlenmistir. Retina tam numunelerine yönelik gözler parçalara ayrilmistir ve anteriyor parça çikartilmistir. Göz fincanlari, vitröz kalintilari sivilastirmak ve uzaklastirmak üzere hiyalüronidaz (tip l-S) (0.07mg/ml) (Sigma) içinde 10 dakika islatilmistir akabinde PBS içinde 10 dakika x 3 yikanmistir ve retina tam numuneleri toplanmistir. Tam göz bölümlemeye yönelik gözler, 2 saat boyunca %4 PFA içinde %30 sakaroz içine koyulmustur akabinde PBS içinde 15 dakika X 3 yikanmistir. Gözler, O.C.T içine gömülmüstür ve kuru buz üzerinde yavasça 02 1 67-P-0001 dondurulmustur akabinde kriyostat ile sagital bölümlenmistir (7um). Beyinler toplanmistir ve bir gece boyunca %4 yeni PFA içine hemen sabitlenmistir.
Beyinler, %30 sakaroz (%4 PFA içinde) gradyani içine koyulmustur. Beyinler, PBS içinde 15 dakika X3 yikanmistir, akabinde O.C.T içine gömülmüstür ve kuru buz üzerinde yavasça dondurulmustur akabinde kriyostat ile koronal bölümlenmistir (30iim). Örnek 1] (Altyapi ve bilgilendirme amaçlarina yönelik) Insan Otopsi Gözleri Alzheimer hastalarindan otopsi gözleri, IRB protokolleri 99491 ve 3201 altinda Alzheimer Hastaligi Arastirma Merkezi, Patoloji Bölümü, Southern California Üniversitesfnden (Los Angeles, CA) elde edilmistir. Saglikli donör gözleri, Ulusal Hastalik Arastirma Degisimiden (NDRI, Philadelphia, PA) alinmistir.
NDRI, bir yönetim kumlu tarafindan onaylanan ve Ulusal Saglik Enstitüleri denetimine tabi olan bir insan dokusu toplama protokolüne sahiptir. Hastalikli ve normal gözler, %10 nötr tamponlanmis formalin içine yerlestirilmistir ve saklanmistir. Ayrica -800C,de yerlestirme olmadan dondurulan ve -800C,de saklanan iki saglikli göz kullandik. Retina tam numuneleri, gözlerden hazirlanmistir ve ayrica immünohistokimya tarafindan arastirilmistir.
Kürkümi'nin Kuyruk Damari Enjeksiyonu PBS içinde kürkümin ile (7.5mg/kg/gün, arka arkaya 7 gün boyunca) kuyruk damarina veya PBS ile intravenöz olarak enjekte edilmistir. Akabinde beyinler ve gözlerin donuk kesiti alinmistir veya bunlar retina tam numunesine yönelik 02 1 67-P-0001 hazirlanmistir. Alternatif bir düzenlemede kürkümin, hastaya oral olarak uygulanabilir.
Immünohistoki'm ya Beyin donuk kesitleri (30um kalinlik), retina enine kesitleri (donuk kesitler) (70um kalinlik) ve retina tam numuneleri, %20 at serumu (Invitrogen) ve %0.01- 0.1 Triton X-100 içeren geçirgen hale getiren/bloke eden solüsyon (Sigma- Aldrich, St. Louis, M0) ile muamale edilmistir. Kesitler, %10 bloke eden Milipore, Temecula, CA)] içeren PBS içinde sonraki primer Abs”nin spesifik bir kombinasyonu ile 4°C°de bir gece boyunca boyanmistir. Kesitler, sekonder Abs ile oda sicakliginda 1 saat inkübe edilmistir akabinde 1 x PBS ile üç kere yikanmistir ve 4',6-diamidin0-2-fenilindol, dihidroklorid içeren veya içermeyen Vectorshield (DAPI, Vector Laboratories, Peterborough, UK) kullanilarak numune alinmistir. 1 x PBS içinde sekonder Abs solüsyonu, Cy-5-k0njugeli esek anti-fare antikoru (1:200; Jackson lmmunoResearch Laboratories, West Grove, PA) içermistir. Negatif bir kontrol, spesifik olmayan etiketlemeyi degerlendirmek üzere primer antikorun çikartilmasi ile ayni protokol ile islenmistir. Mikrokobik analize yönelik, bir Zeiss ApoTome floresansi kullandik.
Kürkümi'n Boyamasi 0.1 mg/mFde kürkümin solüsyonu, 1 x PBS içinde dogrudan seyreltmenin akabinde 0.5M NaOH, pH=7.9 içinde kürkümin (Sigma-Aldrich) çözündürülerek hazirlanmistir. Beyin ve retina dokusu donuk kesitleri (sirasiyla 30um and 7pm kalinlik) ve retina tam numuneleri, oda sicakliginda 10 dakika boyunca kürkümin 02 1 67-P-0001 solüsyonu ile boyanmistir akabinde her biri 15 dakika boyunca 1 x PBS ile üç kere teinizlenmistir. Numuneler, GVA gömme ortami (Zymed) ile kaplanmistir.
