TR201808740T4 - Arttırılmış duyarlılığa sahip hücre aracılı bir immün yanıt tahlili. - Google Patents

Abstract

Mevcut tarifname genel olarak hücre aracılı immüno yanıt verebilirliği ölçmeye yönelik bir tahlil dahil olmak üzere immünolojik temelli tanı tahlilleri alanı ile ilgilidir. Mevcut tarifname, bir deneğin, geliştirilmiş duyarlılığa sahip hücre aracılı immüno yanıt verebilirlik temelli bir antijene maruz kalma tanısını gösterir. Bir denekten alınan lenfositler, 7 ila 14 amino asit kalıntısı uzunluğundaki en az bir peptid içeren bir birinci peptid seti ve en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalıntısı peptidi içeren bir ikinci peptid seti ile temas ettirilir ve immün molekülün varlığı veya yükselmesi tespit edilir. Burada öngörülen tahlil, tanısal bir raporlama sistemi sunmak ve hasta başında klinik tedaviyi kolaylaştırmak amacıyla standart patoloji mimarisine entegre olabilmektedir.

Description

TARIFNAME ARTTIRILMIS DUYARLILIGA SAHIP HÜCRE ARACILI BIR IMMÜN YANIT BULUSUN ALANI Mevcut tarifname genel olarak hücre aracili immüno yanit verebilirligi ölçmeye yönelik bir tahlil dahil olmak üzere immünolojik temelli tani tahlilleri alani ile ilgilidir. Mevcut tarifname, bir denegin, gelistirilmis duyarliliga sahip hücre aracili immüno yanit verebilirlik temelli bir antijene maruz kalma tanisini gösterir. Burada öngörülen tahlil, tanisal bir raporlama sistemi sunmak ve hasta basinda klinik tedaviyi kolaylastirmak amaciyla standart. patoloji mimarisine entegre olabilmektedir.

BULUSUN GEÇMISI Bu tarifnamede yazar tarafindan atifta bulunulan yayinlarin bibliyografik bilgileri, tarifnamenin sonunda alfabetik olarak derlenmistir.

Bu tarifnamede herhangi bir önceki teknige yapilan atif, mevcut Önceki teknigin herhangi bir ülkedeki yaygin genel bilginin bir parçasini olusturduguna dair bir onay veya herhangi bir öneri degildir ve öyle oldugu kabul edilmemelidir.

Immünolojik temelli tani tahlilleri, çesitli hastalik durumlarini tespit etmede önemli araçlardir. Bu tür tahlillerin etkinligi, immün sistemi içindeki bilesenlerin özgüllügü ile kismen iliskilidir. Bu özgüllüge bagli olmaksizin, immünolojik temelli tanilar, düsük dereceli enfeksiyonu veya persistan düsük seviyeli enfeksiyonun varligini tespit etmede veya aktif veya latent infeksiyöz hastalik durumlari olan deneklerde her zaman yeterince duyarli degildir. Hücre aracili immüno yanit verebilirlik ile iliskili olarak arttirilmis duyarliliga sahip tani tahlilleri gelistirmeye ihtiyaç vardir.

Bir tür immünolojik temelli tani tahlili, izole edilmis hücre kültüründe veya tam kan kültüründe antijenler veya mitojenler içindeki T-hücrelerinin uyarilmasini, ardindan uyarilan T hücreleri (ayrica efektör T hücreleri olarak da adlandirilir) tarafindan üretilen sitokinler gibi efektör moleküllerin tespit edilmesini içerir. Efektör moleküller genellikle enzim immünolojik tahlilleri, multipleks boncuk analizi, ELISpot ve akis sitometrisi gibi teknikler kullanilarak tespit edilir. Bu tür tahliller, hastaliga özgü T-hücresi yanitlarini tespit etmede kullanislidir. T hücresi tahliline ait bir örnek, QuantiFERON (Tescilli Marka; Cellestis Limited)'dur. Bir baska tahlil, T-hücrelerini uyarmak için 15mer peptid antijenlerini kullanir. Bununla birlikte, bu uzunluga sahip olan peptidler, CD4+ T hücreleri tarafindan tespit edilebilirken, CD8+ T hücreleri tarafindan tespit edilemeyecek kadar uzundur.

Hücre aracili immüniteyi hizli bir sekilde ve yüksek derecede duyarlilik ile degerlendirmek klinik öneme sahiptir. Bu özellikle immün sistemi tehlikesi olan hastalar için geçerlidir.

Bir klinisyenin, bir hastalik. durumunun gelisimini ve bunun konakçinin immün sistemi üzerindeki etkisini degerlendirmesi peptidleri ve CD8+ peptidleri ile ayri ayri uyarildiktan sonra Mycobacterium tuberculosis'e özgü T hücresi yanitlarini degerlendirir. Benzer sekilde, Maccalli ve dig. (2008) Clin. ile ayri ayri uyarildiktan sonra kolorektal kanseri hastalarindan alinan T hücrelerinin yanitini degerlendirir.

Bununla birlikte, bir denekteki hücre aracili immüno yanit verebilirlik tahlillerinin duyarliligini gelistirmeye ihtiyaç BULUSUN ÖZETI Mevcut bulus, bir denekte hücre aracili bir immün yanitinin tespit edilmesine yönelik bir yöntem ile ilgilidir; yöntem, bir protein antijeninden türetilmis iki peptid seti kombinasyonu ile denekten alinan lenfositlerin birlikte inkübe edilmesini içerir CD8+ lenfositleri tarafindan taninan her biri 7 ila 14 amino asit uzunlugundaki bir peptid seti ile CD4+ lenfositleri tarafindan taninan 15'ten fazla amino asit uzunlugundaki ikinci bir peptid setinin protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan kombinasyonunu ve daha sonra aktive edilmis lenfositler tarafindan üretilen efektör moleküllerin seviyeleri için tarama yapilmasini içerir. anlamina gelir. Bu, burada bir birinci peptid seti olarak kabul edilir. “15'ten fazla amino asit" 16 ila 50 amino asit içeren protein antijeninin 16 ila tüm uzunlugu anlamina gelir. Bu ikinci bir peptid seti olarak kabul edilir. Mevcut yöntem, hangi peptid setinin birinci veya ikinci olarak adlandirildigi ile sinirlandirilmamalidir. Her bir set en az bir peptid ila örtusen bir peptid setini içerir.

Protein anti jeni nden türetilen 7 ila 14 ami no asit pepti di ni n ve 'ten fazla amino asit peptidinin Ienfositler ile birlikte inkübasyonu, lenfosit uyariminin aksi durumun mümkün olabileceginden daha erken sekilde tespit edilmesine olanak saglayarak daha duyarli bir tahlil ile sonuçlanir. Artirilmis duyarlilik, antijen veya tüm antijenin kendisinden türetilen 7 ila 14 amino asit araliginda veya >15 amino asit araliginda tek bir peptid ile birlikte inkübasyonu ile karsilastirildiginda efektör moleküllerinin en az %10 oraninda arttirilmis tespitini içerir. Bir hücre aracili immün yanit tahlilinin duyarliligini arttirma kabiliyeti ayni zamanda efektör moleküllerin daha az duyarli bir sekilde tespit edilmesini saglar. Ayrica, bulusa ait tahlilde tespit edilen hücre aracili immün yanitinin büyüklügü hastaligin durumu, ilerlemesi ve/veya siddeti ile iliskilendirilebilmektedir. Bu nedenle mevcut tarifname, bir denekte hücre aracili bir immüno yanit verebilirlik tahlilini Mevcut bulusu herhangi bir teoriye veya etki tarzina sinirlamaksizin, iki peptid seti, 7 ila l4mer peptidleri ve >15mer peptidleri, hem CD4+ hem de CD8+ T hücreleri ile tespit edilmeyi mümkün kilar. CD4+ T hücreleri > 15mer peptidleri tanir ve CD8+ T hücreleri 7 ila 14 mer peptidleri tanir. Bu peptidler burada "CD4+ peptidleri" (>15 mer peptidler) veya "CD8+ peptidleri" (7 ila 14 mer peptidler) olarak ifade edilebilir.

Bir yönüyle, bulus, bir denekte hücre aracili bir immün yanitinin ölçülmesine yönelik bir yöntem sunar; yöntem, bir birinci setin CD8+ lenfositleri tarafindan taninan her biri 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki bir veya daha fazla peptid içerdigi ve bir ikinci setin CD4+ lenfositleri tarafindan taninan 16 veya daha fazla amino asit peptidi içerdigi protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan iki peptid seti kombinasyonu ile demekten alinan lenfositlerin birlikte inkübe edilmesim içerir ve immün hücrelerinden alinan bir immün efektör molekülünün varligini veya seviyesindeki yükselmeyi ölçer burada immün efektör molekülünün varligi veya seviyesi denegin antijene olan hücre aracili yanit verebilirligi seviyesinin göstergesidir.

Faydali olmasi açisindan, denek bir insandir ve numune seyreltilmemis tam kandir. Alternatif olarak, numune, tahlil edilecek numunenin hacimce yaklasik %10 ila %100'ünü içeren veya tahlil edilecek numunenin, hacimce yaklasik. %50 ila %100'ünü içeren veya tahlil edilecek numunenin hacimce yaklasik %80 ila mikrolitre veya mililitre miktarlarinda olabilir. Uygun olarak, tam. kan heparin içeren bir` tüpte toplanir ve immün efektör molekülü IFN-y'dir. Genel olarak, immün efektörler, ELISA veya ELISpot kullanilarak aynilarina özgü olan antikorlar ile tespit Denek, Mycobacterium tuberculosis veya tüberküloz (TB) gibi Mycobacterium türleri, Staphylococcus türleri, Streptococcus türleri, Borrelia türleri, Escherichia coli, Salmonella türleri, Clostridium türleri, Shigella türleri, Proteus türleri, Bacillus türleri, Herpes Virüsü, Hepatit B veya C virüsü ve Insan immün yetmezlik virüsü (HIV) veya bunlardan kaynaklanan bir hastaliktan seçilen bir patojenik ajan enfeksiyonuna sahip olabilir.

Denek alternatif olarak çölyak hastaligi, otoimmün diyabet, alopesi areata, ankilozan spondilit, antifosfolipid sendromu, otoimmün Addison hastaligi multipl skleroz, otoimmün böbrek üstü bezi hastaligi, otoimmün hemolitik anemi, otoimmün hepatit, otoimmün ooforit ve orsit, Behçet hastaligi, büllöz pemfigoid, kardiyomiyopati, çölyak sprue-dermatit, kronik yorgunluk sendromu (CFIDS), kronik inflamatuar demiyelinizan, kronik inflamatuar polinöropati, Churg-Strauss sendromu, sikatrisyel pemfigoid, crest sendromu, soguk aglutinin hastaligi, Crohn hastaligi, dermatitis herpetiformis, diskoid lupus, esansiyel karisik kriyoglobulinemi, fibromiyalji, glomerülonefrit, Grave hastaligi, Guillain-Barre, Hashimoto tiroiditi, idiopatik pulmoner fibrozis, idiopatik trombositopeni purpura (ITP), IgA nefropati, insüline bagimli diyabet (Tip I), liken planus, lupus, Meniere hastaligi, karisik bag dokusu hastaligi, multipl skleroz, miyastenia gravis, miyokardit, pemfigus vulgaris, pernisiyöz anemi, poliarteritis nodosa, polikondrit, poliglanküler sendromlar, polimiyaljiya romatika, polimiyozit ve dermatomiyozit, primer agammaglobulinemi, primer biliyer siroz, psoriyazis, Raynaud fenomeni, Reiter sendromu, romatizmal ates, romatoid artrit, sarkoidoz, skleroderma, Sjogren sendromu, kati insan sendromu, sistemik Iupus eritematozus, Takayasu arteriti, temporal arterit/dev hücreli arterit, ülseratif kolit, uveit, vaskulit, vitiligo ve inflamatuar bagirsak hastaligindan seçilen bir hastalik durumuna sahip olabilir.

Denek alternatif olarak ABL1 protoonkogen, AIDS ile ilgili kanserler, akustik nöroma, akut Ienfositik lösemi, akut miyeloid lösemi, adenokistik karsinom, adrenokortikal kanser, agnojenik miyeloid metaplazi, alopesi, alveolar yumusak kisim sarkomu, anal kanser, anjiyosarkom, aplastik anemi, astrositom, ataksi- telenjiektazi, bazal hücreli karsinom (deri), mesane kanserh kemik kanserleri, bagirsak kanseri, beyin sapi gliomu, beyin ve CNS tümörleri, meme kanseri, CNS tümörleri, karsinoid tümörler, serviks kanSeri, çocukluk çagi beyin tümörleri, çocukluk çagi kanseri, çocukluk çagi lösemisi, çocukluk çagi yumusak doku sarkomu, kondrosarkom, koryokarsinom, kronik Ienfositik lösemi, kronik miyeloid lösemi, kolorektal kanserler, kutanöz T hücre lenfomasi, dermatofibrosarkom-protuberans, desmoplastik-küçük- yuvarlak hücreli tümör, duktal karsinom, endokrin kanserlen endometriyal kanser, ependimom, özofagus kanseri, Ewing sarkomu, ekstra-hepatik safra kanali kanseri, göz kanseri, göz: melanom, retinoblastom, yumurtalik tüpü kanseri, fankoni anemisL fibrosarkom, safra kesesi kanseri, mide kanseri, gastrointestinal kanserler, gastrointestinaI-karsinoid-tümör, genitoüriner kanserler, germ hücreli tümörler, gestasyonel- trofoblastik hastalik, gliyom, jinekolojik kanserler, hematolojik maliniteler, saçakli hücreli lösemi, bas ve boyun kanseri, hepatosellüler kanser, kalitsal meme kanseri, histiyositoz, Hodgkin hastaligi, insan papilloma virüsü, hidatidiform mol, hiperkalsemi, hipofarinks kanseri, intraoküler melanom, islet hücre kanseri, Kaposi sarkomu, böbrek kanseri, Langerhan hücre histiositozisi, larinks kanseri, Ieyomiyosarkom, lösemi, Li-Fraumeni sendromu, dudak kanseri, liposarkom, karaciger kanseri, akciger kanseri, lenfödem, lenfoma, Hodgkin lenfomasi, Hodgkin olmayan lenfoma, erkek meme kanseri, malign böbrek yumusak. doku tümörü, medülloblastom, melanom, merkel hücre kanseri, mezotelyoma, metastatik kanser, agiz kanseri, multipl endokrin neoplazi, mikozis fungoides, miyelodisplastik sendromlar, miyelom, miyeloproliferatif bozukluklar, naza kanser, nazofarenks kanseri, nefroblastom, nöroblastom, nörofibromatozis, nijmejen breakage sendromu, melanom disi cilt kanseri, küçük hücreli olmayan akciger kanseri (NSCLC), oküler kanserler, özofagus kanseri, oral kavite kanseri, orofarenks kanseri, osteosarkom, ostomi over kanseri, pankreas kanseri, paranazal kanser, paratiroid kanseri, parotis bezi kanseri, penis kanseri, periferik nöroektodermal tümörler, hipofiz kanseri, polisitemi vera, prostat kanseri, nadir kanserler ve Iliskili bozukluklar, renal hücreli karsinom, retinoblastom, rabdomiyosarkom, Rothmund-Thomson sendromu, tükürük bezi kanseri, sarkom, schwannom, Sezary sendromu, cilt kanseri, küçük hücreli akciger kanseri (SCLC), ince bagirsak kanseri, yumusak doku sarkomu, spinal kord tümörleri, skuamöz hücreli karsinom (deri), mide kanseri, sinovyal sarkom, testis kanseri, timus kanseri, tiroid kanseri, transizyonel hücreli kanser (mesane), transizyonel hücreli kanser (renal-pelvis-I-üreter), trofoblastik kanser, üretral kanser, üriner sistem kanseri, üroplakinler, uterus sarkomu, uterus kanseri, vajinal kanser, vulva kanseri, Waldenstrom makroglobulinemisi ve Wilms tümöründen seçilen bir kansere sahip olabilir.

