SU940020A1 - Способ определени глюкозы - Google Patents

Description

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ

1

Изобретение относитс  к аналитической биохимии и может быть использовано в научно-исследовательской работе, пищевой и микробиологической промышленност х, бродильном производстве, клинических исследовани х .

Известен способ определени  глюкозы путем внесени  пробы анализируемого вещества в смесь, содержащую буферный раствор , глюкозооксидазу, пероксидазу и индикаторный субстрат - о-толуидин с последующим измерением плотности полученного раствора 1.

Недостатком способа  вл етс  его сложность , св занна  с необходимостью введени  двух ферментов, глюкозооксидазы и пероксидазы , что приводит к ограничению возможности использовани  способа.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемым результатам к предлагаемому  вл етс  способ определени  глюкозы путем введени  пробы анализируемого вещества в смесь, содержащую буферный раствор с рН 4-5, глюкозооксидазу и индикаторный субстрат - 2,6-дихлорфенолиндофенол с последующим измерением оптической плотности полученного раствора 2.

Недостатком способа  вл етс  его невысока  чувствительность (б-Ю М) и точность (ошибка составл ет 20%).

Цель изобретени  - повышение чувствительности и точности способа.

Поставленна  цель достигаетс  тем, что в способе определени  глюкозы путем внесени  пробы анализируемого вещества в смесь, содержащую буферный раствор, глюкозооксидазу и индикаторный субстрат с последующим измерением оптической плотности полученного раствора, в качестве индикаторного субстрата используют N,N,N, N- тетраметил-п-фенилендиамин и процесс ведут при рН 7,3-8.

Ион-радикальна  соль N,N,N, N - тетра15 метил-п-фенилендиамина имеет  рко-синее окрашивание (А. макс 606 нм), исчезающее при восстановлении, характеризуетс  высоким коэффициентом мол рного погашени  ( 1, СМ ), стабилен в течение длительного времени при рН 4,6.

Пример}. При проведении измерений в спектрофотометрическую кювету внос т 2,2 мл Na-фосфатного буферного раствора (рН 7,7; 0.2М), 0,3 мл рабочего раствора ион-радикальной соли N,N, N, N-тетраметил-n-фенилендиамина (0,164 мг/мл, рН 4,6), 0,1 мл раствора глюкозооксидазы (2 мг/мл). После проведени  измерени  начальной оптической плотности при 606 им реакцию инициируют добавлением в раствор 50 мкл исследуемого раствора глюкозы. После завершени  реакции (5 мин) регистрируют полное изменение оптической плотности. Концентрацию глюкозы рассчитывают из калибровочного графика зависимости изменени  оптической плотности от концентрации глюкозы. Результаты анализа приведены -в табл. 1.

Таблица 1 Разбавление в кювете в 53,раза. Пример 2. При проведении измерений в спектрофотометрическую кювету внос т 2,2 мл Na-фосфатного буферного раствора (рН 7,6; 0,2М), 0,3 мл рабочего раствора ион-радикальной соли N, N, N,N- тетраметил-п-фенилендиамина (0,164 мг/мл, рН 4,6), ОД мл раствора глюкозооксидазы (2 мг/мл). Фотометрирование реакции провод т при 606 нм. Реакцию инициируют добавлением в раствор 50 мкл исследуемого раствора глюкозы. О скорости реакции суд т, измер   тангенс угла наклона линейного участка графика зависимости величины оптической плотности от времени. Концентрацию глюкозы рассчитывают из калибровочного графика зависимости скорости ферментативной реакции от концентрации глюкозы. Результаты анализа представлены в табл. 2.

Таблица 2

Claims (2)

1. Разбавление в кювете в 53 раза. Формула изобретени  Способ определени  глюкозы путе.м внесени  пробы анализируемого вещества в смесь, содержанхую буферный раствор, глюкозооксидазу и индикаторный субстрат с последующим измерением оптической плотности полученного раствора, отличающийс  тем, что, с целью повыщени  чувствительности и точности способа, в качестве индикаторного субстрата используют N,N, NiN- тетраметил-п-фенилендиамин и процесс ведут при рН 7,3-8,0. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1.Патент США Re № 29498, кл. 195-1035, опублик. 1977.
2. 2.Патент США № 3009862, кл. 195-1035 опублик. 1961 (прототип).