Thioilavin S ve T ve bazi türevleri, Kongo Kirmizisi ve türevleri, metoksi-X04, Pittsburgh Bilesigi-B (PiB), DDNP, Chrysamine-G ve digerleri dahil olinak üzere in vivo amiloid plaklarini boyayabilen/etiketleybilen ilave bilesikler teknikte bilinir. Ancak kürkümin ve bunun türevleri, asagidaki avantaj nedeniyle insanlarin yani sira hayvan inodellerinde amiloid plaklarinin in vivo optik görüntülenmesine yönelik oldukça caziptir. Kürkümin, yaygin olarak kullanilan optik spektrumda spesifik ve oldukça parlak sinyaller olusturur ve son derece düsük maliyetli bir sekilde ticari olarak temin edilebilir. Kürkümin ile ilgili güvenlik sorunlari minimum seviyededir (yüksek dozajlarda dahi) ve bir antioksidan olarak hastanin sagligina faydali oldugu düsünülebilir. Kürkümin, Aß”ya oldukça iyi in vitro ve in vivo baglama özellikleri olan etkili bir liganddir ve iyi baslangiç beyin alimi ve beyinden bosaltma orani (in vivo görüntüleme ajanlarina yönelik önemli özellikler) sunar.
Miktar Belirleme Boyanan dokularin mikro grafikleri, AxioCam MRm monokrom kamera boyutu, >112200 dinamik araligi, bu peltier sogutmali sensör nedeniyle düsük gürültülü görüntüler verir) ile bir Axio lmager Zl ApoTome-donatili mikroskop (motorlu Z-sürücüsü ile) üzerinde elde edilmistir. Aß plak sayisi ve alaninin (ßin2) nicel analizi, fare basina (grup basina n:4 fare) iki retina tam numunesinden gerçeklestirilmistir. 0.28 Bm çözünürlükle 40X objektifte yakalanan her bir görüntü, 0.04 mm2 bir alani ve 60 nm tarama derinliginde optik diskin çevresinde toplamda 12 dikdörtgen alan içermistir (motorlu bir tarama asamasi kullanilarak sirali fokal düzlemlerde çoklu gerçek kesit görüntüler). Ortalama plak 02 1 67-P-0001 yariçapinin (kürkümin boyamasindan sonra) ölçümleri, her bir hayvan grubuna yönelik tamamlanmistir akabinde her bir hayvan grubunda ortalama plak alaninin hesaplanmasi yapilmistir. Elde etmeye yönelik bütün görüntülere yönelik benzer maruziyet sürelerini (yaklasik olarak 75 ms) ve ayni kanzan degerlerini (0) kullandik. Herhangi bir görüntü ileri islemesi gerçeklestirilmemistir. Kürkümin ile boyanan Aßüplaklarinin emisyon sinyalleri, sinyal ila arkaplan oranini belirlemek üzere retinal dokuda arka plan sinyalleri ile karsilastirilmistir. Görüntülerden hesaplanan sinyal ila arkaplan gürültü orani yüksek ve 321 ila lO:l araliginda olmustur. Beyindeki Aß plak sayisi ve alaninin (ßm2) nicel analizi, hipokampal ve kortikal bölgeleri kaplayan bir alan üzerinde 450 nm araliklar ile fare basina üç koronal kesitten (her biri iki yarimküre) belirlenmistir. Numunenin her bir sahasindan optik kesitler, NIH Görüntü J programina (Ulusal Saglik Enstitüleri) aktarilmistir. Gri skalaya dönüstürme, immünoreaktivite alanlari ve altyapiyi ayirt etmek üzere gerçeklestirilmistir. Immünoreaktivitenin toplam alani ve nicel seviyeleri, standartlastirilmis özel histogram bazli esik degeri teknigi kullanilarak belirlenmistir ve akabinde partikül analizine tabi tutulmustur.
Spektral ve Çoklu Spektral Görüntüleme.
Spektral görüntüleme, her pikselde kesin optik imzalar olusturan büyük, sirali sayida dalga boylarinda bir nesnenin dijital görüntülerini saglar. Kürkümin ile in vi'vo olarak etiketlenen Aß plaklarinin floresans Spektral imzasi, asagidaki ekipman kullanilarak Spektral görüntüleme sistemimiz ile yakalanmistir. Nikon floresans mikroskoplari (E800 ve TE2000), civa ve ksenon ark lambalari, bir CCD kamera, bir AOTF (sesli isiksal ayarlanabilir filtreler)-temelli Spektral görüntü edinme sistemi (ChromoDynamics, Inc)[29] ve Minimal Invazit` Cerrahi Teknolojiler Enstitüsü tarafindan gelistirilen analiz sonrasi görüntüleme yazilimi.
Nihai görüntüler, analiz edilen nesnelerinin boyutunu ve lokasyonunu temsil eden ham görüntülerden çikarilan Spektral imzanin bir görsel sözde renkli temsilini 02 1 67-P-0001 saglamistir. Çoklu spektral görüntülemede bir darbeli lazer ve bir LaVision PicoStar HR geçitli kamera ile gerçeklestirilen floresans ömürlü görüntüleme, spektral edinimi tamamlamistir.
Sekil 6, mevcut bulusun bir düzenlemesine göre Aß plaklarinin in vivo olarak teshis edilmesine, prognozuna ve analiz edilmesine yönelik bir spektral görüntüleme sisteminin (100) bir akis diyagramini gösterir. Söz konusu retina (110), Aß plaklarini etiketlemek üzere bir Iloresans marköiü ile boyanir. Bundan kisa bir süre sonra boyanan retina (110), floresansi görsellestirmek ve daha yüksek çözünürlüklerde sinyalleri yaymak üzere ayarlanan bir görüntüleme cihazi (120) ile görüntülenir. Görüntüleme cihazi (120), bir Polyehrome V degisken spektral isik kaynagi (130) ile donatilabilir. Ilave düzenlemelerde spektral görüntüleme sistemi (100), büyütmeyi ve görüntü ayrintisini gelistirmek üzere bir renkli dijital kamera (140) (örnegin, MicroFire) ve bir veya daha fazla büyütme lensi içerebilir. Görüntüleme elde edilmesi (170), görüntüleme yazilimi (160) kullanilarak analiz sonrasi görüntü bölümlendirme ve siniflandirmasi ile edinilir.