Denek alternatif olarak bir protein toksik maddesine maruz birakilabilir.

Yukaridaki yönlerde, antijen hastalik durumu veya kanser ile iliskili patojenik ajandan türetilen bir proteindir veya bir toksik maddedir.

Bir kullanicinin, bir denegin hücre aracili immüno yanit verebilirlik durumunu belirlemesine olanak saglayan bilgisayar tarafindan uygulanan bir yöntem de sunulur, yöntem asagidakileri (@ CD8+ lenfositleri tarafindan taninan 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki peptidleri içeren bir birinci set ile CD4+ lenfositleri tarafindan taninan 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidini içeren bir ikinci setin olusturdugu bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan iki peptid seti kombinasyonu ile denekten alinan lenfositlerin birlikte inkübasyonunun ardindan immün efektör nmlekülünün ölçülmesi ile, bir kontrol ile ilgili olarak, bir iletisim agi araciligiyla kullanicinin hücre aracili immüno yanit verebilirlik durumuyla ilgili bir korelasyon saglayan immün efektör molekülü seviyeleri veya konsantrasyonlari biçiminde verilerin alinmasi; (m bir immüno yanit verebilirlik degeri saglamak için tek degiskenli veya çok degiskenli analiz araciligiyla verilerin islenmesi; (m önceden belirlenmis degerlere kiyasla immüno yanit verebilirlik degerinin sonuçlarina göre denegin durumunun belirlenmesi; ve w)iletisim agi araciligiyla denegin durumunun bir göstergesinin kullaniciya aktarilmasi.

Bir uygulamada, tüberküloz antijeni CFPlO, ESAT-6, TB7.7 veya TB37.6'dir. Bir uygulamada, denek HIV ile enfekte edilir. Bir uygulamada, Ienfositler CD4+ ve CD8+ peptidleri kombinasyonu ile temas ettirilir. Iki peptid seti kombinasyonunun lenfositlerle birlikte inkübasyonuna ve efektör nwleküllerde varligin veya seviyenin tespit edilmesine yönelik yöntem ile hücre aracili bir immün yanit verebilirlik tani tahlilinin üretiminde CD8+ lenfositleri tarafindan taninan 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki peptidleri içeren bir birinci set ile CD4+ lenfositleri tarafindan taninan 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidini içeren bir ikinci setin olusturdugu bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan iki peptid setinde de bir kullanim sunulur.

SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekil 1, tüm degerlendirilebilir deneklerde üç havuzdan biri olan QFN-TB veya QFN-TB plus'a verilen ortalama yanitlari gösteren histogram seklindeki bir grafik gösterimdir (n = 41). Ortalama standart hata ile ortalama degerler gösterilir. Tüm peptid havuzlarinin eklenmesiyle yanitta önemli bir artis gözlenmistir (P<0,00l) [bir Dunn çoklu karsilastirma testi ile Friedman testi]. QFN-TB tahlili CD4+ peptidlerini ve 10 mer peptidleri (CD8+ peptidleri) havuzunu Sekil 2, antijen CMV olmadan veya yalnizca 16 mer CD4+ peptidleri ile bir Nil tüpü kullanilarak ve birlestirilmis CMV CD4+ + CD8+ peptidi ile ve bir kontrol olarak mitojen kullanilarak CMV pp65 antijenine (CD4+ peptidleri) yönelik 16 mer peptidlerini içeren bir QFT-CMV tahlilinde IFN-y yanitlarina ait bir grafik gösterimdir.

DETAYLI AÇIKLAMA Bu tarifname boyunca, baglam aksini gerektirmedikçe, "içerme" kelimesinin veya "içerir" ya da “içeren” gibi varyasyonlarinin, belirtilen bir unsur veya tam sayi veya yöntem asamasinin ya da unsurlar veya tam sayilar veya yöntem asamalari grubunun dahil edildigini belirttigi ancak baska herhangi bir unsur veya tam sayi veya yöntem asamasinin ya da unsurlar veya tam sayilar veya yöntem asamalari grubunun dahil edilmedigini belirtmedigi anlasilacaktir.

Söz konusu tarifnamede kullanildigi sekilde "bir", "bu” ifadelerinin tekil biçimleri, baglam aksini açikça belirtmedigi sürece çogul göndermelerini de kapsar. Bu nedenle, örnegin, "bir T hücresi" referansi, tek bir T hücresi ile birlikte iki veya daha fazla T-hücresini içerir; "bir antijen" referansi, tek bir antijen ile birlikte iki veya daha fazla antijen içerir; veya birden fazla yönü içerir; ve benzeri. Burada ele alinan yönler, "bulus" teriminin kapsami altindadir. Bulusun tüm yönleri, istemlerin genisligi içinde etkinlestirilmistir. “T hücreler" ve “T Ienfositler” terimleri burada birbirinin yerine kullanilir. Bir "immün hücresi", bir T hücre gibi bir lenfosit Bir "ajan", "reaktif“, "molekül" ve "bilesik" referanslari, tek entitileri ve söz konusu entitilerin iki veya daha fazlasinin kombinasyonlarini içerir. Bir "kombinasyon" ayrica, ajanlarin ayri olarak sunuldugu ve kullanildigi veya ayri olarak dagitildigi veya dagitilmadan önce birlikte karistirildigi iki parçali bir bilesim gibi çoklu parça da içerir. Örnegin, çok parçali bir tahlil paketi, yaklasik 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki ve/veya 15'ten fazla amino asit kalintisi uzunlugundaki ve bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan bir dizi örtüsen peptide sahip olabilir, buna karsin hücre aracili bir immün yanitin Ölçülmesi gerekir. Bu nedenle, mevcut tarifnamenin bu yönü, kurutulmus ve gevsek veya bir tahlil paketindeki bir kompartman duvarina veya kati destege ImmObIIize edilmis ajanlari içerir.

Mevcut tarifname, peptid setlerini tasarlar. "Set" terimi, tarif edilmekte olan yöntemden ayrilmaksizin "havuz", "grup“, "seri", degistirebilir. Her bir set en az bir peptid içerir ve bir uygulamada bir dizi örtüsen peptid içerir. Bu nedenle, bir birinci set, 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki bir dizi örtüsen peptid içerebilir. Bu peptidler CD8+ T hücreIeH (CD8+ peptidleri) tarafindan taninir. Ikinci bir set, 15'ten fazla amino asit kalintisi uzunlugundaki bir dizi örtüsen peptid içerebilir. Bu peptidler CD4+ T hücreleri (CD4+ peptidleri) tarafindan taninir. Ayrica, peptidlerin mutlaka örtüsmesi gerekmez veya tek bir amino asit veya birden fazla amino asit ile üst üste gelebilir. Peptidler, bir protein antijeninin %80- 99 veya 100 anlamina gelir.

Bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki bir dizi örtüsen peptid referansi, toplamda amino asit kalintilarini kapsayan her amino asit kalintisindan N-terminal ucundan C-terminal ucuna ya da bunun bir kismina kadar olan bir protein antijenin en fazla 6 amino asit kalintisina kadar kapsayan 7 amino asit kalintisi uzunlugundan en fazla 14 amino asit kalintisina kadar olan bir peptid anlamina gelir. Dolayisiyla, belirli bir peptidin uzunlugu x'in 7 ila 14 arasinda oldugu x amino asit kalintisi uzunlugunda ise iki ardisik peptid arasindaki örtüsme derecesi X-l'den X-6'ya kadardir. Bir düzenlemede, her bir ardisik peptidin örtüsmesi x-1'dir. 15'ten fazla amino asit kalintisi uzunlugundaki bir dizi örtüsen peptid de her bir peptidin en az 16 amino asit kalintisi uzunlugunda ya da en fazla tam protein antijen uzunlugunda oldugu bir protein antijeninin tamamini ya da bir kismini kapsar. Bir uygulamada, 15'ten fazla amino asit kalintisi gibi 16 ila 50 amino asittir. Yukarida belirtildigi gibi, en az bir adet bir veya daha fazla 7 ila 14 amino asit peptid seti ve en az bir adet >15mer peptidi seti olmasi halinde peptidlerin örtüsmesine gerek yoktur.

Mevcut tarifname, serideki her bir peptidin ayni uzunlukta (diger bir deyisle x) bulundugu durumu içerir. Bununla birlikte, peptid serileri, xi peptidlerinin her birinin yaklasik 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugunda veya 15'ten fazla amino asit kalintisi uzunlugunda oldugu bir X1, X2, Xj... Xi peptidlen karisimi içerebilir.

Burada bir denekte hücre aracili bir immün yanitin tespit edilmesine yönelik bir yöntem sunulur, yöntem, bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi protein antijeninin tamamini Veya bir kismini kapsayan peptidlerin en az iki setinin bir kombinasyonu ile denekten alinan lenfositlerin birlikte inkübe edilmesini ve daha sonra aktive edilmis lenfositler tarafindan üretilen efektör moleküllerin seviyeleri için tarama yapilmasini Lenfositler, bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid setinin bir kombinasyonu ile birlikte inkübe edilmesiyle aktive edilir.

Mevcut tarifname, bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid setine maruz kalan Ienfositlerden efektör moleküllerin üretiminin arttirilmasini ele alir. Bu tür lenfositler "aktive edilmis" veya "uyarilmis" lenfositlerdir. Arttirma, hücrelerin bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid setine maruz birakilmasi ile gerçeklestirilir. Yanit seviyesi, tam antijenin veya 7 amino asitten daha az veya 14 amino asitten daha fazla olan antijenden türetilmis bir peptidin varliginda daha fazladir. Bu, bir denegin hücre aracili immün yanit verebilirligini degerlendirmesine yönelik daha duyarli bir tahlil saglar. Mevcut tarifname, bu nedenle, bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid seti ile uyarilan T hücrelerin efektör moleküllerinin varliginin veya seviyesinin ölçülmesi ile bir denekte hücre aracili bir yanitin tespit edilmesi, degerlendirilmesi veya aksi takdirde izlenmesine yönelik bir tahlil sunar. Tahlil ayrica hücre aracili yanit verebilirligin daha erken tespit edilmesini saglar. Bir uygulamada, burada ele alinan tahlil, hücre bir aracili tahlilin duyarliligini arttirir bu da daha az duyarli tespit etme tahlillerinin uygulanmasini mümkün kilabilir. Ayrica, hücre aracili immün yanitin kapsami veya büyüklügünün, bir hastalik durumunun evresi, ilerlemesi ve/veya siddetini yansitici veya bunlar hakkinda bilgilendirici olmasi önerilir. Örnegin, yanitin büyüklügü bir denegin latent veya aktif veya akut bir enfeksiyon veya hastalik durumuna sahip olup olmadigini belirleyebilir.

Uygun olarak, CD4+ ve/veya CD8+ peptidler, ayri peptid havuzlarina bölünür.

Mevcut bulusu herhangi bir teoriye veya etki tarzina sinirlamaksizin, iki peptid seti, hem CD4+ hem de CD8+ epitoplarinin uyarilmasini saglar. Bu peptidler burada "CD4+ peptidleri“ (>15 mer peptidler) veya "CD8+ peptidleri" (7 ila 14 mer peptidler) olarak ifade edilir.

Ilave bir ajan, örnegin düzenleyici T hücrelerinin (T-reg hücreleri) aktivitesini modüle etmek amaciyla inkübasyon karisimina ilave edilebilir. Ikincisi, T-reg hücrelerinin supresör fonksiyonunu inhibe etmeyi kapsar. Burada kapsanan T- reg hücrelerini modüle eden ajanlar arasinda bir CD25 ligandi; JAKl veya TYK2'yi kodlayan genetik materyale yönelik bir sens veya antisens oligonükleotidi; bir nötrlestirici antikor; CpG içeren bir oligonükleotid; tolI benzeri bir reseptör (TLR) modüle edici ajan olarak islev gören bir oligonükleotid; ve diger TLR modüle edici ajanlar bulunur.

Burada tarif edildigi gibi, T-reg hücreleri aktivitesi inhibe edilmis immün yanit supresör hücreleridir.

Bir "CpG molekülü", bir` CpG sekansi veya motifi içeren bir Mevcut tarifname, bir denekte hücre aracili immünitenin yanit verebilirligini belirlemeye yönelik bir araç sunar ve, sirasiyla, bir hastalik durumunun veya bir ajanin immünosupresyonu indükleyip indüklemediginin veya bununla iliskili olup olmadiginin belirlenmesini ele alir. Yöntem ayrica, infeksiyöz hastaliklarin teshisini, patolojik kosullari, immünokompetans seviyesinin belirlenmesini ve endojen veya egzojen ajanlara karsi immün hücre yanit verebilirliginin degerlendirilmesi ile birlikte protein toksik maddelerine maruz kalmanin degerlendirilmesini saglar. Tahlil ayrica, bir hastalik, enfeksiyon veya kontaminant ile iliskili bir antijen gibi, belirli bir antijene daha önce maruz kalmis deneklerin taranmasini da saglar.

Buna uygun olarak, burada bir denekte hücre aracili bir immün yanit aktivitesinin ölçülmesine yönelik bir yöntem tarif edilir; yöntem, bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid seti ile denekten alinan lenfositlerin temas ettirilmesini ve immün hücreleri tarafindan üretilen bir immün efektör molekülünün seviyesini ölçmeyi içerir, burada immün efektör molekülünün seviyesi denegin hücre aracili yanit verebilirligi seviyesinin göstergesidir.

Ayrica burada bir denekte hücre aracili bir immün yanit aktivitesinin ölçülmesine yönelik bir yöntem tarif edilir yöntem, bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid seti ile denekten alinan lenfositlerin temas ettirilmesini ve immün hücrelerinden alinan bir immün efektör molekülünün seviyesindeki yükselmeyi ölçmeyi içerir, burada immün efektör molekülünün seviyesi denegin hücre aracili yanit verebilirligi seviyesinin göstergesidir ve yanit verebilirlik seviyesi patojenik bir ajanin sebep oldugu bir enfeksiyonu, bir otoimmün hastaligi, kanseri, inflamatuar bir durumu ve toksik proteinli bir ajana maruz kalmayi içeren listeden seçilen bir hastalik veya durumun varliginin veya yoklugunun veya derecesinin veya evresinin göstergesidir.

Ayrica yine burada bir denekte hücre aracili bir immün yanit aktivitesinin ölçülmesine yönelik bir yöntem tarif edilir yöntem, bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 Veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid seti ile denekten alinan lenfositlerin temas ettirilmesini ve immün hücrelerinden alinan bir immün efektör molekülünün seviyesindeki yükselmeyi ölçmeyi içerir, burada immün efektör molekülünün seviyesi hücre aracili yanit verebilirligi seviyesinin göstergesidir ve patojenik bir ajanin sebep oldugu bir enfeksiyonu, bir otoimmün hastaligi, kanseri, inflamatuar bir durumu ve toksik proteinli bir ajana maruz kalmayi içeren listeden seçilen bir hastalik veya durumun varliginin veya yoklugunun veya derecesinin veya evresinin göstergesidir.

Yine mevcut tarifname ile ele alinan bir baska yön, bir denekte bir hastalik veya durumun varligini, yoklugunu, derecesini veya evresini tespit etmeye yönelik bir tahlildir; yöntem, bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid seti ile denekten alinan lenfositlerin temas ettirilmesini ve immün hücrelerden alinan bir immün efektör molekülünün seviyesindeki yükselmeyi ölçmeyi içerir, burada immün efektör molekülünün seviyesi hastaligin veya durumun göstergesidir.

