SU857874A1 - Method of glucose quantitative determination - Google Patents

Description

1one

Изобретение относитс  к технике количественного определени  глюкозы и может быть использовано в клиничес ,кой практике, в микробиологической, пищевой и других отрасл х народного хоз йства.The invention relates to a technique for the quantitative determination of glucose and can be used in clinical practice, in microbiological, food, and other sectors of the national economy.

Известен способ количественного определени  глюкозы путем инкубации пробы в среде, содержащей глюкозокси- jg дазу, тетразолий, феназинметасульфат и буфер.A known method for the quantitative determination of glucose is obtained by incubating the sample in a medium containing glucose oxygene, tetrazolium, phenazine metasulfate and a buffer.

Однако известный способ недостаточно точен, так как ферментативную реакцию провод т при рН 6,6 или 7,0, . что отрицательно вли ет на точность 5 определени  и нижний предел определ емых концентраций глюкозы.However, the known method is not sufficiently accurate, since the enzymatic reaction is carried out at a pH of 6.6 or 7.0,. which negatively affects the accuracy of the 5 determination and the lower limit of the determined glucose concentrations.

Ц«гль изобретени  - повыиение точности способа.20Q "Gl invention - improving the accuracy of the method.20

Поставленна  цель достигаетс  тем, что в предлагаемом способе количественного определени  глюкозы путем инкубации пробы в среде, содержащей о1окозоксидазу, тетразолий, 25 фенаэинметасульфат и буфер, инкубацию ведут при рН среды, равном 7,58 ,0.The goal is achieved by the fact that in the proposed method of quantitative determination of glucose by incubating the sample in a medium containing o1 coscoxidase, tetrazolium, 25 phenaine methasulfate and buffer, the incubation is carried out at a pH of 7.58, 0.

Способ осуществл ют следующим об- .The method is carried out as follows.

разом.at once.

В исследуемую среду, содержащую искусственный субстрат - глюковсксидазу , внос т феназинметасульфат (ФМС), вторичный акцептор электронов дл  проведени  фотометрической регистрации реакции восстановлени  ФМС и буфер. Вторичными акцепторами могут быть 2,6-дихлорфенолиндофенол или тетразолиевые красители: нитротетразо лиевый синий, тетранитротетразолиевый синий,(Нитротетразолиевый фиолетовый и т.д. Инкубацию ведут при рН среды,- равном 7,5-8,0.Phenazine metasulfate (PMS), a secondary electron acceptor for photometric recording of the PMS reduction reaction and buffer, are introduced into the test medium containing the artificial substrate, glucovskidazu. Secondary acceptors can be 2,6-dichlorophenolindophenol or tetrazolium dyes: nitrotetrazolium blue, tetranitrotetrazolium blue, (purple nitrotrazolium, etc. Incubation is carried out at a pH of the medium equal to 7.5-8.0.

Восстановление вторичного акцептора протекает спонтанно с большой скоростью и не требует присутстви  в среде катализатора.The recovery of the secondary acceptor proceeds spontaneously at high speed and does not require the presence of a catalyst in the medium.

Процесс протекает по следующей схеме: 0-глюкоэа + . глюкозоксидаза-« .клюконо- С -лактон + ФМС,-+ втоboo ФМС вторичныйThe process proceeds as follows: 0-glucoea +. glucose oxidase- ". glucon-C-lactone + FMS, - + vtoboo FMS secondary

ричтай акцепторRichta acceptor

акцептрр),.acceptor)

Claims (2)