Sekil 7, mevcut bulusun bir düzenlemesine göre Aß plaklarinin olarak teshis edilmesine, prognozuna ve analiz edilmesine yönelik bir spektral görüntüleme sisteminin (200) bir akis diyagramini gösterir. Söz konusu retina (210), Aß plaklarini etiketlemek üzere bir floresans markörü ile boyanir. Bundan kisa bir süre sonra boyanan retina (210), bir görüntüleme cihazi (220) kullanilarak görüntülenir. Görüntüleme cihazi (220), bir dijital kamera (240) kullanilarak sesli isiksal ayarlanabilir filtreler (AOTF) (230) ve floresans ömürlü görüntüleme ile spektral görüntülemeden olusan çoklu spektral görüntüleme teknolojisi ile donatilabilir. Görüntüleme elde edilmesi (260), görüntüleme yazilimi (250) kullanilarak analiz sonrasi görüntü bölümlendirme ve siniflandirmasi ile edinilir. 02 1 67-P-0001 Fare Retinasmin in vi'vo Görüntülenmesi.
AD-Tg ve wt fareleri retinalari, kürkümin intravenöz enjeksiyondan iki saat sonra görüntülenmistir. Farelere Ketamin lOOmg/ml/kg ve Ksilazin 20mg/ml/kg ile anestezi yapilmistir. Fare yavrulari, %05 tropikamid oftalmik solüsyon (Mydral, Bausch & Lomb) ile koinbine edilen %05 fenilefrin hidroklorid oftalmik solüsyonu (Bausch & Lomb) ile çap olarak yaklasik 2 mm olarak açilmistir.
Görüntüleme prosesi sirasinda fareler, bir stereomikroskop asamasinda konumlandirilmistir ve göz, göz yüzeyi ile görüntüleme lensi arasinda bir optik birlestirme ortami islevi gören kalsiyum ve magnezyum takviyeli PBS'nin bir damlasi ile kaplanmistir. Floresansi görsellestirmek ve daha yüksek çözünürlüklerde sinyalleri yaymak üzere ayarlanan modifiye edilmis bir stereomikroskop (Leica SÖE), görüntüleri yakalamak (kazanç 4 ile maruziyet süresi 750 ms) üzere kullanilmistir. Modifiye edilmis sterepmikroskop, bir Polychrome V (Till Photonics) degisken dalga boyu isik kaynagi, bir MicroFire renkli dijital kamera (Optronics) ve 10 cm71ik bir fokal uzunlugu olan ilave 6x (çift konveks) büyütme lensi içermek üzere düzenlenmistir. Görüntüler, daha büyük bir alani görsellestirinek üzere ve Spesifik olmayan yansima sinyallerini ortadan kaldirmak üzere birkaç farkli açida tekrarli olarak yakalanmistir.
Istatistiksel Analiz Sonuçlar, iki grubun karsilastirmasinin p degerlerine yöneliktek yönlü eslestirilmemis Student t testi ile analiz edilmistir. Sonuçlar, ortalama ± SD olarak ifade edilir.
Genel olarak burada kullanilan ifadelerin genel olarak “açik” ifadeler olmasinin 02 1 67-P-0001 amaçlandigi (örnegin, “içeren” ifadesinin “bunlarla sinirli olmamak üzere içeren” olarak yorumlanmasi gerekir, “sahip olan” ifadesinin “en az buna sahip olan” olarak yoruinlanmasi gerekir, “içerir” ifadesinin “bunlarla sinirli olmamak üzere bunu içerir” olarak yorumlanmasi gerekir, Vb.) teknikte uzman kisiler tarafindan anlasilacaktir.
Referanslar 1. Sisodia, S.S. & Price, D.L. Role of the beta-amyloid protein in Alzheimer's 2. Hardy, J. & Selkoe, D.J. The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics. Science 297, 353-356 (2002). 3. McGeer, P.L. & McGeer, E.G. Local neuroinflammation and the 4. Klunk, W.E. et al. Imaging brain amyloid in Alzheimer's disease With . Ng, S. et al. Visual assessment versus quantitative assessment of 11C-PIB PET and l8F-FDG PET for detection of Alzheimer's disease. J Nucl Med 48, 6. Wang, Y. et al. Development of a PET/SPECT agent for amyloid imaging 7. Nordberg, A. Amyloid plaque imaging in vivo: current achievement and 8. Hintersteiner, M. et al. ln vivo detection of amyloid-beta deposits by near- infrared imaging using an oxazine-derivative probe. Nat Biotechnol 23, 577- 583 (2005). 9. Nakada, T., Matsuzawa, H., lgarashi, H., Fujii, Y. & Kwee, l.L. In vivo visualization of senile-plaque-like pathology in Alzheimer's disease patients 02 1 67-P-0001 lO. Toyama, H. et al. PET imaging of brain with the beta-amyloid probe, 11. Klunk, W.E. et al. Binding of the positron emission tomography tracer Pittsburgh compound-B reflects the amount of amyloid-beta in Alzheimer's (2005). 12. Lockhart, A. et al. PIB is a non-specific imaging marker of amyloid-beta 13. Meyer-Luehmann, M. et al. Rapid appearance and local toxicity of amyloid-beta plaques in a mouse model of Alzheimer's disease. Nature 451, 14. Morin, P.J. et al. Amyloid precursor protein is synthesized by retinal ganglion cells, rapidly transported to the optic nerve plasma membrane and . Greeve, I. et al. Age-dependent neurodegeneration and Alzheimer-amyloid 16. Ning, A., Cui, J.Z., To, E., Hsiao Ashe, K. & Matsubara. J.A. Amyloid Beta Deposits Lead to Retinal Degeneration in a Mouse Model of Alzheimer Disease. Invest Ophthalmol Vis Sci (2008). 17. Koronyo-Hamaoui, M. et al. Dendritic-cell based vaccination With a weak agonist of myelin-derived peptide attenuates Alzheimer's-like pathology in APP/PS] transgenic mice. SfN abstract 740.1/Q1 (2008). 18. Hauben, E. et al. Vaccination with dendritic cells pulsed With peptides of myelin basic protein promotes functional recovery from spinal cord injury. J 19. Yang, F. et al. Curcumin inhibits formation of amyloid beta oligomers and fibrils, binds plaques, and reduces amyloid in Vivo. J Biol Chem 280, 5892- 5901 (2005).