Mevcut tarifname ayrica bir ajanin bir denekte immünosupresyonu indükleyip indüklemedigini belirlemeye yönelik bir yöntemi öngörür; yöntem, bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid seti ile ajana maruz birakildiktan sonra denekten alinan lenfositlerin temas ettirilmesini ve immün hücrelerden alinan bir immün efektör molekülünün varligini ve seviyesini ölçmeyi içerir, burada immün efektör molekülünün seviyesi ajanin indükledigi immünosupresyon seviyesini belirler.

Bu yönüne uygun olarak, ajan bir ilaç veya çevresel bir toksik olabilir.

Spesifik olarak, lenfositler bir kan numunesi içinde yer alir.

Kan numunesi, bir birinci setin 7 ila l4 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid seti ile birlikte uyarilir.

Lenfositleri sinirlayici bir miktardaki agonist ile birlikte inkübe etmeye ve bir efektör molekülündeki varligin veya yükselmenin tespit edilmesine yönelik yöntem ile hücre aracili bir immün yanit verebilirlik tani tahlilinin üretiminde bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid setine yönelik bir kullanim sunulur.

Baska bir tarifnamede, bir hastalik durumunun bir denekte immünosupresyonu indükleyip indüklemedigini tespit etmeye yönelik bir yöntem ele alinir; yöntem, bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid seti ile bir hastalik durumuna sahip denekten alinan lenfositlerin temas ettirilmesini ve Ienfositlerden alinan bir immün efektör molekülünün varligini veya seviyesini ölçmeyi içerir, burada immün efektör molekülünün seviyesi indüklenen veya hastalik durumu ile iliskili olan immünosupresyon boyutunun göstergesidir.

Hücre aracili bir immün yanit verebilirlik tani tahlilinin üretiminde bir` birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid setine yönelik bir kullanini da açiklanir. Genel olarak, yöntem Ienfositleri bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid seti ile inkübe etmeyi içerir.

Bu kullanim, patojenik bir ajanin sebep oldugu bir enfeksiyon, bir otoimmün hastalik, kanser, inflamatuar bir durum ve/veya bir ilaca ya da çevresel bir toksik madde gibi toksik proteinli bir ajana maruz kalma gibi bir hastalik veya durumun varligini, yoklugunu, derecesini veya evresini tespit etmeye veya izlemeye yönelik bir kullanimi içerir. "Bir immün efektör molekülü" ölçmek, bir veya daha fazla farkli tipteki molekülün ölçülmesini Mevcut tarifname ayrica bir denekte hücre aracili bir immün yanit aktivitesinin ölçülmesine yönelik bir yöntem sunar; yöntem, denekten alinan düzenleyici bir T hücrenin (i) bir supresör düzenleyici T hücre inhibitörü ve (ii) bir immün arttirici hücre aktivatöründen veya bunun bir alt kümesinden seçilen bir ajan ile temas ettirilmesini ve ayrica T hücrelerinin bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid seti ile temas ettirilmesini ve immün hücrelerinden alinan bir immün efektör molekül ünün seviyesindeki yüksel meni n öl çül mesi ni içerir, burada immün efektör molekülünün seviyesi denegin hücre aracili yanit verebilirligi seviyesinin göstergesidir.

T-reg fonksiyonu inhibitörleri veya modül atörl eri örnekleri arasinda, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, CD25'e yönelik bir pol i kl onal veya monokl onal anti kor veya bunun bi r anti jen baglayici fragmani, CD25'e yönelik hümanize edilmis veya deimmünize edilmis poliklonal veya monoklonal antikorlar veya poliklonal veya monoklonal antikorlarin rekombinant veya sentetik bir formu gibi CD25 ligandlari bulunur. Diger ajan örnekleri arasinda Janus Tirozin Kinaz l (JAKl) ya da Tirozin Ki naz 2' yi (TYK2) veya JAKl ya da TYK2 protei nl eri ni n küçük molekül inhibitörlerini kodlayan mRNA veya DNA'ya (diger bir deyisle genetik. materyal) yönelik olan sens ya da antisens nükleik ve leeküller bulunur. "Küçük leeküller" referansi, gi bi i mmünogl obul i n yeni anti jen resept örl eri ni (I gNAR' I ar) içerir. Yine uygun ajanlarin baska örnekleri arasinda Toll-Iike reseptörleri (TLR'ler) ve/Veya baska mekanizmalar araciligiyla etkiyen CpG molekülleri gibi uyarici ajanlar bulunur. Bu nedenle, CpG içeren 0I i gonükl eoti dI er ve TLR modül e edici ajan olarak islev gören bir oI i gonükl eotid de mevcut tari fnameni n bi r parçasini olusturur.

Tek bir tip ajan kullanilabilir veya T-reg hücrelerini modüle etmek için iki veya daha fazla ajan tipi kullanilabilir. Örnegin, tahlil bir CD25 ligandi ve bir JAKl/TYKZ sens veya antisens Oligonükleotidi; bir CD25 ligandi ve bir TLR module edici ajan; bi r JAKl/TYK2 sens veya anti sens ol i gonükl eoti di ve bi r TLR module edici ajan; veya bir CD25 ligandi, bir JAKl/TYKZ sens veya antisens oligonükleotidi ve bir TLR module edici ajani ile gerçeklestirilebilir. Alternatif olarak, sadece bir tip ajan kullanilir. Baska bir alternatifte, CpG içeren bir oligonükleotid ve TLR modüle edici bir ajan kullanilir- hayvanlari (örnegin koyun, inek, domuz, at, esek, keçi), laboratuvar deneyi hayvanlari (örnegin fareler, siçanlar, tavsanlar, gine domuzlari, hamsterlar), evcil hayvanlar (örnegin köpekler, kediler), kus türleri (örnegin kümes hayvanlari, kafes kuslari), Sürüngenler ve amfibiyanlar dahil olmak üzere insan veya insan olmayan türler bulunur. Mevcut konu, insan tibbinda uygulanabilir olmasi ile birlikte at, köpek ve deve yarisi endüstrilerini içeren çiftlik ve veterinerlik ve vahsi yasam uygulamalarina da sahiptir. Örnegin, mevcut tarifnamede açiklanan tahlil, egzersizle indüklenen pulmoner hemoraji (EIPH) bulgusunu taramak amaciyla (yaris gibi) agir bir efordan önce ve/veya sonra atlarda rutin olarak gerçeklestirilebilir. Tüm atlar egzersiz sirasinda bir dereceye kadar EIPH sergilerler.

Bununla birlikte, ElPH'nin alt klinik formlarinin tespit edilmesi zor olabilmektedir. bagli insan topluluklari gibi belirli insan topluluklari ile birlikte belirli bir etnik kökene sahip belirli insan kOhOrtlari veya topluluklari bulunur.

Baska bir uygulamada denek bir insandir ve hücre aracili immün yanit tahlili, patojenik mikroorganizmalara, virüslere ve parazitlere karsi duyarlilik taramasinda, otoimmün durumlarin, Çölyak hastaliginin, gelismesi veya izlenmesi, bir denegin onkolojik zorluga verdigi yanitinin izlenmesi ve herhangi bir immün yetmezlik veya immünosupresyonun varligini belirleme potansiyelinde kullanilir. Sonuncusu, örnegin çesitli kemoterapötik ajanlar dahil olmak üzere belirli ilaçlara bagli olarak ortaya çikabilir. Alternatif olarak, çevresel proteinli toksik maddelere ve kirletici maddelere maruz kalma.

Immün efektör molekülleri, hücre aktivasyonuna veya bir antijen ile uyarmaya yanit olarak üretilen bir dizi molekülün herhangi biri olabilir. IFN-y gibi bir interferon (IFN) özellikle kullanisli bir immün efektör molekülü olmasina ragmen, digerleri interlökinler (IL), örnegin IL-Z, IL-4I IL-6, IL-6 (CXCLS), IL- Dönüstürücü Büyüme Faktörü beta (TGF-ß), Granülosit (G)-CSF veya Granülosit Makrofaj (GMl-CSE` gibi bir Koloni Uyarici Faktör (CSF), kompleman bileseni 5a (C5a), Groa (CXCLl), slCAM-l (CDS4)I IP-lO (CXCLlO)I I-TAC (CXCLll), MCP-1 (CCLZ), MIF (GIFL MlP-ld (CCL3), MIP-lß(CCL4), RANTES (CCLS) veya MIG (CXCL9) gibi bir dizi sitokin içerir.

Mevcut tarifname ayrica bir denekte hücre aracili bir immün yanit aktivitesinin ölçülmesine yönelik bir yöntem sunar; yöntem, bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid seti ile denekten alinan lenfositlerin temas ettirilmesini ve immün hücrelerinden alinan bir immün efektör molekülünün seviyesini ölçmeyi içerir, burada immün efektör molekülünün seviyesi denegin hücre aracili yanit verebilirligi seviyesinin göstergesidir.

Burada ele alinan tahlil, bir patojenik bir ajanin sebep oldugu bir enfeksiyon, bir otoimmün hastalik, kanser, inflamatuar bir ajana maruz kalma, bir ilaca maruz kalma, toksik proteinli bir ajana maruz kalma ve bir hastalik durumunun indükledigi immün yetmezlik veya immünosupresyon gibi bir denekte bir hastalik veya durumun varligini veya yoklugunu veya derecesini veya evresini tespit etmeyi mümkün kilar.

Bir uygulamada, denekten toplanan numune genellikle bir kan toplama tüpünde biriktirilir. Bir kan toplama tüpü bir kan alma tüpü veya baska benzer bir kabi içerir. Uygun olarak, numune tam kan oldugunda, kan toplama tüpü heparinize edilir. Alternatif olarak, kan alindiktan sonra tüpe heparin eklenir. Tam kanin Özellikle düsünülmesine ve en uygun numune olmasina karsin, mevcut tarifname, hücre deplesyonu geçiren numunelerin yani sira lenf sivisi, serebral sivi, doku sivisi ve nazal ve pulmoner sivi dahil olmak üzere solunum sivisi gibi immün hücreleri içeren diger numuneleri kapsar. “Tam, kan" referansi, doku kültürü, ortam, reaktifler, eksipiyanlar, Vb. ile seyreltilmemis tam kani içerir. Bir uygulamada, "tam kan" terimi, hacimce en az %10 tam kan içeren bir tahlil numunesi (diger bir deyisle reaksiyon karisimi) içerir. "Hacimce en az %10" terimi, reaksiyon karisiminin toplam tahlil hacminin hacimsel olarak %10, 11, 12, enzimler, eksipiyanlar, antijen ve benzerleri seklinde ilave ajanlar eklenebilir.

Kan hacimleri yaklasik 0,5 pl ila 200 ml arasinda olabilir. 500 pl, 1 ml, 5 ml, 10 ml ve 20 ml bulunur. Mevcut tarifname ayni zamanda tahlilde bilesenlerin karistirilmasini gelistirmek amaciyla akustik mikro-akis kullanimini mümkün kilar. Akustik mikro-akis, Uluslararasi Patent Basvuru No. PCT/AUOl/00420'de ve edilmistir.

Bu nedenle, burada bir veya daha fazla lenfosit ile bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya. bir kismini kapsayan. en az iki peptid. setini karistirmaya yönelik bir yöntem tarif edilir; yöntem akustik empedansta bir süreksizlik olusturacak sekilde kabin içindeki bilesenleri içeren yaklasik 0,5 ul ila 150 ul sivi saglamayi ve sivi içinde karismasini saglamak için bir akustik sinyal uygulamayi içerir. Ikinci bir akustik sinyal de uygulanabilir, birinci ve ikinci sinyaller, sivi içinde kaotik karismayi etkileyecek alternatif bir sekilde her biri sirasiyla yaklasik lHz ila yaklasik 20,000 Hz arasindan seçilen ilgili frekanslara sahiptir.

Kan toplama tüplerinin kullanimi standart otomatik laboratuvar sistemleri ile uyumludur ve bunlar büyük ölçekli ve rastgele erisim numune almada analizden sorumludur. Kan toplama tüpleri ayrica kullanim maliyetlerini en aza indirir ve laboratuvarda tam kan ve plazmaya maruz kalmasini azaltir ve böylelikle, laboratuvar personelinin HIV veya Hepatit B virüsü (HBV) veya Hepatit C virüsü (HCV) gibi bir patojenik alana yakalanma riskini azaltir.

Toplama tüpü ile Inkübasyon asamasinin birlestirilmesi özellikle etkilidir ve hücrelerin dekstroz veya glukoz gibi basit bir seker varliginda inkübe edilmesine yönelik istege bagli özellikte oldugu gibi tahlilin duyarliligini arttirir.

Hücre aracili immün sistem hücreleri denekten kan alinmasinin ardindan uzatilan süre sonrasinda tam kanda bir immün yaniti baslatma kapasitesini kaybeder ve müdahale olmaksizin yanitlar genellikle ciddi sekilde azalir veya kan alimindan 24 saat sonra yok olur. Is gücünün ve özel plastik malzemelere duyulan ihtiyacin azaltilmasi, doktor ofisleri, klinikler, ayakta tedavi tesisleri ve veteriner klinikleri veya çiftlikler gibi bakim noktalarinda gerçeklestirilecek peptid antijenleri ile hücre aracili immün uyarimini saglar. Antijen uyarimi tamamlandiginda, taze ve aktif hücrelere olan gereklilik artik bulunmaz. IFN-y ve diger sitokinler veya immün efektör moleküller plazmada stabildir ve bu nedenle numune saklanabilir ya da özel kosullar veya hizli zaman gereklilikleri olmadan gönderilebilir.

Inkübasyon adimi 1 ila 50 saat, örnegin 1 ila 40 saat veya 8 ila 47, 48, 49 veya 50 saat arasindaki bir zaman araliginda olabilir. 24 saatlik bir süre özellikle uygundur.

Hücre aracili immüniteyi ölçebilme kabiliyeti, bir denegin bir mikroorganizma veya Virüs veya parazit gibi bir patojenik ajanin neden oldugu bir enfeksiyona yanit verme, otoimmün diyabet gibi bir otoimmün yaniti baslatma veya kansere veya diger onkolojik durumlara karsi koruma veya enflamatuar bir durumu tespit etme veya bir denegin berilyum gibi toksik bir maddeye maruz kalmasini veya duyarliligini tespit etme yetenegini degerlendirmek açisindan önemlidir. Burada tarif edilen tahlil ayrica immünosupresyona yol açan hastalik durumlarinin veya ilaçlarla uyarilan immünosupresyonun tespit edilmesini saglar. Sonuç olarak, "bir denekte hücre aracili immün yanitin ölçülmeSi" referansi, infeksiyöz ve otoimmün hastaliklarin immün teshisini ve immünokompetansa yönelik bir markörün yani sira inflamatuar hastaliklar, kanser ve toksik. maddelere yönelik. bir markörü içerir ve kapsar. Önemli olarak, birlestirilmis dogustan ve/Veya adaptif immün yanit verebilirlik belirlenir. Ayrica, küçük kan hacimleri kullanma kabiliyeti, örnegin pediatrik, yasli ve yataga bagli topluluklar üzerinde tahlillerin kolayca gerçeklestirilmesini saglar. Buradaki tahlil, erken teshisi veya immüno yanit verebilirligin daha duyarli bir sekilde tespit edilmesini saglar.

Bir uygulamada, immünosupresyona yol açan hastalik durumlari arasinda kronik enfeksiyon ve kanser bulunur. Immünosupresyona yol açabilen ilaçlar arasinda romatoid artrit, kanser ve inflamatuar bagirsak hastaligini tedavi etmede kullanilan ilaçlar yer alir.