Содержание глюкозы определ ют либо из калибровочного графика зависимости скорости и ферментативной реакции от концентрации глюкозы,.либо из графика зависимости конечных значений оптической плотности исследуемых растворов , соответствующих полному протеkaHH ферментативной реакции, от кон центрации глюкозы. Дл  осуществлени  предлагаемого способа используют спектрофотометры или фотоэлектроколориметры широкого назначени . В данном случае исполь9уют фотодетектирующее устройство, которое позвол ет после предваритель ной настройкиПО стандартным растворам производить считывание показаний непосредственно в единицах концентра ции глюкозы, например в мг.%. Пример. Калибруют прибор по стандартным растворам глюкозы. К 1,5 МП фосфатного буферного раство ра рН 8,0 (0,05 М) в 1 см стекл нной кювете добавл ют 0,5 мл раствора ФМС в концентрации 5Ю М, 0,5 мл раствора тетранитротетразолиевого синего в концентрации 2 мг/мл, 0,1 мл раствора глюкозоксидазы в концентрации 10 М. Начальное поглощение раствора компенсируют, приним его за 0-точку отсчета. Добавл ют 50 мкл стандартного раствора глюкозы и через заданный промежуток врем ни считывают показани . Концентрацию глюкозы варьируют от 1 до 400 мг %. П р и М е р The glucose content is determined either from a calibration graph of the dependence of the rate and the enzymatic reaction on the glucose concentration, or on the graph of the final values of the optical density of the studied solutions, corresponding to the total proteinHH enzyme reaction, on the glucose concentration. For the implementation of the proposed method using spectrophotometers or photoelectric colorimeters of wide use. In this case, a photodetection device is used, which, after pre-setting the software, allows standard solutions to read the readings directly in units of glucose concentration, for example, in mg.%. Example. Calibrate the device according to standard glucose solutions. To 1.5 MP of phosphate buffer solution pH 8.0 (0.05 M) in 1 cm glass cuvette add 0.5 ml of PMS solution at a concentration of 5U M, 0.5 ml of tetranitrotetrazolium blue solution at a concentration of 2 mg / ml, 0.1 ml of glucose oxidase solution at a concentration of 10 M. The initial absorption of the solution is compensated, taking it as a 0-point of reference. 50 µl of a standard glucose solution is added, and after a specified time, the readings are read. The concentration of glucose varies from 1 to 400 mg%. PRI and MER 2. Определ ют воспро водимость показаний прибора в разны режимах работы - по начальным скор т м и по конечной точке, при варьир вании концентрации глюкозы от 25 до 100 мг %. СчитьГвание результатов провод т рез равные промежутки времени: 1,2, и 3 мин - кинематический режим рабо ты, 5 мин - по конечной точке. Дл  нагл дности результаты, получаемые при концентрации 100 мг-%, принимают за 100%. Установлено, что наименьша  с иибка , меньше tl%, получена в кинетическом режиме работы при считывании результатов через 2 мин. Примерз. Определение концентрации глюкозы в образцах цельной крови провод т, как описано в примере 1, но к буферному раствору добавл ют детергент Тритон Х-100, в количествах 1 мл/1000 мл. При добав лении 50 мкл крови в такой буферный раствор происходит моментгшьное разрушение эритроцитов, и раствор становитс  оптически прозрачным. Начальное поглощение раствора принимаютГ за О - точку отсчета. Предлагаемый способ количественного определени  глюкозы обеспечивает по сравнению с известным повышение точности анализа и надежности получени  достоверных результатов и может быть широко внедрен в практику клинических лабораторий. Формула изобретени  Способ количественного определени  глюкозы путем инкубации пробы в среде, содержащей глюкозоксидазу, тетразолий, феназинметасульфат и буфер , отличающийс  тем, что, с целью повышени  точности способа , инкубацию ведут при рН среды, рав ном 7,5-8,0. Источники информации прин тые во внимание при зкспертизе 1. Патент США 3791988, кл. .252-413, 1974.2. Determine the reproducibility of the instrument readings in different modes of operation — by initial speeds and end-point, while varying the glucose concentration from 25 to 100 mg%. Accountability of the results is carried out at equal intervals of time: 1.2, and 3 min - the kinematic mode of work, 5 min - at the end point. For clarity, results obtained at a concentration of 100 mg-% are taken as 100%. It was established that the smallest of iibka, less than tl%, was obtained in the kinetic mode of operation when reading the results after 2 min. Froze Determination of glucose concentration in whole blood samples was carried out as described in Example 1, but Triton X-100 detergent was added to the buffer solution in amounts of 1 ml / 1000 ml. When 50 µl of blood is added to such a buffer solution, the red blood cells are instantly destroyed and the solution becomes optically transparent. The initial absorption of the solution is taken as O - the starting point. The proposed method for the quantitative determination of glucose provides, as compared with the known, improved accuracy of analysis and reliability of obtaining reliable results and can be widely implemented in the practice of clinical laboratories. Claims A method for quantitatively determining glucose by incubating a sample in a medium containing glucose oxidase, tetrazolium, phenazine metasulfate and a buffer, characterized in that, in order to improve the accuracy of the method, the incubation is carried out at a pH of 7.5-8.0. Sources of information taken into account in the examination 1. US patent 3,791,988, cl. .252-413, 1974.