. Garcia-Alloza, M., Borrelli, L.A., Rozkalne, A., Hyman, B.T. & Bacskai, B.J. Curcumin labels amyloid pathology in vivo, disrupts existing plaques, and 02 1 67-P-0001 partially 18 restores distoned neurites in an Alzheimer mouse model. J 21. Schnell, S.A., Staines, W.A. & Wessendorf, M.W. Reduction of lipofuscin-like autofluorescence in Iluorescently labeled tissue. J Histochem 22. Baschong, W., Suetterlin, R. & Laeng, R.H. Control of autofluorescence of archival formaldehyde-fixed, paraffin-embedded tissue in confocal laser 23. Garcia-Alloza, M. et al. Characterization of amyloid deposition in the APPswe/PSldE9 mouse model of Alzheimer disease. Neurobiol Dis 24, 516- 524 (2006). 24. Frenkel, D., Maron, R., Burt, D.S. & Weiner, H.L. Nasal vaccination with a proteosome-based adjuvant and glatiramer acetate clears beta-amyloid in a . Butovsky, O. et al. Glatiramer acetate fights against Alzheimer's disease by inducing dendritic-like microglia expressing insulin-like growth factor 1. 26. Butovsky, O., Kunis, G., Koronyo-Hamaoui, M. & Schwartz, M. Selective ablation of bone marrOW-derived dendritic cells increases amyloid plaques in a 27. Ford, ML. & Evavold, B.D. An MHC anchor-substituted analog of myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55 induces IFN-gamma and autoantibodies in the absence of experimental autoimmune encephalomyelitis and optic 28. ZiV, Y., Avidan, H., Pluchino, S., Martino, G. & Schwartz, M. Synergy between immune cells and adult neural stem/progenitor cells promotes functional recovery from spinal cord injury. Proc Natl Acad Sci USA 103, 29. Wachman, E.S., Niu, W. & Farkas, D.L. AOTF microscope for imaging 02 1 67-P-0001 . Burton, K., Jeong, J., Wachsmann-Hogiu, S. and Farkas, D. L. Spectral Optical imaging in biology and medicine in Biomedical Optical lmaging, Edn. 31. Goldstein, L.E. et al. Cytosolic beta-amyloid deposition and supranuclear cataracts in lenses from people with Alzheimer's disease. Lancet 361, 1258- 1265 (2003). 32. Carroll, J., Choi, S.S. & Williams, D.R. In vivo imaging of the (2008). 33. Murata, H. et al. Imaging mouse retinal ganglion cells and their loss in vivo by a fundus camera in the normal and ischemia-reperfusion model. Invest 34. Leung, C.K. et al. Longitudinal profile of retinal ganglion cell damage after optic nerve crush with blue-light confocal scanning laser . Dhillon, N. et al. Phase II trial of curcumin in patients With advanced 36. Anand, P., Kunnumakkara, A.B., Newman, R.A. & Aggarwal, B.B.
Bioavailability of curcumin: problems and promises. Mol Pharm 4, 807-818 (2007). 37. Sadun, A.A., Borchert, M., DeVita, E., Hinton, D.R. & Bassi, C.J.
Assessment of visual impairment in patients With Alzheimer's disease. Am J 38. Katz, B. & Rimmer, S. Ophthalmologic manifestations of Alzheimer's 39. Hinton, D.R., Sadun, A.A., Blanks, J.C. & Miller, C.A. Optic-nerve 40. Blanks, J .0, Torigoe, Y., Hinton, D.R. & Blanks, R.H. Retinal pathology in Alzheimer's disease. I. Ganglion cell loss in foveal/parafoveal retina. 02 1 67-P-0001 4l. Trick, G.L., Barris, M.C. & Bickler-Bluth, M. Abnormal pattern electroretinograms in patients With senile dementia of the Alzheimer type. 42. Katz, B., Rimmer, S., lragui, V. & Katzman, R. Abnormal pattern electroretinogram in Alzheimer's disease: evidence for retinal ganglion cell 43. Parisi, V. et al. Morphological and functional retinal impairment in 44. Berisha, F., Feke, G.T., Trempe, C.L., McMeel, J.W. & Schepens, C.L.