Patojenik veya infeksiyöz ajanlar arasinda bakteriler, parazitler ve virüsler bulunur. Bakteri örnekleri arasinda Mycobacterium türleri, Staphylococcus türleri, Streptococcus türleri, Escherichia coli, Salmonella türleri, Clostridium türleri, Shigella türleri, Proteus türleri, Bacillus türlerh Hemophilus türleri, Borrelia türleri gibi Gram pozitif ve Gram negatif mikroorganizmalar bulunur. Tüberküloz (TB) gibi M.

Tuberculosis enfeksiyonundan kaynaklanan durumlarin yani sira Mycobacterium tuberculosis özellikle kullanisli bir hedeftir.

Virüs örnekleri arasinda Hepatit Virüsü (Hepatit B virüsü ve Hepatit C virüsü), Herpes Virüsü ve Insan immün yetmezlik Virüsü (HIV) ile birlikte bunlardan kaynaklanan hastaliklar yer alir.

Parazitler arasinda Plasmodium türleri, saçkiran, karaciger parazitleri ve benzerleri bulunur. Diger patojenik ajanlar arasinda mayalar ve mantarlar gibi ökaryotik hücreler bulunur.

Bir uygulamada, tüberküloz antijeni CFPlO, ESAT-6, TB7.7 veya TB37.6'dir. Bir uygulamada, denek HIV ile enfekte edilir.

Mevcut bulusa göre yöntem, M. tuberculosis`e maruz kalma dUrumunun taranmasinda özellikle kullanislidir. Bu nedenle, mevcut tarifname bir denekte hücre aracili immün yanit aktivitesinin ölçülmesine yönelik bir yöntemi ele alir; yöntem, bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid seti ile denekten alinan lenfositlerin temas ettirilmesini içerir, burada antijen Mycobacterium tuberculosis 'e yönelik CFPlO, ESAT-6, TB7.7 ve TB37.6'dan seçilir ve yöntem ayrica immün hücreleri tarafindan üretilen bir immün efektör molekülünün seviyesini ölçmeyi içerir, burada immün efektör molekülünün seviyesi denegin M. Tuberculosis"e olan hücre aracili yanit verebilirligi seviyesinin göstergesidir.

CFPlO ayrica ESAT-ö-benzeri protein eesxB ve salgilanmis antijenik protein MTSA-lO olarak bilinir. ESAT-6, M. tuberculosis'in alti kDa'lik erken salgilayici bir antijenik hedefidir. M. Tuberculosis için uygun olan diger hedef protein antijenleri arasinda TB7.7 ve TB37.6 bulunur.

Tespit etmeye yönelik burada tasarlanan otoimmün hastaliklar arasinda digerlerine ilaveten alopesi areata, ankilozan spondilit, antifosfolipid sendromu, otoimmün Addison hastaligi multipl skleroz, otoimmün böbrek üstü bezi hastaligi, otoimmün hemolitik anemi, otoimmün hepatit, otoimmün ooforit ve orsit, Behçet hastaligi, bullöz pemfigoid, kardiyomiyopati, çölyak sprue-dermatit, kronik yorgunluk sendromu (CFIDS), kronik inflamatuar demiyelinizan, kronik inflamatuar polinöropati, Churg-Strauss sendromu, sikatrisyel pemfigoid, crest sendromu, soguk aglutinin hastaligi, Crohn hastaligi, dermatitis herpetiformis, diskoid lupus, esansiyel karisik kriyoglobulinemi, fibromiyalji, glomerülonefrit, Grave hastaligi, Guillain-Barre, Hashimoto tiroiditi, idiopatik pulmoner fibrozis, idiopatik trombositopeni purpura (ITP), IgA nefropati, insüline bagimli diyabet (Tip I), liken planus, lupus, Meniere hastaligi, karisik bag dokusu hastaligi, multipl skleroz, miyastenia gravis, miyokardit, pemfigus vulgaris, pernisiyöz anemi, poliarteritis nodosa, polikondrit, poliglanküler sendromlar, polimiyaljiya romatika, polimiyozit ve dermatomiyozit, primer agammaglobulinemi, primer biliyer siroz, psoriyazis, Raynaud fenomeni, Reiter sendromu, romatizmal ates, romatoid artrit, sarkoidoz, skleroderma, Sjogren sendromu, kati insan sendromu, sistemik Iupus eritematozus, Takayasu arteriti, temporal arterit/dev hücreli arterit, ülseratif kolit, uveit, vaskülit ve vitiligo bulunur.

Bu infeksiyöz entitilere maruz kalan deneklerde potansiyel veya gerçek hücre aracili yanit verebilirligi degerlendirmek genellikle önemlidir. Mevcut tarifnameye ait yöntem ayni zamanda hastalik sürecinin derecesini veya evresini tespit etmenin yani sira bu durumlarin varligini veya yoklugunu tespit etmek için de kullanilabilir.

Immünosupresyona yol açabilecek diger hastalik durumlari arasinda inflamatuar hastalik durumlari yer alir.

Mevcut tarifname ile tasarlanan inflamatuar hastalik durumlari örnekleri arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, hasar veya hastaliktan etkilenen dokulari korumaya yönelik olan kizariklik, sisme, agri ve belirli alanlarda isi hissi yaniti ile sonuçlanan hastaliklar ve bozukluklar yer alir. Mevcut tarifnamenin yöntemlerinin kullanilmasiyla tedavi edilebilen inflamatuar hastaliklar arasinda, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, akne, anjina, artrit, aspirasyon pnömonisi, hastalik, ampiyem, gastroenterit, inflamasyon, bagirsak gribi, NEC, nekrotizan enterokolit, pelvik inflamatuar hastalik, farenjit, PID, plörezi, girtlak iltihabi, kizariklik, rubor, bogaz agrisi, mide gribi› ve idrar yolu enfeksiyonlari, kronik, inflamatuar demiyelinizan polinöropati, kronik inflamatuar demiyelinizan poliradikülonöropati, kronik inflamatuar demiyelinizan polinöropati, kronik inflamatuar demiyelinizan poliradikülonöropati bulunur. Insan disi uygulamalar açisindan, mevcut tarifname, atlarda EIPH'nin ve hayvanlarda Tazmanya Canvariindaki yüz tümörü hastaligi gibi çesitli durumlari tespit etmeyi kapsamaktadir.

Kanser tedavisi ayrica hücre aracili immüniteye de bir miktar bagimlidir ve kanserin kendisi veya kanseri tedavi etmek için kullanilan ilaçlar immünosupresyona neden olabilmektedir. Burada ele alinan kanserler sunlari içerir: bu hücreleri özel ve farkli hücrelerden herhangi bir sekilde farklilastirmadan kontrolsüz hücreli büyüme (örnegin tümör olusumu) ile karakterize edilen bir grup hastalik ve bozukluk. Bu tür hastaliklar ve rahatsizliklar arasinda ABLl protoonkogen, AIDS ile ilgili kanserler, akustik nöroma, akut lenfositik lösemi, akut miyeloid lösemi, adenokistik karsinom, adrenokortikal kanser, agnojenik miyeloid metaplazi, alopesi, alveolar yumusak kisim sarkomu, anal kanser, anjiyosarkom, aplastik anemi, astrositom, ataksi- telenjiektazi, bazal hücreli karsinom (deri), mesane kanserh kemik kanserleri, bagirsak kanseri, beyin sapi gliomu, beyin ve CNS tümörleri, meme kanseri, CNS tümörleri, karsinoid tümörler, serviks kanseri, çocukluk çagi beyin tümörleri, çocukluk çagi kanseri, çocukluk çagi lösemisi, çocukluk çagi yumusak doku sarkomu, kondrosarkom, koryokarsinom, kronik lenfositik lösemi, kronik miyeloid lösemi, kolorektal kanserler, kutanöz T hücre lenfomasi, dermatofibrosarkom-protuberanS, desmoplastik-küçük- yuvarlak hücreli tümör, duktal karsinom, endokrin kanserlen endometriyal kanser, ependimom, özofagus kanseri, Ewing sarkomu, ekstra-hepatik safra kanali kanseri, göz kanseri, göz: melanom, retinoblastom, yumurtalik tüpü kanseri, fankoni anemisi, fibrosarkom, safra kesesi kanseri, mide kanseri, gastrointestinal kanserler, gastrointestinaI-karsinoid-tümör, genitoüriner kanserler, germ hücreli tümörler, gestasyonel- trofoblastik hastalik, gliyom, jinekolojik kanserler, hematolojik maliniteler, saçakli hücreli lösemi, bas ve boyun kanseri, hepatosellüler kanser, kalitsal meme kanseri, histiyositoz, Hodgkin hastaligi, insan papilloma virüsü, hidatidiform mol, hiperkalsemi, hipofarinks kanseri, intraoküler melanom, islet hücre kanseri, Kaposi sarkomu, böbrek kanseri, Langerhan hücre histiositozisi, larinks kanseri, leyomiyosarkom, lösemi, Li-Fraumeni sendromu, dudak kanseri, liposarkom, karaciger kanseri, akciger kanseri, lenfödem, lenfoma, Hodgkin lenfomasi, Hodgkin olmayan lenfoma, erkek meme kanseri, malign böbrek yumusak doku tümörü, medülloblastom, melanom, merkel hücre kanseri, mezotelyoma, metastatik kanser, agiz kanseri, multipl endokrin neoplazi, mikozis fungoides, miyelodisplastik sendromlar, miyelom, miyeloproliferatif bozukluklar, naza kanser, nazofarenks kanseri, nefroblastom, nöroblastom, nörofibromatozis, nijmejen breakage sendromu, melanom disi cilt kanseri, küçük hücreli olmayan akciger kanseri (NSCLC), oküler kanserler, özofagus kanseri, oral kavite kanseri, orofarenks kanseri, osteosarkom, ostomi over kanseri, pankreas kanseri, paranazal kanser, paratiroid kanseri, parotis bezi kanseri, penis kanseri, periferik nöroektodermal tümörler, hipofiz kanseri, polisitemi vera, prostat kanseri, nadir kanserler ve iliskili bozukluklar, renal hücreli karsinom, retinoblastom, rabdomiyosarkom, Rothmund-Thomson sendromu, tükürük bezi kanseri, sarkom, schwannom, Sezary sendromu, cilt kanseri, küçük hücreli akciger kanseri (SCLC), ince bagirsak kanseri, yumusak doku sarkomu, spinal kord tümörleri, skuamöz hücreli karsinom (deri), mide kanseri, sinovyal sarkom, testis kanseri, timus kanseri, tiroid kanseri, transizyonel hücreli kanser (mesane), transizyonel hücreli kanser (renal-pelvis-/-üreter), trofoblastik kanser, üretral kanser, üriner sistem kanseri, üroplakinler, uterus sarkomu, uterus kanseri, vajinal kanser, vulva kanseri, Waldenstrom makroglobulinemisi ve Wilms tümörü Yukaridaki yönlerde, antijen, patojenik ajandan türetilebilir, hastalik durumu veya kanser ile iliskili olabilir veya bir toksik madde olabilir. Alternatif olarak, enfeksiyon, hastalik durumu, kanser veya toksik madde, hücre aracili bagisikligi baskilayabilir, bu durumda denegin önceden maruz birakildigi herhangi bir antijen kullanilabilir.

Immün efektör moleküllerinin tespit edilmesi protein veya nükleik asit seviyelerinde ölçülebilir. Sonuç olarak, immün efektör molekülünün "varligi veya seviyesi" referansi, dogrudan ve dolayli verileri içerir. Örnegin, yüksek seviyelerde sitokin mRNA, sitokinin artan seviyelerini gösteren dolayli verilerdir.

Immün efektörlere karsi ligandlar, bu molekülleri tespit etmede ve/veya miktarini ölçmede özellikle kullanislidir. Immün efektörlere karsi antikorlars özellikle kullanislidir. Burada tasarlanan tahlillere yönelik teknikler, teknikte bilinmektedir ve Örnegin radyo immünolojik tahlilleri, sandviç tahliller, ELISA.ve ELISpot içerir. "Antikorlar"a yapilan referans, antikor parçalarini, memelize edilmis (örnegin hümanize edilmis) antikorlari, deimmünize edilmis antikorlari, rekombinant veya sentetik antikorlari ve hibrit ve tek Zincirli antikorlari içerir. Deri testleri için, insanlarda, hümanize edilmis veya immünize edilmis antikorlar, efektör molekülleri tespit etmek için burada özellikle tasarlanmistir.

Hem poliklonal hem de monoklonal antikorlar, immün efektör molekülleri veya bunlarin antijenik fragmanlari ile immünizasyon yoluyla elde edilebilir ve her iki tip immünolojik tahlil için de kullanilabilir. Her iki seruni tipini elde etmeye yönelik yöntemler teknikte iyi bilinir. Poliklonal serumlar daha az tercih edilir ancak uygun bir laboratuvar hayvanina, hayvandan serum toplanmasi ve spesifik serumlarin bilinen herhangi bir immünoadsorban teknikle izole edilmesiyle etkili bir miktarda immün efektörünün, veya bunun antijenik kisminin, enjekte edilmesi yoluyla. nispeten. kolaylikla hazirlanir. Bu yöntemle üretilen antikorlar neredeyse her türlü immünolojik tahlilde kullanilabilir olsa da bunlar ürünün potansiyel heterojenliginden dolayi genellikle daha az terCIh edilirler. immünolojik bir tahlilde monoklonal antikorlarin kullanilmasi, bunlarin büyük miktarlarda üretilmesi ve ürünün homojenligi nedeniyle özellikle kullanislidir. Bir ölümsüz hücre hatti ile immünojenik preparasyona karsi duyarli hale getirilen lenfositlerin kaynastirilmasiyla elde edilen monoklonal antikor üretimine yönelik hibridoma hücre hatlari preparasyonu, teknikte uzman kisilerce iyi bilinen tekniklerle yapilabilmektedir.

Bu nedenle, burada açiklanan bir baska yön, bir denekten alinan tespit edilmesine yönelik bir yöntemdir; yöntem, bir antikor- efektör kompleksi olusturmak için yeterli bir sürede ve kosullar altinda numunenin veya numunenin bir alikotunun immün efektör molekülüne veya bunun bir antijenik fragmanina özgü bir antikor ile temas ettirilmesini ve ardindan kompleksin tespit edilmesini içerir, burada immün efektör molekülü bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid seti ile lenfositlerin inkübe edilmesinin ardindan olusturulur.

Bir "numune", tam kan veya bunun Ienfositleri içeren bir fraksiyonunu içerir. Bu yöntem, düzlemsel veya küresel kati destekler üzerindeki mikro-dizileri, makro-dizileri ve nano- dizileri içerir. Bir mikro veya makro dizi kullanislidir. Bir yaklasik 200 ml gibi daha büyük hacimlerin yani sira 5 ul, lO ul, 20 ul, 50 ul ve 100 ul dahil olmak üzere yaklasik 0,5 ul ila lOOO ul arasinda küçük bir hacim numunesini içerir. referanslarinda görülebilecegi gibi çok çesitli immünolojik tahlil teknikleri mevcuttur.

Asagidaki, bir tahlil türünün açiklamasidir. Etiketlenmemis bir antikor, kati bir substrat üzerinde immobilize edilir ve immün efektör molekülleri (örnegin bir sitokin) için test edilecek numune bagli molekül ile temas ettirilir. Uygun bir inkübasyon sürecinden sonra, bir antikor-immün efektör molekül kompleksi olusturulmasina olanak saglayan yeterli bir süre boyunca, tespit edilebilir bir sinyal üretebilen bir raportör molekül ile etiketlenmis efektör moleküle özgü ikinci bir antikor eklenir ve bir baska antikor-efektÖr-etiketli antikor kompleksinin olusumu için yeterli zamani saglanmasi ile inkübe edilir. Reaksiyona girmemis herhangi bir madde yikanir ve efektör molekülün varligi, raportör molekül tarafindan üretilen bir sinyalin gözlemlenmesiyle belirlenir. Sonuçlar, görünür sinyalin basit bir sekilde gözlemlenmesiyle kalitatif olabilir veya bilinen miktarlarda antijen içeren bir kontrol numunesi ile karsilastirilarak miktari ölçülebilir. Bu genellestirilmis teknik, bir dizi varyasyondan herhangi biri olabildigi için teknikte tecrübeli kisilerce iyi bilinir.