Retinal abnormalities in early Alzheimer's disease. Invest Ophthalmol Vis Sci 45. Anderson, D.H. et al. Characterization of beta amyloid assemblies in drusen: the deposits associated with aging and age-related macular 46. Dentchev, T., Milam, A.H., Lee, V.M., Trojanowski, J.Q. & Dunaief, J .L.
Amyloidbeta is found in drusen from some age-related macular degeneration 47. Ding, J .D. et al. Targeting age-related macular degeneration with Alzheimer's disease based immunotherapies: anti-amyloid-beta antibody attenuates pathologies in an agerelated macular degeneration mouse model. 48. Koronyo, Y., Koronyo-Hamaoui, M., Black, K.L., Schwartz, M. & Farkas, D.L., Optical method for the detection of Alzheimer's Disease. Patent application submitted to the USPTO (2008) 49. Jankowsky, J.L. et al. APP processing and amyloid deposition in mice 50. McKinnon SJ, Lehman DM, Kerrigan-Baumrind LA, Merges CA, Pease ME, Kerrigan DF, Ransom NL, Tahzib NG, Reitsamer HA, Levkovitch- 51. Yoneda S, Hara H, Hirata A, Fukushima M, lnomata Y, & Tanihara H 02 1 67-P-0001 52. Guo L, Salt TE, Luong V, Wood N, Cheung W, Maass A, Ferrari G, Russo-Marie F, Sillito AM, Cheetham ME, et al. (2007) Proc Natl Acad Sci U 53. Dentchev T, Milam AH, Lee VM, Trojanowski JQ, & Dunaief JL (2003)

Claims (12)

ISTEMLER
1. Bir memelide Alzheimer hastaliginin teshisi veya prognozu yönteminde kullanima yönelik kürkümindir, söz konusu yöntem asagidaki adimlari
2. Bir kürküminin memeliye sistemik olarak uygulanmasi; memelinin retinasinin bir optik görüntüleme sistemi ile görüntülenmesi; boyanan Aß peptitlerine yönelik görüntülerin incelenmesi; ve (i) boyanan Aß peptitlerinin mevcut olmasi halinde memelinin Alzheimer hastaligina sahip olan olarak teshis edilmesi; veya (ii) bir önceki teshis ile karsilastirildiginda öznenin retinasinda boyanan Aß peptitlerinin artisi/azalmasinin belirleninesi; ve öznenin retinasinda boyanan Aß peptitlerinin seviyesine bagli olarak bir prognozun ifade edilmesi. memelide Alzheimer hastaligi tedavisinin etkinliginin degerlendirilmesi yönteminde kullanima yönelik kürkümindir, asagidaki adimlari içerir: kürküminin memeliye sistemik olarak uygulanmasi; memelinin retinasinin bir optik görüntüleme sistemi ile görüntülenmesi; boyanan AB peptitlerine yönelik görüntülerin incelenmesi; ve memeli retinasinda boyanmis AB peptitlerinin seviyesine bagli olarak Alzheimer hastaligi tedavisinin etkinliginin degerlendirilmesi.
3. Bir memelide bir Aß peptiti ile iliskili retinal rahatsizliga yönelik tedavinin etkinliginin degerlendirilmesi yönteininde kullanima yönelik kürkümindir, söz konusu yöntem asagidaki adimlari içerir: kürküminin memeliye sistemik olarak uygulanmasi; memelinin retinasinin bir optik görüntüleme sistemi ile görüntülenmesi; boyanan AB peptitlerine yönelik görüntülerin incelenmesi; ve memeli retinasinda boyanmis AB peptitlerinin seviyesine bagli olarak AB peptiti ile iliskili retinal rahatsizliga yönelik tedavinin etkinliginin degerlendirilmesi.
4. Bir memeli retinasinda AB peptitlerinin tanimlanmasi yönteminde kullanima yönelik kürkümindir, söz konusu yöntem asagidaki adimlari kürküminin memeliye sistemik olarak uygulanmasi; memelinin retinasinin bir optik görüntüleme sistemi ile görüntülenmesi; ve boyanan AB peptitlerine yönelik görüntülerin incelenmesi.
5. Önceki herhangi bir istemde tanimlandigi üzere kullanima yönelik kürkümindir, burada yöntem ayrica asagidaki adimlari içerir: memeli retinasinda AB plaklarmin boyutunu ve lokasyonunu temsil eden, ham görüntülerden bir spektral imza çikartilarak görüntülerin görsel sözde renkli temsilinin saglanmasi.
6. Önceki herhangi bir isteme göre kullanima yönelik kürkümindir, burada AB peptitleri, AB plaklar] formundadir.
7. Önceki herhangi bir isteine göre kullanima yönelik kürkümindir, burada optik görüntüleme, in vivo olarak gerçeklestirilir.
8. Önceki herhangi bir isteme göre kullanima yönelik kürkümindir, burada optik görüntüleme sistemi, bir spektrometre, bir floresans mikroskopu, bir stereomikroskop, bir civa ark lambasi, bir degisken dalga boyu isik kaynagi, bir ksenon ark lambasi, bir CCD geçitli kamera, bir renkli dijital kamera, bir sesli isiksal ayarlanabilir filtre temelli spektral görüntü edinme sistemi, adaptiv optikler, görüntüleme yazilimi ve bunlarin kombinasyonlarindan olusan gruptan seçilir.
9. Önceki herhangi bir isteme göre kullanima yönelik kürkümindir, burada uygulanan kürkümin miktari 12.0 gramldan az ve 7.5 mg°den fazladir.
10. Önceki herhangi bir isteme göre kullanima yönelik kürkümindir, burada kürkümin, sistemik enjeksiyon ile sistemik olarak uygulanir.
11. Istem 10”a göre kullanima yönelik kürkümindir, burada kürkümin sistemik intravenöz enjeksiyon ile sistemik olarak uygulanir.
12. Istem 3,e göre kullanima yönelik kürkümindir, burada retinal rahatsizlik, görüs kaybi, kataraktlar, glokom, yasla ilgili maküler dejenerasyon, amiloid plaklarimn retinada biriktigi nörodejeneratif kosullar ve bunlarin kombinasyonlarindan olusan bir gruptan seçilir.
TR2018/16335T 2008-09-18 2009-09-18 Alzheimer hastalığının tespitine yönelik optik yöntem. TR201816335T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US9820608P 2008-09-18 2008-09-18

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201816335T4 true TR201816335T4 (tr) 2018-11-21

Family

ID=42039899

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2018/16335T TR201816335T4 (tr) 2008-09-18 2009-09-18 Alzheimer hastalığının tespitine yönelik optik yöntem.

Country Status (13)

Country Link
US (2) US9839699B2 (tr)
EP (1) EP2323696B1 (tr)
JP (4) JP5771525B2 (tr)
KR (2) KR101679438B1 (tr)
CN (1) CN102186504B (tr)
CA (1) CA2735869C (tr)
DK (1) DK2323696T3 (tr)
ES (1) ES2694278T3 (tr)
IL (1) IL211540A (tr)
MX (1) MX349711B (tr)
PT (1) PT2323696T (tr)
TR (1) TR201816335T4 (tr)
WO (1) WO2010033861A1 (tr)

Families Citing this family (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI239847B (en) 1997-12-02 2005-09-21 Elan Pharm Inc N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease
US20080050367A1 (en) 1998-04-07 2008-02-28 Guriq Basi Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
UA81216C2 (en) * 1999-06-01 2007-12-25 Prevention and treatment of amyloid disease
MY139983A (en) 2002-03-12 2009-11-30 Janssen Alzheimer Immunotherap Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide
US8916165B2 (en) 2004-12-15 2014-12-23 Janssen Alzheimer Immunotherapy Humanized Aβ antibodies for use in improving cognition
US8784810B2 (en) 2006-04-18 2014-07-22 Janssen Alzheimer Immunotherapy Treatment of amyloidogenic diseases
PL2182983T3 (pl) 2007-07-27 2014-10-31 Janssen Alzheimer Immunotherap Leczenie chorób amyloidowych z wykorzystaniem humanizowanych przeciwciał specyficznych względem Abeta
JO3076B1 (ar) 2007-10-17 2017-03-15 Janssen Alzheimer Immunotherap نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe
KR101679438B1 (ko) * 2008-09-18 2016-11-24 세다르스-신나이 메디칼 센터 알츠하이머병의 검출을 위한 광학적 방법
US9067981B1 (en) 2008-10-30 2015-06-30 Janssen Sciences Ireland Uc Hybrid amyloid-beta antibodies
ES2351454A1 (es) * 2009-07-23 2011-02-04 Universidad Complutense De Madrid Kit y metodo de detección pre mortem de la enfermedad de alzheimer in vitro.
CA2832517C (en) * 2010-05-05 2021-07-13 Melanie Crombie Williams CAMPBELL Method and system for imaging amyloid beta in the retina of the eye in association with alzheimer's disease
WO2012041292A2 (de) * 2010-09-20 2012-04-05 Klinikum Darmstadt Gmbh Verbindungen für die diagnostik neurodegenerativer erkrankungen an der retina
DE102010047060A1 (de) * 2010-09-30 2012-04-05 Carl Zeiss Meditec Ag Verfahren und Vorrichtung zur Diagnose von Morbus Alzheimer
EP2632321A4 (en) 2010-10-25 2017-08-09 NeuroVision Imaging LLC Apparatus and method for detecting amyloid in a retina in a diagnosis, advancement, and prognosing of alzheimer's disease, traumatic brain injury, macular degeneration and a plurality of neurodegenerative dissorders, and ocular diseases
US9808155B2 (en) 2010-10-25 2017-11-07 Neurovision Imaging Llc Apparatus to detect amyloid in a patient user's retina in a diagnosis, advancement and prognosis of alzheimer's disease, traumatic brain injury, macular degeneration and a plurality of neurodegenerative disorders and ocular diseases
WO2013086516A1 (en) * 2011-12-09 2013-06-13 Regents Of The University Of Minnesota Hyperspectral imaging for early detection of alzheimer's disease
TWI470205B (zh) * 2011-12-30 2015-01-21 Ind Tech Res Inst 光學檢測方法
KR20140145173A (ko) * 2012-03-26 2014-12-22 예다 리서치 앤드 디벨럽먼트 캄파니 리미티드 알츠하이머 질병 진단 및 알츠하이머 질병 진행 진단용 세포 마커
KR101493935B1 (ko) * 2012-10-17 2015-02-16 아주대학교산학협력단 아밀로이드 베타 플라크에 특이적인 이광자 형광 프로브, 이의 제조방법, 및 이를 이용한 생체 내 아밀로이드 베타 플라크의 영상화 방법
JP6133053B2 (ja) * 2012-12-21 2017-05-24 浜松ホトニクス株式会社 アミロイドの凝集体の定量方法及びその定量装置
US9320724B2 (en) 2013-02-13 2016-04-26 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Method of improving cognition and increasing dendritic complexity in humans with down syndrome and compositions therefor
JP6461084B2 (ja) * 2013-03-15 2019-01-30 ニューロビジョン イメージング，インコーポレーテッド アルツハイマー病又は軽度認知機能障害の検出支援システム
US9782075B2 (en) 2013-03-15 2017-10-10 I2Dx, Inc. Electronic delivery of information in personalized medicine
US11089959B2 (en) 2013-03-15 2021-08-17 I2Dx, Inc. Electronic delivery of information in personalized medicine
JP6324032B2 (ja) * 2013-06-14 2018-05-16 国立研究開発法人科学技術振興機構 Ａβペプチド酸化体
CN103776679B (zh) * 2014-01-29 2017-03-15 华中科技大学 一种减少生物样品背景荧光的方法
US9889087B2 (en) 2014-06-10 2018-02-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Intranasal delivery of β2-adrenergic receptor agonists for improving cognition in humans with down syndrome and compositions therefor
WO2017156400A1 (en) 2016-03-10 2017-09-14 Regents Of The University Of Minnesota Spectral-spatial imaging device
ITUA20164712A1 (it) 2016-06-28 2017-12-28 Centervue S P A Macchina oftalmica per l’acquisizione di immagini di fluorescenza della retina e relativo metodo d’utilizzo.