Bu tahlillerde, hazir immün efektörleri için özgüllüge sahip olan bir birinci antikor, bir kati yüzeye kovalent veya pasif olarak baglanir. Kati yüzey tipik olarak cam veya bir polimerdir, en yaygin olarak kullanilan polimerler selüloz, poliakrilamid, naylon, polistiren, polivinil klorür veya polipropilendir. Kati destekler, tüp, boncuk, küreler, mikroplaka diski veya immünolojik bir tahlili gerçeklestirmek için uygun baska herhangi bir yüzey formunda olabilir. Baglanma prosesleri teknikte iyi bilinir ve genellikle çapraz baglanma, kovalent baglanma veya fiziksel olarak adsorbe etmeyi içerir, polimer- antikor kompleksi test numunesi preparasyonunda yikanir. Test edilecek numunenin bir alikuotu daha sonra kati faz kompleksine eklenir ve antikorda mevcut herhangi bir alt birimin baglanmasina izin veren yeterli bir süre boyunca (örnegin 2-120 dakika veya daha uygun olmasi halinde gece boyunca) ve uygun kosullar altinda (örnegin yaklasik 20°C ila yaklasik 40°C'de) inkübe edilir. Inkübasyon süresinin ardindan, antikor alt birimi kati fazi yikanir ve kurutulur ve efektör molekülün bir kismina özgü olan ikinci bir antikor ile inkübe edilir. Ikinci antikor, ikinci antikorun efektör moleküle baglanmasini göstermek için kullanilan bir raportör moleküle baglanir.

Bu tahlilin birçok varyasyonu bulunur. Özellikle kullanisli olan bir varyasyon, bilesenlerin tümü veya birçogunun büyük ölçüde es zamanli olarak karistirildigi es zamanli bir tahlildir. Ayrica, bir antikorun bir sitokine baglanmasi, bahsedilen ilk antikora yönlendirilmis bir etiketli antikorun baglanmasiyla belirlenebilir.

Mevcut tarifnamede kullanildigi sekilde "raportör molekül" ile, kimyasal yapisiyla, antijene bagli antikorun tespit edilmesine olanak saglayan analitik olarak tanimlanabilir bir sinyal gönderen bir molekül kastedilmektedir. Tespit etme, niteliksel veya niceliksel olabilir. Bu tür tahlilde en yaygin kullanilan raportör moleküller enzimler, floroforlar ya da radyonüklid içeren moleküller (diger bir deyisle radyoizotoplar) ve kemilüminesan moleküllerdir. Uygun florofor örnekleri Tablo 1'de sunulmustur. Bir enzim immünolojik tahlili durumunda, bir enzim genel olarak glutaraldehid Veya periyodat araciligiyla ikinci antikora konjüge edilir. Bununla birlikte, kolaylikla anlasilacagi gibi, teknikte tecrübeli kisilerce kolaylikla temin edilebilen çok çesitli farkli konjügasyon teknikleri mevcuttur.

Yaygin olarak kullanilan enzimler arasinda, digerlerinin yani sira, yaban turpu peroksidaz, glukoz oksidaz, beta-galaktosidaz ve alkalin fosfataz bulunur. Spesifik enzimler ile kullanilacak substratlar genellikle, ilgili enzim tarafindan hidrolize edilerek, tespit edilebilir bir renk degisimi üretimi için seçilir. Uygun enzim. örnekleri arasinda alkalin fosfataz ve peroksidaz bulunur. Yukarida belirtilen kromojenik substratlardan ziyade fluoresan bir ürün veren florojenik substratlarin kullanilmasi da mümkündür. Her durumda, enzim etiketli antikor ilk antikor-antijen kompleksine eklenir, baglanmasi saglanir ve sonra fazla reaktif yikanir. Uygun substrati içeren bir çözelti daha sonra antikor-antijen-antikor kompleksine eklenir. Substrat, numunede mevcut olan antijen miktarinin bir göstergesini sunmak üzere, sektrofotometre vasitasiyla daha fazla nicellestirilebilen niteliksel bir görsel sinyal vererek ikinci antikorla baglantili enzim ile reaksiyona girecektir. Yine, mevcut tarifname büyük ölçüde es zamanli bir tahlili kapsar.

Alternatif olarak, fluoresein ve rodamin gibi fluoresan bilesikleri, baglanma kapasitelerini degistirmeden antikorlara kimyasal olarak baglanabilir. Belirli bir dalga boyunun isigi ile aydinlatilarak aktive edildiginde, fluorokrom etiketli antikor, moleküldeki uyarilabilirlige bir durumu indükleyerek ve ardindan isik ndkroskobu ile görsel olarak tespit edilebilen karakteristik bir renkte isigin yayilmasi ile isik enerjisini adsorbe eder. Flüoresan etiketli antikorun, birinci antikor- antijen kompleksine baglanmasi saglanir. Baglanmamis reaktifi yikadiktan sonra, kalan tersiyert kompleksi daha sonra uygun dalga boyu isigina maruz birakilir, gözlemlenen fluoresan ilgili antijenin varligini gösterir. Immunofluoresan ve enzim immünolojik tahlil teknikleri, bu alanda çok iyi bilinmektedir ve mevcut yöntem için özellikle tercih edilir. Bununla birlikte, radyoizotop, kemilüminesan veya biyolüminesan moleküller gibi diger rapörtör moleküller de kullanilabilir.

Asilti altin dahil olmak üzere kullanilabilen bir dizi baska tespit sistemi bulunur ve bu tür tüm tespit sistemleri mevcut tarifname kapsamindadir.

Mevcut tarifname ayrica bir immün efektörünü kodlayan genetik bir sekansin RNA ekspresyon ürünlerini tespit etmeye yönelik PCR analizinin dahil edilmesi gibi genetik tahlilleri de kapsar.

Bir uygulamada, PCR, biri veya her ikisi de genellikle ayirt edilebilir bir sinyal gönderebilen ayni veya farkli bir rapörtör molekülü ile etiketlenmis primer çifti kullanilarak gerçeklestirilir. Floroforlarin kullanimi, mevcut tarifnamenin uygulanmasinda özellikle kullanislidir. Uygun florofor örnekleri Tablo 1'de verilen listeden seçilebilir. Diger etiketler, kizilötesi boyalarin yani sira luminesans ve fosforesans içerir.

Bu boyalar veya floroforlar ayrica antikorlar moleküller olarak kullanilabilir.

Uygun floroforlar listesi Prob Ex1 (nm) Em2 (nm) Reaktif ve konjüge problar Hidroksikumarin 325 386 Aminokumarin 350 455 Metoksikumarin 360 410 Cascade Mavi 375; 400 423 Lucifer Sari 425 528 R-Fikoeritrin (PE) 480; 565 578 Fluoresein 495 519 FIuorX 494 520 BODIPY-FL 503 512 X-Rodamin 570 576 Lissamine Rodamin B 570 590 Texas Kirmizi 589 615 Allofikosiyanin (APC) 650 660 için raportör Prob l Ex1 (nm) | Em2 (nm) Reaktif ve konjüge problar TruRed 490, 675 695 Alexa Flor 350 346 445 Alexa Flor 430 430 545 Alexa Flor 488 494 517 Alexa Flor 532 530 555 Alexa Flor 546 556 573 Alexa Flor 555 556 573 Alexa Flor 568 578 603 Alexa Flor 594 590 617 Alexa Flor 633 621 639 Alexa Flor 647 650 688 Alexa Flor 660 663 690 Alexa Flor 680 679 702 Alexa FIor 700 696 719 Alexa Flor 750 752 779 Cy2 489 506 Cy5, 5 675 694 Cy7 743 767 Nükleik asit problari Prob Ex1 (nm) Em2 (nm) SYTOX Mavi 431 480 Kromomisin A3 445 575 Mitramisin 445 575 SYTOX Yesil 504 523 SYTOX Turuncu 547 570 Ethidium Bormide 493 620 7-AAD 546 647 Akridin Turuncu 503 530/640 Tiyazol Turuncu 510 530 Prob Ex1 (nm) Em2 (nm) Propidyum Iyodür (PI) 536 617 Fluoresan Proteinler Y66F 360 508 Y66H 360 442 Y66W 436 485 565A 471 504 565C 479 507 565L 484 510 S65T 488 511 Diger problar Monoklorobiman 380 461 Kalsein 2Em: Pik emisyon dalga boyu (nm) Fluoresan emisyonunu analiz etmeye yönelik uygun herhangi bir yöntem bu metnin kapsamindadir. Bu baglamda, burada ele alinan teknikler, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla, örnegin Lakowicz ve 3-foton zamani çözünmüs fluoresan spektroskopisi, örnegin Eriksson ve dig. (1993) Biophys. J. 2:64 ile açiklandigi gibi fluoresan ömür boyu görüntüleme ve örnegin Youvan ve dig. (1997) Biotechnology et elia 3 1-18 ile açiklandigi gibi fluoresan rezonans enerji transferini içerir.

Luminesans ve fosforesans, teknikte bilindigi gibi, sirasiyla uygun bir Iuminesan veya fosforesan etiketten kaynaklanabilir.

Bu gibi bir etiketi tanimlamak için herhangi bir optik araç bu baglamda kullanilabilir.

Kizilötesi radyasyon uygun bir kizilötesi boyadan kaynaklanabilir. Mevcut tarifnamede kullanilabilen örnek niteligindeki kizilötesi boyalar, bunlarla sinirli kalmamak dig. Mater. Res. Soc. Symp. Proc. 488 [Electrical, Optical and Magnetic Properties of Organic Solid-State Materials IV], 885- belgelerinde tarif edilenleri içerir. Kizilötesi boyayi sorgulamak için herhangi bir uygun kizilötesi spektroskopik yöntem kullanilabilir. Örnegin, Rahman ve dig. (1998) J. Org.

Chem. 63:6196 ile tarif edildigi gibi, fourier dönüsümü kizilötesi spektroskopisi bu baglamda kullanilabilir.

Uygun olacak sekilde, elektromanyetik saçilma, isik ve X- isinlari dahil olmak üzere gelen elektromanyetik radyasyonun dagilmasi, yansimasi, polarizasyonu veya kirilmasindan kaynaklanabilir. Bu saçilma, mRNA seviyesini veya protein seviyesini ölçmek için kullanilabilmektedir.

Akis sitometrisi, flüorofor emisyonunu analiz etmede özellikle kullanislidir.

Teknikte bilindigi gibi, akis sitometrisi, bir sivi akisinda süspanse edilirken bir veya daha fazla IaZer isininin yolundan geçtiginden parçaciklarin fiziksel ve kimyasal özelliklerini (örnegin etiketli mRNA, DNA veya proteinler) hizla analiz etmeyi içeren yüksek verimli bir tekniktir. Her parçacik lazer isinini yakaladigi için, her bir hücre veya parçacik tarafindan yayilan saçilmis isik ve fluoresan isigi, örnegin asagida tarif edilen uygun herhangi bir izleme algoritmasi kullanilarak tespit edilir ve kaydedilir.

Modern bir akis sitometresi, bu görevleri 100.000 hücre/parçacik 54'e kadar gerçeklestirebilmektedir. Bir optik filtre ve dikroik ayna dizisi kullanilarak, farkli dalga boylarindaki fluoresan isigi ayrilabilmekte ve ayni anda tespit edilebilmektedir. Ek olarak, farkli uyarim dalga boylarina sahip bir dizi lazer kullanilabilir. Bu nedenle, birden çok denekten alinan bir numune veya immün efektörlerinde, örnegin, farkli immün efektörleri hedeflemek ve incelemek için çesitli floroforlar kullanilabilmektedir.

Mevcut tarifname yöntemlerinde kullanilabilecek uygun akis sitometreleri, tek bir uyarilma lazeri, yaygin olarak 488 nm'lik spektral çizgide 15 mW'de çalisan bir argon iyonu hava sogutmali lazeri kullanilarak bes ila dokuz optik parametreyi (bkz. Tablo 2) ölçenleri içerir. Daha gelismis akis sitometreleri, argon iyon Iazere (488 veya 514 nm) ek olarak bir HeNe lazeri (633 nm) veya bir HeCd lazeri (325 nm) gibi çoklu uyarilma lazerlerini kullanabilmektedit Bir akis sitometresi ile ölçülebilen Örnek niteligindeki optik parametreler.

Parametre Kisaltma Tespit etme açisi formu Dalga boyu gelen lazer isini (nm) Ileri saçimli isik FS 2-5° 488* Yana saçimli isik SS 900 488* *488 nm uyarilma lazeri kullanimi l bant geçiren filtrenin genisligi lazeri kullanarak ll parametreli bir akis sitometresi insa etmislerdir ve immünofenotiplendirme (diger bir deyisle siniflandirma) parçaciklari için ileri ve yan saçilma ölçümlerine ek olarak dokuz ayirt edici floroforun kullanimini göstermistir. Parametrelerin seçimi uygun bir sekilde kullanilabilir ve tüm floroforlar arasindaki sönüm katsayilari, kuantum verimleri ve spektral örtüsme miktarina baglidir (Malemed ve dig. (1990) "Flow cytometry and sorting", 2. Ed., New York, Wi l ey-Li ss) . Mevcut tari fnameni n herhangi bir belirli akis sitometresi veya herhangi bir belirli parametre seti ile sinirli olmadigi anlasilmalidir. Bu baglamda, tarifname ayni zamanda, örnegin, Fu ve dig. (1999) Nature Biotechnology sitometresinin yerine mikrofabrike bir akis sitometresi kullanilmasini öngörür.

Burada tarif edilen tahlil, yüksek verimli bi r tarama testi içi n veya bir denekten alinan bir dizi immün efektörün taranmasi için otomatiklestirilebilir veya yari otomatiklestirilebilir.

Otomasyon bilgisayar yazilimi ile rahatça kontrol edilir.

Mevcut tarifname, bundan baska, bir denegin hücre aracili immüno yanit verebilirligi ile ilgili verilerin bir istemci sunucu ya da baska bir mimari platform tarafindan bir kontrolü analiz eden ve karsilastiran ve istege bagli olarak hastanin yasi, cinsiyeti, agirligi ve diger tibbi durumlar gibi diger bilgileri göz önünde bulunduran ve daha sonra örnegin hastalik siddeti veya ilerlemesi veya durumuna yönelik bir risk faktörü veya hastalik gelisimi olasiliginin bir indeksi gibi bir rapor sunan merkezi islemciye sunuldugu web-tabanli ve web-tabanli olmayan sistemleri de tasarlar. Hücre aracili immüno yanit verebilirlik için belirlenen bir konumda daha sonra analiz edilecek kanin tasinabilir tüplerde toplandigi ve sonuçlarin bir klinik bakim saglayicisina bir istemci sunucusu veya baska bir mimari platform araciligiyla elektronik bir rapor seklinde gönderildigi ticari faaliyet yöntemi de sunulur.

Dolayisiyla, bilgi tabanli bilgisayar yazilimi ve donanimi da mevcut tarifnamenin bir parçasini olusturur. Bu, enfeksiyom infl amasyon kanseri ya da bi r ilaç ya da toksik madde içeren bi r hastalik durumunun, immünosupresyonu indükleyip indüklemedigi veya onunla iliskili olup olmadigini belirlemek amaciyla klinik bakimin yapilmasini kolaylastirir.