JP2019526055A (ja) * 2016-08-01 2019-09-12 コグノプティックス， インコーポレイテッド 眼組織におけるタウタンパク質を検出するためのシステムおよび方法
CN107561264B (zh) * 2017-09-05 2020-03-27 齐鲁工业大学 基于图像处理的β淀粉样斑块识别和测量方法
EP3716838A4 (en) * 2017-11-27 2021-08-11 Retispec Inc. RAMAN EYE IMAGER, GUIDED BY HYPERSPECTRAL IMAGE, FOR PATHOLOGIES OF ALZHEIMER'S MORBUS
WO2019136513A1 (en) * 2018-01-11 2019-07-18 Centre For Eye Research Australia Method and system for quantifying biomarker of a tissue
AU2019279001A1 (en) * 2018-05-31 2020-12-03 Amydis, Inc. Compositions and methods for detection of traumatic brain injury
US20220351371A1 (en) * 2019-06-27 2022-11-03 Macquarie University Diagnosis and monitoring of neurodegenerative diseases
CN110403572A (zh) * 2019-07-01 2019-11-05 清华大学 阿兹海默症无标记病理成像诊断方法及装置
US11923091B2 (en) 2020-05-21 2024-03-05 Baruch SCHLER Methods for remote visual identification of congestive heart failures
US11276498B2 (en) 2020-05-21 2022-03-15 Schler Baruch Methods for visual identification of cognitive disorders
CN113008850B (zh) * 2021-02-07 2022-02-25 首都医科大学宣武医院 诊断阿尔茨海默病的用途及诊断阿尔茨海默病的装置
KR102536281B1 (ko) 2021-02-26 2023-05-26 (주)블라우비트 망막 시신경을 이용한 알츠하이머 진단 장치 및 방법

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6198532B1 (en) * 1991-02-22 2001-03-06 Applied Spectral Imaging Ltd. Spectral bio-imaging of the eye
PT101290B (pt) * 1993-06-18 2000-10-31 Fernandes Jose Guilherme Da Cu Fluorometro para medicao da concentracao de fluoroforos de localizacao ocular
CA2209240C (en) 1995-01-03 2009-07-21 Non-Invasive Technology, Inc. Optical coupler for in vivo examination of biological tissue
IL140888A0 (en) 2001-01-14 2002-02-10 Yeda Res & Dev Pharmaceutical compositions comprising peptides for immune neuroprotection
US6274119B1 (en) * 1998-08-20 2001-08-14 The Regents Of The Univ. Of California Methods for labeling β-amyloid plaques and neurofibrillary tangles
WO2002016951A2 (en) 2000-08-21 2002-02-28 The General Hospital Corporation Methods for diagnosing a neurodegenerative condition
US7297326B2 (en) 2000-08-21 2007-11-20 The General Hospital Corporation Ocular diagnosis of Alzheimer's disease
EP2298361A3 (en) * 2001-04-27 2011-05-04 The General Hospital Corporation Ocular diagnosis of Alzheimer's disease
US20040167217A1 (en) * 2003-02-26 2004-08-26 Giovanni Scapagnini Neuroprotective effects of polyphenolic compounds
CA2525547C (en) * 2003-05-14 2012-07-03 Torreypines Therapeutics, Inc. Compounds and uses thereof in modulating amyloid beta
EP1624900A4 (en) * 2003-05-20 2007-05-02 Univ California METHOD OF BINDING AGENTS AT BETA AMYLOID PLAQUE
US7575321B2 (en) * 2003-10-30 2009-08-18 Welch Allyn, Inc. Apparatus and method of diagnosis of optically identifiable ophthalmic conditions
US8841326B2 (en) * 2004-02-12 2014-09-23 Stc.Unm Therapeutic curcumin derivatives
US7700616B2 (en) * 2006-05-08 2010-04-20 Molecular Neuroimaging, Llc. Compounds and amyloid probes thereof for therapeutic and imaging uses
DE102006030382A1 (de) * 2006-06-29 2008-01-03 Carl Zeiss Meditec Ag Verfahren und Vorrichtung zur optischen Detektion am Auge
US7678819B2 (en) * 2006-12-07 2010-03-16 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Acetylene derivatives and their use for binding and imaging amyloid plaques
EP2171478A4 (en) * 2007-03-30 2013-01-30 Univ California IN VIVO IMAGING METHOD FOR SULPHOTRANSFERASES
US20090041666A1 (en) * 2007-05-21 2009-02-12 Goldstein Lee E Ophthalmic formulations of Amyloid-beta contrast agent and methods of use thereof
US20090123373A1 (en) * 2007-11-05 2009-05-14 Yanming Wang Amyloid-imaging agents
US8318132B2 (en) * 2008-02-14 2012-11-27 Siemens Medical Solutions Usa, Inc. Imaging agents for detecting neurological dysfunction
WO2010017094A2 (en) * 2008-07-31 2010-02-11 The General Hospital Corporation CURCUMIN DERIVATIVES FOR AMYLOID-β PLAQUE IMAGING
KR101679438B1 (ko) * 2008-09-18 2016-11-24 세다르스-신나이 메디칼 센터 알츠하이머병의 검출을 위한 광학적 방법