Mevcut tarifnamenin olanak sagladigi tahliller, mevcut veya yeni gelistirilen bilgi tabanli mimaride veya patoloji hizmetleriyle iliskili platformlarda kullanilabilir. Örnegin, tahlillerden elde edilen sonuçlar bir iletisim agi (örnegin internet) veya bir algoritmanin depolandigi ve daha sonra bir teshis veya tahmin raporu seklinde bir son kullaniciya iletilen hücre aracili immüno yanit verebilirlik veya immünosupresyon endeksine dönüsen tahmini bir posterior olasilik degeri üretmek için kullanildigi bir islem sistemine telefon baglantisi araciligiyla IletIIIr. Bu rapor ayrica klinik bakim yönetimi ve kisisellestirilmis tibbin temelini olusturabilir.

Bu nedenle, tahlil, lenfosi tI eri n bi r bi ri nci seti n 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bi r iki nci setin en az bi r 16 veya daha fazla ami no asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid setine maruz kalmasinin ardindan immün efektör molekülün konsantrasyonunu tespit etmek için gerekli olan reaktifleri ve raporlarin belirlenmesi ve bir klinisyene iletilmesini kolaylastirmak için gerekli bilgisayar yazilimi ve/Veya donanimini içeren bir kit veya bilgisayar tabanli bir sistem seklinde olabilir. Örnegin, mevcut bulus, bir kullanicinin, bir denegin hücre aracili immüno yanit verebilirlik durumunu belirlemesine olanak saglayan bilgisayar tarafindan uygulanan bir yöntem ile ilgilidir, yöntem asagidakileri içerir: (m CD8+ lenfositleri tarafindan taninan 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki peptidl eri içeren bi r bi ri nci set ile CD4+ lenfositleri tarafindan taninan 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidini içeren bir ikinci setin olusturdugu bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan iki pepti cl seti kombinasyonu ile denekt en alinan lenfositlerin birlikte inkübasyonunun ardindan immün efektör nwlekülünün ölçülmesi ile, bir kontrol ile ilgili olarak, bir iletisim agi araciligiyla bir denekteki hücre aracili immüno yanit verebilirlik durumuyla ilgili bir korelasyon saglayan immün efektör molekülü seviyeleri veya konsantrasyonlari biçiminde verilerin alinmasi; (m bir immüno yanit verebilirlik degeri saglamak için tek degiskenli veya çok degiskenli analiz araciligiyla verilerin islenmesi; (q önceden belirlenmis degerlere kiyasla immüno yanit verebilirlik degerinin sonuçlarina göre denegin durumunun belirlenmesi; ve (m iletisim agi araciligiyla denegin durumunun bir göstergesinin kullaniciya aktarilmasi. referans, tek degiskenli veya çok degiskenli analiz islevini gerçeklestiren bir algoritmayi içerir.

Uygun olarak, yöntem genel olarak asagidakileri içerir: (a kullanicinin uzak uç istasyon kullanarak verileri belirlemesi; ve (m iletisim agi araciligiyla uç istasyondan baz istasyonuna verilerin aktarilmasi.

Baz istasyonu, birinci ve ikinci islem sistemlerini içerebilir, bu durumda yöntem sunlari içerebilir: (@ verinin birinci islem sistemine aktarilmasi; (m verilerin ikinci islem sistemine aktarilmasi; ve (m birinci islem sisteminin, hücre aracili immüno yanit verebilirlik degerini üretmesi amaciyla tek degiskenli veya çok degiskenli analiz fonksiyonunu yerine getirmesine neden Yöntem ayrica sunlari içerebilir: (@ tek degiskenli veya çok degiskenli analiz fonksiyonu sonuçlarinin birinci islem sistemine aktarilmasi; ve (m birinci islem sisteminin denegin durumunu belirlemesine neden olma.

Bu durumda, yöntem ayrica asagidakilerden en az birini içerir: (@ iletisim agi ile birinci islem sistemi arasindaki verileri birinci güvenlik duvari araciligiyla aktarma; ve (m birinci ve ikinci islem sistemleri arasindaki verileri ikinci bir güvenlik duvari araciligiyla aktarma.

Ikinci islem sistemi, önceden belirlenmis verileri ve/veya tek degiskenli veya çok degiskenli analiz fonksiyonunu saklamaya uyarlanmis bir veri tabanina baglanabilir, yöntem asagidakileri (m en az seçilen önceden belirlenmis verileri elde etmek için veri tabaninin sorgulanmasi veya veri tabanindan tek degiskenli veya çok degiskenli analiz fonksiyonuna erisim; ve (m seçilen önceden belirlenmis verilerin denek verileri ile karsilastirilmasi veya bir hücresel immüno yanit verebilirlik veya Immünosupresyona seviyesinin tahmin edilen bir olasilik indeksinin olusturulmasi.

Ikinci islem sistemi bir veri tabanina baglanabilmektedir, yöntem verileri veri tabaninda saklamayi içerir.

Yöntem ayrica baz istasyonun asagidakilere neden olmasini da içerebilir: (m Ödeme bilgilerini, kullanici tarafindan Ödeme hükmünü temsil eden ödeme bilgisini belirlemek; ve (m Ödeme bilgilerinin belirlenmesine karsilik karsilastirmayi gerçeklestirmek.

Mevcut tarifname ayrica, hücre aracili immüno yanit verebilirlik veya immünosupresyon ile ilgili olarak bir denegin durumunu belirlemeye yönelik bir baz istasyonu da sunar, baz istasyonu asagidakileri içerir: (a bir depolama yöntemi; (m bir islem sistemi, islem sistemi asagidakilere uyarlanmistir: (a bir iletisim agi araciligiyla kullanicidan denek verilerini almak, veriler, Ienfositlerin bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid setine maruz kalmasinin ardindan immün efektör molekülünün belirlendigi bir kontrole göre efektör molekülün seviyesinin hücre aracili immüno yanit verebilirlik durumuna bir korelasyon sagladigi immün efektör molekülü seviyelerini içerir; (0 verilerin önceden belirlenmis verilere karsilastirilmasini içeren bir algoritmik fonksiyonun gerçeklestirilmesi; (@ karsilastirma dahil olmak üzere algoritmik fonksiyon sonuçlarina göre denegin durumunun belirlenmesi; ve (m iletisim agi araciligiyla denegin durumunun bir göstergesinin kullaniciya aktarilmasi.

Islem sistemi, verileri belirlemek için adapte edilmis uzak bir uç istasyondan veri alacak sekilde uyarlanabilmektedir.

Islem sistemi asagidakileri içerebilir: (m asagidakilere uyarlanmis bir birinci islem sistemi: m verileri almak; ve miverilerin karsilastirilmasi dahil olmak üzere tek degiskenli veya çok degiskenli analiz fonksiyonu sonuçlarina göre denegin durumunun belirlenmesi; ve (m asagidakilere uyarlanmis ikinci bir islem sistemi: m islem sisteminden verilerin alinmasi; m karsilastirma dahil olmak üzere tek degiskenli veya çok degiskenli analiz fonksiyonunun gerçeklestirilmesi; ve (m sonuçlarin birinci islem sistemine aktarilmasi.

Islem sistemi bir veri tabanina baglanabilmektedir, islem sistemi verileri veri tabaninda saklamaya uyarlanmistir.

Bu tarifnameye uygun olarak, immün efektör molekülünün seviyeleri, tek baslarina veya baska biyomarkörler veya hastalik indikatörleri ile kombinasyon halinde taranabilir. konsantrasyonlarindaki bir artis veya yükselme veya bir azalma veya düsüs anlamina gelir.

Immün efektör molekülünün konsantrasyonlarinin veya seviyelerinin belirlenmesi, kontrollere göre konsantrasyonlara dayanan bir teshis kurali olusturulmasini saglar. Alternatif olarak, teshis kurali, istatistiksel ve makine ögrenimi algoritmasinin uygulanmasina dayanir. Böyle bir algoritma, bilinmeyen durum ile birlikte deneklerin durumunu tahmin etmek için kullanilan iliskileri ortaya çikarmak amaciyla efektör molekülü ile (bilinen hastalik veya hücre aracili immüno yanit verebilirlik durumu ile ilgili) egitim verilerinde gözlemlenen hastalik durumu arasindaki iliskileri kullanir. Bir denegin belirli bir hücre aracili immüno yanit verebilirlik seviyesine ve/Veya. bir hastalik durumuna sahip olmasi olasiliginin bir indeksini sunan bir algoritma kullanilabilmektedir. Algoritma tek degiskenli veya çok degiskenli analiz fonksiyonu gerçeklestirir.

Bu nedenle mevcut tarifname, istatistiksel ve makine ögrenimi algoritmalarinin uygulanmasina dayali bir teshis kurali sunar.

Böyle bir algoritma, bilinmeyen immün durumu ile birlikte hastalarin durumunu tahmin etmek için kullanilan iliskileri ortaya çikarmak amaciyla immün efektör molekülü ile (bilinen immün durumu ile ilgili) egitim verilerinde gözlemlenen immüno yanit verebilirlik veya immünosupresyon arasindaki iliskileri kullanir. Veri analizir tekniginde tecrübeli praktisyonerler, egitim verilerindeki birçok farkli türdeki iliskilerin mevcut tarifnameyi bariz bir sekilde degistirmeden kullanilabilecegini kabul eder.

Mevcut tarifname ayrica, bilinmeyen bir immüno yanit verebilirlik seviyesine sahip bir denekten alinan ayni immün efektör molekülü seviyelerini içeren ikinci bir veri bilgi tabani girdisi ile, hücre aracili immüno yanit verebilirligin dogasini tahmin eden bir olasilik indeksi sunan bir algoritma olusturmak için bilinen bir hücre aracili immüno yanit verebilirlik seviyesine sahip bir denekten alinan immün efektör molekülü seviyelerini içeren bir egitim verisi bilgi tabaninin kullanimini da tasarlar. l4 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid setine maruz kalmasinin ardindan immün efektör nwlekülünün belirlendigi bir kontrole göre immün efektör molekülü seviyeleri bilgisini içerir. Bir immün efektör molekülü seviyelerinin bir karsilastirmasini içerir veya denemelere dayanan istatistiksel olarak belirlenmis bir seviye olabilir.

Bu nedenle, "egitim verileri" terimi, bir immün efektör molekülünün seviyelerini içerir.

Immün efektör molekülün seviyeleri veya konsantrasyonlari, burada “ikinci veri bilgi tabani" olarak adlandirilan girdi testi verilerini sunar. Ikinci veri bilgi tabani ya bir kontrol ile iliskili olarak kabul edilir ya da bilinen bir immünolojik duruma sahip bir denekte bir immün efektör seviyelerinin bulgularini içeren bir “birinci veri bilgi tabani" tarafindan üretilen bir algoritmaya beslenir. Ikinci veri bilgi tabani, hücre aracili immüno yanit verebilirlik açisindan bilinmeyen duruma sahip bir denekten kaynaklanmaktadir. Algoritma çiktisi veya bir kontrol ile karsilastirilmasi, belirli bir immüno yanit verebilirlik veya immünosupresif seviyesine sahip bir denege ait, burada "bir olasilik indeksi" olarak ifade edilen, bir Immün efektör nmlekülü seviyelerinden üretilen veriler giris verileridir. Immün efektör seviyelerini içeren verilerin girisi, bir kontrol ile karsilastirilir veya örnegin denegin bir immünosupresif duruma sahip olma olasiliginin bir risk degeri saglayan bir algoritmaya yerlestirilir. Herhangi bir immünosupresyonun varligini belirlemek amaciyla bir tedavi rejimi de izlenebilir. Bir immünosupresyOn seviyesi, denegin ikincil enfeksiyona yakalanma veya hastaligin tekrarlamasi (örnegin kanser tedavisi veya patojenik bir enfeksiyonun tedavisi sirasinda) riskini artirabilir.

Yukarida tarif edildigi gibi, bir denegin bir immün efektör molekülü seviyesi araciligiyla bir dogustan ve/veya adaptif immün yaniti ne ölçüde baslatabildigini belirleyerek bir immüno yanit verebilirlik veya immünosupresif durumunun teshisine yönelik yöntemler, bilinen immün durumuna sahip deneklerdeh ayni efektör* molekülünün birinci bilgi tabani verileri veya seviyeleri ile üretilen bir algoritmada ikinci bir bilgi tabani verisi sunar. Ayni zamanda, bir denek numunesinde dogustan gelen ve/veya adaptif immün sisteminin uyarilmasinin ardindan bir immün efektör molekülünün varligini ve/veya hizini belirlemeyi içeren immüno yanit verebilirligi tespit etmeye yönelik yöntemler de sunulmustur. "Hiz" ile, bir denek numunesinde zaman içindeki efektör molekül konsantrasyonundaki degisiklik kastedilmektedir.

Yukarida belirtildigi gibi, burada kullanilan "numune" terimi, bunlarla sinirli olmamak kaydiyla tam kan, bir tam kan fraksiyonu, doku ekstreleri ve taze toplanmis hücreler dahil olmak üzere bir veya daha fazla lenfosit içeren herhangi bir numune anlamina gelir.

SÖZ konusu tarifnameye ait yöntem, bir hastaligin teshis ve evrelemesinde kullanilabilir. Mevcut tarifname ayrica bir durumun ilerlemesini izlemek ve belirli bir tedavinin etkiH olup olmadigini izlemek için kullanilabilir. Özellikle, bu yöntem ameliyat, kanser terapisi ya da digerled ya da ilaç tedavisi ya da toksik maddelere maruz kalma sonrasi immünosupresyonu izlemek için kullanilabilmektedir.

Bir uygulamada, söz konusu tarifname, bir denekte immünosupresyonu izlemeye yönelik asagidakileri içeren bir yöntem tasarlah (a bir denekten bir numune almak; (m bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir l6 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid seti ile uyarilmanin ardindan bir immün efektör molekülünün seviyesinin belirlenmesi; burada bir kontrol ile ilgili olarak immün efektörünün seviyesi, hücre aracili immüno yanit verebilirlik durumuna bir korelasyon ve belirli bir immüno yanit verebilirlik seviyesine sahip olan denegin bir olasilik indeksini saglamak amaciyla seviyeleri bir algoritmaya tabi tutmayi saglar; ve (m (a) ve (b) adimlarinin daha sonraki bir zamanda tekrarlanmasi ve (b) adiminin sonucunun (c) adiminin sonucu ile karsilastirilmasi, burada olasilik indeksindeki bir fark, denekteki durumun ilerleyisinin göstergesidir.

Yukarida belirtildigi gibi bir "algoritma" veya "algoritmik fonksiyonlar" referansi, tek degiskenli veya çok degiskenli analiz fonksiyonunun performansini içerir. Yukarida açiklananlara ek olarak bir dizi farkli mimari ve platform da uygulanabilir. Mevcut tarifnamenin uygulanmasi için uygun olan herhangi bir mimari biçiminin kullanilabilecegi kabul görmektedir. Bununla birlikte, faydali tekniklerden biri, dagitilmis mimarilerin kullanilmasidir. Özellikle, ilgili cografi konumlarda birkaç uç istasyon saglanabilir. Bu, veri bant genisligi maliyetlerini ve gereksinimlerini azaltarak sistemin verimliligini arttirabilmekle birlikte bir baz istasyonunun tikanmasi veya burada bir ariza meydana gelmesi durumunda diger uç istasyonlari devreye sokabilmeyi de mümkün kilar. Bu ayrica, sisteme her zaman erisilebilmesini saglamak amaciyla yük paylasimina veya benzerlerine olanak saglar.

Bu durumda, baz istasyonunun farkli uç istasyonlarin kullanilabilecegi sekilde ayni bilgiyi ve imzayi içermesini saglamak gerekli olacaktir.

Bir örnekte, uç istasyonlarin, PDA'lar, cep telefonlari ya da benzerleri gibi söz konusu verileri baz istasyonuna Internet gibi bir iletisim agi araciligiyla aktarabilen ve raporlari alabilen tasinabilir cihazlar olabilecegi kabul görmektedir.

Yukaridaki yönlerde, "veri" terimi, bir protein antijeninin tüm uzunlugunu kapsayan yaklasik 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki bir dizi örtüsen peptid ile uyarilmanin ardindan immün efektörünün seviyelerini veya konsantrasyonlarini ifade eder. "Iletisim agi" internet ve cep telefonu sebekesi ve telefon sabit hattini içerir. Bir sunucu kullanildiginda, genellikle bir istemci sunucusudur veya daha özel olarak basit nesne uygulama protokol üdür (SOAP).

Mevcut tari fnameye ait bir yön, bi r bi ri nci seti n 7 ila 14 ami no asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid setinde yanit verebilirligin ölçülmesi ile bir denegin hücre aracili immün yanit verebilirligini kanitlayan deneyleri içerir. Bir uygulamada, periferik kan, zenginlestirilmis kan beyaz hücre fraksiyonunu veya bronkoalveoler Iavaj numunesi gibi bir veya daha fazla numune, belirli bir hastaliga (örnegin otoimmün hastalik, bir patojenik ajana olan enfeksiyon veya proteinli bir toksik maddeye maruz kalma) sahip olan veya hastaligin ilerlemesinden süphelenilen bir denekten elde edilebilir ve efektör moleküllerin efektör T hücrelerinden (örnegin CD4+ 1' hücreleri ve CD8+ T-hücreleri) belirlenmesi ile immün yanit verebilirligi ölçülebilir.

Immüno baglanma yöntemleri, bir numunedeki reaktif bir bilesenin miktarini tespit etmeye veya ölçmeye yönelik yöntemler içerir, bu yöntemler, baglanma prosesi sirasinda olusan herhangi bir immün kompleksinin tespit edilmesini veya miktarinin belirlenmesini gerektirir. Burada bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid seti ile Ienfositlerin uyarilmasinin ardindan bir sitokin içerdigi süphelenilen bir numune elde edilebilir ve numune bir antikor ile temas ettirebilir ve sonra belirli kosullar altinda olusturulan immün komplekslerin miktari tespit edilebilir veya ölçülebilir.

Seçilen biyolojik numunenin antikor ile immün komplekslerinin (birincil immün kompleksleri) olusumuna izin verecek etkili kosullar altinda ve bir süre boyunca temas ettirilmesi genellikle bilesimin numuneye eklenmesi ve karisimin bir süre bOyunca antikorlarin mevcut herhangi bir efektör molekülü ile immün kompleksleri olusturma, diger bir deyisle efektör moleküle baglanmasi, için yeterince uzun bir zaman zarfi süresince inkübe edilmesidir. Bu süreden sonra, bir doku kesiti, ELISA plakasi, ELISpot, dot blot veya Western blot gibi numune-antikor bilesimi, yalnizca tespit edilecek birincil immün komplekslerde spesifik olarak bagli antikorlara izin vererek spesifik olmayan baglanmis antikor türlerini uzaklastirmak için genellikle yikanir.

Belirli bir uygulamada, mevcut tarifname, bir insan denekte bir hastalik veya durumun varligini, yoklugunu, derecesini veya evresini tespit etmeye yönelik bir yöntemi ele alir; yöntem, bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan en az iki peptid seti ile bir reaksiyon karisiminda toplam hacmin en az %lO'unu içeren tam kani temas ettirmeyi ve T hücrelerden alinan bir immün efektör molekülünün seviyesindeki varligi veya yükselmeyi ölçmeyi içerir, burada immün efektör molekülünün varligi veya seviyesi hastaligin veya durumun göstergesidir.

Bir baska uygulamada, mevcut tarifname, yukarida açiklanan yöntemlerle kullanilmaya yönelik kitler sunar. Bir uygulamada, bir immüno tespit kiti tasarlanmistir. Baska bir uygulamada, bir metal ile veya kimyasal olarak indüklenen bir hastaliga yakalanmis veya hastaligi gelistirdigi süphesi bulunan bir denekten alinan bir numunenin analizine yönelik bir kit tasarlanir. Daha özel bir uygulamada, bir hastaliga yakalanmis veya hastaligi gelistirdigi süphesi bulunan bir denekten alinan bir numunenin analizine yönelik bir kit tasarlanir. Bir uygulamada, bir hastalik durumunun ortaya çikmasindan önce veya sonra veya bir denege bir ilaç verilmesinden ya da bir toksik maddeye veya kirletici maddeye maruz kalmasindan önce veya sonra bir denegin hücre aracili immün yanit verebilirligini degerlendirmeye yönelik bir kit tasarlanir. Bir antijen kullanilmasi durumunda kit ayrica belirli bir antijeni de içerebilir.

Kitin immüno tespit reaktifleri, belirli antikor veya antijen ile iliskili veya bunlara bagli tespit edilebilir etiketler ve ikincil bir baglanma ligandi ile iliskili veya bunlara bagli tespit edilebilir etiketler de dahil olmak üzere çesitli biçimlerden herhangi birini alabilir. Örnek niteligindeki ikincil ligandlar, birinci antikor veya antijen için baglanma afinitesine sahip ikincil antikorlar ve bir insan antikoru için baglanma afinitesine sahip ikincil antikorlardir.

Mevcut kitlerde kullanima yönelik olan uygun immün tespit reaktifleri arasinda ikinci antikor için baglanma afinitesine sahip olan tespit edilebilir bir etikete bagli üçüncü bir antikor ile birlikte, birinci antikor veya antijen için baglanma afinitesine sahip bir ikincil antikor içeren iki bilesenli reaktifi bulunur.

Kitler ayrica, bir tespit tahlili için standart bir egri hazirlamada kullanilabilecek, etiketlenmis veya etiketlenmemis, antijen veya efektör molekülün uygun bir sekilde alikuot edilmis bir bilesimini içerebilir.

Kitleri tam konjüge formda, ara ürün formunda veya kit kullanicisi tarafindan konjüge edilecek ayri parçalar halinde antikor-etiket konjügatlari içerebilir. Kitlerin bilesenleri, ya sulu ortamda ya da liyofilize biçimde paketlenebilir.

Kitlerin herhangi birinin kap araci arasinda genellikle test maddesinin, antikorun veya antijenin yerlestirilebildigi ve genel olarak uygun sekilde alikuot edilebildigi en az bir flakon sise, deney tüpü, yassi sise, sise, siringa veya diger kap araçlari bulunur. Bir ikinci veya üçüncü baglanma ligandi veya ek bilesen sunulmasi durumunda bu kit ayrica genel olarak bu ligandin veya bilesenin yerlestirilebilecegi ikinci, üçüncü veya baska bir ek kabi da içerecektir. Mevcut tarifname ile ele alinan kitleri tipik olarak, antikoru, bir antijenden türetilen peptidleri içeren bir araci ve ticari satis için yakin bir sinirlama içinde herhangi bir baska reaktif kabi içerir. Bu tür kaplar arasinda enjeksiyon veya içine arzu edilen siselerin konuldugu üfleme yolu ile kaliplanmis plastik kaplar bulunabilin Ayrica burada bir denekte hücre aracili bir immün yanitin veya bunun seviyesinin tespit edilmesine yönelik gelistirilmis bir tahlil tasarlanir; tahlil, denekten alinan lenfositlerin bir antijen ile inkübe edilmesini ve efektör moleküllerin varliginin veya moleküllerdeki yükselmenin teSpit edilmesini içerim gelisme, bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan peptidlerin en az iki seti ile lenfositlerin inkübe edilmesim Mevcut tarifname ayrica bir patojenik enfeksiyona, bir otoimmün bozukluga veya kansere veya böyle bir durum veya bozuklugun gelistirilmesi için bir egilime sahip olan bir denegin tedavi yöntemini sunar; yöntem, bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsayan peptidlerin en az iki seti ile denekten alinan lenfosit kaynaginin temas ettirilmesini ve T hücrelerden alinan bir immün efektör molekülünün varligini veya seviyesindeki yükselmeyi ölçmeyi ve sonrasinda durumu ya da bozuklugu tedavi etmeyi içerir, burada immün efektör molekülünün varligi veya seviyesi durumun veya bozuklugun varliginin, yoklugunun, derecesinin veya evresinin göstergesi olan denegin hücre aracili yanit verebilirliginin seviyesinin göstergesidir.

Burada ele alinan yönler, asagidaki Örneklerle daha ayrintili olarak açiklanmaktadir.

Tahlilin Gelistirilmesi Heparinize kan numuneleri Li-Hep Vacuette [Tescilli Marka] tüplerinde (Greiner Bio-one, Almanya) toplanir.

Kan numuneleri alikuotlari bir birinci setin 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki en az bir (CD8+ T hücrelerini taniyan) peptid içerdigi ve bir ikinci setin en az bir 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi ve (CD4+ T hücrelerim taniyan) peptidlerin bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsadigi en az iki peptid seti ile inkübe edilmistir, burada antijen M. tuberculosis CFP10, ESAT-6, TB7.7 ve TB37.6'dan seçilmistir.

Bazi deneylerde, inkübasyon baslangicindan önce kana çesitli konsantrasyonlarda glikoz eklenir.

Uyarllmis kan numuneleri, 37°C'de antijen peptidlerinin varliginda 16-24 saat dahil olmak üzere 1 ila 48 saat boyunca inkübe edilmistir, daha sonra plazma, yerlesmis kan hücrelerinin üstünden toplanmistir. Her bir plazma numunesindeki mevcut IFN- y› miktari, daha sonra üreticinin talimatlarina uygun olarak Quantiferon-TB [Tescilli Marka] ELISA (Cellestis Limited, Avustralya) kullanilarak ölçülmüstür. IFN-y numunesi, üreticinin talimatlarina uygun olarak daha duyarli Quantiferon-TB Gold kullanilarak alternatif olarak ölçülmüstür.

Her ELISA plakasinda çalisilan IFN-y› standartlarina yönelik ELISA optik yogunluk degerleri, test plazma numunelerinin her birinde bulunan IFN-v miktarinin IU/mL degerlerine dönüstürüldügü standart bir egri olusturmak için kullanilmistir.

CD8+ TB'ye özgü peptidlerin CD4+ peptidlere eklenmesiyle QuantiFERON-TB tüplerindeki yanitlarin arttirilmasi Bu çalismalar, klinik olarak dogrulanmis aktif tüberküloz enfeksiyonu olan bir grup hastada gerçeklestirilmistir. Hastalar mevcut QuantiFERON-TB In-Tube tani testi ile test edilmistir.

QuantiFERON-TB tüpü CD4FT hücreleri için spesifik olan peptid havuzlarini içerir (> 15 mer peptidler). Hastalar ayrica CDSVT hücreleri için spesifik olan peptid havuzlarinin eklendigi modifiye bir tüp kullanilarak test edilmistir (10 mer peptidler). Bu ek peptidler 91 peptidin tam bir havuzu olarak ve iki küçük havuz olarak test edilmistir. Bu havuzlar, yalnizca bu peptidlere verilen arka plan yanitlarini degerlendirmek için kontrol olarak QuantIFERON-Nil tüplerine eklenmistir.

Aktif TB hastaligi olan hastal arda, Quanti FERON-TB tüpleri ne CD8+ pepti dl eri ni n eklenmesi, mevcut Quanti FERON-TB testine kiyasla duyarlilikta %10'luk bir artisa neden olmustur.

CFTO peptid havuzlari kullanilarak TB tanisi Bu Örnegin amaci, CD8+ T hücreleri (10 mer peptidler) tarafindan taninmasi için tasarlanan TB antijenlerinin, aktif TB enfeksiyonu olan hastalarin kaninda tespit edilebilir seviyelerde IFN-y üretmemeyi indükleyip indüklemeyecegini test etmektir. Tek basina veya mevcut peptidlerle baglantili olarak MHC sinif l-kisitli peptidlerin ("CD8+ pepti dl er" olarak adlandirilir) kullaniminin TB tanisinin duyarliligini arttirabilecegi öngörülmüstür. Bu özellikle, az sayida CD4+ T hücresine sahip olan HIV ile enfekte kisilerle ile oldukça Iliskilidir.

CFPlO Mtbproteininin tüm uzunlugunu kaplayan, her biri 10 amino asit uzunlugundaki, toplam 91 peptid üç havuzda toplanmistir.

Havuz 1 91 peptidin tümünü içermistir, Havuz 2 CFPlO proteininin birinci yarisini (1-45. pepti dl er ) kapsayan pepti dl eri içermistir ve Havuz 3 CFPlO proteininin ikinci yarisini (46-91. peptidler) kapsayan peptidleri içermistir. Havuzlar (bir Nil tüpüne eklenerek) tek baslarina veya mevcut QFT-TB Gold antijen tüpüyle kombinasyon halinde test edilmistir.

Toplamda 63 hasta çaIismaya dahil edilmistir. Bunlardan 50 hasta QuantiFERON-TB Gold In-tube testinde pozitif çikmistir. Kültür (veya bir vakada klinik semptomlar) ile dogrulanmis aktif TB hastaligi olan 31 hasta çalismaya dahil edilmistir* ve dahil edilen 19 hasta TB süphesi olan hastalardir.

Hasta bilgisi: TB hastaligi: 31 (biri kültür ile dogrulanmamistir) TB süphesi olanlar: 19 Toplam hasta sayisi (#): 63 Sonuçlar Tablo 3 ila 7'de ve Sekil 1'de gösterilir ve sonuçlar bir QFT-TB Gold antijen tüpü ile kombinasyon halinde test edilen peptid havuzlarinin kalitatif sonuçlari gösterir.

TB hastaligi olan hastalar (n=31): QFT-TB Gold Havuz 1 Havuz 2 Havuz 3 Belirsiz O 0 0 O Negatif 3 O 1 Pozitif 28 31 30 31 TB süphesi olanlar (n=19): QFT-TB Gold Havuz 1 Havuz 2 Havuz 3 Belirsiz 0 0 0 0 Negatif 9 7 6 7 Pozitif 10 12 13 12 HHC Hastalari (n=3t QFT-TB Gold Havuz 1 Havuz 2 Havuz 3 Belirsiz 0 0 0 0 Negatif 0 0 O 0 Pozitif 3 3 3 3 Tek basina QFT-TB Gold antijen tüpüne kiyasla, arttirilmasi ile ilgili olarak, CD8+ peptidi havuzlarinin CD4+ peptidlerinin mevcut tüplerine ilave edilmesinin etkilerini incelemek için bir nicel analiz gerçeklestirilmistir. IFN-y yanitindaki bir artis, QFN TB sonucunun > 1,5 kati bir artis olarak tanimlanmistir. Tedaviye tepkileri ölçülebilir hastalar, dönüstürülmüs/tersine çevrilmis bir yanita sahip olanlari ya da olmadiklarini tüm plazma numunelerinin ölçülebilir içermez.

QFT-TB'ye tek basina veya her havuzla kombinasyon halinde verilen ortalama IFN-y yanitini gösterir.

TB hastaligina Tepkileri Ölçülebilir Hastalar (n=24): Artis yok 6 4 5 ölçülebilir hastalar)Tablo 7 Tepkileri ölçülebilir TB süphelileri (n=6): Artis (>l,5x QFN TB sonucu) 0 0 0 Artis yok 6 6 6 6 Artis (tepkileri %0 %0 %0 ölçülebilir hastalar) Bu veriler, CD8+ peptidlerinin (CD4+ peptidlerini QFT-TB Gold In Tube içeren) mevcut tahliline eklenmesinin tahIiH duyarliliginda %lO'luk bir artisa neden oldugunu gösterir.