US7854510B2 (en) 2008-10-16 2010-12-21 Steven Roger Verdooner Apparatus and method for imaging the eye
JP5566523B2 (ja) 2010-03-23 2014-08-06 ニューロビジョン イメージング，エルエルシー 目を撮像するための装置
US9808155B2 (en) 2010-10-25 2017-11-07 Neurovision Imaging Llc Apparatus to detect amyloid in a patient user's retina in a diagnosis, advancement and prognosis of alzheimer's disease, traumatic brain injury, macular degeneration and a plurality of neurodegenerative disorders and ocular diseases
EP2632321A4 (en) 2010-10-25 2017-08-09 NeuroVision Imaging LLC Apparatus and method for detecting amyloid in a retina in a diagnosis, advancement, and prognosing of alzheimer's disease, traumatic brain injury, macular degeneration and a plurality of neurodegenerative dissorders, and ocular diseases

Also Published As

Publication number Publication date
KR20110074972A (ko) 2011-07-05
US20190022255A1 (en) 2019-01-24
CA2735869C (en) 2020-08-18
DK2323696T3 (en) 2018-11-26
WO2010033861A1 (en) 2010-03-25
JP2014122245A (ja) 2014-07-03
JP2012503012A (ja) 2012-02-02
IL211540A0 (en) 2011-05-31
IL211540A (en) 2015-11-30
JP2015214588A (ja) 2015-12-03
CN102186504B (zh) 2018-04-06
KR101679438B1 (ko) 2016-11-24
PT2323696T (pt) 2018-11-20
US20110286932A1 (en) 2011-11-24
JP2017052793A (ja) 2017-03-16
ES2694278T3 (es) 2018-12-19
EP2323696B1 (en) 2018-09-05
MX349711B (es) 2017-08-09
EP2323696A4 (en) 2014-10-01
EP2323696A1 (en) 2011-05-25
CN102186504A (zh) 2011-09-14
CA2735869A1 (en) 2010-03-25
JP5771525B2 (ja) 2015-09-02
KR20160135843A (ko) 2016-11-28
US9839699B2 (en) 2017-12-12
US10512699B2 (en) 2019-12-24
MX2011002930A (es) 2011-10-11
JP5988445B2 (ja) 2016-09-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10512699B2 (en) Optical method for the detection of Alzheimer&#39;s disease using curcumin
Koronyo-Hamaoui et al. Identification of amyloid plaques in retinas from Alzheimer's patients and noninvasive in vivo optical imaging of retinal plaques in a mouse model
Mirzaei et al. Alzheimer’s retinopathy: seeing disease in the eyes
Hart et al. Ocular indicators of Alzheimer’s: exploring disease in the retina
Koronyo et al. Retinal amyloid pathology and proof-of-concept imaging trial in Alzheimer’s disease
Davis et al. Glaucoma: the retina and beyond
Guo et al. Alzheimer's disease and retinal neurodegeneration
Williams et al. Retinal ganglion cell dendritic degeneration in a mouse model of Alzheimer's disease
van Wijngaarden et al. Emerging ocular biomarkers of Alzheimer disease
Hierro-Bujalance et al. In vivo imaging of microglia with multiphoton microscopy
Di Pierdomenico et al. Age and intraocular pressure in murine experimental glaucoma
R Heaton et al. Ocular biomarkers of Alzheimer’s disease
US10532112B2 (en) Non-human primate model of age-related macular degeneration and method for producing same
Nazari et al. Age dependence of retinal vascular plexus attenuation in the triple transgenic mouse model of Alzheimer's disease
CN105343107A (zh) 雷公藤红素在制备防治视网膜退行性改变相关疾病药物中的应用
Ratnayaka et al. Alzheimer’s-related amyloid beta peptide aggregates in the ageing retina: implications for sight loss and dementia
JP2018157809A (ja) 非ヒト霊長類の加齢黄斑変性モデル動物及びその作製方法
Koronyo-Hamaoui et al. Advances in retinal imaging: retinal amyloid imaging
Frame et al. Alterations in retinal signaling across age and sex in 3xTg Alzheimer’s disease mice
Schön et al. In Vivo imaging of Tau aggregates in the mouse retina
Frame Tracing the effects of Alzheimer's disease across sensory circuits
Nazari Neuronal and Vascular Degeneration of the aging retina in the 3xTg-AD mouse
Green Optical coherence tomography and retinal pathology in neurologic diseases
Barton Innovations in Delivery of Theranostic Agents Across Biological Barriers for Applications in Alzheimer’s Disease
Brennan et al. Mechanism and therapy for the shared susceptibility to migraine and epilepsy after traumatic brain injury (TBI).