Ayrica, veriler yanit büyüklügünde CD8 peptidlerinin eklenmesinden kaynaklanan 1,5 kattan daha fazla bir artmanin ("artis"), tahlilin sadece onaylanmis aktif TB'ye sahip deneklerden alinan hasta numuneleri üzerinde gerçeklestirildigi zaman belirgin oldugunu gösterir. Bu veriler, mevcut QFT-TB Gold karsi latent TB hastaligi olan denekler arasinda farklilastigini gösterir.

CFPlO CD8+ peptidlerinin tahlil özgüllügüne etkisi Bu Örnegin amaci, CFPlO CD8* peptidlerinin QFT-TB Gold tüpüne eklenmesinin tahlil özgüllügünde bir azalmaya yol açip açmayacagini arastirmaktir. Bu nedenle, peptid havuzlari, TB insidansi düsük olan bir ülkeden (Melbourne, Avustralya) alinan saglikli kontrol donörleri toplulugunda (CD4+ peptidleri içeren) QFT-TB Gold In Tube tahlili ile birlikte kullanilmistir.

CFPlO Mtbproteininin tüm uzunlugunu kaplayan, her biri 10 amino asit uzunlugundaki, toplam 91 peptid üç havuzda toplanmistir.

Havuz l CFPlO proteininin birinci yarisini (1-45. peptidler) kapsayan peptidleri içermistir, Havuz 2 CFPlO proteininin ikinci yarisini (46-91. peptidler) kapsayan peptidleri içermistir ve Havuz 3 91 peptidin tümünü içermistir.

Toplamda 92 denek çalismaya dahil edilmistir. Bunlardan 3 denek QuantiFERON-TB Gold In-tube testinde pozitif çikmistir. QFT- TB”si negatif olan denekler, herhangi bir peptid havuzuna cevap vermemistir. Sonuçlar, Tablo 8 ve 9'da gösterilmektedir.

QFT-TB Gold Havuz 1 Havuz 2 Havuz 3 Belirsiz O 0 O 0 Negatif 89 89 89 89 Pozitif 3 3 3 3 3 QFT-TB pozitif donörde, peptid havuzlarinin eklenmesiyle IFN- y yanitinda herhangi bir artis görülmemistir (artis > QFN TB sonucunun 1,5 kati).

Bu veriler, CD8+ peptidlerinin mevcut QFT-TB Gold In Tube Artis (>l,5x QFN TB sonucu) 0 0 0 Artis yok 3 3 3 hastalar) tahliline eklenmesinin tahlil özgüllügünü olumsuz etkilemedigini göstermistir.

Bir QFT-CMV tahlilinde CMV 16 mer CD4+ peptidinin CD8+ peptidleri ile kombinasyonu Bu Ornek, CD8+ peptidlerinin eklenmesinin, CMV antijeni pp65'ten alinan bir 16 mer peptidinin kullanilmasiyla bir QFT-CMV tahlilinde yaniti arttirip artirmayacagini arastirmistir.

Pozitif bir CMV seroloji sonucuna sahip üç saglikli donörden alinan kan, l) lug/ml'lik (nihai konsantrasyon) 16-mer peptIdI içeren bir Nil tüpünün ve 2) lpg/ml'lik (nihai konsantrasyon) 16-mer peptidini içeren QFT-CMV tüpünün eklenmesi ile QFT-CMV tahlilinde kullanilmistir. Tahlil üreticinin talimatlarina uygun olarak gerçeklestirilmistir. 0/3 donör, yalnizca l6-mer peptidine yanit vermistir. 3/3 donör, QFT-CMV tahlilinde 16 mer + CD8+-peptidlerine yanit vermistir.

Sonuçlar, asagida Sekil 1'de grafik seklinde gösterilmektedir.

Herhangi bir donörde 16 mer peptidine yanit görülmemistir. Tüm donörler, QFT-CMV tahlilinde CD8+ peptidleri ile kombinasyon halinde 16 mer peptidine pozitif bir yanit göstermistir.

BIBLIYOGRAFYA Eriksson ve dig. (1993) Biophys. J. 2: 64 Lakowicz ve dig. (1997) Biophys. J. 72:567 Malemed ve dig. (1990) "Flow cytometry and sorting", 2.

Baski, New York, Wiley-LISS Tawa ve dig. Meter. Res. Soc. Symp. Pro. 488 [Electrical, Optical and Magnetic Properties of Organic Solid-State Materials IV], 885-890 Youvan ve dig. (1997) Biotechnology et elia 3:1-18 Uyarici

Claims (13)

1. ISTEMLER Bir denekte hücre aracili bir immün yanitinin ölçülmesine yönel i k bi r yöntem olup, özelligi; söz konusu yöntemi n, bi r birinci setin CD8+ lenfositleri tarafindan taninan her biri 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki peptidleri içerdigi ve bir ikinci setin CD4+ lenfositleri tarafindan taninan 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidi içerdigi ve pepti dl eri n protein anti jeni ni ri tamamini veya bir kismini kapsadigi iki peptid seti kombinasyonu ile denekten alinan molekülünün varligi veya seviyesinin denegin hücre aracili yanit verebilirligi seviyesinin göstergesi oldugu immün hücrelerinden alinan bir immün efektör molekülünün varligini veya seviyesindeki yükselmeyi ölçmeyi içermesidir.
2. Istem l'e göre yöntem. olup, özelligi; denegin. bir insan olmasidir.
3. Istem l'e göre yöntem olup, özelligi; denekten alinan lenfositlerin bir kan numunesi içinde yer almasi ve numunenin seyreltilmemis tam kan olmasi veya numunenin tahlil edilecek numunenin hacimce %10 ila %100'ünü içeren tam kan olmasi, özellikle tam kanin tahlil edilecek numunenin hacimce %50 ila numuneni ri haci mce %80 ila %100' ünü içermesi di r.
4. Istem 3'e göre yönteni olup, özelligi; tam kanin heparin içeren bir tüpte toplanmasidir.
5. Istem l'e göre yöntem olup, özelligi; immün efektör molekülünün bir sitokin olmasi, sitokinin özellikle IFN-y olmasidir.
6. Istem l'e göre yöntem olup, özelligi; immün efektörlerinin aynilarina özgü olan antikorlar ile tespit edilmesi, özellikle immün efektörlerin ELISA kullanilarak tespit edilmesi, daha özel olarak immün efektörlerin özellikle ELISpot kullanilarak tespit edilmesidir istem l'e göre yöntem olup, özelligi; denegin Mycobacterium türleri, Staphylococcus türleri, Streptococcus türlerh Borrelia türleri, Escherichia coli, Salmonella türlen, Clostridium türleri, Shigella türleri, Proteus türleH, Bacillus türleri, Herpes virüsü, Hepatit B veya C virüsü ve Insan immün yetmezlik virüsü (HIV) veya bunlardan kaynaklanan bir hastaliktan seçilen bir patojenik ajan enfeksiyonuna sahip olmasi, özellikle hastalik durumunun Mycobacterium tuberCUIOSIS veya tüberkülozun (TB) sebep oldugu bir enfeksiyon olmasi örnegin, antijenin CFPlO, ESAT-6, TB7.7 ve TB37.6'dan seçilmesidir.
7. Istem l'e göre yöntem olup, özelligi; denegin alopesi areata, ankilozan spondilit, antifosfolipid sendromu, otoimmün Addison hastaligi multipl skleroz, otoimmün böbrek üstü bezi hastaligi, otoimmün hemolitik anemi, otoimmün hepatit, otoimmün ooforit ve orsit, Behçet hastaligi, büllöz pemfigoid, kardiyomiyopati, çölyak sprue-dermatit, kronik yorgunluk sendromu (CFIDS), kronik inflamatuar demiyelinizan, kronik inflamatuar polinöropati, Churg-Strauss sendromu, sikatrisyel pemfigoid, crest sendromu, soguk aglutinin hastaligi, Crohn hastaligi, dermatitis herpetiformis, diskoid lupus, esansiyel karisik kriyoglobulinemi, fibromiyalji, glomerülonefrit, Grave hastaligi, Guillain-Barre, Hashimoto tIrOIdItI, idiopatik pulmoner fibrozis, idiopatik trombositopeni purpura (ITP), IgA nefropati, insüline bagimli diyabet (Tip I), liken planus, lupus, Meniere hastaligi, karisik bag dokusu hastaligi, multipl skleroz, miyastenia gravis, miyokardit, pemfigus vulgaris, pernisiyöz anemi, poliarteritis nodosa, polikondrit, poliglanküler sendromlari polimiyaljiya romatika, polimiyozit ve dermatomiyozit, primer agammaglobulinemi, primer biliyer siroz, psoriyazis, Raynaud fenomeni, Reiter sendromu, romatizmal ates, romatoid artrit, sarkoidoz, skleroderma, Sjogren sendromu, kati insan sendromu, sistemik lupus eritematozus.
8. Takayasu arteriti, temporal arterit/dev T hücreli arterit, ülseratif kolit, uveit, vaskülit, vitiligo ve inflamatuar bagirsak hastaligindan seçilen bir hastalik durumuna sahip olmasi, veya hastaligin Çölyak hastaligi olmasi, veya hastaligin otoimmün diyabet olmasidir.
9. Istem l'e göre yöntem olup, özelligi; denegin ABLl protoonkogen, AIDS ile ilgili kanserler, akustik nöroma, akut karsinom, adrenokortikal kanser, agnojenik miyeloid metaplazi, alopesi, alveolar yumusak kisim sarkomu, anal kanser, anjiyosarkom, aplastik anemi, astrositom, ataksi- telenjiektazi, bazal hücreli karsinom (deri), mesane kanseri, kemik kanserleri, bagirsak kanseri, beyin sapi gliomu, beyin ve CNS tümörleri, meme kanseri, CNS tümörleri, karsinoid tümörler, serviks kanseri, çocukluk çagi beyin tümörleri, çocukluk çagi kanseri, çocukluk çagi lösemisi, çocukluk çagi yumusak doku sarkomu, kondrosarkom, koryokarsinom, kronik kanserler, kutanöz T hücre lenfomasi, dermatofibrosarkom- protuberans, desmoplastik-küçük-yuvarlak hücreli tümör, duktal karsinom, endokrin kanserler, endometriyal kanser, ependimom, özofagus kanseri, Ewing sarkomu, ekstra-hepatik safra kanali kanseri, göz kanseri, göz: melanom, retinoblastom, yumurtalik tüpü kanseri, fankoni anemisi, fibrosarkom, safra kesesi kanseri, mide kanseri, gastrointestinal kanserler, gastrointestinal-karsinoid- tümör, genitoüriner kanserler, germ hücreli tümörler, gestasyoneI-trofoblastik hastalik, gliyom, jinekolojik kanserler, hematolojik maliniteler, saçakli hücreli lösemi, bas ve boyun kanseri, hepatosellüler kanser, kalitsal meme kanseri, histiyositoz, Hodgkin hastaligi, insan papilloma virüsü, hidatidiform mol, hiperkalsemi, hipofarinks kanseri, intraoküler melanom, islet hücre kanseri, Kaposi sarkomu, böbrek kanseri, Langerhan hücre histiositozisi, larinks kanseri, leyomiyosarkom, lösemi, Li-Fraumeni sendromu, dudak kanseri, liposarkom, karaciger kanseri, akciger kanseri, lenfödem, lenfoma, Hodgkin lenfomasi, Hodgkin olmayan tümörü, medülloblastom, melanom, merkel hücre kansen, mezotelyoma, metastatik kanser, agiz kanseri, multipl endokrin neoplazi, mikozis fungoides, miyelodisplastik sendromlar, miyelom, miyeloproliferatif bozukluklar, nazal kanser, nazofarenks kanseri, nefroblastom, nöroblastom, nörofibromatozis, nijmejen breakage sendromu, nelanom disi cilt kanseri, küçük hücreli olmayan akciger kanseri (NSCLC), oküler kanserler, özofagus kanseri, oral kavite kanseri, orofarenks kanseri, osteosarkom, ostomi over kanseri, pankreas kanseri, paranazal kanser, paratiroid kansen, parotis bezi kanseri, penis kanseri, periferik nöroektodermal tümörler, hipofiz kanseri, polisitemi vera, prostat kanseri, nadir kanserler ve iliskili bozukluklar, renal hücreli karsinom, retinoblastom, rabdomiyosarkom, Rothmund-Thomson sendromu, tükürük bezi kanseri, sarkom, schwannom, Sezary sendromu, cilt kanseri, küçük hücreli akciger kanseri (SCLC), ince bagirsak kanseri, yumusak doku sarkomu, spinal kord tümörleri, skuamöz hücreli karsinom (deri), mide kanseri, sinovyal sarkom, testis kanseri, timus kanseri, tiroid kanseri, transizyonel hücreli kanser (mesane), transizyonel hücreli kanser (renal-pelvis-/-üreter), trofoblastik kanser, üretral kanser, üriner sistem kanseri, üroplakinler, uterus sarkomu, uterus kanseri, vajinal kanser, vulva kanseri, Waldenstrom makroglobulinemisi ve Wilms tümöründen seçilen bir kansere sahip olmasidir.
10. 10. Istem l'e göre yöntem olup, özelligi; denegin proteinli bir toksik maddeye maruz birakilmasidir.
11. ll. Istemler 1 ila lO'dan herhangi birine göre yöntem olup, özelligi; hücre aracili immün yanit büyüklügünün bir hastalik durumunun evresi, ilerlemesi ve/veya siddeti ile iliskili olmasidir.
12. 12. Iki peptid setinin kullanimi olup, özelligi; SÖZ konusu IM peptid seti kombinasyonunun Ienfositlerle birlikte inkübasyonuna ve efektör moleküllerde varligin veya yükselmenin tespit edilmesine yönelik yöntem ile hücre aracili bir immün yanit verebilirlik tani tahlilinin üretiminde bir birinci setin CD8+ lenfositleri tarafindan taninan 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki peptidleri içermesi ve bir ikinci setin CD4+ lenfositleri tarafindan taninan 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidini içermesi ve söz konusu peptidlerin bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsamasidir.
13. 13. Bir kullanicinin, bir denegin hücre aracili immüno yanit verebilirlik durumunu belirlemesine olanak saglayan bilgisayar tarafindan uygulanan bir yöntem olup, özelligi; yöntemin (a) CD8+ lenfositleri tarafindan taninan 7 ila 14 amino asit kalintisi uzunlugundaki peptidleri içeren bir birinci set ile CD4+ lenfositleri tarafindan taninan 16 veya daha fazla amino asit kalintisi peptidini içeren bir ikinci setin olusturdugu ve peptidlerin bir protein antijeninin tamamini veya bir kismini kapsadigi iki peptid setinin kombinasyonu ile denekten alinan lenfositlerin birlikte inkübasyonunun ardindan immün efektör molekülünün ölçülmesi ile, bir kontrol ile ilgili olarak, bir iletisim agi araciligiyla kullanicinin hücre aracili immüno yanit verebilirlik durumuyla ilgili bir korelasyon saglayan immün efektör molekülü seviyeleri veya konsantrasyonlari biçiminde verilerin alinmasini; (b) bir immüno yanit verebilirlik degeri saglamak için tek degiskenli veya çok degiskenli analiz araciligiyla denek verilerinin islenmesini; (C) önceden belirlenmis degerlere kiyasla immüno yanit verebilirlik degerinin sonuçlarina göre denegin durumunun belirlenmesini; ve (d) iletisim agi araciligiyla denegin durumunun bir göstergesinin kullaniciya aktarilmasini içermesidir.